特許 6730992 甲虫粉末

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6730992

(24)【登録日】2020年7月7日

(45)【発行日】2020年7月29日

(54)【発明の名称】甲虫粉末

(51)【国際特許分類】

   A23J 3/04 20060101AFI20200716BHJP

   A23L 33/17 20160101ALI20200716BHJP

   A23K 10/20 20160101ALI20200716BHJP

   A23K 20/147 20160101ALI20200716BHJP

   A23K 20/163 20160101ALI20200716BHJP

【ＦＩ】

   A23J3/04

   A23L33/17

   A23K10/20

   A23K20/147

   A23K20/163

【請求項の数】12

【全頁数】23

(21)【出願番号】特願2017-535684(P2017-535684)

(86)(22)【出願日】2015年12月30日

(65)【公表番号】特表2018-506273(P2018-506273A)

(43)【公表日】2018年3月8日

(86)【国際出願番号】FR2015053785

(87)【国際公開番号】WO2016108037

(87)【国際公開日】20160707

【審査請求日】2018年12月5日

(31)【優先権主張番号】1463512

(32)【優先日】2014年12月31日

(33)【優先権主張国】FR

(31)【優先権主張番号】1560012

(32)【優先日】2015年10月20日

(33)【優先権主張国】FR

(73)【特許権者】

【識別番号】517227839

【氏名又は名称】インセクト

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100077517

【弁理士】

【氏名又は名称】石田 敬

(74)【代理人】

【識別番号】100087871

【弁理士】

【氏名又は名称】福本 積

(74)【代理人】

【識別番号】100087413

【弁理士】

【氏名又は名称】古賀 哲次

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100150810

【弁理士】

【氏名又は名称】武居 良太郎

(74)【代理人】

【識別番号】100182730

【弁理士】

【氏名又は名称】大島 浩明

(72)【発明者】

【氏名】バンジャマン アルメンジョン

(72)【発明者】

【氏名】ナタリー ベレジナ

(72)【発明者】

【氏名】ソフィ ローラン

(72)【発明者】

【氏名】セシリア ソコルスキー

(72)【発明者】

【氏名】ロレーナ サンチェス

(72)【発明者】

【氏名】アントワーヌ ユベール

【審査官】 戸来 幸男

(56)【参考文献】

【文献】 中国特許出願公開第１０１２９２７３７（ＣＮ，Ａ）

【文献】 J. Insect Sci.，２０１４年１０月，vol.14, no.139，pp.1-4

【文献】 Zoo Biol.，２００２年，vol.21, no.3，pp.269-285

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ２３Ｊ ３／０４

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ／ＦＳＴＡ／

ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＰｕｂＭｅｄ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

６７重量％以上のタンパク質、５重量％以上のキチン及び５〜２０重量％の脂肪を含有する甲虫粉末であって、当該重量％が甲虫粉末の全重量に対するものである、甲虫粉末。

【請求項2】

前記甲虫粉末の全重量に対して４重量％以下の灰を含有する、請求項１に記載の甲虫粉末。

【請求項3】

タンパク質成分が８５％以上の消化性を呈する、請求項１〜２のいずれか１項に記載の甲虫粉末。

【請求項4】

残留水分が２〜１５％である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の甲虫粉末。

【請求項5】

タンパク質の全重量に対して４０〜６０重量％の可溶性タンパク質を含有し、その内５０％のサイズが１２，４００ｇ／ｍｏｌ以下である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の甲虫粉末。

【請求項6】

請求項１〜５のいずれか１項に記載の甲虫粉末を製造する方法であって、以下の工程：
ｉ）甲虫を殺す、
ｉｉ）甲虫を圧搾して圧搾塊を得る、及び
ｉｉｉ）圧搾塊を挽き潰す、
を含む、方法。

【請求項7】

前記圧搾塊を乾燥させる工程を含む、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

以下の工程：
ｉ）甲虫を殺す、
ｉｉ）甲虫を圧搾して圧搾塊を得る、
ｉｉｉ）圧搾塊を乾燥させる、及び
ｉｖ）圧搾塊を挽き潰す、
を含み、当該圧搾工程が、甲虫を挽き潰す工程の後に行われる、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

以下の工程：
ｉ）甲虫を殺す、
ｉｉ）甲虫を圧搾して圧搾塊を得る、
ｉｉｉ）圧搾塊を乾燥させる、及び
ｉｖ）圧搾塊を挽き潰す、
を含み、当該圧搾工程が加熱下で行われる、請求項７に記載の方法。

【請求項10】

以下の工程：
ｉ）甲虫を殺す、
ｉｉ）甲虫を圧搾して圧搾塊を得る、
ｉｉｉ）圧搾塊を乾燥させる、及び
ｉｖ）圧搾塊を挽き潰す、
を含み、当該圧搾塊を挽き潰す工程が、粒径が３００μｍ〜１ｍｍとなるように行われる、請求項７に記載の方法。

【請求項11】

ヒト又は動物の栄養補給用の栄養組成物であって、請求項１〜５のいずれか１項に記載の甲虫粉末を含有する、栄養組成物。

【請求項12】

前記甲虫粉末がタンパク質粉を置換するものである、請求項１１に記載の栄養組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、昆虫の粉末に関する。本発明は、この昆虫粉末の製造方法、及びそのヒト又は動物の栄養補給、特に魚類飼料における使用にも関する。

【背景技術】

【0002】

水産業は、食糧産業において最も動的な区分の一つである。魚介類に対する高度な需要は、養殖魚介類向けの餌の価格の顕著な増大をもたらしている。

【0003】

魚類飼料において最も多く使われるのは魚粉である。魚粉は水産飼料の主要なタンパク質源の一つである。魚粉は消化の容易な動物性タンパク質に富む（リシン及びメチオニン型のアミノ酸に富む）。限定的な供給に伴う需要増大はその価格の顕著な増大をもたらし、水産業の持続的成長に対するリスクを生じる。従って、水産飼料のための高品質かつ可能な限り再生可能なタンパク質の代替的供給源に対する高度な需要が存在する。

【0004】

昆虫粉末は、生態学的な足跡を最小限にして大量生産出来る天然の大体タンパク質源を提示する。特に、Ｔｅｎｅｂｒｉｏ ｍｏｌｉｔｏｒ等の特定の甲虫は、集中的な大量生産に適するという利益を有する。

【0005】

しかしながら、魚粉を様々な昆虫粉末に置き換える試験の結果、混合され得ることが判明した。置換が可能である場合、一般にそれは５０％を越えず；この含量を越えた場合、観察された魚の成長に対する有害な効果が有った。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

発明者らは、特定の昆虫粉末が水産飼料における魚粉の置換に有利に用いられ得ることを実証した。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明は、従って、６７重量％以上のタンパク質及び５重量％以上のキチンを含有する甲虫（鞘翅目）粉末であって、当該重量％が甲虫粉末の全重量に対するものである、甲虫粉末に関する。

