特許 6585659 脂質、脂質組成物およびそれらの使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6585659

(24)【登録日】2019年9月13日

(45)【発行日】2019年10月2日

(54)【発明の名称】脂質、脂質組成物およびそれらの使用方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 47/34 20170101AFI20190919BHJP

   C08G 65/333 20060101ALI20190919BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20190919BHJP

   A61K 47/28 20060101ALI20190919BHJP

   C08G 65/332 20060101ALI20190919BHJP

   C08L 71/00 20060101ALI20190919BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20190919BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20190919BHJP

   A61K 31/713 20060101ALI20190919BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20190919BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20190919BHJP

【ＦＩ】

   A61K47/34

   C08G65/333ZNA

   A61K47/22

   A61K47/28

   C08G65/332

   C08L71/00

   A61P35/00

   A61P1/16

   A61K31/713

   A61K31/7105

   A61K48/00

【請求項の数】13

【全頁数】227

(21)【出願番号】特願2017-122319(P2017-122319)

(22)【出願日】2017年6月22日

(62)【分割の表示】特願2015-196915(P2015-196915)の分割

【原出願日】2010年12月21日

(65)【公開番号】特開2018-16789(P2018-16789A)

(43)【公開日】2018年2月1日

【審査請求日】2017年7月24日

(31)【優先権主張番号】61/284,787

(32)【優先日】2009年12月23日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】504389991

【氏名又は名称】ノバルティス アーゲー

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100077517

【弁理士】

【氏名又は名称】石田 敬

(74)【代理人】

【識別番号】100087871

【弁理士】

【氏名又は名称】福本 積

(74)【代理人】

【識別番号】100087413

【弁理士】

【氏名又は名称】古賀 哲次

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100138210

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 達則

(72)【発明者】

【氏名】ジェレミー・バリーザ

(72)【発明者】

【氏名】キース・ボウマン

(72)【発明者】

【氏名】アンドリュー・ゲール

(72)【発明者】

【氏名】タンジナ・ファザール

(72)【発明者】

【氏名】キャメロン・リー

(72)【発明者】

【氏名】チャンドラ・バルギース

(72)【発明者】

【氏名】ローラ・ウエスト

(72)【発明者】

【氏名】ジャオ・ジュンピン

【審査官】 磯部 洋一郎

(56)【参考文献】

【文献】 特許第６１６６３２１（ＪＰ，Ｂ２）

【文献】 国際公開第２００８／１４７４３８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００８／１０３２７６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００９／０５１４５１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２００８−５３０２１５（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ４７／３４

Ａ６１Ｋ ３１／７１０５

Ａ６１Ｋ ３１／７１３

Ａ６１Ｋ ４７／２２

Ａ６１Ｋ ４７／２８

Ａ６１Ｋ ４８／００

Ａ６１Ｐ １／１６

Ａ６１Ｐ ３５／００

Ｃ０８Ｇ ６５／３３２

Ｃ０８Ｇ ６５／３３３

Ｃ０８Ｌ ７１／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

少なくとも１種のカチオン性脂質、少なくとも１種のヘルパー脂質、及び式(XI)：

【化1】

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[式中、
Ｚは、ＰＥＧ、ならびに、ポリ（オキサゾリン）、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（グリセロール）、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリ［Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］およびポリ（アミノ酸）をベースとするポリマー（ここで、ポリマーは直鎖であっても分枝鎖であってもよく、また、所望により置換されていてもよい。）から選択される親水性頭部であり；
ここで、Ｚは、ｎ個のサブユニットにより重合されており；
ｎは、１０ユニットと２００ユニットの間のＺの平均重合度であり；
Ｌ₁は、エステル、スクシネート、カルバメート、カーボネート、ケトン、カルボニル、ウレア、アミン、アミド、イミン、チオエーテル、キサントゲン酸エステルおよびホスホジエステル（これらは何れも、０個、１個またはそれ以上のＺ基によって置換されていてもよい。）を１個、２個またはそれ以上含む、所望により置換されたＣ_1-10ヘテロアルキレンリンカーであり；
Ｘ₁およびＸ₂は、炭素原子、または、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−もしくはホスフェートから選択されるヘテロ原子から独立して選択され；そして
Ａ₁およびＡ₂は、Ｃ_6-30アルキル、Ｃ_6-30アルケニルおよびＣ_6-30アルキニルから独立して選択され、ここで、Ａ₁およびＡ₂は、同一であっても異なっていてもよい。]
の少なくとも１種のステルス脂質を含む組成物。

【請求項2】

前記ステルス脂質が、以下：

【化2】

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から選択される、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記ステルス脂質が、以下：

【化3】

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である、請求項１に記載の組成物。

【請求項4】

前記ステルス脂質が、請求項１〜３の何れか１項に記載されたステルス脂質の薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の組成物。

【請求項5】

前記ステルス脂質が、請求項１〜３の何れか１項に記載されたステルス脂質の薬学的に許容される溶媒和物である、請求項１に記載の組成物。

【請求項6】

前記ステルス脂質が、請求項１〜３の何れか１項に記載されたステルス脂質の薬学的に許容される水和物である、請求項１に記載の組成物。

【請求項7】

少なくとも１種の中性脂質をさらに含む、請求項１〜４の何れか１項に記載の組成物。

【請求項8】

前記カチオン性脂質が、以下の表：

【表1-1】

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【表1-2】

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【表1-3】

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【表1-4】

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【表1-5】

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【表1-6】

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【表1-7】

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【表1-8】

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【表1-9】

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【表1-10】

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【表1-11】

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【表1-12】

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【表1-13】

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【表1-14】

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【表1-15】

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【表1-16】

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【表1-17】

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【表1-18】

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【表1-19】

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【表1-20】

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【表1-21】

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【表1-22】

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【表1-23】

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【表1-24】

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【表1-25】

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【表1-26】

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【表1-27】

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【表1-28】

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【表1-29】

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【表1-30】

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【表1-31】

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【表1-32】

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【表1-33】

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【表1-34】

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【表1-35】

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【表1-36】

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【表1-37】

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【表1-38】

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【表1-39】

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【表1-40】

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【表1-41】

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【表1-42】

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【表1-43】

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【表1-44】

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【表1-45】

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【表1-46】

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【表1-47】

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【表1-48】

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【表1-49】

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【表1-50】

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【表1-51】

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【表1-52】

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【表1-53】

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【表1-54】

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【表1-55】

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に示されるＥ０００１〜Ｅ０１７１及びＥ０１７５〜Ｅ０１８０から選択される、請求項１〜５の何れか１項に記載の組成物。

【請求項9】

生物活性薬物をさらに含む、請求項１〜６の何れか１項に記載の組成物。

【請求項10】

前記生物活性薬物が、抗体、コレステロール、ホルモン、抗ウイルス剤、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、核タンパク質、化学療法剤、低分子量薬物、ビタミン、補因子、ヌクレオシド、ヌクレオシド誘導体、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、酵素的核酸、アンチセンス核酸、三本鎖形成オリゴヌクレオチド、２−５Ａアンチセンスキメラ、アロザイム、アプタマー、デコイＲＮＡ分子およびそのアナログ、および、低分子核酸から成る群から選択される、請求項９に記載の組成物。

【請求項11】

前記生物活性薬物が、１又は複数のヌクレオシド、ヌクレオシド誘導体、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、および低分子核酸から選択される、請求項１０に記載の組成物。

【請求項12】

薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１〜１１の何れか１項に記載の組成物。

【請求項13】

脂質ナノ粒子の形態における、請求項１〜１２の何れか１項に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明の分野
本発明は、カチオン性脂質化合物、ステルス脂質(stealth lipid)化合物、および、当該化合物を含む組成物に関する。本発明はまた、当該化合物および組成物の製造方法、および、例えば細胞および組織に生物活性薬物を送達するための、当該化合物および組成物の方法およびその方法における当該化合物および組成物の使用に関する。本発明は、特に肝臓および腫瘍を含む特定の細胞型に、生物活性薬物を送達するための脂質製剤に使用するためのカチオン性脂質において、最適化されたｐＫａ範囲、および製剤を最適化する方法を記載している。

【背景技術】

【0002】

本発明の背景
生物活性薬物(治療関連化合物を含む)の対象への送達は、しばしば、化合物が標的細胞または組織に到達するのが困難であることによって妨げられる。特に、多くの生物活性薬物の生存細胞への輸送は、細胞の複雑な膜系によってかなり制限される。これらの制限のために、成果を得るために望ましい濃度よりもはるかに高い濃度の生物活性薬物の使用を要し、これは毒作用および副作用のリスクを増大させる。この問題の１つの解決方法は、細胞への選択的な侵入が可能な特異的担体分子を利用することである。脂質担体、生物分解性ポリマーおよび種々のコンジュゲート系を、細胞への生物活性薬物の送達を改善するために用いることが可能である。

【0003】

細胞に送達するのが特に難しい生物活性薬物の１つのクラスは、生物治療薬(ヌクレオシド、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、核酸およびこれらの誘導体を含む)である。一般的に、核酸は、細胞または血漿中で、限られた時間のみ安定である。ＲＮＡ干渉、ＲＮＡｉ治療、ＲＮＡ薬、アンチセンス治療および遺伝子治療の発展により、とりわけ、細胞に活性な核酸薬物を導入する有効な手段の必要性が増大している。これらの理由のために、核酸をベースとする薬物を安定化して細胞に送達することができる組成物は、特に興味深い。

【0004】

細胞への外来性核酸の輸送を改善する最も研究された方法は、ウイルスベクターまたはカチオン性脂質の使用を含む。ウイルスベクターは、幾つかの細胞型に遺伝子を有効に輸送するために使用することができるが、それらは、一般的に、化学的に合成された分子を細胞に導入するために使用することはできない。

【0005】

他の方法は、一部分で生物活性薬物と相互作用し、他の部分で膜系と相互作用するカチオン性脂質を組み込んだ送達組成物を使用することである (レビューについては、Felgner, 1990, Advanced Drug Delivery Reviews, 5, 162-187 および Felgner, 1993, J. Liposome Res., 3, 3-16を参照のこと)。このような組成物は、リポソームを含むと報告されている。

【0006】

リポソームが1965年にBanghamによって最初に記載されて以来 (J. Mol. Biol. 13, 238 252)、生物活性薬物を送達する脂質ベース担体系を開発することに、関心が持たれて努力され続けている。正に帯電したリポソームの使用によって培養細胞に機能的核酸を導入するプロセスは、Philip Felgner et al. Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 84, 7413 7417 (1987)に最初に記載されている。このプロセスは、その後に、K. L. Brigham et al., Am. J. Med. Sci., 298, 278 281 (1989)によってin vivoで証明された。

【0007】

リポソームは、生物分子を分解から保護しながらその細胞取り込みを改善するために、魅力的な担体である。リポソームの種々のクラスの中で、カチオン性脂質を含むリポソームは、一般的に、ポリアニオン(例えば核酸)を送達するために使用される。このようなリポソームは、カチオン性脂質のみを使用して、所望により他の脂質および両親媒性物質、例えばホスファチジルエタノールアミンを含んで、形成される。当技術分野では、脂質製剤の組成およびその製造方法の双方が、得られた凝集物の構造およびサイズに影響を及ぼすことが周知である。

【0008】

生物活性薬物の細胞送達におけるカチオン性脂質の使用は、幾つかの利点を有する。カチオン性脂質を用いたアニオン性化合物の被包は、静電相互作用により、本質的に定量的である。さらに、カチオン性脂質は、負に帯電した細胞膜と相互作用して、細胞膜輸送が開始されると考えられる (Akhtar et al., 1992, Trends Cell Bio., 2, 139; Xu et al., 1996, Biochemistry 35, 5616)。

【0009】

正に帯電したリポソームを用いる培養細胞への機能的核酸の導入についてのFelgnerの初期の研究に続いて、一般式Ｉ：

【化1】

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をベースとするカチオン性脂質化合物が、欧州特許第0 187 702号の特許明細書に開示されている。

【0010】

これらのカチオン性脂質化合物は、一般的に、窒素を含む“頭部”に結合している２個のアルキル鎖またはアルケニル鎖からなる。また、Ｒ³、Ｒ⁴およびＲ⁵のうち２つまた
は３つが、一体となって、キヌクリジノ、ピペリジノ、ピロリジノまたはモルホリノであるものが開示されている。

【0011】

欧州特許第0 187 702号以降、多くの別の研究者たちが、カチオン性脂質化合物を開示している。関連する特許明細書は、国際公開第00/030444号であり、これは、合成カチオン性脂質およびリポソームを記載している。この明細書は、多様な異なる頭部を有するカチオン性脂質化合物を開示しており、その幾つかの例は、１個より多い頭部を特徴としている。すなわち、これに開示された化合物のうち、式(II)の化合物である。

【化2】

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【0012】

国際公開第2005/121348号は、脂質をベースとする製剤を開示している。当該明細書に開示された核酸脂質粒子は、干渉ＲＮＡ分子、１個所より多い不飽和部位を有する約１０〜２０個の炭素原子のアルキル側鎖を有するカチオン性脂質、非カチオン性脂質、および、粒子の凝集を阻害する脂質コンジュゲート、例えばポリエチレングリコール(ＰＥＧ)脂質コンジュゲートまたはポリアミド(ＡＴＴＡ)コンジュゲートを含む。この特許明細書に開示された具体的なカチオン性脂質化合物は、ＤＳＤＭＡ、ＤＯＤＭＡ、ＤＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｅｎＤＭＡを含む。

【化3】

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【0013】

Cullis and Bailey, Biochemistry 1994, 33, 12573-12580は、アミノ脂質、例えば下記のアミノ脂質を含むリポソームを報告している。

【化4】

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【0014】

新規カチオン性脂質化合物に関係する他の最近の文献は、薬物送達および診断に有用であると報告されている、広範なアミノ酸脂質化合物を記載している国際公開第2008/137758号である。

【0015】

米国特許第2006/0240554号および関連出願である米国特許第2008/0020058号および米国特許第2009/0048197号はまた、カチオン性脂質に関係している。これらの脂質は、細胞および／または組織に、低分子量核酸、例えば低分子干渉核酸(ｓｉＮＡ)を含む生物活性薬物を送達することができることが報告されている。

【0016】

米国特許第2006/0240554号、米国特許第2008/0020058号および米国特許第2009/0048197号は、細胞にｓｉＲＮＡを送達するための、コレステロールおよびＰＥＧ−ＤＡＧと組み合わせたカチオン性脂質ＣＬｉｎＤＭＡの使用を記載している。ＣＬｉｎＤＭＡの構造を下に示す。この分子の“頭部”には、−Ｎ(Ｍｅ)₂基がある。ＣｌｉｎＤＭＡはまた、本明細書でE0173と記載される。

【化5】

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【0017】

国際公開第2009/086558号は、下記の化合物を開示している。

【化6】

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【0018】

それはまた、下記の一般式：

【化7】

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(式中、Ｒ³およびＲ⁴は、一体となって、所望により置換された４〜６個の炭素原子および窒素および酸素から選択される１個または２個のヘテロ原子を含むヘテロ環式環を形成してもよい。)
を有するアミノ脂質を開示している。

【0019】

細胞への生物活性薬物の全身および局所送達を助けるさらなるカチオン性脂質が必要とされている。また、当技術分野で既知のカチオン性脂質と比較して、細胞への生物活性薬物の全身および局所送達を改善したカチオン性脂質が必要とされている。さらに、特定の臓器および腫瘍、特に肝臓外部の腫瘍への生物活性薬物の全身および局所送達を改善するために最適化された物理学的性質を有する脂質製剤が必要とされている。

【発明の概要】

【0020】

本発明の概要
本発明は、新規カチオン性脂質およびステルス脂質、それらを含む製剤、およびそれらの使用方法を提供する。また、特にＲＮＡｉ構築物を含む薬物を治療有効量でそれを必要とする対象に送達するために当該脂質を使用する製剤を提供する。特定の範囲内のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む特定の製剤が、対象の肝臓および／または体細胞組織中の腫瘍へ治療有効量の薬物を投与するために提供される。原則として(例外がある)、腫瘍への送達に最も有効な製剤(下により詳細に記載)は、約６.１以下のｐＫａを有するカチオン性脂質を含み、特定の範囲は、腫瘍のタイプに依存して、約５.０〜約６.７を含み、特に約５.２〜約６.３、または約５.４〜約６.２、または約５.８〜約６.１を含む。一方、肝臓への送達に最も有効な製剤(下記により詳細に記載)は、約６.１以上のｐＫａを有するカチオン性脂質を含み、特定の範囲は、約５.１〜約７.４を含み、約５.３〜約７.３を含み、特に約５.９〜約７.０を含み、一つの態様において約６.２〜約６.８である。

【0021】

製剤は、さらに、当業者によって、例えば標的となる細胞のタイプまたは臓器に最適化したカチオン性脂質のｐＫａ、用いられるカチオン性脂質、用いられるステルス脂質、ヘルパー脂質、用いられる中性脂質(中性脂質が存在するか否かを含む)、選択されたヘルパー脂質、所望により存在する中性脂質、ステルス脂質およびカチオン性脂質の比率、Ｎ／Ｐ比、粒子サイズ、投与レジメ、投与量、製剤方法などの個々の選択を含むが、これらに限定されない、製剤の他の局面を調節することによって最適化され得る。

【0022】

本発明は、カチオン性脂質(本明細書中で“化合物”とも言う)および当該脂質を含む組成物を提供する。本発明はまた、当該化合物および組成物の製造方法、当該化合物および
組成物により生物活性薬物(治療薬を含む)を細胞に送達(in vivo送達を含む)するための方法およびその方法における当該化合物および組成物の使用、および、in vivoで特定の細胞型および組織に送達するために当該製剤を最適化する方法を提供する。本発明はまたステルス脂質を提供する。

【0023】

一つの態様において、本発明は、式(Ｉ)：

【化8】

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[式中、
Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニルまたはＣ_5-20ヘテロアリール基を形成し；
ａは、存在しないか、または、所望により置換されたＣ_1-4アルキレンであり；
ｂは、存在しないか、または、所望により置換されたＣ_1-4アルキレンであり；
ｃは、存在しないか、または、所望により置換されたＣ_1-4アルキレンであり；
Ｘ¹は、ＯまたはＳであり；
Ｘ²は、ＯまたはＳであり；
Ｙ¹は、所望により置換されたＣ_10-30アルケニル、Ｃ_10-30アルキニル、Ｃ_10-30ヘテロアルケニルまたはＣ_10-30ヘテロアルキニルであり；
Ｌは、存在しないか、または−(Ｌ^a)_d−(Ｌ^b)_e−(Ｌ^c)_f−
｛ここで、Ｌ^aは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
Ｌ^bは、所望により置換されたＣ_6-14アリーレンまたはＣ_5-13ヘテロアリーレンであり；
Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
ｄは、０または１であり；
ｅは、０または１であり；
ｆは、０または１である。｝
であり；
Ｙ²は、所望により置換されたステロイドである。]
の化合物またはその薬学的に許容される誘導体を提供する。

【0024】

本発明はまた、式(Ｉ)の化合物を含む医薬組成物を提供する。これらの組成物は、所望により他の脂質成分と組み合わせた生物活性薬物を含み得る。

【0025】

本発明はまた、式(XI)の化合物を含む医薬組成物を提供する。これらの組成物は、所望により他の脂質成分と組み合わせた生物活性薬物を含み得る。

【0026】

一つの態様において、本発明は、式(XI)：

【化9】

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[式中、
Ｚは、ＰＥＧ、ならびに、ポリ(オキサゾリン)、ポリ(エチレンオキシド)、ポリ(ビニルアルコール)、ポリ(グリセロール)、ポリ(Ｎ−ビニルピロリドン)、ポリ[Ｎ−(２−ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド]およびポリ(アミノ酸)をベースとするポリマー(ここで、ポリマーは直鎖であっても分枝であってもよく、また、所望により置換されていてもよい。)から選択される親水性頭部であり；
ここで、Ｚは、ｎ個のサブユニットが重合したものであり；
ｎは、１０ユニットと２００ユニットの間のＺの平均重合度であり、ここで、ｎは、異なるポリマータイプについて最適化されており；
Ｌ₁は、エーテル(例えば−Ｏ−)、エステル(例えば−Ｃ(Ｏ)Ｏ−)、スクシネート(例えば−Ｏ(Ｏ)Ｃ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−Ｃ(Ｏ)Ｏ−))、カルバメート(例えば−ＯＣ(Ｏ)−ＮＲ'−)、カーボネート(例えば−ＯＣ(Ｏ)Ｏ−)、ケトン(例えば−Ｃ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ−)；カルボニル(例えば−Ｃ(Ｏ)−)；ウレア(例えば−ＮＲＣ(Ｏ)ＮＲ'−)、アミン(例えば−ＮＲ'−)、アミド(例えば−Ｃ(Ｏ)ＮＲ'−)、イミン(例えば−Ｃ(ＮＲ')−)、チオエーテル(例えば−Ｓ−)、キサントゲン酸エステル(xanthate)(例えば−ＯＣ(Ｓ)Ｓ−)およびホスホジエステル(例えば−ＯＰ(Ｏ)₂Ｏ−)(これらは何れも、０個、１個またはそれ以上のＺ基によって置換されていてもよい。)を０個、１個、２個またはそれ以上含む、所望により置換されたＣ_1-10アルキレンまたはＣ_1-10ヘテロアルキレンリンカーであり；
ここで、Ｒ'は、−Ｈ、−ＮＨ−、−ＮＨ₂、−Ｏ−、−Ｓ−、ホスフェートまたは所望により置換されたＣ_1-10アルキレンから独立して選択され；
Ｘ₁およびＸ₂は、炭素原子、または、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−もしくはホスフェートから選択されるヘテロ原子から独立して選択され；
Ａ₁およびＡ₂は、Ｃ_6-30アルキル、Ｃ_6-30アルケニルおよびＣ_6-30アルキニルから独立して選択され、ここで、Ａ₁およびＡ₂は、同一であっても異なっていてもよいか、
あるいは、Ａ₁およびＡ₂は、それらが結合している炭素原子と一体となって、所望により置換されたステロイドを形成する。]
の化合物またはその塩または薬学的に許容される誘導体を提供する。

【0027】

本発明の脂質を含む組成物は、例えば、患者において、特に遺伝子発現の調節に応答する障害または疾患を含む障害または疾患を処置するために治療用化合物(例えば１種以上の生物活性薬物)を送達するのに、あるいは、標的細胞または組織に治療薬を投与するのに有用である。本発明の化合物および組成物は、それ自体、患者において疾患および状態を処置するために用いられ得る。特に、本化合物は、抗体、低分子量組成物、タンパク質治療薬および核酸組成物、例えばＲＮＡｉのためのｓｉＲＮＡを含む生物活性薬物を、細胞または組織に送達するための、リポソームおよび／または脂質ナノ粒子製剤組成物に利用され得る。

【0028】

本発明の方法において、生物活性薬物は、記載されたカチオン性脂質を利用して細胞に送達され、その過程において、上皮組織および内皮組織、例えば皮膚、粘膜、血管組織、胃腸の組織、血液脳関門組織、眼の組織、肺組織、肝臓組織、心臓組織、腎臓組織、腫瘍組織などを通り抜けることができる。本化合物および組成物は、生物活性薬物の局所送達および全身送達の双方に用いることができる。

【発明を実施するための形態】

【0029】

本発明の詳細な説明
これまで、大部分の体細胞組織への治療有効量のＲＮＡｉ組成物の送達に問題があるために、ＲＮＡｉ分野の治療可能性は満たされていない。ＲＮＡｉ治療薬は、眼、皮膚、肺および肝臓の組織を対象とする場合は、ある程度有効である。他の全ての体細胞組織を処置するために、および転移性癌を含む癌に、治療有効量のＲＮＡｉを送達するための組成物および方法に対する必要性が残存している。

【0030】

本明細書に記載する発見は、腫瘍へ送達するための製剤では、カチオン性脂質の最適ｐＫａ範囲が、肝臓へ送達するためのものより低いことが見出されたことである。原則として(例外がある)、腫瘍に送達するのに最も有効な脂質を有する製剤(下により詳細に記載)は、腫瘍のタイプに依存して、特に約５.８〜約６.１を含む約５.０〜約６.７のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。一方、肝臓へ送達するのに最も有効な脂質を有する製剤(下により詳細に記載)は、特に約５.９〜約７.０を含む約５.１〜約７.４のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。一つの態様において、約６.１以下のｐＫａを有するカチオン性脂質は、腫瘍または腫瘍細胞に生物活性薬物を送達する製剤に、より有効である。一方、約６.１以上のｐＫａを有するカチオン性脂質は、肝臓または肝細胞に生物活性薬物を送達する製剤に、より有効である。

【0031】

本発明では、新規カチオン性脂質、ステルス脂質およびそれらを含む製剤、ならびに使用方法が提供される。特定のｐＫａ範囲の典型的なカチオン性脂質であって、in vivoで対象に投与されたときに、それを含む製剤が腫瘍に治療有効量のＲＮＡｉ組成物を送達し得るカチオン性脂質が記載されている。他のｐＫａ範囲のカチオン性脂質で作られる他の製剤であって、in vivoで対象に投与されたときに、それを含む製剤が治療有効量のＲＮＡｉ組成物を送達し得るカチオン性脂質が記載されている。

【0032】

本発明のカチオン性脂質
一つの態様において、本発明は、式(Ｉ)：

【化10】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニルまたはＣ_5-20ヘテロアリール基を形成し；
ａは、存在しないか、または、所望により置換されたＣ_1-4アルキレンであり；
ｂは、存在しないか、または、所望により置換されたＣ_1-4アルキレンであり；
ｃは、存在しないか、または、所望により置換されたＣ_1-4アルキレンであり；
Ｘ¹は、ＯまたはＳであり；
Ｘ²は、ＯまたはＳであり；
Ｙ¹は、所望により置換されたＣ_10-30アルケニル、Ｃ_10-30アルキニル、Ｃ_10-30ヘテロアルケニルまたはＣ_10-30ヘテロアルキニルであり；
Ｌは、存在しないか、または−(Ｌ^a)_d−(Ｌ^b)_e−(Ｌ^c)_f−
｛ここで、Ｌ^aは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
Ｌ^bは、所望により置換されたＣ_6-14アリーレンまたはＣ_5-13ヘテロアリーレンであり；
Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
ｄは、０または１であり；
ｅは、０または１であり；
ｆは、０または１である。｝
であり；
Ｙ²は、所望により置換されたステロイドである。]
の化合物またはその薬学的に許容される誘導体を提供する

【0033】

式Ｉの一つの態様において、ａは、所望により置換されたＣ_1-2アルキレンである。
式Ｉの一つの態様において、ａは、所望により置換されたＣ₁アルキレンである。式Ｉの一つの態様において、ｂは、所望により置換されたＣ_0-2アルキレンである。式Ｉの一つの態様において、ｂは、所望により置換されたＣ₁アルキレンである。式Ｉの一つの態様において、ｃは、存在しないか、または所望により置換されたＣ₁アルキレンである。
式Ｉの一つの態様において、ａ、ｂおよびｃは非置換である。式Ｉの一つの態様において、ｃは存在しない。

【0034】

式Ｉの一つの態様において、Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニルまたはＣ_3-20ヘテロシクロアルキニル基を形成する。式Ｉの一つの態様において、Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル基を形成する。式Ｉの一つの態様において、Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_5-16基を形成する。式Ｉの一つの態様において、Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_5-12基を形成する。

【0035】

式Ｉの一つの態様において、Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ₅基、Ｃ₆基またはＣ₇基を形成する。式Ｉの一つの態様において、Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ₅基またはＣ₆基を形成する。

【0036】

式Ｉの一つの態様において、Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、Ｈ¹〜Ｈ⁵²から選択されるものである。

【0037】

式Ｉの一つの態様において、Ｘ¹はＯである。式Ｉの一つの態様において、Ｘ²はＯである。

【0038】

式Ｉの一つの態様において、Ｌは、少なくとも１個のヘテロ原子を含む。式Ｉの一つの態様において、Ｌは、少なくとも１個のＯ原子を含む。式Ｉの一つの態様において、Ｌは、少なくとも２個のヘテロ原子を含む。式Ｉの一つの態様において、Ｌは、少なくとも２個のＯ原子の置換を含む。式Ｉの一つの態様において、Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキレンである。式Ｉの一つの態様において、Ｌ^cは、Ｌ^c-i〜Ｌ^c-xxxxiiiの何れか１個以上から選択される。

【0039】

式Ｉの一つの態様において、Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15ヘテロアルキレンである。式Ｉの一つの態様において、Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-11基である。式Ｉの一つの態様において、Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-9基である。式Ｉの一つの態様において、Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_3-8基である。式Ｉの一つの態様において、Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_4-7基である。式Ｉの一つの態様において、Ｌ^cは、所望により置換されたＣ₅、Ｃ₆またはＣ₇基である。

【0040】

式Ｉの一つの態様において、ｄは０であり；ｅは０であり、ｆは１である。

【0041】

式Ｉの一つの態様において、Ｙ¹はＣ_12-28基である。式Ｉの一つの態様において、Ｙ¹はＣ_14-26基である。式Ｉの一つの態様において、Ｙ¹はＣ_16-24基である。式Ｉの一つの態様において、Ｙ¹はＣ_16-22基である。式Ｉの一つの態様において、Ｙ¹は少なくとも１個のアルケニル基を有する。式Ｉの一つの態様において、Ｙ¹は、１個、２個または３個のアルケニル基を有する。式Ｉの一つの態様において、Ｙ¹は、ω３位で１個のアルケニル基を有する。式Ｉの一つの態様において、Ｙ¹は、ω６位で１個のアルケニル基を有する。式Ｉの一つの態様において、Ｙ¹は、ω９位で１個のアルケニル基を有する。

【0042】

式Ｉの一つの態様において、Ｙ¹は、少なくとも１個のｃｉｓ不飽和アルケニル基を有する。式Ｉの一つの態様において、Ｙ¹は、少なくとも２個のｃｉｓ不飽和アルケニル基を有する。式Ｉの一つの態様において、Ｙ¹は、少なくとも３個のｃｉｓ不飽和アルケニル基を有する。式Ｉの一つの態様において、Ｙ¹は、Ｙ^1-i〜Ｙ^1-viiから選択される。

【0043】

式Ｉの一つの態様において、Ｙ²は、酸素原子を介して、所望により置換されたステロイド上で、Ｌに結合している。式Ｉの一つの態様において、Ｙ²は、酸素原子を介して、ステロイドの環Ａの３位で、Ｌに結合している。式Ｉの一つの態様において、Ｙ²は、ステロイドの環Ａの３位でヒドロキシ基の水素原子が除かれたステロールである。式Ｉの一つの態様において、ステロールは、コレステロールである。

【0044】

本発明の第２の態様は、式(II)：

【化11】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニルまたはＣ_5-20ヘテロアリール基を形成し；
ａは、存在しないか、または、所望により置換されたＣ_1-4アルキレンであり；
ｂは、存在しないか、または、所望により置換されたＣ_1-4アルキレンであり；
ｃは、存在しないか、または、所望により置換されたＣ_1-4アルキレンであり；
Ｘ¹は、ＯまたはＳであり；
Ｘ²は、ＯまたはＳであり；
Ｙ¹は、所望により置換されたＣ_10-30アルケニル、Ｃ_10-30アルキニル、Ｃ_10-30ヘテロアルケニルまたはＣ_10-30ヘテロアルキニルであり；
Ｌは、−(Ｌ^a)_d−(Ｌ^b)_e−(Ｌ^c)_f−
｛ここで、Ｌ^aは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
Ｌ^bは、所望により置換されたＣ_6-14アリーレンまたはＣ_5-13ヘテロアリーレンであり；
Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
ｄは、０または１であり；
ｅは、０または１であり；
ｆは、０または１である。
ただし、Ｌは、１個以上のヘテロ原子を含む。｝
であり；
Ｙ²は、所望により置換されたステロイドである。]
の化合物またはその薬学的に許容される誘導体によって表される。

【0045】

本発明の第３の態様は、式(III)：

【化12】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニルまたはＣ_5-20ヘテロアリール基を形成し；
ａは、メチレンであり；
ｂは、メチレンであり；
ｃは、存在せず；
Ｘ¹は、ＯまたはＳであり；
Ｘ²は、ＯまたはＳであり；
Ｙ¹は、所望により置換されたＣ_10-30アルケニル、Ｃ_10-30アルキニル、Ｃ_10-30ヘテロアルケニルまたはＣ_10-30ヘテロアルキニルであり；
Ｌは、−(Ｌ^a)_d−(Ｌ^b)_e−(Ｌ^c)_f−
｛ここで、Ｌ^aは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
Ｌ^bは、所望により置換されたＣ_6-14アリーレンまたはＣ_5-13ヘテロアリーレンであり；
Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
ｄは、０または１であり；
ｅは、０または１であり；
ｆは、０または１である。｝
であり；
Ｙ²は、所望により置換されたステロイドである。]
の化合物またはその薬学的に許容される誘導体によって表される。

【0046】

本発明の第４の態様は、式(IV)：

【化13】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニルまたはＣ_5-20ヘテロアリール基を形成し；
ａは、メチレンであり；
ｂは、メチレンであり；
ｃは、存在せず；
Ｘ¹は、ＯまたはＳであり；
Ｘ²は、ＯまたはＳであり；
Ｙ¹は、所望により置換されたＣ_10-30アルケニル、Ｃ_10-30アルキニル、Ｃ_10-30ヘテロアルケニルまたはＣ_10-30ヘテロアルキニルであり；
Ｌは、−(Ｌ^a)_d−(Ｌ^b)_e−(Ｌ^c)_f−
｛ここで、Ｌ^aは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
Ｌ^bは、所望により置換されたＣ_6-14アリーレンまたはＣ_5-13ヘテロアリーレンであり；
Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
ｄは、０または１であり；
ｅは、０または１であり；
ｆは、０または１である。
ただし、Ｌは、１個以上のヘテロ原子を含む。｝
であり；
Ｙ²は、所望により置換されたステロイドである。
の化合物またはその薬学的に許容される誘導体によって表される。

【0047】

本発明の第５の態様は、式(Ｖ)：

【化14】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニルまたはＣ_5-20ヘテロアリール基を形成し；
ａは、メチレンであり；
ｂは、メチレンであり；
ｃは、存在せず；
Ｘ¹は、Ｏであり；
Ｘ²は、Ｏであり；
Ｙ¹は、所望により置換されたＣ_10-30アルケニル、Ｃ_10-30アルキニル、Ｃ_10-30ヘテロアルケニルまたはＣ_10-30ヘテロアルキニルであり；
Ｌは、−(Ｌ^a)_d−(Ｌ^b)_e−(Ｌ^c)_f−
｛ここで、Ｌ^aは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
Ｌ^bは、所望により置換されたＣ_6-14アリーレンまたはＣ_5-13ヘテロアリーレンであり；
Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
ｄは、０または１であり；
ｅは、０または１であり；
ｆは、０または１である。
ただし、Ｌは、１個以上のヘテロ原子を含む。｝
であり；
Ｙ²は、所望により置換されたステロイドである。]
の化合物またはその薬学的に許容される誘導体によって表される。

【0048】

本発明の第６の態様は、式(VI)：

【化15】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニルまたはＣ_5-20ヘテロアリール基を形成し；
ａは、メチレンであり；
ｂは、メチレンであり；
ｃは、存在せず；
Ｘ¹は、Ｏであり；
Ｘ²は、Ｏであり；
Ｙ¹は、所望により置換されたＣ_10-30アルケニル、Ｃ_10-30アルキニル、Ｃ_10-30ヘテロアルケニルまたはＣ_10-30ヘテロアルキニルであり；
Ｌは、−Ｌ^c−
｛ここで、Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンである。｝
であり；
Ｙ²は、所望により置換されたステロイドである。]
の化合物またはその薬学的に許容される誘導体によって表される。

【0049】

本発明の第７の態様は、式(VII)：

【化16】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニルまたはＣ_5-20ヘテロアリール基を形成し；
ａは、メチレンであり；
ｂは、メチレンであり；
ｃは、存在せず；
Ｘ¹は、Ｏであり；
Ｘ²は、Ｏであり；
Ｙ¹は、所望により置換されたＣ_16-22アルケニル基であり；
Ｌは、−Ｌ^c−
｛ここで、Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンである。｝
であり；
Ｙ²は、所望により置換されたステロイドである。]
の化合物またはその薬学的に許容される誘導体によって表される。

【0050】

本発明の第８の態様は、式(VIII)：

【化17】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニルまたはＣ_5-20ヘテロアリール基を形成し；
ａは、メチレンであり；
ｂは、メチレンであり；
ｃは、存在せず；
Ｘ¹は、Ｏであり；
Ｘ²は、Ｏであり；
Ｙ¹は、所望により置換されたＣ_16-22アルケニル基であり；
Ｌは、−Ｌ^c−
｛ここで、Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンである。｝
であり；
Ｙ²は、ステロイドの環Ａの３位のヒドロキシ基を介して結合しているコレステロールであり、当該ヒドロキシ基の水素原子は存在しない。]
の化合物またはその薬学的に許容される誘導体によって表される。

【0051】

本発明の第９の態様は、ｐＫａが約５.１〜約７.４である式(IX)：

【化18】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニルまたはＣ_5-20ヘテロアリール基を形成し；
ａは、メチレンであり；
ｂは、メチレンであり；
ｃは、存在せず；
Ｘ¹は、ＯまたはＳであり；
Ｘ²は、ＯまたはＳであり；
Ｙ¹は、所望により置換されたＣ_10-30アルケニル、Ｃ_10-30アルキニル、Ｃ_10-30ヘテロアルケニルまたはＣ_10-30ヘテロアルキニルであり；
Ｌは、−(Ｌ^a)_d−(Ｌ^b)_e−(Ｌ^c)_f−
｛ここで、Ｌ^aは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
Ｌ^bは、所望により置換されたＣ_6-14アリーレンまたはＣ_5-13ヘテロアリーレンであり；
Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
ｄは、０または１であり；
ｅは、０または１であり；
ｆは、０または１である。
ただし、Ｌは、１個以上のヘテロ原子を含む。｝
であり；
Ｙ²は、所望により置換されたステロイドである。]
の化合物またはその薬学的に許容される誘導体によって表される。

【0052】

本発明の第１０の態様は、ｐＫａが約５.０〜約６.７である式(Ｘ)：

【化19】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニルまたはＣ_5-20ヘテロアリール基を形成し；
ａは、メチレンであり；
ｂは、メチレンであり；
ｃは、存在せず；
Ｘ¹は、ＯまたはＳであり；
Ｘ²は、ＯまたはＳであり；
Ｙ¹は、所望により置換されたＣ_10-30アルケニル、Ｃ_10-30アルキニル、Ｃ_10-30ヘテロアルケニルまたはＣ_10-30ヘテロアルキニルであり；
Ｌは、−(Ｌ^a)_d−(Ｌ^b)_e−(Ｌ^c)_f−
｛ここで、Ｌ^aは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
Ｌ^bは、所望により置換されたＣ_6-14アリーレンまたはＣ_5-13ヘテロアリーレンであり；
Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
ｄは、０または１であり；
ｅは、０または１であり；
ｆは、０または１である。
ただし、Ｌは、１個以上のヘテロ原子を含む。｝
であり；
Ｙ²は、所望により置換されたステロイドである。]
の化合物またはその薬学的に許容される誘導体によって表される。

【0053】

ステルス脂質
本発明は、脂質部分に連結している親水性頭部を含む“ステルス脂質”を含む。ステルス脂質のさらなる特徴を以下に示す。

【0054】

一つの態様において、式(XI)：

【化20】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
Ｚは、ＰＥＧ、ならびに、ポリ(オキサゾリン)、ポリ(エチレンオキシド)、ポリ(ビニルアルコール)、ポリ(グリセロール)、ポリ(Ｎ−ビニルピロリドン)、ポリ[Ｎ−(２−ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド]およびポリ(アミノ酸)をベースとするポリマー(ここで、ポリマーは直鎖であっても分枝鎖であってもよく、また、所望により置換されていてもよい。)から選択される親水性頭部であり；
ここで、Ｚは、ｎ個のサブユニットが重合したものであり；
ｎは、１０ユニットと２００ユニットの間のＺの平均重合度であり、ここで、ｎは、異なるポリマータイプについて最適化されており；
Ｌ₁は、エーテル(例えば−Ｏ−)、エステル(例えば−Ｃ(Ｏ)Ｏ−)、スクシネート(例えば−Ｏ(Ｏ)Ｃ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−Ｃ(Ｏ)Ｏ−))、カルバメート(例えば−ＯＣ(Ｏ)−ＮＲ'−)、カーボネート(例えば−ＯＣ(Ｏ)Ｏ−)、ケトン(例えば−Ｃ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ−)、カルボニル(例えば−Ｃ(Ｏ)−)、ウレア(例えば−ＮＲＣ(Ｏ)ＮＲ'−)、アミン(例えば−ＮＲ'−)、アミド(例えば−Ｃ(Ｏ)ＮＲ'−)、イミン(例えば−Ｃ(ＮＲ')−)、チオエーテル(例えば−Ｓ−)、キサントゲン酸エステル(例えば−ＯＣ(Ｓ)Ｓ−)およびホスホジエステル(例えば−ＯＰ(Ｏ)₂Ｏ−)(これらは何れも、０個、１個またはそれ以上のＺ基で置換されていてもよい。)を０個、１個、２個またはそれ以上含む、所望により置換されたＣ_1-10アルキレンまたはＣ_1-10ヘテロアルキレンリンカーであり；
ここで、Ｒ'は、−Ｈ、−ＮＨ−、−ＮＨ₂、−Ｏ−、−Ｓ−、ホスフェートまたは所望により置換されたＣ_1-10アルキレンから独立して選択され；
Ｘ₁およびＸ₂は、炭素原子、または、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−もしくはホスフェートから選択されるヘテロ原子から独立して選択され；
Ａ₁およびＡ₂は、Ｃ_6-30アルキル、Ｃ_6-30アルケニルおよびＣ_6-30アルキニルから独立して選択され、ここで、Ａ₁およびＡ₂は、同一であっても異なっていてもよいか、
あるいは、Ａ₁およびＡ₂は、それらが結合している炭素原子と一体となって、所望により置換されたステロイドを形成する。]
のステルス脂質またはその塩または薬学的に許容される誘導体を提供する。

【0055】

一つの態様において、本発明は、式(XII)：

【化21】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
ＰＥＧは、ポリ(エチレングリコール)サブユニットであり、ここで、ＰＥＧは、直鎖であっても分枝鎖であってもよく；
ｎは、１０ユニットと２００ユニットの間のＰＥＧの平均重合度であり、好ましくは約２３ユニット、約４５ユニットまたは約６８ユニットであり；
Ｌ₁は、エーテル、エステル、スクシネート、カルバメート、カーボネート、ケトン、カルボニル、ウレア、アミン、アミド、イミン、チオエーテル、キサントゲン酸エステルおよびホスホジエステル(これらは何れも、０個、１個またはそれ以上のＰＥＧ基によって置換されていてもよい。)を１個、２個またはそれ以上含む、所望により置換されたＣ_1-10アルキレンまたはＣ_1-10ヘテロアルキレンリンカーであり；
Ｘ₁およびＸ₂は、炭素または酸素から独立して選択され；
Ａ₁およびＡ₂は、Ｃ_6-30アルキル、Ｃ_6-30アルケニルおよびＣ_6-30アルキニルから独立して選択され、ここで、Ａ₁およびＡ₂同一であっても異なっていてもよいか、
あるいは、Ａ₁およびＡ₂は、それらが結合している炭素原子と一体となって、所望により置換されたステロイドを形成する。]
のステルス脂質またはその塩または薬学的に許容される誘導体を提供する。

【0056】

式(XI)および(XII)のステルス脂質は、例えば式(Ｉ)のカチオン性脂質と共に製剤化されるとき、以前の同等のステルス脂質と比較して、in vivo有効性が増大した脂質ナノ粒子を提供する。従って、本発明は、有効性と毒性を改善する可能性を有するステルス脂質を提供する。本発明において、これらのステルス脂質を含む組成物、および、細胞に生物活性薬物を送達するためのこれらのステルス脂質の使用が提供される。

【0057】

表８に示す通り、同じ方法で製剤化され、ステルス脂質が異なる以外は同一の組成物である２種の例示的脂質ナノ粒子は、肝臓に送達される。先行技術のステルス脂質S010を含み、第VII因子(“FVII”)に特異的なｓｉＲＮＡ構築物を送達する脂質ナノ粒子は、肝臓へ投与されたとき、in vivoで、７２.２％阻害であることを証明した。一方、ステルス脂
質S006を含む脂質ナノ粒子は、比較すると、in vivoで、８３.８％の第VII因子阻害であることを証明した。

