特許 6588341 転移抑制活性を有するリン含有糖アナログ複素環

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6588341

(24)【登録日】2019年9月20日

(45)【発行日】2019年10月9日

(54)【発明の名称】転移抑制活性を有するリン含有糖アナログ複素環

(51)【国際特許分類】

   C07F 9/6574 20060101AFI20191001BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20191001BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20191001BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20191001BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20191001BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20191001BHJP

   A61K 31/665 20060101ALI20191001BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20191001BHJP

   A61K 47/18 20060101ALI20191001BHJP

   A61K 47/34 20170101ALI20191001BHJP

   A61K 47/10 20060101ALI20191001BHJP

【ＦＩ】

   C07F9/6574 ACSP

   A61P35/04

   A61P43/00 105

   A61P15/00

   A61P11/00

   A61P35/00

   A61P43/00 121

   A61K31/665

   A61K45/00

   A61K47/18

   A61K47/34

   A61K47/10

【請求項の数】14

【全頁数】34

(21)【出願番号】特願2015-558539(P2015-558539)

(86)(22)【出願日】2014年2月25日

(65)【公表番号】特表2016-510723(P2016-510723A)

(43)【公表日】2016年4月11日

(86)【国際出願番号】FR2014050409

(87)【国際公開番号】WO2014128429

(87)【国際公開日】20140828

【審査請求日】2017年1月17日

(31)【優先権主張番号】1351654

(32)【優先日】2013年2月25日

(33)【優先権主張国】FR

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】501455677

【氏名又は名称】サントル・ナシオナル・ドゥ・ラ・ルシェルシュ・シアンティフィーク

(73)【特許権者】

【識別番号】515230198

【氏名又は名称】エコール ナシオナル スュペリュール ドゥ シミー ドゥ モンペリエ

(73)【特許権者】

【識別番号】515011944

【氏名又は名称】ウニヴェルシテ・ドゥ・モンペリエ

(73)【特許権者】

【識別番号】515230202

【氏名又は名称】ユニヴェルシテ パリ−ノール １３

(73)【特許権者】

【識別番号】515230213

【氏名又は名称】ユニヴェルシテ パリ スュッド １１

(74)【代理人】

【識別番号】100074734

【弁理士】

【氏名又は名称】中里 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100086265

【弁理士】

【氏名又は名称】川崎 仁

(74)【代理人】

【識別番号】100076451

【弁理士】

【氏名又は名称】三嶋 景治

(72)【発明者】

【氏名】バカララ ノルベール

(72)【発明者】

【氏名】デラフォルジュ マルセル

(72)【発明者】

【氏名】ルクヴェ マルク

(72)【発明者】

【氏名】ユグノ ジャン−フィリップ

(72)【発明者】

【氏名】ルグラン フィリップ

(72)【発明者】

【氏名】ピラ ジャン−リュック

(72)【発明者】

【氏名】ヴィリユー ダヴィッド

(72)【発明者】

【氏名】ヴォール ジャン−ノエル

【審査官】 ▲吉▼澤 英一

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２００９／００４０９６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 Ludovic Clarion et al.,，Oxaphosphinanes: new therapeutic perspectives for glioblastoma，Journal of Medicinal Chemistry，２０１２年，(2012), 55(5), 2196-2211

【文献】 Cristau, Henri-Jean et al.,，First synthesis of P-aryl-phosphinosugars, organophosphorus analogues of C-arylglycosides，Tetrahedron Letters，２００５年，(2005), 46(21), 3741-3744

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｆ

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｐ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

転移性癌に罹患した患者における転移の発生を低減もしくは予防するための医薬であって、一般式（１）：

【化1】

に対応する少なくとも１つの化合物を含有する医薬。
（式中、
Ｒ^１は、置換され、もしくは置換されていないアルキル基、またはアリール基を表す、
Ｒ^２ａは、ハロゲン原子、または−Ｘ−Ｒ^２基を表し、Ｘは、酸素、もしくはＮＨ基を表す、およびＲ^２は、置換され、もしくは置換されていないアリール基、またはアルキル基、水素原子、アシル基またはアリル基を表す、またはＸ−Ｒ^２は、Ｐ（Ｏ）Ｒ^２’Ｒ^６’基（式中、Ｒ^２’およびＲ^６’は、相互から独立したＯＨ基、アルコキシ基もしくはアリールオキシ基を表す）を表す、
Ｒ^３およびＲ^４は、相互から独立して、置換され、もしくは置換されていないアルキル基を表す、またはＲ^３およびＲ^４は、一緒にまとめて、式−Ｒ^３−Ｒ^４−の二価ラジカルを形成し、ここで、−Ｒ^３−Ｒ^４−は、置換され、もしくは置換されていないイソプロピリデン基、ベンジリデン基、ジフェニルメチリデン基、シクロヘキシルメチリデン基または直鎖状アルキレン基を表し、
Ｒ^５は、
下記の基：

【化2】

（式中、Ｒ^１４、Ｒ^１５およびＲ^１６は、相互から独立して、置換され、もしくは置換されていないアルキル基を表す、またはＲ^１５およびＲ^１６は、一緒にまとめて、式−Ｒ^１５−Ｒ^１６−の二価ラジカルを形成し、−Ｒ^１５−Ｒ^１６−は、置換され、もしくは置換されていないイソプロピリデン基、ベンジリデン基、ジフェニルメチリデン基、シクロヘキシルメチリデン基、または直鎖状アルキレン基を表す）から選択される。）

【請求項2】

式（１）の化合物が、
式：

【化4】

（式中、Ｒ^１およびＲ^２ａは、請求項１に規定したとおりであり、Ｂｎは、ベンジル基を表す）の化合物から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の医薬。

【請求項3】

式（１）の化合物が、
式：

【化5】

（式中、Ｒ^１は、請求項１に規定したとおりであり、Ｂｎはベンジル基を表し、Ｒ^１９およびＲ^３２は、相互から独立して、水素原子、アリール基、置換され、もしくは置換されていないアルキル基、もしくはアシル基を表す）の化合物から選択されることを特徴とする、請求項１または２に記載の医薬。

【請求項4】

Ｒ^２ａは、-Ｘ−Ｒ^２基（式中、Ｘ＝ＮＨである）を表すことを特徴とする、請求項１または２に記載の医薬。

【請求項5】

Ｘ−Ｒ^２は、ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ^１２基（式中、Ｒ^１２は、アリール基もしくは、置換され、もしくは置換されていないアルキル基を表す）であることを特徴とする、請求項４に記載の医薬。

【請求項6】

Ｒ^２ａは、-Ｘ−Ｒ^２基（式中、Ｒ^２は、アリール基である）を表すことを特徴とする、請求項１または２に記載の医薬。

【請求項7】

Ｒ^２ａは、ハロゲン原子を表すことを特徴とする、請求項１または２に記載の医薬。

【請求項8】

Ｒ^３およびＲ^４は、相互から独立して、アルキル基、ベンジル基を表し、またはＲ^３およびＲ^４は、一緒にまとめて、式−Ｒ^３−Ｒ^４−の二価ラジカルを形成し、ここで、−Ｒ^３−Ｒ^４−は、置換され、もしくは置換されていないイソプロピリデン基、ベンジリデン基、ジフェニルメチリデン基、シクロヘキシルメチリデン基または直鎖状アルキレン基を表す
ことを特徴とする、請求項１に記載の医薬。

【請求項9】

式（１）の化合物が、
式（３．４８ａ）：

【化17】

の化合物であることを特徴とする、請求項１に記載の医薬。

【請求項10】

式（１）の化合物が、
式（４．２ａ）または（５．６ｄ）：

【化7】

の化合物であることを特徴とする、請求項１に記載の医薬。

【請求項11】

転移性癌に罹患した患者における転移の発生を低減もしくは予防するための医薬であって、前記医薬は、請求項１〜１０のいずれか一項に規定した式（１）の少なくとも１つの化合物を１種以上の医薬上許容される賦形剤および／またはビヒクルと組み合わせて含むことを特徴とする医薬。

【請求項12】

前記癌は、多形性膠芽腫、乳癌および非小細胞肺癌から選択される癌であることを特徴とする、請求項１１に記載の医薬。

【請求項13】

少なくとも１種の有機溶媒および少なくとも１種の界面活性剤を更に含むことを特徴とする、請求項１１または１２に記載の医薬。

【請求項14】

請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の医薬であって、前記医薬が、少なくとも１種の細胞毒性化合物を更に含むことを特徴とする医薬。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ヒトまたは動物における癌の治療的処置の分野に関する。本発明は特に、転移抑制活性があるために、ヒト医学または獣医学におけるホスフィナン環、好ましくはオキサホスフィナンを組み込んでいるリン含有糖アナログ（グリコミメティック）ファミリーの使用に関する。

【背景技術】

【0002】

最近の統計学によると、癌は、先進工業国において心血管疾患に次いで第二位の死因である。癌に起因する疾患に立ち向かうために展開される手段には、早期診断の強化だけではなく医学的治療の改善が含まれる。健常細胞に比較して腫瘍細胞に対する特異性が完全である新規なオリジナル分子を見つけることができれば、新規療法の開発が可能になろう。

【0003】

癌治療の治療法を選択するためには、一定数のパラメータ：癌のタイプ（肉腫、黒色腫など）、罹患器官、癌の進行度、全ての予後因子および患者に特有の特徴（年齢、全身状態、精神状態など）を調査しなければならない。これらのデータから、局所性または全身性いずれかである療法を選択できる。最も有効な治療は、手術および／または放射線療法を含む局所療法である。局所療法は、広範には進行していない病変を治療し、限局性癌の大半を治癒させる。全身性療法、化学療法および／またはホルモン療法は、一般に緩和的または補助的治療である。これらの治療は、限局性ではあるがより広範に進行した癌の症例で使用される。これらの治療は、限られた数の広汎性癌を治癒させることはできるが、患者の平均余命を改善することはない（例えば、Ｃａｐｄｅｖｉｌｌｅ Ｒ．，Ｂｕｃｈｄｕｎｇｅｒ Ｅ．，Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ Ｊ．，Ｍａｔｔｅｒ Ａ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．，２００２，１，４９３；Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ Ｂ．Ｌ．，Ｖｏｎ Ｍｅｈｒｅｎ Ｍ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．，２００３，６，８６９；Ｇｉｌｍａｎ Ａ．，Ｐｈｉｌｉｐｓ Ｆ．Ｓ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９４６，１０３，４０９；Ｇｉｎｇｒａｓ Ｄ，Ｂｅｌｉｖｅａｕ Ｒ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．，１９９７，１３，１４２８−３５を参照されたい）。

【0004】

転移現象は、癌細胞が原初部位（原発腫瘍）を離れて身体の他の部分に遊走する間の一連の複雑な過程である。癌細胞は、実際に原発腫瘍から離れてしまうことがあり、免疫系が癌細胞を検知できないと、リンパ管や血管内に侵入し、その後に身体の他の部分へ循環して新規腫瘍を形成する（「転移する」）ことになる。これは続発性もしくは転移性腫瘍と呼ばれる。

【0005】

転移の形成は、多数の因子による影響を受け、特に癌のタイプと攻撃性に左右される。転移のリスクは、身体内に原発腫瘍が存在する期間に伴って増大し、癌を他の組織や器官へ伝播して潜在的致死性疾患にさせる能力である。癌が原因で死亡する人々の大多数は死亡時に転移を有しており、転移性播種は癌患者の最も頻度の高い死因である。

【0006】

最も頻度の高い癌（例えば、前立腺癌、乳癌、腸癌および肺癌）は、手術により完全または部分的に切除できる器官において発生する。手術は、原発癌が転移していなければ患者を治癒させることができる。これらの癌の重篤な結果の大多数は、癌が身体の他の部分へ伝播するために発生する。特定の症例では、癌の最も重篤な作用は、身体の特に主要部分への伝播である。他の症例では、多数の器官における伝播および増殖は、極めて多数の癌細胞を作り出すので、それにより生体の正常な代謝が深刻に崩壊させられる。

【0007】

一般に、原発腫瘍を見つけることができれば、医師は続発性病巣を探し出すことができる。だが現在利用できる手段が高精度であるにもかかわらず作成された医学的評価は依然として陰性のままであるが、他方で数カ月もしくは数年後における可視転移の発生は転移が存在していたが以前は極めて小さくて「潜在的」であったことを示している。癌は、一般に特定容積に達した場合にしか検出できない：癌が細胞約１０億個に相当する直径１ｃｍに達する前に検出できることは希である。

