特許 6697789 抗腫瘍薬による表面汚染に対する直接読み取り検出キット

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6697789

(24)【登録日】2020年4月30日

(45)【発行日】2020年5月27日

(54)【発明の名称】抗腫瘍薬による表面汚染に対する直接読み取り検出キット

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/15 20060101AFI20200518BHJP

   G01N 1/04 20060101ALI20200518BHJP

   G01N 33/53 20060101ALN20200518BHJP

   G01N 33/543 20060101ALN20200518BHJP

【ＦＩ】

   G01N33/15 Z

   G01N1/04 W

   !G01N33/53 G

   !G01N33/543 521

【請求項の数】25

【全頁数】39

(21)【出願番号】特願2019-92468(P2019-92468)

(22)【出願日】2019年5月15日

(62)【分割の表示】特願2018-108327(P2018-108327)の分割

【原出願日】2013年7月16日

(65)【公開番号】特開2019-164154(P2019-164154A)

(43)【公開日】2019年9月26日

【審査請求日】2019年5月15日

(31)【優先権主張番号】61/672,059

(32)【優先日】2012年7月16日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】515009435

【氏名又は名称】センターズ フォー ディジーズ コントロール アンド プリベンション

(74)【代理人】

【識別番号】110000877

【氏名又は名称】龍華国際特許業務法人

(72)【発明者】

【氏名】スミス、ジェローム

(72)【発明者】

【氏名】サモンズ、デボラ

(72)【発明者】

【氏名】ロバートソン、シャーリー

【審査官】 海野 佳子

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１０−５１２５３７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許出願公開第２００６／０２９２７００（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 特表２００８−５３０５２８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００５−５３８０９０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 TURCI Roberta et al.，Biological and Environmental Monitoring of Hospital Personnel Exposed to Antineoplastic Agents: A Review of analytical methods，Journal of Chromatography B，２００３年 ６月１５日，vol.789,No.2，PP.169-209

【文献】 阿部誠治ほか，抗がん剤調製者への被爆調査と閉鎖式調製器具の使用効果に関する研究，昭和大学薬学雑誌，２０１２年 ６月，第３巻第１号，PP.77-83

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｇ０１Ｎ ３３／１５

Ｇ０１Ｎ ３３／４８−３３／９８

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

表面の抗腫瘍薬汚染を分析する方法であって、
ラテラルフローアッセイに適合し、前記抗腫瘍薬と相溶性があり、０．０１−１０％ｖ／ｖの非イオン性界面活性剤を含む湿潤性溶液を提供する段階と、
前記抗腫瘍薬の表面からの可逆的吸収のための固体マトリクスを提供する段階と、
前記固体マトリクスを前記湿潤性溶液と接触させ、分析試料マトリクスを生成する段階と、
前記分析試料マトリクスと前記表面とを接触させ、表面サンプルを生成する段階と、
前記表面サンプルを一定量の湿潤性溶液に接触させて、流体試験サンプルを生成する段階と、
分析結果を生成するために、ラテラルフローアッセイによって前記流体試験サンプル中の前記抗腫瘍薬を分析する段階と、
前記分析結果を検出する段階と、
を備える、
方法。

【請求項2】

前記分析結果を基準と比較する段階をさらに備える、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記抗腫瘍薬は、ドキソルビシン、パクリタキセル、および５−フルオロウラシルから成る群から選択される、請求項１または請求項２に記載の方法。

【請求項4】

前記ラテラルフローアッセイは、コンジュゲートパッド、前記コンジュゲートパッドに隣接する固体または半固体の多孔質支持体、前記支持体に存在する試験領域、および前記支持体に存在するコントロール領域を有するラテラルフローアッセイ装置を提供する段階を備え、
ラベルされた抗−抗腫瘍薬抗体は、前記コンジュゲートパッドに拡散可能に結合され、
検出試薬は、前記試験領域に非拡散可能に結合され、
前記抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合するコントロール試薬は、前記コントロール領域に非拡散可能に結合され、
前記固体または半固体の多孔質支持体は、前記コンジュゲートパッドおよび前記固体または半固体の多孔質支持体を含む流路に沿った前記流体試験サンプルの毛細管流動を促進するウィッキングパッドに隣接する、請求項１から請求項３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項5】

前記抗−抗腫瘍薬抗体は、抗−５−フルオロウラシル抗体、抗−パクリタキセル抗体、および抗ドキソルビシン抗体から成る群から選択される、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

前記ラテラルフローアッセイは、競合的アッセイであり、前記検出試薬は、前記抗腫瘍薬を含む、請求項４または請求項５に記載の方法。

【請求項7】

前記コントロール試薬は前記抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合する抗体である、請求項４から請求項６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項8】

前記ラテラルフローアッセイ装置は、前記コンジュゲートパッド、前記固体または半固体の多孔質支持体、および、前記ウィッキングパッドのうちの少なくとも１つを少なくとも部分的に包囲する筐体をさらに有する、請求項４から請求項７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項9】

前記分析結果を検出する段階は目視観測を含む、請求項１から請求項８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

前記分析結果を検出する段階は電子読取器の操作を含む、請求項１から請求項８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項11】

前記湿潤性溶液は、生物学的に適合する緩衝剤、および、０．０１−１０％ｖ／ｖの有機溶媒の少なくとも１つをさらに有する、請求項１から請求項１０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項12】

前記有機溶媒は有機極性プロトン性溶媒である、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

コンジュゲートパッド、前記コンジュゲートパッドに隣接する固体または半固体の多孔質支持体、前記支持体に存在する試験領域、および前記支持体に存在するコントロール領域を備え、
前記コンジュゲートパッドは、拡散可能に結合され検出可能にラベルされた抗腫瘍薬結合剤を有し、
前記試験領域は、非拡散可能に結合された検出試薬を有し、
前記コントロール領域は、非拡散可能に結合されたコントロール試薬を有し、
前記固体または半固体の多孔質支持体は、前記コンジュゲートパッドおよび前記固体または半固体の多孔質支持体を含む流路に沿った流体サンプルの毛細管流動を促進するウィッキングパッドに隣接し、
前記抗腫瘍薬結合剤は、抗−抗腫瘍薬抗体であり、
前記コントロール試薬は、前記抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合し、抗腫瘍薬を含むことが疑われる、０．０１−１０％ｖ／ｖの非イオン性界面活性剤を含む湿潤性溶液を有する流体サンプルを備え、
表面上で、抗腫瘍薬を検出するためのラテラルフローアッセイ装置。

【請求項14】

前記抗−抗腫瘍薬抗体は、抗−５−フルオロウラシル抗体、抗−パクリタキセル抗体、および抗ドキソルビシン抗体から成る群から選択される、請求項１３に記載のラテラルフローアッセイ装置。

【請求項15】

前記ラテラルフローアッセイは、競合的アッセイであり、前記検出試薬は、前記抗腫瘍薬を含む、請求項１３または請求項１４に記載のラテラルフローアッセイ装置。

【請求項16】

前記コントロール試薬は前記抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合する抗体である、請求項１３から請求項１５のいずれか１項に記載のラテラルフローアッセイ装置。

【請求項17】

前記コンジュゲートパッド、前記固体または半固体の多孔質支持体、および、前記ウィッキングパッドのうちの少なくとも１つを少なくとも部分的に包囲する筐体をさらに備える、請求項１３から請求項１６のいずれか１項に記載のラテラルフローアッセイ装置。

【請求項18】

表面の抗腫瘍薬汚染を検出するキットであって、
ラテラルフローアッセイに適合し、前記抗腫瘍薬と相溶性があり、０．０１−１０％ｖ／ｖの非イオン性界面活性剤を含む湿潤性溶液と、
前記抗腫瘍薬の可逆的吸収のための固体マトリクスと、
ラベルされた抗腫瘍薬結合剤、検出試薬、および、コントロール試薬を有するラテラルフローアッセイ装置と、
を備え、
前記抗腫瘍薬結合剤は抗−抗腫瘍薬抗体であり、前記コントロール試薬は前記抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合する、
キット。

【請求項19】

前記ラテラルフローアッセイ装置は、コンジュゲートパッド、前記コンジュゲートパッドに隣接する固体または半固体の多孔質支持体、前記支持体に存在する試験領域、および前記支持体に存在するコントロール領域を有し、
前記ラベルされた抗−抗腫瘍薬抗体は、前記コンジュゲートパッドに拡散可能に結合され、
前記検出試薬は、前記試験領域に非拡散可能に結合され、
前記コントロール試薬は、前記コントロール領域に非拡散可能に結合され、
前記固体または半固体の多孔質支持体は、前記コンジュゲートパッドおよび前記固体または半固体の多孔質支持体を含む流路に沿った流体試験サンプルの毛細管流動を促進するウィッキングパッドに隣接する、請求項１８に記載のキット。

【請求項20】

前記抗−抗腫瘍薬抗体は、抗−５−フルオロウラシル抗体、抗−パクリタキセル抗体、および抗ドキソルビシン抗体から成る群から選択される、請求項１８または請求項１９に記載のキット。

【請求項21】

前記ラテラルフローアッセイは、競合的アッセイであり、前記検出試薬は、前記抗腫瘍薬を含む、請求項１８から請求項２０のいずれか１項に記載のキット。

【請求項22】

前記コントロール試薬は、前記抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合する抗体である、請求項１８から請求項２１のいずれか１項に記載のキット。

【請求項23】

前記コンジュゲートパッド、前記固体または半固体の多孔質支持体、および、前記ウィッキングパッドのうちの少なくとも１つを少なくとも部分的に包囲する筐体をさらに備える、請求項１９から請求項２２のいずれか１項に記載のキット。

【請求項24】

前記湿潤性溶液は、生物学的に適合する緩衝剤、および、０．０１−１０％ｖ／ｖの有機溶媒の少なくとも１つをさらに有する、請求項１８から請求項２３のいずれか１項に記載のキット。

【請求項25】

前記有機溶媒は有機極性プロトン性溶媒である、請求項２４に記載のキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

［関連出願の相互参照］
この出願は、２０１２年７月１６日に出願された米国特許仮出願第６１／６７２，０５９号からの優先権を主張し、その開示内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

本発明は概して、環境試料中の抗腫瘍薬を分析するための方法、装置、およびキットに関する。特定の複数の態様に従うと、本発明は、作業場表面の抗腫瘍薬汚染を検出するため、または定量化するために収集されたサンプルのラテラルフローアッセイのための方法、装置、およびキットに関する。

【背景技術】

【0003】

抗腫瘍薬は癌の治療に使用され、それ自体が発癌性、突然変異促進性、および催奇性である。米国内で８００万人を越える医療労働者が、これらの薬物の調製、処理、および投与の間に潜在的に露出される。抗腫瘍薬の処理に対するＮＩＯＳＨおよびＯＳＨＡのガイドラインが実施されているものの、これらの薬物に対する労働者の露出が研究により報告され続けている。最近の報告は、薬物ビンの外部汚染および作業場表面の汚染を観測してきた。汚染された領域の洗浄は、清浄化が上手くいったかを決定するための迅速で安価な方法が欠如しているので、困難且つ複雑である。環境試料中の抗腫瘍薬を測定する複数の分析手法が利用可能ではあるものの、これらの方法は、複雑且つ時間がかかり、外部の実験室への発送を必要とし、サンプリング結果の受領が遅れる。さらに、これらの分析手法は相当な専門技術を必要とし、日常的に採用するには高価なものであり得る。

【0004】

作業場表面のような環境試料中の抗腫瘍薬を分析するための方法、装置、およびキットに対する継続した要求がある。

【発明の概要】

【0005】

表面の抗腫瘍薬汚染を検出する複数の方法が本発明により提供される。これは、抗腫瘍薬と相溶性があり、分析されるべき表面からの薬物の放出を促進するように処方された湿潤性溶液を提供すること、抗腫瘍薬の可逆的吸収のための固体マトリクスを提供すること、固体マトリクスを湿潤性溶液と接触させ、分析試料マトリクスを生成すること、分析試料マトリクスと表面とを接触させ、表面サンプルを生成すること、表面サンプルをある量の湿潤性溶液に接触させて、流体試験サンプルを生成すること、検出可能な分析結果を生成するために、ラテラルフローアッセイによって流体試験サンプル中の抗腫瘍薬を分析すること、および、検出可能な分析結果を検出することにより、表面の抗腫瘍薬汚染を検出すること、を含む。

【0006】

表面の抗腫瘍薬汚染を検出する複数の方法が本発明により提供される。これは、抗腫瘍薬と相溶性があり、分析されるべき表面からの薬物の放出を促進するように処方された湿潤性溶液を提供すること、抗腫瘍薬の可逆的吸収のための固体マトリクスを提供すること、固体マトリクスを湿潤性溶液と接触させ、分析試料マトリクスを生成すること、分析試料マトリクスと表面とを接触させ、表面サンプルを生成すること、表面サンプルをある量の湿潤性溶液に接触させて、流体試験サンプルを生成すること、検出可能な分析結果を生成するために、ラテラルフローアッセイによって流体試験サンプル中の抗腫瘍薬を分析すること、検出可能な分析結果を検出することにより、表面の抗腫瘍薬汚染を検出すること、および、分析結果を基準と比較すること、を含む。

【0007】

本発明の複数の方法に従って分析される抗腫瘍薬の非限定的な例は、これらに限定されるものではないが、ドキソルビシン、パクリタキセル、および５−フルオロウラシルを含む。

【0008】

本発明の複数の方法の複数の態様に従うと、ラテラルフローアッセイは、ラテラルフローアッセイ装置を提供することを含む。この装置は、コンジュゲートパッド、コンジュゲートパッドに隣接する固体または半固体の多孔質支持体、支持体に存在する試験領域、および支持体に存在するコントロール領域、を有する。ここで、コンジュゲートパッドは、拡散可能に結合され（diffusibly bound）検出可能にラベルされた抗腫瘍薬結合剤を有し、試験検出領域は、非拡散可能に結合された（non-diffusibly bound）検出試薬を有し、コントロール領域は、非拡散可能に結合されたコントロール試薬を有し、固体または半固体の多孔質支持体は、コンジュゲートパッドおよび固体または半固体の多孔質支持体を含む流路に沿った流体試験サンプルの毛細管流動を促進するウィッキングパッド（wicking pad）に隣接する。

【0009】

本発明の複数の方法の複数の態様に従うと、ラテラルフローアッセイは、ラテラルフローアッセイ装置を提供することを含む。この装置は、コンジュゲートパッド、コンジュゲートパッドに隣接する固体または半固体の多孔質支持体、支持体に存在する試験領域、および支持体に存在するコントロール領域、を有する。ここで、コンジュゲートパッドは、拡散可能に結合され検出可能にラベルされた抗腫瘍薬結合剤を有し、抗腫瘍薬結合剤は抗−抗腫瘍薬抗体（anti-antineoplastic drug antibody）であり、試験検出領域は、非拡散可能に結合された検出試薬を有し、コントロール領域は、非拡散可能に結合されたコントロール試薬を有し、固体または半固体の多孔質支持体は、コンジュゲートパッドおよび固体または半固体の多孔質支持体を含む流路に沿った流体試験サンプルの毛細管流動を促進するウィッキングパッドに隣接する。

