特許 6606183 トロポミオシン関連キナーゼ（ＴＲＫ）阻害剤の医薬製剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6606183

(24)【登録日】2019年10月25日

(45)【発行日】2019年11月13日

(54)【発明の名称】トロポミオシン関連キナーゼ（ＴＲＫ）阻害剤の医薬製剤

(51)【国際特許分類】

   C07D 471/04 20060101AFI20191031BHJP

   A61K 31/437 20060101ALI20191031BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20191031BHJP

   A61P 25/04 20060101ALI20191031BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20191031BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20191031BHJP

   A61K 47/32 20060101ALI20191031BHJP

   A61K 47/24 20060101ALI20191031BHJP

   A61K 47/34 20170101ALI20191031BHJP

   A61K 9/52 20060101ALI20191031BHJP

【ＦＩ】

   C07D471/04 107A

   C07D471/04CSP

   A61K31/437

   A61P19/02

   A61P25/04

   A61P43/00 111

   A61K47/26

   A61K47/32

   A61K47/24

   A61K47/34

   A61K9/52

【請求項の数】27

【全頁数】56

(21)【出願番号】特願2017-532722(P2017-532722)

(86)(22)【出願日】2015年12月17日

(65)【公表番号】特表2018-503611(P2018-503611A)

(43)【公表日】2018年2月8日

(86)【国際出願番号】US2015066396

(87)【国際公開番号】WO2016100677

(87)【国際公開日】20160623

【審査請求日】2018年12月6日

(31)【優先権主張番号】62/093,801

(32)【優先日】2014年12月18日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】500034653

【氏名又は名称】ジェンザイム・コーポレーション

(74)【代理人】

【識別番号】100127926

【弁理士】

【氏名又は名称】結田 純次

(74)【代理人】

【識別番号】100140132

【弁理士】

【氏名又は名称】竹林 則幸

(72)【発明者】

【氏名】ハーヴィー・リーバーマン

(72)【発明者】

【氏名】トンライ・ヤン

(72)【発明者】

【氏名】マイケル・シー・フィルブルック

(72)【発明者】

【氏名】マイケル・サントス

(72)【発明者】

【氏名】クリス・ホー

【審査官】 三上 晶子

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１０−５２４９１１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１６−５３９９５７（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ２０１／００−５１９／００

Ａ６１Ｋ ３１／３３− ３３／４４

Ａ６１Ｐ １／００− ４３／００

Ａ６１Ｋ ９／００− ９／７２

Ａ６１Ｋ ４７／００− ４７／６９

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

Ｘ線粉末回折パターンが、ＣｕＫα線を用いて測定した以下の２θピーク３．６、７．１、８．９、１０．４、１０．７、１２．４、１２．７及び１４．３を含む、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの結晶形態。

【請求項2】

請求項１に記載の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの結晶形態、及び医薬的に許容される賦形剤を含む医薬製剤。

【請求項3】

【化1】

を含む化合物。

【請求項4】

ａ、下記構造式の化合物

【化2】

及び、
ｂ、 医薬的に許容される賦形剤を含む医薬製剤。

【請求項5】

医薬的に許容される賦形剤が、希釈剤を含む、請求項４に記載の医薬製剤。

【請求項6】

希釈剤が、マリトール、ヒマワリ油、アルギン酸アンモニウム、炭酸カルシウム、乳酸カルシウム、リン酸カルシウム二塩基無水物、二塩基性二水和物、三塩基性、ケイ酸カルシウム、硫酸カルシウム、セルロース（粉末状、ケイ素化微結晶）、酢酸セルロース、圧縮性糖、菓子砂糖、コーンスターチ及びアルファ化デンプン、デキストレート、デキストリン、デキストロース、エリスリトール、エチルセルロース、フルクトース、フマル酸、パルミトステアリン酸グリセリル、吸入ラクトース、イソマルト、カオリン、ラクチトール、ラクトース（無水物、一水和物及びコーンスターチ、一水和物及び微結晶セルロース、噴霧乾燥）、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、マルトデキストリン、マルトース、マンニトール、中鎖トリグリセリド、微結晶セルロース、ポリデキストロース、ポリメタクリレート、シメチコン、アルギン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ソルビトール、デンプン（アルファ化、滅菌可能なトウモロコシ）スクロース、糖球、スルホブチルエーテルｂ−シクロデキストリン、タルク、トラガカント、トレハロース、及びキシリトールから選択される請求項５に記載の医薬製剤。

【請求項7】

医薬的に許容される賦形剤が、懸濁化剤を含む、請求項４に記載の医薬製剤。

【請求項8】

懸濁化剤が、アカシア、寒天、アルギン酸、ベントナイト、ステアリン酸カルシウム、カルボマー、カルボキシメチルセルロース（カルシウム及びナトリウム）、カラギーナン、セルロース（微結晶性、微結晶性及びカルボキシメチルセルロースナトリウム、粉末状）、コロイド状二酸化ケイ素、デストリン、ゼラチン、グアーガム、ヘクトライト、疎水性コロイド状シリカ、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒプロメロース、カオリン、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、マルチトール溶液、中鎖トリグリセリド、メチルセルロース、ホウ酸フェニル水銀、リン脂質、ポリカルボフィル、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポビドン（ポリビニルピロリドン）、アルギン酸プロピレングリコール
、サポナイト、ゴマ油、アルギン酸ナトリウム、ソルビタンエステル、スクロース、トラガカント、ビタミンＥポリエチレングリコールサクシネート、及びキサンタンガムから選択される請求項７記載の医薬製剤。

【請求項9】

医薬的に許容される賦形剤が、緩衝剤を含む、請求項４に記載の医薬製剤。

【請求項10】

緩衝剤が、アジピン酸、アンモニア溶液、ホウ酸、炭酸カルシウム、水酸化カルシウム、乳酸カルシウム、リン酸カルシウム、三塩基性クエン酸一水和物、二塩基性リン酸ナトリウム、ジエタノールアミン、グリシン、マレイン酸、リンゴ酸、メチオニン、メチオニン、一塩基性リン酸ナトリウム、モノエタノールアミン、グルタミン酸ナトリウム、リン酸、クエン酸カリウム、酢酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム二水和物、水酸化ナトリウム、乳酸ナトリウム、及びトリエタノールアミンから選択される請求項９に記載の医薬製剤。

【請求項11】

変形性関節症の治療に使用する、請求項２に記載の医薬製剤。

【請求項12】

疼痛の治療に使用する、請求項２に記載の医薬製剤。

【請求項13】

変形性関節症に関連する疼痛の治療に使用する、請求項２に記載の医薬製剤。

【請求項14】

３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを充填したマイクロスフェアを含む徐放性医薬製剤。

【請求項15】

マイクロスフェアが、ポリマーを含む、請求項１４に記載の徐放性医薬製剤。

【請求項16】

ポリマーが、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）を含む、請求項１５に記載の徐放性医薬製剤。

【請求項17】

ポリマーが、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）を含む、請求項１５に記載の徐放性医薬製剤。

【請求項18】

ポリマーが、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）及びポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）を含む、請求項１５に記載の徐放性医薬製剤。

【請求項19】

ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）が、固有粘度０．１６〜０．３５ｄＬ／ｇを有する、請求項１６に記載の徐放性医薬製剤。

【請求項20】

ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）が、固有粘度０．１４〜０．２４ｄＬ／ｇを有する、請求項１７に記載の徐放性医薬製剤。

【請求項21】

ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）が、固有粘度０．１６〜０．３５ｄＬ／ｇを有し、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）が、固有粘度０．１４〜０．２４ｄＬ／ｇを有する、請求項１８に記載の徐放性医薬製剤。

【請求項22】

マイクロスフェアが、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）及びポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）を９：１の比で含む、請求項１８に記載の徐放性医薬製剤。

【請求項23】

マイクロスフェアが、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）及びポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）を９．５：０．５の比で含む、請求項１８に記載の徐放性医薬製剤。

【請求項24】

マイクロスフィアに３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−アミンを１％ｗ／ｗから９９％ｗ／ｗ充填した、請求項１４に記載の徐放性医薬製剤。

【請求項25】

変形性関節症の治療に使用する、請求項１４に記載の徐放性医薬製剤。

【請求項26】

疼痛の治療に使用する、請求項１４に記載の徐放性医薬製剤。

【請求項27】

変形性関節症に関連する疼痛の治療に使用する、請求項１４に記載の徐放性医薬製剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、トロポミオシン関連キナーゼ阻害剤「ＴＲＫ阻害剤」である、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン、及び、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態である、
３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン一水和物に関する。
一水和物の形態は、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンから医薬製剤への調製を容易にするという望ましい特性を有する。

【0002】

Ｔｒｋ阻害剤微結晶溶液医薬製剤は、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンをその一水和物の形態で含み、無水物の形態をより改善した特性を示す。

【0003】

本発明はまた、Ｔｒｋ阻害剤である、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの徐放性医薬製剤にも関し、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを充填したマイクロスフェアを含む。

【0004】

本発明は、更に、炎症性疾患、自己免疫疾患、骨代謝欠陥、及び癌を含む疾患の治療、同様に、変形性関節症（ＯＡ）、疼痛、術後疼痛及びＯＡに伴う疼痛の治療における、これらの医薬製剤の使用に関する。

【0005】

Ｔｒｋ阻害剤である、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン及びＴｒｋ阻害剤の製造方法は、それぞれ、「トロポミオシン関連キナーゼ（ＴＲＫ）阻害剤」という発明の名称で、特許文献１及び特許文献２に開示されており、それらは参照により本明細書に組み込まれる。

【0006】

〔関連技術〕
特になし。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0007】

【特許文献1】ＰＣＴ／ＵＳ１４／６９４６９号

【特許文献2】米国特許出願第１４／５６４，７７３号

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明における第一の態様は、Ｔｒｋ阻害剤である３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの結晶構造に関し、Ｘ線粉末回折パターンが、ＣｕＫα線を用いて測定した以下の２θピーク、７．１４、８．８９、１０．２２、１２．４２、２．７３及び１４．３１を含む。

【0009】

本発明における第２の態様は、Ｔｒｋ阻害剤である、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの結晶形態を含む医薬製剤に関し、ＣｕＫα線を用いて測定した粉末Ｘ線回折パターンが以下の２θピーク、７．１４、８．８９、１０．２２、１２．４２、２．７３及び１４．３１を含む。

【0010】

本発明における第３の態様は、Ｔｒｋ阻害剤である、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物の形態に関する。

【0011】

本発明における第４の態様は、Ｔｒｋ阻害剤である３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物の形態を含む医薬製剤、及び医薬的に受容可能な賦形剤に関する。

【0012】

本発明における第５の態様は、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを充填したマイクロスフェアを含む徐放性を延長した医薬製剤に関する。

【0013】

本発明における第６の態様は、下記工程、
ａ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンと溶媒とを混合し、懸濁液を形成する工程、
ｂ 懸濁液を攪拌する工程、
ｃ 濾過によって懸濁液中の固体を回収する工程、及び、
ｄ 固体の乾燥工程、
を含む、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの結晶形態を製造する方法に関する。

【0014】

本発明における第７の態様は、下記工程、
ａ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンと溶媒とを混合し、懸濁液を形成する工程、
ｂ 懸濁液を攪拌する工程、
ｃ 濾過によって懸濁液中の固体を回収する工程、及び、
ｄ 固体の乾燥工程、
を含む、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物の形態を製造する方法に関する。

【0015】

本発明における第８の態様は、下記工程、
ａ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを有機溶媒中で溶解し、薬剤溶液を形成する工程、
ｂ ポリマーを薬剤溶液に添加し、ポリマー／３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン溶液を形成する工程、
ｃ ポリマー／３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン溶液を水性溶液中で混合し、乳濁液を形成する工程、
ｄ 乳濁液に脱イオン水を添加する工程、
ｅ 溶媒抽出により、乳濁液から、マイクロスフェアを形成する工程、及び、
ｆ 界面活性剤溶液を用いて得られたマイクロスフェアを篩い分ける工程
を含む、溶媒抽出により、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを充填したマイクロカプセルを製造する方法に関する。

【0016】

更に、本発明における第９の態様は、下記工程、
ａ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを有機溶媒中で分散し、薬剤懸濁液を形成する工程、
ｂ ポリマーを薬剤懸濁液に添加し、ポリマー／３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン分散液を形成する工程、
ｃ ポリマー／３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン分散液を水性溶液と混合し、乳濁液を形成する工程、
ｄ 乳濁液に脱イオン水を添加する工程、
ｅ 溶媒抽出により，乳濁液から、マイクロスフェアを形成する工程、及び、
ｆ 界面活性剤溶液を用いて得られたマイクロスフェアを篩い分ける工程
を含む、溶媒抽出により、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを充填したマイクロカプセルを製造する方法に関する。

【0017】

本発明における第１０の態様は、下記工程、
ａ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを有機溶媒中で溶解し、薬剤溶液を形成する工程、
ｂ ポリマーを薬剤溶液に添加し、ポリマー／３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン溶液を形成する工程、
ｃ ポリマー／３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン溶液を噴霧器を介して乾燥器に送出し、球形粒子を形成する工程、
を含む、噴霧乾燥により、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを充填したマイクロカプセルを製造する方法に関する。

