特許 6747981 腫瘍抗原発現組換えポックスウイルス及び免疫チェックポイント分子アンタゴニストまたはアゴニストを用いた癌治療のための併用療法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6747981

(24)【登録日】2020年8月11日

(45)【発行日】2020年8月26日

(54)【発明の名称】腫瘍抗原発現組換えポックスウイルス及び免疫チェックポイント分子アンタゴニストまたはアゴニストを用いた癌治療のための併用療法

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/76 20150101AFI20200817BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20200817BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20200817BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20200817BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20200817BHJP

   C07K 14/82 20060101ALN20200817BHJP

   C12N 15/00 20060101ALN20200817BHJP

【ＦＩ】

   A61K35/76

   A61K45/00

   A61K39/395 E

   A61K39/00 H

   A61P35/00

   !C07K14/82ZNA

   !C12N15/00

【請求項の数】22

【全頁数】78

(21)【出願番号】特願2016-567370(P2016-567370)

(86)(22)【出願日】2015年5月8日

(65)【公表番号】特表2017-515837(P2017-515837A)

(43)【公表日】2017年6月15日

(86)【国際出願番号】US2015029855

(87)【国際公開番号】WO2015175334

(87)【国際公開日】20151119

【審査請求日】2018年4月23日

(31)【優先権主張番号】61/992,788

(32)【優先日】2014年5月13日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】509296443

【氏名又は名称】バヴァリアン・ノルディック・アクティーゼルスカブ

(74)【代理人】

【識別番号】100069556

【弁理士】

【氏名又は名称】江崎 光史

(74)【代理人】

【識別番号】100111486

【弁理士】

【氏名又は名称】鍛冶澤 實

(74)【代理人】

【識別番号】100139527

【弁理士】

【氏名又は名称】上西 克礼

(74)【代理人】

【識別番号】100164781

【弁理士】

【氏名又は名称】虎山 一郎

(72)【発明者】

【氏名】フォイ・スーザン

(72)【発明者】

【氏名】マンドル・ステファニー

(72)【発明者】

【氏名】ラウントリー・リャン

(72)【発明者】

【氏名】フランツソフ・アレックス

【審査官】 大島 彰公

(56)【参考文献】

【文献】 特開２００６−３４０７１４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 Cancer Immunol. Immunother.，２０１２年，Vol.61，pp.19-29

【文献】 Proc. Natl. Acad. Sci. USA，２０１０年，Vol.107，pp.4275-4280

【文献】 Biotechnol. Appl. Biochem.，２００４年，Vol.39，pp.313-318

【文献】 OncoImmunology，２０１２年，Vol.1 No.7，pp.1-2

【文献】 日経メディカル Oncology ニュース，２０１１年，ＵＲＬ，https://medical.nikkeibp.co.jp/leaf/all/search/cancer/news/201111/522495.html&pr=1

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ、Ａ６１Ｐ、Ｃ０７Ｋ、Ｃ１２Ｎ

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

以下の（ａ）および（ｂ）：
（ａ）以下の（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）ＣＥＡ抗原およびＭＵＣ−１抗原；または
（ｉｉ）ＨＥＲ−２抗原、
である少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）のポリペプチドをコードする核酸を含む組換えオルソポックスウイルス；および
（ｂ）ＰＤ−１アンタゴニスト及びＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、
を含む、ヒト癌患者を治療する方法に使用するための免疫原性組み合わせ物であって、
前記ＰＤ−１アンタゴニストがＰＤ−１機能に干渉する抗体であり、ＣＴＬＡ−４アンタゴニストがＣＴＬＡ−４機能に干渉する抗体である、免疫原性組み合わせ物。

【請求項2】

前記組換えオルソポックスウイルスが、ワクシニアウイルス、修飾ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）ウイルス、ＭＶＡ−ＢＮまたはＭＶＡ−ＢＮの誘導体から選択される、請求項１記載の免疫原性組み合わせ物。

【請求項3】

さらに以下を含む、請求項１または２に記載の免疫原性組み合わせ物：
（ｃ）少なくとも一つのＴＡＡのポリペプチドをコードする核酸を含む組換えアビポックスウイルス。

【請求項4】

前記アビポックスウイルスが鶏痘ウイルスである、請求項３記載の免疫原性組み合わせ物。

【請求項5】

前記少なくとも一つのＴＡＡがＭＵＣ−１抗原及びＣＥＡ抗原である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の免疫原性組み合わせ物。

【請求項6】

前記少なくとも一つのＴＡＡがＨＥＲ−２抗原である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の免疫原性組み合わせ物。

【請求項7】

前記組換えオルソポックスウイルスが免疫チェックポイントアンタゴニストの前に投与される、請求項１記載の使用のための免疫原性組み合わせ物。

【請求項8】

前記癌が乳癌、肺癌、頭頸部癌、甲状腺、メラノーマ、胃癌、膀胱癌、腎癌、肝癌、メラノーマ、膵癌、前立腺癌、卵巣癌、または結腸直腸癌である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性組み合わせ物。

【請求項9】

前記癌が乳癌である、請求項８に記載の使用のための免疫原性組み合わせ物。

【請求項10】

前記癌が肺癌である、請求項８に記載の使用のための免疫原性組み合わせ物。

【請求項11】

前記癌が前立腺癌である、請求項８に記載の使用のための免疫原性組み合わせ物。

【請求項12】

前記癌が結腸直腸癌である、請求項８に記載の使用のための免疫原性組み合わせ物。

【請求項13】

異種性プライム・ブースト処方の一部として前記組み合わせ物が投与される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性組み合わせ物であって、
前記異種性プライム・ブースト処方が、前記アンタゴニストと組み合わせた第一のプライム用量の組換えオルソポックスウイルス、および前記アンタゴニストと組み合わせた一つまたは複数の後続のブースト用量の前記組換えアビポックスウイルスを含む、免疫原性組み合わせ物。

【請求項14】

前記異種性プライム・ブースト処方が、
前記アンタゴニストと組み合わせた、第一のプライム用量のＰＳＡを発現する組換えオルソポックスウイルス；および
前記アンタゴニストと組み合わせた、一つまたは複数の後続のブースト用量のＰＳＡを発現する組換えアビポックスウイルス、
を含む、請求項１３に記載の使用のための免疫原性組み合わせ物。

【請求項15】

相同性プライム・ブースト処方の一部として前記組み合わせ物が投与される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性組み合わせ物であって、
前記相同性プライム・ブースト処方が、前記アンタゴニストと組み合わせた第一のプライム用量の組換えオルソポックスウイルス、および前記アンタゴニストと組み合わせた一つまたは複数の後続のブースト用量の同一の組換えオルソポックスウイルスを含む、免疫原性組み合わせ物。

【請求項16】

前記異種性プライム・ブースト処方が、
前記アンタゴニストと組み合わせた、第一のプライム用量のＣＥＡ抗原およびＭＵＣ−１抗原を発現する組換えオルソポックスウイルス；および
前記アンタゴニストと組み合わせた、一つまたは複数の後続のブースト用量のＣＥＡおよびＭＵＣ−１を発現する組換えアビポックスウイルス、
を含む、請求項１３に記載の使用のための免疫原性組み合わせ物。

【請求項17】

ヒト癌患者における癌治療において使用するためのキットであって、
（ａ）以下の（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）ＣＥＡ抗原およびＭＵＣ−１抗原；または
（ｉｉ）ＨＥＲ−２抗原、
である少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）のポリペプチドをコードする核酸を含む組換えオルソポックスウイルス；および
（ｂ）ＰＤ−１アンタゴニスト及びＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、
を含み、
前記ＰＤ−１アンタゴニストがＰＤ−１機能に干渉する抗体であり、ＣＴＬＡ−４アンタゴニストがＣＴＬＡ−４機能に干渉する抗体である、前記キット。

【請求項18】

少なくとも一つのＴＡＡのポリペプチドをコードする核酸を含む組換えアビポックスウイルスをさらに含む、請求項１７のキット。

【請求項19】

前記少なくとも一つのＴＡＡがＣＥＡ抗原およびＭＵＣ−１抗原である、請求項１７または１８に記載のキット。

【請求項20】

前記少なくとも一つのＴＡＡがＨＥＲ−２である、請求項１７または１８のいずれか一項に記載のキット。

【請求項21】

請求項１〜７のいずれか一項に記載の免疫原性組み合わせ物を含む、ヒト癌患者の治療において使用するための薬剤または組成物。

【請求項22】

前記癌が乳癌、結腸直腸癌、肺癌、胃癌、膵癌、膀胱癌または卵巣癌である、請求項２１に記載の使用のための薬剤または組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、免疫チェックポイント分子の一つもしくは複数のアゴニストまたはアンタゴニストと併用して腫瘍抗原をコード化する組換えポックスウイルスを用いる癌治療に関する。

【背景技術】

【0002】

組換えポックスウイルスは、感染性生物そして最近では腫瘍に対するワクチンとして使用されてきた（Ｍａｓｔｒａｎｇｅｌｏら，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２０００；１０５（８）：１０３１-１０３４）。アビポックスウイルス及びオルソポックスウイルスの二つのポックスウイルスグループが癌闘病に効果があることが判明し、可能性のある癌治療に取り入れられてきた（同上）。

【0003】

アビポックスウイルス種の一つである鶏痘ウイルスは、哺乳類細胞に入りタンパク質を発現するが複製は不完全なため、ヒト投与用の安全なビヒクル（ｖｅｈｉｃｌｅ）であることが示されている（Ｓｋｉｎｎｅｒら，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ．２００５ Ｆｅｂ；４（１）：６３−７６）。さらに、発現用の鶏痘ウイルスのビヒクルとしての使用は、癌、マラリア、結核、及びＡＩＤＳに対するワクチンの多くの治験で評価されている（同上）。

【0004】

最もよく知られているオルソポックスウイルスであるワクシニアは世界的な天然痘の撲滅に使用され、ベクター及び／またはワクチンとして有用であることが分かっている。組換えワクシニアベクターはｐ９７、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ｐ５３及びＥＴＡといった数種類の腫瘍関連遺伝子を含む幅広い挿入遺伝子を発現するように設計された（Ｐａｏｌｅｔｔｉら，１９９３）。

【0005】

有用なオルソポックスウイルス株は、修飾ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）ウイルスである。ＭＶＡは、ワクシニアウイルスのアンカラ株（ＣＶＡ）をニワトリ胚線維芽細胞で５１６代に渡って連続継代することにより作出された（Ｍａｙｒ，Ａ．ら，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ３，６−１４（１９７５）を参照）。これらの長期の継代の結果として、得られたＭＶＡウイルスはそのゲノム配列の約３１キロ塩基分を欠失しており、従って宿主細胞がトリ細胞に大きく制限される（Ｍｅｙｅｒ，Ｈ．ら，Ｊ． Ｇｅｎ． Ｖｉｒｏｌ． ７２，１０３１−１０３８（１９９１））。得られたＭＶＡが有意に無毒性であることが種々の動物モデルにおいて示された（Ｍａｙｒ，Ａ．＆Ｄａｎｎｅｒ，Ｋ．，Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄ．４１：２２５−３４（１９７８））。さらにこのＭＶＡ株は、ヒト天然痘疾患に対する予防接種のためのワクチンとして、臨床試験において試験されている（Ｍａｙｒら，Ｚｂｌ．Ｂａｋｔ．Ｈｙｇ．Ｉ，Ａｂｔ．Ｏｒｇ．Ｂ１６７，３７５−３９０（１９８７）；Ｓｔｉｃｋｌら，Ｄｔｓｃｈ．ｍｅｄ．Ｗｓｃｈｒ．９９，２３８６−２３９２（１９７４））。これらのヒト研究では、ＭＶＡは良好な特異的免疫応答を誘導した一方、ＭＶＡは病原性または感染力がワクシニア系ワクチンと比較して低減した。

【0006】

その後数十年間、ＭＶＡは組換え遺伝子発現用のウイルスベクターまたは組換えワクチンとして使用するために改変された（Ｓｕｔｔｅｒ，Ｇ．ら，Ｖａｃｃｉｎｅ １２：１０３２−４０（１９９４））。

【0007】

１９７０年代にＭａｙｒらはＭＶＡがヒト及び哺乳類において高度に弱毒化及び無毒化されることを実証したが、研究者の中には細胞における残存複製の可能性からＭＶＡが哺乳類及びヒト細胞株で完全に弱毒化されるわけではないと報告する者もいた。（Ｂｌａｎｃｈａｒｄら，Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ ７９，１１５９−１１６７（１９９８）；Ｃａｒｒｏｌｌ＆Ｍｏｓｓ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２３８，１９８−２１１（１９９７）；Ａｌｔｅｎｂｅｒｇｅｒ，米国特許第５，１８５，１４６号；Ａｍｂｒｏｓｉｎｉら，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｒｅｓ ５５（５），５６９（１９９９））。使用されたウイルスの性質、特に様々な細胞株における増殖挙動が本質的に異なることから、上記文献の結果は様々な既知のＭＶＡ株から得られたと考えられる。残存複製は、ヒトへの使用といった安全上の懸念等様々な理由により望ましくない。

【0008】

ワクチンや医薬品等のより安全な製品の開発用の安全性プロファイルがＭＶＡ株により強化されたことが知られている。本明細書に参照として組み込まれる国際ＰＣＴ公報ＷＯ２００２０４２４８０（例えば米国特許第６，７６１，８９３号及び６，９１３，７５２号）を参照。そのような株は特にニワトリ胚線維芽細胞（ＣＥＦ）といった非ヒト細胞及び細胞株において繁殖複製可能であるが、既知のワクシニア株を複製可能であることが判明しているいくつかのヒト細胞株における有意な繁殖複製は不可能である。こうした細胞株には、ヒト角化細胞細胞株、ＨａＣａｔ（Ｂｏｕｋａｍｐら，Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １０６（３）：７６１−７１（１９８８））、ヒト子宮頸部腺癌細胞株、ＨｅＬａ（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＣＬ−２）、ヒト胚腎臓細胞株、２９３（ＥＣＡＣＣ Ｎｏ．８５１２０６０２）、及びヒト骨肉腫細胞株１４３Ｂ（ＥＣＡＣＣ Ｎｏ．９１１１２５０２）が含まれる。これらの株は、例えば重度に免疫力が低下し複製ウイルスに易感染性であるトランスジェニックマウスモデルＡＧＲ １２９といったいくつかのマウス株においてインビボでの有意な繁殖複製が不可能である。米国特許第６，７６１，８９３号を参照。そうしたＭＶＡ株及びその誘導体及び組換えとして、「ＭＶＡ−ＢＮ」が挙げられる。国際ＰＣＴ公報ＷＯ２００２０４２４８０（例えば米国特許第６，７６１，８９３号及び６，９１３，７５２号）を参照。

【0009】

ＭＶＡ及びＭＶＡ−ＢＮはそれぞれ組換え遺伝子発現用のウイルスベクターまたは組換えワクチンとして改変されてきた。例えば、Ｓｕｔｔｅｒ，Ｇ．ら，Ｖａｃｃｉｎｅ １２：１０３２−４０（１９９４）、国際ＰＣＴ公報ＷＯ２００２０４２４８０（例えば米国特許第６，７６１，８９３号及び６，９１３，７５２号）を参照。

【0010】

癌免疫療法に対するある種のアプローチには、腫瘍関連抗原のワクチン接種が含まれる。いくつかの場合、こうしたアプローチには腫瘍関連抗原に対する宿主免疫応答を促進するデリバリーシステムの使用が含まれる。いくつかの場合、こうしたデリバリーシステムに組換えウイルスベクターが含まれる。例えば、Ｈａｒｒｏｐら，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１１：８０４−８１７（２００６）、Ａｒｌｅｎら，Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３２：５４９−５５５（２００５）、Ｌｉｕら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０１（ｓｕｐｐｌ．２）：１４５６７−１４５７１（２００４）を参照。

【0011】

ＨＥＲ−２は、多数の癌患者の腫瘍細胞に過剰発現する腫瘍関連抗原である。様々なＨＥＲ−２ポリペプチドで免疫付与することにより、この抗原を発現する腫瘍細胞に対する免疫応答が生じる。例えば、Ｒｅｎａｒｄら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １７１：１５８８−１５９５（２００３）、Ｍｉｔｔｅｎｄｏｒｆら，Ｃａｎｃｅｒ １０６：２３０９−２３１７（２００６）を参照。

【0012】

ＨＥＲ−２抗原をコード化するＭＶＡであるＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２が、肺における制御性Ｔ細胞（Ｔ_ｒｅｇ）の頻発を特徴とする強力な腫瘍介在性免疫抑制環境にもかかわらず、実験用肺転移マウスモデルにおいて強力な抗腫瘍有効性を発揮することが示された（Ｍａｎｄｌら，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ（２０１２）６１：１９-２９）。組換えＭＶＡは、Ｔｈ１優位ＨＥＲ−２−特異的抗体及びＴ細胞反応を強く誘導することが報告された（同上）。抗腫瘍活性は、高度に活性化されたＨＥＲ−２−特異的ＣＤ８陽性ＣＤ１１ｃ陽性Ｔ細胞の肺への浸潤増加を特徴とし、肺におけるＴ_ｒｅｇ細胞の存在頻度の低下を伴い、その結果有意にエフェクターＴ細胞対Ｔ_ｒｅｇ細胞比が上昇した（同上）。

【0013】

またＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２は安全かつ寛容破壊により、転移を設定したヒト臨床試験での特異的Ｔ及びＢ細胞応答を誘導することが示された（Ｇｕａｒｄｉｎｏら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ：Ｄｅｃｅｍｂｅｒ １５，２００９；Ｖｏｌｕｍｅ ６９，Ｉｓｓｕｅ ２４，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ ３）。

【0014】

トラスツズマブ（ハーセプチン）はＨＥＲ２の細胞外ドメインを標的とするヒト化モノクローナル抗体（ｍＡｂ）であり、ＨＥＲ２陽性乳癌に対する臨床有効性を示した（Ｗａｎｇら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１２ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ １；７２（１７）：４４１７-４４２８）。しかし、多数の患者が初回トラスツズマブ治療に反応を示さず、継続治療後に多数のトラスツズマブ応答性腫瘍が耐性を示した（同上）。

【0015】

免疫細胞における抑制性受容体は癌における免疫回避の重要な制御因子である（Ｗｏｏら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ；７２（４）；９１７-２７，２０１１）。これらの抑制性受容体の中で、ＣＴＬＡ−４（細胞障害性Ｔリンパ球関連タンパク質４）は優位なオフスイッチとして機能し、その一方でＰＤ−１（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｄｅａｔｈ １、ＣＤ２７９）、ＬＡＧ−３（リンパ球活性化遺伝子、ＣＤ２２３）、及びＴＩＭ−３（Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメイン−３）等の他の受容体がより繊細なレオスタット機能として働くと考えられる（同上）。

【0016】

ＣＴＬＡ−４は活性化したＴ細胞上でアップレギュレートされる免疫チェックポイント分子である（Ｍａｃｋｉｅｗｉｃｚ，Ｗｓｐｏｌｃｚｅｓｎａ ｏｎｋｏｌ ２０１２；１６（５）：３６３−３７０）。ＣＴＬＡ−４はその増殖を抑制する活性化したＴ細胞上で発現される陰性同時刺激分子である（Ｍｅｌｌｍａｎ，Ｎａｔｕｒｅ ２０１１；４８０：４８０−９を参照）。抗ＣＴＬＡ４ ｍＡｂはＣＴＬＡ−４のＣＤ８０／８６との相互作用をブロックし、免疫抑制メカニズムをスイッチオフし、ＤＣによるＴ細胞の継続刺激を可能にする。ＣＴＬＡ−４に対する二つのＩｇＧ ｍＡｂであるイピリムマブ及びトレメリムマブはメラノーマ患者の治験で使用されている（同上）。

【0017】

これらの最近の研究は、ＣＴＬＡ−４に対しＩｇＧ ｍＡｂを使用することでメラノーマ患者が治療上の利益を享受できることを示唆するが、これら抗ＣＴＬＡ−４抗体による治療は高レベルの免疫関連有害事象を示した（Ｍｅｌｌｍａｎら，Ｎａｔｕｒｅ ２０１１；４８０（７３７８）：４８０−４８９）。こうした有害事象は、肝臓に関連した問題と同様に大腸炎及び下垂体炎といった副作用を治療患者が呈する実際の毒性として特徴づけられる（同上）。

【0018】

免疫システムを調節する他のヒトｍＡｂは、死−１受容体（ＰＤ−１Ｒ）に対するＢＭＳ−９３６５５８（ＭＤＸ−１１０６）であり、そのリガンド（ＰＤ−１Ｌ）はメラノーマ細胞上で直接発現される（同上）。ＰＤ−１ＲはＴ細胞活性化及び寛容を制御する同時刺激分子のＢ７：ＣＤ２８ファミリーの一員であり、よって抗ＰＤ−１Ｒは寛容破壊における役割を担う（同上）。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路に関与することによりＴ細胞のエフェクター機能が阻害され、サイトカイン分泌及び増殖が起こる（Ｔｕｒｎｉｓら，ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １：７，１１７２−１１７４；２０１２）。ハイレベルなＰＤ−１は、消耗したまたは慢性的に刺激されたＴ細胞に関連している（同上）。さらに、ＰＤ−１発現上昇は癌患者の生存期間短縮に相関する（同上）。

【0019】

これらの最近の研究結果は、ＰＤ−１発現と癌の生存率との関連づけが可能であることを示唆するが、癌治療におけるＰＤ−１阻害に関する従来の研究では多種多様の有害な副作用が示された（Ｍｅｌｌｍａｎら，Ｎａｔｕｒｅ ２０１１；４８０（７３７８）：４８０−４８９；Ｃｈｏｗ，Ａｍ Ｓｏｃ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ Ｅｄｕｃ Ｂｏｏｋ，２０１３，「Ｅｘｐｌｏｒｉｎｇ ｎｏｖｅｌ ｉｍｍｕｎｅ−ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏｘｉｃｉｔｉｅｓ ａｎｄ ｅｎｄｐｏｉｎｔｓ ｗｉｔｈ ｉｍｍｕｎｅ−ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ」）。

【0020】

ＬＡＧ−３は、様々なリンパ系細胞に発現する陰性同時刺激分子である。炎症条件下（ＩＦＮ−γ刺激等）では、ＬＡＧ−３及びＭＨＣクラスＩＩの両方がアップレギュレートされる（Ｔｒｉｅｂｅｌ Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００３；２４：６１９−２２）。

【0021】

ＴＩＭ−３は慢性感染及び癌においてＴ細胞に発現される（Ｊｉｎ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ２０１０；１０７：１４７３３−８， Ｂａｇｈａｄｉ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ２０１３；６２：６２９−３７）。

【0022】

能動免疫療法及び癌ワクチンといった付加的な癌治療においては実質的に満たされていない医療ニーズが存在する。さらに従来の癌療法の多くに見られる有害な副作用といった観点から、チェックポイントインヒビター療法といった、低い投与量で有効性を保つ療法のニーズが当技術分野に存在する。こうした低投与量療法は副作用の低減及び／または除去に有用となり得る。

【発明の概要】

【0023】

本発明は、ヒト癌患者を治療するための方法、組成物、及びキットを包含する。

【0024】

一つの実施形態において、本発明の方法は、少なくとも一つの腫瘍関連抗原を含むポリペプチドをコード化する組換えポックスウイルスをヒト癌患者に投与すること、およびＰＤ−１アンタゴニスト及びＣＴＬＡ−４アンタゴニストを前記患者に投与することを含む。

【0025】

一つの好ましい実施形態において、前記組換えポックスウイルスは組換えオルソポックスウイルスまたは組換えアビポックスウイルスである。

【0026】

一つのより好ましい実施形態において、前記組換えオルソポックスウイルスは組換えワクシニアウイルスまたは組換え修飾ワクシニアウイルスアンカラ（ＭＶＡ）である。他の好ましい実施形態において、前記組換えオルソポックスウイルスはＭＶＡ−ＢＮである。

【0027】

他の好ましい実施形態において、前記組換えアビポックスウイルスは組換え鶏痘ウイルスである。

【0028】

様々な好ましい実施形態において、前記少なくとも一つの腫瘍抗原に、限定されるものではないが、ＣＥＡ、ＭＵＣ−１、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＨＥＲ−２、サバイビン、ｔｙｒｐ１、ｔｙｒｐ２、またはＢｒａｃｈｙｕｒｙ抗原が含まれる。

【0029】

他の好ましい実施形態において、前記ＰＤ−１アンタゴニスト及び前記ＣＴＬＡ−４アンタゴニストに、抗ＰＤ−１アンタゴニスト抗体及び抗ＣＴＬＡ−４抗体がそれぞれ含まれてもよい。

【0030】

さらに他の実施形態において、本明細書に記載の癌治療が、限定されるものではないが、乳癌、肺癌、胃癌、腎癌、肝癌、メラノーマ、膵癌、前立腺癌、卵巣癌、結腸直腸癌、またはそれらの組み合わせに対する治療である。

【0031】

さらに他の実施形態では、本開示は、ヒト患者における癌の治療方法であって、（ａ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む治療有効量の組換えポックスウイルスベクター及び（ｂ）治療有効量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの組み合わせを前記患者に投与することを含み、前記治療有効量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストにより、少なくとも一つのＴＡＡを含む前記ポックスウイルスベクター単独、前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独、または他の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストとの併用投与と比較した場合、前記組み合わせの投与による前記治療効果が増大する、前記方法を包含する。

【0032】

さらに他の実施形態において、本発明は、一人または複数のヒト癌患者の治療キットであって、治療有効量の少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含むポリペプチドをコード化する組換えポックスウイルス、（ｂ）ＰＤ−１アンタゴニスト、及び（ｃ）ＣＴＬＡ−４アンタゴニストを含むことができる、前記キットを含んでいてもよい。

【0033】

さらに他の実施形態において、前記キットが、（ａ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む組換えポックスウイルスベクター、（ｂ）少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト、及び（ｃ）治療有効量の前記ポックスウイルスベクター及び治療有効量の少なくとも一つの前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを投与する指示を含み、少なくとも一つのＴＡＡを含むポックスウイルスベクター単独、少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独、または他の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストとの併用投与と比較して、前記ポックスウイルスベクターを併用した前記治療有効量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの治療効果が増大する、前記キットであってもよい。

【0034】

さらに他の実施形態では、本発明に、ヒト癌患者における癌の治療方法であって、（ａ）治療有効量の少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む組換えポックスウイルス及び（ｂ）治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの組み合わせを前記患者に投与することを含み、前記治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストにより、前記少なくとも一つのＴＡＡを含むポックスウイルス単独、前記治療有効量以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独、または他の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの併用投与と比較して、前記組み合わせの前記治療効果が増大する、前記方法が含まれる。

【0035】

本発明のその他の目的及び有利な効果は本明細書の一部に記載されており、本明細書より明らかであるかもしくは本発明の実施によって知ることができる。本発明の目的及び有利な効果添付の請求項において具体的に記載されている要素及び組み合わせにより実現及び達成されるであろう。

【0036】

上述の一般的な説明と、以下に述べる詳細な説明は具体例であって、例示だけを目的としており、特許請求されている本発明の範囲の限定を意図するものではない。

【0037】

本出願の一部として組み入れられる添付の図面は一つまたは複数の本発明の実施形態を本明細書とともに解説するものであり、本発明の原理を説明するものである。

【図面の簡単な説明】

【0038】

【図1】ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２及び抗ＣＴＬＡ−４による腫瘍浸潤抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞の増加を示す。実施例２に記載の通りマウスに細胞を移植し、３日目及び１８日目に未処置とするか２００μｇの抗ＣＴＬＡ−４（１００μＬのＰＢＳで腹腔内投与）で処置し、及び／または４日目及び１８日目に未処置とするか１×１０７ Ｉｎｆ．Ｕ ＭＶ−ＢＮ−ＨＥＲ２（７．１μＬ、尾乱切法）で処置した。２５日目に腫瘍／肺または脾臓をプールし（４匹／群）、一晩再度刺激し、ウイルス及び腫瘍抗原特異的応答を測定した。

【図2】ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処置による脾臓における腫瘍抗原及びウイルス特異的Ｔ細胞の規模及び質の増加を示す。実施例３に記載の通りマウスに細胞を移植した。Ａ）はＣＤ８陽性Ｔ細胞１００万個あたりのＩＦＮγ陽性細胞数を反映するように重み付けされた円グラフである。Ｂ）は多官能性Ｔ細胞の併用療法によるＩＦＮγ ＭＦＩの増加を示す。

【図3】実験用肺転移モデルにおいてＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２が抗ＣＴＬＡ−４に相乗作用すると腫瘍が除去され生存期間が延長すること示す。実施例４に記載の通り１日目にマウスに細胞を移植し、４日目及び１８日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置し、３日目及び１７日目に抗ＣＴＬＡ−４で処置した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、ログ・ランク検定。

