特許 6594985 多重の食物抗原に対するＩｇＧおよびＩｇＡ抗体、およびＣ１Ｑ―食物タンパク質免疫複合体の同時の特性評価

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6594985

(24)【登録日】2019年10月4日

(45)【発行日】2019年10月23日

(54)【発明の名称】多重の食物抗原に対するＩｇＧおよびＩｇＡ抗体、およびＣ１Ｑ―食物タンパク質免疫複合体の同時の特性評価

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/53 20060101AFI20191010BHJP

   G01N 33/543 20060101ALI20191010BHJP

【ＦＩ】

   G01N33/53 Q

   G01N33/543 501A

【請求項の数】22

【全頁数】35

(21)【出願番号】特願2017-540642(P2017-540642)

(86)(22)【出願日】2015年1月30日

(65)【公表番号】特表2018-504602(P2018-504602A)

(43)【公表日】2018年2月15日

(86)【国際出願番号】US2015013770

(87)【国際公開番号】WO2016122597

(87)【国際公開日】20160804

【審査請求日】2018年1月29日

(31)【優先権主張番号】14/609,865

(32)【優先日】2015年1月30日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】515012789

【氏名又は名称】サイレックス ラボラトリーズ，エルエルシー

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】ヴォジュダニ，アリスト

【審査官】 海野 佳子

(56)【参考文献】

【文献】 米国特許出願公開第２００５／０２５５５３３（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１０／１１０４５４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 Vojdani Aristo，Detection of IgE, IgG, IgA and IgM antibodies against raw and processed food antigens，NUTRITION & METABOLISM，２００９年，Vol.6, No.1，p22

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｇ０１Ｎ ３３／４８−３３／９８

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

食物抗原コ―ティングを含む試験表面を提供すること（ここで食物抗原コ―ティングは、連続的な方法で試験表面にアプライされている第一の食物抗原、第二の食物抗原、および第三の食物抗原を含む）；
試験表面を１つ以上のイムノグロブリンおよび天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体を含む試料の少なくとも一部分と接触させること；
試験表面を抗体混合物と接触させること（ここで抗体混合物は、Ｃ１ｑを対象とする第一の抗体および試料種の１つ以上のイムノグロブリンの少なくとも１つを対象とする第二の抗体を含む）；および
試験表面への試料からのイムノグロブリンの少なくとも１つおよび天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体の両方の結合に特有なシグナルを得ること（ここでバックグラウンドカットオフを上回るシグナル強度は陽性の結果として特性評価される）
を含む、抗体および補体プロファイルを特性評価するための方法。

【請求項2】

イムノグロブリンの少なくとも１つがＩｇＧである、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

イムノグロブリンの少なくとも１つがＩｇＡである、請求項１または請求項２に記載の方法。

【請求項4】

第一の食物抗原、第二の食物抗原、および第三の食物抗原が異なる抽出方法により同じ食物から得られる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

第一の抗体を対象とする抗体を含む第三の抗体と試験表面を接触させることをさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法であって、第三の抗体が検出可能なタグを含む、方法。

【請求項6】

第二の抗体を対象とする抗体を含む第四の抗体と試験表面を接触させることをさらに含む、請求項５に記載の方法であって、第四の抗体が検出可能なタグを含む、方法。

【請求項7】

第一および第二の抗体の両方を対象とする抗体を含む第五の抗体と試験表面を接触させることをさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法であって、第五の抗体が検出可能なタグを含む、方法。

【請求項8】

第一の抗体が第一の検出可能なタグをさらに含みかつ第二の抗体が第二の検出可能なタグをさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

第一の検出可能なタグおよび第二の検出可能なタグが区別できない、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

第一の食物抗原コ―ティングを含む第一の試験表面を提供すること（ここで第一の食物抗原コ―ティングは、連続的な方法で前記第一の試験表面にアプライされている第一の食物抗原、第二の食物抗原、および第三の食物抗原を含む）；
第二の食物抗原コ―ティングを含む第二の試験表面を提供すること（ここで第二の食物抗原コ―ティングは、連続的な方法で第二の試験表面にアプライされている第四の食物抗原、第五の食物抗原、および第六の食物抗原を含む）；
１つ以上のイムノグロブリンおよび１つ以上の天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体を含む試料の第一のおよび第二の部分と第一のおよび第二の試験表面を、それぞれ接触させること；
抗体混合物と第一のおよび第二の試験表面を接触させること（ここで抗体混合物は、Ｃ１ｑを対象とする第一の抗体および試料種のイムノグロブリンの少なくとも１つを対象とする第二の抗体を含む）；
第一の試験表面から、第一の試験表面への試料からのイムノグロブリンの少なくとも１つおよび天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体の少なくとも１つの両方の結合に特有な第一のシグナルを得ること（ここでバックグラウンドカットオフを上回る第一のシグナル強度は第一の試験表面についての陽性の結果として特性評価される）；および
第二の試験表面から、第二の試験表面への試料からのイムノグロブリンの少なくとも１つおよび天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体の少なくとも１つの両方の結合に特有な第二のシグナルを得ること（ここでバックグラウンドカットオフを上回る第二のシグナル強度は第二の試験表面についての陽性の結果として特性評価される）
を含む、抗体および補体プロファイルを特性評価するための方法。

【請求項11】

共通の試験表面；
第一のプロセスにより食物から抽出される第一の食物抗原を含む共通の試験表面上の第一のコ―ティング；
第二のプロセスにより該食物から抽出される第二の食物抗原を含む該共通の試験表面上の第二のコ―ティング；および
第三のプロセスにより該食物から抽出される第三の食物抗原を含む該共通の試験表面上の第三のコ―ティング、
を含む、抗体およびＣ１ｑプロファイルを特性評価するための試験表面であって、
第二のコ―ティングが第一のコ―ティングの適用に続いて該共通の試験表面に適用され、かつ第三のコ―ティングが第二のコ―ティングの適用に続いて該共通の試験表面に適用される、試験表面。

【請求項12】

第一の食物抗原が水溶性タンパク質、アルコ―ル可溶性タンパク質、アルカリ可溶性タンパク質、糖脂質、多糖、および糖タンパク質からなる群から選択される、請求項１１に記載の試験表面。

【請求項13】

第二の食物抗原が水溶性タンパク質、アルコ―ル可溶性タンパク質、アルカリ可溶性タンパク質、糖脂質、多糖、および糖タンパク質からなる群から選択される、請求項１１または１２に記載の試験表面。

【請求項14】

第三の食物抗原が水溶性タンパク質、アルコ―ル可溶性タンパク質、アルカリ可溶性タンパク質、糖脂質、多糖、および糖タンパク質からなる群から選択される、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の試験表面。

【請求項15】

共通の試験表面を提供すること；
第一の食物抗原調製物の第一の食物抗原の少なくとも一部分が共通の試験表面と複合することを可能にするために十分な期間にわたり共通の試験表面と第一の食物抗原調製物を接触させること；
第一の食物抗原調製物との接触に続いて、第二の食物抗原調製物の第二の食物抗原の少なくとも一部分が共通の試験表面と複合することを可能にするために十分な期間にわたり共通の試験表面と第二の食物抗原調製物を接触させること；および
第二の食物抗原調製物との接触に続いて、第三の食物抗原調製物の第三の食物抗原の少なくとも一部分が共通の試験表面と複合することを可能にするために十分な期間にわたり共通の試験表面と第三の食物抗原調製物を接触させること、
を含む、食物感受性を特性評価するための試験表面を製造する方法であって、第一の食物抗原調製物、第二の食物抗原調製物、および第三の食物抗原調製物が同じ食物から調製される、方法。

【請求項16】

第二の食物抗原調製物と共通の試験表面を接触させるより前に第一の食物抗原調製物から非複合物質を除く工程をさらに含む、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

除く工程が界面活性剤を含有する溶液と共通の試験表面を接触させることを含む、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

第三の食物抗原調製物と共通の試験表面を接触させるより前に第二の抗原調製物から非複合物質を除く工程をさらに含む、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

除く工程が界面活性剤を含有する溶液と共通の試験表面を接触させることを含む、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

ブロッキング溶液と共通の試験表面を接触させる工程をさらに含む、請求項１５〜１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

試験プレ―トを含む抗体およびＣ１ｑ結合プロファイルを特性評価するための試験キットであって、試験プレ―トが請求項１１に記載の複数の共通の試験表面を含む、キット。

【請求項22】

複数の共通の試験表面が第一の食物からの抗原を含む第一の試験表面および第二の食物からの抗原を含む第二の試験表面を含む、請求項２１に記載の試験キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明の分野は、食物アレルギ―のため、特に食物抗原に対する遅延型過敏性反応のための、アッセイである。

【背景技術】

【0002】

以下の記載は、本発明を理解するにあたり有用であり得る情報を含む。本明細書中、提供される任意の情報が、先行技術であるかまたは本願にクレ―ムされる発明に関連すること、または具体的に若しくは非明示的に参照される任意の出版物が先行技術であることは、認められない。
神経自己免疫疾患を含む自己免疫障害は、世界人口の７〜１０％に影響を及ぼす。近年、かかる障害は、一般に消費される食物に対する免疫反応性と関連するようになってきている。通常、消化管粘膜免疫系は、食物性タンパク質およびペプチド並びに片利共生的微生物叢に見出される抗原に対する寛容を誘導することにより免疫恒常性を維持し、一方で、同時に、病原体に対する免疫防御を発揮する。しかしながら、体の、「フレンドリ―な」抗原性物質の正常な寛容は、多くの因子により妨害され得る。腸のバリア機能不全および消化管関連バリアの機能停止は、消化されていないタンパク質およびペプチドの循環へのエントリ―を許し得る。これらの環境下で、これらの食物物質の摂取は、さまざまな食物抗原に対するだけでなく体自身の組織に対しても、ＩｇＧおよびＩｇＡ抗体の産生をもたらし得る（食物自己免疫反応性として知られる現象）。これは、多くの一般に消費される食物のアミノ酸配列と神経細胞を含むヒト組織において自然に生じる多くのタンパク質のものとの間の相同性（それはさまざまな程度で存在する）に起因する。これらのさまざまな食物タンパク質と異なる標的組織抗原との間の、この抗原類似性または分子の模倣性の結果として、食物免疫反応性の検出の失敗は、最初に自己免疫反応性の発達をもたらし得、潜在的に自己免疫（例えば神経自己免疫）疾患を引き起こす（Ｖｏｊｄａｎｉ， ２０１４ａ；Ｖｏｊｄａｎｉ， ２０１４ｂ）。結果として、食物免疫反応性は、増加する有病率並びに健康およびクオリティ・オブ・ライフへの悪影響のいずれにも起因して、ますます注目を集めている（Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１４；Ｖｏｊｄａｎｉ ｅｔ ａｌ．， ２０１４ｃ）。

【0003】

本明細書中、同定される全ての出版物は、それぞれ個別の出版物または特許出願が具体的におよび個別に示され参照により組み込まれるのと同程度に、参照により組み込まれる。組み込まれる参考文献における用語の定義または使用が、本明細書中に提供される用語の定義と矛盾するまたは反する場合、本明細書中に提供される用語の定義が適用され、参考文献における用語の定義は適用されない。
免疫反応性のメカニズムは、一般に二段階である：急性反応は、アレルゲン暴露に続いて直ちに生じ、続いて、数時間後に後期反応が生じる。急性反応の間、さまざまな細胞へのＩｇＥおよび／またはＩｇＧの結合、並びにマスト細胞、好中球および好塩基球による、ヒスタミンおよび血小板活性化因子（ＰＡＦ）などのメディエ―タ―の放出に起因して、症状が生じる。後期は、炎症性ＩＬ―４、ＩＬ―９、ＩＬ―３３およびＴＮＦ―αなどのサイトカインの流入、並びに好中球および好酸球などの細胞に関与する（Ｈｏ ｅｔ ａｌ．， ２０１２）。古典的な遅延型食物免疫反応性において、さまざまな食物抗原に対する高レベルのＩｇＧ、ＩｇＭまたはＩｇＡの産生は、免疫複合体の形成およびさまざまな組織部位における免疫複合体の堆積を伴う、抗体へのＣ１ｑの結合をもたらす。症状は、かかる食物抗原に対する初期免疫反応に続いて、数日間またはさらに数週間継続し得る。
ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＭは、食物免疫反応性において、さまざまな役割を果たす（Ｍｉｊａｙｉｍａ ｅｔ ａｌ．， １９９７）。ＩｇＥは、マスト細胞および好塩基球で高く発現される、その高親和性受容体ＦｃεＲＩを介して機能する。ＩｇＧは、高親和性ＦｃｖＲＩおよびＦｃｖＲＩＶ受容体並びに低親和性ＦｃｖＲＩＩＢおよびＦｃｖＲＩＩＩ受容体を含む、いくつかの受容体を有する。これらの受容体のすべては、マスト細胞、好塩基球、好中球、およびマクロファ―ジを含む、アナフィラキシ―に関与するいくつかのタイプの細胞で発現される。

【0004】

５つの異なるパスウェイが、食物免疫反応性に関与する（Ｍａｎｃａｒｄｉ ｅｔ ａｌ．， ２０１３；Ｓｍｉｔ ｅｔ ａｌ， ２０１１；Ｓｔｒａｉｔ ｅｔ ａｌ．， ２００２）：
１．古典的パスウェイ― ＩｇＥおよびその受容体ＦｃεＲＩ、マスト細胞並びにヒスタミンに関与する
２．代替パスウェイ― ＩｇＧ１、ＦｃｖＲＩＩＩ、マクロファ―ジおよびＰＡＦパスウェイにより媒体される
３．ＩｇＧ―好塩基球―ＰＡＦパスウェイ
４．ＦｃｖＲＩＶを介する、ＩｇＧ―好中球―ＰＡＦパスウェイ
５．ＩｇＧ、ＩｇＭまたはＩｇＡ―免疫複合体好中球パスウェイ。
食物性構成要素に対する、これらのすべての反応は、経口寛容の失敗によりもたらされる。

【0005】

上述のとおり、消化管粘膜免疫系は免疫恒常性を正常に維持し、それは有害な病原体に対する効果的で適切な免疫応答を備え付ける一方で消化管において無害であるかまたは有益ですらある分子に対する寛容を維持することからなる（ＬｉｍおよびＲｏｗｌｅｙ， １９８２）。食物抗原に対する応答の欠如とそれに続く全身性免疫応答の下方制御は、経口寛容として特性評価されるものである。経口寛容における失敗は、アレルギ―および自己免疫性などの潜在的に生命を脅かす結果を伴う、摂取される食物に対する免疫反応性をもたらし得る（ＴｓｕｊｉおよびＫｏｓａｋａ， ２００８）。
動作のこれらの異なるメカニズムが摂取された抗原を制御し損なう場合、結果は、最初は溶解性抗原に対する寛容における機能停止であり得、これが食物抗原に対する分泌性および全身性の免疫応答を活性化し得る。免疫排除メカニズムが機能しない個人は、高分子の慢性過剰吸収および、自己抗体およびさらに自己免疫疾患を発達させる傾向を経験し得る（ＭａｕｌおよびＤｉｃｈｍａｎｎ， ２００８）。この理由のため、実際の食物抗原に対するＩｇＧ、ＩｇＭおよびＩｇＡ抗体の誘導および免疫複合体形成並びにバイスタンダ―抗原に対するさらなるクロスプライミングが、臨床的に重要であり得る。ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏの実験的研究のいずれもが、粘膜ＩｇＡ応答によりバランスが保たれていないＩｇＧ抗体が、バイスタンダ―タンパク質の上皮侵入を増強することを実証してきた（ＢｒａｎｄｔｚａｅｇおよびＴｏｌｏ， １９９７）。上皮細胞を介する細菌毒素およびさまざまな食物抗原の移動は、自己免疫を含む、多くの免疫障害をもたらし得る。

【0006】

食物性タンパク質およびペプチドに対する全身性免疫反応のタイプは、抗原性構造（例えば、タンパク質抗原、微粒子抗原、多糖、糖タンパク質、糖脂質または酵素）および個人の遺伝的性質に依存する。例えば、食物性構成要素に対して、ある人物はＩｇＧを産生し得るが、別の人物はＩｇＡまたはＩｇＭ抗体を産生し得る（Ｂａｒｎｅｓ， １９９５）。食物性抗原に対する、かかるＩｇＧ、ＩｇＭおよびＩｇＡ抗体が検出されないままである場合、結果は自己免疫の発達とそれに続く自己免疫疾患であり得る。
結果として、最近数十年で、自己免疫疾患に関与する自己抗原との類似性を共有する、食物抗原中の標的ペプチドの同定において、著しい進歩が形成されてきた（Ｂａｂｏｏｎｉａｎ ｅｔ ａｌ．， １９８９；Ｂａｂｏｏｎｉａｎ ｅｔ ａｌ．， １９９１；Ｌｕｎａｒｄｉ ｅｔ ａｌ．， １９９２；Ｌｕｎａｒｄｉ ｅｔ ａｌ．， ２０００；Ｏｓｔｅｎｓｔａｄ ｅｔ ａｌ．， １９９５；Ｓｃｈｒａｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．， １９９７）。グリシンリッチ細胞壁タンパク質ペプチド（ＧＲＰ）は、完全に異なりかつ関係のない疾患においてＴおよびＢ細胞免疫応答を開始することができる抗原性ペプチド配列の例を表す。ＧＲＰは、豆、果物、野菜およびゼラチンにおいて見出されるユビキタスな食物タンパク質である。それは、自己免疫障害と関係がある一般的な抗原である、リボ核タンパク質、線維性コラ―ゲン、サイトケラチンおよびＥＢＶ核抗原―１（ＥＢＮＡ―１）に対して、非常に高い程度の抗原類似性／相同性を有する。

