特許 6768011 キネシンスピンドルタンパク質（ＫＳＰ）阻害剤の抗ＣＤ１２３抗体との抗体薬物複合体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6768011

(24)【登録日】2020年9月24日

(45)【発行日】2020年10月14日

(54)【発明の名称】キネシンスピンドルタンパク質（ＫＳＰ）阻害剤の抗ＣＤ１２３抗体との抗体薬物複合体

(51)【国際特許分類】

   A61K 47/68 20170101AFI20201005BHJP

   A61K 31/40 20060101ALI20201005BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20201005BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20201005BHJP

【ＦＩ】

   A61K47/68ZNA

   A61K31/40

   A61P35/00

   A61K39/395 L

   A61K39/395 C

【請求項の数】20

【全頁数】511

(21)【出願番号】特願2017-565697(P2017-565697)

(86)(22)【出願日】2016年6月20日

(65)【公表番号】特表2018-520130(P2018-520130A)

(43)【公表日】2018年7月26日

(86)【国際出願番号】EP2016064133

(87)【国際公開番号】WO2016207098

(87)【国際公開日】20161229

【審査請求日】2019年6月17日

(31)【優先権主張番号】15173479.5

(32)【優先日】2015年6月23日

(33)【優先権主張国】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】300049958

【氏名又は名称】バイエル ファーマ アクチエンゲゼルシャフト

(74)【代理人】

【識別番号】100114188

【弁理士】

【氏名又は名称】小野 誠

(74)【代理人】

【識別番号】100119253

【弁理士】

【氏名又は名称】金山 賢教

(74)【代理人】

【識別番号】100124855

【弁理士】

【氏名又は名称】坪倉 道明

(74)【代理人】

【識別番号】100129713

【弁理士】

【氏名又は名称】重森 一輝

(74)【代理人】

【識別番号】100137213

【弁理士】

【氏名又は名称】安藤 健司

(74)【代理人】

【識別番号】100143823

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 英彦

(74)【代理人】

【識別番号】100151448

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 孝博

(74)【代理人】

【識別番号】100196483

【弁理士】

【氏名又は名称】川嵜 洋祐

(74)【代理人】

【識別番号】100203035

【弁理士】

【氏名又は名称】五味渕 琢也

(74)【代理人】

【識別番号】100185959

【弁理士】

【氏名又は名称】今藤 敏和

(74)【代理人】

【識別番号】100160749

【弁理士】

【氏名又は名称】飯野 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100160255

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 祐輔

(74)【代理人】

【識別番号】100202267

【弁理士】

【氏名又は名称】森山 正浩

(74)【代理人】

【識別番号】100146318

【弁理士】

【氏名又は名称】岩瀬 吉和

(74)【代理人】

【識別番号】100127812

【弁理士】

【氏名又は名称】城山 康文

(72)【発明者】

【氏名】ラーチェン，ハンス−ゲオルク

(72)【発明者】

【氏名】レブストック，アンヌ−ソフィ

(72)【発明者】

【氏名】キャンチョ・グランデ，ヨランダ

(72)【発明者】

【氏名】ウィットロック，スヴェン

(72)【発明者】

【氏名】ステルト−ルートヴィヒ，ベアトリクス

(72)【発明者】

【氏名】マーラート，クリストフ

(72)【発明者】

【氏名】グレーフェン，シモーヌ

(72)【発明者】

【氏名】マルシュ，シュテファン

(72)【発明者】

【氏名】キルヒホフ，デニス

【審査官】 高橋 樹理

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１４／１５１０３０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１５／０９６９８２（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ４７／６８

Ａ６１Ｋ ３１／４０

Ａ６１Ｋ ３９／３９５

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

１以上の薬物分子と抗体の複合体であって、下記式で表される複合体、またはそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩もしくはエピマー。

【化1】

[この文献は図面を表示できません]

［式中、
バインダーは、抗体７Ｇ３もしくは１２Ｆ１のキメラもしくはヒト化変異体である抗ＣＤ１２３抗体を表すか、それの抗原結合性断片を表し、
Ｌは、リンカーを表し、
ｎは、１から５０、好ましくは１．２から２０、特に好ましくは２から８の数字を表し、
ＫＳＰは、下記式（Ｉ）の化合物：
式（Ｉ）：

【化2】

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を表し、
式（Ｉ）中、
Ｒ^５がＨであり、Ｒ^６とＲ^７がともにＦであり、Ｒ^８がＣ（ＣＨ_３）_３であり、Ｒ^９がＨであって、
・ＡがＣ＝Ｏであり、Ｒ^１がＨであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３が−ＣＨ_２ＯＨであり、Ｒ^４が−Ｌ−＃１であり、
・ＡがＣ＝Ｏであり、Ｒ^１が−Ｌ−＃１であり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３が−ＣＨ_２ＯＨであり、Ｒ^４がＨであり、
・ＡがＣ＝Ｏであり、Ｒ^１がＨ又は−ＣＨ_２Ｆであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３が−Ｌ−＃１であり、Ｒ^４がＨであり、
・ＡがＣ＝Ｏであり、Ｒ^１がＨ又はＦであり、Ｒ^２とＲ^４が一緒になってピロリジン環を形成し、Ｒ^３が−Ｌ−＃１であり、又は
・ＡがＣ＝Ｏであり、Ｒ^１がＨであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３が−ＣＨ_２−Ｓ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ_２−Ｓ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＣＨ_２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ_２−Ｓ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯＯＨ又は−ＣＨ_２−Ｓ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＣＨ_２−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ_２−ＣＨ（ＮＨ_２）−ＣＯＯＨであり、Ｒ^４が−Ｌ−＃１であり、
Ｌはリンカーを表し、＃１は抗体への結合を表す。］

【請求項2】

前記複合体が下記式（ＩＩｊ）を有する、請求項１に記載の複合体。

【化3】

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［式中、
Ｒ^３は、−Ｌ−＃１を表し；
Ａは、−Ｃ（＝Ｏ）−を表し；
Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８およびＲ^９は、請求項１における式（Ｉ）での場合と同じ意味を有す
る。］

【請求項3】

前記置換基Ｒ^１が−Ｌ−＃１を表す、請求項１に記載の複合体。

【請求項4】

前記複合体が下記式（ＩＩｋ）を有する、請求項３に記載の複合体。

【化4】

[この文献は図面を表示できません]

［式中、
Ｒ^１は、−Ｌ−＃１を表し；
Ａは、−Ｃ（＝Ｏ）−を表し、
Ｒ^３は、−ＣＨ_２ＯＨを表し；
Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８およびＲ^９は、請求項１における式（Ｉ）での場合と同じ意味を有する。］

【請求項5】

前記リンカー−Ｌ−が、下記の基本構造（ｉ）から（ｉｖ）：
（ｉ）−（ＣＯ）_ｍ−ＳＧ１−Ｌ１−Ｌ２−
（ｉｉ）−（ＣＯ）_ｍ−Ｌ１−ＳＧ−Ｌ１−Ｌ２−
（ｉｉｉ）−（ＣＯ）_ｍ−Ｌ１−Ｌ２−
（ｉｖ）−（ＣＯ）_ｍ−Ｌ１−ＳＧ−Ｌ２
のうちの一つを有し、
ｍが０または１であり、ＳＧおよびＳＧ１がイン・ビボで開裂可能な基を表し、Ｌ１が互いに独立に、イン・ビボで開裂できない有機基を表し、Ｌ２が、バインダーに対するカップリング基を表す、請求項１から４のいずれか一項に記載の複合体。

【請求項6】

前記イン・ビボで開裂可能な基ＳＧが２から８オリゴペプチド基、好ましくはジペプチド基またはジスルフィド、ヒドラゾン、アセタールもしくはアミナールであり、ＳＧ１が２から８オリゴペプチド基、好ましくはジペプチド基である、請求項５に記載の複合体。

【請求項7】

前記リンカーＬが、システイン側鎖もしくはシステイン残基に結合しており、下記式を有する、請求項１から６のいずれか一項に記載の複合体。

【化5】

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［式中、
ｍは、０または１を表し；
§は、活性化合物分子への結合を表し、
§§は、抗体への結合を表し、
−Ｌ２−は、

【化6】

[この文献は図面を表示できません]

を表し、
＃^１は、抗体の硫黄原子への結合箇所を示し、
＃^２は、基Ｌ^１への結合箇所を示し、
Ｌ^１は、−（ＮＲ^１０）_ｎ−（Ｇ１）_ｏ−Ｇ２−を表し、
Ｒ^１０は、−Ｈ、−ＮＨ_２またはＣ_１−Ｃ_３−アルキルを表し；
Ｇ１は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−を表し；
ｎは、０または１を表し；
ｏは、０または１を表し；
Ｇ２は、アリール基からの１から１００（好ましくは１から２５）個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖、および／または直鎖および／または分岐アルキル基、および／または環状アルキル基を表し、それは−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）_２−、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ−ＣＨ_３−、−ＮＨＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）_２−ＮＨＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ−およびＮ、ＯおよびＳ、−Ｓ（＝Ｏ）−もしくは−Ｓ（＝Ｏ）_２−から選択される１から４個の同一もしくは異なるヘテロ原子および／またはヘテロ基を有する５から１０員芳香族もしくは非芳香族複素環によって同一にまたは異なって１回もしくは複数回中断されていても良く、
前記直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、−ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
または下記の基のうちの一つを表し、

【化7】

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Ｒ^ｘは−Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_３−アルキルまたはフェニルを表す。］

【請求項8】

Ｌ２が、下記式の一方または両方によって表される、請求項７に記載の複合体。

【化8】

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［式中、
＃^１は、バインダーの硫黄原子への結合箇所を示し、
＃^２は、基Ｌ^１への結合箇所を示し、
Ｒ^２２は、−ＣＯＯＨを表し、
前記バインダーの硫黄原子への結合の８０％より多く（前記バインダーへの前記リンカーの結合総数に基づく）が、これら二つの構造のうちの一つで存在する。］

【請求項9】

Ｌ^１が下記式を有する、請求項７および８のいずれか一項に記載の複合体。

【化9】

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［式中、ｒは０から８の数字を表す。］

【請求項10】

前記リンカー−Ｌ−がシステイン側鎖もしくはシステイン残基に結合しており、下記式を有する、請求項１から９のいずれか一項に記載の複合体。

【化10】

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［式中、
§は、活性化合物分子への結合を表し、
§§は、抗体への結合を表し、
ｍは、０、１、２または３を表し；
ｎは、０、１または２を表し；
ｐは、０から２０を表し；
Ｌ３は、

【化11】

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を表し、
ｏは、０または１を表し；
Ｇ３は、アリール基からの１から１００（好ましくは１から２５）個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖、および／または直鎖および／または分岐アルキル基、および／または環状アルキル基を表し、それは−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）_２−、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ−ＣＨ_３−、−ＮＨＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）_２−ＮＨＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ−およびＮ、ＯおよびＳ、−Ｓ（＝Ｏ）−もしくは−Ｓ（＝Ｏ）_２−から選択される１から４個の同一もしくは異なるヘテロ原子および／またはヘテロ基を有する５から１０員芳香族もしくは非芳香族複素環によって同一にまたは異なって１回もしくは複数回中断されていても良く、
前記直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、−ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。］

【請求項11】

前記複合体が下記式のうちの一つを有する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の複合体、またはそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩もしくはエピマー。

【化12】

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［式中、
ＡＫ１はシステインを介して結合した抗ＣＤ１２３抗体を表し、ＡＫ２はリジンを介して結合した抗ＣＤ１２３抗体を表し、その抗体は抗体７Ｇ３もしくは１２Ｆ１のキメラもしくはヒト化変異体であり、
ｎは、１から２０の数字を表し；
Ｌ_１は、１から３０個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖を表し、それは−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）_２−、−ＮＨ−、シクロペンチル、ピペリジニル、フェニルによって同一にもしくは異なって、１回または複数回中断されていても良く、
前記直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖は、−ＣＯＯＨまたは−ＮＨ_２によって置換されていても良い。］

【請求項12】

前記リンカーＬ_１が、下記の基：

【化13】

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または

【化14】

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を表し、
§が、活性化合物分子への結合を表し、
§§が、抗体への結合を表し、
ｉｓｏＣ_３Ｈ_７が、イソプロピル基を表す、
請求項１１に記載の複合体、またはそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩もしくはエピマー。

【請求項13】

前記複合体が、下記式のうちの一つを有する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の複合体。

【化15】

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［式中、
ＡＫ１はシステインを介して結合した抗ＣＤ１２３抗体を表し、ＡＫ２はリジンを介して結合した抗ＣＤ１２３抗体を表し、その抗体は抗体７Ｇ３もしくは１２Ｆ１のキメラもしくはヒト化変異体であり、
ｎは、１から２０の数字を表す。］

【請求項14】

前記抗ＣＤ１２３抗体またはそれの抗原結合性断片が、
配列番号２に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号３に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、および配列番号４に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、および
配列番号６に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号７に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列、および配列番号８に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖、または
配列番号１２に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号１３に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、および配列番号１４に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、および
配列番号１６に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号１７に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列、および配列番号１８に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖、または
配列番号２２に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号２３に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、および配列番号２４に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、および
配列番号２６に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号２７に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列、および配列番号２８に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖、または
配列番号３２に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号３３に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、および配列番号３４に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、および
配列番号３６に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号３７に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列、および配列番号３８に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖
を含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の複合体。

【請求項15】

前記抗ＣＤ１２３抗体またはそれの抗原結合性断片が、
配列番号１に示した重鎖の可変配列、さらに配列番号５に示した軽鎖の可変配列、または
配列番号１１に示した重鎖の可変配列、さらに配列番号１５に示した軽鎖の可変配列、または
配列番号２１に示した重鎖の可変配列、さらに配列番号２５に示した軽鎖の可変配列、または
配列番号３１に示した重鎖の可変配列、さらに配列番号３５に示した軽鎖の可変配列
を含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の複合体。

【請求項16】

前記抗ＣＤ１２３抗体がＩｇＧ抗体である、請求項１から１５のいずれか一項に記載の複合体。

【請求項17】

前記抗ＣＤ１２３抗体が、
配列番号９に示した重鎖の配列、さらに配列番号１０に示した軽鎖の配列、または
配列番号１９に示した重鎖の配列、さらに配列番号２０に示した軽鎖の配列、または
配列番号２９に示した重鎖の配列、さらに配列番号３０に示した軽鎖の配列、または
配列番号３９に示した重鎖の配列、さらに配列番号４０に示した軽鎖の配列
を含む、請求項１から１６のいずれか一項に記載の複合体。

【請求項18】

不活性な無毒性の医薬として好適な補助剤と組み合わせて請求項１から１７のいずれか一項に記載の複合体を含む医薬組成物。

【請求項19】

疾患の治療および／または予防方法で使用される請求項１から１７のいずれか一項に記載の複合体。

【請求項20】

過剰増殖性障害および／または血管新生性障害の治療方法で使用される請求項１から１７のいずれか一項に記載の複合体。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

緒言および最新技術
本発明は、キネシンスピンドルタンパク質阻害剤のバインダー薬剤複合体（ＡＤＣ）、これらＡＤＣの活性代謝物、これらＡＤＣの製造方法、疾患の治療および／または予防のためのこれらＡＤＣの使用、および疾患、特に過剰増殖性および／または血管新生障害、例えば癌疾患の治療および／または予防のための医薬を製造するためのこれらＡＤＣの使用に関する。そのような治療は、単独療法として、または他の医薬もしくはさらなる治療手段と組み合わせて行うことができる。

【背景技術】

【0002】

癌は、最も多様な組織の制御されない細胞増殖の結果である。多くの場合、新たな細胞が既存の組織に侵入し（浸潤性増殖）、またはそれらは離れた臓器に転移する。癌は、非常に多様な異なる臓器で生じ、多くの場合、組織特異的経過を辿る。従って、一般名称として「癌」という用語は、各種臓器、組織および細胞型の所定の疾患の大きい群を説明するものである。

【0003】

早期の一部腫瘍は、外科手段および放射線療法手段によって摘出することができる。転移腫瘍は基本的に、化学療法によって対症的に治療可能なだけである。この場合の目的は、生活の質の向上および寿命延長の至適な組み合わせを達成することにある。

【0004】

バインダータンパク質の１以上の活性化合物分子との複合体は、特に腫瘍関連抗原に向かうインターナライジング抗体がリンカーを介して細胞毒性薬に共有結合的に結合している抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の形態で知られている。腫瘍細胞へのＡＤＣの導入と次に複合体の解離に続いて、細胞毒性薬自体またはそれから形成される細胞毒性代謝物が腫瘍細胞内で放出され、直接および選択的にそれの作用を発揮することができる。このようにして、従来の化学療法と対照的に、正常組織への損傷は、かなり狭い範囲に抑えられる［例えば、Ｊ． Ｍ． Ｌａｍｂｅｒｔ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ５， ５４３−５４９ （２００５）； Ａ． Ｍ． Ｗｕ ａｎｄ Ｐ． Ｄ． Ｓｅｎｔｅｒ， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２３， １１３７−１１４６ （２００５）； Ｐ． Ｄ． Ｓｅｎｔｅｒ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｌ． １３， ２３５−２４４ （２００９）； Ｌ． Ｄｕｃｒｙ ａｎｄ Ｂ． Ｓｔｕｍｐ， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２１， ５−１３ （２０１０）参照］。従って、ＷＯ２０１２／１７１０２０には、複数の担毒体分子が高分子リンカーを介して抗体に結合しているＡＤＣが記載されている。可能な担毒体として、ＷＯ２０１２／１７１０２０には、特に、物質ＳＢ７４３９２１、ＳＢ７１５９９２（イスピネシブ）、ＭＫ−０３７１、ＡＺＤ８４７７、ＡＺ３１４６およびＡＲＲＹ−５２０が挙げられている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【特許文献1】ＷＯ２０１２／１７１０２０

【非特許文献】

【0006】

【非特許文献1】Ｊ． Ｍ． Ｌａｍｂｅｒｔ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ５， ５４３−５４９ （２００５）

【非特許文献2】Ａ． Ｍ． Ｗｕ ａｎｄ Ｐ． Ｄ． Ｓｅｎｔｅｒ， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２３， １１３７−１１４６ （２００５）

【非特許文献3】Ｐ． Ｄ． Ｓｅｎｔｅｒ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｌ． １３， ２３５−２４４ （２００９）

【非特許文献4】Ｌ． Ｄｕｃｒｙ ａｎｄ Ｂ． Ｓｔｕｍｐ， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２１， ５−１３ （２０１０）

【発明の概要】

【0007】

最後に挙げた物質は、キネシンスピンドルタンパク質阻害剤である。キネシンスピンドルタンパク質（ＫＳＰ、Ｅｇ５、ＨｓＥｇ５、ＫＮＳＬ１またはＫＩＦ１１とも称される）は、双極性有糸分裂紡錘体が機能するのに必須のキネシン様モータータンパク質である。ＫＳＰの阻害によって有糸分裂停止となり、比較的長期間かけてアポトーシスに至る（Ｔａｏ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２００５ Ｊｕｌ ８（１）， ３９−５９）。最初の細胞透過性ＫＳＰ阻害剤であるモナストロール発見後、ＫＳＰ阻害剤は新たな化学療法剤の種類として確立され（Ｍａｙｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８６：９７１−９７４， １９９９）、多くの特許出願のテーマとなってきた（例えばＷＯ２００６／０４４８２５；ＷＯ２００６／００２２３６；ＷＯ２００５／０５１９２２；ＷＯ２００６／０６０７３７；ＷＯ０３／０６００６４；ＷＯ０３／０４０９７９；およびＷＯ０３／０４９５２７）。しかしながら、ＫＳＰは、有糸分裂期の比較的短期間中にのみそれの作用を発揮することから、ＫＳＰ阻害剤は、この相中に十分に高い濃度で存在していなければならない。ＷＯ２０１４／１５１０３０には、ある種のＫＳＰ阻害剤を含むＡＤＣが開示されている。

【0008】

この背景に対して、本発明の目的は、比較的低濃度で投与した後に、アポトーシス作用を発揮することから、癌療法において有益であり得る物質を提供することにある。

【0009】

この目的を達するため、本発明は、抗ＣＤ１２３抗体と下記の式（Ｉ）の化合物との複合体であって、式（Ｉ）の化合物のうちの１以上がリンカーＬを介して抗体に結合している複合体を提供する。その抗体は好ましくは、ヒト、ヒト化またはキメラモノクローナル抗体である。ここで好ましいものは、マウス起源の抗体７Ｇ３または１２Ｆ１由来のキメラまたはヒト化抗ＣＤ１２３抗体である。特に好ましいものは、抗体ＴＰＰ−６０１３、ＴＰＰ−５９６８、ＴＰＰ−５９６９およびＴＰＰ−５９７１である。

【0010】

式（Ｉ）：

【化1】

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【0011】

式中、
Ｒ^１はＨ、−Ｌ−＃１、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｚは−Ｈ、−ＮＨＹ^３、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ハロゲン、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_０−３−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′（例えば、−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ_２Ｗ）Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＮＨ_２、ＳＯ_３Ｈ、ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ（ＮＨ_２）ＣＯＯＨまたは−（ＣＯ−ＮＨ−ＣＨＹ^４）_１−３ＣＯＯＨを表し、ＷはＨまたはＯＨを表し、
Ｙ^４は、−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６アルキルを表すか、−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジル；
Ｒ^２は、Ｈ、−ＭＯＤ、−ＣＯ−ＣＨＹ^４−ＮＨＹ^５または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し；
Ｙ^４は、−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し、Ｙ^５はＨまたは−ＣＯ−ＣＨＹ^６−ＮＨ_２を表し、Ｙ^６は直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表し；
Ｒ^４はＨ、−Ｌ−＃１、−ＳＧ_ｌｙｓ−（ＣＯ）_０−１−Ｒ^４′、−ＣＯ−ＣＨＹ^４−ＮＨＹ^５または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、
ＳＧ_ｌｙｓはリソソーム酵素によって開裂され得る基、特にはジペプチドもしくはトリペプチドからなる基を表し、Ｒ^４′はＣ_１−１０−アルキル、Ｃ_５−１０−アリールまたはＣ_６−１０−アラルキル、Ｃ_５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリール、Ｃ_５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルコキシ、Ｃ_１−１０−アルコキシ、Ｃ_６−１０−アリールオキシまたはＣ_６−１０−アラルコキシ、Ｃ_５−１０−ヘテロアラルコキシ、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリールオキシ、Ｃ_５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは−ＮＨ_２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）_２、ＮＨ−ＣＯ−アルキル、Ｎ（アルキル）−ＣＯアルキル、−ＳＯ_３Ｈ、−ＳＯ_２ＮＨ_２、−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ_２、−ＣＯＮ（アルキル）_２または−ＯＨ、−Ｈまたは基−Ｏ_ｘ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙ−Ｒ^４″によってモノ置換もしくは多置換されていても良く（ｘは０または１を表し、ｖは１から２０の数字を表し、Ｒ^４″は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ_１−１２−アルキル）、−ＣＨ_２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯＯＨまたは−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＮＨ_２を表す。）、開裂後に１級アミン基が存在し（Ｒ^４＝Ｈに相当）；
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し；
Ｙ^４は−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表し、または−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し、Ｙ^５はＨまたは−ＣＯ−ＣＨＹ^６−ＮＨ_２を表し、Ｙ^６は直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表し；
またはＲ^２およびＲ^４が一緒になって（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ_２−ＣＨＲ^１１−または−ＣＨＲ^１１−ＣＨ_２−を表し、Ｒ^１１は−Ｈ、−ＮＨ_２、−ＳＯ_３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨ、ハロゲン（特にはＦまたはＣｌ）、Ｃ_１−４−アルキル、Ｃ_１−４−ハロアルキル、Ｃ_１−４−アルコキシ、ヒドロキシル置換されたＣ_１−４−アルキル、ＣＯＯ（Ｃ_１−４−アルキル）またはＯＨを表し；
ＡはＣＯ、ＳＯ、ＳＯ_２、ＳＯ_２ＮＨまたはＣＮＮＨ_２を表し；
Ｒ^３は、−Ｌ−＃１、−ＭＯＤまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくは−Ｌ−＃１またはＣ_１−１０−アルキル、Ｃ_６−１０−アリールまたはＣ_６−１０−アラルキル、Ｃ_５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリールまたはＣ_５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個のＯ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（Ｏ）_ｎ−アルキル基、１から３個の−ＳＯ_２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）_２基、１から３個の−ＮＨ_２基または１から３個の−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ基によって置換されていても良く、ｎは０、１または２を表し、Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、−ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨ、−（ＣＨ_２）_０−３−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ_３）Ｚ′、−（ＣＨ_２）_０−３−ＣＨ（ＮＨ_２）Ｚ′または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し（「アルキル」は好ましくは、Ｃ_１−１０−アルキルを表す。）；
Ｒ^５は、Ｈ、ＮＨ_２、ＮＯ_２、ハロゲン（特にはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ）、−ＣＮ、ＣＦ_３、−ＯＣＦ_３、−ＣＨ_２Ｆ、−ＣＨ_２Ｆ、ＳＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｚは−Ｈ、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ハロゲン、ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し；
Ｒ^６およびＲ^７は互いに独立に、Ｈ、シアノ、（フッ素化されていても良い）Ｃ_１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルキニル、ヒドロキシ、ＮＯ_２、ＮＨ_２、ＣＯＯＨまたはハロゲン（特にはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ）を表し、
Ｒ^８は、（フッ素化されていても良い）Ｃ_１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルキニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_４−１０−シクロアルキルまたは−（ＣＨ_２）_０−２−（ＨＺ^２）を表し、ＨＺ^２はＮ、ＯおよびＳからなる群から選択される２個以下のヘテロ原子を有する４から７員複素環を表し、これらの基のそれぞれは−ＯＨ、ＣＯ_２ＨまたはＮＨ_２によって置換されていても良く；
Ｒ^９はＨ、Ｆ、ＣＨ_３、ＣＦ_３、ＣＨ_２ＦまたはＣＨＦ_２を表し；
置換基Ｒ^１、Ｒ^３またはＲ^４のうちの一つがを表すか、（Ｒ^８の場合）−Ｌ−＃１を含み、
Ｌはリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
−ＭＯＤは−（ＮＲ^１０）_ｎ−（Ｇ１）_ｏ−Ｇ２−Ｇ３を表し、
Ｒ^１０はＨまたはＣ_１−Ｃ_３−アルキルを表し；
Ｇ１はを表し−ＮＨＣＯ−または−ＣＯＮＨ−（Ｇ１が−ＮＨＣＯ−を表す場合、Ｒ^１０はＮＨ_２を表さない。）；
ｎは０または１を表し；
ｏは０または１を表し；
Ｇ２は直鎖および／または分岐の炭化水素基を表し、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ_２、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣＯ−、ＣＯＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−ＳＯ_２ＮＲｙＮＲｙ−、−ＣＯＮＲｙＮＲｙ−（ＲｙはＨ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、それらはそれぞれ、ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。）、−ＣＯ−、または−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−（ＲｘはＨ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す。）の１以上によって１回もしくは複数回中断されていても良く、何らかの側鎖を含む前記炭化水素鎖は−ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、Ｇ３は−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し、基−ＭＯＤは好ましくは、少なくとも１個の基−ＣＯＯＨを有する；
ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマーである。

【0012】

本発明による複合体は、化学的に不安定なリンカー、酵素的に不安定なリンカーまたは安定なリンカーを有することができる。特に好ましいものは、安定なリンカーおよびプロテアーゼによって開裂可能なリンカーである。

【0013】

本発明はさらに、本発明による複合体、さらにはその製造のための前駆体および中間体の製造方法を提供する。

【0014】

本発明による複合体の製造は、通常は、次の段階：
保護基を有していても良く、抗体にカップリング可能な反応性基を有するリンカー前駆体を製造する段階；
保護基を有していても良い式（Ｉ）のＫＳＰ阻害剤の誘導体への前記リンカー前駆体の結合（これらの式において、リンカーへの結合はまだ全くない。）によって、保護基を有していても良い反応性ＫＳＰ阻害剤／リンカー複合体を得る段階；
前記ＫＳＰ阻害剤／リンカー複合体に存在する保護基を除去する段階；および
前記ＫＳＰ阻害剤／リンカー複合体への前記抗体の結合によって、本発明による抗体／ＫＳＰ阻害剤複合体を得る段階
を含む。

【0015】

反応性基の結合は、保護されていても良いＫＳＰ阻害剤／リンカー前駆体複合体の構築後に行うこともできる。

【0016】

リンカーに応じて、結合後に、コハク酸イミド連結ＡＤＣを、図式２６に従って、有利な安定性プロファイルを有する開鎖コハク酸アミドに変換することができる。

【0017】

上記で示したように、リンカー前駆体の低分子量ＫＳＰ阻害剤への結合は、式（Ｉ）におけるＲ^１、Ｒ^３またはＲ^４での水素原子のリンカーによる置換によるものであることができる。前記結合前の合成段階において、存在するいずれの官能基も、保護された形で存在していても良い。前記結合段階の前に、これらの保護基を公知のペプチド化学法によって除去する。その結合は、実施例における図式２０から３１で例示的に示されているように、各種経路によって化学的に行うことができる。特に、例えば置換を促進するための保護基もしくは脱離基の導入によって、リンカーへの結合のために低分子量ＫＳＰ阻害剤を修飾することが可能である場合がある。

【0018】

特に、本発明は、抗ＣＤ１２３抗体、例えば７Ｇ３または１２Ｆ１のキメラまたはヒト化変異体に結合した新規な低分子量ＫＳＰ阻害剤を提供する。これらのＫＳＰ阻害剤またはそれらの抗体複合体は、下記一般式（ＩＩ）を有し、ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマーである。

【化2】

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【0019】

式中、
Ｒ^１は、Ｈ、−Ｌ−バインダー、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｚは−Ｈ、−ＮＨＹ^３、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ハロゲン、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_０−３−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ_２Ｗ）Ｚ′を表し、
Ｙ^３は、Ｈまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は、Ｈ、ＮＨ_２、ＳＯ_３Ｈ、ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ（ＮＨ_２）ＣＯＯＨまたは−（ＣＯ−ＮＨ−ＣＨＹ^４）_１−３ＣＯＯＨを表し；
Ｗは、ＨまたはＯＨを表し、
Ｙ^４は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６アルキルを表すか、−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し；
Ｒ^２は、Ｈ、−ＭＯＤ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ^４−ＮＨＹ^５または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、
またはＲ^２およびＲ^４が一緒になって（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ_２−ＣＨＲ^１１−または−ＣＨＲ^１１−ＣＨ_２−を表し、
Ｒ^１１は、−Ｈ、−ＮＨ_２、−ＳＯ_３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨ、ハロゲン（特にはＦまたはＣｌ）、Ｃ_１−４−アルキル、Ｃ_１−４−ハロアルキル、Ｃ_１−４−アルコキシ、ヒドロキシル置換されたＣ_１−４−アルキル、ＣＯＯ（Ｃ_１−４−アルキル）またはＯＨを表し；
Ｚは、−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し；
Ｙ^４は、−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し、Ｙ^５はＨまたは−ＣＯ−ＣＨＹ^６−ＮＨ_２を表し、Ｙ^６は直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表し；
Ｒ^４はＨ、−Ｌ−バインダー、−ＳＧ_ｌｙｓ−（ＣＯ）_０−１−Ｒ^４′、−ＣＯ−ＣＨＹ^４−ＮＨＹ^５または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、
ＳＧｌｙｓはリソソーム酵素によって開裂され得る基、特にはジペプチドもしくはトリペプチドからなる基を表し、Ｒ^４′はＣ_１−１０−アルキル、Ｃ_５−１０−アリールまたはＣ_６−１０−アラルキル、Ｃ_５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリール、Ｃ_５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルコキシ、Ｃ_１−１０−アルコキシ、Ｃ_６−１０−アリールオキシまたはＣ_６−１０−アラルコキシ、Ｃ_５−１０−ヘテロアラルコキシ、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリールオキシ、Ｃ_５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは−ＮＨ_２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）_２、ＮＨ−ＣＯ−アルキル、Ｎ（アルキル）−ＣＯアルキル、−ＳＯ_３Ｈ、−ＳＯ_２ＮＨ_２、−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ_２、−ＣＯＮ（アルキル）_２または−ＯＨ、−Ｈまたは基−Ｏ_ｘ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙ−Ｒ^４″（ｘは０または１を表し、ｖは１から２０の数字を表し、Ｒ^４″は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ_１−１２−アルキル）、−ＣＨ_２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯＯＨまたは−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＮＨ_２を表す。）によってモノ置換もしくは多置換されていても良く、開裂後に１級アミン基が存在し（Ｒ^４＝Ｈに相当）；
Ｚは、−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し；
Ｙ^４は−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し、Ｙ^５はＨまたは−ＣＯ−ＣＨＹ^６−ＮＨ_２を表し、Ｙ^６は直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表し；
またはＲ^２およびＲ^４が一緒になって（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ_２−ＣＨＲ^１１−または−ＣＨＲ^１１−ＣＨ_２−を表し、Ｒ^１１はＨ、ＮＨ_２、ＳＯ_３Ｈ、ＣＯＯＨ、ＳＨ、ハロゲン（特にはＦまたはＣｌ）、Ｃ_１−４−アルキル、Ｃ_１−４−ハロアルキル、Ｃ_１−４−アルコキシ、ヒドロキシル置換されたＣ_１−４−アルキル、ＣＯＯ（Ｃ_１−４−アルキル）またはＯＨを表し；
Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）_２−、−Ｓ（＝Ｏ）_２−ＮＨ−または−ＣＮＮＨ_２−を表し；
Ｒ^３は−Ｌ−バインダー、−ＭＯＤまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくは−Ｌ−バインダーまたはＣ_１−１０−アルキル、Ｃ_６−１０−アリールまたはＣ_６−１０−アラルキル、Ｃ_５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリールまたはＣ_５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個のＯ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（Ｏ）_ｎ−アルキル基、１から３個の−ＳＯ_２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）_２基、１から３個の−ＮＨ_２基または１から３個の−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ基によって置換されていても良く、Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、−ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨ、−（ＣＨ_２）_０−３−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ_３）Ｚ′、−（ＣＨ_２）_０−３−ＣＨ（ＮＨ_２）Ｚ′または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し（「アルキル」は好ましくは、Ｃ_１−１０−アルキルを表す。）；
ｎは０、１または２を表し、
Ｒ^５はＨ、ＮＨ_２、ＮＯ_２、ハロゲン（特にはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ）、−ＣＮ、ＣＦ_３、−ＯＣＦ_３、−ＣＨ_２Ｆ、−ＣＨ_２Ｆ、ＳＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｚは−Ｈ、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ハロゲン、ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し；
Ｒ^８は、（フッ素化されていても良い）Ｃ_１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルキニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_４−１０−シクロアルキルまたは−（ＣＨ_２）_０−２−（ＨＺ^２）を表し、ＨＺ^２はＮ、ＯおよびＳからなる群から選択される２個以下のヘテロ原子を有する４から７員複素環（好ましくはオキセタン）を表し、これらの基のそれぞれは−ＯＨ、ＣＯ_２ＨまたはＮＨ_２によって置換されていても良く；
Ｒ^９は、Ｈ、Ｆ、ＣＨ_３、ＣＦ_３、ＣＨ_２ＦまたはＣＨＦ_２を表し；
Ｌはリンカーを表し、バインダーは抗ＣＤ１２３抗体を表し、前記バインダーは複数の活性化合物分子に結合していても良く、
Ｒ^１、Ｒ^３およびＲ^４のうちの一つの代表的なものは−Ｌ−バインダーを表し；
Ｒ^６およびＲ^７は互いに独立に、Ｈ、シアノ、（フッ素化されていても良い）Ｃ_１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルキニル、ヒドロキシ、ＮＯ_２、ＮＨ_２、ＣＯＯＨまたはハロゲン（特にはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ）を表し、
−ＭＯＤは−（ＮＲ^１０）_ｎ−（Ｇ１）_ｏ−Ｇ２−Ｇ３を表し、
Ｒ^１０はＨまたはＣ_１−Ｃ_３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨＣＯ−または−ＣＯＮＨ−を表し（Ｇ１が−ＮＨＣＯ−を表す場合、Ｒ^１０はＮＨ_２を表さない。）；
ｎは０または１を表し；
ｏは０または１を表し；
Ｇ２は直鎖および／または分岐の炭化水素基を表し、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ_２、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣＯ−、ＣＯＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−ＳＯ_２ＮＲｙＮＲｙ−、−ＣＯＮＲｙＮＲｙ−（ＲｙはＨ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、それらはそれぞれ、ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。）、−ＣＯ−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−（ＲｘはＨ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す。）の１以上によって１回もしくは複数回中断されていても良く、何らかの側鎖を含む前記炭化水素鎖は、−ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、Ｇ３は−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し、基−ＭＯＤは好ましくは、少なくとも１個の基−ＣＯＯＨを有する。

【図面の簡単な説明】

【0020】

【図1】配列プロトコールである。

【図2】注釈付きの抗体の配列を示す図である（抗体または抗体断片のそれぞれについて、ＣＤＲ領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）および可変領域（ＶＨ、ＶＬ）が強調されている。）。

【発明を実施するための形態】

【0021】

本発明は、抗ＣＤ１２３抗体の１以上の活性化合物分子との複合体を提供し、活性化合物分子はリンカーＬを介して抗体に結合したキネシンスピンドルタンパク質阻害剤（ＫＳＰ阻害剤）である。

【0022】

本発明による複合体は、下記一般式によって表すことができる。

【化3】

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【0023】

式中、バインダーは抗ＣＤ１２３抗体を表し、Ｌはリンカーを表し、ＫＳＰはＫＳＰ阻害剤を表し、ｎは１から５０、好ましくは１．２から２０および特に好ましくは２から８の数字を表す。ここで、ｎはバインダー当たりのＫＳＰ阻害剤／リンカー複合体の数の平均である。好ましくは、ＫＳＰ−Ｌは、上記で示した式（Ｉ）を有する。さらに、リンカーは好ましくは、抗体の異なるアミノ酸に結合している。特に好ましいものは、バインダーの異なるシステイン残基への結合である。当該抗ＣＤ１２３抗体は好ましくは、ヒト、ヒト化またはキメラモノクローナル抗体である。ここで、好ましいものは、マウス起源の抗体７Ｇ３または１２Ｆ１由来のキメラまたはヒト化抗ＣＤ１２３抗体である。特に好ましいものは、抗体ＴＰＰ−６０１３、ＴＰＰ−５９６８、ＴＰＰ−５９６９およびＴＰＰ−５９７１である。

【0024】

本発明に従って使用可能な抗体、本発明に従って使用可能なＫＳＰ阻害剤および制限なく組み合わせて使用可能な本発明に従って使用可能なリンカーについて、下記で説明する。特に、好ましいまたは特に好ましいものとして各場合で表されるバインダーを、好ましいまたは特に好ましいものとして各場合で表されるＫＳＰ阻害剤と組み合わせて、適宜に好ましいまたは特に好ましいものとして各場合で表されるリンカーと組み合わせて用いることができる。

【0025】

ＫＳＰ阻害剤およびそれらのバインダー複合体
定義
「置換された」という用語は、言及された原子もしくは基での１以上の水素が、挙げられている基の選択によって置き換わっていることを意味するが、ただし、現在の状況下で、言及された原子の通常の価数を超えるものではない。置換基および／または可変要素の組み合わせが許容される。

【0026】

「置換されていても良い」という用語は、置換基の数がゼロであるかゼロ以外であることができることを意味する。別段の断りがない限り、置換されていても良い基は、いずれか使える炭素もしくは窒素もしくは硫黄原子で水素原子に代えて非水素置換基とすることで収容できるだけの数の適宜の置換基によって置換されていても良い。通常、適宜の置換基（存在する場合）の数は、１、２、３、４または５、特には１、２または３であることができる。

【0027】

本明細書で使用される場合、例えば本発明の一般式の化合物の置換基の定義における「１回以上」という用語は、「１、２、３、４または５、好ましくは１、２、３または４、特に好ましくは１、２または３、非常に特に好ましくは１または２」を意味する。

【0028】

本発明による化合物が置換されている場合、その基は、別段の断りがない限り、モノ置換または多置換されていることができる。本発明の範囲において、複数存在する全ての基の意味は、互いに独立である。１個、２個もしくは３個の同一もしくは異なる置換基による置換が好ましい。１個の置換基による置換が特に好ましい。

【0029】

アルキル
アルキルは、１から１０個の炭素原子（Ｃ_１−Ｃ_１０−アルキル）、通常は１から６（Ｃ_１−Ｃ_６−アルキル）、好ましくは１から４（Ｃ_１−Ｃ_４−アルキル）および特に好ましくは１から３個の炭素原子（Ｃ_１−Ｃ_３−アルキル）を有する直鎖もしくは分岐の飽和１価炭化水素基を表す。

【0030】

例としてそして好ましいものとして、次のもの：メチル−、エチル−、プロピル−、ブチル−、ペンチル−、ヘキシル−、イソプロピル−、イソブチル−、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル−、イソペンチル−、２−メチルブチル−、１−メチルブチル−、１−エチルプロピル−、１，２−ジメチルプロピル−、ネオペンチル−、１，１−ジメチルプロピル−、４−メチルペンチル−、３−メチルペンチル−、２−メチルペンチル−、１−メチルペンチル−、２−エチルブチル−、１−エチルブチル−、３，３−ジメチルブチル−、２，２−ジメチルブチル−、１，１−ジメチルブチル−、２，３−ジメチルブチル−、１，３−ジメチルブチル−および１，２−ジメチルブチル−が挙げられる。

【0031】

特に好ましいものは、メチル−、エチル−、プロピル−、イソプロピル−およびｔｅｒｔ−ブチル基である。

【0032】

ヘテロアルキル
ヘテロアルキルは、１から１０個の炭素原子を有する直鎖および／または分岐の炭化水素鎖であって、基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）_２−、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｓ（＝Ｏ）_２−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙＮＲｙ−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−のうちの１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖を含む前記炭化水素鎖がある場合、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ_２、−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＮＨ_２）−、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い炭化水素鎖を表す。

【0033】

ここで、Ｒｙは各場合で、−Ｈ、フェニル−、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル−、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニル−またはＣ２−Ｃ１０−アルキニル−を表し、それは、それらの部分において、それぞれ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ_２、−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＮＨ_２）−、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。

【0034】

ここで、Ｒｘは−Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキル−またはフェニル−を表す。

【0035】

アルケニル
アルケニルは、１個もしくは２個の二重結合および２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の炭素原子（Ｃ_２−Ｃ_１０−アルケニル）、特には２もしくは３個の炭素原子（Ｃ_２−Ｃ_３−アルケニル）を有する直鎖もしくは分岐の１価炭化水素鎖を表し、アルケニル基が複数の二重結合を含む場合、それらの二重結合は、互いに離れているか、共役していることができることは明らかである。アルケニル基は、例えば、エテニル（またはビニル）、プロパ−２−エン−１−イル（または「アリル」）、プロパ−１−エン−１−イル、ブタ−３−エニル、ブタ−２−エニル、ブタ−１−エニル、ペンタ−４−エニル、ペンタ−３−エニル、ペンタ−２−エニル、ペンタ−１−エニル、ヘキサ−５−エニル、ヘキサ−４−エニル、ヘキサ−３−エニル、ヘキサ−２−エニル、ヘキサ−１−エニル、プロパ−１−エン−２−イル（または「イソプロペニル」）、２−メチルプロパ−２−エニル、１−メチルプロパ−２−エニル、２−メチルプロパ−１−エニル、１−メチルプロパ−１−エニル、３−メチルブタ−３−エニル、２−メチルブタ−３−エニル、１−メチルブタ−３−エニル、３−メチルブタ−２−エニル、２−メチルブタ−２−エニル、１−メチルブタ−２−エニル、３−メチルブタ−１−エニル、２−メチルブタ−１−エニル、１−メチルブタ−１−エニル、１，１−ジメチルプロパ−２−エニル、１−エチルプロパ−１−エニル、１−プロピルビニル、１−イソプロピルビニル、４−メチルペンタ−４−エニル、３−メチルペンタ−４−エニル、２−メチルペンタ−４−エニル、１−メチルペンタ−４−エニル、４−メチルペンタ−３−エニル、３−メチルペンタ−３−エニル、２−メチルペンタ−３−エニル、１−メチルペンタ−３−エニル、４−メチルペンタ−２−エニル、３−メチルペンタ−２−エニル、２−メチルペンタ−２−エニル、１−メチルペンタ−２−エニル、４−メチルペンタ−１−エニル、３−メチルペンタ−１−エニル、２−メチルペンタ−１−エニル、１−メチルペンタ−１−エニル、３−エチルブタ−３−エニル、２−エチルブタ−３−エニル、１−エチルブタ−３−エニル、３−エチルブタ−２−エニル、２−エチルブタ−２−エニル、１−エチルブタ−２−エニル、３−エチルブタ−１−エニル、２−エチルブタ−１−エニル、１−エチルブタ−１−エニル、２−プロピルプロパ−２−エニル、１−プロピルプロパ−２−エニル、２−イソプロピルプロパ−２−エニル、１−イソプロピルプロパ−２−エニル、２−プロピルプロパ−１−エニル、１−プロピルプロパ−１−エニル、２−イソプロピルプロパ−１−エニル、１−イソプロピルプロパ−１−エニル、３，３−ジメチルプロパ−１−エニル、１−（１，１−ジメチルエチル）エテニル、ブタ−１，３−ジエニル、ペンタ−１，４−ジエニルまたはヘキサ−１−５−ジエニル基である。その基は特にはビニルまたはアリルである。

【0036】

アルキニル
アルキニルは三重結合および２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の炭素原子（Ｃ_２−Ｃ_１０−アルキニル）、特には２もしくは３個の炭素原子（Ｃ_２−Ｃ_３−アルキニル）を有する直鎖もしくは分岐の１価炭化水素鎖を表す。Ｃ_２−Ｃ_６−アルキニル基は、例えば、エチニル、プロパ−１−イニル、プロパ−２−イニル（またはプロパルギル）、ブタ−１−イニル、ブタ−２−イニル、ブタ−３−イニル、ペンタ−１−イニル、ペンタ−２−イニル、ペンタ−３−イニル、ペンタ−４−イニル、ヘキサ−１−イニル、ヘキサ−２−イニル、ヘキサ−３−イニル、ヘキサ−４−イニル、ヘキサ−５−イニル、１−メチルプロパ−２−イニル、２−メチルブタ−３−イニル、１−メチルブタ−３−イニル、１−メチルブタ−２−イニル、３−メチルブタ−１−イニル、１−エチルプロパ−２−イニル、３−メチルペンタ−４−イニル、２−メチルペンタ−４−イニル、１−メチルペンタ−４−イニル、２−メチルペンタ−３−イニル、１−メチルペンタ−３−イニル、４−メチルペンタ−２−イニル、１−メチルペンタ−２−イニル、４−メチルペンタ−１−イニル、３−メチルペンタ−１−イニル、２−エチルブタ−３−イニル、１−エチルブタ−３−イニル、１−エチルブタ−２−イニル、１−プロピルプロパ−２−イニル、１−イソプロピルプロパ−２−イニル、２，２−ジメチルブタ−３−イニル、１，１−ジメチルブタ−３−イニル、１，１−ジメチルブタ−２−イニル−または３，３−ジメチルブタ−１−イニル基である。アルキニル基は特には、エチニル、プロパ−１−イニルまたはプロパ−２−イニルである。

【0037】

シクロアルキル
シクロアルキルは、３から１２個の炭素原子を有する飽和の１価単環式もしくは二環式炭化水素基（Ｃ_３−Ｃ_１２−シクロアルキル）を表す。

【0038】

ここで、単環式炭化水素基は、通常は３から１０個（Ｃ_３−Ｃ_１０−シクロアルキル）、好ましくは３から８個（Ｃ_３−Ｃ_８−シクロアルキル）、特に好ましくは３か７個（Ｃ_３−Ｃ_７−シクロアルキル）の炭素原子を有する１価炭化水素基を表す。

【0039】

単環式炭化水素基について、例としてそして好ましいものとして、次のもの：シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルが挙げられる。

【0040】

特に好ましいものは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチルである。

【0041】

ここで、二環式炭化水素基は、２個の直接隣接する原子を一緒に共有する二つの飽和環系の縮合と理解されるべき、通常は３から１２個の炭素原子を有する炭化水素基（Ｃ_３−Ｃ_１２−シクロアルキル）を表す、二環式炭化水素基について、例としてそして好ましいものとして、次のもの：ビシクロ［２．２．０］ヘキシル、ビシクロ［３．３．０］オクチル、ビシクロ［４．４．０］デシル、ビシクロ［５．４．０］ウンデシル、ビシクロ［３．２．０］ヘプチル、ビシクロ［４．２．０］オクチル、ビシクロ［５．２．０］ノニル、ビシクロ［６．２．０］デシル、ビシクロ［４．３．０］ノニル、ビシクロ［５．３．０］デシル、ビシクロ［６．３．０］ウンデシルおよびビシクロ［５．４．０］ウンデシルが挙げられる。

【0042】

複素環アルキル
複素環アルキルは、同一であるか異なっていることができる１個、２個、３個もしくは４個のヘテロ原子を有する非芳香族単環式もしくは二環式環系を表す。存在するヘテロ原子は、窒素原子、酸素原子または硫黄原子であることができる。

【0043】

本発明による単環式環系は、３から８個、好ましくは４から７個、特に好ましくは５個もしくは６個の環原子を有することができる。

【0044】

９
３個の環原子を有する複素環アルキルについて、例としてそして好ましいものとして、次のもの：アジリジニルが挙げられる。

【0045】

４個の環原子を有する複素環アルキルについて、例としてそして好ましいものとして、次のもの：アゼチジニル、オキセタニルが挙げられる。

【0046】

５個の環原子を有する複素環アルキルについて、例としてそして好ましいものとして、次のもの：ピロリジニル、イミダゾリジニル、ピラゾリジニル、ピロリニル、ジオキソラニルおよびテトラヒドロフラニルが挙げられる。

【0047】

６個の環原子を有する複素環アルキルについて、例としてそして好ましいものとして、次のもの：ピペリジニル、ピペラジニル、モルホニル、ジオキサニル、テトラヒドロピラニルおよびチオモルホニルが挙げられる。

【0048】

７個の環原子を有する複素環アルキルについて、例としてそして好ましいものとして、次のもの：アゼパニル、オキセパニル、１，３−ジアゼパニル、１，４−ジアゼパニルが挙げられる。

【0049】

８個の環原子を有する複素環アルキルについて、例としてそして好ましいものとして、次のもの：オキソカニル、アゾカニルが挙げられる。

【0050】

単環式複素環アルキルの中からは、好ましいものは、Ｏ、ＮおよびＳからなる群からの２個以下のヘテロ原子を有する４から７員の飽和複素環基である。

【0051】

特に好ましいものは、モルホニル、ピペリジニル、ピロリジニルおよびテトラヒドロフラニルである。

【0052】

同一であっても異なっていても良い１個、２個、３個もしくは４個のヘテロ原子を有する二環式環系は、本発明によれば、６から１２個、好ましくは６から１０個の環原子を有することができ、１個、２個、３個もしくは４個の炭素原子がＯ、ＮおよびＳからなる群からの同一もしくは異なるヘテロ原子によって置き換わっていることができる。

【0053】

例としては、次のもの：アザビシクロ［３．３．０］オクチル、アザビシクロ［４．３．０］ノニル、ジアザビシクロ［４．３．０］ノニル、オキサザビシクロ［４．３．０］ノニル、チアザビシクロ［４．３．０］ノニルまたはアザビシクロ［４．４．０］デシル、さらには定義によるさらなる可能な組み合わせから誘導される基を挙げることができる。

【0054】

特に好ましいものは、パーヒドロシクロペンタ［ｃ］ピロリル、パーヒドロフロ［３，２−ｃ］ピリジニル、パーヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジニル、パーヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピロリルおよび３，４−メチレンジオキシフェニルである。

【0055】

アリール
アリールは、炭素原子からなる１価単環式もしくは二環式芳香族環系である。例としては、ナフチルおよびフェニルがあり、好ましいものはフェニルまたはフェニル基である。

【0056】

Ｃ_６−Ｃ_１０−アラルキル
本発明の文脈において、Ｃ_６−１０−アラルキルは、Ｃ_１−Ｃ_４−アルキル基に結合した単環式芳香族アリール、例えばフェニルを表す。

【0057】

Ｃ_６−１０−アラルキル基の例にはベンジルがある。

【0058】

ヘテロアリール
ヘテロアリールは、少なくとも１個の環ヘテロ原子および適宜に１個、２個もしくは３個のＮ、ＯおよびＳからなる群からのさらなる環ヘテロ原子を含み、環炭素原子を介してまたは適宜に（価数が許す場合）環窒素原子を介して結合している５、６、８、９、１０、１１、１２、１３または１４個の環系（「５から１４員ヘテロアリール」基）、特には５、６、９または１０個の環原子を有する１価の単環式、二環式もしくは三環式芳香族環系である。

【0059】

ヘテロアリール基は、５員ヘテロアリール基、例えば、チエニル、フリル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリルまたはテトラゾリル；または６員ヘテロアリール基、例えば、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニルまたはトリアジニル；または三環式ヘテロアリール基、例えばカルバゾリル、アクリジニルもしくはフェナジニル；または９員ヘテロアリール基、例えばベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾトリアゾリル、インダゾリル、インドリル、イソインドリル、インドリジニルもしくはプリニル；または１０員ヘテロアリール基、例えばキノリニル、キナゾリニル、イソキノリニル、シンノリニル、フタラジニル、キノキサリニルまたはプテリジニルであることができる。

【0060】

概して、そして別段の言及がなければ、ヘテロアリール基は、それの全ての可能な異性体型、例えば互変異体および分子の残りの部分への結合箇所に関しての位置異性体を含む。従って、例示的な非限定的例として、ピリジニルという用語は、ピリジン−２−イル、ピリジン−３−イルおよびピリジン−４−イルを含み、またはチエニルという用語はチエン−２−イルおよびチエン−３−イルを含む。

【0061】

Ｃ_５−Ｃ_１０−ヘテロアリール
本発明の文脈で、Ｃ_５−１０−ヘテロアリールは、同一であっても異なっていても良い１個、２個、３個もしくは４個のヘテロ原子を有する単環式もしくは二環式芳香族環系を表す。存在しても良いヘテロ原子は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）および／またはＳ（＝Ｏ）_２である。結合価は、いずれの芳香族炭素原子または窒素原子にあっても良い。

【0062】

本発明による単環式ヘテロアリール基は、５または６個の環原子を有する。好ましいものは、１個もしくは２個のヘテロ原子を有するヘテロアリール基である。特に好ましいのは、この場合、１個もしくは２個の窒素原子である。

【0063】

５個の環原子を有するヘテロアリール基には、例えば、次の環：チエニル、チアゾリル、フリル、ピロリル、オキサゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリルおよびチアジアゾリルなどがある。

【0064】

６個の環原子を有するヘテロアリール基には、例えば、次の環：ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニルおよびトリアジニルなどがある。

【0065】

本発明による二環式ヘテロアリール基は、９または１０個の環原子を有する。

【0066】

９個の環原子を有するヘテロアリール基には、例えば、次の環：フタリジル、チオフタリジル、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、アゾシニル、インドリジニル、プリニル、インドリニルなどがある。

【0067】

１０個の環原子を有するヘテロアリール基には、例えば、次の環：イソキノリニル、キノリニル、キノリジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、シンノリニル、フタラジニル、１，７−および１，８−ナフチリジニル、プテリジニル、クロマニルなどがある。

【0068】

ヘテロアルコキシ
ヘテロアルコキシは、１から１０個の炭素原子を有する直鎖および／または分岐の炭化水素鎖であって、−Ｏ−を介して分子の残り部分に結合しており、さらに基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）_２−、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｓ（＝Ｏ）_２−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙＮＲｙ−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−の１以上によってさらに１回もしくは複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合にそれを含む炭化水素鎖が−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ_２、−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＮＨ_２）−、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い炭化水素鎖を表す。

【0069】

ここで、Ｒｙは各場合で、−Ｈ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、それらはそれらの部分において、各場合で、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ_２、−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＮＨ_２）−、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。

【0070】

ここで、Ｒｘは、−Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す。

【0071】

本発明の文脈において、ハロゲンまたはハロゲン原子はフッ素（−Ｆ）、塩素（−Ｃｌ）、臭素（−Ｂｒ）またはヨウ素（−Ｉ）を表す。

【0072】

フルオロアルキル、フルオロアルケニルおよびフルオロアルキニルは、アルキル、アルケニルおよびアルキニルが、フッ素．によってモノ置換もしくは多置換されていても良いことを意味する。

【0073】

ＫＳＰ阻害剤の抗体への結合は、実施例における図式２０から３１で例示的に示されているように、各種経路によって化学的に行うことができる。特に、例えば置換を促進するための保護基もしくは脱離基の導入によって、リンカーへの結合のために低分子量ＫＳＰ阻害剤を修飾することが可能である場合がある（その反応において、水素原子ではない前記脱離基がリンカーによって置換される。）。次に、このようにして得られたＫＳＰ阻害剤−リンカー分子（そのリンカーはバインダーへの結合に関して反応性基を有する。）をバインダーと反応させることで、本発明によるバインダー複合体を得ることができる。実験の部において、この手順を、非常に多くの実施例によって例示的に説明する。

【0074】

他の特に好ましい化合物は、下記の式（Ｉ）または（Ｉａ）を有するものである。

【0075】

式（Ｉ）ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマー。

【化4】

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【0076】

式中、
Ｒ^１はＨ、−Ｌ−＃１、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｚは−Ｈ、−ＮＨＹ^３、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ハロゲン、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_０−３−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ_２Ｗ）Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＮＨ_２、ＳＯ_３Ｈ、ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ（ＮＨ_２）ＣＯＯＨまたは−（ＣＯ−ＮＨ−ＣＨＹ^４）_１−３ＣＯＯＨを表し、ＷはＨまたはＯＨを表し、
Ｙ^４は、−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６アルキルを表すか、−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し；
Ｒ^２はＨ、−ＭＯＤ、−ＣＯ−ＣＨＹ^４−ＮＨＹ^５または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し；
Ｙ^４は、−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し、Ｙ^５はＨまたは−ＣＯ−ＣＨＹ^６−ＮＨ_２を表し、Ｙ^６は直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表し；
Ｒ^４はＨ、−Ｌ−＃１、−ＳＧ_ｌｙｓ−（ＣＯ）_０−１−Ｒ^４′、−ＣＯ−ＣＨＹ^４−ＮＨＹ^５または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、
ＳＧｌｙｓはリソソーム酵素によって開裂され得る基、特にはジペプチドもしくはトリペプチドからなる基を表し、Ｒ^４′はＣ_１−１０−アルキル、Ｃ_５−１０−アリールまたはＣ_６−１０−アラルキル、Ｃ_５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリール、Ｃ_５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルコキシ、Ｃ_１−１０−アルコキシ、Ｃ_６−１０−アリールオキシまたはＣ_６−１０−アラルコキシ、Ｃ_５−１０−ヘテロアラルコキシ、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリールオキシ、Ｃ_５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは、−ＮＨ_２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）_２、ＮＨ−ＣＯ−アルキル、Ｎ（アルキル）−ＣＯアルキル、−ＳＯ_３Ｈ、−ＳＯ_２ＮＨ_２、−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ_２、−ＣＯＮ（アルキル）_２または−ＯＨ、−Ｈまたは基−Ｏ_ｘ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙ−Ｒ^４″（ｘは０または１を表し、ｖは１から２０の数字を表し、Ｒ^４″は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ_１−１２−アルキル）、−ＣＨ_２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯＯＨまたは−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＮＨ_２を表す。）によってモノ置換もしくは多置換されていても良く；
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し；
Ｙ^４は、−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し、Ｙ^５はＨまたは−ＣＯ−ＣＨＹ^６−ＮＨ_２を表し、Ｙ^６は直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表し；
またはＲ^２およびＲ^４が一緒になって（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ_２−ＣＨＲ^１１−または−ＣＨＲ^１１−ＣＨ_２−を表し、Ｒ^１１はＨ、ＮＨ_２、ＳＯ_３Ｈ、ＣＯＯＨ、ＳＨ、ハロゲン（特にはＦまたはＣｌ）、Ｃ_１−４−アルキル、Ｃ_１−４−ハロアルキル、Ｃ_１−４−アルコキシ、ヒドロキシル置換されたＣ_１−４−アルキル、ＣＯＯ（Ｃ_１−４−アルキル）またはＯＨを表し；
ＡはＣＯ、ＳＯ、ＳＯ_２、ＳＯ_２ＮＨまたはＣＮＮＨ_２を表し；
Ｒ^３は−Ｌ−＃１、−ＭＯＤまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくはＣ_１−１０−アルキル、Ｃ_６−１０−アリールまたはＣ_６−１０−アラルキル、Ｃ_５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリールまたはＣ_５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個のＯ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（Ｏ）_ｎ−アルキル基、１から３個の−ＳＯ_２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）_２基、１から３個の−ＮＨ（（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−２０Ｈ）基、１から３個の−ＮＨ_２基または１から３個の−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ基によって置換されていても良く、ｎは０、１または２を表し、Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、−ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨ、−（ＣＨ_２）_０−３−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ_３）Ｚ′、−（ＣＨ_２）_０−３−ＣＨ（ＮＨ_２）Ｚ′または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し（「アルキル」は、好ましくはＣ_１−１０−アルキルである。）；
Ｒ^５は、Ｈ、−ＭＯＤ、ＮＨ_２、ＮＯ_２、ハロゲン（特にはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ）、−ＣＮ、ＣＦ_３、−ＯＣＦ_３、−ＣＨ_２Ｆ、−ＣＨ_２Ｆ、ＳＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｚは−Ｈ、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ハロゲン、ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し；
Ｒ^６およびＲ^７は互いに独立に、Ｈ、シアノ、（フッ素化されていても良い）Ｃ_１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルキニル、ヒドロキシ、ＮＯ_２、ＮＨ_２、ＣＯＯＨまたはハロゲン（特にはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ）を表し、
Ｒ^８は、（フッ素化されていても良い）Ｃ_１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルキニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_４−１０−シクロアルキルまたは−（ＣＨ_２）_０−２−（ＨＺ^２）を表し、ＨＺ^２はＮ、ＯおよびＳからなる群から選択される２個以下のヘテロ原子を有する４から７員複素環（好ましくはオキセタン）を表し、これらの基のそれぞれは−ＯＨ、ＣＯ_２ＨまたはＮＨ_２によって置換されていても良く；
置換基Ｒ^１、Ｒ^３およびＲ^４のうちの一つは−Ｌ−＃１を表し、
Ｌはリンカーを表し、＃１は抗体への結合を表し、
Ｒ^９はＨ、Ｆ、ＣＨ_３、ＣＦ_３、ＣＨ_２ＦまたはＣＨＦ_２を表し；
−ＭＯＤは−（ＮＲ^１０）_ｎ−（Ｇ１）_ｏ−Ｇ２−Ｇ３を表し、
Ｒ^１０はＨまたはＣ_１−Ｃ_３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−または

【化5】

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【0077】

（式中、Ｇ１が−ＮＨＣＯ−または

【化6】

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【0078】

を表す場合、Ｒ^１０はＮＨ_２を表さない。）を表し；
ｎは０または１を表し；
ｏは０または１を表し；
Ｇ２は直鎖および／または分岐の炭化水素基を表し、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ_２、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣＯ−、ＣＯＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−ＳＯ_２ＮＲｙＮＲｙ−、−ＣＯＮＲｙＮＲｙ−（Ｒｙは、Ｈ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、それらはそれぞれ、ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。）、−ＣＯ−、または−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−（ＲｘはＨ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す。）の１以上によって１回もしくは複数回中断されていても良く、何らかの側鎖を含む前記炭化水素鎖は、−ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、Ｇ３は−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し、基−ＭＯＤは好ましくは、少なくとも１個の基−ＣＯＯＨを有する。

【0079】

式（Ｉ）の好ましい実施形態において、置換基Ｒ^１またはＲ^３のうちの一つは−Ｌ−＃１を表す。この実施形態において、Ｒ^４がＨまたは−ＳＧ_ｌｙｓ−（ＣＯ）_０−１−Ｒ^４′を表し、ＳＧ_ｌｙｓおよびＲ^４′が上記と同じ意味を有する場合が特に好ましい。式（Ｉ）の別の好ましい実施形態において、置換基Ｒ^４は−Ｌ−＃１を表し、前記リンカーは、Ｒ^４に結合している窒素原子で開裂できることで、開裂後に１級アミノ基が存在するようにするリンカーである（Ｒ^４＝Ｈに相当）。そのような開裂可能な基について、下記で詳細に説明する。

【0080】

Ｒ^１がＨを表さない場合、Ｒ^１が結合している炭素原子は、Ｌおよび／またはＤ配置で、好ましくはＬ配置で存在し得る立体中心である。

【0081】

Ｒ^２がＨを表さない場合、Ｒ^２が結合している炭素原子は、Ｌおよび／またはＤ配置で存在しても良い立体中心である。

【0082】

式（Ｉａ）ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマー。

【化7】

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【0083】

式中、
Ｒ^１はＨ、−Ｌ−＃１または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｚは−Ｈ、−ＮＨＹ^３、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ハロゲン、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_０−３−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ_２Ｗ）Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＮＨ_２、ＳＯ_３Ｈ、ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ（ＮＨ_２）ＣＯＯＨまたは−（ＣＯ−ＮＨ−ＣＨＹ^４）_１−３ＣＯＯＨを表し、ＷはＨまたはＯＨを表し；
Ｙ^４は、−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６アルキルを表すか、−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し、
Ｒ^２およびＲ^４は互いに独立に、Ｈ、−ＳＧ_ｌｙｓ−（ＣＯ）_０−１−Ｒ^４′、−ＣＯ−ＣＨＹ^４−ＮＨＹ^５または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、
ＳＧｌｙｓはリソソーム酵素によって開裂され得る基、特にはジペプチドもしくはトリペプチドからなる基を表し、Ｒ^４′はＣ_１−１０−アルキル、Ｃ_５−１０−アリールまたはＣ_６−１０−アラルキル、Ｃ_５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリール、Ｃ_５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルコキシ、Ｃ_１−１０−アルコキシ、Ｃ_６−１０−アリールオキシまたはＣ_６−１０−アラルコキシ、Ｃ_５−１０−ヘテロアラルコキシ、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリールオキシ、Ｃ_５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それらは−ＮＨ_２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）_２、ＮＨ−ＣＯ−アルキル、Ｎ（アルキル）−ＣＯアルキル、−ＳＯ_３Ｈ、−ＳＯ_２ＮＨ_２、−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ_２、−ＣＯＮ（アルキル）_２または−ＯＨ、−Ｈまたは基−Ｏ_ｘ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙ−Ｒ^４″（ｘは０または１を表し、ｖは１から２０の数字を表し、Ｒ^４″は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ_１−１２−アルキル）、−ＣＨ_２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯＯＨまたは−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＮＨ_２を表す。）によってモノ置換もしくは多置換されていても良く；
またはＲ^２およびＲ^４が一体となって、−ＣＨ_２−ＣＨＲ^１１−または−ＣＨＲ^１１−ＣＨ_２−を表し（ピロリジン環の形成）、Ｒ^１１はＨ、ＮＨ_２、ＳＯ_３Ｈ、ＣＯＯＨ、ＳＨ、ハロゲン（特にはＦまたはＣｌ）、Ｃ_１−４−アルキル、Ｃ_１−４−ハロアルキル、Ｃ_１−４−アルコキシ、ヒドロキシル置換されたＣ_１−４−アルキル、ＣＯＯ（Ｃ_１−４−アルキル）またはＯＨを表し；またはＲ^２はＨ、−ＣＯ−ＣＨＹ^４−ＮＨＹ^５または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｒ^４は−Ｌ−＃１を表し、Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、−ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ_１Ｙ_２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し；
Ｙ^４は互いに独立に、−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し、Ｙ^４は−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し、Ｙ^５はＨまたは−ＣＯ−ＣＨＹ^６−ＮＨ_２を表し、Ｙ^６は直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表し；
ＡはＣＯ、ＳＯ、ＳＯ_２、ＳＯ_２ＮＨまたはＣＮＮＨ_２を表し；
Ｒ^３は置換されていても良いアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくは−Ｌ−＃１またはＣ_１−１０−アルキル、Ｃ_６−１０−アリールまたはＣ_６−１０−アラルキル、Ｃ_５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリールまたはＣ_５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個のＯ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（Ｏ）_ｎ−アルキル基、１から３個の−ＳＯ_２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）_２基、１から３個の−ＮＨ_２基または１から３個の−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ基によって置換されていても良く、ｎは０、１または２を表し、Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、−ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨ、−（ＣＨ_２）_０−３−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ_３）Ｚ′、−（ＣＨ_２）_０−３−ＣＨ（ＮＨ_２）Ｚ′または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し（「アルキル」は好ましくは、Ｃ_１−１０−アルキルを表す。）；
Ｒ^５はＨ、Ｆ、ＮＨ_２、ＮＯ_２、ハロゲン、ＳＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し；
Ｒ^６およびＲ^７は互いに独立に、Ｈ、シアノ、（フッ素化されていても良い）Ｃ_１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲンを表し、
Ｒ^８は（フッ素化されていても良い）Ｃ_１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_４−１０−シクロアルキルまたは置換されていても良いオキセタンを表し；
Ｒ^９はＨ、Ｆ、ＣＨ_３、ＣＦ_３、ＣＨ_２ＦまたはＣＨＦ_２を表す。

【0084】

Ｒ^１、Ｒ^３またはＲ^４での水素原子の置換により、置換基Ｒ^１、Ｒ^３およびＲ^４のいずれも−Ｌ−＃１を表さない式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物を当業者に公知の方法でリンカーに結合させることができる。これによって、置換基Ｒ^１、Ｒ^３またはＲ^４のうちの一つが−Ｌ−＃１を表し、Ｌがリンカーを表し、＃１が抗体への結合を表す式（Ｉ）または（Ｉａ）の複合体が得られる。そこで、式（Ｉ）または（Ｉａ）によるＫＳＰ阻害剤がバインダーと結合している場合、置換基Ｒ^１、Ｒ^３またはＲ^４のうちの一つが−Ｌ−＃１を表し、Ｌはリンカーを表し、＃１は抗体への結合を表す。すなわち、その複合体の場合、置換基Ｒ^１、Ｒ^３またはＲ^４のうちの一つが−Ｌ−＃１を表し、−Ｌ−＃１は抗体への結合を表す。バインダーは、好ましくはヒト、ヒト化またはキメラのモノクローナル抗体またはそれの抗原結合性断片である。式（Ｉ）または（Ｉａ）の好ましい実施形態において、置換基Ｒ^１またはＲ^３のうちの一つが−Ｌ−＃１を表す。この実施形態において、Ｒ^４がＨまたは−ＳＧ_ｌｙｓ−（ＣＯ）_０−１−Ｒ^４′を表し、ＳＧ_ｌｙｓおよびＲ^４′が上記と同じ意味を有する場合が特に好ましい。式（Ｉ）の別の好ましい実施形態において、置換基Ｒ^４は−Ｌ−＃１を表し、リンカーは、Ｒ^４に結合している窒素原子で開裂できることで、開裂後に１級アミノ基が存在するようにできる（Ｒ^４＝Ｈに相当）リンカーである。そのような開裂可能な基について、下記で詳細に説明する。ここで、好ましいものは、マウス起源の抗体７Ｇ３または１２Ｆ１由来のキメラまたはヒト化抗ＣＤ１２３抗体である。特に好ましいものは、抗体ＴＰＰ−６０１３、ＴＰＰ−５９６８、ＴＰＰ−５９６９およびＴＰＰ−５９７１である。

【0085】

−Ｌ−＃１に代えて、化合物中に基−Ｌ−＃３が存在することも可能であり、Ｌはリンカーを表し、＃３は抗体への結合のための反応性基を表す。−Ｌ−＃３を含む化合物は、抗体と反応する反応性化合物である。＃３は好ましくは、アミノまたはチオール基と反応して共有結合を形成する、好ましくはタンパク質中のシステイン残基と反応する基である。タンパク質中のシステイン残基は、タンパク質中に天然に存在することができるか、生化学的方法によって導入することができるか、好ましくは、バインダーのジスルフィドの事前の還元によって発生させることができる。

【0086】

Ａに関しては、好ましいものはＣＯ（カルボニル）である。

【0087】

Ｒ^１について好ましいものは、−Ｌ−＃１、Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_１−３ＮＨ_２、−ＣＯＮＺ″（ＣＨ_２）_１−３ＮＨ_２および−ＣＯＮＺ″ＣＨ_２ＣＯＯＨであり、Ｚ″はＨまたはＮＨ_２を表す。

【0088】

Ｒ^２およびＲ^４について好ましいものはＨであるか、Ｒ^２およびＲ^４が一緒になって（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ_２−ＣＨＲ^１１−または−ＣＨＲ^１１−ＣＨ_２−を表し、Ｒ^１１はＨまたはＦを表す。Ｒ^４については、−Ｌ−＃１も好ましく、−Ｌ−＃１は開裂可能なリンカー、好ましくは細胞内で酵素によって開裂し得るリンカーである。

【0089】

Ｒ^３について好ましいものは−Ｌ−＃１またはＣ_１−１０−アルキル−であり、それは−ＯＨ、Ｏ−アルキル、ＳＨ、Ｓ−アルキル、Ｏ−ＣＯ−アルキル、Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル、ＮＨ−ＣＯ−アルキル、ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル、Ｓ（Ｏ）_ｎ−アルキル、ＳＯ_２−ＮＨ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ（アルキル）_２またはＮＨ_２（アルキルは好ましくはＣ_１−３−アルキルである。）によって置換されていても良い。

【0090】

Ｒ^５について好ましいものはＨまたはＦである。

【0091】

Ｒ^６およびＲ^７について好ましいものは、互いに独立に、Ｈ、（フッ素化されていても良い）Ｃ_１−３−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−４−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−４−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲンである。

【0092】

Ｒ^８について好ましいものは、分岐のＣ_１−５−アルキル基、特には式−Ｃ（ＣＨ_３）_２−（ＣＨ_２）_０−２−Ｒｙの基（Ｒｙは−Ｈ、−ＯＨ、ＣＯ_２ＨまたはＮＨ_２を表す。）、または（フッ素化されていても良い）Ｃ_５−７−シクロアルキルである。特に好ましいものは、式−Ｃ（ＣＨ_３）_３またはシクロヘキシル基の基である。