【図4】ＣＴ２６−ＨＥＲ−２肺腫瘍担持マウスを実施例５に記載の通り２５日目に処置し全身腫瘍組織量分析を行った。図４Ａでは、マウスを安楽死させて気管からトリパンブルーでかん流した。肺を摘出して過酸化水素に短時間浸漬した後ＰＢＳに浸漬した。未処置及び抗ＣＴＬＡ−４処置肺に小さな腫瘍塊が認められる。ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処置マウスでは腫瘍は観察されなかった。スケールバーは１ｃｍに相当。図４Ｂでは、２５日目ではＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処置マウスの肺重量はナイーブマウスと同様であったが、２５日目の未処置及び抗ＣＴＬＡ−４処置マウスでは肺重量が有意に多い。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、一元配置分散分析を用いたＤｕｎｎｅｔｔの多重比較検定。

【図5】実施例６に記載の通りＣＴ２６−ＨＥＲ−２腫瘍をマウスに移植した。４日目及び１８日目に１００μＬのＰＢＳで２００μｇ（Ａ：１０ｍｇ／ｋｇ）、６６ｕｇ（Ｂ：３ｍｇ／ｋｇ）、または２２μｇ（Ｃ：１ｍｇ／ｋｇ）のＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２及び抗ＣＴＬＡ−４を腹腔内投与しマウスを処置した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、ログ・ランク検定。

【図6】実施例７に記載の通りマウスに細胞を移植した。マウスを１日目及び１５日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２（１００μＬのＴＢＳで１Ｅ７ Ｉｎｆ．Ｕ．を尾基部に皮下投与）及び２２μｇの抗ＣＴＬＡ−４（１ｍｇ／ｋｇ）で処置した。結果はＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２を併用した低用量抗ＣＴＬＡ−４により、２０日目に他の治療と比べて有意に全身腫瘍組織量が低下したことを示す。

【図7】実施例８に記載の通りマウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２腫瘍を移植した。４日目及び１８日目に１００μＬのＰＢＳで２００μｇ（Ａ：１０ｍｇ／ｋｇ）、６６ｕｇ（Ｂ：３ｍｇ／ｋｇ）、または２２μｇ（Ｃ：１ｍｇ／ｋｇ）のＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２及び抗ＰＤ−１を腹腔内投与しマウスを処置した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊ｐ＜０．０５、ｎｓ＝ログ・ランク検定による有意差なし。

【図8】実施例９に記載の通りメスＢＡＬＢ／ｃマウス（６−８週齢、〜２０ｇ、Ｓｉｍｏｎｓｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｇｉｌｒｏｙ、ＣＡ）に細胞を移植した。マウスを４日目及び１８日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置し、３日目及び１７日目に１００μＬのＰＢＳで２００μｇ（Ａ：１０ｍｇ／ｋｇ）、６６ｕｇ（Ｂ：３ｍｇ／ｋｇ）、または２２μｇ（Ｃ：１ｍｇ／ｋｇ）の抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＰＤ−１の各抗体を腹腔内投与し処置した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、ログ・ランク検定。

【図9】実施例１０に記載の通り１日目にメスＣ５７／ＢＬ６マウス（６−８週齢、〜２０ｇ、Ｓｉｍｏｎｓｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｇｉｌｒｏｙ、ＣＡ）に細胞を移植した。マウスを４日目及び１８日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１で処置し、抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＰＤ−１（各２００μｇ）を腹腔内投与し処置した。

【図10】Ｅ６固形腫瘍モデルにおけるＰＲＯＳＴＶＡＣ及び抗ＰＤ−１の併用療法を示す。実施例１２に記載の通りマウスに腫瘍を移植した。図１０Ａでは、マウスを１日目にＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｖで処置し、８日目及び１５日目にＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｆで処置した。１日目及び１５日目に抗ＰＤ−１を投与した。図１０Ａはマウスの平均腫瘍容積を示す。図１０Ｂはマウスの個体別の腫瘍増殖を示す。

【図11】Ｅ６固形腫瘍モデルにおけるＰＲＯＳＴＶＡＣ及び抗ＬＡＧ−３の併用療法を示す。実施例１３に記載の通りマウスに腫瘍を移植した。図１１Ａでは、マウスを１日目にＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｖで処置し、８日目及び１５日目にＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｆで処置した。１日目及び１５日目に抗ＬＡＧ−３を投与した。図１１Ａはマウスの平均腫瘍容積を示す。図１１Ｂはマウスの個体別の腫瘍増殖を示す。

【図12】Ｅ６固形腫瘍モデルにおけるＰＲＯＳＴＶＡＣと抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３との併用療法を示す。実施例１４に記載の通りマウスに腫瘍を移植した。図１２Ａでは、マウスを１日目にＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｖで処置し、８日目及び１５日目にＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｆで処置した。１日目及び１５日目に抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３を投与した。図１２Ａはマウスの平均腫瘍容積を示す。図１２Ｂはマウスの個体別の腫瘍増殖を示す。

【図13】実施例１５に記載の通りマウスに細胞を移植した。マウスを７日目及び２２日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２（１Ｅ７ Ｉｎｆ．Ｕ．、尾乱切法）で処置し、１、４、８、１１、１５、１８、２２、２５日目に抗ＩＣＯＳ（２００μｇ腹腔内投与）で処置した。図１３Ａはマウスの平均腫瘍容積を示す。図１３Ｂはマウスの個体別の腫瘍増殖を示す。

【図14】ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処置によるＴｉｍ−３発現増加を示す。実施例３２に記載の通りマウスを処置した。１５ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処置（１Ｅ７ Ｉｎｆ．Ｕ．、尾乱切法）１日及び５日後に、マウスにおけるＴｉｍ−３発現を測定した。

【図15】実施例３３に記載の通りマウスを処置した。一回のＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処置後、ＩＣＯＳはＣＤ８陽性Ｔ細胞では肺及び血液で１０日目に上昇し（Ａ）、ＣＤ４陽性Ｔ細胞では肺、血液、及び脾臓で上昇した（Ｂ）。１５日目の二回目のＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処置により、ＩＣＯＳはＣＤ８陽性Ｔ細胞（Ｃ）及びＣＤ４陽性Ｔ細胞（Ｄ）では肺、血液、及び脾臓で上昇した。データは平均±ＳＥＭで表し、各時点で一群あたりマウス３匹とした。

【図16】実施例３４に記載の通りマウスを処置した。１日目のＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処置により肺及び血液におけるＣＤ８陽性Ｔ細胞のＰＤ−１発現が上昇した（Ａ）。さらに１５日目の二回目の処置により肺、脾臓、及び血液におけるＰＤ−１発現が上昇した（Ｃ）。１回の処置後肺におけるＣＤ４陽性Ｔ細胞のＰＤ−１発現は若干上昇し（Ｂ）、二回目のＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処置後は安定した（Ｄ）。

【図17】実施例３５に記載の通りマウスを処置した。１日目（Ａ）または１日目及び１５日目（Ｃ）のＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処置により肺、脾臓、及び血液におけるＣＤ８陽性Ｔ細胞のＬＡＧ−３発現が上昇した。ＣＤ４陽性Ｔ細胞のＬＡＧ−３発現は１日目（Ｂ）または１日目及び１５日目（Ｄ）のＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処置後に若干上昇した。

【図18】ＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１及び抗ＰＤ−１によるＭＣ３８−ＣＥＡ固形腫瘍モデルにおける腫瘍増殖の遅延を示す。実施例３７に記載の通り、マウスにＭＣ３８−ＣＥＡ腫瘍を皮内移植して処置した。マウスをさらにＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１及び抗ＰＤ−１で処置した。図１８Ａはマウスの平均腫瘍容積を示す。図１８Ｂはマウスの個体別の腫瘍増殖を示す。

【図19】ＭＣ３８−ＣＥＡ固形腫瘍モデルにおけるＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１及び抗ＬＡＧ−３の併用療法を示す。実施例３８に記載の通り、マウスにＭＣ３８−ＣＥＡ腫瘍を皮内移植して処置した。マウスをさらにＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１及び抗ＬＡＧ−３で処置した。図１９Ａはマウスの平均腫瘍容積を示す。図１９Ｂはマウスの個体別の腫瘍増殖を示す。

【図20】ＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ−３０１と抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３との併用療法を示す。実施例３９に記載の通り、マウスにＭＣ３８−ＣＥＡ腫瘍を皮内移植して処置した。マウスをさらにＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ−３０１、抗ＬＡＧ−３、及び抗ＰＤ−１で処置した。図２０Ａはマウスの平均腫瘍容積を示す。図２０Ｂはマウスの個体別の腫瘍増殖を示す。

【図21】実施例４０に記載の通りマウスを処置した。プールした脾細胞を、ＰＳＡ−特異的応答についてＩＦＮ ＥＬＩＳＰＯＴ（Ａ、Ｂ）で、細胞障害活性（ＣＤ１０７陽性ＩＦＮγ陽性ＣＤ８Ｔ細胞（％））についてフローサイトメトリー（Ｃ）でアッセイを行った。ＥＬＩＳＡにより各マウス個体の抗ＰＳＡ ＩｇＧ力価を測定した（Ｄ）。ＥＬＩＳＰＯＴの場合、独立して実施した４回の実験結果の代表的データをグラフに示す。

【図22】実施例４１に記載の通りマウスを処置した。図２２Ａは、検出細胞数を反映している大きさで重み付けした円グラフを示す（Ｔ細胞１００万個あたりのＰＳＡ−特異的ＣＤ８細胞の合計を各円グラフに示す）。図２２Ｂは平均蛍光強度（ＭＦＩ）により測定した細胞ごとのＩＦＮγ産生を示す。独立して実施した２回の実験結果の代表的データをグラフに示す。

【図23】実施例４２に記載の通りマウスを処置した。プールした脾細胞を、前回処置の１４日後にフローサイトメトリーによりワクシニアウイルス（ＶＶ）−特異的（左側のパネルＡ及びＣ）またはＰＳＡ−特異的（右側のパネルＡ及びＣ）細胞障害活性（ＣＤ１０７陽性ＩＦＮγ陽性ＣＤ８Ｔ細胞（％））についてアッセイした。独立して実施した２回の実験結果の代表的データをグラフに示す。

【発明を実施するための形態】

【0039】

一つまたは複数の腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を発現するよう改変されたワクシニア、修飾ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）、及び鶏痘系ベクターを用いた療法が、多くの最近の治験で取り入れられている。これらのベクターを単独またはプライム・ブースト戦略で使用し様々な癌に対する能動免疫応答を生じさせる。ＰＲＯＳＴＶＡＣ（登録商標）はＰＳＡ及びＴＲＩＣＯＭ（商標）を発現するワクシニア及び鶏痘を用いたプライム・ブースト戦略を採用し、去勢抵抗性転移前立腺癌のグローバルフェーズ３治験（ＰＲＯＳＰＥＣＴ）で現在使用されている。ＣＶ３０１またはＣＶ−３０１はＭＵＣ−１抗原、ＣＥＡ、及びＴＲＩＣＯＭ^ＴＭを発現するワクシニア及び鶏痘を用いた異種性プライム・ブースト戦略を採用し、膀胱癌のフェーズ２治験で現在使用されている。

【0040】

ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２（Ｍａｎｄｌら，２０１２）はＨＥＲ−２陽性乳癌の治療を目的としたフェーズ１治験で使用されている。この組換えベクターはＭＶＡ−ＢＮとして知られる高度に弱毒化した修飾ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）ウイルスに由来する。ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２は、破傷風毒素（ＴＴｐ２及びＴＴｐ３０）由来の２つのユニバーサルＴ細胞エピトープを有するよう設計されたＨＥＲ−２の細胞外ドメインからなる修飾型ＨＥＲ−２（特定のＨＥＲ２）を発現し、それによりＨＥＲ−２に対する効果的な免疫応答の誘導を容易にする。

【0041】

さらにポックスウイルス系免疫療法の抗腫瘍有効性を高めるために、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２をＣＴＬＡ−４の活性を遮断するモノクローナル抗体であるＴ細胞活性化をダウンレギュレートする免疫チェックポイントタンパク質と組み合わせた。ＣＴ２６−ＨＥＲ−２実験用肺転移モデルにおいて、抗ＣＴＬＡ−４治療自体による生存期間に対する恩恵はあまり認められなかったものの、生存期間の中央値は未処置マウスの３０日間からＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処置マウスの４９．５日間に増加した。（生存期間中央値３５日間）。対照的に、抗ＣＴＬＡ−４併用のＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２では、５０％超のマウスで１００日間を超える有意な生存期間の増加を認めた（ｐ＜０．０００１）。１００日目に生存マウスを調べたところ腫瘍は観察されなかった。

【0042】

様々な腫瘍モデルにおけるＰＤ−１及びＬＡＧ−３に対する様々なアンタゴニスト抗体を併用し、ＰＲＯＳＴＶＡＣ（登録商標）及びＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１（ＴＲＩＣＯＭ有りまたは無しでのＣＥＡ及びＭＵＣ−１発現ＭＶＡ）をそれぞれ試験した。併用によりＰＲＯＳＴＶＡＣ（登録商標）及びＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１の効果が高められることが分かった。

【0043】

ＣＴＬＡ−４のアンタゴニスト及び他の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを用いた癌治療の毒性及び副作用（Ｍｅｌｌｍａｎら，Ｎａｔｕｒｅ ２０１１を参照）を考慮して、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２等の腫瘍関連抗原をコード化する組換えポックスウイルスをＣＴＬＡ−４活性を遮断するモノクローナル抗体と併用して用量漸増アッセイを行った。本明細書に図示及び記載の通り、ＣＴＬＡ−４阻害と組み合わせたＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２等の組換えポックスウイルス療法により、ＣＴＬＡ−４阻害単独または組換えポックスウイルス療法単独の癌治療と比較して、治療効果の増大を達成できた。最も重要なことは、治療有効性が低投与量であっても組み合わせ治療により維持されたことであった。

【0044】

付加的免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを用いたポックスウイルス系免疫療法の抗腫瘍有効性の向上を測定するために、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２にＰＤ−１に対するアンタゴニスト抗体と同様にＣＴＬＡ−４の活性を遮断するモノクローナル抗体を組み合わせた。本明細書に図示及び記載の通り、組換えポックスウイルス療法にＣＴＬＡ−４抗体及びＰＤ−１アンタゴニストを併用した場合、ＣＴＬＡ−４併用及びＰＤ−１阻害単独または組換えポックスウイルス療法単独での癌治療と比較して治療効果の増大を達成できた。最も重要なことは、治療有効性が低投与量であっても組み合わせ治療により維持されたことであった。

【0045】

さらに付加的免疫チェックポイントアンタゴニスト及びアゴニストを用いたポックスウイルス系免疫療法の抗腫瘍有効性の向上を測定するために、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２等の腫瘍関連抗原をコード化する組換えポックスウイルスを本明細書に記載の様々な付加的免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用して用量漸増アッセイを行った。本明細書に図示及び記載の通り、本明細書における免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを併用した組換えポックスウイルス療法では、治療効果の増大を達成できた。最も重要なことは、治療有効性が低投与量であっても組み合わせ治療により維持されたことであった。

【0046】

少なくとも一つの態様において、本発明の方法及び組成物は、低投与量でも優位な治療有効性を有し、現在の癌療法で認められる有害な副作用を最小限にしつつ免疫チェックポイント及びポックスウイルス癌療法の治療上の利益を最大化するようデザインされている。一つの実施形態において、副作用の低減を伴う治療上の利益は、ポックスウイルス療法を併用した低投与量の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト（例えば、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト抗体）の投与により達成される。本発明により提供される通り、ポックスウイルス療法を併用した場合、免疫チェックポイントアゴニスト及びアンタゴニストは低投与量であっても治療有効性を維持する。意義深いことに、低投与量で治療有効性が維持される場合、単独療法として治療有効量以下で免疫チェックポイントアゴニストまたはアンタゴニストを投与する場合も含まれる。

【0047】

その他の実施形態では、本発明は、ポックスウイルス療法及び免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの組み合わせを投与する一つまたは複数の投与処方及び方法を含む。少なくとも一つの態様では、本明細書で提示する投与処方及び方法は、癌療法に関連した有害な副作用を最小限としつつ免疫チェックポイント及びポックスウイルス癌療法の治療上の利益を最大化するようデザインされている。

【0048】

腫瘍抗原を含むポリペプチドをコード化するポックスウイルス
本発明の一つの実施形態において、少なくとも一つの腫瘍抗原もしくは腫瘍関連抗原を含むポリペプチドをコード化する及び／または発現する組換えポックスウイルスをヒト癌患者に投与すること、少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを前記患者に投与することを含む方法がある。

【0049】

一つの実施形態において、腫瘍抗原を発現する組換えポックスウイルスは限定されないが、好ましくはワクシニアウイルス、修飾ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）ウイルス、またはＭＶＡ−ＢＮといったオルソポックスウイルスである。

【0050】

ワクシニアウイルス株の例として、天壇（Ｔｅｍｐｌｅ ｏｆ Ｈｅａｖｅｎ）株、コペンハーゲン株、パリ株、ブダペスト株、大連（Ｄａｉｒｅｎ）株、ガム（Ｇａｍ）株、ＭＲＩＶＰ株、パー（Ｐｅｒ）株、タシケント株、ＴＢＫ株、トム（Ｔｏｍ）株、ベルン（Ｂｅｒｎ）株、パトワダンガル（Ｐａｔｗａｄａｎｇａｒ）株、ＢＩＥＭ株、Ｂ−１５株、リスター（Ｌｉｓｔｅｒ）株、ＥＭ−６３株、ニューヨーク市公衆衛生局（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｃｉｔｙ Ｂｏａｒｄ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）株、エルストリー（Ｅｌｓｔｒｅｅ）株、池田（Ｉｋｅｄａ）株及びＷＲ株が挙げられる。好ましいワクシニアウイルス（ＶＶ）株はＷｙｅｔｈ（ＤＲＹＶＡＸ）株（米国特許第７，４１０，６４４号）である。他の好ましいＶＶ株は修飾されたワクシニアウイルスアンカラ（ＭＶＡ）（Ｓｕｔｔｅｒ，Ｇ．ら［１９９４］，Ｖａｃｃｉｎｅ １２：１０３２−４０）である。他の好ましいＶＶ株はＭＶＡ−ＢＮである。

【0051】

本発明の実施に有用でありブダペスト条約の規定に従って寄託されているＭＶＡウイルス株の例として、ヨーロピアン・コレクション・オブ・アニマル・セル・カルチャーズ（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ：ＥＣＡＣＣ）（Ｖａｃｃｉｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｃｅｎｔｒｅ ｆｏｒ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｐｏｒｔｏｎ Ｄｏｗｎ、Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ、Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ ＳＰ４ ０ＪＧ、Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）に受託番号ＥＣＡＣＣ ９４０１２７０７で寄託されている（１９９４年１月２７日）ＭＶＡ ５７２、同様にヨーロピアン・コレクション・オブ・アニマル・セル・カルチャーズ（ＥＣＡＣＣ）に寄託されているＭＶＡ５７５（受託番号ＥＣＡＣＣ ００１２０７０７、２０００年１２月７日寄託）及びＭＶＡ−ＢＮ（受託番号Ｖ０００８３００８、２０００年８月３０日寄託）、及びそれらの誘導体が挙げられる。

【0052】

高い安全性（低複製コンピテント）からＭＶＡ−ＢＮが好ましいが、すべてのＭＶＡが本発明に適している。本発明の実施形態によれば、ＭＶＡ株はＭＶＡ−ＢＮ及びその誘導体である。ＭＶＡ−ＢＮ及びその誘導体の定義は、本明細書に参照として組み入れるＰＣＴ／ＥＰ０１／１３６２８に記載の通りである。

【0053】

一つの実施形態において、本発明は、癌療法のための組換えオルソポックスウイルス、好ましくはワクシニアウイルス（ＶＶ）、Ｗｙｅｔｈ株、ＡＣＡＭ １０００、ＡＣＡＭ ２０００、ＭＶＡ、またはＭＶＡ−ＢＮの使用を包含する。組換えオルソポックスウイルスは、オルソポックスウイルスに異種性配列を挿入することにより作製される。

【0054】

いくつかの実施形態では、オルソポックスウイルスは少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む。好ましい実施形態では、ＴＡＡには、限定されるものではないが、ＣＥＡ、ＭＵＣ−１、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＨＥＲ−２、サバイビン、ｔｙｒｐ１、ｔｙｒｐ２、またはＢｒａｃｈｙｕｒｙ抗原が含まれる。

【0055】

さらなる実施形態では、腫瘍関連抗原が一つまたは複数の外来Ｔ_Ｈエピトープを含むように修飾を行う。様々な癌免疫療法剤が本明細書に記載される。少なくとも一つの態様では、本発明により、そうした製剤を免疫不全患者を含むヒト及び他の哺乳類のプライム／ブーストワクチン接種処方に使用し、既存のＴｈ２環境におけるＴｈ１免疫応答誘導等の液性及び細胞免疫応答を誘導可能である。

【0056】

いくつかの実施形態では、ＭＶＡは受託番号Ｖ０００８３００８ＭＶＡ−ＢＮでヨーロピアン・コレクション・オブ・アニマル・セル・カルチャーズ（ＥＣＡＣＣ）に２０００年８月３０日に寄託された国際ＰＣＴ公報ＷＯ２００２０４２４８０に記載のＭＶＡ−ＢＮである（米国特許第６，７６１，８９３号及び６，９１３，７５２号参照）。これら特許文献に記載の通り、ＭＶＡ−ＢＮは２９３、１４３Ｂ、ＨｅＬａ及びＨａＣａｔの細胞株において繁殖的に複製されない。特に、ＭＶＡ−ＢＮは、ヒト胚腎臓細胞株２９３において０．０５〜０．２の応答倍率を示す。ヒト骨肉腫細胞株１４３Ｂでは、ＭＶＡ−ＢＮは、０．０〜０．６の応答倍率を示す。ヒト子宮頸部腺癌細胞株ＨｅＬａでは、ＭＶＡ−ＢＮは、０．０４〜０．８の応答倍率を示し、ヒト角化細胞細胞株ＨａＣａｔでは０．０２〜０．８の応答倍率を示す。アフリカミドリザル腎臓細胞（ＣＶ１：ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＣＬ−７０）では、ＭＶＡ−ＢＮは０．０１〜０．０６の応答倍率を示す。

【0057】

国際ＰＣＴ公報ＷＯ２００２０４２４８０（例えば米国特許第６，７６１，８９３号及び６，９１３，７５２号を参照）に記載されるように、ニワトリ胚線維芽細胞では、ＭＶＡ−ＢＮの応答倍率は１より大きい（ＣＥＦ：初代培養）。このウイルスはＣＥＦの初代培養において５００倍超に簡単に繁殖及び増幅可能である。

【0058】

いくつかの実施形態では、組換えＭＶＡはＭＶＡ−ＢＮの誘導体である。このような「誘導体」には、基本的に寄託株（ＥＣＡＣＣ Ｎｏ．Ｖ０００８３００８）と同じ複製特性を示すが、ＭＶＡのゲノムの一つまたは複数の部分において異なるウイルスが含まれる。寄託ウイルスと同様の「複製特性」を有するウイルスは、ＣＥＦ細胞及びＨｅＬａ、ＨａＣａｔ及び１４３Ｂ細胞株において寄託株と同様の応答倍率で複製し、例えばＡＧＲ１２９トランスジェニックマウスモデルにおいて特定される同様の複製特性をインビボで示すウイルスである。

【0059】

いくつかの実施形態では、前記ポックスウイルスは、ポックスウイルスに対して異種性を示す付加的塩基配列を含む組換えワクシニアウイルスである。そのようないくつかの実施形態では、異種性配列は免疫システムにより応答を誘導するエピトープをコード化する。よって、いくつかの実施形態では、組換えポックスウイルスは、該エピトープを含むタンパク質または製剤に対してワクチン接種する目的で使用される。一つの実施形態において、該エピトープは腫瘍関連抗原、好ましくはＨＥＲ−２である。一つの実施形態において、ＨＥＲ−２抗原は配列番号２の配列を含む。

【0060】

その他の実施形態では、前記エピトープは、限定されるものではないが、ＣＥＡ、ＭＵＣ−１、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＨＥＲ−２、サバイビン、ｔｙｒｐ１、ｔｙｒｐ２、またはＢｒａｃｈｙｕｒｙ等の抗原から選択される腫瘍関連抗原である。

【0061】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の腫瘍関連抗原をコード化する異種性核酸配列は、前記ウイルスゲノムの非必須領域に挿入される。それらのいくつかの実施形態では、ＰＣＴ／ＥＰ９６／０２９２６に記載される通り、異種性核酸配列はＭＶＡゲノムの天然欠失部位に挿入される。異種性配列をポックスウイルスゲノムに挿入する方法は当業者に周知である。

【0062】

別の実施形態では、腫瘍抗原を発現する組換えポックスウイルスは、限定されるものではないが、鶏痘ウイルス等のアビポックスウイルスである。

【0063】

ここで「アビポックスウイルス」とは、鶏痘ウイルス、カナリア痘ウイルス、ジュンコ痘ウイルス、マイナ痘ウイルス、鳩痘ウイルス、オウム痘ウイルス、ウズラ痘ウイルス、クジャク痘ウイルス、ペンギン痘ウイルス、スズメ痘ウイルス、ムクドリ痘ウイルス及び七面鳥痘ウイルスなど、任意のアビポックスウイルスを指す。好ましいアビポックスウイルスは、カナリア痘ウイルス及び鶏痘ウイルスである。

【0064】

カナリア痘ウイルスの一例はレンチュラー（Ｒｅｎｔｓｃｈｌｅｒ）株である。ＡＬＶＡＣと呼ばれるプラーク精製されたカナリア痘ウイルス（米国特許第５，７６６，５９８号）は、ブダペスト条約の規定に基づいて、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ：ＡＴＣＣ）に受託番号ＶＲ−２５４７として寄託された。もう１つのカナリア痘ウイルス株は、ＬＦ２ ＣＥＰ ５２４ ２４ １０ ７５と呼ばれる市販のカナリア痘ワクチン株であり、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｍｅｒｉｅｕｘ，Ｉｎｃ．から入手することができる。

【0065】

鶏痘ウイルスの例はＦＰ−１、ＦＰ−５及びＴＲＯＶＡＣ（米国特許第５，７６６，５９８号）株及びＰＯＸＶＡＣ−ＴＣ（米国特許第７，４１０，６４４号である。ＦＰ−１は、一日齢のニワトリにワクチンとして使用するために改変されたデュベット（Ｄｕｖｅｔｔｅ）株である。この株は、Ｏ ＤＣＥＰ ２５／ＣＥＰ６７／２３０９ Ｏｃｔｏｂｅｒ １９８０と呼ばれる市販の鶏痘ウイルスワクチン株であり、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｍｅｒｉｅｕｘ，Ｉｎｃ．から入手することができる。ＦＰ−５は、ニワトリ胚由来の市販の鶏痘ウイルスワクチン株であり、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｃｏｒｐ．），Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｌｉｃｅｎｓｅ Ｎｏ．１６５，ｓｅｒｉａｌ Ｎｏ．３０３２１から入手することができる。

【0066】

ワクシニアウイルスの例は、天壇（Ｔｅｍｐｌｅ ｏｆ Ｈｅａｖｅｎ）株、コペンハーゲン株、パリ株、ブダペスト株、大連（Ｄａｉｒｅｎ）株、ガム（Ｇａｍ）株、ＭＲＩＶＰ株、パー（Ｐｅｒ）株、タシケント株、ＴＢＫ株、トム（Ｔｏｍ）株、ベルン（Ｂｅｒｎ）株、パトワダンガル（Ｐａｔｗａｄａｎｇａｒ）株、ＢＩＥＭ株、Ｂ−１５株、リスター（Ｌｉｓｔｅｒ）株、ＥＭ−６３株、ニューヨーク市公衆衛生局（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｃｉｔｙ Ｂｏａｒｄ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）株、エルストリー（Ｅｌｓｔｒｅｅ）株、池田（Ｉｋｅｄａ）株及びＷＲ株である。好ましいワクシニアウイルス（ＶＶ）株にＷｙｅｔｈ（ＤＲＹＶＡＸ）株（米国特許第７，４１０，６４４号）、ＡＣＡＭ１０００、またはＡＣＡＭ２０００が含まれてもよい。他の好ましいＶＶ株は修飾ワクシニアウイルスアンカラ（ＭＶＡ）（Ｓｕｔｔｅｒ，Ｇ．ら［１９９４］，Ｖａｃｃｉｎｅ １２：１０３２−４０）である。他の好ましいＶＶ株はＭＶＡ−ＢＮである。

【0067】

いくつかの実施形態では、前記アビポックスウイルスに、少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）が含まれる。好ましい実施形態では、ＴＡＡに、限定されるものではないが、ＣＥＡ、ＭＵＣ−１、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＨＥＲ−２、サバイビン、ｔｙｒｐ１、ｔｙｒｐ２、またはＢｒａｃｈｙｕｒｙ抗原が含まれる。

【0068】

その他の実施形態では、腫瘍抗原を発現する組換えポックスウイルスは、腫瘍抗原を発現するワクシニアウイルス及び腫瘍抗原を発現する鶏痘等のアビポックスウイルスの組み合わせである。ワクシニアウイルス及び鶏痘ウイルスの組み合わせを異種性プライム・ブースト処方として投与可能であると考えられる。ある非限定的な例では、異種性プライム・ブースト処方はＰＲＯＳＴＶＡＣ（登録商標）またはＣＶ３０１である。