【0010】

本発明の複数の方法の複数の態様に従うと、ラテラルフローアッセイは、ラテラルフローアッセイ装置を提供することを含む。この装置は、コンジュゲートパッド、コンジュゲートパッドに隣接する固体または半固体の多孔質支持体、支持体に存在する試験領域、および支持体に存在するコントロール領域、を有する。ここで、コンジュゲートパッドは、拡散可能に結合され検出可能にラベルされた抗腫瘍薬結合剤を有し、抗腫瘍薬結合剤は抗−抗腫瘍薬抗体であり、試験検出領域は、非拡散可能に結合された検出試薬を有し、検出試薬は腫瘍薬であり、コントロール領域は、非拡散可能に結合されたコントロール試薬を有し、固体または半固体の多孔質支持体は、コンジュゲートパッドおよび固体または半固体の多孔質支持体を含む流路に沿った流体試験サンプルの毛細管流動を促進するウィッキングパッドに隣接する。

【0011】

本発明の複数の態様に従うと、コントロール試薬は抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合する。任意で、コントロール試薬は抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合する抗体である。

【0012】

分析結果を検出することは、ここに記載される複数の方法に従って、目視観測または電子読取器によって実現される。

【0013】

本発明の複数の態様に従うと、湿潤性溶液は、生物学的に適合する緩衝剤、０．０１−１０％ｖ／ｖの界面活性剤、および／または、０．０１−１０％ｖ／ｖの有機溶媒を有する。任意で、有機溶媒は有機極性プロトン性溶媒である。任意で、界面活性剤は非イオン性界面活性剤である。

【0014】

本発明の複数の態様に従った、抗腫瘍薬を検出するためのラテラルフローアッセイ装置は、コンジュゲートパッド、コンジュゲートパッドに隣接する固体または半固体の多孔質支持体、支持体に存在する試験領域、および支持体に存在するコントロール領域を含む。ここでコンジュゲートパッドは、拡散可能に結合され検出可能にラベルされた抗腫瘍薬結合剤を有し、試験検出領域は、非拡散可能に結合された検出試薬を有し、コントロール領域は、非拡散可能に結合されたコントロール試薬を有し、固体または半固体の多孔質支持体は、コンジュゲートパッドおよび固体または半固体の多孔質支持体を含む流路に沿った流体試験サンプルの毛細管流動を促進するウィッキングパッドに隣接する。

【0015】

本発明の複数の態様に従うと、含まれる抗腫瘍薬結合剤は抗−抗腫瘍薬抗体である。

【0016】

本発明の複数の態様に従うと、含まれる検出試薬は、ある量の腫瘍薬である。

【0017】

本発明の複数の態様に従うと、含まれるコントロール試薬は、抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合する。例えば、コントロール試薬は、抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合する抗体である。

【0018】

本発明の複数の態様に従った装置は、任意で、抗腫瘍薬を含むことが疑われる流体試験サンプルを有する。

【0019】

本発明の複数の態様に従った装置は、任意で、コンジュゲートパッド、固体または半固体の多孔質支持体、および／または、ウィッキングパッドを少なくとも部分的に包囲する筐体をさらに備える。

【0020】

抗腫瘍薬を含む、または含むことが疑われる流体試験サンプルは、流体試験サンプルが隣接するコンジュゲートパッドの方向に流れるように、コンジュゲートパッドに隣接して配置されたサンプルパッドに加えられる。流体試験サンプルは、コンジュゲートパッドに、またはサンプルパッドとして指定されたコンジュゲートパッドの一部分に、直接置かれてよい。本発明の複数の態様に従ったラテラルフローアッセイ装置は、隣接するコンジュゲートパッドの方向に流体試験サンプルが流れるように、コンジュゲートパッドに隣接して配置されたサンプルパッドを含む。

【0021】

本発明の複数の態様に従った、抗腫瘍薬を検出するためのラテラルフローアッセイ装置は、コンジュゲートパッドに隣接するサンプルパッド、コンジュゲートパッドに隣接する固体または半固体の多孔質支持体、支持体に存在する試験領域、および支持体に存在するコントロール領域を含む。ここでコンジュゲートパッドは、拡散可能に結合され検出可能にラベルされた抗腫瘍薬結合剤を有し、試験検出領域は、非拡散可能に結合された検出試薬を有し、コントロール領域は、非拡散可能に結合されたコントロール試薬を有し、固体または半固体の多孔質支持体は、サンプルパッド、コンジュゲートパッドおよび固体または半固体の多孔質支持体を含む流路に沿った流体試験サンプルの毛細管流動を促進するウィッキングパッドに隣接する。

【0022】

本発明の複数の態様に従うと、表面の抗腫瘍薬汚染を検出するための複数のキットが提供される。これは、抗腫瘍薬と相溶性があり、分析されるべき表面からの薬物の放出を促進するように処方された湿潤性溶液と、抗腫瘍薬の可逆的吸収のための固体マトリクスと、抗腫瘍薬に対して特異的な結合剤と、コントロール試薬を有するラテラルフロー装置とを含む。

【0023】

本発明の複数の態様に従うと、発明のキットに含まれるラテラルフローアッセイ装置は、コンジュゲートパッド、コンジュゲートパッドに隣接する固体または半固体の多孔質支持体、支持体に存在する試験領域、および支持体に存在するコントロール領域を含む。ここで、結合剤は、コンジュゲートパッドに拡散可能に結合された検出可能にラベルされた抗腫瘍薬結合剤であり、試験検出領域は、非拡散可能に結合された検出試薬を有し、コントロール試薬は、コントロール領域に非拡散可能に結合され、固体または半固体の多孔質支持体は、コンジュゲートパッドおよび固体または半固体の多孔質支持体を含む流路に沿った流体試験サンプルの毛細管流動を促進するウィッキングパッドに隣接する。

【0024】

本発明の複数の態様に従うと、発明のキットに含まれるラテラルフローアッセイ装置は、コンジュゲートパッドに隣接するサンプルパッド、コンジュゲートパッドに隣接する固体または半固体の多孔質支持体、支持体に存在する試験領域、および支持体に存在するコントロール領域を含む。ここで、コンジュゲートパッドは、拡散可能に結合され検出可能にラベルされた抗腫瘍薬結合剤を有し、試験検出領域は、非拡散可能に結合された検出試薬を含み、コントロール領域は非拡散可能に結合されたコントロール試薬を含み、固体または半固体の多孔質支持体は、サンプルパッド、コンジュゲートパッドおよび固体または半固体の多孔質支持体を含む流路に沿った流体試験サンプルの毛細管流動を促進するウィッキングパッドに隣接する。

【0025】

本発明の複数の態様に従うと、含まれる抗腫瘍薬結合剤は、抗−抗腫瘍薬抗体である。

【0026】

本発明の複数の態様に従うと、含まれる検出試薬は、ある量の腫瘍薬である。

【0027】

本発明の複数の態様に従うと、含まれるコントロール試薬は、抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合する。例えば、コントロール試薬は、抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合する抗体である。

【0028】

本発明の複数の態様に従うと、発明のキットに含まれる湿潤性溶液は、生物学的に適合する緩衝剤、０．０１−１０％ｖ／ｖの界面活性剤、および／または、０．０１−１０％ｖ／ｖの有機溶媒を有する。発明のキットに含まれる有機溶媒は、任意で、有機極性プロトン性溶媒である。発明のキットに含まれる界面活性剤は、任意で、非イオン性界面活性剤である。

【図面の簡単な説明】

【0029】

【図1】本発明の複数の態様に従った、抗腫瘍薬のラテラルフローアッセイのための装置および方法の模式図である。

【0030】

【図2A】スパイクされたサンプリング緩衝液についてのラテラルフローモニタ応答を％Ｂ／Ｂｏとして示すグラフである。

【0031】

【図2B】スパイクされたサンプリング緩衝液についてのラテラルフローモニタ応答をＣ／Ｔ比として示すグラフである。

【0032】

【図2C】％Ｂ／ＢｏおよびＣ／Ｔ曲線を用いた、期待される質量の関数として（観測された質量）を示すグラフであり、データに対する良好なフィッティングを示している。

【0033】

【図3A】スパイクされた綿球からの溶液について、モニタ装置の応答を％Ｂ／Ｂｏとして示すグラフである。

【0034】

【図3B】スパイクされた綿球からの溶液について、モニタ装置の応答をＣ／Ｔ比として示すグラフである。

【0035】

【図3C】スパイクされた緩衝液コントロールについて行われた、観測された質量対期待される質量を示すグラフであり、良好なフィッティングを示している。

【図3D】スパイクされた緩衝液コントロールサンプル曲線を用いて得られた、綿球からの回収された質量を示すグラフである。

【0036】

【図4A】スパイクされたタイルからの溶液について、モニタ装置の応答を％Ｂ／Ｂｏとして示すグラフである。

【0037】

【図4B】スパイクされたタイルからの溶液について、モニタ装置の応答をＣ／Ｔ比として示すグラフである。

【0038】

【図5A】パクリタキセルスパイクされたサンプリング緩衝液についてのラテラルフローアッセイモニタ応答を％Ｂ／Ｂｏとして示すグラフである。

【0039】

【図5B】パクリタキセルスパイクされた複数のセラミックタイルについてのラテラルフローアッセイモニタ応答を％Ｂ／Ｂｏとして示すグラフである。

【0040】

【図5C】ラテラルフローアッセイ結果の目視評価による、スパイクされた緩衝液中、または、スパイクされた複数のセラミックタイルを拭き取るために使用された複数の綿球から抽出された、様々な量のパクリタキセルの検出を示すグラフである。

【0041】

【図6A】ドキソルビシンスパイクされたサンプリング緩衝液についてのラテラルフローアッセイモニタ応答を％Ｂ／Ｂｏとして示すグラフである。

【0042】

【図6B】ドキソルビシンスパイクされた複数のセラミックタイルについてのラテラルフローアッセイモニタ応答を％Ｂ／Ｂｏとして示すグラフである。

【0043】

【図6C】ラテラルフローアッセイ結果の目視評価による、スパイクされた緩衝液中、または、スパイクされた複数のセラミックタイルを拭き取るために使用された複数の綿球から抽出された、様々な量のドキソルビシンの検出を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0044】

ここで使用される科学用語および技術用語は、この分野の当業者によって一般に理解される意味を持つものであることが意図されている。そのような用語は、様々な標準的参照文献の文脈において定義され、使用されていることが見出される。実例として以下のものを含む。J. Sambrook and D.W. Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; 3rd Ed., 2001; F.M. Ausubel, Ed., Short Protocols in Molecular Biology, Current Protocols; 5th Ed., 2002; B. Alberts et al., Molecular Biology of the Cell, 4th Ed., Garland, 2002; D.L. Nelson and M.M. Cox, Lehninger Principles of Biochemistry, 4th Ed., W.H. Freeman & Company, 2004; Wild, D., The Immunoassay Handbook, 3rd Ed., Elsevier Science, 2005; Gosling, J. P., Imunoassays: A Practical Approach, Practical Approach Series, Oxford University Press, 2005; E.Harlow and D. Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988; F. Breitling and S. Dubel, Recombinant Antibodies, John Wiley & Sons, New York, 1999; H. Zola, Monoclonal Antibodies: Preparation and Use of Monoclonal Antibodies and Engineered Antibody Derivatives, Basics: From Background to Bench, BIOS Scientific Publishers, 2000; B.K.C. Lo, Antibody Engineering: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology, Humana Press, 2003; F. M. Ausubel et al., Eds., Short Protocols in Molecular Biology, Current Protocols, Wiley, 2002; Ormerod, M. G., Flow Cytometry: a practical approach, Oxford University Press, 2000; Givan, A. L., Flow Cytometry: first principles, Wiley, New York, 2001; and Herdewijn, P. (Ed.), Oligonucleotide Synthesis: Methods and Applications, Methods in Molecular Biology, Humana Press, 2004。

【0045】

不定冠詞および定冠詞による単数形の用語は、限定的であることを意図されるものではなく、そうでないと明白に述べていない限り、またはそうでないと文脈が明確に示していない限り、複数形の指示対象を含む。

【0046】

本発明の複数の態様に従うと、表面の抗腫瘍薬汚染を検出するための複数の方法が提供される。これは、抗腫瘍薬と相溶性があり、分析されるべき表面からの薬物の放出を促進するように処方された湿潤性溶液を提供すること、抗腫瘍薬の可逆的吸収のための固体マトリクスを提供すること、固体マトリクスを湿潤性溶液と接触させ、分析試料マトリクスを生成すること、分析試料マトリクスと表面とを接触させ、表面サンプルを生成すること、表面サンプルをある量の湿潤性溶液に接触させて、流体試験サンプルを生成すること、および、分析結果を生成するために、ラテラルフローアッセイによって流体試験サンプル中の抗腫瘍薬を定量化し、これにより、表面の抗腫瘍薬汚染を検出することを含む。

【0047】

本発明の複数の好ましい態様に従うと、分析結果が基準と比較される。

【0048】

抗腫瘍薬と相溶性のある湿潤性溶液は、薬物に対して実質的に不活性である。

【0049】

湿潤性溶液は、生物学的に適合する緩衝剤含み、任意で界面活性剤および／または少量の有機溶媒を含む。

【0050】

生物学的に適合する緩衝剤の例は、これらに限定されるものではないが、酢酸アンモニウム、ＭＯＰＳ緩衝剤、クエン酸塩緩衝剤、ＨＥＰＥＳ緩衝剤、炭酸塩緩衝剤、トリス緩衝剤、トリシン緩衝剤、酢酸塩緩衝剤、リン酸塩緩衝剤、および、リン酸緩衝生理食塩水を含む。

【0051】

本発明の複数の態様に従うと、界面活性剤は０．０１−１０％ｖ／ｖの量で含まれる。

【0052】

含まれる界面活性剤は、アニオン性、カチオン性、または非イオン性界面活性剤であってよい。

【0053】

本発明の湿潤性溶液に含まれる非イオン性界面活性剤は、これらに限定されるものではないが、脂肪酸エステルおよびアルコキシル化された脂肪アルコールによって例示される。本発明の湿潤性溶液に含まれる非イオン性界面活性剤は、これらに限定されるものではないが、グリセロールアルキルエステル、ポリオキシエチレングリコールアルキルエーテル、ポリオキシプロピレングリコールアルキルエーテル、ポリオキシエチレングリコールオクチルフェノールエーテル、ポリオキシエチレングリコールアルキルフェノールエーテル、ポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキルエステル、プロポキシル化されたポリオキシエチレンエーテル、ポロキサマー、ポリソルベート、ソルビタンアルキルエステル、および、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのブロックコポリマによって例示される。本発明の湿潤性溶液に含まれる非イオン性界面活性剤は、これらに限定されるものではないが、ブリッジ（Brij）、コカミドＭＥＡ、コカミドＤＥＡ、デシルグルコシド、ドデシルジメチルアミンオキシド、ラウリン酸グリセリル、ノノキシノール−９、オクタエチレングリコールモノドデシルエーテル、ラウリルグルコシド、オクチルグルコシド、ペンタエチレングリコールモノドデシルエーテル、ポロキサマー４０７、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、ポリエトキシ化された牛脂アミン（ＰＯＥＡ）、スパン（Span）、および、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００によって例示される。

