特許 6703997 カチオン性ヒドロキシエチルセルロースを含有する組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6703997

(24)【登録日】2020年5月13日

(45)【発行日】2020年6月3日

(54)【発明の名称】カチオン性ヒドロキシエチルセルロースを含有する組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 47/38 20060101AFI20200525BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20200525BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20200525BHJP

【ＦＩ】

   A61K47/38

   A61K9/08

   A61K45/00

【請求項の数】8

【全頁数】16

(21)【出願番号】特願2017-550256(P2017-550256)

(86)(22)【出願日】2016年3月28日

(65)【公表番号】特表2018-510169(P2018-510169A)

(43)【公表日】2018年4月12日

(86)【国際出願番号】US2016024491

(87)【国際公開番号】WO2016160688

(87)【国際公開日】20161006

【審査請求日】2019年3月11日

(31)【優先権主張番号】62/142,045

(32)【優先日】2015年4月2日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】502141050

【氏名又は名称】ダウ グローバル テクノロジーズ エルエルシー

(73)【特許権者】

【識別番号】590002035

【氏名又は名称】ローム アンド ハース カンパニー

【氏名又は名称原語表記】ＲＯＨＭ ＡＮＤ ＨＡＡＳ ＣＯＭＰＡＮＹ

(74)【代理人】

【識別番号】110000589

【氏名又は名称】特許業務法人センダ国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ジョシュア・エス・カッツ

(72)【発明者】

【氏名】ユージン・タン

(72)【発明者】

【氏名】エメット・エム・パーティン・サード

(72)【発明者】

【氏名】ディミトリウス・ディールマン

(72)【発明者】

【氏名】スーザン・エル・ジョーダン

(72)【発明者】

【氏名】ジェイミー・エル・カーティス−フィスク

(72)【発明者】

【氏名】ライアン・ジェイ・デュプイ

【審査官】 菊池 美香

(56)【参考文献】

【文献】 特表平０９−５０３７６３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００３−５１３８９７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開昭６１−１８１８０１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００６−５２６０２９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１０−５０４９９２（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ４７／３８

Ａ６１Ｋ ９／０８

Ａ６１Ｋ ４５／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ａ）水中に溶解されるカチオン性ポリマーであって、ヒドロキシエチルセルロースポリマー骨格に共有結合している疎水性第４級アンモニウム基を含み、非疎水性第４級アンモニウム基が前記カチオン性ポリマー中に存在する場合に、前記非疎水性第４級アンモニウム基の前記疎水性第４級アンモニウム基に対するモル比が０：１〜０．１：１であるカチオン性ポリマーと、
（ｂ）１つ以上の生理活性薬剤と、
を含む、鼻腔内の粘膜面に投与するための水溶液。

【請求項2】

前記カチオン性ポリマーが非疎水性第４級アンモニウム基を有しない、請求項１に記載の水溶液。

【請求項3】

前記カチオン性ポリマーの量は、前記水溶液の重量に基づいて０．０１重量％〜１０重量％である、請求項１または２に記載の水溶液。

【請求項4】

前記カチオン性ポリマーは、構造ＩＩの繰り返し単位を有し、

【化1】

式中、ｎは、１０以上であり、−Ｒ^ａ、−Ｒ^ｂ、及び−Ｒ^ｃは、それぞれがＨまたは−［ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ］_ｘ−Ｒ^１であり、各ｘは、０、１、２、３、または４から選択され、Ｒ^１は、Ｈまたは構造ＩＩＩであり、少なくとも１つの繰り返し単位が構造ＩＩＩを有し、

【化2】

式中、−Ｒ^ｄ−は、２価の有機基であり、−Ｒ^ｅは、水素原子またはヒドロキシル（ＯＨ）基のいずれかであり、−Ｒ^２及び−Ｒ^３は、それぞれが３個以下の炭素原子を有するアルキル基であり、Ｒ^４は、１０個以上の炭素原子を有するアルキル基であり、Ｘは、ｖの価数のアニオンである、請求項１または２に記載の水溶液。