【0018】

本発明における第１１の態様は、下記工程、
ａ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを有機溶媒中で分散し、薬剤懸濁液を形成する工程、
ｂ ポリマーを薬剤懸濁液に添加し、ポリマー／３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン分散液を形成する工程、及び
ｃ ポリマー／３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン分散液を噴霧器を介して乾燥器に送入し、球形粒子を形成する工程、
を含む、
噴霧乾燥により、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを充填したマイクロカプセルを製造する方法に関する。

【図面の簡単な説明】

【0019】

【図1】３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）、４−４０°２θ。３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態のＸＲＰＤは、ＣｕＫαを用いて測定した２θピークの７．１４、８．８９、１０．２２、１２．４２、１２．７３、及び１４．３１に固有のピークを示す。

【図2】一水和物形態の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを、１０℃／分で加熱した示差走査熱量測定（ＤＳＣ）及び熱重量分析（ＴＧＡ）のサーモグラム。ＤＳＣサーモグラムは、７６．７２、１６０．１３、及び１９５．７８℃で３つの熱事象を示し、ＴＧＡサーモグラムは、２５〜１００℃で３．７％の重量損失を示す。

【図3】３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態の結晶構造である。Ｔｒｋ阻害剤の一水和物形態の結晶構造を表示する。

【図4】単結晶構造から計算されたＸＲＰＤパターンと試験的ＸＲＰＤパターンとの重ね合わせ。この図は、単結晶構造から計算されたものと試験的な粉末パターンとを重ね合わせて表示した。適合の程度が強いものは、単結晶構造がバルク材料を示すことを示唆している。

【図5】ＩＶＲ特性に及ぼすＡＰＩ充填の影響−１２％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：７５２Ｈの比９：１、１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：７５２Ｈの比９：１及び２０％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：７５２Ｈの比９：１のマイクロスフェア。この図では、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン充填が種々の組成を有するマイクロスフェアのインビトロにおける放出特性に及ぼす影響を比較した。

【図6】１６％ＡＰＩ／９：１ Ｒ２０２Ｈ：７５２Ｈ及び２０％ＡＰＩ／９：１ Ｒ２０２Ｈ：７５２Ｈ マイクロスフェアのＤＳＣサーモグラム。ＤＳＣサーモグラムは、２０％のマイクロスフェアは１３０〜１５０℃の間で融解吸熱を示し、表面の薬剤結晶の存在を確認したことを証明している。

【図7】１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：７５２Ｈの比が９：１のマイクロスフェアの走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）図（１５００倍）。薬剤充填１６％のマイクロスフェアは薬剤結晶を示さず、薬剤が非晶質であることを示している。

【図8】２０％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：７５２Ｈの比が９：１のマイクロスフェアの走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）図（１５００倍）。薬剤充填２０％のマイクロスフェアは表面に薬剤結晶を示した。

【図9】ＩＶＲ特性に及ぼすＡＰＩ充填の影響−１５％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ、１７％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ及び１９％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈのマイクロスフェア。この図では、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの充填が種々の組成を有するマイクロスフェアのインビトロにおける徐放性に及ぼす影響を比較した。

【図10】ＩＶＲ特性に及ぼすＡＰＩ充填の影響−１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：７５２Ｈの比が９．５：０．５、１８％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：７５２Ｈの比が９．５：０．５、及び２０％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：７５２Ｈの比が９．５：０．５のマイクロスフェア。この図では、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの充填が種々の組成を有するマイクロスフェアのインビトロにおける放出特性に及ぼす影響を比較した。

【図11】ＩＶＲ特性に及ぼすポリマーブレンドの影響− １６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ、１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９．５：０．５及び１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１のマイクロスフェア。この図では、ポリマーブレンドが種々の組成を有するマイクロスフェアのインビトロにおける放出特性に及ぼす影響を比較した。

【図12】ＩＶＲ特性に及ぼすポリマーブレンドの影響−１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ、１６％ＡＰＩ／９．５：０．５ Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ５０２Ｈ及び１６％ＡＰＩ／９：１ Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ５０２Ｈのマイクロスフェア。この図では、ポリマーブレンドが種々の組成を有するマイクロスフェアのインビトロにおける放出特性に及ぼす影響を比較した。

【図13】１８０日間に亘り、ゼロ次のＩＶＲ特性を示した製剤。１５％ＡＰＩ／Ｒ２０３Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１、及び１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ５０２Ｈの比が９．５：０．５のマイクロスフェア。Ｒ２０３Ｈ：７５２Ｈポリマーを９：１の比にした中の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン１５％、及びＲ２０２Ｈ：ＲＧ５０２Ｈポリマーを９．５：０．５の比にした中の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン１６％を用いて調製したマイクロスフェアは、６ヶ月に亘り、疑似ゼロ次放出特性を示した。

【図14】調製時における共溶媒系のＩＶＲ特性に及ぼす影響―１６％ＡＰＩ／Ｒ２０３Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１のマイクロスフェア―ＤＣＭ：ＭｅＯＨの比が９：１、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＢＡが９：０．５：０．５、ＤＣＭ：ＢＡが９．５：０．５、ＤＣＭ：ＢＡ が９：１。この図では、薬剤を１６％充填し、Ｒ２０３Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１であるポリマーブレンドを有するマイクロスフェアの調製時に共溶媒系を使用する際の、インビトロにおける放出特性に及ぼす影響を比較した。

【図15】ＡＰＩ充填を増加させるためのＤＣＭ：ＢＡ共溶媒システムがＩＶＲ特性に及ぼす影響−１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１、２５％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１、３０％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ、２５％ＡＰＩ／Ｒ２０３Ｈ、３０％ＡＰＩ／Ｒ２０３Ｈ、４０％ＡＰＩ／Ｒ２０３Ｈ、５０％ＡＰＩ／Ｒ２０３Ｈのマイクロスフェア。この図ではマイクロスフィアの製造時に、薬剤充填を増加させるために使用した共溶媒系が、ポリマーブレンドを種々変えたマイクロスフィアのインビトロ放出特性に及ぼす影響を比較した。

【図16】マイクロ化懸濁液マイクロカプセル化プロセスで調製したマイクロスフェアの走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）図（１５００倍）。３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの懸濁液をカプセル化することにより製造したマイクロスフェアは、表面に包埋した薬剤結晶が存在するため、粗い表面組織を有する球状であった。

【図17】ＩＶＲ特性に及ぼすマイクロ化懸濁液のマイクロカプセル化プロセスの影響―２５％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１ ５％ＰＶＡ３９ｍＬ＋ＥＡ２．６ｍＬ、２５％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１ ５％ＰＶＡ３９ｍＬ＋ＥＡ３．２５ｍＬ、２５％ＡＰＩ／Ｒ２０３Ｈ ５％ＰＶＡ３９ｍＬ＋ＥＡ２．０ｍＬ、３０％マイクロフルイダイズＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１ ５％ＰＶＡ３９ｍＬ＋ＥＡ２．０ｍＬ、４０％マイクロフルイダイズＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１ ５％ＰＶＡ３９ｍＬ＋ＥＡ２．０ｍＬ、３０％マイクロフルイダイズＡＰＩ／ Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１ ５％ＰＶＡ３９ｍＬ＋ＥＡ２．０ｍＬ、３０％マイクロフルイダイズＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１ ５％ＰＶＡ３９ｍＬ＋ＥＡ２．３ｍＬ、３０％マイクロフルイダイズＡＰＩ／Ｒ２０２Ｓ ５％ＰＶＡ３９ｍＬ＋ＥＡ２．０ｍＬ、３０％マイクロフルイダイズＡＰＩ／Ｒ２０３Ｓ ５％ＰＶＡ３９ｍＬ＋ＥＡ２．０ｍＬのマイクロスフェア。この図では、種々の薬剤を充填したマイクロスフェアのインビトロにおける放出特性に関して、マイクロスフェアの調製時に使用する微粉化懸濁液マイクロカプセル化プロセスを比較した。

【図18】溶媒抽出による、１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１のマイクロスフェア、の走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）図（１０００倍）。溶媒抽出したマイクロスフェアは、平滑表面組織を有する球状であった。

【図19】噴霧乾燥による、１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１のマイクロスフェア、の走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）図（１０００倍）。噴霧乾燥したマイクロスフェアは、多少の表面組織を有する球状であった。

【図20】ＩＶＲ特性に及ぼすマイクロカプセル化プロセスの影響―溶媒抽出（ＯＷ）による１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１のマイクロスフェア、噴霧乾燥（２０％及び２２．５％ポリマー）による１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１のマイクロスフェア、及び噴霧乾燥（２２．５％ポリマー）による１６％ＡＰＩ／Ｒ２０３Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１のマイクロスフェア。この図では、溶媒抽出及び噴霧乾燥により調製した１６％の薬剤を充填したＲ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１のマイクロスフェアのインビトロにおける放出特性を比較した。 図２０ ＩＶＲ特性に及ぼすマイクロカプセル化プロセスの影響―溶媒抽出（ＯＷ）による１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１のマイクロスフェア、噴霧乾燥（２０％及び２２．５％ポリマー）による１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１のマイクロスフェア、及び噴霧乾燥（２２．５％ポリマー）による１６％ＡＰＩ／Ｒ２０３Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１のマイクロスフェア。この図では、種々の製剤のマイクロスフェアのインビトロにおける放出特性に及ぼすマイクロカプセル化プロセスの影響を示した。

【図21】噴霧乾燥による１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：Ｒ２０３Ｈの比が１：１／無添加のマイクロスフェアの走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）図（１０００倍）。１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：Ｒ２０３Ｈの比が１：１／無添加の噴霧乾燥マイクロスフェアを示した。

【図22】噴霧乾燥による１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：Ｒ２０３Ｈの比が１：１／ＰＥＧ ３１．２５ｍｇのマイクロスフェアの走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）図（１０００倍）。１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：Ｒ２０３Ｈの比が１：１／ＰＥＧ ３１．２５ｍｇ含有の噴霧乾燥マイクロスフェアを示した。

【図23】噴霧乾燥による１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：Ｒ２０３Ｈの比が１：１／ポロキサマー４０７ ３１．２５ｍｇのマイクロスフェアの走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）図（１０００倍）。１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：Ｒ２０３Ｈの比が１：１／ポロキサマー４０７ ３１．２５ｍｇ含有の噴霧乾燥マイクロスフェアを示した。

【図24】ＩＶＲ特性に及ぼす１０ｋＤａ ＰＥＧ１％又は、ポロキサマー４０７ １％の影響―１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：Ｒ２０３Ｈの比が１：１／無添加、１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：Ｒ２０３Ｈの比が１：１／ＰＥＧ ３１．２５ｍｇ、１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：Ｒ２０３Ｈの比が１：１／ポロキサマー４０７ ３１．２５ｍｇ。この図では、噴霧乾燥によって調製した、１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：Ｒ２０３Ｈの比が１：１／無添加のマイクロスフェア、１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：Ｒ２０３Ｈの比がの比が１：１／ＰＥＧ ３１．２５ｍｇのマイクロスフェア、及び１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：Ｒ２０３Ｈの比が１：１／ポロキサマー４０７ ３１．２５ｍｇのマイクロスフェアのインビトロにおける放出特性を比較した。

【図25】インビボ（ラット）におけるＩＶＲ特性−１６％ＡＰＩ／２０２Ｈ：ＲＧ５０２Ｈの比が９：１、及び１５％ＡＰＩ／Ｒ２０３Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１のマイクロスフェア。この図では、１６％ＡＰＩ／２０２Ｈ：ＲＧ５０２Ｈの比が９：１及び１５％ＡＰＩ／Ｒ２０３Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１のマイクロスフェアについて、インビボにおいて約３〜４ヶ月及び約５〜６ヶ月間に亘りほぼゼロ次放出を示した。

【図26】［^１４Ｃ］３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの経時的残存（ラット膝関節）−１６％ＡＰＩ／２０２Ｈ：ＲＧ５０２Ｈの比が９：１、及び１５％ＡＰＩ／２０３Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１のマイクロスフェア。ラット膝関節への関節内投与後、１６％ＡＰＩ／２０２Ｈ：ＲＧ５０２Ｈの比が９：１、及び１５％ＡＰＩ／２０３Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１のマイクロスフェアは５〜６ヶ月以上の薬剤放出示し、１６％ＡＰＩ／２０２Ｈ：ＲＧ５０２Ｈの比が９：１は５ヶ月後に関節に１２％残存し、かつ１５％ＡＰＩ／２０３Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１は６ヶ月後に薬剤の３０％が残存していることを示した。

【図27】３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの濃度経時特性（ラット血液）−１６％ＡＰＩ／２０２Ｈ：ＲＧ５０２Ｈの比が９：１、及び１５％ＡＰＩ／２０３Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１のマイクロスフェア。この図では、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを充填したマイクロスフェアを関節内投与した後の血液中の経時的薬剤濃度を示した。

【図28】ＩＶＲ特性−１６％ＡＰＩ／２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１、１５％ＡＰＩ／Ｒ２０３Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１及び４０％ＡＰＩ／２０３Ｈのマイクロスフェア