【0093】

Ｒ^９について好ましいものは、ＨまたはＦである。

【0094】

特別に好ましいものは、
ＡがＣＯ（カルボニル）を表し；
Ｒ^１がＨ、−Ｌ−＃１、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_１−３ＮＨ_２、−ＣＯＮＺ″（ＣＨ_２）_１−３ＮＨ_２または−ＣＯＮＺ″ＣＨ_２ＣＯＯＨを表し、Ｚ″がＨまたはＮＨ_２を表し；
Ｒ^２およびＲ^４がＨを表すか、Ｒ^２およびＲ^４が一緒になって（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ_２−ＣＨＲ^１１−または−ＣＨＲ^１１−ＣＨ_２−を表し、Ｒ^１１がＨを表し；またはＲ^４が−Ｌ−＃１を表し、Ｒ^２がＨを表し；
Ｒ^３が、−Ｌ−＃１またはフェニル基（それは、ハロゲン（特にはＦ）またはフッ素化していても良いＣ_１−３−アルキルによってモノ置換もしくは多置換されていても良い。）を表し、または−ＯＹ^４、−ＳＹ^４、−Ｏ−ＣＯ−Ｙ^４、−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｙ^４、ＮＨ−ＣＯ−Ｙ^４、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−Ｙ^４、Ｓ（Ｏ）_ｎ−Ｙ^４（ｎは０、１または２を表す。）、−ＳＯ_２−ＮＨ−Ｙ^４、ＮＨ−Ｙ^４またはＮ（Ｙ^４）_２によって置換されていても良いフッ素化していても良いＣ_１−１０−アルキル基を表し、Ｙ^４がＨ、フェニル（ハロゲン（特にはＦ）またはフッ素化していても良いＣ_１−３−アルキルによってモノ置換もしくは多置換されていても良い。）、またはアルキル（当該アルキル基は、−ＯＨ、−ＣＯＯＨおよび／または−ＮＨＣＯ−Ｃ_１−３−アルキルによって置換されていても良く、アルキルは好ましくはＣ_１−３−アルキルを表す。）を表し；
特に好ましくは、Ｒ^３が−ＯＨ、Ｏ−アルキル、ＳＨ、Ｓ−アルキル、Ｏ−ＣＯ−アルキル、Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル、ＮＨ−ＣＯ−アルキル、ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル、Ｓ（Ｏ）_ｎ−アルキル、ＳＯ_２−ＮＨ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ（アルキル）_２またはＮＨ_２によって置換されていても良く（アルキルは好ましくはＣ_１−３−アルキルを意味する。）；
Ｒ^５がＨまたはＦを表し；
Ｒ^６およびＲ^７が互いに独立に、Ｈ、（フッ素化されていても良い）Ｃ_１−３−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−４−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−４−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲンを表し；
Ｒ^８が分岐Ｃ_１−５−アルキル基またはシクロヘキシルを表し；
Ｒ^９がＨまたはＦを表す、式（Ｉ）の化合物または（Ｉａ）である。

【0095】

さらに、（単独でまたは組み合わせて）
Ｒ^１が−Ｌ−＃１、ＣＯＯＨまたはＨを表し、
Ｒ^２およびＲ^４がＨを表し、またはＲ^２およびＲ^４が一緒になって（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ_２−ＣＨＲ^１１−または−ＣＨＲ^１１−ＣＨ_２−を表し（Ｒ^１１はＨを表す。）、またはＲ^４が−Ｌ−＃１を表し、Ｒ^２がＨを表し；
ＡがＣＯを表し、
Ｒ^３が、−（ＣＨ_２）ＯＨ、−ＣＨ（ＣＨ_３）ＯＨ、−ＣＨ_２ＳＣＨ_２ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨＣＯＣＨ_３、−ＣＨ（ＣＨ_３）ＯＣＨ_３、フェニル基（１から３個のハロゲン原子、１から３個のアミノ基または１から３個のアルキル基（ハロゲン化されていても良い）によって置換されていても良い。）を表し、または−Ｌ−＃１を表し、
Ｒ^５がＨを表し、
Ｒ^６およびＲ^７が互いに独立に、Ｈ、Ｃ_１−３−アルキルまたはハロゲンを表し；特には、Ｒ^６およびＲ^７がＦを表し；
Ｒ^８がＣ_１−４−アルキル（好ましくはｔｅｒｔ−ブチル）またはシクロヘキシルを表し；および／または
Ｒ^９がＨを表す場合が好ましい。

【0096】

さらに、本発明によれば、
Ｒ^１が−Ｌ−＃１、ＣＯＯＨまたはＨを表し、
Ｒ^２およびＲ^４がＨを表し、またはＲ^２およびＲ^４が一緒になって（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ_２−ＣＨＲ^１１−または−ＣＨＲ^１１−ＣＨ_２−を表し（Ｒ^１１はをＨ表す。）、
ＡがＣＯを表し、
Ｒ^３が、−（ＣＨ_２）ＯＨ、−ＣＨ（ＣＨ_３）ＯＨ、−ＣＨ_２ＳＣＨ_２ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨＣＯＣＨ_３、−ＣＨ（ＣＨ_３）ＯＣＨ_３、フェニル基（１から３個のハロゲン原子、１から３個のアミノ基または１から３個のアルキル基（ハロゲン化されていても良い）によって置換されていても良い。）を表し、または−Ｌ−＃１を表し、
Ｒ^５がＨを表し、
Ｒ^６およびＲ^７が互いに独立に、Ｈ、Ｃ_１−３−アルキルまたはハロゲンを表し；特には、Ｒ^６およびＲ^７がＦを表し；
Ｒ^８がＣ_１−４−アルキル（好ましくはｔｅｒｔ−ブチル）を表し；
Ｒ^９がＨを表す場合が好ましい。

【0097】

他の特に好ましい化合物は、下記式式（ＩＩ）または（ＩＩａ）を有する。

【0098】

式（ＩＩ）：ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマー。

【化8】

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【0099】

式中、
Ｒ^１はＨ、−Ｌ−バインダー、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｚは−Ｈ、−ＮＨＹ^３、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ハロゲン、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_０−３−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ_２Ｗ）Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＮＨ_２、ＳＯ_３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ（ＮＨ_２）ＣＯＯＨまたは−（ＣＯ−ＮＨ−ＣＨＹ^４）_１−３ＣＯＯＨを表し、ＷはＨまたはＯＨを表し、
Ｙ^４は、−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６アルキルを表すか、−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し；
Ｒ^２はＨ、−ＭＯＤ、−ＣＯ−ＣＨＹ^４−ＮＨＹ^５または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｙ^４は、−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６アルキルを表すか、−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し、Ｙ^５はＨまたは−ＣＯ−ＣＨＹ^６−ＮＨ_２を表し、Ｙ^６は直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表し、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し；
Ｒ^４はＨ、−Ｌ−バインダー、−ＳＧ_ｌｙｓ−（ＣＯ）_０−１−Ｒ^４′、−ＣＯ−ＣＨＹ^４−ＮＨＹ^５または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、
ＳＧｌｙｓはリソソーム酵素によって開裂され得る基、特にはジペプチドもしくはトリペプチドからなる基を表し、Ｒ^４′はＣ_１−１０−アルキル、Ｃ_５−１０−アリールまたはＣ_６−１０−アラルキル、Ｃ_５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリール、Ｃ_５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルコキシ、Ｃ_１−１０−アルコキシ、Ｃ_６−１０−アリールオキシまたはＣ_６−１０−アラルコキシ、Ｃ_５−１０−ヘテロアラルコキシ、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリールオキシ、Ｃ_５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは、−ＮＨ_２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）_２、ＮＨ−ＣＯ−アルキル、Ｎ（アルキル）−ＣＯアルキル、−ＳＯ_３Ｈ、−ＳＯ_２ＮＨ_２、−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ_２、−ＣＯＮ（アルキル）_２または−ＯＨ、−Ｈまたは基−Ｏ_ｘ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙ−Ｒ^４″（ｘは０または１を表し、ｖは１から２０の数字を表し、Ｒ^４″は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ_１−１２−アルキル）、−ＣＨ_２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯＯＨまたは−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＮＨ_２を表す。）によってモノ置換もしくは多置換されていても良く；
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し；
Ｙ^４は、−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し、Ｙ^５はＨまたは−ＣＯ−ＣＨＹ^６−ＮＨ_２を表し、Ｙ^６は直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表し；
またはＲ^２およびＲ^４が一緒になって（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ_２−ＣＨＲ^１１−または−ＣＨＲ^１１−ＣＨ_２−を表し、Ｒ^１１はＨ、ＮＨ_２、ＳＯ_３Ｈ、ＣＯＯＨ、ＳＨまたはＯＨを表し；
ＡはＣＯ、ＳＯ、ＳＯ_２、ＳＯ_２ＮＨまたはＣＮＮＨ_２を表し；
Ｒ^３は、−Ｌ−バインダー、−ＭＯＤまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくは−Ｌ−バインダーまたはＣ_１−１０−アルキル、Ｃ_６−１０−アリールまたはＣ_６−１０−アラルキル、Ｃ_５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリールまたはＣ_５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個のＯ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（Ｏ）_ｎ−アルキル基、１から３個の−ＳＯ_２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）_２基、１から３個の−ＮＨ_２基または１から３個の−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ基によって置換されていても良く、Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、−ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨ、−（ＣＨ_２）_０−３−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ_３）Ｚ′、−（ＣＨ_２）_０−３−ＣＨ（ＮＨ_２）Ｚ′または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し（「アルキル」は好ましくは、を表す。Ｃ_１−１０−アルキル）；
Ｒ^５は、Ｈ、ＮＨ_２、ＮＯ_２、ハロゲン（特にはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ）、−ＣＮ、ＣＦ_３、−ＯＣＦ_３、−ＣＨ_２Ｆ、−ＣＨ_２Ｆ、ＳＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｚは−Ｈ、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ハロゲン、ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し；
Ｒ^６およびＲ^７は互いに独立に、Ｈ、シアノ、（フッ素化されていても良い）Ｃ_１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルキニル、ヒドロキシ、ＮＯ_２、ＮＨ_２、ＣＯＯＨまたはハロゲン（特にはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ）を表し、
Ｒ^８は、（フッ素化されていても良い）Ｃ_１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルキニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_４−１０−シクロアルキルまたは−（ＣＨ_２）_０−２−（ＨＺ^２）を表し、ＨＺ^２はＮ、ＯおよびＳからなる群から選択される２個以下のヘテロ原子を有する４から７員複素環を表し、これらの基のそれぞれは−ＯＨ、ＣＯ_２ＨまたはＮＨ_２によって置換されていても良く；
Ｒ^９はＨ、Ｆ、ＣＨ_３、ＣＦ_３、ＣＨ_２ＦまたはＣＨＦ_２を表し；
−ＭＯＤは−（ＮＲ^１０）_ｎ−（Ｇ１）_ｏ−Ｇ２−Ｇ３を表し、
Ｒ^１０はＨまたはＣ_１−Ｃ_３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨＣＯ−または−ＣＯＮＨ−を表し（Ｇ１が−ＮＨＣＯ−を表す場合、Ｒ^１０はＮＨ_２を表さない。）；
ｎは０または１を表し；
ｏは０または１を表し；
Ｇ２は直鎖および／または分岐の炭化水素基を表し、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ_２、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣＯ−、ＣＯＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−ＳＯ_２ＮＲｙＮＲｙ−、−ＣＯＮＲｙＮＲｙ−（ＲｙはＨ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、それらはそれぞれ、ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。）、−ＣＯ−、−ＣＲ^ｘ＝Ｎ−Ｏ−（ＲｘはＨ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す。）の１以上によって１回もしくは複数回中断されていても良く、何らかの側鎖を含む前記炭化水素鎖は、−ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、Ｇ３は−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し、基−ＭＯＤは好ましくは、少なくとも１個の基−ＣＯＯＨを有する。

【0100】

式（ＩＩ）のＫＳＰ阻害剤のバインダー複合体の場合、Ｒ^１、Ｒ^３およびＲ^４のうちの多くとも一つの代表的なもの（上記の条件のうちの一つに代わって）が−Ｌ−バインダーを表すことができ、Ｌはリンカーを表し、バインダーは抗体を表し、その抗体は複数の活性化合物分子に結合していても良い。

【0101】

式（ＩＩａ）ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマー。

【化9】

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【0102】

式中、
Ｒ^１は−Ｌ−バインダー、Ｈまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｚは−Ｈ、−ＮＨＹ^３、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ハロゲン、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_０−３−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′または−ＣＨ（ＣＨ_２Ｗ）Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＮＨ_２、ＳＯ_３Ｈ、ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ（ＮＨ_２）ＣＯＯＨまたは−（ＣＯ−ＮＨ−ＣＨＹ^４）_１−３ＣＯＯＨを表し；ＷはＨまたはＯＨを表し；
Ｙ^４は、−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６アルキルを表すか、−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し；
Ｒ^２およびＲ^４は互いに独立に、−ＳＧ_ｌｙｓ−（ＣＯ）_０−１−Ｒ^４′、Ｈ、−ＣＯ−ＣＨＹ^４−ＮＨＹ^５または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表すか、Ｒ^２およびＲ^４が一緒になって（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ_２−ＣＨＲ^１１−または−ＣＨＲ^１１−ＣＨ_２−を表し、またはＲ^２がＨ、−ＣＯ−ＣＨＹ^４−ＮＨＹ^５または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｒ^４は−Ｌ−＃１を表し、Ｒ^１１はＨ、ＮＨ_２、ＳＯ_３Ｈ、ＣＯＯＨ、ＳＨ、ハロゲン（特にはＦまたはＣｌ）、Ｃ_１−４−アルキル、Ｃ_１−４−ハロアルキル、Ｃ_１−４−アルコキシ、ヒドロキシル置換されたＣ_１−４−アルキル、ＣＯＯ（Ｃ_１−４−アルキル）またはＯＨを表し；
ＳＧｌｙｓはリソソーム酵素によって開裂され得る基、特にはジペプチドもしくはトリペプチドからなる基を表し、Ｒ^４′はＣ_１−１０−アルキル、Ｃ_５−１０−アリールまたはＣ_６−１０−アラルキル、Ｃ_５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリール、Ｃ_５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルコキシ、Ｃ_１−１０−アルコキシ、Ｃ_６−１０−アリールオキシまたはＣ_６−１０−アラルコキシ、Ｃ_５−１０−ヘテロアラルコキシ、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリールオキシ、Ｃ_５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは、−ＮＨ_２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）_２、ＮＨ−ＣＯ−アルキル、Ｎ（アルキル）−ＣＯアルキル、−ＳＯ_３Ｈ、−ＳＯ_２ＮＨ_２、−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ_２、−ＣＯＮ（アルキル）_２または−ＯＨ、−Ｈまたは基−Ｏ_ｘ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙ−Ｒ^４″（ｘは０または１を表し、ｖは１から２０の数字を表し、Ｒ^４″は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ_１−１２−アルキル）、−ＣＨ_２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯＯＨまたは−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＮＨ_２を表す。）によってモノ置換もしくは多置換されていても良く；
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し；
Ｙ^４は、−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し、Ｙ^５はＨまたは−ＣＯ−ＣＨＹ^６−ＮＨ_２を表し、Ｙ^６は直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表し；
Ａは、ＣＯ、ＳＯ、ＳＯ_２、ＳＯ_２ＮＨまたはＣＮＮＨ_２を表し；
Ｒ^３は、−Ｌ−バインダーまたは置換されていても良いアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくは−Ｌ−バインダーまたはＣ_１−１０−アルキル、Ｃ_６−１０−アリールまたはＣ_６−１０−アラルキル、Ｃ_５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリールまたはＣ_５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個のＯ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（Ｏ）_ｎ−アルキル基、１から３個の−ＳＯ_２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）_２基、１から３個の−ＮＨ_２基または１から３個の−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ基によって置換されていても良く、Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、−ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨ、−（ＣＨ_２）_０−３−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ_３）Ｚ′、−（ＣＨ_２）_０−３−ＣＨ（ＮＨ_２）Ｚ′または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し（「アルキル」は好ましくは、Ｃ_１−１０−アルキルを表す。）；
Ｒ^５はＨ、Ｆ、ＮＨ_２、ＮＯ_２、ハロゲン、ＳＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、−ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し；
Ｌはリンカーを表し、バインダーはバインダーまたはそれの誘導体を表し、前記バインダーは複数の活性化合物分子に結合していても良く、
Ｒ^６およびＲ^７は互いに独立に、Ｈ、シアノ、（フッ素化されていても良い）Ｃ_１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲンを表し、
Ｒ^８は（フッ素化されていても良い）Ｃ_１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_４−１０−シクロアルキルまたは置換されていても良いオキセタンを表し；
Ｒ^９はＨ、Ｆ、ＣＨ_３、ＣＦ_３、ＣＨ_２ＦまたはＣＨＦ_２を表す。

【0103】

本発明による好ましいものは、さらに、下記のＫＳＰ阻害剤／抗体複合体である。

【0104】

式（ＩＩｂ）：

【化10】

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【0105】

式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８およびＲ^９は式（ＩＩ）もしくは（ＩＩａ）でのものと同じ意味を有し、ＡはＣＯを表し、Ｂは単結合、−Ｏ−ＣＨ_２−または−ＣＨ_２−Ｏ−を表し、Ｒ^２０はＮＨ_２、Ｆ、ＣＦ_３またはＣＨ_３を表し、ｎは０、１または２を表す。

【0106】

式（ＩＩｃ）：

【化11】

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【0107】

式中、Ａ、Ｒ^１、Ｒ^３、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８およびＲ^９は式（ＩＩ）もしくは（ＩＩａ）でのものと同じ意味を有し、Ａは好ましくはＣＯを表し、Ｒ^３は−ＣＨ_２ＯＨ、−ＣＨ_２ＯＣＨ_３、ＣＨ（ＣＨ_３）ＯＨまたはＣＨ（ＣＨ_３）ＯＣＨ_３を表す。

【0108】

式（ＩＩｄ）：

【化12】

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【0109】

式中、Ａ、Ｒ^３、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８およびＲ^９は式（ＩＩ）もしくは（ＩＩａ）でのものと同じ意味を有し、Ａは好ましくはＣＯを表し、Ｒ^３は−ＣＨ_２−Ｓ_ｘ−（ＣＨ_２）_０−４−ＣＨＹ^５−ＣＯＯＨを表し、ｘは０または１を表し、Ｙ^５はＨまたはＮＨＹ^６を表し、Ｙ^６はＨまたは−ＣＯＣＨ_３を表す。

【0110】

式（ＩＩｅ）：

【化13】

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【0111】

式中、Ａ、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８およびＲ^９は式（ＩＩ）もしくは（ＩＩａ）でのものと同じ意味を有し、Ｒ^１は−Ｌ−バインダーを表す。

【0112】

式（ＩＩｉ）：

【化14】

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【0113】

式中、Ａ、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８およびＲ^９は式（ＩＩ）もしくは（ＩＩａ）でのものと同じ意味を有し、Ｒ^４は−Ｌ−バインダー、好ましくは、開裂後にＲ^４＝Ｈとなるように酵素的に開裂可能なバインダーを表す。Ｒ^１またはＲ^３は特に好ましくは、−ＭＯＤを表す。

【0114】

式（ＩＩｊ）：

【化15】

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【0115】

式中、
Ｒ^３は−Ｌ−＃１を表し；
ＡはＣＯを表し；
Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８およびＲ^９は、式（Ｉ）でのものと同じ意味を有する。

【0116】

式（ＩＩｋ）：

【化16】

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【0117】

式中、
Ｒ^１は−Ｌ−＃１を表し；
ＡはＣＯを表し、Ｒ^３は−ＣＨ_２ＯＨを表し；
Ｒ^３、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８およびＲ^９は、式（Ｉ）でのものと同じ意味を有する。

【0118】

さらに、式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｉ）、（ＩＩｊ）および（ＩＩｋ）の化合物において（単独でまたは組み合わせて）、
ＺがＣｌまたはＢｒを表し；
Ｒ^１が−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｚが−ＣＯＯＨまたは−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２を表し、Ｙ^２が−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_０−３−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^１がＨ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_０−３−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し；
Ｙ^１がＨを表し、Ｙ^２が−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_３−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｚ′を表し、Ｚ′が−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ^１がＨを表し、Ｙ^２が−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｚ′を表し、Ｚ′が−（ＣＯＮＨＣＨＹ^４）_２ＣＯＯＨを表し；
Ｙ^１がＨを表し、Ｙ^２が−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｚ′を表し、Ｚ′が−（ＣＯＮＨＣＨＹ^４）_２ＣＯＯＨを表し、Ｙ^４基の一方がｉ−プロピルを表し、他方が−（ＣＨ_２）_３−ＮＨＣＯＮＨ_２を表し；
Ｙ^１がＨを表し、Ｙ^２が−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｚ′を表し、Ｚ′が−（ＣＯＮＨＣＨＹ^４）_２ＣＯＯＨを表し、Ｙ^４基の一方が−ＣＨ_３を表し、他方が−（ＣＨ_２）_３−ＮＨＣＯＮＨ_２を表し；
Ｙ^４が−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表し；
少なくとも一方のＹ^４の代表的なものがｉ−プロピルおよび−ＣＨ_３からなる群から選択され；
Ｙ^１がＨを表し、Ｙ^２が−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｚ′を表し、Ｚ′が−ＣＯＮＨＣＨＹ^４ＣＯＯＨを表し、Ｙ^４が−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し；
Ｙ^４がアミノベンジルを表し；
Ｒ^２が−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｚが−ＳＹ^３を表し；
Ｒ^４が−ＣＯ−ＣＨＹ^４−ＮＨＹ^５を表し、Ｙ^５がＨを表し；
Ｒ^４が−ＣＯ−ＣＨＹ^４−ＮＨＹ^５を表し、Ｙ^５が−ＣＯ−ＣＨＹ^６−ＮＨ_２を表し；
Ｙ^４が、−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表す場合が好ましい。

【0119】

さらに、式（Ｉ）または（ＩＩ）において、Ｒ^１、Ｒ^２またはＲ^３が−ＭＯＤを表す場合が好ましい。

【0120】

特に好ましくは、Ｒ^３は−ＭＯＤを表し、Ｒ^１またはＲ^４は−Ｌ−＃１または−Ｌ−バインダーを表し、
−ＭＯＤは−（ＮＲ^１０）_ｎ−（Ｇ１）_ｏ−Ｇ２−Ｇ３を表し、
Ｒ^１０はＨまたはＣ_１−Ｃ_３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨＣＯ−または−ＣＯＮＨ−（Ｇ１が−ＮＨＣＯ−を表す場合、Ｒ^１０はＮＨ_２を表さない。）を表し；
ｎは０または１を表し；
ｏは０または１を表し；
Ｇ２は直鎖および／または分岐の炭化水素基を表し、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ_２、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣＯ−、ＣＯＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−ＳＯ_２ＮＲｙＮＲｙ−、−ＣＯＮＲｙＮＲｙ−（ＲｙはＨ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、それらはそれぞれ、ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、−ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。）、−ＣＯ−、または−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−（ＲｘはＨ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す。）の１以上によって１回もしくは複数回中断されていても良く、何らかの側鎖を含む前記炭化水素鎖は、ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、Ｇ３は−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し、基−ＭＯＤは好ましくは少なくとも１個の基−ＣＯＯＨを有する。

【0121】

特に好ましくは、基−ＭＯＤは、例えばベタイン基において（好ましくは末端）−ＣＯＯＨ基を有する。好ましくは、基−ＭＯＤは、式−ＣＨ_２−Ｓ_ｘ−（ＣＨ_２）_０−４−ＣＨＹ^５−ＣＯＯＨを有し、ｘは０または１であり、Ｙ^５はＨまたはＮＨＹ^６を表し、Ｙ^６はＨまたは−ＣＯＣＨ_３を表す。

【0122】

他の特に好ましい化合物は、下記の式（ＩＩＩ）を有し、ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマーである。

【化17】

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【0123】

式中、
Ｒ^１は−Ｌ−バインダー、Ｈまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｚは−Ｈ、−ＮＨＹ^３、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ハロゲン、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_０−３−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′または−ＣＨ（ＣＨ_２Ｗ）Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＮＨ_２、ＳＯ_３Ｈ、ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ（ＮＨ_２）ＣＯＯＨまたは−（ＣＯ−ＮＨ−ＣＨＹ^４）_１−３ＣＯＯＨを表し；
Ｙ^４は−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６アルキルを表すか、−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し；
Ｒ^２およびＲ^４は互いに独立に、Ｈ、−ＳＧ_ｌｙｓ−（ＣＯ）_０−１−Ｒ^４′、−ＣＯ−ＣＨＹ^４−ＮＨＹ^５または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、
またはＲ^２およびＲ^４が一緒になって（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ_２−ＣＨＲ^１１−または−ＣＨＲ^１１−ＣＨ_２−を表し、Ｒ^１１はＨ、ＮＨ_２、ＳＯ_３Ｈ、ＣＯＯＨ、ＳＨ、ハロゲン（特にはＦまたはＣｌ）、Ｃ_１−４−アルキル、Ｃ_１−４−ハロアルキル、Ｃ_１−４−アルコキシ、ヒドロキシル置換されたＣ_１−４−アルキル、ＣＯＯ（Ｃ_１−４−アルキル）またはＯＨを表し；
ＳＧｌｙｓはリソソーム酵素によって開裂され得る基、特にはジペプチドもしくはトリペプチドからなる基を表し、Ｒ^４′はＣ_１−１０−アルキル、Ｃ_５−１０−アリールまたはＣ_６−１０−アラルキル、Ｃ_５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリール、Ｃ_５−１０−複素環アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルコキシ、Ｃ_１−１０−アルコキシ、Ｃ_６−１０−アリールオキシまたはＣ_６−１０−アラルコキシ、Ｃ_５−１０−ヘテロアラルコキシ、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリールオキシ、Ｃ_５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは、−ＮＨ_２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）_２、ＮＨ−ＣＯ−アルキル、Ｎ（アルキル）−ＣＯアルキル、−ＳＯ_３Ｈ、−ＳＯ_２ＮＨ_２、−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ_２、−ＣＯＮ（アルキル）_２または−ＯＨ、−Ｈまたは基−Ｏ_ｘ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｙ−Ｒ^４″（ｘは０または１を表し、ｖは１から２０の数字を表し、Ｒ^４″は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ_１−１２−アルキル）、−ＣＨ_２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯＯＨまたは−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＮＨ_２を表す。）によってモノ置換もしくは多置換されていても良く；
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し；
Ｙ^４は、−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し、Ｙ^５はＨまたは−ＣＯ−ＣＨＹ^６−ＮＨ_２を表し、Ｙ^６は直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表し；
ＡはＣＯ、ＳＯ、ＳＯ_２、ＳＯ_２ＮＨまたはＣＮＮＨ_２を表し；
Ｒ^３は−Ｌ−バインダーまたは置換されていても良いアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、または−ＣＨ_２−Ｓ_ｘ−（ＣＨ_２）_０−４−ＣＨＹ^５−ＣＯＯＨを表し、ｘは０または１を表し、Ｙ^５はＨまたはＮＨＹ^６を表し、Ｙ^６はＨまたは−ＣＯＣＨ_３、好ましくは−Ｌ−バインダーまたはＣ_１−１０−アルキル、Ｃ_６−１０−アリールまたはＣ_６−１０−アラルキル、Ｃ_５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリールまたはＣ_５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個のＯ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（Ｏ）_ｎ−アルキル基、１から３個の−ＳＯ_２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）_２基、１から３個の−ＮＨ_２基または１から３個の−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ基によって置換されていても良く、Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、−ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨ、−（ＣＨ_２）_０−３−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ_３）Ｚ′、−（ＣＨ_２）_０−３−ＣＨ（ＮＨ_２）Ｚ′または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し（「アルキル」は好ましくは、を表す。Ｃ_１−１０−アルキル）；
Ｒ^５はＨ、Ｆ、ＮＨ_２、ＮＯ_２、ハロゲン、ＳＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、−ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２は互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３はＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′はＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し；
Ｌはリンカーを表し、バインダーは抗体を表し、前記バインダーは複数の活性化合物分子に結合していても良く、
Ｒ^６およびＲ^７は互いに独立に、Ｈ、シアノ、（フッ素化されていても良い）Ｃ_１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲンを表し、
Ｒ^８は（フッ素化されていても良い）Ｃ_１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_４−１０−シクロアルキルまたは置換されていても良いオキセタンを表し；
Ｒ^９はＨ、Ｆ、ＣＨ_３、ＣＦ_３、ＣＨ_２ＦまたはＣＨＦ_２を表す。

【0124】

さらに、（単独でまたは組み合わせて）式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｉ）、（ＩＩｊ）、（ＩＩｋ）または（ＩＩＩ）において、
ＺがＣｌまたはＢｒを表し；
Ｒ^１が−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｚが−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２を表し、Ｙ^２が−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_０−３−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^１がＨ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_０−３−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し；
Ｙ^１がＨを表し、Ｙ^２が−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_３−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｚ′を表し、Ｚ′がを−ＣＯＯＨ表し；
Ｙ^１がＨを表し、Ｙ^２が−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｚ′を表し、Ｚ′が−（ＣＯＮＨＣＨＹ^４）_２ＣＯＯＨを表し；
Ｙ^１がＨを表し、Ｙ^２が−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｚ′を表し、Ｚ′が−（ＣＯＮＨＣＨＹ^４）_２ＣＯＯＨを表し、一方のＹ^４を代表するものがｉ−プロピルを表し、他方が−（ＣＨ_２）_３−ＮＨＣＯＮＨ_２を表し；
Ｙ^１がＨを表し、Ｙ^２が−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｚ′を表し、Ｚ′が−（ＣＯＮＨＣＨＹ^４）_２ＣＯＯＨを表し、一方のＹ^４を代表するものが−ＣＨ_３を表し、他方が−（ＣＨ_２）_３−ＮＨＣＯＮＨ_２を表し；
Ｙ^４が、−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表し；
少なくとも一方のＹ^４を代表するものがｉ−プロピルおよび−ＣＨ_３からなる群から選択され；
Ｙ^１がＨを表し、Ｙ^２が−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｚ′を表し、Ｚ′が−ＣＯＮＨＣＨＹ^４ＣＯＯＨを表し、Ｙ^４が−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し；
Ｙ^４がアミノベンジルを表し；
Ｒ^２が−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｚが−ＳＹ^３を表し；
Ｒ^４が−ＣＯ−ＣＨＹ^４−ＮＨＹ^５を表し、Ｙ^５がＨを表し；
Ｒ^４が−ＣＯ−ＣＨＹ^４−ＮＨＹ^５を表し、Ｙ^５が−ＣＯ−ＣＨＹ^６−ＮＨ_２を表し；および／または
Ｙ^４が、−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表す場合が好ましい。

【0125】

好ましいものはさらに、
Ｒ^１がＨ、−Ｌ−＃１または−Ｌ−バインダー、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｚが−Ｈ、−ＮＨＹ^３、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ハロゲン、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２が互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_０−３−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ_２Ｗ）Ｚ′を表し、Ｙ^３がＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′がＨ、ＮＨ_２、ＳＯ_３Ｈ、ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ（ＮＨ_２）ＣＯＯＨまたは−（ＣＯ−ＮＨ−ＣＨＹ^４）_１−３ＣＯＯＨを表し、ＷがＨまたはＯＨを表し、
Ｙ^４が、−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６アルキルを表すか、−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し；
Ｒ^２がＨ、−ＣＯ−ＣＨＹ^４−ＮＨＹ^５または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、
Ｚが−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２が互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３がＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′がＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し；
Ｙ^４が互いに独立に、−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し、Ｙ^５がＨまたは−ＣＯ−ＣＨＹ^６−ＮＨ_２を表し、Ｙ^６が直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表し；
Ｒ^４がＨまたは−Ｌ−＃１または−Ｌ−バインダーを表し（−Ｌ−＃１または−Ｌ−バインダーは、Ｒ^４をＨに変換する酵素的に開裂可能なリンカーである。）；
ＡがＣＯ、ＳＯ、ＳＯ_２、ＳＯ_２ＮＨまたはＣＮＮＨ_２を表し；
Ｒ^３が−Ｌ−＃１または−Ｌ−バインダー、−ＭＯＤまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくはＣ_１−１０−アルキル、Ｃ_６−１０−アリールまたはＣ_６−１０−アラルキル、Ｃ_５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリールまたはＣ_５−１０−複素環アルキル基を表し、それが１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個のＯ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（Ｏ）_ｎ−アルキル基、１から３個の−ＳＯ_２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）_２基、１から３個の−ＮＨ（（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−２０Ｈ）基、１から３個の−ＮＨ_２基または１から３個の−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ基によって置換されていても良く、Ｚが−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、−ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、Ｙ^１およびＹ^２が互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３がＨ、−（ＣＨ_２）_０−３−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ_３）Ｚ′、−（ＣＨ_２）_０−３−ＣＨ（ＮＨ_２）Ｚ′または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′がＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し（「アルキル」は好ましくはＣ_１−１０−アルキルである。）；
Ｒ^５がＨ、−ＭＯＤ、ＮＨ_２、ＮＯ_２、ハロゲン（特にはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ）、−ＣＮ、ＣＦ_３、−ＯＣＦ_３、−ＣＨ_２Ｆ、−ＣＨ_２Ｆ、ＳＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｚが−Ｈ、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ハロゲン、ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２が互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３がＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′がＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し；
Ｒ^６およびＲ^７が互いに独立に、Ｈ、シアノ、（フッ素化されていても良い）Ｃ_１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルキニル、ヒドロキシ、ＮＯ_２、ＮＨ_２、ＣＯＯＨまたはハロゲン（特にはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ）を表し、
Ｒ^８が（フッ素化されていても良い）Ｃ_１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−１０−アルキニルまたは（フッ素化されていても良い）Ｃ_４−_１０−シクロアルキルを表し；
置換基Ｒ^１およびＲ^３のうちの一つが−Ｌ−＃１または−Ｌ−バインダーを表し、
Ｌがリンカーを表し、＃１が抗体への結合を表し、バインダーが抗体を表し、
Ｒ^９がＨ、Ｆ、ＣＨ_３、ＣＦ_３、ＣＨ_２ＦまたはＣＨＦ_２を表し；
−ＭＯＤが−（ＮＲ^１０）_ｎ−（Ｇ１）_ｏ−Ｇ２−Ｇ３を表し、
Ｒ^１０がＨまたはＣ_１−Ｃ_３−アルキルを表し；
Ｇ１が−ＮＨＣＯ−または−ＣＯＮＨ−を表し（Ｇ１が−ＮＨＣＯ−を表す場合、Ｒ^１０はＮＨ_２を表さない。）；
ｎが０または１を表し；
ｏが０または１を表し；
Ｇ２が、直鎖および／または分岐の炭化水素基を表し、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ_２、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣＯ−、ＣＯＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−ＳＯ_２ＮＲｙＮＲｙ−、−ＣＯＮＲｙＮＲｙ−（ＲｙはＨ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、それらはそれぞれ、ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。）、−ＣＯ−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−（ＲｘはＨ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す、）の１以上によって１回もしくは複数回中断されていても良く、何らかの側鎖を含む前記炭化水素鎖は、−ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、Ｇ３が−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し、基−ＭＯＤが好ましくは少なくとも１個の基−ＣＯＯＨを有する、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）または（ＩＩＩ）の化合物ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマーである。

【0126】

好ましいものは、
Ｒ^１がＨ、−Ｌ−＃１または−Ｌ−バインダー、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｚが−Ｈ、−ＮＨＹ^３、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ハロゲン、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２が互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_０−３−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ_２Ｗ）Ｚ′を表し、Ｙ^３がＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′がＨ、ＮＨ_２、ＳＯ_３Ｈ、ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ（ＮＨ_２）ＣＯＯＨまたは−（ＣＯ−ＮＨ−ＣＨＹ^４）_１−３ＣＯＯＨを表し、ＷがＨまたはＯＨを表し、
Ｙ^４が、−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６アルキルを表すか、−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し；
Ｒ^２がＨ、−ＣＯ−ＣＨＹ^４−ＮＨＹ^５または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、
Ｚが−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２が互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３がＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′がＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し；
Ｙ^４が、−ＮＨＣＯＮＨ_２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ_２によって置換されていても良いアリールまたはベンジルを表し、Ｙ^５がＨまたは−ＣＯ−ＣＨＹ^６−ＮＨ_２を表し、Ｙ^６が直鎖もしくは分岐のＣ_１−６−アルキルを表し；
Ｒ^４がＨを表し、
ＡがＣＯ、ＳＯ、ＳＯ_２、ＳＯ_２ＮＨまたはＣＮＮＨ_２を表し；
Ｒ^３が、−Ｌ−＃１または−Ｌ−バインダー、−ＭＯＤまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくはＣ_１−１０−アルキル、Ｃ_６−１０−アリールまたはＣ_６−１０−アラルキル、Ｃ_５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ_１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ_６−１０−アリールまたはＣ_５−１０−複素環アルキル基を表し、それが１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個のＯ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（Ｏ）_ｎ−アルキル基、１から３個の−ＳＯ_２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）_２基、１から３個の−ＮＨ（（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１−２０Ｈ）基、１から３個の−ＮＨ_２基または１から３個の−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ基によって置換されていても良く、Ｚが−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、−ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、Ｙ^１およびＹ^２が互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３がＨ、−（ＣＨ_２）_０−３−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ_３）Ｚ′、−（ＣＨ_２）_０−３−ＣＨ（ＮＨ_２）Ｚ′または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′がＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し（「アルキル」は好ましくはＣ_１−１０−アルキルである。）；
Ｒ^５がＨ、−ＭＯＤ、ＮＨ_２、ＮＯ_２、ハロゲン（特にはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ）、−ＣＮ、ＣＦ_３、−ＯＣＦ_３、−ＣＨ_２Ｆ、−ＣＨ_２Ｆ、ＳＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚを表し、Ｚが−Ｈ、−ＯＹ^３、−ＳＹ^３、ハロゲン、ＮＨＹ^３、−ＣＯ−ＮＹ^１Ｙ^２または−ＣＯ−ＯＹ^３を表し、
Ｙ^１およびＹ^２が互いに独立に、Ｈ、ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｙ^３がＨまたは−（ＣＨ_２）_０−３Ｚ′を表し、Ｚ′がＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＯＨを表し；
Ｒ^６およびＲ^７が互いに独立に、Ｈまたはハロゲン（特にはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ）を表し；
Ｒ^８が（フッ素化されていても良い）Ｃ_１−１０−アルキルを表し；
置換基Ｒ^１およびＲ^３のうちの一つが−Ｌ−＃１または−Ｌ−バインダーを表し、
Ｌがリンカーを表し、＃１が抗体への結合を表し、バインダーが抗体を表し、
Ｒ^９がＨ、Ｆ、ＣＨ_３、ＣＦ_３、ＣＨ_２ＦまたはＣＨＦ_２を表し；
−ＭＯＤが−ＣＨ_２−Ｓ_ｘ−（ＣＨ_２）_０−４−ＣＨＹ^５−ＣＯＯＨを表し、ｘが０または１であり、Ｙ^５がＨまたはＮＨＹ^６を表し、Ｙ^６がＨまたは−ＣＯＣＨ_３を表す、さらには、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）または（ＩＩＩ）の化合物ならびにそれの塩、溶媒和物、および溶媒和物の塩である。

【0127】

好ましいものはさらに、例えばトリフルオロ酢酸などの酸とともに存在しても良い次の化合物である。これらの化合物は、リンカーを介して位置Ｒ^１、Ｒ^３およびＲ^４に相当する位置を介して抗体に結合していることができる（水素原子はリンカーによって置換されている。）。

【0128】

Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド；
（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−メチルブタンアミド（１：１）；
Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｓ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アセトアミド；
Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｓ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド；
Ｓ−（１−｛２−［（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル）アミノ］エチル｝−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル）−Ｌ−システイン；
Ｓ−（１−｛２−［（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル）アミノ］エチル｝−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル）−Ｌ−システイン；
Ｓ−［１−（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル］−Ｌ−システイン；
Ｎ−［１９−（３（Ｒ／Ｓ）−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｒ／Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝ホモシステイン；
Ｓ−｛（３Ｒ／Ｓ）−１−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル｝−Ｌ−システイン；
Ｓ−［（３Ｒ／Ｓ）−１−（２−｛［６−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）ヘキサノイル］アミノ｝エチル）−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル］−Ｌ−システイン；
Ｓ−｛１−［２−（｛［（１Ｒ，３Ｓ）−３−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）シクロペンチル］カルボニル｝アミノ）エチル］−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル｝−Ｌ−システイン；
Ｓ−（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）−Ｌ−システイン；
Ｎ^６−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル）−Ｎ^２−｛Ｎ−［６−（３−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝−Ｌ−リジン；
Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−Ｌ−グルタミン；
Ｎ^６−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル）−Ｌ−リジン；
Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−３，３，３−トリフルオロプロパンアミド；
Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−４−フルオロベンズアミド；
Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アセトアミド；
Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−４−（トリフルオロメチル）ベンズアミド；
（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタン酸；
（２Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（２−アミノエチル）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタンアミド；
４−［（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−３−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸；
４−［（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−２−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸；
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニン；
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｌ−セリン；
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｌ−アラニン；
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝グリシン；
Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−４−メチルベンズアミド；
Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−４−（メチルスルファニル）ベンズアミド；
（２Ｓ）−Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシプロパンアミド；
Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−（メチルスルファニル）アセトアミド；
（２Ｓ）−Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［４−ベンジル−１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシプロパンアミド；
メチル４−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−４−オキソブタノエート；
４−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−４−オキソブタン酸；
（２Ｒ）−２２−［（３Ｒ／Ｓ）−３−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル］−２−［（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）メチル］−４，２０−ジオキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−３，１９−ジアザドコサン−１−酸；
Ｎ−アセチル−Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｌ−システイン；
Ｎ−アセチル−Ｓ−［２−（［３−（Ｌ−アラニルアミノ）プロピル］｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｌ−システイン；
（２Ｓ）−Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝テトラヒドロフラン−２−カルボキサミド；
３−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）プロパン酸；
Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝ホモシステイン；
４−アミノ−Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝ベンズアミド；
４−［（２−｛［（２Ｒ）−２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−２−カルボキシエチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−３−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸；
４−［（２−｛［（２Ｒ）−２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−２−カルボキシエチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−２−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸。

【0129】

本発明による特に好ましいものは、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４およびＲ^５が上記で挙げた意味（例えば式（Ｉ）または（ＩＩ）について挙げたもの）を有する下記の式ＩＶの化合物である。

【化18】

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【0130】

特に好ましいものは、Ｒ^１およびＲ^５がＨまたは−Ｌ−＃１を表し；Ｒ^２およびＲ^４がＨを表し、またはＲ^２およびＲ^４が一緒になって（ピロリジン環を形成）−ＣＨ_２−ＣＨＲ^１１−または−ＣＨＲ^１１−ＣＨ_２−を表し、Ｒ^１１がＨを表し；Ｒ^３がＣＨ_２ＯＨ、ＣＨ（ＣＨ_３）ＯＨまたは−Ｌ−＃１を表し、置換基Ｒ^１およびＲ^３のうちの一つが−Ｌ−＃１を表す式ＩＶの化合物である。さらに、特に好ましいものは、Ｒ^１がＨまたはＣＯＯＨを表し；Ｒ^２およびＲ^５がＨを表し；Ｒ^４が−Ｌ−＃１を表し；Ｒ^３がＣＨ_２ＯＨまたはＣＨ（ＣＨ_３）ＯＨを表し、−Ｌ−＃１が、Ｒ^４をＨに変換させる酵素的に開裂可能なリンカーである式ＩＶの化合物である。

【0131】

リンカー
文献に、例えば抗体などのバインダーに有機分子を共有結合的にカップリング（結合）させるための多様な選択肢が開示されている（例えば、Ｋ． Ｌａｎｇ ａｎｄ Ｊ． Ｗ． Ｃｈｉｎ． Ｃｈｅｍ． Ｒｅｖ． ２０１４， １１４， ４７６４−４８０６， Ｍ． Ｒａｓｈｉｄｉａｎ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２０１３， ２４， １２７７−１２９４参照）。本発明に従って好ましいものは、遊離チオールとして既に存在しているか、ジスルフィド架橋の還元によって発生する抗体のシステイン残基の１以上の硫黄原子を介した、および／または抗体のリジン残基の１以上のＮＨ基を介した、ＫＳＰ阻害剤の抗体への結合である。しかしながら、チロシン残基を介して、グルタミン残基を介して、非天然アミノ酸の残基を介して、遊離カルボキシル基を介して、または抗体の糖残基を介して、ＫＳＰ阻害剤を抗体に結合させることも可能である。カップリングのためには、リンカーを用いる。リンカーは、イン・ビボで開裂可能なリンカーの群およびイン・ビボで安定なリンカーの群に分類することができる（Ｌ． Ｄｕｃｒｙ ａｎｄ Ｂ． Ｓｔｕｍｐ， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２１， ５−１３（２０１０）参照）。イン・ビボで開裂可能なリンカーは、イン・ビボで開裂可能な基を有し、そこで、イン・ビボで化学的に開裂可能な基とイン・ビボで酵素的に開裂可能な基の間で区別することが可能である。「イン・ビボで化学的に開裂可能な」および「イン・ビボで酵素的に開裂可能な」は、リンカーまたは基が循環中では安定であり、標的細胞でもしくは標的細胞内でのみ、そこでの化学的もしくは酵素的に異なる環境（比較的低いｐＨ；高いグルタチオン濃度；プロテアーゼ類などのリソソーム酵素、または例えば、β−グルクロニダーゼ類などのグリオシダーゼ類（ｇｌｙｏｓｉｄａｓｅｓ）の存在）によって開裂することで、低分子量ＫＳＰ阻害剤またはそれの誘導体を放出することを意味する。イン・ビボで化学的に開裂可能な基は、特にはジスルフィド、ヒドラゾン、アセタールおよびアミナールであり；酵素的にイン・ビボで開裂可能な基は、特にはリソソーム酵素によって開裂可能なものであり、特に２−８−オリゴペプチド基、特別にはトリ−もしくはジペプチド基またはグリコシドである。ペプチド開裂部位は、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２００２， １３， ８５５−８６９およびＢｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ ８ （１９９８） ３３４１−３３４６、さらにはＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． １９９８， ９， ６１８−６２６に開示されている。これらには、例えば、バリン−アラニン、バリン−リジン、バリン−シトルリン、アラニン−リジンおよびフェニルアラニン−リジン（適宜に、さらなるアミド基を有する）などがある。

【0132】

イン・ビボで安定なリンカーは、高い安定性（血漿中２４時間後に５％未満の代謝物）によって区別され、上記のようなイン・ビボで化学的または酵素的に開裂可能基を持たない。

【0133】

リンカー−Ｌ−は好ましくは、
下記の基本構造（ｉ）から（ｉｖ）：
（ｉ）−（ＣＯ）_ｍ−ＳＧ１−Ｌ１−Ｌ２−
（ｉｉ）−（ＣＯ）_ｍ−Ｌ１−ＳＧ−Ｌ１−Ｌ２−
（ｉｉｉ）−（ＣＯ）_ｍ−Ｌ１−Ｌ２−
（ｉｖ）−（ＣＯ）_ｍ−Ｌ１−ＳＧ−Ｌ２
のうちの一つを有し、
ｍは０または１であり；ＳＧは、（化学的にまたは酵素的に）イン・ビボで開裂可能な基（特に、ジスルフィド、ヒドラゾン、アセタールおよびアミナール；またはプロテアーゼによって開裂可能な２から８オリゴペプチド基）であり、ＳＧ１はオリゴペプチド基または好ましくはジペプチド基であり、Ｌ１は互いに独立に、イン・ビボで安定な有機基を表し、Ｌ２は、バインダーに対するカップリング基または単結合を表す。ここで、カップリングは好ましくは、抗体のシステイン残基またはリジン残基に対するものである。あるいは、カップリングは、抗体のチロシン残基、グルタミン残基または非天然アミノ酸に対するものであることができる。非天然アミノ酸は、例えば、アルデヒドまたはケト基（例えば、例えばホルミルグリシン）またはアジドもしくはアルキン基（Ｌａｎ ＆ Ｃｈｉｎ， Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｕｎｎａｔｕｒａｌ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｂｉｏｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ Ｌａｂｅｌｉｎｇ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ， Ｃｈｅｍ． Ｒｅｖ． ２０１４， １１４， ４７６４−４８０６参照）を含むことができる。

【0134】

本発明に従って特に好ましいものは、基本的リンカー構造（ｉｉｉ）である。代謝により、基本的リンカー構造（ｉｉｉ）を有する本発明による複合体の投与および抗体のシステインまたはリジン残基へのリンカーのカップリングによって、下記式のシステインまたはリジン誘導体が生じる。

【化19】

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【0135】

式中、Ｌ１は、各場合で、低分子量ＫＳＰ阻害剤、例えば式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃａ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩＩ）または（ＩＶ）の化合物に結合している。

【0136】

本発明に従って好ましいものはさらに、基本的リンカー構造（ｉｉ）および（ｉｖ）であり、特に結合が位置Ｒ^１でのものである場合、特には基Ｌ１が下記構造のうちの一つを有する場合である。

【0137】

（ａ）−ＮＨ−（ＣＨ_２）_０−４−（ＣＨＣＨ_３）_０−４−ＣＨＹ^５−ＣＯ−Ｙ^７［Ｙ^５は、ＨまたはＮＨＹ^６を表し、Ｙ^６は、Ｈまたは−ＣＯＣＨ_３を表し、Ｙ^７は、単結合または−ＮＨ−（ＣＨ_２）_０−_４−ＣＨＮＨ_２−ＣＯ−を表すことで、開裂後に、相当する構造−ＮＨ−（ＣＨ_２）_０−４−（ＣＨＣＨ_３）_０−４−ＣＨＹ^５−ＣＯＯＨまたは−ＮＨ−（ＣＨ_２）_０−４−（ＣＨＣＨ_３）_０−４−ＣＨＹ^５−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ_２）_０−４−ＣＨＮＨ_２−ＣＯＯＨが得られる。］。

【0138】

（ｂ）−ＣＨ_２−Ｓ_ｘ−（ＣＨ_２）_０−４−ＣＨＹ^５−ＣＯ−［ｘは０または１であり、Ｙ^５は、ＨまたはＮＨＹ^６を表し、Ｙ^６は、Ｈまたは−ＣＯＣＨ_３を表すことで、開裂後に、相当する構造−ＣＨ_２−Ｓ_ｘ−（ＣＨ_２）_０−４−ＣＨＹ^５−ＣＯＯＨが得られる。］。

【0139】

本発明に従って好ましいものは、位置Ｒ^４に結合した場合の、特にｍ＝０の場合の基本的リンカー構造（ｉ）でもある。

【0140】

リンカーがシステイン側鎖またはシステイン残基に結合している場合、Ｌ２は好ましくは、システインのスルフヒドリル基と反応する基から誘導される。これらには、ハロアセチル類、マレイミド類、アジリジン類、アクリロイル類、アリール化化合物、ビニルスルホン類、ピリジルジスルフィド類、ＴＮＢチオール類およびジスルフィド還元剤などがある。これらの基は一般に、スルフヒドリル結合と求電子的に反応して、スルフィド（例えばチオエーテル）またはジスルフィド架橋を形成する。好ましいものは、安定なスルフィド架橋である。Ｌ２は好ましくは

【化20】

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【0141】

であり、
＃^１は、抗体の硫黄原子への結合点を示し、
＃^２は、基Ｌ^１への結合点を示し、
Ｒ^２２は、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ、ＣＯＲ、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲ_２（Ｒは各場合で、Ｃ_１−３−アルキルを表す。）、ＣＯＮＨ_２、好ましくはＣＯＯＨを表す。

【0142】

Ｌ２について特に好ましいものは、

【化21】

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【0143】

であり、
＃^１は抗体の硫黄原子への結合点を示し、＃^２は活性化合物への結合点を示し、ｘは１または２を表し、Ｒ^２２はＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ、ＣＯＲ、ＣＯＮＲ_２、ＣＯＮＨＲ（Ｒは各場合で、Ｃ_１−３−アルキルを表す。）、ＣＯＮＨ_２、好ましくはＣＯＯＨを表す。ｘ＝１であり、Ｒ^２２がＣＯＯＨを表す場合が好ましい。

【0144】

本発明による複合体または本発明による複合体の混合物において、抗体のシステイン残基への結合が、好ましくは８０％強、特に好ましくは９０％強（各場合、抗体へのリンカーの結合の総数に基づいて）の範囲で、特に好ましくは式Ａ３またはＡ４の二つの構造のうちの一つとして存在する。ここで、式Ａ３またはＡ４の構造は通常は一緒に存在し、好ましくは抗体への結合の数に基づいて６０：４０から４０：６０の比率で存在する。そして、残りの結合は、下記構造として存在する。

【化22】

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【0145】

本発明によれば、Ｌ１は好ましくは、下記式によって表される。

【化23】

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【0146】

式中、
Ｒ^１０は、Ｈ、ＮＨ_２またはＣ_１−Ｃ_３−アルキルを表し；
Ｇ１は、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−または

【化24】

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【0147】

を表し；（Ｇ１が、ＮＨＣＯまたは

【化25】

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【0148】

を表す場合はＲ^１０は好ましくはＮＨ_２ではない。）。

【0149】

ｎは、０または１を表し；
ｏは、０または１を表し；
Ｇ２は、アリーレン基からの１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖および／または直鎖および／または分岐および／または環状のアルキレン基を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ_２、−ＮＲ^ｙ−、−ＮＲ^ｙＣＯ−、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲ^ｙ−、ＣＯＮＲ^ｙ−、−ＮＲ^ｙＮＲ^ｙ−、−ＳＯ_２ＮＲ^ｙＮＲ^ｙ−、−ＣＯＮＲ^ｙＮＲ^ｙ−（Ｒ^ｙは、Ｈ、フェニル、Ｃ_１−Ｃ_１０−アルキル、Ｃ_２−Ｃ_１０−アルケニルまたはＣ_２−Ｃ_１０−アルキニルを表し、それらはそれぞれＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。）、−ＣＯ−、−ＣＲ^ｘ＝Ｎ−Ｏ−（Ｒ^ｘは、Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_３−アルキルまたはフェニルを表す。）および／または４個以下のＮ、ＯおよびＳ、−ＳＯ−または−ＳＯ_２−からなる群から選択されるヘテロ原子を有する３から１０員の芳香族もしくは非芳香族複素環（好ましくは

【化26】

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【0150】

）の１以上によって１回もしくは複数回中断されていても良く、側鎖を含む炭化水素は、−ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。

【0151】

Ｇ２は、アリーレン基からの１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキレン基を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ_２、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−ＳＯ_２ＮＨＮＨ−、−ＣＯＮＨＮＨ−およびＮ、ＯおよびＳ、または−ＳＯ−からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５から１０員の芳香族または非芳香族複素環（好ましくは

【化27】

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【0152】

）の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、前記側鎖が存在する場合、それは−ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。

【0153】

Ｇ２は好ましくは、アリーレン基からの１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキレン基を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ_２、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−ＳＯ_２ＮＨＮＨ−、−ＣＯＮＨＮＨ−、−ＣＲ^ｘ＝Ｎ−Ｏ−（Ｒ^ｘは、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す。）およびＮ、ＯおよびＳ、−ＳＯ−または−ＳＯ_２−からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する３から１０員、例えば５から１０員の芳香族または非芳香族複素環（好ましくは

【化28】

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【0154】

）の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖を含む炭化水素鎖が存在する場合、それは−ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。

【0155】

Ｇ２におけるさらなる中断基は、好ましくは

【化29】

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【0156】

であり、
Ｒ^ｘは、Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_３−アルキルまたはフェニルを表す。

【0157】

ここで、＃^１はＫＳＰ阻害剤への結合であり、＃^２は抗体へのカップリング基への結合である（例えばＬ２）。

【0158】

アリーレン基および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキレン基の直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖は通常、言及される個々の数の炭素原子を有するα，ω−二価アルキル基を含む。次のもの：メチレン、エタン−１，２−ジイル（１，２−エチレン）、プロパン−１，３−ジイル（１，３−プロピレン）、ブタン−１，４−ジイル（１，４−ブチレン）、ペンタン−１，５−ジイル（１，５−ペンチレン）、ヘキサン−１，６−ジイル（１，６−ヘキシレン）、ヘプタン−１，７−ジイル（１，７−ヘキシレン）、オクタン−１，８−ジイル（１，８−オクチレン）、ノナン−１，９−ジイル（１，９−ノニレン）、デカン−１，１０−ジイル（１，１０−デシレン）を例として、そして好ましいものとして挙げることができる。しかしながら、炭化水素鎖におけるアルキレン基は分岐であることもでき、すなわち上記で言及の直鎖アルキレン基の１以上の水素原子がＣ_１−１０−アルキル基によって置換されていることで、側鎖を形成していることができる。炭化水素鎖はさらに、環状アルキレン基（シクロアルカンジイル）、例えば１，４−シクロヘキサンジイルまたは１，３−シクロペンタンジイルを含んでいても良い。これらの環状基は不飽和であっても良い。特に、その炭化水素基には、芳香族基（アリーレン基）、例えばフェニレンが存在しても良い。そして、環状アルキレン基およびアリーレン基において、やはり、１以上の水素原子がＣ_１−１０−アルキル基によって置換されていても良い。このようにして、分岐していても良い炭化水素鎖が形成される。この炭化水素鎖は、合計０から１００個の炭素原子、好ましくは１から５０個、特に好ましくは２から２５個の炭素原子を有する。

【0159】

側鎖が存在する場合、それは−ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって同一でまたは異なってモノ置換または多置換されていても良い。

【0160】

当該炭化水素鎖は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ_２、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−ＳＯ_２ＮＨＮＨ−、−ＣＯＮＨＮＨ−ならびにＮ、ＯおよびＳ、−ＳＯ−または−ＳＯ_２−からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５から１０員の芳香族または非芳香族複素環（好ましくは

【化30】

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【0161】

）によって同一でまたは異なって１回または複数回中断されていても良い。

【0162】

Ｇ２におけるさらなる中断基は好ましくは、

【化31】

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【0163】

である。

【0164】

好ましくは、リンカーは、下記式：

【化32】

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【0165】

に相当し、
ｍは、０または１を表し；
§は、活性化合物分子への結合を表し、
§§は、バインダーペプチドもしくはタンパク質への結合を表し、
Ｌ１およびＬ２は上記の意味を有する。

【0166】

特に好ましくは、Ｌ１は式−ＮＲ１１Ｂ−を有し、
Ｒ^１１は、ＨまたはＮＨ_２を表し；
Ｂは、−［（ＣＨ_２）_ｘ−（Ｘ^４）_ｙ］_ｗ−（ＣＨ_２）_ｚ−を表し、
ｗ＝０から２０であり；
ｘ＝０から５であり；
ｙ＝０または１であり；
ｚ＝０から５であり；
Ｘ^４は、−Ｏ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯ−または

【化33】

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【0167】

を表す。

【0168】

本発明に従って好ましいリンカーＬは、下記式：

【化34】

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【0169】

を有し、
＃３は、活性化合物分子への結合を表し、
＃４は、バインダーペプチドもしくはタンパク質への結合を表し、
Ｒ１１は、ＨまたはＮＨ_２を表し；
Ｂは、−［（ＣＨ_２）_ｘ−（Ｘ^４）_ｙ］_ｗ−（ＣＨ_２）_ｚ−を表し、
ｗ＝０から２０であり；
ｘ＝０から５であり；
ｙ＝０または１であり；
ｚ＝１から５であり；
Ｘ^４は、−Ｏ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯ−または

【化35】

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【0170】

を表す。

【0171】

上記で言及したリンカーは、リンカーがＲ１での水素原子の置換によってカップリングする式（Ｉ）または（ＩＩ）の複合体で、またはＲ４での開裂可能リンカーＳＧ１と組み合わせたものが特に好ましく、すなわちＲ１が−Ｌ−＃１を表し、またはＲ４が−ＳＧ１−Ｌ−＃１を表し、＃１が抗体への結合を表す。

【0172】

本発明に従って好ましいものはさらに、下記のリンカーである。すなわち、本発明による複合体において、または本発明による複合体の混合物において、抗体のシステイン残基への結合が、好ましくは８０％強、特に好ましくは９０％強（各場合で、抗体へのリンカーの結合の総数に基づいて）の程度まで、特に好ましくは式Ａ５またはＡ６の二つの構造のうちの一つとして存在する。

【化36】

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【0173】

式中、
＃^１は、抗体の硫黄原子への結合箇所を示し、
＃^２は、基Ｌ^１への結合箇所を示し、
Ｒ^２２は、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ、ＣＯＲ、ＣＯＮＲ_２、ＣＯＮＨＲ（Ｒは各場合で、Ｃ_１−３−アルキルを表す。）、ＣＯＮＨ_２、好ましくはＣＯＯＨを表す。

【0174】

ここで、式Ａ５またはＡ６の構造は通常は一緒に存在し、好ましくは抗体への結合数に基づいて６０：４０から４０：６０の比率である。残りの結合は、下記構造として存在する。

【化37】

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【0175】

システイン側鎖またはシステイン残基に結合した他のリンカー−Ｌ−は下記式を有する。

【化38】

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【0176】

式中、
§は、活性化合物分子への結合を表し、
§§は、バインダーペプチドもしくはタンパク質への結合を表し、
ｍは、０、１、２または３を表し；
ｎは、０、１または２を表し；
ｐは、０から２０を表し；
Ｌ３は、

【化39】

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【0177】

を表し、
ｏは、０または１を表し；
Ｇ３は、アリーレン基からの１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖および／または直鎖および／または環状アルキレン基を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ_２、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−ＳＯ_２ＮＨＮＨ−、−ＣＯＮＨＮＨ−およびＮ、ＯおよびＳ、−ＳＯ−またはＳＯ_２からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する３から１０員（好ましくは５から１０員）の芳香族もしくは非芳香族複素環（好ましくは

【化40】

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【0178】

）の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合、それは−ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。

【0179】

上記式において、好ましくは
ｍは、１を表し；
ｐは、０を表し；
ｎは、０を表し；
Ｌ３は

【化41】

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【0180】

を表し、
ｏは、０または１を表し；
Ｇ_３は、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｓ（ＣＨ_２）_ｔ（ＣＯＮＨ）_ｕＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｖ（ＣＨ_２）_ｗ−を表し、
ｓ、ｔ、ｖおよびｗはそれぞれ互いに独立に、０から２０であり、ｕは０または１である。

【0181】

上記の式§−（ＣＯ）ｍ−Ｌ１−Ｌ２−§§における好ましい基Ｌ１は下記のものであり、それらにおいて、ｒは各場合で互いに独立に、０から２０、好ましくは０から１５、特に好ましくは１から２０、特別に好ましくは２から１０の数字を表す。

【化42】

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【0182】

Ｌ１のさらなる例を表Ｃに示してあり、表中において、この基はボックスで強調してある。

【0183】

リンカー部分Ｌ１の例を、下記の表ＡおよびＡ′に示してある。その表にはさらに、Ｌ１のこれらの例が好ましく組み合わされる基Ｌ２、さらには好ましいカップリング箇所（Ｒ^１またはＲ^３またはＲ^４）およびｍについての好ましい値を示してあり、これはＬ１の前にカルボニル基があるか否かを問わない（§−（ＣＯ）ｍ−Ｌ１−Ｌ２−§§と比較）。これらのリンカーは好ましくは、システイン残基にカップリングしている。Ｌ２がコハク酸イミドであるかそれから誘導されている場合、このイミドは完全にまたは部分的に、上記のような加水分解された開鎖コハク酸アミドの形態であっても良い。Ｌ１に応じて、開鎖コハク酸アミドへのこの加水分解は、ほぼ明白であるか、全く存在しないことがある。

【0184】

表Ａ

【表1】

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【0185】

^＊＊特に好ましくは、これらの列で提供されるリンカーは、下記のものから選択されるリンカーＬ２に結合する。

【化43】

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【0186】

および／または

【化44】

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【0187】

式中、＃^１はバインダーの硫黄原子への結合箇所を示し、＃^２は基Ｌ^１への結合箇所を示し、Ｒ^２２は好ましくはＣＯＯＨを表す。本発明による複合体において、または本発明による複合体の混合物において、バインダーのシステイン残基への結合が、好ましくは８０％強、特に好ましくは９０％強（各場合で、バインダーへのリンカーの結合の総数に基づいて）の程度まで、特に好ましくは式Ａ７またはＡ８の二つの構造のうちの一つとして存在する。ここで、式Ａ７またはＡ８の構造は通常は一緒に存在し、好ましくはバインダーへの結合数に基づいて６０：４０から４０：６０の比率である。残りの結合は、下記構造として存在する。

【化45】

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【0188】

表Ａ′

【表2】

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【0189】

^＊＊：表Ａにおける注^＊＊を参照する。

【0190】

^＊＊＊：この構造Ｌ２が存在する場合、同時に下記式の構造Ｌ２があっても良い。

【化46】

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【0191】

相当するリンカーを有する複合体の例は下記構造を有し、Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し、Ｌ１は上記の意味を有し、Ｌ２およびＬ３はＬ１と同じ意味を有し、ＡＫ１はシステイン残基を介して結合した抗ＣＤ１２３抗体を表し、ｎは１から１０の数字である。特に好ましくは、ＡＫ１は、ヒト、ヒト化またはキメラモノクローナル抗ＣＤ１２３抗体である。ここで、特に好ましいものは、マウス起源の抗体７Ｇ３または１２Ｆ１由来のキメラまたはヒト化抗ＣＤ１２３抗体である。特に好ましいものは、抗体ＴＰＰ−６０１３、ＴＰＰ−５９６８、ＴＰＰ−５９６９およびＴＰＰ−５９７１である。

【化47】

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【0192】

リンカーがリジン側鎖またはリジン残基に結合している場合、それは好ましくは、下記式を有する。

【化48】

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【0193】

式中、
§は活性化合物分子への結合を表し、
§§は、バインダーペプチドもしくはタンパク質への結合を表し、
ｘは０または１を表し、
ＳＧは、開裂可能基、好ましくは２から８オリゴペプチド、特に好ましくはジペプチドを表し、
Ｌ４は、単結合または基−（ＣＯ）_ｙ−Ｇ４−を表し、ｙは０または１を表し、
Ｇ４は、アリーレン基からの１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキレン基を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ_２、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−ＳＯ_２ＮＨＮＨ−、−ＣＯＮＨＮＨ−およびＮ、ＯおよびＳ、−ＳＯ−または−ＳＯ_２−からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５から１０員の芳香族または非芳香族複素環（好ましくは

【化49】

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【0194】

）の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合、それは−ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。

【0195】

下記の表Ｂは、リジン残基へのリンカーの例を提供するものである。その表はさらに、好ましいカップリング箇所（Ｒ^１−Ｒ^５）を提供する。最初の欄にはさらに、相当するリンカーを使用する実施例番号も記載されている。

【0196】

表Ｂ：リジンリンカー
−§−（ＳＧ）ｘ−Ｌ４−ＣＯ−§§

【表3】

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【0197】

相当するリンカーを有する複合体の例は、下記構造を有し、その構造において、Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し、Ｌ４は上記で提供の意味を有し、ＡＫ２はリジン残基を介して結合した抗体を表し、ｎは１から１０の数字である。ＡＫ２は、ヒト、ヒト化またはキメラモノクローナル抗ＣＤ１２３抗体またはそれの抗原結合性断片である。ここで、特に好ましいものは、マウス起源の抗体７Ｇ３または１２Ｆ１由来のキメラまたはヒト化抗ＣＤ１２３抗体である。特に好ましいものは、抗体ＴＰＰ−６０１３、ＴＰＰ−５９６８、ＴＰＰ−５９６９およびＴＰＰ−５９７１である。

【化50】

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【0198】

本発明に従って好ましいものはさらに、基本構造（ｉ）、（ｉｉ）または（ｉｖ）であり、それらにおいて、ＳＧ１またはＳＧはプロテアーゼによって開裂可能な基を表し、Ｌ１およびＬ２は上記で提供の意味を有する。特に好ましいものは、下記の基である。

【0199】

−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＣＯＮＨ−（これにより、アラニンのＣ末端アミドでのアミド結合の開裂）
−ＮＨ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−ＣＯＮＨ−（リジンのＣ末端アミドでのアミド結合の開裂）
−ＮＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＣＯＮＨ−（シトルリンのＣ末端アミドでのアミド結合の開裂）
−ＮＨ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＣＯＮＨ（リジンのＣ末端アミドでのアミド結合の開裂）
−ＮＨ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−ＣＯＮＨ−（リジンのＣ末端アミドでのアミド結合の開裂）
−ＮＨ−Ａｌａ−Ｃｉｔ−ＣＯＮＨ−（シトルリンのＣ末端アミドでのアミド結合の開裂）。

【0200】

ＳＧ１またはＳＧは特に好ましくは

【化51】

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【0201】

であり、
Ｘは、ＨまたはＣ_１−１０−アルキル基を表し、それは−ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、ＮＨ_２、−ＮＨ−ＣＮＮＨ_２またはスルホン酸によって置換されていても良い。

【0202】

下記の表Ｃは、リンカー部分−ＳＧ１−Ｌ１−または−Ｌ１−ＳＧ−Ｌ１−の例を提供するものであり、ＳＧ１およびＳＧはプロテアーゼによって開裂可能な基である。表Ｃはさらに、−ＳＧ１−Ｌ１−および−Ｌ１−ＳＧ−Ｌ１−のこれらの例が好ましく組み合わせる基Ｌ２、さらには好ましいカップリング箇所（Ｒ^１−Ｒ^５）およびｍについての好ましい値を示しており、従ってＬ１の前にカルボニル基にあるか否かは無関係である（§−（ＣＯ）ｍ−Ｌ１−Ｌ２−§§と比較）。これらのリンカーは、好ましくはシステイン残基にカップリングする。Ｌ１基は、ボックスで強調されている。しかしながら、これらの基Ｌ１は、上記の式§−（ＣＯ）ｍ−Ｌ１−Ｌ２−§§について提供の基Ｌ１のうちの一つによって置き換わっていることができる。Ｌ２がコハク酸アミドであるかそれから誘導されている場合、このアミドは完全にまたは部分的に、上記のような加水分解された開鎖コハク酸アミドの形態であっても良い。

【0203】

表Ｃ

【表4】

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【0204】

基本構造（ｉ）を有する複合体の例は下記構造を有し、Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し、Ｌ４はＬ１と同じ意味を有し、ＡＫ１はシステイン残基を介して結合した抗ＣＤ−１２３抗体を表し、ｎは１から１０の数字である。ここで、特に好ましいものは、マウス起源の抗体７Ｇ３または１２Ｆ１由来のキメラまたはヒト化抗ＣＤ１２３抗体である。特に好ましいものは、抗体ＴＰＰ−６０１３、ＴＰＰ−５９６８、ＴＰＰ−５９６９およびＴＰＰ−５９７１である。

【化52】

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【0205】

ＫＳＰ阻害剤−リンカー−中間体および複合体の製造
本発明による複合体は、最初に低分子量ＫＳＰ阻害剤にリンカーを提供することによって製造される。次に、このようにして得られた中間体をバインダー（好ましくは抗体）と反応させる。

【0206】

好ましくは、システイン残基へのカップリングのために、下記化合物のうちの一つを、システイン含有バインダー、例えばこの目的のために部分還元されていても良い抗体と反応させる。

【化53】

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【0207】

式中、
Ｒは−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し、
Ｋは、Ｃ_１−Ｃ_６−アルコキシまたは−ＯＨによって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ_１−Ｃ_６アルキルを表し、
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し、ＳＧ１、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は上記と同じ意味を有する。

【0208】

上記各化合物および下記化合物において、ｔｅｒｔ−ブチル基は、シクロヘキシルに置き換わっていても良い。

【0209】

その化合物は、例えば、それのトリフルオロ酢酸塩の形で用いることができる。例えば抗体などのバインダーとの反応の関しては、当該化合物は好ましくは、バインダーに関して２から１２倍モル過剰で用いる。

【0210】

好ましくは、リジン残基へのカップリングに関しては、下記化合物のうちの一つを、抗体などのリジン含有バインダーと反応させる。

【化54】

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【0211】

式中、Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し、Ｌ４はＬ１と同じ意味を有し、Ｌ１は上記と同じ意味を有する。

【0212】

システイン残基への中間体カップリングに関しては、その反応は下記のように説明することができる。

【化55】

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【0213】

他の中間体および他の抗体を同様に反応させることができる。

【0214】

リジン残基への中間体カップリングに関しては、その反応は下記のように説明することができる。

【化56】

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【0215】

本発明によれば、下記の複合体が提供される。

【化57】

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【0216】

リンカーに応じて、コハク酸イミド連結ＡＤＣは、結合後に、有利な安定性プロファイルを有する開鎖コハク酸アミドに変換することができる。

【化58】

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【0217】

この反応（開環）は、ｐＨ７．５から９で、好ましくはｐＨ８で、２５℃から３７℃の温度で、例えば撹拌することで行うことができる。好ましい撹拌時間は８から３０時間である。

【0218】

上記式において、Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し、ＳＧ１およびＬ１は上記と同じ意味を有し、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はＬ１と同じ意味を有し；ＲおよびＫは上記と同じ意味を有する。ＡＫ１はシステイン残基を介してカップリングした抗ＣＤ１２３抗体であり、ＡＫ２はリジン残基を介してカップリングした抗ＣＤ１２３抗体である。特に好ましくは、ＡＫ１およびＡＫ２はマウス起源の抗体７Ｇ３または１２Ｆ１由来のキメラもしくはヒト化抗ＣＤ１２３抗体である。特に好ましいものは、抗体ＴＰＰ−６０１３、ＴＰＰ−５９６８、ＴＰＰ−５９６９およびＴＰＰ−５９７１である。

【0219】

抗ＣＤ１２３抗体
文献に、抗体への有機分子の共有結合カップリング（結合）の多様な選択肢も開示されている。本発明に従って好ましいものは、抗体のシステイン残基の１以上の硫黄原子を介したおよび／または抗体のリジン残基の１以上のＮＨ基を介した抗体への担毒体の結合である。しかしながら、遊離カルボキシル基を介して、または抗体の糖残基を介して抗体に担毒体を結合させることも可能である。

【0220】

抗体は、結合を介してリンカーに結合することができる。抗体の結合は、バインダーのヘテロ原子を介したものであることができる。結合に用いることができる抗体の本発明によるヘテロ原子は、硫黄（１実施形態において、抗体のスルフヒドリル基を介して）、酸素（本発明によれば、抗体のカルボキシルまたはヒドロキシル基によって）および窒素（１実施形態において、抗体の１級もしくは２級アミン基もしくはアミド基を介して）である。これらのヘテロ原子は天然抗体に存在し得るものであるか、化学的方法または分子生物学の方法によって導入される。本発明によれば、担毒体への抗体の結合は、標的分子に関して抗体の結合活性に対するごくわずかな効果しか持たない。好ましい実施形態において、その結合は、標的分子に関して抗体の結合活性に対して全く効果を持たない。

【0221】

本発明によれば、「抗体」という用語は、それの最も広い意味で理解すべきであり、免疫グロブリン分子、例えば無傷もしくは修飾モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体または多特異的抗体（例えば二重特異抗体）を含む。免疫グロブリン分子は好ましくは、代表的にはジスルフィド架橋によって連結される四つのポリペプチド鎖、二つの重鎖（Ｈ鎖）および二つの軽鎖（Ｌ鎖）を有する分子を含む。各重鎖は、重鎖の可変ドメイン（略称ＶＨ）および重鎖の定常ドメインを含む。重鎖の定常ドメインは、例えば、三つのドメインＣＨ１、ＣＨ_２およびＣＨ３を含むことができる。各軽鎖は、可変ドメイン（略称ＶＬ）および定常ドメインを含む。軽鎖の定常ドメインは、ドメイン（略称ＣＬ）を含む。ＶＨおよびＶＬドメインは、超可変性を有する領域［相補性決定領域（略称ＣＤＲ）とも称される］および低い配列可変性を有する領域（フレームワーク領域、略称ＦＲ）にさらに細分することができる。代表的には、各ＶＨおよびＶＬ領域は、三つのＣＤＲおよび四つ以下のＦＲからなる。例えば、アミノ末端からカルボキシ末端に次の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４である。抗体は、いずれか好適な生物種、例えばウサギ、ラマ、ラクダ、マウスまたはラットから得ることができる。１実施形態において、抗体は、ヒトまたはマウス起源のものである。抗体は、例えばヒト、ヒト化またはキメラであることができる。

【0222】

「モノクローナル」抗体という用語は、実質的に均一な抗体の群から得られる抗体を指し、すなわち、その群の個々の抗体は、数が少ない可能性がある自然突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高い特異性を有する単一抗原性結合部位を認識する。モノクローナル抗体という用語は、特定の製造プロセスを指さない。

【0223】

「無傷」抗体という用語は、軽鎖および重鎖の抗原結合ドメインおよび定常ドメインの両方を含む抗体を指す。定常ドメインは、多くの修飾アミノ酸位置を有する天然ドメインまたはそれの変異体であることができる。

