特許 6768676 多血小板血漿および骨髄穿刺液細胞分離および除去方法および装置

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6768676

(24)【登録日】2020年9月25日

(45)【発行日】2020年10月21日

(54)【発明の名称】多血小板血漿および骨髄穿刺液細胞分離および除去方法および装置

(51)【国際特許分類】

   A61M 1/02 20060101AFI20201012BHJP

【ＦＩ】

   A61M1/02 120

【請求項の数】21

【全頁数】42

(21)【出願番号】特願2017-538941(P2017-538941)

(86)(22)【出願日】2016年1月22日

(65)【公表番号】特表2018-506343(P2018-506343A)

(43)【公表日】2018年3月8日

(86)【国際出願番号】US2016014537

(87)【国際公開番号】WO2016153590

(87)【国際公開日】20160929

【審査請求日】2019年1月10日

(31)【優先権主張番号】15152110.1

(32)【優先日】2015年1月22日

(33)【優先権主張国】EP

(31)【優先権主張番号】62/237,407

(32)【優先日】2015年10月5日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】506115514

【氏名又は名称】ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア

(73)【特許権者】

【識別番号】517253078

【氏名又は名称】ザ ユニバーシティ オブ サウザン カリフォルニア

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】エマーソン，ジェーン エフ．

【審査官】 白土 博之

(56)【参考文献】

【文献】 米国特許出願公開第２０１４／０１１３７９５（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 特開２０００−３４２５５７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１４−５０６３１９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１３−５２２１８６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許出願公開第２０１１／０１６８２９４（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 米国特許出願公開第２０１２／００７８２１４（ＵＳ，Ａ１）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｍ １／０２

Ａ６１Ｊ １／２０

Ｇ０１Ｎ ３３／４８

Ｇ０１Ｎ １／１０

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

重合可能なセパレータ物質を含む捕集管において、全血試料からＰＲＰ画分を分離する方法であって、前記重合可能なセパレータ物質はオリゴマ、光開始剤、および安定剤を含み、全血と共に流動可能であり、第１の平均分子量を有し、ＰＲＰ画分の平均密度と非ＰＲＰ画分の平均密度の間の密度を有し、
前記重合可能なセパレータ物質を含む前記捕集管において、遠心分離プロトコルを使用して、前記全血試料を遠心分離する工程であって、
前記遠心分離プロトコルを使用して遠心分離すると、前記重合可能なセパレータ物質は、前記ＰＲＰ画分と前記非ＰＲＰ画分の間で、前記ＰＲＰ画分中の血小板の実質的な活性化なしで流れ、実質的な活性化は、前記ＰＲＰ画分中の血小板のリストセチンおよびコラーゲンの少なくとも１つに対して凝集する能力に基づき測定可能である工程；
前記セパレータ物質を、ＵＶエネルギーへの曝露により、血小板の実質的な活性化なしで硬化させ、固体バリアを形成させることであって、前記固体バリアの前記重合可能なセパレータ物質は、前記第１の平均分子量よりも大きな第２の平均分子量を有する工程であって、
前記固体バリアは、前記ＵＶエネルギーへの曝露後、前記捕集管に対して、前記ＰＲＰ画分より下、前記非ＰＲＰ画分より上の中間位置で静止し、これにより、前記ＰＲＰ画分の少なくとも９５％の前記捕集管からの除去が可能になる工程；および
前記ＰＲＰ画分の無菌性を維持する閉鎖系プロセスにおいて、前記ＰＲＰ画分および流体ディスペンサーの第１の端と同時に接触するトランスファニードルを用いて前記捕集管から前記流体ディスペンサーに前記ＰＲＰ画分を引き上げる工程であって、前記流体ディスペンサーは前記第１の端とは異なる第２の端を備え、前記第２の端は前記ＰＲＰ画分を分配するように構成される、工程
を包含する方法。

【請求項2】

前記ＰＲＰ画分は前記全血試料中の白血球の１０％以下を含み、前記ＰＲＰ画分中の前記白血球の２５％以下は顆粒球である、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記捕集管中で、前記硬化工程後少なくとも１日に前記ＰＲＰ画分をホモジナイズすることをさらに含み、前記ＰＲＰ画分をホモジナイズすることにより、実質的に均質なＰＲＰ画分が得られ、よって、そこから得られた異なるアリコートは、使用される細胞計数法の１の変動係数内にある血小板数を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記ＰＲＰ画分は、前記全血試料の血小板濃度の少なくとも２００％である血小板濃度を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

前記ＰＲＰ画分は、前記全血試料の血小板濃度の１８０％〜２６０％である血小板濃度を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

前記ＰＲＰ画分は、前記全血試料の血小板濃度の２００％〜２５０％である血小板濃度を有する、請求項５に記載の方法。

【請求項7】

前記セパレータ物質はオリゴマ、光開始剤および安定剤を含み、前記オリゴマは９５ｗｔ％〜１００ｗｔ％の濃度で存在し、前記光開始剤は、５ｗｔ％未満の濃度で存在し、前記安定剤は、０．５ｗｔ％未満の濃度で存在する、請求項１に記載の方法。

【請求項8】

前記捕集管は管キャップを含み、
前記キャップの少なくとも一部を貫通し、前記捕集管中の前記ＰＲＰ画分と接触するような大きさおよび寸法とされたニードルを含む、アダプターを提供する工程をさらに含み；
前記ニードルは流体ディスペンサーに流体結合され；
前記流体ディスペンサーは、前記ニードルが少なくとも部分的に前記捕集管内にある場合、前記捕集管の外側にあり；ならびに
前記流体ディスペンサーは、点眼器として構成され、前記ＰＲＰ画分の無菌の制御された液滴分注を可能にするメカニズムを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項9】

前記流体ディスペンサーは細管および真空バルブを含み、前記ＰＲＰ画分を前記ニードルの第１の端から引き上げ、前記ＰＲＰ画分を前記ニードルの第２の端から放出するように構成される、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

前記メカニズムは少なくとも第１の一方向弁を含む、請求項８に記載の方法。

【請求項11】

前記捕集管は管キャップを含み、前記ＰＲＰ画分を移すのにアダプターを使用する工程をさらに含み、前記アダプターは、
第１の内部セクション、第２の内部セクション、および第１および第２の開端の間に配置されたベース構造を有するハウジング；
前記ベース構造は前記ハウジングの内面に固定して結合される第１のベース部分、および前記ハウジングの内面に移動可能に結合される第２のベース部分を含み；
前記第１のベース部分から前記第１の内部セクションまで延在する第１のニードル部分；
前記第１のベース部分から前記第２の内部セクションまで延在する第２のニードル部分；
前記第２のベース部分から前記第１の内部セクションまで延在する第３のニードル部分；ならびに
前記ハウジングを通って延在し、前記第３のニードル部分に結合されるベント
を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項12】

ハウジング内に配置された第１のニードル、第２のニードル、およびベース構造を含む移行装置であって、
前記ハウジングは第１および第２の開端を有し、前記ベースの両端で第１および第２の内部セクションを含み；
前記第１のニードルは、前記ベース構造の第１の部分に固定され、前記ハウジングの前記第１の内部セクション内に配置された第１の端、および前記ハウジングの前記第２の内部セクション内に配置された第２の端を含み；
前記第２のニードルは、前記ベース構造の第２の部分に結合され、前記ハウジングの前記第１の内部セクション内に配置された第１の端、およびベント構造に結合された第２の端を含み；
前記ベント構造は前記ハウジングの細長いスロットを通って延在し；かつ
前記第２のニードルは前記ベント構造を移動させることにより第１の位置から第２の位置まで移動可能であり、そのため、前記ハウジングの前記第１の開端に対する前記第１の端の位置は調整可能である、移行装置。

【請求項13】

前記第２の端は、前記ベント構造に、ある角度で結合される、請求項１２に記載の移行装置。

【請求項14】

前記ベース構造の前記第２の部分は移動可能であり、前記第２のニードルは、前記ベース構造の前記第２の部分に固定される、請求項１２に記載の移行装置。

【請求項15】

前記ベントは前記ハウジング内に、前記第１および第２の開端の間で完全に配置される、請求項１２に記載の移行装置。

【請求項16】

前記ハウジングの前記第１および第２の開端の少なくとも１つは、膜により被覆される、請求項１２に記載の移行装置。

【請求項17】

第１の内部セクション、第２の内部セクション、第１および第２の開端、ならびに前記第１および第２の開端の間に配置されたベース構造を有するハウジングであって、
前記ベース構造は前記ハウジングの内面に固定して結合される第１のベース部分、および前記ハウジングの前記内面に移動可能に結合される第２のベース部分を含む、ハウジング；
前記第１のベース部分から前記第１の内部セクションまで延在する第１のニードル部分（i）および前記第１のベース部分から前記第２の内部セクションまで延在する第２のニードル部分（ii）を備える第１のニードル；
前記第２のベース部分から前記第１の内部セクションまで延在する第３のニードル部分を備える第２のニードル；および
前記第３のニードル部分に結合され、かつ前記ハウジングの細長いスロットを通って延在するベント
を含む、移行装置。

【請求項18】

前記第３のニードル部分は前記第２のベースから延在する唯一のニードル部分であり、前記第３のニードル部分は前記第２の内部セクションまで延在しない、請求項１７に記載の移行装置。

【請求項19】

第１の内部セクション、第２の内部セクション、第１および第２の開端、ならびに前記第１および第２の開端の間に配置されるベース構造、を有するハウジング；
前記ベース構造から前記第１の内部セクションまで延在する第１のニードル部分（i）および前記ベース構造から前記第２の内部セクションまで延在する第２のニードル部分（ii）を備える第１のニードル；
前記ベース構造から前記第１の内部セクションまで延在する第３のニードル部分を備える第２のニードル；
前記ハウジングに摺動可能に結合されたベント
を含み；
前記ベントは前記第３のニードル部分に流体結合され、かつ前記ベントは前記ハウジングの細長いスロットを通って延在する、
移行装置。

【請求項20】

重合可能なセパレータ物質を含む捕集管において、骨髄穿刺液画分（ＢＭＡＦ）を骨髄穿刺液から分離する方法であって、前記骨髄穿刺液はＸの初期血小板濃度を有し、前記重合可能なセパレータ物質は９５ｗｔ％〜１００ｗｔ％の濃度のオリゴマ、５ｗｔ％未満の濃度の光開始剤、および０．５ｗｔ％未満の濃度の安定剤を含み、前記骨髄穿刺液と共に流動可能であり、第１の平均分子量を有し、ＢＭＡＦ画分の平均密度と非ＢＭＡＦ画分の平均密度の間の密度を有し、
前記重合可能なセパレータ物質を含む前記捕集管において、遠心分離プロトコルを使用して、前記骨髄穿刺液を遠心分離すること；
前記遠心分離プロトコルを使用して遠心分離すると、前記重合可能なセパレータ物質は前記ＢＭＡＦ画分と前記非ＢＭＡＦ画分の間で、流れ；
前記セパレータ物質を、ＵＶエネルギーへの曝露により硬化させることによって、前記第１の平均分子量よりも大きな第２の平均分子量を有する固体バリアを形成すること
を含み；
前記固体バリアは、前記ＵＶエネルギーへの曝露後、前記捕集管に対して、前記ＢＭＡＦ画分より下、前記非ＢＭＡＦ画分より上の中間位置で静止し、これにより、前記ＢＭＡＦ画分の少なくとも９５％の前記捕集管からの除去が可能になり；
前記ＢＭＡＦは少なくとも１．１Ｘの血小板濃度を有し；ならびに
前記ＢＭＡＦ画分の無菌性を維持する閉鎖系プロセスにおいて、前記ＢＭＡＦ画分および流体ディスペンサーの第１の端と同時に接触するトランスファニードルを用いて前記捕集管から前記流体ディスペンサーに前記ＢＭＡＦ画分を引き上げる工程であって、前記流体ディスペンサーは前記第１の端とは異なる第２の端を備え、前記第２の端は前記ＢＭＡＦ画分を分配するように構成される、方法。