【請求項5】

（ａ）水中に溶解されるカチオン性ポリマーであって、ヒドロキシエチルセルロースポリマー骨格に共有結合している疎水性第４級アンモニウム基を含み、構造ＩＩの繰り返し単位のみからなり、

【化3】

式中、ｎは、１０以上であり、−Ｒ^ａ、−Ｒ^ｂ、及び−Ｒ^ｃは、それぞれがＨまたは−［ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ］_ｘ−Ｒ^１であり、各ｘは、０、１、２、３、または４から選択され、Ｒ^１は、Ｈまたは構造ＩＩＩであり、少なくとも１つの繰り返し単位が構造ＩＩＩを有し、

【化4】

式中、−Ｒ^ｄ−は、２価の有機基であり、−Ｒ^ｅは、水素原子またはヒドロキシル（ＯＨ）基のいずれかであり、−Ｒ^２及び−Ｒ^３は、それぞれ３個以下の炭素原子を有するアルキル基であり、−Ｒ^４は、１０個以上の炭素原子を有するアルキル基であり、Ｘはｖの価数のアニオンである、カチオン性ポリマーと、
（ｂ）１つ以上の生理活性薬剤と、
を含む、鼻腔内の粘膜面に投与するための水溶液。

【請求項6】

前記カチオン性ポリマーの量が、前記水溶液の重量に基づいて０．０１重量％〜１０重量％である、請求項５に記載の水溶液。

【請求項7】

−Ｒ^ｄ−は、−ＣＨ_２−であり、−Ｒ^ｅ−は、−ＯＨであり、−Ｒ^２及び−Ｒ^３は、それぞれがメチルであり、−Ｒ^４は、１２個以上の炭素原子を有するアルキル基である、請求項４〜６のいずれか１項に記載の水溶液。

【請求項8】

薬物を鼻腔内の粘膜面に送達する薬剤を製造するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の水溶液の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

粘膜面は、外部の雰囲気に曝されている空洞を含む、生体における様々な空洞を覆う。粘膜面は、化合物の体内への吸収に関与する。その結果として、生理活性薬剤を体内に導入する有用な方法は、生理活性薬剤を含有する組成物を粘膜面に適用することである。そのような組成物を粘膜面に適用するとき、組成物が比較的長時間、粘膜面上に滞留することが望ましい。また、組成物は、生理活性薬剤が生体の組織及び／または血流に入ることができるように、生理活性薬剤が容易に粘膜面に透過することを可能にすることが望ましい。しばしば、生理活性薬剤を含有する組成物は、また、「賦形剤」と称される１つ以上の追加の化合物を含有する。賦形剤は、組成物の滞留時間を改善し、及び／または生理活性薬剤の粘膜面への透過を改善することが望ましい。生理活性薬剤の導入のための、人体における重要な粘膜面は、鼻腔内の粘膜面である。

【0002】

ＵＳ３，４７２，８４０は、ある特定のカチオン性多糖ポリマーを記載している。ＵＳ３，４７２，８４０によって記載されているカチオン性多糖ポリマーと比較して、粘膜面への改善された透過を提供するカチオン性多糖ポリマーを提供することが望まれる。これまで、キトサンが賦形剤として使用されている。キトサンは、天然産物に由来し、そのため、質及び特質のばらつきを被り、また、キトサンの有用性は、キトサンが、ある望ましいｐＨ値で可溶性ではないため、望ましくなく制限される。賦形剤としてよく機能し、望ましい広範囲のｐＨ値にわたって可溶性である合成ポリマーを提供することが望まれる。

【0003】

以下は、本発明を記述したものである。

【0004】

本発明の第１の態様は、水中に溶解されたカチオン性ポリマーを含む水溶液であり、該カチオン性ポリマーは、ヒドロキシエチルセルロースポリマー骨格に共有結合している疎水性第４級アンモニウム基を含む。