【0007】

グリシンリッチ食物抗原およびエプスタイン・バ―ル・ウイルスと自己免疫疾患に関与するさまざまな組織抗原との間の、この抗原類似性は、交差反応性抗体の産生をもたらし得る。食物免疫反応性および異なる自己免疫障害を有する患者において免疫応答を引き出し得る共通のペプチドエピト―プの発見は、食物抗原、消化管粘膜、および全身性免疫応答の間の、可能性な関連性の疑問を生じさせる（Ｌｕｎａｒｄｉ ｅｔ ａｌ．， １９９２；Ｓｃｈｒａｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．， １９９７）。ＧＲＰペプチドに対する血清ＩｇＧ抗体は、いくつかの自己免疫障害および食物アレルギ―性患者において検出され、ケラチン、コラ―ゲンおよびＥＢＮＡ―１を含む自己抗原と交差反応できた（Ｌｕｎａｒｄｉ ｅｔ ａｌ．， ２０００）。このデ―タは、植物ウイルスおよびヒトにおいて、系統発生的に高く保存されたエピト―プが、影響を受けやすい個人における自己免疫応答の原因であり得ることを示唆する。さらに、これは、見かけ上異なるタンパク質間の特定の配列が分布する抗原が免疫応答を開始または増幅することに関与し、影響を受けやすい個人において自己免疫をもたらし得ることを示す。

【0008】

特定の食物抗原エピト―プに特異的なＴ細胞クロ―ンにより媒介される自己免疫応答は、消化管粘膜において生じ得る。かかるＴ細胞は、それらが滑液タンパク質に由来する相同ペプチドに対して応答して増殖する関節などの特定の部位に集められ得る。局所炎症およびＭＨＣ分子の上方制御に続いて、さらなる自己抗原の放出および／またはエピト―プの拡散は、自己免疫をもたらす、器官の炎症および破壊の慢性的で自己持続的なプロセスを引き起こし得る（Ｌｕｎａｒｄｉ ｅｔ ａｌ．， １９９２；Ｖｏｊｄａｎｉ， ２０１４ａ）。

【0009】

特に小麦および乳に関し、食物免疫反応性および関連する健康問題の認識は、過去２０年にわたり拡大してきた（Ｂｏｕｓｑｕｅｔ ｅｔ ａｌ．， １９９８；Ｌａｃｋ， ２００８；Ｚｕｉｄｍｅｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２００８）。セリアック疾患（ＣＤ）患者において、腸のＴヘルパ―細胞を刺激する能力を有する多くのグルテンペプチドが同定されてきている（Ａｒｅｎｔｚ―Ｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．， ２０００；Ａｒｅｎｔｚ―Ｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．， ２００２；Ｃａｍａｒｃａ ｅｔ ａｌ．， ２００９；Ｔｏｌｌｅｆｓｅｎ ｅｔ ａｌ．， ２００６）。最近の研究は、非セリアックグルテン感受性（ＮＣＧＳ）およびＣｏｈｎ’ｓ疾患を有する患者が小麦抗原のレパ―トリ―に対して反応し、それらに対するＩｇＧおよびＩｇＡを産生することを示した。このレパ―トリ―は、さまざまなペプチド、α―、γ―、ω―グリアジン、グルテニン、グルテオモルフィンおよびコムギ胚芽アグルチニンを含んだ（Ｖｏｊｄａｎｉ， ２０１１）。小麦などの環境因子に対する継続的な暴露は、ＮＣＧＳおよびセリアック疾患を引き起こすだけでなく、処置されないままである場合、炎症および自己免疫をもたらし得る（Ｃｏｕｎｓｅｌｌ ｅｔ ａｌ．， １９９４；Ｄｅ Ｆｒｅｉｔａｓ ｅｔ ａｌ．， ２００２；Ｇｉｌｌｅｔｔ ｅｔ ａｌ．， ２００１）。実際、セリアック疾患は、さまざまな自己免疫障害と関連付けられてきた。ＣＤまたはＮＣＧＳを有する患者において検出された自己免疫関連抗体のスペクトルは、交差―反応性および分子模倣性がグリアジンとさまざまな組織抗原との間で生じることを示す（Ａｌａｅｄｉｎｉ ｅｔ ａｌ．， ２００７；Ｃｏｌｌｉｎ ｅｔ ａｌ．， ２００２；Ｆｒｕｓｔａｃｉ ｅｔ ａｌ．， ２００２；Ｈａｄｊｉｖａｓｓｉｌｉｏｕ ｅｔ ａｌ．， ２００４；Ｊａｃｏｂ ｅｔ ａｌ．， ２００５；Ｎａｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２００１；Ｐｒａｔｅｓｉ ｅｔ ａｌ．， １９９８；Ｒｅｉｎｋｅ ｅｔ ａｌ．， ２０１１；Ｖｏｊｄａｎｉ ｅｔ ａｌ．， ２００４）。

【0010】

多くの研究は多発性硬化症（ＭＳ）の有病率と乳製品食物消費との間の関連について注目し、ＭＳの発生率がミルクの消費とパラレルであることを見出した（ＡｇｒａｎｏｆｆおよびＧｏｌｄｂｅｒｇ， １９７４；Ｂｕｔｃｈｅｒ， １９７６；Ｋａｈａｎａ ｅｔ ａｌ．， １９９４；Ｋｎｏｘ， １９７７；Ｍａｌｏｓｓｅ ｅｔ ａｌ， １９９２）。とりわけ、高い程度の配列相同性が、ブチロフィリン（ＢＴＮ）およびミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）と呼ばれる、乳脂肪球皮膜の主要なタンパク質の間に見出された（Ｇａｒｄｉｎｉｅｒ ｅｔ ａｌ．， １９９２；Ｈｅｎｒｙ ｅｔ ａｌ．， １９９９；ＪａｃｋおよびＭａｔｈｅｒ， １９９０）。

【0011】

ＭＯＧ（ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質）は、ＭＳおよびその動物モデルである、実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）の、病原性自己免疫応答における主要な抗原である（Ｖｏｊｄａｎｉ ｅｔ ａｌ．， ２００２）。ＭＯＧは、ＥＡＥを有する動物において、脱髄自己抗体応答および脳炎惹起性（ｅｃｅｐｈａｌｉｔｏｇｅｎｉｃ）ＣＤ４＋Ｔ細胞応答のいずれもを誘導することが知られる、唯一のミエリン自己抗原である（Ａｍｏｒ ｅｔ ａｌ．， １９９４）。ＭＯＧに対する脳炎惹起性Ｔ細胞応答は、ミルクタンパク質ブチロフィリン（ＢＴＮ）の細胞外ＩｇＶ様ドメインとの免疫学的交差反応性（または「分子模倣性」）の結果として誘導され得るか、または代わりに抑制され得ることが見出されている。ラットにおいて、天然のＢＴＮでの能動的な免疫付与は、Ｔ細胞およびマクロファ―ジの、髄膜および血管周囲への散在性の浸潤の形成により特性評価される、中枢神経系における炎症性応答を引き起こす（Ｖｏｊｄａｎｉ ｅｔ ａｌ．， ２００２）。この病理学は、ＭＯＧペプチド配列と交差反応する、ＢＴＮのＭＨＣクラスＩＩ拘束性Ｔ細胞応答により媒介されることも見出されている（Ｍｕｔｈｕｋｕｍａｒ Ｍ， ｅｔ ａｌ．， ２００９）。
視神経脊髄炎（Ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｏｐｔｉｃａ）（ＮＭＯ）は、脳および脊髄において灰白質および白質に影響を及ぼす重度の神経自己免疫障害であり、脱髄、軸索損傷およびネクロ―シスをもたらし、かつ影響を及ぼされた個人において、まひおよび感覚喪失を最終的にもたらす（Ｊａｒｉｕｓ ｅｔ ａｌ．， ２００８）。症例の７５％において、ＮＭＯは、アクアポリンファミリ―に属する水チャネルであるアクアポリン―４（ＡＱＰ４）に選択的に結合するＩｇＧ１抗体の存在と関連する（Ｊａｒｉｕｓ ｅｔ ａｌ．， ２０１０；Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．， ２０１２）。ＡＱＰ４は血液脳関門でのアストロサイトの足突起において発現し、足突起は溶質濃度、電気的活性、および神経細胞の信号伝達および興奮性の調節に影響を及ぼす脳微小血管またはクモ膜腔と接触している（Ｋｉｎｏｓｈｉｔａ ｅｔ ａｌ．， ２０１０）。結合後、ＡＱＰ４特異的なＩｇＧ１抗体は、アストロサイトを最初に損傷する能力を有し、その後、脊髄および視神経において脱髄を引き起こす（ＢｒａｄｌおよびＬａｓｓｍａｎｎ， ２００８）。ＡＱＰ４へのＩｇＧ１の結合は、補体カスケ―ドおよび炎症性浸潤の活性化も誘導し、それは、アストロサイト細胞毒性の誘導後に、脱髄および組織破壊を引き起こす。

【0012】

近年、ＡＱＰ４に対する病原性抗体が、ＡＱＰ４の特異的なエピト―プに対する類似性または分子擬態を有する周囲のタンパク質への暴露によりが引き起こされ得ることが提案された（Ｖａｉｓｈｎａｖ ｅｔ ａｌ．， ２０１３）。興味深いことに、ホウレンソウの葉は、内在性膜タンパク質の２０％を構成する、２つの熱的に安定なアクアポリンを発現する（Ｐｌａｓｅｎｃｉａ ｅｔ ａｌ．， ２０１１）。同様に、大豆は、根粒において、および発芽する種子において、アクアポリンを発現する（Ｆｌｅｕｒａｔ―Ｌａｓｓａｒｄ ｅｔ ａｌ．， ２００５）。ヒトＡＱＰ４がトマトおよびトウモロコシ液胞膜内在性タンパク質と交差反応し得ることも見出された（Ｖａｉｓｈｎａｖ ｅｔ ａｌ．， ２０１３）。
ここで留意すべきは、ＮＭＯにおける初代Ｔ細胞エピト―プに対して有意な同一性を有するアミノ酸配列が、パ―スニップ、セロリ、ニンジン、パセリ、シラントロ、チャ―ビルおよびディルに感染するパ―スニップイエロ―フレックウイルスの、潜在的に免疫原性のコ―トタンパク質において生じることである。このエピト―プはまた、マメ科植物ウマゴヤシ（Ｍ． ｔｒｕｎｃａｔｕｌａ）におけるセリンプロテア―ゼ阻害剤に存在する配列とも有意な配列同一性を共有する（Ｖａｉｓｈｎａｖ ｅｔ ａｌ．， ２０１３）。
未だ特性評価されていない食物の多くの構成要素も、自己免疫を引き起こす可能性を有し得ることは明らかである。これまで、食物免疫反応性と関連する多くの研究は、研究された食物中に存在する、タンパク質およびペプチドの水溶性集団のみを特性評価してきた。これに対する例外は小麦であり、グルテン（小麦のアルコ―ル可溶性構成要素）は食物免疫反応性、交差反応性、および自己免疫研究において使用されてきた。その上、補体の役割はまだ明らかでない。

【0013】

上述のとおり、これまで食物アレルゲン研究は、主として、特異的な抗原に対するイムノグロブリンの存在を検出することに焦点を当てており、補体活性化の問題点には対処してこなかった。米国特許出願Ｎｏ．２００９／００１０９３７（Ｃｈａｕｈａｎに対し）は、Ｃ１ｑなどの補体構成要素を含む、循環する免疫複合体の検出について議論するが、しかしながら議論される手法は、免疫複合体に対する細胞受容体を利用して、抗補体抗体を用いる検出のために必要な固定化を提供する。そのようなものとして、かれらは、かかる複合体の抗原特異性への洞察がないことに対して、ほとんど何も提供しない。米国特許Ｎｏ．８，３０９，３１８（ＤｏｒｖａｌおよびＤａｎｔｉｎｉに対し）は、固定化された抗原を用いて、結合されたＣ３ｂを含有する、アレルゲン特異的免疫複合体の検出を議論する。しかしながら、いわゆる「イノセントバイスタンダ―」ＩｇＧ―Ｃ３ｂ付加物が補体活性化の間に形成することがあり（、それは抗原特異的複合体の存在の決定における、かかるアプロ―チの有用性をひどく制限することが実証された（Ｆｒｉｅｓ ｅｔ ａｌ，１９８４）。
このように、それらの自然な状態で水抽出可能なタンパク質およびペプチドによって表されるよりも、より広い範囲の、食物中に見出される抗原性分子に結合する抗体（例えばＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ，および他の抗体クラス）を特性評価するための、システム、デバイス、および方法に対するニ―ズが存在する。その上、かかる抗体と関連する補体構成要素（例えばＣ１ｑ）の存在を特性評価するための、システム、デバイス、および方法に対するニ―ズが存在する。

【発明の概要】

【0014】

本発明の主題は、装置、システムおよび方法を提供し、それにおいて異なる群の抗原性分子がさまざまな異なる物理的／化学的方法を用いて食物から抽出され、アルカリ可溶性タンパク質、アルコ―ル可溶性タンパク質、水溶性タンパク質、多糖、糖脂質、および糖タンパク質を含む。これらの抽出物のそれぞれは、特定の順番で同じ試験表面に対して適用されて、これらの異なる抽出物のそれぞれからの抗原を含む多重コ―トされた試験表面を提供する。これらの抗原に結合するＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＣ１ｑ（天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体の形態で）は、試験表面を試料にさらし、洗浄して過剰な試料を除き、かつ酵素などの検出可能なタグをもつＩｇＧおよび／またはＩｇＡに対する種特異的な抗体並びにＣ１ｑに対する抗体と、さらされた試験表面を接触させることにより同定される。結合されたタグの特性評価は、試験表面に存在する幅広いさまざまな食物抗原の少なくとも１つに対するＩｇＧ、ＩｇＡおよび／またはＣ１ｑの結合の程度を示す。
本発明の主題のさまざまな目的、特性、側面および長所は、それにおいて類似の数字が類似の構成要素を表す付随する図と共に、以下の好ましい実施態様の詳細な記載からより明白になるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0015】

【図1】図１は、本発明概念の試験表面を用いて生成された免疫応答についてのキャリブレ―ション曲線を示す。

【図2】図２は、本発明概念の試験表面に対する、ＩｇＧの結合研究の結果を示す。ＩｇＧ抗体結合は、第一の個人について試験された１８０の食物からの抽出物を含有する異なる抗原を含む試験表面を用いて特性評価された。０．５ＯＤのアッセイカットオフを上回る結果は、バナナ、パイナップル、ショウガ、バニラ、ア―ティチョ―ク、アスパラガス、キャベツ、トウモロコシ、ナス、オリ―ブ類、ピクルス、フライドポテト、海草、レンティル レクチン、ピ―カン、卵白および模造カニに対するＩｇＧにおける有意な上昇を示す。残りの１６３の食物抽出物に対するＩｇＧ免疫反応性は０．４ＯＤを下回り、陰性とみなされた。

【図3】図３は、本発明概念の試験表面に対する、Ｃ１ｑの結合（天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体を介する）についてのアッセイの結果を示す。イムノグロブリン―Ｃ１ｑ結合は、第一の個人について試験された１８０の食物からの抽出物を含有する異なる抗原を含む試験表面を用いて特性評価された。実施例において留意すべきは、Ｃ１ｑの結合（天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体を介する）が測定される場合、ＩｇＧが測定された場合には陽性でなかった１２の異なる新しい食物抽出物に対して、この複合体のレベルが有意に上昇することである。これらの抽出物は、ラテックス ヘベイン、ニンニク、タマネギ、エンドウ レクチン、大根、コメ エンドキチナ―ゼ、食物着色料、マグロ、エビ、ガムおよび緑茶である。図２に示すとおりＩｇＧのレベルが測定された場合、これらの同じ１２の食物についての光学密度は０．５を下回り陰性とみなされたことも留意すべきである。

