特許 6770968 Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍの発酵エキスおよびその美容のための使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6770968

(24)【登録日】2020年9月30日

(45)【発行日】2020年10月21日

(54)【発明の名称】Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍの発酵エキスおよびその美容のための使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 8/9728 20170101AFI20201012BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20201012BHJP

   A61Q 5/00 20060101ALI20201012BHJP

   A61K 8/06 20060101ALI20201012BHJP

   A61Q 3/02 20060101ALI20201012BHJP

   C12N 1/14 20060101ALI20201012BHJP

   C12P 1/02 20060101ALI20201012BHJP

   C12R 1/645 20060101ALN20201012BHJP

【ＦＩ】

   A61K8/9728

   A61Q19/00

   A61Q5/00

   A61K8/06

   A61Q3/02

   C12N1/14 A

   C12P1/02 A

   C12N1/14 A

   C12R1:645

【請求項の数】39

【全頁数】68

(21)【出願番号】特願2017-546120(P2017-546120)

(86)(22)【出願日】2016年3月2日

(65)【公表番号】特表2018-508521(P2018-508521A)

(43)【公表日】2018年3月29日

(86)【国際出願番号】IB2016051181

(87)【国際公開番号】WO2016139602

(87)【国際公開日】20160909

【審査請求日】2019年2月18日

(31)【優先権主張番号】15382099.8

(32)【優先日】2015年3月5日

(33)【優先権主張国】EP

【微生物の受託番号】CECT  CECT20901

(73)【特許権者】

【識別番号】506347528

【氏名又は名称】ルブリゾル アドバンスド マテリアルズ， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(72)【発明者】

【氏名】アルミニャナ ドメネク， ヌリア

(72)【発明者】

【氏名】ソレイ アスタルス， アルベルト

(72)【発明者】

【氏名】ガルシア サンス， ヌリア

(72)【発明者】

【氏名】モラ ロベラ， ジェンマ

(72)【発明者】

【氏名】ダリアス， ホセ

(72)【発明者】

【氏名】クエト， メルセデス

【審査官】 星 浩臣

(56)【参考文献】

【文献】 特開平０２−２６８６７９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許第０６２９４５２４（ＵＳ，Ｂ１）

【文献】 特開２００５−２２００４３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００４−３４６０４１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開昭６１−１４３３１４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 山口英世, 西山彌生，真菌と抗真菌剤−作用機序に関する電子顕微鏡的解析を中心に−，電子顕微鏡，１９９２年，Vol.27, No.2，pp.90-100

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ８／００−８／９９

Ａ６１Ｑ １／００−９０／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧用の非治療的処置および／またはケアのための、ユーペニシリウム・クルスタセウム（Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ）種の菌株由来の発酵エキスの使用であって、前記発酵エキスが、パーセンテージの合計が１００％を超えないという条件で、重量で３１〜７９％のペプチド、重量で１〜８％の遊離アミノ酸、重量で１０〜２７％の炭水化物、及び重量で１５〜４０％の脂質を含む、使用。

【請求項2】

前記発酵エキスが、ユーペニシリウム・クルスタセウム（Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ）種の菌株を水性培養培地中で発酵させること、および発酵生成物を単離することによって得られる、請求項１に記載の使用。

【請求項3】

前記発酵エキスが３４００Ｄａ未満の分子量を有する、請求項１または請求項２に記載の使用。

【請求項4】

ユーペニシリウム・クルスタセウム（Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ）種の前記菌株が、寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１の菌株である、請求項１から３のいずれか一項に記載の使用。

【請求項5】

前記化粧用の非治療的処置および／またはケアが、前記皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の色の脱色またはホワイトニングまたはライトニング；年齢に伴う斑の色の脱色またはホワイトニングまたはライトニング；目のくまの皮膚の色の脱色またはホワイトニングまたはライトニング；皮膚の明度の維持または改善；皮膚老化の症状の軽減または防止；眼窩周囲の皺などの皮膚皺の処置；目の下のくまの処置；目の腫れの処置；涙袋の処置；皮膚皺の引き伸ばしまたは減少；目の腫れまたは涙袋の体積の減少；皮膚の弾力の維持または改善；皮膚の抵抗性、張りまたは引張強度の維持または改善である、請求項１から４のいずれか一項に記載の使用。

【請求項6】

前記化粧用の非治療的処置および／またはケアが、前記皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の色の前記脱色または前記ホワイトニングまたは前記ライトニングである、請求項５に記載の使用。

【請求項7】

前記化粧用の非治療的処置および／またはケアが、前記皮膚の化粧用の非治療的処置および／またはケアである、請求項５または請求項６に記載の使用。

【請求項8】

前記皮膚の化粧用の非治療的処置および／またはケアが、前記皮膚老化の症状の軽減または防止である、請求項５に記載の使用。

【請求項9】

前記皮膚の化粧用の非治療的処置および／またはケアが、年齢に伴う斑、皮膚皺；目のくま；目の腫れ；および涙袋のうちの少なくとも１つの処置である、請求項５または請求項８に記載の使用。

