特許 6599342 アブシナゾール

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6599342

(24)【登録日】2019年10月11日

(45)【発行日】2019年10月30日

(54)【発明の名称】アブシナゾール

(51)【国際特許分類】

   C07D 249/08 20060101AFI20191021BHJP

   A01P 21/00 20060101ALI20191021BHJP

   A01N 43/653 20060101ALI20191021BHJP

【ＦＩ】

   C07D249/08 524

   C07D249/08CSP

   A01P21/00

   A01N43/653 H

【請求項の数】4

【全頁数】23

(21)【出願番号】特願2016-550138(P2016-550138)

(86)(22)【出願日】2015年9月16日

(86)【国際出願番号】JP2015076336

(87)【国際公開番号】WO2016047533

(87)【国際公開日】20160331

【審査請求日】2018年9月4日

(31)【優先権主張番号】特願2014-196773(P2014-196773)

(32)【優先日】2014年9月26日

(33)【優先権主張国】JP

(73)【特許権者】

【識別番号】304023318

【氏名又は名称】国立大学法人静岡大学

(74)【代理人】

【識別番号】100088155

【弁理士】

【氏名又は名称】長谷川 芳樹

(74)【代理人】

【識別番号】100124800

【弁理士】

【氏名又は名称】諏澤 勇司

(74)【代理人】

【識別番号】100126653

【弁理士】

【氏名又は名称】木元 克輔

(72)【発明者】

【氏名】轟 泰司

(72)【発明者】

【氏名】久保尻 由貴

【審査官】 東 裕子

(56)【参考文献】

【文献】 特開２０１３−１５８２９４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２０１３−２３１０１４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１４／０９５９９４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 OKAZAKI,M. et al，Abscinasole-E2B, a practical and selective inhibitor ob ABA 8'-hydroxylase CYP707A，BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY，２０１２年，Vol.20, Iss.10，pp.3162-3172

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）で表される化合物又はその塩。

【化1】

［ＲはＣ１−６アルキル基であり、Ｃ１−６アルキル基はハロゲン原子及びＣ１−６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。］

【請求項2】

Ｒがｎ−ブチル基又は２−メトキシエチル基である、請求項１記載の化合物又はその塩。

【請求項3】

請求項１又は２記載の化合物又はその塩を含む、アブシジン酸８’位水酸化酵素ＣＹＰ７０７Ａの阻害剤。

【請求項4】

請求項１又は２記載の化合物又はその塩を含む、植物成長調節剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、アブシナゾールに関する。

【背景技術】

【0002】

アブシジン酸は、種子の休眠及び環境ストレス応答において重要な役割を担う植物ホルモンである。アブシジン酸の異化による不活性化は、主にアブシジン酸８’位水酸化酵素ＣＹＰ７０７Ａによって制御されている。

【0003】

植物矮化剤であるＳ−ウニコナゾールは、ジベレリンの生合成に関与する酵素であるｅｎｔ−カウレンオキシダーゼＣＹＰ７０１Ａを阻害することにより、その機能を発揮するが、Ｓ−ウニコナゾールはＣＹＰ７０７Ａをも阻害する。そこで、Ｓ−ウニコナゾールの機能からＣＹＰ７０１Ａ阻害活性を除去し、ＣＹＰ７０７Ａ阻害活性を残した化合物群が開発され、この化合物群はアブシナゾールと名付けられている。例えば、アブシナゾールの一つであるアブシナゾール−Ｅ２Ｂを植物に投与すると、内生のアブシジン酸が分解されず、植物に乾燥耐性を付与できることが報告されている（特許文献１及び非特許文献１）。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【特許文献1】特開２０１３−２３１０１４号公報

【非特許文献】

【0005】

【非特許文献1】Okazaki et al., "Abscinazole-E2B, a practical and selective inhibitor of ABA 8'-hydroxylase CYP707A", Bioorganic & Medicinal Chemistry, vol.20, pp.3162-3172 (2012)

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本発明は、ＣＹＰ７０７Ａの阻害剤となる新たなアブシナゾールを提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明者らが鋭意検討を行ったところ、アブシナゾール−Ｅ２Ｂの１，２，３−トリアゾール環をアセチレンジイル基に代えた化合物は、ＣＹＰ７０７Ａ阻害作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。

【0008】

すなわち、本発明は、式（Ｉ）で表される化合物又はその塩を提供する。

【化1】

［ＲはＣ１−６アルキル基であり、Ｃ１−６アルキル基はハロゲン原子及びＣ１−６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。］

【0009】

上記化合物又はその塩において、Ｒはｎ−ブチル基又は２−メトキシエチル基であってよい。

【0010】

上記化合物又はその塩は、ＣＹＰ７０７Ａの阻害剤として利用することが可能であり、また、植物成長調節剤としても利用することが可能である。

【発明の効果】

【0011】

式（Ｉ）で表される化合物又はその塩は、ＣＹＰ７０７Ａ阻害作用を有し、植物成長調節剤となり得る。

【図面の簡単な説明】

【0012】

【図1】実施例１〜４の化合物がシロイヌナズナの種子発芽に及ぼす影響を調べた結果を表すグラフである。

【図2】実施例１〜４の化合物がシロイヌナズナの種子発芽に及ぼす影響を調べた結果を表す写真である。

【図3】実施例１〜２の化合物及び比較例１の化合物がシロイヌナズナの種子発芽に及ぼす影響を調べた結果を表す写真である。

【図4】実施例１〜４の化合物がイネの第二葉鞘の伸長に及ぼす影響を調べた結果を表すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0013】

以下に、本明細書において使用する用語などを説明し、本発明を詳細に説明する。

【0014】

本明細書において、「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等を意味し、好ましくはフッ素原子、塩素原子である。

【0015】

本明細書において、「Ｃ１−６アルキル基」とは、炭素数が１〜６個の直鎖又は分枝状のアルキル基を意味し、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｎ−ヘキシル基などが挙げられる。Ｃ１−６アルキル基は、より好ましくは、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基などの、炭素数が１〜４個のアルキル基であるＣ１−４アルキル基である。

【0016】

本明細書において、「Ｃ１−６アルコキシ基」とは、Ｃ１−６アルキル基が結合したオキシ基であることを意味し、例えば、メトキシ基、エトキシ基、１−プロピルオキシ基、２−プロピルオキシ基、１−ブチルオキシ基、２−メチルプロピルオキシ基、１−メチルプロピルオキシ基、１，１−ジメチルエトキシ基などが挙げられる。

【0017】

本実施形態に係る化合物は、式（Ｉ）で表される。以下、化合物（Ｉ）と表す場合もある。

【化2】

［ＲはＣ１−６アルキル基であり、Ｃ１−６アルキル基はハロゲン原子及びＣ１−６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。］

【0018】

Ｒが置換基を有するＣ１−６アルキル基である場合、置換基の位置はいずれでもよく、また置換基の数も１個でも複数個でもよい。置換基がＣ１−６アルコキシ基の場合、好ましくは、置換基の数は１である。

【0019】

Ｒは、好ましくは、Ｃ１−６アルキル基又はＣ１−６アルコキシ基で置換されたＣ１−６アルキル基である。

【0020】

Ｒは、より好ましくは、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、メトキシメチル基、２−メトキシエチル基、３−メトキシプロピル基、４−メトキシブチル基、エトキシメチル基、２−エトキシエチル基、３−エトキシプロピル基又は４−エトキシブチル基である。

