特許 6676058 ヘテロアリーレン架橋したベンゾジアゼピン二量体、そのコンジュゲート、ならびに製造および使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6676058

(24)【登録日】2020年3月13日

(45)【発行日】2020年4月8日

(54)【発明の名称】ヘテロアリーレン架橋したベンゾジアゼピン二量体、そのコンジュゲート、ならびに製造および使用方法

(51)【国際特許分類】

   C07D 519/00 20060101AFI20200330BHJP

   A61K 47/68 20170101ALN20200330BHJP

   A61K 47/42 20170101ALN20200330BHJP

   A61K 31/5513 20060101ALN20200330BHJP

   A61K 39/395 20060101ALN20200330BHJP

   A61P 35/00 20060101ALN20200330BHJP

   A61P 1/00 20060101ALN20200330BHJP

   A61P 11/00 20060101ALN20200330BHJP

【ＦＩ】

   C07D519/00 311

   C07D519/00CSP

   !A61K47/68

   !A61K47/42

   !A61K31/5513

   !A61K39/395 D

   !A61K39/395 N

   !A61P35/00

   !A61P1/00

   !A61P11/00

【請求項の数】9

【全頁数】109

(21)【出願番号】特願2017-537229(P2017-537229)

(86)(22)【出願日】2016年1月13日

(65)【公表番号】特表2018-502131(P2018-502131A)

(43)【公表日】2018年1月25日

(86)【国際出願番号】US2016013154

(87)【国際公開番号】WO2016115201

(87)【国際公開日】20160721

【審査請求日】2018年12月27日

(31)【優先権主張番号】62/103,157

(32)【優先日】2015年1月14日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】62/215,938

(32)【優先日】2015年9月9日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】391015708

【氏名又は名称】ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー

【氏名又は名称原語表記】ＢＲＩＳＴＯＬ−ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ ＣＯＭＰＡＮＹ

(74)【代理人】

【識別番号】100100158

【弁理士】

【氏名又は名称】鮫島 睦

(74)【代理人】

【識別番号】100126778

【弁理士】

【氏名又は名称】品川 永敏

(74)【代理人】

【識別番号】100156155

【弁理士】

【氏名又は名称】水原 正弘

(74)【代理人】

【識別番号】100162684

【弁理士】

【氏名又は名称】呉 英燦

(74)【代理人】

【識別番号】100162695

【弁理士】

【氏名又は名称】釜平 双美

(72)【発明者】

【氏名】アイバー・エム・マクドナルド

(72)【発明者】

【氏名】ナイドゥ・エス・チョウダリ

(72)【発明者】

【氏名】ウォルター・ルイス・ジョンソン

(72)【発明者】

【氏名】ジャン・ヨン

(72)【発明者】

【氏名】ロバート・エム・ボルジレリ

(72)【発明者】

【氏名】サンジーブ・ギャングウォー

【審査官】 東 裕子

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１４−５０６８９２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１４／０３１５６６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２０１８−５０３６３９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１２−５１６８９６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２００７／１１７１８０（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（ＩＩａ）：

【化1】

[この文献は図面を表示できません]

［式中：
Ｘは、

【化2】

[この文献は図面を表示できません]

からなる群より選択され；
Ｒ^２は、各々独立して、ＨまたはＣ_１−Ｃ_５アルキルであり；
Ｒ^３およびＲ^４は、各々独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨ、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、Ｏ（Ｃ_１−Ｃ_３アルキル）、シアノ、（ＣＨ_２）_０−５ＮＨ_２、またはＮＯ_２であり；
ジアゼピン環系中の二重線

【化3】

[この文献は図面を表示できません]

は、各々独立して、単結合または二重結合を表し；
Ｒ^５が結合するＮとの二重線

【化4】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合ならば、Ｒ^５は、各々、Ｈであり、二重線が二重結合ならば、不在であり；
Ｒ^６が結合するＣとの二重線

【化5】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合ならば、Ｒ^６は、各々、Ｈ、ＯＨ、ＳＯ_３Ｎａ、またはＳＯ_３Ｋであり、二重線が二重結合ならば、不在であり；
Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０は、各々独立して、Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_５アルキル、Ｃ≡Ｃ（ＣＨ_２）_１−５Ｘ^２、ＯＨ、Ｏ（Ｃ_１−Ｃ_５アルキル）、シアノ、ＮＯ_２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−８（Ｃ_１−３アルキル）、（ＣＨ_２）_０−５Ｘ^２、Ｏ（ＣＨ_２）_２−５Ｘ^２、３−ないし７−員のシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル（置換されていないか、あるいは（ＣＨ_２）_０−５Ｘ^２またはＯ（ＣＨ_２）_２−５Ｘ^２で置換される）、５−ないし６−員のアリールまたはヘテロアリール（置換されていないか、あるいは（ＣＨ_２）_０−５Ｘ^２またはＯ（ＣＨ_２）_２−５Ｘ^２で置換される）、

【化6】

[この文献は図面を表示できません]

であり；および
Ｘ^２は、各々独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ_１−Ｃ_３アルキル）、Ｏ（Ｃ_１−Ｃ_３アルキレン）、ＣＯ_２Ｈ、Ｎ_３、ＣＮ、ＮＯ_２、ＣＯ_２（Ｃ_１−Ｃ_３アルキル）、ＮＨ_２、ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_５アルキル）、Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_５アルキル）_２、ＳＨ、ＣＨＯ、Ｎ（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_３アルキル）、ＮＨＮＨ_２、またはＣ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ_２である］
で示される構造を有する、ベンゾジアゼピン二量体またはその医薬的に許容される塩。

【請求項2】

Ｘが

【化7】

[この文献は図面を表示できません]

である、請求項１に記載のベンゾジアゼピン二量体またはその医薬的に許容される塩。

【請求項3】

式（ＩＩａ’’）：

【化8】

[この文献は図面を表示できません]

［式中
Ｒ^５が結合するＮとの二重線

【化9】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合ならば、Ｒ^５はＨであり、二重線

【化10】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合ならば、不在であり；
Ｒ^６が結合するＣとの二重線

【化11】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合ならば、Ｒ^６はＨであり、二重線

【化12】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合ならば、不在であり；
Ｒ^９は、各々独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＭｅ、ＮＨ_２、ＮＭｅ_２、Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−８Ｍｅ、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、または

【化13】

[この文献は図面を表示できません]

であり；および
Ｘ^３はＨ、ＯＨ、ＯＭｅ、Ｍｅ、ＣＨ_２ＯＨ、Ｏ（アリル）、ＣｌまたはＣＯ_２Ｍｅである］
で示される構造を有する、請求項１に記載のベンゾジアゼピン二量体またはその医薬的に許容される塩。

【請求項4】

【化14】

[この文献は図面を表示できません]

【化15】

[この文献は図面を表示できません]

【化16】

[この文献は図面を表示できません]

【化17】

[この文献は図面を表示できません]

からなる群より選択される、請求項３に記載のベンゾジアゼピン二量体またはその医薬的に許容される塩。

【請求項5】

式（ＩＩＩａ’）：

【化18】

[この文献は図面を表示できません]

［式中
Ｒ^９は、各々独立して、Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−４Ｈ、（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−４（Ｃ_１−Ｃ_３アルキル）、ＯＨ、Ｃｌ、Ｆ、またはＢｒであり；
Ｒ^５が結合するＮとの二重線

【化19】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合ならば、Ｒ^５はＨであり、二重線

【化20】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合ならば、不在であり；
Ｒ^６が結合するＣとの二重線

【化21】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合ならば、Ｒ^６はＨであり、二重線

【化22】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合ならば、不在であり；
Ｔは自己犠牲基であり；
ｔは０または１であり；
ＡＡ^ａおよび各ＡＡ^ｂは、アラニン、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、γ−カルボキシグルタミン酸、シトルリン、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンからなる群より独立して選択され；
ｐは１、２、３または４であり；
ｑは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２であり；
ｒは１、２、３、４または５であり；
ｓは０または１であり；
Ｒ^３１は

【化23】

[この文献は図面を表示できません]

であり；および
Ｘ^４はＳ−Ｓ、ＯまたはＮＨである］
で示される構造を有する、ベンゾジアゼピン二量体−リンカー化合物またはその医薬的に許容される塩。

【請求項6】

式（ＩＩＩｂ’’）：

【化24】

[この文献は図面を表示できません]

［式中
Ｒ^９は、各々独立して、Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−４Ｈ、（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−４（Ｃ_１−Ｃ_３アルキル）、ＯＨ、Ｃｌ、Ｆ、またはＢｒであり；
Ｘ^３はＨ、ＯＨ、ＯＭｅ、Ｍｅ、ＣＨ_２ＯＨ、Ｏ（アリル）、Ｃｌ、またはＣＯ_２Ｍｅであり；
Ｒ^５が結合するＮとの二重線

【化25】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合ならば、Ｒ^５はＨであり、二重線

【化26】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合ならば、不在であり；
Ｒ^６が結合するＣとの二重線

【化27】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合ならば、Ｒ^６はＨであり、二重線

【化28】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合ならば、不在であり；
Ｔは自己犠牲基であり；
ｔは０または１であり；
ＡＡ^ａおよび各ＡＡ^ｂは、アラニン、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、γ−カルボキシグルタミン酸、シトルリン、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンからなる群より独立して選択され；
ｐは１、２、３または４であり；
ｑは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２であり；
ｒは１、２、３、４または５であり；
ｓは０または１であり；および
Ｒ^３１は

【化29】

[この文献は図面を表示できません]

である］
で示される構造を有する、ベンゾジアゼピン二量体−リンカー化合物またはその医薬的に許容される塩。

【請求項7】

【化30】

[この文献は図面を表示できません]

【化31】

[この文献は図面を表示できません]

【化32】

[この文献は図面を表示できません]

【化33】

[この文献は図面を表示できません]

からなる群より選択される、請求項６に記載のベンゾジアゼピン二量体−リンカー化合物またはその医薬的に許容される塩。

【請求項8】

式（ＩＩＩｃ’’）：

【化34】

[この文献は図面を表示できません]

［式中
Ｘ^３はＨ、ＯＨ、ＯＭｅ、Ｍｅ、ＣＨ_２ＯＨ、Ｏ（アリル）、Ｃｌ、またはＣＯ_２Ｍｅであり；
ジアゼピン環系中の二重線

【化35】

[この文献は図面を表示できません]

の少なくとも１つは二重結合であり；
Ｒ^５が結合するＮとの二重線

【化36】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合ならば、Ｒ^５はＨであり、二重線

【化37】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合ならば、不在であり；
Ｒ^６が結合するＣとの二重線

【化38】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合ならば、Ｒ^６はＨであり、二重線

【化39】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合ならば、不在であり；
Ｒ^９がＨ、Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−４Ｈ、（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−４（Ｃ_１−Ｃ_３アルキル）、ＯＨ、Ｃｌ、Ｆ、またはＢｒであり；
Ｔは自己犠牲基であり；
ｔは０または１であり；
ＡＡ^ａおよび各ＡＡ^ｂは、アラニン、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、γ−カルボキシグルタミン酸、シトルリン、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンからなる群より独立して選択され；
ｐは１、２、３または４であり；
ｑは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２であり；
ｒは１、２、３、４または５であり；
ｓは０または１であり；および
Ｒ^３１は

【化40】

[この文献は図面を表示できません]

である］
で示される構造を有する、ベンゾジアゼピン二量体−リンカー化合物またはその医薬的に許容される塩。

【請求項9】

【化41】

[この文献は図面を表示できません]

からなる群より選択される、請求項８に記載のベンゾジアゼピン二量体−リンカー化合物またはその医薬的に許容される塩。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、二量体の２つの単位の間にヘテロ芳香族基を有するベンゾジアゼピン二量体、それより誘導される二量体−リンカー化合物、そのコンジュゲート、ならびにそれらの調製および使用方法に関する。

【背景技術】

【0002】

トマイマイシンおよびアントラマイシンなどの数種の天然に存在するサイトトキシンはベンゾジアゼピン環系を含有する。ジアゼピン環に縮合したピロリジン環のさらなる存在を反映して、これらの化合物は、しばしば、ピロロベンゾジアゼピンまたはＰＢＤとも称される。

【化1】

[この文献は図面を表示できません]

【0003】

ＰＢＤは抗生物質および抗腫瘍活性を有し、その後者の特性によりＰＢＤに抗がん薬としての関心がもたらされる。機構的に、ＰＢＤは配列選択的方式にてＤＮＡのマイナー・グルーブに結合し、そのＤＮＡをアルキル化する。異なる置換基の構造活性相関（ＳＡＲ）が研究されてきた（Antonowら、2010；Thurstonら、1999）。

【0004】

さらなる研究はＰＢＤ二量体が抗がん剤として特別な有望性を示すことを明らかにした。典型的なＰＢＤ二量体のコア構造は、式（Ａ−１）：

【化2】

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で表すことができ、ここでＸは二量体の２つの半分の単位を連結する架橋基である。

【0005】

単量体のＰＢＤと同様に、その二量体はＤＮＡのマイナー・グルーブの結合剤−アルキル化剤である。二官能性であるため、二量体によるアルキル化はＤＮＡの架橋をもたらし、ＤＮＡの修復をより困難なものとする。（ＤＮＡのアルキル化はイミン基を介して起こる。イミン基の一つが還元されているＰＢＤはそれでもＤＮＡをアルキル化できるが、それを架橋し得ない。それらは生物学的に未だに活性であるが、一般にそれほどではないにせよ、それらの異なる薬物動態特性はある用途に好ましいかもしれない。）ＰＢＤの抗腫瘍剤としての天然に存する単量体から合成単量体を介する合成二量体への進化について再検討するには、Hartley 2011を参照のこと。

【0006】

ＰＢＤ二量体のＳＡＲが、Ａ／Ａ’およびＣ／Ｃ’環の置換基、Ｃ／Ｃ’環の不飽和、架橋基Ｘの構造および長さ、およびＢ／Ｂ’環にあるイミン二重結合の酸化または還元、ならびにそのような特徴の組み合わせを通して研究された。Boseら、1992；Gregsonら、1999；Gregsonら、2001aおよび2001b；Gregsonら、2004；Gregsonら、2009；Hartleyら、2012；Howardら、2007；Howardら、2009a；Howardら、2010；Howardら、2013aおよび2013b；Liuら、2007；Thurstonら、1996；Thurstonら、2006；およびThurstonら、2008を参照のこと。上記されるように、大抵のＰＢＤ二量体は、８／８’架橋を介して接合されるが、７／７’架橋も開示されている（Howardら、2009b）。

【0007】

強い関心を集めている抗がん剤の型は抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ、免疫コンジュゲートとも称される）である。ＡＤＣ中で、治療剤（薬物、ペイロードまたは弾頭とも称される）は抗体（その抗原（腫瘍関連抗原）ががん細胞により発現される）と共有結合する。抗体は、抗原と結合することにより、ＡＤＣをがん部位に送達する。そこで、共有結合が切断されるか、抗体が分解され、治療剤の放出がもたらされる。逆に、ＡＤＣが血流系を循環している間は、治療剤は抗体と共有結合しているため、不活性のままである。かくして、ＡＤＣに使用される治療剤は、それが局所的に放出されるため、従来の化学療法剤と比べてより一層強力（すなわち、細胞傷害能を有する）とすることができる。ＡＤＣを再検討するには、Schramaら、2006を参照のこと。

【0008】

ＰＢＤ二量体はＡＤＣ中の薬物として提案されている。リンカーと抗体との接続は、Ｃ／Ｃ’環に位置する官能基、架橋基Ｘを介するか、Ｂ／Ｂ’環におけるイミン基を横切って付加することにより行うことができる。Beau-Larvorら、2014；Bouchardら、2013；Commerconら、2013aおよび2013b；Flygareら、2013；Gauzyら、2012；Howard、2104a-2014e；Howardら、2011；Howardら、2013cおよび2013d；Howardら、2014a-2014h；Jeffreyら、2013；Jeffreyら、2014aおよび2014b；およびZhaoら、2014を参照のこと。

【0009】

もう一つ別の型のベンゾジアゼピン二量体もまた、ＡＤＣにおいて使用されるための薬物として提案されている。構造的に、この型は、式（Ａ−２）および（Ａ−３）に示されるように、各Ｃ／Ｃ’環にさらにフェニル環が縮合したＰＢＤ二量体として考えられてもよい。Chariら、2013；Liら、2013；Fishkinら、2014；Liら、2014を参照のこと。

【化3】

[この文献は図面を表示できません]

【0010】

テトラヒドロイソキノリン［２,１−ｃ］［１,４］ベンゾジアゼピンなどの他の環系を有するベンゾジアゼピン化合物も開示されている。Kothakondaら、2004を参照のこと。
本明細書において第１の著者または発明者および年度により引用される文献に関して十分な引用部を本明細書の最後に列挙する。

【発明の概要】

【0011】

本発明は、新規なベンゾジアゼピン二量体であって、少なくとも一つのベンゾジアゼピン単位が、ベンゾジアゼピン環系に縮合したテトラヒドロイソキノリン（ＴＨＩＱ）環系を有し、二量体の２つの単位を連結する架橋においてテトラアリーレン部分をさらに有する、新規なベンゾジアゼピン二量体を提供する。所望により、ベンゾジアゼピン環系にあるイミン結合は還元されてもよい。

【化4】

[この文献は図面を表示できません]

【0012】

二量体は、両方の単位（半分）でＴＨＩＱ環系を有することができ（「ＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体」または「ＴＨＩＱホモ二量体」）、あるいは一方の単位でＴＨＩＱ環系を有し、他方の単位で異なる、ＰＢＤ環系などのベンゾジアゼピン環系を有することができる（一般に、「ＴＨＩＱヘテロ二量体」またはこの特定の例では、「ＴＨＩＱ−ＰＢＤ二量体」）。ＴＨＩＤ−ＴＨＩＤ二量体で、２個の単位は、同じとすること（「対称ＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体」）も、異なること（「非対称ＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体」）もできる。

【0013】

かくして、本発明は、構造式（Ｉ）：

【化5】

[この文献は図面を表示できません]

［式中：
Ｘは、

【化6】

[この文献は図面を表示できません]

からなる群より選択され；
Ｒ^１は、式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）：

【化7】

[この文献は図面を表示できません]

で示されるとおりであり；
ＧおよびＧ’は、各々、ＣまたはＮである：ただし、Ｇのうち２個未満またはＧ’のうち２個未満がＮであり；
Ｒ^２は、各々独立して、ＨまたはＣ_１−Ｃ_５アルキルであり；
Ｒ^３およびＲ^４は、各々独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨ、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、Ｏ（Ｃ_１−Ｃ_３アルキル）、シアノ、（ＣＨ_２）_０−５ＮＨ_２、またはＮＯ_２であり；
ジアゼピン環系中の二重線

【化8】

[この文献は図面を表示できません]

は、各々独立して、単結合または二重結合を表し；
Ｒ^５が結合するＮとの二重線

【化9】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合ならば、Ｒ^５は、各々、Ｈであり、二重線が二重結合ならば、不在であり；
Ｒ^６が結合するＣとの二重線

【化10】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合ならば、Ｒ^６は、各々、Ｈ、ＯＨ、ＳＯ_３Ｎａ、またはＳＯ_３Ｋであり、二重線が二重結合ならば、不在であり；
Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０は、各々独立して、Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_５アルキル、Ｃ≡Ｃ（ＣＨ_２）_１−５Ｘ^２、ＯＨ、Ｏ（Ｃ_１−Ｃ_５アルキル）、シアノ、ＮＯ_２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−８（Ｃ_１−３アルキル）、（ＣＨ_２）_０−５Ｘ^２、Ｏ（ＣＨ_２）_２−５Ｘ^２、３−ないし７−員のシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル（置換されていないか、あるいは（ＣＨ_２）_０−５Ｘ^２またはＯ（ＣＨ_２）_２−５Ｘ^２で置換される）、５−ないし６−員のアリールまたはヘテロアリール（置換されていないか、あるいは（ＣＨ_２）_０−５Ｘ^２またはＯ（ＣＨ_２）_２−５Ｘ^２で置換される）、

【化11】

[この文献は図面を表示できません]

であるか；
あるいは、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９またはＲ^１０が、ＮであるＧまたはＧ’に結合する場合、その時にはＲ^７、Ｒ^８、Ｒ^９またはＲ^１０は不在であり；
式（Ｉｂ）中の環Ｃにおける点線はＣ１−Ｃ２、Ｃ２−Ｃ３またはＣ２−Ｒ^１１の二重結合が任意に存在することを示し；
Ｒ^１１は、Ｈ、＝Ｏ、＝ＣＨ_２、＝ＣＨ（Ｃ_１−Ｃ_５アルキル）、ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_２）_１−５Ｘ^２、Ｃ≡Ｃ（ＣＨ_２）_１−５Ｘ^２、Ｃ_１−Ｃ_５アルキル、ＯＨ、Ｏ（Ｃ_１−Ｃ_５アルキル）、シアノ、ＮＯ_２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−８（Ｃ_１−３アルキル）、（ＣＨ_２）_０−５Ｘ^２、４−ないし７−員のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル（置換されていないか、あるいは（ＣＨ_２）_０−５Ｘ^２またはＯ（ＣＨ_２）_２−５Ｘ^２で置換される）、３−ないし７−員のシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル（置換されていないか、あるいは（ＣＨ_２）_０−５Ｘ^２またはＯ（ＣＨ_２）_２−５Ｘ^２で置換される）、５−ないし６−員のアリールまたはヘテロアリール（置換されていないか、あるいは（ＣＨ_２）_０−５Ｘ^２またはＯ（ＣＨ_２）_２−５Ｘ^２で置換される）であり；
Ｒ^１１’は、Ｃ１−Ｃ２、Ｃ２−Ｃ３またはＣ２−Ｒ^１１の二重結合が存在するならば、不在であり、そうでなければＨであり；
Ｘ^２は、各々独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ_１−Ｃ_３アルキル）、Ｏ（Ｃ_１−Ｃ_３アルキレン）、ＣＯ_２Ｈ、Ｎ_３、ＣＮ、ＮＯ_２、ＣＯ_２（Ｃ_１−Ｃ_３アルキル）、ＮＨ_２、ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_５アルキル）、Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_５アルキル）_２、ＳＨ、ＣＨＯ、Ｎ（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_３アルキル）、ＮＨＮＨ_２、またはＣ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ_２であり；
Ｙは、各々独立して、ＣＨ_２、Ｃ＝ＯまたはＣＨＲ^１２であり；ここで、Ｒ^１２は、各々独立して、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＣ_１−Ｃ_３アルキルであり；および
Ｙ’およびＹ’’は、独立して、ＣＨ_２、Ｃ＝ＯまたはＣＨＲ^１２であり、ここでＲ^１２は、各々独立して、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＣ_１−Ｃ_３アルキルである、ただしＹ’およびＹ’’のうち少なくとも１つは存在する］
で示されるベンゾジアゼピン二量体またはその医薬的に許容される塩を提供する。

【0014】

もう一つ別の実施態様において、本発明は、標的細胞上の化学物質と特異的または優先的に結合する標的とする部分と共有結合した、好ましくはがん細胞である細胞を標的とする、式（Ｉ）の二量体を含むコンジュゲートを提供する。標的とする部分は抗体であることが好ましく、より好ましくはモノクローナル抗体であり、さらにより好ましくはヒトモノクローナル抗体であり、化学物質は腫瘍関連抗原である。腫瘍関連抗原は、がん細胞の表面に提示される抗原であるか、またはがん細胞により周辺の細胞外間隙に分泌される抗原であり得る。好ましくは、腫瘍関連抗原は、正常な細胞と比べてがん細胞により過剰に発現される抗原であるか、または正常な細胞ではなくがん細胞により発現される抗原である。

【0015】

もう一つ別の実施態様において、標的とする部分とコンジュゲートするのに適する、反応性官能基を有するリンカー部分と共有結合した式（Ｉ）で示される二量体が提供される。

【0016】

もう一つ別の実施態様において、がんを患っている対象においてかかるがんを治療する方法であって、該対象に治療的に効果的な量の本発明の二量体または標的とする部分とのそのコンジュゲートを投与することを含む、方法が提供される。もう一つ別の実施態様において、がんを患っている対象にてかかるがんを治療するための医薬を調製するのに、本発明の二量体または標的とする部分とのそのコンジュゲートの使用が提供される。本発明の二量体または標的とする部分とのそのコンジュゲートは、がん細胞のインビトロ、エクスビボまたはインビボにおける増殖を阻害するのにも使用され得る。特に、がんは肺がんまたは胃がんであり得る。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1】本発明の二量体の調製に有用な種々の中間体を合成するためのスキームを示す。

【図2】本発明の二量体の調製に有用な種々の中間体を合成するためのスキームを示す。

【図3】本発明の二量体の調製に有用な種々の中間体を合成するためのスキームを示す。

【図4】本発明の二量体の調製に有用な種々の中間体を合成するためのスキームを示す。

【図5】本発明の二量体の調製に有用な種々の中間体を合成するためのスキームを示す。

【図6】本発明の種々の二量体を合成するためのスキームを示す。

【図7A】本発明の種々の二量体−リンカーを合成するためのスキームを示す。

【図7B】本発明の種々の二量体−リンカーを合成するためのスキームを示す。

【図8】本発明の種々の二量体を合成するためのスキームを示す。

【図9】本発明の種々の二量体を合成するためのスキームを示す。

【図10】本発明の種々の二量体−リンカーを合成するためのスキームを示す。

【図11】本発明の種々の二量体を合成するためのスキームを示す。

【図12A】本発明の種々の二量体−リンカーを合成するためのスキームを示す。

【図12B】本発明の種々の二量体−リンカーを合成するためのスキームを示す。

【図13】本発明の種々の二量体−リンカーを合成するためのスキームを示す。

【図14】本発明の種々の二量体を合成するためのスキームを示す。

【図15】本発明の種々の二量体−リンカーを合成するためのスキームを示す。

【図16】本発明の種々の二量体を合成するためのスキームを示す。

【図17】本発明の種々の二量体−リンカーを合成するためのスキームを示す。

【図18】本発明の種々の二量体を合成するためのスキームを示す。

【図19A】本発明の二量体の調製に有用な種々の中間体を合成するためのスキームを示す。

【図19B】本発明の二量体の調製に有用な種々の中間体を合成するためのスキームを示す。

【図20】本発明の種々の二量体−リンカーを合成するためのスキームを示す。

【図21】本発明の二量体の調製に有用な種々の中間体を合成するためのスキームを示す。

【図22】本発明の種々の二量体を合成するためのスキームを示す。

【発明を実施するための形態】

【0018】

定義
「抗体」は全抗体およびいずれかの抗原結合フラグメント（すなわち、「抗原結合部分」）またはその一本鎖変種を意味する。全抗体は、ジスルフィド結合により相互連結される、少なくとも２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖を含むタンパク質である。重鎖は、各々、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、３つのドメイン、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２およびＣ_Ｈ３を含む重鎖定常領域とを含む。軽鎖は、各々、軽鎖可変領域（Ｖ_ＬまたはＶ_ｋ）と、１つの単一ドメイン、Ｃ_Ｌを含む軽鎖定常領域とを含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、超可変性の領域、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される領域、フレームワーク領域（ＦＲ）をさらに保存して組み入れられた領域にさらに細分割され得る。Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌは、各々、アミノ末端からカルボキシ末端に次の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４で配置された、３つのＣＤＲと、４つのＦＲとを含む。可変領域は抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。定常領域は、抗体と、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および典型的な補体系の第１成分（Ｃｌｑ）を含む、宿主組織または因子との結合を媒介してもよい。抗体が５ｘ１０^−８Ｍ以下、より好ましくは１ｘ１０^−８Ｍ以下、より好ましくは６ｘ１０^−９Ｍ以下、より好ましくは３ｘ１０^−９Ｍ以下、さらにより好ましくは２ｘ１０^−９Ｍ以下のＫ_Ｄで抗原Ｘと結合するならば、抗体は抗原Ｘと「特異的に結合する」と言われる。抗体は、キメラ、ヒト化、または好ましくはヒト抗体であり得る。重鎖定常領域に遺伝子操作を施し、糖鎖形成の型または程度に影響を及ぼし、抗体の半減期を延ばすこと、エフェクター細胞または補体系との相互作用を強化または弱めること、あるいは他のある種の特性を調節することもできる。遺伝子操作は、１個または複数個のアミノ酸の置換、付加または欠失により、またはドメインをもう一つ別の免疫グロブリン型から由来のドメインと置換することにより、あるいはその上記を組み合わせることにより達成され得る。

【0019】

抗体の「抗原結合フラグメント」および「抗原結合部分」（あるいは簡単に「抗体部分」または「抗体フラグメント」）は、抗原と特異的に結合する能力を保持する抗体の1または複数のフラグメントを意味する。抗体の抗原結合機能は、（ｉ）Ｆａｂフラグメント、Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ、Ｃ_ＬおよびＣ_Ｈ１ドメインからなる一価フラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント、ヒンジ領域でジスルフィド結合により連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント；（ｉｉｉ）Ｆａｂ’フラグメント、本質的にＦａｂと、ヒンジ領域の一部とを含むフラグメント（例えば、Abbasら、Cellular and Molecular Immunology, 6th Ed., Saunders Elsevier 2007を参照のこと）；（ｉｖ）Ｖ_ＨおよびＣ_Ｈ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｖ）抗体の単一アームのＶ_ＬおよびＶ_ＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖｉ）Ｖ_Ｈドメインからなる、ｄＡｂフラグメント（Wardら、（1989）Nature 341：544-546）；（ｖｉｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）；および（ｖｉｉｉ）単一ドメイン抗体（nanobody）、単一の可変ドメインと２つの定常ドメインを含有する重鎖可変領域などの、全長抗体のフラグメントにより成されうる。好ましい抗原結合フラグメントはＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ’、Ｆｖ、およびＦｄフラグメントである。さらには、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン、Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈは、別個の遺伝子によりコード化されるが、それらは、組換え技法を用い、Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈ領域を対にして組をなし、一価分子（一本鎖Ｆｖ、またはｓｃＦｖとして知られる）を形成する単一タンパク質として製造され得るようにする、合成リンカーにより結び付けることができる；例えば、Birdら（1988） Science 242：423-426；およびHustonら（1988）Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85：5879-5883を参照のこと）。そのような一本鎖抗体も抗体の「抗原結合部分」なる語の範囲に含まれる。

【0020】

「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない、抗体を意味する（例えば、抗原Ｘと特異的に結合する単離された抗体は、抗原Ｘ以外の抗原と特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかしながら、抗原Ｘと特異的に結合する単離された抗体は、他の種からの抗原Ｘ分子などの他の抗原との交差反応性を有してもよい。ある実施態様において、単離された抗体はヒト抗原Ｘと特異的に結合し、他の（ヒト以外の）抗原Ｘ抗原と交差反応しない。その上、単離された抗体は他の細胞材料および／または化学物質が実質的になくてもよい。

