特許 6622293 アントラサイクリンジスルフィド中間体、抗体−薬物複合体、及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6622293

(24)【登録日】2019年11月29日

(45)【発行日】2019年12月18日

(54)【発明の名称】アントラサイクリンジスルフィド中間体、抗体−薬物複合体、及び方法

(51)【国際特許分類】

   C07D 498/14 20060101AFI20191209BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20191209BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20191209BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20191209BHJP

   C07K 16/18 20060101ALN20191209BHJP

【ＦＩ】

   C07D498/14CSP

   A61K39/395 C

   A61K39/395 E

   A61K39/395 L

   A61K39/395 T

   A61P35/00

   A61K47/68

   !C07K16/18ZNA

【請求項の数】26

【全頁数】88

(21)【出願番号】特願2017-513785(P2017-513785)

(86)(22)【出願日】2015年9月11日

(65)【公表番号】特表2017-531625(P2017-531625A)

(43)【公表日】2017年10月26日

(86)【国際出願番号】US2015049728

(87)【国際公開番号】WO2016040825

(87)【国際公開日】20160317

【審査請求日】2018年9月10日

(31)【優先権主張番号】62/049,720

(32)【優先日】2014年9月12日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】509012625

【氏名又は名称】ジェネンテック， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林特許業務法人

(72)【発明者】

【氏名】フライゲア， ジョン

(72)【発明者】

【氏名】ピロー， トーマス

【審査官】 水島 英一郎

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１１−５２８３６０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２００９／０９９７４１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特開平０１−２４６２９５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００３−５３１８２１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０５−２０１７２６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 WILLNER D ET AL，(6-MALEIMIDOCAPROYL)HYDRAZONE OF DOXORUBICIN - A NEW DERIVATIVE FOR THE PREPARATION OF IMMUNOCONJUGATES OF DOXORUBICIN，BIOCONJUGATE CHEMISTRY，米国，ACS，１９９３年，4(6)，521-527

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ

ＣＡｐｌｕｓ（ＳＴＮ）

ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式Ｉのリンカー−薬物中間体であって、
Ａｎｔ-Ｌ-（Ｚ）_ｍ-Ｘ Ｉ
式中、Ａｎｔが、以下の構造から選択され、

式中、波線が、Ｌへの結合を示し、
Ｌが、−ＣＨ_２Ｏ−、−ＣＨ_２Ｎ（Ｒ）−、-Ｎ（Ｒ）-、-Ｎ（Ｒ）（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-、−Ｎ（Ｒ）（Ｃ_２-Ｃ_８アルケニレン）-、-Ｎ（Ｒ）（Ｃ_２-Ｃ_８アルキニレン）-、-Ｎ（Ｒ）（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ-、及び以下の構造から選択されるリンカーであり、

式中、波線が、Ａｎｔ及びＺへの結合を示し、
Ｚが、-ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）-、-ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＲ（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-、及び以下の構造から選択される任意のスペーサーであり、

式中、波線が、Ｌ及びＸへの結合を示し、
Ｒが、Ｈ、Ｃ_１-Ｃ_１２アルキル、またはＣ_６-Ｃ_２０アリールであり、
Ｚ^１が、-（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-、-（Ｃ_２-Ｃ_８アルケニレン）-、-（Ｃ_２-Ｃ_８アルキニレン）-、-Ｏ（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-、-Ｏ（Ｃ_２-Ｃ_８アルケニレン）-、-Ｏ（Ｃ_２-Ｃ_８アルキニレン）-、及び-（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ-から選択され、
ｍが、０または１であり、
ｎが、１〜６であり、
Ｘが、ピリジルジスルフィドであり、この場合、ピリジルが、ＮＯ_２、Ｃｌ、Ｆ、ＣＮ、及びＢｒから選択される１つ以上の基で置換されていてもよく、
アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アルキル、及びアリールが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｎ（ＣＨ_３）_２、及びＯＣＨ_３から選択される１つ以上の基で置換されていてもよい、前記リンカー−薬物中間体。

【請求項2】

Ｌが−ＣＨ_２Ｏ−である、請求項１に記載のリンカー−薬物中間体。

【請求項3】

Ｌが−Ｎ（Ｒ）−または-Ｎ（Ｒ）（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-である、請求項１に記載のリンカー−薬物中間体。

【請求項4】

Ｚ^１が-（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-または-Ｏ（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-である、請求項１に記載のリンカー−薬物中間体。

【請求項5】

Ｚが、

である、請求項１に記載のリンカー−薬物中間体。

【請求項6】

Ｚ^１が-Ｏ（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-である、請求項５に記載のリンカー−薬物中間体。

【請求項7】

ＲがＨまたはＣ_１-Ｃ_１２アルキルである、請求項５に記載のリンカー−薬物中間体。

【請求項8】

Ｘが、

であり、
式中、波線が、ＬまたはＺへの結合を示し、
Ｒ^１が、ＮＯ_２、Ｃｌ、Ｆ、ＣＮ、またはＢｒであり、ｑが、０、１、または２である、請求項１に記載のリンカー−薬物中間体。

【請求項9】

式Ｉａ〜ｃから選択され、

式中、Ｒ^１が、ＮＯ_２、Ｃｌ、Ｆ、またはＢｒであり、ｑが、０、１、または２である、請求項１に記載のリンカー−薬物中間体。

【請求項10】

Ｒ^１がＮＯ_２であり、ｎが１である、請求項９に記載のリンカー−薬物中間体。

【請求項11】

式Ｉｄを有する、請求項１に記載のリンカー−薬物中間体。

【請求項12】

以下から選択される、請求項１に記載のリンカー−薬物中間体。

【請求項13】

ジスルフィド、リンカーＬ、及び任意のスペーサーＺによって１つ以上のアントラサイクリン誘導体薬物部分Ｄに共有結合される抗体を含む抗体−薬物複合体化合物であって、式ＩＩ：
Ａｂ−Ｓ−Ｓ−（Ｚ_ｍ−Ｌ−Ｄ）_ｐ ＩＩ
を有し、
式中、Ａｂが、（１）〜（５３）から選択される１つ以上の腫瘍関連抗原または細胞表面受容体に結合する抗体であり、
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形態形成タンパク質受容体ＩＢ型）、
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５）、
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺６膜貫通上皮抗原）、
（４）ＭＵＣ１６（０７７２Ｐ、ＣＡ１２５）、
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン）、
（６）Ｎａｐｉ２ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質担体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ）、
（７）Ｓｅｍａ ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７回トロンボスポンジン反復（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）及び短細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ）、
（８）ＰＳＣＡ ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２遺伝子）、
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体）、
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５）、
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ−１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺癌関連遺伝子１、前立腺癌関連タンパク質１、前立腺６膜貫通上皮抗原２、６膜貫通前立腺タンパク質）、
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４）、
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形癌腫由来成長因子）、
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタインバーウイルス受容体）またはＨｓ ７３７９２）、
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、ＩＧｂ（免疫グロブリン関連ベータ）、Ｂ２９）、
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ）、
（１７）ＨＥＲ２、
（１８）ＮＣＡ、
（１９）ＭＤＰ、
（２０）ＩＬ２０Ｒα、
（２１）ブレビカン、
（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ、
（２３）ＡＳＬＧ６５９、
（２４）ＰＳＣＡ、
（２５）ＧＥＤＡ、
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３）、
（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォーム）、
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９α、免疫グロブリン関連アルファ）、
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１）、
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ＭＨＣクラスＩＩ分子のベータサブユニット（Ｉａ抗原））、
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン作動性受容体Ｐ２Ｘリガンド開口型イオンチャネル５）、
（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ−２）、
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質）、
（３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１）、
（３５）ＦｃＲＨ５（ＩＲＴＡ２、免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２）、
（３６）ＴＥＮＢ２（推定膜貫通プロテオグリカン）、
（３７）ＰＭＥＬ１７（シルバーホモログ、ＳＩＬＶ、Ｄ１２Ｓ５３Ｅ、ＰＭＥＬ１７、ＳＩ、ＳＩＬ）、
（３８）ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様及び２つのホリスタチン様ドメイン１を有する膜貫通タンパク質、トモレグリン−１）、
（３９）ＧＤＮＦ−Ｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ１、ＧＦＲＡ１、ＧＤＮＦＲ、ＧＤＮＦＲＡ、ＲＥＴＬ１、ＴＲＮＲ１、ＲＥＴ１Ｌ、ＧＤＮＦＲ−アルファ１、ＧＦＲ−ＡＬＰＨＡ−１）、
（４０）Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ、Ｌｙ６７、ＲＩＧ−Ｅ、ＳＣＡ−２、ＴＳＡ−１）、
（４１）ＴＭＥＭ４６（シサホモログ２（アフリカツメガエル）、ＳＨＩＳＡ２）、
（４２）Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６Ｄ、Ｌｙ６−Ｄ、ＭＥＧＴ１）、
（４３）ＬＧＲ５（ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役受容体５、ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）、
（４４）ＲＥＴ（ＲＥＴプロト癌遺伝子、ＭＥＮ２Ａ、ＨＳＣＲ１、ＭＥＮ２Ｂ、ＭＴＣ１、ＰＴＣ、ＣＤＨＦ１２、Ｈｓ．１６８１１４、ＲＥＴ５１、ＲＥＴ−ＥＬＥ１）、
（４５）ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ、ＬＹ６Ｋ、ＨＳＪ００１３４８、ＦＬＪ３５２２６）、
（４６）ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質共役受容体１９、Ｍｍ．４７８７）、
（４７）ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＧＰＲ５４、ＨＯＴ７Ｔ１７５、ＡＸＯＲ１２）、
（４８）ＡＳＰＨＤ１（アスパラギン酸ベータヒドロキシラーゼドメイン含有１、ＬＯＣ２５３９８２）、
（４９）チロシナーゼ（ＴＹＲ、ＯＣＡＩＡ、ＯＣＡ１Ａ、チロシナーゼ、ＳＨＥＰ３）、
（５０）ＴＭＥＭ１１８（リングフィンガータンパク質、膜貫通２、ＲＮＦＴ２、ＦＬＪ１４６２７）、
（５１）ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質共役受容体１７２Ａ、ＧＰＣＲ４１、ＦＬＪ１１８５６、Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）、
（５２）ＣＤ３３、及び
（５３）ＣＬＬ−１、
Ｄが、以下の構造から選択されるアントラサイクリン誘導体であり、

式中、波線が、Ｌへの結合を示し、
Ｌが、−ＣＨ_２Ｏ−、−ＣＨ_２Ｎ（Ｒ）−、-Ｎ（Ｒ）-、-Ｎ（Ｒ）（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-、−Ｎ（Ｒ）（Ｃ_２-Ｃ_８アルケニレン）-、-Ｎ（Ｒ）（Ｃ_２-Ｃ_８アルキニレン）-、-Ｎ（Ｒ）（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ-、及び以下の構造から選択されるリンカーであり、

式中、波線が、Ｄ及びＺへの結合を示し、
Ｚが、-ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）-、-ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＲ（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-、及び以下の構造から選択される任意のスペーサーであり、

Ｒが、Ｈ、Ｃ_１-Ｃ_１２アルキル、またはＣ_６-Ｃ_２０アリールであり、
Ｚ^１が、-（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-、-（Ｃ_２-Ｃ_８アルケニレン）-、-（Ｃ_２-Ｃ_８アルキニレン）-、及び-（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ-から選択され、
ｍが、０または１であり、
ｎが、１〜６であり、
ｐが、１〜８の整数であり、
アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アルキル、及びアリールが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｎ（ＣＨ_３）_２、ＮＯ_２、及びＯＣＨ_３から選択される１つ以上の基で任意に置換される、前記化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項14】

Ｌが-ＮＨ（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-であり、ｍが０である、請求項１３に記載の抗体−薬物複合体化合物。

【請求項15】

アルキレンが、-ＣＨ_２ＣＨ_２-、-ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２-、-ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２-、及び-Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２-から選択される、請求項１４に記載の抗体−薬物複合体化合物。

【請求項16】

Ａｂがシステイン操作抗体である、請求項１３に記載の抗体−薬物複合体化合物。

【請求項17】

前記システイン操作抗体が、ＨＣ Ａ１１８Ｃ、ＬＣ Ｋ１４９Ｃ、ＨＣ Ａ１４０Ｃ、ＬＣ Ｖ２０５Ｃ、及びＬＣ Ｓ１２１Ｃから選択される変異体である、請求項１６に記載の抗体−薬物複合体化合物。

【請求項18】

Ａｂが、抗ＨＥＲ２ ４Ｄ５、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗Ｎａｐｉ３ｂ、抗ＨＥＲ２ ７Ｃ２、及び抗ＣＬＬ−１から選択される、請求項１３に記載の抗体−薬物複合体化合物。

【請求項19】

ｐが、１、２、３、または４である、請求項１３に記載の抗体−薬物複合体化合物。

【請求項20】

前記抗体−薬物複合体化合物の混合物を含み、前記抗体−薬物複合体化合物混合物中の１抗体当たりの平均薬物負荷が２〜５である、請求項１３に記載の抗体−薬物複合体化合物。

【請求項21】

請求項１３〜２０のいずれか一項に記載の抗体−薬物複合体化合物と、薬学的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤と、を含む、薬学的組成物。

【請求項22】

請求項２１に記載の薬学的組成物を含む、癌の治療のための医薬。

【請求項23】

前記抗体−薬物複合体と併せて更に化学療法剤を含む、請求項２２に記載の医薬。

【請求項24】

哺乳動物における癌の治療に使用するための、請求項１３〜２０のいずれか一項に記載の抗体−薬物複合体化合物。

【請求項25】

抗体を請求項１に記載の式Ｉのリンカー−薬物中間体と反応させることを含む、請求項１３に記載の抗体−薬物複合体化合物の作製方法。

【請求項26】

請求項２１に記載の薬学的組成物と、容器と、前記薬学的組成物を使用して癌を治療することができることを示す添付文書またはラベルと、を含む、製品。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、参照により全体が本明細書に組み込まれる、２０１４年９月１２日出願の米国仮出願第６２／０４９７２０号の優先権の利益を主張するものである。

【0002】

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出されており、かつ参照により全体が本明細書に組み込まれる配列表を包含する。２０１５年９月４日に作成された前記ＡＳＣＩＩのコピーは、Ｐ０５８１３−ＵＳ＿ＳＬ．ｔｘｔという名前であり、１６，０１２バイトのサイズである。

【0003】

本発明は、概して、アントラサイクリンジスルフィド中間体に複合されて、治療的または診断的用途を有する抗体−薬物複合体を形成する抗体に関する。この抗体は、アントラサイクリンジスルフィド中間体との複合に反応性の遊離システインアミノ酸で操作され得る。本発明は、哺乳類細胞、または関連病理学的状態のインビトロ、インサイチュ、及びインビボ診断または治療のための抗体−薬物複合体化合物の使用方法にも関する。

【背景技術】

【0004】

抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、強力な細胞毒性薬物の標的を抗原発現腫瘍細胞、内部化、及び薬物の放出とし、それによりそれらの抗腫瘍活性を増強することによって抗体及び細胞毒性薬物の両方の特性を組み合わせる、標的とされる化学療法分子である（Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．ａｎｄ Ｓｅｎｔｅｒ，Ｐ．（２００８）Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒ． １４（３）：１５４−１６９）。所与の標的抗原に対するＡＤＣ開発の成功は、抗体選択の最適化、リンカー設計及び安定性、細胞毒性薬物の効力、ならびに抗体に対する薬物とリンカーの複合様式に依存する（Ｐｏｌａｋｉｓ，Ｐ．（２００５）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ５：３８２−３８７）。

【0005】

近年、ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）（トラスツズマブエムタンシン、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）が乳癌の治療に認可された。トラスツズマブエムタンシンは、安定した非ジスルフィドリンカーＭＣＣを介して抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブに共有結合されるメイタンシン薬物部分ＤＭ１を有する抗体−薬物複合体である（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ Ｇ．ｅｔ ａｌ． （２００８）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６８：９２８０−９０）。トラスツズマブは、１９９８年にＨＥＲ２陽性乳癌の治療に許可されたＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）として製剤化された抗体である。

【0006】

アントラサイクリンは、白血病、乳癌、肺癌、卵巣腺癌、及び肉腫等の数々の癌の治療に使用される。一般に使用されるアントラサイクリンとしては、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、及びダウノマイシンが挙げられる。グリコシドアミノ基上での環化により形成されるドキソルビシン及びダウノルビシンのモルホリノ類似体は、より高い効力を有する（Ａｃｔｏｎ ｅｔ ａｌ（１９８４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．６３８−６４５、ＵＳ４４６４５２９、ＵＳ４６７２０５７、ＵＳ５３０４６８７）。ネモルビシンは、ドキソルビシンのグリコシドアミノ上に２−メトキシモルホリノ基を有するドキソルビシンの半合成類似体であり、臨床評価されており（Ｇｒａｎｄｉ ｅｔ ａｌ（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ． Ｒｅｗ． １７：１３３、Ｒｉｐａｍｏｎｔｉ ｅｔ ａｌ（１９９２）Ｂｒｉｔ． Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ６５：７０３）、肝細胞癌についての第ＩＩ／ＩＩＩ相試験を含む（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ（２００３）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２２，Ａｂｓ１４４８、Ｑｕｉｎｔｉｅｒｉ（２００３）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４４：１ｓｔ Ｅｄ，Ａｂｓ ４６４９、Ｐａｃｃｉａｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ（２００６）Ｊｏｕｒ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２４：１４１１６）。ダウノルビシンとドキソルビシンの免疫複合体及びプロドラッグが調製され、研究されている（Ｋｒａｔｚ ｅｔ ａｌ（２００６）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７−５２３、Ｊｅｆｆｒｅｙ ｅｔ ａｌ（２００６）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔｅｒｓ １６：３５８−３６２、Ｔｏｒｇｏｖ ｅｔ ａｌ（２００５）Ｂｉｏｃｏｎｊ． Ｃｈｅｍ．１６：７１７−７２１、Ｎａｇｙ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９７：８２９−８３４、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ｅｔ ａｌ（２００２）Ｂｉｏｏｒｇ．＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １２：１５２９−１５３２、Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ（２００２）Ｊ．Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．４５：４３３６−４３４３、ＵＳ６６３０５７９）。抗体−薬物複合体であるＢＲ９６−ドキソルビシンは、腫瘍関連抗原Ｌｅｗｉｓ−Ｙと特異的に反応し、Ｉ相及びＩＩ相試験で評価されている（Ｓａｌｅｈ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １８：２２８２−２２９２、Ａｊａｎｉ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒ．６：７８−８１、Ｔｏｌｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １７：４７８−４８４）。

【0007】

ＰＮＵ−１５９６８２を含む肝臓ミクロソーム由来のネモルビシン（ＭＭＤＸ）のいくつかの代謝物が特徴付けされている（Ｑｕｉｎｔｉｅｒｉ ｅｔ ａｌ（２００５）Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１１（４）：１６０８−１６１７、Ｂｅｕｌｚ−Ｒｉｃｈｅ ｅｔ ａｌ（２００１）Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ ＆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１５（６）：３７３−３７８、ＥＰ０８８９８９８、ＷＯ２００４／０８２６８９、ＷＯ２００４／０８２５７９）。ＰＮＵ−１５９６８２は、インビトロでネモルビシン及びドキソルビシンよりも著しく細胞毒性が高く、有効なインビボ腫瘍モデルであった。ＰＮＵ−１５９６８２は、３’−デアミノ−３’’，４’−無水−［２’’（Ｓ）−メトキシ−３’’Ｒ）−オキシ−４’’−モルホリニル］ドキソルビシンと命名されており、以下の構造を有する。

【0008】

ある特定のＰＮＵ−１５９６８２抗体−薬物複合体について説明されている（ＷＯ２００９／０９９７４１、ＷＯ２０１０／００９１２４、ＵＳ８７４２０７６、ＵＳ８３８９６９７）。ＰＮＵ−１５９６８２類似体を作製するプロセスについて説明されている（ＵＳ８４７０９８４）。

【発明の概要】

【0009】

本発明は、式Ｉを有するアントラサイクリンジスルフィド中間体であって、
Ａｎｔ-Ｌ-（Ｚ）_ｍ-Ｘ Ｉ
式中、Ａｎｔが、以下の構造から選択され、

式中、波線が、Ｌへの結合を示し、
Ｌが、−ＣＨ_２Ｏ−、−ＣＨ_２Ｎ（Ｒ）−、-Ｎ（Ｒ）-、-Ｎ（Ｒ）（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-、−Ｎ（Ｒ）（Ｃ_２-Ｃ_８アルケニレン）-、-Ｎ（Ｒ）（Ｃ_２-Ｃ_８アルキニレン）-、-Ｎ（Ｒ）（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ-、及び以下の構造から選択されるリンカーであり、

式中、波線が、Ａｎｔ及びＺへの結合を示し、
Ｚが、-ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）-、-ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＲ（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-、及び以下の構造から選択される任意のスペーサーであり、

式中、波線が、Ｌ及びＸへの結合を示し、
Ｒが、Ｈ、Ｃ_１-Ｃ_１２アルキル、またはＣ_６-Ｃ_２０アリールであり、
Ｚ^１が、-（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-、-（Ｃ_２-Ｃ_８アルケニレン）-、-（Ｃ_２-Ｃ_８アルキニレン）-、-Ｏ（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-、-Ｏ（Ｃ_２-Ｃ_８アルケニレン）-、-Ｏ（Ｃ_２-Ｃ_８アルキニレン）-、及び-（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ-から選択され、
ｍが、０または１であり、
ｎが、１〜６であり、
Ｘが、ピリジルジスルフィドであり、この場合、ピリジルが、ＮＯ_２、Ｃｌ、Ｆ、及びＢｒから選択される１つ以上の基で任意に置換され、
アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アルキル、及びアリールが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｎ（ＣＨ_３）_２、及びＯＣＨ_３から選択される１つ以上の基で任意に置換される、アントラサイクリンジスルフィド中間体を含む。

【0010】

本発明は、抗体に共有結合されて、治療的または診断的用途を有する抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）化合物を形成するアントラサイクリンジスルフィド中間体を含む。

【0011】

本発明の別の態様は、ジスルフィド、リンカーＬ、及び任意のスペーサーＺによって１つ以上のアントラサイクリン誘導体薬物部分Ｄに共有結合される抗体を含む抗体−薬物複合体化合物であって、式ＩＩを有し、
Ａｂ-Ｓ−Ｓ-（Ｚ_ｍ-Ｌ-Ｄ）_ｐＩＩ：
式中、Ａｂが、（１）〜（５３）から選択される１つ以上の腫瘍関連抗原または細胞表面受容体に結合する抗体であり、
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形態形成タンパク質受容体ＩＢ型）、
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５）、
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺６膜貫通上皮抗原）、
（４）ＭＵＣ１６（０７７２Ｐ、ＣＡ１２５）、
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン）、
（６）Ｎａｐｉ２ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質担体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ）、
（７）Ｓｅｍａ ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７回トロンボスポンジン反復（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）及び短細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ）、
（８）ＰＳＣＡ ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２遺伝子）、
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体）、
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５）、
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ−１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺癌関連遺伝子１、前立腺癌関連タンパク質１、前立腺６膜貫通上皮抗原２、６膜貫通前立腺タンパク質）、
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４）、
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形癌腫由来成長因子）、
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタインバーウイルス受容体）またはＨｓ ７３７９２）、
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、ＩＧｂ（免疫グロブリン関連ベータ）、Ｂ２９）、
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ）、
（１７）ＨＥＲ２、
（１８）ＮＣＡ、
（１９）ＭＤＰ、
（２０）ＩＬ２０Ｒα、
（２１）ブレビカン、
（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ、
（２３）ＡＳＬＧ６５９、
（２４）ＰＳＣＡ、
（２５）ＧＥＤＡ、
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３）、
（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォーム）、
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９α、免疫グロブリン関連アルファ）、
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１）、
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ＭＨＣクラスＩＩ分子のベータサブユニット（Ｉａ抗原））、
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン作動性受容体Ｐ２Ｘリガンド開口型イオンチャネル５）、
（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ−２）、
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質）、
（３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１）、
（３５）ＦｃＲＨ５（ＩＲＴＡ２、免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２）、
（３６）ＴＥＮＢ２（推定膜貫通プロテオグリカン）、
（３７）ＰＭＥＬ１７（シルバーホモログ、ＳＩＬＶ、Ｄ１２Ｓ５３Ｅ、ＰＭＥＬ１７、ＳＩ、ＳＩＬ）、
（３８）ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様及び２つのホリスタチン様ドメイン１を有する膜貫通タンパク質、トモレグリン−１）、
（３９）ＧＤＮＦ−Ｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ１、ＧＦＲＡ１、ＧＤＮＦＲ、ＧＤＮＦＲＡ、ＲＥＴＬ１、ＴＲＮＲ１、ＲＥＴ１Ｌ、ＧＤＮＦＲ−アルファ１、ＧＦＲ−ＡＬＰＨＡ−１）、
（４０）Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ、Ｌｙ６７、ＲＩＧ−Ｅ、ＳＣＡ−２、ＴＳＡ−１）、
（４１）ＴＭＥＭ４６（シサホモログ２（アフリカツメガエル）、ＳＨＩＳＡ２）、
（４２）Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６Ｄ、Ｌｙ６−Ｄ、ＭＥＧＴ１）、
（４３）ＬＧＲ５（ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役受容体５、ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）、
（４４）ＲＥＴ（ＲＥＴプロト癌遺伝子、ＭＥＮ２Ａ、ＨＳＣＲ１、ＭＥＮ２Ｂ、ＭＴＣ１、ＰＴＣ、ＣＤＨＦ１２、Ｈｓ．１６８１１４、ＲＥＴ５１、ＲＥＴ−ＥＬＥ１）、
（４５）ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ、ＬＹ６Ｋ、ＨＳＪ００１３４８、ＦＬＪ３５２２６）、
（４６）ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質共役受容体１９、Ｍｍ．４７８７）、
（４７）ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＧＰＲ５４、ＨＯＴ７Ｔ１７５、ＡＸＯＲ１２）、
（４８）ＡＳＰＨＤ１（アスパラギン酸ベータヒドロキシラーゼドメイン含有１、ＬＯＣ２５３９８２）、
（４９）チロシナーゼ（ＴＹＲ、ＯＣＡＩＡ、ＯＣＡ１Ａ、チロシナーゼ、ＳＨＥＰ３）、
（５０）ＴＭＥＭ１１８（リングフィンガータンパク質、膜貫通２、ＲＮＦＴ２、ＦＬＪ１４６２７）、
（５１）ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質共役受容体１７２Ａ、ＧＰＣＲ４１、ＦＬＪ１１８５６、Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）、
（５２）ＣＤ３３、及び
（５３）ＣＬＬ−１、
Ｄが、以下の構造から選択されるアントラサイクリン誘導体であり、