【0021】

Ｒは、最も好ましくは、ｎ−ブチル基又は２−メトキシエチル基である。

【0022】

化合物（Ｉ）のベンゼン環上の置換基の結合位置は、オルト位、メタ位及びパラ位のいずれであってもよく、好ましくはメタ位又はパラ位であり、最も好ましくはメタ位である。すなわち、化合物（Ｉ）は好ましくは、下記に示す化合物（Ｉａ）又は化合物（Ｉｂ）であり、最も好ましくは化合物（Ｉａ）である。化合物（Ｉａ）及び化合物（Ｉｂ）におけるＲの好ましい態様は、上述の化合物（Ｉ）におけるＲの好ましい態様と同じである。

【化3】

【0023】

化合物（Ｉ）のペント−１−エン鎖の３位の炭素原子は不斉炭素原子であり、化合物（Ｉ）は光学異性体を有する。化合物（Ｉ）は、Ｒ体であってもよく、Ｓ体であってもよく、ラセミ体であってもよく、Ｒ体及びＳ体の任意の混合物であってもよい。

【0024】

化合物（Ｉ）は塩の形態であってもよい。塩としては、例えば、無機酸塩及び有機酸塩が挙げられる。無機酸塩の例としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩などが挙げられる。有機酸塩の例としては、酢酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、ステアリン酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩などが挙げられる。

【0025】

化合物（Ｉ）は、以下の反応スキームにより製造することができる。

【化4】

［式中、Ｔｓはトシル基を表す。］

【0026】

工程１は、１，２，４−トリアゾールと１−ブロモ−３，３−ジメチル−２−ブタノンとを炭酸カリウムなどの塩基の存在下で反応させて、３，３−ジメチル−１−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ブタン−２−オンを得る工程である。具体的な反応条件としては、例えば、製造例１に示した反応条件が挙げられる。

【0027】

工程２は、３，３−ジメチル−１−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ブタン−２−オン及びヨードベンズアルデヒドを反応させて、化合物（ＶＩ）を得る工程である。具体的な反応条件としては、例えば、製造例２及び７に示した反応条件が挙げられる。

【0028】

工程３は、化合物（ＶＩ）から化合物（ＶＩ−Ｅ）を得る工程である。ＥＺ体の混合物である化合物（ＶＩ）からＥ体である化合物（ＶＩ−Ｅ）を分離してもよく、ＥＺ体の混合物である化合物（ＶＩ）にＵＶ光を照射しＥ体である化合物（ＶＩ−Ｅ）を過剰にしてから分離してもよい。分離は、カラムクロマトグラフィーなどの通常の分離手段が利用可能である。具体的なＵＶ照射及び分離の条件としては、例えば、製造例３及び８に示した条件が挙げられる。

【0029】

工程４は、化合物（ＶＩ−Ｅ）を還元して化合物（Ｖ）を得る工程である。水素化ホウ素ナトリウム、水素化アルミニウムリチウムなどの還元剤を用いて、ケトンからアルコールへの還元反応で常用されている反応条件で工程４の反応を行うことが可能である。具体的な反応条件としては、例えば、製造例４及び９に示した反応条件が挙げられる。

【0030】

工程５は、化合物（Ｖ）と化合物（ＩＶ）を反応させて化合物（ＩＩ）を得る工程である。具体的な反応条件としては、例えば、製造例６及び１０に示した反応条件が挙げられる。化合物（ＩＶ）は市販の化合物を原料にして当業者が容易に製造することが可能である。例えば、製造例５に示した反応条件にしたがい、化合物（ＩＶ）を製造することが可能である。

【0031】

工程６は、化合物（ＩＩ）と化合物（ＩＩＩ）を反応させて化合物（Ｉ）を得る工程である。具体的な反応条件としては、例えば、実施例１〜３に示した反応条件が挙げられる。得られた化合物（Ｉ）は、必要に応じて光学分割を行ってもよい。光学分割は、当業者に周知の方法により行うことが可能である。例えば、キラルＨＰＬＣ法により光学分割を行う場合、実施例１〜３に示した条件を参考に実施することが可能である。

【0032】

キラルＨＰＬＣ法の他に、以下の反応スキームに示す方法により、化合物（Ｉ）の（−）体と（＋）体を光学分割し、（＋）体に比べて活性が高い（−）体を取得することができる。以下の反応スキームによれば、高価なキラルカラムによる分取が不要となり、簡便且つ低コストで、化合物（Ｉ）の（−）体を得ることができる。

【化5】

【0033】

工程７は、化合物（Ｉ）とＮ−（ｐ−トルエンスルホニル）−Ｌ−フェニルアラニルクロリドを反応させて、化合物（Ｉ）の（−）体と化合物（ＶＩＩ）を得る工程である。化合物（Ｉ）とＮ−（ｐ−トルエンスルホニル）−Ｌ−フェニルアラニルクロリドの当量比を１：１０で反応させた場合には、化合物（Ｉ）の（＋）体がほぼすべて反応するのに対し、（−）体の約半量は未反応のまま残る。未反応のまま残った（−）−（Ｉ）と化合物（ＶＩＩ）とは、オープンカラムクロマトフラフィーにより容易に分離できる。このため、上記方法によりキラルＨＰＬＣを用いた光学分割よりも簡便に活性の高い化合物（Ｉ）の（−）体を得ることができる。具体的な反応条件としては、例えば実施例５に示した反応条件が挙げられる。

【0034】

化合物（Ｉ）とＮ−（ｐ−トルエンスルホニル）−Ｌ−フェニルアラニルクロリドの当量比を１：２０で反応させた場合には、化合物（Ｉ）の（−）体と（＋）体のいずれもすべて反応し、化合物（ＶＩＩ）が得られる。工程８は、化合物（ＶＩＩ）をＯＤＳカラムを用いたＨＰＬＣによってジアステレオマーに分割してから、水酸化ナトリウム水溶液などのアルカリ性水溶液によって加水分解し、化合物（Ｉ）の（−）体あるいは（＋）体を得る工程である。具体的な反応条件としては、例えば実施例６に示した反応条件が挙げられる。

【0035】

化合物（Ｉ）は、ＣＹＰ７０７Ａ阻害作用を有するため、ＣＹＰ７０７Ａによるアブシジン酸の分解を抑制することができる。そのため、化合物（Ｉ）を投与された植物は、ストレスによりアブシジン酸が合成されると、アブシジン酸の効果を持続させ、アブシジン酸の効果を増強することが可能となる。これにより、化合物（Ｉ）は植物の成長を調節することが可能となる。特に、その作用機序を考慮すると、植物に対してストレス耐性を付与することが可能となる。例えば、乾燥、高温、低温などのストレスに植物が曝されたとしても、化合物（Ｉ）を植物に投与することで、植物が枯れるのを防ぐことが可能である。

【0036】

対象となる植物は特に限定されず、種子植物、シダ植物又はコケ植物でもよく、種子植物としては裸子植物又は被子植物でもよく、被子植物としては単子葉植物でも双子葉植物でもよい。