【図4】図４は、本発明概念の同じ試験表面に対する、ＩｇＧおよびＣ１ｑの結合（天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体を介する）の両方についてのアッセイの結果を示す。ＩｇＧおよびＣ１ｑの結合は、第一の個人について試験された１８０の食物からの異なる抗原を含む抽出物を含有する試験表面を用いて特性評価された。ＩｇＧまたはＣ１ｑのいずれかが測定された場合に反応性であった（図２および３に示すとおり）すべての食物抽出物は、高度に反応性となった。残りの１５１の食物について、光学密度は０．５を下回り陰性とみなされた。

【図5】図５は、本発明概念の試験表面に対するＩｇＧの結合研究の結果を示す。ＩｇＧ抗体の結合は、第二の個人について試験された１８０の食物からの異なる抗原を含む抽出物を含有する試験表面を用いて特性評価された。０．５ＯＤのアッセイカットオフを上回る結果は、ＩｇＧにおける有意な上昇を示す。１８０の食物抗原抽出物のうちの１０に対する有意なＩｇＧ結合が同定された。

【図6】図６は、第二の個人からの、本発明概念の試験表面に対するＣ１ｑの結合（天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体を介する）についてのアッセイの結果を示す。Ｃ１ｑの結合は、１８０の試験された食物からの異なる抗原を含む抽出物を含有する試験表面を用いて特性評価された。０．５ＯＤのアッセイカットオフを上回る結果は、Ｃ１ｑにおける有意な上昇を示す。１４の食物抗原抽出物について有意なＣ１ｑ結合（天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体を介する）が同定され、そのうち１１がＣ１ｑに特有であった。

【図7】図７は、第二の個人からの、本発明概念の同じ試験表面に対するＩｇＧおよびＣ１ｑの両方の結合（天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体を介する）についてのアッセイの結果を示す。ＩｇＧおよびＩｇＣ１ｑの結合は、第二の個人について試験された１８０の食物からの異なる抗原を含む抽出物を含有する試験表面を用いて特性評価された。組み合わせて、有意なＩｇＧおよびＣ１ｑの結合が２１の食物抗原抽出物について同定され、これは、この個人について個別のＩｇＧおよびＣ１ｑ研究において同定された食物抗原抽出物を表す。

【図8】図８は、商業的に利用可能な食物抗原調製物を用いて異なる食物から調製された試験表面、および本発明概念の方法を用いて調製された試験表面のパネルに対する個人からの血清ＩｇＧおよびＩｇＡの結合を示す表を描写する。結果は、それぞれの食物について、その食物からのすべての食物抗原調製物を用いて連続的にコ―トされた試験表面について、および熱処理後の同じ食物に由来するすべての食物抗原調製物を用いて連続的にコ―トされた試験表面についての個別の抗原調製物について示される。

【図9】図９は、図８に示される食物抗原パネルの拡張を示す表を描写する。

【図10】図１０は、図８および９に示される食物抗原パネルの拡張を示す表を描写する。

【図11】図１１は、図８、９、および１０に示される食物抗原パネルの拡張を示す表を描写する。

【発明を実施するための形態】

【0016】

詳細な記載
食物抗原に対する抗体の存在、および食物抗原に結合するＣ１ｑ―抗体複合体の存在を特性評価するためのシステム、デバイス、および方法が提供される。食物抗原抽出物は、さまざまな食物およびそれらの熱変性型からの水溶性タンパク質、アルコ―ル可溶性タンパク質、アルカリ可溶性タンパク質、糖脂質、多糖および糖タンパク質の抽出のための方法を用いて調製される。連続的な方法で共通の試験表面に適用される場合、これらは、先行技術の方法よりも、さらにより多様な食物抗原を提供する試験表面を提供する。驚くべきことに、連続的な添加の使用、および抗原抽出物が適用される順番が、かかる複合試験表面を産生するために必要であることが見出された。

【0017】

その上、異なる食物源からの食物抗原抽出物をそれぞれ含有する複数の試験表面にさらされた場合、ＩｇＧおよび天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体（すなわち、個体内で形成されるイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体）は、異なる結合プロファイルを示したことが見出された。同じ試験表面へのＩｇＧ／ＩｇＡおよびＣ１ｑ （天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体の形態で） の両方の結合を同時に特性評価することは、ＩｇＧおよびＣ１ｑの結合を個別に試験することから得られる結果と同等のプロファイルを提供し、これは減少した数の試験表面およびアッセイ工程を用いて食物抗原についてのより完全な免疫反応性プロファイルを有利に提供することも見出された。

【0018】

いくつかの実施態様において、本発明のある実施態様を記載しクレ―ムするために使用される、濃度、反応条件などの含有物の特性の数量を表す数は、場合によっては用語「約」により修飾されるように理解されるものである。それに応じて、いくつかの実施態様において、記述された記載および添付の請求項において説明する、数を表すパラメ―タ―は、特定の実施態様により得られようとされる所望の特性に依存して変化してよい近似値である。いくつかの実施態様において、数を表すパラメ―タ―は、報告される有意な桁の数の観点から、および通常の丸め技術を適用することにより解釈されるべきである。本発明のいくつかの実施態様の広い範囲を説明する、数を表す範囲およびパラメ―タ―は、近似値であるにもかかわらず、具体的な実施例を説明する、数を表す値は、実現可能なように、正確に報告される。本発明のいくつかの実施態様において提示される、数を表す値は、必ずしもそのそれぞれの測定を試験する場合に見出される標準偏差により生じるものでない、ある誤差を含有し得る。

【0019】

本明細書中の記載およびそれに続く特許請求の範囲全体において使用されるように「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」の意味することは、文脈が他の方法で明らかに記載しない限り、複数の参照を含む。また、本明細書中の記載において使用されるように、「ｉｎ」の意味することは、文脈が他の方法で明らかに記載しない限り、「ｉｎ」および「ｏｎ」を含む。

【0020】

文脈が正反対のことを記載しない限り、本明細書中説明する、すべての範囲は、それらの端点を含めているように解釈されるべきであり、オ―プンエンドな範囲は、商業用に実際的な値のみを含むと解釈されるべきである。同様に、値のすべてのリストは、文脈が正反対のことを示さない限り、中間の値を含めているとみなされるべきである。

【0021】

本明細書中、値の範囲の記述は、単に、それぞれ分離した、範囲内に落ちる値を個別に言及することの、省略表現方法として役立つことを意図している。本明細書中、他の方法で示されない限り、範囲を有するそれぞれ個別の値は、まるで本明細書中、個別に列挙されたかのように、明細書に組み込まれる。本明細書中、記載されたすべての方法を、本明細書中、他の方法で示されない限り、または他の方法で明らかに文脈により矛盾しない限り、任意の適切な順番において、行うことができる。本明細書中、ある実施態様に関して提供される、任意のおよびすべての例、または代表的言葉（例えば「などの」）の使用は、単に、本発明をより良く明らかにすることを意図し、クレ―ムされない限り、本発明の範囲についての限定を提起しない。明細書にない言葉は、本発明の実行に必須の、クレ―ムされない任意の要素を示すように解釈されるべきである。

【0022】

本明細書中、使用されるように文脈を他の方法で述べない限り、用語「にカップリングされる」は、ダイレクトカップリング（それにおいて、お互いにカップリングされる２の要素が互いに接触する）およびインダイレクトカップリング（それにおいて、少なくとも１のさらなる要素が、この２つの要素間に位置する）のいずれもを含むよう意図される。従って、用語「にカップリングされる」および「とカップリングされる」は、同意語として使用される。

【0023】

本明細書中に開示される本発明の、代替要素または実施態様のグル―プ分けは、限定のように解釈されない。それぞれの群の一員は、個別に、または群のほかの一員もしくは本明細書中に見出されるほかの要素と、任意に組合せて、言及され得るし、クレ―ムされる得る。群の１以上の一員は、利便性および／または特許性の理由のため、群の中に含まれ得るし、または群から削除され得る。かかる任意の包含または削除が生じる場合、明細書は、この中に、変更されるように群を含有するとみなされ、従って添付された請求項において使用された、すべてのマ―カッシュ群の記述された記載を満たす。

【0024】

以下の議論は、本発明の主題の多くの実施態様例を提供する。それぞれの実施態様は、発明要素の単一の組合せを表すが、本発明の主題は、開示される要素の、可能性があるすべての組合せを含むとみなされる。したがって、一実施態様が要素Ａ、ＢおよびＣを含み、第二の実施態様が要素ＢおよびＤを含むならば、本発明の主題は、明示的に開示されない場合でさえ、Ａ、Ｂ、ＣまたはＤのほかの残りの組合せを含むともみなされる。

【0025】

本発明概念のいくつかの実施態様において、食物構成要素は、乳製品および卵（変更された）、穀物（そのままの、および変更された）、豆およびマメ科植物（変更された）、ナッツおよび種子（そのままの、および変更された）、野菜（そのままの、および変更された）、果物（そのままの、および変更された）、魚および海産食物（そのままの、および変更された）、肉（変更された）、ハ―ブ（そのままの）、スパイス（そのままの）、ガム、および醸造された飲料および添加物を含む一般的な群に分類され得る。変更された食物は、例えばゆでること、焼くこと、および／または揚げることなど、消費の前に通常実行される調製工程を反映し得る。

【0026】

「乳製品および卵」は、卵白、調理された（ゆでられた）；卵黄、調理された（ゆでられた）；ヤギ乳；ソフトチ―ズおよびハ―ドチ―ズ；およびヨ―グルトを含み得る。「穀物、そのままの、および変更された」は、コメ、白米および玄米、調理された（炊かれた）；餅；コメタンパク質；コメ エンドキチナ―ゼ；野生米、調理された（炊かれた）；および小麦＋アルファ―グリアジンを含み得る。

【0027】

「豆およびマメ科植物、変更された」は、ブラックビ―ンズ、調理された；豆 アグルチニン；ダ―クチョコレ―トおよびココア；ソラマメ、調理された（ゆでられた）；ひよこ豆、調理された（ゆでられた）；インゲン豆、調理された（ゆでられた）；レンティル、調理された（ゆでられた）；レンティル レクチン、（ゆでられた）；リマ豆、調理された（ゆでられた）；うずら豆、調理された（ゆでられた）；大豆 アグルチニン；大豆 オレオシン＋アクアポリン；しょうゆ、グルテンフリ―；および豆腐を含み得る。

【0028】

「ナッツおよび種子、そのままの、および変更された」は、ア―モンド；ア―モンド、ロ―ストされた；ブラジルナッツ、そのままの、およびロ―ストされた；カシュ―；カシュ―、ロ―ストされた；カシュ―、ビシリン（ｖｉｃｉｌｌｉｎ）；チア種子；亜麻種子；ヘ―ゼルナッツ、そのままの、およびロ―ストされた；マカダミアナッツ、そのままの、およびロ―ストされた；マスタ―ド種子；ピ―カン、そのままの、およびロ―ストされた；ピ―ナッツ、ロ―ストされた；ピ―ナッツバタ―；ピ―ナッツアグルチニン；ピ―ナッツ オレオシン；ピスタチオ、そのままの、およびロ―ストされた；カボチャ種子、ロ―ストされた；ゴマ アルブミン；ゴマ オレオシン；ヒマワリ種子、ロ―ストされた；およびクルミを含み得る。

【0029】

「野菜、そのままの、および変更された」は、ア―ティチョ―ク、調理された（煮込まれた）；アスパラガス；アスパラガス、調理された（ゆでられた）；ビ―ト、調理された（ゆでられた）；ピ―マン；ブロッコリ―；ブロッコリ―、調理された（ゆでられた）；芽キャベツ、調理された（ゆでられた）；キャベツ、レッド＋グリ―ン；キャベツ、レッド＋グリ―ン（ゆでられた）；キャノ―ラ オレオシン；ニンジン；ニンジン、調理された（ゆでられた）；カリフラワ―、調理された（ゆでられた）；セロリ；トウガラシ；トウモロコシ、調理された（ゆでられた）；トウモロコシ アクアポリン；ポップコ―ン；トウモロコシ オレオシン；キュウリ、漬けられた；ナス、調理された（ゆでられた）；ニンニク；ニンニク、調理された（ゆでられた）；サヤマメ、調理された（ゆでられた）；レタス；キノコ、そのままの、および調理された（ゆでられた）；オクラ、調理された（ゆでられた）；オリ―ブ、グリ―ンおよびブラック、漬けられた；タマネギおよび／またはアオネギ（ｓｃａｌｌｉｏｎ）；タマネギおよび／またはアオネギ（ｓｃａｌｌｉｏｎ）、調理された（ゆでられた）；エンドウ、調理された（ゆでられた）；エンドウタンパク質；エンドウ レクチン；イモ、白、調理された（焼かれた）；イモ、白、調理された（揚げられた）；カボチャおよび／またはカボチャ、調理された（焼かれた）；大根；ベニバナおよび／またはヒマワリ オレオシン；海草；ホウレンソウ；ホウレンソウ アクアポリン；トマト；トマト アクアポリン；トマトペ―スト；ヤムおよび／またはサツマイモ、調理された（焼かれた）；およびズッキ―ニ、調理された（ゆでられた）を含み得る。

【0030】

「果物、そのままの、および変更された」は、リンゴ；リンゴ シ―ドル；アプリコット；アボカド；バナナ；バナナ、調理された（ゆでられた）；ラテックス ヘベイン；ブル―ベリ―；カンタロ―プおよび／またはハネデュ―メロン；サクランボ；ココナツ、肉および／または水および／または乳；クランベリ―；ナツメヤシ；イチジク；ブドウ、レッド＋およびグリ―ン；赤ワイン；白ワイン；グレ―プフル―ツ；キ―ウィ；レモンおよび／またはライム；マンゴ―；オレンジ；オレンジジュ―ス；パパイヤ；桃および／またはネクタリン；西洋ナシ；パイナップル；パイナップル ブロメライン；プラム；ザクロ；イチゴ；およびスイカを含み得る。

【0031】

「魚および海産食物、そのままの、および変更された」は、タラ、調理された（焼かれた）；ハリバット、調理された（焼かれた）；サバ、調理された（焼かれた）；レッドスナッパ―、調理された（焼かれた）；サケ；サケ、調理された（焼かれた）；イワシ＋アンチョビ、調理された（煮た）；シ―バス、調理された（焼かれた）；テラピア、調理された（焼かれた）；トラウト、調理された（焼かれた）；マグロ；マグロ、調理された（煮た）；ホワイトフィッシュ、調理された（焼かれた）；カニ＋ロブスタ―、調理された（ゆでられた）；模造カニ、調理された（ゆでられた）；クラム、調理された（ゆでられた）；カキ、調理された（ゆでられた）；ホタテ、調理された（ゆでられた）；イカ（カラマリ）、調理された（ゆでられた）；エビ、調理された（ゆでられた）；エビ トロポミオシン；およびパルブアルブミンを含み得る。

【0032】

「肉、変更された」は、牛肉、ミディアムに調理された（ゆでられた）；鶏、調理された（ゆでられた）；子羊、調理された（ゆでられた）；豚肉、調理された（ゆでられた）；シチメンチョウ、調理された（ゆでられた）；ゼラチン；および肉膠（ゆでられた）を含み得る。

【0033】

「ハ―ブ、そのままの」は、バジル、シラントロ、クミン、ディル、ミント、オレガノ、パセリ、ロ―ズマリ―、およびタイムを含み得る。

【0034】

「スパイス、そのままの」は、シナモン、クロ―ブ、ショウガ、ナツメグ、パプリカ、タ―メリック（クルクミン（ｃｕｒｃｕｒｍｉｎ））、およびバニラを含み得る。

【0035】

「ガム」は、ベ―タ―グルカン、カラギ―ナン、グァ―ガム、トラガカントガム、ロ―カストビ―ンガム、マスチックガム＋アラビアゴム、およびキサンタン（ｘａｎｔｈａｍ）ガムを含み得る。

【0036】

「醸造された飲料および添加物」は、コ―ヒ―豆タンパク質、煎じた；ブラックティ―、煎じた；緑茶、煎じた；蜂蜜、そのままの、および加工された；および食物着色料、人工のもの、を含み得る。

【0037】

抽出より前に、食物は、抽出プロセスのために利用可能な表面面積を増加させるように処理され得る。例えば、食物物質は、浸軟、切断、粉砕（ｇｒｉｎｄｉｎｇ）、粉砕（ｍｉｌｌｉｎｇ）、超音波処理、および／または押出しにより、微粒子に縮小させられ得る。本発明概念の好ましい実施態様において、抽出される食物は、例えば液体窒素を用いて、最初に凍結される。凍結された食物は、その後、例えば商業用ミキサ―またはグラインダ―を用いて、粉砕（ｇｒｏｕｎｄ）または粉砕される（ｍｉｌｌｅｄ）。

