特許 6731004 富化体液の調製のための方法および装置

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6731004

(24)【登録日】2020年7月7日

(45)【発行日】2020年7月29日

(54)【発明の名称】富化体液の調製のための方法および装置

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/16 20150101AFI20200716BHJP

   A61K 35/15 20150101ALI20200716BHJP

   A61K 35/55 20150101ALI20200716BHJP

   A61P 19/00 20060101ALI20200716BHJP

【ＦＩ】

   A61K35/16 A

   A61K35/15 A

   A61K35/55

   A61P19/00

【請求項の数】11

【全頁数】18

(21)【出願番号】特願2017-567669(P2017-567669)

(86)(22)【出願日】2016年7月2日

(65)【公表番号】特表2018-528929(P2018-528929A)

(43)【公表日】2018年10月4日

(86)【国際出願番号】US2016040890

(87)【国際公開番号】WO2017004606

(87)【国際公開日】20170105

【審査請求日】2018年11月29日

(31)【優先権主張番号】62/188,118

(32)【優先日】2015年7月2日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】597117606

【氏名又は名称】アースレックス インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】230104019

【弁護士】

【氏名又は名称】大野 聖二

(74)【代理人】

【識別番号】100119183

【弁理士】

【氏名又は名称】松任谷 優子

(74)【代理人】

【識別番号】100149076

【弁理士】

【氏名又は名称】梅田 慎介

(74)【代理人】

【識別番号】100173185

【弁理士】

【氏名又は名称】森田 裕

(74)【代理人】

【識別番号】100162503

【弁理士】

【氏名又は名称】今野 智介

(74)【代理人】

【識別番号】100144794

【弁理士】

【氏名又は名称】大木 信人

(72)【発明者】

【氏名】タッカー，メリッサ

(72)【発明者】

【氏名】ベア，クリストファー

(72)【発明者】

【氏名】ネイバース，アビゲイル

(72)【発明者】

【氏名】ハリソン，ロバート

【審査官】 渡部 正博

(56)【参考文献】

【文献】 カナダ国特許出願公開第０２６１７４６５（ＣＡ，Ａ１）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３５／００−３５／７６８

Ａ６１Ｐ １／００−４３／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ａ）上部カップリングエレメントおよび底部カップリングエレメントを有する第１のシリンジ内の全血を遠心分離し、シリンジ内で全血を乏血小板血漿層、バフィー層、および、赤血球層に分画すること、
ｂ）第１のシリンジの上部カップリングエレメントから、乏血小板血漿層の少なくとも一部を取り出すこと、
ｃ）第２のシリンジまたは第２の容器の底部カップリングエレメントを第１のシリンジの上部カップリングエレメントに取り付けること、
ｄ）ｉ）乏血小板血漿層、およびバフィー層のいずれかを第２のシリンジまたは第２の容器に吸い上げること、もしくは
ｉｉ）乏血小板血漿層、バフィー層、および赤血球層の一部のいずれかを第２のシリンジまたは第２の容器に吸い上げること、および
ｅ）第２のシリンジまたは第２の容器を遠心分離し、乏血小板血漿層、バフィー層、および赤血球層のいずれかが多血小板血漿層および赤血球層に分画されること、
を含む、血液分画の方法。

【請求項2】

多血小板血漿層が取り出され、容器に移される、請求項１または２に記載の方法。

【請求項3】

多血小板血漿層が約８×１０⁶から約１×１０⁷血小板／μＬを含む、請求項１または２に記載の方法。

【請求項4】

多血小板血漿層が約０．１×１０⁵から約２×１０⁵赤血球／μＬを含む、請求項１から３のいずれかに記載の方法。

【請求項5】

多血小板血漿層が約５００から約４０００白血球／μＬを含む、請求項１から４のいずれかに記載の方法。

【請求項6】

多血小板血漿層が約１０から約３００好中球／μＬを含む、請求項１から５のいずれかに記載の方法。

【請求項7】

ステップ（ａ）の遠心分離が約１５００×ｇから約２０００×ｇの相対遠心力（ＲＣＦ）である、請求項１から６のいずれかに記載の方法。

【請求項8】

ステップ（ｅ）の遠心分離が約３０×ｇから約２００×ｇの相対遠心力（ＲＣＦ）である、請求項１から７のいずれかに記載の方法。

【請求項9】

第２のシリンジがダブルシリンジである、請求項１から８のいずれかに記載の方法。

【請求項10】

第２のシリンジまたは第２の容器から赤血球層を排出すること、および第２のシリンジまたは第２の容器に多血小板血漿を保持することをさらに含む、請求項１から９のいずれかに記載の方法。

【請求項11】

第２のシリンジまたは第２の容器の底部カップリングエレメントに針を取り付けることをさらに含む、請求項１から１０のいずれかに記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

優先権
本出願は、参照によりその内容全体を本明細書に組み込むものとする、２０１５年７月２日に出願された米国特許出願第６２／１８８，１１８号の利益を主張するものである。

【0002】

背景
本開示は、多血小板血漿、骨髄単核細胞（ＢＭＭＣ）、脂肪組織由来の間質血管画分（ＳＶＦ）、および他の富化または濃縮体液を生産する方法および器具に関する。本開示は、障害組織を多血小板血漿、骨髄単核細胞、脂肪組織の間質血管画分、または他の富化もしくは濃縮体液で治療する方法、ならびに障害組織の治療において使用するための、多血小板血漿、骨髄単核細胞、脂肪組織の間質血管画分、または他の富化もしくは濃縮体液も開示する。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0003】

要約
多血小板血漿（ＰＲＰ）、骨髄単核細胞（ＢＭＭＣ）、脂肪組織の間質血管画分（ＳＶＦ）、および他の富化または濃縮体液、ならびにこれらの体液を生成する方法が本明細書で開示される。実施形態は、全血分画の方法を提供する。一実施形態では、全血を赤血球層、バフィー層、ならびに乏血小板血漿（ＰＰＰ）層に分画することができる。一実施形態では、全血の分画は、遠心分離によって達成することができる。ＰＰＰ層の少なくとも一部を取り出し、残りの体液を異なる容器に移すことができる。一実施形態では、残りの体液はダブルシリンジのような第２の容器に移される。次いで、残りの体液を、赤血球層および血漿層（すなわち、多血小板血漿）の２層に分画することができる。一実施形態では、多血小板血漿は第２のシリンジまたは容器から取り出され、対象に投与される。

【0004】

一実施形態では、本明細書に記載の方法によって生産されたＰＲＰは、約８×１０^６から約１×１０^７血小板／μＬを含む。一実施形態では、本明細書の方法によって生産されたＰＲＰは、約０．１×１０^５から約２×１０^５赤血球／μＬを含む。一実施形態では、本明細書の方法によって生産されたＰＲＰは、約５００から約４０００白血球／μＬを含む。一実施形態では、本明細書の方法によって生産されたＰＲＰは、約１０から約３００好中球／μＬを含む。本発明のこれらの実施形態のいずれかに従うＰＲＰは、本明細書に記載の医学的用途で用いられる場合がある。