【0037】

対象となる植物器官としては、特に限定されず、根、茎、葉、花、生殖器官、種子のいずれでもよく、さらに、培養細胞でもよい。

【0038】

植物に適用する化合物（Ｉ）の濃度及び接触方法は、対象となる植物の種類、その器官及び目的等に応じて適宜調整可能である。

【0039】

化合物（Ｉ）を含む植物成長調節剤は、化合物（Ｉ）の他に、殺菌剤、防黴剤、殺虫剤、或いは、化合物（Ｉ）以外の植物成長調節作用を有する化合物を含有していてもよい。さらに、公知の製剤用添加剤を含有していてもよい。このような製剤用添加剤としては、例えば、賦形剤、乳化剤、湿潤剤を使用することができる。また、本発明の植物成長調節剤の剤型は特に限定されないが、例えば、乳剤、水和剤、水溶剤、液剤、粒剤、粉剤、マイクロカプセル、燻蒸剤、燻煙剤、エアゾール、フロアブル剤、ペースト剤、錠剤、塗布剤、微量散布用剤、油剤、複合肥料とすることができ、対象となる植物、その器官及び目的等に応じて、使用者が適宜選択することができる。このような剤型の植物成長調節剤は、公知の方法により製造することができる。

【実施例】

【0040】

製造例１：３，３−ジメチル−１−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ブタン−２−オンの合成

【化6】

炭酸カリウム２．０６ｇ（１４．９ｍｍｏｌ）をアセトン５ｍＬに溶解し、室温で１，２，４−１Ｈ−トリアゾール０．９８ｇ（１４．０ｍｍｏｌ）を加えた。１−ブロモ−３，３−ジメチル−２−ブタノン２ｍＬ（１４．９ｍｍｏｌ）を加え、反応を開始した。室温で３時間撹拌した後に濾紙で濾過して炭酸カリウムを取り除き、減圧濃縮した。これをヘキサン−アセトン（７：３）を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィー（３５ｇ，１．５ｃｍ内径×４５ｃｍ長さ）に供し、標記化合物を無色透明針状結晶として１．６５ｇ（９．８７ｍｍｏｌ；収率７１％）得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，ＴＭＳ）：δ（ｐｐｍ）１．２８（９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），５．２０（２Ｈ，ｓ，Ｈ−１），７．９６（１Ｈ，ｓ，Ｈ−３’），８．１５（１Ｈ，ｓ，Ｈ−５’）

【0041】

製造例２：１−（３−ヨードフェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オンの合成

【化7】

３−ヨードベンズアルデヒド５５２．２ｍｇ（２．３８０ｍｍｏｌ）を無水酢酸１ｍＬに溶解し、室温で炭酸カリウム３２７．８ｍｇ（２．３７２ｍｍｏｌ）、３，３−ジメチル−１−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ブタン−２−オン４０５．７ｍｇ（２．４２６ｍｍｏｌ）を加えて反応を開始した。１００℃で８時間、室温に戻して１０時間、再び１００℃にて１２時間撹拌した後、水８ｍＬを加えて反応を停止し、更に水１５ｍＬを追加して酢酸エチル５０ｍＬで３回抽出した。飽和塩化ナトリウム水溶液３ｍＬで２回洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した後、減圧濃縮して淡橙色油状物質９８６．０ｍｇを得た。これをヘキサン−アセトン（７５：２５）を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィー（６０ｇ，２．４ｃｍ内径×２５ｃｍ長さ）に供し、標記化合物をＺ：Ｅ＝１０：３（ＮＭＲ測定の１，３’，５’，２’’，４’’，５’’，６’’位プロトンの積分比より算出）で淡黄色油状物質として５５１．６ｍｇ（１．４４７ｍｍｏｌ；収率６１％）得た。

【0042】

製造例３：（Ｅ）−１−（３−ヨードフェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オンの合成

【化8】

製造例２で得られた１−（３−ヨードフェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オンのＥＺ体の混合物１２３．３ｍｇをヘキサン−酢酸エチル（７５：２５）を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１５ｇ，１．４ｃｍ内径×１６ｃｍ長さ）に供し、（Ｚ）−１−（３−ヨードフェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オンを８３．４ｍｇ、（Ｅ）−１−（３−ヨードフェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オンを１６．０ｍｇ及び両者の混合物を１８．１ｍｇ得た。
製造例２で得られたＥＺ体の混合物１００．１ｍｇ（０．２６３ｍｍｏｌ）をメタノールに溶解し、氷冷しながらＵＶランプ（ＵＶＰ ＢＬＡＣＫ−ＲＡＹ ＬＯＮＧＷＡＶＥ ＵＬＴＲＡＶＩＯＬＥＴ ＬＡＭＰ，ＭＯＤＥＬ Ｂ−１００Ａ）を照射した。２時間後、ＵＶ照射を止めて減圧濃縮し、淡黄色油状物質１００．２ｍｇを得た。これをヘキサン−酢酸エチル（７５：２５）を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１２ｇ，１．２ｃｍ内径×２０ｃｍ長さ）に供し、ＥＺ混合物１０．３ｍｇ及びＥ体９７．２ｍｇ（０．２５５ｍｍｏｌ）を淡黄色油状物質として得た（収率９７％）。
Ｚ体
^１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，ＴＭＳ）：δ（ｐｐｍ）１．２２（９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），６．６８−６．７１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６’’），６．９８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，Ｈ−５’’），７．２７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’’），７．４６（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１），７．６４−７．６８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４’’），７．９８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−３’），８．１８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−５’）
Ｅ体
^１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，ＴＭＳ）：δ（ｐｐｍ）１．０３（９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），７．０８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１）７．１２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，Ｈ−５’’），７．３０−７．３３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６’’），７．６７−７．７０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’’ａｎｄ４’’），８．０７（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−３’），８．２６（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−５’）
高分解能ＭＳ：Ｃ_１５Ｈ_１６Ｉ_１Ｎ_３Ｎａ_１Ｏ_１に対する計算値４０４．０２３５７；実測値４０４．０２３９９

【0043】

製造例４：（Ｅ）−１−（３−ヨードフェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オールの合成

【化9】

（Ｅ）−１−（３−ヨードフェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オン８６．８ｍｇ（０．２２８ｍｍｏｌ）をメタノール３ｍＬに溶解し、水素化ホウ素ナトリウム１１．６ｍｇ（０．３０７ｍｍｏｌ）を加えて反応を開始した。室温で１時間、撹拌した後に水５ｍＬを加えて反応を停止し、酢酸エチル１５ｍＬで３回抽出した。飽和塩化ナトリウム水溶液１ｍＬで２回洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した後、減圧濃縮して白色固体８８．８ｍｇを得た。これをヘキサン−酢酸エチル（６：４）を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィー（８．５ｇ，１．０ｃｍ内径×２０．５ｃｍ）に供し、標記化合物を白色固体として８６．２ｍｇ（０．２２５ｍｍｏｌ；収率９９％）得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，ＴＭＳ）：δ（ｐｐｍ）０．６８（９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），４．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，ＯＨ），４．５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，Ｈ−３），６．８８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１），７．１６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，Ｈ−５’’），７．３４−７．３７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６’’），７．６８−７．７６（２Ｈ，ｍ，Ｈ−４’’ａｎｄ２’’），８．０５（１Ｈ，ｓ，Ｈ−３’），８．４８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−５’）
高分解能ＭＳ：Ｃ_１５Ｈ_１８Ｉ_１Ｎ_３Ｎａ_１Ｏ_１に対する計算値４０６．０３９２２；実測値４０６．０３９１４