【図29】３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン濃度−経時特性−１６％ＡＰＩ／２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１、１５％ＡＰＩ／Ｒ２０３Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１及び４０％ＡＰＩ／２０３Ｈのマイクロスフェア。

【図30】形態１から４（無水物及び水和物）の測定による、又は模擬的なＸＲＰＤ。３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの無水物及び水和物形態のＸＲＰＤを提示した。

【図31】形態５（エタノール）のＸＲＰＤ。３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの形態５（エタノール）のＸＲＰＤを提供した。

【図32】形態９（アセトン）のＸＲＰＤ。３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの形態９（アセトン）のＸＲＰＤを提供した。

【図33】形態１０（アセトン）及び形態９（アセトン）のＸＲＰＤ比較。この図では、アセトン中で得た３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの二つの形態の比較を提供した。

【図34】形態１１（アセトニトリル）のＸＲＰＤ。３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの形態１１（アセトニトリル）のＸＲＰＤを提供した。

【図35】３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの固体結晶相。この図では、試験で得た３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの１０種の結晶形態の比較を提供した。

【発明を実施するための形態】

【0020】

本発明は、トロポミオシン関連キナーゼ阻害剤「ＴＲＫ阻害剤」である、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン、及び、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態の医薬製剤に関する。

【0021】

Ｔｒｋ阻害剤微結晶溶液医薬製剤は、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンをその一水和物の形態で含み、無水物の形態より改善した特性を示す。

【0022】

本発明は又、Ｔｒｋ阻害剤である、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの徐放性医薬製剤にも関し、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを充填したマイクロスフェアを含む。

【0023】

更に、本発明は、炎症性疾患、自己免疫疾患、骨代謝の欠陥、及び癌を含む疾患の治療、並びに変形性関節症（ＯＡ）、疼痛、術後疼痛及びＯＡに関連する疼痛の治療における、これらの医薬製剤の使用に関する。

【0024】

本発明のＴｒｋ阻害剤の医薬製剤は、トロポミオシン関連キナーゼＡ（ＴｒｋＡ）、トロポミオシン関連キナーゼＢ（ＴｒｋＢ）、トロポミオシン関連キナーゼＣ（ＴｒｋＣ）、及びｃ−ＦＭＳ（コロニー刺激因子−１のための細胞受容体（ＣＳＦ−１））を阻害する。トロポミオシン関連キナーゼ（Ｔｒｋ）は、好中球（ＮＴ）と称する可溶性増殖因子により活性化される高親和性受容体である。神経栄養性チロシンキナーゼ受容体１型としても知られるＴｒｋＡは、神経栄養因子（ＮＧＦ）によって活性化される。ＴｒｋＢは、脳由来栄養因子及びＮＴ−４／５によって活性化される。ＴｒｋＣはＮＴ３によって活性化される。Ｔｒｋの活性化は、細胞増殖、生存、血管新生及び転移を含む細胞シグナル伝達に関与する下流キナーゼの活性化をもたらす。Ｔｒｋは、ＯＡを含む多くの疾患に関与している。

【0025】

本発明のＴｒｋ阻害剤の医薬製剤は、ｃ−ＦＭＳ（コロニー刺激因子−１（ＣＳＦ−１）の細胞受容体）を阻害することもできる。Ｃ−ＦＭＳはマクロファージ機能を調節する役割を果たし、かつ、炎症性疾患、自己免疫疾患、骨代謝及び癌の欠陥において一定の役割を果たすと考えられている（Ｂｕｒｎｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｓ、２０１１、Ｉｎｆｏｒｍａ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）。

【0026】

ＯＡは、関節軟骨の慢性疼痛及び破壊を特徴とする一般的で、かつ衰弱性の関節疾患である。最近の臨床試験において、抗ＮＧＦブロッキング抗体を静脈内注入することにより治療した患者において、顕著な疼痛緩和と高いレスポンダ率が実証され、ＯＡ膝痛におけるＮＧＦを遮断する役割が確認されている（Ｌａｎｅ、２０１０、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ）。しかし、この治療法は、ＮＧＦシグナル伝達の全身的阻害による有害事象へのリスク増大をもたらす可能性がある（抗神経栄養因子関連安全問題討議ＦＤＡ関節炎諮問委員会； ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ＡｄｖｉｓｏｒｙＣｏｍｍｉｔｔｅｅｓ／Ｃａｌｅｎｄａｒ／ｕｃｍ２８６５５６．ｈｔｍ）。従って、Ｔｒｋ阻害剤、具体的にはＮＧＦの高親和性受容体であるＴｒｋＡ阻害剤の開発（Ｎｉｃｏｌ、２００７、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｎｔｅｒｖ）を通じ、ＮＧＦ媒介性ＯＡ疼痛を標的とする新規なアプローチが採用されている。本発明のＴｒｋ阻害剤は局所的に送達され、それにより、抗ＮＧＦの静脈内投与で観察される全身分配が回避される。この治療戦略は、非局所的部位では生理学的に必要なＮＧＦシグナル伝達（すなわち感覚／交感神経維持、血管新生）の維持が可能となるため、投与の利便性を高め、更に安全性を高める。

【0027】

本発明は、Ｔｒｋ阻害剤の医薬製剤、及びＴｒｋ阻害剤の医薬製剤で疾患を治療する方法に関する。より具体的には、本発明は、疼痛、ＯＡ、ＯＡ関連疼痛、術後疼痛、炎症性疾患、自己免疫疾患、骨代謝の欠陥及び癌をＴｒｋ阻害剤の医薬製剤で治療する方法に関する。Ｔｒｋ阻害剤の医薬組成物は、微結晶懸濁液として、及び徐放性製剤中で両方共に、局所送達のための注射を含む複数の剤形で投与することができる。Ｔｒｋ阻害剤は、Ｔｒｋ阻害剤を含む医薬組成物中の有効医薬成分である。Ｔｒｋ阻害剤はまた、疼痛、ＯＡ及びＯＡに関連する疼痛の治療を含む、疾患の治療のための他の有効成分と同時投与及び／または同時製剤することもできる。

【0028】

本発明のＴｒｋ阻害剤の医薬製剤は、有効医薬成分として、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを含み、下記式（Ｉ）で表される。３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンは、又、ＧＺ３８９９８８としても知られている。

【化1】

【0029】

本発明で解決すべき問題は、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを含む製剤組成物における困難性である。

【0030】

この問題は、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物の形態が、無水物の形態と比べ、物理的安定性がより良好であり、かつ水性溶解がより遅いことを含め、物理的及び化学的により改善された特性を有することを発見することにより解決できた。３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの無水物の形態は溶液中で比較的不安定であり、医薬組成物への製剤化における課題として判明していた。無水物の形態は、特定の条件下で、水和物への変換を含み、色々な形態の固体への変化を示す。３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態は、安定性を更に付与でき、しかも、長期に亘る貯蔵中、及び加工中も多形な変化を避けるためには不可欠であり、より高い物理的な安定をもたらす。更に、一水和物形態については水溶液中における溶解がより遅くなることが観察された。３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態は、ＧＺ３８９９８８Ａとしても知られ、下式（ＩＩ）によって表される。

【化2】

【0031】

３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの分子量は４７０．５４ｇ／ｍｏｌであり、組成式（elemental formula）はＣ_２６Ｈ_２６Ｎ_６Ｏ_３である。３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンはオフホワイト色の粉末であり、偏光顕微鏡下では細かい針状または繊維状粒子のように見える。

【0032】

３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態を実施例１に従って合成した。

【0033】

本発明の特定の実施形態は、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの結晶形態であり、ＣｕＫα線を用いて測定したＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）は、以下の２θピーク：７．１４、８．８９、１０．２２、１２．４２、１２．７３及び１４．３１を含む。ＸＲＰＤを計算で得る方法の詳細を、実施例１に提供する。本発明の別の実施形態は、Ｔｒｋ阻害剤である３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの結晶形態を含む医薬製剤、及び医薬的に許容される賦形剤である。

【0034】

本発明の別の実施形態は、エタノール、アセトン、アセトニトリル、及び混合溶媒を含む他の溶媒中における、Ｔｒｋ阻害剤である３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの他の結晶形態に関する。３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンのその他の形態、及びＸＲＰＤ計算で得る方法の詳細を実施例４に提供する。

【0035】

本発明は又、式（Ｉ）で表される３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態を含む組成物、及びＴｒｋ阻害剤である３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態を含む医薬製剤、及び医薬的に許容される賦形剤に関する。

【0036】

Ｔｒｋ阻害剤の医薬製剤は、１種又はそれ以上の医薬的に許容される賦形剤を含み得る。Ｔｒｋ阻害剤の医薬製剤の投与様式には、経口、舌下、静脈内、皮下、筋肉内、関節内、経皮、直腸、吸入、くも膜下腔内／脳室内、及び局所が含まれる。従って、Ｔｒｋ阻害剤の医薬製剤は、例えば、カプセル、錠剤、粉末、溶液、懸濁液、乳濁液、凍結乾燥粉末、又は注射用マイクロカプセルを含む徐放性製剤として製剤し得る。Ｔｒｋ阻害剤の医薬製剤に使用される賦形剤は、Ｔｒｋ阻害剤の医薬製剤が意図している投与経路に依存することになろう。

【0037】

適切な賦形剤としては、希釈剤、溶媒、ゼラチン、アルブミン、ラクトース、デンプン、安定剤、溶融剤、乳化剤、懸濁化剤、塩及び緩衝剤などの無機又は有機材料を挙げられるが、これらに限定する訳ではない。溶液又は懸濁液のような関節内製剤用に適切な医薬的に許容される賦形剤としては、商業的に入手可能な不活性ゲル又は液体を挙げられるが、これらに限定する訳ではない。

【0038】

Ｔｒｋ阻害剤である３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン、及び３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物、の溶解性が低いものであるとすれば、有効医薬成分としてＴｒｋ阻害剤を含む関節内注射用の微結晶懸濁液製剤を調製するには、懸濁化剤が必要とされる。一般に使用される医薬的に許容される懸濁化剤としては、アカシア、寒天、アルギン酸、ベントナイト、ステアリン酸カルシウム、カルボマー、カルボキシメチルセルロース（カルシウム及びナトリウム）、カラギーナン、セルロース（微結晶性、微結晶性及びカルボキシメチルセルロースナトリウム、粉末状）、コロイド状二酸化ケイ素、デストリン、ゼラチン、グアーガム、ヘクトライト、疎水性コロイドシリカ、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒプロメロース、カオリン、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、マルチトール溶液、中鎖トリグリセリド、メチルセルロース、ホウ酸フェニル水銀、リン脂質、ポリカルボフィル、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポビドン（ポリビニルピロリドン）、アルギン酸プロピレングリコール、サポナイト、ゴマ油、アルギン酸ナトリウム、ソルビタンエステル、スクロース、トラガカント、ビタミンＥポリエチレングリコールサクシネート、及びキサンタンガムが挙げられる（Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ、第６版）が挙げられる。

【0039】

Ｔｒｋ阻害剤としての有効成分が３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態である関節内投与のための液液製剤において、緩衝剤も又、使用される。医薬的に許容される緩衝剤としては、アジピン酸、アンモニア溶液、ホウ酸、炭酸カルシウム、水酸化カルシウム、乳酸カルシウム、リン酸カルシウム、三塩基性クエン酸一水和物、二塩基性リン酸ナトリウム、ジエタノールアミン、グリシン、マレイン酸、リンゴ酸、メチオニン、メチオニン、一塩基性リン酸ナトリウム、モノエタノールアミン、グルタミン酸ナトリウム、リン酸、クエン酸カリウム、酢酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム二水和物、水酸化ナトリウム、乳酸ナトリウム、及びトリエタノールアミン（Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ、第６版）。

【0040】

本発明のＴｒｋ阻害剤である医薬製剤は、関節内投与のための製剤であるため、それらは又、希釈剤を含んでいても良い。本発明に適用するための適切な希釈剤としては、マリトール、ヒマワリ油、アルギン酸アンモニウム、炭酸カルシウム、乳酸カルシウム、リン酸カルシウム二塩基無水物、二塩基性二水和物、三塩基性、ケイ酸カルシウム、硫酸カルシウム、セルロース（粉末状、ケイ素化微結晶）、酢酸セルロース、圧縮性糖、菓子砂糖、コーンスターチ及びアルファ化デンプン、デキストレート、デキストリン、デキストロース、エリスリトール、エチルセルロース、フルクトース、フマル酸、パルミトステアリン酸グリセリル、吸入ラクトース、イソマルト、カオリン、ラクチトール、ラクトース（無水、一水和物及びコーンスターチ、一水和物及び微結晶セルロース、噴霧乾燥）、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、マルトデキストリン、マルトース、マンニトール、中鎖トリグリセリド、微結晶セルロース、ポリデキストロース、ポリメタクリレート、シメチコン、アルギン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ソルビトール、デンプン（アルファ化、滅菌可能なトウモロコシ）スクロース、糖球、スルホブチルエーテルｂ−シクロデキストリン、タルク、トラガカント、トレハロース、及びキシリトールを含む（Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ、第６版）。

