特許 6611221 ソフォロリピッドの製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6611221

(24)【登録日】2019年11月8日

(45)【発行日】2019年11月27日

(54)【発明の名称】ソフォロリピッドの製造方法

(51)【国際特許分類】

   C12P 7/64 20060101AFI20191118BHJP

【ＦＩ】

   C12P7/64

【請求項の数】4

【全頁数】11

(21)【出願番号】特願2014-121069(P2014-121069)

(22)【出願日】2014年6月12日

(65)【公開番号】特開2016-17(P2016-17A)

(43)【公開日】2016年1月7日

【審査請求日】2017年3月7日

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】000000918

【氏名又は名称】花王株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】110000084

【氏名又は名称】特許業務法人アルガ特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】四方 健一

(72)【発明者】

【氏名】佐藤 仁

【審査官】 平林 由利子

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１３／１２９６６７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特開昭５４−１０９９１３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０６−１００５８１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００９−５３１３１０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 安田耕作他著, 新版 油脂製品の知識，株式会社幸書房，２００２，p.22

【文献】 Biochemistry Research International, 2013, Vol.2013, Article ID 169797, pp.1-11

【文献】 J. Biosci. Bioeng., 1999, Vol.88, No.5, pp.488-494

【文献】 Enzyme and Microbial Technology, 1997, Vol.21, pp.221-229

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ１２Ｐ １／００−４１／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

次の成分（Ａ）及び（Ｂ）：
（Ａ）液体状の炭化水素及び液体状の脂肪酸エステルから選択される１種又は２種以上の油性物質
（Ｂ）固体状の脂肪酸から選択される１種又は２種以上の油性物質
を含有し、油性物質の総モル量に対する成分（Ｂ）のモル量が２０〜７５モル％である培地にて、ソフォロリピッドを生産する能力を有するカンジダ属に属する微生物の休止菌体を用いて発酵によりソフォロリピッドを得る工程を含む、ソフォロリピッドの製造方法。

【請求項2】

成分（Ａ）の融点が、５℃〜２５℃である請求項１記載のソフォロリピッドの製造方法。

【請求項3】

成分（Ｂ）の融点が、４０℃〜８０℃である請求項１又は２記載のソフォロリピッドの製造方法。

【請求項4】

培地中の油性物質の含有量が１〜２０％（ｗ／ｖ）である請求項１〜３のいずれか１項記載のソフォロリピッドの製造方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ソフォロリピッドの製造方法に関する。

【背景技術】

【0002】

酵母等の微生物が生産する両親媒性物質はバイオサーファクタント（生物界面活性剤）と呼ばれ、環境適合性と機能性を兼ね備えた材料として、食品、化粧品、ライフサイエンス、環境・エネルギー分野等での応用が研究されている。
なかでもソフォロリピッドは、現在産業利用されている代表的なバイオサーファクタントの一つである。

【0003】

ソフォロリピッドは、炭化水素や油脂類等の油性物質を基質として、比較的高い生産量で発酵生産されることが知られている。特に、炭素源基質としてグルコース等の糖類と油脂類を組み合わせると、効率良くソフォロリピッドが発酵生産されることが知られている。
ソフォロリピッドの発酵生産に利用される油脂類としては、動植物性の油脂、脂肪酸、脂肪酸エステル等が用いられ、例えば、特許文献１には、カンジダ属酵母を、糖類と植物油に加えてオレイン酸等の遊離脂肪酸を混合した培地で培養して、高収量かつ高収率でソフォロリピッドを発酵生産する方法が開示されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【特許文献1】特開２００２−４５１９５号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

ソフォロリピッドの非糖質部分である側鎖脂肪酸部分の構造は、培養時の炭素源基質、具体的には油性物質を適宜選択することにより変化させることができることが知られている。しかしながら、油性物質の種類によっては、基質である油性物質からソフォロリピッドへの変換速度（発酵速度）が遅い場合があり、工業生産に適した生産性の向上が大きな課題と考えられた。また従来は、ソフォロリピッドの生産性を鑑みて、ソフォロリピッドの炭素源基質として液体状の油脂類を用いるのが一般的であり（例えば、特許文献１）、培養温度よりも融点が高い油性物質は、微生物の資化性が低いため好適に利用することは難しいとされ、これまでに、培養温度下で固体状の油性物質を利用してソフォロリピッドを高効率で生産したとの報告はない。
したがって、本発明は、変換速度が速く、効率よく基質からソフォロリピッドを製造することのできる方法を提供することに関する。