【0021】

「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性を示す、単一分子組成物の抗体分子の調製物を意味する。

【0022】

「ヒト抗体」は、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列から誘導される可変領域を有する（および定常領域をあるとすれば有する）抗体を意味する。ヒト抗体は、天然または合成修飾を含め、その後の修飾を含んでもよい。ヒト抗体はヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列（例えば、インビトロでのランダムまたは部位特異的変異により、またはインビボでの体細胞変異により導入される変異体）によりコードされないアミノ酸残基を含んでもよい。しかしながら、「ヒト抗体」は、マウスなどの他の哺乳動物種の生殖細胞系列から由来のＣＤＲ配列をヒトフレームワーク配列に移植した、抗体を含まない。

【0023】

「ヒトモノクローナル抗体」は、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列より誘導される可変領域を有する、単一結合特異性を提示する抗体を意味する。１の実施態様において、ヒトモノクローナル抗体は、ヒト以外のトランスジェニック動物、例えばトランスジェニックマウスより得られるＢ細胞を含む、不死化細胞と融合したヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する、ハイブリドーマにより産生される。

【0024】

「脂肪族」は、（例えば、「Ｃ_３脂肪族」、「Ｃ_１−５脂肪族」、「Ｃ_１−Ｃ_５脂肪族」または「Ｃ_１〜Ｃ_５脂肪族」において見られるように、後の３種の語は１〜５個の炭素原子を有する脂肪族についての同義語である）特定数の炭素原子を有するか、あるいは炭素原子の数が明確に特定されない場合、１ないし４個の炭素原子（不飽和脂肪族基の場合には２ないし４個の炭素）を有する、直鎖または分岐鎖で飽和または不飽和の非芳香族炭化水素の部分を意味する。同様の理解は、Ｃ_２−４アルケン、Ｃ_４−Ｃ_７脂環式等において見られるような、他の型の炭素数にも適用される。同様にして、「（ＣＨ_２）_１−３」などの語は、かかる用語がＣＨ_２、ＣＨ_２ＣＨ_２およびＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２を示すように、下付き文字が１、２または３であることに対する省略形として理解されるべきである。

【0025】

「アルキル」は飽和脂肪族の部分を意味し、炭素数を特定するのに同じ慣習が適用され得る。例として、Ｃ_１−Ｃ_４アルキルの部分は、限定されないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、ｔ−ブチル、１−ブチル、２−ブチル等を包含する。「アルキレン」は、ＣＨ_２ＣＨ_２、ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２、およびＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２などのアルキル基の二価の対応基を意味する。

【0026】

「アルケニル」は少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を有する脂肪族の部分を意味し、炭素数を特定するのに同じ慣習が適用され得る。例として、Ｃ_２−Ｃ_４アルケニルの部分は、限定されないが、エテニル（ビニル）、２−プロペニル（アリルまたはプロパ−２−エニル）、シス−１−プロペニル、トランス−１−プロペニル、Ｅ−（またはＺ−）２−ブテニル、３−ブテニル、１,３−ブタジエニル（ブタ−１,３−ジエニル）等を包含する。

【0027】

「アルキニル」は少なくとも１個の炭素−炭素三重結合を有する脂肪族の部分を意味し、炭素数を特定するのに同じ慣習が適用され得る。例として、Ｃ_２−Ｃ_４アルキニル基は、エチニル（アセチレニル）、プロパルギル（プロパ−２−イニル）、１−プロピニル、ブタ−２−イニル等を包含する。

【0028】

「脂環式」は、１ないし３個の環を有し、各環が３ないし８個（好ましくは、３ないし６個）の炭素原子を有する、飽和または不飽和の、非芳香族炭化水素の部分を意味する。「シクロアルキル」は各環が飽和の脂環式の部分を意味する。「シクロアルケニル」は、少なくとも１個の環が少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を有する、脂環式の部分を意味する。「シクロアルキニル」は、少なくとも１個の環が少なくとも１個の炭素−炭素三重結合を有する、脂環式の部分を意味する。例として、脂環式の部分として、限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル、シクロオクチル、およびアダマンチルが挙げられる。好ましい脂環式の部分はシクロアルキルの部分、特にシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが挙げられる。「シクロアルキレン」はシクロアルキル基の二価の対応基を意味する。

【0029】

「ヘテロ脂環式」は、少なくとも１個の環にて、３個までの（好ましくは１ないし２個の）炭素が、Ｎ、ＯまたはＳより独立して選択されるヘテロ原子と置き換えられる脂環式の部分を意味し、ここでそのＮおよびＳは所望により酸化されてもよく、そのＮは所望により四級化されてもよい。同様に、「ヘテロシクロアルキル」、「ヘテロシクロアルケニル」および「ヘテロシクロアルキニル」は、少なくとも１個の環がそのように修飾されている、各々、シクロアルキル、シクロアルケニル、またはシクロアルキニルの部分を意味する。典型的なヘテロ脂環式の部分として、アジリジニル、アゼチジニル、１,３−ジオキサニル、オキセタニル、テトラヒドロフリル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、テトラヒドロチオピラニルスルホン、モルホリニル、チオモルホリニル、チオモルホリニルスルホキシド、チオモルホリニルスルホン、１,３−ジオキソラニル、テトラヒドロ−１,１−ジオキソチエニル、１,４−ジオキサニル、チエタニル等が挙げられる。「ヘテロシクロアルキレン」はヘテロシクロアルキル基の二価の対応基を意味する。

【0030】

「アルコキシ」、「アリールオキシ」、「アルキルチオ」および「アリールチオ」は、各々、−Ｏ（アルキル）、−Ｏ（アリール）、−Ｓ（アルキル）および−Ｓ（アリール）素意味する。一例が、各々、メトキシ、フェノキシ、メチルチオおよびフェニルチオである。
「ハロゲン」または「ハロ」はフッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味する。

【0031】

「アリール」は、各環が３ないし７個の炭素原子を有し、少なくとも１個の環が芳香族である、単環、二環または三環式環系の炭化水素の部分を意味する。該環系中の環は（ナフチルに見られるように）相互に縮合しても、または（ビフェニルに見られるように）相互に結合してもよく、（インダニルまたはシクロヘキシルフェニルに見られるように）非芳香族環と縮合しても結合してもよい。さらなる例として、アリールの部分は、限定されないが、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、ビフェニル、フェナントリル、アントラセニル、およびアセナフチルを包含する。「アリーレン」は、アリール基の二価の対応基、例えば、１,２−フェニレン、１,３−フェニレン、または１,４−フェニレンを意味する。

【0032】

「ヘテロアリール」は、各環が３ないし７個の炭素原子を有し、少なくとも１個の環が、Ｎ、ＯまたはＳより独立して選択される１ないし４個のヘテロ原子を含有する芳香族である、単環、二環または三環式環系の部分を意味し、ここでそのＮおよびＳは所望により酸化されてもよく、そのＮは所望により四級化されてもよい。そのような少なくとも１個のヘテロ原子を含有する芳香族環は（ベンゾフラニルまたはテトラヒドロイソキノリルに見られるように）他の型の環に縮合してもよく、あるいは（フェニルピリジルまたは２−シクロペンチルピリジルに見られるように）他の型の環に直接結合してもよい。さらなる例として、ヘテロアリールの部分は、ピロリル、フラニル、チオフェニル（チエニル）、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、Ｎ−オキソピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、キノリニル、イソキノリニル、キナゾリニル、シンノリニル、キノザリニル、ナフチリジニル、ベンゾフラニル、インドリル、ベンゾチオフェニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、フェノチアゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ジベンゾフラニル、カルバゾリル、ジベンゾチオフェニル、アクリジニル等を包含する。「ヘテロアリーレン」はヘテロアリール基の二価の対応基を意味する。

【0033】

「置換されていないか、または置換されたＣ_１−Ｃ_５アルキル」あるいは「所望により置換されてもよいヘテロアリール」に見られるように、「置換されていないか、または置換された」あるいは「所望により置換されてもよい」なる語を使用することによるなどの、部分が置換されてもよいことを示す場合、かかる部分は、１または複数の、好ましくは１ないし５個の、より好ましくは１ないし２個の、独立して選択される置換基を有してもよい。置換基および置換パターンは、置換基が結合する部分を考慮して、化学的に安定し、そして当該分野にて公知の技法ならびに本明細書に記載の方法により合成され得る、化合物を提供するように、当業者によって選択され得る。部分が「置換されていないか、または置換された」あるいは「所望により置換されてもよい」と同一視される場合、好ましい実施態様において、かかる部分は置換されていない。

【0034】

「アリールアルキル」、「（ヘテロ脂環式）アルキル」、「アリールアルケニル」、「アリールアルキニル」、「ビアリールアルキル」等は、アルキル、アルケニル、またはアルキニルの部分が、場合によっては、アリール、ヘテロ脂環式、ビアリール等で置換されてもよく、部分が、場合によっては、例えば、ベンジル、フェネチル、Ｎ−イミダゾリルエチル、Ｎ−モルホリノエチル等に見られるように、アルキル、アルケニルまたはアルキニルの部分でオープン（未充足）価電子帯であってもよい。反対に、「アルキルアリール」、「アルケニルシクロアルキル」等は、アリール、シクロアルキル等の部分が、場合によっては、アルキル、アルケニル等で置換されてもよく、部分が、場合によっては、例えば、メチルフェニル（トリル）またはアリルシクロヘキシルに見られるような状態であってもよい。「ヒドロキシアルキル」、「ハロアルキル」、「アルキルアリール」、「シアノアリール」等は、アルキル、アリール等の部分が、場合によっては、１または複数の特定の置換基（場合によっては、ヒドロキシル、ハロ等）で置換されてもよいことを意味する。

【0035】

例えば、許容される置換基は、限定されないが、アルキル（特に、メチルまたはエチル）、アルケニル（特に、アリル）、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、脂環式、ヘテロ脂環式、ハロ（特に、フルオロ）、ハロアルキル（特に、トリフルオロメチル）、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル（特に、ヒドロキシエチル）、シアノ、ニトロ、アルコキシ、−Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−Ｏ（ハロアルキル）（特に、−ＯＣＦ３）、−Ｏ（シクロアルキル）、−Ｏ（ヘテロシクロアルキル）、−Ｏ（アリール）、アルキルチオ、アリールチオ、＝Ｏ、＝ＮＨ、＝Ｎ（アルキル）、＝ＮＯＨ、＝ＮＯ（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、−ＣＯ_２Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、−ＯＣ（＝Ｏ）（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）（ヒドロキシアルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、アジド、−ＮＨ_２、−ＮＨ（アルキル）、−Ｎ（アルキル）_２、−ＮＨ（アリール）、−ＮＨ（ヒドロキシアルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−ＯＳＯ_２（アルキル）、−ＳＨ、−Ｓ（アルキル）、−Ｓ（アリール）、−Ｓ（シクロアルキル）、−Ｓ（＝Ｏ）アルキル、−ＳＯ_２（アルキル）、−ＳＯ_２ＮＨ_２、−ＳＯ_２ＮＨ（アルキル）、−ＳＯ_２Ｎ（アルキル）_２等を包含する。

【0036】

置換されている部分が脂肪族の部分である場合、好ましい置換基は、アリール、ヘテロアリール、脂環式、ヘテロ脂環式、ハロ、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、アルコキシ、−Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−Ｏ（ハロアルキル）、−Ｏ（シクロアルキル）、−Ｏ（ヘテロシクロアルキル）、−Ｏ（アリール）、アルキルチオ、アリールチオ、＝Ｏ、＝ＮＨ、＝Ｎ（アルキル）、＝ＮＯＨ、＝ＮＯ（アルキル）、−ＣＯ_２Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、−ＯＣ（＝Ｏ）（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）（ヒドロキシアルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、アジド、−ＮＨ_２、−ＮＨ（アルキル）、−Ｎ（アルキル）_２、−ＮＨ（アリール）、−ＮＨ（ヒドロキシアルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−ＯＳＯ_２（アルキル）、−ＳＨ、−Ｓ（アルキル）、−Ｓ（アリール）、−Ｓ（＝Ｏ）アルキル、−Ｓ（シクロアルキル）、−ＳＯ_２（アルキル）、−ＳＯ_２ＮＨ_２、−ＳＯ_２ＮＨ（アルキル）、および−ＳＯ_２Ｎ（アルキル）_２である。より好ましい置換基は、ハロ、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、アルコキシ、−Ｏ（アリール）、＝Ｏ、＝ＮＯＨ、＝ＮＯ（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、アジド、−ＮＨ_２、−ＮＨ（アルキル）、−Ｎ（アルキル）_２、−ＮＨ（アリール）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、および−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２である。フェニル、シアノ、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、Ｃ_１−Ｃ_４アルキルオキシ、Ｏ（Ｃ_２−Ｃ_４アルキレン）ＯＨ、およびＯ（Ｃ_２−Ｃ_４アルキレン）ハロが特に好ましい。

【0037】

置換されている部分が脂環式、ヘテロ脂環式、アリール、またはヘテロアリールの部分である場合、好ましい置換基はアルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、シアノ、ニトロ、アルコキシ、−Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−Ｏ（ハロアルキル）、−Ｏ（アリール）、−Ｏ（シクロアルキル）、−Ｏ（ヘテロシクロアルキル）、アルキルチオ、アリールチオ、−Ｃ（＝Ｏ）（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、−ＣＯ_２Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、−ＯＣ（＝Ｏ）（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）（ヒドロキシアルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、アジド、−ＮＨ_２、−ＮＨ（アルキル）、−Ｎ（アルキル）_２、−ＮＨ（アリール）、−ＮＨ（ヒドロキシアルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−ＯＳＯ_２（アルキル）、−ＳＨ、−Ｓ（アルキル）、−Ｓ（アリール）、−Ｓ（シクロアルキル）、−Ｓ（＝Ｏ）アルキル、−ＳＯ_２（アルキル）、−ＳＯ_２ＮＨ_２、−ＳＯ_２ＮＨ（アルキル）、および−ＳＯ_２Ｎ（アルキル）_２である。より好ましい置換基はアルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、シアノ、ニトロ、アルコキシ、−Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、−ＣＯ_２Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、−ＯＣ（＝Ｏ）（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）（ヒドロキシアルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、−ＮＨ_２、−ＮＨ（アルキル）、−Ｎ（アルキル）_２、−ＮＨ（アリール）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、および−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２である。Ｃ_１−Ｃ_４アルキル、シアノ、ニトロ、ハロ、およびＣ_１−Ｃ_４アルコキシが特に好ましい。

【0038】

「Ｃ_１−Ｃ_５アルキル」または「５ないし１０％」に見られるように範囲で示される場合、かかる範囲は、第１の例におけるＣ_１およびＣ_５、および第２の例における５％および１０％のような、その範囲の端点を含む。

【0039】

特定の立体異性体が（例えば、構造式中にて関連する立体中心で太文字または破線のくさび形結合により、構造式中で二重結合がＥまたはＺ配置を有すると記載することにより、あるいは立体化学特定命名法を用いることにより）具体的に示されていない限り、立体異性体のすべてが、純粋な化合物ならびにその混合物として、本発明の範囲内に包含される。特記されない限り、本発明は、個々のエナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体、ならびにその組み合わせおよび混合物もすべて包含する。

【0040】

当業者は化合物が互変異性形態（例えば、ケトおよびエノール形態）、共鳴構造、および双性イオン形態（本明細書で使用される構造式で示される形態と均等な形態）を有し、その構造式がかかる互変異性形態、共鳴構造または双性イオン形態を包含することを理解するであろう。

【0041】

「医薬的に許容されるエステル」は、インビボにて（例えば、ヒト体内にて）加水分解し、親化合物またはその塩を生成するか、またはそれ自体が親化合物と同様の活性を有する、エステルを意味する。適切なエステルは、Ｃ_１−Ｃ_５アルキル、Ｃ_２−Ｃ_５アルケニルまたはＣ_２−Ｃ_５アルキニルエステル、特に、メチル、エチルまたはｎ−プロピルを包含する。

【0042】

「医薬的に許容される塩」は、医薬製剤に適する化合物の塩を意味する。化合物が１または複数の塩基性基を有する場合、その塩は、硫酸塩、臭化水素酸塩、酒石酸塩、メシル酸塩、マレイン酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、酢酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、塩化水素酸塩、乳酸塩、メチル硫酸塩、フマル酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、メシル酸塩、ラクトビオン酸塩、スベリン酸塩、トシル酸塩等などの酸付加塩であり得る。化合物が１または複数の酸性基を有する場合、その塩はカルシウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、メグルミン塩、アンモニウム塩、亜鉛塩、ピペラジン塩、トロメタミン塩、リチウム塩、コリン塩、ジエチルアミン塩、４−フェニルシクロヘキシルアズ民塩、ベンザチン塩、ナトリウム塩、テトラメチルアンモニウム塩等などの塩とすることができる。多形性結晶形態および溶媒和物も本発明の範囲内に含まれる。

【0043】

本願明細書に記載の式中にて、結合手を横切る波線

【化12】

[この文献は図面を表示できません]

または結合端にある星印（＊）は共有結合部位を示す。例えば、
式：

【化13】

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中で、Ｒが

【化14】

[この文献は図面を表示できません]

であるとの記述は

【化15】

[この文献は図面を表示できません]

をいう。

【0044】

本願明細書に記載の式中にて、芳香族環の２個の炭素間を横切る結合手は、その結合手と結合した基がその芳香族環の利用可能ないずれの位置にあってもよいことを意味する。例として、式：

【化16】

[この文献は図面を表示できません]

は、

【化17】

[この文献は図面を表示できません]

を示す。

【0045】

二量体
好ましい実施態様において式（Ｉ）で示されるベンゾジアゼピン二量体は、
式（Ｉ’）：

【化18】

[この文献は図面を表示できません]

で示される構造を有し、ここで式（Ｉ’）中の可変基の意義は式（Ｉ）にて定義されるとおりであって、すなわち、式（Ｉ’）は、Ｘが

【化19】

[この文献は図面を表示できません]

である点で、式（Ｉ）と異なる。

【0046】

式（Ｉ）およびその下位群、ならびに二量体−リンカー化合物およびコンジュゲートと関連付けられる式において、個々の式の文脈中に、より具体的な優先的記載がない限り、次の記載を優先して適用する：
（ａ）式中に二重線

【化20】

[この文献は図面を表示できません]

のある２つのベンゾジアゼピン環系がある場合、二重線

【化21】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合を示すのは１個以下である。どちらかと言えば、好ましくは、両方共、二重結合であるか、あるいはまた１つが単結合であり、他が二重結合である。
（ｂ）式中にある各Ｒ^２はＭｅであり、より好ましくは、Ｒ^２はＭｅであって、式中にある各Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^７、Ｒ^８およびＲ^１０はＨである。
（ｃ）式中にある各ＹはＣＨ_２である。
（ｄ）式中にある各Ｒ^９は、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＭｅ、ＮＨ_２、ＮＭｅ_２、Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−８Ｍｅ、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、または

【化22】

[この文献は図面を表示できません]

である。
（ｅ）式中にある場合、各Ｇ’はＣであって、Ｙ’およびＹ’’は共にＣＨ_２であるか、またはＧ’はＮであって、Ｙ’はＣＨ_２であり、Ｙ’’は不在である。
（ｆ）式中にある場合、Ｒ^１１はＨ、＝ＣＨ_２、ＣＨ＝ＣＨＭｅ、＝ＣＨＭｅ、Ｃ≡ＣＣＨ_２ＮＨ_２、

【化23】

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であり；
（ｈ）架橋基

【化24】

[この文献は図面を表示できません]

は

【化25】

[この文献は図面を表示できません]

であり、より好ましくは

【化26】

[この文献は図面を表示できません]

である。
（ｉ）架橋基

【化27】

[この文献は図面を表示できません]

中の部分（ＣＨ_２）_０−５Ｘ^２は、好ましくは、Ｈ、ＯＨ、ＯＭｅ、ＭｅまたはＣＨ_２ＯＨである。

【0047】

本発明の二量体は、ＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体；すなわち、式（Ｉ）において、Ｒ^１は式（Ｉａ）で示されるとおりとすることができる。かかる二量体は、式（ＩＩａ）：

【化28】

[この文献は図面を表示できません]

［式中
Ｘ、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、二重線

【化29】

[この文献は図面を表示できません]

およびＸ^２は、式（Ｉ）に関して上記される簡単な発明の概要のセクションにおいて定義されるとおりである］
で表すことができる。

【0048】

式（ＩＩａ）で示される好ましいＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体は、式（ＩＩａ’）：

【化30】

[この文献は図面を表示できません]

で表される構造を有し、ここで式（ＩＩａ’）中の可変基は、式（Ｉ）に関して上記される簡単な発明の概要のセクションにおいて定義されるとおりである。

【0049】

すなわち、式（ＩＩａ’）は、Ｘが

【化31】

[この文献は図面を表示できません]

である点で、式（ＩＩａ）と異なる。

【0050】

式（ＩＩａ）に係るもう一つ別の好ましい実施態様において、ＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体は、式（ＩＩａ’’）：

【化32】

[この文献は図面を表示できません]

［式中
Ｒ^５が結合するＮとの二重線

【化33】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合ならば、Ｒ^５はＨであり、二重線

【化34】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合ならば、不在であり；
Ｒ^６が結合するＣとの二重線

【化35】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合ならば、Ｒ^６はＨであり、二重線

【化36】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合ならば、不在であり；
Ｒ^９が、各々独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＭｅ、ＮＨ_２、ＮＭｅ_２、Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−８Ｍｅ、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、または

【化37】

[この文献は図面を表示できません]

であり；および
Ｘ^３はＨ、ＯＨ、ＯＭｅ、Ｍｅ、ＣＨ_２ＯＨ、Ｏ（アリル）、ＣｌまたはＣＯ_２Ｍｅである］
で示される。

【0051】

ＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体の具体例として：

【化38】

[この文献は図面を表示できません]

【化39】

[この文献は図面を表示できません]

【化40】

[この文献は図面を表示できません]

が挙げられる。

【0052】

もう一つ別の実施態様において、本発明の二量体はＴＨＩＱ−ＰＢＤ二量体であり；すなわち、式（Ｉ）において、Ｒ^１は式（Ｉｂ）で表されるとおりである。かかる二量体は、式（ＩＩｂ）：

【化41】

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［式中
Ｘ、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１１、Ｒ^１１’、二重線

【化42】

[この文献は図面を表示できません]

環Ｃ中の点線、およびＸ^２は、式（Ｉ）に関して上記した簡単な発明の概要のセクションにて定義されるとおりである。

【0053】

式（ＩＩｂ）で示される好ましいＴＨＩＱ−ＰＢＤ二量体は、式（ＩＩｂ’）：

【化43】

[この文献は図面を表示できません]

で表される構造を有し、ここで式（ＩＩｂ’）中の可変基は、式（Ｉ）に関して上記した簡単な発明の概要のセクションにて定義されるとおりである。

【0054】

すなわち、式（ＩＩｂ’）は、Ｘが

【化44】

[この文献は図面を表示できません]

である点で式（ＩＩｂ）と異なる。

【0055】

式（ＩＩｂ）で示されるもう一つ別の好ましいＴＨＩＱ−ＰＢＤ二量体は、式（ＩＩｂ’’）：

【化45】

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［式中
Ｒ^９はＨ、ＯＨ、ＯＭｅ、ＮＨ_２、ＮＭｅ_２、Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−８Ｍｅ、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、

【化46】

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であり；
Ｒ^１１はＨ、＝ＣＨ_２、ＣＨ＝ＣＨＭｅ、＝ＣＨＭｅ、Ｃ≡ＣＣＨ_２ＮＨ_２、

【化47】

[この文献は図面を表示できません]

であり；
Ｒ^１１’は、Ｃ１−Ｃ２、Ｃ２−Ｃ３、またはＣ２−Ｒ^１１の二重結合が存在するならば、不在であり、そうでなければＨであり；
Ｘ^３はＨ、ＯＨ、ＯＭｅ、Ｍｅ、またはＣＨ_２ＯＨであり；
ジアゼピン環系中の二重線

【化48】

[この文献は図面を表示できません]

の少なくとも１つが二重結合であり；
Ｒ^５が結合するＮとの二重線

【化49】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合ならば、Ｒ^５はＨであり、二重線

【化50】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合ならば、不在であり；
Ｒ^６が結合するＣとの二重線

【化51】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合ならば、Ｒ^６はＨであり、二重線

【化52】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合ならば、不在である］
で示される。

【0056】

好ましくは、式（ＩＩｂ）、（ＩＩｂ’）および（ＩＩｂ’’）において、

【化53】

[この文献は図面を表示できません]

は、

【化54】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0057】

もう一つ別の実施態様において、本発明の二量体は、ＴＨＩＱ環系を有するベンゾジアゼピン単位、およびアザインドリン（ＡＺＩ）環系を有するベンゾジアゼピン単位（「ＴＨＩＱ−ＡＺＩ二量体」）を含む。かかる二量体は、式（ＩＩｃ）：

【化55】

[この文献は図面を表示できません]

［式中
Ｘ、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、二重線

【化56】

[この文献は図面を表示できません]

およびＸ^２は、式（Ｉ）に関して、上記した簡単な発明の概要のセクションにて定義されるとおりであり；
１つのＧ’はＮであり、他方はＣであり；
ジアゼピン環系中の二重線

【化57】

[この文献は図面を表示できません]

の少なくとも１つが二重結合であり；
Ｒ^５が結合するＮとの二重線

【化58】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合ならば、Ｒ^５はＨであり、二重線

【化59】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合ならば、不在であり；
Ｒ^６が結合するＣとの二重線

【化60】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合ならば、Ｒ^６はＨであり、二重線

【化61】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合ならば、不在である］
で表されうる。

【0058】

式（ＩＩｃ）で示される好ましいＴＨＩＱ−ＡＺＩ二量体は、式（ＩＩｃ）：

【化62】

[この文献は図面を表示できません]

で表される構造を有し、ここで可変基は、式（Ｉ）に関して上記した簡単な発明の概要のセクションにて定義されるとおりであり；すなわち、（ＩＩｃ’）はＸが

【化63】

[この文献は図面を表示できません]

である点で式（ＩＩｃ）と異なる。

【0059】

コンジュゲート
概要
本発明の二量体は、治療剤それ自体として使用され得るが、がん細胞の化学物質に特異的または優先的に結合する標的とする部分とのコンジュゲートとして使用されるのが好ましい。好ましくは、標的とする部分が抗体またはその抗原結合部であり、化学物質が腫瘍関連抗原である。

【0060】

このように、本発明のもう一つ別の実施態様は、本発明の二量体およびリガンドを含む、式（ＩＩ）：

【化64】

[この文献は図面を表示できません]

［式中、Ｚはリガンドであり、Ｄは本発明の二量体であり、−（Ｘ^Ｄ）_ａＣ（Ｘ^ｚ）_ｂ−はＺとＤを連結するものであるから、集合的に、「リンカー部分」または「リンカー」と称される］
で示される、コンジュゲートである。リンカー内で、Ｃは二量体Ｄの意図する生物学的作用の部位で、またはその付近で切断されるように設計された切断基であり；Ｘ^ＤおよびＸ^Ｚは、それらが、各々、ＤとＣ、およびＣとＺを一定の間隔を置いて離すため、スペーサー部分（または「スペーサー」）と称され；下付き文字のａ、ｂおよびｃは、独立して、０または１である（すなわち、Ｘ^Ｄ、Ｘ^ＺおよびＣの存在は任意である）。下付き文字のｍは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０（好ましくは、１、２、３または４）である。Ｄ、Ｘ^Ｄ、Ｃ、Ｘ^ＺおよびＺは下記においてより詳細に記載される。

【0061】

リガンドＺ（例えば、抗体）は標的とする機能を遂行する。その抗原または受容体が位置付けられる標的組織または細胞と結合することにより、リガンドＺはコンジュゲートをそこに向かわせる。リガンドＺが抗体である場合、そのコンジュゲートは、時に、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）または免疫コンジュゲートと称される。好ましくは、標的組織または細胞はがん組織または細胞であり、抗原または受容体は組織関連抗原、すなわちがん細胞により一意的に発現されるか、またはがん細胞以外の細胞と比べて、がん細胞により過剰発現される抗原である。標的組織または細胞で基Ｃを切断して二量体Ｄを放出させ、その細胞傷害性作用を局所的に発揮させる。ある場合には、そのコンジュゲートは飲食作用により標的細胞の中に取り込まれ、その標的細胞内で切断が起こる。このように、二量体Ｄが意図する作用部位に正確に送達され、必要とされる投与量が減少する。また、二量体Ｄは、通常、そのコンジュゲートされた状態では生物学的に不活性であり（あるいは活性が有意に小さく）、それにより標的とされない組織または細胞に対する望ましくない毒性が減少する。抗がん剤は、一般に、細胞に対して毒性であることが極めて多いため、このことは重視すべき事項である。

【0062】

下付き文字のｍによって反映されるように、リガンドＺの各分子は、リガンドＺがコンジュゲーションのために利用できる部位の数、および利用される実験条件に応じて、１より多くの二量体Ｄとコンジュゲートし得る。当業者であれば、リガンドＺの各々個々の分子が二量体Ｄの整数とコンジュゲートされる一方で、コンジュゲートの調製は、統計的平均を反映して、二量体ＤのリガンドＺに対する非整数割合について分析してもよいことを認識するであろう。この割合は、置換割合（ＳＲ）、または、同意語として、薬物−抗体割合（ＤＡＲ）と称される。

【0063】

リガンドＺ
好ましくは、リガンドＺは抗体である。便宜と簡潔のために、限定されるものではないが、本明細書のリガンドＺのコンジュゲーションに関する下記の詳細な説明は、それが抗体であるとの文脈で記述されるが、当業者であれば、他の型のリガンドＺが、変更すべき点は変更して、コンジュゲートされ得ることを理解するであろう。例えば、葉酸をリガンドとして有するコンジュゲートは、その表面に葉酸受容体を有する細胞を標的とすることができる（Leamonら、Cancer Res. 2008, 68（23）, 9839）。同じ理由で、下記の詳細な説明は、抗体Ｚを二量体アナログＤに対して１：１（ｍ＝１）の割合で記述する。