【0044】

製造例５：４−メチルベンゼンスルホン酸 ２−（２−（プロパ−２−イン−１−イロキシ）エトキシ）エチルの合成

【化10】

プロパルギルアルコール２５０μＬ（４．２３ｍｍｏｌ）を脱水ジメチルホルムアミド３０ｍＬに溶解し、６０％水素化ナトリウム３４８ｍｇ（８．７ｍｍｏｌ）を加えて室温で３０分撹拌した。ジエチレングリコールビス（ｐ−トルエンスルホネート）３．５ｇ（８．５ｍｍｏｌ）を氷冷下で加えて反応を開始した。室温で１時間撹拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液１５ｍＬを加えて反応を停止した。水６０ｍＬを追加して１Ｍ塩酸を３ｍＬ加えｐＨを７にした後、酢酸エチル１００ｍＬで３回抽出した。飽和塩化ナトリウム水溶液３ｍＬで２回洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した後、減圧濃縮して白色固体と淡黄色油状物質の混合物３２６２．５ｍｇを得た。これをヘキサン−酢酸エチル（７５：２５）を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１５０ｇ，３．０ｃｍ内径×３５ｃｍ長さ）に供し、標記化合物を無色透明油状物質として７５３．０ｍｇ（２．５２３ｍｍｏｌ；収率６０％）得た。

【0045】

製造例６：４−メチルベンゼンスルホン酸 （Ｅ）−２−（２−（３−（３−（３−ヒドロキシ−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−１−イル）フェニル）プロパ−２−イン−１−イロキシ）エトキシ）エチルの合成

【化11】

（Ｅ）−１−（３−ヨードフェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オール４１７．９ｍｇ（１．０９１ｍｍｏｌ）をアルゴン気流下で脱水テトラヒドロフラン６ｍＬに溶解し、トリエチルアミン０．７６ｍＬ（５．４５ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）１９．０ｍｇ（０．０９９７ｍｍｏｌ）、トランス−ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）２０．０ｍｇ（０．０２８５ｍｍｏｌ）を順に加えた。室温で３０分撹拌した後、４−メチルベンゼンスルホン酸 ２−（２−（プロパ−２−イン−１−イロキシ）エトキシ）エチル３４９．０ｍｇ（１．１７０ｍｍｏｌ）を脱水テトラヒドロフラン溶液として３ｍＬ×２回で洗い込みながら添加して反応を開始した。室温で１．５時間撹拌した後にシリカゲル（８ｇ）のショートカラムに通して反応を停止し、酢酸エチル１００ｍＬで溶出した。飽和塩化ナトリウム水溶液２ｍＬ、水２ｍＬ×２回、飽和塩化ナトリウム水溶液２ｍＬで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した後に減圧濃縮して褐色油状物質７５６．９ｍｇを得た。これをヘキサン−酢酸エチル（４：６）を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィー（６５ｇ，２．４ｃｍ内径×２７ｃｍ長さ）に供し、標記化合物を淡黄色油状物質として４２６．９ｍｇ（０．７７１０ｍｍｏｌ；収率７１％）得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，ＴＭＳ）：δ（ｐｐｍ）０．５８（９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），２．３７（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１４’’’），３．５７−３．６７（６Ｈ，ｍ，Ｈ−４’’’，５’’’ａｎｄ６’’’），４．１０−４．１３（２Ｈ，ｍ，Ｈ−７’’’），４．３４（２Ｈ，ｓ，Ｈ−３’’’），４．４７（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−３），６．８５（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１），７．１９−７．３８（６Ｈ，ｍ，Ｈ−５’’，６’’，９’’’，１０’’’，１２’’’，１３’’’），７．７２−７．７５（２Ｈ，ｍ，Ｈ−２’’ａｎｄ４’’），７．９８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−３’），８．４４（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−５’）
高分解能ＭＳ：Ｃ_２９Ｈ_３５Ｎ_３Ｎａ_１Ｏ_６Ｓ_１に対する計算値５７６．２１４４３；実測値５７６．２１４７８

【0046】

製造例７：１−（４−ヨードフェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オンの合成

【化12】

３，３−ジメチル−１−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ブタン−２−オン１０４．６ｍｇ（０．６２５ｍｍｏｌ）を無水酢酸１ｍＬに溶解し、炭酸カリウム８７．４ｍｇ（０．６３２ｍｍｏｌ）、４−ヨードベンズアルデヒド１４６．０ｍｇ（０．６２９ｍｍｏｌ）を加えて１００℃に昇温して反応を開始した。反応５時間後、水３ｍＬを加えて反応を停止し、更に水３ｍＬを追加して酢酸エチル１６ｍＬで３回抽出した。飽和塩化ナトリウム水溶液１ｍＬで２回洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した後、減圧濃縮して淡橙色油状物質と白色固体の混合物２５５．６ｍｇを得た。これをヘキサン−酢酸エチル（８：２）を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１９ｇ，１．４ｃｍ内径×２０ｃｍ長さ）に供し、標記化合物を白色固体として１０１．５ｍｇ（０．２６６３ｍｍｏｌ；収率４３％）得た。

【0047】

製造例８：（Ｅ）−１−（４−ヨードフェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オンの合成

【化13】

製造例７で得られた１−（４−ヨードフェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オンのＥＺ体の混合物８４．０ｍｇ（０．２１１ｍｍｏｌ）をメタノールに溶解し、氷冷しながらＵＶランプを照射した。１．５時間後、照射を止めて減圧濃縮し、主に（Ｅ）−１−（４−ヨードフェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オンと、わずかに（Ｚ）−１−（４−ヨードフェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オンを含んだ白色固体と無色透明油状物質の混合物を８０．４ｍｇ（０．２１０９ｍｍｏｌ）得た。
Ｚ体
^１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）０．９９（９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），７．１３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’’ｏｒ６’’），７．１６（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’’ｏｒ６’’），７．２４（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−１），７．７３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３’’ｏｒ５’’），７．７７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３’’ｏｒ５’’），８．１２（１Ｈ，ｓ，Ｈ−３’），８．９２（１Ｈ，ｓ，Ｈ−５’）
Ｅ体
^１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）１．２６（９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），６．６２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’’ｏｒ６’’），６．６６（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’’ｏｒ６’’），７．６４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３’’ｏｒ５’’），７．６８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３’’ｏｒ５’’），７．７３（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−１），８．２３（１Ｈ，ｓ，Ｈ−３’），８．４５（１Ｈ，ｓ，Ｈ−５’）