【0058】

in vivoで、皮下腫瘍に送達するための表９に示した他の例において、ＰＥＧ／ステルス脂質を除いて同一の組成物を有する６種のナノ粒子を、ポロ様キナーゼ１(“ＰＬＫ１”)に特異的なｓｉＲＮＡの有効な送達について比較する。先行技術のステルス脂質S011
を含む脂質ナノ粒子は、腫瘍組織において、in vivoで、４６％のＰＬＫ１阻害であることを証明した。一方、ステルス脂質S004、S007、S009、S008およびS005を含む脂質ナノ粒子は、腫瘍組織において、in vivoで、それぞれ５６％、６５％、６４％、６０％および５２％のＰＬＫ１阻害であることを証明した。

【0059】

ステルス脂質S001〜S009およびS012〜S026は、個々におよび一群として、生物活性薬物、この場合、１種以上のｓｉＲＮＡの送達に使用するための製剤および治療用組成物に用いられるとき、改善された性質を示す。

【0060】

本発明において、新規ステルス脂質が提供される。本発明の一つの態様において、ステルス脂質はS001である。一つの態様において、ステルス脂質はS002である。一つの態様において、ステルス脂質はS003である。一つの態様において、ステルス脂質はS004である。
一つの態様において、ステルス脂質はS005である。一つの態様において、ステルス脂質はS006である。一つの態様において、ステルス脂質はS007である。一つの態様において、ステルス脂質はS008である。一つの態様において、ステルス脂質はS009である。一つの態様において、ステルス脂質はS012である。一つの態様において、ステルス脂質はS013である。一つの態様において、ステルス脂質はS014である。一つの態様において、ステルス脂質はS015である。一つの態様において、ステルス脂質はS016である。一つの態様において、ステルス脂質はS017である。一つの態様において、ステルス脂質はS018である。一つの態様において、ステルス脂質はS019である。一つの態様において、ステルス脂質はS020である。一つの態様において、ステルス脂質はS021である。一つの態様において、ステルス脂質はS022である。一つの態様において、ステルス脂質はS023である。一つの態様において、ステルス脂質はS024である。一つの態様において、ステルス脂質はS025である。一つの態様において、ステルス脂質はS026である。

【0061】

生物活性薬物を送達するための製剤
一般的に、先行技術では、ステルス脂質のみを変更することによって組織依存的有効性を制御していたところ、我々は、驚くべきことに、カチオン性脂質を変えることによって特定の組織に関する有効性を制御することができることを見出した。下に記す通り、生物活性薬物を送達するための脂質製剤を、製剤に含まれるカチオン性脂質のみを変更することによって、他より優先的に１つの細胞型または臓器を標的化するよう調節することができることを見出した。例えば、ｐＫａが約６.１以上であるカチオン性脂質は、肝臓を標的とする製剤において、ｐＫａが約６.１以下であるカチオン性脂質を含む製剤と比べて、かなり有効である。ｐＫａが約６.１以下であるカチオン性脂質を含む製剤は、比較すると、in vivoで腫瘍を標的とする製剤において、より有効である。原則として(例外がある)、腫瘍に送達するのに最も有効な脂質を有する製剤(下記により詳細に記載)は、腫瘍のタイプに依存して、特に、約５.２〜約６.３または約５.４〜約６.２または約５.８〜約６.１を含む、約５.０〜約６.７のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。一方、肝臓に送達するのに最も有効な脂質を有する製剤(下記により詳細に記載)は、約５.３〜約７.３を含み、約５.９〜約７.０を含み、一つの態様において、約６.２〜約６.８を含む、約５.１〜約７.４のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。

【0062】

一つの態様において、当業者は、望ましいｐＫａ範囲を有するカチオン性脂質、ステルス脂質、ヘルパー脂質、所望のアルキルレゾルシノールをベースとする脂質および所望により存在する中性脂質を、例えばリポソーム製剤、リポナノ粒子(ＬＮＰ)製剤などを含むin vivoで特定の細胞および組織に送達するための製剤に組み込むことによって、さらなる最適化が可能である。一つの態様において、これらの種々のタイプの脂質のモル比を調節することによって、さらなる最適化が行われる。一つの態様において、望ましい粒子サイズ、Ｎ／Ｐ比、製剤化方法、および／または投与レジメ(例えば時間経過に対する投与回数、実際の投与量(mg/kg)、投与のタイミング、他の治療薬との組み合わせなど)の１つ以上を調節することによって、さらなる最適化が行われる。上記態様に関する当業者に既知の種々の最適化方法は、本発明の一部とみなす。

【0063】

一つの態様において、治療有効量の生物活性薬物を送達するための製剤が、カチオン性脂質、ヘルパー脂質およびステルス脂質をそれぞれ少なくとも１種含むとき、本発明のカチオン性脂質が提供される。一つの態様において、当該製剤は、さらに、少なくとも１種の中性脂質を含む。一つの態様において、製剤は、腫瘍へ送達するための生物活性薬物を送達するのに最適化される。一つの態様において、製剤は、肝臓に送達するための生物活性薬物を送達するために最適化される。一つの態様において、製剤は、特定のタイプの生物活性薬物を送達するために最適化される。生物活性薬物のタイプの例は、例えば、抗体、コレステロール、ホルモン、抗ウイルス剤、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、核タンパク質、化学療法剤、低分子量薬物、ビタミン、補因子、ヌクレオシド、ヌクレオシド誘導体、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、酵素的核酸(enzymatic nucleic acid)、アンチセンス核酸、三本鎖形成オリゴヌクレオチド、２,５−Ａアンチセンスキメラ、アロザイム、アプタマー、リボザイム、デコイＲＮＡ分子およびそのアナログ、および、低分子核酸、例えば低分子干渉核酸(ｓｉＮＡ)、低分子干渉ＲＮＡ(ｓｉＲＮＡ)、二本鎖ＲＮＡ(ｄｓＲＮＡ)、ミクロＲＮＡ(ｍｉＲＮＡ)および低分子ヘアピン型ＲＮＡ(ｓｈＲＮＡ)を含むが、これらに限定されない。このような生物活性薬物は、所望により、その治療上の価値を増大させるために、１つ以上のさらなる化学的および生物学的薬物で最適化されてもよく、例えば安定性、半減期、効果および／または免疫原性などの生物学的性質を調節する修飾を行ってもよい。

【0064】

腫瘍に治療薬を送達するために、好ましい製剤は、このような投与を必要とする対象において、治療標的の活性を有効に調節するのに十分な量の生物活性薬物を送達するものから選択される。

【0065】

生物活性薬物がＲＮＡｉ構築物であるとき、有効量のＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＮＡまたはｓｈＲＮＡは、少なくとも２０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上または１００％までの、標的細胞中で発現される標的ｍＲＮＡのノックダウン(ＫＤ)を提供する量である。一般的に、有効な処置に必要とされる治療上関連するＫＤの範囲の選択は、標的化経路、細胞型または組織、および／または処置される疾患または障害によって変化し得る。

【0066】

本明細書において、Ｒ¹およびＲ²が、それらが結合している窒素原子と一体となって、環状の“頭部”を形成している、上に記載されたタイプのカチオン性脂質は、脂質製剤に使用するのに有効なカチオン性脂質であることを報告する。さらに、本明細書において
、環状の頭部の存在が、脂質製剤の挙動を予測されないほど変えること、特にそれが他の置換基の影響を変えることを報告する。

【0067】

本発明のカチオン性脂質化合物の頭部(すなわちＲ¹−Ｎ−Ｒ²)は、１個の第３級アミン基を含む。この特徴は、化合物の挙動を、例えば、それらが、例えば第４級(カチオン性)アミン基を有するときと異なるようにする。なぜならば、窒素の四級化がその原子に固定化された電荷を据え、そのｐＨ応答性を除き、化合物の極めて異なった挙動を生じさせるからである。

【0068】

一つの具体例において、本発明の化合物E0027およびE0014中の環状頭部の存在は、全体として、頭部のみが異なる脂質E0173およびE0172と比較して、製剤において有効な送達剤として作用するカチオン性脂質の能力を変化させる。例えば、下により詳細に記載する通り、−Ｎ(Ｍｅ)₂頭部を有する特定のカチオン性脂質(E0173, CLinDMA)を含む製剤は、第VII因子に特異的なＲＮＡｉ構築物を送達する製剤に用いられるとき、in vivoで、第VII因子を９８.５％阻害することが証明される。Ｌ−アルキレン置換基をＬ−ヘテロアルキレン置換基と置き換えることによって修飾した場合(下に矢印で印を付けた)、化合物(E0172)の活性は減少し、in vivoで第VII因子を４０.８％阻害することが見出される。

【化22】

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【0069】

対照的に、本発明者らは、環状の頭部が存在するとき、Ｌ−アルキレンのＬ−ヘテロアルキレン置換基への変更は逆の作用があり、化合物の有効性が増大することを見出した。
例：

【化23】

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【0070】

従って、本発明の一つの態様は、Ｌが１個以上のヘテロ原子を含むこれらの化合物を含む。上で述べた通り、ＣＬｉｎＤＭＡ頭部を有する化合物から出発した当業者は、２個以上のヘテロ原子を含むＬ基が、最終化合物の有効性を減少させることしか発見しなかったであろうから、当業者は、ＣＬｉｎＤＭＡの開示から出発してもこのような化合物に至らず、そのため、このような基を含む化合物は提供されなかったであろう。

【0071】

如何なる理論にも束縛されるつもりはないが、一つの可能性として、本発明の脂質製剤の有効性は、ｐＫａに関連する。例えば、Ｌ中のヘテロ原子の数を変更することで、または、頭部の性質を変更することで、構造を変えることによって、カチオン性脂質のｐＫａを調節することができる。

【0072】

一つの例において、例えば、肝臓において、第VII因子をそれぞれ９８.５％、４０.８％、３０.３％および９７.４％阻害する上記製剤(カチオン性脂質E0172、E0171、E0027およびE0014を含む)を用いる表８におけるin vivoでのｓｉＲＮＡ試験について、そのｐＫａ値は、それぞれ６.７、８.５、５.７および６.４であることが見出される。

【0073】

肝臓への薬物の送達に関して、本発明の一つの態様において、原則として(例外がある)、このような製剤に使用するのに最も有効なカチオン性脂質は、約５.１〜約７.４のｐＫａを有すると考えられる。一つの態様において、肝臓送達のための本発明の製剤のために、約５.３〜約７.３のｐＫａを有するカチオン性脂質を提供する。一つの態様において、肝臓送達のための本発明の製剤のために、約５.９〜約７.０のｐＫａを有するカチオン性脂質を提供する。一つの態様において、肝臓に生物活性薬物を送達する製剤に使用するためには、好ましい脂質は、約６.２〜約６.８のｐＫａ範囲を有する。

【0074】

本発明の驚くべき発見は、腫瘍組織が、有効性について、異なる最適ｐＫａ範囲を有することである。従って、上の段落のｐＫａ範囲は、脂質が生物活性薬物を肝臓細胞に送達することが意図されている限り、適用される。

【0075】

腫瘍への生物活性薬物の送達に関して、原則として(例外がある)、このような製剤に使用するのに最も有効な本発明のカチオン性脂質は約５.０〜約６.７のｐＫａを有し、従って、それが、一つの態様において腫瘍に送達するのに好ましい脂質である。

【0076】

一つの一般的な態様において、生物活性薬物を１つ以上の腫瘍に送達するのに使用するための本発明の製剤において、約５.０〜約６.７のｐＫａを有するカチオン性脂質を提供する。一つの態様において、生物活性薬物を１つ以上の腫瘍に送達するのに使用するための本発明の製剤において、約５.２〜約６.３のｐＫａを有するカチオン性脂質を提供する。一つの態様において、生物活性薬物を１つ以上の腫瘍に送達するのに使用するための本発明の製剤において、約５.４〜約６.２のｐＫａを有するカチオン性脂質を提供する。一つの態様において、生物活性薬物を１つ以上の腫瘍に送達するのに使用する本発明の製剤において、約５.８〜約６.１のｐＫａを有するカチオン性脂質を提供する。

【0077】

一つの態様において、本製剤に用いられるカチオン性脂質は、生物活性薬物を特定の腫瘍または細胞型に送達するのに最適化されたｐＫａを有する。腫瘍タイプは、原発性腫瘍であっても転移性腫瘍であってもよい。

【0078】

一つの具体的な態様において、Ｈｅｐ３Ｂ様腫瘍への送達に最適化された製剤は、約５.０〜約６.７のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。一つの具体的な態様において、Ｈｅｐ３Ｂ様腫瘍への送達に最適化された製剤は、約５.３〜約６.３のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。一つの具体的な態様において、Ｈｅｐ３Ｂ様腫瘍への送達に最適化された製剤は、約５.４〜約５.９のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。一つの具体的な態様において、Ｈｅｐ３Ｂ様腫瘍への送達に最適化された製剤は、約５.８〜約５.９のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。

【0079】

一つの具体的な態様において、ＨｅｐＧ２様腫瘍への送達に最適化された製剤は、約５.２〜約６.２のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。一つの具体的な態様において、Ｈｅｐ３Ｂ様腫瘍への送達に最適化された製剤は、約５.３〜約６.２のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。一つの具体的な態様において、Ｈｅｐ３Ｂ様腫瘍への送達に最適化された製剤は、約５.６〜約６.１のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。一つの具体的な態様において、ＨｅｐＧ２様腫瘍への送達に最適化された製剤は、約６.１のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。

【0080】

一つの具体的な態様において、７８６−０様腎腫瘍またはその転移腫瘍への送達に最適化された製剤は、約６.１のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。

【0081】

他の組織、適応、腫瘍タイプまたは投与経路が、好ましい脂質ｐＫａ範囲を有するとの仮説を立てることは当然である。また、リポソームまたはＬＮＰ製剤について、種々の組織、適応、腫瘍タイプまたは投与経路が、好ましいカチオン性脂質ｐＫａ範囲、Ｎ／Ｐ比、粒子サイズ、用いられるカチオン性脂質、用いられるステルス脂質、用いられるヘルパー脂質、所望により選択された中性脂質の使用、各脂質成分の相対的モル比、製剤方法、送達されるべき生物活性薬物、および、投与量を含む投与レジメを有することの仮説を立てることも当然である。これらの局面をそれぞれ最適化することは、それぞれ独立にまたは連係した方法で、下に記載されており、このような最適化の多くの具体的な局面は、過度の実験を必要とせず、当業者の能力の範囲内であると考えられる。

【0082】

製剤は、当業者によって、例えば、標的となる細胞のタイプまたは臓器に最適化されたカチオン性脂質のｐＫａ；用いられるカチオン性脂質；用いられるステルス脂質；用いられるヘルパー脂質；中性脂質が存在するか否か；存在するならば、用いられる中性脂質の選択；選択されたヘルパー脂質、所望により存在する中性脂質、ステルス脂質およびカチオン性脂質のモル比；Ｎ／Ｐ比；粒子サイズ；投与レジメ；投与量；製剤方法などの個別の選択を含むがこれらに限定されない、製剤の他の局面を調節することによって、最適化され得る。

【0083】

式(Ｉ)〜(Ｘ)の化合物の態様
ａ、ｂおよびｃ
一つの態様において、ａは、所望により置換されたＣ_1-2アルキレンである。一つの態様において、ａは、所望により置換されたＣ₁アルキレンである。

【0084】

一つの態様において、ｂは、所望により置換されたＣ_0-2アルキレンである。一つの態様において、ｂは、所望により置換されたＣ₁アルキレンである。

【0085】

一つの態様において、ｃは、存在しないか、または、所望により置換されたＣ₁アルキレンである。一つの態様において、ｃは、存在しない。

【0086】

一つの態様において、ａ、ｂおよびｃが、存在するならば、置換されていない。

【0087】

カチオン性脂質の頭部
一つの態様において、Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニル基、Ｃ₅ヘテロアリールまたはＣ₆ヘテロアリール基を形成する。一つの態様において、Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニルまたはＣ_3-20ヘテロシクロアルキニル基を形成する。
一つの態様において、Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル基を形成する。

【0088】

一つの態様において、Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換された環状Ｃ_5-16基を形成する。一つの態様において、Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換された環状Ｃ_5-12基を形成する。一つの態様において、Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換された環状Ｃ₅基、環状Ｃ₆基または環状Ｃ₇基を形成する。一つの態様において、Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換された環状Ｃ₅基または環状Ｃ₆基を形成する。

【0089】

本発明の一つの態様において、Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、少なくとも１個の酸素原子を含む環状基を形成する。

【0090】

一つの態様において、Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、表１に示した頭部Ｈ¹〜Ｈ⁵²の少なくとも１つから選択されるものである。
表１：Ｈ¹〜Ｈ⁵²と名付けられた部分

【表1】

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【表2】

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【0091】

【表3】

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【表4】

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【0092】

カチオン性脂質のｐＫａ
一つの態様において、望ましい範囲のｐＫａ範囲を有するカチオン性脂質は、特に生物活性薬物を送達する製剤の場合を含む本発明において好ましい。

【0093】

上に記載した通り、および下に示す通り、約５.１〜約７.４のｐＫａを有するカチオン性脂質は、一般的に、肝臓を標的とする製剤に用いられるとき有効である。一つの態様において、カチオン性脂質のｐＫａは、肝臓への送達について、約５.１〜約７.４である。
一つの態様において、肝臓を特異的に標的とするための製剤に使用するための、約５.３〜約７.３のｐＫａを有するカチオン性脂質である。従って、一つの態様において、カチオン性脂質のｐＫａは、肝臓への送達について、約５.３〜約７.３である。一つの態様において、カチオン性脂質のｐＫａは、肝臓への送達について、約５.９〜約７.０である。
一つの態様において、カチオン性脂質のｐＫａは、肝臓への送達について、約６.２〜約６.８である。

【0094】

上に記載した通り、および下に実験に基づいて説明する通り、約５.０〜約６.７のｐＫａを有するカチオン性脂質は、腫瘍に生物活性薬物を送達するための製剤に用いられるとき、特に有効である。従って、一つの態様において、カチオン性脂質のｐＫａは、腫瘍への送達について、約５.０〜約６.７である。一つの態様において、カチオン性脂質のｐＫａは、腫瘍への送達について、約５.２〜約６.３である。一つの態様において、カチオン性脂質のｐＫａは、腫瘍への送達について、約５.４〜約６.２である。一つの態様において、カチオン性脂質のｐＫａは、腫瘍への送達について、約５.８〜約６.１である。一般的な態様において、カチオン性脂質のｐＫａは、腫瘍または腫瘍細胞への生物活性薬物の送達について、約６.１以下である。

【0095】

生物活性薬物を送達する製剤に使用するためのカチオン性脂質のｐＫａは、さらに、腫瘍のタイプに依存して、最適化できる。例えば、表９、１０および１１に示す通り、ＰＬＫ１ ｍＲＮＡに特異的なＲＮＡｉ構築物は、ＬＮＰ製剤中のカチオン性脂質のｐＫａと相関する方法で、マウスの脇腹に注射されたＨｅｐ３Ｂ、ＨｅｐＧ２および７８６−０腎腫瘍に異なって送達される。さらなる分析により、in vivoでＨｅｐ３Ｂ腫瘍においてＰＬＫ１をノックダウンするのに最適なｐＫａ範囲がＨｅｐＧ２および７８６−０腫瘍に対する最適なｐＫａ範囲と異なることは明らかであるが、両方の範囲とも、上の段落に記載した５.０〜６.７の一般的な範囲内であり、そして全ての範囲は、一般的に、肝臓への送達に最適なものより低いｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。

【0096】

従って、一つの態様において、in vivoでのＨｅｐ３Ｂ様腫瘍への生物活性薬物の送達について、本発明のカチオン性脂質は、約５.０〜約６.７のｐＫａ範囲を有する。一つの態様において、カチオン性脂質のｐＫａは、Ｈｅｐ３Ｂ様腫瘍への送達について、約５.３〜約６.３である。一つの態様において、カチオン性脂質のｐＫａは、Ｈｅｐ３Ｂ様腫瘍について、約５.４〜約５.９である。一つの態様において、カチオン性脂質のｐＫａは、Ｈｅｐ３Ｂ様腫瘍への送達について、約５.８〜約５.９である。

【0097】

さらに、一つの態様において、in vivoでＨｅｐＧ２様腫瘍への生物活性薬物の送達について、本発明のカチオン性脂質は、約５.２〜約６.２のｐＫａ範囲を有する。一つの態様において、カチオン性脂質のｐＫａは、ＨｅｐＧ２様腫瘍への送達について、約５.３〜約６.２である。一つの態様において、カチオン性脂質のｐＫａは、ＨｅｐＧ２様腫瘍への送達について、約５.６〜約６.１である。一つの態様において、カチオン性脂質のｐＫａは、ＨｅｐＧ２様腫瘍または７８６−０腎腫瘍様腫瘍への送達について、約６.１である。

【0098】

Ｘ¹およびＸ²
一つの態様において、Ｘ¹はＯである。他の態様において、Ｘ²はＯである。一つの態様において、Ｘ¹およびＸ²の両方がＯである。

【0099】

リンカー
一つの態様において、Ｌは少なくとも１個のヘテロ原子を含む。これは、Ｘ²およびＹ²の間を直接連結する鎖が、少なくとも１個のヘテロ原子を有することを意味する。言い換えれば、Ｌ上の置換基中の何れのヘテロ原子も、これらの目的については、考慮されない。一つの態様において、Ｌは少なくとも１個のＯ原子を含む。

【0100】

一つの態様において、Ｌは少なくとも２個のヘテロ原子を含む。一つの態様において、Ｌは少なくとも２個のＯ原子を含む。

【0101】

一つの態様において、Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキレンである。一つの態様において、Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキレンであり、ｄおよびｅは、両方ともゼロ(０)である。

【0102】

一つの態様において、Ｌ^cは、式Ｌ^c-i〜Ｌ^c-xxxxiiiの１つから選択される。一つの態様において、Ｌ^cは、式Ｌ^c-i〜Ｌ^c-xxxxiiiの１つから選択され、ｄおよびｅは、両方ともゼロ(０)である。

【0103】

【表5】

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【0104】

【表6】

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【0105】

【表7】

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【0106】

Ｌが少なくとも１個のヘテロ原子を含む基が好ましいため、Ｌ^cは、好ましくは、Ｌ^c-i、Ｌ^c-iv〜Ｌ^c-viiおよびＬ^c-ix〜Ｌ^c-xxxxiiiから選択される。

【0107】

一つの態様において、Ｌ^cは所望により置換されたＣ_1-15ヘテロアルキレンである。
一つの態様において、Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-11基である。一つの態様において、Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-9基である。一つの態様において、Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_3-8基である。一つの態様において、Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_4-7基である。一つの態様において、Ｌ^cは、所望により置換されたＣ₅、Ｃ₆またはＣ₇基である。

【0108】

一つの態様において、ｄは０であり；ｅは０であり；ｆは１である。一つの態様において、ｄは０であり；ｅは０であり；ｆは１であり；Ｌ^cは、上に示した鎖長の範囲内のヘテロアルキレンである。

【0109】

カチオン性脂質におけるＹ¹
一つの態様において、Ｙ¹はＣ_12-28基である。一つの態様において、Ｙ¹は所望により置換されたＣ_14-26基である。一つの態様において、Ｙ¹は所望により置換されたＣ_16-24基である。一つの態様において、Ｙ¹は所望により置換されたＣ_16-22基である。一つの態様において、所望により置換されたＹ¹鎖は、１８、１９、２０または２１原子長である。

【0110】

上に示した炭素数の範囲内で、Ｙ¹は、好ましくは、アルケニルまたはヘテロアルケニルである。

【0111】

一つの態様において、Ｙ¹は、少なくとも１個のアルケニル基を有する。一つの態様において、Ｙ¹は、１個、２個または３個のアルケニル基である。

【0112】

一つの態様において、Ｙ¹は、ω３位でアルケニル基を有する。他の態様において、Ｙ¹は、ω６位でアルケニル基を有する。他の態様において、Ｙ¹は、ω９位でアルケニル基を有する。一つの態様において、Ｙ¹は、ω３位、ω６位およびω９位のうち２箇所または３箇所でアルケニル基を有する。一つの態様において、Ｙ¹は、ω６位およびω９位で不飽和である。他の態様において、Ｙ¹は、ω３位、ω６位およびω９位で不飽和である。一つの態様において、Ｙ¹は、ω９位で不飽和である。

【0113】

一つの態様において、Ｙ¹は、少なくとも１個のｃｉｓ不飽和アルケニル基を有する。
一つの態様において、Ｙ¹は、少なくとも２個のｃｉｓ不飽和アルケニル基を有する。一つの態様において、Ｙ¹は、少なくとも３個のｃｉｓ不飽和アルケニル基を有する。少なくとも１個のｃｉｓ不飽和アルケニル基は、ω３位、ω６位およびω９位の１箇所、２箇所または３箇所であってもよい。脂質の鎖中の不飽和は、MacLachlan et al., Journal of Controlled Release 107 (2005) 276-287において議論されている。

【0114】

一つの態様において、Ｙ¹は、表２に示されたＹ^1-i〜Ｙ^1-viiから選択される。
表２：Ｙ^1-i〜Ｙ^1-viiと名付けられたＹ¹に関連した部分

【表8】

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【0115】

Ｙ²
一つの態様において、Ｙ²は、所望により置換されたステロイド上の酸素原子を介してＬに結合している。一つの態様において、Ｙ²は、ステロイドの環Ａの３位で、酸素原子を介してＬに結合している。一つの態様において、Ｙ²は、ステロイドの環Ａの３位のヒドロキシ基の水素原子が除かれたステロールである(Ｌへの結合は、当該ヒドロキシ基の酸素原子を介したものである)。

【0116】

一つの態様において、当該ステロールは、アンナステロール(annasterol)；アベナステロール;β−シトステロール；ブラシカステロール；カルシフェロール；カンプエステロール；カリノステロール(chalinosterol)；チャイナステロール(chinasterol)；コレスタノール；コレステロール；コプロスタノール；シクロアルテノール；デヒドロコレステロール；デスモステロール；ジヒドロカルシフェロール；ジヒドロコレステロール；ジヒドロエルゴステロール；ジノステロール；エピコレステロール；エルゴステロール；フコステロール；ヘキサヒドロルミステロール；ヘキサオール；ヒドロキシコレステロール；ラノステロール；ルミステロール；パルケオール；ポリフェラステロール；サリンゴステロール；シトスタノール；シトステロール；スチグマスタノール；スチグマステロール；ウェインベルステロール；チモステロール(zymosterol)；ステロール胆汁酸(例えばコール酸；ケノデオキシコール酸；グリココール酸；タウロコール酸；デオキシコール酸；およびリトコール酸)；および／またはそれらの薬学的に関連する塩または薬学的に許容される誘導体からなる群から選択されるものである。
一つの態様において、ステロールは、コレステロールである。

【0117】

生物活性薬物の送達に使用するための具体的な脂質
新規の本発明のカチオン性脂質およびステルス脂質が、例えば生物活性薬物を含む治療上許容される薬物の送達に用いられ得る。カチオン性脂質、ステルス脂質および他のタイプの脂質を含む製剤が、本明細書に記載されている。本明細書に開示された脂質は、新規であり、有用であると考えられるが、下に示す例示的で非拘束的開示において、さらに詳細に示す通り、治療使用のために、特定の特性が他より好ましい。一つの態様において、リポソーム、脂質ナノ粒子または他のこのような脂質製剤は、さらに、生物学的に有効な薬物を含む。一つの態様において、リポソーム、脂質ナノ粒子または他のこのような脂質製剤は、空である。

【0118】

一つの態様において、製剤に使用するための個別の脂質成分は、キットで提供される。
一つの態様において、キットは、脂質製剤を作製するための説明書を含む。キットは、予め作られた製剤を含んでも、投与前に混合を必要とする個別の成分または一部の成分を含んでもよい。キットは、さらに、コントロール、緩衝液、容器および送達成分など(これらに限定されない)の追加の成分を提供してもよいし、本明細書に記載された本発明の脂質および成分に限定されてもよい。

【0119】

一つの態様において、キットは、カチオン性脂質、ステルス脂質、ヘルパー脂質および／または所望により存在する中性脂質の１つ以上を含むが、これらに限定されない、少なくとも１種のリポソームまたはリポソーム成分を含む。一つの態様において、キットは、さらに、生物活性薬物を含む。一つの態様において、キットは、さらに、コントロール脂質、またはコントロール薬物、コントロールリポソーム製剤、着色剤、緩衝剤、使用説明書などを１つ以上含む。他の態様において、リポソーム製剤は、予め混合されている。キットの１つ以上の化学成分は、脱水和された形態であっても水和物の形態であってもよい。本明細書に記載された種々の化合物および組成物を凍結乾燥で脱水するための、当技術分野で既知の種々の方法の何れもが使用され得る。

【0120】

本発明の一つの局面において、下に例示された具体的な化合物の何れか１つまたはその薬学的に許容される誘導体が提供される。

【0121】

一つの態様において、本化合物は、肝臓に生物活性薬物を送達するためのものであり、本化合物は、E0024、E0014、E0052、E0118、E0175、E0177またはE0083の１種以上から選択される。一つの態様において、肝臓に生物活性薬物を送達する組成物は、E0024、E0014、E0052、E0118またはE0083から選択される１種以上の化合物を含む。一つの態様において、肝臓に生物活性薬物を送達する組成物は、化合物E0024を含む。一つの態様において、肝臓に生物活性薬物を送達する組成物は、化合物E0014を含む。一つの態様において、肝臓に生物活性薬物を送達する組成物は、化合物E0052を含む。一つの態様において、肝臓に生物活性薬物を送達する組成物は、化合物E0118を含む。一つの態様において、肝臓に生物活性薬物を送達する組成物は、化合物E0083を含む。

【0122】

一つの態様において、本化合物は、腫瘍に生物活性薬物を送達するためのものであり、本化合物は、E0011、E0008、E0025、E0026、E0076、E0077、E0085またはE0088の１種以上から選択される。一つの態様において、腫瘍に生物活性薬物を送達する組成物は、E0011、E0008、E0025、E0026、E0076、E0077、E0085またはE0088から選択される１種以上の化合物を含む。一つの態様において、腫瘍に生物活性薬物を送達する組成物は、化合物E0011を含む。一つの態様において、腫瘍に生物活性薬物を送達する組成物は、化合物E0008を含む。一つの態様において、腫瘍に生物活性薬物を送達する組成物は、化合物E0025を含む。一つの態様において、腫瘍に生物活性薬物を送達する組成物は、化合物E0026を含む。一つの態様において、腫瘍に生物活性薬物を送達する組成物は、化合物E0076を含む。
一つの態様において、腫瘍に生物活性薬物を送達する組成物は、化合物E0077を含む。一つの態様において、腫瘍に生物活性薬物を送達する組成物は、化合物E0085を含む。一つの態様において、腫瘍に生物活性薬物を送達する組成物は、化合物E0088を含む。

【0123】

本明細書に記載された脂質を１種以上含むリポソーム、脂質ナノ粒子および他のこのような脂質製剤は、in vitroまたはin vivoの何れかで、細胞または組織に核酸組成物を送達するのに有用である。治療関連核酸組成物は、疾患または障害に関連する１つ以上の遺伝子に特異的であるＲＮＡｉ剤であって、細胞または組織中の内在性配列をＲＮＡｉ剤で標的化することが、治療効果または予防効果をもたらすＲＮＡｉ剤を含む。

【0124】

非拘束的原則として、標的阻害の治療有効量の特にＲＮＡｉ剤を含む生物活性薬物の送達によって、標的が肝臓内で発現されたとき、少なくとも７０％の標的阻害を起こす。一つの態様において、肝臓にＲＮＡｉを送達する製剤に提供されるとき、本発明のカチオン性脂質は、少なくとも７０％標的阻害を提供する。肝臓用に製剤化されるとき、少なくとも７０％ ＫＤを提供するカチオン性脂質は、E0007、E0008、E0011、E0014、E0015、E0016、E0017、E0018、E0019、E0022、E0024、E0025、E0026、E0032、E0034、E0040、E0042、E0043、E0045、E0048、E0049、E0051、E0052、E0053、E0054、E0055およびE0118を含むが、これらに限定されない。一つの態様において、肝臓にＲＮＡｉを送達する製剤に添加したとき、本発明のカチオン性脂質は、少なくとも８０％標的阻害を提供する。肝臓用に製剤化されるとき、少なくとも８０％ ＫＤを提供するカチオン性脂質は、E0008、E0011、E0014、E0016、E0017、E0018、E0019、E0022、E0024、E0025、E0026、E0032、E0034、E0040、E0042、E0043、E0045、E0048、E0052、E0053、E0054、E0055およびE0118を含むが、これらに限定されない。一つの態様において、肝臓にＲＮＡｉを送達する製剤に添加したとき、本発明のカチオン性脂質は、少なくとも９０％標的阻害を提供する。肝臓用に製剤化されるとき、少なくとも９０％ ＫＤを提供するカチオン性脂質は、E0011、E0014、E0017、E0018、E0024、E0025、E0026、E0040、E0043、E0045、E0052、E0053、E0054、E0055およびE0118を含むが、これらに限定されない。一つの態様において、肝臓にＲＮＡｉを送達する製剤に添加したとき、本発明のカチオン性脂質は、少なくとも９５％標的阻害を提供する。肝臓用に製剤化されるとき、少なくとも９５％ ＫＤを提供するカチオン性脂質は、E0014、E0017、E0018、E0024、E0026、E0040、E0043、E0052、E0054、E0055およびE0118を含むが、これらに限定されない。一つの態様において、肝臓にＲＮＡｉを送達する製剤に添加したとき、本発明のカチオン性脂質は、少なくとも９８％標的阻害を提供する。肝臓用に製剤化されるとき、少なくとも９８％ ＫＤを提供するカチオン性脂質は、E0014、E0017、E0018、E0024、E0052、E0054およびE0118を含むが、これらに限定されない。

【0125】

非拘束的原則として、標的阻害の治療有効量の特にＲＮＡｉ剤を含む生物活性薬物の送達によって、標的が腫瘍であるとき、少なくとも５０％の標的阻害を起こす。一つの態様において、腫瘍または腫瘍細胞にＲＮＡｉを送達する製剤に添加したとき、本発明のカチオン性脂質は、少なくとも５０％標的阻害を提供する。腫瘍または腫瘍細胞用に製剤化されるとき、少なくとも５０％ ＫＤを提供するカチオン性脂質は、E0008、E0011、E0025、E0026、E0075、E0076、E0077、E0085、E0088、E0095、E0104、E0178およびE0179を含むが、これらに限定されない。一つの態様において、腫瘍または腫瘍細胞にＲＮＡｉを送達する製剤に添加したとき、本発明のカチオン性脂質は、少なくとも６０％標的阻害を提供する。腫瘍または腫瘍細胞用に製剤化されるとき、少なくとも６０％ ＫＤを提供するカチオン性脂質は、E0008、E0011、E0025、E0026、E0075、E0076、E0077、E0085およびE0088を含むが、これらに限定されない。一つの態様において、腫瘍または腫瘍細胞にＲＮＡｉを送達する製剤に添加したとき、本発明のカチオン性脂質は、少なくとも７０％標的阻害を提供する。腫瘍または腫瘍送達用に製剤化されるとき、少なくとも７０％ ＫＤを提供するカチオン性脂質は、E0011、E0025、E0026、E0075、E0076、E0077およびE0088を含むが、これらに限定されない。一つの態様において、腫瘍または腫瘍細胞にＲＮＡｉを送達する製剤に添加したとき、本発明のカチオン性脂質は、少なくとも８０％標的阻害を提供する。腫瘍または腫瘍細胞用に製剤化されるとき、少なくとも８０％ ＫＤを提供するカチオン性脂質は、E0008、E0025およびE0076を含むが、これらに限定されない。

【0126】

具体的な態様において、標的阻害の治療有効量の特にＲＮＡｉ剤を含む生物活性薬物の送達によって、標的がＨｅｐＧ２様腫瘍または７８６−０様腫瘍であるとき、少なくとも３０％の標的阻害を起こす。一つの具体的な態様において、本発明のカチオン性脂質は、ＨｅｐＧ２様腫瘍または７８６−０様腫瘍にＲＮＡｉを送達する製剤に添加したとき、少なくとも３０％標的阻害を提供し、E0056、E0076、E0085、E0104、E0175、E0176およびE0177を含む。一つの具体的な態様において、ＨｅｐＧ２様腫瘍または７８６−０様腫瘍にＲＮＡｉを送達する製剤に添加したとき、本発明のカチオン性脂質は、少なくとも３０％標的阻害を提供し、E0085、E0175およびE0177を含む。

【0127】

肝臓に送達するための具体的なカチオン性脂質
一つの態様において、好ましいカチオン性脂質は、E0014である。一つの態様において、好ましいカチオン性脂質は、E0017である。一つの態様において、好ましいカチオン性脂質は、E0018である。一つの態様において、好ましいカチオン性脂質は、E0024である。
一つの態様において、好ましいカチオン性脂質は、E0052である。一つの態様において、好ましいカチオン性脂質は、E0054である。一つの態様において、好ましいカチオン性脂質は、E0118である。

【0128】

一つの態様において、肝臓に生物活性薬物を送達するのに好ましい製剤は、約５.１〜約７.４のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。一つの態様において、肝臓に生物活性薬物を送達するのに好ましい製剤は、約５.３〜約７.３のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。一つの態様において、肝臓に生物活性薬物を送達するのに好ましい製剤は、約５.９〜約７.０のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。一つの態様において、肝臓に生物活性薬物を送達するのに好ましい製剤は、約６.２〜約６.８のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。一つの態様において、肝臓に生物活性薬物を送達するのに好ましい製剤は、約６.１以上のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。

【0129】

腫瘍に送達するための具体的なカチオン性脂質
一つの態様において、好ましいカチオン性脂質は、E0008である。一つの態様において、好ましいカチオン性脂質は、E0025である。一つの態様において、好ましいカチオン性脂質は、E0076である。一つの態様において、好ましいカチオン性脂質は、E0085である。
一つの態様において、好ましいカチオン性脂質は、E0175である。一つの態様において、好ましいカチオン性脂質は、E0177である。

【0130】

一つの態様において、in vivoで腫瘍に生物活性薬物を送達するのに好ましい製剤は、約５.０〜約６.７のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。一つの態様において、in vivoで腫瘍に生物活性薬物を送達するのに好ましい製剤は、約５.２〜約６.３のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。一つの態様において、in vivoで腫瘍に生物活性薬物を送達するのに好ましい製剤は、約５.４〜約６.２のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。一つの態様において、in vivoで腫瘍に生物活性薬物を送達するのに好ましい製剤は、約５.８〜約６.１のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。一つの態様において、腫瘍または腫瘍細胞に生物活性薬物を送達するのに好ましい製剤は、約６.１以下のｐＫａを有するカチオン性脂質を含む。

【0131】

医薬組成物および製剤
本発明は、少なくとも１種の本発明のカチオン性脂質化合物を含む医薬組成物を提供する。本発明は、少なくとも１種の本発明のステルス脂質を含む医薬組成物を提供する。一つの態様において、少なくとも１種の他の脂質成分が存在する。このような組成物はまた、所望により１種以上の他の脂質成分と組み合わせた生物活性薬物を含んでもよい。一つの態様において、１種以上の成分、組成物および／または薬物が、キット中に提供される。１種以上の生物活性薬物と組み合わせて本発明の脂質を含む組成物は、一つの態様において、例えば、細胞または組織に、治療有効量の１種以上の生物活性薬物を送達するのに使用するための製剤として提供される。一つの態様において、細胞または組織は、処置または予防を必要とする対象における細胞または組織である。一つの態様において、対象は、治療有効量の生物活性薬物を必要とする患者である。本明細書で用いられるとき、対象は、ヒトおよび非ヒト動物の双方を含む。

【0132】

他の脂質成分は、カチオン性脂質、(所望の)中性脂質、ヘルパー脂質、ステルス脂質およびアルキルレゾルシノールをベースとする脂質からなる群から１種以上選択されるものであり得る。一つの態様において、本発明は、(ａ) カチオン性脂質、例えば式Ｉ〜Ｘの何れか１つの化合物、および／または本発明のE0001〜E0171およびE0175〜E0180；(ｂ) 所望により存在する中性脂質、例えばＤＳＰＣ；(ｃ) ヘルパー脂質、例えばコレステロールを含むもの；(ｄ) ステルス脂質、例えば式XIまたはXIIの何れか１つ、または、S001〜S009およびS012〜S026の何れか１つ以上、または、１,２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−[メトキシ(ポリエチレングリコール) ２０００](カタログ番号 880150P, Avanti Polar Lipids)を含む組成物を提供する。一つの態様において、脂質成分は、リポソーム製剤、例えばナノ粒子などの中に存在する。一つの態様において、リポソーム製剤は、さらに、生物活性薬物を含む。一つの態様において、リポソーム製剤は、さらに、治療有効量の生物活性薬物を含む。

【0133】

他の脂質成分は、例えば、塩化 Ｎ,Ｎ−ジオレイル−Ｎ,Ｎ−ジメチルアンモニウム(ＤＯＤＡＣ)、臭化 Ｎ,Ｎ−ジステアリル−Ｎ,Ｎ−ジメチルアンモニウム(ＤＤＡＢ)、塩化 Ｎ−(１−(２,３−ジオレオイルオキシ)−プロピル)−Ｎ,Ｎ,Ｎ−トリメチルアンモニウム(ＤＯＴＡＰ)、塩化 Ｎ−(１−(２,３−ジオレイルオキシ)プロピル)−Ｎ,Ｎ,Ｎ−トリメチルアンモニウム(ＤＯＴＭＡ)、Ｎ,Ｎ−ジメチル−(２,３−ジオレイルオキシ)プロピルアミン(ＤＯＤＭＡ)、１,２−ジオレオイル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン(ＤＯＤＡＰ)、１,２−ジオレオイルカルバミル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン(ＤＯＣＤＡＰ)、１,２−ジリネオイル(Dilineoyl)−３−ジメチルアンモニウム−プロパン(ＤＬＩＮＤＡＰ)、ジラウリル(Ｃ_12:0)−トリメチル−アンモニウム−プロパン(ＤＬＴＡＰ)、ジオレオイルオキシ−Ｎ−[２−スペルミンカルボキサミド)エチル｝−Ｎ,Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウム トリフルオロ酢酸塩(ＤＯＳＰＡ)、ジオクタデシルアミドグリシル−スペルミン(ＤＯＧＳ)、ＤＣ−Ｃｈｏｌ、臭化 １,２−ジミリスチルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウム(ＤＭＲＩＥ)、３−ジメチルアミノ−２−(コレスタ−５−エン−３−β−オキシブタン−４−オキシ)−１−(ｃｉｓ,ｃｉｓ−９,１２−オクタデカジエンオキシ)プロパン(ＣＬｉｎＤＭＡ)、２−[５'−(コレスタ−５−エン−３[β]−オキシ)−３'−オキサペントキシ)−３−ジメチル−１−(ｃｉｓ,ｃｉｓ−９',１２'−オクタデカジエンオキシ)−プロパン(ＣｐＬｉｎＤＭＡ)、および、Ｎ,Ｎ−ジメチル−３,４−ジオレイルオキシベンジルアミン(ＤＭＯＢＡ)、ジオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン(ＤＯＰＥ)、１,２−Ｎ,Ｎ'−ジオレイルカルバミル−３−ジメチルアミノプロパン(ＤＯｃａｒｂＤＡＰ)からなる既知のカチオン性脂質の群から選択されるものであってもよい。一つの態様において、他の脂質成分は、ＤＯＴＡＰまたはＤＬＴＡＰである。

【0134】

一つの態様において、カチオン性脂質は、式Ｉの脂質から選択される。一つの態様において、カチオン性脂質は、式IIの脂質から選択される。一つの態様において、カチオン性脂質は、式IIIの脂質から選択される。一つの態様において、カチオン性脂質は、式IVの脂質から選択される。一つの態様において、カチオン性脂質は、式Ｖの脂質から選択される。一つの態様において、カチオン性脂質は、式VIの脂質から選択される。一つの態様において、カチオン性脂質は、式VIIの脂質から選択される。一つの態様において、カチオン性脂質は、式VIIIの脂質から選択される。一つの態様において、カチオン性脂質は、式IXの脂質から選択される。一つの態様において、カチオン性脂質は、式Ｘの脂質から選択される。一つの態様において、カチオン性脂質は、E0001からE0171(E0001〜E0171)、および、E0175からE0180(E0175〜E0180) のリストから選択される。