【0005】

本発明の第２の態様は、薬物を生体の粘膜面に送達する方法であり、該方法は、第１の態様の水溶液を該粘膜面に適用することを含み、第１の態様の該水溶液は、該薬物を含む。

【0006】

以下は、本発明の詳述である。

【0007】

本明細書で使用される場合、以下の用語は、文脈が明確に示さない限り、指定された定義を有する。

【0008】

粘膜面は、動物及びヒトの生体に見られる。粘膜面は、上皮を含有し、それは、粘膜を生成し、分泌する。粘膜面の例は、鼻腔、口、眼、耳、膣、食道、胃、腸、及び体の他の部分で見られる。

【0009】

化合物は、本明細書において、正電荷を持つ原子または化学基が化合物に共有結合している場合、カチオン性であるとみなされる。カチオン性官能基は、正電荷を持つ原子または化学基である。カチオン性官能基は、４〜１１の範囲を含む範囲にわたるすべてのｐＨ値で正電荷を持つ。

【0010】

ポリマーの量は、本明細書において、その量のポリマー及び水の混合物が、２５℃で均質であり、２５℃でポリマーの水からの相分離を示さない組成物を形成する場合、水中に溶解されるとみなされる。

【0011】

本明細書で使用される場合、薬物は、個体、典型的に哺乳類、特にヒト個体に投与されたとき、有益な予防的及び／または治療特性を有する化合物である。

【0012】

本明細書で使用される場合、疎水性基は、８個以上の炭素原子の基を含有する化学基であり、これらの炭素原子は、直鎖状、環状、分枝状、またはそれらの組み合わせである様式で互いに結合し、疎水性基中の原子のみが、炭素及び水素である。

【0013】

本明細書で使用される場合、疎水性第４級アンモニウム基は、構造Ｉを有する化学基であり、

【0014】

【化1】

【0015】

式中、−Ｒ^２及び−Ｒ^３は、それぞれが１つ以上の炭素原子を含有する置換または非置換炭化水素基であり、−Ｒ^４は、１つ以上の疎水性基を含有する。非疎水性第４級アンモニウム基は、構造Ｉを有する化学基であり、ここで−Ｒ^２、−Ｒ^３、及び−Ｒ^４のいずれも疎水性基を有しない。

【0016】

本発明は、ヒドロキシエチルセルロースポリマー骨格に結合しているカチオン性官能基を含有するカチオン性ポリマーに関する。すなわち、カチオン性ポリマーは、ヒドロキシエチルセルロースポリマー（「骨格」ポリマー）の分子が、ヒドロキシエチルセルロースポリマー上のヒドロキシル基のうちの１つ以上をカチオン性官能基と置換するための１つ以上の化学反応に供される場合に生じる構造を有する。カチオン性ポリマーを作製する方法にかかわらず、カチオン性ポリマーは、骨格ポリマーの特性によって特徴付けられることができる。

【0017】

ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）ポリマーは、構造ＩＩの繰り返し単位を有する。

【0018】

【化2】

【0019】

構造ＩＩでは、繰り返し単位が括弧内に示されている。重合度（ｎ）は、１０以上であり、構造ＩＩはポリマーであるほど十分に大きく、すなわち、ｎが十分に大きい場合、ＨＥＣの２％標準溶液粘度（以下に定義される通り）は、１０ｍＰａ＊ｓ以上である。−Ｒ^ａ、−Ｒ^ｂ、及び−Ｒ^ｃは、それぞれが−［ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ］_ｘ−Ｈであり、各ｘは、０、１、２、３、または４から選択される。−Ｒ^ａ、−Ｒ^ｂ、及び−Ｒ^ｃの選択は、各繰り返し単位において同じであり得るか、または異なる繰り返し単位は、−Ｒ^ａ、−Ｒ^ｂ、及び−Ｒ^ｃの異なる選択を有し得る。１つ以上の繰り返し単位が、−Ｒ^ａ、−Ｒ^ｂ、及び−Ｒ^ｃのうちの１つ以上を有し、ここでｘは、１〜４である。

