特許 6656505 オービットアジン−フマル酸塩、水和物、結晶形及びその調製方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6656505

(24)【登録日】2020年2月7日

(45)【発行日】2020年3月4日

(54)【発明の名称】オービットアジン−フマル酸塩、水和物、結晶形及びその調製方法

(51)【国際特許分類】

   C07D 243/08 20060101AFI20200220BHJP

   A61K 31/551 20060101ALI20200220BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20200220BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20200220BHJP

【ＦＩ】

   C07D243/08 506

   A61K31/551

   A61P35/00

   A61P43/00 111

【請求項の数】11

【全頁数】37

(21)【出願番号】特願2018-522834(P2018-522834)

(86)(22)【出願日】2015年7月24日

(65)【公表番号】特表2018-525436(P2018-525436A)

(43)【公表日】2018年9月6日

(86)【国際出願番号】CN2015085025

(87)【国際公開番号】WO2017015784

(87)【国際公開日】20170202

【審査請求日】2018年5月2日

(73)【特許権者】

【識別番号】519460960

【氏名又は名称】シェンチェン チェンシン メディカル テクノロジー カンパニー リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100090033

【弁理士】

【氏名又は名称】荒船 博司

(74)【代理人】

【識別番号】100093045

【弁理士】

【氏名又は名称】荒船 良男

(72)【発明者】

【氏名】チェン， リーレン

【審査官】 吉海 周

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１３−５４０７８１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００８−５４５７１８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１２／１７６８４２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１０／１０２５１３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 中国特許出願公開第１０２２７６５５６（ＣＮ，Ａ）

【文献】 中国特許出願公開第１０１９４１９５３（ＣＮ，Ａ）

【文献】 中国特許出願公開第１０１５０３３９４（ＣＮ，Ａ）

【文献】 Tang, Jing et al.，Absorption mechanism of SM-1 based on a procaspase-3-activated anti-tumor agent，Zhongguo Yaolixue Tongbao，２０１４年，30(4)，542-546.

【文献】 平山令明，有機化合物結晶作製ハンドブック，２００８年，p.17-23,37-40,45-51,57-65

【文献】 STAHLY，P.，医薬品の塩選択,結晶多形のスクリーニングの重要性について，薬剤学，２００６年，Vol.66，No.6，p.435-439

【文献】 米持悦生，医薬品原薬及び製剤のバルク状態分析の重要性，SCAS NEWS，２００４年，2004-II，3-6

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ

Ａ６１Ｋ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

オービットアジン−フマル酸塩水和物の結晶形であって、
前記オービットアジン−フマル酸塩水和物は式ＩＩに示される構造を有し、
式ＩＩ中、ｎは約１、ｍは約１であり、
前記結晶形のＣｕ−Ｋα線を用いて決定されるＸ線粉末回折パターンは、少なくとも７．０±０．２、１７．３±０．２及び２１．３±０．２の２θ位置にピークを有し、
前記Ｘ線粉末回折パターンは、任意に、さらに少なくとも１つのピークを、１２．９±０．２、１７．９±０．２及び１９．７±０．２の２θ位置から選択される位置、及び／又は１３．４±０．２、１４．７±０．２及び２３．５±０．２の２θ位置から選択される位置に有する結晶形。

【化1】

【請求項2】

示差走査熱量測定により決定される２つの融点を有し、
前記２つの融点は、それぞれ１０２．１８℃±３．０℃及び１５３．７２℃±３．０℃である請求項１に記載の結晶形。

【請求項3】

請求項１に記載の結晶形の調整方法であって、以下の項目のいずれかから選択されることを特徴とする方法：
１）式I（式I中、ｎは１）に示されるオービットアジン−フマル酸塩の結晶形を、水、有機溶媒（例えば、エチルアセテート）又は有機溶媒（例えば、エタノール、ＤＭＡ、ＮＭＰ又はＤＭＳＯ）と水の混合溶媒中で結晶化して請求項１に記載の結晶形を取得し、任意に、さらに濾過又は乾燥を含む方法であって、
前記式Ｉの結晶形のＣｕ−Ｋα線を用いて決定されるＸ線粉末回折パターンは、少なくとも５．９±０．２、１６．８±０．２及び１８．１±０．２の２θ位置にピークを有し、
前記Ｘ線粉末回折パターンは、任意に、さらに少なくとも１つのピークを、１０．１±０．２、１４．２±０．２及び２２．４±０．２の２θ位置から選択される位置、及び／又は１１．４±０．２、２０．８±０．２及び２３．８±０．２の２θ位置から選択される位置に有する方法；
２）式I（式I中、ｎは２）に示されるオービットアジン−フマル酸塩の結晶形を室温の水中で１２〜３６時間撹拌して請求項１に記載の結晶形に変換する方法であって、
前記式Ｉの結晶形のＣｕ−Ｋα線を用いて決定されるＸ線粉末回折パターンは、少なくとも５．７±０．２、９．５±０．２及び１０．０±０．２の２θ位置にピークを有し、
前記Ｘ線粉末回折パターンは、任意に、さらに少なくとも１つのピークを、１４．７±０．２、１９．２±０．２及び２６．７±０．２の２θ位置から選択される位置、及び／又は１３．３±０．２、２２．２±０．２及び２３．６±０．２の２θ位置から選択される位置に有する方法；及び
３）式I（式I中、ｎは１）に示されるオービットアジン−フマル酸塩のアモルファス形を室温の水中で１２〜３６時間撹拌して請求項１に記載の結晶形に変換する方法であって、
前記式Ｉのアモルファス形の示差走査熱量測定により決定されるガラス転移温度が５１．１２℃±３．０℃である方法。

【化2】

【請求項4】

項目１）において、式Iに示されるオービットアジン−フマル酸塩の結晶形の、示差走査熱量測定により決定される前記結晶形の融点は１５６．２７℃±３．０℃である、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

項目２）において、式Iに示されるオービットアジン−フマル酸塩の結晶形の、示差走査熱量測定により決定される前記結晶形の融点は１５６．９３℃±３．０℃である、請求項３に記載の方法。

【請求項6】

請求項１又は２に記載のオービットアジン−フマル酸塩水和物の結晶形、及び
医薬的に許容される担体又は賦形剤
を含むことを特徴とする医薬組成物。

【請求項7】

腫瘍の予防及び／又は治療に使用される、
請求項１又は２に記載のオービットアジン−フマル酸塩水和物の結晶形。

【請求項8】

前記腫瘍は、カスパーゼ−３の異常発現に関連する腫瘍であり、例えば、胃癌、大腸癌、肝臓癌、胆嚢癌、悪性リンパ腫、子宮頸癌、神経芽細胞腫、髄芽腫及び肺癌からなる群より選択される、
請求項７に記載のオービットアジン−フマル酸塩水和物の結晶形。

【請求項9】

腫瘍細胞の破壊又は殺傷に使用される請求項１又は２に記載のオービットアジン−フマル酸塩水和物の結晶形。

【請求項10】

前記腫瘍細胞は、腫瘍細胞株又は被検者由来の腫瘍細胞である、
請求項９に記載のオービットアジン−フマル酸塩水和物の結晶形。

【請求項11】

前記腫瘍細胞は、胃癌細胞、大腸癌細胞、肝臓癌細胞、胆癌細胞、悪性リンパ腫細胞、子宮頸癌細胞、神経芽細胞腫細胞、髄芽腫細胞及び肺癌細胞からなる群より選択される、
請求項９に記載のオービットアジン−フマル酸塩水和物の結晶形。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、製薬化学分野に関し、特に、オービットアジン−フマル酸塩、水和物、結晶形及びその調製方法に関する。

【背景技術】

【0002】

悪性腫瘍は、ヒトの生命及び健康を著しく脅かす、臨床的に大きな疾患群である。多数の様々な種類の薬剤が開発され、腫瘍の治療に臨床的に適用されている。中でも、分子標的抗腫瘍薬は、その治療効果と低い副作用から広く注目を集めている。しかし、既存の分子標的薬の臨床適用において薬剤耐性に関する問題が発生し、これは薬剤の効果に影響するものであった。

【0003】

カスパーゼ−３は、アポトーシスに関連するプロテアーゼであり、アポトーシスの鍵となる実行分子である。酵素前駆体であるプロカスパーゼ−３が活性化されて活性カスパーゼ−３となり、細胞の重要なタンパクを分解してアポトーシスを引き起こさない限り、エフェクタータンパク質としての作用は実行されない。従って、プロカスパーゼ−３を特異的に活性化させてアポトーシスを誘発することは、新規かつ非常に効果的な抗腫瘍戦略である。

【0004】

特許文献WO2006/128173は、癌細胞において選択的にアポトーシスを誘発可能なピペラジンアセトヒドラジドヘテロ環化合物群を開示しており、このような化合物が潜在的に分子標的抗腫瘍剤として使用可能であることを示している。このような化合物の作用機序は、まさに、酵素前駆体であるプロカスパーゼ−３を活性化させて活性カスパーゼ−３とし、これにより、作用するものである。

【0005】

中国特許CN101503394Aにおいて、発明者は、ジアゼパンアセトヒドラジドヘテロ環化合物群を開示した。この抗腫瘍活性もまた、酵素前駆体であるプロカスパーゼ−３を活性化させて活性カスパーゼ−３とすることにより発揮される。従って、その化合物もまた、抗腫瘍剤として開発され得る。この特許は、オービットアジンモノフマル酸塩の調製方法及びその化合物の抗腫瘍活性を開示している。オービットアジンの化合物名は、以下の通りである：
（Ｅ）−Ｎ’−（３−アリル−（２−ヒドロキシフェニル）メチレン）−２−（４−ベンジル−１，４−ジアゼパン−１−イル）アセトヒドラジド。化学式は、以下の通りである：

【0006】

【化1】

【0007】

割合、溶媒及び多形が異なる塩は、異なる物理的及び化学的性質につながり、さらに薬の治療効果及び副作用に影響し得る。従って、薬剤として、割合、溶媒及び多形が異なる塩を調整することは、薬剤の開発において重要な問題である。しかし、上記問題に関して、オービットアジンについての報告は未だ存在しない。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

発明者はオービットアジン−フマル酸塩について広く研究を行い、驚くべきことに、複数の水和物及び異なる複数の結晶形を見出した。これにより、より高い薬効を有し、より容易に調整可能であり、保存安定性に優れたオービットアジン−フマル酸塩を提供することが可能となる。本発明は、上記の発見に基づいて完成された。