【0008】

このため癌の治療は、原発腫瘍を治療すること（局所性抗増殖性治療）のみではなく、特に癌転移のリスクが高い場合は完全および長期の寛解を期待できるように、極めて頻回に予防的転移抑制治療を併用しなければならない。詳細には、化学療法による治療中には、抗増殖有効成分の作用は細胞に高い遊走能を生じさせる。治療に対するこの細胞応答は、環境変化に順応した応答を生じさせる分子可塑性を有する（幹細胞タイプの）細胞部分母集団に関する。転移抑制治療の目的は、遊走によって治療を回避するこの適応応答を遮断することである。

【0009】

特定の症例では、原発腫瘍は、極めて小さくて目に見えないままであるか、転移性病巣の原因となる悪性細胞を遊離させた後に自然消失してしまったかのいずれかのために検出されない。

【0010】

公知の抗癌剤の使用に関連する限界はそれらの高い毒性に関連しており、それらの毒性は、患者の死亡さえ引き起こす可能性がある多数の副作用の原因である。癌を治療するために使用される化学兵器は、健常細胞を傷つけずに癌細胞を破壊すると考えられている。しかし、選択性は極めて相対的であり、化学療法に使用される医薬品の大多数は、相当に大きな血液学的毒性を有する。有害な副作用、特に重篤な医学的および生理学的結果を伴う副作用を低減させることは、特定の医薬品の有効性の改良を試みることと全く同様に重要である。全体としてみると、現在の化学療法兵器庫は依然として旧式の細胞毒性の高い薬品から構成され、公知の抗癌剤の大多数は既に数十年を経過しており、少なくとも細胞に関して標的化が不良で、耐性現象への代替策を全く提供することができていない。そこで、化学療法に使用できる、および理想的には癌細胞だけを標的として転移抑制特性を有する新規な抗癌分子に対する必要が存在する。

【0011】

糖は、生物界に偏在する生体分子ファミリーを表し、極めて様々な構造および機能を備えており、療法において肥満や糖尿病を撲滅するだけではなく、抗ウイルス薬、抗生物質および抗癌剤としても多数の用途を有する。糖アナログもしくはグリコミメティックの合成は、これらの化合物が糖を含む様々な受容体もしくは酵素、特に特定分子、複合糖質の生合成もしくはエネルギー機構、および細胞間接着の機構を妨害できるために興味深い。

【0012】

環式糖アナログを調製する分野では、２つの主要なアプローチ：アノマー位置でのヒドロキシル基の炭素系基との置換（Ｃ−アリールグリコシド）、および環内酸素原子とまた別のへテロ原子との置換（リン糖酸、ホスファ糖、イミノ糖、チオグリコシド）が既に開発されている。

【0013】

近年、特許出願の国際公開第２００９／００４０９６号パンフレットおよび論文のＣｌａｒｉｏｎ Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１２，２１９６−２２１１では、ホスフィノ糖のファミリーが抗癌特性を有することが証明されている。このファミリーの多数の代表的化合物の構造を下記の図式に示す：

【化1】

【0014】

このファミリーの化合物は、数種の癌細胞系に対する抗増殖活性（低用量での細胞毒性）を示すが、健常（非腫瘍）細胞に対してはそれらが抗癌活性を有する用量では細胞毒性を示さない。

【0015】

驚くべきことに、本発明者らは今では、糖アナログであるこれらの複素環式ホスフィン化合物が、転移抑制特性もまた有することを見いだした。用語「転移抑制特性」は、癌に罹患した患者における転移の発生もしくは伝播を低減もしくは予防する特性を意味する。これは、治療の非存在下で見いだされる状態に比較した転移形成の排除または転移のサイズおよび／または転移の部位数の減少によって反映される可能性がある。

【0016】

本発明の目的のためには、続発性もしくは転移性癌腫瘍の抗増殖性治療（例えば、確定された転移の退行を誘発する、または潜在転移からマクロ転移への転換を阻害する）は、本発明による化合物の転移抑制特性に関係する転移抑制治療であるとは見なされない。

【0017】

本発明による化合物は、原発腫瘍もしくは転移腫瘍の増殖を妨害することにより癌細胞の増殖を標的とする（抗増殖性治癒作用）だけではなく、それらの移動性もまた標的とし、さらに転移の形成を阻害する、または最低限でも低減する（予防作用）。

【0018】

何らかの理論によって拘束することを望まなくても、本発明者らは、本発明による化合物が転移の発生の分子過程を阻害もしくは低減させる、およびそこで原発腫瘍からの転移の発生を予防もしくは低減させると考えている。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0019】

本発明の主題は、癌に罹患した患者における転移の発生を低減もしくは予防するための本発明の状況においてはホスフィノ糖と呼ばれる下記の式（１）の化合物である：

【化2】

【0020】

式中では、Ｙは、酸素、硫黄もしくはセレン原子、好ましくは酸素原子を表し、
Ｚは、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＨ基もしくはＮＲ^６基（式中、Ｒ^６は、任意選択的に置換されたアリール基もしくはアルキル基、好ましくは酸素原子である）を表す、
Ｒ^１は、水素原子、任意選択的に置換されたアルキル基もしくはアリール基を表す、
Ｒ^２ａは、水素もしくはハロゲン原子、特にフッ素原子、アジド基（Ｎ_３）、カーボネート基もしくはジチオカーボネート基、１Ｈ−［１，２，３］トリアゾリル基または−Ｘ−Ｒ^２基（式中、Ｘは、酸素、硫黄もしくはセレン原子を表す）、ＮＨもしくはＮＲ^７基（式中、Ｒ^７は、任意選択的に置換されたアリール基もしくはアルキル基である）を表す、Ｘは、好ましくはＯもしくはＮＨを表す、およびＲ^２は、任意選択的に置換されたアリール基もしくはアルキル基、水素原子、トリクロロアセトイミデート基（−Ｃ（＝ＮＨ）ＣＣｌ_３）、アシル基、ホルミル基、スルホニル基、スルフィニル基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基、アリル基、サッカリル基、エステル基、アミド基、チオアミド基もしくはスルホンアミド基を表す、またはＸ−Ｒ^２は、Ｐ（Ｏ）Ｒ^２’Ｒ^６’基（式中、Ｒ^２’およびＲ^６’は、相互から独立して、任意選択的に置換されたアリール基もしくはアルキル基、ＯＨ基、アルコキシ基もしくはアリールオキシを表す）を表す、
Ｒ^３およびＲ^４は、相互から独立して、任意選択的に置換されたアリール基もしくはアルキル基、水素原子、トリクロロアセトイミデート基、アシル基、ホルミル基、スルホニル基、スルフィニル基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基、アリル基、エステル基、アミド基、チオアミド基、スルホンアミド基もしくはサッカリル基を表す、またはＲ^３およびＲ^４は、一緒にまとめて、式−Ｒ^３−Ｒ^４−（式中、−Ｒ^３−Ｒ^４−は、好ましくはイソプロピリデン基、ベンジリデン基、ジフェニルメチリデン基、シクロヘキシルメチリデン基およびそれらの置換アナログ、例えば、４−メトキシベンジリデン基もしくは直鎖状アルキレン基、例えばエチレン基（プロパン−１，２−ジオール基を形成できるように）の二価ラジカルを表す、
Ｒ^５は、水素原子または好ましくは酸素、硫黄および窒素から選択される１個以上のヘテロ原子、より好ましくは酸素を含む炭化水素系基を表す。

【0021】

本発明はさらに、癌に罹患した患者における転移の発生を低減もしくは予防する目的でヒト医学または獣医学において使用するための抗癌医薬組成物であって、式（１）の少なくとも１つの化合物を１種以上の医薬上許容される賦形剤および／またはビヒクルと組み合わせて含む抗癌医薬組成物をさらに提供する。

【0022】

本発明はさらに、ヒトまたは動物の治療的処置のための、そのような治療を必要とする個体における転移の発生を低減もしくは予防するための方法であって、治療有効量の本明細書において規定した式（１）の化合物がその個人もしくは動物に、単独で、または１種以上の医薬上許容される賦形剤および／またはビヒクルとの混合物のいずれかで投与される方法に関する。

【図面の簡単な説明】

【0023】

【図1】時間および様々な処置の関数としての、ＳＮＢ７５細胞系（５×１０^６個の細胞）の癌細胞の皮下移植を受けていたマウスが提示した腫瘍サイズの測定値を示す図である。各測定に対する平均標準偏差もまた表示されている。

【図1A】癌細胞の注射を受けた後に、本発明による化合物（３．４８ａまたは４．２ａ）を用いた処置を受けていたか否かに依存する、転移を発生した、または発生しなかったマウスの器官（肝臓もしくは卵巣）の写真を示す図である。

【図2-3】本発明による化合物３．４８ａの濃度の関数としての、様々な細胞外マトリックスタンパク質支持体上の、ボイデンチャンバ内のＳＮＢ７５およびＧｌｉ４Ｆ１１細胞系の癌細胞の遊走を例示する図である。

【図4】癌細胞の注射を受けた後に、本発明による化合物（３．４８ａまたは４．２ａ）を用いた処置を受けていたか否かに依存する、転移を発生した、または発生しなかったマウスの器官（肝臓もしくは卵巣）の写真を示す図である。

【図5】本発明による化合物４．２ａを用いて治療されていたか否かに依存する、癌細胞が注射された後にマウスが提示した平均転移数を示す図である。

【図6】処置条件の関数としての、これらの続発性腫瘍の質量分布を表す図である。

【発明を実施するための形態】

【0024】

リン原子を組み込んでいる６員環（ホスフィナン環）を含むホスフィノ糖化合物のファミリー、典型的には１，２−オキサホスフィナン２−オキシドのファミリーは、本発明によって特に転移抑制特性があるために提供される。

【0025】

化学化合物の説明では、これらの用語は一般にそれらの通常の意味で使用される。

【0026】

本特許出願では、用語「アルキル」は、１〜２５個の炭素原子を含有する、特に１〜８個の炭素原子を含有する非環式基、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ブチル基およびｎ−ヘキシル基、好ましくは３〜７個の炭素原子を含有するシクロアルキル基、好ましくは４〜８個の炭素原子を含有するシクロアルキルメチル基を含む直鎖状もしくは分岐鎖状の飽和もしくは不飽和炭化水素系ラジカルを意味する。

【0027】

用語「置換アルキル」基は、ｓｐ^３炭素原子を介して結合され、１つ以上のアリール基で置換された、および／または１個以上のヘテロ原子、例えばＮ、ＳもしくはＯを含む上記に規定したアルキル基を意味する。言及する例には、アリールアルキル基、例えばトリチル基（−ＣＰｈ_３）、Ｂｎもしくは４−メトキシベンジル基と記されるベンジル基、アルコキシアルキル基、特にジアルコキシメチル基、例えばジエトキシメチルもしくはジメトキシメチル基、ＣＨ_２ＣＯ_２Ｒ^１１基（式中、Ｒ^１１は、任意選択的に置換されたアルキル基もしくはアリール基を表す）が含まれる。

【0028】

用語「アルコキシ」は、１個の酸素原子を介して分子の残余に結合されたアルキル基、例えばエトキシ基、メトキシ基もしくはｎ−プロポキシ基を意味する。

【0029】

用語「アリールオキシ」は、１個の酸素原子を介して分子の残余に結合されたアリール基、例えばベンゾキシ基を意味する。

【0030】

用語「アシル」は、ヒドロキシル基の欠失によりカルボン酸に由来する、好ましくは式−Ｃ（Ｏ）Ｒ^８（式中、Ｒ^８は、任意選択的に置換されたアリール基もしくはアルキル基、例えばアセチル基、プロピオニル基、オレオイル基、ミリストイル基、ベンゾイル基もしくはトリフルオロアセチル基を意味する）を有するラジカルを意味する。

【0031】

用語「スルホニル」は、ヒドロキシル基の欠失によりスルホン酸に由来する、好ましくは式−ＳＯ_２Ｒ^９（式中、Ｒ^９は、任意選択的に置換されたアリール基もしくはアルキル基、例えばＣＦ_３基を意味する）を有するラジカルを意味する。

【0032】

用語「スルフィニル」は、ヒドロキシル基の欠失によりスルフィン酸に由来する、好ましくは式−ＳＯＲ^１０（式中、Ｒ^１０は、任意選択的に置換されたアリール基もしくはアルキル基を意味する）を有するラジカルを意味する。

【0033】

用語「ジチオカーボネート」は、式−ＯＣ（Ｓ）ＳＲ^９ｃ（式中、Ｒ^９ｃは、任意選択的に置換されたアリール基もしくはアルキル基を意味する）の基を意味する。

【0034】

用語「カーボネート」は、式−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ^９ｄ（式中、Ｒ^９ｄは、任意選択的に置換されたアリール基もしくはアルキル基を意味する）の基を意味する。