【0135】

他の脂質成分は、例えば、中性脂質であってもよい。中性脂質は、一つの態様において、多様な中性の非荷電または双性イオン性脂質の何れかから１つ以上選択されてもよい。
本発明において、中性リン脂質の例は、５−ヘプタデシルベンゼン−１,３−ジオール(レゾルシノール)、コレステロール ヘミスクシネート(ＣＨＥＭＳ)、ジパルミトイルホスファチジルコリン(ＤＰＰＣ)、ジステアロイルホスファチジルコリン(ＤＳＰＣ)、ホスホコリン(ＤＯＰＣ)、ジミリストイルホスファチジルコリン(ＤＭＰＣ)、ホスファチジルコリン(ＰＬＰＣ)、ホスファチジルエタノールアミン(ＰＥ)、例えばホスファチジルコリン(ＥＰＣ)、ジラウリロイルホスファチジルコリン(ＤＬＰＣ)、ジミリストイルホスファチジルコリン(ＤＭＰＣ)、１−ミリストイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン(ＭＰＰＣ)、１−パルミトイル−２−ミリストイルホスファチジルコリン(ＰＭＰＣ)、１,２−ジアラキドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン(ＤＢＰＣ)、１−パルミトイル−２−ステアロイルホスファチジルコリン(ＰＳＰＣ)、１−ステアロイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン(ＳＰＰＣ)、１,２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン(ＤＡＰＣ)、１,２−ジエイコセノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン(ＤＥＰＣ)、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン(ＰＯＰＣ)、リゾホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン(ＤＳＰＥ)、ジミリストイル ホスファチジルエタノールアミン(ＤＭＰＥ)、ジパルミトイル ホスファチジルエタノールアミン(ＤＰＰＥ)、パルミトイルオレオイル ホスファチジルエタノールアミン(ＰＯＰＥ)、リゾホスファチジルエタノールアミン、またはこれらの組み合わせを含む。一つの態様において、中性リン脂質は、ジステアロイルホスファチジルコリン (ＤＳＰＣ)およびジミリストイル ホスファチジル エタノールアミン(ＤＭＰＥ)からなる群から選択される。

【0136】

他の脂質成分は、例えばアニオン性脂質、例えば安定な複合体を作ることができるアニオン性脂質であってもよい。アニオン性脂質の例は、ホスファチジルグリセロール、カルジオリピン、ジアシルホスファチジルセリン、ジアシルホスファチジル酸、Ｎ−ドデカのイル ホスファチジル エタノールアミン、Ｎ−スクシニル ホスファチジルエタノールアミン、Ｎ−グルタリル ホスファチジルエタノールアミンおよびリジルホスファチジルグリセロールである。

【0137】

適当な中性およびアニオン性脂質はまた、米国特許第2009/0048197号の段落[0119]に記載されたものを含む。

【0138】

投与される組成物中の脂質総量は、一つの態様において、約５〜約３０mg脂質／mg生物活性薬物(例えばｓｉＲＮＡ)、他の態様において約５〜約２５mg脂質／mg生物活性薬物(例えばｓｉＲＮＡ)、他の態様において約７〜約２５mg脂質／mg生物活性薬物(例えばｓｉＲＮＡ)であり、一つの態様において約７〜約１５mg脂質／mg生物活性薬物(例えばｓｉＲＮＡ)である。

【0139】

脂質組成物、例えばリポソームおよびリポナノ粒子に生物活性薬物を負荷する種々の方法は、当技術分野で利用可能であり、受動的および能動的負荷方法を含む。その何れもが、本発明の範囲内であるとみなされる。用いられる正確な方法は、例えば負荷される生物活性薬物、負荷後に用いる保存方法、得られた粒子の大きさ、および意図される投与レジメを含むが、これらに限定されない多くの要素に基づいて選択され得る。方法は、例えばリポソームを形成または再構成する際に薬物と脂質を機械的に混合し、有機溶媒中で全成分を溶解し、それらを乾燥フィルムに濃縮し、ｐＨまたはイオン濃度勾配を作り活性な薬物をリポソーム内部に入れ、膜電位差を作り、イオノフォア介在負荷することを含む。少なくとも下記の実施例６８、６９および７７、ＰＣＴ公開公報第95/08986号、米国特許第5,837,282号、米国特許第5,837,282号および米国特許第7,811,602号を参照のこと。

【0140】

投与される生物活性薬物の投与量は、生物活性薬物の個性および標的患者(例えば動物種)などの幾つかの要素に依存する。生物活性薬物の濃度は、ｓｉＲＮＡが動物に投与されるとき、それに従って調節されるが、１回投与量当たり０.１mg/ml〜１０mg/mlが典型的である。

【0141】

ｓｉＲＮＡの総量を、幾つかの方法によって測定することができる。ＨＰＬＣ法は、アニオン交換、逆相(ＲＰ)またはサイズ排除(ＳＥＣ)を含む。また、蛍光法を用いてもよい。これらの全ての方法において、総ｓｉＲＮＡ含量を測定する前に、ナノ粒子からｓｉＲＮＡを遊離するために、ナノ粒子を溶解しておかなければならない。

【0142】

一つの態様において、本組成物は、組成物中に存在する脂質総量に対して約１０％〜約８０％、約２０％〜約７０％または約３０％〜約６０％となるカチオン性脂質成分を含む。これらのパーセンテージは最終脂質粒子中の脂質成分の総モルに対するモル％である。

【0143】

一つの態様において、本組成物は、組成物中に存在する脂質総量に対して約０％〜約５０％、約０％〜約３０％または約１０％〜約２０％となる中性脂質成分を含む。一つの態様において、組成物の中性脂質成分は、オプションである。一つの態様において、本組成物は、中性脂質成分を有しない。これらのパーセンテージは最終脂質粒子中の脂質成分の総モルに対するモル％である。

【0144】

一つの態様において、本組成物は、組成物中に存在する脂質総量に対して約５％〜約８０％、約２０％〜約７０％または約３０％〜約５０％となるヘルパー脂質成分を含む。これらのパーセンテージは最終脂質粒子中の脂質成分の総モルに対するモル％である。

【0145】

一つの態様において、本組成物は、組成物中に存在する脂質総量に対して約０％〜約１０％、約１％〜約６％、または約２％〜約５％となるステルス脂質成分を含む。これらのパーセンテージは最終脂質粒子中の脂質成分の総モルに対するモル％である。

【0146】

一つの態様において、本組成物は、製剤中に存在する脂質総量に対して約３０〜約６０％となるカチオン性脂質成分、製剤中に存在する脂質総量に対して約０〜約３０％となる中性脂質成分、製剤中に存在する脂質総量に対して約１８〜約４６％となるヘルパー脂質、および、製剤中に存在する脂質総量に対して約２〜約４％となるステルス脂質を含む。
これらのパーセンテージは最終脂質粒子中の脂質成分の総モルに対するモル％である。

【0147】

本発明のリポソーム組成物は、非経腸、静脈内、全身、局所、経口、腫瘍内、筋肉内、皮下、腹腔内、吸入またはこのような送達方法の何れかを含む、幾つかの方法の何れかで投与される。一つの態様において、本組成物は、非経腸で、すなわち、関節内、静脈内、腹腔内、皮下または筋肉内に投与される。具体的な態様において、リポソーム組成物は、静脈内注入によって、または、ボラス注射によって腹腔内に投与される。

【0148】

本発明のリポソーム組成物は、対象に送達するのに適当な医薬組成物として製剤化され得る。本発明の医薬組成物は、しばしば、さらに、１種以上の緩衝剤(例えば中性緩衝食塩水またはリン酸緩衝食塩水)、炭水化物(例えばグルコース、マンノース、ショ糖、デキストロースまたはデキストラン)、マンニトール、タンパク質、ポリペプチドまたはアミノ酸、例えばグリシン、抗酸化剤、静菌剤、キレート剤、例えばＥＤＴＡまたはグルタチオン、アジュバント(例えば水酸化アルミニウム)、製剤をレシピエントの血液に対して等張性、低張性または弱高張性とする溶質、懸濁剤、濃厚化剤、および／または保存料を含む。あるいは、本発明の組成物は、凍結乾燥物として製剤化され得る。

【0149】

本発明に使用するのに適当な製剤は、例えばRemington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 17.sup.th Ed. (1985)で見出される。しばしば、静脈内組成物は、許容される担体、例えば水性担体に懸濁したリポソームの溶液を含む。

【0150】

生物活性薬物を送達する方法および関連する使用
本発明のカチオン性脂質およびステルス脂質は、生物活性薬物を送達するのに用いられる製剤に有用である。本発明の新規脂質を含む製剤は、ミクロ粒子を含む粒子形成送達剤、ナノ粒子、および、細胞に種々の分子を送達するのに有用な導入剤を含むが、これらに限定されない種々の形態であってもよい。具体的な製剤は、生物活性薬物、例えば、抗体(例えばモノクローナル、キメラ、ヒト化、ナノボディおよびそのフラグメントなど)、コレステロール、ホルモン、ペプチド、タンパク質、化学療法剤および他のタイプの抗腫瘍薬、低分子量薬物、ビタミン、補因子、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、酵素的核酸、アンチセンス核酸、三本鎖形成オリゴヌクレオチド、アンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡ組成物、キメラＤＮＡ：ＲＮＡ組成物、アロザイム、アプタマー、リボザイム、デコイおよびそのアナログ、プラスミドおよび他のタイプの発現ベクター、および小分子核酸、ＲＮＡｉ剤、低分子干渉核酸(ｓｉＮＡ)、低分子干渉ＲＮＡ(ｓｉＲＮＡ)、二本鎖ＲＮＡ(ｄｓＲＮＡ)、ミクロＲＮＡ(ｍｉＲＮＡ)および低分子ヘアピン型ＲＮＡ(ｓｈＲＮＡ)分子を、関連する細胞および／または組織、例えば細胞培養物、対象または生物体に、移入または送達するのに有効である。生物活性薬物の上記リストは、例示のみであり、これらに限定されることを意図しない。このような化合物は、精製されていても部分的に精製されていてもよく、天然由来であっても合成されたものであってもよく、化学的に修飾されていてもよい。

【0151】

このような生物活性薬物を含む製剤は、例えば、細胞、対象または生物体において、疾患、状態または体質を予防、阻害または処置する組成物を提供するのに有用である。疾患、状態または体質は、癌、炎症性疾患、移植片および／または組織拒絶反応を含む増殖性疾患、自己免疫性疾患または状態、加齢性疾患、神経疾患または神経変性疾患、呼吸器疾患、心血管疾患、眼疾患、代謝疾患、皮膚疾患、聴覚疾患、肝臓疾患、腎臓疾患などを含むが、これらに限定されない。

【0152】

１回投与当たりに投与される活性薬物の量は、最小治療量より多いが、中毒量に満たない量である。１回投与当たりの実際の量は、幾つかの要素、例えば患者の病歴、他の治療の使用、提供される生物活性薬物および疾患の性質に依存して、医師によって決定され得る。投与される生物活性薬物の量は、処置に対する患者の応答および何らかの処置関連副作用の存在または重症度に依存して、処置時に調節され得る。適切な規制当局によって承認された典型的な投与量および化合物処置は、当業者に知られており、利用可能である。
例えばPhysician's Desk Reference, 64th ed., Physician's Desk Reference Inc. (2010), Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa. (1985)、および、Remington The Science and Practice of Pharmacy, 21st ed., Lippincott Williams & Williams Publishers (2005)を参照のこと。

【0153】

一つの態様において、生物活性薬物の１回投与量が、それを必要とする患者に投与される。一つの態様において、多回投与量が投与されるとき、同時に、別個に、または交互に、多回投与量が投与されてもよい。一つの態様において、多回投与量では、同じ製剤が投与される。一つの態様において、多回投与量では、製剤が異なる。種々の態様において、投与は、１日１回で投与されても１日、２日、３日、４日以上の連続した日の間で１回で投与されてもよい。一つの態様において、用量は、週１回投与される。一つの態様において、用量は、１週間おきに投与される。一つの態様において、患者は、処置に対する患者の応答に依存して、少なくとも２クール、場合によりそれ以上の処置レジメを受ける。一剤レジメにおいて、処置の全クールは、観察された応答および毒性に基づいて、患者および医師によって決定される。上記の投与レジメは例示と考えられるべきである。他の投与レジメは、本発明の範囲内とみなされ、これは望ましい治療効果に依存する。

【0154】

一つの態様において、本発明は、細胞に生物活性薬物を送達する方法であって、生物活性薬物および本発明の化合物を含む組成物を、細胞に投与することを含む方法を提供する。

【0155】

細胞は、in vitroであってもin vivoであってもよい。

【0156】

本発明は、治療に使用するための、式(Ｉ)の化合物を提供する。本発明はまた、さらに式II〜Ｘで識別された式Ｉの化合物のサブセットを提供する。式Ｉ〜Ｘの化合物は、一般的に、本明細書で、カチオン性脂質と呼ばれる。

【0157】

本発明はさらに、治療に使用するための、式(XI)の化合物を提供する。本発明はまた、さらに、式(XII)で区別された式(XI)の化合物のサブセットを提供する。式(XI)および(XII)の化合物は、一般的に、本明細書で、ステルス脂質と呼ばれる。

【0158】

本発明は、さらに、疾患または状態を処置する方法であって、疾患または状態を処置する生物活性薬物と組み合わせた、少なくとも１種の式(Ｉ)の化合物を含む医薬組成物を治療有効量で患者に投与する工程を含む方法を提供する。本発明はまた、疾患または状態の処置に使用するための、少なくとも１種の式(XI)の化合物を含み組成物を提供する。

【0159】

本発明はまた、疾患または状態を処置する医薬の製造における、式(Ｉ)の化合物の症を提供する。一つの態様において、医薬は、疾患または状態を処置する生物活性薬物を含む。本発明はまた、式(Ｉ)または式(XI)の化合物を含む、疾患または状態を処置する医薬の製造における、疾患または状態を処置する生物活性薬物の使用を提供する。

【0160】

本発明はまた、疾患または状態を処置する方法であって、少なくとも１つの本発明の組成物を含む製剤において、治療有効量の生物活性薬物を、患者に投与する工程を含む方法を提供する。一つの態様において、疾患または状態は、肝臓疾患、腫瘍または疾患である。一つの態様において、疾患または状態は、ｓｉＲＮＡ剤を投与することによって処置可能である。

【0161】

本発明はまた、患者における疾患または状態の処置に使用するための、本発明の組成物を提供する。一つの態様において、疾患または状態は、肝臓疾患、腫瘍またはｍＲＮＡによってコードされたタンパク質が介在する疾患である。

【0162】

本発明はまた、式(Ｉ)および／または式XIの化合物を含む製品を提供する。一つの態様において、本発明は、さらに、治療において同時、別個または連続使用するための、組み合わせ製剤として、生物活性薬物を含む

【0163】

投与および製剤
全般
薬学的使用において、本発明の化合物および組成物は、静脈内、筋肉内、皮下、経皮、気道(エアゾール)、経口、鼻腔内、直腸、膣、頬側、鼻咽頭、消化器または舌下投与を含む、経腸または非経腸経路によって、医薬の少なくとも一部として投与され得る。投与は、全身であっても局所であってもよい。局所投与は、例えば、カテーテル挿入、インプラント埋め込み、浸透圧ポンプ、直接注射、皮膚／経皮適用、ステント挿入、耳／眼用滴剤、または門脈投与を含んでもよい。式(Ｉ)および／または式(XI)の化合物は、提案された適応症の処置に最も適切な投与形および投与経路を選択するために、溶解度および溶液安定性(ｐＨに対する)、浸透性などの生物薬学的性質について評価されるべきである。

【0164】

本発明の化合物および組成物は、一般的に、しかし必須ではなく、１種以上の薬学的に許容される添加物と組み合わせた製剤として投与される。用語“添加物”は、本発明の化合物以外の何らかの成分、他の脂質成分および生物活性薬物を含む。添加物は、製剤に、機能的(例えば薬物放出速度制御)および／または非機能的(例えば加工助剤または希釈剤)の特性を与え得る。添加物の選択は、大体において、特定の投与方法、溶解性および安定性に対する添加物の効果、および投与形の性質などの要素に依存する。

【0165】

典型的な薬学的に許容される添加物は、
・希釈剤、例えば乳糖、ブドウ糖、ショ糖、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／またはグリシン；
・滑沢剤、例えばシリカ、タルク、ステアリン酸とそのマグネシウム塩もしくはカルシウム塩および／またはポリエチレングリコール；
・結合剤、例えばケイ酸アルミニウムマグネシウム、澱粉ペースト、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース ナトリウムおよび／またはポリビニルピロリドン；
・崩壊剤、例えば澱粉、寒天、アルギン酸もしくはそのナトリウム塩、または、発泡性混合物；および／または
／吸収剤、着色料、風味剤および／または甘味料；
を含む。

【0166】

添加物は、所望により緩衝剤(例えばＰＢＳ緩衝液)および／または糖を含む水溶液の担体であってもよい。

【0167】

薬学的に許容される添加物の徹底的な議論は、Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy 2000, 20th edition (ISBN: 0683306472)で利用できる。

【0168】

経口投与
本発明の化合物および組成物は、経口で投与されてもよい。経口投与は、化合物が消化器に入る嚥下、および／または、化合物が口から直接血流に入る頬側、舌または舌下の投与を含んでもよい。

【0169】

非経腸投与
本発明の化合物および組成物を、非経腸で投与することができる。本発明の化合物および組成物は、血流、皮下組織、筋肉または内臓に直接投与されてもよい。投与に適当な方法は、静脈内、動脈内、髄腔内、脳室内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内、滑液内および皮下を含む。投与に適当なデバイスは、針(マイクロニードル)のある注射器、針のない注射器および点滴を含む。

【0170】

非経腸製剤は、典型的に、水性または油性溶液である。溶液が水性であるとき、添加物、例えば糖類(ブドウ糖、マンニトール、ソルビトールなどを含むが、これらに限定されない)、塩類、炭水化物および緩衝剤(好ましくはｐＨ ３〜９)であるが、幾つかの適用において、滅菌処理された非水性溶液として、または適当なビークル、例えば滅菌処理されたパイロジェンを含まない水(ＷＦＩ)と併せて用いられる乾燥された形態として、より適切に製剤化され得る。

【0171】

非経腸製剤は、分解可能なポリマー、例えばポリエステル(すなわちポリ乳酸、ポリラクチド、ポリラクチド−コ−グリコリド、ポリカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸)、ポリオルトエステル類およびポリ無水物から誘導されるインプラントであってもよい。これらの製剤は、外科的切開により、皮下組織、筋肉組織または特定の臓器に直接投与されてもよい。

【0172】

凍結乾燥などによる、滅菌条件下での非経腸製剤の製造は、例えば、当業者に周知の標準的な薬学的方法を用いて、容易に達成され得る。

【0173】

非経腸溶液の製造に用いられる化合物および組成物の溶解度は、適切な製剤方法の使用によって、例えば共溶媒の混合および／または溶解促進剤、例えば界面活性剤、ミセル構造およびシクロデキストリンの使用によって増大させてもよい。

【0174】

吸入および鼻腔内投与
本発明の化合物および組成物を、鼻腔内に、典型的には、乾燥粉末の形態(単独で、または、例えば乳糖との乾燥混合物における混合物として、または例えばリン脂質、例えばホスファチジルコリンと混合された混合成分粒子としての何れか)で、乾燥粉末吸入器、加圧容器、ポンプ、スプレー、アトマイザー(好ましくは微小ミストを作るための電気水力学を用いたアトマイザー)またはネブライザーからのエアゾールスプレーとして、適当な噴射剤、例えば１,１,１,２−テトラフルオロエタンまたは１,１,１,２,３,３,３−ヘプタフルオロプロパンを使用してまたは使用せずに、吸入によって、あるいは、鼻腔用滴剤として、投与することができる。鼻腔内の使用について、粉末は、生体接着剤、例えばキトサンまたはシクロデキストリンを含んでもよい。

【0175】

加圧容器、ポンプ、スプレー、アトマイザーまたはネブライザーは、例えばエタノール、水性エタノール、または本発明の化合物を分散、溶解または遅延放出するための適当な代替剤、溶媒としての噴射剤、および所望の界面活性剤、例えばトリオレイン酸ソルビタン、オレイン酸またはオリゴ乳酸を含む、本発明の化合物の溶液または懸濁液を含む。

【0176】

乾燥粉末または懸濁液製剤を使用する前に、本化合物または組成物を、吸入による送達に適当な大きさ(典型的には５ミクロン未満)まで微細化する。これは、何らかの適切な粉砕法、例えばスパイラルジェット・ミル、流動床ジェットミル、ナノ粒子を形成するための超臨界流体加工、高圧均質化またはスプレー乾燥などによって達成され得る。

【0177】

噴射吸入器(inhaler)または吸気吸入器(insufflator)に使用するためのカプセル剤(例えばゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースから作られている)、ブリスターおよびカートリッジは、本発明の化合物または組成物、適当な粉末基剤、例えば乳糖または澱粉および性能修飾剤、例えばｌ−ロイシン、マンニトールまたはステアリン酸マグネシウムの粉末混合物を含んで製剤化され得る。乳糖は、無水物であっても一水和物の形態であってもよく、好ましくは後者である。他の適当な添加物は、デキストラン、ブドウ糖、麦芽糖、ソルビトール、キシリトール、果糖、ショ糖およびトレハロースを含む。

【0178】

吸入／鼻腔内投与用製剤は、例えばＰＧＬＡを用いて、即時および／または修飾放出製剤で製剤化され得る。修飾放出製剤は、遅延、持続性、パルス、制御、標的化およびプログラム放出を含む。

【0179】

経皮投与
経皮適用に適当な製剤は、担体と共に、治療有効量の本発明の化合物または組成物を含む。好都合な担体は、宿主の皮膚を通過するのを助けるための吸収可能な薬理学的に許容される溶媒を含む。典型的には、経皮デバイスは、裏打ち材、所望により担体と共に化合物を含むリザーバー、所望により延長した時間に亘って制御されたおよび予め定められた速度で化合物を宿主の皮膚に送達するための速度制御障壁、および、皮膚にデバイスを固定化するための手段を含むバンテージの形態である。

【0180】

本発明が標的とする細胞および臓器
本発明の化合物、組成物、方法および使用は、患者において、下記の１つ以上に生物活性薬物を送達するために用いられ得る：
肝臓または肝臓細胞(例えば肝細胞)；
腎臓または腎臓細胞；
腫瘍または腫瘍細胞；
ＣＮＳまたはＣＮＳ細胞(中枢神経系、例えば脳および／または脊髄)；
ＰＮＳまたはＰＮＳ細胞(末梢神経系)；
肺または肺細胞；
脈管構造または血管細胞；
皮膚または皮膚細胞(例えば真皮細胞および／または濾胞細胞)；
眼または眼の細胞(例えば斑、中心窩、角膜、網膜)；および
耳または耳の細胞(例えば内耳、中耳および／または外耳の細胞)。

【0181】

一つの態様において、本発明の化合物、組成物、方法および使用は、肝臓細胞(例えば肝細胞)に生物活性薬物を送達するためのものである。一つの態様において、本発明の化合物、組成物、方法および使用は、腫瘍または腫瘍細胞(例えば原発性腫瘍または転移性癌細胞)に生物活性薬物を送達するためのものである。

【0182】

肝臓または肝臓細胞に生物活性薬物を送達するために、一つの態様において、本発明の化合物または組成物を、当技術分野で一般的に知られている通りに、例えば送達を助けるために、非経腸投与(例えば静脈内、筋肉内、皮下投与)、または局所投与(例えば直接注射、門脈注射、カテーテル挿入、ステント挿入)によって、患者の肝臓または肝臓細胞と接触させる。

【0183】

腎臓または腎臓細胞に生物活性薬物を送達するために、一つの態様において、本発明の化合物または組成物を、当技術分野で一般的に知られている通りに、例えば送達を助けるために、非経腸投与(例えば静脈内、筋肉内、皮下投与)、または局所投与(例えば直接注射、カテーテル挿入、ステント挿入)によって、患者の腎臓または腎臓細胞と接触させる。

【0184】

腫瘍または腫瘍細胞に生物活性薬物を送達するために、一つの態様において、本発明の化合物または組成物を、当技術分野で一般的に知られている通りに、例えば送達を助けるために、非経腸投与(例えば静脈内、筋肉内、皮下投与)、または局所投与(例えば直接注射、カテーテル挿入、ステント挿入)によって、患者の腫瘍または腫瘍細胞と接触させる。

【0185】

ＣＮＳまたはＣＮＳ細胞(例えば脳細胞および／または脊髄細胞)に、生物活性薬物を送達するために、一つの態様において、本発明の化合物または組成物を、当技術分野で一般的に知られている通りに、例えば送達を助けるために、非経腸投与(例えば静脈内、筋肉内、皮下投与)、または局所投与(例えば直接注射、カテーテル挿入、ステント挿入、浸透圧ポンプ投与(例えば髄腔内(intrathecal)または脳室内))によって、患者のＣＮＳまたはＣＮＳ細胞(例えば脳細胞および／または脊髄細胞)と接触させる。

【0186】

ＰＮＳまたはＰＮＳ細胞に生物活性薬物を送達するために、一つの態様において、本発明の化合物または組成物を、当技術分野で一般的に知られている通りに、例えば送達を助けるために、非経腸投与(例えば静脈内、筋肉内、皮下投与)、または局所投与(例えば直接注射)によって、患者のＰＮＳまたはＰＮＳ細胞と接触させる。

【0187】

肺または肺細胞に生物活性薬物を送達するために、一つの態様において、本発明の化合物または組成物を、当技術分野で一般的に知られている通りに、例えば送達を助けるために、非経腸投与(例えば静脈内、筋肉内、皮下投与)、または局所投与(例えば肺組織および細胞への直接的肺投与)によって、患者の肺または肺細胞と接触させる。

【0188】

血管または血管細胞に、生物活性薬物を送達するために、一つの態様において、本発明の化合物または組成物を、当技術分野で一般的に知られている通りに、例えば送達を助けるために、非経腸投与(例えば静脈内、筋肉内、皮下投与)、または局所投与(例えばクランプ、カテーテル挿入、ステント挿入)によって、患者の血管または血管細胞と接触させる。

【0189】

皮膚または皮膚細胞(例えば真皮細胞および／または濾胞細胞)に、生物活性薬物を送達するために、一つの態様において、本発明の化合物または組成物を、当技術分野で一般的に知られている通りに、例えば送達を助けるために、非経腸投与(例えば静脈内、筋肉内、皮下投与)、または局所投与(例えば直接皮膚に塗布する、イオン導入)によって、患者の皮膚または皮膚細胞(例えば真皮細胞および／または濾胞細胞)と接触させる。

【0190】

眼または眼の細胞(例えば班、中心窩、角膜、網膜)に、生物活性薬物を送達するために、一つの態様において、本発明の化合物または組成物を、当技術分野で一般的に知られている通りに、例えば送達を助けるために、非経腸投与(例えば静脈内、筋肉内、皮下投与)、または局所投与(例えば直接注射、眼内注射、イオン導入、点眼剤の使用、インプラント)によって、患者の眼または眼の細胞(例えば班、中心窩、角膜、網膜)と接触させる。

【0191】

耳または耳の細胞(例えば内耳、中耳および／または外耳の細胞)に、生物活性薬物を送達するために、一つの態様において、本発明の化合物または組成物を、当技術分野で一般的に知られている通りに、例えば送達を助けるために、非経腸投与(例えば静脈内、筋肉内、皮下投与)、または局所投与(例えば直接注射)によって、患者の耳または耳の細胞(例えば内耳、中耳および／または外耳の細胞)と接触させる。

【0192】

疾患または状態の処置
本発明によって処置され得る疾患または状態は、患者の遺伝子、遺伝子発現、タンパク質、タンパク質活性、細胞経路などの調節に関連するものを含む。本発明によって処置される疾患または状態は、増殖性疾患(例えば腫瘍)；炎症性疾患；移植片および／または組織拒絶反応(同種移植片拒絶反応)；自己免疫疾患；感染性疾患；加齢関連疾患；神経疾患または神経変性疾患(例えばハンチントン病)；代謝疾患；心血管疾患；呼吸器疾患；眼疾患；皮膚疾患；聴覚疾患(例えば聴覚消失、難聴)；肝臓疾患(例えば肝炎、ＨＣＶ、ＨＢＶ、糖尿病、肝硬変、肝細胞癌)および腎臓(kidney/renal)疾患(例えば多発性嚢胞腎疾患)からなる群から選択される、１つ以上であり得る。一つの具体的な態様において、本発明は、増殖性疾患、例えば腫瘍または腫瘍細胞を処置する。一つの具体的な態様において、本発明は、肝臓疾患、例えば肝炎、ＨＣＶ、ＨＢＶ、糖尿病、肝硬変、特定の肝細胞癌を処置する。

【0193】

当業者は、本発明の化合物と組み合わせて治療有効量の薬物を送達する生物活性薬物を選択することが可能である。薬物がＲＮＡｉ治療剤であるとき、望ましい治療効果は、対象の疾患または状態に関係する標的遺伝子の発現を調節することである。一つの態様において、遺伝子発現の減少およびその結果として応答するタンパク質／ＲＮＡのレベルの減少は、ある程度、疾患または状態の症状を緩和する。

【0194】

有効性
本化合物、組成物、方法および使用は、疾患または状態を軽減、阻止または寛解するのに適当な状態に投与条件を含み得る。一つの態様において、処置しない患者と比較して、患者において、標的遺伝子の発現レベルを減少させる、治療有効量のＲＮＡｉ剤を、それを必要とする患者に投与する。

【0195】

一つの態様において、対象の疾患または状態に関係する標的の発現を、処置しない患者に対して、約１０％、より好ましくは約２０％、より好ましくは約３０％、より好ましくは約４０％、より好ましくは約５０％、より好ましくは約６０％、より好ましくは約７０％、より好ましくは約８０％、より好ましくは約９０％、より好ましくは約９５％、より好ましくは約９８％、および最も好ましくは約１００％まで減少させる。

【0196】

定義
本明細書全体で用いられるとき、“a”および“an”などの記載は、記載の文法上の対象物の１つ以上(少なくとも１つ)を言う。

【0197】

式(Ｉ)、(II)、(III)、(IV)、(Ｖ)、(VI)、(VII)、(VIII)、(IX)、(Ｘ)、(XI)および(XII)の化合物およびその誘導体
本明細書で用いられるとき、用語“本発明の(脂質)化合物”、“式(Ｉ)の(脂質)化合物”、“(脂質)化合物”、“カチオン性脂質”など(すなわち本発明のカチオン性脂質につ
いての全ての記載)および／または“ステルス脂質”は、その薬学的に許容される誘導体および多型、異性体および同位体標識体を含む。さらに、当該用語は、カチオン性脂質についての式(II)、(III)、(IV)、(Ｖ)、(VI)、(VII)、(VIII)、(IX)および(Ｘ)の化合物；およびステルス脂質についての式(XI)および(XII)の化合物；および本明細書に開示されたその態様を含む。

【0198】

薬学的に許容される誘導体
用語“薬学的に許容される誘導体”は、式(Ｉ)の化合物の薬学的に許容される塩、溶媒和物または水和物を何れも含む。一つの態様において、薬学的に許容される誘導体は、式(Ｉ)の化合物の薬学的に許容される塩、溶媒和物または水和物である。

【0199】

薬学的に許容される塩
用語“薬学的に許容される塩”は、無機酸または有機酸および無機塩基または有機塩基を含む、薬学的に許容される非毒性の酸または塩基から製造される塩を含む。薬学的に許容される塩のレビューについては、Stahl and Wermuth, Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use (Wiley VCH, Weinheim, Germany, 2002)を参照のこと。

【0200】

溶媒和物および水和物
本発明の化合物は、溶媒和されていない形態で存在しても溶媒和された形態で存在してもよい。用語“溶媒和物”は、本発明の化合物および１種以上の薬学的に許容される溶媒分子、例えば水またはＣ_1-6アルコール、例えばエタノールを含む分子複合体を含む。
用語“水和物”は、溶媒が水である“溶媒和物”を意味する。

【0201】

異性体の形態
本発明の化合物は、ｃｉｓ型およびｔｒａｎｓ型、Ｅ型およびＺ型、Ｒ型、Ｓ型およびメソ型、ケト型およびエノール型を含むが、これらに限定されない、１種以上の幾何異性体、光学異性体、エナンチオマー、ジアステレオマーおよび互変異性体の形態で存在してもよい。全てのこのような異性体の形態が本発明の範囲内に含まれる。異性体の形態は、異性体として純粋なまたは富化された形態で存在しても、異性体混合物(例えばラセミ体またはジアステレオマー混合物)で存在してもよい。

【0202】

従って、本発明は、例えば、
・式(Ｉ)の化合物の立体異性体混合物；
・式(Ｉ)の化合物のジアステレオマーとして富化されたまたはジアステレオマーとして純粋な異性体；または
・式(Ｉ)の化合物のエナンチオマーとして富化されたまたはエナンチオマーとして純粋な異性体；
を少なくとも提供する。

【0203】

適切な異性体は、既知の方法(例えばクロマトグラフィー法および再結晶)を適用するまたは適合させることによって、混合物から分離され得る。適切な異性体は、既知の方法(例えば不斉合成)を適用するまたは適合させることによって製造され得る。

【0204】

同位体標識
本発明は、１個以上の原子が、同じ原子番号を有するが天然に通常見出される原子質量または質量数と異なる原子質量または質量数を有する原子に置き換えられている、薬学的に許容される同位体標識された式(Ｉ)の化合物を含む。

【0205】

本発明の化合物に包含するのに適当な同位体の例は、水素の同位体、例えば²Ｈおよび³Ｈ、炭素の同位体、例えば¹¹Ｃ、¹³Ｃおよび¹⁴Ｃ、塩素の同位体、例えば³⁶Ｃｌ、フッ素の同位体、例えば¹⁸Ｆ、ヨウ素の同位体、例えば¹²³Ｉおよび¹²⁵Ｉ、窒素の同位体、例えば¹³Ｎおよび¹⁵Ｎ、酸素の同位体、例えば¹⁵Ｏ、¹⁷Ｏおよび¹⁸Ｏ、リンの同位体、例えば³²Ｐ、および硫黄の同位体、例えば³⁵Ｓを含む。或る同位体標識された式(Ｉ)の化合物、例えば放射性同位体を組み込んだものは、薬物および／または基質組織分布研究に有用である。放射性同位体、³Ｈおよび¹⁴Ｃは、特に、組み込みが容易で迅速な検出方法がある点で、この目的に特に有用である。

【0206】

陽電子放出同位体、例えば¹¹Ｃ、¹⁸Ｆ、¹⁵Ｏおよび¹³Ｎとの置換は、陽電子放出断層撮影法(ＰＥＴ)に有用であり得る。

【0207】

同位体標識された式(Ｉ)の化合物は、一般的に、当業者に既知の方法によって製造され得るか、または、先に用いられた標識されていない反応剤の代わりに適切な同位体標識された反応剤を用いて本明細書で記載された工程と類似の工程によって製造され得る。

【0208】

治療の定義
本明細書で用いられるとき、“処置”は、寛解、治療および予防の処置を含む。本明細書で用いられるとき、“患者”は、処置を必要とする動物、好ましくは哺乳類、好ましくはヒトを意味する。

【0209】

“生物活性薬物”は、好ましくは治療用化合物、すなわち疾患または状態を処置または予防するのに有用な化合物である。

【0210】

生物活性薬物は、例えば、抗体、コレステロール、ホルモン、抗ウイルス剤、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、核タンパク質、化学療法剤、低分子量薬物、ビタミン、補因子、ヌクレオシド、ヌクレオシド誘導体、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、酵素的核酸、アンチセンス核酸、三本鎖形成オリゴヌクレオチド、２−５Ａアンチセンスキメラ、アロザイム、アプタマー、リボザイム、デコイＲＮＡ分子およびそのアナログ、および、低分子核酸、例えば低分子干渉核酸(ｓｉＮＡ)、低分子干渉ＲＮＡ(ｓｉＲＮＡ)、二本鎖ＲＮＡ(ｄｓＲＮＡ)、ミクロＲＮＡ(ｍｉＲＮＡ)および低分子ヘアピン型ＲＮＡ(ｓｈＲＮＡ)を含むＲＮＡ阻害剤(ＲＮＡｉ)を含むが、これらに限定されない。一つの態様において、生物活性薬物は、好ましくは、ヌクレオシドまたはヌクレオシド誘導体、例えば核酸、オリゴヌクレオチド、ポリ核酸(例えばｓｉＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ、アンチセンス、アプタマー、リボザイム、デコイ、リボザイム、２−５Ａ、三本鎖形成オリゴヌクレオチド)、好ましくはｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ阻害剤またはｍｉＲＮＡ阻害剤である。

【0211】

一つの態様において、生物活性薬物はｓｉＮＡ(低分子干渉核酸)分子である。一つの態様において、ｓｉＮＡはｓｉＤＮＡである。一つの態様において、ｓｉＮＡはｓｉＲＮＡである。一つの態様において、ｓｉＮＡはｍｉＲＮＡである。

【0212】

一つの態様において、生物活性薬物は、以降便宜上“ｓｉＮＡ”分子と呼ぶ、標的遺伝子の発現を下方制御する低分子核酸であり、ここで、例えば標的遺伝子は、標的をコードする配列を含むか、あるいは、標的遺伝子は、標的遺伝子発現に関与する標的をコードしない配列または調節エレメントを含む。

【0213】

ｓｉＮＡは、単鎖、二本鎖または多重鎖であり得る。一つの態様において、それは二本鎖である。

【0214】

一つの態様において、ｓｉＮＡは、非修飾ヌクレオチドおよび／または非ヌクレオチドを含む。一つの態様において、ｓｉＮＡは、少なくとも１種または１種以上の修飾ヌクレオチドおよび／または非ヌクレオチドを含む。一つの態様において、修飾ヌクレオチドは、修飾された塩基部分を含む。一つの態様において、修飾ヌクレオチドは、修飾された糖部分を含む。一つの態様において、修飾ヌクレオチドは、修飾された骨格部分を含む。一つの態様において、ｓｉＮＡは、１つ以上の修飾された塩基部分、修飾された糖部分および／または修飾された骨格部分を含む。

【0215】

一つの態様において、ｓｉＮＡ分子は、約１５〜約４０塩基対(例えば約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、２３、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０塩基対)を含み、副態様において約１５〜約３０塩基対(例えば約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０塩基対)、副態様において約１５〜約２８塩基対、副態様において約１７〜約２５塩基対、副態様において約１８〜約２３塩基対、さらなる副態様において約１９〜約２２塩基対を含む。一つの態様において、ｓｉＮＡは、約１７塩基対を含む。一つの態様において、ｓｉＮＡは約１８塩基対を含む。一つの態様において、ｓｉＮＡは、約１９塩基対を含む。一つの態様において、ｓｉＮＡは約２０塩基対を含む。一つの態様において、ｓｉＮＡは約２１塩基対を含む。

【0216】

一つの態様において、ｓｉＮＡ分子の２本鎖はそれぞれ独立して、約１５〜約４０ヌクレオチド(例えば約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、２３、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０ヌクレオチド)、副態様において、約１５〜約３０ヌクレオチド(例えば約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０ヌクレオチド)、副態様において、約１５〜約２８ヌクレオチド、副態様において、約１７〜約２５ヌクレオチド、副態様において、約１８〜約２３ヌクレオチド、さらなる副態様において、約１９〜約２２ヌクレオチドを含む。一つの態様において、それぞれの鎖は約１７ヌクレオチド長である。一つの態様において、それぞれの鎖は、約１８ヌクレオチド長である。一つの態様において、それぞれの鎖は、約１９ヌクレオチド長である。一つの態様において、それぞれの鎖は約２０ヌクレオチド長である。一つの態様において、それぞれの鎖は約２１ヌクレオチド長である。

【0217】

一つの態様において、ｓｉＮＡ分子は、標的ＲＮＡの切断を、ＲＩＳＣ複合体、すなわちＲＮＡ干渉(ＲＮＡｉ)を介して行う。

【0218】

一つの態様において、ｓｉＮＡ分子は、第１鎖および第２鎖を含み、ｓｉＮＡ分子の第１鎖は、ＲＮＡ干渉により標的ＲＮＡの直接的に切断するための、標的ＲＮＡに十分な相補性を有するヌクレオチド配列を含み、ｓｉＮＡ分子の第２鎖は、第１鎖に相補的であるヌクレオチド配列を含む。

【0219】

一つの態様において、低分子干渉核酸(ｓｉＮＡ)分子は、化学的に合成された二本鎖分子である。

【0220】

一つの態様において、ｓｉＮＡは、標的遺伝子または標的遺伝子ファミリー(ここで、当該遺伝子または遺伝子ファミリー配列は、配列相同性を有する。)の発現を阻害する。
このような相同な配列は、当技術分野で知られている通りに、例えば配列アラインメントを用いて識別され得る。このようなｓｉＮＡ分子は、相同な配列を標的化するように、例えば完全に相補的な配列を用いて、またはさらなる標的配列を提供し得る非標準的塩基対、例えばミスマッチおよび／またはゆらぎ塩基対を組み込むことによって設計され得る。

【0221】

一つの態様において、二本鎖ｓｉＮＡ分子は、リボヌクレオチドを全く含まない。他の態様において、二本鎖ｓｉＮＡ分子が１個以上のリボヌクレオチドを含む。

【0222】

一つの態様において、標的遺伝子の発現を下方制御するｓｉＮＡ分子は、アンチセンス領域(ここで、アンチセンス領域は、標的遺伝子またはその一部のヌクレオチド配列およびセンス領域に対して相補的な配列であるヌクレオチド配列を含み、センス領域は、標的遺伝子またはその一部のヌクレオチド配列と実質的に同一であるヌクレオチド配列を含む。)を含む。一つの態様において、アンチセンス領域およびセンス領域は、独立して、約１５〜約３０ヌクレオチド(例えば約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０ヌクレオチド)を含む。一つの態様において、アンチセンス領域は、標的遺伝子またはその一部をコードするＲＮＡのヌクレオチド配列に相補的であるヌクレオチド配列を含み、センス領域は、アンチセンス領域に相補的であるヌクレオチド配列を含む。

【0223】

一つの態様において、ｓｉＮＡ分子は、平滑末端化した末端を１つ含む。一つの態様において、ｓｉＮＡ分子は、平滑末端化した末端を２つ含み、すなわちオーバーハングした対になっていないヌクレオチドが全くない対称な末端を含む。

【0224】

一つの態様において、ｓｉＮＡ分子の各フラグメントの全てのヌクレオチドは、ｓｉＮＡ分子のもう一方の鎖上の相補的なヌクレオチドと塩基対となっている。

【0225】

一つの態様において、ｓｉＮＡ分子は、下記の１つ以上の特徴を含む：ミスマッチ、バルジ、ループおよびゆらぎ塩基対。これらはそれぞれ、ＲＮＡ干渉を媒介するｓｉＮＡ分子の活性を調節し得る。

【0226】

一つの態様において、センス領域は、リンカー分子、例えばポリヌクレオチドリンカーまたは非ヌクレオチドリンカーを介してアンチセンス領域に連結している。

【0227】

一つの態様において、ｓｉＮＡ分子は、１個以上の修飾されたピリミジンおよび／またはプリンヌクレオチドを有する。一つの態様において、センス領域におけるピリミジンヌクレオチドは、２'−Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドまたは２'−デオキシ−２'−フルオロピリミジンヌクレオチドであり、センス領域に存在するプリンヌクレオチドは、２'−デオキシプリンヌクレオチドである。他の態様において、センス領域におけるピリミジンヌクレオチドは、２'−デオキシ−２'−フルオロピリミジンヌクレオチドであり、センス領域に存在するプリンヌクレオチドは、２'−Ｏ−メチルプリンヌクレオチドである。他の態様において、センス領域におけるピリミジンヌクレオチドは、２'−デオキシ−２'−フルオロピリミジンヌクレオチドであり、センス領域に存在するプリンヌクレオチドは、２'−デオキシプリンヌクレオチドである。一つの態様において、アンチセンス領域におけるピリミジンヌクレオチドは、２'−デオキシ−２'−フルオロピリミジンヌクレオチドであり、アンチセンス領域に存在するプリンヌクレオチドは、２'−Ｏ−メチルまたは２'−デオキシプリンヌクレオチドである。