【0064】

好ましくは、リガンドＺは、がん細胞の選択的標的を可能とする、腫瘍関連抗原に拮抗する抗体である。そのような抗原の例として、メソテリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ７０、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４（Ｏ８Ｅとしても知られる）、タンパク質チロシンキナーゼ７（ＰＴＫ７）、グリピカン−３、ＲＧ１、フコシル−ＧＭ１、ＣＴＬＡ−４、およびＣＤ４４が挙げられる。抗体は動物（例えば、ネズミ）、キメラ、ヒト化、または、好ましくはヒト抗体とすることができる。抗体は、好ましくは、モノクローナル、特にヒトモノクローナル抗体である。上記のいくつかの抗原に対するヒトモノクローナル抗体の調製がKormanら、ＵＳ８,６０９,８１６Ｂ２（２０１３；Ｂ７Ｈ４、０８Ｅとしても知られる；特に抗体２Ａ７、１Ｇ１１および２Ｆ９）；Rao-Naikら、８,０９７,７０３Ｂ２（２０１２；ＣＤ１９；特に抗体５Ｇ７、１３Ｆ１、４６Ｅ８、２１Ｄ４、２１Ｄ４ａ、４７Ｇ４、２７Ｆ３および３Ｃ１０）；Kingら、ＵＳ８,４８１,６８３Ｂ２（２０１３；ＣＤ２２；特に抗体１２Ｃ５、１９Ａ３、１６Ｆ７および２３Ｃ６）；Kelerら、ＵＳ７,３８７,７７６Ｂ２（２００８；ＣＤ３０；特に抗体５Ｆ１１、２Ｈ９および１７Ｇ１）；Terrettら、ＵＳ８,１２４,７３８Ｂ２（２０１２；ＣＤ７０；特に抗体２Ｈ５、１０Ｂ４、８Ｂ５、１８Ｅ７および６９Ａ７）；Kormanら、ＵＳ６,９８４,７２０Ｂ１（２００６；ＣＴＬＡ−４；特に抗体１０Ｄ１、４Ｂ６および１Ｅ２）；Visticaら、ＵＳ８,３８３,１１８Ｂ２（２０１３、フコシル−ＧＭ１、特に抗体５Ｂ１、５Ｂ１ａ、７Ｄ４、７Ｅ４、１３Ｂ８および１８Ｄ５）；Kormanら、ＵＳ８,００８,４４９Ｂ２（２０１１；ＰＤ−１；特に抗体１７Ｄ８、２Ｄ３、４Ｈ１、５Ｃ４、４Ａ１１、７D３および５Ｆ４）；Huangら、ＵＳ２００９／０２９７４３８Ａ１（２００９；ＰＳＭＡ、特に抗体１Ｃ３、２Ａ１０、２Ｆ５、２Ｃ６）；Cardarelliら、ＵＳ７,８７５,２７８Ｂ２（２０１１；ＰＳＭＡ；特に抗体４Ａ３、７Ｆ１２、８Ｃ１２、８Ａ１１、１６Ｆ９、２Ａ１０、２Ｃ６、２Ｆ５および１Ｃ３）；Terrettら、ＵＳ８,２２２,３７５Ｂ２（２０１２；ＰＴＫ７；特に抗体３Ｇ８、４Ｄ５、１２Ｃ６、１２Ｃ６ａおよび７Ｃ８）；Terrettら、ＵＳ８,６８０,２４７Ｂ２（２０１４；グリピカン−３；特に抗体４Ａ６、１１Ｅ７および１６Ｄ１０）；Harkinsら、ＵＳ７,３３５,７４８Ｂ２（２００８；ＲＧ１；特に抗体Ａ、Ｂ、ＣおよびＤ）；Terrettら、ＵＳ８,２６８,９７０Ｂ２（２０１２；メソテリン；特に抗体３Ｃ１０、６Ａ４および７Ｂ１）；Xuら、ＵＳ２０１０／００９２４８４Ａ１（２０１０；ＣＤ４４；特に抗体１４Ｇ９.Ｂ８.Ｂ４、２Ｄ１.Ａ３.Ｄ１２および１Ａ９.Ａ６.Ｂ９）；Deshpandeら、ＵＳ８,２５８,２６６Ｂ２（２０１２；ＩＰ１０；特に抗体１Ｄ４、１Ｅ１、２Ｇ１、３Ｃ４、６Ａ５、６Ａ８、７Ｃ１０、８Ｆ６、１０Ａ１２、１０Ａ１２Ｓおよび１３Ｃ４）；Kuhneら、UＳ８,４５０,４６４Ｂ２（２０１３；ＣＸＣＲ４；特に抗体Ｆ７、Ｆ９、Ｄ１およびＥ２）；およびKormanら、ＵＳ７,９４３,７４３Ｂ２（２０１１；ＰＤ−Ｌ１；特に抗体３Ｇ１０、１２Ａ４、１０Ａ５、５Ｆ８、１０Ｈ１０、１Ｂ１２、７Ｈ１、１１Ｅ６、１２Ｂ７、および１３Ｇ４）に開示されており；その内容を出典明示により本明細書に組み込むものとする。上記した抗体は、各々、本発明の二量体とのＡＤＣに用いることができる。

【0065】

リガンドＺは、アフィボディ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、ナノボディ、ユニボディ、ＤＡＲＰｉｎ、アンチカリン、ベルサボディ、デュオカリン、リポカリンまたはアビマーなどの抗体フラグメントまたは抗体模倣物の抗原結合フラグメントとすることもできる。

【0066】

リガンドＺ上の数種の異なる反応基のいずれか一つは、リジン残基のε−アミノ基、ペンダント炭水化物部分、カルボン酸基、ジスルフィド基およびチオール基を含む、コンジュゲーション部位とすることができる。各種の反応基は二律背反を示し、利点もあれば欠点もある。コンジュゲーションに適する抗体の反応基を評価するには、例えば、Garnett、Adv. Drug Delivery Rev. 53（2001）, 171-216、およびDubowchikとWalker、Pharmacology & Therapeutics 83（1999）, 67-123（出典明示によりその内容を本明細書の一部とする）を参照のこと。

【0067】

１の実施態様において、リガンドＺはリジンε−アミノ基を通してコンジュゲートされる。大抵の抗体は複数のリジンε−アミノ基を有し、当該分野で公知の技法を用い、アミド、尿素、チオ尿素またはカルバマート結合を介してコンジュゲートされ得る。しかしながら、コンジュゲート調製において潜在的バッチ間変動をもたらす、多くのε−アミノ基のどれを、どのように反応させるかを制御することは困難である。また、コンジュゲーションは、抗体の未変性コンホメーションを維持するのに重要なε−アミノ基のプロトン化の中和を引き起こすかもしれず、あるいはリガンドまたは抗原結合部位で、またはその近くのリジンで、そのいずれも望ましくはないが、起こるかもしれない。

【0068】

もう一つ別の実施態様において、多くの抗体が糖鎖形成されるように、リガンドＺは炭水化物の側鎖を介してコンジュゲートされ得る。炭水化物の側鎖は過ヨウ素酸で酸化されてアルデヒド基を生成し、それは、順次、アミンと反応して、セミカルバゾン、オキシム、またはヒドラゾンにあるように、イミン基を形成し得る。所望により、イミン基はＮａＣＮＢＨ_３で還元することによりさらに安定したアミン基に変換されてもよい。炭水化物の側鎖を介するコンジュゲーションに関するさらなる開示については、例えば、Rodwellら、Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 83, 2632-2636（1986）（その内容を出典明示により本明細書の一部とする）を参照のこと。リジンε−アミノ基と同様に、コンジュゲーション部位の位置および化学量論の再現性に関する懸念がある。

【0069】

さらにもう一つ別の実施態様において、リガンドＺは、グルタミン酸またはアスパラギン酸の側鎖カルボニルなどのカルボン酸基を通してコンジュゲートされ得る。１の実施態様において、末端カルボン酸基に官能基を付与してカルボヒドラジドを生成させ、次にそれをアルデヒドを有するコンジュゲーション部分と反応させる。Fischら、Bioconjugate Chemistry 1992, 3, 147-153を参照のこと。

【0070】

さらにもう一つ別の実施態様において、抗体Ｚは、抗体Ｚ上のシステイン残基と、コンジュゲートの他の部分にある硫黄とを架橋するジスルフィド結合を通してコンジュゲートされ得る。ある抗体は、例えば、ヒンジ領域に、ジスルフィド基があるが、遊離チオール（スルフヒドリル）基を欠く。そのような場合、天然のジスルフィド基を還元することにより遊離チオール基が生成され得る。そのように生成されたチオール基は次にコンジュゲーションに使用され得る。例えば、Packardら、Biochemistry 1986, 25, 3548-3552；Kingら、Cancer Res. 54, 6176-6185（1994）；およびDoroninaら、Nature Biotechnol. 21（7）, 778-784（2003）（その内容を出典明示により本明細書の一部とする）を参照のこと。ここでも、コンジュゲーション部位の位置および化学量論ならびに抗体未変性コンホメーションの崩壊の可能性に関して懸念がある。

【0071】

天然のジスルフィド結合を破壊することなく、遊離チオール基を抗体に導入するための多くの方法が知られており、本発明のリガンドＺを用いて実施することができる。利用される方法に応じて、予測可能な数の遊離スルフヒドリルを所定の位置で導入することが可能であるかもしれない。一の方法では、システインが別のアミノ酸と置換されている変異抗体を調製する。例えば、Eigenbrotら、ＵＳ７,５２１,５４１Ｂ２（2009）；Chilkotiら、Bioconjugate Chem. 1994, 5, 504-507；Urnovitzら、ＵＳ４,６９８,４２０（1987）；Stimmelら、J. Biol. Chem., 275（39）, 30445-30450（2000）；Bamら、ＵＳ７,３１１,９０２Ｂ２（2007）；Kuanら、J. Biol. Chem., 269（10）, 7610-7618（1994）；Poonら、J. Biol. Chem., 270（15）, 8571-8577（1995）を参照のこと。もう一つ別の方法において、必要以上のシステインをＣ−末端に加える。例えば、Cumberら、J. Immunol., 149, 120-126（1992）；Kingら、Cancer Res., 54, 6176-6185（1994）；Liら、Bioconjugate Chem., 13, 985-995（2002）；Yangら、Protein Engineering, 16, 761-770（2003）；およびOlafsonら、Protein Engineering Design & Selection, 17, 21-27（2004）を参照のこと。遊離システインを導入する好ましい方法は、Liuら、８,８６５,８７５Ｂ２（2014）により教示される方法であり、そこではシステインを含むアミノ酸配列が抗体の重鎖のＣ−末端に加えられる。この方法は既知の数のシステイン残基（重鎖に付き１個の残基）を抗原結合部位から離れた既知の場所に導入する。この段落で引用される参考文献の内容もすべて出典明示により本明細書の一部とする。

【0072】

さらにもう一つ別の実施態様において、リジンε−アミノ基は、ε−アミノ基をチオールまたはジスルフィド基に変換し、言うなればシステインサロゲートを作製する、２−イミノチオラン、２−イミノチアシクロヘキサンまたはＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）などの試薬を用いて修飾され得る。しかしながら、この方法では、適切なε−アミノ基との関連で、上記と同じコンジュゲーション位置および化学量論の制限に悩まされる。

【0073】

リンカー成分
上記されるように、本発明のコンジュゲートのリンカー部分は、３つまでの要素：切断可能な基Ｃ、および任意のスペーサーＸ^ＺおよびＸ^Ｄを含む。

【0074】

切断可能な基Ｃは、コンジュゲートが一般に血漿中に循環している間は相対的に安定しているが、コンジュゲートがその意図する作用部位に、すなわち、標的細胞付近に、その細胞に、またはその細胞内に一旦達すれば、容易に切断されるように選択されることが好ましい、生理学的条件下で切断可能な基である。好ましくは、該コンジュゲートは、抗体Ｚが標的細胞の表面に提示される抗原と結合して、標的細胞によって内在化される。その後で、基Ｃの切断が標的細胞の小胞体（初期エンドソーム、後期エンドソーム、または特に、リソソーム）で起こる。

【0075】

１の実施態様において、基ＣはｐＨ感受性基である。血漿中のｐＨは中性よりもわずかに上であり、一方でリソソーム内部のｐＨは酸性で約５である。かくして、その切断が酸触媒作用である基Ｃは、血漿中の速度よりも、リソソーム内部で桁違いに速い速度で開裂するであろう。適切な酸感受性基の例として、Shenら、ＵＳ４,６３１,１９０（1986）；Shenら、ＵＳ５,１４４,０１１（1992）；Shenら、Biochem. Biophys. Res. Commun. 102, 1048-1054（1981）およびYangら、Proc. Natl Acad. Sci（USA）, 85, 1189-1193（1988）（その内容を出典明示により本明細書の一部とする）により記載されるように、シス−アコニチルアミドおよびヒドラゾンが挙げられる。

【0076】

もう一つ別の実施態様において、基Ｃはジスルフィドである。ジスルフィドは、環境下のチオール濃度に依存する速度で、チオール−ジスルフィド交換機能により切断され得る。グルタチオンおよび他のチオールの細胞内濃度はその血清中濃度よりも高いため、ジスルフィドの切断速度は細胞内でより速いであろう。さらには、チオール−ジスルフィド交換速度は、ジスルフィドの立体および電子特性を調整すること（例えば、アルキル−アリールジスルフィド対アルキル−アルキルジスルフィド；アリール環上の置換等）によりモジュレートすることができ、血清中安定性および特定の切断速度を高めるジスルフィド結合の設計を可能とする。コンジュゲートにおけるジスルフィド切断可能な基に関するさらなる開示として、例えば、Thorpeら、Cancer Res. 48, 6396-6403（1988）；Santiら、ＵＳ７,５４１,５３０Ｂ２（2009）；Ｎgら、ＵＳ６,９８９,４５２Ｂ２（2006）；Ｎgら、ＷＯ２００２／０９６９１０Ａ１；Boydら、ＵＳ７,６９１,９６２Ｂ２；およびSufiら、ＵＳ２０１０／０１４５０３６Ａ１（その内容を出典明示により本明細書の一部とする）を参照のこと。

【0077】

好ましい切断可能な基は、血清中のプロテアーゼによって切断されるのとは対称的に、標的細胞の内部にあるプロテアーゼにより選択的に切断されるペプチドである。典型的には、切断可能なペプチド基は、１ないし２０個のアミノ酸、好ましくは１ないし６個のアミノ酸、より好ましくは１ないし３個のアミノ酸を含む。アミノ酸は天然および／または天然以外のα−アミノ酸とすることができる。天然アミノ酸は、遺伝コードによりコードされるアミノ酸、ならびにそれらから誘導されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタマート、シトルリン、およびＯ−ホスホセリンである。この文脈では、「アミノ酸」なる語はまた、アミノ酸アナログおよび模倣物を含む。アナログは、天然アミノ酸と同じ一般的Ｈ_２Ｎ（Ｒ）ＣＨＣＯ_２Ｈ構造（ただし、Ｒ基は天然アミノ酸の間で認められる基である）を有する化合物である。アナログの例として、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、およびメチオニンメチルスルホニウムが挙げられる。アミノ酸模倣物は、α−アミノ酸の一般的化学構造と異なる構造を有するが、それと同様のように機能する、化合物である。アミノ酸は、遺伝的にコードされるアミノ酸の「Ｌ」立体化学の、ならびにエナンチオマー的に「Ｄ」立体化学のものとすることができる。

【0078】

好ましくは、基Ｃは、プロテアーゼの切断可能な認識配列である、アミノ酸配列を含む。多数の切断可能な認識配列が当該分野にて知られている。例えば、Matayoshiら、Science 247：954（1990）；Dunnら、Meth. Enzymol. 241：254（1994）；Seidahら、Meth. Enzymol. 244：175（1994）；Thornberry、Meth. Enzymol. 244：615（1994）；Weberら、Meth. Enzymol. 244：595（1994）；Smithら、Meth. Enzymol. 244：412（1994）；およびBouvierら、Meth. Enzymol. 248：614（1995）（その内容を出典明示により本明細書の一部とする）を参照のこと。

【0079】

細胞により内在化されることを意図としないコンジュゲートでは、基Ｃは、それが標的組織の近傍にある細胞外マトリックスに存在するプロテアーゼ、例えば、すぐ近くにある死細胞により放出されるプロテアーゼ、または腫瘍関連プロテアーゼによって切断されるように選択され得る。典型的な細胞外腫瘍関連プロテアーゼは、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）、チメットオリゴペプチダーゼ（thimet oligopeptidase）（ＴＯＰ）およびＣＤ１０である。

【0080】

細胞により内在化されるように設計されるコンジュゲートでは、基Ｃは、好ましくは、エンドソームまたはリソソームプロテアーゼにより、特に後者により切断されるように選択されるアミノ酸配列を含む。かかるプロテアーゼの例として、限定されるものではないが、カテプシンＢ、Ｃ、Ｄ、Ｈ、ＬおよびＳ、特に、カテプシンＢが挙げられる。カテプシンＢは、ペプチドを、配列−ＡＡ２−ＡＡ１−（ここで、ＡＡ１は塩基性アミノ酸または強固に水素結合しているアミノ酸（リジン、アルギニンまたはシトルリンなど）であり、ＡＡ２は疎水性アミノ酸（フェニルアラニン、バリン、アラニン、ロイシンまたはイソロイシンなど）である）、例えばＶａｌ−Ｃｉｔ（ここで、Ｃｉｔはシトルリンを意味する）またはＶａｌ−Ｌｙｓで優先的に切断する。（本明細書中、アミノ酸配列は、文脈にて明らかにそうでないと示されない限り、Ｈ_２Ｎ−ＡＡ２−ＡＡ１−ＣＯ_２Ｈに示されるように、Ｎ−からＣ−の方向に記述される。）Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｌａ、Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、およびＡｓｐ−Ｖａｌ−ＣｉｔもカテプシンＢに関する基質のペプチドモチーフであるが、ある場合には切断速度は遅くなるかもしれない。カテプシン−切断可能な基に関するさらなる情報については、Dubowchikら、Biorg. Med. Chem. Lett. 8, 3341-3346（1998）；Dubowchikら、Bioorg. Med. Chem. Lett., 8, 3347-3352（1998）；およびDubowchikら、Bioconjugate Chem. 13, 855-869（2002）（その内容を出典明示により本明細書の一部とする）を参照のこと。ペプチジルリンカーを切断するのに利用され得る別の酵素はレグマインであり、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎで優先的に切断するリソソームシステインプロテアーゼである。

【0081】

１の実施態様において、基Ｃは、２個のアミノ酸配列、−ＡＡ２−ＡＡ１−（ここで、ＡＡ１はリジン、アルギニンまたはシトルリンであり、ＡＡ２はフェニルアラニン、バリン、アラニン、ロイシンまたはイソロイシンである）を含む、ペプチドである。もう一つ別の実施態様において、基Ｃは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｃｉｔ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ、Ｓｅｒ、およびＧｌｕからなる群より選択される、１ないし３個のアミノ酸の配列で構成される。

【0082】

単一のアミノ酸で構成される切断可能な基Ｃの調製および設計は、Chenら、ＵＳ８,６６４,４０７Ｂ２（2014）（その内容を出典明示により本明細書の一部とする）に開示される。

【0083】

基Ｃは光切断可能な基でもあり、例えば光に暴露されると切断される、ニトロベンジルエーテルである。

【0084】

基Ｃは抗体ＺまたはアナログＤと直接結合することができ；すなわち、スペーサーＸ^ＺおよびＸ^Ｄが、場合によっては、不在とすることができる。例えば、基Ｃがジスルフィドであるならば、２個の硫黄の一つを抗体Ｚ上のシステイン残基またはその代替基とすることができる。あるいは、基Ｃは抗体の炭水化物側鎖のアルデヒドとヒドラゾン結合を形成し得る。あるいは、基Ｃは抗体Ｚのリジンε−アミノ基とペプチド結合を形成し得る。好ましい実施態様において、二量体Ｄは、二量体Ｄのカルボキシルまたはアミン基と結合したペプチジルを通して、基Ｃと直接的に結合される。

【0085】

スペーサーＸ^Ｚは、存在する場合には、基Ｃと抗体Ｚとの間に、前者が後者と抗原との結合を空間的に干渉しないように、または後者が前者の切断を空間的に干渉しないように、空間的隔離を提供する。さらには、スペーサーＸ^Ｚは、コンジュゲートに対して溶解性を増大させるために、または凝集性を低下させるために使用され得る。スペーサーＸ^Ｚは、任意の数の組み合わせで組み立てることのできる、１または複数のモジュラーセグメントを含むことができる。スペーサーＸ^Ｚに適切なセグメントの例が、

【化65】

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であり、ここでその下付き文字ｇは０または１であり、下付き文字ｈは１〜２４、好ましくは２〜４である。これらのセグメントは、次に：

【化66】

[この文献は図面を表示できません]

説明されるように組み合わせることができる。

【0086】

スペーサーＸ^Ｄは、存在するとすれば、基Ｃと二量体Ｄとの間に、後者が前者の切断を立体的または電子的に干渉しないように、空間的隔離を提供する。スペーサーＸ^Ｄはまた、コンジュゲートにさらなる分子の質量および官能性の付加を導入するのに供され得る。一般に、さらなる質量および官能性はコンジュゲートの血清中半減期および他の特性に影響を及ぼすであろう。かくして、スペーサー基の賢明な選択を通して、コンジュゲートの血清中半減期をモジュレートすることができる。スペーサーＸ^Ｄは、スペーサーＸ^Ｚの文脈にて上記されるように、モジュラーセグメントから組み立てることもできる。

【0087】

スペーサーＸ^Ｚおよび／またはＸ^Ｄは、存在するならば、各々、ＺおよびＣ、またはＤおよびＣの間で、好ましくは原子数４〜２５の、より好ましくは原子数４〜２０の線形の分離を提供する。

【0088】

リンカーは、抗体と薬物を共有的に結び付けることに加えて、他の機能を果たし得る。例えば、リンカーは、コンジュゲーション化学を遂行する間に、または最終のＡＤＣ産物のいずれかにおいて、溶解度を高める、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）基を含有し得る。ＰＥＧ基が存在する場合、それはスペーサーＸ^ＺまたはＸ^Ｄのいずれか、あるいはその両方に組み込まれてもよい。ＰＥＧ基での反復単位の数は２〜２０、好ましくは４〜１０とすることができる。

【0089】

スペーサーＸ^ＺまたはＸ^Ｄのいずれか、あるいはその両方は、自己犠牲部分を含むことができる。自己犠牲部分は、（１）基Ｃと、そして抗体Ｚまたは二量体Ｄのいずれかと結合し、および（２）基Ｃからの切断が、場合によっては、結果として、自己犠牲部分がそれ自体を抗体Ｚまたは二量体Ｄから剥離させる、反応を開始させるような構造を有する、部分である。言い換えれば、（基Ｃから切断可能な）体Ｚまたは二量体Ｄから離れた部位での反応は、Ｘ^Ｚ−ＺまたはＸ^Ｄ−Ｄの結合を惹起し、その上で断裂させる。スペーサーＸ^Ｄの場合には、自己犠牲部分が存在することが望ましい。というのも、仮にコンジュゲートを切断した後に、スペーサーＸ^Ｄまたはその一部が二量体Ｄに結合したままとしたら、その生物学的活性が損なわれるかもしれないからである。自己犠牲部分の使用は、切断可能な基Ｃがポリペプチドである場合に特に望ましく、その場合には、自己犠牲部分は、典型的には、ポリペプチドに隣接して位置付けられる。

【0090】

パートナー分子Ｄのヒドロキシルまたはアミノ基と結合する典型的な自己犠牲部分（ｉ）−（ｖｉｉ）を以下に示す：

【化67】

[この文献は図面を表示できません]

【0091】

自己犠牲部分は、点線ａとｂ（または点線ｂとｃ）の間で、文脈を提供するように示される隣接する構造的特徴のある構造部分である。自己犠牲部分（ｉ）および（ｖ）は、二量体Ｄ−ＮＨ_２に結合し（すなわち、二量体Ｄはアミノ基を介してコンジュゲートされる）、一方で自己犠牲部分（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）は二量体Ｄ−ＯＨに結合する（すなわち、二量体Ｄはヒドロキシルまたはカルボキシル基を介してコンジュゲートされる）。点線ｂでのアミド結合の切断（例えば、ペプチダーゼによる）は、アミドの窒素をアミンの窒素として放出し、点線ａの結合の切断を、場合によっては、結果としてＤ−ＯＨまたはＤ−ＮＨ_２の放出をもたらす、反応を開始させる。別法として、自己犠牲反応を引き起こす切断は、構造式（ｖｉ）の場合のように、異なる型の酵素による、例えばβ−グルクロニダーゼによるものとすることができる。ある場合には、自己犠牲基は、構造式（ｖｉｉ）に示されるように、縦一列になって、使用され得る。そのような場合には、点線ｃでの切断が１,６−脱離反応により点線ｂとｃの間の部分の自己犠牲を誘発し、つづいて環化−脱離反応により点線ａとｂの間の部分の自己犠牲を誘発する。自己犠牲部分に関するさらなる開示として、Carlら、J. Med. Chem., 24（3）, 479-480（1981）；Carlら、ＷＯ８１／０１１４５（1981）；Dubowchikら、Pharmacology & Therapeutics, 83, 67-123（1999）；Firestoneら、ＵＳ６,２１４,３４５Ｂ１（2001）；Tokiら、J. Org. Chem. 67, 1866-1872（2002）；Doroninaら、Nature Biotechnology 21（7）, 778-784（2003）（誤植、p. 941）；Boydら、ＵＳ７,６９１,９６２Ｂ２；Boydら、ＵＳ２００８／０２７９８６８Ａ１；Sufiら、WＯ２００８／０８３３１２Ａ２；Feng、ＵＳ７,３７５,０７８Ｂ２；Jeffreyら、ＵＳ８０３９,２７３；およびSenterら、ＵＳ２００３／００９６７４３Ａ１（その内容を出典明示により本明細書の一部とする）を参照のこと。好ましい自己犠牲基は、構造式（ｉ）に示されるように、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）基である。

【0092】

もう一つ別の実施態様において、抗体を標的とする部分と二量体Ｄとを、切断できないリンカーで連結する：すなわち、要素Ｃが不在である。抗体のデグラデーションとは、結局は、リンカーを、二量体Ｄの生物学的活性に干渉しない、添付した小さな部分に縮小することである。

【0093】

コンジュゲーション技法
本発明のコンジュゲートは、好ましくは、本発明のアナログ（下記の式中にてＤで表される）およびリンカー：（Ｘ^Ｄ）_ａ（Ｃ）ｃ（Ｘ^Ｚ）_ｂ（ここでＸ^Ｄ、Ｃ、Ｘ^Ｚ、ａ、ｂ、およびｃは式（ＩＩ）について定義されるとおりである）を含む化合物をまず調製し、式（ＩＩＩ）：

【化68】

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［式中、Ｒ^３１は、抗体Ｚ上の相補的官能基と反応し、コンジュゲートを形成するのに適する官能基である］
で示されるアナログ−リンカー組成物を形成することにより製造される。適切な基Ｒ^３１の例として、アミノ、アジド、チオール、シクロオクチン、

【化69】

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が挙げられ、ここでＲ^３２は、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、メシラート、またはトシラートであり、Ｒ^３３はＣｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、ＯＨ、−Ｏ−Ｎ−スクシンイミジル、−Ｏ−（４−ニトロフェニル）、−Ｏ−ペンタフルオロフェニル、または−Ｏ−テトラフルオロフェニルである。適切な部分Ｄ−（Ｘ^Ｄ）_ａＣ（Ｘ^Ｚ）_ｂ−Ｒ^３１を調製するのに一般に使用され得る化学は、Ngら、ＵＳ７,０８７,６００Ｂ２（2006）；Ngら、ＵＳ６,９８９,４５２Ｂ２（2006）；Ngら、ＵＳ７,１２９,２６１Ｂ２（2006）；Ngら、WＯ０２／０９６９１０Ａ１；Boydら、ＵＳ７,６９１,９６２Ｂ２；Chenら、ＵＳ７,５１７,９０３Ｂ２（2009）；Gangwarら、ＵＳ７,７１４,０１６Ｂ２（2010）；Boydら、ＵＳ２００８／０２７９８６８Ａ１；Gangwarら、ＵＳ７,８４７,１０５Ｂ２（2010）；Gangwarら、ＵＳ７,９６８,５８６Ｂ２（2011）；Sufiら、ＵＳ２０１０／０１４５０３６Ａ１；およびChenら、ＵＳ２０１０／０１１３４７６Ａ１（その内容を出典明示により本明細書の一部とする）に開示される。

【0094】

好ましくは、反応性官能基−Ｒ^３１は、−ＮＨ_２、−ＯＨ、−ＣＯ_２Ｈ、−ＳＨ、マレイミド、シクロオクチン、アジド（−Ｎ_３）、ヒドロキシルアミノ（−ＯＮＨ_２）またはＮ−ヒドロキシスクシンイミドである。特に好ましい官能基−Ｒ^３１は：

【化70】

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である。

【0095】

−ＯＨ基は、抗体にある、例えばアスパラギン酸またはグルタミン酸側鎖上のカルボキシ基でエステル化され得る。

【0096】

−ＣＯ_２Ｈ基は、抗体にある、−ＯＨ基でエステル化され、あるいはアミノ基（例えば、リジン側鎖上の基）でアミド化され得る。

【0097】

Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド基は、機能的に活性化されたカルボキシル基を有し、都合よくはアミノ基（例えば、リジンより由来のアミノ基）と反応させることによりアミド化され得る。

【0098】

マレイミド基は、ミカエル付加反応において、抗体にある−ＳＨ基（例えば、システインから由来、またはスルフヒドリル官能基を導入するのに抗体を化学的に修飾して得られる基）とコンジュゲートされ得る。あるいは、２つの基の位置は、抗体を修飾してマレイイミド基と結合させ、薬物−リンカー化合物が−ＳＨ基を有するように逆にすることもできる。

【0099】

種々の技法が−ＳＨ基を抗体に導入し得る。好ましい技法において、抗体のリジン残基の側鎖にあるε−アミノ基を２−イミノチオランと反応させて遊離チオ−ル（−ＳＨ）基を導入する。そのチオール基をマレイミドまたは他の求核アクセプター基と反応させてコンジュゲーションを行うことができる：

【化71】

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【0100】

典型的には、抗体に付き２〜３個のチオールのチオレーションレベルを達成する。代表的な操作として、Congら、2004（その内容を出典明示により本明細書の一部とする）を参照のこと。かくして、１の実施態様において、本発明の二量体とコンジュゲートされる抗体は、イミノチオランとの反応により修飾される、１または複数の（好ましくは２または３個の）リジン残基を有する。