【請求項10】

前記化粧用の非治療的処置および／またはケアが、皮膚皺、好ましくは眼窩周囲の皺の引き伸ばしまたは減少である、請求項９に記載の使用。

【請求項11】

前記化粧用の非治療的処置および／またはケアが、目の腫れまたは涙袋の体積の減少である、請求項９に記載の使用。

【請求項12】

前記化粧用の非治療的処置および／またはケアが、目のくまの皮膚の色のライトニングまたは脱色もしくはホワイトニングである、請求項７または請求項９に記載の使用。

【請求項13】

前記化粧用の非治療的処置および／またはケアが、年齢に伴う斑の色のライトニングまたは脱色もしくはホワイトニングである、請求項７または請求項９に記載の使用。

【請求項14】

前記化粧用の非治療的処置および／またはケアが、前記皮膚の明度の維持または改善である、請求項５または請求項８に記載の使用。

【請求項15】

前記化粧用の非治療的処置および／またはケアが、前記皮膚の弾力の維持または改善である、請求項５または請求項８に記載の使用。

【請求項16】

前記化粧用の非治療的処置および／またはケアが、前記皮膚の抵抗性、張りまたは引張強度の維持または改善である、請求項５または請求項８に記載の使用。

【請求項17】

発酵エキスにより、皮膚において、コラーゲン生成が促進され、エラスチン生成が促進され、コラゲナーゼ活性が阻害され、エラスターゼ活性が阻害され、ＡＧＥの生成が阻害され、血管透過性が阻害され、メラニン形成が阻害され、チロシナーゼ活性が阻害され、かつ／またはビリルビンの分解が促進される、請求項５から１６のいずれか一項に記載の使用。

【請求項18】

美容のために有効な量のユーペニシリウム・クルスタセウム（Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ）種の菌株由来の発酵エキス、ならびに少なくとも１種の美容のために許容される賦形剤、アジュバントおよび／または成分を含む化粧品組成物であって、前記発酵エキスが、パーセンテージの合計が１００％を超えないという条件で、重量で３１〜７９％のペプチド、重量で１〜８％の遊離アミノ酸、重量で１０〜２７％の炭水化物、及び重量で１５〜４０％の脂質を含む、化粧品組成物。

【請求項19】

前記発酵エキスが、ユーペニシリウム・クルスタセウム（Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ）種の菌株を水性培養培地中で発酵させること、および発酵生成物を単離することによって得られる、請求項１８に記載の化粧品組成物。

【請求項20】

前記発酵エキスが３４００Ｄａ未満の分子量を有する、請求項１８または請求項１９に記載の化粧品組成物。

【請求項21】

ユーペニシリウム・クルスタセウム（Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ）種の前記菌株が、寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１の菌株である、請求項１８から２０のいずれか一項に記載の化粧品組成物。

【請求項22】

前記発酵エキスが、リポソーム、混合リポソーム、オレオソーム、ニオソーム、エトソーム、ミリ粒子、マイクロ粒子、ナノ粒子および固体脂質ナノ粒子、ナノ構造の脂質担体、スポンジ、シクロデキストリン、小胞、ミセル、界面活性剤の混合ミセル、界面活性剤−リン脂質の混合ミセル、ミリスフェア、ミクロスフェアおよびナノスフェア、リポスフェア、ミリカプセル、マイクロカプセル、ナノカプセル、マイクロエマルションおよびナノエマルションによって形成される群から選択される、美容のために許容される送達系または徐放系に組み込まれるか、または、タルク、ベントナイト、シリカ、デンプンまたはマルトデキストリンによって形成される群から選択される固体有機ポリマーまたは固体無機支持体上に吸着される、請求項１８から２１のいずれか一項に記載の化粧品組成物。

【請求項23】

多重エマルション、溶液、液晶、無水組成物、水性分散液、油、乳液、バルサム、フォーム、水性もしくは油性ローション、水性もしくは油性ジェル、クリーム、溶液、ハイドロアルコール溶液、ハイドログリコール溶液、ヒドロゲル、リニメント、美容液、石けん、シャンプー、コンディショナー、フェイスマスク、ヘアスプレー、セラム、多糖類膜、軟膏、ムース、ポマード、ペースト、パウダー、棒状物質、ペンシル、スプレーまたはエアロゾルによって形成される群から選択される製剤で提供される、請求項１８から２２のいずれか一項に記載の化粧品組成物。

