特許 6681838 ペプチド模倣薬化合物及びその抗体−薬剤複合体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6681838

(24)【登録日】2020年3月26日

(45)【発行日】2020年4月15日

(54)【発明の名称】ペプチド模倣薬化合物及びその抗体−薬剤複合体

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20200406BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20200406BHJP

   A61K 31/5517 20060101ALI20200406BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20200406BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20200406BHJP

   C07D 519/00 20060101ALI20200406BHJP

【ＦＩ】

   C07K16/28ZNA

   A61K39/395 C

   A61K39/395 L

   A61K31/5517

   A61P35/00

   A61P35/02

   A61K39/395 E

   A61K39/395 T

   C07D519/00 301

【請求項の数】14

【全頁数】113

(21)【出願番号】特願2016-558545(P2016-558545)

(86)(22)【出願日】2014年12月16日

(65)【公表番号】特表2017-503009(P2017-503009A)

(43)【公表日】2017年1月26日

(86)【国際出願番号】US2014070493

(87)【国際公開番号】WO2015095124

(87)【国際公開日】20150625

【審査請求日】2017年12月18日

(31)【優先権主張番号】61/916,675

(32)【優先日】2013年12月16日

(33)【優先権主張国】US

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】509012625

【氏名又は名称】ジェネンテック， インコーポレイテッド

(73)【特許権者】

【識別番号】508098350

【氏名又は名称】メドイミューン・リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ

(74)【代理人】

【識別番号】110000523

【氏名又は名称】アクシス国際特許業務法人

(72)【発明者】

【氏名】ジョン・フライゲア

(72)【発明者】

【氏名】ジャネット・ガンズナー−トースト

(72)【発明者】

【氏名】トーマス・ピロー

(72)【発明者】

【氏名】ブライアン・サフィナ

(72)【発明者】

【氏名】ヴィシャル・ヴァーマ

(72)【発明者】

【氏名】ビンチン・ウェイ

(72)【発明者】

【氏名】ギーリン・ツァオ

(72)【発明者】

【氏名】リアンナ・ステイベン

(72)【発明者】

【氏名】フィリップ・ウィルソン・ハワード

(72)【発明者】

【氏名】ルーク・マスターソン

【審査官】 北村 悠美子

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１３／１７７０５５（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１３／０４１６０６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２０１３−５２３８９５（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｋ １／００−１９／００

Ａ６１Ｋ ３９／３９５−３９／４４

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）：
Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）_p （Ｉ）
で表される抗体−薬剤複合体であって、
式中、
Ａｂは、抗体であり、
Ｌは、下記の式：
−Ｓｔｒ−（ＰＭ）−Ｓｐ−
で表されるペプチド模倣薬リンカーであり、
式中、
Ｓｔｒは、Ａｂに共有結合しているストレッチャー単位であり、
Ｓｐは、結合または薬剤部分に共有結合しているスペーサー単位であり、
ＰＭは、下記の式：

【化1】

からなる群から選択される非ペプチド化学部分であり、
Ｙは、

【化2】

からなる群から選択される部分であり、
各Ｒ¹は、独立してＣ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ₂または（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ₂であり、
Ｒ³及びＲ²は、それぞれ独立してＨ、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、アリールアルキルまたはヘテロアリールアルキルであるか、あるいはＲ³及びＲ²はともにＣ₃−Ｃ₇シクロアルキルを形成可能であり、
Ｒ⁴及びＲ⁵はともにＣ₃−Ｃ₇シクロアルキル環を形成し、
ｐは１〜８の整数であり、
Ｄは式Ａ：

【化3】

に示す薬剤部分又はその薬理学的に許容される塩及び／又は溶媒和物であり、
波線はリンカーへの共有結合性の付着部位を示し、
点線はＣ１とＣ２またはＣ２とＣ３の間に二重結合の任意の存在を示し、
Ｒ²²は、Ｈ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ₂、ＣＮ、Ｒ^m、ＯＲ^m、＝ＣＨ−Ｒ^D、＝Ｃ（Ｒ^D）₂、Ｏ−ＳＯ₂−Ｒ^m、ＣＯ₂Ｒ^m及びＣＯＲ^mから独立して選択され、また任意にハロまたはジハロからさらに選択され、そこでＲ^Dは、Ｒ^m、ＣＯ₂Ｒ^m、ＣＯＲ^m、ＣＨＯ、ＣＯ₂Ｈ及びハロから独立して選択され、
Ｒ⁶⁶及びＲ⁹⁹は、Ｈ、Ｒ^m、ＯＨ、ＯＲ^m、ＳＨ、ＳＲ^m、ＮＨ₂、ＮＨＲ^m、ＮＲ^mＲ^p、ＮＯ₂、Ｍｅ₃Ｓｎ及びハロから独立して選択され、
Ｒ⁷⁷は、Ｈ、Ｒ^m、ＯＨ、ＯＲ^m、ＳＨ、ＳＲ^m、ＮＨ₂、ＮＨＲ^m、ＮＲ^mＲ^p、ＮＯ₂、Ｍｅ₃Ｓｎ及びハロから独立して選択され、
Ｑは、Ｏ、Ｓ及びＮＨから独立して選択され、
Ｒ¹¹は、ＨまたはＲ^mであるか、あるいはＱがＯである場合、ＳＯ₃Ｍであり、そこでＭは金属カチオンであり、
Ｒ^m及びＲ^pはそれぞれ任意に置換されたＣ_1-8アルキル、Ｃ₂−Ｃ₈アルケニル、Ｃ₂−Ｃ₈アルキニル、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアリル、Ｃ_3-8ヘテロシクリル、Ｃ_5-20アリール及びＣ_5-20ヘテロアリール基から独立して選択され、そして任意にＮＲ^mＲ^p基に対して、Ｒ^m及びＲ^p基は、それらが付着している窒素原子とともに任意に置換された４員、５員、６員または７員ヘテロシクロ環を形成し、
Ｒ¹²、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁹、及びＲ¹⁷は、それぞれＲ²²、Ｒ⁶⁶、Ｒ⁹⁹、及びＲ⁷⁷について定義されたとおりであり、
Ｒ”は、Ｃ₃−Ｃ₁₂アルキレン基であり、その鎖は、Ｏ、Ｓ、Ｎ（Ｈ）、及びＮＭｅから選択された１つ以上のヘテロ原子によって中断され得、及び／または１つの芳香族環であり、その環は任意に置換され、
Ｘ及びＸ’は、Ｏ、Ｓ及びＮ（Ｈ）から独立して選択される、
抗体−薬剤複合体。

【請求項2】

Ｒ⁴及びＲ⁵はともにシクロブチル環を形成する、請求項１に記載の前記抗体−薬剤複合体。

【請求項3】

Ｓｔｒは、下記の式で表される化学部分であって、

【化4】

式中、
Ｒ⁶は、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキレン、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、（Ｃ₁−Ｃ₈アルキレン）Ｏ−及びＣ₁−Ｃ₁₀アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^a）−Ｃ₂−Ｃ₆アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンは、ハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオアリール、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₄−Ｃ₇ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールアルキル及びヘテロアリールからなる群から選択される１〜５の置換基で置換されてもよく、各Ｒ^aは独立してＨまたはＣ₁−Ｃ₆アルキルであり、かつ
Ｓｐは、−Ａｒ−Ｒ^b−であり、式中、Ａｒは、アリールまたはヘテロアリールであり、かつＲ^bは、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキレン）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−である、
請求項１または２に記載の抗体−薬剤複合体。

【請求項4】

Ｓｔｒは、下記の式を有し、

【化5】

式中、Ｒ⁷は、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキレン、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキレン）Ｏ−、Ｎ（Ｒ^c）−（Ｃ₂−Ｃ₆アルキレン）−Ｎ（Ｒ^c）及びＮ（Ｒ^c）−（Ｃ₂−Ｃ₆アルキレン）から選択され、各Ｒ^cは、独立してＨまたはＣ₁−Ｃ₆アルキルであり、かつ
Ｓｐは、−Ａｒ−Ｒ^b−であり、Ａｒは、アリールまたはヘテロアリールであり、Ｒ^bは（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキレン）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−である、
請求項１または２に記載の前記抗体−薬剤複合体。

【請求項5】

Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）_p
で表され、
式中、Ａｂは、抗体であり、
Ｌは、下記の式：

【化6】

で表される非ペプチド化学部分であり、
Ｒ¹は、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルケニル、（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ₂または（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ₂であり、かつ
Ｒ³及びＲ²は、それぞれ独立してＨ又はＣ₁−Ｃ₁₀アルキルである、
請求項１または３に記載の前記抗体−薬剤複合体。

【請求項6】

Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）_p
で表され、
式中、Ａｂは抗体であり、
Ｌは下記の式：

【化7】

で表される非ペプチド化学部分であり、
Ｒ¹は、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ₂または（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ₂であり、かつ
Ｒ⁴及びＲ⁵は、ともにＣ₃−Ｃ₇シクロアルキル環を形成する、
請求項１または３に記載の抗体−薬剤複合体。

【請求項7】

Ｒ⁶はＣ₁−Ｃ₁₀アルキレンである、請求項３〜５のいずれか１つに記載の抗体−薬剤複合体。

【請求項8】

Ｓｔｒは下記の式：

【化8】

で表される化学部分であり、
Ｒ⁶はＣ₁−Ｃ₆アルキレンであり、かつ
Ｓｐは、−Ａｒ−Ｒ^b−であり、式中、Ａｒはアリールであり、かつＲ^bは（Ｃ₁−Ｃ₃アルキレン）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−である、
請求項７に記載の抗体−薬剤複合体。

【請求項9】

下記の式：

【化9】

で表され、
式中、
Ｒ¹は、（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ₂または（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ₂であり、かつ
ｐは１、２、３または４である、又は、

下記の式：

【化10】

で表され、
式中、
ｐは１、２、３または４であり、
Ｒ¹は、（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ₂または（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ₂であり、かつ
Ｒ⁴及びＲ⁵は共にＣ₃−Ｃ₇シクロアルキル環を形成する、
請求項１又は３に記載の抗体−薬剤複合体。

【請求項10】

式（ＩＶ）又は式（Ｖ）：

【化11】

【化12】

の非ペプチド化合物であって、
式中、
Ｓｔｒは抗体に共有結合可能なストレッチャー単位であり、
Ｓｐは結合または薬剤部分に共有結合しているスペーサー単位であり、
Ｙは

【化13】

からなる群から選択される部分であり、
Ｒ¹はＣ₁−Ｃ₁₀アルキル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ₂または（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ₂であり、
Ｒ³及びＲ²はそれぞれ独立してＨ、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、アリールアルキルまたはヘテロアリールアルキルであるか、またはＲ³及びＲ²はともにＣ₃−Ｃ₇シクロアルキルを形成可能であり、Ｒ⁴及びＲ⁵は共にＣ₃−Ｃ₇シクロアルキル環を形成し、
Ｄは式Ａ：

【化14】

に示す薬剤部分又はその薬理学的に許容される塩及び／又は溶媒和物であり、式中、
波線はリンカーへの共有結合性の付着部位を示し、
点線はＣ１とＣ２またはＣ２とＣ３の間に二重結合の任意の存在を示し、
Ｒ²²はＨ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ₂、ＣＮ、Ｒ^m、ＯＲ^m、＝ＣＨ−Ｒ^D、＝Ｃ（Ｒ^D）₂、Ｏ−ＳＯ₂−Ｒ^m、ＣＯ₂Ｒ^m及びＣＯＲ^mから独立して選択され、またハロまたはジハロから任意にさらに選択され、そこでＲ^DはＲ^m、ＣＯ₂Ｒ^m、ＣＯＲ^m、ＣＨＯ、ＣＯ₂Ｈ及びハロから独立して選択され、
Ｒ⁶⁶及びＲ⁹⁹はＨ、Ｒ^m、ＯＨ、ＯＲ^m、ＳＨ、ＳＲ^m、ＮＨ₂、ＮＨＲ^m、ＮＲ^mＲ^p、ＮＯ₂、Ｍｅ₃Ｓｎ及びハロから独立して選択され、
Ｒ⁷⁷はＨ、Ｒ^m、ＯＨ、ＯＲ^m、ＳＨ、ＳＲ^m、ＮＨ₂、ＮＨＲ^m、ＮＲ^mＲ^p、ＮＯ₂、Ｍｅ₃Ｓｎ及びハロから独立して選択され、
ＱはＯ、Ｓ及びＮＨから独立して選択され、
Ｒ¹¹はＨまたはＲ^mであるか、あるいはＱがＯである場合、ＳＯ₃Ｍであり、そこでＭは金属カチオンであり、
Ｒ^m及びＲ^pはそれぞれ任意に置換されたＣ_1-8アルキル、Ｃ₂−Ｃ₈アルケニル、Ｃ₂−Ｃ₈アルキニル、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアリル、Ｃ_3-8ヘテロシクリル、Ｃ_5-20アリール及びＣ_5-20ヘテロアリールの基から独立して選択され、そして任意にＮＲ^mＲ^p基に対して、Ｒ^m及びＲ^pは、それらが付着している窒素原子とともに任意に置換された４員、５員、６員または７員のヘテロシクロ環を形成し、
Ｒ¹²、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁹、及びＲ¹⁷はそれぞれＲ²²、Ｒ⁶⁶、Ｒ⁹⁹、及びＲ⁷⁷について定義されたとおりであり、
Ｒ”はＣ₃−Ｃ₁₂アルキレン基であり、その鎖は、Ｏ、Ｓ、Ｎ（Ｈ）及びＮＭｅから選択された１つ以上のヘテロ原子によって中断され得、及び／または１つの芳香族環であり、その環は任意に置換され、
Ｘ及びＸ’はＯ、Ｓ及びＮ（Ｈ）から独立して選択される、
非ペプチド化合物。

【請求項11】

下記の式のいずれかで表される、請求項１０に記載の化合物：
（ａ）（ｉ）

【化15】

で表され、
式中、Ｒ₆はＣ₁−Ｃ₁₀アルキレンであり、かつＲ⁴及びＲ⁵はともにＣ₃−Ｃ₇シクロアルキル環を形成する；
（ａ）（ｉｉ）

【化16】

で表され、
式中、
Ｒ₆はＣ₁−Ｃ₁₀アルキレンである；
（ｂ）（ｉ）

【化17】

；

（ｂ）（ｉｉ）

【化18】

。

【請求項12】

前記抗体は、以下からなる群から選択される１つ以上のポリペプチドに結合する、請求項１〜９のいずれか１つに記載の抗体−薬剤複合体：
ＢＭＰＲ１Ｂ、
Ｅ１６、
ＳＴＥＡＰ１、
０７７２Ｐ、
ＭＰＦ、
Ｎａｐｉ３ｂ、
Ｓｅｍａ５ｂ、
ＰＳＣＡ ｈｌｇ、
ＥＴＢＲ、
ＭＳＧ７８３、
ＳＴＥＡＰ２、
ＴｒｐＭ４、
ＣＲＩＰＴＯ、
ＣＤ２１、
ＣＤ７９ｂ、
ＦｃＲＨ２、
ＨＥＲ２、
ＮＣＡ、
ＭＤＰ、
ＩＬ２０Ｒα、
ブレビカン、
ＥｐｈＢ２Ｒ、
ＡＳＬＧ６５９、
ＰＳＣＡ、
ＧＥＤＡ、
ＢＡＦＦ−Ｒ、
ＣＤ２２、
ＣＤ７９ａ、
ＣＸＣＲ５、
ＨＬＡ−ＤＯＢ、
Ｐ２Ｘ５、
ＣＤ７２、
ＬＹ６４、
ＦｃＲＨ１、
ＩＲＴＡ２、
ＴＥＮＢ２、
ＰＭＥＬ１７、
ＴＭＥＦＦ１、
ＧＤＮＦ−Ｒａ１、
Ｌｙ６Ｅ、
ＴＭＥＭ４６、
Ｌｙ６Ｇ６Ｄ、
ＬＧＲ５、
ＲＥＴ、
ＬＹ６Ｋ、
ＧＰＲ１９、
ＧＰＲ５４、
ＡＳＰＨＤ１、
チロシナーゼ、
ＴＭＥＭ１１８、
ＧＰＲ１７２Ａ、
ＭＵＣ１６及び
ＣＤ３３。

【請求項13】

癌を治療するために使用される、請求項１〜９及び１２のいずれか１つに記載の抗体−薬剤複合体、又は請求項１０若しくは１１に記載の化合物。

【請求項14】

請求項１〜９及び１２のいずれか１つに記載の抗体−薬剤複合体若しくは請求項１０若しくは１１に記載の化合物、及びその薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は抗体−薬剤複合体（ＡＤＣ）のリンカーとして有用である、新規ペプチド模倣薬化合物に関する。本発明はペプチド模倣薬リンカー及びピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）を含有するＡＤＣにも関する。本発明はヒトにおいて疾患を治療する方法にも関する。

【背景技術】

【0002】

近年腫瘍細胞に直接に抗癌薬剤を送達するためのモノクローナル抗体（ｍＡＢ）の使用が非常に注目を集めている。癌の治療にＦＤＡは２つの抗体−薬剤複合体を承認している。Ａｄｃｅｔｒｉｓ（登録商標）（ブレンツキシマブベドチン）は、再発または難治性のホジキンリンパ腫及び全身性未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）の治療に有用であるＣＤ３０特異抗体−薬剤複合体（ＡＤＣ）である。Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標）（アドトラスツズマブエムタンシン）は、ＨＥＲ２陽性の末期（転移）乳癌を罹患する患者への承認され新規治療薬である。ＡＤＣにおいて強力な抗腫瘍効果及び許容範囲内の治療指数を有する治療剤を得るために、設計では幾つかの側面を最適化し得る。特に、リンカーの化学的構造がＡＤＣの効能及び安産生に著しい影響を及ぼすことがよく知られている（Ｄｕｃｒｙ＆Ｓｔｕｍｐ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ、２０１０、２１、５−１３）。正しいリンカーを選択することは、癌細胞における意図する細胞コンパートメントへの適切な薬剤送達に影響を及ぼす。リンカーは一般的に、劈開可能（例えばペプチド、ヒドラゾン、またはジスルフィド）または劈開不可能（例えばチオエーテル）の２分類に分けられる。リソソーム酵素（例えばカテプシンＢ）により加水分解可能なペプチドリンカー、例えばバリン−シトルリン（Ｖａｌ−Ｃｉｔ）が、薬剤と抗体を接続するために用いられている（米国特許第６２１４３４５号）。それらは、全身性循環における比較的な安定性及び腫瘍において薬剤を効率的に放出する能力に部分的に起因して、特に有用である。Ｖａｌ−Ｃｉｔリンカーを含有するＡＤＣは、体内で比較的に安定していることが証明されている（薬剤放出のｔ１／２が約７日間（Ｄｏｒｏｎｉｎａら（２００８）、Ｂｉｏ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．、１９、１９６０−１９６３）。しかし天然ペプチドにより表される化学分野は限られているため、ペプチドのように作用し、リソソームプロテアーゼにより効率的に劈開することができる、様々な非ペプチドリンカーを有することが望ましい。非ペプチド構造のより広い多様性により、ペプチドリンカーでは得られない、新規で有益な特性がもたらされる可能性がある。本明細書において、リソソーム酵素により劈開可能な、ＡＤＣのための、様々な種類の非ペプチドリンカーが記載される。

【発明の概要】

【0003】

本発明は式（Ｉ）：
Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）_p
で表される抗体−薬剤複合体に関し、
Ａｂは抗体であり、
Ｌは下記の式：
−Ｓｔｒ−（ＰＭ）−Ｓｐ−
で表されるペプチド模倣薬リンカーであり、
式中、
ＳｔｒはＡＢに共有結合しているストレッチャー単位であり、
Ｓｐは結合または薬剤部分に共有結合しているスペーサー単位であり、
ＰＭは、

【化1】

からなる群から選択される非ペプチド化学部分であり、
Ｗは−ＮＨ−ヘテロシクロアルキル−またはヘテロシクロアルキルであり、
Ｙはヘテロアリール、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｃ₁−Ｃ₆アルキレン、Ｃ₁−Ｃ₆アルケニル、Ｃ₁−Ｃ₆アルキレニルまたは−Ｃ₁−Ｃ₆アルキレン−ＮＨ−であり、
Ｒ¹はそれぞれ独立してＣ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ₂または（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ₂であり、
Ｒ³及びＲ²は、それぞれ独立してＨ、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、アリールアルキルまたはヘテロアリールアルキルであるか、あるいはＲ³及びＲ²はともにＣ₃−Ｃ₇シクロアルキルを形成可能であり、
Ｒ⁴及びＲ⁵は、それぞれ独立してＣ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）ＯＣＨ₂−であるか、あるいはＲ⁴及びＲ⁵はともにＣ₃−Ｃ₇シクロアルキル環を形成可能であり、
ｐは１〜８の整数であり、
Ｄは式Ａまたは式Ｂ：

【化2】

【化3】

に示す薬剤部分及びその塩及び溶媒和物であり、
式中、
波線はリンカーへの共有結合性の付着部位を示し、
点線はＣ１とＣ２またはＣ２とＣ３の間に二重結合の任意の存在を示し、
Ｒ²²はＨ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ₂、ＣＮ、Ｒ^m、ＯＲ^m、＝ＣＨ−Ｒ^D、＝Ｃ（Ｒ^D）₂、Ｏ−ＳＯ₂−Ｒ^m、ＣＯ₂Ｒ^m及びＣＯＲ^mから独立して選択され、またハロまたはジハロから任意でさらに選択され、そこでＲ^DはＲ^m、ＣＯ₂Ｒ^m、ＣＯＲ^m、ＣＨＯ、ＣＯ₂Ｈ及びハロから独立して選択され、
Ｒ⁶⁶及びＲ⁹⁹はＨ、Ｒ^m、ＯＨ、ＯＲ^m、ＳＨ、ＳＲ^m、ＮＨ₂、ＮＨＲ^m、ＮＲ^mＲ^p、ＮＯ₂、Ｍｅ₃Ｓｎ及びハロから独立して選択され、
Ｒ⁷⁷はＨ、Ｒ^m、ＯＨ、ＯＲ^m、ＳＨ、ＳＲ^m、ＮＨ₂、ＮＨＲ^m、ＮＲ^mＲ^p、ＮＯ₂、Ｍｅ₃Ｓｎ及びハロから独立して選択され、
ＱはＯ、Ｓ及びＮＨから独立して選択され、
Ｒ¹¹はＨまたはＲ^mであるか、あるいはＱがＯである場合、ＳＯ₃Ｍであり、そこでＭは金属カチオンであり、
Ｒ^m及びＲ^pはそれぞれ任意に置換されたＣ_1-8アルキル、Ｃ₂−Ｃ₈アルケニル、Ｃ₂−Ｃ₈アルキニル、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ_3-8ヘテロシクリル、Ｃ_5-20アリール及びＣ_5-20ヘテロアリールの基から独立して選択され、そして任意に、ＮＲ^mＲ^p基に関して、Ｒ^m及びＲ^pは、それらが付着している窒素原子とともに、任意に置換された４員、５員、６員または７員ヘテロシクロ環を形成し、
Ｒ¹²、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁹、Ｒ²¹及びＲ¹⁷はそれぞれＲ²²、Ｒ⁶⁶、Ｒ⁹⁹、Ｒ¹¹及びＲ⁷⁷について定義されたとおりであり、
Ｒ”はＣ₃−Ｃ₁₂アルキレン基であって、その鎖は１つ以上のヘテロ原子、例えば、Ｏ、Ｓ、Ｎ（Ｈ）、ＮＭｅによって中断され得、及び／または芳香族環、例えばベンゼンまたはピリジンであり、それらの環は任意に置換され、
Ｘ及びＸ’はＯ、Ｓ及びＮ（Ｈ）から独立して選択され、
Ｒ^Cはキャッピング基である。

【0004】

本発明は式（Ｉ）の抗体−薬剤複合体の薬学的組成物にも関する。

【0005】

本発明は癌を治療する方法、治療における式（Ｉ）の抗体−薬剤複合体の使用及び癌治療のための薬品の製造における式（Ｉ）の抗体−薬剤複合体の使用にも関する。

【0006】

本発明は式（Ｉ）の抗体−薬剤複合体の調製方法にも関する。

【図面の簡単な説明】

【0007】

【図1】ＯＶＣＡＲ３Ｘ２．１のヒト卵巣腫瘍を有するＳＣＩＤベージュマウスにおけるＮａＰｉ３ｂのＡＤＣ（ＮａＰｉ３ｂ ＰＢＤのＡＤＣ１−１及びＡＤＣ２−１）の有効性比較を示す。

【図2】ＯＶＣＡＲ３Ｘ２．１のヒト卵巣腫瘍を有するＳＣＩＤベージュマウスにおけるＮａＰｉ３ｂのＡＤＣ（ＮａＰｉ３ｂ ＰＢＤのＡＤＣ１−１及びＡＤＣ３−１）の有効性比較を示す。

【図3】ＥＯＬ−１ヒト急性骨髄性白血病腫瘍を有するＳＣＩＤマウスにおける様々な用量でのＣＤ３３ ＰＢＤのＡＤＣ２−２の有効性を示す。

【発明を実施するための形態】

【0008】

リソソーム酵素により劈開可能なＡＤＣのための様々な種類の非ペプチドリンカーが本明細書に記載される。例えば、ジペプチド（例えば、Ｖａｌ−Ｃｉｔ）内のアミド結合がアミド模倣体により置換された及び／またはアミノ酸の全体（例えばＶａｌ−Ｃｉｔ内のバリンアミノ酸）が非アミド酸部分（例えばシクロアルキルジカルボニル構造（例えば環のサイズ＝４または５））により置換された。

【0009】

本発明は式（Ｉ）の抗体−薬剤複合体に関する。

【0010】

本発明は、
Ｙがヘテロアリールであり、
Ｒ⁴及びＲ⁵はともにシクロブチル環を形成する、式（Ｉ）の抗体複合体にも関する。

【0011】

本発明は、
Ｙが

【化4】

からなる群から選択される部分である、式（Ｉ）の抗体複合体にも関する。

【0012】

本発明は、
Ｓｔｒが下記の式：

【化5】

で表される化学部分であって、
式中、Ｒ⁶はＣ₁−Ｃ₁₀アルキレン、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、（Ｃ₁−Ｃ₈アルキレン）Ｏ−及びＣ₁−Ｃ₁₀アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^a）−Ｃ₂−Ｃ₆アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンはハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオアリール、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₄−Ｃ₇ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールアルキル及びヘテロアリールからなる群から選択される１〜５の置換基に置換されてもよく、各Ｒ^aは独立してＨまたはＣ₁−Ｃ₆アルキルであり、
Ｓｐが
−Ａｒ−Ｒ^b−
であり、
式中、Ａｒはアリールまたはヘテロアリールであり、Ｒ^bは（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキレン）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−である、
式（Ｉ）の抗体複合体にも関する。

【0013】

本発明は、
Ｓｔｒが式：

【化6】

を有し、
式中、Ｒ⁷はＣ₁−Ｃ₁₀アルキレン、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキレン）Ｏ−、Ｎ（Ｒ^c）−（Ｃ₂−Ｃ₆アルキレン）−Ｎ（Ｒ^c）及びＮ（Ｒ^c）−（Ｃ₂−Ｃ₆アルキレン）から選択され、各Ｒ^cは独立してＨまたはＣ₁−Ｃ₆アルキルであり、
Ｓｐが
−Ａｒ−Ｒ^b−
であり、
式中、Ａｒはアリールまたはヘテロアリールであり、Ｒ^bは（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキレン）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−である、
式（Ｉ）の抗体−薬剤複合体にも関する。

【0014】

本発明は、
Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）_p
で表され,
式中、Ａｂは抗体であり、
Ｌは下記の式：

【化7】

で表される非ペプチド化学部分であり、
Ｒ¹はＣ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルケニル、（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ₂または（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ₂であり、
Ｒ³及びＲ²はそれぞれ独立してＨ、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキルである、
式（Ｉ）の抗体−薬剤複合体にも関する。

【0015】

本発明は、
Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）_p
で表され、
式中、Ａｂは抗体であり、
Ｌは下記の式：

【化8】

で表される非ペプチド化学部分であり、
Ｒ¹はＣ₁−Ｃ₆アルキル、（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ₂または（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ₂であり、
Ｒ⁴及びＲ⁵はともにＣ₃−Ｃ₇シクロアルキル環を形成する、
式（Ｉ）の抗体−薬剤複合体にも関する。

【0016】

本発明は、
Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）_p
で表され、
式中、Ａｂは抗体であり、
Ｌは下記の式：

【化9】

で表される非ペプチド化学部分であり、
Ｒ¹はＣ₁−Ｃ₆アルキル、（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ₂または（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ ₂である、
式（Ｉ）の抗体−薬剤複合体にも関する。

【0017】

本発明は、下記の式：

【化10】

で表され、
式中、
Ｓｔｒは下記の式：

【化11】

で表される化学部分であり、
式中、Ｒ⁶はＣ₁−Ｃ₁₀アルキレン及びＣ₁−Ｃ₁₀アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^a）−Ｃ₂−Ｃ₆アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンはハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオアリール、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₄−Ｃ₇ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールアルキル及びヘテロアリールからなる群から選択される１〜５の置換基に置換されてもよく、各Ｒ^aは独立してＨまたはＣ₁−Ｃ₆アルキルであり、
Ｐは１、２、３または４である、
式（Ｉ）の抗体−薬剤複合体にも関する。

【0018】

本発明は、下記の式：

【化12】

で表され、
式中、
Ｓｔｒは下記の式：

【化13】

で表される化学部分であり、
式中、Ｒ⁶はＣ₁−Ｃ₁₀アルキレン及びＣ₁−Ｃ₁₀アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^a）−Ｃ₂−Ｃ₆アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンはハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオアリール、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₄−Ｃ₇ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールアルキル及びヘテロアリールからなる群から選択される１〜５の置換基に置換されてもよく、各Ｒ^aは独立してＨまたはＣ₁−Ｃ₆アルキルであり、
Ｐは１、２、３または４である、
式（Ｉ）の抗体−薬剤複合体にも関する。

【0019】

本発明は、Ｙがヘテロアリール、アリールまたはアルケニルであり、Ｒ⁶がＣ₁−Ｃ₁₀アルキレンである、上記のいずれか１つの抗体−薬剤複合体にも関する。

【0020】

本発明は、Ｙが

【化14】

である、上記のいずれか１つの抗体−薬剤複合体にも関する。

【0021】

本発明は、Ｙが

【化15】

である、上記のいずれか１つの抗体−薬剤複合体にも関する。

【0022】

本発明は、Ｙが

【化16】

である、上記のいずれか１つの抗体−薬剤複合体にも関する。

【0023】

本発明は、
Ｓｔｒが下記の式：

【化17】

で表される化学部分であり、
Ｒ⁶はＣ₁−Ｃ₆アルキレンであり、
Ｓｐが、−Ａｒ−Ｒ^b−であって、式中、Ａｒはアリールであり、Ｒ^bは（Ｃ₁−Ｃ₃アルキレン）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−である、
上記のいずれか１つの抗体−薬剤複合体にも関する。

【0024】

本発明は、下記の式：

【化18】

で表され、
式中、
Ｒ¹はＣ₁−Ｃ₆アルキル−ＮＨ₂、（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ₂または（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ₂であり、
ｐは１、２、３または４である、
上記のいずれか１つの抗体−薬剤複合体にも関する。

【0025】

本発明は、下記の式：

【化19】

で表され、
式中、
ｐは１、２、３または４であり、
Ｒ¹はＣ₁−Ｃ₆アルキル−ＮＨ₂、（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ₂または（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ₂であり、
Ｒ⁴及びＲ⁵はそれぞれ独立してＣ₁−Ｃ₆アルキルであり、当該アルキルは未置換であるか、あるいはＲ⁴及びＲ⁵はＣ₃−Ｃ₇シクロアルキル環を形成可能である、
上記のいずれか１つの抗体−薬剤複合体にも関する。

【0026】

本発明は式（ＩＶ）：

【化20】

に記載の非ペプチド化合物にも関し、
式中、
Ｓｔｒは抗体に共有結合可能なストレッチャー単位であり、
Ｓｐは結合または薬剤部分に共有結合しているスペーサー単位であり、
Ｒ¹はＣ₁−Ｃ₁₀アルキル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ₂または（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ₂であり、
Ｒ⁴及びＲ⁵はそれぞれ独立して、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）ＯＣＨ₂−であるか、またはＲ⁴及びＲ⁵はＣ₃−Ｃ₇シクロアルキル環を形成可能であり、
Ｄは式Ａまたは式Ｂ：

【化21】

【化22】

の薬剤部分及びその塩及び溶媒和物であり、式中、
波線はリンカーへの共有結合性の付着部位を示し、
点線はＣ１とＣ２またはＣ２とＣ３の間に二重結合の任意の存在を示し、
Ｒ²²はＨ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ₂、ＣＮ、Ｒ^m、ＯＲ^m、＝ＣＨ−Ｒ^D、＝Ｃ（Ｒ^D）₂、Ｏ−ＳＯ₂−Ｒ^m、ＣＯ₂Ｒ^m及びＣＯＲ^mから独立して選択され、またハロまたはジハロから任意にさらに選択され、そこでＲ^DはＲ^m、ＣＯ₂Ｒ^m、ＣＯＲ^m、ＣＨＯ、ＣＯ₂Ｈ及びハロから独立して選択され、
Ｒ⁶⁶及びＲ⁹⁹はＨ、Ｒ^m、ＯＨ、ＯＲ^m、ＳＨ、ＳＲ^m、ＮＨ₂、ＮＨＲ^m、ＮＲ^mＲ^p、ＮＯ₂、Ｍｅ₃Ｓｎ及びハロから独立して選択され、
Ｒ⁷⁷はＨ、Ｒ^m、ＯＨ、ＯＲ^m、ＳＨ、ＳＲ^m、ＮＨ₂、ＮＨＲ^m、ＮＲ^mＲ^p、ＮＯ₂、Ｍｅ₃Ｓｎ及びハロから独立して選択され、
ＱはＯ、Ｓ及びＮＨから独立して選択され、
Ｒ¹¹はＨまたはＲ^mであるか、あるいはＱがＯである場合、ＳＯ₃Ｍであり、そこでＭは金属カチオンであり、
Ｒ^m及びＲ^pはそれぞれ任意に置換されたＣ_1-8アルキル、Ｃ₂−Ｃ₈アルケニル、Ｃ₂−Ｃ₈アルキニル、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ_3-8ヘテロシクリル、Ｃ_5-20アリール及びＣ_5-20ヘテロアリールの基から独立して選択され、そして任意にＮＲ^mＲ^p基に対して、Ｒ^m及びＲ^pは、それらが付着している窒素原子とともに任意に置換された４員、５員、６員または７員のヘテロシクロ環を形成し、
Ｒ¹²、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁹、Ｒ²¹及びＲ¹⁷はそれぞれＲ²²、Ｒ⁶⁶、Ｒ⁹⁹、Ｒ¹¹及びＲ⁷⁷について定義されたとおりであり、
Ｒ”はＣ₃−Ｃ₁₂アルキレン基であり、その鎖は１つ以上のヘテロ原子、例えば、Ｏ、Ｓ、Ｎ（Ｈ）、ＮＭｅによって中断され得、及び／または芳香族環、例えばベンゼンまたはピリジンであり、それらの環は任意に置換され、
Ｘ及びＸ’はＯ、Ｓ及びＮ（Ｈ）から独立して選択され、
Ｒ^Cはキャッピング基である。

【0027】

本発明は、下記の式：

【化23】

で表される、非ペプチド化合物にも関し、
式中、Ｒ₆はＣ₁−Ｃ₁₀アルキレンであり、Ｒ⁴及びＲ⁵はともにＣ₃−Ｃ₇シクロアルキル環を形成する。

【0028】

本発明は、下記の式：

【化24】

で表される、非ペプチド化合物にも関する。

【0029】

本発明は、式：

【化25】

に記載の非ペプチド化合物にも関し、
式中、
Ｓｔｒは抗体に共有結合可能なストレッチャー単位であり、
Ｓｐは薬剤部分に共有結合している任意のスペーサー単位であり、
Ｙはヘテロアリール、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｃ₁−Ｃ₆アルケニル、Ｃ₁−Ｃ₆アルケニルまたは−Ｃ₁−Ｃ₆アルケニル−ＮＨ−であり、
Ｒ¹はＣ₁−Ｃ₁₀アルキル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ₂または（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ₂であり、
Ｒ³及びＲ²はそれぞれ独立してＨ、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、アリールアルキルまたはヘテロアリールアルキルであるか、またはＲ³及びＲ²はともにＣ₃−Ｃ₇シクロアルキルを形成可能であり、
Ｄは式Ａまたは式Ｂ：