【0224】

「修飾無傷」抗体という用語は、抗体起源ではないさらなるポリペプチドもしくはタンパク質との共有結合（例えば、ペプチド結合）によってアミノ末端またはカルボキシ末端を介して融合した無傷抗体を指す。さらに、抗体を修飾して、定義の位置で、反応性システインを導入して、担毒体へのカップリングを促進するようにすることができる（Ｊｕｎｕｔｕｌａ ｅｔ ａｌ． Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２００８， ２６（８）：９２５−３２参照）。

【0225】

「ヒト」抗体という用語は、ヒトから得ることができるか、合成ヒト抗体である抗体を指す。「合成」ヒト抗体は、ヒト抗体配列の分析に基づいて合成配列からイン・シリコで部分的または完全に得ることができる抗体である。ヒト抗体は、例えば、ヒト起源の抗体配列のライブラリから単離された核酸によってコードされ得る。そのような抗体の例が、Ｓｏｄｅｒｌｉｎｄ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ． ２０００， １８：８５３−８５６にある。

【0226】

「ヒト化」または「キメラ」抗体という用語は、配列の非ヒトおよびヒト部分からなる抗体を説明するものである。これらの抗体において、ヒト免疫グロブリン（受容体）の配列の一部が、非ヒト免疫グロブリン（供与体）の配列部分によって置き換わっている。多くの場合で、供与体はマウス免疫グロブリンである。ヒト化抗体の場合、受容体のＣＤＲのアミノ酸が、供与体のアミノ酸によって置き換わっている。場合により、フレームワークのアミノ酸も、供与体の相当するアミノ酸によって置き換わっている。場合により、ヒト化抗体は、抗体の至適化時に導入された、受容体にも供与体にも存在しないアミノ酸を含む。キメラ抗体の場合、供与体免疫グロブリンの可変ドメインが、ヒト抗体の定常領域と融合している。

【0227】

本明細書で使用される相補性決定領域（ＣＤＲ）という用語は、抗原への結合に必要な可変抗体ドメインのアミノ酸を指す。代表的には、各可変領域は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と称される三つのＣＤＲ領域を有する。各ＣＤＲ領域は、カバットの定義によるアミノ酸および／またはコチアに従って定義される超可変ループのアミノ酸を包含することができる。カバットによる定義は、例えば、可変軽鎖のほぼアミノ酸位置２４から３４（ＣＤＲ１）、５０から５６（ＣＤＲ２）および８９から９７（ＣＤＲ３）、そして可変重鎖の３１から３５（ＣＤＲ１）、５０から６５（ＣＤＲ２）および９５から１０２（ＣＤＲ３）からの領域を含む（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ．（１９９１））。コチアによる定義は、例えば、可変軽鎖のほぼアミノ酸位置２６から３２（ＣＤＲ１）、５０から５２（ＣＤＲ２）および９１から９６（ＣＤＲ３）そして可変重鎖の２６から３２（ＣＤＲ１）、５３から５５（ＣＤＲ２）および９６から１０１（ＣＤＲ３）の領域を含む（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ； Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１−９１７（１９８７））。場合により、ＣＤＲは、カバットおよびコチアに従って定義されるＣＤＲ領域からのアミノ酸を含むことができる。

【0228】

重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、抗体は異なる群に分けることができる。無傷抗体の主要な５群：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、さらなる下位群（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２に分けることができる。異なる群に相当する重鎖の定常ドメインは、［アルファ／α］、［デルタ／δ］、［イプシロン／ε］、［ガンマ／γ］および［ミュー（ｍｙ）／μ］と称される。抗体の三次元構造およびサブユニット構造の両方が公知である。

【0229】

抗体／免疫グロブリンの「機能性断片」または「抗原結合性抗体断片」という用語は、やはり抗体／免疫グロブリンの抗原結合性ドメインを含む抗体／免疫グロブリンの断片（例えば、ＩｇＧの可変ドメイン）と定義される。抗体の「抗原結合性ドメイン」は代表的には、抗体の１以上の超可変領域、例えばＣＤＲ、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３領域を含む。しかしながら、抗体の「フレームワーク」または「骨格」領域は、抗原に対する抗体の結合時に関与し得る。そのフレームワーク領域は、ＣＤＲの骨格を形成する。好ましくは、抗原結合性ドメインは、少なくとも可変軽鎖のアミノ酸４から１０３および可変重鎖のアミノ酸５から１０９、より好ましくは可変軽鎖のアミノ酸３から１０７および可変重鎖の４から１１１、特に好ましくは完全な可変軽および重鎖、すなわちＶＬのアミノ酸１から１０９およびＶＨの１から１１３（ＷＯ９７／０８３２０による番号付け）を含む。

【0230】

本発明の「機能性断片」または「抗原結合性抗体断片」は、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２およびＦｖ断片、二重特異抗体、単一ドメイン抗体（ＤＡｂｓ）、線状抗体、抗体の個々の鎖（単鎖Ｆｖ、略称ｓｃＦｖ）；および多特異的抗体、例えば二重特異抗体および三重特異抗体、例えば抗体断片から形成されるものを包含するが、これらに限定されるものではない（Ｃ． Ａ． Ｋ Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ， ｅｄｉｔｏｒ （１９９５） Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ （Ｂｒｅａｋｔｈｒｏｕｇｈｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ； Ｒ． Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ＆Ｓ． Ｄｕｅｂｅｌ， ｅｄｉｔｏｒｓ （２００１） Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ）。「多特異的」または「多機能性」抗体以外の抗体は、同一の結合部位を有するものである。多特異的抗体は、抗原の異なるエピトープに特異的であることができるか、複数の抗原のエピトープに特異的であることができる（例えば、ＷＯ９３／１７７１５；ＷＯ９２／０８８０２；ＷＯ９１／００３６０；ＷＯ９２／０５７９３；Ｔｕｔｔ， ｅｔ ａｌ．， １９９１， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４７：６０ ６９；米国特許第４，４７４，８９３号；同４，７１４，６８１号；同４，９２５，６４８号；同５，５７３，９２０号；同５，６０１，８１９号；またはＫｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．， １９９２， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４８：１５４７１５５３参照）。Ｆ（ａｂ′）_２またはＦａｂ分子は、Ｃｈ１ドメインとＣＬドメインの間で起こる分子間ジスルフィド相互作用の作用を低減または完全に防止することができるように構築することができる。

【0231】

「エピトープ」は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合する能力を有するタンパク質決定基を指す。エピトープ決定基は通常、アミノ酸もしくは糖側鎖またはそれらの組み合わせなどの分子の化学的に活性な表面基からなり、通常は特異な三次元構造特性を有し、特異な電荷特性も有する。

【0232】

「機能性断片」または「抗原結合性抗体断片」は、それのアミノ末端またはカルボキシル末端を介して、共有結合（例えばペプチド連結）によって、抗体を起源としない別のポリペプチドまたはタンパク質と融合していることができる。さらに、抗体および抗原結合性断片を、規定の場所で反応性システインを導入することで修飾して、担毒体へのカップリングを促進することができる（Ｊｕｎｕｔｕｌａ ｅｔ ａｌ． Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２００８ Ａｕｇ；２６（８）：９２５−３２参照）。

【0233】

ポリクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって作ることができる。モノクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって作ることができる（Ｋｏｅｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ, Ｎａｔｕｒｅ, ２５６, ４９５−４９７, １９７５）。ヒトおよびヒト化モノクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって作ることができる（Ｏｌｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．, Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ． ９２, ３−１６またはＣａｂｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ ＵＳ ４，８１６，５６７またはＢｏｓｓ ｅｔ ａｌ ＵＳ４，８１６，３９７）。

【0234】

当業者は、例えば、トランスジェニックマウス（Ｎ Ｌｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｄ Ｈｕｓｚａｒ， Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １９９５； １３（１）：６５−９３）またはファージ提示技術（Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ． １９９１ Ａｕｇ １５；３５２（６３３６）：６２４−８）によってヒト抗体およびそれの断片を作る多様な方法を知っている。本発明の抗体は、例えば非常に多数の健常志願者から集めた非常に多数の抗体のアミノ酸配列からなる組換え抗体ライブラリーから得ることができる。抗体は、公知の組換えＤＮＡ技術によって作ることも可能である。抗体の核酸配列は、通常の配列決定によって得ることができるか、公開でアクセス可能なデータベースから入手することができる。

【0235】

「単離」抗体またはバインダーは、精製されて細胞の他の構成要素が除去されたものである。診断的使用または治療的使用を妨害し得る細胞の汚染構成要素は、例えば、酵素類、ホルモン類、または細胞の他のペプチドもしくは非ペプチド構成要素である。好ましい抗体またはバインダーは、抗体またはバインダーに対して９５重量％強の範囲（例えばローリー法、ＵＶ−Ｖｉｓスペクトル分析またはＳＤＳキャピラリーゲル電気泳動によって測定）まで精製されているものである。さらに、アミノ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５個のアミノ酸を決定することができる程度まで精製されている抗体、または均一となるまで精製された（均一性は還元条件もしくは非還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥによって決定される（検出は、クマシー・ブルー（Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ Ｂｌａｕ）染色または好ましくは銀着色によって決定することができる。）。）抗体である。しかしながら、抗体は通常は、１以上の精製段階によって得られる。

【0236】

「特異的結合」または「特異的に結合する」という用語は、所定の抗原／標的分子に結合する抗体またはバインダーを指す。抗体またはバインダーの特異的結合は代表的には、少なくとも１０^−７Ｍのアフィニティを有する抗体またはバインダーを説明するものであり（Ｋｄ値として；すなわち好ましくは１０^−７Ｍより小さいＫｄ値を有するもの）、その抗体またはバインダーは所定の抗原／標的分子でも非常に関連の深い抗原／標的分子でもない非特異的抗原／標的分子（例えばウシ血清アルブミンまたはカゼイン）に対してより、所定の抗原／標的分子に対して少なくとも２倍高いアフィニティを有する。その抗体は好ましくは、少なくとも１０^−７Ｍ（Ｋｄ値として；すなわち、好ましくは１０^−７Ｍより小さいＫｄ値を有するもの）、好ましくは少なくとも１０^−８Ｍ、より好ましくは１０^−９Ｍから１０^−１１Ｍの範囲のアフィニティを有する。Ｋｄ値は、例えば表面プラズモン共鳴分光法によって測定することができる。

【0237】

本発明の抗体−薬物複合体は同様に、これらの範囲のアフィニティを示す。そのアフィニティは、好ましくは薬物の結合によってほとんど影響を受けない（概して、そのアフィニティは一桁未満低下し、すなわち、例えば、多くとも１０^−８Ｍから１０^−７Ｍである。）。

【0238】

本発明に従って使用される抗体は、好ましくは高い選択性についても注目すべきものである。高い選択性が存在するのは、本発明の抗体が、独立の他の抗原、例えばヒト血清アルブミンに対してより少なくとも２倍、好ましくは５倍、またはより好ましくは１０倍良好な標的タンパク質に対するアフィニティを示す場合である（アフィニティは、例えば表面プラズモン共鳴分光法によって測定することができる。）。

【0239】

さらに、使用される本発明の抗体は、好ましくは交差反応性である。前臨床試験、例えば毒性試験または活性試験（例えば、異種移植マウスでの試験）を容易にし、より良好に解釈できるようにするために、本発明に従って使用される抗体がヒト標的タンパク質に結合するだけでなく、試験に用いられる生物における生物標的タンパク質にも結合する場合が有利である。１実施形態において、本発明に従って使用される抗体は、ヒト標的タンパク質に加えて、少なくとも一つの別の生物種の標的タンパク質に対して交差反応性である。毒性試験および活性試験に関しては、齧歯類、イヌおよび非ヒト霊長類の科の生物を用いることが好ましい。好ましい齧歯類種は、マウスおよびラットである。好ましい非ヒト霊長類は、アカゲザル、チンパンジーおよびカニクイザルである。

【0240】

１実施形態において、本発明に従って用いられる抗体は、ヒト標的タンパク質に加えて、マウス、ラットおよびカニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）からなる生物種の群から選択される少なくとも一つの別の生物種の標的タンパク質に対して交差反応性である。特別に好ましいものは、ヒト標的タンパク質に加えて、少なくともマウス標的タンパク質に対して交差反応性である本発明に従って用いられる抗体である。好ましいものは、前記別の非ヒト生物種の標的タンパク質に対するアフィニティがヒト標的タンパク質に対するアフィニティと５０倍まで、詳細には１０倍まで異なる交差反応性抗体である。

【0241】

癌標的分子に対する抗体
バインダー、例えば抗体またはそれの抗原結合性断片が向かう標的分子は、好ましくは癌標的分子である。「癌標的分子」という用語は、同じ組織型の非癌細胞上より１以上の癌細胞種上で豊富に存在する標的分子を説明するものである。好ましくは、癌標的分子は、同じ組織型の非癌細胞と比較して１以上の癌細胞種上に選択的に存在し、「選択的に」とは、同じ組織型の非癌細胞と比較して癌細胞上で少なくとも２倍豊富であることを説明するものである（「選択的癌標的分子」）。癌標的分子を用いることで、本発明による複合体を用いる癌細胞の選択的療法が可能となる。

【0242】

ここで、特に好ましいものは、細胞外癌標的分子ＩＬ−３Ｒα、ＣＤ１２３（配列番号４１）である。

【0243】

機能性インターロイキン３受容体は、特異的α鎖（ＩＬ−３Ｒα、ＣＤ１２３）および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）およびインターロイキン５（ＩＬ−５）についての受容体と共有されている「一般」ＩＬ−３受容体β鎖（βＣ、ＣＤ１３１）を含むヘテロ二量体である。

【0244】

ＩＬ−３Ｒα、ＣＤ１２３は、計算分子量約４１ｋＤａを有する１型の膜貫通タンパク質である。ＣＤ１２３は、ＩＬ−３結合に関与する細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび約５０アミノ酸の短い細胞質末端を含む。細胞外ドメインは、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−５受容体α鎖の等価な領域と配列類似性を有する約１００アミノ酸のＮ末端領域および四つの保存されたシステイン残基およびサイトカイン受容体ファミリーにおいて共通のＷＳＸＷＳモチーフを含む膜貫通ドメインに近位の領域という二つの領域からなる。

【0245】

ＩＬ−３結合ドメインは、Ｉｇ様に畳まれた二つのドメインから構成される約２００アミノ酸残基のサイトカイン受容体モチーフ（ＣＲＭ）を含む。ＩＬ−３Ｒα、ＣＤ１２３の細胞外ドメインは高度にグリコシル化されており、Ｎ−グリコシル化はリガンド結合および受容体シグナル伝達に必要である。

【0246】

ＩＬ−３Ｒα、ＣＤ１２３は、造血系全体にわたり広範囲に、例えば造血前駆細胞、肥満細胞、赤血球、巨核球、好中球、好塩基球および好酸球顆粒球、単球／マクロファージ、およびＣＤ５＋Ｂリンパ球で発現され、ＣＤ１２３は樹状細胞、ライディッヒ細胞、内皮細胞および間質細胞などの非造血細胞でも発現される。

【0247】

ＩＬ−３Ｒα、ＣＤ１２３は、ある種の疾患に関与する細胞によっても発現され、それらの疾患には骨髄異形成症候群、白血病（急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）など）、リンパ腫、アレルギーおよび自己免疫障害、例えば狼瘡または強皮症が含まれる。

【0248】

これらの関係のため、抗ＩＬ−３Ｒα、抗ＣＤ１２３抗体は、裸の（ｎａｋｅｄ）抗体または結合（ｃｏｕｐｌｅｄ）抗体（例えばＡＤＣ類）として治療法で用いることができる。

【0249】

本発明は、ＩＬ−３Ｒα、ＣＤ１２３（配列番号４１）に特異的に結合する抗体を含む複合体に関するものである。

【0250】

「抗ＣＤ１２３抗体」または「ＣＤ１２３に特異的に結合する抗体」という用語は、診断用途および／または治療用途に十分なアフィニティで癌標的分子ＣＤ１２３（ＩＬ−３Ｒα、配列番号４１）に結合する抗体に関するものである。１実施形態において、ＣＤ１２３に関連しないタンパク質への抗ＣＤ１２３抗体の結合は、例えば表面プラズモン共鳴分光法による測定で、抗体のＣＤ１２３への結合の１０％未満である。ある種の実施形態において、抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭの解離定数（ＫＤ）でＣＤ１２３（ＩＬ−３Ｒα、配列番号４１）に結合する。ある種の実施形態において、抗ＣＤ１２３抗体は、異なる生物種間で保存されるエピトープに結合する。

【0251】

癌標的分子に結合する抗体は、例えば化学合成または組換え発現などの公知の方法を用いて当業者が作ることができる。癌標的分子についてのバインダーは、商業的に入手できるか、例えば化学合成または組換え発現などの公知の方法を用いて当業者が作ることができる。抗体または抗原結合性抗体断片を作るさらなる方法については、ＷＯ２００７／０７０５３８に記載されている（２２頁「抗体」参照）。当業者であれば、ファージ提示ライブラリー（例えばＭｏｒｐｈｏｓｙｓ ＨｕＣＡＬ Ｇｏｌｄ）などのプロセスを収集および使用して抗体または抗原結合性抗体断片を発見する方法については知っている（ＷＯ２００７／０７０５３８、２４頁以降および７０頁のＡＫ実施例１、７２頁のＡＫ実施例２参照）。Ｂ細胞からのＤＮＡライブラリーを用いるさらなる抗体取得方法が、例えば２６頁（ＷＯ２００７／０７０５３８）に記載されている。ヒト化抗体についてのプロセスは、ＷＯ２００７０７０５３８の３０−３２頁に記載されており、Ｑｕｅｅｎ、ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｓ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３， １９８９またはＷＯ９０／０７８６に詳細に記載されている。さらに、タンパク質一般および特に抗体の組換え発現方法は当業者には公知である（例えば、Ｂｅｒｇｅｒ ａｎｄ Ｋｉｍｒｎｅｌ （Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ， Ｖｏ１． １５２， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．）； Ｓａｍｂｒｏｏｋ， ｅｔ ａｌ．， （Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， （Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ； Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．； １９８９） Ｖｏｌ． １−３）； Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， （Ｆ． Ｍ． Ａｕｓａｂｅｌ ｅｔ ａｌ． ［Ｅｄｓ．］， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ， Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ， Ｉｎｃ． ／ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｉｎｃ．）； Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．， （Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ （１９８８１， Ｐａｕｌ ［Ｅｄ．］）； Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， （Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ （１９９８））； ａｎｄ Ｈａｒｌｏｗ， ｅｔ ａｌ．， （Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ （１９９８）参照）。当業者であれば、タンパク質／抗体の発現に必要な相当するベクター、プロモーターおよびシグナルペプチドは知っている。通常プロセスが、ＷＯ２００７／０７０５３８の４１−４５頁にも記載されている。ＩｇＧ１抗体の取得方法が、例えばＷＯ２００７／０７０５３８の７４頁以降の実施例６に記載されている。抗原への結合後の抗体の内在化の決定を可能とするプロセスが当業者には公知であり、例えばＷＯ２００７／０７０５３８の８０頁に記載されている。当業者は、異なる標的分子特異性を有する抗体の作製と同様にして炭酸脱水酵素ＩＸ（Ｍｎ）抗体を作るのに用いられているＷＯ２００７／０７０５３８に記載の方法を用いることができる。

【0252】

抗ＣＤ１２３抗体
本発明によれば、抗ＣＤ１２３抗体またはそれの抗原結合性断片、好ましくは下記のものまたは好適な突然変異によって脱グリコシル化されたものから選択されるものを用いる。さらに、当業者であれば、ＣＤ１２３に結合する抗体については熟知している。

【0253】

スンら（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．）（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．, １９９６, Ｂｌｏｏｄ ８７（１）：８３−９２）は、ＩＬ−３Ｒα、ＣＤ１２３のＮ末端ドメインに結合するモノクローナル抗体７Ｇ３の発生および特性について報告している。米国特許第６，１７７，０７８号（Ｌｏｐｅｚ）は、抗ＣＤ１２３抗体７Ｇ３に関するものである。この抗体のキメラ変異体（ＣＳＬ３６０）がＷＯ２００９／０７０８４４に記載されており、ヒト化版（ＣＳＬ３６２）がＷＯ２０１２／０２１９３４に記載されている。７Ｇ３抗体の配列が、ＥＰ２４２６１４８に開示されている。この配列は、ＣＤＲ移植によって得られるヒト化抗体ＴＰＰ−５９６８、ＴＰＰ−５９６９およびＴＰＰ−５９７１の出発点を表す。

【0254】

細胞表面抗原結合後に、特に良好に内在化される抗体は、クオら（Ｋｕｏ ｅｔ ａｌ．）（Ｋｕｏ ｅｔ ａｌ．, ２００９, Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ． ２０（１０）：１９７５−８２）によって開示されている抗ＣＤ１２３抗体１２Ｆ１である。抗体１２Ｆ１は、抗体７Ｇ３より高いアフィニティでＣＤ１２３に結合し、細胞表面抗原結合後に、７Ｇ３より顕著に速く内在化される。１２Ｆ１に基づく二重特異的ｓｃＦｖ免疫融合タンパク質が、ＷＯ２０１３／１７３８２０に開示されている。抗体ＴＰＰ−６０１３は、１２Ｆ１のキメラ変異体である。

【0255】

本発明は特には、マウス起源の抗体７Ｇ３（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．, １９９６, Ｂｌｏｏｄ ８７（１）：８３−９２）および１２Ｆ１（Ｋｕｏ ｅｔ ａｌ．, ２００９, Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ． ２０（１０）：１９７５−８２）由来の抗体またはそれの抗原結合性抗体断片またはそれの変異体との複合体に関するものである。

【0256】

抗ＣＤ１２３の生成
７Ｇ３の可変領域（ＶＨおよびＶＬ）の配列の公開（ＥＰ２４２６１４８）に基づき、ヒトフレームワーク領域でのＣＤＲ移植によって、次の抗体配列：ＴＰＰ−５９６８、ＴＰＰ−５９６９およびＴＰＰ−５９７１を得た。

【0257】

１２Ｆ１の可変領域（ＶＨおよびＶＬ）の配列の公開（ＷＯ２０１３／１７３８２０）に基づき、ドナー免疫グロブリンの可変領域（ＶＨおよびＶＬ）のヒト抗体の定常領域との融合により、次の抗体配列：ＴＰＰ−６０１３を得た。

【0258】

当業界で公知のヒト化プロセスによって、抗ＣＤ１２３抗体のさらなるヒト化変異体を形成することができる。

【0259】

それらの生成方法の総覧が、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ, Ｆｒｏｎｔ． Ｂｉｏｓｃｉ． １３：１６１９−１６３３（２００８）、さらにはＲｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ８６：１００２９−１００３３（１９８９）；米国特許第５，８２１，３３７号、同７，５２７，７９１号、同６，９８２，３２１号および同７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．, Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５−３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）移植について記載）；Ｐａｄｌａｎ, Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２８：４８９−４９８（１９９１）（再出現について記載）；Ｄａｌｌ′ Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３−６０（２００５）（ＦＲシャッフリングについて記載）；およびＯｓｂｏｕｍ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１−６８（２００５）およびＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ， ８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングのための誘導選択アプローチについて記載）に記載されている。

【0260】

抗ＣＤ１２３抗体の特定の実施形態
本願では、下記の表中で示した、次の本発明の好ましい抗ＣＤ１２３抗体：「ＴＰＰ−６０１３」、「ＴＰＰ−５９６８」、「ＴＰＰ−５９６９」および「ＴＰＰ−５９７１」について説明する。

【0261】

ＴＰＰ−６０１３は、可変領域ＶＨおよびＶＬがκサブタイプのヒトＩｇＧ１の定常領域（ＣＬ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）に連結されている１２Ｆ１のキメラ変異体である。

【0262】

抗体ＴＰＰ−５９６８、ＴＰＰ−５９６９およびＴＰＰ−５９７１は、ヒトＩｇＧ１κのサブタイプとしての７Ｇ３のヒト化変異体である。

【0263】

表：抗体のタンパク質配列：

【表5】

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【0264】

ＴＰＰ−５９６８は、配列番号９に相当する重鎖の領域および配列番号１０に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。

【0265】

ＴＰＰ−５９６９は、配列番号１９に相当する重鎖の領域および配列番号２０に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。

【0266】

ＴＰＰ−５９７１は、配列番号２９に相当する重鎖の領域および配列番号３０に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。

【0267】

ＴＰＰ−６０１３は、配列番号３９に相当する重鎖の領域および配列番号４０に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。

【0268】

ＴＰＰ−５９６８は、配列番号１に相当する重鎖の可変領域および配列番号５に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。

【0269】

ＴＰＰ−５９６９は、配列番号１１に相当する重鎖の可変領域および配列番号１５に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。

【0270】

ＴＰＰ−５９７１は、配列番号２１に相当する重鎖の可変領域および配列番号２５に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。

【0271】

ＴＰＰ−６０１３は、配列番号３１に相当する重鎖の可変領域および配列番号３５に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。

【0272】

本発明によるリンカーおよび／または担毒体とのカップリングのための抗ＣＤ１２３抗体の好ましい実施形態は、下記のものである。

【0273】

１．ＣＤ１２３に結合し、抗体７Ｇ３または１２Ｆ１のキメラまたはヒト化変異体である抗体または抗原結合性断片）。

【0274】

２．次のもの：
配列番号２に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号３に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、および配列番号４に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、および
配列番号６に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号７に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列、および配列番号８に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖、または
配列番号１２に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号１３に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、および配列番号１４に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、および
配列番号１６に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号１７に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列、および配列番号１８に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖、または
配列番号２２に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号２３に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、および配列番号２４に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、および
配列番号２６に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号２７に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列、および配列番号２８に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖、または
配列番号３２に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号３３に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、および配列番号３４に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、および
配列番号３６に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号３７に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列、および配列番号３８に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖
を含むＴＷＥＡＫＲに結合する抗体または抗原結合性断片。

【0275】

３．次のもの：
配列番号１に示した重鎖の可変配列、さらに配列番号５に示した軽鎖の可変配列、または
配列番号１１に示した重鎖の可変配列、さらに配列番号１５に示した軽鎖の可変配列、または
配列番号２１に示した重鎖の可変配列、さらに配列番号２５に示した軽鎖の可変配列、または
配列番号３１に示した重鎖の可変配列、さらに配列番号３５に示した軽鎖の可変配列
を含む実施形態２による抗体またはそれの抗原結合性断片。

【0276】

４．ＩｇＧ抗体である前出の実施形態のいずれかによる抗体。

【0277】

５．次のもの：
配列番号９に示した重鎖の配列、さらに配列番号１０に示した軽鎖の配列、または
配列番号１９に示した重鎖の配列、さらに配列番号２０に示した軽鎖の配列、または
配列番号２９に示した重鎖の配列、さらに配列番号３０に示した軽鎖の配列、または
配列番号３９に示した重鎖の配列、さらに配列番号４０に示した軽鎖の配列
を含む前出の実施形態のいずれかによる抗体。

【0278】

６．前出の実施形態のいずれかによる抗原結合性断片またはｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ′断片またはＦ（ａｂ）２断片である前出の実施形態のいずれかによる抗体の抗原結合性断片を含む前出の実施形態のいずれかによる抗体。

【0279】

７．モノクローナル抗体またはそれの抗原結合性断片である前出の実施形態のいずれかによる抗体または抗原結合性断片。

【0280】

８．ヒト、ヒト化またはキメラ抗体または抗原結合性断片である前出の実施形態のいずれかによる抗体または抗原結合性断片。

【0281】

特に好ましいものは、抗ＣＤ１２３抗体「ＴＰＰ−６０１３」、「ＴＰＰ−５９６８」、「ＴＰＰ−５９６９」および「ＴＰＰ−５９７１」である。

【0282】

同位体、塩、溶媒和物、同位体変異体
本発明はまた、本発明の化合物の全ての好適な同位体形態を包含する。本発明の化合物の同位体形態は本明細書において、本発明の化合物内の少なくとも一つの原子が同じ原子番号であるが、自然界において通常もしくは支配的にある原子質量とは異なる原子質量を有する別の原子に交換されている化合物を意味するものと理解される。本発明の化合物に組み込むことができる同位体の例には、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素の同位体があり、例えば^２Ｈ（重水素）、^３Ｈ（三重水素）、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^１７Ｏ、^１８Ｏ、^３２Ｐ、^３３Ｐ、^３３Ｓ、^３４Ｓ、^３５Ｓ、^３６Ｓ、^１８Ｆ、^３６Ｃｌ、^８２Ｂｒ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２９Ｉおよび^１３１Ｉである。本発明の化合物の特定の同位体型、特別には１以上の放射性同位体が組み込まれているものは、例えば、作用機序または身体中での有効成分分布の試験に有用となり得る。製造および検出が比較的容易であることから、特には、^３Ｈまたは^１４Ｃ同位体で標識された化合物がその目的には好適である。さらに、同位体、例えば重水素を組み込むことにより、化合物の代謝安定性が高くなることで特に治療上有益となり得るものであり、例えば身体中での半減期が長くなり、または必要な活性成分用量が減る。従って、本発明の化合物のそのような修飾も、場合により、本発明の好ましい実施形態を構成し得る。本発明による化合物の同位体型は、当業者に公知の方法によって、例えばさらに下記に記載の方法および実施例に記載の手順によって、個々の試薬および／または出発化合物の相当する同位体修飾を用いることで製造することができる。

【0283】

本発明の文脈において好ましい塩は、本発明による化合物の生理的に許容される塩である。自体は医薬用途には適さないが、例えば本発明の化合物の単離または精製には用いることができる塩も包含される。

【0284】

本発明による化合物の生理的に許容される塩には、鉱酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩などがある。

【0285】

本発明の化合物の生理的に許容される塩にはさらに、通常の塩基の塩、例えば好ましくは、アルカリ金属塩（例えばナトリウムおよびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えばカルシウムおよびマグネシウム塩）およびアンモニアもしくは１から１６個の炭素原子を有する有機アミン、例えば好ましくはエチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン、アルギニン、リジンおよび１,２−エチレンジアミンから誘導されるアンモニウム塩などがある。

【0286】

本発明の文脈で溶媒和物と称されるものは、溶媒分子による配位によって固体または液体での錯体を形成している本発明による化合物の形態と記述される。水和物は、配位が水によるものである溶媒和物の特定の形態である。本発明の文脈で好ましい溶媒和物は水和物である。

【0287】

本発明はさらに、本発明の化合物のプロドラッグも包含する。この文脈での「プロドラッグ」という用語は、自体は生理的に活性または不活性であり得るが、身体に存在中に本発明の化合物に変換される（例えば、代謝的または加水分解的に）化合物を指す。

【0288】

特定の実施形態
次の実施形態が特に好ましい。

【0289】

実施形態Ａ：
下記式のＡＤＣ

【化59】

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【0290】

式中、
ＫＳＰ−Ｌ−は、下記の式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｉ）、（ＩＩｊ）、（ＩＩｋ）または下記の式（ＩＩｆ）の化合物を表し、バインダーは抗ＣＤ１２３抗体（特に好ましくはマウス起源の抗体７Ｇ３または１２Ｆ１由来のキメラまたはヒト化抗ＣＤ１２３抗体、特には抗体ＴＰＰ−６０１３、ＴＰＰ−５９６８、ＴＰＰ−５９６９およびＴＰＰ−５９７１）であり、ｎは１から１０の数字を表す：
式（ＩＩｆ）：

【化60】

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【0291】

式中、
Ａは、ＣＯ（カルボニル）を表し；
Ｒ^１は、−Ｌ−＃１、Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_１−３ＮＨ_２、−ＣＯＮＺ″（ＣＨ_２）_１−３ＮＨ_２および−ＣＯＮＺ″ＣＨ_２ＣＯＯＨを表し、Ｚ″は、ＨまたはＮＨ_２を表し；
Ｒ^２およびＲ^４はＨを表し、またはＲ^２およびＲ^４が一緒に（ピロリジン環の形成）、−ＣＨ_２−ＣＨＲ^１１−または−ＣＨＲ^１１−ＣＨ_２−を表し、Ｒ^１１はＨを表し；
Ｒ^３は、−Ｌ−＃１またはＣ_１−１０−アルキル−を表し、それは−ＯＨ、Ｏ−アルキル、ＳＨ、Ｓ−アルキル、Ｏ−ＣＯ−アルキル、Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル、ＮＨ−ＣＯ−アルキル、ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル、Ｓ（Ｏ）_ｎ−アルキル、ＳＯ_２−ＮＨ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ（アルキル）_２またはＮＨ_２（アルキルは好ましくはＣ_１−３−アルキルである。）によって置換されていても良く；
Ｒ^５は、ＨまたはＦを表し；
Ｒ^６およびＲ^７は互いに独立に、Ｈ、（フッ素化されていても良い）Ｃ_１−３−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−_４−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−_４−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲンを表し；
Ｒ^８は、分岐のＣ_１−_５−アルキル基を表し；
Ｒ^９は、ＨまたはＦを表し、
置換基Ｒ^１およびＲ^３のうちの一つは、−Ｌ−＃１を表し、
−Ｌ−はリンカーを表し、＃１は抗体への結合を表す、
ならびに、ＡＤＣの塩、溶媒和物および溶媒和物の塩。

【0292】

リンカーは、好ましくは下記のリンカー

【化61】

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【0293】

であり、
ｍは、０または１を表し；
§は、ＫＳＰへの結合を表し；
§§は、抗体への結合を表し、
Ｌ２は、

【化62】

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【0294】

を表し、
＃^１は、抗体の硫黄原子への結合点を示し、
＃^２は、基Ｌ^１への結合点を示し、
Ｌ１は下記式：

【化63】

[この文献は図面を表示できません]

【0295】

によって表され；
Ｒ^１０は、Ｈ、ＮＨ_２またはＣ_１−Ｃ_３−アルキルを表し；
Ｇ１は、−ＮＨＣＯ−または

【化64】

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【0296】

を表し；
ｎは、０または１を表し；
ｏは、０または１を表し；
Ｇ２は、アリーレン基からの１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖および／または直鎖および／または分岐および／または環状のアルキレン基を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ_２、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−ＳＯ_２ＮＨＮＨ−、−ＣＯＮＨＮＨ−およびＮ、ＯおよびＳまたは−ＳＯ−からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する３から１０員芳香族または非芳香族複素環（好ましくは

【化65】

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【0297】

）の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合、それは−ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。

【0298】

ここで、＃^１はＫＳＰ阻害剤への結合であり、＃^２は抗体に対するカップリング基（例えばＬ２）への結合である。

【0299】

実施形態Ｂ：
下記式のＡＤＣ

【化66】

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【0300】

式中、
ＫＳＰ−Ｌ−は、下記の式（Ｉ）の化合物、（Ｉａ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｉ）、（ＩＩｊ）、（ＩＩｋ）の化合物または下記の式（ＩＩｇ）の化合物を表し、バインダーは抗ＣＤ１２３抗体（特に好ましくはマウス起源の抗体７Ｇ３または１２Ｆ１由来のキメラまたはヒト化抗ＣＤ１２３抗体、特には抗体ＴＰＰ−６０１３、ＴＰＰ−５９６８、ＴＰＰ−５９６９およびＴＰＰ−５９７１）であり、ｎは１から１０の数字を表す：
式（ＩＩｇ）：

【化67】

[この文献は図面を表示できません]

【0301】

式中、
Ａは、ＣＯ（カルボニル）；を表し
Ｒ^１は、−Ｌ−＃１、Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_１−３ＮＨ_２、−ＣＯＮＺ″（ＣＨ_２）_１−３ＮＨ_２および−ＣＯＮＺ″ＣＨ_２ＣＯＯＨを表し、Ｚ″は、ＨまたはＮＨ_２を表し；
Ｒ^２およびＲ^４はＨを表し、またはＲ^２およびＲ^４が一緒に（ピロリジン環の形成）、−ＣＨ_２−ＣＨＲ^１１−または−ＣＨＲ^１１−ＣＨ_２−を表し、Ｒ^１１はＨを表し；
Ｒ^３は、−Ｌ−＃１またはＣ_１−１０−アルキル−を表し、それは−ＯＨ、Ｏ−アルキル、ＳＨ、Ｓ−アルキル、Ｏ−ＣＯ−アルキル、Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル、ＮＨ−ＣＯ−アルキル、ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル、Ｓ（Ｏ）_ｎ−アルキル、ＳＯ_２−ＮＨ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ（アルキル）_２またはＮＨ_２（アルキルは好ましくはＣ_１−３−アルキルである。）によって置換されていても良く；
Ｒ^５は、ＨまたはＦを表し；
Ｒ^６およびＲ^７は互いに独立に、Ｈ、（フッ素化されていても良い）Ｃ_１−３−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−_４−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−_４−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲンを表し；
Ｒ^８は、分岐のＣ_１−_５−アルキル基を表し；
Ｒ^９は、ＨまたはＦを表し、
置換基Ｒ^１およびＲ^３のうちの一つは、−Ｌ−＃１を表し、
−Ｌ−はリンカーを表し、＃１は抗体への結合を表し、
−Ｌ−は、

【化68】

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【0302】

によって表され；
ｍは、０または１を表し；
§は、ＫＳＰへの結合を表し；
§§は、抗体への結合を表し；
Ｌ２は、

【化69】

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【0303】

を表し、
＃^１は、抗体の硫黄原子への結合点を示し、
＃^２は、基Ｌ^１への結合点を示し、
Ｌ１は、下記式：

【化70】

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【0304】

によって表され；
Ｒ^１０は、Ｈ、ＮＨ_２またはＣ_１−Ｃ_３−アルキルを表し；
Ｇ１は、−ＮＨＣＯ−または

【化71】

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【0305】

を表し；
ｎは、０または１を表し；
ｏは、０または１を表し；
Ｇ２は、アリーレン基からの１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖および／または直鎖および／または分岐および／または環状のアルキレン基を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ_２、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−ＳＯ_２ＮＨＮＨ−、−ＣＯＮＨＮＨ−およびＮ、ＯおよびＳまたは−ＳＯ−からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する３から１０員芳香族または非芳香族複素環（好ましくは

【化72】

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【0306】

）の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合、それは、−ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く；
＃^１はＫＳＰ阻害剤への結合であり、＃^２は抗体に対するカップリング基（例えばＬ２）への結合である、
ならびに、ＡＤＣの塩、溶媒和物および溶媒和物の塩。

【0307】

実施形態Ｃ：
下記式のＡＤＣ

【化73】

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【0308】

式中、
ＫＳＰ−Ｌ−は、下記の（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）；（ＩＩｉ）、（ＩＩｊ）、（ＩＩｋ）の化合物または下記の式（ＩＩｈ）の化合物を表し、バインダーは抗ＣＤ１２３抗体（特に好ましくはマウス起源の抗体７Ｇ３または１２Ｆ１由来のキメラまたはヒト化抗ＣＤ１２３抗体、特には抗体ＴＰＰ−６０１３、ＴＰＰ−５９６８、ＴＰＰ−５９６９およびＴＰＰ−５９７１）であり、ｎは１から１０の数字を表す。

【0309】

式（ＩＩｈ）：

【化74】

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【0310】

式中、
Ａは、ＣＯ（カルボニル）を表し；
Ｒ^１は、−Ｌ−＃１を表し；
Ｒ^２およびＲ^４はＨを表し、またはＲ^２およびＲ^４が一緒に（ピロリジン環の形成）、−ＣＨ_２−ＣＨＲ^１１−または−ＣＨＲ^１１−ＣＨ_２−を表し、Ｒ^１１はＨを表し；
Ｒ^３は、Ｃ_１−１０−アルキル−を表し、それは−ＯＨ、Ｏ−アルキル、ＳＨ、Ｓ−アルキル、Ｏ−ＣＯ−アルキル、Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル、ＮＨ−ＣＯ−アルキル、ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−アルキル、Ｓ（Ｏ）_ｎ−アルキル、ＳＯ_２−ＮＨ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ（アルキル）_２またはＮＨ_２（アルキルは好ましくはＣ_１−３−アルキルである。）または−ＭＯＤによって置換されていても良く；
−ＭＯＤは、−（ＮＲ^１０）_ｎ−（Ｇ１）_ｏ−Ｇ２−Ｇ３を表し、
Ｒ^１０は、ＨまたはＣ_１−Ｃ_３−アルキルを表し；
Ｇ１は、−ＮＨＣＯ−または−ＣＯＮＨ−（Ｇ１が−ＮＨＣＯ−を表す場合、Ｒ^１０はＮＨ_２を表さない。）を表し；
ｎは、０または１を表し；
ｏは、０または１を表し；
Ｇ２は、直鎖もしくは分岐の炭化水素基を表し、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ_２、−ＮＲ^ｙ−、−ＮＲ^ｙＣＯ−、ＣＯＮＲ^ｙ−、−ＮＲ^ｙＮＲ^ｙ−、−ＳＯ_２ＮＲ^ｙＮＲ^ｙ−、−ＣＯＮＲ^ｙＮＲ^ｙ−（Ｒ^ｙは、Ｈ、フェニル、Ｃ_１−Ｃ_１０−アルキル、Ｃ_２−Ｃ_１０−アルケニルまたはＣ_２−Ｃ_１０−アルキニルを表し、それらはそれぞれＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。）、−ＣＯ−、−ＣＲ^ｘ＝Ｎ−Ｏ−（Ｒｘは、Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_３−アルキルまたはフェニルを表す。）の１以上によって１回もしくは複数回中断されていても良く、側鎖を含む炭化水素は−ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、Ｇ３は−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し、前記基−ＭＯＤは好ましくは少なくとも１個の基−ＣＯＯＨを有し；
Ｒ^５は、ＨまたはＦを表し；
Ｒ^６およびＲ^７は互いに独立に、Ｈ、（フッ素化されていても良い）Ｃ_１−３−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−_４−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ_２−_４−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲンを表し；
Ｒ^８は、分岐のＣ_１−_５−アルキル基を表し；
Ｒ^９は、ＨまたはＦを表し；
−Ｌ−はリンカーを表し、＃１は抗体への結合を表し、
−Ｌ−は、

【化75】

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【0311】

によって表され；
ｍは、０または１を表し；
§は、ＫＳＰへの結合を表し；
§§は、抗体への結合を表し、
Ｌ２は、

【化76】

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【0312】

を表し、
＃^１は、抗体の硫黄原子への結合点を示し、
＃^２は、基Ｌ^１への結合点を示し、
Ｌ１は、下記式：

【化77】

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【0313】

によって表され；
式中、
Ｒ^１０は、Ｈ、ＮＨ_２またはＣ_１−Ｃ_３−アルキルを表し；
Ｇ１は、−ＮＨＣＯ−または

【化78】

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【0314】

を表し；
ｎは、０または１を表し；
ｏは、０または１を表し；
Ｇ２は、アリーレン基からの１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖および／または直鎖および／または分岐および／または環状のアルキレン基を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ_２、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−ＳＯ_２ＮＨＮＨ−、−ＣＯＮＨＮＨ−、−ＣＲ^ｘ＝Ｎ−Ｏ−（Ｒｘは、Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_３−アルキルまたはフェニルを表す。）およびＮ、ＯおよびＳ、−ＳＯ−または−ＳＯ_２−からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する３から１０員芳香族または非芳香族複素環（好ましくは

【化79】

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【0315】

）の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、存在する場合に側鎖を含む炭化水素鎖は、−ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く；
＃１はＫＳＰ阻害剤への結合であり、＃２は抗体に対するカップリング基（例えばＬ２）への結合である、
ならびに、ＡＤＣの塩、溶媒和物および溶媒和物の塩。

【0316】

実施形態Ｄ：
本発明は、下記一般式のバインダー／活性化合物複合体も提供する。

【化80】

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【0317】

式中、
バインダーは抗ＣＤ１２３抗体（特に好ましくはマウス起源の抗体７Ｇ３または１２Ｆ１由来のキメラまたはヒト化抗ＣＤ１２３抗体、特には抗体ＴＰＰ−６０１３、ＴＰＰ−５９６８、ＴＰＰ−５９６９およびＴＰＰ−５９７１）を表し、Ｌはリンカーを表し、ＷＳは活性化合物、好ましくはＫＳＰ阻害剤、例えば、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩｈ）（ＩＩｉ）のうちの一つの本発明によるＫＳＰ阻害剤を表し、ｍは１から２、好ましくは１の数字を表し、ｎは１から５０、好ましくは１．２から２０、特に好ましくは２から８の数字を表し、Ｌは下記構造のうちの一つを有する。ここで、ｍは、リンカー当たりの活性化合物分子の数を表し、ｎはバインダー当たりの活性化合物／リンカー複合体の数の平均を表す。従って、複合体分子に存在する全てのＷＳの合計はｍおよびｎの積である。

【0318】

ＷＳは、動物、好ましくはヒトにおける局所または全身治療作用を有する活性化合物である。これらの活性化合物は概して、５ｋＤａ以下、好ましくは１．５ｋＤａ以下の分子量を有する。好ましい活性化合物は、ビンカ・アルカロイド類、オーリスタチン類、ツブリシン類、デュオカルマイシン類、キナーゼ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤およびＫＳＰ阻害剤である。

【0319】

ここで、Ｌは、下記の式Ａ３およびＡ４の一つ：

【化81】

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【0320】

を表し、
＃^１はバインダーの硫黄原子への結合点を示し、＃^２は活性化合物への結合点を示し、ｘは１または２を表し、Ｒ２２はＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ、ＣＯＲ（Ｒは各場合で、Ｃ_１−３−アルキルを表す。）、ＣＯＮＨ_２、Ｂｒ、好ましくはＣＯＯＨを表す。

【0321】

Ｌ１は上記と同じ意味を有する。好ましくは、−Ｌ１−＃２は下記式：

【化82】

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【0322】

によって表され、
＃３は窒素原子への結合点を示し；
Ｒ^１０は、Ｈ、ＮＨ_２またはＣ_１−Ｃ_３−アルキルを表し；
Ｇ１は、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−または

【化83】

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【0323】

（Ｇ１がＮＨＣＯまたは

【化84】

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【0324】

を表す場合、Ｒ１０はＮＨ_２を表さない。）を表し；
ｎは、０または１を表し；
ｏは、０または１を表し；
Ｇ２は、アリーレン基からの１から１００個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖および／または直鎖および／または分岐および／または環状のアルキレン基を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ_２、−ＮＲ^ｙ−、−ＮＲ^ｙＣＯ−、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲ^ｙ−、ＣＯＮＲ^ｙ−、−ＮＲ^ｙＮＲ^ｙ−、−ＳＯ_２ＮＲ^ｙＮＲ^ｙ−、−ＣＯＮＲ^ｙＮＲ^ｙ−（Ｒ^ｙは、Ｈ、フェニル、Ｃ_１−Ｃ_１０−アルキル、Ｃ_２−Ｃ_１０−アルケニルまたはＣ_２−Ｃ_１０−アルキニル、それらはそれぞれによって置換されていても良くＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸を表す。）、−ＣＯ−、−ＣＲ^ｘ＝Ｎ−Ｏ−（Ｒ^ｘは、Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_３−アルキルまたはフェニルを表す。）および／またはＮ、ＯおよびＳ、−ＳＯ−または−ＳＯ_２−からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する３から１０員芳香族または非芳香族複素環（好ましくは

【化85】

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【0325】

）の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖を含む炭化水素は、−ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。

【0326】

Ｇ２におけるさらなる中断基は好ましくは、

【化86】

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【0327】

であり、
Ｒ^ｘは、Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_３−アルキルまたはフェニルを表す。

【0328】

本発明による複合体において、または本発明による複合体の混合物において、抗体のシステイン残基への結合が、好ましくは８０％強、特に好ましくは９０％強（各場合、抗体へのリンカーの結合の総数に基づいて）の範囲で、式Ａ３またはＡ４の二つの構造のうちの一つとして存在する。

【0329】

式Ａ３またはＡ４のリンカーとの複合体は、それぞれ下記の式Ａ３′およびＡ４′の適切な臭素誘導体への抗体のカップリングによって得ることができる。

【化87】

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【0330】

式Ａ３′またはＡ４′のこれらの臭素誘導体は、下記の図式３０から３２において例示的に示したように、Ｒ_２２ＣＨ_２ＣＨＢｒＣＯＯＨまたはＲ_２２ＣＨＢｒＣＨ_２ＣＯＯＨをバインダーのアミン基と反応させることによって得ることができる。

【0331】

図式３０：

【化88】

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【0332】

［ａ）：２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフルオロボレート（ＢＥＰ）、ＤＣＭ、ピリジン、ＲＴ；ｂ）塩化亜鉛、トリフルオロエタノール、５０℃、ＥＤＴＡ；ｃ）３から４当量のＴＣＥＰ、ＰＢＳ緩衝液；ｄ）ＰＢＳ緩衝液、２０時間室温］
図式３１：

【化89】

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【0333】

［ａ）：２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフルオロボレート（ＢＥＰ）、ＤＣＭ、ピリジン、ＲＴ；ｂ）塩化亜鉛、トリフルオロエタノール、５０℃、ＥＤＴＡ；ｃ）３から４当量のＴＣＥＰ、ＰＢＳ緩衝液；ｄ）ＰＢＳ緩衝液、２０時間室温］
実施形態Ｅ：
本発明は、下記一般式のバインダー／活性化合物複合体も提供する。

【化90】

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【0334】

式中、
バインダーは抗ＣＤ１２３抗体（特に好ましくはマウス起源の抗体７Ｇ３または１２Ｆ１由来のキメラまたはヒト化抗ＣＤ１２３抗体、特には抗体ＴＰＰ−６０１３、ＴＰＰ−５９６８、ＴＰＰ−５９６９およびＴＰＰ−５９７１）を表し、Ｌはリンカーを表し、ＷＳは活性化合物、好ましくはＫＳＰ阻害剤、例えば、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）または（ＩＩａ）のうちの一つの本発明によるＫＳＰ阻害剤を表し、ｍは１から２、好ましくは１の数字を表し、ｎは１から５０、好ましくは１．２から２０、特に好ましくは２から８の数字を表し、Ｌは下記構造のうちの一つを有する。ここで、ｍは、リンカー当たりの活性化合物分子の数を表し、ｎはバインダー当たりの活性化合物／リンカー複合体の数の平均を表す。従って、複合体分子に存在する全てのＷＳの合計はｍおよびｎの積である。

【0335】

ここで、Ｌは、

【化91】

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【0336】

を表し、
＃^１は抗体の硫黄原子への結合点を示し、＃^２は活性化合物への結合点を示し、Ｒ^２２は、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ、ＣＯＲ（Ｒは各場合で、Ｃ_１−３−アルキルを表す。）、ＣＯＮＨ_２、Ｂｒ、好ましくはＣＯＯＨを表し；従って、バインダーの硫黄原子への連結は下記の構造の一つを有し得る。

【化92】

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【0337】

抗体薬物複合体当たり複数の活性化合物分子ＷＳを含む抗体薬物複合体の場合、式Ａ１および／またはＡ２による両方の構造が抗体薬物複合体に存在し得る。本発明による抗体薬物複合体は異なる抗体薬物複合体の混合物であることができることから、この混合物が式Ａ１または式Ａ２の抗体薬物複合体および式Ａ１およびＡ２のものの両方を含むこともできる。

【0338】

Ｌ_５は、−（ＣＨ_２）_ｍ−（ＣＨＲＳ）_ｎ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｏ−（Ｘ）_ｐ−（ＣＨ_２）_ｑ−から選択される基であり、ｍ、ｎ、ｏ、ｐおよびｑは互いに独立に、次の値：ｍ＝０から１０；ｎ＝０または１；ｏ＝０から１０；ｐ＝０または１；およびｑ＝０から１０（ｍ＋ｎ＋ｏ＝１から１５、好ましくは１から６）を有する。Ｘは、５員もしくは６員の芳香族または非芳香族複素環もしくは同素環、好ましくは−Ｃ_６Ｈ_４−または−Ｃ_６Ｈ_１０−を表す。ＲＳは、酸基、好ましくは−ＣＯＯＨまたはＳＯ_３Ｈを表す。

【0339】

Ｌ_６は、−ＣＯＮＨ−、−ＯＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、−ＮＨＣＯＯ−、

【化93】

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【0340】

から選択される基であり、
ｒは１、２または３である。

【0341】

Ｌ_７は、単結合または直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖（それは、アリーレン基からの１から１００個（好ましくは１から１０個）の炭素原子を有する。）および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキレン基から選択される基であり、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ_２、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣＯ−、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲｙ−、ＣＯＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−ＳＯ_２ＮＲｙＮＲｙ−、−ＣＯＮＲｙＮＲｙ−（Ｒ^ｙは、Ｈ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、それらはそれぞれＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。）、−ＣＯ−、−ＣＲ^ｘ＝Ｎ−Ｏ−（Ｒｘは、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す。）および／またはＮ、ＯおよびＳ、−ＳＯ−または−ＳＯ_２−からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する３から１０員、好ましくは５から１０員の芳香族または非芳香族複素環（好ましくは

【化94】

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【0342】

）の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖を含む炭化水素は、−ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ_２、ＮＨ−ＣＮＮＨ_２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。

【0343】

Ｌ_５は好ましくは、基−（ＣＨ_２）_ｍ−（ＣＨＲＳ）_ｎ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｏ−（Ｘ）_ｐ−（ＣＨ_２）_ｑ−であり、ｍ＝１から３、ｎ＝０、ｏ＝０から７、ｐ＝０およびｑ＝０または１である。特に好ましいものは、基−（ＣＨ_２）_ｍ−（ＣＨＲＳ）_ｎ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｏ−（Ｘ）_ｐ−（ＣＨ_２）_ｑ−であり、ｍ＝１または２、ｎ＝０、ｏ＝０または１、ｐ＝０およびｑ＝０または１である。

【0344】

Ｌ_６は好ましくは、−ＣＯＮＨ−および−ＮＨＣＯ−から選択される基である。

【0345】

Ｌ_７は好ましくは、単結合または−［（ＣＨ_２）_ｘ−（Ｘ^４）_ｙ］_ｗ−（ＣＨ_２）_ｚ−であり、
ｗ＝０から２０であり；
ｘ＝０から５であり；
ｙ＝０または１であり；
ｚ＝１から５であり；
Ｘ^４は、−Ｏ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯ−または

【化95】

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【0346】

を表す。

【0347】

特に好ましくは、Ｌ_７は単結合または基−［（ＣＨ_２）_ｘ−ＮＨＣＯ−）］であり、ｘ＝１から５である。

【0348】

特に好ましくは、−Ｌ_５−Ｌ_６−Ｌ_７−は、−（ＣＨ_２）_ｍ−（ＣＨＲＳ）_ｎ−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｏ−（Ｘ）_ｐ−（ＣＨ_２）_ｑ−−ＮＨＣＯ−−［（ＣＨ_２）_ｘ−ＮＨＣＯ−）］を表し、ｍ＝１または２、ｎ＝０、ｏ＝０または１、ｐ＝０、およびｑ＝０または１、ｘ＝１から５である。

【0349】

しかしながら、これらの二つの構造が一緒に、本発明による複合体に存在することも可能である。

【0350】

本発明によれば、これらの抗体薬物複合体は、下記式の化合物から製造することができる。

【化96】

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【0351】

式中、Ｌは下記式Ａ′：

【化97】

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【0352】

を有する。

【0353】

好ましくは、Ａ′のＡへの変換は、７．５から８．５、好ましくは８のｐＨを有するｐＨ緩衝液中、３７℃以下、好ましくは１０から２５℃の温度で、４０時間以内、好ましくは１から１５時間の期間にわたって撹拌することで行う。

【0354】

実施形態Ｉ：
下記式の抗体薬物複合体

【化98】

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【0355】

式中、
Ｒ２、Ｒ４およびＲ５はＨを表し；
Ｒ３は、−ＣＨ_２ＯＨを表し；
Ｒ１は、−Ｌ１−Ｌ２−バインダーを表し、
Ｌ１は、

【化99】

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【0356】

を表し、
＃２はＬ２への結合を表し、＃１は他方の結合への結合を表し；
Ｌ２は、下記式Ａ５およびＡ６の構造の一方または両方：

【化100】

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【0357】

を表し、
＃^１は、抗体の硫黄原子への結合点を示し、
＃^２は、基Ｌ^１への結合点を示し、
Ｒ^２２は、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ、ＣＯＲ、ＣＯＮＨＲ（Ｒは各場合で、Ｃ_１−３−アルキルを表す。）、ＣＯＮＨ_２、好ましくはＣＯＯＨを表す。

【0358】

本発明による複合体において、または本発明による複合体の混合物において、抗体のシステイン残基への結合が、好ましくは８０％強、特に好ましくは９０％強（各場合、抗体へのリンカーの結合の総数に基づいて）の範囲で、特に好ましくは式Ａ５またはＡ６の二つの構造のうちの一つとして存在する。

【0359】

ここで、式Ａ５またはＡ６の構造は概して、好ましくは抗体の結合数に基づいて６０：４０から４０：６０の比率で一緒に存在する。そして、残りの結合は、下記構造として存在する。

【化101】

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【0360】

その抗体は好ましくは、マウス起源の抗体７Ｇ３または１２Ｆ１由来のキメラまたはヒト化抗ＣＤ１２３抗体である。特に好ましいものは、抗体ＴＰＰ−６０１３、ＴＰＰ−５９６８、ＴＰＰ−５９６９およびＴＰＰ−５９７１である。

【0361】

具体的実施形態
下記の式のうちの一つによる次の特に好ましい抗体複合体が提供され、ｎは１から２０の数字であり、ＡＫ１（ならびにＡＫ１ａ、ＡＫ１ｂなど）およびＡＫ２（ならびにＡＫ２ａ、ＡＫ２ｂなど）は抗体である。ＡＫ１はシステインを介して結合した抗体であり、ＡＫ２はリジンを介して結合した抗体である。下記式のうちの一つにおける抗体（ＡＫ１またはＡＫ２）は好ましくは、マウス起源の抗体７Ｇ３または１２Ｆ１由来のキメラまたはヒト化抗ＣＤ１２３抗体である。特に好ましいものは、抗体ＴＰＰ−６０１３、ＴＰＰ−５９６８、ＴＰＰ−５９６９およびＴＰＰ−５９７１である。

【化102】

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【0362】

さらなる複合体
さらなる複合体は、下記式のうちの一つを有することができる：

【化103】

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【0363】

式中、
ＡＫ１はシステインを介して結合した抗体を表し、ＡＫ２はリジンを介して結合した抗体を表し、その抗体はＣＤ１２３に結合しており、抗体７Ｇ３または１２Ｆ１のキメラまたはヒト化変異体を表し、それの抗体断片であり、
ｎは、１から２０の数字を表し、
Ｌ_１は、１から３０個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖を表し、それは−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）_２−、−ＮＨ−、シクロペンチル、ピペリジニル、フェニルによって同一でまたは異なって１回または複数回中断されていても良く、
その直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖は、−ＣＯＯＨまたは−ＮＨ_２によって置換されていても良い、
ならびにそれらの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマー。

【0364】

ここで、リンカーＬ_１は好ましくは、次の基：

【化104】

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【0365】

または

【化105】

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【0366】

を表し、
§は、活性化合物分子への結合を表し、
§§は、抗体への結合を表し、
ｉｓｏＣ_３Ｈ_７はイソプロピル基を表す。

【0367】

これらの複合体も、それらの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマーを含む。

【0368】

治療用途
治療するのに本発明による化合物を用いることができる過増殖性疾患には、特には癌および腫瘍疾患の群などがある。本発明の文脈において、これらは、特には次の疾患（ただし、これらに限定されるものではない）：乳癌および乳房腫瘍（腺管癌および小葉型などの乳癌、イン・サイツも）、気道の腫瘍（小細胞肺癌および非小細胞肺癌、気管支癌）、脳腫瘍（例えば、脳幹の腫瘍および視床下部の腫瘍、星細胞腫、上衣細胞腫、神経膠芽腫、神経膠腫、髄芽腫、髄膜腫ならびに神経外胚葉性腫瘍および松果体腫瘍）、消化器の腫瘍（食道、胃、胆嚢、小腸、大腸、直腸および肛門の癌）、肝臓腫瘍（特に、肝細胞癌、胆管癌および混合型肝細胞胆管癌）、頭部および頸部領域の腫瘍（喉頭、下咽頭、鼻咽頭、口咽頭癌、口唇および口腔癌、口腔メラノーマ）、皮膚腫瘍（基底細胞腫、棘細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫、悪性メラノーマ、非メラノーマ皮膚癌、メルケル細胞皮膚癌、肥満細胞腫瘍）、間質および結合組織の腫瘍（特に、軟組織の肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、線維肉腫、血管肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ肉腫および横紋筋肉腫）、眼球の腫瘍（特に、眼球内メラノーマおよび網膜芽細胞腫）、内分泌腺および外分泌腺の腫瘍（例えば甲状腺および副甲状腺、膵臓および唾液腺の癌、腺癌）、尿路の腫瘍（膀胱、陰茎、腎臓、腎盂および尿管の腫瘍）および生殖器の腫瘍（女性における子宮内膜、子宮頸部、卵巣、膣、外陰部および子宮の癌、および男性における前立腺および睾丸の癌）を意味するものと理解される。これらには、固形型または循環細胞としての血液、リンパ系および脊髄の増殖性疾患などもあり、例えば白血病、リンパ腫および骨髄増殖性疾患、例えば急性骨髄性、急性リンパ芽球性、慢性リンパ性、慢性骨髄性およびヘアリー細胞性の白血病、およびＡＩＤＳ関連リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫および中枢神経系でのリンパ腫である。

【0369】

ヒトでのこれらの十分に特徴付けられている疾患は、他の哺乳動物でも同等の病因によって生じ得るものであり、本発明の化合物によって同様に治療可能である。

【0370】

本発明による化合物による上記で言及の癌疾患の治療は、固体腫瘍の治療およびそれの転移型および循環型の治療の両方を含むものである。

【0371】

本発明の文脈において、「治療」または「治療する」という用語は、従来の意味で用いられ、疾患または健康上の異常と戦い、軽減し、弱化し、または改善すること、ならびに例えば癌の場合でのように、この疾患によって障害される生活条件を改善することを目的として、患者の世話を行い、ケアを行い、看病することを意味する。

【0372】

従って、本発明はさらに、障害の、特別には上記障害の治療および／または予防のための本発明の化合物の使用を提供する。

【0373】

本発明はさらに、障害の、特別には上記障害の治療および／または予防のための医薬品を製造するための本発明の化合物の使用を提供する。

【0374】

本発明はさらに、障害の、特別には上記障害の治療および／または予防方法での本発明の化合物の使用を提供する。

【0375】

本発明はさらに、有効量の少なくとも１種類の本発明による化合物を用いて、障害、特別には上記障害を治療および／または予防する方法を提供する。

【0376】

本発明の化合物は、単独で、または必要に応じて、１以上の他の薬理活性物質と組み合わせて用いることができ、ただしその組み合わせは望ましくないおよび許容できない副作用を生じるものではない。従って、本発明はさらに、特には上記障害の治療および／または予防のための、少なくとも１種類の本発明の化合物および１以上のさらなる有効成分を含む医薬品を提供する。

【0377】

例えば、本発明の化合物は、癌疾患治療のための既知の抗過剰増殖性、細胞増殖抑制性または細胞毒性物質と組み合わせることができる。好適な組み合わせ活性化合物の例には、下記のものなどがある。

【0378】

１３１Ｉ−ｃｈＴＮＴ、アバレリックス、アビラテロン、アクラルビシン、アファチニブ、アフリベルセプト、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリセルチブ（ａｌｉｓｅｒｔｉｂ）、アリトレチノイン、アルファラディン（塩化ラジウム−２２３）、アルトレタミン、アミノグルテチミド、ＡＭＰ−５１４、アムルビシン、アムサクリン、アナストロゾール、アルグラビン、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、ＡＴ９２８３、アキシチニブ、アザシチジン、バシリキシマブ、ベロテカン、ベンダムスチン、ベバシズマブ、ベキサロテン、ビカルタミド、ビサントレン、ブレオマイシン、ＢＭＳ−９３６５５９、ボスチニブ、ボルテゾミブ、ブレンツキシマブ・ベドチン、ブセレリン、ブスルファン、カバジタキセル、カボザンチニブ、ホリナートカルシウム、レボホリナートカルシウム、カペシタビン、カルボプラチン、カルフィルゾミブ（プロテアソーム阻害剤）、カルモフール、カルムスチン、カツマキソマブ、セレコキシブ、セルモロイキン、セツキシマブ、クロラムブシル、クロルマジノン、クロルメチン、シスプラチン、クラドリビン、クロドロン酸、クロファラビン、コパンリシブ、クリサンタスパーゼ、クリゾチニブ、シクロホスファミド、ＣＹＣ１１６、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダルベポエチンアルファ、ダブラフェニブ、ダヌセルチブ（ｄａｎｕｓｅｒｔｉｂ）、ダサチニブ、ダウノルビシン、デシタビン、デガレリクス、デニロイキンジフチトクス、デノスマブ、デスロレリン、塩化ジブロスピジウム（ｄｉｂｒｏｓｐｉｄｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、ドキソルビシン＋エストロン、エクリズマブ、エドレコロマブ、エリプチニウム酢酸塩、エルトロンボパグ、エンドスタチン、ＥＮＭＤ−２０７６、エノシタビン、エピルビシン、エピチオスタノール、エポエチンアルファ、エポエチンベータ、エプタプラチン（ｅｐｔａｐｌａｔｉｎ）、エリブリン、エルロチニブ、エストラジオール、エストラムスチン、エトポシド、エベロリムス、エキセメスタン、ファドロゾール、フィルグラスチム、フルダラビン、フルオロウラシル、フルタミド、フォルメスタン、ホテムスチン、フルベストラント、硝酸ガリウム、ガニレリクス、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツズマブ、グルトキシム（ｇｌｕｔｏｘｉｍ）、ゴセレリン、ヒスタミン二塩酸塩、ヒストレリン、ヒドロキシカルバミド、Ｉ−１２５シード、イバンドロン酸、イブリツモマブ チウキセタン、イブルチニブ、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、イミキモド、ＩＮＣＢ２４３６０、インプロスルファン、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ、イピリムマブ、イリノテカン、イキサベピロン、ランブロリズマブ、ランレオチド、ラパチニブ、レナリドミド、レノグラスチム、レンチナン、レトロゾール、リュープロレリン、レバミソール、リスリド、ロバプラチン、ロムスチン、ロニダミン、マソプロコール、メドロキシプロゲステロン、メゲストロール、メルファラン、メピチオスタン、メルカプトプリン、メトトレキサート、メトキサレン、アミノレブリン酸メチル、メチルテストステロン、ミファムルチド、ミルテホシン、ミリプラチン、ミトブロニトール、ミトグアゾン、ミトラクトール、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、ＭＬＮ−８０５４、Ｍｐｓ１阻害剤（ＷＯ２０１３／０８７５７９で開示、特に実施例０１．０１、ＷＯ２０１４／１３１７３９、特に実施例２）、ネダプラチン、ネララビン、ネモルビシン（ｎｅｍｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ニロチニブ、ニルタミド、ニモツズマブ、ニムスチン、ニトラクリン、ニボルマブ、ＮＭＳ−Ｐ７１５、ＮＭＳ−Ｐ９３７、オファツムマブ、オメプラゾール、オプレルベキン、オキサリプラチン、ｐ５３遺伝子治療、パクリタキセル、パルボシクリブ、パリフェルミン、パラジウム−１０３シード、パミドロン酸、パニツムマブ、パゾパニブ、ペグアスパルガーゼ、ペグ−エポエチンベータ（メトキシペグ−エポエチンベータ）、ペグフィルグラスチム、ペグインターフェロンアルファ−２ｂ、ペメトレキセド、ペンタゾシン、ペントスタチン、ペプロマイシン、ペルホスファミド、ピシバニール、ピラルビシン、プレリキサホル、プリカマイシン、ポリグルサム（ｐｏｌｉｇｌｕｓａｍ）、リン酸ポリエストラジオール、ポリサッカライド−Ｋ、ポナチニブ、ポルフィマーナトリウム、プララトレキサート、プレドニムスチン、プロカルバジン、キナゴリド、Ｒ７６３、ラロキシフェン、ラルチトレキセド、ラニムスチン、ラゾキサン、レファメチニブ、レゴラフェニブ、リセドロン酸、リツキシマブ、ロミデプシン、ロミプロスチム、ロニシクリブ、ルキソリチニブ、サルグラモスチム、シプロイセル−Ｔ、シゾフィラン、ソブゾキサン、グリシジダゾール・ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｇｌｙｃｉｄｉｄａｚｏｌｅ）、ＳＮＳ−３１４、ソラフェニブ、ストレプトゾシン、スニチニブ、タラポルフィン、タミバロテン、タモキシフェン、タソネルミン、テセロイキン、テガフール、テガフール＋ギメラシル＋オテラシル、テモポルフィン、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、テストステロン、テトロホスミン、サリドマイド、チオテパ、チマルファシン、ＴＫＭ−ＰＬＫ１、チオグアニン、トシリズマブ、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トザセルチブ、トラベクテジン、トラメチニブ、トラスツズマブ、トラスツズマブ・エムタンシン、トレオスルファン、トレチノイン、トリロスタン、トリプトレリン、トロホスファミド、トリプトファン、ウベニメクス、バルルビシン、バンデタニブ、バプレオチド、ベムラフェニブ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンフルニン、ビノレルビン、ボラセルチブ、ボリノスタット、ボロゾール、ＸＬ２２８、イットリウム−９０ガラスマイクロスフェア、ジノスタチン、ジノスタチン スチマラマー、ゾレドロン酸、ゾルビシン。

【0379】

さらに、本発明の化合物は、例えば、例として次の標的：ＯＸ−４０、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＤＲ３、ＩＤＯ１／ＩＤＯ２、ＬＡＧ−３、ＣＤ４０に結合し得るバインダーと組み合わせることができる。

【0380】

さらに、本発明による化合物は、放射線療法および／または外科的介入と組み合わせて用いることもできる。

【0381】

概して、本発明の化合物と他の細胞増殖抑制的にまたは細胞毒性的に活性な薬剤との組み合わせで、次の目的を追求することができる。

【0382】

個々の活性化合物による治療と比較して、腫瘍増殖の遅延、それの大きさの低減、またはさらにそれの完全な除去における効力の改善；
単独療法の場合より低い用量で使用される化学療法剤使用の可能性；
個々の投与と比較して副作用少なく、より耐容性のある治療法の可能性；
より広いスペクトラムの腫瘍性疾患の治療の可能性；
療法に対するより高い応答速度の達成；
現代の標準療法と比較して長い患者の生存時間。

【0383】

さらに、本発明による化合物は、放射線療法および／または外科的介入と組み合わせて用いることもできる。

【0384】

本発明はさらに、代表的には１以上の不活性で無毒性の医薬として好適な賦形剤とともに少なくとも一つの本発明の化合物を含む医薬、および上記目的のためのそれの使用を提供する。

【0385】

本発明の化合物は、全身的および／または局所的に作用し得る。これに関して、それは好適な形で、例えば非経口的に、可能な場合に吸入によって、またはインプラントもしくはステントとして投与することができる。

【0386】

本発明の化合物は、これらの投与経路に好適な投与形態で投与することができる。

【0387】

非経口投与は、吸収段階（例えば、静脈、動脈、心臓内、髄腔内または腰椎内で）を回避することができ、または吸収（例えば、筋肉、皮下、皮内、経皮または腹腔内で）を含むことができる。非経口投与の好適な投与形態には、液剤、懸濁液、乳濁液または凍結乾燥物の形態での注射および注入用製剤などがある。好ましいものは、非経口投与、特別には静脈投与である。

【0388】

概して、非経口投与の場合、約０．００１から１ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．０１から０．５ｍｇ／ｋｇの量を投与して、効果的な結果を得ることが有利であることが認められている。

【0389】

そうではあっても、場合により、具体的に体重、投与経路、有効成分に対する個体の応答、製剤の種類、および投与を行う時刻もしくは間隔に応じて、指定量から逸脱する必要であることもあり得る。従って、場合により、上記最小量より少ない量で十分である可能性があるが、他の場合には、言及した上限を超えなければならない。より大きい量の投与の場合、それらを１日かけて、いくつかの個々の用量に分けることが得策である可能性がある。

【0390】

実施例
下記の実施例は、本発明を説明するものである。本発明は実施例に限定されるものではない。

【0391】

別段の断りがない限り、下記の試験および実施例におけるパーセントは重量パーセントであり、部は重量部である。液体／液体溶液における溶媒比、希釈比および濃度データは、各場合で体積基準である。

【0392】

実験の説明において、反応が行われる温度が記載されていない場合、室温を想定することができる。

【0393】

合成経路：
実施例の例として、下記の図式は、実施例に至る例示的合成経路を示すものである。

【0394】

図式２０：システイン連結ＡＤＣの合成

【化106】

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【0395】

図式２１：システイン連結ＡＤＣの合成

【化107】

[この文献は図面を表示できません]

【0396】

図式２２：中間体の合成

【化108】

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【0397】

［ａ）：例えば水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム、酢酸、ＤＣＭ、ＲＴ；ｂ）例えばアセトキシアセチルクロライド、ＮＥｔ_３、ＤＣＭ、ＲＴ；ｃ）例えばＬｉＯＨ、ＴＨＦ／水、ＲＴ；ｄ）例えばＨ_２、Ｐｄ−Ｃ、ＥｔＯＨ、ＲＴ；ｅ）例えばＴｅｏｃ−ＯＳｕ、ＮＥｔ_３、ジオキサン、ＲＴ；ｆ）例えばＦｍｏｃ−Ｃｌ、ジイソプロピルエチルアミン、ジオキサン／水２：１、ＲＴ］
図式２４：中間体の合成

【化109】

[この文献は図面を表示できません]

【0398】

［ａ）：例えばベンジルブロマイド、Ｃｓ_２ＣＯ_３、ＤＭＦ、ＲＴ；ｂ）例えばＰｄ（ｄｐｐｆ）_２Ｃｌ_２、ＤＭＦ、Ｎａ_２ＣＯ_３、８５℃；ｃ）例えばＬｉＡｌＨ_４、ＴＨＦ、０℃；ＭｎＯ_２、ＤＣＭ、ＲＴ；ｄ）例えばＴｉ（ｉＯＰｒ）_４、ＴＨＦ、ＲＴ；ｅ）例えばｔＢｕＬｉ、ＴＨＦ、−７８℃；ＭｅＯＨ、ＮＨ_４Ｃｌ；ｆ）例えばＨＣｌ／１，４−ジオキサン］
図式２５：システイン連結ＡＤＣの合成

【化110】

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【0399】

図式２６：加水分解コハク酸アミドを介したシステイン連結ＡＤＣの合成
Ｌ１＝ＣＨ_２であるか、Ｌ１＝ＣＨ−ＣＨ_３であるか、Ｌ１＝フェニルであるＡＤＣについて特に、この方法を用いて、これらのＡＤＣを開鎖連結型に変換した。

【化111】

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【0400】

図式２７：ＡＤＣ前駆体分子の合成

【化112】

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【0401】

［ａ）：水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム、酢酸、ＤＣＭ、ＲＴ；ｂ）アセトキシアセチルクロライド、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＣＭ、ＲＴ；ｃ）ＬｉＯＨ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｄ）トリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｅ）塩化亜鉛、トリフルオロエタノール、５０℃、ＥＤＴＡ．］
図式２８：ＡＤＣ前駆体分子の合成

【化113】

[この文献は図面を表示できません]

【0402】

［ａ）：ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｂ）塩化亜鉛、トリフルオロエタノール、５０℃、ＥＤＴＡ．］
図式２９：ＡＤＣ前駆体分子の合成

【化114】

[この文献は図面を表示できません]

【0403】

［ａ）：水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム、酢酸、ＤＣＭ、ＲＴ；ｂ）アセトキシアセチルクロライド、トリエチルアミン、ＤＣＭ、ＲＴ；ｃ）ＬｉＯＨ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｄ）トリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｅ）塩化亜鉛、トリフルオロエタノール、５０℃、ＥＤＴＡ．］
図式３０：ＡＤＣ類の合成

【化115】

[この文献は図面を表示できません]