【0035】

用語「エステル基」は、式−Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１０’（式中、Ｒ^１０’は、任意選択的に置換されたアリール基もしくはアルキル基を意味する）の基を意味する。

【0036】

用語「アミド基」は、式−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^９’Ｒ^９’’（式中、Ｒ^９’は、任意選択的に置換されたアリール基もしくはアルキル基を表し、Ｒ^９’’は、任意選択的に置換されたアリール基もしくはアルキル基または水素原子を表す）の基、例えば−Ｃ（Ｏ）ＮＨＰｈ）の基を意味する。

【0037】

用語「チオアミド基」は、式−Ｃ（Ｓ）ＮＲ^９ａＲ^９ｂ（式中、Ｒ^９ａは、任意選択的に置換されたアリール基もしくはアルキル基を表し、Ｒ^９ｂは、任意選択的に置換されたアリール基もしくはアルキル基または水素原子を表す）の基を意味する。

【0038】

用語「スルホンアミド基」は、式−ＳＯ_２ＮＲ^１１’Ｒ^１１’’（式中、Ｒ^１１’は、任意選択的に置換されたアリール基もしくはアルキル基を表し、Ｒ^１１’’は、任意選択的に置換されたアリール基もしくはアルキル基または水素原子を表す）の基を意味する。

【0039】

用語「アリール」は、任意選択的に１つ以上の基、例えば制限なく、アルキル（例えば、メチル）基、ヒドロキシアルキル基、アミノアルキル基、ヒドロキシル基、チオール基、アミノ基、ハロ（フルオロ、ブロモ、ヨードもしくはクロロ）基、ニトロ基、アルキルチオ基、アルコキシ（例えば、メトキシ）基、アリールオキシ基、モノアルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アシル基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、ヒドロキシスルホニル基、アルコキシスルホニル基、アリールオキシスルホニル基、アルキルスルホニル基、アルキルスルフィニル基、シアノ基、トリフルオロメチル基、テトラゾリル基、カルバモイル基、アルキルカルバモイル基もしくはジアルキルカルバモイル基で置換されていてよい、１個だけの環（例えば、フェニル基）または数個の縮合環（例えば、ナフチル基もしくはテルフェニル基）を含む芳香族一価炭素環式ラジカルを意味する。または、芳香環の２つの隣接位置は、メチレンジオキシ基またはエチレンジオキシ基で置換されてよい。

【0040】

用語「アリール」にはさらに、「ヘテロアリール」基、すなわち芳香環の１個以上の炭素原子が例えば窒素、酸素、リンもしくは硫黄などのへテロ原子で置換されている芳香環が含まれる。ヘテロアリール基は、１個以上の芳香環を含有する構造、または１個以上の非芳香環と結合した１個以上の芳香環を含有する構造であってよい。数個の環を有する構造では、環は、例えばメチレン基、エチレン基もしくはカルボニル基などの共通二価基を介して縮合、共有結合または結合されていてよい。ヘテロアリール基の例は、チオフェン（２−チエニル、３−チエニル）基、ピリジン（２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル）基、イソキサゾール基、フタルイミド基、ピラゾール基、インドール基、フラン基およびそれらのベンゾ縮合アナログ、フェニルピリジルケトン基、キノリン基、フェノチアジン基、カルバゾール基、ベンゾピラノン基である。

【0041】

本明細書で使用する用語「サッカリル基」は、ヒドロキシル基もしくは水素原子（好ましくはヒドロキシル基）の欠失により天然もしくは合成、保護もしくは非保護炭水化物または糖に由来する全てのラジカルに及ぶ。サッカリル基には、モノサッカリル基およびオリゴサッカリル基、例えばジサッカリル基が含まれる。サッカリル基、例えばグリコシル基もしくはマンノシル基は、例えば、制限なく、グルクロン酸、ラクトース、スクロース、マルトース、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、イドース、ガラクトース、タロース、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、フルクトース、トレオース、エリトロース、β−Ｄ−Ｎ−アセチルガラクトサミン、β−Ｄ−Ｎ−アセチルグルコサミン、フコース、シアル酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−アセチルムラミン酸、グルコサミン、ガラクトサミン、ラムノースおよび例えばアシル基、アルキル基、アリール基、ハロ基もしくはアミノ基で保護もしくは置換されたそれらのアナログならびにさらにそれらのデオキシアナログなどの糖に由来してよい。用語「オリゴサッカリル基」は、好ましくは１〜３個の糖単位を含む少なくとも２つの共有結合単糖類に由来するサッカリル基を意味する。好ましいサッカリル基は、モノサッカリル基である。式（１）の化合物では、Ｒ^２ａが−Ｘ−Ｒ^２（式中、Ｒ^２は、サッカリル基である）を表す場合、このサッカリル基は、好ましくはＯもしくはＮＨ、好ましくはＯを表すＸ基を介して結合されている。糖タイプの構造の説明については、書籍‘‘Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｓ ｏｆ Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ’’，Ｖａｒｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｅｄｓ．，ｃｈａｐｔｅｒ ２（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９９９）を参照されたい。

【0042】

用語「糖」は、単糖もしくはオリゴ糖を意味する。Ｂｎはベンジル基を表し、Ａｃはアセチル基を表す。

【0043】

本発明の特定の化合物は、溶媒和形および非溶媒和形の両方で、例えば水和物形で存在してよい。一般に、溶媒和形は非溶媒和形と同等であり、本発明の範囲内に含まれる。本発明の特定の化合物は、複数の結晶形または非晶質形で存在してよい。一般に、全ての物理的形態は本発明によって想定される使用のために同等であり、本発明の範囲内に含まれる。

【0044】

本発明による化合物は、数個の不斉（光学的）中心を有しており、したがってエナンチオマーまたはジアステレオ異性体が存在する可能性がある。本発明は、式（１）の化合物の全てのエナンチオマーおよびジアステレオ異性体ならびにそれらの混合物、特にラセミ化合物を含むと理解されている。言い換えると、本発明による化合物は、精製エナンチオマーの形態またはエナンチオマーの混合物の形態で使用することができる。様々な異性体は、当業者には公知の方法によって、特にシリカゲルクロマトグラフィまたは分別結晶化によって分離することができる。

【0045】

式（１）の好ましい化合物は、式中、Ｙ＝Ｚ＝Ｏである化合物、すなわち１，２−オキサホスフィナン２−オキシドである。

【0046】

本発明による化合物では、置換基Ｒ^１は、それが水素原子を意味しない場合は、１個の炭素原子を介して環内リン原子に常に結合されている。

【0047】

好ましい基Ｒ^１は、Ｈ基、アルキル基、例えば２−ベンジルオキシエチル基、エチル基、ｎ−ブチル基、３ーフェニルプロピル基もしくはｎ−オクチル基、ジアルコキシメチル基、例えばジエトキシメチル基もしくはジメトキシメチル基、アリール基、例えばフェニル基、４−メチルフェニル基、４−ニトロフェニル基、４−アミノフェニル基、４−メトキシフェニル基、３，４−ジフルオロフェニル基、３，５−ジフルオロフェニル基、２−チエニル基、４−フルオロフェニル基、４−ビフェニル基、３−メチルフェニル基もしくは３−メトキシフェニル基およびさらに以下の基である：

【化3】

【0048】

好ましいＲ^２基は、Ｈ基、アリールスルホニル基、メチルスルホニル基、トリクロロアセトイミデート基、ベンジル基、サッカリル基およびアリール基、例えばフェニル基、４−メチルフェニル基、４−ニトロフェニル基、４−アミノフェニル基、３，４−ジフルオロフェニル基、３，５−ジフルオロフェニル基および３，４−ジニトロフェニル基である。

【0049】

好ましいＸ−Ｒ^２基は、Ｏ−アリール基、ＯＨ基、ＮＨ_２基、ＮＨ−アリール基、Ｓ−アリール基、ジチオカーボネート基、ＮＨＣＨ_２ＣＯ_２Ｒ^１１基（式中、Ｒ^１１は、上記に規定した意味を有する）、ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ^１２基（式中、Ｒ^１２は、任意選択的に置換されたアルキル基もしくはアリール基を表す）、Ｏ−ＳＯ_２Ｒ^９基（式中、Ｒ^９は上記に規定した意味を有する）、ＮＨ−Ｂｎ基、Ｏ−サッカリル基、ＯＣ（＝ＮＨ）ＣＣｌ_３基、ホスホン酸基、ホスフィンサン基もしくはホスフィンオキシド基、ウレア基、チオウレア基、カルバメート基もしくはカーボネート基である。

【0050】

好ましくは、Ｒ^３およびＲ^４は、相互から独立して、水素原子、ベンジル基、ベンゾイル基もしくはアセチル基を表す、または一緒にまとめて、好ましくはイソプロピリデン基を表す式−Ｒ^３−Ｒ^４−の二価ラジカルを形成する。

【0051】

本発明の好ましい実施形態によると、Ｒ^５は、化合物（１）が式（２）もしくは（３）：

【化4】

（式中、Ｒ^１、Ｒ^２ａ、Ｒ^３、Ｒ^４、ＹおよびＺは、上記と同一の意味を有し、Ｒ^１４、Ｒ^１５およびＲ^１６は、相互から独立して、水素原子、任意選択的に置換されたアリール基もしくはアルキル基、トリクロロアセトイミデート基、アシル基、アシル基、ホルミル基、スルホニル基、スルフィニル基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基、アリル基、エステル基、アミド基、チオアミド基、スルホンアミド基もしくはサッカリル基を表し、またはＲ^１５およびＲ^１６は、一緒にまとめて、式−Ｒ^１５−Ｒ^１６−（式中、−Ｒ^１５−Ｒ^１６−は、好ましくはイソプロピリデン基、ベンジリデン基、ジフェニルメチリデン基もしくはシクロヘキシルメチリデン基およびそれらの置換アナログを表す）の二価ラジカル、例えば４−メトキシベンジリデン基または直鎖状アルキレン基、例えばエチレン基を形成する）に対応する基である。）

【0052】

Ｒ^５基は、それが水素原子を表さない場合は、好ましくは１〜２５個の炭素原子、好ましくは１〜２０個の炭素原子、いっそう好ましくは１〜１０個の炭素原子、およびいっそうより好ましくは１〜８個の炭素原子を含む。Ｒ^５基は、好ましくは酸素、硫黄および窒素から選択される１個以上のヘテロ原子、いっそうより好ましくは酸素原子を含む任意選択的に置換されたアルキル基であってよい。好ましいＲ^５基は、アルコキシアルキル基、例えばベンジルオキシメチル（−ＣＨ_２ＯＢｎ）基、−ＣＨ_２ＯＨ基、２，２−ジメチル［１，３］ジオキソラン−４−イル基および１，２−ジヒドロキシエチルＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２ＯＨ基であり、これは式（２）および（３）において、Ｒ^１４＝ＨもしくはＢｎおよびＲ^１５＝Ｒ^１６＝Ｈである、またはＲ^１５およびＲ^１６は、一緒にまとめて、イソプロピリデンラジカルを形成することによって反映されている。

【0053】

式（１）の化合物を調製するための様々な方法は、参照して本明細書に組み込まれる特許出願の国際公開第２００９／００４０９６号パンフレットおよび論文のＣｌａｒｉｏｎ Ｌ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１２，２１９６−２２１１の中に詳細に記載されている。

【0054】

化合物（１）の好ましいファミリーの例は、以下の一般式（式中、Ｒ^１およびＲ^２ａは、上記に規定したとおりである）を有するファミリーである：

【化5】

【0055】

一般式（１８）の１，２−オキサホスフィナンの中では、式（１９）および（２０）（式中、Ｒ^１およびＲ^３〜Ｒ^５は、上記に規定したとおりであり、Ｒ^１は、好ましくはアリール基、水素原子、任意選択的に置換されたアリール基、例えばジアルコキシメチル基を表す）の化合物が好ましい。

【化6】

【0056】

本発明による第二に好ましいクラスの化合物（１）は、一般式（２１）：

【化7】

（式中、Ｒ^１およびＲ^３〜Ｒ^５は、上記と同一の意味を有し、Ｒ^１８およびＲ^１９は、相互から独立して、水素原子、アリール基、任意選択的に置換されたアルキル基、トリクロロアセトイミデート基、アシル基、ホルミル基、スルホニル基、スルフィニル基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基、アリル基、エステル基、アミド基、チオアミド基もしくはスルホンアミド基を表し、Ｒ^１８は、好ましくは水素原子を表す）の１，２−オキサホスフィナンに相当する。これらの窒素性ホスフィノ糖の中では、Ｃ_３位でアミノ基（Ｒ^１８＝Ｒ^１９＝Ｈ）、Ｃ_３位でベンジルアミノ基（Ｒ^１８＝Ｈ、Ｒ^１９＝Ｂｎ）またはＣ_３位でアセチルアミノ基（Ｒ^１８＝Ｈ、Ｒ^１９＝Ａｃ）を含むホスフィノ糖を挙げることができる。化合物（２１）の中では、式（２２）および（２３）の化合物が好ましく、このときＲ^１およびＲ^１９は上記に規定した意味を有し、Ｒ^１は、好ましくはアリール基、水素原子もしくはジアルコキシメチル基を表し、Ｒ^１９は、好ましくはアリール基もしくはアシル基を表す。