【0054】

本発明の複数の態様に従って含まれる界面活性剤の非限定的な例は、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０として市販されるポリソルベート２０のような非イオン性界面活性剤である。

【0055】

本発明の複数の態様に従うと、湿潤性溶液は、生物学的に適合する緩衝剤を含み、且つ、界面活性剤および／または０．０１−１０％ｖ／ｖの有機溶媒を含む。

【0056】

湿潤性溶液の非限定的な例は、含水性の１０ｍＭ酢酸アンモニウム−１％Ｔｗｅｅｎ２０（ｖ／ｖ）である。

【0057】

本発明の複数の態様に従うと、湿潤性溶液は、生物学的に適合する緩衝剤を含み、且つ、界面活性剤および／または０．０１−１０％ｖ／ｖの有機極性プロトン性溶媒を含む。有機極性プロトン性溶媒は当技術分野において良く知られており、これらに限定されるものではないが、メタノール、プロパノール、およびエタノールを例として含む。

【0058】

使用される固体マトリクスは、薬物の化学的構造に対する実質的な変化を伴わずに、抗腫瘍薬の可逆的吸収が分析されることを可能とする。固体マトリクスの非限定的な例は、ろ紙、綿マトリクス、発泡マトリクス、およびセルロースマトリクスを含む。そのようなマトリクスは、これらに限定されるものではないが、綿球、ワイプ、およびガーゼによって例示される。

【0059】

本発明の複数の態様に従うと、１または複数の作業場表面からサンプルが収集される。そのような複数の作業場表面は、抗腫瘍薬の製造、パッケージング、試験、使用、および／または、廃棄の場所に存在するものである。サンプルが収集されるような複数の作業場表面の非限定的な例は、ベンチの上部、カウンター、机の表面、実験室ドラフトまたは隔離フード、オートクレーブ、ガラス製品、プラスチック製品、衣服、床、壁、天井、ドアを含めた取っ手、引き出しおよびキャビネットの取っ手、電気器具および装置の表面を含む。

【0060】

本発明の複数の方法、装置、およびキットを用いて、ドキソルビシン、パクリタキセル、および５−フルオロウラシルによって例示される、様々な抗腫瘍薬が分析されることができる。

【0061】

抗腫瘍薬は、例えば、Goodman et al., Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 8th Ed., Macmillan Publishing Co., 1990に記載されている。

【0062】

本発明の複数の態様に従って分析され得る抗腫瘍薬は、これらに限定されるものではないが、アシビシン、アクラルビシン、アコダゾール、アクロニン、アドゼレシン、アルデスロイキン、アリトレチノイン、アロプリノール、アルトレタミン、アムボマイシン、アメタントロン、アミホスチン、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナストロゾール、アントラマイシン、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、アスペルリン、アザシチジン、アゼテパ、アゾトマイシン、バチマスタット、ベンゾデパ、ビカルタミド、ビサントレン、ビスナフィドジメシレート、ビゼレシン、ブレオマイシン、ブレキナル、ブロピリミン、ブスルファン、カクチノマイシン、カルステロン、カペシタビン、カラセミド、カルベチマー、カルボプラチン、カルムスチン、カルビシン、カルゼレシン、セデフィンゴール、セレコキシブ、クロラムブシル、シロレマイシン、シスプラチン、クラドリビン、メシル酸クリスナトール、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デシタビン、デキソルマプラチン、デザグアニン、メシル酸デザグアニン、ジアジクオン、ドセタキセル、ドキソルビシン、ドロロキシフェン、ドロモスタノロン、デュアゾマイシン、エダトレキサート、エフロミチン、エルサミトルシン、エンロプラチン、エンプロマート、エピプロピジン、エピルビシン、エルブロゾール、エソルビシン、エストラムスチン、エタニダゾール、エトポシド、エトプリン、ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、フルロシタビン、ホスキドン、ホストリエシン、フルベストラント、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、イルモホシン、インターロイキンＩＩ（ＩＬ−２、組み換え型インターロイキンＩＩまたはｒＩＬ２を含む）、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、インターフェロンアルファ−ｎ１、インターフェロンアルファ−ｎ３、インターフェロンベータ−Ｉａ、インターフェロンガンマ−Ｉｂ、イプロプラチン、イリノテカン、ランレオチド、レトロゾール、ロイプロリド、リアロゾール、ロメトレキソール、ロムスチン、ロソキサントロン、マソプロコール、メイタンシン、塩酸メクロレタミン、メゲストロール、酢酸メレンゲストロール、メルファラン、メノガリル、メルカプトプリン、メトトレキサート、メトプリン、メツレデパ、ミチンドミド、ミトカルシン、ミトクロミン、ミトギリン、ミトマルシン、マイトマイシン、ミトスペル、ミトタン、ミトキサントロン、ミコフェノール酸、ネララビン、ノコダゾール、ノガラマイシン、オルムナプラチン、オキシスラン、パクリタキセル、ペグアスパラガーゼ、ペリオマイシン、ペンタムスチン、ペプロマイシン、ペルホスファミド、ピポブロマン、ピポスルファン、塩酸ピロキサントロン、プリカマイシン、プロメスタン、ポルフィマー、ポルフィロマイシン、プレドニムスチン、プロカルバジン、ピューロマイシン、ピラゾフリン、リボプリン、ログレチミド、サフィンゴール、セムスチン、シムトラゼン、スパルホサート、スパルソマイシン、スピロゲルマニウム、スピロムスチン、スピロプラチン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、スロフェヌル、タリソマイシン、タモキシフェン、テコガラン、テガフール、テロキサントロン、テモポルフィン、テニポシド、テロキシロン、テストラクトン、チアミプリン、チオグアニン、チオテパ、チアゾフリン、チラパザミン、トポテカン、トレミフェン、トレストロン、トリシリビン、トリメトレキサート、トリプトレリン、ツブロゾール、ウラシルマスタード、ウレデパ、バプレオチド、ベルテポルフィン、ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、ビンデシン、ビネピジン、ビングリシナート、ビンロイロシン、ビノレルビン、ビンロシジン、ビンゾリジン、ボロゾール、ゼニプラチン、ジノスタチン、ゾレドロネート、およびゾルビシンを含む。

【0063】

本発明の複数の態様に従うと、イムノアッセイは、イムノクロマトグラフィ技術による、流体試験サンプル中の抗腫瘍薬の分析を含む。広く説明すれば、イムノクロマトグラフィ技術は、抗体とアナライトとの特異的な結合を検出するために、抗アナライト抗体（anti-analyte antibody）を含む固体または半固体の支持体に沿って、関心のあるアナライトを含む、または含むことが疑われる流体試験サンプルを流すことを含む。

【0064】

本発明の複数の態様に従うと、サンプル中の抗腫瘍薬の分析は、ラテラルフローアッセイによるもののような、抗原の捕獲を含む。

【0065】

本発明の複数の態様に従ったラテラルフローアッセイは、流体試験サンプル中の抗−抗腫瘍薬結合剤（anti-antineoplastic drug binding agent）と抗腫瘍薬との特異的な結合を検出するために、抗−抗腫瘍薬結合剤を含む固体または半固体の支持体に沿って、抗腫瘍薬を含む、または含むことが疑われる流体試験サンプルを流すことを含む。

【0066】

本発明の複数の態様に従ったラテラルフローアッセイは、流体試験サンプル中の抗腫瘍薬と、抗体のような抗−抗腫瘍薬結合剤との結合に対する競合を検出するために、抗体のような抗−抗腫瘍薬結合剤を含む固体または半固体の支持体に沿って得られた流体試験サンプルを、コンペティターの存在する中で流すことを含む。

【0067】

本発明の複数の態様に従うと、抗腫瘍薬の分析のためのラテラルフローアッセイプロセスは、抗体のような、検出可能にラベルされた抗−抗腫瘍薬結合剤、または、検出可能にラベルされた抗腫瘍薬が拡散可能に結合されたコンジュゲートパッドを提供することを含む。コンジュゲートパッドは、流体試験サンプルのラテラルフローを可能にし、非拡散可能に結合された検出試薬を含む少なくとも１つの試験検出領域と非拡散可能に結合されたコントロール試薬を含む少なくとも１つのコントロール領域とを有する固体または半固体の多孔質支持体に隣接する。固体または半固体の多孔質支持体は、コンジュゲートパッドおよび固体または半固体の多孔質支持体を含む流路に沿った流体試験サンプルの毛細管流動を促進するウィッキングパッドに隣接する。

【0068】

非拡散可能に結合された検出試薬は、抗体のような、抗−抗腫瘍薬結合剤である。コンジュゲートパッドが検出可能にラベルされた抗−抗腫瘍薬結合剤を含むような本発明の複数の態様に従うと、検出試薬は、検出可能にラベルされた抗−抗腫瘍薬結合剤とは非競合的である。

【0069】

関心のある抗腫瘍薬を含むまたは含むことが疑われる流体試験サンプルが、コンジュゲートパッドに塗布される。

【0070】

検出可能にラベルされた抗腫瘍薬結合剤がコンジュゲートパッドに含まれるような複数の態様に従うと、サンプル中の抗腫瘍薬を分析するために、検出可能なラベルが試験領域中にて検出される。検出可能なラベルの検出量がより大きいことは、サンプル中の抗腫瘍薬が、より多量なこと示す。検出可能にラベルされた抗腫瘍薬がコンジュゲートパッドに含まれるような複数の態様に従うと、流体試験サンプル中の抗腫瘍薬を分析するために、検出可能なラベルが試験領域中にて検出される。検出可能なラベルの検出量がより小さいことは、流体試験サンプル中の抗腫瘍薬が、より多量なことを示す。

【0071】

検出可能なラベルの検出量を、サンプル中の抗腫瘍薬の量と関連付けるために、１または複数の基準が使用されてよい。

【0072】

コンジュゲートパッドおよび／または支持体は、非特異的結合を阻害するために、任意でブロックされる。任意で適用されるブロッキング試薬の非限定的な例は、任意で緩衝された脱脂粉乳の溶液、１−５％のウシ血清アルブミンを含み、さらに任意で、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０またはＴＲＩＴＯＮ−Ｘ１００のような０．１−０．３％の浄化剤を含む。ブロッキング試薬のさらなる非限定的な例は、１０ｍＭホウ酸塩、３％ＢＳＡ、１％ＰＶＰ−４０、０．２５％ＴＲＩＴＯＮ Ｘ−１００、ｐＨ８である。

【0073】

サンプル、試薬、および反応と適合する任意の反応または希釈緩衝剤が使用されることができ、これらに限定されるものではないが、リン酸緩衝生理食塩水、酢酸アンモニウム、リン酸ナトリウム緩衝剤、リン酸カリウム緩衝剤、トリス−ＨＣｌ緩衝剤、およびトリシン緩衝剤を含む。

【0074】

コンジュゲートパッドは、固体または半固体の多孔質支持体に隣接して配置される。固体または半固体の多孔質支持体は、ウィッキングパッドに隣接して配置される。発明の装置の複数の態様に従うと、コンジュゲートパッド、固体または半固体の多孔質支持体、およびウィッキングパッドというそれぞれの構成要素は、それぞれ他の構成要素の上面と実質的に同一な平面に、その上面を有する。コンジュゲートパッド、固体または半固体の多孔質支持体、およびウィッキングパッドは、これらが１つのユニットとして移動され得るように、一緒に付着されてよい。代替的に、または付加的に、コンジュゲートパッド、固体または半固体の多孔質支持体、およびウィッキングパッドの全てが、支持体用の下地材のような１つの構造支持体に付着されてよい。これによって、これらが１つのユニットとして移動されてよい。

【0075】

隣接するコンジュゲートパッドの方向に流体試験サンプルが流れるように、コンジュゲートパッドに隣接して配置されたサンプルパッドが含まれてよい。本発明の装置の複数の態様に従うと、サンプルパッド、コンジュゲートパッド、固体または半固体の多孔質支持体、およびウィッキングパッドの各構成要素は、それぞれ他の構成要素の上面と実質的に同一な平面に、その上面を有する。サンプルパッド、コンジュゲートパッド、固体または半固体の多孔質支持体およびウィッキングパッドは、これらが１つのユニットとして移動されることができるように、一緒に付着されていてよい。代替的に、または付加的に、サンプルパッド、コンジュゲートパッド、固体または半固体の多孔質支持体、およびウィッキングパッドの全てが、支持体用の下地材のような１つの構造支持体に付着されてよい。これによって、これらが１つのユニットとして移動されてよい。

【0076】

本発明の複数の態様に従うと、流体試験サンプル中の抗腫瘍薬を検出するためのラテラルフローアッセイ法は、競合的または非競合的である。

【0077】

本発明の複数の態様に従うと、１）検出可能にラベルされた抗−抗腫瘍薬抗体または検出可能にラベルされた抗腫瘍薬が拡散可能に結合されたコンジュゲートパッド、２）流体試験サンプルのラテラルフローを可能にし、非拡散可能に結合された検出試薬を含む少なくとも１つの試験検出領域、および、非拡散可能に結合されたコントロール試薬を含む少なくとも１つのコントロール領域を有する固体または半固体の多孔質支持体、および、３）流体試験サンプルの毛細管流動を可能にするウィッキングパッド、を含むラテラルフローアッセイ装置が提供される。

【0078】

本発明の複数の態様に従うと、１）検出可能にラベルされた抗−５−フルオロウラシル抗体または検出可能にラベルされた５−フルオロウラシルが拡散可能に結合されたコンジュゲートパッド、２）流体試験サンプルのラテラルフローを可能にし、非拡散可能に結合された検出試薬を含む少なくとも１つの試験検出領域、および、非拡散可能に結合されたコントロール試薬を含む少なくとも１つのコントロール領域を有する固体または半固体の多孔質支持体、および、３）流体試験サンプルの毛細管流動を可能にするウィッキングパッド、を含むラテラルフローアッセイ装置が提供される。

【0079】

本発明の複数の態様に従うと、１）検出可能にラベルされた抗−パクリタキセル抗体または検出可能にラベルされたパクリタキセルが拡散可能に結合されたコンジュゲートパッド、２）流体試験サンプルのラテラルフローを可能にし、非拡散可能に結合された検出試薬を含む少なくとも１つの試験検出領域、および、非拡散可能に結合されたコントロール試薬を含む少なくとも１つのコントロール領域を有する固体または半固体の多孔質支持体、および、３）流体試験サンプルの毛細管流動を可能にするウィッキングパッド、を含むラテラルフローアッセイ装置が提供される。