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意検討を重ねた結果、基質として培養温度下で液体状の油性物質と固体状の油性物質とを特定の比率で組み合わせることにより、意外にも液体状の油性物質だけを用いるよりもソフォロリピッドへの変換速度が速まり、効率よく基質からソフォロリピッドを製造できることを見出した。

【0007】

すなわち、本発明は、次の成分（Ａ）及び（Ｂ）：
（Ａ）液体状の油性物質
（Ｂ）固体状の油性物質
を含有し、油性物質の総モル量に対する成分（Ｂ）のモル量が２０〜８０モル％である培地にて、ソフォロリピッドを生産する能力を有する微生物を用いて発酵によりソフォロリピッドを得る工程を含む、ソフォロリピッドの製造方法を提供するものである。

【発明の効果】

【0008】

本発明によれば、ソフォロリピッドを効率よく製造することができる。また、固体状の油性物質の利用も図れるため、ソフォロリピッドの生産に際し、目的に応じた新たな炭素源の利用が期待できる。

【発明を実施するための形態】

【0009】

本発明のソフォロリピッドの製造方法は、次の成分（Ａ）及び（Ｂ）：
（Ａ）液体状の油性物質
（Ｂ）固体状の油性物質
を含有し、油性物質の総モル量に対する成分（Ｂ）のモル量が２０〜８０モル％である培地にて、ソフォロリピッドを生産する能力を有する微生物を用いて発酵によりソフォロリピッドを得る工程を含むものである。
なお、本明細書における発酵とは、微生物の機能を物質生産（本明細書ではソフォロリピッドの生産）に利用することを意味する。
また、本明細書における油性物質とは、２０℃における水１００ｇへの溶解度が２ｇ以下である脂肪族化合物を意味する。油性物質は、培養温度で液体状又は固体状のいずれかを呈する。

【0010】

ソフォロリピッドは、ソフォロースとヒドロキシ脂肪酸とからなる糖脂質である。ソフォロースは、グルコースがβ−１，２結合した二糖類であり、ヒドロキシ脂肪酸は、ω位、或いはω−１位にヒドロキシ基を有する脂肪酸である。ヒドロキシ脂肪酸の脂肪酸部分は、特に限定されないが、炭素数８〜２２の飽和又は不飽和脂肪酸が好ましく、更に炭素数１２〜２２の飽和又は不飽和脂肪酸が好ましい。また、ソフォロースは、ヒドロキシ基が一部アセチル化したものも含む。
ソフォロリピッドは、ヒドロキシ脂肪酸のカルボキシル基が遊離した酸型と分子内のソフォロースと結合したラクトン型に大別され、一般的に発酵生産では酸型とラクトン型の混合物として得られることが知られている。

【0011】

本発明で用いられるソフォロリピッドを生産する能力を有する微生物は、基質からソフォロリピッドを生成し、菌体外に産出する能力を有する微生物であればよく、例えば、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）に属する微生物が挙げられる。
カンジダ属に属する微生物としては、Ｃａｎｄｉｄａ ｂｏｍｂｉｃｏｌａ、Ｃａｎｄｉｄａ ｂｏｇｏｒｉｅｎｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｇｎｏｌｉａｅ、Ｃａｎｄｉｄａ ｇｒｏｐｅｎｇｉｅｓｓｅｒｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｐｉｃｏｌａ等が挙げられる。なかでも、ソフォロリピッド生産性の点から、Ｃａｎｄｉｄａ ｂｏｍｂｉｃｏｌａが好ましい。

【0012】

本発明で用いられる培地は、成分（Ａ）液体状の油性物質を含有する。
ここで、液体状の油性物質とは、培養温度で液状の油性物質である。このような油性物質の融点としては、２５℃以下が好ましく、更に好ましくは５℃〜２５℃、より好ましくは１０℃〜２５℃である。なお、本明細書における融点は、油脂及び脂肪酸の場合は上昇融点であり、日本油化学協会法の「基準油脂分析試験法」中の上昇融点の測定法に準じ測定した値である。
液体状の油性物質の種類としては、例えば、炭化水素、動植物性油脂、脂肪酸、脂肪酸エステルが挙げられ、これらは１種又は２種以上を組み合わせて用いることができる。
炭化水素としては、脂肪族炭化水素やイソプレノイド炭化水素が挙げられ、例えば、ｎ−ヘキサデセン、ｎ−ヘキサデカン、スクアレン等が挙げられる。
また、動植物油脂としては、例えば、大豆油、ナタネ油、米糠油、サフラワー油、コーン油、ヒマワリ油、綿実油、オリーブ油、ゴマ油、シソ油、アマニ油等の植物性油脂、あるいはそれらのエステル交換油、分別油、廃油等が挙げられる。