【0048】

製造例９：（Ｅ）−１−（４−ヨードフェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オールの合成

【化14】

（Ｅ）−１−（４−ヨードフェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オンを主成分とする混合物をメタノール２ｍＬに溶解し、水素化ホウ素ナトリウム１０．４ｍｇ（０．２７４ｍｍｏｌ）を加えて反応を開始した。室温で１．５時間撹拌し、水素化ホウ素ナトリウム５．１ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を追加し、その１時間後に更に水素化ホウ素ナトリウム６．３ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ）を追加した。反応開始から３時間後に水３ｍＬを加えて反応を停止し、酢酸エチル１８ｍＬで３回抽出した。この際、分離が悪かったために１Ｍ塩酸を０．３ｍＬ加えた。飽和塩化ナトリウム水溶液１ｍＬで２回洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した後、減圧濃縮して無色透明油状物質８９．２ｍｇを得た。これをヘキサン−酢酸エチル（７：３）を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１１ｇ，１．２ｃｍ内径×１６ｃｍ長さ）に供し、標記化合物を白色固体として６１．４ｍｇ（収率７３％）得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）０．５６（９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），４．５４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−３）６．９５（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１），７．０９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’’ｏｒ６’’），７．１２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’’ｏｒ６’’），７．６８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３’’ｏｒ５’’），７．７０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３’’ｏｒ５’’），７．９９（１Ｈ，ｓ，Ｈ−３’），８．８２（１Ｈ，ｓ，Ｈ−５’）

【0049】

製造例１０：４−メチルベンゼンスルホン酸 （Ｅ）−２−（２−（３−（４−（３−ヒドロキシ−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−１−イル）フェニル）プロパ−２−イン−１−イロキシ）エトキシ）エチルの合成

【化15】

（Ｅ）−１−（４−ヨードフェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オール３１．２ｍｇ（８１．８μｍｏｌ）をアルゴン気流下で脱水テトラヒドロフラン０．５ｍＬに溶解し、トリエチルアミン２２μＬ（１５８μｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）２．４ｍｇ（１３μｍｏｌ）、トランス−ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）１．６ｍｇ（２．３μｍｏｌ）を順に加えた。室温で３０分撹拌した後に４−メチルベンゼンスルホン酸 ２−（２−（プロパ−２−イン−１−イロキシ）エトキシ）エチル３８．１ｍｇ（１２７μｍｏｌ）を脱水テトラヒドロフラン溶液として０．１ｍＬ×２回で洗い込みながら添加して反応を開始した。室温で１．５時間撹拌した後、シリカゲル（０．５ｇ）のショートカラムに通して反応を停止し、酢酸エチル２５ｍＬで溶出した。水２ｍＬ、飽和塩化ナトリウム水溶液１ｍＬで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した後に減圧濃縮して橙色油状物質６９．７ｍｇを得た。これをヘキサン−酢酸エチル（３：７）を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１０ｇ，１．２ｃｍ内径×１８ｃｍ長さ）に供し、標記化合物を淡黄色油状物質として３７．８ｍｇ（６８．３ｍｍｏｌ；収率８４％）得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，ＴＭＳ）：δ（ｐｐｍ）０．６６（９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），２．４４（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１４’’’），３．６４−３．７４（６Ｈ，ｍ，Ｈ−４’’’，５’’’ａｎｄ６’’’），４．１９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，Ｈ−７’’’），４．４１（２Ｈ，ｓ，Ｈ−３’’’），４．５８（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−３），６．９３（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１），７．３４（４Ｈ，ｍ，Ｈ−２’’，６’’，１０’’’ａｎｄ１２’’’），７．４９（２Ｈ，ｍ，Ｈ−３’’ａｎｄ５’’），７．８１（２Ｈ，ｍ，Ｈ−９’’’ａｎｄ１３’’’），８．０６（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−３’），８．４９（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−５’）
高分解能ＭＳ：Ｃ_２９Ｈ_３５Ｎ_３Ｎａ_１Ｏ_６Ｓ_１に対する計算値５７６．２１４４３；実測値５７６．２１４１６

【0050】

実施例１：（Ｅ）−１−（３−（２，５，８，１１−テトラオキサテトラデス−１３−イン−１４−イル）フェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オールの合成

【化16】

２−メトキシエタノール３ｍＬにアルゴン気流下で６０％水素化ナトリウムを３２３．５ｍｇ（８．０８８ｍｍｏｌ）加えて室温で１５分間撹拌した。４−メチルベンゼンスルホン酸 （Ｅ）−２−（２−（３−（３−（３−ヒドロキシ−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−１−イル）フェニル）プロパ−２−イン−１−イロキシ）エトキシ）エチル３９５．７ｍｇ（０．７１４６ｍｍｏｌ）を２−メトキシエタノール３ｍＬ×３回で洗い込みながら加え、反応を開始した。室温で３０分撹拌した後に８０℃に昇温して１時間撹拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液２０ｍＬを氷冷下で加えて反応を停止した。水２０ｍＬを追加して酢酸エチル６０ｍＬで３回抽出した。飽和塩化ナトリウム水溶液３ｍＬで２回洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した後、減圧濃縮して褐色油状物質と無色透明油状物質の混合物４３２．９ｍｇを得た。これをヘキサン−酢酸エチル（９：１−０：１０のステップグラジエント）を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィー（４３ｇ，２．４ｃｍ内径×１８．５ｃｍ長さ）に供して不純物を取り除いた後、酢酸エチル−メタノール（９９：１）の溶離液で溶出することで標記化合物及び不純物の混合物を２７１．６ｍｇ得た。これを、７０％メタノール／水を溶離液としたＨＰＬＣ（カラム、ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＨｙｄｒｏｓｐｈｅｒｅＣ１８（２０ｍｍ内径×１５０ｍｍ長さ）；流速８ｍＬ／ｍｉｎ；検出ＵＶ２５４ｎｍ）で分離し、標記化合物を無色透明油状物質として２４８．４ｍｇ（０．５４２８ｍｍｏｌ；収率７６％）得た。（総収率２２％）
^１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，ＴＭＳ）：δ（ｐｐｍ）０．６６（９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），３．３８（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１０’’’），３．４９−３．８０（１２Ｈ，ｍ，Ｈ−４’’’，５’’’，６’’’，７’’’，８’’’ａｎｄ９’’’），４．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＯＨ），４．４４（２Ｈ，ｓ，Ｈ−３’’’），４．５４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，Ｈ−３），６．９２（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１），７．３１−７．４５（４Ｈ，ｍ，Ｈ−２’’，３’’，４’’ａｎｄ６’’），８．０５（１Ｈ，ｓ，Ｈ−３’），８．５０（１Ｈ，ｓ，Ｈ−５’）
ＵＶ λｍａｘ（ＭｅＯＨ） ｎｍ（ε）：２４１（３３０００）
高分解能ＭＳ：Ｃ_２５Ｈ_３５Ｎ_３Ｎａ_１Ｏ_５に対する計算値４８０．２４７４４；実測値４８０．２４６９８

【0051】

標記化合物をキラルＨＰＬＣ（カラム、ＣＨＩＲＡＬ ＣＥＬ ＯＤ−Ｈ（１０ｍｍ内径×２５０ｍｍ長さ）；１８％２−プロパノール／ヘキサン；流速４．５ｍＬ／ｍｉｎ；検出ＵＶ２５４ｎｍ）により光学分割した。先に溶出した化合物は（−）体、後に溶出した化合物は（＋）体であった。
（−）体
ｅｅ＞９９．９６（％）
［α］²⁹_D −２．８（ＭｅＯＨ；ｃ０．５２）
（＋）体
ｅｅ＝９９．９６（％）
［α］³⁰_D ＋３．６（ＭｅＯＨ；ｃ０．５４）