【0080】

本発明の複数の態様に従うと、１）検出可能にラベルされた抗−ドキソルビシン抗体または検出可能にラベルされたドキソルビシンが拡散可能に結合されたコンジュゲートパッド、２）流体試験サンプルのラテラルフローを可能にし、非拡散可能に結合された検出試薬を含む少なくとも１つの試験検出領域、および、非拡散可能に結合されたコントロール試薬を含む少なくとも１つのコントロール領域を有する固体または半固体の多孔質支持体、および、３）流体試験サンプルの毛細管流動を可能にするウィッキングパッド、を含むラテラルフローアッセイ装置が提供される。

【0081】

図１は、本発明の複数の態様に従った、抗腫瘍薬のラテラルフローアッセイのための装置および方法の模式図である。コンジュゲートパッド、固体または半固体の多孔質支持体（ここでは、ニトロセルロース膜として示される）、およびウィッキングパッドが付着され、互いに隣接して配置される。コンジュゲートパッド、固体または半固体の多孔質支持体、およびウィッキングパッドは、それぞれ他の上面と実質的に同一な平面である少なくとも１つの上面を有する。ラテラルフローの方向が示されている。試験領域およびコントロール領域が示されている。

【0082】

本発明の複数の態様に従うと、競合的ラテラルフローアッセイは、図１に示される複数の態様を含む。抗腫瘍薬に対する特異的結合が可能な第１の検出可能にラベルされた結合剤（ここでは、"抗腫瘍薬に対する金ラベルされた抗体"によって例示される）が、コンジュゲートパッドに拡散可能に付着される。隣接するコンジュゲートパッドの方向に流体試験サンプルが流れるように、コンジュゲートパッドに隣接して配置されたサンプルパッドに対して、抗腫瘍薬を含むまたは含むことが疑われる流体試験サンプルが加えられる。流体試験サンプルはまた、コンジュゲートパッドに、またはサンプルパッドとして指定されたコンジュゲートパッドの一部分に、直接置かれてもよい。抗腫瘍薬、および、抗腫瘍薬に対する特異的結合が可能な第１の検出可能にラベルされた結合剤は、コンジュゲートパッドにおいて複合物を形成する。複合物は、全ての結合されていない第１の検出可能にラベルされた結合剤と一緒に、ラテラルフローによって試験領域およびコントロール領域の方向に移動される。試験領域は、試験領域に非拡散可能に付着された抗腫瘍薬を含む。コントロール領域は、第１の検出可能にラベルされた結合剤に対して特異的な第２の結合剤を含む。抗腫瘍薬に対する特異的結合が可能な第１の検出可能にラベルされた結合剤の余剰分は、ラテラルフローによって試験領域およびコントロール領域へと移動する。もしも第１の検出可能にラベルされた結合剤の余剰分が試験領域中の抗腫瘍薬と結合した場合、流体試験サンプル中の抗腫瘍薬の量によって直接変動することを示す検出可能な信号が存在する。ここで、強い検出可能な信号は、サンプル中に抗腫瘍薬がほとんど無いか全く無いことを示し、試験領域において信号が検出できないことは、流体試験サンプル中の抗腫瘍薬の存在を示す。サンプル中の抗腫瘍薬の量を示す定量的または半定量的な結果を得るために、複数の基準が使用されてよい。第１の検出可能にラベルされた結合剤に対して特異的な第２の結合剤との第１の検出可能にラベルされた結合剤の相互作用は、適切に動作している分析であることを示す検出可能な信号を生成する。

【0083】

図１に示される例においては、第１の検出可能にラベルされた結合剤はマウス中で生成された抗体であり、第１の検出可能にラベルされた結合剤に対して特異的な第２の結合剤はヤギ抗マウスＩｇＧである。第１の検出可能にラベルされた結合剤がマウス中で生成されたＩｇＧ（またはその他の）抗体である場合、第２の結合剤は、例えば、ヒツジ抗マウス、ウサギ抗マウス、またはマウス抗マウスを生成するための任意の適切な種中の抗マウスＩｇＧ（またはその他の）抗体であってよい。同様に、もしも第１の検出可能にラベルされた結合剤がウサギ中で生成されたＩｇＧ（またはその他の）抗体である場合には、第２の結合剤は、例えば、ヒツジ抗ウサギ、ヤギ抗ウサギ、またはマウス抗ウサギを生成するための任意の適切な種中の抗ウサギＩｇＧ（またはその他の）抗体であってよい。

【0084】

複数の態様に従うと、本発明のラテラルフローアッセイ装置は、モニタ装置とも呼ばれ、表面上の抗腫瘍薬の存在を検出するために、競合的ラテラルフローイムノアッセイを使用する。本発明の複数の態様に従ったラテラルフローアッセイモニタ装置は、１）分析される抗腫瘍薬に対して特異的な抗体であって、コンジュゲートパッド中の金粒子にコンジュゲートされた抗体、および、２）テストラインに存在するＢＳＡにコンジュゲートされた、予め定められた量の同じ抗腫瘍薬、を含む。もしもサンプルパッドに塗布されたサンプル中に抗腫瘍薬がある場合、これは、この薬物に対して特異的であり、金粒子コンジュゲートされた抗体に結合するであろう。これにより、テストライン上の薬物ＢＳＡコンジュゲートに対するこれらの抗体の結合を減少させるであろう。従って、サンプルパッドに塗布された流体試験サンプル中に存在する抗腫瘍薬の量がより多くなると、より少量の抗腫瘍薬を含む流体試験サンプルと比較した場合に、テストラインに結合する金粒子がより少なくなる。金粒子はテストラインに対して赤色を提示するので、テストラインにおける赤色の強度はサンプル中の抗腫瘍薬の量を示し、より弱い色ほどより多くの薬物を示す。本発明のラテラルフローアッセイモニタ装置および方法の複数の態様に従うと、コントロールラインもまた含まれる。コントロールラインは、テストラインとは異なる抗体相互作用を使用し、ラテラルフローアッセイに対する陽性対照を提供し、ラテラルフローアッセイモニタ装置が適切に機能していることを確実にする。溶液中の競合的な分析試料−薬物は、金でラベルされた抗体に結合し、テストラインにおける薬物−ＢＳＡコンジュゲートに対する抗体の結合がより少なくなる。この例においては、流体試験サンプル中の薬物量が増大するとともにテストラインはより弱くなる。一方で、コントロールラインは相対的に一定であり、ラテラルフローアッセイモニタ装置が正常に動作していることを示す。

【0085】

"拡散可能に結合され"という用語は、生体サンプルに接触された場合に、ラテラルフローによってある材料が移動するような、コンジュゲートパッドに対するその材料の可逆的な付着または吸着を指す。"非拡散可能に結合され"という用語は、固体の支持体に対するある材料の付着を指し、非拡散可能に結合された材料は固定され、従って、流体試験サンプルに接触された場合でもラテラルフローによって移動しない。

【0086】

"試験検出領域"という用語は、固体または半固体の多孔質支持体のうち検出試薬が非拡散可能に結合される領域を指す。試験検出領域は、検出試薬に対するアナライトの結合を決定可能なように構成された、任意の様々な形状およびサイズを有してよい。通常、試験検出領域は、"テストライン"と呼ばれる、一連の非拡散可能に結合された検出試薬である。

【0087】

"コントロール領域"という用語は、固体または半固体の多孔質支持体のうちコントロール試薬が非拡散可能に結合される領域を指す。コントロール領域は、コントロール試薬に対するコントロール物質の結合を決定可能なように構成された、任意の様々な形状およびサイズを有してよい。通常、コントロール領域は、"コントロールライン"と呼ばれる、一連の非拡散可能に結合されたコントロール試薬である。

【0088】

コントロール試薬によってユーザは、イムノアッセイが適切に動作していることを確認することが可能となる。例えば、コントロール試薬は、検出可能にラベルされた抗−抗腫瘍薬抗体に対して特異的に結合する抗体であってよい。

【0089】

上記のように、本発明の複数の態様に従うと、試験領域に対して非拡散可能に結合された抗腫瘍薬を試験領域が含む。抗腫瘍薬は、所望の位置において固体または半固体の多孔質支持体に対して任意で直接付着される。さらなるオプションにおいては、所望の位置における支持体への抗腫瘍薬の結合を補助するために、抗腫瘍薬がキャリアに対してコンジュゲートされ、キャリア−抗腫瘍薬コンジュゲートは、固体または半固体の多孔質支持体に結合される。適切なキャリアは、支持体に対して吸着または共有結合できる分子であり、これらに限定されるものではないが、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）のようなポリペプチド、ラクトアルブミン、ポリリシン、およびキーホールリンペットヘモシアニンを含む。

【0090】

本発明の複数の態様に従うと、ラテラルフローアッセイ装置は、１）コンジュゲートパッドに拡散可能に結合された検出可能にラベルされた抗−抗腫瘍薬抗体、２）非拡散可能に結合された第２の抗−抗腫瘍薬抗体を含む試験検出領域を有する固体または半固体の多孔質支持体、および、３）ウィッキングパッドを含む。この態様に従うと、コンジュゲートパッドに拡散可能に結合された検出可能にラベルされた抗−抗腫瘍薬抗体、および、固体または半固体の多孔質支持体に非拡散可能に結合された第２の抗−抗腫瘍薬抗体は、抗腫瘍薬の複数の異なるエピトープに対して特異的に結合する。

【0091】

本発明の複数の態様に従うと、ラテラルフローアッセイ装置は、１）コンジュゲートパッドに拡散可能に結合された検出可能にラベルされた抗腫瘍薬エピトープ、２）非拡散可能に結合された抗−抗腫瘍薬抗体を含む試験検出領域を有する固体または半固体の多孔質支持体、および、３）ウィッキングパッドを含む。この態様に従うと、コンジュゲートパッドに拡散可能に結合された検出可能にラベルされた抗腫瘍薬エピトープは、固体または半固体の多孔質支持体に非拡散可能に結合された抗−抗腫瘍薬抗体に対して特異的に結合し、これにより、流体試験サンプル中の抗腫瘍薬と競合する。

【0092】

サンプルパッドは、隣接するコンジュゲートパッドへの流体試験サンプルのラテラルフローを促進し、分析されるべき抗腫瘍薬のラテラルフローとは干渉しない材料であり、これらに限定されるものではないが、ガラスファイバ、結合されたガラスファイバ、ポリエステル、セルロースおよび酢酸セルロース並びにニトロセルロースを含むセルロース誘導体、ナイロン、ポリフッ化ビニリデン、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリエーテルスルホン、および、これらのうちの任意のものの組み合わせを含む。

【0093】

コンジュゲートパッドは、検出可能にラベルされた抗腫瘍薬結合剤が拡散可能に付着されてよい材料であり、これらに限定されるものではないが、ガラスファイバ、結合されたガラスファイバ、ポリエステル、セルロースおよび酢酸セルロース並びにニトロセルロースを含むセルロース誘導体、ナイロン、ポリフッ化ビニリデン、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリエーテルスルホン、および、これらのうちの任意のものの組み合わせを含む。

【0094】

固体または半固体の多孔質支持体は、クロマトグラフへの適用に適切な、任意の固体または半固体の吸着性多孔質材料であってよく、これらに限定されるものではないが、ポリフッ化ビニリデン、ナイロン、ポリエーテルスルホン、ポリエステル、ポリプロピレン、紙、シリカ、レーヨン、セルロースおよび酢酸セルロース並びにニトロセルロースを含むセルロース誘導体、天然または合成の織り繊維または不織繊維、および、アガロース、ゼラチン、デキストラン、並びにシリカゲルのような多孔質ゲルを含む。固体または半固体の多孔質支持体は、膜のように自己支持型であってよく、あるいは、ガラススライド上に堆積されたアガロース薄層のような構造支持体上に堆積されてよい。本発明の複数の態様に従うと、固体または半固体の多孔質支持体はニトロセルロース膜である。

【0095】

ウィッキングパッドは、流体を毛管作用で導くことによりラテラルフローを促進する吸収性の材料であり、これらに限定されるものではないが、セルロースのような、吸収性の合成または天然ポリマを含む。

【0096】

サンプルパッド、コンジュゲートパッド、固体または半固体の多孔質支持体、および／またはウィッキングパッドが付着される構造支持体は、支持を提供する任意の材料であることができ、これらに限定されるものではないが、下地カード（backing card）、ガラス、シリカ、セラミック、および／またはプラスチック膜を含む。構造支持体に対してコンジュゲートパッド、固体または半固体の多孔質支持体、および／またはウィッキングパッドを付着させるために接着剤が使用されてもよい。

【0097】

サンプルパッド、コンジュゲートパッド、固体または半固体の多孔質支持体、およびウィッキングパッドを少なくとも部分的に包囲するために、任意で筐体が含まれる。筐体は、任意で、抗腫瘍薬に対して分析されるべきサンプルを適用するため、試験および／またはコントロール結果の視覚化またはその他の分析のため等の、１または複数の開口を画定する。筐体は、サンプルパッド、コンジュゲートパッド、固体または半固体の多孔質支持体、およびウィッキングパッドを挿入および除去するための開口を画定する。

【0098】

筐体は、ユーザが分析結果を直接可視化することを可能にする開口を任意で画定する。その代わりに筐体は、分析結果の検出のために、光学式スキャナのような検出装置を含んでよい。

【0099】

分析結果を検出することは、目視観測および／または電子読取器のような検出装置の使用によって成されてよい。ラテラルフローアッセイの結果を検出するために使用される電子読取器は、分析試料中に使用される検出可能なラベルまたは複数のラベルを検出するように構成される。従って、例えば、検出可能なラベルがコロイド金のような金粒子または色付けされたラテックス粒子である場合、検出可能なラベルの信号を検出するために、電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラが使用されてよい。さらなる例においては、検出可能なラベルが蛍光である場合、適切な励起源および結果的に放出される信号のセンサが使用されてよい。電子読取器は、コンピュータで実行される１または複数の方法を用いて、分析用のデータを生成してよい。電子読取器は、検出されたラテラルフローアッセイ結果を分析するために、コンピュータで実行される複数の方法用のハードウェアおよびソフトウェア構成要素を含んでよい。

【0100】

流体試験サンプルは毛細管作用によって、結合剤、好ましくは抗体を有し、立証実験を通して決定された正確な濃度で配置されたコントロールラインおよびテストラインへと流れる。コントロールラインは、サンプルが適切に移動したことを確実にし、分析が正当であることを確認する内部品質管理である。テストラインは、試験されたアナライトに対する結果が陽性であるか陰性であるかを決定する。

【0101】

分析試料を結合することは、アナライトを検出するための結合剤の使用を含む。

【0102】

本明細書で使用される"結合剤"という用語は、特定の物質に対する実質的に特異的な結合によって特徴付けられる化学物質を指す。特定の物質に対する結合剤の結合に関連して本明細書で使用される"実質的に特異的な結合"という表現および文法上の同等物は、特定の物質の存在を分析されるべきサンプル中に存在するその他の複数の物質に対する実質的な結合を伴わない、特定の物質に対する結合剤の結合のことを指す。特異的結合とは、非特異的な結合からこれを区別するための適切なコントロールの使用によって決定できるものとしての特異的結合を指すことは、当業者には理解される。