式中、波線が、Ｌへの結合を示し、
Ｌが、−ＣＨ_２Ｏ−、−ＣＨ_２Ｎ（Ｒ）−、-Ｎ（Ｒ）-、-Ｎ（Ｒ）（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-、−Ｎ（Ｒ）（Ｃ_２-Ｃ_８アルケニレン）-、-Ｎ（Ｒ）（Ｃ_２-Ｃ_８アルキニレン）-、-Ｎ（Ｒ）（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ-、及び以下の構造から選択されるリンカーであり、

式中、波線が、Ｄ及びＺへの結合を示し、
Ｚが、-ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）-、-ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＲ（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-、及び以下の構造から選択される任意のスペーサーであり、

Ｒが、Ｈ、Ｃ_１-Ｃ_１２アルキル、またはＣ_６-Ｃ_２０アリールであり、
Ｚ^１が、-（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-、-（Ｃ_２-Ｃ_８アルケニレン）-、-（Ｃ_２-Ｃ_８アルキニレン）-、及び-（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ-から選択され、
ｍが、０または１であり、
ｎが、１〜６であり、
ｐが、１〜８の整数であり、
アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アルキル、及びアリールが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｎ（ＣＨ_３）_２、ＮＯ_２、及びＯＣＨ_３から選択される１つ以上の基で任意に置換される、抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩である。

【0012】

本発明の別の態様は、式ＩＩの抗体−薬物複合体化合物と、薬学的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤とを含む薬学的組成物である。

【0013】

本発明の別の態様は、哺乳動物における癌の治療用の薬剤の製造における式ＩＩの抗体−薬物複合体化合物の使用である。

【0014】

本発明の別の態様は、患者に式ＩＩの抗体−薬物複合体化合物を含む薬学的組成物を投与することによる癌の治療方法である。

【0015】

本発明の別の態様は、式ＩＩの抗体−薬物複合体化合物の作製方法である。

【0016】

本発明の別の態様は、式ＩＩの抗体−薬物複合体化合物を含む薬学的組成物と、容器と、薬学的組成物を使用して癌を治療することができることを示す添付文書またはラベルとを含む製品である。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1】チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＨＣ Ａ１１８Ｃ−（ＬＤ−５７）１１４、チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）１０９、及びチオＨｕ 抗ＣＤ３３ １５Ｇ１５．３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）１１０の濃度（μｇ／ｍＬ）に対する５日間でのＳＫ−ＢＲ−３インビトロ細胞生存率のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す。

【図2】チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５９）１１６、チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）１０９、及びチオＨｕ 抗ＣＤ３３ １５Ｇ１５．３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５９）１１５の濃度（μｇ／ｍＬ）に対する５日間でのＳＫ−ＢＲ−３インビトロ細胞生存率のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す。

【図3】ビヒクル（ヒスチジン緩衝液＃８：２０ｍＭ 酢酸ヒスチジン（ｐＨ５．５）、２４０ｍＭ スクロース、０．０２％ＰＳ ２０）、チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＨＣ Ａ１１８Ｃ−（ＬＤ−５１）１０７、及びチオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）１０８を単回静脈内投与した後にＣＲＬ ｎｕ／ｎｕマウスの乳腺脂肪体に接種したＭＭＴＶ−ＨＥＲ２ Ｆｏ５トランスジェニック乳腺腫瘍の経時的なインビボフィッティング腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す。ＡＤＣを０日目に３ｍｇ／ｋｇで単回静脈内投与した。

【図4】０．２ｍＬの体積で胸郭乳腺脂肪体に接種したＳＣＩＤベージュマウスにおけるＫＰＬ４腫瘍モデルの経時的なインビボフィッティング腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す。腫瘍が平均腫瘍体積１００〜２５０ｍｍ３に到達したときに、それらを各々８〜１０匹のマウスの９群に群分けした。単回処置を、以下のように０日目に尾静脈を介して静脈内に行った：（０１）ビヒクル（ヒスチジン緩衝液＃８：２０ｍＭ酢酸ヒスチジン（ｐＨ５．５）、２４０ｍＭスクロース、０．０２％ＰＳ ２０）、（０２）チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（エチルマレイミド）０．３ｍｇ／ｋｇ １３８、（０３）チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（エチルマレイミド）１ｍｇ／ｋｇ １３８、（０４）チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（エチルマレイミド）３ｍｇ／ｋｇ １３８、（０５）チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）０．３ｍｇ／ｋｇ １０９、（０６）チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）１ｍｇ／ｋｇ １０９、（０７）チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）３ｍｇ／ｋｇ １０９、（０８）チオＨｕ 抗ＣＤ３３ １５Ｇ１５．３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（エチルマレイミド）３ｍｇ／ｋｇ １３９、及び（０９）チオＨｕ 抗ＣＤ３３ １５Ｇ１５．３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）３ｍｇ／ｋｇ １１０。

【図5】（０１）ビヒクル（ヒスチジン緩衝液＃８：２０ｍＭ酢酸ヒスチジン（ｐＨ５．５）、２４０ｍＭスクロース、０．０２％ＰＳ ２０）、（０２）チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）１ｍｇ／ｋｇ １０９、（０３）チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）３ｍｇ／ｋｇ １０９、（０４）チオＨｕ 抗ＣＤ３３ １５Ｇ１５．３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）１ｍｇ／ｋｇ １１０、（０５）チオＨｕ 抗ＣＤ３３ １５Ｇ１５．３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）３ｍｇ／ｋｇ １１０、（０６）トラスツズマブエムタンシン３ｍｇ／ｋｇ １４１、及び（０７）トラスツズマブエムタンシン１０ｍｇ／ｋｇ １４１を単回静脈内投与した後にＣＲＬ ｎｕ／ｎｕマウスの乳腺脂肪体に接種したＭＭＴＶ−ＨＥＲ２ Ｆｏ５トランスジェニック乳腺腫瘍の経時的なインビボフィッティング腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す。

【図6】チオＨｕ 抗Ｎａｐｉ３ｂ １０Ｈ１．１１．４Ｂ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）１２１、チオＨｕ 抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）１２０、チオＨｕ 抗Ｎａｐｉ３ｂ １０Ｈ１．１１．４Ｂ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５９）１２３、チオＨｕ 抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５９）１２２、チオＨｕ 抗Ｎａｐｉ３ｂ １０Ｈ１．１１．４Ｂ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５８）１２５、チオＨｕ 抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５８）１２４、チオＨｕ 抗Ｎａｐｉ３ｂ １０Ｈ１．１１．４Ｂ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−６０）１２７、及びチオＨｕ 抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−６０）１２６の濃度（μｇ／ｍＬ）に対する５日間でのＢＪＡＢ．ｌｕｃインビトロ細胞生存率のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す。

【図7】チオＨｕ 抗Ｎａｐｉ３ｂ １０Ｈ１．１１．４Ｂ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）１２１、チオＨｕ 抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）１２０、チオＨｕ 抗Ｎａｐｉ３ｂ １０Ｈ１．１１．４Ｂ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５９）１２３、チオＨｕ 抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５９）１２２、チオＨｕ 抗Ｎａｐｉ３ｂ １０Ｈ１．１１．４Ｂ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５８）１２５、チオＨｕ 抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５８）１２４、チオＨｕ 抗Ｎａｐｉ３ｂ １０Ｈ１．１１．４Ｂ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−６０）１２７、及びチオＨｕ 抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−６０）１２６の濃度（μｇ／ｍＬ）に対する５日間でのＷＳＵ−ＤＬＣＬ２インビトロ細胞生存率のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す。

【発明を実施するための形態】

【0018】

本発明のある特定の実施形態についてこれから詳細に言及し、それらの例は、添付の構造及び式に例証されている。本発明が例証される実施形態とともに説明されるが、それらが本発明をそれらの実施形態に限定するようには意図されていないことが理解される。それとは反対に、本発明は、特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内に含まれ得るすべての代替案、修正、及び等価物を網羅するよう意図されている。

【0019】

当業者であれば、本発明の実施に使用され得る本明細書に記載のものと同様または同等の多くの方法及び材料を認識するであろう。本発明は、記載される方法及び材料には決して限定されない。

【0020】

別途定義されない限り、本明細書で使用される技術及び科学用語は、本発明が属する当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有し、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ ｅｔ ａｌ（１９９４）Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２ｎｄ Ｅｄ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ、及びＪａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋと一致する。

【0021】

定義
別途明記されない限り、本明細書で使用される以下の用語及び語句は、以下の意味を有するよう意図されている。

【0022】

商標名が本明細書で使用される場合、出願人は、商標名製品製剤、ジェネリック医薬品、及び商標名製品の医薬品活性成分（複数可）を独立して含むよう意図している。

【0023】

本明細書における「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二量体、多量体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を、それらが所望の生物学的活性を呈する限り、具体的に網羅する（Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ（２００３）Ｊｏｕｒ．ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １７０：４８５４−４８６１）。抗体は、マウス、ヒト、ヒト化、キメラであり得るか、または他の種由来であり得る。抗体は、特異的抗原を認識してそれに結合することができる免疫系によって生成されるタンパク質である （Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）Ｉｍｍｕｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。標的抗原は、一般に、複数の抗体上のＣＤＲによって認識されるエピトープとも呼ばれる多数の結合部位を有する。異なるエピトープに特異的に結合する抗体は、各々異なる構造を有する。したがって、１つの抗原は、２つ以上の対応する抗体を有し得る。抗体は、全長免疫グロブリン分子または全長免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、目的とする標的の抗原またはその一部に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含有する分子を含み、かかる標的は、自己免疫疾患に関連する自己免疫抗体を産生する癌細胞（複数可）を含むが、これらに限定されない。本明細書に開示される免疫グロブリンは、免疫グロブリン分子の任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）、またはサブクラスのものであり得る。免疫グロブリンは、任意の種由来であり得る。しかしながら、一態様では、免疫グロブリンは、ヒト、マウス、またはウサギ起源のものである。

【0024】

「抗体断片」は、全長抗体の一部、一般に、抗原結合またはその可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、及びＦｖ断片、ダイアボディ、直鎖抗体、ミニボディ（Ｏｌａｆｓｅｎ ｅｔ ａｌ（２００４）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ． Ｄｅｓｉｇｎ ＆ Ｓｅｌ． １７（４）：３１５−３２３）、Ｆａｂ発現ライブラリによって産生される断片、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、ＣＤＲ（相補性決定領域）、及び癌細胞抗原、ウイルス抗原、または微生物抗原に免疫特異的に結合する上記のうちのいずれかのエピトープ結合断片、一本鎖抗体分子、ならびに抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。

【0025】

本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団を含む個々の抗体は、少量で存在し得る天然に存在する変異の可能性を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一抗原部位に指向される。さらに、異なる決定基（エピトープ）に指向される異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、その抗原上の単一決定基に指向される。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、それらが他の抗体によって汚染されていない状態で合成され得るという点で有利である。「モノクローナル」という修飾句は、実質的に同種の抗体集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５によって最初に説明されたハイブリドーマ法によって作製することができるか、または組換えＤＮＡ法によって作製することができる（例えば、ＵＳ４８１６５６７、ＵＳ５８０７７１５を参照のこと）。モノクローナル抗体は、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７に記載の技法を使用してファージ抗体ライブラリから単離することもできる。

【0026】

本明細書におけるモノクローナル抗体は、特に、重鎖及び／または軽鎖の一部が特定の種由来の抗体または特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同である一方で、それらの鎖（複数可）の残りが別の種由来の抗体または別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同である「キメラ」抗体、ならびにそれらが所望の生物学的活性を呈する限り、かかる抗体の断片を含む（ＵＳ４８１６５６７、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５）。本明細書における目的とするキメラ抗体は、非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル、類人猿等）由来の可変ドメイン抗原結合配列及びヒト定常領域配列を含む「霊長類化」抗体を含む。

【0027】

本明細書における「インタクト抗体」とは、ＶＬ及びＶＨドメイン、ならびに軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含むものである。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列変異形であり得る。インタクト抗体は、抗体のＦｃ定常領域（天然配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列変異形Ｆｃ領域）に起因するそれらの生物学的活性を指す１つ以上の「エフェクター機能」を有し得る。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞毒性、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）、食作用、及びＢ細胞受容体及びＢＣＲ等の細胞表面受容体の下方調節が挙げられる。

【0028】

本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含有する免役グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異形Ｆｃ領域を含む。一実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端まで延びる。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在する場合も存在しない場合もある。本明細書で別途明記されない限り、Ｆｃ領域または定常領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載のＥＵ指数とも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。

【0029】

「フレームワーク」または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメイン、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（またはＶＬ）における以下の配列：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４に現れる。

【0030】

重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、インタクト抗体は、異なる「クラス」に割り当てられ得る。インタクト免疫グロブリン抗体には５つの主なクラス、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、「サブクラス」（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２にさらに分類され得る。抗体の異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造及び三次元配置が周知である。Ｉｇ形態は、ヒンジ修飾またはヒンジなしの形態を含む（Ｒｏｕｘ ｅｔ ａｌ（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：４０８３−４０９０、Ｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６７：７２４６−７２５６、ＵＳ２００５／００４８５７２、ＵＳ２００４／０２２９３１０）。

【0031】

「ヒト抗体」は、ヒト若しくはヒト細胞によって産生される抗体またはヒト抗体レパートリー若しくは他のヒト抗体コード配列を利用する非ヒト源由来の抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。

【0032】

「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免役グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を代表するフレームワークである。一般に、ヒト免役グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列の下位群から行われる。一般に、配列の下位群は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３にあるような下位群である。一実施形態では、ＶＬの場合、下位群は、上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．にあるような下位群カッパＩである。一実施形態では、ＶＨの場合、下位群は、上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．にあるような下位群ＩＩＩである。

【0033】

「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、それらのＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）のすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト抗体のそれらに対応し、それらのＦＲのすべてまたは実質的にすべてがヒト抗体のそれらに対応する。ヒト化抗体は、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を任意に含み得る。抗体、例えば非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化を経た抗体を指す。

【0034】

本明細書で使用される「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、配列が超可変性であり、及び／または構造的に規定されたループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインの領域の各々を指す。一般に、天然の四本鎖抗体は、６つのＨＶＲを含み、これらのうちの３つがＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）に存在し、３つがＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）に存在する。ＨＶＲは、一般に、超可変ループ由来及び／または「相補性決定領域」（ＣＤＲ）由来のアミノ酸残基を含み、後者が、最も高い配列可変性のものであり、及び／または抗原認識に関与する。例示の超可変ループは、アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）で生じる（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６：９０１−９１７（１９８７））。例示のＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３）は、Ｌ１のアミノ酸残基２４〜３４、Ｌ２の５０〜５６、Ｌ３の８９〜９７、Ｈ１の３１〜３５Ｂ、Ｈ２の５０〜６５、及びＨ３の９５〜１０２で生じる （Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））。ＶＨにおけるＣＤＲ１を除いて、ＣＤＲは、一般に超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲは、抗原と接触する残基である「特異性決定残基」または「ＳＤＲ」も含む。ＳＤＲは、短縮型（ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ）ＣＤＲ、またはａ−ＣＤＲと呼ばれるＣＤＲの領域内に含有される。例示のａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２、及びａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、Ｌ１のアミノ酸残基３１〜３４、Ｌ２の５０〜５５、Ｌ３の８９〜９６、Ｈ１の３１〜３５Ｂ、Ｈ２の５０〜５８、及びＨ３の９５〜１０２で生じる （Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ． Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照のこと）。別途示されない限り、可変ドメインにおけるＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．に従って本明細書で番号付けされる。

【0035】

「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体を抗原に結合することに関与する抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）は、一般に、同様の構造を有し、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む（例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ． Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６^ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７）を参照のこと）。単一のＶＨまたはＶＬドメインが抗原結合特異性を付与するには十分であり得る。さらに、抗原に結合する抗体由来のＶＨまたはＶＬドメインを使用して特定の抗原に結合する抗体を単離して、それぞれ、相補的ＶＬまたはＶＨドメインのライブラリをスクリーニングすることができる。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照されたい。

【0036】

本明細書で使用される「ベクター」という用語は、連結している別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。この用語には、自己複製核酸構造としてのベクター、ならびに導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。ある特定のベクターは、作動的に連結された核酸の発現を導くことができる。かかるベクターは、本明細書において「発現ベクター」と称される。

【0037】

「遊離システインアミノ酸」は、操作されて親抗体になっており、チオール官能基（−ＳＨ）を有し、かつ分子内または分子間ジスルフィド架橋として対合されていないシステインアミノ酸残基を指す。

【0038】

「リンカー」、「リンカー単位」、または「連結」とは、抗体を薬物部分に共有結合する原子の鎖を含む化学部分を意味する。様々な実施形態では、リンカーは、Ｌと特定される二価ラジカルである。

【0039】

置換基の数を示す場合、「１つ以上」という用語は、１つの置換基から可能な限り最も多い数の置換までの範囲、すなわち、置換基による１つの水素の置換から最大ですべての水素の置換を指す。「置換基」という用語は、親分子上の水素原子に置き換わる原子または原子群を意味する。「置換された」という用語は、特定の群が１つ以上の置換基を持つことを意味する。いずれかの群が複数の置換基を持つことができ、かつ様々な可能な置換基が提供される場合、置換基は、独立して選択され、同じである必要はない。「非置換の」という用語は、特定の群が置換基を持たないことを意味する。「任意に置換される」という用語は、特定の群が置換されないか、または独立して可能な置換基の群から選択される１つ以上の置換基で置換されることを意味する。置換基の数を示す場合、「１つ以上」という用語は、１つの置換基から可能な限り最も多い数の置換までの範囲、すなわち、置換基による１つの水素の置換から最大ですべての水素の置換を指す。

【0040】

本明細書で使用される「アルキル」という用語は、１〜１２個の炭素原子（Ｃ_１-Ｃ_１２）の任意の長さの飽和直鎖または分岐鎖一価炭化水素ラジカルを指し、アルキルラジカルは、以下に記載される１つ以上の置換基で独立して任意に置換され得る。別の実施形態では、アルキルラジカルは、１〜８個の炭素原子（Ｃ_１-Ｃ_８）、または１〜６個の炭素原子（Ｃ_１-Ｃ_６）である。アルキル基の例としては、メチル（Ｍｅ、−ＣＨ_３）、エチル（Ｅｔ、−ＣＨ_２ＣＨ_３）、１−プロピル（ｎ−Ｐｒ、ｎ−プロピル、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、２−プロピル（ｉ−Ｐｒ、ｉ−プロピル、−ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、１−ブチル（ｎ−Ｂｕ、ｎ−ブチル、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、２−メチル−１−プロピル（ｉ−Ｂｕ、ｉ−ブチル、−ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、２−ブチル（ｓ−Ｂｕ、ｓ−ブチル、−ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_３）、２−メチル−２−プロピル（ｔ−Ｂｕ、ｔ−ブチル、−Ｃ（ＣＨ_３）_３）、１−ペンチル（ｎ−ペンチル、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_２）、２−メチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、３−メチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、３−メチル−１−ブチル（−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、２−メチル−１−ブチル（−ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_３）、１−ヘキシル（−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、２−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、３−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）（ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３））、２−メチル−２−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、３−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_３）、４−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、３−メチル−３−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ_３）（ＣＨ_２ＣＨ_３）_２）、２−メチル−３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、２，３−ジメチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、３，３−ジメチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ_３）Ｃ（ＣＨ_３）_３、１−ヘプチル、１−オクチル等が挙げられるが、これらに限定されない。

【0041】

本明細書で使用される「アルキレン」という用語は、１〜１２個の炭素原子（Ｃ_１-Ｃ_１２）の任意の長さの飽和直鎖または分岐鎖二価炭化水素ラジカルを指し、アルキレンラジカルは、以下に記載される１つ以上の置換基で独立して任意に置換され得る。別の実施形態では、アルキレンラジカルは、１〜８個の炭素原子（Ｃ_１-Ｃ_８）、または１〜６個の炭素原子（Ｃ_１-Ｃ_６）である。アルキレン基の例としては、メチレン（−ＣＨ_２−）、エチレン（-ＣＨ_２ＣＨ_２-）、ｎ−プロピレン（-ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２-）、ｉ−プロピレン（-ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２-）、ｉ−ブチレン（-Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２-）等が挙げられるが、これらに限定されない。

【0042】

「アルケニル」という用語は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち、炭素−炭素、ｓｐ^２二重結合を有する２〜８個の炭素原子（Ｃ_２-Ｃ_８）の任意の長さの直鎖または分岐鎖一価炭化水素ラジカルを指し、アルケニルラジカルは、本明細書に記載の１つ以上の置換基で独立して任意に置換され得、「シス」及び「トランス」配向、またはあるいは「Ｅ」及び「Ｚ」配向を有するラジカルを含む。例としては、エチレニルまたはビニル（-ＣＨ=ＣＨ_２）、アリル（-ＣＨ_２ＣＨ=ＣＨ_２）、クロチル（-ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ=ＣＨ_２）等が挙げられるが、これらに限定されない。

【0043】

「アルケニレン」という用語は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち、炭素−炭素、ｓｐ^２二重結合を有する２〜８個の炭素原子（Ｃ_２-Ｃ_８）の任意の長さの直鎖または分岐鎖二価炭化水素ラジカルを指し、アルケニレンラジカルは、本明細書に記載の１つ以上の置換基で独立して任意に置換され得、「シス」及び「トランス」配向、またはあるいは「Ｅ」及び「Ｚ」配向を有するラジカルを含む。例としては、エチレニレンまたはビニレン（-ＣＨ=ＣＨ-）、アリレン（-ＣＨ_２ＣＨ=ＣＨ-）、クロチレン（-ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ=ＣＨ-）等が挙げられるが、これらに限定されない。

【0044】

「アルキニル」という用語は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち、炭素−炭素、ｓｐ三重結合を有する２〜８個の炭素原子（Ｃ_２〜Ｃ_８）の任意の長さの直鎖または分岐鎖一価炭化水素ラジカルを指し、アルキニルラジカルは、本明細書に記載の１つ以上の置換基で独立して任意に置換され得る。例としては、エチニル（−Ｃ≡ＣＨ）、プロピニル（プロパルギル、−ＣＨ_２Ｃ≡ＣＨ）等が挙げられるが、これらに限定されない。

【0045】

「アルキニレン」という用語は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち、炭素−炭素、ｓｐ三重結合を有する２〜８個の炭素原子（Ｃ_２〜Ｃ_８）の任意の長さの直鎖または分岐鎖二価炭化水素ラジカルを指し、アルキニレンラジカルは、本明細書に記載の１つ以上の置換基で独立して任意に置換され得る。例としては、エチニレン（−Ｃ≡Ｃ−）、プロピニレン（プロパルギレン、−ＣＨ_２Ｃ≡Ｃ−）、２−ブチニレン（−ＣＨ（ＣＨ_３）Ｃ≡Ｃ−）等が挙げられるが、これらに限定されない。

【0046】

「炭素環」、「カルボシクリル」、「炭素環式環」、及び「シクロアルキル」という用語は、単環式環として３〜１２個の炭素原子（Ｃ_３-Ｃ_１２）または二環式環として７〜１２個の炭素原子を有する、一価非芳香族飽和または部分不飽和環を指す。７〜１２個の原子を有する二環式炭素環は、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、若しくは［６，６］系として配置され得、９個若しくは１０個の環原子を有する二環式炭素環は、ビシクロ［５，６］若しくは［６，６］系として、またはビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ビシクロ［２．２．２］オクタン、及びビシクロ［３．２．２］ノナン等の架橋系として配置され得る。スピロ部分もこの定義の範囲内に含まれる。単環式炭素環の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１−シクロペンタ−１−エニル、１−シクロペンタ−２−エニル、１−シクロペンタ−３−エニル、シクロヘキシル、１−シクロヘキサ−１−エニル、１−シクロヘキサ−２−エニル、１−シクロヘキサ−３−エニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシル、シクロウンデシル、シクロドデシル等が挙げられるが、これらに限定されない。カルボシクリル基は、本明細書に記載の１つ以上の置換基で独立して任意に置換される。

【0047】

「アリール」とは、親芳香族環系の単一の炭素原子からの１個の水素原子の除去によって誘導される６〜２０個の炭素原子（Ｃ_６-Ｃ_２０）の一価芳香族炭化水素ラジカルを意味する。いくつかのアリール基が例示の構造において「Ａｒ」として表される。アリールは、飽和環、部分不飽和環、または芳香族炭素環式環に縮合された芳香族環を含む二環式ラジカルを含む。典型的なアリール基としては、ベンゼン（フェニル）、置換ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニル、インデニル、インダニル、１，２−ジヒドロナフタレン、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル等由来のラジカルが挙げられるが、これらに限定されない。アリール基は、本明細書に記載の１つ以上の置換基で独立して任意に置換される。