【請求項21】

前記骨髄穿刺液はＹの初期生存血小板濃度を有し、前記ＢＭＡＦは少なくとも１．１Ｙの生存血小板濃度を有する、請求項２０に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０１５年１月２２日に出願された欧州特許出願番号１５１５２１１０．１号および２０１５年１０月５日に出願された米国特許仮出願番号６２／２３７４０７号の優先権を主張する。これらのおよび全ての他の外部参考文献は、それぞれ個々の刊行物または特許出願が特定的に、かつ個々に、参照により組み込まれることが示されたのと同じ程度まで参照により本明細書に組み込まれる。組み込まれる参考文献における用語の定義または使用が、本明細書で提供されるその用語の定義と一致しない、または相容れない場合、本明細書で提供されるその用語の定義が適用され、参考文献におけるその用語の定義は適用されない。

【0002】

発明の分野
発明の分野は分離技術である。

【背景技術】

【0003】

背景説明には、本発明を理解するのに有用となり得る情報が含まれる。本明細書で提供される情報のいずれかが、ここで特許請求される発明の先行技術である、またはこれに関連する、あるいは特定的に、または暗に言及されるいずれかの刊行物が先行技術であるということを認めるものではない。

【0004】

多血小板血漿（ＰＲＰ）療法は、骨修復および再生、形成手術、口腔手術適用および目の処置のために使用されてきており、スポーツ外傷、神経損傷、腱炎および変形性関節症の治療におけるその有効性についてますます注目と認識を受けている。ＰＲＰは濃縮された血小板源と考えることができ、これは、損傷部位に送達され、活性化され、迅速な増殖因子放出および骨または軟部組織回復の刺激を可能にする。血小板の初期の意図していない活性化は回避されるべきである。というのも、多くの増殖因子は短い半減期を有し、より大きな有効性は、それらが使用（例えば、注射）時に、または使用直前に活性化される場合に得られるからである。

【0005】

遠心分離法を用いてＰＲＰを調製または分離するのにいくらかの努力が示されてきた。例としては、米国特許第６，５９６，１８０号、６，６１０，００２号、６，８２７，８６３号、６，８９９，８１３号、米国特許出願公開第２００９／０２９４３８３号、および国際特許出願公開第ＷＯ０２／０８１００７号が挙げられる。不運なことに、公知の方法は、高い血小板活性化、ＰＲＰと共にバフィーコートまたはゲルを分取するリスクなしにＰＲＰの全てまたは実質的に全てを除去することはできないこと、またはＰＲＰの均質性を得ることができないことおよび無菌開管処理の必要性を含むいくつかの不利点の少なくとも１つに苦しむ。

【0006】

Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｓｃｉ １０１，９１−９７（２００６）において公開されたＳｕｍｉｄａらによる、“Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｆｒｏｍ Ｗｈｏｌｅ Ｂｌｏｏｄ ｉｎ ａｎ Ａｑｕｅｏｕｓ Ｔｗｏ−Ｐｈａｓｅ Ｓｙｓｔｅｍ Ｗｉｔｈ Ｗａｔｅｒ−Ｓｏｌｕｂｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ”は、従来の遠心分離法を使用した高血小板活性化の問題を認識し、血小板を遠心分離なしで分離する方法を開発した。より特定的には、様々なポリマがクエン酸デキストロースを含む全血と混合され、血液細胞分離および血小板活性化が観察された。不運なことに、Ｓｕｍｉｄａは、ポリマは血小板をより効率的に分離した場合、より多くの血小板が活性化されたことを見出した。反対に、血小板の活性化の減少が達成された場合、血小板収率が不十分となった。加えて、沈降プロトコルのために、血小板は典型的にはＰＲＰ画分中に均一に分布されておらず、よって、定量化が困難である。

【0007】

再生多能性幹細胞を含む骨髄穿刺液もまた、様々な骨および関節状態を治療するのを助けるために使用されている。不運ことに、公知の遠心分離法は所望の細胞（例えば、Ｂ細胞、血小板、Ｔ細胞、単球、造血幹細胞、間葉系間質細胞、内皮前駆細胞、小胚様細胞）の著しい損失を引き起こす。

【0008】

よって、依然として、ＰＲＰおよび骨髄穿刺液画分を調製する改善された方法が必要とされる。

【0009】

さらに、前の分離取り組みでは、明らかに、商業用途のための別の保存容器中に移すために、調製または分離された捕集管からＰＲＰまたは骨髄穿刺液画分（または流体の他の画分）をピペッティングする、または手作業により除去する必要がある。除去工程は１つ以上の望ましくない効果を有する可能性があり、例えば、ＰＲＰまたは他の望ましい画分の全てを分取しないこと、無菌状態を壊すこと、望まれない画分または材料を分取すること、または汚染が挙げられる。

【0010】

よって、当技術分野において、改善された無菌移行装置および方法が依然として必要である。

【発明の概要】

【0011】

発明対象は所望の濃度の機能血小板を有する多血小板血漿（ＰＲＰ）画分が全血試料から分離される装置、システムおよび方法を提供する。発明対象はまた、所望の濃度の機能血小板または他の細胞を有する骨髄穿刺液画分（ＢＭＡＦ）が、骨髄流体の試料から分離される装置、システムおよび方法を提供する。分離は、全血と共に流動可能で、硬化可能で固体バリアを形成する、重合可能なセパレータ物質を使用して達成される。

【0012】

本明細書の説明において、および下記の特許請求の範囲を通して使用されるように、「１つの（ａ、ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」の意味は、文脈で明確に別記されない限り、複数の言及物を含む。また、本明細書の説明において使用されるように、「中」の意味は、文脈で明確に別記されない限り、「中」および「上」を含む。

【0013】

本明細書で用いる場合、ＰＲＰ画分は、全血試料中少なくとも１５０％の血小板濃度、それが得られた全血試料から２０％未満の白血球、およびそれが得られた全血試料から２０％未満の赤血球を含む。血小板、ＷＢＣおよびＲＢＣレベルは、分離前および分離後に、全血球計算（ＣＢＣ）、血液塗抹、または任意の他の商業的に好適な試験により決定することができることが認識されるべきである。

【0014】

本明細書で用いる場合、骨髄穿刺液画分（ＢＭＡＦ）は、遠心分離前の骨髄穿刺液中の生存血小板濃度少なくとも１００％を含む。いくつかの好ましい実施形態では、ＢＭＡＦは、遠心分離前の骨髄穿刺液中の生存血小板濃度の少なくとも１０５％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％またはさらに多くを含むことができる。骨髄穿刺液からの血小板回収は、全血試料からの血小板回収よりもずっと変わりやすい。出願人は、驚いたことに、発明対象の重合可能なセパレータ物質を使用した骨髄穿刺液の遠心分離では、公知のシステムに比べ、より大きな生存血小板濃度、ならびにより少ない細胞損傷または死を有する多血小板画分が得られたことを発見した。骨髄穿刺液の遠心分離は血小板および幹細胞を骨髄試料から分離するので、生存血小板濃度の増加は、より大きな幹細胞分離／捕獲と相関することが予測される。

【0015】

重合可能なセパレータ物質は、重合可能なセパレータ物質が全血試料のＰＲＰ画分と非ＰＲＰ画分の間に定着するまで、遠心分離される全血試料を有する捕集管に含めることができる。重合可能なセパレータ物質（硬化前）はより小さなビルディングブロック（例えば、オリゴマ）を含むので、実質的により少ない摩擦およびせん断力が血小板（または他の所望の細胞）とセパレータ物質材料の間に存在し、そのため、血小板の活性化はより低く、かつ細胞死または損傷はより低くなる。

【0016】

重合可能なセパレータ物質がＰＲＰと非ＰＲＰ画分（または流体の他の画分）の間に定着するとすぐに、重合可能なセパレータ物質は硬化され、固体バリアを形成することができ、ここで、固体バリアの重合可能なセパレータ物質は、流動可能な場合の、重合可能なセパレータ物質の平均分子量よりも高い平均分子量を有し、重合は、血小板生存率に対し実質的に悪影響を有さない。固体バリアは好ましくは、捕集管に対して静止しており、かくはんしてもＰＲＰ画分および非ＰＲＰ画分の混合を防止する程度まで不透過性である。これにより、好都合なことに、使用者はＰＲＰ画分をホモジナイズし、これを捕集管から、ＰＲＰおよび非ＰＲＰ画分を再混合せずに完全に除去することができる。

【0017】

本発明はまた、無菌試料を、分離／調製容器（例えば、バキュテナー）から消費者または他の容器（例えば、点眼器）へ、試料の無菌性を維持しながら移すことができる、装置、システム、および方法を提供する。

【0018】

発明対象の１つの態様では、移行装置はハウジングを含み、これはベースおよび少なくとも２つのニードルを封入する。ハウジングは２つの開端を含み（例えば、円筒管）、封入されたベースの両端に２つの内部セクションを含むことができる。

【0019】

２つのニードルのうちの１つは、ベース構造の第１の部分に結合させることができ、よって、ニードルの第１の端が１つの内部セクション内に配置され、ニードルの第２の端が第２の内部セクション内に配置される。いくつかの実施形態では、ニードルの第１の端およびニードルの第２の端は、ベース構造のスルーホールの反対端付近に配置された２つの別々のニードルを構成することができることが認識されるべきである。

【0020】

第２のニードルはベース構造の第２の部分に結合させることができ、よって、これはハウジングに対して移動可能であり、一端は第１の内部セクション内に配置され（第１のニードルの第１の端の隣）、第２の端はベース内に配置される−第２の内部セクション内ではない。好ましくは、第２の端は、ハウジングのスロットから延在するベント構造に対してある角度で結合される。

【0021】

本明細書で提示される移行装置により、好都合なことに、使用者は、流体を１つの管から別のものに無菌性を損なわずに移すことができる。加えてまたはその代わりに、この移行装置により、ＰＲＰ画分（またはＢＭＡＦまたは他の望ましい画分）全体を、管を振盪、回転または別操作なしに、移すことができる。

【0022】

１つ以上のフィルタが、装置中に組み込まれ得る。例えば、１つ以上のフィルタはエアベント、トランスファニードル、または装置の任意の他の部分に結合させることができる。企図されるフィルタは、（ａ）漏れを防止する（例えば、装置が傾けられた場合）、および（ｂ）装置（例えば、ベント、ベントニードル）または調製管に入る空気を滅菌する、の少なくとも１つを実施することができる。いくつかの実施形態では、フィルタは疎水性膜を含むことができる。