【0038】

食物粒子サイズを減少させることにおいて有用性を有することに加え、超音波処理は細胞を溶解し抽出の間の食物抗原の放出を改善するためにも採用され得る。かかる超音波処理は、超音波バスを用いて、超音波ホ―ンまたはプロ―ブの抽出懸濁液中への挿入により、あるいはフロ―スル――超音波処理デバイスを介するパッセ―ジにより、適用され得る。

【0039】

さまざまな方法が、食物から水溶性タンパク質（例えば、アルブミン類）を抽出するために適している。水または本質的に中性の（すなわち、ｐＨが６．５〜７．５）バッファ―を用いる抽出より前に、食物は上述のとおり、微粒子に縮小され得る。食物はその後、適切な温度で水または本質的に中性の水性バッファ―中に懸濁され得る。いくつかの実施態様において、ＥＤＴＡ、ＰＭＳＦ、および／またはペプスタチンなどのプロテア―ゼ活性を阻害する化合物が、抽出のため使用される溶液中に含まれ得る。ほかの実施態様において、４―（１，１，３，３―テトラメチルブチル）フェニル―ポリエチレン グリコ―ル、ポリエチレン グリコ―ル ソルビタン モノラウレ―ト、ｎ―ドデシル―β―Ｄ―マルトシド、アルキルフェノ―ル（ａｌｋｙｐｈｅｎｏｌ）エトキシレ―ト、およびドデシル硫酸ナトリウムなどの界面活性剤が、抽出のため使用される溶液中に含まれ得る。適切な抽出温度は、処理されている特定の食物のために適切であるように、４℃〜９５℃の範囲であり得る。同様に、最適な抽出に必要な時間は、食物、粒子サイズ、および水で抽出可能なタンパク質抗原の性質に依存し得る。適切な抽出時間は、３０分〜４８時間の範囲であり得る。抽出に続いて、残留固形物を、沈降およびデカンテ―ション、遠心分離、ろ過、またはこれらの組合せにより除くことができる。抽出および抽出される固形物の除去に続いて、水溶性タンパク質抗原調製物は、適切な結合バッファ―に移され得るか、または、代替として、使用の前に保存され得る。水溶性タンパク質抗原調製物は、使用の前に保存のため凍結乾燥され、低減された温度で液体形態で保存され、または凍結されて保存され得る。いくつかの実施態様において、０℃未満の温度での液体保存を可能にするため、グリセロ―ルなどの添加物が水溶性タンパク質抗原調製物に添加され得る。

【0040】

さまざまな方法が、食物からアルカリ可溶性タンパク質を抽出するために適している。アルカリ性溶液を用いる抽出より前に、食物は、上述のとおり微粒子に縮小され得る。食物は、その後、適切な温度で、塩基性の（すなわち、ｐＨ約８以上）溶液中に懸濁され得る。本発明概念の好ましい実施態様において、かかるアルカリ性溶液は、ｐＨ約１０以上を有し得る。かかるアルカリ性溶液は、塩基性塩を水に添加することにより調製され得る。適切な塩基性塩は、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、Ｃａ（ＯＨ）_２、Ｎａ_２ＣＯ_３、ＮａＨＣＯ_３、Ｎａ_２ＨＰＯ_４、Ｋ_２ＣＯ_３、ＫＨＣＯ_３、Ｃａ（ＨＣＯ_３）_２、ＣａＣＯ_３、およびそれらの組合せを含む。代替として、適切なアルカリ性バッファ―は、ＣＡＰＳ、ＣＡＰＳＯ、Ｔｒｉｓ、および／またはグリシンなどのバッファ―を用いて調製され得る。本発明概念のほかの実施態様において、かかるアルカリ性溶液は、ｐＨ約９以上を有し得る。本発明概念のいくつかの実施態様において、かかるアルカリ性溶液は、ｐＨ８以上を有し得る。いくつかの実施態様において、ＥＤＴＡ、ＰＭＳＦ、および／またはペプスタチンなどのプロテア―ゼ活性を阻害する化合物が、抽出のために使用されるアルカリ性溶液中に含まれ得る。ほかの実施態様において、４―（１，１，３，３―テトラメチルブチル）フェニル―ポリエチレングリコ―ル、ポリエチレン グリコ―ル ソルビタン モノラウレ―ト、およびドデシル硫酸ナトリウムなどの界面活性剤が、抽出のために使用されるアルカリ性溶液中に含まれ得る。適切な抽出温度は、処理されている特定の食物のために適切であるように、４℃〜９５℃の範囲であり得る。同様に、最適な抽出に必要な時間は、食物、粒子サイズ、およびアルカリ性抽出可能なタンパク質抗原の性質に依存し得る。適切な抽出時間は、３０分〜４８時間の範囲であり得る。抽出に続いて、残留固形物を、沈降およびデカンテ―ション、遠心分離、ろ過、またはこれらの組合せにより除くことができる。抽出および抽出される固形物の除去に続いて、アルカリ溶解性タンパク質抗原調製物は、適切な結合バッファ―に移され得るか、または、代替として、使用の前に保存され得る。アルカリ溶解性タンパク質抗原調製物は、使用の前に保存のため凍結乾燥され、低減された温度で液体形態で保存され、または凍結されて保存され得る。いくつかの実施態様において、０℃未満の温度での液体保存を可能にするため、グリセロ―ルなどの添加物が水溶性タンパク質抗原調製物に添加され得る。

【0041】

さまざまな方法が、食物からアルコ―ル／有機溶解性タンパク質を抽出するために適している。アルコ―ルまたはほかの有機溶媒を用いる抽出より前に、食物は上述のとおり、微粒子に縮小され得る。食物は、その後、アルコ―ルまたはほかの適切な有機溶媒の水性溶液中に懸濁され得る。適切なアルコ―ルは、メタノ―ル、エタノ―ル、プロパノ―ル、およびそれらの混合物を含む。ほかの適切な有機溶媒は少なくとも水と混和性であり、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、およびグリセロ―ルを含む。適切な抽出温度は、処理されている特定の食物のために適切であるように、４℃〜９５℃の範囲であり得る。同様に、最適な抽出に必要な時間は、食物、粒子サイズ、および水抽出可能なタンパク質抗原の性質に依存し得る。適切な抽出時間は、３０分〜４８時間の範囲であり得る。抽出に続いて、残留固形物を、沈降およびデカンテ―ション、遠心分離、ろ過、またはこれらの組合せにより除くことができる。抽出および抽出される固形物の除去に続いて、アルコ―ル／有機溶解性タンパク質抗原調製物は、適切な結合バッファ―に移され得るか、または、代替として、使用の前に保存され得る。アルコ―ル／有機溶解性タンパク質抗原調製物は、使用の前に保存のため凍結乾燥され、低減された温度で液体形態で保存され、または凍結されて保存され得る。いくつかの実施態様において、０℃未満の温度での液体保存を可能にするため、グリセロ―ルなどの添加物が水溶性タンパク質抗原調製物に添加され得る。

【0042】

さまざまな方法が、食物から糖脂質を抽出するために適している。抽出より前に、食物は上述のとおり、微粒子に縮小され得る。脂質を含有する画分は、クロロホルム、メタノ―ル、ピリジン、またはそれらの混合物などの、有機溶媒または有機溶媒混合物を用いて食物から抽出され得る。糖脂質は、抽出された脂質混合物から、例えばＤＥＡＥ置換クロマトグラフィ―媒体を用いるイオン交換クロマトグラフィ―を用いて分離でき、有機溶媒／水性塩溶液混合物（クロロホルム／メタノ―ル混合物と混合した酢酸ナトリウムなど）を用いて溶出され得る。いくつかの実施態様において、この抽出の間に超音波処理が適用され得る。いくつかの実施態様において、溶出された糖脂質は、塩基性溶液を用いて加水分解され、その後中和され得る。結果として生じる塩は、ゲルろ過、疎水性相互作用クロマトグラフィ―、および／または逆相クロマトグラフィ―などの、適切な脱塩プロセスにより除かれ得る。適切な抽出温度は、処理されている特定の食物のために適切であるように、４℃〜９５℃の範囲であり得る。同様に、最適な抽出に必要な時間は、食物および粒子サイズに依存し得る。適切な抽出時間は、３０分〜４８時間の範囲であり得る。抽出に続いて、残留固形物を、沈降およびデカンテ―ション、遠心分離、ろ過、またはこれらの組合せにより除くことができる。抽出および抽出される固形物の除去に続いて、糖脂質抗原調製物は適切な結合バッファ―に移され得るか、または、代替として、使用の前に保存され得る。糖脂質は、使用の前に乾燥のため蒸発させられ、凍結乾燥され、低減された温度で液体形態で保存され、または凍結されて保存され得る。いくつかの実施態様において、０℃未満の温度での液体保存を可能にするため、グリセロ―ルなどの添加物が糖脂質調製物に添加され得る。

【0043】

さまざまな方法が、食物から多糖を抽出するために適している。抽出より前に、食物は上述のとおり、微粒子に縮小され得る。多糖含有画分は、例えばセルラ―ゼを用いる酵素的消化により、食物から抽出され得る。適切な期間に続いて、酵素的活性は、例えば抽出混合物をボイルすることにより、停止され得る。これに続いて、タンパク質（添加された酵素を含む）は、沈殿により多糖抗原調製物から除かれ得る。タンパク質は、クロロホルム、ブタノ―ル、またはそれらの混合物などの揮発性有機溶媒を用いて都合よく沈殿させることができる。適切な抽出温度は、処理されている特定の食物のために適切であるように、４℃〜１００℃の範囲であり得る。同様に、最適な抽出に必要な時間は、食物および粒子サイズに依存し得る。適切な抽出時間は、３０分〜４８時間の範囲であり得る。抽出に続いて、残留固形物を、沈降およびデカンテ―ション、遠心分離、ろ過、またはこれらの組合せにより除くことができる。抽出および抽出される固形物の除去に続いて、多糖抗原調製物は適切な結合バッファ―に移され得るか、または、代替として、使用の前に保存され得る。多糖は、使用の前に乾燥のため蒸発させられ、凍結乾燥され、低減された温度で液体形態で保存され、または凍結されて保存され得る。いくつかの実施態様において、０℃未満の温度での液体保存を可能にするため、グリセロ―ルなどの添加物が多糖調製物に添加され得る。

【0044】

この適用の目的のため糖に対して親和性を有するタンパク質であると理解される糖タンパク質抗原は、さまざまな方法により食物から抽出され得る。抽出より前に、食物は上述のとおり、微粒子に縮小され得る。糖タンパク質含有画分は、例えば、親和性クロマトグラフィ―または特異的沈降剤により食物から抽出され得る。親和性クロマトグラフィ―法において、食物から得られたタンパク質画分は、糖タンパク質と相互作用する能力がある、固定された単糖または多糖群を含むクロマトグラフィ―媒体に適用される。結合された糖タンパク質は、グルコ―ス、ガラクト―ス、マンノ―ス、またはそれらの誘導体などの適切な糖溶液を適用することにより、媒体から続いて溶出され得る。特異的沈降剤は、糖部分および難溶性有機部分を含む化合物を含み得る。かかる化合物の結合は、適切なバッファ―条件下（例えば、二価陽イオンの存在下）で糖タンパク質を沈殿させ得る。かかる沈殿された糖タンパク質は、例えば、沈降試薬を開裂して難溶解性有機部分を放出し、続く脱塩工程（上記提供されるいくつかの例）により回収され得る。適切な抽出温度は、処理されている特定の食物のために適切であるように、４℃〜９５℃の範囲であり得る。同様に、最適な抽出に必要な時間は、食物および粒子サイズに依存し得る。適切な抽出時間は、３０分〜４８時間の範囲であり得る。抽出に続いて、残留固形物を、沈降およびデカンテ―ション、遠心分離、ろ過、またはこれらの組合せにより除くことができる。抽出および抽出される固形物の除去に続いて、糖タンパク質抗原調製物は適切な結合バッファ―に移され得るか、または、代替として、使用の前に保存され得る。糖タンパク質は、使用の前に凍結乾燥され、低減された温度で液体形態で保存され、凍結されて保存され得る。いくつかの実施態様において、０℃未満の温度での液体保存を可能にするため、グリセロ―ルなどの添加物が糖タンパク質調製物に対して添加され得る。

【0045】

上述のとおり、いくつかの実施態様において、抽出される抗原調製物をあるバッファ―から別のものへ、例えばあるプロセスバッファ―から別のものへあるいは保存バッファ―から固相に抗原を付着するのに適切なバッファ―へ、移すことが望ましい。かかるバッファ―移動は、抽出される抗原を保持する排除限界を有する透析膜を用いる新しいバッファ―に対する透析により達成され得る。代替として、バッファ―は、適切なクロマトグラフィ―媒体を通じて、サイズ排除クロマトグラフィ―を用いて変更され得る。さらにほかの実施態様において、バッファ―は、揮発性添加物を用いる沈降、沈降物の回収および乾燥、並びに所望のバッファ―中での再可溶化により交換され得る。

【0046】

抗体および／またはＣ１ｑの結合アッセイにおいて使用されるために、抽出された抗原は、固相にカップリングされる。この適用の文脈内で、用語「固相」は、不溶性、粒子および微小粒子などの懸濁相を含む。かかる微小粒子は、粒子集団の差別化を可能にするよう、例えば粒子サイズおよび／または染料の組込みによってコ―ド化され得る（例えば、特定の食物に由来する抗原と関係がある粒子）。かかるコ―ド化は、単一の多重アッセイ内での、同時の決定を可能にし得る。代表的な固相は、マイクロウェルプレ―ト、マイクロウェルストリップ、マイクロアレイ、多孔性または線維性物質、ピペットチップ、ビ―ズ、および微小粒子を含むが、これらに限定されない。かかるカップリングは、共有結合性（すなわち、抽出される抗原および固相の分子間の共有結合性結合を利用する）または非共有結合性であり得る。本発明概念の好ましい実施態様において、固相は少なくとも、マイクロウェルプレ―トまたはマイクロウェルストリップのウェルの内側表面部分である。かかるマイクロウェルは、ポリスチレン、ポリカ―ボネ―ト、ポリプロピレン、およびポリエチレンを含む任意の適切な物質を材料として作製され得る。本発明概念のいくつかの実施態様において、マイクロウェル表面は、結合を増強するために、化学的にまたは物理的に変更されている（例えば、テクスチャリングにより）。

【0047】

試料からのＣ１ｑおよび／または抗体と固定化された食物抗原との間の複合体の形成を検出するために利用されるアッセイは、免疫アッセイであり得る。かかる免疫アッセイは、インダイレクト（すなわち、競合）またはダイレクト（すなわち、「サンドイッチ」アッセイ）であり得るし、任意の適切な検出可能な標識（例えば、蛍光性部分、発色部分、質量標識、放射性部分、および／または酵素）を利用し得る。本発明概念の好ましい実施態様において、アッセイは、アルカリホスファタ―ゼまたは西洋ワサビペルオキシダ―ゼなどの酵素標識を利用するダイレクト免疫アッセイである。１つより多い特異的抗体（例えば、抗ＩｇＧ種、抗ＩｇＡ種、および／または抗Ｃ１ｑ）を単一の試験表面に適用してもよい一方で、すべてについて共通の標識が使用され得ることが、理解されるべきである。

【0048】

本発明概念のいくつかの実施態様において、上記のような抗原調製物からの抗原は、吸着により固形試験表面に付けられる。本発明概念の試験表面は、単一の食物源から異なる方法で調製された、少なくとも２つの異なる抗原抽出物から得られる抗原を含む。いくつかの実施態様において、試験表面は、単一の食物源から異なる方法で調製された、少なくとも３つの異なる抗原抽出物から得られる抗原を含む。ほかの実施態様において、試験表面は、単一の食物源から異なる方法で調製された、少なくとも４つの異なる抗原抽出物から得られる抗原を含む。ほかの実施態様において、試験表面は、単一の食物源から異なる方法で調製された、少なくとも５つの異なる抗原抽出物から得られる抗原を含む。好ましい実施態様において、試験表面は、単一の食物源から異なる方法で調製された、少なくとも６つの異なる抗原抽出物から得られる抗原を含む。

【0049】

本発明概念の好ましい実施態様において、上記のように調製された抗原調製物を、添加の間に結合していない物質を除きながら、連続的で段階的な方法で試験表面に吸着させる。例えば、食物から調製された抗原調製物は、吸着を可能にするのに十分な時間、試験表面に適用され得る。かかる時間は、０．５〜４８時間の範囲であってよく、４℃〜５０℃の範囲の温度で行われ得る。結合していない物質はその後、同じ食物に由来する第二の、異なる抗原調製物の吸着の前に、例えばピペッティングにより除かれる。随意に、試験表面は、第二のおよび／またはそれに続く抗原調製物とそれを接触させるより前に洗浄され得る。かかる洗浄は、界面活性剤を含み得る洗浄バッファ―を用いて行われ得る。適切な界面活性剤としては、ポリオキシエチレン ソルビタン モノラウレ―ト（Ｔｗｅｅｎ ２０）、ポリオキシエチレン ソルビタン モノオレエ―ト（Ｔｗｅｅｎ ８０）、４―（１，１，３，３―テトラメチルブチル）フェニル―ポリエチレン グリコ―ル（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ―１００）、および／またはオクチルフェノキシ ポリ（エチレンオキシ）エタノ―ル（ノニデットＰ４０）が挙げられる。このプロセスを、同じ食物からの、さらなる（例えば、第三の、第四の、第五の、およびまたは第六の）食物抗原調製物を用いて繰り返して、連続的にコ―トされた試験表面を産生できる。