【化8】

【0057】

第三のクラスの好ましい化合物（１）は、下記の式（２４）の化合物に相当するが、このとき様々な置換基は上記で規定した意味を有し、Ｒ^２０は、サッカリル基、好ましくはモノサッカリル基を意味する。

【化9】

【0058】

式（２４）の化合物の中では、好ましい化合物は下記の式（２７）、（２７ａ）および（２７ｂ）の疑似二糖類（マンノースもしくはグルコース誘導体との結合に由来する）（式中、Ｒ^１９ａ、Ｒ^１９ｂ、Ｒ^１９ｃ、Ｒ^１９ｄ、Ｒ^１９ｅ、Ｒ^１９ｆおよびＲ^１９ｇは、相互から独立して、水素原子もしくはベンジル基を意味する、Ｒ^１９ｈは、水素原子もしくはメチル基を意味する、他の置換基は上記に規定したとおりである）である。

【化10】

【0059】

また別の好ましいクラスの化合物（１）は、下記の式（２４ａ）（式中、様々な置換基は上記に規定した意味を有する）の化合物に相当する。これらの化合物の中では、式（２４ｂ）および（２４ｃ）の化合物が好ましい。

【化11】

【0060】

化合物（２８）と記載した化合物（１）（式中、Ｒ^１は、水素原子である）および化合物（３０）（式中、Ｒ^２１は、アリール基を表す）もまた好ましい化合物であり、このときアリール基はフェニル基、２，４−ジフルオロフェニル基、３，４−ジフルオロフェニル基、４−メトキシフェニル基、３，４−ジニトロフェニル基もしくは４−ニトロフェニル基などの様々な基を表す可能性がある。

【化12】

【0061】

本発明によるホスフィノ糖（１）はそれらのヒドロキシル基が保護されている形態で入手できるが、本発明は、決してこの実施形態には限定されず、それらの全てのヒドロキシル基またはそれらの一部だけが脱保護されている形態で入手されるホスフィノ糖（１）もまた含んでいる。本発明のこの他の実施形態に対応する好ましいポリヒドロキシホスフィノ糖およびさらに他の好ましいホスフィノ糖は、下記の式（式中、Ｒ^１、Ｒ^２ａ、ＹおよびＺは、上記に規定した意味を有し、Ｒ^２２は、ＣＦ_３基もしくはアリール基、例えば４−トリル基（Ｒ^２ａは、好ましくは上記に規定したＯＳＯ_２Ｒ^２２基、Ｎ_３基もしくはハロゲン原子、好ましくはフッ素原子を表す）を意味し、ならびにＲ^３０およびＲ^３１は、相互から独立して、炭化水素系基もしくは水素原子を意味する）に対応する。

【化13】

【0062】

式（３９）では、Ｒ^１は、上記に規定した意味を有し、Ｒ^３２は、Ｒ^１９基について上記で規定した置換基と同一置換基から選択される。Ｒ^３２は、好ましくはアシル基、好ましくはベンゾイル基を表す。式（３８）では、Ｒ^３０およびＲ^３１は、好ましくは、相互から独立して、アルキル基もしくはアリール基または水素原子を表す。好ましいのは、式（３８）（式中、Ｒ^３０基およびＲ^３１基の一方は水素原子であり、炭化水素系基中の他方は、よりいっそう好ましくは、Ｒ^３０＝ＨおよびＲ^３１＝アリール基、理想的にはフェニル基である）の化合物である。１Ｈ［１，２，３］トリアゾリル置換基を含む式（３８）の化合物は、特別には、対応するアジドを（例えば、銅（Ｉ）を用いて触媒されるアジド−アルキン付加環化反応によって）アルキンと反応させることによって入手できる。式（３８）の好ましい化合物は、以下の構造（３８ａ）を有する。

【化14】

【0063】

式（３５）の好ましい化合物の１つは、以下の構造（３５ａ）を有する。

【化15】

【0064】

式（１）（式中、Ｒ^２ａは、ハロゲン原子（好ましくは、フッ素、塩素もしくは臭素）は、対応するトリフレート（Ｒ^２ａ＝ＯＳＯ_２ＣＦ_３（これ自体が式中Ｒ^２ａ＝ＯＨである化合物から入手される）から、適切なハロゲン化物塩の存在下での求核置換によって入手できる。特別には、アンモニウム塩ｎ−Ｂｕ_４Ｎ^＋Ｘ⁻（式中、Ｘ＝Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）を利用できる。さらに、式（１）（式中、Ｒ^２ａ＝ＯＨである）の化合物を、カストロ試薬（Ｐｈ_３ＰＸ_２（式中、Ｘ＝Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉである））またはアッペル試薬（Ｐｈ_３Ｐ、ＣＸ_４（式中、Ｘ＝Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉである））との反応によって対応するハロ誘導体に直接的に変換させることも可能である。

【0065】

下記のクラスの式（１）の化合物は、リン原子上に芳香核を有する化合物、および／または位置Ｃ１αでリン原子に置換されたヘテロ原子を有する、および／または非アノマー位置でヒドロキシル基の保護を有するマンノース誘導体が好ましい。

【0066】

１つの実施形態によると、下記の化合物は、本発明の生成物および／または方法から除外される。

【化16】

【0067】

本発明による式（１）の化合物を含む組成物
本明細書において既に上記で述べたように、式（１）の化合物は、抗増殖性抗癌活性の他に、それらが癌細胞の遊走を阻害もしくは低減させるという意味での転移抑制活性を有するので、そこで任意のタイプの抗癌組成物中に使用できる有効成分を構成する。

【0068】

本発明は、癌に罹患した患者における転移の発生を低減もしくは予防する目的で、ヒト医学または獣医学使用のための医薬品として使用するための本明細書に規定した式（１）の化合物に関する。

【0069】

詳細には、式（１）の化合物は、癌（転移性もしくは原発性）、すなわち癌細胞を治療することが意図される、ヒト医学または獣医学使用のための、または癌の発生を予防するための（例えば、式（３８）の化合物）、特に癌に罹患した患者における転移の発生を低減もしくは予防するための医薬組成物中の有効成分として有用である。患者が転移癌に罹患している症例では、式（１）の化合物は、特に、追加の転移の発生を低減もしくは予防することに向けられる。

【0070】

本明細書では、患者とは、動物、特に非ヒト動物およびヒトの両方を意味する。用語「癌に罹患した患者」は、宣告された癌（原発性もしくは転移性）と潜在癌、すなわち目には見えず、その存在が例えば転移の検出によって明らかになった癌との両方を意味する。

【0071】

本発明の主題はさらに、ヒト医学または獣医学において使用するための、特に癌に罹患した患者における転移の発生を低減もしくは予防する目的で、本明細書において規定した式（１）の少なくとも１つの化合物を１種以上の医薬上許容される賦形剤および／またはビヒクルと好ましくは組み合わせて含む医薬組成物である。

【0072】

本特許出願では、癌細胞とは、癌を引き起こす細胞の典型的な特徴、例えば無制御増殖、不死性、転移能、急成長および高速増殖ならびに特定の特異的な形態学的特徴を有する細胞を意味する。癌細胞は、腫瘍の形態にあることが多いが、そのような細胞は身体内に単独で存在することがある、または例えば白血球などの非腫瘍形成癌細胞の場合もある。癌細胞は、制限なく、白血病、リンパ腫、黒色腫、神経芽細胞腫、肝臓癌、卵巣癌、脳腫瘍、肺癌、腸癌、乳癌、膵臓癌、前立腺癌、精巣癌、食道癌、子宮癌、子宮頸癌、腎臓癌、胃癌、膀胱癌、脳脊髄癌もしくは結腸直腸癌を含む非常に多くのタイプの癌と関連する可能性がある。本発明の医薬組成物は、上に挙げた癌の少なくとも１つの治療的処置のために使用できる。

【0073】

本発明による化合物が転移抑制治療の状況で使用される場合、患者は「原発」癌に罹患している。この癌は、制限なく、黒色腫、多形性膠芽腫、肺癌、特に非小細胞肺癌、腸癌もしくは結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌、精巣癌、子宮頸癌、腎臓癌、好ましくは多形性膠芽腫、乳癌もしくは非小細胞肺癌であってよい転移可能な癌である。本発明の化合物は特に、多形性膠芽腫に罹患している患者における転移リスクに対応するために適合する。現在では、一般に膠芽腫として公知の多形性膠芽腫（ＧＢＭ）は、全身性病理を発生させる転移能を備える癌の可能性があると認識されている（Ｓｃｈｏｅｎｓｔｅｉｎｅｒ，Ｓ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２０１１，２９，２３，６６８−６７１）。膠芽腫を起源とする癌細胞は、血液脳関門を有効に横断することができ、神経外転移を樹立する場合がある。報告されている神経外転移の部位は、肺、胸膜、肝臓、頸部リンパ節、骨および骨髄である。

【0074】

本発明によるヒト医学または獣医学用医薬組成物は、特にその有効性を増加させるために、式（１）の化合物とは異なる、１つ以上の他の抗癌性（抗増殖性および／または転移抑制性）化合物を含む１種以上の他の有効成分をさらに含むことができる。本発明による医薬組成物中に含めることのできる他の有効成分としては、特に、抗ヒスタミン薬、抗炎症薬、殺菌剤もしくは局所麻酔薬を挙げることができる。

【0075】

本発明の１つの実施形態によると、本発明による組成物は、抗癌性有効成分として式（１）の化合物だけを含有する。

【0076】

本発明の他の実施形態によると、本発明による組成物は、追加の抗癌剤、例えばタキサン（例えば、パクリタキセルもしくはドセタキセル）、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンクリスチン、ブレオマイシン、テモゾロミド、５−フルオロウラシルおよび／または血管形成阻害剤（例えば、ベバシズマブ）を含有する。

【0077】

または、もしくは追加して、本発明による組成物は、他の治療的処置と組み合わせて、特に個別に投与される追加の抗癌治療、例えば上記で言及した追加の抗癌剤の１つを使用する、例えば癌細胞の増殖および／または血管形成を標的とする治療と組み合わせて使用することができる。

【0078】

そこで、本発明はさらに、癌を治療するための、同時もしくは別個に使用するため、または経時的に展開される使用のための併用製剤であって、少なくとも１つの（上記の癌の増殖を治療することを意図する）細胞毒性化合物と転移の発生を低減もしくは予防するための本発明による少なくとも１つの式（１）の化合物とを含む併用製剤に関する。

【0079】

本発明による抗癌化合物を含む医薬組成物は、好ましさを考えなければ、固体形（乾燥粒子）または液体形にある。液体形では、水性懸濁液もしくは非水性懸濁液の形態にある、または油中水型もしくは水中油型エマルジョンの形態にある医薬組成物が好ましいと思われる。

【0080】

本発明による医薬組成物中では、より特別には経口、局所、非経口、経鼻、静脈内、経皮（皮膚を通して）、皮下、経直腸、経舌もしくは呼吸器投与のために適合する医薬組成物ならびに特に単純な錠剤もしくは糖衣錠、舌下錠、ゲルカプセル、ロゼンジ剤、坐剤、クリーム剤、軟膏、皮膚用ゲルおよび飲用もしくは注射用バイアルを挙げることができる。

【0081】

用量は、患者の性別、年齢および体重にしたがって、投与経路にしたがって、および癌のタイプ、癌の進行状態、特にその患者において転移が検出されているかどうかにしたがって変動する。用量はさらに、併用される抗癌治療のタイプによって変動することがある。

【0082】

一般に、本発明において規定した式（１）の化合物は、１回以上の用量摂取において、２４時間当たり好ましくは０．００１ｍｇ／ｋｇ（患者または動物の体重）〜１ｇ／ｋｇ（患者または動物の体重）の範囲内の量で使用される。好ましくは、上記の量は、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ、およびいっそうより好ましくは少なくとも０．０５ｍｇ／ｋｇと等価である。好ましくは、上記の量は、５００ｍｇ／ｋｇ以下、およびいっそうより好ましくは１００ｍｇ／ｋｇ以下である。