【0023】

発明対象の様々な目的、特徴、態様および利点は、好ましい実施形態の下記詳細な説明、ならびに添付図面（これらにおいては、同様の数字は同様の構成要素を表す）からより明らかになるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0024】

【図1】全血の多血小板血漿画分を分離するための、発明対象の方法により使用される捕集管を示す。

【図2】全血試料から多血小板血漿画分を分離する方法の略図である。

【図3】対照、ＬＡＩを有する管、およびＬＡＩＴを有する管の「Ｃｔ」（サイクル閾値）を示す。

【図4】非混合血漿から得られたｃｆＤＮＡ数の非再現性を示す。

【図5】リストセチンに対する対照、ＬＡＩおよびＬＡＩＥの凝集を示す。

【図6】コラーゲンに対する対照、ＬＡＩおよびＬＡＩＥの凝集を示す。

【図7】全血試料から多血小板血漿画分を分離する別の方法の略図である。

【図8】全血試料から多血小板血漿画分を分離するさらに別の方法の略図である。

【図9A-9I】分離された物質を第１の容器から第２の容器に移すために使用される移行装置を示す。

【図10A-10D】分離された物質を１つの容器から別の容器に移すために使用される移行装置の断面図を提供する。

【図11A-11B】発明対象の他の移行装置を示す。

【図12A-12B】別の他の移行装置を示す。

【図13A-C】ハウジングから延在していないベントを有する例示的な移行装置を示す。

【図14】カバーを有する移行装置を示す。

【発明を実施するための形態】

【0025】

下記記載は、発明対象の多くの実施形態例を提供する。各実施形態は発明要素の単一の組み合わせを表すが、発明対象は、開示された要素の全ての可能な組み合わせを含むと考えられる。よって、１つの実施形態が要素Ａ、Ｂ、およびＣを含み、ならびに第２の実施形態が要素ＢおよびＤを含む場合、そうすると、発明対象はまた、明確に開示されていなくても、Ａ、Ｂ、Ｃ、またはＤの他の残りの組み合わせを含むと考えられる。

【0026】

開示された技術は、重合可能なセパレータ物質（ＰＳＳ）の存在下での、分離された血小板の実質的な活性化なしでの増加した血小板分離を含む多くの有利な技術効果を提供することが認識されるべきである。加えて、提供される組成物および方法により、使用者は、セパレータ物質の重合時に、捕集管を逆にし、分離したＰＲＰ画分またはＢＭＡＦを、分離した相またはＰＳＳと再混合することなしに、血小板の実質的に均質な分布が得られるまで混合することができる。加えて、提供される方法および装置により、別の保存容器中への配置のために画分が調製または分離された捕集管からこれを除去することなく、ＢＭＡＦ、ＰＲＰまたは流体の他の画分の商業用途が可能になる。

【0027】

発明対象によりＰＲＰ画分を分離する１つの実施形態が概略的に、図１に示される。任意の好適な捕集管が発明対象の方法を実施するために使用することができることが企図される。管は好ましくは、その管腔内で真空を支持するのに好適な剛性材料（例えば、硬質プラスチック、ガラス、など）製であり、望ましい量のＰＲＰまたはＢＭＡＦを分離することができる望ましい全血または骨髄穿刺液の試料を保持するのに十分な体積を有する。例示的な管としては、ＢＤバキュテナー（登録商標）製品が挙げられる。本明細書で記載される好ましい装置および方法は捕集管の使用を含むが、捕集管は、フラスコ、ジャー、ビーカー、瓶またはバイアルなどの他の容器に置き換えることができることが企図される。

【0028】

図１の実施形態では、流動性の／重合可能なセパレータ物質１０５を含む捕集管１００が、滅菌エネルギー源１１０に曝露され、これは滅菌エネルギー１１５（例えば、ガンマ線、ｅ−ビーム放射線、熱）を管１００およびセパレータ物質１０５に適用し、滅菌された分離管および滅菌された（が、依然として流動性で、ＵＶ硬化性の）セパレータ物質１２０が得られる。全血試料１２５を管１００に添加することができ、これにより、試料と滅菌されたセパレータ物質の混合物１３０が形成される。

【0029】

管１００および混合物１３０はその後、混合物１３０のセパレータ物質１４０成分が、全血試料１２５のＰＲＰ画分１４５と非ＰＲＰ画分１３５の間に定着するまで遠心分離することができる。ＰＲＰ画分１４５は好ましくは試料１２５の血小板濃度の少なくとも１５０％である血小板濃度を有し、非ＰＲＰ画分１３５は、好ましくは試料１２５由来のＷＢＣおよびＲＢＣの少なくとも９０％を含む。

【0030】

本明細書の説明は、一般に、ＰＲＰ画分の全血試料からの分離に向けられるが、同じ装置および方法を使用して、骨髄穿刺液から骨髄穿刺液画分を分離することができることが認識されるべきである。捕集管中では、ＢＭＡＦはＰＳＳ上方に位置し、骨髄穿刺液の残りの成分はＰＳＳより下に位置する。

【0031】

重合可能なセパレータ物質１４０は全体として、または部分的に重合可能となり得る。よって、セパレータ物質１４０の好適なエネルギー源１５５（例えば、ＵＶ光源）により発生するエネルギー１５０（例えば、ＵＶエネルギー）への曝露はラジカル重合を開始させ、これにより、セパレータ物質１４０の少なくとも一部が固体の、架橋組成物１６０を形成し、これが、ＰＲＰ画分１４５と非ＰＲＰ画分１３５の間の不透過性バリアとして作用する。いくつかの実施形態では、バリアの最終厚さ（ＵＶ硬化後）はわずか１０ｍｍ、より好ましくはわずか５ｍｍである。

【0032】

重合可能なセパレータ物質（または重合可能なセパレータ物質の重合可能な部分）は、好適なエネルギー源（例えば、ＵＶ光）により誘引されると、１０分以内に重合して、ショア００硬さスケールで少なくとも１の硬度、より好ましくはショアＡ硬さスケールで少なくとも１０の硬度となる、ならびにプローブ、ピペット、デカンティングまたはさらには凍結に関し固体を形成するように配合することができる。形成された硬化固体バリアは、管の管腔の壁に付着することができ、実質的に、または完全にＰＲＰ画分を１つ以上の他の画分から密閉し、よって、ＰＲＰ画分が拡散、かくはん、試料抽出、または他の望ましくない相互作用による汚染から保護される。

【0033】

好適な光源は、５〜１００Ｗ／ｃｍ^２、１０〜７５Ｗ／ｃｍ^２、１５〜５０Ｗ／ｃｍ^２の強度または任意の他の好適な強度（全て光源から１０ｃｍの距離で測定される）を有する光を放出することができる。加えてまたはその代わりに、好適なエネルギー源は、５０〜４００ｎｍ、例えば２００〜２８０ｎｍ（ＵＶＣ）、２８０〜３１５ｎｍ（ＵＶＢ）、３１５〜４００ｎｍ（ＵＶＡ）、または２００〜４００ｎｍの波長で最大ピークを有する光を生成させることができる。加えてまたはその代わりに、好適なエネルギー源は、．１〜１０Ｗ／ｃｍ^２、例えば、．３〜１Ｗ／ｃｍ^２、１．５〜２．５Ｗ／ｃｍ^２、または．５〜３．５Ｗ／ｃｍ^２のピーク放射照度を有する光を放出することができる。加えてまたはその代わりに、好適な光源により生成される光は硬化される表面に、．３〜８Ｊ／ｃｍ^２、例えば、１〜５Ｊ／ｃｍ^２、または１〜２Ｊ／ｃｍ^２の放射エネルギー密度で到達することができる。

【0034】

１つの例示的な好適な光源はＨｅｒａｅｕｓ製の特注のライトボックスであり、これは、３８５ｎｍの波長で最大ピーク、および２．２Ｗ／ｃｍ^２のピーク放射照度を有する光を生成させる。この光源を、２５Ｗの最大光出力の２５％の電力設定で使用した。試験した光硬化型物質のいくらかは、．２５〜１ｍＬの体積を有し、バキュテナー管内に配置され、好適なエネルギー源は、３８０〜３９０ｎｍでエネルギーを放出し、２．２Ｗ／ｃｍ^２のピーク放射照度を有する、発光ダイオードであった。しかしながら、より少ない、またはより大きな体積に対して同様の硬化時間を達成するために、１つ以上の曝露要因（例えば、放射照度、波長、放射エネルギー）を改変することができ、物質成分の濃度を改変することができ（例えば、抗酸化剤濃度、光開始剤濃度）、または異なるエネルギー源を使用することができることが認識されるべきである。

【0035】

セパレータ物質１４０が一部のみ重合可能である場合、重合可能でない部分（例えば、揺変性ゲル成分）は重合可能な部分より下方で定着することができ、そのため、所望のＰＲＰ画分は、ＰＲＰ画分を非ＰＲＰ画分または重合可能でない部分と混合させずに、使用することができ、または捕集管から完全に除去することができることが企図される。重合可能でない部分としては、例えば、既製のゲル（例えば、ＢＤバキュテナー（登録商標）ＳＳＴ（商標）、ＢＤバキュテナー（登録商標）ＰＳＴ（商標）、ゲルセパレータを有するバキュエット（登録商標）採血管、ＰＰＭＡ血清セパレータゲル管、ポリプロピレン血清セパレータゲル管、など）、または任意の他の商業的に好適なゲルを挙げることができる。

【0036】

発明対象のセパレータ物質により、形成された固体バリアのために、使用者は、例えば、捕集管中で、ＰＲＰと非ＰＲＰ画分の間のバリアを取り除くことなく、ＰＲＰ画分を混合するまたは別様にかくはんすることにより、ＢＭＡＦ、ＰＲＰまたは他の画分の実質的な均質性を達成する、および再達成することができることが認識されるべきである。加えて、細胞の破壊なしで、例えば、血小板の実質的な活性化なしで実質的な均質性が達成され得る。加えて、セパレータ物質の少なくとも一部が重合可能で固体を形成する場合、重合可能なセパレータ物質を硬化させることにより、ポリマネットワークを形成させることができ、これにより、ポリマセパレータ物質と同じくらい効率的に、またはこれよりも良好にＰＲＰ画分の分離が維持される。

【0037】

いくつかの企図される重合可能なセパレータ物質は下記を含むことができる：（１）オリゴマ（例えば、それらの組み合わせ（例えば、Ｅｂｅｃｒｙｌ、Ｃｙｔｅｃ））、（２）光開始剤（例えば、Ａｄｄｉｔｏｌ（登録商標）ＢＤＫ、Ａｄｄｉｔｏｌ（登録商標）ＴＰＯ）および（３）安定剤（フェノチアジン）。企図される光硬化型組成物の例としては、とりわけ、ＬＡＩ（例えば、Ｌ１Ａ１およびフェノチアジン）およびＬＡＩＲが挙げられる。本明細書で用いる場合、Ｌ＝オリゴマ（例えば、Ｌ１＝Ａｌｌｎｅｘ製のＥｂｅｃｒｙｌ ２３０、以前はＣｙｔｅｃ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．製、など）；Ａ＝光開始剤（例えば、Ａ１＝Ａｄｄｉｔｏｌ ＢＤＫ）；Ｉ＝安定剤（例えば、フェノチアジン、など）である。ＰＳＳ中に含められ得る成分のより多くの例については、下記表１を参照されたい。