【0013】

脂肪酸としては、炭素数８〜２２の遊離脂肪酸が好ましく、例えば、カプリル酸、ペラルゴン酸等の飽和脂肪酸；パルミトレイン酸、リノール酸、オレイン酸、ｃｉｓ−バクセン酸、α−リノレン酸、ゴンドイン酸等の不飽和脂肪酸が挙げられる。
また、脂肪酸エステルとしては、脂肪酸と１価から３価のアルコールとのエステルが挙げられ、例えば、カプリル酸メチル、カプリル酸プロピル、カプリン酸メチル、カプリン酸エチル、カプリン酸ブチル、ラウリン酸メチル、ラウリン酸エチル、ラウリン酸ブチル、ラウリン酸ドデシル、ミリスチン酸メチル、ミリスチン酸エチル、ミリスチン酸ブチル、パルミチン酸エチル、パルミチン酸プロピル、パルミチン酸イソプロピル、パルミチン酸ブチル、パルミチン酸アミル、パルミチン酸オクチル、ステアリン酸ブチル等が挙げられる。
脂肪酸部の炭素数としては、より好ましくは１２〜２２、更に好ましくは１６〜２２、更に好ましくは１６〜１８である。

【0014】

高級アルコールとしては、例えば、ラウリルアルコール、２−ペンタデカノール、オレイルアルコール、リノレイルアルコール等が挙げられる。

【0015】

液体状の油性物質の中でも、単一脂肪酸組成のソフォロリピッドを得やすい点から、炭化水素、脂肪酸又はそのエステルが好ましく、更にアルカン又は飽和脂肪酸のエステルが好ましく、更にｎ−ヘキサデセン、ｎ−ヘキサデカン、ラウリン酸ブチル、ラウリン酸ドデシル、ミリスチン酸ブチル、パルミチン酸エチル、パルミチン酸プロピル、パルミチン酸イソプロピル、パルミチン酸ブチル、パルミチン酸アミル、パルミチン酸オクチル、パルミチン酸デシル又はステアリン酸ブチルが好ましく、更にｎ−ヘキサデカン、パルミチン酸プロピル、パルミチン酸イソプロピル又はパルミチン酸ブチルが好ましい。

【0016】

また、本発明で用いられる培地は、成分（Ｂ）固体状の油性物質を含有する。
ここで、固体状の油性物質とは、培養温度で固体状の油性物質である。固体状は、液体状ではない半固体状も含む。このような油性物質の融点としては、３０℃以上が好ましく、更に好ましくは４０℃〜８０℃、より好ましくは５０℃〜７０℃である。
固体状の油性物質の種類としては、例えば、動植物性油脂、脂肪酸、脂肪酸エステル、高級アルコールが挙げられ、これらは１種又は２種以上を組み合わせて用いることができる。
動植物性油脂としては、例えば、パーム油、パームオレイン、パームステアリン、やし油、パーム核油、カカオ脂、サル脂、シア脂等の植物性油脂、ラード、牛脂、バター脂等の動物性油脂、それらのエステル交換油、水素添加油もしくは分別油等が挙げられる。また、大豆油、綿実油、魚油等の液状油の水素添加により固体状としたものも包含される。

【0017】

脂肪酸としては、炭素数１０〜３０の遊離脂肪酸が好ましく、例えば、カプリン酸、ラウリン酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシリ酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、ノナデシル酸、アラキジン酸、ヘンイコサン酸、ベヘン酸、トリコサン酸、リグノセリン酸等の飽和脂肪酸、ペトロセリン酸、エライジン酸、バクセン酸、エルカ酸、ソルビン酸、リノエライジン酸、プニカ酸等の不飽和脂肪酸が挙げられる。
また、脂肪酸エステルとしては、前記脂肪酸と１価から３価のアルコールとのエステルが挙げられ、例えば、ラウリン酸オクタデシル、ミリスチン酸テトラデシル、パルミチン酸メチル、パルミチン酸デシル、パルミチン酸ドデシル、パルミチン酸ヘキサデシル、ステアリン酸メチル、ステアリン酸エチル、ステアリン酸プロピル、ステアリン酸オクチル、アラキジン酸メチル、アラキジン酸エチル等が挙げられる。
脂肪酸部の炭素数としては、より好ましくは１２〜２４、更に好ましくは１６〜２２、更に好ましくは１６〜１８である。