【0048】

「アリーレン」とは、親芳香族環系の２個の炭素原子からの２個の水素原子の除去によって誘導される６〜２０個の炭素原子（Ｃ_６-Ｃ_２０）の二価芳香族炭化水素ラジカルを意味する。いくつかのアリーレンが例示の構造において「Ａｒ」として表される。アリーレンは、飽和環、部分不飽和環、または芳香族炭素環式環に縮合された芳香族環を含む二環式ラジカルを含む。典型的なアリーレン群としては、ベンゼン（フェニレン）、置換ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニレン、インデニレン、インダニレン、１，２−ジヒドロナフタレン、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル等由来のラジカルが挙げられるが、これらに限定されない。アリーレン基は、本明細書に記載の１つ以上の置換基で任意に置換される。

【0049】

「複素環」、「ヘテロシクリル」、及び「複素環式環」という用語は、本明細書で同義に使用され、少なくとも１個の環原子が、窒素、酸素、リン、及び硫黄から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子がＣであり、そこで１個以上の環原子が以下に記載される１つ以上の置換基で独立して任意に置換される、３〜約２０個の環原子の飽和または部分不飽和（すなわち、その環内に１つ以上の二重結合及び／または三重結合を有する）炭素環式ラジカルを指す。複素環は、３〜７個の環員（２〜６個の炭素原子、及びＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜４個のベテロ原子）を有する単環、または７〜１０個の環員（４〜９個の炭素原子、及びＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜６個のヘテロ原子）を有する二環、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、または［６，６］系であり得る。複素環については、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ Ａ．；“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｍｏｄｅｒｎ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９６８）（特に、第１章、第３章、第４章、第６章、第７章、及び第９章）、“Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ”（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９５０年〜現在）（特に、第１３巻、第１４巻、第１６巻、第１９巻、及び第２８巻）、ならびにＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６０）８２：５５６６に記載されている。「ヘテロシクリル」は、複素環ラジカルが、飽和環、部分不飽和環、または芳香族炭素環式若しくは複素環式環と縮合されるラジカルも含む。複素環式環の例としては、モルホリン−４−イル、ピペリジン−１−イル、ピペラジニル、ピペラジン−４−イル−２−オン、ピペラジン−４−イル−３−オン、ピロリジン−１−イル、チオモルホリン−４−イル、Ｓ−ジオキソチオモルホリン−４−イル、アゾカン−１−イル、アゼチジン−１−イル、オクタヒドロピリド［１，２−ａ］ピラジン−２−イル、［１，４］ジアゼパン−１−イル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、チオキサニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ホモピペリジニル、オキセパニル、チエパニル、オキサゼピニル、ジアゼピニル、チアゼピニル、２−ピロリニル、３−ピロリニル、インドリニル、２Ｈ−ピラニル、４Ｈ−ピラニル、ジオキサニル、１，３−ジオキソラニル、ピラゾリニル、ジチアニル、ジチオラニル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロフラニル、ピラゾリジニルイミダゾリニル、イミダゾリジニル、３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサニル、３−アザビシクロ［４．１．０］ヘプタニル、アザビシクロ［２．２．２］ヘキサニル、３Ｈ−インドリルキノリジニル、及びＮ−ピリジルウレアが挙げられるが、これらに限定されない。スピロ部分もこの定義の範囲内に含まれる。２個の環原子がオキソ（＝Ｏ）部分で置換される複素環式基の例は、ピリミジノニル及び１，１−ジオキソ−チオモルホリニルである。本明細書における複素環基は、本明細書に記載の１つ以上の置換基で独立して任意に置換される。

【0050】

「ヘテロアリール」」という用語は、５、６、または７員環の一価芳香族ラジカルを指し、独立して窒素、酸素、及び硫黄から選択される１つ以上のヘテロ原子を含む５〜２０個の原子の縮合環系（それらのうちの少なくとも１つが芳香族である）を含む。ヘテロアリール基の例は、ピリジニル（例えば、２−ヒドロキシピリジニル等）、イミダゾリル、イミダゾピリジニル、１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール、［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン、ピリミジニル（例えば、４−ヒドロキシピリミジニル等）、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、インドリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、シノリニル、インダゾリル、インドリジニル、フタラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、イソインドリル、プテリジニル、プリニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、及びフロピリジニルである。ヘテロアリール基は、本明細書に記載の１つ以上の置換基で独立して任意に置換される。

【0051】

複素環またはヘテロアリール基は、可能である場合、炭素（炭素連鎖）結合または窒素（窒素連鎖）結合し得る。一例であって、限定するものではなく、炭素結合した複素環またはヘテロアリールは、ピリジンの２、３、４、５、若しくは６位、ピリダジンの３、４、５、若しくは６位、ピリミジンの２、４、５、若しくは６位、ピラジンの２、３、５、若しくは６位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール、若しくはテトラヒドロピロールの２、３、４、若しくは５位、オキサゾール、イミダゾール、若しくはチアゾールの２、４、若しくは５位、イソオキサゾール、ピラゾール、若しくはイソチアゾールの３、４、若しくは５位、アジリジンの２若しくは３位、アゼチジンの２、３、若しくは４位、キノリンの２、３、４、５、６、７、若しくは８位、またはイソキノリンの１、３、４、５、６、７、若しくは８位で結合する。

【0052】

一例であって、限定するものではなく、窒素結合複素環またはヘテロアリールは、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２−ピロリン、３−ピロリン、イミダゾール、イミダゾリドン、２−イミダゾリン、３−イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２−ピラゾリン、３−ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ−インダゾールの１位、イソインドール若しくはイソインドリンの２位、モルホリンの４位、及びカルバゾール若しくはβ−カルボリンの９位で結合する。

【0053】

「キラル」という用語は、鏡像パートナーの重ね合わせ不可能な特性を有する分子を指し、「アキラル」という用語は、それらの鏡像パートナーと重ね合わせ可能な分子を指す。

【0054】

「立体異性体」という用語は、同一の化学構成を有するが、空間内の原子または基の配置の点で異なる化合物を指す。

【0055】

「ジアステレオマー」とは、２つ以上のキラル性の中心を有し、かつそれらの分子が互いの鏡像でない立体異性体を指す。ジアステレオマーは、異なる物理的特性、例えば、融点、沸点、スペクトル特性、及び反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は、電気泳動法及びクロマトグラフィー等の高解像度分析手順下で分離され得る。

【0056】

「鏡像異性体」とは、互いに重ね合わせ不可能な鏡像である化合物の２つの立体異性体を指す。

【0057】

本明細書で使用される立体化学的定義及び変換は、一般に、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ（１９８４）ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、及びＥｌｉｅｌ，Ｅ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｎ，Ｓ．，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（１９９４）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに従う。多くの有機化合物は、光学活性形態で存在し、すなわち、それらは、平面偏光の平面を回転させる能力を有する。光学活性化合物を説明する際、接頭辞Ｄ及びＬ、またはＲ及びＳは、そのキラル中心（複数可）の周りの分子の絶対配置を意味するために使用される。接頭辞ｄ及びｌまたは（＋）及び（−）は、化合物による平面偏光の回転の兆候を指定するために用いられ、（−）またはｌは、化合物が左旋性であることを意味する。（＋）またはｄの接頭辞を有する化合物は、右旋性である。所与の化学構造について、これらの立体異性体は、それらが互いの鏡像であることを除いて同一である。特定の立体異性体は、鏡像異性体とも称され得、かかる異性体の混合物は、しばしば鏡像異性体混合物と呼ばれる。鏡像異性体の５０：５０混合物は、ラセミ混合物またはラセミ体と称され、それらは、化学反応またはプロセスにおいて立体選択または立体特異性が存在しない場合に生じ得る。「ラセミ混合物」及び「ラセミ体」という用語は、光学活性を欠く２つの鏡像異性体種の等モル混合物を指す。

【0058】

本明細書で使用される「薬学的に許容される塩」という語句は、抗体-薬物複合体(ADC)の薬学的に許容される有機または無機塩を指す。例示の塩としては、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、重酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩、及びパモ酸塩(すなわち、１,１’-メチレン-ビス-(２-ヒドロキシ-３-ナフトエ酸塩))が挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に許容される塩は、酢酸イオン、コハク酸イオン、または他の対イオン等の別の分子の包含を伴い得る。対イオンは、親化合物上の電荷を安定させる任意の有機または無機部分であり得る。さらに、薬学的に許容される塩は、その構造に２個以上の荷電原子を有し得る。複数の荷電原子が薬学的に許容される塩の一部である事例は、複数の対イオンを有し得る。それ故に、薬学的に許容される塩は、１個以上の荷電原子及び／または１つ以上の対イオンを有し得る。

【0059】

以下の略語が本明細書で使用され、示される定義を有する。ＢＭＥは、ベータ−メルカプトエタノールであり、Ｂｏｃは、Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）であり、ｃｉｔは、シトルリン（２−アミノ−５−ウレイドペンタン酸）であり、ＤＣＣは、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドであり、ＤＣＭは、ジクロロメタンであり、ＤＥＡは、ジエチルアミンであり、ＤＥＡＤは、ジエチルアゾジカルボキシレートであり、ＤＥＰＣは、ジエチルホスホリルシアニデートであり、ＤＩＡＤは、ジイソプロピルアゾジカルボキシレートであり、ＤＩＥＡは、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンであり、ＤＭＡは、ジメチルアセトアミドであり、ＤＭＡＰは、４−ジメチルアミノピリジンであり、ＤＭＥは、エチレングリコールジメチルエーテル（または１，２−ジメトキシエタン）であり、ＤＭＦは、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであり、ＤＭＳＯは、ジメチルスルホキシドであり、ＤＴＴは、ジチオスレイトールであり、ＥＤＣＩは、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩であり、ＥＥＤＱは、２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリンであり、ＥＳ−ＭＳは、エレクトロスプレー質量分析であり、ＥｔＯＡｃは、酢酸エチルであり、Ｆｍｏｃは、Ｎ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）であり、ｇｌｙは、グリシンであり、ＨＡＴＵは、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートであり、ＨＯＢｔは、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールであり、ＨＰＬＣは、高圧液体クロマトグラフィーであり、ｉｌｅは、イソロイシンであり、ｌｙｓは、リジンであり、ＭｅＣＮ（ＣＨ_３ＣＮ）は、アセトニトリルであり、ＭｅＯＨは、メタノールであり、Ｍｔｒは、４−アニシルジフェニルメチル（または４−メトキシトリチル）であり、ＮＨＳは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドであり、ＰＢＳは、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７）であり、ＰＥＧは、ポリエチレングリコールまたはエチレングリコール単位（−ＯＣＨ_２ＣＨ_２−）であり、Ｐｈは、フェニルであり、Ｐｎｐは、ｐ−ニトロフェニルであり、ＭＣは、６−マレイミドカプロイルであり、ｐｈｅは、Ｌ−フェニルアラニンであり、ＰｙＢｒｏｐは、ブロモトリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェートであり、ＳＥＣは、イズ排除クロマトグラフィーであり、Ｓｕは、スクシンイミドであり、ＴＦＡは、トリフルオロ酢酸であり、ＴＬＣは、薄層クロマトグラフィーであり、ＵＶは、紫外線であり、及びｖａｌは、バリンである。

【0060】

システイン操作抗体
本発明の化合物は、システイン操作抗体を含む抗体−薬物複合体を含み、そこで野生型または親抗体の１つ以上のアミノ酸がシステインアミノ酸（ＴＨＩＯＭＡＢ（商標））と置き換えられる。任意の形態の抗体がそのように操作され得る、すなわち変異させられ得る。例えば、親Ｆａｂ抗体断片が操作されて、システイン操作Ｆａｂを形成することができる。同様に、親モノクローナル抗体が操作されて、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を形成することができる。単一の部位変異が、Ｆａｂ抗体断片に単一の操作されたシステイン残基を生成する一方で、単一の部位変異が、ＩｇＧ抗体の二量体性質により、全長ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）に２つの操作されたシステイン残基を生成することに留意されたい。置き換えられた（「操作された」）システイン（Ｃｙｓ）残基を有する変異体は、新たに導入された操作されたシステインチオール基の反応性について評価される。チオール反応性値は、０〜１．０の範囲の相対的な数値用語であり、任意のシステイン操作抗体に対して測定することができる。本発明のシステイン操作抗体のチオール反応性値は、０．６〜１．０、０．７〜１．０、または０．８〜１．０の範囲である。

【0061】

システインアミノ酸は、抗体の重鎖（ＨＣ）または軽鎖（ＬＣ）における反応性部位で操作され得、鎖内ジスルフィド結合も分子間ジスルフィド結合も形成しない（Ｊｕｎｕｔｕｌａ，ｅｔ ａｌ．，２００８ｂ Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２６（８）：９２５−９３２、Ｄｏｒｎａｎ ｅｔ ａｌ（２００９）Ｂｌｏｏｄ １１４（１３）：２７２１−２７２９、ＵＳ７５２１５４１、ＵＳ７７２３４８５、ＷＯ２００９／０５２２４９、Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ（２０１２）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，３０（２）：１８４−１９１、Ｊｕｎｕｔｕｌａ ｅｔ ａｌ（２００８）Ｊｏｕｒ ｏｆ Ｉｍｍｕｎ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ３３２：４１−５２）。操作されたシステインチオールは、チオール反応性の求電子性ピリジルジスルフィド基を有するリンカー試薬または本発明のリンカー−薬物中間体と反応して、システイン操作抗体（ＴＨＩＯＭＡＢ（商標））を有するＡＤＣ及び薬物（Ｄ）部分を形成することができる。それ故に、薬物部分の位置を設計し、制御し、知ることができる。操作されたシステインチオール基が、典型的には、チオール反応性リンカー試薬またはリンカー−薬物中間体と高収率で反応するため、薬物負荷を制御することができる。重鎖または軽鎖上の単一の部位での置換によりシステインアミノ酸を導入するために抗体を操作することにより、対称的な抗体上に２つの新たなシステインがもたらされる。ほぼ２の薬物負荷が達成され、複合生成物ＡＤＣの均質性に近づき得る。

【0062】

本発明のシステイン操作抗体は、好ましくは、それらの野生型親抗体対応物の抗原結合能力を保持する。それ故に、システイン操作抗体は、抗原に好ましくは特異的に結合することができる。かかる抗原としては、例えば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、細胞表面受容体タンパク質及び他の細胞表面分子、膜貫通タンパク質、シグナル伝達タンパク質、細胞生存調節因子、細胞増殖調節因子、組織発達または分化に関連する（例えば、それに機能的に寄与することが知られているかまたは疑われている）分子、リンフォカイン、サイトカイン、細胞周期調節に関与する分子、脈管形成に関与する分子、及び血管形成に関連する（例えば、それに機能的に寄与することが知られているかまたは疑われている）分子が挙げられる。腫瘍関連抗原は、クラスター分化因子（すなわち、ＣＤタンパク質）であり得る。システイン操作抗体が結合することができる抗原は、上述のカテゴリーの１つのサブセットのメンバーであり得、そのカテゴリーの他のサブセット（複数可）は、（目的とする抗原に関して）はっきりと異なる特徴を有する他の分子／抗原を含む。

【0063】

システイン操作抗体は、鎖内ジスルフィド基の還元及び再酸化によるリンカー−薬物中間体との複合のために調製される（実施例１９）。

【0064】

癌の治療における本発明の抗体−薬物複合体において有用であり得るシステイン操作抗体としては、細胞表面受容体及び腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に対する抗体が挙げられるが、これに限定されない。腫瘍関連抗原が当該技術分野で既知であり、当該技術分野で周知の方法及び情報を使用した抗体の生成における使用のために調製され得る。癌診断及び療法に有効な細胞標的を見つけるために、研究者らは、１つ以上の正常な非癌性細胞と比較して１つ以上の特定の種類の癌細胞の表面上に特異的に発現する膜貫通、またはさもなければ、別様の腫瘍関連ポリペプチドを特定しようと努めている。多くの場合、かかる腫瘍関連ポリペプチドは、非癌性細胞の表面と比較して癌細胞の表面上により豊富に発現する。かかる腫瘍関連細胞表面抗原ポリペプチドの特定は、抗体に基づく療法により破壊について癌細胞を特異的に標的とする能力をもたらしている。