【0052】

実施例２：（Ｅ）−１−（３−（３−（２−（２−ブトキシエトキシ）エトキシ）プロパ−１−イン−１−イル）フェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オールの合成

【化17】

２−メトキシエタノールに代えて１−ブタノールを用いて、実施例１に記載の方法と同様の方法で反応を行い、標記化合物を得た（総収率２６％）。
^１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，ＴＭＳ）：δ（ｐｐｍ）０．６６（９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），０．９１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ−１１’’’），１．２２−１．４３（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１０’’’），１．５２−１．６２（２Ｈ，ｍ，Ｈ−９’’’），３．４７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｈ−８’’’），３．５９−３．８１（８Ｈ，ｍ，Ｈ−４’’’，５’’’，６’’’ａｎｄ７’’’），４．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，ＯＨ），４．４５（２Ｈ，ｓ，Ｈ−３’’’），４．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，Ｈ−３），６．９２（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１），７．３１−７．４５（４Ｈ，ｍ，Ｈ−２’’，３’’，４’’ａｎｄ６’’），８．０５（１Ｈ，ｓ，Ｈ−３’），８．５０（１Ｈ，ｓ，Ｈ−５’）
ＵＶ λｍａｘ（ＭｅＯＨ） ｎｍ（ε）：２４１（３５０００）
高分解能ＭＳ：Ｃ_２６Ｈ_３７Ｎ_３Ｎａ_１Ｏ_４に対する計算値４７８．２６８１８；実測値４７８．２６７５１

【0053】

標記化合物をキラルＨＰＬＣ（カラム、ＣＨＩＲＡＬ ＣＥＬ ＯＤ−Ｈ（１０ｍｍ内径×２５０ｍｍ長さ）；１０％２−プロパノール／ヘキサン；流速４．５ｍＬ／ｍｉｎ；検出、ＵＶ２５４ｎｍ）により光学分割した。先に溶出した化合物は（−）体、後に溶出した化合物は（＋）体であった。
（−）体
ｅｅ＞９９．９６（％）
［α］³²_D −４．４（ＭｅＯＨ；ｃ０．５）
（＋）体
ｅｅ＝９９．９６（％）
［α］³²_D ＋３．８（ＭｅＯＨ；ｃ０．５）

【0054】

実施例３：（Ｅ）−１−（４−（２，５，８，１１−テトラオキサテトラデス−１３−イン−１４−イル）フェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オールの合成

【化18】

アルゴン気流下で、２−メトキシエタノール２ｍＬに６０％水素化ナトリウムを７５．６ｍｇ（１．８９ｍｍｏｌ）加え、室温で２０分撹拌した。４−メチルベンゼンスルホン酸 （Ｅ）−２−（２−（３−（４−（３−ヒドロキシ−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−１−イル）フェニル）プロパ−２−イン−１−イロキシ）エトキシ）エチル８７．２ｍｇ（０．１５８ｍｍｏｌ）を２−メトキシエタノール１ｍＬ×３回で洗い込みながら添加し、６０℃に昇温して反応を開始した。７．５時間撹拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液を１０ｍＬ加えて反応を停止した。水１０ｍＬを追加して酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出した。飽和塩化ナトリウム水溶液２ｍＬで２回洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した後、減圧濃縮して黄色油状物質９７．７ｍｇを得た。これをジクロロメタン−メタノール（１９：１）を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１０ｇ，１．４ｃｍ内径×１７ｃｍ長さ）に供して標記化合物を淡黄色油状物質として６１．０ｍｇ（０．１３４ｍｍｏｌ；収率８５％）得た。（総収率１６％）これを６５％メタノール／水を溶離液としたＨＰＬＣ（カラム、ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＨｙｄｒｏｓｐｈｅｒｅＣ１８（２０ｍｍ内径×１５０ｍｍ長さ）；流速８ｍＬ／ｍｉｎ；検出ＵＶ２５４ｎｍ）で精製し、無色透明油状物質を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，ＴＭＳ）：δ（ｐｐｍ）０．６６（９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），３．３８（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１０’’’），３．５４−３．８０（１２Ｈ，ｍ，Ｈ−４’’’，５’’’，６’’’，７’’’，８’’’ａｎｄ９’’’），４．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＯＨ），４．４５（２Ｈ，ｓ，Ｈ−３’’’），４．５７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，Ｈ−３），６．９３（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１），７．３２−７．３５（２Ｈ，ｍ，Ｈ−２’’ａｎｄ６’’），７．４７−７．５０（２Ｈ，ｍ，Ｈ−３’’ａｎｄ５’’），８．０５（１Ｈ，ｓ，Ｈ−３’），８．４８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−５’）
ＵＶ λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ε）：２７０（２４０００）
高分解能ＭＳ：Ｃ_２５Ｈ_３５Ｎ_３Ｎａ_１Ｏ_５に対する計算値４８０．２４７４４；実測値４８０．２４７３４

【0055】

標記化合物をキラルＨＰＬＣ（カラム、ＣＨＩＲＡＬ ＣＥＬ ＯＤ−Ｈ（１０ｍｍ内径×２５０ｍｍ長さ）；１５％２−プロパノール／ヘキサン；流速４．５ｍＬ／ｍｉｎ；検出、ＵＶ２５４ｎｍ）により光学分割し、（−）体と（＋）体を得た。先に溶出した化合物は（−）体、後に溶出した化合物は（＋）体であった。
（−）体
ｅｅ＞９９．８４（％）
［α］³²_D −３５（ＭｅＯＨ；ｃ０．８１）
（＋）体
ｅｅ＝９９．８４（％）
［α］³²_D ＋３６（ＭｅＯＨ；ｃ０．８２）

【0056】

実施例４：（Ｅ）−１−（３−（３−（２−（２−ブトキシエトキシ）エトキシ）プロパ−１−イン−１−イル）フェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オールの合成

【化19】

２−メトキシエタノールに代えて１−ブタノールを用いて、実施例３に記載の方法と同様の方法で反応を行い、標記化合物を得た（総収率１５％）。
^１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）０．２２（９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），０．４８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，Ｈ−１１’’’），０．９０−０．９８（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１０’’’），１．０８−１．１４（２Ｈ，ｍ，Ｈ−９’’’），３．０４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｈ−８’’’），３．１４−３．１６（２Ｈ，ｍ，Ｈ−７’’’），３．２０−３．２２（２Ｈ，ｍ，Ｈ−６’’’），３．２５−３．２６（２Ｈ，ｍ，Ｈ−５’’’），３．３１−３．３３（２Ｈ，ｍ，Ｈ−４’’’），４．００（２Ｈ，ｓ，Ｈ−３’’’），４．２４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−３），６．６６（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１），６．９７−６．９８（２Ｈ，ｍ，Ｈ−２’’ａｎｄ６’’），７．０５−７．０６（２Ｈ，ｍ，Ｈ−３’’ａｎｄ５’’），７．６５（１Ｈ，ｓ，Ｈ−３’），８．４８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−５’）
ＵＶ λｍａｘ（ＭｅＯＨ） ｎｍ（ε）：２７１（２４０００）
高分解能ＭＳ：Ｃ_２６Ｈ_３７Ｎ_３Ｎａ_１Ｏ_４に対する計算値４７８．２６８１８；実測値４７８．２６７６３