【0083】

経口投与のためには、本発明による医薬組成物は、錠剤、ゲルカプセル、ウエハーカプセル、糖衣錠、シロップ剤、懸濁剤、液剤、散剤、顆粒剤、エマルジョン剤、マイクロスフェアもしくはナノスフェアの懸濁剤、様々なポリマーをベースとする脂質ベシクルもしくはベシクルの懸濁剤の形態にあってよい。

【0084】

経口投与のためには、本発明による医薬組成物は、式（１）の少なくとも１つの化合物を例えば微結晶セルロース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸二カルシウムもしくはグリシンなどの様々な賦形剤と組み合わせて含む固形組成物から製造できる錠剤の形態にあってよい。例えばデンプン（コーンスターチ、ジャガイモデンプン、タピオカデンプン、その他のデンプン）、アルギン酸またはケイ酸塩などの様々な錠剤崩壊剤が使用されてよい。例えばポリビニルピロリドン、スクロース、ゼラチンまたはアカシアなどの結合剤が使用されてよい。例えばステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムまたはタルクなどの潤滑剤が使用されてよい。粉末の形態にあるそのような固形組成物は、ゼラチンカプセルを製造するために使用することができる。固形組成物のためには、ラクトースまたは高分子量ポリエチレングリコールもまた使用されてよい。

【0085】

経口投与のための液体組成物を製造するために、式（１）の化合物は、例えば水、エタノール、プロピレングリコール、グリセロールなどの希釈液と組み合わせて、様々な甘味料、香味料、着色料、さらに任意選択的に乳化剤もしくは懸濁化剤またはこれらの賦形剤の任意の組み合わせと組み合わせられてよい。

【0086】

非経口投与のためには、本発明による医薬組成物は、潅流用もしくは注射用の液剤もしくは懸濁剤の形態にあってよい。

【0087】

非経口投与のためには、特に油性もしくは水性溶液、または懸濁剤、エマルジョン剤もしくは坐剤を含むインプラントが使用されてよい。例えば、式（１）の化合物は、注射用医薬製剤を調製するために慣習的に使用される、例えば生理的食塩水または５重量％のデキストロースを含有する食塩液などの中に液体ビヒクル中に分散させることができる。

【0088】

腸内投与のためには、徐放性組成物、例えば中性もしくは塩基性媒質と接触すると（腸溶コーティング層）、または水性媒質と接触すると（水中で分解する可溶性ポリマーを含むコーティング層）、式（１）の化合物が様々に分解する、複数のコーティング層によって外部媒質から保護された組成物を使用することができる。

【0089】

本発明の医薬組成物は、非経口、表面もしくは局所投与のため、ならびに予防的および／または治療的に使用することができる。そこで、本発明による抗癌化合物は、例えば液体形もしくは凍結乾燥形で、選択された投与タイプに適合する形態で調製される。

【0090】

本発明による抗癌化合物を含む医薬組成物は、液体もしくは固体、例えば水性の医薬上許容される賦形剤および／またはビヒクルを含有してよい。多数の医薬上許容される賦形剤および／またはビヒクル、例えば、溶媒もしくは希釈剤；適切であればプロピレングリコールもしくはポリエチレングリコール、緩衝水、食塩液、グリシン溶液およびそれらの誘導体との混合液としての水、特に例えばエタノール、Ｎ−メチルピロリドン、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）および／またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）などの溶媒を含む非水溶液、およびさらに生理的条件を複製するために必要な物質、例えば緩衝剤およびｐＨ調整剤、例えばＳｏｌｕｔｏｌ（登録商標）ＨＳ１５、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウムなどの界面活性剤または例えばＣｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（登録商標）などのビヒクルを使用できるが、このリストは限定的ではない。さらに、医薬組成物は、当業者には周知の滅菌技術によって滅菌することができる。式（１）の化合物を溶解させるために少なくとも１種の有機溶媒および少なくとも１種の界面活性剤、好ましくはエタノール、ジメチルアセトアミドおよび少なくとも１種の界面活性剤の混合物を使用するのが好ましい。

【0091】

不活性、非毒性の医薬上許容されるビヒクル、アジュバントもしくは賦形剤としてはさらに、非限定的指針として、溶媒以外の可溶化剤、保存料、湿潤剤、乳化剤、分散剤、結合剤、膨潤剤、錠剤崩壊剤、カプセル封入剤、遅延剤、潤滑剤、吸収剤、懸濁剤、着色剤、香味料、安定剤、増粘剤を挙げることができる。そのような化合物は、例えば、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、セルロース系物質、カカオ脂などである。

【0092】

一般に、本発明による医薬組成物は、上記組成物の総重量に比較して、０．０１重量％〜９９重量％および有益には１重量％〜９０重量％の式（１）の化合物を含む。投与される化合物（１）の１日量は、一般に０．５〜５０ｍｇ／ｋｇおよび好ましくは１〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲に及ぶ。一般に、本発明による医薬組成物は、１重量％〜９９．９９重量％および有益には１０重量％〜９９重量％の医薬上許容される賦形剤および／またはビヒクル（もしくは希釈剤）または医薬上許容される賦形剤および／またはビヒクルの組み合わせを含む。

【0093】

錠剤形にある固形組成物が調製される場合、主要有効成分は、例えばゼラチン、デンプン、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、アラビアガムなどの医薬ビヒクルと混合される。

【0094】

錠剤は、スクロースもしくは他の適切な出発物質でコーティングすることができる、またはそれらが持続性もしくは遅延性活性を有するように、およびそれらが規定量の有効成分を持続的に遊離するように処理することができる。

【0095】

ゲルカプセルのような製剤は、有効成分を希釈剤と混合し、得られた混合物を軟質もしくは硬質ゲルカプセルに注入する工程によって得られる。

【0096】

シロップ剤もしくはエリキシル剤形にある医薬組成物は、有効成分を甘味料、好ましくはノンカロリー甘味料、防腐剤としてのメチルパラベンおよびプロピルパラベンならびにさらに風味を与える物質および適切な着色料と組み合わせて含有することができる。

【0097】

水分散性散剤もしくは顆粒剤は、有効成分を分散剤もしくは湿潤剤もしくは懸濁剤、例えばポリビニルピロリドンと、および同様に甘味料もしくは調味料との混合物として含有することができる。

【0098】

有効成分は、任意選択的に１つ以上の支持体もしくは添加物とともに、マイクロカプセルの形態で処方することもできる。

【0099】

一般に、本発明による医薬組成物を製造するためには、当業者は、有利には欧州薬局方の最新版、例えば２００５年１月に発行された欧州薬局方第５版、または２００７年６月に一般に利用可能な欧州薬局方第６版を参照できる。

【0100】

本発明による医薬組成物を調製するための技術は、当業者であれば、例えば書籍Ｒｅｍｍｉｎｇｓｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍｉｄ．Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，ＵＳＡの中で容易に見いだすことができる。

【0101】

生理的に許容できるビヒクルおよび賦形剤（もしくはアジュバント）は、さらにまた‘‘Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ’’と題する書籍（Ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，１９９４）にも記載されている。

【0102】

本発明による医薬組成物を調剤するためには、当業者であれば、有益にも欧州薬局方または米国薬局方の最新版（米国薬局方、特にＵＳＰ３０−ＮＦ２５版）を参照できる。

【0103】

有益には、上記に規定した医薬組成物は、経口、非経口または静脈内投与のために適合する。

【0104】

本発明による医薬組成物が少なくとも１種の医薬上もしくは生理学上許容される賦形剤を含む場合は、その賦形剤は特に、本組成物の経口投与のために適合する賦形剤または本組成物の非経口投与のために適合する賦形剤である。

【0105】

本発明はさらに、患者における癌の発生を予防もしくは治療するため、および／または癌に罹患した患者における転移の発生を低減もしくは予防するための治療的処置法であって、その間に治療有効量の本明細書に規定した式（１）の化合物または上記の式（１）の化合物を含有する医薬組成物がその患者に投与される方法に関する。

【0106】

本発明による転移抑制治療は、一般に、主治療に補完的もしくは補助的である抗癌治療である。この補助的治療は、一般に、初期治療後に治療補完を促す情報が収集された場合の第二期に適用される。しかし、特定の症例では、この補助的治療は、この補完的治療が有利である適応が最初から公知である場合は、最初に適用されてよい。実施された分析が生体内での顕微的播種の仮説を実証する場合は、転移が発生する前にこの全身化を治療するために、本発明による化合物を使用した化学療法による全身性治療が正当化される。

【0107】

本発明は、他の治療用式、例えばホルモン療法、手術、凍結療法、ハイパーサーミア、放射線療法、追加の化学療法などと併用して実施されてよい。有益にも、本発明による治療は、癌細胞の増殖および／または血管形成を標的とする治療と併用することができる。

【0108】

以下では、本発明をさらに実施例により例示するが、それらによって限定されることはない。

【実施例】

【0109】

ａ）材料
他に特に指示しない限り、ＮＭＲスペクトルは、ＣＤＣｌ_３中で４００．１３ＭＨｚ（^１Ｈ）で作動するＢｒｕｅｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ４００分光計上で記録した。化学シフトは、^１Ｈおよび^１３Ｃについてｐｐｍ／ＴＭＳで表示した；結合定数^ｎＪはＨｚで表示した。スペクトルが一次である場合、または一次であると見なせる場合、信号は文字ｓ（一重項）、ｄ（二重項）、ｔ（三重項）、ｑ（四重項）、ｍ（多重項）およびこれらの文字の組み合わせによって表示した。広帯域信号は、文字ｂが先行するこれらの文字の１つで表示した。

【0110】

高分解能質量スペクトル（ＨＲ ＭＳ）は、Ｊｅｏｌ ＪＭＳ ＤＸ−３００装置上でマトリックスとしてｐ−ニトロベンジルアルコール（ＮＢＡ）を用いるポジティブＦＡＢイオン化モードで記録した。

【0111】

感湿性もしくは酸素感受性化合物は、シュレンク技術を使用して窒素雰囲気下で取り扱った。無水溶媒は、適切な乾燥剤を用いて窒素雰囲気下で蒸留した。フラッシュクロマトグラフィによる生成物の分離は、１５〜４０μｍまたは３０〜７５μｍのシリカゲルのＭｅｒｃｋ製カラム上で実施した。

【0112】

Ｒ．Ｊａｎｖｉｅｒ繁殖センターから供給された、平均体重２５ｍｇ、４〜５週齢の雌ヌードマウスを使用した。これらのマウスは、無菌環境で飼育し、飼料および飲用水を任意に摂取させた。実験は、マウスを１週間かけて新しい環境に順化させた後に開始した。

【0113】

数種の癌細胞系をｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ生物学試験で使用した：
− ＳＮＢ７５は、一次培養由来の、つまり原発性悪性癌腫瘍由来のヒト膠芽腫細胞系である。この細胞系は、ＮＣＩに寄託された一群の５９種の癌細胞系の一部を形成する。Ｗｅｌｃｏｍｅ Ｔｒｕｓｔ Ｓａｎｇｅｒ研究所によって発行されたＣｏｓｍｉｃ寄託番号は９０５９８２である。この細胞系は、Ｍｒ．Ｓｏｕｈｇｈｅｎｇ Ｎｉｎｇ（スタンフォード大学医療センター放射線腫瘍学科のＭ．Ｄ．Ｐｈ．Ｄ）から供給された。この細胞系は、１０％ウシ胎児血清を補給したＨａｍ’ｓ Ｆ−１２およびＤＭＥＭ（１／１）中で培養した。実験は、指数増殖期にある細胞を用いて実施した。
− Ｇｌｉ４（またはＧｌｉ４Ｆ１１）およびＧｌｉ７は、ヒト膠芽腫由来の癌系統細胞の培養（一次培養）である。これらの細胞系は、動物において多能性および腫瘍原性であるＣＤ１３３^＋、ＣＤ１５^＋である。これらの細胞系はＪ．Ｐ．Ｈｕｇｎｏｔによって樹立され（ＩＮＭ ＩＮＳＥＲＭ Ｕ−１０５１ Ｅｑ．４）、Ｇｕｉｃｈｅｔ，Ｐ．Ｏ．ｅｔ ａｌ，Ｇｌｉａ ２０１３，６１（２），２２５−２３９に記載されている。
− Ｃ６は、ラット膠芽腫細胞系である。この細胞系は、寄託番号ＣＣＬ−１０７を付してＡＴＣＣに寄託されている。
− ＭＤＡＭＢ−４３５は、乳房黒色腫由来の黒色腫細胞系である。この細胞系は、ＮＣＩに寄託された一群の５９種の癌細胞系の一部を形成する。この細胞系は、寄託番号ＨＴＢ−１２９を付してＡＴＣＣに寄託されている。この細胞系は、１０％ウシ胎児血清を補給したＨａｍ’ｓ Ｆ−１２およびＤＭＥＭ（１／１）中で培養した。実験は指数増殖期にある細胞を用いて実施した。