【0008】

本願の文中で、他の言及が無い限り、表示される数値の範囲は包括的と理解されることを留意されたい。

【0009】

「甲虫粉末」は、甲虫単独又はこれと任意で水から調製された、粒子の形態の組成物を意味する。

【0010】

甲虫粉末の残留水分は２〜１５％、好ましくは５〜１０％、より好ましくは４〜８％である。この含水量は、例えば、ＥＣ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ １５２／２００９ ｏｆ ２７−０１−２００９ （１０３℃／４ｈ）に記載の方法に従い決定され得る。

【0011】

本願全体で、規制、標準又は指示において日付が特定されていない場合、本願出願日に発効している規制、標準又は指示を意味する。

【0012】

甲虫粉末がヒト又は動物の食料として許容される粒径に挽き潰されるとき、後者は「鞘翅目粉」と表記されてもよい。「ヒト又は動物の食料として許容される粒径」は、１００μｍ〜１．５ｍｍ、好ましくは３００μｍ〜１ｍｍ、より好ましくは５００〜８００μｍである。

【0013】

好ましくは、本発明の好ましい甲虫は、ゴミムシダマシ科、コフキコガネ亜科、カツオブシムシ科、テントウムシ科、カミキリムシ科、オサムシ科、タマムシ科、ハナムグリ科、オサゾウムシ科に属するもの、又はそれらの混合物である。

【0014】

より具体的には、それらは以下の甲虫：Ｔｅｎｅｂｒｉｏ ｍｏｌｉｔｏｒ， Ａｌｐｈｉｔｏｂｉｕｓ ｄｉａｐｅｒｉｎｕｓ， Ｚｏｐｈｏｂａｓ ｍｏｒｉｏ， Ｔｅｎｅｂｒｉｏ ｏｂｓｃｕｒｕｓ， Ｔｒｉｂｏｌｉｕｍ ｃａｓｔａｎｅｕｍ及びＲｈｙｎｃｈｏｐｈｏｒｕｓ ｆｅｒｒｕｇｉｎｅｕｓ又はそれらの混合物である。

【0015】

「タンパク質」は、粗タンパク質の量である。粗タンパク質の定量は当業者に公知である。例えばＤｕｍａｓ法やＫｊｅｌｄａｈｌ法が挙げられる。好ましくは、標準ＮＦ ＥＮ ＩＳＯ １６６３４−１ （２００８）に対応するＤｕｍａｓ法が使用される。

【0016】

好ましくは、甲虫粉末は、６８重量％、より好ましくは７０重量％の粗タンパク質を含有し、当該重量パーセンテージは、甲虫粉末の全重量に対する。

【0017】

本発明において、「キチン」は、任意の種類のキチン、即ち、Ｎ−アセチル−グルコサミン単位及びＤ−グルコサミン単位を含む任意の種類の多糖類誘導体、特にキチン−ポリペプチドコポリマー（「キチン−ポリペプチド複合体」とも表記される）である。これらのコポリマーは、メラニン型の色素と結び付いている場合もある。

【0018】

キチンは、セルロースの次に多い生物界で合成されるポリマーである。実際に、キチンは生物界の様々な種により剛性され、それは、甲殻類や昆虫の外骨格や、真菌を囲み保護する側板の一部を構成する。より具体的には、昆虫においてキチンは、それらの外骨格の３〜６０％を占める。

【0019】

キチン含量はその抽出によって決定される。そのような方法は実施例２に記載の方法ＡＯＡＣ ９９１．４３で有り得、これはこの決定において好ましい。

【0020】

好ましくは、前記粉末は、５〜１６％、より好ましくは８〜１４％のキチンを含有し、当該重量パーセンテージは、甲虫粉末の全重量に対する。

【0021】

本発明の甲虫粉末は粗タンパク質を多く含有する。そのような成分は、通常は加水分解工程を含む甲虫の処理方法によってのみ得られる。加水分解工程は、キチン含量を、組成物の全重量に対して５重量％のオーダー、例えば５重量％未満に減少させる効果を有する。

【0022】

現在、キチンは、消化が困難であるため、抗栄養因子の一種と考えられている。これは、農業−食料の分野における応用で、昆虫ベースの組成物が何故受け入れられないのか（キチンを除去する工程が実施される）を説明する。発明者らの研究は、受け入れられた考え方に反して、顕著なキチン含量を有する（下記実施例４）本発明の甲虫粉末を与えた魚類の成長に対しキチンは何の影響も与えなかったことを実証し得る。対照的に、本発明の甲虫粉末は、水産飼料中の魚粉の一部ではなく全部を有利に置き換えられる。実際に、本発明の甲虫粉末は、この粉末を与えた動物の成長を改善できる。

【0023】

更に、飼料製造プロセスの中で、本発明の甲虫粉末の導入は、任意の熱処理の過程での水溶性ビタミンの損失の減少、及び任意の押出し工程の間に要求されるエネルギーの減少という利点も有する。

【0024】

有利な場合、本発明の甲虫粉末は、甲虫粉末の全重量に対し４重量％以下、尚もより有利な場合３．５重量％以下の灰を含有する。

【0025】

灰は、本発明の組成物の燃焼から生じた残留物を構成する。

【0026】

灰含量を決定する方法は当業者に周知である。好ましくは、灰含量は、ＥＣ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ １５２／２００９ ｏｆ ２７−０１−２００９により定められた方法に従い決定される。

【0027】

本発明の甲虫粉末の脂肪含量は、好ましくは、甲虫粉末の全重量に対し５〜２０重量％、より好ましくは９〜１７重量％である。

【0028】

脂肪含量を決定する方法は当業者に周知である。例えば、好ましくは、脂肪含量は、ＥＣ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ １５２／２００９により定められた方法に従い決定される。

【0029】

有利な場合、本発明の甲虫粉末のタンパク質の消化性は、粗タンパク質の全重量に対して８５重量％以上である。

【0030】

消化性は、Ｄｉｒｅｃｔｉｖｅ ７２／１９９／ＥＣに記載の方法により測定されるペプシン消化性である。

【0031】

好ましくは、消化性は、８６％以上、より好ましくは８８％以上である。

【0032】

有利な場合、本発明の甲虫粉末は、タンパク質の全重量に対し３５〜６５重量％の可溶性タンパク質を含有し、その５０％以上のタンパク質のサイズが１２，４００ｇ／ｍｏｌである。

【0033】

「タンパク質の全重量」とは、本発明の甲虫粉末中に存在する粗タンパク質の重量を意味する。

【0034】

「可溶性タンパク質」は、粗タンパク質の内、ｐＨ６〜８、有利な場合７．２〜７．６の水溶液中に溶解するものを意味する。

【0035】

好ましくは、前記水溶液は、ｐＨ６〜８、有利な場合７．２〜７．６の緩衝溶液である。好ましくは、緩衝溶液は、ｐＨ７．４±０．２のＮａＣｌリン酸緩衝溶液である。

【0036】

ヒト及び動物の消化性は、タンパク質のサイズによって大幅に決定される。動物の栄養において、動物による消化を促進するためにタンパク質のサイズを小さくすることは常識である。このタンパク質のサイズ減少は、一般に、加水分解（例えば酵素的）プロセスにより実施されるが、その実施は特に費用が掛かる。

【0037】

加水分解を含まない方法により得られた本発明の甲虫粉末は、動物による消化を促進するために十分にサイズが減少した大量の可溶性タンパク質を含有する。また、本発明の甲虫粉末は、より低コストで調製できるという利点を有する。