【化26】

【化27】

の薬剤部分及びその塩及び溶媒和物であり、式中、
波線はリンカーへの共有結合性の付着部位を示し、
点線はＣ１とＣ２またはＣ２とＣ３の間に二重結合の任意の存在を示し、
Ｒ²²はＨ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ₂、ＣＮ、Ｒ^m、ＯＲ^m、＝ＣＨ−Ｒ^D、＝Ｃ（Ｒ^D）₂、Ｏ−ＳＯ₂−Ｒ^m、ＣＯ₂Ｒ^m及びＣＯＲ^mから独立して選択され、またハロまたはジハロから任意にさらに選択され、そこでＲ^DはＲ^m、ＣＯ₂Ｒ^m、ＣＯＲ^m、ＣＨＯ、ＣＯ₂Ｈ及びハロから独立して選択され、
Ｒ⁶⁶及びＲ⁹⁹はＨ、Ｒ^m、ＯＨ、ＯＲ^m、ＳＨ、ＳＲ^m、ＮＨ₂、ＮＨＲ^m、ＮＲ^mＲ^p、ＮＯ₂、Ｍｅ₃Ｓｎ及びハロから独立して選択され、
Ｒ⁷⁷はＨ、Ｒ^m、ＯＨ、ＯＲ^m、ＳＨ、ＳＲ^m、ＮＨ₂、ＮＨＲ^m、ＮＲ^mＲ^p、ＮＯ₂、Ｍｅ₃Ｓｎ及びハロから独立して選択され、
ＱはＯ、Ｓ及びＮＨから独立して選択され、
Ｒ¹¹はＨまたはＲ^mであるか、あるいはＱがＯである場合、ＳＯ₃Ｍであり、そこでＭは金属カチオンであり、
Ｒ^m及びＲ^pはそれぞれ任意に置換されたＣ_1-8アルキル、Ｃ₂−Ｃ₈アルケニル、Ｃ₂−Ｃ₈アルキニル、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ_3-8ヘテロシクリル、Ｃ_5-20アリール及びＣ_5-20ヘテロアリールの基から独立して選択され、そして任意にＮＲ^mＲ^p基に対して、Ｒ^m及びＲ^pは、それらが付着している窒素原子とともに任意に置換された４員、５員、６員または７員のヘテロシクロ環を形成し、
Ｒ¹²、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁹、Ｒ²¹及びＲ¹⁷はそれぞれＲ²²、Ｒ⁶⁶、Ｒ⁹⁹、Ｒ¹¹及びＲ⁷⁷について定義されたとおりであり、
Ｒ”はＣ₃−Ｃ₁₂アルキレン基であり、その鎖は１つ以上のヘテロ原子、例えば、Ｏ、Ｓ、Ｎ（Ｈ）、ＮＭｅによって中断され得、及び／または芳香族環、例えばベンゼンまたはピリジンであり、それらの環は任意に置換され、
Ｘ及びＸ’はＯ、Ｓ及びＮ（Ｈ）から独立して選択され、
Ｒ^Cはキャッピング基である。

【0030】

本発明は、下記の式：

【化28】

で表され、
式中、Ｒ₆はＣ₁−Ｃ₁₀アルキレンである、非ペプチド化合物にも関する。

【0031】

本発明は、下記の式：

【化29】

で表される、非ペプチド化合物にも関する。

【0032】

本発明は、
Ｓｔｒが下記の式：

【化30】

を有し、
式中、Ｒ⁶はＣ₁−Ｃ₁₀アルキレン、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｏ−（Ｃ₁−Ｃ₈アルキレン）及びＣ₁−Ｃ₁₀アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^a）−Ｃ₂−Ｃ₆アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンはハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオアリール、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₄−Ｃ₇ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールアルキル及びヘテロアリールからなる群から選択される１〜５の置換基に置換されてもよく、各Ｒ^aは独立してＨまたはＣ₁−Ｃ₆アルキルであり、
Ｓｐが、−Ａｒ−Ｒ^b−であって、式中、Ａｒはアリールまたはヘテロアリールであり、Ｒ^bは（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキレン）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−である、
上記いずれか１つの非ペプチド化合物にも関する。

【0033】

本発明は、Ｒ⁶がＣ₁−Ｃ₁₀アルキレンであり、Ｓｐが、−Ａｒ−Ｒ^b−であって、式中、Ａｒはアリールであり、Ｒ^bは（Ｃ₁−Ｃ₆アルキレン）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−である、非ペプチド化合物にも関する。

【0034】

本発明は、Ｒ₆が−（ＣＨ₂）_qで、１〜１０である、非ペプチド化合物にも関する。

【0035】

本発明は、
Ｓｔｒが式：

【化31】

を有し、
式中、Ｒ⁷はＣ₁−Ｃ₁₀アルキレン、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキレン−Ｏ、Ｎ（Ｒ^c）−（Ｃ₂−Ｃ₆アルキレン）−Ｎ（Ｒ^c）及びＮ（Ｒ^c）−（Ｃ₂−Ｃ₆アルキレン）からなる群から選択され、各Ｒ^cは独立してＨまたはＣ₁−Ｃ₆アルキルであり、
Ｓｐが、−Ａｒ−Ｒ^b−であって、式中、Ａｒはアリールまたはヘテロアリールであり、Ｒ^bは（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキレン）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−である、
非ペプチド化合物にも関する。

【0036】

本発明は、Ｒ⁶がＣ₁−Ｃ₁₀アルキレンであり、Ｓｐが、−Ａｒ−Ｒ^b−であって、式中、Ａｒはアリールであり、Ｒ^bは（Ｃ₁−Ｃ₆アルキレン）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−である、非ペプチド化合物にも関する。

【0037】

ＰＭ
上記の通り、ＰＭは、

【化32】

からなる群から選択される、非ペプチド化学部分である。

【0038】

ＰＭ１、ＰＭ２及びＰＭ３のそれぞれにおいて、Ｒ¹は独立してＣ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ₂または（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ₂である。幾つかの実施形態において、Ｒ¹はＣ₁−Ｃ₆アルキル、（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ₂または（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ₂である。幾つかの実施形態において、Ｒ¹はＣ₃Ｈ₆ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ₂である。
ＰＭ１において、Ｗは−ＮＨ−ヘテロシクロアルキル−またはヘテロシクロアルキルである。幾つかの実施形態において、

【0039】

ＰＭ２において、Ｙはヘテロアリール、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｃ₁−Ｃ₆アルキレン、Ｃ₁−Ｃ₆アルケニル、Ｃ₁−Ｃ₆アルキレニルまたは−Ｃ₁−Ｃ₆アルキレン−ＮＨ−である。幾つかの実施形態において、Ｙはヘテロアリールである。これらの実施形態の幾つかにおいて、Ｙは

【化33】

である。

【0040】

別の実施形態において、ＹはＣ₁−Ｃ₆アルキレニルである。これらの実施形態に幾つかにおいて、Ｙは

【化34】

である。

【0041】

ＰＭ２において、Ｒ³及びＲ²はそれぞれ独立してＨ、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、アリールアルキルまたはヘテロアリールアルキルであるか、またはＲ³及びＲ²はともにＣ₃−Ｃ₇シクロアルキルを形成してもよい（付着の炭素原子と）。幾つかの実施形態において、Ｒ²及びＲ³は独立してＨまたはＣ₁−₁₀アルキルである。それらの実施形態の１つにおいては、Ｒ²はＨであり、Ｒ³はイソプロピルである。

【0042】

ＰＭ３において、Ｒ⁴及びＲ⁵はそれぞれ独立してＣ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）ＯＣＨ₂−であるか、またはＲ⁴及びＲ⁵はＣ₃−Ｃ₇シクロアルキル環を形成してもよい（付着の炭素原子と）。具体的にそれらは、シクロブチル基を形成してもよく、そこでＰＭ３は

【化35】

である。

【0043】

幾つかの実施形態において、ＰＭ基は

【化36】

であってもよい。

【0044】

Ｓｔｒ
上記の通りにＳｔｒはＡｂに共有結合しているストレッチャー単位である。

【0045】

幾つかの実施形態において、Ｓｔｒは下記の式：

【化37】

で表される化学部分であり、
式中、Ｒ⁶はＣ₁−Ｃ₁₀アルキレン、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、（Ｃ₁−Ｃ₈アルキレン）Ｏ−及びＣ₁−Ｃ₁₀アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^a）−Ｃ₂−Ｃ₆アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンはハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオアリール、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₄−Ｃ₇ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールアルキル及びヘテロアリールからなる群から選択される１〜５の置換基に置換されてもよく、各Ｒ^aは独立してＨまたはＣ₁−Ｃ₆アルキルであり、
Ｓｐは、−Ａｒ−Ｒ^b−であって、式中、Ａｒはアリールまたはヘテロアリールであり、Ｒ^bは（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキレン）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−である。

【0046】

これらの実施形態の幾つかにおいて、Ｒ⁶はＣ₁−Ｃ₁₀アルキレン及びＣ₁−Ｃ₁₀アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^a）−Ｃ₂−Ｃ₆アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンはハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオアリール、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₄−Ｃ₇ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールアルキル及びヘテロアリールからなる群から選択される１〜５の置換基に置換されてもよく、各Ｒ^aは独立してＨまたはＣ₁−Ｃ₆アルキルである。

【0047】

これらの実施形態の幾つかにおいて、Ｒ⁶はＣ₁−Ｃ₁₀アルキレン、Ｃ_1-6アルキレンである。特定の実施形態において、Ｒ⁶はＣ₅アルキレンである。

【0048】

幾つかの実施形態においてＳｔｒは、式：

【化38】

を有し、
式中、Ｒ⁷はＣ₁−Ｃ₁₀アルキレン、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキレン）Ｏ−、Ｎ（Ｒ^c）−（Ｃ₂−Ｃ₆アルキレン）−Ｎ（Ｒ^c）及びＮ（Ｒ^c）−（Ｃ₂−Ｃ₆アルキレン）から選択され、各Ｒ^cは独立してＨまたはＣ₁−Ｃ₆アルキルである。

【0049】

これらの実施形態の幾つかにおいて、Ｒ⁷はＣ₁−Ｃ₁₀アルキレン、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキレン）Ｏ−、Ｎ（Ｒ^c）−（Ｃ₂−Ｃ₆アルキレン）−Ｎ（Ｒ^c）及びＮ（Ｒ^c）−（Ｃ₂−Ｃ₆アルキレン）から選択され、各Ｒ^cは独立してＨまたはＣ₁−Ｃ₆アルキルである。

【0050】

Ｓｐ
Ｓｐは薬剤部分に共有結合している結合またはスペーサー単位である。

【0051】

幾つかの実施形態において、Ｓｐは、−Ａｒ−Ｒ^b−であって、式中、Ａｒはアリールまたはヘテロアリールであり、Ｒ^bは（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキレン）ＯＣ（＝Ｏ）−である。これらの実施形態の幾つかにおいて、Ｒ^bは（Ｃ₁−Ｃ₃アルキレン）ＯＣ（＝Ｏ）−である。さらにこれらの実施形態の幾つかにおいて、Ｒ^bは−ＣＨ₂−ＯＣ（＝Ｏ）−である。幾つかの実施形態において、Ａｒはフェニレンであり、

【化39】

であってもよい。したがって、Ｓｐは

【化40】

であってもよい。

【0052】

Ｓｔｒ、ＰＭ、Ｓｐ
幾つかの実施形態において、−Ｓｔｒ−ＰＭ−Ｓｐ−は

【化41】

から選択される。

【0053】

Ｒ^C
Ｒ^C基はＰＢＤ部分のＮ１０位から取り外し、Ｎ１０−Ｃ１１のイミン結合、カルビノールアミン、置換カルビノールアミン、ＱＲ¹¹がＯＳＯ₃Ｍである場合に重亜硫酸塩の付加物、チオカルビノールアミン、置換チオカルビノールアミン、または置換カルビナルアミンを残してもよい。

【0054】

一実施形態において、Ｒ^Cは取り外し、Ｎ１０−Ｃ１１のイミン結合、カルビノールアミン、置換カルビノールアミン、ＱＲ²¹がＯＳＯ₃Ｍである場合に重亜硫酸塩の付加物を残す保護基であってもよい。一実施形態において、Ｒ^Cは取り外し、 Ｎ１０−Ｃ１１のイミン結合を残す保護基である。

【0055】

Ｒ^c基は、例えばＮ１０−Ｃ１１のイミン結合、カルビノールアミン等を得るために、ペプチド模倣薬リンカーの劈開に必要となる条件と同様な条件下で取り外せることが意図される。キャッピング基は、意図されたＮ１０位における官能基のための保護基として作用する。キャッピング基は抗体に対して反応性が無いため、例えばＲ^CはＳｔｒ−（ＰＭ）−Ｓｐ−ではない。

【0056】

キャッピング基は、国際公開第００／１２５０７に定義される通りの、治療的に取り外せる窒素保護基として言及され得、その定義は参照することにより本明細書に組み込まれる。

【0057】

一実施形態において、Ｒ^C基はペプチド模倣薬基ＰＭを劈開する条件下で取り外せる。したがって、一実施形態において、キャッピング基は酵素の作用により劈開可能である。

【0058】

キャッピング基はＮ１０−Ｃ１１のイミン結合に対するマスクとして使用してもよい。キャッピング基は、化合物においてイミン官能基が必要となるなどの時点で取り外してもよい。キャッピング基は、上記の通りにカルビノールアミン、置換カルビノールアミン、重亜硫酸塩付加物のマスクでもある。

【0059】

一実施形態において、Ｒ^Cはカルバメート保護基である。

【0060】

一実施形態において、カルバメート保護基はＡｌｌｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ、Ｔｒｏｃ及びＴｅｏｃから選択される。

【0061】

一実施形態において、Ｒ^Cは抗体への接続用の官能基基を欠くリンカー基Ｓｔｒ−（ＰＭ）−Ｓｐ−から得られる。

【0062】

本出願は特にカルバメートであるＲ^C基に関する。

【0063】

一実施形態において、Ｒ^Cは

【化42】

の基であり、
式中、アスタリスクはＮ１０位への付着箇所を示し、Ｇ²は末端基であり、Ｌ³は共有結合または劈開可能なリンカーＬ¹であり、Ｌ²は共有結合であるか、またはＯＣ（＝Ｏ）とともに自壊性リンカーを形成する。あるいは、Ｌ³はＰＭであってもよく、Ｌ²とＯＣ（＝Ｏ）とともにＳｐを形成してもよい。

【0064】

Ｌ³及びＬ²の両方が共有結合である場合、Ｇ²及びＯＣ（＝Ｏ）は上記の通りに、ともにカルバメート保護基を形成する。

【0065】

Ｌ¹は、好ましくは劈開可能なリンカーであり、劈開のためのリンカーの活性化のトリガーと呼ばれることがある。

【0066】

存在する場合は、Ｌ¹及びＬ²の性質が広く異なり得る。これらの基は劈開特徴に基づいて選択され、複合体が送達される部位での条件に左右され得る。酵素作用により劈開されるリンカーが望ましいが、ｐＨ（例えば酸または塩基不安定）、温度の変化または放射（例えば感光性）により劈開可能であるリンカーも使用可能である。還元または酸化条件下で劈開可能なリンカーも本発明に有用であることがある。

【0067】

Ｌ¹はアミノ酸の連続配列を含んでもよい。アミノ酸配列は酵素的劈開の標的基質であってもよく、それによってＮ１０位からＲ¹⁰の解放が可能になる。

【0068】

一実施形態において、Ｌ¹は酵素作用により劈開可能である。一実施形態において、酵素はエステラーゼまたはペプチダーゼである。

【0069】

一実施形態において、Ｌ²は存在し、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−とともに自壊性リンカーを形成する。一実施形態において、Ｌ²は酵素作用の基質であり、それによってＮ１０位からＲ¹⁰の解放が可能になる。

【0070】

一実施形態において、Ｌ¹が酵素作用により劈開可能であり、Ｌ²が存在し、酵素はＬ¹及びＬ²の間の結合を劈開する。

【0071】

存在する場合、Ｌ¹及びＬ²は
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−及び
−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ−
から選択される結合により接続されてもよい。

【0072】

Ｌ²に接続するＬ¹のアミノ基はアミノ酸の第Ｎ末端であるか、またはアミノ側鎖、例えばリジンのアミノ酸側鎖のアミノ基から得られてもよい。

【0073】

Ｌ²に接続するＬ¹のカルボキシル基はアミノ酸の第Ｃ末端であるか、またはアミノ側鎖、例えばグルタミン酸のアミノ酸側鎖のカルボキシル基から得られてもよい。

【0074】

Ｌ²に接続するＬ¹のヒドロキシル基はアミノ側鎖、例えばセリンのアミノ酸側鎖のヒドロコシル基から得られてもよい。

【0075】

「アミノ酸側鎖」という用語は、（ｉ）天然アミノ酸、例えばアラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン及びバリン、（ｉｉ）非主要アミノ酸、例えばオルニチン及びシトルリン、（ｉｉｉ）非天然アミノ酸、β−アミノ酸、合成類似体及び天然アミノ酸の誘導体及び（ｉｖ）それらのすべてのエナンチオマー、ジアステレオマー、異性体濃縮、同位体ラベル（例えば²Ｈ、³Ｈ、¹⁴Ｃ、¹⁵Ｎ）の保護形態及びそのラセミ混合物に見出される基を含む。

【0076】

一実施形態において、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−及びＬ²はともに基：

【化43】

の基を形成し、
式中、アスタリスクはＮ１０位への付着箇所を示し、波線はリンカーＬ¹への付着箇所を示し、Ｙは−Ｎ（Ｈ）−、−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）−または−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−であり、ｎは０〜３である。フェニレン環は本明細書に記載されるように、１つ、２つまたは３つの置換基により任意に置換される。一実施形態において、フェニレン基はハロ、ＮＯ₂、ＲまたはＯＲにより任意に置換される。

【0077】

一実施形態において、ＹはＮＨである。一実施形態において、ｎは０または１である。好ましくは、ｎは０である。

【0078】

ＹがＮＨであり、ｎが０である場合、自壊性リンカーはｐ−アミノベンジルカルボニルリンカー（ＰＡＢＣ）と呼ばれてもよい。

【0079】

自壊性リンカーは、遠隔部位が活性化される際に保護された化合物の放出を可能にし、下記のように作用し（ｎ＝０の場合）：

【化44】

ここで、Ｌ^*はリンカーの残る部分の活性化形態である。これらの基は活性化部位を保護された化合物から分離する利点を有する。上記の通りに、フェニレン基は任意に置換されてもよい。

【0080】

本明細書に記載される一実施形態において、Ｌ^*基は本明細書に記載のリンカーＬ¹であり、ジペプチド基を含む。

【0081】

別の実施形態においては、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−及びＬ²はともに

【化45】

から選択される基を形成し、
式中、アスタリスク、波線、Ｙ及びｎは上記の定義通りである。各フェニレン環は本明細書に記載されるように、１つ、２つまたは３つの置換基により任意に置換される。一実施形態において、置換基Ｙを有するフェニレン環は任意に置換され、Ｙ置換基Ｙのないフェニレン環は未置換である。一実施形態において、置換基Ｙを有するフェニレン環は未置換であり、Ｙ置換基Ｙのないフェニレン環は任意に置換される。

【0082】

別の実施形態において、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−及びＬ²はともに

【化46】

から選択される基を形成し、
式中、アスタリスク、波線、Ｙ及びｎは上記の定義通りであり、ＥはＯ、ＳまたはＮＲであり、ＤはＮ、ＣＨ、またはＣＲであり、ＦはＮ、ＣＨ、またはＣＲである。

【0083】

一実施形態において、ＤはＮである。一実施形態において、ＤはＣＨである。一実施形態において、ＥはＯまたはＳである。一実施形態において、ＦはＣＨである。

【0084】

好適な実施形態において、リンカーはカテプシン不安定リンカーである。

【0085】

一実施形態において、Ｌ¹はジペプチドを含む。ジペプチドは、−ＮＨ−Ｘ₁−Ｘ₂−ＣＯ−として表されてもよく、式中、−ＮＨ−及び−ＣＯ−はアミノ酸基Ｘ₁及びＸ₂のそれぞれのＮ−及びＣ−末端を表す。ジペプチド内のアミノ酸は天然アミノ酸のいかなる組み合わせであってもよい。リンカーがカテプシン不安定リンカーである場合、ジペプチドはカテプシン仲介劈開の作用部位であり得る。

【0086】

さらに、カルボキシルまたはアミノ側鎖の官能基を有するアミノ酸の基、例えばＧｌｕ及びＬｙｓのそれぞれに関して、ＣＯ及びＮＨはその側鎖の官能基を表し得る。

【0087】

一実施形態において、ジペプチド−ＮＨ−Ｘ₁−Ｘ₂−ＣＯ−における−Ｘ₁−Ｘ₂−基は
−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ａｌａ−、
−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、
−Ａｌａ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−、
−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−、
−Ｌｅｕ−Ｃｉｔ−、
−Ｉｌｅ−Ｃｉｔ−、
−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−、
−Ｔｒｐ−Ｃｉｔ−
から選択され、Ｃｉｔはシトルリンである。

【0088】

好ましくは、ジペプチド−ＮＨ−Ｘ₁−Ｘ₂−ＣＯ−における−Ｘ₁−Ｘ₂−基は
−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ａｌａ−、
−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、
−Ａｌａ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−
から選択される。

【0089】

最も好ましくは、ジペプチド−ＮＨ−Ｘ₁−Ｘ₂−ＣＯ−における−Ｘ₁−Ｘ₂−基は、−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−または−Ｖａｌ−Ａｌａ−である。

【0090】

他のジペプチドの組み合わせを使用してもよく、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００２、１３，８５５−８６９に記載の物を含み、当該文献は、参照することによって本明細書に組み込まれる。

【0091】

一実施形態において、アミノ酸側鎖は、適切な場合に誘導体化されてもよい。例えばアミノ酸側鎖のアミノ基またはカルボキシ基は誘導体化されてもよい。一実施形態において、側鎖アミノ酸、例えばリジンのアミノ基ＮＨ₂は、ＮＨＲ及びＮＲＲ’からなる群から選択される誘導体化の形態である。一実施形態において、側鎖アミノ酸、例えばアスパラギン酸のカルボキシ基ＣＯＯＨは、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＮＨＲ及びＣＯＮＲＲ’からなる群から選択される誘導体化の形態である。

【0092】

一実施形態において、アミノ酸側鎖は、適切な場合に化学的に保護される。側鎖保護基は、下記に記載されるように基Ｒ^Lに対する基であってもよい。本発明の発明者は保護アミノ酸配列が酵素により劈開可能であることを証明した。例えば、Ｂｏｃ側鎖保護のＬｙｓ残基を含むジペプチド配列がカテプシンにより劈開可能であることを証明した。

【0093】

アミノ酸側鎖用のアミノ酸保護基側鎖は既知であり、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ Ｃａｔａｌｏｇに記載されている。さらなる保護基の戦略はＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ 有機 Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｇｒｅｅｎｅ及びＷｕｔｓに記載されている。

【0094】

反応性側鎖機能性を有するアミノ酸に対する、可能性のある側鎖保護基を以下に示す。
Ａｒｇ：Ｚ、Ｍｔｒ、Ｔｏｓ；
Ａｓｎ：Ｔｒｔ、Ｘａｎ；
Ａｓｐ：Ｂｚｌ、ｔ−Ｂｕ；
Ｃｙｓ：Ａｃｍ、Ｂｚｌ、Ｂｚｌ−ＯＭｅ、Ｂｚｌ−Ｍｅ、Ｔｒｔ；
Ｇｌｕ：Ｂｚｌ、ｔ−Ｂｕ；
Ｇｌｎ：Ｔｒｔ、Ｘａｎ；
Ｈｉｓ：Ｂｏｃ、Ｄｎｐ、Ｔｏｓ、Ｔｒｔ；
Ｌｙｓ：Ｂｏｃ、Ｚ−Ｃｌ、Ｆｍｏｃ、Ｚ、Ａｌｌｏｃ；
Ｓｅｒ：Ｂｚｌ、ＴＢＤＭＳ、ＴＢＤＰＳ；
Ｔｈｒ：Ｂｚ；
Ｔｒｐ：Ｂｏｃ；
Ｔｙｒ：Ｂｚｌ、Ｚ、Ｚ−Ｂｒ。

【0095】

一実施形態において、側鎖保護は、キャッピング基が存在する場合にそのキャッピング基として、またはその一部として、提供される基に直交するように選択される。したがって、側鎖保護基を取り外すことは、キャッピング基またはキャッピング基の一部であるいかなる保護基官能基も取り外すことにはならない。

【0096】

本発明の別の実施形態において、選択されるアミノ酸は反応性側鎖官能基のないものである。例えば、アミノ酸はＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ及びＶａｌから選択されてもよい。一実施形態において、ジペプチドは自壊性リンカーと組み合わせて使用される。自壊性リンカーは−Ｘ₂−に接続してもよい。

【0097】

自壊性リンカーが存在する場合、−Ｘ₂−は直接に自壊性リンカーに接続される。好ましくは、−Ｘ₂−ＣＯ−基はＹに接続され、ＹはＮＨであり、それによって−Ｘ₂−ＣＯ−ＮＨ−基を形成する。

【0098】

−ＮＨ−Ｘ₁−は直接にＡに接続される。Ａは−ＣＯ−官能基を含み、それによって−Ｘ₁−とアミド結合を形成する。

【0099】

一実施形態において、Ｌ¹及びＬ²は−ＯＣ（＝Ｏ）−とともにＮＨ−Ｘ₁−Ｘ₂−ＣＯ−ＰＡＢＣ−基を形成する。ＰＡＢＣ基はＮ１０位に直接に接続されている。好ましくは自壊性リンカー及びジペプチドはともに下に示される−ＮＨ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＣＯ−ＮＨ−ＰＡＢＣ−基：

【化47】

を形成し、
式中、アスタリスクはＮ１０位への付着箇所を示し、波線はリンカーＬ¹の残る部分への付着箇所またはＡへの付着箇所を示す。好ましくは、波線はＡへの付着箇所を示す。Ｌｙｓアミノ酸の側鎖は、上記の通りに、例えばＢｏｃ、Ｆｍｏｃ、またはＡｌｌｏｃにより保護されてもよい。

【0100】

あるいは、自壊性リンカー及びジペプチドはともに、以下に示される−ＮＨ−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＣＯ−ＮＨ−ＰＡＢＣ−基：

【化48】

形成し、
式中、アスタリスク及び波線は上に定義されるとおりである。

【0101】

あるいは、自壊性リンカー及びジペプチドはともに、以下に示される−ＮＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＣＯ−ＮＨ−ＰＡＢＣ−基：

【化49】

を形成し、
式中、アスタリスク及び波線は上に定義されるとおりである。

【0102】

以下、既知の保護基に基づくものを含めて様々な末端基が記載される。

【0103】

一実施形態において、Ｌ³は劈開可能なリンカーＬ¹であり、Ｌ²はＯＣ（＝Ｏ）とともに、自壊性リンカーを形成する。本実施形態においては、Ｇ²はＡｃ（アセチル）またはＭｏｃ、あるいは、Ａｌｌｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ、Ｔｒｏｃ、Ｔｅｏｃ、Ｐｓｅｃ、Ｃｂｚ及びＰＮＺから選択されるカルバメート保護基である。任意に、カルバメート保護基はさらにＭｏｃから選択される。

【0104】

別の実施形態において、Ｇ²はアシル基−Ｃ（＝Ｏ）Ｇ³であり、Ｇ³はアルキル（シクロアルキル、アルケニル及びアルキニルを含む）、ヘテロアルキル、ヘテロシクリル及びアリール（ヘテロアリール及びカルボアリールを含む）から選択される。これらの基は、任意に置換されてもよい。アシル基はＬ³またはＬ²のアミノ基とともに、適切な場合にアミド結合を形成してもよい。アシル基はＬ³またはＬ²のヒドロキシ基とともに、適切な場合にエステル結合を形成してもよい。

【0105】

一実施形態において、Ｇ³はヘテロアルキルである。ヘテロアルキル基はポリエチレングリコールを含んでもよい。ヘテロアルキル基はアシル基に隣接するヘテロ原子、例えばＯまたはＮを有し、それによって、適切な場合に、カルバメートまたはカルボネート基を形成し、適切な場合に、ヘテロ原子がＬ³またはＬ²の基に存在する。

【0106】

一実施形態において、Ｇ³はＮＨ₂、ＮＨＲ及びＮＲＲ’から選択される。好ましくは、Ｇ³はＮＲＲ’である。

【0107】

一実施形態においてＧ²は基：

【化50】

【0108】

であり、
式中、アスタリスクはＬ³への付着箇所を示し、ｎは０〜６であり、Ｇ⁴はＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲＲ’、ＮＨ₂、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ₂及びハロから選択される。ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ₂及びＮＨＲの基は保護される。一実施形態において、ｎは１〜６であり、好ましくはｎは５である。一実施形態において、Ｇ⁴はＯＲ、ＳＲ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲＲ’及びＮＲＲ’である。一実施形態において、Ｇ⁴はＯＲ、ＳＲ及びＮＲＲ’である。好ましくは、Ｇ⁴はＯＲ及びＮＲＲ’から選択され、最も好ましくはＧ⁴はＯＲである。最も好ましくはＧ⁴はＯＭｅである。

【0109】

一実施形態において、Ｇ²基は

【化51】

であり、
式中、アスタリスクはＬ³への付着箇所を示し、ｎ及びＧ⁴は上に定義されるとおりである。

【0110】

一実施形態において、Ｇ²基は

【化52】

であり、
式中、アスタリスクはＬ³への付着箇所を示し、ｎは０または１であり、ｍは０〜５０であり、Ｇ⁴はＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲＲ’、ＮＨ₂、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ₂及びハロから選択される。好適な実施形態において、ｎは１であり、ｍは０〜１０、１〜２、好ましくは４〜８、最も好ましくは４または８である。別の実施形態において、ｎは１であり、ｍは１０〜５０、好ましくは２０〜４０である。ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ₂及びＮＨＲ基が保護されている。一実施形態において、Ｇ⁴はＯＲ、ＳＲ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲＲ’及びＮＲＲ’である。一実施形態において、Ｇ⁴はＯＲ、ＳＲ及びＮＲＲ’である。好ましくは、Ｇ⁴はＯＲ及びＮＲＲ’から選択され、最も好ましくはＧ⁴はＯＲである。好ましくはＧ⁴はＯＭｅである。

【0111】

一実施形態において、Ｇ²基は

【化53】

であり、
式中、アスタリスクはＬ³への付着箇所を示し、ｎ、ｍ及びＧ⁴は上に定義されるとおりである。

【0112】

一実施形態において、Ｇ²基は

【化54】

であり、
式中、ｎは１〜２０であり、
ｍは０〜６であり、Ｇ⁴はＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲＲ’、ＮＨ₂、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ₂及びハロから選択される。一実施形態において、ｎは１〜１０である。別の実施形態において、ｎは１０〜５０、好ましくは２０〜４０である。一実施形態において、ｎは１である。一実施形態において、ｍは１である。ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ₂及びＮＨＲ基が保護されている。一実施形態において、Ｇ⁴はＯＲ、ＳＲ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲＲ’及びＮＲＲ’である。一実施形態において、Ｇ⁴はＯＲ、ＳＲ及びＮＲＲ’である。好ましくは、Ｇ⁴はＯＲ及びＮＲＲ’から選択され、最も好ましくはＧ⁴はＯＲである。好ましくはＧ⁴はＯＭｅである。

【0113】

一実施形態において、Ｇ²基は

【化55】

であり、
式中、
アスタリスクはＬ³への付着箇所を示し、ｎ、ｍ及びＧ⁴は上に定義されるとおりである。

【0114】

上記それぞれの実施形態において、Ｇ⁴はＯＨ、ＳＨ、ＮＨ₂及びＮＨＲであってもよい。これらの基は好ましくは保護されている。一実施形態において、ＯＨはＢｚｌ、ＴＢＤＭＳまたはＴＢＤＰＳにより保護される。一実施形態において、ＳＨはＡｃｍ、Ｂｚｌ、Ｂｚｌ−ＯＭｅ、Ｂｚｌ−ＭｅまたはＴｒｔにより保護される。一実施形態において、ＮＨ₂またはＮＨＲはＢｏｃ、Ｍｏｃ、Ｚ−Ｃｌ、Ｆｍｏｃ、Ｚ、またはＡｌｌｏｃにより保護される。

【0115】

一実施形態において、Ｇ²基はＬ³基との組み合わせで存在し、その基はジペプチドである。

【0116】

キャッピング基は細胞結合剤との接続のために意図されない。したがって、二量体に存在する他のモノマーは、リンカーを介した細胞結合剤への接続箇所として働く。よって、キャッピング基に存在する官能基は、細胞結合剤との反応に利用不可能であることが好ましい。したがって、反応的性官能基、例えばＯＨ、ＳＨ、ＮＨ₂、ＣＯＯＨを、好ましくは回避する。しかし、上記の通りに、そのような機能性は、保護される場合にキャッピング基に存在してもよい。

【0117】

本発明の幾つかの実施形態において、Ｄは式Ａ

【化56】

の薬剤部分及び塩及びその溶媒和物であり、式中、
波線はリンカーへの共有結合性の付着部位を示し、
点線はＣ１とＣ２またはＣ２とＣ３の間に二重結合の任意の存在を示し、
Ｒ²²はＨ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ₂、ＣＮ、Ｒ^m、ＯＲ^m、＝ＣＨ−Ｒ^D、＝Ｃ（Ｒ^D）₂、Ｏ−ＳＯ₂−Ｒ^m、ＣＯ₂Ｒ^m及びＣＯＲ^mから独立して選択され、またハロまたはジハロから任意にさらに選択され、そこでＲ^DはＲ^m、ＣＯ₂Ｒ^m、ＣＯＲ^m、ＣＨＯ、ＣＯ₂Ｈ及びハロから独立して選択され、
Ｒ⁶⁶及びＲ⁹⁹はＨ、Ｒ^m、ＯＨ、ＯＲ^m、ＳＨ、ＳＲ^m、ＮＨ₂、ＮＨＲ^m、ＮＲ^mＲ^p、ＮＯ₂、Ｍｅ₃Ｓｎ及びハロから独立して選択され、
Ｒ⁷⁷はＨ、Ｒ^m、ＯＨ、ＯＲ^m、ＳＨ、ＳＲ^m、ＮＨ₂、ＮＨＲ^m、ＮＲ^mＲ^p、ＮＯ₂、Ｍｅ₃Ｓｎ及びハロから独立して選択され、
ＱはＯ、Ｓ及びＮＨから独立して選択され、
Ｒ¹¹はＨまたはＲ^mであるか、あるいはＱがＯである場合、ＳＯ₃Ｍであり、そこでＭは金属カチオンであり、
Ｒ^m及びＲ^pはそれぞれ任意に置換されたＣ_1-8アルキル、Ｃ_3-8ヘテロシクリル及びＣ_5-20アリール基から独立して選択され、そして任意にＮＲ^mＲ^p基に対して、Ｒ^m及びＲ^pは、それらが付着している窒素原子とともに任意に置換された４員、５員、６員または７員のヘテロシクロ環を形成し、
Ｒ¹²、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁹、及びＲ¹⁷はそれぞれＲ²²、Ｒ⁶⁶、Ｒ⁹⁹、Ｒ⁷⁷及びＲ⁷⁷について定義されたとおりであり、
Ｒ”はＣ₃−Ｃ₁₂アルキレン基であり、その鎖は１つ以上のヘテロ原子、例えば、Ｏ、Ｓ、Ｎ（Ｈ）、ＮＭｅによって中断され得、及び／または芳香族環、例えばベンゼンまたはピリジンであり、それらの環は任意に置換され、
Ｘ及びＸ’はＯ、Ｓ及びＮ（Ｈ）から独立して選択される。

【0118】

本発明はｐが２である、上記の抗体−薬剤複合体のいずれか１つにも関する。

【0119】

本発明は、抗体が、以下からなる群から選択される１つ以上のポリペプチドに結合する、上記いずれか１つの抗体−薬剤複合体にも関する：
ＢＭＰＲ１Ｂ、
Ｅ１６、
ＳＴＥＡＰ１、
０７７２Ｐ、
ＭＰＦ、
Ｎａｐｉ３ｂ、
Ｓｅｍａ５ｂ、
ＰＳＣＡｈｌｇ、
ＥＴＢＲ、
ＭＳＧ７８３、
ＳＴＥＡＰ２、
ＴｒｐＭ４、
ＣＲＩＰＴＯ、
ＣＤ２１、
ＣＤ７９ｂ、
ＦｃＲＨ２、
ＨＥＲ２、
ＮＣＡ、
ＭＤＰ、
ＩＬ２０Ｒα、
ブレビカン、
ＥｐｈＢ２Ｒ、
ＡＳＬＧ６５９、
ＰＳＣＡ、
ＧＥＤＡ、
ＢＡＦＦ−Ｒ、
ＣＤ２２、
ＣＤ７９ａ、
ＣＸＣＲ５、
ＨＬＡ−ＤＯＢ、
Ｐ２Ｘ５、
ＣＤ７２、
ＬＹ６４、
ＦｃＲＨ１、
ＩＲＴＡ２、
ＴＥＮＢ２、
ＰＭＥＬ１７、
ＴＭＥＦＦ１、
ＧＤＮＦ−Ｒａ１、
Ｌｙ６Ｅ、
ＴＭＥＭ４６、
Ｌｙ６Ｇ６Ｄ、
ＬＧＲ５、
ＲＥＴ、
ＬＹ６Ｋ、
ＧＰＲ１９、
ＧＰＲ５４、
ＡＳＰＨＤ１、
チロシナーゼ、
ＴＭＥＭ１１８、
ＧＰＲ１７２Ａ、
ＭＵＣ１６及び
ＣＤ３３。

【0120】

本発明は、疾患を治療することを、それを必要とするヒトにおいて行う方法にも関し、当該方法は、請求項１に記載の抗体−薬剤複合体の有効な投与量を当該ヒトにに投与することを含む。

【0121】

本発明は請求項１に記載の化合物及びそれに対する薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物にも関する。