【0057】

標記化合物をキラルＨＰＬＣ（カラム、ＣＨＩＲＡＬ ＣＥＬ ＯＤ−Ｈ（１０ｍｍ内径×２５０ｍｍ長さ）；８％２−プロパノール／ヘキサン；流速４．５ｍＬ／ｍｉｎ；検出、ＵＶ２５４ｎｍ）により光学分割し、（−）体と（＋）体を得た。先に溶出した化合物は（−）体、後に溶出した化合物は（＋）体であった。
（−）体
ｅｅ＞９９．９（％）
［α］²⁷_D −３６（ＭｅＯＨ；ｃ０．７８）
（＋）体
ｅｅ＞９９．９（％）
［α］²⁸_D ＋３２（ＭｅＯＨ；ｃ０．７５）

【0058】

実施例５：（−）−（Ｓ）−（Ｅ）−１−（３−（２，５，８，１１−テトラオキサテトラデス−１３−イン−１４−イル）フェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オールの合成

【化20】

アルゴン気流下、（Ｅ）−１−（３−（２，５，８，１１−テトラオキサテトラデス−１３−イン−１４−イル）フェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オール５７．０ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ）をトルエン５ｍＬに溶解し、Ｎ−（パラ−トルエンスルホニル）−Ｌ−フェニルアラニルクロリド４２０．８ｍｇ（１．２５ｍｍｏｌ）を加えて１３０℃で３時間撹拌した。室温に戻した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液１２ｍＬを加え、酢酸エチル１５ｍＬで３回抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で３回洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した後、減圧濃縮して、粘性のある黄色油状物質１１７ｍｇを得た。これをヘキサン−酢酸エチル（０−１００％，ステップグラジエント）を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１４ｇ，１５ｍｍ内径×１４０ｍｍ長さ）に供し、標記化合物を１２．８ｍｇ（２８ｎｍｏｌ，収率２２％，ｅ．ｅ９８．４％）得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，ＴＭＳ）：δ（ｐｐｍ）０．５２（９Ｈ，ｓ），２．２３（３Ｈ，ｓ），２．８９（１Ｈ，ｄｄ），３．１０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．８ａｎｄ６．９Ｈｚ），３．３４（３Ｈ，ｓ），３．４９−３．８４（１２Ｈ，ｍ），４．３６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．９ａｎｄ７．３Ｈｚ），４．４６（２Ｈ，ｓ），５．８２（１Ｈ，ｓ），７．０８−７．６３（１４Ｈ，ｍ），８．１４（１Ｈ，ｓ），８．８０（１Ｈ，ｓ）

【0059】

実施例６：（−）−（Ｓ）−（Ｅ）−１−（３−（２，５，８，１１−テトラオキサテトラデス−１３−イン−１４−イル）フェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オールの合成

【化21】

アルゴン気流下、（Ｅ）−１−（３−（２，５，８，１１−テトラオキサテトラデス−１３−イン−１４−イル）フェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オール５０．３ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）をトルエン５ｍＬに溶解し、Ｎ−（パラ−トルエンスルホニル）−Ｌ−フェニルアラニルクロリド７４３．８ｍｇ（２．２０ｍｍｏｌ）を加えて１３０℃で３時間撹拌した。室温に戻した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液１０ｍＬを加え、酢酸エチル１５ｍＬで３回抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で３回洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した後、減圧濃縮して、粘性のある黄色油状物質２５１ｍｇを得た。これをヘキサン−酢酸エチル（０−１００％，ステップグラジエント）を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１１ｇ，１４ｍｍ内径×１５０ｍｍ長さ）に供し、さらにＯＤＳ ＨＰＬＣ（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−ＡＱ（２０ｍｍ内径×１５０ｍｍ長さ），８０％ＭｅＯＨ，８．０ｍＬ／ｍｉｎ，２５４ｎｍ）に供して、標記化合物のエステル体を３２．２ｍｇ（０．０２７ｍｍｏｌ）得た。このうち２０．２ｍｇをテトラヒドロフラン１．５ｍＬに溶解し、５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液１．５ｍＬを加えて６０℃で６時間撹拌した。室温に戻し、酢酸エチル１２ｍＬで３回抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で３回洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した後、減圧濃縮して、無色透明油状物質１４ｍｇを得た。これをヘキサン−酢酸エチル（０−１００％，ステップグラジエント）を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１０ｇ，１５ｍｍ内径×１３５ｍｍ長さ）に供し、標記化合物を１１．５ｍｇ（０．０２５ｍｍｏｌ，収率３６％）得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，ＴＭＳ）：δ（ｐｐｍ）０．５２（９Ｈ，ｓ），２．２３（３Ｈ，ｓ），２．８９（１Ｈ，ｄｄ），３．１０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．８ａｎｄ６．９Ｈｚ），３．３４（３Ｈ，ｓ），３．４９−３．８４（１２Ｈ，ｍ），４．３６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．９ａｎｄ７．３Ｈｚ），４．４６（２Ｈ，ｓ），５．８２（１Ｈ，ｓ），７．０８−７．６３（１４Ｈ，ｍ），８．１４（１Ｈ，ｓ），８．８０（１Ｈ，ｓ）

【0060】

比較例１：１−（４−（４−（（２−（２−ブトキシエトキシ）エトキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）−４，４−ジメチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ペント−１−エン−３−オールの合成

【化22】

非特許文献１に記載の方法に従い、標記化合物を合成し、光学分割により（＋）体及び（−）体を得た。

【0061】

試験例１：シロイヌナズナ種子発芽阻害試験（１）
シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ，Ｃｏｌ−０）種子を７０％エタノール水溶液５００μＬに３０分、続いて１００％エタノール５００μＬに１分浸漬し、蒸留水１ｍＬで３回洗浄した後に、種子を蒸留水に浸漬させ、暗所下、４℃で３日間春化処理した。試料のメタノール溶液及びＡＢＡのメタノール溶液を１．５ｍＬ容マイクロチューブに入れ、減圧下にてメタノールを除去し、７０℃の０．５％寒天水溶液（含１／２ＭＳ培地無機塩類）を加えて撹拌した。それを９６穴プレートに入れ、サンプルを含む培地とした。ここに春化処理したシロイヌナズナ種子を２０−３０粒ずつ播種し、連続光下、２２℃で培養してその発芽数を経時的に観察した。下記式（１）にしたがって発芽率を計算した。なお，メタノールを用いて同様に培地を調製したものを無処理区とし、播種７２時間後に発芽率１００％を示した。播種７２時間後の発芽率を図１に示し、１２０時間後のシロイヌナズナの初期生育の様子を図２に示す。実施例１〜４の化合物の投与により種子の発芽が阻害されることが明らかとなった。
発芽率（％）＝発芽数（個）／播種数（個）×１００…（１）

【0062】

試験例２：シロイヌナズナ種子発芽阻害試験（２）
試料に、実施例１の（−）体、実施例２の（−）体及び比較例１の（−）体を用いて、試験例１と同様の試験を行った。播種１２０時間後の発芽の様子を図３に示す。比較例１の（−）体と比較して、実施例１の（−）体及び実施例２の（−）はより低濃度でも種子の発芽を阻害できることが明らかとなった。