【0069】

ワクチンの作製において、ポックスウイルスを生理学的に許容可能な形態に変換できる。いくつかの実施形態では、そうしたワクチン作製は、例えば、Ｓｔｉｃｋｌ，Ｈ．ら，Ｄｔｓｃｈ．ｍｅｄ．Ｗｓｃｈｒ．９９，２３８６−２３９２（１９７４）に記載のように天然痘に対するワクチン接種に使用するポックスウイルスワクチンの作製における経験に基づく。

【0070】

作製例を以下の通り記載する。精製ウイルスを−８０℃、力価５´１０^８ＴＣＩＤ_５０／ｍｌで１０ｍＭ Ｔｒｉｓ及び１４０ｍＭ ＮａＣｌにｐＨ７．４で配合する。ワクチンショットの作製では、例えば、１０^２〜１０^８個のウイルス粒子を、アンプル、好ましくはガラスアンプル内で２％ペプトン及び１％ヒトアルブミンの存在下でリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に加え凍結乾燥することができる。あるいは、ワクチンショットを、製剤中のウイルスを段階的に凍結乾燥して作製することもできる。いくつかの実施形態では、製剤はマンニトール、デキストラン、糖、グリシン、ラクトース、ポリビニルピロリドンといった付加的添加剤を含み、また限定されるものではないが、インビボ投与に適した抗酸化剤や不活性ガス、安定剤や組換えタンパク質（例えばヒト血清アルブミン）等の他の添加剤を含む。該アンプルをその後封止し、適切な温度、例えば４°Ｃ〜室温で数ヶ月間保存可能である。しかし、必要なければアンプルを温度−２０℃未満で保存することが好ましい。

【0071】

ワクチン接種または療法に関する様々な実施形態、凍結乾燥物を０．１〜０．５ｍｌの水性溶液、好ましくは生理食塩水またはＴｒｉｓ緩衝液に溶解し、全身的または局所的に、すなわち非経口、皮下、経静脈、筋肉内、経鼻、皮内投与、または当業者に周知の他の任意の投与経路により投与する。投与形態、用量、及び投与回数は当業者の技術及び知識範囲内である。

【0072】

いくつかの実施形態では、弱毒化ワクシニアウイルス株は、免疫力が低下した動物、例えばＳＩＶに感染したサル（ＣＤ４＜血液４００／μｌ）または免疫力が低下したヒトにおける免疫応答の誘導に有用である。ここで「免疫力が低下した」とは、不完全な免疫応答のみ示すまたは病原体に対する防御の効率性が低下した個体の免疫システムの状態を指す。

【0073】

一定の例示的腫瘍関連抗原
ある実施形態では、細胞関連ポリペプチド抗原に対する免疫応答を、対象内で生じさせる。そのような実施形態では、細胞関連ポリペプチド抗原が腫瘍関連抗原である。

【0074】

ここで「ポリペプチド」とは、ペプチド結合または修飾ペプチド結合により結合した二つ以上のアミノ酸のポリマーを指す。該アミノ酸は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、または天然アミノ酸の化学的アナログであってもよい。該用語はまたタンパク質、すなわち少なくとも一つのポリペプチドを含む機能的生体分子を指し、少なくとも二つのポリペプチドを含む場合、これらポリペプチドは複合体を形成してもよく、共有結合または非共有結合していてもよい。タンパク質のポリペプチドは、グリコシル化及び／または脂質付加可能であり及び／または接合団を含むことができる。

【0075】

好ましくは腫瘍関連抗原には、限定されるものではないが、ＨＥＲ−２、ＰＳＡ、ＰＡＰ、ＣＥＡ、ＭＵＣ−１，サバイビン、ｔｙｒｐ１、ｔｙｒｐ２、またはＢｒａｃｈｙｕｒｙ単独もしくはそれらの組み合わせが含まれる。そういった組み合わせ例にＣＥＡ及びＣＶ３０１としても知られるＭＵＣ−１が含まれても良い。他の組み合わせ例ではＰＡＰ及びＰＳＡが含まれる。

【0076】

多数の腫瘍関連抗原が当技術分野において周知である。腫瘍関連抗原の例として、限定されるものではないが、５アルファリダクターゼ、アルファ−フェトプロテイン、ＡＭ−１、ＡＰＣ、Ａｐｒｉｌ、ＢＡＧＥ、ベータカテニン、Ｂｃｌ１２、ｂｃｒ−ａｂｌ、ＣＡ−１２５、ＣＡＳＰ−８／ＦＬＩＣＥ、Ｃａｔｈｅｐｓｉｎｓ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ２２、ＣＤ３３ ＣＤ３５、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ５、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ４、ＣＥＡ、ｃ−ｍｙｃ、Ｃｏｘ−２、ＤＣＣ、ＤｃＲ３、Ｅ６／Ｅ７、ＣＧＦＲ、ＥＭＢＰ、Ｄｎａ７８、ファルネシルトランスフェラーゼ、ＦＧＦ８ｂ、ＦＧＦ８ａ、ＦＬＫ−１／ＫＤＲ、葉酸受容体、Ｇ２５０、ＧＡＧＥファミリー、ガストリン１７、ガストリン放出ホルモン、ＧＤ２／ＧＤ３／ＧＭ２、ＧｎＲＨ、ＧｎＴＶ、ＧＰ１、ｇｐ１００／Ｐｍｅｌ１７、ｇｐ−１００−ｉｎ４、ｇｐ１５、ｇｐ７５／ＴＲＰ−１、ｈＣＧ、ヘパランス（ｈｅｐａｒａｎｓｅ）、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＨＭＴＶ、Ｈｓｐ７０、ｈＴＥＲＴ、ＩＧＦＲ１、ＩＬ−１３Ｒ、ｉＮＯＳ、Ｋｉ６７、ＫＩＡＡ０２０５、Ｋ−ｒａｓ、Ｈ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、ＫＳＡ、ＬＫＬＲ−ＦＵＴ、ＭＡＧＥファミリー、マンマグロビン（ｍａｍｍａｇｌｏｂｉｎ）、ＭＡＰ１７、ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１、メソテリン（ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ）、ＭＩＣ Ａ／Ｂ、ＭＴ−ＭＭＰ、ムチン、ＮＹ−ＥＳＯ−１、オステオネクチン、ｐ１５、Ｐ１７０／ＭＤＲ１、ｐ５３、ｐ９７／メラノトランスフェリン（ｍｅｌａｎｏｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ）、ＰＡＩ−１、ＰＤＧＦ、ｕＰＡ、ＰＲＡＭＥ、プロバシン（ｐｒｏｂａｓｉｎ）、プロゲニポエチン（ｐｒｏｇｅｎｉｐｏｉｅｎｔｉｎ）、ＰＳＡ、ＰＳＭ、ＲＡＧＥ−１、Ｒｂ、ＲＣＡＳ１、ＳＡＲＴ−１、ＳＳＸ−ｆａｍｉｌｙ、ＳＴＡＴ３、ＳＴｎ、ＴＡＧ−７２、ＴＧＦ−アルファ、ＴＧＦ−ベータ、チモシン−ベータ−１５、ＴＮＦ−アルファ、ＴＹＲＰ−、ＴＹＲＰ−２、チロシナーゼ、ＶＥＧＦ、ＺＡＧ、ｐ１６ＩＮＫ４、及びグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼが挙げられる。

【0077】

好ましいＰＳＡ抗原は、本明細書に参照として組み込む米国特許第７，２４７，６１５号に記載の１５５番目のイソロイシンをロイシンに置換したアミノ酸を含む。

【0078】

腫瘍関連抗原の一例はＨＥＲ−２である。これまでのところ、ＨＥＲ−２は四つの異なる受容体（ｃ−ｅｒｂＢ−１（ＥＧＦｒ）、ｃ−ｅｒｂＢ−２（ＨＥＲ−２、ｃ−Ｎｅｕ）、ｃ−ｅｒｂＢ−３及びｃ−ｅｒｂＢ−４）からなる前記上皮成長因子受容体ファミリー（ｃ−ｅｒｂＢ）の一員である（Ｓａｌｏｍｏｎら，１９９５）。ｃ−ｅｒｂＢ−３及びｃ−ｅｒｂＢ−４はＥＧＦｒ及びＨＥＲ−２ほど特徴が明らかにされていない。ＨＥＲ−２は複合膜糖タンパク質である。この成熟タンパク質は分子量が１８５ｋＤであり、構造的特徴がＥＧＦｒ受容体に非常に似ている（Ｐｒｉｇｅｎｔら，１９９２）。ＥＧＦｒもまた一つのサブユニットからなる複合膜受容体である。ＥＧＦｒは見かけの分子量が１７０ｋＤであり、６２１個のアミノ酸の表面リガンド結合ドメイン、２３個のアミノ酸の単一の疎水性膜貫通ドメイン、及び５４２個のアミノ酸の高度に保存された細胞質チロシンキナーゼドメインからなる。該タンパク質はＮ−グリコシル化されている（Ｐｒｉｇｅｎｔら，１９９４）。

【0079】

このファミリーのタンパク質はすべてチロシンキナーゼである。リガンドとの相互作用により受容体の二量体化が起こり、チロシンキナーゼの触媒的作用が増大する（Ｂｅｒｎａｒｄ．１９９５，Ｃｈａｎｔｒｙ １９９５）。該ファミリーのタンパク質は、ホモ二量化及びヘテロ二量化可能であり、この点が活性に重要である。ＥＧＦｒは増殖促進効果を伝達し、グルコース及びアミノ酸の細胞による取り込みを刺激する（Ｐｒｉｇｅｎｔら，１９９２）。ＨＥＲ−２は増殖促進シグナルも伝達する。

【0080】

正常組織上に発現される上皮成長因子受容体の量は少ないが、多くの癌種において過剰発現される。ＥＧＦｒは乳癌（Ｅａｒｐら，１９９３，Ｅｐｐｅｎｂｅｒｇｅｒ １９９４）、グリオーマ（Ｓｃｈｌｅｇｅｌら，１９９４）、胃癌（Ｔｋｕｎａｇａら，１９９５）、皮膚扁平上皮癌（Ｆｕｊｉｉ，１９９５）、卵巣癌（ｖａｎ Ｄａｍら，１９９４）及び他の癌で過剰発現される。正常ヒト組織上に発現するＨＥＲ−２はわずかであり、最も特徴的には分泌上皮において発現する。ＨＥＲ−２の過剰発現は、乳癌、胃癌、膵癌、膀胱癌及び卵巣癌の約３０％に生じる。

【0081】

これらの受容体の発現は、腫瘍及び癌種の分化の度合いにより異なり、例えば、乳癌では、両方の受容体が原発巣で過剰発現する一方、胃癌では、過剰発現は転移腫瘍の後期に起こる（Ｓａｌｏｍｏｎら，１９９５）。患者から単離したいくつかの頭頸部癌、外陰癌、乳癌及び卵巣癌細胞株では、腫瘍細胞で過剰発現した受容体の数は１０^６／細胞よりも多い（Ｄｅａｎら，１９９４）。

【0082】

受容体のＥＧＦｒファミリーが腫瘍免疫療法の適切なターゲットとなる理由はいくつかある。一つ目に、該受容体は多くの癌種で過剰発現され、腫瘍に対する免疫応答を指示する。二つ目に、腫瘍はこの受容体のファミリーのリガンドをしばしば発現または過剰発現し、いくつかはリガンドが介在する増殖効果に過敏である。三つ目に、増殖因子受容体を過剰発現する腫瘍を有する患者はしばしば予後が不良である。過剰発現は特に乳癌、肺癌、及び膀胱癌における予後不良に密接に関連しており、浸潤／転移表現型とも関連すると考えられ、従来療法よりもより集中的にみられる（Ｅｃｃｌｅｓら，１９９４）。

【0083】

修飾腫瘍関連抗原
いくつかの実施形態では、細胞関連ポリペプチド抗原が修飾されることにより、ＣＴＬ応答がポリペプチド抗原由来のエピトープをその表面に提示する細胞に対して誘導され、この場合、該エピトープはＡＰＣ表面でＭＨＣクラスＩ分子と会合して存在する。そのようないくつかの実施形態では、少なくとも一つの第一の外来ＴＨエピトープが存在する場合、該エピトープはＡＰＣ表面のＭＨＣクラスＩＩ分子と会合する。そのようないくつかの実施形態では、細胞関連抗原は腫瘍関連抗原である。

【0084】

エピトープを提示可能なＡＰＣの例として樹状細胞及びマクロファージが含まれる。その他のＡＰＣの例として、１）ＭＨＣクラスＩ分子に結合したＣＴＬエピトープ及び２）ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合したＴ_Ｈエピトープを同時に提示可能な任意の飲作用性または食作用性ＡＰＣが含まれる。

【0085】

いくつかの実施形態では、本明細書で提示される一つまたは複数の腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、例えば限定されるものではないがＣＥＡ、ＭＵＣ−１、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＨＥＲ−２、サバイビン、ｔｙｒｐ１、ｔｙｒｐ２、またはＢｒａｃｈｙｕｒｙ等を修飾することによって、対象に投与後、ポリクローナル抗体を一つまたは複数のＴＡＡと優位に反応するように誘導する。このような抗体は転移細胞が転移に発展するのを防ぐと同時に腫瘍細胞を攻撃及び除去できると考えられる。この抗腫瘍効果のエフェクターメカニズムは補体及び抗体依存的細胞障害性により調節される。さらに、誘導された抗体は、増殖因子依存的オリゴ二量体化及び受容体の内部移行を阻害することにより癌細胞増殖を阻害することも可能と考えられる。いくつかの実施形態では、こうした修飾ＴＡＡは、腫瘍細胞に提示される既知及び／または予測されるＴＡＡエピトープに対するＣＴＬ応答を誘導可能と考えられる。

【0086】

いくつかの実施形態では、修飾ＴＡＡポリペプチド抗原は、細胞関連ポリペプチド抗原及び変異体のＣＴＬエピトープを含み、該変異体は外来Ｔ_Ｈエピトープの少なくとも一つのＣＴＬエピトープを含む。非限定的な例において、特定のそのような修飾ＴＡＡには、少なくとも一つのＣＴＬエピトープを含む一つまたは複数のＨＥＲ−２ポリペプチド抗原及び外来Ｔ_Ｈエピトープの少なくとも一つのＣＴＬエピトープを含む変異体がふくまれ、その製造方法は米国特許第７，００５，４９８号及び米国特許公開公報第２００４／０１４１９５８号及び２００６／０００８４６５号に記載されている。

【0087】

いくつかの実施形態では、外来Ｔ_Ｈエピトープは天然「乱交雑性」Ｔ細胞エピトープである。乱交雑性Ｔ細胞エピトープは、動物種及び動物集団の個体の多くで活性化している。いくつかの実施形態では、ワクチンはそのような乱交雑性Ｔ細胞エピトープを含む。そのようないくつかの実施形態では、乱交雑性Ｔ細胞エピトープの使用により、同一のワクチンにおける多数の異なるＣＴＬエピトープの必要性が低減する。乱交雑性Ｔ細胞エピトープの例として、限定されないが、破傷風毒素のエピトープがあげられ、前記Ｐ２及びＰ３０エピトープ（Ｐａｎｉｎａ−Ｂｏｒｄｉｇｎｏｎら， １９８９）、ジフテリア毒素、インフルエンザウイルスヘマグルチニン（ＨＡ）、及びＰ． ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ ＣＳ抗原が挙げられる。

【0088】

その他の乱交雑性Ｔ細胞エピトープに、異なるＨＬＡ−ＤＲにコード化されるＨＬＡ−ＤＲ分子の大部分に結合可能なペプチドが含まれる。例えば、以下を参照：ＷＯ ９８／２３６３５（Ｆｒａｚｅｒ ＩＨら， ａｓｓｉｇｎｅｄ ｔｏ Ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄ）；Ｓｏｕｔｈｗｏｏｄ Ｓ ら，１９９８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：３３６３ ３３７３；Ｓｉｎｉｇａｇｌｉａ Ｆら，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３６：７７８ ７８０；Ｒａｍｍｅｎｓｅｅ ＨＧら，１９９５，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ４１：４ １７８ ２２８；Ｃｈｉｃｚ ＲＭら，１９９３，Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ １７８：２７ ４７；Ｈａｍｍｅｒ Ｊら，１９９３，Ｃｅｌｌ ７４：１９７ ２０３；Ｆａｌｋ Ｋら，１９９４，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ３９： ２３０ ２４２。後者の文献ではＨＬＡ−ＤＱ及び−ＤＰリガンドについても扱っている。これら文献に列挙されるすべてのエピトープは本明細書に記載の天然エピトープの候補として関連性があり、これらエピトープは共通のモチーフを有する。

【0089】

その他の特定の実施形態では、乱交雑性Ｔ細胞エピトープは、ハプロタイプの大部分に結合可能な人工Ｔ細胞エピトープである。そのようないくつかの実施形態では、人工Ｔ細胞エピトープは、ＷＯ９５／０７７０７及び対応文献のＡｌｅｘａｎｄｅｒ Ｊら，１９９４，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １：７５１ ７６１に記載のｐａｎ ＤＲエピトープペプチド（「ＰＡＤＲＥ」）である。

【0090】

ｍＨＥＲ２
様々な修飾ＨＥＲ−２ポリペプチド抗原及びそれらの製造方法は、本明細書に組み入れる米国特許第７，００５，４９８号及び米国特許公開公報第２００４／０１４１９５８及び２００６／０００８４６５号に記載されている。これら文献にはＨＥＲ−２ポリペプチドの異なる位置で乱交雑性Ｔ細胞エピトープを含む様々な修飾ＨＥＲ−２ポリペプチド抗原が記載されている。

【0091】

ヒトＨＥＲ−２配列をタンパク質の一次構造のみに基づいてドメイン数に分割することができる。ドメインは以下のとおりである。細胞外（受容体）ドメインは１−６５４番目のアミノ酸に相当し以下のいくつかのサブドメインを有する：１−１７３番目のアミノ酸に相当するドメインＩ（成熟ポリペプチドのＮ末端ドメイン）；１７４−３２３番目のアミノ酸に相当するドメインＩＩ（システインリッチドメイン、２４システイン残基）；３２４−４８３番目のアミノ酸に相当するドメインＩＩＩ（前記相同性ＥＧＦ受容体におけるリガンド結合ドメイン）；及び４８４−６２３番目のアミノ酸に相当するドメインＩＶ（システインリッチドメイン、２０システイン残基）。膜貫通残基は６５４−６７５番目のアミノ酸に相当する。細胞内（キナーゼ）ドメインは６５５−１２３５番目のアミノ酸に相当し、６５５−１０１０番目のアミノ酸に相当する（７２５−９９２番目のアミノ酸に相当するコアＴＫドメイン）チロシンキナーゼドメイン及び１０１１−１２３５番目のアミノ酸に相当するＣ末端ドメインを含む。

【0092】

Ｐ２またはＰ３０ヒトＴヘルバーエピトープのいずれかに提示されるＨＥＲ−２のアミノ酸配列における部位の選択については、米国特許第７，００５，４９８号及び米国特許公開公報第２００４／０１４１９５８及び２００６／０００８４６５号に記載されている。要約すると以下のパラメーターが考慮される。

【0093】

１．既知及び予測されるＣＴＬエピトープ
２．相同性と関連する受容体（特にＥＧＦＲ）
３．システイン残基の保存
４．予測されるループ、αヘリックス及びβシート構造
５．可能性のあるＮ−グリコシル化部位
６．暴露及び埋没アミノ酸残基の予測
７．ドメイン組織化

【0094】

ＣＴＬエピトープは、ドメインＩ、ドメインＩＩＩ、ＴＭドメイン、及びＴＫドメインにおいては２つまたは３つの「ホットスポット」にクラスター化されるとみられる。米国特許第７，００５，４９８号及び米国特許公開公報第２００４／０１４１９５８及び２００６／０００８４６５号に記載のとおり、これらは大部分が保存されるはずである。

【0095】

他の受容体との相同性が高い領域は、ＨＥＲ−２の「全体」三次構造、ひいては抗体認識にとって構造上重要となりやすい一方で、相同性が低い領域は構造の局所的変更のみ起こりうる。

【0096】

システイン残基は、分子内ジスルフィド架橋形成に関わることが多いことから前記三次構造に関与しているため、変更するべきではない。αヘリックスまたはβシート構造を形成すると予測される領域は、タンパク質のフォールディングに関与すると考えられるため、外来性エピトープの挿入位置として避けるべきである。

【0097】

前記タンパク質のマンノシル化が望ましい場合、可能性のあるＮ−グリコシル化部位を保存する。

【0098】

好ましくは、前記分子内に存在すると予測される領域（疎水性に基づく）はフォールディングに関与している可能性があるため保存されるべきである。対照的に、溶媒暴露領域はモデルＴ_ＨエピトープＰ２及びＰ３０の挿入位置候補となりうる。

【0099】

最終的に、前記タンパク質のドメイン組織化は、タンパク質構造及び機能の関連性から考慮されるべきである。

【0100】

米国特許第７，００５，４９８号及び米国特許公開公報第２００４／０１４１９５８号及び２００６／０００８４６５号に記載のとおり、前記戦略の焦点は、抗体を中和するためのターゲットとして関連性のあるタンパク質の一部であるＨＥＲ−２の細胞外部分の構造を可能な限り保存することにあった。それに反して、癌細胞表面の生体膜結合ＨＥＲ−２の細胞内部分は液性免疫システムにアクセス不可能である。

【0101】

ＨＥＲ−２の様々なドメインに挿入された破傷風毒素のＰ２及びＰ３０エピトープを用いたコンストラクトの様々な例が米国特許第７，００５，４９８号及び米国特許公開公報第２００４／０１４１９５８号及び２００６／０００８４６５号に挙げられている。一例である「ｍＨＥＲ２」と呼ばれる修飾ＨＥＲ−２ポリペプチド抗原は、細胞外ドメイン及び膜貫通ドメインの９個のアミノ酸、修飾ＨＥＲ−２ポリペプチドの２７３〜２８７番目のアミノ酸残基に相当するドメインＩＩに挿入されたＰ２エピトープ、及び修飾ＨＥＲ−２ポリペプチドの６５５〜６７５番目のアミノ酸残基に相当するドメインＩＶに挿入されたＰ３０エピトープを含む。

【0102】

組換えＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２
非限定的な実施形態では、例えばＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２といった腫瘍関連抗原含む組換えＭＶＡは以下のように構築される。例えばＣＥＦ細胞といった複製に許容可能な細胞型を用いた細胞培養による組換えで初代ウイルス株を作製する。細胞に、ＭＶＡ−ＢＮといった弱毒化ワクシニアウイルスを接種し腫瘍関連抗原（例えばｍＨＥＲ２）のウイルスゲノム配列及びフランキング領域をコード化する組換えプラスミド（例えば、ｐＢＮ１４６）でトランスフェクトする。非限定的な一施形態では、プラスミドｐＢＮ１４６は、ＭＶＡ−ＢＮ（１４Ｌ及び１５Ｌオープンリーディングフレーム）にも存在する配列を有する。ｍＨＥＲ２配列はＭＶＡ−ＢＮ配列に挿入されることによりＭＶＡ−ＢＮウイルスゲノムの組換えを可能にする。いくつかの実施形態では、前記プラスミドは一つまたは複数の選択遺伝子を含む選択カセットを有することによりＣＥＦ細胞での組換えコンストラクトの選択を可能にする。好ましい実施形態では、組換えＭＶＡは配列番号２のポリペプチドをコード化する。

【0103】

培養物の同時感染及びトランスフェクションにより、ウイルスゲノム及び組換えプラスミド間の相同組換えを起こす。インサート担持ウイルスをその後単離し特徴づけ、ウイルス株を作製する。いくつかの実施形態では、ウイルスを選択条件下でＣＥＦ細胞培養で継代し、選択遺伝子ｇｐｔ及びＥＧＦＰをコード化する領域を欠失させる。

【0104】

免疫チェックポイント分子のアンタゴニスト
本明細書に記載のとおり、少なくとも一つの態様では、本発明は免疫チェックポイントアンタゴニストの使用を包含する。このような免疫チェックポイントアンタゴニストには、細胞障害性Ｔ−リンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）、Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｐｒｏｔｅｉｎ １（ＰＤ−１）、Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ Ｄｅａｔｈ−Ｌｉｇａｎｄ １（ＰＤＬ−１）、Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｇｅｎｅ ３（ＬＡＧ−３）、及びＴ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン３（ＴＩＭ−３）といった免疫チェックポイント分子のアンタゴニストが含まれる。ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、またはＴＩＭ−３のアンタゴニストはそれぞれＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、またはＴＩＭ−３機能に干渉する。

【0105】

上記ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、及びＴＩＭ−３アンタゴニストは、特異的にＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、及びＴＩＭ−３に結合し、それぞれ生物活性及び機能を阻害及び／または遮断する抗体を含むことができる。

【0106】

ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、及びＴＩＭ−３の他のアンタゴニストは以下を含む：ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、及びＴＩＭ−３の発現に干渉するアンチセンス核酸ＲＮＡ；ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、及びＴＩＭ−３の発現に干渉する低分子干渉ＲＮＡ；及びＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、及びＴＩＭ−３の小分子阻害剤。

【0107】

ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、及びＴＩＭ−３の候補アンタゴニストを、当技術分野で周知の及び／または本願記載の様々な手技によって、インビトロまたはマウスモデルにおいてＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、及びＴＩＭ−３機能に対する干渉能等の機能面でスクリーニングできる

【0108】

ＩＣＯＳのアゴニスト
本発明は、ＩＣＯＳのアゴニストをさらに包含する。ＩＣＯＳのアゴニストはＩＣＯＳを活性化する。ＩＣＯＳは活性化Ｔ細胞に発現されそのリガンドに結合した陽性同時刺激分子で、Ｔ細胞の増殖を促進する（Ｄｏｎｇ，Ｎａｔｕｒｅ ２００１；４０９：９７−１０１）。

【0109】

一つの実施形態において、前記アゴニストはＩＣＯＳ−ＬやＩＣＯＳの天然リガンドである。アゴニストは、結合及び活性化の性質を維持するＩＣＯＳ−Ｌ変異型とすることができる。ＩＣＯＳ−Ｌの変異型は、インビトロでＩＣＯＳを刺激する活性によりスクリーニングできる。

【0110】

抗体
一つの実施形態において、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、及びＴＩＭ−３のアンタゴニスト及びＩＣＯＳのアゴニストは抗体である。抗体は、当技術分野で周知の技術で作製される合成、モノクローナル、またはポリクローナル抗体とすることができる。このような抗体は、抗体の抗原−結合部位を介してＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、またはＩＣＯＳに特異的に結合する（非特異的結合と対照的）。ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、またはＩＣＯＳポリペプチド、断片、変異体、融合タンパク質等は免疫反応性抗体を作製する免疫原として利用できる。より具体的には、該ポリペプチド、断片、変異体、融合タンパク質等は、抗体形成を誘発する抗原性決定因子またはエピトープを有する。

【0111】

これらの抗原性決定因子またはエピトープは直線状または立体構造（非連続的）であってもよい。直線状エピトープは前記ポリペプチドのアミノ酸の一つのセクションから構成され、一方で立体構造または非連続的エピトープはタンパク質フォールディング時に近接するポリペプチド鎖の異なる領域のアミノ酸の複数のセクションから構成される（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ， Ｊｒ． ａｎｄ Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｉｍｍｕｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３：９（Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｉｎｃ．，第二版．１９９６））。折り畳まれたタンパク質は複雑な表面を有するため、利用可能なエピトープ数は非常に大きいが、タンパク質の構造及び立体障害により、エピトープに実際に結合する抗体数は利用可能なエピトープ数よりも少ない（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ，Ｊｒ． ａｎｄ Ｐ． Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｉｍｍｕｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２：１４（Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｉｎｃ．，第二版．１９９６））。エピトープは当技術分野で周知の上記いずれかの方法によって特定できる。

【0112】

本発明は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、またはＩＣＯＳに特異的に結合してその機能を遮断する（「アンタゴニスト抗体」）またはその機能を高める／活性化する（「アゴニスト抗体」）ｓｃＦＶ断片を含む抗体を包含する。このような抗体は従来の手段により作製できる。

【0113】

一つの実施形態において、本発明は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、またはＩＣＯＳ免疫チェックポイント分子を遮断（「アンタゴニスト抗体」）または高める／活性化する（「アゴニスト抗体」）ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、またはＩＣＯＳそれぞれに対するモノクローナル抗体を包含する。ＰＤ−１に対するブロッキングモノクローナル抗体の例は、本明細書に参照として組み入れるＷＯ２０１１／０４１６１３に記載されている。

【0114】

抗体は高活性及び高特異性によってターゲットに結合可能となる。抗体は比較的大きい分子（〜１５０ｋＤａ）で、抗体結合部位がタンパク質−タンパク質相互作用部位に近接する場合、二つのタンパク質（例えばＰＤ−１及びそのターゲットリガンド）の相互作用を立体的に阻害できる。本発明は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、またはＩＣＯＳリガンド結合部位に近接してエピトープに結合する抗体をさらに包含する。