【0038】

有利な場合、本発明の甲虫粉末は、タンパク質の全重量に対して３８〜６０重量％、好ましくは４３〜５５重量％の可溶性タンパク質を含有する。

【0039】

好ましくは、可溶性タンパク質の６０％以上、好ましくは７０％以上は、サイズが１２，４００ｇ／ｍｏｌ以下である。

【0040】

より具体的には、前記可溶性タンパク質のサイズは、６，５００〜１２，４００ｇ／ｍｏｌである。

【0041】

有利な場合、可溶性タンパク質の１０％未満、好ましくは８％未満、より好ましくは６％未満が、２９，０００ｇ／ｍｏｌ以上である。

【0042】

例えば、本発明の甲虫粉末の可溶性タンパク質のサイズの立体排除クロマトグラフィー解析は、実施例６に示されている。

【0043】

本発明は、本発明の甲虫粉末の調製方法も開示する。

【0044】

本発明の甲虫粉末の調製方法は、甲虫を圧搾する工程を含む。

【0045】

圧搾の目的は、甲虫から油脂を抜いて、油脂（脂肪）含量が圧搾塊の乾燥重量の２０重量％以下、好ましくは１７重量％以下の圧搾塊を得ることである。

【0046】

圧搾工程は、下記の詳細な方法の工程２により具体的に記載されている。

【0047】

特に、加熱又は冷却圧搾の実施が可能である。好ましくは、シングルスクリュー圧搾が使用される。

【0048】

より具体的には、本発明の調製方法は、下記の工程：
ｉ）甲虫を殺す、
ｉｉ）甲虫を圧搾して圧搾塊を得る、及び
ｉｉｉ）圧搾塊を挽き潰す、
を含む。

【0049】

甲虫は、熱湯処理（ｓｃａｌｄｉｎｇ）又はブランチング（ｂｌａｎｃｈｉｎｇ）によって殺されてもよく、それらは下記で詳述する方法の工程１でより詳しく記載される。

【0050】

同様に、挽き潰しは下記の詳細な方法の工程４でより詳しく記載される。

【0051】

最後に、本発明の調製方法は、圧搾塊を乾燥させる工程を含み得る。

【0052】

乾燥工程は、圧搾工程前及び挽き潰し工程後に実施するのが有利である。

【0053】

乾燥工程は、下記の詳細な方法の工程３でより詳細に記載される。

【0054】

本発明の甲虫粉末調製の詳細な方法
工程１：昆虫を殺す工程
この殺す工程１は、熱湯処理又はブランチングにより実施するのが有利である。この工程１は、微生物の担持を減少しつつ（劣化のリスクや健康リスクが減少する）昆虫を殺すことを可能とする。また、自己溶解及び急速な変色を引き起こし得る昆虫の内部酵素を失活できる。

【0055】

熱湯処理において、昆虫、好ましくは幼虫は、水により２〜２０分間、好ましくは５〜１５分間熱湯処理される。好ましくは、水温は９５〜１００℃、好ましくは１００℃である。

【0056】

この熱湯処理工程で導入される水の量は、水の体積（ｍＬ）と昆虫の重量（ｇ）の比率が好ましくは０．３〜１０、より好ましくは０．５〜５、なおもより好ましくは０．７〜３、なおもより好ましくは１のオーダーとなるように決定される。

【0057】

ブランチングにおいて、昆虫、好ましくは幼虫は、温度８０〜１３０℃、好ましくは９０〜１２０℃、より好ましくは９５〜１０５℃、なおもより好ましくは９８℃の水蒸気（水蒸気ノズル又はベッド）で、又は温度９５〜１０５℃、好ましくは１００℃の熱湯（スプレーノズルにより）で、又は温度８０〜１３０℃、好ましくは９０〜１２０℃、より好ましくは９５〜１０５℃、なおもより好ましくは９８℃の混合モード（水＋水蒸気）でブランチングされる。ブランチングチャンバー中の滞留時間は、１〜１５分、好ましくは３〜７分である。

【0058】

（任意）工程：挽き潰し工程
昆虫を熱湯処理タンク又はブランチングチャンバーから取り出し、それらは篩にかけられ、昆虫を粒子に粉砕できるナイフミルのようなグラインダー中に置かれる。

【0059】

挽き潰しを促進するため、所定の量の水が添加され得る。水の量は、工程１で導入される水の量と類似しており：水の体積（ｍＬ）と昆虫の重量（ｇ）の比率が好ましくは０．３〜１０、より好ましくは０．５〜５、なおもより好ましくは０．７〜３、なおもより好ましくは１のオーダーとなる。また、この工程を実施するために中間工程で生じた熱湯及び／又は水を保持することも可能である。

【0060】

好ましくは、挽き潰しの終了後、昆虫粒子のサイズは１ｃｍ（顕微鏡を用いて観察できる最大の粒子サイズ）未満、好ましくは０．５ｃｍ未満である。好ましくは、粒子サイズは５００μｍ〜０．５ｃｍ、なおもより好ましくは５００μｍ〜１ｍｍである。粒子のサイズを、２５０μｍ未満のように過剰に小さくする必要は無い。

【0061】

工程２：圧搾
殺す工程１で得た昆虫、又は任意の挽き潰し工程で得た湿ったペーストを、それを圧搾して脂肪フラクションとタンパク質フラクションを両方含有するジュースを分離できる手順に従い、圧搾機中に置く。

【0062】

好ましくは、圧搾工程は、オイル含量が圧搾塊の乾燥重量に対し２０重量％以下、１７重量％以下、より好ましくは１５重量％以下の圧搾塊を得ることを可能とする。

【0063】

同様に、圧搾工程は、乾燥体の含量が３０〜６０％、好ましくは４０〜５５％、より好ましくは４５〜５５％の圧搾塊を得ることを可能とする。

【0064】

圧搾工程では、例えば単スクリュー又は双スクリュー圧搾（Ａｎｇｅｌ型の双スクリュー圧搾）、フィルター圧搾（Ｃｈｏｑｕｅｎｅｔ型のフィルター圧搾）、プラテン圧搾（ｐｌａｔｅｎ ｐｒｅｓｓ）等の任意の圧搾系が用いられる。これらの系は、上記のオイル及び／又は水成分を取得するために圧搾条件を決定出来る当業者にとって周知である。

【0065】

特に、加熱又は冷却圧搾の実施が可能である。有利な場合、圧搾は、圧搾塊の脱脂を増大出来る加熱圧搾で実施され得る。特に、加熱圧搾は、オイル含量が圧搾塊の乾燥重量に対し１７重量％以下、好ましくは１５重量％以下の圧搾塊を得ることを可能とする。

【0066】

工程３：乾燥
圧搾塊は、当業者に公知の標準的な技術によって乾燥させられる。乾燥は、直接又は間接（薄層ドライヤー、パドルドライヤー、チューブラードライヤー、ディスクドライヤー等）、温度６０〜２６０℃で、１５分〜２４時間実施され得る。例えば、圧搾塊は通気／撹拌空気中、温度８０〜１００℃、好ましくは９０℃で、３〜７時間、好ましくは５時間乾燥させられる。