【0122】

本発明は、抗体が、以下からなる群から選択される１つ以上のポリペプチドに結合する、上記いずれか１つの抗体−薬剤複合体にも関する：
ＳＴＥＡＰ１、
Ｎａｐｉ３ｂ、
ＳＴＥＡＰ２、
ＴｒｐＭ４、
ＣＲＩＰＴＯ、
ＣＤ２１、
ＣＤ７９ｂ、
ＦｃＲＨ２、
ＨＥＲ２、
ＣＤ２２、
ＣＤ７９ａ、
ＣＤ７２、
ＬＹ６４、
Ｌｙ６Ｅ、
ＭＵＣ１６及び
ＣＤ３３。

【0123】

本発明は抗体がＣＤ３３に結合する、上記いずれか１つの抗体−薬剤複合体にも関する。

【0124】

本発明は、抗体がＣＤ３３に結合し、抗ＣＤ３３抗体が、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、上記いずれか１つの抗体−薬剤複合体にも関する。

【0125】

本発明は、抗体がＣＤ３３に結合し、抗ＣＤ３３抗体が、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む、
上記いずれか１つの抗体−薬剤複合体にも関する。

【0126】

幾つかの実施形態において、抗体−薬剤複合体の抗体はＣＤ３３と結合する。幾つかの実施形態において、抗体−薬剤複合体の抗体は、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２及び（ｆ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。

【0127】

幾つかの実施形態において、抗体は上記のいずれかの実施形態に記載のＶＨ及び上記のいずれかの実施形態に記載のＶＬを含む。一実施形態において、抗体は配列番号２５及び配列番号２６のそれぞれに記載のＶＬを含み、それらの配列の翻訳後の変更を含む。

【0128】

本発明は抗体がＮａＰｉ３ｂに結合する、上記抗体−薬剤複合体のいずれか１つにも関する。

【0129】

本発明は、抗体がＮａＰｉ３ｂに結合し、ＮａＰｉ３ｂ抗体は配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、上記抗体−薬剤複合体のいずれか１つにも関する。

【0130】

本発明は、抗体がＮａＰｉ３ｂに結合し、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む、上記いずれか１つの抗体−薬剤複合体にも関する。

【0131】

本発明は、抗体がＮａＰｉ３ｂに結合し、ＮａＰｉ３ｂ抗体は配列番号９のアミノ酸配列及び配列番号１０のアミノ酸配列を含む、上記いずれか１つの抗体−薬剤複合体にも関する。

【0132】

定義
特に明記しない限り、本明細書に使用される場合、以下の語及び表現は以下の意味を有することが意図される：商品名が本明細書で使用される場合、出願人は、その商品名製品の製剤、そのジェネリック薬剤、及びその商品名製品の活性医薬品成分を独立して含むことを意図する。

【0133】

「ペプチド模倣の」という用語または「ＰＭ」は、本明細書に使用される場合、非−ペプチド化学部分を指す。ペプチドは、１つのアミノ酸のカルボキシル基が別のアミノ基と反応するとき、化学共有結合によって形成されるペプチド（アミド）結合によって結合されるアミノ酸モノマーの短い連鎖である。最も短いペプチドは一つのペプチド結合でつながれる２つのアミノ酸から成るジペプチドであり、トリペプチド、テトラペプチドなどがそれに続く。ペプチド模倣化学部分は非−アミノ酸化学部分を含む。ペプチド模倣化学部分は１つ以上の非−アミノ酸性の化学単位によって切り離された１つ以上のアミノ酸を含みうる。ペプチド模倣化学部分は、化学構造のどの部分にも、ペプチド結合によって結合される隣接するアミノ酸を２つ以上含まない。

【0134】

「アミノ酸」という用語は、本明細書に使用される場合グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、メチオニン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、トリプトファン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミンまたはシトルリンを意味する。

【0135】

本明細書の「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二量体、多量体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び望ましい生物活性を示す限り抗体断片を含む、（Ｍｉｌｌｅｒら（２００３）Ｊｏｕｒ．ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１７０：４８５４−４８６１）。抗体はマウス、ヒト、ヒト化、キメラであり得、または他の種に由来する。抗体は、特定の抗原と結合し、それを認識することができる免疫系によって生成されるするタンパク質である（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）Ｉｍｍｕｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ Ｅｄ．， Ｇａｒｌ ａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。目標とする抗原は、一般に多数の、エピトープと呼ばれる、複数の抗体の上のＣＤＲにより認識される結合部位を有する。特定の異なるエピトープに結合する各々の抗体は、異なる構造を有する。このように、１つの抗原は、複数の対応する抗体有し得る。抗体は、全長免疫グロブリン分子または全長免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、目的の標的の抗原またはその一部と免疫特異的結合する抗原結合部位を含む分子を含む。そのような標的は、自己免疫疾患と関連した自己免疫抗体を産する細胞または癌細胞を含むが、それらに限られるものではない。本明細書で開示される免疫グロブリンは、任意の免疫グロブリン分子のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）またはサブクラスでありうる。免疫グロブリンは、任意の種に由来することができる。しかしながら、一態様において、免疫グロブリンはヒト、ネズミ、またはウサギ起源である。

【0136】

単語「抗体断片（複数可）」という用語は、本明細書に使用される場合、全長抗体の一部分、一般的にはその抗原結合またはその可変領域を含む。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）₂、及びＦｖ断片、二特異性抗体、線形抗体、ミニボディ（Ｏｌａｆｓｅｎら（２００４）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓｉｇｎ＆Ｓｅｌ．１７（４）：３１５−３２３）、発現ライブラリーによって生成された断片、反イディオタイプ（反Ｉｄ）抗体、ＣＤＲ（相補性決定領域）、及び癌細胞抗原と免疫特異的に結合する上記のどれかのエピトープ結合断片、ウィルス抗原または微生物抗原、単鎖抗体分子、及び抗体断片から生じた多重特異性抗体を含む。

【0137】

「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書に使用される場合、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体が、少量に存在する場合がある考えられる自然に生じる突然変異を除いて、同一であるものである。モノクローナル抗体は非常に特異的で、一つの抗原性部位に向けられる。さらにまた、異なる決定要素（エピトープ）に向けられる異なる抗体を含む多クローン性抗体調製物と対照的に、各々のモノクローナル抗体は、抗原の上で一つの決定要素に向けられる。特異性に加えて、他の抗体によって汚染されずに合成され得るという点で、モノクローナル抗体は有利である。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均一な抗体の集団から得られるという抗体の特性を示し、一つの特定の方法によって抗体が産生されることを必要とすると解釈されない。たとえば、本発明に従って使われるモノクローナル抗体はＫｏｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ方法によって、または組み換えＤＮＡ方法によって作成され得る（たとえば：米国特許第４８１６５６７号、米国特許第５８０７７１５号）。たとえば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８；Ｍａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７で記載される技術を用いたファージ抗体ライブラリから、モノクローナル抗体が単離され得る。

【0138】

ここでのモノクローナル抗体は特に「キメラ」抗体、及び望ましい生物活性を示す限り、その抗体の断片を含み、重鎖及び／または軽鎖の一部が、特定の抗体クラスまたはサブクラスに属しているまたは特定の種に由来する抗体の中に存在し、対応する配列に同族または同一であるが、鎖の残りは、別の抗体クラスまたはサブクラスに属しているまたは別の種に由来する抗体の中に存在し、対応する配列に同族または同一であるものである。（米国特許第４８１６５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎら（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５）本明細書で目的とするキメラ抗体は、非ヒトの霊長類（例えば、旧世界ザル、類人猿など）に由来する可変領域抗原結合配列及びヒト定常領域配列を含む「霊長類化」抗体を含む。

【0139】

本明細書に使用される単語「インタクト抗体」は、ＶＬ及びＶＨ領域、ならびに軽鎖定常領域（ＣＬ）及び重鎖定常領域、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。定常領域は、天然配列定常領域（例えばヒトの天然配列定常領域）またはそれのアミノ酸配列変異形であり得る。インタクト抗体は、抗体のＦｃ定常領域（天然配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列変形Ｆｃ領域）に起因しているそれらの生物活性を指す一つ以上のエフェクター機能を有し得る。抗体エフェクター機能の例は、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞障害、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介細胞障害性（ＡＤＣＣ）、食菌作用；Ｂ細胞受容体及びＢＣＲのような細胞表面受容体のダウンレギュレーションを含む。

【0140】

「Ｆｃ領域」という用語は、本明細書で使用される場合、少なくとも定常領域の一部を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を意味する。この用語は、天然配列ＦＣ領域及び変異Ｆｃ領域を含む。一実施形態において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６からまたはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端にわたる。しかし、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は存在するまたはしない場合がある。本明細書で特定されない限り、Ｆｃ領域または定常領域のアミノ酸残基の付番は、ＥＵ付番システム（また、ＥＵ指標と呼ばれている）に従う（Ｋａｂａｔら．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１）。

【0141】

「フレームワーク」または「ＦＲ」という用語は、本明細書に使用される場合、超可変的領域（ＨＶＲ）の残基以外の可変領域残基を指す。可変領域のＦＲは、４つのＦＲの領域から一般的に成る：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４。したがって、ＨＶＲ及びＦｒ配列は、ＶＨ（またはＶＬ）において、一般に以下の順序で発生する：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。重鎖の定常領域のアミノ酸配列に依存して、インタクト抗体は、異なる「クラス」に割り当てられ得る。インタクト免疫グロブリン抗体には５つの主要なクラスがある：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、そしてこれらのいくつかが「サブクラス」（アイソタイプ）に分けられる場合がある、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２。抗体の異なるクラスに対応する重鎖定常領域は、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び３次元構成は周知である。Ｉｇの形態は、ヒンジ修飾またはヒンジのない形態を含む。（Ｒｏｕｘら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：４０８３−４０９０；Ｌｕｎｄら（２０００）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６７：７２４６−７２５６；米国特許第２００５／００４８５７２号；米国特許第２００４／０２２９３１０号）。

【0142】

「ヒト抗体」という用語は、本明細書に使用される場合、ヒトの抗体レパートリーまたは他のヒト抗体コード配列を利用する非ヒトの源に由来する、またはヒトの細胞またはヒトによって生み出される抗体のそれに対応するアミノ酸配列を有する抗体を指す。ヒト抗体のこの定義は、特定的に、非ヒトの抗原結合性残基を含むヒト化抗体を除外する。

【0143】

「ヒトコンセンサスフレームワーク」という用語は、本明細書に使用される場合、ヒトの免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択で最も一般に発生するアミノ酸残基を表すフレームワークを指す。一般に、ヒトの免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変領域配列のサブグループからのものである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３に記載されるようなサブグループである。一実施形態において、ＶＬについて、サブグループは上記ＫａｂａｔらにあるようなサブグループｋａｐｐａＩである。一実施形態において、ＶＨについて、サブグループは，上記ＫａｂａｔらにあるようなサブグループＩＩＩである。

【0144】

「ヒト化抗体」という用語は、本明細書に使用される場合、非ヒトＨＶＲ（複数）からのアミノ酸残基と、ヒトのＦＲ（複数）からのアミノ酸残基とを含むキメラ抗体を指す。ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つまたは一般的に２つの、すべての可変的領域を含み、その領域では、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全てが非ヒト抗体のそれらに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト抗体のそれらに対応する。ヒト化抗体は、ヒト抗体から誘導される抗体定常領域の少なくとも一部のを任意で含み得る。抗体、例えば非ヒト抗体の「ヒト化された形態」は、ヒト化を経た抗体を指す。

【0145】

「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、本明細書に使用される場合、配列において超可変である及び／または構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成する超可変抗体変数領域の領域の各々を指す。通常、天然４本鎖抗体は、６つのＨＶＲを含み、ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）である。ＨＶＲは超可変ループ及び／または「相補性決定領域」（ＣＤＲ）からのアミノ酸残基を含み、後者は最も高い配列可変性であり及び／または抗原認識に関与する。例示的超可変ループは、アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）及び９６〜１０１（Ｈ３）で発生する。（Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）．）例示的なＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３）は、Ｌ１の２４〜３４、Ｌ２の５０〜５６、Ｌ３の８９〜９７、Ｈ１の３１〜３５Ｂ、Ｈ２の５０〜６５、及びＨ３の９５〜１０２アミノ酸残基で発生する（Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）．）。ＣＤＲ１（ＶＨ）を除いて、ＣＤＲは一般的に超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲは抗原と接触する「特異決定残基」または「ＳＤＲ」を含む。ＳＤＲは、省略ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ）と呼ばれるＣＤＲの領域に含まれる。例示的なａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２、及びａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、Ｌ１の３１〜３４、Ｌ２の５０〜５５、Ｌ３の８９〜９６、Ｈ１の３１〜３５Ｂ、Ｈ２の５０〜５８、及びＨ３の９５〜１０２アミノ酸残基で発生する（Ａｌｍａｇｒｏ及びＦｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）．参照）。特に明記しない限り、ＨＶＲ残基及び可変領域にある他の残基（例えばＦＲ残基）は上記Ｋａｂａｔらに従い付番される。

【0146】

「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、本明細書に使用される場合、抗原と抗体を結合させる抗体重鎖または軽鎖の領域を指す。天然抗体の重さ及び軽鎖の可変領域（それぞれＶＨ／ＶＬ）は一般に似た構造を有し、それぞれの領域は４つの保存フレームワーク領域及び３つの可変可変領域（ＨＶＲ）を有する。（例えばＫｉｎｄｔらＫｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６^thｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ及びＣｏ．，ｐａｇｅ９１（２００７）．参照）。単一のＶＨまたはＶＬ領域は、抗原結合特異性を付与するのに十分である。さらに、特定の抗原と結合する抗体を、その抗原と結合する抗体からのＶＨまたはＶＬ領域を用いて、それぞれの相補的ＶＨまたはＶＬ領域のライブラリーをスクリーニングすることによって単離されうる。例えばＰｏｒｔｏｌａｎｏら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）；ら，Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４−６２８（１９９１）参照。

【0147】

「ベクター」という用語は、本明細書に使用される場合、それが結合する別の核酸を伝播することができる核酸分子を指す。この用語は、自己再生する核酸構造としてのベクター、ならびにそれが導入された宿主細胞のゲノムに取り込まれるベクターとを含む。ある特定のベクターは、作用可能に結合した核酸の発現を指示することができる。そのようなベクターは、ここでは「発現ベクター」と称する。

【0148】

「フリーシステインアミノ酸」という用語は、本明細書に使用される場合、親抗体に操作され、チオール官能基（−ＳＨ）を有し、分子内または分子間ジスルフィド橋として対にされないシステインアミノ酸残基を指す。

【0149】

「リンカー」、「リンカー単位」、または「リンク」という用語は、本明細書に使用される場合、薬剤部分を抗体に共有結合させる原子の連鎖を含む化学部分を意味する。様々な実施形態において、リンカーは二価基で、Ｌとして特定される。

【0150】

「薬剤部位」という用語は、本明細書に使用される場合、、細胞機能を妨げる及び／または細胞死または破壊を起こす物質を指す。細胞障害性剤は、以下を含むが、これに限定されるものではない：放射性同位元素（例えば、Ａｔ²¹¹、Ｉ¹³¹、Ｉ¹²⁵、Ｙ⁹⁰、Ｒｅ¹⁸⁶、Ｒｅ¹⁸⁸、Ｓｍ¹⁵³、Ｂｉ²¹²、Ｐ³²、Ｐｂ²¹²及びＬｕの放射性同位体）、化学療法剤または薬剤（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他の挿入剤）、成長阻害剤、酵素及びその断片（例えばヌクレオ溶解酵素）、及び下に開示する抗腫瘍剤または抗癌剤。

【0151】

本明細書に使用される場合、請求項で別に定められない限り、単語「アシル」という用語は−Ｃ（Ｏ）Ｒ’の基を指し、Ｒ’はそれぞれ本明細書で定義されるアルキル、Ｃ₃−Ｃ₆シクロアルキル、またはヘテロシクリルである。

【0152】

本明細書に使用される場合、請求項で別に定められない限り、「アルコキシ」という用語は、-ＯＲ’基を指し、Ｒ’は上で定義するＣ₁−Ｃ₄アルキルまたはＣ₃−Ｃ₆シクロアルキルである。「アルコキシ」の例には、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、プロポキシ、ブトキシ、ｔ−ブトキシ、イソブトキシ、シクロプロポキシ、及びシクロブトキシ、そしてそのハロゲン化された形態、例えばフルオロメトキシ及びジフルオロメトキシが挙げられる。

【0153】

本明細書に使用される場合、請求項で別に定められない限り「アルキル」という用語は１〜１２の（Ｃ１−Ｃ１２）炭素原子を有する、直鎖または分岐鎖の一価のまたは二価炭化水素鎖ラジカルを指し、それらの炭素原子は非置換または複数の程度で置換され、たとえば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つが本発明に含まれる。置換基の例は、ハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸及びアルキルチオから成る基から選択される。本明細書に使用される場合、「アルキル」の例には、メチル（Ｍｅ、−ＣＨ₃）、エチル（Ｅｔ、−ＣＨ₂ＣＨ₃）、１−プロピル（ｎ−Ｐｒ、ｎ−プロピル、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃）、２−プロピル（ｉ−Ｐｒ、ｉ−プロピル、−ＣＨ（ＣＨ₃）₂）、１−ブチル（ｎ−Ｂｕ、ｎ−ブチル、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃）、２−メチル−１−プロピル（ｉ−Ｂｕ、ｉ−ブチル、−ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）２）、２−ブチル（ｓ−Ｂｕ、ｓ−ブチル、−ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₃）、２−メチル−２−プロピル（ｔ−Ｂｕ、ｔ−ブチル、−Ｃ（ＣＨ₃）₃）、１−ペンチル（ｎ−ペンチル、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃）、２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃）、３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ₃）₂）、２−メチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ₃）₂ＣＨ₂ＣＨ₃）、３−メチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ（ＣＨ₃）₂）、３−メチル−１−ブチル（−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂）、２−メチル−１−ブチル（−ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₃）、１−ヘキシル（−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃）、２−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃）、３−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ₃）（ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃））、２−メチル−２−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ₃）₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃）、３−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₃）、４−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂）、３−メチル−３−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ₃）（ＣＨ₂ＣＨ₃）₂）、２−メチル−３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ₃）ＣＨ（ＣＨ₃）₂）、２、３−ジメチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ₃）₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂）、３、３−ジメチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ₃）Ｃ（ＣＨ₃）₃、ならびにそれらの二価の（「アルキレン」）及びそれの置換バージョンが挙げられるが、それに限定されない。置換アルキルの例は、ヒドロキシメチル、ジフルオロメチル及びトリフルオロメチルを含む。

【0154】

本明細書に使用される場合、「アルケニル」という用語は、不飽和（すなわち、炭素−炭素結合、ｓｐ２二重結合）の少なくとも１つの部位を持つ２〜８の（Ｃ１−Ｃ１２）炭素原子を有する、直鎖または分岐鎖の一価のまたは二価炭化水素鎖ラジカルを意味し、アルケニルラジカルは、任意に、上記の「アルキル」の定義における一つ以上の置換基で独立して置換され得、「ｃｉｓ」及び「ｔｒａｎｓ」配向、または代わりに、「Ｅ」及び「Ｚ」配向を有するラジカルを含む。アルケニルの例には、エテニルまたはビニル（−ＣＨ＝ＣＨ₂）、プロポ−１−エニル（−ＣＨ＝ＣＨＣＨ₃）、プロポ−２−エニル（−ＣＨ₂ＣＨ＝ＣＨ₂）、２−メチルプロポ−１−エニル、ブタ−１−エニル、ブタ−２−エニル、ブタ−３−エニル、ブタ−１、３−ジエニル、２−メチルブタ−１、３−ジエン、ヘキサ−１−エニル、ヘキサ−２−エニル、ヘキサ−３−エニル、ヘキサ−４−エニル、ヘキサａ−１、３−ジエニルならびに二価の（「アルケニレン」）及びその置換形態が挙げられるがそれに限定されない。

【0155】

本明細書に使用される場合、請求項で別に定められない限り「アルキニル」という用語は、少なくとも１つの不飽和（すなわち、炭素−炭素結合、ｓｐ２二重結合）の部位を有する２〜８の（Ｃ１−Ｃ１２）炭素原子を有する、直鎖または分岐鎖の一価のまたは二価炭化水素鎖ラジカルを指し、アルキニルラジカルは、任意に、上記の「アルキル」の定義における一つ以上の置換基で独立して置換されうる。アルキニルの例には、エチニル（−ＣＣＨ）、プロポ−１−イニル（−ＣＣＣＨ₃）、プロポ−２−イニル（プロパギル，−ＣＨ₂ＣＣＨ），ブタ−１−イニル，ブタ−２−イニル及びブタ−３−イニル、ならびに二価の（「アルキニレン」）及びその置換形態が挙げられるが、それに限定されない。

【0156】

本明細書に使用される場合、請求項で別に定められない限り「アルキルアミノ」という用語は、−ＮＲ’Ｒ”基を指し、Ｒ’はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルまたはＣ₃−Ｃ₆シクロアルキルであり、Ｒ”はＣ₁−Ｃ₆アルキルまたはＣ₃−Ｃ₆シクロアルキルである。アルキルアミノの例にはメチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノ、プロピルアミノ及びシクロプロピルアミノが挙げられるが、それに限定されない。

【0157】

本明細書に使用される場合、請求項で別に定められない限り「アミド」という用語は−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ”基を指し、Ｒ’及びＲ”は各々独立してＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル，またはＣ₃−Ｃ₆シクロアルキルであり、アミドの例には−Ｃ（Ｏ）ＮＨ₂、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ₃、及びＣ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ₃）₂が挙げられるが、それに限定されない。

【0158】

本明細書に使用される場合、請求項で別に定められない限り「アリール」という用語は芳香族の炭化水素、環系を指す。その環系は単環式または縮合多環式で（例えば、二環式、三環系など）あり、置換または非置換である。様々な実施形態において、単環式アリール環はＣ₅−Ｃ₁₀，またはＣ₅−Ｃ₇，またはＣ₅−Ｃ₆であり、これらの炭素数は環系を形成炭素原子の数を指す。Ｃ₆環系、すなわちフェニル環はアリール基である。様々な実施形態において、多環の環は二環式アリール基であり、その例にはＣ₈−Ｃ１₂またはＣ₉−Ｃ₁₀が挙げられる。ナフチル環（１０の炭素原子を有する）は、多環アリール基である。アリールの置換基の例は「任意に置換」の定義において下に記載される。

【0159】

本明細書に使用される場合、請求項で別に定められない限り「シアノ」という用語は −ＣＮ基を指す。

【0160】

本明細書に使用される場合、請求項で別に定められない限り「シクロアルキル」という用語は、非芳香族の、非置換または置換の、飽和または部分的不飽和炭化水素環基を指す。置換基の例は「任意に置換」の定義において記載される。一例において、シクロアルキル基は３〜１２の炭素原子（Ｃ₃−Ｃ₁₂）である。他の例では、シクロアルキルはＣ₃−Ｃ₈，Ｃ₃−Ｃ₁₀またはＣ₅−Ｃ₁₀である_。他の例では、シクロアルキル基は、単環式として、Ｃ₃−Ｃ₈、Ｃ₃−Ｃ₆ またはＣ₅−Ｃ₆である。他の例では、シクロアルキル基は、二環式として、Ｃ₇−Ｃ₁₂である。他の例では、シクロアルキル基は、スピロ系として、Ｃ₅−Ｃ₁₂である。単環式シクロアルキルの例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１−シクロペント−１−エニル、１−シクロペント−２−エニル、１−シクロペント−３−エニル、シクロヘキシル、過重水素を含むシクロヘキシル、１−シクロヘキサ−１−エニル、１−シクロヘキサ‐２−エニル、１−シクロヘキサ−３−エニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシル、シクロウンデシル及びシクロドデシルが挙げられる。７〜１２の環原子有する二環式シクロアルキルの例示的配列は、［４，４］、［４，５］、［５，５］、［５，６］または［６，６］環系を含むが、これに限定されるものではない。例示的な架橋二環式シクロアルキルにはビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ビシクロ［２．２．２］オクタン及びビシクロ［３．２．２］ノナンが挙げられるが、これに限定されるものではない。スピロシクロアルキルの例には、スピロ［２．２］ペンタン、スピロ［２．３］ヘキサン、スピロ［２．４］ヘプタン、スピロ［２．５］オクタン及びはスピロ［４．５］デカンが挙げられる。

【0161】

本明細書に使用される場合、請求項で別に定められない限り「エステル」という用語は−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’基を指し、Ｒ’はＣ₁−Ｃ₆アルキルまたはＣ₃−Ｃ₆シクロアルキルである。

【0162】

本明細書に使用される場合、請求項で別に定められない限り「ヘテロ環状体」、「ヘテロシクロアルキル」または「ヘテロシクリル」という用語は、２〜１２の環炭素原子及び１〜３の環ヘテロ原子を含む、非置換及び置換の単環式のまたは多環式の非芳香族環系を指す。多環式の環系は手交号２環または３環で、スピロまたは架橋である。ヘテロ原子の例は、Ｎ、Ｏ、及びＳ、窒素酸化物、硫黄酸化物、及び二酸化物を含む。一実施形態において、環は３〜８員で、完全飽和または一つ以上の不飽和度を有する。本定義において、複数の置換度が含まれる。下に置換基の例が示される。「ヘテロ環状体」基の例には、テトラヒドロフラニル、ピラニル、１，４−ジオキサニル、１，３−ジオキサニル、オキソラニル、オキセタニル、２−オキサ−６−アザスピロ［３．３］ヘプタン−６−イル、ピペリジニル、ピロリジニル、モルフォリニル、アゼチジニル、ピぺラジニル、ピロリジノニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、及びそれらの様々な互変異性体が挙げられる。

【0163】

本明細書に使用される場合、請求項で別に定められない限り「ヘテロアリール」という用語は、１〜９の炭素及び少なくとも１つのヘテロ原子を含む芳香族環系を指す。ヘテロ原子の例はＮ，Ｏ，及びＳを含む。ヘテロアリールは単環式または多環式であり、置換または非置換であり得る。単環式ヘテロアリール基は２〜６の環炭素原子及び１〜３のリングヘテロ原子を環の中において有し得、多環式ヘテロアリールは３〜９の環炭素原子及び１〜５のヘテロ原子を有し得る。多環式ヘテロアリール環は縮合、スピロ、または架橋環接合を有し得、例えば、二環ヘテロアリールは多環式ヘテロアリールである。二環式ヘテロアリール環は８〜１２の員原子を有し得る。単環ヘテロアリール環は５〜８の員原子（炭素及びヘテロ原子）を有し得る。例示的なヘテロアリール基は下記のものを含むがそれに限定されない：ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、フラニル、イミダゾリル、インドールイル、アザインドールイル、アザベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾイミダゾリル、テトラジニル、テトラゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリジニル、ピリミジニル、ピロールイル、キノリンイル、キナゾリニル、キノキサリニル、トリアジニル、トリアゾリル、チアゾリル及びチオフェニル。ヘテロアリールの置換基の例は「任意に置換」の定義において下に記載される。

【0164】

本明細書に使用される場合、請求項で別に定められない限り「ヘテロアリールアルキル」という用語は（ヘテロアリール）Ｃ₁−Ｃ₃アルキル基を意味する。

【0165】

本明細書に使用される場合、請求項で別に定められない限り「アリールアルキル」という用語は（アリール）Ｃ₁−Ｃ₃アルキル基を意味する。

【0166】

本明細書に使用される場合、請求項で別に定められない限り、「尿素」という用語は−ＮＲ’Ｃ（Ｏ）ＮＲ”基を指し、Ｒ’及びＲ”はそれぞれ独立してＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、またはＣ₃−Ｃ₆シクロアルキルである。

【0167】

本明細書に使用される場合、請求項で別に定められない限り、「任意に」という用語は、その後に記載される事情がが起きる場合もあり起きない場合もあることを意味し、起こることと起こらない事情の両方を含む。

【0168】

本明細書に使用される場合、別に定められない限り，「任意に置換」，「置換」という表現またはそれの変形は、１、２、または３のような一つ以上の置換基による、複数の置換程度を含む任意の置換を表す。この表現は本明細書で記載し説明される置換の重複として解釈されるべきではない。例示的な任意の置換基基にはアシル、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、スルホニル、アミノ、スルホンアミド、スルホキシド、アルコキシ、シアノ、ハロ、尿素、エステル、カルボン酸、アミド、ヒドロキシ、オキソ、及びニトロが挙げられる。

【0169】

ハロ：Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩ。

【0170】

ヒドロキシ：ＯＨ。

【0171】

アルコキシ：ＯＲ、Ｒはアルキル基、たとえばＣ_1-8アルキル基である。Ｃ_1-8アルコキシ基の例には−ＯＭｅ（メトキシ）、−ＯＥｔ（エトキシ）、−Ｏ（ｎＰｒ）（ｎ−プロポキシ）、−Ｏ（ｉＰｒ）（イソプロポキシ）、−Ｏ（ｎＢｕ）（ｎ−ブトキシ）、−Ｏ（ｓＢｕ）（ｓｅｃ−ブトキシ）、−Ｏ（ｉＢｕ）（イソブトキシ）、及びＯ（ｔＢｕ）（ｔｅｒｔ−ブトキシ）が挙げられるが、それに限定されない。

【0172】

オキソ（ｋｅｔｏ、−オン）：＝Ｏ。

【0173】

アシル（ｋｅｔｏ）：−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、Ｒはアシル置換基、例えばＣ_1-8アルキル基（別名Ｃ_1-8アルキルアシルまたはＣ_1-8アルカノイル）、Ｃ_2-8アルケニル基（別名Ｃ_2-8アルケニルアシル）、Ｃ_2-8アルキニル基（別名Ｃ_2-8アルキニルアシル）、Ｃ_3-8シクロアルキル基（別名Ｃ_3-8シクロアルキルアシル），Ｃ_3-20ヘテロシクリル基（別名Ｃ_3-20ヘテロシクリルアシル）、Ｃ_5-20アリール基（別名Ｃ_5-20アリールアシル）、またはＣ_5-20ヘテロアリール基（別名Ｃ_5-20ヘテロアリールアシル）、好ましくはＣ_1-8アルキル基である。アシル基の例には−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ₃（アセチル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ₂ＣＨ₃（プロピオニル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ₃）₃（ｔ−ブチリル）、及び−Ｃ（＝Ｏ）Ｐｈ（ベンゾイル、フェノン）が挙げられるが、それに限定されない。

【0174】

カルボキシ（カルボン酸）：−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ。

【0175】

エステル（カルボン酸塩、カルボン酸エステル、オキシカルボニル）：−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ、Ｒはエステル置換基、例えばＣ₁−Ｃ₈アルキル，Ｃ₂−Ｃ₈アルケニル，Ｃ₂−Ｃ₈アルキニル，Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル，Ｃ₃−Ｃ₈ヘテロシクリル，Ｃ_5-Ｃ₂₀アリールまたはＣ_5-20ヘテロアリール基であり、好ましくはＣ_1-8アルキル基である。エステル基の例には、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ₃，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ₂ＣＨ₃，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣ（ＣＨ₃）₃，及び−Ｃ（＝Ｏ）ＯＰｈが挙げられるが、それに限定されない。

【0176】

アミノ：−ＮＲ¹Ｒ²、Ｒ¹及びＲ²は独立してアミノ置換基、例えば、水素、Ｃ₁−Ｃ₈アルキル、Ｃ₂−Ｃ₈アルケニル、Ｃ₂−Ｃ₈アルキニル、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₃−Ｃ₈ヘテロシクリル、Ｃ_5-Ｃ₂₀アリールまたはＣ_5-20ヘテロアリール基、好ましくはＨまたはＣ_1-8アルキル基、または、「環状」アミノ基の例において、Ｒ¹及びＲ²は、結合する窒素原子と一緒に、４〜８の環原子を有するヘテロシクリル環を形成する。アミノ基は第１級（−ＮＨ₂）、第２級（−ＮＨＲ¹）、または第３級（−ＮＨＲ¹Ｒ²）、及び陽イオン形では、第４級であり得る（−⁺ＮＲ¹Ｒ²Ｒ³）。アミノ基の例には−ＮＨ₂、−ＮＨＣＨ₃、−ＮＨＣ（ＣＨ₃）₂、−Ｎ（ＣＨ₃）₂、−Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₃）₂、及び−ＮＨＰｈが挙げられるが、これに限定されない。環状アミノ基の例には、アジリジノ、アゼチジノ、ピロリジノ、ピペラジノ、モルフォリノ、及びチオモルフォリノ挙げられるが、これに限定されない。

【0177】

アミド（カルバモイル、カルバミル、アミノカルボニル、カルボキサミド）：
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ¹Ｒ²、アミノ基について定義されるように、Ｒ¹及びＲ²は独立してアミノ置換基である。アミド基の例には、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ₂、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ₃、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ₃）₂、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ₂ＣＨ₃、及び−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₃）₂ならびに、Ｒ¹及びＲ²が、結合する窒素原子と共に、複素環式の構造を形成するアミド基、たとえば、ピペリジノカルボニル、モルフォリノカルボニル、チオモルフォリノカルボニル、及びピペロチノカルボニルが挙げられるが、これに限定されるものではない。

【0178】

ニトロ：−ＮＯ₂。

【0179】

シアノ（ニトリル、カルボニトリル）：−ＣＮ。

【0180】

スルフィン（スルフィニル、スルホキシド）：−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、Ｒはスルフィン置換基、例えば、Ｃ₁−Ｃ₈アルキル、Ｃ₂−Ｃ₈アルケニル、Ｃ₂−Ｃ₈アルキニル、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₃−Ｃ₈ヘテロシクリル、Ｃ_5-Ｃ₂₀アリールまたはＣ_5-20ヘテロアリール基、望ましくはＣ_1-8アルキル基である。スルフィン基の例には−Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ₃及び−Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ₂ＣＨ₃が挙げられるが、これに限定されるものではない。

【0181】

スルホン（スルホニル）：−Ｓ（＝Ｏ）₂Ｒ、Ｒはスルホン置換基、例えば、Ｃ₁−Ｃ₈アルキル、Ｃ₂−Ｃ₈アルケニル、Ｃ₂−Ｃ₈アルキニル、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₃−Ｃ₈ヘテロシクリル、Ｃ_5-Ｃ₂₀アリールまたはＣ_5-20ヘテロアリール基、望ましくはＣ_1-8アルキル基、たとえば、フッ化または全フッ素置換されたＣ_1-8アルキル基を含む。スルホン基の例には−Ｓ（＝Ｏ）₂ＣＨ₃（メタンスルホニル、メシル）、−Ｓ（＝Ｏ）₂ＣＦ₃（トリフリル）、−Ｓ（＝Ｏ）₂ＣＨ₂ＣＨ₃（エシル）、−Ｓ（＝Ｏ）₂Ｃ₄Ｆ₉（ノナフリル）、−Ｓ（＝Ｏ）₂ＣＨ₂ＣＦ₃（トレシル）、−Ｓ（＝Ｏ）₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨ₂（タウロイル）、−Ｓ（＝Ｏ）₂Ｐｈ（フェニルスルホニル、ベシル）、４−メチルフェニルスルホニル（トシル）、４−クロロフェニルスルホニル（クロシル）、４−ブロモフェニルスルホニル（ブロシル）、４−ニトロフェニル（ノシル）、２−ナフタレンスルホナート（ｎａｐｓｙｌ）、及び５−ジメチルアミノ−ナフタレン−１−イルスルホナート（ダンシル）が挙げられるが、これに限定されるものではない。

【0182】

本明細書に使用される場合、請求項で別に定められない限り「治療」という用語は特定された病態を緩和すること、病態の１つ以上の徴候を減少または除くこと、病態の進行を除くまたは減速することを指す。

【0183】

本明細書に使用される場合、請求項で別に定められない限り、「効果的な量」という用語は、研究者または臨床医によって求められている、組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的な反応を誘発する量の薬剤または医薬品薬剤を意味する。

【0184】

本明細書に使用される場合、請求項で別に定められない限り「治療的有効量」という用語は、そのような量を受けなかった対応する対象と比較して、病気、障害、または副作用の治療の結果、または病気または障害の進行率の減少に至る量を意味する。本用語はまた、その範囲中に、通常の生理的機能を強化するのに有効な量を含む。治療で使用するために、式Ｉの化合物とその塩の治療的有効量は、生の化学品として投与されうる。さらに、活性成分は医薬品組成物として提示され得る。

【0185】

本発明はまた実験のセクションにおけるいずれの実施例にも関連する。

【0186】

「薬理学的に許容される塩」という表現は、本明細書に使用される場合、抗体−薬剤複合体（ＡＤＣ）またはリンカー−薬剤部分の薬理学的に許容される有機または無機の塩を指す。例示的な塩は、硫酸塩、クエン酸塩、アセテート、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、ニコチネート、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸、マレアート、ゲンチシン酸塩、フマル酸エステル、グルコン酸塩、グルクロン酸、サッカラート、ギ酸塩、ベンゾアート、グルタミン酸塩、メタンスルホナート、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トシラート、及びパモ酸塩（すなわち、１、１’メチレンビス‐（２‐ヒドロキシ‐３‐ナフトアート））を含むが限定されない。薬理学的に許容される塩は、別の分子（例えばアセテートイオン、コハク酸イオンまたは他対イオン）の包含を含み得る。その対イオンは、
親化合物の電荷を安定させる有機または無機の任意の部分であり得る。さらに、薬理学的に許容される塩は一つ以上の電荷を帯びた原子をその構造に含む可能性がある。複数の電荷を帯びた原子が薬理学的に許容される塩の一部であるいくつかの例は複数の対イオンを持つことが可能である。従って、薬理学的に許容される塩は一つ以上の電荷を帯びた原子及び／または一つ以上の対イオンを有することができる。