【0228】

一つの態様において、センス鎖は、非相補的な領域を有する。所望により、非相補的な領域に存在するヌクレオチドは、全て２'−デオキシヌクレオチドである。

【0229】

一つの態様において、センス領域を含むポリヌクレオチドは、鎖の５'末端、３'末端または５'末端および３'末端の両方の末端キャップ部分を含む。一つの態様において、アンチセンス鎖を含むポリヌクレオチドは、鎖の５'末端および３'末端または５'末端および３'末端の両方の末端キャップ部分を含む。一つの態様において、末端キャップ部分は、逆転デオキシ脱塩基部分またはグリセリル部分である。末端キャップ部分の他の例は、当技術分野で既知であり、例えば国際公開第2005/021749号および国際公開第2007/128477号により知られている。

【0230】

一つの態様において、ｓｉＮＡは、ポリヌクレオチド骨格中のホスファイト、ホスホジエステル、ホスホロチオエートおよび／またはホスホロジチオエート結合を有する。一つの態様において、ｓｉＮＡは、少なくとも１個のホスホロチオエート結合を有する。一つの態様において、ｓｉＮＡは、少なくとも１個のホスホロジチオエート結合を有する。

【0231】

一つの態様において、ヌクレオチド修飾は、ｓｉＮＡ中の、リボヌクレアーゼによる切断に感受性である特異的に選択された位置、例えばピリミジンヌクレオチドを有する位置に存在する。

【0232】

一つの態様において、ｓｉＮＡ分子の各鎖の２個の３'末端−ヌクレオチドはそれぞれ、２'−デオキシピリミジンヌクレオチド、例えば２'−デオキシチミジンである。

【0233】

本発明の化合物および投与される生物活性薬物(例えば治療用化合物)の量は、疾患または状態の処置に用いられる治療上有効な量、および、疾患または状態の予防に用いられる予防上有効な量であるべきである。

【0234】

用語“治療上有効な量”は、標的となる疾患または状態を処置または寛解するのに必要な本発明の化合物および生物活性薬物(例えば治療用化合物)の量を言う。用語“予防上有効な量”は、標的となる疾患または状態を予防するのに必要な本発明の化合物および生物活性薬物(例えば治療用化合物)の量を言う。正確な投与量は、一般的に、投与時の患者の状態に依存する。投与量を決定する際に考慮されるべき要素は、患者の疾病状態の重症度、患者の全身の健康、年齢、体重、性別、食事、投与時間、投与頻度、投与経路、生物活性薬物(例えば治療用化合物)の個性、反応感受性および患者の治療に対する耐容性または応答を含む。正確な量を、通常の実験方法によって決定することができるが、最終的には臨床医の判断に委ねられ得る。一般的に、有効投与量は、０.０１mg/kg/日(患者の体重に対する薬物の重量)〜１０００mg/kg/日、例えば１mg/kg/日〜１００mg/kg/日である。組成物は、患者に、個々に投与されても、他の薬物(agent)、薬剤(drug)またはホルモンと組み合わせて投与されてもよい。

【0235】

処置方法または関連する使用の何れかにおいて、本発明の化合物または組成物は、種々の時間間隔での投与、例えば１日１回の処置過程、２日毎に１回の処置過程、３日毎に１回の処置過程、４日毎に１回の処置過程、５日毎に１回の処置過程、６日毎に１回の処置過程、１月１回の処置過程などの処置過程として患者に投与され得る。一つの態様において、処置過程は、１週、２週、３週、４週、５週、６週、７週、８週、９週または１０週毎に１回である。一つの態様において、処置過程は、約１週〜約５２週以上(例えば不定)である。一つの態様において、処置過程は、約１月〜約４８月以上(例えば不定)である。

【0236】

一つの態様において、処置過程は、固定化された間隔で、例えば１週、２週、３週、４週、５週、６週、７週、８週、９週、１０週以上毎に１回(例えば１×、２×、３×、４×、５×、６×、７×、８×、９×、１０×以上)の初期処置過程、続いて、追加の固定化された間隔で、例えば４週、６週、８週、１０週、１５週、２０週、２５週、３０週、３５週、４０週以上毎に１回(例えば１×、２×、３×、４×、５×、６×、７×、８×、９×、１０×以上)の維持処置過程を含む。

【0237】

“増殖性疾患”とは、本明細書で用いられるとき、当技術分野で知られている制御されない細胞増殖または複製によって特徴付けられる何れかの疾患、状態、体質、遺伝子型または表現型を意味する。一つの態様において、増殖性疾患は癌である。一つの態様において、増殖性疾患は腫瘍である。一つの態様において、増殖性疾患は、液体腫瘍、例えば白血病、例えば急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)、慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)、急性リンパ性白血病(ＡＬＬ)、多発性骨髄腫および慢性リンパ性白血病；および固形腫瘍、例えばＡＩＤＳ関連癌、例えばカポジ肉腫；乳癌；骨の癌；脳の癌；頭頚部癌、非ホジキンリンパ腫、腺癌、扁平上皮細胞癌、喉頭癌、胆嚢癌および胆管癌、網膜の癌、食道癌、胃腸の癌、卵巣癌、子宮癌、甲状腺癌、精巣癌、子宮内膜の癌、黒色腫、結腸直腸癌、肺癌、膀胱癌、前立腺癌、肺癌(非小細胞肺癌を含む)、膵臓癌、肉腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、頭頚部癌、皮膚癌、鼻咽頭癌、脂肪肉腫、上皮癌、腎細胞癌、胆嚢腺癌、子宮内膜肉腫、多剤耐性癌を含むが、これらに限定されない。一つの態様において、増殖性疾患は、腫瘍血管新生に関連した血管新生、黄斑変性(例えば滲出型(wet)／萎縮型(dry)加齢関連黄斑変性)、角膜血管新生、糖尿病網膜症、血管新生緑内障、近視性変性を含むが、これらに限定されない。一つの態様において、増殖性疾患は、再狭窄および多発性嚢胞腎疾患を含む。

【0238】

“炎症性疾患”とは、本明細書で用いられるとき、当技術分野で知られている炎症過程またはアレルギー過程によって特徴付けられる何れかの疾患、状態、体質、遺伝子型または表現型を意味する。炎症性疾患は、例えば、炎症(例えば急性および／または慢性炎症)、呼吸器疾患、アテローム性動脈硬化症、乾癬、皮膚炎、再狭窄、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、敗血症ショック、関節リウマチ、炎症性腸疾患、炎症性骨盤疾患、疼痛、眼の炎症性疾患、セリアック病、結核、珪肺症および他の塵肺を含むが、これらに限定されない。

【0239】

“自己免疫疾患”とは、本明細書で用いられるとき、当技術分野で知られている自己免疫によって特徴付けられる何れかの疾患、状態、体質、遺伝子型または表現型を意味する。自己免疫疾患は、例えば、多発性硬化症、真性糖尿病、狼瘡、強皮症、線維筋痛症、移植拒絶反応(例えば同種移植片拒絶反応の予防)、悪性貧血、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、重症筋無力症、エリテマトーデスおよびグレーブス病を含むが、これらに限定されない。

【0240】

“感染性疾患”とは、感染病原体、例えばウイルス、細菌、真菌、プリオンまたは寄生虫と関連する何れかの疾患、障害または状態を意味する。

【0241】

“神経疾患”とは、中枢または末梢神経系を冒す何らかの疾患、障害または状態を意味する。神経学的疾患は、例えば、アルツハイマー病、動脈瘤、脳傷害、手根管症候群、脳動脈瘤、慢性疼痛、クロイツフェルト・ヤコブ病、癲癇、ハンチントン病を含む末梢神経系または中枢神経系の何れかの疾患または障害、および他の神経疾患、障害および症候群を含むが、これらに限定されない。

【0242】

“呼吸器疾患”とは、呼吸管を冒す何らかの疾患または障害を意味する。呼吸器疾患は、例えば喘息、慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)、アレルギー性鼻炎、副鼻腔炎、アレルギー、呼吸妨害、呼吸窮迫症候群、嚢胞性線維症、肺高血圧または血管収縮および肺気腫を含むが、これらに限定されない。

【0243】

“心血管疾患”とは、心臓および脈管構造を冒す疾患または状態を意味する。心血管疾患は、例えば冠動脈心疾患(ＣＨＤ)、脳血管疾患(ＣＶＤ)、大動脈弁狭窄症、末梢血管疾患、心筋梗塞(心臓発作)、不整脈および鬱血性心不全を含むが、これらに限定されない。

【0244】

“眼疾患”とは、本明細書で用いられるとき、眼および関連する構造の何らかの疾患、状態、体質、遺伝子型または表現型を意味する。眼疾患は、例えば嚢胞様黄斑浮腫、糖尿病網膜症、網膜格子状変性、網膜静脈閉塞症、網膜動脈閉塞症、黄斑変性(例えば加齢関連黄斑変性、例えば滲出型ＡＭＤまたは萎縮型ＡＭＤ)、トキソプラスマ症、網膜色素変性、結膜断裂、角膜断裂、緑内障などを含むが、これらに限定されない。

【0245】

“代謝疾患”とは、代謝経路を冒す何らかの疾患または状態を意味する。代謝疾患は、遺伝した酵素異常による先天性の異常な代謝プロセスか、または内分泌性臓器の疾患または代謝に重要な臓器、例えば肝臓の機能不全による後天性の異常な代謝プロセスに起因し得る。一つの態様において、代謝疾患は、肥満、インスリン抵抗性および糖尿病(例えばＩ型および／またはII型糖尿病)を含む。

【0246】

“皮膚疾患”とは、皮膚、真皮または髪の毛もしくは濾胞などの何らかの下部構造の何らかの疾患または状態を意味する。皮膚疾患、障害、状態および体質は、乾癬、異所性皮膚炎、皮膚癌、例えば黒色腫および基底細胞癌、頭髪喪失、脱毛および色素沈着の変化を含み得る。

【0247】

“聴覚疾患”とは、耳、例えば内耳、中耳、外耳および聴覚神経、その何れかの下部構造を含む、聴覚系の何らかの疾患または状態を意味する。聴覚疾患、障害、状態および体質は、聴覚消失、難聴、耳鳴、眩暈および平衡障害および運動障害を含み得る。

【0248】

一つの態様において、疾患または状態は、肝臓疾患、腫瘍、第VII因子が介在する疾患、および／またはＰＬＫ１が介在する疾患である。第VII因子が介在する疾患は、異常血液凝固および腫瘍を含み、従って、このような疾患は、血栓症(例えば静脈血栓塞栓症、肺塞栓症および卒中)を含む。

【0249】

生化学的用語および定義
用語“脂質”は、脂肪酸エステルを含むが、これに限定されず、そして、水に不溶性であるが多くの有機溶媒に可溶性であることによって特徴付けられる有機化合物のグループを言う。脂質は、少なくとも３つのクラス(１) 脂および油、ならびに蝋を含む“単純脂質”；(２) リン脂質および糖脂質を含む“脂質化合物”；および(３) “誘導化脂質”例えばステロイド、に分割され得る。

【0250】

用語“カチオン性脂質”は、本明細書で用いられるとき、正電荷を有する何れかの親油性化合物、例えば式(Ｉ)：

【化24】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、定義は、本明細書の他の箇所で示されている。]
を有する化合物を意味する。カチオン性脂質の他の例は、“組成物”の表題で上に示されている。

【0251】

ヘルパー脂質
用語“ヘルパー脂質”は、本明細書で用いられるとき、トランスフェクション(例えば生物活性薬物を含むナノ粒子のトランスフェクション)を或る程度増強する脂質を意味する。ヘルパー脂質がトランスフェクションを増強するメカニズムは、例えば、粒子の安定性を向上させること、および／または膜融合性を向上させることを含み得る。ヘルパー脂質は、ステロイド類およびアルキルレゾルシノール類を含む。ヘルパー脂質の例は、コレステロール、５−ヘプタデシルレゾルシノールおよびコレステロール ヘミスクシネートである。

【0252】

ステルス脂質
用語“ステルス脂質”は、本明細書で用いられるとき、ナノ粒子がin vivoで(例えば血中で)存在することができる時間の長さを延長する脂質を意味する。一つの態様において、ステルス脂質は、脂質部分に連結した親水性ポリマー頭部を含む。一つの態様においてリポソーム製剤中のステルス脂質は、ナノ粒子表面を保護し、それによって血液細胞によるオプソニン化および単核食細胞系のマクロファージによる取り込みを減少させる。本発明で使用するのに適当なステルス脂質の構造は、例えば式XIおよび式XIIで示された化合物を含むが、これらに限定されない。他の意図されるステルス脂質および当該脂質の生化学についての情報は、Romberg et al., Pharmaceutical Research, Vol. 25, No. 1, 2008, p.55-71 および Hoekstra et al., Biochimica et Biophysica Acta 1660 (2004) 41-52で見出され得る。

【0253】

一つの態様において、ステルス脂質は、ＰＥＧ(時々ポリ(エチレンオキシド)と呼ぶ)、および、ポリ(オキサゾリン)、ポリ(ビニルアルコール)、ポリ(グリセロール)、ポリ(Ｎ−ビニルピロリドン)、ポリアミノ酸およびポリ[Ｎ−(２−ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド]をベースとするポリマーから選択される基を含む。一つの態様において、ヘルパー脂質は、Rombergらに記載された通りに“脱ぎ捨てられる”ことができる。本発明の具体的なステルス脂質は、例えば式XIおよび式XIIで示されるものであり、これらは当業
者によってさらに置き換えられ得る。さらなる適当なＰＥＧ脂質は、例えば国際公開第2006/007712号に開示されている。

【0254】

具体的な適当なステルス脂質は、約Ｃ₄〜約Ｃ₄₀飽和または不飽和炭素原子を含むアルキル鎖を有するジアルキルグリセロールまたはジアルキルグリカミド(glycamide)基を含む、ポリエチレングリコール ジアシルグリセロールまたはポリエチレングリコール ジアシルグリカミド(ＰＥＧ−ＤＡＧ)コンジュゲートを含む。ジアルキルグリセロールまたはジアルキルグリカミド基は、さらに、１個以上の置換されたアルキル基を含んでもよい。本明細書に記載された何れかの態様において、ＰＥＧコンジュゲートは、ＰＥＧ−ジラウリルグリセロール、ＰＥＧ−ジミリスチルグリセロール(カタログ番号 GM 020 (NOF))、ＰＥＧ−ジパルミトイルグリセロール、ＰＥＧ−ジステアリルグリセロール、ＰＥＧ−ジラウリルグリカミド、ＰＥＧ−ジミリスチルグリカミド、ＰＥＧ−ジパルミトイルグリカミド、およびＰＥＧ−ジステアリル(disteryl)グリカミド、ＰＥＧ−コレステロール(１−[８'−(コレスタ−5−エン−３β−オキシ)カルボキサミド−３',６'−ジオキサオクタニル]−カルバモイル−ω−メチルポリ(エチレングリコール)、ＰＥＧ−ＤＭＢ(３,４−ジテトラデオキシベンジル−ω−メチルポリ(エチレングリコール)エーテル)、S001、S002、S003、S004、S005、S006、S007、S008、S009、S010、S011、S012、S013、S014、S015、S016、S017、S018、S019、S020、S021、S022、S023、S024、S025、S026、1,2 ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−[メトキシ(ポリエチレングリコール) 2000] (カタログ番号 880150P (Avanti Polar Lipids))から選択され得る。
S010およびS011は、それぞれ、ラベルIVaおよびIVcの下に国際公開第WO 2009/086558号に開示されている。

【0255】

ことわりのない限り、用語“ＰＥＧ”は、本明細書で用いられるとき、何れかのポリエチレングリコールまたは他のポリアルキレンエーテル・ポリマーを意味する。一つの態様において、ＰＥＧは、所望により置換された直鎖または分枝鎖のエチレングリコールまたはエチレンオキシドのポリマーである。一つの態様において、ＰＥＧは、非置換である。
一つの態様において、ＰＥＧは、例えば１個以上のアルキル、アルコキシ、アシルまたはアリール基によって置換されている。一つの態様において、用語は、ＰＥＧコポリマー、例えばＰＥＧ−ポリウレタンまたはＰＥＧ−ポリプロピレンを含む(例えばJ. Milton Harris, Poly(ethylene glycol) chemistry: biotechnical and biomedical applications (1992)を参照のこと。)；他の態様において、用語は、ＰＥＧコポリマーを含まない。一つの態様において、ＰＥＧは、約１３０〜約５０,０００、副態様において約１５０〜約３０,０００、副態様において約１５０〜約２０,０００、副態様において約１５０〜約１５,０００、副態様において約１５０〜約１０,０００、副態様において約１５０〜約６０００、副態様において約１５０〜約５０００、副態様において約１５０〜約４０００、副態様において約１５０〜約３０００、副態様において約３００〜約３０００、副態様において約１０００〜約３０００、副態様において約１５００〜約２５００の分子量を有する。

【0256】

或る態様において、ＰＥＧは、“ＰＥＧ ２０００”とも呼ばれる“ＰＥＧ ２Ｋ”であり、これは、約２０００ダルトンの平均分子量を有する。ＰＥＧ ２Ｋは、式(XIIa)：

【化25】

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によって本明細書で表されるものであり、ここで、平均重合度を意味するｎは４５であり、約４５サブユニットを含む。しかし、当技術分野で既知の他のＰＥＧの態様は、平均重合度が約２３サブユニット(ｎ＝２３)および／または６８サブユニット(ｎ＝６８)を含むものを用い得る。

【0257】

ＲＮＡ干渉およびＲＮＡｉ製剤についての定義
“脂質ナノ粒子”とは、分子間力によって互いに物理的に結合している複数の(すなわち１種より多い)脂質分子を含む粒子を意味する。脂質ナノ粒子は、例えばミクロスフィア(単層および多層の小胞を含むもの、例えばリポソーム)、エマルジョン中で分散された相、ミセルまたは懸濁液中の内部相であってもよい。

【0258】

脂質ナノ粒子は、約１〜約２,５００nm、約１〜約１,５００nm、約１〜約１,０００nm、副態様において約５０〜約６００nm、副態様において、約５０〜約４００nm、副態様において約５０〜約２５０nm、副態様において約５０〜約１５０nmのサイズを有する。断りのない限り、本明細書で記載された全てのサイズは、Malvern Zetasizerで動力学的光散乱によって測定される完全に形成されたナノ粒子の平均サイズ(直径)である。ナノ粒子サンプルは、計数速度が約２００〜４００kctsとなるようリン酸緩衝食塩水(ＰＢＳ)で希釈される。データは、光強度測定の重量平均として表される。

【0259】

一つの態様において、生物活性薬物は、脂質ナノ粒子(例えば小胞)と結合しており、好ましくはそれに封入されている。

【0260】

一つの態様において、脂質ナノ粒子は、生物活性薬物、本発明の化合物、中性脂質、ヘルパー脂質およびステルス脂質を含む。

【0261】

一つの態様において、リポソーム粒子は、血清中で安定である。

【0262】

用語“低分子干渉核酸”(ｓｉＮＡ)は、本明細書で用いられるとき、配列特異的な方法で、ＲＮＡ干渉(ＲＮＡｉ)の媒介または遺伝子発現抑制によって、遺伝子発現またはウイルス複製を阻害または下方制御することができる何れかの核酸分子を言う。それは、低分子干渉ＲＮＡ(ｓｉＲＮＡ)、ミクロＲＮＡ(ｍｉＲＮＡ)、低分子干渉オリゴヌクレオチド、および、化学修飾された低分子干渉核酸分子を含む。ｓｉＲＮＡは、動物および植物において、ＲＮＡ干渉、配列特異的転写後遺伝子発現抑制のプロセスを担う。ｓｉＲＮＡは、発現抑制される遺伝子標的に相同なまたは特異的な、より長い二本鎖ＲＮＡ(ｄｓＲＮＡ)から、リボヌクレアーゼIII切断によって作られる。

【0263】

“ＲＮＡ干渉”(ＲＮＡｉ)とは、一般的に当技術分野で知られている通り、細胞中で、遺伝子発現を阻害するまたは下方制御する生物学的プロセスを意味する。例えば、Zamore and Haley, 2005, Science, 309, 1519 1524; Zamore et al., 2000, Cell, 101, 25-33; Elbashir et al., 2001, Nature, 411, 494 498; および Kreutzer et al., 国際公開第00/44895号; Fire, 国際公開第99/32619号; Mello and Fire, 国際公開第01/29058号などを参照のこと。

【0264】

本明細書で用いられるとき、ＲＮＡｉは、配列特異的ＲＮＡ干渉を記載するために用いられる他の用語、例えば転写後遺伝子発現抑制、翻訳阻害、転写阻害またはエピジェネティクスと等価である。例えば、本発明の脂質を含む製剤は、転写後レベルおよび／または翻訳前レベルの両方で後成的に遺伝子発現抑制するｓｉＮＡ分子と組み合わせて使用することができる。非限定的な例において、ｓｉＮＡ分子による遺伝子発現調節は、ＲＩＳＣを介したＲＮＡ(コーディングまたは非コーディングＲＮＡの何れか)のｓｉＮＡ介在切断、あるいは、当技術分野で知られている転写阻害の結果生じ得る。他の態様において、ｓｉＮＡによる遺伝子発現の調節は、例えば Janowski et al., 2005, Nature Chemical Biology, 1, 216-222で報告されているような、転写阻害の結果生じ得る。

【0265】

“ＲＮＡｉ阻害剤”とは、細胞または患者におけるＲＮＡ干渉機能または活性を下方制御する(例えば減少させるまたは阻害する)ことができる何らかの分子を意味する。ＲＮＡｉ阻害剤は、ＲＩＳＣなどのタンパク質成分、またはｍｉＲＮＡまたはｓｉＲＮＡなどの核酸成分を含むＲＮＡｉ経路の何れかの化合物と相互作用するか、またはこれらの機能を妨害することによって、ＲＮＡｉ(例えば標的ポリヌクレオチドのＲＮＡｉ介在切断、翻訳阻害または転写阻害、または転写抑制)を下方制御、減少または阻害することができる。ＲＮＡｉ阻害剤は、ｓｉＮＡ分子、アンチセンス分子、アプタマーまたはＲＩＳＣと相互作用するか、またはその機能を妨害する低分子、ｍｉＲＮＡまたはｓｉＲＮＡ、または細胞もしくは患者におけるＲＮＡｉ経路の他の何れかの成分であってもよい。ＲＮＡｉ(例えば標的ポリヌクレオチドのＲＮＡｉ介在切断、翻訳阻害または転写抑制)を阻害することによって、標的遺伝子の発現を調節(例えば上方制御または下方制御)するために、ＲＮＡｉ阻害剤を用いることができる。一つの態様において、ＲＮＡ阻害剤は、翻訳阻害による遺伝子発現の内因性下方制御または阻害、翻訳阻害、転写抑制、または、ポリヌクレオチド(例えばｍＲＮＡ)のＲＩＳＣ介在切断を妨害する(例えば減少させるまたは妨げる)ことによって、遺伝子発現を上方制御するために用いられる。遺伝子発現の内因性抑制、発現抑制または阻害を妨害することによって、本発明のＲＮＡｉ阻害剤は、従って、機能の喪失に起因する疾患または状態を処置するために、遺伝子発現を上方制御するために用いられ得る。用語“ＲＮＡｉ阻害剤”は、本明細書の種々の態様において、用語“ｓｉＮＡ”と同じ意味で用いられる。

【0266】

用語“酵素的核酸”は、本明細書で用いられるとき、基質結合領域において特定の遺伝子標的に相補性を有し、かつ、標的ＲＮＡを特異的に切断する作用をする酵素活性を有し、それによって標的ＲＮＡ分子を不活性化する核酸分子を言う。相補性領域は、酵素的核酸分子が標的ＲＮＡに十分にハイブリダイゼーションして切断をすることを可能とする。
１００％の相補性が好ましいが、５０〜７５％程の相補性もまた、本発明に有用であり得る(例えばWerner and Uhlenbeck, 1995, Nucleic Acids Research, 23, 2092-2096; Hammann et al., 1999, Antisense and Nucleic Acid Drug Dev., 9, 25-31を参照のこと。)。核酸は、塩基部分、糖部分およびリン酸部分で修飾され得る。用語酵素的核酸は、例えばリボザイム、触媒的ＲＮＡ、酵素的ＲＮＡ、触媒的ＤＮＡ、アプタザイム(aptazyme)またはアプタマー結合リボザイム、制御可能なリボザイム、触媒的オリゴヌクレオチド、ヌクレオザイム(nucleozyme)、ＤＮＡザイム、ＲＮＡ酵素、エンドリボヌクレアーゼ、エンドヌクレアーゼ、ミニザイム(minizyme)、リードザイム(leadzyme)、オリゴザイム(oligozyme)またはＤＮＡ酵素などのフレーズと同じ意味で用いられる。これらの用語は全て、酵素活性を有する核酸分子を記載している。酵素的核酸分子の重要な特徴は、標的核酸領域の１つ以上と相補性である基質特異的結合部位を有すること、および、それが核酸切断および／または分子へのライゲーション活性を与える基質結合部位中にまたはその周辺にヌクレオチド配列を有することである(例えば Cech et al., 米国特許出願第4,987,071号; Cech et al., 1988, 260 JAMA 3030を参照のこと)。本発明のリボザイムおよび酵素的核酸分子は、例えば、当技術分野で記載された通りに、または本明細書の他の場所で記載された通りに、化学修飾されていてもよい。

【0267】

用語“アンチセンス核酸”は、本明細書で用いられるとき、ＲＮＡ−ＲＮＡまたはＲＮＡ−ＤＮＡまたはＲＮＡ−ＰＮＡ(タンパク質核酸; Egholm et al., 1993 Nature 365, 566)相互作用によって標的ＲＮＡに結合し、標的ＲＮＡの活性を変化させる非酵素的核酸分子を言う(レビューについては、Stein and Cheng, 1993 Science 261, 1004 および Woolf et al., 米国特許第5,849,902号を参照のこと。)。アンチセンスＤＮＡは、化学的に合成されるか、または、一本鎖ＤＮＡ発現ベクターまたはその等価物の使用によって発現され得る。本発明のアンチセンス分子は、例えば当技術分野に記載された通りに、化学修飾され得る。

【0268】

用語“ＲＮＡアーゼＨ活性化領域”は、本明細書で用いられるとき、ＲＮＡに結合して、細胞のＲＮＡアーゼＨ酵素によって認識される非共有結合性複合体を形成することができる核酸分子の領域(一般的に４〜２５ヌクレオチド長と同じまたはそれより長いもの、好ましくは５〜１１ヌクレオチド長)を言う(例えばArrow et al., 米国特許第5,849,902号; Arrow et al., 米国特許第5,989,912号を参照のこと。)。ＲＮＡアーゼＨ酵素は、核酸分子−標的ＲＮＡ複合体に結合し、標的ＲＮＡ配列を切断する。

【0269】

用語“２,５−Ａアンチセンスキメラ”は、本明細書で用いられるとき、５'−リン酸化２',５'−結合アデニレート残基を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを言う。これらのキメラは、配列特異的な方法で、標的ＲＮＡに結合し、細胞の２,５−Ａ依存性リボヌクレアーゼを活性化し、次に標的ＲＮＡを切断する(Torrence et al., 1993 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90, 1300; Silverman et al., 2000, Methods Enzymol., 313, 522-533; Player and Torrence, 1998, Pharmacol. Ther., 78, 55-113)。２,５−Ａアンチセンスキメラ分子は、例えば、当技術分野で記載された通りに化学的に修飾され得る。

【0270】

用語“三本鎖形成オリゴヌクレオチド”は、本明細書で用いられるとき、配列特異的な方法で二本鎖ＤＮＡに結合して三本鎖を形成することができるオリゴヌクレオチドを言う。このような三本鎖構造の形成が、標的となった遺伝子の転写を阻害することが示されている(Duval Valentin et al., 1992 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 504; Fox, 2000, Curr. Med. Chem., 7, 17-37; Praseuth et. al., 2000, Biochim. Biophys. Acta, 1489, 181-206)。本発明の三本鎖形成オリゴヌクレオチド分子は、例えば、当技術分野で記載された通りに化学的に修飾され得る。

【0271】

用語“デコイＲＮＡ”は、本明細書で用いられるとき、予め定められたリガンドに優先的に結合するよう設計されたＲＮＡ分子またはアプタマーを言う。このような結合は、標的分子の阻害または活性化をもたらし得る。デコイＲＮＡまたはアプタマーは、特異的なリガンドの結合について、天然由来の結合標的と競合し得る。同様に、デコイＲＮＡは、受容体に結合してエフェクター分子の結合をブロックするか、または、受容体の対象に結合して受容体との相互作用を妨げるよう設計され得る。本発明のデコイ分子は、例えば、当技術分野で記載された通りに化学的に修飾され得る。

【0272】

用語“一本鎖ＤＮＡ”(ｓｓＤＮＡ)は、本明細書で用いられるとき、直線状一本鎖を含む天然由来または合成デオキシリボ核酸分子を言う。例えばｓｓＤＮＡは、センスまたはアンチセンス遺伝子配列またはＥＳＴ(Expressed Sequence Tag)であり得る。

【0273】

用語“アロザイム”は、本明細書で用いられるとき、例えば米国特許第5,834,186号、第5,741,679号、第5,589,332号、第5,871,914号およびＰＣＴ国際公開第00/24931号、第00/26226号、第98/27104号および第99/29842号を含む、アロステリック酵素的核酸分子を言う。

【0274】

“アプタマー”とは、本明細書で用いられるとき、標的分子に特異的に結合するポリヌクレオチド組成物であって、ポリヌクレオチドが細胞中の標的分子によって通常認識される配列と異なる配列を有するポリヌクレオチド組成物を意味する。あるいは、アプタマーは、天然では核酸に結合しない標的分子に結合する核酸分子であり得る。標的分子は、対象の何れの分子であってもよい。本発明のアプタマー分子は、当技術分野で記載された通りに化学修飾され得る。

【0275】

“調節”とは、遺伝子発現、またはＲＮＡ分子レベル、または１個以上のタンパク質またはタンパク質サブユニットをコードする等価のＲＮＡ分子の発現、あるいは、１個以上のタンパク質またはタンパク質サブユニットの活性を、上方制御するか、または下方制御する、あるいは、モジュレーターなしで観察されるよりも発現、レベルまたは活性が高いまたは低くなるように、存在しなくなることを意味する。例えば、一つの態様において、用語“調節”は、“阻害”を意味する。一つの態様において、経路の調節は、本発明の用語では、例えば、標的ｍＲＮＡによって標的化されるかもしくはコードされているタンパク質、酵素または基質を含むか、またはこれらによって制御される、治療上意味のある構成要素および／または生物学的経路のエンドポイントを上方制御することまたは下方制御することを表す。

【0276】

“阻害”、“下方制御”または“減少”とは、１個以上のタンパク質またはタンパク質サブユニットをコードする遺伝子またはＲＮＡ分子レベルまたは等価ＲＮＡ分子の発現、あるいは、１個以上のタンパク質またはタンパク質サブユニットの活性が、通常環境で、例えば核酸分子(例えばｓｉＮＡ)の非存在下で観察されるよりも下まで減少することを意味する。一つの態様において、ｓｉＮＡ分子による阻害、下方制御または減少は、不活性化されたまたは減弱した分子の存在下で観察されるレベルより低い。一つの態様において、ｓｉＮＡ分子による阻害、下方制御または減少は、例えばスクランブル配列またはミスマッチを有するｓｉＮＡ分子の存在下で観察されるレベルより低い。一つの態様において、核酸分子による阻害、下方制御または遺伝子発現の減少は、核酸分子の非存在下よりも核酸分子の存在下で大きい。一つの態様において、遺伝子発現の阻害、下方制御または減少は、転写後発現抑制、例えば標的核酸分子(例えばＲＮＡ)のＲＮＡｉ介在切断、または、翻訳阻害に関係している。一つの態様において、遺伝子発現の阻害、下方制御または減少は、転写前発現抑制に関係する。

【0277】

“上方制御する”または“促進する”とは、遺伝子の発現、またはＲＮＡ分子レベル、または１個以上のタンパク質もしくはタンパク質サブユニットをコードする等価のＲＮＡ分子、または１個以上のタンパク質もしくはタンパク質サブユニットの活性が、天然の環境で、例えば核酸分子(例えばｓｉＮＡ)の非存在下で観察されるよりも増加することを意味する。一つの態様において、ｓｉＮＡ分子による遺伝子発現の上方制御または促進は、不活性または減衰した分子の存在下で観察されるレベルより高い。一つの態様において、ｓｉＮＡ分子による遺伝子発現の上方制御または促進は、例えばスクランブル配列またはミスマッチを有するｓｉＮＡ分子の存在下で観察されるレベルより高い。一つの態様において、核酸分子による上方制御または促進は、核酸分子の非存在下よりも核酸分子の存在下で大きい。一つの態様において、遺伝子発現の上方制御または促進は、ＲＮＡ介在遺伝子発現抑制、例えば対象の遺伝子の発現を下方制御し、阻害し、または発現抑制するコーディングまたは非コーティングＲＮＡ標的のＲＮＡｉ介在切断または発現抑制に関係している。

【0278】

“遺伝子”または“標的遺伝子”とは、ＲＮＡ、例えばポリペプチドをコードする構造遺伝子を含む(これらに限定されない)、核酸配列をコードする核酸を意味する。遺伝子または標的遺伝子はまた、機能的ＲＮＡ(ＦＲＮＡ)または非コーディングＲＮＡ(ｎｃＲＮＡ)、例えば小分子ＲＮＡ(ｓｔＲＮＡ)、ミクロＲＮＡ(ｍｉＲＮＡ)、核内低分子ＲＮＡ(ｓｎＲＮＡ)、低分子干渉ＲＮＡ(ｓｉＲＮＡ)、核小体低分子ＲＮＡ(ｓｎＲＮＡ)、リボソーム(ｒＲＮＡ)、トランスファーＲＮＡ(ｔＲＮＡ)およびその前駆体ＲＮＡをコードし得る。このような非コーディングＲＮＡは、機能的または制御細胞プロセスに関係するＦＲＮＡまたはｎｃＲＮＡの活性を調節するｓｉＮＡ介在ＲＮＡ干渉の標的核酸分子となる。そのために、疾患を引き起こす異常なＦＲＮＡまたはｎｃＲＮＡ活性をｓｉＮＡ分子によって調節することができる。

【0279】

“標的”とは、本明細書で用いられるとき、標的遺伝子をコードする何らかの標的タンパク質、ペプチドまたはポリペプチドを意味する。用語“標的”はまた、標的活性を有する何らかの標的タンパク質、ペプチドまたはポリペプチドをコードする核酸配列、例えば標的ＲＮＡをコードするものを言う。用語“標的”はまた、他の標的をコードする配列、例えば他の標的アイソフォーム、変異体標的遺伝子、標的遺伝子のスプライスバリアント、および遺伝子多型を含むことを意味する。“標的核酸”とは、その発現または活性が調節されるべきものである何れかの核酸配列を意味する。標的核酸はＤＮＡであってもＲＮＡであってもよい。

【0280】

“非標準塩基対”とは、何れかの非ワトソン・クリック塩基対、例えばミスマッチおよび／または、ゆらぎ塩基を意味する。

【0281】

“センス領域”とは、ｓｉＮＡ分子のアンチセンス領域と相補性を有するｓｉＮＡ分子のヌクレオチド配列を意味する。さらに、ｓｉＮＡ分子のセンス領域は、標的核酸配列と相同性を有する核酸配列を含み得る。一つの態様において、ｓｉＮＡ分子のセンス領域は、センス鎖またはパッセンジャー鎖と呼ぶ。

【0282】

“アンチセンス領域”とは、標的核酸配列に相補性を有するｓｉＮＡ分子のヌクレオチド配列を意味する。さらに、ｓｉＮＡ分子のアンチセンス領域は、所望によりｓｉＮＡ分子のセンス領域に相補性を有する核酸配列を含んでもよい。一つの態様において、ｓｉＮＡ分子のアンチセンス領域は、アンチセンス鎖またはガイド鎖と呼ばれる。

【0283】

“標的核酸”または“標的ポリヌクレオチド”は、発現または活性が調節されるべき何れかの核酸配列を意味する。標的核酸は、ＤＮＡであってもＲＮＡであってもよい。一つの態様において、本発明の標的核酸は、標的ＲＮＡである。一つの態様において、本発明の標的核酸は、標的ＤＮＡである。

【0284】

“相補性”とは、伝統的なワトソン−クリック・タイプまたは他の非伝統的なタイプ、例えばフーグスティーン塩基対形成の何れかによって、核酸が他の核酸配列と水素結合を形成し得ることを意味する。一つの態様において、本発明の二本鎖核酸分子、例えばｓｉＮＡ分子(ここで、各鎖は１５ヌクレオチド長と４０ヌクレオチド長の間である。)は、二本鎖核酸分子の２本鎖の間で、約１０％と約１００％の間(例えば約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％または１００％)の相補性を含む。相補性パーセントは、第２核酸配列と水素結合を形成する(例えばワトソン−クリックの塩基対形成)ことによってペアとなり得る、核酸分子中の隣接する残基のパーセンテージを示す。

【0285】

化学用語および定義
本明細書を説明する目的において、下記の定義を適用し、適切な場合はいつでも、単数形で用いられた用語は、複数を含み、またその逆も同様である。

【0286】

ハロ
本明細書で用いられるとき、用語“ハロゲン”または“ハロ”は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを言う。用語“ハロゲン”(または“ハロ”)は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を含む。

【0287】

本明細書で用いられるとき、用語“ハロアルキル”は、１個以上の本明細書で定義されたハロ基によって置換されている、本明細書で定義されたアルキルを言う。ハロアルキルは、モノハロアルキル、ジハロアルキル、または、パーハロアルキルを含むポリハロアルキルであり得る。モノハロアルキルは、アルキル基内に１個のヨード、ブロモ、クロロまたはフルオロを有し得る。ジハロアルキルおよびポリハロアルキル基は、アルキル内に２個以上の同一のハロ原子または異なるハロ基の組み合わせを有し得る。典型的には、ポリハロアルキルは、１２個まで、または１０個または８個または６個または４個または３個または２個のハロ基を含む。ハロアルキルの非限定的な例は、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、クロロメチル、ジクロロメチル、トリクロロメチル、ペンタフルオロエチル、ヘプタフルオロプロピル、ジフルオロクロロメチル、ジクロロフルオロメチル、ジフルオロエチル、ジフルオロプロピル、ジクロロエチルおよびジクロロプロピルを含む。パーハロアルキルは、全ての水素原子がハロ原子で置き換えられているアルキルを言う。

【0288】

アルキル、アルキレン、アルケニル、アルキニル、シクロアルキルなど
用語“アルキル”、“アルキレン”、“アルケニル”および“アルキニル”は、直鎖および分枝鎖の非環式形を言うために本明細書で用いられる。その環状アナログは、シクロアルキル、シクロアルケニルなどと呼ばれる。

【0289】

用語“アルキル”は、一価の直鎖または分枝鎖の飽和非環状ヒドロカルビル基を含む。本明細書で用いられるとき、用語“アルキル”は、５０個までの炭素原子を有する完全に飽和の分枝または非分枝炭化水素部分を言う。ことわりのない限り、アルキルは、１〜５０個の炭素原子、１〜４０個の炭素原子、１〜３０個の炭素原子、１〜２０個の炭素原子、１〜１６個の炭素原子、１〜１０個の炭素原子、１〜７個の炭素原子または１〜４個の炭素原子を有する炭化水素部分を言う。アルキルの代表例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、３−メチルヘキシル、２,２−ジメチルペンチル、２,３−ジメチルペンチル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、ｎ−デシルなどを含むが、これらに限定されない。一つの態様において、アルキルは、Ｃ_1-10アルキルであり、他の態様においてＣ_1-6アルキルであり、他の態様においてＣ_1-4アルキル、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピルまたはｔ−ブチル基である。

【0290】

用語“シクロアルキル”は、一価の飽和環状ヒドロカルビル基を含む。一つの態様において、シクロアルキルはＣ_3-10シクロアルキルであり、他の態様においてＣ_3-6シクロアルキルであり、例えばシクロペンチルおよびシクロヘキシルである。

【0291】

用語“アルコキシ”は、アルキル−Ｏ−(ここで、アルキルは、上で定義されたものである。)を意味する。アルコキシの代表例は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、２−プロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ、シクロプロピルオキシ−、シクロヘキシルオキシ−などを含むが、これらに限定されない。典型的には、アルコキシ基は、約１〜７個、より好ましくは約１〜４個の炭素原子を有する。

【0292】

用語“アルケニル”は、少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を有する一価の直鎖または分枝鎖の不飽和非環状ヒドロカルビル基を含み、一つの態様において炭素−炭素三重結合を有さないものである。本明細書で用いられるとき、用語“アルキレン”は、１〜５０個の炭素原子を有する本明細書で定義された二価のアルキル基を言う。それは、１〜５０個の炭素原子を含む。断りのない限り、アルキレンは、１〜５０個の炭素原子、１〜４０個の炭素原子、１〜３０個の炭素原子、１〜２０個の炭素原子、１〜１６個の炭素原子、１〜１０個の炭素原子、１〜７個の炭素原子または１〜４個の炭素原子を有する部分を言う。アルキレンの代表例は、メチレン、エチレン、ｎ−プロピレン、イソプロピレン、ｎ−ブチレン、ｓｅｃ−ブチレン、イソブチレン、ｔｅｒｔ−ブチレン、ｎ−ペンチレン、イソペンチレン、ネオペンチレン、ｎ−ヘキシレン、３−メチルヘキシレン、２,２−ジメチルペンチレン、２,３−ジメチルペンチレン、ｎ−ヘプチレン、ｎ−オクチレン、ｎ−ノニレン、ｎ−デシレンなどを含むが、これらに限定されない。一つの態様において、アルケニルは、Ｃ_2-10アルケニルであり、他の態様においてＣ_2-6アルケニルであり、他の態様において、Ｃ_2-4アルケニルである。

【0293】

用語“シクロアルケニル”は、少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を有する一価の部分的に不飽和な環状ヒドロカルビル基を含む。一つの態様において、シクロアルケニルは、Ｃ_3-10シクロアルケニルであり、他の態様において、Ｃ_5-10シクロアルケニル、例えばシクロヘキセニルである。

【0294】

用語“アルキニル”は、少なくとも１個の炭素−炭素三重結合を有する、一価の直鎖または分枝の不飽和非環状ヒドロカルビル基を含み、一つの態様において炭素−炭素二重結合を有さないものである。一つの態様において、アルキニルは、Ｃ_2-10アルキニルであり、他の態様においてＣ_2-6アルキニルであり、他の態様においてＣ_2-4アルキニルである。

【0295】

用語“シクロアルキニル”は、少なくとも１個の炭素−炭素三重結合を有する一価の部分的に不飽和の環状ヒドロカルビル基を含む。一つの態様において、シクロアルキニルは、Ｃ_6-10シクロアルキニルであり、他の態様においてＣ_8-10シクロアルキニルである。

【0296】

用語“アルキレン”は、二価の直鎖または分枝鎖の飽和非環状ヒドロカルビル基を含む。一つの態様において、アルキレンは、Ｃ_1-10アルキレンであり、他の態様において
Ｃ_1-6アルキレンであり、他の態様においてＣ_1-4アルキレン、例えばメチレン、エチレン、ｎ−プロピレン、ｉ−プロピレンまたはｔ−ブチレン基である。

【0297】

用語“アルケニレン”は、少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を有する二価の直鎖または分枝鎖の不飽和非環状ヒドロカルビル基を含み、一つの態様において炭素−炭素三重結合を有さないものである。一つの態様において、アルケニレンは、Ｃ_2-10アルケニレンであり、他の態様においてＣ_2-6アルケニレンであり、他の態様においてＣ_2-4アルケニレンである。

【0298】

用語“アルキニレン”は、少なくとも１個の炭素−炭素三重結合を有する、二価の直鎖または分枝鎖の不飽和非環状ヒドロカルビル基を含む。一つの態様において アルキニレンは、Ｃ_2-10アルキニレンであり、他の態様においてＣ_2-6アルキニレンであり、他の態様においてＣ_2-4アルキニレンである。