【0067】

この乾燥工程の目的は、含水量２〜１５％、好ましくは５〜１０％、尚もより好ましくは４〜８％の圧搾塊を取得することである。

【0068】

工程４：最後の挽き潰し
乾燥させた圧搾塊をハンマーミル等のグラインダー中に置き、圧搾塊を粒子に粉砕した。

【0069】

有利な場合、最後の挽き潰しの終了後、昆虫粒子のサイズは、０．５ｃｍ（顕微鏡を用いて観察できる最大の粒子サイズ）未満、好ましくは１ｍｍのオーダーである。より好ましくは、粒子サイズは３００μｍ〜１ｍｍ、なおもより好ましくは５００μｍ〜８００μｍである。

【0070】

これらの４つの工程は、粗タンパク質含量が高く、組成物の全重量に対し５重量％以上のオーダーのキチン含量を維持する、本発明の甲虫粉末を得ることを可能とする。

【0071】

上記のように、圧搾工程は加熱又は冷却圧搾であり得る。

【0072】

本発明の甲虫粉末取得方法の例として、以下の冷却圧搾を含む：
例えばＴ． ｍｏｌｉｔｏｒの幼虫を、予め煮沸した２００ｍＬの水を入れたビーカーに導入し、１００℃のウォーターバス中で熱湯処理で殺す。５分後ビーカーをウォーターバスから取り出し、幼虫を取り出し、２００ｍＬの水と混合する。得られた液体をツインスクリュー型圧搾機に通す。得られた圧搾塊を７０℃で２４時間乾燥させ、２５０μｍに挽き潰す。

【0073】

本発明の甲虫粉末取得方法の例として、以下の加熱圧搾を含む：
例えばＴ． ｍｏｌｉｔｏｒの幼虫をブランチングチャンバーに入れ、１００℃で５分間蒸気中でブランチングする。ブランチングした幼虫を、水を含む産物に適した「乾燥」型圧搾機に導入する。得られた圧搾塊を９０℃で５時間乾燥させ、１ｍｍに挽き潰す。

【0074】

好ましくは、本発明の甲虫粉末調製方法は、以下の工程：
ｉ）甲虫を殺す、
ｉｉ）甲虫を圧搾して圧搾塊を得る、
ｉｉｉ）圧搾塊を乾燥させる、及び
ｉｖ）圧搾塊を挽き潰す、
を含む。

【0075】

本発明の第一の態様において、圧搾工程は、甲虫を挽き潰す工程の後に行われる。

【0076】

従って、本発明の甲虫粉末調製方法は、以下の工程：
ｉ）甲虫を殺す、
ｉｉ）甲虫を圧搾して圧搾塊を得る、
ｉｉｉ）圧搾塊を乾燥させる、及び
ｉｖ）圧搾塊を挽き潰す、
を含み、ここで圧搾工程は甲虫を挽き潰す工程の後に行われる。

【0077】

圧搾の前に甲虫を挽き潰す利点は、実施例５に詳述している。

【0078】

本発明の方法の第二の態様において、甲虫を圧搾する工程は、加熱下で行われる。

【0079】

従って、本発明は、以下の工程：
ｉ）甲虫を殺す、
ｉｉ）甲虫を圧搾して圧搾塊を得る、
ｉｉｉ）圧搾塊を乾燥させる、及び
ｉｖ）圧搾塊を挽き潰す、
を含み、当該圧搾工程が加熱下で行われる、甲虫粉末の調製方法に関する。

【0080】

上記のように、加熱圧搾は、オイル含量が圧搾塊の乾燥重量に対し１７重量％以下、好ましくは１５重量％以下の圧搾塊を得ることを可能とする。

【0081】

本発明の方法の第三の態様において、圧搾塊を挽き潰す工程は、粒径が３００μｍ〜１ｍｍ、好ましくは５００〜８００μｍとなるように実施される。

【0082】

従って、本発明は、以下の工程：
ｉ）甲虫を殺す、
ｉｉ）甲虫を圧搾して圧搾塊を得る、
ｉｉｉ）圧搾塊を乾燥させる、及び
ｉｖ）圧搾塊を挽き潰す、
を含み、当該圧搾塊を挽き潰す工程が、粒径が３００μｍ〜１ｍｍとなるように行われる、甲虫粉末調製方法に関する。

【0083】

より具体的には、この本発明の方法の第三の態様において、甲虫を圧搾する工程は、加熱下で実施され得る。あるいは、圧搾工程は、甲虫を挽き潰す工程の後に行われ得る。

【0084】

最後に、本発明は、ヒト又は動物の栄養補給における本発明の甲虫粉末の使用に関する。

【0085】

有利な場合、本発明の甲虫粉末は、犬、猫、鳥、魚、爬虫類及びげっ歯類等のペットの飼料に使用され得る。

【0086】

より具体的には、本発明の甲虫粉末は、水産（魚類、甲殻類）、鳥（ニワトリ）、ブタ、反芻動物（ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ）及びミンク用の飼料に使用され得る。

【0087】

最後に、本発明の甲虫粉末は、タンパク質粉の置換に有利に使用され得る。

【0088】

タンパク質粉は、より具体的には、例えば鳥の飼料用の、魚粉、乳粉又は乳清粉、濃縮大豆タンパク質（ＣＳＰ）、肉粉を意味する。

【0089】

置換は、一部又は全部であり得る。

【0090】

好ましくは、本発明の甲虫粉末は、例えば５０又は１００％置換等、魚粉の一部又は全部の置換のために使用される。

【0091】

本発明の他の特徴及び利点は、以下の図面を参照して、例示のために示す実施例から明らかになり得る。

【図面の簡単な説明】

【0092】

【図1】図１は、本発明の甲虫粉末を異なる量で与えたマスを飼育した場合の水温及びタンク中の溶存酸素レベルの変化を示すグラフである。

【0093】

【図2】図２は、本発明の甲虫粉末を異なる量で与えたマスの、最終体重（図２Ａ）及び飼料変換率（図２Ｂ）に対する影響を示すグラフである。

【0094】

【図3】図３は、圧搾工程、又は挽き潰し後の圧搾工程を含む方法により得られた圧搾塊及び圧搾汁中に見られる昆虫由来の脂質の分布を示す。

【0095】

【図4】図４は、本発明の甲虫粉末のタンパク質のサイズの立体排除クロマトグラフィー解析を示す図である。

【実施例】

【0096】

実施例１：本発明の甲虫粉末の調製方法
甲虫粉末を調製するのに用いた甲虫は、Ｔｅｎｅｂｒｉｏ ｍｏｌｉｔｏｒの幼虫である。幼虫を受け取って直ぐ、それらは、殺す前まで、４℃で０〜１５日間、それらの飼育タンク中で、目立った劣化無く保存され得た。使用した幼虫の重量（齢）は様々で、故にそれらの組成は様々で、下記表１に示すようになる。