【0404】

［ａ）：２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフルオロボレート（ＢＥＰ）、ＤＣＭ、ピリジン、ＲＴ；ｂ）塩化亜鉛、トリフルオロエタノール、５０℃、ＥＤＴＡ；ｃ）３から４当量のＴＣＥＰ、ＰＢＳ緩衝液；ｄ）ＰＢＳ緩衝液、２０時間室温］
図式３１：ＡＤＣ類の合成

【化116】

[この文献は図面を表示できません]

【0405】

［ａ）：２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフルオロボレート（ＢＥＰ）、ＤＣＭ、ピリジン、ＲＴ；ｂ）塩化亜鉛、トリフルオロエタノール、５０℃、ＥＤＴＡ；ｃ）３から４当量のＴＣＥＰ、ＰＢＳ緩衝液；ｄ）ＰＢＳ緩衝液、２０時間室温］
図式３２：中間体の合成

【化117】

[この文献は図面を表示できません]

【0406】

［ａ）例えば亜鉛ジメチル、シクロヘキシル（ｃｙｈｅｘｙｌ）ＭｇＣｌ、ＴＨＦ、−７８℃；ＮＨ_４Ｃｌ；ｂ）例えばＨＣｌ／１，４−ジオキサン］
図式３３：ＡＤＣ前駆体分子の合成

【化118】

[この文献は図面を表示できません]

【0407】

［ａ）：水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム、酢酸、ＤＣＭ、ＲＴ；ｂ）アセトキシアセチルクロライド、トリエチルアミン、ＤＣＭ、ＲＴ；ｃ）Ｌ−システイン、ＮａＨＣＯ_３、ＤＢＵ、イソプロパノール／水、ＲＴ；ｄ）３−スルファニルプロパン酸、Ｋ_２ＣＯ_３、ＲＴ；ｅ）リンカー、ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｅ）塩化亜鉛、トリフルオロエタノール、５０℃、ＥＤＴＡ．］
図式３４：リジン連結ＡＤＣ類の合成

【化119】

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【0408】

図式３５：リジン連結ＡＤＣ類の合成

【化120】

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【0409】

Ａ．実施例
略称および頭字語：
ＡＢＣＢ１：ＡＴＰ結合カセットサブファミリーＢメンバー１（Ｐ−ｇｐおよびＭＤＲ１と同義語）
ａｂｓ．：純粋
Ａｃ：アセチル
ＡＣＮ：アセトニトリル
ａｑ．：水系、水溶液
ＡＴＰ：アデノシン三リン酸
ＢＣＲＰ：乳癌耐性タンパク質、排出輸送体
ＢＥＰ：２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフルオロボレート
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ｂｒ．：広い（ＮＭＲで）
Ｅｘ．：実施例
ＣＩ：化学イオン化（ＭＳで）
Ｄ：二重線（ＮＭＲで）
Ｄ：日
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
ＤＣＩ：直接化学イオン化（ＭＳで）
ＤＣＭ：ジクロロメタン
Ｄｄ：二重線の二重線（ＮＭＲで）
ＤＭＡＰ：４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＥ：１，２−ジメトキシエタン
ＤＭＥＭ：ダルベッコ改変イーグル培地（細胞培養のための標準培養液）
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＤＰＢＳ、Ｄ−ＰＢＳ、ＰＢＳ：ダルベッコのリン酸緩衝塩溶液
ＰＢＳ＝ＤＰＢＳ＝Ｄ−ＰＢＳ、ｐＨ７．４、Ｓｉｇｍａから、Ｎｏ Ｄ８５３７
組成：
ＫＣｌ ０．２ｇ
ＫＨ_２ＰＯ_４（無水物）０．２ｇ
ＮａＣｌ ８．０ｇ
Ｎａ_２ＨＰＯ_４（無水物）１．１５ｇ
Ｈ_２Ｏで１リットルとする
Ｄｔ：三重線の二重線（ＮＭＲで）
ＤＴＴ：ＤＬ−ジチオスレイトール
ＥＤＣ：Ｎ′−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＥＧＦＲ：上皮増殖因子受容体
ＥＩ：電子衝撃イオン化（ＭＳで）
ＥＬＩＳＡ：酵素結合免疫吸着検定法
ｅｑ．：当量
ＥＳＩ：電気スプレーイオン化（ＭＳで）
ＥＳＩ−ＭｉｃｒｏＴｏｆｑ：ＥＳＩ−ＭｉｃｒｏＴｏｆｑ（Ｔｏｆ＝飛行時間およびｑ＝四重極を用いる質量分析装置の名称）
ＦＣＳ：ウシ胎仔血清
Ｆｍｏｃ：（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル
ｓａｔ．：飽和
ＧＴＰ：グアノシン５′三リン酸
ｈ：時間
ＨＡＴＵ：Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＥＰＥＳ：４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸
ＨＯＡｃ：酢酸
ＨＯＡｔ：１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物
ＨＯＳｕ：Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド
ＨＰＬＣ：高圧高速液体クロマトグラフィー
ＩＣ_５０：半最大阻害濃度
ｉ．ｍ．：筋肉的に、筋肉への投与
ｉ．ｖ．：静脈的に、静脈への投与
ＫＧ−１：ヒト腫瘍細胞株
ｃｏｎｃ．：濃厚
ＬＣ−ＭＳ：液体クロマトグラフィー結合質量分析
ＬＬＣ−ＰＫ１細胞：ルイス肺癌ブタ（ｐｏｒｋ）腎臓細胞株
Ｌ−ＭＤＲ：ヒトＭＤＲ１トランスフェクトＬＬＣ−ＰＫ１細胞
ＬｏＶｏ：ヒト腫瘍細胞株
Ｌ４２８：ヒト腫瘍細胞株
ｍ：多重線（ＮＭＲで）
ＭＤＲ１：多剤耐性タンパク質１
Ｍｅ：メチル
ＭｅＣＮ：アセトニトリル
ｍｉｎ：分
ＭＯＬＭ−１３：ヒト腫瘍細胞株
ＭＳ：質量分析
ＭＴＴ：３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロマイド３
ＭＶ−４−１１：ヒト腫瘍細胞株
ＮＣＩ−Ｈ２９２：ヒト腫瘍細胞株
ＮＭＭ：Ｎ−メチルモルホリン
ＮＭＰ：Ｎ−メチル−２−ピロリジノン
ＮＭＲ：核磁気共鳴スペクトル測定
ＮＭＲＩ：Ｎａｖａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＭＲＩ）由来のマウス系統
Ｎｕｄｅマウス：ヌードマウス（実験動物）
ＮＳＣＬＣ：非小細胞肺癌
ＰＢＳ：リン酸緩衝塩溶液
Ｐｄ／Ｃ：パラジウム／活性炭
Ｐ−ｐｇ：Ｐ−糖タンパク質（ｇｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）、輸送体タンパク質
ＰＮＧａｓｅＦ：糖を開裂させる酵素
ｑｕａｎｔ．：定量的（収率で）
ｑｕａｒｔ：四重線（ＮＭＲで）
ｑｕｉｎｔ：五重線（ＮＭＲで）
Ｒ_ｆ：保持指数（ＴＬＣで）
ＲＴ：室温
Ｒ_ｔ：保持時間（ＨＰＬＣで）
ｓ：一重線（ＮＭＲで）
ｓ．ｃ．：皮下的に、皮下への投与
ＳＣＩＤマウス：重度の複合免疫不全を有する試験マウス
ｔ：三重線（ＮＭＲで）
ＴＢＡＦ：フッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム
ＴＥＭＰＯ：（２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−イル）オキシル
ｔｅｒｔ：ターシャリー
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＨＰ−１：ヒト腫瘍細胞株
Ｔ３Ｐ（登録商標）：２，４，６−トリプロピル−１，３，５，２，４，６−トリオキサトリホスフィナン２，４，６−トリオキサイド
ＵＶ：紫外線スペクトル測定
ｖ／ｖ：体積比（溶液のもの）
Ｚ：ベンジルオキシカルボニル
ＨＰＬＣ法およびＬＣ−ＭＳ法：
方法１（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＳＱＤ ＵＰＬＣシステム；カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３ １．８μ ５０×１ｍｍ；移動相Ａ：水１リットル＋９９％強度ギ酸０．２５ｍＬ、移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋９９％強度ギ酸０．２５ｍＬ；勾配：０．０分９０％Ａ→１．２分５％Ａ→２．０分５％Ａオーブン：５０℃；流量：０．４０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２０８−４００ｎｍ。

【0410】

方法２（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｎａｐｔ Ｇ２Ｓ；ＵＰＬＣ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｉ−ＣＬＡＳＳ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ、ＢＥＨ３００、２．１×１５０ｍｍ、Ｃ１８ １．７μｍ；移動相Ａ：水１リットル＋０．０１％ギ酸；移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋０．０１％ギ酸；勾配：０．０分２％Ｂ→１．５分２％Ｂ→８．５分９５％Ｂ→１０．０分９５％Ｂ；オーブン：５０℃；流量：０．５０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２２０ｎｍ。

【0411】

方法３（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ装置：Ｗａｔｅｒｓ （Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ）ＱＭ；ＨＰＬＣ装置：Ａｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズ；カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ ＺＯＲＢＡＸ Ｅｘｔｅｎｄ−Ｃ１８ ３．０×５０ｍｍ ３．５ミクロン；移動相Ａ：水１リットル＋０．０１ｍｏｌの炭酸アンモニウム、移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル；勾配：０．０分９８％Ａ→０．２分９８％Ａ→３．０分５％Ａ→４．５分５％Ａ；オーブン：４０℃；流量：１．７５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。

【0412】

方法４（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｎａｐｔ Ｇ２Ｓ；ＵＰＬＣ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｉ−ＣＬＡＳＳ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ、ＨＳＳＴ３、２．１×５０ｍｍ、Ｃ１８ １．８μｍ；移動相Ａ：水１リットル＋０．０１％ギ酸；移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋０．０１％ギ酸；勾配：０．０分１０％Ｂ→０．３分１０％Ｂ→１．７分９５％Ｂ→２．５分９５％Ｂ；オーブン：５０℃；流量：１．２０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。

【0413】

方法５（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＳＱＤ ＵＰＬＣシステム；カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３ １．８μ ５０×１ｍｍ；移動相Ａ：水１リットル＋９９％強度ギ酸０．２５ｍＬ、移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋９９％強度ギ酸０．２５ｍＬ；勾配：０．０分９５％Ａ→６．０分５％Ａ→７．５分５％Ａオーブン：５０℃；流量：０．３５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０−４００ｎｍ。

【0414】

方法６（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：Ｗａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ Ａｃｑｕｉｔｙ搭載Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ Ｑｕａｔｔｒｏ Ｐｒｅｍｉｅｒ；カラム：Ｔｈｅｒｍｏ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＧＯＬＤ１．９μ５０×１ｍｍ；移動相Ａ：水１リットル＋５０％強度ギ酸０．５ｍＬ、移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋５０％強度ギ酸０．５ｍＬ；勾配：０．０分９７％Ａ→０．５分９７％Ａ→３．２分５％Ａ→４．０分５％Ａオーブン：５０℃；流量：０．３ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。

【0415】

方法７（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：Ａｇｉｌｅｎｔ ＭＳ Ｑｕａｄ ６１５０；ＨＰＬＣ：Ａｇｉｌｅｎｔ １２９０；カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３ １．８μ ５０×２．１ｍｍ；移動相Ａ：水１リットル＋９９％強度ギ酸０．２５ｍＬ、移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋９９％強度ギ酸０．２５ｍＬ；勾配：０．０分９０％Ａ→０．３分９０％Ａ→１．７分５％Ａ→３．０分５％Ａオーブン：５０℃；流量：１．２０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２０５−３０５ｎｍ。

【0416】

方法８（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｎａｐｔ Ｇ２Ｓ；ＵＰＬＣ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｉ−ＣＬＡＳＳ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ、ＨＳＳＴ３、２．１×５０ｍｍ、Ｃ１８ １．８μｍ；移動相Ａ：水１リットル＋０．０１％ギ酸；移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋０．０１％ギ酸；勾配：０．０分２％Ｂ→２．０分２％Ｂ→１３．０分９０％Ｂ→１５．０分９０％Ｂ；オーブン：５０℃；流量：１．２０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。

【0417】

方法９：実施例１８１から１９１についてのＬＣ−ＭＳ−Ｐｒｅｐ精製法（方法ＬＩＮＤ−ＬＣ−ＭＳ−Ｐｒｅｐ）
ＭＳ装置：Ｗａｔｅｒｓ、ＨＰＬＣ装置：Ｗａｔｅｒｓ（カラムＷａｔｅｒｓ Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８、１９ｍｍ×５０ｍｍ、５μｍ、移動相Ａ：水＋０．０５％アンモニア、移動相Ｂ：アセトニトリル（ＵＬＣ）勾配；流量：４０ｍＬ／分；ＵＶ検出：ＤＡＤ；２１０−４００ｎｍ）。

【0418】

または
ＭＳ装置：Ｗａｔｅｒｓ、ＨＰＬＣ装置：Ｗａｔｅｒｓ （カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）１００Ａ、ＡＸＩＡ Ｔｅｃｈ． ５０×２１．２ｍｍ、移動相Ａ：水＋０．０５％ギ酸、移動相Ｂ：アセトニトリル（ＵＬＣ）勾配；流量：４０ｍＬ／分；ＵＶ検出：ＤＡＤ；２１０−４００ｎｍ）。

【0419】

方法１０：実施例１８１から１９１についてのＬＣ−ＭＳ分析法（ＬＩＮＤ＿ＳＱＤ＿ＳＢ＿ＡＱ）
ＭＳ装置：Ｗａｔｅｒｓ ＳＱＤ；装置ＨＰＬＣ：Ｗａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ；カラム：Ｚｏｒｔｅｘ ＳＢ−Ａｑ（Ａｇｉｌｅｎｔ）、５０ｍｍ×２．１ｍｍ、１．８μｍ；移動相Ａ：水＋０．０２５％ギ酸、移動相Ｂ：アセトニトリル（ＵＬＣ）＋０．０２５％ギ酸；勾配：０．０分９８％Ａ−０．９分２５％Ａ−１．０分５％Ａ−１．４分５％Ａ−１．４１分９８％Ａ−１．５分９８％Ａ；オーブン：４０℃；流量：０．６００ｍＬ／分；ＵＶ検出：ＤＡＤ；２１０ｎｍ。

【0420】

方法１１（ＨＰＬＣ）：
装置：ＨＰ１１００シリーズ
カラム：Ｍｅｒｃｋ Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ ＳｐｅｅｄＲＯＤ ＲＰ−１８ｅ、５０−４．６ｍｍ、カタログ番号１．５１４５０．０００１、プレカラムＣｈｒｏｍｏｌｉｔｈ Ｇｕａｒｄカートリッジキット、ＲＰ−１８ｅ、５−４．６ｍｍ、カタログ番号１．５１４７０．０００１
勾配：流量５ｍＬ／分
注入容量５μＬ
溶媒Ａ：ＨＣｌＯ_４（７０％強度）／水（４ｍＬ／Ｌ）
溶媒Ｂ：アセトニトリル
開始２０％Ｂ
０．５０分２０％Ｂ
３．００分９０％Ｂ
３．５０分９０％Ｂ
３．５１分２０％Ｂ
４．００分２０％Ｂ
カラム温度：４０℃
波長：２１０ｎｍ。

【0421】

方法１２（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ装置型：Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＦＴ−ＭＳ；ＵＨＰＬＣ＋装置型：Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＵｌｔｉＭａｔｅ ３０００；カラム：Ｗａｔｅｒｓ、ＨＳＳＴ３、２．１×７５ｍｍ、Ｃ１８ １．８μｍ；移動相Ａ：水１リットル＋０．０１％ギ酸；移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋０．０１％ギ酸；勾配：０．０分１０％Ｂ→２．５分９５％Ｂ→３．５分９５％Ｂ；オーブン：５０℃；流量：０．９０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ／最適積分経路２１０−３００ｎｍ。

【0422】

方法１３：（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ装置：Ｗａｔｅｒｓ （Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ） Ｑｕａｔｔｒｏ Ｍｉｃｒｏ；装置Ｗａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ Ａｃｑｕｉｔｙ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＢＥＨＣ１８ １．７μ ５０×２．１ｍｍ；移動相Ａ：水１リットル＋０．０１ｍｏｌギ酸アンモニウム、移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル；勾配：０．０分９５％Ａ→０．１分９５％Ａ→２．０分１５％Ａ→２．５分１５％Ａ→２．５１分１０％Ａ→３．０分１０％Ａ；オーブン：４０℃；流量：０．５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。

【0423】

方法１４：（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ装置型：ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＬＴＱ−Ｏｒｂｉｔｒａｐ−ＸＬ；ＨＰＬＣ装置型：Ａｇｉｌｅｎｔ １２００ＳＬ；カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ、ＰＯＲＯＳＨＥＬＬ １２０、３×１５０ｍｍ、ＳＢ−Ｃ１８ ２．７μｍ；移動相Ａ：水１リットル＋０．１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋０．１％トリフルオロ酢酸；勾配：０．０分２％Ｂ→０．３分２％Ｂ→５．０分９５％Ｂ→１０．０分９５％Ｂ；オーブン：４０℃；流量：０．７５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。

【0424】

以下において製造が明瞭に記載されていない全ての反応物または試薬は、一般に利用可能な提供元から商業的に購入したものである。製造が同様に以下において記載されておらず、商業的に入手できなかったか、通常は使えない供給元から得た他の全ての反応物または試薬については、それらの製造が記載されている刊行文献を挙げてある。

【0425】

原料および中間体：
中間体Ｃ１１
Ｒ／Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−ホモシステイン／トリフルオロ酢酸塩（１：１）

【化121】

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【0426】

最初に（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン９９０．０ｍｇ（２．７９ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン１５．０ｍＬに入れ、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム８２８．８ｍｇ（３．９１ｍｍｏｌ）および酢酸１２９．９ｍｇ（３．２１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で５分間撹拌した。ジクロロメタン１５．０ｍＬに溶かした２−（トリメチルシリル）エチル（３−オキソプロピル）カーバメート（中間体Ｌ５８）６９８．１ｍｇ（３．２１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を各場合で、飽和炭酸ナトリウム溶液で２回および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下に溶媒を留去した。残留物をシリカゲル（移動相：ジクロロメタン／メタノール＝１００：２）で精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート１．２５ｇ（理論値の７３％）を得た。

【0427】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５５６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0428】

トリエチルアミン１５１．４ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）およびクロロアセチルクロライド１６１．６ｍｇ（１．４３ｍｍｏｌ）を、２−（トリメチルシリル）エチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート４００．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）に加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水で３回および飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル＝３：１）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート２５４．４ｍｇ（理論値の５７％）を得た。

【0429】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４９分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝６７６（Ｍ＋ＨＣＯＯ⁻）⁻。

【0430】

２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート１１７．４ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）をイソプロパノール１０．０ｍＬに溶かし、１Ｍ ＮａＯＨ ９２８．４μＬおよびＤＬ−ホモシステイン５０．２ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で４．５時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×４０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物７５．３ｍｇ（理論値の４８％）を得た。

【0431】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．２４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0432】

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ［ｐｐｍ］＝０．０３（ｓ、９Ｈ）、０．４０（ｍ、１Ｈ）、０．７５−０．９１（ｍ、１１Ｈ）、１．３０（ｍ、１Ｈ）、１．９９−２．２３（ｍ、２Ｈ）、２．６３−２．８８（ｍ、４Ｈ）、３．１８−３．６１（ｍ、５Ｈ）、３．７９−４．１０（ｍ、３Ｈ）、４．８９（ｄ、１Ｈ）、４．８９（ｄ、１Ｈ）、５．１６（ｄ、１Ｈ）、５．５６（ｓ、１Ｈ）、６．８２（ｍ、１Ｈ）、６．９１（ｓ、１Ｈ）、６．９７（ｍ、１Ｈ）、７．１３−７．３８（ｍ、６Ｈ）、７．４９（ｓ、１Ｈ）、７．６３（ｍ、１Ｈ）、８．２６（ｓ、３Ｈ）。

【0433】

中間体Ｃ１２
Ｒ／Ｓ−［（８Ｓ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−８−カルボキシ−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル］ホモシステイン

【化122】

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【0434】

原料としてメチル（２Ｓ）−４−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノエート（中間体Ｌ５７）および中間体Ｃ５２を用い、中間体Ｃ１１の合成と同様にして合成を行った。

【0435】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．１８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７７５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0436】

中間体Ｃ５２
（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン

【化123】

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【0437】

最初に、４−ブロモ−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル１０．００ｇ（４９．０１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １００．０ｍＬに入れ、炭酸セシウム２０．７６ｇ（６３．７２ｍｍｏｌ）およびベンジルブロマイド９．２２ｇ（５３．９１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、水と酢酸エチルとの間で分配し、水相を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。反応を４−ブロモ−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル９０．０ｇで繰り返した。

【0438】

二つの合わせた反応取得物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｄａｉｓｏ ３００×１００；１０μ、流量：２５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物１−ベンジル−４−ブロモ−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル１２５．１５ｇ（理論値の８７％）を得た。

【0439】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．１８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２９５［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0440】

最初に、アルゴン下に、１−ベンジル−４−ブロモ−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル４．８０ｇ（１６．３２ｍｍｏｌ）をＤＭＦに入れ、（２，５−ジフルオロフェニル）ボロン酸３．６１ｇ（２２．８５ｍｍｏｌ）、飽和炭酸ナトリウム１９．２０ｍＬ溶液および［１，１′−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］−ジクロロパラジウム（ＩＩ）：ジクロロメタン１．３３ｇ（１．６３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を８５℃で終夜撹拌した。反応混合物をセライトで濾過し、フィルターケーキを酢酸エチルで洗浄した。有機相を水で抽出し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル１００：３）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル３．６０ｇ（理論値の６７％）を得た。

【0441】

ＬＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒ_ｔ＝１．５９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３２８［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0442】

最初に１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル３．６０ｇ（１１．００ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ ９０．０ｍＬに入れ、水素化リチウムアルミニウム１．０４ｇ（２７．５０ｍｍｏｌ）（２．４Ｍ ＴＨＦ中溶液）を０℃で加えた。反応混合物を０℃で３０分間撹拌した。０℃で、飽和酒石酸カリウムナトリウム溶液を加え、酢酸エチルを反応混合物に加えた。有機相を飽和酒石酸カリウムナトリウム溶液で３回抽出した。有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留物をジクロロメタン３０．０ｍＬに溶解させた。酸化マンガン（ＩＶ）３．３８ｇ（３２．９９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で４８時間撹拌した。追加の酸化マンガン（ＩＶ）２．２０ｇ（２１．４７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物をセライトで濾過し、フィルターケーキをジクロロメタンで洗浄した。溶媒を減圧下に留去し、残留物（１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド）２．８０ｇを、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。

【0443】

ＬＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒ_ｔ＝１．４８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２９８［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0444】

最初に１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド２８．２１ｇ（９４．８８ｍｍｏｌ）と（Ｒ）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド２３．００ｇ（１８９．７７ｍｍｏｌ）を、純粋ＴＨＦ ４０３．０ｍＬに入れ、チタン（ＩＶ）イソプロポキシド６７．４２ｇ（２３７．２１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。飽和ＮａＣｌ溶液５００．０ｍＬおよび酢酸エチル１０００．０ｍＬを加え、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を珪藻土で濾過し、濾液を飽和ＮａＣｌ溶液で２回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、カラム１５００＋３４０ｇＳＮＡＰ、流量２００ｍＬ／分、酢酸エチル／シクロヘキサン１：１０）を用いて精製した。

【0445】

ＬＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒ_ｔ＝１．６３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４０１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0446】

最初に（Ｒ）−Ｎ−｛（Ｅ／Ｚ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］メチレン｝−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド２５．００ｇ（６２．４２ｍｍｏｌ）を、アルゴン下に純粋ＴＨＦに入れ、冷却して−７８℃とした。ｔｅｒｔ−ブチルリチウム（１．７Ｍペンタン中溶液）１２．００ｇ（１８７．２７ｍｍｏｌ）を−７８℃で加え、混合物をこの温度で３時間撹拌した。−７８℃で、メタノール７１．４ｍＬおよび飽和塩化アンモニウム溶液２１４．３ｍＬをその順で加え、反応混合物を昇温させて室温とし、室温で１時間撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、水で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物（Ｒ）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミドを、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。

【0447】

ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒ_ｔ＝２．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４５９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0448】

最初に（Ｒ）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド２８．００ｇ（６１．０５ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン１８６．７ｍＬに入れ、ＨＣｌ／１，４−ジオキサン溶液（４．０Ｍ）４５．８ｍＬを加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｋｉｎｅｔｉｘ１００×３０；流量：６０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって精製した。アセトニトリルを減圧下に留去し、ジクロロメタンを水系残留物に加えた。有機相を重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１６．２ｇ（理論値の７５％）を得た。

【0449】

ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒ_ｔ＝２．１０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３８［Ｍ−ＮＨ_２］^＋、７０９［２Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0450】

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ［ｐｐｍ］＝０．８７（ｓ、９Ｈ）、１．５３（ｓ、２Ｈ）、３．５９（ｓ、１Ｈ）、５．２４（ｄ、２Ｈ）、６．５６（ｓ、１Ｈ）、６．９４（ｍ、１Ｈ）、７．１０（ｄ、２Ｈ）、７．２０（ｍ、１Ｈ）、７．２６（ｍ、２Ｈ）、７．３４（ｍ、２Ｈ）、７．４６（ｍ、１Ｈ）。

【0451】

中間体Ｃ５３
（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ブタン酸

【化124】

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【0452】

最初に、中間体Ｃ５８と同様にして、中間体Ｃ５２を、ベンジル（２Ｓ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−４−オキソブタノエートで還元的にアルキル化した。中間体Ｃ５８に記載の方法に従って、２級アミノ基を２−クロロ−２−オキソ酢酸エチルでアシル化し、次に二つのエステル基を２Ｍ水酸化リチウム溶液／メタノールで加水分解した。このようにして得られた中間体をエタノールに溶解させ、パラジウム／炭素（１０％）を加え、混合物を、室温で標準気圧下に水素で１時間水素化した。脱保護化合物をジオキサン／水２：１に取り、最後の段階で、９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルクロロカーボネートの存在下にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを用いてＦｍｏｃ保護基を導入した。

【0453】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３４（Ｍ−Ｈ）⁻。

【0454】

中間体Ｃ５４
Ｎ−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル］−β−アラニン

【化125】

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【0455】

最初に、中間体Ｃ２と同様にして、中間体Ｃ５２を、ベンジルＮ−［（２Ｓ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−４−オキソブタノイル］−β−アラニネートで還元的にアルキル化した。中間体Ｃ５８について記載の方法に従って、２級アミノ基を２−クロロ−２−オキソ酢酸エチルでアシル化した。このようにして得られた中間体をメタノールに溶解させ、パラジウム／炭素（１０％）を加え、混合物を、標準気圧下に室温で水素によって１時間水素化した。エステル基を２Ｍ水酸化リチウム溶液／メタノールで加水分解した。脱保護化合物をジオキサン／水２：１に取り、最後の段階でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルクロロカーボネートを用いてＦｍｏｃ保護基を導入した。標題化合物４８ｍｇを得た。

【0456】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８０７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0457】

中間体Ｃ５８
（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタン酸

【化126】

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【0458】

最初に、中間体Ｃ２と同様にして、中間体Ｃ５２を、ベンジル（２Ｓ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−４−オキソブタノエートで還元的にアルキル化した。中間体Ｃ２７について記載の方法に従って２級アミノ基を２−クロロ−２−オキソ酢酸エチルでアシル化し、二つのエステル基を２Ｍ水酸化リチウム溶液／メタノールで加水分解した。このようにして得られた中間体をエタノールに溶解させ、パラジウム／炭素（１０％）を加え、混合物を室温で水素によって標準気圧下に１時間水素化した。

【0459】

この完全に脱保護された中間体５００ｍｇ（０．８８６ｍｍｏｌ）をジオキサン６０ｍＬに取り、１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオン２５３ｍｇ（０．９７５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン１９８μＬを加えた。室温で２４時間撹拌後、反応液を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に濃縮し、真空乾燥することで、標題化合物３１２ｍｇ（理論値の５０％）を得た。

【0460】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝４．６１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６５８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0461】

あるいは、次の経路によって中間体Ｃ５８を製造した。

【0462】

中間体Ｃ５２ ４．３ｇ（１２．２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ５２５ｍＬに溶かし、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム３．６３ｇ（１７．１２ｍｍｏｌ）および酢酸８．４ｍＬを加えた。室温で５分間撹拌後、ＤＣＭ １７５ｍＬに溶かした中間体Ｌ５７ ８．９９ｇ（２４．５ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温でさらに４５分間撹拌した。反応液をＤＣＭ ３００ｍＬで希釈し、重炭酸ナトリウム溶液１００ｍＬで２回および飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ Ｃ１８）によって精製した。適切な分画を合わせた後、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、メチル（２Ｓ）−４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノエート４．６ｇ（理論値の６１％）を得た。

【0463】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝１．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0464】

最初に、この中間体２．０６ｇ（３．３６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ７６ｍＬに入れ、トリエチルアミン２．１ｍＬの存在下に２−クロロ−２−オキソ酢酸エチル０．８１ｍＬ（７．１７ｍｍｏｌ）でアシル化した。室温で２０時間撹拌後、２−クロロ−２−オキソ酢酸エチル０．３６ｍＬおよびトリエチルアミン０．９４ｍＬを加え、反応液を室温でさらに１５分間撹拌した。混合物を酢酸エチル５００ｍＬで希釈し、５％強度クエン酸３００ｍＬで２回、飽和重炭酸ナトリウム溶液３００ｍＬで２回、および飽和塩化ナトリウム溶液１００ｍＬで１回の順で抽出し、硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。高真空乾燥によって、保護中間体２．１７ｇ（理論値の７９％）を得た。

【0465】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0466】

この中間体２．１７ｍｇ（２．６４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ ５４ｍＬおよび水２７ｍＬに溶かし、２Ｍ水酸化リチウム溶液２６ｍＬを加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、次にＴＦＡ １．４ｍＬを用いてｐＨを３から４に調節した。混合物を減圧下に濃縮した。ＴＨＦのほとんどが留去されたら、水溶液をＤＣＭで２回抽出し、減圧下に濃縮乾固させた。残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ Ｃ１８）によって精製した。適切な分画を合わせた後、溶媒を減圧下に留去し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、標題化合物１．１ｇ（理論値の６３％）を得た。

【0467】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６５６（Ｍ−Ｈ）⁻。

【0468】

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ［ｐｐｍ］＝０．０３（ｓ、９Ｈ）、０．５８（ｍ、１Ｈ）、０．７４−０．９２（ｍ、１１Ｈ）、１．４０（ｍ、１Ｈ）、３．３（ｍ、２Ｈ）、３．７（ｍ、１Ｈ）、３．８−４．０（ｍ、２Ｈ）、４．１５（ｑ、２Ｈ）、４．９および５．２（２ｄ、２Ｈ）、５．６１（ｓ、１Ｈ）、６．９４（ｍ、２Ｈ）、７．１３−７．３８（ｍ、７Ｈ）、７．４８（ｓ、１Ｈ）、７．６０（ｍ、１Ｈ）、１２．３５（ｓ、１Ｈ）。

【0469】

中間体Ｃ５９
（２Ｓ）−４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［（２Ｓ）−２−メトキシプロパノイル］アミノ）−２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ブタン酸

【化127】

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【0470】

最初に、ベンジル（２Ｓ）−４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノエートの２級アミノ基を、中間体Ｃ５３について記載の方法に従って、トリエチルアミンの存在下に（２Ｓ）−２−メトキシプロパノイルクロライド（中間体Ｃ５３の中間体）でアシル化した。得られた中間体をエタノールに取り、パラジウム／炭素（１０％）を加え、混合物を室温で水素によって標準気圧下に１時間水素化した。脱保護化合物をジオキサン／水２：１に取り、最後の段階でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルクロロカーボネートを用いてＦｍｏｃ保護基を導入した。

【0471】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６４（Ｍ−Ｈ）⁻。

【0472】

中間体Ｃ６０
（２Ｓ）−４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［（２Ｓ）−２−メトキシプロパノイル］アミノ）−２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ブタン酸

【化128】

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【0473】

中間体Ｃ５３と同様にして合成を行った。

【0474】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７５０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0475】

中間体Ｃ６１
Ｎ−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノイル］−β−アラニン

【化129】

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【0476】

中間体Ｃ５８ ６０ｍｇ（０．０９１ｍｍｏｌ）をβ−アラニネートメチルとカップリングさせ、次に２Ｍ水酸化リチウム溶液でエステル開裂することで、標題化合物を製造した。これによって、２段階で標題化合物６７ｍｇ（理論値の６１％）を得た。

【0477】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．２９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７２９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0478】

中間体Ｃ６２
Ｎ−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノイル］−Ｄ−アラニン

【化130】

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【0479】

中間体Ｃ５８およびメチルＤ−アラニネートから中間体Ｃ６１と同様にして標題化合物を製造した。

【0480】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７２９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0481】

中間体Ｃ６４
トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル｛（２Ｓ）−１−［（２−アミノエチル）アミノ］−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝カーバメート（１：１）

【化131】

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【0482】

中間体Ｃ６３と同様にして、標題化合物を中間体Ｃ５８から製造した。

【0483】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝２．４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７００（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0484】

中間体Ｃ６５
（８Ｓ）−８−｛２−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−（グリコロイル）アミノ］エチル｝−２，２−ジメチル−６，１１−ジオキソ−５−オキサ−７，１０−ジアザ−２−シラテトラデカン−１４−オン酸

【化132】

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【0485】

最初に中間体Ｌ６６ ２１５ｍｇ（０．５９ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン２５ｍＬに入れ、デス−マーチンペルヨージナン３７７ｍｇ（０．８９ｍｍｏｌ）およびピリジン１４４μＬ（１．７８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で３０分間撹拌した。反応液をジクロロメタン３００ｍＬで希釈し、有機相を各場合で、１０％強度Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３溶液２回、１０％強度クエン酸溶液および飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。これによって、アルデヒド３０５ｍｇを得て、それをそれ以上精製せずに反応させた。

【0486】

中間体Ｃ５２ １７５ｍｇ（０．４９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン５０ｍＬに溶かし、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム１４７ｍｇ（０．６９ｍｍｏｌ）および酢酸３２．５μＬを加えた。室温で５分間撹拌後、上記のアルデヒド２１４ｍｇ（０．５９３ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で終夜撹拌した。ここで、期待の生成物に代えて、２−（トリメチルシリル）エチル［（２Ｓ）−４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）−１−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）ブタン−２−イル］カーバメートが生成した。このイミドも標題化合物に変換することもできることから、反応液を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切なイミド含有分画を組み合わせた後、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、上記で挙げたイミド１９５ｍｇ（５８％）を得た。

【0487】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝３．３２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６６７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0488】

このイミド６５ｍｇ（９７．５μｍｏｌ）をジクロロメタン１５ｍＬに取り、アセトキシアセチルクロライド３６７μＬ（３．４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５９５μＬを加えた。室温で３０分間撹拌後、反応液を減圧下に加熱せずに濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせて、溶媒留去および高真空乾燥後に、（８Ｓ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−８−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）メチル］−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イルアセテート２８ｍｇ（理論値の３７％）を得た。

【0489】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0490】

この中間体２８ｍｇ（３７μｍｏｌ）をメタノール３ｍＬに溶かし、２Ｍ水酸化リチウム溶液５４８μＬを加えた。室温で１０分間撹拌後、反応液をトリフルオロ酢酸でｐＨ４に調節し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、溶媒を留去し、残留物を高真空下に乾燥して、標題化合物２６ｍｇ（理論値の９６％）を白色固体として得た。

【0491】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0492】

中間体Ｃ６６
２−（トリメチルシリル）エチル［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−｛［２−（グリシルアミノ）エチル］アミノ｝−１−オキソブタン−２−イル］カーバメート

【化133】

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【0493】

最初に、ペプチド化学の古典的方法に従って（ＨＡＴＵカップリングおよびＢｏｃ除去）、トリフルオロ酢酸／ベンジル｛２−［（２−アミノエチル）アミノ］−２−オキソエチル｝カーバメート（１：１）をＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシンおよびｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）カーバメートから製造した。

【0494】

この中間体１３ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）および中間体Ｃ５８ ２５ｍｇ（０．０３３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３ｍＬに取り、ＨＡＴＵ １９ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１７μＬを加えた。室温で１０分間撹拌後、混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、中間体１７．８ｍｇ（理論値の６０％）を得た。

【0495】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0496】

この中間体１７ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）をエタノール１０ｍＬに溶かし、パラジウム／炭素（１０％）を加え、混合物を室温で水素によって標準気圧で２時間水素化した。触媒を濾去し、減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物９ｍｇ（理論値の６２％）を得た。

【0497】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７５７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0498】

中間体Ｃ６７
９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート

【化134】

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【0499】

（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン（中間体Ｃ５２）６０５．３ｍｇ（１．７１ｍｍｏｌ）を最初に、ジクロロメタン１０．０ｍＬに入れ、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム５０６．７ｍｇ（２．３９ｍｍｏｌ）および酢酸１１７．９ｍｇ（１．９６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で５分間撹拌した。ジクロロメタン１０．０ｍＬに溶かした９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル（３−オキソプロピル）カーバメート（中間体Ｌ７０）５８０．０ｍｇ（１．９６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を各場合で、飽和炭酸ナトリウム溶液で２回および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル３：１）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物５１４．７ｍｇ（理論値の４６％）を得た。

【0500】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．１０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６３４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0501】

中間体Ｃ６９
１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−オン酸

【化135】

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【0502】

最初に（２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート（中間体Ｃ７０）１１７．０ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）および３−スルファニルプロパン酸２１．６ｍｇ（０．２０ｍｍｏｌ）を、メタノール３．０ｍＬに入れ、炭酸カリウム８９．５ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で４時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。これによって、標題化合物１０６．１ｍｇ（理論値の７３％）を得た。

【0503】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４２分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝７００（Ｍ−Ｈ）⁻。

【0504】

中間体Ｃ７０
（２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート

【化136】

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【0505】

最初に２−（トリメチルシリル）エチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート（中間体Ｃ１１の合成参照）９０８．１ｍｇ（１．６３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン５４５．６ｍｇ（５．３９ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン１０．０ｍＬに入れ、混合物を冷却して０℃とした。この温度で、クロロアセチルクロライド５９０．５ｍｇ（５．２３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を各場合で、飽和重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化アンモニウム溶液で３回洗浄した。有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物６７３．８ｍｇ（理論値の６５％）を得た。

【0506】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．５３分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝６７６（Ｍ＋ＨＣＯＯ⁻）⁻。

【0507】

中間体Ｃ７１
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化137】

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【0508】

Ｌ−システイン５３６．６ｍｇ（４．４３ｍｍｏｌ）を、水２．５ｍＬと重炭酸ナトリウム５３１．５ｍｇ（６．３３ｍｍｏｌ）に懸濁させた。イソプロパノール２５．０ｍＬに溶かした２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート（中間体Ｃ７０）４００．０ｍｇ（０．６３ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン１．１６ｇ（７．５９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１．５時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物４４９．５ｍｇ（理論値の８６％）を得た。

【0509】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．２０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0510】

中間体Ｃ７２
（９Ｓ）−９−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］メチル｝−２，２−ジメチル−６，１１−ジオキソ−５−オキサ−７，１０−ジアザ−２−シラテトラデカン−１４−オン酸

【化138】

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【0511】

最初に中間体Ｌ７２ ９０ｍｇ（０．２１２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン６ｍＬに入れ、ピリジン８６μＬ（１．０６ｍｍｏｌ）およびデス−マーチンペルヨージナン１３５ｍｇ（０．３１８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で３０分間撹拌した。反応液をジクロロメタン３０ｍＬで希釈し、有機相を１０％強度Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３溶液で２回、そして５％強度クエン酸溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。このようにして得られたアルデヒドを、それ以上精製せずに反応させた。

【0512】

中間体Ｃ５２ ６３ｍｇ（０．１７７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１５ｍＬに溶かし、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム５２．４ｍｇ（０．２４７ｍｍｏｌ）および酢酸２０．２μＬを加えた。室温で５分間撹拌後、上記のアルデヒド８９．６ｍｇ（０．２１２ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で２０分間撹拌した。反応液を減圧下に濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせた後、溶媒を減圧下に留去し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、ベンジル（９Ｒ）−９−［（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］−２，２−ジメチル−６，１１−ジオキソ−５−オキサ−７，１０−ジアザ−２−シラテトラデカン−１４−オエート７１ｍｇ（２段階で理論値の５３％）を得た。

【0513】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．２１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0514】

この中間体７０ｍｇ（９２μｍｏｌ）をジクロロメタン１５ｍＬに取り、混合物を冷却して１０℃とし、トリエチルアミン５４μＬおよびアセトキシアセチルクロライド２５．５μＬ（０．２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１時間撹拌後、同量の酸塩化物およびトリエチルアミンを加え、室温でさらに１時間撹拌後に再度加えた。反応を室温でさらに３０分間撹拌し、減圧下に濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせて、溶媒留去および残留物のアセトニトリル／水からの凍結乾燥後に、アシル化中間体４６．５ｍｇ（理論値の５９％）を得た。

【0515】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．５３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0516】

この中間体４６ｍｇ（５３μｍｏｌ）をメタノール５ｍＬに溶かし、２Ｍ水酸化リチウム溶液２．７ｍＬを加えた。室温で１０分間撹拌後、反応液を酢酸でｐＨ３から４に調節し、水１５ｍＬで希釈した。水相を酢酸エチルで抽出し、有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥して、残留物を高真空乾燥した後、標題化合物３７ｍｇ（理論値の９０％）を白色固体として得た。

【0517】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７２９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0518】

中間体Ｃ７３
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［３−（トリメチルシリル）プロパノイル］−Ｌ−システイン

【化139】

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【0519】

最初にＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）６１９ｍｇ（０．８６ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン８．８ｍＬに入れ、トリエチルアミン８７ｍｇ（０．８６ｍｍｏｌ）およびＮ−［２−（トリメチルシリル）エトキシカルボニルオキシ］ピロリジン−２，５−ジオン２２４ｍｇ（０．８６ｍｍｏｌ）を加えた。１時間後、Ｎ−［２−（トリメチルシリル）エトキシカルボニルオキシ］ピロリジン−２，５−ジオン４５ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を減圧下に濃縮し、残留物をジクロロメタンに取り、有機相を水および飽和重炭酸ナトリウム溶液で２回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、ロータリーエバポレータで濃縮し、真空乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物６０２ｍｇ（７１％、純度８７％）を得た。

【0520】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．５８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0521】

中間体Ｃ７４
トリフルオロ酢酸２−（トリメチルシリル）エチル３−アミノ−Ｎ−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノイル］−Ｄ−アラニネート（１：１）

【化140】

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【0522】

中間体Ｃ５８ ７５ｍｇ（０．１１４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １２．５ｍＬに取り、ＨＡＴＵ ６５ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン７９μＬの存在下に中間体Ｌ７５ ７８ｍｇ（０．１７１ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製後に、中間体をエタノール２０ｍＬに取り、１０％パラジウム／活性炭で室温で水素標準圧下に１時間水素化した。触媒を濾去し、溶媒を減圧下に除去し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。アセトニトリル／水１：１からの凍結乾燥によって、標題化合物６３ｍｇ（２段階で理論値の６４％）を得た。

【0523】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．１６分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0524】

中間体Ｃ７５
メチル（２Ｓ）−４−［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノエート

【化141】

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【0525】

中間体Ｃ５２ ４．３ｇ（１２．２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ５２５ｍＬに溶かし、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム３．６３ｇ（１７．１２ｍｍｏｌ）および酢酸８．４ｍＬを加えた。室温で５分間撹拌後、ＤＣＭ １７５ｍＬに溶かしたメチル（２Ｓ）−４−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノエート（古典的方法によって（３Ｓ）−３−アミノ−４−メトキシ−４−オキソブタン酸から製造）３．２３ｇ（１１．８５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温でさらに４５分間撹拌した。混合物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム溶液１００ｍＬで２回抽出し、次に飽和塩化ナトリウム溶液で抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、濃縮し、残留物を高真空乾燥して、中間体４．６ｇ（理論値の６１％）を得た。

【0526】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝１．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１４．３２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0527】

この中間体２００ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ １０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン１０５μＬおよびアセトキシアセチルクロライド７７μＬ（０．７１７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を酢酸エチルに取り、飽和重炭酸ナトリウム溶液で２回、次に飽和塩化ナトリウム溶液で抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。これによって、標題化合物２１３ｍｇ（７５％）をベージュ泡状物として得た。

【0528】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0529】

中間体Ｃ７６
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛（１Ｓ）−３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−カルボキシプロピル｝−Ｌ−アラニンアミド

【化142】

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【0530】

ペプチド化学の古典的方法に従って（塩化亜鉛によるＴｅｏｃ保護基の除去、ＨＡＴＵの存在下でのＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニンによるアシル化、およびＴＨＦ／水中での水酸化リチウムによるエステル開裂）、標題化合物を中間体Ｃ７５から製造した。

【0531】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．２３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0532】

中間体Ｃ７７
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−オキソブタノイル）−Ｌ−システイン

【化143】

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【0533】

最初に４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−オキソブタン酸（８．３９ｍｇ、４８．１μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物７．３７ｍｇ（４８．１μｍｏｌ）、（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）ビスジメチルアミノメチリウムフルオロボレート１５．５ｍｇ（（４８．１μｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン８．６０μＬ（４８．１μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１０分間撹拌した。最初にＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイントリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）４０．０ｍｇ（０．０４８ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２５．４μＬ（１４１．９μｍｏｌ）を加え、混合物を反応液に加え、反応混合物を室温で４時間撹拌した。反応混合物を、によって直接精製し分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物３５．０ｍｇ（理論値の８３％）を得た。

【0534】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝２．７６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８７３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0535】

中間体Ｃ７８
１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラペンタデカン−１５−酸

【化144】

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【0536】

最初に２−（トリメチルシリル）エチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート（中間体Ｃ１１の合成を参照）１９７ｍｇ（０．３５４ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン５．０ｍＬに入れ、混合物を加熱して４０℃とした。この温度で、ピリジン２４０μＬ（３．０ｍｍｏｌ）および４−クロロ−４−オキソブタン酸メチル２２０μＬ（１．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。ピリジン２４０μＬ（３．０ｍｍｏｌ）および４−クロロ−４−オキソブタン酸メチル２２０μＬ（１．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。ピリジン２４０μＬ（３．０ｍｍｏｌ）および４−クロロ−４−オキソブタン酸メチル２２０μＬ（１．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を各場合で５％強度ＫＨＳＯ_４溶液で３回抽出した。有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、メチル１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラペンタデカン−１５−オエート７４．１ｍｇ（理論値の３１％）を得た。

【0537】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0538】

メチル１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラペンタデカン−１５−オエート７８．３ｍｇ（１１７μｍｏｌ）を最初に、ＴＨＦ ４．０ｍＬに入れ、メタノール８００μＬ、水１６０μＬおよびＬｉＯＨ水溶液（１Ｍ）２３０μＬ（２３０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、酢酸で反応停止し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物６４．８ｍｇ（理論値の８５％）を得た。

【0539】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝２．６１分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝６５４［Ｍ−Ｈ］⁻。

【0540】

中間体Ｃ７９
トリフルオロ酢酸２−（トリメチルシリル）エチル３−アミノ−Ｎ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−Ｄ−アラニネート（１：１）

【化145】

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【0541】

最初に１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−オン酸（中間体Ｃ６９）５７．４ｍｇ（８１．８μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ５．７ｍＬに入れ、トリフルオロ酢酸２−（トリメチルシリル）エチル３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｄ−アラニネート（１：１）（中間体Ｌ７５）７４．０ｍｇ（１６４μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４３μＬ（２５０μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ６２．２ｍｇ（１６４μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、酢酸で反応停止し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチルＮ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｄ−アラニネート５２．４ｍｇ（理論値の６３％）を得た。

【0542】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．６４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２２［Ｍ］^＋。

【0543】

アルゴン下に、最初に酢酸パラジウム（ＩＩ）６．２３ｍｇ（２７．７μｍｏｌ）を、ジクロロメタン３．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン１２μＬ（８３μｍｏｌ）およびトリエチルシラン８９μＬ（５５０μｍｏｌ）を加え、混合物を５分間撹拌した。ジクロロメタン３．０ｍＬ中の２−（トリメチルシリル）エチルＮ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｄ−アラニネート５６．７ｍｇ（５５．５μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。混合物を濃縮してほぼ乾固させ、アセトニトリル／水を加え、混合物を濾過し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物３７．４ｍｇ（理論値の６７％）を得た。

【0544】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：）：Ｒ_ｔ＝２．１５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８８８［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0545】

中間体Ｃ８０
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１５−（グリシルアミノ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン−１−オイル］−Ｌ−システイントリフルオロ酢酸（１：１）

【化146】

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【0546】

アルゴン下に、最初に１−（｛Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オン酸（中間体Ｌ９０）４３．４ｍｇ（９５．１μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ２．５ｍＬに入れ、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物１４．６ｍｇ（９５．１μｍｏｌ）、（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）ビスジメチルアミノメチリウムフルオロボレート３０．５ｍｇ（９５．１μｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１６．５μＬ（９５．１μｍｏｌ）を加え、混合物を１０分間撹拌した。Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイントリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）７９．０ｍｇ（９５．１μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ２．５ｍＬに溶かし、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４９．５μＬ（２８５．３μｍｏｌ）を加え、混合物を反応液に加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１５−（｛Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン４４．２ｍｇ（理論値の４０％）を得た。

【0547】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝２．５７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１５６［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0548】

Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１５−（｛Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン６０．２ｍｇ（５２．１μｍｏｌ）をエタノール３．０ｍＬに懸濁させ、パラジウム／活性炭（１０％）６．０ｍｇを加え、混合物を水素で室温および標準圧で１時間水素化した。２回、パラジウム／活性炭（１０％）６．０ｍｇを加え、混合物を水素で室温および標準圧で１時間水素化した。触媒を濾去し、反応混合物から減圧下に溶媒を除去し、真空乾燥した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２９．４ｍｇ（理論値の５０％）を得た。

【0549】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝３．７７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0550】

中間体Ｃ８１
（Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−１−シクロヘキシルメタンアミン

【化147】

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【0551】

アルゴン下に−７８℃で、シクロヘキシルマグネシウムクロライド／ジエチルエーテル（２Ｍ）１８．７ｍＬ（３７．４５ｍｍｏｌ）をジメチル亜鉛３．１２ｍＬ（６．２４ｍｍｏｌ）のトルエン中溶液（２．０Ｍ）に加え、混合物を−７８℃で３０分間撹拌した。（Ｒ）−Ｎ−｛（Ｅ／Ｚ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］メチレン｝−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド５．０ｇ（１２．４８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ中溶液を−７８℃で加え、反応混合物をこの温度で１時間撹拌し、次に室温で４時間撹拌した。−７８℃で、飽和塩化アンモニウム溶液を加え、反応混合物を昇温させて室温とした。混合物を酢酸エチルで希釈し、水で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、酢酸エチル／シクロヘキサン２５：７５）を用いて精製した。これによって、中間体１．５９ｇ（理論値の２６％）を得た。

【0552】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝２．７６分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝４８３［Ｍ−Ｈ］⁻。

【0553】

アルゴン下に、最初にこの中間体２６４．０ｍｇ（０．５４ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン０．５ｍＬに入れ、ＨＣｌ／１，４−ジオキサン溶液（４．０Ｍ）１．３６ｍＬを加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。ジクロロメタンを加え、反応混合物を１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、メタノール／ジクロロメタン９８：２）を用いて精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物をジクロロメタンに溶解させ、重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１４８ｍｇ（理論値の７２％）を得た。

【0554】

ＬＣ−ＭＳ（方法１３）：Ｒ_ｔ＝２．０７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３６４［Ｍ−ＮＨ_２］^＋。

【0555】

中間体Ｃ８２
２−（トリメチルシリル）エチル（３−｛［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］アミノ｝プロピル）カーバメート

【化148】

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【0556】

アルゴン下に、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム３９２．２ｍｇ（１．８５ｍｍｏｌ）および酢酸９１．２９ｍｇ（１．５２ｍｍｏｌ）を、１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−１−シクロヘキシルメタンアミン（中間体Ｃ８１）５０３．０ｍｇ（１．３２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１．４ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を室温で１０分間撹拌した。２−（トリメチルシリル）エチル（３−オキソプロピル）カーバメート５７４．６（２．３８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン中溶液を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。２−（トリメチルシリル）エチル（３−オキソプロピル）カーバメート１４３ｍｇ（０．６６ｍｍｏｌ）を加えた後、混合物をさらに２時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を各場合で、飽和炭酸ナトリウム溶液で２回および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物４８８ｇ（理論値の６３％）を得た。

【0557】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝１．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５８２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0558】

中間体Ｃ８３
２−（トリメチルシリル）エチル（３−｛［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］（クロロアセチル）アミノ｝プロピル）カーバメート

【化149】

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【0559】

トリエチルアミン２８０．０ｍｇ（２．７７ｍｍｏｌ）およびクロロアセチルクロライド３９７．８ｍｇ（３．５２ｍｍｏｌ）を、４Åモレキュラーシーブスを加えた２−（トリメチルシリル）エチル（３−｛［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］アミノ｝プロピル）カーバメート（中間体Ｃ８２）４８７．９ｍｇ（０．８４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（８．４０ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を室温で６時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化アンモニウム溶液で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物４７０ｍｇ（理論値の８５％）を得た。

【0560】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝２．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８０（Ｍ＋Ｎａ）^＋。

【0561】

中間体Ｃ８４
Ｓ−｛１１−［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル｝−Ｌ−システイン

【化150】

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【0562】

Ｌ−システイン３２２．１ｍｇ（２．６６ｍｍｏｌ）を水０．１９ｍＬと重炭酸ナトリウム３１９．０ｍｇ（３．８０ｍｍｏｌ）に懸濁させた。イソプロパノール１．９０ｍＬに溶かした２−（トリメチルシリル）エチル（３−｛［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］（クロロアセチル）アミノ｝プロピル）カーバメート（中間体Ｃ８３）２５０．０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン６９３．８ｇ（４．５６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３．５時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物２７６ｍｇ（理論値の９７％）を得た。

【0563】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝２．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0564】

中間体Ｃ８５
Ｓ−｛１１−［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル｝−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−システイン

【化151】

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【0565】

Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン３４．８ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）をＳ−｛１１−［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル｝−Ｌ−システイン（１：１）（中間体Ｃ８４）１００ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）および１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン４１．５ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４．０ｍＬ）中混合物に加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した。後処理せずに、混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物８８ｍｇ（理論値の７０％）を得た。

【0566】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝２．７１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９３６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0567】

中間体Ｃ８６
１１−［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−オン酸

【化152】

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【0568】

炭酸カリウム１６１．６５ｍｇ（１．１７ｍｍｏｌ）を、２−（トリメチルシリル）エチル（３−｛［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］（クロロアセチル）アミノ｝プロピル）カーバメート（中間体Ｃ８３）２２０．０ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ）および３−スルファニルプロパン酸３９．０２ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）のメタノール（７．４５ｍＬ）中混合物および数滴の水に加えた。反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上後処理せずに用いた。これによって、標題化合物２０１ｍｇ（理論値の８３％）を得た。

【0569】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝２．７２分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝７２６（Ｍ−Ｈ）⁻。

【0570】

中間体Ｃ８７
２−（トリメチルシリル）エチル｛１３−［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘキサデカン−１６−イル｝カーバメート

【化153】

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【0571】

ＤＭＦ中のＮ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（中間体Ｌ１）５４．１８ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン７１．０１ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ １０４．４６ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール０．２３ｍＬ（０．１４ｍｍｏｌ）０．５Ｍを、１１−［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−オン酸（中間体Ｃ８６）１００ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．３７ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で５時間撹拌した。それ以上後処理せずに、混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物４１ｍｇ（理論値の３３％）を得た。

【0572】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝２．６１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９０７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0573】

中間体Ｃ８８
ｔｅｒｔ−ブチル３−［（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］ピロリジン−１−カルボキシレート・トリフルオロ酢酸（１：１）
立体異性体の混合物

【化154】

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【0574】

水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム１．７１ｇ（８．０５ｍｍｏｌ）および酢酸０．４０ｇ（６．６１ｍｍｏｌ）を、（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン（中間体Ｃ５２）２．０４ｍｇ（５．７５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５１ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を室温で５分間撹拌した。３−ホルミルピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル１．３２ｇ（６．６１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）中溶液を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を各場合で、飽和炭酸ナトリウム溶液で２回および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１．８６ｇ（理論値の５０％）を得た。

【0575】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５３８（Ｍ＋Ｈ−ＣＦ_３ＣＯ_２Ｈ）^＋。

【0576】

中間体Ｃ８９
ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝ピロリジン−１−カルボキシレート

【化155】

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【0577】

トリエチルアミン１．３６ｇ（１３．４２ｍｍｏｌ）およびクロルアセチルクロライド２．１３ｇ（１８．８７ｍｍｏｌ）を、４Åモレキュラーシーブスを入れたｔｅｒｔ−ブチル３−［（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］ピロリジン−１−カルボキシレート（中間体Ｃ８８）２．８９ｇ（４．１９ｍｍｏｌ、純度８０％）の（４２ｍＬ）ジクロロメタン中溶液に加えた。反応混合物を室温で５時間撹拌した。混合物をロータリーエバポレータで濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物の異性体１ ４４９ｍｇ（理論値の１７％）および異性体２ ４４２ｍｇ（理論値の１７％）を得た。

【0578】

異性体１ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝２．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0579】

異性体２ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝２．７８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0580】

中間体Ｃ９０
Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｌ−システイン（異性体１）

【化156】

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【0581】

Ｌ−システイン３５７．３ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ）を、重炭酸ナトリウム４８８．７ｍｇ（４．０７ｍｍｏｌ）を含む水２．３ｍＬに懸濁させた。イソプロパノール２３．０ｍＬに溶かしたｔｅｒｔ−ブチル３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝ピロリジン−１−カルボキシレート（異性体１）（中間体Ｃ８９、異性体１）３５７．０ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン１．０６ｇ（６．９８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物２５５．０ｍｇ（理論値の６２％）を得た。

【0582】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６９９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0583】

中間体Ｃ９１
Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｌ−システイン（異性体２）

【化157】

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【0584】

Ｌ−システイン４５３．５ｍｇ（３．７４ｍｍｏｌ）を、重炭酸ナトリウム４４９．２ｍｇ（５．３５ｍｍｏｌ）を含む水２．１ｍＬに懸濁させた。イソプロパノール２１．１ｍＬに溶かしたｔｅｒｔ−ブチル３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝ピロリジン−１−カルボキシレート（中間体Ｃ８９、異性体２）３２８７．４ｍｇ（０．５４ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン０．９８ｇ（６．４２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物２２１．０ｍｇ（理論値の５９％）を得た。

【0585】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．１２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６９９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0586】

中間体Ｃ９２
Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−システイン（異性体１）

【化158】

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【0587】

Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１８．４９ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を、Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｌ−システイン（中間体Ｃ９０）５０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）および１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン２２．０６ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．３ｍＬ）中混合物に加え、反応混合物を室温で４５分間撹拌した。後処理せずに、混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物６５ｍｇ（理論値の１００％、純度７１％）を得た。

【0588】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0589】

中間体Ｃ９３
Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−システイン（異性体２）

【化159】

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【0590】

Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１８．４９ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を、Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｌ−システイン（中間体Ｃ９１）５０．０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）および１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン２２．０６ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．０ｍＬ）中混合物に加え、反応混合物を室温で９０分間撹拌した。後処理せずに、混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物６３ｍｇ（理論値の９８％、純度７３％）を得た。

【0591】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0592】

中間体Ｃ９４
Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−システイン（異性体１）

【化160】

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【0593】

Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１８．５ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を、Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｌ−システイン（中間体Ｃ９０）５０．０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）および−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン１８．０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．３ｍＬ）中混合物に加え、反応混合物を室温で３０分間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物５７ｍｇ（理論値の８１％、純度８５％）を得た。

【0594】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0595】

中間体Ｃ９５
３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸（異性体１）

【化161】

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【0596】

炭酸カリウム３０２．５ｍｇ（２．１９ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝ピロリジン−１−カルボキシレート（中間体Ｃ８９、異性体１）３８４．０ｍｇ（０．６２ｍｍｏｌ）および３−スルファニルプロパン酸７３．０ｍｇ（０．６９ｍｍｏｌ）のメタノール（１４ｍＬ）および水数滴中混合物に加えた。反応混合物を５０℃で２．５時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を、それ以上後処理せずに用いた。これによって、標題化合物３５８．０ｍｇ（理論値の８４％）を得た。

【0597】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0598】

中間体Ｃ９６
３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸（異性体２）

【化162】

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【0599】

炭酸カリウム２２６．０ｍｇ（１．６４ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝ピロリジン−１−カルボキシレート（中間体Ｃ８９、異性体２）２８７．０ｍｇ（０．４５ｍｍｏｌ）および３−スルファニルプロパン酸５４．６ｍｇ（０．５１ｍｍｏｌ）のメタノール（１４ｍＬ）および水数滴中混合物に加えた。反応混合物を５０℃で２．５時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を、それ以上後処理せずに用いた。これによって、標題化合物３１８．７ｍｇ（理論値の８８％、純度８８％）を得た。

【0600】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0601】

中間体Ｃ９７
ｔｅｒｔ−ブチル３−［２−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３，８，１３−トリオキソ−５−チア−２，９，１２−トリアザテトラデカ−１−イル］ピロリジン−１−カルボキシレート（異性体２）

【化163】

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【0602】

アルゴン下に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１４．１７ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ２７．８０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を、３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸（中間体Ｃ９６）２５．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．８１ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド−エタン（１：１）トリフルオロ酢酸（中間体Ｌ１）２２．７５ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．４ｍＬ）中溶液およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。

【0603】

水を加え、混合物をジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上後処理せずに用いた。これによって、標題化合物２６ｍｇ（理論値の８４％）を得た。

【0604】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝４．３９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６。

【0605】

中間体Ｃ９８
ｔｅｒｔ−ブチル３−［２−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３，８，１３−トリオキソ−５−チア−２，９，１２−トリアザオクタデカ−１−イル］ピロリジン−１−カルボキシレート（異性体２）

【化164】

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【0606】

アルゴン下に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１４．１７ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ２７．８０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を、３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸（中間体Ｃ９６）２５．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．８１ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ−（２−アミノエチル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド−エタン（１：１）トリフルオロ酢酸３７．３０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．４ｍＬ）中溶液およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。水を加え、混合物をジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物２２ｍｇ（理論値の６３％）を得た。

【0607】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝４．５４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９１９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0608】

中間体Ｃ９９
ｔｅｒｔ−ブチル３−［２−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３，８，１９−トリオキソ−１２，１５−ジオキサ−５−チア−２，９，１８−トリアザテトラコサ−１−イル］ピロリジン−１−カルボキシレート（異性体２）

【化165】

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【0609】

アルゴン下に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１４．１７ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ２７．８０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を、３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸（中間体Ｃ９６）２５．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．８１ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド−エタン（１：１）トリフルオロ酢酸（中間体Ｌ８２）３５．０５ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．４ｍＬ）中溶液およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。水を加え、混合物をジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物２５ｍｇ（理論値の６０％）を得た。

【0610】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝４．５２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１００７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0611】

中間体Ｃ１００
２−（トリメチルシリル）エチル｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［（２Ｒ）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝カーバメート

【化166】

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【0612】

（２Ｒ）−Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド（１：１）トリフルオロ酢酸２２．２ｍｇ（０．０６８ｍｍｏｌ）を、（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタン酸（中間体Ｃ５８）４５ｍｇ（０．０６８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５．８ｍＬ）中溶液に加えた。室温で３０分間撹拌後、ＨＡＴＵ ３９ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン３６ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）を前記混合物に加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。後処理せずに、混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物７ｍｇ（理論値の１２％）を得た。

【0613】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ８５１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0614】

中間体Ｃ１０１
トリフルオロ酢酸／メチル（２Ｓ）−４−［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−アミノブタノエート（１：１）

【化167】

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【0615】

中間体Ｃ５２ ４．３ｇ（１２．２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ５２５ｍＬに溶かし、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム３．６３ｇ（１７．１２ｍｍｏｌ）および酢酸８．４ｍＬを加えた。室温で５分間撹拌後、ＤＣＭ １７５ｍＬに溶かしたメチル（２Ｓ）−４−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノエート（古典的方法を用いて（３Ｓ）−３−アミノ−４−メトキシ−４−オキソブタン酸から製造）３．２３ｇ（１１．８５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温でさらに４５分間撹拌した。混合物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム溶液１００ｍＬで２回抽出し、次に飽和塩化ナトリウム溶液で抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、濃縮し、残留物を高真空乾燥して、中間体４．６ｇ（理論値の６１％）を得た。

【0616】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝１．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１４．３２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0617】

最初に、この中間体２．０６ｇ（３．３６ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ ７６ｍＬに入れ、トリエチルアミン２．１ｍＬの存在下に２−クロロ−２−オキソ酢酸エチル０．８１ｍＬ（７．１７ｍｍｏｌ）を用いてアシル化した。室温で２０時間撹拌後、追加の２−クロロ−２−オキソ酢酸エチル０．３６ｍＬおよびトリエチルアミン０．９４ｍＬを加え、混合物を室温でさらに１５分間撹拌した。混合物を酢酸エチル５００ｍＬで希釈し、５％強度クエン酸３００ｍＬで２回、飽和重炭酸ナトリウム溶液３００ｍＬで２回、飽和塩化ナトリウム溶液１００ｍＬで１回の順で抽出し、次に硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。高真空乾燥によって、保護中間体２．１７ｇ（理論値の７９％）を得た。

【0618】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0619】

この中間体３２１ｍｇ（０．３４２ｍｍｏｌ）を、２，２，２−トリフルオロエタノール７ｍＬに溶かした。塩化亜鉛２７９．５ｍｇ（２．０５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で２時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸５９９ｍｇ（２．０５ｍｍｏｌ）および０．１％強度トリフルオロ酢酸水溶液２ｍＬを加え、混合物を次に減圧下に濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物６０ｍｇ（理論値の２６％）を得て、それはまだ少量の脱アセチル化化合物を含んでいる。

【0620】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９１分および０．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５２８および５７０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0621】

中間体Ｃ１０２
（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタン酸

【化168】

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【0622】

最初に、中間体Ｃ２と同様にして、中間体Ｃ５２について、ベンジル（２Ｓ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−４−オキソブタノエートによる還元的アルキル化を行った。次に、２級アミノ基を２−クロロ−２−オキソ酢酸エチルでアシル化し、最後に、二つのエステル基を２Ｍ水酸化リチウム／メタノール溶液を用いて加水分解した。

【0623】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６４６（Ｍ−Ｈ）⁻。

【0624】

中間体Ｃ１０３
２−（トリメチルシリル）エチルＮ−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−Ｎ２−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−グルタミネート

【化169】

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【0625】

最初にＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中で中間体Ｃ１０２ １５１ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）を中間体Ｌ９８ １２８ｍｇ（０．２３４ｍｍｏｌ）とカップリングさせることで、標題化合物を製造した。次に、室温で標準水素圧で３０分間１０％パラジウム／活性炭で水素化することでＺ保護基を除去して、標題化合物を得た。

【0626】

収量：２段階で理論値の３０％。

【0627】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．１４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0628】

中間体Ｃ１０４
２−（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）−３−［（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート

【化170】

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【0629】

水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム１．８７ｇ（８．８４ｍｍｏｌ）を、（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン２．２４ｇ（６．３１ｍｍｏｌ）のモレキュラーシーブス４Åの入ったジクロロメタン（５６．０ｍＬ）中溶液に加え、混合物を室温で１５分間撹拌した。２−（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｓ）−３−フルオロ−４−ホルミルピロリジン−１−カルボキシレート（文献：ＷＯ２０１４／１５１０３０Ａ１）２．２０ｇ（７．５８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３．５時間撹拌した。混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液および水で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物１．３９ｇ（理論値の２４％）を得た。

【0630】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．１５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６００（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0631】

中間体Ｃ１０５
２−（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）−３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート

【化171】

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【0632】

トリエチルアミン２９５．０ｍｇ（２．９１ｍｍｏｌ）およびクロロアセチルクロライド４１８．９ｍｇ（３．７１ｍｍｏｌ）を、２−（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）−３−［（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート（中間体Ｃ１０４）６９２．８ｍｇ（０．８８ｍｍｏｌ）のモレキュラーシーブス４Åを入れたジクロロメタン（８．７ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を室温で２．５時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化アンモニウム溶液で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。再度、トリエチルアミン２９５．０ｍｇ（２．９１ｍｍｏｌ）およびクロロアセチルクロライド４１８．９ｍｇ（３．７１ｍｍｏｌ）を、モレキュラーシーブス４Åを入れたジクロロメタン８．７ｍＬ中の残留物に加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化アンモニウム溶液で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮し、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物６９１ｍｇ（理論値の７４％、純度６４％）を得た。

【0633】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．７８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0634】

中間体Ｃ１０６
３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ，４Ｒ）−４−フルオロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸

【化172】

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【0635】

炭酸カリウム３１６ｍｇ（２．２９ｍｍｏｌ）を、２−（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）−３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート（中間体Ｃ１０５）６９１．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）および３−スルファニルプロパン酸７６．３ｍｇ（０．７２ｍｍｏｌ）のメタノール（１５ｍＬ）および水数滴中混合物に加えた。反応混合物を５０℃で１．５時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を、それ以上後処理せずに用いた。これによって、標題化合物５０２ｍｇ（理論値の６７％、純度６５％）を得た。

【0636】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４８分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝７４４（Ｍ−Ｈ）⁻。

【0637】

中間体Ｃ１０７
Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ，４Ｒ）−４−フルオロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｌ−システイン

【化173】

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【0638】

Ｌ−システイン２０３．６ｍｇ（１．６８ｍｍｏｌ）と重炭酸ナトリウム２０１．７ｍｇ（２．４０ｍｍｏｌ）とを水０．９５ｍＬに懸濁させた。イソプロパノール９．５ｍＬに溶かした２−（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）−３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート（中間体１０５）１７０．０ｍｇ（０．２４ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン４３８．５ｍｇ（２．４０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。酢酸エチルを混合物に加え、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物１５２ｍｇ（理論値の８３％）を得た。

【0639】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．２６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0640】

中間体Ｃ１１５
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（２−カルボキシエチル）スルファニル］アセチル｝アミノ）プロピル］−Ｌ−アラニンアミド

【化174】

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【0641】

１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−酸（２００ｍｇ、２８５μｍｏｌ）（中間体Ｃ６９）をトリフルオロエタノール１０ｍＬに溶かした。塩化亜鉛（２３３ｍｇ、１．７１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。さらに２回、塩化亜鉛（２３３ｍｇ、１．７１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−四酢酸（１．５０ｇ、５．１３ｍｍｏｌ）を加え、次に水（０．１％ＴＦＡ）を加え、次に混合物を減圧下に濃縮した。残留物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥させた。これによって、化合物３−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）プロパン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）１６２ｍｇ（理論値の８５％）が得られる。

【0642】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝５５６［Ｍ−Ｈ］⁻。

【0643】

３−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）プロパン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）（８０．０ｍｇ、１１９μｍｏｌ）をＤＭＦ ５．０ｍＬに溶かし、２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニネート（６９．４ｍｇ、純度８２％、１１９μｍｏｌ）（中間体Ｌ８８）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４１μＬ、２４０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間３０分撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。混合物を濃縮し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥させた。これによって、標題化合物８２．２ｍｇ（理論値の７５％）を得た。

【0644】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0645】

中間体Ｃ１１６
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［（｛３−［（２−カルボキシエチル）アミノ］−３−オキソプロピル｝スルファニル）アセチル］アミノ）プロピル］−Ｌ−アラニンアミド

【化175】

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【0646】

最初に、アルゴン下に、Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（２−カルボキシエチル）スルファニル］アセチル｝アミノ）プロピル］−Ｌ−アラニンアミド（５６．７ｍｇ、６１．６μｍｏｌ）（中間体Ｃ１１５）およびｔｅｒｔ−ブチルβ−アラニネート塩酸塩（１：１）（１３．４ｍｇ、７３．９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ３．０ｍＬに入れ、ＨＡＴＵ（２８．１ｍｇ、７３．９μｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３２μＬ、１８０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥させた。これによって、化合物Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−（１４−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−４，８，１３−トリオキソ−３−オキサ−１１−チア−７，１４−ジアザヘプタデカン−１７−イル）−Ｌ−アラニンアミド４１．４ｍｇ（理論値の６４％）を得た。

【0647】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．２８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０４８［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0648】

Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−（１４−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−４，８，１３−トリオキソ−３−オキサ−１１−チア−７，１４−ジアザヘプタデカン−１７−イル）−Ｌ−アラニンアミド（３９．３ｍｇ、３７．５μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．５ｍＬに溶かした。塩化亜鉛（３０．７ｍｇ、２２５μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。もう１回、塩化亜鉛（３０．７ｍｇ、２２５μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−四酢酸（１３１ｍｇ、４５０μｍｏｌ）を加え、次に水（０．１％ＴＦＡ）を加え、次に混合物を減圧下に濃縮した。残留物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を少量の水に取り、凍結乾燥した。これによって、標題化合物３０ｍｇ（理論値の８１％）を得た。

【0649】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．１２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９９２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0650】

中間体Ｌ１
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）

【化176】

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【0651】

市販の（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸およびｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）カーバメートからペプチド化学の古典的方法によって、標題化合物を製造した。

【0652】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝０．１９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１９８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0653】

中間体Ｌ２
トリフルオロ酢酸／ｒｅｌ−（１Ｒ，２Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）

【化177】

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【0654】

ＥＤＣ／ＨＯＢＴとのカップリングと次にＴＦＡによる脱保護によって、市販のシス−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−１−シクロペンタンカルボン酸５０ｍｇ（０．２１４ｍｍｏｌ）および同様に市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）６０ｍｇ（０．２３５ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、標題化合物３６ｍｇ（２段階で理論値の３８％）を得た。

【0655】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝０．２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0656】

中間体Ｌ３
トリフルオロ酢酸／（１Ｓ，２Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）

【化178】

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【0657】

ＥＤＣ／ＨＯＢＴとのカップリングおよび次にＴＦＡによる脱保護によって、市販の（１Ｓ，２Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロペンタンカルボン酸５０ｍｇ（０．２１４ｍｍｏｌ）と同様に市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）７２ｍｇ（０．２８３ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、標題化合物１３ｍｇ（２段階で理論値の１６％）を得た。

【0658】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝０．２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0659】

中間体Ｌ４
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（２−アミノエチル）−４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）シクロヘキサンカルボキサミド（１：１）

【化179】

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【0660】

市販の１−［（４−｛［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］カルボニル｝シクロヘキシル）メチル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンおよびｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）カーバメートから、ペプチド化学の古典的方法によって標題化合物を製造した。

【0661】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝０．２６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．２５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２８０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0662】

中間体Ｌ５
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル］−β−アラニンアミド（１：１）

【化180】

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【0663】

市販の１−（４−アミノフェニル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンおよびＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニンから、ペプチド化学の古典的方法によって標題化合物を製造した。

【0664】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝０．２２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．２２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２６０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0665】

中間体Ｌ６
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｌ−リシネート（１：１）

【化181】

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【0666】

最初に、ＥＤＣ／ＨＯＢＴの存在下に、市販の６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサン酸をペプチド化学の古典的方法によって製造された部分的に保護されたペプチドｔｅｒｔ−ブチルＬ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ^６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシネートとカップリングすることで、標題化合物を製造した。これを次に、温和な条件下に室温で５％強度トリフルオロ酢酸／ＤＣＭ中で撹拌することによりアミノ基で脱保護し、それによって収率３７％で標題化合物を得た。