【0187】

薬理学的に許容されない、他の塩は、本発明の化合物の調製に有用であり得、本発明の更なる態様を成すとみなすべきである。これらの塩（例えばシュウ酸またはトリフルオロ酢酸塩）は、それ自体は薬学的に許容されないが、発明の化合物及びそれらの薬理学的に許容される塩を得る中間体として有効な塩の調製に有用であり得る。

【0188】

本発明の化合物は、固体のまたは液体状態として存在し得る。固体の状態では、それは結晶または非晶質の形態で、またはその混合として存在し得る。当業者は、薬理学的に許容される溶媒和物が結晶質のまたは非結晶質の化合物のために形成され得ることを理解するであろう。結晶質の溶媒和物において、溶媒分子は、結晶化の間に、結晶格子に取り込まれる。溶媒和物はエタノール、イソプロパノール、ＤＭＳＯ、酢酸、エタノールアミン、または酢酸エチルのような非水性溶媒を含み得、それらはまた、結晶格子に取り込まれる溶媒としての水を含み得る。水が結晶格子に取り込まれる溶媒である溶媒和物は、「水和物」と典型的に呼ばれる。水和物は、化学式の水和物ならびに可変量の水を含んでいる組成を含む。本発明は、そのような全ての溶媒和物を含む。

【0189】

当業者は、結晶形（そのいろいろな溶媒和物を含む）として存在する本発明のある特定の化合物が多形（すなわち異なる結晶構造に現れる能力）を示し得ることをさらに理解するであろう。これらの異なる結晶形は、「多形体」として典型的に知られる。本発明はすべてのそのような多形体を含む。多形体は同じ化学組成を持つが、充填、幾何学的な配列、及び結晶固体の他の記述可能な特性において異なる。多形体は、したがって、異なる物性（例えば形態、密度、硬さ、変形性、安定性、及び溶解性）を有し得る。多形体は異なる融点、赤外線スペクトル、及びＸ線粉回折パターンを一般的に表す。そして、それが識別のために用いられ得る。当業者は、たとえば、化合物を作る際に用いられる反応条件または試薬を変えるまたは調節することによって、異なる多形体を生成し得ることを理解するであろう。たとえば、温度、圧力、または溶媒の変化は、多形体をもたらし得る。これに加えて、１つの多形体は、ある特定の状況の下では別の多形体に自発的に変換され得る。

【0190】

本発明の化合物またはその塩は、立体異性の形として存在し得る（例えば、それはより１つ以上の不斉炭素原子を含む）。個々の立体異性体（鏡像異性体及びジアステレオマーの混合物）及びそれらの混合物は、本発明の範囲内に含まれる。同様に、式（Ｉ）の化合物または塩は、式に示されたものとは異なる、互変異性形として存在し得、それらもまた本発明の範囲内に含まれると理解される。本発明が上に定義された特定の基のすべての組合せ及びサブセットを含むことを理解すべきである。本発明の範囲は立体異性体の混合物、ならびに、精製された鏡像異性体またはは鏡像異性的に／ジアステレオマーを富化した混合物を含む。本発明は上に定義された特定の基のすべての組合せ及びサブセットを含むことを理解すべきである。

【0191】

主題の発明は、本発明の化合物の同位体標識された形態も含むが、原子質量または質量数が通常自然で見出されるものと異なる原子が、１つ以上の原子に取って代わる事実による。本発明の化合物及びその薬理学的に許容される塩に取り込まれることができる同位体の例は、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、ヨウ素、及び塩素の同位体を含み、例えば²Ｈ、³Ｈ、¹¹Ｃ、¹³Ｃ、¹⁴Ｃ、¹⁵Ｎ、¹⁷Ｏ、¹⁸Ｏ、³¹Ｐ、³²Ｐ、³⁵Ｓ、¹⁸Ｆ、³⁶Ｃｌ、¹²³Ｉ及び¹²⁵Ｉである。

【0192】

前述の同位体及び／または他の原子の他の同位体を含む本発明の化合物及び当該化合物の薬理学的に許容される塩は、本発明の範囲内である。同位体標識された本発明の化合物、例えば³Ｈ、¹⁴Ｃのような放射性同位元素が取り入れられたものは薬剤及び／または基質生体内分布分析に役立つ。トリチウム標識した、すなわち、³Ｈ、及び炭素１４、すなわち、¹⁴Ｃ、同位体は調製の容易さ及び検出可能性のために一般的に用いられる。¹¹Ｃ及び¹⁸Ｆ同位体はＰＥＴ（陽電子放射断層撮影）において有用であり、及び¹²⁵Ｉ同位体はＳＰＥＣＴ（単一光子放射のコンピュータ化された断層撮影）に有用であり、すべてが脳の撮像に有用である。さらに、ジュウテリウム（すなわち、²Ｈ）のようなより重い同位体による置換は、より大きな代謝安定性（例えば、増加した体内半減期または減少した投薬必要量）、から生じるある特定の治療的な利点を持つ。それゆえに、幾つかの状況では好ましい場合がある。同位体標識の式Ｉの化合物および本発明の以下のものは、一般に、非同位体標識試薬を、容易に入手できる同位体標識試薬に代えることによって、下記のスキーム及び／またはで実施例で開示される手順を実行することによって調製することができる。

【0193】

ＡＤＣの医薬品組成物
発明の治療的な抗体薬複合体（ＡＤＣ）の医薬組成物は、典型的に、薬理学的に許容される非経口ビヒクルとともに、及び、単位投薬量注射可能の形態で、例えばボーラス、静脈内の、腫瘍内部のような、非経口投与のために調製される。望まれる純度を有する抗体薬複合体（ＡＤＣ）は、凍結乾燥された製剤または水溶液の形で、任意に、薬理学的に許容される希釈剤、担体、賦形剤または安定化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９８０）１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ． Ｅｄ．）と一緒に混合される。

【0194】

システイン操作された抗体
発明の化合物は、野生型または元の抗体の一つ以上のアミノ酸がシステインアミノ酸と入れ替えられるシステイン操作された抗体を含む抗体薬複合体を含む。抗体のどんな形でも、そのように操作、すなわち変異させることができる。たとえば、親Ｆａｂ抗体断片を操作して、以下「ＴｈｉｏＦａｂ」と称する、システイン操作されたＦａｂを形成することができる。同様に、元のモノクローナル抗体を操作して「ＴｈｉｏＭａｂ」生成し得る。注意すべきは、単点突然変異が、ＴｈｉｏＦａｂで一つの操作されたシステイン残基を得るのに対し、ＩｇＧ抗体の二量体性質のために、単点突然変異は２つの操作されたシステイン残基をＴｈｉｏＭａｂで得る。置換された（「操作された」）システイン（Ｃｙｓ）残基を伴う変異体は、新しく導入され、操作されたシステインチオールグループの反応性のために評価される。チオール反応性の値は０〜１．０の範囲の相対的な数で、どんなシステイン操作された抗体についても測定することができる。発明のシステイン操作された抗体のチオール反応性値は、０．６〜１．０、０．７〜１．０、または０．８〜１．０の範囲にある。突然変異生成によってシステイン操作された抗体を調製するために、出発ポリペプチドのアミノ酸配列変形をコードするＤＮＡは、本技術分野で知られて種々の方法によって調製される。これらの方法は、以下を含むが、これに限定されるものではない：ポリペプチドをコードする初期に用意されたＤＮＡの、部位特異的な（またはオリゴヌクレオチドによって媒介される）突然変異生成、ＰＣＲ突然変異生成とカセット突然変異生成による調製。また、組み換え型抗体の変形は、制限断片操作によって、または、合成オリゴヌクレオチドを伴う共通部分拡張ＰＣＲによって生成され得る。突然変異誘発性プライマーは、システインコドン置き換えをコード化する。突然変異によるシステイン操作された抗体をコードするＤＮＡを生み出すために、標準的な突然変異生成技術は使用することができる。一般的なガイダンスは、ＳａｍｂｒｏｏｋらＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９、とＡｕｓｕｂｅｌらＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９９３に見出される。システインアミノ酸は抗体で反応部位で設計され得、そして、内部チェーンまたは分子間ジスルフィド連結を形成しない（Ｊｕｎｕｔｕｌａ，ら．，２００８ｂ Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２６（８）：９２５−９３２；Ｄｏｒｎａｎら（２００９）Ｂｌｏｏｄ１１４（１３）：２７２１−２７２９；ＵＳ７５２１５４１；ＵＳ７７２３４８５；国際公開第２００号９／０５２２４９，Ｓｈｅｎら（２０１２）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，３０（２）：１８４−１９１；Ｊｕｎｕｔｕｌａら（２００８）Ｊｏｕｒ ｏｆ Ｉｍｍｕｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ３３２：４１−５２）。操作されたシステインチオールは、リンカー試薬、または、マレイミドまたはアルファ−ハロアミドのようなチオール反応性の、求電子基を有する本発明のリンカー−薬中間体と反応し、システイン操作された抗体（ＴｈｉｏＭａｂｓ）と薬（Ｄ）部分を有するＡＤＣを形成し得る。薬部分の位置は、このように設計、制御、及び知ることができる。一般的には、操作されたシステインチオール基が高収率でチオール反応性リンカー試薬またはリンカー−薬中間体と反応することから、薬の負荷を制御することができる。重鎖または軽鎖上の単一の部位での置換によってシステインアミノ酸を導入すために抗体を操作することは、対称形の抗体の上で２つの新しいシステインを与える。２に近い薬物負荷と、共役製品ＡＤＣに近均一性が達成されうる。

【0195】

発明のシステイン操作された抗体は、好ましくはそれらの野生型の、対応する親抗体の抗原結合能力を保持する。したがって、システイン操作された抗体は、好ましくは特異的に抗原と結合することができる。そのような抗原は、たとえば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、細胞表面受容体蛋白と他の細胞表面分子、膜貫通型タンパク質、シグナリングタンパク質、細胞生存制御因子、細胞増殖制御因子、組織発達または分化に関連する（例えば、機能を付与すると知られている、または思われる）分子、リンホカイン、サイトカインに関係する分子、細胞周期制御に関係する分子、脈管形成に関係する分子と血管形成に関係する（（例えば、機能を付与すると知られている、または思われる）分子を含む。腫瘍関連抗原は、集団分化因子（すなわち、ＣＤタンパク質）である場合がある。システイン操作された抗体が結合することができる抗原は、上記のカテゴリーの１つのサブセットである場合があるが、上記カテゴリーの他のサブセットは異なった特徴（関連の抗原に関して）がある他の分子／抗原を含む。システイン操作された抗体は、鎖内ジスルフィド基の還元と再酸化によるリンカー−薬中間体との複合体化のために調製される。

【0196】

腫瘍関連抗原
システイン操作された抗体を含むがそれに限定されず、癌の治療において発明の抗体薬複合体において有用であり得る抗体は、細胞表面レセプターに対する抗体と腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）が挙げられるが、それに限定されない。ある特定の腫瘍関連抗原は技術で知られており、周知の技術で用いられる方法と情報を用いて、抗体を生み出すために、調製されることができる。癌診断と治療の効果的細胞標的を発見する試みにおいて、研究者は、一つ以上の通常の非癌細胞の表面と比較して、一つ以上の特定の種類の癌細胞の表面で発現される、膜貫通であるか、さもなければ腫瘍関連のポリペプチドを特定しようとしている。しばしば、そのような腫瘍関連のポリペプチドは、非癌細胞の表面上と比較して、癌細胞の表面で、より豊かに発現される。そのような腫瘍関連の細胞表面抗原ポリペプチドの識別は、抗体ベースの治療法によって、具体的な標的癌細胞が破壊する能力を与える。
腫瘍関連抗原ＴＡＡの例は、下記のそれらを含むが、これに限定されるものではない。便宜上、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）の核酸とタンパク質配列識別の慣例に従い、これらの抗原（その全ては当該技術で知られている）に関する情報を、以下に記載され、名前、他の名前、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号と主要引例を含む。下記のＴＡＡと対応する核酸とタンパク質配列は、ＧｅｎＢａｎｋのような公共データベースで利用できる。抗体が標的とする腫瘍関連抗原は、引用文献に見られる配列に対し、少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の配列同一性を有するすべてのアミノ酸配列変形とアイソフォームを含む。そしてそれらは、ＴＡＡが引用文献にみられる配列を持っているため、ほぼ同一の生物学的特徴を持っている。たとえば、変形配列があるＴＡＡは一般的に、対応する羅列された配列を有するＴＡＡと結合する抗体と結合できる。特に、ここにおいて引用される配列と参考文献の開示は、参考文献により明示的に組み込まれる。
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形態形成タンパク質受容体タイプ１Ｂ，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＭ＿００１２０３）
ｔｅｎ Ｄｉｊｋｅ，Ｐ．，らＳｃｉｅｎｃｅ２６４（５１５５）：１０１−１０４（１９９４），Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １４（１１）：１３７７−１３８２（１９９７））；国際公開第２００４０６３３６２号（請求項２）；国際公開第２００３０４２６６１号（請求項１２）；米国特許第２００３１３４７９０−Ａ１号（頁３８−３９）；国際公開第２００２１０２２３５号（請求項１３；頁２９６）；国際公開第２００３０５５４４３号（頁９１−９２）；国際公開第２００２９９１２２号（実施例２；頁５２８−５３０）；国際公開第２００３０２９４２１号（請求項６）；国際公開第２００３０２４３９２号（請求項２；図１１２）；国際公開第２００２９８３５８号（請求項１；頁１８３）；国際公開第２００２５４９４０号（頁１００−１０１）；国際公開第２００２５９３７７号（頁３４９−３５０）；国際公開第２００２３０２６８号（請求項２７；頁３７６）；国際公開第２００１４８２０４号（実施例；図４）
ＮＰ＿００１１９４骨形態形成タンパク質受容体、タイプＩＢ／ｐｉｄ＝ＮＰ＿００１１９４．１−
相互参照：ＭＩＭ：６０３２４８；ＮＰ＿００１１９４．１；ＡＹ０６５９９４

【0197】

（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１，ＳＬＣ７Ａ５，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＭ＿００３４８６）
Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５５（２），２８３−２８８（１９９９），Ｎａｔｕｒｅ３９５（６６９９）：２８８−２９１（１９９８），Ｇａｕｇｉｔｓｃｈ，Ｈ．Ｗ．，ら（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７（１６）：１１２６７−１１２７３）；国際公開第２００４０４８９３８号（実施例２）；国際公開第２００４０３２８４２号（実施例ＩＶ）；国際公開第２００３０４２６６１号（請求項１２）；国際公開第２００３０１６４７５号（請求項１）；国際公開第２００２７８５２４号（実施例２）；国際公開第２００２９９０７４号（請求項１９；頁１２７−１２９）；国際公開第２００２８６４４３号（請求項２７；頁２２２，３９３）；国際公開第２００３００３９０６号（請求項１０；頁２９３）；国際公開第２００２６４７９８号（請求項３３；頁９３−９５）；国際公開第２０００１４２２８号（請求項５；頁１３３−１３６）；米国特許第２００３２２４４５４号（図３）；国際公開第２００３０２５１３８号（請求項１２；頁１５０）；
ＮＰ＿００３４７７溶質輸送体ファミリー７（カチオン性アミノ酸輸送体，ｙ＋系），メッンバ５／ｐｉｄ＝ＮＰ＿００３４７７．３−ホモ・サピエンス
相互参照：ＭＩＭ：６００１８２；ＮＰ＿００３４７７．３；ＮＭ＿０１５９２３；ＮＭ＿００３４８６＿１

【0198】

（３）ＳＴＥＡＰ１（６回膜貫通型前立腺上皮抗原，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＭ＿０１２４４９）
Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１（１５），５８５７−５８６０（２００１），Ｈｕｂｅｒｔ，Ｒ．Ｓ．，ら（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９（２５）：１４５２３−１４５２８）；国際公開第２００４０６５５７７号（請求項６）；国際公開第２００４０２７０４９号（図１Ｌ）；ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）；国際公開第２００４０１６２２５号（請求項２）；国際公開第２００３０４２６６１号（請求項１２）；米国特許第２００３１５７０８９号（実施例５）；米国特許第２００３１８５８３０号（実施例５）；米国特許第２００３０６４３９７号（図２）；国際公開第２００２８９７４７号（実施例５；頁６１８−６１９）；国際公開第２００３０２２９９５号（実施例９；図１３Ａ，実施例５３；頁１７３，実施例２；図２Ａ）；ＮＰ＿０３６５８１ ６回膜貫通型前立腺上皮抗原
相互参照：ＭＩＭ：６０４４１５；ＮＰ＿０３６５８１．１； ＮＭ＿０１２４４９＿１

【0199】

（４）０７７２Ｐ（ＣＡ１２５，ＭＵＣ１６，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＦ３６１４８６）
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（２９）：２７３７１−２７３７５（２００１））；国際公開第２００４０４５５５３号（請求項１４）；国際公開第２００２９２８３６号（請求項６；図１２）；国際公開第２００２８３８６６号（請求項１５；頁１１６−１２１）；米国特許第２００３１２４１４０号（実施例１６）；相互参照：ＧＩ：３４５０１４６７；ＡＡＫ７４１２０．３；ＡＦ３６１４８６＿１

【0200】

（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ，ＭＳＬＮ，ＳＭＲ，巨核球可能因子（ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ），メソテリン（ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ），Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＭ＿００５８２３）Ｙａｍａｇｕｃｈｉ，Ｎ．，らＢｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９（２），８０５−８０８（１９９４），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９６（２０）：１１５３１−１１５３６（１９９９），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９３（１）：１３６−１４０（１９９６），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０（３７）：２１９８４−２１９９０（１９９５））；国際公開第２００３１０１２８３号（請求項１４）；（国際公開第２００２１０２２３５号（請求項１３；頁２８７−２８８）；国際公開第２００２１０１０７５号（請求項４；頁３０８−３０９）；国際公開第２００２７１９２８号（頁３２０−３２１）；国際公開第９４１０３１２号（頁５２−５７）；相互参照：ＭＩＭ：６０１０５１；ＮＰ＿００５８１４．２；ＮＭ＿００５８２３＿１

【0201】

６）Ｎａｐｉ３ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ，ＮＰＴＩＩｂ，ＳＬＣ３４Ａ２，溶質輸送体ファミリー３４（リン酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）），メンバ２，タイプＩＩ ナトリウム依存性リン酸塩輸送体３ｂ，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＭ＿００６４２４）
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（２２）：１９６６５−１９６７２（２００２），Ｇｅｎｏｍｉｃｓ６２（２）：２８１−２８４（１９９９），Ｆｅｉｌｄ，Ｊ．Ａ．，ら（１９９９）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５８（３）：５７８−５８２）；国際公開第２００４０２２７７８号（請求項２）；ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）；国際公開第２００２１０２２３５号（請求項１３；頁３２６）；ＥＰ８７５５６９（請求項１；頁１７−１９）；国際公開第２００１５７１８８号（請求項２０；頁３２９）；国際公開第２００４０３２８４２号（実施例ＩＶ）；国際公開第２００１７５１７７号（請求項２４；頁１３９−１４０）；
相互参照：ＭＩＭ：６０４２１７；ＮＰ＿００６４１５．１；ＮＭ＿００６４２４＿１

【0202】

（７）Ｓｅｍａ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２，ＫＩＡＡ１４４５，Ｍｍ．４２０１５，ＳＥＭＡ５Ｂ，ＳＥＭＡＧ，Ｓｅｍａｐｈｏｒｉｎ５ｂ Ｈｌｏｇ，ｓｅｍａ ｄｏｍａｉｎ， ７トロンボスポンジン繰り返し（タイプ１及びタイプ１のような）（ｓｅｖｅｎ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｒｅｐｅａｔｓ （タイプ１およびタイプ１様）），膜貫通ドメイン（商標）及び短細胞質ドメイン，（ｓｅｍａｐｈｏｒｉｎ）５Ｂ，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＢ０４０８７８）
Ｎａｇａｓｅ Ｔ．，ら（２０００）ＤＮＡＲｅｓ．７（２）：１４３−１５０）；国際公開第２００４０００９９７号（請求項１）；国際公開第２００３００３９８４号（請求項１）；国際公開第２００２０６３３９号（請求項１；頁５０）；国際公開第２００１８８１３３号（請求項１；頁４１−４３，４８−５８）；国際公開第２００３０５４１５２号（請求項２０）；国際公開第２００３１０１４００号（請求項１１）；
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：Ｑ９Ｐ２８３；ＥＭＢＬ；ＡＢ０４０８７８；ＢＡＡ９５９６９．１．Ｇｅｎｅｗ；ＨＧＮＣ：１０７３７；

【0203】

（８）ＰＳＣＡ ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ，Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ，ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ２７０００５０Ｃ１２，ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ２７０００５０Ｃ１２ｇｅｎｅ，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＹ３５８６２８）；Ｒｏｓｓら（２００２）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６２：２５４６−２５５３；米国特許第２００３１２９１９２号（請求項２）； 米国特許第２００４０４４１８０号（請求項１２）；米国特許第２００４０４４１７９号（請求項１１）；米国特許第２００３０９６９６１号（請求項１１）；米国特許第２００３２３２０５６号（実施例５）；国際公開第２００３１０５７５８号（請求項１２）；米国特許第２００３２０６９１８号（実施例５）；ＥＰ１３４７０４６（請求項１）；国際公開第２００３０２５１４８号（請求項２０）；
相互参照：ＧＩ：３７１８２３７８；ＡＡＱ８８９９１．１；ＡＹ３５８６２８＿１

【0204】

（９）ＥＴＢＲ（エンドセリン受容体タイプＢ（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ ｔｙｐｅ Ｂ ｒｅｃｅｐｔｏｒ），Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＹ２７５４６３）；
Ｎａｋａｍｕｔａ Ｍ．，らＢｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７７，３４−３９，１９９１；Ｏｇａｗａ Ｙ．，らＢｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７８，２４８−２５５，１９９１；Ａｒａｉ Ｈ．，らＪｐｎ．Ｃｉｒｃ．Ｊ．５６，１３０３−１３０７，１９９２；Ａｒａｉ Ｈ．，らＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，３４６３−３４７０，１９９３；Ｓａｋａｍｏｔｏ Ａ．，Ｙａｎａｇｉｓａｗａ Ｍ．，らＢｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７８，６５６−６６３，１９９１；Ｅｌｓｈｏｕｒｂａｇｙ Ｎ．Ａ．，らＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，３８７３−３８７９，１９９３；Ｈａｅｎｄｌｅｒ Ｂ．，らＪ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０，ｓ１−Ｓ４，１９９２；Ｔｓｕｔｓｕｍｉ Ｍ．，らＧｅｎｅ２２８，４３−４９，１９９９；ＳｔｒａｕｓｂｅｒｇＲ．Ｌ．，らＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９，１６８９９−１６９０３，２００２；Ｂｏｕｒｇｅｏｉｓ Ｃ．，らＪ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８２，３１１６−３１２３，１９９７；Ｏｋａｍｏｔｏ Ｙ．，らＢｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，２１５８９−２１５９６，１９９７；Ｖｅｒｈｅｉｊ Ｊ．Ｂ．，らＡｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．１０８，２２３−２２５，２００２；ＨｏｆｓｔｒａＲ．Ｍ．Ｗ．，らＥｕｒ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．５，１８０−１８５，１９９７；Ｐｕｆｆｅｎｂｅｒｇｅｒ Ｅ．Ｇ．，らＣｅｌｌ７９，１２５７−１２６６，１９９４；Ａｔｔｉｅ Ｔ．，ら，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．４，２４０７−２４０９，１９９５；Ａｕｒｉｃｃｈｉｏ Ａ．，らＨｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．５：３５１−３５４，１９９６；Ａｍｉｅｌ Ｊ．，らＨｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．５，３５５−３５７，１９９６；Ｈｏｆｓｔｒａ Ｒ．Ｍ．Ｗ．，らＮａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１２，４４５−４４７，１９９６；Ｓｖｅｎｓｓｏｎ Ｐ．Ｊ．，らＨｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１０３，１４５−１４８，１９９８；Ｆｕｃｈｓ Ｓ．，らＭｏｌ．Ｍｅｄ．７，１１５−１２４，２００１；Ｐｉｎｇａｕｌｔ Ｖ．，ら（２００２）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１１１，１９８−２０６；国際公開第２００４０４５５１６号（請求項１）；国際公開第２００４０４８９３８号（実施例２）；国際公開第２００４０４００００号（請求項１５１）；国際公開第２００３０８７７６８号（請求項１）；国際公開第２００３０１６４７５号（請求項１）；国際公開第２００３０１６４７５号（請求項１）；国際公開第２００２６１０８７号（図１）；国際公開第２００３０１６４９４号（図６）；国際公開第２００３０２５１３８号（請求項１２；頁１４４）；国際公開第２００１９８３５１号（請求項１；頁１２４−１２５）；ＥＰ５２２８６８（請求項８；図２）；国際公開第２００１７７１７２号（請求項１；頁２９７−２９９）；米国特許第２００３１０９６７６号；米国特許第６５１８４０４号（図３）；米国特許第５７７３２２３号（請求項１ａ；Ｃｏｌ３１−３４）；国際公開第２００４００１００４号；

【0205】

（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４，仮説タンパク質ＦＬＪ２０３１５，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＭ＿０１７７６３）；
国際公開第２００３１０４２７５号（請求項１）；国際公開第２００４０４６３４２号（実施例２）；国際公開第２００３０４２６６１号（請求項１２）；国際公開第２００３０８３０７４号（請求項１４；頁６１）；国際公開第２００３０１８６２１号（請求項１）；国際公開第２００３０２４３９２号（請求項２；図９３）；国際公開第２００１６６６８９号（実施例６）；
相互参照：ＬｏｃｕｓＩＤ：５４８９４；ＮＰ＿０６０２３３．２；ＮＭ＿０１７７６３＿１

【0206】

（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９，ＩＰＣＡ−１，ＰＣＡＮＡＰ１，ＳＴＡＭＰ１，ＳＴＥＡＰ２，ＳＴＭＰ，前立腺癌関連遺伝子１，前立腺がん関連タンパク質１，６回膜貫通型前立腺上皮抗原２，６回膜貫通型前立腺タンパク質，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＦ４５５１３８）
Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．８２（１１）：１５７３−１５８２（２００２））；国際公開第２００３０８７３０６号；米国特許第２００３０６４３９７号（請求項１；図１）；国際公開第２００２７２５９６号（請求項１３；頁５４−５５）；国際公開第２００１７２９６２号（請求項１；図４Ｂ）；国際公開第２００３１０４２７０号（請求項１１）；国際公開第２００３１０４２７０号（請求項１６）；米国特許第２００４００５５９８号（請求項２２）；国際公開第２００３０４２６６１号（請求項１２）；米国特許第２００３０６０６１２号（請求項１２；図１０）；国際公開第２００２２６８２２号（請求項２３；図２）；国際公開第２００２１６４２９号（請求項１２；図１０）；
相互参照：ＧＩ：２２６５５４８８；ＡＡＮ０４０８０．１；ＡＦ４５５１３８＿１

【0207】

（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０，ＦＬＪ２００４１，ＴＲＰＭ４，ＴＲＰＭ４Ｂ，一過性受容体電位カチオンチャンネル，サブファミリＭ，メンバ４，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＭ＿０１７６３６）
Ｘｕ，Ｘ．Ｚ．，らＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９８（１９）：１０６９２−１０６９７（２００１），Ｃｅｌｌ１０９（３）：３９７−４０７（２００２），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８（３３）：３０８１３−３０８２０（２００３））；米国特許第２００３１４３５５７号（請求項４）；国際公開第２０００４０６１４号（請求項１４；頁１００−１０３）；国際公開第２００２１０３８２号（請求項１；図９Ａ）；国際公開第２００３０４２６６１号（請求項１２）；国際公開第２００２３０２６８号（請求項２７；頁３９１）；米国特許第２００３２１９８０６号（請求項４）；国際公開第２００１６２７９４号（請求項１４；図１Ａ−Ｄ）；
相互参照：ＭＩＭ：６０６９３６；ＮＰ＿０６０１０６．２；ＮＭ＿０１７６３６＿１

【0208】

（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ，ＣＲ１，ＣＲＧＦ，ＣＲＩＰＴＯ，ＴＤＧＦ１，テラトーマ由来成長因子，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿００３２０３ｏｒＮＭ＿００３２１２）
Ｃｉｃｃｏｄｉｃｏｌａ，Ａ．，らＥＭＢＯ Ｊ．８（７）：１９８７−１９９１（１９８９），Ａｍ． Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．４９（３）：５５５−５６５（１９９１））；米国特許第２００３２２４４１１号（請求項１）；国際公開第２００３０８３０４１号（実施例１）；国際公開第２００３０３４９８４号（請求項１２）；国際公開第２００２８８１７０号（請求項２；頁５２−５３）；国際公開第２００３０２４３９２号（請求項２；図５８）；国際公開第２００２１６４１３号（請求項１；頁９４−９５，１０５）；国際公開第２００２２２８０８号（請求項２；図１）；米国特許第５８５４３９９号（実施例２；Ｃｏｌ１７−１８）；米国特許第５７９２６１６号（図２）；
相互参照：ＭＩＭ：１８７３９５；ＮＰ＿００３２０３．１；ＮＭ＿００３２１２＿１

【0209】

（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２） またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／Ｅｐｓｔｅｉｎ Ｂａｒｒウイルス受容体）またはＨｓ．７３７９２Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｍ２６００４）
Ｆｕｊｉｓａｋｕら（１９８９）Ｊ． Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４（４）：２１１８−２１２５）；Ｗｅｉｓ Ｊ．Ｊ．，らＪ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７，１０４７−１０６６，１９８８；Ｍｏｏｒｅ Ｍ．，らＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８４，９１９４−９１９８，１９８７；Ｂａｒｅｌ Ｍ．，らＭｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３５，１０２５−１０３１，１９９８；Ｗｅｉｓ Ｊ．Ｊ．，らＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８３，５６３９−５６４３，１９８６；Ｓｉｎｈａ Ｓ．Ｋ．，ら（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０，５３１１−５３２０；国際公開第２００４０４５５２０号 （実施例 ４）； 米国特許第２００４００５５３８号（実施例１）；国際公開第２００３０６２４０１号（請求項９）；国際公開第２００４０４５５２０号（実施例４）；国際公開第９１０２５３６号（図９．１−９．９）；国際公開第２００４０２０５９５号（請求項１）；
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：Ｐ２００２３；Ｑ１３８６６；Ｑ１４２１２；ＥＭＢＬ；Ｍ２６００４；ＡＡＡ３５７８６．１．

【0210】

（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ，ＣＤ７９β，ＩＧｂ（イムノグロブリン関連β），Ｂ２９，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＭ＿０００６２６ｏｒ１１０３８６７４）
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（２００３）１００（７）：４１２６−４１３１，Ｂｌｏｏｄ（２００２）１００（９）：３０６８−３０７６，Ｍｕｌｌｅｒら（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（６）：１６２１−１６２５）；国際公開第２００４０１６２２５号（請求項２，図１４０）；国際公開第２００３０８７７６８号，米国特許第２００４１０１８７４号（請求項１，頁１０２）；国際公開第２００３０６２４０１号（請求項９）；国際公開第２００２７８５２４号（実施例２）；米国特許第２００２１５０５７３号（請求項５，頁１５）；米国特許第５６４４０３３号；国際公開第２００３０４８２０２号（請求項１，頁ｓ３０６ａｎｄ３０９）；ＷＯ９９／５５８６５８，米国特許第６５３４４８２号（請求項１３，図１７Ａ／Ｂ）；国際公開第２０００５５３５１号（請求項１１，頁ｓ１１４５−１１４６）；
相互参照：ＭＩＭ：１４７２４５；ＮＰ＿０００６１７．１；ＮＭ＿０００６２６＿１

【0211】

（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４，ＩＲＴＡ４，ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有 ホスファターゼアンカータンパク質１ａ），ＳＰＡＰ１Ｂ，ＳＰＡＰ１Ｃ，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＭ＿０３０７６４，ＡＹ３５８１３０）
Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１３（１０）：２２６５−２２７０（２００３），Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ５４（２）：８７−９５ （２００２），Ｂｌｏｏｄ９９（８）：２６６２−２６６９（２００２），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９８（１７）：９７７２−９７７７（２００１），Ｘｕ，Ｍ．Ｊ．，ら（２００１）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２８０（３）：７６８−７７５；国際公開第２００４０１６２２５号（請求項２）；国際公開第２００３０７７８３６号；国際公開第２００１３８４９０号（請求項５；図１８Ｄ−１−１８Ｄ−２）；国際公開第２００３０９７８０３号（請求項１２）；国際公開第２００３０８９６２４号（請求項２５）；
相互参照：ＭＩＭ：６０６５０９；ＮＰ＿１１０３９１．２；ＮＭ＿０３０７６４＿１

【0212】

（１７）ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｍ１１７３０）
Ｃｏｕｓｓｅｎｓ Ｌ．，らＳｃｉｅｎｃｅ（１９８５）２３０（４７３０）：１１３２−１１３９）；Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｔ．，らＮａｔｕｒｅ３１９，２３０−２３４，１９８６；Ｓｅｍｂａ Ｋ．，らＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２，６４９７−６５０１，１９８５；Ｓｗｉｅｒｃｚ Ｊ．Ｍ．，らＪ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１６５，８６９−８８０，２００４；Ｋｕｈｎｓ Ｊ．Ｊ．，らＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４，３６４２２−３６４２７，１９９９；Ｃｈｏ Ｈ．−Ｓ．，らＮａｔｕｒｅ４２１，７５６−７６０，２００３；Ｅｈｓａｎｉ Ａ．，ら（１９９３）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ１５，４２６−４２９； 国際公開第２００４０４８９３８号（実施例２）；国際公開第２００４０２７０４９号（図１Ｉ）；国際公開第２００４００９６２２号；国際公開第２００３０８１２１０号；国際公開第２００３０８９９０４号（請求項９）；国際公開第２００３０１６４７５号（請求項１）；米国特許第２００３１１８５９２号；国際公開第２００３００８５３７号（請求項１）；国際公開第２００３０５５４３９号（請求項２９；図１Ａ−Ｂ）；国際公開第２００３０２５２２８号（請求項３７；図５Ｃ）；国際公開第２００２２２６３６号（実施例１３；頁９５−１０７）；国際公開第２００２１２３４１号（請求項６８；図７）；国際公開第２００２１３８４７号（頁７１−７４）；国際公開第２００２１４５０３号（頁１１４−１１７）；国際公開第２００１５３４６３号（請求項２；頁４１−４６）；国際公開第２００１４１７８７号（頁１５）；国際公開第２０００４４８９９号（請求項５２；図７）；国際公開第２０００２０５７９号（請求項３；図２）；米国特許第５８６９４４５号（請求項３；Ｃｏｌ３１−３８）；国際公開第９６３０５１４号（請求項２；頁５６−６１）；ＥＰ１４３９３９３（請求項７）；国際公開第２００４０４３３６１号（請求項７）；国際公開第２００４０２２７０９号；国際公開第２００１００２４４号（実施例３；図４）；
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：Ｐ０４６２６；ＥＭＢＬ；Ｍ１１７６７；ＡＡＡ３５８０８．１．ＥＭＢＬ；Ｍ１１７６１；ＡＡＡ３５８０８．１．

【0213】

（１８）ＮＣＡ（ＣＥＡＣＡＭ６，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｍ１８７２８）；
Ｂａｒｎｅｔｔ Ｔ．，らＧｅｎｏｍｉｃｓ３，５９−６６，１９８８；Ｔａｗａｒａｇｉ Ｙ．，らＢｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５０，８９−９６，１９８８；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ Ｒ．Ｌ．，らＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９：１６８９９−１６９０３，２００２；国際公開第２００４０６３７０９号；ＥＰ１４３９３９３（請求項７）；国際公開第２００４０４４１７８号（実施例４）；国際公開第２００４０３１２３８号；国際公開第２００３０４２６６１号（請求項１２）；国際公開第２００２７８５２４号（実施例２）；国際公開第２００２８６４４３号（請求項２７；頁４２７）；国際公開第２００２６０３１７号（請求項２）；
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：Ｐ４０１９９；Ｑ１４９２０；ＥＭＢＬ；Ｍ２９５４１；ＡＡＡ５９９１５．１．ＥＭＢＬ；Ｍ１８７２８；

【0214】

（１９）ＭＤＰ（ＤＰＥＰ１，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＢＣ０１７０２３）
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９（２６）：１６８９９−１６９０３（２００２））；国際公開第２００３０１６４７５号（請求項１）；国際公開第２００２６４７９８号（請求項３３；頁８５−８７）；ＪＰ０５００３７９０（図６−８）；国際公開第９９４６２８４号（図９）；
相互参照：ＭＩＭ：１７９７８０；ＡＡＨ１７０２３．１；ＢＣ０１７０２３＿１