【0005】

ＰＲＰを生成する他のシステムが知られているが、それらは高濃度の血小板を提供せず、多くの場合、容認し難いほど高濃度の赤血球、好中球、または白血球で汚染されたＰＲＰを生産する可能性がある。本明細書に提示される方法、医学的用途、および組成物は、高濃度の血小板、および低濃度の赤血球、白血球、および好中球を有するＰＲＰを提供する。本明細書で開示された装置および方法を用いて、骨髄単核細胞、脂肪組織の間質血管画分、および他の富化または濃縮体液を生産することもできる。

【0006】

実施形態は、骨髄分画の方法を提供する。方法は、上部カップリングエレメントおよび底部カップリングエレメントを有する第１のシリンジに骨髄を添加すること、ならびに第１のシリンジを遠心分離することを含むことができ、第１のシリンジ内で骨髄を乏血小板血漿層、バフィー層、および赤血球／顆粒球層に分画する。場合により、第１のシリンジの上部カップリングエレメントから、乏血小板血漿層の少なくとも一部を取り出すことができる。第２のシリンジまたは第２の容器の底部カップリングエレメントを第１のシリンジの上部カップリングエレメントに取り付けることができる。乏血小板血漿層およびバフィー層のいずれかを第２のシリンジまたは第２の容器に吸い上げることができる。第２のシリンジまたは第２の容器を遠心分離することができ、乏血小板血漿層およびバフィー層が骨髄単核細胞層および赤血球／顆粒球層に分画される。本発明のこれらの実施形態のいずれかに従うＢＭＭＣは、本明細書に記載の医学的用途で用いられる場合がある。

【0007】

実施形態は、脂肪組織分画の方法を提供する。方法は、上部カップリングエレメントおよび底部カップリングエレメントを有する第１のシリンジ内で脂肪組織を遠心分離することを含むことができ、第１のシリンジ内で、脂肪組織が、（上部から底部に向かって）脂質層、圧縮された脂肪層および過剰な体液層に分画される。第１のシリンジの上部カップリングエレメントおよび底部カップリングエレメントのそれぞれから、脂質層および過剰な体液層の少なくとも一部を取り出すことができる。第２のシリンジの底部カップリングエレメントを第１のシリンジの上部カップリングエレメントに取り付けることができる。圧縮された脂肪層を第２のシリンジまたは第２の容器に吸い上げることができる。第２のシリンジを遠心分離することができ、圧縮された脂肪層が上部脂肪細胞層および底部間質血管画分に分画される。本発明のこれらの実施形態のいずれかに従うＳＶＦは、本明細書に記載の医学的用途で用いられる場合がある。

【図面の簡単な説明】

【0008】

【図1】実施例１、Ａｒｔｈｒｅｘ ＡＣＰ（登録商標）ダブルシリンジシステム、２％ヘマトクリットのＡｎｇｅｌ（登録商標）ＰＲＰシステム、７％ヘマトクリットのＡｎｇｅｌ（登録商標）ＰＲＰシステム、および１５％ヘマトクリットのＡｎｇｅｌ（登録商標）ＰＲＰシステムの方法によって生成されたＰＲＰの血小板比率（白）、白血球比率（ひし形）、および好中球比率（黒）を、同一ドナー由来の全血試料と比較した場合を図示するグラフである。

【図2A】ＰＰＰ、バフィー層、および赤血球層を生成するための第１のシリンジの使用を示す図である。

【図2B】ＰＰＰ、バフィー層、および赤血球層を生成するための第１のシリンジの使用を示す図である。

【図2C】ＰＰＰ、バフィー層、および赤血球層を生成するための第１のシリンジの使用を示す図である。

【図3A】ＰＲＰを生成するための第１のシリンジおよび第２のシリンジの使用を示す図である。

【図3B】ＰＲＰを生成するための第１のシリンジおよび第２のシリンジの使用を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0009】

濃縮多血小板血漿（ＰＲＰ）、骨髄単核細胞（ＢＭＭＣ）、脂肪組織の間質血管画分（ＳＶＦ）、および他の富化または濃縮体液、ならびにこれらの体液を生成する方法、が本明細書で開示される。多血小板血漿については、全血を遠心分離することによって上層の透明な乏血小板血漿（ＰＰＰ）画分、下層の赤色の赤血球画分、および上層と下層との間の白色画分に分画することができる。中間画分は、「バフィー層」であり、大部分の白血球、血小板、ならびに間葉細胞および／または造血幹細胞を含む。図２Ｃ。

【0010】

実施形態は、全血分画の方法を提供する。対象からの全血は、瀉血針、中心静脈カテーテル（例えば、ＰＩＣＣライン）、または任意の他の全血収集手段によって得ることができる。他の体液は、任意の許容される方法を用いて得ることができる。一実施形態では、場合により全血を、例えば、クエン酸、クエン酸デキストロース（ＡＣＤ）、クエン酸−リン酸−デキストロース（ＣＰＤ）、またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のような抗凝固剤と混合することができる。ヘパリンを、処理ステップの間、トロンビン活性を防止または阻害するために十分な量で添加することもできる。アプロチニン、ε−アミノカプロン酸、またはトラネキサム酸のようなタンパク質分解酵素阻害剤を、自己増殖因子のタンパク質分解を防止するために添加することができる。

【0011】

遠心分離条件（例えば、相対遠心力（ＲＣＦ）、時間、その他）は、血液または他の体液分画の範囲および程度を決定する。一実施形態では、全血または他の体液を分画する方法は、全血を２回遠心分離することを含み、第１の遠心分離は強回転であり、第２の遠心分離は弱回転である。一実施形態では、全血または他の体液を分画する方法は、全血を２回遠心分離することを含み、第１の遠心分離は弱回転であり、第２の遠心分離は強回転である。一実施形態では、強回転は２０００×ｇより大きく、または約１５００×ｇから約２０００×ｇである。一実施形態では、弱回転は約３０×ｇから約２００×ｇである。

【0012】

一実施形態では、全血を分画する方法は、全血を２回遠心分離することを含み、第１の遠心分離は、血液を乏血小板血漿層、バフィー層、および赤血球層の３画分に分離し、ならびに第２の遠心分離は血液を多血小板血漿層および赤血球層の２層に分離する。第１の遠心分離は、約５分から約２０分の持続時間になり得る。第２の遠心分離は、約５分から約２０分の持続時間になり得る。