【0020】

本発明のカチオン性ポリマーは、構造ＩＩの繰り返し単位を有し、ここで−Ｒ^ａ、−Ｒ^ｂ、及び−Ｒ^ｃのうちの１つ以上が、構造−［ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ］_ｘ−Ｒ^１を有し、Ｒ^１は、構造ＩＩＩを有し、

【0021】

【化3】

【0022】

式中、−Ｒ^ｄ−は、２価の有機基であり、−Ｒ^ｅは、水素原子またはヒドロキシル基のいずれかである。好ましくは、−Ｒ^ｄ−は、０〜８個の炭素原子、より好ましくは１〜２個の炭素原子、より好ましくは１個の炭素原子を有する炭化水素基である。好ましくは、−Ｒ^ｅは、ヒドロキシル基である。−Ｒ^２、−Ｒ^３、及び−Ｒ^４は、それぞれが独立して、置換または非置換炭化水素基である。好ましくは、−Ｒ^２及び−Ｒ^３は、非置換炭化水素基であり、より好ましくは、−Ｒ^２及び−Ｒ^３は、アルキル基である。好ましくは、−Ｒ^２及び−Ｒ^３は、それぞれが独立して、３個以下の炭素原子を有するアルキル基、より好ましくは２個以下の炭素原子を有するアルキル基、より好ましくはメチル基である。−Ｒ^４は、疎水性基を含有する化学基である。好ましくは、−Ｒ^４は、アルキル基である。好ましくは、−Ｒ^４は、１０個以上の炭素原子、より好ましくは、１２個以上の炭素原子を有する。好ましくは、−Ｒ^４は、１８個以下の炭素原子、より好ましくは１６個以下の炭素原子、より好ましくは１４個以下の炭素原子、より好ましくは１２個以下の炭素原子を有する。好ましくは、１つ以上の−Ｒ^ｂまたは−Ｒ^ｃ基が構造ＩＩを有する。Ｘ^−ｖは、ｖの価数のアニオンである。ｖが１より大きい場合、構造ＩＩＩのｖ基は、ｖの価数の各アニオンと関連するということが意図される。好ましいアニオンは、ハロゲン化物イオンであり、より好ましくは塩化物イオンである。

【0023】

好ましくは、本発明のカチオン性ポリマーは、非疎水性第４級アンモニウム基を有しないか、あるいは、たとえ非疎水性第４級アンモニウム基が存在するとしても、非疎水性第４級アンモニウム基は極めて少ないか、のいずれかである。特に、非疎水性第４級アンモニウム基の疎水性第４級アンモニウム基に対するモル比は、０：１〜０．１：１、より好ましくは０：１〜０．０１：１、より好ましくは０：１であることが好ましい。

【0024】

本発明のカチオン性ポリマーは、２５℃の水中でのカチオン性ポリマーの１重量％または２重量％のいずれかの溶液の粘度によって特徴付けられ得る。その粘度は、ステンレス製の円錐平板センサー（直径６０ｍｍ及び０．５°の円錐角）または同心円筒カップとボブセンサーのいずれかを備えるＴＡ ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓのＤＨＲ−３レオメータを使用して、２５．０℃及び６．３１秒^−１のせん断速度で測定される。２％溶液の粘度が１８，０００ｍＰａ＊ｓより大きい場合、水中でのカチオン性ポリマーの１重量％の溶液が作製され、２５℃で同じ方法によって試験される。この粘度試験の結果は、「標準溶液粘度」として本明細書に報告される。

【0025】

好ましくは、２重量％溶液中の本発明のカチオン性ポリマーの標準溶液粘度は、５０ｍＰａ＊ｓ以上、より好ましくは１００ｍＰａ＊ｓ以上である。好ましくは、１重量％溶液中の本発明のカチオン性ポリマーの標準溶液粘度は、３０，０００ｍＰａ＊ｓ以下である。好ましくは、２重量％溶液中の本発明のカチオン性ポリマーの標準溶液粘度は、１８，０００ｍＰａ＊ｓ以下、より好ましくは１０，０００ｍＰａ＊ｓ以下である。