【0114】

ｂ）オキサザホスフィナンの性質を備える化合物の調製
ｂ．１）化合物３．４８ａ（４，５−ビス−ベンジルオキシ−６−ベンジルオキシメチル−２−フェニル−２−オキソ−２λ^５−［１，２］オキサホスフィナン−３−オール）
５００ｍｇ（０．９ｍｍｏｌ）の特許出願の国際公開第２００９／００４０９６号パンフレットに記載されたＰ−Ｈ結合を含む式３．４７のジアステレオマーの混合物、１２５ｍｇのテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０．０９ｍｍｏｌ、０．１当量）、５ｍｌの無水トルエン、ヨードベンゼンもしくはブロモベンゼン（０．９ｍｍｏｌ、１当量）および３６５μｌのトリエチルアミン（２．７ｍｍｏｌ、３当量）は、凝縮器を装備した窒素雰囲気下の三つ口フラスコ内へ連続的に導入した。反応媒質は、磁気攪拌装置を用いて４時間にわたり７０℃で維持した。反応媒質をセライトに通してろ過し、そこで得られたろ液を減圧下で蒸発させた。油性残留物はその後、８１／１９のモル比で得られた２つのジアステレオマー３．４８ａおよび３．４８ｂの分離を可能にするために、シリカゲルクロマトグラフィ（１００／０〜５０／５０のＣＨ_２Ｃｌ_２／ＥｔＯＡｃ勾配）によって精製した。ジアステレオ異性体３．４８ａは、総収率６０％で、無色固体の形態で得られた（Ｃ_３２Ｈ_３３Ｏ_６Ｐ、Ｍ＝５４４．５９ｇ／ｍｏｌ）。この化合物を調製するためにより効率的な方法は、刊行物Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１２，５５，２１９６−２２１１に記載されている。

【化17】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００，１３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ３．６８（ｄｄ，１Ｈ，^３Ｊ_Ｈ−Ｈ＝１．９Ｈｚ，^２Ｊ_Ｈ−Ｈ＝１１．１Ｈｚ，^５ＣＨ_２ａ），３．８６−３．９１（ｍ，２Ｈ，^５ＣＨ_２ｂ＋^４ＣＨ），３．９４（ｂｄ，１Ｈ，^２Ｊ_Ｐ−Ｈ＝９．６Ｈｚ，^１ＣＨ），４．１１（ｍ，１Ｈ，^３ＣＨ），４．４４−４．６３（ｍ，４Ｈ，２ＣＨ_２ＯＢｎ），４．８０−４．８４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_２ＯＢｎ），４．８９（ｄｄ，１Ｈ，^３Ｊ_Ｐ−Ｈ＝１１．３Ｈｚ，^３Ｊ_Ｈ−Ｈ＝４．７Ｈｚ，^２ＣＨ），７．１２−７．７４（ｍ，２０Ｈ，ＣＨ_Ａｒ）．
ＨＲＭＳ^＋（ＮＢＡ）：理論質量５４５．２０９３；試験質量５４５．２１０４．

【0115】

ｂ．２）化合物４．２ａ（Ｓ_ＰＲＳＲＲ）−３−ベンゾエート−４−（２，２−ジメチル−［１．３］ジオキソラン−４−イル）−２，２−ジメチル−２−オキソ−２−フェニル−テトラヒドロ−２λ^５−［１．２］オキサホスフィナン）
安息香酸無水物（１３２ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）、ピリジン（２５μＬ、０．３９ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（４．８ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で、無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（３ｍｌ）中の特許出願の国際公開第２００９／００４０９６号パンフレットに記載された化合物３．３ａの溶液（１５０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）に加えた。反応混合液を室温で一晩攪拌した。有機溶液を水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。結合有機相を硫酸ナトリウムの上方に通して乾燥させ、ろ過し、真空下で濃縮した。残留物を最小必要量のＣＨ_２Ｃｌ_２中に溶解させ、ヘキサンから再沈降させた。化合物４．２ａは、無色固体の形態で、総収率７８％（１４９ｍｇ）で得られた。

【化18】

^３１Ｐ ＮＭＲ（１６１．９７ＭＨｚ，ＤＭＳＯｄ_６）：δ＝２５．０２ｐｐｍ．^１ＨＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯｄ_６）：δ＝１．３０（ｓ，３Ｈ），１．３３（ｓ，３Ｈ），１．３８（ｓ，３Ｈ），１．５６（ｓ，３Ｈ），３．８６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ），４．０６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），４．３１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ），４．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），４．８６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ），４．９８（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２４，８，４Ｈｚ），６．００（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４Ｈｚ），７．５３−７．９７（ｍ，１０Ｈ）ｐｐｍ．^１３ＣＮＭＲ（１００．６１ＭＨｚ，ＤＭＳＯｄ_６）：δ＝２４．３９，２５．１６，２５．６２，２６．２８，６５．４８，６７．１６（ｄ，Ｊ＝１０５．３Ｈｚ），７３．４１（ｄ，Ｊ＝８．０５Ｈｚ），７３．４６（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ），７３．９３（ｄ，Ｊ＝８．０５Ｈｚ），７５．７２（ｄ，Ｊ＝８．０５Ｈｚ），１０８．７９，１０９．９２，１２８．２９，１２８．６８（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ），１２９．１８（ｄ，Ｊ＝５１．２Ｈｚ），１３０．７８（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ），１３１．２８（ｄ，Ｊ＝１３４．７Ｈｚ），１３２．７３（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），１３４．０４，１６４．７８ｐｐｍ．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ_２５Ｈ_３０Ｏ_８Ｐ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対して計算：４８９．１６７８；実測値：４８９．１６６９．

【0116】

ｂ．３）５，６−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−Ｎ−ベンジル−Ｄ−マンノシラミンの合成

【化19】

１０ｇの保護Ｄ−マンノース（特許出願の国際公開第２００９／００４０９６号パンフレットに記載された［２，３，５，６］−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−マンノース；３８ｍｍｏｌ）、１００ｍｌのエタノール、１０ｇの硫酸マグネシウムおよび７．５ｍｌの蒸留ベンジルアミン（５７ｍｍｏｌ、１．５当量）を三つ口フラスコ内に配置した。媒質を４８時間、還流させながら撹拌した。媒質をセライトに通してろ過し、そこで得られたろ液を減圧下で蒸発させた。油性残留物は、１００／０〜５０／５０の勾配で、ジクロロメタン／酢酸エチル系を用いるシリカゲルカラム上で直接精製した。生成物は、黄色油の形態で得られた。Ｙｌｄ５８％．
^１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１．１９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３），１．２４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３），１．３０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３），１．３８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３），３．３０（ｄｄ，１Ｈ，^３Ｊ_Ｈ−Ｈ＝３．３Ｈｚ，^３Ｊ_Ｈ−Ｈ＝７．６Ｈｚ，^４ＣＨ），３．６７（ｄｄ，１Ｈ，^３Ｊ_Ｈ−Ｈ＝５．９Ｈｚ，^３Ｊ_Ｈ−Ｈ＝７．２Ｈｚ，^５ＣＨ），３．８１（ｄｄ，１Ｈ，^２Ｊ_Ｈ−Ｈ＝３．８Ｈｚ，^３Ｊ_Ｈ−Ｈ＝２．０Ｈｚ，^２ＣＨ），３．９７（ｍ，２Ｈ，^６ＣＨ_２），４．２９（ｔｄ，１Ｈ，^３Ｊ_Ｈ−Ｈ＝３．３Ｈｚ，^３ＣＨ），４．４８（ｄｄｄ，２Ｈ，^２Ｊ_Ｈ−Ｈ＝４１．８Ｈｚ，^３Ｊ_Ｈ−Ｈ＝６．３Ｈｚ，^２Ｊ_Ｈ−Ｈ＝３．５Ｈｚ，^７ＣＨ_２），４．６６（ｄｄ，１Ｈ，^３Ｊ_Ｈ−Ｈ＝５．１Ｈｚ，^３Ｊ_Ｈ−Ｈ＝３．６Ｈｚ，^１ＣＨ），４．８１（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．２２−７．４７（ｍ，５Ｈ，ＣＨ_Ａｒ）．

【0117】

（Ｒ_ＰＳＳＲＲ）−４−（２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソラン−４−イル）−２，２−ジメチル−２−オキソ−２−フェニル−テトラヒドロ−６λ^＊５^＊−［１，３］ジオキソロ［４，５−ｄ］［１，２］オキサホスフィナン−３−アミノベンジルの合成

【化20】

先行段落で得られた１ｇの化合物（３ｍｍｏｌ）、１０ｍＬのＴＨＦ、０．３５ｍＬのメチルフェニルホスフィネート（３ｍｍｏｌ、１当量）およびｔｅｒｔ−ブトキシドカリウム（７０ｍｇ、０．２当量）をあらかじめ脱酸素化したシュレンク管内に窒素雰囲気下で配置した。そこで媒質を１５時間、室温で撹拌した。次に１５ｍＬの０．１Ｎ塩酸を反応媒質に加え、次に１５ｍＬの飽和塩化ナトリウム水溶液および５０ｍＬのクロロホルムを加えた。水相は５０ｍＬのクロロホルムを用いて２回抽出した。有機相を結合し、硫酸マグネシウムの上方に通して乾燥させ、減圧下で蒸発させた。このようにして得られた油性残留物は、次にジエチルエーテルを用いるシリカゲルカラム上で精製した。７３％収率．
^３１Ｐ ＮＭＲ（１６１．９７ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ３８．３１．^１ＨＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１．３５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３），１．３７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３），１．４０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３），１．４５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３），３．３５（ｄｄ，１Ｈ，^３Ｊ_Ｈ−Ｈ＝４．３Ｈｚ，^２Ｊ_Ｐ−Ｈ＝７．６Ｈｚ，^１ＣＨ），３．９４（ｂｓ，２Ｈ，^７ＣＨ_２），４．１４（ｍ，２Ｈ，^６ＣＨ_２），４．４３（ｍ，１Ｈ，^３ＣＨ），４．４９（ｑｄ，１Ｈ，^３Ｊ_Ｈ−Ｈ＝１．８Ｈｚ，^３Ｊ_Ｈ−Ｈ＝７．６Ｈｚ，^４ＣＨ），４．５８（ｍ，１Ｈ，^５ＣＨ），４．６９（ｄｄｄ，１Ｈ，^３Ｊ_Ｐ−Ｈ＝２１．２Ｈｚ，^３Ｊ_Ｈ−Ｈ＝４．３Ｈｚ，^３Ｊ_Ｈ−Ｈ＝６．６Ｈｚ，^２ＣＨ），７．２３−７．９７（ｍ，５Ｈ，ＣＨ_Ａｒ）．^１３ＣＮＭＲ（１００．６１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ２４．６６（１ｓ，１Ｃ，ＣＨ_３），２５．２６（１ｓ，１Ｃ，ＣＨ_３），２６．３１（１ｓ，１Ｃ，ＣＨ_３），２７．０１（１ｓ，１Ｃ，ＣＨ_３），５２．９７（ｄ，１Ｃ，^１Ｊ_Ｐ−Ｃ＝８７．３Ｈｚ，^１ＣＨ），５３．０５（ｓ，１Ｃ，^７ＣＨ２），６６．８１（ｓ，１Ｃ，^６ＣＨ_２），７２．５６（ｄ，１Ｃ，^２Ｊ_Ｐ−Ｃ＝３．６Ｈｚ，^２ＣＨ），７３．７０（ｄ，１Ｃ，^３Ｊ_Ｐ−Ｃ＝５．１Ｈｚ，^５ＣＨ），７３．８１（ｄ，１Ｃ，^３Ｊ_Ｐ−Ｃ＝８．７Ｈｚ，^３ＣＨ），７５．４７（ｄ，１Ｃ，^２Ｊ_Ｐ−Ｃ＝１．５Ｈｚ，^４ＣＨ），１０９．１０（ｓ，１Ｃ，Ｃｑ），１１０．０１（ｓ，１Ｃ，Ｃｑ），１２７．２７（ｓ，２Ｃ，ＣＨ_ＡＮＩｍ），１２８．１４（ｓ，２Ｃ，ＣＨ_ＡＮＩｏ），１２８．７９（ｓ，１Ｃ，ＣＨ_Ａｒｍ），１２８．３０（ｓ，１Ｃ，ＣＨ_Ａｒｍ），１２９．５７（ｄ，１Ｃ，Ｊ_Ｐ−Ｃ＝１３８．９Ｈｚ，Ｃｑ_Ａｒ），１２９．６０（ｓ，１Ｃ，ＣＨ_ＡＮＩｐ），１３１．８２（ｓ，１Ｃ，ＣＨ_Ａｒｏ），１３１．９７（ｓ，１Ｃ，ＣＨ_Ａｒｏ），１３２．８７（ｓ，１Ｃ，ＣＨ_Ａｒｐ），１３８．９４（ｄ，１Ｃ，^３Ｊ_Ｐ−Ｃ＝１７．４Ｈｚ，Ｃｑ_Ａｒ）．ＩＲ（ＫＢｒペレット）：３３５１ｆｆ（νＮＨ），２９８０ｆｆ，２８９４ｆｆ（νＣＨ_Ａｌｋ），１４９１ｆｆ，１４３９ｆｆ，１３７０ｆ，１２６５ｆ，１２０５ＦＦ，１１６７ｆ，１１２８ｍ（νＣ−Ｏ−Ｃ），１０５９ｆ（νＰ＝Ｏ），９６２ｍ（νＰ−Ｏ−Ｃ），９２５ｍ（δＣＨ_Ａｒ），８９１ｍ，８１７ｆ，７３３Ｆ，７１３ｆ，６９３Ｆ．ＭＳＦＡＢ＋（ＮＢＡ）：ｍ／ｚ（％）４７５［ＭＨ＋Ｈ^＋］（９０％）；４７４［Ｍ＋Ｈ^＋］（５０％）．ＨＲＭＳ^＋（ＮＢＡ）：理論質量４７４．２０４６；試験質量４７４．２０５８．