【0065】

腫瘍関連抗原ＴＡＡの例としては、以下に列記されるＴＡＡ（１）〜（５１）が挙げられるが、これらに限定されない。便宜上、それらの抗原に関する情報（それらはすべて当該技術分野で既知である）が以下に列記されており、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）の核酸及びタンパク質配列同一性協定に従う、名称、代替名、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号、及び主な参考文献（複数可）を含む。ＴＡＡ（１）〜（５３）に対応する核酸及びタンパク質配列は、ＧｅｎＢａｎｋ等の公開データベースから入手可能である。抗体によって標的とされる腫瘍関連抗原は、引用される参考文献で特定される配列に対して少なくとも約７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の配列同一性を有するか、または引用される参考文献で見つけられる配列を有するＴＡＡと実質的に同じ生物学的特性または特徴を呈するすべてのアミノ酸配列変異形及びアイソフォームを含む。例えば、変異形配列を有するＴＡＡは、一般に、列記される対応する配列を有するＴＡＡに特異的に結合する抗体に特異的に結合することができる。本明細書で具体的に列挙される参考文献における配列及び開示は、参照により明示的に組み込まれる。
腫瘍関連抗原：
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形態形成タンパク質受容体ＩＢ型、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＮＭ＿００１２０３）
ｔｅｎ Ｄｉｊｋｅ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６４（５１５５）：１０１−１０４（１９９４），Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １４（１１）：１３７７−１３８２（１９９７））、ＷＯ２００４０６３３６２（請求項２）、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＵＳ２００３１３４７９０−Ａ１（３８〜３９貢）、ＷＯ２００２１０２２３５（請求項１３、２９６貢）、ＷＯ２００３０５５４４３（９１〜９２貢）、ＷＯ２００２９９１２２（実施例２、５２８〜５３０貢）、ＷＯ２００３０２９４２１（請求項６）、ＷＯ２００３０２４３９２（請求項２、図１１２）、ＷＯ２００２９８３５８（請求項１、１８３貢）、ＷＯ２００２５４９４０（１００〜１０１貢）、ＷＯ２００２５９３７７（３４９〜３５０貢）、ＷＯ２００２３０２６８（請求項２７、３７６貢）、ＷＯ２００１４８２０４（実施例、図４）
ＮＰ＿００１１９４骨形態形成タンパク質受容体、ＩＢ型／ｐｉｄ＝ＮＰ＿００１１９４．１−
相互参照：ＭＩＭ：６０３２４８、ＮＰ＿００１１９４．１、ＡＹ０６５９９４
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＮＭ＿００３４８６）
Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ． ２５５（２），２８３−２８８（１９９９），Ｎａｔｕｒｅ ３９５（６６９９）：２８８−２９１（１９９８）、Ｇａｕｇｉｔｓｃｈ，Ｈ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ． ２６７（１６）：１１２６７−１１２７３）、ＷＯ２００４０４８９３８（実施例２）、ＷＯ２００４０３２８４２（実施例ＩＶ）、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００２７８５２４（実施例２）、ＷＯ２００２９９０７４（請求項１９、１２７〜１２９貢）、ＷＯ２００２８６４４３（請求項２７、２２２貢、３９３貢）、ＷＯ２００３００３９０６（請求項１０、２９３貢）、ＷＯ２００２６４７９８（請求項３３、９３〜９５貢）、ＷＯ２０００１４２２８（請求項５、１３３〜１３６貢）、ＵＳ２００３２２４４５４（図３）、ＷＯ２００３０２５１３８（請求項１２、１５０貢）、
ＮＰ＿００３４７７溶質担体ファミリー７（カチオン性アミノ酸輸送体、ｙ＋
系）、メンバー５／ｐｉｄ＝ＮＰ＿００３４７７．３−人類
相互参照：ＭＩＭ：６００１８２、ＮＰ＿００３４７７．３、ＮＭ＿０１５９２３、ＮＭ＿００３４８６＿１
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺６膜貫通上皮抗原、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＮＭ＿０１２４４９）
Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１（１５），５８５７−５８６０（２００１），Ｈｕｂｅｒｔ，Ｒ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ（１９９９）Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．９６（２５）：１４５２３−１４５２８）、ＷＯ２００４０６５５７７（請求項６）、ＷＯ２００４０２７０４９（図１Ｌ）、ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）、ＷＯ２００４０１６２２５（請求項２）、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＵＳ２００３１５７０８９（実施例５）、ＵＳ２００３１８５８３０（実施例５）、ＵＳ２００３０６４３９７（図２）、ＷＯ２００２８９７４７（実施例５、６１８〜６１９貢）、ＷＯ２００３０２２９９５（実施例９、図１３Ａ、実施例５３、１７３貢、実施例２、図２Ａ）、
ＮＰ＿０３６５８１前立腺６膜貫通上皮抗原
相互参照：ＭＩＭ：６０４４１５、ＮＰ＿０３６５８１．１、ＮＭ＿０１２４４９＿１
（４）０７７２Ｐ（ＣＡ１２５、ＭＵＣ１６、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＡＦ３６１４８６）
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（２９）：２７３７１−２７３７５（２００１））、ＷＯ２００４０４５５５３（請求項１４）、ＷＯ２００２９２８３６（請求項６、図１２）、ＷＯ２００２８３８６６（請求項１５、１１６〜１２１貢）、ＵＳ２００３１２４１４０（実施例１６）、ＵＳ７９８９５９ 相互参照：ＧＩ：３４５０１４６７、ＡＡＫ７４１２０．３、ＡＦ３６１４８６＿１
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＮＭ＿００５８２３）Ｙａｍａｇｕｃｈｉ、Ｎ．，ｅｔ ａｌ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ． ２６９（２），８０５−８０８（１９９４），Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．９６（２０）：１１５３１−１１５３６（１９９９）、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９３（１）：１３６−１４０（１９９６）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０（３７）：２１９８４−２１９９０（１９９５））、ＷＯ２００３１０１２８３（請求項１４）、（ＷＯ２００２１０２２３５（請求項１３、２８７〜２８８貢）、ＷＯ２００２１０１０７５（請求項４、３０８〜３０９貢）、ＷＯ２００２７１９２８（３２０〜３２１貢）、ＷＯ９４１０３１２（５２〜５７貢）、相互参照：ＭＩＭ：６０１０５１、ＮＰ＿００５８１４．２、ＮＭ＿００５８２３＿１
（６）Ｎａｐｉ３ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質担体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＮＭ＿００６４２４）
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（２２）：１９６６５−１９６７２（２００２），Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ６２（２）：２８１−２８４（１９９９），Ｆｅｉｌｄ，Ｊ．Ａ．，ｅｔ ａｌ（１９９９）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５８（３）：５７８−５８２）、ＷＯ２００４０２２７７８（請求項２）、ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）、ＷＯ２００２１０２２３５（請求項１３、３２６貢）、ＥＰ８７５５６９（請求項１、１７〜１９貢）、ＷＯ２００１５７１８８（請求項２０、３２９貢）、ＷＯ２００４０３２８４２（実施例ＩＶ）、ＷＯ２００１７５１７７（請求項２４、１３９〜１４０貢）、
相互参照：ＭＩＭ：６０４２１７、ＮＰ＿００６４１５．１、ＮＭ＿００６４２４＿１
（７）Ｓｅｍａ ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７回トロンボスポンジン反復（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）及び短細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＡＢ０４０８７８）
Ｎａｇａｓｅ Ｔ．，ｅｔ ａｌ（２０００）ＤＮＡ Ｒｅｓ．７（２）：１４３−１５０）、ＷＯ２００４０００９９７（請求項１）、ＷＯ２００３００３９８４（請求項１）、ＷＯ２００２０６３３９（請求項１、５０貢）、ＷＯ２００１８８１３３（請求項１、４１〜４３貢、４８〜５８貢）、ＷＯ２００３０５４１５２（請求項２０）、ＷＯ２００３１０１４００（請求項１１）、
受託：Ｑ９Ｐ２８３、ＥＭＢＬ、ＡＢ０４０８７８、ＢＡＡ９５９６９．１． Ｇｅｎｅｗ、ＨＧＮＣ：１０７３７、
（８）ＰＳＣＡ ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２遺伝子、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＡＹ３５８６２８）、Ｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ（２００２）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６２：２５４６−２５５３、ＵＳ２００３１２９１９２（請求項２）、ＵＳ２００４０４４１８０（請求項１２）、ＵＳ２００４０４４１７９（請求項１１）、ＵＳ２００３０９６９６１（請求項１１）、ＵＳ２００３２３２０５６（実施例５）、ＷＯ２００３１０５７５８（請求項１２）、ＵＳ２００３２０６９１８（実施例５）、ＥＰ１３４７０４６（請求項１）、ＷＯ２００３０２５１４８（請求項２０）、
相互参照：ＧＩ：３７１８２３７８、ＡＡＱ８８９９１．１、ＡＹ３５８６２８＿１
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＡＹ２７５４６３）、
Ｎａｋａｍｕｔａ Ｍ．，ｅｔ ａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７７，３４−３９，１９９１、Ｏｇａｗａ Ｙ．，ｅｔ ａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７８，２４８−２５５，１９９１、Ａｒａｉ Ｈ．，ｅｔ ａｌ Ｊｐｎ． Ｃｉｒｃ． Ｊ．５６，１３０３−１３０７，１９９２、Ａｒａｉ Ｈ．，ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ． ２６８，３４６３−３４７０，１９９３、Ｓａｋａｍｏｔｏ Ａ．，Ｙａｎａｇｉｓａｗａ Ｍ．，ｅｔ ａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ． １７８，６５６−６６３，１９９１、Ｅｌｓｈｏｕｒｂａｇｙ Ｎ．Ａ．，ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．２６８，３８７３−３８７９，１９９３、Ｈａｅｎｄｌｅｒ Ｂ．，ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０，ｓ１−Ｓ４，１９９２、Ｔｓｕｔｓｕｍｉ Ｍ．，ｅｔ ａｌ Ｇｅｎｅ ２２８，４３−４９，１９９９、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ Ｒ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９，１６８９９−１６９０３，２００２、Ｂｏｕｒｇｅｏｉｓ Ｃ．，ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ． Ｍｅｔａｂ． ８２，３１１６−３１２３，１９９７、Ｏｋａｍｏｔｏ Ｙ．，ｅｔ ａｌ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ． ２７２，２１５８９−２１５９６，１９９７、Ｖｅｒｈｅｉｊ Ｊ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ Ａｍ． Ｊ．Ｍｅｄ． Ｇｅｎｅｔ．０８，２２３−２２５、２００２、Ｈｏｆｓｔｒａ Ｒ．Ｍ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ Ｅｕｒ． Ｊ．Ｈｕｍ． Ｇｅｎｅｔ． ５，１８０−１８５，１９９７、Ｐｕｆｆｅｎｂｅｒｇｅｒ Ｅ．Ｇ．，ｅｔ ａｌ Ｃｅｌｌ ７９，１２５７−１２６６，１９９４、Ａｔｔｉｅ Ｔ．，ｅｔ ａｌ，Ｈｕｍ． Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．４，２４０７−２４０９，１９９５、Ａｕｒｉｃｃｈｉｏ Ａ．，ｅｔ ａｌ Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．５：３５１−３５４，１９９６、Ａｍｉｅｌ Ｊ．，ｅｔ ａｌ Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．５，３５５−３５７，１９９６、Ｈｏｆｓｔｒａ Ｒ．Ｍ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１２，４４５−４４７，１９９６、Ｓｖｅｎｓｓｏｎ Ｐ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ． １０３，１４５−１４８，１９９８、Ｆｕｃｈｓ Ｓ．，ｅｔ ａｌ Ｍｏｌ． Ｍｅｄ． ７，１１５−１２４，２００１、Ｐｉｎｇａｕｌｔ Ｖ．，ｅｔ ａｌ（２００２）Ｈｕｍ． Ｇｅｎｅｔ． １１１，１９８−２０６、ＷＯ２００４０４５５１６（請求項１）、ＷＯ２００４０４８９３８（実施例２）、ＷＯ２００４０４００００（請求項１５１）、ＷＯ２００３０８７７６８（請求項１）、ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００２６１０８７（図１）、ＷＯ２００３０１６４９４（図６）、ＷＯ２００３０２５１３８（請求項１２、１４４貢）、ＷＯ２００１９８３５１（請求項１、１２４〜１２５貢）、ＥＰ５２２８６８（請求項８、図２）、ＷＯ２００１７７１７２（請求項１、２９７〜２９９貢）、ＵＳ２００３１０９６７６、ＵＳ６５１８４０４（図３）、ＵＳ５７７３２２３（請求項１ａ、第３１〜３４欄）、ＷＯ２００４００１００４
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＮＭ＿０１７７６３）、
ＷＯ２００３１０４２７５（請求項１）、ＷＯ２００４０４６３４２（実施例２）、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＷＯ２００３０８３０７４（請求項１４、６１貢）、ＷＯ２００３０１８６２１（請求項１）、ＷＯ２００３０２４３９２（請求項２、図９３）、ＷＯ２００１６６６８９（実施例６）、
相互参照：ＬｏｃｕｓＩＤ：５４８９４、ＮＰ＿０６０２３３．２、ＮＭ＿０１７７６３＿１
（１１） ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ−１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺癌関連遺伝子１、前立腺癌関連タンパク質１、前立腺６膜貫通上皮抗原２、６膜貫通前立腺タンパク質、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＡＦ４５５１３８）
Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．８２（１１）：１５７３−１５８２（２００２））、ＷＯ２００３０８７３０６、ＵＳ２００３０６４３９７（請求項１、図１）、ＷＯ２００２７２５９６（請求項１３、５４〜５５貢）、ＷＯ２００１７２９６２（請求項１、図４Ｂ）、ＷＯ２００３１０４２７０（請求項１１）、ＷＯ２００３１０４２７０（請求項１６）、ＵＳ２００４００５５９８（請求項２２）、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＵＳ２００３０６０６１２（請求項１２、図１０）、ＷＯ２００２２６８２２（請求項２３、図２）、ＷＯ２００２１６４２９（請求項１２、図１０）、
相互参照：ＧＩ：２２６５５４８８、ＡＡＮ０４０８０．１、ＡＦ４５５１３８＿１
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＮＭ＿０１７６３６）
Ｘｕ，Ｘ．Ｚ．，ｅｔ ａｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９８（１９）：１０６９２−１０６９７（２００１），Ｃｅｌｌ １０９（３）：３９７−４０７（２００２），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８（３３）：３０８１３−３０８２０（２００３））、ＵＳ２００３１４３５５７（請求項４）、ＷＯ２０００４０６１４（請求項１４、１００〜１０３貢）、ＷＯ２００２１０３８２（請求項１、図９Ａ）、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＷＯ２００２３０２６８（請求項２７、３９１貢）、ＵＳ２００３２１９８０６（請求項４）、ＷＯ２００１６２７９４（請求項１４、図１Ａ〜Ｄ）、
相互参照：ＭＩＭ：６０６９３６、ＮＰ＿０６０１０６．２、ＮＭ＿０１７６３６＿１
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形癌腫由来成長因子、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＮＰ＿００３２０３またはＮＭ＿００３２１２）
Ｃｉｃｃｏｄｉｃｏｌａ，Ａ．，ｅｔ ａｌ ＥＭＢＯ Ｊ．８（７）：１９８７−１９９１（１９８９），Ａｍ． Ｊ．Ｈｕｍ． Ｇｅｎｅｔ． ４９（３）：５５５−５６５（１９９１））、ＵＳ２００３２２４４１１（請求項１）、ＷＯ２００３０８３０４１（実施例１）、ＷＯ２００３０３４９８４（請求項１２）、ＷＯ２００２８８１７０（請求項２、５２〜５３貢）、ＷＯ２００３０２４３９２（請求項２、図５８）、ＷＯ２００２１６４１３（請求項１、９４〜９５貢、１０５貢）、ＷＯ２００２２２８０８（請求項２、図１）、ＵＳ５８５４３９９（実施例２、第１７〜１８欄）、ＵＳ５７９２６１６（図２）、
相互参照：ＭＩＭ：１８７３９５、ＮＰ＿００３２０３．１、ＮＭ＿００３２１２＿１
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタインバーウイルス受容体）またはＨｓ．７３７９２、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 Ｍ２６００４）
Ｆｕｊｉｓａｋｕ ｅｔ ａｌ（１９８９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４（４）：２１１８−２１２５）、Ｗｅｉｓ Ｊ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７，１０４７−１０６６，１９８８、Ｍｏｏｒｅ Ｍ．，ｅｔ ａｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８４，９１９４−９１９８，１９８７、Ｂａｒｅｌ Ｍ．，ｅｔ ａｌ Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３５，１０２５−１０３１，１９９８、Ｗｅｉｓ Ｊ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８３，５６３９−５６４３，１９８６、Ｓｉｎｈａ Ｓ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５０，５３１１−５３２０、ＷＯ２００４０４５５２０（実施例４）、ＵＳ２００４００５５３８（実施例１）、ＷＯ２００３０６２４０１（請求項９）、ＷＯ２００４０４５５２０（実施例４）、ＷＯ９１０２５３６（図９．１〜９．９）、ＷＯ２００４０２０５９５（請求項１）、
受託：Ｐ２００２３、Ｑ１３８６６、Ｑ１４２１２、ＥＭＢＬ、Ｍ２６００４、ＡＡＡ３５７８６．１．
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、ＩＧｂ（免疫グロブリン関連ベータ）、Ｂ２９、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＮＭ＿０００６２６または１１０３８６７４）
Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（２００３）１００（７）：４１２６−４１３１，Ｂｌｏｏｄ（２００２）１００（９）：３０６８−３０７６，Ｍｕｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ （１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（６）：１６２１−１６２５）、ＷＯ２００４０１６２２５（請求項２、図１４０）、ＷＯ２００３０８７７６８、ＵＳ２００４１０１８７４（請求項１、１０２貢）、ＷＯ２００３０６２４０１（請求項９）、ＷＯ２００２７８５２４（実施例２）、ＵＳ２００２１５０５７３（請求項５、１５貢）、ＵＳ５６４４０３３、ＷＯ２００３０４８２０２（請求項１、３０６及び３０９貢）、ＷＯ９９／５５８６５８、ＵＳ６５３４４８２（請求項１３、図１７Ａ／Ｂ）、ＷＯ２０００５５３５１（請求項１１、１１４５〜１１４６貢）、
相互参照：ＭＩＭ：１４７２４５、ＮＰ＿０００６１７．１、ＮＭ＿０００６２６＿１
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＮＭ＿０３０７６４、ＡＹ３５８１３０）
Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１３（１０）：２２６５−２２７０（２００３），Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ５４（２）：８７−９５（２００２），Ｂｌｏｏｄ ９９（８）：２６６２−２６６９（２００２），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９８（１７）：９７７２−９７７７（２００１），Ｘｕ，Ｍ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ（２００１）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ． ２８０（３）：７６８−７７５、ＷＯ２００４０１６２２５（請求項２）、ＷＯ２００３０７７８３６、ＷＯ２００１３８４９０（請求項５、図１８Ｄ−１〜１８Ｄ−２）、ＷＯ２００３０９７８０３（請求項１２）、ＷＯ２００３０８９６２４（請求項２５）、
相互参照：ＭＩＭ：６０６５０９、ＮＰ＿１１０３９１．２、ＮＭ＿０３０７６４＿１
（１７）ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 Ｍ１１７３０）
Ｃｏｕｓｓｅｎｓ Ｌ．，ｅｔ ａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８５）２３０（４７３０）：１１３２−１１３９）、Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｔ．，ｅｔ ａｌ Ｎａｔｕｒｅ ３１９，２３０−２３４，１９８６、Ｓｅｍｂａ Ｋ．，ｅｔ ａｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２，６４９７−６５０１，１９８５、Ｓｗｉｅｒｃｚ Ｊ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１６５，８６９−８８０，２００４、Ｋｕｈｎｓ Ｊ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ． ２７４，３６４２２−３６４２７，１９９９、Ｃｈｏ Ｈ．−Ｓ．，ｅｔ ａｌ Ｎａｔｕｒｅ ４２１，７５６−７６０，２００３、Ｅｈｓａｎｉ Ａ．，ｅｔ ａｌ（１９９３）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １５，４２６−４２９、ＷＯ２００４０４８９３８（実施例２）、ＷＯ２００４０２７０４９（図１Ｉ）、ＷＯ２００４００９６２２、ＷＯ２００３０８１２１０、ＷＯ２００３０８９９０４（請求項９）、ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）、ＵＳ２００３１１８５９２、ＷＯ２００３００８５３７（請求項１）、ＷＯ２００３０５５４３９（請求項２９、図１Ａ〜Ｂ）、ＷＯ２００３０２５２２８（請求項３７、図５Ｃ）、ＷＯ２００２２２６３６（実施例１３、９５〜１０７貢）、ＷＯ２００２１２３４１（請求項６８、図７）、ＷＯ２００２１３８４７（７１〜７４貢）、ＷＯ２００２１４５０３（１１４〜１１７貢）、ＷＯ２００１５３４６３（請求項２、４１〜４６貢）、ＷＯ２００１４１７８７（１５貢）、ＷＯ２０００４４８９９（請求項５２、図７）、ＷＯ２０００２０５７９（請求項３、図２）、ＵＳ５８６９４４５（請求項３、第３１〜３８欄）、ＷＯ９６３０５１４（請求項２、５６〜６１貢）、ＥＰ１４３９３９３（請求項７）、ＷＯ２００４０４３３６１（請求項７）、ＷＯ２００４０２２７０９、ＷＯ２００１００２４４（実施例３、図４）、
受託：Ｐ０４６２６、ＥＭＢＬ、Ｍ１１７６７、ＡＡＡ３５８０８．１． ＥＭＢＬ、Ｍ１１７６１、ＡＡＡ３５８０８．１．
（１８）ＮＣＡ（ＣＥＡＣＡＭ６、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 Ｍ１８７２８）、
Ｂａｒｎｅｔｔ Ｔ．，ｅｔ ａｌ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ３，５９−６６，１９８８、Ｔａｗａｒａｇｉ Ｙ．，ｅｔ ａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５０，８９−９６，１９８８、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ Ｒ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９：１６８９９−１６９０３，２００２、ＷＯ２００４０６３７０９、ＥＰ１４３９３９３（請求項７）、ＷＯ２００４０４４１７８（実施例４）、ＷＯ２００４０３１２３８、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＷＯ２００２７８５２４（実施例２）、ＷＯ２００２８６４４３（請求項２７、４２７貢）、ＷＯ２００２６０３１７（請求項２）、
受託：Ｐ４０１９９、Ｑ１４９２０、ＥＭＢＬ、Ｍ２９５４１、ＡＡＡ５９９１５．１．ＭＢＬ、Ｍ１８７２８
（１９）ＭＤＰ（ＤＰＥＰ１、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＢＣ０１７０２３）
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９（２６）：１６８９９−１６９０３（２００２））、ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００２６４７９８（請求項３３、８５〜８７貢）、ＪＰ０５００３７９０（図６〜８）、ＷＯ９９４６２８４（図９）、
相互参照：ＭＩＭ：１７９７８０、ＡＡＨ１７０２３．１、ＢＣ０１７０２３＿１
（２０）ＩＬ２０Ｒα（ＩＬ２０Ｒａ、ＺＣＹＴＯＲ７、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＡＦ１８４９７１）、
Ｃｌａｒｋ Ｈ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１３，２２６５−２２７０，２００３、Ｍｕｎｇａｌｌ Ａ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ Ｎａｔｕｒｅ ４２５，８０５−８１１，２００３、Ｂｌｕｍｂｅｒｇ Ｈ．，ｅｔ ａｌ Ｃｅｌｌ １０４，９−１９，２００１、Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ Ｌ．，ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７，３５４５−３５４９，２００１、Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋ Ｊ．，ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７，４７５１７−４７５２３，２００２、Ｐｌｅｔｎｅｖ Ｓ．，ｅｔ ａｌ（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４２：１２６１７−１２６２４、Ｓｈｅｉｋｈ Ｆ．，ｅｔ ａｌ（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． １７２，２００６−２０１０、ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）、ＵＳ２００４００５３２０（実施例５）、ＷＯ２００３０２９２６２（７４〜７５貢）、ＷＯ２００３００２７１７（請求項２、６３貢）、ＷＯ２００２２２１５３（４５〜４７貢）、ＵＳ２００２０４２３６６（２０〜２１貢）、ＷＯ２００１４６２６１（５７〜５９貢）、ＷＯ２００１４６２３２（６３〜６５貢）、ＷＯ９８３７１９３（請求項１、５５〜５９貢）、
受託：Ｑ９ＵＨＦ４、Ｑ６ＵＷＡ９、Ｑ９６ＳＨ８、ＥＭＢＬ、ＡＦ１８４９７１、ＡＡＦ０１３２０．１．
（２１）ブレビカン（ＢＣＡＮ、ＢＥＨＡＢ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＡＦ２２９０５３）
Ｇａｒｙ Ｓ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ Ｇｅｎｅ ２５６，１３９−１４７，２０００、Ｃｌａｒｋ Ｈ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１３，２２６５−２２７０，２００３、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ Ｒ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９，１６８９９−１６９０３，２００２、ＵＳ２００３１８６３７２（請求項１１）、ＵＳ２００３１８６３７３（請求項１１）、ＵＳ２００３１１９１３１（請求項１、図５２）、ＵＳ２００３１１９１２２（請求項１、図５２）、ＵＳ２００３１１９１２６（請求項１）、ＵＳ２００３１１９１２１（請求項１、図５２）、ＵＳ２００３１１９１２９（請求項１）、ＵＳ２００３１１９１３０（請求項１）、ＵＳ２００３１１９１２８（請求項１、図５２）、ＵＳ２００３１１９１２５（請求項１）、ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００２０２６３４（請求項１）、
（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ（ＤＲＴ、ＥＲＫ、Ｈｅｋ５、ＥＰＨＴ３、Ｔｙｒｏ５、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＮＭ＿００４４４２）
Ｃｈａｎ，Ｊ．ａｎｄ Ｗａｔｔ，Ｖ．Ｍ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ６（６），１０５７−１０６１（１９９１）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １０（５）：８９７−９０５（１９９５），Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． ２１：３０９−３４５（１９９８），Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｃｙｔｏｌ．１９６：１７７−２４４（２０００））、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＷＯ２０００５３２１６（請求項１、４１貢）、ＷＯ２００４０６５５７６（請求項１）、ＷＯ２００４０２０５８３（請求項９）、ＷＯ２００３００４５２９（１２８〜１３２貢）、ＷＯ２０００５３２１６（請求項１、４２貢）、
相互参照：ＭＩＭ：６００９９７、ＮＰ＿００４４３３．２、ＮＭ＿００４４４２＿１
（２３）ＡＳＬＧ６５９（Ｂ７ｈ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＡＸ０９２３２８）
ＵＳ２００４０１０１８９９（請求項２）、ＷＯ２００３１０４３９９（請求項１１）、ＷＯ２００４０００２２１（図３）、ＵＳ２００３１６５５０４（請求項１）、ＵＳ２００３１２４１４０（実施例２）、ＵＳ２００３０６５１４３（図６０）、ＷＯ２００２１０２２３５（請求項１３、２９９貢）、ＵＳ２００３０９１５８０（実施例２）、ＷＯ２００２１０１８７（請求項６、図１０）、ＷＯ２００１９４６４１（請求項１２、図７ｂ）、ＷＯ２００２０２６２４（請求項１３、図１Ａ〜１Ｂ）、ＵＳ２００２０３４７４９（請求項５４、４５〜４６貢）、ＷＯ２００２０６３１７（実施例２、３２０〜３２１貢、請求項３４、３２１〜３２２貢）、ＷＯ２００２７１９２８（４６８〜４６９貢）、ＷＯ２００２０２５８７（実施例１、図１）、ＷＯ２００１４０２６９（実施例３、１９０〜１９２貢）、ＷＯ２０００３６１０７（実施例２、２０５〜２０７貢）、ＷＯ２００４０５３０７９（請求項１２）、ＷＯ２００３００４９８９（請求項１）、ＷＯ２００２７１９２８（２３３〜２３４貢、４５２〜４５３貢）、ＷＯ０１１６３１８、
（２４）ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原前駆体、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＡＪ２９７４３６）
Ｒｅｉｔｅｒ Ｒ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．９５，１７３５−１７４０，１９９８、Ｇｕ Ｚ．，ｅｔ ａｌ Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １９，１２８８−１２９６，２０００、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ． （２０００）２７５（３）：７８３−７８８、ＷＯ２００４０２２７０９、ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）、ＵＳ２００４０１８５５３（請求項１７）、ＷＯ２００３００８５３７（請求項１）、ＷＯ２００２８１６４６（請求項１、１６４貢）、ＷＯ２００３００３９０６（請求項１０、２８８貢）、ＷＯ２００１４０３０９（実施例１、図１７）、ＵＳ２００１０５５７５１（実施例１、図１ｂ）、ＷＯ２０００３２７５２（請求項１８、図１）、ＷＯ９８５１８０５（請求項１７、９７貢）、ＷＯ９８５１８２４（請求項１０、９４貢）、ＷＯ９８４０４０３（請求項２、図１Ｂ）、
受託：Ｏ４３６５３、ＥＭＢＬ、ＡＦ０４３４９８、ＡＡＣ３９６０７．１．
（２５）ＧＥＤＡ（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＡＹ２６０７６３）、
ＡＡＰ１４９５４脂肪腫ＨＭＧＩＣ融合パートナー様タンパク質／ｐｉｄ＝ＡＡＰ１４９５４．１−人類
種：人類（ヒト）
ＷＯ２００３０５４１５２（請求項２０）、ＷＯ２００３０００８４２（請求項１）、ＷＯ２００３０２３０１３（実施例３、請求項２０）、ＵＳ２００３１９４７０４（請求項４５）、
相互参照：ＧＩ：３０１０２４４９、ＡＡＰ１４９５４．１、ＡＹ２６０７６３＿１
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＡＦ１１６４５６）、ＢＡＦＦ受容体／ｐｉｄ＝ＮＰ＿４４３１７７．１−人類
Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９３（５５３７），２１０８−２１１１（２００１）、ＷＯ２００４０５８３０９、ＷＯ２００４０１１６１１、ＷＯ２００３０４５４２２（実施例、３２〜３３貢）、ＷＯ２００３０１４２９４（請求項３５、図６Ｂ）、ＷＯ２００３０３５８４６（請求項７０、６１５〜６１６貢）、ＷＯ２００２９４８５２（第１３６〜１３７欄）、ＷＯ２００２３８７６６（請求項３、１３３貢）、ＷＯ２００２２４９０９（実施例３、図３）、
相互参照：ＭＩＭ：６０６２６９、ＮＰ＿４４３１７７．１、ＮＭ＿０５２９４５＿１、ＡＦ１３２６００
（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォーム、ＢＬ−ＣＡＭ、Ｌｙｂ−８、Ｌｙｂ８、ＳＩＧＬＥＣ−２、ＦＬＪ２２８１４、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＡＫ０２６４６７）、
Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １７３：１３７−１４６、ＷＯ２００３０７２０３６（請求項１、図１）、
相互参照：ＭＩＭ：１０７２６６、ＮＰ＿００１７６２．１、ＮＭ＿００１７７１＿１
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９α、免疫グロブリン関連アルファ、Ｉｇベータ（ＣＤ７９Ｂ）と共有的に相互作用し、Ｉｇ Ｍ分子を有する表面上に複合体を形成し、Ｂ細胞分化に関与するシグナルを伝達するＢ細胞特異的タンパク質）、ｐＩ：４．８４、ＭＷ：２５０２８ ＴＭ：２［Ｐ］遺伝子染色体：１９ｑ１３．２、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＮＰ＿００１７７４．１０）
ＷＯ２００３０８８８０８、ＵＳ２００３０２２８３１９、ＷＯ２００３０６２４０１（請求項９）、ＵＳ２００２１５０５７３（請求項４、１３〜１４貢）、ＷＯ９９５８６５８（請求項１３、図１６）、ＷＯ９２０７５７４（図１）、ＵＳ５６４４０３３、Ｈａ ｅｔ ａｌ（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５２６−１５３１、Ｍｕｅｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２：１６２１−１６２５、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ４０（４）：２８７−２９５、Ｐｒｅｕｄ’ｈｏｍｍｅ ｅｔ ａｌ（１９９２）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９０（１）：１４１−１４６、Ｙｕ ｅｔ ａｌ（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（２）６３３−６３７、Ｓａｋａｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ（１９８８）ＥＭＢＯ Ｊ．７（１１）：３４５７−３４６４
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１、ＣＸＣＬ１３ケモカインによって活性化され、リンパ球移動及び体液性防御において機能し、ＨＩＶ−２感染、ならびに恐らくＡＩＤＳ、リンパ腫、骨髄腫、及び白血病の発症に関与するＧタンパク質共役受容体）、３７２ａａ、ｐＩ：８．５４ ＭＷ：４１９５９ ＴＭ：７［Ｐ］遺伝子染色体：１１ｑ２３．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＮＰ＿００１７０７．１）
ＷＯ２００４０４００００、ＷＯ２００４０１５４２６、ＵＳ２００３１０５２９２（実施例２）、ＵＳ６５５５３３９（実施例２）、ＷＯ２００２６１０８７（図１）、ＷＯ２００１５７１８８（請求項２０、２６９貢）、ＷＯ２００１７２８３０（１２〜１３貢）、ＷＯ２０００２２１２９（実施例１、１５２〜１５３貢、実施例２、２５４〜２５６貢）、ＷＯ９９２８４６８（請求項１、３８貢）、ＵＳ５４４００２１（実施例２、第４９〜５２欄）、ＷＯ９４２８９３１（５６〜５８貢）、ＷＯ９２１７４９７（請求項７、図５）、Ｄｏｂｎｅｒ ｅｔ ａｌ（１９９２）Ｅｕｒ． Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：２７９５−２７９９、Ｂａｒｅｌｌａ ｅｔ ａｌ（１９９５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０９：７７３−７７９、
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ペプチドに結合してそれらをＣＤ４＋Ｔリンパ球に提示するＭＨＣクラスＩＩ分子のベータサブユニット（Ｉａ抗原））、２７３ａａ、ｐＩ：６．５６ ＭＷ：３０８２０ ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：６ｐ２１．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＮＰ＿００２１１１．１）
Ｔｏｎｎｅｌｌｅ ｅｔ ａｌ（１９８５）ＥＭＢＯ Ｊ．４（１１）：２８３９−２８４７、Ｊｏｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ（１９８９）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ２９（６）：４１１−４１３、Ｂｅｃｋ ｅｔ ａｌ（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２８：４３３−４４１、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ ＵＳＡ ９９：１６８９９−１６９０３、Ｓｅｒｖｅｎｉｕｓ ｅｔ ａｌ（１９８７）Ｊ．Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６２：８７５９−８７６６、Ｂｅｃｋ ｅｔ ａｌ（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２５５：１−１３、Ｎａｒｕｓｅ ｅｔ ａｌ（２００２）Ｔｉｓｓｕｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ ５９：５１２−５１９、ＷＯ９９５８６５８（請求項１３、図１５）、ＵＳ６１５３４０８（第３５〜３８欄）、ＵＳ５９７６５５１（第１６８〜１７０欄）、ＵＳ６０１１１４６（第１４５〜１４６欄）、Ｋａｓａｈａｒａ ｅｔ ａｌ（１９８９）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ３０（１）：６６−６８、Ｌａｒｈａｍｍａｒ ｅｔ ａｌ（１９８５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０（２６）：１４１１１−１４１１９
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン作動性受容体Ｐ２Ｘリガンド開口型イオンチャネル５、細胞外ＡＴＰによって開口されたイオンチャネル、シナプス伝達及び神経新生に関与している可能性があり、欠損は特発性排尿筋不安定の病態生理学に寄与し得る）、４２２ａａ）、ｐＩ：７．６３、ＭＷ：４７２０６ ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：１７ｐ１３．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＮＰ＿００２５５２．２）
Ｌｅ ｅｔ ａｌ（１９９７）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ． ４１８（１−２）：１９５−１９９、ＷＯ２００４０４７７４９、ＷＯ２００３０７２０３５（請求項１０）、Ｔｏｕｃｈｍａｎ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１０：１６５−１７３、ＷＯ２００２２２６６０（請求項２０）、ＷＯ２００３０９３４４４（請求項１）、ＷＯ２００３０８７７６８（請求項１）、ＷＯ２００３０２９２７７（８２貢）
（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ−２）ＰＲＯＴＥＩＮ ＳＥＱＵＥＮＣＥ Ｆｕｌｌ ｍａｅａｉｔｙ．．．ｔａｆｒｆｐｄ（１．．３５９、３５９ａａ）、ｐＩ：８．６６、ＭＷ：４０２２５ ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：９ｐ１３．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＮＰ＿００１７７３．１）
ＷＯ２００４０４２３４６（請求項６５）、ＷＯ２００３０２６４９３（５１〜５２貢、５７〜５８貢）、ＷＯ２０００７５６５５（１０５〜１０６貢）、Ｖｏｎ Ｈｏｅｇｅｎ ｅｔ ａｌ（１９９０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４（１２）：４８７０−４８７７、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ９９：１６８９９−１６９０３
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質、Ｂ細胞活性化及びアポトーシスを調節し、機能喪失は全身性紅斑性狼瘡を有する患者における疾患活動性の増加に関連している）、６６１ａａ、ｐＩ：６．２０、ＭＷ：７４１４７ ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：５ｑ１２、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＮＰ＿００５５７３．１）
ＵＳ２００２１９３５６７、ＷＯ９７０７１９８（請求項１１、３９〜４２貢）、Ｍｉｕｒａ ｅｔ ａｌ（１９９６）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ３８（３）：２９９−３０４、Ｍｉｕｒａ ｅｔ ａｌ（１９９８）Ｂｌｏｏｄ ９２：２８１５−２８２２、ＷＯ２００３０８３０４７、ＷＯ９７４４４５２（請求項８、５７〜６１貢）、ＷＯ２０００１２１３０（２４〜２６貢）
（３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１、Ｃ２型Ｉｇ様及びＩＴＡＭドメインを含有する免疫グロブリンＦｃドメインの推定受容体、Ｂリンパ球分化に関与する可能性がある）、４２９ａａ、ｐＩ：５．２８、ＭＷ：４６９２５ ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：１ｑ２１−１ｑ２２、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＮＰ＿４４３１７０．１）
ＷＯ２００３０７７８３６、ＷＯ２００１３８４９０（請求項６、図１８Ｅ−１〜１８−Ｅ−２）、Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ９８（１７）：９７７２−９７７７、ＷＯ２００３０８９６２４（請求項８）、ＥＰ１３４７０４６（請求項１）、ＷＯ２００３０８９６２４（請求項７）
（３５）ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２、Ｂ細胞発生及びリンパ腫新生に関与する可能性のある推定免疫受容体、転座による遺伝子の調節解除がいくつかのＢ細胞悪性腫瘍で生じる）、９７７ａａ、ｐＩ：６．８８ ＭＷ：１０６４６８ ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：１ｑ２１、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ヒト：ＡＦ３４３６６２、ＡＦ３４３６６３、ＡＦ３４３６６４、ＡＦ３４３６６５、ＡＦ３６９７９４、ＡＦ３９７４５３、ＡＫ０９０４２３、ＡＫ０９０４７５、ＡＬ８３４１８７、ＡＹ３５８０８５、マウス：ＡＫ０８９７５６、ＡＹ１５８０９０、ＡＹ５０６５５８、ＮＰ＿１１２５７１．１
ＷＯ２００３０２４３９２（請求項２、図９７）、Ｎａｋａｙａｍａ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２７７（１）：１２４−１２７、ＷＯ２００３０７７８３６、ＷＯ２００１３８４９０（請求項３、図１８Ｂ−１〜１８Ｂ−２）
（３６）ＴＥＮＢ２（ＴＭＥＦＦ２、トモレグリン、ＴＰＥＦ、ＨＰＰ１、ＴＲ、推定膜貫通プロテオグリカン、成長因子及びホリスタチンのＥＧＦ／ヘレグリンファミリーに関連）、３７４ａａ、ＮＣＢＩ受託：ＡＡＤ５５７７６、ＡＡＦ９１３９７、ＡＡＧ４９４５１、ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ、ＮＰ＿０５７２７６、ＮＣＢＩ遺伝子：２３６７１、ＯＭＩＭ：６０５７３４、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｑ９ＵＩＫ５、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 ＡＦ１７９２７４、ＡＹ３５８９０７、ＣＡＦ８５７２３、ＣＱ７８２４３６
ＷＯ２００４０７４３２０（配列番号８１０）、ＪＰ２００４１１３１５１（配列番号２、４、８）、ＷＯ２００３０４２６６１（配列番号５８０）、ＷＯ２００３００９８１４（配列番号４１１）、ＥＰ１２９５９４４（６９〜７０貢）、ＷＯ２００２３０２６８（３２９貢）、ＷＯ２００１９０３０４（配列番号２７０６）、ＵＳ２００４２４９１３０、ＵＳ２００４０２２７２７、ＷＯ２００４０６３３５５、ＵＳ２００４１９７３２５、ＵＳ２００３２３２３５０、ＵＳ２００４００５５６３、ＵＳ２００３１２４５７９、Ｈｏｒｉｅ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ６７：１４６−１５２、Ｕｃｈｉｄａ ｅｔ ａｌ（１９９９）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２６６：５９３−６０２、Ｌｉａｎｇ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６０：４９０７−１２、Ｇｌｙｎｎｅ−Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ（２００１）Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．Ｏｃｔ １５；９４（２）：１７８−８４
（３７）ＰＭＥＬ１７（シルバーホモログ、ＳＩＬＶ、Ｄ１２Ｓ５３Ｅ、ＰＭＥＬ１７、ＳＩ、ＳＩＬ）、ＭＥ２０、ｇｐ１００）ＢＣ００１４１４、ＢＴ００７２０２、Ｍ３２２９５、Ｍ７７３４８、ＮＭ＿００６９２８、ＭｃＧｌｉｎｃｈｅｙ，Ｒ．Ｐ． ｅｔ ａｌ（２００９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０６（３３），１３７３１−１３７３６、Ｋｕｍｍｅｒ，Ｍ．Ｐ．ｅｔ ａｌ（２００９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８４（４），２２９６−２３０６
（３８）ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様及び２つのホリスタチン様ドメイン１を有する膜貫通タンパク質、トモレグリン−１）、Ｈ７３６５、Ｃ９ｏｒｆ２、Ｃ９ＯＲＦ２、Ｕ１９８７８、Ｘ８３９６１、ＮＭ＿０８０６５５、ＮＭ＿００３６９２、Ｈａｒｍｓ，Ｐ．Ｗ．（２００３）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１７（２１），２６２４−２６２９、Ｇｅｒｙ，Ｓ．ｅｔ ａｌ（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２２（１８）：２７２３−２７２７
（３９）ＧＤＮＦ−Ｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ１、ＧＦＲＡ１、ＧＤＮＦＲ、ＧＤＮＦＲＡ、ＲＥＴＬ１、ＴＲＮＲ１、ＲＥＴ１Ｌ、ＧＤＮＦＲ−アルファ１、ＧＦＲ−ＡＬＰＨＡ−１）、Ｕ９５８４７、ＢＣ０１４９６２、ＮＭ＿１４５７９３ ＮＭ＿００５２６４、Ｋｉｍ，Ｍ．Ｈ． ｅｔ ａｌ（２００９）Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２９（８），２２６４−２２７７、Ｔｒｅａｎｏｒ，Ｊ．Ｊ．ｅｔ ａｌ（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ ３８２（６５８６）：８０−８３
（４０）Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ、Ｌｙ６７、ＲＩＧ−Ｅ、ＳＣＡ−２、ＴＳＡ−１）、ＮＰ＿００２３３７．１、ＮＭ＿００２３４６．２、ｄｅ Ｎｏｏｉｊ−ｖａｎ Ｄａｌｅｎ，Ａ．Ｇ． ｅｔ ａｌ（２００３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １０３（６），７６８−７７４、Ｚａｍｍｉｔ，Ｄ．Ｊ．ｅｔ ａｌ（２００２）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２２（３）：９４６−９５２
（４１）ＴＭＥＭ４６（シサホモログ２（アフリカツメガエル）、ＳＨＩＳＡ２）、ＮＰ＿００１００７５３９．１、ＮＭ＿００１００７５３８．１、Ｆｕｒｕｓｈｉｍａ，Ｋ．ｅｔ ａｌ（２００７）Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．３０６（２），４８０−４９２、Ｃｌａｒｋ，Ｈ．Ｆ．ｅｔ ａｌ（２００３）Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１３（１０）：２２６５−２２７０
（４２）Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６Ｄ、Ｌｙ６−Ｄ、ＭＥＧＴ１）、ＮＰ＿０６７０７９．２、ＮＭ＿０２１２４６．２、Ｍａｌｌｙａ，Ｍ． ｅｔ ａｌ（２００２）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ８０（１）：１１３−１２３、Ｒｉｂａｓ，Ｇ． ｅｔ ａｌ（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３（１）：２７８−２８７
（４３）ＬＧＲ５（ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役受容体５、ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）、ＮＰ＿００３６５８．１、ＮＭ＿００３６６７．２、Ｓａｌａｎｔｉ，Ｇ．ｅｔ ａｌ（２００９）Ａｍ．Ｊ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．１７０（５）：５３７−５４５、Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｙ．ｅｔ ａｌ（２００３）Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ３７（３）：５２８−５３３
（４４）ＲＥＴ（ＲＥＴプロト癌遺伝子、ＭＥＮ２Ａ、ＨＳＣＲ１、ＭＥＮ２Ｂ、ＭＴＣ１、ＰＴＣ、ＣＤＨＦ１２、Ｈｓ．１６８１１４、ＲＥＴ５１、ＲＥＴ−ＥＬＥ１）、ＮＰ＿０６６１２４．１、ＮＭ＿０２０９７５．４、Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ，Ｈ．ｅｔ ａｌ（２００９）Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ． １００（１０）：１８９５−１９０１、Ｎａｒｉｔａ，Ｎ．ｅｔ ａｌ（２００９）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２８（３４）：３０５８−３０６８
（４５）ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ、ＬＹ６Ｋ、ＨＳＪ００１３４８、ＦＬＪ３５２２６）、ＮＰ＿０５９９９７．３、ＮＭ＿０１７５２７．３、Ｉｓｈｉｋａｗａ，Ｎ．ｅｔ ａｌ（２００７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ６７（２４）：１１６０１−１１６１１、ｄｅ Ｎｏｏｉｊ−ｖａｎ Ｄａｌｅｎ，Ａ．Ｇ．ｅｔ ａｌ（２００３）Ｉｎｔ． Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １０３（６）：７６８−７７４
（４６）ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質共役受容体１９、Ｍｍ．４７８７）、ＮＰ＿００６１３４．１、ＮＭ＿００６１４３．２、Ｍｏｎｔｐｅｔｉｔ，Ａ．ａｎｄ Ｓｉｎｎｅｔｔ，Ｄ．（１９９９）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１０５（１−２）：１６２−１６４、Ｏ’Ｄｏｗｄ，Ｂ．Ｆ．ｅｔ ａｌ（１９９６）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３９４（３）：３２５−３２９
（４７）ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＧＰＲ５４、ＨＯＴ７Ｔ１７５、ＡＸＯＲ１２）、ＮＰ＿１１５９４０．２、ＮＭ＿０３２５５１．４、Ｎａｖｅｎｏｔ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ ａｌ（２００９）Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７５（６）：１３００−１３０６、Ｈａｔａ，Ｋ．ｅｔ ａｌ（２００９）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２９（２）：６１７−６２３、
（４８）ＡＳＰＨＤ１（アスパラギン酸ベータヒドロキシラーゼドメイン含有１、ＬＯＣ２５３９８２）、ＮＰ＿８５９０６９．２、ＮＭ＿１８１７１８．３、Ｇｅｒｈａｒｄ，Ｄ．Ｓ．ｅｔ ａｌ（２００４）Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１４（１０Ｂ）：２１２１−２１２７
（４９）チロシナーゼ（ＴＹＲ、ＯＣＡＩＡ、ＯＣＡ１Ａ、チロシナーゼ、ＳＨＥＰ３）、ＮＰ＿０００３６３．１、ＮＭ＿０００３７２．４、Ｂｉｓｈｏｐ，Ｄ．Ｔ．ｅｔ ａｌ（２００９）Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．４１（８）：９２０−９２５、Ｎａｎ，Ｈ．ｅｔ ａｌ（２００９）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １２５（４）：９０９−９１７、
（５０）ＴＭＥＭ１１８（リングフィンガータンパク質、膜貫通２、ＲＮＦＴ２、ＦＬＪ１４６２７）、ＮＰ＿００１１０３３７３．１、ＮＭ＿００１１０９９０３．１、Ｃｌａｒｋ，Ｈ．Ｆ．ｅｔ ａｌ（２００３）Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１３（１０）：２２６５−２２７０、Ｓｃｈｅｒｅｒ，Ｓ．Ｅ．ｅｔ ａｌ（２００６）Ｎａｔｕｒｅ ４４０（７０８２）：３４６−３５１
（５１）ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質共役受容体１７２Ａ、ＧＰＣＲ４１、ＦＬＪ１１８５６、Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）、ＮＰ＿０７８８０７．１、ＮＭ＿０２４５３１．３、Ｅｒｉｃｓｓｏｎ，Ｔ．Ａ．ｅｔ ａｌ（２００３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１００（１１）：６７５９−６７６４、Ｔａｋｅｄａ，Ｓ．ｅｔ ａｌ（２００２）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ． ５２０（１−３）：９７−１０１．
（５２）シアル酸結合免疫グロブリン様レクチンファミリーのメンバーであるＣＤ３３は、６７ｋＤａグリコシル化膜貫通タンパク質である。ＣＤ３３は、関与する骨髄単核細胞及び赤血球前駆細胞に加えて、大半の脊髄細胞及び単球白血病細胞上で発現する。これは、最も初期の多能性幹細胞、成熟顆粒球、リンパ球細胞、または非造血細胞上では見られない（Ｓａｂｂａｔｈ ｅｔ ａｌ．，（１９８５）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７５：７５６−５６、Ａｎｄｒｅｗｓ ｅｔ ａｌ．，（１９８６）Ｂｌｏｏｄ ６８：１０３０−５）．ＣＤ３３は、その細胞質尾部上に２つのチロシン残基を含有し、それらの各々の後に、多くの阻害受容体に見られる免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）と同様の疎水性残基が続く。
（５３）ＣＬＬ−１（ＣＬＥＣ１２Ａ、ＭＩＣＬ、及びＤＣＡＬ２）は、Ｃ型レクチン／Ｃ型レクチン様ドメイン（ＣＴＬ／ＣＴＬＤ）スーパーファミリーのメンバーをコードする。このファミリーのメンバーは、共通のタンパク質折り畳みを共有し、細胞接着、細胞間シグナル伝達、糖タンパク質代謝回転等の種々の機能を有し、炎症及び免疫応答に関与する。この遺伝子によってコードされたタンパク質は、顆粒球及び単球機能の負の調節因子である。この遺伝子のいくつかの選択的にスプライスされた転写物変異形について説明されているが、これらの変異形のうちのいくつかの全長性質は決定されていない。この遺伝子は、染色体１２ｐ１３上のナチュラルキラー遺伝子複合体領域における他のＣＴＬ／ＣＴＬＤスーパーファミリーメンバーに密接に連結している（Ｄｒｉｃｋａｍｅｒ Ｋ（１９９９）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．９（５）：５８５−９０、ｖａｎ Ｒｈｅｎｅｎ Ａ，ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ １１０（７）：２６５９−６６、Ｃｈｅｎ ＣＨ，ｅｔ ａｌ． （２００６）Ｂｌｏｏｄ １０７（４）：１４５９−６７、Ｍａｒｓｈａｌｌ ＡＳ，ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６（８）：２１５９−６９、Ｂａｋｋｅｒ ＡＢ，ｅｔ ａｌ（２００５）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６４（２２）：８４４３−５０、Ｍａｒｓｈａｌｌ ＡＳ，ｅｔ ａｌ（２００４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（１５）：１４７９２−８０２）。ＣＬＬ−１は、（カルシウムまたは糖のいずれかに結合することは予測されない）単一のＣ型レクチン様ドメイン、ストーク領域、膜貫通ドメイン、及びＩＴＩＭモチーフを含有する短い細胞質尾部を含むＩＩ型膜貫通受容体であると示されている。