【0667】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝１．２９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．６２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５６６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0668】

中間体Ｌ７
トリフルオロ酢酸／β−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）

【化182】

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【0669】

ペプチド化学の古典的方法に従って、順次に、ＨＡＴＵの存在下にＮ^２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンとカップリングし、ＴＦＡで脱保護し、２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−バリネートとカップリングし、ＴＦＡで脱保護し、２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニネートとカップリングし、ＴＦＡでさらに脱保護することで、市販の１−（４−アミノフェニル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンから標題化合物を製造した。標題化合物３２ｍｇを得た。

【0670】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝０．３１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．４７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0671】

中間体Ｌ８
トリフルオロ酢酸／Ｌ−アラニル−Ｎ５−カルバモイル−Ｎ−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）

【化183】

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【0672】

ペプチド化学の古典的方法に従って、順次にＨＡＴＵの存在下にＮ^２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンとカップリングし、ＴＦＡで脱保護し、２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニネートとカップリングし、ＴＦＡでさらに脱保護することで、市販の１−（４−アミノフェニル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンから標題化合物を製造した。標題化合物１７１ｍｇを得た。

【0673】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝０．２３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒ_ｔ＝０．３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４１７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0674】

中間体Ｌ９
トリフルオロ酢酸／β−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−［４−（２−メトキシ−２−オキソエチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）

【化184】

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【0675】

市販の（４−アミノフェニル）酢酸メチルから、中間体Ｌ７と同様にして標題化合物を製造した。標題化合物３２０ｍｇを得た。

【0676】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝０．４５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．４８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４９３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0677】

中間体Ｌ１０
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−ｒｅｌ−Ｎ^６−｛［（１Ｒ，２Ｓ）−２−アミノシクロペンチル］カルボニル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：２）

【化185】

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【0678】

ＥＤＣ／ＨＯＢＴを用いるシス−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−１−シクロペンタンカルボン酸とのカップリングおよび次にＴＦＡによる脱保護によって、標題化合物を中間体Ｌ６から製造した。これによって、標題化合物１２ｍｇ（２段階で理論値の５２％）を得た。

【0679】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝１．４５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0680】

中間体Ｌ１１
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ^６−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−２−アミノシクロペンチル］カルボニル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：２）

【化186】

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【0681】

ＥＤＣ／ＨＯＢＴを用いる（１Ｓ，２Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロペンタンカルボン酸とのカップリングおよび次にＴＦＡによる脱保護によって、標題化合物を中間体Ｌ６から製造した。これによって、標題化合物１１ｍｇ（２段階で理論値の３９％）を得た。

【0682】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝１．４５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0683】

中間体Ｌ１２
トリフルオロ酢酸／１−［２−（２−アミノエトキシ）エチル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）

【化187】

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【0684】

メチル２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボキシレート３８１ｍｇ（２．４６ｍｍｏｌ）を、ジオキサン／水１：１ ７ｍＬに溶かしたｔｅｒｔ−ブチル［２−（２−アミノエトキシ）エチル］カーバメート２２８ｍｇ（１．１２ｍｍｏｌ）に加えた。飽和重炭酸ナトリウム溶液１．２ｍＬを加え、反応液を室温で撹拌した。合計５日間撹拌し、同量の重炭酸ナトリウム溶液をさらに２回加えた後に、トリフルオロ酢酸で酸性とし、ロータリーエバポレータで濃縮し、分取ＨＰＬＣによって残留物を精製することで反応の後処理を行った。適切な分画を合わせ、溶媒を減圧下に除去し、残留物をアセトニトリル／水１：１から凍結乾燥した。

【0685】

残留物をジクロロメタン３ｍＬに取り、トリフルオロ酢酸１ｍＬを加えた。室温で１５分間撹拌した後、溶媒を減圧下に除去し、残留物をアセトニトリル／水１：１から凍結乾燥した。これによって、標題化合物７０ｍｇ（２段階で理論値の６７％）を樹脂状残留物として得た。

【0686】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝０．２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．１８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１８５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0687】

中間体Ｌ１３
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチルＮ^２−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−リシネート（１：１）

【化188】

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【0688】

ＥＤＣ／ＨＯＢＴの存在下に（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸をｔｅｒｔ−ブチルＮ^６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシネート塩酸塩（１：１）とカップリングし、次に中間体Ｌ６と同様にしてｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基をやさしく除去することで、標題化合物を製造した。

【0689】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝０．４２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．４３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0690】

中間体Ｌ１４
トリフルオロ酢酸／１−［２−（４−アミノピペラジン−１−イル）−２−オキソエチル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）

【化189】

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【0691】

中間体Ｌ２と同様にして２段階でｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−イルカーバメートおよび（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸から、標題化合物を製造した。

【0692】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝０．２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒ_ｔ＝０．２５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２３９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0693】

中間体Ｌ１５
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（２−アミノエチル）−３−（２−｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）プロパンアミド（１：１）

【化190】

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【0694】

ｔｅｒｔ−ブチル３−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エトキシ｝プロパノエート２．９３ｇ（１０．５８ｍｍｏｌ）をジオキサン／水１：１ １００ｍＬに溶かし、ｐＨ６から７に到達するまで、メチル２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボキシレート３．２８ｇ（２１．１５ｍｍｏｌ）および飽和重炭酸ナトリウム溶液を加えた。溶液を室温で３０分間撹拌し、１，４−ジオキサンを減圧下に留去した。次に、水２００ｍＬを加え、混合物を各場合で酢酸エチル３００ｍＬで３回抽出した。有機抽出液を合わせ、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過した。濃縮することで、ｔｅｒｔ−ブチル３−（２−｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）プロパノエートを褐色油状物として得て、それを高真空乾燥した。

【0695】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝１．５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒ_ｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３７５（Ｍ＋ＮＨ_４）^＋。

【0696】

この中間体を、標準的な方法（ＴＦＡによる脱保護、ｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）カーバメートとのカップリング、ＴＦＡによるさらなる脱保護）によって標題化合物に変換した。

【0697】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝０．２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒ_ｔ＝０．２５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0698】

中間体Ｌ１６
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン

【化191】

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【0699】

市販の１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン５３５ｍｇ（１．７３ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン９３０ｍＬを、Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン２６６ｍｇ（１．３３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２４ｍＬ）中溶液に加えた。反応を超音波浴で２４時間処理し、減圧下に濃縮して乾固させた。残った残留物を分取ＨＰＣＬによって精製し、適切な分画の濃縮および残留物の高真空乾燥後に、標題化合物３３７ｍｇ（理論値の５０％）を得た。

【0700】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝０．４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒ_ｔ＝０．５８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４６８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0701】

中間体Ｌ１７
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチル−Ｌ−リシネート（１：１）

【化192】

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【0702】

最初にＥＤＣ／ＨＯＢＴおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１６ １７２ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルＮ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシネート塩酸塩（１：１）１２５ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）をカップリングさせ、次に室温で１０％強度トリフルオロ酢酸／ＤＣＭ中で２時間撹拌することで温和な条件下にアミノ基を脱保護することで、標題化合物を製造した。アセトニトリル／水からの凍結乾燥によって、２段階で標題化合物１９４ｍｇ（理論値の４９％）を得た。

【0703】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝１．１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．５８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６５２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0704】

中間体Ｌ１８
トリフルオロ酢酸／β−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−［４−（２−メトキシ−２−オキソエチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）

【化193】

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【0705】

中間体Ｌ７と同様にしてペプチド化学の古典的方法に従って順次に、ＨＡＴＵの存在下にＮ^２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンを連結し、ＴＦＡによって脱保護し、２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニネートとカップリングし、ＴＦＡで脱保護し、２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニネートとカップリングし、ＴＦＡでさらに脱保護することで、標題化合物を（４−アミノフェニル）酢酸メチルから製造した。標題化合物３３０ｍｇを得た。

【0706】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝０．２９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．４１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４６５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0707】

中間体Ｌ１９
トリフルオロ酢酸／Ｌ−アラニル−Ｎ５−カルバモイル−Ｎ−（４−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝フェニル）−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）

【化194】

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【0708】

順次にペプチド化学の古典的方法に従って、標題化合物を１，４−フェニレンジアミンから製造した。第１段階で、１，４−フェニレンジアミン９４２ｍｇ（８．７２ｍｍｏｌ）を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ^２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン０．８ｇ（２．９ｍｍｏｌ）でモノアシル化した。第２段階で、同様にして、第２のアニリン性アミノ基を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸でアシル化した。ＴＦＡによる脱保護、２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニネートとのカップリングおよびＴＦＡによるさらなる脱保護によって、さらに３合成段階で標題化合物を得て、この経路によって１４８ｍｇを得た。

【0709】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．２１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0710】

ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒ_ｔ＝０．２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0711】

中間体Ｌ２０
トリフルオロ酢酸／Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）

【化195】

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【0712】

ペプチド化学の古典的方法に従って、中間体Ｌ８と同様にして市販の１−（４−アミノフェニル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンから、順次に、ＨＡＴＵの存在下にＮ^２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンとカップリングさせ、ＴＦＡで脱保護し、２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−バリネートとカップリングさせ、ＴＦＡでさらに脱保護することで、標題化合物を製造した。標題化合物１７１ｍｇを得た。

【0713】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝０．２８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．３９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４４５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0714】

中間体Ｌ２１
Ｌ−バリル−Ｎ^６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−［４−（２−メトキシ−２−オキソエチル）フェニル］−Ｌ−リジンアミド

【化196】

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【0715】

ペプチド化学の古典的方法に従って、順次に、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ２−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−リジンとカップリングさせ、ピペリジンで脱保護し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリネートとカップリングさせ、次に１０％パラジウム／活性炭でベンジルオキシカルボニル保護基を水素分解的に除去することで、市販の（４−アミノフェニル）酢酸メチル０．４２ｇ（２．５６ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。これによって、標題化合物３６０ｍｇ（４段階で理論値の３２％）を得た。

【0716】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝１．５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４９３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0717】

中間体Ｌ２２
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−メトキシ−３−オキソプロピル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）

【化197】

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【0718】

順次にペプチド化学の古典的方法に従って、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−ニトロ−Ｌ−フェニルアラニンから標題化合物を製造した。第１段階で最初に、この原料２．５ｇ（８．０６ｍｍｏｌ）をセシウム塩に変換し、次にＤＭＦ中ヨードメタンでメチルエステルに変換した。

【0719】

メタノール中１０％パラジウム／活性炭で水素化分解的に、ニトロ基をアミノ基に変換した。

【0720】

このようにして生成したアミノ基を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中、Ｎ５−カルバモイル−Ｎ２−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−オルニチンでアシル化した。次の段階で、ＤＭＦ中にてピペリジンでＦｍｏｃ基を除去した。

【0721】

次に、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、ＤＭＦ中、Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリンとのカップリングを行い、最後にｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基をトリフルオロ酢酸で除去した。

【0722】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝１．６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0723】

中間体Ｌ２３
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］−β−アラニンアミド（１：１）

【化198】

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【0724】

ＥＤＣＩ／ＨＯＢＴおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニンとカップリングさせ、次にトリフルオロ酢酸で脱保護することで、市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）から標題化合物を製造した。

【0725】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝０．１９分。

【0726】

中間体Ｌ２４
トリフルオロ酢酸／１−アミノ−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロプロパンカルボキサミド（１：１）

【化199】

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【0727】

市販の１−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロプロパン−カルボン酸１１４ｍｇ（０．６７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ２５ｍＬに溶かした。市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）１１０ｍｇ（０．６２３ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン３９５μＬを加え、混合物を冷却して−１０℃とした。次に、２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフルオロボレート２１７ｍｇ（０．７９３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、１０％強度クエン酸、飽和重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化ナトリウム溶液の順で抽出し、硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。高真空乾燥によって、保護中間体１５２ｍｇを得た。

【0728】

次に、これらをＤＣＭ １０ｍＬに取り、トリフルオロ酢酸１ｍＬで脱保護した。アセトニトリル／水からの凍結乾燥によって、標題化合物１５８ｍｇ（２段階で理論値の７１％）を得た。

【0729】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝０．１９分。

【0730】

ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒ_ｔ＝０．９８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２２４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0731】

中間体Ｌ２５
Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン

【化200】

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【0732】

バリル−Ｌ−アラニン３１．４ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ３．０ｍＬに溶かし、３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛２７−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２７−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４−オクタオキサヘプタコサ−１−イル｝プロパンアミド１１５．０ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン３３．７ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物７４．１ｍｇ（理論値の５８％）を得た。

【0733】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．６１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0734】

中間体Ｌ２６
Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン

【化201】

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【0735】

Ｎ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン６００．０ｍｇ（１．５８ｍｍｏｌ）を水／エタノール／ＴＨＦ（１：１：０．５）２５．０ｍＬに懸濁させ、パラジウム／炭素（１０％）を加え、混合物を室温で水素によって標準気圧下に５時間水素化した。触媒を濾去し、減圧下に溶媒留去した。得られた化合物を、それ以上精製せずに次の段階で用いた。

【0736】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．４２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２４７［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0737】

Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン１８０ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ５．０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン７４．０ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。次に、２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリネート２５４．６ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン７４．０ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３．５時間撹拌した。反応溶液を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン２９４．１ｍｇ（理論値の７６％）を得た。

【0738】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４８０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0739】

最初にＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン２７２．２ｍｇ（０．５７ｍｍｏｌ）を、酢酸エチル／エタノール／ＴＨＦ（１：１：１）２０．０ｍＬに入れ、パラジウム／活性炭２７．２ｍｇを加えた。混合物を水素で室温で標準気圧下に５時間水素化した。混合物を、セライト（登録商標）を用いて濾過し、フィルターケーキを酢酸エチル／エタノール／ＴＨＦ（１：１：１）で洗浄した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。標題化合物（１８２ｍｇ、理論値の７２％）を、それ以上精製せずに次の反応段階で用いた。

【0740】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．５３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４６［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0741】

中間体Ｌ２７
Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン

【化202】

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【0742】

最初にＬ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン（中間体Ｌ２６）３０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）および３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛２７−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２７−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４−オクタオキサヘプタコサ−１−イル｝プロパンアミド４６．１ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．５ｍＬに入れ、４−メチルモルホリン６．８ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を加えた。反応溶液を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物５５．６ｍｇ（理論値の９０％）を得た。

【0743】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0744】

中間体Ｌ２８
ｔｅｒｔ−ブチル３−ホルミル−４−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ピロリジン−１−カルボキシレート

【化203】

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【0745】

最初に１−ｔｅｒｔ−ブチル３−エチル−４−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ピロリジン−１，３−ジカルボキシレート（ＷＯ２００６／０６６８９６の文献手順に従って、この化合物を製造した。）４６１．７ｍｇ（１．１５ｍｍｏｌ）を、純粋ジクロロメタン５．０ｍＬに入れ、混合物を冷却して−７８℃とした。水素化ジイソブチルアルミニウム溶液（１Ｍ ＴＨＦ中溶液）３２６．２ｍｇ（２．２９ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下し、混合物を−７８℃で２時間撹拌した（薄層クロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝３：１）によってモニタリングした。）。水６０ｍＬに溶かした酒石酸カリウムナトリウム１．３ｇ（４．５９ｍｍｏｌ）を滴下し、反応混合物を昇温させて室温とした。酢酸エチルを反応混合物に加え、水相を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物６２９．０ｍｇを粗生成物として得て、それをそれ以上精製せずに、次の反応段階で直接用いた。

【0746】

中間体Ｌ２９
ｔｅｒｔ−ブチル３−ホルミル−４−［（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）メチル］ピロリジン−１−カルボキシレート
ジアステレオマーの混合物

【化204】

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【0747】

最初にｔｅｒｔ−ブチル３−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボキシレート（ＷＯ２００６／１０００３６の文献手順に従って製造したもの）８０７．１ｍｇ（２．３４ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン８．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン２３６．４ｍｇ（２．３４ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で、メタンスルホニルクロライド２６７．６ｍｇ（２．３４ｍｍｏｌ）を滴下し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。追加のメタンスルホニルクロライド１３３．８ｍｇ（１．１７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン１１８．２ｍｇ（１．１７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を各場合で飽和重炭酸ナトリウム溶液、５％強度硫酸水素カリウム溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。硫酸マグネシウムで脱水した後、溶媒を減圧下に留去し、残留物をＢｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、カラム５０ｇＳＮＡＰ、流量６６ｍＬ／分、シクロヘキサン／酢酸エチル）で精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル３−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）−４−｛［（メチルスルホニル）オキシ］メチル｝ピロリジン−１−カルボキシレート４０２．０ｍｇ（理論値の４１％）を得た。

【0748】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４２４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0749】

最初にｔｅｒｔ−ブチル３−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）−４−｛［（メチルスルホニル）オキシ］メチル｝ピロリジン−１−カルボキシレート４００．０ｍｇ（０．９４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ５．０ｍＬに入れ、アジ化ナトリウム９８．２ｍｇ（１．５１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を４０℃で１０時間撹拌した。追加のアジ化ナトリウム３０．７ｍｇ（０．４７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を４０℃でさらに１０時間撹拌した。酢酸エチルを加え、有機相を水で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水した後、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル３−（アジドメチル）−４−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）ピロリジン−１−カルボキシレート３０９．５ｍｇ（理論値の８９％）を得た。化合物を、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。

【0750】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．５０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３７１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0751】

ｔｅｒｔ−ブチル３−（アジドメチル）−４−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）ピロリジン−１−カルボキシレート２５０ｍｇ（０．６８ｍｍｏｌ）を酢酸エチル／エタノール（１：１）１０．０ｍＬに溶かし、パラジウム／活性炭（１０％）２５．０ｍｇを加えた。混合物を水素で室温で標準気圧下に８時間水素化した。反応液をセライト（登録商標）で濾過し、フィルターケーキを酢酸エチルで十分に洗浄した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル３−（アミノメチル）−４−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）ピロリジン−１−カルボキシレート２２６．２ｍｇ（理論値の８２％）を得た。化合物を、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。

【0752】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４５［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0753】

ｔｅｒｔ−ブチル３−（アミノメチル）−４−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）ピロリジン−１−カルボキシレート７１５．０ｍｇ（２．０８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ １５．０ｍＬに溶かし、ＴＢＡＦ溶液（１Ｍ ＴＨＦ中溶液）２．２８ｍＬ（２．２８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。溶媒を減圧下に留去し、残留物（１．５４ｇ）をそれ以上精製せずに合成の次の段階で用いた。

【0754】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．４１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２３１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0755】

最初にｔｅｒｔ−ブチル３−（アミノメチル）−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボキシレート１．５４ｇ（４．８８ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサンに入れ、塩化カルシウム（無水）５４１．８ｍｇ（４．８８ｍｍｏｌ）および炭酸カルシウム４８８．６ｍｇ（４．８８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を高撹拌した。トリエチルアミン５９２．８ｍｇ（５．８６ｍｍｏｌ）および１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオン１．５２ｇ（５．８６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。ＨＯＡｃ ６４４．９ｍｇ（１０．７ｍｍｏｌ）および酢酸エチルを加えた。有機相を水で２回および飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。硫酸マグネシウムで脱水した後、溶媒を減圧下に留去し、残留物をシリカゲル（移動相：ジクロロメタン／メタノール＝１００：１）で精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル３−（ヒドロキシメチル）−４−［（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）メチル］ピロリジン−１−カルボキシレート３４６．９ｍｇ（理論値の１９％）を得た。

【0756】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３７５［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0757】

最初にｔｅｒｔ−ブチル３−（ヒドロキシメチル）−４−［（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）メチル］ピロリジン−１−カルボキシレート８０４．０ｍｇ（２．１５ｍｍｏｌ）を、クロロホルム２０．０ｍＬおよび０．０５Ｎ炭酸カリウム／０．０５Ｎ重炭酸ナトリウム溶液（１：１）２０．０ｍＬに入れた。テトラ−ｎ−ブチル塩化アンモニウム５９．７ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ）、Ｎ−クロロコハク酸イミド４２９．９ｍｇ（３．２２ｍｍｏｌ）およびＴＥＭＰＯ ３３．５ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜高撹拌した。有機相を分離し、減圧下に溶媒を除去した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル＝３：１）によって精製した。これによって、標題化合物５１７．０ｍｇ（理論値の４６％）を得た。

【0758】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．１３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３７３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0759】

中間体Ｌ３０
ｔｅｒｔ−ブチル３−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）−４−ホルミルピロリジン−１−カルボキシレート
立体異性体の混合物

【化205】

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【0760】

最初にｔｅｒｔ−ブチル３−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボキシレート（ＷＯ２００６／１０００３６の文献手順に従って製造した化合物）２５０．０ｍｇ（０．７２ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン／ＤＭＳＯ（４：１）１２．５ｍＬに入れ、トリエチルアミン２１９．６ｍｇ（２．１７ｍｍｏｌ）を加えた。２℃で、三酸化硫黄−ピリジン錯体３４５．５ｍｇ（２．１７ｍｍｏｌ）を１回に少量ずつ加え、混合物を２℃で３時間撹拌した。追加の三酸化硫黄−ピリジン錯体３４５．５ｍｇ（２．１７ｍｍｏｌ）を１回に少量ずつ加え、混合物を室温で１７時間撹拌した。反応混合物を、ジクロロメタンと水との間で分配した。水相をジクロロメタンで３回抽出し、合わせた有機相を水で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに合成の次の段階で用いた（薄層クロマトグラフィー：石油エーテル／酢酸エチル７：３）。

【0761】

中間体Ｌ３１
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル｛［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］メチル｝マロネート

【化206】

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【0762】

ｔｅｒｔ−ブチルカーバメート５７．２ｇ（４８８．２７ｍｍｏｌ）、３７％強度ホルムアルデヒド水溶液５１．２ｍＬ（６８３．５７ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム２５．９ｇ（２４４．１３ｍｍｏｌ）を水６００ｍＬに加えた。混合物を、溶液がとなるまで昇温させ、室温で１６時間撹拌した。形成された懸濁液をジクロロメタン５００ｍＬで抽出し、有機相を分離し、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した。混合物をロータリーエバポレータで濃縮し、残留物を高真空下に乾燥して結晶固体を得た。残留物を純粋ＴＨＦ １０００ｍＬに取り、および無水酢酸３２２ｍＬ（３．４１４ｍｏｌ）およびピリジン１３８ｍＬ（１．７０７ｍｏｌ）の混合物を室温で滴下した。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、ロータリーエバポレータで水浴にて室温で濃縮した。残留物をジエチルエーテルに取り、飽和重炭酸ナトリウム溶液で３回および飽和塩化ナトリウム溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、ロータリーエバポレータで濃縮し、残留物を高真空下に２日間乾燥した。残留物を純粋ＴＨＦ ２０００ｍＬに取り、氷冷しながら１Ｍカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド／ＴＨＦ溶液４５６ｍＬ（４５６．５２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃で２０分間撹拌し、純粋ＴＨＦ ２００ｍＬに溶かしたジ−ｔｅｒｔ−ブチルマロネート１００．８ｇ（４５６．５２ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を室温で４８時間撹拌し、水を加えた。反応混合物をロータリーエバポレータで濃縮し、酢酸エチル５００ｍＬに取った。混合物を水５００ｍＬおよび飽和塩化ナトリウム溶液１００ｍＬで洗浄し、有機相を硫酸ナトリウムで脱水した。有機相をロータリーエバポレータで濃縮し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物をシリカゲルでの濾過（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル、勾配＝３０：１→５：１）によって精製した。これによって、標的化合物３７．０７ｇ（理論値の２２％）を得た。

【0763】

ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒ_ｔ＝２．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４６［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0764】

中間体Ｌ３２
ｔｅｒｔ−ブチル［３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）プロピル］カーバメート

【化207】

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【0765】

ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（アセトキシメチル）マロネート３７．０ｇ（１０７．１１ｍｍｏｌ）を純粋ＴＨＦ １０００ｍＬに溶かし、氷冷しながら２Ｍ水素化ホウ素リチウム／ＴＨＦ溶液５３５．５ｍＬ（１０７１．１０ｍｍｏｌ）を滴下した。水１９．３ｍＬ（１０７１．１０ｍｍｏｌ）を滴下し、混合物を室温で４．５時間撹拌した。反応混合物をロータリーエバポレータで濃縮し、真空乾燥した。残留物を酢酸エチル１５００ｍＬに取り、水１００ｍＬを加え、混合物を水冷しながら（軽い発熱）３０分間撹拌した。有機相を分離し、水相を酢酸エチル５００ｍＬで２回抽出した。有機相をロータリーエバポレータで濃縮し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標的化合物２０．７ｇ（理論値の９４％）を得た。

【0766】

ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒ_ｔ＝１．４９分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０６［Ｍ−Ｃ_５Ｈ_８Ｏ_２］^＋。

【0767】

中間体Ｌ３３
ｔｅｒｔ−ブチル［３−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−２−（ヒドロキシメチル）プロピル］カーバメート

【化208】

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【0768】

ｔｅｒｔ−ブチル［３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）プロピル］カーバメート２０．００ｇ（９７．４４ｍｍｏｌ）を純粋ジクロロメタン１０００ｍＬに溶かし、イミダゾール６．６３ｇ（９７．４４ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチル（クロロ）ジメチルシラン１６．１６ｇ（１０７．１８ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、半濃縮塩化ナトリウム溶液で洗浄した。水相を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、ロータリーエバポレータで濃縮し、真空乾燥した。これによって、標的化合物２８．５０ｇ（理論値の９２％）を得た。

【0769】

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ［ｐｐｍ］＝０．０２（ｓ、６Ｈ）、０．８６（ｓ、９Ｈ）、１．３７（ｓ、９Ｈ）、１．５８−１．７３（ｍ、１Ｈ）、２．９１（ｑ、２Ｈ）、３．３３−３．３６［ｍ、（２Ｈ、隠れている）］、３．５３−３．５８（ｍ、２Ｈ）、６．６５−６．７２（ｍ、１Ｈ）。

【0770】

中間体Ｌ３４
ｔｅｒｔ−ブチル（３−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−２−ホルミルプロピル）カーバメート

【化209】

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【0771】

ｔｅｒｔ−ブチル［３−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−２−（ヒドロキシ−メチル）プロピル］カーバメート１２．６５ｇ（３９．５９１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン２００ｍＬに溶かし、ジクロロメタン１５０ｍＬに溶かしたデス−マーチンペルヨージナン１９．３１ｇ（４５．５３ｍｍｏｌ）を室温で滴下した。混合物を室温で２時間撹拌し、半濃縮重炭酸ナトリウム溶液２５０ｍＬおよび１０％強度チオ硫酸ナトリウム溶液２５０ｍＬを加え、混合物を２０分間撹拌した。有機相を分離し、水相を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を水３００ｍＬで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、ロータリーエバポレータで濃縮し、真空乾燥した。これによって、標的化合物１１．３５ｇ（理論値の９０％）を得た。

【0772】

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ［ｐｐｍ］＝０．０２（ｓ、６Ｈ）、０．８４（ｓ、９Ｈ）、１．３６（ｓ、９Ｈ）、１．４８−１．５１（ｍ、１Ｈ）、３．０８−３．３２［ｍ、（１Ｈ、隠れている）］、３．５０−３．５８（ｍ、２Ｈ）、３．８１−３．９１（ｍ、１Ｈ）、６．７１（ｔ、１Ｈ）、９．６０（ｄ、１Ｈ）。

【0773】

中間体Ｌ３５
ｔｅｒｔ−ブチル（３−オキソプロピル）カーバメート

【化210】

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【0774】

文献から公知の方法に従って（例えば、Ｊｅａｎ Ｂａｓｔｉｄｅ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ２００３， ４６（１６）， ３５３６−３５４５）標題化合物を製造した。

【0775】

中間体Ｌ３６
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン

【化211】

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【0776】

Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン１００ｍｇ（０．５７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ４．０ｍＬに取り、トリエチルアミン０．０８ｍＬ（０．５７ｍｍｏｌ）を加えた。２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリン１９９．０ｍｇ（０．５７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン０．０８ｍＬ（０．５７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で４８時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水（０．１％ＴＦＡ含有））によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物７５．７ｍｇ（理論値の３３％）を得た。

【0777】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．６９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４０９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0778】

中間体Ｌ３７
Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン

【化212】

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【0779】

中間体Ｌ３６ ７５．７ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）を水／エタノール／ＴＨＦ２５ｍＬに懸濁させ、パラジウム／活性炭（１０％）７．５ｍｇを加え、混合物を室温で水素によって標準気圧下に４．５時間水素化した。触媒を濾去し、反応混合物から溶媒を除去し減圧下に、真空乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに次の段階に用いた。これによって、標題化合物６４．９ｍｇ（理論値の９３％）を得た。

【0780】

ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒ_ｔ＝０．２５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２７５［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0781】

中間体Ｌ３８
Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン

【化213】

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【0782】

最初に中間体Ｌ３７ ３８．３ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ３．０ｍＬに入れ、３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛２７−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２７−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４−オクタオキサヘプタコサ−１−イル｝プロパンアミド９６．４ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン３９．０μＬ（０．２８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。ＨＯＡｃ １６．０μＬ（０．２８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物５８．９ｍｇ（理論値の４５％）を得た。

【0783】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．６１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0784】

中間体Ｌ３９
２−（トリメチルシリル）エチル（２−スルファニルエチル）カーバメート

【化214】

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【0785】

最初に２−アミノエタンチオール塩酸塩（１：１）３００ｍｇ（２．６４ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン３．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン６６８．０ｍｇ（６．６０ｍｍｏｌ）および１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオン７１９．１ｍｇ（２．７７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２日間撹拌した（薄層クロマトグラフィー：ジクロロメタン／メタノール＝１００：１．５によってモニタリング）。酢酸エチルを加え、反応混合物を水で３回洗浄した。有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で２回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。その化合物を、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。

【0786】

中間体Ｌ４０
Ｎ−［３１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２９−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５−オクタオキサ−２８−アザヘントリアコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン

【化215】

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【0787】

Ｎ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン６００ｍｇ（１．５８ｍｍｏｌ）を水／エタノール／ＴＨＦ（１：１：０．５）２５．０ｍＬ中で、パラジウム／炭素（１０％）を用い、室温で標準気圧下に水素で水素化した。化合物Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジンを、それ以上精製せずに次の合成段階で用いる。

【0788】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２４７［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0789】

Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン１８０．０（０．７３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ５．０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン７４．０ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリネート２５４．６ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン７４．０ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３．５時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン２９４．１ｍｇ（理論値の７６％）を得た。

【0790】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４８０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0791】

Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン２７２．２ｍｇ（０．５７ｍｍｏｌ）を酢酸エチル／エタノール／ＴＨＦ（１：１：１）２０ｍＬに溶かし、パラジウム／活性炭２７．２ｍｇを加え、混合物を標準気圧下におよび室温で水素によって水素化した。混合物をセライト（登録商標）で濾過し、フィルターケーキを酢酸エチル／エタノール／ＴＨＦ（１：１：１）で十分に洗浄した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン１８２．０ｍｇ（理論値の７２％）を得た。

【0792】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．５３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４６［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0793】

Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン３０．０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）および３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛２７−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２７−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４−オクタオキサヘプタコサ−１−イル｝プロパンアミド４６．１ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １．５ｍＬに溶かし、４−メチルモルホリン６．８ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物５５．６ｍｇ（理論値の９０％）を得た。

【0794】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0795】

中間体Ｌ４１
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン

【化216】

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【0796】

Ｎ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン６００ｍｇ（１．５８ｍｍｏｌ）を、水／エタノール／ＴＨＦ（１：１：０．５）２５．０ｍＬ中、パラジウム／炭素（１０％）を用いて、室温で標準気圧下に水素によって水素化した。化合物Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジンを、それ以上精製せずに次の合成段階で用いる。

【0797】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２４７［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0798】

Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン１８０．０（０．７３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ５．０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン７４．０ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリネート２５４．６ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン７４．０ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３．５時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン２９４．１ｍｇ（理論値の７６％）を得た。

【0799】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４８０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0800】

Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン２７２．２ｍｇ（０．５７ｍｍｏｌ）を酢酸エチル／エタノール／ＴＨＦ（１：１：１）２０．０ｍＬに溶かし、パラジウム／活性炭２７．２ｍｇを加え、混合物を標準気圧下におよび室温で、水素によって水素化した。混合物をセライト（登録商標）で濾過し、フィルターケーキを酢酸エチル／エタノール／ＴＨＦ（１：１：１）で十分に洗浄した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン１８２．０ｍｇ（理論値の７２％）を得た。

【0801】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．５３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４６［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0802】

Ｌ−バリル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン３０．０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）および３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛１５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカ−１−イル｝プロパンアミド３４．３ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １．５ｍＬに溶かし、４−メチルモルホリン６．８ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物４０．６ｍｇ（理論値の８２％）を得た。

【0803】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0804】

中間体Ｌ４２
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン

【化217】

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【0805】

最初にＬ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン（中間体Ｌ３７）５０．０ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦに入れ、３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛１５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカ−１−イル｝プロパンアミド９３．６ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン３６．９ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。ＨＯＡｃ ２１．９ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２０．６ｍｇ（理論値の１４％）を得た。

【0806】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．５５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0807】

中間体Ｌ４３
Ｎ−［６７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−６５−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，４６，４９，５２，５５，５８，６１−イコサオキサ−６４−アザヘプタヘキサコンタン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン

【化218】

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【0808】

最初にＬ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチン（中間体Ｌ３７）１１．３ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦに入れ、３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛６３−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６３−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０−イソサオキサトリヘキサコンタ−１−イル｝プロパンアミド５０．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン８．３ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。ＨＯＡｃ ４．９ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１５．８ｍｇ（理論値の２０％）を得た。

【0809】

ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒ_ｔ＝０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１３７７［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0810】

中間体Ｌ４４
Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン

【化219】

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【0811】

Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン７３．３ｍｇ（０．３９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ７．０ｍＬに溶かし、３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛１５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカ−１−イル｝プロパンアミド２００．０ｍｇ（０．３９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン７８．８ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１０３．３ｍｇ（理論値の４５％）を得た。

【0812】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．５８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５８７［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0813】

中間体Ｌ４５
ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−オキソブタノエート

【化220】

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【0814】

ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−ホモセリネート２．００ｇ（７．２６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン９０ｍＬに溶かし、ピリジン１．７６ｍＬおよび１，１，１−トリアセトキシ−１λ^５，２−ベンゾヨードキソール−３（１Ｈ）−オン（デス−マーチンペルヨージナン）４．６２ｇ（１０．９０ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で２時間撹拌し、ジクロロメタン２００ｍＬで希釈し、１０％強度チオ硫酸ナトリウム溶液で２回、次に５％強度クエン酸で２回および飽和重炭酸ナトリウム溶液で２回の順で抽出した。有機相を分離し、硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下に濃縮した。ジエチルエーテル１００ｍＬおよびシクロヘキサン（体積比＝１：１）を残留物に加え、混合物を若干濃縮して、白色沈殿を生成させた。これを吸引濾過した。濾液をロータリーエバポレータで濃縮し、高真空乾燥して、標的化合物１．７４ｇ（理論値の８８％）を明黄色油状物として得た。

【0815】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２７４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0816】

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ［ｐｐｍ］＝１．３８（ｓ、１８Ｈ）、２．６４−２．８１（ｍ、２Ｈ）、４．３１−４．３６（ｍ、１Ｈ）、７．２３（ｄ、１Ｈ）、９．５９（ｓ、１Ｈ）。

【0817】

中間体Ｌ４６
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］−Ｌ−グルタミネート（１：１）

【化221】

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【0818】

最初にＥＤＣ／ＨＯＢＴおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）２００ｍｇ（０．７９ｍｍｏｌ）を（４Ｓ）−５−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−オキソペンタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）２６３ｍｇ（０．８７ｍｍｏｌ）とカップリングさせ、次に１０％強度トリフルオロ酢酸／ＤＣＭ中室温で１時間撹拌することによって温和な条件下でアミノ基を脱保護することにより、標題化合物を製造した。アセトニトリル／水からの凍結乾燥によって、２段階で標題化合物８５ｍｇ（理論値の２０％）を得た。

【0819】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．３７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３２６［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0820】

中間体Ｌ４７
トリフルオロ酢酸／β−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ５−カルバモイル−Ｎ−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（１：１）

【化222】

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【0821】

中間体Ｌ８を２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニネートとカップリングさせ、次にＴＦＡで脱保護することで、標題化合物を製造した。

【0822】

ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒ_ｔ＝１．３６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４８８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0823】

中間体Ｌ４８
トリフルオロ酢酸／（１Ｒ，２Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）

【化223】

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【0824】

中間体Ｌ２と同様にして、市販の（１Ｒ，２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロペンタンカルボン酸から標題化合物を製造した。

【0825】

ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒ_ｔ＝１．２２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0826】

中間体Ｌ４９
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（ブロモアセチル）−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｌ−リシネート（１：１）

【化224】

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【0827】

最初にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にジクロロメタン中で、市販のブロモ無水酢酸を、ペプチド化学の古典的方法に従って製造された部分的に保護されたペプチドｔｅｒｔ−ブチルＬ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ^６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシネートとカップリングさせることで、標題化合物を製造した。これを次に、温和な条件下に１０％強度トリフルオロ酢酸／ＤＣＭ中で室温で撹拌することにより、アミノ基で脱保護して、標題化合物を２段階で収率４９％で得た。

【0828】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５９３および５９５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0829】

中間体Ｌ５０
トリフルオロ酢酸／（１Ｓ，３Ｒ）−３−アミノ−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）

【化225】

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【0830】

Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＨＡＴＵとカップリングさせ、次にＴＦＡで脱保護することで、市販の（１Ｓ，３Ｒ）−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロペンタンカルボン酸および同様に市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）から標題化合物を製造した。

【0831】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝０．２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒ_ｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0832】

中間体Ｌ５１
トリフルオロ酢酸／（１Ｒ，３Ｒ）−３−アミノ−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）

【化226】

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【0833】

Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＨＡＴＵとカップリングさせ、次にＴＦＡで脱保護することで、市販の（１Ｒ，３Ｒ）−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロペンタンカルボン酸および同様に市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）から標題化合物を製造した。

【0834】

ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒ_ｔ＝０．９８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５０（Ｍ−Ｈ）⁻。

【0835】

中間体Ｌ５２
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（２−アミノエチル）−２−ブロモアセトアミド（１：１）

【化227】

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【0836】

ｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）カーバメート４２０ｍｇ（２．６２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン５０ｍＬに取り、ブロモ無水酢酸８１７ｍｇ（３．１５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン９１３μＬ（５．２４ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で１時間撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。

【0837】

これによって、保護された中間体５７７ｍｇを得て、それを次にジクロロメタン５０ｍＬに取り、トリフルオロ酢酸１０ｍＬを加えた。室温で１時間撹拌後、反応液を減圧下に濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、標題化合物７０５ｍｇ（理論値の６５％）を得た。

【0838】

ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒ_ｔ＝０．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１８１および１８３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0839】

中間体Ｌ５３
トリフルオロ酢酸／（１Ｓ，３Ｓ）−３−アミノ−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）

【化228】

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【0840】

Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＨＡＴＵとカップリングさせ、次にＴＦＡで脱保護することで、市販の（１Ｓ，３Ｓ）−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロペンタンカルボン酸および同様に市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）から標題化合物を製造した。

【0841】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝０．１９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒ_ｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５０（Ｍ−Ｈ）⁻。

【0842】

中間体Ｌ５４
トリフルオロ酢酸／（１Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−Ｎ−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル］シクロペンタンカルボキサミド（１：１）

【化229】

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【0843】

Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＨＡＴＵとカップリングさせ、次にＴＦＡで脱保護することで、市販の（１Ｒ，３Ｓ）−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロペンタンカルボン酸および同様に市販のトリフルオロ酢酸／１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）から標題化合物を製造した。

【0844】

ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒ_ｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0845】

中間体Ｌ５５
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ６−Ｄ−アラニル−Ｎ２−｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝−Ｌ−リシネート（１：１）

【化230】

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【0846】

最初にＨＡＴＵの存在下に中間体Ｌ６をＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アラニンとカップリングさせ、次に５％強度トリフルオロ酢酸／ＤＣＭ中室温で９０分間撹拌することで温和な条件下にアミノ基で脱保護することで、標題化合物を製造した。

【0847】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝１．３５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．６７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６３７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0848】

中間体Ｌ５６
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ６−｛［（１Ｒ，３Ｓ）−３−アミノシクロペンチル］カルボニル｝−Ｌ−リシネート（１：１）

【化231】

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【0849】

最初にＨＡＴＵの存在下に中間体Ｌ６を（１Ｒ，３Ｓ）−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロペンタンカルボン酸とカップリングさせ、次に２５％強度トリフルオロ酢酸／ＤＣＭ中室温で１５分間撹拌することで温和な条件下にアミノ基で脱保護することで、標題化合物を製造した。

【0850】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝１．４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0851】

中間体Ｌ５７
メチル（２Ｓ）−４−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノエート

【化232】

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【0852】

最初にＬ−アスパラギン酸メチル塩酸塩５００．０ｍｇ（２．７２ｍｍｏｌ）および２−（トリメチルシリル）エチル２，５−ジオキソピロリジン−１−カルボキシレート７０６．３ｍｇ（２．７２ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン５．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン８２６．８ｍｇ（８．１７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×４０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物（３Ｓ）−４−メトキシ−４−オキソ−３−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタン酸５８３．９ｍｇ（理論値の７４％）を得た。

【0853】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝２９０（Ｍ−Ｈ）⁻。

【0854】

最初に（３Ｓ）−４−メトキシ−４−オキソ−３−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタン酸５９２．９ｍｇを、１，２−ジメトキシエタン１０．０ｍＬに入れ、混合物を冷却して−１５℃とし、４−メチルモルホリン２０５．８ｍｇ（２．０４ｍｍｏｌ）およびクロルギ酸イソブチル２７７．９ｍｇ（２．０４ｍｍｏｌ）を加えた。１５分後に沈殿を吸引濾過し、各場合１，２−ジメトキシエタン１０．０ｍＬを用いて２回濾過した。濾液を冷却して−１０℃とし、水１０ｍＬに溶かした水素化ホウ素ナトリウム１１５．５ｍｇ（３．０５ｍｍｏｌ）を高撹拌しながら加えた。相を分離し、有機相を各場合で飽和重炭酸ナトリウム溶液で１回および飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物メチルＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−ホモセリネート５１５．９ｍｇ（理論値の９１％）を得た。

【0855】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２７８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0856】

最初にメチルＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−ホモセリネート５５４．９ｍｇ（２．００ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン３０．０ｍＬに入れ、デス−マーチンペルヨージナン１．２７ｇ（３．０ｍｍｏｌ）およびピリジン４７４．７ｍｇ（６．００ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。４時間後、反応液をジクロロメタンで希釈し、有機相を各場合で、１０％強度Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３溶液で３回、１０％強度クエン酸溶液および飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。これによって、標題化合物５６５．７ｍｇ（理論値の９７％）を得た。

【0857】

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ［ｐｐｍ］＝０．０３（ｓ、９Ｈ）、０．９１（ｍ、２Ｈ）、２．７０−２．７９（ｍ、１Ｈ）、２．８８（ｄｄ、１Ｈ）、３．６３（ｓ、３Ｈ）、４．０４（ｍ、２Ｈ）、４．５５（ｍ、１Ｈ）、７．５４（ｄ、１Ｈ）、９．６０（ｔ、１Ｈ）。

【0858】

中間体Ｌ５８
２−（トリメチルシリル）エチル（３−オキソプロピル）カーバメート

【化233】

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【0859】

３−アミノ−１−プロパノール４３４．４ｍｇ（５．７８ｍｍｏｌ）および２−（トリメチルシリル）エチル２，５−ジオキソピロリジン−１−カルボキシレート１．５０ｇ（５．７８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１０．０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン５８５．３ｍｇ（５．７８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を水および飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去した。残留物２−（トリメチルシリル）エチル（３−ヒドロキシプロピル）カーバメート（９９６．４ｍｇ、理論値の７９％）を高真空乾燥し、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。

【0860】

最初に２−（トリメチルシリル）エチル（３−ヒドロキシプロピル）カーバメート８０７．０ｍｇ（３．６８ｍｍｏｌ）を、クロロホルム１５．０ｍＬおよび０．０５Ｎ炭酸カリウム／０．０５Ｎ重炭酸ナトリウム溶液（１：１）１５．０ｍＬに入れた。テトラ−ｎ−ブチル塩化アンモニウム１０２．２ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）、Ｎ−クロロコハク酸イミド７３６．９ｍｇ（５．５２ｍｍｏｌ）およびＴＥＭＰＯ ５７．５ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜高撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を高真空乾燥し、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた（８９０．３ｍｇ）。

【0861】

中間体Ｌ５９
トリフルオロ酢酸／１−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１：１）

【化234】

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【0862】

最初にｔｅｒｔ−ブチル（２−｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エトキシ｝エチル）カーバメート３００．０ｍｇ（０．９１ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタンに入れ、ＴＦＡ ４．２ｇ（３６．５４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した（ＴＬＣ：ジクロロメタン／メタノール１０：１によってモニタリング）。揮発性成分を減圧下に留去し、残留物についてジクロロメタンと４回共蒸留を行った。残留物を高真空乾燥し、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。

【0863】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．１９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２２９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0864】

中間体Ｌ６０
６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイルクロライド

【化235】

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【0865】

６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサン酸２００．０ｍｇ（０．９５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン４．０ｍＬに溶かし、塩化チオニル３３８．０ｍｇ（２．８４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、ＤＭＦ １滴を加えた。混合物をさらに１時間撹拌した。溶媒を減圧下に留去し、残留物をジクロロメタンで３回共蒸留した。粗生成物を、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。

【0866】

中間体Ｌ６１
トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチルＮ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｌ−リシネート（１：１）

【化236】

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【0867】

最初に、ペプチド化学の古典的方法に従って（ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いる２−（トリメチルシリルエタノールによるエステル化、水素化分解、ＨＡＴＵの存在下でのＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニンとのカップリング、およびさらなる水素化分解）、トリペプチド誘導体２−（トリメチルシリル）エチルＬ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシネートをＮ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジンから製造した。ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、この部分保護されたペプチド誘導体を市販の６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサン酸とカップリングさせることで、標題化合物を製造した。これを次に、５％強度トリフルオロ酢酸／ＤＣＭ中室温で２．５時間撹拌することで温和な条件下にアミノ基で脱保護し、エステル保護基は保持されたままとした。後処理および分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物４３８ｍｇを得た。

【0868】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝１．６９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0869】

中間体Ｌ６２
トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチルＮ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチル−Ｌ−リシネート（１：１）

【化237】

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【0870】

最初に、ペプチド化学の古典的方法に従って、２−（トリメチルシリル）エチルＮ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシネートをＮ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジンから製造した。この中間体１４８ｍｇ（０．４３ｍｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ １９５ｍｇ（０．５１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１４９μＬの存在下に、中間体Ｌ１６ ２００ｍｇ（０．４３ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。濃縮および分取ＨＰＬＣによる残留物の精製後に、保護中間体をＤＣＭ ２０ｍＬに取り、トリフルオロ酢酸２ｍＬを加え、室温で１時間撹拌することでｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基を除去した。濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、２５４ｍｇ（２段階で理論値の６３％）を得た。

【0871】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝１．５１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．６８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６９６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0872】

中間体Ｌ６３
（４Ｓ）−４−｛［（２Ｓ）−２−｛［（２Ｓ）−２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝−３−メチルブタノイル］アミノ｝プロパノイル］アミノ｝−５−オキソ−５−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］ペンタン酸

【化238】

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【0873】

最初に、ペプチド化学の古典的方法に従って（ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いる２−（トリメチルシリルエタノールによるエステル化、トリフルオロ酢酸によるＢｏｃ保護基の脱離、ＨＡＴＵの存在下でのＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニンとのカップリングおよびメタノール中１０％パラジウム／活性炭での水素化分解）、トリペプチド誘導体（４Ｓ）−４−｛［（２Ｓ）−２−｛［（２Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタノイル］アミノ｝プロパノイル］アミノ｝−５−オキソ−５−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］ペンタン酸を（２Ｓ）−５−（ベンジルオキシ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−オキソペンタン酸から製造した。この部分保護されたペプチド誘導体を市販の１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンとカップリングさせることで、標題化合物を製造した。後処理および分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物６０１ｍｇを得た。

【0874】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0875】

中間体Ｌ６４
（４Ｓ）−４−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝−５−オキソ−５−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］ペンタン酸

【化239】

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【0876】

ペプチド化学の古典的方法に従って（ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いる２−（トリメチルシリルエタノールによるエステル化、トリフルオロ酢酸によるＢｏｃ保護基の脱離、メタノール中１０％パラジウム／活性炭でのベンジルエステルの水素化分解的開裂、およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン存在下での１−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンとのカップリング）、標題化合物を（２Ｓ）−５−（ベンジルオキシ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−オキソペンタン酸から製造した。

【0877】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３８５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0878】

中間体Ｌ６５
トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｌ−アラニネート（１：１）

【化240】

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【0879】

ペプチド化学の古典的方法に従って（ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いる２−（トリメチルシリルエタノールによるエステルおよびトリフルオロ酢酸によるＢｏｃ保護基の脱離）、標題化合物を３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニンから製造した。これによって、標題化合物３７３ｍｇ（２段階で理論値の７９％）を得た。

【0880】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0881】

中間体Ｌ６６
メチル（８Ｓ）−８−（２−ヒドロキシエチル）−２，２−ジメチル−６，１１−ジオキソ−５−オキサ−７，１０−ジアザ−２−シラテトラデカン−１４−オエート

【化241】

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【0882】

最初に（３Ｓ）−３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタン酸１０００ｍｇ（２．８４ｍｍｏｌ）を、１，２−ジメトキシエタン１０．０ｍＬに入れ、４−メチルモルホリン３４４．４ｍｇ（３．４ｍｍｏｌ）およびクロルギ酸イソブチル５０４ｍｇ（３．６９ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１０分間撹拌後、反応液を冷却して５℃とし、高撹拌しながら、水３ｍＬに溶かした水素化ホウ素ナトリウム１６１ｍｇ（４．２６ｍｍｏｌ）を１回に少量ずつ加えた。１時間後、同量の水素化ホウ素ナトリウムを再度加え、反応液をゆっくり昇温させて室温とした。水１７０ｍＬを加え、反応液を、各場合酢酸エチル２００ｍＬで４回抽出した。相を分離し、有機相をクエン酸で１回、次に飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物ベンジルｔｅｒｔ−ブチル［（２Ｓ）−４−ヒドロキシブタン−１，２−ジイル］ビスカーバメート７６０ｍｇ（理論値の７８％）を得た。

【0883】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0884】

塩化水素／ジオキサン１３ｍＬに溶かしたこの中間体７６０ｍｇ（２．１６ｍｍｏｌ）を室温で２０分間撹拌した。反応液を濃縮して５ｍＬとし、ジエチルエーテルを加えた。沈殿を濾過し、アセトニトリル／水１：１から凍結乾燥した。

【0885】

このようにして得られた生成物をＤＭＦ １３２ｍＬに溶解させ、４−メトキシ−４−オキソブタン酸３４５．５ｍｇ（２．３５ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ ９７０ｍｇ（２．５５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１０２５μＬを加えた。混合物を室温で５分間撹拌した。溶媒を減圧下に除去し、残った残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、アセトニトリルを減圧下に留去した。残った水相を酢酸エチルで２回抽出し、有機相を濃縮し、真空乾燥した。

【0886】

このようにして得られた中間体をメタノールに取り、室温で水素標準圧下に１時間１０％パラジウム／活性炭で水素化した。触媒を濾去し、溶媒を減圧下に除去した。

【0887】

この脱保護化合物２４７ｍｇをＤＭＦ ２０ｍＬに取り、１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオン３５２ｍｇ（１．３６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５９２μＬを加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、５段階で合計収率２１％で標題化合物２１８ｍｇを得た。

【0888】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３６３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0889】

中間体Ｌ６７
トリフルオロ酢酸／２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル−β−アラニネート（１：１）

【化242】

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【0890】

ジクロロメタン１０ｍＬ中１．５当量のＥＤＣＩおよび０．１当量の４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンの存在下にＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニン１３４ｍｇ（０．７１ｍｍｏｌ）とカップリングさせ、次にトリフルオロ酢酸で脱保護することで、市販の１−（２−ヒドロキシエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン５０ｍｇ（０．３５４ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。

【0891】

収量：５６ｍｇ（２段階で理論値の４８％）。

【0892】

ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒ_ｔ＝１．１５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２１３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0893】

中間体Ｌ６８
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド（１：１）

【化243】

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【0894】

ペプチド化学の古典的方法に従って、中間体Ｌ１と同様にして、市販の（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパン酸およびｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）カーバメートから標題化合物を製造した。

【0895】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２１２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0896】

中間体Ｌ６９
トリフルオロ酢酸／１−［（ベンジルオキシ）カルボニル］ピペリジン−４−イル−Ｌ−バリル−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチネート（１：１）

【化244】

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【0897】

ペプチド化学の古典的方法によって、ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いるＮ２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンによるエステル化、順次、ＴＦＡによるＢｏｃ除去、次にＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン存在下でのＮ−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリンとのカップリング、最後にさらなるＴＦＡによるＢｏｃ除去により、標題化合物を市販のベンジル４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレートから製造した。

【0898】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．６２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４９２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0899】

中間体Ｌ７０
９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル（３−オキソプロピル）カーバメート

【化245】

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【0900】

最初に９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル（３−ヒドロキシプロピル）カーバメート１０００．０ｍｇ（３．３６ｍｍｏｌ）を、クロロホルム１５．０ｍＬおよび０．０５Ｎ炭酸カリウム／０．０５Ｎ重炭酸ナトリウム溶液（１：１）１５．０ｍＬに入れた。テトラ−ｎ−ブチル塩化アンモニウム９３．５ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）、Ｎ−クロロコハク酸イミド６７３．６ｍｇ（５．０４ｍｍｏｌ）およびＴＥＭＰＯ ５２．５ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜高撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を高真空乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィー（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル３：１−１：１）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物５８９．４ｍｇ（理論値の５８％）を得た。

【0901】

ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒ_ｔ＝２．１５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２９６（Ｍ−Ｈ）^＋。

【0902】

中間体Ｌ７１
ｔｅｒｔ−ブチル［４−（クロロカルボニル）フェニル］カーバメート

【化246】

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【0903】

最初に４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］安息香酸１００．０ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン２．０ｍＬに入れ、オキサリルジクロライド６４．２ｍｇ（０．５１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌した（ＴＬＣ：ジクロロメタン／メタノールによってモニタリング）。追加のオキサリルジクロライド１９２．６ｍｇ（１．５３ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ １滴を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を減圧下に留去し、残留物をジクロロメタンと繰り返し共蒸留した。残留物を、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。

【0904】

中間体Ｌ７２
ベンジル（９Ｓ）−９−（ヒドロキシメチル）−２，２−ジメチル−６，１１−ジオキソ−５−オキサ−７，１０−ジアザ−２−シラテトラデカン−１４−オエート

【化247】

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【0905】

ペプチド化学の古典的方法に従って、Ｚ保護基の水素分解的除去、次にＥＤＣＩ／ＨＯＢＴの存在下に４−（ベンジルオキシ）−４−オキソブタン酸とのカップリング、次にＴＦＡによるＢｏｃ保護基の脱離、最後にトリエチルアミンの存在下での１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオンとの反応によって、市販のベンジルｔｅｒｔ−ブチル［（２Ｓ）−３−ヒドロキシプロパン−１，２−ジイル］ビスカーバメートから標題化合物を製造した。

【0906】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４２５［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0907】

中間体Ｌ７３
Ｎ−（２−アミノエチル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド

【化248】

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【0908】

６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサン酸３９５．５ｍｇ（１．８７ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１．２１ｇ（９．３６ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ８５４．３ｍｇ（２．２５ｍｍｏｌ）をｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）カーバメート３００ｍｇ（１．８７ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で５分間撹拌した。混合物の濃縮後、残留物をＤＣＭに取り、水で洗浄した。有機相をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。これによって、標題化合物４０８ｍｇ（３３％、純度５３％）を得て、それをそれ以上精製せずに用いた。

【0909】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３５４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0910】

ＴＦＡ １ｍＬを、ｔｅｒｔ−ブチル（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エチル）カーバメート（４０８ｍｇ、０．３６５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（７ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で０．５時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物をジクロロメタンと２回共蒸留した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物３８４ｍｇ（９４％、純度５７％）を得た。

【0911】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．２６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0912】

中間体Ｌ７４
３−［２−［２−［２−［２−［［２−（２，５−ジオキソピロール−１−イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸

【化249】

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【0913】

ｔｅｒｔ−ブチル３−［２−［２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノエート１０７ｍｇ（０．３３５ｍｍｏｌ）および（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）２−（２，５−ジオキソピロール−１−イル）アセテート９３ｍｇ（０．３６９ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド５ｍＬに溶かし、Ｎ−メチルモルホリン０．０７４ｍＬ（０．６７１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。酢酸０．０４８ｍＬ（０．８３８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ−ブチル３−［２−［２−［２−［２−［［２−（２，５−ジオキソピロール−１−イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノエート１３３ｍｇ（８６％、純度１００％）を得た。

【0914】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４５９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0915】

ＴＦＡ ０．５ｍＬをｔｅｒｔ−ブチル３−［２−［２−［２−［２−［［２−（２，５−ジオキソピロール−１−イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノエート（１３０ｍｇ、０．２８４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水に取り、凍結乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物１０２ｍｇ（９０％、純度１００％）を得た。

【0916】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．５２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４０２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0917】

中間体Ｌ７５
トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｄ−アラニネート（１：１）

【化250】

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【0918】

ペプチド化学の古典的方法に従って（ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いる２−（トリメチルシリルエタノールによるエステル化およびトリフルオロ酢酸によるＢｏｃ保護基の脱離）、標題化合物を３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アラニンから製造した。これによって、標題化合物４０５ｍｇ（２段階で理論値の５８％）を得た。

【0919】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0920】

中間体Ｌ７６
（２Ｓ）−２−ブロモ−４−オキソ−４−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］ブタン酸

【化251】

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【0921】

最初に、ペプチド化学の古典的方法に従って（ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いる２−トリメチルシリルエタノールによるエステル化、Ｚ保護基およびベンジルエステルの水素分解的除去）、好適に保護されたアスパラギン酸誘導体を、（３Ｓ）−４−（ベンジルオキシ）−３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−４−オキソブタン酸から製造した。

【0922】

このようにして得られた（２Ｓ）−２−アミノ−４−オキソ−４−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］ブタン酸４７０ｍｇ（１．８ｍｍｏｌ）を、水１０ｍＬに懸濁させ、１Ｍ塩酸１．８ｍＬおよび濃硫酸０．５ｍＬを加え、次に臭化カリウム８６３ｍｇ（７．２５ｍｍｏｌ）を加えた。１０℃で、３０分の期間をかけて亜硝酸ナトリウム１５０ｍｇ（２．１７５ｍｍｏｌ）の水（１ｍＬ）中溶液を滴下し、混合物を１０から１５℃で２時間撹拌した。混合物を酢酸エチル５０ｍＬで抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒の留去および分取ＨＰＬＣによる生成物の精製によって、標題化合物２６０ｍｇ（理論値の４８％）を得た。

【0923】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０３分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝２９５および２９７（Ｍ−Ｈ）⁻。

【0924】

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ［ｐｐｍ］＝０．０３（ｓ、９Ｈ）、０．９５（ｔ、２Ｈ）、２．９４および３．２（２ｄｄ、２Ｈ）、４．１８（ｔ、２Ｈ）、４．５７（ｔ、１Ｈ）。

【0925】

中間体Ｌ７７
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［２−（２−アミノエトキシ）エチル］−２−ブロモアセトアミド（１：１）

【化252】

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【0926】

ｔｅｒｔ−ブチル［２−（２−アミノエトキシ）エチル］カーバメート４１８ｍｇ（２．０５ｍｍｏｌ）を最初に、ブロモ無水酢酸６３８ｍｇ（２．４６ｍｍｏｌ）と反応させ、次にＢｏｃ保護基をトリフルオロ酢酸で除去した。これによって、標題化合物５５１ｍｇ（２段階で理論値の６３％）を得た。

【0927】

ＬＣ−ＭＳ（方法）：Ｒ_ｔ＝０．３２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２２７および２２５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0928】

中間体Ｌ７８
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−β−アラニン

【化253】

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【0929】

ＥＤＣＩ／ＨＯＢｔおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にｔｅｒｔ−ブチルβ−アラニネート塩酸塩（１：１）とカップリングさせ、次にトリフルオロ酢酸で脱保護することで、市販の（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸から標題化合物を製造した。

【0930】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．３２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２２７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0931】

中間体Ｌ７９
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニン

【化254】

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【0932】

ｔｅｒｔ−ブチルβ−アラニネート塩酸塩（１：１）６４．８ｍｇ（０．３５７ｍｍｏｌ）および１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン１００ｍｇ（０．３２４ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド４ｍＬに溶かし、Ｎ−メチルモルホリン６５．６ｍｇ（０．６４９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。酢酸０．０４８ｍＬ（０．８３８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニネート８４．５ｍｇ（７７％、純度１００％）を得た。

【0933】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0934】

ＴＦＡ １．６２ｍＬを、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニネート（８２．８ｍｇ、０．２４４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（８ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水に取り、凍結乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物６２．７ｍｇ（８７％、純度９５％）を得た。

【0935】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２８３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0936】

中間体Ｌ８０
２−（トリメチルシリル）エチル３−［（１５−アミノ−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン−１−オイル）アミノ］−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アラニネート

【化255】

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【0937】

ペプチド化学の古典的方法に従って（塩からの放出およびＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いる２−（トリメチルシリル）エタノールによるエステル化、Ｚ保護基の水素分解的除去、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下の市販の３−オキソ−１−フェニル−２，７，１０，１３，１６−ペンタオキサ−４−アザノナデカン−１９−オン酸とのカップリング、およびさらなるＺ保護基の水素分解的除去）、市販の３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アラニン／Ｎ−シクロヘキシルシクロヘキサンアミン（１：１）から標題化合物を製造した。

【0938】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５５２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0939】

中間体Ｌ８１
トリフルオロ酢酸／ベンジル｛２−［（２−アミノエチル）スルホニル］エチル｝カーバメート（１：１）

【化256】

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【0940】

ＤＭＦ中Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、２，２′−スルホニルジエタンアミン２５０ｍｇ（１．１１ｍｍｏｌ）を１−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］オキシ｝ピロリジン−２，５−ジオン９２．３ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。次に、ＨＰＬＣによる精製を行って、標題化合物７０ｍｇ（理論値の４７％）を得た。

【0941】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝０．６４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５７．１１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0942】

中間体Ｌ８２
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド（１：１）

【化257】

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【0943】

Ｎ−Ｂｏｃ−２，２′−（エチレンジオキシ）ジエチルアミン８８．６ｍｇ（０．３５７ｍｍｏｌ）およびＮ−スクシニミジル６−マレイミドヘキサノエート１００ｍｇ（０．３２４ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド４．０ｍＬに溶かし、Ｎ−メチルモルホリン０．０７１ｍＬ（０．６５０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。酢酸０．０４８ｍＬ（０．８３８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：７５ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ−ブチル｛２−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］エチル｝カーバメート１２７ｍｇ（理論値の８１％）を得た。

【0944】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４４２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0945】

ＴＦＡ ２．０ｍＬを、ｔｅｒｔ−ブチル｛２−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］エチル｝カーバメート１２３ｍｇ（２２５μｍｏｌ）のジクロロメタン（７．５ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水に取り、凍結乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物１１１ｍｇ（理論値の１００％）を得た。

【0946】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．３１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0947】

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ［ｐｐｍ］＝１．１７（ｍ、２Ｈ）、１．４７（ｍ、４Ｈ）、２．０４（ｍ、２Ｈ）、２．９８（ｍ、２Ｈ）、３．１９（ｍ、２Ｈ）、３．３９（ｍ、４Ｈ）、３，５６（ｍ、６Ｈ）、７．０１（ｓ、２Ｈ）、７．７２（ｂｓ、３Ｈ）、７．８０（ｍ、１Ｈ）。

【0948】

中間体Ｌ８３
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）

【化258】

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【0949】

ｔｅｒｔ−ブチル｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝カーバメート２００ｍｇ（０．８０５ｍｍｏｌ）、（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸１５０ｍｇ（０．９６６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５６０μＬ（３．２ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド１０ｍＬに溶かし、ＨＡＴＵ ４５９ｍｇ（１．２１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。溶媒を減圧下に留去し、残留物をジクロロメタンに溶解させた。有機相を５％強度クエン酸溶液で２回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、カラム２５ｇＳＮＡＰ、ジクロロメタン：メタノール９８：２）を用いて精製した。これによって、ｔｅｒｔ−ブチル｛２−［２−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］エチル｝カーバメート２７６ｍｇ（理論値の８９％）を得た。

【0950】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．６７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３８６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0951】

ＴＦＡ ４ｍＬを、ｔｅｒｔ−ブチル｛２−［２−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］エチル｝カーバメート（２７５ｍｇ、７１４μｍｏｌ）のジクロロメタン（１５ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水に取り、凍結乾燥した。これによって、標題化合物２８１ｍｇ（理論値の９９％）を得た。

【0952】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２８６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0953】

中間体Ｌ８４
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカ−１−イル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド（１：１）

【化259】

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【0954】

ｔｅｒｔ−ブチル（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカ−１−イル）カーバメート２００ｍｇ（０．５９４ｍｍｏｌ）および１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン２０２ｍｇ（０．６５４ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド４．０ｍＬに溶かし、Ｎ−メチルモルホリン０．１３０ｍＬ（１．２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。酢酸０．０８５ｍＬ（１．５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ−ブチル［２１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１６−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサ−１５−アザヘンアイコサ−１−イル］カーバメート２７５ｍｇ（理論値の７３％）を得た。

【0955】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５３０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0956】

ＴＦＡ ７８０μＬ（１０ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル［２１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１６−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサ−１５−アザヘンアイコサ−１−イル］カーバメート（２６８ｍｇ、５０５μｍｏｌ）のジクロロメタン（５．０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水に取り、凍結乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物２６６ｍｇ（理論値の９７％）を得た。

【0957】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．４６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４３０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0958】

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ［ｐｐｍ］＝１．１７（ｍ、２Ｈ）、１．４７（ｍ、４Ｈ）、２．０３（ｍ、２Ｈ）、２．９９（ｍ、２Ｈ）、３．１８（ｍ、２Ｈ）、３．３８（ｍ、４Ｈ）、３，５２（ｍ、８Ｈ）、３，５８（ｍ、６Ｈ）、７．０１（ｓ、２Ｈ）、７．７３（ｂｓ、３Ｈ）、７．８０（ｍ、１Ｈ）。

【0959】

中間体Ｌ８５
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカ−１−イル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）

【化260】

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【0960】

ｔｅｒｔ−ブチル（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカ−１−イル）カーバメート２００ｍｇ（０．５９４ｍｍｏｌ）、（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸１１１ｍｇ（０．７１３ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４１０μＬ（２．４ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド６ｍＬに溶かし、ＨＡＴＵ ３３９ｍｇ（０．８９２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ−ブチル［１７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１６−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサ−１５−アザヘプタデカ−１−イル］カーバメート１３０ｍｇ（理論値の４３％）を得た。

【0961】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0962】

ＴＦＡ ４１０μＬ（５．３ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル［１７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１６−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサ−１５−アザヘプタデカ−１−イル］カーバメート（１２６ｍｇ、２６７μｍｏｌ）のジクロロメタン（４．０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１２４ｍｇ（理論値の９５％）を得た。

【0963】

ＬＣ−ＭＳ（方法１３）：Ｒ_ｔ＝０．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３７４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0964】

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ［ｐｐｍ］＝２．９９（ｍ、２Ｈ）、３．２２（ｍ、２Ｈ）、３．４１（ｍ、２Ｈ）、３，５３（ｍ、８Ｈ）、３，５８（ｍ、６Ｈ）、４．０２（ｓ、２Ｈ）、７．０９（ｓ、２Ｈ）、７．７３（ｂｓ、３Ｈ）、８．２１（ｍ、１Ｈ）。

【0965】

中間体Ｌ８６
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン

【化261】

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【0966】

Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン１００ｍｇ（０．５３１ｍｍｏｌ）および１−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン１３４ｍｇ（０．５３１ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド３ｍＬに溶かし、トリエチルアミン０．１５０ｍＬ（１．１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で８時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物７１．５ｍｇ（理論値の４１％）を得た。

【0967】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．４２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３２６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0968】

中間体Ｌ８７
３−［２−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパン酸

【化262】

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【0969】

ｔｅｒｔ−ブチル３−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］プロパノエート２５０ｍｇ（１．０７ｍｍｏｌ）、２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸１５１ｍｇ（０．９７４ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物２２４ｍｇ（１．４６ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩２２４ｍｇ（１．１７ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド５．０ｍＬに溶かした。反応混合物を室温で１時間撹拌した。酢酸エチルを加え、混合物を５％強度クエン酸溶液で２回、そして飽和重炭酸ナトリウム溶液で抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×４０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ−ブチル３−［２−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノエート２６７ｍｇ（理論値の６４％）を得た。

【0970】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３７１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0971】

ＴＦＡ １．１ｍＬ（１４ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル３−［２−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノエート（２６３ｍｇ、７１０μｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２４０ｍｇ（理論値の９４％）を得た。

【0972】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝０．５７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３１５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0973】

中間体Ｌ８８
２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニネート

【化263】

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【0974】

Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン１５０ｍｇ（０．７９７ｍｍｏｌ）および１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン２４６ｍｇ（０．７９７ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド４．０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン０．２２０ｍＬ（１．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン３０２ｍｇ（理論値の９７％）を得た。

【0975】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝１．０２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３８２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0976】

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ［ｐｐｍ］＝０．８２（ｄｄ、６Ｈ）、１．１７（ｍ、２Ｈ）、１．２７（ｄ、３Ｈ）、１．４８（ｍ、４Ｈ）、１．９４（ｍ、１Ｈ）、２．１３（ｍ、２Ｈ）、３．３８（ｔ、２Ｈ）、４．１７（ｍ、２Ｈ）、７．００（ｓ、２Ｈ）、７．７５（ｄ、１Ｈ）、８．１９（ｄ、１Ｈ）。

【0977】

Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン１３０ｍｇ（０．５３１ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン６．５ｍＬに溶かし、１−ヒドロキシピロリジン−２，５−ジオン５８．８ｍｇ（０．５１１ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩７８．４ｍｇ（０．４０９ｍｍｏｌ）を加えた。追加の１−ヒドロキシピロリジン−２，５−ジオン５８．８ｍｇ（０．５１１ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩７８．４ｍｇ（０．４０９ｍｍｏｌ）を加えた。ジクロロメタンを加え、混合物を水で３回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１７２ｍｇ（理論値の８７％）を得た。

【0978】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝１．２８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0979】

中間体Ｌ８９
１−ベンジル−５−［２−（トリメチルシリル）エチル］−Ｌ−グルタメート塩酸塩（１：１）

【化264】

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【0980】

（４Ｓ）−５−（ベンジルオキシ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−オキソペンタン酸１．００ｇ（２．９６ｍｍｏｌ）を最初に、ＴＨＦ １３．０ｍＬに入れ、２−（トリメチルシリル）エタノール５１０μＬ（３．６ｍｍｏｌ）および４−ジメチルアミノピリジン１０９ｍｇ（８８９μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を冷却して０℃とし、Ｎ−エチル−Ｎ′−３−（ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩６８２ｍｇ（３．５６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を酢酸エチルに溶解させた。有機相を０．１Ｎ ＨＣｌ溶液で２回および飽和塩化ナトリウム溶液洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、カラム２５ｇＳＮＡＰ、シクロヘキサン：酢酸エチル８０：２０）を用いて精製した。これによって、化合物１−ベンジル−５−［２−（トリメチルシリル）エチル］−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−グルタメート６４９ｍｇ（理論値の５０％）を得た。

【0981】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝４．６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４３８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0982】

１−ベンジル−５−［２−（トリメチルシリル）エチル］−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−グルタメート６４９ｍｇ（１．４８ｍｍｏｌ）を、ジオキサン７．０ｍＬに溶かし、氷浴冷却しながら、４Ｎ ＨＣｌ／ジオキサン１４ｍＬ（５９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を高真空乾燥し、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、カラム２５ｇＳＮＡＰ、ジクロロメタン：メタノール９０：１０）によって精製した。これによって、標題化合物３２０ｍｇ（理論値の５７％）を得た。

【0983】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0984】

中間体Ｌ９０
１−（｛Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オン酸

【化265】

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【0985】

最初にＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシン１１８ｍｇ（５６６μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ５．０ｍＬに入れ、ｔｅｒｔ−ブチル１−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オエート２００ｍｇ（６２２μｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物１３０ｍｇ（８４９μｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩１３０ｍｇ（６７９μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。酢酸エチルを加え、混合物を５％強度クエン酸溶液で２回および飽和重炭酸ナトリウム溶液で抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ−ブチル１−（｛Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オエート２７４ｍｇ（理論値の９５％）を得た。

【0986】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．６９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0987】

ＴＦＡ ８２０μＬ（１１ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル１−（｛Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オエート２７４ｍｇ（５３５μｍｏｌ）のジクロロメタン（５．０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水に取り、凍結乾燥した。これによって、標題化合物２６２ｍｇ（理論値の１００％）を得た。

【0988】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝１．１２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４５７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0989】

中間体Ｌ９１
トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル１−｛［３−アミノ−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アラニル］アミノ｝−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オエート（１：１）

【化266】

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【0990】

ペプチド化学の古典的方法によって（ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いる２−トリメチルシリルエタノールによるエステル化、Ｚ保護基の水素分解的除去、市販のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｄ−アラニンとのカップリング、およびＦｍｏｃ保護基の除去）、市販の３−オキソ−１−フェニル−２，７，１０，１３，１６−ペンタオキサ−４−アザノナデカン−１９−オン酸から標題化合物を製造した。

【0991】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５５２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0992】

中間体Ｌ９５
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン

【化267】

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【0993】

ペプチド化学の古典的方法を用いて、Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリンおよびｔｅｒｔ−ブチルＬ−アラニネート塩酸塩（１：１）からこの中間体を製造した。

【0994】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３２３．１６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0995】

中間体Ｌ９６
Ｎ−アセチル−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド

【化268】

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【0996】

ペプチド化学の古典的方法により、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリネートのＮ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンとのカップリングから始め、次にエタノール中１０％パラジウム／活性炭でのＺ保護基の水素分解的除去、最後に得られたジペプチドの１−アセトキシピロリジン−２，５−ジオンとの反応によって、この中間体を製造した。

【0997】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．２５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３１７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0998】

中間体Ｌ９７
１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−オキソ−６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７−オクタオキサ−３−アザトリアコンタン−３０−酸

【化269】

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【0999】

最初にｔｅｒｔ−ブチル１−アミノ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４−オクタオキサヘプタコサン−２７−オエート（１００ｍｇ、２０１μｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸（４６．８ｍｇ、３０１μｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物（７６．９ｍｇ、５０２μｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（７７．０ｍｇ、４０２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸エチルを加えた。有機相を５％強度クエン酸溶液で２回、飽和重炭酸ナトリウム溶液で、次に飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−オキソ−６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７−オクタオキサ−３−アザトリアコンタン−３０−オエート１９．１ｍｇ（理論値の１３％）を得た。

【1000】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６３５［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1001】

ＴＦＡ（６２μＬ、６００μｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−オキソ−６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７−オクタオキサ−３−アザトリアコンタン−３０−オエート（１９．１ｍｇ、３０．１μｍｏｌ）のＤＣＭ（１．０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水に取り、凍結乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物１０．８ｍｇ（理論値の４６％）を得た。

【1002】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．５５分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝５７７［Ｍ−Ｈ］⁻。