【0118】

（Ｒ_ＰＳＳＲＲ）−（２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソラン−４−イル）−２，２−ジメチル−２−オキソ−２−フェニル−テトラヒドロ−６λ^＊５^＊−［１，３］ジオキソロ［４，５−ｄ］［１，２］オキサホスフィナン−３−アミノ５．５ｄの合成

【化21】

１ｇのホスフィノ糖（０．００２ｍｏｌ）、１０ｍＬのエタノールおよび１ｇの木炭上のパラジウムをあらかじめ脱酸素化したシュレンク管内に窒素雰囲気下で配置した。そこで媒質を室温の水素雰囲気下で２４時間撹拌した。反応媒質を次にセライトに通してろ過してパラジウムを除去した。得られたろ液を減圧下で蒸発させると、わずかに着色された油が得られた。この油をシリカゲルカラム上で精製したが、エタノールを用いて溶出した場合にのみ予想生成物が発生した。８７％収率．
^３１Ｐ ＮＭＲ（１６１．９７ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ３７．４６．^１ＨＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１．３８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３），１．４１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３），１．４４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３），１．５０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３），１．８６（ｂｓ，２Ｈ，ＮＨ_２），３．４９（ｄｄ，１Ｈ，^２Ｊ_Ｐ−Ｈ＝５．２Ｈｚ，^３Ｊ_Ｈ−Ｈ＝６．４Ｈｚ，^１ＣＨ），４．１１（ｍ，２Ｈ，^６ＣＨ_２），４．３９−４．５８（ｍ，４Ｈ，^３ＣＨ＋^５ＣＨ＋^２ＣＨ＋^４ＣＨ），７．３９−７．８７（ｍ，５Ｈ，ＣＨ_Ａｒ）．^１３ＣＮＭＲ（１００．６１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ２５．０４（ｓ，１Ｃ，ＣＨ_３），２５．２７（ｓ，１Ｃ，ＣＨ_３），２６．９３（ｓ，１Ｃ，ＣＨ_３），２６．９５（ｓ，１Ｃ，ＣＨ_３），４８．７８（ｄ，１Ｃ，^１Ｊ_Ｐ−Ｃ＝９１．６Ｈｚ，^１ＣＨ），６６．７８（ｓ，１Ｃ，^６ＣＨ_２），７２．８５（ｄ，１Ｃ，^２Ｊ_Ｐ−Ｃ＝３Ｈｚ，^２ＣＨ），７３．２７（ｄ，１Ｃ，^２Ｊ_Ｐ−Ｃ＝５．１Ｈｚ，^４ＣＨ），７３．９７（ｄ，１Ｃ，^３Ｊ_Ｐ−Ｃ＝９．５Ｈｚ，^３ＣＨ），７８．３３（ｓ，１Ｃ，^５ＣＨ），１０９．２３（ｄ，１Ｃ，Ｃｑ），１０９．９６（ｄ，１Ｃ，Ｃｑ），１２８．７１（ｄ，１Ｃ，^２Ｊ_Ｐ−Ｃ＝１３８Ｈｚ，Ｃｑ_Ａｒ），１２８．４１（ｓ，１Ｃ，ＣＨ_Ａｒ），１２８．５２（ｓ，１Ｃ，ＣＨ_Ａｒ），１３１．９２（ｓ，１Ｃ，ＣＨ_Ａｒ），１３２．０２（ｓ，１Ｃ，ＣＨ_Ａｒ），１３３．０２（ｓ，１Ｃ，ＣＨ_Ａｒｐ）．ＩＲ（ＫＢｒペレット）：３２８７ｆ（νＯＨ），２９８７ｆｆ，２９３７ｆｆ（νＣＨ_Ａｌｋ），１５９３ｆｆ（νＮＨ），１４３９ｆｆ，１３７２ｆ，１２０７ＦＦ（νＰ＝Ｏ），１１５９ｍ（νＣ−Ｏ−Ｃ），１１２４Ｆ（νＣ−Ｏ），１０６０ＦＦ，９５８Ｆ（νＰ−Ｏ−Ｃ），９２０ｆ，８９０ｍ，８３６ｍ，７９８ｆ，７２７Ｆ，６９４Ｆ．ＭＳＦＡＢ＋（ＮＢＡ）：ｍ／ｚ（％）７６７［２Ｍ＋Ｈ^＋］（１０％），３８４［Ｍ＋Ｈ^＋］（９０％）．ＨＲＭＳ^＋（ＮＢＡ）：理論質量３８４．１５７６；試験質量３８４．１５６７．

【0119】

化合物５．６ｄ（Ｒ_ＰＳＳＲＲ）−３−アセトアミド−４−（２．２−ジメチル−［１．３］ジオキソラン−４−イル）−２．２−ジメチル−２−オキソ−２−フェニルテトラヒドロ−２λ^５−［１．２］オキサホスフィナン）の合成
酢酸無水物（７２μＬ、０．７６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（６０μＬ、０．４２ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（５ｍＬ）中の以前に得られた化合物５．５ｄの溶液（１４５ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）に窒素雰囲気下で加えた。反応混合液を室温で２時間攪拌した。有機溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。結合有機相を硫酸ナトリウムの上方に通して乾燥させ、ろ過し、真空下で濃縮した。次に残留物をシリカゲルクロマトグラフィ（５０／５０／０〜０／９５／５のヘプタン／ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ勾配）上で精製した。得られた無色固体を最小必要量のジエチルエーテル中に溶解させ、ヘキサンから再沈降させた。化合物５．６ｄは、１２％の総収率で得られた（２０ｍｇ）。

【化22】

^３１Ｐ ＮＭＲ（１６１．９７ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝３７．０２ｐｐｍ．^１ＨＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１．３１（ｓ，３Ｈ），１．３４（ｓ，３Ｈ），１．３７（ｓ，３Ｈ），１．５３（ｓ，３Ｈ），１．９１（ｓ，３Ｈ），４．０３（ｄｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝４．５，５．５，９Ｈｚ），４．３６−４．４８（ｍ，３Ｈ），４．６０−４．７１（ｍ，２Ｈ，），６．７４（ｂｓ，１Ｈ），７．４２−７．８８（ｍ，５Ｈ）ｐｐｍ．^１３ＣＮＭＲ（１００．６１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝２５．５９，２６．４１，２６．８５，２７．５１，６６．６１，６８．０１，６８．９７，７４．７２，７５．０９，７５．１７，７６．８６，７６．９３，１０９．８８，１１１．０４，１２９．７０，１３０．０３，１３０．５４，１３１．９２，１３３．８７，１３５．５０，１６５．９８．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ_２０Ｈ_３０ＮＯ_７Ｐ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対しての理論値：４２６．１６８２；試験質量４２６．１６８６．

【0120】

ｃ）本発明による式（１）の化合物の調製物
式３．４８ａおよび４．２ａの化合物は水中、数多くの水溶性溶媒中で不溶性であり、シクロデキストリン中では錯体形成不能である。下記の２種の調製物は、化合物３．４８ａおよび４．２ａに特に適合するので、約２０〜１００ｍｇ／ｋｇの濃度で静脈内投与によるｉｎ ｖｉｖｏ投与を可能にする。

【0121】

調製物１：化合物３．４８ａおよび４．２ａをＥｔＯＨ／ＭＤＡ混合液中に溶解させ、その後に界面活性剤Ｓｏｌｕｔｏｌ（登録商標）ＨＳ１５（ＢＡＳＦ社によって販売されたポリエチレングリコール−６６０−ヒドロキシステアレート）を即時添加して３７°Ｃに加熱してろ過すると（０．２２μｍ）、ＥｔＯＨ／ＭＤＡ／Ｓｏｌｕｔｏｌ（登録商標）ＨＳ１５混合液（容積で１／３／６）が得られたので、１０容積％の０．９％ ＮａＣｌ溶液を加えて希釈した。使用した０．９％ ＮａＣｌ溶液は、気密シールを備える無菌ガラス瓶に入れられた注射液（無菌および非発熱性）である。

【0122】

調製物２：ＥｔＯＨ／ＭＤＡ／Ｓｏｌｕｔｏｌ（登録商標）ＨＳ１５混合液（容積で１／３／６）を得るために調製物１と同一方法で調製し、０．９％ ＮａＣｌを用いて４倍に希釈した（化合物３．４８ａまたは４．２ａの調製物の調製中に５ｍｇ／ｋｇを使用した以外）。

【0123】

ｄ）急性および慢性ｉｎ ｖｉｖｏ毒性
化合物３．４８ａおよび４．２ａの急性毒性試験は、５０、２５、１０、５および１ｍｇ／ｋｇの濃度範囲について健常マウスを対象に実施した。５０ｍｇ／ｋｇの最高用量についてさえ、死亡は観察されなかった。

【0124】

慢性毒性試験は、４週間にわたり注射３回／週のペースで２０、５および１ｍｇ／ｋｇの注射を対象に実施した。ｍｇ／ｋｇの最高用量についてさえ、死亡は観察されなかった。

【0125】

ｅ）ｉｎ ｖｉｖｏ転移抑制活性
ＳＮＢ７５皮下モデル（図１）
１００μＬの無菌ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩液、Ｆｉｓｈｅｒ製）中の５×１０^６個のＳＮＢ７５細胞の懸濁液を各マウスに注射した（麻酔を伴わない皮下投与）。マウスが０．１３〜０．０３３ｍｍ^３の容積の腫瘍を提示し時点に、各群が同等数の大、中および小腫瘍を含有するように群を形成した。各群マウス７匹を含む５群を用いて試験手順を実施した。以下に記載する５種の調製物中１種を用いて５群のマウスを処置した：
Ａ群：１００μＬのＮａＣｌの注射による処置（コントロール、Ｎｏ．１）。
Ｂ群：１００〜１５０μＬの量の調製物２を用いて、マウスの体重にしたがって１０ｍｇ／ｋｇの割合で化合物３．４８ａを用いた処置。
Ｃ群：１００〜１５０μＬの量の調製物２を用いて、マウスの体重にしたがって５ｍｇ／ｋｇの割合で化合物３．４８ａを用いた処置。
Ｄ群：１００〜１５０μＬの量を用いて、マウスの体重にしたがって２０ｍｇ／ｋｇの割合でテモゾロミドを用いた処置。テモゾロミドは、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｐｌｏｕｇｈ研究所によってＴｅｍｏｄａｌの名称で販売されている比較抗癌有効成分である。テモゾロミドは、多形性膠芽腫を治療するために適応である。４０ｍｇ／ｋｇの用量は実験期間の終了前にマウス死亡を生じさせるので、用量を２０ｍｇ／ｋｇに限定した。
Ｅ群：化合物３．４８ａを含有していない調製物２の、マウスの体重にしたがって１００〜１５０μＬの注射による処置（コントロール、Ｎｏ．２）。