【0101】

−ＳＨ基もコンジュゲーションのために使用することができ、それには、その記載されるものの「鏡像」であるミカエル付加反応においてマレイミド基を抗体中に導入するために抗体を修飾した。抗体はＮ−スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）−シクロヘキサンカルボキシラート（ＳＭＣＣ）またはそのスルホン酸化した変異体スルホ−ＳＭＣＣを用いてマレイミド基を有するように修飾され得る。その試薬は共にSigma-Aldrichより入手可能である。

【0102】

代替となるコンジュゲーション技法は、銅触媒不要の「クリックケミストリー」を利用し、そこではアジド基をシクロオクチンの歪んだアルキン結合と交差して付加し、１,２,３−トリアゾール環を形成する。例えば、Agardら、J. Amer. Chem. Soc. 2004, 126, 15046；Best、Biochemistry 2009, 48, 6571（その内容を出典明示により本明細書の一部とする）を参照のこと。アジドを抗体に、シクロオクチンを薬物部分に配置、あるいはその逆に位置付けることができる。好ましいシクロオクチン基はジベンゾシクロオクチン（ＤＩＢＯ）である。ＤＩＢＯ基を有する種々の試薬がInvitrogen／Molecular Probes, Eugene. Oregonより入手可能である。以下の反応は、ＤＩＢＯ基が抗体（Ａｂ）に結合されている場合のクリックケミストリーのコンジュゲーションを説明する：

【化72】

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【0103】

さらにもう一つ別のコンジュゲーション技法は、天然に存在しないアミノ酸を抗体に導入し、その天然に存在しないアミノ酸を用いて薬物部分の反応性官能基とコンジュゲートするための官能性を提供することを含む。例えば、天然に存在しないアミノ酸のｐ−アセチルフェニルアラニンは、Tianら、ＷＯ２００８／０３０６１２Ａ２（2008）にて教示されるように、抗体または他のポリペプチドに取り込まれ得る。ｐ−アセチルフェニルアラニンのケト基は、リンカー−薬物部分にあるヒドロキシルアミンとの、オキシムの形成を介する、コンジュゲーション部位であり得る。別法として、天然に存在しないアミノ酸のｐ−アジドフェニルアラニンは、上記されるように、抗体に取り込まれ、クリックケミストリーを介するコンジュゲーションのためのアジド官能基を提供し得る。天然に存在しないアミノ酸はまた、Goerkeら、ＵＳ２０１０／００９３０２４Ａ１（2010）およびGoerkeら、Biotechnol. Bioeng. 2009, 102（2）, 400-416において教示されるように、無細胞系方法を用いて抗体または他のポリペプチドに組み込むこともできる。上述した開示は出典明示により本明細書の一部とする。かくして、１の実施態様において、本発明の二量体とコンジュゲートを製造するのに使用される抗体は、好ましくはｐ−アセチルフェニルアラニンまたはｐ−アジドフェニルアラニン、より好ましくはｐ−アセチルフェニルアラニンである、天然に存在しないアミノ酸と置換される１または複数のアミノ酸を有する。

【0104】

さらにもう一つ別のコンジュゲーション技法は、Jegerら、Angew. Chem. Int. Ed. 2010, 49, 9995に従って、トランスグルタミナーゼ酵素（好ましくは、細菌性トランスグルタミナーゼまたはＢＴＧ）を用いる。ＢＴＧは、グルタミンの側鎖であるカルボキシアミド（アミンアクセプター）と、例えば、リジンのε−アミノ基または５−アミノ−ｎ−ペンチル基とすることができる、アルキレンアミノ基（アミンドナー）の間にアミド結合を形成する。典型的なコンジュゲーション反応にて、以下に示されるように、グルタミン残基は抗体に位置付けられ、一方でアルキレンアミノ基はリンカー−薬物部分に位置付けられる：

【化73】

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【0105】

ポリペプチド鎖にあるグルタミン残基の位置付けはＢＴＧ介在性アミノ基転移に対するその感受性に大きな影響を及ぼす。抗体にグルタミン残基のないものは、通常は、ＢＴＧ基質である。しかしながら、Jegerは、抗体が脱グリコシル化されているならば、グルタミン２９５（Ｑ２９５）のすぐ近くにあるアスパラギン２９７（Ｎ２９７）である糖鎖形成部位が遮断されず、ＢＴＧを反応性にすると開示する。抗体は、ＰＮＧａｓｅＦ（ペプチド−Ｎ−グリコシダーゼＦ）で処理することにより、酵素を用いて脱グリコシル化され得る。別法として、抗体は定常領域にＮ２９７Ａ変異を導入することによりグリコシドフリーで合成され、Ｎ２９７糖鎖形成部位を取り除くことができる。Jegerは、抗体でのＮ２９７Ｑ置換が、糖鎖形成を排除するだけでなく、アミンアクセプターでもある、別のグルタミン残基を（位置２９７に）導入することを開示する。かくして、１の実施態様において、本発明の二量体とコンジュゲートされる抗体は脱グリコシル化される。もう一つ別の実施態様において、抗体はＮ２９７Ａ置換を有する。当業者であれば、合成後修飾による、またはＮ２９７Ａ変異の導入による脱グリコシル化が、抗体当たり２つのＢＴＧ−反応性グルタミン残基（重鎖に付き１つ、位置２９５）を生成し、一方でＮ２９７Ｑ置換の抗体は４つのＢＴＧ−反応性グルタミン残基（重鎖に付き２つ、位置２９５および２９７）を有するであろうことを理解するであろう。（抗体におけるアミノ酸位置の番号付けは、Kabatら、「Sequences of proteins of immunological interest, 5th ed., Pub. No. 91-3242, U.S. Dept. Health & Human Services, NIH, Bethesda, Md., 1991」（以下、「Kabat」という）によるものである。）

【0106】

コンジュゲーションはまた、Levaryら、PLoS One 2011, 6（4）, e18342；Proft、Biotechnol. Lett. 2010, 32, 1-10；Ploeghら、ＷＯ２０１０／０８７９９４Ａ２（2010）；およびMaoら、ＷＯ２００５／０５１９７６Ａ２（2005）において教示されるように、酵素のソルターゼ（Sortase）Ａを用いて行われうる。ソルターゼＡ認識モチーフ（典型的には、ＬＰＸＴＧであり、ここでＸはいずれか天然のアミノ酸である）は、リガンドＺに位置付けられ、求核アクセプターモチーフ（典型的には、ＧＧＧ）は式（ＩＩＩ）中の基Ｒ^３１であってもよく、あるいはその逆であってもよい。

【0107】

抗体はまた、Zhuら、mAbs 2014, 6, 1によって教示されるように、そのグリコシル基を修飾し、オキシム形成によりコンジュゲーション部位として役立つ、ケト基を導入することによりコンジュゲーションに適合され得る。もう一つ別の糖鎖工学の変法において、抗体のグリコシル基を修飾し、「クリックケミストリー」によってコンジュゲーションのためのアジド基を導入することができる。Huangら、J. Am. Chem. Soc., 2012, 134, 12308およびWang, ＵＳ８,９００,８２６Ｂ２（2014）およびＵＳ７,８０７,４０５Ｂ２（2010）を参照のこと。

【0108】

さらにもう一つ別のコンジュゲーション技法は、一般に、ジスルフィド架橋と称され、抗体にあるジスルフィド結合を切断し、一対のチオール（−ＳＨ）基を生成する。次に、抗体を２個のチオール反応性部位を含有する薬物−リンカー化合物で処理する。チオール基と２個の部位の反応は、一の方法にて、オリジナルなジスルフィド架橋を再生する再架橋をもたらし、かくして抗体の三次構造が保持され、薬物−リンカー部分と結合する。例えば、Burtら、ＷＯ２０１３／１９０２９２Ａ２（2013）およびJacksonら、ＵＳ２０１３／０２２４２２８Ａ１（2013）を参照のこと。

【0109】

二量体−リンカー化合物
一般に、本発明の二量体のＡＤＣは、その二量体の官能基に結合したリンカーを含み、そのリンカーは抗体と結合する。利用可能なコンジュゲーション技法の多様性を考慮して、本発明の二量体は、抗体とのコンジュゲーションに適する多くの異な二量体−リンカー化合物に変化させることができる。

【0110】

一般に、リンカーを本発明の二量体と結合させるには、以下の図で説明されるように、３種の異なるやり方がある（簡潔にするために環における可変基と共に任意の置換基は図示せず）。

【化74】

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【0111】

（ａ）型の二量体−リンカー化合物では、リンカーを結合させるための官能基は、２つの半二量体の間にある架橋Ｘに配置付けられる。（ｂ）型の二量体−リンカー化合物では、リンカーはイミン二重結合を横切る付加生成物として結合される。（ｃ）型および（ｃ’）型の二量体−リンカー化合物では、リンカーを結合させるための官能基はＴＨＩＱ、ＡＺＩまたはＰＢＤの二量体単位の「外側の」環に配置付けられる。

【0112】

１の実施態様において、（ａ）型の二量体−リンカー化合物は、式（ＩＩＩａ）：

【化75】

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［式中
Ｔは自己犠牲基であり；
ｔは０または１であり；
ＡＡ^ａおよび各ＡＡ^ｂは、アラニン、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、γ−カルボキシグルタミン酸、シトルリン、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンからなる群より独立して選択され；
ｕは０または１であり；
ｐは１、２、３または４であり；
ｑは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２（好ましくは２、３、４または８）であり；
ｒは１、２、３、４または５であり；
ｓは０または１であり；
Ｒ^３１は

【化76】

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であり；
Ｘ^４はＳ−Ｓ、ＯまたはＮＨであり；および
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｇ、Ｙ、および二重線

【化77】

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は、式（Ｉ）に関して上記される簡単な発明の概要のセクションにおいて定義されるとおりである］
で表されうる。

【0113】

式（ＩＩＩａ）に係る（ａ）型の好ましい二量体−リンカー化合物は、式（ＩＩＩａ’）：

【化78】

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［式中、
Ｘ^４、Ｔ、ｔ、ＡＡ^ａ、ＡＡ^ｂ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、およびＲ^３１は式（ＩＩＩａ）について定義されるとおりであり；
Ｒ^９は、各々独立して、Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−４Ｈ、（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−４（Ｃ_１−Ｃ_３アルキル）、ＯＨ、Ｃｌ、Ｆ、またはＢｒであり；
Ｒ^５は、それが結合するＮとの二重線

【化79】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合である場合、Ｈであり、二重線

【化80】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合である場合、存在せず；
Ｒ^６は、それが結合するＣとの二重線

【化81】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合である場合、Ｈであり、二重線

【化82】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合である場合、存在しない］
で示される。

【0114】

好ましくは、式（ＩＩＩａ）および（ＩＩＩａ’）において、Ｒ^９はＨであり、Ｘ^４はＮＨである。

【0115】

１の実施態様において、（ｂ）型の二量体−リンカー化合物は、式（ＩＩＩｂ）：

【化83】

[この文献は図面を表示できません]

［式中
Ｔ、ｔ、ＡＡ^ａ、ＡＡ^ｂ、ｕ、ｐ、ｑ、ｓ、ｒ、およびＲ^３１は、式（ＩＩＩａ）に関して定義されたとおりであり；および
Ｘ、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｘ^２、ＹおよびＧは、式（Ｉ）に関して、上記される簡単な発明の概要のセクションにて定義されるとおりである。

【0116】

式（ＩＩＩｂ）で表される好ましい（ｂ）型の二量体−リンカーは、式（ＩＩＩｂ’）：

【化84】

[この文献は図面を表示できません]

で示される。

【0117】

すなわち、式（ＩＩＩｂ’）は、下付き文字ｕが１であり、Ｘが

【化85】

[この文献は図面を表示できません]

である点で、式（ＩＩＩｂ）と異なる。

【0118】

式（ＩＩＩｂ）で表されるもう一つ別の好ましい（ｂ）型の二量体−リンカーは、式（ＩＩＩｂ’’）：

【化86】

[この文献は図面を表示できません]

［式中
Ｔ、ｔ、ＡＡ^ａ、ＡＡ^ｂ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、およびＲ^３１は、式（ＩＩＩａ）に関して定義されるとおりであり；
Ｒ^９は、各々独立して、Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−４Ｈ、（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−４（Ｃ_１−Ｃ_３アルキル）、ＯＨ、Ｃｌ、Ｆ、またはＢｒであり；
Ｘ^３はＨ、ＯＨ、ＯＭｅ、Ｍｅ、またはＣＨ_２ＯＨであり；
Ｒ^５は、それが結合するＮとの二重線

【化87】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合である場合、Ｈであり、二重線

【化88】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合である場合、存在せず；
Ｒ^６は、それが結合するＣとの二重線

【化89】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合である場合、Ｈであり、二重線

【化90】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合である場合、存在しない］
で示される。

【0119】

好ましくは、式（ＩＩＩｂ’’）において、Ｒ^９はＨであり、Ｘ^３はＨである。

【0120】

好ましくは、式（ＩＩＩｂ’’）において、部分

【化91】

[この文献は図面を表示できません]

は、

【化92】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0121】

（ｂ）型の二量体−リンカー化合物の例として：

【化93】

[この文献は図面を表示できません]

【化94】

[この文献は図面を表示できません]

【化95】

[この文献は図面を表示できません]

【化96】

[この文献は図面を表示できません]

が挙げられる。

【0122】

１の実施態様において、（ｃ）型の二量体−リンカー化合物は、式（ＩＩＩｃ）：

【化97】

[この文献は図面を表示できません]

［式中
Ｔ、ｔ、ＡＡ^ａ、ＡＡ^ｂ、ｕ、ｐ、ｑ、ｓ、ｒ、およびＲ^３１は、式（ＩＩＩａ）に関して定義されるとおりであり；および
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｙ、Ｘ^２および二重線

【化98】

[この文献は図面を表示できません]

は、式（Ｉ）に関して、上記される簡単な発明の概要のセクションにて定義されるとおりである。

【0123】

式（ＩＩＩｃ）で表される好ましい（ｃ）型の二量体−リンカー化合物は、式（ＩＩＩｃ’）：

【化99】

[この文献は図面を表示できません]

で示される。

【0124】

すなわち、式（ＩＩＩｃ’）は、下付き文字ｕが１であり、Ｘが

【化100】

[この文献は図面を表示できません]

である点で、式（ＩＩＩｃ）と異なる。

【0125】

式（ＩＩＩｃ）で表されるもう一つ別の好ましい（ｃ）型の二量体−リンカー化合物は、式（ＩＩＩｃ’’）：

【化101】

[この文献は図面を表示できません]

［式中
Ｘ^３はＨ、ＯＨ、ＯＭｅ、Ｍｅ、またはＣＨ_２ＯＨであり；
ジアゼピン環系における二重線の少なくとも１つは二重結合であり；
Ｒ^５は、それが結合するＮとの二重線

【化102】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合である場合、Ｈであり、二重線

【化103】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合である場合、存在せず；
Ｒ^６は、それが結合するＣとの二重線

【化104】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合である場合、Ｈであり、二重線

【化105】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合である場合、存在せず；
Ｒ^９はＨ、Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−４Ｈ、（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−４（Ｃ_１−Ｃ_３アルキル）、ＯＨ、Ｃｌ、Ｆ、またはＢｒである］
で示される。

【0126】

好ましくは、式（ＩＩＩｃ’’）において、Ｒ^９はＨであり、Ｘ^３はＨである。

【0127】

好ましくは、式（ＩＩＩｃ’’）において、部分

【化106】

[この文献は図面を表示できません]

は、

【化107】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0128】

（ｃ）型の二量体−リンカー化合物の例として、

【化108】

[この文献は図面を表示できません]

【化109】

[この文献は図面を表示できません]

が挙げられる。

【0129】

（ｃ’）型の二量体−リンカーは、好ましくは、式（ＩＩＩｃ’’’）：

【化110】

[この文献は図面を表示できません]

［式中
Ｘ^３はＨ、ＯＨ、ＯＭｅ、Ｍｅ、またはＣＨ_２ＯＨであり；
Ｔ、ｔ、ＡＡ^ａ、ＡＡ^ｂ、ｕ、ｐ、ｑ、ｓ、ｒ、およびＲ^３１は、式（ＩＩＩａ）に関連して定義されるとおりであり；および
Ｒ^５０は、各々独立して、Ｈ、Ｏ（Ｃ_１−Ｃ_３アルキル）、Ｏ（Ｃ_２−Ｃ_３アルキレン）、Ｏ（Ｃ_２−Ｃ_３アルキニル）、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＣＮである］
で示される。

【0130】

式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）および（ＩＩＩｃ’’’）において、下付き文字ｔおよびｕが共に０である場合、上記されるように、リンカーは非切断型のものである。

【0131】

式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩａ’）、（ＩＩＩａ’’）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｂ’）、（ＩＩＩｂ’’）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｃ’）、（ＩＩＩｃ’’）および（ＩＩＩｃ’’’）におけるＲ^３１は、上記されるように、抗体の相補的官能基と反応し、コンジュゲーションを形成し得る反応性官能基である。

【0132】

好ましい実施態様において、式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩａ’）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｂ’）、（ＩＩＩｂ’’）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｃ’’）、（ＩＩＩｃ’）または（ＩＩＩｃ’’’）において、基Ｒ^３１は

【化111】

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である。

【0133】

もう一つ別の好ましい実施態様において、式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩａ’）、（ＩＩＩａ’’）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｂ’）、（ＩＩＩｂ’’）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｃ’）または（ＩＩＩｃ’’’）において、基Ｒ３１は

【化112】

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である。

【0134】

式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩａ’）、（ＩＩＩａ’’）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｂ’）、（ＩＩＩｂ’’）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｃ’）、（ＩＩＩｃ’’）および（ＩＩＩｃ’’’）において、−ＡＡ^ａ−［ＡＡ^ｂ］_ｐ−は、その長さがｐの値により決定されるポリペプチド（ｐが１ならばジペプチド、ｐが３ならばテトラペプチド等）を表す。ＡＡ^ａはポリペプチドのカルボキシ末端にあり、そのカルボキシル基が二量体（あるいは存在するとすれば、自己犠牲基）のアミンの窒素とペプチド（アミド）結合を形成する。反対に、最後のＡＡ^ｂはそのポリペプチドのアミノ末端にあり、そのα−アミノ基は、ｓが、各々、１であるか、０であるかに応じて、

【化113】

[この文献は図面を表示できません]

とペプチド結合を形成する。好ましいポリペプチド−ＡＡ^ａ−［ＡＡ^ｂ］_ｐ−は、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｌａ、Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ｇｌｎ、およびＡｓｐ−Ｖａｌ−Ｃｉｔであり、Ｈ_２Ｎ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＣＯ_２Ｈにあるように慣用的にＮからＣの方向に記載される。より好ましくは、該ポリペプチドはＶａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、またはＶａｌ−Ａｌａである。好ましくは、ポリペプチド−ＡＡ^ａ−［ＡＡ^ｂ］_ｐ−は、標的（がん）細胞の内部に認められる酵素、例えば、カテプシン、特にカテプシンＢで切断可能である。

【0135】

下付き文字のｔが０または１であることで示されるように、自己犠牲基Ｔは式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩａ’）、（ＩＩＩａ’’）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｂ’）、（ＩＩＩｂ’’）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｃ’）および（ＩＩＩｃ’’）の二量体−リンカー化合物において所望により存在してもよい。自己犠牲基Ｔが存在する場合、それは、好ましくは、その構造が下記に示される、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）基であり、星印（＊）は二量体のアミンの窒素と結合するＰＡＢＣの末端を示し、波線

【化114】

[この文献は図面を表示できません]

はポリペプチド−ＡＡ^ａ−［ＡＡ^ｂ］_ｐ−と結合する末端を示す。

【化115】

[この文献は図面を表示できません]

【0136】

コンジュゲートの調製
この一般的操作は、上記されるように、リジンε−アミノ基と２−イミノチオランとを反応させ、つづいてマレイミド含有の薬物−リンカーの部分と反応させることによって、遊離チオール基の抗体への導入を基礎とする。まず、抗体を５０ｍＭ ＮａＣｌおよび２ｍＭジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）を含有する０.１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ８.０）への緩衝液交換に供し、５−１０ｍｇ／ｍＬに濃縮した。チオール化は２−イミノチオランの抗体への添加を通してなされる。２−イミノチオランの添加される量は予備実験により測定することができ、抗体によって様々である。予備実験においては、増大する量の２−イミノチオランを抗体に添加して滴定し、抗体と一緒に室温（約２５℃）で１時間インキュベートした後、抗体をセファデックス（SEPHADEX）（登録商標）Ｇ−２５カラムを用いて５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、５ｍＭグリシン、２ｍＭ ＤＴＰＡ、ｐＨ５.５中に脱塩処理に付し、ジチオジピリジン（ＤＴＤＰ）と反応させることで導入されたチオール基の数を速やかに測定する。チオール基とＤＴＤＰの反応はチオピリジンの遊離をもたらし、そのことは分光的に３２４ｎｍでモニター観察され得る。試料は、典型的には、０.５−１.０ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度で使用される。吸光度を２８０ｎｍで用い、試料中のタンパク質の濃度を正確に測定し、次に各試料のアリコート（０.９ｍＬ）を０.１ｍＬのＤＴＤＰ（エタノール中５ｍＭストック溶液）と一緒に室温で１０分間インキュベートすることができる。緩衝液単独のブランク試料もＤＴＤＰと一緒に並行してインキュベートする。１０分後に、３２４ｎｍでの吸光度を測定し、１９,８００Ｍ^−１のチオピリジンの吸光係数を用いてチオール基の数を定量する。

【0137】

典型的には、１個の抗体に付き約２ないし３個のチオール基のチオール化レベルが望ましい。例えば、ある抗体では、このことは１５倍のモル過剰の２−イミノチオランを添加し、つづいて室温で１時間インキュベートすることにより達成され得る。ついで抗体を２−イミノチオランと一緒に所望のモル比でインキュベートし、次にコンジュゲーション緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、５ｍＭグリシン、２ｍＭ ＤＴＰＡ、ｐＨ５.５）中に脱塩処理に付した。導入されるチオールの数を上記のように定量しながら、チオール化される材料を氷上に維持する。

【0138】

導入されたチオールの数を検証した後、チオールに付き２.５倍モル過剰量の薬物（二量体）−リンカーの部分を添加する。コンジュゲーション反応を、２５％プロピレングリコールおよび５％トレハロースを最終濃度で含有する、コンジュゲーション緩衝液中で進行させる。通常、薬物−リンカーのストック溶液を１００％ＤＭＳＯに溶かす。そのストック溶液をチオール化抗体に直接添加する。

【0139】

コンジュゲーション反応混合物を緩やかに攪拌しながら室温で２時間インキュベートする。次に１０倍モル過剰量のＮ−エチルマレイイミド（ＤＭＳＯ中１００ｍＭストック溶液）を該コンジュゲーション混合物に添加し、さらに１時間攪拌し、未反応のチオールを遮断した。

【0140】

次に、試料を０.２μフィルターを通して濾過する。材料をＴＦＦビバフロー５０ザルトリウス３０ＭＷＣＯ ＰＥＳ膜を通して１０ｍｇ／ｍＬのグリシン、２０ｍｇ／ｍＬのソルビトール、１５％アセトニトリル ｐＨ５.０（５ｘＴＦＦ緩衝液交換容量）に緩衝液交換に供し、未反応のいずれの薬物も除去する。最終処方をＴＦＦで行い、２０ｍｇ／ｍｌのソルビトール、１０ｍｇ／ｍＬのグリシン、ｐＨ５.０とする。

【0141】

二量体−リンカー化合物（ここで、リンカーはアミン基を有し、アミン供与体として作用しうる）のトランスグルタミナーゼ介在のコンジュゲーションのために以下の操作を用いることができる。抗体は、トランスグルタミナーゼ反応性グルタミンを有する抗体、例えば、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑ置換のある抗体とすることができる。コンジュゲーションは、組換え細菌性トランスグルタミナーゼにより抗体：酵素（５：１のモル比）を用いて実施される。コンジュゲーションは、５０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ８.０）中、３７℃で一夜インキュベートする標準的プロトコルを用いて実施される。得られたコンジュゲートを、５０ｍＭトリス（ｐＨ８.０）で予め平衡にした、プロテインＡカラムを用いて精製する。コンジュゲートは０.１Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ３.５）で溶出する。その溶出したフラクションを１Ｍトリス（ｐＨ９.０）で中和する。コンジュゲートは２０ｍｇ／ｍＬソルビトール、１０ｍｇ／ｍＬグリシン（ｐＨ５.０）に処方され得る。

【0142】

当業者は上記の条件および方法が例示であって、限定するものではなく、コンジュゲーションのための他の方法も当該分野にて知られており、本発明にて用いることができることを理解するであろう。

【0143】

コンジュゲート
１の実施態様において、本発明のコンジュゲートは、（ａ）型の二量体−リンカー化合物より誘導され、式（ＩＶａ）：

【化116】

[この文献は図面を表示できません]

［式中
Ａｂは抗体であり；
Ｒ^４０は

【化117】

[この文献は図面を表示できません]

であり；
ここで、Ａｂと結合するＲ^４０のオープン価電子帯が星印（＊）で示され、（ＣＨ_２）_ｒと結合するＲ^４０のオープン価電子帯が波線

【化118】

[この文献は図面を表示できません]

で示され；
ｍは１、２、３または４であり；
Ｔ、ｔ、ＡＡ^ａ、ＡＡ^ｂ、ｕ、ｐ、ｑ、ｓ、ｒ、およびＸ^４は式（ＩＩＩａ）において定義されるとおりであり；および
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｙ、Ｇ、および二重線

【化119】

[この文献は図面を表示できません]

は、上記の簡単な発明の概要のセクションにて式（Ｉ）について定義されるとおりである］
で示されうる。

【0144】

式（ＩＶａ）に係る好ましいコンジュゲートは、式（ＩＶａ’）：

【化120】

[この文献は図面を表示できません]

［式中
Ａｂ、Ｒ^４０、Ｔ、ｔ、ＡＡ^ａ、ＡＡ^ｂ、ｐ、ｑ、ｓ、ｒおよびＸ^４は、式（ＩＩＩａ）について定義されるとおりであり；
Ｒ^５は、それが結合するＮとの二重線

【化121】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合である場合、Ｈであり、二重線

【化122】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合である場合、存在せず；
Ｒ^６は、それが結合するＣとの二重線

【化123】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合である場合、Ｈであり、二重線

【化124】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合である場合、存在せず；および
Ｒ^９は、Ｈ、ＯＨ、ＯＭｅ、ＮＨ_２、ＮＭｅ_２、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−８Ｍｅ、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒまたは

【化125】

[この文献は図面を表示できません]

である］
で示される。

【0145】

もう一つ別の実施態様において、本発明のコンジュゲートは、（ｂ）型の二量体−リンカー化合物より誘導され、式（ＩＶｂ）：

【化126】

[この文献は図面を表示できません]

［式中
Ａｂ、Ｒ^４０、ｍ、Ｔ、ｔ、ＡＡ^ａ、ＡＡ^ｂ、ｕ、ｐ、ｑ、ｓ、およびｒは、式（ＩＶａ）に関して定義されるとおりであり；および
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｙ、Ｇ、およびＸは、式（Ｉ）に関して上記の簡単な発明の概要のセクションにて定義されるとおりである］
で示すことができる。

【0146】

式（ＩＶｂ）に係る好ましいコンジュゲートは、式（ＩＶｂ’）：

【化127】

[この文献は図面を表示できません]

［式中
Ｔ、ｔ、ＡＡ^ａ、ＡＡ^ｂ、ｍ、ｐ、ｑ、ｓ、ｒ、Ｒ^４０、およびＡｂは、式（ＩＶａ）に関して定義されるとおりであり；および
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｙ、Ｇ、およびＸ^２は、式（ＩＶａ）に関して定義されるとおりである］
で示される。

【0147】

すなわち、コンジュゲート（ＩＶｂ’）は、下付き文字ｕが１であり、Ｘが

【化128】

[この文献は図面を表示できません]

である点でコンジュゲート（ＩＶｂ）と異なる。

【0148】

式（ＩＶｂ）に係るもう一つ別の好ましいコンジュゲートは、式（ＩＶｂ’’）：

【化129】

[この文献は図面を表示できません]

［式中
Ｔ、ｔ、ＡＡ^ａ、ＡＡ^ｂ、ｍ、ｐ、ｑ、ｓ、ｒ、Ｒ^４０、およびＡｂは、式（ＩＶａ）に関して定義されるとおりであり；
Ｘ^３はＨ、ＯＨ、ＯＭｅ、ＭｅまたはＣＨ_２ＯＨであり；
Ｒ^５は、それが結合するＮとの二重線

【化130】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合である場合、Ｈであり、二重線

【化131】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合である場合、存在せず；
Ｒ^６は、それが結合するＣとの二重線

【化132】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合である場合、Ｈであり、二重線

【化133】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合である場合、存在せず；および
Ｒ^９はＨ、ＯＨ、ＯＭｅ、ＮＨ_２、ＮＭｅ_２、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−８Ｍｅ、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、Ｆ、Ｂｒ、Ｃｌ、または

【化134】

[この文献は図面を表示できません]

である］
で示される構造を有する。

【0149】

好ましくは、式（ＩＶｂ’）中、Ｒ９はＨであり、Ｘ３はＨである。

【0150】

もう一つ別の実施態様において、本発明のコンジュゲートは、（ｃ）型の二量体−リンカー化合物より誘導され、式（ＩＶｃ）：

【化135】

[この文献は図面を表示できません]

［式中
Ａｂ、Ｒ^４０、ｍ、Ｔ、ｔ、ＡＡ^ａ、ＡＡ^ｂ、ｕ、ｐ、ｑ、ｓ、およびｒは、式（ＩＶａ）に関して定義されるとおりであり；および
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｙ、Ｘ、および二重線

【化136】

[この文献は図面を表示できません]

は、式（Ｉ）に関して上記の簡単な発明の概要のセクションにて定義されるとおりである］
で表すことができる。

【0151】

式（ＩＶｃ）に係る好ましいコンジュゲートは、式（ＩＶｃ’）：

【化137】

[この文献は図面を表示できません]

［式中
Ａｂ、Ｒ^４０、ｍ、Ｔ、ｔ、ＡＡ^ａ、ＡＡ^ｂ、ｐ、ｑ、ｓ、およびｒは、式（ＩＶａ）に関して定義されるとおりであり；および
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｙ、Ｘ^２、および二重線

【化138】

[この文献は図面を表示できません]

は、式（Ｉ）に関して上記の簡単な発明の概要のセクションにて定義されるとおりである］
で表される。

【0152】

すなわち、コンジュゲート（ＩＶｃ’）は、下付き文字ｕが１であり、Ｘが

【化139】

[この文献は図面を表示できません]