【0050】

驚くべきことに、抗原調製物へのおよび界面活性剤を含有する洗浄バッファ―への事前の暴露にもかかわらず、多くの共通の試験表面（例えば、ポリスチレンマイクロウェル）が、さらなる抗原性物質を吸着させる能力を保持することを見出した。最後の抗原調製物の適用に続いて、試験表面の残りの吸着部位を、ブロッキングバッファ―の適用によりブロックできる。かかるブロッキングバッファ―は、試験表面に残留する吸着またはカップリング部位を占拠するが、ほかのアッセイ構成要素との有意な相互作用をもたらさない、１つ以上のタンパク質（すなわち、ブロッキングタンパク質）を含有し得る。適切なブロッキングタンパク質の例としては、適切な種からの血清アルブミン、オボアルブミン、ゼラチン、乳タンパク質、および非特異的イムノグロブリンが挙げられる。
驚くべきことに、本発明者らは、多重の抗原抽出物を含む試験表面が、試験表面への適用より前にかかる抗原抽出物を混合することによっては効果的に産生されないことを見出した。かかる混合物は不安定であり、試験表面への適用の前に、少なくともいくつかの抗原性化合物が除かれた沈殿の形成をもたらすことが証明された。かかる抗原の喪失は特定の食物について偽陰性の結果をもたらし得るため、これは非常に望ましくない。驚くべきことに、本発明者らは、食物抗原調製物を試験表面に連続的に適用することは、より広くさまざまな食物抗原が存在する試験表面を生成することを見出した。本発明概念のいくつかの実施態様において、食物抗原調製物は、特定の順番で添加される。例えば、多重食物抗原調製物は、以下の順番でうまく適用され得る：第一にアルカリ可溶性タンパク質、その後アルコ―ル可溶性タンパク質、その後水溶性タンパク質、その後多糖、その後糖脂質、および最後に糖タンパク質。本発明概念のほかの実施態様において、分離した異なる工程で試験表面に異なる抗原調製物が適用されるのであるならば、異なる添加の順番が適切であり得る。いくつかの実施態様において、上記に議論された食物抗原調製物の１つ以上が、コ―ティングプロセスから省略され得ることも理解されるべきである。

【0051】

実施例
実施例１：さまざまな食物からのタンパク質の抽出
さまざまな食物源からの水溶性、アルコ―ル可溶性、およびアルカリ溶解性タンパク質の抽出に適した方法は以下のとおりである：
工程１― それぞれのタンパク質抗原調製のため、乾燥豆、ナッツ、種子およびスパイスの２グラムまたは非乾燥の果物または野菜の２０グラムを、３つの異なる溶媒／バッファ―（指定されたＡ、ＢおよびＣ）の一つの中で、粉砕する（ｇｒｉｎｄ）または粉砕する（ｍｉｌｌ）：
Ａ． 水溶性タンパク質用の、０．１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ ７．２）１００ｍＬ
Ｂ． アルコ―ル可溶性タンパク質用の、７０％エタノ―ル１００ｍＬ
Ｃ． アルカリ可溶性タンパク質用の、０．１Ｍ ＫＯＨ（ｐＨ １０．０）１００ｍＬ。
工程２― 細胞を溶解するために、２〜５分の超音波処理を適用する。２ｍＬの界面活性剤（１，１，３，３―テトラメチルブチル）フェニル―ポリエチレングリコ―ルまたはｎ―ドデシル―β―Ｄ―マルトシド）を添加し、さらに２〜５分間、超音波処理を繰り返す。
工程３― 混合物を２時間、撹拌し、その後それぞれの調製物を１０，０００ｇで１５分間、遠心分離する。上清を除く。
工程４― それぞれの上清を別々の透析バッグ（６，０００ダルトンＭＷカットオフ）に移し、特定の溶媒に対して透析する。例えば、ＰＢＳ中に溶解したタンパク質抗原の溶液については、透析はＰＢＳに対して行うべきである。同様に、ＫＯＨを用いて抽出されたタンパク質抗原については、透析は０．１Ｍ ＫＯＨに対して行うべきである。
工程５―透析の４８時間後に、透析された溶液を回収し、１４，０００ｇで１５分間、遠心分離する。タンパク質濃度の測定のために試料を取り出し得る；残っているタンパク質抗原調製物は、免疫学的アッセイにおける使用のため必要とされるまで、―２０℃で保存され得る。

【0052】

実施例２：さまざまな食物からの糖脂質の抽出
さまざまな食物源からの、糖脂質の抽出に適した方法は以下のとおりである。
工程１― ２グラムの乾燥豆、ナッツ、種子およびスパイス、または２０グラムの非乾燥の果物もしくは野菜を、１００ｍＬの水の中で粉砕する（ｇｒｉｎｄ）または粉砕する（ｍｉｌｌ）。
工程２― ２〜５分の超音波処理を適用して細胞を溶解する。
工程３― １２０ｍＬのクロロホルム：メタノ―ル（２：１、ｖ：ｖ）を添加し、超音波処理を繰り返す。
工程４― ６００μｌのピリジンを添加し、混合物を５０℃で２４時間インキュベ―ションして、単純脂質、リン脂質および糖脂質を抽出する。
工程５― クロロホルム：メタノ―ル抽出物を、ＤＥＡＥベ―スのイオン交換媒体に適用する；その後、クロロホルム：メタノ―ル：酢酸ナトリウム（１：２：１、ｖ：ｖ：ｖ）を用いて、カラムから糖脂質を溶出する。
工程６― ０．１Ｎ水酸化ナトリウム／メタノ―ル溶液を用いて溶出された糖脂質を加水分解し、酢酸を用いて中和し、その後Ｃ―１８逆相カラムへの結合およびそれに続くそこからの溶出により脱塩する。
工程７― 脱塩された糖脂質をクロロホルム：メタノ―ル（２：１、ｖ：ｖ）中に溶解する。
工程８― ロ―タリ―エバポレ―タ―を用いて５５℃で溶解した糖脂質から有機溶媒を除く。この乾燥された物質は、―２０℃で保存することができる。
工程９― 使用するため、糖脂質を７０％メタノ―ル中に懸濁し、２分間、室温で超音波処理する。

【0053】

実施例３―さまざまな食物からの多糖の調製
果物、野菜、または豆から多糖を産生するのに適した方法は以下のとおりである。
工程１― ２グラムの乾燥豆、ナッツ、種子およびスパイス、または２０グラムの非乾燥の果物もしくは野菜を、１００ｍＬの水中で、粉砕する（ｇｒｉｎｄ）または粉砕する（ｍｉｌｌ）。
工程２― 細胞を溶解するために、２〜５分の超音波処理を適用する。
工程３― １００ｍｇのセルラ―ゼを添加し、３７℃で４時間インキュベ―ションする。
工程４― 温度を１００℃に上昇させ、６０分間インキュベ―ションする。
工程５― １０，０００ｇで１５分間、遠心分離し、上清を保持する。
工程６―４：１クロロホルム：ブチルアルコ―ル（４：１、ｖ：ｖ）を添加してセルラ―ゼを含む、フリ―のタンパク質を除く。
工程７― ４体積の９５％エタノ―ルを添加することによりタンパク質除去された溶液から多糖を沈殿させ、その後、１００ｍＬの水中に沈殿物を再溶解する。
工程８― 標準としてグルコ―スを用いて中性糖含有量を決定し（例えば、Ｄｕｂｏｉｓ ｅｔ ａｌ， １９５６のフェノ―ル―硫酸比色分析法により）、単糖構成をさらに特性評価する（例えば、Ｓｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ ２００７の方法により）。多糖調製物は、免疫学的アッセイにおける使用のため必要とされるまで、―２０℃で保存され得る。

【0054】

実施例４―さまざまな食物からの糖タンパク質の抽出
さまざまな食物源からの、糖タンパク質の抽出に適した方法は以下のとおりである。
工程１― １００グラムの果物、野菜、豆、マメ科植物、ナッツ、種子、スパイス、ハ―ブ、乳製品、卵、肉、海産食物、ガムまたは飲料を、ミキサ―中で粉砕する（ｇｒｉｎｄ）または粉砕する（ｍｉｌｌ）。
工程２― １００ｍＬの２％（ｗ／ｖ）ＣａＣｌ_２を添加し、５分間ホモジナイズする。
工程３― 細胞を溶解するために、３分の超音波処理を適用する。
工程４― 混合物を２時間、室温で撹拌し、その後、溶液を１０，０００ｇで３０分間、遠心分離する。上清を保持する。
工程５― １２０ｍｇの１，３，５―Ｐ―β―Ｄ―ガラクトシル―オキシフェナゾ）２，４，６―トリヒドロキシベンゼンを含有する２％（ｗ／ｖ）ＣａＣｌ_２１２０ｍＬを添加し、糖タンパク質を沈殿させるために１時間撹拌する。
工程６― １０分間、２，０００ｇで遠心分離することにより、糖タンパク質を含有する沈殿物を収集する。
工程７― １５ｍＬの蒸留水中に沈殿物を溶解する。
工程８― ５ｍＬの蒸留水中に溶解した５０ｍｇの二亜硫酸ナトリウムを添加してジアゾ結合を還元する。
工程９― 糖タンパク質を含有するチュ―ブにしっかりと蓋をかぶせ、５０℃で２０分間インキュベ―ションする。
工程１０― 分画分子量を有する透析膜を用いて、還元された糖タンパク質溶液を３リットルの蒸留水に対して３日間、毎日、水を交換して透析する。
工程１１― 透析された物質を、１４，０００ｇで１５分間、遠心分離する。糖タンパク質濃度は、Ｒｏｃｈｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ， Ｉｎｄｉａｎａ）からのＤＩＧ ＧＬＹＣＡＮ ＤＥＴＥＣＴＩＯＮ ＫＩＴ（登録商標）を用いて測定できる。調製物は、免疫学的アッセイにおいて使用されるまで、―２０℃で保存され得る。

【0055】

実施例５―抗体の測定のための固体マトリックスへのさまざまな食物抽出物の結合
同じ試験表面へ上記のように抽出された抗原調製物を用いる成功を収めたプレ―トコ―ティングにおいて、結合していない物質を除くために連続的な添加の間に提供される洗浄工程を伴い、同じ試験表面に異なる抽出物が連続的に添加される。マイクロウェルプレ―トのウェルへの添加の適切な順番は以下のとおりである。
工程１― プレ―トにアルカリ可溶性タンパク質を添加し、続いて４℃で２４時間のインキュベ―ション、その後ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ２０を用いて洗浄する。
工程２― プレ―トにアルコ―ル可溶性タンパク質を添加し、続いて４℃で２４時間のインキュベ―ション、その後ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ２０を用いて洗浄する。
工程３― プレ―トに水溶性タンパク質を添加し、続いて４℃で２４時間のインキュベ―ション、その後ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ２０を用いて洗浄する。
工程４―プレ―トに多糖を添加し、続いて４℃で２４時間のインキュベ―ション、その後ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ２０を用いて洗浄する。
工程５― プレ―トに糖脂質を添加し、続いて４℃で２４時間のインキュベ―ション、その後ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ２０を用いて洗浄する。
工程６― プレ―トに糖タンパク質を添加し、続いて４℃で２４時間のインキュベ―ション、その後ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ２０を用いて洗浄する。
工程７― ６つのすべての抗原の調製物がプレ―トに添加されかつその中に含有される抗原が固体マトリックスに結合させられた後で、２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン、２％（ｗ／ｖ）オボアルブミン、２％（ｗ／ｖ）粉乳、２％（ｗ／ｖ）ゼラチン、または２％（ｗ／ｖ）硬骨魚ゼラチンを添加することにより、残っている非特異的な結合部位を飽和状態にする。ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ２０を用いる最後の洗浄後に、プレ―トは、抗体および／またはＣ１ｑ測定のために使用されるまで、４℃で保存され得る。

【0056】

実施例６― さまざまな食物の抽出物の組合せに対する、血液中のＩｇＧ、ＩｇＡ抗体およびイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体の検出のためのアッセイ手順
以下の手順は、実施例５による食物抽出物の組合せを用いてコ―トしたマイクロウェルプレ―トの使用について記載する。試験チュ―ブ、ニトロセルロ―ス紙、微小粒子懸濁液、およびほかのマトリックスが使用され得ることが、理解されるべきである。

【0057】

血清試料を個人から静脈穿刺（ｖｅｎｉｐｕｎｔｕｒｅ）により収集し、２０分間室温で静置した。血漿、全血、唾液、粘液、滑液流体、および／または脳脊髄液を含む、ほかの試料タイプも適している。１０分間、８００ｇでの遠心分離後、血清を取り出し―４０℃で保存した。

【0058】

洗浄バッファ―を以下のとおり調製した：５００ｍＬの目盛り付きシリンダ―中で、５０ｍＬの１０ｘ洗浄バッファ―（３．０Ｌの蒸留または脱イオンＨ_２Ｏで希釈した１．０Ｌの１ｘＰＢＳ；１．５ｍＬのＴｗｅｅｎ２０；４００ｍｇのアジ化ナトリウム）に４５０ｍＬの水を添加した。溶液を混合し、５００ｍＬのスクイ―ズボトルに移し、使用するまで２〜８℃で保存した。

【0059】

抗イムノグロブリンおよび抗Ｃ１ｑ抗体を以下のとおり調製した：１００μｌの酵素―標識抗ヒトＩｇＧ、抗ヒトＩｇＡ、抗ヒトＩｇＧプラス抗Ｃ１ｑ補体、または抗ヒトＩｇＡプラス抗Ｃ１ｑ補体を、０．１Ｍ ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ２０および２％ＢＳＡを含有する２０〜５０ｍＬのコンジュゲ―ト希釈物に添加し、血清中の抗体および／またはＣ１ｑ抗体コンジュゲ―トの検出のために使用した。

【0060】

空のポリプロピレンチュ―ブ中で５ｍｇの基質タブレットにつき５ｍＬの基質バッファ―を添加することにより、基質溶液を使用の直前に調製した。チュ―ブに蓋をかぶせ、混合してタブレットを溶解し、その後、溶液を直ちに使用した。マイクロウェルストリップあたり、およそ１ｍＬの基質溶液を使用した。

【0061】

抗体およびＣ１ｑプロファイルの特性評価のため、０．１Ｍ ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ２０および２％ＢＳＡを含有する４ｍＬの希釈バッファ―への４０μｌ血清の添加により、血清を１：１００（ｖ／ｖ）希釈した。］。この希釈は必要に応じて適合させることができ、１：２０（ｖ／ｖ）〜１：４００（ｖ／ｖ）の範囲であり得ることが、理解されるべきである。それぞれの食物について調製した複製ウェルに希釈した血清を添加し４℃〜２５℃で３０〜６０分間インキュベ―ションした。このインキュベ―ションは、１５分程度に短く、および２４時間程度に長くてよい。インキュベ―ション後に、０．１Ｍ ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ２０などの洗浄バッファ―を用いて３〜６回プレ―トを洗浄し、その後、すべてがアルカリホスファタ―ゼなどの酵素で標識された、１００μｌの適切に希釈された抗ヒトＩｇＧ、抗ヒトＩｇＡまたは抗ヒトＩｇＧプラス抗ヒトＣ１ｑを試験されるウェルに添加する。かかる抗イムノグロブリンおよび抗Ｃ１ｑコンジュゲ―トに適した希釈は、約１：２００〜約１：１０００（ｖ／ｖ） の範囲であり得る。

【0062】

その後、マイクロウェルプレ―トまたはストリップをカバ―し、６０分間、室温（すなわち、２２℃〜２５℃）でインキュベ―ションする。その後、液体をすべてのウェルから除き、約２００μＬの洗浄バッファ―を用いてウェルを４回洗浄する。その後、１００μｌのｐ―ＮＰＰ基質溶液を、反応の読取りに使用される機器の読取り時間に相当する時限間隔で、ウェルに添加する（例えば、機器が単一のウェルからデ―タを取得するために３０秒を必要とする場合、３０秒間隔でウェルに基質を添加する）。それぞれのウェル中での基質のインキュベ―ション時間は、２２℃〜２５℃の温度で、４５分〜６０分である。より高い温度で基質インキュベ―ション工程を行う場合この時間を減少させることができることが、理解されるべきである。酵素反応は、ｐ―ＮＰＰを添加したのと同じ時限間隔でウェルに５０μｌの３Ｎ ＮａＯＨを添加することにより停止される。その後、マイクロウェルプレ―トを、１〜２分間、振とうする。読取りの前に、非研磨紙タオルを用いてマイクロウェルプレ―トの底を拭い、機器をブランクウェル上でゼロに設定する。酵素反応停止の３０分以内に、４０５ｎｍ±５ｎｍで光学密度（ＯＤ）を読み取り、値を記録する。