【表1】

【0038】

いくつかの企図される重合可能なセパレータ物質では、光開始剤（例えば、アゾビスイソブチロニトリル、過酸化ベンゾイル、カンファーキノン、ホスフィンオキシド光開始剤、ケトン系光開始剤、ベンゾインエーテル光開始剤）が、１０ｗｔ％未満、５ｗｔ％未満またはさらには２ｗｔ％未満の濃度で存在し、安定剤が、５ｗｔ％未満、２ｗｔ％未満、１ｗｔ％未満またはさらには０．５ｗｔ％未満の濃度で存在する。より特定的な、非限定的例として、セパレータ物質は、９５〜１００％の濃度（例えば、１００ｗｔ％）で存在するオリゴマ、０．８〜１．２％の濃度（例えば、１ｗｔ％）で存在する光開始剤、および０．０１〜０．０５％の濃度（例えば、０．１ｗｔ％）で存在する安定剤を含むことができる。

【0039】

企図される光開始剤としては、とりわけ、Ａｄｄｉｔｏｌ ＢＤＫおよびＡｄｄｉｔｏｌ ＴＰＯが挙げられる。企図される安定剤としては、とりわけ、フェノチアジンが挙げられる。セパレータ物質はまた、とりわけ、セパレータ物質を有する捕集管の放射線滅菌がセパレータ物質の実質的な硬化なしで望まれる場合、抗酸化剤を含むことができる。放射線滅菌は大量処理のためには好ましい可能性があるが、作用機序はフリーラジカル生成に依存し、これは、セパレータ物質の望まれない時期尚早な硬化のために、本質的に問題となる。しかしながら、出願人は驚いたことに、トコフェロールなどのラジカルスカベンジャーが含められた場合、発明対象のいくつかの組成物（例えば、ＬＡＩＥ）は３ｋＧを超える放射線量での放射線滅菌中流動性を維持するが、出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／５７３５９号および欧州出願第１４１９０６８１．８号（参照により本明細書に組み込まれる）でさらに議論されるように、いくつかの他の組成物（例えば、ＬＡＩ）は同じ放射線量下で流動性を維持しないことを見出した。別の観点から見ると、ＬＡＩは、放射線滅菌中およそ３ｋＧの放射線量までは流動性を維持するにすぎないことが見出された。いくつかの好ましい実施形態では、ラジカルスカベンジャーおよび抗酸化剤の少なくとも１つはトコフェロールを含み、組成物中、少なくとも７５ｍＭ、より好ましくは少なくとも１００ｍＭ、さらにいっそう好ましくは少なくとも１３５ｍＭのモル濃度で存在する。トコフェロールのより低い濃度（例えば、約７５ｍＭ未満）は様々な理由のために好ましくない。例えば、より低いトコフェロール濃度を有するセパレータ物質は、より低い放射線量で流動性を維持することができるにすぎず、これでは、ＩＳＯプロトコル下でのコスト効率の良い滅菌が可能とならない。加えて、より低いトコフェロール濃度を有するセパレータ物質は典型的にはより低い光開始剤濃度（例えば、１ｗｔ％未満）を必要とし、これにより、一般に、より長い硬化時間が必要となる。

【0040】

いくつかの企図される抗酸化剤としては、ヒドロキシル含有（ＡＯＨ）抗酸化剤（例えば、ビタミンＥ（α−トコフェロール）、ビタミンＣ（アスコルビン酸）、没食子酸）、およびニトロキシド（ＲＮＯ）抗酸化剤（例えば、ＴＥＭＰＯ（２，２，６，６−テトラメチルピペリジン１−オキシル）、ＴＥＭＰＯＬ（４−ヒドロキシ−ＴＥＭＰＯ）が挙げられる。別の観点から見ると、企図される抗酸化剤としては、とりわけ、トコフェロール、ブチル化ヒドロジトルエン（ｈｙｄｒｏｚｙｔｏｌｕｅｎｅ）（ＢＵＴ）、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、カロテン、ビリルビンおよびアスコルビン酸が挙げられる。

【0041】

例示的な重合可能なセパレータ物質はオリゴマ、光開始剤および安定剤を含み、ここで、光開始剤は、５ｗｔ％未満（例えば、０．１〜５％、０．１〜３％）の濃度で存在し、安定剤は、．５ｗｔ％未満（例えば、０．１〜０．５％、０．１〜０．３％）の濃度で存在する。

【0042】

ＬＡＩ（例えば、Ｌ１、Ａ１およびフェノチアジン）はいくつかのとりわけ好ましい光硬化型組成物を構成し、１．００〜１．０９ｇ／ｃｍ^３の所望の密度範囲を有するように配合することができる。実験を、オリゴマを有する光硬化型組成物を使用して実施したが、モノマ含有組成物もまた、ＰＲＰ調製において使用するには好適であり得ることが企図され、というのも、多くのモノマおよびオリゴマは、同様に高い反応性を有し、多くのモノマおよびオリゴマはＵＶ光の存在下で重合することができるからである。

【0043】

潜在的に好適な光硬化型セパレータ物質の他の例としては、米国特許第７，６７４，３８８号、７，６７３，７５８号、７，７７５，９６２号、７，９７１７３０、７，７８０，８６１号、８，２０６，６３８号、８，２８２，５４０号、８，１５１，９９６、および８，３１８０７７号に記載されるもの、ＬＡＩＥ（例えば、Ｌ１、Ａ１、フェノチアジンおよびトコフェロール）、およびＬＡＩＥＲが挙げられ、ここでＲ＝ゲル化剤（例えば、ＤＢＳ、シリカ、など）、およびＥ＝抗酸化剤およびラジカルスカベンジャーの少なくとも１つ（例えば、ビタミンＥ、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、カロテン、ビリルビン、アスコルビン酸、など）である。ＲおよびＥは一般に光硬化型組成物の必要成分ではないが、各々がいくつかの用途のための光硬化型組成物に有利な特徴を提供することができる。例えば、ゲル化剤は光硬化型組成物の必要成分ではないかもしれないが、この場合、セパレータ物質はまた、揺変性ソフトゲル成分を含み、これは、捕集管中、光硬化型組成物上方にロードされ、よって、使用前には流れが生じない。にもかかわらず、例えば、ソフトゲル成分なしで管内に、またはソフトゲル成分の上面に配置されたシーラントを有することが望ましい場合、揺変性光硬化型組成物を有することが望ましい可能性がある。しかしながら、ゲル化剤濃度の増加は、放射線滅菌中、時期尚早な硬化につながることが見出されていることに注意すべきである。

【0044】

さらに別の例は、下記を含む組成物である：（１）モノマ、およびオリゴマの少なくとも１つ（例えば、その組み合わせ（例えば、Ｅｂｅｃｒｙｌ、Ｃｙｔｅｃ））、（２）光開始剤（例えば、Ａｄｄｉｔｏｌ（登録商標）ＢＤＫ、Ａｄｄｉｔｏｌ（登録商標）ＴＰＯ）および（３）安定剤（フェノチアジン）。任意の商業的に好適な光硬化型組成物を使用することができることが認識されるべきである。好適な光硬化型組成物は、典型的には、ゲルの少なくとも１つ（例えば、ゲル化剤（例えば、ＤＢＳまたはシリカ）が添加される場合）で、重合前には流動性であり（全血と共に）、好適なエネルギー源（例えば、ＵＶ光）に曝露されると固化し得る。これらとしては、とりわけ、ＭＬＡ（例えば、Ｍ１Ｌ１Ａ１）、ＭＬＡＩ（例えば、Ｍ１Ｌ１Ａ１およびフェノチアジン）、ＭＡＩ（例えば、Ｍ１Ａ１およびフェノチアジン）、ＬＡＩ（例えば、Ｌ１Ａ１およびフェノチアジン）、およびＬＭＡ（例えば、Ｌ１Ｍ１Ａ１）を挙げることができる。本明細書で用いる場合、Ｍ＝モノマ（例えば、Ｍ１、これは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製のモノマトリメチロールプロパンプロポキシレートトリアクリレートである、Ｃａｔ．Ｎｏ．４０７５７７）；Ｌ＝オリゴマ（例えば、Ｌ１＝Ａｌｌｎｅｘ製のＥｂｅｃｒｙｌ ２３０、以前はＣｙｔｅｃ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．製）；Ａ＝光開始剤（例えば、Ａ１＝Ａｄｄｉｔｏｌ ＢＤＫ）；Ｉ＝安定剤（例えば、フェノチアジン）。

【0045】

ビタミンＥ活性を有する化合物などのラジカルスカベンジャー（例えば、トコフェロール）は、必要ではないが、熱滅菌を必要とせずに、光硬化型組成物を放射線により硬化なしで（例えば、密度特性を変化させることにより）滅菌させるために含めることができ、全血試料の２つの画分間での沈降を可能にするのに有効な流動性が維持される。熱滅菌が望ましい場合、捕集管およびセパレータ物質を、少なくとも２００セルシウス度、より好ましくは少なくとも２２５セルシウス度、最も好ましくは少なくとも２５０セルシウス度の熱に曝露させることにより達成することができる。

【0046】

いくつかの実施形態では、トコフェロールまたは他の好適な抗酸化剤が含められる場合、セパレータ物質を含む捕集管は、販売前に国際標準化機構（ＩＳＯ）プロトコルを満たすように、滅菌することができる。出願人は驚いたことに、トコフェロールなどのラジカルスカベンジャーが含められた場合、発明対象のいくつかの組成物（例えば、ＬＡＩＥ）は、３ｋＧを超える放射線量での放射線滅菌中流動性を維持するが、いくつかの他の組成物（例えば、ＬＡＩ）は、同じ放射線量下で流動性を維持しないことを見出した。別の観点から見ると、ＬＡＩは、およそ３ｋＧの放射線量までの放射線滅菌中に流動性を維持するにすぎないことが見出された。いくつかの好ましい実施形態では、ラジカルスカベンジャーおよび抗酸化剤の少なくとも１つはトコフェロールを含み、組成物中に少なくとも７５ｍＭ、より好ましくは少なくとも１００ｍＭ、さらにいっそう好ましくは少なくとも１３５ｍＭのモル濃度で存在する。トコフェロールのより低い濃度（例えば、約７５ｍＭ未満）は様々な理由のために好ましくない。例えば、より低いトコフェロール濃度を有するセパレータ物質は、より低い放射線量で流動性を維持することができるにすぎず、これでは、ＩＳＯプロトコル下でのコスト効率の良い滅菌が可能とならない。加えて、より低いトコフェロール濃度を有するセパレータ物質は、典型的にはより低い光開始剤濃度（例えば、１ｗｔ％未満）を必要とし、これにより、一般に、より長い硬化時間が必要となる。

【0047】

例えば、管は、（例えば、コバルト源（例えば、コバルト６０）からの）ガンマ線を使用して、（例えば、７ＭｅＶパルス線形加速器（ＬＩＮＡＣ）電子ビーム源からの）ｅ−ビーム放射線、ガス（例えば、エチレンオキシド）、または約１０〜６０分の期間の５０〜８０セルシウス度の熱、または１００〜２５０セルシウス度またはさらにそれ以上の熱を使用して滅菌することができる（好ましくは、セパレータ物質またはその一部の実質的な重合なしで）。別の観点から見ると、セパレータ物質は、４０％を超える硬化なしで、より好ましくは３０％を超える硬化なしで、放射線、ガス、または熱滅菌を可能にする、かつ、ＵＶによるその後の重合または他の硬化を可能にするのに有効となり得る。例えば、好適なポンプを使用して管の管腔の体積を単に減圧することにより、任意的な真空を導入することができる。