である点で、コンジュゲート（ＩＶｃ）とは異なる。

【0153】

式（ＩＶｃ）に係るもう一つ別の好ましいコンジュゲートは、式（ＩＶｃ’’）：

【化140】

[この文献は図面を表示できません]

［式中
Ａｂ、Ｒ^４０、ｍ、Ｔ、ｔ、ＡＡ^ａ、ＡＡ^ｂ、ｐ、ｑ、ｓ、およびｒは式（ＩＶａ）に関して定義されるとおりであり；
Ｘ^３はＨ、ＯＨ、ＯＭｅ、ＭｅまたはＣＨ_２ＯＨであり；
ジアゼピン環系中の二重線

【化141】

[この文献は図面を表示できません]

のうち少なくとも１個は二重結合であり；
Ｒ^５は、それが結合するＮとの二重線

【化142】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合である場合、Ｈであり、二重線

【化143】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合である場合、存在せず；
Ｒ^６は、それが結合するＣとの二重線

【化144】

[この文献は図面を表示できません]

が単結合である場合、Ｈであり、二重線

【化145】

[この文献は図面を表示できません]

が二重結合である場合、存在せず；および
Ｒ^９はＨ、ＯＨ、ＯＭｅ、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−８Ｍｅ、Ｆ、Ｃｌ、またはＢｒである］
で示される構造を有する。

【0154】

好ましくは、式（ＩＶｃ’’）中、Ｒ^９はＨであり、Ｘ^３はＨである。

【0155】

型（ｃ’）の二量体−リンカーに基づく、好ましいコンジュゲートは、式（ＩＶｃ’’’）：

【化146】

[この文献は図面を表示できません]

［式中
Ａｂ、Ｒ^４０、ｍ、Ｔ、ｔ、ＡＡ^ａ、ＡＡ^ｂ、ｐ、ｑ、ｓ、ｕ、およびｒは式（ＩＶａ）に関して定義されるとおりであり；
Ｘ^３はＨ、ＯＨ、ＯＭｅ、Ｍｅ、またはＣＨ_２ＯＨであり；および
Ｒ^５０は、各々独立して、Ｈ、Ｏ（Ｃ_１−Ｃ_３アルキル）、Ｏ（Ｃ_２−Ｃ_３アルキレン）、Ｏ（Ｃ_２−Ｃ_３アルキニル）、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＣＮである］
で示される。

【0156】

式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩａ’）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｂ’）、（ＩＩＩｂ’’）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｃ’）、（ＩＩＩｃ’’）および（ＩＩＩｃ’’’）の二量体リンカーに関してポリペプチド−ＡＡ^ａ−［ＡＡ^ｂ］_ｐ−および自己犠牲基Ｔについて上記される優先事項は、式（ＩＶａ）、（ＩＶａ’）、（ＩＶｂ）、（ＩＶｂ’）、（ＩＶｃ）、（ＩＶｃ’）および（ＩＶｃ’’’）のコンジュゲートにも適用され得る。

【0157】

式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（ＩＶｃ）および（ＩＶｃ’’’）において、下付き文字ｔおよびｕが共に０であるならば、その場合にはリンカーは切断できない型のものであり、抗体Ａｂの分解に応じて薬物を放出する。もし、ポリエチレングリコール成分の存在が、例えば、薬物−リンカー化合物のコンジュゲーションの間の溶解性を増大させることにより、利益であり、薬物の生物学的活性を干渉しないとすれば、該成分は所望により存在してもよい（すなわち、ｓが１であってもよい）。

【0158】

医薬組成物
もう一つ別の態様において、本発明の開示は、本発明の化合物またはそのコンジュゲートを含み、医薬的に許容される担体または賦形剤と一緒に処方された医薬組成物を提供する。抗体またはもう一つ別の薬物などの１または複数のさらなる医薬的に活性な成分を所望により含有してもよい。該医薬組成物は、もう一つ別の治療剤、特にもう一つ別の抗がん剤との併用療法にて投与され得る。

【0159】

医薬組成物は１または複数の賦形剤を含んでもよい。使用されてもよい賦形剤は、担体、界面活性剤、増粘剤または乳化剤、固形結合剤、分散または懸濁助剤、可溶化剤、着色剤、矯味矯臭剤、被覆剤、崩壊剤、滑沢剤、甘味剤、保存剤、等張剤、ならびにそれらの組み合わせを包含する。適切な賦形剤の選択および使用は、Gennaro編、Remington：The Science and Practice of Pharmacy、20th Ed.（Lippincott Williams & Wilkins 2003）において教示されており、その開示を出典を明示することで本明細書に組み込むものとする。

【0160】

好ましくは、医薬組成物は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または表皮投与（例えば、注射または注入による投与）に適する。投与経路に応じて、活性化合物を一の材料で被覆し、その化合物を酸の作用から、あるいは該化合物を不活性とするかもしれない他の天然条件から、保護してもよい。「非経口投与」なる語は、腸内投与および局所投与以外の、通常は注射による投与方法を意味し、限定されるものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、皮膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内注射および注入を包含する。あるいはまた、医薬組成物は、局所、表皮または粘膜投与経路などの非経口以外の経路を介して、例えば、鼻腔内に、経口的に、経膣的に、経直腸的に、舌下的にまたは局所的に投与され得る。

【0161】

医薬組成物は、滅菌水溶液または分散液の形態であってもよい。それらはまた、マイクロエマルジョン、リポソーム、あるいは高い薬物濃度を達成するのに適した他の秩序だった構造に処方することもできる。該組成物はまた、投与前に水で復元するための凍結乾燥した形態にて提供され得る。

【0162】

担体材料と組み合わせて単一剤形を生成することのできる活性成分の量は、治療される対象および個々の投与方法に応じて変化するであろうし、一般には治療効果をもたらす組成物の量であろう。一般に、この量は、１００％中に、約０.０１％ないし約９９％の範囲の活性成分、好ましくは約０.１％ないし約７０％、最も好ましくは約１％ないし約３０％の範囲の活性成分と、医薬的に許容される担体とを組み合わせたものであろう。

【0163】

投与方法は治療効果を提供するように調整される。例えば、単一のボーラスで投与されてもよく、数回に分割した用量を経時的に投与してもよく、あるいはその用量は状況の緊急性により示されるように比例的に減少または増加させてもよい。投与を容易にし、投与量を均一にするために、投与単位形態の非経口用組成物を処方するのが特に有利である。「投与単位形態」は、治療される対象のために単回投与に適した、物理的に別個の単位をいい；各単位は、必要とされる医薬担体と合わさって、望ましい治療効果が得られるように算定した、所定量の活性化合物を含有する。

【0164】

投与量は、宿主体重１ｋｇ当たり約０.０００１〜１００ｍｇ、より一般的には０.０１〜５ｍｇの範囲にある。例えば、投与量は、０.３ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重または１０ｍｇ／ｋｇ体重とするか、あるいは１−１０ｍｇ／ｋｇの範囲内と、あるいはまた０.１〜５ｍｇ／ｋｇとすることができる。典型的な治療計画は、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、月に１回、３ヶ月に１回、または３ないし６ヶ月に１回の投与である。好ましい投与計画は、１ｍｇ／ｋｇ体重または３ｍｇ／ｋｇ体重を静脈内投与を介して、以下の投与スケジュールの１つで投与すること：（ｉ）６回の投与を４週間毎に、ついで３ヶ月毎に；（ｉｉ）３週間毎に；または（ｉｉｉ）３ｍｇ／ｋｇ体重を１回、つづいて１ｍｇ／ｋｇ体重を３週間毎に投与することを包含する。ある方法において、投与量は約１−１０００μｇ／ｍＬの血漿中抗体濃度が得られるように、ある方法では約２５−３００μｇ／ｍＬが得られるように調整される。

【0165】

本発明の化合物の「治療的に効果的な量」は、好ましくは、症状の重篤度の減少、無症状の期間の頻度および持続期間の増加、疾患による障害または身体障害の防止をもたらす。例えば、腫瘍を患う対象を治療する場合、「治療的に効果的な量」は、未処理の対象と比べて、好ましくは少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、さらにより好ましくは少なくとも約６０％、その上さらに好ましくは少なくとも約８０％の腫瘍増殖を阻害する。治療用化合物の治療的に効果的な量は、腫瘍の大きさを縮小させるか、そうでなければ、典型的にはヒトであるが、他の哺乳動物とすることもできる対象での徴候を改善することができる。

【0166】

医薬組成物は、インプラント、経皮パッチおよびマイクロカプセル化デリバリーシステムを含む、制御放出性または徐放性製剤とすることができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを用いることができる。例えば、Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems、J.R. Robinson編、Marcel Dekker, Inc., New York, 1978を参照のこと。

【0167】

治療用組成物は、（１）無針皮下注射装置（例えば、米国特許第５,３９９,１６３号；第５,３８３,８５１号；第５,３１２,３３５号；第５,０６４,４１３号；第４,９４１,８８０号；第４,７９０,８２４号；および第４,５９６,５５６号）；（２）マイクロ注入ポンプ（米国特許第４,４８７,６０３号）；（３）経皮装置（米国第４,４８６,１９４号）；（４）注入装置（米国第ｋ４,４４７,２３３号および第４,４４７,２２４号）；および（５）浸透性装置（米国第４,４３９,１９６号および第４,４７５,１９６号）（それらの開示は出典明示により本明細書に組み込まれる）などの医療装置を通して投与され得る。

【0168】

ある実施態様において、医薬組成物は、インビボでの適切な分布を確保するために製剤化され得る。例えば、本発明の治療用化合物が血液脳関門を横切って移動することを確保するために、それらはリポソーム中に処方することができ、それは特異的細胞または器官への選択的輸送を強化するために、さらに標的とする部分を含んでもよい。例えば、米国特許第４,５２２,８１１号；第５,３７４,５４８号；第５,４１６,０１６号；および第５,３９９,３３１号；V.V. Ranade（1989） J. Clin. Pharmacol. 29：685；Umezawaら、（1988） Biochem. Biophys. Res. Commun. 153：1038；Bloemanら（1995）FEBS Lett. 357：140；M. Owaisら（1995）Antimicrob. Agents Chemother. 39：180；Briscoeら（1995）Am. J. Physiol. 1233：134；Schreierら（1994）J. Biol. Chem. 269：9090；KeinanenおよびLaukkanen（1994）FEBS Lett. 346：123；ならびにKillionおよびFidler（1994）Immunomethods 4：273を参照のこと。

【0169】

使用
本発明の化合物またはそれらのコンジュゲートは、限定されるものではないが、頭部、頚部、鼻腔、副鼻腔、鼻咽頭、口腔、中咽頭、喉頭、下咽頭、唾液腺および傍神経節の腫瘍を含む頭頸部がん；肝臓および胆道系のがん、特に肝細胞がん；腸がん、特に大腸がん；卵巣がん；小細胞および非小細胞肺がん（ＳＣＬＣおよびＮＳＣＬＣ）；線維肉腫、悪性線維性組織球腫、胎児性横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、神経線維腫、骨肉腫、滑膜肉腫、脂肪肉腫および胞巣状軟部肉腫などの乳がん肉腫；急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）などの白血病；中枢神経系の腫瘍、特に脳がん；多発性骨髄腫（ＭＭ）、ホジキンリンパ腫、リンパ形成細胞性リンパ腫、濾胞性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｂ系統大細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、およびＴ細胞未分化大細胞型リンパ腫を含む、過剰増殖性疾患などの疾患の治療に使用され得る。臨床的に、本明細書に記載の方法の実施および組成物の使用は、成長したがんの大きさまたは数の減少、および／または（該当する場合には）関連する徴候の減少をもたらすであろう。病理学的に、本明細書に記載の方法の実施および組成物の使用は、がん細胞増殖の阻害、がんまたは腫瘍の大きさの減少、さらなる転移の防止、および腫瘍血管新生の阻害などの病理学的に関連する応答を生じさせるであろう。そのような疾患を治療する方法は、治療的に効果的な量の本発明の組み合わせを対象に投与することを含む。該方法は必要に応じて繰り返されてもよい。特に、がんは腎臓、肺、胃、または卵巣のがんとすることができる。

【0170】

本発明の化合物またはそれらのコンジュゲートは、抗体、アルキル化剤、血管新生阻害剤、抗代謝産物、ＤＮＡ切断剤、ＤＮＡ架橋剤、ＤＮＡ挿入剤、ＤＮＡ副溝結合剤、エンジイン、熱ショックタンパク質９０阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤、免疫調節剤、微小管安定剤、ヌクレオシド（プリンまたはピリミジン）類似体、核外輸送阻害剤、プロテアソーム阻害剤、トポイソメラーゼ（ＩまたはＩＩ）阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、およびセリン／トレオニンキナーゼ阻害剤を含む、他の治療剤と組み合わせて投与され得る。特定の治療剤として、アダリブマブ、アンサミトシンＰ３、アウリスタチン、ベンダムスチン、ベバシズマブ、ビカルタミド、ブレマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カリスタチンＡ、カンプトテシン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、セツキシマブ、シスプラチン、クラドリビン、シタラビン、クリプトフィシン、ダカルバジン、ダサチニブ、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、ダイネマイシンＡ、エポチロン、エトポシド、フロクスウリジン、フルダラビン、５−フルオロウラシル、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、イピリムマブ、ヒドロキシ尿素、イマチニブ、インフリキシマブ、インターフェロン、インターロイキン、□−ラパコン、レナリドミド、イリノテカン、マイタンシン、メクロレタミン、メファラン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトマイシンＣ、ニロチニブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、プロカルバジン、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、６−チオグアニジン、チオテパ、テニポシド、トポテカン、トラスツズマブ、トリコスタチンＡ、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビンデシンが挙げられる。

【0171】

実施例
本発明の実施は、例示として提供され、限定するものではない、以下の実施例を参照することによりさらに理解され得る。次の一般的操作は例示であり、当業者であれば別法であるが、同等である方法を用いることができることを理解する。

【0172】

^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルはブルーカー（Bruker）６００、５００、または４００ＭＨｚ装置で測定され、化学シフトはテトラメチルシラン（□＝０.０）との関連でｐｐｍ（□）で報告された。一般に、蒸発は減圧下で実施される。

【0173】

これらの２つのＬＣ／ＭＳ分析方法は例示である：
Ａ カラム：：ウォーターズ（Waters）ＢＥＨ Ｃ１８、２.０ｘ５０ｍｍ、１.７μｍ粒子；移動相Ａ：水＋０.０５％ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）；移動相Ｂ：アセトニトリル＋０.０５％ＴＦＡ；３分間の測定時間で、１.５分間で２−９８％とする；温度：４０℃；流れ：０.８ｍＬ／分；２２０または２５４ｎｍに設定されたＵＶ検出器
Ｂ カラム：フェノメネックス・ルナ（Phenomenex Luna）２.０ｘ３０ｍｍ、３μｍ粒子；移動相Ａ：１０％アセトニトリル／９０％水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０％アセトニトリル／１０％水＋０.１％ＴＦＡ；４分間の測定時間で、２分間で０−１００％とする；温度：４０℃；流れ：１.０ｍＬ／分；２２０または２５４ｎｍに設定されたＵＶ検出器

【0174】

実施例１−中間化合物６
この実施例および図１は、本発明の二量体の調製に用いられる、中間化合物６の合成に関する。

【0175】

４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイルクロリド１を以下のように対応するメチルエステルより調製した：４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロ安息香酸メチル（Harve Chem、１５ｇ、４７.３ミリモル）のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、３５０ｍＬ）中溶液に、ＮａＯＨ水溶液（５６.７ｍＬ、１４２ミリモル、２.５Ｍ）を添加した。反応物を５０℃で５時間攪拌した。該反応物を室温（ＲＴ）に冷却し、次に真空下で濃縮し、ＴＨＦを除去した。残りの水層を水性ＨＣｌ（６Ｎ）を用いてｐＨ２の酸性にした。得られた黄色の沈殿物を濾過し、水で洗浄し、真空下で乾燥させて４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロ安息香酸（１４.３２ｇ、収率１００％）を得た。ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）＝３０４.０８；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ_４）□７.６０（ｓ，１Ｈ）、７.５３−７.４５（ｍ，２Ｈ）、７.４５−７.３１（ｍ，３Ｈ）、７.２９（ｓ，１Ｈ）、５.２３（ｓ，２Ｈ）、３.９８（ｓ，３Ｈ）

【0176】

上記のニトロ安息香酸（３.５ｇ、１１.５４ミリモル）のＴＨＦ（１５０ｍＬ）中溶液に、塩化オキサリル（１.２１２ｍＬ、１３.８５ミリモル）を、つづいてＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、５０μＬ）を滴下して加えた。その得られた溶液を室温で２時間攪拌し、ついでそれを真空下で濃縮し、酸クロリド１を黄色の固体として得た。

【0177】

酸クロリド１をＴＨＦ（３５ｍＬ）に溶かし、（Ｓ）−ベンジル １,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキシラート・ｐ−トルエンスルホン酸塩２（Accela、５.５８ｇ、１２.７０ミリモル）およびトリエチルアミン（４.８３ｍＬ、３４.６ミリモル）のＴＨＦ（８０ｍＬ）中溶液に０℃で滴下して加えた。反応混合物を室温で４時間攪拌し、ついで水でクエンチさせ、濃縮してＴＨＦを除去した。得られた混合物をＥｔＯＡｃで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液で、次にブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空下で濃縮した。その粗生成物の混合物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（８０ｇ カラム、ＥｔＯＡｃ／ジクロロメタン（ＤＣＭ）の１５分間における０％から１００％までの勾配）を用いて精製し、エステル３（６.２５ｇ、収率９８％）を得た。ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）＝５５３；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）□７.９５−７.７２（ｍ，１Ｈ）、７.５７−７.３５（ｍ，５Ｈ）、７.３４−７.０（ｍ，８Ｈ）、７.１４−６.９８（ｍ，１Ｈ）、６.９４−６.６９（ｍ，１Ｈ）、５.３９−５.１９（ｍ，２Ｈ）、５.１９−５.０８（ｍ，１Ｈ）、４.９９（ｑ，Ｊ＝１２.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.７５（ｄ，Ｊ＝１７.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.６５−４.４０（ｍ，２Ｈ）、４.２８（ｄ，Ｊ＝１５.６Ｈｚ，１Ｈ）、３.８６（ｂｒｓ．，３Ｈ）、３.７１（ｓ，１Ｈ）、３.５０−３.１８（ｍ，１Ｈ）

【0178】

エステル３（６.２５ｇ、１１.３１ミリモル）、亜鉛（４.４４ｇ、６７.９ミリモル）およびＮＨ_４Ｃｌ（７.２６ｇ、１３６ミリモル）のＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中懸濁液を５０℃で１６時間加熱した。反応物を室温に冷却し、ＭｅＯＨで希釈した。得られた混合物をセライト（登録商標）のパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ、ＤＣＭおよびＭｅＯＨで連続して洗浄した。濾液を合わせ、真空下で濃縮した。粗生成物の混合物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（１２０ｇ カラム、ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭの１５分間における０％から１００％までの勾配）を用いて精製し、ジオン４（４.５ｇ、収率９６％）を得た。ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）＝４１５；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）□７.４９−７.４０（ｍ，４Ｈ）、７.３２（ｂｒｓ．，６Ｈ）、６.４５（ｓ，１Ｈ）、５.１９（ｓ，２Ｈ）、５.１３（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.４７（ｄ，Ｊ＝１５.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.２１（ｔ，Ｊ＝６.７Ｈｚ，１Ｈ）、３.９３（ｓ，３Ｈ）、３.５２（ｄｄ，Ｊ＝１５.４、７.０Ｈｚ，１Ｈ）、３.０２（ｄｄ，Ｊ＝１５.４、６.４Ｈｚ，１Ｈ）

【0179】

ジオン４（４.５ｇ、１０.８６ミリモル）のＤＭＦ（５４.３ｍＬ）中溶液を０℃に冷却し、ついでＮａＨ（鉱油中６０％分散液、０.５４ｇ、１３.５７ミリモル）をバッチ式にて添加した。得られた混合物を３０分間攪拌し、ついで（２−（クロロメトキシ）エチル）トリメチルシラン（ＳＥＭ−Ｃｌ、２.３１ｍＬ、１３.０３ミリモル）を添加した。反応物を室温に加温し、１時間攪拌し、ついで水でクエンチさせた。得られた混合物をＥｔＯＡｃで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物の混合物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（８０ｇ カラム、ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭの１５分間における０％から５０％までの勾配）を用いて精製し、ＳＥＭ−ジオン５（４.６０ｇ、収率７８％）を得た。ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）＝５４５；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）□７.５９−７.４１（ｍ，２Ｈ）、７.４０−７.２１（ｍ，９Ｈ）、５.４３（ｄ，Ｊ＝９.９Ｈｚ，１Ｈ）、５.２１（ｓ，２Ｈ）、５.１４（ｄ，Ｊ＝１５.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.５０（ｄ，Ｊ＝９.７Ｈｚ，１Ｈ）、４.４１（ｄ，Ｊ＝１５.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.３３−４.１６（ｍ，１Ｈ）、４.１３（ｄ，Ｊ＝７.３Ｈｚ，１Ｈ）、３.９２（ｓ，３Ｈ）、３.８２−３.４６（ｍ，３Ｈ）、３.０６−２.８４（ｍ，１Ｈ）、１.２６（ｔ，Ｊ＝７.２Ｈｚ，１Ｈ）、０.９７（ｄｄｄ，Ｊ＝９.９、６.８、２.６Ｈｚ，２Ｈ）、０.１０−０.０１（ｍ，９Ｈ）

【0180】

ＳＥＭ−ジオン５（４.６８ｇ、８.５９ミリモル）およびＰｄ／Ｃ（１０％、０.４５７ｇ）のＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中懸濁液をＨ_２バルーン下にて室温で３時間攪拌した。反応物をセライト（登録商標）パッドを通して濾過し、ＥｔＯＨで洗浄し、真空下で濃縮した。粗生成物の混合物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（１２０ｇ カラム、ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭの１５分間における０％から１００％までの勾配）を用いて精製し、化合物６（３.２３ｇ、収率８３％）を得た。ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）＝４５５；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）□７.４０−７.２１（ｍ，５Ｈ）、５.９７（ｓ，１Ｈ）、５.４６（ｄ，Ｊ＝９.７Ｈｚ，１Ｈ）、５.１８（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.７２（ｄ，Ｊ＝９.７Ｈｚ，１Ｈ）、４.５８−４.２４（ｍ，２Ｈ）、３.９５（ｓ，３Ｈ）、３.８３−３.４４（ｍ，３Ｈ）、３.１４−２.８８（ｍ，１Ｈ）、０.９９（ｔ，Ｊ＝８.０Ｈｚ，２Ｈ）、０.１４（ｓ，９Ｈ）

【0181】

実施例２−中間化合物１３
この実施例および図２は、本発明の二量体の調製に有用なさらなる中間化合物の合成に関する。

【0182】

酸クロリド１をＴＨＦ（３０ｍＬ）に溶かし、カルボキシラート７（Borzilleriら、ＷＯ２０１４／０４７０２４Ａ１（２０１４）、１.６ｇ、６.３９ミリモル）およびＮＥｔ_３（２.６７ｍＬ、１９.２ミリモル）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に０℃にて滴下して加えた。反応溶液を室温までのゆっくりとした加温に供し、３０分間攪拌した。反応物を水でクエンチさせ、濃縮してＴＨＦを除去した。得られた混合物をＥｔＯＡｃで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液で、ついでブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物の混合物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（８０ｇ カラム、ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの１５分間における０％から１００％までの勾配）を用いて精製し、エチルエステル８（２.６６ｇ、収率７８％）を得た。ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）＝５３６.４

【0183】

エチルエステル８（１.７５ｇ、３.５５ミリモル）、亜鉛（１.３９４ｇ、２１.３２ミリモル）およびＮＨ_４Ｃｌ（２.２８１ｇ、４２.６ミリモル）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中懸濁液を５０℃で一夜加熱した。反応混合物をセライト（登録商標）のパッドを通して濾過し、多量のＤＣＭ中２０％ＭｅＯＨで洗浄した。濾液を濃縮し、アミノ−ジオン９を白色の固体（１.２５ｇ、２.９０ミリモル、収率８２％）として得た。ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）＝４３０.３；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）□１０.２６（ｂｒｓ．，１Ｈ）、７.５３−７.３１（ｍ，６Ｈ）、７.２４（ｓ，１Ｈ）、６.９２（ｄ，Ｊ＝７.９Ｈｚ，１Ｈ）、６.７８（ｓ，１Ｈ）、６.５０−６.４１（ｍ，２Ｈ）、５.０７（ｄ，Ｊ＝４.６Ｈｚ，２Ｈ）、５.００−４.８８（ｍ，２Ｈ）、４.８４（ｄ，Ｊ＝１５.０Ｈｚ，１Ｈ）、４.０９（ｄ，Ｊ＝１５.０Ｈｚ，１Ｈ）、４.０１（ｔ，Ｊ＝６.９Ｈｚ，１Ｈ）、３.７５（ｓ，３Ｈ）、３.１２（ｄｄ，Ｊ＝１５.３、７.６Ｈｚ，１Ｈ）、２.７８（ｄｄ，Ｊ＝１５.２、６.２Ｈｚ，１Ｈ）

【0184】

アミノ−ジオン９（１.６ｇ、３.７３ミリモル）および塩化トリチル（１.２４６ｇ、４.４７ミリモル）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に、ＮＥｔ_３（０.７７９ｍＬ、５.５９ミリモル）を添加した。反応混合物を室温で３時間攪拌し、濃縮した。粗生成物の混合物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（８０ｇ カラム、０−５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を用いて精製し、トリチル−ジオン１０を白色の固体（２.２ｇ、３.２７ミリモル、収率８８％）として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）□８.０１（ｓ，１Ｈ）、７.５０−７.１２（ｍ，２２Ｈ）、６.７７（ｄ，Ｊ＝８.４Ｈｚ，１Ｈ）、６.４７−６.３４（ｍ，２Ｈ）、６.１６（ｄｄ，Ｊ＝８.１、２.４Ｈｚ，１Ｈ）、５.０２（ｂｒｓ．，１Ｈ）、４.９１（ｄ，Ｊ＝１５.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.１８−４.０９（ｍ，２Ｈ）、４.０５（ｔ，Ｊ＝６.９Ｈｚ，１Ｈ）、３.９２（ｓ，３Ｈ）、３.２８（ｄｄ，Ｊ＝１５.４、７.７Ｈｚ，１Ｈ）、２.７５（ｄｄ，Ｊ＝１５.４、６.４Ｈｚ，１Ｈ）

【0185】

トリチル−ジオン１０（２.２ｇ、３.２７ミリモル）の０℃でのＤＭＦ（１５ｍＬ）中溶液に、ＮａＨ（鉱油中６０％分散液、０.２３６ｇ、３.９３ミリモル）を添加した。該混合物を３０分間攪拌し、ついでＳＥＭ−Ｃｌ（０.６９７ｍＬ、３.９３ミリモル）を添加した。反応混合物を０℃で２時間攪拌し、ついでそれをブラインでクエンチさせた。反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物の混合物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇ カラム、０−５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を用いて精製し、ＳＥＭ−ジオン１１（２.１ｇ、２.６２ミリモル、収率８０％）を得た。ＬＣＭＳ （Ｍ−トリチル）＝５６０.４；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）□７.４８−７.４２（ｍ，２Ｈ）、７.４１−７.３２（ｍ，９Ｈ）、７.３１−７.１８（ｍ，１１Ｈ）、６.７７（ｄ，Ｊ＝８.１Ｈｚ，１Ｈ）、６.３８（ｄ，Ｊ＝２.２Ｈｚ，１Ｈ）、６.１９（ｄｄ，Ｊ＝８.３、２.３Ｈｚ，１Ｈ）、５.４５（ｄ，Ｊ＝９.７Ｈｚ，１Ｈ）、５.２１（ｓ，２Ｈ）、５.０８−４.９２（ｍ，２Ｈ）、４.４９（ｄ，Ｊ＝９.７Ｈｚ，１Ｈ）、４.１３−４.０８（ｍ，１Ｈ）、４.０２（ｄ，Ｊ＝１５.２Ｈｚ，１Ｈ）、３.９３（ｓ，３Ｈ）、３.７１（ｔｄ，Ｊ＝９.６、７.０Ｈｚ，１Ｈ）、３.６１（ｔｄ，Ｊ＝９.６、７.２Ｈｚ，１Ｈ）、３.３６（ｄｄ，Ｊ＝１５.５、８.３Ｈｚ，１Ｈ）、２.７２（ｄｄ，Ｊ＝１５.５、６.５Ｈｚ，１Ｈ）、１.０５−０.９２（ｍ，２Ｈ）、０.０６（ｓ，９Ｈ）

【0186】

ＳＥＭ−ジオン１１（９５０ｍｇ、１.１８ミリモル）およびＰｄ／Ｃ（１０％、２００ｍｇ）のＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）中懸濁液をＨ_２バルーン下にて２日間攪拌した。反応混合物をセライト（登録商標）のパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃで、ついでＭｅＯＨで洗浄した。濾液を合わせ、濃縮してＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇ カラム、０−１００％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を用いて精製し、化合物１２（５１０ｍｇ、１.０８ミリモル、収率９０％）を得た。ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）＝４７０.２；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）□７.３３（ｓ，１Ｈ）、７.２７（ｓ，１Ｈ）、７.０９（ｄ，Ｊ＝８.６Ｈｚ，１Ｈ）、６.６７−６.５４（ｍ，２Ｈ）、６.０２（ｓ，１Ｈ）、５.４７（ｄ，Ｊ＝９.７Ｈｚ，１Ｈ）、５.１１（ｄ，Ｊ＝１５.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.７１（ｄ，Ｊ＝９.７Ｈｚ，１Ｈ）、４.２９（ｄ，Ｊ＝１５.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.２２（ｄｄ，Ｊ＝７.７、６.５Ｈｚ，１Ｈ）、３.９４（ｓ，３Ｈ）、３.７９−３.６０（ｍ，４Ｈ）、３.４７（ｄｄ，Ｊ＝１５.４、７.７Ｈｚ，１Ｈ）、２.９０（ｄｄ，Ｊ＝１５.５、６.４Ｈｚ，１Ｈ）、１.０９−０.９４（ｍ，２Ｈ）、０.０５（ｓ，９Ｈ）