【0103】

抗腫瘍薬に対して実質的に特異的な結合剤は、商業的供給源から得られるであろう。または、良く知られた方法論に従って、本発明の複数の方法における使用に向けて生成されるであろう。

【0104】

"結合"という用語は、結合剤とターゲットとの間の物理的または化学的相互作用を指す。結合は、これらに限定されるものではないが、イオン性結合、非イオン性結合、共有結合、水素結合、疎水性相互作用、親水性相互作用、およびファンデルワールス相互作用を含む。

【0105】

本発明の複数の態様に従って流体試験サンプル中の抗腫瘍薬を分析することは、抗腫瘍薬に対して直接的または間接的に付着された検出可能なラベルを検出することを含んでよい。"検出可能なラベル"という用語は、検出可能な信号を与えることができ、結合剤またはアナライトに対して付着されることのできる任意の原子または部分を指す。そのような検出可能なラベルの例は、蛍光性部分、化学発光性部分、生物発光性部分、配位子、粒子、磁性粒子、蛍光性粒子、コロイド金、酵素、酵素基質、放射性同位体、および発色団を含む。抗腫瘍薬に対して検出可能なラベルを直接的または間接的に付着する複数の方法が、当技術分野において良く知られている。

【0106】

これらに限定されるものではないが、分光によるもの、光学式のもの、光化学によるもの、生化学によるもの、酵素によるもの、電気的なもの、および／または免疫化学によるものを含む適切な方法が、ここに記載される分析試料中の検出可能なラベルを検出するために使用される。

【0107】

本発明の複数の態様に従うと、結合剤が、抗腫瘍薬に対する実質的に特異的な結合によって特徴付けられる抗−抗腫瘍薬抗体であるような複数の組成物および複数の方法が提供される。本発明の複数の態様に従うと、結合剤が、５−フルオロウラシル（５−ＦＵまたはＦＵ）に対する実質的に特異的な結合によって特徴付けられる抗−５−フルオロウラシル抗体であるような複数の組成物および複数の方法が提供される。本発明の複数の態様に従うと、結合剤が、パクリタキセルに対する実質的に特異的な結合によって特徴付けられる抗−パクリタキセル抗体であるような複数の組成物および複数の方法が提供される。本発明の複数の態様に従うと、結合剤が、ドキソルビシンに対する実質的に特異的な結合によって特徴付けられる抗−ドキソルビシン抗体であるような複数の組成物および複数の方法が提供される。

【0108】

"抗体"という用語は、その最も広い意味でここでは使用され、抗原に対する実質的に特異的な結合によって特徴付けられる単一の抗体および複数の抗体の混合物を含む。複数の組成物および複数の方法に従って提供される抗体は、例として、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、および／または、例えば抗原結合抗体フラグメントである。抗体という用語は、複数の特定の実施形態においては、複数のジスルフィド結合によって連結された２つの重鎖（Ｈ）および２つの軽鎖（Ｌ）を含む４つのポリペプチド鎖を有する、標準的で損傷の無い免疫グロブリンを指す。抗原結合抗体フラグメントは、例として、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ'フラグメント、Ｆ（ａｂ'）２フラグメント、Ｆｄフラグメント、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、および、例えばドメイン抗体（ｄＡｂ）を含む。さらに、抗体という用語は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥを含む様々なクラス、並びに、例として、例えばヒトサブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、例えばマウスサブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、およびＩｇＧＭを含むサブクラスの抗体を指す。

【0109】

複数の特定の実施形態においては、実質的に特異的な結合によって特徴付けられる抗体は、約１０^−８Ｍよりも小さい、約１０^−９Ｍよりも小さい、または、約１０^−１０Ｍよりも小さい等、約１０^−７Ｍよりも小さい、または、特定の組成に対する依存性が小さい解離定数Ｋｄを有する。抗体の結合親和力は、P.J. Munson and D. Rodbard, Anal. Biochem., 107:220-239, 1980に記載されるようなスキャッチャード解析によって、または、プラズモン共鳴を使用した生体分子相互作用解析のようなその他の複数の方法によって、決定されることができる。

【0110】

複数の抗体、および複数の抗体を調製するための複数の方法が、当技術分野において良く知られている。

【0111】

広く言えば、タンパク質、ペプチド、抗腫瘍薬、または、これらの免疫原性の部分のような免疫原が、複数の特定の方法により、ウサギ、ヤギ、マウス、ラット、ヒツジ、またはニワトリのような動物に投与され、動物中で生成された免疫グロブリンが動物から得られ、任意でスクリーニングおよび使用に向けて精製される。

【0112】

免疫原に対して特異的な抗体を生成するために使用される、タンパク質、ペプチド、抗腫瘍薬、または、これらの免疫原性の部分のような免疫原は、キーホールリンペットヘモシアニンまたはウシ血清アルブミンのようなキャリアにコンジュゲートされてよい。

【0113】

抗体生成および抗原に対する実質的に特異的な結合のために生成された抗体のスクリーニング方法についての詳細は、以下のような標準的参照文献に記載されている。E.Harlow and D. Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988; F. Breitling and S. Dubel, Recombinant Antibodies, John Wiley & Sons, New York, 1999; H. Zola, Monoclonal Antibodies: Preparation and Use of Monoclonal Antibodies and Engineered Antibody Derivatives, Basics: From Background to Bench, BIOS Scientific Publishers, 2000; and B.K.C. Lo, Antibody Engineering: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology, Humana Press, 2003。

【0114】

本発明の複数の態様に従うと、モノクローナル抗体が分析試料中に使用されてよい。モノクローナル抗体は、例えば以下に記載されるような、当技術分野において知られている技術を用いて調製される。E.Harlow and D. Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988; F. Breitling and S. Dubel, Recombinant Antibodies, John Wiley & Sons, New York, 1999; H. Zola, Monoclonal Antibodies: Preparation and Use of Monoclonal Antibodies and Engineered Antibody Derivatives, Basics: From Background to Bench, BIOS Scientific Publishers, 2000; and B.K.C. Lo, Antibody Engineering: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology, Humana Press, 2003。本発明に従った、および／または、本発明に従った複数の方法において使用されるモノクローナル抗体は、例として、これらに限定されるものではないが、ハイブリドーマ技術、組み換え型核酸手法、および／または、例えば上記の参照文献中に記載されるようなファージライブラリからの単離を含む技術によって生成される。単一のエピトープを認識するモノクローナル抗体の結合の特異性のため、複数の特定の実施形態においてモノクローナル抗体が有利に使用される。

【0115】

モノクローナル抗体の調製の具体的な複数の方法は、免疫原によって免疫性を与えられた動物から脾臓細胞を得ること、および、培養液中で無制限に複製することの可能なハイブリドーマ細胞を得るために、抗体分泌リンパ球を、骨髄腫または形質転換細胞と融合することを含む。

【0116】

得られた抗体は、例としてＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、および免疫細胞化学を含む複数の方法により、免疫原に対する実質的に特異的な結合について試験される。

【0117】

項目

【0118】

表面の抗腫瘍薬汚染を検出する方法であって、
抗腫瘍薬と相溶性があり、分析されるべき表面からの薬物の放出を促進するように処方された湿潤性溶液を提供する段階と、
抗腫瘍薬の可逆的吸収のための固体マトリクスを提供する段階と、
固体マトリクスを湿潤性溶液と接触させ、分析試料マトリクスを生成する段階と、
分析試料マトリクスと表面とを接触させ、表面サンプルを生成する段階と、
表面サンプルをある量の湿潤性溶液に接触させて、流体試験サンプルを生成する段階と、
分析結果を生成するために、ラテラルフローアッセイによって流体試験サンプル中の抗腫瘍薬を分析する段階と、
分析結果を検出することにより、表面の抗腫瘍薬汚染を検出する段階とを備える。

【0119】

分析結果を基準と比較する段階をさらに備える、項目１に記載の方法。

【0120】

抗腫瘍薬は、ドキソルビシン、パクリタキセル、および５−フルオロウラシルから成る群から選択される、項目１または２に記載の方法。

【0121】

ラテラルフローアッセイは、ラテラルフローアッセイ装置を提供する段階を備え、この装置は、コンジュゲートパッド、コンジュゲートパッドに隣接する固体または半固体の多孔質支持体、支持体に存在する試験領域、および支持体に存在するコントロール領域を有し、
コンジュゲートパッドは、拡散可能に結合され検出可能にラベルされた抗腫瘍薬結合剤を有し、
試験検出領域は、非拡散可能に結合された検出試薬を有し、
コントロール領域は、非拡散可能に結合されたコントロール試薬を有し、
固体または半固体の多孔質支持体は、コンジュゲートパッドおよび固体または半固体の多孔質支持体を含む流路に沿った流体試験サンプルの毛細管流動を促進するウィッキングパッドに隣接する、項目１から３のいずれかに記載の方法。

【0122】

抗腫瘍薬結合剤は抗−抗腫瘍薬抗体である、項目４に記載の方法。

【0123】

抗−抗腫瘍薬抗体は、抗−５−フルオロウラシル抗体、抗−パクリタキセル抗体、および抗ドキソルビシン抗体から成る群から選択される、項目５に記載の方法。

【0124】

検出試薬は腫瘍薬である、項目４から６のいずれかに記載の方法。

【0125】

コントロール試薬は抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合する、項目４から７のいずれかに記載の方法。

【0126】

コントロール試薬は抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合する抗体である、項目４から８のいずれかに記載の方法。

【0127】

ラテラルフローアッセイ装置は、コンジュゲートパッド、固体または半固体の多孔質支持体、および／または、ウィッキングパッドを少なくとも部分的に包囲する筐体をさらに有する、項目４から９のいずれかに記載の方法。

【0128】

分析結果を検出する段階は目視観測を含む、項目１から１０のいずれかに記載の方法。

【0129】

分析結果を検出する段階は電子読取器の操作を含む、項目１から１０のいずれかに記載の方法。

【0130】

湿潤性溶液は、生物学的に適合する緩衝剤、０．０１−１０％ｖ／ｖの界面活性剤、および／または、０．０１−１０％ｖ／ｖの有機溶媒を有する、項目１から１２のいずれかに記載の方法。

【0131】

有機溶媒は有機極性プロトン性溶媒である、項目１３に記載の方法。

【0132】

界面活性剤は非イオン性界面活性剤である、項目１３または１４に記載の方法。

【0133】

抗腫瘍薬を検出するためのラテラルフローアッセイ装置であって、
コンジュゲートパッド、コンジュゲートパッドに隣接する固体または半固体の多孔質支持体、支持体に存在する試験領域、および支持体に存在するコントロール領域を備え、
コンジュゲートパッドは、拡散可能に結合され検出可能にラベルされた抗腫瘍薬結合剤を有し、
試験検出領域は、非拡散可能に結合された検出試薬を有し、
コントロール領域は、非拡散可能に結合されたコントロール試薬を有し、
固体または半固体の多孔質支持体は、コンジュゲートパッドおよび固体または半固体の多孔質支持体を含む流路に沿った流体サンプルの毛細管流動を促進するウィッキングパッドに隣接する。

【0134】

抗腫瘍薬結合剤は抗−抗腫瘍薬抗体である、項目１６に記載の装置。

【0135】

抗−抗腫瘍薬抗体は、抗−５−フルオロウラシル抗体、抗−パクリタキセル抗体、および抗−ドキソルビシン抗体から成る群から選択される、項目１７に記載の装置。

【0136】

検出試薬は腫瘍薬である、項目１６から１８のいずれかに記載の装置。

【0137】

コントロール試薬は抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合する、項目１６から１９のいずれかに記載の装置。

【0138】

コントロール試薬は抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合する抗体である、項目１６から２０のいずれかに記載の装置。

【0139】

抗腫瘍薬を含むことが疑われる流体サンプルをさらに有する、項目１６から２１のいずれかに記載の装置。

【0140】

コンジュゲートパッド、固体または半固体の多孔質支持体、および／または、ウィッキングパッドを少なくとも部分的に包囲する筐体をさらに備える、項目１６から２２のいずれかに記載の装置。

【0141】

表面の抗腫瘍薬汚染を検出するためのキットであって、
抗腫瘍薬と相溶性があり、分析されるべき表面からの薬物の放出を促進するように処方された湿潤性溶液と、
抗腫瘍薬の可逆的吸収のための固体マトリクスと、
抗腫瘍薬に対して特異的な結合剤、および、コントロール試薬を有するラテラルフロー装置と、
を備える。

【0142】

ラテラルフローアッセイ装置は、コンジュゲートパッド、コンジュゲートパッドに隣接する固体または半固体の多孔質支持体、支持体に存在する試験領域、および支持体に存在するコントロール領域を有し、
結合剤は、コンジュゲートパッドに拡散可能に結合された検出可能にラベルされた抗腫瘍薬結合剤であり、
試験検出領域は、非拡散可能に結合された検出試薬を有し、
コントロール試薬は、コントロール領域に非拡散可能に結合され、
固体または半固体の多孔質支持体は、コンジュゲートパッドおよび固体または半固体の多孔質支持体を含む流路に沿った流体試験サンプルの毛細管流動を促進するウィッキングパッドに隣接する、項目２４に記載のキット。

【0143】

検出可能にラベルされた抗腫瘍薬結合剤は抗−抗腫瘍薬抗体である、項目２５に記載のキット。

【0144】

抗−抗腫瘍薬抗体は、抗−５−フルオロウラシル抗体、抗−パクリタキセル抗体、および抗ドキソルビシン抗体から成る群から選択される、項目２６に記載のキット。

【0145】

検出試薬は腫瘍薬である、項目２５から２７のいずれかに記載のキット。

【0146】

コントロール試薬は抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合する、項目２５から２８のいずれかに記載のキット。

【0147】

コントロール試薬は、抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合する抗体である、項目２５から２９のいずれかに記載のキット。

【0148】

コンジュゲートパッド、固体または半固体の多孔質支持体、および／または、ウィッキングパッドを少なくとも部分的に包囲する筐体をさらに備える、項目２４から３０のいずれかに記載のキット。

【0149】

湿潤性溶液は、生物学的に適合する緩衝剤、０．０１−１０％ｖ／ｖの界面活性剤、および／または、０．０１−１０％ｖ／ｖの有機溶媒を有する、項目２４から３１のいずれかに記載のキット。

【0150】

有機溶媒は有機極性プロトン性溶媒である、項目３２に記載のキット。

【0151】

界面活性剤は非イオン性界面活性剤である、項目３２または３３に記載のキット。

【0152】

発明の複数の装置、キット、および方法の複数の態様が、以下の複数の例に示される。これらの例は説明目的で提供されるものであり、発明の装置、キット、および方法の範囲に対する限定とみなされるものではない。