【0215】

（２０）ＩＬ２０Ｒα（ＩＬ２０Ｒａ，ＺＣＹＴＯＲ７，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＦ１８４９７１）；
Ｃｌａｒｋ Ｈ．Ｆ．，らＧｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１３，２２６５−２２７０，２００３；Ｍｕｎｇａｌｌ Ａ．Ｊ．，らＮａｔｕｒｅ４２５，８０５−８１１，２００３；Ｂｌｕｍｂｅｒｇ Ｈ．，らＣｅｌｌ１０４，９−１９，２００１；Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ Ｌ．，らＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７，３５４５−３５４９，２００１；Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋ Ｊ．，らＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７，４７５１７−４７５２３，２００２；Ｐｌｅｔｎｅｖ Ｓ．，ら（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ４２：１２６１７−１２６２４；Ｓｈｅｉｋｈ Ｆ．，ら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２，２００６−２０１０；ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）；米国特許第２００４００５３２０号（実施例５）；国際公開第２００３０２９２６２号（頁７４−７５）；国際公開第２００３００２７１７号（請求項２；頁６３）；国際公開第２００２２２１５３号（頁４５−４７）；米国特許第２００２０４２３６６号（頁２０−２１）；国際公開第２００１４６２６１号（頁５７−５９）；国際公開第２００１４６２３２号（頁６３−６５）；国際公開第９８３７１９３号（請求項１；頁５５−５９）；
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：Ｑ９ＵＨＦ４；Ｑ６ＵＷＡ９；Ｑ９６ＳＨ８；ＥＭＢＬ；ＡＦ１８４９７１；ＡＡＦ０１３２０．１．

【0216】

（２１）Ｂｒｅｖｉｃａｎ（ＢＣＡＮ，ＢＥＨＡＢ，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＦ２２９０５３）
Ｇａｒｙ Ｓ．Ｃ．，らＧｅｎｅ２５６，１３９−１４７，２０００；Ｃｌａｒｋ Ｈ．Ｆ．，らＧｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１３，２２６５−２２７０，２００３；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ Ｒ．Ｌ．，らＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９，１６８９９−１６９０３，２００２；米国特許第２００３１８６３７２号（請求項１１）；米国特許第２００３１８６３７３号（請求項１１）；米国特許第２００３１１９１３１号（請求項１；図５２）；米国特許第２００３１１９１２２号（請求項１；図５２）；米国特許第２００３１１９１２６号（請求項１）；米国特許第２００３１１９１２１号（請求項１；図５２）；米国特許第２００３１１９１２９号（請求項１）；米国特許第２００３１１９１３０号（請求項１）；米国特許第２００３１１９１２８号（請求項１；図５２）；米国特許第２００３１１９１２５号（請求項１）；国際公開第２００３０１６４７５号（請求項１）；国際公開第２００２０２６３４号（請求項１）；

【0217】

（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ（ＤＲＴ，ＥＲＫ，Ｈｅｋ５，ＥＰＨＴ３，Ｔｙｒｏ５，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＭ＿００４４４２）
Ｃｈａｎ，Ｊ．ａｎｄ Ｗａｔｔ，Ｖ．Ｍ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ６（６），１０５７−１０６１（１９９１）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ１０（５）：８９７−９０５（１９９５），Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２１：３０９−３４５（１９９８），Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｃｙｔｏｌ．１９６：１７７−２４４（２０００））；国際公開第２００３０４２６６１号（請求項１２）；国際公開第２０００５３２１６号（請求項１；頁４１）；国際公開第２００４０６５５７６号（請求項１）；国際公開第２００４０２０５８３号（請求項９）；国際公開第２００３００４５２９号（頁１２８−１３２）；国際公開第２０００５３２１６号（請求項１；頁４２）；
相互参照：ＭＩＭ：６００９９７；ＮＰ＿００４４３３．２；ＮＭ＿００４４４２＿１

【0218】

（２３）ＡＳＬＧ６５９（Ｂ７ｈ，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＸ０９２３２８）
米国特許第２００４０１０１８９９号（請求項２）；国際公開第２００３１０４３９９号（請求項１１）；国際公開第２００４０００２２１号（図３）；米国特許第２００３１６５５０４号（請求項１）；米国特許第２００３１２４１４０号（実施例２）；米国特許第２００３０６５１４３号（図６０）；国際公開第２００２１０２２３５号（請求項１３；頁２９９）；米国特許第２００３０９１５８０号（実施例２）；国際公開第２００２１０１８７号（請求項６；図１０）；国際公開第２００１９４６４１号（請求項１２；図７ｂ）；国際公開第２００２０２６２４号（請求項１３；図１Ａ−１Ｂ）；米国特許第２００２０３４７４９号（請求項５４；頁４５−４６）；国際公開第２００２０６３１７号（実施例２；頁３２０−３２１，請求項３４；頁３２１−３２２）；国際公開第２００２７１９２８号（頁４６８−４６９）；国際公開第２００２０２５８７号（実施例１；図１）；国際公開第２００１４０２６９号（実施例３；頁ｓ１９０−１９２）；国際公開第２０００３６１０７号（実施例２；頁２０５−２０７）；国際公開第２００４０５３０７９号（請求項１２）；国際公開第２００３００４９８９号（請求項１）；国際公開第２００２７１９２８号（頁２３３−２３４， ４５２−４５３）；ＷＯ０１１６３１８；

【0219】

（２４）ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原前駆体，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＪ２９７４３６）
Ｒｅｉｔｅｒ Ｒ．Ｅ．，らＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９５，１７３５−１７４０，１９９８；Ｇｕ Ｚ．，らＯｎｃｏｇｅｎｅ１９，１２８８−１２９６，２０００；Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．（２０００）２７５（３）：７８３−７８８；国際公開第２００４０２２７０９号；ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）；米国特許第２００４０１８５５３号（請求項１７）；国際公開第２００３００８５３７号（請求項１）；国際公開第２００２８１６４６号（請求項１；頁１６４）；国際公開第２００３００３９０６号（請求項１０；頁２８８）；国際公開第２００１４０３０９号（実施例１；図１７）；米国特許第２００１０５５７５１号（実施例１；図１ｂ）；国際公開第２０００３２７５２号（請求項１８；図１）；国際公開第９８５１８０５号（請求項１７；頁９７）；国際公開第９８５１８２４号（請求項１０；頁９４）；国際公開第９８４０４０３号（請求項２；図１Ｂ）；
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：Ｏ４３６５３；ＥＭＢＬ；ＡＦ０４３４９８；ＡＡＣ３９６０７．１．

【0220】

（２５）ＧＥＤＡ（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＹ２６０７６３）；
ＡＡＰ１４９５４ｌｉｐｏｍａ ＨＭＧＩＣ ｆｕｓｉｏｎ−ｐａｒｔｎｅｒ−ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ／ｐｉｄ＝ＡＡＰ１４９５４．１−Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
Ｓｐｅｃｉｅｓ：Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）
国際公開第２００３０５４１５２号（請求項２０）；国際公開第２００３０００８４２号（請求項１）；国際公開第２００３０２３０１３号（実施例３，請求項２０）；米国特許第２００３１９４７０４号（請求項４５）；
相互参照：ＧＩ：３０１０２４４９；ＡＡＰ１４９５４．１；ＡＹ２６０７６３＿１

【0221】

（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体，ＢＬｙＳ受容体３，ＢＲ３，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＦ１１６４５６）；ＢＡＦＦ受容体／ｐｉｄ＝ＮＰ＿４４３１７７．１−ホモ・サピエンス
Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｓ．，らＳｃｉｅｎｃｅ２９３（５５３７），２１０８−２１１１（２００１）；国際公開第２００４０５８３０９号；国際公開第２００４０１１６１１号；国際公開第２００３０４５４２２号（実施例；頁３２−３３）；国際公開第２００３０１４２９４号（請求項３５；図６Ｂ）；国際公開第２００３０３５８４６号（請求項７０；頁６１５−６１６）；国際公開第２００２９４８５２号（Ｃｏｌ１３６−１３７）；国際公開第２００２３８７６６号（請求項３；頁１３３）；国際公開第２００２２４９０９号（実施例３；図３）；
相互参照：ＭＩＭ：６０６２６９；ＮＰ＿４４３１７７．１；ＮＭ＿０５２９４５＿１；ＡＦ１３２６００

【0222】

（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォーム，ＢＬ−ＣＡＭ，Ｌｙｂ−８，Ｌｙｂ８，ＳＩＧＬＥＣ−２，ＦＬＪ２２８１４，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＫ０２６４６７）；
Ｗｉｌｓｏｎら（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１３７−１４６；国際公開第２００３０７２０３６号（請求項１；図１）；
相互参照：ＭＩＭ：１０７２６６；ＮＰ＿００１７６２．１；ＮＭ＿００１７７１＿１

【0223】

（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ，ＣＤ７９α，イムノグロブリン関連α，共有結合してＩｇベータ（ＣＤ７９Ｂ）と相互作用して、Ｉｇ Ｍ分子と表面で複合体を形成するＢ細胞特有のタンパク質、細胞分化に関する信号を送る）
，ｐＩ：４．８４，ＭＷ：２５０２８ＴＭ：２［Ｐ］Ｇｅｎｅ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ：１９ｑ１３．２，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿００１７７４．１０）
国際公開第２００３０８８８０８号，米国特許第２００３０２２８３１９号；国際公開第２００３０６２４０１号（請求項９）；米国特許第２００２１５０５７３号（請求項４，頁ｓ１３−１４）；国際公開第９９５８６５８号（請求項１３，図１６）；国際公開第９２０７５７４号（図１）；米国特許第５６４４０３３号；Ｈａら（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５２６−１５３１；Ｍｕｅｌｌｅｒら（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２：１６２１−１６２５；Ｈａｓｈｉｍｏｔｏら（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ４０（４）：２８７−２９５；Ｐｒｅｕｄ’ｈｏｍｍｅら（１９９２）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９０（１）：１４１−１４６；Ｙｕら（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（２）６３３−６３７；Ｓａｋａｇｕｃｈｉら（１９８８）ＥＭＢＯＪ．７（１１）：３４５７−３４６４；

【0224】

（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１，ＣＸＣＬ１３ケモカインによって活性化される蛋白質共役受容体、リンパ球移動と体液防御に機能し、ＨＩＶ−２感染症とおそらくＡＩＤＳ、リンパ腫、骨髄腫と白血病の発展で役割を果たす。）；３７２ａａ，ｐＩ：８．５４ＭＷ：４１９５９ＴＭ：７［Ｐ］ Ｇｅｎｅ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ：１１ｑ２３．３，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿００１７０７．１）
国際公開第２００４０４００００号；国際公開第２００４０１５４２６号；米国特許第２００３１０５２９２号（実施例２）；米国特許第６５５５３３９号（実施例２）；国際公開第２００２６１０８７号（図１）；国際公開第２００１５７１８８号（請求項２０，頁２６９）；国際公開第２００１７２８３０号（頁ｓ１２−１３）；国際公開第２０００２２１２９号（実施例１，頁ｓ１５２−１５３，実施例２，頁ｓ２５４−２５６）；国際公開第９９２８４６８号（請求項１，頁３８）；米国特許第５４４００２１号（実施例２，ｃｏｌ４９−５２）；国際公開第９４２８９３１号（頁ｓ５６−５８）；国際公開第９２１７４９７号（請求項７，図５）；Ｄｏｂｎｅｒら（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：２７９５−２７９９；Ｂａｒｅｌｌａら（１９９５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０９：７７３−７７９；

【0225】

（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ペプチドを結びつけて、それらをＣＤ４＋Ｔリンパ球に出すＭＨＣクラスＩＩ分子（Ｉａ抗原）のベータサブユニット）；２７３ａａ，ｐＩ：６．５６ＭＷ：３０８２０ＴＭ：１［Ｐ］Ｇｅｎｅ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ：６ｐ２１．３，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿００２１１１．１）
Ｔｏｎｎｅｌｌｅら（１９８５）ＥＭＢＯ Ｊ．４（１１）：２８３９−２８４７；Ｊｏｎｓｓｏｎら（１９８９）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ２９（６）：４１１−４１３；Ｂｅｃｋら（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２８：４３３−４４１；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇら（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ９９：１６８９９−１６９０３；Ｓｅｒｖｅｎｉｕｓら（１９８７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：８７５９−８７６６；Ｂｅｃｋら（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５５：１−１３；Ｎａｒｕｓｅら（２００２）Ｔｉｓｓｕｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ５９：５１２−５１９；国際公開第９９５８６５８号（請求項１３，図１５）；米国特許第６１５３４０８号（Ｃｏｌ３５−３８）；米国特許第５９７６５５１号（ｃｏｌ１６８−１７０）；米国特許第６０１１１４６号（ｃｏｌ１４５−１４６）；Ｋａｓａｈａｒａら（１９８９）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ３０（１）：６６−６８；Ｌａｒｈａｍｍａｒら（１９８５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０（２６）：１４１１１−１４１１９；

【0226】

（３１）Ｐ２Ｘ５（細胞外ＡＴＰによって集められたイオンチャネルである、プリン受容体Ｐ２Ｘリガンド開口型のイオンチャネル５、神経発生とシナプス伝達に関係しているかもしれない、不十分性は特発性排尿筋不安定性の病態生理に寄与し得る）；４２２ａａ），ｐＩ：７．６３，ＭＷ：４７２０６ＴＭ：１［Ｐ］Ｇｅｎｅ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ：１７ｐ１３．３，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿００２５５２．２）
Ｌｅら（１９９７）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．４１８（１−２）：１９５−１９９；国際公開第２００４０４７７４９号；国際公開第２００３０７２０３５号（請求項１０）；Ｔｏｕｃｈｍａｎら（２０００）Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１０：１６５−１７３；国際公開第２００２２２６６０号（請求項２０）；国際公開第２００３０９３４４４号（請求項１）；国際公開第２００３０８７７６８号（請求項１）；国際公開第２００３０２９２７７号（頁８２）；

【0227】

（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２，Ｌｙｂ−２）ＰＲＯＴＥＩＮ ＳＥＱＵＥＮＣＥ Ｆｕｌｌ ｍａｅａｉｔｙ．．．ｔａｆｒｆｐｄ（１．．３５９；３５９ａａ），ｐＩ：８．６６，ＭＷ：４０２２５ＴＭ：１［Ｐ］Ｇｅｎｅ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ：９ｐ１３．３，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿００１７７３．１）
国際公開第２００４０４２３４６号（請求項６５）；国際公開第２００３０２６４９３号（頁ｓ５１−５２，５７−５８）；国際公開第２０００７５６５５号（頁ｓ１０５−１０６）；Ｖｏｎ Ｈｏｅｇｅｎら（１９９０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４（１２）：４８７０−４８７７；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇら（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ９９：１６８９９−１６９０３；

【0228】

（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５），ロイシンリッチリピートファミリーの膜タンパク質タイプＩ（ｔｙｐｅ Ｉ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｔｈｅ ｌｅｕｃｉｎｅ ｒｉｃｈ ｒｅｐｅａｔ（ＬＲＲ）ｆａｍｉｌｙ），Ｂ細胞の活性化と自然死を規制，機能の喪失は全身性紅斑性狼瘡患者の増加する病気活動と関係）；６６１ａａ，ｐＩ：６．２０，ＭＷ：７４１４７ＴＭ：１［Ｐ］Ｇｅｎｅ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ：５ｑ１２，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿００５５７３．１）
米国特許第２００２１９３５６７号；国際公開第９７０７１９８号（請求項１１，頁ｓ３９−４２）；Ｍｉｕｒａら（１９９６）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ３８（３）：２９９−３０４；Ｍｉｕｒａら（１９９８）Ｂｌｏｏｄ９２：２８１５−２８２２；国際公開第２００３０８３０４７号；国際公開第９７４４４５２号（請求項８，頁ｓ５７−６１）；国際公開第２０００１２１３０号（頁ｓ２４−２６）；

【0229】

（３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１，Ｃ２ｔｙｐｅ Ｉｇ様及びＩＴＡＭドメインを含むイムノグロブリンＦｃドメインの推測受容体，Ｂリンパ球分化に機能する可能性）；４２９ａａ，ｐＩ：５．２８，ＭＷ：４６９２５ＴＭ：１［Ｐ］Ｇｅｎｅ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ：１ｑ２１−１ｑ２２，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿４４３１７０．１）
国際公開第２００３０７７８３６号；国際公開第２００１３８４９０号（請求項６，図１８Ｅ−１−１８−Ｅ−２）；Ｄａｖｉｓら（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ９８（１７）：９７７２−９７７７；国際公開第２００３０８９６２４号（請求項８）；ＥＰ１３４７０４６（請求項１）；国際公開第２００３０８９６２４号（請求項７）；

【0230】

（３５）ＩＲＴＡ２（イムノグロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２，リンパ腫形成とＢ細胞発達に機能する可能性がある推定の免疫受容体；移動による遺伝子の規制緩和は、若干のＢ細胞悪性腫瘍に起こる）；９７７ａａ，ｐＩ：６．８８ＭＷ：１０６４６８ＴＭ：１［Ｐ］Ｇｅｎｅ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ：１ｑ２１，Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｈｕｍａｎ：ＡＦ３４３６６２，ＡＦ３４３６６３，ＡＦ３４３６６４，ＡＦ３４３６６５，ＡＦ３６９７９４，ＡＦ３９７４５３，ＡＫ０９０４２３，ＡＫ０９０４７５，ＡＬ８３４１８７，ＡＹ３５８０８５；Ｍｏｕｓｅ：ＡＫ０８９７５６，ＡＹ１５８０９０，ＡＹ５０６５５８；ＮＰ＿１１２５７１．１
国際公開第２００３０２４３９２号（請求項２，図９７）；Ｎａｋａｙａｍａら（２０００）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２７７（１）：１２４−１２７；国際公開第２００３０７７８３６号；国際公開第２００１３８４９０号（請求項３，図１８Ｂ−１−１８Ｂ−２）；

【0231】

（３６）ＴＥＮＢ２（ＴＭＥＦＦ２，ｔｏｍｏｒｅｇｕｌｉｎ，ＴＰＥＦ，ＨＰＰ１，ＴＲ，推定膜貫通プロテオグリカン，ＥＧＦ／ヘレグリンファミリー成長因子及びホリスタチンに関連する）；３７４ａａ，ＮＣＢＩ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＡＡＤ５５７７６，ＡＡＦ９１３９７，ＡＡＧ４９４５１，ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ：ＮＰ＿０５７２７６；ＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ：２３６７１；ＯＭＩＭ：６０５７３４；ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｑ９ＵＩＫ５；Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＦ１７９２７４；ＡＹ３５８９０７，ＣＡＦ８５７２３，ＣＱ７８２４３６
国際公開第２００４０７４３２０号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８１０）；ＪＰ２００４１１３１５１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ２，４，８）；国際公開第２００３０４２６６１号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５８０）；国際公開第２００３００９８１４号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４１１）；ＥＰ１２９５９４４（頁ｓ６９−７０）；国際公開第２００２３０２６８号（頁３２９）；国際公開第２００１９０３０４号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２７０６）；米国特許第２００４２４９１３０号；米国特許第２００４０２２７２７号；国際公開第２００４０６３３５５号；米国特許第２００４１９７３２５号；米国特許第２００３２３２３５０号；米国特許第２００４００５５６３号；米国特許第２００３１２４５７９号；Ｈｏｒｉｅ ら（２０００）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ６７：１４６−１５２；Ｕｃｈｉｄａら（１９９９）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２６６：５９３−６０２；Ｌｉａｎｇら（２０００）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６０：４９０７−１２；Ｇｌｙｎｎｅ−Ｊｏｎｅｓら（２００１）Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．Ｏｃｔ１５；９４（２）：１７８−８４；

【0232】

（３７）ＰＭＥＬ１７（ｓｉｌｖｅｒ相同体（ｈｏｍｏｌｏｇ）；ＳＩＬＶ；Ｄ１２Ｓ５３Ｅ；ＰＭＥＬ１７；（ＳＩ）；（ＳＩＬ）；ＭＥ２０；ｇｐ１００）ＢＣ００１４１４；ＢＴ００７２０２；Ｍ３２２９５；Ｍ７７３４８；ＮＭ＿００６９２８；ＭｃＧｌｉｎｃｈｅｙ，Ｒ．Ｐ．ら（２００９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０６（３３），１３７３１−１３７３６；Ｋｕｍｍｅｒ，Ｍ．Ｐ．ら（２００９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８４（４），２２９６−２３０６；

【0233】

（３８）ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様および２つのホリスタチン様ドメイン１を有する膜貫通蛋白質）；Ｔｏｍｏｒｅｇｕｌｉｎ−１；Ｈ７３６５；Ｃ９ｏｒｆ２；Ｃ９ＯＲＦ２；Ｕ１９８７８；Ｘ８３９６１）ＮＭ＿０８０６５５；ＮＭ＿００３６９２；Ｈａｒｍｓ，Ｐ．Ｗ．（２００３）ＧｅｎｅｓＤｅｖ．１７（２１），２６２４−２６２９；Ｇｅｒｙ，Ｓ．ら（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２２（１８）：２７２３−２７２７；

【0234】

（３９）ＧＤＮＦ−Ｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体α１；ＧＦＲＡ１；ＧＤＮＦＲ；ＧＤＮＦＲＡ；ＲＥＴＬ１；ＴＲＮＲ１；ＲＥＴ１Ｌ；ＧＤＮＦＲ−ａｌｐｈａ１；ＧＦＲ−ＡＬＰＨＡ−１；Ｕ９５８４７；ＢＣ０１４９６２；ＮＭ＿１４５７９３）ＮＭ＿００５２６４；Ｋｉｍ，Ｍ．Ｈ．ら（２００９）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２９（８），２２６４−２２７７；Ｔｒｅａｎｏｒ，Ｊ．Ｊ．ら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ３８２（６５８６）：８０−８３；

【0235】

（４０）Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体，遺伝子座Ｅ（ｌｏｃｕｓ Ｅ）；Ｌｙ６７，ＲＩＧ−Ｅ，ＳＣＡ−２，ＴＳＡ−１）ＮＰ＿００２３３７．１；ＮＭ＿００２３４６．２；ｄｅ Ｎｏｏｉｊ−ｖａｎ Ｄａｌｅｎ，Ａ．Ｇ．ら（２００３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ１０３（６），７６８−７７４；Ｚａｍｍｉｔ，Ｄ．Ｊ．ら（２００２）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２２（３）：９４６−９５２；

【0236】

（４１）ＴＭＥＭ４６（ＳＨＩＳＡ相同体２（ｓｈｉｓａ ｈｏｍｏｌｏｇ２（Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ））；ＳＨＩＳＡ２）ＮＰ＿００１００７５３９．１；ＮＭ＿００１００７５３８．１；Ｆｕｒｕｓｈｉｍａ，Ｋ．ら（２００７）Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．３０６（２），４８０−４９２；Ｃｌａｒｋ，Ｈ．Ｆ．ら（２００３）Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１３（１０）：２２６５−２２７０；

【0237】

（４２）Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体，遺伝子座Ｇ６Ｄ；Ｌｙ６−Ｄ，ＭＥＧＴ１）ＮＰ＿０６７０７９．２；ＮＭ＿０２１２４６．２；Ｍａｌｌｙａ，Ｍ．ら（２００２）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ８０（１）：１１３−１２３；Ｒｉｂａｓ，Ｇ．ら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３（１）：２７８−２８７；

【0238】

（４３）ＬＧＲ５（Ｇ蛋白質共役受容体５を含むロイシンリッチリピート（ｌｅｕｃｉｎｅ−ｒｉｃｈ ｒｅｐｅａｔ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ５）；ＧＰＲ４９，ＧＰＲ６７）ＮＰ＿００３６５８．１；ＮＭ＿００３６６７．２；Ｓａｌａｎｔｉ，Ｇ．ら（２００９）Ａｍ．Ｊ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．１７０（５）：５３７−５４５；Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｙ．ら（２００３）Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ３７（３）：５２８−５３３；

【0239】

（４４）ＲＥＴ（ｒｅｔプロト癌遺伝子；ＭＥＮ２Ａ；ＨＳＣＲ１；ＭＥＮ２Ｂ；ＭＴＣ１；（ＰＴＣ）；ＣＤＨＦ１２；Ｈｓ．１６８１１４；ＲＥＴ５１；ＲＥＴ−ＥＬＥ１）ＮＰ＿０６６１２４．１；ＮＭ＿０２０９７５．４；Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ，Ｈ．ら（２００９）Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ．１００（１０）：１８９５−１９０１；Ｎａｒｉｔａ，Ｎ．ら（２００９）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ２８（３４）：３０５８−３０６８；

【0240】

（４５）ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体，遺伝子座Ｋ；ＬＹ６Ｋ；ＨＳＪ００１３４８；ＦＬＪ３５２２６）ＮＰ＿０５９９９７．３；ＮＭ＿０１７５２７．３；Ｉｓｈｉｋａｗａ，Ｎ．ら（２００７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６７（２４）：１１６０１−１１６１１；ｄｅ Ｎｏｏｉｊ−ｖａｎ Ｄａｌｅｎ，Ａ．Ｇ．ら（２００３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ１０３（６）：７６８−７７４；

【0241】

（４６）ＧＰＲ１９（Ｇ蛋白質共役受容体１９（Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ１９）；Ｍｍ．４７８７）ＮＰ＿００６１３４．１；ＮＭ＿００６１４３．２；Ｍｏｎｔｐｅｔｉｔ，Ａ．ａｎｄ Ｓｉｎｎｅｔｔ，Ｄ．（１９９９）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１０５（１−２）：１６２−１６４；Ｏ’Ｄｏｗｄ，Ｂ．Ｆ．ら（１９９６）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３９４（３）：３２５−３２９；

【0242】

（４７）ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体；ＫＩＳＳ１Ｒ；ＧＰＲ５４；ＨＯＴ７Ｔ１７５；ＡＸＯＲ１２）ＮＰ＿１１５９４０．２；ＮＭ＿０３２５５１．４；Ｎａｖｅｎｏｔ，Ｊ．Ｍ．ら（２００９）Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７５（６）：１３００−１３０６；Ｈａｔａ，Ｋ．ら（２００９）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２９（２）：６１７−６２３；

【0243】

（４８）ＡＳＰＨＤ１（アスパラギン酸βヒドロキシラーゼドメイン含有１；ＬＯＣ２５３９８２）ＮＰ＿８５９０６９．２；ＮＭ＿１８１７１８．３；Ｇｅｒｈａｒｄ，Ｄ．Ｓ．ら（２００４）Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１４（１０Ｂ）：２１２１−２１２７；

【0244】

（４９）チロシナーゼ（ＴＹＲ；ＯＣＡＩＡ；ＯＣＡ１Ａ；チロシナーゼ（ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ）；ＳＨＥＰ３）ＮＰ＿０００３６３．１；ＮＭ＿０００３７２．４；Ｂｉｓｈｏｐ，Ｄ．Ｔ．ら（２００９）Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．４１（８）：９２０−９２５；Ｎａｎ，Ｈ．ら（２００９）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ１２５（４）：９０９−９１７；

【0245】

（５０）ＴＭＥＭ１１８（リングフィンガータンパク質，膜貫通２；ＲＮＦＴ２；ＦＬＪ１４６２７）ＮＰ＿００１１０３３７３．１；ＮＭ＿００１１０９９０３．１；Ｃｌａｒｋ，Ｈ．Ｆ．ら（２００３）Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１３（１０）：２２６５−２２７０；Ｓｃｈｅｒｅｒ，Ｓ．Ｅ．ら（２００６）Ｎａｔｕｒｅ４４０（７０８２）：３４６−３５１

【0246】

（５１）ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇ蛋白質共役受容体１７２Ａ（Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ１７２Ａ）；ＧＰＣＲ４１；ＦＬＪ１１８５６；Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）ＮＰ＿０７８８０７．１；ＮＭ＿０２４５３１．３；Ｅｒｉｃｓｓｏｎ，Ｔ．Ａ．ら（２００３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１００（１１）：６７５９−６７６４；Ｔａｋｅｄａ，Ｓ．ら（２００２）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．５２０（１−３）：９７−１０１．

【0247】

一実施形態において、抗体は下記のポリペプチド：ＢＭＰＲ１Ｂ、Ｅ１６、ＳＴＥＡＰ１、０７７２Ｐ、ＭＰＦ、Ｎａｐｉ３ｂ、Ｓｅｍａ５ｂ、ＰＳＣＡ ｈｌｇ、ＥＴＢＲ、ＭＳＧ７８３、ＳＴＥＡＰ２、ＴｒｐＭ４、ＣＲＩＰＴＯ、ＣＤ２１、ＣＤ７９ｂ、ＦｃＲＨ２、ＨＥＲ２、ＮＣＡ、ＭＤＰ、ＩＬ２０Ｒα、ブレビカン、ＥｐｈＢ２Ｒ、ＡＳＬＧ６５９、ＰＳＣＡ、ＧＥＤＡ、ＢＡＦＦ−Ｒ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＸＣＲ５、ＨＬＡ−ＤＯＢ、Ｐ２Ｘ５、ＣＤ７２、ＬＹ６４、ＦｃＲＨ１、ＩＲＴＡ２、ＴＥＮＢ２、ＰＭＥＬ１７、ＴＭＥＦＦ１、ＧＤＮＦ−Ｒａ１、Ｌｙ６Ｅ、ＴＭＥＭ４６、Ｌｙ６Ｇ６Ｄ、ＬＧＲ５、ＲＥＴ、ＬＹ６Ｋ、ＧＰＲ１９、ＧＰＲ５４、ＡＳＰＨＤ１、チロシナーゼ、ＴＭＥＭ１１８、ＧＰＲ１７２Ａ及びＣＤ３３の１つ以上に結合する。
一実施形態において、抗体はＢＭＰＲ１Ｂに結合し、
一実施形態において、抗体はＥ１６に結合し、
一実施形態において、抗体はＳＴＥＡＰ１に結合し、
一実施形態において、抗体は０７７２Ｐに結合し、
一実施形態において、抗体はＭＰＦに結合し、
一実施形態において、抗体はＮａｐｉ３ｂに結合し、
一実施形態において、抗体はＳｅｍａ５ｂに結合し、
一実施形態において、抗体はＰＳＣＡ ｈｌｇに結合し、
一実施形態において、抗体はＥＴＢＲに結合し、
一実施形態において、抗体はＭＳＧ７８３に結合し、
一実施形態において、抗体はＳＴＥＡＰ２に結合し、
一実施形態において、抗体はＴｒｐＭ４に結合し、
一実施形態において、抗体はＣＲＩＰＴＯに結合し、
一実施形態において、抗体はＣＤ２１に結合し、
一実施形態において、抗体はＣＤ７９ｂに結合し、
一実施形態において、抗体はＦｃＲＨ２に結合し、
一実施形態において、抗体はＨＥＲ２に結合し、
一実施形態において、抗体はＮＣＡに結合し、
一実施形態において、抗体はＭＤＰに結合し、
一実施形態において、抗体はＩＬ２０Ｒαに結合し、
一実施形態において、抗体はブレビカンに結合し、
一実施形態において、抗体はＥｐｈＢ２Ｒに結合し、
一実施形態において、抗体はＡＳＬＧ６５９に結合し、
一実施形態において、抗体はＰＳＣＡに結合し、
一実施形態において、抗体はＧＥＤＡに結合し、
一実施形態において、抗体はＢＡＦＦ−Ｒに結合し、
一実施形態において、抗体はＣＤ２２に結合し、
一実施形態において、抗体はＣＤ７９ａに結合し、
一実施形態において、抗体はＣＸＣＲ５に結合し、
一実施形態において、抗体はＨＬＡ−ＤＯＢに結合し、
一実施形態において、抗体はＰ２Ｘ５ に結合し、
一実施形態において、抗体はＣＤ７２に結合し、
一実施形態において、抗体はＬＹ６４に結合し、
一実施形態において、抗体はＦｃＲＨ１に結合し、
一実施形態において、抗体はＩＲＴＡ２に結合し、
一実施形態において、抗体はＴＥＮＢ２に結合し、
一実施形態において、抗体はＰＭＥＬ１７に結合し、
一実施形態において、抗体はＴＭＥＦＦ１に結合し、
一実施形態において、抗体はＧＤＮＦ−Ｒａ１に結合し、
一実施形態において、抗体はＬｙ６Ｅに結合し、
一実施形態において、抗体はＴＭＥＭ４６に結合し、
一実施形態において、抗体はＬｙ６Ｇ６Ｄに結合し、
一実施形態において、抗体はＬＧＲ５に結合し、
一実施形態において、抗体はＲＥＴに結合し、
一実施形態において、抗体はＬＹ６Ｋに結合し、
一実施形態において、抗体はＧＰＲ１９に結合し、
一実施形態において、抗体はＧＰＲ５４に結合し、
一実施形態において、抗体はＡＳＰＨＤ１に結合し、
一実施形態において、抗体はチロシナーゼに結合し、
一実施形態において、抗体はＴＭＥＭ１１８に結合し、
一実施形態において、抗体はＧＰＲ１７２Ａに結合し、
一実施形態において、抗体はＣＤ３３に結合する。

【0248】

親抗体はアルブミン結合ペプチド（ＡＢＰ）配列を含む融合タンパク質であってもよい（Ｄｅｎｎｉｓら（２００２）“Ａｌｂｕｍｉｎ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ａｓ Ａ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｓｔｒａｔｅｇｙ Ｆｏｒ Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ Ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ”Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７７：３５０３５−３５０４３、国際公開第０１／４５７４６号）。本発明の抗体は、（ｉ）Ｄｅｎｎｉｓら（２００２） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．
２７７：３５０３５−３５０４３、表ＩＩＩ及びＩＶ、３５０３８頁、（ｉｉ）米国特許第２００４０００１８２７号、［００７６］及び（ｉｉｉ）国際公開第０１／４５７４６号、１２−１３頁に教授される、ＡＢＰ配列を含む融合タンパク質を含み、これら全てが本明細書に、参照することによって組み込まれる。抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号に記載され既知であるように、組み替えの方法及び組成物を使用して生成可能である。幾つかの実施形態において、抗体は真核生物宿主の細胞（例えば哺乳類宿主の細胞）にて生成される。幾つかの実施形態において、抗体は原核生物の細胞（例えばＥ．ｃｏｌｉ）にて生成される。

【0249】

ある特定の実施形態において、１つ以上のアミノ酸修飾を、本明細書に記載の抗体のＦｃ領域に導入してもよく、それによってＦｃ領域変異体を生成する。Ｆｃ領域変異体は、１つ以上のアミノ酸位置でアミノ酸修飾（例えば、置換）を含む、ヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４のＦｃ領域）を含んでもよい。

【0250】

ある特定の実施形態において、本発明は全てではなく幾つかのエフェクター機能を有する抗体変異物を企図し、それによって、抗体の体内半減期が重要だが特定のエフェクター機能（例えば補体及びＡＤＣＣ）は不要または有害である用途に望ましい候補となる。体外及び／または体内の細胞毒性アッセイを、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣの活性の低下／減少を確認するために実行してもよい。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合に関しては、抗体がＦｃγＲ結合を欠ける（それで恐らくＡＤＣＣ活性も欠ける）が、ＦｃＲｎ結合の能力を保持することを確かめるためにアッセイを行える。

【0251】

ＡＤＣの薬剤負荷
薬剤負荷は抗体あたりの平均薬剤部分数である。薬剤負荷は抗体（Ａｂ）につき１〜８の薬剤（Ｄ）であってもよく、すなわち、１、２、３、４、５、６、７及び８の薬剤が抗体に共有結合している。ＡＤＣの組成物は範囲１〜８の薬剤と共役される抗体の収集を含む。共役反応によるＡＤＣの組成物において抗体あたりの平均薬剤数は、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、電気泳動及びＨＰＬＣのような従来の手段によって特定可能である。ｐに対してＡＤＣの量的分布も特定可能である。ＥＬＩＳＡでは、特定のＡＤＣ組成物におけるｐの平均値を特定可能である（Ｈａｍｂｌｅｔｔら（２００４）Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：７０６３−７０７０；Ｓａｎｄｅｒｓｏｎら（２００５）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． １１：８４３−８５２）。しかし、ｐ値（薬剤）の分布は抗体−抗原結合及びＥＬＩＳＡの検知制限により特定できない。また抗体−薬剤複合検知のためのＥＬＩＳＡアッセイは、薬剤部分、例えば重鎖または軽鎖断片、または特定のアミノ酸残渣が、どこで抗体に付着するかを特定しない。幾つかの場合には、均一ＡＤＣの分離、精製及び特性化は、ｐがＡＤＣからの特定数値であり他の薬剤負荷を有する場合、逆位相ＨＰＬＣまたは電気泳動のような手段により達成可能である。幾つかの抗体−薬剤複合体において、ｐは抗体にて付着部位数により制限されることがある。例えば、抗体は１つのみ、または複数のシステインチオル基を有するか、または１つのみ、またはそれらを介しリンカーを付着可能である複数の十分反応的なチオル基を有してもよい。より高い薬剤負荷、例えばｐ＞５は、ある特定の抗体−薬剤複合体において凝集、不溶性、毒性または細胞透過性の損失を引き起こすことがある。

【0252】

典型的に共役反応において、理論上最大より少ない薬剤部分が交代に複合体化される。抗体は、例えばリンカー−薬剤中間品（Ｘ−Ｌ−Ｄ）またはリンカー試薬と反応しない多くのリジン残基を含み得る。最も反応的なリジン基のみ、アミン反応的リンカー試薬と反応することができる。また、最も反応的なシステインチオル基のみ、チオル−反応的リンカー試薬またはリンカー−薬剤中間品と反応することもある。一般的に抗体は、含むとしても、沢山の薬剤部分に結合可能な自由で反応的システインチオル基を含まない。化合物の抗体内で殆どのシステインチオル残渣は、ジスルフィドのブリッジとして存在し、部分的また全体の還元条件下でジチオスレイトール（ＤＴＴ）またはＴＣＥＰのような還元剤により還元しなければならない。ＡＤＣの負荷（薬剤／抗体比率、「ＤＡＲ」）は（ｉ）抗体に対してリンカー−薬剤中間品またはリンカー試薬のモル余分を制限すること、（ｉｉ）共役反応時間または温度を制限すること、（ｉｉｉ）システインチオル変更における部分的または制限された還元条件を含めて多数の方法により制御可能である。