【0013】

一実施形態では、全血を２０００×ｇ未満の相対遠心力で遠心分離することができるが、それでも血液を乏血小板血漿層、バフィー層、および赤血球層（例えば、強回転）に分画する。一実施形態では、全血試料を、約１５００×ｇ、約１５５０×ｇ、約１６００×ｇ、約１６５０×ｇ、約１６７５×ｇ、約１７００×ｇ、約１７２５×ｇ、約１７５０×ｇ、約１７７５×ｇ、約１８００×ｇ、約１８２５×ｇ、約１８５０×ｇ、約１８７５×ｇ、約１９００×ｇ、約１９２５×ｇ、約１９５０×ｇ、または約１９７５×ｇで遠心分離することができる。例示的な実施形態では、全血試料を、約１５００×ｇから２０００×ｇまで、約１５５０×ｇから２０００×ｇまで、約１６００×ｇから２０００×ｇまで、約１６５０×ｇから２０００×ｇまで、約１６７５×ｇから２０００×ｇまで、約１７００×ｇから２０００×ｇまで、約１７２５×ｇから２０００×ｇまで、約１７５０×ｇから２０００×ｇまで、約１７７５×ｇから２０００×ｇまで、約１８００×ｇから２０００×ｇまで、約１８２５×ｇから２０００×ｇまで、約１８５０×ｇから２０００×ｇまで、約１８７５×ｇから２０００×ｇまで、約１９００×ｇから２０００×ｇまで、約１９２５×ｇから２０００×ｇまで、約１９５０×ｇから２０００×ｇまで、または約１９７５×ｇから２０００×ｇまでのＲＣＦで遠心分離することができる。

【0014】

例示的な実施形態では、全血試料を、約１５００×ｇから約１９００×ｇ、約１５５０×ｇから約１９００×ｇ、約１６００×ｇから約１９００×ｇ、約１６５０×ｇから約１９００×ｇ、約１６７５×ｇから約１９００×ｇ、約１７００×ｇから約１９００×ｇ、約１７２５×ｇから約１９００×ｇ、約１７５０×ｇから約１９００×ｇ、約１７７５×ｇから約１９００×ｇ、約１８００×ｇから約１９００×ｇ、約１８２５×ｇから約１９００×ｇ、約１８５０×ｇから約１９００×ｇ、または約１８７５×ｇから約１９００×ｇ（例えば、強回転）のＲＣＦで遠心分離することができる。

【0015】

例示的な実施形態では、全血試料を、約１５００×ｇから約１８００×ｇ、約１５５０×ｇから約１８００×ｇ、約１６００×ｇから約１８００×ｇ、約１６５０×ｇから約１８００×ｇ、約１６７５×ｇから約１８００×ｇ、約１７００×ｇから約１８００×ｇ、約１７２５×ｇから約１８００×ｇ、約１７５０×ｇから約１８００×ｇ、約１７７５×ｇから約１８００×ｇ、約１６５０×ｇから約１７５０×ｇ、約１６７５×ｇから約１７５０×ｇ、約１７００×ｇから約１７５０×ｇ、約１６７５×ｇから約１７２５×ｇ、または約１７００×ｇから約１７２５×ｇ（例えば、強回転）のＲＣＦで遠心分離することができる。

【0016】

一実施形態では、強回転を受けた血液試料のような血液試料を、２００×ｇ未満のＲＣＦで遠心分離することができ、血液を血漿層および赤血球層に分画する（例えば、弱回転）。例示的な実施形態では、血漿層は多血小板血漿層である。一実施形態では、血液試料を、約３０×ｇ、約３５×ｇ、約４０×ｇ、約４５×ｇ、約５０×ｇ、約５５×ｇ、約６０×ｇ、約７０×ｇ、約７５×ｇ、約８０×ｇ、約９０×ｇ、約１００×ｇ、約１１０×ｇ、約１２０×ｇ、約１２５×ｇ、約１５０×ｇ、約１７５×ｇ、または約２００×ｇで遠心分離することができる。

【0017】

例示的な実施形態では、血液を、約３０×ｇから約２００×ｇ、約３０×ｇから約１７５×ｇ、約３０×ｇから約１５０×ｇ、約３０×ｇから約１２５×ｇ、約３０×ｇから約１２０×ｇ、約３０×ｇから約１１０×ｇ、約３０×ｇから約１００×ｇ、約３０×ｇから約９０×ｇ、約３０×ｇから約８０×ｇ、約３０×ｇから約７５×ｇ、約３０×ｇから約７０×ｇ、約３０×ｇから約６０×ｇ、約３０×ｇから約５０×ｇ、約３０×ｇから約４５×ｇ、約４０×ｇから約２００×ｇ、約４０×ｇから約１７５×ｇ、約４０×ｇから約１５０×ｇ、約４０×ｇから約１２５×ｇ、約４０×ｇから約１２０×ｇ、約４０×ｇから約１１０×ｇ、約４０×ｇから約１００×ｇ、約４０×ｇから約９０×ｇ、約４０×ｇから約８０×ｇ、約４０×ｇから約７５×ｇ、約４０×ｇから約７０×ｇ、約４０×ｇから約６０×ｇ、約４０×ｇから約５０×ｇ、または約４０×ｇから約４５×ｇのＲＣＦで遠心分離することができる（例えば、弱回転）。

【0018】

一実施形態では、第１の遠心分離（例えば、強回転）は、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約２０、約２５、または約３０分であり得る。一実施形態では、第２の遠心分離（例えば、弱回転）は、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約２０、約２５、または約３０分であり得る。

【0019】

例示的な実施形態では、乏血小板血漿層（ＰＰＰ）の少なくとも一部を、第１の遠心分離（例えば、強回転）の後、および第２の遠心分離（例えば、弱回転）の前に取り出すことができる。一実施形態では、乏血小板血漿層（ＰＰＰ）の少なくとも半分、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％が取り出される。取り出されたＰＰＰは、最終ＰＲＰ調製の希釈のような他の目的のために保存される、または自己血餅の創出のために用いられることができる。

【0020】

ＰＲＰの少なくとも一部を取り出した後、残りの血液成分を第２の容器（例えば、遠心分離チューブまたはシリンジ、例えば、Ａｒｔｈｒｅｘ ＡＣＰ（登録商標）ダブルシリンジシステム）に移すことができる。一実施形態では、本明細書で開示されたＰＲＰはシリンジに送達され、即時に適用する準備が整っている。

【0021】

本明細書に記載のＰＲＰを生産する方法の実施形態において、ＰＲＰは全血と比較して、上昇した血小板レベルを含む。一実施形態では、本明細書の方法によって生産されたＰＲＰは、約８×１０^６から約１×１０^７血小板／μＬを含む。一実施形態では、本明細書の方法によって生産されたＰＲＰは、約８．５×１０^６から約１×１０^７血小板／μＬを含む。例示的な実施形態では、本明細書の方法によって生産されたＰＲＰは、約９×１０^６から約１×１０^７血小板／μＬを含む。一実施形態では、本明細書の方法によって生産されたＰＲＰは、約９．５×１０^６から約１×１０^７血小板／μＬを含む。一実施形態では、本明細書の方法によって生産されたＰＲＰは、約８×１０^６、約８．５×１０^６、約９×１０^６、約９．５×１０^６、約９．７５×１０^６、約９．８×１０^６、約９．９×１０^６、または約１×１０^７血小板／μＬを含む。