【0115】

様々な実施形態において、本発明は、分子内相互作用（例えば分子中の立体構造変化）を撹乱する抗体だけでなく分子間相互作用（例えばタンパク質−タンパク質相互作用）に干渉する抗体も同様に包含する。抗体は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、またはＩＣＯＳの生物活性またはリガンドへのＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、またはＩＣＯＳの結合、及び／または他の性質を遮断または高める／活性化する能力に基づいてスクリーニングできる。

【0116】

ポリクローナル及びモノクローナル抗体のどちらも従来技術により作製できる。

【0117】

ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、及びＩＣＯＳのアミノ酸配列に基づくＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、及びＩＣＯＳ及びペプチドを利用して、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、またはＩＣＯＳに特異的に結合する抗体を作製できる。用語「抗体」は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、Ｆ（ａｂ’）２及びＦａｂ断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、単ドメイン抗体断片（ＶＨＨまたはナノボディ）、二価抗体断片（二重特異性抗体）等の抗体断片、及び組換え及び合成により作製された結合相手を意味する。

【0118】

抗体は、約１０^７Ｍ^−１Ｋａ以上でＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、及びＩＣＯＳポリペプチドに特異的に結合すると定義される。結合相手または抗体の親和性は、例えばＳｃａｔｃｈａｒｄら，Ａｎｎ． Ｎ．Ｙ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．，５１：６６０（１９４９）に記載の従来技術により簡単に決定できる。

【0119】

ポリクローナル抗体は、様々なソース例えばウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ニワトリ、ウサギ、マウス、またはラットから当技術分野の周知技術により簡単に作製できる。通常、適切に接合したＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、及びＩＣＯＳのアミノ酸配列に基づく精製ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、及びＩＣＯＳまたはペプチドを、主に注射等により宿主動物に投与する。ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１，ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、及びＩＣＯＳの免疫原性は、フロイント完全または不完全なアジュバントといったアジュバントを使用して高めることができる。追加免疫後、血清の少量のサンプルを回収し、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、及びＩＣＯＳポリペプチドに対する反応性を試験する。このような測定に有用な様々なアッセイの例に、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（編），Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８８に記載のものや、対向免疫電気泳動（ＣＩＥＰ）、ラジオイムノアッセイ、ラジオ免疫沈降、酵素免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ドットブロットアッセイ、及びサンドイッチアッセイ（米国特許第４，３７６，１１０号及び４，４８６，５３０号参照）といった測定法が含まれる。

【0120】

モノクローナル抗体は周知の技術を用いて簡単に作製できる（例えば、米国特許第ＲＥ３２，０１１号，４，９０２，６１４号，４，５４３，４３９号及び４，４１１，９９３号；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ：Ａ Ｎｅｗ Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｅｓ，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｋｅｎｎｅｔｔ，ＭｃＫｅａｍ，ａｎｄ Ｂｅｃｈｔｏｌ（編纂），１９８０に記載の方法を参照）。

【0121】

例えば、マウス等の前記宿主動物に、単離及び精製ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、及びＩＣＯＳまたは接合したＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、及びＩＣＯＳペプチドを約３週間間隔で少なくとも１回、好ましくは少なくとも２回腹腔内投与する。アジュバントの存在下で投与してもよい。マウス血清はその後従来技術のドットブロット法または抗体捕捉（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃａｐｔｕｒｅ）（ＡＢＣ）でアッセイし融合するのに最適な動物を決定する。約２〜３週間後、マウスに経静脈的にＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、及びＩＣＯＳまたは接合したＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、及びＩＣＯＳペプチドを追加投与する。マウスをその後屠殺し、確立されたプロトコールに従って脾臓細胞をＡｇ８．６５３（ＡＴＣＣ）等の市販のミエローマ細胞と融合する。簡潔には、ミエローマ細胞を数回培地で洗浄し、マウス脾臓細胞に、ミエローマ細胞１個に対し脾臓細胞が３個となるように融合する。例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）といった当技術分野で使用されるいかなる融合剤も使用できる。前記融合細胞の選択的増殖が可能な培地を含むプレートに融合物を広げる。融合細胞は約８日間増殖可能である。得られたハイブリドーマの上清を回収し、最初にヤギ抗マウスＩｇを塗布したプレートに加える。洗浄後、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、及びＩＣＯＳポリペプチド等の標識を加えた後培養する。その後陽性のウェルを検出できる。陽性クローンはバルク培養で増殖でき、上清はその後Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）で精製する。

【0122】

本発明のモノクローナル抗体は、本明細書に参照として組み入れる文献（Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓら，「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ：Ａ Ｒａｐｉｄ Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｔｏ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ」，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３：１−９（１９９０））に記載のその他の方法でも作製できる。同様に、組換えＤＮＡを用いて結合相手をコンストラクトし、特異的結合抗体をコード化する遺伝子の可変領域を組み入れることができる。この方法はＬａｒｒｉｃｋら，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，７：３９４（１９８９）に記載されている。

【0123】

従来技術で作製できる上記抗体の抗原結合断片もまた、本発明に包含される。そのような断片の例として、限定されるものではないが、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片が挙げられる。遺伝子工学的手法により製造される抗体断片及び誘導体もまた提供される。

【0124】

本発明のモノクローナル抗体には、例えばヒト化したマウスモノクローナル抗体等のキメラ抗体が含まれる。そのようなヒト化抗体は周知の手法で作製でき、該抗体をヒトに投与した場合に免疫原性が低下する点で有利である。一つの実施形態において、ヒト化モノクローナル抗体は、マウス抗体の可変領域（または単に抗原結合部位）及びヒト抗体由来の定常領域を含む。あるいは、ヒト化抗体断片は、マウスモノクローナル抗体の抗原結合部位及びヒト抗体由来の可変領域断片（抗原−結合部位を持たない）を含むことができる。キメラ及びさらに改変モノクローナル抗体を作製する手順には、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３，１９８８）、Ｌｉｕら（ＰＮＡＳ ８４：３４３９，１９８７）、Ｌａｒｒｉｃｋら（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７：９３４，１９８９）、及びＷｉｎｔｅｒ ａｎｄ Ｈａｒｒｉｓ（ＴＩＰＳ １４：１３９，Ｍａｙ，１９９３）に記載の方法が挙げられる。抗体遺伝子導入により抗体を作製する手法は、本明細書に参照として組み入れるＧＢ２，２７２，４４０、米国特許第５，５６９，８２５号及び５，５４５，８０６号に記載されている。

【0125】

キメラ及びヒト化モノクローナル抗体等の遺伝子工学的方法により製造される抗体は、標準的な組換えＤＮＡ手技により作製されるヒト及び非ヒト部分の両方を含む。そのようなキメラ及びヒト化モノクローナル抗体は、当技術分野で周知の標準的なＤＮＡ技術を用いた遺伝子工学的手法により製造できる。それらの手法には以下の文献記載の方法が含まれる（Ｒｏｂｉｎｓｏｎら，国際公報ＷＯ８７／０２６７１；Ａｋｉｒａら，欧州特許出願第０１８４１８７号；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．，欧州特許出願第０１７１４９６号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら，欧州特許出願第０１７３４９４号；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら，ＰＣＴ国際公報ＷＯ８６／０１５３３；Ｃａｂｉｌｌｙら，米国特許第４，８１６，５６７号；Ｃａｂｉｌｌｙら，欧州特許出願第０１２５０２３号；Ｂｅｔｔｅｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１ １０４３，１９８８；Ｌｉｕら，ＰＮＡＳ ８４：３４３９ ３４４３，１９８７；Ｌｉｕら，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１ ３５２６，１９８７；Ｓｕｎら，ＰＮＡＳ ８４：２１４ ２１８，１９８７；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら，Ｃａｎｃ． Ｒｅｓ． ４７：９９９ １００５，１９８７；Ｗｏｏｄら，Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４４６ ４４９，１９８５；Ｓｈａｗら，Ｊ． Ｎａｔｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８０：１５５３ １５５９，１９８８；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２ １２０７，１９８５；Ｏｉら，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４，１９８６；Ｗｉｎｔｅｒ米国特許第５，２２５，５３９号；Ｊｏｎｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５５２ ５２５，１９８６；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４，１９８８；及びＢｅｉｄｌｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３ ４０６０，１９８８）。

【0126】

合成及び半合成抗体に関連して、これら用語は限定されるものではないが、抗体断片、アイソタイプスイッチ型抗体、ヒト化抗体（例えば、マウス−ヒト、ヒト−マウス）、ハイブリッド、複数の特異性を有する抗体、及び完全合成抗体様分子を意味する。

【0127】

治療的用途では、ヒト定常及び可変領域を有する「ヒト」モノクローナル抗体は、該抗体に対する患者の免疫応答を最小限にすることが好ましいことが多い。そのような抗体は、ヒトイムノグロブリン遺伝子を有するトランスジェニック動物を免疫することにより作製できる（Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら，Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ７６４：５２５−５３５（１９９５））。

【0128】

ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、及びＩＣＯＳポリペプチドに対するヒトモノクローナル抗体は、対象のリンパ球由来のｍＲＮＡから作製した免疫グロブリン軽鎖及び重鎖ｃＤＮＡを用いてＦａｂファージディスプレイライブラリーまたはｓｃＦｖファージディスプレイライブラリーといったコンビナトリアル免疫グロブリンライブラリーを構築することによって作製することもできる（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，ＰＣＴ公報ＷＯ９２／０１０４７；Ｍａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１ ５９７；及びＧｒｉｆｆｔｈｓら（１９９３）ＥＭＢＯ Ｊ １２：７２５ ７３４参照）。さらに、抗体可変領域のコンビナトリアルライブラリーを公知のヒト抗体に変異導入することにより作製することができる。例えば、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、及びＩＣＯＳに結合することが知られているヒト抗体の可変領域に、例えばランダムに変更された変異誘発オリゴヌクレオチドを用いて変異導入することにより、変異導入された可変領域のライブラリーを作製しＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、及びＩＣＯＳへの結合についてスクリーニングすることができる。イムノグロビン重鎖及び／または軽鎖のＣＤＲ領域におけるランダムな変異誘発を誘発する方法、ランダム化した重鎖及び軽鎖を交差してペアを形成する方法、及びスクリーニング方法は、例えば以下の文献に記載されている（Ｂａｒｂａｓら，ＰＣＴ公報ＷＯ９６／０７７５４；Ｂａｒｂａｓら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：４４５７ ４４６１）。

【0129】

ディスプレイパッケージ（好ましくは繊維状ファージに由来）の集団に免疫グロブリンライブラリーを発現させて抗体ディスプレイライブラリーを形成することができる。抗体ディスプレイライブラリー作製時に特に許容可能な方法及び試薬の例は以下の文献に挙げられている（Ｌａｄｎｅｒら，米国特許第５，２２３，４０９号；Ｋａｎｇら，ＰＣＴ公報ＷＯ９２／１８６１９；Ｄｏｗｅｒら，ＰＣＴ公報ＷＯ９１／１７２７１；Ｗｉｎｔｅｒら，ＰＣＴ公報ＷＯ９２／２０７９１；Ｍａｒｋｌａｎｄら，ＰＣＴ公報ＷＯ９２／１５６７９；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇら，ＰＣＴ公報ＷＯ９３／０１２８８；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，ＰＣＴ公報ＷＯ ９２／０１０４７；Ｇａｒｒａｒｄら，ＰＣＴ公報ＷＯ９２／０９６９０；Ｌａｄｎｅｒら，ＰＣＴ公報ＷＯ９０／０２８０９；Ｆｕｃｈｓら（１９９１），Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１３７０ １３７２；Ｈａｙら（１９９２），Ｈｕｍ Ａｎｔｉｂｏｄ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ３：８１ ８５；Ｈｕｓｅら（１９８９），Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５ １２８１；Ｇｒｉｆｆｔｈｓら（１９９３），ｓｕｐｒａ；Ｈａｗｋｉｎｓら（１９９２），Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２６：８８９ ８９６；Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１），Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４ ６２８；Ｇｒａｍら（１９９２），ＰＮＡＳ ８９：３５７６ ３５８０；Ｇａｒｒａｄら（１９９１），Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１３７３ １３７７；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（１９９１），Ｎｕｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ １９：４１３３ ４１３７；及びＢａｒｂａｓら（１９９１），ＰＮＡＳ ８８：７９７８ ７９８２）。ディスプレイパッケージ（例えば、繊維状ファージ）表面にディスプレイされると、抗体ライブラリーがスクリーニングされ、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、またはＩＣＯＳポリペプチドに結合する抗体を発現するパッケージを特定及び単離する。好ましい実施形態では、前記ライブラリーの初回スクリーニングには、固定化ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、及びＩＣＯＳポリペプチドによるパニングが含まれ、固定化ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、及びＩＣＯＳポリペプチドに結合する抗体を発現するディスプレイパッケージが選択される。

【0130】

上記に記載のＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、及びＩＣＯＳアンタゴニスト及びアゴニストに加え、前記アンタゴニスト及びアゴニストに、当技術分野で周知のアンタゴニスト及びアゴニストが含まれていても良い。例えば、イピリムマブ（登録商標）及びトレメリムマブは公知のＣＴＬＡ−４抗体である。さらに、ランブロリズマブ（ペンブロリズマブ）、アンプリミューン−２２４（ＡＭＰ−２２４）、アンプリミューン−５１４（ＡＭＰ−５１４）、ニボルマブ、ＭＫ−３４７５、及びＢ７Ｈ１は公知のＰＤ−１である。ＰＤＬ−１の抗体のいくつかの例として、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｒｏｃｈｅ）、ＭＥＤ１４７３６（ＡＺＮ）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（Ｍｅｒｃｋ）が挙げられる。

【0131】

免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを小分子、ペプチド、可溶性受容体タンパク質、及び他の種類の融合タンパク質から構成できることが本開示により予測される。

【0132】

腫瘍抗原を発現するポックスウイルス及び及び免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストによる併用療法
少なくとも一つの態様において、本発明は、腫瘍抗原をコード化する組換えポックスウイルス及び一つまたは複数の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの組み合わせを採用する治療方法を包含する。

【0133】

本発明の一つの実施形態において、前記腫瘍関連抗原であるＨＥＲ−２抗原をコード化するオルソポックスウイルス（例えば、ワクシニアウイルスであるＷｙｅｔｈ、ＡＣＡＭ１０００、ＡＣＡＭ２０００、ＭＶＡ、またはＭＶＡ−ＢＮ）またはアビポックスウイルス（例えば，鶏痘ウイルス、ＰＯＸＶＡＣ−ＴＣ）及び一つまたは複数の免疫チェックポイント抗体、アゴニスト、またはアンタゴニストとの組み合わせにより、腫瘍関連抗原ＨＥＲ−２を過剰発現する細胞が介在する癌（例えば、乳癌）の患者を治療可能である。好ましい実施形態では、前記ＭＶＡはＭＶＡ−ＢＮである。特に好ましい実施形態では、前記ＭＶＡは配列番号２の配列を含むポリペプチドをコード化する。

【0134】

本発明の一つの実施形態において、ＰＳＡ及び／またはＰＡＰ抗原をコード化するオルソポックスウイルス（限定されるものではないが、ワクシニアウイルスであるＷｙｅｔｈ、ＡＣＡＭ１０００、ＡＣＡＭ２０００、ＭＶＡ、またはＭＶＡ−ＢＮ等）またはアビポックスウイルス（例えば、鶏痘ウイルス、ＰＯＸＶＡＣ−ＴＣ）及び一つまたは複数の抗体、アゴニスト、またはアンタゴニストとの組み合わせにより、前立腺癌患者を治療可能である。特に好ましい実施形態では、前記ワクシニアウイルスはＰＲＯＳＴＶＡＣ（登録商標）の一部である。

【0135】

本発明の一つの実施形態において、ＣＥＡ及び／またはＭＵＣ−１抗原をコード化するオルソポックスウイルス（例えば、ワクシニアウイルスであるＷｙｅｔｈ、ＡＣＡＭ１０００、ＡＣＡＭ２０００、ＭＶＡ、またはＭＶＡ−ＢＮ Ｗｙｅｔｈ、またはＭＶＡ）またはアビポックスウイルス（例えば、鶏痘ウイルス、（例えばＰＯＸＶＡＣ−ＴＣ）及び一つまたは複数の抗体、アゴニスト、またはアンタゴニストとの組み合わせにより、腫瘍関連抗原ＣＥＡ及び／またはＭＵＣ−１を過剰発現する細胞が介在する癌（例えば、乳、結腸直腸、肺、及び卵巣癌）の患者を治療可能である。

【0136】

前記組換えポックスウイルスは、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、経鼻、皮内、乱切といった全身的または局所的投与法、または任意の他の当業者に周知の投与経路によって投与可能である。好ましくは、乱切により投与される。より好ましくは、皮下注射により投与される。一つの実施形態において、１０^５〜１０^１０ＴＣＩＤ_５０の前記組換えポックスウイルスを前記患者に投与する。好ましくは、１０^７〜１０^１０ＴＣＩＤ_５０の前記組換えポックスウイルスを前記患者に投与する。より好ましくは、１０^８〜１０^１０ＴＣＩＤ_５０の前記組換えポックスウイルスを前記患者に投与する。最も好ましくは、１０^８〜１０^９ＴＣＩＤ_５０の前記組換えポックスウイルスを前記患者に投与する。

【0137】

好ましくは前記癌には、限定されるものではないが、前立腺癌、乳癌、肺癌、胃癌、膵癌、膀胱癌、または卵巣癌が含まれる。好ましい実施形態では、前記癌は転移乳癌である。

【0138】

前記癌患者は、マウスまたはラットを含む任意の哺乳類とすることができる。好ましくは前記癌患者は霊長類であり最も好ましくはヒトである。

【0139】

一つまたは複数の実施形態において、前記組換えポックスウイルスを免疫チェックポイントアゴニスト及び／またはアンタゴニスト投与日または投与後１、２、３、４、５、６、または７日間以内以内に投与する。前記組換えポックスウイルスを、前記免疫チェックポイントアゴニスト及び／またはアンタゴニストの前後で投与可能である。

【0140】

本発明の一つの実施形態において、本発明の一つまたは複数の免疫チェックポイント抗体、アゴニスト、またはアンタゴニスト及び腫瘍抗原を含むポリペプチドをコード化する前記ポックスウイルスを同時に投与する。該組み合わせ治療は、それぞれの単独治療よりも優れている。

【0141】

一つまたは複数の好ましい実施形態では、前記免疫チェックポイントアンタゴニスト及びアゴニスト投与前に、前記組換えポックスウイルスを投与する。

【0142】

相同性／異種性プライム・ブースト処方を用いた併用療法
上記に定義される通り、前記組換えポックスウイルスの単回投与により免疫応答を誘導することが可能である。本発明の前記ポックスウイルスを、相同性プライム・ブースト処方の一部として使用してもよい。前記相同性プライム・ブースト処方においては、第一のプライミングワクチン接種後に、一回または複数回の後続ブースティングワクチン接種を行う。前記ブースティングワクチン接種は、第一のワクチン接種で使用したものと同じ組換えポックスウイルスを投与することによって第一のワクチン接種による免疫応答を強化するものである。

【0143】

本発明の前記組換えポックスウイルスを、異種性プライム・ブースト処方に使用してもよい。異種性プライム・ブースト処方では、本明細書に定義されるポックスウイルスで一つまたは複数の初回プライムワクチン接種を行い、他のウイルスワクチンやタンパク質または核酸ワクチンといった異なるワクチンで一回または複数回の後続ブースティングワクチン接種を行う。

【0144】

一つの実施形態において、異種性プライム・ブースト処方の一回または複数回の後続ブースティングワクチン接種では、前記初回プライムワクチン接種とは異なる属のポックスウイルスから選択される。ある非限定的な例では、前記第一または初回ポックスウイルスワクチンに、ワクシニアが含まれる場合、前記第二及び後続ポックスウイルスワクチンは、ワクシニアとは免疫原性が異なるスイポックス、アビポックス、カプリポックスまたはオルソポックスといった異なる属のポックスウイルスから選択される。

【0145】

一つの例示的実施形態では、第一の投与量として、ＨＥＲ２に限定されない一つまたは複数の腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を発現するＭＶＡ−ＢＮといったポックスウイルスを、一つまたは複数の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用して投与する、相同性プライム・ブースト処方を用いてもよい。一つまたは複数の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを併用するＨＥＲ２に限定されない一つまたは複数のＴＡＡを発現するＭＶＡ−ＢＮの一回または複数回の後続投与により、前記第一の投与による免疫応答を強化できる。好ましくは、前記第二及び後続投与のＭＶＡ−ＢＮにおける一つまたは複数のＴＡＡは、前記第一の投与におけるＴＡＡと同一または類似である。

【0146】

他の例示的実施形態において、一つまたは複数のＴＡＡを発現するワクシニア等のポックスウイルスを第一の用量として、一つまたは複数の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用して投与するために、異種性プライム・ブースト処方を採用してもよい。この第一の用量の後に、一つまたは複数のＴＡＡを発現する鶏痘等の異なるポックスウイルスを一回または複数回投与する。好ましくは、鶏痘ウイルスにおける前記一つまたは複数のＴＡＡは、前記第一の投与のワクシニアウイルスに含まれるＴＡＡと同一または類似である。さらに、付加的に例示する異種性プライム・ブースト処方について、本明細書に参照として組み入れる米国特許第６，１６５，４６０号、７，５９８，２２５号、及び７，２４７，６１５号に記載されている。

【0147】

一つの好ましい実施形態において、前記異種性プライム・ブースト処方における前記一つまたは複数のＴＡＡには、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）及び／または前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）抗原が含まれる。一つのより好ましい実施形態において、前記ＰＳＡ抗原には、本明細書に参照として組み入れる米国特許第７，２４７，６１５号及び７，５９８，２２５号に記載のＰＳＡ抗原が含まれる。ある非限定的な例では、ＰＳＡを含む前記異種性プライム・ブースト処方はＰＲＯＳＴＶＡＣ（登録商標）である。

【0148】

さらに他の好ましい実施形態では、前記異種性プライム・ブースト処方における前記一つまたは複数のＴＡＡに、Ａムチン１、細胞表面関連（ＭＵＣ１）抗原及び癌胎児性抗原（ＣＥＡ）が含まれる。一つのより好ましい実施形態において、ＭＵＣ１及びＣＥＡ抗原には、本明細書に参照として組み入れる米国特許第７，１１８，７３８号、７，７２３，０９６号及びＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０２００５８に記載のものが含まれる。ある非限定的な例では、ＭＵＣ−１抗原及びＣＥＡを含む前記異種性プライム・ブースト処方はＣＶ３０１である。

【0149】

さらに他の好ましい例示的実施形態では、一つまたは複数のＴＡＡを発現するＭＶＡまたはＭＶＡ−ＢＮ等のポックスウイルスを第一の用量として、一つまたは複数の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用して投与する異種性プライム・ブースト処方を採用してもよい。この第一の用量の後に、一つまたは複数のＴＡＡを発現する鶏痘等の異なるポックスウイルスを一回または複数回投与する。好ましくは、鶏痘ウイルスにおける一つまたは複数のＴＡＡは、前記第一の投与のＭＶＡまたはＭＶＡ−ＢＮウイルスに含まれるＴＡＡと同一または類似である。

【0150】

本明細書に記載の前記相同性及び異種性プライム・ブースト処方に、本発明の一つまたは複数の用法・用量の実施形態を組み入れ可能であることが本開示により理解される。例として、前記相同性及び異種性プライム・ブースト処方のどちらかまたは両方において、治療有効量（または投与量）以下の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを、本明細書に記載のとおり投与可能である。

【0151】

さらに一例として、前記相同性及び異種性プライム・ブースト処方のどちらかまたは両方において、ＴＡＡをコード化する組換えポックスウイルスの後に、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを、本明細書に記載の通り投与可能である。

【0152】

さらに一例として、前記相同性及び異種性プライム・ブースト処方のどちらかまたは両方において、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの第二の投与量または投与回数を、第一の投与量または投与と比較して増加可能である。

【0153】

いくつかの実施形態では、前記初回プライミングワクチン接種後、数日間、数週間、数ヶ月間の間隔で前記一つまたは複数のブースティングワクチン接種を行う。いくつかの実施形態では、前記初回プライミングワクチン接種後１、２、３、４、５、６、７日間もしくはそれ以上の間隔で、前記一つまたは複数のブースティングワクチン接種を行う。いくつかの実施形態では、前記初回プライミングワクチン接種後１、２、３、４、５、６、７、８週間もしくはそれ以上の間隔で、前記一つまたは複数のブースティングワクチン接種投与を行う。いくつかの実施形態では、前記初回プライミングワクチン接種後１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月間もしくはそれ以上の間隔で、前記一つまたは複数のブースティングワクチン接種を行う。いくつかの実施形態では、前記初回プライミングワクチン接種後に、任意の投与間隔の組み合わせにより前記一つまたは複数のブースティングワクチン接種を行う（例えば、１、２、３、４、５、６、７日間もしくはそれ以上、１、２、３、４、５、６、７、８週間もしくはそれ以上、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月間もしくはそれ以上）。

【0154】

組換えポックスウイルス治療と併用する免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの用法・用量
本明細書に記載及び図示される通り、組換えポックスウイルスベクターを一つまたは複数の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用した癌治療は、様々な投与量で効果的である。特に、当技術分野における理解とは対照的に、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを低投与量で投与する場合でも、腫瘍関連抗原をコード化する組換えポックスウイルスベクターを併用した免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストは癌治療に効果的であることが本開示により実証される。こうした低投与量治療により、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを用いた現在の癌治療で見受けられる多くの有害な副作用を低減及び／または除外することができる。

【0155】

本開示の様々な態様においては、本明細書に記載の患者へのアゴニストまたはアンタゴニストの投与量は、患者の体重あたり約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇとすることができる。好ましくは、患者への投与量は、患者の体重あたり約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、さらに好ましくは約３ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇである。ヒトへの高い投与量での免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの治療の副作用を考慮し、アゴニストまたはアンタゴニストの最も好ましい投与量は、患者の体重あたり約１ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇである。

【0156】

組換えポックスウイルス療法と組み合わせた低投与量の免疫チェックポイントアゴニスト及びアンタゴニストの有効性を考慮し、別の実施形態においては、前記アゴニストまたはアンタゴニストの投与量は、患者の体重あたり約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇである。付加的実施形態においては、前記アゴニストまたはアンタゴニストの投与量は、患者の体重あたり約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、または約３ｍｇ／ｋｇである。

【0157】

本開示の付加的態様においては、本明細書に記載の患者へのアゴニストまたはアンタゴニストの投与量は、患者の体重あたり０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇとすることができる。好ましくは、患者に対する投与量は、患者の体重あたり０．１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、さらに好ましくは３ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは１ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇである。高投与量の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストによるヒトの治療の副作用を考慮し、最も好ましいアゴニストまたはアンタゴニストの投与量は、患者の体重あたり１ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇである。

【0158】

組換えポックスウイルス療法と組み合わせた低投与量の免疫チェックポイントアゴニスト及びアンタゴニストの有効性を考慮し、別の実施形態においては、前記アゴニストまたはアンタゴニストの投与量は、患者の体重あたり０．１ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ、または０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇである。付加的実施形態においては、前記アゴニストまたはアンタゴニストの投与量は、患者の体重あたり０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、または３ｍｇ／ｋｇである。

【0159】

効果的療法に必要な有効成分の量は、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、及び投与される他の薬剤といった多くの異なる要因によるものである。よって、安全性、忍容性、及び有効性を最適化するために、治療投与量を滴定により決定する。一般的に、インビトロでの投与量により、有効成分のｉｎ ｓｉｔｕ 投与における有効量の有用な指針が規定される。特定の疾病の治療における効果的な用量のための動物試験により、ヒト投与量の予想適用量が規定される。様々な検討が、例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第７版（１９８５），ＭａｃＭｉｌｌａｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ，Ｅａｓｔｏｎ Ｐａに記載されている。これら文献に記載の投与方法には、経口、静脈内、腹腔内、筋肉内、経皮、経鼻、イオン導入投与等が含まれる。

【0160】

本発明の組成物は、投与方法により様々な単位剤形で投与可能である。例えば、経口投与に適した単位剤形には、粉末、錠剤、丸薬、カプセル、及び糖衣錠等の固形剤形及びリキシル剤、シロップ、及び懸濁剤等の液体剤形が含まれる。有効成分を、滅菌液体剤形として非経口的に投与することも可能である。ゼラチンカプセルは、有効成分及び添加物としてグルコース、ラクトース、スクロース、マンニトール、スターチ、セルロースまたはセルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、サッカリンナトリウム、タルク、及び炭酸マグネシウム等の粉末担体を含有する。望ましい色、味、安定性、緩衝能、分散または他の周知の望ましい性質を付与する付加的添加物の例としては、赤色酸化鉄、シリカゲル、ラウリル硫酸ナトリウム、二酸化チタン、及び食用白インク等が挙げられる。同様の希釈剤を用いて圧縮錠剤を製造可能である。錠剤及びカプセルのどちらも、数時間にわたり薬剤を連続的に放出するための徐放性製品として製造可能である。圧縮錠剤は、いかなる不快な味をも隠し、大気から錠剤を保護するために糖衣錠またはフィルム錠とすることができ、または消化管における選択的崩壊のために腸溶性剤とすることもできる。経口投与のための液体剤形は、着色剤や矯味剤を含有することにより、患者に受け入れられやすくできる。