【請求項24】

布、不織布または医療デバイスに組み込まれる、請求項１８から２３のいずれか一項に記載の化粧品組成物。

【請求項25】

前記賦形剤、アジュバントおよび／または成分が、皮脂生成を減少させる薬剤、抗脂漏剤、艶消し剤、抗座瘡剤、真皮もしくは上皮高分子の合成を刺激し、かつ／またはそれらの分解を阻害もしくは防止することができる薬剤、コラーゲン合成刺激剤、エラスチン合成刺激剤、デコリン合成刺激剤、ラミニン合成刺激剤、デフェンシン合成刺激剤、シャペロン合成刺激剤、ｃＡＭＰ合成刺激剤、ＡＱＰ−３をモジュレートする薬剤、アクアポリン合成をモジュレートする薬剤、アクアポリンファミリーのタンパク質、ヒアルロン酸合成刺激剤、グリコサミノグリカン合成刺激剤、フィブロネクチン合成刺激剤、サーチュイン合成刺激剤、熱ショックタンパク質、熱ショックタンパク質合成刺激剤、神経細胞の開口分泌を阻害する薬剤、他の抗コリン作用剤、筋収縮を阻害する薬剤、老化防止剤、皺取り剤、制汗剤、抗炎症剤および／もしくは鎮痛剤、抗そう痒剤、鎮静剤、麻酔薬、アセチルコリン受容体凝集の阻害剤、アセチルコリンエステラーゼを阻害する薬剤、皮膚弛緩剤、メラニン合成の刺激剤もしくは阻害剤、ホワイトニング剤もしくは脱色剤、色素沈着促進剤、セルフタンニング剤、ＮＯシンターゼ阻害剤、５α還元酵素阻害剤、リシルおよび／もしくはプロリルヒドロキシラーゼ阻害剤、抗酸化剤、フリーラジカルスカベンジャーおよび／もしくは抗大気汚染剤、反応性カルボニル種スカベンジャー、抗糖化剤、抗ヒスタミン剤、抗ウイルス剤、駆虫剤、乳化剤、皮膚軟化剤、有機溶媒、液体噴霧剤、皮膚コンディショナー、保湿剤、保湿物質、アルファヒドロキシ酸、ベータヒドロキシ酸、モイスチャー化粧品、上皮加水分解酵素、ビタミン、アミノ酸、タンパク質、顔料もしくは着色剤、染料、バイオポリマー、ゲル化ポリマー、増粘剤、界面活性剤、軟化剤、乳化剤、結合剤、保存剤、目の下のたるみを低減もしくは処置することができる薬剤、角質除去剤、角質溶解剤（ｋｅｒａｔｏｌｙｔｉｃ ａｇｅｎｔ）、角質溶解剤（ｄｅｓｑｕａｍａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、抗微生物剤、抗真菌剤、静真菌剤、殺菌剤、静菌剤、脂質および角質層構成成分の合成を刺激する薬剤、セラミド、脂肪酸、コラーゲン分解を阻害する薬剤、マトリックスメタロプロテイナーゼを阻害する薬剤、エラスチン分解を阻害する薬剤、セリンプロテアーゼを阻害する薬剤、線維芽細胞増殖を刺激する薬剤、ケラチノサイト増殖を刺激する薬剤、脂肪細胞増殖を刺激する薬剤、メラニン細胞増殖を刺激する薬剤、ケラチノサイト分化を刺激する薬剤、脂肪細胞分化を刺激するもしくは遅延させる薬剤、抗過角化症剤、面皰溶解剤、抗乾癬剤、ＤＮＡ修復剤、ＤＮＡ保護剤、幹細胞保護剤、安定剤、敏感肌の処置および／もしくはケアのための薬剤、引締め剤、抗ストレッチマーク剤、結合剤、脂肪分解剤もしくは脂肪分解を刺激する薬剤、脂肪生成剤、ＰＧＣ−１α発現をモジュレートする薬剤、ＰＰＡＲγの活性をモジュレートする薬剤、脂肪細胞のトリグリセリド含量を増加させるもしくは低減する薬剤、抗セルライト剤、ＰＡＲ−２の活性を阻害する薬剤、治癒を刺激する薬剤、コアジュバント治癒剤、上皮再形成を刺激する薬剤、コアジュバント上皮再形成剤、サイトカイン成長因子、毛細血管循環および／もしくは微小循環に作用する薬剤、血管新生を刺激する薬剤、血管透過性を阻害する薬剤、静脈強壮剤、細胞代謝に作用する薬剤、真皮−上皮結合を改善する薬剤、発毛誘導剤、発毛阻害剤もしくは発毛遅延剤、抜け毛遅延剤、保存剤、香料、臭気吸収剤および／もしくは体臭マスキング用のデオドラント、キレート剤、植物エキス、エッセンシャルオイル、海産物エキス、生物工学的プロセスから得られた薬剤、ミネラル塩、細胞エキス、日焼け止めならびに紫外Ａおよび／もしくはＢ線および／もしくは赤外Ａ線に対して活性な有機もしくは無機光防護剤、またはそれらの混合物によって形成される群から選択される、請求項１８から２４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項26】