【0066】

抗ＣＤ２２抗体
表３のＡＤＣの抗ＣＤ２２抗体は、ＵＳ８２２６９４５によると、３つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３）ならびに３つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）を含む。

【0067】

抗ＨＥＲ２抗体
ある特定の実施形態では、表３のＡＤＣは、抗ＨＥＲ２抗体を含む。本発明の一実施形態では、本発明のＡＤＣの抗ＨＥＲ２抗体は、ヒト化抗ＨＥＲ２抗体、例えば、参照により本明細書に具体的に組み込まれるＵＳ５８２１３３７の表３に記載のｈｕＭＡｂ４Ｄ５−１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−２、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−３、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−４、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−６、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−７、及びｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８を含む。それらの抗体は、ＨＥＲ２に結合するマウス抗体（４Ｄ５）の相補性決定領域を有するヒトフレームワーク領域を含有する。ヒト化抗体ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８は、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）という商標名で市販されているトラスツズマブとも称される。本発明の別の実施形態では、本発明のＡＤＣの抗ＨＥＲ２抗体は、ヒト化抗ＨＥＲ２抗体、例えば、ＵＳ７８６２８１７に記載のヒト化２Ｃ４を含む。例示のヒト化２Ｃ４抗体は、ＰＥＲＪＥＴＡ（登録商標）という商標名で市販されているペルツズマブである。

【0068】

本発明の別の実施形態では、本発明のＡＤＣの抗ＨＥＲ２抗体は、ヒト化抗ＨＥＲ２抗体を含み、７Ｃ２である。

【0069】

いくつかの実施形態では、表３のＡＤＣを調製するために使用されるシステイン操作ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体は、システイン残基を軽鎖の１４９リジン部位（ＬＣ Ｋ１４９Ｃ）に導入させる。他の実施形態では、システイン操作ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体は、システイン残基を重鎖の１１８アラニン部位（ＥＵ番号付け）（ＨＣ Ａ１１８Ｃ）に導入させる。あるいは、この部位は、連続番号付けによって１２１に、またはＫａｂａｔ番号付けによって１１４に番号付けされる。

【0070】

抗ＣＤ３３抗体
表２のＡＤＣの抗ＣＤ３３抗体１５Ｇ１５．３３は、３つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３）ならびに３つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）を含む。

【0071】

表５のＡＤＣの抗ＣＤ３３抗体１５Ｇ１５．３３は、配列番号１３の軽鎖可変領域及び／または配列番号１４の重鎖可変領域を含む。
ＥＩＶＬＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＶＮＳＶ
ＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＬＱＴＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
（配列番号１３）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＩＦＳＮＨＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹ
ＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＦＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＷＡＤＶＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ
（配列番号１４）
抗ＣＤ３３抗体９Ｃ３及び他の実施形態

９Ｃ３ Ｖ_Ｌ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦ
ＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＨＮＳＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
（配列番号２１）
９Ｃ３ Ｖ_Ｈ
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＡＬＩＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＩＳＧＮＹＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＬＩＹＳＧＤＳＴＹＹＡＤＳ
ＶＫＧＲＦＮＩＳＲＤＩＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＶＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＤＧＹＹＶＳＤＭＶＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳ
（配列番号２２）
９Ｃ３．２ Ｖ_Ｌ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦ
ＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＨＮＳＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
（配列番号２３）
９Ｃ３．２ Ｖ_Ｈ
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＡＬＩＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＩＳＧＮＹＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＬＩＹＳＧＤＳＴＹＹＡＤＳ
ＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＩＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＶＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＤＧＹＹＶＳＤＭＶＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳ
（配列番号２４）
９Ｃ３．３ Ｖ_Ｌ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦ
ＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＨＮＳＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
（配列番号２５）
９Ｃ３．３ Ｖ_Ｈ
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＡＬＩＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＩＳＧＮＹＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＬＩＹＳＧＤＳＴＹＹＡＤＳ
ＶＫＧＲＦＳＩＳＲＤＩＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＶＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＤＧＹＹＶＳＤＭＶＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳ
（配列番号２６）
９Ｃ３．４ Ｖ_Ｌ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦ
ＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＨＮＳＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
（配列番号２７）
９Ｃ３．４ Ｖ_Ｈ
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＡＬＩＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＩＳＧＮＹＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＬＩＹＳＧＤＳＴＹＹＡＤＳ
ＶＫＧＲＦＡＩＳＲＤＩＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＶＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＤＧＹＹＶＳＤＭＶＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳ
（配列番号２８）

【0072】

いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＣＤ３３抗体を提供する。

【0073】

一態様では、本発明は、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つの、少なくとも２つの、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態では、この抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態では、この抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態では、この抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態では、この抗体は、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。

【0074】

別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つの、少なくとも２つの、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態では、この抗体は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。

【0075】

別の態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つの、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つの、少なくとも２つの、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。

【0076】

別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。

【0077】

上記の実施形態のうちのいずれかでは、抗ＣＤ３３抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＣＤ３３抗体は、上記の実施形態のうちのいずれかにあるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。ある特定の実施形態では、ヒトアクセプターフレームワークは、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬ_ＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ_１である。ある特定の実施形態では、ヒトアクセプターフレームワークは、以下の変異のうちのいずれか１つを含むヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬ_ＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ_１である。

【0078】

別の態様では、抗ＣＤ３３抗体は、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、及び／または配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態では、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、及び／または配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、及び／または配列番号２８において置換されており、挿入されており、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、及び／または配列番号２８において置換されており、挿入されており、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲで）生じる。任意に、抗ＣＤ３３抗体は、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、及び／または配列番号２８のＶＨ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、このＶＨは、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。

【0079】

別の態様では、抗ＣＤ３３抗体が提供され、この抗体は、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、及び／または配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、及び／または配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、及び／または配列番号２７において置換されており、挿入されており、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、及び／または配列番号２７において置換されており、挿入されており、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲで）生じる。任意に、抗ＣＤ３３抗体は、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、及び／または配列番号２７のＶＬ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、このＶＬは、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。

【0080】

別の態様では、抗ＣＤ３３抗体が提供され、この抗体は、上に提供される実施形態のうちのいずれかにあるようなＶＨ及び上に提供される実施形態のうちのいずれかにあるようなＶＬを含む。

【0081】

一実施形態では、この抗体は、それぞれ、配列番号２２及び配列番号２１にＶＨ配列及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、この抗体は、それぞれ、配列番号２４及び配列番号２３にＶＨ配列及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、この抗体は、それぞれ、配列番号２６及び配列番号２５にＶＨ配列及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、この抗体は、それぞれ、配列番号２８及び配列番号２７にＶＨ配列及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。

【0082】

さらなる態様では、本明細書に提供される抗ＣＤ３３抗体と同じエピトープに結合する抗体が本明細書に提供される。例えば、ある特定の実施形態では、それぞれ、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、及び／または配列番号２８のＶＨ配列、ならびに配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、及び／または配列番号２７のＶＬ配列を含む、抗ＣＤ３３抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。

【0083】

本発明のさらなる態様では、上記の実施形態のうちのいずれかによる抗ＣＤ３３抗体は、ヒト抗体等のモノクローナル抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ３３抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）_２断片である。別の実施形態では、この抗体は、実質的に全長抗体、例えば、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、または本明細書で定義される他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。

【0084】

さらなる態様では、上記の実施形態のうちのいずれかによる抗ＣＤ３３抗体は、以下に記載の特徴のうちのいずれかを単独でまたは組み合わせで組み込み得る。

【0085】

親抗体は、アルブミン結合ペプチド（ＡＢＰ）配列を含む融合タンパク質でもあり得る（参照により本明細書に組み込まれる、Ｄｅｎｎｉｓ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７７：３５０３５−３５０４３（表ＩＩＩ及びＩＶ、３５０３８貢）、及びＷＯ２００１／４５７４６（１２〜１３貢）。

【0086】

変異誘発によってシステイン操作抗体を調製するために、出発ポリペプチドのアミノ酸配列変異形をコードするＤＮＡは、当該技術分野で既知の様々な方法によって調製される。これらの方法としては、ポリペプチドをコードする先に調製されたＤＮＡの部位特異的（またはオリゴヌクレオチド媒介）変異誘発、ＰＣＲ変異誘発、及びカセット変異誘発による調製が挙げられるが、これらに限定されない。組換え抗体の変異形は、制限断片操作または合成オリゴヌクレオチドを用いたオーバーラップエクステンションＰＣＲによっても構築され得る。変異誘発プライマーは、システインコドン置換（複数可）をコードする。標準の変異誘発技法を用いて、かかる変異体システイン操作抗体をコードするＤＮＡを生成することができる。一般的ガイダンスは、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９、及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９９３で見つけることができる。