【0161】

前記製剤処方における本発明の組成物濃度は、幅広く変更可能である。すなわち、選択される特定の投与形態により、約０．１重量％未満、または通常少なくとも約２重量％以上最大２０〜５０重量％以上の範囲で主に液量や粘度等に基づいて選択される。

【0162】

固形組成物には、従来の非毒性固形担体である、例えば医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、スターチ、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、スクロース、及び炭酸マグネシウム等を使用可能である。経口投与には、医薬的に許容される非毒性組成物を、上記担体等の通常使用される任意の賦形剤及び、通常１０％−９５％及び好ましくは２５％−７５％濃度の本発明の一つまたは複数の組成物である有効成分を含有するよう作製する。

【0163】

噴霧投与では、本発明の組成物は、好ましくは界面活性剤及び推進剤とともに微細粉末形で提供される。本発明の組成物の好ましい割合は、０．０１〜２０重量％、好ましくは１〜１０重量％である。いうまでもなく、前記界面活性剤は、非毒性であり好ましくは前記推進剤に可溶性でなくてはならない。そのような成分の代表例として、脂肪族多価アルコールまたはその環状無水物を添加したカプロン酸、オクタン酸、ラウリル酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、オレステリン酸及びオレイン酸等の炭素数６〜２２の脂肪酸のエステルまたは部分エステルが挙げられる。混合または天然グリセリド等を使用することもできる。前記界面活性剤は、前記組成物の０．１〜２０重量％、好ましくは０．２５〜５重量％とすることができる。前記組成物の残余分は通常推進剤である。望ましくは、経鼻送達用のレシチン等の担体と共に含有される。

【0164】

本発明のコンストラクトを、当技術分野で公知の技術であるデポー型システム、カプセル型剤形、またはインプラントにより付加的に送達することができる。同様に、前記コンストラクトを、対象の組織にポンプで送達することも可能である。

【0165】

上述のいかなる製剤も、本発明による治療及び療法に好適であるが、前記製剤における活性薬剤は、該製剤により不活性化されず前記製剤は生理学的に適合性があるとする。

【0166】

いくつかの実施形態では、本発明の組換えポックスウイルスを一つまたは複数の医薬組成物と組み合わせることができる。ＴＡＡをコード化する組換えポックスウイルス及び一つまたは複数の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストに加えて、医薬組成物に一つまたは複数の医薬的に許容される及び／または承認された担体、添加物、抗生物質、保存料、アジュバント、希釈剤及び／または安定化剤が含まれてもよい。このような添加剤には、限定されるものではないが、例えば、水、生理食塩水、グリセロール、エタノール、湿潤剤または乳化剤、及びｐＨ緩衝物質が含まれる。例示される担体は、一般的に分子量が大きく代謝速度が遅い分子であり、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、高分子アミノ酸、アミノ酸共重合体、または脂質凝集体等が挙げられる。

【0167】

免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの投与処方
本発明の付加的実施形態においては、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの投与量、濃度、及び投与処方を、癌患者または癌患者群（例えば癌転移前後）の腫瘍サイズ、腫瘍容積、癌ステージといった一つまたは複数の癌関連要因に基づいて設定する。また、一つまたは複数の前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの投与量、濃度、及び投与処方を、限定されるものではないが、ＦｏｒｓｓｍａｎまたはｓＣＤ２７抗体といった関連バイオマーカーまたは抗体の有効性をモニタリング及び検討することにより設定できる。本態様により、ヒト癌患者またはヒト癌患者群にたいしてより効果的な投与処方を設定可能となる。少なくとも一つの態様では、本明細書に記載の通り提供されるより効果的な投与処方によれば、過多または過小量の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが治療で患者または患者群に投与される頻度を低減できる。

【0168】

本明細書に定義される「投与処方」とは、時間単位あたりの治療薬の用量のスケジュールとして定義されるものであり、投与間の時間または投与時刻及び各具体的な時点において投与される薬剤または治療薬の量も包含される。

【0169】

少なくとも一つの態様では、本明細書に開示の方法を、例えば特定の投与処方に関して、本開示の前記組み合わせの治療上の利益を最大限にしつつ有害な副作用を最小限にするよう設定する。一つの実施形態において、一つまたは複数のＴＡＡをコード化する組換えポックスウイルスの投与日に、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを患者に投与する。付加的実施形態においては、以下の段落に記載の通り、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを、一つまたは複数のＴＡＡをコード化する組換えポックスウイルスの投与後に患者に投与する。

【0170】

組換えポックスウイルス療法後の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの投与により癌治療の有効性が高まる
図１４〜１７及び実施例３２〜３５に示すように、ＴＡＡを含む組換えポックスウイルスを対象に投与後、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＩＣＯＳ、及びＰＤ−１といった免疫チェックポイント分子の発現レベルを一定の間隔で測定した。治療に対して、当初免疫チェックポイント発現にほとんど増加は認められなかった。しかし約１〜２日後、Ｔ細胞における免疫チェックポイント分子発現が増加した。約３日目から１２日目にかけて、免疫チェックポイント発現は劇的に増大した。約１８日目まで発現増加を認めた。さらにこの免疫チェックポイント発現増加は、ＣＤ４Ｔ細胞と比較してＣＤ８Ｔ細胞においてより強く認められた（図１４〜１７参照）。

【0171】

図１４〜１７及び実施例３２〜３５の結果から、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト投与の最も効果的な時期は、組換えポックスウイルスによる治療後である。例えば、図１４に示すように、約１〜３日目から約１８日目の間に、治療後に免疫チェックポイント分子ＴＩＭ−３のＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２発現レベルが増加し、約３日目〜約１４日目の間に最も顕著な増加を認めた。よって、より効果的なＴＩＭ−３アンタゴニスト投与時期は、組換えポックスウイルス治療後の上記発現増加が生じる期間である。

【0172】

図１５〜１７に示すように、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ−２による治療後、免疫チェックポイント分子ＩＣＯＳ、ＰＤ−１、及びＬＡＧ−３において同様の発現上昇が認められた。この発現結果により、より高い治療有効性を達成するためには、免疫チェックポイントアンタゴニスト（例えば、ＴＩＭ−３、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、及びＬＡＧ−３）またはアゴニスト（例えば、ＩＣＯＳ）のそれぞれを組換えポックスウイルス治療後に癌患者に投与する。

【0173】

少なくとも一つの態様では、免疫チェックポイント分子発現が少なくとも部分的に上昇する上記期間に、より高い治療有効性が認められるが、これは発現上昇により、前記投与される免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが結合可能な基質が増加し、それにより前記免疫チェックポイント分子のブロッキングまたは活性化がより強く生じるからである。

【0174】

他の態様では、図１４〜１７に示す結果は、組換えポックスウイルス治療後に免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを投与することが有効性を高めるために重要であることを示している。この重要性は、組換えポックスウイルス治療後に免疫チェックポイント分子発現が上昇する時期により明らかに実証される。

【0175】

本開示の記載において、一実施形態における癌治療方法は、限定されるものではないが少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む組換えポックスウイルス等の治療用癌ワクチンを所定の投与量で患者に投与すること、（ｂ）所定投与量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを前記患者に投与することを含み、前記投与量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを前記投与量の治療用癌ワクチン後に投与する方法である。

【0176】

一実施形態では、前記投与量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを、前記投与量の治療用癌ワクチン投与後に同日中に投与することが理解される。また、前記投与量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストは、前記投与量の治療用癌ワクチン投与後、約１〜１８日間、約２〜１７日間、約３〜１６日間、約３〜１４日間、約３〜１２日間、約３〜１０日間、約３〜８日間、約３〜７日間、約４〜１５日間、約４〜１４日間、約４〜１３日間、または約４〜１２日間投与されることが理解される。一つのより好ましい実施形態において、前記投与量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストは、前記投与量の治療用癌ワクチン投与後約３〜１５日間投与される。一つのより好ましい実施形態において、前記投与量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストは、前記投与量の治療用癌ワクチン投与後約３〜７日間投与される。さらにより好ましい実施形態では、前記投与量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストは、前記投与量の治療用癌ワクチン投与後３日間または７日間投与される。

【0177】

また、前記投与量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストは、前記投与量の治療用癌ワクチン投与日または投与後１〜１８日間、２〜１７日間、３〜１６日間、３〜１５日間、３〜１４日間、３〜１２日間、４〜１５日間、４〜１４日間、４〜１３日間、または４〜１２日間投与されることが理解される。一つのより好ましい実施形態において、前記投与量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストは、前記投与量の治療用癌ワクチン投与後３〜１５日間投与される。一つのより好ましい実施形態において、前記投与量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストは、前記投与量の治療用癌ワクチン投与後３〜７日間投与される。さらにより好ましい実施形態では、前記投与量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストは、前記投与量の治療用癌ワクチン投与後３日間または７日間投与される。

【0178】

付加的実施形態においては、本開示には、後続（前記段落における投与量に対する）または第二の投与量の限定されるものではないが少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む組換えポックスウイルス等の治療用癌ワクチンを患者に投与すること、（ｂ）後続（前記段落における投与量に対する）または第二の投与量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを前記患者に投与することを含み、前記後続投与量の治療用癌ワクチン投与後に前記後続投与量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを投与することを含む。前記後続投与量の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを、前記後続投与量の治療用癌ワクチン後に同様の間隔（例えば、前記投与量の治療用癌ワクチン投与後約１〜１８日間、約２〜１７日間、約３〜１６日間、約３〜１５日間、約３〜１４日間、約３〜１２日間、約４〜１５日間、約４〜１４日間、約４〜１３日間、または約４〜１２日間）で投与できることが理解される。

【0179】

組換えポックスウイルス療法等の治療用癌ワクチン投与後の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト投与による治療有効性の向上は、実施例２６から実施例３１においてさらに実証される。

【0180】

一つの実施形態において、前記治療用癌ワクチンには、少なくとも一つのＴＡＡを含む組換えポックスウイルスが含まれる。他の好ましい実施形態において、前記組換えポックスウイルスには、少なくとも一つのＴＡＡを含むオルソポックスウイルスまたはアビポックスウイルスが含まれる。他の好ましい実施形態において、前記オルソポックスウイルスは、ワクシニア、ＭＶＡ、またはＭＶＡ−ＢＮを含む。別の実施形態では、前記アビポックスウイルスには鶏痘ウイルスが含まれる。

【0181】

別の実施形態では、ＣＴＬＡ−４アンタゴニストを、前記投与量の治療用癌ワクチン投与日または投与後約１〜３日間投与することが理解される。

【0182】

さらに他の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストまたはＰＤＬ−１アンタゴニストを、前記投与量の治療用癌ワクチン投与後約２〜１８日間投与することが理解される。
第２回目の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト投与の治療有効量の増加は癌治療の有効性を向上させる
図１４〜１７及び実施例３２〜３５に記載される通り、対象にＴＡＡを含む組換えポックスウイルスを１日目及び１５日目に投与した。ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＩＣＯＳ、及びＰＤ−１といった免疫チェックポイント分子の発現レベルを一定の間隔で測定した。１日目の治療に対し、初期の免疫チェックポイント発現増加はほとんど認められなかった。しかし、１日目の治療後約１〜２日間で免疫チェックポイント分子のＴ細胞発現に増加を認めた。約３日目から約１２日目にかけて、免疫チェックポイント発現は劇的に増加した。発現増加は約１８日目まで認められた。

【0183】

とりわけ、組換えポックスウイルスによる第二または後続治療の１５日目以降、Ｔ細胞によるさらなる免疫チェックポイント分子発現増加が生じた。この免疫チェックポイント発現増加は、ＣＤ４Ｔ細胞と比較してＣＤ８Ｔ細胞においてより顕著に認められた（図１４〜１７参照）。例えば図１２に示すように、１５日目におけるＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ−２による治療後わずかな発現減少を認めた。その後ＴＩＭ−３の発現レベルは１８日目に顕著に増加した。ＴＩＭ−３発現結果によれば、第一の投与量と比較してＴＩＭ−３アンタゴニストの第二または後続投与量を増加することによりさらに高い治療有効性が達成される。

【0184】

図１４〜１７に示すように、１５日目のＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ−２による第二の組換えポックスウイルス治療後、免疫チェックポイント分子であるＩＣＯＳ、ＰＤ−１、及びＬＡＧ−３の発現増加が同様に生じた。さらにこの発現増加は、第一のＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処置と比較して有意に高かった。上記発現結果によれば、免疫チェックポイントアンタゴニスト（例えば、ＴＩＭ−３、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３）またはアゴニスト（例えば、ＩＣＯＳ）の投与量を増加して第二または後続組換えポックスウイルス後に癌患者に投与する。

【0185】

少なくとも一つの態様では、第二または後続治療において、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの投与量（または量）を第一の投与量の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと比較して高くすることにより、治療有効性の向上が達成される。これは少なくともある程度達成可能である。なぜなら第二の治療後の発現増加により、投与される免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが結合可能な基質が増え、前記免疫チェックポイント分子のブロッキングまたは活性化がより強く生じるためである。

【0186】

他の態様では、図１４〜１７に示す結果より、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの第二または後続投与量を第一の投与量と比較して増やすことが、組換えポックスウイルス療法と併用した免疫チェックポイントアンタゴニスト治療の有効性を高めるために重要であることがわかる。この重要性は、本明細書に記載の組換えポックスウイルスによる第二の治療後の免疫チェックポイント分子発現増加期間からも裏付けられる。

【0187】

さらなる態様においては、免疫チェックポイントアンタゴニストＴ細胞受容体占有率（ＲＯ）を示す最近のデータをふまえると、本明細書に記載の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの第二または後続投与において投与量を増加することにより、治療有効性が大幅に向上する。免疫チェックポイントアンタゴニストである抗ＰＤ−１抗体の第一の投与量投与後、Ｔ細胞上における受容体占有率（ＲＯ）をＦＡＣＳ（ＣＤ４５陽性、ＣＤ３ゲート）により測定した（データ未記載）。得られたデータは、前記免疫チェックポイントアンタゴニストであるＰＤ−１の様々な投与量（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、１．４ｍｇ／ｋｇ、及び５ｍｇ／ｋｇ）において血流中のＴ細胞上のＰＤ−１ ＲＯのパーセンテージ（ＲＯ：０．１ｍｇ／ｋｇ＝６５％、ＲＯ：０．４ｍｇ／ｋｇ＝８４％、ＲＯ：１．４ｍｇ／ｋｇ＝９６％、及びＲＯ：５ｍｇ／ｋｇ＝８９％）が高かったことを示す。前記血液でのＲＯ割合を比較したところ、腫瘍に見られるＴ細胞のＲＯは低かった（ＲＯ：０．１ｍｇ／ｋｇ＝９％、ＲＯ：０．４ｍｇ／ｋｇ＝４１％、ＲＯ：１．４ｍｇ／ｋｇ＝５８％、及びＲＯ：５ｍｇ／ｋｇ＝６５％）。

【0188】

組換えポックスウイルスと併用する免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの初回投与量の投与中、高い割合の腫瘍特異的Ｔ細胞（ＣＤ８Ｔ細胞）が、主に血液及びリンパ節といった周辺領域に見られると考えられる。血液中のＴ細胞上の免疫チェックポイントアンタゴニストにおけるＲＯ増加を考慮すると、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの第一の投与は低投与量においてより効果的である。組換えポックスウイルスと併用した免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの第二または後続投与量における有効性向上のために、腫瘍におけるＴ細胞上でのＲＯが低いことから第一の用法・用量と比較して高い投与量で投与する。

【0189】

本開示の記載によれば、付加的実施形態において、本開示は、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを併用した治療用癌ワクチンを利用したヒト癌患者の治療方法であって、（ａ）組換えポックスウイルス等の治療用癌ワクチンを少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用した第一の投与を前記患者に提供すること、及び（ｂ）治療用癌ワクチンを少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用した第二の投与を前記患者に提供すること、を含み、前記第二の投与における前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの用量が、前記第一の投与における前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと比較して高い、前記方法を提供する。

【0190】

また本開示は、一連の投与を患者に提供する方法であって、一連の提供に所定の投与量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用する組換えポックスウイルス等の治療用癌ワクチンの投与が含まれ、前記第二の投与における投与量が、前記第一の投与における投与量と比較して高い、前記方法を提供すると理解される。

【0191】

様々な実施形態では、前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの第二の投与における投与量（または量）を、前記第一の投与における投与量に比べて約２〜約１００倍、約３〜約１００倍、約５〜約１００倍、約１０〜約１００倍、約５〜約９０倍、約１０〜約８０倍、約１０〜約７０倍、約１０〜約６０倍、または約１０〜約５０倍に増加する。好ましい実施形態では、前記第二の投与における投与量を、前記第一の投与における投与量に比べて約１０〜約１００倍に増加する。他の好ましい実施形態において、前記第二の投与における投与量を、前記第一の投与における投与量に比べて約１０〜約５０に増加する。さらに他のより好ましい実施形態では、前記第二の投与における投与量を約３、約１０、約３０、または約１００倍に増加する。

【0192】

様々な付加的実施形態では、前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの第二の投与における投与量を、前記第一の投与における投与量に比べて２〜１００倍、３〜１００倍、５〜１００倍、１０〜１００倍、５〜９０倍、１０〜８０倍、１０〜７０倍、１０〜６０倍、または１０〜５０倍に増加する。好ましい実施形態では、前記第二の投与における投与量を、前記第一の投与における投与量に比べて１０〜１００倍に増加する。他のより好ましい実施形態では、前記第二の投与における投与量を、前記第一の投与における投与量に比べて１０〜５０倍に増加する。さらに他のより好ましい実施形態では、前記第二の投与における投与量を３、１０、３０、または１００倍に増加する。

【0193】

いくつかの例示的実施形態では、限定されるものではないが組換えポックスウイルス等の治療用癌ワクチンと免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの第一の投与に、治療投与量以下または治療有効量以下の投与量での投与が含まれ、その後に限定されるものではないが組換えポックスウイルス等の治療用癌ワクチンとの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの第二または後続投与に、本明細書に記載の前記投与処方に記載の通り増加した投与量での投与が含まれると理解される。ある非限定的な例では、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの第一の投与に、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ投与量での投与が含まれる。この第一の投与後に、約３ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇに増加した投与量での一つまたは複数の後続投与を伴う。

【0194】

一つの好ましい実施形態において、前記治療用癌ワクチンは、少なくとも一つのＴＡＡを含む組換えポックスウイルスを含む。他の好ましい実施形態において、前記組換えポックスウイルスは、少なくとも一つのＴＡＡを含むオルソポックスウイルスまたはアビポックスウイルスを含む。他の好ましい実施形態において、前記オルソポックスウイルスはワクシニア、ＭＶＡ、またはＭＶＡ−ＢＮを含む。別の実施形態では、前記アビポックスウイルスは、鶏痘ウイルスを含む。第一の投与量と比較して増加した第二または後続投与量の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの投与により治療有効性が高められることは、実施例２６〜３１によってさらに実証される。

【0195】

治療用癌ワクチンは、特異的に腫瘍及び／または腫瘍細胞を標的化する患者または患者群自身の免疫システムを刺激する一つまたは複数の独自の免疫学的性質を提示するワクチンである。これらの独自の免疫学的性質は、主に腫瘍または腫瘍細胞に関連する抗原である。少なくとも一つの態様において、治療用癌ワクチンは、癌細胞増殖を遅らせるまたは止める機能を有することにより、腫瘍を縮小させ、癌再発を防ぎ、または他の治療により死滅しなかった癌細胞を除外する。

【0196】

一つの好ましい実施形態において、前記治療用癌ワクチンは、ウイルス系ワクチンである。治療用癌ワクチンとして有用なウイルスのいくつかの非限定的実施例には、ポックスウイルス、アデノウイルス、アルファウイルス、麻疹ウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、パルボウイルス、レオウイルス、及び水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）が含まれる。一つのより好ましい実施形態において、治療用癌ワクチンは、ポックスウイルス系治療薬である。

【0197】

表１に現在開発中のウイルス系治療用癌ワクチンのいくつかの非限定的実施例を示す。

【0198】

【表1】

【0199】

別の実施形態では、治療用癌ワクチンは、酵母系ワクチンとしてもよい。Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１４ Ｍａｒ；６３（３）：２２５−３４等参照。ある非限定的な例では、酵母系治療用癌ワクチンに、現在第ＩＩ相治験中の組換え酵母−ＣＥＡワクチン（ＧＩ−６２０７）が含まれる。Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３１，２０１３（ｓｕｐｐｌ；ａｂｓｔｒ ＴＰＳ３１２７）参照。

【0200】

さらに他の実施形態では、治療用癌ワクチンは、細菌系ワクチンとしてもよい。ある非限定的な例では、細菌系癌ワクチンに、コーリーワクチンが含まれる。Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１２ Ｏｃｔ １；１８（１９）：５４４９−５９参照。

【0201】

異種性プライム・ブーストにおけるブースト投与量後の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト投与は癌治療の有効性を高める
ＰＲＯＳＴＶＡＣ（登録商標）は異種性プライム・ブースト処方からなり、ＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｖ（ＰＳＡ発現ワクシニアウイルス及びＴＲＩＣＯＭ^ＴＭ）の単回プライム投与後に一つまたは複数の連続ブースティング用量ＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｆ（ＰＳＡ発現鶏痘ウイルス及びＴＲＩＣＯＭ（商標））が投与され、本明細書に参照として組み入れるＪ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２０１０，２８：１０９９−１１０５にも記載されている。

【0202】

図２１〜２３及び実施例４０〜４３に図示及び記載の通り、癌治療において、異種性ＰＲＯＳＴＶＡＣ（登録商標）投与処方により、同一ベクターの相同性投与と比較して、ＰＳＡ特異的Ｔ細胞応答の程度及び質は非常に高められる。また、上記図及び実施例により、ＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｖによるプライミング及びＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｆによるブースティングにより、ＰＳＡ及び標的腫瘍抗原指向性かつワクシニアベクター反指向性の高機能ＣＤ８ＣＴＬ免疫応答にフォーカスするさらなる効果がもたらされることが実証される。

【0203】

少なくとも一つの態様では、一つまたは複数の投与量の組換えポックスウイルスを癌治療の一環として投与する場合、一つまたは複数の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを第二または後続投与の組換えポックスウイルスと併用することにより、より高い治療有効性が達成される。

【0204】

より具体的な態様では、本発明の一つまたは複数の投与量の組換えポックスウイルスを癌治療の一環として異種性プライム・ブースト処方の一部として投与する場合、少なくとも一つのチェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを第二または後続ブースト投与量の少なくとも一つのＴＡＡをコード化する組換えポックスウイルスと併用して投与することにより、より高い治療有効性が達成される。より高い治療有効性は少なくともある程度達成される。なぜなら前記第二または後続ブースト投与量の異種性プライム・ブースト処方の投与中及び投与後で、患者の免疫Ｔ細胞応答が組換えポックスウイルスよりも腫瘍抗原にフォーカスされる。その結果、少なくとも一つの態様では、前記ブースティング投与量の投与中の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの投与は、腫瘍抗原に対する患者免疫応答を高める機能があり、それにより腫瘍により特異的な患者免疫応答が増加する。

【0205】

少なくとも他の態様では、異種性プライム・ブースト処方を含む癌治療の一環として、少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを前記第二または後続ブースト投与量の組換えポックスウイルスと併用投与することにより、前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの治療上の利益が最大化され、かつ免疫チェックポイント治療で認められた有害な副作用が最小化される。

【0206】

本開示の記載を考慮すると、付加的実施形態において、前記本発明に、ヒト癌患者の治療方法であって、（ａ）限定されるものではないが少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む第一の組換えポックスウイルス等の第一の治療用癌ワクチン及び（ｂ）限定されるものではないが少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む第二の組換えポックスウイルス等の第二の組換えポックスウイルスを前記患者に投与することを含み、前記第二の組換えポックスウイルスを少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用して投与する、前記方法が含まれる。別の実施形態では、前記第二の組換えポックスウイルスは、前記第一の組換えポックスウイルスと異なる。他の実施形態では、前記第二の組換えポックスウイルスは、前記第一の組換えポックスウイルスとは異なる属に由来する。

【0207】

別の実施形態では、異種性プライム・ブースト処方として、互いに異なるまたは属が異なる前記第一及び第二の組換えポックスウイルスが投与され、前記異種性プライム・ブースト処方が、ａ）第一のプライム用量として前記第一の組換えポックスウイルスを投与すること及びｂ）一つまたは複数のブースト用量として前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用して前記第二の組換えポックスウイルスを投与することを含む。好ましい実施形態では、前記異種性プライムブースト処方は、ＰＲＯＳＴＶＡＣ（登録商標）、ＣＶ３０１またはＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１から選択される。

【0208】

さらに他の実施形態において、初回またはプライム用量の前記第一の組換えポックスウイルスまたは前記組換えポックスウイルスに免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが含まれないと理解される。

【0209】

前記第一及び第二の組換えポックスウイルスは任意のポックスウイルスであってよく限定されるものではないが、本開示に例示されるものであることがさらに理解される。前記少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）は任意のＴＡＡであってよく限定されるものではないが、本開示に例示されるＴＡＡであることがさらに理解される。

【0210】

付加的実施形態においては、癌患者に（ａ）限定されるものではないが少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む第一の組換えポックスウイルス等の第一の治療用癌ワクチン及び（ｂ）第二の治療用癌ワクチンを含む異種性プライム・ブースト処方を投与する方法であって、前記第二の治療用癌ワクチンを少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用して投与する、前記方法が挙げられる。前記記載されている異種性プライム・ブースト処方が企図される。

【0211】

一つまたは複数の実施形態において、前記第二または後続投与量の少なくとも一つのＴＡＡをコード化する組換えポックスウイルス投与日または投与後１、２、３、４、５、６、または７日間以内以内に少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを投与する。好ましい実施形態では、前記第二または後続ブースト投与量の少なくとも一つのＴＡＡをコード化する組換えポックスウイルス投与日または投与後１、２、３、４、５、６、または７日間以内以内に少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを異種性プライム・ブースト処方の一部として投与する。

【0212】

一つまたは複数の実施形態において、前記第二または後続投与量の少なくとも一つのＴＡＡをコード化する組換えポックスウイルス投与後に、少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを投与する。好ましい実施形態では、前記第二または後続ブースト投与量の少なくとも一つのＴＡＡをコード化する組換えポックスウイルスの後に、異種性プライム・ブースト処方の一部として少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを投与する。前記第二または後続ブースト投与量の組換えポックスウイルスの後に、前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの投与間隔には、本開示に例示される間隔が含まれると理解される。

【0213】

第二または一つまたは複数の後続ブースト投与量の少なくとも一つのＴＡＡをコード化する組換えポックスウイルスと併用して投与される場合、本開示に記載される投与量または濃度で少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを投与可能であることがさらに理解される。

【0214】

治療用組成物及びその用途
本発明はさらに、腫瘍エピトープに対する免疫学的反応の発生及び改善を誘導するまたはそれらに寄与することが可能な治療用組成物またはワクチンの作製のための本発明の前記ポックスウイルスベクターの使用に関する。よって本発明により、薬剤またはワクチンとして有用なベクターが提供される。

【0215】

その結果、本発明は、本発明の一つまたは複数の抗体、アゴニスト、またはアンタゴニストと併用される本発明のＭＶＡベクターを含む免疫原性組成物に関する。

【0216】

よって、本発明の前記ＭＶＡベクターを癌治療のための治療用組成物の作製に使用することができる。

【0217】

本発明は、特に抗癌治療としての腫瘍の治療のために予防的及び／または治療用ワクチン接種プロトコールにおいて使用される組成物を包含する。

【0218】

一つの実施形態において、本発明は、特に限定されるものではないが乳癌、肺癌、胃癌、膀胱癌、腎癌、肝癌、膵癌、前立腺癌、卵巣癌、または結腸直腸癌といった癌の患者に対する投与または治療目的で使用される組成物を包含する。

【0219】

一つの実施形態において、本発明は、患者、特に乳癌、肺癌、胃癌、膀胱癌、腎癌、肝癌、膵癌、前立腺癌、卵巣癌、または結腸直腸癌から選択される癌の患者に対する投与または治療目的で組成物を投与することを包含する。

【0220】

付加的実施形態においては、本発明は、癌特に乳癌の患者に対する投与または治療目用途の組成物またはその組成物の使用を包含する。

【0221】

一つの実施形態において、同時または連続投与される前記組成物は、本発明のＭＶＡベクター及び本発明の一つまたは複数の抗体、アゴニスト、またはアンタゴニストを含む。

【0222】

さらに付加的な実施形態において、本発明は、癌特に前立腺癌の患者に対する投与または治療目用途の組成物またはその組成物の使用を包含する。

【0223】

一つの実施形態において、同時または連続投与される前記組成物は、本発明のＰＲＯＳＴＶＡＣ（登録商標）ベクター及び本発明の一つまたは複数の抗体、アゴニストまたはアンタゴニストを含む。

【0224】

別の実施形態では、本発明は、癌の治療方法であって、（ａ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む治療有効量の組換えポックスウイルス及び（ｂ）治療有効量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを前記患者に投与することを含み、前記治療有効量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストにより、少なくとも一つのＴＡＡを含む前記ポックスウイルスベクター単独、前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独、または他の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストとの併用投与と比較した場合、前記組み合わせの前記治療効果が増大する、前記方法を包含する。