前記組成物中の前記発酵エキスの有効な量が、前記エキスの乾燥重量に基づいて、前記組成物の総重量に対して、組成物の総重量に基づいて、重量で、０．０００００００００１％〜２０％である、請求項１８から２５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項27】

前記発酵エキスが、請求項１８から２６のいずれか一項に記載の組成物中に提供される、請求項１から１７のいずれか一項に記載の使用。

【請求項28】

個体に、有効な量のユーペニシリウム・クルスタセウム（Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ）種の菌株由来の発酵エキスを局所投与することを含む、皮膚の化粧用の非治療的処置および／またはケアのための化粧方法であって、前記発酵エキスが、パーセンテージの合計が１００％を超えないという条件で、重量で３１〜７９％のペプチド、重量で１〜８％の遊離アミノ酸、重量で１０〜２７％の炭水化物、及び重量で１５〜４０％の脂質を含む、化粧方法。

【請求項29】

前記発酵エキスが、ユーペニシリウム・クルスタセウム（Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ）種の菌株を水性培養培地中で発酵させること、および発酵生成物を単離することによって得られる、請求項２８に記載の化粧方法。

【請求項30】

前記発酵エキスが３４００Ｄａ未満の分子量を有する、請求項２８または請求項２９に記載の化粧方法。

【請求項31】

ユーペニシリウム・クルスタセウム（Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ）種の前記菌株が、寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１の菌株である、請求項２８から３０のいずれか一項に記載の化粧方法。

【請求項32】

前記皮膚の前記化粧用の非治療的処置および／またはケアが、皮膚老化の症状を軽減または防止するためのものである、請求項２８から３１のいずれか一項に記載の化粧方法。

【請求項33】

前記皮膚の前記化粧用の非治療的処置および／またはケアが、皮膚皺、目の下のくま、目の腫れおよび／または涙袋のうちの少なくとも１つの化粧処置のためのものである、請求項２８から３１のいずれか一項に記載の化粧方法。

【請求項34】

前記皮膚の前記化粧用の非治療的処置および／またはケアが、皮膚の弾力、皮膚の明度、皮膚の抵抗性、皮膚の張りおよび／または皮膚の引張強度を改善するためのものである、請求項２８から３１のいずれか一項に記載の化粧方法。

【請求項35】

前記皮膚の前記化粧用の非治療的処置および／またはケアが、皮膚の色のライトニング、ホワイトニングまたは脱色のためのものである、請求項２８から３１のいずれか一項に記載の化粧方法。

【請求項36】

前記皮膚の前記化粧用の非治療的処置および／またはケアが、年齢に伴う斑の色のライトニング、ホワイトニングまたは脱色のためのものである、請求項３５に記載の化粧方法。

【請求項37】

個体に、請求項１８から２６のいずれか一項に記載の組成物を局所投与することを含む、請求項２８から３６のいずれか一項に記載の化粧方法。

【請求項38】

前記個体が、コーカサス人またはアジア人である、請求項２８から３７のいずれか一項に記載の化粧方法。

【請求項39】

前記個体が、２０歳超である、請求項２８から３８のいずれか一項に記載の化粧方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（発明の分野）
開示されている技術は、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧処置および／またはケアにおいて有用な、Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株由来の発酵エキスに関する。特に、この発酵エキスは、皮膚老化の症状の軽減または防止、および皮膚の色のライトニングまたは脱色もしくはホワイトニングにおいて活性である。

【背景技術】

【0002】

（発明の背景）
皮膚老化は、経時的因子および環境因子（主にＵＶ照射）によって誘導される複雑なプロセスである。皮膚老化の徴候または症状としては、皮膚の弾力および張りの喪失、皺および深い皺、目の下のくま、目の腫れ、涙袋、日光黒子（年齢に伴う斑）および斑状皮膚などの特徴の出現が挙げられる。皮膚老化の最初の徴候は、通常、人の顔、特に目の周囲の領域に顕在化する。これらとしては、目のくま（眼窩周囲の色素沈着過剰）、目の腫れ（眼窩周囲の腫れ）、涙袋（眼窩下の眼瞼の袋）、および皺（例えば、眼窩周囲の皺）の存在が挙げられる。人の皮膚、特に顔に老化の徴候が存在することは、美的に望ましくない。より若く見える皮膚、すなわち、老化症状が低減した皮膚が望ましい。

【0003】

皮膚、粘膜、毛髪および／または爪は、生物とその環境との間に物理的バリアをもたらすものである。皮膚は、２つの基本的な層である上皮と真皮とで構成される。真皮は、最も厚い層（おおよその厚さが皮膚の厚さの９０％である）であり、コラーゲン、エラスチン、血管などのいくつかの分化した構造、および線維芽細胞（コラーゲンおよびエラスチンを合成する）などの多くの細胞型を含有する。上皮は、ケラチノサイト、メラニン細胞およびランゲルハンス細胞で構成され、主要な細胞集団はケラチノサイトで構成される。