【0026】

本発明のカチオン性ポリマーは、重量平均分子量（Ｍｗ）によって特徴付けられてもよく、それは、ゲル浸透クロマトグラフィーによって測定される。好ましくは、Ｍｗは、５０，０００以上、より好ましくは１００，０００以上、より好ましくは２００，０００以上である。好ましくは、Ｍｗは、１，０００，０００以下、より好ましくは５００，０００以下である。

【0027】

本発明のカチオン性ポリマーは、カチオン置換度（ＣＤＳ）によって特徴付けられてもよく、それは、構造ＩＩＩを有する繰り返し無水グルコース単位の、総繰り返し無水グルコース単位に対するモル比として定義される。ＣＤＳは、測定され、ケルダール窒素分析から計算される。好ましくは、カチオン置換度は、０．０１以上、より好ましくは０．０２以上、より好ましくは０．０５以上である。

【0028】

カチオン性ポリマーを作製する好ましい方法は、ヒドロキシエチルセルロースポリマーを、構造ＩＶ、Ｖ、またはＶＩの化合物と反応させることであり、

【0029】

【化4】

【0030】

【化5】

【0031】

【化6】

【0032】

式中、Ｒ^ｄ、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｘ、及びｖは、上記に定義される。

【0033】

本発明は、水中で溶解されるカチオン性ポリマーを含有する水溶液に関する。好ましくは、溶液中の水の量は、溶液中の揮発性成分の総重量に基づいて、５０重量％以上、より好ましくは７５重量％以上、より好ましくは９０重量％以上である。

【0034】

溶液中のカチオン性ポリマーの量は、好ましくは、溶液中の重量に基づいて、０．０１重量％以上、より好ましくは０．１重量％以上である。溶液中のポリマーの量は、好ましくは、溶液の重量に基づいて、１０重量％以下、５重量％以下、より好ましくは、２重量％以下、より好ましくは１重量％以下である。

【0035】

溶液は、任意で、例えば、界面活性剤、増粘剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、及びそれらの混合物等の追加の成分を含有する。

【0036】

好ましくは、水溶液は、無機塩類を含有する緩衝液である。１つの好ましい緩衝液は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）であり、それは、塩化ナトリウム、及びリン含有アニオンのナトリウム塩、ならびに任意で、塩化カリウム、及びリン含有アニオンのカリウム塩も含有する。

【0037】

水溶液は、液体、ゲル、ローション、クリーム、または別の形態であってもよい。好ましいのは、液体である。好ましくは、溶液の粘度は、２５℃、１０秒^−１で円錐平板を使用する安定したせん断粘度測定によって測定される場合、１，０００ｍＰａ−ｓ以下、より好ましくは３００ｍＰａ−ｓ以下、より好ましくは１００ｍＰａ−ｓ以下、より好ましくは３０ｍＰａ−ｓ以下、より好ましくは１０ｍＰａ−ｓ以下である。

【0038】

好ましい粘膜面は、鼻腔、口、眼、耳、膣、食道、胃、腸、及びそれらの組み合わせの粘膜面であり、より好ましくは、鼻腔の粘膜面である。

【0039】

好ましくは、本発明の組成物は、１つ以上の生理活性薬剤、好ましくは、以下から選択される１つ以上の生理活性薬剤を含有する。１つ以上の薬物、１つ以上の診断用薬剤、または１つ以上の精油、または美容もしくは栄養に関する目的で有用な１つ以上の生理活性薬剤。好ましい生理活性薬剤は、薬物である。好ましい薬物は、治療上有用である濃度で、１５℃〜４０℃の水に可溶性または分散性である。効果的な賦形剤が存在しない場合、粘膜面を通る体への、望ましくないほど低い吸収能を有する好ましい薬物。

【0040】

鼻腔内からの送達に有用な生理活性薬剤は、当技術分野で既知である。いくつかの生理活性薬剤及び鼻腔内からの送達のいくつかの方法は、ＷＯ２０１５／００９７９９に記載される。