【0087】

抗体は、例えばＵＳ４８１６５６７に記載の組換え方法及び組成物を使用して産生され得る。一実施形態では、単離された核酸は、その抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／またはＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、その抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードする。さらなる実施形態では、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態では、かかる核酸を含む宿主細胞が提供される。かかる一実施形態では、宿主細胞は、（１）この抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及びこの抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）この抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及びこの抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。一実施形態では、宿主細胞は、真核性、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、方法は、上に提供されるその抗体をコードする核酸を含む宿主細胞をその抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、その抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することとを含む。

【0088】

組換え産生のために、例えば上述の抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニング及び／または発現のために１つ以上のベクターに挿入される。かかる核酸は、従来の手順を使用して（例えば、その抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離及び配列決定され得る。抗体コードベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞としては、本明細書に記載の原核細胞または真核細胞が挙げられる。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合に、細菌中で産生され得る。細菌中での抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、ＵＳ５６４８２３７、ＵＳ５７８９１９９、及びＵＳ５８４０５２３を参照されたく、大腸菌中での抗体断片の発現について説明する、Ｃｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４も参照されたい）。発現後、この抗体は、可溶性画分中の細菌細胞ペーストから単離され得、さらに精製され得る。原核生物に加えて、糸状菌または酵母等の真核微生物は、抗体コードベクターに好適なクローニングまたは発現宿主であり、それらとしては、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、結果として部分的または完全ヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、真菌及び酵母株が挙げられる。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、及びＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照されたい。グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物及び昆虫細胞が挙げられる。特にヨトウガ細胞のトランスフェクションのために昆虫細胞とともに使用することができる多数のバキュロウイルス株が特定されている。ＵＳ５９５９１７７、ＵＳ６０４０４９８、ＵＳ６４２０５４８、ＵＳ７１２５９７８、及びＵＳ６４１７４２９（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬ抗体（商標）技術について説明している）に記載のもの等の植物細胞培養物も宿主として利用することができる。脊椎動物細胞も宿主として使用され得る。例えば、懸濁液中で成長するように適合された哺乳類細胞株が有用であり得る。有用な哺乳類宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０で形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）、ヒト胚腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載の２９３または２９３細胞、ベビーハムスタ腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載のＴＭ４細胞、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）、例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載のＴＲＩ細胞、ＭＲＣ ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳類宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ⁻ＣＨＯ細胞等のチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））、ならびにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０等の骨髄腫細胞株が挙げられる。抗体産生に好適なある特定の哺乳類宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照されたい。

【0089】

部位特異的変異誘発は、置換変異形、すなわち、変異体タンパク質を調製するための方法の１つである（Ｃａｒｔｅｒ（１９８５）ｅｔ ａｌ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：４４３１−４４４３、Ｈｏ ｅｔ ａｌ（１９８９）Ｇｅｎｅ（Ａｍｓｔ．）７７：５１−５９、及びＫｕｎｋｅｌ ｅｔ ａｌ（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８２：４８８）。出発ＤＮＡは、最初に所望の変異をコードするオリゴヌクレオチドをかかる出発ＤＮＡの一本鎖にハイブリダイズすることによって改変される。ハイブリダイズした後、ハイブリダイズされたオリゴヌクレオチドをプライマーとして使用し、かつ出発ＤＮＡの一本鎖を鋳型として使用して、全第二鎖を合成するためにＤＮＡポリメラーゼが使用される。それ故に、所望の変異をコードするオリゴヌクレオチドは、結果として生じる二本鎖ＤＮＡに組み込まれる。部位特異的変異誘発は、発現プラスミド中で変異誘発されるタンパク質を発現させる遺伝子内で実行され得、結果として生じるプラスミドが配列決定されて、所望のシステイン置換変異の導入を確認することができる（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ（１９９８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：２０２５２−２０２６０）。部位特異的変異誘発プロトコル及び形式、例えば、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ（登録商標）多部位特異的変異誘発キット（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）は、広く入手可能である。

【0090】

ＰＣＲ変異誘発は、出発ポリペプチドのアミノ酸配列変異形の作製にも好適である。Ｈｉｇｕｃｈｉ，（１９９０） ｉｎ ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ｐｐ．１７７−１８３，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｉｔｏ ｅｔ ａｌ（１９９１）Ｇｅｎｅ １０２：６７−７０、Ｂｅｒｎｈａｒｄ ｅｔ ａｌ（１９９４）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，５：１２６−１３２、及びＶａｌｌｅｔｔｅ ｅｔ ａｌ（１９８９）Ｎｕｃ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１７：７２３−７３３を参照されたい。簡潔に、少量の鋳型ＤＮＡがＰＣＲにおいて出発材料として使用される場合、鋳型ＤＮＡにおける対応する領域と配列がわずかに異なるプライマーを使用して、プライマーが鋳型とは異なる位置でのみ鋳型配列が異なる比較的多量の特異的ＤＮＡ断片を生成することができる。

【0091】

変異形を調製するための別の方法であるカセット変異誘発は、Ｗｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ（１９８５）Ｇｅｎｅ，３４：３１５−３２３により説明される技法に基づく。出発材料は、変異される出発ポリペプチドＤＮＡを含むプラスミド（または他のベクター）である。変異される出発ＤＮＡにおけるコドン（複数可）が特定される。特定された変異部位（複数可）の両側に特有の制限エンドヌクレアーゼ部位が存在するはずである。かかる制限部位が存在しない場合、それらは、それらを出発ポリペプチドＤＮＡにおける適切な位置に導入する上述のオリゴヌクレオチド媒介変異誘発方法を使用して生成され得る。このプラスミドＤＮＡがそれらの部位で切断されて、それを直線化する。制限部位間のそのＤＮＡの配列をコードするが、所望の変異（複数可）を含有する二本鎖オリゴヌクレオチドは、標準の手順を使用して合成され、オリゴヌクレオチドの２つの鎖は別個に合成され、その後、標準の手順を使用して一緒にハイブリダイズされる。この二本鎖オリゴヌクレオチドは、カセットと称される。このカセットは、それがプラスミドに直接ライゲートされ得るように、直線化されたプラスミドの末端と適合性のある５’末端及び３’末端を有するように設計されている。このプラスミドは、変異されたＤＮＡ配列を含有するようになる。コードされたシステイン置換を含有する変異体ＤＮＡは、ＤＮＡ配列決定によって確認され得る。

【0092】

単一変異は、ＰＣＲベースの変異誘発による二本鎖プラスミドＤＮＡを鋳型として使用したオリゴヌクレオチド指向変異誘発によっても生成され得る（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌ，（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｚｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ（１９８３）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１００：４６８−５００、Ｚｏｌｌｅｒ，Ｍ．Ｊ．ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．（１９８２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１０：６４８７−６５００）。

【0093】

ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾が本明細書に提供される抗体のＦｃ領域に導入され、それによりＦｃ領域変異形を生成することができる。このＦｃ領域変異形は、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含み得る。

【0094】

ある特定の実施形態では、本発明は、抗体のインビボ半減期が重要であるが、ある特定のエフェクター機能（補体及びＡＤＣＣ等の）が不必要または有害である用途の望ましい候補となる、すべてではないがいくつかのエフェクター機能を有する抗体変異形を企図する。インビトロ及び／またはインビボ細胞毒性アッセイを実行して、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実行して、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（それ故に、ＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持することを確実にすることができる。

【0095】

アントラサイクリンジスルフィド中間体
本発明の抗体−薬物複合体化合物は、ケトン基にてジスルフィド基で誘導体化されたＰＮＵ−１５６８２部分から成るアントラサイクリンジスルフィド中間体を含む。

【0096】

このアントラサイクリンジスルフィド中間体は、以下の式を有し、
Ａｎｔ-Ｌ-（Ｚ）_ｍ-Ｘ Ｉ
式中、Ａｎｔが、以下の構造から選択され、

式中、波線が、Ｌへの結合を示し、
Ｌが、−ＣＨ_２Ｏ−、−ＣＨ_２Ｎ（Ｒ）−、-Ｎ（Ｒ）-、-Ｎ（Ｒ）（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-、−Ｎ（Ｒ）（Ｃ_２-Ｃ_８アルケニレン）-、-Ｎ（Ｒ）（Ｃ_２-Ｃ_８アルキニレン）-、-Ｎ（Ｒ）（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ-、及び以下の構造から選択されるリンカーであり、

式中、波線が、Ａｎｔ及びＺへの結合を示し、
Ｚが、-ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）-、-ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＲ（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-、及び以下の構造から選択される任意のスペーサーであり、

式中、波線が、Ｌ及びＸへの結合を示し、
Ｒが、Ｈ、Ｃ_１-Ｃ_１２アルキル、またはＣ_６-Ｃ_２０アリールであり、
Ｚ^１が、-（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-、-（Ｃ_２-Ｃ_８アルケニレン）-、-（Ｃ_２-Ｃ_８アルキニレン）-、-Ｏ（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-、-Ｏ（Ｃ_２-Ｃ_８アルケニレン）-、-Ｏ（Ｃ_２-Ｃ_８アルキニレン）-、及び-（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ-から選択され、
ｍが、０または１であり、
ｎが、１〜６であり、
Ｘが、ピリジルジスルフィドであり、この場合、ピリジルが、ＮＯ_２、Ｃｌ、Ｆ、ＣＮ、及びＢｒから選択される１つ以上の基で任意に置換され、
アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アルキル、及びアリールが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｎ（ＣＨ_３）_２、ＮＯ_２、及びＯＣＨ_３から選択される１つ以上の基で任意に置換される。

【0097】

Ｘの例示の実施形態は、

であり、
式中、波線が、ＬまたはＺへの結合を示し、
Ｒ^１が、ＮＯ_２、Ｃｌ、Ｆ、ＣＮ、またはＢｒであり、ｑが、０、１、または２である。

【0098】

特定の機構または効果に限定されることなく、アントラサイクリンジスルフィド中間体のピリジル環上での電子求引基Ｒ^１、ＮＯ_２、Ｃｌ、Ｆ、またはＢｒの存在により、システイン操作抗体のシステインチオールとの反応が加速される。システインチオールが抗体上の妨害された部位または反応性のより低い部位に導入されている場合、かかるアントラサイクリンジスルフィド中間体は、対応する非置換ピリジル類似体（Ｒ^１＝Ｈ）に対してより効率的な複合をもたらす。

【0099】

例示のリンカー−薬物中間体は、式Ｉａ〜ｃであり、

式中、Ｒ^１が、ＮＯ_２、Ｃｌ、Ｆ、ＣＮ、またはＢｒであり、ｑが、０、１、または２である。

【0100】

例示のリンカー−薬物中間体は、を含み、式中、Ｒ^１がＮＯ_２であり、ｑが１である。

【0101】

例示のリンカー−薬物中間体は、式Ｉｄである。

【0102】

本発明の抗体−薬物複合体の調製に好適な例示のアントラサイクリンジスルフィド、リンカー−薬物中間体が表１に包含されている。アントラサイクリンジスルフィド、リンカー−薬物（ＬＤ）中間体の合成については、実施例１で説明されている。

【0103】

抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）
本発明の抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）化合物は、強力なアントラサイクリン薬物部分に連結された腫瘍関連抗原に特異的な抗体を含み、癌を含むいくつかの過剰増殖性障害に対して有効な治療活性を有するものを含む。薬物部分の生物学的活性は、抗体への複合によって調節される。本発明のＡＤＣは、有効用量のアントラサイクリン薬物、または毒素を腫瘍細胞または部位に選択的に送達し、それにより、治療指数（「治療濃度域」）を増加させながら、より高い選択性、すなわち、より低い効果的用量が達成され得る。例示の実施形態では、ＡＤＣ化合物は、リンカーによってアントラサイクリン薬物部分に複合される、すなわち共有結合されるシステイン操作抗体を含む。

【0104】

本発明の抗体−薬物複合体化合物は、ジスルフィド、リンカーＬ、及び任意のスペーサーＺによって１つ以上のアントラサイクリン誘導体薬物部分Ｄに共有結合される抗体を含み、この化合物は、式ＩＩ、
Ａｂ-Ｓ−Ｓ-（Ｚ_ｍ-Ｌ-Ｄ）_ｐＩＩ
またはその薬学的に許容される塩を有し、
式中、Ａｂが、（１）〜（５３）から選択される１つ以上の腫瘍関連抗原または細胞表面受容体に結合する抗体であり、
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形態形成タンパク質受容体ＩＢ型）、
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５）、
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺６膜貫通上皮抗原）、
（４）ＭＵＣ１６（０７７２Ｐ、ＣＡ１２５）、
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン）、
（６）Ｎａｐｉ２ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質担体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ）、
（７）Ｓｅｍａ ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７回トロンボスポンジン反復（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）及び短細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ）、
（８）ＰＳＣＡ ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２遺伝子）、
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体）、
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５）、
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ−１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺癌関連遺伝子１、前立腺癌関連タンパク質１、前立腺６膜貫通上皮抗原２、６膜貫通前立腺タンパク質）、
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４）、
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形癌腫由来成長因子）、
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタインバーウイルス受容体）またはＨｓ ７３７９２）、
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、ＩＧｂ（免疫グロブリン関連ベータ）、Ｂ２９）、
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ）、
（１７）ＨＥＲ２、
（１８）ＮＣＡ、
（１９）ＭＤＰ、
（２０）ＩＬ２０Ｒα、
（２１）ブレビカン、
（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ、
（２３）ＡＳＬＧ６５９、
（２４）ＰＳＣＡ、
（２５）ＧＥＤＡ、
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３）、
（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォーム）、
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９α、免疫グロブリン関連アルファ）、
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１）、
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ＭＨＣクラスＩＩ分子のベータサブユニット（Ｉａ抗原））、
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン作動性受容体Ｐ２Ｘリガンド開口型イオンチャネル５）、
（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ−２）、
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質）、
（３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１）、
（３５）ＦｃＲＨ５（ＩＲＴＡ２、免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２）、
（３６）ＴＥＮＢ２（推定膜貫通プロテオグリカン）、
（３７）ＰＭＥＬ１７（シルバーホモログ、ＳＩＬＶ、Ｄ１２Ｓ５３Ｅ、ＰＭＥＬ１７、ＳＩ、ＳＩＬ）、
（３８）ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様及び２つのホリスタチン様ドメイン１を有する膜貫通タンパク質、トモレグリン−１）、
（３９）ＧＤＮＦ−Ｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ１、ＧＦＲＡ１、ＧＤＮＦＲ、ＧＤＮＦＲＡ、ＲＥＴＬ１、ＴＲＮＲ１、ＲＥＴ１Ｌ、ＧＤＮＦＲ−アルファ１、ＧＦＲ−ＡＬＰＨＡ−１）、
（４０）Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ、Ｌｙ６７、ＲＩＧ−Ｅ、ＳＣＡ−２、ＴＳＡ−１）、
（４１）ＴＭＥＭ４６（シサホモログ２（アフリカツメガエル）、ＳＨＩＳＡ２）、
（４２）Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６Ｄ、Ｌｙ６−Ｄ、ＭＥＧＴ１）、
（４３）ＬＧＲ５（ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役受容体５、ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）、
（４４）ＲＥＴ（ＲＥＴプロト癌遺伝子、ＭＥＮ２Ａ、ＨＳＣＲ１、ＭＥＮ２Ｂ、ＭＴＣ１、ＰＴＣ、ＣＤＨＦ１２、Ｈｓ．１６８１１４、ＲＥＴ５１、ＲＥＴ−ＥＬＥ１）、
（４５）ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ、ＬＹ６Ｋ、ＨＳＪ００１３４８、ＦＬＪ３５２２６）、
（４６）ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質共役受容体１９、Ｍｍ．４７８７）、
（４７）ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＧＰＲ５４、ＨＯＴ７Ｔ１７５、ＡＸＯＲ１２）、
（４８）ＡＳＰＨＤ１（アスパラギン酸ベータヒドロキシラーゼドメイン含有１、ＬＯＣ２５３９８２）、
（４９）チロシナーゼ（ＴＹＲ、ＯＣＡＩＡ、ＯＣＡ１Ａ、チロシナーゼ、ＳＨＥＰ３）、
（５０）ＴＭＥＭ１１８（リングフィンガータンパク質、膜貫通２、ＲＮＦＴ２、ＦＬＪ１４６２７）、
（５１）ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質共役受容体１７２Ａ、ＧＰＣＲ４１、ＦＬＪ１１８５６、Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）、
（５２）ＣＤ３３、及び
（５３）ＣＬＬ−１、
Ｄが、以下の構造から選択されるアントラサイクリン誘導体であり、

式中、波線が、Ｌへの結合を示し、
Ｌが、−ＣＨ_２Ｏ−、−ＣＨ_２Ｎ（Ｒ）−、-Ｎ（Ｒ）-、-Ｎ（Ｒ）（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-、−Ｎ（Ｒ）（Ｃ_２-Ｃ_８アルケニレン）-、-Ｎ（Ｒ）（Ｃ_２-Ｃ_８アルキニレン）-、-Ｎ（Ｒ）（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ-、及び以下の構造から選択されるリンカーであり、

式中、波線が、Ｄ及びＺへの結合を示し、
Ｚが、-ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）-、-ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＲ（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-、及び以下の構造から選択される任意のスペーサーであり、

Ｒが、Ｈ、Ｃ_１-Ｃ_１２アルキル、またはＣ_６-Ｃ_２０アリールであり、
Ｚ^１が、-（Ｃ_１-Ｃ_１２アルキレン）-、-（Ｃ_２-Ｃ_８アルケニレン）-、-（Ｃ_２-Ｃ_８アルキニレン）-、及び-（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ-から選択され、
ｍが、０または１であり、
ｎが、１〜６であり、
ｐが、１〜８の整数である。
表２：抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）

ＤＡＲ＝平均薬物／抗体比
Ａ１１８Ｃ（ＥＵ番号付け）＝Ａ１２１Ｃ（連続番号付け）＝Ａ１１４Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付け）
野生型（「ＷＴ」）、システイン操作変異体抗体（「ｔｈｉｏ」）、軽鎖（「ＬＣ」）、重鎖（「ＨＣ」）、６−マレイミドカプロイル（「ＭＣ」）、マレイミドプロパノイル（「ＭＰ」）、バリン−シトルリン（「ｖａｌ−ｃｉｔ」または「ｖｃ」）、アラニン−フェニルアラニン（「ａｌａ−ｐｈｅ」）、ｐ−アミノベンジル（「ＰＡＢ」）、及びｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（「ＰＡＢＣ」）
表３：切断不可能、非ジスルフィド、コンパレータＡＤＣ

【0105】

インビトロ細胞増殖アッセイ
一般に、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）の細胞毒性または細胞増殖抑制活性は、受容体タンパク質、例えば、ＨＥＲ２を有する哺乳類細胞を、細胞培養培地中のＡＤＣの抗体に曝すことと、その細胞を約６時間〜約５日間培養することと、細胞生存率を測定することとによって測定される。細胞ベースのインビトロアッセイを使用して、本発明のＡＤＣの生存率（増殖）、細胞毒性、及びアポトーシス誘発（カスパーゼ活性化）を測定した。

【0106】

抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）のインビトロ効力を細胞増殖アッセイ（実施例４）によって測定した。本発明のＡＤＣは、腫瘍細胞増殖の阻害において驚くべき予想外の効力を示した。ＡＤＣの効力を細胞の標的抗原発現と相関させた。試験された複合体は、細胞の表面上に発現する特異的抗原に結合し、かつそれらの細胞のインビトロ死を引き起こすことができる。

【0107】

ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイは、市販の（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）鞘翅目ルシフェラーゼ組換え発現に基づく均質アッセイ方法（ＵＳ５５８３０２４、ＵＳ５６７４７１３、ＵＳ５７００６７０）である。この細胞増殖アッセイは、代謝的に活性な細胞の指標である存在するＡＴＰの定量に基づいて培養物中の生存細胞の数を決定する（Ｃｒｏｕｃｈ ｅｔ ａｌ（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６０：８１−８８、ＵＳ６６０２６７７）。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイを９６ウェル形式で実行して、自動ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）に従順させた（Ｃｒｅｅ ｅｔ ａｌ（１９９５）ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ ６：３９８−４０４）。均質アッセイ手順は、単一の試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を血清補充培地中で培養された細胞に直接添加することを伴う。細胞洗浄、培地除去、及び複数のピペット操作ステップは不要である。このシステムは、試薬を添加して混合した１０分後に３８４ウェル形式において１ウェル当たりわずか１５個の細胞しか検出しない。これらの細胞は、ＡＤＣで連続して処置され得るか、または処置されてＡＤＣから分離され得る。一般に、短時間、すなわち、３時間処置された細胞は、連続して処置された細胞と同じ効力効果を示した。

【0108】

均質「添加−混合−測定」形式は、細胞溶解及び存在するＡＴＰの量に比例した発光シグナルの発生をもたらす。ＡＴＰの量は、培養物中に存在する細胞の数に正比例する。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイは、細胞の種類及び使用される培地に応じて一般に５時間を超える半減期を有するルシフェラーゼ反応によってもたらされる「グロー型」発光シグナルを発生させる。生存細胞は、相対発光単位（ＲＬＵ）で反射される。基質である甲虫ルシフェリンは、組換えホタルルシフェラーゼによって酸化的に脱炭酸化され、ＡＴＰのＡＭＰへの変換及び光子の発生を同時に伴う。

【0109】

細胞ベースのインビトロアッセイを使用して、本発明のＡＤＣの生存率（増殖）、細胞毒性、及びアポトーシス誘発（カスパーゼ活性化）を測定する。一般に、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）の細胞毒性または細胞増殖抑制活性は、Ｈｅｒ２またはＭＵＣ１６ポリペプチド等の抗原を発現する哺乳類細胞を、細胞培養培地中のＡＤＣに曝すことと、その細胞を約６時間〜約５日間培養することと、細胞生存率を測定することとによって測定される。抗ＭＵＣ１６ ＡＤＣの細胞増殖アッセイに有用な哺乳類細胞としては、（１）ＭＵＣ１６ポリペプチド発現細胞株ＯＶＣＡＲ−３、（２）ＭＵＣ１６ポリペプチドの一部をその細胞表面上で安定して発現させるように操作されたＰＣ３由来の細胞株（ＰＣ３／ＭＵＣ１６）、（３）ＭＵＣ１６ポリペプチドを発現しない親ＰＣ３細胞株、及び（４）ＭＵＣ１６ポリペプチドを発現しないが、外因性ＭＵＣ１６発現を誘導するために使用されるベクターを保有するＰＣ３細胞株（ＰＣ３／ｎｅｏ）が挙げられる。

【0110】

図１は、チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＨＣ Ａ１１８Ｃ−（ＬＤ−５７）１１４、チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）１０９、及びチオＨｕ 抗ＣＤ３３ １５Ｇ１５．３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）１１０の濃度（μｇ／ｍＬ）に対する５日間でのＳＫ−ＢＲ−３インビトロ細胞生存率のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す。Ｈｅｒ２抗原は、ＳＫ−ＢＲ−３細胞内で高度に発現される。抗Ｈｅｒ２ ＡＤＣ １１４も１０９もいずれも、線形用量応答細胞死滅活性を示した。軽鎖Ｋ１４９Ｃ変異体ＡＤＣ １０９は、重鎖Ａ１１８Ｃ変異体ＡＤＣ １１４と同じか、またはそれよりもわずかにより強力な細胞死滅活性を示した。対照オフターゲット抗ＣＤ３３ ＡＤＣ １１０は、より低い活性を示す。

【0111】

図２は、チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５９）１１６、チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）１０９、及びチオＨｕ 抗ＣＤ３３ １５Ｇ１５．３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５９）１１５の濃度（μｇ／ｍＬ）に対する５日間のＳＫ−ＢＲ−３インビトロ細胞生存率のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す。抗Ｈｅｒ２ ＡＤＣ １１６も１０９もいずれも、線形用量応答細胞死滅活性を示した。非置換のあまり妨害されていないエチルジスルフィドリンカー１０９を有する抗体−薬物複合体１０９は、メチル置換されたより妨害されたジスルフィドリンカーＡＤＣ−１１６と同じか、またはそれよりもわずかに強力な細胞死滅活性を示した。

【0112】

図６は、チオＨｕ 抗Ｎａｐｉ３ｂ １０Ｈ１．１１．４Ｂ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）１２１、チオＨｕ 抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）１２０、チオＨｕ 抗Ｎａｐｉ３ｂ １０Ｈ１．１１．４Ｂ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５９）１２３、チオＨｕ 抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５９）１２２、チオＨｕ 抗Ｎａｐｉ３ｂ １０Ｈ１．１１．４Ｂ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５８）１２５、チオＨｕ 抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５８）１２４、チオＨｕ 抗Ｎａｐｉ３ｂ １０Ｈ１．１１．４Ｂ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−６０）１２７、及びチオＨｕ 抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−６０）１２６の濃度（μｇ／ｍＬ）に対する５日間のＢＪＡＢ．ｌｕｃインビトロ細胞生存率のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す。

【0113】

図７は、チオＨｕ 抗Ｎａｐｉ３ｂ １０Ｈ１．１１．４Ｂ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）１２１、チオＨｕ 抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）１２０、チオＨｕ 抗Ｎａｐｉ３ｂ １０Ｈ１．１１．４Ｂ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５９）１２３、チオＨｕ 抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５９）１２２、チオＨｕ 抗Ｎａｐｉ３ｂ １０Ｈ１．１１．４Ｂ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５８）１２５、チオＨｕ 抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５８）１２４、チオＨｕ 抗Ｎａｐｉ３ｂ １０Ｈ１．１１．４Ｂ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−６０）１２７、及びチオＨｕ 抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−６０）１２６の濃度（μｇ／ｍＬ）に対する５日間のＷＳＵ−ＤＬＣＬ２インビトロ細胞生存率のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す。