【0225】

本発明の前記様々な実施形態によると、癌治療において、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストをＴＡＡをコード化するポックスウイルスベクターと併用した場合、前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが治療上効果的な投与量は、１）前記ポックスウイルスベクターを併用しない治療上有効な投与量の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストまたは２）治療上有効な投与量の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独の場合と比較して、少ないもしくは減少する。このように、治療上有効な投与量の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを低投与量で投与することが可能であり、それにより先行技術における治療で見られる毒性のある有害な副作用を低減または除外可能である。

【0226】

「治療有効量」とは、治療対象において所望の治療または臨床効果を達成するのに十分な組成物の量である。例えば、発現制御配列作動可能に連結した腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）核酸（限定されるものではないがＣＥＡ、ＭＵＣ−１、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＨＥＲ−２、サバイビン、ｔｙｒｐ１、ｔｙｒｐ２、またはＢｒａｃｈｙｕｒｙ抗原等）を含むポックスウイルスベクターの治療有効量は、ＴＡＡ−特異的免疫応答の誘発、腫瘍サイズまたは負荷の低減、腫瘍転移数の低減、癌の進行の遅延、または癌患者または癌患者集団の全生存期間延長に十分な量である。

【0227】

また例として、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの治療有効量は、標的化免疫チェックポイント分子の機能阻害、標的化免疫チェックポイント分子への結合、腫瘍サイズまたは負荷の低減、腫瘍転移数の低減、癌の進行の遅延、または癌患者または癌患者集団の全生存期間延長に十分な量となるであろう。

【0228】

「治療効果」とは、対象における所望の治療または臨床効果である。癌治療における「治療効果」は、腫瘍サイズ、腫瘍量、または全身腫瘍組織量の低減、腫瘍転移数の低減、癌の進行の遅延、または癌患者または癌患者集団の全生存期間延長等に特徴付けられる。

【0229】

組換えポックスウイルスを併用した免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストによる癌治療により低用量のアンタゴニストまたはアゴニストで治療有効性が得られる
本明細書に図示及び記載のとおり、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストをＴＡＡコード化するポックスウイルスベクターと組み合わせた場合、前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが治療上効果的な投与量は、少ないもしくは減少する。様々な付加的実施形態において、本開示には、（ａ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む治療有効量の組換えポックスウイルス及び（ｂ）治療有効量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの組み合わせをヒト癌患者に投与することが含まれる。本実施形態では、前記治療有効量以下の前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストにより、前記治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストにより、前記少なくとも一つのＴＡＡを含むポックスウイルス単独、前記治療有効量以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独、または他の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの併用投与と比較して、前記組み合わせの前記治療効果の増大が達成される。

【0230】

少なくとも一つの態様において、前記治療有効量以下の投与量は、先行技術における免疫チェックポイント治療で見られる有害な副作用を最小にしつつ治療上の利益を最大とするように設定されている。

【0231】

「治療有効量以下の」とは、単独治療用または単独療法に投与される場合または他のまたは複数の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用して投与される場合に、「治療効果」という点において前記免疫チェックポイントアンタゴニストが効果的でない投与量または量である。

【0232】

一つの実施形態において、前記治療有効量以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストは、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの治療有効量の約９９％〜約５％、約９０％〜約５％、約８５％〜約５％、約８０％〜約５％、７５％〜約５％、約７０％〜約１０％、約６５％〜約１５％、約６０％〜約２０％、約５５％〜約２５％、約５０％〜約３０％、または約５０％〜約１０％に相当する。好ましい実施形態では、前記治療有効量以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストは、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの治療有効量における約９９％〜約３０％の減少に相当する。他の好ましい実施形態において、前記治療有効量以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストは、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの治療有効量における約９０％〜約３０％の減少に相当する。さらに他の好ましい実施形態では、前記治療有効量以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストは、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの治療有効量における約９９％、約９０％、または約３０％の減少に相当する。

【0233】

別の実施形態では、前記治療有効量以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストは、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの治療有効量の９９％〜５％、９０％〜５％、８５％〜５％、８０％〜５％、７５％〜５％、７０％〜１０％、６５％〜１５％、６０％〜２０％、５５％〜２５％、５０％〜３０％、または５０％〜１０％に相当する。好ましい実施形態では、前記治療有効量以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストは、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの治療有効量における９９％〜３０％の減少に相当する。他の好ましい実施形態において、前記治療有効量以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストは、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの治療有効量の約９０％〜約３０％の減少に相当する。他の好ましい実施形態では、前記治療有効量以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストは、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの治療有効量における９９％、９０％、または３０％の減少に相当する。

【0234】

一つまたは複数の実施形態において、本明細書に記載の異種性または相同性プライム・ブースト処方の一部として、治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを、少なくとも一つのＴＡＡを含む組換えポックスウイルスと併用してもよい。

【0235】

キット
一つの実施形態において、本発明は、組換えポックスウイルス及び少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを含むキットを包含する。前記組換えポックスウイルス及び前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストは、それぞれバイアルまたは容器に収容できる。一つの実施形態において、前記組換えポックスウイルスは本明細書に記載のとおり腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）をコード化する。別の実施形態では、前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストは、本明細書に記載の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストから選択される。様々な実施形態では、ワクチン接種のためのキットは、第一のバイアルのセットまたは容器の第一のワクチン接種（「プライミング」）及び第二または第三のバイアルまたは容器の第二または第三のワクチン接種（「ブースティング」）のための組換えポックスウイルス及び免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを含む。

【0236】

一つの実施形態において、前記キットは、組換えポックスウイルス及び少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの組み合わせ及び癌予防のための前記組み合わせの投与の指示を含む。一つの実施形態において、前記キットは一つまたは複数の腫瘍関連マーカーの上昇が検出された場合の前記組み合わせ及び癌予防のための前記組み合わせの投与の指示を含む。

【0237】

一つの実施形態において、前記キットは、組換えポックスウイルス及び少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの組み合わせ及び治療有効量の前記ポックスウイルス及び治療有効量の少なくとも一つの前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを投与する指示を含んでいてもよく、少なくとも一つのＴＡＡを含むポックスウイルス単独、少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独、または他の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストとの併用投与と比較して、前記ポックスウイルスを併用した前記治療有効量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの治療効果が増大する。

【0238】

別の実施形態では、前記キットは、組換えポックスウイルス及び少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの組み合わせ及び治療域以下の投与量の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを投与する指示を含んでいてもよく、前記治療有効投与量（量）以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストにより、少なくとも一つのＴＡＡを含む前記ポックスウイルス単独、前記治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独、または他の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの併用投与と比較して、前記組み合わせの治療効果が増大する。

【0239】

別の実施形態では、前記キットは、組換えポックスウイルス及び少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの組み合わせ及び前記患者に前記組換えポックスウイルス及び前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの一連の投与を提供する指示をさらに含んでいてもよく、前記指示が前記一連の投与においての第一の投与の投与量と比較して第二の投与の投与量を増加することを含む。

【0240】

別の実施形態では、前記キットは、組換えポックスウイルス及び少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの組み合わせ及び組換えポックスウイルス及び少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを第二の投与を前記患者に提供する指示を含んでいてもよく、前記指示に、治療有効量以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの組み合わせの第一の投与を提供した後第二の投与を提供することを含み、前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの投与量を本明細書に記載の通り増加させることを含む。

【0241】

本開示により、提供される前記一つまたは複数の指示は、キット単体に組み合わせてもよいことが理解される。本明細書において提供される前記一つまたは複数の指示に、本出願において提供される一つまたは複数の前記投与処方が含まれることさらに理解される。

【0242】

組み合わせまたは薬剤の付加的実施形態
付加的実施形態においては、本開示は、ヒト癌患者治療に使用する組み合わせまたは薬剤を包含する。該組み合わせまたは薬剤には、組換えポックスウイルスベクター、前記少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含むポックスウイルスベクター、（ｂ）ＰＤ−１アンタゴニスト、及び（ｃ）ＣＴＬＡ−４アンタゴニストが含まれる。前記ＰＤ−１アンタゴニスト及び前記ＣＴＬＡ−４アンタゴニストに、抗ＰＤ−１アンタゴニスト抗体及び抗ＣＴＬＡ−４抗体がそれぞれ含まれてもよい。

【0243】

さらに付加的実施形態において、本開示に、ヒト癌患者治療に使用する組み合わせまたは薬剤であって、該組み合わせまたは薬剤は（ａ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む治療有効量の組換えポックスウイルス及び（ｂ）治療有効量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの組み合わせを前記患者に投与することを含み、前記治療有効量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、少なくとも一つのＴＡＡを含む前記ポックスウイルスベクター単独、前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独、または他の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストとの併用投与と比較した場合、増大した治療効果を有する前記組み合わせまたは薬剤が含まれてもよい。さらに他の実施形態では、前記組み合わせまたは薬剤に、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＰＤＬ−１アンタゴニスト、ＬＡＧ−３アンタゴニスト、ＴＩＭ−３アンタゴニスト、またはＩＣＯＳアゴニストから選択される免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが含まれてもよい。前記様々な免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを一つまたは複数の抗体と組み合わせ可能であることが理解される。

【0244】

別の実施形態では、本開示に、ヒト癌患者の全生存期間を増加するために使用する組み合わせまたは薬剤であって、前記組み合わせまたは薬剤が（ａ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含むポックスウイルス、（ｂ）ＰＤ−１アンタゴニスト、及び（ｃ）ＣＴＬＡ−４アンタゴニストを含む、前記組み合わせまたは薬剤が含まれてもよい。前記ＰＤ−１アンタゴニスト及び前記ＣＴＬＡ−４アンタゴニストに、抗ＰＤ−１アンタゴニスト抗体及び抗ＣＴＬＡ−４抗体がそれぞれ含まれてもよい。

【0245】

さらに他の実施形態では、本開示に、ヒト癌患者の全生存期間を増加するために使用する組み合わせまたは薬剤であって、前記組み合わせまたは薬剤が（ａ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含むポックスウイルス及び（ｂ）治療有効量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを含み、前記治療有効量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、少なくとも一つのＴＡＡを含む前記ポックスウイルスベクター単独、前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独、または他の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストとの併用投与と比較した場合、増大した治療効果を有する、前記組み合わせまたは薬剤が含まれていてもよい。

【0246】

さらに付加的実施形態において、本開示に、ヒト癌患者の全生存期間を増加するために使用する組み合わせまたは薬剤であって、前記組み合わせまたは薬剤が（ａ）治療有効量の少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む組換えポックスウイルス及び（ｂ）治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを含み、前記治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストにより、前記少なくとも一つのＴＡＡを含むポックスウイルス単独、前記治療有効量以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独、または他の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの併用投与と比較して、前記組み合わせの前記治療効果が増大する、前記組み合わせまたは薬剤が含まれてもよい。前記組み合わせまたは薬剤に、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＰＤＬ−１アンタゴニスト、ＬＡＧ−３アンタゴニスト、ＴＩＭ−３アンタゴニスト、またはＩＣＯＳアゴニストから選択される免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが含まれていてもよいことが理解される。前記様々な免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを一つまたは複数の抗体と組み合わせ可能であることが理解される。

【0247】

さらに付加的実施形態において、本開示に、ヒト癌患者の全生存期間を増加するために使用する組み合わせまたは薬剤であって、前記組み合わせまたは薬剤が（ａ）治療有効量の少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む組換えポックスウイルス及び（ｂ）治療有効量のまたは治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを含み、前記治療有効量のまたは治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが前記治療有効量の組換えポックスウイルスの後に投与され、前記組換えポックスウイルスと組み合わせた治療有効量のまたは治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、少なくとも一つのＴＡＡを含む前記ポックスウイルスベクター単独、前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独、または他の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストとの併用投与と比較した場合、増大した治療効果を有する、前記組み合わせまたは薬剤が含まれていてもよい。

【0248】

さらに他の実施形態において、本開示に、ヒト癌患者の治療に使用する組み合わせまたは薬剤であって、前記組み合わせまたは薬剤の少なくとも第一及び第二の投与量において、各投与量に（ａ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む治療有効量の組換えポックスウイルス及び（ｂ）治療有効量または治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが含まれ、前記第二の投与量の治療有効量または治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを前記第一の投与量の治療有効量または治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと比較して増加し、前記ポックスウイルスと組み合わせた前記治療有効量または治療有効量以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、少なくとも一つのＴＡＡを含む前記ポックスウイルスベクター単独、治療有効量または治療有効量以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独、または他の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストとの併用投与と比較した場合、増大した治療効果を有する、前記組み合わせまたは薬剤が含まれていてもよい。

【0249】

さらに他の実施形態では、本明細書に記載の前記組み合わせまたは薬剤における前記ＴＡＡをコード化する組換えポックスウイルスを、ＰＲＯＳＴＶＡＣ（登録商標）とすることができる。さらに他の実施形態において、本明細書に記載の前記組み合わせまたは薬剤における前記ＴＡＡをコード化する組換えポックスウイルスを、ＣＶ３０１とすることができる。

【0250】

さらなる付加的実施形態において、本開示に、医薬組成物または薬剤の作製における（ａ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む組換えポックスウイルス、（ｂ）ＰＤ−１アンタゴニスト；及び（ｃ）ＣＴＬＡ−４アンタゴニストの使用が含まれてもよい。前記ＰＤ−１アンタゴニスト及び前記ＣＴＬＡ−４アンタゴニストに、抗ＰＤ−１アンタゴニスト抗体及び抗ＣＴＬＡ−４抗体がそれぞれ含まれてもよい。付加的実施形態においては、前記開示された医薬組成物または薬剤を、前記ヒト癌患者の治療に使用可能である。

【0251】

さらに付加的実施形態において、本開示に、医薬組成物または薬剤の作製における（ａ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む組換えポックスウイルス及び（ｂ）治療有効量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの使用において、前記ポックスウイルスベクターと組み合わせた前記治療有効量の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、少なくとも一つのＴＡＡを含む前記ポックスウイルスベクター単独、前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独、または他の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストとの併用投与と比較した場合、増大した治療効果を有する、前記使用が含まれていてもよい。

【0252】

さらに付加的実施形態において、本開示に、医薬組成物または薬剤の作製における（ａ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む治療有効量の組換えポックスウイルス及び（ｂ）治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの医薬組成物または薬剤の使用において、前記治療有効量以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストにより、少なくとも一つのＴＡＡを含む前記ポックスウイルス単独、前記治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独、または他の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの併用投与と比較して、前記組み合わせの治療効果が増大する、前記使用が含まれてもよい。前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＰＤＬ−１アンタゴニスト、ＬＡＧ−３アンタゴニスト、ＴＩＭ−３アンタゴニスト、またはＩＣＯＳアゴニストから選択可能であることが理解される。前記様々な免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを、一つまたは複数の抗体と組み合わせ可能であることが理解される。

【0253】

さらに付加的実施形態において、本開示に、医薬組成物または薬剤の作製における（ａ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む治療有効量の組換えポックスウイルス及び（ｂ）治療有効量または治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの医薬組成物または薬剤の使用において、前記治療有効量のまたは治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが前記治療有効量の組換えポックスウイルスの後に投与され、前記組換えポックスウイルスと組み合わせた治療有効量のまたは治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、少なくとも一つのＴＡＡを含む前記ポックスウイルスベクター単独、治療有効量または治療有効量以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独、または他の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストとの併用投与と比較した場合、増大した治療効果を有する、前記使用が含まれていてもよい。

【0254】

さらに他の実施形態において、本開示に、医薬組成物または薬剤の作製における少なくとも第一及び第二の用法・用量の使用において、各用法・用量が（ａ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む治療有効量の組換えポックスウイルス及び（ｂ）治療有効量または治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを含み、治療有効量または治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの前記第二の投与量を治療有効量または治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの前記第一の投与量と比較して増加し、前記ポックスウイルスと組み合わせた前記治療有効量または治療有効量以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、少なくとも一つのＴＡＡを含む前記ポックスウイルスベクター単独、治療有効量または治療有効量以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独、または他の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストとの併用投与と比較した場合、増大した治療効果を有する、前記使用が含まれていてもよい。
なお、本願は特許請求の範囲に記載の発明に関するものであるが、他の態様として以下も包含し得る。
１．ヒト癌患者の治療方法であって、
（ａ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含むポリペプチドをコード化する組換えポックスウイルスを前記患者に投与すること、および
（ｂ）ＰＤ−１アンタゴニスト及びＣＴＬＡ−４アンタゴニストを前記患者に投与すること、を含む前記方法。
２．前記ＰＤ−１アンタゴニスト及び前記ＣＴＬＡ−４アンタゴニストに、抗ＰＤ−１アンタゴニスト抗体及び抗ＣＴＬＡ−４抗体がそれぞれ含まれる、上記１記載の方法。
３．前記ＰＤ−１アンタゴニスト及びＣＴＬＡ−４アンタゴニストが、可溶性融合タンパク質受容体、ペプチド、小分子、またはそれらの組み合わせを含む、上記１記載の方法。
４．前記ポックスウイルスがオルソポックスウイルスである、上記１〜３記載の方法。
５．前記オルソポックスウイルスがワクシニアウイルスである、上記４記載の方法。
６．前記ワクシニアウイルスが修飾ワクシニアウイルスアンカラ（ＭＶＡ）である、上記５記載の方法。
７．前記ＭＶＡがＭＶＡ−ＢＮである、上記６記載の方法。
８．前記ポックスウイルスがアビポックスウイルスである、上記１〜３記載の方法。
９．前記アビポックスウイルスが鶏痘ウイルスである、上記８記載の方法。
１０．前記少なくとも一つのＴＡＡが、癌胎児性（ＣＥＡ）、ｍｕｃｉｎ １， ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ（ＭＵＣ−１）、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ−２）、サバイビン、チロシン関連タンパク質１（ｔｙｒｐ１）、チロシン関連タンパク質１（ｔｙｒｐ２）、またはＢｒａｃｈｙｕｒｙ抗原である、上記１〜９のいずれか一項に記載の方法。
１１．前記少なくとも一つのＴＡＡがＣＥＡ抗原及びＭＵＣ−１抗原である、上記１〜９のいずれか一項に記載の方法。
１２．前記少なくとも一つのＴＡＡがＣＥＡ抗原である、上記１〜９のいずれか一項に記載の方法。
１３．前記少なくとも一つのＴＡＡがＭＵＣ−１抗原である、上記１〜９のいずれか一項に記載の方法。
１４．前記少なくとも一つのＴＡＡがＰＡＰ抗原である、上記１〜９のいずれか一項に記載の方法。
１５．前記少なくとも一つのＴＡＡがＰＳＡ抗原である、上記１〜９のいずれか一項に記載の方法。
１６．前記少なくとも一つのＴＡＡがＨＥＲ−２抗原である、上記１〜９のいずれか一項に記載の方法。
１７．前記少なくとも一つのＴＡＡがＢｒａｃｈｙｕｒｙである、上記１〜９のいずれか一項に記載の方法。
１８．前記少なくとも一つのＴＡＡがサバイビンである、上記１〜９のいずれか一項に記載の方法。
１９．前記少なくとも一つのＴＡＡがｔｙｒｐ１である、上記１〜９のいずれか一項に記載の方法。
２０．前記少なくとも一つのＴＡＡがｔｙｒｐ２である、上記１〜９のいずれか一項に記載の方法。
２１．前記癌治療が乳癌、肺癌、頭頸部癌、甲状腺、メラノーマ、胃癌、膀胱癌、腎癌、肝癌、メラノーマ、膵癌、前立腺癌、卵巣癌、または結腸直腸癌に対する治療である、上記１−２０記載の方法。
２２．前記癌治療が前立腺癌に対する治療である、上記１〜２１記載の方法。
２３．前記癌治療が乳癌に対する治療である、上記１〜２１記載の方法。
２４．前記癌治療が結腸直腸癌に対する治療である、上記１〜２１記載の方法。
２５．前記癌治療が肺癌に対する治療である、上記１〜２１記載の方法。
２６．前記癌治療が卵巣癌に対する治療である、上記１〜２１記載の方法。
２７．ヒト癌患者における癌の治療方法であって、
（ａ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む治療有効量の組換えポックスウイルス及び（ｂ）治療有効量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの組み合わせを前記患者に投与することを含み、
前記治療有効量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストにより、少なくとも一つのＴＡＡを含む前記ポックスウイルスベクター単独、前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独、または他の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストとの併用投与と比較した場合、前記組み合わせの前記治療効果が増大する、前記方法。
２８．前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストがＣＴＬＡ−４アンタゴニストを含む、上記２７記載の方法。
２９．前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストがさらにＰＤ−１アンタゴニストを含む、上記２８記載の方法。
３０．前記ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト及びＰＤ−１アンタゴニストがそれぞれ抗ＣＴＬＡ−４抗体及び抗ＰＤ−１抗体である、上記２９記載の方法。
３１．前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの少なくとも一つが、前記患者の体重あたり約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの量で投与される、上記２７〜３０記載の方法。
３２．前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、前記患者の体重あたり約１ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇの量で投与される、上記２７〜３０記載の方法。
３３．前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、前記患者の体重に対し１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの量で投与される、上記２７〜３０記載の方法。
３４．前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、前記患者の体重に対し１ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇの量で投与される、上記２７〜３０記載の方法。
３５．前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、前記患者の体重あたり約１０ｍｇ／ｋｇの量で投与される、上記２７〜３０記載の方法。
３６．前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、前記患者の体重あたり約３ｍｇ／ｋｇの量で投与される、上記２７〜３０記載の方法。
３７．前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、前記患者の体重あたり約１ｍｇ／ｋｇの量で投与される、上記２７〜３０記載の方法。
３８．前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、前記患者の体重あたり１０ｍｇ／ｋｇの量で投与される、上記２７〜３０記載の方法。
３９．前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、前記患者の体重あたり３ｍｇ／ｋｇの量で投与される、上記２７〜３０記載の方法。
４０．前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、前記患者の体重あたり１ｍｇ／ｋｇの量で投与される、上記２７〜３０記載の方法。
４１．前記治療有効量の組換えポックスウイルス及び治療有効量の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを併用して、相同性または異種性プライム・ブースト処方の一部として投与する、上記２７−４０記載の方法であって、
前記相同性プライム・ブースト処方が、第一のプライム用量の前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを併用した前記組換えポックスウイルス及び一つまたは複数の後続ブースト用量の前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを併用した同組換えポックスウイルスを含み、
前記異種性プライム・ブースト処方が、第一のプライム用量の前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを併用した前記組換えポックスウイルス及び一つまたは複数の後続ブースト用量の前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを併用した同組換えポックスウイルスを含む、前記方法。
４２．相同性プライム・ブースト処方の一部として、前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを併用した前記組換えポックスウイルスを投与し、前記第一のプライム用量及び前記一つまたは複数の後続ブースト用量での組換えポックスウイルスがオルソポックスウイルスを含む、上記４１記載の方法。
４３．前記オルソポックスウイルスが、ワクシニアウイルス、ＭＶＡ、またはＭＶＡ−ＢＮから選択される、上記４２記載の方法。
４４．前記少なくとも一つのＴＡＡがＨＥＲ２である、上記４２〜４３記載の方法。
４５．異種性プライム・ブースト処方の一部として、前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを併用した前記組換えポックスウイルスを投与し、前記第一のプライム用量での組換えポックスウイルスがオルソポックスウイルスを含みかつ前記一つまたは複数のブースト用量での前記組換えポックスウイルスがアビポックスウイルスを含む、上記４１記載の方法。
４６．前記オルソポックスウイルスがワクシニアウイルスであり、前記アビポックスウイルスが鶏痘ウイルスである、上記４５記載の方法。
４７．前記異種性プライム・ブースト処方がＰＲＯＳＴＶＡＣまたはＣＶ３０１である、上記４１、４５〜４６記載の方法。
４８．ヒト患者における癌治療キットであって、（ａ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含むポリペプチドをコード化する組換えポックスウイルス、（ｂ）ＰＤ−１アンタゴニスト、及び（ｃ）ＣＴＬＡ−４アンタゴニストを含む、前記キット。
４９．前記ＰＤ−１アンタゴニスト及び前記ＣＴＬＡ−４アンタゴニストに、抗ＰＤ−１アンタゴニスト抗体及び抗ＣＴＬＡ−４抗体がそれぞれ含まれる、上記４８のキット。
５０．前記少なくとも一つのＴＡＡが、ＣＥＡ、ＭＵＣ−１、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＨＥＲ−２、サバイビン、チロシン関連タンパク質１（ｔｙｒｐ１）、チロシン関連タンパク質２（ｔｙｒｐ２）、Ｂｒａｃｈｙｕｒｙ抗原、またはそれらの組み合わせである、上記４８〜４９記載のキット。
５１．前記少なくとも一つのＴＡＡがＰＳＡである、上記４８〜４９記載のキット。
５２．前記少なくとも一つのＴＡＡがＭＵＣ−１及びＣＥＡである、上記４８〜４９記載のキット。
５３．前記ポックスウイルスが、オルソポックスウイルスまたはアビポックスウイルスである、上記４８〜５２記載のキット。
５４．前記オルソポックスウイルスが、ワクシニア、ＭＶＡ、またはＭＶＡ−ＢＮから選択される、上記５３のキット。
５５．前記アビポックスウイルスが鶏痘ウイルスである、上記５３のキット。
５６．前記組換えポックスウイルス及び前記ＰＤ−１アンタゴニスト及びＣＴＬＡ−４アンタゴニストの組み合わせが、一つまたは複数の許容可能な希釈剤、緩衝液、賦形剤、または担体と配合される、上記４８〜５５のキット。
５７．ヒト患者における癌治療キットであって、
（ａ）治療有効量の少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む組換えポックスウイルス、
（ｂ）治療有効量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト、及び
（ｃ）治療有効量の前記ポックスウイルス及び治療有効量の少なくとも一つの前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを投与する指示を含み、
少なくとも一つのＴＡＡを含むポックスウイルス単独、少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独、または他の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストとの併用投与と比較して、前記ポックスウイルスを併用した前記治療有効量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの治療効果が増大する、前記キット。
５８．前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、ＴＩＭ−３アンタゴニスト、ＬＡＧ−３アンタゴニスト、ＩＣＯＳアゴニスト、またはそれらの組み合わせから選択される、上記５７のキット。
５９．前記少なくとも一つのＴＡＡが、ＣＥＡ、ＭＵＣ−１、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＨＥＲ−２、サバイビン、チロシン関連タンパク質１（ｔｙｒｐ１）、チロシン関連タンパク質２（ｔｙｒｐ２）、Ｂｒａｃｈｙｕｒｙ抗原、またはそれらの組み合わせである、上記５７〜５８記載のキット。
６０．前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストに先行して前記組換えポックスウイルスを投与する指示をさらに含む、上記４８〜５９記載のキット。
６１．治療域以下の投与量の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを投与する指示をさらに含み、前記治療有効量以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストにより、少なくとも一つのＴＡＡを含む前記ポックスウイルス単独、前記治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独、または他の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの併用投与と比較して、前記組み合わせの治療効果が増大する、上記４８〜５９記載のキット。
６２．前記患者に前記組換えポックスウイルス及び前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの一連の投与を提供する指示をさらに含み、前記指示が前記一連の投与においての第一の投与の投与量と比較して第二の投与の投与量を増加することを含む、上記４８〜５９記載のキット。
６３．相同性または異種性プライム・ブースト処方の一部として、前記治療有効量の組換えポックスウイルスを前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用して投与する指示をさらに含む、上記４８〜６２記載のキット。
６４．前記キットにＰＲＯＳＴＶＡＣ（登録商標）またはＣＶ３０１が含まれる、上記６３のキット。
６５．前記キットにＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２が含まれる、上記６３のキット。
６６．ヒト癌患者における癌の治療方法であって、
（ａ）治療有効量の少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む組換えポックスウイルス及び（ｂ）治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの組み合わせを前記患者に投与することを含み、
前記治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストにより、前記少なくとも一つのＴＡＡを含むポックスウイルス単独、前記治療有効量以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独、または他の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの併用投与と比較して、前記組み合わせの前記治療効果が増大する、前記方法。
６７．前記治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの治療有効量の約７５％〜約５％に相当する、上記６６記載の方法。
６８．前記治療有効量以下の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの治療有効量の約５０％〜約１０％に相当する、上記６６記載の方法。
６９．前記治療有効量以下の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの治療有効量の７５％及び５％に相当する、上記６６記載の方法。
７０．前記治療有効量以下の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの治療有効量の５０％〜１０％に相当する、上記６６記載の方法。
７１．相同性または異種性プライム・ブースト処方の一部として、前記治療有効量の組換えポックスウイルスを免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用して投与する、上記６６〜６９記載の方法。
７２．前記異種性プライム・ブーストにＰＲＯＳＴＶＡＣまたはＣＶ３０１が含まれる、上記７１記載の方法。
７３．前記相同性プライム・ブースト処方にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２が含まれる、上記７１記載の方法。
７４．ヒト癌患者における癌の治療方法であって、
（ａ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む組換えポックスウイルスの投与量を前記患者に投与する、及び
（ｂ）少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの投与量を前記患者に投与することを含み、
前記組換えポックスウイルスの前記投与量の投与後に前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの前記投与量を投与する、前記方法。
７５．前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストポックスウイルスの前記投与量を、前記組換えポックスウイルスの前記投与量投与後約１〜約１３日間投与する、上記７４記載の方法。
７６．前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの前記投与量を、前記組換えポックスウイルスの前記投与量投与後約４〜約１２日間投与する、上記７４記載の方法。
７７．前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを、前記組換えポックスウイルスの前記投与量投与後１〜１３日間投与する、上記７４記載の方法。
７８．前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの前記投与量を、前記組換えポックスウイルスの前記投与量投与後４〜１２日間投与する、上記７４記載の方法。
７９．前記投与量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを含むことにより、前記少なくとも一つのＴＡＡを含むポックスウイルス単独もしくは前記治療有効量以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独投与と比較して、前記組換えポックスウイルスを併用した前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの前記治療効果が増大する、上記７４〜７８記載の方法。
８０．上記７４〜７９記載の方法であって、
（ａ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む組換えポックスウイルスの後続投与量を前記患者に投与すること、及び
（ｂ）少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの後続投与量を前記患者に投与すること、をさらに含み、
前記組換えポックスウイルスの後続投与量投与後に、前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの後続投与量を投与する、前記方法。
８１．前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの前記後続投与量を、前記少なくとも一つのチェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの先行投与量に比べて増加させる、上記７４〜８０記載の方法。
８２．前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、ＴＩＭ−３アンタゴニスト、ＬＡＧ−３アンタゴニスト、ＩＣＯＳアゴニスト、またはそれらの組み合わせから選択される、上記７４〜８１記載の方法。
８３．前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＴＩＭ−３アンタゴニスト、またはそれらの組み合わせから選択される、上記７４〜８１記載の方法。
８４．前記少なくとも一つのＴＡＡがＣＥＡ、ＭＵＣ−１、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＨＥＲ−２、サバイビン、チロシン関連タンパク質１（ｔｒｐ１）、チロシン関連タンパク質２（ｔｒｐ２）、Ｂｒａｃｈｙｕｒｙ抗原、またはそれらの組み合わせである、上記７４〜８１記載の方法。
８５．前記少なくとも一つのＴＡＡがＰＳＡである、上記７４〜８４記載の方法。
８６．前記少なくとも一つのＴＡＡがＭＵＣ−１及びＣＥＡである、上記７４〜８４記載の方法。
８７．相同性または異種性プライム・ブースト処方の一部として、前記組換えポックスウイルスを前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用して投与する、上記７４〜８４記載の方法。
８８．前記異種性プライム・ブーストがＰＲＯＳＴＶＡＣまたはＣＶ３０１を含む、上記８７記載の方法。
８９．前記相同性プライム・ブースト処方がＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２を含む、上記８７記載の方法。
９０．免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを併用した免疫療法を利用したヒト癌患者の治療方法であって、
（ａ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む組換えポックスウイルスを少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用した第一の投与を前記患者に提供すること、及び
（ｂ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む組換えポックスウイルスを少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用した第二の投与を前記患者に提供すること、を含み、
前記第二の投与における前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの用量が、前記第一の投与における前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと比較して高い、前記方法。
９１．前記第一の投与における少なくとも一つのチェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが治療有効量以下の投与量である、上記９０記載の方法。
９２．前記少なくとも一つのチェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、ＴＩＭ−３アンタゴニスト、ＬＡＧ−３アンタゴニスト、ＩＣＯＳアゴニスト、またはそれらの組み合わせから選択される、上記９０〜９１記載の方法。
９３．免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを併用した免疫療法を利用したヒト癌患者の治療方法であって、
（ａ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む組換えポックスウイルスを投与量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用する一連の投与を患者に提供することを含み、
前記第二の投与における前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの投与量が、前記第一の投与における前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの投与量と比較して高い、前記方法。
９４．前記第一の投与における少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの前記投与量が、治療有効量以下の投与量である、上記９３記載の方法。
９５．前記第二の投与における投与量を、前記第一の投与における投与量に比べて約２〜約１００倍に増加する、上記９０〜９４記載の方法。
９６．前記第二の投与における投与量を、前記第一の投与における投与量に比べて約１０〜約１００倍に増加する、上記９０〜９４記載の方法。
９７．前記第二の投与における投与量を、前記第一の投与における投与量に比べて約３０〜約１００倍に増加する、上記９０〜９４記載の方法。
９８．前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、ＴＩＭ−３アンタゴニスト、ＬＡＧ−３アンタゴニスト、ＩＣＯＳアゴニスト、またはそれらの組み合わせから選択される、上記９０〜９４記載の方法。
９９．前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＴＩＭ−３アンタゴニスト、またはそれらの組み合わせから選択される、上記９０〜９８記載の方法。
１００．前記少なくとも一つのＴＡＡが、ＣＥＡ、ＭＵＣ−１、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＨＥＲ−２、サバイビン、チロシン関連タンパク質１（ｔｒｐ１）、チロシン関連タンパク質２（ｔｒｐ２）、Ｂｒａｃｈｙｕｒｙ抗原、またはそれらの組み合わせである、上記９０〜９８記載の方法。
１０１．相同性または異種性プライム・ブースト処方の一部として前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを併用した前記組換えポックスウイルスを投与する上記９０−１００の方法であって、
前記相同性プライム・ブースト処方が、第一のプライム用量の前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを併用した前記組換えポックスウイルス及び一つまたは複数の後続ブースト用量の前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを併用した同組換えポックスウイルスを含み、および
前記異種性プライム・ブースト処方が、第一のプライム用量の前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを併用した前記組換えポックスウイルス及び一つまたは複数の後続ブースト用量の前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを併用した異なる組換えポックスウイルスを含む、前記方法。
１０２．相同性プライム・ブースト処方の一部として、前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを併用した前記組換えポックスウイルスを投与し、前記第一のプライム用量及び前記一つまたは複数の後続ブースト用量の組換えポックスウイルスがオルソポックスウイルスを含む、上記１０１記載の方法。
１０３．前記オルソポックスウイルスが、ワクシニアウイルス、ＭＶＡ、またはＭＶＡ−ＢＮから選択される、上記１０２記載の方法。
１０４．前記少なくとも一つのＴＡＡがＨＥＲ２である、上記１０２〜１０３記載の方法。
１０５．異種性プライム・ブースト処方の一部として、前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用して前記組換えポックスウイルスを投与し、前記第一のプライム用量の組換えポックスウイルスがオルソポックスウイルスを含み、一つまたは複数の前記ブースト用量の前記組換えポックスウイルスがアビポックスウイルスを含む、上記１０１記載の方法。
１０６．前記オルソポックスウイルスがワクシニアウイルスであり、前記アビポックスウイルスが鶏痘ウイルスである、上記１０５記載の方法。
１０７．前記オルソポックスウイルスがワクシニアウイルス、ＭＶＡ、またはＭＶＡ−ＢＮであり、前記アビポックスウイルスが鶏痘ウイルスである、上記１０５記載の方法。
１０８．前記異種性プライム・ブースト処方がＰＲＯＳＴＶＡＣまたはＣＶ３０１である、上記１０１、１０５−１０６記載の方法。
１０９．ヒト癌患者の治療方法であって、
（ａ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む第一の組換えポックスウイルス及び（ｂ）少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む第二の組換えポックスウイルスを前記患者に投与することを含み、
前記第二の組換えポックスウイルスを少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用して投与する、前記方法。
１１０．前記第二の組換えポックスウイルスの後に前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが投与される、上記１０９記載の方法。
１１１．前記少なくとも一つのチェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、ＴＩＭ−３アンタゴニスト、ＬＡＧ−３アンタゴニスト、ＩＣＯＳアゴニスト、またはそれらの組み合わせから選択される、上記１０９〜１１０記載の方法。
１１２．前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＴＩＭ−３アンタゴニスト、またはそれらの組み合わせから選択される、上記１０９〜１１０記載の方法。
１１３．前記少なくとも一つのＴＡＡが、ＣＥＡ、ＭＵＣ−１、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＨＥＲ−２、サバイビン、チロシン関連タンパク質１（ｔｒｐ１）、チロシン関連タンパク質２（ｔｒｐ２）、Ｂｒａｃｈｙｕｒｙ抗原、またはそれらの組み合わせである、上記１０９〜１１２記載の方法。
１１４．異種性プライム・ブースト処方の一部として、互いに異なる前記第一及び第二の組換えポックスウイルスが投与され、
前記異種性プライム・ブースト処方が、ａ）第一のプライム用量として前記第一の組換えポックスウイルスを投与すること及びｂ）一つまたは複数のブースト用量として前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用して前記第二の組換えポックスウイルスを投与することを含む、上記１０９〜１１３記載の方法。
１１５．前記第一の組換えポックスウイルスがオルソポックスウイルスを含み、前記第二の組換えポックスウイルスがアビポックスウイルスを含む、上記１１４記載の方法。
１１６．前記オルソポックスウイルスがワクシニアウイルスであり、前記アビポックスウイルスが鶏痘ウイルスである、上記１１５記載の方法。
１１７．前記異種性プライム・ブースト処方がＰＲＯＳＴＶＡＣまたはＣＶ３０１である、上記１１６記載の方法。
１１８．前記オルソポックスウイルスが、ワクシニアウイルス、ＭＶＡ、またはＭＶＡ−ＢＮから選択され、前記アビポックスウイルスが鶏痘ウイルスである、上記１１５記載の方法。
１１９．前記少なくとも一つのＴＡＡがＣＥＡ及びＭＵＣ−１である、上記１１８記載の方法。
１２０．ヒト癌患者における癌の治療方法であって、
（ａ）投与量の治療用癌ワクチンを前記患者に投与すること、及び
（ｂ）投与量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを前記患者に投与すること、を含み、
前記投与量の治療用癌ワクチンの後に前記投与量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを投与する、前記方法。
１２１．前記治療用癌ワクチンがポックスウイルスである、上記１２０記載の方法。
１２２．前記ポックスウイルスが、少なくとも一つの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）が含まれる組換えポックスウイルスである、上記１２０記載の方法。
１２３．前記投与量の前記治療用癌ワクチンの投与後約２〜約１６または約４〜１２日後に前記投与量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを投与する、上記１２０〜１２２記載の方法。
１２４．前記投与量の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、治療有効量以下の少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを含むことにより、前記治療用癌ワクチン単独または前記治療有効量以下の前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト単独投与と比較して、前記治療用癌ワクチンを併用した前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの治療効果が増大する、上記１２０〜１２３記載の方法。
１２５．上記１２０〜１２４記載の方法であって、
（ａ）治療用癌ワクチンの後続投与量を前記患者に投与すること、及び
（ｂ）少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの後続投与量を前記患者に投与することをさらに含み、
前記治療用癌ワクチンの後続投与量の後に前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの後続投与量を投与する、前記方法。
１２６．前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの前記後続投与量を、前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの先行投与量に比べて増加させる、上記１２０〜１２５記載の方法。
１２７．前記少なくとも一つの免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストが、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、ＴＩＭ−３アンタゴニスト、ＬＡＧ−３アンタゴニスト、ＩＣＯＳアゴニスト、またはそれらの組み合わせから選択される、上記１２０〜１２６記載の方法。
１２８．前記少なくとも一つのＴＡＡが、ＣＥＡ、ＭＵＣ−１、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＨＥＲ−２、サバイビン、チロシン関連タンパク質１（ｔｒｐ１）、チロシン関連タンパク質２（ｔｒｐ２）、Ｂｒａｃｈｙｕｒｙ抗原、またはそれらの組み合わせである、上記１２２〜１２７記載の方法。
１２９．相同性または異種性プライム・ブースト処方の一部として、前記免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用して前記治療用癌ワクチンが投与される、上記１２０〜１２８記載の方法。
１３０．前記異種性プライム・ブーストがＰＲＯＳＴＶＡＣまたはＣＶ３０１を含む、上記１２９記載の方法。
１３１．前記相同性プライム・ブースト処方がＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２を含む、上記１２９記載の方法。
１３２．ヒト癌患者の全生存期間を増加する方法であって、上記１〜１３１の記載に従って組換えポックスウイルスベクター及び免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの組み合わせを投与することを含む、前記方法。