【0018】

高級アルコールとしては、ミリスチルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、２−ヘキサデカノール、２−ヘキシルデカノール等が挙げられる。

【0019】

固体状の油性物質の中でも、単一脂肪酸組成のソフォロリピッドを得やすい点から、脂肪酸又はそのエステル、高級アルコールが好ましく、更に飽和脂肪酸又はそのエステル、高級アルコールが好ましく、更に脂肪酸部の炭素数１６〜２２の飽和脂肪酸又はそのエステルが好ましく、更にパルミチン酸が好ましい。

【0020】

本発明で用いられる培地において、培地中の油性物質の総モル量に対する成分（Ｂ）のモル量は２０〜８０モル％である。斯かる範囲内とすることで、基質からソフォロリピッドへの変換速度を高めることができる。また、培養時の泡立ちを抑えることができる。
ここで、培地中の油性物質の総モル量は、培養温度で液体状の油性物質のモル量と培養温度で固体状の油性物質のモル量を合わせた量であり、該油性物質の総モル量に対する成分（Ｂ）のモル量は、次式（１）：
｛［成分（Ｂ）のモル量］／［油性物質の総モル量］｝×１００（％）・・・（１）
で表される。
培地中の油性物質の総モル量に対する成分（Ｂ）のモル量は、効率的なソフォロリピッドの生産の点から、２５モル％以上が好ましく、更に３０モル％以上が好ましく、更に４０モル％以上が好ましく、また、発泡を抑制する点から、７５モル％以下が好ましく、更に７０モル％以下が好ましく、更に６０モル％以下が好ましい。また、２５〜７５モル％が好ましく、更に３０〜７０モル％が好ましく、更に４０〜６０モル％が好ましい。

【0021】

培地中の油性物質の初発の含有量は、特に制限されないが、効率的なソフォロリピッドの生産の点から、１％（ｗ／ｖ）以上、更に５％（ｗ／ｖ）以上であることが好ましく、また、２０％（ｗ／ｖ）以下、更に１５％（ｗ／ｖ）以下であることが好ましい。また、１〜２０％（ｗ／ｖ）が好ましく、更に５〜２０％（ｗ／ｖ）であることが好ましい。

【0022】

本発明で用いられる培地には、成分（Ａ）、（Ｂ）の他に、微生物が資化し得る炭素源、窒素源、無機塩類、その他必要な栄養源等を適宜用いることができる。また、ソフォロリピッドの発酵培地として従来公知の培地を用いることができ、例えば、ＹＭ培地等の市販の固体培地又は液体培地を用いることができる。
炭素源としては、例えば、糖類（グルコース、アラビノース、キシロース、マンノース、フラクトース、ガラクトース、シュークロース、マルトース、ラクトース、ソルビトール、マンニトール、イノシット、グリセリン、可溶性澱粉、廃糖蜜、転化糖等）、酢酸等の資化しうる有機酸、エタノール等の低級アルコール類等が挙げられる。なかでも、増殖の点、ソフォロリピッドの生産の点から、糖類、更にグルコースを含有するのが好ましい。
培地中の初発の糖類の含有量は、増殖の点から、１〜１５％（ｗ／ｖ）が好ましい。
窒素源としては、例えば、アンモニア、無機・有機アンモニウム塩、尿素、コーングルテンミール、大豆粉、酵母エキス、肉エキス、魚肉エキス、ポリペプトン、ペプトン、各種アミノ酸、ソイビーンミール等が挙げられる。

【0023】

本発明において、ソフォロリピッドを生産する能力を有する微生物を用いて発酵によりソフォロリピッドを得る工程では、該微生物が増殖する条件下で培養しつつソフォロリピッドを発酵生産させてもよく、また、休止菌体の状態、すなわち該微生物の生育、増殖を止めた状態で培養、反応させて、ソフォロリピッドを発酵生産させてもよい。増殖に必要とする時間の点からは、休止菌体の状態でソフォロリピッドを生産させることが好ましい。
休止菌体を用いる場合、ソフォロリピッドを生産する能力を有する微生物の濃度は６６０ｎｍでの吸光度（ＯＤ６６０）として、１０〜２００が好ましい。また、休止菌体の状態で培養、反応を行う時間としては５０〜２００時間が好ましい。