【0126】

各バッチは、１００〜１５０μＬの溶液の尾静脈内への静脈内注射によって処置した（精密シリンジおよびＧ２５Ｘ１超微細針、ＶＷＲ）。４週間にわたり週３回の注射を実施した。マウスの体重は各注射時に計量した。腫瘍のサイズは、４週間にわたり週２回測定した。マウスを４週間後に犠死させ、腫瘍および器官（肝臓、腎臓、脾臓、脳、腸、心臓、筋肉）を切除した。組織学的分析をこれらの器官に対して実施した。

【0127】

図１に示したように、コントロール群（Ａ群およびＥ群）のマウスに比較して、４週間後には、化合物３．４８ａ（Ｂ群およびＣ群）を用いて処置したマウスでは原発腫瘍の増殖の極めて大きな減少が観察された。Ｂ群およびＣ群については、マウスは１匹も死亡せず、体重減少は観察されなかった。Ｄ群に関しては、マウス７匹中３匹が第３回注射後に死亡し、残り４匹のマウスについては、腫瘍の極めて大きな退行が見られたにもかかわらず、実質的な体重減少が観察された。

【0128】

ヒト膠芽腫を起源とするＳＮＢ７５細胞系は、皮下移植後のヌードマウスにおいて転移できる。詳細には、コントロール群（Ａ群およびＥ群）の全マウスが肝臓および腸内で転移を発生した。化合物３．４８ａを用いて処置したマウス（Ｂ群およびＣ群）は、１匹も転移を発生しなかった。図１Ａは、ＳＮＢ７５細胞の皮下移植８週間後の、Ａ群のマウス肝臓内での転移の存在およびＢ群のマウス肝臓内での転移の非存在を示している。

【0129】

Ｇｌｉ４頭蓋内モデル
２×１０^５個のＧｌｉ４細胞を１群のマウスに注射した（右側線条体注射、注射座標：プレグマ ０ Ｌ−Ｌ：Ｌ：−１．５ｍｍ Ｐ：−３．５〜２．５）。マウスは、直ちに週３回、化合物３．４８ａを１０ｍｇ／ｋｇで用いて（調製物１、Ｂ群）または同一処置手順にしたがって１００μＬのＮａＣｌを使用して（Ａ群）４週間にわたり処置し、１０週間後に犠死させた。

【0130】

コントロール群のマウス（Ａ群）では、脳梁に沿って遊走して他方の半球内へ通過した分散性のＧｌｉ４細胞が観察された。Ｇｌｉ４細胞は、抗マウス二次抗体（Ａｌｅｘａ ５９４）とともに明らかになった抗ヒト核（抗−ＨｕＮｕ）抗体により同定された。この遊走は、ヒト多形性膠芽腫において観察されるような白質に沿った遊走（白質に沿った繊維束内増殖としての分散）を反映している。

【0131】

１０ｍｇ／ｋｇの割合で化合物３．４８ａを用いて処置したマウス群（Ｂ群）では、４週間の処置は細胞遊走の阻害を可能にした。処置の中止後、最後の６週間中に細胞の増殖および遊走の再開が観察された。

【0132】

ＭＤＡＭＢ−４３５皮下モデル（図４〜６）
１００μＬの無菌ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩液、Ｆｉｓｈｅｒ製）中の１×１０^６個のＭＤＡＭＢ−４３５細胞の懸濁液を各マウスに注射した（左後四半身の乳腺中に麻酔を伴わない皮下投与）。マウス３匹の予備コントロール群が最初の転移（肝臓、腸、卵巣）を提示した時点に、マウス８匹の４群を用いて試験手順を実施した。以下に記載する５種の調製物中１種を用いて５群のマウスを処置した：
Ａ群：１００μＬのＮａＣｌの注射による処置（コントロール、Ｎｏ．１）。
Ｂ群：化合物４．２ａを含有していない１００〜１５０μＬの調製物２を用いて、マウスの体重にしたがった注射による処置（コントロール、Ｎｏ．２）。
Ｃ群：１００〜１５０μＬの量の調製物２を用いて、マウスの体重にしたがって、１０ｍｇ／ｋｇの割合で化合物４．２ａを用いた処置。
Ｄ群：１００〜１５０μＬの量の調製物２を用いて、マウスの体重にしたがって、５ｍｇ／ｋｇの割合で化合物４．２ａを用いた処置。

【0133】

各バッチは、１００〜１５０μｌの溶液の尾静脈内への静脈内注射によって処置した（精密シリンジおよびＧ２５Ｘ１超微細針、ＶＷＲ）。４週間にわたり週３回の注射を実施した。各注射時にマウスの体重を計量した。マウスを４週間後に犠死させ、腫瘍および器官（肝臓、腎臓、脾臓、脳、腸、心臓、筋肉）を切除した。組織学的分析をこれらの器官に対して実施した。

【0134】

ヒト黒色腫を起源とするＭＤＡＭＢ−４３５細胞系は、乳腺内への皮下移植後のヌードマウスにおいて転移できる。詳細には、コントロール群（Ａ群およびＢ群）の全マウスが肝臓および腸内で転移を発生した。化合物４．２ａを用いて処置したマウス（Ｃ群およびＤ群）は、転移発生の低減（小規模転移）および転移数の大きな減少を経験した。

【0135】

図４は、コントロール群マウス（Ａ群およびＢ群）における卵巣での転移の存在、および化合物４．２ａを用いて処置したマウス（Ｃ群およびＤ群）での転移の非存在を示している。

【0136】

図５は、処置条件の関数としての、マウス１匹当たりの平均転移数を示している。この図は、化合物４．２ａを用いて処置したマウス（Ｃ群およびＤ群）が１匹も３つ以上の転移を発生しなかったことを示している。他方、コントロール群マウス（Ａ群およびＢ群）は、大多数が３つ以上の転移を発生した。

【0137】

図６は、処置条件の関数としての、これらの続発性腫瘍の質量分布を示している。この図は、化合物４．２ａを用いた処置が転移の発生を低減させたことを示している。

【0138】

ｆ）ｉｎ ｖｉｔｒｏ抗増殖活性
細胞系ＭＤＡＭＢ−４３５およびＡ４３１は、９６ウエルプレート内に１ウエル当たり細胞３，０００個の密度で播種した。２４時間後、１００％ ＤＭＳＯ中に再懸濁させた化合物４．２ａおよび５．６ｄは、０．３％の最終一定量のＤＭＳＯに対して０〜０．００１〜０．０１０〜０．１〜１〜１０〜５０μＭの濃度で加えた。培養をさらに７２時間保持し、次にＭＴＴ比色試験を実施した。ＰＢＳ中で５ｍｇ／ｍＬのＭＴＴの１００μＬ溶液を培養媒質に加え、これを３時間にわたり培養させた。培養媒質を取り除き、細胞は、イソプロパノール中の１００μＬの４ｍＭ ＨＣｌ溶媒、０．１％ Ｎｏｎｄｅｔ Ｐ−４０（ＮＰ４０）を加えることによって溶解させた。黄色テトラゾリウムＭＴＴ塩（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）は、活性生細胞のミトコンドリアコハク酸デヒドロゲナーゼによって還元させられると、青紫色のホルマザン生成物を形成する。この媒質はその後、黄色から青紫色に変化する。５９０ｎｍでのこの着色強度は試験中に存在する生細胞数に比例し、これらの細胞の代謝活性の指標を生じる。

【0139】

表１は、腸癌（ＣａＣｏ２）、皮膚癌（Ａ４３１、ＭＤＡＭＢ−４３５、Ｂ１６Ｆ１０）、乳癌（ＭＤＡＭＢ−４３１）、腸癌（ＨｕＨ７）、前立腺癌（ＤＵ１４５）および脳腫瘍（ＳＮＢ７５、Ｇｌｉ４、Ｇｌｉ７）由来の細胞系上での化合物４．２ａおよび５．６ｄについての増殖５０％阻害率（ＩＣ_５０）に対する濃度値を示している。

【0140】

【表1】

【0141】

表１は、化合物４．２ａおよび５．６ｄが様々なヒトおよびラットの組織の種々の癌細胞系に抗増殖活性を有することを示している。詳細には、化合物４．２ａは、ヒト黒色腫細胞系ＭＤＡＭＢ−４３５の細胞増殖を０．６６μＭのＩＣ_５０で阻害し、化合物５．６ｄはＡ４３１細胞系（ヒト扁平上皮癌）の増殖を１００ｎＭのＩＣ_５０で阻害する。

【0142】

ｇ）ｉｎ ｖｉｔｒｏ抗遊走活性
化合物３．４８ａ、４．２ａおよび５．６ｄが癌細胞（一方ではヒト膠芽腫系ＳＮＢ７５またはヒト膠芽腫Ｇｌｉ４Ｆ１の一次培養ならびに他方ではＭＤＡＭＢ ４３５およびＡ４３１）の遊走に及ぼす作用は、ボイデンチャンバ内での標準遊走試験（２４時間にわたる細胞の処置）を実施することによって決定した。

【0143】

この試験のために、化合物をｉｎ ｖｉｔｒｏで溶解させ、０．３％のＤＭＳＯ中での培養に使用した。インサートの内部は、試験した細胞外マトリックスタンパク質（ラミニン−１、ビトロネクチンもしくはフィブロネクチン）で被覆した。様々な濃度で前処理した、および未処理（コントロール）の細胞は、０．１％のＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）を含有する媒質中の細胞５０，０００個／５００μＬ／インサートの割合で上記タンパク質を用いて被覆したインサート内に配置した。

【0144】

次に１０％ウシ胎児血清を含有する５００μＬの媒質を、多孔質膜を越える化学走性勾配を形成できるように、Ｃｏｍｐａｎｉｏｎプレートの各ウエル内に配置した。３７℃のインキュベータ内での２４時間の遊走後、上清を取り出し、インサートの各面をＰＢＳですすぎ洗いした。細胞数は顕微鏡を用いて計数した（Ｚｅｉｓｓ Ａｘｉｏｐｈｏｔ、倍率２００倍）。これは、未処置細胞に比較した遊走率（％）を生じる。

【0145】

下記の表２は、化合物３．４８ａについて、ボイデンチャンバ内での様々な細胞外マトリックスタンパク質支持体上でのヒトＧＢＭ細胞系（ＳＮＢ７５）、ＧＢＭ幹細胞系（Ｇｌｉ４、Ｇｌｉ７）および乳癌細胞系ＭＤＡＭＢ２３１の遊走についての阻害定数（Ｋｉ）の数値を表示している。下記の表３および４は、化合物４．２ａおよび５．６ｄについて、様々な細胞外マトリックスタンパク質支持体上でのボイデンチャンバ内での黒色腫細胞系（ＭＤＡＭＢ−４３５）または扁平上皮癌細胞系（Ａ４３１）の遊走についての阻害定数（Ｋｉ）の数値を表示している。阻害作用は、使用される細胞系および幹細胞だけではなく、使用される細胞外マトリックスタンパク質支持体にも左右される。

【0146】

【表2】

【0147】

【表3】

【0148】

【表4】

【0149】

図２および３ならびに表２は、化合物３．４８ａが、使用したマトリックス（ビトロネクチン、フィブロネクチンもしくはラミニン−１）に依存する用量作用で、様々な細胞外マトリックス物質上でのＧＢＭ細胞系であるＳＮＢ７５およびＣ６ならびにＧＢＭ幹細胞（Ｇｌｉ４およびＧｌｉ７）の細胞遊走を阻害することを示している。癌細胞における遊走の５０％減少は、詳細には化合物３．４８ａの１〜１００ｎＭという低い濃度についてフィブロネクチンもしくはビトロネクチン上で得られる（ＳＮＢ７５細胞系）。

【0150】

表３および４は、化合物４．２ａおよび５．６ｄが、使用したマトリックス（ビトロネクチン、フィブロネクチンもしくはラミニン−１）に依存する用量作用で、細胞系ＭＤＡＭＢ−４３５およびＡ４３１の細胞遊走を各々阻害することを示している。癌細胞における遊走の５０％減少は、詳細には化合物４．２ａおよび５．６ｄの１０〜１００ｎＭという濃度についてフィブロネクチンもしくはビトロネクチン上で得られる。

【0151】

本発明による化合物（１）は、転移抑制性であると想定されている市販の化合物の作用様式とは異なる作用様式を有する。特定の理論によって縛られることを望むものではないが、本発明者らは、化合物（１）が、α−１，６−結合マンノース基上のβ−１，６位にあるＮ−アセチルグルコサミンの添加を触媒するグリコシルトランスフェラーゼを阻害することにより細胞糖化を標的とすると考えている。これらの修飾の結果は、例えばフィブロネクチンもしくはビトロネクチンなどの様々な細胞外マトリックスタンパク質上でのこれらの細胞の遊走能の阻害である。

【図1】

【図1A】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】