【1003】

中間体Ｌ９８
２，２−ジメチルプロパン酸／２−（トリメチルシリル）エチル−Ｎ−（２−アミノエチル）−Ｎ^２−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−グルタミネート（１：１）

【化270】

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【1004】

最初に、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、（４Ｓ）−５−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−オキソペンタン酸をベンジル（２−アミノエチル）カーバメートとカップリングさせた。次に、Ｂｏｃ保護基およびｔｅｒｔ−ブチルエステルを、トリフルオロ酢酸／ＤＣＭを用いて開裂させた。次に、最初に、再度、ＤＭＦ／水中Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオンと反応させることでアミノ基を保護し、次にＤＣＭ中ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰの存在下に２−（トリメチルシリル）エタノールと反応させることでカルボキシル基を保護した。最後の段階で、エタノール中標準圧下に１０％パラジウム／活性炭で水素化分解することで、末端アミノ基を脱保護した。濾過による触媒の除去、濃縮、分取ＨＰＬＣによる精製および残留物のアセトニトリル／水からの凍結乾燥によって、標題化合物を得た。

【1005】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４３４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1006】

中間体Ｌ９９
トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル−Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−β−アラニル−Ｌ−リシネート（１：１）

【化271】

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【1007】

最初に、Ｎ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジンから出発して、ペプチド化学の古典的方法によって２−（トリメチルシリル）エチルＮ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシネートを製造した。次に、この中間体を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、標準的方法によって製造したトリペプチド構成要素Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−β−アラニンを用いてカップリングさせた。次に、水素化分解およびメタノールによって、Ｚ保護基を除去し、得られた中間体を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸とカップリングさせた。最後の段階で、温和な条件下に１０％強度トリフルオロ酢酸／ＤＣＭ中、室温で１時間撹拌することにより、側鎖アミノ基を脱保護した。濃縮およびアセトニトリル／水からの凍結乾燥によって、標題化合物を得た。

【1008】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．６４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６２５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1009】

中間体Ｌ１００
３−［５−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパン酸

【化272】

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【1010】

ヒドロキシルアミン塩酸塩４６１ｍｇ（６．６０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン１３４１．８６ｍｇ（１３．２６ｍｍｏｌ）を、メチル３−シアノプロパノエート（５００ｍｇ、４．４２ｍｍｏｌ）のエタノール（４０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物を酢酸エチルに溶解させ、次に水およびブラインで洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物４００ｍｇ（理論値の６２％）を得た。

【1011】

Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニン６．９１ｇ（３６．５０ｍｍｏｌ）および１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド８．２２ｇ（３９．８２ｍｍｏｌ）を、メチル（４Ｅ）−４−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニル］アミノ｝−４−（ヒドロキシイミノ）ブタノエート（４．８５ｇ、３３．１９ｍｍｏｌ）のジオキサン（１２０．０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物を水に溶解させ、酢酸エチルで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。これによって、標題化合物６．０ｇ（理論値の５７％）を得た。

【1012】

メチル（４Ｅ）−４−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニル］アミノ｝−４−（ヒドロキシイミノ）ブタノエート（６．０ｇ、１８．９１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１００ｍＬ）中溶液を１２０℃で５時間撹拌した。水を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物４ｇ（理論値の７１％）を得た。

【1013】

トリフルオロ酢酸２．９６ｇ（２５．９６ｍｍｏｌ）を、３−（５−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］エチル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）プロパン酸（２．０ｇ、７．０１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。水を加え、混合物をジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物１．５０ｇ（理論値の７２％）を得た。

【1014】

１−［２−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル］−１−ピロール−２，５−ジオン１．３０ｇ（５．５２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン１．５２ｇ（１５．０４ｍｍｏｌ）を、３−［５−（２−アミノエチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパン酸（１．５ｇ、５．０１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２５ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。水を加え、混合物をジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物７７４ｍｇ（理論値の４７％）を得た。

【1015】

^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ［ｐｐｍ］＝２．６７（ｔ、２Ｈ）、２．９１（ｔ、２Ｈ）、３．０３（ｔ、２Ｈ）、３．４６（ｑ、２Ｈ）、４．２８（ｓ、２Ｈ）、７．０１（ｓ、２Ｈ）、８．３７（ｔ、１Ｈ）、１２．２８（ｂｓ、１Ｈ）。

【1016】

中間体Ｌ１２３
ｔｅｒｔ−ブチル［１−フルオロ−４−オキソブタン−２−イル］カーバメート

【化273】

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【1017】

最初に、アルゴン下に、エチル３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−フルオロブタノエート（１５０ｍｇ、６０２μｍｏｌ）（Ｓｙｎｔｈ． Ｃｏｍ．， １９８５， １５（５）， ３７７）を、ＤＣＭ １２．０ｍＬに入れた。反応混合物を冷却して−７８℃とし、１Ｍ水素化ジイソブチルアルミニウム／トルエン（１．２ｍＬ、１．０Ｍ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２時間撹拌した。混合物を、メタノールで注意深く反応停止し、さらに１０分間撹拌し、酢酸エチルで希釈した。有機相を飽和酒石酸カリウムナトリウム溶液で３回抽出した。有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥させた。これによって、標題化合物８６．１ｍｇ（理論値の６７％）を得た。

【1018】

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ［ｐｐｍ］：１．３７（ｓ、９Ｈ）、２．５８（ｍ、２Ｈ）、４．１８（ｍ、１Ｈ）、４．３１（ｄｄ、２Ｈ）、７．０５（ｄ、１Ｈ）、９．６０（ｓ、１Ｈ）。

【1019】

中間体Ｌ１２４
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−｛（２Ｒ）−２−アミノ−３−オキソ−３−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］プロピル｝−Ｎ^２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アスパルテート

【化274】

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【1020】

Ｂｏｃ−Ａｓｐ−ＯｔＢｕ ４．０ｇ（１３．８ｍｍｏｌ）およびＮ−ヒドロキシコハク酸イミド１．８ｇ（１５．２ｍｍｏｌ）を酢酸エチル１００ｍＬに溶かし、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド３．１ｇ（１５．２ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を、０℃で２時間、次に室温で終夜撹拌した。次に、反応混合物を濾過し、減圧下に濃縮した。これによって、。化合物１−ｔｅｒｔ−ブチル４−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アスパルテート４．１ｇ（理論値の７７％）を得た。

【1021】

３−アミノ−Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｄ−アラニン（２．５３ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３０ｍＬに溶かし、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２．７４ｇ、２１．２ｍｍｏｌ）および１−ｔｅｒｔ−ブチル４−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アスパルテート（４．１０ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、減圧下に濃縮した。これによって、化合物（２Ｒ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−３−（｛（３Ｓ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−オキソブタノイル｝アミノ）プロパン酸４．９ｇ（理論値の９０％）を得た。

【1022】

（２Ｒ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−３−（｛（３Ｓ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−オキソブタノイル｝アミノ）プロパン酸（４．９０ｇ、９．６２ｍｍｏｌ）をアセトニトリル１００ｍＬに溶かし、室温でピリジン（１．６ｍＬ、１９ｍｍｏｌ）、２−（トリメチルシリル）エタノール（１．７ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）およびジシクロヘキシルカルボジイミド（２．３８ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、０℃で１時間、次に室温で終夜撹拌した。次に、反応混合物を濾過し、減圧下に濃縮した。残留物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥させた。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチルＮ−｛（２Ｒ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−３−オキソ−３−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］プロピル｝−Ｎ２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アスパルテート３．９ｇ（理論値の６６％）を得た。

【1023】

ｔｅｒｔ−ブチルＮ−｛（２Ｒ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−３−オキソ−３−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］プロピル｝−Ｎ^２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アスパルテート（３．８０ｇ、６．２３ｍｍｏｌ）をメタノール１２０ｍＬに溶かし、パラジウム／炭素（１０％）３８０ｍｇを加えた。反応混合物を室温で標準圧下に２時間にわたり水素によって水素化し、濾過した。溶媒を減圧下に除去した。これによって、標題化合物２．９ｇ（理論値の８４％）を得た。

【1024】

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝０．０４（ｓ、９Ｈ）、０．９７（ｍ、２Ｈ）、１．３８（ｓ、９Ｈ）、１．３９（ｓ、９Ｈ）、１．８９（ｂｓ、２Ｈ）、２．４３（ｍ、１Ｈ）、３．１８（ｍ、３Ｈ）、３．３８（ｍ、１Ｈ）、４．１１（ｍ、３Ｈ）、６．９３（ｄ、１Ｈ）、７．９１（ｂｔ、１Ｈ）。

【1025】

中間体Ｌ１２５
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−（２−アミノエチル）−Ｎ^２−（ブロモアセチル）−Ｄ−α−グルタミネート（１：１）

【化275】

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【1026】

ペプチド化学の旧来の方法によって（２Ｒ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−５−ｔｅｒｔ−ブトキシ−５−オキソペンタン酸およびｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）カーバメートから出発して、この中間体を製造した。

【1027】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．４９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３６６および３６８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1028】

中間体Ｆ１０４
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）ブタンアミド（１：１）

【化276】

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【1029】

中間体Ｃ５３ １０ｍｇ（０．０１４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３．３ｍＬに溶かし、中間体Ｌ１ ８．５ｍｇ（０．０２７ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ ７．８ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１２μＬを加えた。反応液を室温で１５分間撹拌し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製して、凍結乾燥後に、保護中間体５．６ｍｇ（理論値の３８％）を得た。

【1030】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９１５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1031】

この中間体５．６ｍｇ（０．００６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２ｍＬに取り、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン６９ｍｇ（０．６１ｍｍｏｌ）を加えた。反応を超音波浴で２時間処理した。次に、酢酸３５μＬを加え、反応液を高真空下に濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物２．４ｍｇ（理論値の４８％）を得た。

【1032】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６９３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1033】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝１．９１分。

【1034】

あるいは、標題化合物を、中間体Ｃ５８からも製造した。最初に、ＨＡＴＵ １３ｍｇ（０．０３４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１０μＬの存在下に、中間体Ｃ５８ １５ｍｇ（０．０２３ｍｍｏｌ）を、中間体Ｌ１ １１ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）と反応させた。室温で６０分間撹拌後、混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、保護中間体１２．３ｍｇ（理論値の６３％）を得た。

【1035】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３７［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1036】

第２段階で、この中間体を２，２，２−トリフルオロエタノール３ｍＬに溶解させた。塩化亜鉛１２ｍｇ（０．０８８ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃で２時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２６ｍｇ（０．０８８ｍｍｏｌ）および０．１％強度トリフルオロ酢酸水溶液２ｍＬを加えた。反応液を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物８．１ｍｇ（理論値の６８％）を得た。

【1037】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６９３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1038】

中間体Ｆ１１９
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−｛２−［（ブロモアセチル）アミノ］エチル｝ブタンアミド（１：１）

【化277】

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【1039】

中間体Ｃ５８ ２９ｍｇ（０．０４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３．４ｍＬに取り、中間体Ｌ５２ ３６ｍｇ（０．０８７ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ ２５ｍｇ（０．０６５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１９μＬを加えた。室温で６０分間撹拌後、混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、中間体２６．４ｍｇ（理論値の７３％）を得た。

【1040】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２０および８２２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1041】

この中間体を、２，２，２−トリフルオロエタノール３ｍＬに溶解させた。塩化亜鉛６．５ｍｇ（０．０４８ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１３．９ｍｇ（０．０４８ｍｍｏｌ）および０．１％強度トリフルオロ酢酸水溶液２ｍＬを加えた。反応液を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物１４．４ｍｇ（理論値の５８％）を得た。

【1042】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７６および６７８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1043】

中間体Ｆ１２７
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［（２Ｓ）−２−メトキシプロパノイル］アミノ）−Ｎ−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）ブタンアミド（１：１）

【化278】

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【1044】

中間体Ｃ５９ １２ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２．４ｍＬに溶かし、中間体Ｌ１ １４．６ｍｇ（０．０４６ｍｍｏｌ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩６ｍｇ（０．０３１ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物５．９ｍｇ（０．０３９ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン８μＬを加えた。室温で１時間撹拌後、混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、この中間体１１ｍｇ（理論値の７０％）を得た。

【1045】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９４２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1046】

この中間体１１ｍｇ（０．０１１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２ｍＬに取り、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン１２３ｍｇ（１．１ｍｍｏｌ）を加えた。反応を超音波浴で２時間処理した。次に、酢酸６３μＬを加え、反応液を高真空下に濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物２ｍｇ（理論値の２２％）を得た。

【1047】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７２１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1048】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝１．９５分。

【1049】

中間体Ｆ１５３
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［（２Ｓ）−２−ヒドロキシプロパノイル］アミノ）−Ｎ−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）ブタンアミド（１：１）

【化279】

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【1050】

中間体Ｃ６０から中間体Ｆ１０４と同様にして合成を行った。

【1051】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1052】

中間体Ｆ１５５
Ｎ^６−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル）−Ｎ^２−｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化280】

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【1053】

ＨＡＴＵ ８．７ｍｇ（０．０２３ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１７μＬの存在下に中間体Ｃ６１ １４ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）を中間体Ｌ６１ １５ｍｇ（０．０２１ｍｍｏｌ）とカップリングさせ、次に中間体Ｆ１１９について記載の方法に従ってトリフルオロエタノール中で塩化亜鉛によって脱保護することで、標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物１３ｍｇ（２段階で理論値の５９％）を得た。

【1054】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０７６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1055】

中間体Ｆ１７３
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−Ｌ−グルタミン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化281】

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【1056】

ＨＡＴＵ ７．７ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１６μＬの存在下に中間体Ｌ６３ １２ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）とカップリングさせ、次に中間体Ｆ１１９について記載の方法に従ってトリフルオロエタノール中で塩化亜鉛によって脱保護することで、中間体Ｃ６４ １５ｍｇ（０．０１８ｍｍｏｌ）から標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物１２ｍｇ（２段階で理論値の５８％）を得た。

【1057】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０４８［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1058】

中間体Ｆ１７８
トリフルオロ酢酸／（１Ｒ，２Ｓ）−２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−Ｎ−｛２−［（ブロモアセチル）アミノ］エチル｝シクロペンタンカルボキサミド（１：１）

【化282】

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【1059】

中間体Ｌ１に代えて、中間体Ｌ５２を用い、中間体Ｆ１７７と同様にして標題化合物を製造した。

【1060】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８７および７８９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1061】

中間体Ｆ１８０
Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−Ｎ２−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−グルタミン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化283】

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【1062】

ＨＡＴＵ ７ｍｇ（０．０１８ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６μＬの存在下に中間体Ｃ６４ ９．６ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）を中間体Ｌ６４ ５ｍｇ（０．０１３ｍｍｏｌ）とカップリングさせ、次に中間体Ｆ１１９について記載の方法に従ってトリフルオロエタノール中にて塩化亜鉛によって脱保護することによって、標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物３．１ｍｇ（２段階で理論値の２８％）を得た。

【1063】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８５分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1064】

中間体Ｆ１９２
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−３−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝−Ｌ−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化284】

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【1065】

中間体Ｃ５８ ６０ｍｇ（０．０９１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ８ｍＬに取り、ＨＡＴＵ ４２ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６４μＬの存在下に中間体Ｌ６５ ４５ｍｇ（０．１００ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製後、中間体をエタノール１０ｍＬに取り、室温で水素標準圧下に４５分間にわたり１０％パラジウム／活性炭で水素化した。触媒を濾去し、溶媒を減圧下に除去し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。アセトニトリル／水１：１からの凍結乾燥によって、２−（トリメチルシリル）エチル３−アミノ−Ｎ−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノイル］−Ｌ−アラニネート２４．５ｍｇ（２段階で理論値の３１％）を得た。

【1066】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．１７分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1067】

この中間体１０ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）をＨＡＴＵ ５．４ｍｇ（０．０１４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン８μＬの存在下に市販の（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸中間体２ｍｇ（０．０１３ｍｍｏｌ）とカップリングさせ、次に中間体Ｆ１１９について記載の方法に従ってトリフルオロエタノール中にて塩化亜鉛で脱保護することで、標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物３．５ｍｇ（２段階で理論値の３３％）を得た。

【1068】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1069】

中間体Ｆ１９３
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−３−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝−Ｄ−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化285】

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【1070】

３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アラニン／Ｎ−シクロヘキシルシクロヘキサンアミン（１：１）から、中間体Ｆ１９２と同様にして標題化合物の合成を行った。

【1071】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1072】

中間体Ｆ１９４
Ｎ−｛５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−５−オキソペンタノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド

【化286】

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【1073】

最初にＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニンとカップリングさせることで、実施例Ｍ９から標題化合物を製造した。次の段階で、室温で水素標準圧下に１０％パラジウム／活性炭で１時間水素化し、次に１，１′−［（１，５−ジオキソペンタン−１，５−ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン−２，５−ジオンとの反応によって脱保護中間体を標題化合物に変換することによりＺ保護基を除去した。

【1074】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．１９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1075】

中間体Ｆ２０７
Ｎ^６−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル）−Ｎ^２−｛Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化287】

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【1076】

中間体Ｆ１５５と同様にして標題化合物を製造した。

【1077】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1078】

中間体Ｆ２１６
Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−システイニル−β−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化288】

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【1079】

最初に、アルゴン下に、Ｎ，Ｎ′−ビス［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−システイン３０．２ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）を、水２．０ｍＬおよびイソプロパノール２．０ｍＬに入れ、ＴＣＥＰ ５６．７ｍｇ（０．２０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。イソプロパノール２．０ｍＬに溶かした２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート（中間体Ｃ７０）５０．０ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン１２２．２ｍｇ（０．４８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で７時間撹拌した。追加の１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン１２２．２ｍｇ（０．４８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を水および飽和重炭酸ナトリウム溶液で抽出し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−システイン４３．１ｍｇ（理論値の６４％）を得た。

【1080】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1081】

最初に４−メチルベンゼンスルホン酸／ベンジルβ−アラニネート（１：１）１６．５ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１４．０ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）とともにアセトニトリル１．５ｍＬに入れた。反応混合物を室温で３分間撹拌し、アセトニトリル１．５ｍＬに溶かしたＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−システイン３０．８ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２３．４ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）およびＴ３Ｐ（５０％酢酸エチル中溶液）２９．９ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。水を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。得られた化合物は、ベンジルＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−システイニル−β−アラニネートであった。

【1082】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．５９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０１２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1083】

ベンジルＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−システイニル−β−アラニネート４３．８ｍｇ（４３．３μｍｏｌ）をエタノール８．０ｍＬに溶かし、パラジウム／活性炭（１０％）４．４ｍｇを加え、混合物を室温および標準圧で終夜水素化した。反応混合物を段ボールフィルターで濾過し、フィルターケーキをエタノールで洗浄した。溶媒を減圧下に留去した。さらに２回、残留物を、丁度記載した通りに処理した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイニル−β−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）１４．５ｍｇ（理論値の３７％）を得た。

【1084】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1085】

最初にＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイニル−β−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）１４．５ｍｇ（１６．１μｍｏｌ）を、３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛１５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカ−１−イル｝プロパンアミド９．１ｍｇ（１７．７μｍｏｌ）とともにＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、４−メチルモルホリン４．９ｍｇ（４８．２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸３．４ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイニル−β−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）４．９ｍｇ（理論値の５０％）を得た。

【1086】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．２８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１８６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1087】

Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−システイニル−β−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）１４．１ｍｇ（１１．９μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．５ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛９．７ｍｇ（７１．３μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。追加の二塩化亜鉛９．７ｍｇ（７１．３μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。追加の二塩化亜鉛９．７ｍｇ（７１．３μｍｏｌ）を加え、反応混合物を７０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２０．８ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を凍結乾燥した。これによって、標題化合物６．２ｍｇ（理論値の４４％）を得た。

【1088】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０４２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1089】

中間体Ｆ２３９
Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化289】

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【1090】

アルゴン下に、最初に（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸７．５ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．５ｍＬに入れ、ＨＯＢｔ ７．５ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）、ＴＢＴＵ １５．５ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６．２ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。ＤＭＦ １．５ｍＬに溶かしたＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）４０．０ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１８．７ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−システイン１１．２ｍｇ（理論値の２５％）を得た。

【1091】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1092】

Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−システイン１０．９ｍｇ（１２．８μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１０．４ｍｇ（７６．６μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２２．４ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を凍結乾燥した。これによって、標題化合物７．５ｍｇ（理論値の６５％）を得た。

【1093】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1094】

中間体Ｆ２４０
トリフルオロ酢酸／３−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）−Ｎ−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）プロパンアミド（１：１）

【化290】

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【1095】

最初に１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−オン酸（中間体Ｃ６９）２７．５ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸／Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）（中間体Ｌ１）１５．９ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）とともにアセトニトリル １．８ｍＬに入れた。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン３２．４ｍｇ（０．３１ｍｍｏｌ）を加え、Ｔ３Ｐ（５０％酢酸エチル中溶液）３２．４ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル［１３−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘキサデカン−１６−イル］カーバメート１１．９ｍｇ（理論値の３５％）を得た。

【1096】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８８１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1097】

２−（トリメチルシリル）エチル［１３−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘキサデカン−１６−イル］カーバメート１１．９ｍｇ（０．０１ｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛５．５ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で終夜撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１１．８ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物７．４ｍｇ（理論値の６０％）を得た。

【1098】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．７５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1099】

中間体Ｆ２４１
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−（２−｛［Ｎ−（ブロモアセチル）グリシル］アミノ｝エチル）ブタンアミド（１：１）

【化291】

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【1100】

市販の１−（２−ブロモアセトキシ）ピロリジン−２，５−ジオンとのカップリングおよび次に塩化亜鉛による脱ブロックによって、中間体Ｃ６６から標題化合物を製造した。

【1101】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３３および７３５［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1102】

中間体Ｆ２４２
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−（３−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝プロピル）ブタンアミド（１：１）

【化292】

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【1103】

中間体Ｆ１０４と同様にして標題化合物の合成を行った。

【1104】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1105】

中間体Ｆ２４３
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−［２−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エチル］ブタンアミド（１：１）

【化293】

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【1106】

中間体Ｆ２４２と同様にして標題化合物の合成を行った。

【1107】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1108】

中間体Ｆ２４５
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブチル｝−Ｎ′−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）コハク酸アミド（１：１）

【化294】

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【1109】

ＤＭＦ ８ｍＬ中ＨＡＴＵ １５ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン９μＬ存在下での中間体Ｃ６５ １０ｍｇ（０．０１３５ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ１ ８ｍｇ（０．０２７ｍｍｏｌ）とのカップリングおよび次に中間体Ｆ１１９について記載の方法に従ってのトリフルオロエタノール中の塩化亜鉛による脱保護によって、標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物８．８ｍｇ（２段階で理論値の５８％）を得た。

【1110】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７７８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1111】

中間体Ｆ２４７
トリフルオロ酢酸／メチル４−［（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−２−ブロモ−４−オキソブタノエート（１：１）

【化295】

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【1112】

中間体Ｃ６６ １４ｍｇ（０．０１８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ １４ｍＬに溶かし、２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフルオロボレート（ＢＥＰ）１０．１ｍｇ（０．０３７ｍｍｏｌ）とともに、１回に少量ずつｐＨを５から６に維持しながら、ピリジン合計２５０μＬを加えた。次に、酢酸でｐＨを４に調節し、反応液を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、凍結乾燥および乾燥によって、保護中間体４ｍｇ（理論値の２１％）を得て、それを次に、塩化亜鉛によってアミノ官能基で脱保護した。ＨＰＬＣ精製および凍結乾燥によって、標題化合物３ｍｇ（理論値の７２％）を無色泡状物として得た。

【1113】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８０５および８０７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1114】

中間体Ｆ２４８
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エチル｝ブタンアミド（１：１）

【化296】

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【1115】

ＨＡＴＵ存在下での中間体Ｃ５８ １０ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ１２ ５ｍｇ（０．０１７ｍｍｏｌ）とのカップリングおよび次に塩化亜鉛による脱保護によって、標題化合物を製造した。これによって、標題化合物６．５ｍｇ（２段階で理論値の５２％）を得た。

【1116】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1117】

中間体Ｆ２５４
トリフルオロ酢酸／メチル（３Ｓ）−４−［（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−３−ブロモ−４−オキソブタノエート（１：１）

【化297】

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【1118】

中間体Ｃ６６ １５ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メトキシ−４−オキソブタン酸塩酸塩（１：１）から（Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ２００、６５、５１７−５２２）に記載の方法に従って合成した（２Ｓ）−２−ブロモ−４−メトキシ−４−オキソブタン酸２１ｍｇ（０．０９９ｍｍｏｌ）とカップリングさせることで、中間体２４７と同様にして標題化合物を製造した。

【1119】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８０５および８０７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1120】

中間体Ｆ２５５
Ｒ／Ｓ−（Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−α−グルタミル−Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝）ホモシステイン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化298】

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【1121】

最初に（２Ｓ）−５−（ベンジルオキシ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−５−オキソペンタン酸１３．１ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、ＨＯＢｔ ５．４ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）、ＴＢＴＵ １１．４ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４．６ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１２．９ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）に溶かしたＲ／Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）ホモシステイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ１１）３０．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ １ｍＬを加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物４−［２−［［（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル］−［３−（２−トリメチルシリルエトキシカルボニルアミノ）プロピル］アミノ］−２−オキソエチル］スルファニル−２−［［（２Ｓ）−５−ベンジルオキシ−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−５−オキソ−ペンタノイル］アミノ］ブタン酸３２ｍｇ（７３％）を得た。

【1122】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．５３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０８４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1123】

４−［２−［［（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル］−［３−（２−トリメチルシリルエトキシカルボニルアミノ）プロピル］アミノ］−２−オキソエチル］スルファニル−２−［［（２Ｓ）−５−ベンジルオキシ−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−５−オキソ−ペンタノイル］アミノ］ブタン酸４１．４ｍｇ（０．０３８ｍｍｏｌ）をエタノール１０ｍＬに溶解させ、Ｐｄ／Ｃ ４．２ｍｇを加え、混合物を標準気圧下に水素化した。反応混合物を段ボールフィルターで濾過し、フィルターケーキをエタノールで洗浄した。溶媒を減圧下に加熱せずに留去した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×４０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｒ／Ｓ−（Ｌ−α−グルタミル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）ホモシステイン／トリフルオロ酢酸（１：１）２１．１ｍｇ（５６％）を得た。

【1124】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．１１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1125】

最初にＲ／Ｓ−（Ｌ−α−グルタミル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル））ホモシステイン／トリフルオロ酢酸（１：１）２０．４ｍｇ（２０．９４μｍｏｌ）を、３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−｛１５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカ−１−イル｝プロパンアミド１１．８ｍｇ（２３．０４μｍｏｌ）とともにＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、４−メチルモルホリン４．２ｍｇ（４１．８８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸３．１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｒ／Ｓ−（Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−α−グルタミル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル））ホモシステイン９．５ｍｇ（３６％）を得た。

【1126】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．６６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２５９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1127】

Ｒ／Ｓ−（Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−α−グルタミル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル））ホモシステイン９．４ｍｇ（７．４７μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．５ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛６．１ｍｇ（４４．８１μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１３．１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物６．９ｍｇ（７５％）を得た。

【1128】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1129】

中間体Ｆ２５６
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブチル｝−Ｎ′−［２−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エチル］コハク酸アミド（１：１）

【化299】

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【1130】

ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｃ６５ １０ｍｇ（０．０１４ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸／Ｎ−［２−（２−アミノエトキシ）エチル］−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）９．６ｍｇ（０．０２７ｍｍｏｌ）のカップリングおよび次に中間体Ｆ１１９について記載の方法に従ってのトリフルオロエタノール中での塩化亜鉛による脱保護によって、標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物８ｍｇ（２段階で理論値の６４％）を得た。

【1131】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1132】

中間体Ｆ２５７
Ｒ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［１８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザオクタデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化300】

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【1133】

Ｒ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）５０．０ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）および３−［２−［２−［２−［２−［［２−（２，５−ジオキソピロール−１−イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸（中間体Ｌ７４）２９ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３．０ｍＬに溶かし、ＨＡＴＵ ２７．３ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２３．３ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｒ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザオクタデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン１７．４ｍｇ（２６％）を得た。

【1134】

ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒ_ｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１０１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1135】

Ｒ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザオクタデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン１７ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛６．３ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で終夜撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１３．５ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物７．６ｍｇ（４６％）を得た。

【1136】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９５７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1137】

中間体Ｆ２５８
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−［３−｛２−［（ブロモアセチル）アミノ］エチル｝アミノ）−３−オキソプロピル］ブタンアミド（１：１）

【化301】

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【1138】

ＨＡＴＵを用いる中間体Ｃ５８のトリフルオロ酢酸／ベンジル［２−（β−アラニルアミノ）エチル］カーバメート（１：１）とのカップリング、次に水素化分解、次に１−（２−ブロモアセトキシ）ピロリジン−２，５−ジオンとのカップリングおよび最後に塩化亜鉛による脱保護によって、標題化合物を製造した。

【1139】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４７および７４９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1140】

中間体Ｆ２５９
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−３−｛［Ｎ−（ブロモアセチル）グリシル］アミノ｝−Ｄ−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化302】

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【1141】

中間体Ｃ５８ ７５ｍｇ（０．１１４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １２．５ｍＬに取り、ＨＡＴＵ ６５ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン７９μＬの存在下に中間体Ｌ７５ ７８ｍｇ（０．１７１ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製後、中間体をエタノール２０ｍＬに取り、室温で水素標準圧下に１時間にわたり１０％パラジウム／活性炭で水素化した。触媒を濾去し、溶媒を減圧下に除去し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。アセトニトリル／水１：１からの凍結乾燥によって、２−（トリメチルシリル）エチル３−アミノ−Ｎ−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノイル］−Ｄ−アラニネート６３ｍｇ（２段階で理論値の６４％）を得た。

【1142】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．１６分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1143】

この中間体４０ｍｇ（０．０４７ｍｍｏｌ）を、上記の方法と同様にして、ＨＡＴＵの存在下にＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシンとカップリングさせ、再度水素化分解的に脱保護した。

【1144】

この中間体１０ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４μＬの存在下に市販の１−（２−ブロモアセトキシ）ピロリジン−２，５−ジオン７．７ｍｇ（０．０３２ｍｍｏｌ）とカップリングさせ、次に中間体Ｆ１１９について記載の方法に従ってトリフルオロエタノール中にて塩化亜鉛によって脱保護することで、標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物１．３ｍｇを得た。

【1145】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７７７および７７９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1146】

中間体Ｆ２６０
Ｎ^６−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル）−Ｎ^２−｛Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化303】

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【1147】

中間体Ｆ１５５と同様にして標題化合物を製造した。

【1148】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1149】

中間体Ｆ２６１
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−（２−｛２−［（ブロモアセチル）アミノ］エトキシ｝エチル）ブタンアミド（１：１）

【化304】

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【1150】

ＨＡＴＵの存在下での中間体Ｃ５８ ２０ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ７７ ２５．８ｍｇ（０．０６１ｍｍｏｌ）とのカップリングおよび次に塩化亜鉛による脱保護によって標題化合物を製造した。これによって、標題化合物１１．９ｍｇ（２段階で理論値の４７％）を得た。

【1151】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７２２および７２０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1152】

中間体Ｆ２６２
Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−｛３−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノイル｝−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化305】

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【1153】

最初にＳ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）３０ｍｇ（３６μｍｏｌ）と３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−［２−（２−｛３−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−３−オキソプロポキシ｝エトキシ）エチル］プロパンアミド１６．９ｍｇ（４０μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．５ｍＬに入れ、４−メチルモルホリン１０．９ｍｇ（１０８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸７．５８ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−｛３−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノイル｝−Ｌ−システイン３３．４ｍｇ（理論値の８０％）を得た。

【1154】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1155】

Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−｛３−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノイル｝−Ｌ−システイン３２．８ｍｇ（３２μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール３．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛２６．１ｍｇ（１９２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸５６．０ｍｇ（０．１９２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を凍結乾燥した。これによって、標題化合物２２．９ｍｇ（理論値の７１％）を得た。

【1156】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８８３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1157】

中間体Ｆ２６３
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−β−アラニル−Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化306】

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【1158】

Ｒ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）３０．０ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）およびＮ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−β−アラニン（中間体Ｌ７８）９．８ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに溶かし、ＨＡＴＵ １６．４ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１４．０ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−β−アラニル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン４．２ｍｇ（１３％）を得た。

【1159】

ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒ_ｔ＝１．３１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1160】

Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−β−アラニル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン１１．３ｍｇ（０．０１１ｍｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛５．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１０．７ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物４．４ｍｇ（４０％）を得た。

【1161】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1162】

中間体Ｆ２６４
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル−Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化307】

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【1163】

Ｒ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）３０．０ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）およびＮ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニン（中間体Ｌ７９）１２．２ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに溶かし、ＨＡＴＵ １６．４ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１４．０ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン８．９ｍｇ（２４％）を得た。

【1164】

ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒ_ｔ＝１．３８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９８１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1165】

Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン１５．３ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛６．３ｍｇ（０．０４５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１３．５ｍｇ（０．０４５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物９．１ｍｇ（６２％）を得た。

【1166】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1167】

中間体Ｆ２６５
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−６，１７−ジオキソ−１０，１３−ジオキサ−３−チア−７，１６−ジアザドコサン−１−アミド（１：１）

【化308】

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【1168】

最初に１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−オン酸（中間体Ｃ６９）３０．０ｍｇ（４２．７μｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸／Ｎ−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド（１：１）（中間体Ｌ８２）２５．３ｍｇ（５５．６μｍｏｌ）を、アセトニトリル１．９ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６０μＬ（３４０μｍｏｌ）および２，４，６−トリプロピル−１，３，５，２，４，６−トリオキサトリホスフィナン２，４，６−トリオキサイド５０％の酢酸エチル中溶液３３μＬ（５６μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。水（２．０ｍＬ）を加え、精製を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル［４−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−５，１０，２１−トリオキソ−１４，１７−ジオキサ−７−チア−４，１１，２０−トリアザヘキサコサ−１−イル］カーバメート２６．７ｍｇ（理論値の６０％）を得た。

【1169】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1170】

２−（トリメチルシリル）エチル［４−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−５，１０，２１−トリオキソ−１４，１７−ジオキサ−７−チア−４，１１，２０−トリアザヘキサコサ−１−イル］カーバメート２５．３ｍｇ（２４．７μｍｏｌ）を、トリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛２０．２ｍｇ（１４８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸４３．３ｍｇ（１４８μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２３．４ｍｇ（理論値の９５％）を得た。

【1171】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８８１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1172】

中間体Ｆ２６６
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１３−ジオキソ−６，９−ジオキサ−１６−チア−３，１２−ジアザオクタデカン−１８−アミド（１：１）

【化309】

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【1173】

１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−オン酸（中間体Ｃ６９）３０．０ｍｇ（０．０４３ｍｍｏｌ）を最初に、トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）（中間体Ｌ８３）２２．２ｍｇ（０．０５６ｍｍｏｌ）とともにアセトニトリル１．９ｍＬに入れた。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６０μＬ（０．３４ｍｍｏｌ）を加え、Ｔ３Ｐ（５０％酢酸エチル中溶液）３３μＬ（０．０５６ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。水（２．０ｍＬ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル［１９−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１３，１８−トリオキソ−６，９−ジオキサ−１６−チア−３，１２，１９−トリアザドコサン−２２−イル］カーバメート２０．５ｍｇ（理論値の４９％）を得た。

【1174】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９６９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1175】

２−（トリメチルシリル）エチル［１９−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１３，１８−トリオキソ−６，９−ジオキサ−１６−チア−３，１２，１９−トリアザドコサン−２２−イル］カーバメート１９．１ｍｇ（１９．７μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１６．１ｍｇ（１１８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸３４．６ｍｇ（１１８μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１３．９ｍｇ（理論値の７５％）を得た。

【1176】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1177】

中間体Ｆ２６７
Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル］−Ｌ−システイニル−β−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化310】

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【1178】

最初に、アルゴン下に、１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−オキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−オン酸（中間体Ｌ７４）１３．４ｍｇ（３３．３μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン９．３μＬ（５４．４μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ １２．６ｍｇ（３３．３μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４．７μＬ（２７．７μｍｏｌ）に溶かしたＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイニル−β−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｆ２１６の合成参照）２５．０ｍｇ（２７．７μｍｏｌ）およびＤＭＦ １．０ｍＬを加えた。反応混合物を室温で９０分間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル］−Ｌ−システイニル−β−アラニン６．９０ｍｇ（理論値の１９％）を得た。

【1179】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝４．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１７２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1180】

Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル］−Ｌ−システイニル−β−アラニン６．７０ｍｇ（５．７１μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛４．６７ｍｇ（３４．３μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１０ｍｇ（３４．３μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物４．４ｍｇ（理論値の６７％）を得た。

【1181】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1182】

中間体Ｆ２６８
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−６，２３−ジオキソ−１０，１３，１６，１９−テトラオキサ−３−チア−７，２２−ジアザオクタコサン−１−アミド（１：１）

【化311】

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【1183】

最初に１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−オン酸（中間体Ｃ６９）３０．０ｍｇ（０．０４３ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸／Ｎ−（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカ−１−イル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド（１：１）（中間体Ｌ８４）３０．２ｍｇ（０．０５６ｍｍｏｌ）とともにアセトニトリル２．０ｍＬに入れた。次に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６０μＬ（０．３４ｍｍｏｌ）を加え、Ｔ３Ｐ（５０％酢酸エチル中溶液）３３μＬ（０．０５６ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。水（２．０ｍＬ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル［４−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−３２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−５，１０，２７−トリオキソ−１４，１７，２０，２３−テトラオキサ−７−チア−４，１１，２６−トリアザドトリアコンタ−１−イル］カーバメート２７．９ｍｇ（理論値の５９％）を得た。

【1184】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1185】

２−（トリメチルシリル）エチル［４−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−３２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−５，１０，２７−トリオキソトリオキソ−１４，１７，２０，２３−テトラオキサ−７−チア−４，１１，２６−トリアザドトリアコンタ−１−イル］カーバメート２５．６ｍｇ（２３．０μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．５ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１８．８ｍｇ（１３８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸４０．３ｍｇ（１３８μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２２．２ｍｇ（理論値の８８％）を得た。

【1186】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９６９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1187】

中間体Ｆ２６９
４−｛［（８Ｒ，１４Ｒ）−１３−（３−アミノプロピル）−１４−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１５，１５−ジメチル−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘキサデカン−８−イル］アミノ｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化312】

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【1188】

最初にＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−オキソブタノイル）−Ｌ−システイン（中間体Ｃ７７）１７．０ｍｇ（０．０１９５ｍｍｏｌ）を、Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（中間体Ｌ１）４．９９ｍｇ（０．０２５３ｍｍｏｌ）とともにアセトニトリル１．０ｍＬに入れた。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２７μＬ（０．１６ｍｍｏｌ）を加え、Ｔ３Ｐ（５０％酢酸エチル中溶液）１５μＬ（０．０２５ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。水（２．０ｍＬ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル４−｛［（１６Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，２−ジメチル−６，１２，１７，２２−テトラオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１，１８，２１−テトラアザ−２−シラトリコサン−１６−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート９．５ｍｇ（理論値の４６％）を得た。

【1189】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０５２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1190】

ｔｅｒｔ−ブチル４−｛［（１６Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，２−ジメチル−６，１２，１７，２２−テトラオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１，１８，２１−テトラアザ−２−シラトリコサン−１６−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート８．３ｍｇ（７．８９μｍｏｌ）を、トリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛６．４５ｍｇ（４７．３μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で６時間撹拌した。二塩化亜鉛６．４５ｍｇ（４７．３μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で終夜撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２７．７ｍｇ（９４．６μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１．１０ｍｇ（理論値の１４％）を得た。

【1191】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1192】

中間体Ｆ２７０
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−Ｎ′−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）コハク酸アミド（１：１）

【化313】

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【1193】

最初に、アルゴン下に、１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラペンタデカン−１５−オン酸（中間体Ｃ７８）１５．０ｍｇ（２２．９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン８．０μＬ（４５．８μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ １０．４ｍｇ（２７．４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４．０μＬ（２２．９μｍｏｌ）に溶かしたトリフルオロ酢酸／Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）（中間体Ｌ１）８．５４ｍｇ（２７．４μｍｏｌ）およびＤＭＦ １．０ｍＬを加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛４−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−４−オキソブタノイル｝アミノ）プロピル］カーバメート１４．７ｍｇ（理論値の７７％）を得た。

【1194】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝１．３３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1195】

２−（トリメチルシリル）エチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛４−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−４−オキソブタノイル｝アミノ）プロピル］カーバメート１３．２ｍｇ（１５．８μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１２．９ｍｇ（９４．８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２７．７ｍｇ（９４．６μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１０．９ｍｇ（理論値の８３％）を得た。

【1196】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６９１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1197】

中間体Ｆ２７１
４−｛［（２０Ｒ，２６Ｒ）−２５−（３−アミノプロピル）−２６−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２７，２７−ジメチル−２，１９，２４−トリオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−２２−チア−３，１８，２５−トリアザオクタコサン−２０−イル］アミノ｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化314】

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【1198】

最初に、アルゴン下に、Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−オキソブタノイル）−Ｌ−システイン（中間体Ｃ７７）１９．４ｍｇ（２２．２μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ２．０ｍＬに入れ、トリフルオロ酢酸／Ｎ−（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカ−１−イル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）（中間体Ｌ７４）２１．７ｍｇ（４４．４μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１２μＬ（６７μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ １６．９ｍｇ（４４．４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル４−｛［（１６Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−３５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，２−ジメチル−６，１２，１７，３４−テトラオキソ−５，２１，２４，２７，３０−ペンタオキサ−１４−チア−７，１１，１８，３３−テトラアザ−２−シラペンタトリアコンタン−１６−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート１８．１ｍｇ（理論値の６６％）を得た。

【1199】

ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒ_ｔ＝１．７９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２５０（Ｍ＋Ｎａ）^＋。

【1200】

ｔｅｒｔ−ブチル４−｛［（１６Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−３５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，２−ジメチル−６，１２，１７，３４−テトラオキソ−５，２１，２４，２７，３０−ペンタオキサ−１４−チア−７，１１，１８，３３−テトラアザ−２−シラペンタトリアコンタン−１６−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート１８．１ｍｇ（１４．７μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１２．０ｍｇ（８８．４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２５．８ｍｇ（８８．４μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１２．３ｍｇ（理論値の７３％）を得た。

【1201】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1202】

中間体Ｆ２７２
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−Ｎ′−［１７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１６−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサ−１５−アザヘプタデカ−１−イル］コハク酸アミド（１：１）

【化315】

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【1203】

最初に、アルゴン下に、１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラペンタデカン−１５−オン酸（中間体Ｃ７８）１５．０ｍｇ（２２．９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン８．０μＬ（４５．８μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ １０．４ｍｇ（２７．４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４．０μＬ（２２．９μｍｏｌ）に溶かしたトリフルオロ酢酸／Ｎ−（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカ−１−イル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）（中間体Ｌ８５）１３．４ｍｇ（２７．４μｍｏｌ）およびＤＭＦ １．０ｍＬを加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル［２３−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１９，２２−トリオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３，１８，２３−トリアザヘキサコサン−２６−イル］カーバメート１５．８ｍｇ（理論値の６８％）を得た。

【1204】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０１１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1205】

２−（トリメチルシリル）エチル［２３−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１９，２２−トリオキソトリオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３，１８，２３−トリアザヘキサコサン−２６−イル］カーバメート１５．１ｍｇ（１４．９μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１２．２ｍｇ（８９．６μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２６．２ｍｇ（８９．６μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１０．３ｍｇ（理論値の７０％）を得た。

【1206】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1207】

中間体Ｆ２７３
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１９−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−２２−チア−３，１８−ジアザテトラコサン−２４−アミド（１：１）

【化316】

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【1208】

最初に、アルゴン下に、１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−オン酸（中間体Ｃ６９）２０．０ｍｇ（２８．５μｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１０．０μＬ（５７．０μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ １３．０ｍｇ（３４．２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５．０μＬ（２８．５μｍｏｌ）に溶かしたトリフルオロ酢酸／Ｎ−（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカ−１−イル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）（中間体Ｌ８５）１６．７ｍｇ（３４．２μｍｏｌ）およびＤＭＦ １．０ｍＬを加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル［２５−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１９，２４−トリオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−２２−チア−３，１８，２５−トリアザオクタコサン−２８−イル］カーバメート１８．６ｍｇ（理論値の６２％）を得た。

【1209】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０５７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1210】

２−（トリメチルシリル）エチル［２５−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１９，２４−トリオキソトリオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−２２−チア−３，１８，２５−トリアザオクタコサン−２８−イル］カーバメート１７．１ｍｇ（１６．２μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１３．２ｍｇ（９７．０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２８．４ｍｇ（９７．０μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物９．８０ｍｇ（理論値の５９％）を得た。

【1211】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９１３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1212】

中間体Ｆ２７４
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化317】

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【1213】

最初にＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）１３．９ｍｇ（０．０１６７ｍｍｏｌ）を、Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン（中間体Ｌ８６）７．０７ｍｇ（０．０２１７ｍｍｏｌ）とともアセトニトリル２．０ｍＬに入れた。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２３μＬ（０．１３ｍｍｏｌ）を加え、Ｔ３Ｐ（５０％酢酸エチル中溶液）１３μＬ（０．０２２ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン３．７０ｍｇ（理論値の１９％）を得た。

【1214】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1215】

Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン１０．６ｍｇ（１０．３μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛８．４６ｍｇ（６２．１μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１８．１ｍｇ（６２．１μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物５．６０ｍｇ（理論値の５４％）を得た。

【1216】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝１．６９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８８０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1217】

中間体Ｆ２７５
Ｎ−［３−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）プロパノイル］−Ｎ−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）−Ｌ−α−グルタミン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化318】

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【1218】

最初に１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−オン酸（中間体Ｃ６９）３９．０ｍｇ（５５．６μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ４．０ｍＬに入れ、１−ベンジル−５−［２−（トリメチルシリル）エチル］−Ｌ−グルタメート塩酸塩（１：１）（中間体Ｌ８９）４１．６ｍｇ（１１１μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２９μＬ（１７０μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ４２．３ｍｇ（１１１μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、酢酸で反応停止し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物１−ベンジル−５−［２−（トリメチルシリル）エチル］−Ｎ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−Ｌ−グルタメート５３．１ｍｇ（理論値の９３％）を得た。

【1219】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．７１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1220】

最初に、アルゴン下に、酢酸パラジウム（ＩＩ）７．６０ｍｇ（３３．９μｍｏｌ）を、ジクロロメタン３．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン１４μＬ（１００μｍｏｌ）およびトリエチルシラン１１０μＬ（６８０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で５分間撹拌し、ジクロロメタン３．０ｍＬに溶かした１−ベンジル−５−［２−（トリメチルシリル）エチル］−Ｎ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−Ｌ−グルタメート６９．２ｍｇ（６７．７μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を段ボールフィルターで濾過し、フィルターケーキをジクロロメタンで洗浄した。溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物（１９Ｓ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−１９−｛３−オキソ−３−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］プロピル｝−５−オキサ−１４−チア−７，１１，１８−トリアザ−２−シライコサン−２０−オン酸３８．４ｍｇ（理論値の６１％）を得た。

【1221】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．５３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９３１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1222】

最初に（１９Ｓ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−１９−｛３−オキソ−３−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］プロピル｝−５−オキサ−１４−チア−７，１１，１８−トリアザ−２−シライコサン−２０−オン酸（中間体Ｃ６９）１０．０ｍｇ（１０．７μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド／２，２，２−トリフルオロエタン−１，１−ジオール（１：１）（中間体Ｌ１）６．７３ｍｇ（２１．５μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５．６μＬ（３２μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ８．１７ｍｇ（２１．５μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を室温で３時間撹拌し、酢酸で反応停止し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチルＮ２−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−Ｎ−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）−Ｌ−α−グルタミネート６．９０ｍｇ（理論値の５８％）を得た。

【1223】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．５７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1224】

２−（トリメチルシリル）エチルＮ^２−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−Ｎ−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）−Ｌ−α−グルタミネート６．９０ｍｇ（６．２１μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛５．１ｍｇ（３７．２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。二塩化亜鉛５．１ｍｇ（３７．２μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。二塩化亜鉛５．１ｍｇ（３７．２μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。二塩化亜鉛１０．１ｍｇ（７４．４μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で終夜および室温で７２時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸５４．５ｍｇ（１８６μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２．４ｍｇ（理論値の３９％）を得た。

【1225】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1226】

中間体Ｆ２７６
Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−｛３−［２−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノイル｝−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化319】

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【1227】

最初に、アルゴン下に、３−［２−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパン酸（中間体Ｌ８７）９．０８ｍｇ（２８．９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン８．３３μＬ（４８．２μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ １１．０ｍｇ（２８．９μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４．６７μＬ（２４．１μｍｏｌ）に溶かしたＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）２０．０ｍｇ（２７．７μｍｏｌ）およびＤＭＦ １．０ｍＬを加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−｛３−［２−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノイル｝−Ｌ−システイン４．７０ｍｇ（理論値の１９％）を得た。

【1228】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝２．４７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０１３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1229】

Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−｛３−［２−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノイル｝−Ｌ−システイン１３．９ｍｇ（１３．７μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛５．６ｍｇ（４１．２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。二塩化亜鉛５．６ｍｇ（４１．２μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で３０分間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２４．１ｍｇ（８２．４μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１０．８ｍｇ（理論値の８０％）を得た。

【1230】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝１．５８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1231】

中間体Ｆ２７７
Ｎ−［３−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）プロパノイル］−３−［（ブロモアセチル）アミノ］−Ｄ−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化320】

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【1232】

トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル３−アミノ−Ｎ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−Ｄ−アラニネート（１：１）（中間体Ｃ８０）８．９０ｍｇ（８．８８μｍｏｌ）および１−（２−ブロモアセトキシ）ピロリジン−２，５−ジオン２．３１ｍｇ（９．７７μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド１ｍＬに溶かし、Ｎ−メチルモルホリン２．９μＬ（２７μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチルＮ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−３−［（ブロモアセチル）アミノ］−Ｄ−アラニネート５．８０ｍｇ（理論値の６５％）を得た。

【1233】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．５７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１００８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1234】

２−（トリメチルシリル）エチルＮ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−３−［（ブロモアセチル）アミノ］−Ｄ−アラニネート５．８０ｍｇ（５．７５μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛４．７０ｍｇ（３４．５μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。二塩化亜鉛４．７０ｍｇ（３４．５μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で５時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２０．２ｍｇ（６９．０μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１．７０ｍｇ（理論値の３４％）を得た。

【1235】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1236】

中間体Ｆ２７８
Ｎ−［３−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）プロパノイル］−３−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝−Ｄ−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化321】

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【1237】

トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル３−アミノ−Ｎ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−Ｄ−アラニネート（１：１）（中間体Ｃ８０）１０．０ｍｇ（９．９８μｍｏｌ）および１−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン２．７７ｍｇ（１１．０μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド１ｍＬに溶かし、Ｎ−メチルモルホリン３．３μＬ（３０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。酢酸２．０μＬ（３５μｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチルＮ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−３−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝−Ｄ−アラニネート５．５０ｍｇ（理論値の５４％）を得た。

【1238】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．５１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1239】

２−（トリメチルシリル）エチルＮ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−３−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝−Ｄ−アラニネート５．５０ｍｇ（５．３６μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛４．３９ｍｇ（３２．２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。二塩化亜鉛４．３９ｍｇ（３２．２μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。二塩化亜鉛４．３９ｍｇ（３２．２μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２８．２ｍｇ（９６．５μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２．７０ｍｇ（理論値の５６％）を得た。

【1240】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1241】

中間体Ｆ２７９
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［（｛（２Ｒ）−２−カルボキシ−２−［（３−カルボキシプロパノイル）アミノ］エチル｝スルファニル）アセチル］アミノ）プロピル］−Ｌ−アラニンアミド

【化322】

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【1242】

Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−オキソブタノイル）−Ｌ−システイン（中間体Ｃ７７）１２．２ｍｇ（１４μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１１．４ｍｇ（８３．８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２４．５ｍｇ（８３．８μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物４−｛［（１Ｒ）−２−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）−１−カルボキシエチル］アミノ｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）４．６０ｍｇ（理論値の４２％）を得た。

【1243】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1244】

４−｛［（１Ｒ）−２−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）−１−カルボキシエチル］アミノ｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）１０．０ｍｇ（１２．７μｍｏｌ）および２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニネート（中間体Ｌ８８）７．４１ｍｇ（１２．７μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド１．５ｍＬに溶かし、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４．４μＬ（２５μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。酢酸２．０μＬ（３５μｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物５．２０ｍｇ（理論値の３９％）を得た。

【1245】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．１１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０３６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1246】

中間体Ｆ２８０
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ベンズアミド（１：１）

【化323】

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【1247】

市販の１−（３−｛［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］カルボニル｝フェニル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンとのカップリングおよび次に塩化亜鉛による脱保護によって、中間体Ｃ６４から標題化合物を製造した。

【1248】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７５５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1249】

中間体Ｆ２８１
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−３−｛［Ｎ−（ブロモアセチル）−β−アラニル］アミノ｝−Ｄ−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化324】

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【1250】

最初に、修飾アミノ酸構成要素Ｎ−（ブロモアセチル）−β−アラニンおよび２−（トリメチルシリル）エチル−３−アミノ−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アラニネートをペプチド化学の古典的方法によって製造した。これらを、ＨＡＴＵおよびモルホリンの存在下にカップリングさせた。次に、１０％強度トリフルオロ酢酸／ジクロロメタンを用いてｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基を除去して、中間体２−（トリメチルシリル）エチル３−｛［Ｎ−（ブロモアセチル）−β−アラニル］アミノ｝−Ｄ−アラニネートを得た。

【1251】

最後に、この中間体をＨＡＴＵおよび４−メチルモルホリンの存在下に中間体Ｃ５８とカップリングさせ、次に塩化亜鉛によって脱保護することで、標題化合物を製造した。

【1252】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７９１および７９３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1253】

中間体Ｆ２８２
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−（３−｛［Ｎ−（ブロモアセチル）グリシル］アミノ｝プロピル）ブタンアミド（１：１）

【化325】

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【1254】

最初に、ペプチド化学の古典的方法によってｔｅｒｔ−ブチルグリシネートおよびブロモ無水酢酸から、中間体トリフルオロ酢酸／Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ２−（ブロモアセチル）グリシンアミド（１：１）を製造した。

【1255】

最後に、この中間体をＨＡＴＵおよび４−メチルモルホリンの存在下に中間体Ｃ５８とカップリングさせ、次に塩化亜鉛によって脱保護することで、標題化合物を製造した。

【1256】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４７および７４９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1257】

中間体Ｆ２８３
Ｎ−［（２Ｒ）−２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−２−カルボキシエチル］−Ｎ^２−（ブロモアセチル）−Ｌ−α−アスパラギン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化326】

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【1258】

最初に、修飾アミノ酸構成要素（２Ｓ）−２−［（ブロモアセチル）アミノ］−４−オキソ−４−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］ブタン酸およびブロモ無水酢酸を（２Ｓ）−２−アミノ−４−オキソ−４−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］ブタン酸およびブロモ無水酢酸から製造し、アミノ酸構成要素２−（トリメチルシリル）エチル−３−アミノ−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アラニネートを市販の３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アラニン／Ｎ−シクロヘキシルシクロヘキサンアミン（１：１）から製造した。両方の構成要素をＨＡＴＵおよびモルホリンの存在下にカップリングさせ、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基を、５％強度トリフルオロ酢酸／ジクロロメタンを用いて除去して、シリルエチルエステル保護基を得て、従って中間体トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル−Ｎ−｛（２Ｒ）−２−アミノ−３−オキソ−３−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］プロピル｝−Ｎ２−（ブロモアセチル）−Ｌ−α−アスパラギナート（１：１）を得た。

【1259】

最後に、この中間体をＨＡＴＵおよび４−メチルモルホリンの存在下に中間体Ｃ５８とカップリングさせ、次に塩化亜鉛によって脱保護することで、標題化合物を製造した。

【1260】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３５および８３７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1261】

中間体Ｆ２８４
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−３−｛［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル］アミノ｝−Ｄ−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化327】

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【1262】

最初に、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、中間体Ｌ８０を市販の（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸とカップリングさせ、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基を、１６％強度トリフルオロ酢酸／ジクロロメタンを用いて除去して、シリルエチルエステル保護基を得た。

【1263】

最後に、この中間体をＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ５８とカップリングさせ、次に塩化亜鉛によって脱保護することで、標題化合物を製造した。

【1264】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝１．４６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９８４．４５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1265】

中間体Ｆ２８５
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−３−［（１８−ブロモ−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザオクタデカン−１−オイル）アミノ］−Ｄ−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化328】

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【1266】

最初に、中間体Ｌ８０を市販のブロモ無水酢酸でアシル化し、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基を、２０％強度トリフルオロ酢酸／ジクロロメタンを用いて除去して、シリルエチルエステル保護基を得た。

【1267】

最後に、この中間体をＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ５８とカップリングさせ、次に塩化亜鉛によって脱保護することで、標題化合物を製造した。

【1268】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９６７および９６９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1269】

中間体Ｆ２８６
１−［（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−３−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝−Ｄ−アラニル）アミノ］−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化329】

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【1270】

最初に、中間体Ｌ９１を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸とカップリングさせ、Ｂｏｃ保護基を、１２．５％強度ＴＦＡ／ＤＣＭを用いて除去した。得られた中間体を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ５８とカップリングさせ、塩化亜鉛による脱保護によって標題化合物に変換した。

【1271】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９８４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1272】

中間体Ｆ２８８
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−３−（｛Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−セリル｝アミノ）−Ｄ−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化330】

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【1273】

中間体Ｃ７４ ３５ｍｇ（３９μｍｏｌ）を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピル（ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙ）エチルアミンの存在下に、ｔｅｒｔ−ブチルＯ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｌ−セリネートおよび（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸から事前に製造しておいたＮ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−セリンとカップリングさせた。塩化亜鉛による脱保護およびＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物１４ｍｇ（理論値の３８％）を得た。

【1274】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝１．４３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２４．３４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1275】

中間体Ｆ２８９
Ｎ^２−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｎ^６−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｄ−リジン／トリフルオロアセテート（１：１）

【化331】

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【1276】

最初に、ペプチド化学の古典的方法によって、Ｎ^６−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ^２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−リジンからトリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル−Ｎ^６−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｄ−リシネート（１：１）を製造した。

【1277】

次に、この中間体１２．５ｍｇ（２５μｍｏｌ）を、ＨＡＴＵおよび４−メチルモルホリンの存在下に中間体Ｃ５８ １５ｍｇ（２３μｍｏｌ）とカップリングさせた。塩化亜鉛による脱保護およびＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物１４ｍｇ（理論値の５３％）を得た。

【1278】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７７９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1279】

中間体Ｆ２９０
Ｎ^２−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｎ^６−（ブロモアセチル）−Ｄ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化332】

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【1280】

最初に、ペプチド化学の古典的方法によって、Ｎ^６−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ^２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−リジンから、トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル−Ｎ６−（ブロモアセチル）−Ｄ−リシネート（１：１）を製造した。

【1281】

この中間体１２ｍｇ（２５μｍｏｌ）を、ＨＡＴＵおよび４−メチルモルホリンの存在下に中間体Ｃ５８ １５ｍｇ（２３μｍｏｌ）とカップリングさせた。塩化亜鉛による脱保護およびＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物７ｍｇ（理論値の３６％）を得た。

【1282】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６２および７６４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1283】

中間体Ｆ２９１
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド

【化333】

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【1284】

最初に、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニンとカップリングさせることで、実施例Ｍ９から標題化合物を製造した。次の段階で、室温で水素標準圧下に１０％パラジウム／活性炭で１時間水素化することでＺ保護基を除去し、次にＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸とカップリングさせることで、脱保護中間体を標題化合物に変換した。

【1285】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．２１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７７７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1286】

中間体Ｆ２９３
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−３−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ベンゾイル］アミノ｝−Ｄ−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化334】

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【1287】

中間体Ｃ７４ ３５ｍｇ（３９μｍｏｌ）をＤＭＦ ４ｍＬに溶かし、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、市販の１−（３−｛［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］カルボニル｝フェニル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン１３．５ｍｇ（４３μｍｏｌ）とカップリングさせた。塩化亜鉛による脱保護およびＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物１２ｍｇ（理論値の３４％）を得た。

【1288】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝０．９３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７９９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1289】

中間体Ｆ２９４
Ｎ−｛５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−５−オキソペンタノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−｛（１Ｓ）−３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−カルボキシプロピル｝−Ｌ−アラニンアミド

【化335】

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【1290】

メタノール１２ｍＬに溶かした中間体Ｃ７６ ４１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を、室温で１時間、水素標準圧下に１０％パラジウム／活性炭１０ｍｇで水素化した。触媒を濾去し、溶媒を減圧下に除去した。これによって、脱保護中間体３２ｍｇ（理論値の９２％）を得た。

【1291】

この中間体１５ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）をＤＭＦに溶かし、１，１′−［（１，５−ジオキソペンタｎ−１，５−ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン−２，５−ジオン１３ｍｇ（０．０３９ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン７μＬを加えた。室温で１時間撹拌後、反応液を濃縮し、残留物をＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物９ｍｇ（理論値の４５％）を得た。

【1292】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1293】

中間体Ｆ２９５
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛（１Ｓ）−３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−カルボキシプロピル｝−Ｌ−アラニンアミド

【化336】

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【1294】

メタノール１２ｍＬに溶かした中間体Ｃ７６ ４１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を、室温で１時間、水素標準圧下に１０％パラジウム／活性炭１０ｍｇで水素化した。触媒を濾去し、溶媒を減圧下に除去した。これによって、脱保護中間体３２ｍｇ（理論値の９２％）を得た。

【1295】

この中間体１５ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ４ｍＬに溶かし、１−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン１０ｍｇ（０．０３９ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン７μＬを加えた。室温で２時間撹拌後、反応液を濃縮し、残留物をＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物１０ｍｇ（理論値の５６％）を得た。

【1296】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1297】

中間体Ｆ２９６
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−｛２−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）スルホニル］エチル｝ブタンアミド（１：１）

【化337】

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【1298】

ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ５８とカップリングさせることで、中間体Ｌ８１から標題化合物を製造した。次の段階で、ＤＣＭ／メタノール１：１中室温で水素標準圧下に３０分間、１０％パラジウム／活性炭での水素化によってＺ保護基を除去した。ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸とカップリングさせ、最後に塩化亜鉛による脱保護によって、脱保護中間体を標題化合物に変換した。

【1299】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1300】

中間体Ｆ２９７
Ｓ−｛２−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（ピロリジン−３−イルメチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（異性体１）

【化338】

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【1301】

アルゴン下に、塩化亜鉛１５ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）を、Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−システイン（中間体Ｃ９２）３６ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ、純度６８％）の２，２，２−トリフルオロエタノール（０．７４ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を５０℃で７時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ ３２ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物６．４ｍｇ（理論値の２５％）を得た。

【1302】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７９２（Ｍ＋Ｈ−ＣＦ_３ＣＯ_２Ｈ）^＋。

【1303】

中間体Ｆ２９８
Ｓ−｛２−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（ピロリジン−３−イルメチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（異性体２）

【化339】

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【1304】

アルゴン下に、塩化亜鉛１９ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を、Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−システイン（中間体Ｃ９１）４５ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ、純度７１％）の２，２，２−トリフルオロエタノール（０．９４ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ ４２ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物５．７ｍｇ（理論値の１８％）を得た。

【1305】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７９１（Ｍ＋Ｈ−ＣＦ_３ＣＯ_２Ｈ）^＋。

【1306】

中間体Ｆ２９９
Ｓ−（２−｛（３−アミノプロピル）［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］アミノ｝−２−オキソエチル）−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化340】

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【1307】

塩化亜鉛７６．８ｍｇ（０．５７ｍｍｏｌ）を、Ｓ−｛１１−［（Ｒ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］（シクロヘキシル）メチル］−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル｝−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−システイン（中間体Ｃ８４）８８．０ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ）の２，２，２−トリフルオロエタノール（１．８８ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ １６４．６ｍｇ（０．５７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物３１ｍｇ（理論値の３５％）を得た。

【1308】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝１．８２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７９２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1309】

中間体Ｆ３００
（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−Ｎ−（２−｛［（２Ｒ）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エチル）ブタンアミド

【化341】

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【1310】

アルゴン下に、塩化亜鉛１１ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）を、２−（トリメチルシリル）エチル｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［（２Ｒ）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝カーバメート（中間体Ｃ１００）７ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）の２，２，２−トリフルオロエタノール（０．２ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を５０℃で８時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ １４ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物１．６ｍｇ（理論値の２７％）を得た。

【1311】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０７（Ｍ＋Ｈ−ＣＦ_３ＣＯ_２Ｈ）^＋。

【1312】

中間体Ｆ３０２
Ｓ−｛２−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（ピロリジン−３−イルメチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−システイン／トリフルオロアセテート（１：１）（異性体１）

【化342】

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【1313】

アルゴン下に、塩化亜鉛３１．７ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）を、Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−システイン（中間体Ｃ９４）５６．９ｍｇ（５８．２ｍｍｏｌ、純度８５％）の２，２，２−トリフルオロエタノール（１．４ｍＬ）中混合物に加え、反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ ６８．０ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物７ｍｇ（理論値の１３％）を得た。

【1314】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３６（Ｍ＋Ｈ−ＣＦ_３ＣＯ_２Ｈ）^＋。

【1315】

中間体Ｆ３０４
Ｎ−（２−｛［３−（｛２−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（ピロリジン−３−イルメチル）アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）プロパノイル］アミノ｝エチル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド（１：１）トリフルオロ酢酸（異性体２）

【化343】

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【1316】

塩化亜鉛１３．２ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル３−［２−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３，８，１３−トリオキソ−５−チア−２，９，１２−トリアザオクタデカ−１−イル］ピロリジン−１−カルボキシレート（中間体９８）２２．３ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）の２，２，２−トリフルオロエタノール（０．６４ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を５０℃で８時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ ２８．３６ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物５ｍｇ（理論値の２４％）を得た。

【1317】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ３．０５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１９（Ｍ＋Ｈ−ＣＦ_３ＣＯ_２Ｈ）^＋。

【1318】

中間体Ｆ３０５
Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−６，１７−ジオキソ−Ｎ−（ピロリジン−３−イルメチル）−１０，１３−ジオキサ−３−チア−７，１６−ジアザドコサン−１−アミド（１：１）トリフルオロ酢酸（異性体２）

【化344】

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【1319】

塩化亜鉛１３．４２ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル３−［２−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３，８，１９−トリオキソ−１２，１５−ジオキサ−５−チア−２，９，１８−トリアザテトラコサ−１−イル］ピロリジン−１−カルボキシレート（中間体Ｃ９９）２４．８０ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）の２，２，２−トリフルオロエタノール（０．６５ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を５０℃で８時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ ２８．７８ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物１０ｍｇ（理論値の４４％）を得た。

【1320】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝３．１１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９０７（Ｍ＋Ｈ−ＣＦ_３ＣＯ_２Ｈ）^＋。

【1321】

中間体Ｆ３０６
Ｎ^６−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル）−Ｎ^２−｛Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−β−アラニル｝−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化345】

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【1322】

ＨＡＴＵ １６．７ｍｇ（０．０４４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１５μＬ存在下での中間体Ｃ６１ ２４ｍｇ（０．０２９ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ９９ ３０ｍｇ（０．０３５ｍｍｏｌ）とのカップリングおよび次に中間体Ｆ１１９について記載の方法によるトリフルオロエタノール中での塩化亜鉛による脱保護によって、標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物１９ｍｇ（２段階で理論値の５２％）を得た。

【1323】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０９１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1324】

中間体Ｆ３０７
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｓ−｛（５Ｒ，１４Ｒ）−１３−（３−アミノプロピル）−１４−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−５−カルボキシ−１５，１５−ジメチル−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘキサデカ−１−イル｝−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化346】

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【1325】

トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル３−アミノ−Ｎ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−Ｄ−アラニネート（１：１）（中間体Ｃ８０）８．９０ｍｇ（８．８８μｍｏｌ）および１−（２−ブロモアセトキシ）ピロリジン−２，５−ジオン２．３１ｍｇ（９．７７μｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド１ｍＬに溶かし、Ｎ−メチルモルホリン２．９μＬ（２７μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチルＮ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−３−［（ブロモアセチル）アミノ］−Ｄ−アラニネート５．８０ｍｇ（理論値の６５％）を得た。

【1326】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．５７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１００８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1327】

２−（トリメチルシリル）エチルＮ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−イル）−３−［（ブロモアセチル）アミノ］−Ｄ−アラニネート（３１．９ｍｇ、３１．６μｍｏｌ）およびＬ−システイン（７．６６ｍｇ、６３．２μｍｏｌ）をＤＭＦ ３．０ｍＬに溶かし、室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−［（１９Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７，２２−テトラオキソ−１９−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−５−オキサ−１４−チア−７，１１，１８，２１−テトラアザ−２−シラトリコサン−２３−イル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）２８．１ｍｇ（理論値の７６％）を得た。

【1328】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝２．５２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０４９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1329】

Ｓ−［（１９Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７，２２−テトラオキソ−１９−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−５−オキサ−１４−チア−７，１１，１８，２１−テトラアザ−２−シラトリコサン−２３−イル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（１３．５ｍｇ、１１．６μｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに溶解させ、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニネート（６．７６ｍｇ、１１．６μｍｏｌ）（中間体Ｌ８８）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４．０μＬ、２３μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｓ−［（１９Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７，２２−テトラオキソ−１９−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−５−オキサ−１４−チア−７，１１，１８，２１−テトラアザ−２−シラトリコサン−２３−イル］−Ｌ−システイン１１．１ｍｇ（理論値の６８％）を得た。

【1330】

ＬＣ−ＭＳ（方法１４）：Ｒ_ｔ＝７．３８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１４１２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1331】

Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−Ｓ−［（１９Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２，１７，２２−テトラオキソ−１９−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−５−オキサ−１４−チア−７，１１，１８，２１−テトラアザ−２−シラトリコサン−２３−イル］−Ｌ−システイン（９．４０ｍｇ、６．６５μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶解させ、二塩化亜鉛（５．４４ｍｇ、３９．９μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。二塩化亜鉛（５．４４ｍｇ、３９．９μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸（２３．４ｍｇ、７９．８μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物５．６０ｍｇ（理論値の６６％）を得た。

【1332】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１６８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1333】

中間体Ｆ３０８
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［（１２Ｒ，１９Ｒ）−１９−アミノ−４−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１２，１９−ジカルボキシ−５，１０，１５−トリオキソ−７，１７−ジチア−４，１１，１４−トリアザノナデカ−１−イル］−Ｌ−アラニンアミド／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化347】

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【1334】

Ｎ−［３−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）プロパノイル］−３−［（ブロモアセチル）アミノ］−Ｄ−アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）（１２．７ｍｇ、１４．５μｍｏｌ）およびＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイン（３．８４ｍｇ、１４．５μｍｏｌ）をＤＭＦ １．５ｍＬに溶かし、混合物を室温で終夜撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２．５μＬ、１４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−｛（５Ｒ，１４Ｒ）−１３−（３−アミノプロピル）−１４−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−５−カルボキシ−１５，１５−ジメチル−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘキサデカ−１−イル｝−Ｎ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）７．４０ｍｇ（理論値の４８％）を得た。

【1335】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９４９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1336】

Ｓ−｛（５Ｒ，１４Ｒ）−１３−（３−アミノプロピル）−１４−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−５−カルボキシ−１５，１５−ジメチル−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘキサデカ−１−イル｝−Ｎ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（７．５０ｍｇ、７．０５μｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに溶解させ、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニネート（４．１１ｍｇ、純度８２％、７．０５μｍｏｌ）（中間体Ｌ８８）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２．５μＬ、１４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、次に分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［（８Ｒ，１５Ｒ）−２３−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−８，１５−ジカルボキシ−２，２−ジメチル−６，１２，１７，２２−テトラオキソ−５−オキサ−１０，２０−ジチア−７，１３，１６，２３−テトラアザ−２−シラヘキサコサン−２６−イル］−Ｌ−アラニンアミド４．３０ｍｇ（４６％）を得た。

【1337】

ＬＣ−ＭＳ（方法１４）：Ｒ_ｔ＝６．４７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１３１２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1338】

Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［（８Ｒ，１５Ｒ）−２３−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−８，１５−ジカルボキシ−２，２−ジメチル−６，１２，１７，２２−テトラオキソ−５−オキサ−１０，２０−ジチア−７，１３，１６，２３−テトラアザ−２−シラヘキサコサン−２６−イル］−Ｌ−アラニンアミド（４．００ｍｇ、３．０５μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶解させ、二塩化亜鉛（２．４９ｍｇ、１８．３μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌し、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸（５．３４ｍｇ、１８．３μｍｏｌ）を加え、混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２．５０ｍｇ（理論値の６４％）を得た。

【1339】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．００分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１６８［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1340】

中間体Ｆ３０９
４−｛［（１１Ｒ，１７Ｒ）−１６−（３−アミノプロピル）−１７−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１８，１８−ジメチル−６，６−ジオキシド−２，１０，１５−トリオキソ−６λ^６，１３−ジチア−３，９，１６−トリアザノナデカン−１１−イル］アミノ｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化348】

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【1341】

最初にＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−オキソブタノイル）−Ｌ−システイン（５０．０ｍｇ、５７．３μｍｏｌ）（中間体Ｃ７７）およびトリフルオロ酢酸／ベンジル｛２−［（２−アミノエチル）スルホニル］エチル｝カーバメート（１：１）（２７．５ｍｇ、６８．７μｍｏｌ）（中間体Ｌ８１）を、ＤＭＦ ４．０ｍＬに入れ、ＨＡＴＵ（２６．１ｍｇ、６８．７μｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３０μＬ、１７０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、次に分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル４−｛［（１２Ｒ）−１７−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２６，２６−ジメチル−７，７−ジオキシド−３，１１，１６，２２−テトラオキソ−１−フェニル−２，２３−ジオキサ−７λ６，１４−ジチア−４，１０，１７，２１−テトラアザ−２６−シラヘプタコサン−１２−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート５３．９ｍｇ（８１％）を得た。

【1342】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．５４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１４１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1343】

最初に、アルゴン下に、酢酸パラジウム（ＩＩ）（５．１２ｍｇ、２２．８μｍｏｌ）をＤＣＭ ３．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン（９．５μＬ、６８μｍｏｌ）およびトリエチルシラン（７３μＬ、４６０μｍｏｌ）を加え、混合物を５分間撹拌した。ＤＣＭ ２．０ｍＬ中のｔｅｒｔ−ブチル４−｛［（１２Ｒ）−１７−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２６，２６−ジメチル−７，７−ジオキシド−３，１１，１６，２２−テトラオキソ−１−フェニル−２，２３−ジオキサ−７λ^６，１４−ジチア−４，１０，１７，２１−テトラアザ−２６−シラヘプタコサン−１２−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート（５２．１ｍｇ、４５．６μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、水２．０ｍＬを加えた。溶媒を減圧下に留去した。アセトニトリルを残留物に加え、混合物を濾過し、生成物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル４−｛［（１６Ｒ）−２３−アミノ−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−２１，２１−ジオキシド−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４，２１λ６−ジチア−７，１１，１８−トリアザ−２−シラトリコサン−１６−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート（１：１）４３．４ｍｇ（８５％）を得た。

【1344】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．２１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１００７［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1345】

最初にトリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル４−｛［（１６Ｒ）−２３−アミノ−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−２１，２１−ジオキシド−６，１２，１７−トリオキソ−５−オキサ−１４，２１λ^６−ジチア−７，１１，１８−トリアザ−２−シラトリコサン−１６−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート（１：１）（２０．０ｍｇ、１７．８μｍｏｌ）および（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸（３．３２ｍｇ、２１．４μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ２．０ｍＬに入れ、ＨＡＴＵ（８．１４ｍｇ、２１．４μｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（９．３μＬ、５４μｍｏｌ）を加えた。