【0153】

実施例

【0154】

試薬およびモニタ装置

【0155】

この実施例で使用される抗体および薬物−ＢＳＡコンジュゲートは、Saladax Biomedical（Bethlehem、ペンシルベニア州）によって開発され、Saladax BiomedicalおよびLampire Biological Laboratories（Pipersville、ペンシルベニア州）から購入された。綿棒はPuritan model 806-WC（Puritan、Guilford、メイン州)であった。５−フルオロウラシル（５−ＦＵ≧９９％、製品番号Ｆ６６２７−１Ｇ）およびモノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（Ｔｗｅｅｎ２０、製品番号Ｐ−１３７９）はSigma-Aldrich（St. Louis、ミズーリ州）から購入された。濃水酸化アンモニウム（製品Ａ６６９−５００）はFisher Scientific（Fair Lawn、ニュージャージー州）からのものであった。

【0156】

５−ＦＵ溶液調製

【0157】

１０から２５ｍｇの間の秤量された量の５−ＦＵを１ｍｌの濃水酸化アンモニウム中に溶解させることにより、貯蔵液５−ＦＵが調製された。所望される濃度の５−ＦＵを生成するために、必要に応じて貯蔵液を１０ｍＭの酢酸アンモニウム中で希釈することにより、スパイク溶液（spiking solution）が調製された。これにより、同一のスパイク量を用いて、様々な５−ＦＵスパイクレベルが適用されることが可能になった。そのため、全てのタイルが拭き取り前に均等に乾燥するであろう。パクリタキセルまたはドキソルビシンの同様な貯蔵液が、スパイクされたサンプリング緩衝液コントロールとしての使用向けに、または表面サンプリング試験向けに調製された。

【0158】

表面サンプリング

【0159】

表面サンプリングの手順は、簡便で迅速であるように開発された。面積１００ｃｍ^２のセラミック製浴室タイル、ビニール製フロアタイル、カウンター上面の複合物タイル、ステンレス鋼製タイル、およびガラス製タイルが５０μｌのスパイク溶液によってスパイクされ（spiked）て、０、５、１０、２５、５０、または１００ｎｇの５−ＦＵ表面充填物を与え（それぞれのレベルについて３つのタイル）、２時間にわたって乾燥された。１００ｃｍ^２の表面のそれぞれは、１ｍＬのサンプリング緩衝液（１０ｍＭ含水酢酸アンモニウム−１％ Ｔｗｅｅｎ２０（ｖ／ｖ））を含む試薬瓶中で湿らされた綿棒により、最初は上下方向に、続いて横方向に、最後に上下の拭き取り方向を繰り返して、完全に拭き取られた。その後綿球はサンプリング緩衝液を含む試薬瓶へと戻され、２分間激しくかき混ぜられ、生じた抽出物の７５μｌのアリコートが（複数の抽出物のそれぞれに対して２つ）ラテラルフロー薬物モニタ装置に適用された。

【0160】

パクリタキセルまたはドキソルビシンを用いた表面サンプリング試験についても、同じ手順に従った。

【0161】

モニタ装置試験

【0162】

すぐ前のセクションに記載されるように、スパイクされたタイル表面を綿棒によって表面拭き取りし、綿球を抽出することによって生成された複数のサンプルによって複数のモニタ装置が試験された。さらに、複数のモニタ装置は、（１）スパイク溶液によってサンプリング緩衝液を直接スパイクすることにより、および、（２）その後抽出される綿球を直接スパイクすることにより調製された複数のコントロールサンプルによって試験された。スパイクされた緩衝液コントロールは、回収損失の無い、または、複数の綿球あるいは複数の拭き取られた表面による干渉の不自然な結果の無い、複数のモニタ装置の性能を示す。スパイクされた綿球コントロールは、この方法の性能に対するワイプ媒体の寄与（例えば、綿球からの５−ＦＵの不完全な抽出）が区別して評価されることを可能にする。スパイクされた緩衝液コントロールについては、５０μｌの適切なスパイク溶液が９５０μｌのサンプリング緩衝液に対して加えられ、０、５、１０、２５、５０、または１００ｎｇ／ｍＬの５−ＦＵを与えた。生じた抽出物の７５μｌのアリコートがラテラルフロー薬物モニタ装置に適用された。スパイクされた綿球コントロールについては、５０μｌの５−ＦＵスパイク溶液によって複数の綿棒が（各スパイクレベル当り１つ）直接スパイクされ、タイル拭き取り調査から複数の綿球に対して使用されたものと同じ手順を用いて、９５０μｌのサンプリング緩衝液によって抽出された。生じた抽出物の７５μｌのアリコートがラテラルフロー薬物モニタ装置に適用された。毎日１つのタイル材料が試験された。また、スパイクされたタイル、その日のためのスパイクされた緩衝液コントロール、およびスパイクされた綿球コントロールの新たな組のそれぞれを調製するために、５−ＦＵスパイク溶液の新しい組が作成された。

【0163】

３台のモニタ装置が、スパイクされたサンプリング緩衝溶液およびスパイクされた綿球溶液とともに使用された。テストラインおよびコントロールラインの強度を読み取る電子ラテラルフローリーダ（浜松、モデル１００６６）を用いて、複数のモニタ装置の応答が評価された。テストラインの強度がコントロールラインと比較される視覚化読み取り方法も使用された。もしもコントロールラインがテストラインよりも強い場合には、質量は閾値を越えているものと決定された。このように、複数のモニタ装置は、リーダを用いて半定量的結果について評価され、視覚化ライン比較を用いて定性的結果について評価された。モニタ装置に溶液を加えてから５、１０、および１５分後に、電子的および視覚化読み取りに対する応答が決定された。

【0164】

パクリタキセルまたはドキソルビシンを用いた試験も、同じ手順に従った。

【0165】

ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ

【0166】

サンプリング緩衝液として１０ｍＭのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）−１％Ｔｗｅｅｎ２０を用いて、ラテラルフローモニタ装置が開発された。しかしながら、ＰＢＳ−１％Ｔｗｅｅｎは、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法の使用には適合しないことがわかった。従って、サンプリング緩衝液として１０ｍＭの酢酸アンモニウム−１％Ｔｗｅｅｎ２０が使用された。１０ｍＭの酢酸アンモニウム−１％Ｔｗｅｅｎ２０は、複数のラテラルフローモニタ装置を用いたＰＢＳ−１％Ｔｗｅｅｎとほとんど同等な結果を与え、ラテラルフローアッセイ中で使用された同じ溶液が、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって直接分析されることを可能にした。これは利点であった。何故ならば、ラテラルフローアッセイ用とＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析用とで別々の溶液が同等であることを確実にするのは困難であろうからである。

【0167】

ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法は、複数のラテラルフローモニタ装置用に使用される１０ｍＭ酢酸アンモニウム−１％Ｔｗｅｅｎ２０サンプリング緩衝液中で５−ＦＵを直接測定するために開発された。

【0168】

使用されたクロマトグラフ条件は、Ｔｗｅｅｎおよびその他の複数の構成成分からの、５−ＦＵアナライトの十分な分離を可能とした。

【0169】

使用されたＨＰＬＣカラムはWatersのＹＭＣ−ＯＤＳ−ＡＱ、２．０ｘ２５０ｍｍ、５μｍ（Waters部品番号ＡＱ１２Ｓ０５２５０２ＷＴ、Waters Corp, Milford、マサチューセッツ州）であり、３０℃で実行された。移動相の流速は０．２８０ｍＬ／分であり、移動相の構成成分ＡおよびＢ（Ａ−２ｍＭ酢酸アンモニウム、含水、Ｂ−メタノール）を有する。これらの構成成分のグラジエントが、以下のように使用された。
アイソクラチック ９５％Ａ、５％Ｂ ０−４．５分
グラジエント ５％Ａ、９５％Ｂまで ４．５−５．５分、直線型傾斜
アイソクラチック ５％Ａ、９５％Ｂ ５．５−１１分
グラジエント ９５％Ａ、５％Ｂまで １１−１２分、直線型傾斜
アイソクラチック ９５％Ａ、５％Ｂ（再平衡） １２−１７分

【0170】

１５μＬのサンプルがカラムに注入された。５−フルオロウラシルアナライトの溶出時間は約４．５分であり、再平衡を含む全体の実行時間は１７分であった。質量分析計（Micromass Quattro LC（Waters Corp））は、電気スプレー陰イオンイオン化モードで動作され、以下のトランジションに対する複数の反応モニタリングを実行するために、三連四重極を使用した。
５−フルオロウラシル（アナライト）：質量対電荷（ｍ／ｚ）１２９から４２まで
５−フルオロウラシル−^１５Ｎ_２（２０ｎｇ／ｍＬレベルにおける内部標準）：ｍ／ｚ１３１から４３まで

【0171】

複数のトランジションは、それぞれのトランジションに対して２００ｍｓの滞留時間で測定された。電気スプレーキャピラリ電圧は５００Ｖ、コーン電圧は３０Ｖ、どちらのトランジションに対してもフラグメント衝突エネルギーは１４ｅＶであった。サンプリング緩衝液中での有効線形キャリブレーション範囲は０−２５０ｎｇ／ｍＬ ５−ＦＵであった。これにより、全ての試験サンプルが事前の希釈無しで分析されることが可能であった。サンプリング緩衝液中で調製された低レベル５ＦＵ標準から生成された回帰プロットを用いて評価された検出および定量化の限界は、０．３０および０．８４ｎｇ／ｍＬであり、１ｍＬ試験サンプル中の０．３０および０．８４ｎｇと同等であった。

【0172】

使用されたクロマトグラフ条件は、Ｔｗｅｅｎ２０およびその他の複数の構成成分からの５−ＦＵアナライトの十分な分離を可能にした。検出限界（ＬＯＤ）は０．３ｎｇ／ｍＬであり、定量化の限界（ＬＯＱ）は０．８４ｎｇ／ｍＬであった。立証されたキャリブレーション線形ダイナミックレンジ０−２５０ｎｇ／ｍＬにわたって、スパイクされた溶液に対する精度は３％またはそれより良好であった。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳは、契約研究所Bureau Veritas North America（ＢＶＮＡ）からのＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析者によって、サンプリング緩衝液中で調製された複数の標準溶液を用いてキャリブレーションされた。０、１０、２５、および１００ｎｇにおける、スパイクされたサンプリング緩衝液、スパイクされた綿球、およびスパイクされたタイルからの溶液に対して、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析が成された。

【0173】

データの解釈

【0174】

上述のように、複数のモニタ装置の応答は、電子読取器および視覚的解釈の両者によって評価された。

【0175】

電子読取器

【0176】

電子読取器からのライン強度は、２つの方式で処理された。％Ｂ／Ｂｏ（Ｂは、与えられた質量におけるテストライン強度であり、Ｂｏは、質量０におけるテストライン強度である）が算出され、スパイクされた緩衝液コントロール、スパイクされた綿球コントロール、およびスパイクされたタイルサンプル用の５−ＦＵのスパイクされた質量に対して、または、スパイクされた緩衝液コントロールおよびスパイクされたタイルサンプル用のパクリタキセルおよびドキソルビシンに対してプロットされた。キャリブレーション曲線を生成するために、全てのサンプルタイプに対する％Ｂ／Ｂｏが、スパイクされた質量のｌｏｇに対してフィッティングされた。テストライン強度に対するコントロールライン強度の比（Ｃ／Ｔ比）もまた算出され、第２のキャリブレーション曲線も生成するために、スパイクされた質量に対して直接にプロットされた。％Ｂ／Ｂｏ対質量のｌｏｇ曲線およびＣ／Ｔ対質量曲線の"フィッティングの良好さ"の評価が、"標準回収（standards recovery）"（Nix and Wild、２００１）による％Ｂ／ＢｏまたはＣ／Ｔモデルに対する標準データのフィッティングを評価することにより調査され、それぞれのフィッティングされた（観測された）質量からの補間された複数の結果を評価すること、および、これをスパイクされたそれぞれの抗腫瘍薬の質量（期待される質量）と比較することによって算出された。スパイクされたサンプリング緩衝液コントロールについてのフィッティングされた％Ｂ／Ｂｏ曲線およびＣ／Ｔ曲線、および、スパイクされた綿球コントロールおよびスパイクされたタイルサンプルからの溶液についての％Ｂ／ＢｏおよびＣ／Ｔ応答を用いて、それぞれのキャリブレーション点において回収された質量を算出することにより、スパイクされた綿球およびスパイクされたタイルについて、回収された質量が算出された。

【0177】

視覚的解釈

【0178】

視覚的解釈は、どちらのラインがより強いかを視覚的に決定することによる、コントロールライン（Ｃ）かテストライン（Ｔ）かの評価を含む。これらのラインが等しいと判定された場合、（＝）が使用された。これらのラインがほぼ等しいが、テストラインがわずかに明るいと判定された場合は（Ｔ＝）が使用され、コントロールラインがわずかに明るい場合は（Ｃ＝）が使用された。

【0179】

ＬＣ−ＭＳ／ＭＳの検証

【0180】

ＬＣ−ＭＳ／ＭＳの検証のために、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法によって測定された質量が、スパイクされた緩衝液コントロール溶液、スパイクされた綿球コントロール、およびタイルサンプルに対する既知のスパイクされた質量と相関付けられた。複数のラテラルフローモニタ装置によって測定された回収された質量もまた、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって測定された質量と相関付けられた。

【0181】

ラテラルフローイムノアッセイ

【0182】

提示される全てのデータは、複数のモニタ装置に溶液を加えてから１５分後のものであることに留意されたい。複数のモニタ装置に溶液を加えてから５分後および１０分後に得られるデータは、％Ｂ／Ｂｏについて同様な結果を与える。

【0183】

スパイクされたサンプリング緩衝液コントロールサンプル

【0184】

図２Ａは、スパイクされたサンプリング緩衝液についてのラテラルフローモニタ応答を％Ｂ／Ｂｏとして示すグラフである。増大する質量の５−ＦＵによってサンプリング緩衝液がスパイクされ、複数のモニタ装置の応答が％Ｂ／Ｂｏとして測定され、示された。Ｂは、与えられる質量における応答であり、Ｂｏは、質量０における応答である。図２Ｂは、スパイクされたサンプリング緩衝液についていのラテラルフローモニタ応答をＣ／Ｔ比として示すグラフである。増大する質量の５−ＦＵによってサンプリング緩衝液がスパイクされ、複数のモニタ装置の応答がＣ／Ｔ比として測定され、示された。Ｃはコントロールライン強度であり、Ｔはテストライン強度である。

