特許 6689024 皮膚外用剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6689024

(24)【登録日】2020年4月9日

(45)【発行日】2020年4月28日

(54)【発明の名称】皮膚外用剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 8/97 20170101AFI20200421BHJP

   A61K 36/535 20060101ALI20200421BHJP

   A61K 36/65 20060101ALI20200421BHJP

   A61K 36/736 20060101ALI20200421BHJP

   A61P 5/28 20060101ALI20200421BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20200421BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20200421BHJP

   A61P 17/08 20060101ALI20200421BHJP

   A61P 17/10 20060101ALI20200421BHJP

   A61P 17/14 20060101ALI20200421BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20200421BHJP

   A61P 39/06 20060101ALI20200421BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20200421BHJP

   A61Q 1/02 20060101ALI20200421BHJP

   A61Q 7/00 20060101ALI20200421BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20200421BHJP

【ＦＩ】

   A61K8/97

   A61K36/535

   A61K36/65

   A61K36/736

   A61P5/28

   A61P17/00

   A61P17/02

   A61P17/08

   A61P17/10

   A61P17/14

   A61P29/00

   A61P39/06

   A61P43/00 111

   A61Q1/02

   A61Q7/00

   A61Q19/00

【請求項の数】1

【全頁数】17

(21)【出願番号】特願2014-245655(P2014-245655)

(22)【出願日】2014年12月4日

(65)【公開番号】特開2015-143205(P2015-143205A)

(43)【公開日】2015年8月6日

【審査請求日】2017年12月1日

【審判番号】不服2019-4522(P2019-4522/J1)

【審判請求日】2019年4月5日

(31)【優先権主張番号】特願2013-271084(P2013-271084)

(32)【優先日】2013年12月27日

(33)【優先権主張国】JP

(73)【特許権者】

【識別番号】000162021

【氏名又は名称】共栄化学工業株式会社

(72)【発明者】

【氏名】岩野 英生

(72)【発明者】

【氏名】谷澤 由依子

(72)【発明者】

【氏名】小椋 将岐

(72)【発明者】

【氏名】愛水 哲史

(72)【発明者】

【氏名】澤木 茂

(72)【発明者】

【氏名】澤木 茂豊

【合議体】

【審判長】 岡崎 美穂

【審判官】 關 政立

【審判官】 山内 達人

(56)【参考文献】

【文献】 特開２００１−１８１１９３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００５−１４５８９１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２０１２−８７１１２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平９−２０６３３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００６−１１１５６０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平４−１２４１３８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００１−３１６２３４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２０１３−２３７６５７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２０００−２３９１２１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 韓国公開特許第１０−２０１０−００５８８１７（ＫＲ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１２／１１５２４７（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

A61K8/00-8/99

A61Q1/00-90/00

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＢＩＯＳＩＳ／ＫＯＳＭＥＴ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ボタン科（Paeoniaceae）ボタン属（Paeonia）に属するシャクヤクの根の抽出物、バラ科（Rosaceae）サクラ属（Prunus）に属するモモの種子の抽出物、及びシソ科（Lamiaceae）シソ属（Perilla）に属するシソの葉の抽出物を含有する皮膚外用剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、複数の植物の抽出物を有効成分とし、すぐれた皮膚生理活性及び生体安全性を有する化粧料配合成分並びにかかる成分を含有する皮膚外用剤に関する。

【背景技術】

【0002】

皮膚の老化は、加齢に伴う細胞増殖・分化の不活化、細胞の萎縮、ホルモン分泌の低下、角層細胞間脂質成分の量的低下等の内的要因と、太陽光（紫外線）、排ガス等に含まれる化学物質（窒素化合物や硫黄化合物等）に誘発される活性酸素による細胞・組織の損傷、又は炎症等の外的要因とが複雑に絡み合って生ずる現象である。上記内的要因により、例えば、表皮角層細胞の活性低下もしくは増殖能の低下、セラミドや天然保湿因子（Ｎａｔｕｒａｌ ｍｏｉｓｔｕｒｉｚｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ; ＮＭＦ）等の角質層のバリア機能を担う成分の減少、表皮基底細胞の不活化、過剰な皮脂分泌等が生じる。また、上記外的要因により、例えば、皮膚が酸化ダメージを受けて生体成分が変質して皮膚内に抗原が生じ、この抗原が皮膚の炎症やアレルギーの発症の要因となる。そして、それら内定要因と外的要因により皮膚の形態的・生理的変化として、肌荒れ、ニキビの形成、乾燥肌、シワ、たるみ等の皮膚の老化に係る症状が現れる。

【0003】

以上のことから、皮膚の炎症やニキビの予防、改善効果、さらには、皮膚のバリア機能の改善効果を有する皮膚外用成分が求められており、従来、様々な抗酸化剤（ビタミンＣ、ビタミンＥ、スーパーオキシドジスムターゼ等）、抗炎症剤（グリチルリチン酸等）、保湿剤（尿素等）が提案されてきた。しかし、これらの有効成分は皮膚安全性及び有効性の点で問題があった。

【発明の開示】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

本発明者らは、かかる従来技術の問題点に鑑みて、皮膚安全性の観点から天然物由来の新たな有効成分を見出すべく鋭意研究を行った。その結果、ボタン科ボタン属に属する植物の抽出物、バラ科サクラ属に属する植物の抽出物、及びシソ科シソ属に属する植物の抽出物の混合物が、すぐれた抗酸化作用、抗炎症作用、バリア機能向上作用、皮膚のターンオーバー正常化作用及び皮脂分泌抑制作用を有し、これらの作用により、当該混合物を配合することですぐれた皮膚生理活性効果を奏し、かつ、皮膚安全性にすぐれた皮膚外用剤の提供が可能になることを見出した。

【0005】

従来、ボタン科ボタン属の植物抽出物、バラ科サクラ属に属する植物の抽出物、及びシソ科シソ属に属する植物の抽出物のそれぞれが、皮膚生理活性を有することは、例えば、特許文献１〜６に開示されているが、これらの植物の抽出物を組み合わせることにより、各抽出物では奏し得なかった皮膚生理活性が創出することについては、知られていなかった。