【0041】

有効成分として、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態を有するＴｒｋ阻害剤の微結晶懸濁液医薬製剤を実施例２に記載する。

【0042】

本発明はまた、結晶形態の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの製造方法、及び一水和物形態の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの製造方法にも関し、下記工程、
ａ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを溶媒と混合し懸濁液を形成する工程、
ｂ 懸濁液を攪拌する工程、
ｃ 懸濁液中の固体を濾過により回収する工程、及び
ｄ 固体を乾燥する工程
を含む。

【0043】

この方法において、懸濁液を形成するために使用される溶媒は、アセトンと水との混合物でも良い。更に、懸濁液は一晩撹拌して良く、回収した固体を風乾しても良い。

【0044】

Ｔｒｋ阻害剤の徐放性医薬製剤は、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン、又は、一水和物形態の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの何れをも含み得て、即ち、薬剤溶液から製造する製剤の場合、Ｔｒｋ阻害剤はマイクロカプセル化し製剤化する前に、溶媒中に溶解され、又、薬剤懸濁液から製造する製剤の場合、Ｔｒｋ阻害剤はマイクロカプセル化し製剤化する前に、溶媒中に懸濁される。次いで、実施例３に記載したように、有効成分を含有する溶液又は懸濁液を種々のポリマーと結合させ、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンをマイクロカプセル化する。３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンのマイクロカプセル化は、３ヶ月、及びそれ以上、持続する徐放効果を有する製剤を提供し、かつ、患者における持続的な治療効果を提供するのに役立つ。

【0045】

本発明の具体的実施形態では、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態を含む医薬製剤は、医薬的に許容される希釈剤、医薬的に許容される懸濁化剤及び医薬的に許容される緩衝剤を含む。本発明の医薬製剤の特定の実施形態では、希釈剤がソルビトールであり、懸濁化剤がポビドンであり、かつ緩衝剤はリン酸である。

【0046】

本発明はまた、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを充填したマイクロスフェアを含む徐放性医薬製剤に関する。これらの徐放性医薬製剤では、Ｔｒｋ阻害剤は、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン、又はこの化合物の一水和物形態の何れかである。薬剤を充填したマイクロスフェアは更にポリマーを含み得る。

【0047】

ポリマーを含むＴｒｋ阻害剤を充填したマイクロスフェアの具体的の実施形態では、ポリマーは、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）およびポリ（Ｄ、Ｌ−グリコリド）とポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）両方の組合せから選択される。本発明の特定の実施形態では、徐放性製剤に使用されるポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）は、０．１６〜０．３５ｄＬ／ｇの固有粘度を有する。別の実施形態では、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）は、０．１６〜０．２４ｄＬ／ｇの固有粘度を有する。更に別の実施形態において、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）は０．２５〜０．３５ｄＬ／ｇの固有粘度を有する。本発明の特定の実施形態では、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド-ＣＯ−グリコリド）は、０．１４〜０．２４ｄＬ／ｇの固有粘度を有する。一実施形態では、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）は、０．１４〜０．２２ｄＬ／ｇの固有粘度を有する。別の実施形態では、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）は、０．１６〜０．２４ｄＬ／ｇの固有粘度を有する。

【0048】

ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）及びポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）の両方を含む徐放性製剤において、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）は０．１６〜０．３５ｄＬ／ｇの固有粘度を有し、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）は、０．１４〜０．２４ｄＬ／ｇの固有粘度を有する。一実施形態では、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）は０．１６〜０．２４ｄＬ／ｇの固有粘度を有し、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）は０．１４〜０．２２ｄＬ／ｇの固有粘度を有する。別の実施形態において、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）は０．１６〜０．２４ｄＬ／ｇの固有粘度を有し、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）は０．１６〜０．２４ｄＬ／ｇの固有粘度を有する。更に別の実施形態では、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）は０．２５〜０．３５ｄＬ／ｇの固有粘度を有し、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）は０．１４〜０．２２ｄＬ／ｇの固有粘度を有する。更に別の実施形態では、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）は０．２５〜０．３５ｄＬ／ｇの固有粘度を有し、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）は０．１６〜０．２４ｄＬ／ｇの固有粘度を有する。

【0049】

別の実施形態では、Ｔｒｋ阻害剤を充填したマイクロスフェアを含む徐放性医薬製剤は、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）及びポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）を９：１の比で含む。これらの徐放性医薬製剤において、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）は０．１６〜０．３５ｄＬ／ｇの固有粘度を有し、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）は０．１４〜０．２４ｄＬ／ｇの固有粘度を有する。

【0050】

別の実施形態では、Ｔｒｋ阻害剤を充填したマイクロスフェアを含む徐放性医薬製剤は、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）及びポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）を９．５：０．５の比で含む。これらの製剤において、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）は０．１６〜０．３５ｄＬ／ｇの固有粘度を有し、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）は０．１４〜０．２４ｄＬ／ｇの固有粘度を有する。

【0051】

Ｔｒｋ阻害剤を充填したマイクロスフェアを含む徐放性医薬製剤において、マイクロスフェアには、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン１％ｗ／ｗ〜９９％ｗ／ｗを充填する。より具体的な実施形態では、マイクロスフェアに３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン、１２％ｗ／ｗ〜５０％ｗ／ｗを充填する。更に他の実施形態では、マイクロスフェアに３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン、１２％ｗ／ｗ〜５０％ｗ／ｗを充填する。より具体的な実施形態では、マイクロスフェアは、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを１２％ｗ／ｗ、１５％ｗ／ｗ、１６％ｗ／ｗ、１７％ｗ／ｗ、１８％ｗ／ｗ、１９％ｗ／ｗ、２０％ｗ／ｗ、２５％ｗ／ｗ、３０％ｗ／ｗ、４０％ｗ／ｗ、又は５０％ｗ／ｗでも充填する。

【0052】

本発明は又、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを充填したマイクロカプセルを、溶媒抽出及び噴霧乾燥により製造する方法にも関する。

【0053】

本発明の溶媒抽出方法の一つは、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの溶液からＴｒｋ阻害剤を充填したマイクロスフェアを形成することに関する。この方法は、
ａ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを有機溶媒中に溶解し、薬剤溶液を形成する工程、
ｂ 薬剤溶液にポリマーを添加して、ポリマー／３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン溶液を形成する工程、
ｃ ポリマー／３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン溶液を水溶液中に混合し、乳濁液を形成する工程、
ｄ 乳濁液に脱イオン水を添加する工程、
ｅ 溶媒抽出によって乳濁液からマイクロスフェアを形成する工程、及び、
ｆ 界面活性剤溶液を用いて得られたマイクロスフェアを篩い分ける工程を含む。

【0054】

この方法における有機溶媒は、（ｉ）酢酸エチル、（ｉｉ）ジクロロメタン、（ｉｉｉ）クロロホルム、（ｉｖ）酢酸エチル及びジクロロメタン、（ｖ）酢酸エチル及びクロロホルム、（ｖｉ）ジクロロメタン及びクロロホルム、又は（ｖｉｉ）酢酸エチル、ジクロロメタン及びクロロホルムを含み得る。この方法におけるポリマーは、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）、又はポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）とポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）との組合せでも良い。この方法における水溶液は、水中のポリビニルアルコールでも良い。この方法における界面活性剤溶液は、水中のポロキサマー４０７、水中のポリソルベート８０又は水中のポリソルベート２０でも良い。

【0055】

本発明の溶媒抽出方法の他の一つは、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの懸濁液からＴｒｋ阻害剤を充填したマイクロスフェアを形成することに関する。この方法は、
ａ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを有機溶媒中に分散し、薬剤懸濁液を形成する工程、
ｂ 薬剤懸濁液にポリマーを添加して、ポリマー／３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン分散液を形成する工程、
ｃ ポリマー／３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン分散液を水溶液中に混合し、乳濁液を形成する工程、
ｄ 乳濁液に脱イオン水を添加する工程、
ｅ 溶媒抽出によって乳濁液からマイクロスフェアを形成する工程、及び、
ｆ 界面活性剤溶液を用いて得られたマイクロスフェアを篩い分ける工程を含む。

【0056】

この方法における有機溶媒は、（ｉ）酢酸エチル、（ｉｉ）ジクロロメタン、（ｉｉｉ）クロロホルム、（ｉｖ）酢酸エチル及びジクロロメタン、（ｖ）酢酸エチル及びクロロホルム、（ｖｉ）ジクロロメタン及びクロロホルム、又は（ｖｉｉ）酢酸エチル、ジクロロメタン及びクロロホルムを含み得る。この方法におけるポリマーは、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）、又はポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）とポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）との組合せでも良い。この方法における水溶液は、水中のポリビニルアルコールでも良い。この方法における界面活性剤溶液は、水中のポロキサマー４０７、水中のポリソルベート８０又は水中のポリソルベート２０でも良い。

【0057】

別の態様では、本発明は、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを充填したマイクロカプセルの溶液から噴霧乾燥により、Ｔｒｋ阻害剤を充填したマイクロスフィアを形成する方法に関する。この方法は、
ａ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを有機溶媒中に溶解させて薬剤溶液を形成する工程、
ｂ 薬剤溶液にポリマーを添加して、ポリマー／３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン溶液を形成する工程、及び
ｃ ポリマー／３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン溶液を噴霧器を介して乾燥器に送入して球状粒子を形成する工程を含む。

【0058】

この方法における有機溶媒は、（ｉ）ジクロロメタン及びメタノール、（ｉｉ）ジクロロメタン、（ｉｉｉ）ベンジルアルコール及びメタノール、（ｉｖ）ジクロロメタン及びベンジルアルコール、（ｖ）クロロホルム、（ｖ）クロロホルム及びメタノール、又は（ｖｉｉ）クロロホルム及びベンジルアルコールを含み得る。

【0059】

この方法におけるポリマーは、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）、又はポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）とポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）との組合せでも良い。この方法の追加パラメータは、噴霧器の噴霧速度及び噴霧化窒素流量に関する。噴霧速度は０．７ｍＬ／ｍｉｎで良い。噴霧化窒素流量は４Ｌ／ｍｉｎ で良い。乾燥器中の種々のポイントにおける温度もまた、制御し得る要素であり、結果として得られるマイクロスフィアの大きさに強い影響を及ぼす。この方法では、乾燥器の入口温度は５０℃、チャンバ温度は４０〜４５℃、及び排気温度は２０〜３０℃を有し得る。より具体的な実施形態では、チャンバ温度は４０〜４３℃であり、より具体的には、チャンバ温度は４１〜４３℃である。別の実施形態では、排気温度は２２〜２８℃である。

【0060】

さらに別の態様では、本発明は、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを充填したマイクロカプセルの懸濁液から噴霧乾燥によってＴｒｋ阻害剤を充填したマイクロスフィアを形成する方法に関する。この方法は、
ａ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを有機溶媒中に分散し、薬剤懸濁液を形成する工程、
ｂ 薬剤懸濁液にポリマーを添加し、ポリマー／３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン分散液を形成する工程、次に ｃ ポリマー／３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン分散液を噴霧器を介して乾燥器に送入し、球状粒子を形成させる工程、
を含む。

【0061】

この方法において、有機溶媒は、（ｉ）酢酸エチル、（ｉｉ）ジクロロメタン、（ｉｉｉ）クロロホルム、（ｉｖ）酢酸エチル及びジクロロメタン、（ｖ）酢酸エチル及びクロロホルム、（ｖｉ）ジクロロメタン及びクロロホルム、又は（ｖｉｉ）酢酸エチル、ジクロロメタン及びクロロホルムを含み得る。この方法におけるポリマーは、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）、又はポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）とポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）との組合せでも良い。この方法の追加的パラメータとしては、噴霧器の噴霧速度及び噴霧化窒素流量が関係する。噴霧速度は０．７ｍＬ／ｍｉｎで良く、噴霧化窒素流量は４Ｌ／ｍｉｎで良い。乾燥器中の種々の位置における温度も又、制御し得る要素であり、結果として得られるマイクロスフィアの大きさに強い影響を及ぼす。この方法では、乾燥器の入口温度は５０℃、チャンバ温度は４０〜４５℃、及び排気温度は２０〜３０℃を有し得る。より具体的な実施形態では、チャンバ温度は４０〜４３℃であり、より具体的には、チャンバ温度は４１〜４３℃である。別の実施形態では、排気温度は２２〜２８℃である。

【0062】

以下に示す本発明の種々の実施例は、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物の形態、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物の形態を有する医薬製剤、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの徐放性医薬製剤の調製方法、及びこれらの徐放性製剤の製造方法を含むが、これに限定する訳ではない。