【0022】

本明細書に記載のＰＲＰを生産する方法の実施形態において、ＰＲＰは全血と比較して、低下した赤血球（ＲＢＣ）レベルを含む。一実施形態では、本明細書の方法によって生産されたＰＲＰは、約２×１０^５ＲＢＣ／μＬ未満、約１．５×１０^５ＲＢＣ／μＬ未満、約１×１０^５ＲＢＣ／μＬ未満、または約０．５×１０^５ＲＢＣ／μＬ未満を含む。

【0023】

一実施形態では、本明細書の方法によって生産されたＰＲＰは、約０．１×１０^５から約２×１０^５ＲＢＣ／μＬ、約０．１×１０^５から約１．５×１０^５ＲＢＣ／μＬ、約０．１×１０^５から約１×１０^５ＲＢＣ／μＬ、約０．１×１０^５から約０．７５×１０^５ＲＢＣ／μＬ、約０．１×１０^５から約０．６×１０^５ＲＢＣ／μＬ、約０．１×１０^５から約０．５×１０^５ＲＢＣ／μＬ、約０．２５×１０^５から約１．５×１０^５ＲＢＣ／μＬ、約０．２５×１０^５から約１×１０^５ＲＢＣ／μＬ、約０．２５×１０^５から約０．７５×１０^５ＲＢＣ／μＬ、約０．２５×１０^５から約０．６×１０^５ＲＢＣ／μＬ、約０．２５×１０^５から約０．５×１０^５ＲＢＣ／μＬ、約０．５×１０^５から約１．５×１０^５ＲＢＣ／μＬ、約０．５×１０^５から約１×１０^５ＲＢＣ／μＬ、約０．５×１０^５から約０．７５×１０^５ＲＢＣ／μＬ、または約０．５×１０^５から約０．６×１０^５ＲＢＣ／μＬを含む。

【0024】

本明細書に記載のＰＲＰを生産する方法の実施形態において、ＰＲＰは全血と比較して、低下した白血球（ＷＢＣ）レベルを含む。一実施形態では、本明細書の方法によって生産されたＰＲＰは、約４×１０^３ＷＢＣ／μＬ未満、約３．５×１０^３ＷＢＣ／μＬ未満、約３×１０^３ＷＢＣ／μＬ未満、約２．５×１０^３ＷＢＣ／μＬ未満、約２×１０^３ＷＢＣ／μＬ未満、約１．５×１０^３ＷＢＣ／μＬ未満、約１×１０^３ＷＢＣ／μＬ未満、または約０．５×１０^３ＷＢＣ／μＬ未満を含む。

【0025】

一実施形態では、本明細書の方法によって生産されたＰＲＰは、約５００から約４０００ＷＢＣ／μＬ、約５００から約３５００ＷＢＣ／μＬ、約５００から約３０００ＷＢＣ／μＬ、約５００から約２５００ＷＢＣ／μＬ、約５００から約２０００ＷＢＣ／μＬ、約５００から約１５００ＷＢＣ／μＬ、約５００から約１０００ＷＢＣ／μＬ、約５００から約７５０ＷＢＣ／μＬ、または約５００から約５５０ＷＢＣ／μＬ、約７５０から約３５００ＷＢＣ／μＬ、約１０００から約３５００ＷＢＣ／μＬ、約７５０から約３０００ＷＢＣ／μＬ、約１０００から約３０００ＷＢＣ／μＬ、約７５０から約２５００ＷＢＣ／μＬ、または約１０００から約２５００ＷＢＣ／μＬを含む。

【0026】

本明細書に記載のＰＲＰを生産する方法の実施形態において、ＰＲＰは全血と比較して、低下した好中球（Ｎ）レベルを含む。一実施形態では、本明細書の方法によって生産されたＰＲＰは、約３００Ｎ／μＬ、約２５０Ｎ／μＬ、約２３０Ｎ／μＬ、約２２５Ｎ／μＬ、約２００Ｎ／μＬ、約１７５Ｎ／μＬ、約１５０Ｎ／μＬ、約１２５Ｎ／μＬ、約１２０Ｎ／μＬ、約１１０Ｎ／μＬ、約１００Ｎ／μＬ、約７５Ｎ／μＬ、約５０Ｎ／μＬ、約２５Ｎ／μＬ、約２０Ｎ／μＬ、約１５Ｎ／μＬ、または約１０Ｎ／μＬ未満を含む。

【0027】

一実施形態では、本明細書の方法によって生産されたＰＲＰは、約１０から約３００Ｎ／μＬ、約１０から約２５０Ｎ／μＬ、約１０から約２３０Ｎ／μＬ、約１０から約２２５Ｎ／μＬ、約１０から約２００Ｎ／μＬ、約１０から約１７５Ｎ／μＬ、約１０から約１５０Ｎ／μＬ、約１０から約１２５Ｎ／μＬ、約１０から約１２０Ｎ／μＬ、約１０から約１００Ｎ／μＬ、約１０から約７５Ｎ／μＬ、約１０から約５０Ｎ／μＬ、または約１０から約２５Ｎ／μＬを含む。

【0028】

装置
一実施形態では、ＰＲＰ調製のための装置は、例えば、第１のシリンジに血液を直接吸い上げるための点滴セットの直接接続のために、底部カップリングエレメント１１０を有する第１のシリンジ１００を含むことができる。図２Ａ。カップリングエレメントは、オステーパー接続金具とその対になるメス部品との間を漏れのない接続にするために、ルアーロックコネクタまたは任意の他のタイプの小型の液体接続金具であり得る。第１のシリンジは、上部カップリングエレメント１２０を含むこともできる。上部カップリングエレメントは、例えば、スワバブル（ｓｗａｂｂａｂｌｅ）針なし注射ルアーコネクタ１５０またはプランジャー１４０に接続可能である。第１のシリンジは、体液に適したチャンバー１３０を有するバレル１９０を含むことができる。体液を、上部カップリングエレメント１２０に接続したプランジャー１４０（または他の適した手段）を用いて第１のシリンジのチャンバー１３０に吸い上げることができる。