【特許文献1】特開昭63-060935号公報

【特許文献2】特開平01-090131号公報

【特許文献3】特開平06-279256号公報

【特許文献4】特開昭58-172321号公報

【特許文献5】特開平11-106336号公報

【特許文献6】特開昭64-003126号公報

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明は、ボタン科ボタン属に属する植物の抽出物、バラ科サクラ属に属する植物の抽出物、及びシソ科シソ属に属する植物の抽出物を含有する皮膚外用剤である。

【発明の効果】

【0007】

本発明は、ボタン科ボタン属に属する植物の抽出物、バラ科サクラ属に属する植物の抽出物、及びシソ科シソ属に属する植物の抽出物を含有する皮膚外用剤であって、当該植物抽出物の混合物が奏する抗酸化作用、抗炎症作用、皮膚のターンオーバー正常化作用、バリア機能向上作用及び皮脂分泌抑制作用の相乗作用により、肌荒れ（炎症、ドライスキン、アドピー性皮膚炎等）や、ニキビ、肌のシワ、タルミを予防、改善し、肌のハリ、ツヤを向上させ、さらには、シミ、ソバカスの改善や、紫外線等の外的要因による肌のダメージ（酸化ダメージ及び炎症ダメージ）の予防及び改善効果を発揮する皮膚外用剤を提供することができる。また、本発明に係る植物抽出物の混合物は、抗アンドロゲン作用をも有することから、育毛又は脱毛防止用の皮膚外用剤を提供することもできる。

【発明を実施するための形態】

【0008】

以下、本発明の好ましい実施の形態について詳細に説明する。なお、本明細書において化粧料なる文言は、所謂化粧料のほかに医薬部外品までも含む広義で用いる。

【0009】

本発明は、ボタン科ボタン属に属する植物の抽出物、バラ科サクラ属に属する植物の抽出物、及びシソ科シソ属に属する植物の抽出物を含有する皮膚外用剤であって、本発明で用いる抽出素材は、ボタン科ボタン属に属する植物、バラ科サクラ属に属する植物、及びシソ科シソ属に属する植物であればどのような種であってよい。

【0010】

本発明で用いるボタン科（Ｐａｅｏｎｉａｃｅａｅ)ボタン属(Ｐａｅｏｎｉａ)の植物の種は、特に限定されるものではなく、例えば、シャクヤク（Ｐａｅｏｎｉａ ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ）、ヤマシャクヤク（Ｐａｅｏｎｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ）、ベニバナヤマシャクヤク（Ｐａｅｏｎｉａ ｏｂｏｖａｔａ）、ボタン（Ｐａｅｏｎｉａ ｓｕｆｆｒｕｔｉｃｏｓａ）等が挙げられる。また、当該植物の全草、葉、花部、茎、種子、実、根等、いずれを用いても良いが、全草又は根の使用が好ましい。

【0011】

本発明で用いるバラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）サクラ属（Ｐｒｕｎｕｓ）の植物の種は、特に限定されるものではなく、例えば、モモ（Ｐｒｕｎｕｓ ｐｅｒｓｉｃａ）、アンズ（Ｐｒｕｎｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ）、ウメ（Ｐｒｕｎｕｓ ｍｕｍｅ）、スモモ（Ｐｒｕｎｕｓ ｓａｌｉｃｉｎａ）等が挙げられる。また、当該植物の全草、葉、花部、茎、種子、実、根等、いずれを用いても良いが、全草又は種子の使用が好ましい。

【0012】

本発明で用いるシソ科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ)シソ属(Ｐｅｒｉｌｌａ)の植物種は、特に限定されるものではなく、例えば、シソ、エゴマ等が挙げられる。なお、シソとしては、一般的に、学名として、Ｐｅｒｉｌｌａ ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ ｖａｒ. Ｃｒｉｓｐａ、又はＰｅｒｉｌｌａ ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ ｖａｒ. Ｂｒｉｔｔｏｎで表記されるものを含み、例えば、アオジソ、チリメンジソ、アカジソ、マダラジソ、カタメンジソ、チリメンアオジソ又はこれらの変種もしくは亜種、或いは交配種が挙げられるが、本発明はこれに限るものではない。また、当該植物の全草、葉、花部、茎、種子、実、根等、いずれを用いても良いが、全草又は葉の使用が好ましい。

【0013】

抽出物の調製は、まず、各植物の使用部位を、必要ならば予め水洗して異物を除いた後、そのまま又は乾燥した上、必要に応じて細切又は粉砕し、抽出溶媒と接触させて抽出を行う。抽出は、浸漬法等の常法に従って抽出溶媒と接触させることで行うことが可能であるが、浸漬法以外にも超臨界抽出法を用いることも可能である。

【0014】

抽出溶媒としては、水；メタノール、エタノール、プロパノール等の低級アルコール類；エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン等の多価アルコール類；酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチル等のエステル類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；エチルエーテル、イソプロピルエーテル等のエーテル類；ｎ−ヘキサン、トルエン、クロロホルム等の炭化水素系溶媒等が挙げられ、それらは単独で又は二種以上混合して用いられる。

【0015】

それら抽出溶媒のうちでも、得られる抽出物の混合物の抗酸化作用、抗炎症作用、皮脂分泌抑制作用、及びバリア機能向上作用、さらには、皮膚刺激性の観点から、又化粧料への幅広い適用が可能であるという点からも、本発明においては、水、低級アルコール類又は多価アルコール類等の親水性溶媒が好適である。この親水性溶媒を用いる場合の好ましい例としては、例えば、水、低級アルコール類（特にエタノール）、又は多価アルコール（特に、１，３−ブチレングリコール）の単独使用、或いは、水と低級アルコール類（特にエタノール）との混合溶媒、又は水と多価アルコール類（特に１，３−ブチレングリコール，グリセリン）との混合溶媒の使用等が挙げられるが、なかでも水単独、又は水と１，３−ブチレングリコールの混合溶媒が特に好ましい。

【0016】

混合溶媒を用いる場合の混合比は、例えば水と１，３−ブチレングリコールとの混合溶媒であれば、容量比（以下同じ）で１：１〜２０：１、水とエタノールとの混合溶媒であれば、１：１〜２５：１、水とグリセリンとの混合溶媒であれば１：１〜２０：１の範囲とすることが好ましい。