【課題を解決するための手段】

【0009】

第１の側面において、本発明はオービットアジン−フマル酸塩の結晶形に関し、前記オービットアジン−フマル酸塩は式Ｉに示される構造を有し、ｎは約１又は２である。

【0010】

【化2】

【0011】

本発明の第１の側面によるオービットアジン−フマル酸塩の結晶形は、以下の項目を含む：
１．オービットアジン−フマル酸塩の結晶形であって、そのＣｕ-Ｋα線を用いたＸ線粉末回折パターンは、少なくとも以下の２θ位置にピークを有する：５．９±０．２、１６．８±０．２及び１８．１±０．２。
本発明の実施形態において、Ｃｕ-Ｋα線を用いた結晶形のＸ線粉末回折パターンは、さらに少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ又は３つ）のピークを、以下の２θ位置から選択される位置に有する：１０．１±０．２、１４．２±０．２及び２２．４±０．２。
本発明の実施形態において、Ｃｕ-Ｋα線を用いた結晶形のＸ線粉末回折パターンは、さらに少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ又は３つ）のピークを、以下の２θ位置から選択される位置に有する：１１．４±０．２、２０．８±０．２及び２３．８±０．２。
本発明の実施形態において、示差走査熱量測定により決定される結晶形の融点は、１５６．２７℃±３．０℃である。
本発明の実施形態において、式Ｉ中、ｎは約１である。
本発明の実施形態において、結晶形は、フォームＡである。
本発明の実施形態において、フォームＡの典型的なＸＲＰＤパターンは図２に示される。
本発明の実施形態において、フォームＡの典型的なＤＳＣサーモグラムは、図３に示される。

【0012】

２．オービットアジンモノフマル酸塩の結晶形であって、そのＣｕ-Ｋα線を用いたＸ線粉末回折パターンは、少なくとも以下の２θ位置にピークを有する：６．５±０．２、２０．０±０．２及び２４．９±０．２。
本発明の実施形態において、Ｃｕ-Ｋα線を用いた結晶形のＸ線粉末回折パターンは、さらに少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ又は３つ）のピークを、以下の２θ位置から選択される位置に有する：５．３±０．２、１３．３±０．２及び１９．５±０．２。
本発明の実施形態において、Ｃｕ-Ｋα線を用いた結晶形のＸ線粉末回折パターンは、さらに少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ又は３つ）のピークを、以下の２θ位置から選択される位置に有する：１２．０±０．２、１４．８±０．２及び２６．７±０．２。
本発明の実施形態において、示差走査熱量測定により決定される結晶形の融点は１７１．４５℃±３．０℃である。
本発明の実施形態において、式Ｉ中、ｎは約２である。
本発明の実施形態において、結晶形は、フォームＣである。
本発明の実施形態において、フォームＣの典型的なＸＲＰＤパターンは図２８に示される。
本発明の実施形態において、フォームＣの典型的なＤＳＣサーモグラムは、図２９に示される。

【0013】

３．オービットアジンモノフマル酸塩の結晶形であって、そのＣｕ-Ｋα線を用いたＸ線粉末回折パターンは、少なくとも以下の２θ位置にピークを有する：５．７±０．２、９．５±０．２及び１０．０±０．２。
本発明の実施形態において、Ｃｕ-Ｋα線を用いた結晶形のＸ線粉末回折パターンは、さらに少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ又は３つ）のピークを、以下の２θ位置から選択される位置に有する：１４．７±０．２、１９．２±０．２及び２６．７±０．２。
本発明の実施形態において、Ｃｕ-Ｋα線を用いた結晶形のＸ線粉末回折パターンは、さらに少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ又は３つ）のピークを、以下の２θ位置から選択される位置に有する：１３．３±０．２、２２．２±０．２及び２３．６±０．２。
本発明の実施形態において、示差走査熱量測定により決定される結晶形の融点は、１５６．９３℃±３．０℃である。
本発明の実施形態において、式Ｉ中、ｎは約２である。
本発明の実施形態において、結晶形は、フォームＤである。
本発明の実施形態において、フォームＤの典型的なＸＲＰＤパターンは図３４に示される。
本発明の実施形態において、フォームＤの典型的なＤＳＣサーモグラムは、図３５に示される。

【0014】

第２の側面において、本発明は、オービットアジン−フマル酸塩水和物の結晶形に関し、前記オービットアジン−フマル酸塩水和物は式ＩＩに示される構造を有し、ｎは約１であり、ｍは約１である。

【0015】

【化3】

【0016】

本発明の実施形態において、結晶形のＣｕ-Ｋα線を用いたＸ線粉末回折パターンは、少なくとも以下の２θ位置にピークを有する：７．０±０．２、１７．３±０．２及び２１．３±０．２。
本発明の実施形態において、Ｃｕ-Ｋα線を用いた結晶形のＸ線粉末回折パターンは、さらに少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ又は３つ）のピークを、以下の２θ位置から選択される位置に有する：１２．９±０．２、１７．９±０．２及び１９．７±０．２。
本発明の実施形態において、Ｃｕ-Ｋα線を用いた結晶形のＸ線粉末回折パターンは、さらに少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ又は３つ）のピークを、以下の２θ位置から選択される位置に有する：１３．４±０．２、１４．７±０．２及び２３．５±０．２。
本発明の実施形態において、結晶形は、２つの融点を有する。
本発明の実施形態において、示差走査熱量測定により決定される結晶形の２つの融点は、それぞれ、１０２．１８℃±３．０℃及び１５３．７２℃±３．０℃である。
本発明の実施形態において、結晶形は、フォームＢである。
本発明の実施形態において、フォームＢの典型的なＸＲＰＤパターンは図１６に示される。
本発明の実施形態において、フォームＢの典型的なＤＳＣサーモグラムは、図１７に示される。

【0017】

第３の側面において、本発明は、オービットアジン−フマル酸塩のアモルファス形に関し、前記オービットアジン−フマル酸塩は式Ｉに示される構造を有し、ｎは約１である。

【0018】

【化4】

【0019】

本発明の実施形態において、示差走査熱量測定により決定されるオービットアジン−フマル酸塩のアモルファス形のガラス転移温度は５１．１２℃±３．０℃である。

【0020】

第４の側面において、本発明は、オービットアジン−フマル酸塩水和物に関し、前記オービットアジン−フマル酸塩は式ＩＩに示される構造を有し、ｎは約１であり、ｍは約１である。

【0021】

【化5】

【0022】

第５の側面において、本発明は、本発明の第１の側面の項目１に係る結晶形の調整方法に関し、調整方法は、以下の工程を有する：
本発明の第１の側面の項目２〜３のいずれか又は本発明の第２の側面のいずれかに係るオービットアジン−モノフマル酸塩又は結晶形を、溶媒中で結晶化して、本発明の第１の側面の項目１に係る結晶形を得る。
本発明の実施形態において、オービットアジン−モノフマル酸塩は、オービットアジン−モノフマル酸塩の結晶フォームＡである。

【0023】

本発明の実施形態において、溶媒は、水、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ペンタノール、イソペンタノール等）、ケトン（例えば、アセトン、ブタノン等）、アルカン又はハロアルカン（例えば、ｎ−ヘキサン、シクロヘキサン、ｎ−ヘプタン、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、クロロフォルム（ＣＨＣｌ_３）等）、エステル（例えば、エチルアセテート、イソプロピルアセテート、ｔｅｒｔ−ブチルアセテート等）、エーテル（例えば、イソプロピルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、石油エーテル等）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１，４−ジオキサン、トルエン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等、及びこれらの任意の組み合わせから選択される。

【0024】

本発明の実施形態において、オービットアジンモノフマル酸塩は蒸発結晶化されて、本発明の第１の側面の項目１に係る結晶形を得ることができる。蒸発結晶化の溶媒は、好ましくは、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｎ−ペンタノール、イソペンタノール等）、ケトン（例えば、アセトン、ブタノン等）、ハロアルカン（例えば、ＤＣＭ、ＣＨＣｌ_３等）、エステル（例えば、エチルアセテート、イソプロピルアセテート、ｔｅｒｔ−ブチルアセテート等。ただし、ｔｅｒｔ−ギ酸ブチルは除く。）、１，４−ジオキサン、トルエン、アセトニトリル、ＤＭＦ等、又はこれらの任意の組み合わせ（例えばグリセロール／エタノール（１：１、Ｖ／Ｖ）、例えばメタノール又はエタノール／ヘプタン（１：１、Ｖ／Ｖ）、例えばＴＨＦ／ヘプタン（２：１、Ｖ／Ｖ）、ＴＨＦ／アセトニトリル（１：１、Ｖ／Ｖ）、ＴＨＦ／イソプロピルアセテート（１：１、Ｖ／Ｖ）、ＴＨＦ／ＤＣＭ（１：１、Ｖ／Ｖ）、ＴＨＦ／アセトン（１：１、Ｖ／Ｖ）、ＴＨＦ／エチルアセテート（１：１、Ｖ／Ｖ）、ＴＨＦ／ギ酸ブチル（１：１、Ｖ／Ｖ）等）から選択される；好ましくは、蒸発結晶化は室温で行われる。

【0025】

本発明の実施形態において、オービットアジンモノフマル酸塩は再結晶化されて、本発明の第１の側面の項目１に係る結晶形を得ることができる。再結晶化の溶媒は、好ましくは、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｎ−ペンタノール、イソペンタノール等）、ケトン（例えば、アセトン、ブタノン等）、エステル（例えば、エチルアセテート、イソプロピルアセテート等。ただし、ギ酸ブチルは除く）、アセトニトリル、ＴＨＦ等、又はこれらの任意の組み合わせ（例えば、メタノール／水（１：４、Ｖ／Ｖ）、メタノール／メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１：４、Ｖ／Ｖ）、メタノール／イソプロピルアセテート（１：４、Ｖ／Ｖ）、エタノール／ｎ−ヘキサン（３：２、Ｖ／Ｖ））から選択される；好ましくは、オービットアジンモノフマル酸塩は、２５℃〜９０℃の温度（例えば、３０℃、４０℃、５０℃、６０℃、７０℃又は８０℃）で溶解され、オービットアジンモノフマル酸塩は０〜２５℃（例えば１０℃）で結晶化される。