【0299】

ヘテロアルキルなど
本明細書で用いられるとき、用語“ヘテロ原子”は、窒素(Ｎ)、酸素(Ｏ)、リン(Ｐ)または硫黄(Ｓ)原子を言い、特に窒素または酸素である。

【0300】

用語“ヘテロアルキル”は、６個までの炭素原子、一つの態様において５個までの炭素原子、他の態様において４個までの炭素原子、他の態様において３個までの炭素原子、他の態様において２個までの炭素原子、他の態様において１個の炭素原子が、それぞれ独立して、Ｏ、Ｓ(Ｏ)_q、Ｎ、Ｐ(Ｏ)_rまたはＳｉ (好ましくはＯ、Ｓ(Ｏ)_qまたはＮ)によって置き換えられており、ただし、少なくとも１個のアルキル炭素原子が残っているアルキル基を含む。ヘテロアルキル基は、Ｃで結合していてもヘテロで結合していてもよく、すなわち、それは、炭素原子を介して、またはＯ、Ｓ(Ｏ)_q、Ｎ、Ｐ(Ｏ)_rもしくはＳｉを介して、分子の残りに連結していてもよい。なお、Ｓ(Ｏ)_qおよびＰ(Ｏ)_rは、下に定義する。

【0301】

用語“ヘテロシクロアルキル”は、６個までの炭素原子、一つの態様において５個までの炭素原子、他の態様において４個までの炭素原子、他の態様において３個までの炭素原子、他の態様において２個までの炭素原子、他の態様において１個の炭素原子が、それぞれ独立して、Ｏ、Ｓ(Ｏ)_qまたはＮによって置き換えられており、ただし少なくとも１個のシクロアルキル炭素原子が残っているシクロアルキル基を含む。ヘテロシクロアルキル基の例は、オキシラニル、チアラニル(thiaranyl)、アジリジニル、オキセタニル、チアタニル(thiatanyl)、アゼチジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、ピロリジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジニル、１,４−ジオキサニル、１,４−オキサチアニル(oxathianyl)、モルホリニル、１,４−ジチアニル、ピペラジニル、１,４−アザチアニル、オキセパニル、チエパニル(thiepanyl)、アゼパニル、１,４−ジオキセパニル、１,４−オキサチエパニル(oxathiepanyl)、１,４−オキサアゼパニル、１,４−ジチエパニル(dithiepanyl)、１,４−チエアゼパニル(thieazepanyl)および１,４−ジアゼパニルを含む。ヘテロシクロアルキル基は、Ｃで結合していてもＮで結合していてもよく、すなわち、それは、炭素原子または窒素原子を介して、分子の残りに連結していてもよい。

【0302】

用語“ヘテロアルケニル”は、３個までの炭素原子、一つの態様において２個までの炭素原子、他の態様において１個の炭素原子が、それぞれ独立して、Ｏ、Ｓ(Ｏ)_qまたはＮによって置き換えられており、ただし少なくとも１個のアルケニル炭素−炭素二重結合が残っているアルケニル基を含む。ヘテロアルケニル基は、Ｃで結合していてもヘテロで結合していてもよく、すなわち、それは、炭素原子またはＯ、Ｓ(Ｏ)_qまたはＮを介して、分子の残りに連結していてもよい。

【0303】

用語“ヘテロシクロアルケニル”は、３個までの炭素原子、一つの態様において２個までの炭素原子、他の態様において１個の炭素原子が、それぞれ独立して、Ｏ、Ｓ(Ｏ)_qまたはＮによって置き換えられており、ただし、少なくとも１個のシクロアルケニル炭素−炭素二重結合が残っているシクロアルケニル基を含む。ヘテロシクロアルケニルの例は、３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラニル、５,６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラニル、２Ｈ−ピラニル、１,２,３,４−テトラヒドロピリジニルおよび１,２,５,６−テトラヒドロピリジニルを含む。ヘテロシクロアルケニル基は、Ｃで結合していてもＮで結合していてもよく、すなわち、それは、炭素原子または窒素原子を介して分子の残りに連結していてもよい。一つの態様において、本発明のヘテロシクロアルケニル基は、Ｃ₃−Ｃ₁₀シクロアルケニル基を含む。一つの態様において、本発明のヘテロシクロアルケニル基は、Ｃ₅−Ｃ₁₀シクロアルケニル基を含む。

【0304】

用語“ヘテロアルキニル”は、３個までの炭素原子、一つの態様において２個までの炭素原子、他の態様において１個の炭素原子が、それぞれ独立して、Ｏ、Ｓ(Ｏ)_qまたはＮによって置き換えられており、ただし、少なくとも１個のアルキニル炭素−炭素三重結合が残っているアルキニル基を含む。ヘテロアルキニル基は、Ｃで結合していてもヘテロで結合していてもよく、すなわち、それは、炭素原子、またはＯ、Ｓ(Ｏ)_qもしくはＮを介して、分子の残りに連結していてもよい。

【0305】

用語“ヘテロシクロアルキニル”は、３個までの炭素原子、一つの態様において２個までの炭素原子、他の態様において１個の炭素原子が、それぞれ独立して、Ｏ、Ｓ(Ｏ)_qまたはＮによって置き換えられており、ただし、少なくとも１個のシクロアルキニル炭素−炭素三重結合が残っているシクロアルキニル基を含む。ヘテロシクロアルケニル基は、Ｃで結合していてもＮで結合していてもよく、すなわち、それは、炭素原子もしくは窒素原子を介して分子の残りに連結していてもよい。ヘテロシクロアルキニル基の例は、アザシクロオクタ−４−イニルを含む。一つの態様において、本発明は、Ｃ₃−Ｃ₁₀ヘテロシクロアルキニル基を含む。一つの態様において、本発明は、Ｃ₅−Ｃ₁₀ヘテロシクロアルキニル基を含む。

【0306】

用語“ヘテロアルキレン”は、３個までの炭素原子、一つの態様において２個までの炭素原子、他の態様において１個の炭素原子が、それぞれ独立して、Ｏ、Ｓ(Ｏ)_qまたはＮによって置き換えられており、ただし、少なくとも１個のアルキレン炭素−炭素結合が残っているアルキレン基を含む。

【0307】

用語“ヘテロアルケニレン”は、３個までの炭素原子、一つの態様において２個までの炭素原子、他の態様において１個の炭素原子が、それぞれ独立して、Ｏ、Ｓ(Ｏ)_qまたはＮによって置き換えられており、ただし、少なくとも１個のアルケニレン炭素−炭素二重結合が残っているアルケニレン基を含む。

【0308】

用語“ヘテロアルキニレン”は、３個までの炭素原子、一つの態様において２個までの炭素原子、他の態様において１個の炭素原子が、それぞれ独立して、Ｏ、Ｓ(Ｏ)_qまたはＮによって置き換えられており、ただし、少なくとも１個のアルキニレン炭素−炭素三重結合が残っているアルキニレン基を含む。

【0309】

アリール
用語“アリール”は、一価の芳香族環状ヒドロカルビル基を含み、例えばフェニルまたはナフチル(例えば１−ナフチルまたは２−ナフチル)である。一般的に、アリール基は、単環式芳香環基であっても、多環式縮合芳香環基であってもよい。好ましいアリールは、Ｃ₆−Ｃ₁₄アリールである。本明細書で用いられるとき、用語“アリール”は、環部分に６〜２０個の炭素原子を有する芳香族炭化水素基を言う。典型的には、アリールは、６〜２０個の炭素原子を有する単環式、二環式または三環式アリールであり、１個以上の非芳香族炭化水素環が縮合した１個以上の芳香環を含む。非限定的な例は、フェニル、ナフチルまたはテトラヒドロナフチルを含む。

【0310】

アリール基の他の例は、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレン、アントラセン、アズレン、クリセン、コロネン、フルオランテン、フルオレン、ａｓ−インダセン、ｓ−インダセン、インデン、ナフタレン、オバレン、ペリレン、フェナレン、フェナントレン、ピセン、プレイアデン、ピレン、ピラントレンおよびルビセンの一価の誘導体である。

【0311】

用語“アリールアルキル”は、アリール基で置換されたアルキルを意味し、例えばベンジルである。

【0312】

用語“アリーレン”は、二価の芳香族環状ヒドロカルビル基を含み、例えばフェニレンである。一般的に、アリーレン基は、単環式芳香環基であっても、多環式縮合芳香環基であってもよい。好ましいアリーレンは、Ｃ₆−Ｃ₁₄アリーレンである。アリーレン基の他の例は、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレン、アントラセン、アズレン、クリセン、コロネン、フルオランテン、フルオレン、ａｓ−インダセン、ｓ−インダセン、インデン、ナフタレン、オバレン、ペリレン、フェナレン、フェナントレン、ピセン、プレイアデン、ピレン、ピラントレンおよびルビセンの二価の誘導体である。

【0313】

ヘテロアリール
用語“ヘテロアリール”は、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＮＲ^N (ここで、Ｒ^Nは下に定義される(一つの態様において、Ｈまたはアルキル(例えばＣ_1-6アルキル)である。)から独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含む、一価のヘテロ芳香族環状ヒドロカルビル基を含む。本明細書で用いられるとき、用語“ヘテロアリール”は、Ｎ、ＯまたはＳから選択される１〜８個のヘテロ原子を有する５〜１４員単環式または二環式または三環式芳香環
系を言う。典型的に、ヘテロアリールは、５〜１０員の環系(例えば５〜７員単環式または８〜１０員二環式)または５〜７員環系である。典型的なヘテロアリール基は、２−または３−チエニル、２−または３−フリル、２−または３−ピロリル、２−、４−または５−イミダゾリル、３−、４−または５−ピラゾリル、２−、４−または５−チアゾリル、３−、４−または５−イソチアゾリル、２−、４−または５−オキサゾリル、３−、４−または５−イソオキサゾリル、３−または５−１,２,４−トリアゾリル、４−または５−１,２,３−トリアゾリル、テトラゾリル、２−、３−または４−ピリジル、３−または４−ピリダジニル、３−、４−または５−ピラジニル、２−ピラジニル、および２−、４−または５−ピリミジニルを含む。

【0314】

用語“ヘテロアリール”はまた、ヘテロ芳香環が、１個以上のアリール環、脂環式環またはヘテロシクリル環と縮合しており、結合点がヘテロ芳香環上にある基を言う。非限定的な例は、Ｈ¹⁵およびＨ²⁹として、本明細書で示された頭部を含む。

【0315】

一般的に、ヘテロアリール基は、単環式ヘテロ芳香環基であっても多環式(例えば二環式)縮合ヘテロ芳香環基であってもよい。一つの態様において、ヘテロアリール基は、５〜１３環員(例えば５〜１０員)を含み、かつ、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＮＲ^Nから独立して選択される１個、２個、３個または４個の環ヘテロ原子を含む。一つの態様において、ヘテロアリール基は、５員、６員、９員または１０員であってもよく、例えば５員単環式環、６員単環式環、９員縮合二環式環または１０員縮合二環式環である。

【0316】

単環式ヘテロ芳香族基は、５〜６環員を含み、かつＯ、Ｓ、ＮまたはＮＲ^Nから選択される１個、２個、３個または４個のヘテロ原子を含むヘテロ芳香族基を含む。

【0317】

一つの態様において、５員単環式ヘテロアリール基は、−ＮＲ^N−基、−Ｏ−原子または−Ｓ−原子である１個の環員、および、所望により＝Ｎ−原子である１〜３個の環員(例えば１個または２個の環員)(ここで、５個の環員の残りは炭素原子である。)を含む。

【0318】

５員単環式ヘテロアリール基の例は、ピロリル、フラニル、チオフェニル、ピラゾリル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、チアゾリル、１,２,３−トリアゾリル、１,２,４−トリアゾリル、１,２,３−オキサジアゾリル、１,２,４−オキサジアゾリル、１,２,５−オキサジアゾリル、１,３,４−オキサジアゾリル、１,３,４−チアジアゾリル、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニル、１,３,５−トリアジニル、１,２,４−トリアジニル、１,２,３−トリアジニルおよびテトラゾリルである。

【0319】

６員単環式ヘテロアリール基の例は、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニルおよびピラジニルである。

【0320】

一つの態様において、６員単環式ヘテロアリール基は、＝Ｎ−原子である１個または２個の環員(ここで、６個の環員の残りは炭素原子である。)を含む。

【0321】

二環式ヘテロ芳香族基は、９〜１３個の環員を含み、かつ、Ｏ、Ｓ、ＮまたはＮＲ^Nから選択される１個、２個、３個、４個またはそれ以上のヘテロ原子を含む縮合ヘテロ芳香環基を含む。

【0322】

一つの態様において、９員二環式ヘテロアリール基は、−ＮＲ^N−基、−Ｏ−原子または−Ｓ−原子である１個の環員、および、所望により＝Ｎ−原子である１〜３個の環員(例えば１個または２個の環員)(ここで、９個の環員の残りは炭素原子である。)を含む。

【0323】

９員縮合二環式ヘテロアリール環基の例は、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ピロロ[２,３−ｂ]ピリジニル、ピロロ[２,３−ｃ]ピリジニル、ピロロ[３,２−ｃ]ピリジニル、ピロロ[３,２−ｂ]ピリジニル、イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジニル、イミダゾ[４,５−ｃ]ピリジニル、ピラゾロ[４,３−ｄ]ピリジニル、ピラゾロ[４,３−ｃ]ピリジニル、ピラゾロ[３,４−ｃ]ピリジニル、ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジニル、イソインドリル、インダゾリル、プリニル、インドリジニル、イミダゾ[１,２−ａ]ピリジニル、イミダゾ[１,５−ａ]ピリジニル、ピラゾロ[１,２−ａ]ピリジニル、ピロロ[１,２−ｂ]ピリダジニルおよびイミダゾ[１,２−ｃ]ピリミジニルである。

【0324】

用語“ヘテロアリールアルキル”は、ヘテロアリール基で置換されたアルキルを意味する。

【0325】

用語“ヘテロアリーレン”は、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＮＲ^N(ここで、Ｒ^Nは下で定義される(一つの態様において、Ｈまたはアルキル(例えばＣ_1-6アルキル)である。))から独
立して選択される１個以上のヘテロ原子を含む二価のヘテロ芳香族環状ヒドロカルビル基を含む。一般的に、ヘテロアリーレン基は、単環ヘテロ芳香環基であっても多環式(例えば二環式)縮合ヘテロ芳香環基であってもよい。一つの態様において、ヘテロアリーレン基は、５〜１３個の環員(好ましくは５〜１０個の環員)を含み、かつ、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＮＲ^Nから独立して選択される１個、２個、３個または４個の環ヘテロ原子を含む。一つの態様において、ヘテロアリーレン基は、５員、６員、９員または１０員であってもよく、例えば５員単環式環、６員単環式環、９員縮合二環式環または１０員縮合二環式環である。用語“ヘテロアリーレン”は、上で述べたヘテロアリール基それぞれの二価の誘導体を含む。

【0326】

用語“アリール”、“芳香族”、“ヘテロアリール”および“ヘテロ芳香族”はまた、部分的に還元された基を含む。従って、例えば“ヘテロアリール”は、環の１つが飽和環まで還元された縮合種(例えば１,２,３,４−テトラヒドロ−１,８−ナフチリジン−２−イル)を含む。

【0327】

全般
ことわりのない限り、基の組み合わせが、１個の部分(例えばアリールアルキル)として本明細書で記載されたとき、最後に記載された基が、分子の残りにその部分が結合している原子を含む。

【0328】

アルキル基または他の基の炭素原子がＯ、Ｓ(Ｏ)_q、ＮまたはＰ(Ｏ)_rによって置き換えられると記載されるとき、これは、以下を意図している：

【化26】

[この文献は図面を表示できません]

(ここで、Ｅは、Ｈではない。)によって置き換えられ；
−ＣＨ＝は、−Ｎ＝または−Ｐ(Ｏ)_r＝によって置き換えられるか；
≡Ｃ−Ｈは、≡Ｎまたは≡Ｐ(Ｏ)_rによって置き換えられるか；または
−ＣＨ₂−は、−Ｏ−、−Ｓ(Ｏ)_q−、−ＮＲ^N−または−Ｐ(Ｏ)_rＲ^N−(ここで、Ｒ^NはＨまたは所望により置換されたＣ_1-6アルキル、Ｃ_1-6ヘテロアルキル、Ｃ_3-6シクロアルキル、Ｃ_3-6ヘテロシクロアルキル、Ｃ_2-6アルケニル、Ｃ_2-6ヘテロアルケニル、Ｃ_3-6シクロアルケニル、Ｃ_3-6ヘテロシクロアルケニル、フェニルまたは５個もしくは６個の環員を含むヘテロアリールである。)によって置き換えられる。Ｒ^Nは、このましくは、Ｈ、Ｃ_1-6アルキルまたはＣ_3-6シクロアルキルである。
ｑは、独立して、０、１または２である。一つの態様において、ｑは０である。
ｒは、独立して、０または１である。一つの態様において、ｒは０である。

【0329】

炭素原子がＳｉによって置き換えられると記載されるとき、これは、それ以外の結合は同じままであるが、炭素原子をケイ素原子に交換することを意図している。従って、例えば−ＣＨ₂−は、−ＳｉＨ₂−によって置き換えられ；−ＣＨ＝は、−ＳｉＨ＝によって置き換えられ；≡Ｃ−Ｈは、≡Ｓｉ−Ｈによって置き換えられる。

【0330】

明確化のために、上記のヘテロ原子含有基(例えばヘテロアルキルなど)に関して、炭素原子の数が示されるとき、例えばＣ_3-6ヘテロアルキルと示すとき、３〜６個の鎖炭素原子が、Ｏ、Ｓ(Ｏ)_qまたはＮによって置き換えられているＣ_3-6アルキルをベースとする基を意図している。従って、Ｃ_3-6ヘテロアルキル基は、例えば３〜６個未満の鎖炭素原子を含む。他の例として、ピリジル基は、たとえ５個の炭素原子を含むのであってもＣ₆ヘテロアリール基と分類される。

【0331】

下で示された特定の官能基または化学的部分について述べるとき、意図された化学的部分は、次の通りである：
エーテル(例えば−Ｏ−)；エステル(例えば−Ｃ(Ｏ)Ｏ−)；スクシネート(例えば−Ｏ(Ｏ)Ｃ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−Ｃ(Ｏ)Ｏ−))；カルバメート(例えば−ＯＣ(Ｏ)−ＮＲ'−)；カーボネート(例えば−ＯＣ(Ｏ)Ｏ−)；ケトン(例えば−Ｃ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ−)；カルボニル(例えば−Ｃ(Ｏ)−)；ウレア(例えば−ＮＲＣ(Ｏ)ＮＲ'−)；アミン(例えば−ＮＲ'−)；アミド(例えば−Ｃ(Ｏ)ＮＲ'−)；イミン(例えば−Ｃ(ＮＲ')−)；チオエーテル(例えば−Ｓ−)；キサントゲン酸エステル(例えば−ＯＣ(Ｓ)Ｓ−)；ホスホジエステル(例えば−ＯＰ(Ｏ)₂Ｏ−)
｛ここで、Ｒ'は、Ｈ、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、ホスフェートまたは所望により置換されたＣ_1-10アルキレンから独立して選択されていてもよい。｝。

【0332】

ｐＫａ
明示的にことわりのない限り、本明細書で記載された全てのｐＫａは、水中で、標準温度および標準圧力で測定される。また、ことわりのない限り、全てのｐＫａについての記載は、下記の方法を用いて測定されたｐＫａについての記載である。

【0333】

脂質を秤量し、エタノールに溶解することによって、エタノール中２ｍＭの脂質溶液を調製する。エタノール：メタノール ９：１中０.３ｍＭの蛍光プローブＴＮＳ溶液を、最初にメタノール中３ｍＭのＴＮＳの溶液を作り、次いでエタノールで０.３ｍＭまで希釈することによって調製する。

【0334】

リン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウムおよび塩化ナトリウムを含む水性緩衝液を、それぞれ、濃度２０ｍＭ、２５ｍＭ、２０ｍＭおよび１５０ｍＭで調製する。緩衝液を８部に分け、ｐＨを、１２Ｎ ＨＣｌまたは６Ｎ ＮａＯＨの何れかで、４.４４〜４.５２、５.２７、６.１５〜６.２１、６.５７、７.１０〜７.２０、７.７２〜７.８０、８.２７〜８.３３および１０.４７〜１１.１２に調節する。４００μｌの２ｍＭ 脂質溶液および８００μｌの０.３ｍＭ ＴＮＳ溶液を混合する。

【0335】

Tecan Genesis RSP150 ハイスループット液体ハンドラーおよびGemini ソフトウェアを用いて、７.５μｌのプローブ／脂質ミックスを、１ml ９６ウェルプレート(model NUNC 260252, Nalgae Nunc International)中の、２４２.５μｌの緩衝液に加える。これを８つ全ての緩衝液について行う。

【0336】

１ml ９６ウェルプレート中で混合した後、１００μｌの各プローブ／脂質／緩衝液混合物を、２５０μｌの黒色透明底９６ウェルプレート(model COSTAR 3904, Corning)に移す。

【0337】

SpectraMax M5 分光光度計で、ソフトウェア SoftMax pro 5.2および以下のパラメーターを用いて、蛍光測定を行う：
リードモード：蛍光, トップリード
波長：励起 ３２２nm、放出 ４３１nm, オートカットオフ ４２０nm
感度：測定回数６, ＰＭＴ：オート
自動混合：前：オフ
自動較正：オン
アッセイプレートタイプ：９６ウェル Standard clrbtm
測定したウェル：プレート全体を測定
静置時間：オフ
カラム波長優先度；カラム優先
輸送スピード：通常
自動測定：オフ

【0338】

測定後、９６ウェルプレートでの空のウェルのバックグラウンド蛍光値を、各プローブ／脂質／緩衝液混合物から引く。蛍光強度の値を、最も低いｐＨで正規化する。正規化された蛍光強度 対 ｐＨチャートを、Microsoft Excel ソフトウェアでプロットする。８個の点を滑らかな線で繋ぐ。

【0339】

正規化された蛍光強度が０.５に等しい線上の点を見つける。０.５に等しい正規化された蛍光強度に対応するｐＨを見つけ、それを脂質のｐＫａと考える。
本方法を用いて測定されたｐＫａは、約０.２ｐＫａ単位まで正確である。

【0340】

存在しない基
式(Ｉ)中の基ａ、ｂまたはｃが、“存在しない”とき、意味するところは、その変わりに単結合が存在することであり、すなわち、基ａ、ｂまたはｃの両側の２つの基が、互いに直接結合している。

【0341】

置換
本明細書で用いられるとき、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクリル基の何れかに適用される用語“所望により置換されている”は、特にことわりのないかぎり、非置換であるか、あるいは、１個以上、典型的には１個、２個、３個、４個または５個の適当な非水素置換基によって置換されている基を言い、当該置換基はそれそれ、下記の群から独立して選択されるものである：
(ａ) アルキル；
(ｂ) ヒドロキシ(または保護されたヒドロキシ)；
(ｃ) ハロ；
(ｄ) オキソ、すなわち＝Ｏ、または、アルキルイミノ、すなわち＝Ｎ−アルキル；
(ｅ) アミノ、アルキルアミノまたはジアルキルアミノ；
(ｆ) アルコキシ；
(ｇ) シクロアルキル；
(ｈ) カルボキシル；
(ｉ) ヘテロシクロオキシ(ここで、ヘテロシクロオキシは、酸素架橋により結合しているヘテロ環基を表す。)；
(ｊ) アルキル−Ｏ−Ｃ(Ｏ)−；
(ｋ) メルカプト；
(ｌ) ニトロ；
(ｍ) シアノ；
(ｎ) スルファモイルまたはスルホンアミド；
(ｏ) アリール；
(ｐ) アルキル−Ｃ(Ｏ)−Ｏ−；
(ｑ) アリール−Ｃ(Ｏ)−Ｏ−；
(ｒ) アリール−Ｓ−；
(ｓ) アリールオキシ；
(ｔ) アルキル−Ｓ−；
(ｕ) ホルミル、すなわちＨＣ(Ｏ)−；
(ｖ) カルバモイル；
(ｗ) アリール−アルキル−；および
(ｘ) アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、アルキル−Ｃ(Ｏ)−ＮＨ−、アルキルアミノ、ジアルキルアミノまたはハロゲンで置換されたアリール。

【0342】

本明細書で用いられるとき、アルキルまたはアルキル含有基の何れかに適用される用語“所望により置換された”は、非置換であるか、あるいは、１個以上、典型的には１個、２個または３個の適当な非水素置換基によって置換されている基を言い、当該置換基はそれぞれ、ハロ、ヒドロキシ(または保護されたヒドロキシ)またはアルコキシ基からなる群から独立して選択されるものである。

【0343】

本発明の化合物の基(例えばアルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロシクロアルケニル、ヘテロアルキニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルまたはヘテロアリールヘテロアルキル基など)は、置換されていても非置換であってもよく、一つの態様において、非置換である。典型的には、置換は、１個の水素原子を１個の置換基で置き換えること、または＝Ｏによる置換の場合は２個の水素原子を置き換えることを含む。

【0344】

置換されているとき、一般的には、各基で１〜５個の置換基が存在し、一つの態様において１〜３個の置換基が存在し、一つの態様において１個または２個の置換基が存在し、一つの態様において１個の置換基が存在する。一つの態様は、同じ原子上に１個以上の置換基を含み、例えばアセタール基である。

【0345】

一つの態様において、置換基は、独立して、Ｓｕｂ¹またはＳｕｂ²(一つの態様においてＳｕｂ²)であり、
Ｓｕｂ¹は、独立して、ハロゲン、トリハロメチル、トリハロエチル、−ＮＯ₂、−ＣＮ、−Ｎ⁺(Ｒ^s)₂Ｏ^-、−ＣＯ₂Ｈ、−ＣＯ₂Ｒ^s、−ＳＯ₃Ｈ、−ＳＯＲ^s、−ＳＯ₂Ｒ^s、−ＳＯ₃Ｒ^s、−ＯＣ(＝Ｏ)ＯＲ^s、−Ｃ(＝Ｏ)Ｈ、−Ｃ(＝Ｏ)Ｒ^s、−ＯＣ(＝Ｏ)Ｒ^s、＝Ｏ、−ＮＲ^s₂、−Ｃ(＝Ｏ)ＮＨ₂、−Ｃ(＝Ｏ)ＮＲ^s₂、−Ｎ(Ｒ^s)Ｃ(＝Ｏ)ＯＲ^s、−Ｎ(Ｒ^s)Ｃ(＝Ｏ)ＮＲ^s₂、−ＯＣ(＝Ｏ)ＮＲ^s₂、−Ｎ(Ｒ^s)Ｃ(＝Ｏ)Ｒ^s、−Ｃ(＝Ｓ)ＮＲ^s₂、−ＮＲ^sＣ(＝Ｓ)Ｒ^s、−ＳＯ₂ＮＲ^s₂、−ＮＲ^sＳＯ₂Ｒ^s、−Ｎ(Ｒ^s)Ｃ(＝Ｓ)ＮＲ^s₂、−Ｎ(Ｒ^s)ＳＯ₂ＮＲ^s₂、−Ｒ^sまたは−Ｚ^sＲ^s
(ここで、Ｚ^sは、独立して、Ｏ、ＳまたはＮＲ^sであり；
Ｒ^sは、独立して、Ｈ、またはＣ_1-6アルキル、Ｃ_1-6ヘテロアルキル、−(Ａｌｋ^a)_f−Ｃ_3-6シクロアルキル、−(Ａｌｋ^a)_f−Ｃ_3-6ヘテロシクロアルキル、Ｃ_2-6アルケニル、Ｃ_2-6ヘテロアルケニル、−(Ａｌｋ^a)_f−Ｃ_3-6シクロアルケニル、−(Ａｌｋ^a)_f−Ｃ_3-6ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_2-6アルキニル、Ｃ_2-6ヘテロアルキニル、−(Ａｌｋ^a)_f−Ｃ_6-14アリール、−(Ａｌｋ^a)_f−Ｃ_6-14アリールまたは−(Ａｌｋ^a)_f−ヘテロアリール−(ここで、ヘテロアリールは５〜１３環員を含む。)
(ここで、ｆは、０または１であり；
Ａｌｋ^aは、Ｃ_1-6アルキレンまたはＣ_1-6ヘテロアルキレンであり；
Ｒ^sは、それ自身、所望により１〜３個の置換基Ｓｕｂ²によって置換されており(一つの態様において非置換である。)である。)
であり；
Ｓｕｂ²は、独立してハロゲン、トリハロメチル、トリハロエチル、−ＮＯ₂、−ＣＮ、−Ｎ⁺(Ｃ_1-6アルキル)₂Ｏ^-、−ＣＯ₂Ｈ、−ＣＯ₂Ｃ_1-6アルキル、−ＳＯ₃Ｈ、−ＳＯＣ_1-6アルキル、−ＳＯ₂Ｃ_1-6アルキル、−ＳＯ₃Ｃ_1-6アルキル、−ＯＣ(＝Ｏ)ＯＣ_1-6アルキル、−Ｃ(＝Ｏ)Ｈ、−Ｃ(＝Ｏ)Ｃ_1-6アルキル、−ＯＣ(＝Ｏ)Ｃ_1-6アルキル、＝Ｏ、−Ｎ(Ｃ_1-6アルキル)₂、−Ｃ(＝Ｏ)ＮＨ₂、−Ｃ(＝Ｏ)Ｎ(Ｃ_1-6アルキル)₂、−Ｎ(Ｃ_1-6アルキル)Ｃ(＝Ｏ)Ｏ(Ｃ_1-6アルキル)、−Ｎ(Ｃ_1-6アルキル)Ｃ(＝Ｏ)Ｎ(Ｃ_1-6アルキル)₂、−ＯＣ(＝Ｏ)Ｎ(Ｃ_1-6アルキル)₂、−Ｎ(Ｃ_1-6アルキル)Ｃ(＝Ｏ)Ｃ_1-6アルキル、−Ｃ(＝Ｓ)Ｎ(Ｃ_1-6アルキル)₂、−Ｎ(Ｃ_1-6アルキル)Ｃ(＝Ｓ)Ｃ_1-6アルキル、−ＳＯ₂Ｎ(Ｃ_1-6アルキル)₂、−Ｎ(Ｃ_1-6アルキル)ＳＯ₂Ｃ_1-6アルキル、−Ｎ(Ｃ_1-6アルキル)Ｃ(＝Ｓ)Ｎ(Ｃ_1-6アルキル)₂、−Ｎ(Ｃ_1-6アルキル)ＳＯ₂Ｎ(Ｃ_1-6アルキル)₂、−Ｃ_1-6アルキル、−Ｃ_1-6ヘテロアルキル、−Ｃ_3-6シクロアルキル、−Ｃ_3-6ヘテロシクロアルキル、−Ｃ_2-6アルケニル、−Ｃ_2-6ヘテロアルケニル、−Ｃ_3-6シクロアルケニル、−Ｃ_3-6ヘテロシクロアルケニル、−Ｃ_2-6アルキニル、−Ｃ_2-6ヘテロアルキニル、−Ｃ_6-14アリール、−Ｃ_5-13ヘテロアリール、−Ｚ^t−Ｃ_1-6アルキル、−Ｚ^t−Ｃ_3-6シクロアルキル、−Ｚ^t−Ｃ_2-6アルケニル、−Ｚ^t−Ｃ_3-6シクロアルケニルまたは−Ｚ^t−Ｃ_2-6アルキニル
(ここで、Ｚ^tは、独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＨまたはＮ(Ｃ_1-6アルキル)である。)
である。

【0346】

Ｓｕｂ¹中のＲ^sが所望により１〜３個の置換基Ｓｕｂ²によって置換されている場合、Ｓｕｂ²は非置換である。しかし、一つの態様において、Ｒ^sは非置換である。

【0347】

一つの態様において、Ｒ^sは、ＨまたはＣ_1-6アルキルであり、所望により１〜３個の置換基Ｓｕｂ²によって置換されている。

【0348】

一つの態様において、Ｓｕｂ²は、独立して、ハロゲン、トリハロメチル、トリハロエチル、−ＮＯ₂、−ＣＮ、−Ｎ⁺(Ｃ_1-6アルキル)₂Ｏ^-、−ＣＯ₂Ｈ、−ＳＯ₃Ｈ、−ＳＯＣ_1-6アルキル、−ＳＯ₂Ｃ_1-6アルキル、−Ｃ(＝Ｏ)Ｈ、−Ｃ(＝Ｏ)Ｃ_1-6アルキル、＝Ｏ、−Ｎ(Ｃ_1-6アルキル)₂、−Ｃ(＝Ｏ)ＮＨ₂、−Ｃ_1-6アルキル、−Ｃ_3-6シクロアルキル、−Ｃ_3-6ヘテロシクロアルキル、−Ｚ^t−Ｃ_1-6アルキルまたは−Ｚ^t−Ｃ_3-6シクロアルキルである。

【0349】

一つの態様において、置換される基が非環式(例えばアルキル、ヘテロアルキル、アルケニルなど)であるとき、Ｓｕｂ¹は−Ｒ^sではなく、Ｓｕｂ²は−Ｃ_1-6アルキル、−Ｃ_1-6ヘテロアルキル、−Ｃ_2-6アルケニル、−Ｃ_2-6ヘテロアルケニル、−Ｃ_2-6アルキニルまたは−Ｃ_2-6ヘテロアルキニルではない。

【0350】

Ｓｕｂ²以外の基が、置換され得る箇所を少なくとも２箇所有するとき、基は、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレンまたはヘテロアルキニレン鎖(一つの態様において１〜６個の原子、一つの態様において３〜６個の原子、一つの態様において３個または４個の原子を含む)の両端で置換されて、環状部分を形成してもよい。鎖は、所望により１〜３個の置換基Ｓｕｂ²によって置換されている。一つの態様において、鎖は置換されていない。従って、用語所望により置換された“シクロアルキル”、“シクロアルケニル”、“シクロアルキニル”、“ヘテロシクロアルキル”、“ヘテロシクロアルケニル”、“ヘテロシクロアルキニル”、“アリール”および“ヘテロアリール”は、縮合しているものを含む。例えば、“所望により置換されたシクロアルキル”は、２個のシクロアルキル環が縮合している種を含み、“所望により置換されたヘテロアリール”は、１個のヘテロシクロアルキル環が芳香環に縮合している種(例えば５,６,７,８−テトラヒドロ−１,８−ナフチリジン−２−イル)を含む。

【0351】

Ｓｕｂ²以外の基が２回置換され得る基を有するとき、当該原子は、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレンまたはヘテロアルキニレン鎖(一つの態様において２〜８個の原子、一つの態様において３〜６個の原子、一つの態様において４個または５個の原子を含む)の両端によって置換されて、環状部分を形成してもよい。鎖は、所望により１〜３個の置換基Ｓｕｂ²によって置換されている。一つの態様において、鎖は、置換されていない。従って、用語所望により置換された“シクロアルキル”、“シクロアルケニル”、“シクロアルキニル”、“ヘテロシクロアルキル”、“ヘテロシクロアルケニル”、“ヘテロシクロアルキニル”、“アリール”および“ヘテロアリール”は、スピロ種を含む。

【0352】

説明のために、基がヘテロ原子を有するとき、置換基は、ヘテロ原子に結合していてもよい。従って、例えば“所望により置換されたヘテロアルキル”は、−ＣＨ₂−Ｎ(Ｓｕｂ¹)−ＣＨ₂−、−ＣＨ(Ｓｕｂ¹)−ＮＨ−ＣＨ₂−および−ＣＨ(Ｓｕｂ¹)−Ｎ(Ｓｕ
ｂ¹)−ＣＨ₂−などを含む。

【0353】

修飾語
リストが修飾語に先行されるとき、修飾語は、リスト中の各アイテムに適用されると解されるべきことを意図している。例えばフレーズ“所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニルまたはＣ_5-20ヘテロアリール基”は、リスト中の４個のアイテム、すなわちＣ_3-20ヘテロシクロアルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル基、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニル基およびＣ_6-20ヘテロアリール基がそれぞれ、所望により置換されていてもよいことを意味する。

【0354】

ある基が、最初の修飾語によって特徴付けられ、その後同じ基が二次的な修飾語によって特徴付けられるとき、これが意味するものは、この基が両方の修飾語によって同時に特徴付けられることである。例えば、ある基が“Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニル”(最初の修飾語)と記載され、同じ基がその後に“Ｃ_5-16”(二次的修飾語)基と記載されるとき、これが意味するものは、Ｃ_5-16ヘテロシクロアルキニル基である。

【0355】

ステロイド
本明細書で用いられるとき、用語“ステロイド”は、下記の構造：

【化27】

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(この構造は、本明細書で、“ステロイド骨格”とも言う。)を含む何らかの基を言う。

【0356】

単に説明のために、ステロイド骨格を完全に飽和として上に記載した。しかし、用語ステロイドはまた、ステロイド骨格中に不飽和存在がする例を含むことを意図している。例えば用語ステロイドは、完全に不飽和(マンキュード)基本骨格、すなわち１５Ｈ−シクロペンタ[ａ]フェナントレン：

【化28】

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を含む基を含む。
用語ステロイドはまた、部分的に不飽和なステロイド骨格を含む基を含む。

【0357】

用語ステロイドはまた、ステロイド骨格の“セコ”誘導体、すなわち環が開裂している基；それぞれ環の縮小および拡張を含むステロイド骨格の“ノル”および“ホモ”誘導体を含む(Systemic Nomenclature of Organic Chemistry, by D. Hellwinkel, published by Springer, 2001, ISBN: 3 540 41138 0, “セコ”については203頁、“ノル”および“ホモ”については204頁を参照のこと。)。しかし、一つの態様において、このような“セコ”誘導体は、用語“ステロイド”に包含されない。他の態様において、このような“ノル”誘導体は、用語“ステロイド”に包含されない。他の態様において、“ホモ”誘導体は、用語“ステロイド”に本願されない。従って、一つの態様において、このようなセコ、ノルおよびホモ誘導体は、用語“ステロイド”に包含されない。

【0358】

用語ステロイドはまた、ステロイド骨格と名付けられた構造中の１個以上の炭素原子がヘテロ原子によって置き換えられている例を含む。このような態様において６個までの炭素原子、一つの態様において５個までの炭素原子、他の態様において４個までの炭素原子、他の態様において３個までの炭素原子、他の態様において２個までの炭素原子、他の態様において１個の炭素原子はそれぞれ、、Ｏ、Ｓ(Ｏ)_q、Ｎ、Ｐ(Ｏ)_rまたはＳｉ(好ましくはＯ、Ｓ(Ｏ)_qまたはＮ)によって置き換えられている。しかし、一つの態様において、用語“ステロイド”は、“ステロイド基本骨格”はヘテロ原子を含まない種を含む。

【0359】

ステロイド環系は、下に示す慣例に従って番号付けされる。

【化29】

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【0360】

用語ステロイドは、ステロール、ステロイドホルモン、胆汁酸および胆汁酸の塩を包含する。ステロールは、環Ａの３位にヒドロキシル基を有する何れかのステロイドである。

【0361】

不飽和
標準的な使用に従って、ω３位は、鎖の(メチル)末端から３番目の結合を言い；ω６位は、鎖の(メチル)末端から６番目の結合を言い；ω９位は、鎖の(メチル)末端から９番目の結合を言う。

【0362】

ＰＤＩ
頭字語ＰＤＩは、多分散性指数を表す。ことわりのない限り、本明細書で記載された全てのＰＤＩは、Malvern Zetasizerの動的光散乱によって測定された、完全に形成されたナノ粒子のＰＤＩである。計数速度が約２００〜４００kctsであるように、ナノ粒子サンプルをリン酸緩衝食塩水(ＰＢＳ)で希釈する。

【0363】

一般的な定義
用語“含む(comprising)”は、“含む(including)”および“からなる(consisting)”を包含し、例えばＸを“含む”組成物は、排他的にＸからなるのであっても、さらなる何かを含んで、例えばＸ＋Ｙであってもよい。

【0364】

用語“実質的”は、“完全に”を除外せず、例えばＹが“実質的に無い”組成物は、Ｙを完全に含まないものであってもよい。必要ならば、用語“実質的に”は、本発明の定義から省略してもよい。

【0365】

数値ｘに関する用語“約”は、例えばｘ±１０％を意味する。一つの態様において、開示された全ての数値に関して、用語“約”は存在しない。

【0366】

誤解を避けるために、化合物、組成物、方法または使用の内容で明示的に開示された全ての特徴はまた、化合物、組成物、方法および使用の内容について潜在的に開示されている。例えば、或る化合物が特徴“Ａ”を有することが本明細書で明示的に開示されているならば、本明細書では、特徴“Ａ”を有する発明の化合物を含む発明による処置方法を潜在的に開示している。

【0367】

さらに、本発明の種々の態様が本明細書に記載されている。各態様で特定された特徴は、他の特定された特徴と組み合わせて、さらなる態様を提供し得ると認められる。

【0368】

本発明のカチオン性脂質の化学合成
経路Ａは、本発明の化合物を合成するのに用いられ得る一般的な方法を示す。経路ＣＤＴは、コレステロールジグリコール トシレート反応剤をどのように製造するかを説明している。

【0369】

経路Ａ

【化30】

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【0370】

経路ＣＤＴ

【化31】

[この文献は図面を表示できません]

【実施例】

【0371】

エポキシド(実施例１)
リノレイルアルコール(４８.７ｇ, １８３mmol)を丸底フラスコに加え、ＴＨＦ(４００ml)に溶解する。得られた溶液を氷浴を用いて冷却し、水素化ナトリウム(１３.１６ｇ, ３２９mmol)を加える。得られたスラリーを室温で１時間撹拌する。エピブロモヒドリンを一度に加え、室温で反応を続ける。４時間撹拌した後、さらなる水素化ナトリウム(１３.１６ｇ, ３２９mmol)を加える。室温でさらに１時間撹拌撹拌した後、エピブロモヒドリンのさらなるアリコート(３２.５ｇ, ２３８mmol)を加える。反応物を５０℃で一夜加熱する。反応物を室温まで冷却し、水で反応停止させた。ＥｔＯＡｃを加え、得られた有機層を厚め、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させる。揮発成分をロータリーエバポレーターによって除去し、得られた残渣をシリカのクロマトグラフィーによって、ＥｔＯＡｃ／ヘプタンで精製し、望ましいエポキシドを得る。

【0372】

コレステロール トシレート(実施例２)
コレステロール(５０ｇ, １２９mmol)をＤＣＭ(５５ml)およびピリジン(１５０ml)に溶解する。得られた溶液を０℃まで冷却し、塩化トシルを固体として一度に加える。反応物をゆっくりと室温まで一夜温める。反応物をロータリーエバポレーターによって濃縮し、ＭｅＯＨ(５００ml)を加え、白色の固体を得る。３０分間撹拌を続け、沈殿物を濾過によって集め、ＭｅＯＨで洗浄し、真空下で乾燥させ、望ましいトシレートを得る。

【0373】

コレステロール ジグリコール(実施例３)
コレステロール トシレート(７３ｇ, １２８mmol)を１,４−ジオキサン(７５０ml)に溶解する。ジエチレングリコール(２９４ml, ３０７７mmol)を加え、反応物を穏やかに還流する。得られた溶液を室温まで冷却し、ロータリーエバポレーターによって濃縮する。得られたゲル状物質をＤＣＭに溶かし、水で撹拌する。得られた有機層を集め、水層をＤＣＭで１回抽出する。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ロータリーエバポレーターによって濃縮する。粗生成物を、シリカ上で、ＥｔＯＡｃ／ヘプタンで精製し、望ましいコレステロール ジグリコールを得る。

【0374】

コレステロール ジグリコール トシレート(実施例４)
コレステロール ジグリコール(５１.５ｇ, １０３mmol)を、ＤＣＭ(１６０ml)およびピリジン(６０ml)中で撹拌する。無水トシル酸(３８.７ｇ, １１９mmol)を加え、得られた溶液を室温で一夜撹拌する。反応物をロータリーエバポレーターによって濃縮し、得られた残渣を、シリカ上で、ＥｔＯＡｃ／ヘプタンで精製し、望ましい生成物を得る。

【0375】

３−ピペリジニル−１,２−プロパンジオール １−リノレイルエーテル(実施例５)
実施例１のエポキシド(１.０ｇ, ３.１mmol)をＥｔＯＨ(１７ml)に溶解する。ピペリジン(０.４５ml, ４.６５mmol)を加え、混合物を、マイクロ波反応器中、１４０℃で５分間加熱する。室温まで冷却した後、混合物をロータリーエバポレーターによって濃縮し、シリカ上で、ＭｅＯＨ／ＤＣＭで精製し、望ましいアミノアルコールを得る。