【0017】

また、各植物の使用部位と抽出溶媒との重量比は、好ましくは１：１〜１：５０であり、より好ましくは、１：２〜１：３０である。

【0018】

抽出物の調製に際して、そのｐＨに特に限定はないが、一般には３〜９の範囲とすることが好ましい。かかる意味で、必要であれば、前記抽出溶媒に、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ性調整剤、又はクエン酸、塩酸、リン酸、硫酸等の酸性調整剤を配合し、所望のｐＨとなるように調整してもよい。

【0019】

抽出温度、抽出時間等の抽出条件は、用いる溶媒の種類やｐＨによっても異なるが、例えば、水もしくは１，３−ブチレングリコール、又は水と１，３−ブチレングリコールとの混液を溶媒とする場合であれば、抽出温度は好ましくは０℃〜８０℃の範囲であり、より好ましく０℃〜２０℃の範囲であり、又抽出時間は好ましくは１〜１６８時間（１時間〜１週間）であり、より好ましくは１〜１２０時間（１時間〜５日間）の範囲である。

【0020】

なお、本発明の抽出処理に先立って、又は抽出処理と並行して、必要に応じて抽出物に加水分解処理を施してもよい。これによって、抽出物の保存安定性等を改善して、化粧料配合剤としての抽出物をより有効に利用できる可能性がある。

【0021】

抽出物に酵素加水分解処理を施す場合、酵素としては、アクチナーゼ、パパイン、ペプシン等の蛋白分解酵素、グルコアミラーゼ、α−アミラーゼ、β−アミラーゼ等の澱粉分解酵素、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、ペクチナーゼ等の繊維素分解酵素等のいずれかの酵素群から選ばれた１種又は２種以上を用いてもよいが、それらの酵素群からそれぞれ選ばれた１種又は２種以上の酵素を組み合わせて用いることがより好ましい。

【0022】

酵素の添加量は、例えば、植物の使用部位の固形分に対して、合計で０．０１〜１０重量％の範囲とすることが好ましく、より好ましくは０．１〜２．０重量％の範囲である。

【0023】

上述のように調製した抽出物を混合し、一般にはｐＨを３〜８に調製した上で、これをそのままの状態で皮膚外用剤の配合剤として使用しても良く、又減圧濃縮等により所望の濃度として使用しても良い。また、抽出物はスプレードライ法等の常法により乾燥物としても良い。

【0024】

本発明の植物抽出物の混合物を含む皮膚外用剤（化粧料、医薬部外品、外用医薬品）としては、例えば乳液、クリーム、ローション、エッセンス、パック、口紅、ファンデーション、リクイドファンデーション、メイクアッププレスパウダー、ほほ紅、白粉、洗顔料、ボディシャンプー、毛髪用シャンプー、石けん等の清浄用化粧料、育毛剤、さらには浴剤等が挙げられるが、勿論これらに限定されるものではない。

【0025】

本発明の各植物抽出物の配合量は、スキンケア用の皮膚外用剤に配合する場合は、それぞれの抽出物の固形分として、一般に０．００００１〜５．０重量％、好ましくは０．０００１〜１．０重量％の範囲である。また、毛髪用の皮膚外用剤に配合する場合は、それぞれの抽出物の固形分として、一般的には０．００００１〜５．０重量％（固形分重量％、以下同じ）であり、好ましくは、０．０００１〜３．０重量％である。

【0026】

本発明の皮膚外用剤には、必須成分の植物抽出物の混合物ほかに、スキンケア用の皮膚外用剤であれば、例えば、油性成分、界面活性剤（合成系、天然物系）、保湿剤、増粘剤、乳化剤又は乳化助剤、防腐・殺菌剤、粉体成分、紫外線吸収剤、抗酸化剤、色素、香料、その他の生理活性成分等を必要に応じて適宜配合することができる。また、ヘアケア用の皮膚外用剤であれば、他の活性成分（毛母細胞賦活剤、抗男性ホルモン剤、血行促進剤、皮脂分泌抑制剤、抗炎症剤、毛髪保護剤、毛周期の成長維持剤等）を組み合わせ配合するようにしてもよく、これによって、相乗的な育毛効果や脱毛防止効果を期待することもできる。さらに、本発明の植物抽出物の混合物の有効性、特長を損なわない限り、他の生理活性成分と組み合わせて化粧料に配合することも何ら差し支えない。

【0027】

ここで、油性成分としては、例えばオリーブ油、ホホバ油、ヒマシ油、大豆油、米油、米胚芽油、ヤシ油、パーム油、カカオ油、メドウフォーム油、シアーバター、ティーツリー油、アボガド油、マカデミアナッツ油、植物由来スクワラン等の植物由来の油脂類；ミンク油、タートル油等の動物由来の油脂類；ミツロウ、カルナウバロウ、ライスワックス、ラノリン等のロウ類；流動パラフィン、ワセリン、パラフィンワックス、スクワラン等の炭化水素類；ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸、ｃｉｓ−１１−エイコセン酸等の脂肪酸類；ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール等の高級アルコール類；ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸ブチル、２−エチルヘキシルグリセライド、高級脂肪酸オクチルドデシル（ステアリン酸オクチルドデシル等）等の合成エステル類及び合成トリグリセライド類等が挙げられる。

【0028】

界面活性剤としては、例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル等の非イオン界面活性剤；脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレン脂肪アミン硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル燐酸塩、α−スルホン化脂肪酸アルキルエステル塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル燐酸塩等のアニオン界面活性剤；第四級アンモニウム塩、第一級〜第三級脂肪アミン塩、トリアルキルベンジルアンモニウム塩、アルキルピリジニウム塩、２−アルキル−１−アルキル−１−ヒドロキシエチルイミダゾリニウム塩、Ｎ，Ｎ−ジアルキルモルフォルニウム塩、ポリエチレンポリアミン脂肪酸アミド塩等のカチオン界面活性剤；Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−アルキル−Ｎ−カルボキシメチルアンモニオベタイン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリアルキル−Ｎ−アルキレンアンモニオカルボキシベタイン、Ｎ−アシルアミドプロピル−Ｎ′，Ｎ′−ジメチル−Ｎ′−β−ヒドロキシプロピルアンモニオスルホベタイン等の両性界面活性剤等を使用することができる。

【0029】

乳化剤又は乳化助剤としては、酵素処理ステビア等のステビア誘導体、レシチン及びその誘導体（水素添加レシチン等）、乳酸菌醗酵米、乳酸菌醗酵発芽米、乳酸菌醗酵穀類（麦類、豆類、雑穀等）等を配合することもできる。