【0026】

本発明の実施形態において、オービットアジンモノフマル酸塩は逆溶媒結晶化されて、本発明の第１の側面の項目１に係る結晶形を得ることができる。逆溶媒結晶化の良溶媒は、好ましくは、ＤＭＡ、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ及びＮＭＰから選択され、逆溶媒はエーテル（例えば、イソプロピルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル等）、ｎ−ペンタノール及びブタノン）、エステル（例えば、イソプロピルアセテート又はギ酸ブチル）、トルエン、水（好ましくは、良溶媒はＤＭＦ）、アセトニトリル等、又は混合溶媒、例えばＤＣＭ／ｎ−ヘキサン（２：１、Ｖ／Ｖ）、ＣＨＣｌ_３／メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２：５、Ｖ／Ｖ）から選択される；好ましくは、逆溶媒結晶化の工程は、０〜２５℃の温度において静置して又は撹拌しながら行われ、本発明の第１の側面の項目１に係る結晶形が調整される。

【0027】

本発明の実施形態において、オービットアジンモノフマル酸塩は縣濁結晶化されて、本発明の第１の側面の項目１に係る結晶形を得ることができる。縣濁結晶化の溶媒は、好ましくは、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｎ−ペンタノール、イソペンタノール等）、ケトン（例えば、アセトン、ブタノン等）、アルカン（例えば、ｎ−ヘキサン、シクロヘキサン、ｎ−ヘプタン等）、ハロアルカン（例えば、ＤＣＭ、ＣＨＣｌ_３等）、エステル（例えば、エチルアセテート、イソプロピルアセテート、ｔｅｒｔ−ブチルアセテート等。ただし、ギ酸ブチルは除く。）、エーテル（例えば、石油エーテル、イソプロピルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル等）１，４−ジオキサン、トルエン、アセトニトリル、ＴＨＦ等から選択される；好ましくは、縣濁結晶化は、２５〜５０℃の温度で行われる。

【0028】

本発明の実施形態において、本発明の第２の側面のいずれかに係る結晶形は、室温のエタノール中で１２〜３６時間（例えば２４時間）撹拌され、本発明の第１の側面の項目１に係る結晶形が得られる。
本発明の実施形態において、本発明の第２の側面のいずれかに係る結晶形は、１００℃〜１２０℃（例えば１０５℃〜１１５℃、例えば１１０℃）に加熱され、本発明の第１の側面の項目１に係る結晶形が得られる。
本発明の実施形態において、本発明の第１の側面の項目２又は項目３に係る結晶形は、エタノールに溶解され、その後冷却されて沈殿し、本発明の第１の側面の項目１に係る結晶形が得られる。
本発明の実施形態において、本発明の第１の側面の項目１に係る結晶形は、フォームＡである。
本発明の実施形態において、フォームＡの典型的なＸＲＰＤパターンは図２に示される。
本発明の実施形態において、フォームＡの典型的なＤＳＣサーモグラムは、図３に示される。

【0029】

第６の側面において、本発明は、本発明の第１の側面の項目２に係る結晶形の調整方法に関し、調整方法は、以下の工程を有する：
本発明の第１の側面の項目１又は項目３、又は本発明の第２の側面のいずれかに係る結晶形をギ酸ブチル中で結晶化して、本発明の第１の側面の項目２に係る結晶形を得る工程；さらに任意に、濾過又は乾燥工程を有する。

【0030】

本発明の実施形態において、本発明の第１の側面の項目１に係る結晶形は、室温のギ酸ブチル中で再結晶化され、得られた結晶は４０℃〜６０℃で濾過及び乾燥されて、本発明の第１の側面の項目２に係る結晶形が得られる。
本発明の実施形態において、本発明の第１の側面の項目１に係る結晶形は、室温のギ酸ブチル中で１２〜３６時間（例えば２４時間）撹拌されて、本発明の第１の側面の項目２に係る結晶形が得られる。
本発明の実施形態において、本発明の第１の側面の項目１に係る結晶形は、５０〜７５℃（例えば６０℃）の高温及び１５〜３０℃（例えば２５℃）の低温のギ酸ブチル中で再結晶化され、本発明の第１の側面の項目２に係る結晶形が得られる。
本発明の実施形態において、本発明の第１の側面の項目３に係る結晶形は、４０〜８０℃（例えば５０〜７５℃、例えば６０℃）の温度のギ酸ブチル中で１２〜３６時間撹拌され、本発明の第１の側面の項目２に係る結晶形が得られる。

【0031】

本発明の実施形態において、本発明の第２の側面のいずれかに係る結晶形は、室温のギ酸ブチル中で１２〜３６時間（例えば２４時間）撹拌され、本発明の第１の側面の項目２に係る結晶形が得られる。
本発明の実施形態において、本発明の第１の側面の項目２に係る結晶形は、フォームＣである。
本発明の実施形態において、フォームＣの典型的なＸＲＰＤパターンは図２８に示される。
本発明の実施形態において、フォームＣの典型的なＤＳＣサーモグラムは、図２９に示される。

【0032】

第７の側面において、本発明は、本発明の第１の側面の項目３に係る結晶形の調整方法に関し、調整方法は、以下の工程を有する：
本発明の第１の側面の項目１に係る結晶形をギ酸ブチル中で結晶化して、前記結晶形を取得する工程；さらに任意に、濾過又は乾燥工程を有する。

【0033】

本発明の実施形態において、濾過は熱濾過である。
本発明の実施形態において、本発明の第１の側面の項目１に係る結晶形は、４０℃〜６０℃（例えば５０℃）の温度のギ酸ブチル中で結晶化され、得られた結晶は熱濾過及び乾燥されて、本発明の第１の側面の項目３に係る結晶形が得られる。
本発明の実施形態において、本発明の第１の側面の項目１に係る結晶形は、４０℃〜６０℃（好ましくは５０℃）の温度のギ酸ブチル中で４〜１２時間撹拌されて、本発明の第１の側面の項目３に係る結晶形が得られる。
本発明の実施形態において、本発明の第１の側面の項目３に係る結晶形は、フォームＤである。
本発明の実施形態において、フォームＤの典型的なＸＲＰＤパターンは図３４に示される。
本発明の実施形態において、フォームＤの典型的なＤＳＣサーモグラムは、図３５に示される。

【0034】

第８の側面において、本発明は、本発明の第２の側面のいずれかに係る結晶形の調整方法に関し、以下のいずれかの項目から選択される：
１）本発明の第１の側面の項目１に係る結晶形は、水、有機溶媒（例えばエチルアセテート）又は有機溶媒（例えば、エタノール、ＤＭＡ、ＮＭＰ又はＤＭＳＯ）と水の混合溶媒中で結晶化され、前記結晶形が得られる；任意に、濾過又は乾燥をさらに含んでもよい。

【0035】

本発明の実施形態において、本発明の第１の側面の項目１に係る結晶形は、エチルアセテート中、又はエタノールと水の混合溶媒（体積比１：（１〜３）、例えば１：１）中で結晶化されて、本発明の第２の側面のいずれかに係る結晶形が得られる。
本発明の実施形態において、本発明の第１の側面の項目１に係る結晶形は、室温の水中で１２〜３６時間（例えば２４時間）撹拌されて、本発明の第２の側面のいずれかに係る結晶形が得られる。
２）本発明の第１の側面の項目３に係る結晶形は、室温の水中で１２〜３６時間（例えば２４時間）撹拌されて、本発明の第２の側面のいずれかに係る結晶形が得られる。

【0036】

３）本発明の第３の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩のアモルファス形は、室温の水中で１２〜３６時間（例えば２４時間）撹拌され、本発明の第２の側面のいずれかに係る結晶形に変換される。

【0037】

本発明の実施形態において、本発明の第２の側面に係る結晶形は、フォームＢである。
本発明の実施形態において、フォームＢの典型的なＸＲＰＤパターンは図１６に示される。
本発明の実施形態において、フォームＢの典型的なＤＳＣサーモグラムは、図１７に示される。

【0038】

第９の側面において、本発明は、本発明の第３の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩のアモルファス形の調整方法に関し、調整方法は、以下の工程を有する：
本発明の第１の側面又は第２の側面のいずれかに係る結晶形を、有機溶媒中に溶解する（例えば、アルコール又はＴＨＦ中に溶解され、前記アルコールはメタノール又はエタノールとすることができる。）。有機溶媒は蒸発又は回転蒸発により取り除かれて、本発明の第３の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩のアモルファス形が得られる。

【0039】

本発明の実施形態において、有機溶媒は、大気圧下又は減圧下で蒸発により取り除かれる。例えば、有機溶媒は、減圧下における静置蒸発又は回転蒸発により取り除かれる。
本発明の実施形態において、室温から６０℃（例えば２０〜５０℃、例えば３０〜４５℃）の温度において、本発明の第１の側面の項目１に係る結晶形は、エタノール中に溶解され、その後回転蒸発が施されて、本発明の第３の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩のアモルファス形が得られる。

【0040】

本発明の実施形態において、本発明の第１の側面の項目１に係る結晶形は、１５０〜１７５℃（例えば１６０℃）の温度に加熱され、それから室温から６０℃の温度（例えば４０℃）に冷却されて、本発明の第３の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩のアモルファス形が得られる。
本発明の実施形態において、本発明の第１の側面の項目２に係る結晶形は、エタノール中に溶解され、その後回転蒸発が施されて、本発明の第３の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩のアモルファス形が得られる。
本発明の実施形態において、本発明の第１の側面の項目３に係る結晶形は、エタノール中に溶解され、その後回転蒸発が施されて、本発明の第３の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩のアモルファス形が得られる。

【0041】

本発明の実施形態において、本発明の第２の側面のいずれかに係る結晶形は、エタノール中に溶解され、その後回転蒸発が施されて、本発明の第３の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩のアモルファス形が得られる。

【0042】

第１０の側面において、本発明は、本発明の第１の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩の結晶形、本発明の第２の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩水和物の結晶形、本発明の第３の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩のアモルファス形、又は本発明の第４の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩水和物、及び医薬的に許容される担体又は賦形剤を備える医薬組成物に関する。

【0043】

本発明は、腫瘍の予防及び／又は治療のための薬物を製造するために、本発明の第１の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩の結晶形、本発明の第２の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩水和物の結晶形、本発明の第３の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩のアモルファス形、本発明の第４の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩水和物、又は本発明の第１０の側面のいずれかに係る医薬組成物の使用にも関する。