【0024】

培養条件としては、ソフォロリピッドを生産する能力を有する微生物によりソフォロリピッドが発酵生産される条件であればよい。
培養方法は、好気的条件下が好ましく、通気攪拌培養、振盪培養等の一般的な方法を適用することができる。
培養温度は、通常、２０〜３３℃が好ましく、２５〜３０℃がより好ましく、更に２８〜３０℃が好ましい。このとき培養液の初発ｐＨ（３０℃）は２〜７が好ましく、３〜６がより好ましい。

【0025】

培養液のｐＨを調整する緩衝剤としては、例えば、炭酸、酢酸、クエン酸、フマル酸、リンゴ酸、乳酸、グルコン酸、酒石酸等の有機酸又はその塩、リン酸、塩酸、硫酸等の無機酸又はその塩、水酸化ナトリウム等の水酸化物、アンモニア又はアンモニア水等が挙げられ、これらを単独又は２種以上組み合わせて用いることができる。

【0026】

このような培養により、培地中にソフォロリピッドが蓄積するので、培養終了後、適当な分離・精製手段により培地からソフォロリピッドを採取することができる。
例えば、酢酸エチル等を用いた溶剤抽出後、分別沈殿、液液分配、カラムクロマトグラフ及び高速液体クロマトグラフ等を単独或いは組み合わせて用いることによりソフォロリピッドを取得することができる。

【0027】

本発明によれば、１５〜５０％、より好ましくは１８〜４５％の変換率で基質からソフォロリピッドを製造することができる。
ソフォロリピッド変換率とは、培養液に含まれるソフォロリピッド生産モル量を、ソフォロリピッドの発酵生産にあたり培地に仕込んだ油性物質基質、つまり、初期仕込み油性物質の総モル量で割った値である。ソフォロリピッド変換率の算出方法の詳細は実施例に記載した。

【0028】

本発明により得られるソフォロリピッドは、界面活性剤、化粧品基材、各種中間体の原料等としての利用が期待される。

【実施例】

【0029】

以下の実施例及び比較例において、モル％を除き「％」は「％（ｗ／ｖ）」を意味する。

【0030】

〔ソフォロリピッドの分析〕
培養液１０ｍＬをサンプリングし、ヘキサン１０ｍＬで２回洗浄した後、酢酸エチル１０ｍＬで２回抽出し回収を行った。その後、溶媒を留去し、酢酸エチル画分の回収を行った。回収した酢酸エチル画分０．０１ｇに対して、内部標準としてドデカンを用いて、メタノール１ｍＬ、濃塩酸０．０３ｍＬを添加し、１００℃温浴バスにて２時間メタノール交換を行った。冷却後、飽和食塩水１ｍＬ、ヘキサン１．５ｍＬを添加し混合を行い、静置後にヘキサン相を回収した。得られたヘキサン相の溶媒を留去し、シリル化剤ＴＭＳＩ−Ｈを０．２ｍＬ添加し７０℃で２０分シリル化を行った後、水１．５ｍＬ、ヘキサン１．５ｍＬを添加し混合を行い、静置後にヘキサン相を回収し、ＧＣ分析に供した。

【0031】

〔ソフォロリピッド変換率の算出〕
ソフォロリピッド変換率は次式により算出した。
変換率（％）＝（培養液に含まれるソフォロリピッドモル量）／（初期仕込み油性物質の総モル量）×１００

【0032】

〔培養方法〕
１．プレート培養
Ｃａｎｄｉｄａ ｂｏｍｂｉｃｏｌａ ＮＢＲＣ１０２４３株を用いた。
グルコース１％、酵母エキス１％、トリプトン１％、寒天１．５％を含む寒天培地のシャーレに種菌を１白金耳植菌し、温度３０℃で２日間培養を行った。

【0033】

２．前培養
グルコース１％、酵母エキス１％、トリプトン１％を含む培養液１００ｍＬを坂口フラスコに入れ、１２１℃、２０分加熱滅菌を行った。冷却後、プレートから１白金耳、植菌を行い、温度３０℃、撹拌回転数１２０ｒ／ｍｉｎの条件にて２日間撹拌培養を行った。