【0048】

全ての好適な滅菌時間が企図され（例えば、１０分未満、５分未満、２分未満、５〜１２０秒、５〜９０秒）、この場合、捕集管（およびセパレータ物質）は、５〜２５ｋＧｙ、より典型的には１０〜２０ｋＧｙの線量でｅ−ビーム滅菌される。全ての好適な滅菌時間が企図され（例えば、１０分未満、５分未満、２分未満、５〜１２０秒、５〜９０秒）、この場合、捕集管（およびセパレータ物質）は５〜２５ｋＧｙ、より典型的には１０〜２０ｋＧｙの線量でγ滅菌される。γ滅菌を用いると、より低い線量送達率を有するより弱い源が化合物を硬化させる可能性が高くなったことが観察されている。ＩＳＯにより必要とされる線量は、とりわけ、滅菌される物体のバイオバーデンに依存する。必要とされる照射時間は、使用される滅菌技術だけでなく、例えば、滅菌される物体のバイオバーデン、および放射線量（ｋＧｙ）に依存する。

【0049】

文脈で反対のことが示されない限り、本明細書で明記される全ての範囲は、それらの終点を含むものとして解釈されるべきであり、制限のない範囲は商業的に実用的な値のみを含むと解釈されるべきである。同様に、全ての値のリストは、文脈により反対のことが示されない限り、中間値を含むものとして考えるべきである。

【0050】

捕集管は滅菌することができ、滅菌されたセパレータ物質を、その後、管に添加することができることも企図される。加えてまたはその代わりに、使用者は、セパレータ物質が管内に予め配置されているのとは対照的に、購入後、１つ以上のセパレータ物質を捕集管に添加することができる。

【0051】

試料（例えば、全血）が発明対象の捕集管に添加される場合、遠心分離により、全血をＰＲＰ画分および非ＰＲＰ画分に分離することができる。セパレータ物質が、ＰＲＰと非ＰＲＰ画分の密度の中間である密度を有する場合、これは、遠心分離中、２つの画分間で移動することができ、よって、画分が互いに単離される。セパレータ物質はその後、好適なエネルギー源により誘引されると、迅速に、重合により硬化され得、２つの画分間に固体バリアが提供される。

【0052】

全血試料の凝固を防止し、フィブリノゲンおよび凝固因子を含む血漿を得るために、任意でセパレータ物質の一部として、抗凝固薬を捕集管に含めることができることが企図される。企図される抗凝固薬としては、クエン酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、クエン酸デキストロース、または任意の他の好適な抗凝固薬が挙げられる。たとえ放射線重合が開始され、実施されても、使用される化学、とりわけアクリル重合は血小板活性化または機能に影響しないし、ＰＲＰ画分に対して実施することができる多くのまたはほとんどの他の試験を妨害しないことは注目すべきである。

【0053】

図２は、重合可能なセパレータ物質（ＰＳＳ）を含む捕集管中で全血試料からＰＲＰ画分を分離する方法２００を示す。任意の好適な量のセパレータ物質を管の管腔に含めることができるが、わずか約１ｍｌまたは２グラムのセパレータ物質を、１０ｍｌ体積の管につき、含めることが好ましい。

【0054】

方法２００は、工程２１０に示されるように、ＰＳＳを含む捕集管において、遠心分離プロトコルを使用して、全血試料を遠心分離する工程を含む。工程２１２に示されるように、例えば、１０分間２４℃および１０００ＲＰＭでの遠心分離を含む、ＰＳＳを試料の２つの画分間で流動させるのに十分である任意の好適な遠心分離プロトコルが企図される。好適な遠心分離プロトコルの他の例は下記を含むことができる：１分〜３０分（両端を含める）の遠心分離時間、５００ＲＰＭ〜５０００ＲＰＭ（両端を含める）にて；または５分〜２０分（両端を含める）の遠心分離時間、７００ＲＰＭ〜３６００ＲＰＭ（両端を含める）にて。当技術分野でよく知られているように、遠心分離条件は、血小板の沈降および沈降速度を決定する。ＰＳＳ上方で血小板の望ましい収率を達成するための適切な適用Ｇ力および時間を決定するには、過度の実験なしに、ＰＨＯＳＩＴＡが可能であろう。よって、望ましい収率の増加または減少は、上記考察を用いると容易に達成することができる。

【0055】

下記表２Ａは、発明対象のＰＳＳを使用して、全血試料からＰＲＰを分離する際に使用される、遠心分離プロトコルのいくつかを示す。ＬＡＩ組成物は１００％Ｌ、１％Ａ、および．１０％Ｉを含んだ。
表２Ａ

【表2】

遠心分離プロトコル

【0056】

下記表２Ｂは、発明対象のＰＳＳを使用して、骨髄穿刺液からＢＭＡＦを分離する際に使用される遠心分離プロトコルのいくつかを示す。
表２Ｂ
試料１（７００ＲＰＭ、１５分）：
スピン前血小板数：１６６×１０＾３／μＬ
スピン後血小板数：２１９×１０＾３／μＬ
増加係数：１．３２
試料２（６００ＲＰＭ、２０分）：
スピン前血小板数：４１×１０＾３／μＬ
スピン後血小板数：５１×１０＾３／μＬ
増加係数：１．２４
試料３（１５００ＲＰＭ、５分）
スピン前血小板数：２３６×１０＾３／μＬ
スピン後血小板数：２６０×１０＾３／μＬ
増加係数：１．１
試料４（７００ＲＰＭ、１０分）
スピン前血小板数：６１×１０＾３／μＬ
スピン後血小板数：６７×１０＾３／μＬ
増加係数：１．０９

【0057】

最も好ましい実施形態では、ＰＳＳは全血および骨髄穿刺液の少なくとも１つと共に流動可能であり、（ａ）工程２１５にしたがい、ＰＲＰ画分の平均密度と非ＰＲＰ画分の平均密度の間、および（ｂ）ＢＭＡＦの平均密度と非ＢＭＡＦ画分の平均密度の間の少なくとも１つである密度を有する。

【0058】

所望の初期密度を達成するために、セパレータ物質の密度は、分子組成のおかげで、または適切なフィラー材料（例えば、シリカ、ラテックス、または他の不活性材料）を含めることにより調整され得ることが企図される。ＰＳＳの密度を調整することは、異なる型の細胞（例えば、血小板、幹細胞、ＲＢＣ、ＷＢＣ）を遠心分離により分離するために望ましい可能性がある。全ての商業的に好適な密度調整剤が企図され、例えば、Ｅｂｅｃｒｙｌ １１３が挙げられる。

【0059】

加えてまたはその代わりに、工程２１８にしたがい、好適なプロトコル下での遠心分離により、ＰＳＳは２つの画分、例えば、ＰＲＰ画分と非ＰＲＰ画分の間で、血小板の実質的な活性化なしで流動することができる。ＰＳＳが異なる流体の試料の分離、または全血試料のＰＲＰおよび非ＰＲＰ画分以外の画分への分離のために使用される場合、ＰＳＳは、分離される第１の画分の平均密度と分離される第２の画分の平均密度の間の密度を有することができることが企図される。

【0060】

本明細書で用いる場合、血小板の実質的な活性化なしでＰＳＳを試料の２つの画分間で流動させるための、第１の遠心分離プロトコルを使用する遠心分離は、血小板が、ＰＳＳが使用されない（例えば、セパレータ物質を有さない）第１の遠心分離プロトコルと、他の点で同一な遠心分離プロトコル中に、血小板により保持されるであろうものの１５％内、より好ましくは１０％内まで機能を保持することを意味する。血小板の実質的な活性化は、とりわけ、ＰＲＰ画分、非ＰＲＰ画分、または両方における血小板の、リストセチンおよびコラーゲンの少なくとも１つに対して凝集する能力に基づき測定可能である。

【0061】

方法２００はまた、血小板の実質的な活性化なしでＰＳＳを硬化させ、画分、例えば、ＰＲＰ画分と非ＰＲＰ画分の間に固体バリアを形成させる工程２２０を含む。セパレータ物質の配合によって、重合の様式またはメカニズムはかなり変動し得ることが企図される。本明細書の議論は主としてＵＶエネルギー重合に向けられているが、全ての公知の重合方法が、本明細書での使用に好適であると考えられる。例えば、企図される重合としては様々なラジカルまたはカチオン重合（例えば、感光性化合物、ラジカル開始剤、などを使用する）、縮合重合、エステル化、アミド形成などが挙げられる。反応基としては、酸性基、最も好ましくはモノおよびジカルボン酸基）、共役ジエン基、芳香族ビニル基、およびアルキル（メト）アクリレートを挙げることができる。重合は好都合なことにセパレータ物質のモノマまたはオリゴマの反応基により完全に支持され得るが、追加の試薬もまた好適であり得、ラジカル開始剤が挙げられる。

【0062】

硬化の工程は、好都合なことに、ＰＲＰ画分と非ＰＲＰ画分（または他の分離される画分）の間に、捕集管に対して静止している固体バリアを形成することができる。別の観点から見ると、管が手作業により振盪された場合、管が遠心分離され、分離される画分が再ホモジナイズされた場合、または分離される画分がピペット、移行装置またはデカンティングを介して除去された場合、管内のその位置から移動しない固体バリアを形成させることができる。加えて、工程２２２に示されるように、固体バリアは、かくはんでの分離される画分の混合を防止する程度まで不透過性とすることができる。工程２２５にしたがい、固体バリアのＰＳＳは、全血と共に流動可能である場合のＰＳＳの平均分子量よりも大きい平均分子量を有する。

【0063】

本明細書で用いる場合、血小板の実質的な活性化なしで、重合可能なセパレータ物質を硬化させることは、血小板が、ＰＳＳが使用されない場合および硬化の工程がない場合の血小板により保持されるであろうものの１５％以内、より好ましくは１０％以内まで機能を保持することを意味する。

【0064】

固体バリアは、好都合なことに、画分を再混合することなく（例えば、ＰＲＰ画分を非ＰＲＰ画分と再混合することなく）、捕集管からＰＲＰまたは他の分離される画分の少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは１００％を除去する工程を可能にする。これは、ＰＲＰ画分をそのまま捕集管から除去することにより（例えば、注ぎ出す、ピペッティングする、などにより）、または生理食塩水または他の流体を管に含め、全ＰＲＰ画分を除去するのを補助することにより達成され得る。加えてまたはその代わりに、これは下記で記載される発明対象の移行装置を使用して達成され得る。

【0065】

方法２００は、硬化工程後、任意で、ＰＲＰまたは他の望ましい、分離される画分をホモジナイズする工程を含むことができ、そのため、そこから得られた異なるアリコートは使用される細胞計数法の１の変動係数内にある血小板数を有する。これは、再現性および均一性を提供するのに非常に有益となり得る。ＰＲＰ画分をホモジナイズすることは、任意の好適な方法を用いて達成することができ、例えば、機械的撹拌、気泡撹拌、管をひっくり返すまたは別様にかくはんする、または広口ピペットを介してトリチュレートすることが挙げられる。