【0030】

保湿剤としては、例えばグリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、キシリトール、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等があり、さらにトレハロース等の糖類、ムコ多糖類（例えば、ヒアルロン酸及びその誘導体、コンドロイチン及びその誘導体、ヘパリン及びその誘導体等）、エラスチン及びその誘導体、コラーゲン及びその誘導体、ＮＭＦ関連物質、乳酸、尿素、高級脂肪酸オクチルドデシル、海藻抽出物、シラン根（白及）抽出物、各種アミノ酸及びそれらの誘導体が挙げられる。

【0031】

増粘剤としては、例えばアルギン酸、寒天、カラギーナン、フコイダン等の褐藻、緑藻又は紅藻由来成分；シラン根（白及）抽出物；ペクチン、ローカストビーンガム、アロエ多糖体等の多糖類；キサンタンガム、トラガントガム、グアーガム等のガム類；カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等のセルロース誘導体；ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アクリル酸・メタクリル酸共重合体等の合成高分子類；ヒアルロン酸及びその誘導体；ポリグルタミン酸及びその誘導体等が挙げられる。

【0032】

防腐・殺菌剤としては、例えば尿素；パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチル等のパラオキシ安息香酸エステル類；フェノキシエタノール、ジクロロフェン、ヘキサクロロフェン、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、サリチル酸、エタノール、ウンデシレン酸、フェノール類、ジャマール（イミダゾデイニールウレア）、プロパンジオール、１，２−ペンタンジオール、各種精油類、樹皮乾留物等がある。

【0033】

粉体成分としては、例えばセリサイト、酸化チタン、タルク、カオリン、ベントナイト、酸化亜鉛、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、無水ケイ酸、雲母、ナイロンパウダー、ポリエチレンパウダー、シルクパウダー、セルロース系パウダー、穀類（米、麦、トウモロコシ、キビ等）のパウダー、豆類（大豆、小豆等）のパウダー等がある。

【0034】

紫外線吸収剤としては、例えばパラアミノ安息香酸エチル、パラジメチルアミノ安息香酸エチルヘキシル、サリチル酸アミル及びその誘導体、パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル、桂皮酸オクチル、オキシベンゾン、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸塩、４−ターシャリーブチル−４−メトキシベンゾイルメタン、２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、アロエ抽出物等がある。

【0035】

抗酸化剤としては、例えばブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、ビタミンＥ及びその誘導体（例えば、ビタミンＥニコチネート、ビタミンＥリノレート等）、ムラサキシキブ抽出物、シャクヤク抽出物、シラン根（白及）抽出物等がある。

【0036】

美白剤としては、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、コウジ酸及びその誘導体、アスコルビン酸及びその誘導体、ハイドロキノン又はその誘導体、エラグ酸及びその誘導体、ニコチン酸及びその誘導体、レゾルシノール誘導体、トラネキサム酸及びその誘導体、４−メトキシサリチル酸カリウム塩、マグノリグナン（５，５'−ジプロピル−ビフェニル−２,２’−ジオール）、４−(４−ヒドロキシフェニル）−４−ブタノール））、ヒドロキシ安息香酸及びその誘導体、ビタミンＥ及びその誘導体、α−ヒドロキシ酸、ＡＭＰ（アデノシンモノホスフェイト、アデノシン１リン酸）が挙げられ、これらを単独で配合しても、複数を組み合わせて配合しても良い。

【0037】

上記のコウジ酸誘導体としては、例えばコウジ酸モノブチレート、コウジ酸モノカプレート、コウジ酸モノパルミテート、コウジ酸ジブチレート等のコウジ酸エステル類、コウジ酸エーテル類、コウジ酸グルコシド等のコウジ酸糖誘導体等が、アスコルビン酸誘導体としては、例えばＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルマグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルマグネシウム等のアスコルビン酸エステル塩類、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド、Ｌ−アスコルビン酸−５−グルコシド等のアスコルビン酸糖誘導体、それらアスコルビン酸糖誘導体の６位アシル化物（アシル基は、ヘキサノイル基、オクタノイル基、デカノイル基等）、Ｌ−アスコルビン酸テトライソパルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸テトララウリン酸エステル等のＬ−アスコルビン酸テトラ脂肪酸エステル類、３−Ｏ−エチルアスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−Ｏ−パルミテートナトリウム、グリセリルアスコルビン酸又はそのアシル化誘導体、ビスグリセリルアスコルビン酸等のアスコルビン酸グルセリン誘導体が、ハイドロキノン誘導体としては、アルブチン（ハイドロキノン−β−Ｄ−グルコピラノシド）、α−アルブチン（ハイドロキノン−α−Ｄ−グルコピラノシド）等が、トラネキサム酸誘導体としては、トラネキサム酸エステル（例えば、トラネキサム酸ラウリルエステル、トラネキサム酸ヘキサデシルエステル、トラネキサム酸セチルエステル又はその塩）、トラネキサム酸のアミド体（例えば、トラネキサム酸メチルアミド）等が挙げられ、レゾルシノール誘導体としては、例えば、４−ｎ−ブチルレゾルシノール、４−イソアミルレゾルシノール等が、２，５−ジヒドロキシ安息香酸誘導体としては、例えば２，５−ジアセトキシ安息香酸、２−アセトキシ−５−ヒドロキシ安息香酸、２−ヒドロキシ−５−プロピオニルオキシ安息香酸等が、ニコチン酸誘導体としては、例えばニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル等が、α−ヒドロキシ酸としては、例えば乳酸、リンゴ酸、コハク酸、クエン酸、α−ヒドロキシオクタン酸等がある。