【0044】

本発明の実施形態において、腫瘍は、カスパーゼ−３の異常発現に関連する腫瘍である。
本発明の実施形態において、腫瘍は、胃癌、大腸癌、肝臓癌、胆嚢癌、悪性リンパ腫、子宮頸癌、神経芽細胞腫、髄芽腫及び肺癌からなる群より選択される。

【0045】

本発明は、腫瘍の予防及び／又は治療において使用するための、本発明の第１の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩の結晶形、本発明の第２の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩水和物の結晶形、本発明の第３の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩のアモルファス形、本発明の第４の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩水和物、又は本発明の第１０の側面のいずれかに係る医薬組成物にも関する。

【0046】

本発明の実施形態において、腫瘍は、カスパーゼ−３の異常発現に関連する腫瘍である。
本発明の実施形態において、腫瘍は、胃癌、大腸癌、肝臓癌、胆嚢癌、悪性リンパ腫、子宮頸癌、神経芽細胞腫、髄芽腫及び肺癌からなる群より選択される。

【0047】

本発明は、腫瘍の予防及び／又は治療方法にも関し、その方法は、有効量の、本発明の第１の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩の結晶形、本発明の第２の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩水和物の結晶形、本発明の第３の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩のアモルファス形、本発明の第４の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩水和物、又は本発明の第１０の側面のいずれかに係る医薬組成物を、腫瘍の予防及び／又は治療を必要とする被検者に投与することを含む。

【0048】

本発明の実施形態において、腫瘍は、カスパーゼ−３の異常発現に関連する腫瘍である。
本発明の実施形態において、腫瘍は、胃癌、大腸癌、肝臓癌、胆嚢癌、悪性リンパ腫、子宮頸癌、神経芽細胞腫、髄芽腫及び肺癌からなる群より選択される。
本発明の実施形態において、被検者は哺乳類（例えば、ウシ、ウマ、ヤギ、ブタ、イヌ、ネコ、げっ歯類又は霊長類）であり、好ましい被検者はヒトである。

【0049】

本発明は、腫瘍細胞を破壊又は殺傷するための薬剤を製造するための、本発明の第１の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩の結晶形、本発明の第２の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩水和物の結晶形、本発明の第３の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩のアモルファス形、本発明の第４の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩水和物、又は本発明の第１０の側面のいずれかに係る医薬組成物の使用にも関する。

【0050】

本発明の実施形態の薬剤は、インビトロ法で使用される。
本発明の実施形態の薬剤は、インビボ法で使用される。
本発明の実施形態の腫瘍細胞は、腫瘍細胞株又は被検者由来の腫瘍細胞である。
本発明の実施形態の腫瘍細胞は、胃癌細胞、大腸癌細胞、肝臓癌細胞、胆癌細胞、悪性リンパ腫細胞、子宮頸癌細胞、神経芽細胞腫細胞、髄芽腫細胞及び肺癌細胞からなる群より選択される。

【0051】

本発明は、腫瘍細胞を破壊又は殺傷する方法にも関する。その方法は、有効量の本発明の第１の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩の結晶形、本発明の第２の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩水和物の結晶形、本発明の第３の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩のアモルファス形、本発明の第４の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩水和物、又は本発明の第１０の側面のいずれかに係る医薬組成物を細胞に投与することを含む。
本発明の実施形態の方法は、インビトロで実施される。
本発明の実施形態の方法は、インビボで実施される。
本発明の実施形態の腫瘍細胞は、腫瘍細胞株又は被検者由来の腫瘍細胞である。
本発明の実施形態の腫瘍細胞は、胃癌細胞、大腸癌細胞、肝臓癌細胞、胆癌細胞、悪性リンパ腫細胞、子宮頸癌細胞、神経芽細胞腫細胞、髄芽腫細胞及び肺癌細胞からなる群より選択される。

【0052】

腫瘍細胞を破壊又は殺傷する際に使用するための、本発明の第１の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩の結晶形、本発明の第２の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩水和物の結晶形、本発明の第３の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩のアモルファス形、本発明の第４の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩水和物、又は本発明の第１０の側面のいずれかに係る医薬組成物。
本発明の実施形態において、それはインビトロ法で使用される。
本発明の実施形態において、それはインビボ法で使用される。
本発明の実施形態の腫瘍細胞は、腫瘍細胞株又は被検者由来の腫瘍細胞である。
本発明の実施形態の腫瘍細胞は、胃癌細胞、大腸癌細胞、肝臓癌細胞、胆癌細胞、悪性リンパ腫細胞、子宮頸癌細胞、神経芽細胞腫細胞、髄芽腫細胞及び肺癌細胞からなる群より選択される。

【0053】

本発明は、腫瘍細胞を破壊及び／又は殺傷するためのキットにも関し、そのキットは、本発明の第１の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩の結晶形、本発明の第２の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩水和物の結晶形、本発明の第３の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩のアモルファス形、本発明の第４の側面のいずれかに係るオービットアジン−フマル酸塩水和物、又は本発明の第１０の側面のいずれかに係る医薬組成物を含み、任意に、使用説明書を含む。

【0054】

本発明の側面及び特徴は、さらに以下に説明される。
本発明で使用される用語及びフレーズは、当業者によく知られた一般的な意味である；しかし、本発明では、これらの用語及びフレーズについて、再度詳しく説明する。もし、ここに記載された用語及びフレーズの意味が公知の意味と異なる場合は、本発明に記載された意味とする。

【0055】

本発明で使用される「オービットアジン−フマル酸塩」の用語は、オービットアジンをフマル酸に結合させることにより形成された塩を意味する。本発明の実施形態において、１分子のオービットアジンは１又は２分子のフマル酸に結合可能である。具体的には、フマル酸とオービットアジンのモル比（ｎ値）は１又は２である。塩の形成時の分子間競合により、測定されたｎは、一般的に、１又は２付近の非整数となる。本発明の実施形態において、「ｎは約１」又は「ｎは約２」の表現は、ｎ値が１又は２の９０％〜１１０％の範囲内（例えば、１又は２の９５％〜１０５％の範囲内）にあることを意味する。

【0056】

ｎ値は、本分野において公知の方法、例えば、元素分析、^１ＨＮＭＲ及びイオンクロマトグラフィー等により決定することができる。本発明の実施形態において、ｎ値は、対応する化合物のＮＭＲスペクトルにより決定してもよい。

【0057】

結晶は、原子、分子又はイオン等の構成要素が、ある順序で周期的に配置された化合物を意味する。配置は、３次元空間において周期的であり、一定の距離にわたって繰り返し現れる。化合物は、２以上の結晶状態で存在してもよい。同じ構造の分子が、「多形」と呼ばれる異なる固体形状を形成するように結晶化されてもよい。特定の結晶化形状が含まれる場合、しばしば、本発明で使用される用語である「結晶型」と呼ばれる。本発明で使用される「フォームＡ」及び「結晶形Ａ」の用語は、「オービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡ」及び「オービットアジン−モノフマル酸塩の結晶原料」の用語と互換的に使用可能であり、オービットアジン−モノフマル酸塩の結晶フォームＡを意味する。本発明の実施形態において、その特徴は図１、２又は３に示される。

【0058】

本発明で使用される「フォームＢ」及び「結晶形Ｂ」の用語は、「オービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶フォームＢ」の用語と互換的に使用可能であり、オービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶フォームＢを意味する。本発明の実施形態において、その特徴は図１５、１６、１７又は１８に示される。

【0059】

本発明で使用される「フォームＣ」及び「結晶形Ｃ」の用語は、「オービットアジン二フマル酸塩の結晶形Ｉ」の用語と互換的に使用可能であり、オービットアジン二フマル酸塩の結晶フォームＣを意味する。本発明の実施形態において、その特徴は図２７、２８又は２９に示される。

【0060】

本発明で使用される「フォームＤ」及び「結晶形Ｄ」の用語は、「オービットアジン二フマル酸塩の結晶形ＩＩ」の用語と互換的に使用可能であり、オービットアジン二フマル酸塩の結晶フォームＤを意味する。本発明の実施形態において、その特徴は図３３、３４又は３５に示される。

【0061】

本発明に係る化合物の結晶形は、一定の純度を有する。純度は、特定の結晶形が化合物の総重量に占めるパーセンテージを意味しており、例えば、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９２％以上、９５％以上、９８％以上、９９％以上、９９．５％以上又は９９．９％以上である。残りは、その化合物の別の結晶形又はアモルファス形、又は医薬的に許容される不純物である。

【0062】

異なる種類の装置又は異なる試験条件が用いられた場合、わずかに異なるＸＲＰＤ（Ｘ線粉末回折）のパターン及びピーク値が取得され得ることが理解されるべきである。結晶形の回折ピークのパターン、ピーク値及び相対強度は、試験装置の点検及びメンテナンスのみならず、化合物の純度、サンプルの前処置、走査速度、粒子サイズに依存する。提供される数値は、絶対的な値とみなすことはできない。

【0063】

本発明において、各結晶形のＸ線粉末回折パターンにおける吸収ピークの位置は、開示された値±０．２°の範囲内、例えば開示された値±０．１°の範囲内となり得る。示差走査熱量測定により測定される融点は、開示された値±３．０℃、例えば開示された値±２．０℃の範囲内となり得る。

【0064】

異なる種類の装置又は異なる試験条件が用いられた場合、わずかに異なる融点が読み取られ得ることが理解されるべきである。結晶形の絶対的な値は、試験装置の点検及びメンテナンスのみならず、化合物の純度、サンプルの重量、加熱速度、粒子サイズに依存する。提供される数値は、絶対的な値とみなすことはできない。

【0065】

結晶の調整方法は、本技術において公知である。結晶は、例えば、適切な溶媒からの結晶化又は再結晶化、昇華、融液内成長、他の位相から固体への変換、超臨界流体からの結晶化、及び噴霧又は散布等のさまざまな方法で調整できる。溶媒混合物から結晶形を結晶化又は再結晶化する技術は、例えば、溶媒の蒸発、溶媒混合物の降温、分子及び／又は塩の過飽和溶媒混合物への種結晶の追加、溶媒混合物のフリーズドライ、及び溶媒混合物への逆溶媒の追加を含む。多形体も含め、結晶形の調整には、高スループットな結晶化技術が使用できる。本発明の実施形態において、オービットアジン−フマル酸塩の結晶は、蒸発、再結晶化、逆溶媒結晶化、縣濁結晶化、回転蒸発、粉砕又は溶融等によって得ることができる。