【表1】

＊％は幼虫の湿重量に対する乾燥重量として表される。
表１：重量に基づくＴｅｎｅｂｒｉｏ ｍｏｌｉｔｏｒ幼虫の生化学的組成

【0097】

・工程１：昆虫のブランチング
生きた幼虫（＋４℃〜＋２５℃）をブランチングチャンバーに行く穴の空いたコンベヤーベルト（１ｍｍ）上で、厚さ２〜１０ｃｍの層の中に運搬された。昆虫は９８℃の蒸気（蒸気ノズル又はベッド）中又は混合モード（水＋蒸気）中でブランチングされた。ブランチングチャンバー中の滞在時間は１〜１５分、理想的には５分である。

【0098】

ブランチング後の温度は７５℃〜９８℃である。

【0099】

工程２：圧搾
ブランチングした幼虫を連続シングルスクリュー圧搾機の供給ホッパーに移した。圧搾機を通る間、脱オイル率を上げるため、幼虫の温度を７０℃に維持した。脱オイルの原理は、円筒ケージ内部の材料を、中央シャフト上に配置されたスクリュー及びリングの配置によって加圧することである。ケージは区画中に分配された棒で内側に並べられ、動作面積に依存して異なる厚さの空間によって隔離される。そのように配置された隙間は、いわゆる「乾燥」物、「圧搾塊」と呼ばれるタンパク質フラクションの通過を制限しつつ、オイル／脂肪フラクションの流出を可能とするため、圧搾に組み込まれている。

【0100】

圧搾率は、４８〜５５％であった。
Ｙ_塊＝（質量_塊／質量_汁＋質量_塊）

【0101】

得られた圧搾塊は、３５〜４０％の乾燥物、６７〜７５％のタンパク質及び１３〜１７％の脂肪を含有する。パーセンテージは重量％であり、圧搾塊の乾燥重量に対する。

【0102】

工程３：乾燥
圧搾塊は薄層（約２ｃｍ）中のトレイ上に配置され、乾燥物含量が９２％を超える圧搾塊を得るために、９０℃で５時間通気／撹拌空気中で乾燥させられる。

【0103】

この工程は、前記殺す工程で生じた何らかの汚染に対する防御にもなる。

【0104】

乾燥後のＡｗ（水活性）は０．３５である。微生物学的結果は、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｓｐｐの不在を示し（方法： ＩＲＩＳ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ＢＫＲ ２３／０７−１０／１１）、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａ値は１０ＣＦＵ／ｇ未満であった（方法：ＮＦ ＩＳＯ ２１２８−２， Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２００４， ３０℃及び３７℃）であった。

【0105】

工程４：挽き潰し
主にタンパク質を含有する乾燥させた圧搾塊を、最後に連続ハンマーミル（可逆的な動く６つの部分−厚さ８ｍｍ）を用いて挽き潰した。グラインダーへの導入は、流速調整フラップ（１８０ｋｇ／ｈ）を有するホッパーによる。アウトプットの粒度分布の調整に用いる穴の空いたグリルは０．８ｍｍである。モーターの回転速度は３０００ｒｐｍである（電動モーター、吸収電力４ｋＷ（５．５ＣＶ））。

【0106】

実施例２：本発明の甲虫粉末の特徴付け
実施例１で調製した甲虫粉末を特徴付けた。

【0107】

１．解析
１．１ 含水量の決定
含水量は、ＥＣ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ １５２／２００９ ｏｆ ２７−０１−２００９（１０３℃／４ｈ）に基づく方法に従い決定された。

【0108】

１．２ 粗タンパク質量の決定
粗タンパク質量は、標準ＮＦ ＥＮ ＩＳＯ １６６３４−１ （２００８）に対応するＤｕｍａｓ法により決定された。

【0109】

１．３ キチン量の決定
昆虫食料中の食物繊維は本質的にキチンからなり、方法ＡＯＡＣ ９９１．４３に従いアッセイされた。得られた数値は結果として僅かに多く見積もられた。

【0110】

１．４ 脂肪量の決定
脂肪量は、ＥＣ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ １５２／２００９の方法に従い決定された。

【0111】

１．５ 灰の量の決定
粗灰の量は、ＥＣ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ １５２／２００９ ｏｆ ２７−０１−２００９に基づく方法に従い決定された。

【0112】

１．６ リンの量の決定
リンは、内部校正を用いて、ＩＣＰ（誘導結合プラズマ）によりアッセイされた。

【0113】

１．７ エネルギーの決定
エネルギー値は、ＥＵ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ １１６９／２０１１の係数を用いて得られた。

【0114】

１．８ アミノ酸及び脂肪酸の量の決定
この決定は、加水分解後のガスクロマトグラフィー及びアミノ酸及び脂肪酸それぞれの誘導体化によって実施された。

【0115】

１．９ ペプシン消化性の決定
ペプシン消化性は、Ｄｉｒｅｃｔｉｖｅ ７２／１９９／ＥＣに記載の方法により測定される。

【0116】

２．結果
甲虫粉末の組成を下記表２に示す。

【表2】

表２：甲虫粉末の組成

【0117】

更に、ペプシン消化性は９０±２％であった。

【0118】

実施例３：本発明の甲虫粉末を調製する代替的方法
Ｔ． ｍｏｌｉｔｏｒの幼虫を、予め煮沸した２００ｍＬの水を入れたビーカーに導入し、１００℃のウォーターバス中に置く。５分後ビーカーをウォーターバスから取り出し、幼虫を取り出し、２００ｍＬの水と混合する。得られた液体をツインスクリュー型圧搾機に通す。得られた圧搾塊を７０℃で２４時間乾燥させ、２５０μｍに挽き潰す。こうして甲虫粉末が得られる。

【0119】

実施例４：本発明の甲虫粉末の魚類飼料への導入
本実施例において、飼料中への甲虫粉末導入の、ニジマスの成長、飼料摂食、飼料変換、体組成及び見掛けの栄養の消化性に対する効果を試験した。

【0120】

１．材料及び方法
１．１．甲虫粉末
この例で用いる甲虫粉末は、実施例１で取得して実施例２でより詳細に記載したものである。

【0121】

１．２．実験飼料
魚粉ベースの飼料（ＣＴＲＬ）は、若いニジマスの既知の栄養的要求に合うように、適当な栄養素と共に調製された。このＣＴＲＬ飼料は、２５％の魚粉、８％の他の海産のタンパク源（イカ粉及びオキアミ粉）を含有する。他のタンパク源は、大豆タンパク質、大麦グルテン及びトウモロコシグルテンの濃縮物である。この製剤に基づき、４つの試験飼料（Ｙ５、Ｙ７．５、Ｙ１５及びＹ２５）が調製され、これらはそれぞれ魚粉の２０、３０、６０及び１００％が甲虫粉末に置換されたものである（下記表３参照）。