【0253】

抗体の１つより多い求核基または求電子基がリンカー−薬剤中間品またはリンカー試薬に続いて二量体薬剤部分試薬と反応する場合、結果となる生成物は抗体に付着する薬剤部分の分布、例えば１、２、３等を有する抗体−薬剤複合体の混合物である。液体クロマトグラフィー方法、例えばポリマー逆位相（ＰＬＲＰ）及び疎水性相互作用（ＨＩＣ）は、薬剤負荷値で混合物内の化合物を分離することがある。単一の薬剤負荷値（ｐ）を有するＡＤＣの調製を分離してもよいが、これら単一の薬剤負荷値を有するＡＤＣは、それでも異種混合物であることがあり、なぜなら薬剤部分はリンカーを介し、抗体上の異なる部位に付着出来るからである。したがって本発明の抗体−薬剤複合体組成物は、抗体が１つ以上の薬剤部分を有し、薬剤部分が様々なアミノ酸残渣にて抗体に付着可能である、抗体−薬剤複合体の化合物の混合物を含む。

【0254】

したがって、本発明は複合体の収集も含み、各複合体はｐ以外は同一の式である。

【0255】

例示的な薬剤部分
非制限の例示的なＡＤＣのＰＢＤ二量体成分は式ＡまたはＢ：

【化57】

【化58】

で表されるもの及びその塩及び溶媒和物であり、
式中、
波線はリンカーへの共有結合性の付着部位を示し、
点線はＣ１とＣ２またはＣ２とＣ３の間に二重結合の任意の存在を示し、
Ｒ²²はＨ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ₂、ＣＮ、Ｒ^m、ＯＲ^m、＝ＣＨ−Ｒ^D、＝Ｃ（Ｒ^D）₂、Ｏ−ＳＯ₂−Ｒ^m、ＣＯ₂Ｒ^m及びＣＯＲ^mから独立して選択され、またハロまたはジハロから任意にさらに選択され、そこでＲ^DはＲ^m、ＣＯ₂Ｒ^m、ＣＯＲ^m、ＣＨＯ、ＣＯ₂Ｈ及びハロから独立して選択され、
Ｒ⁶⁶及びＲ⁹⁹はＨ、Ｒ^m、ＯＨ、ＯＲ^m、ＳＨ、ＳＲ^m、ＮＨ₂、ＮＨＲ^m、ＮＲ^mＲ^p、ＮＯ₂、Ｍｅ₃Ｓｎ及びハロから独立して選択され、
Ｒ⁷⁷はＨ、Ｒ^m、ＯＨ、ＯＲ^m、ＳＨ、ＳＲ^m、ＮＨ₂、ＮＨＲ^m、ＮＲ^mＲ^p、ＮＯ₂、Ｍｅ₃Ｓｎ及びハロから独立して選択され、
ＱはＯ、Ｓ及びＮＨから独立して選択され、
Ｒ¹¹はＨまたはＲ^mであるか、あるいはＱがＯである場合、ＳＯ₃Ｍであり、そこでＭは金属カチオンであり、
Ｒ^m及びＲ^pはそれぞれ任意に置換されたＣ_1-8アルキル、Ｃ₂−Ｃ₈アルケニル、Ｃ₂−Ｃ₈アルキニル、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ_3-8ヘテロシクリル、Ｃ_5-20アリール及びＣ_5-20ヘテロアリールの基から独立して選択され、そして任意にＮＲ^mＲ^p基に対して、Ｒ^m及びＲ^pは、それらが付着している窒素原子とともに任意に置換された４員、５員、６員または７員のヘテロシクロ環を形成し、
Ｒ¹²、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁹、Ｒ²¹及びＲ¹⁷はそれぞれＲ²²、Ｒ⁶⁶、Ｒ⁹⁹、Ｒ¹¹及びＲ⁷⁷について定義されたとおりであり、
Ｒ”はＣ₃−Ｃ₁₂アルキレン基であり、その鎖は１つ以上のヘテロ原子、例えば、Ｏ、Ｓ、Ｎ（Ｈ）、ＮＭｅによって中断され得、及び／または芳香族環、例えばベンゼンまたはピリジンであり、それらの環は任意に置換され、
Ｘ及びＸ’はＯ、Ｓ及びＮ（Ｈ）から独立して選択され、
Ｒ^Cはキャッピング基である。

【0256】

幾つかの実施形態において、Ｒ⁹⁹及びＲ¹⁹はＨである。

【0257】

幾つかの実施形態において、Ｒ⁶⁶及びＲ¹⁶はＨである。

【0258】

幾つかの実施形態において、Ｒ⁷⁷及びＲ¹⁷は両方共ＯＲ^7Aであり、Ｒ^7Aは任意に置換されたＣ₁−Ｃ₄アルキルである。幾つかの実施形態において、Ｒ^7AはＭｅである。別の実施形態においては、Ｒ^7AはＣＨ₂Ｐｈである。

【0259】

幾つかの実施形態において、ＸはＯである。

【0260】

幾つかの実施形態において、Ｒ¹¹はＨである。別の実施形態においては、Ｒ¹¹はＳＯ₃Ｍであり、Ｍは金属カチオンである。カチオンはＮａ⁺であってもよい。

【0261】

幾つかの実施形態において、Ｃ１とＣ２の間に、またＣ２とＣ３の間に二重結合は無い。

【0262】

幾つかの実施形態において、各モノマー単位においてＣ２とＣ３の間に二重結合がある。

【0263】

幾つかの実施形態において、Ｒ¹²及び／またはＲ²²がＣ_5-20アリールまたはＣ_1-8アルキルである場合、Ｃ２とＣ３の間に二重結合がある。

【0264】

幾つかの実施形態において、各モノマー単位においてＣ１とＣ２の間に二重結合がある。

【0265】

幾つかの実施形態において、Ｒ¹²及び／またはＲ²²がＣ_5-20アリールまたはＣ_1-8アルキルである場合、Ｃ１とＣ２の間に二重結合がある。

【0266】

幾つかの実施形態において、Ｒ²²及びＲ¹²は独立してＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ₂、Ｒ^m、＝ＣＨ−Ｒ^D及び＝Ｃ（Ｒ^D）₂から選択される。

【0267】

幾つかの実施形態において、Ｒ²²及びＲ¹²は独立してＨ及びＲ^mから選択される。

【0268】

幾つかの実施形態において、Ｒ²²及びＲ¹²はＨである。

【0269】

幾つかの実施形態において、Ｒ²²及びＲ¹²は独立してＲ^mである。幾つかの実施形態において、Ｒ²²及びＲ¹²は独立して任意に置換Ｃ₅−Ｃ₂₀アリールである。幾つかの実施形態において、Ｒ²²及びＲ¹²は独立して任意に置換Ｃ_5-7アリールである。幾つかの実施形態において、Ｒ²²及びＲ¹²は独立して任意に置換Ｃ_8-10アリールである。幾つかの実施形態において、Ｒ²²及びＲ¹²は独立して任意に置換フェニルである。

【0270】

幾つかの実施形態において、Ｒ²²及びＲ¹²は独立して１つ〜３つの置換基を有し、１つ及び２つがより望ましく、単独置換基が最も好ましい。置換基は、どの位置であってもよい。

【0271】

Ｒ²²及び／またはＲ¹²がＣ_5-7アリール基の場合、単独の置換基は好ましくは、化合物の残りとの結合に隣接しない環の原子に置かれ、すなわち、好ましくは化合物の残りとの結合に対してβまたはγである。したがって、Ｃ_5-7アリール基がフェニルである場合、置換基は好ましくは、メタまたはパラ位置に置かれ、より好ましくは、パラ位置に置かれる。

【0272】

Ｒ²²及び／またはＲ¹²が任意に置換されたＣ₅−Ｃ₂₀アリールである場合、置換基はハロ、ヒドロキシル、エーテル、フォルミル、アシル、カルボキシ、エステル、アシルオキシ、アミノ、アミド、アヒルアミド、アミノカルボニルオキシ、ウレイド、ニトロ、シアノ及びチオエーテルから選択してもよい。

【0273】

幾つかの実施形態において、Ｒ²²及びＲ¹²は独立して＝Ｏ、＝ＣＨ₂、＝ＣＨ−Ｒ^D及び＝Ｃ（Ｒ^D）₂から選択される。ＰＢＤ化合物内では、＝ＣＨ−Ｒ^D基は下記の構成のどちらかを有してもよい。

【化59】

【0274】

幾つかの実施形態において、構成は構成（Ｉ）である。

【0275】

幾つかの実施形態において、Ｒ²²及びＲ¹²は＝ＣＨ₂である。

【0276】

幾つかの実施形態において、Ｒ”はＣ₃、Ｃ₅、Ｃ₇、Ｃ₉及びＣ₁₁アルキレン基から選択される。

【0277】

幾つかの実施形態において、Ｒ”はＣ₃、Ｃ₅及びＣ₇アルキレン基から選択される。

【0278】

幾つかの実施形態において、Ｒ”はＣ₃アルキレン基またはＣ₅アルキレン基である。

【0279】

幾つかの実施形態において、例示的なＡＤＣのＰＢＤ二量体成分は式Ａ（Ｉ）：

【化60】

の構造を有し、式中、ｎは０または１である。

【0280】

幾つかの実施形態において、例示的なＡＤＣのＰＢＤ二量体成分は式Ｂ（Ｉ）：

【化61】

の構造を有し、式中、ｎは０または１である。

【0281】

幾つかの実施形態において、例示的なＡＤＣのＰＢＤ二量体成分は式Ａ（ＩＩ）：

【化62】

の構造を有し、式中、ｎは０または１である。
幾つかの実施形態において、例示的なＡＤＣのＰＢＤ二量体成分は式Ｂ（ＩＩ）：

【化63】

のこうぞうを有し、式中、ｎは０または１である。

【0282】

さらなる非制限の例示的なＡＤＣのＰＢＤ二量体成分は式Ａ（ＩＩＩ）：

【化64】

で表され、
式中、
波線はリンカーへの共有結合性の付着部位を示し、
ＯＨに接続する波線はＳまたはＲ構成を示し、
Ｒ^V1及びＲ^V2は独立してＨ、メチル、エチル及びフェニル（そのフェニルは、特に第４位で、フルオロにより任意に置換してもよい）及びＣ_5-6ヘテロシクロアルキルから選択され、
ｎは０または１である。幾つかの実施形態において、Ｒ^V1及びＲ^V2は独立してＨ、フェニル及び４−フルオロフェニルから選択される。

【0283】

さらなる非制限の例示的なＡＤＣのＰＢＤ二量体成分は式Ｂ（ＩＩＩ）：

【化65】

で表され、
式中、
波線はリンカーへの共有結合性の付着部位を示し、
ＯＨに接続する波線はＳまたはＲ構成を示し、
Ｒ^V1及びＲ^V2は独立してＨ、メチル、エチル及びフェニル（そのフェニルは、特に第４位で、フルオロにより任意に置換してもよい）及びＣ_5-6ヘテロシクロアルキルから選択され、ｎは０または１である。

【0284】

幾つかの実施形態において、Ｒ^V1及びＲ^V2は独立してＨ、フェニル及び４−フルオロフェニルから選択される。

【0285】

幾つかの実施形態において、例示的なＡＤＣのＰＢＤ二量体成分は式Ａ（ＩＶ）：

【化66】

の構造を有し、
式中、Ａｒ¹及びＡｒ²はそれぞれ独立して任意に置換Ｃ_5-20アリールまたはＣ_5-20ヘテロアリールであり、ｎは０または１である。Ａｒ¹及びＡｒ²は同一であっても異なってもよい。

【0286】

幾つかの実施形態において、例示的なＡＤＣのＰＢＤ二量体成分は式Ｂ（ＩＶ）：

【化67】

の構造を有し、
式中、Ａｒ¹及びＡｒ²はそれぞれ独立して任意に置換Ｃ_5-20アリールまたはＣ_5-20ヘテロアリールであり、ｎは０または１である。Ａｒ¹及びＡｒ²は同一であっても異なってもよい。

【0287】

一実施形態において、上記の各実施形態においてＡｒ¹及びＡｒ²は独立して任意に置換されるフェニル、フラニル、チオフェニル及びピリジルから選択される。

【0288】

一実施形態において、上記の各実施形態においてＡｒ¹及びＡｒ²は任意に置換されるフェニルである。

【0289】

上記の各実施形態においてＡｒ¹及びＡｒ²は任意に置換されたチエン−２−イルまたはチエン−３−イルである。

【0290】

幾つかの実施形態において、リンカーはＰＢＤ二量体薬剤部分の様々な部位で、Ｂ環のＮ１０イミン、Ｃ環のＣ−２エンド／エキソ位置またはＡ環を結合するテザー単位（下記の構造Ｃ（Ｉ）及びＣ（ＩＩ）を参照）を含めて、付着可能である。

【0291】

非制限の例示的なＡＤＣのＰＢＤ二量体成分は式Ｃ（Ｉ）及びＣ（ＩＩ）：

【化68】

【化69】

を含む。

【0292】

式Ｃ（Ｉ）及びＣ（ＩＩ）はＮ１０−Ｃ１１イミン形態として示される。例示的なＰＢＤ薬剤部分は、以下の表に示すように、カルビノールアミン及び保護カルビノールアミン形態も含む。

【化70】

式中、
ＸはＣＨ₂（ｎ＝１〜５）、ＮまたはＯであり、
Ｒ⁷⁷及びＲ¹⁷は独立してＯＲ^m及びＮＲ^22bから選択され、Ｒ^mは１〜５の炭酸原子を含む、一次、二次または三次アルキル鎖であり、
Ｒ^22a、Ｒ^12a、Ｒ^22b及びＲ^12bはそれぞれ独立してＨ、Ｃ₁−Ｃ₈アルキル、Ｃ₂−Ｃ₈アルケニル、Ｃ₂−Ｃ₈アルキニル、Ｃ₅−Ｃ₂₀アリール（置換アリールを含む）、Ｃ₅−Ｃ₂₀ヘテロアリール基、−ＮＨ₂、−ＮＨＭｅ、−ＯＨ及びＳＨから選択され、そこで幾つかの実施形態において、アルキル、アルケニル及びアルキニル鎖は５つの炭酸原子まで含み、
Ｒ⁶⁶及びＲ¹⁶は独立してＨ、ＯＲ、ＮＨＲ及びＮＲ^22bから選択され、Ｒは１〜５の炭酸原子を含む、一次、二次または三次アルキル鎖であり、
Ｒ⁹⁹及びＲ¹⁹は独立してＨ、Ｍｅ及びＯＭｅから選択され、
Ｒ^11aはＣ₁−Ｃ₈アルキル、Ｃ₂−Ｃ₈アルケニル、Ｃ₂−Ｃ₈アルキニル、Ｃ_5-20アリール（ハロ、ニトロ、シアノ、アルコキシ、アルキル、ヘテロシクリルで置換されるアリールを含み）及びＣ₅−Ｃ₂₀ヘテロアリール基から選択され、そこで幾つかの実施形態において、アルキル、アルケニル及びアルキニル鎖は５つの炭酸原子まで含み、
Ｒ¹¹は、Ｈ、Ｃ₁−Ｃ₈アルキルまたは保護基（例えばアセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、９−フルオレニルメチルエノキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）またはバリンーシトルリンーＰＡＢのような自壊単位を含む部分）であり、
Ｒ^11aはＨ、Ｃ₁−Ｃ₈アルキルまたは保護基であり、
Ｒ₁、Ｒ^22a、Ｒ^12a、Ｒ^22b、Ｒ^12bまたはＲ^11aの１つの水素またはＡ環の間の−ＯＣＨ₂ＣＨ₂（Ｘ）_nＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ−スペーサーの水素はＡＤＣのリンカーに接続する結合で置換される。
例示的なＡＤＣのＰＤＢ二量体部分は、（波線はリンカーへの共有結合性の付着部位を示す）

【化71】

を含むがそれに制限されない。

【0293】

ＰＢＤ二量体及びペプチド模倣薬リンカーを含むＡＤＣの非制限の例示的な実施形態は、下記の構造体を含む。

【化72】

ＰＢＤ二量体−ＰＭＬ−ＰＡＢ−Ａｂ；

【化73】

ＰＢＤ二量体−ＰＭＬ−ＰＡＢ−Ａｂ；

【0294】

ＰＢＤ二量体及びＡＤＣに含まれるＰＢＤ二量体は既知の方法で調製可能である。例えば、国際公開第２００９／０１６５１６号、米国特許第２００９／３０４７１０号、米国特許第２０１０／０４７２５７号、米国特許第２００９／０３６４３１号、米国特許第２０１１／０２５６１５７号、国際公開第２０１１／１３０５９８号、国際公開第２０１３／０５５９８７号を参照。

【0295】

合成
式ＶＩＩＩに記載の二量体中間体の合成において１つの可能な経路を以下に示す。

【化74】

【化75】

【0296】

上記のスキームにおいて、Ｒ^Lは抗体に結合する基、すなわちＬ／Ｓｔｒ−ＰＭ−Ｓｐ−、またはその基の前駆体を表す。幾つかの合成方法において、最初に添加された基は、脱保護後にＳｔｒ基を添加したＰＭ−Ｓｐ−Ｉｎの保護形態であってもよい。

【0297】

非結合ＰＢＤ単位がＮ１０位置でＲ^Cを有する化合物は、上記の方法の変形で製造しても良く、そこでＰｒｏｔ^NはＲ^C（または前駆体、とその後の変換物）で置換される。

【0298】

一般的に非対称の二量体は、Ｎ１０−Ｃ１１結合に対して、分子の対称を壊すために、式ＩＶに記載のｂｉｓ−アミノ化合物をクロロギ酸試薬の１つの同等物と反応させることによって調製可能である。残る自由アミンを独立して機能化しリンク基前駆体（Ｒ^L）を導入してもよい。さらなる機能的基操作によってＰＢＤ Ｂ−環を閉鎖して保護基を取り外すことによって標的分子を得る。

【0299】

式ＩＶの化合物は典型的に、適切に機能化されたＣ環断片（Ｉ）を式ＩＩのＡ環含有二量体コアに結合することによって調製される。Ｃ環断片は既知のカルバメート保護メチル４−オキソプロリネート構成部分から調製されてもよい。ＷｉｔｔｉｇまたはＨｏｒｎｅｒ−Ｅｍｍｏｎｓ条件下でオレフィン化を活用し、エンドまたはエキソ不飽和アルケレンを生成可能である。Ｃ環及びＡ環断片はトリエチルアミンの存在下で標準条件下で、Ａ環断片の酸塩化物誘導体を使用し結合し、タイプＩＩＩの分子を得られる。この段階で異なるＣ環を導入することによって対称を壊してもよい。式ＩＩＩの化合物は、エンドまたはエキソＣ環不飽和に影響を及ぼさず、酢酸またはギ酸中で、亜鉛により還元し式ＩＶの分子を得られる。

【0300】

あるいは、適切な４−ヒドロキシピルロリジン構成部分を式ＩＩの二量体コアに結合してもよい。ヒドロキシル基はケトンに酸化され、エノルトリフレートに変換可能である。鈴木結合を利用しプロＣ２置換基を導入可能である（例えば、アリール、アルケニル、等）。

【0301】

その後ニトロ基はアミンに還元されても良く、１つのアミンは保護され、もう１つの方は、リンカー基を負荷出来るように自由にされてもよい。

【0302】

タイプＶＩの非対称なカルバメートは、タイプＩＶのｂｉｓアミンを、ピリジンまたはトリエチルアミンの存在下で市販（または容易に調製可能）クロロギ酸の単独同等物で反応させることによって調製可能である。クロロギ酸はプロリンカー基（Ｒ^L）に使用されるものに直角する適切なカルバメートに基づく窒素保護基（Ｐｒｏｔ^N）を得るように選択可能である。Ｒ^Lカルバメートは、残るアミノ基をイソシアネートに変換し、Ｒ^Lアルコールで急冷することによって導入可能である。あるいは、Ｒ^Lアルコールはクロロギ酸または機能的な同等物（フルオロギ酸、ｐニトロカルボネート、ペンタフルオロカルボネートまたはヒドロキシベンゾトリアゾールカルボネート）に変換可能である。最後に、残るアミノ基は反応的ｐニトロカルバメート、ペンタフルオロカルバメートまたはヒドロキシベンゾトリアゾールカルバメートに変換してもよく、それをＲ^Lアルコールで変位し式ＶＩの分子を得られる。

【0303】

式ＶＩＩの分子は、例えば水性酢酸で、シリル保護基を取り外すことによって、式ＶＩの分子から調製可能である。Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペリオジナン（またはＴＰＡＰ／ＮＭＯ、ＰＤＣまたはＳｗｅｒｎ条件下）での酸化によって環閉鎖生成物を得る。

【0304】

式Ｖの複合体は、カルバメートに基づく窒素保護基を取り外すことによって式ＶＩＩの分子から調製可能である。

【0305】

化合物ＩＩ
式（ＩＩ）の化合物の合成は国際公開第２００６／１１１７５９号に記載され、Ｇｒｅｇｓｏｎら（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００１、４４、１１６１−１１７４）にも記載される。それらに記載される化合物（ＩＩ）の調製は、参照することによって明示的に本明細書に組み込まれる。

【0306】

ＰＢＤ二量体の既知の合成方法も参考とし、Ａｎｔｏｎｏｗ，Ｄ．及びＴｈｕｒｓｔｏｎ，Ｄ．Ｅ．、Ｃｈｅｍ．
Ｒｅｖ．２０１１ １１１（４）、２８１５−２８６４に考案されるものを含む。

【0307】

さらなる関連開示が国際公開第２０１０／０９１１５０号に記載される。国際公開第２０１０／０９１１５０号に記載の中間化合物は上記の方法にも活用可能である。

【0308】

適応及び治法
本発明の抗体−薬剤複合体（ＡＤＣ）が様々な病気または疾患（例えば、腫瘍抗原の過度発言を特徴とするもの）の治療に使用されることが企図される。例示的な病状または過剰増殖性の疾患は良性または悪性の固形腫瘍及び、白血病及びリンパの悪性腫瘍のような血液学の疾患を含む。他にも、ニューロンの、グリアの、アストロシタル、視床下部の、腺の、マクロフェージの、上皮の、間質の、胞胚腔の、炎症の、血管形成の、及びジコメ駅を含めて、免疫系の、疾患を含む。ある特定の実施形態において、上記のように、抗ＮａＰｉ３ｂ抗体を含む本発明のＡＤＣは、固形腫瘍、例えば卵巣腫瘍、の療法に使用される。別の実施形態においては、上記のように、抗ＣＤ３３抗体を含む本発明のＡＤＣは、血液学悪性腫瘍、例えば非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大造血リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、慢性リンパ細胞白血病、複数の骨髄腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）及び骨髄性細胞白血病（ＭＣＬ）、またＢ細胞関係の癌及び増殖症を含む、療法に使用される。米国特許第８２２６９４５号；Ｌｉら（２０１３）Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．１２（７）：１２５５−１２６５；Ｐｏｌｓｏｎら（２０１０）Ｌｅｕｋｅｍｉａ２４：１５６６−１５７３；Ｐｏｌｓｏｎら（２０１１）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ２０（１）：７５−８５を参照。それらの内容が、参照により本明細書に組み込まれる。

【0309】

別の実施形態において、本明細書に記載の抗ＭＵＣ１６抗体を含む本発明のＡＤＣは、卵巣癌、乳癌及び膵癌治法に使用される。該癌はＭＵＣ１６／ＣＡ１２５／Ｏ７７２Ｐポリペプチドの発現または作用に関連するものであってもよい。国際公開第２００７／００１８５１号、米国特許第７９８９５９５号、米国特許第８４４９８８３号、米国特許第７７２３４８５号；Ｃｈｅｎら（２００７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６７（１０）：４９２４−４９３２；Ｊｕｎｕｔｕｌａら、（２００８）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．、２６（８）：９２５−９３２を参照とし、その内容は参照することによって本明細書に組み込まれる。

【0310】

特定の実施形態において、本明細書に記載の抗ＨＥＲ２抗体を含む本発明のＡＤＣは、癌治法、例えば乳癌または胃癌、より具体的にＨＥＲ２＋乳癌または胃癌に使用され、該治法はそのような治療が必要となっている患者にそのＡＤＣを投与することを含む。そのような一実施形態において、ＡＤＣは抗ＨＥＲ２抗体のトラスツズマブまたはペルツズマブを含む。

【0311】

一般的に、取り扱われるべき病気は癌のような過増殖症である。治療される癌の例としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、そして、白血病またはリンパ悪性が含まれる。もっと具体的な例としては、上皮扁平上皮癌などの扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞性肺癌、肺の腺癌と肺の扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜癌、肝細胞性癌、胃腸癌を含む胃癌、膵癌、グリア芽細胞腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、大腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜であるか子宮癌、唾液腺癌、腎臓または腎臓癌（前立腺癌）、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌と頭頚部癌がある。

【0312】

抗体薬複合体が治療で使われる可能性がある自己免疫疾患としては、以下が含まれる：リウマチ学の障害（例えば関節リウマチ、シェーグレンの症候群、強皮症、狼瘡（例えば全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）と狼瘡性腎炎）、多発筋炎／皮膚筋炎、寒冷グロブリン血、抗リン脂質抗体症候群、乾癬性関節炎）、骨関節炎、自己免疫胃腸及び肝臓障害、炎症性大腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎とクローン病）、自己免疫胃炎と悪性貧血、自己免疫肝炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎とセリアック病）、脈管炎（例：チャーグストラウス症候群、ヴェゲナーの肉芽腫症と多発動脈炎を含むＡＮＣＡ関連の脈管炎）、自己免疫神経障害（例：多発性硬化症（眼球クローヌス・ミオクローヌス運動失調、重症筋無力症、視神経脊髄炎、パーキンソン病、アルツハイマー病と自己免疫多発神経障害））、腎臓障害（例：糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群とベルガーの病気）、自己免疫皮膚科的障害（例：乾癬、蕁麻疹、尋常性天疱瘡、類天疱瘡と皮膚エリテマトーデス）、血液学的な障害（例：血小板減少紫斑病、血栓性血小板減少紫斑病、輸血後紫斑病と自己免疫溶血性貧血）、アテローム性動脈硬化症、ブドウ膜炎、自己免疫聴力病（例：内耳病と聴力損失）、ベーチェット病、レイノー症候群、臓器移植と自己免疫内分泌の障害（例：糖尿病患者関連の自己免疫病気（例：インシュリン依存性真性糖尿病（ＩＤＤＭ）、アジソン病と自己免疫甲状腺の病気（例：グレーブス病と甲状腺炎））。

【0313】

病気の予防または治療のために、分子が予防あるいは治療目的で投与されたかどうかにかかわらず、上記定めたように、ＡＤＣの適切な適用量は治療される病気の種類、病気のひどさと病気の過程、前の治療、患者の病歴と抗体への反応と主治の医者の裁量に依存する。分子は一度に、または数回に分けて投与されるが好ましい。病気の種類とひどさに応じて、およそ１ｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ）の分子が最初の候補投薬量で、一回または数回の投与あるいは継続ある点滴による投与にかかわらず。典型的１日の投薬量は、およそ１ｇ／ｋｇから、上記の要因に従い、１００ｍｇ／ｋｇ以上にわたり得る。患者に投与されるＡＤＣの典型的な適用量は、およそ０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ（患者計量）の範囲にある。

【0314】

実験
一般的な実験方法
分析ＨＰＬＣ方法
水の移動相（Ａ）（ギ酸０．１％）及びアセトニトロリル（Ｂ）（ギ酸０．１％）を使用するＬＣ／ＭＳ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＬＣＭＳ−２０２０）。勾配：初期組成物５％Ｂは０．２５分にわたって保持され、それから２分間で５％Ｂから１００％Ｂまで増加された。組成物は０．５０分で１００％Ｂに保持され、それから０．０５分で５％Ｂに戻され、０．０５分にわたって保持された。合計勾配ラン時間は３分であった。流量は０．８ｍＬ／分であった。波長検知範囲：１９０〜８００ｎｍ。炉温度：５０°Ｃ。コラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｓｈｉｅｌｄ ＲＰ１８ １．７μｍ ２．１ｘ５０ｍｍ。

【0315】

分取ＨＰＬＣ法
逆位相超高性能の液体クロマトグラフィー （ＵＰＬＣ）は、調製業務のためにＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ ＮＸ５μＣ−１８ １５０ｘ２１．２０ｍｍコラムにて行われた。すべての実験は下記の勾配条件下で行われた：初期固定組成物１３％Ｂから１５分で７５％Ｂまで増加され、２．０分で７５％Ｂに保持され、それから０．１０分以内に７５％Ｂから１３％Ｂに減少され、２．９０分にわたって１３％に保持された。勾配ランの合計期間は２０．００分であった。使用された溶離液は溶媒Ａ（Ｈ₂Ｏに０．１％ギ酸）及び溶媒Ｂ（ＣＨ₃ＣＮに０．１％ギ酸）であった。使用された流量は分取ＨＰＬＣに対して２０．０ｍＬ／分であった。検知は２５４及び２８０ｎｍであった。

【0316】

中間体の合成
ａ）アリル１−［［（１Ｓ）−１−［［４−（ヒドロキシメチル）フェニル］カルバモイル］−４−ウレイド−ブチル］カルバモイル］シクロブタンカルボン酸塩（１８）

【化76】

【0317】

（ｉ）ＤＣＭ及びＭｅＯＨ（１００ｍＬ／５０ｍＬ）における化合物Ｉ１（４．０ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）の溶液に、４−アミノ−フェニル−メタノール（Ｉ２）（１．６０ｇ、１３ｍｍｏｌ、１．３当量）及びＥＥＤＱ（３．２ｇ、１３ｍｍｏｌ、１．３当量）を添加した。混合物を室温で１６時間Ｎ₂下で攪拌した後、ＬＣＭＳは化合物Ｉ１が消費されたことを示した。混合物は濃縮され、茶色い固形物を得て、ＭＴＢＥ（２００ｍＬ）を添加し、混合物を１５°Ｃで２時間攪拌された。固形物は回収され、ＭＴＢＥ（５０ｍＬ ｘ２）で洗浄され、Ｉ３（４．２ｇ、８４％）をオレンジ色の固形物として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ、５−９５／１．５ｍｉｎ）：保持時間＝０．８０７ｍｉｎ、Ｍ＋Ｈ⁺＝５０３．０；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ９．９８（ｓ、１Ｈ）、７．８９（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、７．７３（ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．７０−７．６５（ｍ、１Ｈ）、７．５６（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．４１（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、７．３３−７．３２（ｍ、２Ｈ）、７．２４（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、５．９９（ｍ、１Ｈ）、５．４２（ｓ、２Ｈ）、５．１１−５．０８（ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．３６（ｄ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）、４．２７（ｓ、２Ｈ）、４．２６−４．１８（ｍ、２Ｈ）、３．３３−２．９４（ｍ、２Ｈ）、１．６７−１．５９（ｍ、２Ｈ）、１．４７−１．４０（ｍ、２Ｈ）．

【0318】

（ｉｉ）脱水ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の化合物Ｉ３（４．２ｇ、８．３ｍｍｏｌ）の攪拌された溶液に、ピペリジン（１．６５ｍＬ、１７ｍｍｏｌ、２．０当量）を室温で滴下して加えた。混合物は室温で３０分攪拌され、固形物が沈殿し始めた。脱水ＤＣＭ（５０ｍＬ）を添付し、混合物は即座に透明となった。混合物は、さらに室温で３０分攪拌され、ＬＣＭＳは化合物Ｉ３が消費されたことを示した。減圧下で濃縮され、ピペリジンを除去され、残渣はＥｔＯＡｃ及びＨ₂Ｏに分割された（５０ｍＬ／２０ｍＬ）。水相をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬｘ２）で洗浄され、濃縮され、化合物Ｉ４（２．２ｇ、９４％）を油として（ＤＭＦ少量を含み）得た。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ７．９５（ｓ、１Ｈ）、７．５８（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．２３（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、５．９６−５．９３（ｍ、１Ｈ）、５．３７（ｓ、２Ｈ）、５．１５−５．０５（ｍ、１Ｈ）、４．４２（ｓ、２Ｈ）、３．２５（ｍ、１Ｈ）、３．０−２．９（ｍ、２Ｈ）、１．６５−１．３５（ｍ、４Ｈ）．

【0319】

（ｉｉｉ）ＤＭＥ（５０ｍＬ）中の化合物Ｉ５（８．０ｇ、２９．７ｍｍｏｌ）の溶液に、水中（３０ｍＬ）の化合物Ｉ４（６．０ｇ、２１．４ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ₃（７．４８ｇ、８９．０ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物は室温で１６時間攪拌された。混合物を減圧下で乾燥するまで濃縮され、残渣はカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製され，粗製化合物Ｉ６（６．４ｇ、６８．７％）を、白い固形物として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ、５−９５／１．５ｍｉｎ）：保持時間＝０．６９２ｍｉｎ、Ｍ＋Ｈ⁺＝４３５．０。

【0320】

（ｉｖ）ＴＨＦ／ＭｅＯＨ（２０ｍＬ／１０ｍＬ）中の化合物Ｉ６（６．４ｇ、１４．７ｍｍｏｌ）の攪拌された溶液に室温でＨ₂Ｏ（２０ｍＬ）中のＬｉＯＨ・Ｈ₂Ｏ（１．２ｇ、２８．６ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応混合物が室温で１６時間攪拌された後、溶媒を減圧下で除去し、残渣はプレＨＰＬＣにより精製され、化合物Ｉ７（３．５ｇ、５８．５％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ、５−９５／１．５ｍｉｎ）：保持時間＝０．５７５ｍｉｎ、Ｍ＋Ｈ⁺＝４０６．９。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ₄）δ８．８６（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、８．５１（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、５．８８−５．８６（ｍ、２Ｈ）、５．７８（ｓ、２Ｈ）、４．５１−４．４９（ｍ、３Ｈ）、４．３８−４．３６（ｍ、１Ｈ）、３．８６−３．８４（ｍ、１Ｈ）、３．８４−３．８２（ｍ、２Ｈ）、３．８２−３．８０（ｍ、１Ｈ）、３．３０−３．０６（ｍ、３Ｈ）、２．９６−２．９１（ｍ、１Ｈ）、２．８２−２．７４（ｍ、２Ｈ）．

【0321】

（ｖ）ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の化合物Ｉ７（１．３０ｇ、３．２ｍｍｏｌ）の混合物にＫＦ（０．５５７ｇ、９．６ｍｍｏｌ）及びＢｕ₄Ｎ⁺ＨＳＯ^-₄（０．１０１ｇ、０．９ｍｍｏｌ）を添加した。化合物Ｉ８（０．５０ｍＬ、過剰）を滴下して加えた。混合物を１３°Ｃで２時間攪拌し、ＬＣＭＳは２５４ｎｍで化合物１８（８６％）の生成を示した。混合物を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の１０％〜１５％ＭｅＯＨ）により精製され、生成物を油状物質（１．１ｇ）として得た。油状物質を水中で溶解し、凍結乾燥により乾燥され１８を粉末（１．０ｇ、７０％）として得た。ＳＦＣ分析は８９．４％のｅｅを示した。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ、５−９５／１．５ｍｉｎ）：保持時間＝０．７２１ｍｉｎ、Ｍ＋Ｈ⁺＝４４７．０。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ₄）δ７．５８（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．３１（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、６．０１−５．９３（ｍ、１Ｈ）、５．３５（ｄｄ、Ｊ＝１６．８Ｈｚ、１Ｈ）、５．２４−５．２１（ｍ、Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．６９−４．６８（ｄ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．５６−４．５３（ｍ、３Ｈ）、３．２５−３．０５（ｍ、２Ｈ）、２．７０−２．５０（ｍ、４Ｈ）、２．１０−２．００（ｍ、１Ｈ）、２．００−１．８９（ｍ、２Ｈ）、１．７６−１．５８（ｍ、１Ｈ）、１．５８−１．４９（ｍ、２Ｈ）．

【0322】

ｂ）（２Ｓ）−２−［４−［（１Ｓ）−１−アミノ−２−メチル−プロピル］トリアゾール１−イル］−Ｎ−［４−（ヒドロキシメチル）フェニル］−５−ウレイド−ペンタナミド（１０）

【化77】

【0323】

（ｉ）ＮａＮ₃（２０ｇ、２８５．７ｍｍｏｌ）の溶液を蒸留Ｈ₂Ｏ（７５ｍＬ）に溶解し、ＤＣＭ（１００ｍＬ）を添加した。氷浴で冷却され、Ｔｆ₂Ｏ（１９．２ｍＬ、１１４．２８ｍｍｏｌ）を３０分にわたってゆっくりと添加され攪拌は３時間続いた。混合物は分離漏斗に置かれ、ＣＨ₂Ｃｌ₂の相が回収された。水性部分をＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍＬ×２）で抽出した。トリフリルアジド含有の有機画分をまとめ、一度飽和Ｎａ₂ＣＯ₃（１５０ｍＬ）で洗浄し、さらに精製せず使用した。化合物Ｉ９（１０ｇ、５７．１４ｍｍｏｌ）はＫ₂ＣＯ₃（１１．８３ｇ、８５．７ｍｍｏｌ）、ＣｕＳＯ₄・５Ｈ₂Ｏ（１．４３ｇ、５．７１ｍｍｏｌ）、蒸留Ｈ₂Ｏ（５０ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１００ｍＬ）と組み合わせた。生成したＣＨ₂Ｃｌ₂（１２０ｍＬ）中のトリフリルアジドを添加し、混合物を室温で終夜攪拌した。その後、有機溶媒を減圧下で除去し、水性スラリーをＨ₂Ｏ（１００ｍＬ）で希釈した。濃縮ＨＣｌによりｐＨ６まで酸性化され、０．２ＭｐＨ６．２リン酸緩衝液（１５０ｍＬ）により希釈され、ＥｔＯＡＣ（１００ｍＬ×３）で、スルホンアミド副生物を除去するために洗浄された。それから水相を濃縮ＨＣｌでｐＨ２まで酸性化した。ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（２０：１）（１００ｍＬ×４）により抽出された。ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ抽出物を組み合わせ、Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥され、蒸発し、さらに精製せず化合物Ｉ１０を得た（１０ｇ、８７％）。