【0029】

体液、例えば全血を、患者、または以前に収集した体液試料を含む容器のいずれかから直接、第１のシリンジに吸い上げることができる。任意の量の体液、例えば、約１０、２０、５０、７５、１００、１２５、１５０、２００、３００ｍＬまたはそれ以上を用いることができる。プランジャー１４０は上部カップリングエレメント１２０から除去可能であり、スワバブル針なしインジェクタルアー１５０（または他のルアーロックポートまたはインジェクタポート）は上部カップリングエレメントに設置される（図２Ｂ）。第１のシリンジは遠心分離機に設置され、例えば、強回転条件下で回転される。体液の３つの層、ＰＰＰ層１６０、バフィー層１７０、および赤血球または赤血球層１８０が遠心分離後に存在することができる（図２Ｃ）。

【0030】

場合により、ＰＰＰ層の量（例えば、約１、２、５、１０、２０、３０、４０、５０ｍＬまたはそれ以上）を、所望の体積のＰＰＰ（例えば、約５０、４０、３０、２０、１０、５、２、１ｍＬ、それ以下）を残して、スワバブル針なしインジェクタルアー１５０または上部カップリングエレメント１２０を介して取り出すことができる。場合により取り出されたＰＰＰを、例えばＰＲＰ最終注射の希釈、または自己血餅の作製のために用いることができる。あるいは、ＰＰＰのすべてを第１のシリンジ内に保持することができる。第２のシリンジ２００または他の第２の容器を、上部カップリングエレメント１２０またはスワバブル針なしインジェクタルアー１５０に接続することができる。第２のシリンジは、Ａｒｔｈｒｅｘ ＡＣＰ（登録商標）ダブルシリンジであり得る。ダブルシリンジは、例えば、第１の直径の第１の本体を有する遠位（外側）シリンジ、および第１の直径より小さい第２の直径の第２の本体を有する近位（内側）シリンジを含み、遠位（外側）シリンジは近位（内側）シリンジと直接液体をやりとりし、近位（内側）シリンジは遠位（外側）シリンジ内に設置される。第２のシリンジまたは他の第２の容器は、底部カップリングエレメント２１０およびプランジャー２４０を持つことができる。第２のシリンジまたは第２の容器のバレル２２０は、体液を入れることができるチャンバー２３０を含むことができる。第２のシリンジまたは第２の容器のバレルは、第１のシリンジより小さい直径を持つことができ、したがって第２のシリンジは、第１のシリンジのバレル内に適合することができる。図３Ａを参照。

【0031】

第１のシリンジ内に存在する体液のすべてまたは一部（例えば、ＰＰＰ、バフィー層、赤血球層）は、第１のシリンジの上部カップリングエレメント１２０から、第２のシリンジ２００または他の第２の容器に吸い上げることができる。図３Ａ。一例では、ＰＰＰ層、バフィー層および場合により赤血球層の一部（例えば、約１、２、５、１０、１５、または３０ｍＬ未満）は、第２のシリンジまたは他の第２の容器に吸い上げることができる。第２のシリンジまたは第２の容器を第１のシリンジから取り出し、遠心分離機に設置することができる。第２のシリンジまたは第２の容器は、例えば、弱回転条件下で遠心分離することができる。２層、ＰＲＰ層２３５および赤血球層２４０が第２の遠心分離後に存在することができる。図３Ｂ。例えば、第２のシリンジまたは第２の容器の底部カップリングエレメント２１０から赤血球層を排出することによって、ＰＲＰ層を単離することができる。ＰＰＰを、次いで第２のシリンジまたは第２の容器の底部カップリングエレメント２１０に接続した注射セットから患者への直接注射のために用いることができ、または後で使用するために第２のシリンジまたは第２の容器内に保存することができ、または第２のシリンジまたは第２の容器のチャンバーから取り出して、後で使用するために別の容器に保存することができる。

【0032】

第２の容器が、Ａｒｔｈｒｅｘ ＡＣＰ（登録商標）ダブルシリンジのようなダブルシリンジである場合、第２の遠心分離後、内側シリンジのプランジャーをＰＲＰの簡易単離のために用いることができる。第２の遠心分離後、内側シリンジ（ダブルシリンジの）は、ＰＲＰを単離するために引き出される。したがって、第２の、ダブルシリンジの内側シリンジを用いて、ＲＢＣ層をかき乱すことなくＰＲＰを引き出すことができる。第２のシリンジの内側シリンジを、次いで取り出すことができ、底部カップリングエレメントに針を取り付けることができ、および第２の、ダブルシリンジの内側シリンジを用いて、患者または容器にＰＲＰを直接注入することができる。

【0033】

装置のその他の使用
本明細書に記載の装置および方法は、例えば、骨髄または脂肪組織を含む他の体液と共に用いることができる。

【0034】

実施形態は、骨髄分画の方法を提供する。一実施形態では、骨髄単核細胞（ＢＭＭＣ）を単離することができる。ＢＭＭＣは、単球、リンパ球ならびに造血および／または間葉系幹細胞ならびに前駆細胞を含む単核細胞の混合集団である。骨髄、骨髄穿刺液、または骨髄濃縮物（すなわち骨髄試料）を、上部カップリングエレメント１２０に接続されたプランジャー１４０を用いて第１のシリンジのチャンバー１３０に吸い上げることができる。骨髄試料を、患者または以前に収集した骨髄試料を含む容器のいずれかから直接、第１のシリンジに吸い上げることができる。第１のシリンジのチャンバー内で、骨髄試料が上層にあり、密度勾配溶媒が下層にあるように、密度勾配溶媒（例えばρが約１．０７０から約１．０８０のパーコールまたはフィコール）を、場合により第１のシリンジに吸い込むことができる。あるいは、密度勾配溶媒を、底部カップリングエレメント１１０から第１のシリンジに吸い上げることができ、次いで第１のシリンジの上部カップリングエレメント１２０から、骨髄試料を添加することができる。プランジャー１４０（使用する場合）は上部カップリングエレメントから除去可能であり、スワバブル針なしインジェクタルアー１５０（または他のルアーロックポートまたはインジェクタポート）は上部カップリングエレメント１２０に設置することができる。図２Ａ。第１のシリンジを遠心分離機に設置し、例えば、ＰＲＰの単離のために上記に記載されたいずれかの強回転遠心分離条件下で、例えば約２０００×ｇ、約１０分間、回転させることができる。３または４層の体液が、上部から底部に乏血小板血漿層、バフィー層、密度勾配溶媒層（使用する場合）、および赤血球／顆粒球層の順序で存在することができる。

【0035】

場合により、乏血小板血漿層の量は、所望の体積の乏血小板血漿層を残して、スワバブル針なしインジェクタルアーまたは上部カップリングエレメントを介して取り出すことができる。あるいは、乏血小板血漿層のすべてを第１のシリンジ内に保持することができる。第２のシリンジ、例えば、ダブルシリンジ、または他の第２の容器を、上部カップリングエレメントまたはスワバブル針なしインジェクタルアーに接続することができる。第２のシリンジ（例えばダブルシリンジ）または第２の容器は、底部カップリングエレメントを持つことができる。第２のシリンジまたは第２の容器のバレルは、体液を入れることができるチャンバーを含むことができる。第２のシリンジまたは第２の容器のバレルは、第１のシリンジより小さい直径を持つことができ、したがって第２のシリンジまたは第２の容器は、第１のシリンジのバレル内に適合することができる。