【0187】

化合物１２（５００ｍｇ、１.０６５ミリモル）の０℃でのＴＨＦ（３ｍＬ）中溶液に、ＮＥｔ_３（０.７４２ｍＬ、５.３２ミリモル）を添加した。クロロギ酸アリル１２ａ（５１３ｍｇ、４.２６ミリモル）を滴下して加えた。得られた溶液を０℃で２時間攪拌し、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）およびＬｉＯＨ水溶液（２ｍＬ、２Ｎ）で希釈した。得られた混合物を室温で１６時間攪拌した。反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインで洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（２４ｇ カラム、０−１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）に付して精製し、化合物１３を白色の固体（４４０ｍｇ、０.７９５ミリモル、収率７４.６％）として得た。ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）＝５５４.２；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）□７.３８−７.３０（ｍ，３Ｈ）、７.２７−７.２１（ｍ，２Ｈ）、６.９６（ｓ，１Ｈ）、６.２８（ｓ，１Ｈ）、６.０２−５.８９（ｍ，１Ｈ）、５.４４（ｄ，Ｊ＝９.８Ｈｚ，１Ｈ）、５.３５（ｄｑ，Ｊ＝１７.２、１.５Ｈｚ，１Ｈ）、５.２６（ｄｑ，Ｊ＝１０.４、１.３Ｈｚ，１Ｈ）、５.１０（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.７０（ｄ，Ｊ＝９.８Ｈｚ，１Ｈ）、４.６６（ｄ，Ｊ＝５.１Ｈｚ，２Ｈ）、４.４０（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.３１−４.２３（ｍ，１Ｈ）、３.９１（ｓ，３Ｈ）、３.７９−３.５８（ｍ，２Ｈ）、３.５１（ｄｄ，Ｊ＝１５.６、７.３Ｈｚ，１Ｈ）、２.９６（ｄｄ，Ｊ＝１５.５、６.４Ｈｚ，１Ｈ）、１.０７−０.９５（ｍ，２Ｈ）、０.０３（ｓ，９Ｈ）

【0188】

実施例３− さらなる中間体
この実施例および図３および４は、本発明の二量体の合成において有用なさらなる中間体の調製に関する。

【0189】

フラスコに、５−メトキシ−２−ニトロ−４−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）安息香酸１４（ＣＡＳ Ｒｅｇ Ｎｏ．１４３０７３８−０３−６、９.０ｇ、２４.３６ミリモル）およびＮ,Ｎ,Ｎ’,Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウム ヘキサフルオロホスファート（ＨＡＴＵ、１０.１９ｇ、２６.８ミリモル）／ＤＣＭ（１００ｍＬ）を０℃で充填した。反応混合物を１０分間攪拌し、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡまたはＤＩＰＥＡ、４.６８ｍＬ、２６.８ミリモル）およびイソキノリン１５（ＣＡＳ Ｒｅｇ Ｎｏ．２１５９２８−８１−７、７.４３ｇ、２６.８ミリモル）で処理した。反応物を０℃で３時間維持し、次に室温で２４時間攪拌した。反応混合物を飽和ＮＨ_４ＣｌおよびＤＣＭに注いだ。有機相を集め、濃縮して残留物とした。その残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ（Biotage））に付し、ヘキサン中１０％−３０％ＥｔＯＡｃで溶出してさらに精製した。生成物を集め、濃縮してアミド６６を明黄褐色の油（１０.１５ｇ、収率６６％）として得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝６２９.６５

【0190】

アミド１６（１０.１ｇ、１６.０６ミリモル）のＭｅＯＨ（２００ｍＬ）中溶液を０℃に冷却し、ＮＨ_４Ｃｌ（４.２９ｇ、８０ミリモル）および亜鉛粉（５.２５ｇ、８０ミリモル）を加えた。得られた緑色懸濁液を０℃で４５分間攪拌し、次に室温までの加温に一夜供した。反応混合物をセライト（登録商標）パッドを通して（ＭｅＯＨで洗浄しながら）濾過し、濾液を濃縮して残留物とした。その残留物をＤＣＭに溶かし、シリカゲルパッドに負荷した。これを５０％ＥｔＯＡｃおよびヘキサンで流し、アニリン１７（８.０２ｇ、収率８３％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝５９９.３５

【0191】

アニリン１７（２５００ｍｇ、４.１７ミリモル）をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶かし、ピリジン（０.８７８ｍＬ、１０.８５ミリモル）を添加した。その混合物を−７８℃に冷却し、クロロギ酸アリル１２ａ（０.５７９ｍＬ、５.４３ミリモル）を加えた。反応混合物をこの温度で１時間維持し、次に室温までの加温に供した。反応混合物を飽和ＮＨ_４ＣｌおよびＤＣＭに注いだ。該混合物をＤＣＭで抽出し、シリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、ヘキサン中１０％−５０％ＥｔＯＡｃで溶出してカルバマート１８（２.５ｇ、収率８８％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝６８３.４０

【0192】

カルバマート１８（１.３７２ｇ、２.００９ミリモル）をＭｅＯＨ（２０ｍＬ）に溶かした。ＭｅＯＨ中１０％濃度のＨＣｌ（２ｍＬ、６.５８ミリモル）を添加した。混合物を２０分間放置し、ＮａＨＣＯ_３（０.５９１ｇ、７.０３ミリモル）／水でクエンチさせた。該混合物を水で希釈し、ＤＣＭで４回抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。シリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、１０−５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、アルコール１９（９６３ｍｇ、収率８４％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝５６９.２５

【0193】

塩化オキサリル（２.０Ｍ、１.４５０ｍＬ、２.９０ミリモル）をＤＣＭ（３０ｍＬ）に溶かし、次に該混合物をドライアイス／アセトン浴にて−７８℃に冷却した。これにＤＭＳＯ（０.５１５ｍＬ、７.２５ミリモル、約２ｍＬのＤＣＭに溶かし、添加の間に凍結することを防止した）を加え、温度を−７８℃に維持した。２０分後、ＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かしたアルコール１９（１.６５ｇ、２.９０ミリモル）を該反応物に添加した。これによりさらに３０分間攪拌させ、つづいてＮＥｔ_３（２.０２２ｍＬ、１４.５０ミリモル）を添加した。１０分後、反応物を室温までの加温に供した。これを飽和ＮＨ_４Ｃｌでクエンチさせ、ＤＣＭ（２ｘ）で抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、残留物となるまで濃縮させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、ヘキサン中３０％−１００％ＥｔＯＡｃで溶出して精製した。生成物を集め、濃縮してアミナール２０を白色の固体（１.５１ｇ、収率９２％）として得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝５６７.３０；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ） δ ７.３９−７.２４（ｍ，５Ｈ）、７.２２（ｓ，１Ｈ）、６.６７（ｓ，１Ｈ）、５.７５（ｄｄ，Ｊ＝１１.２、５.６Ｈｚ，１Ｈ）、５.３１（ｄｄ，Ｊ＝９.５、４.０Ｈｚ，１Ｈ）、５.２２−５.０７（ｍ，２Ｈ）、４.８４（ｄ，Ｊ＝１５.８Ｈｚ，１Ｈ）、４.６４−４.４９（ｍ，２Ｈ）、４.４４（ｄ，Ｊ＝５.３Ｈｚ，１Ｈ）、３.８７（ｓ，３Ｈ）、３.７７−３.６１（ｍ，１Ｈ）、３.２８−３.０１（ｍ，３Ｈ）、１.３４−１.１８（ｍ，３Ｈ）、１.０９（ｄｄ，Ｊ＝７.４、２.６Ｈｚ，１８Ｈ）

【0194】

アミナール２０（７７６ｍｇ、１.３６９ミリモル）をＤＣＭ（１２ｍＬ）に溶かし、２,６−ルチジン（０.６３８ｍＬ、５.４８ミリモル）を添加した。該混合物を氷浴中で冷却し、tert−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホナート（ＴＢＳＯＴｆ、０.９４３ｍＬ、４.１１ミリモル）を添加した。該混合物を３０分間放置し、ＤＣＭで希釈し、ＮａＨＣＯ_３飽和溶液でクエンチさせ、ＤＣＭで２回抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、１０−３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、シリルエーテル２１（９０７.６ｍｇ、１.３３３ミリモル、収率９７％）を得た。^１Ｈ−ＮＭＲは精製された材料が約０.２５当量の２,６−ルチジン（約４重量％）で汚染されていることを示したが、何らさらに精製することなく用いた。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝６８１.２５

【0195】

シリルエーテル２１（９０７ｍｇ、１.３３２ミリモル）をＤＭＦ（５ｍｌ）および水（０.１ｍＬ）に溶かした。酢酸リチウム（８８ｍｇ、１.３３２ミリモル）を加え、該混合物を一夜放置した。ＤＭＦの大部分を窒素流の下で蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃで希釈し、０.１Ｍクエン酸で２回、次にブラインで１回洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、３０−７０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、^１Ｈ−ＮＭＲによればＥｔＯＡｃをいくらか（約１.３当量；ＥｔＯＡｃの割合を説明するのに収率を調整）含有するフェノール２２（７０７.４ｍｇ、１.１０７ミリモル、収率８３％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝５２５.１０

【0196】

次に図４を検討して、化合物１７（２.１ｇ、３.５１ミリモル）をＤＣＭ（３０ｍＬ）に溶かし、ピリジン（０.３ｍＬ、３.７１ミリモル）を添加した。混合物を０℃に冷却した。４−ニトロフェニルカルボノクロリダート２３（０.７０７ｇ、３.５１ミリモル）を添加し、その混合物をこの同じ温度で７分間放置した。化合物２４（ＣＡＳ Ｒｅｇ．Ｎｏ．１３４３４０７−９１−９、１.３２３ｇ、３.５１ミリモル）およびＤＩＥＡ（０.７５０ｍＬ、４.２９ミリモル）のＤＭＦ（３ｍＬ）中溶液を添加した。該混合物を室温にてロータリーエバポレーターに入れ、ＤＣＭを除去した。２０分後、ＤＭＦを窒素流の下で蒸発させ、次に残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、ヘキサン中１０−１００％ＥｔＯＡｃで溶出して化合物２５（１.５７９ｇ、１.５７５ミリモル、収率４４.９％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝１００２.５０

【0197】

化合物２５（１.５７９ｇ、１.５７５ミリモル）のＭｅＯＨ（１４.４ｍＬ）中溶液をＭｅＯＨ中１０％濃度のＨＣｌ（１.６ｍＬ、５.２７ミリモル）で処理した。混合物を３０分間放置し、飽和ＮａＨＣＯ_３でクエンチし、クロロホルムで抽出した（３ｘ）。有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて残渣を得た。その残渣を、精製のために、同じ反応の（０.８１６ｇの化合物２５で出発する）もう一つ別のバッチと合わせた。粗残渣を合わせ、シリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、２０−１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、カルバマート２６（１.７４１２ｇ、１.９６１ミリモル、収率８２％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝８８８.３０

【0198】

塩化オキサリル（２.０Ｍ、１.００ｍＬ、２.０００ミリモル）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液を−７８℃に冷却した。ＤＭＳＯ（０.３４８ｍＬ、４.９０ミリモル）のＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液を滴下して加え、その混合物をこの同じ温度で１０分間放置した。カルバマート２６（１７４１.２ｍｇ、１.９６１ミリモル）のＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液を滴下して加え、該混合物を再び１５分間放置した。ＮＥｔ_３（１.３６６ｍＬ、９.８０ミリモル）を滴下して加え；該混合物をこの同じ温度で５分間放置し、次に冷却浴を取り外し、混合物を室温にまで加温させた。該混合物をＮＨ_４Ｃｌ溶液でクエンチさせ、ＤＣＭで２回抽出した。有機相を合わせ、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過して蒸発させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、５０−８０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物２７（１３７６.７ｍｇ、１.５５４ミリモル、収率７９％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝８８６.３０

【0199】

化合物２７（１０４５ｍｇ、１.１７９ミリモル）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かし、２,６−ルチジン（０.５４９ｍＬ、４.７２ミリモル）を加えた。混合物を氷浴で冷却し、tert-ブチルジメチルシリル トリフルオロメタンスルホナート（０.８１３ｍＬ、３.５４ミリモル）を添加した。１時間後、該混合物をＤＣＭで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３およびブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過して蒸発させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、２０−１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製した。いくらか混合したフラクションを得、それをシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（定組成）で溶出して再び精製した。純粋なフラクションを合わせ、化合物２８（６７６.９ｍｇ、０.６７７ミリモル、収率５７.４％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝１０００.３０

【0200】

化合物２８（６７６ｍｇ、０.６７６ミリモル）のＤＭＦ（５ｍＬ）および水（０.１ｍＬ）中溶液をＬｉＯＡｃ（４４.６ｍｇ、０.６７６ミリモル）で処理した。該混合物を一夜放置し、溶媒を窒素流の下で蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃと０.１Ｍクエン酸の間に分配した。相を分離し、有機相を０.１Ｍクエン酸で２回、ブラインで１回洗浄し、次にＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過して蒸発させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、５０−１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物２９（５４３.６ｍｇ、０.６４４ミリモル、収率９５％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝８４４.３５

【0201】

実施例４− ＰＡＢＣ基のあるリンカー
この実施例および図５はＰＡＢＣ自己犠牲基を有するリンカーに関する。

【0202】

化合物３０（Firestoneら、ＵＳ６,１２４,３４５Ｂ１（2001）、実施例５７；０.７５ｇ、１.２４６ミリモル）のＤＭＦ（２ｍＬ）およびＴＨＦ（８ｍＬ）中溶液に、ジエチルアミン（２.８１ｍＬ、２６.９ミリモル）を添加した。反応物をを室温で１.５時間攪拌し、濃縮した。粗生成物をＤＣＭでトリチュレートし、濾過し、真空下で乾燥させ、化合物３１を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）＝３８０.２；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）□１０.０６（ｓ，１Ｈ）、８.１５（ｄ，Ｊ＝７.３Ｈｚ，１Ｈ）、７.５６（ｄ，Ｊ＝８.５Ｈｚ，２Ｈ）、７.２６（ｄ，Ｊ＝８.３Ｈｚ，２Ｈ）、６.００（ｔ，Ｊ＝５.４Ｈｚ，１Ｈ）、５.４３（ｓ，２Ｈ）、５.１３（ｔ，Ｊ＝５.３Ｈｚ，１Ｈ）、４.５６−４.３３（ｍ，３Ｈ）、３.０７−２.９３（ｍ，３Ｈ）、２.００−１.５５（ｍ，５Ｈ）、１.４９−１.３２（ｍ，２Ｈ）、０.９０（ｄ，Ｊ＝６.８Ｈｚ，３Ｈ）、０.８０（ｄ，Ｊ＝６.８Ｈｚ，３Ｈ）

【0203】

化合物３１（７９ｍｇ、０.２０９ミリモル）のＤＭＳＯ（２ｍＬ）中溶液に、ＭＡＬ−ｄＰＥＧ（登録商標）８−ＮＨＳエステル３２（QuantaBio、１２０ｍｇ、０.１７４ミリモル）のＤＭＳＯ（１ｍＬ）中溶液を、つづいて２,６−ルチジン（３７.３ｍｇ、０.３４８ミリモル）を添加した。反応物を室温で３時間攪拌した。ビス（４−ニトロフェニル）カルバナート（６３.５ｍｇ、０.２０９ミリモル）のＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液を、つづいて２,６−ルチジン（３７.３ｍｇ、０.３４８ミリモル）を添加した。次に反応物を室温で１２時間攪拌した。次にＤＩＰＥＡ（０.０６１ｍＬ、０.３４８ミリモル）を添加し、反応物を室温で３時間攪拌した。粗生成物の混合物をＤＭＦで希釈し、濾過し、逆相ＨＰＬＣ（カラム：フェノメネックス・ルナ Ｃ１８ ２０ｘ１００ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：１５分間にわたって０−７０％Ｂとする；流速：２０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍでのＵＶ）に付して精製し、化合物３３（４０ｍｇ、０.０３６ミリモル、収率２０.５４％）を得た。ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）＝１１１９.５

【0204】

実施例５− 二量体ＩＩａ−０１およびＩＩａ−０５
この実施例および図６は二量体ＩＩａ−０１の合成に関する。

【0205】

フェノール２２（６０ｍｇ、０.１１４ミリモル）、２,６−ビス（ブロモメチル）ピリジン３４（１５ｍｇ、０.０５７ミリモル、Sigma Aldrichより入手可能）およびＣｓ_２ＣＯ_３（３７ｍｇ、０.１１４ミリモル）のアセトン（０.４ｍＬ）中懸濁液を１時間４０℃への加温に供した。その混合物を０.１Ｍクエン酸でクエンチし、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機相を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過して蒸発させた。該混合物をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ヘキサン中３０−８０％ＥｔＯＡｃの勾配で溶出し、二量体３５（３６.２ｍｇ、収率５５％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝１１５３.４０

【0206】

二量体３５（３６ｍｇ、０.０３１ミリモル）をピロリジンのＤＣＭ中溶液（０.０４２Ｍ、１.９ｍＬ、０.０７８ミリモル）に溶かし、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４、２.２ｍｇ、１.９マイクロモル）を添加した。その混合物を３０分間攪拌し、その時点でそれをＤＣＭと飽和ＮＨ_４Ｃｌの間に分配した。相を分離し、水性フラクションをＤＣＭで２回以上抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、残留物となるまで蒸発させ、次にそれをプレパラティブＨＰＬＣ（サンファイアＣ１８プレパラティブＯＢＤカラム １９ｘ１００ｍｍ；溶媒Ａ＝９５％水、５％アセトニトリル＋０.１％ＴＦＡ；溶媒Ｂ＝５％水、９５％アセトニトリル＋０.１％ＴＦＡ；１０分間にわたって０−１００％勾配；以下、「ＨＰＬＣ操作Ａ」という）に付して精製した。試料を２つの等量のインジェクションに分けた。生成物のピークを含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ ＳＰＥ ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジに通し、アセトニトリルで溶出して生成物の溶液を遊離塩基として得た。大半の有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、凍結乾燥により水を除去し、二量体ＩＩａ−０１（１３.４ｍｇ、収率５６％）を白色の粉末として得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝７２０.１０；ＨＲＭＳ：測定値：Ｍ＋Ｈ＝７２０.２８０８、計算値：７２０.２８１７

【0207】

架橋基として代わりに２,４−ビス（ブロモメチル）ピリジンを用い、二量体ＩＩａ−０５を同様にして調製した。

【0208】

フェノール２２（１７０ｍｇ、０.４１４ミリモル）、２,４−ビス（ブロモメチル）ピリジン（５０ｍｇ、０.１８９ミリモル）およびＣｓ_２ＣＯ_３（１７０ｍｇ、０.５２２ミリモル）のＤＭＦ（１.０ｍＬ）中懸濁液を２５℃で１時間攪拌した。その混合物を水２０ｍＬでクエンチし、濾過した。沈殿物をジエチルエーテルで洗浄し、風乾させた。その材料をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ＤＣＭ中５−５０％アセトンの勾配で溶出して精製し、二量体３５と類似するアロック（Alloc）−ＴＢＳ化合物（１３４ｍｇ、収率７０％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝１１５３.４０

【0209】

アロック−ＴＢＳ化合物（３６ｍｇ、０.０３１ミリモル）をピロリジンのＤＣＭ中溶液（０.０４２Ｍ、１.９ｍＬ、０.０７８ミリモル）に溶かし、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（２.２ｍｇ、１.９マイクロモル）を添加した。該混合物を３０分間攪拌しＤＣＭと飽和ＮＨ_４Ｃｌの間に分配した。相を分離し、水性フラクションをＤＣＭで２回以上抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、残留物となるまで蒸発させ、次にそれをＨＰＬＣ操作Ａに付して精製した。試料を２つの等量のインジェクションに分けた。生成物を含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ ＳＰＥ ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジに通し、アセトニトリルで溶出し、生成物の溶液を遊離塩基として得た。大半の有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、凍結乾燥により水を除去し、二量体ＩＩａ−０５（１６.０ｍｇ、収率６５％）を白色の粉末として得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝７２０.１０

【0210】

実施例６− 二量体−リンカーＩＩＩｂ−０１およびＩＩＩｂ−０２
この実施例および図７Ａと７Ｂは、合わさって、二量体−リンカーＩＩＩｂ０１およびＩＩＩｂ−０２の調製に関する。

【0211】

フェノール２２（４８０ｍｇ、０.８２３ミリモル）、２,６−ビス（ブロモメチル）ピリジン３４（６５４ｍｇ、２.４７ミリモル、Sigma Aldridgeより入手可能）およびＣｓ_２ＣＯ_３（５００ｍｇ、１.５４ミリモル）のＤＭＦ（３.０ｍＬ）中懸濁液を室温で１時間攪拌した。その混合物を０.１Ｍクエン酸でクエンチし、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機相を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。その混合物をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ヘキサン中３０−８０％ＥｔＯＡｃの勾配で溶出して精製し、化合物３６（４６５ｍｇ、収率８０％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝７０８.０５

【0212】

シリルエーテル２７（４３１ｍｇ、０.４８６ミリモル）をＤＭＦ（２.０ｍＬ）および水（０.０４ｍＬ）に溶かし、ＬｉＯＡｃ（３２ｍｇ、０.４８６ミリモル）で処理した。その混合物を４０℃への加温に２.５時間供し、室温でさらに１時間攪拌した。溶媒をＮ_２流下で３日間にわたって除去した。残渣を０.１Ｍクエン酸で処理し、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。その混合物をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ＤＣＭ中０−１０％ＭｅＯＨの勾配で溶出して精製し、フェノール３７（２９７ｍｇ、収率８４％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝７３０.４０

【0213】

フェノール３７（１７８ｍｇ、０.２４４ミリモル）、化合物３６（１９０ｍｇ、０.２６８ミリモル）およびＣｓ_２ＣＯ_３（７９ｍｇ、０.２４４ミリモル）をＤＭＦ（０.７ｍＬ）に懸濁させ、４０℃への加温に３.５時間供した。該混合物を水に加え、濾過して化合物３８（３２０ｍｇ、収率９７％）を白色の固体として集めた。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝１３５７.３０

【0214】

化合物３８（３２０ｍｇ、０.２３６ミリモル）をピロリジンのＤＣＭ中溶液（０.０４２Ｍ、１４ｍＬ、０.５８９ミリモル）に溶かし、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（１５ｍｇ、１３マイクロモル）を添加した。該混合物を２.５時間攪拌し、その時点でそれをＤＣＭと飽和ＮＨ_４Ｃｌの間に分配した。相を分離し、水性フラクションをＤＣＭで２回以上抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、残留物となるまで蒸発させ、次にそれをＨＰＬＣ操作Ａに付して精製した。試料を１０の等量のインジェクションに分けた。生成物のピークを含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ ＳＰＥ ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジを通し、アセトニトリルで溶出して生成物の溶液を遊離塩基として得た。大半の有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、凍結乾燥により水を除去し、アミン３９（１４５ｍｇ、収率５８％）を白色の粉末として得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｎａ＝１０７８.９０

【0215】

アミン３９（１４５ｍｇ、０.１３７ミリモル）をＤＩＰＥＡのＤＭＦ中溶液（０.０５Ｍ、３.３ｍＬ、０.１６５ミリモル）に溶かし、マレイミド４０（８５ｍｇ、０.２７４ミリモル、Sigma Aldridgeより入手可能）を添加した。その混合物を２０時間攪拌し、その時点でそれをＤＭＦで希釈し、ＨＰＬＣ操作Ａに付して精製した。試料を８つの等量のインジェクションに分けた。生成物を含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ ＳＰＥ ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジに通し、アセトニトリルで溶出し、生成物の溶液を遊離塩基として得た。大半の有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、凍結乾燥により水を除去し、二量体−リンカーＩＩＩｂ−０１（６８ｍｇ、収率３８％）を白色の粉末として得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝１２５１.１０

【0216】

二量体−リンカーＩＩＩｂ−０１（２０.０ｍｇ、０.０１６ミリモル）をＴＨＦ（１ｍＬ）およびＡｃＯＨ（０.１ｍＬ）に溶かし、ＮａＣＮＢＨ_３（２.０ｍｇ、０.０３２ミリモル）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）中溶液を添加した。混合物を１時間攪拌し、その時点でそれをアセトニトリルで希釈し、次にＨＰＬＣ操作Ａに付して精製した。試料を２つの等量のインジェクションに分けた。生成物のピークを含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ ＳＰＥ ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジに通し、アセトニトリルで溶出し、生成物の溶液を遊離塩基として得た。大半の有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、凍結乾燥により水を除去し、二量体−リンカーＩＩＩｂ−０２（１６ｍｇ、収率７６％）を白色の粉末として得た。ＬＣＭＳ （Ｍ＋２Ｈ）／２＝６２７.１０

【0217】

実施例７− 二量体ＩＩａ−０２
この実施例および図８は二量体ＩＩａ−０２の調製に関する。

【0218】

アミナール２０（５００ｍｇ、０.２４４ミリモル）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かし、ピロリジン（０.１８ｍＬ、２.２１ミリモル）およびＰｄ（ＰＰｈ_３）_４（５１ｍｇ、４４マイクロモル）を添加した。その混合物を４５分間攪拌し、ＤＣＭと飽和ＮＨ_４Ｃｌの間に分配した。相を分離し、水性フラクションをＤＣＭで２回以上抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、残留物となるまで蒸発させ、イミン４１（４１０ｍｇ、収率１００％）を得、それをさらに精製することなく用いた。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝４６５.２０

【0219】

イミン４１（４１０ｍｇ、０.８８２ミリモル）をＴＨＦ（８ｍＬ）および酢酸（０.８ｍＬ）に溶かし、ＮａＣＮＢＨ_３（１１１ｍｇ、１.７７ミリモル）を添加した。混合物を２時間攪拌し、ＮａＨＣＯ_３でクエンチし、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、残留物となるまで蒸発させ、アミン４２（３１５ｍｇ、収率７７％）を得、それをさらに精製することなく用いた。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝４６７.３０

【0220】

アミン４２（３１５ｍｇ、０.６７５ミリモル）をＤＣＭ（７ｍＬ）に溶かし、ピリジン（０.１５ｍＬ、１.８６ミリモル）を添加し、該混合物を−７８℃に冷却した。クロロギ酸アリル１２ａ（０.１０ｍＬ、１.３９ミリモル）を滴下して加え、該混合物をその同じ温度で３０分間攪拌し、その時点でそれを飽和ＮＨ_４Ｃｌでクエンチし、ＤＣＭで３回抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、残留物となるまで蒸発させて残渣を得、それをシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ヘキサン中２０−５０％ＥｔＯＡｃの勾配で溶出して精製し、アロック保護のアミン４３（３７２ｍｇ、収率１００％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝５５１.５０

【0221】

アミン４３（３７２ｍｇ、０.６７５ミリモル）をフェノール３７の調製に使用されたのと同様に、反応物を加温する代わりに室温で一夜保持することを除いて、処理した。この操作によりフェノール４４（２４９ｍｇ、収率９３％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝３９５.０５

【0222】

フェノール４４（３０ｍｇ、０.０７６ミリモル）、化合物３６（３０ｍｇ、０.０４２ミリモル）およびＣｓ_２ＣＯ_３（３０ｍｇ、０.０９２ミリモル）をＤＭＦ（０.２５ｍＬ）に懸濁させ、４０℃への加温に１時間供した。その混合物を０.１Ｍクエン酸で処理し、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。該混合物をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ヘキサン中３０−１００％ＥｔＯＡｃの勾配で溶出して精製し、化合物４５（３２ｍｇ、収率７４％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝１０２２.１０

【0223】

化合物４５（３２ｍｇ、０.０３１ミリモル）をピロリジンのＤＣＭ中溶液（０.０４２Ｍ、２.０ｍＬ、０.０８ミリモル）に溶かし、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（１.８ｍｇ、１.６マイクロモル）を添加した。該混合物を２.５時間攪拌し、その後でそれを蒸発させ、ＤＭＦで希釈し、次にＨＰＬＣ操作Ａに付して精製した。試料を３つの等量のインジェクションに分けた。生成物のピークを含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ ＳＰＥ ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジに通し、アセトニトリルで溶出して生成物の溶液を遊離塩基として得た。大半の有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、凍結乾燥により水を除去し、二量体ＩＩａ−０２（１２ｍｇ、収率５３％）を白色の粉末として得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝７２２.３０

【0224】

実施例８− 二量体ＩＩａ−０３
この実施例および図９は二量体ＩＩａ−０３の合成に関する。

【0225】

フラスコに化合物６（１.８３０ｇ、４.０３ミリモル）／ＤＭＦ（２０ｍＬ）を加えた。これに、２,６−ビス（ブロモメチル）ピリジン３４（３.２ｇ、１２.０８ミリモル）を、つづいてＫ_２ＣＯ_３（１.６６９ｇ、１２.０８ミリモル）を添加した。反応を室温で一夜攪拌しながら進行させ、次に水中に注ぐことによりクエンチした。反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、飽和ＮａＣｌで洗浄した。有機相を残留物となるまで濃縮し、コンビフラッシュ（COMBIFLASH）（登録商標）カラムに付し、ヘキサン中１０％−１００％ＥｔＯＡｃの勾配で溶出して精製し、化合物４６（２.３ｇ、収率８９％）を白色の固体として得た。

【0226】

フラスコ中、ＤＭＦ（５ｍＬ）に化合物４６（１.０ｇ、１.５６６ミリモル）および化合物１３（１.０８４ｇ、１.９５７ミリモル）を合わせた。これにＫ_２ＣＯ_３（０.６４９ｇ、４.７０ミリモル）を添加した。４時間後、反応混合物を水中に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を濃縮し、コンビフラッシュ（登録商標）カラムに付し、ヘキサン中０−１００％ＥｔＯＡｃ勾配で溶出し、化合物４７（８５６ｍｇ、収率４９.２％）を白色の固体として得た。

【0227】

フラスコに化合物４７（８５０ｍｇ、０.７６５ミリモル）／ＤＣＭ（１０ｍＬ）を加えた。これにＰｄ（ＰＰｈ_３）_４（８８ｍｇ、０.０７６ミリモル）およびピロリジン（０.１５８ｍＬ、１.９１２ミリモル）を添加した。反応混合物を室温で１時間攪拌した。反応混合物を水およびＤＣＭ中に注いだ。有機相を集め、残留物となるまで濃縮した。残渣をコンビフラッシュ（登録商標）カラムに付し、ＤＣＭ中０％−３０ＭｅＯＨで溶出して化合物４８（５００ｍｇ、収率６３.６％）を白色の固体として得た。