【0066】

血小板回収
美容および健康業界における多くが、血液の試料の２００〜２５０％の血小板濃度を有するＰＲＰが最適であることを見出した。遠心分離中に細胞統合性を維持しながら、精製または濃縮された血小板または他の望ましい成分を得ることもまた望ましい。生存血小板数の増加は、治療的使用のために望ましく、おそらく、他の望ましい細胞に対する増加した数と相関するであろう。

【0067】

全血の画分を回収するために、前に使用された捕集管（例えば、セパレータ物質を有さないパープルトップのＢＤバキュテナー）は、血液を遠心分離し、血清画分上清、中間バフィー層、およびバフィー層真下の赤血球画分を得ることを含む。そのような管および方法は、バフィーコートから白血球を除去せずに、上清を除去するのを非常に困難にし、またはさらには不可能にする。他方、ゲルが使用される場合、結果は、遠心分離プロトコルによって、ＰＲＰまたは血清画分、それから中間ゲル層、それからバフィーコート、および最底部ＲＢＣ画分となる。かさねて、ＰＲＰまたは血清を有するゲルを吸引せずに、ＰＲＰまたは血清画分全体を除去することは、不可能ではないにしても、非常に困難となる。どちらの場合でも、ＰＲＰ画分に血小板の著しい不均等分布が存在する。

【0068】

発明対象のＰＳＳおよび方法は、好都合なことに、様々な濃度（２００〜２５０％の範囲を含む）での血小板回収を可能にし、また、ＰＲＰ上清全体の使用を可能にする。下記表３は、ＬＡＩまたはＬＡＩＲを使用する血小板収率は、少なくとも対照を使用した場合と同じくらい良好であったことを示す。表３はまた、ＬＡＩまたはＬＡＩＲを使用すると、対照を使用した場合と同じ赤血球枯渇が達成され得ることを示す。

【表3】

【0069】

下記表４は、ＬＡＩまたはＬＡＩＥを使用した血小板収率は、少なくとも、対照を使用した場合と同じくらい良好であったことを示す。表４はまた、ＬＡＩまたはＬＡＩＥを使用すると、対照を使用した場合と同じか同様の白血球枯渇が達成され得ることを示す。

【0070】

試験した組成物（ＬＡＩおよびＬＡＩＥ）は、下記から構成される：

【表4】

【0071】

ＬＡＩのマニュアル差は下記の通りであった：８％好中球、８０％リンパ球、１０％単球、２％好酸球；ＬＡＩＥのマニュアル差は下記の通りであった：５％好中球、８９％リンパ球、５％単球、１％好酸球。

【表5】

【0072】

表５は、下記の通りの遠心分離プロトコル下での血小板収率および白血球枯渇を示す：１０分間、２４℃で１０００ＲＰＭ。血小板収率のわずかな増加および同様の白血球／赤血球枯渇が存在した。

【0073】

試験した組成物（ＬＡＩおよびＬＡＩＥ）は、下記から構成される：

【表6】

【0074】

実験をクエン酸ナトリウム管内で実施した。

【表7】

【0075】

均質なＰＲＰ画分の回収
発明対象のＰＳＳは、実質的に均質なＢＭＡＦ、ＰＲＰ、または他の画分の調製を可能にするという追加の利点を提供する。出願人は３つの管の型における無細胞ＤＮＡの回収を比較し、非混合標本から得たアリコートでは様々な結果につながることを決定した。異なる観点から見ると、使用者が血漿を非ゲル管から混合なしで分取した場合、アリコートは非常に変動するであろう。使用者が管から血漿を分取し、これを管の外で混合した場合、結果はより再現性があるものとなり得るが、回収が悪くなる。

【0076】

試験した３つの管の型は下記の通りである：対照（「ゲルなし」）、ＬＡＩフォトゲルを有する管およびＬＡＩＴフォトゲルを有する管、ここで、Ｌ＝オリゴマ、Ａ＝ａｄｄｉｔｏｌ ＢＤＫ光開始剤、Ｉ＝フェノチアジン安定剤、およびＴ＝ｔｅｍｐｏニトロキシド。図３は対照、ＬＡＩを有する管、およびＬＡＩＴを有する管の「Ｃｔ」（サイクル閾値）を示す。対照と比べて、ＬＡＩおよびＬＡＩＴのより低いＣｔは、対照と比べてより良好な回収を示す。図５はまた、ＬＡＩおよびＬＡＩＴを使用した結果は、対照と同様に再現性があることを示す。各管の型に対しＮ＝４。

【0077】

使用したプロトコルは下記の通りである：プールした血液を混合し、ピペットにより、９つの管の各々中にロードした。フォトゲル管にＬＡＩまたはＬＡＩＴのいずれかを予めロードした。全ての管を室温で、１０分間３０００ＲＰＭで遠心分離した。遠心分離後、フォトゲル管を、ライトボックス中で１分間ＵＶ光に曝露した。各管から血漿を引き出し、固化されたバリアを含む管では、全ての血漿を引き出した。ゲルなしの対照管では、いくらかの血漿を残すことが要求された（およそ１００μＬ）細胞層を破壊しないように注意した。血漿を、分子病態ｌａｂに、ＤＮＡ−Ｂｒａｆ分析のために送った。そこでは、４つの管がさらに、それぞれ、３つの試料に分取された。よって、示されたばらつきは、各管からの血漿を３通りに分けるプロセスを含む。

【0078】

ゲルなしのＥＤＴＡ管から得た血漿を、上部層、底部（細胞付近）層、および中央部分で、手作業でサンプリングした。血漿をボルテックスにより混合し、再びサンプリングした（「混合した」）。下記融解曲線は、回収されたｃｆＤＮＡは手作業のサンプリングで変動することを証明する。無細胞ＤＮＡを血小板回収に対する代理マーカーとして使用した。

【0079】

図４で示される実施例では、非混合血漿の底部層から得たアリコートは、中央部分または混合した上部部分から得たアリコートより多くのｃｆＤＮＡを有した（より深いトラフはより大きな回収を示す）。

【0080】

本明細書で記載される方法は、硬化され、固体バリアを形成するＰＳＳの使用を含むので、ＰＲＰ画分は捕集管の内側で混合させることができ、その捕集管内でＰＲＰ画分が得られ、または分離され、これにより、捕集管の外の環境に曝露させずに、捕集管内でのＰＲＰ画分のホモジナイズが可能になる。ＰＳＳにより、使用者は、均質な信頼できる数の血小板を得ることができることが認識されるべきであり、というのも、管の異なる部分から得られる量は、使用される細胞計数法の１の変動係数内とすることができるからである。

【0081】

血小板生存率
上記のように、出願人は、発明対象の方法およびＰＳＳを使用して、同様のまたはさらに改善された血小板回収が達成され得ることを証明することができた。長いポリマを有する固体バリアは、しばしば血小板回収を改善するが、血小板機能を妨害することが、当技術分野で知られている。下記で提供される実験およびデータは、出願人の方法およびＰＳＳは、血小板の生存率を維持しながら、最適な血小板回収を可能にすることを示す。

【0082】

血小板生存率を、Ｃｈｒｏｎｏ−ｌｏｇ血小板凝集計において特定のアゴニストに対する血小板凝集を観察することにより試験した。ＰＲＰを対照管（ＢＤクエン酸ナトリウム管、ゲルなし）、ＬＡＩ管（ＬＡＩが添加されたＢＤクエン酸ナトリウム）、およびＬＡＩＥ管（ＬＡＩＥが添加されたＢＤクエン酸ナトリウム管）中にロードされた全血を遠心分離することにより得た。フォトゲル管を遠心分離後にＵＶ光に曝露し、バリアを固化させた。ＰＲＰを分取し、乏血小板血漿で、Ｃｈｒｏｎｏ−ｌｏｇ標準動作手順により必要とされる血小板濃度まで希釈した。以下は、リストセチンおよびコラーゲンに対する血小板凝集の曲線例である。コラーゲンは強いアゴニストであり、血小板顆粒の、凝集、分泌およびトロンボキサン合成を誘導し、よって、これは血小板生存率に対する包括的な試験となる。

【0083】

図５に示されるように、リストセチンに対する凝集において、対照、ＬＡＩおよびＬＡＩＥの間で有意の差は示されなかった。

【0084】

図６に示されるように、対照、ＬＡＩまたはＬＡＩＥ曲線からの、コラーゲンに対する血小板についての血小板凝集曲線において明らかな差は見られず、これにより、ＬＡＩおよびＬＡＩＥは、血小板機能に実質的に影響しないことが示される。

【0085】

図７は、全血と共に流動可能であり、全血のＰＲＰ画分の平均密度と非ＰＲＰ画分の平均密度の間の密度を有するＰＳＳを含む捕集管において全血試料からＰＲＰ画分を分離する別の方法７００を示す。

【0086】

方法７００は、工程７１０に示されるように、ＰＳＳを含む捕集管において、遠心分離プロトコルを使用して、全血試料を遠心分離する工程を含む。方法２００の遠心分離工程と同様に、工程７１２に示されるように、好適な遠心分離プロトコルを使用する遠心分離により、ＰＳＳはＰＲＰ画分と非ＰＲＰ画分の間で血小板の実質的な活性化なしで流動する。工程７１５に示されるように、実質的な活性化は、ＰＲＰ画分における血小板の、リストセチンおよびコラーゲンの少なくとも１つに対して凝集する能力に基づき測定可能である。

【0087】

方法７００は、工程７２０に示されるように、血小板の実質的な活性化なしでＰＳＳを硬化させ、ＰＲＰ画分と非ＰＲＰ画分の間に固体バリアを形成させる工程をさらに含む。工程７２５にしたがい、固体バリアのＰＳＳは、全血と共に流動可能である場合（例えば、硬化の工程前）のＰＳＳの平均分子量よりも大きい平均分子量を有する。

【0088】

いくつかの好ましい方法では、固体バリアは、ＵＶエネルギーへの曝露後、捕集管に対してＰＲＰ画分より下、非ＰＲＰ画分より上の中間位置で静止しており、工程７２２に示されるように、かくはんしてもＰＲＰ画分および非ＰＲＰ画分の混合を防止する程度まで不透過性である。固体バリアは捕集管からの、ＰＲＰ画分の少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは１００％の除去を可能にする。異なる観点から見ると、方法７００は、工程７３０にしたがい、捕集管から、ＰＲＰ画分の少なくとも９５％を除去する任意的な工程を含む。

【0089】

ＰＲＰ画分は好都合なことに、全血試料由来のわずか１０％の白血球を含むことができる。さらに、またはその代わりに、ＰＲＰ画分中のわずか２５％の白血球が顆粒球であることが企図される。別の観点から見ると、ＷＢＣの著しい低減（例えば、６０％未満、７０％未満、８０％未満またはさらに９０％未満）、および顆粒球の著しい低減（例えば、５０％未満、７０％未満、８０％未満またはさらに９０％未満）が、全血中の同じ試料体積と比べて、ＰＲＰ画分において見られ得る。

【0090】

方法７００はまた、硬化工程後、捕集管においてＰＲＰ画分をホモジナイズすることを含むことができる。ホモジナイズ工程は硬化直後に、硬化１時間以内に、硬化１日以内に、硬化後少なくとも２日に、硬化後少なくとも５日に、またはさらに硬化後少なくとも１ヶ月に実施することができる。ＰＲＰ画分をホモジナイズすることにより、実質的に均質なＰＲＰ画分が得られ、よって、そこから得られた異なるアリコートは、使用される細胞計数法の１の変動係数内にある血小板数を有する。