【1346】

反応混合物を室温で１０分間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル４−｛［（１６Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，２−ジメチル−２１，２１−ジオキシド−６，１２，１７，２５−テトラオキソ−５−オキサ−１４，２１λ６−ジチア−７，１１，１８，２４−テトラアザ−２−シラヘキサコサン−１６−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート１７．４ｍｇ（８５％）を得た。

【1347】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１４４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1348】

ｔｅｒｔ−ブチル４−｛［（１６Ｒ）−１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，２−ジメチル−２１，２１−ジオキシド−６，１２，１７，２５−テトラオキソ−５−オキサ−１４，２１λ^６−ジチア−７，１１，１８，２４−テトラアザ−２−シラヘキサコサン−１６−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート（１５．９ｍｇ、１３．９μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶解させ、二塩化亜鉛（１１．４ｍｇ、８３．４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。二塩化亜鉛（１１．４ｍｇ、８３．４μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。二塩化亜鉛（１１．４ｍｇ、８３．４μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸（７３．２ｍｇ、２５０μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１０ｍｇ（理論値の６８％）を得た。

【1349】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝１．４５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９４４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1350】

中間体Ｆ３１０
トリフルオロ酢酸／Ｎ−［（８Ｒ，１４Ｒ）−１３−（３−アミノプロピル）−１４−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１５，１５−ジメチル−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘキサデカン−８−イル］−２，５，８，１１−テトラオキサテトラデカン−１４−アミド（１：１）

【化349】

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【1351】

Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（１００ｍｇ、１２０μｍｏｌ）（中間体Ｃ７０）および１−［（１４−オキソ−２，５，８，１１−テトラオキサテトラデカン−１４−イル）オキシ］ピロリジン−２，５−ジオン（４４．１ｍｇ、１３２μｍｏｌ）を最初に、ＤＭＦ ３．０ｍＬに入れ、４−メチルモルホリン（４０μＬ、３６０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸（４２０μｍｏｌ）で反応停止し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−（１４−オキソ−２，５，８，１１−テトラオキサテトラデカン−１４−イル）−Ｌ−システイン６９．４ｍｇ（理論値の６２％）を得た。

【1352】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝２．６１分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝９３３［Ｍ−Ｈ］⁻。

【1353】

最初にＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−（１４−オキソ−２，５，８，１１−テトラオキサテトラデカン−１４−イル）−Ｌ−システイン（２７．０ｍｇ、２８．９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ２．０ｍＬに入れ、Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１１．４ｍｇ、５７．７μｍｏｌ）（中間体Ｌ１）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１５μＬ、８７μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２２．０ｍｇ、５７．７μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル｛（１６Ｒ）−２１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１６−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）カルバモイル］−１４，２０−ジオキソ−２，５，８，１１−テトラオキサ−１８−チア−１５，２１−ジアザテトラコサン−２４−イル｝カーバメート１３．７ｍｇ（理論値の４３％）を得た。

【1354】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝２．５４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1355】

２−（トリメチルシリル）エチル｛（１６Ｒ）−２１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１６−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）カルバモイル］−１４，２０−ジオキソ−２，５，８，１１−テトラオキサ−１８−チア−１５，２１−ジアザテトラコサン−２４−イル｝カーバメート（１３．７ｍｇ、１２．３μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶解させ、二塩化亜鉛（１０．１ｍｇ、７３．８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸（２１．６ｍｇ、７３．８μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物７．３０ｍｇ（理論値の４７％）を得た。

【1356】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９７０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1357】

中間体Ｆ３１１
Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，３０−ジオキソ−６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７−オクタオキサ−３−アザトリアコンタン−３０−イル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化350】

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【1358】

最初に１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−オキソ−６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７−オクタオキサ−３−アザトリアコンタン−３０−オン酸（１０．８ｍｇ、１８．７μｍｏｌ）（中間体Ｌ９７）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５．４μＬ、３１．２μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（７．１０ｍｇ、１８．７μｍｏｌ）を加え、混合物を１０分間撹拌した。ＤＭＦ １．０ｍＬに溶かしたＳ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（１２．９ｍｇ、１５．６μｍｏｌ）（中間体Ｃ７１）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２．７μＬ、１５．６μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次に分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，３０−ジオキソ−６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７−オクタオキサ−３−アザトリアコンタン−３０−イル］−Ｌ−システイン３．５ｍｇ（１８％）を得た。

【1359】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３０分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝１２７６［Ｍ−Ｈ］⁻。

【1360】

Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，３０−ジオキソ−６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７−オクタオキサ−３−アザトリアコンタン−３０−イル］−Ｌ−システイン（３．５０ｍｇ、２．７４μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶解させ、二塩化亜鉛（６．２５ｍｇ、１６．４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸（４７μＬ、１６μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２．０ｍｇ（理論値の５９％）を得た。

【1361】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１３３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1362】

中間体Ｆ３１２
Ｎ−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−｛［２−（Ｌ−γ−グルタミルアミノ）エチル］アミノ｝−１−オキソブタン−２−イル］−Ｌ−アラニンアミド／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化351】

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【1363】

ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニンとカップリングさせることで、中間体Ｃ１０３から標題化合物を製造した。次の段階で、ＤＣＭ／メタノール１：１中室温で標準水素圧下に１０％パラジウム／活性炭で１時間水素化することで、Ｚ保護基を除去した。次に、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸とのカップリングにより、最後に塩化亜鉛による脱保護および分取ＨＰＬＣによる精製によって、脱保護中間体を標題化合物に変換した。

【1364】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９９２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1365】

中間体Ｆ３１３
Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ，４Ｒ）−４−フルオロピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化352】

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【1366】

アルゴン下に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル（ｄｉｉｓｏｐｒｙｌ）エチルアミン１６．９ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ５０．０ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）を、１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−オキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−オン酸５５．０ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．６０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ，４Ｒ）−４−フルオロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｌ−システイン（中間体Ｃ１０７）４０．０ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）の溶液を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。水を加え、混合物をジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物１０ｍｇ（理論値の１３％、純度８２％）を得た。

【1367】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１４５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1368】

塩化亜鉛４．３ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を、Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ，４Ｒ）−４−フルオロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル］−Ｌ−システイン１０．９ｍｇ（７．８ｍｍｏｌ、純度８２％）の２，２，２−トリフルオロエタノール（０．８５ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を５０℃で２．５時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ ９．１ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。反応混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物２．３ｍｇ（理論値の２６％）を得た。

【1369】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８１（Ｍ＋Ｈ−ＣＦ_３ＣＯ_２Ｈ）^＋。

【1370】

中間体Ｆ３１４
トリフルオロ酢酸／３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｓ，４Ｒ）−４−フルオロピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝−Ｎ−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）プロパンアミド

【化353】

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【1371】

アルゴン下に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル（ｄｉｉｓｏｐｒｙｌ）エチルアミン１６．８９ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ３３．１３ｍｇ（０．０８７ｍｍｏｌ）を、３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ，４Ｒ）−４−フルオロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸（中間体１０６）５０．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．１４ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）トリフルオロ酢酸（中間体Ｌ１）の溶液２７．２９ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１５分間撹拌した。水を加え、混合物をジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物４１ｍｇ（理論値の６８％、純度６６％）を得た。

【1372】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝２．５５分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝９５９（Ｍ−Ｈ＋Ｎａ）⁻。

【1373】

塩化亜鉛２４．７ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）を、２−（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）−３−［２−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３，８，１３−トリオキソ−５−チア−２，９，１２−トリアザテトラデカ−１−イル］−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート４１．１ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ、純度６６％）の２，２，２−トリフルオロエタノール（２．５４ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を５０℃で２．５時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ ５３．０ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。反応混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物１０ｍｇ（理論値の３６％）を得た。

【1374】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８１（Ｍ＋Ｈ−ＣＦ_３ＣＯ_２Ｈ）^＋。

【1375】

中間体Ｆ３１５
Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−｛３−［５−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパノイル｝−Ｌ−システイン

【化354】

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【1376】

アルゴン下に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル（ｄｉｉｓｏｐｒｙｌ）エチルアミン１８．０２ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ３１．８２ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ）を、３−［５−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパン酸（中間体Ｌ１００）５０．０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．５ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ−（２−アミノエチル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミドアセテート（１：１）（中間体Ｃ１０７）の溶液５０．０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２時間撹拌した。水を加え、混合物をジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物４９ｍｇ（理論値の２１％、純度３１％）を得た。

【1377】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1378】

塩化亜鉛８．０ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）を、Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−｛３−［５−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパノイル｝−Ｌ−システイン４９．０ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ、純度３１％）の２，２，２−トリフルオロエタノール（０．５ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ １７．２ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。反応混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物３ｍｇ（理論値の２１％）を得た。

【1379】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８７７（Ｍ＋Ｈ−ＣＦ_３ＣＯ_２Ｈ）^＋。

【1380】

中間体Ｆ３１６
トリフルオロ酢酸／Ｎ−｛２−［（３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｓ，４Ｒ）−４−フルオロピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパノイル）アミノ］エチル｝−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド（１：１）

【化355】

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【1381】

アルゴン下に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル（ｄｉｉｓｏｐｒｙｌ）エチルアミン１６．８９ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ３３．１３ｍｇ（０．０８７ｍｍｏｌ）を、３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ，４Ｒ）−４−フルオロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸（中間体１０６）５０．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ、純度６５％）のＤＭＦ（３．０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ−（２−アミノエチル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミドアセテート（１：１）（中間体Ｌ７３）の溶液３７．２ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ、純度７０％）を加え、混合物を室温で７分間撹拌した。水を加え、混合物をジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物５７ｍｇ（理論値の７７％、純度５９％）を得た。

【1382】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝２．６０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９８１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1383】

塩化亜鉛３６．０ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）を、２−（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）−３−［２−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３，８，１３−トリオキソ−５−チア−２，９，１２−トリアザオクタデカ−１−イル］−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート５６．０ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ、純度５９％）の２，２，２−トリフルオロエタノール（２．８ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ ７８．３ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。反応混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物１６ｍｇ（理論値の４４％、純度８５％）を得た。

【1384】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３７（Ｍ＋Ｈ−ＡｃＯＨ）^＋。

【1385】

中間体Ｆ３１７
１−［（Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル］−Ｌ−システイニル）アミノ］−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−酸／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化356】

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【1386】

最初に、アルゴン下に、Ｎ，Ｎ′−ビス［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−システイン３０．２ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）を、水２．０ｍＬおよびイソプロパノール２．０ｍＬに入れ、ＴＣＥＰ ５６．７ｍｇ（０．２０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート（中間体Ｃ７０）５０．０ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）をイソプロパノール２．０ｍＬに溶かし、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン１２２．２ｍｇ（０．４８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で７時間撹拌した。追加の１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン１２２．２ｍｇ（０．４８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を水および飽和重炭酸ナトリウム溶液で抽出し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥させた。これによって、化合物Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−システイン４３．１ｍｇ（理論値の６４％）を得た。

【1387】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1388】

アルゴン下に、Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−システイン（５０．０ｍｇ、５９μｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに溶かし、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２０．５μＬ、１１７μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２６．８ｍｇ、７０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１０分間撹拌した。ｔｅｒｔ−ブチル１−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オエート（２２．６ｍｇ、７０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１時間撹拌し、次に分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥させた。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル１−（｛Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−システイニル｝アミノ）−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オエート５９．３ｍｇ（理論値の８７．５％）を得た。

【1389】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１５４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1390】

アルゴン下に、酢酸パラジウム（ＩＩ）（６．７４ｍｇ、３０．０μｍｏｌ）を、最初にジクロロメタン３．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン（１３μＬ、９０μｍｏｌ）およびトリエチルシラン（９６μＬ、６００μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５分間撹拌し、ジクロロメタン１．０ｍＬ中のｔｅｒｔ−ブチル１−（｛Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−システイニル｝アミノ）−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オエート（６９．３ｍｇ、６０．０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、トリエチルシラン（４８μＬ、３００μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）２．０ｍＬを加えた。溶媒を減圧下に加熱せずに留去した。残留物をアセトニトリルに取り、シリンジフィルターで濾過し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥させた。これによって、化合物トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル１−｛［Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイニル］アミノ｝−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オエート（１：１）６５．９ｍｇ（理論値の９７％）を得た。

【1391】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．２２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1392】

最初に、アルゴン下に、１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−オキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−酸（４．２６ｍｇ、１０．６μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３．２μＬ、１８μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（４．０２ｍｇ、１０．６μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１０分間撹拌し、トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ−ブチル１−｛［Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイニル］アミノ｝−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オエート（１：１）（１０．０ｍｇ、８．８２μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに溶かし、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．５μＬ、８．８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥させた。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル１−（｛Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル］−Ｌ−システイニル｝アミノ）−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オエート１０．９ｍｇ（理論値の９３％）を得た。

【1393】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１４０４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1394】

ｔｅｒｔ−ブチル１−（｛Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル］−Ｌ−システイニル｝アミノ）−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オエート（８．２０ｍｇ、５．８４μｍｏｌ）を２．０トリフルオロエタノールに溶かし、塩化亜鉛（４．７７ｍｇ、３５．０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。

【1395】

塩化亜鉛（４．７７ｍｇ、３５．０μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−四酢酸（１０．２ｍｇ、３５．０μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥させた。これによって、標題化合物４．１ｍｇ（理論値の５３％）を得た。

【1396】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２０４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1397】

中間体Ｆ３１８
トリフルオロ酢酸／３−｛［２−（［３−アミノ−４−フルオロブチル］｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝−Ｎ−（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）プロパンアミド（１：１）

【化357】

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【1398】

最初に、（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン（１２４ｍｇ、３５０μｍｏｌ）（中間体Ｃ５２）を、ジクロロメタン５．０ｍＬに入れ、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム（１０４ｍｇ、４９１μｍｏｌ）および酢酸（２３μＬ、４００μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で５分間撹拌し、３．０ｍＬジクロロメタンに溶かしたｔｅｒｔ−ブチル［１−フルオロ−４−オキソブタン−２−イル］カーバメート（８２．７ｍｇ、４０３μｍｏｌ）（中間体Ｌ１２３）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸エチルを加えた。混合物を、飽和重炭酸ナトリウム溶液で２回、飽和塩化ナトリウム溶液で次に洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。残留物を、移動相シクロヘキサン／酢酸エチル９５：５を用いるＢｉｏｔａｇｅ／Ｉｓｏｌｅｒａ（ＳＮＡＰ２５ｇ）でのカラムクロマトグラフィーによって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥させた。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル［４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）−１−フルオロブタン−２−イル］カーバメート１４６ｍｇ（理論値の７７％）を得た。

【1399】

ＬＣ−ＭＳ（方法１３）：Ｒ_ｔ＝２．５７分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝５８８［Ｍ＋ＣＨＯＯＨ−Ｈ］⁻。

【1400】

ｔｅｒｔ−ブチル［４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）−１−フルオロブタン−２−イル］カーバメート（１００ｍｇ、１８４μｍｏｌ）をＤＣＭ ６．０ｍＬに溶かし、０℃でトリエチルアミン（８５μＬ、６１０μｍｏｌ）およびクロロアセチルクロライド（４７μＬ、５９０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。溶媒を減圧下に留去した。残留物をアセトニトリル／水に取り、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥させた。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル−｛４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］−１−フルオロブタン−２−イル｝カーバメート８０ｍｇ（理論値の７０％）を得た。

【1401】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝２．６７分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝６６４［Ｍ−Ｈ＋ＣＯＯＨ］⁻。

【1402】

最初に、ｔｅｒｔ−ブチル｛４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］−１−フルオロブタン−２−イル｝カーバメート（７９．２ｍｇ、１２８μｍｏｌ）および３−スルファニルプロパン酸（１２μＬ、１４０μｍｏｌ）を、水１滴を含むメタノール３．０ｍＬに入れた。炭酸カリウム（６１．８ｍｇ、４４７μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。酢酸エチルを加え、混合物を水で繰り返し洗浄した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。残留物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥させた。これによって、化合物９−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−６−（フルオロメチル）−２，２−ジメチル−４，１０−ジオキソ−３−オキサ−１２−チア−５，９−ジアザペンタデカン−１５−酸６８．６ｍｇ（理論値の７８％）を得た。

【1403】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝２．４６分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝６８８［Ｍ−Ｈ］⁻
最初に、９−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−６−（フルオロメチル）−２，２−ジメチル−４，１０−ジオキソ−３−オキサ−１２−チア−５，９−ジアザペンタデカン−１５−酸（１５．０ｍｇ、２１．７μｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸／Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）（８．１２ｍｇ、２６．１μｍｏｌ）（中間体Ｌ１）を、ＤＭＦ １．６ｍＬに入れた。ＨＡＴＵ（９．９２ｍｇ、２６．１μｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１１μＬ、６５μｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で５分間撹拌した。水（０．１％ＴＦＡ）を加え、反応混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した．溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥させた。これによって、化合物ｔｅｒｔ−ブチル［１３−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−フルオロ−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘプタデカン−１６−イル］カーバメート１８．６ｍｇ（理論値の９８％）を得た。

【1404】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝２．３６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1405】

ｔｅｒｔ−ブチル［１３−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−フルオロ−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘプタデカン−１６−イル］カーバメート（１７．０ｍｇ、１９．６μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かした。塩化亜鉛（１６．０ｍｇ、１１７μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。もう１回、塩化亜鉛（１６．０ｍｇ、１１７μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−四酢酸（６８．６ｍｇ、２３４μｍｏｌ）を混合物に加え、水（０．１％ＴＦＡ）を加え、次に混合物を減圧下に濃縮した。残留物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を少量の水に取り、凍結乾燥した。これによって、標題化合物１０．７ｍｇ（理論値の６０％）を得た。

【1406】

ＬＣ−ＭＳ（方法１４）：Ｒ_ｔ＝５．５１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1407】

中間体Ｆ３１９
Ｎ−（３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝アミノ）プロピル］アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパノイル）−β−アラニル−Ｌ−アスパラギン酸

【化358】

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【1408】

最初に、アルゴン下に、Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［（｛３−［（２−カルボキシエチル）アミノ］−３−オキソプロピル｝スルファニル）アセチル］アミノ）プロピル］−Ｌ−アラニンアミド（９．８０ｍｇ、９．８８μｍｏｌ）（中間体Ｃ１１６）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチルＬ−アスパルテート塩酸塩（１：１）（３．３４ｍｇ、１１．９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、ＨＡＴＵ（４．５１ｍｇ、１１．９μｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５．２μＬ、３０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥させた。これによって、化合物ジ−ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝アミノ）プロピル］アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパノイル）−β−アラニル−Ｌ−アスパルテート１０．５ｍｇ（理論値の８７％）を得た。

【1409】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２１９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1410】

ジ−ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝アミノ）プロピル］アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパノイル）−β−アラニル−Ｌ−アスパルテート（９．７０ｍｇ、７．９５μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．５ｍＬに溶かした。塩化亜鉛（６．５０ｍｇ、４７．７μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。もう１回、塩化亜鉛（６．５０ｍｇ、４７．７μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−四酢酸（２７．９ｍｇ、５５．４μｍｏｌ）を混合物に加え、水（０．１％ＴＦＡ）を加え、次に混合物を減圧下に濃縮した。残留物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を少量の水に取り、凍結乾燥した。これによって、標題化合物４．１０ｍｇ（理論値の４７％）を得た。

【1411】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１０７［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1412】

中間体Ｆ３２０
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３−｛［（１Ｓ）−１，３−ジカルボキシプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル）スルファニル］アセチル｝アミノ）プロピル］−Ｌ−アラニンアミド

【化359】

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【1413】

最初に、アルゴン下に、Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（２−カルボキシエチル）スルファニル］アセチル｝アミノ）プロピル］−Ｌ−アラニンアミド（２０．０ｍｇ、２１．７μｍｏｌ）（中間体Ｃ１１５）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチルＬ−グルタメート塩酸塩（１：１）（７．７１ｍｇ、２６．１μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ２．０ｍＬに入れ、ＨＡＴＵ（９．９１ｍｇ、２６．１μｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１１μＬ、６５μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥させた。これによって、化合物ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−２−｛［（１３Ｓ，１６Ｓ）−７−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１６−イソプロピル−１３−メチル−６，１２，１５，１８−テトラオキソ−４−チア−７，１１，１４，１７−テトラアザトリコサン−１−オイル］アミノ｝ペンタンジオエート１６．４ｍｇ（理論値の６５％）を得た。

【1414】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１６２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1415】

ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−２−｛［（１３Ｓ，１６Ｓ）−７−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１６−イソプロピル−１３−メチル−６，１２，１５，１８−テトラオキソ−４−チア−７，１１，１４，１７−テトラアザトリコサン−１−オイル］アミノ｝ペンタンジオエート（１４．７ｍｇ、１２．６μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．５ｍＬに溶かした。塩化亜鉛（１０．３ｍｇ、７５．９μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。もう１回、塩化亜鉛（１０．３ｍｇ、７５．９μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−四酢酸（４４．４ｍｇ、１５２μｍｏｌ）を混合物に加え、水（０．１％ＴＦＡ）を加え、次に混合物を減圧下に濃縮した。残留物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を少量の水に取り、凍結乾燥した。これによって、標題化合物６．０ｍｇ（理論値の４５％）を得た。

【1416】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．１０分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝１０４８［Ｍ−Ｈ］⁻。

【1417】

中間体Ｆ３２１
Ｎ−（３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝アミノ）プロピル］アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパノイル）−β−アラニル−Ｄ−グルタミン酸

【化360】

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【1418】

最初に、アルゴン下に、Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［（｛３−［（２−カルボキシエチル）アミノ］−３−オキソプロピル｝スルファニル）アセチル］アミノ）プロピル］−Ｌ−アラニンアミド（９．８０ｍｇ、９．８８μｍｏｌ）（中間体Ｃ１１６）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチルＤ−グルタメート塩酸塩（１：１）（３．５１ｍｇ、１１．９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、ＨＡＴＵ（４．５１ｍｇ、１１．９μｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５．２μＬ、３０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥させた。これによって、化合物ジ−ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝アミノ）プロピル］アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパノイル）−β−アラニル−Ｄ−グルタメート１１．７ｍｇ（理論値の９６％）を得た。

【1419】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２３３［Ｍ＋Ｈ］^＋
ジ−ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝アミノ）プロピル］アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパノイル）−β−アラニル−Ｄ−グルタメート（１１．５ｍｇ、９．３２μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．５ｍＬに溶かした。（７．６２ｍｇ、５５．９μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。もう１回、塩化亜鉛（７．６２ｍｇ、５５．９μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−四酢酸（３２．６ｍｇ、１１２μｍｏｌ）を混合物に加え、水（０．１％ＴＦＡ）を加え、次に混合物を減圧下に濃縮した。残留物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を少量の水に取り、凍結乾燥した。これによって、標題化合物６．５ｍｇ（理論値の６２％）を得た。

【1420】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1421】

中間体Ｆ３２２
Ｎ−（３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝アミノ）プロピル］アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパノイル）−β−アラニル−Ｌ−グルタミン酸

【化361】

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【1422】

最初に、アルゴン下に、Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［（｛３−［（２−カルボキシエチル）アミノ］−３−オキソプロピル｝スルファニル）アセチル］アミノ）プロピル］−Ｌ−アラニンアミド（９．８０ｍｇ、９．８８μｍｏｌ）（中間体Ｃ１１６）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチルＬ−グルタメート塩酸塩（１：１）（３．５１ｍｇ、１１．９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、ＨＡＴＵ（４．５１ｍｇ、１１．９μｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５．２μＬ、３０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥させた。これによって、化合物ジ−ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝アミノ）プロピル］アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパノイル）−β−アラニル−Ｌ−グルタメート１１．３ｍｇ（理論値の９３％）を得た。

【1423】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２３３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1424】

ジ−ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝アミノ）プロピル］アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパノイル）−β−アラニル−Ｌ−グルタメート（１１．０ｍｇ、８．９２μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．５ｍＬに溶かした。塩化亜鉛（７．２９ｍｇ、５３．５μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。もう１回、塩化亜鉛（７．２９ｍｇ、５３．５μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−四酢酸（３１．２ｍｇ、１０７μｍｏｌ）を混合物に加え、水（０．１％ＴＦＡ）を加え、次に混合物を減圧下に濃縮した。残留物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を少量の水に取り、凍結乾燥した。これによって、標題化合物５．１０ｍｇ（理論値の５１％）を得た。

【1425】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1426】

中間体Ｆ３２３
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［３−（｛［（３−｛［（１Ｒ）−２−（Ｌ−β−アスパラギルアミノ）−１−カルボキシエチル］アミノ｝−３−オキソプロピル）スルファニル］アセチル｝｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］−Ｌ−アラニンアミド／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化362】

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【1427】

最初に、アルゴン下に、Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（２−カルボキシエチル）スルファニル］アセチル｝アミノ）プロピル］−Ｌ−アラニンアミド（１０．０ｍｇ、７．０５μｍｏｌ）（中間体Ｃ１１５）およびｔｅｒｔ−ブチルＮ−｛（２Ｒ）−２−アミノ−３−オキソ−３−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］プロピル｝−Ｎ^２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アスパルテート（４．０２ｍｇ、８．４６μｍｏｌ）（中間体Ｌ１２４）を、ＤＭＦ ２．０ｍＬに入れ、ＨＡＴＵ（３．２２ｍｇ、８．４６μｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３．７μＬ、２１μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を少量の水に取り、凍結乾燥した。これによって、化合物６−ｔｅｒｔ−ブチル１１−［２−（トリメチルシリル）エチル］（６Ｓ，１１Ｒ，２５Ｓ，２８Ｓ）−１９−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−３５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２８−イソプロピル−２，２，２５−トリメチル−４，８，１３，１８，２４，２７，３０−ヘプタオキソ−３−オキサ−１６−チア−５，９，１２，１９，２３，２６，２９−ヘプタアザペンタトリアコンタン−６，１１−ジカルボキシレート４．３ｍｇ（理論値の３２％）を得た。

【1428】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝５．３２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１３７９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1429】

６−ｔｅｒｔ−ブチル１１−［２−（トリメチルシリル）エチル］（６Ｓ，１１Ｒ，２５Ｓ，２８Ｓ）−１９−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−３５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２８−イソプロピル−２，２，２５−トリメチル−４，８，１３，１８，２４，２７，３０−ヘプタオキソ−３−オキサ−１６−チア−５，９，１２，１９，２３，２６，２９−ヘプタアザペンタトリアコンタン−６，１１−ジカルボキシレート（４．１０ｍｇ、純度７３％、２．１７μｍｏｌ）を２．０ｍＬトリフルオロエタノールに溶かした。塩化亜鉛（１．７７ｍｇ、１３．０μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。さらに４回、塩化亜鉛（１．７７ｍｇ、１３．０μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−四酢酸（２２．０ｍｇ、７８μｍｏｌ）を混合物に加え、水（０．１％ＴＦＡ）を加え、次に混合物を減圧下に濃縮した。残留物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を少量の水に取り、凍結乾燥した。これによって、標題化合物２．１ｍｇ（理論値の６９％）を得た。

【1430】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1431】

中間体Ｆ３２４
Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［ピロリジン−３−イルメチル］アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（異性体１）

【化363】

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【1432】

最初に、アルゴン下に、１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−オキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−酸（９９．６ｍｇ、２４７μｍｏｌ）（中間体Ｌ７４）を、ＤＭＦ １．４ｍＬに入れ、ＨＡＴＵ（９０．４ｍｇ、２３８μｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４１μＬ、２４０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、ＤＭＦ １．４ｍＬに溶かしたＳ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｌ−システイン（７０．０ｍｇ、９５．２μｍｏｌ）（中間体Ｃ９０）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を少量の水に取り、凍結乾燥した。これによって、化合物Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル］−Ｌ−システイン１９．０ｍｇ（理論値の１８．４％）を得た。

【1433】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝２．２９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０８２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1434】

Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル］−Ｌ−システイン（１７．０ｍｇ、１５．７μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かした。塩化亜鉛（８．５６ｍｇ、６２．８μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。もう１回、塩化亜鉛（８．５６ｍｇ、６２．８μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−四酢酸（３６．７ｍｇ、１２６μｍｏｌ）を混合物に加え、水（０．１％ＴＦＡ）を加え、次に混合物を減圧下に濃縮した。残留物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥させた。これによって、標題化合物３．９０ｍｇ（理論値の２２％）を得た。

【1435】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９８３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1436】

中間体Ｆ３２５
Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−Ｎ^２−［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］−Ｄ−α−グルタミン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化364】

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【1437】

中間体Ｃ５８ ３０ｍｇ（０．０４６ｍｍｏｌ）を、１．５当量のＨＡＴＵおよび３当量のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、トリフルオロ酢酸／ベンジルＮ−（２−アミノエチル）−Ｎ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｄ−α−グルタミネート（１：１）２９ｍｇ（０．０５５ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製によって、保護された中間体３９．５ｍｇ（理論値の８２％）を得た。最初に、この中間体のベンジルエステル基を水素分解的に除去した。次に、３当量のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中で１−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンとカップリングさせ、中間体Ｆ１１９の場合のようにトリフルオロエタノール中にて塩化亜鉛によってＴｅｏｃ保護基を除去することで、さらに２段階で、標題化合物を得た。

【1438】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝１．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1439】

中間体Ｆ３２６
Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−Ｎ^２−（ブロモアセチル）−Ｄ−α−グルタミン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化365】

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【1440】

１．５当量のＨＡＴＵおよび４当量の４−メチルモルホリンの存在下に、中間体Ｃ５８ ４３ｍｇ（０．０６６ｍｍｏｌ）を中間体Ｌ１２５ ５７ｍｇ（０．０７７ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製によって、保護された中間体２７ｍｇ（理論値の３４％）を得た。これを、中間体Ｆ１１９について記載の方法に従って、トリフルオロエタノール中にて塩化亜鉛を用いて、標題化合物に変換した。

【1441】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８０５および８０７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1442】

Ｂ：抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の製造
Ｂ−１．抗ＣＤ１２３抗体形成の一般的方法
ＣＤＲ移植によって抗ＣＤ１２３抗体を得た。７Ｇ３抗体（ＥＰ２４２６１４８）の配列は、ＴＰＰ−５９６９およびＴＰＰ−５９７１などのヒト化抗体の開始点を表す。１２Ｆ１に基づく二重特異性ｓｃＦｖ免疫融合タンパク質がＷＯ２０１３／１７３８２０に開示されている。１２Ｆ１の可変領域（ＶＨおよびＶＬ）の配列の公開（ＷＯ２０１３／１７３８２０）に基づいて、次の抗体配列を、ドナー免疫グロブリンの可変ドメイン（ＶＨおよびＶＬ）とヒト抗体の定常領域との融合によって得た。１２Ｆ１のキメラ変異体が生成された。

【1443】

ヒト化
ＣＤＲをヒト抗体骨格に導入することで、７Ｇ３抗体のマウス抗体配列をヒト化した。ＫａｂａｔによるＣＤＲ類の定義については、Ａｎｄｒｅ Ｃ．Ｒ． Ｍａｒｔｉｎ， ″Ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ″, Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ （Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｌａｂ Ｍａｎｕａｌｓ）， Ｅｄｓ．： Ｄｕｅｂｅｌ， Ｓ． ａｎｄ Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ， Ｒ．， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ， Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇを参照する。マウスフレーム配列（ＣＤＲなし）とヒト生殖系列配列との比較後、同様の高頻度で生じるヒトフレーム配列を選択した。この場合、それはＪ配列ＩＧＨＪ４−０３を有する重鎖ＩＧＨＶ１−４６−０１およびＪ断片ＩＧＫＪ２を有する軽鎖ＩＧＫＶ４−１−０１であった。生殖系列配列は、ＶＢＡＳＥ２データベースから得たものである（Ｒｅｔｔｅｒ Ｉ， Ａｌｔｈａｕｓ ＨＨ， Ｍｕｎｃｈ Ｒ， Ｍｕｌｌｅｒ Ｗ：ＶＢＡＳＥ２， ａｎ ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ Ｖ ｇｅｎｅ ｄａｔａｂａｓｅ． Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２００５ Ｊａｎ １； ３３（Ｄａｔａｂａｓｅ ｉｓｓｕｅ）：Ｄ６７１−４）。その配列は、ＩＭＧＴシステムを用いて命名した（Ｌｅｆｒａｎｃ， Ｍ．−Ｐ．， Ｇｉｕｄｉｃｅｌｌｉ， Ｖ．， Ｇｉｎｅｓｔｏｕｘ， Ｃ．， Ｊａｂａｄｏ−Ｍｉｃｈａｌｏｕｄ， Ｊ．， Ｆｏｌｃｈ， Ｇ．， Ｂｅｌｌａｈｃｅｎｅ， Ｆ．， Ｗｕ， Ｙ．， Ｇｅｍｒｏｔ， Ｅ．， Ｂｒｏｃｈｅｔ， Ｘ．， Ｌａｎｅ， Ｊ．， Ｒｅｇｎｉｅｒ， Ｌ．， Ｅｈｒｅｎｍａｎｎ， Ｆ．， Ｌｅｆｒａｎｃ， Ｇ． ａｎｄ Ｄｕｒｏｕｘ， Ｐ． ＩＭＧＴ（登録商標）， ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）． Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ， ３７， Ｄ１００６−Ｄ１０１２ （２００９）； ｄｏｉ：１０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｎ８３８）。本明細書に記載の抗体変異体ＴＰＰ−５９６８、ＴＰＰ−５９６９およびＴＰＰ−５９７１は、特性に影響し得るヒト生殖系列配列とは異なる各種点変異を有する。

【1444】

Ｂ−２．哺乳動物細胞で抗ＣＤ１２３抗体を発現する一般的方法
Ｔｏｍ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈａｐｔｅｒ １２ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｘｐｒｅｓｓ：Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ， ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｍｉｃｈｅａｌ Ｒ． Ｄｙｓｏｎ ａｎｄ Ｙｖｅｓ Ｄｕｒｏｃｈｅｒ， Ｓｃｉｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｌｔｄ, ２００７によって記載の方法に従って、抗体、例えばＴＰＰ−６０１３およびＴＰＰ−５９６９を、哺乳動物細胞の一過性培養で製造した。

【1445】

Ｂ−３．細胞上清からの抗体の一般的精製方法
抗体、例えばＴＰＰ−６０１３およびＴＰＰ−５９６９を、細胞培養上清から得た。細胞を遠心することで、細胞上清を清澄化した。次に、細胞上清を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）クロマトグラフィーカラムでのアフィニティクロマトグラフィーによって精製した。このために、カラムをＤＰＢＳ ｐＨ７．４（Ｓｉｇｍａ／Ａｌｄｒｉｃｈ）中で平衡状態とし、細胞上清を加え、カラムを約１０カラム体積のＤＰＢＳ ｐＨ７．４＋５００ｍＭ塩化ナトリウムで洗浄した。抗体を５０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ３．５＋５００ｍＭ塩化ナトリウムで溶離し、次にＤＰＢＳ ｐＨ７．４でのＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）におけるゲル濾過クロマトグラフィーによってさらに精製した。

【1446】

ＢＩＡｃｏｒｅ分析を介しての可溶性ＩＬ３Ｒα（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから入手）への結合アフィニティによって、抗体をさらに特性決定した。抗ＣＤ１２３抗体の細胞結合特性を求めるため、ＣＤ１２３−陽性癌細胞株（ＭＯＬＭ−１３、ＴＨＰ−１）でのフローサイトメトリーによって結合を測定した。

【1447】

Ｂ−４．システイン側鎖へのカップリングの一般的方法
次の抗体を、当該カップリング反応に用いた。

【1448】

抗ＣＤ１２３ ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）
抗ＣＤ１２３ ＡＫ_１Ｂ（ＴＰＰ−５９７１）
抗ＣＤ１２３ ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）
抗ＣＤ１２３ ＡＫ_１Ｄ（ＴＰＰ−５９６８）
カップリング反応は通常、アルゴン下で行った。

【1449】

ＰＢＳ緩衝液に溶かした２から５当量のトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）を、１ｍｇ／ｍＬから２０ｍｇ／ｍＬの濃度範囲、好ましくは約１０ｍｇ／ｍＬから１５ｍｇ／ｍＬの範囲での適切な抗体のＰＢＳ緩衝液中溶液に加え、混合物を室温で１時間撹拌した。これに関しては、使用した個々の抗体の溶液は、実施例で記載の濃度で用いることができるか、指定の出発濃度の約１／２までＰＢＳ緩衝液で希釈して、好ましい濃度範囲とすることもできる。次に、所期の負荷量に応じて、２から１２当量、好ましくは約５から１０当量のカップリング対象のマレインイミド前駆体化合物またはハライド前駆体化合物をＤＭＳＯ中溶液として加えた。この場合、ＤＭＳＯの量は総体積の１０％を超えるものであってはならない。反応液を、マレインイミド前駆体の場合には室温で６０から２４０分間、ハライド前駆体の場合には室温で８から２４時間撹拌し、次にＰＢＳ平衡化ＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に負荷し、ＰＢＳ緩衝液で溶離した。通常、別段の断りがない限り、ＰＢＳ緩衝液中の対象抗体５ｍｇを、還元およびその後のカップリングに用いた。そうして、ＰＤ１０カラムでの精製により、各場合で、個々のＡＤＣのＰＢＳ緩衝液（３．５ｍＬ）中溶液を得た。サンプルを超遠心によって濃縮し、適宜にＰＢＳ緩衝液で再希釈した。必要な場合、低分子量成分をより良好に除去するため、ＰＢＳ緩衝液による再希釈後に、超遠心による濃縮を繰り返した。生物試験のため、必要な場合、最終ＡＤＣサンプルの濃度を、適宜に、再希釈によって０．５から１５ｍｇ／ｍＬの範囲に調節した。実施例で記載のＡＤＣ溶液の個々のタンパク質濃度を求めた。さらに、Ｂ−７下に記載の方法を用いて、抗体負荷量（薬物／ｍＡｂ比）を求めた。

【1450】

リンカーに応じて、実施例で示されているＡＤＣは、多少、抗体に結合した加水分解された開鎖コハク酸アミドの形態で存在していても良い。

【1451】

特に、リンカー下位構造：

【化366】

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【1452】

を介して抗体のチオール基に結合しているＫＳＰ−Ｉ−ＡＤを、開鎖コハク酸アミドを介して結合したＡＤＣを介して、図式２６に従って、カップリング後の再緩衝化およびｐＨ８での約２０から２４時間の撹拌によって、標的指向的に製造することもできる。

【1453】

＃１は抗体への硫黄架橋を表し、＃２は修飾ＫＳＰ阻害剤への結合点を表す。

【1454】

リンカーが加水分解された開鎖コハク酸アミドを介して抗体に結合しているそのようなＡＤＣは、下記のような例示的手順により、標的指向的に製造することもできる。

【1455】

小規模カップリング：
ＰＢＳ緩衝液に溶かした２から５当量のトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）を、濃度範囲１ｍｇ／ｍＬから２０ｍｇ／ｍＬ、好ましくは約５ｍｇ／ｍＬから１５ｍｇ／ｍＬの範囲の対象の抗体２から５ｍｇのＰＢＳ緩衝液中溶液に加え、混合物を室温で３０分から１時間撹拌した。これに関しては、使用される個々の抗体の溶液は、実施例で提供の濃度で用いることができるか、表記の出発濃度の約１／２までＰＢＳ緩衝液で希釈して、好ましい濃度範囲を得ても良い。次に、所期の投入量に応じて、２から１２当量、好ましくは約５から１０当量のカップリングされるマレインイミド前駆体化合物を、ＤＭＳＯ中溶液として加える。ここで、ＤＭＳＯの量は総体積の１０％を超えてはならない。混合物を室温で６０から２４０分間撹拌し、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して体積３から７ｍＬとし、アルゴン下に室温で終夜撹拌する。次に、この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で平衡としたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で溶離する。次に、溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈する。

【1456】

中規模カップリング：
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．３４４ｍｇのＰＢＳ緩衝液（１００μＬ）中溶液を、ＰＢＳ緩衝液５ｍＬ中の対象抗体６０ｍｇ（濃度約１２ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ６００μＬに溶かした０．００３ｍｍｏｌのマレインイミド前駆体化合物を加えた。室温でさらに１．５時間から２時間撹拌した後、反応液を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１０７５μＬで希釈した。

【1457】

この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡化しておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に負荷し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で希釈して総容量１４ｍＬとした。この溶液を室温でアルゴン下に終夜撹拌した。必要な場合、その溶液を再緩衝化してｐＨ７．２とした。そのＡＤＣ溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈し、適宜に再度濃縮して濃度約１０ｍｇ／ｍＬとした。

【1458】

実施例での他の加水分解感受性であり得る抗体へのチアニルコハク酸イミド架橋は、次のリンカー下位構造を含み、＃１は抗体へのチオエーテル連結を表し、＃２は修飾ＫＳＰ阻害剤への結合点を表す。

【化367】

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【1459】

これらのリンカー下位構造は、抗体への連結ユニットを表し、（リンカー組成物に加えて）腫瘍細胞で生成される代謝物の構造およびプロファイルに対して大きい効果を有する。

【1460】

示された構造式において、ＡＫ_１Ａ、ＡＫ_１Ｂ、ＡＫ_１ＣおよびＡＫ_１Ｄは次の意味：
ＡＫ_１Ａ＝抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）（部分還元）−Ｓ§^１
ＡＫ_１Ｂ＝抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｂ（ＴＰＰ−５９７１）（部分還元）−Ｓ§^１
ＡＫ_１Ｃ＝抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）（部分還元）−Ｓ§^１
ＡＫ_１Ｄ＝抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｄ（ＴＰＰ−５９６８）（部分還元）−Ｓ§^１。

【1461】

式中、
§^１は、コハク酸イミド基へのまたはいずれかの異性体の加水分解された開鎖コハク酸アミドまたはそれから生じるアルキレン基への連結を表し、
Ｓは、部分還元抗体のシステイン残基の硫黄原子を表す。

【1462】

Ｂ−５．リジン側鎖へのカップリングの一般的方法
次の抗体を、当該カップリング反応に用いた。

【1463】

抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）
抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｂ（ＴＰＰ−５９７１）
抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）
抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｄ（ＴＰＰ−５９６８）。

【1464】

カップリング反応は通常、アルゴン下で行った。

【1465】

２から８当量のカップリング対象の前駆体化合物を、ＤＭＳＯ中溶液として、所期の負荷量に応じて１ｍｇ／ｍＬから２０ｍｇ／ｍＬ濃度範囲の、好ましくは約１０ｍｇ／ｍＬの対象抗体のＰＢＳ緩衝液中溶液に加えた。室温で３０分から６時間撹拌後、ＤＭＳＯ中の同量の前駆体化合物を再度加えた。この場合、ＤＭＳＯの量は総体積の１０％を超えてはならない。室温でさらに３０分から６時間撹拌後、反応をＰＢＳで平衡化したＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に負荷し、ＰＢＳ緩衝液で溶離した。通常、別段の断りがない限り、ＰＢＳ緩衝液中の対象抗体５ｍｇを、還元およびその後のカップリングに用いた。従って、ＰＤ１０カラムでの精製によって各場合で、個々のＡＤＣのＰＢＳ緩衝液（３．５ｍＬ）中溶液を得た。サンプルを超遠心によって濃縮し、適宜にＰＢＳ緩衝液で再希釈した。必要であれば、低分子量成分の除去をより良好に行うため、限外濾過による濃縮を、ＰＢＳ緩衝液による再希釈後に繰り返した。生物試験のため、必要な場合、最終ＡＤＣサンプルの濃度を、適宜に、再希釈によって０．５から１５ｍｇ／ｍＬの範囲に調節した。

【1466】

実施例で記載のＡＤＣ溶液の個々のタンパク質濃度を求めた。さらに、Ｂ−７下に記載の方法を用いて、抗体負荷量（薬物／ｍＡｂ比）を求めた。

【1467】

示した構造式において、ＡＫ_２Ａ、ＡＫ_２Ｂ、ＡＫ_２ＣおよびＡＫ_２Ｄは次の意味：
ＡＫ_２Ａ＝抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）−ＮＨ§^２
ＡＫ_２Ｂ＝抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｂ（ＴＰＰ−５９７１）−ＮＨ§^２
ＡＫ_２Ｃ＝抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）−ＮＨ§^２
ＡＫ_２Ｄ＝抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｄ（ＴＰＰ−５９６８）−ＮＨ§^２
を有し、
式中、
§^２は、カルボニル基への連結を表し、
ＮＨは、抗体のリジン残留物の側鎖アミノ基を表す。

【1468】

Ｂ−６ａ．閉鎖コハク酸イミド−システイン付加物の一般的製造方法
例示的実施形態において、１０μｍｏｌの上記マレインイミド前駆体化合物をＤＭＦ ３から５ｍＬに取り、Ｌ−システイン２．１ｍｇ（２０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間から２４時間撹拌し、次に減圧下に濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製した。

【1469】

Ｂ−６ａａ．異性体開鎖コハク酸アミド−システイン付加物の一般的製造方法：
例示的実施形態において、上記マレインイミド前駆体化合物６８μｍｏｌを、ＤＭＦ １５ｍＬに取り、Ｎ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイン３６ｍｇ（１３６μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で約２０時間撹拌し、次に減圧下に濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に溶媒留去し、次に、残留物をＴＨＦ／水１：１ １５ｍＬに溶かした。２Ｍ水酸化リチウム水溶液１３１μＬを加え、反応液を室温で１時間撹拌した。次に、反応液を１Ｍ塩酸で中和し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、理論値の約５０％の位置異性体保護中間体を無色泡状物として得た。

【1470】

最後の段階で、０．０２３ｍｍｏｌのこれらの位置異性体加水分解生成物を２，２，２−トリフルオロエタノール３ｍＬに溶かした。塩化亜鉛１２．５ｍｇ（０．０９２ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃で４時間撹拌した。次に、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２７ｍｇ（０．０９２ｍｍｏｌ）を加え、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、加水分解開鎖スルファニルコハク酸アミドを位置異性体混合物として得た。

【1471】

本発明による複合体のさらなる精製および特性決定
反応後、場合により、反応混合物を、例えば限外濾過によって濃縮し、脱塩し、例えばＳｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５カラムを用いるクロマトグラフィーによって精製した。例えば、ホスフェート緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で、溶離を行った。次に、溶液を無菌濾過し、冷凍した。あるいは、複合体を凍結乾燥することができる。

【1472】

Ｂ−７．抗体、担毒体負荷量および開鎖システイン付加物の割合の測定
脱グリコシル化および／または変性後の分子量測定に加えてタンパク質同定のため、トリプシン消化を行い、それは、変性、還元および誘導体化後に、トリプシンペプチドを介してタンパク質のアイデンティティーを確認するものである。

【1473】

実施例に記載の複合体の得られたＰＢＳ緩衝液溶液の担毒体負荷量を、下記のように求めた。

【1474】

リジン連結ＡＤＣの担毒体負荷量の測定を、個々の複合体種の分子量の質量分析測定によって行った。ここで、抗体複合体を最初に、ＰＮＧａｓｅＦで脱グリコシル化し、サンプルを酸性とし、ＨＰＬＣ分離／脱塩後に、ＥＳＩ−ＭｉｃｒｏＴｏｆ_Ｑ（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｋ）を用いる質量分析によって分析した。ＴＩＣ（全イオンクロマトグラム）におけるシグナルでの全てのスペクトラムを加え、異なる複合体種の分子量をＭａｘＥｎｔデコンボリューションに基づいて計算した。次に、異なる種のシグナル積分後に、ＤＡＲ（＝薬物／抗体比）を計算した。

【1475】

還元および変性ＡＤＣの逆相クロマトグラフィーによって、システイン連結複合体の担毒体負荷量を求めた。グアニジニウム塩酸塩（ＧｕＨＣｌ）（２８．６ｍｇ）およびＤＬ−ジチオスレイトール（ＤＴＴ）の溶液（５００ｍＭ、３μＬ）をＡＤＣ溶液（１ｍｇ／ｍＬ、５０μＬ）に加えた。混合物を５５℃で１時間インキュベートし、ＨＰＬＣによって分析した。

【1476】

ＨＰＬＣ分析を、２２０ｎｍで検出を行うＡｇｉｌｅｎｔ １２６０ＨＰＬＣシステムで行った。Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ＰＬＲＰ−Ｓポリマー逆相カラム（カタログ番号ＰＬ１９１２−３８０２）（２．１×１５０ｍｍ、粒径８μｍ、１０００Å）を、次の勾配：０分、２５％Ｂ；３分、２５％Ｂ；２８分、５０％Ｂで流量１ｍＬ／分で用いた。移動相Ａは、０．０５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／水からなり、移動相Ｂは０．０５％トリフルオロ酢酸／アセトニトリルからなるものであった。

【1477】

非複合体化抗体の軽鎖（Ｌ０）および重鎖（Ｈ０）との保持時間比較によって、検出されたピークの割り当てを行った。専ら複合体化サンプルで検出されたピークを、１個の担毒体（Ｌ１）を有する軽鎖および１個、２個および３個の担毒体（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）を有する重鎖に割り当てた。

【1478】

担毒体を有する抗体の平均負荷量を、ＨＣ負荷およびＬＣ負荷の合計の倍として積分することで測定されるピーク面積から計算した（ＬＣ負荷は、全てのＬＣピークの担毒体数平均加重積分結果の合計を全てのＬＣピークの単一加重積分結果の合計で割った値から計算され、ＨＣ負荷は全てのＨＣピークの担毒体数平均加重積分結果の合計を全てのＨＣピークの単一加重積分結果の合計によって割った値から計算される。）。個々の場合で、いくつかのピークの共溶出のために、正確に担毒体負荷を決定することはできない可能性がある。

【1479】

軽鎖および重鎖をＨＰＬＣによって十分に分離できなかった場合、システイン連結複合体の担毒体負荷量の測定は、軽鎖および重鎖での個々の複合体種の分子量の質量分析測定によって行った。

【1480】

グアニジニウム塩酸塩（ＧｕＨＣｌ）（２８．６ｍｇ）およびＤＬ−ジチオスレイトール（ＤＴＴ）の溶液（５００ｍＭ、３μＬ）をＡＤＣ溶液（１ｍｇ／ｍＬ、５０μＬ）に加えた。混合物を５５℃で１時間インキュベートし、ＥＳＩ−ＭｉｃｒｏＴｏｆ_Ｑ（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｋ）を用いるオンライン脱塩後に質量分析によって分析した。

【1481】

ＤＡＲ測定のため、全てのスペクトラムを、ＴＩＣ（全イオンクロマトグラム）におけるシグナルに加え、軽鎖および重鎖での異なる複合体種の分子量をＭａｘＥｎｔデコンボリューションに基づいて計算した。担毒体を有する抗体の平均負荷量を、ＨＣ負荷およびＬＣ負荷の合計の倍として積分することで測定されるピーク面積から計算した（ＬＣ負荷は、全てのＬＣピークの担毒体数平均加重積分結果の合計を全てのＬＣピークの単一加重積分結果の合計で割った値から計算され、ＨＣ負荷は全てのＨＣピークの担毒体数平均加重積分結果の合計を全てのＨＣピークの単一加重積分結果の合計によって割った値から計算される。）。

【1482】

開鎖システイン付加物の割合を求めるため、全ての単一複合体化軽鎖および重鎖変異体の閉鎖：開鎖システイン付加物（分子量Δ１８ダルトン）の分子量面積比を求めた。全ての変異体の平均によって、開鎖システイン付加物の割合を得た。

【1483】

Ｂ−８．ＡＤＣ類の抗原結合のチェック
バインダーの標的分子への結合能力を、カップリングが起こった後に調べた。当業者であれば、この目的に用いられる多種多様の方法については熟知しており、例えば、複合体のアフィニティは、ＥＬＩＳＡ技術または表面プラズモン共鳴分析（ＢＩＡｃｏｒｅ（商標名）測定）を用いて調べることができる。複合体濃度は、例えばタンパク質による抗体複合体についての一般的な方法を用いて当業者が測定することができる（Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ．； Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２００３；２１：７７８−７８４およびＰｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ ２００７；１１０２：６１６−６２３も参照）。

【1484】

代謝物実施形態
実施例Ｍ１
Ｓ−［１−（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化368】

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【1485】

中間体Ｆ１０４ １．８ｍｇ（２μｍｏｌ）をＤＭＦ １ｍＬに取り、Ｌ−システイン２．７ｍｇ（２２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２０時間撹拌し、減圧下に濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製した。標題化合物０．６ｍｇ（理論値の２６％）が無色泡状物として残った。

【1486】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８０分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1487】

実施例Ｍ２
４−［（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−３−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
および
４−［（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−２−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化369】

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【1488】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８０分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1489】

最初に、Ｌ−システインを、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、ＤＭＦ中の１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオンでＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システインに変換した。

【1490】

Ｎ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイン４０６ｍｇ（１．５３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １０ｍＬに溶かし、無水マレイン酸１５７．５ｍｇ（１．６０６ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で１時間撹拌した。中間体Ｃ６６ ７．５ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）をこの溶液１３０μＬに加え、反応液を室温で５分間撹拌した。混合物を減圧下に濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、保護中間体１０ｍｇ（８９％）を得たが、ＨＰＬＣによってもＬＣ−ＭＳによっても位置異性体を分離することはできなかった。

【1491】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３８分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1492】

最後の段階で、この中間体１０ｍｇを２，２，２−トリフルオロエタノール２ｍＬに溶かした。塩化亜鉛１２ｍｇ（０．０８８ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃で３０分間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２６ｍｇ（０．０８８ｍｍｏｌ）を加え、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物８．３ｍｇ（理論値の９９％）を８７：１３の比率での位置異性体混合物として得た。

【1493】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．３分および２．４３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1494】

^１Ｈ−ＮＭＲ主位置異性体：（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）：Ｄ＝８．７（ｍ、１Ｈ）、８．５（ｍ、２Ｈ）、８．１（ｍ、１Ｈ）、７．６（ｍ、１Ｈ）、７．５（ｓ、１Ｈ）７．４−７．１５（ｍ、６Ｈ）、６．９−７．０（ｍ、１Ｈ）、６．８５（ｓ、１Ｈ）、５．６１（ｓ、１Ｈ）、４．９および５．２（２ｄ、２Ｈ）、４．２６および４．０６（２ｄ、２Ｈ）、３．５−３．８（ｍ、５Ｈ）、３．０−３．４（ｍ、５Ｈ）、２．７５−３．０（ｍ、３Ｈ）、２．５８および２．５７（ｄｄ、１Ｈ）、０．７７および１，５（２ｍ、２Ｈ）、０．８１（ｓ、９Ｈ）。

【1495】

別法として、位置異性体標題化合物を次のように製造した。

【1496】

このために、最初に、Ｌ−システインを、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中の１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオンでＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システインに変換した。

【1497】

中間体Ｆ１０４ ５５ｍｇ（０．０６８ｍｍｏｌ）およびＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイン３６ｍｇ（０．１３６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １５ｍＬに溶かし、混合物を室温で２０時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に溶媒留去し、残留物をＴＨＦ／水１：１ １５ｍＬに溶かした。２Ｍ水酸化リチウム水溶液１３１μＬを加え、反応液を室温で１時間撹拌した。次に、反応液を１Ｍ塩酸で中和し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、位置異性体保護中間体３７ｍｇ（理論値の５０％）を無色泡状物として得た。

【1498】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝３．３３分および３．３６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９７６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1499】

最後の段階で、この中間体２５ｍｇ（０．０２３ｍｍｏｌ）を２，２，２−トリフルオロエタノール３ｍＬに溶かした。塩化亜鉛１２．５ｍｇ（０．０９２ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２７ｍｇ（０．０９２ｍｍｏｌ）を加え、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物１８．５ｍｇ（理論値の８５％）を２１：７９の比率での位置異性体混合物として得た。

【1500】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．３７分および３．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1501】

実施例Ｍ３
４−［（２−｛［（２Ｒ）−２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−２−カルボキシエチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−３−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
および
４−［（２−｛［（２Ｒ）−２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）−２−カルボキシエチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−２−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化370】

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【1502】

最初に、Ｌ−システインを、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、ＤＭＦ中の１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオンでＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システインに変換した。

【1503】

中間体Ｆ１９３ １１ｍｇ（０．０１３ｍｍｏｌ）およびＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイン８ｍｇ（０．０１６ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ３ｍＬに溶かし、混合物を室温で２０時間撹拌した。その混合物を濃縮し、残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。

【1504】

適切な分画を合わせ、減圧下に溶媒留去し、残留物をＴＨＦ／水１：１ ２ｍＬに溶かした。２Ｍ水酸化リチウム水溶液１９μＬを加え、反応液を室温で１時間撹拌した。追加の２Ｍ水酸化リチウム水溶液１９μＬを加え、反応液を室温で終夜撹拌した。混合物を１Ｍ塩酸で中和し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、位置異性体保護中間体４．１ｍｇ（理論値の３８％）を無色泡状物として得た。

【1505】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０３分（広い）；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1506】

最後の段階で、この中間体４．１ｍｇ（０．００４ｍｍｏｌ）を２，２，２−トリフルオロエタノール３ｍＬに溶かした。塩化亜鉛３ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸６ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）および０．１％強度トリフルオロ酢酸水溶液２ｍＬを加え、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物５ｍｇ（定量的）を２０：８０の比率での位置異性体混合物として得た。

【1507】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７８分（広い）；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８７６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1508】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．３６分および２．３９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８７６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1509】

実施例Ｍ４
Ｓ−（１−｛２−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エトキシ］エチル｝−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化371】

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【1510】

中間体Ｆ２４８ ３ｍｇ（４μｍｏｌ）をＤＭＦ ２ｍＬに取り、Ｌ−システイン０．９ｍｇ（８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１８時間撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を濃縮して、アセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥後に、標題化合物１．１ｍｇ（理論値の３２％）を白色固体として得た。

【1511】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７８分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８０１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1512】

実施例Ｍ５
（３Ｒ，７Ｓ）−７−アミノ−１７−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−３−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−４−グリコロイル−２，２−ジメチル−８，１６−ジオキソ−１２−オキサ−４，９，１５−トリアザノナデカン−１９−オン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
および
（３Ｒ，７Ｓ）−７−アミノ−１８−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−３−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−４−グリコロイル−２，２−ジメチル−８，１６−ジオキソ−１２−オキサ−４，９，１５−トリアザノナデカン−１９−オン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化372】

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【1513】

中間体Ｆ２４８の保護中間体８ｍｇ（０．０１０ｍｍｏｌ）およびＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイン５．１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３ｍＬに溶かし、混合物を室温で１８時間撹拌し、超音波浴で２時間処理した。混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に溶媒留去し、残留物をＴＨＦ／水１：１ ２ｍＬに溶かした。２Ｍ水酸化リチウム水溶液１５μＬを加え、反応液を室温で１５分間撹拌した。反応液を１Ｍ塩酸でｐＨ約３に調節し、塩化ナトリウム溶液２０ｍＬで希釈し、酢酸エチル２０ｍＬで２回抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、位置異性体保護中間体８．４ｍｇ（２段階で理論値の７８％）を無色泡状物として得た。

【1514】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４４分および３．４３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１０７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1515】

最後の段階で、この中間体８ｍｇ（０．００７ｍｍｏｌ）を２，２，２−トリフルオロエタノール５ｍＬに溶かした。塩化亜鉛９．８ｍｇ（０．０７２ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃で１．５時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸を加え、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物４ｍｇ（理論値の５９％）を３１：６７の比率での位置異性体混合物として得た。

【1516】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７９分および０．８１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1517】

実施例Ｍ６
２−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−（｛（１４Ｒ）−１３−（３−アミノプロピル）−１４−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−１５，１５−ジメチル−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘキサデカ−１−イル｝アミノ）−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）および
３−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−（｛（１４Ｒ）−１３−（３−アミノプロピル）−１４−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−１５，１５−ジメチル−２，７，１２−トリオキソ−１０−チア−３，６，１３−トリアザヘキサデカ−１−イル｝アミノ）−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）

【化373】

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【1518】

中間体Ｆ２１３ １８ｍｇ（０．０２１ｍｍｏｌ）およびＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイン１１．２ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２ｍＬに溶かし、混合物を室温で１８時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮した。残留物（２１．２ｍｇ）をＴＨＦ／水１：１ ３ｍＬに溶解させた。２Ｍ水酸化リチウム水溶液０．０４ｍＬを加え、反応液を室温で３時間撹拌した。２Ｍ水酸化リチウム水溶液０．０２ｍＬを加え、反応液を室温で１時間撹拌した。酢酸７．２ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ）を用いて反応液をｐＨ約７に調節した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水；０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、位置異性体保護中間体１３ｍｇ（２段階で５７％）を得た。

【1519】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1520】

最後の段階で、この中間体１３ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）を２，２，２−トリフルオロエタノール２ｍＬに溶かした。塩化亜鉛６．２ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃で７時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１３．３ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加え、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物１０．３ｍｇ（８１．４％）を位置異性体混合物として得た。

【1521】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８７５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1522】

実施例Ｍ７
Ｓ−（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化374】

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【1523】

中間体Ｆ１１９ ６ｍｇ（８μｍｏｌ）をＤＭＦ ３ｍＬに取り、Ｌ−システイン１．８ｍｇ（１５μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で６時間撹拌し、室温で３日間経過させた。反応を減圧下に濃縮し、生成物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。

【1524】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1525】

実施例Ｍ８
（３Ｒ）−６−｛（１１Ｓ，１５Ｒ）−１１−アミノ−１５−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−１４−グリコロイル−１６，１６−ジメチル−２，５，１０−トリオキソ−３，６，９，１４−テトラアザヘプタデカ−１−イル｝−５−オキソチオモルホリン−３−カルボン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化375】

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【1526】

実施例１３５からの化合物４ｍｇ（０．００４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ／水４ｍＬに溶かし、２Ｍ水酸化リチウム水溶液４８μＬを加えた。反応液を室温で１時間撹拌し、濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、濃縮し、アセトニトリル／水から凍結乾燥することで、標題化合物２．４ｍｇ（理論値の６０％）を得た。

【1527】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1528】

実施例Ｍ９
Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド

【化376】

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【1529】

最初に（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン（中間体Ｃ５２）１５０．０ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン２．０ｍＬに入れ、ＨＯＡｃ ２９．２ｍｇ（０．４９ｍｍｏｌ）および水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム１２５．６ｍｇ（０．５９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で５分間撹拌した。３−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）プロパナール９８．９ｍｇ（０．４９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を飽和炭酸ナトリウム溶液で２回および飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。硫酸マグネシウムで脱水した後、溶媒を減圧下に留去し、残留物をシリカゲル（移動相：ジクロロメタン／メタノール１００：１）で精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン１８８．６ｍｇ（７４％）を得た。

【1530】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．００分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５４１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1531】

最初に２−［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン１７１．２ｍｇ（０．３２ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン５．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン７３．６ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で、アセトキシアセチルクロライド９４．９ｍｇ（０．７０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液で２回および飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。硫酸マグネシウムで脱水した後、溶媒を減圧下に留去し、残留物を、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、カラム１０ｇＳＮＡＰ、流量１２ｍＬ／分、酢酸エチル／シクロヘキサン１：３）を用いて精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）プロピル］アミノ）−２−オキソ酢酸エチル１５９．０ｍｇ（７７％）を得た。

【1532】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６４２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1533】

２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）プロピル］アミノ）−２−オキソ酢酸エチル１４７．２ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）を最初に、エタノール４．０ｍＬに入れ、メタンアミン（４０％水溶液）３５６．２ｍｇ（４．５９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で終夜撹拌した。溶媒を減圧下に留去し、残留物をトルエンで３回共蒸留した。残留物をシリカゲル（移動相：ジクロロメタン／メタノール＝１０：１）で精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物６７．４ｍｇ（６３％）を得た。

【1534】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1535】

実施例Ｍ１０
（２Ｒ，２８Ｒ）−２８−アミノ−２−［（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）メチル］−２５−（カルボキシメチル）−４，２０，２４−トリオキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−２６−チア−３，１９，２３−トリアザノナコサン−１，２９−ジオン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）および
（１Ｒ，２８Ｒ，３４Ｒ）−１−アミノ−３３−（３−アミノプロピル）−３４−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−３５，３５−ジメチル−６，１０，２６，３２−テトラオキソ−１４，１７，２０，２３−テトラオキサ−３，３０−ジチア−７，１１，２７，３３−テトラアザヘキサトリアコンタン−１，４，２８−トリカルボン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）

【化377】

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【1536】

Ｒ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｆ２０９）２０ｍｇ（０．０１８ｍｍｏｌ）およびＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイン９．７８ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２ｍＬに溶かし、混合物を室温で１８時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮した。残留物（４７．７ｍｇ）をＴＨＦ／水１：１ ３ｍＬに溶解させた。２Ｍ水酸化リチウム水溶液０．０８ｍＬを加え、反応液を室温で１時間撹拌した。酢酸９．２６ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）を用いて、反応液をｐＨ約７に調節した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水；０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、位置異性体保護中間体１５．３ｍｇ（２段階で２９％）を得た。

【1537】

ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒ_ｔ＝１２．２６分および１２．３０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２５４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1538】

最後の段階で、この中間体１５．３ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）を２，２，２−トリフルオロエタノール２ｍＬに溶かした。塩化亜鉛６．１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃で２時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１３．１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加え、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物１１．９ｍｇ（７９．５％）を位置異性体混合物として得た。

【1539】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1540】

実施例Ｍ１１
Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：２）

【化378】

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【1541】

Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）１５．０ｍｇ（０．０１８ｍｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛７．４ｍｇ（０．０５４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で終夜撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１５．８ｍｇ（０．０５４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１１．１ｍｇ（７７％）を得た。

【1542】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５７３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1543】

実施例Ｍ１２
４−｛［（１Ｒ）−２−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）−１−カルボキシエチル］アミノ｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化379】

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【1544】

Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−オキソブタノイル）−Ｌ−システイン（中間体Ｃ７７）１２．２ｍｇ（０．０１４ｍｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１１．４ｍｇ（０．０８４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸２４．５ｍｇ（０．０８４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物４．６ｍｇ（４２％）を得た。

【1545】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1546】

実施例Ｍ１３
４−［（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−２−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
位置異性体１、エピマー１（２Ｒ）または（２Ｓ）。

【化380】

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【1547】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1548】

最初に、メチルＬ−システイネート塩酸塩（１：１）を、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中の１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオンでメチルＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイネートに変換した。

【1549】

市販の３−ブロモ−４−メトキシ−４−オキソブタン酸４０８ｍｇ（１．９３ｍｍｏｌ）およびメチルＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイネート１８０ｍｇ（０．６４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ８ｍＬに溶かし、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン１４７ｍｇ（０．９７ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１８時間撹拌後、追加の３−ブロモ−４−メトキシ−４−オキソブタン酸１３６ｍｇ（０．６４ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン１４７ｍｇ（０．９７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温でさらに１２時間撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に留去して、４−メトキシ−３−｛［（２Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸１５１ｍｇ（理論値の５７％）を得た。

【1550】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝１．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝４０８（Ｍ−Ｈ）⁻。

【1551】

この中間体のうち１４５ｍｇを、キラルカラムによる超臨界流体クロマトグラフィーによって個々のジアステレオマー（ＳＦＣ；カラム：ＤＡＩＣＥＬ、ＡＤ−Ｈ ５μ ２５０×２０ｍｍ；流量：８０ｍＬ／分；方法：ＡＤ−２５％ＥＴＯＨ−８０ｍＬ；圧力：１００バール；波長：２１０ｎＭ）に分離し、エピマー１ ６３ｍｇ（４３％）およびエピマー２ ５８ｍｇ（４０％）を得た。

【1552】

エピマー１を次のように特性決定した。

【1553】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝４０８（Ｍ−Ｈ）⁻。

【1554】

^１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）：Ｄ＝７．５７（ｄ、１Ｈ）、４．２４（ｍ、１Ｈ）、４．０５（ｔ、２Ｈ）、３．６７（ｔ、１Ｈ）、３．６５（ｓ、３Ｈ）、３．６２（ｓ、３Ｈ）、３．０５（ｄｄ、１Ｈ）、２．７０−２．８８（ｍ、２Ｈ）、２．５９（ｄｄ、１Ｈ）、０．９３（ｔ、２Ｈ）、０．０２（ｓ、９Ｈ）。

【1555】

エピマー２を次のように特性決定した。

【1556】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝４０８（Ｍ−Ｈ）⁻。

【1557】

^１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）：Ｄ＝７．５８（ｄ、１Ｈ）、４．１６−４．２３（ｍ、１Ｈ）、４．０５（ｔ、２Ｈ）、３．６７（ｄｄ、１Ｈ）、３．６５（ｓ、３Ｈ）、３．６４（ｓ、３Ｈ）、３．０４（ｄｄ、１Ｈ）、２．８８（ｄｄ、１Ｈ）、２．７７（ｄｄ、１Ｈ）、２．６１（ｄｄ、１Ｈ）、０．９２（ｔ、２Ｈ）、０．０２（ｓ、９Ｈ）。

【1558】

エピマー１ ３２．５ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ ３０ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）および４−メチルモルホリン１３．４ｍｇ（０．１３２ｍｍｏｌ）の存在下に中間体Ｃ６６ ５０ｍｇ（０．０６６ｍｍｏｌ）とカップリングさせて、ＨＰＬＣ精製後に、完全に保護された中間体メチル４−｛［（８Ｓ）−８−｛２−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］エチル｝−２，２−ジメチル−６，９，１４−トリオキソ−５−オキサ−７，１０，１３−トリアザ−２−シラペンタデカン−１５−イル］アミノ｝−２−｛［（２Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝−４−オキソブタノエート４３ｍｇ（理論値の５７％）を得た。

【1559】

この中間体４０ｍｇ（０．０３５ｍｍｏｌ）を室温で２Ｍ水酸化リチウム溶液０．９ｍＬ／メタノール１１ｍＬとともに２０分間撹拌して、両方のメチルエステル基を開裂させた。ＨＰＬＣによる精製によって、ジカルボン酸誘導体１２ｍｇ（理論値の３１％）を得た。

【1560】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝４．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1561】

最後に、この中間体１０ｍｇ（０．００９ｍｍｏｌ）を、上記で記載の方法に従って塩化亜鉛／トリフルオロエタノールで完全に脱保護した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物２．６ｍｇ（理論値の３０％）を得た。

【1562】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1563】

実施例Ｍ１４
４−［（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−２−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
位置異性体１、エピマー２（２Ｒまたは２Ｓ）。

【化381】

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【1564】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．４４分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1565】

実施例Ｍ１３に記載の中間体エピマー２を、実施例Ｍ１３における記載と同様にして反応させた。

【1566】

エピマー２ ３２．５ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ ３０ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）および４−メチルモルホリン１３．４ｍｇ（０．１３２ｍｍｏｌ）の存在下に、中間体Ｃ６６ ５０ｍｇ（０．０６６ｍｍｏｌ）とカップリングさせて、ＨＰＬＣ精製後に、完全に保護された中間体メチル４−｛［（８Ｓ）−８−｛２−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］エチル｝−２，２−ジメチル−６，９，１４−トリオキソ−５−オキサ−７，１０，１３−トリアザ−２−シラペンタデカン−１５−イル］アミノ｝−２−｛［（２Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝−４−オキソブタノエート４３ｍｇ（理論値の５７％）を得た。

【1567】

次に、この中間体４０ｍｇ（０．０３５ｍｍｏｌ）を、室温で２Ｍ水酸化リチウム溶液０．９ｍＬ／メタノール１１ｍＬとともに２０分間撹拌して、両方のメチルエステル基を開裂させた。ＨＰＬＣによる精製によって、ジカルボン酸誘導体１１ｍｇ（理論値の２８％）を得た。

【1568】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝４．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1569】

最後に、この中間体１０ｍｇ（０．００９ｍｍｏｌ）を、上記の方法に従って塩化亜鉛／トリフルオロエタノールで完全に脱保護した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物４．４ｍｇ（理論値の５２％）を得た。

【1570】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1571】

実施例Ｍ１５
４−［（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−３−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
位置異性体２、エピマー１（３Ｒまたは３Ｓ）。

【化382】

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【1572】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．４５分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1573】

市販の２−ブロモ−４−エトキシ−４−オキソブタン酸７４２．８ｍｇ（３．３ｍｍｏｌ）およびメチルＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイネート８０２ｍｇ（２．８７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３２ｍＬに溶かし、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン６５５．４ｍｇ（４．３１ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２０時間撹拌後、反応液を減圧下に濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に溶媒留去して、４−エトキシ−２−｛［（２Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸５２１ｍｇ（理論値の４３％）を得た。

【1574】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝３．１３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４２４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1575】

この中間体のうち５１０ｍｇを、キラルカラムによる超臨界流体クロマトグラフィーによって個々のジアステレオマーに分離して（ＳＦＣ；カラム：ＤＡＩＣＥＬ、ＡＤ−Ｈ ５μ ２５０×２０ｍｍ；流量：８０ｍＬ／分；方法：ＡＤ−１０％ＥｔＯＨ−８０ｍＬ；圧力：１００バール；波長：２１０ｎｍ）、エピマー１ １００ｍｇ（２０％）およびエピマー２ １４１ｍｇ（２８％）を得た。

【1576】

エピマー１を次のように特性決定した。

【1577】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９９分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝４２２（Ｍ−Ｈ）⁻。

【1578】

^１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）：Ｄ＝７．６０（ｄ、１Ｈ）、４．１８−４．２６（ｍ、１Ｈ）、４．０１−４．０８（ｍ、４Ｈ）、３．６３（ｓ、３Ｈ）、３．５９（ｄｄ、１Ｈ）、３．０４（ｄｄ、１Ｈ）、２．９２（ｄｄ、１Ｈ）、２．８０（ｄｄ、１Ｈ）、２．６３（ｄｄ、１Ｈ）、１．１７（ｔ、３Ｈ）、０．９２（ｔ、２Ｈ）、０．０２（ｓ、９Ｈ）。

【1579】

エピマー２を次のように特性決定した。

【1580】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝４０８（Ｍ−Ｈ）⁻。

【1581】

^１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）：Ｄ＝７．５６（ｄ、１Ｈ）、４．２１−４．２９（ｍ、１Ｈ）、４．０１−４．１（ｍ、４Ｈ）、３．６４（ｓ、３Ｈ）、３．５８（ｄｄ、１Ｈ）、３．０８（ｄｄ、１Ｈ）、２．８５（ｄｄ、１Ｈ）、２．７８（ｄｄ、１Ｈ）、２．６０（ｄｄ、１Ｈ）、１．１７（ｔ、３Ｈ）、０．９３（ｔ、２Ｈ）、０．０２（ｓ、９Ｈ）。

【1582】

ＨＡＴＵ ３０ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）および４−メチルモルホリン１３．４ｍｇ（０．１３２ｍｍｏｌ）の存在下に、エピマー１ ３３．６ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）を中間体Ｃ６６ ５０ｍｇ（０．０６６ｍｍｏｌ）とカップリングさせて、ＨＰＬＣ精製後に、完全に保護された中間体５１ｍｇ（理論値の６３％）を得た。

【1583】

エチル４−｛［（８Ｓ）−８−｛２−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］エチル｝−２，２−ジメチル−６，９，１４−トリオキソ−５−オキサ−７，１０，１３−トリアザ−２−シラペンタデカン−１５−イル］アミノ｝−３−｛［（２Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝−４−オキソブタノエート
この中間体４９ｍｇ（０．０４２ｍｍｏｌ）を、室温で２Ｍ水酸化リチウム溶液０．５ｍＬ／ＴＨＦ／水１：１ １２ｍＬとともに３０分間撹拌して、両方のメチルエステル基を開裂させた。酸性とし、ＨＰＬＣによって精製することで、ジカルボン酸誘導体１１ｍｇ（理論値の２４％）を得た。