【0036】

第１のシリンジ内に存在する体液のすべてまたは一部（例えば、乏血小板血漿層、バフィー層、密度勾配溶媒層（使用する場合）、および赤血球／顆粒球層）は、上部カップリングエレメントから、第２のシリンジまたは第２の容器に吸い上げることができる。一例では、任意の残りの乏血小板血漿層およびバフィー層は、第２のシリンジまたは他の容器に吸い上げることができる。第２のシリンジまたは第２の容器を除去し、遠心分離機に設置することができる。第２のシリンジまたは第２の容器は、ＰＲＰ単離のために上記の弱回転条件のいずれかで遠心分離することができる。他の条件は、例えば３、５、７、１０、１５分またはそれ以上、約２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５×ｇまたはそれ以上の遠心分離を含むことができる。上部骨髄単核細胞層および底部赤血球／顆粒球層の２層が遠心分離後に存在することができる。骨髄単核細胞層が第２のシリンジに保持されるように、例えば、第２のシリンジまたは第２の容器の底部カップリングエレメント２１０から赤血球／顆粒球層を排出することによって、骨髄単核細胞層を単離することができる。骨髄単核細胞層を、次いで第２のシリンジまたは第２の容器の底部カップリングエレメント２１０に接続した注射セットから患者への直接注射のために用いることができ、または後で使用するために第２のシリンジまたは第２の容器内に保存することができ、または第２のシリンジまたは第２の容器のチャンバーから除去して、後で使用するために別の容器に保存することができる。

【0037】

第２の容器が、Ａｒｔｈｒｅｘ ＡＣＰ（登録商標）ダブルシリンジのようなダブルシリンジである場合、第２の遠心分離後、内側シリンジを骨髄単核細胞層の簡易単離のために用いることができる。第２の遠心分離後、内側シリンジの（ダブルシリンジの）プランジャーは、骨髄単核細胞層を単離するために引き上げる。したがって、第２の、ダブルシリンジの内側シリンジを用いて、赤血球／顆粒球層をかき乱すことなく骨髄単核細胞層を引き出すことができ、シングルシリンジは、赤血球／顆粒球層を押し出し、シリンジ内に骨髄単核細胞層を保つ。第２のシリンジの内側シリンジを、次いで除去することができ、底部カップリングエレメントに針を取り付けることができ、および第２の、ダブルシリンジの内側シリンジを用いて、患者または容器に骨髄単核細胞層を直接注入することができる。

【0038】

骨髄単核細胞層は、次いで患者への注射に使用することができる、または後で使用するために保存することができる。全血を用いた場合、骨髄単核細胞層は、上記の多血小板血漿層と類似しているが、さらに幹細胞を含む。

【0039】

実施形態は、脂肪組織分画の方法を提供する。一実施形態では、精製された間質血管画分または層（ＳＶＦ）を脂肪組織から単離することができる。脂肪組織を、上部カップリングエレメントに接続されたプランジャー１４０を有する第１のシリンジのチャンバー１３０に吸い上げることができる。脂肪組織を、患者または以前に収集した脂肪組織を含む容器のいずれかから直接、第１のシリンジに吸い上げることができる。脂肪組織は、第１のシリンジに吸い上げられるより前に乳化することができ、または第１のシリンジ内で機械的に乳化することができる。プランジャー（使用する場合）は上部カップリングエレメントから除去可能であり、スワバブル針なしインジェクタルアー（または他のルアーロックポートまたはインジェクタポート）は上部カップリングエレメントに設置することができる。図２Ａ。第１のシリンジを遠心分離機に設置し、例えば、ＰＲＰの単離のための上記いずれかの強回転遠心分離条件下で、回転させることができる。他の遠心分離条件は、例えば、約４００、５００、６００、６６６、７００、８００×ｇまたはそれ以上で、約３、４、５、７、１０分またはそれ以上を含む。３層の体液が、上部から底部に脂肪酸／脂質／油層（「脂質層」）、圧縮された脂肪層、および過剰な体液層（例えば、漿液、赤血球、および局所麻酔薬を含む）の順序で存在することができる。

【0040】

脂質層は、スワバブル針なしインジェクタルアーまたは上部カップリングエレメントを介して取り出すことができる。過剰な体液層は、圧縮された脂肪層が第１のシリンジに残るように、底部カップリングエレメント１１０から排出することができる。約７５、８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９または１００％の脂質層および過剰な体液層が取り出される。第２のシリンジ（例えばダブルシリンジ）または第２の容器は、上部カップリングエレメントまたはスワバブル針なしインジェクタルアーに接続することができる。第２のシリンジまたは第２の容器は、底部カップリングエレメントを持つことができる。第２のシリンジまたは第２の容器のバレルは、体液を入れることができるチャンバーを含むことができる。第２のシリンジまたは第２の容器のバレルは、第１のシリンジより小さい直径を持つことができ、したがって第２のシリンジは、第１のシリンジのバレル内に適合することができる。

【0041】

第１のシリンジ内に存在する体液のすべてまたは一部は、上部カップリングエレメントから第２のシリンジまたは第２の容器に吸い上げることができる。一例では、圧縮された脂肪層は、第２のシリンジまたは第２の容器に吸い上げることができ、第２のシリンジまたは第２の容器は、第１のシリンジから除去することができ、第２のシリンジまたは第２の容器は、遠心分離機に設置される。第２のシリンジまたは第２の容器は、ＰＲＰの単離のための上記弱回転条件下で遠心分離することができる。他の条件は、例えば、約２００、２５０、３００、３５０、３７５、４００、４５０×ｇまたはそれ以上、約３、４、５、７、１０分またはそれ以上を含む。上部脂肪細胞層および底部間質血管層または画分の２層が遠心分離後に存在することができる。脂肪組織の間質血管画分は、前脂肪細胞、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、内皮前駆細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、肥満細胞、および脂肪組織マクロファージの豊富な供給源である。例えば第２のシリンジまたは第２の容器の底部ルアーロックコネクタから排出することによって、ＳＶＦを単離することができる。単離されたＳＶＦを、次いで患者への注射のために用いることができ、または後で使用するために保存することができる。