【0228】

化合物４８（２６ｍｇ、０.０２５ミリモル）のＴＨＦ（１ｍＬ）中溶液に、スーパーハイドライド（SUPER HYDRIDE）（登録商標）（０.１２７ｍＬ、０.１２７ミリモル）を−７６℃で添加した。反応混合物を１時間攪拌した。反応物を冷水（１ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ（３ｘ１０ｍＬ）で抽出した。有機層を濃縮し、ＤＣＭ／ＥｔＯＨ／水（１：２：１、４ｍＬ）およびシリカゲル（１ｇ）で３日間処理した。この混合物を焼結漏斗を通して濾過し、そのシリカゲルをＤＣＭ−ＭｅＯＨ（８：２、１００ｍＬ）で洗浄した。濾液を高真空下で濃縮し、１２ｇシリカゲルカラムに付し、０−１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ溶出液を用いて精製し、二量体ＩＩａ−０３（１６ｍｇ、０.０２１ミリモル、収率８２％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝７３５.２

【0229】

実施例９− 二量体−リンカーＩＩＩｃ−０１、ＩＩＩｃ−０３およびＩＩＩｃ−０４
この実施例および図１０は、二量体−リンカーＩＩＩｃ−０１、ＩＩＩｃ−０３およびＩＩＩｃ−０４の合成に関する。

【0230】

化合物４８（１.１５ｇ、１.１１９ミリモル）、酸４９（０.６６７ｇ；１.３４３ミリモル；Firestoneら、ＵＳ６,２１４,３４５Ｂ１（2001））およびＨＡＴＵ（０.５１１ｇ、１.３４３ミリモル）の０℃でのＤＭＦ（１１ｍＬ）中溶液に、２,６−ルチジン（０.２６１ｍＬ、２.２３９ミリモル）を添加した。反応混合物を室温で１時間攪拌した。次に反応物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、水で、次にブラインで洗浄した。水相をＥｔＯＡｃ（２ｘ１００ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮してＴＨＦ（２０ｍＬ）に溶かした。ピペリジン（２ｍＬ）を加え、反応混合物を室温で３０分間攪拌した。反応混合物を濃縮し、ＩＳＣＯコンビフラッシュ（登録商標）（４０ｇ カラム、０−４０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）に３２分間にわたって付して精製し、化合物５０（０.９９７ｇ、収率６９.４％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝１２８４.６；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）□１０.０１（ｓ，２Ｈ）、８.２７（ｍ，２Ｈ）、７.９６（ｔ，Ｊ＝８.０Ｈｚ，２Ｈ）、７.５５（ｍ，４Ｈ）、７.４２（ｄｄ，Ｊ＝８.０、１.６Ｈｚ，２Ｈ）、７.２０−７.３１（ｍ，１２Ｈ）、５.９８（ｔ，Ｊ＝５.６Ｈｚ，２Ｈ）、５.８９（ｂｒｓ，１Ｈ）、５.４３（ｂｒｓ，２Ｈ）、５.３５（ｂｒｓ，１Ｈ）、５.２５（ｍ，８Ｈ）、５.１０（ｄ，Ｊ＝１０.０Ｈｚ，１Ｈ）、５.０９（ｄ，Ｊ＝１０.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.９５（ｄ，Ｊ＝１５.６Ｈｚ，２Ｈ）、４.７５（ｂｒｓ，１Ｈ）、４.５０（ｂｒｓ，２Ｈ）、４.３２（ｍ，６Ｈ）、４.０９（ｑ，Ｊ＝５.２Ｈｚ，４Ｈ）、３.８３（ｓ，３Ｈ）、３.８２（ｓ，３Ｈ）、３.４０（ｑ，Ｊ＝７.６Ｈｚ，１Ｈ）、３.１７（ｄ，Ｊ＝５.２Ｈｚ，８Ｈ）、３.００（ｍ，１０Ｈ）、２.６８（ｔ，Ｊ＝１.６Ｈｚ，１Ｈ）、２.３３（ｔ，Ｊ＝１.６Ｈｚ，２Ｈ）、１.９７（ｍ，３Ｈ）、１.６３（ｍ，１０Ｈ）、１.４２（ｍ，６Ｈ）、０.９１（ｄ，Ｊ＝７.２Ｈｚ，３Ｈ）、０.８４（ｄ，Ｊ＝６.８Ｈｚ，３Ｈ）、０.７５（ｍ，４Ｈ）、０.０８（ｓ，１８Ｈ）

【0231】

化合物５０（３２２ｍｇ、０.２５１ミリモル）の−７６℃でのＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液に、スーパーハイドライド（登録商標）（１.２５４ｍＬ、１.２５４ミリモル）を加え、１時間攪拌した。反応物を冷水（１ｍＬ）でクエンチし、濃縮した。得られた残渣をＤＣＭ／ＥｔＯＨ／水（１：２：１＝８ｍＬ）およびシリカゲル（１ｇ）で２日間処理した。この混合物を焼結漏斗を通して濾過し、そのシリカゲルをＤＣＭ−ＭｅＯＨ（８：２、１００ｍＬ）で洗浄した。濾液を高真空下で濃縮し、２４ｇシリカゲルカラムに付し、０−５０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ溶出液を１５分間にわたって用いて精製し、化合物５１（２４８ｍｇ、収率９０％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝９９１.４

【0232】

化合物５１（８８ｍｇ、０.０８９ミリモル）および化合物４０（５４.７ｍｇ、０.１７８ミリモル）のＤＭＳＯ（６ｍＬ）中溶液に、ＤＩＰＥＡ（０.０３１ｍＬ、０.１７８ミリモル）を添加した。反応混合物を室温で４５分間攪拌した。反応混合物をＲ−ＨＰＬＣに付し、エクスブリッジ（XBridge）プレパラティブＯＢＤ Ｃ１８、５μｍカラム（３０ｘ１５０ｍｍ）および５−６０％アセトニトリル／水（０.０５％ギ酸）の溶出勾配を３０分間にわたって用いて精製した。１６.９分の際に集めたフラクションを塩基性樹脂（ＰＬ−ＨＣＯ３ ＭＰ−樹脂 １.８ミリモル／ｇ；Agilent Part ＃ ＰＬ３５４０−＃６０３）を通して濾過し、アセトニトリル（５ｍＬ）で洗浄し、凍結乾燥させて二量体−リンカーＩＩＩｃ−０１（３９.１ｍｇ、０.０３１ミリモル、収率３５.０％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝１１８４.３

【0233】

二量体−リンカーＩＩＩｃ−０３およびＩＩＩｃ−０４は、各々、化合物５１および二量体ＩＩａ−０３より、下記の適切なＦｍｏｃ−保護のＮ−ヒドロキシスクシンイミドを用い、つづいてピペリジンでＦｍｏｃ基を除去して、同様にして調製された。

【化147】

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【0234】

二量体−リンカーＩＩＩｃ−０３は、末端にアミノ基を有するリンカーを含み、そのためにトランスグルタミナーゼ介在性コンジュゲーションにおけるアミンドナー成分であり得る。ＭＳ（ｍ＋１）＝１４１４.５

【0235】

二量体−リンカーＩＩＩｃ−０４も末端にアミノ基を有するリンカーを含み、そのためにトランスグルタミナーゼ介在性コンジュゲーションにおけるアミンドナー成分であり得る。ペプチド基を欠くため、二量体−リンカーＩＩＩｃ−０４は非切断型であり、二量体の薬物を放出するには、それが結合する抗体の分解に依存することとなる。ＭＳ（ｍ＋１）＝９８２.５３

【0236】

実施例１０− 二量体ＩＩａ−０４
この実施例および図１１は二量体ＩＩａ−０４の合成に関する。

【0237】

２,６−ビス（ブロモメチル）ピリジン３４（４.３１ｇ、１６.２５ミリモル）、化合物１３（１.８ｇ、３.２５ミリモル）およびＤＭＦ（２０ｍＬ）をフラスコ中で合わせた。これにＫ_２ＣＯ_３（０.８９９ｇ、６.５０ミリモル）を添加した。反応混合物を室温で２時間攪拌し、水（２００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）中に注いだ。有機層を水（１００ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、残留物となるまで濃縮した。残渣をコンビフラッシュ（登録商標）８０ｇ カラムに付し、ヘキサン中０−１００％ＥｔＯＡｃ勾配で３０分間にわたって溶出し、化合物５２（１.４０９ｇ、１.９１０ミリモル、収率５８.８％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝７３７.１；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）□７.８０（ｍ，１Ｈ）、７.５４（ｍ，１Ｈ）、７.４５（ｄ，Ｊ＝７.２Ｈｚ，１Ｈ）、７.３７（ｓ，２Ｈ）、７.２８（ｍ，４Ｈ）、６.６２（ｓ，１Ｈ）、５.９８（ｍ，１Ｈ）、５.４２（ｄ，Ｊ＝１０.０Ｈｚ，１Ｈ）、５.３７（ｍ，１Ｈ）、５.２８（ｄ，Ｊ＝７.２Ｈｚ，１Ｈ）、５.１２（ｄ，Ｊ＝１５.６Ｈｚ，１Ｈ）、４.６９（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ）、４.６５（ｄ，Ｊ＝９.６Ｈｚ，１Ｈ）、４.６１（ｓ，１Ｈ）、４.４２（ｄ，Ｊ＝１５.６Ｈｚ，１Ｈ）、４.２７（ｔ，Ｊ＝６.８Ｈｚ，１Ｈ）、３.９５（ｓ，３Ｈ）、３.６５（ｍ，２Ｈ）、３.５１（ｄｄ，Ｊ＝１５.６、７.２Ｈｚ，１Ｈ）、２.９７（ｄｄ，Ｊ＝１５.６、６.４Ｈｚ，１Ｈ）、０.９７（ｍ，２Ｈ）、０.０４（ｓ，９Ｈ）

【0238】

化合物６（２ｇ、４.４０ミリモル）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に、スーパーハイドライド（登録商標）（２２.００ｍＬ、２２.００ミリモル）を−７６℃で添加した。反応混合物をその温度で１時間攪拌した。反応物を冷水（１００ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ（３ｘ１００ｍＬ）で抽出した。得られた残渣をＤＣＭ／ＥｔＯＨ／水（１：２：１＝４０ｍＬ）およびシリカゲル（１０ｇ）で３日間処理した。この混合物を焼結漏斗を通して濾過し、そのシリカゲルをＤＣＭ−ＭｅＯＨ（８：２、１００ｍＬ）で洗浄した。濾液を高真空下で濃縮し、４０ｇシリカゲルカラムに付し、ＭｅＯＨ／ＤＣＭを１５分間にわたって用いて精製した。１０分の際の１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭフラクションから化合物５３（１.３５ｇ、４.０３ミリモル、収率９２％）を黄色の固体として得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝３０９.０

【0239】

化合物５２（１.２６５ｇ、１.７１５ミリモル）および化合物５３（０.５８２ｇ、１.８８６ミリモル）のＤＭＳＯ（１０ｍＬ）中溶液に、Ｋ_２ＣＯ_３（０.４７４ｇ、３.４３ミリモル）を加えた。反応混合物を室温で１時間攪拌し、水およびＥｔＯＡｃ（１：１、３００ｍＬ）中に注いだ。有機層を濃縮し、４０ｇシリカゲルカラムに付し、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ溶出を１５分間にわたって用いて精製し、化合物５４（１.７８ｇ、１.５６８ミリモル、収率９１％）を黄色の固体として得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝９６５.３

【0240】

化合物５４（１.７８ｇ、１.８４４ミリモル）およびＰｄ（ＰＰｈ_３）_４（０.１０７ｇ、０.０９２ミリモル）のＤＣＭ（３０ｍＬ）中溶液に、ピロリジン（０.３０５ｍＬ、３.６９ミリモル）を添加した。反応混合物を室温で３０分間攪拌した。濃縮し、４０ｇシリカゲルカラムに付し、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ溶出を１５分間にわたって用いて精製し、化合物５５（１.５４ｇ、１.７４８ミリモル、収率９５％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝８８１.２

【0241】

化合物５５（１００ｍｇ、０.１１３ミリモル）のＴＨＦ（２ｍＬ）中溶液に、１滴の酢酸を、つづいてＮａＣＮＢＨ_３（１４.２７ｍｇ、０.２２７ミリモル）／ＭｅＯＨ（０.２ｍＬ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で２０分間攪拌し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ_３飽和溶液（１０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を濃縮し、ＩＳＣＯコンビフラッシュ（登録商標）２４ｇカラムに付し、ＭｅＯＨ／ＤＣＭを１５分間にわたって用いて精製し、化合物５６（３７ｍｇ、０.０４２ミリモル、収率３６.９％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝８８３.４；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）□７.７３（ｔ，Ｊ＝８.０Ｈｚ，１Ｈ）、７.４５（ｍ，３Ｈ）、７.３５（ｓ，１Ｈ）、７.２８（ｍ，４Ｈ）、７.２０（ｍ，１Ｈ）、７.０４（ｄ，Ｊ＝８.４Ｈｚ，１Ｈ）、６.６１（ｍ，２Ｈ）、６.１３（ｓ，１Ｈ）、５.４４（ｄ，Ｊ＝９.６Ｈｚ，１Ｈ）、５.２８（ｍ，４Ｈ）、５.０９（ｄ，Ｊ＝１５.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.８１（ｑ，Ｊ＝１５.６Ｈｚ，２Ｈ）、４.６３（ｄ，Ｊ＝１０.０Ｈｚ，１Ｈ）、４.２５（ｄ，Ｊ＝１５.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.１８（ｄｄ，Ｊ＝８.０、６.８Ｈｚ，１Ｈ）、４.１１（ｍ，１Ｈ）、３.９３（ｓ，３Ｈ）、３.９０（ｓ，３Ｈ）、３.７１（ｍ，３Ｈ）、３.４１（ｍ，２Ｈ）、３.２１（ｔ，Ｊ＝１０.４Ｈｚ，１Ｈ）、３.０９（ｄｄ，Ｊ＝１５.２、５.６Ｈｚ，１Ｈ）、２.８３（ｍ，２Ｈ）、０.９８（ｍ，２Ｈ）、０.０３（ｓ，９Ｈ）

【0242】

化合物５６（３７ｍｇ、０.０４２ミリモル）のＴＨＦ（２ｍＬ）中溶液に、スーパーハイドライド（登録商標）（０.２０９ｍＬ、０.２０９ミリモル）を−７６℃で添加した。反応混合物を１時間攪拌し、冷水（１ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ（３ｘ１０ｍＬ）で抽出した。有機層を濃縮し、ＤＣＭ／ＥｔＯＨ／水（１：２：１、４ｍＬ）およびシリカゲル（１ｇ）で３日間処理した。この混合物を焼結漏斗を通して濾過し、そのシリカゲルをＤＣＭ−ＭｅＯＨ（８：２、５０ｍＬ）で洗浄した。濾液を高真空下で濃縮し、１２ｇシリカゲルカラムに付し、０−１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ溶出を１５分間にわたって用いて精製し、二量体ＩＩａ−０４（２５.３ｍｇ、収率７８％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝７３７.２；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）□７.７０（ｔ，Ｊ＝８.０Ｈｚ，１Ｈ）、７.５５（ｓ，１Ｈ）、７.４３（ｍ，３Ｈ）、７.２８（ｍ，３Ｈ）、７.２３（ｍ，１Ｈ）、７.１２（ｄ，Ｊ＝８.０Ｈｚ，１Ｈ）、６.９２（ｓ，１Ｈ）、６.６２（ｄ，Ｊ＝７.２Ｈｚ，１Ｈ）、６.４５（ｓ，１Ｈ）、６.０５（ｓ，１Ｈ）、５.３２（ｍ，３Ｈ）、４.８０（ｍ，２Ｈ）、４.４０（ｄ，Ｊ＝１５.６Ｈｚ，１Ｈ）、４.０１（ｓ，３Ｈ）、３.９０（ｓ，３Ｈ）、３.５０（ｓ，１Ｈ）、３.１４（ｍ，２Ｈ）、２.９７（ｍ，３Ｈ）、２.７５（ｄｄ，Ｊ＝１５.２、５.６Ｈｚ，２Ｈ）

【0243】

実施例１１− 二量体 リンカーＩＩＩｃ−０２
この実施例および図１２Ａおよび１２Ｂは二量体−リンカーＩＩＩｃ０２の合成に関する。

【0244】

２,６−ルチジン（０.３２３ｍＬ、２.７７ミリモル）を化合物５５（１.２２ｇ、１.３８５ミリモル）、化合物４９（０.８２５ｇ、１.６６２ミリモル）およびＨＡＴＵ（０.６３２ｇ、１.６６２ミリモル）の０℃でのＤＭＦ（２０ｍＬ）中溶液に添加した。反応混合物を室温で１時間攪拌し、その時点でＬＣＭＳは完全に生成物に変換したことを示した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）を含有する分離漏斗に注いだ。ブライン（５０ｍＬ）を加え、２層に分離させた。有機層を濃縮し、ＩＳＣＯコンビフラッシュ（登録商標）１２０ｇカラムに付し、０−３０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭで２５分間にわたって溶出して精製し、化合物５６（１.１３ｇ、０.８３１ミリモル、収率６０.０％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝１３５９.４

【0245】

酢酸（０.０９５ｍＬ、１.６６２ミリモル）を化合物５６（１.１３ｇ、０.８３１ミリモル）のＴＨＦ（３０ｍＬ）中溶液に加え、つづいてＮａＣＮＢＨ_３（０.１０４ｇ、１.６６２ミリモル）／ＭｅＯＨ（３ｍＬ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で１時間攪拌し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ_３飽和溶液（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を濃縮し、ＩＳＣＯコンビフラッシュ（登録商標）８０ｇカラムに付し、０−２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ溶出液で２５分間にわたって精製し、化合物５７（１ｇ、０.７３４ミリモル、収率８８％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ｍ＋Ｎａ）＝１３８４.２

【0246】

ピペリジン（２ｍＬ、２０.２０ミリモル）を化合物５７（１ｇ、０.７３４ミリモル）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に添加した。反応混合物を室温で１時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、ＩＳＣＯコンビフラッシュ（登録商標）４０ｇカラムに付し、０−５０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ溶出液で２５分間にわたって精製し、化合物５８（０.７ｇ、０.６１４ミリモル、収率８４％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝１１３９.４

【0247】

化合物５８（０.５ｇ、０.４３９ミリモル）の−７６℃でのＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液に、スーパーハイドライド（登録商標）（４.３９ｍＬ、４.３９ミリモル）を添加した。反応混合物を４５分間攪拌した。反応を冷水（１ｍＬ）でクエンチし、それを濃縮した。得られた残渣をＤＣＭ／ＥｔＯＨ／水（１：２：１、８ｍＬ）およびシリカゲル（２ｇ）で２日間処理した。この混合物を焼結漏斗を通して濾過し、そのシリカゲルをＤＣＭ−ＭｅＯＨ（８：２、２００ｍＬ）で洗浄した。濾液を高真空下で濃縮し、ＩＳＣＯ８０ｇシリカゲル（Gold）カラムに付し、ＭｅＯＨ／ＤＣＭを４０分間にわたって用いて精製し、化合物５９（０.４ｇ、０.４０３ミリモル、収率９２％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝９９３.４

【0248】

化合物５９（２４ｍｇ、０.０２４ミリモル）および化合物８４（１４.９０ｍｇ、０.０４８ミリモル）のＤＭＳＯ（２ｍＬ）中溶液に、ＤＩＰＥＡ（８.４４μＬ、０.０４８ミリモル）を添加した。反応混合物を室温で１時間攪拌した。反応混合物をＲ−ＨＰＬＣに付し、エクスブリッジ・プレパラティブＯＢＤ Ｃ１８、５μｍカラム（３０ｘ２５０ ｍｍ）および５−６０％アセトニトリル／水（０.０５％ギ酸）に３０分間にわたって用いて精製した。２０.３分の際に集めたフラクションを塩基性樹脂（ＰＬ−ＨＣＯ３ ＭＰ樹脂 １.８ミリモル／ｇ；Agilent Part ＃ ＰＬ３５４０−＃６０３）を通して濾過し、アセトニトリル（５ｍＬ）で洗浄した。凍結乾燥に付して二量体−リンカーＩＩＩｃ−０２（７.６ｍｇ、６.２１マイクロモル、収率２５.７％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝１１８６.５

【0249】

実施例１２− 二量体−リンカーＩＩＩｂ−０３およびＩＩＩｂ−０３’
この実施例および図１３は二量体−リンカーＩＩＩｂ−０３の合成に関する。

【0250】

ピリジン−２,４−ジイルジメタノール（８０ｍｇ、０.５７２ミリモル）／ＴＨＦ（２ｍＬ）に、フェノール２２（１００ｍｇ、０.１９１ミリモル）、ポリマー結合のトリフェニルホスフィン（２００ｍｇ、０.６２９ミリモル） およびジイソプロピルアゾジカルボキシラート（ＤＩＡＤ、０.１２２ｍＬ、０.６２９ミリモル）を加えた。反応物を２５℃で１２時間攪拌し、その混合物を濾過した。溶媒を除去し、材料をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ＤＣＭ中２０−１００％アセトンの勾配で溶出し、化合物６１（７０ｍｇ、収率５６.９％）；ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝６４６.４５および６２（５０ｍｇ、収率４０.６％）；ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝６４６.４０を得た。

【0251】

化合物６１（６７ｍｇ、０.１０４ミリモル）およびＴＥＡ（０.０３６ｍＬ、０.２５９ミリモル）／ＤＣＭ（２ｍＬ）に、塩化メタンスルホニル（ＭｓＣｌ、０.０１９ｍＬ、０.２３９ミリモル）を０℃で添加した。反応物を０℃で１時間攪拌し、水でクエンチした。該混合物をＤＣＭで抽出し、冷ＨＣｌ水溶液（０.０５Ｎ）、ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮して化合物６３を橙色の油状物として得た。該材料をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ヘキサン中２０-１００％酢酸エチルの勾配で溶出して精製し、高純度の化合物６３（４０ｍｇ、収率３０％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝７２４.１０

【0252】

化合物６３（４０ｍｇ、０.０５５ミリモル）／ＤＭＦ（.１ｍＬ）にＣｓ_２ＣＯ_３（４０ｍｇ、０.１２３ミリモル）および化合物３７（４０.３ｍｇ、０.０５５ミリモル）を加えた。反応物を２５℃で４時間攪拌し、該材料をＨＰＬＣ操作Ａに付して精製した。試料を２つの等量のインジェクションに分けた。生成物のピークを含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ ＳＰＥ ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジに通し、アセトニトリルで溶出して生成物の溶液を遊離塩基として得た。大半の有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、凍結乾燥により水を除去し、化合物６４（１６.０ｍｇ、収率６５％）を白色の粉末として得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝１３５７.６５

【0253】

化合物６４（１５ｍｇ、０.０１１ミリモル）をピロリジンのＤＣＭ中溶液（０.０４２Ｍ、０.６５８ｍＬ、０.０２８ミリモル）に溶かし およびＰｄ（ＰＰｈ_３）_４（０.７６６ｍｇ、０.６６３マイクロモル）を添加した。該混合物を室温で２.５時間攪拌し、反応溶媒をＮ_２下で除去した。残りの材料を１.５ｍＬのＤＭＦで希釈し、ＨＰＬＣ操作Ａに付して精製した。試料を２つの等量のインジェクションに分けた。生成物のピークを含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ ＳＰＥ ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジに通し、アセトニトリルで溶出して生成物の溶液を遊離塩基として得た。大半の有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、凍結乾燥により水を除去し、アミン６５（１１.５ｍｇ、収率９８％）を白色の粉末として得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｎａ＝１０８０

【0254】

アミン６５（１１.５ｍｇ、１０.８８マイクロモル）をＤＩＰＥＡのＤＭＦ中溶液（０.２６１ｍＬ、０.０１３ミリモル）に加え、化合物４０（６.７１ｍｇ、０.０２２ミリモル）を加えた。該混合物を２０時間攪拌し、ＤＭＦで希釈し、上段で記載されるようにプレパラティブＨＰＬＣに付して精製した。試料を２つの等量のインジェクションに分けた。生成物のピークを含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ ＳＰＥ ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジと通し、アセトニトリルで溶出して生成物の溶液を遊離塩基として得た。大半の有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、凍結乾燥により水を除去し、二量体−リンカー ＩＩＩｂ−０３（３ｍｇ、２.２３１マイクロモル、収率２０.５１％）を白色の粉末として得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝１２５０.６０

【0255】

二量体−リンカーＩＩＩｂ−０３’は化合物６２より同様にして調製され得る。

【0256】

実施例１３− 二量体ＩＩａ−０６
この実施例および図１４は二量体ＩＩａ−０６の調製に関する。

【0257】

ピリジン−３,５−ジイルジメタノール６６（２６.５ｍｇ、０.１９１ミリモル）／ＴＨＦ（２ｍＬ）に、フェノール２２（１００ｍｇ、０.１９１ミリモル）、ポリマー結合のトリフェニルホスフィン（２００ｍｇ、０.６２９ミリモル）およびＤＩＡＤ（０.１２２ｍＬ、０.６２９ミリモル）を添加した。反応物を２５℃で１２時間攪拌し、該混合物を濾過した。溶媒を除去し、該材料をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ＤＣＭ中２０−１００％アセトンの勾配で溶出して精製し、二量体６７（５５ｍｇ、収率１５.０２％）；ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｎａ＝１１７４.６５および化合物６８（３８ｍｇ、収率３１％）；ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝６４６.３０を得た。

【0258】

二量体６７（１５ｍｇ、０.０１３ミリモル）をピロリジンのＤＣＭ中溶液（０.７７５ｍＬ、０.０３３ミリモル）に溶かし、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（１ｍｇ、０.８６５マイクロモル）を添加した。該混合物を３０分間攪拌し、ＤＣＭと飽和ＮＨ_４Ｃｌの間に分配した。相を分離し、水性フラクションをＤＣＭで２回以上抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、残留物となるまで蒸発させ、それをＨＰＬＣ操作Ａに付して精製した。試料を２つの等量のインジェクションに分けた。生成物のピークを含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ ＳＰＥ ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジに通し、アセトニトリルで溶出して生成物の溶液を遊離塩基として得た。大半の有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、凍結乾燥により水を除去し、二量体ＩＩａ−０６（２ｍｇ、収率２０.２８％）を白色の粉末として得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝７２１.３０

【0259】

実施例１４− 二量体−リンカーＩＩＩｂ−０４
この実施例および図１５は二量体−リンカーＩＩＩｂ−０４の合成に関する。

【0260】

フェノール２２（２００ｍｇ、０.３８１ミリモル）、３,５−ビス（クロロメチル）ピリジン・塩酸塩（２５０ｍｇ、１.１７６ミリモル）およびＣｓ_２ＣＯ_３（８００ｍｇ、２.４５５ミリモル）のＤＭＦ（１.０ｍＬ）中懸濁液を２５℃で１６時間攪拌した。溶媒を窒素下で除去した。残渣をセライト（CELITE）（登録商標）で乾燥ローディングに供し、シリカゲルクロマトグラフィーに付し、ＤＣＭ中２−１０％ＭｅＯＨの勾配で溶出して精製し、二量体６９（１２０ｍｇ、収率４７％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｎａ＝６８７.０５

【0261】

化合物３７（１５０ｍｇ、０.２０６ミリモル）／ＤＭＦ（１.０ｍＬ）に、Ｃｓ_２ＣＯ_３（１００ｍｇ、０.３０７ミリモル）および二量体６９（１５０ｍｇ、０.２０６ミリモル）を添加した。反応物を２５℃で１２時間攪拌し、該材料をＨＰＬＣ操作Ａに付して精製した。試料を２つの等量のインジェクションに分けた。生成物のピークを含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ ＳＰＥ ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジに通し、アセトニトリルで溶出して生成物の溶液を遊離塩基として得た。大半の有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、凍結乾燥により水を除去し、化合物７０（４２ｍｇ、収率１５.６５％）を白色の粉末として得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝１３５７.６５

【0262】

化合物７０（４０ｍｇ、０.０２９ミリモル）をピロリジンのＤＣＭ中溶液（０.０４２Ｍ、１.８ｍＬ、０.０７４ミリモル）に溶かし、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（２.０ｍｇ、１.７６８マイクロモル）を加えた。該混合物を室温で２.５時間攪拌し、該反応溶媒をＮ_２下で除去した。該材料を１.５ｍＬのＤＭＦで希釈し、ＨＰＬＣ操作Ａに付して精製した。試料を２つの等量のインジェクションに分けた。生成物のピークを含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ ＳＰＥ ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジに通し、アセトニトリルで溶出し、生成物の溶液を遊離塩基として得た。大半の有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、凍結乾燥により水を除去し、アミン７１（１５ｍｇ、収率４３％）を白色の粉末として得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｎａ＝１０８０

【0263】

アミン７１（１５ｍｇ、１０.８８マイクロモル）をＤＩＰＥＡのＤＭＦ中溶液（０.６１５ｍＬ、０.０３１ミリモル）に溶かし、化合物４０（２５ｍｇ、０.０２４ミリモル）を添加した。該混合物を２０時間攪拌し、ＤＭＦで希釈し、ＨＰＬＣ操作Ａに付して精製した。試料を２つの等量のインジェクションに分けた。 生成物のピークを含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ ＳＰＥ ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジに通し、アセトニトリルで溶出して生成物の溶液を遊離塩基として得た。大半の有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、凍結乾燥により水を除去し、二量体−リンカーＩＩＩｂ−０４（１０ｍｇ、収率３０％）を白色の粉末として得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝１２５０.６０

【0264】

実施例１５− 二量体ＩＩａ−０８
この実施例および図１６は二量体ＩＩａ−０８の調製に関する。

【0265】

ジメチル ４−（ヒドロキシメチル）ピリジン−２,６−ジカルボキシラート７２（２００ｍｇ、０.８８８ミリモル）／ＤＭＦ（０.８８８ｍＬ）に、イミダゾール（１００ｍｇ、１.４６９ミリモル）およびｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（ＴＢＳ−Ｃｌ、４ｍＬ、１.１４９ミリモル）を添加した。反応物を２５℃で一夜攪拌した。溶媒を窒素下で除去し、該材料をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ヘキサン中０−５０％酢酸エチル勾配で溶出して精製し、化合物７３（２９０ｍｇ、収率９１％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝３４０.５０

【0266】

化合物７３（１４ｇ、０.４１２ミリモル）／エタノール（２ｍＬ）に、ＬｉＢＨ_４（０.０５４ｇ、２.４７５ミリモル）を添加した。反応物を２５℃で５時間攪拌した。反応を酢酸（０.１８９ｍＬ、３.３０ミリモル）でクエンチし、１０分間攪拌した。溶媒を除去し、該材料をセライト（登録商標）上の乾燥ローディングに供した。該材料をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ＤＣＭ中２−１０％メタノール勾配で溶出して精製し、化合物７４（１２０ｍｇ、収率９８％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝２８４.５０