【0038】

育毛効果及び脱毛防止効果の相乗効果が期待できる成分としては、ミノキシジル、シプロテロンアセテート、ペンタデカン酸グリセリド、６‐ベンジルアミノプリン（サイトプリン）、アデノシン、トランス‐３,４'‐ジメチル３−ヒドロキシフラバノン（t-フラバノン）、センブリエキス、ヒノキチオール、感光素、パントテン酸及びその誘導体、マイマイ花エキス、ゲンチアナエキス、カミツレエキス、ビタミンＥ及びその誘導体、ニコチン酸誘導体（ニコチン酸アミド等）、塩化カルプロニウム、女性ホルモン類（エチニルエストラジオール、エストロン等）、イチョウエキス、チョウジエキス、アマモエキス、黒大豆エキス、サリチル酸、グリチルリチン酸カリウム（カンゾウエキス）、ヒノキチオール、塩化ベンザルコニウム、イソプロピルメチルフェノール、ｌ−メントール、塩酸ピリドキシン（ビタミンＥ６）、チオキソロン、オランダカラシエキス、カンファー、サリチル酸、レゾルシン、タマサキツヅラフジから得られるビス型アルカロイド、ミツイシコンブ、エルカ酸（ｃｉｓ−１３−ドコセン酸）、ゴンドイン酸（ｃｉｓ−１１−エイコセン酸）等の高級モノエン酸、さらにはアミノ酸類、ビタミン類、フコイダン等が挙げられる。

【0039】

生理活性成分としては、美白成分として、例えば、胎盤抽出液、ソウハクヒ抽出物、ユキノシタ抽出物、米糠抽出物又はその加水分解物、白芥子抽出物又はその加水分解物、白芥子の発酵物、乳酸菌醗酵米、ムラサキシキブ抽出物、ハス種子抽出物又はその加水分解物、ハス種子発酵物、党参抽出物、ハトムギ加水分解物、ハトムギ種子発酵物、ローヤルゼリー発酵物、酒粕発酵物、パンダヌス・アマリリフォリウス(Pandanus amaryllifolius Roxb.)抽出物、アルカンジェリシア・フラバ（Arcangelicia flava Merrilli）抽出物、カミツレ抽出物等が上げられ、抗老化成分として、サンゴ草抽出物、イネの葉の抽出物又はその加水分解物、ナス（水ナス、長ナス、賀茂ナス、米ナス等）抽出物又はその加水分解物、アンズ果実の抽出物、ダマスクバラの抽出物、カタメンキリンサイ等の海藻の抽出物、アマモ等の海産顕花植物の抽出物、豆乳発酵物、クラゲ水、米抽出物又はその加水分解物、米醗酵エキス、発芽米抽出物又はその加水分解物、発芽米発酵物、黒豆抽出物又はその加水分解物、リノール酸及びその誘導体もしくは加工物（例えばリポソーム化リノール酸等）、動物又は魚由来のコラーゲン及びその誘導体、エラスチン及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体（ジカリウム塩等）、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、ビタミンＡ及びその誘導体、アラントイン、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、γ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸、ゲンチアナ抽出物、甘草抽出物、ニンジン抽出物、アロエ抽出物、ミツイシコンブ抽出物、ヘチマ抽出物、アナアオサ抽出物、ジュアゼイロ（Zizyphus joazeiro)抽出物等がある。

【0040】

次に、製造例、処方例及び試験例によって本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれらに限定されるものではない。なお、以下において、部はすべて重量部を、また％はすべて重量％を意味する。

【0041】

製造例１．植物抽出物の混合物溶液
ボタン科ボタン属のシャクヤクの根を刻んだ後乾燥し、乾燥物５０gを精製水２５０ｇに浸漬した後、１,３−ブチレングリコールを２５０g添加した。添加後、４℃で抽出を行った。そして、抽出液をろ過し、褐色透明のシャクヤク抽出物溶液４４２ｇを得た（固形分濃度３．５７％）。また、バラ科サクラ属のモモの種子（トウニン）を乾燥後粉砕し、粉砕物５０gを精製水２５０ｇに浸漬した後、１,３-ブチレングリコールを２５０g添加した。添加後４℃で抽出を行った。そして、抽出液をろ過し、淡黄色透明のトウニン抽出物溶液４９３ｇを得た（固形分濃度１．７４％）。また、シソ科シソ属のシソの葉を乾燥し、乾燥物２５gを精製水２５０ｇに浸漬し、１,３-ブチレングリコールを２５０g添加した。添加後、４℃で抽出を行った。そして、抽出液をろ過し、褐色透明のシソ抽出物溶液４４８ｇを得た（固形分濃度１．０２％）。以上の３種の植物抽出物を混合後、不溶物を濾過し、褐色透明の抽出物混合溶液１２３０ｇを得た（固形分濃度１．５４％）。

【0042】

処方例１．化粧水
［Ａ成分］ 部
オリーブ油 １．０
ポリオキシエチレン（５．５）セチルアルコール ５．０
ブチルパラベン ０．１
［Ｂ成分］ 部
製造例１の混合物溶液 ５．０
エタノール ５．０
グリセリン ５．０
１，３−ブチレングリコール ５．０
水酸化カリウム 適量
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
香料 適量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加温後、Ａ成分にＢ成分を加えて攪拌し、さらにヒスコトロン（５０００ｒｐｍ）で２分間ホモジナイズを行った。これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えて攪拌混合し、さらに３０℃以下まで冷却して化粧水を得た。

【0043】

処方例２．乳液
［Ａ成分］ 部
流動パラフィン ６．０
ヘキサラン ４．０
ホホバ油 １．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート ２．０
大豆レシチン １．５
［Ｂ成分］ 部
製造例１の混合物溶液 ３．０
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド ２．０
水酸化カリウム ０．５
グリセリン ３．０
１，３−ブチレングリコール ２．０
カルボキシメチルセルロース ０．３
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０１
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
香料 適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加熱した後、攪拌混合した。これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えてさらに攪拌混合して乳液を得た。

【0044】

処方例３．乳液
処方例２のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてトラネキサム酸２．０部を用いるほかは処方例２と同様にして乳液を得た。

【0045】

処方例４．乳液
処方例２のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてアルブチン３．０部を用いるほかは処方例２と同様にして乳液を得た。

【0046】

処方例５．乳液
［Ａ成分］ 部
流動パラフィン ６．０
ヘキサラン ４．０
ホホバ油 １．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート ２．０
大豆レシチン １．５
［Ｂ成分］ 部
製造例１の混合物溶液 ５．０
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド ２．０
水酸化カリウム ０．５
アルブチン ３．０
グリセリン ３．０
１，３−ブチレングリコール ２．０
カルボキシメチルセルロース ０．３
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０１
精製水 全量が１００部となる量

【0047】

処方例６．エッセンス
［成分］ 部
エタノール ２．０
グリセリン ５．０
１，３−ブチレングリコール ５．０
メチルパラベン ０．１
ヒアルロン酸 ０．１
製造例１の混合物溶液 ５．０
クエン酸 ０．３
クエン酸ナトリウム ０．６
精製水 全量が１００部となる量
精製水にヒアルロン酸を溶解させた後、残りの原料を順次加えて攪拌溶解させ、透明のエッセンスを得た。