【0063】

力価または抗体レベルは、以下の式を用いるプログラムを実装するコンピュ―タ―を用いて決定され得る：
１） ＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＧ＋Ｃ１ｑインデックス＝
（試験標本の吸光度）／（キャリブレ―タ―の吸光度）
２） ＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＧ＋Ｃ１ｑレベル＝
（（キャリブレ―タ―の値）Ｘ（試験標本の吸光度））／（キャリブレ―タ―の吸光度）

【0064】

正確な決定のため、吸光度は、二地点間のデ―タ減少方法を用いて濃度値に変換され得る。代替として、最良の適合線形回帰を使用して値を得てもよい。

【0065】

値は、自動化されたＥＬＩＳＡリ―ダ―を用いて得られる。Ｘ軸は、それぞれのキャリブレ―タ―の濃度値であった。Ｙ軸は、光学密度（ＯＤ）として表現される、相当する平均吸光度値であった。最良の適合線が生成された。それぞれの患者の唾液または血清の濃度を、Ｙ軸上のその吸光度を位置づけてＸ軸上の相当する濃度値を見出すことにより得た。代表的なキャリブレ―ション曲線の例を図１に示す。濃度は相対単位で表現され、これは実際にはキャリブレ―ションする種の性質に依存する。

【0066】

第一の患者から得られた血清を用いて得られた結果を図２に示す。図２は、１８０の試験された食物から調製された抗原に対するＩｇＧ抗体の上昇を示し、これは上記のように連続的にコ―トされたマイクロウェルプレ―トのウェルを用いて特性評価され、抗ヒトＩｇＧのみでプロ―ブされた。０．５Ｏ．Ｄ．のカットオフ光学密度値が非上昇値の分布に基づいて選択され、この値を上回る光学密度は陽性応答を示唆する。ここで留意すべきは、０．５のカットオフを用いる本実施例において、バナナ、パイナップル、ショウガ、バニラ、ア―ティチョ―ク、アスパラガス、キャベツ、トウモロコシ、ナス、オリ―ブ類、ピクルス、フライドポテト、海草、レンティル レクチン、ピ―カン、卵白および模造カニに対する有意な上昇が観察されることである。ほかの１６３の食物抽出物に対するＩｇＧ免疫反応性は、０．５ＯＤを下回るかまたは陰性であった。

【0067】

同じ試料についてであるがマイクロウェルプレ―トのウェルが抗Ｃ１ｑ抗体のみでプロ―ブされた場合の結果を、図３に示す。図３は、１８０の試験された食物から調製された抗原混合物へのＣ１ｑ結合（天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体の形態での）のレベルにおける上昇を示す。ここで留意すべきは、ｃ１ｑがこのようにして測定されＩｇＧのみが測定された場合に陽性でなかった１２の異なる新規の食物抽出物に対してこの複合体の濃度が有意に上昇することである。これらの抽出物は、ラテックス ヘベイン、ニンニク、タマネギ、エンドウ レクチン、大根、コメ エンドキチナ―ゼ、食物着色料、マグロ、エビ、ガムおよび緑茶である。さらに、ここで留意すべきは、抗ヒトＩｇＧで同様のウェルがプロ―ブされた場合、これらの１２食物について、ＩｇＧの濃度は０．５を下回るかまたは陰性であった（図２を参照）ことである。

【0068】

同じ試料についてであるがマイクロウェルプレ―トのそれぞれのウェルが抗Ｃ１ｑ抗体と抗ヒトＩｇＧの両方のみでプロ―ブされた場合の結果を、図４に示す。図４は、抗ヒトＩｇＧおよび抗ヒトＣ１ｑの両方を同時に適用することによりＩｇＧおよびＣ１ｑ―ＩｇＧ複合体の組合せが測定される場合、ＩｇＧまたはＣ１ｑ―ＩｇＧのいずれかが測定された場合に反応性であったすべての食物抽出物（図２および３に示すとおり）が、非常に反応性になったことを示す。ほかの１５１の食物について、光学密度は０．５を下回るかまたは陰性であった。

【0069】

これらの発見は、ＩｇＧ抗体結合のみがこの個人の血清について特性評価されたならば、１７の食物抽出物のみに対する反応性が検出されたであろうことを実証する。同様に、天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体のみが測定されるならば、患者のＣ１ｑプロファイルは、ＩｇＧ測定単独によっては検出されなかった１２の食物抽出物に対する反応を示す。しかしながら、ＩｇＧおよびＣ１ｑ―ＩｇＧのいずれもが同時に測定される場合、２９すべての食物抽出物に対する反応性を示すプロファイルが生成され（図４に示す）、ＩｇＧにより検出される１７（図２に示す）およびＣ１ｑ―ＩｇＧ評価により検出されるさらなる１２（図３に示す）の両方を組み合わせる。

【0070】

図５、６および７は、異なる個人での同様の研究の結果を示す（すなわち、１８０の食物抽出物に対するＩｇＧ、天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体、およびＩｇＧ＋天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ抗体プロファイル）。ここで留意すべきは、ＩｇＧ測定について１８０の食物抽出物のうち１０のみが反応性であり（図５）、天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体が測定された場合１４の食物が反応性であった（このうち１１は、天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑプロファイルに特有であった、図６を参照） ことである。ＩｇＧおよび天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑの両方が特性評価された場合、組み合わされたプロファイルは、２１の食物抽出物に対する反応性が上昇することを示す（図７に示すとおり）。この組み合わされたプロファイルは、ＩｇＧにより検出される１０の食物抗原（図５に示す）および天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体について検出されるさらなる１１（図６に示す）の組み合わせを表す。

【0071】

これは、食物の免疫反応性の最適な検出のため、試験されたそれぞれの食物に由来する異なる抗原集団の組み合わせでコ―トされた試験表面を利用して、ＩｇＧプラス天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体プロファイルの組み合わせが生成されるべきであることを実証する。

【0072】

図８、９、１０、および１１は、それぞれ、４つの異なる食物のセットに由来する抗原でコ―トされた、血清処理された試験表面に対する、抗ＩｇＧプラス抗Ｃ１ｑ抗体結合の研究の表形式の結果を描写する。試験表面は、主に水溶性構成要素を含有する商業用食物抗原調製物、上記のように抽出される非商業用水溶性タンパク質、上記のように抽出される非商業用アルコ―ル可溶性タンパク質、上記のように抽出される非商業用アルカリ可溶性タンパク質、上記のように抽出される非商業用糖脂質、上記のように抽出される非商業用多糖、および上記のように抽出される非商業用糖タンパク質を含む、異なる抗原調製物でコ―トされた。個別の抗原調製物でコ―トされた試験表面についての、および６つのすべての非商業用抗原調製物の組み合わせでコ―トされた試験表面についての結果を示す。さらに、熱処理された／調理された食物からの非商業用抗原調製物の組合せで処理された表面からの結果を示す。０．５より大きい光学密度を示す結果が、このデ―タセットについて陽性とみなされた。

【0073】

商業用食物抗原調製物および水溶性食物構成要素に対する抗体検出の間に良好な相関がある一方、これらの測定をアルコ―ル可溶性、アルカリ可溶性、糖脂質、多糖および糖タンパク質構成要素で得られたものと比較した場合、免疫反応性における有意差が見出される。同様の差が、このような食物抗原調製物を用いて連続的にコ―トされた試験表面との比較においてみられる。

【0074】

例えば、ＩｇＧおよび天然のＩｇＧ―Ｃｑ複合体の結合が、商業用バナナ抽出物に対し特性評価される場合（図８を参照）、結果は０．５８の光学密度（ＯＤ）であり、または非常に弱く陽性である。上のように調製された水溶性抽出物を用いると、ＯＤは０．６５になり、これは弱く陽性（または「＋」）である。しかし、バナナ多糖に対して特性評価された場合、Ｏ．Ｄ．は０．９８に上がり、または（＋＋）であり、６つのすべての抽出物の混合物でＯＤは１．７３（＋＋＋＋）に上がる。同様に、熱変性させたバナナ抗原混合物を用いると、結果として生じるＯＤは１．４８（＋＋＋）であった。これらの発見は、アッセイにおいて商業用抗原のみが使用されたならば、バナナに対する強い免疫反応性は検出されないであろうことを実証する。

【0075】

同様のパタ―ンがトウモロコシで見られた。（図８を参照）。ＩｇＧプラス天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体が測定された場合、結果は、商業用トウモロコシ抽出物に対して０．４８のＯ．Ｄ．または（±）であり、水溶性抽出物では０．５６または（＋）であり、アルコ―ル可溶性抽出物では１．４または（＋＋＋）であり、アルカリ可溶性抽出物では０．９３または（＋＋）であり、糖脂質調製物では０．７２または（＋）であり、多糖調製物では０．８６または（＋＋）であった。これらの６つの抽出物を用いて連続的にコ―トされた試験表面に対して測定された場合、Ｏ．Ｄ．は２．８４または（＋＋＋＋＋）であり、これは免疫反応性の高い程度を示す。

【0076】

キノコ（図９を参照）は別の良い例であり、免疫反応性が商業用抽出物での０．４５のＯ．Ｄ．または（±）から、水溶性抽出物での３．１１（＋＋＋＋＋）に上昇し、さらに、すべての熱変性させた抗原調製物で連続的に処理された試験表面を用いて３．５２（＋＋＋＋＋＋）に上昇する。同様に、エンドウ（図９）、イモ（図９）、コメ（図１０）、ゴマ種子（図１０）、ホウレンソウ（図１０）、トマト（図１０）、小麦（図１０）、および卵黄（図１０）についてのＯ．Ｄは、検討に耐える。卵黄に対し、水溶性抽出物構成要素は実際にはＩｇＧまたは天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体を検出しなかった（―）が、しかしながらＯ．Ｄ．はアルコ―ル可溶性構成要素で０．３６まで上がり、すべての抗原調製物を用いて連続的にコ―トされた試験表面が使用された場合、３．３１（＋＋＋＋＋）まで上がった。水溶性タンパク質を有する卵白（図１０）では、同様の反応性の（＋＋＋＋）が観察された。同様の結果は、エビ（図１１）、ア―モンド（図１１）、ブラジルナッツ（図１１）、ピ―ナッツ（図１１）、および小麦でも検出された。

【0077】

注目すべきことに、エビおよびア―モンドの場合にＩｇＧおよび天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体の結合は、すべての抗原調製物を用いて連続的にコ―トされた試験表面を用いて測定された場合有意に変化した。ここでまた留意すべきは、エビについて抽出物混合物が使用された場合、熱変性が２．７６（＋＋＋＋＋）から１．２（＋＋）へのＯ．Ｄ．の減少をもたらす一方で、混合物の熱変性は、ア―モンドについて０．５から１．６に、ブラジルナッツについて１．３６から２．４９に増強される免疫反応性をもたらしたことである。最後の例として、ピ―ナッツに対するＩｇＧプラス天然のイムノグロブリン―Ｃ１ｑ複合体のＯ．Ｄ．は、商業用抽出物での１．５１から、すべての抽出物を用いて連続的にコ―トされた試験表面が使用された場合２．１８に上がり、混合物が熱変性された場合３．９８へとさらに上がった。

【0078】

これは、ＩｇＧおよび／または免疫複合体を含有するＣ１ｑのより精密な特性評価のため、それらの生の形態の食物、および適用され得る場合、熱変性されたまたは調理された形態の食物から調製される水溶性構成要素、アルコ―ル可溶性構成要素、アルカリ可溶性構成要素、糖脂質、多糖、糖タンパク質から作られる抽出物を用いて連続的にコ―トされた試験表面が、最も完全な結合プロファイルを産生するために使用されるべきであることを示す。

【0079】

試料からのＩｇＧについての結果が上に書き留められているが、本発明概念の試験表面に結合するＩｇＡについて試験することから同様に改良された結果が予期されることが、理解されるべきである。本発明概念の試験表面に結合するＩｇＥ、ＩｇＭ、および／またはＩｇＤの特性評価が、それぞれの食物から単一の抗原抽出または調製方法を用いて調製された試験表面から得られるものより、食物抗原に対する抗体応答のより完全で、敏感な、および／または精密なアセスメントを提供すると予期されることも理解されるべきである。本発明概念のいくつかの実施態様において、異なる抗体種が、同じ試験表面を利用して組み合わせて試験され得る。例えば、同じ試験表面に結合するＩｇＧおよびＩｇＡの両方が、同時に決定され得る。同様に、同じ試験表面へのＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥが同時に決定され得る。本発明概念のほかの実施態様において、同じ試験表面に結合するＩｇＧおよびＩｇＥが同時に決定され得る。さらにほかの実施態様において、同じ試験表面に結合するＩｇＡおよびＩｇＥが同時に決定され得る。

【0080】

Ｃ１ｑが具体的に上に引用されているが、１つ以上のＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、および／またはＩｇＤと同時にほかの補体種について試験することから同様に改良された結果が予期されることも理解されるべきである。適切な補体構成要素は、Ｃ１ｒおよび／またはＣ１ｓを含む、古典的補体パスウェイに関係するものを含む。いくつかの実施態様において、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、および／またはＣ１ｓは、同じ試験表面を用いて、１つ以上のＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、および／またはＩｇＤと合わせて（すなわち、同時に）特性評価される。同様に、１つ以上のＣ４、Ｃ２、Ｃ４ａ、Ｃ４ｂ、Ｃ２ａ、Ｃ２ｂ Ｃ３、Ｃ３ａ、およびＣ３ｂは、同じ試験表面を用いて、１つ以上のＣ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、および／またはＩｇＤと同時に特性評価され得る。