【0267】

化合物７４（１００ｍｇ、０.３５３ミリモル）、ＴＥＡ（０.１２３ｍＬ、０.８８２ミリモル）のＤＣＭ（２ｍＬ）中懸濁液に、ＭｓＣｌ（０.０６３ｍＬ、０.８１１ミリモル）を０℃で添加した。反応物を０℃で１時間攪拌した。次に反応を水でクエンチし、ＤＣＭで抽出し、冷ＨＣｌ水溶液（０.０５Ｎ）、ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。溶媒を除去し、メシラート７５を橙色の油状物として得た。該材料をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ヘキサン中２０-１００％酢酸エチルの勾配で溶出して精製し、メシラート７５（１５５ｍｇ、収率９８％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝４４０.３０

【0268】

メシラート７５（２５ｍｇ、０.０５７ミリモル）／ＤＭＦ（.３ｍＬ）に、Ｃｓ_２ＣＯ_３（８５ｍｇ、０.２６１ミリモル）およびフェノール２２（９０ｍｇ、０.１７１ミリモル）を添加した。反応物を２５℃で１時間攪拌した。該材料をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ＤＣＭ中３０−１００％アセトンの勾配で溶出して精製し、二量体７６（７０ｍｇ、収率９３％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝１２９６.６５

【0269】

二量体７６（４０ｍｇ、０.０３１ミリモル）／ＴＨＦ（.３ｍＬ）に、ヨウ化テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ、０.０３７ｍＬ、０.０３７ミリモル）を加えた。反応は３０分で完了し、それを飽和（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４でクエンチした。該混合物を酢酸エチルで抽出し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。溶媒を除去し、ＤＭＦで希釈し、ＨＰＬＣ操作Ａに付して精製した。生成物を含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ ＳＰＥ ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジに通し、アセトニトリルで溶出して生成物の溶液を遊離塩基として得た。大半の有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、凍結乾燥により水を除去し、二量体７７（１４ｍｇ、収率４７％）を白色の粉末として得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝９５４.３５

【0270】

二量体７７（１４ｍｇ、０.０１２ミリモル）をピロリジンのＤＣＭ中溶液（０.０４２Ｍ、０.７０５ｍＬ、０.０３０ミリモル）に溶かし、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（１.０ｍｇ、０.９マイクロモル）を加えた。混合物を１時間攪拌し、ＤＣＭと飽和ＮＨ_４Ｃｌの間に分配した。相を分離し、その水性フラクションをＤＣＭで２回以上抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、残留物となるまで蒸発させ、それをＨＰＬＣ操作Ａに付して精製した。試料を２つの等量のインジェクションに分けた。生成物のピークを含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ ＳＰＥ ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジに通し、アセトニトリルで溶出して生成物の溶液を遊離塩基として得た。大半の有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、凍結乾燥により水を除去し、二量体ＩＩａ−０８（５.０ｍｇ、収率５４％）を白色の粉末として得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝７５０.３０

【0271】

実施例１６− 二量体−リンカーＩＩＩｂ−０５
この実施例および図１７は二量体−リンカー ＩＩＩｂ−０５の調製に関する。

【0272】

化合物７５（１１３ｍｇ、０.２５７ミリモル）／ＤＭＦ（.２ｍＬ）に、フェノール２２（４５ｍｇ、０.０８６ミリモル）およびＣｓ_２ＣＯ_３（６０ｍｇ、０.１８４ミリモル）を添加した。反応物を２５℃で１時間攪拌した。該材料をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ＤＣＭ中３０−１００％酢酸エチルの勾配で溶出して二量体７８（４０ｍｇ、収率３０.６％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝８６８.６０

【0273】

二量体７８（３９ｍｇ、０.０４５ミリモル）／ＤＭＦ（.２ｍＬ）に、Ｃｓ_２ＣＯ_３（４０ｍｇ、０.１２３ミリモル）および化合物３７（４０ｍｇ、０.０５５ミリモル）を添加した。反応物を２５℃で４時間攪拌し、該材料をＨＰＬＣ操作Ａに付して精製した。試料を２つの等量のインジェクションに分けた。生成物を含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ ＳＰＥ ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジ、アセトニトリルで溶出し、生成物の溶液を遊離塩基として得た。大半の有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、凍結乾燥により水を除去し、化合物７９（６０.０ｍｇ、収率８９％）を白色の粉末として得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝１５０１.８５

【0274】

二量体７９（６０ｍｇ、０.０４０ミリモル）／ＴＨＦ（.４ｍＬ）に、ＴＢＡＦ（０.０４ｍＬ、０.０４０ミリモル）を添加した。反応は３０分で終了しており、飽和ＮＨ_４Ｃｌでクエンチした。混合物を酢酸エチルで抽出し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。溶媒を除去し、ＤＭＦで希釈しで希釈し、ＨＰＬＣ操作Ａに付して精製した。生成物を含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ ＳＰＥ ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジに通し、アセトニトリルで溶出し、生成物の溶液を遊離塩基として得た。大半の有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、凍結乾燥により水を除去して二量体８０（１３ｍｇ、収率２０％）を白色の粉末として得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝１２７３.５５

【0275】

化合物８０（１３ｍｇ、１０.２１マイクロモル）をピロリジンのＤＣＭ中溶液（０.０４２Ｍ、０.６０８ｍＬ、０.０２６ミリモル）に溶かし、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（０.７０８ｍｇ、０.６１３マイクロモル）を添加した。該混合物を室温で２.５時間攪拌した。反応溶媒をＮ_２下で除去した。該材料を１.５ｍＬのＤＭＦで希釈し、該材料を１.５ｍＬのＤＭＦで希釈し、ＨＰＬＣ操作Ａに付して精製した。試料を２つの等量のインジェクションに分けた。生成物を含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ ＳＰＥ ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジに通し、アセトニトリルで溶出して生成物の溶液を遊離塩基として得た。大半の有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、凍結乾燥により水を除去し、アミン８１（１１ｍｇ、収率９０％）を白色の粉末として得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝１０８７.５０

【0276】

アミン８１（１１ｍｇ、１０.１２マイクロモル）をＤＩＰＥＡのＤＭＦ中溶液（０.２４３ｍＬ、０.０１２ミリモル）に溶かし、化合物４０（６.２４ｍｇ、０.０２０ミリモル）を添加した。該混合物を２０時間攪拌し、ＤＭＦで希釈し、ＨＰＬＣ操作Ａに付して精製した。試料を２つの等量のインジェクションに分けた。生成物を含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ ＳＰＥ ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジに通し、アセトニトリルで溶出し、生成物の溶液を遊離塩基として得た。大半の有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、凍結乾燥により水を除去し、二量体−リンカーＩＩＩｂ−０４（６ｍｇ、収率４２％）を白色の粉末として得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝１２８１.６０

【0277】

実施例１７− 二量体ＩＩａ−０７およびＩＩａ−０９
この実施例および図１８は、二量体ＩＩａ−０７およびＩＩａ０９の調製に関する。

【0278】

（３−メトキシピリジン−２,６−ジイル）ジメタノール８２（９０ｍｇ、０.５３２ミリモル）、ＮＥｔ_３（０.１８５ｍＬ、１.３３０ミリモル）のＤＣＭ（３ｍＬ）中懸濁液に、ＭｓＣｌ（０.０９５ｍＬ、１.２２４ミリモル）を０℃で添加した。反応物を０℃で１時間攪拌した。反応を水でクエンチし、ＤＣＭで抽出しで抽出し、冷却ＨＣｌ水溶液（０.０５Ｎ）、ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮して粗メシラートを橙色の油状物として得た。該材料をクロマトグラフィーに付し、ヘキサン中２０−１００％酢酸エチルの勾配で溶出して精製し、化合物８３（８７ｍｇ、収率４５％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｎａ＝３４７.７５

【0279】

フェノール２２（９７ｍｇ、０.１８４ミリモル）、化合物８３（２０ｍｇ、０.０６１ミリモル）およびＣｓ_２ＣＯ_３（６０ｍｇ、０.１８４ミリモル）のＤＭＦ（０.３ｍＬ）中懸濁液を２５℃で３時間攪拌した。溶媒を窒素下で除去した。その材料をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ＤＣＭ中２−１０％メタノールの勾配で溶出して精製し、二量体８４（６７ｍｇ、収率７７％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝１１８３.０２

【0280】

二量体８４（２０ｍｇ、０.０１７ミリモル）をピロリジンのＤＣＭ中溶液（０.０４２ Ｍ、１.０ｍＬ、０.０４２ミリモル）に溶かし、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（１.０ｍｇ、１.０マイクロモル）を添加した。その混合物を３０分間攪拌し、ＤＣＭと飽和ＮＨ_４Ｃｌの間に分配した。相を分離し、水性フラクションをＤＣＭで２回以上抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、残留物となるまで蒸発させ、それをＨＰＬＣ操作Ａに付して精製した。試料を２つの等量のインジェクションに分けた。生成物を含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ ＳＰＥ ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジに通し、アセトニトリルで溶出して生成物の溶液を遊離塩基として得た。大半の有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、凍結乾燥により水を除去し、二量体ＩＩａ−０９（３.０ｍｇ、収率２２％）を白色の粉末として得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝７５０.３０

【0281】

キノリン−２,４−ジイルジメタノール８５（１００ｍｇ、０.５２９ミリモル）およびＮＥｔ_３（０.１８５ｍＬ、１.３３０ミリモル）のＤＣＭ（３ｍＬ）中懸濁液に、ＭｓＣｌ（０.０９５ｍＬ、１.２２４ミリモル）を０℃で添加した。反応物を０℃で１時間攪拌した。反応を水でクエンチし、ＤＣＭで抽出し、ＨＣｌ冷水溶液（０.０５Ｎ）、ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮して粗メシラートを橙色の油状物として得た。該材料をクロマトグラフィーに付し、ヘキサン中２０−１００％酢酸エチルの勾配で溶出して化合物８６（８０ｍｇ、収率４４％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｎａ＝３４５.８０

【0282】

フェノール２２（１８２ｍｇ、０.３４７ミリモル）、化合物８６（４０ｍｇ、０.１１６ミリモル）およびＣｓ_２ＣＯ_３（１１３ｍｇ、０.３４７ミリモル）のＤＭＦ（０.３ｍＬ）中懸濁液を２５℃で３時間攪拌した。溶媒を窒素下で除去した。該材料をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ＤＣＭ中３０−１００％アセトンの勾配で溶出して精製し、二量体８７（９５ｍｇ、収率６８％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝１２０２.６０

【0283】

二量体８７（２０ｍｇ、０.０１７ミリモル）をピロリジンのＤＣＭ中溶液（０.０４２Ｍ、０.４ｍＬ、０.０１７ミリモル）に溶かし、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（１.０ｍｇ、１.０マイクロモル）を添加した。混合物を３０分間攪拌し、ＤＣＭと飽和ＮＨ_４Ｃｌの間に分配した。相を分離し、水性フラクションをＤＣＭで２回以上抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、残留物となるまで蒸発させ、それをＨＰＬＣ操作Ａに付して精製した。試料を２つの等量のインジェクションに分けた。生成物のピークを含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ ＳＰＥ ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジに通し、アセトニトリルで溶出して生成物の溶液を遊離塩基としてえた。大半の有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、凍結乾燥により水を除去し、二量体ＩＩａ−０７（８.０ｍｇ、収率５９％）を白色の粉末として得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝７７０.３０

【0284】

実施例１８− さらなる中間体
本発明の二量体の合成に有用なジブロミド９１ａ−ｄを、図１９Ａのスキームに従って、合成した。出発材料８８ａおよび８８ｂは、Synth. Commun. 1999, 3719に記載されるように調製された。出発材料８８ｃはArkpharmaより入手した。出発材料８９ｄは、ＷＯ２０１２／１５３２５３に記載されるように、調製された。

【0285】

中間体８８ａを調製するための次の操作は代表的なものである。

【0286】

メチルエーテル８８ａ（０.４５ｇ、２.０ミリモル）をエタノール（２０ｍＬ）に懸濁させ、水素化ホウ素リチウムを添加した。該混合物を外界温度で５時間攪拌し、次に酢酸を添加してクエンチした。該混合物を蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィーに付し、ＤＣＭ中０−２０％メタノールの勾配で精製し、ジオール８９ａ（２１０ｍｇ、収率６２％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ６.８７（ｓ，２Ｈ）、５.３３（ｂｒｔ，Ｊ＝５.５Ｈｚ，２Ｈ）、４.４７（ｂｒｄ，Ｊ＝４.９Ｈｚ，４Ｈ）、３.８４（ｓ，３Ｈ）

【0287】

ジオール８９ａ（０.２１ｇ、１.２４ミリモル）およびトリエチルアミン（０.５２ｍＬ、３.７２ミリモル）をＤＣＭ（６.２ｍＬ）に懸濁させ、氷／水浴で冷却した。この混合物に、ＭｓＣｌ（０.２２ｍＬ、２.８５ミリモル）を添加した。反応混合物をその同じ温度で２時間進展させ、次に水を添加してクエンチし、ＤＣＭで抽出した。有機相を０.１Ｎ ＨＣｌで、つづいてブラインで洗浄し、ついで硫酸ナトリウムで乾燥させた。濾過した後、溶媒を減圧下で蒸発させ、粗メシラート９０ａ（０.４ｇ、推定収率１００％）を得、それをその後の工程にさらに精製することなく用いた。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝３２５.８５

【0288】

メシラート９０ａ（０.４４ｇ、１.３５ミリモル）をＤＭＦ（２.７ｍＬ）に溶かし、臭化ナトリウム（６９６ｍｇ、６.７６ミリモル）を添加した。混合物を３時間攪拌し、その時点でそれを水で希釈し、得られた固体を濾過で集め、真空下で乾燥させ、ジブロミド９１ａ（０.１５５g、収率３９％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ） δ ６.９２（ｓ，２Ｈ）、４.５１（ｓ，４Ｈ）、３.９１（ｓ，３Ｈ）；ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝２９３.７０

【0289】

ジブロミド９１ｂ−ｄを同様に合成した：
９１ｂ：ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝３１９.７０.
９１ｃ：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ） δ ７.４２（ｓ，２Ｈ）、４.５１（ｓ，４Ｈ）
９１ｄ：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ） δ ７.９５（ｓ，２Ｈ）、４.６１（ｓ，４Ｈ）、４.０６−３.９４（ｍ，３Ｈ）

【0290】

実施例１９− 二量体ＩＩａ−１０、ＩＩａ−１１、ＩＩａ−１２、ＩＩａ−１３およびＩＩａ−１４
化合物２０は、図１９Ｂに示されるように、ＬｉＯＡｃで処理することにより、化合物９２に変換された。化合物９２をジブロミド９１ａ−ｄとカップリングさせ、保護された二量体を得、次にそれを、実施例５の操作及び図６のスキームに従い、同様にしてＰｄ（ＰＰｈ_３）_４で脱保護し、二量体ＩＩａ−１０〜ＩＩａ−１４を得た。
（ＩＩａ−１０）：ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝７５０.０５.
（ＩＩａ−１１）：ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝７３６（二量体ＩＩａ−１２に至る脱保護工程におけるアリル基の喪失により得られる）
（ＩＩａ−１２）：ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝７７６.０５
（ＩＩａ−１３）：ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝７５４.００
（ＩＩａ−１４）：ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝７７８.０５

【0291】

二量体（ＩＩａ−１０）〜（ＩＩａ−１４）は、以下に要約されるように、架橋部分の特性で異なる：

【化148】

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【0292】

実施例２０− 二量体−リンカーＩＩＩｂ−０６およびＩＩＩｂ−０７
二量体−リンカーＩＩＩｂ−０６およびＩＩＩｂ−０７は、化合物２２と、各々、ジブロミド９１ａおよび９１ｂとから、実施例１４の操作および図１５のスキームに従い、同様にして調製された。
（ＩＩＩｂ−０６）：ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｎａ＝１３０２.０５
（ＩＩＩｂ−０７）：ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝１２６７

【化149】

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【0293】

実施例２１− 二量体−リンカーＩＩＩｂ−０８、ＩＩＩｂ−０８ａ、ＩＩＩｂ−０８ｂ、およびＩＩＩｂ−０８ｃ
この実施例は、リンカーにポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）部分を有する二量体−リンカーの調製に関する。ＰＥＧ部分の存在は、水性媒体中、コンジュゲーションの間の二量体−リンカーの溶解度を改善し得る。

【化150】

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【0294】

マレイミド化合物３２および３２ａ−ｃ（すべてQuanta Biodesignより入手可能）は、アミン３９（実施例６および図７Ｂ）とカップリングされ、各々、二量体−リンカーＩＩＩｂ−０８、ＩＩＩｂ−０８ａ、ＩＩＩｂ−０８ｂ、およびＩＩＩｂ−０８ｃを調製した：
ＩＩＩｂ−０８：ＬＣＭＳ （Ｍ＋２Ｈ）／２＝８１６.５５
ＩＩＩｂ−０８ａ：ＬＣＭＳ （Ｍ＋２Ｈ）／２＝７７２.５０
ＩＩＩｂ−０８ｂ：ＬＣＭＳ （Ｍ＋２Ｈ）／２＝７２８.４０
ＩＩＩｂ−０８ｃ：ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｎａ＝１３９０.０５

【化151】

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【0295】

実施例２２− 二量体ＩＩａ−１５
この実施例は、二量体ＩＩａ−１５の調製に関し、その中でジアゼピン環のイミン基は両方共に還元された。

【0296】

実施例５の操作および図５のスキームに従い、同様にして、ジブロミド３４を化合物４４とカップリングさせ、ビス−アロック（alloc）化合物を得た。後者をＰｄ（ＰＰｈ_３）_４で脱保護に付し、二量体ＩＩａ−１５を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝７２４.４５

【化152】

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【0297】

実施例２３− 二量体−リンカーＩＩＩｂ−０９
この実施例および図２０は二量体−リンカーＩＩＩｂ−０９の調製に関し、ここで該リンカーは反応性官能基としてのアミノ基を有する。アミノ基は、上記されるように、トランスグルタミナーゼ介在性コンジュゲーションにおいてアミンドナーとして作用することによりコンジュゲーションに関与しうる。

【0298】

アロック化合物４４、ジブロミド３４、および化合物３７を用い、実施例６および１４の操作に略従い、各々、図７Ａ−７Ｂおよび１５と関連付けられるスキームと同様にして化合物９３を調製した。

【0299】

化合物９４（０.０７９ｇ、０.０８６ミリモル、Quanta Biodesign）を化合物９３（０.０９１ｇ、０.０９５ミリモル）と、実施例６の操作および図７Ｂに従い、同様にしてカップリングさせ、化合物９５（４０ｍｇ、収率２７％）を得た。ＬＣＭＳ （Ｍ＋２Ｈ）／２＝８５３.４５。化合物９５（４０ｍｇ、０.０２３ミリモル）をＤＭＦ（１.０ｍＬ）に溶かし、ジエチルアミン（０.１ｍＬ、０.９５７ミリモル）を添加した。その混合物を1時間放置し、ＤＭＦで希釈し、バイオタージ（Biotage）Ｃ１８カラム（溶媒Ａ＝９５％水、５％アセトニトリル＋０.０５％ギ酸；溶媒Ｂ＝５％水、９５％アセトニトリル＋０.０５％ギ酸；２０−１００％勾配）に付して精製した。生成物を含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ ＳＰＥ ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジを通し、アセトニトリルで溶出して、生成物の溶液を遊離塩基として得た。大半の有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、凍結乾燥により水を除去し、二量体−リンカーＩＩＩｂ−０９（１８.５ｍｇ、収率５１％）を白色の粉末として得た。ＬＣＭＳ （Ｍ＋２Ｈ）／２＝７４２.３５

【0300】

実施例２４− さらなる中間体
この実施例および図２１は、芳香族環にさらに窒素を有するＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体の合成に適する中間体の合成に関する。

【0301】

水素化ナトリウム（６０％、２.７２g、５６.８ミリモル）をＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶かし、氷浴で冷却した。ジエチルアセトアミドマロナート９７（６.１７ｇ、２８.４ミリモル）を約３分間にわたって少しずつ添加し、泡立ちが静まるまでさらに１０分間反応させた。ピリジン９６（５ｇ、２８.４ミリモル、ＷＯ２００２／０３６５５５に従って調製）を約１分間にわたって添加した。反応混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層をＮａＣｌ飽和水溶液で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空下で濃縮させた。２種の位置異性体９８ａ／ｂが形成され、次の工程においてさらに精製することなく混合物として適用された（７.２ｇ、収率７９％）。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝３２１.１０（同じ質量の２つのピーク）

【0302】

化合物９８ａ／ｂの混合物（７.２ｇ、２２.４８ミリモル）を６Ｎ ＨＣｌ（５０ｍＬ、１６４６ミリモル）で処理した。得られた混合物を３時間還流させた。室温に冷却した後、反応混合物を真空下で濃縮した。形成した褐色の固体をジオキサンと共に濃縮し、メタノールでトリチュレートした。化合物９９ａ／ｂの混合物の２つのクロップを集め、第１のクロップは２.４ｇの黄褐色の固体であり、第２のクロップは１.０ｇの暗褐色の固体であった。これらをさらに精製することなく用いた。

【0303】

ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）および塩化チオニル（１.５７８ｍＬ、２１.６２ミリモル）を化合物９９ａ／ｂの混合物（１８１０ｍｇ、７.２１ミリモル）に室温にて連続して添加し、次に得られた混合物を２０時間還流させた。反応混合物を完全に濃縮し、形成した固体をジオキサンと一緒に再び濃縮し、過剰な塩化チオニルを除去し、褐色の固体を得た。該混合物をＭｅＯＨでトリチュレートして固体を得、それをＮａ_２ＣＯ_３とＤＣＭの間に分配し、２回以上抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、溶媒を蒸発させて化合物１００ａ／ｂの混合物（１.２ｇ、６.２４ミリモル、収率８７％）を得た。

【0304】

化合物１００ａ／ｂの混合物（１.２ｇ、６.２４ミリモル）をＭｅＯＨ（５０ｍＬ）に溶かし、ＬｉＢＨ_４（０.１３６ｇ、６.２４ミリモル）で処理した。該混合物を２時間還流させ、蒸発させ、エタノールおよびトルエンと一緒に共沸蒸留に付し、化合物１０１ａ／ｂの混合物（１ｇ、収率９８％）を得た。

【0305】

化合物１０１ａ／ｂの混合物（１.０ｇ、６.０９ミリモル）をＤＭＦ（１ｍＬ）およびアセトニトリル（５.８ｍＬ）に溶かし、ＴＢＳ−Ｃｌ（３.１５ｍＬ、２.９Ｍ、９.１３ミリモル）およびイミダゾール（０.６２ｇ、９.１３ミリモル）で処理した。その混合物を２０分間温め、大半の溶媒を蒸発させた。残渣を水とＥｔＯＡｃの間に分配した。水相をＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機相を合わせ、水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。その混合物を濾過し、固体を取り除き、溶媒を蒸発させた。残渣を０−１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを用い、２４ｇシリカゲルカラムでフラッシュクロマトグラフィーに付した。これらの条件下、２成分はその大部分が分割されたが、さらに変形するために化合物１０２ａ／ｂの混合物として再び合わせられた（９６７ｍｇ、収率５７％）。

【0306】

化合物１０２ａ／ｂの混合物（９１７ｍｇ、３.２９ミリモル）は、実施例３の操作に従い、変更すべきは変更して、化合物１０６ａ／ｂに変換された。
１０３ａ／ｂ：（１.３９ｇ、収率６７％）；ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝６３０.２０（同じ質量の２本のピーク）
１０４ａ／ｂ：（０.５２ｇ、収率６２％）；ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝６００.２０（同じ質量の２本のピーク）
１０５ａ／ｂ：（０.５０ｇ、収率８４％）；ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝６８４.７５（同じ質量の２本のピーク）
１０６ａ：（１５８ｍｇ、収率３８％）ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝５７０.２５（シリカゲルクロマトグラフィー、５０−１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの勾配に付して１０６ｂより分離した後）
１０６ｂ：（１７９ｍｇ、収率４３％）ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝５７０.３０（分離した後）

【0307】

実施例２５− 二量体ＩＩａ−１６
この実施例および図２２は、外側のベンゼン環の１つに窒素を有する、すなわち、式（Ｉ）のＧまたはＧ’の一つがＮである、二量体ＩＩａ−１６の調製に関する。

【0308】

化合物１０６ｂは、実施例３の操作に従い、変更すべきは変更して、エナンチオマー１０８ａおよび１０８ｂに変換され、それをキラルパック（CHIRALPAK）（登録商標）ＩＥカラムのキラルＳＥＣクロマトグラフィーに付し、ＣＯ２中２０％ＭｅＯＨで溶出して分離した。１０８ａ：ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝４１１.９５；２５ｍｇ、収率２３％；１０８ｂ：ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝４１１.９５；２２ｍｇ、収率２０％

【0309】

エナンチオマー１０８ｂを、実施例６の操作に従い、同様にして、化合物３６とカップリングさせ、ビス−アロック化合物１０９を得、次にそれをＰｄ（ＰＰｈ_３）_４で処理し、二量体ＩＩａ−１６（４.３ｍｇ、収率４５％）を得た。ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝７２１.３０

【0310】

同様に、エナンチオマー１０８ａを二量体１１０に変換した。それは二量体の単位の１つに天然に存しない立体化学配置がある。

【化153】

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【0311】

さらに同様にして、化合物１０６ａをエナンチオマー１１１ａ（ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝４１１.９５；１８.６ｍｇ、収率１８％）および１１１ｂ（ＬＣＭＳ Ｍ＋Ｈ＝４１１.９５；１９ｍｇ、収率１８％）に変換した。これらのエナンチオマーを用い、上記の操作に従って、変更すべきは変更して、二量体を製造することができる。

【化154】

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【0312】

実施例２６− 二量体の生物学的活性
本発明の二量体の、Ｈ２２６肺がん、ＤＭＳ７９肺がん、Ｈ１８７肺がん、Ｎ８７胃がん、７８６−Ｏ腎臓がん、および／またはＯＶＣＡＲ３卵巣がん細胞系などの種々のがん細胞系に対する、細胞毒性活性が試験され得る。二量体の細胞増殖を阻害する能力は、ＡＴＰ発光アッセイまたはＭＴＳ細胞増殖アッセイのいずれかで測定され得る。一般に、これらの２つの方法は同等な結果をもたらす。

【0313】

これはＡＴＰ発光アッセイのための一般的操作である：細胞を、各々、ＡＴＰのCellTiterGlo（登録商標）アッセイのために、９６−ウェルプレートにて１ｘ１０^３細胞／ウェルで３時間播種する。化合物を連続希釈（１：３）にてウェルに添加する。プレートを７２時間インキュベートさせる。Promegaから由来のCellTiterGlo（登録商標）細胞生存能キットを用い、取扱説明書に従って、試験化合物で処理した細胞のＡＴＰ含量を測定する。ＡＴＰ含量の減少は細胞生存性の低下の指標である。ＥＣ_５０値−薬剤が細胞生存性を最大効果の５０％まで減少させる濃度は、PRISM（登録商標）ソフトウェア、バージョン５.０（GraphPad Software, La Jolla, CA, USA）を用いて算定され得る。

【0314】

ＭＴＳ細胞増殖アッセイを次のように行った。Promega（Madison, WI）製のCellTiter 96 Aqueous Non-Radioactive Cell proliferation Kitを用い、細胞増殖アッセイにおける生存細胞の数を測定する。腫瘍細胞を特定の播種密度で滅菌処理した３８４ウェルの黒色透明底部マトリックスプレートにウェル当たり４０μＬで置き、アッセイを行う前に５％ＣＯ_２中３７℃で一夜インキュベートする。翌日、一群の細胞プレート（１０プレート）を用いて０時間の細胞密度を測定し、３−（４,５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウムを４μＬ／ウェルで１０プレートに加え、つづいて５％ＣＯ_２中３７℃で３時間インキュベートした。このテトラゾリウム試薬は肝細胞により生体内還元され、水溶液に可溶性のホルマザン生成物を形成する。Envision読取り装置（Perkin Elmer, Boston, MA）で４９０ｎｍの吸光度を測定する。その日のうちに、残りの細胞プレート（Ｔ７２プレート）に化合物を加え、５％ＣＯ_２中３７℃でインキュベートする。７２時間後、次に４μＬのＭＴＳ試薬をその細胞プレートに加える。該プレートを５％ＣＯ_２中３７℃で３時間さらにインキュベートし、Ａ４９０での吸光度をEnvision読取り装置で測定した。

【0315】

結果を表Ｉに示す：

【表1】

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【0316】

実施例２７− コンジュゲートの生物学的活性
二量体−リンカー化合物を、上記される一般的操作に従って、抗−フコシルＧＭ１抗体とコンジュゲートさせた。Ｎ８７胃がん、ＤＭＳ７９および／またはＨ１８７小細胞肺がん細胞系に対する試験を行い、前者はその細胞表面にメソテリンを発現し、後者の２つはフコシルＧＭ１を発現するものであった。^３Ｈチミジンアッセイ（Congら、2014）を用いて活性を測定した。結果を表ＩＩに示す。

【表2】

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【0317】

好ましい実施態様において、本発明のコンジュゲート中の抗体は、抗−フコシルＧＭ１または抗−メソテリン抗体である。

【0318】

本発明の上記の詳細な記載は、本発明の特定の部分または態様と主にまたは独占的に関連付けられる一節を包含する。これは簡潔かつ便宜のためであり、特定の特徴はそれを開示する分節だけでなくそれ以上の分節と関連付けることができ、本明細書の開示は異なる分節に認められる情報の適切なすべての組み合わせを包含することを理解すべきである。同様に、本明細書における種々の図表および記載は本発明の特定の実施態様と関連するが、具体的な特徴は特定の図表または実施態様の文脈に開示されており、そのような特徴は他の特徴と組み合わせて、または本発明にて一般的に、他の図表または実施態様の文脈において適度に使用され得ると理解されるべきである。

【0319】

さらには、本発明は、特定の好ましい実施態様の観点から詳細に記載されるが、本発明はかかる好ましい実施態様に限定されるものではない。どちらかと言えば、本発明の範囲は添付した特許請求の範囲により定められる。

【0320】

参考文献
本明細書中に第１著者（または発明者）および先の日付により省略された形式にて引用される次の参考文献を完全な言及にて以下に提供する。これらの参考文献は、各々、出典を明示することによりあらゆる目的で本明細書に組み込まれる。

【0321】

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【図1】

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【図2】

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【図3】

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【図4】

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【図5】

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【図6】

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【図7A】

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【図7B】

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【図8】

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【図9】

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【図10】

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【図11】

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【図12A】

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【図12B】

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【図13】

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【図14】

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【図15】

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【図16】

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【図17】

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【図18】

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【図19A】

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【図19B】

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【図20】

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【図21】

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【図22】

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