【0041】

本発明の組成物は、アレルギー性の鼻炎、鼻閉、及び感染症に対する療法に、糖尿病、片頭痛、嘔気、禁煙、急性疼痛の緩和、夜尿症、骨粗しょう症、ビタミンＢ１２欠乏症の治療に使用される薬物等、１つ以上の生理活性薬剤の鼻腔内からの送達、または鼻腔内にある粘膜を通る送達、及び例えば、インフルエンザワクチン等の鼻腔内ワクチンを投与するために特に有益であるが、しかしながら、生理活性薬剤は、これらの例に限定されない。特に好ましい薬物は、アセトアミノフェン、塩酸アゼラスチン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン一水和物、コハク酸スマトリプタン（ＳＳ）、メシル酸ジヒドロエルゴタミン、プロピオン酸フルチカゾン、トリアムシノロンアセトニド、ブデソニド、クエン酸フェンタニル、酒石酸ブトルファノール、ゾルミトリプタン、酢酸デスモプレシン水和物、サケカルシトニン、酢酸ナファレリン、酢酸ブセレリン、エルカトニン、オキシトシン、インスリン、フロン酸モメタゾン、エストラジオール、メトクロプラミド、塩酸キシロメタゾリン、臭化イプラトロピウム水和物、塩酸オロパタジン、塩酸オキシメタゾリン、デクスパンテノール、ヒドロコルチゾン、塩酸ナファゾリン、塩酸フェニレフリン、マレイン酸メピラミン、塩酸フェニレフリン、クロモグリク酸ナトリウム、レボカバスチン塩酸塩、ビタミンＢ１２、メタスルホ安息香酸プレドニゾロンナトリウム、硝酸ナファゾリン、塩酸テトラヒドロゾリン、マレイン酸クロルフェニラミン、塩化ベンゼトニウム、フマル酸ケトチフェン、ヒスタミン二塩酸塩、フサファンギン、またはこれらの組み合わせである。精油の例は、メントール、サリチル酸メチル、チモール、ユーカリ油、ショウノウ、アニス、スイートオレンジ、またはそれらの組み合わせである。

【0042】

以下は、本発明の実施例である。「Ｃ」で始まる実施例の番号は、比較例を示す。

【0043】

以下の比較ポリマーを試験した。

【0044】

［表］

【0045】

以下の略称が使用される。

【0046】

［表］

【0047】

以下の実施例ポリマーを使用した。各実施例ポリマーは、上記の構造ＩＩによって説明され、−Ｒ^ａ及び−Ｒ^ｂは、−Ｈであり、−Ｒ^ｃは、−［ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ］_ｘ−Ｒ^１であり、いくつかの繰り返し単位は、ｘ＝１または２を有し、−Ｒ^１は、上記の構造ＩＩＩを有し、−Ｒ^ｄは、−ＣＨ_２−であり、−Ｒ^２及び−Ｒ^３は、メチルであり、−Ｒ^４は、アルキル疎水性基である。実施例ポリマーは、以下の通りであった。

【0048】

【表1】

【0049】

ＥｐｉＡｉｒｗａｙ（商標）組織モデル、０．２％ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ−１００界面活性剤、及び３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−臭化ジフェニルテトラゾリウムブロマイド（ＭＴＴ）アッセイをＭａｔＴｅｋ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから得た。組織（２４個）を受け取った後、それらを寒天培地から取り出し、０．９ｍＬの新しいアッセイ培地を含有する清潔な６ウェルプレートに移動し、製品情報に準じた無菌環境で一晩（１８時間）培養した。アッセイ培地は、基本培地（ダルベッコ改変イーグル培地）、成長因子／ホルモン（上皮成長因子、インスリン、ヒドロコルチゾン、及び他の表皮分化の刺激剤）、抗生物質（ゲンタマイシン、５μｇ／ｍＬ）、及び抗真菌薬（アンフォテリシンＢ、０．２５μｇ／ｍＬ）で構成した。