【0004】

コラーゲンは、皮膚の結合組織内の最も豊富なタンパク質であり、皮膚において重要な構造的役割を果たす。コラーゲンは、新しい細胞が成長するにしたがってそれらを支持しながら必要な柔軟性をもたらす、皮膚結合組織内の網目様構造を形成する。皮膚では継続的なコラーゲンの合成と分解がなされ、それらのバランスにより、皮膚の引張強度および弾力の両方が決定される。エラスチンは、結合組織内の弾性のタンパク質である。エラスチンは、皮膚が柔軟だが緊密に保たれるよう補助し、皮膚を引っ張った場合の弾み反応をもたらす。老化プロセスには、皮膚におけるコラーゲン線維と弾性線維の両方の変性および溶解が伴う。皮膚内の弾性線維の緩やかな消失により、皮膚の弾力が進行的に喪失する。コラーゲン線維の変性および溶解により、皮膚が抵抗性（張り）を失っていく。真皮における結合線維の溶解のさらなる結果は、特にコラーゲン線維の減少による真皮の厚さ全体の緩やかな減少である。［Bonta M、Daina L、Mutiu G. The process ofageing reflected by histological changes in the skin. Rom J Morphol Embryol.、２０１３年；５４巻（補遺３号）：７９７〜８０４頁］

【0005】

皮膚の老化における他の因子は、終末糖化産物（ＡＧＥ）の出現である。ＡＧＥは、糖およびタンパク質が関与する、糖化と称される反応から得られる。これらの生成物が皮膚内に存在することにより、物理的特性、生体力学的特性（皮膚硬化および弾力の喪失）および生物学的特性（細胞によるマトリックスの合成、分解のモジュレーション）が変化する。ＡＧＥは、コラーゲンとしての細胞外マトリックス（ＥＣＭ）のタンパク質の発現をモジュレートし得、また、その分解に関与する酵素（エラスターゼおよびメタロプロテイナーゼ酵素）の発現および合成の改変もし得る［Pageon H. Reaction of glycation and human skin: the effects on theskin and its components, reconstructed skin as a model. Pathol Biol（Paris）、２０１０年６月；５８巻（３号）：２２６〜３１頁］。結果は、皮膚の弾力および厚さの低減である。皮膚において、Ｉ型コラーゲンの糖化は、皮膚鈍麻の発生および皮膚の弾力の低減に関連付けられている。

【0006】

皮膚の弾力、張りおよび厚さの低減の結果として、目の周囲に出現するものなどの皺が出現する可能性がある。皮膚におけるコラーゲン分解の防止および／またはコラーゲン生成の刺激を補助することができる活性薬剤を提供する必要がある。皮膚におけるエラスチン分解の防止および／またはエラスチン生成の刺激を補助することができる活性薬剤を提供する必要がある。皮膚におけるＡＧＥの形成を阻害することができる活性薬剤を提供する必要がある。そのような活性薬剤は、老化の徴候を防止または軽減するために皮膚を処置することにおいて有用であり得る。

【0007】

老化プロセスは、皮膚における血管構造にも影響を及ぼす。血管の変化としては、毛細血管壁が薄くなること、および微小循環が遅くなることが挙げられる。血管壁の変化により、血管透過性の変化が引き起こされ、線維間浮腫の出現がもたらされる可能性がある［Bonta M、Daina L、MutiuG. The process of ageing reflected by histological changes in the skin. Rom JMorphol Embryol.、２０１３年；５４巻（補遺３号）：７９７〜８０４頁］。したがって、老化の徴候の１つは、目の周囲または目の下への間質液の蓄積、例えば、目の腫れおよび涙袋（目の下のたるみとしても公知）である。これらは美的に見苦しいものであり、皮膚の腫れ／袋の体積を低減させることが望ましい。目の腫れおよび涙袋において形成される浮腫に関係づけられる血管透過性を低下させることができる活性薬剤が必要とされている。