【0376】

最終化合物１(実施例６)
実施例５のアミノアルコール(０.４４７mg, １.０９mmol)をトルエン(１５ml)中で撹拌し、ＮａＨ(０.１０２ｇ, ４.２４mmol)を一度に加える。得られた混合物を室温で３０分間撹拌し、実施例４のトシレートを一度に加える。反応物を一夜還流する。室温(“ｒｔ”)まで冷却した後、反応物を飽和水性重炭酸ナトリウムを添加することによって反応停
止させる。得られた混合物を５分間撹拌し、ロータリーエバポレーターによって濃縮する。得られた残渣を、直接、シリカ上で、ＭｅＯＨ／ＤＣＭで精製し、粗生成物を得る。これを、シリカ上で、ＥｔＯＡｃ／ヘプタンで精製し、望ましい化合物を得る。

【0377】

下記の化合物(その構造を下に示す)は、経路Ａの方法によって製造され得る：
E0011；E0002；E0003；E0013；E0015；E0006；E0008；E0001；E0022；E0026；E0030；E0037；E0038；E0039；E0042；E0050；E0055；E0061；E0062；E0063；E0064；E0065；E0066；E0068；E0069；E0070；E0071；E0072；E0073；E0074；E0075；E0076；E0077；E0078；E0079；E0080；E0081；E0082；E0083；E0084；E0085；E0086；E0087；E0088；E0089；E0090；E0091；E0092；E0093；E0094；E0095；E0096；E0107；E0109；E0023；E0024；E0025；E0031；E0033；E0034；E0043；E0046；E0059；E0067；E0014；E0119；E0016；E0004；E0005；E0017；E0018；E0019；E0120；E0007；E0020；E0010；E0021；E0027；E0028；E0029；E0032；E0035；E0009；E0040；E0041；E0044；E0048；E0049；E0052；E0053；E0057；E0119；E0120；E0121；E0124；E0126；E0127；E0147；E0149；E0158；E0051；E0067；E0112；E0113；E0114；E0118；E0159；E0170；およびE0171。

【0378】

経路Ｂはまた、本発明の化合物を合成するのに用いられ得る一般的な方法を表す。

【化32】

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【0379】

実施例７
コレステロール(３.３３ｇ, ８.６２mmol)、無水ジグリコール酸(１ｇ, ８.６２mmol)、ＤＭＡＰ(０.２６３ｇ, ２.１５４mmol)、ＣＨ₂Ｃｌ₂(３５ml)およびスターラーバーを丸底フラスコに加える。反応物を室温で３日間撹拌する。

【0380】

反応混合物を濃縮し、残渣を、SF40 80Gカラムを用いるIntelliFlash 280 (AnaLogix)のフラッシュクロマトグラフィーによって精製する：０〜２ＣＶ, １００％ ＣＨ₂Ｃｌ₂；２〜１０ＣＶ, １００：０ ＣＨ₂Ｃｌ₂：(ＭｅＯＨ １０％ＡｃＯＨ)〜９０：１０ ＣＨ₂Ｃｌ₂：(ＭｅＯＨ １０％ ＡｃＯＨ)の直線的濃度勾配；１０〜２５ＣＶ, ９０：１０ ＣＨ₂Ｃｌ₂：(ＭｅＯＨ １０％ＡｃＯＨ)〜８５：１５ ＣＨ₂Ｃｌ₂：(ＭｅＯＨ １０％ ＡｃＯＨ)の直線的濃度勾配。生成物をコレステロールと共溶出する。生成物含有フラクションを合わせて、白色のスラリーになるまで真空で濃縮し、ヘプタンで希釈し(コレステロールはヘプタンに可溶である)、氷浴中で冷却する。白色の固体を濾過して取り、ヘプタンで洗浄し、真空下に置き、１.５０ｇ(３５％)の純粋な生成物を得る。

【0381】

実施例８
実施例５のアミノアルコール(１０５.３mg, ０.２５８mmol)、ＤＭＡＰ(２２mg, ０.１８０mmol)および実施例７のカルボン酸(１３５.６mg, ０.２７０mmol)を、小さいバイアルに秤量する。ジクロロメタン(２.５ml)を加え、次にＥＤＣ塩酸塩(６７.１mg, ０.３５０mmol)を加える。反応混合物を室温で一夜撹拌する。粗製の反応混合物をF15 24Gカラムを用いるIntelliFlash 280 (AnaLogix)のフラッシュクロマトグラフィーによって精製する：０〜３ＣＶ, １００％ ＣＨ₂Ｃｌ₂；３〜２５ＣＶ, １００：０ ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ〜９５：５ ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨの直線的濃度勾配。生成物は未だ不純である。残渣を、再度SF15 24Gカラムを用いるIntelliFlash 280 (AnaLogix)のフラッシュクロマトグラフィーによって精製する：０〜３ＣＶ, １００％ ヘプタン；３〜３０ＣＶ, １００：０ ヘプタン：酢酸エチル〜６５：３５ ヘプタン：酢酸エチルの直線的濃度勾配。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、真空で濃縮し、３８mg(１３％)の純粋な生成物を透明な液体として得る。

【0382】

下記の化合物(その構造を下に示す)は、経路Ｂの方法によって製造され得る：E0036およびE0047。

【0383】

経路Ｃはまた、本発明の化合物を合成するのに用いられ得る一般的な方法を表す。
経路Ｃ

【化33】

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【0384】

実施例９
２−(２−クロロエトキシエタノール)(５.０１ｇ, ４０.２mmol)を丸底フラスコに秤量し、ＤＭＦ(１００ml)に溶解する。溶液を撹拌し、ＮａＮ₃(２.８９ｇ, ４４.５mmol)を加え、温度を８０℃まで上げる。溶液は濁った。反応物を一夜撹拌する。翌朝、反応物を熱源から取り、３００mlの水で希釈する。この溶液を酢酸エチルで洗浄し、生成物を抽出する(４×１００ml)。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して液体を得る。¹Ｈ−ＮＭＲによると、この液体は、４４重量％のＤＭＦを含んでいた。生成物(５.１９ｇ(９８％))を、さらに精製することなく次の工程を行う。

【0385】

実施例１０
実施例９のアジドアルコール(５.２５ｇ, ２２.４２mmol)およびピリジン(３ml, ３７.１mmol)を、丸底フラスコ中で、ＣＨ₂Ｃｌ₂(４５ml)に溶解し、氷浴中で撹拌する。冷えたら、塩化トシル(４.７０ｇ, ２４.６６mmol)を一度に加える。反応物を冷蔵庫中に一夜置く。翌日、反応物をＣＨ₂Ｃｌ₂(５０ml)で希釈し、１Ｍ ＨＣｌ(２×４０ml)で抽出し、ピリジンを除去する。有機相を塩水(４０ml)で１回洗浄し、濃縮する。残渣を、SF40-115Gカラムを用いるIntelliFlash 280 (AnaLogix)のフラッシュクロマトグラフィーによって精製する：０〜２０ＣＶ, １００：０ ヘプタン：酢酸エチル〜５０：５０ ヘプタン：酢酸エチルの直線的濃度勾配。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、真空で濃縮し、概算で純度９０％、０.６１ｇ(１０％)の生成物を得る。

【0386】

実施例１１
実施例５のアミノアルコールおよび実施例１０のトシレートを用いる以外、実施例６の通りに製造する。

【0387】

実施例１２
実施例１１のアルキルアジド(３３４mg, ０.６４１mmol)を、小さいバイアル中で、ＴＨＦ(４ml)および水(０.４００ml)に溶解する。この溶液に、ＴＨＦ中のトリメチルホスフィンの溶液(２.５ml, ２.５００mmolのトリメチルホスフィン)を加え、反応物を一夜撹拌する。ＴＬＣによると、翌朝までに反応が完了した。溶媒を蒸発させ、残渣を１０mlのＭｅＯＨに溶解する。溶液を、ＭｅＯＨで予め平衡化したＳＣＸ(１０ｇ)カラムに負荷し、５０mlのＭｅＯＨで洗浄し、４×１０mlのＭｅＯＨ中７Ｍ ＮＨ₃で溶出する。２番目、３番目および４番目のフラクションに生成物が溶出する；これらのフラクションをプールし、濃縮する。ＴＬＣによると(および臭いによると)、トリメチルホスフィンが未だ存在しているため、残渣を５０mlのＥｔＯＡｃに溶かし、３×１５mlのＮａＨＣＯ₃で僅かに塩基性にした水で洗浄する。有機相をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、濃縮して無色の液体を得る：２３２mg(７３％)。

【0388】

実施例１３
実施例１２のアミン(２３２mg, ０.４６９mmol)を、丸底フラスコ中で、ＣＨ₂Ｃｌ₂(５ml)に溶解する。この溶液に、コレステロール クロロホルメート(３１６mg, ０.７０３mmol)およびＤＭＡＰ(８６mg, ０.７０３mmol)を加える。溶液を室温で一夜撹拌する。粗製の反応混合物を、直接、SF15 24Gカラムを用いるIntelliFlash 280 (AnaLogix)のフラッシュクロマトグラフィーによって精製する：０〜５ＣＶ, １００％ ＣＨ₂Ｃｌ₂；５〜１５ＣＶ, １００：０ ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ〜９５：５ ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨの直線的濃度勾配；１５〜３０, ９５：５ ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ。生成物を含むフラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮し、薄黄色の油状物を得る：３３９mg(８０％)。

【0389】

下記の化合物(その構造を下に示す)は、経路Ｃの方法によって製造され得る：E0054；E0097；E0099；E0103；E0148；E0169；E0175；およびE0176。

【0390】

経路Ｄはまた、本発明の化合物を合成するのに用いられ得る一般的な方法を表す。
経路Ｄ

【化34】

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【0391】

実施例１４
ＣＨ₂Ｃｌ₂中のジエチレングリコール ビニルエーテル(３.９６ｇ, ３０mmol)の溶液に、０℃で、ピリジン(４.８５ml)を、次に塩化トシル(６.８６ｇ, ３６mmol)を加える。
０℃で１０分後、反応物を室温まで温め、一夜撹拌する。反応物を、ＮａＨＣＯ₃飽和水溶液と酢酸エチルの層間で抽出する。有機抽出物を合わせて、乾燥させ、濃縮する。残渣を３０％ 酢酸エチル／７０％ ヘプタンで溶出するフラッシュクロマトグラフィーによって精製する：５.４５ｇ(６３％)。

【0392】

実施例１５
ＣＨ₂Ｃｌ₂中の実施例１４のビニルエーテル(１.０ｇ, ３.４９mmol)の溶液に、室温で、コレステロール(０.６７５ｇ, １.７４６mmol)を、次にＰＰＴＳ(０.８７８ｇ, ３.４９mmol)を加える。反応物を室温で５時間撹拌する。ＴＬＣによると、生成物は、コレステロールの非常に近くに溶出し、僅かにＵＶ活性である。反応物を、ＮａＨＣＯ₃飽和水溶液と酢酸エチルの層間で抽出する。有機抽出物を合わせて、乾燥させ、濃縮する。粗製の残渣を、３０％ 酢酸エチル／７０％ ヘプタンで、フラッシュクロマトグラフィーによって精製する：７００mg(６０％)。

【0393】

実施例１６
実施例５のアミノアルコールおよび実施例１５のトシレートを用いる以外、実施例６の通りに製造する。

【0394】

下記の化合物(その構造を下に示す)は、経路Ｄの方法によって製造され得る：E0058。

【0395】

経路Ｅはまた、本発明の化合物を合成するのに用いられ得る一般的な方法を表す。
経路Ｅ

【化35】

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【0396】

実施例１７
実施例５のアミノアルコールおよび実施例１４のトシレートを用いる以外、実施例６の通りに製造する。

【0397】

実施例１８
水性ＨＣｌの１Ｎ溶液(０.３８ml, ０.３８mmol)を、４mlの１：１ エタノール／ＴＨＦ中の実施例１７のビニルエーテル(１００mg, ０.１９mmol)の溶液に、室温で滴下する。１時間後、反応物を、ＮａＨＣＯ₃飽和水溶液と酢酸エチルの層間で抽出する。有機抽出物を合わせて、乾燥させ、濃縮して、油状物を得る。これをさらに精製することなく次の工程に用いる：８５mg(９０％)。

【0398】

実施例１９
実施例１８のアミノアルコールおよびカルボン酸としてコレステロール ヘミスクシネートを用いる以外、実施例８の通りに製造する。

【0399】

下記の化合物(その構造を下に示す)は、経路Ｅの方法によって製造され得る：E0060；E0104；E0129；E0130；E0143；E0150；E0151；E0152；E0161；E0162；E0163；E0164；E0165；E0177；E0178；およびE0179。

【0400】

経路Ｆはまた、本発明の化合物を合成するのに用いられ得る一般的な方法を表す。
経路Ｆ

【化36】

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【0401】

実施例２０
トルエン(１２ml)中の実施例１８のアミノアルコール(６００mg, １.２１mmol)の溶液に、室温で、６０％ ＮａＨ(９７mg, ２.４２mmol)を加える(反応物は黄色となった)。
１０分後、コレステロール クロロホルメート(８１５mg, １.８１５mmol)を加える。反応物を８０℃まで加熱し(反応物は橙色となった)、一夜撹拌する。反応混合物を冷却し、塩水と酢酸エチルの層間で抽出する。有機抽出物を合わせて、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、油状物となるまで濃縮する。粗製の油状物を、５％ ＭｅＯＨ／９５％ ＣＨ₂Ｃｌ₂で、フラッシュクロマトグラフィーによって精製する：７２０mg(６６％)。

【0402】

下記の化合物(その構造を下に示す)は、経路Ｆの方法によって製造され得る：E0056；E0122；E0123；E0138；およびE0139。

【0403】

経路Ｇはまた、本発明の化合物を合成するのに用いられ得る一般的な方法を表す。
経路Ｇ

【化37】

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【0404】

実施例２１
ＴＨＦ(１０ml)中の実施例５のアミノアルコールの溶液(１２.４mmol)およびＴＨＦ(１０ml)中のＤＩＡＤの溶液(３ml)を、ＴＨＦ(５０ml)中のＰＰｈ₃(２.５ｇ)およびフタルイミド(２.５ｇ)の溶液に同時に加える。得られた混合物を室温で一夜撹拌する。反応物を乾固するまで濃縮し、次の工程に直接用いる。

【0405】

実施例２２
実施例２１の物質をエタノール(２５ml)中で撹拌し、ＴＨＦ中のメチルアミンの溶液を加える。反応物を室温で１６時間撹拌し、乾固するまで濃縮する。粗製の物質をシリカのクロマトグラフィーによって精製する。

【0406】

実施例２３
実施例２２のアミン(０.２２mmol)を、コレステロール ヘミスクシネート(０.２５mmol)、ＨＡＴＵ(０.２６mmol)と共に、ＤＭＦ(５ml)中で撹拌する。Ｎ−メチルモルホリン(０.５５mmol)を加え、反応物を室温で一夜撹拌する。得られた溶液を真空下で濃縮し、ＥｔＯＡｃで希釈する。得られた有機層を、水で、次いで塩水で洗浄し、濃縮して黄色の液体を得る。得られた残渣を中性アルミナで精製し、薄黄色の液体を得る。

【0407】

下記の化合物は、経路Ｇの方法によって製造され得る：E0098；E0100；E0101；E0105；E0106；およびE0108。

【0408】

経路Ｈはまた、本発明の化合物を合成するのに用いられ得る一般的な方法を表す。
経路Ｈ

【化38】

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【0409】

実施例２４
ＤＣＭ(１０ml)中の実施例２２のアミン(３.５５mmol)の溶液に、ＤＩＥＡ(５.７mmol)およびコレステロール クロロホルメート(６.０mmol)を加える。得られた反応物を室温で一夜撹拌する。反応物をＥｔＯＡｃ(５０ml)で希釈し、水で、次いで塩水で洗浄する。得られた有機層を濃縮して残渣を得て、シリカのクロマトグラフィーによって精製し、薄黄色の液体を得る。

【0410】

E0102は、経路Ｈの方法を用いて製造され得る。

【0411】

経路Ｉはまた、本発明の化合物を合成するのに用いられ得る一般的な方法を表す。
経路Ｉ

【化39】

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【0412】

実施例２５
ＤＣＭ(２５ml)中の実施例２２のアミン(０.３３mmol)の溶液に、ＢＯＣ−グリシン(０.３６mmol)、ＨＡＴＵ(０.３６mmol)およびＤＩＥＡ(０.６６mmol)を加える。得られた混合物を室温で一夜撹拌する。得られた反応混合物を飽和水性ＮＨ₄Ｃｌで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、粗製の固体を得る。これをさらに精製することなく用いる。

【0413】

実施例２６
前述の工程で得られた物質をＤＣＭ(１５ml)中で撹拌し、ＴＦＡ(５ml)を加える。得られた溶液を室温で一夜撹拌する。得られた混合物を乾固するまで濃縮し、１.５Ｎ ＨＣｌ(２０ml)を加える。溶液をＥｔＯＡｃで洗浄し、固体のＮａＨＣＯ₃でｐＨを＞７まで減少させる。得られた混合物をＤＣＭで抽出し、得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して粗製の固体を得る。これをさらに精製することなく用いる。

【0414】

実施例２７
前述の工程で得られた物質をＤＣＭ(２０ml)中で撹拌し、ＤＩＥＡ(０.５３mmol)を加える。この溶液に、コレステロール クロロホルメート(０.５３mmol)を加え、反応物を室温で一夜撹拌する。反応物をＥｔＯＡｃ(５０ml)で希釈し、得られた溶液を、１.５Ｎ ＨＣｌ、１０％ 水性ＮａＨＣＯ₃で、そして塩水で洗浄する。得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して固体を得る。

【0415】

E0110およびE0111は、経路Ｉの方法を用いて製造され得る。

【0416】

実施例２８〜３２はまた、本発明の化合物を合成するのに用いられ得る経路を表す。

【化40】

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【0417】

実施例２８
経路Ａの方法を用いて製造したＢＯＣ保護カチオン性脂質(１５０mg)を、トリエチルシラン(０.５ml)と共に撹拌し、ＴＦＡ(１０ml)を一度に加える。２時間後、反応物を乾固するまで濃縮する。得られた残渣を、シリカ上で、ＤＣＭ中０〜１５％ ＭｅＯＨで精製し、濃縮してガラス状油状物を得る。
E0012は、この方法を用いて合成され得る。

【0418】

【化41】

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【0419】

実施例２９
経路Ａの方法を用いて製造したＴＢＤＭＳ保護カチオン性脂質(１３５mg, ０.１３８mmol)をＴＨＦ(２ml)中で撹拌し、ＴＢＡＦ溶液(０.２８ml, ＴＨＦ中１.０Ｍ, ０.２８mmol)を加える。反応物を室温で一夜撹拌する。反応物を、直接、シリカ上で、ＤＣＭ中０〜２０％ ＭｅＯＨで精製し、透明な油状物を得る。
E0045は、この方法を用いて合成され得る。

【0420】

実施例３０〜３１はまた、本発明の化合物を合成するのに用いられ得る経路を表す。

【化42】

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【0421】

実施例３０
ＴＭＳＣｌ(９.４ml)中のパラホルムアルデヒド(５３６mg)の懸濁液に、撹拌しながら、１５分かけて、リノレイルアルコール(５.０ｇ)を滴下する。反応物が透明になったら、それを減圧下で濃縮し、すぐに次の工程に用いる。

【0422】

実施例３１
ＴＨＦ(５０ml)中のグリシドール(１.５ml)の溶液に、撹拌しながら、実施例３０の化合物(５.８ｇ)、ＤＩＥＡ(９.５ml)、ヨウ化 テトラブチルアンモニウム(６.８ｇ)を加える。反応物を室温で５時間撹拌する。固体を濾過によって除き、ジエチルエーテルで洗浄する。濾液を集め、水で、そして塩水で洗浄する。得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮し、粗製の油状物を得る。粗製の物質を、予め３％ トリエチルアミン含有移動相で処理したシリカのクロマトグラフィーによって精製する。物質をヘプタン中のＥｔＯＡｃを用いて溶出し、１.６５ｇの純粋な生成物を透明な液体として得る。

【0423】

E0115、E0116、E0117およびE0160を合成するための出発物質を、実施例３０および実施例３１の工程を用いて合成し得る。

【化43】

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【0424】

実施例３２
エチレングリコール(０.３０ｇ)を、ＴＨＦ(２０ml)中で撹拌し、６０ｗｔ％ 水素化ナトリウム(０.１９ｇ)を加える。得られた混合物を２０分間撹拌する。リノレイル メシレート(１.６４ｇ)を加え、反応物を５０℃で２時間加熱し、一夜還流する。反応物を室温まで冷却し、さらに２４時間撹拌する。反応物に飽和水性塩化アンモニウムを加え、得られた混合物をＤＣＭで抽出する。得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、粗製の油状物を得る。粗製の物質を、シリカで、ヘプタン中ＥｔＯＡｃを用いて精製し、６４０mgの望ましい生成物を得る。

【0425】

実施例３０〜３２の方法は、リノレイル鎖および分子のコアの間にスペーサーを有する脂質(例えばE0055)の合成に用いられ得る。

【0426】

経路Ｊはまた、本発明の化合物を合成するのに用いられ得る一般的な方法を表す。
経路Ｊ

【化44】

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【0427】

実施例３３
ＤＣＭ(３０ml)中のコレステロール(１０ｇ, ２６mmol)およびボラン−ＴＨＦ(５滴)の溶液に、エチルジアゾアセテート(３.５ml, ５２mmol)を加える。５分間撹拌した後、反応混合物を濃縮し、シリカのクロマトグラフィーによって、ヘキサン／ＥｔＯＡｃで精製し、９ｇの望ましい生成物を得る。

【0428】

実施例３４
ＥｔＯＨ(１１０ml)中の実施例３３の化合物(９ｇ, １９mmol)の溶液に、ＮａＯＨ(３ｇ, ７６mmol)を加える。得られた混合物を７０℃で３時間加熱する。反応物を室温まで冷却し、濃縮する。残渣を水に溶かし、２Ｎ ＨＣｌで酸性にして、ＤＣＭ(２×)で抽出する。得られた有機層を合わせ、濃縮し、８ｇの望ましい生成物を得る。

【0429】

実施例３５
ＥＤＣ(１.８ｇ, ９.８mmol)およびＤＭＡＰ(８０mg, ０.６６mmol)を、ＤＣＭ(５ml)中の実施例３４の化合物(２.２ｇ, ４.９mmol)の溶液に加える。反応物を１０分間撹拌し、アルコール(１.５ｇ)を加え、反応物を室温で一夜撹拌する。反応物をＤＣＭで希釈し、水で洗浄する。得られた有機層を濃縮して残渣を得る。これを、シリカ上で、クロロホルム／ＭｅＯＨで精製し、望ましい生成物を油状物として得る。

【0430】

下記の化合物は、経路Ｊの方法によって製造され得る：E0125；E0128；E0131；E0140；およびE0144。

【0431】

経路Ｋはまた、本発明の化合物を合成するのに用いられ得る一般的な方法を表す。
経路Ｋ

【化45】

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【0432】

実施例３６
ＤＣＭ(６ml)中のＮ−Ｂｏｃ−β−アラニン(１.２５ｇ, ６.６１mmol)の溶液に、ＥＤＣ(２.５ｇ, １３mmol)、ＨＯＢｔ(０.３ｇ, ２mmol)およびＴＥＡ(２ml, １３mmol)を加える。得られた混合物を３０分間撹拌する。ＤＣＭ(４ml)中のアミノアルコール(２ｇ)の溶液を加え、反応物を１０時間撹拌する。反応物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウムで、そして塩水で洗浄する。得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して油状物を得る。これを、シリカ上で、ＭｅＯＨ／ＤＣＭで精製する。生成物を濃縮して２.６５ｇの油状物を得る。

【0433】

実施例３７
実施例３６の化合物(２.６ｇ)を、ＤＣＭ(１０ml)中で撹拌し、ＴＦＡ(１０ml)を加える。３時間後、反応物を乾固するまで濃縮し、それを直接次の工程に用いる。

【0434】

実施例３８
ＤＣＭ(２０ml)中の実施例３７の化合物(２ｇ)の溶液に、ＤＩＥＡ(２.７ml, １５.７mmol)およびＤＭＡＰ(８０mg, ０.６mmol)を、続いてコレステロール クロロホルメート(２.１ｇ, ４.７mmol)を加える。反応物を室温で３時間撹拌する。反応物をＤＣＭで希釈し、水で洗浄する。得られた有機層を濃縮し、シリカ上で、ＭｅＯＨ／クロロホルムで精製し、２.１ｇの望ましい生成物を得る。

【0435】

下記の化合物は、経路Ｋの方法によって製造され得る：E0133；E0134；E0135；E0136；E0137；E0141；E0132；E0142；E0145；E0166；およびE0168。

【0436】

経路Ｌはまた、本発明の化合物を合成するのに用いられ得る一般的な方法を表す。
経路Ｌ

【化46】

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【0437】

実施例３９
ＤＣＭ(１０ml)中のアルコール(２.５ｇ, ５.８mmol)の溶液に、ｐ−ニトロクロロホルメートおよびＴＥＡを加える。反応物を室温で一夜撹拌する。反応物をＤＣＭで希釈し、水で洗浄する。得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して油状物を得る。これを、シリカ上で、ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで精製し、望ましい生成物を得る。

【0438】

実施例４０
アルコール(１.３ｇ, ２.９mmol)を、ＭｅＰｈ(１０ml)中で撹拌する。ＮａＨ(０.４６ｇ, １１.４mmol)を加え、反応物を室温で３０分間撹拌する。実施例３９の化合物(１.７ｇ, １.２mmol)を加え、反応物を室温で１６時間撹拌する。反応物を氷浴中で冷却する、水で反応停止させる。得られた混合物をＥｔＯＡｃで抽出する。有機層を合わせて、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して粗製の油状物を得る。この物質を、シリカ上で、ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで精製し、１ｇの望ましい生成物を得る。

【0439】

E0146は、経路Ｌの方法を用いて合成され得る。

【0440】

実施例４１、４２および４３
(記載なし)

【0441】

経路Ｘはまた、本発明の化合物を合成するのに用いられ得る一般的な方法を表す。
経路Ｘ

【化47】

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【0442】

実施例４４
ジクロロメタン(２５ml)中の２−(２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル)エタノール(８００mg, ５.４７mmol)、トリエチルアミン(０.９１５ml, ６.５７mmol)およびＮ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン(１３４mg, １.１０mmol)の溶液に、室温で、塩化トシル(１.１０ｇ, ５.７５mmol)を加える。反応物を室温で３時間撹拌する。反応物を飽和水性ＮａＨＣＯ₃で希釈し、酢酸エチルで抽出する。有機相を乾燥させ、濃縮し、粗生成物を、シリカのフラッシュクロマトグラフィーによって、酢酸エチル／ヘプタンの濃度勾配で精製する：１.２４ｇ, ７５％。

【0443】

実施例４５
実施例４４のトシレート(１.０３ｇ, ３.４３mmol)およびモルホリン(２.９７ml, ３４.３mmol)をフラスコ中で合わせる。フラスコを密封し、６０℃で一夜加熱する。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和水性ＮａＨＣＯ₃で洗浄する。有機相を乾燥させ、濃縮し、粗生成物を、シリカのフラッシュクロマトグラフィーによって、ジクロロメタン／メタノールの濃度勾配で精製する：６７０mg, ９１％。

【0444】

実施例４６
実施例４５のアミン(５３０mg, ２.４６mmol)を、ジオキサン(１５ml)に０℃で溶解する。冷却した溶液に、濃塩酸(水性, ７.３９mmol)を加える。反応物を室温で一夜撹拌する。過剰量の固体のＫ₂ＣＯ₃を加えて酸を中和する。固体を濾過によって除き、アセトンで洗浄する。濾液を濃縮し、粗生成物を、シリカのフラッシュクロマトグラフィーによって、ジクロロメタン／メタノールの濃度勾配で精製する：３２０mg, ７４％。

【0445】

実施例４７
実施例４６の前述の工程で得られたジオール(３２０mg, １.８mmol)を、ＤＣＭ(１２ml)中で、イミダゾール(２４９mg, ３.６５mmol)と共に撹拌する。この溶液に、ＴＢＤＰＳＣｌ(０.４７５ml, １.８mmol)を加える。得られた混合物を室温で一夜撹拌する。反応物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウムで洗浄(ished)する。得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、油状物になるまで濃縮し、シリカ上で、ＤＣＭ／ＭｅＯＨで精製し、６５０mgの望ましい生成物を得る。

【0446】

実施例４８
トルエン(１５ml)中の前述の工程で得られた物質(６４０mg, １.５mmol)に、水素化ナトリウム(１２４mg, 油中６０ｗｔ％, ３.１mmol)を加える。２０分後、コレステロール反応材(１.１７ｇ, １.８６mmol)を加え、反応物を一夜還流する。室温まで冷却した後、反応物を塩水で反応停止させ、酢酸エチルで抽出する。得られた有機層を乾燥させ、濃縮し、シリカ上で、ＥｔＯＡｃ／ヘプタンで精製し、５６０mgの望ましい生成物を得る。

【0447】

実施例４９
ＴＨＦ(６ml)中の前述の工程で得られた物質(６６０mg, ０.７６mmol)に、ＴＨＦ中１ＭのＴＢＡＦ溶液(１.５ml, １.５mmol)を加える。反応物を２時間撹拌し、ＥｔＯＡｃで希釈する。得られた有機層を塩水で洗浄(ished)し、乾燥させ、濃縮して粗生成物を得る。これを、シリカで、ＭｅＯＨ／ＤＣＭで精製する。

【0448】

実施例５０
実施例４９のアミノアルコール(２８０mg, ０.４４３mmol)をトルエン(４ml)に室温で溶解し、６０％ ＮａＨ(４４mg, １.１mmol)を加える。２０分後、オレイル トシレート(実施例１０に記載された方法と類似の方法でオレイルアルコールから製造される)(１８７mg, ０.４４３mmol)を加える。反応物を３時間還流する。反応物を室温まで冷却し、酢酸エチルで希釈し、塩水で洗浄(ished)する。有機相を乾燥させ、濃縮し、粗生成物を、シリカのフラッシュクロマトグラフィーによって、酢酸エチル／ヘプタンの濃度勾配で精製する：１８３mg, ４７％。

【0449】

E0180は、経路Ｘの方法によって製造され得る。

【0450】

経路Ｙはまた、本発明の化合物を合成するのに用いられ得る一般的な方法を表す。
経路Ｙ

【化48】

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【0451】

実施例５１
ＤＣＭ(２０ml)中のコレステロール(７００mg, １.８mmol)の溶液に、炭酸カリウム(７５０ｇ, ５.４mmol)およびＤＭＡＰ(２２mg, ０.１８mmol)を加え、臭化ブロモアセチル(０.１９ml, ２.２mmol)を滴下する。氷浴中で９０分間撹拌した後、反応物を濾過し、濃縮し、シリカ上で、ＤＣＭ／ヘプタンで精製し、８５０mgの望ましい生成物を得る。

【0452】

実施例５２
ＭｅＰｈ(２０ml)中のアミノアルコール(１.０８ｇ, ２.３７mmol)の溶液に、ＮａＨ(１９０mg, 油中６０ｗｔ％, ４.７４mmol)を加える。混合物を１０分間還流し、ブロモアセチルコレステロール(１.２０ｇ, ２.３７mmol)を加える。反応物を還流しながら２時間撹拌し、室温まで冷却する。反応物に水およびＥｔＯＡｃおよび塩水を加える。得られた有機層を集め、乾燥させ、濃縮して粗製の物質を得る。カラムをＤＣＭ中１％ 酢酸で平衡化した後に、これを、シリカ上で、ＥｔＯＡｃ／ヘプタンで精製する。精製後、生成物含有フラクションを合わせて、飽和水性重炭酸ナトリウムで洗浄した後、濃縮し、７００mgの望ましい生成物を得る。

【0453】

E0167は、経路Ｙの方法を用いて製造され得る。

【0454】

実施例５３
ステルス脂質の構造および合成
ステルス脂質S001〜S026の構造を表３に示す。下記の実施例５４〜６７は、ステルス脂質の合成を説明している。

【0455】

表３：ステルス脂質の構造

【表9】

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【0456】

【表10】

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【表11】

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【0457】

実施例５４：S001

【化49】

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【0458】

コレステロール ヘミスクシネート(６０８mg, １.２５mmol)およびＮ−(３−ジメチルアミノプロピル)−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩(２４０mg, １.２５mmol, ＥＤＣ・ＨＣｌ)を、無水ジクロロメタン(４ml)に溶解し、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン(３０５mg, ２.５０mmol)およびポリ(エチレングリコール)メチルエーテル(５００mg, ０.２５０mmol, Ｍ_n＝約２,０００ｇ/mol, Sigma Aldrich)を加える。反応混合物を室温で撹拌する。７２時間後、全反応混合物を１０ｇのBond Elut SCXカラム(Varian；予め５０：５０ ジクロロメタン：メタノールで平衡化)に負荷し、５０：５０ ジクロロメタン：メタノールで溶出する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮する。さらに、粗生成物を、シリカのフラッシュクロマトグラフィーによって、ジクロロメタン／メタノール濃度勾配で精製する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮して白色の固体を得る：３０４mg, ４８.６％。

【0459】

テトラヒドロフランでのサイズ排除クロマトグラフィーによって、単一の狭いピークが示される。¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルで観察されたピークおよび積分値は、予測された生成物と一致している。

【0460】

実施例５５：S002

【化50】

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【0461】

工程１
β−アラニン塩酸塩(１.００ｇ, ７.１６mmol)、コレステロール クロロホルメート(３.０６ｇ, ６.８１mmol)およびトリエチルアミン(２.０ml, １４mmol)を無水クロロホルム(２５ml)に溶解する。溶液を室温で一夜撹拌する。翌朝、溶媒を蒸発させ、残渣を酢酸エチル(１００ml)に溶解し、１Ｍ ＨＣｌで、塩水で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させる。
生成物を濃縮して白色の固体を得る。これをさらに精製することなく次の工程に用いる：３.３１ｇ, ９０.０％。

【0462】

工程２
前述の工程で得られた生成物(メチルエステル)(２９８mg, ０.５７８mmol)をテトラヒドロフラン(２ml)に溶解し、１Ｍ ＮａＯＨ(２.０ml, ２.０mmol)を加え、二相の溶液を得る。溶液を室温で撹拌すると、エマルジョンが形成する。２時間後、反応混合物を１０mlの水で希釈し、１Ｍ ＨＣｌで酸性にする。生成物を酢酸エチル(１００ml)で抽出する。有機相を塩水で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、濃縮して白色の固体を得る。¹Ｈ−ＮＭＲにより、少量のメチルエステル出発物質(約５mol％)の存在が示されたが、さらに精製することなく次の工程に用いるのに十分な程純粋であると考えられる：２５２mg, ８３.０％。

【0463】

工程３
Ｎ−(３−ジメチルアミノプロピル)−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩(９６mg, ０.５０mmol)、前述の工程で得られた生成物(カルボン酸)(２５２mg, ０.４７７mmol)、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン(１２２mg, １.００mmol)およびポリ(エチレングリコール)メチルエーテル(２００mg, ０.１００mmol, Ｍ_n＝約２,０００ｇ/mol, Sigma Aldrich)を無水ジクロロメタン(５.０ml)に溶解し、室温で撹拌する。２４時間後、反応混合物を、１０ｇのBond Elut SCXカラム(Varian；予め５０：５０ ジクロロメタン：メタノールで平衡化)に負荷し、５０：５０ ジクロロメタン：メタノールで溶出する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮する。粗生成物を、さらに、シリカのフラッシュクロマトグラフィーによって、ジクロロメタン／メタノール濃度勾配で精製する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮し、白色の固体を得る：１５１mg, ６０.３％。

【0464】

テトラヒドロフランでのサイズ排除クロマトグラフィーによって、単一の狭いピークが示される。¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルで観察されたピークおよび積分値は、予測された生成物と一致している。

【0465】

実施例５６：S003

【化51】

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【0466】

ＰＥＧ−ＮＨ₂(５００mg, ０.２５０ mmol, Ｍ_n＝約２０００ｇ/mol, “Sunbright MEPA 20H”, NOF Corp.)、コレステロール クロロホルメート(４４９mg, １.００mmol)、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン(１２２mg, １.００mmol)およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(１４８mg, １.１５mmol)を、５mlの１：１ トルエン：ジクロロメタンに溶解し、室温で撹拌する。７２時間後、Ｎ,Ｎ−ジメチルエチレンジアミン(０.２ml)を加えて、過剰のコレステロール クロロホルメートを消失させる。３０分撹拌した後、反応混合物を、１０ｇのBond Elut SCXカラム(Varian；予め５０：５０ ジクロロメタン：メタノールで平衡化)に負荷し、５０：５０ ジクロロメタン：メタノールで溶出する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮する。粗生成物を、さらにシリカのフラッシュクロマトグラフィーによって、ジクロロメタン／メタノールの濃度勾配で精製する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮し、白色の固体を得る：３７６mg, ５７.８％。

【0467】

テトラヒドロフランでのサイズ排除クロマトグラフィーによって、単一の狭いピークが示される。¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルで観察されたピークおよび積分値は、予測された生成物と一致している。

【0468】

実施例５７：S004

【化52】

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【0469】

工程１
ヒートガンで乾燥した丸底フラスコに、窒素下で、オクタデシルアルデヒド(５００mg, １.８６mmol)およびテトラヒドロフラン(１０ml)を加える。テトラヒドロフラン中０.５Ｍの塩化 オクタデシル マグネシウムの溶液(７.５ml, ３.８mmol)をシリンジを介して加え、反応物を４０℃まで温める。添加が完了したら、反応物を１時間撹拌する。反応物を熱源から除き、１mlの酢酸で反応停止させる。室温に至った後、溶液をジクロロメタンで希釈し、水で、０.１Ｍ ＮａＯＨで、１Ｍ ＨＣｌで、そして塩水で洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過する。粗製の物質を熱ヘプタンから２回結晶化し、白色の粉末として得る：１９５mg, ２０.０％。

【0470】

工程２
前述の工程で得られた生成物(アルコール)(１９４mg, ０.３７１mmol)を、ジクロロメタン(４ml)に４０℃で溶解し、ピリジン(１００μｌ, １.２４mmol)および４−ニトロフェニルクロロホルメート(９３mg, ０.４６mmol)を加える。反応物を４０℃で一夜撹拌し、室温まで冷却する。粗生成物を、シリカのフラッシュクロマトグラフィーによって、ヘプタン／ジクロロメタンの濃度勾配で精製する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮し、白色の固体を得る：２１９mg, ８６.０％。

【0471】

工程３
前述の工程で得られた生成物(４−ニトロフェニル カーボネート)を、トルエン(５ml)に室温で溶解する。ＰＥＧ−ＮＨ₂(８００mg, ０.４００mmol, Ｍ_n＝約２０００g/mol, “Sunbright MEPA 20H”, NOF Corp.)、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン(５０mg, ０.４０９mmol)およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(２００μｌ, １.１４５mmol)を加
え、溶液を室温で撹拌する。７２時間後、反応物を、１０ｇのBond Elut SCXカラム(Varian；予め５０：５０ ジクロロメタン：メタノールで平衡化)に負荷し、５０：５０ ジクロロメタン：メタノールで溶出する。生成物含有フラクションを、ＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮する。粗生成物を、さらに、シリカのフラッシュクロマトグラフィーによって、ジクロロメタン／メタノールの濃度勾配で精製する。生成物含有フラクションを、ＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮する。４−ニトロフェノール不純物を除去するために、生成物をジクロロメタン(１０ml)に溶解し、Ｓｉ−アミン捕捉樹脂(Silicycle)(２.０ｇ, カタログ番号R52030B)を加える。溶液を室温で１時間激しく撹拌し、濾過し、樹脂を除き、濃縮して薄黄色の固体を得る：８０６mg, ９７.０％。

【0472】

Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドでのサイズ排除クロマトグラフィーによって、単一の狭いピークが示される。¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルで観察されたピークおよび積分値は、予測された生成物と一致している。

【0473】

実施例５８：S005

【化53】

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【0474】

工程１
丸底フラスコ中で、ペンタトリアコンタン−１８−オン(７５０mg, １.４８mmol)を、穏やかに撹拌しながら、テトラヒドロフラン(４０ml)に溶解する。ケトン含有溶液を室温まで冷却した後、ジエチルエーテル中４Ｍの水素化リチウムアルミニウム溶液(０.７４ml, ２.９６mmol)を滴下する。反応物を室温で３０分間撹拌する。固体の硫酸ナトリウム十水和物を加え、スラリーを２０分間撹拌し、過剰の水素化リチウムアルミニウムで反応停止させる。固体を濾過して除き、濾液をヘプタンで希釈し、１Ｍ ＨＣｌで洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、白色の固体を得る。粗生成物は、さらに精製することなく次の工程に用いるのに十分な程純粋である：６５０mg, ８６.０％。

【0475】

工程２
ジクロロメタン(１０ml)中の前述の工程で得られた生成物(アルコール)(２００mg, ０.３９３mmol)の溶液およびピリジン(７８mg, ０.９８mmol)に、室温で、４−ニトロフェニル クロロホルメート(９９mg, ０.４９mmol)を加える。反応混合物を３５℃で４時間加熱する。反応混合物をヘプタンで希釈し、１Ｍ ＨＣｌで、そして飽和重炭酸ナトリウムで抽出する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、シリカのフラッシュクロマトグラフィーによって、ヘプタン：酢酸エチルの濃度勾配で精製する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせ、濃縮し、白色の固体を得る：２００mg, ７６％。

【0476】

工程３
前述の工程で得られた生成物(４−ニトロフェニル カーボネート)(２６０mg, ０.３８６mmol)を、トルエン(４ml)に溶解し、続いてＰＥＧ２ｋ(６２０mg, ０.３１０mmol, Ｍ_n＝約２０００g/mol, “Sunbright MEPA 20H”, NOF Corp.)、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン(４０mg, ０.３３mmol)およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(２００μｌ,
１.１５mmol)を加える。溶液を室温で一夜撹拌する。反応混合物を１０ｇのBond Elut SCXカラム(Varian；予め５０：５０ ジクロロメタン：メタノールで平衡化)に負荷し、５０：５０ ジクロロメタン：メタノールで溶出する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮する。さらに、粗生成物を、シリカのフラッシュクロマトグラフィーによって、ジクロロメタン／メタノールの濃度勾配で精製する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮する。４−ニトロフェノール不純物を除去するために、粗生成物を１：１ ジクロロメタン：メタノールに溶解し、１０ｇのBond Elut NH₂カラム(Varian；予め５０：５０ ジクロロメタン：メタノールで平衡化)に通して溶出する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮し、薄黄色の固体を得る：６３１mg, ７８.０％。

【0477】

Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドでのサイズ排除クロマトグラフィーによって、単一の狭いピークが示される。¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルで観察されたピークおよび積分値は、予測された生成物と一致している。

【0478】

実施例５９：S007

【化54】

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【0479】

工程１
丸底フラスコに、マグネシウム金属(０.２０１ｇ, ８.２７mmol)および触媒量のヨウ素、続いてテトラヒドロフラン(３０ml)および１−ブロモテトラデカン(２.１７ｇ, ７.８２mmol)を加える。混合物を２時間還流し、室温まで冷却する。テトラヒドロフラン(５ml)中のオクタデシルアルデヒド(０.６００ｇ, ２.２４mmol)の溶液を加え、反応混合物を室温で３０分間撹拌する。反応物を酢酸エチルで希釈し、１Ｍ ＨＣｌで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮する。粗生成物を、さらに、シリカのフラッシュクロマトグラフィーによって、ヘプタン／酢酸エチルの濃度勾配で精製する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮する：３１０mg, ２９.７％。

【0480】

工程２
前述の工程で得られた生成物(アルコール)(３１０mg, ０.６６４mmol)をジクロロメタン(１５ml)で溶解する。ピリジン(０.１３４ml, １.６６mmol)を、続いて４−ニトロフェニル クロロホルメート(１６７mg, ０.８３０mmol)を加える。反応物を室温で一夜撹拌する。反応物を酢酸エチルで希釈し、ＮａＨＣＯ₃の飽和水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮する。粗生成物を、さらに、シリカのフラッシュクロマトグラフィーによって、ヘプタン／酢酸エチルの濃度勾配で精製する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮する：３１５mg, ７５.０％。