【0050】

組織をインキュベーター（３７℃、５％ＣＯ_２）から取り出し、培地交換のために調製した。培地交換は、インキュベーターに戻す前にすべての組織に対して行った。１〜２時間の追加の培養後、１２個の組織をインキュベーターから取り出し、培地を廃棄し、組織をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（Ｄｕｌｂｅｃｃｏから）ですすぎ、ＡＰＩの透過の時間依存試験のために使用する前にＴＥＥＲに対して試験した。ＴＥＥＲ測定は、Ｗｏｒｌｄ Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ＣｏｍｐａｎｙからのＥＶＯＭ^２（商標）抵抗計に連結されたＥｎｄｏｈｍチャンバーを使用して行った。簡潔に、各組織をＥｎｄｏｈｍチャンバー内に配置し、電極が付いたカップで覆い、抵抗計上に示される表示数値を記録した。ＴＥＥＲに続き、組織を、各ウェルに２５０μＬの新しい培地を含有する予めラベルが付いている清潔な２４ウェルプレートに移動させた（完全な透過試験を可能にするため、１つのプレートにつき４または６個の組織）。残り１２個の組織は、次の日のさらなる透過試験に使用するため、追加の２４時間の培養のためにインキュベーターに残した。

【0051】

ドナー溶液を、使用する１６〜２０時間前に調製した。ドナー溶液は、以下の方法で調製した。既定の濃度／量の賦形剤（界面活性剤またはポリマー）を、５０ｍＬの円錐管に分析的に量り、適切な量のＰＢＳで希釈し、室温（約２３℃）で約４時間ロッキング撹拌器上に配置し、水和させた。水和後、ドナー溶液を、ＭｉｌｌｏｐｏｒｅからのＳｔｅｒｉｆｌｉｐ（登録商標）フィルターユニットを使用して無菌濾過し、使用するまで４℃で保管した。

【0052】

５０ｍｇ／ｍＬのＳＳを使用した比較例１を除き、すべてのドナー溶液は、２ｍｇ／ｍＬのＳＳを有した。

【0053】

透過試験は、以下の方法で実行した。ドナー溶液（１００μＬ）を、それらのそれぞれの組織の頂端表面上に注意深くピペットで取り、５分間、３７℃、５％ＣＯ_２で培養した（５分の時点）。培養後、各組織を、新しい培地を有する新しいウェルに移動させた。前のウェルからのレシーバー溶液を収集し、ドライアイス上にある予めラベルが付いているＷａｔｅｒｓトータルリカバリーＬＣ／ＧＣバイアルに配置した。組織を、その後、追加の１０分の培養期間のためにインキュベーターに戻した（１５分の時点）。培養後、組織の次のウェルへの移動、透過したレシーバー溶液の収集、及び培養の工程を、２４０分までのさらなる時点に対して繰り返した。２４０分の実験期間に続き、組織の頂端表面上の残りのドナー溶液を収集し、ドライアイス上に配置し、組織をＰＢＳですすぎ、最終ＴＥＥＲ測定を行った。

【0054】

最終ＴＥＥＲ測定に続き、ＭＴＴアッセイを使用して組織のパーセント生存率を測定した。このキットを使用して、５７０ｎｍでホルマザンの光学密度を測定することによって、細胞により生成されるニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）の量を間接的に測定した。ＮＡＤＰＨの量及び細胞生存率の正相関が知られている。ＰＢＳ緩衝液のみで処理された細胞を１００％に設定し、それをすべての他のサンプルの正規化に使用した。報告された結果（「生存率％」）は、同じ光路長で、サンプルに対する５７０ｎｍでの光学密度を、ＰＢＳ緩衝液のみのサンプルに対する５７０ｎｍでの光学密度で割ることによって得られた割合である。

【0055】

ドナー及びレシーバー溶液サンプルを、−８０℃の保管庫から取り出し、氷上で解凍し、コハク酸スマトリプタンに対して開発されたＨＰＬＣ法を使用して分析した。Ａｇｉｌｅｎｔ１１００シリアルバイナリ勾配液体クロマトグラフシステムを使用した。詳細は以下の通りである。