【実施例】

【0063】

実施例１ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物の形態
実施例１−１ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態の合成
アセトニトリル（５０ｍＬ）中、３−メトキシ−４−（４−メトキシベンジルオキシ）フェニル）メタンアミン（２．００ｇ、７．３２ｍｍｏｌ）と５−ブロモ−２−クロロ−３−ニトロピリジン（１．６６ｇ、６．９７ｍｍｏｌ）との撹拌溶液に、Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．１３ｇ、８．７１ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を加熱還流し、撹拌した。６４時間後、反応混合物を室温まで冷却し、水で希釈した。混合物をジクロロメタンで２回抽出した。有機相を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、５−ブロモ−Ｎ−（３−メトキシ−４−（４−メトキシベンジルオキシ）ベンジル）−３−ニトロピリジン−２−アミン ３．３４ｇ（＞１００％）を黄褐色固体として得た。

【0064】

テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）、エタノール（４０ｍＬ）及び水（４０ｍＬ）中の５−ブロモ−Ｎ−（３−メトキシ−４−（４−メトキシベンジルオキシ）ベンジル）−３−ニトロピリジン−２−アミンの撹拌溶液に、次亜硫酸ナトリウム（６．０９ｇ、３４．９９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を加熱還流し撹拌した。４時間後、反応混合物を室温まで冷却し、水で希釈した。黄色混合物をジクロロメタンで３回抽出した。有機相を合わせブラインで洗浄し、乾燥し（硫酸マグネシウム）、濾過し、次いで、濃縮して、黄褐色固体３．１０ｇを得た。クロマトグラフィー精製（Ｃｏｍｂｉ−Ｆｌａｓｈ ＳｉＯ_２ ４０ｇ 金カラム、メタノール／ジクロロメタン１〜２．５％）により、５−ブロモ−Ｎ²−（３−メトキシ−４−（４−メトキシベンジルオキシ）ベンジル）ピリジン−２，３−ジアミン１．２８ｇ（５１％）を黄色固体として得た。

【0065】

ジクロロメタン（３０ｍＬ）及びメタノール（３０ｍＬ）中の５−ブロモ−Ｎ²−（３−メトキシ−４−（４−メトキシベンジルオキシ）ベンジル）ピリジン−２，３−ジアミン（０．８５０ｇ、１．９１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に臭化シアン（アセトニトリル５．０Ｍ中、５７３μＬ、２．８７ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温で撹拌した。２４時間後、臭化シアン溶液の第２のアリコートの（６００μＬ）を添加し、攪拌を続けた。４８時間後、臭化シアン溶液（６００μＬ）の第３のアリコートを加え、攪拌を続けた。合計７２時間後、反応混合物を濃縮し、残渣をジクロロメタンに溶解した。溶液を１Ｎ水酸化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して褐色固体１．１７ｇを得た。クロマトグラフィー精製（Ｃｏｍｂｉ−Ｆｌａｓｈ、４０ｇ ＳｉＯ２ 金カラム、メタノール／ジクロロメタン中１−１０％２Ｍアンモニア）により、６−ブロモ−３−（３−メトキシ−４−（４−メトキシベンジルオキシ）ベンジル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン０．２８ｇ（３２％）を褐色固体として得た。

【0066】

１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）および水（４ｍＬ）中、６−ブロモ−３−（３−メトキシ−４−（４−メトキシベンジルオキシ）ベンジル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン（０．２５ｇ，０．５３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、１−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール（０．１４ｇ，０．６６ｍｍｏｌ）、リン酸三カリウム（０．３９ｇ、１．８４ｍｍｏｌ）、トリシクロヘキシルホスフィン（０．０１５ｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（０．００５ｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をマイクロ波反応器中で１２５℃に加熱した。１５分後、反応混合物を室温まで冷却し、水で希釈した。その混合物を酢酸エチルで２回抽出した。有機相を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、次いで、濃縮し、うぐいす色の固体０．３６ｇを得た。クロマトグラフィー精製（Ｃｏｍｂｉ−Ｆｌａｓｈ、ＳｉＯ２ １２ｇ 金カラム、メタノール／ジクロロメタン中、アンモニア １〜１０％ ２Ｍ）により、淡緑色の固体生成物０．１０ｇ（４１％）を得た。

【0067】

３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンをアセトン（２ｍＬ）及び水（０．１ｍＬ）の混合物に添加した。この懸濁液をマグネチックスターラで室温下、一晩撹拌した。固体を濾過によって回収し、空気中で乾燥させた。構造をプロトンＮＭＲによって確認した。示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムは、７６．７２℃、１６０．１３℃及び１９５．７８℃において、３つの熱事象を示し、熱重量分析（ＴＧＡ）サーモグラムは２５〜１００℃の間で３．７％の重量損失を示し、及びＸ線粉末回折分析（ＸＲＰＤ）では、ＣｕＫα（正確度±０．２°）を用いて測定し、固有のピークを３．６、７．１、８．９、１０．４、１０．７、１２．４、１２．７及び１４．３に２θピークとして示した。

【0068】

実施例１−２ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態の結晶構造の同定
３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態の結晶構造もまた解明した。３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態の結晶をアセトン／水から再結晶させた。得られた０．２０ｘ０．０８ｘ０．０３ｍｍの大きさの結晶は、ＭｉＴｅＧｅｎ ＭｉｃｒｏＭｏｕｎｔの最上部に置いた場合、回折フレームに適切であった。Ｘ線回折データは、ＳＭＡＲＴ ＡＰＥＸ領域検出器、４５ｋＶ／６５０μＡで動作する低温デバイス（モデルＬＴ２）及び銅−Ｋマイクロフォーカス発生器、像集束スポット直径約２５０μｍを有する集束ビームＭｏｎｔｅｌ多層光学系を備えた、Ｂｒｕｋｅｒ／ＡＸＳ三環式回折計で収集した。（Ｗｉｅｓｍａｎｎ ｅｔ ａｌ、２００７）。データはプログラムパッケージＳＭＡＲＴ Ｖ ５．６２８（Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ、２００１）を用いて収集し、プログラムＳＡＩＮＴ＋Ｒｅｌｅａｓｅ ６．４５（Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ、２００３）で処理した。２４５９回の反射（θｍｉｎ＝ １．７８、θｍａｘ＝５０．２１；０＜ｈ＜２４、−４ ＜ｋ＜０、−１９＜ｌ＜１９ ）を生じたこの解析では、２４５９回の反射全てが固有（Ｒｉｎｔ＝ｎａ、Ｒσ＝０．１５８３）であった。セルパラメータの精緻化は１４０５回の反射を使用して行った。吸収補正を経験的に適用し、位相問題はＡＰＥＸ２ ｓｕｉｔｅの「構造解」モジュールで解消した。

【0069】

構造は、ＡＰＥＸ２スイート（Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ、２０１１）のＸＬモジュールを用いて、最小自乗法（（Ｆ_ｏ^２-Ｆ_ｃ^２）^２の最小化）による精緻化を行った。全ての水素原子の位置を計算し、Ｓ（適合度）＝１．０８５、Ｒ（全データ）＝０．１３２９（｜Ｆｏｂｓ｜＞４σを有する１６１４回の反射について、Ｒ（観測データ）＝０．０９２０、ｗＲ２（全データ）＝０．２７１０、ｗＲ２（観測データ）＝０．２３７７）であった。差分マップにおいて、割当てられていない最大ピークは、Å^３ につき−０．３４８対＋０．３８６電子に対応する。Ｃ−Ｃ結合の平均推定標準偏差（ｅ．ｓ．ｄ．）は０．００９Åであり、Ｏ−Ｃ結合のそれは０．００９Åであり、Ｎ−Ｃ結合の平均標準偏差は０．００９Åである。Ｃ−Ｃ−Ｃ結合角の平均ｅ．ｓ．ｄ．は０．７であり、Ｃ−Ｃ−Ｃのねじれ角は１．００４°である。

【0070】

３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態の結晶構造を図３に示す。図４は、単結晶構造から計算したものと試験的粉末パターンとを重ね合わせて表示した。適合度が強いのは、単結晶構造がバルク材料を示すことを示唆している。

【0071】

実施例２ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン一水和物微結晶懸濁液製剤
３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態を有効成分とするＴｒｋ阻害剤の微結晶性懸濁液医薬製剤を開発した。これらの製剤は、身体へのＴｒｋ阻害剤の送達を、長い時間をかけて、持続させるための、不溶性の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン粒子の懸濁液として開発した。このアプローチは、溶解度の低い有効成分と放出期間を制御するための投与量に依存し、又、それはインビボで、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを略ひと月間、持続的に送達することを示した。

【0072】

実施例２−１ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン一水和物の注射用微結晶懸濁液 ２０ｍｇ／ｍＬ
溶液単位ｍＬ当たり、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態２０ｍｇを含む医薬製剤を調製した。微結晶懸濁液２０ｍｇ／ｍＬの組成を以下の表１に示した。

【0073】

【表1】

【0074】

実施例２−２ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン一水和物の微結晶懸濁液製剤２０ｍｇ／ｍＬの製造方法
３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン一水和物形態の水溶液２０ｍｇ／ｍＬを、以下の工程に従って調製した。

【0075】

１． 注射用水（ＷＦＩ）及びジヒドロゲンホスフェートナトリウムの適当量を合体し、完全に溶解するまで撹拌し、次いで水酸化ナトリウム１Ｎ溶液でｐＨを７．４（±０．２）に調整することにより、ｐＨ７．４のリン酸緩衝液１０ｍＭを調製した。
２． ソルビトール及びポビドンＫ１７パイロジェンの適当量を合体し、ｐＨ７．４のリン酸緩衝液１０ｍＭをを添加し、次いで、完全に溶解するまで撹拌することにより賦形剤を調製した。
３． 次いで、得られた賦形剤をＰＶＤＦ［ポリフッ化ビニリデン］製０．２２μｍの親水性フィルタを通して濾過した。
４． ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態と賦形剤とを混合し、約３０ｍｇ ／ｍＬの濃縮懸濁液を得た。
５． 濃縮懸濁液を撹拌をしながら、７５μｍステンレス鋼製の篩上で濾過した。
６． 攪拌を続けながら、予備的に濾過した懸濁液を、次に、４０μｍステンレス鋼製篩上で濾過し、濃縮物懸濁液が得られる。
７． 濃縮懸濁液を、濾過した賦形剤で調整して、懸濁液２０ｍｇ／ｍＬを得る。
８． 最終懸濁液を、滅菌し、かつパイロジェンを除去した無色のＩ型ガラス製バイアルに、充填容量３．６ｍＬまで充填する。バイアルは、滅菌し、かつパイロジェンを除去したＥＴＦＥで被覆したブロモ−ブチル製ストッパーで閉栓する。ストッパーは、滅菌アルミニウムキャップと滅菌白色プラスチック蓋でバイアル上に圧着した。
９． 充填されたバイアルをオートクレーブ装置内で滅菌した。

【0076】

実施例２−３ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物の微結晶懸濁液製剤２０ｍｇ／ｍＬの臨床用量
３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態の微結晶懸濁液２０ｍｇ／ｍＬを、更に改良し、最終的薬剤製品の形状で患者に投与される用量及び容量を達成した。目標用量は、微結晶懸濁液２０ｍｇ／ｍＬから必要に応じて再構成される。様々な投与量及び容量の様式の概要を表２に示す。

【0077】

【表2】

【0078】

実施例３ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン徐放性製剤
いくつかの場合において、薬剤放出の持続時間は、例えば曝露時間が３ヶ月以上に延長されることが望まれている。そのため、Ｔｒｋ阻害剤である３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを有効成分とする徐放製剤をを製造し、化合物の無水物又は一水和物の形態のいずれかを用いて製剤化した。徐放性製剤へのアプローチとしては、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）ポリマー、又はＰＬＡ−ＰＬＧＡポリマーの組み合わせを用いて３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン（有効医薬成分［ＡＰＩ］又は原薬［ＤＳ］である）をカプセル化し、注射可能なマイクロカプセルの医薬［ＤＰ］溶液を製造する。これらの製剤は、薬剤による身体への暴露を持続して、即ち３カ月以上、提供することができる。この実施例の徐放性製剤の調製に用いた種々のポリマーの概要を表３に示す。

【0079】

【表3】

【0080】

有効成分として、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを有するＴｒｋ阻害剤の徐放性医薬製剤は、生物分解性ポリマーである、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）及び／又はポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコリド）を使用することにより、薬剤粒子が溶解しポリマーの加水分解で、有効成分が放出される際の制御を変化させる。ポリマーと有効成分充填との適切な組み合わせを用いて、薬剤放出速度を制御した結果、３ヶ月又はそれ以上の曝露が可能となった。ＰＬＧＡ／ＰＬＡポリマーと３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンとの特定の組合せを、薬剤放出の持続時間を３ヶ月より長く延長するような方法で組合わせた。これらの製剤についてこの実施例において更に議論する。

【0081】

実施例３−１ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの充填がインビトロの徐放性特性に及ぼす影響
３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンのマイクロスフィアを含む医薬組成物を溶媒抽出によって調製した。各々のバッチを調製するために使用した３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン及びＰＬＡ／ＰＧＬＡポリマーの量を表４に示した。これらの種々の製剤のインビトロ放出（ＩＶＲ）動力学を試験した。