【0063】

試験例３：イネ第二葉鞘伸長阻害試験
イネ（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ． ｃｖ． Ｎｉｈｏｎｂａｒｅ）種子をエタノールに５分間浸漬した後、水で１０回洗浄し、水に浸漬して連続光下、３０℃で３日間培養し発芽させた。試料のメタノール溶液を培養管に入れ、メタノールを減圧下で除去した後、脱イオン水２ｍＬを加えた。これに発芽種子を７粒ずつ入れ、蓋をして連続光下、３０℃で７日間培養後に第二葉鞘長を測定し、下記式（２）にしたがって阻害率を算出した。なお、脱イオン水のみで培養したものをコントロールとした。結果を図４に示す。実施例１〜４の化合物の高濃度投与によってのみ葉鞘の伸長が阻害されることが明らかとなった。
伸長阻害率（％）＝｛１−（各検体の第二葉鞘長／コントロールの第二葉鞘長）｝×１００…（２）

【0064】

試験例４：アブシジン酸８’位水酸化酵素ＣＹＰ７０７Ａ３阻害試験
１．５ｍＬマイクロチューブに、基質である２５０μＭ ＡＢＡのカリウム・リン酸緩衝液（ＫＰＢ）溶液を１０μＬ、試料のジメチルホルムアミド溶液を５μＬ、ＫＰＢ４３５μＬ、アブシジン酸８’位水酸化酵素ＣＹＰ７０７Ａ３＋ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素ＡＴＲ１ ４０μＬを加え、３０℃で１０分間加温した。５ｍｇ／ｍＬのＮＡＤＰＨのＫＰＢ溶液を１０μＬ添加して酵素反応を開始した。３０℃、１０００ｒｐｍで１０分間反応し、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を２５μＬ加えて反応を停止した。４℃で３０分静置した後、１Ｍ塩酸５０μＬを加えて酵素代謝物をファゼイン酸（ＰＡ）に変換した。ＯＡＳＩＳ ＨＬＢカートリッジ（１ｃｃ，３０ｍｇ；メタノール（１％酢酸）１ｍＬで洗浄し、水（１％酢酸）１ｍＬで平衡化したもの）に酵素反応溶液を供し、１０％メタノール／水（１％酢酸）１ｍＬで洗浄した後、メタノール（１％酢酸）１ｍＬでファゼイン酸を溶出した。減圧濃縮し（トルエンを加えて酢酸を共沸）、メタノール５０μＬに溶解して２０μＬをＨＰＬＣ（カラム、ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＨｙｄｒｏｓｐｈｅｒｅＣ１８（６ｍｍ内径×１５０ｍｍ長さ）；流速１ｍＬ／ｍｉｎ；検出、ＵＶ２５４ｎｍ）分析に供した。下記式（３）にしたがって試料によるＣＹＰ７０７Ａ３阻害率を算出した。なお、コントロールには試料溶液の代わりにジメチルホルムアミドを用いた。各試料について２種類の濃度について試験を行い、その酵素阻害率から５０％阻害濃度（ＩＣ_５０）を算出した。その結果を表１に示す。
酵素阻害率（％）＝｛１−（各試料のＰＡピーク面積／コントロールのＰＡピーク面積）｝×１００…（３）

【0065】

【表1】

【0066】

試験例５：ｅｎｔ−カウレンオキシダーゼＣＹＰ７０１Ａ６阻害試験
１．５ｍＬマイクロチューブに、基質である５００μＭ ｅｎｔ−カウレンの４５％シクロデキストリン水溶液を８μＬ、試料のジメチルホルムアミド溶液を８μＬ入れた。そこへ、予め３０℃で５分間加温しておいた２．３２μＭのｅｎｔ−カウレンオキシダーゼＣＹＰ７０１Ａ６を１０μＬと４．６ｕｎｉｔ／ｍＬのＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素ＡＴＲ２を１０μＬ添加した。予め３０℃で１０分間加温しておいた超純水３０４μＬ、５００ｍＭ ＫＰＢ４０μＬ、２０ｍＭ ＮＡＤＰＨ水溶液２０μＬを添加して酵素反応を開始した。３０℃、１０００ｒｐｍで３０分間反応し、１Ｍ塩酸を１００μＬ加えて反応を停止した。内部標準として１０μＭのアビエチン酸５μＬを添加して酢酸エチル４００μＬで抽出し、硫酸ナトリウムで脱水した後、減圧濃縮した。メタノール５０μＬと２Ｍトリメチルシリルジアゾメタン５μＬを添加してカルボン酸をメチル化し、窒素乾固した。ヘキサン１５０μＬに溶解して１μＬをＧＣ−ＭＳ分析に供し、酵素代謝物であるｅｎｔ−カウレン酸を検出した。下記式（４）にしたがって試料によるＣＹＰ７０１Ａ６阻害率を算出した。なお、ｅｎｔ−カウレン酸のピーク面積はｍ／ｚ２７３のピーク面積から算出し、ｍ／ｚ２５７，２１３の面積比からｅｎｔ−カウレン酸であることを確認した。アビエチン酸のピーク面積はｍ／ｚ２５６の面積から算出し、ｍ／ｚ３１６の面積比からアビエチン酸であることを確認した。コントロールには試料溶液の代わりにジメチルホルムアミドを用いた。各試料について２種類の濃度について試験を行い、その酵素阻害率から５０％阻害濃度（ＩＣ_５０）を算出した。その結果を表２に示す。
酵素阻害率（％）＝｛１−（各試料のｅｎｔ−カウレン酸ピーク面積／各試料のアビエチン酸ピーク面積）／（コントロールのｅｎｔ−カウレン酸ピーク面積／コントロールのアビエチン酸ピーク面積）｝×１００…（４）

【0067】

【表2】

【0068】

試験例６：シロイヌナズナ生育試験
Ｇｅｌｚａｎ培地（ＭＳ培地混合塩類と１％ショ糖を含む）で生育させた２週齢のシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ，Ｃｏｌ−０）５個体を、バーミキュライトとプロミックスを１：１で混合させた培養土を入れた２００ｍＬ容のプラスチックポットに移植し、２２℃、１６時間明期−８時間暗期の条件で２週間生育させた。この段階で、植物体と培養土を含むポットの質量が約１５０ｇになるように水分量を調整した。２７ポット（合計１３５個体のシロイヌナズナ実生）に、実施例１の（−）体の５０μＭ水溶液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０と０．２％のＭｅＯＨを含む）５０ｍＬを、１日１回ずつ３日間、地上部に散布した。上記化合物を含まない水溶液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０と０．２％のＭｅＯＨを含む）５０ｍＬを、１日１回ずつ３日間、地上部に散布したポットをコントロールとして用いた。１２日間の乾燥処理後に灌水し、３日後の生存個体数を測定し、下記式（５）にしたがって、生存率を算出した。コントロールのポットでは、乾燥処理後のシロイヌナズナの生存率が１５％であったのに対し、実施例１の（−）体５０μＭ水溶液を散布されたポットでは、乾燥処理後のシロイヌナズナの生存率は７５％であった。シロイヌナズナに実施例１の（−）体の化合物を散布することにより、乾燥による枯死が緩和されることが明らかとなった。
生存率（％）＝生存個体数（個）／全個体数（個）×１００…（５）

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】