【0081】

参考文献：
１． Ｖｏｊｄａｎｉ Ａ． Ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｌｉｎｋ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｔｒｉｇｇｅｒｓ ａｎｄ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ． Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ． Ｖｏｌｕｍｅ ２０１４， Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ ４３７２３１， １８ ｐａｇｅｓ． ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１５／２０１４／４３７２３１， ２０１４．
２． Ｖｏｊｄａｎｉ Ａ． Ｆｏｏｄ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｎｅｕｒｏａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ． Ｆｕｎｃｔ Ｎｅｕｒｏｌ Ｒｅｈａｂｉｌ Ｅｒｇｏｎ． ２０１４；４（２―３）：１７５―１９５．
３． Ｊｏｈｎｓｔｏｎ ＬＫ， Ｃｈｅｎ ＫＢ， Ｂｒｙｃｅ ＰＪ． Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｆｏｏｄ ａｌｌｅｒｇｙ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０１４；１９２：２５２９―２５３４．
４． Ｖｏｊｄａｎｉ Ａ， Ｋｈａｒｒａｚｉａｎ Ｄ， Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ ＰＳ． Ｔｈｅ ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｗｈｅａｔ ａｎｄ ｍｉｌｋ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｂｌｏｏｄ ｄｏｎｏｒｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｔｏ ｎｅｕｒｏａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｒｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ． Ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ． ２０１４；６：１５―３６．
５． Ｈｏ ＭＨ， Ｗｏｎｇ ＷＨ， Ｃｈａｎｇ Ｃ． Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｏｆ ｆｏｏｄ ａｌｌｅｒｇｉｅｓ： ａ ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｒｅｖｉｅｗ． Ｃｌｉｎ． Ｒｅｖ． Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０１２；ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ１２０１６―０１２―８３３９―６．
６． Ｍｉｙａｊｉｍａ Ｉ， Ｄｏｍｂｒｏｗｉｃｚ Ｓ， Ｍａｒｔｉｎ ＴＲ ， Ｒａｖｅｔｃｈ ＪＶ， Ｋｉｎｅｔ ＪＰ， Ｇａｌｌｉ ＳＪ． Ｓｙｓｔｅｍｉｃ ａｎａｐｈｙｌａｘｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｃａｎ ｂｅ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｌａｒｇｅｌｙ ｔｈｒｏｕｇｈ ＩｇＧ１ ａｎｄ Ｆｃ ｇａｍｍａＲＩＩＩ． Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｒｄｉｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｃｈａｎｇｅｓ， ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ｄｅｇｒａｎｕｌａｔｉｏｎ， ａｎｄ ｄｅａｔｈ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｃｔｉｖｅ ｏｒ ＩｇＥ― ｏｒ ＩｇＧ１―ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐａｓｓｉｖｅ ａｎａｐｈｙｌａｘｉｓ． Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． １９９７；９９：９０１−１４．
７． Ｓｔｒａｉｔ ＲＴ， Ｍｏｒｒｉｓ ＳＣ， Ｙａｎｇ Ｍ， Ｑｕ ＸＷ， Ｆｉｎｋｅｌｍａｎ ＦＤ． Ｐａｔｈｗａｙｓ ｏｆ ａｎａｐｈｙｌａｘｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ． Ｊ． Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２００２；１０９： ６５８−６６８．
８． Ｓｍｉｔ ＪＪ， Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎ Ｋ， Ｈａｓｓｉｎｇ Ｉ， Ｆｉｅｃｈｔｅｒ Ｄ， Ｓｔｏｒｍ Ｇ， ｖａｎ Ｂｌｏｏｉｓ Ｌ， Ｌｅｕｓｅｎ ＪＨ， Ｐｅｎｎｉｎｇｓ Ｍ， Ｚａｉｓｓ Ｄ， Ｐｉｅｔｅｒｓ ＲＨ． Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｃｌａｓｓｉｃ ａｎｄ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎ ｐｅａｎｕｔ―ｉｎｄｕｃｅｄ ａｎａｐｈｙｌａｃｔｉｃ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ． ＰＬｏＳ ＯＮＥ． ２０１１；６：ｅ２８９１７．
９． Ｍａｎｃａｒｄｉ ＤＡ， Ａｌｂａｎｅｓｉ Ｍ， Ｊｏｎｓｓｏｎ Ｆ， Ｉａｎｎａｓｃｏｌｉ Ｂ， Ｖａｎ Ｒｏｏｉｊｅｎ Ｎ， Ｋａｎｇ Ｘ， Ｅｎｇｌａｎｄ Ｐ， Ｄａｅｒｏｎ Ｍ， Ｂｒｕｈｎｓ Ｐ． Ｔｈｅ ｈｉｇｈ―ａｆｆｉｎｉｔｙ ｈｕｍａｎ ＩｇＧ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＦｃｇＲＩ （ＣＤ６４） ｐｒｏｍｏｔｅｓ ＩｇＧ―ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ， ａｎａｐｈｙｌａｘｉｓ， ａｎｄ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ． Ｂｌｏｏｄ． ２０１３；１２１：１５６３―１５７３．
１０． Ｌｉｍ ＰＬ， Ｒｏｗｌｅｙ Ｄ． Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ａｎｄ ｏｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ａｄｕｌｔ ｍｉｃｅ． Ｉｎｔ Ａｒｃｈ Ａｌｌｅｒｇｙ Ａｐｐｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９８２；６８．４１―４６．
１１． Ｔｓｕｊｉ ＮＭ， Ｋｏｓａｋａ Ａ． Ｏｒａｌ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ： ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ａｎｄ ａｎｔｉｇｅｎ―ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ． Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２００８；２９（１１）：５３２―５４０． Ｄｏｉ１０．１０１６／ｊ．ｉｔ．２００８．０９．００２．
１２． Ｍａｕｌ Ｊ， Ｄｉｃｈｍａｎｎ Ｒ． Ｃａｎ ｌｏｓｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｃａｕｓｅ ＩＢＤ？ Ｉｎｆｌａｍｍ Ｂｏｗｅｌ Ｄｉｓ． ２００８；１４（２）：Ｓ１１５―Ｓ１１６．
１３． Ｂｒａｎｄｔｚａｅｇ Ｐ， Ｔｏｌｏ Ｋ． Ｍｕｃｏｓａｌ ｐｅｎｅｔｒａｂｉｌｉｔｙ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｂｙ ｓｅｒｕｍ―ｄｅｒｉｖｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ． Ｎａｔｕｒｅ． １９７７；２６６．２６２―２６３．
１４． Ｂａｒｎｅｓ ＲＭＲ． ＩｇＧ ａｎｄ ＩｇＡ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ ｄｉｅｔａｒｙ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｉｎ ｆｏｏｄ ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ ｉｎｔｏｌｅｒａｎｃｅ． Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ． １９９５；２５：７―９．
１５． Ｓｃｈｒａｎｄｅｒ ＪＪ， Ｍｒａｃｅｌｉｓ Ｃ， ｄｅ Ｖｒｉｅｓ ＭＰ， ｖａｎ Ｓａｎｔｅｎ―Ｈｏｅｕｆｆｔ ＨＭ． Ｄｏｅｓ ｆｏｏｄ ｉｎｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｐｌａｙ ａ ｒｏｌｅ ｉｎ ｊｕｖｅｎｉｌｅ ｃｈｒｏｎｉｃ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ？ Ｂｒ Ｊ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ． １９９７；３６：９０５．
１６． Ｌｕｎａｒｄｉ Ｃ， Ｂａｍｂａｒａ ＬＭ， Ｂｉａｓｉ Ｄ， Ｚａｇｎｉ Ｐ， Ｃａｒａｍａｓｃｈｉ Ｐ， Ｐａｃｏｒ ＭＬ． Ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ ｄｉｅｔ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ． Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ． １９９２；１０：１３１．
１７． Ｌｕｎａｒｄｉ Ｃ， Ｎａｎｎｉ Ｌ， Ｔｉｓｏ Ｍ， ｅｔ ａｌ． ｇｌｙｃｉｎｅ―ｒｉｃｈ ｃｅｌｌ ｗａｌｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｃｔ ａｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｔａｒｇｅｔｓ ｉｎ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ａｎｄ ｆｏｏｄ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ． Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０００；１２：６４７―６５７．
１８． Ｂａｂｏｏｎｉａｎ Ｃ， Ｈａｌｌｉｄａｙ Ｄ， Ｖｅｎａｂｌｅｓ ＰＪＷ， Ｐａｗｌｏｗｓｋｉ Ｔ， Ｍｉｌｌｍａｎ Ｇ， Ｍａｉｎｉ ＲＮ． Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｒｅａｃｔ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｇｌｙｃｉｎｅ ａｌａｎｉｎｅ ｒｅｐｅａｔ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｅｐｓｔｅｉｎ―Ｂａｒ ｎｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｇｅｎ―１． Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ Ｉｎｔ． １９８９；９：１６１．
１９． Ｂａｂｏｏｎｉａｎ Ｃ， Ｖｅｎａｖｌｅｓ ＰＪＷ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＤＧ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＲＯ， Ｍａｉｎｉ ＲＮ． Ｃｒｏｓｓ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ ｇｌｙｃｉｎｅ／ａｌａｎｉｎｅ ｒｅｐｅａｔ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｅｐｓｔｅｉｎ―Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ｎｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｇｅｎ―１ ｗｉｔｈ ｃｏｌｌａｇｅｎ， ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ， ａｎｄ ａｃｔｉｎ． Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ． １９９１；５０：７７２．
２０． Ｏｓｔｅｎｓｔａｄ Ｂ， Ｄｙｂｗａｄ Ａ， Ｌｅａ Ｔ， Ｆｏｒｒｅ Ｏ， Ｖｉｎｊｅ Ｏ， Ｓｉｏｕｄ Ｍ． Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｏｆ ｓｙｎｏｖｉａｌ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｂｅａｒｉｎｇ Ｖ ａｌｐｈａ ２．１／Ｖ ｂｅｔａ ５．５ ｇｅｎｅ ｓｅｇｍｅｎｔｓ ａｎｄ ｒｅｃｏｇｎｉｚｉｎｇ ａ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ ｔｈａｔ ｓｈａｒｅｓ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｗｉｔｈ ａ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｐｕｔａｔｉｖｅ ａｕｔｏａｎｔｉｇｅｎｓ． Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ． １９９５；８６：１６８．
２１． Ｚｕｉｄｍｅｅｒ Ｌ， Ｇｏｌｄｈａｎ Ｋ， Ｒｏｎａ ＲＪ， Ｇｉｓｌａｓｏｎ Ｄ， Ｍａｄｓｅｎ Ｃ， Ｓｕｍｍｅｒｓ Ｃ， Ｓｏｄｅｒｇｒｅｅｎ Ｅ， Ｄａｈｌｓｔｒｏｍ Ｊ， Ｌｉｎｄｎｅｒ Ｔ， Ｓｉｇｕｒｄａｒｄｏｔｔｉｒ ＳＴ， ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｆｏｏｄ ａｌｌｅｒｇｉｅｓ： Ａ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｒｅｖｉｅｗ． Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２００８；１２１，１２１０―１２１８．
２２． Ｌａｃｋ Ｇ． Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃ ｒｉｓｋｓ ｆｏｒ ｆｏｏｄ ａｌｌｅｒｇｙ． Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２００８；１２１：１３３１―１３３６．
２３． Ｂｏｕｓｑｕｅｔ Ｊ， Ｂｊｏｒｋｓｔｅｎ Ｂ， Ｂｒｕｉｊｎｚｅｅｌ―Ｋｏｏｍｅｎ ＣＡ， Ｈｕｇｇｅｔｔ Ａ， Ｏｒｔｏｌａｎｉ Ｃ． Ｗａｒｎｅｒ ＪＯ， Ｓｍｉｔｈ Ｍ． Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｃｒｉｔｅｒｉａ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｌｅｒｇｅｎｉｃ ｆｏｏｄｓ ｆｏｒ ｐｒｏｄｕｃｔ ｌａｂｅｌｌｉｎｇ． Ａｌｌｅｒｇｙ． １９９８；５３，３―２１．
２４． Ａｒｅｎｔｚ―Ｈａｎｓｅｎ Ｈ， Ｋｏｒｎｅｒ Ｒ， Ｍｏｌｂｅｒｇ 0， ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ α―ｇｌｉａｄｉｎ ｉｎ ａｄｕｌｔ ｃｅｌｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｓ ｆｏｃｕｓｅｄ ｏｎ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｄｅａｍｉｄａｔｅｄ ｇｌｕｔａｍｉｎｅ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｂｙ ｔｉｓｓｕｅ ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ． Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ． ２０００；１９１（４）６０３―３１２．
２５． Ａｒｅｎｔｚ―Ｈａｎｓｅｎ Ｈ， Ｍｃａｄａｍ ＳＮ， Ｍｏｌｂｅｒｇ Ｏ， ｅｔ ａｌ． Ｃｅｌｉａｃ ｌｅｓｉｏｎ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅ ｅｐｉｔｏｐｅｓ ｔｈａｔ ｃｌｕｓｔｅｒ ｉｎ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｇｌｉａｄｉｎｓ ｒｉｃｈ ｉｎ ｐｒｏｌｉｎｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ． Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ． ２００２；１２３（３）８０３―８０９．
２６． Ｔｏｌｌｅｆｓｅｎ Ｓ， Ａｒｅｎｔｚ―Ｈａｎｓｅｎ Ｈ， Ｆｌｅｃｈｅｎｓｔｅｉｎ Ｂ， ｅｔ ａｌ． ＨＬＡ―ＤＱ２ ａｎｄ ―ＤＱ８ ｓｉｇｎａｔｕｒｅｓ ｏｆ ｇｌｕｔｅｎ Ｔ ｃｅｌｌ ｅｐｉｔｏｐｅｓ ｉｎ ｃｅｌｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ． ２００６；１１６（８）２２２６―２２３６．
２７． Ｃａｍａｒｃａ Ａ， Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＲＰ， Ｍａｍｏｎｅ Ｇ， ｅｔ ａｌ． Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ｇｌｕｔｅｎ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｒｅ ｌａｒｇｅｌｙ ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ： ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ａ ｐｅｐｔｉｄｅ―ｂａｓｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｃｅｌｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２００９：１８２（７）４１５８―４１６６．
２８． Ｖｏｊｄａｎｉ Ａ． Ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ ｏｆ ｗｈａｔ ａｎｔｉｇｅｎ ａｎｄ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍｏｒａｌ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｇｌｕｔｅｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ Ｃｒｏｈｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ． ＩＳＲＮ Ａｌｌｅｒｇｙ． ２０１１；２０１１，９５０１０４．
２９． Ｄｅ Ｆｒｅｉｔａｓ ＩＮ， Ｓｉｐａｈｉ ＡＭ， Ｄａｍｉａｏ ＡＯ， ｄｅ Ｂｒｉｔｏ Ｔ， Ｃａｎｃａｄｏ ＥＬ， Ｌｅｓｅｒ ＰＧ， Ｌａｕｄａｎｎａ ＡＡ． Ｃｅｌｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ Ｂｒａｚｉｌｉａｎ ａｄｕｌｔｓ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｇａｓｒｏｅｎｔｅｒｏｌ． ２００２；３４：４３０―４３４．
３０． Ｇｉｌｌｅｔｔ ＰＭ， Ｇｉｌｌｅｔｔ ＨＲ， Ｉｓｒａｅｌ ＤＭ， Ｍｅｔｚｇｅｒ ＤＬ， Ｓｔｅｗａｒｔ Ｌ， Ｃｈａｎｏｉｎｅ ＪＰ， Ｆｒｅｅｍａｎ ＨＪ． Ｈｉｇｈ ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ ｃｅｌｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｔｙｐｅ Ｉ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ ｅｎｄｏｍｙｓｉｕｍ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ． Ｃａｎ Ｊ Ｇａｓｔｏｒｅｎｔｅｒｏｌ． ２００１；１５：２９７―３０１．
３１． Ｃｏｕｎｓｅｌｌ ＣＥ， Ｔａｈａ Ａ， Ｒｕｄｄｅｌｌ ＷＳＪ． Ｃｏｅｌｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｔｈｙｒｏｉｄ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｇｕｔ． １９９４；３５：８４４―８４６．
３２． Ｖｏｊｄａｎｉ Ａ， Ｔａｒａｓｈ Ｉ． Ｃｒｏｓｓ―ｒｅａｃｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｇｌｉａｄｉｎ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｏｏｄ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ａｎｔｉｇｅｎｓ． Ｆｏｏｄ Ｎｕｔｒ Ｓｃｉ． ２０１３；４４，２０―３２．
３３． Ｈａｄｊｉｖａｓｓｉｌｉｏｕ Ｍ， Ｓａｎｄｅｒｓ ＤＳ， Ｗｏｏｄｒｏｏｆｅ Ｎ， Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ Ｃ， Ｇｒｕｎｅｗａｌｄ ＲＡ． Ｇｌｕｔｅｎ ａｔａｘｉａ． Ｃｅｒｅｂｅｌｌｕｍ． ２００８；７：４９４―９８．
３４． Ｓｔａｍｎａｅｓ Ｊ， Ｄｏｒｕｍ Ｓ， Ｆｌｅｃｋｅｎｓｔｅｉｎ Ｂ， Ａｅｓｃｈｌｉｍａｎｎ Ｄ， Ｓｏｌｌｉｄ ＬＭ． Ｇｌｉａｄｉｎ Ｔ―ｃｅｌｌ ｅｐｉｔｏｐｅ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｂｙ ＴＧ３ ａｎｄ ＴＧ６： ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｇｌｕｔｅｎ ａｔａｘｉａ ａｎｄ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ ｈｙｐｅｒｔｉｆｏｒｍｉｓ． Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ １３^ｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ ｏｎ Ｃｏｅｌｉａｃ Ｄｉｓｅａｓｅ． Ａｍｓｔｅｒｄａｍ． ２００９；Ｐ―１６３：１４８．
３５． Ｓｔａｇｉ Ｓ， Ｇｉａｎｉ Ｔ， Ｓｉｍｏｎｉ Ｇ， Ｆａｌｃｉｎｉ Ｆ． Ｔｈｙｒｏｉｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ， ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｔｈｙｒｏｉｄｉｔｉｓ ａｎｄ ｃｏｅｌｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｊｕｖｅｎｉｌｅ ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ． Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ． ２００５；４４：５１７―５２０．