【0008】

皮膚は、老化するにつれ、薄くなる。例えば、Bontaらは、特に表在の真皮における血管効率の低下により、それが血管構造の効率に適応することによって、すなわち、細胞層の数が減少することによって、すなわち、厚さが減少することによって、上皮における一連の主要な影響が生じることに気づいた［Bonta M、Daina L、MutiuG. The process of ageing reflected by histological changes in the skin. Rom JMorphol Embryol. ２０１３年；５４巻（補遺３号）：７９７〜８０４頁］。この薄さにより、下にある血管および発色団（例えば、ビリルビンおよびメラニンなど）がより目に見えるようになる可能性がある。これが、大多数の人に影響を及ぼす極めて一般的な美容上の問題である目の下のくまの１つの原因である［Ranu H、Thng S、Goh BK、Burger A、Goh CL. Periorbital hyperpigmentationin Asians: an epidemiologic study and a proposed classification. Dermatol Surg.、２０１１年９月；３７巻（９号）：１２９７〜３０３頁］。この問題は、血管が老化とともに漏れやすくなることによってさらに悪化し、結果として、血液の分解産物であるビリルビンが、目の周囲に蓄積すると考えられている。詳細には、ビリルビンは、ヘム代謝の分解産物である。ヘムは、ヘモグロビン、ミオグロビン、および肝臓のチトクロムを最も重要な代表とするいくつかの酵素において見出される鉄含有ポルフィリンである。１日のビリルビン生成のおよそ８０％が老化した赤血球に由来する。これらは分解され、ヘム分子から鉄が除去され、残りのポルフィリン環が酸化され、単一部位で切断されて、ビリベルジンのテトラピロール鎖構造が形成される。ビリベルジンのさらなる還元により、目の下のくまとしての窩下の眼瞼に現れる呈色の原因となるビリルビンの形成がもたらされる［Stillman AE. Jaundice. Clinical Methods： TheHistory, Physical, and Laboratory Examinations.、第３版、Boston： Butterworths；１９９０年、８７章］。目のくまは、複雑な顔の美容上の問題であり、多数の原因があり、それらとして、メラニン沈着、ヘモシデリン沈着を伴う静脈うっ血、および眼窩の構造的問題が挙げられる。真皮におけるメラニン沈着は、先天的なもの、または、日光への過剰曝露、内因性エストロゲンまたは外因性エストロゲンの使用、妊娠および母乳栄養などの環境因子による二次的なものであり得る。目の周囲のくまにおける色素沈着の原因となる顔料の２つである、皮膚におけるビリルビンを分解し、かつ／またはメラニンの量を減少させることができる活性薬剤を提供する必要がある。

【0009】

皺、目の下のくま、目の腫れ、涙袋などの老化の徴候は、他の因子の中でも、疲労、ストレス、薬物およびアルコールの使用によって悪化する可能性がある。

【0010】

皮膚、例えば、目のくまのライトニング、ならびに年齢に伴う斑の排除または減弱を含めた皮膚色の改変は、多くの人に望ましい化粧効果である。多くの場合、目的は、むらのない皮膚色を実現することである。脱色用化粧生成物を使用して血色素増加を低減し、典型的には、色素脱失剤は、メラニン生合成経路を阻害することによって作用する。

【0011】

メラニンは、哺乳動物の皮膚、毛髪および眼に、電離放射線に対する色および光防護をもたらす複雑な色素である。メラニン形成は、メラニン色素の合成をもたらす生理的プロセスであり、要約すると、メラニン細胞によるメラニンの生成プロセスおよびその後の分布によって特徴付けられる。哺乳動物メラニン細胞は、メラノソームと称される複雑な細胞小器官において、異なる酵素により、２つの化学的に異なる型のメラニン色素である黒色〜褐色のユーメラニンと黄色〜赤褐色のフェオメラニンとを生成する。ユーメラニンおよびフェオメラニンはどちらも、チロシナーゼ（ＴＹＲ）によって形成される共通の前駆体であるドパキノンに由来する。チロシナーゼは、ポリフェノールオキシダーゼとも称され、銅を含有する多機能性酵素である。チロシナーゼは、メラニン形成カスケードの第１段階において重要な酵素であり、Ｌ−チロシンのＬ−ドパキノンへの変換を触媒する（Ito S.、Wakamatsu K.、およびOzeki, H. Chemical analysis of melanins and its application to thestudy of the regulation of melanogenesis. Pigment Cell Res.、２０００年：１３巻、補遺８号、１０３〜９頁）。チロシナーゼに加えて、チロシナーゼ関連タンパク質（ＴＲＰ）と称される２つの関連するタンパク質により、ユーメラニン形成が調節されることが示されている。ＴＲＰ−１（チロシナーゼ関連タンパク質−１）またはＤＨＩＣＡ（５，６−ジヒドロキシインドール−２−カルボン酸オキシダーゼ）、およびドパクロムトートメラーゼとしても公知のＴＲＰ−２（チロシナーゼ関連タンパク質−２）（Hearing. V. J. The melanosome: the perfect model for cellularresponse to the environment Pigment Cell Res.、２０００年；１３巻、補遺８号、２３〜４頁）。メラニン形成はまた、メラニン細胞の内部のジヒドロキシフェニルアラニン（ＤＯＰＡ）に対する酵素チロシナーゼによるチロシン酸化においても生じる。