【0481】

工程３
トルエン(１０ml)中の前述の工程で得られた生成物(４−ニトロフェニル カーボネート)(３１５mg, ０.４９８mmol)の溶液に、室温で、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン(４８.７mg, ０.３９９mmol)およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(０.１７４ml, ０.９９７mmol)を、続いてＰＥＧ−ＮＨ₂(７９８mg, ０.３９９mmol, Ｍ_n＝約２０００g/mol, “Sunbright MEPA 20H”, NOF Corp.)を加える。黄色の溶液を室温で一夜撹拌する。反応混合物を１０ｇのBond Elut SCXカラム(Varian；予め５０：５０ ジクロロメタン：メタ
ノールで平衡化)に負荷し、５０：５０ ジクロロメタン：メタノールで溶出する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮する。粗生成物を、さらに、シリカのフラッシュクロマトグラフィーによって、ジクロロメタン／メタノールの濃度勾配で精製する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮する：５４０mg, ５４.３％。

【0482】

¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルで観察されたピークおよび積分値は、予測された生成物と一致している。

【0483】

実施例６０：S008

【化55】

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【0484】

工程１
乾燥した丸底フラスコに、窒素下で、１−ヨードヘキサデカン(０.７０５ｇ, ２.００mmol)およびジエチルエーテル(１５ml)を加える。溶液を−７８℃まで冷却し(溶液は白色のスラリーとなる)、ヘプタン中１.７Ｍのｔ−ブチル リチウムの溶液(２.５９ml, ４.４０mmol)を滴下する。２０分間撹拌した後、反応混合物を室温まで温め、さらに２時間撹拌する。反応混合物に、ジエチルエーテル(３ml)中のオクタデシルアルデヒド(０.２６８ｇ, １.００mmol)の溶液を滴下する(発熱)。反応物を氷冷した１Ｍ ＨＣｌで反応停止させ、ジクロロメタンで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮する。粗生成物を、さらに、シリカのフラッシュクロマトグラフィーによって、ヘプタン／ジクロロメタンの濃度勾配で精製する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮する：１５０mg, ３０.３％。

【0485】

工程２
前述の工程で得られた生成物(アルコール)(２００mg, ０.４０４mmol)を、ジクロロメタン(６ml)に溶解する。ピリジン(０.０８２ml, １.０１mmol)を、次に４−ニトロフェニル クロロホルメート(１０２mg, ０.５０５mmol)を加える。反応物を室温で一夜撹拌する。反応物を、酢酸エチルで希釈し、ＮａＨＣＯ₃の飽和水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮する。粗生成物を、さらに、シリカのフラッシュクロマトグラフィーによって、ヘプタン／酢酸エチルの濃度勾配で精製する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮する：２２０mg, ８２.０％。

【0486】

工程３
トルエン(６ml)中の前述の工程で得られた生成物(４−ニトロフェニル カーボネート)(２３０mg, ０.３４８mmol)の溶液に、室温で、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン(４２.６mg, ０.３４８mmol)およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(０.１５２ml, ０.８７１mmol)を、次にＰＥＧ−ＮＨ₂(６９７mg, ０.３４８mmol, Ｍ_n＝約２０００g/mol, “Sunbright MEPA 20H”, NOF Corp.)を加える。黄色の溶液を室温で一夜撹拌する。反応混合
物を１０ｇのBond Elut SCXカラム(Varian；予め５０：５０ ジクロロメタン：メタノールで平衡化)に負荷し、５０：５０ ジクロロメタン：メタノールで溶出する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮する。粗生成物を、さらに、シリカのフラッシュクロマトグラフィーによって、ジクロロメタン／メタノールの濃度勾配で精製する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮する：６００mg, ６８.３％。

【0487】

¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルで観察されたピークおよび積分値は、予測された生成物と一致している。

【0488】

S009は、S008について記載された方法と類似の方法で製造され得る。

【0489】

実施例６１：S010およびS011
S010およびS011は、例えばＰＣＴ出願国際公開第2009/086558号にそれぞれ化合物IVaおよびIVcについて示された通りに製造され得る。これらの化合物は、国際公開第2009/086558号の実施例１９に示された通りに合成され得る。

【0490】

実施例６２：S012
S012は、S001について記載された方法と類似の方法で、ポリ(エチレングリコール)メチルエーテルの代わりにＰＥＧ−ＮＨ₂(“Sunbright MEPA 20H”, NOF Corp.)を用いて製造され得る。

【0491】

実施例６３：S006およびS013〜S024
S006、S013、S014、S015、S016、S017、S018、S019、S020、S021、S022、S023およびS024は、S004について記載された方法と類似の方法で製造され得る。

【0492】

実施例６４：S025

【化56】

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【0493】

工程１
本明細書に記載された化合物S004の合成の工程２の生成物(４−ニトロフェニル カーボネート)(２８５mg, ０.４１４mmol)を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド(５ml)に懸濁し、次にＤ−グルタミン酸ジメチルエステル(１４５mg, ０.８２８mmol)、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(０.１４５ml, ０.８２８mmol)およびＮ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン(１０１mg, ０.８２８mmol)を加える。溶液を６０℃で一夜加熱する。反応混合物を１０ｇのBond Elut SCX カラム(Varian；予め５０：５０ ジクロロメタン：メタノールで平衡化)に負荷し、５０：５０ ジクロロメタン：メタノールで溶出する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮する。粗生成物を、さらに、シリカのフラッシュクロマトグラフィーによって、酢酸エチル／ヘプタンの濃度勾配で精製する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮し、白色の固体を得る：１３１mg, ４４％。

【0494】

工程２
前述の工程で得られた生成物(ジメチルエステル)(０.１６０ｇ, ０.２２１mmol)をテトラヒドロフラン(５ml)に溶解し、水(５ml)中のＬｉＯＨ(５２.９mg, ２.２１mmol)の溶液を加える。反応物を室温で７２時間撹拌する。溶液をクロロホルムで希釈し、１Ｎ ＨＣｌ(水性)で、そして塩水で洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過する。濾液を濃縮し、白色の固体を得る：１３０mg, ８５％。

【0495】

工程３
前述の工程で得られた生成物(二酸)(１３０mg, ０.１８７mmol)をジクロロメタン(９ml)およびヘプタン(１.５ml)に室温で懸濁する。Ｎ−(３−ジメチルアミノプロピル)−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩(１０７mg, ０.５６０mmol)を懸濁液に加え、次にヒドロキシベンゾトリアゾール(８６mg, ０.５６mmol)を加える。３０分後、ＰＥＧ−ＮＨ₂(４１１mg, ０.４１１mmol, Ｍｎ＝約１０００g/mol, “mPEG-amine, 1k”, Creative PEGWorks)およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(６５μｌ, ０.３７４mmol)を加える。反応物を室温で一夜撹拌する。反応混合物を１０ｇのBond Elut SCX カラム(Varian；予め５０：５０ ジクロロメタン：メタノールで平衡化)に負荷し、５０：５０ ジクロロメタン：メタノールで溶出する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮する。粗生成物を、さらに、シリカのフラッシュクロマトグラフィーによって、ジクロロメタン／メタノールの濃度勾配で精製する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮し、白色の固体を得る：３７６mg, ５７.８％。

【0496】

実施例６５：S026

【化57】

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【0497】

工程１
本明細書で記載された化合物S004の合成の工程１の生成物(アルコール)(２００mg, ０.３８２mmol)、無水コハク酸(３８mg, ０.３８mmol)およびＮ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン(１２mg, ０.０９６mmol)をフラスコに秤量し、クロロホルム(３.５ml)に懸濁する。反応混合物を７０℃で一夜撹拌する。反応混合物を、１ｇのBond Elut SCXカラム(Varian；予めジクロロメタンで平衡化)に負荷し、ジクロロメタンで溶出する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮する。粗生成物を、さらに、シリカのフラッシュクロマトグラフィーによって、酢酸エチル／ヘプタンの濃度勾配で精製する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮し、白色の固体を得る：１３４mg, ５６％。

【0498】

工程２
前述の工程で得られた生成物(カルボン酸)(７５mg, ０.１２mmol)、Ｎ−(３−ジメチルアミノプロピル)−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩(３５mg, ０.１８mmol)およびヒドロキシベンゾトリアゾール(２８mg, ０.１８mmol)を無水クロロホルム(１ml)に溶解し、室温で０.５時間撹拌する。次いでＰＥＧ−ＮＨ₂(２６５mg, ０.１３２mmol, Ｍｎ＝約２０００g/mol, “Sunbright MEPA 20H”, NOF Corp.)およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(３２μｌ, ０.１８mmol)を加え、溶液を室温で一夜撹拌する。反応混合物を２ｇのBond Elut SCXカラム(Varian；予め５０：５０ ジクロロメタン：メタノールで平衡化)に負荷し、ジクロロメタンで溶出する。生成物含有フラクションをＴＬＣによって同定し、合わせて、濃縮し、白色の固体を得る：２４０mg, ７６％。

【0499】

これらのステルス脂質の特性決定データは、下記の表４および５の通りである。
表４：ステルス脂質S001〜S026の¹Ｈ−ＮＭＲ

【表12】

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【0500】

【表13】

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【0501】

表５：ステルス脂質S001〜S026の他の特性決定

【表14】

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【0502】

実施例６６
結果の表の概要
合成された化合物を下記の表に表す。誤解を避けるために、幾つかの置換基は、それらが重複しているように表しているが、化合物の真の構造は、それでもなお完全に明確である。例えば、

【化58】

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は、化学的に不可能な３員の水素含有環を表すのではなく、代わりに、下記：

【化59】

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を表す。

【0503】

表６は、本発明のカチオン性脂質の構造を提供する。
表６：カチオン性脂質の特性決定および構造

【表15】

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【表16】

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【0504】

【表17】

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【表18】

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【0505】

【表19】

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【表20】

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【0506】

【表21】

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【表22】

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【0507】

【表23】

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【表24】

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【0508】

【表25】

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【表26】

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【0509】

【表27】

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【表28】

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【0510】

【表29】

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【表30】

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【0511】

【表31】

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【表32】

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【0512】

【表33】

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【表34】

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【0513】

【表35】

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【表36】

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【0514】

【表37】

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【表38】

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【0515】

【表39】

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【表40】

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【0516】

【表41】

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【表42】

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【0517】

【表43】

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【表44】

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【0518】

【表45】

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【表46】

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【0519】

【表47】

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【表48】

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【0520】

【表49】

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【表50】

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【0521】

【表51】

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【表52】

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【0522】

【表53】

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【表54】

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【0523】

【表55】

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【表56】

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【0524】

【表57】

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【表58】

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【0525】

【表59】

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【表60】

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【0526】

【表61】

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【表62】

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【0527】

【表63】

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【表64】

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【0528】

【表65】

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【表66】

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【0529】

【表67】

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【表68】

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【0530】

【表69】

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【0531】

E0180を除く上記化合物はそれぞれについて、Ｙ²は、酸素原子を介して、ステロイドの環Ａの３位でＬに結合しているコレステロールであり(当該ヒドロキシ基の水素原子は存在しない)；Ｘ¹およびＸ²がＯであり；ａ＝メチレン；ｂ＝メチレン、およびｃは存在せず；一方、E0180についてはａ＝エチレンである。

【0532】

下記の特性決定データに加えて、¹Ｈ−ＮＭＲにより、合成を行った全ての脂質について純度および何れかのオレフィン異性体化を評価する。具体的には、通常0.68ppm付近でのコレステロール誘導体の一重項についての積算値を、5.2〜5.5ppm範囲のオレフィン誘導体のシグナルと比較する。望ましいｃｉｓ非共役オレフィンについてのオレフィン積算値およびコレステロールのオレフィン水素を異性体化生成物に対応する5.5 ppmより大きい何れかの新しいシグナルと比較する。全ての場合において、¹Ｈ−ＮＭＲの積算されたシグナルを比較することによって測定した異性体化の程度は、１０％未満である。

【0533】

実施例６７
種々の脂質のＮＭＲ特性決定を下に示す。

【0534】

E0008
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.25-5.48 (m, 5H), 3.69-3.86 (m, 2H), 3.55-3.69 (m, 7H), 3.34-3.55 (m, 4H), 3.07-3.25 (m, 1H), 2.70-3.01 (m, 4H), 2.30-2.53 (m, 3H), 2.15-2.30 (m, 1H), 1.78-2.14 (m, 11H), 1.42-1.66 (m, 12H), 0.97-1.42 (m, 34H), 0.81-0.97 (m, 16H), 0.68 (s, 3H) ppm。

【0535】

E0006
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.25-5.47 (m, 5H), 3.56-3.85 (m, 11H), 3.48-3.56 (m, 1H), 3.36-3.48 (m, 3H), 3.11-3.27 (m, 1H), 2.66-2.83 (m, 4H), 2.41-2.49 (m, 2H), 2.30-2.41 (m, 1H), 2.15-2.28 (m, 1H), 1.72-2.12 (m, 11H), 0.96-1.70 (m, 60H), 0.68 (s, 3H) ppm。
¹³C NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 140.9, 130.2, 130.1, 128.0, 127.9, 121.6, 79.5, 72.0, 71.7, 71.6, 70.9, 69.4, 67.3, 60.2, 60.1, 59.7, 56.8, 56.1, 50.2, 42.3, 39.8, 39.5, 39.0, 37.2, 36.8, 36.2, 35.8, 31.9, 31.9, 31.5, 29.7, 29.5, 29.5, 29.3, 29.3, 29.0, 28.3, 28.2, 28.0, 27.2, 27.2, 26.2, 25.6, 24.3, 23.8, 22.8, 22.7, 22.6, 22.6, 21.0, 19.4, 18.7, 14.1, 11.8 ppm。

【0536】

E0003
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.22-5.46 (m, 7H), 3.66-3.93 (m, 5H), 3.54-3.66 (m, 6H), 3.35-3.54 (m, 4H), 3.07-3.23 (m, 1H), 2.73-2.89 (m, 4H), 2.39-2.73 (m, 4H), 2.28-2.39 (m, 1H), 2.28-2.39 (m, 1H), 1.70-2.12 (m, 10H), 1.20-1.65 (m, 24H), 0.94-1.19 (m, 13H), 0.77-0.94 (m, 14H), 0.66 (s, 3H) ppm。
¹³C NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 140.9, 130.4, 130.0, 128.3, 128.1, 127.8, 127.6, 121.6, 79.5, 71.6, 70.8, 70.7, 69.2, 67.3, 60.1, 56.7, 56.1, 54.2, 50.1, 42.3, 39.7, 39.5, 39.0, 37.2, 36.8, 36.2, 35.8, 31.9, 31.8, 31.5, 29.5, 29.4, 29.3, 28.3, 28.2, 28.0, 27.2, 27.2, 25.8, 25.6, 24.3, 23.8, 22.8, 22.6, 22.5, 21.0, 19.4, 18.7, 14.1, 11.8 ppm。

【0537】

E0002
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.26-5.44 (m, 5H), 3.68-3.84 (m, 3H), 5.54-3.68 (m, 7H), 3.32-3.54 (m, 6H), 3.09-3.24 (m, 1H), 2.68-2.80 (m, 2H), 2.27-2.58 (m, 3H), 2.12-2.27 (m, 1H), 1.69-2.12 (m, 9H), 1.41-1.69 (m, 20H), 1.19-1.40 (m, 20H), 0.95-1.19 (m, 11H), 0.78-0.95 (m, 12 H), 0.66 (s, 3H) ppm。

【0538】

E0001
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.10-7.24 (m, 3H), 6.96-7.10 (m, 1H), 5.21-5.48 (m, 5H), 3.73-3.90 (m, 3H), 3.37-3.72 (m, 11H), 3.10-3.25 (m, 1H), 2.72-2.86 (m, 2H), 2.28-2.42 (m, 1H), 2.14-2.28 (m, 1H), 1.92-2.14 (m, 6H), 1.78-1.92 (m, 4H), 1.22-1.78 (m, 34 H), 0.95-1.22 (m, 13H), 0.84-0.95 (m, 13H), 0.68 (s, 3H) ppm。

【0539】

E0004
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.24-5.44 (m, 5H), 3.66-3.83 (m, 2H), 3.54-3.65 (m, 7H), 3.34-3.51 (m, 4H), 3.11-3.23 (m, 1H), 2.94-3.10 (m, 2H), 2.56-2.87 (m, 6.5H), 2.41-2.50 (d, J=5.02 Hz, 2H), 2.29-2.40 (m, 2.5H), 1.96-2.26 (m, 8H), 1.62-1.96 (m, 8H), 1.62-1.96 (m, 11H), 1.40-1.61 (m, 11H), 1.22-1.40 (m, 20H), 0.81-1.21 (m, 26H), 0.66 (s, 3H) ppm。
¹³C NMR (CDCl₃, 400MHz) δ 142.5, 140.9, 139.7, 130.1, 130.1, 128.7, 127.9, 127.9, 125.8, 121.5, 79.4, 77.2, 71.8, 71.6, 70.8, 70.8, 69.3, 67.3, 63.1, 59.3, 56.7, 56.1, 53.6, 53.3, 50.1, 49.9, 42.2, 39.7, 39.4, 39.0, 37.2, 36.8, 36.1, 35.7, 31.9, 31.8, 31.5, 29.6, 29.5, 29.4, 29.3, 29.3, 28.3, 28.2, 27.9, 27.2, 27.1, 27.0, 26.9, 26.1, 25.6, 24.8, 24.2, 23.8, 22.8, 22.5, 21.3, 21.0, 19.3, 18.6, 14.0, 11.8 ppm。

【0540】

E0005
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.28-5.44 (m, 3H), 3.69-3.82 (m, 2H), 3.57-3.67 (m, 7H), 3.48-3.64 (m, 1H), 3.39-3.48 (m, 3H), 3.33 (s, 3H), 3.12-3.24 (m, 2H), 2.70-2.86 (m, 4H), 2.42-2.47 (d, J=6.02 Hz, 2H), 2.33-2.42 (m, 3H), 1.97-2.10 (m, 5H), 1.76-1.97 (m, 7H), 1.42-1.64 (m, 12H), 1.23-1.42 (m, 20H), 0.97-1.23 (m, 12H), 0.81-0.97 (m, 13H), 0.68 (s, 3H) ppm。
¹³C NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 140.9, 130.2, 130.1, 127.9, 127.9, 121.5, 79.5, 77.5, 72.5, 72.1, 70.9, 70.8, 69.3, 67.3, 63.1, 59.3, 56.7, 56.1, 55.5, 52.0, 51.7, 50.1, 42.3, 39.8, 39.5, 39.0, 37.2, 36.8, 36.2, 35.8, 31.9, 31.9, 31.5, 31.0, 29.7, 29.5, 29.5, 29.3, 29.3, 28.3, 28.2, 28.0, 27.2, 27.2, 26.1, 25.6, 24.3, 23.8, 22.8, 22.6, 21.0, 19.4, 18.7, 14.1, 11.8 ppm。

【0541】

E0007
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.26-5.44 (m, 5H), 3.84-3.94 (t, J = 5.56 Hz, 4H),3.68-3.87 (m, 2H), 3.56-3.67 (m, 7H), 3.47-3.54 (m, 1H), 3.38-3.47 (m, 3H), 3.11-3.23 (m, 1H), 2.73-2.82 (t, J=6.44 Hz, 2H), 2.42-2.57 (m, 5H), 2.32-2.41 (m, 1H), 2.11-2.27 (m, 2H), 1.97-2.10 (m, 6H), 1.76-1.96 (m, 7H), 1.66-1.75 (m, 2H), 1.41-1.62 (m, 9H), 1.22-1.41 (m, 20H), 0.81-1.22 (m, 25H), 0.67 (s, 3H) ppm。
¹³C NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 141.0, 130.1, 130.1, 127.9, 127.9, 121.5, 96.2, 79.5, 77.6, 72.2, 71.6, 70.9, 70.8, 69.4, 67.3, 63.1, 59.3, 59.1, 56.8, 56.1, 50.5, 50.2, 42.3, 39.8, 39.5, 39.1, 37.2, 36.8, 36.2, 35.7, 32.8, 31.9, 31.9, 31.5, 29.7, 29.5, 29.4, 29.3, 29.3, 28.3, 28.2, 28.0, 27.2, 27.2, 26.1, 25.6, 25.6, 24.3, 23.8, 22.8, 22.5, 21.0, 19.3, 18.7, 14.0, 11.8 ppm。

【0542】

E0009
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.27-5.44 (m, 5H), 4.07-4.22 (m, 2H), 3.67-3.83 (m, 2H), 3.55-3.67 (m, 6H), 3.37-3.52 (m, 4H), 3.12-3.25 (m, 1H), 2.81-2.90 (m, 1H), 2.73-2.81 (t, J=6.53Hz, 2H), 2.42-2.64 (m, 3H), 2.15-2.41 (m, 4H), 1.76-2.11 (m, 11H), 1.64-1.72 (m, 4H), 1.42-1.63 (m, 12H), 1.21-1.41 (m, 22H), 0.81-1.22 (m, 26H), 0.68 (s, 3H) ppm。
¹³C NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 140.9, 130.2, 130.1, 127.9, 127.9, 121.5, 79.5, 77.2, 72.7, 72.0, 71.6, 71.5, 70.8, 69.4, 67.3, 61.9, 59.5, 56.7, 56.5, 56.1, 50.1, 49.3, 49.3, 42.3, 39.7, 39.5, 39.0, 37.2, 36.8, 36.2, 35.8, 31.9, 31.9, 31.5, 29.7, 29.5, 29.5, 29.3, 29.3, 28.4, 28.3, 28.2, 28.0, 27.4, 27.4, 27.2, 27.2, 26.5, 26.1, 25.6, 24.3, 23.8, 22.8, 22.6, 22.6, 21.0, 19.4, 18.7, 14.1, 11.8 ppm。

【0543】

E0170
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.26-5.45 (m, 5H), 3.68-3.82 (m, 2H), 3.56-3.68 (m, 7H), 3.38-3.53 m, 4H), 3.11-3.24 (m, 1H), 2.73-2.82 (t, J=6.53 Hz, 2H), 2.56-2.69 (m, 4H), 2.50-2.56 (m, 2H), 2.32-2.41 (m, 1H), 2.09-2.27 (m, 2H), 1.77-2.09 (m, 13H), 1.42-1.63 (m, 9H), 1.21-1.42 (m, 20H), 0.83-1.21 (m, 25H), 0.68 (s, 3H) ppm。
¹³C NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 140.9, 130.2, 130.1, 128.0, 127.9, 124.4, 122.0, 121.5, 119.6, 79.5, 77.6, 77.2, 71.8, 71.6, 70.9, 70.8, 69.4, 67.3, 58.7, 56.7, 56.1, 50.7, 50.1, 42.3, 39.7, 39.5, 39.0, 37.2, 36.8, 36.1, 35.8, 34.0, 31.9, 31.8, 31.5, 29.6, 29.5, 29.4, 29.3, 28.3, 28.2, 28.0, 27.2, 27.2, 26.1, 25.6, 24.3, 23.8, 22.8, 22.6, 21.0, 19.3, 18.7, 14.1, 11.8 ppm。

【0544】

E0171
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.27-5.46 (m, 5H), 3.58-3.82 (m, 9H), 3.38-3.54 (m, 4H), 3.13-3.26 (m, 1H), 2.74-2.82 (m, 2H), 2.31-2.50 (m, 6H), 2.16-2.2 (m, 1H), 1.70-2.10 (m, 12H), 1.24-1.65 (m, 33H), 0.97-1.23 (m, 13H), 0.82-0.97 (m, 19H), 0.68 (s, 3H) ppm。
¹³C NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 141.0, 130.2, 130.1, 127.9, 127.9, 121.5, 79.5, 77.2, 73.2, 72.5, 72.3, 71.6, 70.9, 70.8, 69.3, 67.3, 66.0, 61.9, 60.9, 60.2, 56.7, 56.1, 50.7, 50.1, 42.3, 39.8, 39.5, 39.0, 38.7, 37.2, 36.8, 36.2, 35.8, 31.9, 31.9, 31.5, 29.7, 29.5, 29.5, 29.3, 29.3, 28.3, 28.2, 28.0, 27.2, 27.2, 26.1, 25.6, 24.3, 23.8, 22.8, 22.6, 21.0, 19.4, 18.7, 14.1, 11.8 ppm。

【0545】

E0010
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.26-5.45 (m, 5H), 3.53-3.84 (m, 9H), 3.37-3.53 (m, 4H), 3.13-3.24 (m, 1H), 2.91-3.00 (m, 1H), 2.74-2.86 (m, 2H), 2.28-2.43 (m, 2H), 2.10-2.28 (m, 2H), 1.42-2.10 (m, 32H), 0.82-1.41 (m, 50H), 0.68 (s, 3H) ppm。
¹³C NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 141.0, 130.2, 130.1, 127.9, 127.9, 121.5, 79.5, 77.2, 71.9, 71.6, 70.9, 70.8, 69.1, 67.3, 66.7, 56.8, 56.1, 55.5, 54.6, 54.0, 50.1, 42.3, 42.1, 42.0, 39.8, 39.5, 39.0, 37.2, 36.8, 36.2, 35.8, 33.2, 32.6, 31.9, 31.9, 31.5, 30.7, 29.7, 29.5, 29.5, 29.3, 29.3, 28.3, 28.2, 28.0, 27.2, 27.2, 26.2, 26.1, 25.8, 25.6, 24.3, 23.8, 22.8, 22.6, 21.0, 19.4, 18.7, 14.1, 11.8 ppm。

【0546】

本化合物の他の特性決定データを、下記の表に示す。
表７：カチオン性脂質の特性決定データ

【表70】

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【表71】

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【0547】

【表72】

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【0548】

【表73】

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【0549】

【表74】

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^a E0050は２種のジアステレオマー成分がシリカで異なるＲｆ値を有するジアステレオマー混合物である。

【0550】

用いられた方法は、下記に示した通りである。
*1 -Zorbax 300SB C3 150×4.6, １mL/分, 水：ＭｅＣＮ ｗ／０.１％ ＴＦＡ, ４０〜１００％を１５分, １００％を５分, ELSD検出。
*2 - Zorbax RX SIL 250×4.6, ０.７mL/分, ヘキサン：ＥｔＯＨ ４：６, ELSD検出。
*3 - Zorbax NH2 250×4.6, １mL/分, ヘキサン：ＩＰＡ, ３０〜６０％を１０分, ６０％を５分, ELSD検出器。
*4 - Xbridge C8, 150×4.6 mm, １mL/分, 水：ＭｅＣＮ ｗ／０.１％ ＴＦＡ, ３０〜１００％を１５分, １００％を５分, ELSD検出。
*5 - Zorbax Eclipse XDB-C18 250×4.6, １mL/分, 水：ＭｅＣＮ ｗ／０.１％ ＴＦＡ, ５０％を５分間維持, ５０〜１００％を５分, 次いで１００％を１２分間維持, ELSD検出器。
*6 - Zorbax Eclipse XDB-C18 250×4.6, １mL/分, 水：ＭｅＯＨ ｗ／０.１％ ＴＦＡ, ５０％を５分, 次いで５０〜１００％を５分, 次いで１００％を５分間維持, ELSD検出器。
*7 - Zorbax Eclipse XDB-C18 250×4.6, １mL/分, 水：ＭｅＯＨ ｗ／０.１％ ＴＦＡ, ５０〜７０％を２分, ７０〜１００％を３分, 次いで１００％を５分間維持, ELSD検出器。
*8 - Acquity BEH Shield RP 18 50×2.1, ０.５mL/分, ６５℃, 水：ＩＰＡ ｗ／０.０１２５％ ＴＦＡ, ３０〜５０％を１.５分, ５０〜７５％を１０.５分, ７５〜９０％を０.６分, 次いで９０％を０.４分間維持, CAD検出器。

【0551】

実施例６８
組成物の製造
本発明の化合物を脂質ナノ粒子の形態で投与することが好ましい。それ故に、本発明の組成物が、本発明の化合物および所望により１種以上の他の脂質成分を含む脂質ナノ粒子を含むのが好ましい。

【0552】

サイズ縮小を達成するためおよび／または粒子サイズの均一性を高めるために、当業者は種々の組合せで実施する下に記載する工程を使用し得る。加えて、当業者は音波処理、濾過またはリポソーム製剤で使用される他のサイジング技術を用い得る。

【0553】

本発明の組成物を製造する方法は、典型的に生物活性薬物を含む水溶液を含む第一リザーバーを提供し、脂質の有機溶液を含む第二リザーバーを提供し、そしてその水溶液と有機脂質溶液を混合することを含む。第一リザーバーは、所望により第二リザーバーと流体連結している。混合工程の後に所望によりインキュベーション工程、濾過工程、および希釈および／または濃縮工程が続いてよい。

【0554】

一つの態様において、生物活性薬物および／または脂質は適当な緩衝液中にある。一つの態様において、生物活性薬物は、水性緩衝液、例えばクエン酸緩衝液中にある。一つの態様において、脂質は有機アルコール、例えばエタノール中にある。

【0555】

一つの態様において、インキュベーション工程は、混合工程からの溶液を、容器中、約０〜約１００時間(好ましくは約０〜約２４時間)、おおよそｒｔでおよび所望により光から保護して静置させることを含む。

【0556】

一つの態様において、希釈工程がインキュベーション工程の後にある。希釈工程は、例えば、ポンピング装置(例えば蠕動ポンプ)を使用した水性緩衝液(例えばクエン酸緩衝液)での希釈を含む。

【0557】

一つの態様において、濾過工程は限外濾過である。一つの態様において、限外濾過は、希釈した溶液の濃縮と、その後の、例えば、適当なポンピングシステム(例えばポンピング装置、例えば蠕動ポンプまたはその同等物)を適当な限外濾過膜(例えばＧＥ中空繊維カートリッジまたは同等物)と共に使用する、ダイアフィルトレーションを含む。

【0558】

この工程は脂質ナノ粒子の形成をもたらさなければならない。一つの態様において、脂質ナノ粒子は生物活性薬物を含む。

【0559】

一つの態様において、混合工程は透明単相を提供する。

【0560】

一つの態様において、混合工程後、有機溶媒を除去して、生物活性薬物が脂質により、例えば脂質二重層中に封入されている粒子の懸濁液を提供する。

【0561】

有機溶媒の選択は、典型的に溶媒極性および溶媒を粒子形成の後の段階で容易に除去できることの考慮を含む。

【0562】

可溶化剤としても使用する有機溶媒は、好ましくは、生物活性薬物と脂質の透明な一相混合物を提供するのに十分な量である。

【0563】

有機溶媒は、クロロホルム、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、シクロヘキサン、シクロペンタン、ベンゼン、トルエン、メタノール、および他の脂肪族アルコール類(例えばＣ₁−Ｃ₈)、例えばエタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、イソブタノール、ペンタノールおよびヘキサノールサノールの１種以上(例えば２種)から選択してよい。

【0564】

混合工程は任意の数の方法により、例えば、機械的手段、例えばボルテックスミキサーにより行うことができる。

【0565】

有機溶媒の除去に使用する方法は典型的にダイアフィルトレーションまたは減圧下の蒸発または混合物への不活性ガス(例えば窒素またはアルゴン)流の吹き付けを含む。

【0566】

他の態様において、本方法は、さらに、本組成物を使用した細胞の形質転換を行うのに有用な非脂質ポリカチオン類を含む。適当な非脂質ポリカチオン類の例は、臭化ヘキサジメトリン(商品名POLYBRENE（登録商標）でAldrich Chemical Co., Milwaukee, Wis., USAから販売)またはヘキサジメトリンの他の塩類を含むが、これらに限定されない。他の適当なポリカチオン類は、例えば、ポリ−Ｌ−オルニチン、ポリ−Ｌ−アルギニン、ポリ−Ｌ−リシン、ポリ−Ｄ−リシン、ポリアリルアミンおよびポリエチレンイミンの塩類を含む。

【0567】

ある態様において、脂質ナノ粒子の形成は、単相系(例えばBlighおよびDyer単相または水性溶媒と有機溶媒の類似混合物)または適当に混合している二相系のいずれかで実施できる。

【0568】

脂質ナノ粒子は、単相系または二相系で形成してよい。単相系では、カチオン性脂質および生物活性薬物を、それぞれ一定量の単相混合物に溶解させる。２溶液の混合により一混合物を提供し、その中で複合体が形成される。二相系では、カチオン性脂質が生物活性薬物(これは水相に存在する)と結合し、それを有機相に“引き込む”。

【0569】

一つの態様において、脂質ナノ粒子を：(ａ)生物活性薬物と非カチオン性脂質および洗剤を含む溶液を接触させて化合物−脂質混合物を形成させ；(ｂ)カチオン性脂質と化合物−脂質混合物を接触させて生物活性薬物の負電荷の部分を中和し、生物活性薬物と脂質の電荷が中和された混合物を形成し；そして(ｃ)洗剤を電荷が中和された混合物から除去することを含む方法により製造する。

【0570】

態様の一つの群において、中性脂質および洗剤の溶液は水溶液である。生物活性薬物と中性脂質および洗剤の溶液の接触は、典型的に生物活性薬物の第一溶液と脂質および洗剤の第二溶液の混合により達成する。好ましくは、生物活性薬物溶液もまた洗剤溶液である。本方法に使用する中性脂質の量は、典型的に使用するカチオン性脂質の量に基づき決定し、典型的に使用するカチオン性脂質の約０.２〜５倍量、好ましくは使用するカチオン性脂質の約０.５〜約２倍量である。

【0571】

こうして形成された生物活性薬物−脂質混合物をカチオン性脂質と接触させて、存在する目的分子(または他のポリアニオン性物質)に関連する負電荷の部分を中和する。使用するカチオン性脂質の量は、典型的に生物活性薬物の負電荷の少なくとも５０％を中和するのに十分な量である。好ましくは、負電荷は少なくとも７０％中和され、より好ましくは少なくとも９０％中和される。

【0572】

洗剤の除去に使用する方法は、典型的に透析を含む。有機溶媒が存在するとき、除去は、典型的にダイアフィルトレーションまたは減圧下の蒸発によりまたは混合物への不活性ガス(例えば窒素またはアルゴン)流の吹き付けにより達成される。

【0573】

本明細書に本発明の組成物を製造するための装置を開示する。本装置は、典型的に生物活性薬物を含む水溶液を保持するための第一リザーバーおよび有機脂質溶液を保持するための第二リザーバーを含む。本装置はまた、水溶液と有機脂質溶液を混合領域または混合チャンバーに実質的に等しい流速でポンプ輸送するために構成されたポンプ機構を典型的に含む。一つの態様において、混合領域または混合チャンバーはＴカップリングまたはその同等物を含み、それは水性流体および有機流体流をＴコネクターへのインプットとして合わせ、得られた合わせた水溶液と有機溶液をＴコネクターから回収リザーバーまたはその同等物へと排出させることを可能にする。

【0574】

実施例６９
組成物の製造方法の例
等容積のアルコールに溶解した脂質と、クエン酸緩衝液に溶解したｓｉＲＮＡを衝突噴流法により混合して、脂質ナノ粒子(ＬＮＰ)を形成させる。脂質溶液は、本発明のカチオン性脂質化合物または同等な脂質、ヘルパー脂質(コレステロール)、任意成分としての中性脂質(ＤＳＰＣ)およびＰＥＧ(ＰＥＧ)脂質を、アルコール中１２mg／mLを目標として８〜１６mg／mLの濃度で含む。本発明の製剤中の各脂質成分の相対的モル比は表８〜１１に記載する。ＬＮＰ製剤が４種の脂質成分を含むとき、モル比は、それらが記載されている順番で、表の最初の４列に記載されている脂質のタイプに対応する。ＬＮＰ製剤が３種の脂質成分を含むとき、中性脂質がない。

【0575】

カチオン性脂質に対する脂質の比率は４０〜６０モル百分率を目標として２０〜７０モル百分率の範囲であり、ヘルパー脂質のモル百分率は３０〜５０を目標として２０〜７０の範囲であり、中性脂質のモル百分率は０〜３０の範囲であり、ＰＥＧ脂質のモル百分率は２〜５を目標として１〜６の範囲である。ｓｉＲＮＡ溶液の濃度はクエン酸ナトリウム：塩化ナトリウム緩衝液ｐＨ４中、０.８〜０.９mg／mLを目標として０.７〜１.０mg／mLの範囲である。ＬＮＰは、等容積のエタノール中の脂質溶液と、クエン酸緩衝液に溶解したｓｉＲＮＡを、０.２５〜２.０mmの範囲の内径のチューブ中、総流速１０〜１２０mL／ｍｉｎを通る衝突噴流法により混合することにより形成させる。混合したＬＮＰ溶液を、希釈工程前にｒｔで０〜４８時間静置する。次いで、溶液を濃縮し、３０〜１００ＫＤのＭＷカットオフを有する膜を使用する限外濾過法により適当な緩衝液に対してダイアフィルトレーション(diafiltered)する。最終産物を滅菌濾過し、４℃で貯蔵する。

【0576】

実施例７０：マウスモデルにおけるin vivoでのトランスフェクション
メスのＣＤ １マウスを、Charles River Labsから購入し、標準的実験食および水を自由に摂取させて飼育する。投与時、動物の体重は約２５グラムである。製剤化したｓｉＲＮＡを、１回投与として、個々の動物の体重に従いmg ｓｉＲＮＡ／kgベースで計算した種々の投与量で、側面尾静脈から静脈内投与する(１０ml／kg注射量)。

【0577】

製剤化したｓｉＲＮＡは、下の実施例に記載するとおり、標的ｍＲＮＡ配列に特異的な二本鎖ｓｉＲＮＡ配列から成り、カチオン性脂質、ステルス脂質および中性脂質を含む脂質ヌクレオチド粒子(ＬＮＰ)の形である。肝臓のターゲティングに使用するｓｉＲＮＡ構築物は、第VII因子に特異的である。腫瘍のターゲティングに使用するｓｉＲＮＡ構築物は、Judge et al., See, J Clin Invest. 2009 Mar; 119(3):661 73; doi: 10.1172/JCI37515により公開されているＰＬＫ１−４２４に特異的である。
１. FVII ｓｉＲＮＡ二本鎖配列
5' UUu AAU UGA AAC cAA GAc Auu 3' (配列番号１)
5' uGu cuu GGu uuc AAu uAA Auu 3' (配列番号２)
２. ＰＬＫ１ ４２４ ｓｉＲＮＡ二本鎖配列
5' UAU UUA AgG AGG GUG AuC Uuu 3' (配列番号３)
5' AGA Uca cCC Ucc uuA AAU auu 3' (配列番号４)

【0578】

これらの配列中、次の略語を使用する：
A＝アデノシン
U＝ウリジン
G＝グアノシン
C＝シトシン
a＝２'−Ｏ−メチル−アデノシン
u＝２'−Ｏ−メチル−ウリジン
g＝２'−Ｏ−メチル−グアノシン
c＝２'−Ｏ−メチル−シトシン

【0579】

実施例７１：第VII因子活性アッセイ
製剤化した第VII因子ｓｉＲＮＡを、１回投与として、個々の動物体重に従いmg ｓｉＲＮＡ／kgベースで計算した種々の投与量で、側面尾静脈から静脈内投与する(１０ml／kg注射量)。注射約４８時間後、マウスをＣＯ₂吸入により麻酔し、大静脈を介して放血させる。血漿第VII因子活性分析のために、０.１０５Ｍ クエン酸ナトリウム抗凝血因子を含むチューブに血液を集める。数例で、フォローアップｍＲＮＡ定量のために肝臓の小片(〜５０mg)を回収し、液体窒素で急速冷凍する。

【0580】

注射したマウスから集めた血漿を、Hyphen BiomedicalのBiophen FVIIキット(カタログ番号221304)を使用して、第VII因子活性について分析する。アッセイ標準曲線を、媒体対照動物由来の貯蔵血漿の一定量を使用して調製する。全サンプルを標準曲線の直線範囲に入るように希釈し、相対的第VII因子活性を記録する。

【0581】

数例で、総肝臓ＲＮＡを、製造者のプロトコールに従いQiagen's RNeasy単離キット(カタログ番号74106)を使用して調製する。第VII因子ｍＲＮＡを定量的ＰＣＲで分析し、ＧＡＰＤＨに対して標準化する。Applied Biosystems第VII因子遺伝子発現アッセイMm00487333_m1およびマウスＧＡＰＤＨ内因性対照(カタログ番号4352339E)をｍＲＮＡ検出に使用する。

【0582】

第VII因子アッセイの結果を下記の表８に示す。
表８：第VII因子アッセイ−in vivoでの肝臓の結果

【表75】

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【0583】

【表76】

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【0584】

【表77】

[この文献は図面を表示できません]

【0585】

【表78】

[この文献は図面を表示できません]

¹ ブランクのセルは、中性脂質が存在しないことを示す。
² ＡＶＡＮＴＩは、ＡＶＡＮＴＩ ８８０１５０Ｐを表す。
³ ＧＭ−０２０は、ＧＭ ０２０ ＮＯＦを表す。
⁴ モル比を表す際の脂質タイプの順番は、表の最初の４列の順番に対応している。モル比に３種の脂質しか挙げられていないときは、中性脂質が存在しない。

【0586】

実施例７２：Ｈｅｐ３Ｂ腫瘍試験
Ｈｅｐ３Ｂ腫瘍を、１００μl ＰＢＳ中７×１０⁶細胞を左脇腹にｓｃ注射することによりメスヌードマウスに確立させる。腫瘍の平均サイズが１００mm³に到達した播種１０〜１４日後に、マウスを処置群に無作為化する。ｓｉＲＮＡ製剤化ＬＮＰ製剤を、個々の動物体重に従いmg ｓｉＲＮＡ／kgベースで計算した種々の投与量で、側面尾静脈から静脈内投与する(１０ml／kg注射量)。マウスを種々の時点でＣＯ₂吸入により麻酔し、腫瘍をｍＲＮＡ定量用に採取する。広範なｐＫａ(５.３〜６.６)を有する脂質をＬＮＰ製剤に使用する。腫瘍をデジタルカリパスを使用して２方向(幅×長さ)で測定して、腫瘍増殖を評価する。腫瘍体積を式[ａ×ｂ×ｂ／２](式中、ａは最大直径であり、ｂは最小直径である)を使用して計算する。

【0587】

実施例７３：ＨｅｐＧ２肝臓腫瘍試験
ＨｅｐＧ２腫瘍を、１００μl ＰＢＳ中５×１０⁶細胞を左脇腹にｓｃ注射することによりメスヌードマウスに確立させる。腫瘍の平均サイズが１５０mm³に到達した播種１０〜１４日後に、マウスを処置群に無作為化する。ｓｉＲＮＡ製剤化ＬＮＰ製剤を、個々の動物体重に従いmg ｓｉＲＮＡ／kgベースで計算した３×３mg／kg投与量で、側面尾静脈から静脈内投与する(１０ml／kg注射量)。マウスを種々の時点でＣＯ₂吸入により麻酔し、腫瘍をｍＲＮＡ定量のために最後の投与から２４時間後に採取する。広範なｐＫａ(５.３〜６.６)を有する脂質をＬＮＰ製剤に使用する。腫瘍をデジタルカリパスを使用して２方向(幅×長さ)で測定して、腫瘍増殖を評価する。腫瘍体積を式[ａ×ｂ×ｂ／２](式中、ａは最大直径であり、ｂは最小直径である)を使用して計算する。

【0588】

実施例７４：７８６−０腎臓腫瘍試験
７８６−０腫瘍を２００μl ＰＢＳ中１０×１０⁶細胞のｓｃ注射により、先に記載のとおり確立する。移植４週間後、２００〜２５０mm³の範囲の腫瘍サイズのマウスを処置群に無作為化する。次に、ｓｉＲＮＡ製剤化ＬＮＰを、５または１０mg／kg投与量のいずれかで静脈内投与する。１回投与４８時間後、腫瘍をｍＲＮＡ定量のために採取する。

【0589】

実施例７５：腫瘍組織におけるＰＬＫ−１およびＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡ ＫＤの測定
約３０〜５０mgの腫瘍組織を、Qiagenホモゲナイザー中で組織溶解緩衝液にモホゲナイズし、遠心により溶解物を浄化させる。総ＲＮＡを、製造者のプロトコールに従いＲＮｅａｓｙ単離キット(カタログ番号74106)を使用して単離する。ＰＬＫ−１ ｍＲＮＡを定量的ＰＣＲにより分析し、ヒトＧＡＰＤＨに対して標準化する。Applied BiosystemsヒトＰＬＫ−１遺伝子発現アッセイHs00983229_m1およびヒトＧＡＰＤＨ内因性対照(カタログ番号4326317E)をｍＲＮＡ検出に使用する。