【0042】

多血小板血漿、骨髄単核細胞、間質血管画分およびそれらの使用
一実施形態では、本明細書で開示された方法によって調製された、ＰＲＰ組成物、ＢＭＭＣ組成物、ＳＶＦ組成物、または他の体液は、１つまたはそれ以上のビタミンＥ、ビタミンＡ、または他のレチノイドのようなビタミンを含むことができる。ビタミンまたは他のレチノイドは、ＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦ中に約４０、３０、２０、１０、５ｍｇ／Ｌ、またはそれ未満で存在することができる。ビタミンは、創傷治癒および抗酸化作用特性を提供することができる。あるいは、またはさらに、非ビタミン抗酸化物質を、ＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦ中に約５０、４０、３０、２０、１０、５ｍｃｇ／ｄＬ、またはそれ未満で含むことができる。そのような抗酸化物質の非限定的な代表的な例は、β−カロテンを含む。

【0043】

実施形態は、軟部組織障害の治療で使用するための、自己多血小板血漿（ＰＲＰ）を含む組成物を提供し、ＰＲＰは約８×１０^６から約１×１０^７血小板／μＬを含む。一実施形態では、ＰＲＰは本明細書に記載の方法によって得られ、および本明細書の方法によって生産されたＰＲＰに関する任意の特徴は、その医学的用途に適用可能である。一実施形態では、自己多血小板血漿（ＰＲＰ）を含む組成物は、注射による靱帯、腱、骨、軟骨、または関節腔への投与のためであり得る。

【0044】

実施形態は、軟部組織損傷または障害の治療で使用するための、本明細書に記載の方法によって得られた血液骨髄単核細胞（ＢＭＭＣ）を含む組成物を提供する。

【0045】

実施形態は、軟部組織損傷または障害の治療で使用するための、本明細書に記載の方法によって得られた間質血管画分（ＳＶＦ）を含む組成物を提供する。

【0046】

一実施形態では、本明細書に記載の方法によって得られた、約０．１、０．５、１、５、１０、１５、２０、２５ｍＬ、またはそれ以上のＰＲＰを対象に投与することができる。対象は、哺乳動物であり得る。哺乳動物は、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、またはウシであり得る。

【0047】

一実施形態では、本明細書に記載の方法によって得られたＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦは、手術を受けていない対象に投与できる。ＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦは、例えば注射によって、手術を受けていない対象の軟骨、靱帯、腱、軟部組織、筋肉、または関節腔に直接投与できる。例えば、慢性腱障害（例えば、アキレス腱症、外側／内側上顆炎、足裏筋膜炎、膝蓋骨腱障害）を有する対象に、注射によって腱にＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦを投与できる。例示的な実施形態では、軟骨損傷および初期または進行性変形性関節症を有する対象に、ＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦを投与できる。

【0048】

一実施形態では、本明細書に記載の方法によって得られたＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦを、手術の間、対象に投与できる。ＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦは、手術の間、靱帯（例えば、前十字靱帯、内側側副靱帯、その他）、軟骨（例えば、半月板、関節唇、その他）、または腱（例えば、アキレス腱）のような軟部組織障害または損傷を修復するために投与できる。ＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦは、手術の間、骨の修復（例えば、膝蓋骨、脛骨、大腿骨、上腕骨、その他）を促すために投与することもできる。ＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦを使って、虚血、虚血性発作、心臓損傷または障害、筋肉損傷または障害、変形性関節症、関節リウマチ、および他の疾患を治療することもできる。ＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦは、軟部組織または関節腔（例えば、肩、膝、足首、手首、股関節、その他）に直接投与できる。

【0049】

一実施形態では、本明細書に記載の方法によって得られた、ＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦは、ニューロパシー（例えば、末梢性ニューロパシー）を有する対象に投与できる。

【0050】

本明細書に記載の方法では、対象に投与されたＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦは、自己ＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦであり得る。一実施形態では、対象に投与されたＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦは、同種ＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦであり得る。

【0051】

一実施形態では、本明細書に記載の方法によって得られたＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦは、１つまたはそれ以上の特定の増殖因子と組み合わせて投与できる。増殖因子は、これらに限定されないが、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、ＴＧＦ−β（トランスフォーミング増殖因子−β）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、および血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）が挙げられる。増殖因子は、ＰＲＰ、ＢＭＭＣ、もしくはＳＶＦに添加できる、または別々に、同時にもしくは連続的に約０．００１、０．０１、０．１、１．０、１０、１００ｎｇ／ｍＬまたはそれ以上で投与できる。

【0052】

一実施形態では、本明細書に記載の方法によって得られたＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦは、骨髄濃縮物（ＢＭＣ）、骨髄穿刺液（ＢＭＡ）、または吸引脂肪組織と組み合わせて投与できる。約１、２、５、１０、１５、２０、２５ｍＬもしくはそれ以上のＢＭＣ、ＢＭＡ、または吸引脂肪組織は、ＰＲＰ、ＢＭＭＣ、もしくはＳＶＦに添加できる、または別々に、同時にもしくは連続的に投与できる。

【0053】

例示的な実施形態では、本明細書に記載の方法によって得られたＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦは、幹細胞と組み合わせて投与できる。例えば、ＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦは、間葉系幹細胞または骨髄幹細胞と共に投与できる。約０．１、０．５、１、２、５、１０、１５、２０、２５ｍＬもしくはそれ以上の間葉系幹細胞または骨髄幹細胞は、ＰＲＰ、ＢＭＭＣ、もしくはＳＶＦに添加できる、または別々に、同時にもしくは連続的に投与できる。

【0054】

一実施形態では、本明細書の方法によって得られたＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦは、第２のシリンジまたは第２の容器から患者に、第２のシリンジまたは第２の容器に取り付けられた注射キットを介して直接投与できる。例えば、ダブルシリンジが第２のシリンジとして使用される場合、内側シリンジを除去し、注射キットに接続することができ、ＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦを患者に直接投与することができる。

【0055】

前の段落のＰＲＰ、ＢＭＭＣ、またはＳＶＦに関して提示されたさまざまな考察、および投与に関連する特徴はすべて、文脈が別途必要とする場合を除いて、本明細書で定義されるこれらの細胞集団の対応する医学的使用に適用可能である。

【0056】

キット
一実施形態では、本明細書に記載の方法は、適切な全血の分画および層の収集を達成するための使い捨て血液分離キットおよび器具を含む。方法、装置、および装置の構成要素は、全血および血液成分の画分への分離（例えば、少なくともＰＰＰの一部が取り出された第２の遠心分離）、およびその後の選択された画分の収集を監視および制御することを含む。

【0057】

定義
「バフィー層」または「バフィーコート」という用語は、血液の密度勾配遠心分離後または強回転遠心分離条件下の、血漿層と赤血球層との間の白血球、血小板、ならびに間葉細胞および／または造血細胞の中間白色層を表す。

【0058】

「乏血小板血漿（ＰＰＰ）」という用語は、血液の密度勾配遠心分離後、または血液の強回転遠心分離条件下の血漿の上層を表す。ＰＰＰ層は、遠心分離が白血球および血小板がバフィー層に分画されるほど十分な力である場合に生じる。

【0059】

「赤血球（ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ）」および「赤血球（ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ）（ＲＢＣ）」という用語は代替可能であり、成熟赤血球を表す。