【0082】

【表4】

【0083】

３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンをジクロロメタン（ＤＣＭ）：メタノール（ＭｅＯＨ）の比が９：１、２ｍＬに穏やかな加熱下、（約３０分間）溶解させた。ポリマーを加え、３０分かけて溶解させた。別に、滅菌濾過した冷たいポリビニルアミン（ＰＶＡ）溶液（水中５％ｗ／ｖ）３９．９ｍＬを７．９×３８．１ｍｍのテフロン（登録商標）磁気攪拌棒を備えた２５０ｍＬビーカーに入れた。ビーカーを、５００ｒｐｍに設定したＩＫＡ社製ＲＣＴベーシック撹拌プレート上の氷浴中に置いた。ポリマー／薬剤溶液を、５ｃｃガラスハミルトンシリンジに取り付けたＰａｌｌ Ａｃｒｏｄｉｓｃ０．２μｍＰＴＦＥシリンジフィルターを使用してＰＶＡ溶液に濾過した。添加すると、ポリマー／薬剤溶液はエマルションを形成した。１分後、脱イオン冷水１６０ｍＬを添加した。５分後、攪拌速度を３００ｒｐｍに下げた。３時間にわたる溶媒抽出によってマイクロスフェアを形成した。マイクロスフェアを、脱イオン水中の冷Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ Ｐ４０７ ０．１％を用いて、７５μｍ及び３８μｍの積層篩を通して篩過した。３８〜７５μｍ画分を集め、過剰なすすぎ液を除去した。マイクロスフェアを−８０℃で凍結し、凍結乾燥した。

【0084】

マイクロスフェア製剤から、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンが放出されるＩＶＲ動力学を、関節内環境の模倣を意図した、ヒアルロン酸０．２％＋Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ Ｐ４０７ ０．２％中のマイクロスフィア水性懸濁液２％（ｗ／ｖ）を調製することにより測定した。理論的充填量が５００μｇの３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを含む懸濁液をを放出媒体であるＰＢＳ ｐＨ７．４の中に０．５％ドデシル硫酸ナトリウムを含む別々の５０ｍＬガラス遠心管、３本にピペットで入れた。これらの試験管を、３７℃の往復振盪インキュベータ内の側面に置いた。各時点で、マイクロスフェアを沈降させ、放出媒体１ｍＬをサンプリングし、再設置した。ＩＶＲ試料中の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの実際の全量を決定するために、放出試験で使用したのと同じ容量の懸濁液を（３回）サンプリングし、ジメチルスルホキシド１０ｍＬを添加した。試料を超音波処理し、穏やかに加熱し、室温でロッカー上に置き、溶解させた。これらの試料は、ＨＰＬＣ−ＵＶを使用して、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの全含量を分析した。累積的ＩＶＲ特性を３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの実際の充填量に対するパーセント割合として経時的にプロットした。

【0085】

３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンをカプセル化する場合の効率は、実際の薬剤充填量を理論充填量で割ることによって決定した。実際の充填量を決定するには、正確に重量測定した３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを充填したマイクロスフェアをジメチルスルホキシドに溶解し、次いで３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの濃度をＨＰＬＣ−ＵＶで測定する。

【0086】

ＩＶＲ特性は、薬剤充填レベルが１６％（ｗ／ｗ）を超えるとバースト放出をすることを示した（図５）。このバーストの原因は、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）及び走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）により確認した。ＤＳＣ分析では、１３０〜１５０℃での溶融吸熱によって証明されるように、薬剤含有量が１６％（ｗ／ｗ）を超えるとマイクロスフェア内で薬剤の結晶化が起こることを示した（図６）。薬剤の結晶化はＳＥＭによっても示され、薬剤含有量が１６％を超えるとマイクロスフェア表面上で薬剤の結晶を示した（図７）。

【0087】

図６は、２０％のマイクロスフェアが１３０〜１５０℃の間で融解吸熱を示し、これは薬剤表面に結晶が確実に存在することを示している。図７及び図８に、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを充填したマイクロスフェアの１５００倍のＳＥＭを示す。図７は、１６％の薬剤充填マイクロスフェアであり、薬剤の結晶を示さない（薬剤が非晶質である）。図８は、２０％の薬剤充填マイクロスフェアであり、表面に薬剤の結晶を示す。

【0088】

関連するマイクロスフェア組成物を用いてＩＶＲに及ぼす薬剤の結晶化の効果も実証した。図９に、Ｒ２０２Ｈポリマーで調製したマイクロスフェアからの３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンのＩＶＲを示した。図１０に、Ｒ２０２ＨとＲＧ７５２Ｈとのポリマー比が９．５：０．５で調製したマイクロスフェアからの３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンのＩＶＲを示した。これらの実施例において、１６％（ｗ／ｗ）を超えた薬剤充填レベルではバースト放出を示し、その薬剤バーストの程度は薬剤充填レベルに直接関係していた。

【0089】

実施例３−２ ポリラクチド及びポリラクチド−ＣＯ−グリコリドポリマーブレンドの、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンのインビトロ放出特性に及ぼす影響
実施例３−２−１ １６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ、１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９．５：０．５、及び１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：７５２Ｈの比が９：１のマイクロスフェア
Ｒ２０２Ｈ、Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比９．５：０．５、及びＲ２０２Ｈ：７５２Ｈの比９：１中の１６％ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン、及びＲ２０２Ｈ、Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ５０２Ｈの比が９．５：０．５、及びＲ２０２Ｈ：ＲＧ５０２Ｈの比が９：１中の１６％ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを含む医薬組成物を調製し、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンのインビトロ放出動力学に及ぼす種々のポリマーブレンドの効果を評価した。表５は、各々のバッチを調製するために使用した薬剤及びポリマーの質量を示す。これらの製剤を調製するために使用する方法を、実施例３−１に記載した。

【0090】

【表5】

【0091】

カプセル化効率及びＩＶＲ分析を、実施例３−１に記載したように実施した。製剤４番，５番及び６番のカプセル化効率はそれぞれ９６．１±２．６％、８７．８±６．３％及び７７．７±８．６％であった。

【0092】

Ｒ２０２Ｈポリマー中の１６％３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを使用するマイクロスフィアは二相の放出速度を示し、初期の０〜７０日間は遅い放出速度を有し、引続く７０〜１１０日間は、より速い二次的放出速度を有した（図１１）。より親水性のポリマーであるＲＧ７５２Ｈ（７５：２５ ＰＬＧＡ）をＰＬＡマイクロスフェア製剤にブレンドすると、初期放出速度が増加した。このＰＬＧＡポリマーは、マイクロスフェア内へのより早い吸水を可能にし、（放出）速度の増加をもたらした。Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比９：１の時、初期放出は二次的放出速度と一致し、３ヶ月以上の擬０次放出特性を生じた（図１１）。

【0093】

実施例３−２−２ １６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ、１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ５０２Ｈの比が９．５：０．５及び１６％ＡＰＩ／Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ５０２Ｈの比が９：１のマイクロスフェア
２０２Ｈ、Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ５０２Ｈの比が９．５：０．５、及びＲ２０２Ｈ：ＲＧ５０２Ｈの比が９：１中の１６％３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン含む医薬製剤を調製し、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンのインビトロ放出動力学に及ぼす種々のポリマーブレンドの効果を評価した。表６は、各々のバッチを調製するために使用した薬剤及びポリマーの質量を示す。これらの製剤を調製するために使用する方法を、実施例３−１に記載した。

【0094】

【表6】

【0095】

カプセル化効率及びＩＶＲ分析を、実施例３−１に記載のように実施した。製剤７番，８番及び９番のカプセル化効率は、各々９６．１±２．６％、９１．７±３．３％及び９４．２±２．５％であった。

【0096】

Ｒ２０２Ｈポリマー中の１６％３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを使用するマイクロスフィアは二相の放出速度を示し、初期の０〜７０日間は遅い放出速度を有し、引続く７０〜１１０日間は、より速い二次的放出速度を有した（図１２）。より親水性の５０：５０ＰＬＧＡポリマー（ＲＧ７５２Ｈ）をＰＬＡマイクロスフェア製剤にブレンドすると、初期放出速度が増加した。ＲＧ７５２Ｈはマイクロスフェア内へのより早い吸水を可能にし、この（放出）速度の増加をもたらした。Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ５０２Ｈの比が９：１の時、初期放出は二次的放出速度と一致し、６ヶ月以上の擬０次放出特性を生じた（図１２）。

【0097】

実施例３−３：１８０日以上に亘るゼロ次インビトロ放出動力学を示すマイクロスフェア製剤の調製及び特性評価
Ｒ２０３Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１中の１５％３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン及びＲ２０２Ｈ：ＲＧ５０２Ｈの比が９．５：０．５ 中の１６％３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを含む医薬組成物を調製し、インビトロ放出動力学について分析した。表７は、各バッチを調製するために使用した薬剤及びポリマーの質量を示す。

【0098】

【表7】

【0099】

カプセル化効率及びＩＶＲの分析を、実施例３−１に記載のように実施した。製剤１０番及び１１番についてのカプセル化効率はそれぞれ８９．７±２．１％及び９１．７±３．３％であった。

【0100】

Ｒ２０３Ｈ：７５２Ｈの比が９：１であるポリマー中の１５％ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン、及びＲ２０２Ｈ：ＲＧ５０２Ｈの比が９．５：０．５であるポリマー中の１６％ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを使用して調製したマイクロスフィアは６ヶ月に亘り、擬似ゼロ次放出特性を示した（図１３）。

【0101】

実施例３−４ 調製時における共溶媒系が３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンのインビトロにおける放出プロフィールに及ぼす影響
実施例３−４−１ ＤＣＭ：ＭｅＯＨの比が９：１、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＢＡの比が９：０．５：０．５、ＤＣＭ：ＢＡの比が９：５及びＤＣＭ：ＢＡの比が９：１中において、調製された場合の１６％ＡＰＩ／２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１
Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１中で、１６％３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを充填したマイクロスフェアを含む医薬組成物を、種々の比率で、種々の共溶媒溶液、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、メタノール（ＭｅＯＨ）及びベンジルアルコール（ＢＡ）を用いて調製した。使用した比率は、ＤＣＭ：ＭｅＯＨの比が９：１、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＢＡが９：０．５：０．５、ＤＣＭ：ＢＡが９．５：０．５、及びＤＣＭ：ＢＡが９：１であった。各バッチを調製するために使用した薬剤、ポリマー及び共溶媒については、表８を参照のこと。これらの製剤を調製するために使用した方法は、実施例３−１に記載した。

【0102】

【表8】

【0103】

カプセル化効率及びＩＶＲ分析を、実施例３−１に記載のように実施した。バッチ１２番，１３番，１４番及び１５番のカプセル化効率は、それぞれ７７．７±８．６％、９４．９±２．０％、９０．５±２．６％及び９４．４±１．５％であった。ベンジルアルコールを共溶媒系に選択して組み入れたのは、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを可溶化する能力を増強するからである。図１４及び図１５は、ベンジルアルコールが放出速度に影響を及ぼすことなく、ジクロロメタン又はジクロロメタン及びメタノールとの共溶媒系の一部として使用して、マイクロスフェアを製造出来ることを示している。これは、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンのマイクロスフィア製造時における再結晶の可能性を低減するのに有用であり得る。

【0104】

実施例３−４−２ ＤＣＭ：ＢＡの使用による３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン充填の増加
Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈ の比が９：１中の１６％及び２５％の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン、Ｒ２０２Ｈ 中の３０％及び４０％の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン、及びＲ２０３Ｈ中の２５％、３０％、４０％及び５０％の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを含む医薬組成物を、種々の容量のジクロロメタン（ＤＣＭ）及びベンジルアルコール（ＢＡ）を使用して調製した。各バッチを調製するために使用した薬剤及びポリマーの質量及び溶媒量については、表９を参照のこと。これらの製剤の調製に用いた方法は実施例３−１に記載した。

【0105】

【表9】

【0106】

カプセル化効率及びＩＶＲ分析は実施例３−１に記載のように実施した。ジクロロメタン（ＤＣＭ）及びベンジルアルコール（ＢＡ）を種々の容量で用いて製造した製剤のカプセル化効率は以下の通りであった：
バッチ カプセル化効率
１６ ９４．４±１．５％
１７ ９６．０±１．８％
１８ ９９．２±３．６％
１９ ９４．０±１．０％
２０ １００．５±１．０％
２１ ９１．２±０．５％
２２ ９０．２±２．８％
２３ ９５．５±６．８％
２４ ９５．４±３．１％
２５ ９５．０±０．８％
２６ ９４．７±１．７％

【0107】

ベンジルアルコールを共溶媒系に組み入れるために選択したのは、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを可溶化する能力が増強されるからである。図１０は、ベンジルアルコールが、ジクロロメタンとの共溶媒系の一部として使用され、５０％（ｗ／ｗ）程度の高充填量のマイクロスフィアを製造出来ることを示している。示された放出特性の中には、最小限のバースト放出及び３〜６ヶ月の持続時間を達成すべき動力学を有するものもある。この方法で使用されるベンジルアルコールの容積は、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンのバースト放出に影響する。ポリマー中のＡＰＩである、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの溶解度を十分維持しながら、溶媒系中のベンジルアルコールの量を減少させると、バースト効果が低下する。ＡＰＩ充填が増加すると、患者に投与されるポリマーの量が減少することによる利益をもたらす。これは、埋込剤の生体適合性を改善し、しかも反復投与後のポリマー蓄積の可能性を低減することが期待される。更に、ＡＰＩ充填の増加は、当然、ユニットあたりの製造コストの低減と言い換えるべきである。