【0590】

実施例７２、７３、７４および７５の腫瘍におけるＰＬＫ１ ｍＲＮＡレベルのノックダウン(“ＫＤ”)の結果を次の表に示し、阻害パーセント(ＰＬＫ１阻害％)として計算する。Ｈｅｐ３Ｂ肝臓腫瘍のターゲティングの結果を表９に示す。ＨｅｐＧ２肝臓腫瘍のターゲティングの結果を表１０に示す。７８６−０腎臓腫瘍のターゲティングの結果を表１１に示す。全表におけるｐＫａは、カチオン性脂質のｐＫａを言う。複数回投与が示されているとき(例えば、３×５)、最初の数字は投与回数を示し、二番目の数字は投与量あたりの用量をmg ｓｉＲＮＡ(生物活性薬物)／kgマウスで示す。一般に複数投与量は２４時間間隔で投与し、ｍＲＮＡ定量用の組織を最後の投与２４時間後に採取する。
表９：in vivoでのＨｅｐ３Ｂ腫瘍アッセイ結果

【表79】

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【0591】

【表80】

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【0592】

【表81】

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¹ ブランクのセルは、中性脂質が存在しないことを示す。
² モル比を表す際の脂質タイプの順番は、表の最初の４列の順番に対応している。モル比に３種の脂質しか挙げられていないときは、中性脂質が存在しない。
³ “レゾルシノール”は、５−ヘプタデシルベンゼン−１,３−ジオールを表す。

【0593】

表１０：in vivoでのＨｅｐＧ２腫瘍アッセイ結果

【表82】

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¹ ブランクのセルは、中性脂質が存在しないことを示す。
² モル比を表す際の脂質タイプの順番は、表の最初の４列の順番に対応している。モル比に３種の脂質しか挙げられていないときは、中性脂質が存在しない。

【0594】

表１１：７８６−０腎臓腫瘍アッセイ結果

【表83】

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¹ ブランクのセルは、中性脂質が存在しないことを示す。
² モル比を表す際の脂質タイプの順番は、表の最初の４列の順番に対応している。モル比に３種の脂質しか挙げられていないときは、中性脂質が存在しない。

【0595】

上記の表において、Ｎ／Ｐ比は次のものに等しい：(最初に製剤化したカチオン性脂質のモル数)／(最初に製剤化したｓｉＲＮＡのモル数＊ｓｉＲＮＡあたりの総アニオン電荷数)。

【0596】

実施例７６：脂質製剤の最適化
例えば、上の表に示すとおりのカチオン性脂質およびステルス脂質を使用する製剤のさらなる最適化は当業者の知識の範囲内で考慮され、過度の実験なしに行い得る。例えば、製剤を、例えば、標的とする細胞または臓器のタイプに対して最適化したカチオン性脂質のｐＫａ、使用するカチオン性脂質、使用するステルス脂質、ヘルパー脂質、使用する中性脂質、中性脂質が存在するか否か、選択したヘルパー脂質、任意成分としての中性脂質、ステルス脂質およびカチオン性脂質の比率、Ｎ／Ｐ比、粒子サイズ、投与レジメン、投与する用量、製剤法など個々の選択を含むが、これらに限定されない少なくとも一つのパラメーターについて最適化し得る。

【0597】

一つの態様において、より最適な中性脂質を選択するとき、当業者はＤＯＰＣよりもＤＳＰＣを選択する。ある態様において、例えば、表９のＥ０１７７および表１０のＥ０１０４において、これらの２種の中性脂質の選択によってのみ異なる組成物は、ＤＳＰＣを使用したときと比べてＤＯＰＣを使用したとき低いＫＤまたは０でさえあるＫＤを示し、他の全ての面が等しいと考えられる。ある組成物において、中性脂質を完全に省くと、例えば、表９のＥ００８５の少なくとも１種の製剤について、中性脂質が存在するときと比較してＰＬＫ１の高い阻害パーセントをもたらすか、または製剤中のＤＳＰＣを徐々に減少させるＥ００１１において、ノックダウンパーセントを徐々に上昇させる。

【0598】

投与量(mg／kg)および投与レジメン、例えば、投与回数および該投与のタイミングもまた最適化できる。例えば、表９に示す一つの実験において、Ｅ０１７８を含む製剤の０.１mg／kgの投与は零(０)％ ＫＤの結果であったが、１.０mg／kg投与は３５％ ＫＤを提供する。高用量が対象により耐容性でないとき、完全処置レジメンを、数日間にわたり提供される複数の小用量の投与量として投与してよく、そのようなものは、表９では、Ｅ００１１およびＳ００４を含む製剤での１×１０mg／kg ｓｉＲＮＡ対３×５ mg／kg ｓｉＲＮＡがそれぞれ７０％ ＫＤおよび６７％ ＫＤをもたらす。

【0599】

実施例７７：核酸レプリコン送達用リポソーム
それぞれ約１０,０００ヌクレオチド長の種々の核酸レプリコンを、下に記載するとおりリポソームで送達する。核酸を、本質的にJeffs et al. (2005) Pharmaceutical Research 22 (3):362-372およびMaurer et al. (2001) Biophysical Journal, 80: 2310-2326の方法により製造したリポソームに封入する。

【0600】

参照リポソームは１０％ ＤＳＰＣ(双性イオン性、すなわち、中性脂質)、４０％ ＤｌｉｎＤＭＡ(カチオン性脂質)、４８％ コレステロール(ヘルパー脂質)および２％ ＰＥＧ接合ＤＭＧ(ステルス脂質)から成る。ＤｌｉｎＤＭＡ脂質(１,２−ジリノレイルオキシ−Ｎ,Ｎ−ジメチル−３−アミノプロパン)を、Heyes et al. (2005) J Controlled Release 107:276-87の方法を使用して合成する。ＤＳＰＣ(１,２−ジアステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン)をGenzymeから購入する。コレステロールをSigma-Aldrichから得る。ＰＥＧ接合ＤＭＧ(１,２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−[メトキシ(ポリエチレングリコール)、アンモニウム塩)、ＤＯＴＡＰ(１,２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン、塩化物塩)およびＤＣ ｃｈｏｌ(３β−[Ｎ−(Ｎ',Ｎ'ジメチル−アミノエタン)−カルバモイル]コレステロール塩酸塩)はAvanti Polar Lipidsから入手可能である。

【0601】

簡単に言うと、脂質をエタノール(２ml)に溶解し、レプリコンを緩衝液(２ml、１００mM クエン酸ナトリウム、ｐＨ６)に溶解し、これらを２mlの緩衝液と混合して、１時間平衡化させる。混合物を６ml緩衝液で希釈して、濾過する。得られた生成物はリポソームを、〜９５％封入効率で含む。

【0602】

封入された核酸のパーセンテージおよび核酸濃度は市販のキットで決定する。色素添加前にリポソームを１×ＴＥ緩衝液(キット含有)で１０倍または１００倍に希釈する。それとは別に、色素添加前にリポソームを０.５％ Triton X含有１×ＴＥ緩衝液で１０倍または１００倍に希釈する(リポソームを破壊し、それ故に、総核酸をアッセイするため)。
その後等量の色素を各溶液に添加し、色素添加後の約１８０μＬの各溶液を、９６ウェル培養プレートにデュプリケートで充填する。蛍光(励起４８５nm、発光５２８nm)をマイクロプレートリーダーで読む。

【0603】

核酸のin vivo発現を評価するために、レポーター酵素(ＳＥＡＰ；分泌型アルカリホスファターゼ)をレプリコン中にコード化する。発現レベルを、１×Phospha-Light希釈緩衝液で１：４希釈した血清で、化学ルミネセンスアルカリホスフェート基質を使用して測定する。８〜１０週齢ＢＡＬＢ／ｃマウス(５匹／群)に、０日目に脚あたり５０μlで０.１μgまたは１μg核酸投与量で筋肉内注射する。同じベクターをまたリポソーム無しで(ＰＢＳ中)、１μgで投与する。

【0604】

封入により、ＳＥＡＰレベルが１μg投与量で約１／２ログ上昇し、６日目に、０.１μg封入投与量からの発現は１μg日封入投与量で見られるレベルと一致する。それ故に、核酸をリポソームに製剤化したとき、裸の核酸対照と比較して、１０倍低用量でさえ増加させる。

【0605】

さらにＳＥＡＰ実験はin vivoでの明らかな用量反応を示し、ここで、発現は１ngほどの少ない核酸の送達後でさえ見られる。封入したおよび裸のレプリコンからの発現を比較した実験は、０.０１μg封入核酸が１μgの裸の核酸と同等であることを示す。０.５μg投与量の核酸で、封入物質は６日目に１２倍高い発現をもたらすことができる；０.１μg投与量レベルで６日目に２４倍高い発現をもたらすことができる。

【0606】

参照脂質(ＤｌｉｎＤＭＡ)を使用する代わりに、本発明のカチオン性脂質を使用する。
参照リポソームを、カチオン性脂質としてＤｌｉｎＤＭＡを使用して形成させる(上記参照)。ＤｌｉｎＤＭＡを、下に記載し、表に示す一連の種々のカチオン性脂質と置き換える。２％ ＰＥＧ２０００−ＤＭＧと(０１)４０％のカチオン性脂質、１０％ ＤＳＰＣ、および４８％ コレステロール、または(０２)６０％のカチオン性脂質および３８％ コレステロールのいずれかを用いて、各リポソームの２種のタイプを形成させる。それ故に、(０１)と(０２)のリポソームの比較は、中性双性イオン性脂質の効果を示す。

【0607】

これらのリポソームを、上に記載するＳＥＡＰレポーターを用いて試験する。次の表１２はリポソームのサイズ(Ｚ平均および多分散指数)、各リポソームにおける核酸封入％を、注射後１日および６日目に検出したＳＥＡＰ活性と共に示す。ＳＥＡＰ活性は、ＤｌｉｎＤＭＡ、コレステロールおよびＰＥＧ ＤＭＧから製造された“ＤｌｉｎＤＭＡ(０２)”リポソームに対する。
表１２：核酸レプリコンのリポソーム送達

【表84】

[この文献は図面を表示できません]

【表85】

[この文献は図面を表示できません]

【0608】

本発明にさらなる局面
本発明は、少なくとも１種のカチオン性脂質、少なくとも１種のヘルパー脂質および少なくとも１種のステルス脂質を含む、生物活性薬物を送達する組成物であって、生物活性薬物が、
(ａ) 組成物が約６.２以上のｐＫａを有するカチオン性脂質を有するとき、肝臓または肝臓細胞；および
(ｂ) 組成物が約６.２以下のｐＫａを有するカチオン性脂質を有するとき、腫瘍または腫瘍細胞；
から選択される組織または細胞に送達するためのものである、組成物を含む。

【0609】

本発明は、少なくとも１種のカチオン性脂質、少なくとも１種のヘルパー脂質および少なくとも１種のステルス脂質を含む、生物活性薬物を送達する組成物であって、生物活性薬物が、
(ａ) 組成物が約５.１〜約７.４のｐＫａを有するカチオン性脂質を有するとき、肝臓または肝臓細胞；および
(ｂ) 組成物が約５.０〜約６.７のｐＫａを有するカチオン性脂質を有するとき、腫瘍または腫瘍細胞；
から選択される組織または細胞に送達するためのものである、組成物を含む。

【0610】

本発明は、さらに所望により存在する中性脂質を含む、段落［０６０８］または[０６０９]の組成物を含む。

【0611】

本発明は、生物活性薬物が疾患または障害の治療的処置に有効な量である、段落[０６０８]、[０６０９]または[０６１０]の何れか１つの組成物を含む。

【0612】

本発明は、生物活性薬物が肝臓または肝臓細胞に送達するためのものであり、カチオン性脂質１が少なくとも約５.１〜約７.４のｐＫａを有する、段落[０６１１]の組成物を含む。

【0613】

本発明は、生物活性薬物が腫瘍または腫瘍細胞に送達するためのものであり、段落１の化合物が約５.０〜約６.７のｐＫａを有する、段落[０６１１]の組成物を含む。

【0614】

本発明は、カチオン性脂質が約５.２〜約６.３のｐＫａを有する、段落[０６１３]の組成物を含む。

【0615】

本発明は、カチオン性脂質が約５.４〜約６.２のｐＫａを有する、段落[０６１３]の組成物を含む。

【0616】

本発明は、カチオン性脂質が約５.８〜約６.１のｐＫａを有する、段落[０６１３]の組成物を含む。

【0617】

本発明は、ステルス脂質、製剤化方法、Ｎ／Ｐ比、粒子サイズ、ならびに、カチオン性脂質、所望により存在する中性脂質、ヘルパー脂質、ステルス脂質および所望のアルキルレゾルシノールをベースとする脂質のモル比の少なくとも１つの選択によって最適化した、段落[０６１３]〜段落[０６１６]の何れか１つ以上の組成物を含む。

【0618】

本発明は、生物活性薬物が肝臓または肝臓細胞に送達するためのものであり、組成物が約５.１〜約７.４のｐＫａを有するカチオン性脂質を少なくとも１種含む製剤を含む、段落[０６１１]の組成物を含む。

【0619】

本発明は、カチオン性脂質が約５.３〜約７.３のｐＫａを有する、段落[０６１８]の組成物を含む。

【0620】

本発明は、カチオン性脂質が約５.９〜約７.０のｐＫａを有する、段落[０６１８]の組成物を含む。

【0621】

本発明は、カチオン性脂質が約６.２〜約６.８のｐＫａを有する、段落[０６１８]の組成物を含む。

【0622】

本発明は、ステルス脂質、製剤化方法、Ｎ／Ｐ比、粒子サイズ、ならびに、カチオン性脂質、所望により存在する中性脂質、ヘルパー脂質、ステルス脂質および所望のアルキルレゾルシノールをベースとする脂質のモル比の少なくとも１つの選択によって最適化した、段落[０６１８]〜段落[０６２１]の何れか１つ以上の組成物を含む。

【0623】

本発明は、カチオン性脂質のｐＫａが約５.４〜約5.9である、Ｈｅｐ３Ｂ様腫瘍に送達するための段落[０６１７]の組成物を含む。

【0624】

本発明は、カチオン性脂質のｐＫａが約５.６〜約６.１である、ＨｅｐＧ２様腫瘍および７８６−０様腫瘍に送達するための段落[０６１７]の組成物を含む。

【0625】

本発明は、疾患または状態を処置する方法であって、段落[０６０８]〜[０６２４]の何れか１つの組成物を、治療有効量でそれを必要とする患者に投与する工程を含む方法を含む。

【0626】

本発明は、疾患または障害が、腫瘍、肝臓疾患、またはＲＮＡｉ構築物による処置に応答する疾患である、段落[０６２５]の方法を含む。

【0627】

本発明は、疾患または状態が腫瘍であり、組成物中のカチオン性脂質が約５.０〜約６.７のｐＫａを有する、段落[０６２５]の方法を含む。

【0628】

本発明は、疾患または状態が肝臓のものであり、組成物中のカチオン性脂質が約５.１〜約７.４のｐＫａを有する、段落[０６２５]の方法を含む。

【0629】

本発明は、式(Ｉ)：

【化60】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニルまたはＣ_5-20ヘテロアリール基を形成し；
ａは、存在しないか、または、所望により置換されたＣ_1-4アルキレンであり；
ｂは、存在しないか、または、所望により置換されたＣ_1-4アルキレンであり；
ｃは、存在しないか、または、所望により置換されたＣ_1-4アルキレンであり；
Ｘ¹は、ＯまたはＳであり；
Ｘ²は、ＯまたはＳであり；
Ｙ¹は、所望により置換されたＣ_10-30アルケニル、Ｃ_10-30アルキニル、Ｃ_10-30ヘテロアルケニルまたはＣ_10-30ヘテロアルキニルであり；
Ｌは、存在しないか、または−(Ｌ^a)_d−(Ｌ^b)_e−(Ｌ^c)_f−
｛ここで、Ｌ^aは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
Ｌ^bは、所望により置換されたＣ_6-14アリーレンまたはＣ_5-13ヘテロアリーレンであり；
Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
ｄは、０または１であり；
ｅは、０または１であり；
ｆは、０または１である。｝
であり；
Ｙ²は、所望により置換されたステロイドである。]
の化合物またはその塩または薬学的に許容される誘導体を含む。

【0630】

本発明は、ａが、所望により置換されたＣ_1-2アルキレンおよび所望により置換されたＣ₁アルキレンから選択される、段落[０６２９]の化合物を含む。

【0631】

本発明は、ｂが、所望により置換されたＣ_0-2アルキレンおよび所望により置換されたＣ₁アルキレンから選択される、段落[０６２９]または[０６３０]の化合物を含む。

【0632】

本発明は、ｃが、存在しないか、または所望により置換されたＣ₁アルキレンである、段落[０６２９]〜[０６３１]の何れか１つの化合物を含む。

【0633】

本発明は、ａ、ｂおよびｃが非置換である、段落[０６２９]〜[０６３２]の何れか１つの化合物を含む。

【0634】

本発明は、Ｒ¹およびＲ²が、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニルまたはＣ_3-20ヘテロシクロアルキニル基を形成する、段落[０６２９]〜[０６３３]の何れか１つの化合物を含む。

【0635】

本発明は、Ｒ¹およびＲ²が、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換された環状Ｃ_5-16基および所望により置換された環状Ｃ_5-12基から選択される基を形成する、段落[０６２９]〜[０６３４]の何れか１つの化合物を含む。

【0636】

本発明は、Ｒ¹およびＲ²が、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換された環状Ｃ₅基、Ｃ₆基またはＣ₇基を形成する、段落[０６３５]の化合物を含む。

【0637】

本発明は、Ｒ¹およびＲ²が、それらが結合している窒素原子と一体となって、頭部Ｈ¹〜Ｈ⁵²の少なくとも１つから選択される基である、段落[０６２９]〜[０６３６]の何れか１つの化合物を含む。

【0638】

本発明は、Ｘ¹がＯである、段落[０６２９]〜[０６３７]の何れか１つの化合物を含む。

【0639】

本発明は、Ｘ²がＯである、段落[０６２９]〜[０６３８]の何れか１つの化合物を含む。

【0640】

本発明は、Ｌが少なくとも１個のヘテロ原子を含む、段落[０６２９]〜[０６３９]の何れか１つの化合物を含む。

【0641】

本発明は、Ｌが少なくとも１個のＯ原子を含む、段落[０６４０]の化合物を含む。

【0642】

本発明は、Ｌ^cが式Ｌ^c-i〜Ｌ^c-xxxxiiiの１つから選択されるものである、段落[０６２９]〜[０６４１]の何れか１つの化合物を含む。

【表86】

[この文献は図面を表示できません]

【0643】

【表87】

[この文献は図面を表示できません]

【0644】

【表88】

[この文献は図面を表示できません]

【0645】

本発明は、ｄが０であり；ｅが０であり；ｆが１である、段落[０６２９]〜[０６４４]の何れか１つの化合物を含む。

【0646】

本発明は、Ｙ¹がＣ_12-28基である、段落[０６２９]〜[０６４５]の何れか１つの化合物を含む。

【0647】

本発明は、Ｙ¹が少なくとも１個のアルケニル基を有する、段落[０６２９]〜[０６４６]の何れか１つの化合物を含む。

【0648】

本発明は、Ｙ¹が少なくとも１個のｃｉｓ不飽和アルケニル基を有する、段落[０６４７]の化合物を含む。

【0649】

本発明は、Ｙ¹が、Ｙ^1-i〜Ｙ^1-viiから選択されるものである、段落[０６２９]〜[０６４５]の何れか１つの化合物を含む。

【0650】

本発明は、Ｙ²が所望により置換されたステロイド上の酸素原子を介してＬに結合している、段落[０６２９]〜[０６４９]の何れか１つの化合物を含む。

【0651】

本発明は、Ｙ²が、ステロイドの環Ａの３位のヒドロキシ基の水素原子が除かれたステロールである、段落[０６５０]の化合物を含む。

【0652】

本発明は、ステロールが、アンナステロール； アベナステロール； beta シトステロール；ブラシカステロール；カルシフェロール；カンプエステロール；カリノステロール；チャイナステロール；コレスタノール；コレステロール；コプロスタノール；シクロアルテノール；デヒドロコレステロール；デスモステロール；ジヒドロカルシフェロール；ジヒドロコレステロール；ジヒドロエルゴステロール； ジノステロール； エピコレステロール；エルゴステロール；フコステロール；ヘキサヒドロルミステロール；ヘキサオール；ヒドロキシコレステロール；ラノステロール；ルミステロール；パルケオール；ポリフェラステロール；サリンゴステロール；シトスタノール；シトステロール；スチグマスタノール；スチグマステロール；ウェインベルステロール；チモステロール；ステロール胆汁酸(コール酸；ケノデオキシコール酸；グリココール酸；タウロコール酸；デオキシコール酸およびリトコール酸から選択される１つ以上を含む)；および／またはその塩または薬学的に許容される誘導体からなる群から選択されるものである、段落[０６５０]の化合物を含む。
本発明は、ステロールが、コレステロールである、段落[０６５２]の化合物を含む。

【0653】

本発明は、式(II)：

【化61】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニルまたはＣ_5-20ヘテロアリール基を形成し；
ａは、存在しないか、または、所望により置換されたＣ_1-4アルキレンであり；
ｂは、存在しないか、または、所望により置換されたＣ_1-4アルキレンであり；
ｃは、存在しないか、または、所望により置換されたＣ_1-4アルキレンであり；
Ｘ¹は、ＯまたはＳであり；
Ｘ²は、ＯまたはＳであり；
Ｙ¹は、所望により置換されたＣ_10-30アルケニル、Ｃ_10-30アルキニル、Ｃ_10-30ヘテロアルケニルまたはＣ_10-30ヘテロアルキニルであり；
Ｌは、−(Ｌ^a)_d−(Ｌ^b)_e−(Ｌ^c)_f−
｛ここで、Ｌ^aは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
Ｌ^bは、所望により置換されたＣ_6-14アリーレンまたはＣ_5-13ヘテロアリーレンであり；
Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
ｄは、０または１であり；
ｅは、０または１であり；
ｆは、０または１である。
ただし、Ｌは、１個以上のヘテロ原子を含む。｝
であり；
Ｙ²は、所望により置換されたステロイドである。]
の化合物またはその塩または薬学的に許容される誘導体を含む、段落[０６２９]の化合物を含む。

【0654】

本発明は、式(III)：

【化62】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニルまたはＣ_5-20ヘテロアリール基を形成し；
ａは、メチレンであり；
ｂは、メチレンであり；
ｃは、存在せず；
Ｘ¹は、ＯまたはＳであり；
Ｘ²は、ＯまたはＳであり；
Ｙ¹は、所望により置換されたＣ_10-30アルケニル、Ｃ_10-30アルキニル、Ｃ_10-30ヘテロアルケニルまたはＣ_10-30ヘテロアルキニルであり；
Ｌは、−(Ｌ^a)_d−(Ｌ^b)_e−(Ｌ^c)_f−
｛ここで、Ｌ^aは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
Ｌ^bは、所望により置換されたＣ_6-14アリーレンまたはＣ_5-13ヘテロアリーレンであり；
Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
ｄは、０または１であり；
ｅは、０または１であり；
ｆは、０または１である。｝
であり；
Ｙ²は、所望により置換されたステロイドである。]
の化合物またはその塩または薬学的に許容される誘導体を含む、段落[０６２９]の化合物を含む。

【0655】

本発明は、式(IV)：

【化63】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニルまたはＣ_5-20ヘテロアリール基を形成し；
ａは、メチレンであり；
ｂは、メチレンであり；
ｃは、存在せず；
Ｘ¹は、ＯまたはＳであり；
Ｘ²は、ＯまたはＳであり；
Ｙ¹は、所望により置換されたＣ_10-30アルケニル、Ｃ_10-30アルキニル、Ｃ_10-30ヘテロアルケニルまたはＣ_10-30ヘテロアルキニルであり；
Ｌは、−(Ｌ^a)_d−(Ｌ^b)_e−(Ｌ^c)_f−
｛ここで、Ｌ^aは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
Ｌ^bは、所望により置換されたＣ_6-14アリーレンまたはＣ_5-13ヘテロアリーレンであり；
Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
ｄは、０または１であり；
ｅは、０または１であり；
ｆは、０または１である。
ただし、Ｌは、１個以上のヘテロ原子を含む。｝
であり；
Ｙ²は、所望により置換されたステロイドである。
の化合物またはその塩または薬学的に許容される誘導体を含む、段落[０６２９]の化合物を含む。

【0656】

本発明は、式(Ｖ)：

【化64】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニルまたはＣ_5-20ヘテロアリール基を形成し；
ａは、メチレンであり；
ｂは、メチレンであり；
ｃは、存在せず；
Ｘ¹は、Ｏであり；
Ｘ²は、Ｏであり；
Ｙ¹は、所望により置換されたＣ_10-30アルケニル、Ｃ_10-30アルキニル、Ｃ_10-30ヘテロアルケニルまたはＣ_10-30ヘテロアルキニルであり；
Ｌは、−(Ｌ^a)_d−(Ｌ^b)_e−(Ｌ^c)_f−
｛ここで、Ｌ^aは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
Ｌ^bは、所望により置換されたＣ_6-14アリーレンまたはＣ_5-13ヘテロアリーレンであり；
Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
ｄは、０または１であり；
ｅは、０または１であり；
ｆは、０または１である。
ただし、Ｌは、１個以上のヘテロ原子を含む。｝
であり；
Ｙ²は、所望により置換されたステロイドである。]
の化合物またはその塩または薬学的に許容される誘導体を含む、段落[０６２９]の化合物を含む。

【0657】

本発明は、式(VI)：

【化65】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニルまたはＣ_5-20ヘテロアリール基を形成し；
ａは、メチレンであり；
ｂは、メチレンであり；
ｃは、存在せず；
Ｘ¹は、Ｏであり；
Ｘ²は、Ｏであり；
Ｙ¹は、所望により置換されたＣ_10-30アルケニル、Ｃ_10-30アルキニル、Ｃ_10-30ヘテロアルケニルまたはＣ_10-30ヘテロアルキニルであり；
Ｌは、−Ｌ^c−
｛ここで、Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンである。｝
であり；
Ｙ²は、所望により置換されたステロイドである。]
の化合物またはその塩または薬学的に許容される誘導体を含む、段落[０６２９]の化合物を含む。

【0658】

本発明は、式(VII)：

【化66】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニルまたはＣ_5-20ヘテロアリール基を形成し；
ａは、メチレンであり；
ｂは、メチレンであり；
ｃは、存在せず；
Ｘ¹は、Ｏであり；
Ｘ²は、Ｏであり；
Ｙ¹は、所望により置換されたＣ_16-22アルケニル基であり；
Ｌは、−Ｌ^c−
｛ここで、Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンである。｝
であり；
Ｙ²は、所望により置換されたステロイドである。]
の化合物またはその塩または薬学的に許容される誘導体を含む、段落[０６２９]の化合物を含む。

【0659】

本発明は、式(VIII)：

【化67】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニルまたはＣ_5-20ヘテロアリール基を形成し；
ａは、メチレンであり；
ｂは、メチレンであり；
ｃは、存在せず；
Ｘ¹は、Ｏであり；
Ｘ²は、Ｏであり；
Ｙ¹は、所望により置換されたＣ_16-22アルケニル基であり；
Ｌは、−Ｌ^c−
｛ここで、Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンである。｝
であり；
Ｙ²は、ステロイドの環Ａの３位のヒドロキシ基を介して結合しているコレステロールであり、当該ヒドロキシ基の水素原子は存在しない。]
の化合物またはその塩または薬学的に許容される誘導体を含む、段落[０６２９]の化合物を含む。

【0660】

本発明は、ｐＫａが約５.１〜約７.４である式(IX)：

【化68】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニルまたはＣ_5-20ヘテロアリール基を形成し；
ａは、メチレンであり；
ｂは、メチレンであり；
ｃは、存在せず；
Ｘ¹は、ＯまたはＳであり；
Ｘ²は、ＯまたはＳであり；
Ｙ¹は、所望により置換されたＣ_10-30アルケニル、Ｃ_10-30アルキニル、Ｃ_10-30ヘテロアルケニルまたはＣ_10-30ヘテロアルキニルであり；
Ｌは、−(Ｌ^a)_d−(Ｌ^b)_e−(Ｌ^c)_f−
｛ここで、Ｌ^aは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
Ｌ^bは、所望により置換されたＣ_6-14アリーレンまたはＣ_5-13ヘテロアリーレンであり；
Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
ｄは、０または１であり；
ｅは、０または１であり；
ｆは、０または１である。
ただし、Ｌは、１個以上のヘテロ原子を含む。｝
であり；
Ｙ²は、所望により置換されたステロイドである。]
の化合物またはその塩または薬学的に許容される誘導体を含む、段落[０６２９]の化合物を含む。

【0661】

本発明は、ｐＫａが約５.０〜約６.７である式(Ｘ)：

【化69】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
Ｒ¹およびＲ²は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により置換されたＣ_3-20ヘテロシクロアルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_3-20ヘテロシクロアルキニルまたはＣ_5-20ヘテロアリール基を形成し；
ａは、メチレンであり；
ｂは、メチレンであり；
ｃは、存在せず；
Ｘ¹は、ＯまたはＳであり；
Ｘ²は、ＯまたはＳであり；
Ｙ¹は、所望により置換されたＣ_10-30アルケニル、Ｃ_10-30アルキニル、Ｃ_10-30ヘテロアルケニルまたはＣ_10-30ヘテロアルキニルであり；
Ｌは、−(Ｌ^a)_d−(Ｌ^b)_e−(Ｌ^c)_f−
｛ここで、Ｌ^aは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
Ｌ^bは、所望により置換されたＣ_6-14アリーレンまたはＣ_5-13ヘテロアリーレンであり；
Ｌ^cは、所望により置換されたＣ_1-15アルキレン、Ｃ_1-15アルケニレン、Ｃ_1-15アルキニレン、Ｃ_1-15ヘテロアルキレン、Ｃ_1-15ヘテロアルケニレンまたはＣ_1-15ヘテロアルキニレンであり；
ｄは、０または１であり；
ｅは、０または１であり；
ｆは、０または１である。
ただし、Ｌは、１個以上のヘテロ原子を含む。｝
であり；
Ｙ²は、所望により置換されたステロイドである。]
の化合物またはその塩または薬学的に許容される誘導体を含む、段落[０６２９]の化合物を含む。

【0662】

本発明は、E0001〜E0171およびE0175〜E0180の何れか１つ以上から選択される、段落[０６２９]〜[０６６１]の式Ｉ〜Ｘの何れか１つの化合物を含む。

【0663】

本発明は、式(XI)：

【化70】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
Ｚは、ＰＥＧ、ならびに、ポリ(オキサゾリン)、ポリ(エチレンオキシド)、ポリ(ビニルアルコール)、ポリ(グリセロール)、ポリ(Ｎ−ビニルピロリドン)、ポリ[Ｎ−(２−ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド]およびポリ(アミノ酸)をベースとするポリマー(ここで、ポリマーは直鎖であっても分子であってもよく、また、所望により置換されていてもよい。)から選択される親水性頭部であり；
ここで、Ｚは、ｎ個のサブユニットが重合したものであり；
ｎは、１０ユニットと２００ユニットの間のＺの平均重合度であり、ここで、ｎは、異なるポリマータイプについて最適化されており；
Ｌ₁は、エーテル(例えば−Ｏ−)、エステル(例えば−Ｃ(Ｏ)Ｏ−)、スクシネート(例えば−Ｏ(Ｏ)Ｃ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−Ｃ(Ｏ)Ｏ−))、カルバメート(例えば−ＯＣ(Ｏ)−ＮＲ'−)、カーボネート(例えば−ＯＣ(Ｏ)Ｏ−)、ケトン(例えば−Ｃ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ−)、カルボニル(例えば−Ｃ(Ｏ)−)、ウレア(例えば−ＮＲＣ(Ｏ)ＮＲ'−)、アミン(例えば−ＮＲ'−)、アミド(例えば−Ｃ(Ｏ)ＮＲ'−)、イミン(例えば−Ｃ(ＮＲ')−)、チオエーテル(例えば−Ｓ−)、キサントゲン酸エステル(例えば−ＯＣ(Ｓ)Ｓ−)およびホスホジエステル(例えば−ＯＰ(Ｏ)₂Ｏ−)(これらは何れも、０個、１個またはそれ以上のＺ基で置換されていてもよい。)を０個、１個、２個またはそれ以上含む、所望により置換されたＣ_1-10アルキレンまたはＣ_1-10ヘテロアルキレンリンカーであり；
ここで、Ｒ'は、−Ｈ、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、ホスフェートまたは所望により置換されたＣ_1-10アルキレンから独立して選択され；
Ｘ₁およびＸ₂は、炭素原子、または、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−もしくはホスフェートから選択されるヘテロ原子から独立して選択され；
Ａ₁およびＡ₂は、Ｃ_6-30アルキル、Ｃ_6-30アルケニルおよびＣ_6-30アルキニルから独立して選択され、ここで、Ａ₁およびＡ₂は、同一であっても異なっていてもよいか、
あるいは、Ａ₁およびＡ₂は、それらが結合している炭素原子と一体となって、所望により置換されたステロイドを形成する。]
のステルス脂質またはその塩または薬学的に許容される誘導体を含む。

【0664】

本発明は、式(XII)：

【化71】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
ＰＥＧは、ポリ(エチレングリコール)サブユニットであり、ここで、ＰＥＧは、直鎖であっても分枝鎖であってもよく；
ｎは、１０ユニットと２００ユニットの間のＰＥＧの平均重合度であり、好ましくは約２３ユニット、約４５ユニットまたは約６８ユニットであり；
Ｌ₁は、エーテル、エステル、スクシネート、カルバメート、カーボネート、ケトン、カルボニル、ウレア、アミン、アミド、イミン、チオエーテル、キサントゲン酸エステルおよびホスホジエステル(これらは何れも、０個、１個またはそれ以上のＰＥＧ基によって置換されていてもよい。)を１個、２個またはそれ以上含む、所望により置換されたＣ_1-10ヘテロアルキレンリンカーであり；
Ｘ₁およびＸ₂は、炭素または酸素から独立して選択され；
Ａ₁およびＡ₂は、Ｃ_6-30アルキル、Ｃ_6-30アルケニルおよびＣ_6-30アルキニルから独立して選択され、ここで、Ａ₁およびＡ₂は、同一であっても異なっていてもよいか、
あるいは、Ａ₁およびＡ₂は、それらが結合している炭素原子と一体となって、所望により置換されたステロイドを形成する。]
のステルス脂質またはその塩または薬学的に許容される誘導体を含む、段落[０６６３]のステルス脂質を含む。

【0665】

本発明は、S001〜S009およびS012〜S026の何れか１つ以上から選択される、段落[０６６３]および[０６６４]の何れか１つの化合物を含む。

【0666】

本発明は、肝臓または肝臓細胞に生物活性薬物を送達するための、ｐＫａが約５.１〜約７.４である段落[０６２９]〜[０６６２]の何れか１つの化合物を含む。

【0667】

本発明は、肝臓または肝臓細胞に生物活性薬物を送達する製剤に使用するための、ｐＫａが約６.２以上である段落[０６２９]〜[０６６２]の何れか１つの化合物を含む。

【0668】

本発明は、肝臓または肝臓細胞に生物活性薬物を送達する製剤に使用するための、ｐＫａが約５.９〜約７.０である段落[０６６７]の化合物を含む。

【0669】

本発明は、腫瘍または腫瘍細胞に生物活性薬物を送達する製剤に使用するための、ｐＫａが約５.０〜約６.７である、段落[０６２９]〜[０６６２]の何れか１つの化合物を含む。

【0670】

本発明は、腫瘍または腫瘍細胞に生物活性薬物を送達する製剤に使用するための、ｐＫａが約５.４〜約６.２である段落[０６２９]〜[０６６２]の何れか１つの化合物を含む。

【0671】

本発明は、腫瘍または腫瘍細胞に生物活性薬物を送達する製剤に使用するための、ｐＫａが約６.２以下である段落[０６２９]〜[０６６２]の何れか１つの化合物を含む。

【0672】

本発明は、治療のために生物活性薬物を送達する製剤に使用するための、段落[０６２９]〜[０６７１]の何れか１つの化合物を含む。

【0673】

本発明は、治療のために生物活性薬物を送達する製剤に使用するための、段落[０６２９]〜[０６７２]の何れか１つの化合物の１つ以上を含む組成物を含む。

【0674】

本発明は、段落[０６２９]〜[０６７２]の何れか１つの化合物に加えて、少なくとも１種の脂質成分をさらに含む、段落[０６７３]の組成物を含む。

【0675】

本発明は、カチオン性脂質、所望により存在する中性脂質、ヘルパー脂質、ステルス脂質および所望のアルキルレゾルシノールをベースとする脂質からなる群から選択される、１種以上の脂質成分を含む脂質製剤を含む、段落[０６０８]〜[０６２４]および段落[０６７４]の何れか１つの組成物を含む。

【0676】

本発明は、ステルス脂質が式XIまたは式XIIのステルス脂質から選択されるものである、段落[０６７５]の組成物を含む。

【0677】

本発明は、標的となる細胞のタイプまたは臓器に最適化したカチオン性脂質のｐＫａ、用いられるカチオン性脂質、用いられるステルス脂質、ヘルパー脂質、用いられる中性脂質、中性脂質が存在するか否か、選択されたヘルパー脂質、所望により存在する中性脂質、ステルス脂質およびカチオン性脂質の比率、Ｎ／Ｐ比、粒子サイズ、投与レジメ、投与量、製剤化方法の個別の選択を含むがこれらに限定されない少なくとも１つのパラメーターを最適化した段落[０６７５]の組成物を含む。

【0678】

本発明は、生物活性薬物をさらに含む、段落[０６０８]〜[０６２４]および段落[０６７３]〜[０６７７]の何れか１つの組成物を含む。

【0679】

本発明は、生物活性薬物が、抗体、コレステロール、ホルモン、抗ウイルス剤、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、核タンパク質、化学療法剤、低分子量薬物、ビタミン、補因子、ヌクレオシド、ヌクレオシド誘導体、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、酵素的核酸、アンチセンス核酸、三本鎖形成オリゴヌクレオチド、２,５−Ａアンチセンスキメラ、アロザイム、アプタマー、デコイＲＮＡ分子およびそのアナログ、および、低分子核酸、例えばＲＮＡ干渉剤(ＲＮＡｉ)、低分子干渉核酸(ｓｉＮＡ)、低分子干渉ＲＮＡ(ｓｉＲＮＡ)、二本鎖ＲＮＡ(ｄｓＲＮＡ)、ミクロＲＮＡ(ｍｉＲＮＡ)および低分子ヘアピン型ＲＮＡ(ｓｈＲＮＡ)からなる群から選択される、段落[０６７８]の組成物を含む。

【0680】

本発明は、生物活性薬物がヌクレオシドまたはヌクレオシド誘導体である、段落[０６７９]の組成物を含む。

【0681】

本発明は、生物活性薬物が、ＲＮＡｉ、ｓｉＮＡ、ＲＮＡｉ阻害剤、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡから選択される、段落[０６８０]の組成物を含む。

【0682】

本発明は、カチオン性脂質が、E0007、E0008、E0011、E0014、E0015、E0016、E0017、E0018、E0019、E0022、E0024、E0025、E0026、E0032、E0034、E0040、E0042、E0043、E0045、E0048、E0049、E0051、E0052、E0053、E0054、E0055およびE0118のカチオン性脂質の１つ以上から選択される段落[０６７５]の組成物を含む。

【0683】

本発明は、カチオン性脂質が、E0008、E0011、E0025、E0026、E0075、E0076、E0077、E0085、E0088、E0095、E0104、E0178およびE0179のカチオン性脂質から選択される、段落[０６７５]の組成物を含む。

【0684】

本発明は、E0008、E0011、E0025、E0026、E0075、E0076、E0077、E0085、E0088、E0095、E0104、E0178およびE0179から選択される少なくとも１種のカチオン性脂質を含む、段落[０６７５]の組成物を含む。

【0685】

本発明は、E0011、E0025、E0026、E0075、E0076、E0077およびE0088から選択される少なくとも１種のカチオン性脂質を含む、段落[０６７５]の組成物を含む。

【0686】

本発明は、ステルス脂質が、S001、S002、S003、S004、S005、S006、S007、S008、S009、S010、S011、S012、S013、S014、S015、S016、S017、S018、S019、S020、S021、S022、S023、S024、S025およびS026のステルス脂質から選択される、段落[０６７５]の組成物を含む。

【0687】

本発明は、何れか１つ以上の上記化合物、薬学的に許容される担体をさらに含む製剤および／または組成物を含む。

【0688】

本発明は、何れか１つ以上の上記化合物、製剤および組成物、ならびに使用説明書を含むキットを含む。

【0689】

本発明は、処置を必要とする対象において、疾患または状態を処置する方法であって、段落[０６０８]〜[０６２４]および段落[０６７３]〜[０６８６]の何れか１つ以上の組成物を含む製剤中の、治療有効量の生物活性薬物を投与する工程を含む方法を含む。

【0690】

本発明は、細胞または組織に生物活性薬物を送達する方法であって、段落[０６０８]〜[０６２４]および段落[０６７３]〜[０６８６]の何れか１つの組成物を、細胞または組織に投与することを含む方法を含む。

【0691】

本発明は、疾患または状態が、腫瘍、肝臓疾患、または、ＲＮＡｉ構築物による処置に応答する疾患である、段落[０６９０]の方法を含む。

【0692】

本発明は、疾患または状態が腫瘍であり、組成物中のカチオン性脂質が約５.０〜約６.７のｐＫａを有する、段落[０６９０]の方法を含む。

【0693】

本発明は、疾患または状態が腫瘍であり、組成物中のカチオン性脂質が、約６.２以下のｐＫａを有する、段落[０６９０]の方法を含む。

【0694】

本発明は、疾患または状態が腫瘍であり、組成物中のカチオン性脂質が約５.０〜約６.７のｐＫａを有する、段落[０６９０]の方法を含む。

【0695】

本発明は、疾患または状態が肝臓であり、組成物中のカチオン性脂質が約５.１〜約７.４のｐＫａを有する、段落[０６９０]の方法を含む。

【0696】

本発明は、生物活性薬物が、抗体、コレステロール、ホルモン、抗ウイルス剤、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、核タンパク質、化学療法剤、低分子量薬物、ビタミン、補因子、ヌクレオシド、ヌクレオシド誘導体、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、酵素的核酸、アンチセンス核酸、三本鎖形成オリゴヌクレオチド、２,５−Ａアンチセンスキメラ、アロザイム、アプタマー、デコイＲＮＡ分子およびそのアナログ、および小分子核酸、例えばＲＮＡ干渉剤(ＲＮＡｉ)、低分子干渉核酸(ｓｉＮＡ)、低分子干渉ＲＮＡ(ｓｉＲＮＡ)、二本鎖ＲＮＡ(ｄｓＲＮＡ)、ミクロＲＮＡ(ｍｉＲＮＡ)および低分子ヘアピン型ＲＮＡ(ｓｈＲＮＡ)からなる群から選択される、段落[０６８９]〜[０６９５]の方法を含む。

【0697】

本発明は、生物活性薬物がヌクレオシドまたはヌクレオシド誘導体である、段落[０６９６]の方法を含む。

【0698】

本発明は、生物活性薬物が、ＲＮＡｉ、ｓｉＮＡ、ＲＮＡｉ阻害剤、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡから選択される、段落[00794]の方法を含む。

【0699】

別途定義しないかぎり、本明細書で用いられた技術用語および科学用語は、本発明が属する分野をよく知っている専門家によって通常理解されるものと同一の意味を有する。

【0700】

ことわりのない限り、詳細に具体的に記載されていない全ての他の方法、工程、技術および操作は、当業者に既知の方法で行われ得るか、行ったものである。例えば、標準的なハンドブックおよび一般的な背景技術およびさらにそこで引用された文献に、記載されている。

【0701】

本発明の特許請求の範囲は、非限定的であり、以下に添付する。

【0702】

特定の態様および主張が本明細書で詳細に開示されているが、これは、例として、説明の目的のためにのみ開示されており、添付された請求項の範囲または何れかの対応するさらなる適応の請求項の対象範囲に関して限定することを意図しない。特に、本発明者らは、請求項によって定義された本発明の精神および範囲から逸脱しない限り、種々の置換、変更および修飾を行い得ることを企図する。出発物質の、対象の生物学的物質またはリポソーム会合方法の選択は、本明細書に記載された態様の知識を有する当業者には、きまりきった事項であると考えられる。他の局面、利点および修飾が、下記の請求項の範囲内であると考えられる。後に出願する対応出願における請求項の範囲の訂正は、種々の国の特許法による限定によるものであり、請求項の対象を放棄すると解釈されるべきではない。

【0703】

[配列表]

【表89】

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【配列表】

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