【0048】

実施例７．リキッドファンデーション
［Ａ成分］ 部
ステアリン酸 ２．４
モノステアリン酸プロピレングリコール ２．０
セトステアリルアルコール ０．２
液状ラノリン ２．０
流動パラフィン ３．０
ミリスチン酸イソプロピル ８．５
プロピルパラベン ０．０５
［Ｂ成分］ 部
製造例１の混合物溶液 ５．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム ０．２
ベントナイト ０．５
プロピレングリコール ４．０
トリエタノールアミン １．１
メチルパラベン ０．１
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］ 部
酸化チタン ８．０
タルク ４．０
着色顔料 適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ加温した後混合攪拌した。これを再加温し、上記のＣ成分を添加して型に流し込み、室温になるまで攪拌してリキッドファンデーションを得た。

【0049】

処方例８．育毛用ヘアトニック
［成分］ 部
ｌ−メントール ０．８
製造例１の混合物溶液 ２．０
１，３−ブチレングリコール １０．０
フェノキシエタノール ０．２
エタノール ２０．０
精製水 全量が１００部となる量
上記の成分を十分攪拌混合して育毛料を得た。

【0050】

本発明の植物抽出物の皮膚生理活性について以下の試験方法により評価した。なお、本試験例では、各植物の抽出物を等量含むように調製した試料溶液を用いて評価を行ったが、本発明はこれに限るものではない。

【0051】

試験例１．ＤＰＰＨラジカル捕捉試験
ＤＰＰＨ２．４部をエタノール２０部に溶解し、これに精製水２０部を加えてＤＰＰＨ溶液を調製した。このＤＰＰＨ溶液２４部に対して、１８ｖ/ｖ％エタノール溶液を１９．２部、２Ｍ酢酸-酢酸ナトリウム緩衝液(ｐＨ５．５)を４．８部加えて、ＤＰＰＨ添加溶液として調製した。また、抽出液そのものの色調が試験に及ぼす影響を差し引くため、ＤＰＰＨ溶液の代わりに５０ｖ/ｖ％エタノール溶液を用いて、１８ｖ/ｖ％エタノール溶液と２Ｍ酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液を混合した液を対照液とした。次に、製造例１の混合物溶液を精製水で希釈して試料溶液を調製した。ここで、試料溶液は、当該混合物溶液の終濃度（溶液としての濃度）がそれぞれ０．１％、０．２％、０．６％となるように調製した３種の濃度のものを使用した。この試料溶液とＤＰＰＨ添加溶液又は対照液とを１：３の割合で混合し、室温で１０分静置後、各試験溶液をＤＰＰＨ添加溶液と混合した場合の５５０ｎｍにおける吸光度と、同じく各試験溶液を対照液と混合した場合の５５０ｎｍにおける吸光度との差を測定し、ＤＰＰＨラジカルの残存量を確認した。また、同時にコントロール（Ｃｏｎｔｒｏｌ）として製造例１の混合物溶液の代わりに、５０％１，３-ブチレングリコール水溶液を用いて上記と同様の操作を行い、ここに得られる ＤＰＰＨラジカル残存率に対する各試料添加時のＤＰＰＨラジカル残存率の相対値を求めた。また、試験系が正常に機能しているかを確認するために、試料溶液の代わりに陽性対照として水溶性ビタミンＥであるＴｒｏｌｏｘ(終濃度５μＭ)を添加した場合についても、同様の試験を行った。

【0052】

試験例１の結果を表１に示す。
［表１］

【0053】

表１に示すように、本発明に係る混合物溶液は、濃度依存的に格段にすぐれたＤＰＰＨラジカル消去作用を有することが示された。なお、陽性対照の水溶性ビタミンＥ（Ｔｒｏｌｏｘ）も同様に、ＤＰＰＨラジカル消去作用が示され、本試験系が正常に行われたことも確認された。

【0054】

試験例２．ＳＯＤ（スーパーオキシドディスムターゼ）様活性効果試験
０．２Ｍトリス塩酸緩衝液５０μＬ、１ｍＭエチレンジアミン四酢酸(ＥＤＴＡ)二ナトリウム溶液２０μＬ、０．７５ｍＭニトロブルーテトラゾリウムクロリド(ＮＢＴ)溶液１０μＬ、１ｍＭキサンチン溶液２０μＬ、０．０６Ｕ／ｍＬキサンチンオキシターゼ溶液５０μＬ、製造例１の抽出物溶液５０μＬを混合して試料溶液を調製した。ここで、試料溶液は、当該混合物溶液の終濃度（溶液としての濃度）が０．１％、０．２％、０．６％になるように調製したものを用いた。この試料溶液を３７℃、３分間インキュベートし、スーパーオキシドを発生させた。そして、ＮＢＴがスーパーオキシドによって還元されて生成するホルマザン量を５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。また、コントロール（Ｃｏｎｔｒｏｌ）として、製造例１の混合物溶液の代わりに３０％１，３−ブチレングリコール水溶液を用いて調製した溶液に対して同様の操作を行い、ここに得られる値を１００として、各試料添加時のホルマザン量の相対値を求めた。また、陽性対照として、ＳＯＤ（１０ｕｎｉｔ）についても同様の操作を行った。

【0055】

試験例２の結果を表２に示す。
［表２］

【0056】

表２に示すように、本発明に係る混合物溶液は、濃度依存的に格段にすぐれたＳＯＤ様活性を有することが示された。また、陽性対照も同様にＳＯＤ様活性が示され、本試験系が正常に行われていることも確認された。

【0057】

試験例３．プロスタグランジンＥ_２（ＰＧＥ_２）生成抑制効果試験
本発明に係る混合物溶液の抗炎症効果をＰＥＧ_２の生成抑制試験により評価した。ここで、ＰＧＥ２は、皮膚の炎症を惹起する炎症性のケミカルメディエーターであって、紫外線や化学物質等の外的要因によりダメージを受けた皮膚細胞内で分泌される物質である。よって、本発明においては、このＰＧＥ_２の生成抑制効果試験により、抗炎症効果を評価した。