【0185】

図２Ａおよび２Ｂに示されるデータは、５組のスパイクされた緩衝液コントロールサンプルの平均であり、そのそれぞれは、５つの異なる表面について行われたタイル拭き取り調査の１つに伴って調製され、分析された。％Ｂ／Ｂｏは、約１０％のＣＶによってスパイクされた５−ＦＵの５ｎｇにおいて６７％の平均％Ｂ／Ｂｏを示す。これは、サンプリング緩衝液中に直接スパイクされた場合にこの量が検出可能であることを示す。Ｃ／Ｔ比は、スパイクされた質量の関数として、直線によってフィッティングされた。これは良好な相関を示す。％Ｂ／Ｂｏは、濃度のｌｏｇに対してフィッティングされた。このフィッティングは、それぞれの点において観測された質量を逆算するために使用された。同様に、フィッティングされたＣ／Ｔ曲線は、観測された質量を逆算するために使用された。

【0186】

図２Ｃは、％Ｂ／ＢｏおよびＣ／Ｔ曲線を用いた、期待される質量の関数として（観測された質量）を示すグラフであり、データに対する良好なフィッティングを示している。％Ｂ／Ｂｏ対質量のｌｏｇ、または、Ｃ／Ｔ対質量のフィッティングされた曲線のどちらかからの補間された結果（観測された質量）を、緩衝液中でスパイクされた５−ＦＵの質量（期待される質量）に対してプロットすることにより、標準回収が算出された。応答曲線は、％Ｂ／Ｂｏ対スパイクされた質量のｌｏｇ、または、Ｃ／Ｔ対スパイクされた質量によってモデル化されることができ、両方とも、観測された質量対期待される質量の良好な相関を与えることができる。

【0187】

スパイクされた緩衝液コントロールについての、スパイクされた質量５−ＦＵとのＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定の良好な相関（傾き＝１．０１、切片＝−０．２３、Ｒ^２＝０．９９９９）は、この調査用に内製の試験サンプルを調製するために使用されたスパイク技術が、正確であったことを示している。表ＩＩＩＡを参照のこと。これはまた、ＬＣ−ＭＳ解析用に調製されたキャリブレーション標準は、内製サンプルとは異なる５ＦＵの供給品を使用したにもかかわらず、調製されたサンプルの定量的精度が信頼できるものであったことを示している。

【0188】

テストラインおよびコントロールライン強度は一緒に上がったり下がったりする傾向があるので、Ｃ／Ｔは算出することが簡単であり、ラテラルフローモニタ装置中の変動に対する幾分かの補償を与える。５ｎｇのスパイクされた質量が検出可能であることを視覚的解釈は示している。何故ならば、この質量においては、全てのモニタ装置がＣ＝からＣまでを与え、１０ｎｇのスパイクレベルに対しては、全てがＣだからである。表Ｉはスパイクされた緩衝液コントロールに対する視覚的解釈を示し、５−１０ｎｇのスパイクされたレベルにおいて、テストライン（Ｔ）よりもコントロールライン（Ｃ）の方がより強いと判定された。

【表I】

【0189】

表Ｉは、視覚的解釈を用いたモニタ装置性能を示す。スパイクされたサンプリング緩衝液、スパイクされた綿球、およびスパイクされたタイルからの溶液によって、複数のモニタ装置が開発された。どちらが最も強いラインであるかを視覚的に評価することによって結果が評価された。もしもテストラインが最も強い場合には、Ｔが使用され、もしもコントロールラインが最も強い場合にはＣが使用された。これらのラインが等しいと判定された場合には、＝が使用された。これらのラインがほぼ等しいが、テストラインがわずかに明るかった場合はＴ＝が使用された。これらのラインがほとんど等しいが、コントロールがわずかに明るいと判定された場合はＣ＝が使用された。

【0190】

スパイクされた綿球コントロールサンプル

【0191】

図３Ａおよび３Ｂは、スパイクされた綿球について、スパイクされたｎｇの関数として％Ｂ／ＢｏおよびＣ／Ｔ比を示す。図３Ａは、スパイクされた綿球からの溶液について、モニタ装置の応答を％Ｂ／Ｂｏとして示すグラフである。増大する質量の５−ＦＵによって複数の綿球がスパイクされ、これらの綿球から抽出された溶液に対する複数のモニタ装置の応答が測定され、％Ｂ／Ｂｏとして示された。Ｂは、与えられた質量における応答であり、Ｂｏは質量０における応答である。図３Ｂは、スパイクされた綿球からの溶液について、モニタ装置の応答をＣ／Ｔ比として示すグラフである。増大する質量の５−ＦＵによって複数の綿球がスパイクされ、これらの綿球から抽出された溶液に対する複数のモニタ装置の応答が測定され、Ｃ／Ｔ比として示された。Ｃはコントロールライン強度であり、Ｔはテストライン強度である。

【0192】

これらの示されるデータは、やはりスパイクされた綿球データの５組に対する平均であり、それぞれは、異なる複数の表面について実行されたタイル拭き取り調査に伴って収集された。％Ｂ／Ｂｏは、１０ｎｇスパイクされた場合において２０％のＣＶによって平均７４％を示す。これは、スパイクされた綿球からこの質量が検出可能であろうことを示す。Ｃ／Ｔおよび％Ｂ／Ｂｏは、溶液の時と同様にフィッティングされ、観測された質量を算出するために使用された。スパイクされた綿球コントロールについては、平均％Ｂ／Ｂｏは１０ｎｇにおいて７４％であった。これは、５−ＦＵのこの質量が検出されることができることを示す。％Ｂ／Ｂｏ対質量のｌｏｇ、または、Ｃ／Ｔ対質量によって、応答がモデル化されることができた。観測された質量対期待される質量は、どちらのフィッティングとも良好な相関を与えた。図３Ｃ。

【0193】

図３Ｃは、スパイクされた緩衝液コントロールについて行われた、観測された質量対期待される質量を示すグラフであり、良好なフィッティングを示している。％Ｂ／Ｂｏ対質量のｌｏｇ、または、Ｃ／Ｔ対質量のフィッティングされた曲線のどちらかからの補間された結果（観測された質量）を、綿球でスパイクされた５−ＦＵの質量（期待される質量）に対してプロットすることにより、標準回収が算出された。

【0194】

上述のように、スパイクされた緩衝液コントロールについてフィッティングされたＣ／Ｔおよび％Ｂ／Ｂｏ曲線が、スパイクされた綿球コントロールサンプルについて回収された質量を算出するために使用された。スパイクされた綿球からの溶液についての複数のモニタ装置の応答を利用し、スパイクされたサンプリング緩衝溶液についてのフィッティングされた％Ｂ／Ｂｏ対質量のｌｏｇ、またはＣ／Ｔ対質量のフィッティングされた曲線を使用して、濃度を算出するために、スパイクされた綿球から回収された質量が算出された。図３Ｄは、良好な相関があるが、綿球からの５−ＦＵの不完全な回収を示すグラフであり、プロットの傾きは＜１．００である。スパイクされた緩衝液コントロールサンプル曲線を用いて得られた算出された回収は、％Ｂ／ＢｏおよびＣ／Ｔ曲線の両者に対して約５０％の回収を与えた。図３Ｄのそれぞれの傾きの値を参照のこと。

【0195】

ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ結果もまた、平均で８６％という、スパイクされた綿球からの不完全な回収を示した。これは、質量に対して回収をプロットした場合の傾きと良く一致する。表ＩＩＩＡ。ただし、これらの値は、表ＩＩＩＢ中の綿球サンプルに対する＜１．００という傾きの値によって示されるようなラテラルフローモニタからのものよりは大きく、これは２つの方法を相互に関連付ける。視覚的解釈は、１０ｎｇの５−ＦＵが検出可能であることを示した。何故ならば、その質量では、全てのモニタ装置がＣ＝からＣまでを示したからである。

【0196】

表Ｉはスパイクされた綿球からのデータの視覚的解釈を示し、１０−２５ｎｇのスパイクレベルにおいて、テストラインよりもコントロールラインの方がより強かったことを示している。

【0197】

スパイクされたタイル拭き取りサンプル

【0198】

スパイクされたタイルに対するデータは、それぞれの表面についてのデータが別々に処理されたことを除いて、スパイクされた緩衝液コントロールおよびスパイクされた綿球コントロールと同様に処理された。それぞれのレベルにおいて３つのタイル、且つ、それぞれのタイルについて２つのラテラルフローモニタ装置があったので、それぞれの値は、６つのラテラルフローモニタ装置の平均を表す。図４Ａおよび４Ｂは、スパイクされたタイルサンプルについて、５−ＦＵのｎｇの関数として％Ｂ／ＢｏおよびＣ／Ｔ比を示すグラフである。図４Ａは、スパイクされたタイルからの溶液について、モニタ装置の応答を％Ｂ／Ｂｏとして示すグラフである。面積１００ｃｍ^２のタイルおよび様々な表面が、増大する質量の５−ＦＵによってスパイクされ、これらのタイルを拭き取るために使用された綿球から抽出された溶液に対する複数のモニタ装置の応答が測定され、％Ｂ／Ｂｏとして示された。Ｂは、与えられる質量における応答であり、Ｂｏは、質量０における応答である。

【0199】

図４Ｂは、スパイクされたタイルからの溶液について、モニタ装置の応答をＣ／Ｔ比として示すグラフである。面積１００ｃｍ^２のタイルおよび様々な表面が、増大する質量の５−ＦＵによってスパイクされ、これらのタイルを拭き取るために使用された綿球から抽出された溶液に対する複数のモニタ装置の応答が測定され、Ｃ／Ｔ比として示された。Ｃはコントロールライン強度であり、Ｔはテストライン強度である。全ての表面タイプに対して回帰直線が示されている。しかしながら、ビニールおよび複合物の回帰方程式のみがグラフには示されている。ビニールに対する回帰が最高の傾きを与え、複合物に対する回帰が最低の傾きを与えた。その他全ての表面に対する傾きは、ビニールと複合物との間にある。

【0200】

％Ｂ／Ｂｏ曲線は表面ごとに変動し、１０ｎｇにおいてビニールおよびセラミックは８０％であり、その他の表面に対しては、１０から２５ｎｇの間において８０％である。タイルは、増大する質量の５−ＦＵによってスパイクされ、拭き取られ、溶液が複数のラテラルフローモニタ装置に適用された。複数のモニタ装置の応答が、質量のｌｏｇの関数としての％Ｂ／Ｂｏとしてフィッティングされた。この関係は、期待される質量に対してプロットされた観測された質量を算出するために使用された。結果は表ＩＩＡに示されている。

【表IIA】

【0201】

複数のモニタ装置の応答が、質量の関数としてのＣ／Ｔ（テストライン強度に対するコントロールライン強度の比）としてフィッティングされた。この関係は、期待される質量に対してプロットされた観測された質量を算出するために使用された。結果は表ＩＩＢに示されている。

【表IIB】

【0202】

タイルは、増大する質量の５−ＦＵによってスパイクされ、拭き取られ、溶液が複数のラテラルフローモニタ装置に適用された。スパイクされたサンプリング緩衝液について、フィッティングされた％Ｂ／Ｂｏ対質量のｌｏｇの関係は、スパイクされた質量に対してプロットされた回収された質量を算出するために、スパイクされたタイルからのモニタ装置の応答とともに使用された。％Ｂ／Ｂｏについての結果が表ＩＩＣに示されている。

【表IIC】

【0203】

タイルは、増大する質量の５−ＦＵによってスパイクされ、拭き取られ、溶液が複数のラテラルフローモニタ装置に適用された。スパイクされたサンプリング緩衝液について、フィッティングされたＣ／Ｔ対質量の関係は、スパイクされた質量に対してプロットされた回収された質量を算出するために、スパイクされたタイルからのモニタ装置の応答とともに使用された。Ｃ／Ｔについての結果が表ＩＩＤに示されている。

【表IID】

【0204】

複数のスパイクされたタイルの例には良好な相関があるが、図３Ｄ中のそれらに対して傾きをプロットして比較すると、綿球による拭き取りが１００％効率的であるとは期待されないであろうし、いくつかの表面はかなりの量の５−ＦＵスパイク（下部）を保持するかもしれないことから予測されるように、複数のスパイクされた綿球コントロールサンプルの場合よりもさらに回収が低い。表Ｉは複数の異なる表面についての視覚的解釈を示し、２５ｎｇのスパイクレベルにおいては、全ての表面が、テストラインよりも強いコントロールラインを有することを示している。

【0205】

スパイクされたタイルについては、図４Ａに示されるように、％Ｂ／Ｂｏ曲線は表面ごとに変動し、セラミックおよびビニール製タイルでは１０ｎｇの５−ＦＵ、その他の表面では１０−２５ｎｇが検出され得たことを示した。全ての表面に対する％Ｂ／ＢｏとＣ／Ｔの両者についてのフィッティングされた曲線を用いると、観測された質量には、期待される質量と良好な相関がある。表ＩＩＡ、ＩＩＢを参照のこと。スパイクされた緩衝液コントロール曲線を用いての、回収された質量の算出は、概して良好な相関を示すが、拭き取り技術の限界から予測されるように、不完全な回収を示している。表ＩＩＣおよびＩＩＤ中の、それぞれＲ２および傾きの値を参照のこと。

【0206】

スパイクされたサンプリング緩衝液コントロールに対してＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定が行わた。ラテラルフローモニタ解析後の残留溶液を用いて、スパイクされた綿球コントロールおよびスパイクされたタイルからの抽出が完了した。スパイクされたサンプリング緩衝溶液、スパイクされた綿球溶液、およびスパイクされたタイル溶液について、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより測定された質量が、全体として、およびタイルタイプによって、スパイクされた質量と相関付けられた。表ＩＩＩＡは、各タイプのサンプルについて、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより測定された回収された質量の、スパイクされた質量との相関性を示す。上述のように、キャリブレーション用のスパイクされたサンプリング緩衝液コントロールサンプルデータを使用した複数のラテラルフローモニタ装置とは異なり、これらの回収は、サンプリング緩衝液中で調製された新たな複数の標準を用いてＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析者により調製された、独自のキャリブレーション曲線を用いて決定されている。複数の表面拭き取りサンプルに対するこの例は、複数の表面が異なる回収を与えるので、全体的な相関性と、各表面タイプについての相関性との両者を示す。表ＩＩＩＡに示される傾きの値によって示されるように、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳは、複数のタイル拭き取りサンプルからの不完全な回収を示している。

【表IIIA】

【0207】

スパイクされたサンプリング緩衝溶液、スパイクされた綿球溶液、およびスパイクされたタイル溶液について、複数のラテラルフローモニタ装置により測定された回収された質量の算出値が、全体およびタイルタイプごとに、質量範囲０−１００および０−２５ｎｇについて、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって測定された回収された質量に対してプロットされた。複数のラテラルフローモニタ装置についての回収された質量は、同じ日に生成されたスパイクされた緩衝液コントロールのフィッティングされた曲線によって決定された、各表面サンプルタイプからのＣ／Ｔの値を使用した。複数の拭き取りサンプルについて、次のものに対して相関が行われた。（１）１００ｎｇスパイクされたものを含む全てのデータ、および、（２）ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ結果とより良好に一致したので、２５ｎｇよりも少ないスパイクされた複数のサンプル、である。１００ｎｇが、２５ｎｇを越える唯一のスパイクレベルであり、これに対してＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いて値が決定された。