【0066】

本発明で使用される「アモルファス形」の用語は、分子及び／又はイオンの、結晶型以外の固体形状を意味する。アモルファス固体のＸ線粉末回折パターンは、鋭いピークを持たない。

【0067】

本発明で使用される「ガラス転移温度」の用語は、非結晶物質の内在的な性質であり、ガラス状態に変化する温度を意味する。

【0068】

本発明で使用される「水和物」の用語は、水分子と親化合物の相互作用、例えば共有結合又は配位結合を介した結合によって得られる化合物を意味する。水和物は、化学量論的又は非化学量論的な方法で水分子を含んでもよく、水分子は水和物中に規則的に又はランダムに配置される。

【0069】

本発明で使用される「室温」の用語は、常温（common temperature）又は一般的な温度（ordinary temperature）とも呼ばれ、一般的に、室内の温度を意味する。最適室内温度は、冬で１６〜１８℃、夏で２４〜２６℃である。一般的に、室温は、２０℃±２℃、２３℃±２℃又は２５℃±２℃、例えば２５℃と定義される。

【0070】

本発明で使用される「医薬的に許容される」の用語は、一般的に、医薬品分野で有用であって、製品又は哺乳類に害をなさない、又は利益／リスクの比が妥当又は許容範囲であることを意味する。

【0071】

本発明に係る医薬組成物は、オービットアジン−フマル酸塩又はその水和物の結晶形、及び医薬的に許容される担体又は賦形剤を含む。ここに記載される担体は以下を含むが、これらに限定されない。イオン交換体、酸化アルミニウム、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒトアルブミン等の血清タンパク質；リン酸等の緩衝物質、グリセロール、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩又は電解質であり、例えば、プロタミン硫酸塩、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸エステル、ミツロウ及びラノリン。賦形剤は、医薬製剤内の活性物質以外のアジュバントを意味する。賦形剤は、性質が安定しており、活性物質と不適合でなく、副作用を引き起こさず、治療効果に影響を及ぼさず、室温で容易に変形、干割れ、軟化及び腐敗、及び虫食いがなく、人体に害をなさす、生理学的作用をなさず、活性物質と化学的又は物理的に相互作用せず、活性物質の量の測定に影響しない。賦形剤は、例えば、錠剤中の結合剤、充填剤、崩壊剤、潤滑剤；伝統的な漢方薬の丸薬中のアルコール、酢、薬液等；軟膏及びクリーム等の半固体製剤中の基材；液体製剤中の防腐剤、抗酸化剤、フレーバー、香料、助溶媒、乳化剤、溶解剤、浸透圧調整剤、着色料等とすることができる。

【0072】

本発明で使用される「治療」の用語は、治癒のための治療、予防的治療（prophylactic treatment）及び予防処置（preventive treatment）を含むが、これらに限定されない。予防的治療は、一般的に、個体において疾患の発症を完全に防ぐこと又は前臨床段階にある疾患の発症を遅らせることを含む。

【0073】

本発明に係るオービットアジン−フマル酸塩の結晶形は、一般的に、医薬組成物の形状で被検者に投与され得る。医薬組成物は、本技術の定法により、以下のような様々な剤形に調整され得るが、これらに限定されない。剤形は、錠剤、カプセル、溶液、懸濁液、顆粒又は注入等であり、例えば、経口又は非経口経路等の経路により投与される。

【0074】

好ましい実施形態において、本発明の医薬組成物は、被検者に経口投与されてよい。経口投与される医薬組成物は、カプセル、錠剤、丸薬、トローチ、オブラート、顆粒、粉末等の形状；又は非水液体中の溶液又は懸濁液の形状；又は水中油型又は油中水型液体乳化液の形状；又はエリキシル剤又はシロップ剤の形状であり、そのそれぞれは、本発明のオービットアジン−フマル酸塩又はその水和物、又はその結晶形を活性成分として含む。

【0075】

必要に応じて、活性成分が遅延放出又は制御放出されるように本発明に係る医薬組成物を処方するために、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース又は他のポリマーマトリクス、リポソーム及び／又は微粒子を任意の比率で使用してよい。

【0076】

さらに、本発明に係る化合物又はその水和物、又はその結晶形の投与量又は使用方法は、年齢、体重、性別、一般的な健康状態、栄養状態、化合物の活性、投与時間、代謝レート、疾患の重症度及び医師の主観的判断を含む、複数の要因に左右されることを指摘しなければならない。好ましい投与量は、０．０１〜１００ｍｇ／体重ｋｇ／日である。

【図面の簡単な説明】

【0077】

【図1】図１は、本発明の実施形態のオービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡの^１ＨＮＭＲ（^１Ｈ核磁気共鳴）スペクトルを示す。

【図2】図２は、本発明の実施形態のオービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡのＸＲＰＤ（Ｘ線粉末回折）パターンを示す。

【図3】図３は、本発明の実施形態のオービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡのＤＳＣ（示差走査熱量測定）サーモグラムを示す。

【図4】図４は、本発明の実施形態の別の方法によって調整されたオービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡのＸＲＰＤパターンを示す。

【図5】図５は、本発明の実施形態の別の方法によって調整されたオービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡのＸＲＰＤパターンを示す。

【図6】図６は、本発明の実施形態の別の方法によって調整されたオービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡのＸＲＰＤパターンを示す。

【図7】図７は、本発明の実施形態の別の方法によって調整されたオービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡのＸＲＰＤパターンを示す。

【図8】図８は、本発明の実施形態の別の方法によって調整されたオービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡのＸＲＰＤパターンを示す。

【図9】図９は、本発明の実施形態の別の方法によって調整されたオービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡのＸＲＰＤパターンを示す。

【図10】図１０は、本発明の実施形態の別の方法によって調整されたオービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡのＸＲＰＤパターンを示す。

【図11】図１１は、本発明の実施形態の別の方法によって調整されたオービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡのＸＲＰＤパターンを示す。

【図12】図１２は、本発明の実施形態のオービットアジンモノフマル酸塩のアモルファス形の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す。

【図13】図１３は、本発明の実施形態のオービットアジンモノフマル酸塩のアモルファス形のＸＲＰＤパターンを示す。

【図14】図１４は、本発明の実施形態のオービットアジンモノフマル酸塩のアモルファス形のＤＳＣサーモグラムを示す。

【図15】図１５は、本発明の実施形態のオービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶フォームＢの^１ＨＮＭＲスペクトルを示す。

【図16】図１６は、本発明の実施形態のオービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶フォームＢのＸＲＰＤパターンを示す。

【図17】図１７は、本発明の実施形態のオービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶フォームＢのＤＳＣサーモグラムを示す。

【図18】図１８は、本発明の実施形態のオービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶フォームＢのＴＧＡ（熱重量分析）サーモグラムを示す。

【図19】図１９は、本発明の実施形態の別の方法によって調整されたオービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶フォームＢのＸＲＰＤパターンを示す。

【図20】図２０は、本発明の実施形態の別の方法によって調整されたオービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶フォームＢのＸＲＰＤパターンを示す。

【図21】図２１は、本発明の実施形態の別の方法によって調整されたオービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶フォームＢのＸＲＰＤパターンを示す。

【図22】図２２は、本発明の実施形態の別の方法によって調整されたオービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶フォームＢのＸＲＰＤパターンを示す。

【図23】図２３は、本発明の実施形態の別の方法によって調整されたオービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶フォームＢのＸＲＰＤパターンを示す。

【図24】図２４は、本発明の実施形態の別の方法によって調整されたオービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶フォームＢのＸＲＰＤパターンを示す。

【図25】図２５は、本発明の実施形態の熱結晶転移の間のオービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶フォームＢの顕微鏡写真を示す。

【図26】図２６は、本発明の実施形態の熱結晶転移の間の異なる位相におけるオービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶フォームＢのＸＲＰＤパターンの比較を示す；第１及び第３のカーブは、フォームＡのＸＲＰＤパターンであり、第２のカーブはフォームＢのＸＲＰＤパターンである。

【図27】図２７は、本発明の実施形態のオービットアジン二フマル酸塩の結晶形Ｉの^１ＨＮＭＲスペクトルを示す。

【図28】図２８は、本発明の実施形態のオービットアジン二フマル酸塩の結晶形ＩのＸＲＰＤパターンを示す。

【図29】図２９は、本発明の実施形態のオービットアジン二フマル酸塩の結晶形ＩのＤＳＣサーモグラムを示す。

【図30】図３０は、本発明の実施形態の別の方法によって調整されたオービットアジン二フマル酸塩の結晶形ＩのＸＲＰＤパターンを示す。

【図31】図３１は、本発明の実施形態の別の方法によって調整されたオービットアジン二フマル酸塩の結晶形ＩのＸＲＰＤパターンを示す。

【図32】図３２は、本発明の実施形態の別の方法によって調整されたオービットアジン二フマル酸塩の結晶形ＩのＸＲＰＤパターンを示す。

【図33】図３３は、本発明の実施形態のオービットアジン二フマル酸塩の結晶形ＩＩの^１ＨＮＭＲスペクトルを示す。

【図34】図３４は、本発明の実施形態のオービットアジン二フマル酸塩の結晶形ＩＩのＸＲＰＤパターンを示す。

【図35】図３５は、本発明の実施形態のオービットアジン二フマル酸塩の結晶形ＩＩのＤＳＣサーモグラムを示す。

【図36】図３６は、本発明の実施形態の別の方法によって調整されたオービットアジン二フマル酸塩の結晶形ＩＩのＸＲＰＤパターンを示す。

【図37】図３７は、本発明の実施形態における、ヒト大腸癌細胞ＳＷ４８０の阻害に対するオービットアジンフマル酸塩の結晶形のカーブを示す。

【図38】図３８は、本発明の実施形態における、ヒト胃腺癌細胞ＭＧＣ−８０３の阻害に対するオービットアジンフマル酸塩の結晶形のカーブを示す。

【図39】図３９は、本発明の実施形態における、ヒト小細胞肺腺癌細胞Ａ５４９の阻害に対するオービットアジンフマル酸塩の結晶形のカーブを示す。

【図40】図４０は、本発明の実施形態における、ヒトリンパ腫細胞Ｕ９３７の阻害に対するオービットアジンフマル酸塩の結晶形のカーブを示す。

【図41】図４１は、本発明の実施形態における、ヒト肝臓癌細胞Ｈｅｐ−Ｇ２の阻害に対するオービットアジンフマル酸塩の結晶形のカーブを示す。

【図42】図４２は、本発明の実施形態における、ヒト子宮頸癌細胞Ｈｅｌａの阻害に対するオービットアジンフマル酸塩の結晶形のカーブを示す。

【図43】図４３は、本発明の実施形態における、ヒト神経膠腫細胞ＢＴ−３２５の阻害に対するオービットアジンフマル酸塩の結晶形のカーブを示す。

【図44】図４４は、本発明の実施形態における、ヒト髄芽腫細胞Ｄ３４１ Ｍｅｄの阻害に対するオービットアジンフマル酸塩の結晶形のカーブを示す。

【図45】図４５は、本発明の実施形態における、ヒト胆嚢癌細胞ＧＢＣ−ＳＤの阻害に対するオービットアジンフマル酸塩の結晶形のカーブを示す。

【発明を実施するための形態】

【0078】

本発明の実施形態を、以下の実施例を参照して詳細に説明する。しかしながら、当業者であれば、以下の実施例は単に発明を説明することを意図しているのみであり、本発明の範囲を定義するとみなされるものではないことを解するであろう。具体的な条件が実施例に記載されていない場合、実施例は、従来法の条件又はメーカーにより推奨される条件によって実施される。メーカーが記載されていない試薬又は装置は、市販の通常の製品である。