【0108】

実施例３−５：マイクロ懸濁液マイクロカプセル化プロセス系が３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンのインビトロ放出特性に及ぼす影響
Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１中の２５％の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン（一水和物形態）、Ｒ２０３Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１中の３０％及び４０％の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン、Ｒ２０２Ｈ中の２５％の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン、、Ｒ２０２Ｓ中の３０％の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン及びＲ２０３Ｓ中の３０％の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを含む医薬組成物を３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態で調製した。各バッチを調製するために使用した薬剤及びポリマーの質量については、表１０を参照のこと。バッチ２７番，２８番及び２９番はバッチで製造した３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを使用して調製し、一方、バッチ３０番，３１番，３２番，３３番，３４番及び３５番は、確実に直径１０μｍ未満の粒径とするためにマイクロフルイダイズ化プロセスを用いてマイクロ化した３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを用いて調製した。この実施例では、ポリマーをエチルアセテート（ＥＡ）、同じくＡＰＩの充填、ポリマー組成物、及び種々に濃度を変えた（ＥＡ容量を変化させた）ポリマー溶液と共に又は無しでポリビニルアルコール（ＰＶＡ）溶液中に分散させたときに得られるマイクロスフェアの差を比較する。

【0109】

【表10】

【0110】

ＳＥＭ分析では、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの懸濁液をカプセル化することによって製造したマイクロスフェアは表面に包埋した薬剤結晶が存在することに起因する粗い表面組織を有する球形であることを示した（図１６）。カプセル化効率及びＩＶＲの分析を、実施例３−１に記載のように実施した。バッチ番号３０番，３１番，３２番，３３番，３４番、及び３５番のカプセル化効率は、それぞれ１０３．３±３．８％、１０１．６±５．３％、９４．７±４．０％、９７．１ ±０．２％、３５．６±０．８％、及び６２．５±３．０％であった。バッチ２７番，２８番又は２９番については、カプセル化効率分析を実施しなかった。

【0111】

ＩＶＲ特性は、２５％から４７％の範囲でバースト放出を示し、その後４日は放出が不足した（図１７）。バッチを２１日間に亘り評価した。

【0112】

実施例３−６ マイクロカプセル化プロセスが、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンのインビトロ放出特性に及ぼす影響
Ｒ２０２Ｈ：ＲＧ７５２Ｈの比が９：１中の１６％ 及び ２５％ の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン、及びＲ２０３Ｈ中の２５％及び３０％の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを含む医薬組成物をジクロロメタン（ＤＣＭ）：ベンジルアルコール（ＢＡ）の９：１の比を用いて、調製した。各バッチを調製するために使用した薬剤及びポリマーの質量については、表１１を参照のこと。バッチ２３を調製するために使用した方法は、実施例３−１、バッチ２に記載されている。バッチ２４は、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを 穏やかな超音波処理をしながらＤＣＭ／ＭｅＯＨの比が９：１の５．０１６ｇに溶解して調製した。次いで、２種のポリマーを添加し、溶解させた。

【0113】

【表11】

【0114】

噴霧乾燥は、０．４ｍｍの開口を有する２流体ノズルを備えたＰｒｏＣｅｐＴ、４Ｍ８ユニットを用いて実施した。噴霧乾燥条件及びパラメーターを以下に列挙する。

【表12】

【0115】

ＳＥＭ分析では、溶媒抽出マイクロスフェアは平滑な表面組織を有する球状であり、噴霧乾燥したマイクロスフェアはある程度表面組織を有する球状であることを示した（図１８及び図１９）。カプセル化効率及びＩＶＲの分析は、実施例３−１に記載のように実施した。溶媒抽出バッチ３６番及び噴霧乾燥バッチ３７番及び３８番のカプセル化効率は、それぞれ１０７．４±１１．６％、９１．４±４．３％及び９２．６±３．６％であった。

【0116】

２つのマイクロカプセル化プロセスでは、ほぼゼロ次の放出特性を有するマイクロスフェアを製造した。図１８及び図１９には、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを充填したマイクロスフェアのＳＥＭ、１０００倍を示した。ＩＶＲ特性は、異なる放出速度を示した（図２０）。噴霧乾燥製剤は、所望の送達期間３〜６ヶ月を達成した。

【0117】

実施例３−７ １％１０ｋＤａ ＰＥＧ又は１％ポロキサマー４０７の１６％（ｗ／ｗ）３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの噴霧乾燥によるマイクロスフェアのインビトロ放出特性に及ぼす影響。
この試験は、ＰＬＡ／ＰＧＡマイクロスフェアからのＧＺ３８９９８８のインビトロ放出速度を促進するため親水性添加剤の添加を使用し得るかどうかのために行ったものである。この試験では、マイクロスフェア（添加剤なし）を、１％１０ｋＤａ ＰＥＧ又は１％ポロキサマー４０７のいずれかを用いて調製したマイクロスフェアと比較した。表１２には、各バッチを調製するために使用した薬剤及びポリマーの質量を詳述した。

【0118】

【表13】

【0119】

噴霧乾燥は、０．４ｍｍの開口を有する二流体ノズルを備えたＰｒｏＣｅｐＴ、４Ｍ８ユニットを使用して実施した。噴霧乾燥の条件及びパラメーターを以下に列挙する。

【表14】

【0120】

ＳＥＭ分析では、噴霧乾燥で調製したマイクロスフェアは、親水性添加剤の有無にかかわらず、粒径分布及び表面組織が同様であることを示した。噴霧乾燥マイクロスフェアは、全て、ある程度の表面組織を有する球状であった（図２１、図２２、及び図２３）。カプセル化効率及びＩＶＲの分析を実施例３−１に記載のように実施した。噴霧乾燥したバッチ番号４０番，４１番及び４２番のカプセル化効率はそれぞれ１０２．０±１６．３％、１０１．７±１６．３％及び１００．５±１６．１％であった。

【0121】

添加剤無しで調製したマイクロスフィアは、ゆっくりとした０次に近いＧＺ３８９９８８の放出を示し、有効化合物の約２０％を３５日間に亘り放出した（図２４）。１％１０
ｋＤａ ＰＥＧ又は１％ポロキシマー４０７の何れの添加も放出速度が増加した。有効化合物の約４２％を３５日にわたって放出した。この実施例より、親水性賦形剤を組み込むとＰＬＡ／ＰＧＡマイクロスフェアからのＧＺ３８９９８８のインビトロの放出速度を加速することが実証された。

【0122】

実施例４ インビボでの研究
実施例４−１ ［^１４Ｃ］−３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを充填したマイクロスフェアをラット膝関節に関節内注射した後のインビボ性能
２種の製剤を選択して、インビトロ放出動力学をラット膝関節内のインビボ薬剤持続性と比較した。製剤を表１３に表示した。

【0123】

インビトロ放出試験は、実施例３−１に記載の方法を用いて実施した。インビボ薬剤持続試験は、［^１４Ｃ］−３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン及び非標識の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを用いて行った。二つの薬剤形態をマイクロカプセル化プロセスの間に互いに溶解させ、マイクロスフェア内での薬剤分布が均一となるのを確実にした。各ラットの関節に投与された放射能の総量は約１．２ＭＢｑであった。

【0124】

ラットの膝関節に残っている薬剤の評価は、各時点で２〜３匹のラットを犠牲にし、膝関節を凍結粉砕し、次いで粉砕した組織から３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを抽出することにより実施した。液体シンチレーション計数によって定量を行った。関節内で回収した放射能の量は、処置して０．１時間後に屠殺したラット内の放射能カウントで各時点の放射能カウントを除することにより算出した。ラット血液中の放射性薬剤の濃度（ｎＥｑ／ｇと表記）を経時的にプロットし、化合物の既知のＩＣ５０（５０％阻害濃度）値と比較した。

【0125】

【表15】

【0126】

バッチ４０番及び４１番のＩＶＲ特性は、約３−４ヶ月及び５−６ヶ月亘りほぼゼロ次放出を示した（図２５）。ラットの膝関節内への関節内投与後、バッチ４３番及び４４番は、５〜６ヶ月にわたって薬剤放出を示した。バッチ４３番は、５ヶ月後で１２％が関節内に残存し、バッチ４４番は６ヶ月後で薬剤の３０％が残存していることを示した（図２６）。インビボの薬剤放出速度は、滑膜中のマイクロスフィアの局在におそらく起因するＩＶＲ速度と比較してわずかに遅かった。

【0127】

図２７は、血液中の薬剤濃度−経時特性を示す。３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを充填したマイクロスフェアの関節内投与後、全身区画中の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの濃度は、第１週の間はＥＣ５０（５０％効果濃度）値（細胞ベース）をわずかに上回ったが、試験の期間中（５〜６ヵ月）は、ＥＣ５０値未満に低下した。この試験は、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを充填したマイクロスフェアが、全身への（即ち、治療量以下の）薬剤の暴露は低いままで、局所である膝関節へ薬剤送達を持続的に提供することを実証した。

【0128】

実施例４−２ ３種の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンを充填したマイクロスフェアによる徐放性マイクロスフェア製剤の関節内単回注射後のＧＺ３８９９８８の薬物動態の評価
３種類の製剤を選択し、ラットの膝関節への関節内注射の後の全身コンパートメントにおけるインビトロ及びインビボの薬物動態を比較した。製剤を表１４に表示した。

【0129】

インビトロ放出試験を、実施例３−１に記載の方法を用いて実施した。３匹の雄Ｗｉｓｔａｒラットの膝関節にＧＺ３８９９８８の０．１ｍｇ又は１ｍｇいずれかを送達する所与のマイクロスフェア製剤を注射することによりインビボ性能を測定した。各時点で、血液試料（約０．２５ｍＬ）を頸静脈カニューレを介して採取し、抗凝固剤としてＫ２ＥＤＴＡを含む冷却管に入れ、混合し、遠心分離までは氷上で保持した。試料採取後、１時間以内に、温度４℃下、３，０００×ｇで５〜１０分間遠心分離した。血液試料を遠心分離した後、血漿はポリプロピレン管に採取した。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析の前に血漿試料をドライアイス上で凍結し−６０〜−８０℃に凍結保存した。ラット血漿中のＧＺ３８９９８８の濃度（ｎｇ／ｍＬとして表示）を経時的にプロットした（合計２８日間）。

【0130】

【表16】

【0131】

製剤Ａ及び製剤ＢのＩＶＲ特性は、緩やかな放出を示し、有効化合物の約１０％を２８日以上に亘り放出した。製剤Ｃは、最初の５日間は初期放出が僅かに高く、次いで残りの２３日間は放出速度が減少した。有効化合物の約２２％を２８日に亘り放出した。

【0132】

ラットの膝関節への関節内投与後、製剤Ａ及びＢは、２８日に亘り、同様の血漿―薬剤曝露プロフィールを示した。両製剤は、試験の継続時間中に、定常状態の血漿レベルを有する１〜１．５時間のＴｍａｘ値を示した（各々、０．１及び１．０ｍｇ用量について０．０８及び０．８ｎｇ／ｍＬ）。製剤Ｃは、製剤Ａ及びＢと比較すると、試験期間を通じ、より高いＣｍａｘ値とより高い定常状態血漿レベルを示した（各々、０．１及び１．０ｍｇ用量について１．２から１２ｎｇ／ｍＬ）（図２９）。これらの結果は、ＩＶＲの試験結果とよく一致した。

【0133】

実施例４−３ 疼痛を伴う変形性膝関節症患者における３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの安全性、耐容性、及び薬物動態を評価するための臨床調査
ヒトにおける３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの一水和物形態の安全性及び有効性を、二重盲検プラセボ対照臨床調査で試験し、単回の関節内漸増投与の安全性、耐容性、及び薬剤動態を評価し、次に、膝の疼痛を伴う変形性関節症の患者に、単回の関節内投与の有効性、安全性、耐容性の評価を行った。

【0134】

この研究の一部において、上記実施例２に従って製造した３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミン一水和物微結晶懸濁液の種々の用量を単回で膝に関節内注射し、３ｍＬ及び５ｍＬのプラセボ用量に対して試験した。
用 量
３ｍｇ／３ｍＬ
１０ｍｇ／３ｍＬ
３０ｍｇ／３ｍＬ
６０ｍｇ／３ｍＬ
１００ｍｇ／５ｍＬ

【0135】

この研究への参加適格者は原発性膝関節症の診断を受けた成人男性及び女性とした。患者は６ヶ月以上の症状があり、研究に関する全ての処理の前に書面によるインフォームドコンセントを提供した。有効性は、注射し１２週間後における安全性及び耐容性（有害事象、身体検査、体重、体温、臨床検査、血圧、心拍数、１２誘導心電図、局所耐容）に基き評価する。薬物動態（血漿、及び可能なら関節液中）及び薬剤動力学も評価した。