【0114】

インビボ有効性
本発明の抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）のインビボ有効性は、マウスにおける腫瘍異種移植片研究（実施例２２）によって測定され得る。抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）のインビボ有効性を、マウスにおける腫瘍成長阻害（実施例２１）によって測定した。本発明のＡＤＣは、腫瘍成長の阻害において驚くべき予想外の効力を示した。ＡＤＣの有効性を腫瘍細胞の標的抗原発現と相関させた。

【0115】

抗体−薬物複合体の有効性を、齧歯類における癌細胞の同種移植片または異種移植片を移植することと、腫瘍をＡＤＣで処置することとによってインビボで測定した。細胞株、ＡＤＣの癌細胞上に存在する受容体への抗体結合の特異性、投与レジメン、及び他の要因に応じて変動する結果が予測される。ＡＤＣのインビボ有効性を、中程度〜高レベルのＨｅｒ２、ＭＵＣ１６、及びＣＤ３３等の腫瘍関連抗原を発現するトランスジェニック外植片マウスモデルを使用して測定した。対象をＡＤＣで１回処置し、３〜６週間にわたって監視し、腫瘍が２倍になるまでの時間、ｌｏｇ細胞死滅、及び腫瘍縮小を測定した。フォローアップ用量応答及び多用量実験を実行した。

【0116】

例えば、本発明の抗ＨＥＲ２ ＡＤＣのインビボ有効性は、高度発現ＨＥＲ２トランスジェニック外植片マウスモデルによって測定され得る（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ ｅｔ ａｌ（２００８）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６８：９２８０−９０）。同種移植片は、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）療法に応答しないか、またはそれにあまり応答しないＦｏ５ ｍｍｔｖトランスジェニックマウスから増殖される。対象をある特定の用量レベル（ｍｇ／ｋｇ）のＡＤＣ及びプラセボ緩衝液対照（ビヒクル）で１回処置し、２週間以上にわたって監視して、腫瘍が２倍になるまでの時間、ｌｏｇ細胞死滅、及び腫瘍縮小を測定した。

【0117】

図３は、ビヒクル（ヒスチジン緩衝液＃８：２０ｍＭ酢酸ヒスチジン（ｐＨ５．５）、２４０ｍＭスクロース、０．０２％ＰＳ ２０）、チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＨＣ Ａ１１８Ｃ−（ＬＤ−５１）１０７、及びチオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）１０８を単回静脈内投与した後にＣＲＬ ｎｕ／ｎｕマウスの乳腺脂肪体に接種したＭＭＴＶ−ＨＥＲ２ Ｆｏ５トランスジェニック乳腺腫瘍の経時的なインビボフィッティング腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す。ＡＤＣを０日目に３ｍｇ／ｋｇで単回静脈内投与した。抗体−薬物複合体１０７も１０８もいずれも腫瘍成長阻害を示した一方で、軽鎖Ｋ１４９Ｃ変異体ＡＤＣ １０８は、重鎖Ａ１１８Ｃ変異体ＡＤＣ １０７よりも高い有効性を示した。

【0118】

図４は、０．２ｍＬの体積で胸郭乳腺脂肪体に接種したＳＣＩＤベージュマウスにおけるＫＰＬ４腫瘍モデルの経時的なインビボフィッティング腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す。腫瘍が平均腫瘍体積１００〜２５０ｍｍ３に到達したときに、それらを各々８〜１０匹のマウスの９群に群分けした。単回処置を、以下のように０日目に尾静脈を介して静脈内に行った：（０１）ビヒクル（ヒスチジン緩衝液＃８：２０ｍＭ酢酸ヒスチジン（ｐＨ５．５）、２４０ｍＭスクロース、０．０２％ＰＳ ２０）、（０２）チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（エチルマレイミド）０．３ｍｇ／ｋｇ １３８、（０３）チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（エチルマレイミド）１ｍｇ／ｋｇ １３８、（０４）チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（エチルマレイミド）３ｍｇ／ｋｇ １３８、（０５）チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）０．３ｍｇ／ｋｇ １０９、（０６）チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）１ｍｇ／ｋｇ １０９、（０７）チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）３ｍｇ／ｋｇ １０９、（０８）チオＨｕ 抗ＣＤ３３ １５Ｇ１５．３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（エチルマレイミド）３ｍｇ／ｋｇ １３９、及び（０９）チオＨｕ 抗ＣＤ３３ １５Ｇ１５．３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）３ｍｇ／ｋｇ １１０。

【0119】

抗ＨＥＲ２ ７Ｃ２抗体−薬物複合体１３８及び１０９は、腫瘍成長に用量依存的効果を示した。非特異的抗ＣＤ３３抗体−薬物複合体１３９及び１１０は、腫瘍成長阻害をほとんどまたは全く示さなかった。

【0120】

図５は、（０１）ビヒクル（ヒスチジン緩衝液＃８：２０ｍＭ酢酸ヒスチジン（ｐＨ５．５）、２４０ｍＭスクロース、０．０２％ＰＳ ２０）、（０２）チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）１ｍｇ／ｋｇ １０９、（０３）チオＨｕ 抗Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）３ｍｇ／ｋｇ １０９、（０４）チオＨｕ 抗ＣＤ３３ １５Ｇ１５．３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）１ｍｇ／ｋｇ １１０、（０５）チオＨｕ 抗ＣＤ３３ １５Ｇ１５．３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５７）３ｍｇ／ｋｇ １１０、（０６）トラスツズマブエムタンシン３ｍｇ／ｋｇ １４１、及び（０７）トラスツズマブエムタンシン１０ｍｇ／ｋｇ １４１を単回静脈内投与した後にＣＲＬ ｎｕ／ｎｕマウスの乳腺脂肪体に接種したＭＭＴＶ−ＨＥＲ２ Ｆｏ５トランスジェニック乳腺腫瘍の経時的なインビボフィッティング腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す。

【0121】

コンパレータＡＤＣ、トラスツズマブエムタンシン（ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１（Ｔ−ＤＭ１）１４１は、抗体−薬物複合体であり（ＣＡＳ Ｒｅｇ． Ｎｏ．１３９５０４−５０−０、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ Ｇ．ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６８：９２８０−９０）、以下の構造を有する。

【0122】

抗ＨＥＲ２ ７Ｃ２抗体−薬物複合体１０９は、腫瘍成長に用量依存的効果を示した。非特異的抗ＣＤ３３抗体−薬物複合体１１０は、１ｍｇ／ｋｇでは腫瘍成長阻害をほとんど示さず、３ｍｇ／ｋｇで中程度の腫瘍成長阻害を示した。抗ＨＥＲ２ ７Ｃ２抗体−薬物複合体１０９は、等価用量（３ｍｇ／ｋｇ）またはより高い１０ｍｇ／ｋｇ用量で、抗ＨＥＲ２ ４Ｄ５トラスツズマブエムタンシン１４１よりも高い有効性を示した（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ Ｇ．ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６８：９２８０−９０）。

【0123】

医薬製剤
本発明の治療用抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）の医薬製剤は、典型的には、非経口投与、すなわち、ボーラス、静脈内、腫瘍内注入のために、薬学的に許容される非経口ビヒクルとともに注入可能な単位剤形で調製される。所望の純度を有する抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、薬学的に許容される希釈剤、担体、賦形剤、または安定剤と任意に混合される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９８０）１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．）。

【0124】

抗体−薬物複合体治療方法
本発明の抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）を使用して、例えば腫瘍抗原の過剰発現を特徴とする様々な疾患または障害を治療することができることが企図される。例示の状態または過剰増殖性障害としては、良性または悪性固形腫瘍ならびに白血病及びリンパ性悪性疾患等の血液学的障害が挙げられる。他には、神経障害、グリア障害、星状障害、視床下部障害、腺障害、マクロファージ障害、上皮障害、間質障害、胞胚腔障害、炎症性障害、血管新生障害、及び自己免疫等の免疫学的障害が挙げられる。

【0125】

本発明の抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、治療される状態に適切な任意の経路によって投与され得る。ＡＤＣは、典型的には、非経口投与、すなわち、輸注、皮下、筋肉内、静脈内、皮内、髄腔内、及び硬膜外投与される。

【0126】

一般に、治療される疾患または障害は、癌等の過剰増殖性疾患である。本明細書において治療される癌の例としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病またはリンパ性悪性疾患が挙げられるが、これらに限定されない。かかる癌のより具体的な例としては、扁平細胞癌(例えば、扁平上皮細胞癌)、肺癌、例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、及び肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌または胃癌、例えば、消化管癌、膵臓癌、膠芽細胞腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜または子宮癌、唾液腺癌、腎臓または腎癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、ならびに頭頸部癌が挙げられる。

【0127】

ＡＤＣ化合物が治療において使用され得る自己免疫疾患としては、リウマチ学的障害（例えば、リウマチ性関節炎、シェーグレン症候群、強皮症、全身性紅斑性狼瘡（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｉｓ）及びループス腎炎等の狼瘡、多発筋炎／皮膚筋炎、クリオグロブリン血症、抗リン脂質抗体症候群、ならびに乾癬性関節炎等）、変形性関節症、自己免疫胃腸及び肝臓障害（例えば、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎及びクローン病）、自己免疫胃炎及び悪性貧血、自己免疫肝炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、及びセリアック病等）、血管炎（例えば、チャーグ・ストラウス症候群血管炎等のＡＮＣＡ関連血管炎、ヴェーゲナー肉芽腫症、及び多発動脈炎等）、自己免疫神経障害（例えば、多発性硬化症、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群、重症筋無力症、視神経脊髄炎、パーキンソン病、アルツハイマー病、及び自己免疫多発ニューロパシー等）、腎臓以上（例えば、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、及びバージャー病等）、自己免疫皮膚科的障害（例えば、乾癬、蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）、じんましん（ｈｉｖｅｓ）、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、及び皮膚エリテマトーデス等）、血液学的障害（例えば、血小板減少性紫斑病、血栓性血小板減少性紫斑病、輸血後紫斑病、及び自己免疫溶血性貧血等）、アテローム性動脈硬化症、ブドウ膜炎、自己免疫聴覚疾患（例えば、内耳疾患及び聴覚損失等）、ベーチェット病、レイノー症候群、臓器移植、及び自己免疫内分泌障害（例えば、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）等の糖尿病関連自己免疫疾患、アジソン病、及び自己免疫甲状腺疾患（例えば、グレーブス病及び甲状腺炎）等）が挙げられる。より好ましいかかる疾患としては、例えば、リウマチ性関節炎、潰瘍性大腸炎、ＡＮＣＡ関連血管炎、ループス、多発性硬化症、シェーグレン症候群、グレーブス病、ＩＤＤＭ、悪性貧血、甲状腺炎、及び糸球体腎炎が挙げられる。

【0128】

疾患の予防または治療のために、ＡＤＣの適切な投薬量は、上で定義される治療される疾患の種類、疾患の重症度及び経過、その分子が予防目的または治療目的のために投与されるか、以前の療法、患者の病歴及び抗体への応答、ならびに主治医の判断に依存する。この分子は、一度にまたは一連の治療にわたって患者に好適に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ）の分子が、例えば、１つ以上の別個の投与によってであろうと、連続注入によってであろうと、患者に投与するための初期候補投与量である。典型的な１日の投薬量は、上述の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得る。患者に投与される例示のＡＤＣ投薬量は、約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ（患者の体重）の範囲である。

【0129】

製品
本発明の別の実施形態では、上述の障害の治療に有用な材料を含有する製品または「キット」が提供される。この製品は、容器及び容器上のラベルまたは容器に関連する添付文書を含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ブリスターパック等が挙げられる。これらの容器は、ガラスまたはプラスチック等の様々な材料から形成され得る。この容器は、状態の治療に有効な抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、この容器は、静脈注射用溶液バッグまたは皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有するバイアルであり得る）。この組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、ＡＤＣである。ラベルまたは添付文書は、この組成物が癌等の選定された状態を治療するために使用されることを示す。あるいは、またはさらに、この製品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、及びデキストロース溶液等の薬学的に許容される緩衝液を含む第２の（または第３の）容器をさらに含み得る。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジ等の商業的視点及び使用者の視点から望ましい他の材料をさらに含み得る。

【実施例】

【0130】

実施例１：アントラサイクリンジスルフィド、リンカー−薬物（ＬＤ）中間体の合成（表１）。
ＬＤ−５１：（２Ｓ，４Ｓ）−４−［［（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチル−３，４，４ａ，６，７，９，９ａ，１０ａ−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［１，２］オキサゾロ［３，４−ｂ］［１，４］オキサジン−３−イル］オキシ］−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−６，１１−ジオキソ−Ｎ−［２−（２−ピリジルジスルファニル）エチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−テトラセン−２−カルボキサミドの合成

【0131】

ＵＳ８３８９６９７の実施例３の後、３ｍＬのメタノール及び２ｍＬのＨ_２Ｏ中のＷＯ１９９８／０２４４６及びＵＳ８４７０９８４の実施例１に報告されるように調製されたＰＮＵ−１５９６８２（１５．３ｍｇ、０．０２０３８ｍｍｏｌ）溶液に、１ｍＬのＨ_２Ｏ中のＮａＩＯ_４（５．１ｍｇ、０．０２３８ｍｍｏｌ）溶液を添加した。出発材料が検出不可能になるまで（ＴＬＣ及びＨＰＬＣ分析）、反応混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、赤色の粗溶液（２Ｓ，４Ｓ）−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−｛［（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］［１，３］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］オキシ｝−６，１１−ジオキソ−１，２，３，４，６，１１−ヘキサヒドロテトラセン−２−カルボン酸５１ａを、さらに精製することなく次のステップで使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）：６２８［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0132】

アルゴン雰囲気下の無水ジクロロメタン中の粗中間体５１ａ溶液に、無水トリエチルアミン、ＴＢＴＵ（Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート、別名Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチル−Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムテトラフルオロボレート、ＣＡＳ番号１２５７００−６７−６、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｂ−２９０３）、及びＮ−ヒドロキシスクシンイミドを添加して、５１ａの中間体ＮＨＳエステルを形成した。あるいは、ＤＣＣまたはＥＤＣ等の他のカップリング試薬を使用することができる。１時間後、２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エタンアミン塩酸塩（ＣＡＳ番号１０６１３９−１５−５）を添加した。出発材料が消失するまで（ＨＰＬＣ−ＭＳ分析）、反応混合物を室温で３０分間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させ、その後、残渣をシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、５１を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：７９６．８８［Ｍ＋Ｈ］^＋。
ＬＤ−５２：２−（２−ピリジルジスルファニル）エチルＮ−［２−［［２−［（２Ｓ，４Ｓ）−４−［［（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチル−３，４，４ａ，６，７，９，９ａ，１０ａ−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［１，２］オキサゾロ［３，４−ｂ］［１，４］オキサジン−３−イル］オキシ］−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−６，１１−ジオキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−テトラセン−２−イル］−２−オキソ−エトキシ］カルボニル−メチル−アミノ］エチル］−Ｎ−メチル−カルバメートの合成

【0133】

［２−［（２Ｓ，４Ｓ）−４−［［（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチル−３，４，４ａ，６，７，９，９ａ，１０ａ−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［１，２］オキサゾロ［３，４−ｂ］［１，４］オキサジン−３−イル］オキシ］−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−６，１１−ジオキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−テトラセン−２−イル］−２−オキソ−エチル］Ｎ−メチル−Ｎ−［２−（メチルアミノ）エチル］カルバメート５２ａを、ＰＮＵ−１５９６８２から、トリホスゲン（Ｃｌ_３ＣＯ）_２Ｃ＝Ｏ、及びＮ１，Ｎ２−ジメチルエタン−１，２−ジアミンとともに調製した。

【0134】

１，２−ジ（ピリジン−２−イル）ジスルファン及び２−メルカプトエタノールを室温のピリジン及びメタノール中で反応させて、２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エタノールを得た。トリエチルアミン及びアセトニトリル中での４−ニトロフェニルカルボノクロリデートとのアシル化により、４−ニトロフェニル−２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エチルカーボネート５２ｂを得た。中間体５２ａを５２ｂと反応させて、ＬＤ−５２を形成した。
ＬＤ−５３：［２−メチル−２−（２−ピリジルジスルファニル）プロピル］Ｎ−［２−［［２−［（２Ｓ，４Ｓ）−４−［［（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチル−３，４，４ａ，６，７，９，９ａ，１０ａ−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［１，２］オキサゾロ［３，４−ｂ］［１，４］オキサジン−３−イル］オキシ］−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−６，１１−ジオキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−テトラセン−２−イル］−２−オキソ−エトキシ］カルボニル−メチル−アミノ］エチル］−Ｎ−メチル−カルバメートの合成

【0135】

ＬＤ−５２の手順後、中間体５２ａを２−メチル−２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロピル４−ニトロフェニルカーボネートとアシル化して、ＬＤ−５３を得た。
ＬＤ−５４：（２Ｓ，４Ｓ）−４−［［（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチル−３，４，４ａ，６，７，９，９ａ，１０ａ−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［１，２］オキサゾロ［３，４−ｂ］［１，４］オキサジン−３−イル］オキシ］−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−Ｎ−［２−メチル−２−（２−ピリジルジスルファニル）プロピル］−６，１１−ジオキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−テトラセン−２−カルボキサミドの合成

【0136】

ＬＤ−５１の手順後、アルゴン雰囲気下の無水ジクロロメタン中の粗中間体５１ａを、無水トリエチルアミン、ＴＢＴＵ、及び２−メチル−２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロパン−１−アミンと反応させて、ＬＤ−５４を得た。
ＬＤ−５５：（２Ｓ，４Ｓ）−４−［［（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチル−３，４，４ａ，６，７，９，９ａ，１０ａ−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［１，２］オキサゾロ［３，４−ｂ］［１，４］オキサジン−３−イル］オキシ］−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−Ｎ−［２−メチル−２−［（５−ニトロ−２−ピリジル）ジスルファニル］プロピル］−６，１１−ジオキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−テトラセン−２−カルボキサミドの合成

【0137】

ＬＤ−６０の手順後、５−ニトロピリジン−２−チオール６０ａをＤＭＦ中のＬＤ−５４溶液に添加して、ＬＤ−５５を得た。
ＬＤ−５６：２−（２−ピリジルジスルファニル）プロピルＮ−メチル−Ｎ−［２−［メチル−［２−オキソ−２−［２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−［（９−メトキシ−１−メチル−３，４，４ａ，６，７，９，９ａ，１０ａ−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［１，２］オキサゾロ［３，４−ｂ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ］−６，１１−ジオキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−テトラセン−２−イル］エトキシ］カルボニル−アミノ］エチル］カルバメートの合成

【0138】

ＬＤ−５２の手順後、中間体５２ａを４−ニトロフェニル２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロピルカーボネートとアシル化して、ＬＤ−５６を得た。
ＬＤ−５７：（２Ｓ，４Ｓ）−４−［［（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチル−３，４，４ａ，６，７，９，９ａ，１０ａ−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［１，２］オキサゾロ［３，４−ｂ］［１，４］オキサジン−３−イル］オキシ］−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−Ｎ−［２−［（５−ニトロ−２−ピリジル）ジスルファニル］エチル］−６，１１−ジオキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−テトラセン−２−カルボキサミドの合成

【0139】

無水ＤＭＦ／ＭｅＯＨ（２５ｍＬ／２５ｍＬ）中の１，２−ビス（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファン５７ａ（１．０ｇ、３．２２ｍｍｏｌ）混合物に、ＨＯＡｃ（０．１ｍＬ）、続いて、２−アミノエタンチオール塩酸塩５７ｂ（１８３ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した後、これを真空下で濃縮して溶媒を除去し、残渣をＤＣＭ（３０ｍＬ×４）で洗浄して、淡黄色の固体として２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）エタンアミン塩酸塩５７ｃ（３００ｍｇ、６９．６％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ９．２８（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．５６（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｓ，４Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．１５−３．１３（ｍ，２Ｈ），３．０８−３．０６（ｍ，２Ｈ）

【0140】

中間体５１ａを上述のように調製した。あるいは、ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（５ｍＬ／５ｍＬ）中のＰＮＵ−１５９６８２（５０ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）懸濁液に、Ｈ_２Ｏ（２ｍＬ）中のＮａＩＯ_４（１７ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）溶液を添加した。この異種反応混合物を室温で４時間、暗所で勢いよく撹拌した。その後、この混合物を真空下で濃縮し、残渣をシリカゲル（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１００／１〜１０／１）上でカラムクロマトグラフィーにより精製して、紫色の固体として中間体５１ａ（４０ｍｇ、８０％）を得た。

【0141】

無水ＤＣＭ（５ｍＬ）中の中間体５１ａ（４０ｍｇ、０．０６４ｍｍｏｌ）溶液に、ＤＩＥＡ（４１ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、７３ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を室温で０．５時間撹拌した後、中間体５７ｃ（５１ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を添加した。結果として生じた混合物を室温でさらに４時間撹拌した。この混合物を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）により精製して、紫色の固体としてＬＤ−５７（１８ｍｇ、３３．３％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ＲＴ＝０．８９０分、Ｍ＋Ｈ^＋＝８４１．２．、方法＝５−９５ＡＢ／１．５分。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １３．９４（ｓ，１Ｈ），１３．３０（ｓ，１Ｈ），９．３３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．４０（ｄｄ，Ｊ＝９．２，２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．２２（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０−７．７６（ｍ，２Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．５２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），５．３４（ｓ，１Ｈ），５．３０（ｓ，１Ｈ），５．２２（ｓ，１Ｈ），４．６９（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），４．４７（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｓ，３Ｈ），４．０７−４．０１（ｍ，２Ｈ），３．９１（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７４（ｓ，２Ｈ），３．７０−３．５５（ｍ，４Ｈ），３．４５（ｓ，３Ｈ），３．４１−３．３８（ｍ，１Ｈ），３．２５（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，２Ｈ），３．０５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．８３−２．８０（ｍ，１Ｈ），２．７３−２．６８（ｍ，１Ｈ），２．５２−２．４８（ｍ，１Ｈ），２．４１−２．３６（ｍ，１Ｈ），２．０５−１．９８（ｓ，１Ｈ），１．８１−１．７５（ｍ，１Ｈ），１．３６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ）
ＬＤ−５８：２−［（５−ニトロ−２−ピリジル）ジスルファニル］エチルＮ−［２−［［２−［（２Ｓ，４Ｓ）−４−［［（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチル−３，４，４ａ，６，７，９，９ａ，１０ａ−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［１，２］オキサゾロ［３，４−ｂ］［１，４］オキサジン−３−イル］オキシ］−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−６，１１−ジオキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−テトラセン−２−イル］−２−オキソ−エトキシ］カルボニル−メチル−アミノ］エチル］−Ｎ−メチル−カルバメートの合成

【0142】

無水ＤＣＭ／ＣＨ_３ＯＨ（２５０ｍＬ／２５０ｍＬ）中の１，２−ビス（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファン５７ａ（９．６ｇ、３０．９７ｍｍｏｌ）及び２−メルカプトエタノール（１．２１ｇ、１５．４９ｍｍｏｌ）溶液をＮ_２下で、室温で２４時間撹拌した。この混合物を真空下で濃縮した後、残渣をＤＣＭ（３００ｍＬ）で希釈した。ＭｎＯ_２（１０ｇ）を添加し、この混合物を室温でさらに０．５時間撹拌した。この混合物をシリカゲル（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１００／１〜１００／１）上でカラムクロマトグラフィーにより精製して、茶色の油として２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）エタノール５８ａ（２．２ｇ、６１．１％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ９．３３（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３８−８．３５（ｄｄ，Ｊ＝９．２，２．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．８１−３．７６（ｑ、２Ｈ），３．０１（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）。

【0143】

無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の５８ａ（５００ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ）溶液に、ＤＩＥＡ（８３４ｍｇ、６．４５ｍｍｏｌ）、続いて、ＰＮＰカーボネート（ビス（４−ニトロフェニル）カーボネート、１．３１ｇ、４．３１ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を室温で４時間撹拌し、この混合物を分取ＨＰＬＣ（ＦＡ）により精製して、薄茶色の油として４−ニトロフェニル２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）エチルカーボネート５８ｂ（２７０ｍｇ、３３．１％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ９．３０（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．４３−８．４０（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．３０−８．２８（ｍ，２Ｈ），７．８７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３９−７．３７（ｍ，２Ｈ），４．５６（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．２１（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）。

【0144】

［２−［（２Ｓ，４Ｓ）−４−［［（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチル−３，４，４ａ，６，７，９，９ａ，１０ａ−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［１，２］オキサゾロ［３，４−ｂ］［１，４］オキサジン−３−イル］オキシ］−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−６，１１−ジオキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−テトラセン−２−イル］−２−オキソ−エチル］Ｎ−メチル−Ｎ−［２−（メチルアミノ）エチル］カルバメート５２ａを、Ｂｐｏｃ保護５８ｃ（Ｂｐｏｃは、２−（ｐ−ビフェニリル）−２−プロピルオキシカルボニルである）の脱保護によりＰＮＵから調製した。無水ＤＣＭ（４ｍＬ）中の５８ｃ（２５ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）（アミンが、２−（４−ビフェニリル）−プロプ−２−イル４′−メトキシカルボニルフェニルカーボネート（ＢＰＯＣ試薬、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ＣＡＳ登録 番号３１１４０−３７−１）で保護されている）溶液に、無水ＤＣＭ（１ｍＬ）中のジクロロ酢酸（Ｃｌ_２ＣＨＣＯＯＨ、６５ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）溶液を添加した。反応溶液を室温で２時間撹拌した。この溶液を真空下で濃縮し、残渣をメチル、ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ、１０ｍＬ×２）で洗浄して、赤色の固体として５２ａ（２５ｍｇ、１００％）を得た。