【0012】

メラノソームは、メラニン色素を生成する独特の能力を有し、また、成熟するにしたがって４つの逐次的な形態学的ステップを進む（Ｉ期、ＩＩ期、ＩＩＩ期およびＩＶ期）リソソーム関連細胞小器官である。Ｉ期メラノソームは、一般に核周囲の領域において見出される、丸く、膜に結合した電子密度の低い（ｅｌｅｃｔｒｏｎ−ｌｕｃｅｎｔ）小胞である。ＩＩ期メラノソームへの移行には、小胞の伸長、および内部での別個の線維状構造の出現が伴う。これらの内部マトリックス線維の生成およびＩ期メラノソームからＩＩ期メラノソームへの成熟化は、Ｐｍｅｌ１７と称される構造タンパク質（ｇｐ１００またはＳＩＬＶとしても公知）の存在に依存する。Ｐｍｅｌ１７は、Ｉ期メラノソームに送達された直後に、細胞小器官の線維状マトリックスを形成するいくつかの断片に切断される。色素沈着細胞では、メラニンがこれらの線維上に沈着し、それにより、内部マトリックスが次第に色素沈着し、その時点で細胞小器官はＩＩＩ期メラノソームと称される。高度に色素沈着された組織では、可視できる内部構造がわずかになるか全くなくなるまでメラニンの合成および沈着が継続され、その時点で、それらはＩＶ期メラノソームと称される。メラノソーム特異的タンパク質としていくつかのタンパク質が同定されている（Ｔｙｒ、Ｔｒｐ１、Ｔｒｐ２、ＭＡＲＴ−１、Ｐｍｅｌ１７、ＧＰＮＭＢなど）。メラノソーム特異的タンパク質であるＭＡＲＴ−１、Ｔ細胞タンパク質によって認識される黒色腫関連抗原（メランＡとしても公知）は、検出可能な酵素活性を有さず、初期メラノソーム（Ｉ期および／またはＩＩ期メラノソーム）において高度に富化されており、また、Ｐｍｅｌ１７と複合体を形成し、その発現、安定性、輸送、およびメラノソーム構造および成熟化のために必要なプロセシングに影響を及ぼし、したがって、哺乳動物の色素沈着の調節において重要な役割を果たす（Hoashi T、Watabe H、MullerJ、Yamaguchi Y、Vieira WD、Hearing VJ. MART-1 is required for the function of the melanosomalmatrix protein PMEL17/GP100 and the maturation of melanosomes. J Biol Chem.、２００５年４月８日；２８０巻（１４号）：１４００６〜１６頁、Epub ２００５年１月２８日）。高度にグリコシル化されたＩ型膜貫通タンパク質であるＧＰＮＭＢ（糖タンパク質（膜貫通型）非転移性黒色腫タンパク質ｂ）は、Ｐｍｅｌ１７との高い類似性を示す。ＧＰＮＭＢは、メラニン細胞におけるその機能と関連するいくつかのドメインを含有する。ＧＰＮＭＢのアルギニン−グリシン−アスパラギン酸（ＲＧＤ）モチーフはインテグリンに結合してメラニン細胞とケラチノサイトの接着を調節できることが確認されており、それにより、メラニンの移動に関与することが示される。メラノソームの重要な構造タンパク質として、ＧＰＮＭＢは、全ての期（Ｉ〜ＩＶ）のメラノソームに存在し、成熟期において特に富化されていることが証明されている。メラニン細胞におけるＧＰＮＭＢ枯渇により、メラノソーム形成が急激に弱まり、これにより、メラノソーム合成における決定的な役割が示される（Zhang P、Liu W、Zhu C、Yuan X、Li D、Gu W、Ma H、Xie X、Gao T.Silencing of GPNMB by siRNA inhibits the formation of melanosomes in melanocytesin a MITF-independent fashion. PLoS One.、２０１２年；７巻（８号）：ｅ４２９５５頁）。

【0013】

生成後、メラノソーム内のメラニンは、メラニン細胞内に存在する樹状突起を通じて隣接するケラチノサイトに移動し、そこで、輸送および分解されることになる。このメラニンの移動は、３つの異なる機序：ケラチノサイトによるメラニン細胞の樹状末端の細胞貪食プロセス；細胞質のメラノソームのケラチノサイトへの直接遊走；および、メラノソームの細胞外空間への放出およびケラチノサイトへのその組み込みによって起こる。したがって、皮膚の色素沈着は、メラニンの数、化学的性質、および含量（チロシナーゼ活性）、および生成されるメラノソームの分布に依存し、各メラニン細胞により、その周囲のケラチノサイトのクラスターに移動される。