【0136】

患者は治験薬又はプラセボを投与して後、８４±７日間、追加の治験薬を投与することなく長期の安全性観察調査を続けるかどうかを選択し、長期的な安全性と有効性を評価した。

【0137】

実施例５ ３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの多多形性に関する研究
純粋な溶媒及び溶媒と水との制御された混合物中の３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの結晶形態を同定するために、ＧＺ３８９９８８の多型性の調査を実施した。多形性についての特徴付けをするツールとして使用した技術は、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）、高分解能Ｘ線粉末回折（ＨＲ−ＸＲＰＤ）及び単結晶Ｘ線回折（ＸＲＳＣＤ）、赤外線分光器（ＦＴ−ＩＲ）又は質量分析器（ＭＳ）と結合した熱重量分析（ＴＧＡ）、水と溶媒との動的蒸気吸着（ＤＶＳ）、及び光学顕微鏡（ＯＭ）などが含まれる。これらの技術については、以下でさらに詳述する。

【0138】

高解像度Ｘ線粉末回折（ＨＲ−ＸＲＰＤ）
高分解能ダイアグラムは、Ｘ’Ｃｅｌｅｒａｔｏｒ検出器と結合させたＢｒａｇｇ−Ｂｒｅｎｔａｎｏ（垂直θ−２θ構成）パラフォーカシング・ジオメトリを使用するＰａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｘ’Ｐｅｒｔ Ｐｒｏ ＭＰＤ粉末回折計で周囲条件下で記録した。密閉した銅アノードＸ線管を使用し、４５ｋＶ及び４０ｍＡレベルで操作した。入射ビームモノクロメータ（Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ型：対称的にカットし湾曲したゲルマニウム（１１１）結晶）で純粋なＣｕΚα１線（λ＝１．５４０６０Å）を生成した。

【0139】

実験の各セットについて、単結晶シリコンウェーハで覆われたサンプルホルダーの表面上に製造物の薄層を堆積させた。ウェーハは、Ｓｉ（５１０）結晶の配向に従って切り出され、組織的に消失させることにより、シリコンからのいかなるブラッグ反射も妨げた。利用可能な角度範囲は、２θで２〜５０°に拡大され、２θで０．０１７°のステップサイズであった。１ステップ当たり１００から２５００秒に計数時間を変えて使用した。

【0140】

Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）
他のＸＲＰＤ分析としては、Ｂｒａｇｇ−Ｂｒｅｎｔａｎｏ（垂直θ−θ配置）パラフォーカシングジオメトリー及びＡｎｔｏｎ−Ｐａａｒ ＴＴＫ４５０温度チャンバーを用いて、Ｓｉｅｍｅｎｓ社製−Ｂｒｕｃｋｅｒ Ｄ８ Ａｄｖａｎｃｅ粉末回折計で行った。製造物の薄層を単結晶シリコンウェーハ上に堆積させ、Ｓｉ（５１０）結晶学的配向に従って切り出し、組織的に消失させることにより、ウェーハーからのいかなるブラッグ反射も妨げた。４０ｋＶ及び３５ｍＡレベルで動作する密封型銅アノードＸ線管を使用した。通常、ＣｕＫα１（λ＝１．５４０５Å）及びＣｕＫα２（λ＝１．５４４３Å）の２本の線を放出する。検出器と試料との間に配置されたニッケルβ−フィルターは、ＣｕＫβ（λ＝１．３９２２Å）線を完全に除去する訳ではなく、依然として検出器での回折ビームの約１％を占めていた（製造業者のデータ）。ビームはソーラスリットを通って平行度を向上させた。可変発散スリットはサンプル領域の照度を一定に保った。コリメータで、管と試料との間の拡散を制限した。ＬｙｎｘＥｙｅのリニアディテクタでセットアップを完了した。角度２θにおいて３．５°の幅の検出窓を有した。図表は、以下の条件で記録した。周囲温度下、角度２θで２°から４０°まで走査する。積算時間は実験条件に依存した。発展的研究や大部分の走査は、２θで０．１秒の計数時間を用いて実施した。より長い積算時間（５秒まで）を使用して、安定した形態を特徴づけることも可能である。

【0141】

Ｘ線単結晶回折（ＸＲＳＣＤ、または ＳＣＸＲＤ）
ＸＲＳＣＤデータをＢｒｕｋｅｒ Ｓｍａｒｔ Ａｐｅｘ単結晶回折計で記録した。モリブデン製ＩμＳマイクロフォーカスＸ線源を使用する、Ｍｏ−Κα線（λ＝０．７１０７３１Å）を放射し、５０ｋＶ及び０．６ｍＡで操作した。電荷結合素子（ＣＣＤチップ：４Ｋ、６２ｍｍ）面検出器を６．０ｃｍに配置した。Ｏｘｆｏｒｄ Ｃｒｙｏｓｙｓｔｅｍｓ社製窒素クライオスタット（Ｃｒｙｏｓｔｒｅａｍ Ｐｌｕｓ）を用いて、１００ＫでＸＲＳＣＤ実験を行った。

【0142】

結晶は共にＰａｒａｔｏｎｅ Ｎ （商標）オイルドロップから低バックグラウンドのマイラーＭｉＴｅＧｅｎループにマウントした。エワルド球体の反射全てが収集された（フレーム幅が０．３°の６８０フレームの３つのオメガスキャン）。蓄積時間は結晶に依存する。

【0143】

オリエンテーションマトリックス及びユニットセルは、Ａｐｅｘ２（ｖ２０１４．１１−０）プログラムスイートを使用して確立させた。３Ｄ反射特性及びすべての反射の統合は、ＳＡＩＮＴ（ｖ８．３４Ａ）プログラムを用いて行った。ＳＡＤＡＢＳ（ｖ２０１４／５）プログラムを使用して、ローレンツ及び分極効果、及び試料による吸収に関して補正した。仮の空間群は、ＸＰＲＥＰ（ｖ２０１４／２）プログラムを用いて決定した。ＳＨＥＬＸＴＬ（ｖ２０１４／７）スイートを使用し、固有のフェージング方法による構造の解決及び、Ｆ²に関する完全行列最小二乗計算による精緻化を行った。

【0144】

多形体の同定及び特徴付け
上記の技術を用いて、３−（３−メトキシ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）ベンジル）−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４、５−ｂ］ピリジン−２−アミンの結晶形態を同定した。これらの形態、ＣｕＫα線を用いて測定したＸＲＰＤ２θピーク、及び形成条件を以下の表１５に示した。

【0145】

【表17】

【0146】

一水和物形態１、無水物形態２及び３を測定したＨＲ−ＸＲＰＤ図、並びに、セスキ水和物形態４の模擬ＸＲＰＤ図を、併せて図３０にプロットした。

【0147】

エタノール／水（９９／１）の混合溶媒中、ＧＺ３８９９８８Ａ形態の一水和物の懸濁液２０ｍｇ／ｍｌを８０℃で１時間加熱した。次いで、懸濁液を濾過した。次に、溶液を室温で一晩保持した。一晩後、結晶が観察され、後にエタノール溶媒和物形態（形態５と表示した）に一致するものとして同定した。エタノールと水との混合物（９９／１）から緩やかな蒸発により得た結晶の物理的品質は、単結晶Ｘ線回折によって分析するのに適合した。測定は、１００Ｋ下、５×５０×２００μｍ^３の結晶上でフレーム当たり３００秒の蓄積時間で行った。回折図より、分析した粒子の結晶性を確認した。図３１には、室温で測定したエタノール溶媒和物粉末（底部）のＨＲ−ＸＲＰＤ図を示し、１００Ｋ下で測定したＸＲＳＣＤデータ（上図）からの模擬的ＸＲＰＤ図とを比較した。

【0148】

ＧＺ３８９９８８Ａ形態の一水和物１（形態１）の懸濁液２０ｍｇ／ｍｌをアセトン／水（９９／１）溶媒混合物中、又は純粋アセトン中で調製し、８０℃で１時間加熱して、完全に溶解させた。次に、懸濁液を濾過した。次いで、溶液を室温又は５℃に保持した。一晩後、裸眼で結晶を視認でき、後で、アセトン溶媒和物形態（形態９と表示）に一致するものとして同定した。アセトンと水の混合物（９９／１）から緩やかな蒸発により得た結晶の物理的品質は、単結晶ＸＲ回折によって分析するのに適合した。測定は１００Ｋ下、１００×２００×２０００μｍ^３の結晶上で、フレーム当たり３０秒の蓄積時間で行った。図３２には、室温で測定した（底部）及び、１００ＫでＸＲＳＣＤからの模擬的な（上部）、アセトン溶媒和物粉末のＸＲＰＤ図を示した。

【0149】

別の実験ではＧＺ３８９９８８Ａ形態の一水和物１（形態１）の懸濁液２０ｍｇ／ｍｌを純粋なアセトン中で調製し、８０℃で１時間加熱した。次に、懸濁液を濾過し、次いで５℃に直接冷却し、その温度で保管した。一晩後、結晶は裸眼で視認でき、アセトン溶媒和物１、形態９について得られたものと同様であった。乳鉢中でそれらを懸濁液中粉砕した後、別のアセトン溶媒和物、形態１０に一致するものとして同定した。図３３では、２種のアセトン溶媒和物形態、形態９（下部）及び形態１０（上部）についてＸＲＰＤを比較した。

【0150】

アセトニトリル（ＡＣＮ）中、ＧＺ３８９９８８Ａ形態の一水和物の懸濁液２０ｍｇ／ｍｌを８０℃で４時間加熱した。次いで、懸濁液を濾過した。次に、溶液を４０℃で一晩保持し、次いで２時間放置して室温まで冷却した。一晩後、バイアルの底部に結晶のクラスターが形成された。アセトニトリル（ＡＣＮ）溶媒和物形態（形態１１）のＨＲ−ＸＲＰＤ図を図３４に報告した。

【0151】

アセトン／水、及びアセトニトリル／水の混合溶媒中で形成した固体結晶相の同定

【0152】

ＧＺ３８９９８８Ａの一水和物１ ５０ｍｇを、３つの異なる重量比：５０／５０、８０／２０及び９５／５を有する、溶媒（アセトン又はアセトニトリル）と脱塩水との混合物２ｍＬで補完した。アセトンを用いて、比９９／１及び９８／２の追加の混合物を調査した。８０℃で２時間後、試料を公称孔径０．４５μｍを有するＰＴＦＥシリンジフィルターで濾過し、濾過後、再び８０℃で１５分間保管した。

【0153】

次いで、試料を４０℃で一晩、次に室温でさらに２４時間放置冷却した。

【0154】

次いで、試料を、対応する溶媒で飽和したチャンバー内でＸＲＰＤにより分析した。必要であれば、大きな結晶はバイアル内でスパチュラで粉砕し微粉化した。次いで、「湿った」粉末試料を、試料ホルダ上に可能な限り平坦に堆積させた。これらの分析結果を以下の表１６に示した。

【0155】

【表18】

【0156】

エタノール、アセトン、アセトニトリル、並びにアセトン／水及びアセトニトリル／水混合物中の一水和物１の結晶化からの溶媒和物及び水和物の形成を調査し、この実施例に示した。１０種の結晶相を同定した。
・無水相１（形態２）
・無水相２（形態３）
・無水相３（形態６／７）
・一水和物１（形態１）
・一水和物２（形態８）
・セスキ水和物（形態４）
・エタノール溶媒和物（形態５）
・アセトン溶媒和物１（形態９）
・アセトン溶媒和物２（形態１０）
・アセトニトリル溶媒和物（形態１１）
対応する回折図を、図３５に、併せてプロットした。

【0157】

エタノール、アセトン及びアセトニトリル、並びに、溶媒混合物（アセトン／水及びアセトニトリル／水）について実施した多形体の調査から、いくつかの結論を引出すことができた。純粋溶媒３種は全て、固体の結晶性溶媒和相の形成をもたらした。エタノール及びアセトニトリル中でのＧＺ３８９９８８Ａの再結晶化は各々１種の溶媒和物の形態をもたらした。アセトン中での再結晶化により、２種の溶媒和物の形態が得られた。重量比が９８：２、９７：３、９５：５、８０：２０及び５０：５０を有するアセトン／水混合溶媒系中で形成した結晶はすべて一水和物１の結晶相であった。重量比が９５：５，８０：２０及び５０：５０を有するアセトニトリル／水混合溶媒系で形成された結晶も又、全て一水和物１結晶であった。アセトン溶媒和物１は、脱溶媒和を行なうと大部分は非晶質固体に変換することが観察された。もし、アセトンと水との混合蒸気の存在により、分子移動度が増加するならば、当初のアセトン溶媒和物１の結晶と非晶質固体は両方共に、再構成され、１水和物になる。エタノール、アセトニトリル及びアセトン溶媒和物１を窒素下、１２０℃の温度に暴露すると、脱溶媒和して、同じ無水物結晶相２になった。エタノール、アセトニトリル及びアセトン溶媒和物２の形態（単結晶Ｘ線回折によって確認される）については異種同形であることが観察された。これらは全て可逆的に脱溶媒和して同じ無水相３になった。無水物相３は水和して一水和物形態である「一水和物２」になるが、一水和物１とは異なる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【図34】

【図35】