【0079】

（４−ベンジル−［１，４］ジアゼパン−１−イル）−アセトヒドラジド（ＡＢＴ０２）（調整については、ＣＮ１０１５０３３９４Ａの実施例１参照。）
ＸＲＰＤ試験の装置及び条件：メーカー：パナリティカルＢ．Ｖ．；型：Ｅｍｐｙｒｅａｎ；Ｘ線発生装置の設定：４５ｋＶ、４０ｍＡ；走査範囲：３〜４０°；走査ステップ長さ：０．０１６８°；走査速度：１０秒／ステップ。
ＤＳＣ試験の装置及び条件：メーカー：ＴＡ；型：Ｑ２０００；温度範囲：３０〜３００℃；加熱速度：１０℃／分；窒素流速：５０ｍＬ／分。
核磁気共鳴（ＮＭＲ）：Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ＩＩＩ ＨＤ ６００；
熱重量分析（ＴＧＡ）――ＴＡ Ｑ５００；
真空乾燥機――上海一恒科学機器株式会社；
電磁撹拌装置――ＯｒａｇｏｎＬａｂ ＭＳ−Ｐｒｏ。

【0080】

実施例１ オービットアジンモノフマル酸塩の結晶形（フォームＡ）の調整

【0081】

【化6】

【0082】

室温において、機械式攪拌装置を備えた反応瓶に、（４−ベンジル−［１，４］ジアゼパン−１−イル）−アセトヒドラジド（２２．３０ｇ）、エタノール（１３３．８０ｍＬ）及び３−アリル−２−ヒドロキシベンズアルデヒド（１３．７９ｇ）を加え、均一に撹拌した。得られた混合物を６０℃に加熱して４時間恒温反応させ、（４−ベンジル−［１，４］ジアゼパン−１−イル）−アセトヒドラジド≦１．０％となるまで、培地コントロールのためにサンプルを採取した（サンプルは２時間ごとに採取した）。フマル酸（９．８７ｇ）を加え、その後、温度を８０℃に上げた。１３４ｍＬのシクロヘキサンを加えた後、温度を７５℃に下げ、白色固体を沈殿させた；３５分以内に、温度を室温と（１８℃）とした；１時間後に濾過を実行し、濾過ケークを４０℃の真空中で一晩乾燥させて、オービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡを得た。この結晶は、無水単結晶であり、吸水性が無く、バルク結晶であった。ＭＮＲスペクトルが図１に、ＸＲＰＤパターン及びＤＳＣサーモグラムが図２及び図３にそれぞれ示されている。得られた産物は、続く結晶形スクリーニング及び調整例の原料として使用された。

【0083】

実施例２ オービットアジンモノフマル酸塩の結晶形（フォームＡ）の調整
実施例１で調整された原料１００ｍｇを、６０℃の２ｍＬの無水エタノール／イソプロパノールに溶解した。２５℃に冷却した後、得られた混合物を静置して蒸発乾固させ、オービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡを得た。そのＸＲＰＤパターンは図４に示される。

【0084】

オービットアジンモノフマル酸塩結晶フォームＡは、蒸発結晶化によっても得られた。具体的な操作は以下の通りである：実施例１で調整された原料を溶媒に溶解し、室温で静置し、蒸発により固体（具体的には、オービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡ）が沈殿した。溶媒は、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｎ−ペンタノール、イソペンタノール、アセトン、ブタノン、ＤＣＭ、ＣＨＣｌ_３、エチルアセテート、イソプロピルアセテート、ｔｅｒｔ−ブチルアセテート、１，４−ジオキサン、トルエン、アセトニトリル及びＤＭＦ、又は以下の混合溶媒から選択される：グリセロール／エタノール（１：１、Ｖ／Ｖ）、メタノール又はエタノール／ヘプタン（１：１、Ｖ／Ｖ）、ＴＨＦ／ヘプタン（２：１、Ｖ／Ｖ）、ＴＨＦ／アセトニトリル（１：１、Ｖ／Ｖ）、ＴＨＦ／イソプロピルアセテート（１：１、Ｖ／Ｖ）、ＴＨＦ／ＤＣＭ（１：１、Ｖ／Ｖ）、ＴＨＦ／アセトン（１：１、Ｖ／Ｖ）、ＴＨＦ／エチルアセテート（１：１、Ｖ／Ｖ）又はＴＨＦ／ギ酸ブチル（１：１、Ｖ／Ｖ）。

【0085】

実施例３ オービットアジンモノフマル酸塩の結晶形（フォームＡ）の調整
実施例１で調整された原料１００ｍｇを、５０℃のアセトン１５ｍＬに溶解し、温度を０℃に下げた。得られた混合物を一晩撹拌し、白色固体が沈殿した。濾過の後、その固体を４０℃の真空中で乾燥させてオービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡを得た。そのＸＲＰＤパターンは図５に示される。

【0086】

上述の方法を参照して、オービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡは、実施例１で調整された原料を以下の溶媒中で再結晶することによっても得られた：メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｎ−ペンタノール、イソペンタノール、ブタノン、エチルアセテート、イソプロピルアセテート、アセトニトリル、ＴＨＦ又は以下の混合溶媒：メタノール／水（１：４、Ｖ／Ｖ）、メタノール／メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１：４、Ｖ／Ｖ）、メタノール／イソプロピルアセテート（１：４、Ｖ／Ｖ）、エタノール／ｎ−ヘキサン（３：２、Ｖ／Ｖ）。溶媒の沸点に応じて、再結晶化は２５〜７０℃の高温及び結晶温度０〜２５℃で行われる。

【0087】

実施例４ オービットアジンモノフマル酸塩の結晶形（フォームＡ）の調整
実施例１で調整された原料３０ｍｇを、２５℃のジメチルスルホキシド０．２ｍＬに溶解し、４ｍＬのイソプロピルエーテルを加えた。撹拌下で白色固体が沈殿した。濾過の後、その固体を４０℃の真空中で乾燥させてオービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡを得た。そのＸＲＰＤパターンは図６に示される。

【0088】

上述の方法を参照して、オービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡは、実施例１で調整された原料を以下の溶媒中で逆溶媒結晶化することによっても得られた：良溶媒は、ＤＭＡ、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ又はＮＭＰ；逆溶媒は、イソプロピルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、ｎ−ペンタノール、ブタノン、イソプロピルアセテート、ギ酸ブチル、トルエン、水、アセトニトリル又は以下の混合溶媒：ＤＣＭ／ｎ−ヘキサン（２：１、Ｖ／Ｖ）、ＣＨＣｌ_３／メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２：５、Ｖ／Ｖ）。良溶媒は原料の溶解に十分な量加えられ、逆溶媒結晶化は０〜２５℃の温度で実施され、得られた混合物は静置又は撹拌されて、オービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡを得た。

【0089】

実施例５ オービットアジンモノフマル酸塩の結晶形（フォームＡ）の調整
実施例１で調整された原料１００ｍｇを、２５℃のエチルアセテート２ｍＬに縣濁させ、２４時間撹拌した。濾過の後、その固体を４０℃の真空中で乾燥させてオービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡを得た。そのXRPDパターンは図７に示される。

【0090】

上述の方法を参照して、オービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡは、実施例１で調整された原料を以下の溶媒中で縣濁結晶化することによっても得られた：メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｎ−ペンタノール、イソペンタノール、アセトン、ブタノン、ｎ−ヘキサン、シクロヘキサン、ｎ−ヘプタン、ＤＣＭ、ＣＨＣｌ_３、エチルアセテート、イソプロピルアセテート、ｔｅｒｔ−ブチルアセテート、石油エーテル、イソプロピルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、１，４−ジオキサン、トルエン、アセトニトリル、ＴＨＦ。縣濁結晶化は２５〜５０℃の温度で実施された。

【0091】

実施例６ オービットアジンモノフマル酸塩の結晶形（フォームＡ）の調整
１５０ｍｇの（実施例２４の方法で調整された）オービットアジン二フマル酸塩の結晶フォームＣを７０℃の無水エタノール５ｍＬに溶解し、その後、０℃に冷却して結晶を沈殿させた。濾過の後、その結晶を４０℃の真空中で乾燥させてオービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡを得た。そのXRPDパターンは図８に示される。

【0092】

実施例７ オービットアジンモノフマル酸塩の結晶形（フォームＡ）の調整
１００ｍｇの（実施例２８の方法で調整された）オービットアジン二フマル酸塩の結晶形ＩＩ（フォームＤ）を７０℃の無水エタノール５ｍＬに溶解し、その後、０℃に冷却して結晶を沈殿させた。濾過の後、その結晶を４０℃の真空中で乾燥させてオービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡを得た。そのXRPDパターンは図９に示される。

【0093】

実施例８ オービットアジンモノフマル酸塩の結晶形（フォームＡ）の調整
１００ｍｇの（実施例１６の方法で調整された）オービットアジンモノフマル酸塩一水和物（フォームＢ）を２５℃の無水エタノール５ｍＬ中で２４時間撹拌して、オービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡに変換された。そのXRPDパターンは図１０に示される。