【0058】

＜実験方法＞
ウサキ角膜由来細胞(SIRC)を、１０％ＦＢＳ含有イーグル最少必須培地に懸濁して９６穴プレートに５．０×１０^３個ずつ播種し、３７℃で４日間培養した後、培養器の底面から１００ｍＪ／ｃｍ^２の紫外線Ｂ波を照射し、その培養液に製造例１の混合物溶液（試料溶液）を添加した。ここで、試料溶液は、上記培養液全量に対する溶液としての終濃度が０．１％の濃度となるように添加した。添加後、２日間培養し、培養上清に分泌されたＰＧＥ_２の量を、ＰＧＥ_２測定キット(カイマンケイミカル社製)を用いて測定した。また、試料溶液の代わりに５０％１，３-ブチレングリコール水溶液を添加したものコントロールとし、上記と同様の操作によりＰＥＧ_２の量を測定した。また、試料溶液の代わりに陽性対照としてインドメタシン１０μＭを用いた場合のＰＧＥ_２の量も同様に測定した。さらに、試料溶液の代わりに５０％１，３-ブチレングリコール水溶液を添加し２４時間培養後、紫外線を照射しない対照区についてもＰＧＥ_２の量を測定した。

【0059】

試験例３の結果を表３に示す。
［表３］

【0060】

表３に示すように、本発明に係る混合物溶液は、格段にすぐれたＰＧＥ_２抑制作用を有することが示された。また、陽性対照であるインドメタシンも同様の効果を有することが示され、本試験系が正常に行われたことも確認された。

【0061】

試験例４．セラミド合成酵素（β-グルコセレブロシダーゼ）活性亢進効果試験
ヒト表皮細胞ＰＨＫ１６−０ｂを、ＨＫＧＳ（クラボウ社製）含有ＭＣＤＢ１５３培地（ＳＩＧＭＡ社製）を入れた９６穴マイクロプレートに１×１０^４個／穴播種し、３７℃，５．０％ＣＯ_２の条件下に３日間プレ培養した後、製造例１の混合物溶液（試料溶液）を０．１％、０．５％の濃度（培地に対する溶液としての最終濃度）となるように培地に添加し、同条件でさらに４日間培養した。次に、培地を除去し、１ｍＭ Ｐｈｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｎｙｌ ｆｌｕｏｒｉｄｅ（ＰＭＳＦ)、１％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ含有ＰＢＳ(‐)溶液を２０μＬ添加して５分間室温で静置して細胞を破砕し、粗酵素液とした。１ｍＭ ４−ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ−β−Ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ、１０ｍＭ ｓｏｄｉｕｍ ｔａｕｒｏｃｈｏｌａｔｅ、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘｉｎ ０．１Ｍ ｃｉｔｒａｔｅ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ (ｐＨ５．６)２０μＬ添加して３７℃条件下で1時間反応させた。反応終了後、０．２Ｍ ｃａｒｂｏｎａｔｅ ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ (ｐＨ１０．５)を２００μＬ添加して反応を停止させた。その後、反応液のＥｘ３５５/Ｅｍ４６０における蛍光強度を測定してβ-グルコセレブロシダーゼ活性値とした。また、試料溶液に代えてＰＢＳ(-)を添加した試料無添加の場合（対照）についても上記と同様の操作を行い、ここに得られたβ-グルコセレブロシダーゼ活性値（１００）に対する各試料添加区のβ-グルコセレブロシダーゼ活性の相対値を求め、この値をβ−グルコセレブロシダーゼ活性率（％）とした。また、試験系が正常に機能しているかを確認するために、試料溶液の代わりに陽性対照として０．００５％ガラクトセレブロシド（ＧａｌＣｅｒ）を添加した場合についても同様の試験を行った。

【0062】

試験例４の結果を表１に示す。
［表４］

【0063】

表４に示すように、本発明に係る混合物溶液は、濃度依存的に格段にすぐれたセラミド合成酵素（β-グルコセレブロシダーゼ）の活性亢進作用を有することが示された。また、陽性対照であるＣａｌＣｅｒも同様にβ-グルコセレブロシダーゼの活性亢進作用を有することが示され、本試験系が正常に行われたことも確認された。

【0064】

試験例５．リパーゼ活性抑制効果試験
リパーゼキットＳ（ＤＳファーマバイオメディカル）を用いて、以下の測定を行った。１検体につき、ガラス製試験管を２本用意し、１本を検体用（Ａ），他の１本は盲検用(Ｂ)とした。Ａ、Ｂ両試験管に、発色液（５，５’−ジチオビス(２−ニトロ安息香酸)含有）１ｍＬ、製造例１の混合物溶液を含む試料溶液４０μＬ（当該混合物溶液の溶液としての終濃度が１．０％）、リパーゼ（Ｓｉｇｍａ社製）液４０μＬを入れて混和した後、試験管Ａにのみ基質液（三酪酸ジメルカプロール（ＢＡＬＢ）、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）含有）１００μＬを加え、混和後直ちに３０±１℃で正確に３０分間インキュベートした。インキュベーション終了後、直ちに試験管Ａに反応停止液２ｍＬを添加した。次いで、試験管Ｂに反応停止液２ｍＬを添加し、さらに試験管Ｂにのみ基質液１００μＬを加えてもう一度混和した。検体（Ａ）及び盲検（Ｂ）の吸光度を、波長４１５ｎｍで測定した。検体（Ａ）の波長４１５ｎｍにおける吸光度から盲検（Ｂ）の波長４１５ｎｍにおける吸光度を差し引いた値をリパーゼ活性とした。さらに、各試料溶液の代わりに精製水を用いて同様に試験を行い、ここに得られたリパーゼ活性を１００としたときの各試料溶液のリパーゼ活性の相対値を求めた。