【表3】

＊組成物の全重量に対する乾燥重量の％
＊＊乾燥物の全重量に対する乾燥重量の％
^１ペルー産の魚粉ＬＴ７０：７１％粗タンパク質（ＣＰ）， １１％粗脂肪（ＣＦ）， ＥＸＡＬＭＡＲ， Ｐｅｒｕ； ^２オキアミ粉： ６１％ ＣＰ， １９％ ＣＦ， Ａｋｅｒ ＢｉｏＭａｒｉｎｅ Ａｎｔａｒｃｔｉｃ ＡＳ， Ｎｏｒｗａｙ；^３Ｓｕｐｅｒ Ｐｒｉｍｅ内臓不含： ８２％ ＣＰ， ３．５％ ＣＦ， Ｓｏｐｒｏｐｅｃｈｅ， Ｆｒａｎｃｅ； ^４ Ｓｏｙｃｏｍｉｌ Ｐ： ６２％ ＣＰ， ０．７％ ＣＦ， ＡＤＭ， Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ； ^５ ＶＩＴＥＮ： ８４．７％ ＣＰ， １．３％ ＣＦ， ＲＯＱＵＥＴＴＥ， Ｆｒａｎｃｅ； ^６トウモロコシグルテン粉： ６１％ ＣＰ， ６％ ＣＦ， ＣＯＰＡＭ， Ｐｏｒｔｕｇａｌ； ^７ＰＲＥＭＩＸ Ｌｄａ， Ｐｏｒｔｕｇａｌ． ビタミン（ＩＵ又はｍｇ／飼料ｋｇ）： ＤＬ−アルファ酢酸トコフェロール， １００ ｍｇ； メナジオン重亜硫酸ナトリウム， ２５ ｍｇ； 酢酸レチニル， ２０，０００ ＩＵ； ＤＬ−コレカルシフェロール， ２０００ ＩＵ； チアミン， ３０ ｍｇ；リボフラビン， ３０ ｍｇ；ピリドキシン， ２０ ｍｇ；シアノコバラミン， ０．１ ｍｇ； ニコチン酸， ２００ｍｇ；蟻酸， １５ ｍｇ；アスコルビン酸， １０００ ｍｇ；イノシトール， ５００ ｍｇ；ビオチン， ３ ｍｇ；パントテン酸カルシウム， １００ ｍｇ；塩化コリン， １０００ ｍｇ，ベタイン， ５００ｍｇ。ミネラル（ｇ又はｍｇ／ｋｇ）：炭酸コバルト， ０．６５ ｍｇ；硫酸銅， ９ ｍｇ；硫化鉄， ６ ｍｇ；ヨウ化カリウム， ０．５ ｍｇ；酸化マンガン， ９．６ ｍｇ；亜セレン酸ナトリウム， ０．０１ ｍｇ；硫酸亜鉛， ７．５ ｍｇ； 塩化ナトリウム， ４００ ｍｇ；炭酸カルシウム， １．８６ ｇ；賦形剤小麦（ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ ｗｈｅａｔ）； ^８消化性測定に用いる飼料のフラクションにのみ酸化イットリウムを加えた。
表３：実験飼料の調製及び組成

【0122】

イカ及びオキアミ粉のレベルは、高度な食味を保証するために、全ての飼料で一定とした。等窒素条件（粗タンパク質、４８．５％ＤＭ）、等脂質条件（２２．７％ＤＭ）及び等エネルギー条件（粗エネルギー、２３．２ＭＪ／ｋｇＤＭ）を維持するため、試験された飼料の製剤に僅かな調整を加えた。試験された飼料中の第一リン酸カルシウム及びメチオニンの補給のレベルは、ＣＴＲＬ飼料中に見られるそれらに対応するように調整された。

【0123】

飼料は、スクリュー直径が５５．５ｍｍ及び温度範囲１１９〜１２３℃のパイロットスケールでＣＬＥＸＴＲＡＬ ＢＣ４５ツインスクリュー押出し機を使用して、押出しにより生産された（顆粒サイズ：１．２及び２．０ｍｍ）。押出しの間、押し出された飼料の全てのバッチは、振動する流動床ドライヤー（モデルＤＲ１００， ＴＧＣ Ｅｘｔｒｕｓｉｏｎ， Ｆｒａｎｃｅ）中で乾燥させられた。顆粒の冷却後、真空下の被覆によりオイルを添加した（モデルＰＧ−１０ＶＣＬＡＢ， Ｄｉｎｎｉｓｅｎ， Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）。この試験の間中、実験飼料は常温だが涼しく風通しの良い場所で保存された。各飼料を代表する試料を解析のために取った（表４及び５）

【表4】

含量は乾燥前の下流の全重量に対する重量％で表される。
表４：実験飼料のアミノ酸プロフィール

【表5】

含量は乾燥前の下流の全重量に対する重量％で表される。
表５：実験飼料の脂肪酸プロフィールの合成

【0124】

１．３．成長効率の試験
３５匹の初期体重（ＩＢＷ）５．０１±０．１ｇのニジマス（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ ｍｙｋｉｓｓ）の３つの群に、前記５つの実験飼料を９０日間与えた。温度１４．１±０．３℃及び溶存酸素量７．４ｍｇ／Ｌ超（図１参照）の新鮮な水の連続的水流を与えた円形のガラス繊維製タンク（容積：２５０Ｌ）中で、前記魚を飼育した。魚を天然の光周期変化を有する夏の条件（５月〜７月）に供した。魚は、餌の無駄を避けるために注意を払いつつ、一週間の間１日３回（９時、１４時、１８時）及び週末は１日２回（１０時及び１６時）、飽食したように見えるまで手動給餌された。試験開始及び終了時に麻酔した魚を個別に計量し、前記群は２８日目と６０日目に計量された。開始時、同一の当初ストックの１５匹の魚を抽出し、全身組成の解析のために−２０℃で保存された。９０日の実験的給餌の後、各タンクから６匹の魚を同一の目的で抽出した。

【0125】

１．４．見掛けの消化性の測定
成長試験の最後及び関係する全てのサンプリングに続いて、各複製タンクから１２匹の魚（体重４５ｇ）を用いて、内部トレーサーとして酸化イットリウムを含有する（２００ｍｇ／ｋｇ）同一の餌を用いた間接的方法により、乾燥物、タンパク質、脂質、エネルギー及びリンの見掛けの消化性を決定した。魚は、定常水温１４℃で、楕円錐タンク（体積６０Ｌ、水流速３．７Ｌ／ｍｉｎ、溶存酸素レベル６．４ｍｇ／Ｌ超）中で保存した。魚は養殖条件に適合され、１０日以上実験飼料を与えられた。そしてその魚は、僅かに過剰となるように、１日１回（１０時）手動給餌された。全ての残留餌を除去するように飼育タンクを丁寧に掃除した後、その後の８日間連続出水濾過系（Ｃｈｏｕｂｅｒｔ−ＩＮＲＡ系）を用いて毎日糞便物質を回収した。毎日の回収後、糞便物質は−２０℃で凍結された。各魚の群からの糞便物質を混合したものを凍結乾燥して解析に供した。各試料は３回試験された。