【0091】

図８は、全血と共に流動可能であり、全血のＰＲＰ画分の平均密度と非ＰＲＰ画分の平均密度の間の密度を有するＰＳＳを含む捕集管において、全血試料からＰＲＰ画分を分離するさらに別の方法８００を示す。

【0092】

ＰＲＰ画分は、これが得られ、分離される全血試料の血小板濃度よりも大きな任意の好適な血小板濃度を有することができることが認識されるべきである。例えば、ＰＲＰ画分は、これが得られる試料の血小板濃度の少なくとも１５０％、少なくとも２００％、少なくとも２５０％またはさらにこれより大きな血小板濃度を含むことができる。異なる観点から見ると、ＰＲＰ画分は、これが得られる試料の血小板濃度の１８０％〜２６０％の血小板濃度または２００％〜２５０％の血小板濃度を含むことができる。

【0093】

方法８００は、工程８１０に示されるように、ＰＳＳを含む捕集管において、第１の遠心分離プロトコル下で全血試料を遠心分離する工程を含む。工程８１２に示されるように、第１のプロトコル下での遠心分離により、ＰＳＳは、ＰＲＰ画分と非ＰＲＰ画分の間で、好ましくは血小板の実質的な活性化なしで流動することができる。

【0094】

方法８００はまた、工程８２０に示されるように、遠心分離後、ＵＶエネルギーに１０分未満の期間の間、捕集管を曝露し、ＰＳＳを重合させ、固体バリアを形成させる工程を含む。工程８２２に示されるように、固体バリアのＰＳＳは、全血試料と共に流動可能である場合のＰＳＳの平均分子量よりも大きい平均分子量を有する。

【0095】

方法８００はさらに、固体バリアの存在下でＰＲＰ画分をホモジナイズし、実質的に均質なＰＲＰ画分を形成させる工程を含み、よって、そこから得られた異なるアリコートは、使用される細胞計数法の１の変動係数内にある血小板数を有する。

【0096】

本明細書で記載される方法により、好都合なことに、使用者は、ＰＳＳを有する捕集管に含まれる試料（例えば、血液）の異なる密度の画分を分離することができる。固体バリアにより、均質性および再現性の両方が可能になり、出願人は、画分がその中で分離される管を決して開く必要のないようにアダプターを提供することにより、さらなる利点が達成され得ることを発見した。

【0097】

ＢＭＡＦまたはＰＲＰ画分が捕集管内で分離されるとすぐに、試料の無菌性を維持しながら、画分を分離／調製管から他の容器に移すことが有利となるであろう。これにより、分離される画分の、例えば、創傷、ひりひりする痛みまたは他の病状の治療のためのＰＲＰ点眼溶液としての家庭での使用が可能になる。

【0098】

図９Ａ〜９Ｉは、分離された物質（例えば、ＰＲＰ、ＢＭＡＦ）を第１のバキュテナーから第２のバキュテナーへ移すために使用される企図される移行装置９００の一実施形態を示す。しかしながら、移行装置９００は、任意の物質を任意の商業的に好適な調製容器から任意の商業的に好適な使用者容器へ移すために使用することができることが認識されるべきである。１つの非限定的な例として、移行装置９００は全血のＰＲＰ画分をバキュテナーからセルフシール型隔壁を有する無菌点眼容器へ移すために使用することができる。

【0099】

移行装置９００は、ベース構造、トランスファニードル、およびベントニードル（それぞれ、９０２および９０４）を少なくとも部分的に封入するハウジングを含む。ハウジングとベース構造の第１の部分は、互いに固定して結合または付着させることができ、少なくとも部分的に、第１の内部セクション９１０および第１の部分の反対側の第２の内部セクション９２０を規定することができる。

【0100】

加えてまたはその代わりに、ハウジングおよびベース構造の第１の部分は、互いに移動可能にまたはさらに取り外し可能に結合させることができる。加えてまたはその代わりに、ハウジングおよびベース構造の第２の部分は互いに固定して結合または付着させることができる。加えてまたはその代わりに、ハウジングおよびベース構造の第２の部分は、互いに移動可能に結合させることができる。例えば、ベース構造の第２の部分は、ハウジングに固定して結合されるベース構造の第１の部分に移動可能に結合させることができる。別の例として、ベース構造の第２の部分は、ハウジングの内壁に移動可能に結合させることができ、ベース構造の第１の部分は、ハウジングの内壁に固定して付着させることができる。

【0101】

ベース構造の一部が移動可能である場合、第１および第２の内部セクションの体積は変化しないことが認識されるべきである。代わりに、第１および第２の内部セクションは、異なるベース構造部分が可能な限り並べて整列された場合、ベース構造により分離されたセクションとして考えられるべきである。

【0102】

図示されるように、第１の内部セクション９１０は、トランスファニードル９０２の一部、およびベントニードル９０４の一部を含むことができる。第２の内部セクション９２０は、トランスファニードル９０２の一部のみを含む。ベントニードル９０２は、ベース上方に延在するのみであり、第１の内部セクション９１０内に配置された管のみを貫通するように構成される。より特定的には、トランスファニードル９０４は移行装置ベースの第１の部分を通って延在することができ、ベントニードル９０２は、移行装置ベースの第２の部分に付着させることができる（が、これを通って延在しない）。

【0103】

第２のベントニードルを含むベースの第２の部分は、ハウジングに対して移動可能とすることができる。加えてまたはその代わりに、ベントニードル９０２は、ハウジングの細長いスロット９２５を通って延在するベント９３０に結合させることができる。ベントニードル９０２が調製管のゴム栓に穴を開けると、空気がベント９３０を通って、ベントニードル９０２を通って、調製管中に流れることができる。第１の内部セクション９１０内に配置され、よって、調製管に穴を開けることができるベントニードル９０２の量は細長いスロット９２５を通るベント９３０の配置、およびハウジングに対するベースの第２の部分の配置によって変動し得る。

【0104】

ベース構造の第２の部分がハウジングに移動可能に結合される場合、ベントがベースの第２の部分に固定して結合され得ることが企図される。ニードル、ベント、およびベース構造の移動する第２の部分をハウジングに結合させると、トランスファニードルが移行管９４０に入るまで、確実に、ベントニードル（およびベントを介する空気）が調製管９３５に入らないようにすることができる。

【0105】

ベース構造の第２の部分がハウジングに固定して結合される場合、ベントは、ベースの第２の部分に移動可能に（例えば、摺動可能に）結合され得ることが企図される。ニードル、ベント、およびベース構造の固定されたセクション部分をハウジングへ結合させると、トランスファニードルが移行管９４０に入るまで、確実に、ベントニードルが調製管９３５に入らないようにすることができる。使用者は、調製管および移行管をトランスファニードル（ハウジングの第１および第２の内部セクション内）で貫通させることができ、その後、ベントをハウジングの第１の内部セクション９１０に向かってスライドさせ、調製管をベントニードルで貫通させることができる。

【0106】

加えてまたはその代わりに、ベース構造の第２の部分とベントは両方とも、ハウジングに対して移動可能とすることができることが認識されるべきである。

【0107】

移行装置９００が使用される場合、ベント９３０は好ましくは最初、図９Ｅおよび９Ｆに示される構成で、第２の内部セクションに向かう、スロットの下縁にあるであろう。そのような構成では、ベント９３０がスロット内に、ハウジングの第２の内部部分に最も近い位置で配置される。移行される試料を含む調製管９３５が、少なくとも部分的に第１の内部セクション９１０内に配置された場合、トランスファニードルはそのゴム隔壁を貫通することができ、ベントニードルは管９３５の外側に残ったままとすることができる。

【0108】

無菌移行管９４０はその後、第２の内部部分９２０中に部分的に挿入することができ、よって、トランスファニードルが管９４０（または他の容器）のセルフシール型隔壁を貫通する。トランスファニードルが管９４０に入るにつれ、ベント９３０およびベントニードルが、図９Ｄおよび９Ｇに示されるように移動され、よって、第２のニードルが、管９３５の隔壁を貫通することが企図される。

【0109】

ベントニードルが管９３５の隔壁を貫通すると、空気が管９３５にベント９３０を介して入り、図９Ｇ、９Ｈおよび９Ｉに示されるように、ＰＲＰの実質的に全てが、管９３５から、管９４０にトランスファニードルを介して移行される。

【0110】

図１０Ａ〜１０Ｄは、分離された物質を第１の容器から第２の容器に移すために使用される発明対象の別の移行装置の断面図を提供する。

【0111】

図１０Ａでは、調製容器（上部容器）１０８０が逆さまに、移行装置の第１の内部セクション１０５０中に、配置される。調製容器１０８０はゴム栓１０８９、血清画分１０８８、空気１０８６、セパレータ物質１０８４、および細胞画分１０８２を含む。セパレータ物質が発明対象のＰＳＳである場合、調製容器は好都合なことに、逆さまに、第１の内部セクション中に、除去される、または別様に移動されることなく配置することができることが認識されるべきである。

【0112】

装置９００と同様に、装置１０００はハウジング（または安全性シュラウド）１０１０、ベース構造、第１および第２の内部セクション（それぞれ、１０５０および１０６０）を通って延在するトランスファニードル１０２０、およびベント１０３５に結合され、ベース構造から第１の内部セクション１０５０まで延在する移動可能なベントニードル１０３０を含む。

【0113】

調製容器１０８０がトランスファニードル１０２０により貫通されるとすぐに、真空管（下部容器）１０９０は第２の内部セクション１０６０内に配置され、トランスファニードル１０２０により貫通され得る。

【0114】

図１０Ｂは、調製容器をトランスファニードルで貫通させた後で、しかし、調製容器をベントニードルで貫通させる前での、移行装置内の構成要素の可能な配置を示す。トランスファニードル１０２０はベース構造の第１の部分上の定位置に、ハウジング内の穴１０４５を通して挿入される接着剤を用いて保持される。

【0115】

ベントニードル１０３０は好ましくは、ベントニードルに直角に延在するベント１０３５に結合される。ベント１０３５はベース構造のスライドするまたは別様に移動する部分に結合させることができ、ハウジングのスロット１０４０を通って延在することができる。ここで、ベント１０３５はスロット１０４０を通って、ハウジングの第２の内部部分１０６０に最も近接する端に配置される。

【0116】

いくつかの好ましい実施形態では、トランスファニードルは、ベントがハウジングの第２の内部部分に最も近接するスロットの端に配置されても、ベース構造の摺動部分ではなく、第２の内部部分中にさらに延在する。これにより、確実に、ベントニードルが調製容器を貫通する前に移行容器（下部容器）１０９０が貫通されることが助けられ得、そのため、ＰＲＰは無駄にならない。ゴムまたは他のスリーブ（例えば、１０２２、１０３２、および１０２４）が、１つまたは両方のニードルの露出された端部を被覆し、汚染を防止し、または追加の安全性および無菌性を提供するために含められ得る。