【0065】

試験例５の結果を表５に示す。
［表５］

【0066】

表５に示すように、本発明に係る混合物溶液は、格段にすぐれたリパーゼ活性抑制作用が示された。

【0067】

試験例６．アンドロゲン結合阻害効果試験
アンドロゲン依存性増殖を示すマウス由来乳がん細胞ＳＣ‐３を、２％ＦＢＳ（チャコールデキストリン処理）含有イーグル最少必須培地を入れた９６穴マイクロプレートに５×１０^３個／穴播種し、３７℃,５．０％ＣＯ_２の条件下に１日間プレ培養した後、製造例１の混合物溶液（試料溶液）を０．６％の濃度（溶液として終濃度）となるようにＨＭＢ培地（ＨＡＭ培地：イーグル培地＝１：１）を使って調製し、細胞培養系の培地と交換した。また、試料と併用して１０ｎＭのＤＨＴ（ジヒドロテストステロン［高活性型アンドロゲン］）を添加する区としない区を設定した。同条件でさらに３日間培養した。次に、培地を除去し、０．０３％のＭＴＴを添加して３７℃に１時間保持した後、生成したホルマザンをイソプロパノールで抽出し、マイクロプレートリーダー(Ｍｏｄｅｌ ６８０、バイオラッド社製)を用いて波長５７０−６３０ｎｍでＭＴＴ値を測定した。試料溶液に代えてＰＢＳ(-)を添加した試料無添加（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の場合についても上記と同様の操作を行い、ＤＨＴ添加区のＣｏｎｔｒｏｌにおいて得られたＭＴＴ値に対する各試料添加時のＭＴＴ値、及びＤＨＴ無添加区のＣｏｎｔｒｏｌにおいて得られたＭＴＴ値の相対値を求め、ＳＣ−３細胞の増殖率（％）とした。

【0068】

試験例６の結果を表６に示す。
［表６］

【0069】

表６に示すように、コントロールではＤＨＴによってＳＣ−３細胞の増殖が亢進されたのに対して、本発明に係る混合物溶液は、顕著にＳＣ−３細胞の増殖を抑制し、すなわち、格段にすぐれた抗アンドロゲン作用を有することが示された。

【0070】

試験例７．皮脂分泌抑制効果試験
健常な被験者に対し、市販の洗顔料を用いて洗顔、さらに７５％エタノールにて両頬部を清拭した後、室温２０℃、湿度５０〜６０％の部屋に入室してもらった。３０分間の安静の後、Sebumeter（登録商標）SM815（Courage＋Khazaka（ドイツ）社製）を用いて両頬の皮脂量を測定し、これを各被験者の初期値とした。製造例１の混合物溶液（試料溶液）を溶液としての終濃度が２％となるように添加したローション（Ａ）と試料の代わりに精製水を含むローション（Ｂ）「Ｃｏｎｔｒｏｌ」を用意し、Ａを左頬、Ｂを右頬に１日２回朝夜塗布してもらった（塗布時は被験者にはどちらが試料ローションか分からない様に、所謂ブラインドの状態で塗布してもらった）。２週間後、４週間後に、初期値の測定と同様の方法で各被験部（両頬）の皮脂量を測定した。

【0071】

試験例７の結果を表７に示す。
［表７］

【0072】

表７に示すように、本発明に係る混合物溶液は、格段にすぐれた皮脂分泌抑制作用を有することが示された。

【0073】

試験例８．カリクレイン-７活性亢進効果の評価試験
本試験例８では、正常皮膚において表皮角層の剥離を促し、表皮角層のターンオーバーの正常化に影響を与えるキモトリプシン型セリンプロテアーゼ（カリクレイン−７）の活性亢進について評価した。
［試験方法］
正常ヒト表皮角化細胞を増殖添加剤含有HuMedia-KB2［登録商標］（クラボウ社製）にて２×１０^５個／ｍＬに調製し、９６穴マイクロプレートに１００μＬを播種して、５％炭酸ガス、飽和水蒸気下、３７℃で培養した。２４時間後、本発明の製造例１に係る混合物溶液（試料溶液）を含んだ培養液を追添加して培養した。ここで、試料溶液は、培養液全量に対して溶液として終濃度が０．５％，１．０％となるように調製した。また、終濃度が１．０％となるように５０％１，３−ブチレングリコールを含んだ培養液を追添加した試験区をコントロール（control）として設定した。７２時間後、それぞれの試験区の細胞培養上清を除去し０．１４Ｍ塩化ナトリウムおよび０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含むトリス−塩酸緩衝液(pH8.0)２０μＬを用いて細胞を破砕したものを粗酵素液とした。粗酵素液に対し、バッファーとして０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０を含む１００ｍＭトリス−塩酸緩衝液(pH7.8)３０μＬ、基質として１００ｍＭのSuc-Leu-Leu-Val-Tyr-MCAを含む上記バッファー５０μＬを加え、撹拌しながら３７℃で１時間反応させた。反応終了後、蛍光プレートリーダ―（フルオロスキャン アセント、Thermo Labsystems社製）を用いて蛍光強度（励起波長：355nm、蛍光波長：460nm）を測定し、これをカリクレイン-7活性とした。また、同様の培養操作を行った別プレートを用意し、培養上清を除去した後、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２溶液１００μＬを添加し、３７℃で１時間反応させた。反応終了後、蛍光プレートリーダーを用いて蛍光強度（励起波長：355nm、蛍光波長：460nm）を測定し、ＤＮＡ量とした。得られた数値を用いて、DNA当たりのカリクレイン-7活性を算出した。

【0074】

試験例８の結果を表８に示す。
［表８］

【0075】

表８に示すように、本発明の製造例１に係る抽出物は、濃度依存的に格段にすぐれたカリクレイン−７の活性を亢進することが示された。

【0076】

以上のように、本発明に係る植物抽出物の混合物は、抗酸化作用（ＤＰＰＨラジカル消去作用、ＳＯＤ様活性作用）、抗炎症作用（ＰＧＥ_２抑制作用）、セラミド合成酵素（β-グルコセレブロシダーゼ）活性亢進作用、皮膚のターンオーバー正常化作用、リパーゼ活性抑制作用、及び抗アンドロゲン作用、さらに、皮脂分泌抑制作用を有するものである。これにより、本発明によれば、それらの相乗作用により、肌荒れやアトピー性皮膚炎、ニキビ、及び肌のシワ、タルミを改善し、肌のハリ、ツヤを向上させ、さらには、シミ、ソバカスの改善や、紫外線等の外的要因による肌のダメージ（酸化ダメージ及び炎症ダメージ）の予防及び改善効果を発揮する皮膚外用剤を提供することができる。さらには、過剰な皮脂分泌により生じる毛穴のつまり等も改善することができる、また、本発明に係る植物抽出物の混合物は、抗アンドロゲン作用、及び皮脂分泌抑制作用を有することから、本発明によれば、育毛又は脱毛防止用の皮膚外用剤を提供することもできる。