【0094】

実施例９ オービットアジンモノフマル酸塩の結晶形（フォームＡ）の調整
５０ｍｇの（実施例１６の方法で調整された）オービットアジンモノフマル酸塩一水和物（フォームＢ）を１１０℃に加熱して、オービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡを得た。そのXRPDパターンは図１１に示される。

【0095】

実施例１０ オービットアジンモノフマル酸塩のアモルファス形の調整
実施例１で調整された原料３ｇを、６０℃の無水エタノール６０ｍＬに溶解し、回転蒸発により４０℃で蒸発乾固させた。残留物を、さらに４０℃の真空中で２０時間乾燥させて、アモルファス形を得た。産物のＨＮＭＲスペクトル、ＸＲＰＤパターン及びＤＳＣサーモグラムは、図１２〜１４にそれぞれ示される。

【0096】

実施例１１ オービットアジンモノフマル酸塩のアモルファス形の調整
実施例１で調整された原料２００ｍｇを、室温のエタノール２０ｍＬに溶解し、回転蒸発させた後、４０℃の真空中で２０時間乾燥させて、オービットアジンフマル酸塩のアモルファス形を得た。
上述の方法を参照して、オービットアジンモノフマル酸塩のアモルファス形は以下のようにも得られた。実施例１で調整された原料をＴＨＦに溶解し、室温で静置して溶媒を蒸発させ、固体を沈殿させた。

【0097】

実施例１２ オービットアジンモノフマル酸塩のアモルファス形の調整
実施例１で調整された原料５０ｍｇを１６０℃に加熱した後、４０℃に冷却し、オービットアジンモノフマル酸塩のアモルファス形を得た。

【0098】

実施例１３ オービットアジンモノフマル酸塩のアモルファス形の調整
２００ｍｇの（実施例１６の方法で調整された）オービットアジンモノフマル酸塩一水和物（フォームＢ）を室温のエタノール２０ｍＬに溶解した後、回転蒸発により乾燥させた。４０℃の真空中で２０時間乾燥させた後、オービットアジンモノフマル酸塩のアモルファス形を得た。

【0099】

実施例１４ オービットアジンモノフマル酸塩のアモルファス形の調整
２００ｍｇの（実施例２４の方法で調整された）オービットアジン二フマル酸塩の結晶形Ｉ（フォームＣ）を室温のエタノール２０ｍＬに溶解した後、回転蒸発により乾燥させた。４０℃の真空中で２０時間乾燥させた後、オービットアジンモノフマル酸塩のアモルファス形を得た。

【0100】

実施例１５ オービットアジンモノフマル酸塩のアモルファス形の調整
２００ｍｇの（実施例２８の方法で調整された）オービットアジン二フマル酸塩の結晶形ＩＩ（フォームＤ）を室温のエタノール２０ｍＬに溶解した後、回転蒸発により乾燥させた。４０℃の真空中で２０時間乾燥させた後、オービットアジンモノフマル酸塩のアモルファス形を得た。

【0101】

実施例１６ オービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶形（フォームＢ）の調整
実施例１で調整された原料３０ｍｇを、２５℃のエチルアセテート２ｍＬに縣濁させ、２４時間撹拌した。濾過の後、その固体を４０℃の真空中で乾燥させてオービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶フォームＢを得た。^１ＨＮＭＲスペクトル、ＸＲＰＤパターン及びＤＳＣサーモグラムは、図１５〜１７にそれぞれ示される。ＴＧＡ試験によって（図１８に示されるように）測定された水分量は、３．３０８％であり、一水和物における理論的な水分量は３．３３０％であった。
実施例４の方法を参照して、オービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶フォームＢは、実施例１で調整された原料をＤＭＡ（ＮＭＰ又はＤＭＳＯ）及び水の混合溶媒中で逆溶媒結晶化することによって得られた。

【0102】

実施例１７ オービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶形（フォームＢ）の調整
実施例１で調整された原料１００ｍｇを、８０℃の純水２ｍＬに縣濁させ、２５℃に冷却して、白色固体を沈殿させた。濾過の後、その固体を４０℃の真空中で乾燥させてオービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶フォームＢを得た。得られた産物のXRPDパターンは図１９に示される。

【0103】

実施例１８ オービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶形（フォームＢ）の調整
実施例１で調整された原料１００ｍｇを、７０℃の１ｍＬの無水エタノール及び１ｍＬの水の混合溶媒に溶解させた。２５℃に冷却した後、３ｍＬの水を加え、固体を沈殿させた。濾過の後、その固体を４０℃の真空中で乾燥させてオービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶フォームＢを得た。得られた産物のXRPDパターンは図２０に示される。

【0104】

実施例１９ オービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶形（フォームＢ）の調整
実施例１で調整された原料５ｇに、１００ｍＬの純水を加え、得られた混合物を室温（２５℃）で２４時間電磁撹拌した。濾過の後、その固体を４０℃の真空中で２０時間乾燥させてオービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶フォームＢを得た。得られた産物のXRPDパターンは図２１に示される。

【0105】

実施例２０ オービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶形（フォームＢ）の調整
実施例１で調整された原料３０ｍｇを、２５℃の水３ｍＬ中で２４時間撹拌し、オービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶フォームＢに変換させた。得られた産物のXRPDパターンは図２２に示される。

【0106】

実施例２１ オービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶形（フォームＢ）の調整
３０ｍｇの（実施例２８の方法で調整された）オービットアジン二フマル酸塩の結晶形ＩＩを、２５℃の水３ｍＬ中で２４時間撹拌し、オービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶フォームＢに変換させた。得られた産物のXRPDパターンは図２３に示される。

【0107】

実施例２２ オービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶形（フォームＢ）の調整
３０ｍｇの（実施例１０の方法で調整された）オービットアジンモノフマル酸塩のアモルファス形を、２５℃の水３ｍＬ中で２４時間撹拌し、オービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶フォームＢに変換させた。得られた産物のXRPDパターンは図２４に示される。

【0108】

実施例２３ オービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶形（フォームＢ）の結晶転移実験
適量の結晶フォームＢに、ホットステージ偏光光学顕微鏡を用いて熱結晶転移実験を施した。加熱工程は以下の通りである：

【0109】

【数1】

【0110】

異なる温度における結晶の状態を撮影した結果が図２５に示される。結晶フォームＢを８０℃に加熱すると、明らかに融解が開始し、１００℃に加熱されると完全に融解し、融解した液体の一部が再度結晶化した。さらに１１０℃に加熱すると、融解した液体はほぼ完全に結晶化された。その温度におけるサンプルはＸＲＰＤ（ＨＣＳ１４４３７−０６−０１−１１０Ｃ）処理され、フォームＡであると特定された。さらに１５０℃に加熱した後、その固体は再度融解した。融解した液体は１６０℃に加熱され、その後、４０℃に冷却され、結晶化は起こらず、得られた固体はアモルファス形であった。ＤＳＣサーモグラムが図１７に示され、ＸＲＰＤパターンが図２６に示される。図２６において、第１のカーブはフォームＡの標準的なＸＲＰＤパターンであり、第２のカーブはフォームＢのＸＲＰＤパターンであり、第３のカーブは再度結晶化して得られたフォームＡのＸＲＰＤパターンである。ＸＲＰＤパターンの比較から、フォームＢは１１０℃に加熱されて結晶水を失うことによってフォームＡに変換され得ることが分かる。

【0111】

実施例２４ オービットアジン二フマル酸塩の結晶形Ｉ（フォームＣ）の調整
実施例１で調整された原料５ｇに、１００ｍＬのギ酸ブチルを加え、得られた混合物を室温（２５℃）で４８時間電磁撹拌した。濾過の後、その固体を４０℃の真空中で２０時間乾燥させてオービットアジン二フマル酸塩の結晶フォームＣを得た。ＨＮＭＲスペクトル、ＸＲＰＤパターン及びＤＳＣサーモグラムは、図２７〜２９にそれぞれ示される。
実施例１で調整された原料３０ｍｇを６０℃のギ酸ブチル２ｍＬに溶解し、２５℃に冷却して固体を沈殿させた。これによっても、オービットアジン二フマル酸塩の結晶フォームＣが得られた。

【0112】

実施例２５ オービットアジン二フマル酸塩の結晶形Ｉ（フォームＣ）の調整
実施例１で調整された原料３０ｍｇを２５℃のギ酸ブチル３ｍＬ中で２４時間撹拌して、オービットアジン二フマル酸塩の結晶形Ｉ（フォームＣ）を得た。得られた産物のＸＲＰＤパターンは図３０に示される。

【0113】

実施例２６ オービットアジン二フマル酸塩の結晶形Ｉ（フォームＣ）の調整
３０ｍｇの（実施例１６の方法で調整された）オービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶形Ｂを２５℃のギ酸ブチル３ｍＬ中で２４時間撹拌して、オービットアジン二フマル酸塩の結晶形Ｉ（フォームＣ）を得た。得られた産物のＸＲＰＤパターンは図３１に示される。

【0114】

実施例２７ オービットアジン二フマル酸塩の結晶形Ｉ（フォームＣ）の調整
５０ｍｇの（実施例２８の方法で調整された）オービットアジン二フマル酸塩の結晶形ＩＩ（フォームＤ）を６０℃のギ酸ブチル５ｍＬ中で２４時間撹拌して、オービットアジン二フマル酸塩の結晶形Ｉ（フォームＣ）を得た。得られた産物のＸＲＰＤパターンは図３２に示される。

【0115】

実施例２８ オービットアジン二フマル酸塩の結晶形（フォームＤ）の調整
実施例１で調整された原料０．２ｇに、８ｍＬのギ酸ブチルを加えた。得られた混合物を４０℃に加熱し、一晩縣濁させた。その後、得られた混合物を熱濾過し、濾過ケークを乾燥させて、オービットアジン二フマル酸塩の結晶フォームＤを得た。ＨＮＭＲスペクトル、ＸＲＰＤパターン及びＤＳＣサーモグラムは、図３３〜３５にそれぞれ示される。

【0116】

実施例２９ オービットアジン二フマル酸塩の結晶形（フォームＤ）の調整
実施例１で調整された原料０．２ｇに、８ｍＬのギ酸ブチルを加えた。得られた混合物を４０℃に加熱し、一晩縣濁させた。その後、得られた混合物を熱濾過し、濾過ケークを４０℃で乾燥させて、オービットアジン二フマル酸塩の結晶フォームＤを得た。得られた産物のＸＲＰＤパターンは、図３６に示される。