【0126】

試験試料中の栄養及びエネルギーの見掛けの消化性係数（ＡＤＣ）は、以下の式に従い計算された。

【化1】

【0127】

１．５．解析方法
試験成分、飼料及び凍結乾燥した糞便物質は、解析前に挽き潰された。全身試料は寸断され、混合され、代表的試料は凍結乾燥され、解析前に実験室のミルでホモジナイズされた。成分、飼料、糞便物質及び魚全体の化学組成の解析は、以下の手順を用いて実施された。乾燥物 １０５℃で２４時間乾燥後；灰 ５５０℃で１２時間燃焼による；粗タンパク質（Ｎｘ６．２５） フラッシュ燃焼技術とその後のガスクロマトグラフィーによる分離及び熱伝導率検出（ＬＥＣＯ ＦＰ４２８）による；脂肪 ジクロロメタン抽出（Ｓｏｘｈｌｅｔ）による；全リン バナドモリブジック試薬を用いたＩＳＯ／ＤＩＳ ６４９１の手法に従う；粗エネルギー 断熱ボンベ熱量計中で測定する。飼料及び糞便中の酸化イットリウムは、ＩＣＰ−ＡＥＳの手法により検出された。

【0128】

全アミノ酸の解析のため、試験成分及び試験飼料を加水分解し（窒素で濯いだガラスフラスコ中の１１６℃の６Ｍ ＨＣｌで２２時間）、そしてＡｃｃＱ−Ｔａｇ法（Ｗａｔｅｒｓ， ＵＳＡ）に従いＡｃｃＱ（６−アミノキノリル−Ｎ−ヒドロキシスクシニミジル）フッ素試薬で誘導体化した。解析は、内部標準としてノルバリンを用いて、逆相アミノ酸解析システムにおいて高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により実施された。トリプトファンは、酸加水分解により部分的に破壊されるため、検出されなかった。得られたピークは、ＥＭＰＯＷＥＲソフトウエア（Ｗａｔｅｒｓ， ＵＳＡ）を用いて解析された。脂肪酸の解析において、脂質はＦｏｌｃｈら（１９５７）の方法に従い抽出され、続いてフィレ（ｆｉｌｌｅｔｓ）の脂肪酸組成は、Ｌｅｐａｇｅ ａｎｄ Ｒｏｙ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ （１９８６）に従いガスクロマトグラフィーによるメチルエステルの解析により決定された。

【0129】

１．６．成長及び栄養利用を評価する基準
ＩＢＷ（ｇ）：初期体重。
ＦＢＷ（ｇ）：最終体重。
特定成長速度、ＳＧＲ（％／日）：（Ｌｎ ＦＢＷ−Ｌｎ ＩＢＷ）ｘ１００／日。
飼料変換速度、ＦＣＲ：総飼料供給量（ｇｒｏｓｓ ｆｅｅｄ ｒａｔｉｏｎ）／体重増加。
自発飼料摂取、ＶＦＩ（％ＢＷ／日）：（総飼料供給量／ＩＢＷ＋ＦＢＷ）／２／日）ｘ１００．
タンパク質効率比、ＰＥＲ：湿重量増／粗タンパク質摂取量。
保持（摂取の％）：１００ｘ（ＦＢＷｘ死体中の最終栄養含量−ＩＢＷｘ死体中の初期栄養含量）／栄養摂取量。

【0130】

１７．統計解析
データは、３回反復の平均±標準偏差によって表される。データは、変動の一要素解析に供された。ＡＮＯＶＡの前に、％で表される数値は、アークサイン平方根変換に供された。統計的有意性は、尤度レベル０．０５で試験された。全ての統計的試験は、ＩＢＭ ＳＰＳＳ Ｖ２１ソフトウエアを用いて実施された。

【0131】

２．結果
２．１．成長能力
試験飼料を２８、６０及び９０日間与えたニジマスの成長能力、飼料変換及びタンパク質効率におけるデータを、表６〜８及び図２に示す。試験中のニジマスの死亡は無かった。

【0132】

【表6】

数値は平均±標準偏差（ｎ＝３）である。
１つの行の中の数値で異なる指数が付いているものは有意に異なる（Ｐ＜０．０５）。
表６：２８日目の成長能力
２８日間の給餌実験（表６）の後、魚の体重は、初期体重の３倍以上であった。飼料摂取量は高く（３．２２〜３．３１％ＢＷＭ／日）、導入した甲虫粉末の量の増大の影響は無かった（Ｐ＞０．０５）。この知見は、甲虫粉末は食味に対して負の影響は無く、それは飼料摂取量を妥協せずに魚粉の完全な除外を補償しさえしうることを示唆する。成長速度は、４．１９〜４．５０％／日で異なっていた。ＣＴＲＬ処理と比較して、Ｙ５及びＹ７．５飼料はＦＢＲ及びＳＧＲに影響しないものの、Ｙ１５及びＹ１５飼料は、ＦＢＲ及びＳＧＲの顕著な増大（Ｐ＜０．０５）を生じた。飼料変換速度の値は、０．８１〜０．８７で異なっていた。ＣＴＲＬと比較して、甲虫粉末の含有量が５％と７．５％の場合（Ｙ５及びＹ７．５％飼料）は、ＦＣＲに影響しなかった。しかしながら、甲虫粉末の高レベルの含有（Ｙ１５及びＹ２５飼料）は、ＦＣＲの顕著な減少を生じた（Ｐ＜０．０５）。タンパク質効率比（ＰＥＲ）は、２．５５〜２．７２で異なっていた。Ｙ２５飼料を与えた魚のＰＥＲは、ＣＴＲＬ、Ｙ５及びＹ７．５飼料を与えた場合と比較して、顕著に増大した。

【0133】

【表7】

数値は平均±標準偏差（ｎ＝３）である。
１つの行の中の数値で異なる指数が付いているものは有意に異なる（Ｐ＜０．０５）。
表７：６０日目の成長能力
６０日間の給餌実験（表７）の後、最も効果的な処理をした魚は、初期体重の８倍の増大を示した。成長レベルは、３．００〜３．５７％／日で異なっていた。ＣＴＲＬ処理と比較して、甲虫粉末を加えた全ての飼料で、ＳＧＲの顕著な増大（Ｐ＜０．０５）を生じた。ＦＣＲ値は、０．８５〜１．１０で異なっており、ＣＴＲＬと比較して、試験した全ての量での甲虫粉末の添加は、ＦＣＲの顕著な減少を生じた（Ｐ＜０．０５）。タンパク質効率比（ＰＥＲ）は２．０１〜２．５６で異なっていた。ＣＴＲＬ飼料を与えた魚においてＰＥＲ値は最低で、一方、ＰＥＲの改善は、甲虫粉末の用量増大と密接に関連した。

【0134】

【表8】

数値は平均±標準偏差（ｎ＝３）である。
１つの行の中の数値で異なる指数が付いているものは有意に異なる（Ｐ＜０．０５）。
表８：９０日目の成長能力
９０日間の給餌実験（表８）の後、最も効果的な処理をした魚は、初期体重の１１倍の増大を示した。ＣＴＲＬ魚と比較して、昆虫に富む飼料を与えた魚は、最終体重の顕著な増大を示した（Ｐ＜０．０５）。この増大は用量に関連しており、Ｙ５飼料では穏和な増大で、Ｙ７．５及びＹ１５では中度、Ｙ２５ではより高かった。特定成長速度（ＳＧＲ）は２．３９〜２．６７％／日で異なっており、ＣＴＲＬ飼料を与えた魚で最低値を示し、一方甲虫粉末を含有する試料を与えた魚は、顕著に高いＳＧＲ値を示した（ｐ＜０．０５）。含有レベルに関係無く、甲虫粉末はＦＣＲの顕著な減少をもたらした（ｐ＜０．０５）。ＣＴＲＬ処理と比較して、昆虫粉を含有する全ての飼料は、ＰＥＲ値の顕著な増大を示した（ｐ＜０．０５）。