【0060】

「好中球（Ｎ）」という用語は、成熟した顆粒白血球の一つのタイプを表す。他の顆粒球は、好塩基球および好酸球を含む。

【0061】

「強回転」という用語は、赤血球層の真上および乏血小板血漿層の下の層で赤血球を沈殿物におよび血小板を沈殿物にする遠心分離条件を表す。一般的に、強回転は、約１５００×ｇから約２０００×ｇの相対遠心力（ＲＣＦ）を有すると定義される。「弱回転」という用語は、赤血球を沈殿物にし、一方血小板は懸濁液のままである遠心分離条件を表す。一般的に、弱回転は、約２０×ｇから約２００×ｇのＲＣＦを有すると定義される。

【0062】

本明細書において使用する場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、状況が明らかに別の方法で指示しなければ、複数の指示対象を含む。数値と関連した「約」という用語は、数値のプラスまたはマイナス５％以下、数値が変動可能であることを意味する。

【0063】

すべての特許、特許出願、および本明細書のいずれかに引用された他の科学的または技術的な文献は、その内容全体を参照により本明細書に組み込むものとする。本明細書に例示的に記載された本発明は、本明細書に具体的に開示されていない任意の要素、制限の不存在下で適切に実施することができる。したがって、例えば、本明細書の各例において、「含む」、「から本質的になる」、および「からなる」の用語のいずれかは、それらの通常の意味を保持しながら、他の２つの用語のいずれかと置き換えてもよい。使用された用語および表現は、限定ではなく説明の用語として使用され、示され説明された特徴またはその一部の任意の均等物を排除するような用語および表現を使用する意図はないが、さまざまな変更は請求項に係る本発明の範囲内で可能であることが認識されている。したがって、本発明は、実施形態によって具体的に開示されているが、本明細書に開示された概念の任意の特徴、変更および変形は、当業者によって採用されてもよく、そのような変更および変形は説明および添付の請求項によって定義される本発明の範囲内である。

【0064】

さらに、本発明の特徴または態様がマーカッシュグループまたは代替の他のグループに関して記載されている場合、当業者は、本発明がマーカッシュグループまたは他のグループの任意の個々のメンバーまたはサブグループのメンバーに関しても記載されることを認識するであろう。

【0065】

本明細書で使用する「実施形態」という用語は、本発明を特定の特徴の組み合わせに限定することを意図するものではない。上記の任意の実施形態および任意の実施形態において存在することが「できる」、または存在して「もよい」と言及される任意の特徴は、本明細書に記載される任意の他のまたはさらなる実施形態または特徴と任意の実行可能な組み合わせで組み合わせ可能であることが意図される。

【0066】

以下は、例示目的のためにのみ提供されており、上記の広い意味で記載された本発明の範囲を限定するものではない。

【実施例1】

【0067】

濃縮多血小板血漿の調製
より高い血小板比率の濃縮多血小板血漿（すなわち、自己調整血漿（ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ｐｌａｓｍａ））を生産する方法が開発された。

【0068】

方法
全血をシリンジに吸い上げた（各々３人の異なるドナー）。プランジャーをシリンジから除去し、全血をシリンジ内で、１７０５×ｇ、１０分間、室温で遠心分離した（Ｈｅｔｔｉｃｈ（登録商標）１３９０バケット、Ｈｅｔｔｉｃｈ Ｌａｂ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ））。上部帯黄色透明画分（乏血小板血漿）、白色境界画分（「バフィー層」）、およびシリンジ底部の赤色画分の３つの画分が識別できた。約２０ｍＬの乏血小板血漿画分を取り出した。残りの血漿およびバフィー層をＡｒｔｈｒｅｘ ＡＣＰ（登録商標）ダブルシリンジシステム（Ａｒｔｈｒｅｘ Ｉｎｃ．、Ｎａｐｌｅｓ、ＦＬ）に移した。ダブルシリンジを、スワバブル針なしＬｕｅｒ−Ｌｏｋ（登録商標）接続を介してより大きなシリンジに接続した。ダブルシリンジをＨｅｔｔｉｃｈ（登録商標）１３９０バケットに設置し、４１．６５×ｇ、５分間、室温で遠心分離した。遠心分離の後に、上方帯黄色透明画分（多血小板血漿）および底部赤色赤血球画分の２つの画分が識別できた。上方画分をＡｒｔｈｒｅｘ ＡＣＰ（登録商標）ダブルシリンジの内側シリンジを用いて単離した。細胞内含量の測定のために処理されたＰＲＰの総体積は６ｍＬであった。

【0069】

結果
全血（ＷＢ）および最終ＰＲＰ画分を細胞含量について分析した。

【0070】

【表1】

【0071】

全血と比較したＰＲＰ中の成分（白血球（ＷＢＣ）、赤血球（ＲＢＣ）、血小板（ＰＬＴ）、および好中球（Ｎ））の量の比率として、成分を表２において比較する。

【0072】

【表2】

本明細書に記載の方法は、高血小板比率の増加したならびに白血球、赤血球、および好中球比率の低下したＰＲＰを生産した。

【実施例2】

【0073】

濃縮ＰＲＰの比較
実施例１で生成された濃縮ＰＲＰと比較するために、異なる方法によって濃縮ＰＲＰを生成した。

【0074】

方法
Ａｒｔｈｒｅｘ ＡＣＰ（登録商標）ダブルシリンジシステムおよびＡｎｇｅｌ（登録商標）ＰＲＰシステム（Ａｒｔｈｒｅｘ Ｉｎｃ．、Ｎａｐｌｅｓ、ＦＬ）によって、製造業社の取扱説明書にしたがって、濃縮ＰＲＰを調製した。２％、７％、および１５％のヘマトクリット設定のみ異なる、３つの別々のＡｎｇｅｌ（登録商標）ＰＲＰを調製した。

【0075】

結果
さまざまな異なる方法によって調製されたＰＲＰの成分を表３に比較する（ＰＲＰ対全血）（図１も参照）。実施例１と類似して、細胞内量の測定のために処理された各々のＡｎｇｅｌ（登録商標）ＰＲＰ試料は６ｍＬであった。しかし、細胞含量の測定のために処理されたＡｒｔｈｒｅｘ ＡＣＰ（登録商標）ダブルシリンジシステム試料は４．６ｍＬであった。同一体積での比較を提供するために、データを４．６ｍＬから６．０ｍＬまで外挿した。

【0076】

【表3】

実施例１の方法は、１５％ヘマトクリットのＡｎｇｅｌ（登録商標）ＰＲＰ試料を除いて他の方法より、より高い血小板比率を有するＰＲＰを生産した。しかし、赤血球、好中球および白血球比率は、１５％ヘマトクリットのＡｎｇｅｌ（登録商標）ＰＲＰ試料よりはるかに低かった。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図3A】

【図3B】