３６． Ｖｏｊｄａｎｉ Ａ， Ｏ’Ｂｒｙａｎ Ｔ， Ｇｒｅｅｎ ＪＡ， ＭｃＣａｎｄｌｅｓｓ Ｊ， Ｗｏｅｌｌｅｒ ＫＮ， Ｖｏｊｄａｎｉ Ｅ， Ｎｏｕｒｉａｎ ＡＡ， Ｃｏｏｐｅｒ ＥＬ． Ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｄｉｅｔａｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ， ｇｌｉａｄｉｎ ａｎｄ ｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｉｎ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｗｉｔｈ ａｕｔｉｓｍ． Ｎｕｔｒ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． ２００４；７，１５１―１６１．
３７． Ａｌａｅｄｉｎｉ Ａ， ｅｔ ａｌ． Ｉｍｍｕｎｅ ｃｒｏｓｓ―ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｃｅｌｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ： ａｎｔｉ―ｇｌｉａｄｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｂｉｎｄ ｔｏ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｓｙｎａｐｓｉｎ Ｉ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２００７；１７８：６５９０―６５９５．
３８． Ｊａｃｏｂ Ｓ， Ｚａｒｅｉ Ｍ， Ｋｅｎｔｏｎ Ａ， Ａｌｌｒｏｇｇｅｎ Ｈ． Ｇｌｕｔｅｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｏｐｔｉｃａ： ｔｗｏ ｃａｓｅ ｒｅｐｏｒｔｓ． Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ． ２００５；７６：１０２８―１０３０．
３９． Ｒｅｉｎｋｅ Ｙ， Ｂｅｈｒｅｎｄｔ Ｍ， Ｓｃｈｍｉｄｔ Ｓ， Ｚｉｍｍｅｒ ＫＰ， Ｎａｉｍ ＨＹ． Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ ｂｙ ｄｉｒｅｃｔ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｉａｄｉｎ ｐｅｐｔｉｄｅ ｗｉｔｈ ａｃｔｉｎ． Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ． ２０１１；ＤＯＩ：１０．１０１６／Ｊ．ＹＸＣＴ．２０１１．０５．０２２．
４０． Ｈａｄｊｉｖａｓｓｉｌｉｏｕ Ｍ， Ｓａｎｄｅｒｓ ＤＳ， Ｇｒｕｎｅｗａｌｄ ＲＡ， Ａｋｉｌ Ｍ， Ｇｌｕｔｅｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｍａｓｑｕｅｒａｄｉｎｇ ａｓ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ ． Ａｎｎ Ｒｈｅｍ Ｄｉｓ． ２００４；６３：１５０１―１５０３．
４１． Ｓｕｇａｉ Ｅ， Ｃｈｅｒｎａｖｓｋｙ Ａ， Ｐｅｄｒｅｉｒａ Ｓ， ｅｔ ａｌ． Ｂｏｎｅ―ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｓｅｒａ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｅｌｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ： ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２００２；２２：３５３―３６２．
４２． Ｃｏｌｌｉｎ Ｐ， Ｋａｕｋｉｎｅｎ Ｋ， Ｖａｌｉｍａｋｉ Ｍ， Ｓａｌｍｉ Ｊ． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ａｎｄ ｃｅｌｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｅｎｄｏｃ Ｒｅｖ． ２００２；２３：４６４―４８３．
４３． Ｆｒｕｓｔａｃｉ Ａ， Ｃｕｏｃｏ Ｌ， Ｃｈｉｍｅｎｔｉ Ｃ， ｅｔ ａｌ． Ｃｅｌｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ． ２００２；２：２６１１―２６１８
４４． Ｐｒａｔｅｓｉ Ｒ， Ｇａｎｄｏｌｆｉ Ｌ， Ｆｒｉｅｄｍａｎ Ｈ， ｅｔ ａｌ． Ｓｅｒｕｍ ＩｇＡ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｏｅｌｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅａｃｔ ｓｔｒｏｎｇｌｙ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ ｂｒａｉｎ ｂｌｏｏｄ―ｖｅｓｓｅｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ． １９９８；３３：８１７―８２１．
４５． Ｎａｔｔｅｒ Ｓ， Ｇｒａｎｄｉｔｓｃｈ Ｇ． Ｒｅｉｃｈｅｌ ＧＬ， ｅｔ ａｌ． ＩｇＡ ｃｒｏｓｓ―ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ａ ｎｕｃｌｅａｒ ａｕｔｏａｎｔｉｇｅｎ ａｎｄ ｗｈｅａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｕｇｇｅｓｔｓ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｉｍｉｃｒｙ ａｓ ａ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｐａｔｈｏｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｉｎ ｃｅｌｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２００１；３１：９１８―９２８．
４６． Ｋａｈａｎａ Ｅ， Ｚｉｌｂｅｒ Ｎ， Ａｂｒａｍｓｏｎ ＪＨ， Ｂｉｔｏｎ Ｖ， Ｌｅｉｂｏｗｉｔｚ Ｙ， Ａｂｒａｍｓｋｙ Ｏ． Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ： ｇｅｎｅｔｉｃ ｖｅｒｓｕｓ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ａｅｔｉｏｌｏｇｙ． Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｉｎ Ｉｓｒａｅｌ ｕｐｄａｔｅｄ． Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ． １９９４；２４１：３４１―３４６．
４７． Ａｇｒａｎｏｆｆ ＢＷＡ， Ｇｏｌｄｂｅｒｇ Ｄ． Ｄｉｅｔ ａｎｄ ｔｈｅ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ． Ｌａｎｃｅｔ １９７４；２：１０６１―１０６６．
４８． Ｋｎｏｘ ＥＧ． Ｆｏｏｄｓ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅｓ． Ｂｒ． Ｊ． Ｐｒｅｖ． Ｓｏｃ． Ｍｅｄ． １９７７；３１：７１―８０．
４９． Ｂｕｔｃｈｅｒ Ｊ． Ｔｈｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ｉｎ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｄａｉｒｙ ｉｎｄｕｓｔｒｙ ａｎｄ ｍｉｌｋ ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ． Ｎ．Ｚ． Ｍｅｄ． Ｊ． １９７６；８３：４２７―４３０．
５０． Ｍａｌｏｓｓｅ Ｄ， Ｐｅｒｒｏｎ Ｈ， Ｓａｓｃｏ Ａ， Ｓｅｉｇｎｅｕｒｉｎ ＪＭ． Ｃｏｒｒｅｌａｔｏｉｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｍｉｌｋ ａｎｄ ｄａｉｒｙ ｐｒｏｄｕｃｔ ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ： ａ ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ ｓｔｕｄｙ． Ｎｅｕｒｏｅｐｉｄｅｍｉｏｌ． １９９２；１１：３０４―３１２．
５１． Ｈｅｎｒｙ Ｊ， Ｍｉｌｌｅｒ ＭＭ， Ｐｏｎｔａｒｏｔｔｉ ＰＰ． Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｅｎｄｅｄ Ｂ７ ｆａｍｉｌｙ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｔｏｄａｙ． １９９９；２０：２８５．
５２． Ｇａｒｄｉｎｉｅｒ ＭＶ， Ａｍｉｇｕｅｔ Ｐ， Ｌｉｍｉｎｇｔｏｎ Ｃ， Ｍａｔｔｈｉｅｕ ＪＭ． Ｍｙｅｌｉｎ／ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｉｓ ａ ｕｎｉｑｕｅ ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｓｕｐｅｒ―ｆａｍｉｌｙ． Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． Ｒｅｓ． １９９２；３３：１７７．
５３． Ｊａｃｋ ＬＪ， Ｍａｔｈｅｒ ＩＨ， Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｂｏｖｉｎｅ ｂｕｔｙｒｏｐｈｉｌｉｎ， ａｎｄ ａｐｉｃａｌ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｍａｍｍａｒｙ ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｉｎ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｍｉｌｋ―ｆａｔ ｇｌｏｂｕｌｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｄｕｒｉｎｇ ｌａｃｔａｔｉｏｎ． Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． １９９０；２６５：１４４８１．
５４． Ｖｏｊｄａｎｉ Ａ， Ｃａｍｐｂｅｌｌ Ａ， Ａｎｙａｎｗｕ Ｅ， Ｋａｓｈａｎｉａｎ Ａ， Ｂｏｃｋ Ｋ， Ｖｏｊｄａｎｉ Ｅ． Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ ｎｅｕｒｏｎ―ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｉｎ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｗｉｔｈ ａｕｔｉｓｍ： Ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｃｒｏｓｓ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｇｅｎｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ ｍｉｌｋ． Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ ａｎｄ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ Ｇｒｏｕｐ Ａ． Ｊ． Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ． ２００２；１２９：１６８―１７７．
５５． Ａｍｏｒ Ｓ， Ｇｒｏｏｍｅ Ｎ， Ｌｉｎｉｎｇｔｏｎ Ｃ， Ｍｏｒｒｉｓ ＭＭ， Ｄｏｒｎｍａｉｒ Ｋ， Ｇａｒｄｉｎｉｅｒ ＭＶ， Ｍａｔｔｈｉｅｕ ＪＭ， Ｂａｋｅｒ Ｄ． Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｐｉｔｏｐｅｓ ｏｆ ｍｙｅｌｉｎ ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｉｎ ＳＪＬ ａｎｄ Ｂｉｏｚｚｉ ＡＢ／Ｈ ｍｉｃｅ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １９９４；１５３：４３４９．
５６． Ｊａｒｉｕｓ Ｓ， ｅｔ ａｌ． Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｄｉｓｅａｓｅ： ａｑｕａｐｏｒｉｎ―４ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｏｐｔｉｃａ． Ｎａｔ． Ｃｌｉｎ． Ｐｒａｃｔ． Ｎｅｕｒｏｌ． ２００８；４：２０２―２１４．
５７． Ｊａｒｉｕｓ Ｓ， Ｗｉｌｄｅｒｍａｎｎ Ｂ． ＡＱＰ４ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｏｐｔｉｃａ： ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌｅｖａｎｃｅ． Ｎａｔ． Ｒｅｖ． Ｎｅｕｒｏｌ． ２０１０；６：３８３―３９２．
５８． Ｋｉｍ ＳＨ， ｅｔ ａｌ． Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｏｆ ＣＮＳ ａｑｕａｐｏｒｉｎ―４ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ． Ｎｅｕｒｏｌ． ２０１２；７８：１１７９―１１８５．
５９． Ｋｉｎｏｓｈｉｔａ Ｍ， ｅｔ ａｌ． Ａｎｔｉ―ａｑｕａｐｏｒｉｎ―４ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｎｄｕｃｅｓ ａｓｔｒｏｃｙｔｉｃ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎ ｔｈｅ ａｂｓｅｎｃｅ ｏｆ ＣＮＳ ａｎｔｉｇｅｎ―ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ ｃｅｌｌｓ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅ．ｓ Ｃｏｍｍｕｎ． ２０１０；３９４：２０５―２１０．
６０． Ｂｒａｄｌ Ｍ， Ｌａｓｓｍａｎｎ ＤＨ． Ａｎｔｉ―ａｑｕａｐｏｒｉｎ―４ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｏｐｔｉｃａ： ｈｏｗ ｔｏ ｐｒｏｖｅ ｔｈｅｉｒ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌｅｖａｎｃｅ？ Ｉｎｔ． ＭＳ Ｊ． ２００８；１５：７５―７８．
６１． Ｖａｉｓｈｎａｖ Ｒ， ｅｔ ａｌ． Ａｑｕａｐｏｒｉｎ―４ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｉｍｉｃｒｙ ａｎｄ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｏｐｔｉｃｓ． Ｊ． Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ． ２０１３；２６：９２―９８．
６２． Ｐｌａｓｅｎｃｉａ Ｉ， ｅｔ ａｌ． Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｓｐｉｎａｃｈ ａｑｕａｐｏｒｉｎ ＳｏＰＩＰ２：１ ｉｎ ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ ｍｉｃｅｌｌｅｓ ａｎｄ ｌｉｐｉｄ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ． ＰＬｏＳ Ｏｎｅ． ２０１１；６：ｅ１４６７４．
６３． Ｆｌｅｕｒａｔ―Ｌａｓｓａｒｄ Ｐ， ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ａｑｕａｐｏｒｉｎ ｓｕｂｔｙｐｅｓ （ＰＩＰ１， ＰＩＰ２ ａｎｄ ｇａｍｍａ―ＴＩＰ） ｉｓ ｔｉｓｓｕｅ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎ ｓｏｙｂｅａｎ （Ｇｌｙｃｉｎｅ Ｍａｘ） ｒｏｏｔ ｎｏｄｕｌｅｓ． Ａｎｎ． Ｂｏｔ． ２００５；９６：４５７―４６０．
６４． Ｆａｂｉａｎ Ｃ， Ｊｕ Ｙ―Ｈ； Ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｎ ｒｉｃｅ ｂｒａｎ ｐｒｏｔｅｉｎ： ｉｔｓ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ． Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ Ｎｕｔｒ． ２０１１；５１：８１６―８２７．
６５． Ｈａｍａｄａ ＪＳ． Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｒｉｃｅ ｂｒａｎ ｔｏ ｄｅｖｉｓｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ． Ｃｅｒｅａｌ Ｃｈｅｍ． １９９７；７４：６６２―６６８．
６６． Ｓｉｎｇｈ ＮＫ， Ｄｏｎｏｖａｎ ＧＲ， Ｂａｔｅｙ ＩＬ， ｅｔ ａｌ． Ｕｓｅ ｏｆ ｓｏｎｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｉｚｅ―ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ＨＰＬＣ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｗｈｅａｔ ｆｌｏｕｒ ｐｒｏｔｅｉｎ． Ｉ． Ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｕｎｒｅｄｕｃｅｄ ｆｏｒｍ． Ｃｅｒｅａｌ Ｃｈｅｍ． １９９０；６７：１５０―１６１．
６７． Ｔａｎｇ Ｓ， Ｈｅｔｔｉａｒａｒｃｈｙ ＮＳ， Ｓｈｅｌｌｈａｍｍｅｒ ＴＨ． Ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｈｅａｔ―ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ ｄｅｆａｔｔｅｄ ｒｉｃｅ ｂｒａｎ． Ｉ． Ｐｈｙｓｉｃａｌ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ａｎｄ ｅｎｚｙｍｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ． Ｊ Ａｇｒｉｃ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ． ２００２；５０：７４４４―７４４８．
６８． Ｎｏｖｉｋ ＧＩ， Ａｓｔａｐｏｖｉｃｈ ＮＩ， Ｇｒｚｅｇｏｒｚｅｗｉｃｚ Ａ， ｅｔ ａｌ． Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｓ ｆｒｏｍ ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ． Ｍｉｋｒｏｂｉｏｌｏｇｙ． ２００５；７４（５）：１―８．
６９． Ｎｏｖｉｋ ＧＩ， Ｇａｍｉａｎ Ａ， Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ Ｊｄａ Ｃ， Ｄｅｙ ＥＳ． Ａ ｎｏｖｅｌ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｓ ｆｒｏｍ Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ ９４ ＢＩＭ ｕｓｉｎｇ ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ ｃａｒｂｏｎ ｄｉｏｘｉｄｅ． Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２００６；１２１（４）：５５５―６２．
７０． Ｉｓｈｉｋａｗａ Ｔ， ｅｔ ａｌ． Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｓｅｐａｒａｔｉｎｇ ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｓ． Ｐｕｂ． Ｎｏ： ＵＳ２００５／０１１９４７５ Ａ１， Ｊｕｎｅ ２， ２００５．
７１． Ｃｈａｉｋｌａｈａｎ Ｒ， ｅｔ ａｌ． Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｓｐ． ａｎｄ ｉｔｓ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｃａｐａｃｉｔｙ． Ｉｎｔ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｍａｃｒｏｍｏｌ． ５８： ７３―７８， ２０１３．
７２． Ｄｕｂｏｉｓ Ｍ， ｅｔ ａｌ． Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｇａｒ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ． Ａｎａｌ Ｃｈｅｍ． ２８（３）： ３５０−３５６， １９５６．
７３． Ｓｈｅｎｇ Ｊ， ｅｔ ａｌ． Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ， ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｆｒｏｍ Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｐｙｒｅｎｏｉｄｏｓａ． Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ． １０５（２）： ５３３―５３９， ２００７．
７４． Ｖｏｊｄａｎｉ Ａ． Ｌｅｃｔｉｎｓ， ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎｓ， ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｏｌｅ ｉｎ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｒｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ． Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ｉｎ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， （Ｉｎ Ｐｒｅｓｓ）， ２０１５．
７５． Ｌａｍｐｏｒｔ ＤＴ． Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｒａｂｉｎｏｇａｌａｃｔａｎ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ ｐｌａｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ． Ｂｉｏ―Ｐｒｏｔｏｃｏｌ． ３（１９）：１０／５／２０１３， ｅ９１８．
７６． Ｍｕｔｈｕｋｕｍａｒ Ｍ， ｅｔ ａｌ． Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ， ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｅｃｔｉｎ ｆｒｏｍ ｏｙｓｔｅｒ ｍｕｓｈｒｏｏｍ， Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｓａｊｏｒ―ｃａｊｕ． Ｐｌａｎｔ Ａｒｃｈｉｖｅｓ ２００９；９：４１―４６．

【0082】

本明細書中の本発明概念から逸脱することなく、すでに記載されたものに加えて、より多くの変更の可能性があることは、当業者にとって明らかであるべきである。本発明の主題は、従って、添付された特許請求の範囲の精神を除いて制限されない。さらに、明細書および特許請求の範囲のいずれを解釈する際にも、すべての用語は、文脈と矛盾しない、可能性のある最も広い方法で解釈されるべきである。具体的には、用語「含む」（“ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ”）および「含む」（“ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ”）は、非排他的方法において、要素、構成要素または工程について言及すると解釈されべきであり、参照される、要素、構成要素または工程が、存在し得るか、利用され得るか、明示的に参照されないほかの要素、構成要素または工程と結び付けられ得ることを示す。明細書特許請求の範囲が、Ａ、Ｂ、Ｃ…およびＮからなる群から選択される少なくとも１つに対して言及する場合、文章は、ＡプラスＮ、またはＢプラスＮなどでなく、群からの１の要素のみを必要とするとして解釈されるべきである。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】