【0324】

（ｉｉ）無水ＴＨＦ（３００ｍＬ）中の化合物Ｉ１１（１８．００ｇ、１０８．３６ｍｍｏｌ）の溶液にＮａＨ（５．２ｇ、１３０．０３ｍｍｏｌ）を０^oＣで添加した。混合物を１時間０^oＣで攪拌し、それから化合物Ｉ１２（２５．６４ｇ、１３０．０３ｍｍｏｌ）をゆっくりと混合物に添加した。反応混合物を０°Ｃで０．５時間攪拌した。混合物を濾過し、濃縮し、シリカゲル（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１：１）上でカラムクロマトグラフィーで精製し、所望の生成物Ｉ１３（２０ｇ、９６％）を得た。
¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ₃）δ３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．８１（ｓ、３Ｈ）、２．２５（ｓ、３Ｈ）．

【0325】

（ｉｉｉ）無水ＤＣＭ（１５０ｍＬ）中の化合物Ｉ１４（２０．０ｇ、７９．５９ｍｍｏｌ）の混合物にＥｔ₃Ｎ（２４．１６ｇ、２３８．７７ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（４５．４０ｇ、１１９．３９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１５分攪拌し、それからＮＨＭｅ（ＯＭｅ）ＨＣｌ（１１．６５ｇ、１１９．３９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物は室温終夜攪拌された。混合物をＤＣＭで希釈し、Ｎａ₂ＣＯ₃飽和水溶液（１００ｍＬ×３）、飽和クエン酸（１００ｍＬ×３）及びブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥し、濃縮し、シリカゲル（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）でカラムクロマトグラフィーで精製し、所望の生成物Ｉ１５（２０．０ｇ、８５．４％）を得た。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ７．９７（ｓ、１Ｈ）、７．７３（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．３６−７．２９（ｍ、５Ｈ）、６．０１（ｓ、１Ｈ）、５．４０（ｄｄ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、１Ｈ）、５．０８−４．９９（ｍ、２Ｈ）、４．５８（ｄｄ、Ｊ＝２．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．９９−２．９４（ｍ、２Ｈ）、２．２１−２．０２（ｍ、４Ｈ）、１．０２−１．３３（ｍ、２Ｈ）、０．８６−０．７７（ｍ、６Ｈ）．

【0326】

（ｉｖ）化合物Ｉ１５（１２ｇ、４０．７７ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ（４０ｍＬ）中で溶解し、結果の溶液を乾燥氷／アセトン浴で−７８°Ｃまで冷却した。ＤＩＢＡＬ−Ｈ（トルエン中で、１２２．３ｍＬ、１２２．３ｍｍｏｌ、１．０ Ｍ）を滴下して加え、結果の溶液を−７８°Ｃで４時間攪拌した。余分の水素化物は、ＭｅＯＨ（４０ｍＬ）を−７８°Ｃで添加することによって急冷され、結果の溶液を室温まで温めた。溶液を蒸発させ、化合物Ｉ１６（約９．２ｇ、９６％）をさらに精製せず得た。

【0327】

（ｖ）ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）中の化合物Ｉ１６（粗製、約９．２ｇ、３９．１ｍｍｏｌ）及び化合物Ｉ１３（１１．２７ｇ、５８．６５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｋ₂ＣＯ₃（１６．２ｇ、１１７．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で終夜攪拌した。混合物を真空で濃縮し、シリカゲル（ＰＥ： ＥｔＯＡｃ＝５０：１）上でコラム クロマトグラフィーで精製し、所望の生成物Ｉ１７（４ｇ、４４％）を得た。

【0328】

（ｖｉ）ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の化合物Ｉ１７（４．０ｇ、１７．２９ｍｍｏｌ）及び化合物Ｉ１０（４．１７ｇ、２０．７５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｃｕ（ＣＨ₃ＣＮ）₄ＰＦ₆（１．２９ｇ、３．４６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を６０°Ｃ、２時間で攪拌した。混合物を精製し、化合物Ｉ１８（５．０ｇ、６６．８％）を得た。
¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ ７．９７（ｓ、１Ｈ）、７．７３（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．３６−７．２９（ｍ、５Ｈ）、６．０１（ｓ、１Ｈ）、５．４０（ｄｄ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、１Ｈ）、５．０８−４．９９（ｍ、２Ｈ）、４．５８（ｄｄ、Ｊ＝２．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．９９−２．９４（ｍ、２Ｈ）、２．２１−２．０２（ｍ、４Ｈ）、１．０２−１．３３（ｍ、２Ｈ）、０．８６−０．７７（ｍ、６Ｈ）．

【0329】

（ｖｉｉ）ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の化合物Ｉ１８（粗製、約３．８ｇ、８．７９ｍｍｏｌ）の溶液にＥＥＤＱ（４．３４ｇ、１７．５８ｍｍｏｌ）及び化合物Ｉ１９（１．６２ｇ、１３．１８ｍｍｏｌ）を０^oＣで添加した。反応混合物は室温でＮ₂下で終夜攪拌された。混合物は分取ＨＰＬＣにより精製され化合物Ｉ２０（６５０ｍｇ、１３．７％）を得た。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ １０．５２ （ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、１Ｈ）、８．０５（ｓ、１Ｈ）、７．７２（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、２Ｈ）、７．３３−７．２３（ｍ、７Ｈ）、６．０１（ｓ、１Ｈ）、５．４７−５．４３（ｍ、３Ｈ）、５．０４−４．９６（ｍ、２Ｈ）、４．５９−４．５４（ｍ、１Ｈ）、４．４１（ｓ、２Ｈ）、３．０４−２．９４（ｍ、３Ｈ）、２．０９−１．９７（ｍ、４Ｈ）、１．２４（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、０．８２−０．７４（ｍ、６Ｈ）．

【0330】

（ｖｉｉｉ）ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中の化合物Ｉ２０（６５０ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）の反応にＰｄ／Ｃ（３００ｍｇ）を添加した。反応混合物は室温でＮ₂下で２時間攪拌された。反応混合物は濾過され、濾液を濃縮し１０（４５０ｍｇ、９２％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：保持時間＝０．６１１ｍｉｎ、Ｍ＋Ｈ⁺＝４０４．０。方法＝５−９５／１．５分。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ １０．５５（ｓ、１Ｈ）、８．０３（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．５１（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．２３（ｄ、Ｊ＝８．４、２Ｈ）、６．０５（ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、１Ｈ）、５．４６−５．４２（ｍ、３Ｈ）、５．１４（ｓ、１Ｈ）、４．４０（ｓ、２Ｈ）、３．７６（ｄ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．００−２．９３（ｍ、３Ｈ）、２．０９−２．０４（ｍ、２Ｈ）、１．９０−１．８７（ｍ、１Ｈ）、１．２５−１．２１（ｍ、２Ｈ）、０．８２−０．７７（ｍ、６Ｈ）．

【0331】

（ｃ）アリル Ｎ−［（１Ｓ）−１−［１−［（１Ｓ）−１−［［４−（ヒドロキシメチル）フェニル］カルバモイル］−４−ウレイド−ブチル］トリアゾール４−イル］−２−メチル−プロピル］カルバメート（２）

【化78】

【0332】

（ｉ）無水ＤＣＭ（１５０ｍＬ）化合物Ｉ２１（２０．０ｇ、７９．５９ｍｍｏｌ）の混合物にＥｔ₃Ｎ（２４．１６ｇ、２３８．７７ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（４５．４０ｇ、１１９．３９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１５分攪拌した後、ＮＨＭｅ（ＯＭｅ）ＨＣｌ（１１．６５ｇ、１１９．３９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物は室温で終夜攪拌された。混合物をＤＣＭで希釈しＮａ₂ＣＯ₃飽和水溶液（１００ｍＬ×３）、飽和クエン酸（１００ｍＬ×３）及びブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層をシリカゲル（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝２：１）上のカラムクロマトグラフィーで乾燥し、濃縮し、で精製し所望の生成物Ｉ２２（２０．０ｇ、８５．４％）を得た。

【0333】

（ｉｉ）化合物Ｉ２２（５．０ｇ、１６．９９ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍＬ）に溶解し、結果の溶液は乾燥氷／アセトン浴で−７８°Ｃまで冷却した。ＤＩＢＡＬ−Ｈ（トルエン中で５１．０ｍＬ、５１．００ｍｍｏｌ、１．０Ｍ）を滴下して加え、結果の溶液を−７８°Ｃで４時間攪拌した。余分の水素化物を−７８°ＣでＭｅＯＨ（１０ｍＬ）を添加することで反応停止処理し、結果の溶液を室温まで温めた。溶液を蒸発させ、さらに精製せず化合物Ｉ２３（３．２ｇ、８０％）を得た。

【0334】

（ｉｉｉ）無水ＴＨＦ（２００ｍＬ）中の化合物Ｉ２４（６．００ｇ、３６．１２ｍｍｏｌ）の溶液にＮａＨ（１．７３ｇ、４３．３４ｍｍｏｌ）を^oＣで添加した。混合物は０^oＣで１時間攪拌され、それから化合物Ｉ２５（７．１２ｇ、３６．１２ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。結果の混合物を０°Ｃで０．５時間攪拌した。混合物をシリカゲル（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝２：１）上のカラムクロマトグラフィーで乾燥し、濃縮し、で精製し所望の生成物（６．０ｇ、８６．５％）を得た。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ₆） δ３．７６（ｓ、３Ｈ）、３．７３（ｓ、３Ｈ）、２．２２（ｓ、３Ｈ）。

【0335】

（ｉｖ）ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中の化合物Ｉ２３（粗製、約３．２０ｇ、１３．６０ｍｍｏｌ）及び化合物Ｉ２６（５．２３ｇ、２７．２０ｍｍｏｌ）の溶液にＫ₂ＣＯ₃（５．６４ｇ、４０．８０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物は室温で終夜攪拌された。混合物を真空で濃縮し、シリカゲル（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝５：１）上のカラムクロマトグラフィーで精製し所望の生成物Ｉ２７（２．００ｇ、６３．６％）を得た。¹Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ ７．７７（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．３９−７．３０（ｍ、５Ｈ）、５．０４（ｓ、２Ｈ）、４．１２−４．０７（ｍ、１Ｈ）、３．１９（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、１．８３−１．７４（ｍ、１Ｈ）、０．９４（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、０．９０（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）。

【0336】

（ｖ）ＨＯＡｃ（２０ｍＬ）中の化合物Ｉ２７（２．９０ｇ、１２．５４ｍｍｏｌ）の溶液にＨＢｒ水溶液（３０ｍＬ、１４８．３１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４０^oＣで３時間攪拌した後、真空で濃縮し、溶媒を除去した。残渣をＨ₂Ｏ（４０ｍＬ）で取り上げＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で洗浄した。水性層をｐＨ１０までＮａ₂ＣＯ₃溶液で調節し、またＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。組み合わせた有機層をＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、濾過し、ＨＣＯＯＨでｐＨ ５に調節し、濃縮し、所望の生成物Ｉ２８（１．２０ｇ、６６．８％）を塩として得た。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ ３．８９（ｄｄ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、２．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．５９（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、１．８３−１．７４（ｍ、１Ｈ）、０．９６（ｄｄ、Ｊ＝６．４、４．８Ｈｚ、６Ｈ）。

【0337】

（ｖｉ）ＴＨＦ／Ｈ₂Ｏ（２０ｍＬ／ ４ｍＬ）中の化合物Ｉ２８（１．３０ｇ、９．０８ｍｍｏｌ）にＫ₂ＣＯ₃（３．７６ｇ、２７．２４ｍｍｏｌ）を添加した。Ａｌｌｏｃ−Ｃｌ（１．６４ｇ、１３．６２ｍｍｏｌ）を滴下して混合物に０^oＣで加えた。反応混合物は室温で０．５時間攪拌された。混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）抽出し、Ｈ₂Ｏ（２０ｍＬ）で洗浄した。組み合わせた有機層をＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、濾過し濃縮した。残渣をシリカゲル（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝５：１）上のカラムクロマトグラフィーで乾燥し、濃縮し、で精製し化合物Ｉ２９を得た。（１．３ｇ、７９．０％）。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ ７．７１（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、５．９６−５．８６（ｍ、１Ｈ）、５．３１−５．２６（ｍ、１Ｈ）、５．２０−５．１６（ｍ、１Ｈ）、４．４８（ｄ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、２Ｈ）、４．０９−４．０４（ｍ、１Ｈ）、３．１９（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、１Ｈ）、１．８２−１．７３（ｍ、１Ｈ）、０．９４（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、０．８９（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）．

【0338】

（ｖｉｉ）ＮａＮ₃（７．８０ｇ、１１９．９８ｍｍｏｌ）の溶液を蒸留Ｈ₂Ｏ（２０ｍＬ）に溶解し、ＣＨ₂Ｃｌ₂（４０ｍＬ）を添加した。氷浴で冷却され、Ｔｆ₂Ｏ（３．０ｍＬ、１９．６５ｍｍｏｌ）を５分にわたってゆっくりと添加され攪拌はさらに２時間続いた。混合物は分離漏斗に置かれ、ＣＨ₂Ｃｌ₂相が回収された。水性部分をＣＨ₂Ｃｌ₂（３０ｍＬ×２）で抽出した。トリフリルアジド含有の有機画分をまとめ、一度飽和Ｎａ₂ＣＯ₃（４０ｍＬ）で洗浄し、さらに精製せず使用した。化合物Ｉ３０（１．８０ｇ、１０．２７ｍｍｏｌ）はＫ₂ＣＯ₃（２．１３ｇ、１５．４１ｍｍｏｌ）、ＣｕＳＯ₄・５Ｈ₂Ｏ（２５７ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）、蒸留Ｈ₂Ｏ（４０ｍＬ）及びＭｅＯＨ（８０ｍＬ）中で混合した。上記生成したＣＨ₂Ｃｌ₂（１００ｍＬ）中のトリフリルアジドを添加し、混合物を室温で終夜攪拌した。その後、有機溶媒を減圧下で除去し、水性スラリーをＨ₂Ｏ（５０ｍＬ）で希釈した。濃縮ＨＣｌによりｐＨ６まで酸性化され、０．２Ｍ ｐＨ６．２リン酸緩衝液（５０ｍＬ）により希釈され、ＥｔＯＡＣ（１００ｍＬ×３）で、スルホンアミド副生物を除去するために洗浄された。それから水相を濃縮ＨＣｌでｐＨ２まで酸性化した。ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（２０：１）（１００ｍＬ×４）により抽出された。ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ抽出物を組み合わせ、Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥され、蒸発し、さらに精製せず化合物Ｉ３１を得た（１．６ｇ、７７．４％）。

【0339】

（ｖｉｉｉ）ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の化合物Ｉ３１（１．７０ｇ、８．４５ｍｍｏｌ）及び化合物Ｉ２９（１．２３ｇ、６．７６ｍｍｏｌ）の溶液にＣｕ（ＣＨ₃ＣＮ）₄ＰＦ₆（３１５ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を５０°Ｃで２時間攪拌し、混合物を次のステップに直接に使用した。

【0340】

（ｉｘ）ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の化合物Ｉ３２（粗製、約２．５０ｇ、６．５４ｍｍｏｌ）の混合物に、ＥＥＤＱ（２．４２ｇ、９．８１ｍｍｏｌ）及び化合物Ｉ３３（１．２１ｇ、９．８１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を０^oＣ〜室温でＮ₂保護下で終夜攪拌した。混合物はプレＨＰＬＣ（ＦＡ）で精製され、粗製生成物を得て、それからＭＴＢＥで洗浄し純粋生成物を得た。ＳＦＣ分離後、２（１．１０ｇ、３４．５％）及び２’（２２０ｍｇ、６．９％）を得た．
２：ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：保持時間＝０．９７３分、Ｍ＋Ｈ⁺＝４８８．０。方法＝１０−８０／２分。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ １０．５３（ｓ、１Ｈ）、８．０８（ｓ、１Ｈ）、７．６６（ｄ、Ｊ＝９．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．５４（ｄｄ、Ｊ＝６．８、２．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．２６（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、６．０２（ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、１Ｈ）、５．９４−５．８７（ｍ、１Ｈ）、５．４８（ｄｄ、Ｊ＝８．８、６．８Ｈｚ、１Ｈ）、５．４１（ｓ、２Ｈ）、５．２８（ｄｄ、Ｊ＝１７．２、１．６Ｈｚ、１Ｈ）、５．１６（ｄｄ、Ｊ＝１０．４、１．２Ｈｚ、１Ｈ）、５．１３（ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．５８（ｄｄ、Ｊ＝９．２、６．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．４９−４．４６（ｍ、２Ｈ）、４．４４（ｄ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）、３．０４−２．９７（ｍ、２Ｈ）、２．１４−２．０１（ｍ、３Ｈ）、１．２９−１．２３（ｍ、２Ｈ）、０．８５（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、０．７８（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）．

【0341】

２’：ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：保持時間＝０．９８０ｍｉｎ、Ｍ＋Ｈ⁺＝４８８．０。方法＝１０−８０ ／２分。¹Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ₆） δ １０．５２ （ｓ、１Ｈ）、８．０７ （ｓ、１Ｈ）、７．６４ （ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．５４ （ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．２７ （ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、６．０２ （ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、１Ｈ）、５．９５ − ５．８６ （ｍ、１Ｈ）、５．４７ （ｄｄ、Ｊ＝８．８、６．８Ｈｚ、１Ｈ）、５．４２ （ｓ、２Ｈ）、５．２８ （ｄｄ、Ｊ＝１６．８、１．２Ｈｚ、１Ｈ）、５．１６ （ｄ、Ｊ＝１１．６Ｈｚ、１Ｈ）、５．１３ （ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．５７ （ｄｄ、Ｊ＝９．２、７．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．４９ − ４．４６ （ｍ、２Ｈ）、４．４４ （ｄ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）、３．０６ − ２．９４ （ｍ、２Ｈ）、２．１６ − ２．０２ （ｍ、３Ｈ）、１．２９ − １．２５ （ｍ、２Ｈ）、０．８５ （ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、０．７８ （ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）．

【0342】

ＨＰＬＣ分離条件 （２＆２’）：
機器： ＳＨＩＭＡＤＺＵ ＬＣ−８Ａ
コラム： ｓｙｎｅｒｇｉ−１０μｍ、２５０×５０ｍｍＩ．Ｄ．
移動相： Ｈ₂Ｏ（２‰ＦＡを添加、ｖ／ｖ）はＡでＭｅＣＮはＢである
勾配： Ｂ １０−５０％
流量： ８０ｍＬ／分
監視波長： ２２０ｎｍ／２５４ｎｍ
ラン長： ２２分／２５分

【0343】

ＳＦＣ分離条件（２ ＆ ２’）：
機器： Ｔｈａｒ ＳＦＣ ８０
コラム： Ｃｈｉｒａｌ ＰＡＫ ＡＤ、５μｍ ，Ｄａｉｃｅｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｌｔｄ
２５０×３０ｍｍ Ｉ．Ｄ．
移動相： Ａ： Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ ＣＯ２、Ｂ：ＥｔＯＨ（０．１％のＮＨ３Ｈ２Ｏ含有 ）、６０ｍｌ／分でＡ：Ｂ＝７０：３０
コラム温度： ３８^oＣ
ノズル圧力： １００Ｂａｒ
ノズル温度： ６０^oＣ
蒸発器温度： ２０^oＣ
トリマー温度： ２５^oＣ
波長： ２２０ｎｍ
実施例１： ［４−［［（２Ｓ）−２−［４−［（１Ｓ）−１−［６−（２，５−ジオキソピロール−１−イル）ヘキサノイルアミノ］−２−メチル−プロピル］トリアゾール１−イル］−５−ウレイド−ペンタノイル］アミノ］フェニル］メチル （６Ｓ，６ａＳ）−３−［５−［［（６ａＳ）−２−メトキシ−８−メチレン−１１−オキソ−７，９−ジヒドロ−６ａＨ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−３−イル］ｏｘｙ］ペントキシ］−６−ヒドロキシ−２−メトキシ−８−メチレン−１１−オキソ−６，６ａ，７，９−テトラヒドロピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンｅ−５−カルボン酸塩 （ＰＢＤ−ＬＤ２）の調製

【化79】

【0344】

化合物１は国際公開第２０１１／１３０５９８号の化合物６である。

【0345】

（ｉ） ４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−アミノ−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（５−（（５−（５−（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）−４−（（Ｒ）−２−（アセトキシメチル）−４−メチレンピルロリジン−１−カルボニル）−２−メトキシフェノキシ）ペンチル）オキシ）−２−（（Ｒ）−２−（アセトキシメチル）−４−メチレンピルロリジン−１−カルボニル）−４−メトキシフェニル）カルバメート （３）
乾燥ＴＨＦ（２５ｍＬ）中でアルゴン雰囲気下で室温でトリエチルアミン（０．５５ｇ、０．７６ｍＬ ５．５ｍｍｏｌ、２．２当量）をモノアロック保護ビスアニリン１ （１．９８ｇ、２．５ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリフォスジェン（０．２７ｇ、０．９ｍｍｏｌ、０．３６当量） の攪拌された溶液に添加した。反応混合物を４０°Ｃまで加熱し、試薬をメタノールで処理し、ＬＣＭＳでメチルカルバメートとして分析した
）、３．５９（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、１．８３−１．７４（ｍ、１Ｈ）、０．９６（ｄｄ、Ｊ＝６．４、４．８Ｈｚ、６Ｈ）．

【0346】

脱水ＴＨＦ／ＤＭＦ（４０ｍＬ／５ｍＬ）中のベンジルアルコール２（１．５８ｇ、３．２４ｍｍｏｌ、１．３当量）の溶液を滴下して新たに調製したイソシアネートに加えた。反応混合物は、ＬＣＭＳでモニターし、４．５時間で４０°Ｃで完了した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で蒸発させた。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー［勾配溶出ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ ３％〜６％で、１％ずつの増加］で精製し、生成物を白い泡として（１．８３ｇ、５６％）得た。分析データ：保持時間１．７２分； ＭＳ （ＥＳ⁺） ｍ／ｚ （相対強度） １３０６ （［Ｍ ＋ Ｈ］^+.、４０ ）。

【0347】

（ｉｉ） ４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−アミノ−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（５−（（５−（５−（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）−４−（（Ｒ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチレンピルロリジン−１−カルボニル）−２−メトキシフェノキシ）ペンチル）オキシ）−２−（（Ｒ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチレンピルロリジン−１−カルボニル）−４−メトキシフェニル）カルバメート（４）
Ｈ₂Ｏ（７ｍＬ）中のＫ₂ＣＯ₃（０．９６ｇ、７．０ｍｍｏｌ、５．０当量）溶液をＭｅＯＨ（４０ｍＬ）中の酢酸塩３（１．８２ｇ、１．３９ｍｍｏｌ、１．０当量）に添加した。反応混合物は１時間室温で攪拌された。メタノールは蒸発減圧下で、残渣はＨ₂Ｏ（１００ｍＬ）で希釈され、１Ｍクエン酸でｐＨ３まで酸性化された。混合物はＤＣＭ（５ ｘ１００ｍＬ）で抽出された。組み合わせた抽出物は飽和ブライン（２００ｍＬ）で洗浄され、乾燥され（ＭｇＳＯ₄）、減圧下で蒸発させ、白い泡（１．５１ｇ、８８％）として生成物を得た。分析データ：ＲＴ１．５７分； ＭＳ （ＥＳ⁺） ｍ／ｚ （相対強度） １２２２ （［Ｍ ＋ Ｈ］^+.、４５ ）。

【0348】

（ｉｉｉ）アリル（１１Ｓ，１１ａＳ）−８−（（５−（（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１０−（（（４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（（（アリルｏｘｙ）カルボニル）アミノ）−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンｅ−１０（５Ｈ）−カルボン酸塩（５）
安定化された４５重量％ ２−ヨードキシベンゼン酸（ＩＢＸ）（１．７８ｇ、２．９ｍｍｏｌ、２．４当量）を脱水ＤＭＳＯ（９０ｍＬ）中のビス−アルコール４（１．４６ｇ、１．１９ｍｍｏｌ、１．０当量）溶液に、一度に添加した。溶液を３０°Ｃで３２時間攪拌した。反応混合物をＤＣＭ（５ｘ１５０ｍＬ）で抽出されたＨ₂Ｏ（５００ｍＬ）に添加した。組み合わせた抽出物を飽和水性重炭酸ナトリウム溶液（３００ｍＬ）、Ｈ₂Ｏ （３００ｍＬ）、ブライン（３００ｍＬ）で洗浄し乾燥した（ＭｇＳＯ₄）。溶媒は回転蒸発で減圧下で除去され、粗製生成物を得た。フラッシュカラムクロマトグラフィー［勾配溶出ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ ０％〜８％で１％ずつの増加］による精製で白い固形物（０．８ｇ、５５％）として生成物を得た。分析データ：保持時間１．５２分； ＭＳ （ＥＳ⁺） ｍ／ｚ （相対強度） １２１８ （［Ｍ ＋ Ｈ］^+.，１００ ）。

【0349】

（ｉｖ） ４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−アミノ−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンｅ−１０（５Ｈ）−カルボン酸塩 （６）
Ｐｄ（ＰＰｈ₃）₄ （１４ｍｇ、１２．４ μｍｏｌ ０．０５当量）を、脱水ＤＣＭ（２０ｍＬ）中で、アルゴン雰囲気下で、ビスアロック化合物 ５ （０．３０ｇ、０．２５ｍｍｏｌ、１．０当量）及びピルロリジン （３９ｍｇ、４５μＬ、０．８６ｍｍｏｌ、２．２当量）の溶液に添加した。溶液を室温で３０分で攪拌し濁った懸濁液を得た。溶媒を減圧下で半分で蒸発させ、それからジエチルエーテルで希釈した。沈殿生成物は、濾過により回収され、ジエチルエーテル（ｘ２）で洗浄された。これでは白い粉末としてさらに精製せず生成物を得た（０．２５ｇ、１００％）。分析データ：保持時間１．１５分； ＭＳ （ＥＳ⁺） ｍ／ｚ （相対強度） １０３２ （［Ｍ ＋ Ｈ］^+.，１０ ）．

【0350】

（ｖ） ４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピルロル−１−イル）ヘキサナミド）−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンｅ−１０（５Ｈ）−カルボン酸塩 （７）
ＥＥＤＱ （１２．６ｍｇ、５１ μｍｏｌ、１．５当量）を脱水ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（５ｍＬ／１ｍＬ）のアミン／イミン６ （３５ｍｇ、３４ μｍｏｌ、１．０当量）及びマレイミドカプロン酸 （７．２ｍｇ、３４ μｍｏｌ １．０当量）の溶液に添加した。溶液を室温で１８時間攪拌した。ＥＥＤＱ（１２．６ｍｇ、５１ μｍｏｌ、１．５当量）の追加部分を添加し、反応をさらに１８時間攪拌した。溶媒は減圧下で蒸発させられ、残渣は分取ＨＰＬＣで精製され、凍結乾燥後に、白い泡として生成物を得た（５．５ｍｇ、１３％）。分析データ：保持時間１．４１分； ＭＳ （ＥＳ⁺） ｍ／ｚ （相対強度） １２２５ （［Ｍ ＋ Ｈ］^+.，６０）。

【化80】

【0351】

実施例２
（ａ） ４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（６−（２−ブロモアセタミド）ヘキサナミド）−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンｅ−１０（５Ｈ）−カルボン酸塩（９ａ）
ＥＥＤＱ（３６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、１．５当量）を脱水ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（６ｍＬ／３ｍＬ）中のアミン／イミン６（１０１ｍｇ、９８ μｍｏｌ、１．０当量）及びブロモアセタミドカプロン酸８ａ（３０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ １．２当量）溶液に添加した。溶液を室温で５日間に攪拌した。溶媒は減圧下で蒸発させられ、残渣は分取ＨＰＬＣで精製され凍結乾燥上で、白い泡として生成物を得た（２５ｍｇ、２０％）。分析データ：保持時間１．４２分； ＭＳ （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） １２６７ （［Ｍ ＋ Ｈ］＋．，２０）．

【0352】

（ｂ） ４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（６−（２−ブロモアセタミド）ヘキサナミド）−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンｅ−１０（５Ｈ）−カルボン酸塩（９ｂ）
ＥＥＤＱ（３６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、１．５当量）を脱水ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（６ｍＬ／３ｍＬ）中のアミＮ／イミン６（１００ｍｇ、９８ μｍｏｌ、１．０当量）及びＮメチルブロモアセタミドカプロン酸８ｂ（３０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ １．２当量）の溶液に添加した。溶液を室温で５日間攪拌した。溶媒は減圧下で蒸発させられ、残渣は分取ＨＰＬＣで精製され凍結乾燥上で、白い泡として生成物を得た（１６ｍｇ、１３％）。分析データ：保持時間１．４４分； ＭＳ （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） １２８０ （［Ｍ ＋ Ｈ］＋．，２０ ）。

【0353】

実施例３： ［４−［［（２Ｓ）−２−［４−［（１Ｓ）−１−［６−（２，５−ジオキソピロール−１−イル）ヘキサノイルアミノ］−２−メチル−プロピル］トリアゾール１−イル］−５−ウレイド−ペンタノイル］アミノ］フェニル］メチル （６Ｓ，６ａＳ）−３−［５−［［（６ａＳ）−２−メトキシ−８−メチレン−１１−オキソ−７，９−ジヒドロ−６ａＨ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−３−イル］ｏｘｙ］ペントキシ］−６−ヒドロキシ−２−メトキシ−８−メチレン−１１−オキソ−６，６ａ，７，９−テトラヒドロピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンｅ−５−カルボン酸塩（ＰＢＤ−ＬＤ２）の別の調製方法
（ａ） ６−（２，５−ｄｉオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピルロル−１−イル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（１−（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール４−イル）−２−メチルプロピル）駅真毎度（１２）

【化81】

アミン１０（４．３７ｇ、１０．８ｍｍｏｌ、１．０当量）及び２，５−ジオキソピローリジン−１−イル ６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−プルロール−１−イル） ヘキサン塩酸１１（３．６７ｇ、１１．９ｍｍｏｌ、１．１当量）を攪拌しながら無水ＤＭＦ（１００ｍＬ）に溶解した。反応混合物は室温で２時間攪拌した。溶媒は減圧下で蒸発され生成物１２を粘性のある黄色い油状物質として得た（６．０ｇ、９２％）。分析データ：保持時間１．２０分； ＭＳ （ＥＳ⁺） ｍ／ｚ （相対強度） ５９７ （［Ｍ ＋ Ｈ］^+.，１００）．

【0354】

（ｂ） ［４−［［（２Ｓ）−２−［４−［（１Ｓ）−１−［６−（２，５−ジオキソピロール−１−イル）ヘキサノイルアミノ］−２−メチル−プロピル］トリアゾール１−イル］−５−ウレイド−ペンタノイル］アミノ］フェニル］メチル （６Ｓ，６ａＳ）−３−［５−［［（６ａＳ）−２−メトキシ−８−メチレン−１１−オキソ−７，９−ジヒドロ−６ａＨ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−３−イル］ｏｘｙ］ペントキシ］−６−ヒドロキシ−２−メトキシ−８−メチレン−１１−オキソ−６，６ａ，７，９−テトラヒドロピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンｅ−５−カルボン酸塩 （７、ＰＢＤ−ＬＤ２）

【化82】

要約

【0355】

（ｉ） トリフォスジーン、ピリジン、ＴＨＦ
（ｉｉ） ＡｃＯＨ、ＴＨＦ、Ｈ₂Ｏ
（ｉｉｉ） ＩＢＸ、ＤＭＳＯ
（ｉｖ） ９５％ ＴＦＡ

【0356】

化合物１３は国際公開第２０１３／０５５９８７号の化合物９である。

【0357】

（ｉ） ４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（６−（２，５−ｄｉオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピルロル−１−イル）ヘキサンアミド）−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル （５−（（５−（５−（（テルト−ブトキシカルボニル）アミノ）−４−（（Ｒ）−２−（（（テルト−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチレンピルロリジン−１−カルボニル）−２−メトキシフェノキシ）ペンチル）オキシ）−２−（（Ｒ）−２−（（（テルト−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチレンピルロリジン−１−カルボニル）−４−メトキシフェニル）カルバメート （１４）

【0358】

トリエチルアミン （０．１３ｇ、０．１８ｍＬ １．３ｍｍｏｌ、２．２当量）を、アルゴン雰囲気下で室温で、脱水ＴＨＦ （１５ｍＬ）中のモノボック保護ビスアニリン１３（０．５５５ｇ、０．５８ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリフォスジーン（０．０６２ｇ、０．２１ｍｍｏｌ、０．３６当量）の攪拌溶液に添加した。反応混合物を４０°Ｃに加熱され、試薬をメタノールで処理されメチルカルバメートとしてＬＣＭＳにより分析された。

【0359】

脱水ＴＨＦ／ピリジン（３ｍＬ／３ｍＬ）中のベンジルアルコール１２（０．５１ｇ、０．８５ｍｍｏｌ、１．４５当量）溶液を滴下して、新たに調製されたイソシアネートに加えた。反応混合物がＬＣＭＳでモニターされ、４時間で４０°Ｃで完了した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で蒸発させた。残渣をＣＨＣｌ₃（１００ｍＬ）の中に取り上げ、これを飽和ＣｕＳＯ₄溶液（２ ｘ１５０ｍＬ）、飽和ブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、減圧下で蒸発させられ黄色い泡を得た。フラッシュカラムクロマトグラフィー［勾配溶出ＣＨＣｌ₃／２％ＭｅＯＨ〜５％ ＭｅＯＨで、１％ずつの増加］で精製し、生成物を白い泡として （０．２６ｇ、２９％）得た。分析データ：保持時間２．２３分； ＭＳ （ＥＳ⁺） ｍ／ｚ （相対強度） １５７７ （［Ｍ ＋ Ｈ］^+.、１００）。

【0360】

（ｉｉ） ４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピルロル−１−イル）ヘキサンアミド）−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル （５−（（５−（５−（（テルト−ブトキシカルボニル）アミノ）−４−（（Ｒ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチレンピルロリジン−１−カルボニル）−２−メトキシフェノキシ）ペンチル）オキシ）−２−（（Ｒ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチレンピルロリジン−１−カルボニル）−４−メトキシフェニル）カルバメート （１５）
ＡｃＯＨ／Ｈ₂Ｏ （１．５／１） （４２ｍＬ）をＴＨＦ （１７ｍＬ）中の化合物１４（０．９３４ｇ、０．６ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に添加し、結果の溶液を室温で７２時間攪拌した。反応混合物を飽和ナトリウム水素カルボネート溶液でｐＨ８まで塩基性化した。混合物をＤＣＭ（４ ｘ１００ｍＬ）で抽出し、組み合わせた抽出物を飽和ナトリウム水素カルボネート（３００ｍＬ）、Ｈ₂Ｏ （２００ｍＬ）、飽和ブライン（２５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）減圧下で蒸発させた。フラッシュカラムクロマトグラフィー［勾配溶出ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ２％〜９％で、１％ずつの増加］で精製し、生成物を白い泡として（０．５７３ｇ、７２％）。分析データ：保持時間１．６分； ＭＳ （ＥＳ⁺） ｍ／ｚ （相対強度） １３４７ （［Ｍ ＋ Ｈ］^+.，１００）。

【0361】

（ｉｉｉ） テルト−ブチル（１１Ｓ，１１ａＳ）−８−（（５−（（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１０−（（（４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピルロル−１−イル）ヘキサンアミド）−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンｅ−１０（５Ｈ）−カルボン酸塩 （１６）
安定化された４５重量％ ２−ヨードキシベンゼン酸（ＩＢＸ）（ ０．６３５ｇ、１．０２ｍｍｏｌ、２．４当量）を脱水ＤＭＳＯ（９０ｍＬ）中のビス−アルコール（１５）（０．５７３ｇ、０．４２５ｍｍｏｌ、１．０当量）溶液に一度に添加した。溶液を３０°Ｃで２１時間攪拌した。さらなる部分のＩＢＸ（２６ｍｇ、４２．５ μｍｏｌ、０．１当量）を添加し、反応をさらに２４時間続けた。反応混合物をブライン溶液（５００ｍＬ）に添加しＤＣＭ（５ ｘ１５０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた抽出物を飽和水性重炭酸ナトリウム溶液（３００ｍＬ）、Ｈ₂Ｏ （２００ｍＬ）、ブライン（３００ｍＬ）で洗浄し乾燥した（ＭｇＳＯ₄）。溶媒は回転蒸発で減圧下で除去され、粗製生成物を得た。フラッシュカラムクロマトグラフィー［勾配溶出ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ ０％〜６％で１％ずつの増加］による精製は白い固形物（０．３５ｇ、６１％）として生成物を得た。分析データ：保持時間１．５３分； ＭＳ （ＥＳ⁺） ｍ／ｚ （相対強度） １３４３ （［Ｍ ＋ Ｈ］^+.，９７）．