【0117】

図１０Ｃでは、調製容器１０８０は、ハウジングの第１の内部部分１０５０におけるトランスファニードル１０２０により貫通され、ベントニードル１０３０は調製容器１０８０の完全に外側に配置されたままである。図１０Ｄでは、移行容器１０９０は、ハウジングの第２の内部部分１０６０におけるトランスファニードル１０２０により貫通され、第１の内部部分１０５０に向かって移動される。移行容器１０９０が、第１の内部部分１０５０に向かって移動される間、ベースの移動部分、ベント１０３５およびベントニードル１０３０もまた、第１の内部部分１０５０に向かって移動される。ベントニードル１０３０は、調製容器１０８０に貫通し、これにより、空気が調製管１０８０に入り、血清１０８８が移行容器１０９０中に押し込まれる。

【0118】

図１１Ａ〜１１Ｂは、流体を調製容器から別の容器へ移すために使用することができる他の移行装置１１００を提供する。

【0119】

図１１Ａでは、移行装置１１００は、血清トランスファニードル１１２０および空気トランスファニードル１１３０を含み、それらは各々、ハウジング１１１０の第１および第２の内部セクション中に延在する。調製管１１８０は少なくとも部分的に、移行装置１１２０の一端内に配置され、真空管１１９０または点眼器は少なくとも部分的に移行装置１１２０の他端内に配置され、そのため、血清トランスファニードル１１２０および空気トランスファニードル１１３０端の両方が両方の管内に存在する。第１の内部セクション内に配置された空気トランスファニードルの端は、好ましくは、調製管１１８０内の血清１１５０より上のレベルまで挿入される。蠕動または他のポンプ１１４０は、空気を真空管１０９０から調製管１０８０中に空気トランスファニードル１１３０を介して移動させるように動作することができる。真空管から除去された空気のこの体積Ｘは、真空管１１９０において真空を作り、同じ体積Ｘの血清１１５０が調製管１１８０から真空管１１９０中に血清トランスファニードル１１２０を介して引き出され得る。図１１Ｂはどのように体積Ｘの血清が真空管中に移動するかを示す。

【0120】

図１２Ａ〜１２Ｂは、ハウジング１２１０を含む、発明対象のさらに別の移行装置１２００を提供する。移行装置は図１１Ａ〜１１Ｂの装置と同様である。しかしながら、可撓管１２４０と組み合わせたピンチング装置１２５０がポンプの代わりに使用される。ピンチング装置により、体積Ｙの空気が調製管１２８０中に移動し得、同時に、同じ体積Ｙの空気が真空管１２９０から引き抜かれ得る。調製管中のこの余分な空気および真空管内のより低い量の空気により、同じ体積Ｙの血清１２８５が調製管から、真空管へ血清トランスファニードル１２２０を介して移動され得る。

【0121】

空気を調製管中に移動させるための、図１２Ａおよび１２Ｂで示されるメカニズムはピンチャーであり、これは可撓管を摘み、ノブ１２６０により管を横切って移動させることができる。スロット１２７０は、移行装置１２００のハウジング１２１０において提供することができ、これを通って、ノブ１２６０およびピンチャー１２５０は、使用者により移動され得る。ピンチャー１２５０が、ハウジングの第１の内部セクションに向かって移動されると、これは体積Ｙの空気を、空気トランスファニードル１２３０を通って調製管中、血清１２８５上方に押し出すように作用する。同時に、ピンチャーが移動されると、真空が真空管または点眼器中で生成され、そのため、真空管からの空気が可撓管１２４０中に引き込まれる。図１２Ｂは、どのように、体積Ｘの血清１２８５が真空管１２９０中に移動され得るかを示す。

【0122】

ハウジングのスロットを通って延在するベントは使用者が容易にかつ適正にベントニードルを要望通りに配置するのを可能にするのに有益となり得るが、そのようなベントは、誤って調製管に向かって移動され、トランスファニードルが移行管に穴を開ける前に、ベントニードルが調製管に穴を開けてしまうことになる可能性がある。移行装置の様々な使用のために、とりわけ、装置が使い捨ての、１回使用装置である場合、不注意調整のリスクを低減または排除するには、装置の全ての構成要素が、外側ハウジング内に配置されることは有利であろう。

【0123】

図１３Ａ〜Ｃは、調製管中への空気流を可能にするベントを含む、全ての構成要素がハウジング内に配置された、いくつかの例示的な移行装置を示す。

【0124】

図１３Ａでは、移行装置１３００Ａはハウジング１３１０Ａを含み、これは２つの開端を含み、トランスファニードル１３２０Ａ、ベントニードルｌ３３０Ａ、ベント１３５０Ａ、トランスファニードル１３２０Ａに結合された第１のベース部分、および移動可能な第２のベース部分１３４０Ａを収容する。図示されるように、ハウジング壁から外に延在する装置の構成要素はない。代わりに、空気はベント、ベントニードル、および調製管１３６０Ａに、移行管が配置される第２の内部部分を介して入ることができる。

【0125】

図１３Ｂでは、移行装置１３００Ｂはハウジング１３１０Ｂを含み、これは２つの開端を含み、トランスファニードル１３２０Ｂ、ベントニードルｌ３３０Ｂ、ベント１３５０Ｂ、トランスファニードル１３２０Ｂと結合された第１のベース部分、および移動可能な第２のベース部分１３４０Ｂ（これを通って、ベント１３５０Ｂが少なくとも部分的にベントニードル１３３０Ｂに沿って延在する）を収容する。ベース部分は、ベントニードル１３３０Ｂを調製管１３６０Ｂ中の所望の点まで押し込むことができる、任意の好適な長さを含むことができることが認識されるべきである。ベント１３５０Ｂはベース部分１３４０Ｂを通ってある角度で、例えば、第２の内部部分に向かって延在し、その後、トランスファニードルから離れて延在することができることもまた認識されるべきである。図示されるように、ハウジング壁から外に延在する装置の構成要素はない。その代わりに、空気はベント、ベントニードル、および調製管１３６０Ａに第２の内部部分（移行管が配置されるであろう）を介して入ることができる。

【0126】

図１３Ｃでは、移行装置１３００Ｃは、ハウジング１３１０Ｃを含み、これは２つの開端を含み、トランスファニードル１３２０Ｃ、ベントニードル１３３０Ｃ、ベント１３５０Ｃ、トランスファニードル１３２０Ｃと結合された第１のベース部分、および移動可能な第２のベース部分１３４０Ｃを収容する。図示されるように、ハウジング壁から外に延在する装置の構成要素はない。その代わりに、空気はベント、ベントニードル、および調製管１３６０Ｃに、ハウジング１３１０Ｃ内の開口を介して入ることができる。

【0127】

好適な移行装置は様々な構成を有することができることが認識されるべきである。いくつかの好ましい移行装置は、調製管および移行管に同時に穴を開けるように構成されたトランスファニードル、および調製管に穴を開けるように移動可能なベントニードルを含み、ここで、ベントニードルは、ベントに結合され、これを介して空気が調製管に入ることができる。ベントは完全にハウジング内に配置することができ、または、スロットまたは他の開口を介してハウジングから外に延在することができる。

【0128】

本明細書で記載される移行装置のいずれも、１つ以上のフィルタを含むことができ、これは、ベント、ベントニードル、トランスファニードル、ハウジング開口部（例えば、開端、スロット、または開口）または装置の任意の他の位置（複数可）上またはこれに隣接して配置することができる。企図されるフィルタは、（ａ）漏れを防止する（例えば、装置が傾けられた場合）、および（ｂ）装置（例えば、ベント、ベントニードル）または調製管に入る空気を滅菌する、の少なくとも１つを実施することができる。少なくともいくつかの実施形態では、フィルタは疎水性とすることができる。無菌移行が望ましい場合、空気無菌性のためのフィルタがとりわけ好ましい。

【0129】

図１４は移行装置１４００を示し、これは、カバーを含み、これにより使用者は、ベント１４１０にアクセスし、所望の位置まで移動させることができる。カバー１４２０は、使用者が、これにより、カバー１４２０をハウジング凹部１４３０に向かってスライドさせることができるつめを含む。カバー１４２０はスライディングドアとして示されているが、任意の好適な移動可能なカバーが企図されることが認識されるべきである。加えてまたはその代わりに、カバー１４２０は固定することができるが、透明であり、そのため、使用者はベント１４１０の位置を見ることができるであろう。

【0130】

流体を１つの密閉容器から別の容器に移すことができる様々な他の移行装置が企図されることが認識されるべきである。典型的に、調製管が商業的に好適な移行装置の一端に入れられ、真空管または点眼器が移行装置の他端に入れられた場合、かなりの体積の流体が、重力だけでは、調製管から、真空管中に移動する可能性は低い。真空管は真空密閉されており、系は自然に平衡に達することを望むが、調製管からの血清の移動は調製管において真空を生成させる。これらの２つの真空は明らかに互いに対して働き、十分な血清が真空管に移行することができる前に平衡に到達する。よって、調製管中で生成された真空を解放すること、または真空管内でより強い真空を生成させることが有利である。上記記載は、これが達成され得るいくつかの方法を説明する。

【0131】

本明細書で用いる場合、文脈により別記されない限り、「に結合された」という用語は、直接結合（この場合、互いに結合される２つの要素が互いに接触する）および間接結合（この場合、少なくとも１つの追加の要素が２つの要素間に配置される）を含むことが意図される。よって、「に結合された」および「と結合された」という用語は同義語として使用される。

【0132】

本明細書で開示される発明の他の要素または実施形態の分類は制限するものと解釈されるべきではない。各群のメンバーは個々に、または本明細書で見出される群の他のメンバーまたは他の要素と組み合わせて言及され、特許請求され得る。ある群の１つ以上のメンバーは、利便性および／または特許性の理由のために、１つの群に含めることができ、またはそれから削除することができる。任意のそのような包含または削除が生じた場合、本明細書はその群を改変として含むと考えられ、よって、添付の特許請求の範囲で使用される全てのマーカッシュ群の記載された説明を満たす。

【0133】

本明細書における発明概念から逸脱せずに、すでに記載されたもの以外にさらに多くの改変が可能であることは当業者には明らかなはずである。そのため、発明対象は、添付の特許請求の範囲の精神を除いて、制限されるべきではない。その上、明細書および特許請求の範囲の両方を解釈する場合、全ての用語は、文脈と一致する可能な限り最も広い意味で解釈されるべきである。特に、「含む」および「含んでいる」という用語は、要素、成分、または工程に非排他的な様式で言及し、言及された要素、成分、または工程は、明確に言及されていない他の要素、成分、または工程と共に存在し、または使用され、または組み合わせられ得ることを示すと解釈されるべきである。明細書および特許請求の範囲がＡ、Ｂ、Ｃ．．．．およびＮからなる群より選択される何かの少なくとも１つに言及する場合、その本文は、Ａ＋Ｎ、またはＢ＋Ｎ、などではなく、その群からのただ１つの要素を必要とするものとして解釈されるべきである。

【図1】

【図2】

【図2-1】

【図2-2】

【図3】

【図3-1】

【図3-2】

【図4】

【図4-1】

【図4-2】

【図5】

【図5-1】

【図5-2】

【図6】

【図6-1】

【図6-2】

【図7】

【図7-1】

【図7-2】

【図8】

【図8-1】

【図8-2】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図9D】

【図9E】

【図9F】

【図9G】

【図9H】

【図9I】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図10D】

【図10E】

【図11A】

【図11B】

【図12A】

【図12B】

【図13A】

【図13B】

【図13C】

【図14】