【実施例】

【0255】

実施例１
ＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２のコンストラクション
培養物の同時感染及びトランスフェクションにより、ウイルスゲノム及び組換えプラスミド間の相同組換えを生じさせた。インサート担持ウイルスを単離し特徴付けを行い、ウイルス株を作製した。

【0256】

プラスミドｐＢＮ１４６は、ＭＶＡ−ＢＮ（１４Ｌ及び１５Ｌオープンリーディングフレーム）にも存在する配列を有する。ｍＨＥＲ２配列をＭＶＡ−ＢＮ配列間に挿入し、ＭＶＡ−ＢＮウイルスゲノムへの組換えを行った。こうしてｍＨＥＲ２配列をポックスウイルスプロモーター、具体的にはウシポックスウイルスＡ型封入体遺伝子プロモーターの下流に含むように、プラスミドを構築した。プラスミドは、合成ワクシニアウイルスプロモーター（Ｐｓ）、薬剤耐性遺伝子（グアニンキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ、Ｅｃｏｇｐｔ）、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、及び強化緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）を含む選択カセットも有していた。両方の選択遺伝子（ｇｐｔ及びＥＧＦＰ）をシングルバイシストロニックトランスクリプトによりコード化した。

【0257】

前記ＨＥＲ−２配列を、破傷風毒素エピトープｐ２及びｐ３０をコード化する核酸配列を付加して修飾することにより免疫応答を高めた。ＭＶＡ−ＢＮゲノムにｍＨＥＲ２を挿入後、前記ウイルス「挿入領域」は以下の構造を有していた。
ＡＴＩプロモーター−ｍＨＥＲ２配列−Ｐｓプロモーター−ｇｐｔ−ＩＲＥＳ−ＥＧＦＰ。前記細菌組換えプラスミドｐＢＮ１４６内で、前記挿入領域は、ＭＶＡ−ＢＮ Ｉ４Ｌ遺伝子間領域配列（Ｆ１及びＦ２）に隣接していた。前記前記コンストラクトの塩基配列を以下に示す。

【0258】

【表2】

【0259】

ＨＥＲ２開始及び停止コドンを太字で示す。フランキング配列をイタリック体で示す。
前記コード化されたｍＨＥＲ２ポリペプチドの翻訳配列を以下に示す。

【0260】

【表3】

【0261】

破傷風毒素エピトープｐ２及びｐ３０配列を太字で示す。

【0262】

ＭＶＡ−ＢＮをＣＥＦ培養物に接種し、ｐＢＮ１４６プラスミドＤＮＡによりトランスフェクトした。次に、これらの細胞培養の試料を選択薬を含有する培地におけるＣＥＦ培養物に接種し、ＥＧＦＰ−発現ウイルスクローンをプラーク精製により単離した。前記選択薬及び発現されたＥＧＦＰの存在下で増殖するウイルス株を、ＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２とした。ＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２の生成及び前記ウイルス株の作製では、５回のプラーク精製を含む１２回の連続継代を行った。

【0263】

ＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２を、選択薬の非存在下でＣＥＦ細胞培養物で継代した。選択薬の非存在下で、前記挿入配列から前記選択遺伝子をコード化する領域、ｇｐｔ及びＥＧＦＰ、及び前記関連プロモーター（選択カセット）の喪失が起こった。選択カセットの喪失に至った組換えは、Ｆ１Ｉ４Ｌ領域及び該領域のサブセクションである、プラスミドｐＢＮ１４６の前記選択カセットに隣接する前記Ｆ１リピート（Ｆ１ｒｐｔ）に媒介される。前記複製配列は組換えを介在するように含まれ、その結果前記選択カセットの喪失が起こり、前記Ｉ４Ｌ遺伝子間領域に挿入された前記ｍＨＥＲ２配列のみ残される。

【0264】

前記選択カセットを持たないプラーク精製ウイルスを作製した。作製に際し、５回のプラーク精製を含む１５回の連続継代を行った。

【0265】

ＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２株における前記ｍＨＥＲ２配列の存在及び親ＭＶＡ−ＢＮウイルスの非存在をＰＣＲ分析により確認し、ネステッドＰＣＲを用いて前記選択カセット（ｇｐｔ及びＥＧＦＰ遺伝子）の有無を検証した。

【0266】

ｍＨＥＲ２タンパク質の発現がＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２を接種した細胞においてインビトロで実証された。

【0267】

実施例２
ＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２及び抗ＣＴＬＡ４での処置によるＩＦＮγの増加
メスＢＡＬＢ／ｃマウス（６〜８週齢、〜２０ｇ）はＳｉｍｏｎｓｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（カリフォルニア州ギルロイ）より購入した。１日目に、実験用肺転移モデルとして、マウスに肺に腫瘍を形成するＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞（５．０×１０^４個）を含む３００μＬのＤＰＢＳを経静脈的に移植した。

【0268】

以下の抗体はＢｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ（ニューハンプシャー州ウエスト・レバノン）から購入した：抗ＩＣＯＳアゴニスト抗体（クローン１７Ｇ９）、抗ＣＴＬＡ−４（９Ｄ９）、抗ＰＤ−１（ＲＭＰ１−１４）、及び抗ＬＡＧ−３（Ｃ９Ｂ７Ｗ）。特に記載のない限り３日目及び１７日目に、各抗体をマウス１匹あたり２００μｇ含有する１００μＬのＰＢＳを腹腔内注射した。特に記載のない限り４日目及び１８日目に、ウイルス治療としてマウスに７．１μＬの１．０×１０^７Ｉｎｆ．Ｕ．ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２（Ｂａｖａｒｉａｎ Ｎｏｒｄｉｃ［ＢＮ］製造，マルティンスリート、ドイツ）を乱切により投与した。

【0269】

２５日目に、フローサイトメトリー分析のために全血、腫瘍／肺または脾臓をプールした（４マウス／群）。脾臓を２枚のすりガラス板で圧迫し、赤血球をＡＣＫ溶解緩衝液（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ニューヨーク州グランドアイランド）で溶解することにより脾細胞を調製した。肺及び関連腫瘍を、〜１〜２ｍｍ^３サイズのダイス状の小片にカットしてさらに消化し、１０％ＦＢＳ、５０Ｕ／ｍＬＤＮＡｓｅＩ、及び２５０Ｕ／ｍＬＣｏｌｌａｇｅｎａｓｅＩ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ニュージャージー州レイクウッド）含有ＤＭＥＭで単細胞懸濁液とし３７℃で１時間処理した。前記肺及び全血の両方の赤血球をＲＢＣ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ（ｅＢｉｏｓｃｅｉｎｃｅ）で溶解した。

【0270】

以下のタンパク質に対する抗体を購入した：ＣＤ３ｅ（５００Ａ２）、ＣＤ４（ＲＭ４−５）、ＣＤ８ａ（５３−６．７）、ＣＤ１０７ａ（１Ｄ４Ｂ）、ＩＦＮ−γ（ＸＭＧ１．２）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カリフォルニア州サンノゼ）；ＣＤ３ｅ（１４５−２Ｃ１１）、ＩＬ−２（ＪＥＳ６−５Ｈ４）、ＬＡＧ−３（Ｃ９Ｂ７Ｗ）、ＰＤ−１（ＣＤ２７９、２９Ｆ．１Ａ１２）、Ｔｉｍ−３（ＲＭＴ３−２３）、ＴＮＦ−α（ＭＰ６−ＸＴ２２）（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カリフォルニア州サンディエゴ）；またはＩＣＯＳ（７Ｅ．１７Ｇ９）、ＣＤ１６／ＣＤ３２（９３）（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カリフォルニア州サンディエゴ）。

【0271】

脱顆粒Ｔ細胞を特定するために、脾細胞（２×１０^６細胞／ウェル）または腫瘍／肺（１×１０^６細胞／ウェル）の単細胞懸濁液をＲＰＭＩ−１０（１０％ＦＢＳ、１％Ｐｅｎ−ｓｔｒｅｐ、及び０．１％β−メルカプトエタノール）に再懸濁し、抗ＣＤ１０７ａ抗体及びＧｏｌｇｉ Ｓｔｏｐ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の存在下で３７℃で一晩再刺激を行った。以下に記載のペプチドを再刺激に使用した：ＭＶＡ Ｅ３Ｌ及びＦ２Ｌ（ＶＧＰＳＮＳＰＴＦ及びＳＰＧＡＡＧＹＤＬ、各１μＭ）、ＨＥＲ２ ｐ６３（ＴＹＬＰＴＮＡＳＬ、１μＭ）、ＨＥＲ２ ＥＣＤオーバーラッピングペプチドライブラリー（ＨＥＲ２ＯＰＬ、１μＭ）、及びＰＳＡ（ＨＰＱＫＶＴＫＦＭＬ、１μＭ）（５，９−１１）。５μｇ／ｍＬのコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）を陽性対照として用いた。翌日、細胞を洗浄して抗ＣＤ１６／ＣＤ３２抗体でブロッキングを行い表面マーカーで染色した。その後細胞を洗浄し、ＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ Ｂｕｆｆｅｒで固定／透過処理し、細胞内のＩＦＮ−γを染色した。

【0272】

前記抗ＣＤ１０７ａ抗体を使わずＧｏｌｇｉＳｔｏｐ及びＧｏｌｇｉＰｌｕｇを添加して細胞内ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、及びＴＮＦ−αを染色した以外は上述の通り、脾細胞の細胞内サイトカイン染色をさらに行った。

【0273】

全てのＦＡＣＳ試料をＢＤ ＬＳＲＩＩまたはＦｏｒｔｅｓｓａにより得てＦｌｏｗＪｏ ｖｅｒｓｉｏｎ９．６．２（ＴｒｅｅＳｔａｒ Ｉｎｃ．、オレゴン州アシュランド）により分析した。

【0274】

全ての統計学的分析をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖｅｒｓｉｏｎ６．０１ ｆｏｒ Ｗｉｎｄｏｗｓ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、カリフォルニア州ラホヤ）を用いて行った。

【0275】

図１に結果を示す。腫瘍抗原特異的脱顆粒細胞（ＨＥＲ２ ｐ６３ ＣＤ１０７陽性ＩＦＮγ陽性）は、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２及びＣＴＬＡ−４併用療法で処置したマウスの腫瘍／肺及び脾臓で増加した。ウイルス特異的脱顆粒細胞（ＭＶＡ Ｅ３Ｌ Ｆ２Ｌ ＣＤ１０７陽性ＩＦＮγ陽性）は、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置したマウスの腫瘍／肺及び脾臓の両方で高値を示した。

【0276】

実施例３
ＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２及び抗ＣＴＬＡ４での処置によるＩＦＮγ及びサイトカイン産生の増加
ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２での処置により、脾臓における腫瘍抗原及びウイルス特異的Ｔ細胞の規模及び質が高められた。実施例２に記載の通り、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞（５×１０^４個）を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２及び抗ＣＴＬＡ−４で処置した。２５日目に、腫瘍／肺または脾臓をプールし（４マウス／群）一晩再刺激を行ってウイルス及び腫瘍抗原特異的応答を測定した。

【0277】

図２に結果を示す。Ａ）円グラフはＣＤ８陽性Ｔ細胞１００万個あたりのＩＦＮγ陽性細胞数を反映するよう重み付けされた区分を示す。Ｂ）ＩＦＮγＭＦＩは、併用両方により腫瘍抗原特異的（ＨＥＲ２ｐ６３）多官能性Ｔ細胞とともに増加している。

【0278】

実施例２及び３の両方において、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２及び抗ＣＴＬＡ−４の組み合わせによる処置の結果、抗原及びウイルス特異的Ｔ細胞の数及び質が高められた。さらに、前記組み合わせ治療により、腫瘍に存在する抗原及びウイルス特異的Ｔ細胞の数が増加した。図１及び２に示されるように、腫瘍部位における抗原及びウイルス特異的Ｔ細胞の増加は、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２または抗ＣＴＬＡ−４治療の単独処置を上回る改善を示した。このような抗原及びウイルス特異的Ｔ細胞の量及び特異性に関する増加に基づいて、より優れた効果的なヒト癌治療を提供できる。

【0279】

さらに図２に示すとおり、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２はＩＦＮγを産生する腫瘍抗原特異的Ｔ細胞を誘導する。ウイルスがＩＦＮγを分泌するＴＩＬ（腫瘍浸潤リンパ球）を誘導したことにより腫瘍細胞上でのＰＤ−Ｌ１の増加に至ったと思われ、ウイルス治療の併用による上記経路の封鎖を裏付けることが本開示により理解される。

【0280】

実施例４
実施例２に記載のとおりマウスに経静脈的にＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞（５×１０^４個）を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２及び抗ＣＴＬＡ−４で処置した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、ログ・ランク検定。結果：図３に示すように、上記の結果、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２または抗ＣＴＬＡ−４単独での癌の治療と比較して、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２及び抗ＣＴＬＡ−４による治療で対象の全生存率が有意に増加することが実証された。

【0281】

実施例５
ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２は２５日目までに顕著に肺腫瘍負荷を低減する
実施例２に記載のとおりマウスに経静脈的にＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞（５×１０^４個）を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２及び抗ＣＴＬＡ−４で処置した。Ａ）マウスを安楽死させ気管からトリパンブルーをかん流した。肺を取り出して過酸化水素に短時間浸し、ＰＢＳで洗浄した。未処置及び抗ＣＴＬＡ−４処置マウスでは、小さな腫瘍塊が観察された。ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置したマウスは、肺に腫瘍は観察されなかった。スケールバーは１ｃｍに相当。Ｂ）２５日目の肺重量。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較検定による一元配置分散分析。

【0282】

結果：図４に示すように、上記の結果、癌の治療として未処置または抗ＣＴＬＡ−４単独処置と比較して、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２単独処置または抗ＣＴＬＡ−４併用処置により、２５日目までに有意に全身腫瘍組織量が低下したことが実証された。

【0283】

実施例６
ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２及び抗ＣＴＬＡ−４治療により全生存率が増加する
実施例２に記載のとおりマウスに経静脈的にＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞（５×１０^４個）を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２及び抗ＣＴＬＡ−４で処置した。マウスに２００μｇ（Ａ、１０ｍｇ／ｋｇ）、６６μｇ（Ｂ、３ｍｇ／ｋｇ）、または２２μｇ（Ｃ、１ｍｇ／ｋｇ）の抗ＣＴＬＡ−４を含む１００μＬのＰＢＳを４日目及び１８日目に腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、ログ・ランク検定。

【0284】

結果：図５に示すように、上記の結果、未処置または抗ＣＴＬＡ−４単独処置と比較して、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２に抗ＣＴＬＡ−４を併用したことにより、全生存率が各投与量濃度で増加したことが実証された。

【0285】

実施例７
ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２及び抗ＣＴＬＡ−４は腫瘍負荷を低減する
固形腫瘍モデルにおいて、メスＢＡＬＢ／ｃマウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を１日目に移植した（１．０×１０^５個、背面脇腹に皮内投与）。１日目及び１５日目に、マウスをＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２（１００μＬのＴＢＳに１Ｅ７Ｉｎｆ．Ｕ．含有、尾基部に皮下投与）及び２２μｇの抗ＣＴＬＡ−４（１ｍｇ／ｋｇ）で処置した。腫瘍を週２回測定して腫瘍容積を以下の式により求めた：腫瘍容積（ｍｍ３）＝（長さ×幅２）／２。

【0286】

結果：図６に示すように、上記の結果、他の治療と比較して、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２と低用量抗ＣＴＬＡ−４との併用によって全身腫瘍組織量が２０日目までに有意に減少したことが実証された。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0287】

実施例８
ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２及び抗ＰＤ−１治療
実施例２に記載のとおりマウスに経静脈的にＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞（５×１０^４個）を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに２００μｇ（Ａ、１０ｍｇ／ｋｇ）、６６μｇ（Ｂ、３ｍｇ／ｋｇ）、または２２μｇ（Ｃ、１ｍｇ／ｋｇ）の抗ＰＤ−１を含有する１００μＬのＰＢＳを４日目及び１８日目に腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊ｐ＜０．０５、ｎｓ＝ログ・ランク検定による有意差なし。

【0288】

結果：図７は、抗ＰＤ−１を併用したＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２の結果を示す。

【0289】

実施例９
ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２と抗ＣＴＬＡ−４及び抗１ＰＤ−１との組み合わせにより低投与量での全生存率が上昇する
実施例２に記載のとおりマウスに経静脈的にＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞（５×１０^４個）を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに、抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＰＤ−１を各抗体２００μｇ（Ａ、１０ｍｇ／ｋｇ）、６６μｇ（Ｂ、３ｍｇ／ｋｇ）、または２２μｇ（Ｃ、１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳ（各抗体）を３日目及び１７日目に腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、ログ・ランク検定。

【0290】

結果：図８に示すように、上記の結果、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２または抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＰＤ−１単独での処置による癌の治療と比較して、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２と抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＰＤ−１との併用によって、各投与量濃度における対象の全生存率が有意に上昇したことが実証された。より重要な点は、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２または抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＰＤ−１単独での処置と比較して、抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＰＤ−１を併用したＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２とによって体重あたり３ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇの低投与量の抗体で生存率が上昇した。