【0362】

（ｉｖ） ４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−プルロル−１−イル）ヘキサンアミド）−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル （１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンｅ−１０（５Ｈ）−カルボン酸塩 （７）
９５％トリフルオロ酢酸（１６ｍＬ）の低温（氷浴）溶液を氷浴で冷却された化合物１６に添加した。溶液は０°Ｃで１５分で攪拌され、ＬＣＭＳで完了と示された。反応混合物を、トリフルオロ酢酸溶液を中和させるために氷及び飽和ナトリウム水素カルボネートの混合物に滴下して加えた。混合物を１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ₃ （４ ｘ１００ｍＬ）で抽出し、組み合わせた抽出物を飽和ブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、減圧下で蒸発させて、生成物を黄色い固形物 （０．３３７ｇ、１０６％）として得た。分析データ：保持時間１．４５分； ＭＳ （ＥＳ⁺） ｍ／ｚ （相対強度） １２２５ （［Ｍ ＋ Ｈ］^+.，１００）．

【0363】

実施例４：調製 ｏｆ ［４−［［（２Ｓ）−２−［［１−［５−（２，５−ジオキソピロール−１−イル）ペンチルカルバモイル］シクロブタンカルボニル］アミノ］−５−ウレイド−ペンタノイル］アミノ］フェニル］メチル （６Ｓ，６ａＳ）−３−［５−［［（６ａＳ）−２−メトキシ−８−メチレン−１１−オキソ−７，９−ジヒドロ−６ａＨ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−３−イル］オキシ］ペントキシ］−６−ヒドロキシ−２−メトキシ−８−メチレン−１１−オキソ−６，６ａ，７，９−テトラヒドロピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンｅ−５−カルボン酸塩 （２４、ＰＢＤ−ＬＤ３）
（ａ） アリル （５−（（５−（５−アミノ−４−（（Ｓ）−２−（（（テルト−ブチルｄｉメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチレンピルロリジン−１−カルボニル）−２−メトキシフェノキシ）ペンチル）オキシ）−２−（（Ｓ）−２−（（（テルト−ブチルｄｉメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチレンピルロリジン−１−カルボニル）−４−メトキシフェニル）カルバメート （１７）

【化83】

【0364】

化合物１７Ａは国際公開第２０１３／０５５９８７号の化合物８である。

【0365】

脱水ＤＣＭ（１０ｍＬ）のアリルクロロギ酸１７Ａ （０．３８ｇ、０．３４ｍＬ、３．２ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を脱水ＤＣＭ（３０ｍＬ）中のビスアニリン（２．７２ｇ、３．２ｍｍｏｌ、１．０当量）及び脱水ピリジン（０．５ｇ、０．５２ｍＬ、６．４ｍｍｏｌ、２．０当量）の溶液に−７８°Ｃ（ドライアイス／アセトン）で、アルゴン雰囲気下で滴滴に添加した。結果の溶液を−７８°Ｃで１時間攪拌し、室温に至るまで放置された。反応混合物をＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈し、飽和硫酸銅溶液 （２ ｘ２００ｍＬ）、水（２００ｍＬ）、ブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）減圧下で蒸発させた。フラッシュカラムクロマトグラフィー［勾配溶出６０％ｎ−ヘキサン／４０％ＥｔＯＡｃ〜１００％ＥｔＯＡｃで１０％ずつの増加］による精製はオフホワイト泡（１．４５ｇ、４８％）として生成物を得た。分析データ：保持時間２．２５分； ＭＳ （ＥＳ⁺） ｍ／ｚ （相対強度） ９３７ （［Ｍ ＋ Ｈ］^+.，１００ ）、９５９（［Ｍ ＋ Ｎａ］^+.，６０）。

【0366】

（ｂ） ［４−［［（２Ｓ）−２−［［１−［５−（２，５−ジオキソピロール−１−イル）ペンチルカルバモイル］シクロブタンカルボニル］アミノ］−５−ウレイド−ペンタノイル］アミノ］フェニル］メチル （６Ｓ，６ａＳ）−３−［５−［［（６ａＳ）−２−メトキシ−８−メチレン−１１−オキソ−７，９−ジヒドロ−６ａＨ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−３−イル］オキシ］ペントキシ］−６−ヒドロキシ−２−メトキシ−８−メチレン−１１−オキソ−６，６ａ，７，９−テトラヒドロピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンｅ−５−カルボン酸塩 （２４）

【化84】

要約

【0367】

（ｉ） トリフォスジーン、ピリジン、ＴＨＦ
（ｉｉ） ＴＢＡＦ、ＴＨＦ
（ｉｉｉ） ＩＢＸ、ＤＭＳＯ
（ｉｖ） Ｐｄ（ＰＰｈ₃）₄、ピルロリジン、ＣＨ₂Ｃｌ₂
（ｖ） ＢＯＰ−Ｃｐ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ

【0368】

（ｉ） アリル １−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（（５−（（５−（５−（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）−４−（（Ｓ）−２−（（（テルト−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチレンピルロリジン−１−カルボニル）−２−メトキシフェノキシ）ペンチル）オキシ）−２−（（Ｓ）−２−（（（テルト−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチレンピルロリジン−１−カルボニル）−４−メトキシフェニル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）カルバモイル）シクロブタン−１−カルボン酸塩 （１９）
脱水ＴＨＦ（２５ｍＬ）中でアルゴン雰囲気下で室温でトリエチルアミン（１．８５ｇ、０．２６ｍＬ １．８５ｍｍｏｌ、２．２当量）をモノアロック保護ビスアニリン１７（０．７９ｇ、０．８４ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリフォスジェン（９０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ、０．３６当量） の攪拌された溶液に添加した。反応混合物を４０°Ｃまで加熱し、試薬をメタノールで処理し、ＬＣＭＳでメチルカルバメートとして分析した。

【0369】

脱水ＴＨＦ（２０ｍＬ）中のベンジルアルコール１８（０．４９ｇ、１．１ｍｍｏｌ、１．３当量）の溶液を滴下して新たに調製したイソシアネートに加えた。反応混合物は、ＬＣＭＳで監視され、５時間で４０°Ｃで完了した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で蒸発させた。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー［勾配溶出ＥｔＯＡｃ／０％ ＭｅＯＨ〜６％ ＭｅＯＨで、１％ずつの増加］で精製し、生成物を白い泡として （０．７３ｇ、６１％）得た。分析データ：保持時間２．２０分； ＭＳ （ＥＳ⁺） ｍ／ｚ （相対強度） １４１０ （［Ｍ ＋ Ｈ］^+.，５０ ）、１４３１ （［Ｍ ＋ Ｎａ］^+.，５０）．

【0370】

（ｉｉ） アリル １−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（（５−（（５−（５−（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）−４−（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチレンピルロリジン−１−カルボニル）−２−メトキシフェノキシ）ペンチル）オキシ）−２−（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチレンピルロリジン−１−カルボニル）−４−メトキシフェニル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）カルバモイル）シクロブタン−１−カルボン酸塩（２０）
テトラ−Ｎ−ブチルフッ化アンモニウム（ＴＨＦ中で１．０ Ｍ、１．１ｍＬ、２．２当量）をアルゴン雰囲気下で脱水ＴＨＦ（２０ｍＬ）中のビス−ＴＢＳ化合物１９（０．７ｇ、０．５ｍｍｏｌ、１．０当量）溶液に添加した。反応混合物は室温で１５分攪拌された。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をＤＣＭに再溶解し、ブラインで洗浄し（ｘ１）、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、蒸発させ、淡黄色の油状物質を得た。フラッシュカラムクロマトグラフィー［勾配溶出ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ５％〜１５％で、２．５％ずつの増加］で精製し、生成物を白い泡として （０．４６ｇ、７９％）得た。分析データ：保持時間１．５５分； ＭＳ （ＥＳ⁺） ｍ／ｚ （相対強度） １１８１ （［Ｍ ＋ Ｈ］^+.，１００）．

【0371】

（ｉｉｉ） アリル （１１Ｓ，１１ａＳ）−８−（（５−（（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１０−（（（４−（（Ｓ）−２−（１−（（アリルオキシ）カルボニル）シクロブタン−１−カルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヒキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンｅ−１０（５Ｈ）−カルボン酸塩 （２１）
安定化された４５ 重量％ ２−ヨードキシベンゼン酸（ＩＢＸ）（０．５４５ｇ、０．８８ｍｍｏｌ、２．４当量）を脱水ＤＭＳＯ（３１ｍＬ）中のビス−アルコール２０（０．４３ｇ、０．３６５ｍｍｏｌ、１．０当量）溶液に一つの部分として添加した。溶液を３０°Ｃで１８時間攪拌した。反応混合物をブライン溶液に添加し、ＤＣＭ（５ ｘ ７５ｍＬ）で抽出した。組み合わせた抽出物を重炭酸ナトリウム飽和水溶液（２００ｍＬ）、Ｈ₂Ｏ（２００ｍＬ）、ブライン（２００ｍＬ）で洗浄し乾燥した（ＭｇＳＯ₄）。溶媒は回転蒸発で減圧下で除去され、粗製生成物を得た。フラッシュカラムクロマトグラフィー［勾配溶出ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ ０％〜６％で１％ずつの増加］による精製は白い泡（０．２１ｇ、４８％）として生成物を得た。分析データ：保持時間１．４８分； ＭＳ （ＥＳ⁺） ｍ／ｚ （相対強度） １１７７ （［Ｍ ＋ Ｈ］^+.，１００）．

【0372】

（ｉｖ） １−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンｅ−１０−カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）カルバモイル）シクロブタン−１−カルボン酸 （２２）
Ｐｄ（ＰＰｈ₃）₄ （６ｍｇ、５．１ μｍｏｌ ０．０６当量）をアルゴン雰囲気下で脱水ＤＣＭ（５ｍＬ）中の化合物 ２１ （０．１ｇ、８５ μｍｏｌ、１．０当量）及びピルロリジン（１５ｍｇ、１７μＬ、０．２１ｍｍｏｌ、２．５当量）の溶液に添加した。溶液を室温で３５分攪拌した。反応混合物をジエチルエーテル（ｘｓ）で希釈し、濾過で回収された生成物を沈殿し、ジエチルエーテル（ｘ２）で洗浄した。これでは、さらに精製せず白い粉末として生成物を得た。分析データ：保持時間１．３４分； ＭＳ （ＥＳ⁺） ｍ／ｚ （相対強度） １０３５ （［Ｍ ＋ Ｈ］^+.，１００）．

【0373】

（ｖ） ４−（（Ｓ）−２−（１−（（５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピルロル−１−イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタン−１−カルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル （１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンｅ−１０（５Ｈ）−カルボン酸塩 （２４）
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１５ｍｇ、２０μＬ、１１６ μｍｏｌ、３．０当量）をｂｉｓ（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）塩化ホスフィン（１２ｍｇ、４６．４ μｍｏｌ、１．２当量）及び酸 ２２ （４０ｍｇ、３９．１ μｍｏｌ、１．０当量）の脱水ＤＭＦ（５ｍＬ）中の溶液に、アルゴン雰囲気下で攪拌しながら添加した。５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピルロル−１−イル）ペンタン−１−塩化アンモニウム２３（９ｍｇ、３９．１ μｍｏｌ、１．０当量）を添加し、混合物を室温で終夜攪拌した。混合物をクエン酸で反応停止処理し、ＤＣＭ（３ ｘ ５０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた抽出物を飽和ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し （ＭｇＳＯ₄）減圧下で蒸発させて、黄色い固形物を得て分取ＨＰＬＣで精製し、生成物を白い泡として凍結乾燥 （４．５ｍｇ、１０％）上で得た。分析データ：保持時間１．４２分； ＭＳ （ＥＳ⁺） ｍ／ｚ （相対強度） １１９９ （［Ｍ ＋ Ｈ］^+.，６０）．

【0374】

ＡＤＣの調製方法
縮小と再酸化による複合体かのためのシステイン操作された抗体の調製
いくつかの場合において、システイン操作された抗体は、発明のリンカー−薬中間体との複合体に反応するよう作られている、表４にあるように、還元剤（例えばＤＴＴ（クレランドの試薬（ジチオスレイトール））またはＴＣＥＰ（塩酸トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン）を使った処理によって（Ｇｅｔｚら（１９９９）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｖｏｌ−２７３：７３−８０；Ｓｏｌｔｅｃ Ｖｅｎｔｕｒｅｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）。全長、ＣＨＯ細胞で発現されたシステイン操作されたモノクローナル抗体（ＴｈｉｏＭａｂｓ）（Ｇｏｍｅｚら（２０１０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇ．１０５（４）：７４８−７６０、Ｇｏｍｅｚら（２０１０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２６：１４３８−１４４５）は、例えば、新しく導入されたシステイン残基とシステインの間で形成され得る培養基に存在するジスルフィド結合を減らすために５０倍過剰のＤＴＴにより室温で終夜還元された。

【0375】

軽鎖アミノ酸はＫａｂａｔによって付番される。（Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，（１９９１）５ｔｈ Ｅｄ．，ＵＳ Ｄｅｐｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）重鎖アミノ酸は、Ｋａｂａｔ ｓｙｓｔｅｍが言及される以外の場合ＥＵ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍに従い付番される（Ｅｄｅｌｍａｎら（１９６９） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ｏｆ Ｓｃｉ．６３（１）：７８−８５）。単文字アミノ酸省略形が使われる。

【0376】

全長、ＣＨＯ細胞で発現するシステイン操作されたモノクローナル抗体（ＴｈｉｏＭａｂｓ）はシステイン付加物（シスチン）を有し、あるいは細胞培養状況によって、操作されたシステインの上にグルタチオン付加されている。操作されたシステインの反応チオール・グループを放出するために、ＴｈｉｏＭａｂｓは５００ｍＭのホウ酸ナトリウムと約ｐｈ８．０の５００ｍＭの塩化ナトリウムで溶かされて、３７度で１〜２時間、５０〜１００倍過剰の１ｍＭのＴＣＥＰ（塩酸トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン）によって還元される（Ｇｅｔｚら（１９９９）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｖｏｌ２７３：７３−８０；Ｓｏｌｔｅｃ Ｖｅｎｔｕｒｅｓ， Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）。あるいは、ＤＴＴは還元剤として使われることができる。分子間鎖ジスルフィド結合の形成は、非還元ＳＤＳ−頁によって、または、逆相ＨＰＬＣ ＰＬＲＰカラムクロマトグラフィーの特性を奪うことによって、モニターされる。還元したＴｈｉｏＭａｂは薄められて、１０ｍＭのナトリウムアセテート（ｐＨ５）の中のＨｉＴｒａｐ ＳＰ ＦＦコラムの上にロードされて、０．３Ｍの塩化ナトリウムを含むＰＢＳ、または１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む５０ｍＭのトリス−Ｃｌ（ｐＨ７．５）とともに溶出される。

【0377】

ジスルフィド結合は、再酸化を実行することによって、親Ｍａｂに存在するシステイン残基の間で復旧される。溶出した還元ＴｈｉｏＭａｂは、３時間の間、１５Ｘまたは２ｍＭのデヒドロアスコルビン酸（ｄｈＡＡ）（７ｍＭ）、または５０ｍＭのトリス−Ｃｌ（ｐＨ７．５）で３時間、または終夜室温の２ｍＭの水性硫酸銅（ＣｕＳＯ４）で処理される。酸化剤や酸化条件など、技術で知られている他のオキシダントが、使われるかもしれない。外気酸化は、効果的である場合もある。この軽い、部分的な再酸化ステップは、高忠実度で効率的に内部チェーンジスルフィドを形成する。緩衝装置はＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５樹脂の上への溶出によって交換されて、１ｍＭのＤＴＰＡでＰＢＳとともに抜き取られる。溶液の２８０ｎｍの吸光度から還元した抗体濃度や、ＤＴＮＢ（オールドリッチ、ミルウォーキー、ＷＩ）と４１２ｎｍでの吸収度の決定との反応によって得られるチオール濃度を決定することによって、チオール／Ａｂ価値は、チェックされる。

【0378】

液体クロマトグラフィー／質量分析を、拡張された質量レンジ（熱電子、 カリフォルニア州サンノゼ）で、ＴＳＱ Ｑｕａｎｔｕｍ Ｔｒｉｐｌｅ ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ（商標）質量分析計で実行した。ＰＲＬＰ−Ｓ（登録商標）という、１０００Ａ、７５°Ｃまで加熱されるマイクロ口径のコラム（５０ｍｍ´２．１ｍｍ、ポリマー研究所、シュロップシャー、英国）の上で、サンプルは色層分析された。３０〜４０％のＢからの線形勾配（溶媒Ａ：水の中に０．０５％のＴＦＡ、溶媒Ｂ：アセトニトリルの中に０．０４％のＴＦＡ）が使われて、溶離液は、エレクトロスプレーの源を直接使うことによってイオン化された。データはＸｃａｌｉｂｕｒ（登録商標）データ・システムによって集められた、そして、解析はＰｒｏＭａｓｓ（登録商標）（Ｎｏｖａｔｉａ、ＬＬＣ、ニュージャージー）を使って実行された。ＬＣ／ＭＳ分析の前に、抗体または薬複合体（５０マイクログラム）は、Ｎにリンクされた炭水化物を除去するため、３７°Ｃで２時間、ＰＮＧａｓｅＦで処理された（２単位／ｍｌ；ＰＲＯｚｙｍｅ、サンリアンドロ、ＣＡ）。

【0379】

疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）サンプルはブチルＨＩＣ ＮＰＲコラム（２．５ミクロン粒径、４．６ｍｍ´３．５ｃｍ）（Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の上に注入されて、０．８ｍｌ／分で線形勾配０から７０％Ｂと一緒に溶出された。（Ａ：ｐＨ７、５０ｍＭのリン酸カリウムの中の１．５Ｍの硫酸アンモニウム、Ｂ：５０ｍＭのリン酸カリウム（ｐＨ７）、２０％のイソプロパノール）。複数波長検知器とＣｈｅｍｓｔａｔｉｏｎソフトウェアを備えたＡｇｉｌｅｎｔ１１００シリーズＨＰＬＣシステムは、抗体につき異なる比率の薬を持つ抗体種を分解し、定量するために用いられた。本発明のシステイン操作された抗体は、上述の一般的な方法で調製されることができる。

【0380】

抗体へのリンカー−薬中間体の複合体化（手順１）
操作された抗体シスチンをグルタチオンで混合ジスルフィドとして及び／またはＣＨＯ細胞で発現されるシスチンとしてブロックした。これらのシスチンは、複合化の前に「脱ブロック」されなければならなかった。

【0381】

２０ｍＭのコハク酸塩、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのＥＤＴＡの中の脱ブロックされた抗体（５〜１２ｍｇ／ｍＬ）は、７５〜１００ｍＭのトリス（ｐＨ７．５〜８（１Ｍのトリスを利用する））に入れられた。共溶媒（ＤＭＳＯ、ＤＭＦまたはＤＭＡ）を抗体溶液に加えた。そして、リンカー−薬（ＤＭＳＯまたはＤＭＦ内で）が続き、１０〜１３％の最終的な％−有機溶剤と抗体濃度と比較してリンカー−薬２．５〜１０Ｘの最終濃度を得た。反応は、１〜１２時間（最大の複合体化が達成されるまで）室温で進行させた。複合体化反応は、処理できるコラム（ＳマキシまたはＺｅｂａ、それぞれ）を用いたゲル濾過及び／または陽イオン交換クロマトグラフィーによって精製された。分析ＳＥＣによって天然複合体がかなり凝集する（例えば、＞１０％）ならば分取ゲル濾過（Ｓ２００コラム）によるさらなる精製が実行される。ゲル濾過か透析を使っている製剤バッファ（２０ｍＭのＨｉｓ−ａｃｅｔａｔｅ、ｐＨ５．５、２４０ｍＭの蔗糖）に、複合体はその後換えられた。トゥイーン−２０が０．０２％の最終濃度に達するために、精製された複合体にその後加えられた。最終的な複合体濃度は、２．４から７．５ｍｇ／ｍＬにわたった（収率％：非ブロックされた抗体から３４−８１％）。複合体は薬抗体比率（ＤＡＲ）の測定値を得るためにＬＣＭＳによって分析された。そして、それは１．３から２．１にわたる（平均：１．８）。分析ＳＥＣ（ＺｅｎｉｘまたはＳｈｏｄｅｘコラム）を使っている高分子量集計の存在についても、複合体が分析された、最終的な、精製された複合体は、０〜１０％の範囲の凝集を示した。複合体はエンドトキシン汚染についても評価された。そして、それは、すべての場合で、１．３ＥＵ／ｍｇを超えなかった。遊離の、複合体化されていない薬剤は、最終的な複合体の１％を超えなかった。

【0382】

抗体へのリンカー−薬中間体の複合体化（手順２、代替的な手順）
上記の例の還元と再酸化手順の後、抗体はＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）緩衝液に溶かされて、氷の上で冷やされる。過剰は、およそ１．５モルから２０当量のマレイミドまたはブロモアセトアミドのようなチオール反応性官能基とのリンカー−薬中間体まで、ＤＭＳＯで溶かされて、アセトニトリルと水の中で希釈し、冷却して還元し、再酸化されたＰＢＳの中の抗体に加えられる。およそ１時間後に、反応を停止させて、任意の反応していない抗体チオール基をキャップするために、マレイミドの過剰が加えられる。複合体混合物は、過剰な薬−リンカー中間体と他の不純物を除去するために、ＨｉＴｒａｐ ＳＰ ＦＦコラムを通して載せられて溶出され得る。反応混合物は遠心性限外濾過によって濃縮される。そして、システイン操作された抗体薬複合体はＰＢＳにあるＧ２５樹脂を通しての溶出によって精製されて、脱塩され、無菌状態の下で０．２のμｍフィルタで濾過され、保管のために冷凍される。

【0383】

本発明のＡＤＣは、上の切で記述される手順によって調整することができる。

【0384】

分析評価アッセイ
次いで、選ばれたリンカーが試験されて、試験管内及び生体内分析において活性であるとわかった。劈開データが、下の表に示される。

【0385】

カテプシンＢ分割分析
ペプチドリンカーのように、ＡＤＣのための非ペプチドリンカーは、適当な薬リリースのために適切にリソソームで劈開可能であることが期待される。細胞の消化細胞小器官として、酸性ｐＨで最適加水分解活動を示す多少のプロテアーゼで、リソソームは富化される。カテプシンＢは代表的なリソソームプロテアーゼであり、ＡＤＣペプチドリンカー（参照）の起動に寄与することが示されている。最初のスクリーンとして、抗体との結合にふさわしい劈開可能リンカー薬構成を確認するために精製されたカテプシンＢを使って、分析が開発された。ノルフロキサシンが、リンカー−薬の薬構成要素を表すのに用いられた。支配ペプチド（例えばＶａｌＣｉｔ）に比しての劈開のパーセンテージ、所定の時点で、ならびに劈開反応（ＫｍとＶｍａｘ）の運動パラメータが測定された。分析の詳しい説明が、下で示される。この分析から、いろいろなタンパク分解性に活発で構造的に多様なリンカーが、特定されて、ＡＤＣを作る際に、後で使われた。

【0386】

基質として実験的なリンカー−薬剤を用いるカテプシンＢ劈開活性が、ＬＣ／ＭＳを用いて、ノルフロキサシンの放出をモニターすることによって測定された。様々な濃度のリンカー−薬剤（３倍の連続希釈）を、２０ｎＭ Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｂを含んでいる２０μＬ反応物で培養した（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ｃａｔ．＃２１９３６４，ｈｕｍａｎ ｌｉｖｅｒ）、１０ｍＭのＭＥＳ ｐＨ ６．０、１ｍＭのＤＴＴ、０．０３％のＣＨＡＰＳと２５ｎＭノルフロキサシン−ｄ５内部の標準（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｃａｔ．＃ｓｃ−３０１４８２）。反応物は３７°Ｃで１時間培養され、次いで反作を停止させるために６０μＬの２％のギ酸の追加が続いた。Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｐｈｅｎｙｌ ｃｏｌｕｍｎ（２．１ｍｍｘ ５０ｍｍ、ｗａｔｅｒｓ ｃａｔ＃１８６００２８８４）へ２μＬ停止した反応物を注入することによって、試料を分析した。試料は、アセトニトリル（Ｗａｔｅｒ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣの０．１％のギ酸）の線形２分の勾配（０％〜８０％）を使って精製された。ポジティブＭＲＭモード（ノルフロキサシン３２０ ２３３ｍ／ｚ、ノルフロキサシン−ｄ５ ３２５ ２３３ｍ／ｚ）で動作するＡＢ Ｓｃｉｅｘ ＱＴｒａｐ５５００トリプル四重極質量分析計を使って、ノルフロキサシンとノルフロキサシン−ｄ５内部の標準を検出した。定量されたノルフロキサシン（内部の標準に正規化された）をリンカー−薬濃度に対してプロットした、そして、結果として生じるプロットを、運動定数ＫｍとＶｍａｘのためにＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して、マイケリスメンテンフィッティングでと曲線当てはめをした。

【0387】

試験管内の細胞増殖分析
以下のプロトコルを使用して、細胞増殖分析によって、ＡＤＣの効能を測定した：（ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ ＧＬＯ（商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ，Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ＴＢ２８８；Ｍｅｎｄｏｚａら（２００２）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６２：５４８５−５４８８）。
１，媒体でおよそ１０４の細胞（ＳＫＢＲ−３、ＢＴ４７４、ＭＣＦ７またはＭＤＡ−ＭＢ−４６８）を含んでいる細胞培養の１００ｍｌの分割量を、９６穴、不透明な壁のプレートの各々の穴に置いた。
２．対照穴は媒体を含んで準備されて、細胞はなかった。
３．ＡＤＣが実験の穴に加えられて、３〜５日の間培養された。
４．プレートを、およそ３０分の間室温に平衡させた。
５．各々の穴に存在する細胞培養培地の量と等しいＣＥＬＬＴＩＴＥＲ ＧＬＯ（商標）試薬の量が加えられた。
６．含有物を、細胞溶解を誘発するために、軌道シェーカーの上で２分間混ぜた。
７．プレートを、発光信号を安定化させるために、１０分の間室温で暖めた。
８．発光を記録して、ＲＬＵ＝相対的な発光単位としてグラフので報告した。
標準偏差エラーバーとともに、データを各複製セットにつき、発光の平均としてプロットする。プロトコルは、ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ ＧＬＯ（商標）発光細胞の修正版である。
媒体：ＳＫ−ＢＲ−３は、５０／５０／１０％ＦＢＳ／グルタミン／２５０のμｇ／ｍＬＧ−４１８で成長。ＯＶＣＡＲ−３は、ＲＰＭＩ／２０％ＦＢＳ／グルタミンで成長。

【0388】

生体内分析
１．抗ＣＤ３３抗体薬複合体（ＡＤＣ）の有効性を、ＨＬ−６０またはＥＯＬ−１（ヒトの急性脊髄性白血病）のマウス異種移植片モデルで調査した。ＨＬ−６０細胞系は、ＡＴＣＣから得られ（米国菌培養収集所；Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）、ＥＯＬ−１細胞系は、ＤＳＭＺから得られた（Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ；Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。

【0389】

雌のＣ．Ｂ−１７ ＳＣＩＤマウス（チャールズ・リバー・ラボラトリーズ；ホリスター、カリフォルニア州）の各々を、５００万細胞のＨＬ−６０またはＥＯＬ−１で横腹部位の皮下に接種した。異種移植片腫瘍が平均腫瘍１００〜３００のｍｍ³（０日目と呼ばれる）量に達したとき、動物は各々７〜１０のマウスの群に無作為割当されて、ＡＤＣの一回の静脈注射を受けた。ＡＤＣの投与のおよそ４時間前に、腫瘍細胞上で起こり得る非特異性の抗体結合部位をブロックするために、動物は過剰量（３０ｍｇ／ｋｇ）の反ｇＤ対照抗体で、腹膜内に薬を投与された。マウスの腫瘍と体重を、試験を通して１週につき１〜２回測定した。体重損失がマウスの開始体重の２０％超であったとき、マウスはすぐに安楽死させた。腫瘍が３０００のｍｍ³に達するか、切迫した潰瘍化の徴候を示す前に、すべての動物は安楽死させた。

【0390】

２．反Ｎａｐｉ２Ｂ抗体薬複合体（ＡＤＣｓ）の有効性を、ＯＶＣＡＲ３−Ｘ２．１（ヒトの卵巣癌）のマウス異種移植片モデルで調査した。ＯＶＣＡＲ３細胞系は、ＡＴＣＣから得られた（米国菌培養収集所；Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）、そして、下位系統ＯＶＣＡＲ３−Ｘ２．１は、マウスの最適増大のために、ジェネンテックで生成した。

【0391】

雌のＣ．Ｂ−１７ＳＣＩＤ−ベージュ・マウス（チャールズ・リバー・ラボラトリーズ；サンディエゴ、ＣＡ）の各々を、１０００万のＯＶＣＡＲ３−Ｘ２．１細胞で、胸の乳房の分厚いパッド部位で接種した。異種移植片腫瘍が平均腫瘍１００−３００のｍｍ³（０日目と呼ばれる）量に達したとき、動物は各々７〜１０のマウスの群れに無作為割当されて、ＡＤＣの一回の静脈注射を受けた。マウスの腫瘍と体重は、試験を通して１週につき１〜２回測定した。体重損失がマウスの開始体重の２０％超であったとき、マウスはすぐに安楽死させた。腫瘍が３０００のｍｍ³に至るか、切迫した潰瘍化の徴候を示す前に、すべての動物は安楽死させた。

【0392】

反ＣＤ２２抗体薬複合体（ＡＤＣ）の有効性は、ＢＪＡＢ−ｌｕｃ（ヒトのバーキットリンパ腫）またはＷＳＵ−ＤＬＣＬ２（ヒトのびまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫）のマウス異種移植片モデルで調査される。ＢＪＡＢ細胞系は、ＤＳＭＺから得られる（Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ；Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。そして、下位系統のＢＪＡＢ ｌｕｃは、安定してルシフェラーゼ遺伝子を表すために、ジェネンテックで生成する。ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞系も、ＤＳＭＺから得られる。

【0393】

雌のＣ．Ｂ−１７ＳＣＩＤマウス（チャールズ・リバー・ラボラトリーズ；ホリスター、ＣＡ）の各々は、２０００万細胞のＢＪＡＢ−ｌｕｃまたはＷＳＵ−ＤＬＣＬ２で横腹部位の皮下に接種をされる。異種移植片腫瘍が平均腫瘍１００〜３００のｍｍ³（０日目と呼ばれる）量に達したとき、動物は各々７〜１０のマウスの群れに無作為割当されて、ＡＤＣの一回の静脈注射を受けた。マウスの腫瘍と体重は、試験を通して１週につき１〜２回測定される。体重損失がマウスの開始体重の２０％超であるとき、マウスはすぐに安楽死させる。腫瘍が３０００ｍｍ³に達するか、切迫した潰瘍化の徴候を示す前に、すべての動物は安楽死させる。

【0394】

4. 反Ｈｅｒ２抗体薬複合体（ＡＤＣ）の有効性は、ＭＭＴＶ−ＨＥＲ２ファウンダー＃５（ネズミ乳房の腫瘍）のマウス同種移植モデルで調査される。ＭＭＴＶ−ＨＥＲ２ファウンダー＃５（Ｆｏ５）モデル（ジェネンテックで発展）は、ヒトＨＥＲ２遺伝子が、ネズミ乳房の腫瘍ウイルスプロモーター（ＭＭＴＶ−ＨＥＲ２）の転写調節の下で、乳房の上皮で過剰発現するトランスジェニックマウスモデルである。過剰発現によって、ヒトのＨＥＲ２レセプターを過剰発現させる乳房の腫瘍の自然発達が起きる。ファウンダー動物（ファウンダー＃５、Ｆｏ５）の１匹からの乳房の腫瘍は、腫瘍断片の連続移植によって、ＦＶＢマウス（チャールズリバーラボラトリーズ）で伝播された。

【0395】

有効性研究のために、Ｆｏ５のトランスジェニック乳房の腫瘍が、雌のｎｕ／ｎｕマウス（チャールズ・リバー・ラボラトリーズ；ホリスター、ＣＡ）の胸の乳房の分厚いパッドにサイズおよそ２ｍｍ×２ｍｍの腫瘍断片として外科的に移植された。同種移植片腫瘍が平均腫瘍１００〜３００のｍｍ³（０日目と呼ばれる）量に達したとき、動物は各々７〜１０のマウスの群に無作為割当されて、ＡＤＣの一回の静脈注射を受けた。マウスの腫瘍と体重は、試験を通して１週につき１〜２回測定される。体重損失がマウスの開始体重の２０％超であるとき、マウスはすぐに安楽死させる。腫瘍が３０００のｍｍ³に達するか、切迫した潰瘍化の徴候を示す前に、すべての動物は安楽死する。
生物学的データ
ＡＤＣリンカー−薬剤の構造体

【化85】

【化86】

【化87】

【0396】

ＰＢＤ−ＬＤ１は国際公開第 ２０１１／１３０５９８号に記載の化合物８７である。

【0397】

配列
ＮａＰｉ３ｂヒト化抗体：
一実施形態において、本発明のＡＤＣのＮａｐｉ３ｂ抗体は、３つの軽鎖超可変領域及び３つの重鎖超可変領域（配列番号１−６）を含み、それらの配列を以下に示す。

【0398】

一実施形態において、本発明のＡＤＣのＮａｐｉ３ｂ抗体は、可変軽鎖配列配列番号７の可変軽鎖配列及び配列番号８の可変軽鎖配列を含む。

【0399】

一実施形態において、本発明のＡＤＣのＮａｐｉ３ｂ抗体は、配列番号９の軽鎖配列及び配列番号１０重鎖配列を含む。

【0400】

抗ＣＤ３３のヒト化抗体：
一実施形態において、本発明のＡＤＣの抗ＣＤ３３抗体は、３つの軽鎖の超可変領域及び３つの重鎖の超可変領域を含み、それらの配列（配列番号１１−１６）を以下に示す。

【0401】

一実施形態において、本発明のＡＤＣの抗ＣＤ３３抗体は、可変軽鎖配列配列番号１７の可変軽鎖配列及び配列番号 １８の可変軽鎖配列を含む。

【0402】

一実施形態において、本発明のＡＤＣの抗ＣＤ３３抗体は、可変軽鎖配列配列番号１９の可変軽鎖配列及び配列番号２０の可変軽鎖配列を含む。

【0403】

一実施形態において、本発明のＡＤＣの抗ＣＤ３３抗体は、３つの軽鎖の超可変領域及び３つの重鎖の超可変領域を含み、それらの配列（配列番号１９−２４）を以下に示す。

【0404】

一実施形態において、本発明のＡＤＣの抗ＣＤ３３抗体は、可変軽鎖配列配列番号２５の可変軽鎖配列及び配列番号２６の可変軽鎖配列を含む。一実施形態において、本発明のＡＤＣの抗ＣＤ３３抗体は、可変軽鎖配列配列番号２７の可変軽鎖配列及び配列番号２８の可変軽鎖配列を含む。一実施形態において、本発明のＡＤＣの抗ＣＤ３３抗体は、可変軽鎖配列配列番号２９の可変軽鎖配列及び配列番号３０の可変軽鎖配列を含む。
一実施形態において、本発明のＡＤＣの抗ＣＤ３３抗体は、可変軽鎖配列配列番号３１の可変軽鎖配列及び配列番号３２の可変軽鎖配列を含む。

【0405】

ＡＤＣの体外データ
下記のＡＤＣは上記の体外測定で試験され、活性であることが判明された。該ＡＤＣの活性は下記の表に示される。

【0406】

ＡＤＣ体内データ
以下のＡＤＣは上記の対内測定で試験され、活性であることが判明された。該ＡＤＣの活性度は図１〜３及び下記の説明に示される。図１はＯＶＣＡＲ３Ｘ２．１のヒト卵巣腫瘍のあるＳＣＩＤベージュマウスにおけるＮａＰｉ３ｂのＡＤＣの有効性比較を示す。ＮａＰｉ３ｂ ＰＢＤのＡＤＣ１−１及びＡＤＣ２−１は両方共、ビヒクル群と比べて腫瘍成長に対して用量依存的な阻害を示した。非標的対照ｇＤまたはＣＤ３３ ＰＢＤのＡＤＣは腫瘍成長に対して顕著な効果があったが、同用量では対応するＮａＰｉ３ｂ ＰＢＤのＡＤＣの効果の方がより良好であった。

【0407】

図２はＯＶＣＡＲ３Ｘ２．１のヒト卵巣腫瘍のあるＳＣＩＤベージュマウスにおけるＮａＰｉ３ｂのＡＤＣの有効性比較を示す。ＮａＰｉ３ｂ ＰＢＤのＡＤＣ１−１及びＡＤＣ３−１は両方共、ビヒクル群と比べて腫瘍成長に対して用量依存的な阻害を示した。非標的対照ＣＤ３３ ＰＢＤのＡＤＣ３−２は腫瘍成長に対して僅かな効果があった。

【0408】

図３はＥＯＬ−１ヒト急性骨髄性白血病腫瘍のあるＳＣＩＤマウスにおける様々な用量でのＣＤ３３ＰＢＤのＡＤＣ２−２の有効性を示す。ＣＤ３３ＰＢＤのＡＤＣ２−２は腫瘍成長に対して用量依存性の阻害を示し、０．２ｍｇ／ｋｇの抗体用量で腫瘍血行停止を、０．５ｍｇ／ｋｇ以上では腫瘍の寛解を、引き起こした。

【図1】

【図2】

【図3】