【0135】

２．２．全体の組成
試験終了時点のマスの全体の組成のデータを表９に示す。給餌処理は、前魚体の水分、タンパク質、脂質、灰、リン及びエネルギーレベルに対して影響が無かった（ｐ＞０．０５）。

【表9】

＊パーセンテージは魚の全重量に対する重量のパーセンテージである。
数値は平均±標準偏差（ｎ＝３）である。
初期の魚：水分７５．０％；タンパク質１４．１％；脂肪８．７％；灰２．２％；リン０．４％、エネルギー６．７ｋＪ／ｇ。
表９：異なる飼料を給餌したマスの全体の組成

【0136】

２．３．栄養保持
栄養及びエネルギー保持値（摂取量のパーセンテージ）を表１０で表す。ＣＴＲＬ処理と比較して、甲虫粉末に富む飼料を与えた魚は、タンパク質及びエネルギーの保持の顕著な増大を示した（ｐ＜０．０５）。動揺に、Ｙ１５及びＹ２５飼料は、ＣＴＲＬよりも顕著に高いＰ保持を示した（ｐ＜０．０５）。脂肪保持は飼料の影響を受けなかった（ｐ＞０．０５）。

【表10】

数値は平均±標準偏差（ｎ＝３）である。
１つの行の中の数値で異なる指数が付いているものは有意に異なる（Ｐ＜０．０５）。
表１０：異なる飼料を給餌したマスにおける栄養及びエネルギー保持

【0137】

２．４．見掛けの消化性
異なる餌を給餌したマスから回収した糞便物質の組成を表１１に示す。

【表11】

＊％は糞便物質中の乾燥物の全重量に対する重量である。
数値は平均±標準偏差（ｎ＝３）である。
表１１：異なる餌を給餌したマスから回収した糞便物質の組成

【0138】

異なる栄養及びエネルギーにおける見掛けの消化性係数（ＡＤＣ％）を表１２に示す。導入した甲虫粉末の用量の増大は、乾燥物、タンパク質、脂肪、リン及びエネルギーの見掛けの消化性に顕著な効果を有しなかった（ｐ＞０．０５）。

【表12】

数値は平均±標準偏差（ｎ＝３）である。
表１２：マスにおける栄養及びエネルギーの見掛けの消化性

【0139】

３．結論
９０日間の給餌実験の後、全体の成長能力は、非常に満足のいくものと見做され得、若いニジマスのより広い範囲において、試験の全期間におけるＳＧＲ値は２．４〜２．７％／日で異なっていた。最も効果的な処理において、魚は、初期体重の１１倍の増大を示した。処理群の飼料変換率は０．７９〜０．９３で異なっており、これは、飼料の良好な栄養的妥当性及び良好な摂食活動を示唆する。

【0140】

この実施例で得た実験データは、以下のことを示す：
・甲虫粉末の含量増大（５、７．５、１５及び２５％）とそれに伴う魚粉含量の減少は、魚の顕著な体重増大と進行的に関連していた。
・甲虫粉末を含有する全ての飼料は、ＳＧＲ、ＦＣＲ及びＰＥＲの顕著な改善を示した。
・含有する甲虫粉末の量の増大は、マスの全体の組成に影響しなかった。
・含有する甲虫粉末の量の増大は、異なる実験飼料における乾燥物、タンパク質、脂質、リン及びエネルギーの見掛けの消化性に影響しなかった。
・タンパク質、リン及びエネルギーの保持は、甲虫粉末を含有する飼料を与えたマスにおいて促進した。

【0141】

一般に、この実施例で用いた甲虫粉末は、若いニジマスの飼料中の魚粉を効果的に１００％置換でき、ＦＣＲ及び全体の成長能力に正の効果を有する。

【0142】

実施例５：圧搾前に挽き潰しをする又はしない方法
圧搾のみの方法
Ｔ． ｍｏｌｉｔｏｒの幼虫を、予め煮沸した２００ｍＬの水を入れたビーカーに導入し、１００℃のウォーターバス中に置いた。５分後ビーカーをウォーターバスから取り出し、幼虫を取り出し、ツインスクリュー型圧搾機に通す。こうして圧搾塊が得られる。

【0143】

圧搾前に挽き潰しをする方法
Ｔ． ｍｏｌｉｔｏｒの幼虫を、予め煮沸した２００ｍＬの水を入れたビーカーに導入し、１００℃のウォーターバス中に置いた。５分後ビーカーをウォーターバスから取り出し、幼虫を取り出し、２００ｍＬの水と混合する。得荒れた液体をツインスクリュー型圧搾機に通す。こうして圧搾塊が得られる。

【0144】

脂質含量の測定
２ｇの試料をビーカーに入れ、ここに０．２ｇのＮａ_２ＳＯ_４及び１５ｍＬのＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ（２／１ ｖ／ｖ）を添加する。この混合物をマグネチックスターラーで２０分間撹拌し、溶液を濾過し、残留物をもう一度１０ｍＬのＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ（２／１ ｖ／ｖ）と一緒にビーカーに入れる。この混合物をマグネチックスターラーで１５分間撹拌し、溶液を濾過し、溶媒相を組み合わせ、定常重量となるまで蒸発させた。脂質含量は、試料の初期重量（２ｇ）に対する抽出−蒸発後の重量パーセンテージとして決定される。

【0145】

結論
圧搾の前の挽き潰しの重要性が試験された（図３）。それは圧搾塊及び圧搾汁の間の脂質の分配においてより効果的であり、挽き潰しの無い場合４２．７：５７．３であるのに対し、ある場合、１２．９：８７．１である。

【0146】

実施例６：本発明の甲虫粉末の可溶性タンパク質のサイズの解析
実施例１で調製した甲虫粉末試料１００ｍｇを１０ｍＬのＮａＣｌリン酸緩衝剤（ｐＨ７．４、０．１３７ｍＭ）中に置いた。飼料を１分間撹拌（ボルテックス）し、９００ｇで１分間遠心分離した。遠心分離後、試料を０．４５μｍメンブレンを通して濾過した。可溶性タンパク質のサイズの解析は、Ｎｕｃｌｅｏｇｅｌ ＧＦＣ−３００カラムを有する立体排除クロマトグラフィー系を用いて実施された。ＮａＣｌリン酸緩衝剤（ｐＨ７．４、０．１３７ｍＭ）を溶出剤として用いた。流速は１．０ｍＬ／分とした。検出は、２８０ｎｍのＵＶ検出器を用いて実施した。

【0147】

解析の結果を図４に示し、下記表１３にまとめる。

【表13】

表１３：実施例１で調製した甲虫粉末中に含有される可溶性タンパク質のサイズの分布

【0148】

これらの結果は、本発明の甲虫粉末中に存在する可溶性タンパク質の約７４．４％の分子量が１２，４００ｇ／ｍｏｌ（又はＤａ、ダルトン）未満であることを示す。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】