【0056】

［表］

【0057】

様々な時間で収集された溶液から、効果的な透過係数（Ｐｅｆｆ）を、
Ｐｅｆｆ＝（ＴＳＳ）／［（ＭＡ）＊（ＤＣ）＊（ＰＴ）］
によって計算した。
ＴＳＳ＝透過におけるＳＳの総量（ｍｇの単位）
ＭＡ＝膜面積（０．６ｃｍ^２と等しい）
ＤＣ＝ドナー濃度（ｍｇ／ｃｍ^３の単位）
ＰＴ＝透過時間（１４４００秒と等しい）

【0058】

比較例１：溶液中の様々な比較カチオン性ポリマーを伴う、ＰＢＳ緩衝液中のコハク酸スマトリプタン（ＳＳ）の透過。結果は以下の通りである。

【0059】

【表2】

【0060】

試験した合成ポリマーのすべて（比較例Ｃ１〜Ｃ６）が、キトサン（比較例Ｃ７）よりはるかに劣る能力を示した。

【0061】

実施例２：２つの異なる組織サンプルに対して実施例ポリマーＰ７を使用したＳＳの透過。透過試験は、比較例１の通りに行った。結果は以下の通りである。

【0062】

【表3】

【0063】

実施例ポリマーＰ７は、比較ポリマーの比較１、比較２、及び比較３よりはるかに良い性能を示した。また、Ｐ７は、キトサンと同程度の性能を示した。

【0064】

実施例３：ＴＥＥＲ試験
ＴＥＥＲ試験は、上記の実施例２に報告されるサンプルに対して行った。抵抗は、透過前の初期値から透過試験の最後の最終値へ落下し、より大きい落下は、より高い透過性を示す。結果は以下の通りである。

【0065】

【表4】

【0066】

Ｐ７及びキトサンは、緩衝液のみよりはるかに大きい抵抗の落下（したがって、透過を援助するより大きい傾向）を示す。

【0067】

実施例４：組織生存率試験
上述のように透過試験を行った後、組織に上述の通りに生存試験を行った。サンプルは、ＳＳを含有した。１つのサンプルは、０．２重量％のレベルでＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００界面活性剤を有した。結果は以下の通りである。：

【0068】

【表5】

【0069】

界面活性剤を有するサンプルは、低い生存率を有した。界面活性剤は、透過を高めるが、細胞生存率の低下を引き起こす可能性があると考えられる。Ｐ７を有するサンプルは、良好な透過性（前の実施例において上記で実証した通り）及び良好な生存率を示した。

【0070】

実施例５：ＴＥＥＲ法による膜の回復
サンプルは、また、ＴＥＥＲ法での回復に対して試験した。サンプルは、２ｍｇ／ＬのＳＳを有した。結果は以下の通りである。

【0071】

【表6】

【0072】

実施例５では、ポリマーＰ７を有する実施例５−１４のみが、（１）４時間の透過でのＴＥＥＲの落下（良好な透過性を実証する）及び２４時間後のＴＥＥＲの良好な回復（膜が永久的な損傷を残さずに治療から回復することを実証する）の両方を示す。

【0073】

実施例６：実施例ポリマーＰ７を使用する製剤の透過試験
透過試験は、比較例１の通りに行った。Ｐ７−１及びＰ７−２のラベルが付いた、実施例ポリマーＰ７の２つの異なるバッチを使用した。結果は以下の通りである。

【0074】

【表7】

【0075】

実施例７：様々な実施例ポリマーの透過試験。さらなる透過試験を比較例１の通りに実施した。Ｐ７の２つのバッチ、Ｐ７−１及びＰ７−２を使用した。結果は以下の通りである。

【0076】

【表8】

【0077】

【表9】

【0078】

実施例ポリマーＰ１〜Ｐ８のすべてが、ポリマーを有しない対照サンプルに対して、透過性の有意な改善を示す。