【0117】

実施例３０ オービットアジンフマル酸塩の結晶形安定性試験
１．異なる培地における結晶形の安定性試験
１．１ リン酸ナトリウム／塩酸緩衝液 ｐＨ＝６．８（３７℃）における異なる結晶形の安定性

【0118】

【表1】

【0119】

１．２ ｐＨ＝１．２の塩酸溶液（３７℃）における異なる結晶形の安定性

【0120】

【表2】

【0121】

ｐＨ＝１．２の塩酸培地中で２４時間撹拌した後、フォームＢ及びフォームＣの純度は著しく減少したが、フォームＢでは分解の程度がわずかに少なかった。

【0122】

２． 結晶形の溶解性試験
２．１ 水（３７℃）への異なる結晶形の溶解性

【0123】

【表3】

【0124】

２．２ ｐＨ＝６．８のリン酸ナトリウム／塩酸緩衝液（３７℃）における異なる結晶形の溶解性

【0125】

【表4】

【0126】

２．３ フォームＡの溶解性試験
オービットアジンモノフマル酸塩の結晶フォームＡ（３０ｍｇ）を白色ガラス瓶に入れて、異なる溶媒をゆっくり加え、溶解性を観察した。試験は２６℃で実施され、結果は以下の通りである。

【0127】

【表5】

【0128】

上の表から分かるように、室温において、メタノール、ＤＭＦ、ＤＭＡ、ＤＭＳＯ及びＮＭＰは良溶媒であり、エステル、エーテル及びアルカンは貧溶媒であった。さらに、原料は、加熱条件下で、アルコール及びケトン等の溶媒によりよく溶解する

【0129】

３．異なる結晶形の影響要因試験
３．１ 関連物質及び結晶形の転移（１０日間）

【0130】

【表6】

【0131】

上の表に示されるように、高温、高湿又は照明条件において１０日後、全結晶形の純度はいくらか減少した。フォームＡ及びフォームＢは比較的安定しており、基本的に減少傾向は一致していた；ただし、アモルファス形は高湿条件下でフォームＢに変換され、他の条件下では結晶形の変化はなかった。

【0132】

３．２ 外観及び吸湿性の変化（１０日間）

【0133】

【表7】

【0134】

上の表に示されるように、フォームＣの色はわずかに黄色を呈し、他の結晶形の色は変化しなかった；フォームＡ、Ｂ、Ｃの吸湿性は低く１％以内であり、アモルファスはフォームＢに変換する際の吸湿によって優位に重量が増加した。

【0135】

実施例３３ 腫瘍細胞の増殖に対するオービットアジンフマル酸塩の結晶形の阻害効果試験
ＭＴＴ法により、オービットアジンモノフマル酸塩の結晶形（フォームＡ）、オービットアジンモノフマル酸塩のアモルファス形、オービットアジンモノフマル酸塩一水和物の結晶形（フォームＢ）、オービットアジン二フマル酸塩の結晶形Ｉ（フォームＣ）及びオービットアジン二フマル酸塩の結晶形ＩＩ（フォームＤ）の、異なる腫瘍細胞の増殖を阻害する効果が決定された。

【0136】

腫瘍細胞は、以下の細胞を含むが、これらに限定されるものではない：ヒト大腸癌細胞ＳＷ４８０、ヒト胃腺癌細胞ＭＧＣ−８０３、ヒト小細胞肺腺癌細胞Ａ５４９、ヒトリンパ腫細胞Ｕ９３７、ヒト肝臓癌細胞Ｈｅｐ−Ｇ２、ヒト子宮頸癌細胞Ｈｅｌａ、ヒト神経膠腫細胞ＢＴ−３２５、ヒト髄芽腫細胞Ｄ３４１ Ｍｅｄ及びヒト胆嚢癌細胞ＧＢＣ−ＳＤ。

【0137】

実験方法：指数関数的成長期の細胞が採取され、最終濃度が５×１０^３細胞／９０μｌ／ウェルとなるように細胞培養プレートの９６ウェルに播かれた。細胞を一晩培養した後、（ＤＭＳＯ中に溶解された）オービットアジンフマル酸塩の結晶化合物１０μｌを異なる濃度で加え、治療のためのオービットアジンフマル酸塩の結晶化合物の最終濃度が３０．００μＭ、１０．００μＭ、３．３３３μＭ、１．１１１μＭ、０．３７０μＭ、０．１２３μＭ、０．０４１μＭ、０．０１４μＭ及び０．００４６μＭ（合計で９つの濃度）となるようにした。全ての濃度は、３つのウェルに繰り返され、同じ量のＤＭＳＯがネガティブコントロールとして使用された。７２時間の処理の後１０μｌのＭＴＴ溶液（５ｍｇ／ｍｌ、シグマ）を各ウェルに加え、細胞をさらに４時間培養した。培養液を捨て、１００μｌのＤＭＳＯを各ウェルに加え、振動台上で１０分間回転させながら溶解させた。ＥＬＩＳＡ装置によって５７０ｎｍの吸光度値を測定し、結晶化合物の細胞増殖−阻害率（５０％阻害濃度、ＩＣ_５０値）を算出した。結果を表８に示す。

【0138】

【表8】

【0139】

実験結果から、以下が示される：
（１）オービットアジンフマル酸塩の結晶形はＳＷ４８０細胞に対して優位な阻害効果を持ち、０．００４６μＭから３０．００μＭの濃度範囲において、ＳＷ４８０細胞の阻害率は、濃度の増加に伴って徐々に増加した。各オービットアジンフマル酸塩の結晶形は、ＳＷ４８０細胞の阻害能力は同等であり、５０％阻害濃度（具体的には、ＩＣ_５０値）は表８及び図３７に示される。

【0140】

（２）オービットアジンフマル酸塩の結晶形はＭＧＣ−８０３細胞に対して優位な阻害効果を持ち、０．００４６μＭから３０．００μＭの濃度範囲において、ＭＧＣ−８０３細胞の阻害率は、濃度の増加に伴って徐々に増加した。オービットアジンフマル酸塩の各結晶形のＭＧＣ−８０３細胞の阻害能力は同等であり、５０％阻害濃度（具体的には、ＩＣ_５０値）は表８及び図３８に示される。

【0141】

（３）オービットアジンフマル酸塩の結晶形はＡ５４９細胞に対して優位な阻害効果を持ち、０．００４６μＭから３０．００μＭの濃度範囲において、Ａ５４９細胞の阻害率は、濃度の増加に伴って徐々に増加した。オービットアジンフマル酸塩の各結晶形のＡ５４９細胞の阻害能力は同等であり、５０％阻害濃度（具体的には、ＩＣ_５０値）は表８及び図３９に示される。

【0142】

（４）オービットアジンフマル酸塩の結晶形はＵ９３７細胞に対して優位な阻害効果を持ち、０．００４６μＭから３０．００μＭの濃度範囲において、Ｕ９３７細胞の阻害率は、濃度の増加に伴って徐々に増加した。オービットアジンフマル酸塩の各結晶形のＵ９３７細胞の阻害能力は同等であり、５０％阻害濃度（具体的には、ＩＣ_５０値）は表８及び図４０に示される。

【0143】

（５）オービットアジンフマル酸塩の結晶形はＨｅｐ−Ｇ２細胞に対して優位な阻害効果を持ち、０．００４６μＭから３０．００μＭの濃度範囲において、Ｈｅｐ−Ｇ２細胞の阻害率は、濃度の増加に伴って徐々に増加した。オービットアジンフマル酸塩の各結晶形のＨｅｐ−Ｇ２細胞の阻害能力は同等であり、５０％阻害濃度（具体的には、ＩＣ_５０値）は表８及び図４１に示される。

【0144】

（６）オービットアジンフマル酸塩の結晶形はＨｅｌａ細胞に対して優位な阻害効果を持ち、０．００４６μＭから３０．００μＭの濃度範囲において、Ｈｅｌａ細胞の阻害率は、濃度の増加に伴って徐々に増加した。オービットアジンフマル酸塩の各結晶形のＨｅｌａ細胞の阻害能力は同等であり、５０％阻害濃度（具体的には、ＩＣ_５０値）は表８及び図４２に示される。

【0145】

（７）オービットアジンフマル酸塩の結晶形はＢＴ−３２５細胞に対して優位な阻害効果を持ち、０．００４６μＭから３０．００μＭの濃度範囲において、ＢＴ−３２５細胞の阻害率は、濃度の増加に伴って徐々に増加した。オービットアジンフマル酸塩の各結晶形のＢＴ−３２５細胞の阻害能力は同等であり、５０％阻害濃度（具体的には、ＩＣ_５０値）は表８及び図４３に示される。

【0146】

（８）オービットアジンフマル酸塩の結晶形はＤ３４１ Ｍｅｄ細胞に対して優位な阻害効果を持ち、０．００４６μＭから３０．００μＭの濃度範囲において、Ｄ３４１ Ｍｅｄ細胞の阻害率は、濃度の増加に伴って徐々に増加した。オービットアジンフマル酸塩の各結晶形のＤ３４１ Ｍｅｄ細胞の阻害能力は同等であり、５０％阻害濃度（具体的には、ＩＣ_５０値）は表８及び図４４に示される。

【0147】

（９）オービットアジンフマル酸塩の結晶形はＧＢＣ−ＳＤ細胞に対して優位な阻害効果を持ち、０．００４６μＭから３０．００μＭの濃度範囲において、濃度の増加に伴って、ＧＢＣ−ＳＤ細胞の生存率は徐々に減少し、阻害率は徐々に増加した。オービットアジンフマル酸塩の各結晶形のＧＢＣ−ＳＤ細胞の阻害能力は同等であり、５０％阻害濃度（具体的には、ＩＣ_５０値）は表８及び図４５に示される。

【0148】

本発明の実施形態を詳細に説明したが、当業者であれば、開示された全ての教示に基づいて、これらの詳細に様々な修正及び置換がなされ得ることが理解されるであろう。これらの変更は全て本発明の保護範囲内である。本発明の範囲は、添付された特許請求の範囲及びその等価物によって定義される。

【図1】

【図2-1】

【図2-2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16-1】

【図16-2】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【図34】

【図35】

【図36】

【図37】

【図38】

【図39】

【図40】

【図41】

【図42】

【図43】

【図44】

【図45】