【0145】

無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中の５２ａ（２５ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）及び４−ニトロフェニル２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）エチルカーボネート５８ｂ（３０ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）溶液に、ＴＥＡ（トリエチルアミン、２５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を室温で一晩撹拌した後、これを真空下で濃縮し、残渣を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）により精製して、赤色の固体としてＬＤ−５８（１２ｍｇ、４８．０％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ＲＴ＝０．９２１分、Ｍ＋Ｎａ^＋＝１０３６．２。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １３．８８（ｓ，１Ｈ），１３．２４（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），９．２６−９．２５（ｍ，１Ｈ），８．４０（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），８．０１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７７（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．４７（ｓ，１Ｈ），５．３０−５．２３（ｍ，２Ｈ），５．１５−５．１１（ｍ，１Ｈ），４．９２−４．８７（ｍ，１Ｈ），４．７０（ｓ，１Ｈ），４．４７（ｓ，１Ｈ），４．３５（ｓ，２Ｈ），４．１０−４．０３（ｍ，４Ｈ），３．９２−３．８７（ｍ，１Ｈ），３．５９−３．４０（ｍ，８Ｈ），３．２５−３．２２（ｍ，１Ｈ），３．１２−３．１０（ｍ，２Ｈ），３．０４（ｓ，２Ｈ），３．９８（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，４Ｈ），２．８４−２．８２（ｍ，２Ｈ），２．６０（ｄ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，１Ｈ），２．０７−１．９８（ｍ，１Ｈ），１．７６−１．７２（ｍ，１Ｈ），１．４１（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，３Ｈ）。
ＬＤ−５９：２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−［（９−メトキシ−１−メチル−３，４，４ａ，６，７，９，９ａ，１０ａ−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［１，２］オキサゾロ［３，４−ｂ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ］−Ｎ−［２−［（５−ニトロ−２−ピリジル）ジスルファニル］プロピル］−６，１１−ジオキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−テトラセン−２−カルボキサミドの合成

【0146】

ＭｅＯＨ（３６０ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（４０ｍＬ）中の１−アミノプロパン−２−オール５９ａ（１０ｇ、１３３ｍｍｏｌ）撹拌溶液に、Ｂｏｃ_２Ｏ（３７ｇ、１６９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で５時間撹拌した後、これを濃縮し、クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ＝１０％〜５０％）により精製して、無色の油としてｔｅｒｔ−ブチル２−ヒドロキシプロピルカルバメート５９ｂ（１９．８ｇ、収率８５％）を得た。

【0147】

ＤＣＭ（１３０ｍＬ）中の５９ｂ（１０ｇ、５７ｍｍｏｌ）及びＥｔ_３Ｎ（１７ｇ、１７１ｍｍｏｌ）撹拌溶液に、ＭｓＣｌ（塩化メタンスルホニル、１３ｇ、１１４ｍｍｏｌ）溶液を添加した。反応混合物を室温で４時間撹拌した後、これを氷水（２００ｍＬ×３）及びブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を濃縮して、赤色の油として１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパン−２−イルメタンスルホネート５９ｃ（１２ｇ、収率８３％）を得た。

【0148】

アセトン（７０ｍＬ）中の５９ｃ（６ｇ、２３．７ｍｍｏｌ）撹拌溶液に、Ｈ_２Ｏ（１００ｍＬ）中のチオ酢酸カリウム（エタンチオ酸カリウム、５．４ｇ、４７．３ｍｍｏｌ）溶液を添加した。反応混合物を６０℃で１２時間撹拌した。この混合物を濃縮し、ＤＣＭ（２００ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、クロマトグラフィーにより精製して、赤色の固体としてＳ−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパン−２−イルエタンチオアート５９ｄ（１．１ｇ、収率２０％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３−ｄ）δ１．３０（ｄ，Ｊ＝７．０９Ｈｚ，３Ｈ）１．４４（ｓ，９Ｈ）２．３３（ｓ，３Ｈ）３．１６−３．４２（ｍ，２Ｈ）３．５８−３．７１（ｍ，１Ｈ）

【0149】

ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中の５９ｄ（５００ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ）撹拌溶液に、ＨＣｌ／ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）を滴加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した後、これを濃縮して１−アミノプロパン−２−チオール塩酸塩５９ｅを得て、次のステップで直接使用した。

【0150】

ＤＣＭ（３５ｍＬ）中の５７ａ（１．３３ｇ、４．３ｍｍｏｌ）溶液に、５９ｅ（２７３ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ）溶液を添加した。この混合物を１５℃で１２時間撹拌した。ＭｎＯ_２（３７４．１ｍｇ、４．３ｍｍｏｌ）をこの混合物に添加し、この固体をＤＣＭ（１００ｍＬ）及びＭｅＯＨ（３０ｍＬ×３）で洗浄した。この溶液を１５℃で１０分間撹拌した。濃縮して、黄色の固体として２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロパン−１−アミン５９ｆ（３００ｍｇ、５７％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ＲＴ＝０．５４６分、Ｍ＋Ｈ^＋＝２４５．７。

【0151】

無水ＤＣＭ／ＤＭＦ（５ｍＬ）中の中間体５１ａ（２５ｍｇ、０．０４０ｍｍｏｌ）溶液に、ＤＩＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン、２６ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、４６ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を室温で０．５時間撹拌した後、５９ｆ（３４ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を添加した。結果として生じた混合物を室温でさらに４時間撹拌した。この混合物をＤＣＭ（３０ｍＬ）で希釈し、ブライン（１５ｍＬ×３）で洗浄した。ＤＣＭ層を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）により精製して、紫色の固体としてＬＤ−５９（７ｍｇ、２０．６％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ＲＴ＝０．７８３分、Ｍ＋Ｈ^＋＝８５５．２。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １３．９４（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），１３．３２（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），９．３３（ｓ，１Ｈ），８．６３−８．４７（ｍ，１Ｈ），８．３９−８．３５（ｍ，１Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７４−７．７１（ｄｄ，Ｊ＝８．８，５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．５２（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），５．３５（ｓ，１Ｈ），５．２７（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），４．６８（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｓ，３Ｈ），４．０６（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．９２（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７１−３．６７（ｍ，１Ｈ），３．５９−３．５５（ｍ，２Ｈ），３．４５（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），３．４１−３．３６（ｍ，１Ｈ），３．２８−３．２２（ｍ，３Ｈ），２．８４−２．６０（ｍ，２Ｈ），２．５３−２．３７（ｍ，２Ｈ），２．０６−１．９４（ｍ，１Ｈ），１．８１−１．７７（ｍ，１Ｈ），１．４０−１．３８（ｄｄ，Ｊ＝６．４，２．４Ｈｚ，３Ｈ），１．３５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ）
ＬＤ−６０：［２−オキソ−２−［２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−［（９−メトキシ−１−メチル−３，４，４ａ，６，７，９，９ａ，１０ａ−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［１，２］オキサゾロ［３，４−ｂ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ］−６，１１−ジオキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−テトラセン−２−イル］エチル］Ｎ−メチル−Ｎ−［２−［メチル−［２−［（５−ニトロ−２−ピリジル）ジスルファニル］プロポキシカルボニル］アミノ］エチル］カルバメートの合成

【0152】

ＤＭＦ（１ｍＬ）中の２−（２−ピリジルジスルファニル）プロピルＮ−メチル−Ｎ−［２−［メチル−［２−オキソ−２−［２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−［（９−メトキシ−１−メチル−３，４，４ａ，６，７，９，９ａ，１０ａ−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［１，２］オキサゾロ［３，４−ｂ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ］−６，１１−ジオキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−テトラセン−２−イル］エトキシ］カルボニル−アミノ］エチル］カルバメートＬＤ−５６（１０ｍｇ、１０．１７ｕｍｏｌ）溶液に、５−ニトロピリジン−２−チオール６０ａ（１５．８９ｍｇ、１０１．７２ｕｍｏｌ）溶液を２０℃で添加した。反応混合物を２０℃で２時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈し、その後、水（５ｍＬ）、ＮａＨＣＯ_３水溶液（５ｍＬ）、及びブライン（５ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２５：１）により精製して、赤色の固体として純粋なＬＤ−６０（７ｍｇ、６６．９４％）を得た。ＬＣＭＳ：（１０−８０、ＣＤ、７．０分）、３．７８２分、Ｍｓ＝１０２８．２（Ｍ＋１）；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １３．８３（ｓ，１Ｈ），１３．１９（ｓ，１Ｈ），９．１８（ｓ，１Ｈ），８．３１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．９７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．８６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．７３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．３３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），５．４１（ｓ，１Ｈ），５．２９−５．０５（ｍ，３Ｈ），４．８９−４．７５（ｍ，１Ｈ），４．６４（ｓ，１Ｈ），４．４０（ｓ，１Ｈ），４．１３（ｓ，２Ｈ），４．０９−３．８０（ｍ，６Ｈ），３．５８−３．１２（ｍ，１２Ｈ），３．０５−２．８５（ｍ，７Ｈ），２．７８−２．４２（ｍ，３Ｈ），２．１２−１．８５（ｍ，２Ｈ），１．７２−１．５５（ｍ，１Ｈ），１．３８−１．２５（ｍ，６Ｈ）
ＬＤ−６１：２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−［（９−メトキシ−１−メチル−３，４，４ａ，６，７，９，９ａ，１０ａ−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［１，２］オキサゾロ［３，４−ｂ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ］−６，１１−ジオキソ−Ｎ−［２−（２−ピリジルジスルファニル）プロピル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−テトラセン−２−カルボキサミドの合成

【0153】

ＬＤ−５１の手順後、アルゴン雰囲気下の無水ジクロロメタン中の粗中間体５１ａを、無水トリエチルアミン、ＴＢＴＵ、及び２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロパン−１−アミンと反応させて、ＬＤ−６１を得た。
ＬＤ−６２：（２Ｓ，４Ｓ）−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−（（（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ）−Ｎ−（（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロピル）−６，１１−ジオキソ−１，２，３，４，６，１１−ヘキサヒドロテトラセン−２−カルボキサミドの合成

【0154】

ＬＤ−５９の手順後、ＬＤ−６２を調製した。
ＬＤ−６３：（２Ｓ，４Ｓ）−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−（（（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ）−Ｎ−（（Ｓ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロピル）−６，１１−ジオキソ−１，２，３，４，６，１１−ヘキサヒドロテトラセン−２−カルボキサミドの合成

【0155】

ＬＤ−５９の手順後、ＬＤ−６３を調製した。

【0156】

実施例２：還元及び再酸化による複合へのシステイン操作抗体の調製
ある特定の条件下で、システイン操作抗体を、２ｍＭ ＥＤＴＡを有する５０ｍＭトリス（ｐＨ７．５）中で、ＤＴＴ（クレランド試薬、ジチオスレイトール）またはＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩、Ｇｅｔｚ ｅｔ ａｌ（１９９９）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｖｏｌ ２７３：７３−８０；Ｓｏｌｔｅｃ Ｖｅｎｔｕｒｅｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）等の還元剤で、３７℃で３時間または室温で一晩処置することにより、表１の中間体等の本発明のリンカー−薬物中間体との複合に対して反応させることができる。ＣＨＯ細胞中で発現した全長システイン操作モノクローナル抗体（ＴＨＩＯＭＡＢ（商標））（Ｇｏｍｅｚ ｅｔ ａｌ（２０１０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇ．１０５（４）：７４８−７６０、Ｇｏｍｅｚ ｅｔ ａｌ（２０１０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２６：１４３８−１４４５）を、例えば、約５０倍過剰のＤＴＴで、室温で一晩還元して、新たに導入されたシステイン残基と培養培地中に存在するシステインとの間に生じ得るジスルフィド結合を還元した。還元されたＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を希釈し、１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５）中のＨｉＴｒａｐ Ｓカラム上に装填し、０．３Ｍ塩化ナトリウムを含有するＰＢＳで溶出した。あるいは、この抗体を、２０分の１の体積の１０％酢酸を添加することにより酸性化し、１０ｍＭコハク酸塩（ｐＨ５）で希釈し、そのカラム上に装填し、その後、１０カラム体積のコハク酸緩衝液で洗浄した。このカラムを５０ｍＭトリス（ｐＨ７．５）、２ｍＭ ＥＤＴＡで溶出した。

【0157】

軽鎖アミノ酸を、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，（１９９１）５ｔｈ Ｅｄ．，ＵＳ Ｄｅｐｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）に従って番号付けする。重鎖アミノ酸を、Ｋａｂａｔシステムとして言及される場合を除いて、ＥＵ番号付け（Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ（１９６９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ｏｆ Ｓｃｉ．６３（１）：７８−８５）に従って番号付けする。単一文字のアミノ酸略語を使用する。

【0158】

ＣＨＯ細胞中で発現した全長システイン操作モノクローナル抗体（ＴＨＩＯＭＡＢ（商標））は、システイン付加物（シスチン）を有するか、または細胞培養条件により操作されたシステイン上でグルタチオン化されている。操作されたシステインの反応性チオール基を遊離させるために、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を５００ｍＭホウ酸ナトリウム及び５００ｍＭ塩化ナトリウム（約ｐＨ８．０）中に溶解し、約５０〜１００倍過剰の１ｍＭ ＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（Ｇｅｔｚ ｅｔ ａｌ（１９９９）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｖｏｌ ２７３：７３−８０；Ｓｏｌｔｅｃ Ｖｅｎｔｕｒｅｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）で、３７℃で約１〜２時間還元する。あるいは、ＤＴＴを還元剤として使用することができる。鎖間ジスルフィド結合の形成を、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥまたは変性逆相ＨＰＬＣ ＰＬＲＰカラムクロマトグラフィーのいずれかにより監視した。還元されたＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を希釈し、１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５）中のＨｉＴｒａｐ ＳＰ ＦＦカラム上に装填し、０．３Ｍ塩化ナトリウムを含有するＰＢＳまたは１５０ｍＭ塩化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス−Ｃｌ（ｐＨ７．５）で溶出した。

【0159】

再酸化を実行することにより、ジスルフィド結合を親Ｍａｂに存在するシステイン残基間に再構築した。溶出された還元されたＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を、５０ｍＭトリス−Ｃｌ（ｐＨ７．５）中の１５倍若しくは２ｍＭデヒドロアスコルビン酸（ｄｈＡＡ）（ｐＨ７）で約３時間若しくは約３時間、または２００ｎＭ〜２ｍＭ硫酸銅水溶液（ＣｕＳＯ_４）で、室温で一晩処置した。当該技術分野で既知の他の酸化体、すなわち、酸化剤、及び酸化条件を使用することができる。環境大気酸化も有効であり得る。この軽度の部分的再酸化ステップにより、鎖内ジスルフィドが高忠実度で効果的に形成される。Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５樹脂で溶出することにより緩衝液を交換し、１ｍＭ ＤＴＰＡを有するＰＢＳで溶出する。還元された抗体濃度をその溶液の２８０ｎｍでの吸光度から決定することにより、かつＤＴＮＢ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）と反応させ、４１２ｎｍでの吸光度を決定することによりチオール濃度を決定することにより、チオール／Ａｂ値を確認する。

【0160】

液体クロマトグラフィー／質量分光分析を、ＴＳＱ Ｑｕａｎｔｕｍトリプル四重極（商標）質量分光計上で、拡張された質量範囲で行った（Ｔｈｅｒｍｏ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）。試料を、７５℃に加熱したＰＲＬＰ−Ｓ（登録商標）、１０００Ａ、マイクロボアカラム（５０ｍｍ×２．１ｍｍ、Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｓｈｒｏｐｓｈｉｒｅ，ＵＫ）上でクロマトグラフにかけた。３０〜４０％Ｂ（溶媒Ａ：水中０．０５％ＴＦＡ、溶媒Ｂ：アセトニトリル中０．０４％ＴＦＡ）からの線形勾配を使用し、エレクトロスプレー源を使用して溶出液を直接イオン化した。データをＸｃａｌｉｂｕｒ（登録商標）データシステムにより収集し、ＰｒｏＭａｓｓ（登録商標）（Ｎｏｖａｔｉａ，ＬＬＣ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）を使用してデコンボリューションを行った。ＬＣ／ＭＳ分析前に、抗体または薬物複合体（５０ミリグラム）をＰＮＧａｓｅ Ｆ（２単位／ｍＬ、ＰＲＯｚｙｍｅ，Ｓａｎ Ｌｅａｎｄｒｏ，ＣＡ）で、３７℃で２時間処置して°、Ｎ結合型炭水化物を除去した。

【0161】

疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）試料をブチルＨＩＣ ＮＰＲカラム（粒径２．５ミクロン、４．６ｍｍ×３．５ｃｍ）（Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）に注入し、０〜７０％Ｂ（Ａ：５０ｍＭリン酸カリウム中１．５Ｍ硫酸アンモニウム（ｐＨ７）、Ｂ：５０ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ７）、２０％イソプロパノール）からの線形勾配で、０．８ｍＬ／分で溶出した。多波長検出器及びＣｈｅｍｓｔａｔｉｏｎソフトウェアを装備したＡｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズＨＰＬＣシステムを使用して、１抗体当たり異なる薬物比率を有する抗体種を分解し、定量した。

【0162】

実施例３：リンカー−薬物中間体の抗体への複合
実施例２の還元及び再酸化手順後、システイン操作抗体（ＴＨＩＯＭＡＢ（商標））をＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）緩衝液中に溶解し、氷上で冷やす。表１のＬＤ−５１〜ＬＤ−６１を含むが、これらに限定されない、チオール反応性ピリジルジスルフィド基を有する過剰の約１．５モル〜２０当量のリンカー−薬物中間体をＤＭＳＯ中に溶解し、アセトニトリル及び水中に希釈し、ＰＢＳ中の冷やした還元された再酸化抗体に添加する。典型的には、このリンカー−薬物を、５０ｍＭトリス（ｐＨ８）中約２０ｍＭの濃度のＤＭＳＯストックからその抗体に添加し、反応混合物のＬＣ−ＭＳ分析によって決定されるように反応が完了するまで約１〜約２４時間監視する。反応が完了すると、過剰のマレイミドを添加して反応停止処理し、いずれの反応していない抗体チオール基もキャップする。複合混合物を、ＨｉＴｒａｐ ＳＰ ＦＦカラム上に装填し、それを通して溶出して、過剰の薬物−リンカー中間体及び他の不純物を除去することができる。反応混合物を遠心限外濾過により濃縮し、システイン操作抗体薬物複合体をＰＢＳ中Ｇ２５樹脂での溶出により精製して脱塩し、滅菌条件下で０．２μｍのフィルターを通して濾過し、保管用に凍結させた。

【0163】

例えば、粗抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）を、２０ｍＭコハク酸ナトリウム（ｐＨ５）で希釈した後に、カチオン交換カラムに適用する。このカラムを少なくとも１０カラム体積の２０ｍＭコハク酸ナトリウム（ｐＨ５）で洗浄し、この抗体をＰＢＳで溶出した。ゲル濾過カラムを使用して抗体−薬物複合体を２４０ｍＭスクロースとともに２０ｍＭ酢酸ヒスチジン（ｐＨ５）に製剤化した。抗体−薬物複合体を、リジンＣエンドペプチダーゼでの処置前及び処置後に、タンパク質濃度を決定するためのＵＶ分光法、凝集分析のための分析ＳＥＣ（サイズ排除クロマトグラフィー）、及びＬＣ−ＭＳによって特徴付けた。

【0164】

０．２５ｍＭ塩化カリウムを有する０．２Ｍリン酸カリウム（ｐＨ６．２）及び１５％ＩＰＡ中のＳｈｏｄｅｘ ＫＷ８０２．５カラムを使用して、サイズ排除クロマトグラフィーを０．７５ｍＬ／分の流量で行う。この複合体の凝集状態を２８０ｎｍでの溶出ピーク面積吸光度の積分により決定した。

【0165】

Ａｇｉｌｅｎｔ ＱＴＯＦ ６５２０ ＥＳＩ機器を使用してＬＣ−ＭＳ分析を行うことができる。一例として、抗体−薬物複合体を、トリス（ｐＨ７．５）中１：５００ｗ／ｗエンドプロテイナーゼＬｙｓ Ｃ（Ｐｒｏｍｅｇａ）で、３７℃で３０分間処置する。結果として生じる切断断片を８０℃に加熱した１０００Å（オングストローム）の８μｍ（ミクロン）のＰＬＲＰ−Ｓ（高度に架橋されたポリスチレン）カラム上に装填し、３０％Ｂ〜４０％Ｂの勾配で５分間溶出する。移動相Ａは、０．０５％ＴＦＡを有するＨ_２Ｏであり、移動相Ｂは、０．０４％ＴＦＡを有するアセトニトリルであった。流量は、０．５ｍＬ／分であった。エレクトロスプレーオン化及びＭＳ分析前に、タンパク質溶出を２８０ｎｍでのＵＶ吸光度検出により監視した。複合されていないＦｃ断片、複合されていない残留Ｆａｂ、及び薬物付加されたＦａｂのクロマトグラフ分解を通常達成した。Ｍａｓｓ Ｈｕｎｔｅｒ（商標）ソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して得られたｍ／ｚスペクトルをデコンボリューションして、抗体断片の質量を計算した。

【0166】

これらの手順により、表２のシステイン操作抗体−薬物複合体１０１〜１１７を調製した。

【0167】

実施例４：インビトロ細胞増殖アッセイ
以下のプロトコルを用いた細胞増殖アッセイ（ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ ＧＬＯ（商標）発光細胞生存率アッセイ、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ＴＢ２８８、Ｍｅｎｄｏｚａ ｅｔ ａｌ（２００２）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６２：５４８５−５４８８）により、ＡＤＣの有効性を測定した。
１．約１０^４細胞（ＳＫＢＲ−３、ＢＴ４７４、ＭＣＦ７、またはＭＤＡ−ＭＢ−４６８）を有する一定分量の１００mＬの細胞培養培地を不透明壁付き９６ウェルプレートの各ウェル中に堆積させた。
２．培地を含有する細胞なしの対照ウェルを調製した。
３．ＡＤＣを実験ウェルに添加し、３〜５日間インキュベートした。
４．これらのプレートを約３０分間室温に平衡化した。
５．各ウェル中に存在する細胞培養培地の体積に等しい体積のＣＥＬＬＴＩＴＥＲ ＧＬＯ（商標）試薬を添加した。
６．これらの内容物を軌道振盪器上で２分間混合して、細胞溶解を誘導した。
７．このプレートを室温で１０分間インキュベートして、発光シグナルを安定させた。
８．発光を記録し、ＲＬＵ＝相対発光単位でグラフに報告した。
データを標準偏差エラーバーで各複製物セットの発光の平均としてプロットする。このプロトコルは、ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ ＧＬＯ（商標）発光細胞の修飾である。
培地：ＳＫ−ＢＲ−３を５０／５０／１０％ＦＢＳ／グルタミン中で成長させ、２５０μｇ／ｍＬのＧ−４１８ ＯＶＣＡＲ−３をＲＰＭＩ／２０％ＦＢＳ／グルタミン中で成長させる。

【0168】

実施例５：高発現ＨＥＲ２トランスジェニック外植片マウスにおける腫瘍成長阻害、インビボ有効性
０日目の単回処置前に、腫瘍を構築し、体積１５０〜２００ｍｍ^３（キャリパーを使用して測定）に成長させた。式：Ｖ（ｍｍ^３）＝０．５Ａ×Ｂ^２（式中、Ａ及びＢは、それぞれ、長い直径及び短い直径である）に従ってキャリパーを使用して腫瘍体積を測定した。腫瘍体積が３０００ｍｍ^３に到達する前に、または腫瘍が切迫した潰瘍形成の兆候を示したときに、マウスを安楽死させた。各実験群（１群当たり１０匹のマウス）から収集したデータを平均＋ＳＥとして表した。

【0169】

Ｆｏ５マウス乳腺腫瘍モデルを用いて、本発明の抗体−薬物複合体のインビボ有効性を、単回用量静脈注入後に、かつ参照により本明細書に組み込まれる、先に記載されている（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ ＧＤＬ，Ｌｉ ＧＭ，Ｄｕｇｇｅｒ ＤＬ，ｅｔ ａｌ． Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＨＥＲ２−Ｐｏｓｉｔｉｖｅ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ ｗｉｔｈ Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ−ＤＭ１，ａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ．（２００８）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ６８：９２８０−９０）ように評価した。抗Ｈｅｒ２ ＡＤＣを、ヒトＨＥＲ２遺伝子が図３及び５に示されるプロモーター（ＭＭＴＶ−ＨＥＲ２）に対して転写調節下でマウス乳腺腫瘍の乳腺上皮中で過剰発現されるトランスジェニックマウスモデルであるＦｏ５モデルで試験した。ＨＥＲ２過剰発現は、乳腺腫瘍の自然発症を引き起こす。これらの創始者動物（創始者番号５［Ｆｏ５］）のうちの１匹の乳腺腫瘍を、腫瘍断片（約２×２ｍｍの大きさ）の連続移植によりＦＶＢマウスの次の世代に伝播させた。すべての研究をＧｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓに従って実行した。各抗体−薬物複合体（単回用量）を９匹の動物に、この研究の開始時に、かつ移植１４日後に静脈内投与した。初期腫瘍サイズは、体積約２００ｍｍ^３であった。本発明の抗体−薬物複合体及び対照による経時的な腫瘍成長阻害の測定結果を図３〜５に示す。

【0170】

別の乳腺脂肪体移植有効性モデルを記載されるように（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６７：４９２４−４９３２）用いて、単回静脈内投与後の腫瘍体積を評価し、腹腔内腫瘍を有するマウスから切除した腫瘍を使用し、その後、受容マウスの乳腺脂肪体に連続継代することができる。

【0171】

上述の発明は、明確な理解のために例証及び例としてある程度詳細に記載されているが、これらの説明及び例は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書全体にわたって引用されるすべての特許、特許出願、及び参考文献は、参照により明示的に組み込まれる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]