【0208】

ＬＣ−ＭＳ／ＭＳからの回収の値とラテラルフローアッセイから算出された値との間には良好な相関がある。表ＩＩＩＢ中のＲ２の値を参照のこと。イムノアッセイから算出された回収の絶対値はより小さい。表ＩＩＩＢ中の傾きの値が＜１．００であることを参照のこと。絶対値は、質量値２５ｎｇまたはそれよりも小さい場合に、より良く一致する。例外は、ステンレス鋼拭き取りサンプルであり、これに対しては、一致にほとんど差が無い。ガラス拭き取りサンプルについては、範囲が比較されることを可能とするのには、不十分なＬＣ−ＭＳ／ＭＳデータしか得られなかった。

【表IIIB】

【0209】

この例に記載されるように、これらの結果は、モニタ装置が、綿棒を用いたサンプリング技術とともに使用される場合、２５ｎｇの５−ＦＵが視覚的に検出されることができ、２５ｎｇよりも小さいものは電子読取器を用いて検出されることができることを示している。この例に記載される、表面拭き取りおよび複数のラテラルフローモニタ装置を用いた５−ＦＵ検出技術は、１５分またはそれよりも短い時間に、２５ｎｇ／１００ｃｍ^２（０．２５ｎｇ／ｃｍ^２）またはそれより良好な感度を提供する。

【0210】

複数の個別のセラミックタイル表面１０×１０ｃｍが既知量のパクリタキセル０−５００ｎｇによってスパイクされた。セラミックタイルは湿った綿球によって拭き取られ、５−ＦＵについて記載されるように、綿球からパクリタキセルが抽出された。生じた試験溶液がラテラルフローアッセイ装置に適用された。視覚技術および電子読取器技術の両者を用いて結果が評価された。電子読取器を用いると、スパイクされた溶液については２５ｎｇ／ｍｌにおいて、タイル拭き取りサンプルについては５０ｎｇ／１００ｃｍ^２において、％Ｂ／Ｂｏは７０％であった。視覚的解釈を用いると、スパイクされた溶液については５０ｎｇ／ｍｌよりも大きい場合に、タイル拭き取りサンプルについては５０ｎｇ／１００ｃｍ^２よりも大きい場合に、コントロールラインがテストラインよりも強かった。この例においては、複数のパクリタキセルモニタ装置用に、ＰＢＳ−１％Ｔｗｅｅｎがサンプリング緩衝液として使用された。

【0211】

図５Ａは、パクリタキセルスパイクされたサンプリング緩衝液についてのラテラルフローアッセイモニタ応答を％Ｂ／Ｂｏとして示すグラフである。増大する質量のパクリタキセルによってサンプリング緩衝液がスパイクされた。複数のモニタ装置の応答が測定され、％Ｂ／Ｂｏとして示された。Ｂは与えられた質量における応答であり、Ｂｏは質量０における応答である。

【0212】

図５Ｂは、パクリタキセルスパイクされた複数のセラミックタイルについてのラテラルフローアッセイモニタ応答を％Ｂ／Ｂｏとして示すグラフである。増大する質量のパクリタキセルによって複数のセラミックタイルがスパイクされた。複数のモニタ装置の応答が測定され、％Ｂ／Ｂｏとして示された。Ｂは与えられた質量における応答であり、Ｂｏは質量０における応答である。

【0213】

図５Ｃは、ラテラルフローアッセイ結果の目視評価による、スパイクされた緩衝液中、または、スパイクされた複数のセラミックタイルを拭き取るために使用された複数の綿球から抽出された、様々な量のパクリタキセルの検出を示すグラフである。

【0214】

パクリタキセルアッセイは、この例においては、電子読取器により０．２５ｎｇ／ｃｍ^２を検出し、視覚的に０．５ｎｇ／ｃｍ^２を検出した。

【0215】

複数の個別のセラミックタイル表面１０×１０ｃｍが既知量のドキソルビシン０−５００ｎｇによってスパイクされた。セラミックタイルは湿った綿球によって拭き取られ、５−ＦＵについて記載されるように、綿球からパクリタキセルが抽出された。生じた試験溶液がラテラルフローアッセイ装置に適用された。視覚技術および電子読取器技術の両者を用いて結果が評価された。電子読取器を用いると、スパイクされた溶液については１ｎｇ／ｍｌにおいて％Ｂ／Ｂｏは４０％であり、タイル拭き取りサンプルについては５ｎｇ／１００ｃｍ^２において８０％であった。視覚的解釈を用いると、スパイクされた溶液については１ｎｇ／ｍｌよりも大きい場合に、タイル拭き取りサンプルについては５ｎｇ／１００ｃｍ^２よりも大きい場合に、コントロールラインがテストラインよりも強かった。この例においては、複数のドキソルビシンモニタ装置用に、Ｔｗｅｅｎの無いＰＢＳのみがサンプリング緩衝液として使用された。複数の発泡綿球が使用された。

【0216】

図６Ａは、ドキソルビシンスパイクされたサンプリング緩衝液についてのラテラルフローアッセイモニタ応答を％Ｂ／Ｂｏとして示すグラフである。増大する質量のドキソルビシンによってサンプリング緩衝液がスパイクされた。複数のモニタ装置の応答が測定され、％Ｂ／Ｂｏとして示された。Ｂは与えられた質量における応答であり、Ｂｏは質量０における応答である。

【0217】

図６Ｂは、ドキソルビシンスパイクされた複数のセラミックタイルについてのラテラルフローアッセイモニタ応答を％Ｂ／Ｂｏとして示すグラフである。増大する質量のドキソルビシンによって複数のセラミックタイルがスパイクされた。複数のモニタ装置の応答が測定され、％Ｂ／Ｂｏとして示された。Ｂは与えられた質量における応答であり、Ｂｏは質量０における応答である。

【0218】

図６Ｃは、ラテラルフローアッセイ結果の目視評価による、スパイクされた緩衝液中、または、スパイクされた複数のセラミックタイルを拭き取るために使用された複数の綿球から抽出された、様々な量のドキソルビシンの検出を示すグラフである。

【0219】

ドキソルビシンアッセイは、視覚的に０．０５−０．１ｎｇ／ｃｍ^２を検出した。

【0220】

本明細書において述べられたあらゆる特許または出版物は、あたかも、それぞれ個別の出版物が参照により組み込まれるべきことが具体的に且つ個別に示されているのと同じ程度に、参照により本明細書に組み込まれる。

【0221】

ここに記載される複数の装置、キット、および方法は、現在の代表的な好ましい実施形態で、例示的なものであり、発明の範囲に対する限定として意図されるものではない。この分野の当業者には、これらにおける変更およびその他の使用が思い浮かぶであろう。請求項に説明される発明の範囲から逸脱することなく、そのような変更およびその他の使用が成されることができる。
［項目１］
セラミック、ビニール、複合物、ステンレス鋼及びガラスからなるグループから選択される硬い表面の抗腫瘍薬汚染を検出する方法であって、
抗腫瘍薬と相溶性があり、分析されるべき硬い表面からの抗腫瘍薬の放出を促進するように処方された０．０１−１０％ｖ／ｖの非イオン性界面活性剤を含む湿潤性溶液を提供する段階と、
抗腫瘍薬の可逆的吸収のための固体マトリクスを提供する段階と、
固体マトリクスを湿潤性溶液と接触させ、分析試料マトリクスを生成する段階と、
分析試料マトリクスと表面とを接触させ、表面サンプルを生成する段階と、
表面サンプルを一定量の湿潤性溶液に接触させて、流体試験サンプルを生成する段階と、
分析結果を生成するために、ラテラルフローアッセイによって流体試験サンプル中の抗腫瘍薬を分析する段階と、
分析結果を検出することにより、表面の抗腫瘍薬汚染を検出する段階と、
を備え、
ラテラルフローアッセイは、
ラベルされた抗−抗腫瘍薬抗体と、
検出試薬と、
抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合するコントロール試薬と、
を有する、
方法。
［項目２］
分析結果を基準と比較する段階をさらに備える、項目１に記載の方法。
［項目３］
抗腫瘍薬は、ドキソルビシン、パクリタキセル、および５−フルオロウラシルから成る群から選択される、項目１または項目２に記載の方法。
［項目４］
ラテラルフローアッセイは、コンジュゲートパッド、コンジュゲートパッドに隣接する固体または半固体の多孔質支持体、支持体に存在する試験領域、および支持体に存在するコントロール領域を有するラテラルフローアッセイ装置を提供する段階を備え、
ラベルされた抗−抗腫瘍薬抗体は、コンジュゲートパッドに拡散可能に結合され、
検出試薬は、試験領域に非拡散可能に結合され、
コントロール試薬は、コントロール領域に非拡散可能に結合され、
固体または半固体の多孔質支持体は、コンジュゲートパッドおよび固体または半固体の多孔質支持体を含む流路に沿った流体試験サンプルの毛細管流動を促進するウィッキングパッドに隣接する、項目１から項目３のいずれか１項に記載の方法。
［項目５］
抗−抗腫瘍薬抗体は、抗−５−フルオロウラシル抗体、抗−パクリタキセル抗体、および抗ドキソルビシン抗体から成る群から選択される、項目４に記載の方法。
［項目６］
ラテラルフローアッセイは、競合的アッセイであり、検出試薬は、抗腫瘍薬を含む、項目４または項目５に記載の方法。
［項目７］
コントロール試薬は抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合する抗体である、項目４から項目６のいずれか１項に記載の方法。
［項目８］
ラテラルフローアッセイ装置は、コンジュゲートパッド、固体または半固体の多孔質支持体、および、ウィッキングパッドのうちの少なくとも１つを少なくとも部分的に包囲する筐体をさらに有する、項目４から項目７のいずれか１項に記載の方法。
［項目９］
分析結果を検出する段階は目視観測を含む、項目１から項目８のいずれか１項に記載の方法。
［項目１０］
分析結果を検出する段階は電子読取器の操作を含む、項目１から項目８のいずれか１項に記載の方法。
［項目１１］
湿潤性溶液は、生物学的に適合する緩衝剤、および、０．０１−１０％ｖ／ｖの有機溶媒の少なくとも１つをさらに有する、項目１から項目１０のいずれか１項に記載の方法。
［項目１２］
有機溶媒は有機極性プロトン性溶媒である、項目１１に記載の方法。
［項目１３］
コンジュゲートパッド、コンジュゲートパッドに隣接する固体または半固体の多孔質支持体、支持体に存在する試験領域、および支持体に存在するコントロール領域を備え、
コンジュゲートパッドは、拡散可能に結合され検出可能にラベルされた抗腫瘍薬結合剤を有し、
試験領域は、非拡散可能に結合された検出試薬を有し、
コントロール領域は、非拡散可能に結合されたコントロール試薬を有し、
固体または半固体の多孔質支持体は、コンジュゲートパッドおよび固体または半固体の多孔質支持体を含む流路に沿った流体サンプルの毛細管流動を促進するウィッキングパッドに隣接し、
抗腫瘍薬結合剤は、抗−抗腫瘍薬抗体であり、
コントロール試薬は、抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合し、抗腫瘍薬を含むことが疑われる、０．０１−１０％ｖ／ｖの非イオン性界面活性剤を含む湿潤性溶液を有する流体サンプルを備え、
セラミック、ビニール、複合物、ステンレス鋼及びガラスからなるグループから選択される硬い表面上で、抗腫瘍薬を検出するためのラテラルフローアッセイ装置。
［項目１４］
抗−抗腫瘍薬抗体は、抗−５−フルオロウラシル抗体、抗−パクリタキセル抗体、および抗ドキソルビシン抗体から成る群から選択される、項目１３に記載のラテラルフローアッセイ装置。
［項目１５］
ラテラルフローアッセイは、競合的アッセイであり、検出試薬は、抗腫瘍薬を含む、項目１３または項目１４に記載のラテラルフローアッセイ装置。
［項目１６］
コントロール試薬は抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合する抗体である、項目１３から項目１５のいずれか１項に記載のラテラルフローアッセイ装置。
［項目１７］
コンジュゲートパッド、固体または半固体の多孔質支持体、および、ウィッキングパッドのうちの少なくとも１つを少なくとも部分的に包囲する筐体をさらに備える、項目１３から項目１６のいずれか１項に記載のラテラルフローアッセイ装置。
［項目１８］
セラミック、ビニール、複合物、ステンレス鋼及びガラスからなるグループから選択される硬い表面の抗腫瘍薬汚染を検出するキットであって、
抗腫瘍薬と相溶性があり、分析されるべき硬い表面からの抗腫瘍薬の放出を促進するように処方された０．０１−１０％ｖ／ｖの非イオン性界面活性剤を含む湿潤性溶液と、
抗腫瘍薬の可逆的吸収のための固体マトリクスと、
ラベルされた抗腫瘍薬結合剤、検出試薬、および、コントロール試薬を有するラテラルフローアッセイ装置と、
を備え、
抗腫瘍薬結合剤は抗−抗腫瘍薬抗体であり、コントロール試薬は抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合する、
キット。
［項目１９］
ラテラルフローアッセイ装置は、コンジュゲートパッド、コンジュゲートパッドに隣接する固体または半固体の多孔質支持体、支持体に存在する試験領域、および支持体に存在するコントロール領域を有し、
ラベルされた抗−抗腫瘍薬抗体は、コンジュゲートパッドに拡散可能に結合され、
検出試薬は、試験領域に非拡散可能に結合され、
コントロール試薬は、コントロール領域に非拡散可能に結合され、
固体または半固体の多孔質支持体は、コンジュゲートパッドおよび固体または半固体の多孔質支持体を含む流路に沿った流体試験サンプルの毛細管流動を促進するウィッキングパッドに隣接する、項目１８に記載のキット。
［項目２０］
抗−抗腫瘍薬抗体は、抗−５−フルオロウラシル抗体、抗−パクリタキセル抗体、および抗ドキソルビシン抗体から成る群から選択される、項目１８または項目１９に記載のキット。
［項目２１］
ラテラルフローアッセイは、競合的アッセイであり、検出試薬は、抗腫瘍薬を含む、項目１８から項目２０のいずれか１項に記載のキット。
［項目２２］
コントロール試薬は、抗−抗腫瘍薬抗体に特異的に結合する抗体である、項目１８から項目２１のいずれか１項に記載のキット。
［項目２３］
コンジュゲートパッド、固体または半固体の多孔質支持体、および、ウィッキングパッドのうちの少なくとも１つを少なくとも部分的に包囲する筐体をさらに備える、項目１９から項目２２のいずれか１項に記載のキット。
［項目２４］
湿潤性溶液は、生物学的に適合する緩衝剤、および、０．０１−１０％ｖ／ｖの有機溶媒の少なくとも１つをさらに有する、項目１８から項目２３のいずれか１項に記載のキット。
［項目２５］
有機溶媒は有機極性プロトン性溶媒である、項目２４に記載のキット。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図4A】

【図4B】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図6A】

【図6B】

【図6C】