【1584】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝４．６８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1585】

最後に、この中間体１１ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）を、上記の方法に従って塩化亜鉛／トリフルオロエタノールで完全に脱保護した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物３．７ｍｇ（理論値の３９％）を得た。

【1586】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．４５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1587】

実施例Ｍ１６
４−［（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−３−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
位置異性体２、エピマー２（３Ｒまたは３Ｓ）。

【化383】

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【1588】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．４４分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1589】

実施例Ｍ１５に記載の中間体エピマー２を、実施例Ｍ１５における記載と同様にして反応させた。

【1590】

ＨＡＴＵ ３０ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）および４−メチルモルホリン１３．４ｍｇ（０．１３２ｍｍｏｌ）の存在下に、エピマー２ ３３．６ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）を、中間体Ｃ６６ ５０ｍｇ（０．０６６ｍｍｏｌ）とカップリングさせて、ＨＰＬＣ精製後に、完全に保護された中間体５１ｍｇ（理論値の６３％）を得た。

【1591】

エチル４−｛［（８Ｓ）−８−｛２−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］エチル｝−２，２−ジメチル−６，９，１４−トリオキソ−５−オキサ−７，１０，１３−トリアザ−２−シラペンタデカン−１５−イル］アミノ｝−３−｛［（２Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝−４−オキソブタノエート
この中間体４９ｍｇ（０．０４２ｍｍｏｌ）を、室温で２Ｍ水酸化リチウム溶液０．５ｍＬ／ＴＨＦ／水１：１ １２ｍＬとともに３０分間撹拌して、両方のメチルエステル基を開裂させた。酸性とし、ＨＰＬＣによって精製することで、ジカルボン酸誘導体１３．４ｍｇ（理論値の２８％）を得た。

【1592】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝４．６６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1593】

最後に、この中間体１３．４ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）を、上記の方法に従って塩化亜鉛／トリフルオロエタノールで完全に脱保護した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物７．５ｍｇ（理論値の６６％）を得た。

【1594】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1595】

実施例Ｍ１７
（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタン酸塩酸塩（１：１）

【化384】

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【1596】

中間体Ｃ５３ １５０ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １５ｍＬおよびＤＡＢＣＯ ２．２９ｇ（２０．３９ｍｍｏｌ）に溶かした。反応液を超音波浴で３０分間処理した。酢酸１．１７ｍＬを加えることで、反応液をｐＨ３から４に調節し、混合物を減圧下に濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製し、適切な分画を室温で減圧下に濃縮した。残留物をアセトニトリル／水（１：１）に取り、４Ｎ塩酸５ｍＬを加え、混合物を凍結乾燥した。これによって、標題化合物８１ｍｇ（理論値の６８％）を得た。

【1597】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．６９分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1598】

実施例Ｍ１８
Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−Ｌ−グルタミン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化385】

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【1599】

最初に、トリフルオロ酢酸／ベンジルＮ−（２−アミノエチル）−Ｎ^２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−グルタミネート（１：１）を、ペプチド化学の古典的方法を用いて製造した。次に、ＨＡＴＵの存在下に、この中間体を中間体Ｃ５８とカップリングさせた。次に、最初に、ベンジルオキシカルボニル保護基およびベンジルエステルを水素化開裂によって除去し、次に２−（トリメチルシリル）エトキシカルボニル保護基を、塩化亜鉛を用いて除去した。

【1600】

ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒ_ｔ＝１．９１分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８５［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1601】

実施例Ｍ１９
Ｎ^６−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル）−Ｌ−リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化386】

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【1602】

最初に、ペプチド化学において公知の古典的保護基操作を用いて、トリフルオロ酢酸／２−（トリメチルシリル）エチル−Ｎ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−リシネート（１：１）を製造した。ＨＡＴＵの存在下に、この中間体を中間体Ｃ６１とカップリングさせた。次に、最初に、２−（トリメチルシリル）エトキシカルボニル保護基および２−（トリメチルシリル）エチルエステルを、塩化亜鉛を用いて開裂させた。最後に、ベンジルオキシカルボニル保護基の水素化分解的開裂および分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物を得た。

【1603】

ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝１．６５分。

【1604】

実施例Ｍ２０
（１Ｒ，４Ｒ，２７Ｒ，３３Ｒ）−１−アミノ−３２−（３−アミノプロピル）−３３−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−３４，３４−ジメチル−６，９，２５，３１−テトラオキソ−１３，１６，１９，２２−テトラオキサ−３，２９−ジチア−７，１０，２６，３２−テトラアザペンタトリアコンタン−１，４，２７−トリカルボン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）

【化387】

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【1605】

最初に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、メチルＬ−システイネート塩酸塩（１：１）を、ＤＭＦ中の１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオンでメチルＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイネートに変換した。

【1606】

市販の３−ブロモ−４−メトキシ−４−オキソブタン酸４０８ｍｇ（１．９３ｍｍｏｌ）およびメチルＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイネート１８０ｍｇ（０．６４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ８ｍＬに溶かし、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン１４７ｍｇ（０．９７ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１８時間撹拌した後、追加の３−ブロモ−４−メトキシ−４−オキソブタン酸１３６ｍｇ（０．６４ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン１４７ｍｇ（０．９７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温でさらに１２時間撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に溶媒留去して、４−メトキシ−３−｛［（２Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸１５１ｍｇ（理論値の５７％）を得た。

【1607】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝１．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝４０８（Ｍ−Ｈ）⁻。

【1608】

４−メトキシ−３−｛［（２Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸３．６６ｍｇ（８．９３μｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ ３．６６ｍｇ（８．９３μｍｏｌ）および４−メチルモルホリン１．６μＬ（１５μｍｏｌ）の存在下に、Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１５−（グリシルアミノ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ８０）１３．０ｍｇ（７．４４μｍｏｌ）とカップリングさせて、ＨＰＬＣ精製後に、完全に保護された中間体Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１５−（｛Ｎ−［（８Ｒ，１１Ｒ）−８，１１−ビス（メトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−６，１３−ジオキソ−５−オキサ−１０−チア−７−アザ−２−シラトリデカン−１３−イル］グリシル｝アミノ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン３．９ｍｇ（理論値の３７％）を得た。

【1609】

この中間体３．９０ｍｇ（２．７６μｍｏｌ）を、室温で２Ｍ水酸化リチウム溶液３５μＬ／ＴＨＦ／水３：１ １．０ｍＬとともに１５分間撹拌して、両方のメチルエステル基を開裂させた。ＨＰＬＣによる精製によって、ジカルボン酸誘導体３．６０ｍｇ（理論値の９４％）を得た。

【1610】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝４．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１３８５［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1611】

最後に、この中間体３．６ｍｇ（２．６μｍｏｌ）を、上記の方法に従って塩化亜鉛／トリフルオロエタノールで完全に脱保護した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物１．９２ｍｇ（理論値の５５％）を得た。

【1612】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．７２分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝１０９４［Ｍ−Ｈ］⁻。

【1613】

実施例Ｍ２１
（２Ｒ，２４Ｓ，２７Ｒ）−２７−アミノ−２−［（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）メチル］−２４−（カルボキシメチル）−４，２０，２３−トリオキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−２５−チア−３，１９，２２−トリアザオクタコサン−１，２８−ジオン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）

【化388】

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【1614】

市販の２−ブロモ−４−エトキシ−４−オキソブタン酸７４２．８ｍｇ（３．３ｍｍｏｌ）およびメチルＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイネート８０２ｍｇ（２．８７ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ３２ｍＬに溶かし、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン６５５．４ｍｇ（４．３１ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２０時間撹拌後、反応液を減圧下に濃縮し、残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に溶媒留去して、４−エトキシ−２−｛［（２Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸５２１ｍｇ（理論値の４３％）を得た。

【1615】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝３．１３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４２４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1616】

４−エトキシ−２−｛［（２Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸４．３６ｍｇ（１０．３μｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ ３．９２ｍｇ（１０．３μｍｏｌ）および４−メチルモルホリン１．９μＬ（１７μｍｏｌ）の存在下に、Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１５−（グリシルアミノ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ８０）１５．０ｍｇ（８．５９μｍｏｌ）とカップリングさせて、ＨＰＬＣ精製後に、完全に保護された中間体Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｎ−［１５−（｛Ｎ−［（８Ｒ，１１Ｓ）−１１−（２−エトキシ−２−オキソエチル）−８−（メトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１０−チア−７−アザ−２−シラドデカン−１２−イル］グリシル｝アミノ）−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン−１−オイル］−Ｌ−システイン３．６ｍｇ（理論値の２６％）を得た。

【1617】

この中間体６．２０ｍｇ（２．８２μｍｏｌ）を、室温で２Ｍ水酸化リチウム溶液３５μＬ／ＴＨＦ／水１：１ １．０ｍＬとともに１５分間撹拌して、両方のエステル基を開裂させた。酸性とし、ＨＰＬＣによって精製して、ジカルボン酸誘導体３．６０ｍｇ（理論値の９２％）を得た。

【1618】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝４．７１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１３８５［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1619】

最後に、この中間体３．６０ｍｇ（１．６９μｍｏｌ）を、上記の方法に従って塩化亜鉛／トリフルオロエタノールで完全に脱保護した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物０．８８ｍｇ（理論値の３９％）を得た。

【1620】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．７２分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝１０９４［Ｍ−Ｈ］⁻。

【1621】

実施例Ｍ２２
（２Ｒ，２７Ｒ）−２７−アミノ−２−［（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）メチル］−２４−（カルボキシメチル）−４，２０，２３−トリオキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−２５−チア−３，１９，２２−トリアザオクタコサン−１，２８−ジオン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）および
（１Ｒ，２７Ｒ，３３Ｒ）−１−アミノ−３２−（３−アミノプロピル）−３３−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−３４，３４−ジメチル−６，９，２５，３１−テトラオキソ−１３，１６，１９，２２−テトラオキサ−３，２９−ジチア−７，１０，２６，３２−テトラアザペンタトリアコンタン−１，４，２７−トリカルボン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）

【化389】

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【1622】

Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｎ−［１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，１８−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル］−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｆ２５７）１６．５ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）およびＮ−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−システイン８．１８ｍｇ（０．０３１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ２ｍＬに溶かし、混合物を室温で１８時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮した。残留物（２８．９ｍｇ）をＴＨＦ／水１：１ ３ｍＬに溶解させた。２Ｍ水酸化リチウム水溶液０．０４６ｍＬを加え、混合物を室温で３時間撹拌した。次に、酢酸５．２μＬ（０．０９２ｍｍｏｌ）を用い、混合物をｐＨ約７に調節した。反応混合物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水；０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、位置異性体保護中間体１２．１ｍｇ（２段階で５８％）を得た。

【1623】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝１．８２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２４０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1624】

最後の段階で、この中間体１２．１ｍｇ（０．００９ｍｍｏｌ）を２，２，２−トリフルオロエタノール２ｍＬに溶かした。塩化亜鉛７．３ｍｇ（０．０５４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で２時間撹拌した。次に、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸１５．７ｍｇ（０．０５４ｍｍｏｌ）を加え、溶媒を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮およびアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物６．４ｍｇ（５９％）を位置異性体混合物として得た。

【1625】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０９６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【1626】

実施例Ｍ２３
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル−Ｌ−グルタミン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化390】

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【1627】

最初に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルＬ−グルタメート塩酸塩（１：１）を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ６１とカップリングさせた。保護された中間体をトリフルオロエタノールに取り、塩化亜鉛存在下に５０℃で終夜撹拌することで、脱保護を完了させた。ＥＤＴＡ添加後に、分取ＨＰＬＣによる精製によって、後処理を行った。

【1628】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝１．４５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1629】

実施例Ｍ２４
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル−Ｄ−グルタミン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化391】

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【1630】

最初に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルＤ−グルタメート塩酸塩（１：１）を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ６１とカップリングさせた。保護された中間体をトリフルオロエタノールに取り、塩化亜鉛存在下に５０℃で撹拌することで、脱保護を完了させた。ＥＤＴＡ添加後に、分取ＨＰＬＣによる精製によって、後処理を行った。

【1631】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝１．４１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1632】

実施例Ｍ２５
Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｌ−グルタミン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）

【化392】

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【1633】

最初に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルＬ−グルタメート塩酸塩（１：１）を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ６１とカップリングさせた。次の段階で、標準水素圧下に４５分間にわたり、室温でメタノール中にて１０％パラジウム／活性炭で水素化することで、Ｚ保護基を除去した。部分保護された中間体をトリフルオロエタノールに取り、塩化亜鉛の存在下に５０℃で７時間撹拌することで、脱保護を完了させた。ＥＤＴＡ添加後に、分取ＨＰＬＣによる精製によって、後処理を行った。

【1634】

ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒ_ｔ＝１．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６４３［Ｍ＋Ｈ］^＋．
実施例Ｍ２６
４−［（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−２−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
位置異性体１、エピマーの混合物

【化393】

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【1635】

本実施例は、実施例１３および実施例１４の化合物のエピマー混合物について説明するものである。その合成は、実施例１３と同様に行い、超臨界流体クロマトグラフィーによる二つのエピマーの分離は行わず、標題化合物をエピマーの混合物として製造した。

【1636】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．４３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］^＋．
実施例Ｍ２７
４−［（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−３−｛［（２Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル］スルファニル｝−４−オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
位置異性体２、エピマーの混合物

【化394】

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【1637】

本実施例は、実施例１５および実施例１６の化合物のエピマー混合物について説明するものである。その合成は、実施例１５と同様に行い、超臨界流体クロマトグラフィーによる二つのエピマーの分離は行わず、標題化合物をエピマーの混合物として製造した。

【1638】

ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．４５分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【1639】

実施例ＡＤＣ
マレイミド基を介して抗体のシステイン側鎖にカップリングさせた実施例の構造式に示したＡＤＣは、リンカーおよびカップリング手順に応じて、主として各場合で示した開環型または閉環型で存在する。しかしながら、その製造物は、小さい割合で個々の他の形態を含むことができる。

【1640】

実施例１９４ｍ１

【化395】

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【1641】

ここでは、抗ＣＤ１２３ ＡＫ１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）５ｍｇ／ＰＢＳ（５００μＬ）（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）を、中間体Ｆ１９４とのカップリングに用いた。最初に、ＤＭＳＯ １００μＬに溶かした５当量の中間体Ｆ１９４を加え、室温で１時間撹拌後、同量を再度加え、反応液を室温でさらに１時間撹拌した。次に、反応液をＳｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、次に超遠心によって濃縮し、ＰＢＳで再希釈した。

【1642】

タンパク質濃度：１．２８ｍｇ／ｍＬ；
薬物／ｍＡｂ比：３．３。

【1643】

実施例１９４ｍ２
ここでは、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｂ（ＴＰＰ−５９７１）５ｍｇ／ＰＢＳ（５００μＬ）（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）を、中間体Ｆ１９４とのカップリングに用いた。最初に、ＤＭＳＯ １００μＬに溶かした５当量の中間体Ｆ１９４を加え、室温で１時間撹拌後同量を再度加え、反応液を室温でさらに１時間撹拌した、次に、反応液をＳｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳで再希釈した。

【1644】

タンパク質濃度：１．１８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．２。

【1645】

実施例１９４ｍ３
ここでは、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）５ｍｇ／ＰＢＳ（５００μＬ）（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）を、中間体Ｆ１９４とのカップリングに用いた。最初に、ＤＭＳＯ １００μＬに溶かした５当量の中間体Ｆ１９４を加え、室温で１時間撹拌後、同量を再度加え、反応液を室温でさらに１時間撹拌した。次に、反応液をＳｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳで再希釈した。

【1646】

タンパク質濃度：０．４２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．９。

【1647】

実施例２０８ｍ１

【化396】

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【1648】

アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．００６ｍｇのＰＢＳ緩衝液（１０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）１ｍｇ／ＰＢＳ（９３μＬ）（ｃ＝１０．２ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ １０μＬに溶かした中間体Ｆ１０４ ０．０４３ｍｇ（０．０５３μｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液２３８７μＬで希釈した。

【1649】

この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で希釈して総体積１５ｍＬとした。この溶液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、ＰＤ−１０カラムを用いて再緩衝してｐＨ７．２とした。溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈し、再度濃縮した。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1650】

タンパク質濃度：０．５４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．５。

【1651】

実施例２０８ｍ１（ＴＶ）
アルゴン下に、ＴＣＥＰ １．４ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．８３ｍＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）２５０ｍｇ／ＰＢＳ（２１．７ｍＬ）（ｃ＝１１．５ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ２５００μＬに溶かした中間体Ｆ１０４ １０．７６ｍｇ（０．０１３３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を、ＰＤ−１０カラムを用いて再緩衝してｐＨ８とした。合わせた溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。

【1652】

反応液を、ＰＤ−１０カラムを用いＰＢＤ緩衝液で再緩衝してｐＨ７．２とし溶出液をＰＢＳで希釈して総体積１２５ｍＬとした。溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈し、再度濃縮した。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1653】

タンパク質濃度：９．７９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．９。

【1654】

実施例２０８ｍ２
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．２８７ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｂ（ＴＰＰ−５９７１）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ１０４ ０．２１５ｍｇ（０．０００２６７ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９５０μＬで希釈した。

【1655】

この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で希釈して総体積１５ｍＬとした。この溶液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、ＰＤ−１０カラムを用いて再緩衝してｐＨ７．２とした。溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1656】

タンパク質濃度：１．７６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．８。

【1657】

実施例２０８ｍ３
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ１０４ ０．２１５ｍｇ（０．０００２６７ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９５０μＬで希釈した。

【1658】

この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で希釈して総体積１５ｍＬとした。この溶液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、ＰＤ−１０カラムを用いて再緩衝してｐＨ７．２とした。溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1659】

タンパク質濃度：１．９９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．９。

【1660】

実施例２０８ｍ３（ＴＶ）
アルゴン下に、ＴＣＥＰ １．４ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．８３ｍＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）２５０ｍｇ／ＰＢＳ（２１．７ｍＬ）（ｃ＝１１．５ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ２５００μＬに溶かした中間体Ｆ１０４ １０．７６ｍｇ（０．０１３３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を、ＰＤ−１０カラムを用いて再緩衝してｐＨ８とした。

【1661】

合わせた溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。

【1662】

反応液を、ＰＤ−１０カラムを用いＰＢＤ緩衝液で再緩衝してｐＨ７．２とし、溶出液をＰＢＳで希釈して総体積１２５ｍＬとした。溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈し、再度濃縮した。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1663】

タンパク質濃度：１１．０６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．４。

【1664】

このＡＤＣ製造に関しては、開環コハク酸イミド型の割合が８６．１％と決定された。

【1665】

実施例２０８ｍ４
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｄ（ＴＰＰ−５９６８）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ１０４ ０．２１５ｍｇ（０．０００２６７ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９５０μＬで希釈した。

【1666】

この溶液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で希釈して総体積１５ｍＬとした。この溶液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、ＰＤ−１０カラムを用いて再緩衝してｐＨ７．２とした。溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1667】

タンパク質濃度：１．４１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．８。

【1668】

実施例２４０ｍ１

【化397】

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【1669】

アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）５ｍｇ／ＰＢＳ（３６６μＬ）（ｃ＝１３．６６ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９８４μＬで希釈し、室温で１時間撹拌した。ＤＭＳＯ １００μＬに溶かした中間体Ｆ２４０ ０．１９９ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1670】

タンパク質濃度：１．８４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．７。

【1671】

実施例２４０ｍ２
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｂ（ＴＰＰ−５９７１）５ｍｇ／ＰＢＳ（３３７μＬ）（ｃ＝１４．８５ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液２０１３μＬで希釈し、室温で１時間撹拌した。ＤＭＳＯ １００μＬに溶かした中間体Ｆ２４０ ０．１９９ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1672】

タンパク質濃度：１．７４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．７。

【1673】

実施例２４０ｍ３
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）５ｍｇ／ＰＢＳ（３７１μＬ）（ｃ＝１３．４９ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９７９μＬで希釈し、室温で１時間撹拌した。ＤＭＳＯ １００μＬに溶かした中間体Ｆ２４０ ０．１９９ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1674】

タンパク質濃度：１．５８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．３。

【1675】

このＡＤＣ製造に関しては、開環コハク酸イミド型の割合が９２．９％と決定された。

【1676】

実施例２５７ｍ１

【化398】

[この文献は図面を表示できません]

【1677】

アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）５ｍｇ／ＰＢＳ（３６６μＬ）（ｃ＝１３．６６ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９８４μＬで希釈し、室温で１時間撹拌した。ＤＭＳＯ １００μＬに溶かした中間体Ｆ２５７ ０．２９０ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1678】

タンパク質濃度：１．７８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．２。

【1679】

実施例２５７ｍ１（ＴＶ）
アルゴン下に、ＴＣＥＰ １．４ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．８３ｍＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）２５０ｍｇ／ＰＢＳ（２１．７ｍＬ）（ｃ＝１１．５ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ２５００μＬに溶かした中間体Ｆ２５７ ８．９２ｍｇ（０．００８３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を、ＰＤ−１０カラムを用いて再緩衝してｐＨ８とした。合わせた溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。

【1680】

反応液を、ＰＤ−１０カラムを用いＰＢＤ緩衝液で再緩衝してｐＨ７．２とし、溶出液をＰＢＳで希釈して総体積１２５ｍＬとした。溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈し、再度濃縮した。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1681】

タンパク質濃度：１１．２７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．６。

【1682】

実施例２５７ｍ２
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｂ（ＴＰＰ−５９７１）５ｍｇ／ＰＢＳ（３３７μＬ）（ｃ＝１４．８５ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液２０１３μＬで希釈し、室温で１時間撹拌した。ＤＭＳＯ １００μＬに溶かした中間体Ｆ２５７ ０．２９０ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1683】

タンパク質濃度：１．５４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．１。

【1684】

実施例２５７ｍ３
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）５ｍｇ／ＰＢＳ（３７１μＬ）（ｃ＝１３．４９ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９７９μＬで希釈し、室温で１時間撹拌した。ＤＭＳＯ １００μＬに溶かした中間体Ｆ２５７ ０．２９０ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1685】

タンパク質濃度：１．５９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．４。

【1686】

実施例２５７ｍ３（ＴＶ）
アルゴン下に、ＴＣＥＰ １．４ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．８３ｍＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）２５０ｍｇ／ＰＢＳ（２１．７ｍＬ）（ｃ＝１１．５ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ２５００μＬに溶かした中間体Ｆ２５７ ８．９３ｍｇ（０．００８３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を、ＰＤ−１０カラムを用いて再緩衝してｐＨ８とした。合わせた溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。

【1687】

反応液を、ＰＤ−１０カラムを用いＰＢＤ緩衝液で再緩衝してｐＨ７．２とし、溶出液をＰＢＳで希釈して総体積１２５ｍＬとした。溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈し、再度濃縮した。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1688】

タンパク質濃度：１３．３６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。

【1689】

このＡＤＣ製造に関しては、開環コハク酸イミド型の割合が７８．７％と決定された。

【1690】

実施例２５９ｍ１

【化399】

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【1691】

ここでは、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｂ（ＴＰＰ−５９６９）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１ｍｇ／ｍＬ）を、中間体Ｆ２５９とのカップリングに用いた。抗体の還元時間は３０分とし、Ｆ２５９ ０．２４５ｍｇ（０．２６７μｍｏｌ）を加えた後、反応液を室温で２０時間撹拌し、Ｓｅｐｈａｄｅｘで精製した。最終的に、溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳで再希釈した。

【1692】

タンパク質濃度：１．７０ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．７。

【1693】

実施例２５９ｍ２
ここでは、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｂ（ＴＰＰ−５９７１）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１ｍｇ／ｍＬ）を、中間体Ｆ２５９とのカップリングに用いた。抗体の還元時間は３０分とし、Ｆ２５９ ０．２４５ｍｇ（０．２６７μｍｏｌ）を加えた後、反応液を室温で２０時間撹拌し、Ｓｅｐｈａｄｅｘで精製した。最終的に、溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳで再希釈した。

【1694】

タンパク質濃度：１．７２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．８。

【1695】

実施例２５９ｍ３
ここでは、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１ｍｇ／ｍＬ）を、中間体Ｆ２５９とのカップリングに用いた。抗体の還元時間は３０分とし、Ｆ２５９ ０．２４５ｍｇ（０．２６７μｍｏｌ）を加えた後、反応液を室温で２０時間撹拌し、Ｓｅｐｈａｄｅｘで精製した。最終的に、溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳで再希釈した。

【1696】

タンパク質濃度：１．５７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．０。

【1697】

実施例２６０ｍ１

【化400】

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【1698】

実施例２６０ｍ１（ＴＶ）
アルゴン下に、ＴＣＥＰ １．４ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．８３ｍＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）２５０ｍｇ／ＰＢＳ（２１．７ｍＬ）（ｃ＝１１．５ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ２５００μＬに溶かした中間体Ｆ２６０ １５．１ｍｇ（０．０１３３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を、ＰＤ−１０カラムを用いて再緩衝してｐＨ８とした。合わせた溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。

【1699】

反応液を、ＰＤ−１０カラムを用いＰＢＤ緩衝液で再緩衝してｐＨ７．２とし、溶出液をＰＢＳで希釈して総体積１２５ｍＬとした。溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈し、再度濃縮した。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1700】

タンパク質濃度：９．４７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．０。

【1701】

実施例２６０ｍ２
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｂ（ＴＰＰ−５９７１）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ２６０ ０．３０２ｍｇ（０．０００２７ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９５０μＬで希釈した。

【1702】

この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1703】

タンパク質濃度：１．６２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．５。

【1704】

実施例２６０ｍ３（ＴＶ）
アルゴン下に、ＴＣＥＰ １．４ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．８３ｍＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）２５０ｍｇ／ＰＢＳ（２１．７ｍＬ）（ｃ＝１１．５ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ２５００μＬに溶かした中間体Ｆ２６０ １５．１ｍｇ（０．０１３３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を、ＰＤ−１０カラムを用いて再緩衝してｐＨ８とした。合わせた溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。

【1705】

反応液を、ＰＤ−１０カラムを用いＰＢＤ緩衝液で再緩衝してｐＨ７．２とし、溶出液をＰＢＳで希釈して総体積１２５ｍＬとした。溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈し、再度濃縮した。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1706】

タンパク質濃度：１２．０８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．８。

【1707】

このＡＤＣ製造に関しては、開環コハク酸イミド型の割合が８４．５％と決定された。

【1708】

実施例２７０ｍ１

【化401】

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【1709】

アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）５ｍｇ／ＰＢＳ（３６６μＬ）（ｃ＝１３．６６ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９８４μＬで希釈し、室温で１時間撹拌した。ＤＭＳＯ １００μＬに溶かした中間体Ｆ２７０ ０．１８８ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1710】

タンパク質濃度：１．７１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．７。

【1711】

実施例２７０ｍ２
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｂ（ＴＰＰ−５９７１）５ｍｇ／ＰＢＳ（３３７μＬ）（ｃ＝１４．８５ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液２０１３μＬで希釈し、室温で１時間撹拌した。ＤＭＳＯ １００μＬに溶かした中間体Ｆ２７０ ０．１８８ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1712】

タンパク質濃度：１．６５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．９。

【1713】

実施例２７０ｍ３
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）５ｍｇ／ＰＢＳ（３７１μＬ）（ｃ＝１３．４９ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９７９μＬで希釈し、室温で１時間撹拌した。ＤＭＳＯ １００μＬに溶かした中間体Ｆ２７０ ０．１８８ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1714】

タンパク質濃度：１．５１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．４。

【1715】

このＡＤＣ製造に関しては、開環コハク酸イミド型の割合が９４．４％と決定された。

【1716】

実施例２７１ｍ１

【化402】

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【1717】

アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．１７２ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．３０ｍＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）３０ｍｇ／ＰＢＳ（３．０ｍＬ）（ｃ＝１０．０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ３００μＬに溶かした中間体Ｆ２７１ １．１４ｍｇ（０．００１ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、混合物を、ＰＤ−１０カラムを用いてｐＨ８に再緩衝させた。合わせた溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。

【1718】

混合物を、ＰＤ−１０カラムを用いＰＢＤ緩衝液で再緩衝してｐＨ７．２とし、溶出液をＰＢＳで希釈して総体積１４ｍＬとした。溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈し、再度濃縮した。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1719】

タンパク質濃度：１１．８２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．１。

【1720】

実施例２７１ｍ３
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌した。ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ２７１ ０．２６７ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、混合物をｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９５０μＬで希釈し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1721】

タンパク質濃度：１．３３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．２。

【1722】

実施例２７４ｍ１

【化403】

[この文献は図面を表示できません]

【1723】

アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）５ｍｇ／ＰＢＳ（３６６μＬ）（ｃ＝１３．６６ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９８４μＬで希釈し、室温で１時間撹拌した。ＤＭＳＯ １００μＬに溶かした中間体Ｆ２７４ ０．２３２ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1724】

タンパク質濃度：１．９２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．２。

【1725】

実施例２７４ｍ２
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｂ（ＴＰＰ−５９７１）５ｍｇ／ＰＢＳ（３３７μＬ）（ｃ＝１４．８５ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液２０１３μＬで希釈し、室温で１時間撹拌した。ＤＭＳＯ １００μＬに溶かした中間体Ｆ２７４ ０．２３２ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1726】

タンパク質濃度：１．８４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．２。

【1727】

実施例２７４ｍ３
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）５ｍｇ／ＰＢＳ（３７１μＬ）（ｃ＝１３．４９ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９７９μＬで希釈し、室温で１時間撹拌した。ＤＭＳＯ １００μＬに溶かした中間体Ｆ２７４ ０．２３２ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1728】

タンパク質濃度：１．６９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．０。

【1729】

このＡＤＣ製造に関しては、開環コハク酸イミド型の割合が８９．５％と決定された。

【1730】

実施例２７６ｍ１

【化404】

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【1731】

アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌した。ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ２７６ ０．２２９ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９５０μＬで希釈し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1732】

タンパク質濃度：１．２６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．８。

【1733】

実施例２７６ｍ３
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌した。ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ２７６ ０．２２９ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９５０μＬで希釈し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に負荷し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1734】

タンパク質濃度：１．３９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．０。

【1735】

実施例２８１ｍ３

【化405】

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【1736】

ここでは、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）５ｍｇ／ＰＢＳ（５００μＬ）を、ｐＨ７．２で中間体Ｆ２８１とのカップリングに用いた（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）。ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇ存在下での抗体の還元時間は３０分であった。次に、Ｆ２８１ ０．２５ｍｇ（０．２７μｍｏｌ）を加えた後、混合物をＤＭＳＯ ５０μＬ中、室温で２０時間撹拌し、次にＳｅｐｈａｄｅｘで精製した。最後に、溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳで再希釈した。

【1737】

タンパク質濃度：１．４２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．８。

【1738】

実施例２８４ｍ１

【化406】

[この文献は図面を表示できません]

【1739】

アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ２８４ ０．２５６ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９５０μＬで希釈した。

【1740】

この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1741】

タンパク質濃度：１．７８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．７。

【1742】

実施例２８４ｍ２
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｂ（ＴＰＰ−５９７１）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ２８４ ０．２５６ｍｇ（０．０００２３３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、反応液を、予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９５０μＬで希釈した。

【1743】

この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1744】

タンパク質濃度：１．８３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。

【1745】

実施例２８４ｍ３
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）５ｍｇ／ＰＢＳ（５１０μＬ）（ｃ＝９．８ｍｇ／ｍＬ）に加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ２８４ ０．２６ｍｇ（０．２３μｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、混合物をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で２．５ｍＬとし、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離し、次に室温で終夜撹拌した。溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1746】

タンパク質濃度：１．５４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．２。

【1747】

実施例２９６ｍ１

【化407】

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【1748】

アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．１４ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．２５ｍＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）２５ｍｇ／ＰＢＳ（２．５ｍＬ）（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ２５０μＬに溶かした中間体Ｆ２９６ １．０５ｍｇ（０．００１２ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、混合物を、ｐＨ８に調節したＰＢＳ緩衝液２ｍＬで希釈し、反応液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。

【1749】

反応液を、ＰＤ−１０カラムを用いＰＢＤ緩衝液で再緩衝してｐＨ７．２とした。混合物を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈し、再度濃縮した。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1750】

タンパク質濃度：７．６６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．８。

【1751】

実施例２９６ｍ２
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｂ（ＴＰＰ−５９７１）５ｍｇ／ＰＢＳ（５００μＬ）（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ２９６ ０．２１ｍｇ（０．２３μｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、混合物をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で２．５ｍＬとし、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離し、次にアルゴン下に室温で終夜撹拌した。溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1752】

タンパク質濃度：１．７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．８。

【1753】

実施例２９６ｍ３
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）５ｍｇ／ＰＢＳ（５００μＬ）（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ２９６ ０．２１ｍｇ（０．２３μｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、混合物をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で２．５ｍＬとし、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離し、次にアルゴン下に室温で終夜撹拌した。溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1754】

タンパク質濃度：１．５１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．１。

【1755】

実施例２９７ｍ１

【化408】

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【1756】

ここでは、ｐＨ７．２の抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）５ｍｇ／ＰＢＳ（４２７μＬ）（ｃ＝１３．６６ｍｇ／ｍＬ）を、中間体Ｆ２９７とのカップリングに用いた。ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇ存在下での抗体の還元時間は３０分であった。Ｆ２９７ ０．２３ｍｇ（０．２６μｍｏｌ）／ＤＭＳＯ（５０μＬ）を加えた後、反応液を室温で２時間撹拌し、次にＳｅｐｈａｄｅｘで精製した。最終的に、溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳで再希釈した。

【1757】

タンパク質濃度：１．８１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．５。

【1758】

実施例２９７ｍ２
ここでは、ｐＨ７．２の抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｂ（ＴＰＰ−５９７１）５ｍｇ／ＰＢＳ（４２７μＬ）（ｃ＝１４．８５ｍｇ／ｍＬ）を、中間体Ｆ２９７とのカップリングに用いた。ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇ存在下での抗体の還元時間は３０分であった。Ｆ２９７ ０．２３ｍｇ（０．２６μｍｏｌ）／ＤＭＳＯ（５０μＬ）を加えた後、反応液を室温で２時間撹拌し、次にＳｅｐｈａｄｅｘで精製した。最終的に、溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳで再希釈した。

【1759】

タンパク質濃度：１．６４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．４。

【1760】

実施例２９７ｍ３
ここでは、ｐＨ７．２の抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３） ５ｍｇ／ＰＢＳ（４２７μＬ）（ｃ＝１３．４９ｍｇ／ｍＬ）を、中間体Ｆ２９７とのカップリングに用いた。ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇ存在下での抗体の還元時間は３０分であった。Ｆ２９７ ０．２３ｍｇ（０．２６μｍｏｌ）／ＤＭＳＯ（５０μＬ）を加えた後、反応液を室温で２時間撹拌し、次にＳｅｐｈａｄｅｘで精製した。最終的に、溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳで再希釈した。

【1761】

タンパク質濃度：１．８１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．１。

【1762】

実施例３０９ｍ１

【化409】

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【1763】

アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間撹拌した。ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ３０９ ０．２４７ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９５０μＬで希釈し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1764】

タンパク質濃度：０．７７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．１。

【1765】

実施例３０９ｍ３
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間撹拌した。ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ３０９ ０．２４７ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９５０μＬで希釈し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1766】

タンパク質濃度：１．１５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．２。

【1767】

実施例３１０ｍ１

【化410】

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【1768】

アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．１７２ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．３０ｍＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）３０ｍｇ／ＰＢＳ（３．０ｍＬ）（ｃ＝１０．０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ３００μＬに溶かした中間体Ｆ３１０ １．０８ｍｇ（０．００１ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、混合物を、ＰＤ−１０カラムを用いて再緩衝させてｐＨ８とした。合わせた溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌した。

【1769】

ＰＤ−１０カラムとＰＢＳ緩衝液を用い、混合物を再緩衝させてｐＨ７．２とし、溶出液をＰＢＳで希釈して総体積１４ｍＬとした。混合物を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈し、再度濃縮した。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1770】

タンパク質濃度：１３．０４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．０。

【1771】

実施例３１０ｍ３
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間撹拌した。ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ３１０ ０．２５３ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９５０μＬで希釈し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1772】

タンパク質濃度：１．８４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．４。

【1773】

実施例３１４ｍ１

【化411】

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【1774】

アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間撹拌した。ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ３１４ ０．２０９ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、混合物を事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９５０μＬで希釈し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1775】

タンパク質濃度：１．４２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．０。

【1776】

実施例３１４ｍ３
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３） ５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間撹拌した。ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ３１４ ０．２０９ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９５０μＬで希釈し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1777】

タンパク質濃度：１．２９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．３。

【1778】

実施例３１７ｍ１

【化412】

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【1779】

アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し．ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ３１７ ０．３０８ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９５０μＬで希釈し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1780】

タンパク質濃度：１．５９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．５。

【1781】

実施例３１７ｍ３
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇ／ＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３０分間撹拌した。ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ３１７ ０．３０８ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、混合物を事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９５０μＬで希釈し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1782】

タンパク質濃度：１．６１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．７。

【1783】

実施例３１８ｍ１

【化413】

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【1784】

アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間撹拌した。ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ３１８ ０．２０６ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、混合物を事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９５０μＬで希釈し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1785】

タンパク質濃度：１．３９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．２。

【1786】

実施例３１８ｍ３
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間撹拌した。ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ３１８ ０．２０６ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、混合物を事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９５０μＬで希釈し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1787】

タンパク質濃度：１．４６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．０。

【1788】

実施例３１９ｍ１

【化414】

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【1789】

アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．１４３ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．２５ｍＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）２５ｍｇ／ＰＢＳ（２．５ｍＬ）（ｃ＝１０．０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ２５０μＬに溶かした中間体Ｆ３１９ ０．９２３ｍｇ（０．０００８３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、混合物をＰＢＳ緩衝液２ｍＬで希釈した。

【1790】

混合物をＰＤ−１０カラムで精製し、溶出液をＰＢＳで希釈して総体積１４ｍＬとした。次に、混合物を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液で再希釈し、再度濃縮した。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1791】

タンパク質濃度：１２．７９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．９。

【1792】

実施例３２０ｍ１

【化415】

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【1793】

ここでは、ｐＨ７．２の抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）５ｍｇ／ＰＢＳ（３７４μＬ）（ｃ＝１３．３６ｍｇ／ｍＬ）を、中間体Ｆ３２０とのカップリングに用いた。ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇ存在下での抗体の還元時間は３０分であった。Ｆ３２０ ０．２４５ｍｇ（０．２３μｍｏｌ）／ＤＭＳＯ（１００μＬ）を加えた後、混合物を室温で９０分間撹拌し、次にＳｅｐｈａｄｅｘで精製した。混合物を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳで再希釈した。

【1794】

タンパク質濃度：１．８４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．８。

【1795】

実施例３２１ｍ１

【化416】

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【1796】

ここでは、ｐＨ７．２の抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）５ｍｇ／ＰＢＳ（３７４μＬ）（ｃ＝１３．３６ｍｇ／ｍＬ）を、中間体Ｆ３２１とのカップリングに用いた。ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇ存在下での抗体の還元時間は３０分であった。Ｆ３２１ ０．２６２ｍｇ（０．２３μｍｏｌ）／ＤＭＳＯ（１００μＬ）を加えた後、混合物を室温で９０分間撹拌し、次にＳｅｐｈａｄｅｘで精製した。混合物を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳで再希釈した。

【1797】

タンパク質濃度：１．９３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．９。

【1798】

実施例３２２ｍ１

【化417】

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【1799】

ここでは、ｐＨ７．２の抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）５ｍｇ／ＰＢＳ（３７４μＬ）（ｃ＝１３．３６ｍｇ／ｍＬ）を、中間体Ｆ３２２とのカップリングに用いた。ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇ存在下での抗体の還元時間は３０分であった。Ｆ３２２ ０．２６２ｍｇ（０．２３μｍｏｌ）／ＤＭＳＯ（１００μＬ）を加えた後、混合物を室温で９０分間撹拌し、次にＳｅｐｈａｄｅｘで精製した。混合物を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳで再希釈した。

【1800】

タンパク質濃度：１．８８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．８。

【1801】

実施例３２３ｍ１

【化418】

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【1802】

アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間撹拌した。ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ３２３ ０．３２８ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、混合物をＰＢＳ緩衝液１９５０μＬで希釈し、ＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製した。混合物を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液で再希釈した。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1803】

タンパク質濃度：２．０３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．９。

【1804】

実施例３２３ｍ３
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間撹拌した。ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ３２３ ０．３２８ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、混合物をＰＢＳ緩衝液１９５０μＬで希釈し、ＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製した．混合物を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液で再希釈した。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1805】

タンパク質濃度：２．０６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．２。

【1806】

実施例３２４ｍ１

【化419】

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【1807】

アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ａ（ＴＰＰ−５９６９）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間撹拌した。ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ３２４ ０．２５６ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、混合物を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９５０μＬで希釈し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1808】

タンパク質濃度：１．４８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．１。

【1809】

実施例３２４ｍ３
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）５ｍｇ／ＰＢＳ（４５０μＬ）（ｃ＝１１．１１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間撹拌した。ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ３２４ ０．２５６ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、混合物を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１９５０μＬで希釈し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。これらの条件下では、ＡＤＣの一部が閉環型でも存在し得る。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1810】

タンパク質濃度：１．４２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．４。

【1811】

実施例３２５ｍ３

【化420】

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【1812】

アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）５ｍｇ／ＰＢＳ（０．４００ｍＬ）（ｃ＝１２．５ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ３２５ ０．２２ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌した後、混合物をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で２．５ｍＬとし、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離し、アルゴン下に室温で終夜撹拌した。溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1813】

タンパク質濃度：１．８７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．１。

【1814】

実施例３２６ｍ３

【化421】

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【1815】

アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（５０μＬ）中溶液を、抗ＣＤ１２３ＡＫ_１Ｃ（ＴＰＰ−６０１３）５ｍｇ／ＰＢＳ（０．４００ｍＬ）（ｃ＝１２．５ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｆ３２６ ０．２２ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をアルゴン下に室温で終夜撹拌し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で２．５ｍＬとし、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で平衡としておいたＰＤ−１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に乗せた。混合物を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチを次のように特性決定した。

【1816】

タンパク質濃度：１．３３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：６．０。

【1817】

Ｃ：生物学的効力の評価
本発明による化合物の生理活性を、下記の評価で示すことができる。

【1818】

Ｃ−１ａ：ＣＤ１２３に対するＡＤＣの細胞毒性効果の測定
抗ＣＤ１２３ ＡＤＣおよび相当する代謝物の細胞毒性効果の分析を、各種細胞株を用いて行った。

【1819】

ＮＣＩ−Ｈ２９２：ヒト粘膜表皮肺癌細胞、ＡＴＣＣ−ＣＲＬ−１８４８、標準培地：ＲＰＭＩ １６４０（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ；＃ＦＧ１２１５、安定化グルタミン）＋１０％ＦＣＳ（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ；＃Ｓ０４１５）。

【1820】

ＭＯＬＭ−１３：ヒト急性単球性白血病細胞（ＡＭＬ−Ｍ５ａ）、ＤＳＭＺ、Ｎｏ．ＡＣＣ５５４、標準培地：ＲＰＭＩ １６４０（Ｇｉｂｃｏ；＃２１８７５−０５９、安定化Ｌ−グルタミン）＋２０％熱失活ＦＣＳ（Ｇｉｂｃｏ、Ｎｏ．１０５００−０６４）；ＣＤ１２３−陽性。

【1821】

ＴＨＰ−１：ヒト単球性白血病細胞、ＡＴＣＣ番号ＴＩＢ−２０２、標準培地：ＲＰＭＩ １６４０（Ｇｉｂｃｏ；＃２１８７５−−０５９、安定化Ｌ−グルタミン）＋１０％熱失活ＦＣＳ（Ｇｉｂｃｏ、Ｎｏ．１０５００−０６４）＋グルコース２．５ｇ（２０％グルコース溶液、Ｇｉｂｃｏ、Ｎｏ．１９００２）；ＣＤ１２３−陽性。

【1822】

ＫＧ−１：骨髄から得たヒト急性骨髄性白血病細胞、ＤＳＭＺ、Ｎｏ．ＡＣＣ１４、標準培地：ＲＰＭＩ １６４０（Ｇｉｂｃｏ；＃２１８７５−０５９、安定化Ｌ−グルタミン）＋１０％熱失活ＦＣＳ（Ｇｉｂｃｏ、Ｎｏ．１０５００−０６４）＋グルコース２．５ｇ（２０％グルコース溶液、Ｇｉｂｃｏ、Ｎｏ．１９００２）；ＣＤ１２３−陽性。

【1823】

対象の細胞株についてＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）またはｔｈｅ Ｌｅｉｂｎｉｚ−Ｉｎｓｔｉｔｕｔ ＤＳＭＺ−Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に記載の標準的方法によって、細胞を培養した。

【1824】

ＭＴＴアッセイ
Ｃ−１下に挙げた増殖培地を用いて、標準的な方法に従って、細胞を培養した。本試験は、ＡｃｃｕｔａｓｅのＰＢＳ中溶液（ＢｉｏｃｈｒｏｍＡＧ＃Ｌ２１４３）による細胞の分離、ペレット化、培地での再懸濁、カウンティングおよび白色底の９６ウェル培養プレート（Ｃｏｓｔａｒ＃３６１０）への細胞播種（ＮＣＩ Ｈ２９２：総体積１００μＬ中２５００細胞／ウェル、ＭＯＬＭ−１３：２０００細胞／ウェル；ＴＨＰ−１：８０００細胞／ウェル；ＫＧ−１：５０００細胞／ウェル）によって行う。次に、細胞を、インキュベータにおいて３７℃および５％二酸化炭素でインキュベートした。４８時間後、培地を交換した。次に、濃度１０^−５Ｍから１０^−１３Ｍでの培地１０μＬ中の抗体薬物複合体または代謝物をピペットで細胞に加え（三連で）、アッセイ液をインキュベータにおいて３７℃および５％二酸化炭素でインキュベートした。９６時間後、ＭＴＴアッセイ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ， Ｖｉｒｇｉｎｉａ， ＵＳＡ、カタログ番号３０−１０１０Ｋ）を用いて細胞増殖を検出した。このために、ＭＴＴ試薬を細胞とともに４時間インキュベートし、次に界面活性剤を加えることで、細胞を終夜溶解させた。生成した色素を、５７０ｎｍで検出した（Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ１０００ｐｒｏ， Ｔｅｃａｎ）。測定データを用いて、ＤＲＣ（用量応答曲線）を使用して増殖阻害のＩＣ_５０を計算した。試験物質で処理しなかったが、それ以外は同様に処理した細胞の増殖を、１００％数値と定義した。

【1825】

下記の表１に、本アッセイからの各種抗ＣＤ１２３抗体についての代表的実施例のＩＣ_５０値を挙げてある。

【1826】

表１：

【表6】

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【1827】

報告の活性データは、本実験セクションに記載の実施例に関するものであり、薬物／ｍＡＢ比が示されている。それらの値は、異なる薬物／ｍＡＢ比に関して逸脱している可能性がある。ＩＣ_５０値は、いくつかの独立の実験または個々の値の平均である。抗ＣＤ１２３抗体薬物複合体の作用は、個々のリンカーおよび担毒体を含む個々のアイソタイプ対照に関して選択的であった。

【1828】

Ｃ−１ｂ：選択された実施例によるキネシンスピンドルタンパク質ＫＳＰ／Ｅｇ５の阻害の測定
ヒトキネシンスピンドルタンパク質ＫＳＰ／Ｅｇ５（ｔｅｂｕ−ｂｉｏ／Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ Ｉｎｃ, Ｎｏ．０２７ＥＧ０１−ＸＬ）のモータードメインを、１５ｍＭ ＰＩＰＥＳ、ｐＨ６．８（５ｍＭ ＭｇＣｌ_２および１０ｍＭ ＤＴＴ、Ｓｉｇｍａ）中室温で５分間、５０μｇ／ｍＬタキソール（Ｓｉｇｍａ Ｎｏ．Ｔ７１９１−５ＭＧ）で安定化した微小管（ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｉ）（ウシまたはブタ、ｔｅｂｕ−ｂｉｏ／Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ Ｉｎｃ）とともに濃度１０ｎＭでインキュベートした。調製したばかりの混合物を３８４ＭＴＰ（Ｇｒｅｉｎｅｒ ｂｉｏ−ｏｎｅ ＲＦＦ ７８１０９６）に小分けした。濃度１．０×１０^−６Ｍから１．０×１０^−１３Ｍの調べる阻害剤およびＡＴＰ（最終濃度５００μＭ、Ｓｉｇｍａ）を加えた。インキュベーションは室温で２時間であった。マラカイトグリーン（Ｂｉｏｍｏｌ）を用いて形成された無機ホスフェートを検出することで、ＡＴＰａｓｅ活性を検出した。試薬を加えた後、アッセイ液を室温で５０分間インキュベートしてから、波長６２０ｎｍでの吸収を検出した。使用した陽性対照は、モナストロール（Ｓｉｇｍａ、Ｍ８５１５−１ｍｇ）およびイスピネシブ（ＡｄｏｏＱ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ａ１０４８６）であった。用量−活性曲線の個々のデータは、８倍測定である。ＩＣ_５０値は、二つの独立の実験の平均である。１００％対照は、阻害剤で処理されなかったサンプルであった。

【1829】

下記の表２に、記載のアッセイおよび相当する細胞毒性データからの代表的実施例のＩＣ_５０値を挙げてある（ＭＴＴアッセイ）。

【1830】

表２

【表7】

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【1831】

報告された活性データは、本実験セクションに記載の実施例に関するものである。

【1832】

Ｃ−２ａ：内在化アッセイ
内在化は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を介した抗原発現性癌細胞における細胞毒性ペイロードの特異的かつ効率的提供を可能とする重要なプロセスである。このプロセスは、ｐＨ感受性蛍光体で標識した特異的ＣＤ１２３抗体およびアイソタイプ対照抗体の蛍光標識を介してモニタリングされる。最初に、蛍光色素を抗体のリジンに結合させた。結合は、ｐＨ８．３の２倍モル過剰のＣｙｐＨｅｒ ５ＥモノＮＨＳエステル（バッチ３５７３９２, ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて行った。カップリング後、反応混合物をゲルクロマトグラフィー（Ｚｅｂａ Ｓｐｉｎ Ｄｅｓａｌｔｉｎｇ Ｃｏｌｕｍｎｓ、４０Ｋ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｎｏ．８７７６８；溶離緩衝液：ダルベッコＰＢＳ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｎｏ．Ｄ８５３７）によって精製して、過剰の色素を除去し、ｐＨを調節した。得られたタンパク質溶液を、ＶＩＶＡＳＰＩＮ５００カラム（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ｓｔｅｄｉｍ ｂｉｏｔｅｃ ＶＳ０１３１）を用いて濃縮した。抗体の色素負荷量を、分光光度分析（ＮａｎｏＤｒｏｐ）、次に、次の式：Ｄ：Ｐ＝Ａ_ｄｙｅε_{ｐｒｏｔｅｉｎ}：（Ａ_２８０−０．１６Ａ_ｄｙｅ）ε_ｄｙｅを用いる計算によって求めた。ここで調べたＣＤ１２３抗体およびアイソタイプ対照の色素負荷量は、同等の次数のものであった。細胞結合アッセイにおいて、前記結合が抗体のアフィニティにおける変化をもたらさないことが確認された。調べる抗原は造血懸濁細胞によって発現されることから、標識ＣＤ１２３抗体の内在化を、ＦＡＣＳに基づく内在化アッセイで調べた。このために、レポーターの異なる発現レベルを有する細胞株を選択し、調べた。細胞（５×１０^４／ウェル）を、総体積１００μＬの９６−ＭＴＰ（Ｇｒｅｉｎｅｒ ｂｉｏ−ｏｎｅ、ＣＥＬＬＳＴＡＲ、６５０１８０、Ｕ字底）に播いた。調べる抗ＣＤ１２３抗体を最終濃度１０μｇ／ｍＬで加えた後、細胞バッチを、各種期間にわたり３７℃でインキュベートした（三連で１時間、２時間、６時間）。同じ処理プロトコールを、標識アイソタイプ対照（陰性対照）にも適用した。並列で、同じ試験バッチを４℃で処理した（陰性対照）。次に、Ｇｕａｖａフローサイトメーター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて、ＦＡＣＳ分析を行った。ｇｕａｖａＳｏｆｔ ２．６ソフトウェア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いる蛍光強度の測定を介して、動態評価を行った。抗ＣＤ１２３抗体の標的介在特異的内在化が各種癌細胞株（ＭＯＬＭ−１３、ＴＨＰ−１、ＫＧ−１）で認められたが、アイソタイプ対照および４℃バッチは内在化を全く示さなかった。

【1833】

Ｃ−２ｂ：リソソームでの内在化ＣＤ１２３抗体の共局在化の測定
選択されるリンカーのために、抗体薬物複合体の有毒活性化合物がリソソームで放出される。従って、このオルガネラへの抗体の輸送が必須である。リソソームに特異的なマーカータンパク質（例えば、表面タンパク質または小ＧＴＰａｓｅｎ）と抗体との共局在化により、好適なプロファイルを有する抗体を識別することができる。このためには、最初に、培地１００μＬ中のＣＤ１２３−陽性細胞（５×１０^４／ウェル）を、９６−ＭＴＰ（Ｇｒｅｉｎｅｒ ｂｉｏ−ｏｎｅ、ＣＥＬＬＳＴＡＲ、６５０１８０、Ｕ字底）に播いた。ＣｙｐＨｅｒ５Ｅ標識抗ＣＤ１２３抗体（最終濃度２０μｇ／ｍＬ）を加えた後、バッチを二連で３７℃にて６時間インキュベートした。各場合、インキュベーション時間終了の３０分前に、リソソーム特異的生存色素をサンプルに加えた。ＣｙｔｏＰａｉｎｔｅｒ ＬｙｓｏＧｒｅｅｎ指示試薬（最終濃度１：２０００；ａｂｃａｍ、ａｂ１７６８２６）を用いてリソソーム（ｌｙｓｏｍｅｓ）を染色した。インキュベーション後、２００μＬ氷冷ＦＡＣＳ緩衝液（ＤＵＬＢＥＣＣＯのＰＢＳ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｎｏ．Ｄ８５３７＋３％ＦＢＳ熱失活ＦＢＳ、Ｇｉｂｃｏ、Ｎｏ．１０５００−０６４）をバッチにピペットで加え、細胞懸濁液を４００×ｇおよび４℃で５分間遠心した。次に、ペレットを氷冷ＦＡＣＳ緩衝液３００μＬに再懸濁させ、再度遠心した（４分、４００×ｇ、４℃）。遠心後、上清を廃棄し、ペレットを氷冷ＦＡＣＳ緩衝液３０μＬに取った。このようにして調製したサンプルについて、直ちにＦＡＣＳ／画像分析（ＦｌｏｗＳｉｇｈｔ ａｍｎｉｓ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を行った。特異的共局在化ソフトウェアＩＤＥＡＳ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｖ６．１を用いて、共局在化を評価した。表３に、調べた抗ＣＤ１２３抗体についての本アッセイからのデータをまとめてある。

【1834】

表３

【表8】

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【1835】

Ｃ−３：細胞透過性を求めるためのイン・ビトロ試験
Ｃａｃｏ−２細胞を用いるフラックスアッセイでのイン・ビトロ試験によって、基質の細胞透過性を調べることができる［Ｍ． Ｄ． Ｔｒｏｕｔｍａｎ ａｎｄ Ｄ． Ｒ． Ｔｈａｋｋｅｒ, Ｐｈａｒｍ． Ｒｅｓ． ２０ （８）, １２１０−１２２４（２００３）］。これに関して、２４ウェルフィルタープレート上で、細胞１５から１６日間培養した。透過を求めるため、個々の試験物質を、ＨＥＰＥＳ緩衝液溶液で、頂部で（ａｐｉｃａｌｌｙ）（Ａ）または基底部で（ｂａｓａｌｌｙ）（Ｂ）細胞に付与し、２時間インキュベートした。０時間後および２時間後に、シスおよびトランスコンパートメントからサンプルを取った。それらのサンプルを、逆相カラムを用いるＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ １２００、Ｂｏｅｂｌｉｎｇｅｎ, Ｇｅｒｍａｎｙ）によって分離した。ＨＰＬＣシステムを、Ｔｕｒｂｏ Ｉｏｎ Ｓｐｒａｙ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅを介して三連四重極質量分析計ＡＰＩ４０００（ＡＢ ＳＣＩＥＸ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧＭＢＨ, Ｄａｒｍｓｔａｄｔ, Ｇｅｒｍａｎｙ）に連結した。Ｓｃｈｗａｂらが公開した式を用いて計算されたＰ_ａｐｐ値に基づいて透過性を評価した［Ｄ． Ｓｃｈｗａｂ ｅｔ ａｌ．, Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ４６, １７１６−１７２５（２００３）］。Ｐ_ａｐｐ（Ｂ−Ａ）／Ｐ_ａｐｐ（Ａ−Ｂ）の比（排出比）が＞２または＜０．５であった場合に、物質は能動的に輸送されると分類された。

【1836】

細胞内で放出される担毒体について非常に重要なものは、ＢからＡへの透過性［Ｐ_ａｐｐ（Ｂ−Ａ）］およびＰ_ａｐｐ（Ｂ−Ａ）：Ｐ_ａｐｐ（Ａ−Ｂ）の比（排出比）であり、この浸透率が低いほど、Ｃａｃｏ−２細胞の単層を通る物質の能動輸送および受動輸送が遅くなる。さらに、排出比が能動輸送を示さない場合、その物質は、細胞内放出後に、細胞内でより長く留まることができる。従って、生化学的標的（この場合、キネシンスピンドルタンパク質、ＫＳＰ／Ｅｇ５）との相互作用に使える時間も長くなる。

【1837】

下記の表３には、このアッセイからの代表的実施例についての浸透率データを示してある。

【1838】

表４

【表9】

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【1839】

Ｃ−４：Ｐ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）についての基質特性を求めるためのイン・ビトロ試験
多くの腫瘍細胞が、薬物のための輸送タンパク質を発現し、これは非常に多くの場合、細胞増殖抑制剤に対する抵抗性の発達を伴う。従って、そのような輸送タンパク質、例えばＰ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）またはＢＣＲＰの基質ではない物質は、例えば、改善された活性プロファイルを示し得ると考えられる。

【1840】

Ｐ−ｇｐ（ＡＢＣＢ１）用の物質の基質特性を、Ｐ−ｇｐを過剰発現するＬＬＣ−ＰＫ１細胞（Ｌ−ＭＤＲ１細胞）を用いるフラックスアッセイによって求めた［Ａ．Ｈ． Ｓｃｈｉｎｋｅｌ ｅｔ ａｌ．, Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． ９６, １６９８−１７０５ （１９９５）］。このために、ＬＬＣ−ＰＫ１細胞またはＬ−ＭＤＲ１細胞を、３から４日間、９６ウェルフィルタープレートで培養した。透過性を測定するため、個々の試験物質を、単独でまたは阻害剤（例えば、イベルメクチンまたはベラパミル）の存在下に、ＨＥＰＥＳ緩衝液溶液で、頂部で（ａｐｉｃａｌｌｙ）（Ａ）または基底部で（ｂａｓａｌｌｙ）（Ｂ）細胞に付与し、２時間インキュベートした。０時間後および２時間後に、シスおよびトランスコンパートメントからサンプルを取った。それらのサンプルを、逆相カラムを用いるＨＰＬＣによって分離した。ＨＰＬＣシステムを、Ｔｕｒｂｏ Ｉｏｎ Ｓｐｒａｙ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅを介して三連四重極質量分析計ＡＰＩ３０００（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ａｐｐｌｅｒａ, Ｄａｒｍｓｔａｄｔ, Ｇｅｒｍａｎｙ）に連結した。Ｓｃｈｗａｂらが公開した式を用いて計算されたＰ_ａｐｐ値に基づいて透過性を評価した［Ｄ． Ｓｃｈｗａｂ ｅｔ ａｌ．, Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ４６, １７１６−１７２５（２００３）］。Ｐ_ａｐｐ（Ｂ−Ａ）／Ｐ_ａｐｐ（Ａ−Ｂ）の排出比が＞２であった場合に、物質はＰ−ｇｐ基質であると分類された。

【1841】

Ｐ−ｇｐ基質特性の評価のためのさらなる基準として、Ｌ−ＭＤＲ１細胞およびＬＬＣ−ＰＫ１細胞における排出比または阻害剤存在下もしくは非存在下での排出比を比較することができる。これらの値が２より大きい係数だけ異なる場合、対象の物質はＰ−ｇｐ基質である。

【1842】

Ｃ−５：薬物動態
Ｃ５ａ：イン・ビトロでの内在化後のＡＤＣ代謝物の確認
方法の説明：
免疫複合体を用いる内在化試験を行って、細胞内的に形成された代謝物を分析する。このために、ヒト肺腫瘍細胞ＮＣＩ Ｈ２９２（３×１０^５／ウェル）を６ウェルプレートに播き、終夜インキュベートする（３７℃、５％ＣＯ_２）。その細胞を１０μｇ／ｍＬ（６６ｎＭ）の被験ＡＤＣで処理する。内在化を、３７℃および５％ＣＯ_２で行う。各種時間点で（０、４、２４、４８、７２時間）、さらなる分析用に細胞サンプルと取る。最初に、上清（約５ｍＬ）を回収し、遠心（２分、室温、１０００ｒｐｍ Ｈｅｒａｅｕｓ Ｖａｒｉｏｆｕｇｅ ３．０Ｒ）後に、−８０℃で保存する。細胞をＰＢＳで洗浄し、Ａｃｃｕｔａｓｅを用いて分離し、細胞数を測定する。さらに洗浄した後、所定数の細胞（２×１０^５）を溶解緩衝液（哺乳動物細胞溶解キット（Ｓｉｇｍａ ＭＣＬ１）１００ｍＬで処理し、Ｐｒｏｔｅｉｎ ＬｏＢｉｎｄ管（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆカタログ番号００３０１０８．１１６）中、連続振盪しながら（Ｔｈｅｒｍｏｍｉｘｅｒ、１５分、４℃、６５０ｒｐｍ）インキュベートする。インキュベーション後、溶解物を遠心し（１０分、４℃、１２０００ｇ、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ５４１５Ｒ）、上清を回収する。得られた上清を−８０℃で保存する。そして、全てのサンプルを下記のように分析する。

【1843】

培養上清または細胞溶解物中の化合物の測定を、メタノールまたはアセトニトリルでタンパク質を沈殿させた後に、三連四重極質量分析計（ＭＳ）に連結された高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって行う。

【1844】

培養上清／細胞溶解物５０μＬの後処理のため、沈殿試薬（一般にはアセトニトリル）１５０μＬを加え、混合物を１０秒間振盪する。沈殿試薬は、好適な濃度で（通常は、２０から１００ｎｇ／ｍＬの範囲）内部標準（ＩＳＴＤ）を含んでいる。１６０００ｇで３分間遠心した後、上清をオートサンプラーバイアルに移し、移動相に適した緩衝液５００μＬを加え、再度振盪する。

【1845】

次に、ＡＢ ＳＣＩＥＸ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨからのＨＰＬＣ連結三連四重極質量分析計ＡＰＩ６５００を用いて、その二つのマトリックスサンプルの測定を行う。

【1846】

較正のため、０．５から２０００μｇ／Ｌの濃縮液を血漿サンプルに加えた。検出限界（ＬＯＱ）は約２μｇ／Ｌである。直線範囲は、２から１０００μｇ／Ｌの幅である。

【1847】

腫瘍サンプルの較正のため、０．５から２００μｇ／Ｌの濃縮液を、未処理腫瘍の上清に加える。検出限界は４μｇ／Ｌであった。直線範囲は、４から２００μｇ／Ｌの幅である。

【1848】

妥当性を調べるための品質対照は、５および５０μｇ／Ｌを含んでいる。

【1849】

Ｃ５ｂ：イン・ビボでのＡＤＣ代謝物の確認
３から３０ｍｇ／ｋｇの異なるＡＤＣを静脈投与した後、ＡＤＣおよび生じる代謝物の血漿および腫瘍濃度を測定することができ、クリアランス（ＣＬ）、曲線下面積（ＡＵＣ）および半減期（ｔ_１／２）などの薬物動態パラメータを計算することができる。

【1850】

生じる代謝物の定量分析
メタノールまたはアセトニトリルによるタンパク質の沈殿後に、三連四重極質量分析計（ＭＳ）に連結された高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により、血漿および腫瘍中の化合物の測定を行う。

【1851】

血漿５０μＬの後処理のため、沈殿試薬（一般にアセトニトリル）２５０μＬを加え、混合物を１０秒間振盪する。沈殿試薬は、好適な濃度で（通常は、２０から１００ｎｇ／ｍＬの範囲）内部標準（ＩＳＴＤ）を含む。１６０００ｇで３分間遠心した後、上清をオートサンプラーバイアルに移し、移動相に適した緩衝液５００μＬを加え、再度振盪する。

【1852】

腫瘍の後処理中、後者を３倍量の抽出緩衝液で処理する。その抽出緩衝液は、組織タンパク質抽出試薬（Ｐｉｅｒｃｅ, Ｒｏｃｋｆｏｒｄ, ＩＬ）５０ｍＬ、完全−プロテアーゼ−阻害剤−カクテルのペレット２個（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧＭＢＨ, Ｍａｎｎｈｅｉｍ, Ｇｅｒｍａｎｙ）および最終濃度１ｍＭでフェニルメチルスルホニルフルオリド（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ, ＭＯ）を含む。最大ストローク数でＴｉｓｓｕｅｌｙｓｅｒ ＩＩ（Ｑｉａｇｅｎ）で、サンプルを２０分間２回ホモジナイズする。ホモジネート５０μＬをオートサンプラーバイアルに移し入れ、ＩＳＴＤを含むメタノール１５０μＬを加える。１６０００ｇで３分間遠心後、上清１０μＬに移動相に適した緩衝液１８０μＬを加え、再度振盪する。そして、腫瘍サンプルは測定準備が整った状態である。

【1853】

次に、ＡＢ ＳＣＩＥＸ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨからのＨＰＬＣ連結三連四重極質量分析計ＡＰＩ６５００を用いて、二つのマトリクスサンプルを測定する。

【1854】

較正のため、０．５から２０００μｇ／Ｌの濃縮液を血漿サンプルに加える。検出限界（ＬＯＱ）は約２μｇ／Ｌである。直線範囲は、２から１０００μｇ／Ｌの幅である。

【1855】

腫瘍サンプルの較正のため、０．５から２００μｇ／Ｌの濃縮液を、未処理腫瘍の上清に加える。検出限界は５μｇ／Ｌである。直線範囲は、５から２００μｇ／Ｌの幅である。

【1856】

妥当性を調べるための品質対照は、５および５０μｇ／Ｌを含み、血漿ではさらに５００μｇ／Ｌである。

【1857】

使用した抗体の定量分析
ＡＤＣの抗体部分を、リガンド結合アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて、血漿サンプルおよび腫瘍溶解物中の総ＩｇＧ濃度として測定した。ここでは、サンドイッチＥＬＩＳＡ方式を用いた。このＥＬＩＳＡは、血漿および腫瘍サンプルでの測定に関して適格性判定し、バリデーションしたものであった。ＥＬＩＳＡプレートを、抗ヒトヤギＩｇＧＦｃ抗体でコーティングした。サンプルとともにインキュベーションした後、プレートを洗浄し、サル抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体および西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）の検出器（ｄｅｔｅｃｔｏｒ）複合体とともにインキュベートした。さらなる洗浄段階後、ＨＲＰ基質をＯＰＤに加え、４９０ｎｍでの吸収を介して、発色をモニタリングした。既知ＩｇＧ濃度を有する標準サンプルを、４パラメータ式を用いて適合させた。定量下限（ＬＬＯＱ）および定量上限（ＵＬＯＱ）の範囲内で、未知濃度を内挿によって求めた。

【1858】

Ｃ−６：イン・ビボ効力試験
本発明による複合体の効力を、異種移植モデルを用いてイン・ビボで調べることができた。当業者は、本発明による化合物の効力を調べるために用いることができる先行技術の方法について熟知している（例えば、ＷＯ２００５／０８１７１１；Ｐｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．, Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２００９ Ｍａｒ １５；６９（６）：２３５８−６４参照）。このために、例えば、バインダーの標的分子を発現する腫瘍細胞株を、齧歯類（例えばマウス）に移植した。次に、本発明による複合体、アイソタイプ抗体対照複合体または対照抗体または等張性生理食塩水をインプラント動物に投与した。投与を、１回または複数回行った。数日のインキュベーション時間後、複合体処理動物および対照群（対照複合体）の比較によって、腫瘍の大きさを求めた。複合体処理動物は、相対的に小さい腫瘍サイズを示した。

【1859】

Ｃ−６ａ．マウスでの増殖阻害／実験腫瘍の退行
抗体薬物複合体に対する抗原を発現するヒト腫瘍細胞を、免疫抑制マウス、例えばＮＭＲｉヌードまたはＳＣＩＤマウスの脇腹に皮下接種した。１００から１０００万個の細胞を細胞培養液から分離し、遠心し、培地または培地／Ｍａｔｒｉｇｅｌに再懸濁させた。細胞懸濁液をマウスの皮下に注射した。

【1860】

長い日数内に、腫瘍が成長した。腫瘍サイズ約４０ｍｍ^２で腫瘍が確立されたら、治療を開始した。それより大きい腫瘍に対する効果を調べるため、腫瘍サイズが５０から１００ｍｍ^２でのみ処置を開始することもできる。

【1861】

ＡＤＣによるマウスの処置を、腹腔内（ｉ．ｐ．）経路によって行った。ＡＤＣは５ｍＬ／ｋｇの体積で投与した。

【1862】

処置プロトコールは、抗体複合体の薬物動態によって決まるものであった。標準として、４日に１回での４連続処置があった。迅速な評価のために、単回処置を行うプロトコールを用いることも可能である。しかしながら、治療を続けることも可能であるか、後により遅い段階で、３処置日の第２サイクルを行うことができる。

【1863】

標準として、処置群当たり動物８匹を用いた。活性物質を受けた群に加えて、対照群として、一つの群を、同じプロトコールに従って、緩衝液のみで処理した。

【1864】

実験の経過中、腫瘍面積を、定期的にカリパスを用いて２次元（長さ／幅）で測定した。その腫瘍面積は、長さ×幅として求めた。処置群：対照群の平均腫瘍面積の比較を、Ｔ／Ｃ面積と記述した。

【1865】

処置終了後、全ての実験群を同時に屠殺した場合、腫瘍を摘出し、秤量することができた。処置群：対照群の平均腫瘍重量比は、Ｔ／Ｃ重量と記述した。

【1866】

Ｃ−６ｂ．ヒト腫瘍異種移植モデルでの効力
対照の腫瘍細胞を、雌ＮＭＲＩ−ヌードマウス（Ｊａｎｖｉｅｒ）の脇腹に皮下接種した。腫瘍サイズ約４０ｍｍ^２で、動物を、抗体薬物複合体で静注にて処置した。その処置に続いて、適宜に、腫瘍増殖をさらにモニタリングした。

【1867】

抗ＣＤ１２３抗体薬物複合体による処置によって、対照群およびアイソタイプ薬物複合体と比較して顕著かつ長期の腫瘍増殖阻害が生じた。接種後に計算したアイソタイプ群の最終測定値を用いて当日に腫瘍面積にわたって測定されたＴ／Ｃ値を、表５に示している。

【1868】

表５：

【表10】

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【1869】

抗ＣＤ１２３抗体の実施例
本明細書で詳細に記載されていない限り、実施例は全て、当業者に公知の標準的方法を用いて行った。下記の実施例の分子生物学の通常の方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．, Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ, ２． Ｅｄｉｔｉｏｎ； Ｃｏｌｄ ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ, Ｃｏｌｄ ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ, Ｎ．Ｙ．, １９８９などの標準的実験書に記載の方法に従って行うことができる。

【1870】

表面プラズモン共鳴による抗体の結合アフィニティの測定：
定量結合分析のための表面プラズモン共鳴実験を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉａｃｏｒｅ, Ｉｎｃ．）を用いて行った。ここでは、調べる抗体を、センサーチップ表面にアミン結合した抗ヒトＦｃ抗体（「ヒト抗体捕捉キット」、ＢＲ−１００８−３９、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉａｃｏｒｅ, Ｉｎｃ．）を用いて固定した。１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド（ＮＨＳ）およびエタノールアミンＨＣｌ ｐＨ８．５を用いる製造者説明書に従ってアミンカップリングを行った（「アミンカップリングキット」ＢＲ−１０００−５０、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉａｃｏｒｅ, Ｉｎｃ．）。分析のため、シリーズＳセンサーチップＣＭ５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉａｃｏｒｅ, Ｉｎｃ．）を、移動（ｍｏｂｉｌｅ）緩衝液ＨＢＳ−ＥＰ＋（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ Ｐ２０）とともに用いた。全ての実験段階は２５℃で行った。調べる抗ＣＤ１２３抗体の固定後、１．５６から２００ｎＭの濃度範囲でのＩＬ３Ｒａ（Ａｎａｌｙｔ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の細胞外ドメインの注射を行い、各抗原注射後に、センサー表面をグリシンＨＣｌ ｐＨ２．０で再生した。別の分析物注射の前に、抗体を、各場合で、同一条件下に上記にように固定した。全ての測定に関して、固定化アミン結合抗ヒトＦｃ抗体ノミを含む上流フローセルを参照セルとして用いた。二重参照（参照フローセルシグナルの減算および緩衝液注射）後に、得られたセンサーグラムの評価を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉａｃｏｒｅ, Ｉｎｃ．）を用いる１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデルに基づく全体的適合によって行った。

【1871】

表６ａ：アフィニティ測定に用いた組み換え抗原（ＩＬ３Ｒ３α／ＣＤ１２３）

【表11】

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【1872】

表６ｂ：ＩＬ３Ｒａタンパク質を用いＢｉａｃｏｒｅによって求めた抗ＣＤ１２３抗体の１価Ｋ_Ｄ値（分析物としてＴＰＰ−５５２１）

【表12】

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【1873】

各種抗原発現癌細胞株への抗ＣＤ１２３抗体の結合
抗ＣＤ１２３抗体の結合を、各種ヒト血液細胞株（ＭＯＬＭ−１３、ＴＨＰ−１、ＫＧ−１）を用いてフローサイトメトリーによって調べた。このために、細胞（５×１０^５細胞／ウェル）を、遮光下に氷上で３０から４５分間にわたり、１０μｇ／ｍＬの一次抗体溶液（開始濃度）を含むＦＡＣＳ緩衝液（Ｃａ／Ｍｇを含まないＰＢＳ、３％ＦＣＳ、Ｂｉｏｃｈｒｏｍ）中でインキュベートした。用量活性曲線（１：５希釈）をプロットした。インキュベーション後、氷冷ＦＡＣＳ緩衝液２００μＬをピペットを用いて加え、細胞懸濁液を４℃、４００ｇで４分間遠心した。細胞ペレットを氷冷ＦＡＣＳ緩衝液３００μＬで洗浄し、得られたペレットをＦＡＣＳ緩衝液１００μＬに再懸濁させ、氷上で３０分間にわたり、１：１０希釈で二次抗体（モノクローナル抗κ軽鎖−ＦＩＴＣ抗体、Ｓｉｇｍａ、Ｎｏ． ＳＡＢ４７００６０５）とともに再度インキュベートした。次に、細胞を氷冷ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、細胞濃度０．５×１０^６細胞／ｍＬに調節してから、Ｇｕａｖａフローサイトメーター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いてフローサイトメトリーを行った。ヨウ化プロピジウム（最終濃度１μｇ／ｍＬ）を、生細胞染色に用いた。滴定曲線によって、調べた抗体のＥＣ５０値を求めた（表７）。

【1874】

表７：ＦＡＣＳ分析：各種癌細胞株への抗ＣＤ１２３抗体の結合

【表13】

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【図1-1】

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【図1-2】

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【図1-3】

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【図1-4】

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【図2-1】

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【図2-2】

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【図2-3】

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【図2-4】

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【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]