【0291】

実施例１０
抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＰＤ−１を併用したＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１により全生存率が上昇する
メスＣ５７／ＢＬ６マウス（６−８週齢、〜２０ｇ、Ｓｉｍｏｎｓｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カリフォルニア州ギルロイ）に腫瘍を形成するＭＣ３８−ＭＵＣ１細胞（１．０×１０^６個）を含有する３００μＬのＤＰＢＳを１日目に経静脈的に移植した。４日目及び１８日目にマウスにＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１（４Ｅ５Ｉｎｆ．Ｕ．前記尾基部上部に皮下投与）を投与し、抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＰＤ−１（各２００μｇ）を腹腔内に投与した。

【0292】

結果：図９に示すように、上記の結果、ＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１または抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＰＤ−１単独での処置による癌の治療と比較して、抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＰＤ−１を併用したＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１によって対象の全生存率が有意に上昇したことが実証された。

【0293】

実施例１１
ＰＲＯＳＴＶＡＣ及び抗体で処置したマウスにおける抗腫瘍応答の誘導
オスＢＡＬＢ／ｃマウス（６−８週齢、〜２０ｇ、Ｓｉｍｏｎｓｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カリフォルニア州ギルロイ）に、固形腫瘍を形成するＥ６細胞（１．５×１０^５個、背面脇腹に皮内投与）を１日目に移植した。マウスを１日目にＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｖで処置し（２Ｅ７Ｉｎｆ．Ｕ．、尾基部に皮下投与）、８日目及び１５日目にＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｆで処置した（１Ｅ８Ｉｎｆ．Ｕ．、尾基部に皮下投与）。マウスに抗ＰＤ−１（２００μｇ）を１日目及び１５日目に腹腔内投与した。腫瘍を週２回測定して腫瘍容積を以下の式で求めた：腫瘍容積（ｍｍ３）＝（長さ×幅２）／２。

【0294】

実施例１２
ＰＲＯＳＴＶＡＣ及び抗ＰＤ−１処置マウスにおける抗腫瘍応答の誘導
実施例１１に記載の通りマウスにＥ６腫瘍を皮内移植し、ＰＲＯＳＴＶＡＣ及び抗ＰＤ−１で処置した。図１０に結果を示す。

【0295】

実施例１３
ＰＲＯＳＴＶＡＣ及び抗ＬＡＧ−３処置マウスにおける抗腫瘍応答の誘導
実施例１１に記載の通りマウスにＥ６腫瘍を皮内移植し、ＰＲＯＳＴＶＡＣ及び抗ＬＡＧ−３で処置した。図１１に結果を示す。

【0296】

実施例１４
ＰＲＯＳＴＶＡＣ、抗ＰＤ−１、及び抗ＬＡＧ−３処置マウスにおける抗腫瘍応答の誘導
実施例１１に記載の通りマウスにＥ６腫瘍を皮内移植し、ＰＲＯＳＴＶＡＣ、抗ＰＤ−１、及び抗ＬＡＧ−３で処置した。図１２に結果を示す。

【0297】

実施例１５
ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２及び抗ＣＴＬＡ−４は腫瘍負荷を減少する
実施例７に記載のとおり、１日目にマウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を皮内移植した。マウスを７日目及び２２日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置し（１Ｅ７Ｉｎｆ．Ｕ．、乱切）、１、４、８、１１、１５、１８、２２、及び２５日目に抗ＩＣＯＳで処置した（２００μｇ、腹腔内投与）。Ａ）平均腫瘍増殖。Ｂ）マウス個体における腫瘍増殖。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊ｐ＜０．０１、２要因の分散分析。図１３に結果を示す。

【0298】

実施例１６
抗ＰＤ−１を併用したＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２により低投与量で全身腫瘍組織量が減少する
実施例７に記載の通り、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに抗ＰＤ−１を２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）、６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）、または２２μｇ（１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを１日目及び１５日目に腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0299】

実施例１７
抗ＩＣＯＳを併用したＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２により低投与量で全身腫瘍組織量が減少する
実施例７に記載のとおり、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに抗ＩＣＯＳを２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）、６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）、または２２μｇ（１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを１日目及び１５日目に腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0300】

実施例１８
抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３を併用したＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２により低投与量で全身腫瘍組織量が減少する
実施例７に記載のとおり、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３を各抗体２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）、６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）、または２２μｇ（１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを１日目及び１５日目腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0301】

実施例１９
抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＩＣＯＳを併用したＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２により低投与量で全身腫瘍組織量が減少する
実施例７に記載のとおり、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＩＣＯＳを各抗体２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）、６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）、または２２μｇ（１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを１日目及び１５日目腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0302】

実施例２０
抗ＣＴＬＡ−４を併用したＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２により全身腫瘍組織量が第二の投与量増加に伴い減少する
実施例７に記載のとおり、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに、１日目に抗ＣＴＬＡ−４を６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）、２２μｇ（１ｍｇ／ｋｇ）、または２．２μｇ（０．１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを、１５日目目に抗ＣＴＬＡ−４を２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）または６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0303】

実施例２１
抗ＰＤ−１を併用したＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２により全身腫瘍組織量が第二の投与量増加に伴い減少する
実施例７に記載のとおり、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに、１日目に抗ＰＤ−１を６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）、２２μｇ（１ｍｇ／ｋｇ）、または２．２μｇ（０．１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを、１５日目目に抗ＰＤ−１を２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）または６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0304】

実施例２２
抗ＩＣＯＳを併用したＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２により全身腫瘍組織量が第二の投与量増加に伴い減少する
実施例７に記載のとおり、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに、１日目に抗ＩＣＯＳを６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）、２２μｇ（１ｍｇ／ｋｇ）、または２．２μｇ（０．１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを、１５日目目に抗ＩＣＯＳを２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）または６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0305】

実施例２３
抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＰＤ−１を併用したＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２により全身腫瘍組織量が第二の投与量増加に伴い減少する
実施例７に記載のとおり、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに、１日目に抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＰＤ−１を各抗体６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）、２２μｇ（１ｍｇ／ｋｇ）、または２．２μｇ（０．１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを、１５日目目に抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＰＤ−１を各抗体２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）または６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0306】

実施例２４
抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３を併用したＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２により全身腫瘍組織量が第二の投与量増加に伴い減少する
実施例７に記載のとおり、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに、１日目に抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３を各抗体６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）、２２μｇ（１ｍｇ／ｋｇ）、または２．２μｇ（０．１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを、１５日目目に抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３を各抗体２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）または６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0307】

実施例２５
抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＩＣＯＳを併用したＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２により全身腫瘍組織量が第二の投与量増加に伴い減少する
実施例７に記載のとおり、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに、１日目に抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＩＣＯＳを各抗体６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）、２２μｇ（１ｍｇ／ｋｇ）、または２．２μｇ（０．１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを、１５日目目に抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＩＣＯＳを各抗体２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）または６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0308】

実施例２６
抗ＣＴＬＡ−４前にポックスウイルスを投与するＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２と抗ＣＴＬＡ−４との併用により全身腫瘍組織量が減少する
実施例７に記載のとおり、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに、３日目に抗ＣＴＬＡ−４を６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）、２２μｇ（１ｍｇ／ｋｇ）、または２．２μｇ（０．１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを、１８日目目に抗ＣＴＬＡ−４を２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）または６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0309】

実施例７に記載のとおり、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに、７日目に抗ＣＴＬＡ−４を６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）、２２μｇ（１ｍｇ／ｋｇ）、または２．２μｇ（０．１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを、２１日目目に抗ＣＴＬＡ−４を２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）または６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0310】

実施例２７
抗ＰＤ−１前にポックスウイルスを投与するＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２と抗ＰＤ−１との併用により全身腫瘍組織量が減少する
実施例７に記載のとおり、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに、３日目に抗ＰＤ−１を６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）、２２μｇ（１ｍｇ／ｋｇ）、または２．２μｇ（０．１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを、１８日目目に抗ＰＤ−１を２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）または６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0311】

実施例７に記載のとおり、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに、７日目に抗ＰＤ−１を６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）、２２μｇ（１ｍｇ／ｋｇ）、または２．２μｇ（０．１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを、２１日目目に抗ＰＤ−１を２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）または６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0312】

実施例２８
抗ＩＣＯＳ前にポックスウイルスを投与するＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２と抗ＩＣＯＳとの併用により全身腫瘍組織量が減少する
実施例７に記載のとおり、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに、３日目に抗ＩＣＯＳを６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）、２２μｇ（１ｍｇ／ｋｇ）、または２．２μｇ（０．１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを、１８日目目に抗ＩＣＯＳを２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）または６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0313】

実施例７に記載のとおり、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに、７日目に抗ＩＣＯＳを６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）、２２μｇ（１ｍｇ／ｋｇ）、または２．２μｇ（０．１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを、２１日目目に抗ＩＣＯＳを２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）または６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0314】

実施例２９
抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＰＤ−１前にポックスウイルスを投与するＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２と抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＰＤ−１との併用により全身腫瘍組織量が減少する
実施例７に記載のとおり、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに、３日目に抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＰＤ−１を各抗体６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）、２２μｇ（１ｍｇ／ｋｇ）、または２．２μｇ（０．１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを、１８日目目に抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＰＤ−１を各抗体２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）または６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0315】

実施例７に記載のとおり、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに、７日目に抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＰＤ−１を各抗体６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）、２２μｇ（１ｍｇ／ｋｇ）、または２．２μｇ（０．１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを、２１日目目に抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＰＤ−１を各抗体２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）または６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0316】

実施例３０
抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３前にポックスウイルスを投与するＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２と抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３との併用により全身腫瘍組織量が減少する
実施例７に記載のとおり、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに、３日目に抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３を各抗体６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）、２２μｇ（１ｍｇ／ｋｇ）、または２．２μｇ（０．１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを、１８日目目に抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３を各抗体２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）または６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0317】

実施例７に記載のとおり、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに、７日目に抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３を各抗体６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）、２２μｇ（１ｍｇ／ｋｇ）、または２．２μｇ（０．１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを、２１日目目に抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３を各抗体２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）または６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0318】

実施例３１
抗ＣＴＬＡ−４及びＩＣＯＳ前にポックスウイルスを投与するＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２と抗ＣＴＬＡ−４及びＩＣＯＳとの併用により全身腫瘍組織量が減少する
実施例７に記載のとおり、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに、３日目に抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＩＣＯＳの各抗体を６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）、２２μｇ（１ｍｇ／ｋｇ）、または２．２μｇ（０．１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを、１８日目目に抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＩＣＯＳの各抗体を２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）または６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0319】

実施例７に記載のとおり、マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞を移植し、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２で処置した。マウスに、７日目に抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＩＣＯＳの各抗体を６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）、２２μｇ（１ｍｇ／ｋｇ）、または２．２μｇ（０．１ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを、２１日目目に抗ＣＴＬＡ−４及び抗ＩＣＯＳの各抗体を２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）または６６μｇ（３ｍｇ／ｋｇ）含有する１００μＬのＰＢＳを腹腔内投与した。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊ｐ＜０．０５、２要因の分散分析。

【0320】

実施例３２
ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処置によるＴｉｍ−３発現の増加
メスＢＡＬＢ／ｃマウス（６−８週齢、〜２０ｇ、Ｓｉｍｏｎｓｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カリフォルニア州ギルロイ）を、１日目及び１５日目に７．１μＬの１．０×１０^７Ｉｎｆ．Ｕ．ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２（Ｂａｖａｒｉａｎ Ｎｏｒｄｉｃ［ＢＮ］製造，マルティンスリート、ドイツ）を乱切により投与した。実施例２に記載の通り組織を回収、処理、染色し、さらに様々な間隔でＴｉｍ−３の表面発現を測定した。

【0321】

結果：図１４に示すように、対象にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ−２を投与後Ｔｉｍ−３発現レベルを一定の間隔で測定した。投与に反応して、初期に免疫チェックポイント発現がほんのわずか上昇した。約３日目から約１２日目にかけて、ＴＩＭ−３のＴ細胞発現は劇的に増加した。発現増加は約１８日目まで認められた。１５日目のＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２による第二の投与により、Ｔｉｍ３発現が１７日目から増加した。免疫チェックポイント発現の発現増加は、ＣＤ４Ｔ細胞と比較してＣＤ８Ｔ細胞でより顕著に認められた。

【0322】

図１４に示すように、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処置により、一時的にＴ細胞上のＴｉｍ−３発現が誘導された。一つの態様では、このＴ細胞上のＴｉｍ−３発現誘導により、一つまたは複数のＴＩＭ−３アンタゴニストを介したＴｉｍ−３経路のブロッキングにより、癌患者のＴ細胞応答が高められることが示された。

【0323】

実施例３３
ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処置によりＣＤ８陽性及びＣＤ４陽性Ｔ細胞上のＩＣＯＳが増加する
マウスを１日目及び１５日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２（１Ｅ７Ｉｎｆ．Ｕ．、乱切）で処置した。実施例２に記載の通り組織を回収、処理、染色し、さらに様々な間隔でＩＣＯＳの表面発現を測定した。

【0324】

結果：図１５に示すように、対象にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ−２を投与後ＩＣＯＳ発現レベルを一定の間隔で測定した。投与に反応して、初期に免疫チェックポイント発現がほんのわずか上昇した。約１〜２日後、ＩＣＯＳのＴ細胞発現はわずかに症状した。約３日目〜約１２日目に、ＩＣＯＳのＴ細胞発現は劇的に上昇した。発現上昇は、約１８日目まで認められた。１５日目のＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２による第二の投与により、ＩＣＯＳ発現が１７日目から増加した。免疫チェックポイント発現の発現増加は、ＣＤ４Ｔ細胞と比較してＣＤ８Ｔ細胞でより顕著に認められた。

【0325】

図１５に示すように、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処置により、一時的にＴ細胞上のＩＣＯＳ発現が誘導された。一つの態様では、このＴ細胞上のＩＣＯＳ発現誘導により、前記ＩＣＯＳ経路を一つまたは複数のＩＣＯＳアゴニストを介して活性化することにより、癌患者のＴ細胞応答が高められることが示された。

【0326】

実施例３４
ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処置によりＰＤ−１発現が増加する
マウスを１日目及び１５日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２（１Ｅ７Ｉｎｆ．Ｕ．、乱切）で処置した。実施例２に記載の通り組織を回収、処理、染色し、さらに様々な間隔でＰＤ−１の表面発現を測定した。

【0327】

結果：図１６に示すように、対象にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ−２を投与後ＰＤ−１発現レベルを一定の間隔で測定した。投与に反応して、初期に免疫チェックポイント発現がほんのわずか上昇した。約１〜２日後、ＰＤ−１のＴ細胞発現はわずかに症状した。約３日目〜約１２日目に、ＰＤ−１のＴ細胞発現は劇的に上昇した。発現上昇は、約１８日目まで認められた。１５日目のＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２による第二の投与により、ＰＤ−１発現が１７日目から増加した。免疫チェックポイント発現の発現増加は、ＣＤ４Ｔ細胞と比較してＣＤ８Ｔ細胞でより顕著に認められた。

【0328】

図１６に示すように、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処置により、一時的にＴ細胞上のＰＤ−１発現が誘導された。一つの態様では、このＴ細胞上のＰＤ−１発現誘導により、一つまたは複数のＰＤ−１／ＰＤＬ−１アゴニストを介したＰＤ−１／ＰＤＬ−１経路のブロッキングにより、癌患者のＴ細胞応答が高められることが示された。

【0329】

さらに、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２によるＰＤ−１のブロッキングが、ＬＡＧ−３共発現に繋がりうること及びＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２を併用した場合の前記ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１及びＬＡＧ−３経路両方のブロッキングにより治療上の利益がもたらされうることが示唆される。

【0330】

実施例３５
ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２に対するＬＡＧ−３免疫応答
マウスを１日目及び１５日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２（１Ｅ７Ｉｎｆ．Ｕ．、乱切）で処置した。実施例２に記載の通り組織を回収し、処理し、染色し、さらに様々な間隔でＬＡＧ−３の表面発現を測定した。

【0331】

結果：図１７に結果を示す。対象にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ−２を投与後ＬＡＧ−３発現レベルを一定の間隔で測定した。ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処置後にＣＤ４またはＣＤ８Ｔ細胞上のＬＡＧ−３発現の増加を認めた。

【0332】

実施例３６
ＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１及び抗体で処置したマウスの抗腫瘍応答の誘導
メスＣ５７ＢＬ／６マウス（６−８週齢、〜２０ｇ、Ｓｉｍｏｎｓｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カリフォルニア州ギルロイ）に１日目にＭＣ３８−ＣＥＡ細胞（２×１０５、背面脇腹に皮内投与）を移植した。マウスを１日目及び１５日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１（１Ｅ７Ｉｎｆ．Ｕ．、尾基部に皮下投与）で処置した。各図や例示及び実施例２に記載の通り、マウスに抗ＰＤ−１及び／または抗ＬＡＧ−３を腹腔内投与した。

【0333】

実施例３７
ＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１及び抗ＰＤ−１で処置したマウスの抗腫瘍応答の誘導
Ｃ５７／ＢＬ６マウスにＭＣ３８−ＣＥＡ腫瘍を皮内移植し、実施例３６に記載の通り処置した。図１８に結果を示す。

【0334】

実施例３８
ＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１及び抗ＬＡＧ−３で処置したマウスの抗腫瘍応答の誘導
Ｃ５７／ＢＬ６マウスにＭＣ３８−ＣＥＡ腫瘍を皮内移植し、実施例３６に記載の通り処置した。図１９に結果を示す。

【0335】

実施例３９
ＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１、抗ＰＤ−１、及び抗ＬＡＧ−３で処置したマウスの抗腫瘍応答の誘導
Ｃ５７／ＢＬ６マウスにＭＣ３８−ＣＥＡ腫瘍を皮内移植し、実施例３６に記載の通り処置した。図２０に結果を示す。

【0336】

実施例４０
異種性プライムブーストによりＰＳＡ−特異的Ｔ細胞応答が増幅される
オスＢＡＬＢ／ｃマウス（５匹／群）を隔週で緩衝液（対照）、ＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｖ（ＶＶＶ）（２Ｅ６Ｉｎｆ．Ｕ．、尾基部に皮下投与）、ＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｆ（ＦＦＦ）（１Ｅ７Ｉｎｆ．Ｕ．、尾基部に皮下投与）で処置またはＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｖプライムを投与後２回ＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｆブーストを投与した（ＶＦＦ）。本明細書に参照として組み入れるＭａｎｄｌら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ（２０１２），６１：１９−２９に記載の通り、プールした脾細胞をＩＦＮγＥＬＩＳＰＯＴによりＰＳＡ−特異的応答についてアッセイした。

【0337】

（Ａ、Ｂ）フローサイトメトリーにより細胞障害活性を測定した（％ＣＤ１０７陽性ＩＦＮγ陽性ＣＤ８Ｔ細胞）（Ｃ）。各マウス個体の抗ＰＳＡ−ＩｇＧ力価をＥＬＩＳＡにより測定した（Ｄ）。ＥＬＩＳＰＯＴでは、ＣＤ４またはＣＤ８−ＰＳＡ特異的ペプチドまたは対照で脾細胞を再度刺激した（表示濃度の対照については未記載）。非常に数が多いためカウントできなかった応答については、１０００スポット／１００万細胞と示した。統計学的有意差は、０．０１μＭでテューキーのポスト検定を組み合わせた反復測定分散分析により決定した。^＊＊＊＊Ｐ＜０．００１（対照と比較）（Ａ＆Ｂ）。細胞障害性ＣＤ８陽性Ｔ細胞を特定するため、脾細胞を、抗ＣＤ１０７抗体の存在下でＰＳＡ−ＣＤ８特異的ペプチドで一晩再刺激した。グラフは、独立して４回実施された実験の主なデータを示す。

【0338】

図２１に示すように、ワクシニアウイルスを含む異種性プライム・ブースト処方後に一つまたは複数の鶏痘ウイルスブースト用量を投与することにより、ＶＶＶまたはＦＦＦ相同性投与計画と比較して、非常に高い頻度でＩＦＮγ−産生ＰＳＡ−特異的ＣＤ４Ｔ細胞（図２１Ａ）及びＣＤ８Ｔ細胞（図２１Ｂ及び２２Ａ）が認められた。

【0339】

さらに、ＥＬＩＳＰＯＴにおいて低いペプチド濃度（０．０１μＭ）で応答するＴ細胞のより高い発生頻度に証明されるように、ＶＦＦ投与によりＰＳＡ−特異的Ｔ細胞はより高い活性を示した（図２１Ａ及び２１Ｂ）。重要なのは、ＶＦＦ異種性プライム・ブースト処方に起因する機能的に活性化したＰＳＡ−特異的ＣＤ８ＣＴＬ数、各相同性投与計画と比較して、７〜２０倍高かったことである（図２１Ｃ）。

【0340】

Ｔ細胞応答と対照的に、異種性プライム・ブースト処方は、ＰＳＡ特異的抗体応答を改善しなかった（図２１Ｄ）。この結果は、より高い活性及びＣＤ８ＣＴＬ活性上昇で判断されるように、異種性ＶＦＦ投与により、高い規模とレベルでＣＤ４及びＣＤ８ＰＳＡ特異的Ｔ細胞応答が生じることを示す。本明細書に記載の通り、これらの結果は、異種性ＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｖ／Ｆ投与後の抗ＰＳＡ特異的抗腫瘍応答の向上に寄与する。

【0341】

実施例４１
異種性プライム・ブーストはＰＳＡ−特異的Ｔ細胞応答の質を向上させる
オスＢＡＬＢ／ｃマウス（５匹／群）を実施例４０に記載の通り処置した。最終処置から１４日後に脾臓取り出し、プールした脾細胞をＰＳＡ ＯＰＬまたは対照で一晩再刺激した（対照は記載せず）。該細胞の細胞内ＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ−２をフローサイトメトリー分析先立って染色した。（Ａ）は検出細胞数を反映するように重み付けされた円グラフを示す（Ｔ細胞１００万個あたりの全ＰＳＡ特異的ＣＤ８数を各チャートに示す）。（Ｂ）細胞単位のＩＦＮγ産生量を平均蛍光強度に基づいて測定した（ＭＦＩ）。グラフは独立して実施された２回の実験の主なデータを示す。

【0342】

図２２に示す通り、ＰＳＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞をフローサイトメトリーによりＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ−２のマルチサイトカイン産生について分析したところ、ＰＳＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答の質におけるさらなる特徴的性質が観察された（図２２）。サイトカイン発現を使用し、ＣＤ８メモリーＴ細胞は、二重陽性ＣＤ８エフェクターメモリーＴ細胞（ＩＦＮγ陽性ＴＮＦα陽性、ＴＥＭ及び三重陽性ＣＤ８セントラルメモリーＴ細胞（ＩＦＮγ陽性ＴＮＦα陽性ＩＬ−２陽性、ＴＣＭ）、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００８、８：２４７−２５８を参照）として分類されている。

【0343】

前記ＣＤ８Ｔ細胞応答の規模の増加（図２１及び図２２Ａ）に加え、前記ＣＤ８Ｔ細胞応答の質の明白な変化が、相同性投与処方と比較した異種性ＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｖ／Ｆ処方の結果、二重陽性ＴＥＭ及び三重陽性ＴＣＭの高い割合によって明らかになった（図２２Ａ）。５倍のＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｖ用量のプライミングは、ＣＤ８Ｔ細胞応答規模または質にいかなる付加的利益ももたらさなかった（データ未記載）。さらに、二重陽性ＴＥＭ及び三重陽性ＴＣＭＣＤ８Ｔ細胞は、一重陽性細胞よりも細胞あたりのＩＦＮγが高かった（図２２Ｂ）。このＩＦＮγ産生増加は、投与処方に関わらずＴＥＭ及びＴＣＭＣＤ８Ｔ細胞で認められた。

【0344】

また、図２２に示すとおり、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２は、ＩＦＮγ腫瘍抗原特異的Ｔ細胞を誘導する。本開示により、ウイルスによるＩＦＮγを分泌するＴＩＬ（腫瘍浸潤リンパ球）の誘導は、腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１増加に至りウイルス投与を併用したこの経路のブロッキングを支持することが理解される。

【0345】

実施例４２
ＰＳＡに対するＴ細胞応答の免疫フォーカス
マウスを実施例４０に記載のとおり処置した。プールした脾細胞を、最終処置後１４日目に、フローサイトメトリーによりワクシニアウイルス（ＶＶ）特異的（左側パネルＡ及びＣ）またはＰＳＡ特異的（右側パネルＡ及びＣ）細胞障害活性についてアッセイした（％ＣＤ１０７陽性ＩＦＮγ陽性ＣＤ８Ｔ細胞）。脾細胞を、ワクシニアＥ３Ｌ及びＦ２ＬペプチドまたはＰＳＡＯＰＬで抗ＣＤ１０７抗体の存在下で一晩再刺激した。翌日、細胞を表面マーカーＣＤ１２７及びＫＬＲＧ１により細胞内ＩＦＮγについて染色した。％抗原特異的細胞障害性ＳＬＥＣ及びＤＰＥＣを（ＣＤ８陽性ＣＤ１２７−ＫＬＲＧ１陽性）及び（ＣＤ８陽性ＣＤ１２７陽性ＫＬＲＧ１陽性）細胞にそれぞれゲーティングすることにより測定した。グラフは独立して実施された２回の実験の主なデータを示す。図２３に結果を示す。

【0346】

相同性投与と比較して、異種性ＰＲＯＳＴＶＡＣワクシニアウイルス（鶏痘ウイルス／Ｆ）投与計画の、ベクター特異的対ＰＳＡ特異的エフェクターＴ細胞サブセットの細胞障害性能力に対する影響を分析した。相同性ＶＶＶ投与により、相対的に高い数のワクシニア特異的細胞障害性ＳＬＥＣ（〜５０％）及びＤＰＥＣ（〜２０％）が得られた（図２３Ａ及び２３Ｃ）一方で、１０％以下のＳＬＥＣまたはＤＰＥＣ細胞障害性ＣＤ８Ｔ細胞がＰＳＡ−特異的であった。逆に、６５％のＳＬＥＣ及び３０％の高活性ＤＰＥＣエフェクターメモリーＴ細胞は異種性ＶＦＦ投与のＰＳＡ特異的ＣＴＬである一方、１０％未満がワクシニア特異的ＣＴＬであった（図２３Ａ及び２３Ｃ）。よって、前記異種性ＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｖ／Ｆ処方により、ＰＳＡ標的化ＳＬＥＣ及びＤＰＥＣＴ細胞応答のワクシニア標的化ＳＬＥＣ及びＤＰＥＣＴ細胞応答に対する比率が１００倍改善した（図２３Ｂ及び２３Ｄ）。また、５倍以上のＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｖによるプライミングでは、いかなる付加的利益も得られなかった（データ未記載）。

【0347】

実施例４３
免疫フォーカス後のＣＴＬＡ−４併用療法
実施例４０に記載の通り、オスＢＡＬＢ／ｃマウス（５匹／群）を隔週で緩衝液（対照）またはＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｖプライム後２回のＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｆブースト（ＶＦＦ）で処置した。マウスに、１、１５及び２９日目（Ａ）、１５日目及び２９日目（Ｂ）、１６日目及び３０日目（Ｃ）、または１７日目及び３１日目（Ｄ）に抗ＣＴＬＡ−４（６０μｇ）を腹腔内投与する。ＰＳＡ特異的Ｔ細胞応答を、実施例４０、４１及び４２に記載の通り分析した。

【0348】

本出願により本明細書に記載及び実証されるように、一つまたは複数の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストを併用したＴＡＡを含む組換えポックスウイルス投与は、様々な投与量で治療上効果的であった。特に、本開示の組み合わせは、一つまたは複数の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストまたはポックスウイルス療法単独の投与量よりも低用量の投与量で効果的である。

【0349】

本出願により、前記組換えポックスウイルス及び免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの組み合わせの有効性は、治療中の投与計画により大きく高められることが付加的に実証される。例えば、組換えポックスルイルス治療の一つまたは複数の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの投与により、前記組み合わせ治療の有効性が大きく高められる。さらに、第二または後続組換えポックスウイルス治療後の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストの投与量を増加することにより、本明細書に記載の前記組み合わせ治療の有効性を大きく高められる。

【0350】

本出願により、本明細書に記載前記投与計画が、前記大きく高められた前記組換えポックスウイルス及び免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニスト併用療法の有効性にとって重要であることがさらに実証される。

【0351】

特に本開示により、免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと併用して投与されるＴＡＡを有するポックスウイルスベクターにより、ポックスウイルスベクターの種類に関係なくさらに高い治療効果が得られることが実証される。なかでも、本開示により、複数種のポックスウイルスを前記組み合わせ治療に使用することによりさらに高い治療効果が得られることが実証される。例えば、オルソポックスウイルスまたはアビポックスウイルスといったポックスウイルスが本明細書に記載の免疫チェックポイントアンタゴニストまたはアゴニストと投与される場合、治療効果が達成される。

【0352】

本明細書に記載の前記方法または組成物の詳細について、本開示の趣旨から逸脱することなく変形または修飾可能であることは明らかである。そのようなさまざまな修正及び変形は特許請求の範囲の趣旨と範囲内であることをここに主張する。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]