【0034】

３．本培養
グルコース１０％、酵母エキス２％、尿素１．２％を含む培養液をｐＨ５．０に調整し、１．２Ｌにメスアップした。培養液を全容２Ｌのジャーファーメンターにて滅菌後に、前培養液２４ｍＬ植菌し、温度３０℃、撹拌回転数６００ｒ／ｍｉｎ、通気速度（通気量）０．６Ｌ／分の条件にて４８時間撹拌培養を行った。

【0035】

４．菌の回収
本培養で得られた培養液を６，０００ｒ／ｍｉｎ、２０分間の遠心分離を行い、菌体を回収した。生理食塩水で懸濁後に再度６，０００ｒ／ｍｉｎ、２０分間の遠心分離を行い、菌体を回収した。回収した菌体を用いて休止菌体反応を行った。

【0036】

実施例１
油性物質としてパルミチン酸イソプロピル（融点１２℃）０．２１ｇとパルミチン酸（融点６３℃）０．７２ｇを含み、当該油性物質、グルコース１０％、２０ｍＭリン酸Ｎａバッファーからなる培地（ｐＨ４．０）を試験管に１０ｍＬ入れ、１２１℃、２０分高温で滅菌を行った。冷却後に回収した休止菌体をＯＤ６６０ｎｍが３０になるように培地に投入し、温度３０℃、撹拌回転数２４０ｒ／ｍｉｎの条件で７６時間培養を行った。
培養後、ソフォロリピッド変換率を求めたところ１９．１％であった。

【0037】

実施例２
パルミチン酸イソプロピルを０．４２ｇ、パルミチン酸を０．５４ｇに代えた以外は実施例１と同様に培養を行った。
培養後、ソフォロリピッド変換率を求めたところ２２．９％であった。

【0038】

実施例３
パルミチン酸イソプロピルを０．６３ｇ、パルミチン酸を０．３６ｇに代えた以外は実施例１と同様に培養を行った。
培養後、ソフォロリピッド変換率を求めたところ２１．６％であった。

【0039】

実施例４
パルミチン酸イソプロピルを０．８４ｇ、パルミチン酸を０．１８ｇに代えた以外は実施例１と同様に培養を行った。
培養後、ソフォロリピッド変換率を求めたところ２０．４％であった。

【0040】

実施例５
パルミチン酸イソプロピルをｎ−ヘキサデカン（融点１８℃）０．１６ｇに代え、パルミチン酸０．７２ｇにて実験を行った以外は実施例１と同様に培養を行った。
培養後、ソフォロリピッド変換率を求めたところ１７．０％であった。

【0041】

実施例６
ｎ−ヘキサデカンを０．３２ｇ、パルミチン酸を０．５４ｇに代えた以外は実施例５と同様に培養を行った。
培養後、ソフォロリピッド変換率を求めたところ１９．７％であった。

【0042】

実施例７
ｎ−ヘキサデカンを０．４８ｇ、パルミチン酸を０．３６ｇに代えた以外は実施例５と同様に培養を行った。
培養後、ソフォロリピッド変換率を求めたところ２０．５％であった。

【0043】

実施例８
ｎ−ヘキサデカンを０．６４ｇ、パルミチン酸を０．１８ｇに代えた以外は実施例５と同様に培養を行った。
培養後、ソフォロリピッド変換率を求めたところ２１．９％であった。

【0044】

比較例１
パルミチン酸０．９０ｇにて実験を行った以外は実施例１と同様に培養を行った。
培養後、ソフォロリピッド変換率を求めたところ１４．５％であった。

【0045】

比較例２
パルミチン酸イソプロピル１．０５ｇにて実験を行った以外は実施例１と同様に培養を行った。
培養後、ソフォロリピッド変換率を求めたところ１７．３％であった。

【0046】

比較例３
ｎ−ヘキサデカン０．８０ｇにて実験を行った以外は実施例１と同様に培養を行った。
培養後、ソフォロリピッド変換率を求めたところ１６．６％であった。

【0047】

各実施例、比較例の条件と結果を表１と表２に示す。

【0048】

【表1】

【0049】

【表2】

【0050】

表１及び表２に示すように、基質として、培養温度下で液体状の油性物質と固体状の油性物質を特定の比率で組み合わせることにより、高い変換率でソフォロリピッドが得られることが確認された。他方、液体状の油性物質のみ、或いは固体状の油性物質のみでは基質からソフォロリピッドへの変換速度が遅く、また固体状の油性物質のみでは培養時に泡量が多くなり、培養が困難であった。