【0014】

直接または間接的な刺激に起因するメラニン生成の増加は、日光による攻撃からの保護のための皮膚の防御反応である。ＵＶ照射後、メラノソームは、細胞の遺伝子材料を保護するために核の周囲に再編成され、したがって、皮膚および毛髪の着色を促進することに加えて、メラニンは、光防護を促進し、それにより、日射を回折または反射させる日よけとして作用する。メラニン細胞−ケラチノサイト複合体は、広範囲の環境の刺激に対して、多くの場合パラ分泌様式および／または自己分泌様式で直ちに応答する。したがって、メラニン細胞は、ＵＶ−Ｒ、アグーチシグナル伝達タンパク質、メラニン細胞−刺激ホルモン（ＭＳＨ）、エンドセリン、成長因子、サイトカインなどに応答する。ＵＶ−Ｒ曝露後、メラニン細胞は、メラニン細胞によるプロオピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ、ＭＳＨの前駆体）およびその受容体であるメラノコルチン１受容体（ＭＣ１−Ｒ）、ＴＹＲおよびＴＹＲＰ１、プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）、ならびに他のシグナル伝達因子の発現を増大させる。他方では、ＵＶにより、ケラチノサイトによるエンドセリン−１（ＥＴ−１）およびＰＯＭＣの生成が刺激されること、および、これらの因子がその後、パラ分泌的に作用してメラニン細胞の機能を刺激し得ることが公知である。ケラチノサイトに加えて、線維芽細胞、および場合によって皮膚内の他の細胞によっても、メラニン細胞によるメラニン生成を増加させ、かつ／またはメラニンのケラチノサイトへの移動を刺激することができるサイトカイン、増殖因子、および炎症性メディエーターが生成される。メラニン細胞増殖因子は、メラニン細胞の成長および色素沈着だけでなく、それらの形状、樹状突起形成度、マトリックスタンパク質への接着、および移動性にも影響を及ぼす。

【0015】

α−ＭＳＨ、ＡＣＴＨ、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、神経増殖因子（ＮＧＦ）、エンドセリン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、造血幹細胞因子、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、および肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）は、メラニン細胞の増殖および／または分化の調節に関与し、一部は受容体媒介性シグナル伝達経路を通じて作用すると考えられている、ケラチノサイト由来因子である。ヒト上皮において、α−ＭＳＨおよびＡＣＴＨは、ケラチノサイトにより生成され、放出され、メラニン形成および／またはメラニン細胞樹状突起形成の調節に関与することが示されている。α−ＭＳＨおよびＡＣＴＨは、メラニン細胞に特異的な受容体であるＭＣ１−Ｒに結合し、それによりアデニル酸シクラーゼがＧタンパク質を通じて活性化し、次に、それにより、アデノシン三リン酸からのｃＡＭＰが上昇する。サイクリックＡＭＰは、一部においてプロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）を通じてその効果を発揮し、小眼球関連転写因子（ＭＩＴＦ）遺伝子のＭプロモータ内に存在するｃＡＭＰ応答エレメント（ＣＲＥ）に結合するｃＡＭＰ応答エレメント結合タンパク質（ＣＲＥＢ）をリン酸化し、活性化する。ＭＩＴＦ−Ｍ発現の増大により、ＴＹＲ、ＴＹＲＰ１、およびＤＣＴの上方調節が誘導され、それにより、メラニン合成が導かれる。

【0016】

色素沈着過剰は、誇大なメラニン生成によって引き起こされる障害である。中でも、過剰な日光への曝露、老化、ホルモンの変化、炎症、アレルギーなどの因子により、メラニン生成および分布プロセスの不均衡が引き起こされ、その結果、皮膚染色が生じる。日光黒子（老人性黒子、そばかす、肝斑、または年齢に伴う斑としても公知）は、限局性の色素沈着した斑であり、通常は薄茶色であるが、色の程度は漆黒まで変動する。日光黒子は、典型的には身体のＵＶ曝露領域（顔、手背部、伸筋前腕、上背、およびデコルテ）において見出される。日光黒子は、あらゆる場所に及ぶ可能性があり、サイズは直径１ｍｍから最大数センチメートルまでであり、重度に太陽により損傷を受けた皮膚の領域では、さらに大きな病変に癒合する可能性がある。日光黒子（年齢に伴う斑）などの色素沈着過剰の皮膚の色を明るくする美容のための活性物質を提供することが望まれている。

【0017】

日光黒子の出現に関して現在提唱されている分子機序は、ＥＴ−１／ＥＴＢＲ（ＥＴ−１がその受容体であるＥＴＢＲに結合することによって開始される）およびＳＣＦ／ｃ−ｋｉｔ（幹細胞因子がその受容体であるｃ−Ｋｉｔに結合することによって開始される）からなる２つの上皮カスケードの刺激、ならびに、ＵＶ曝露後のこれら２つの間のクロストークを伴う。ＵＶ照射への曝露により、ケラチノサイトによるＥＴ−１の生成、およびその分泌の増加が誘導され、したがって、メラニン細胞が刺激されてメラニンが生成される。ＳＬ損傷性上皮に位置するケラチノサイトによりＥＴ−１が生成される可能性は、病変周囲の正常対照よりも有意に高く、また、同様にＥＴＢＲ転写物の発現も顕著である。ＥＴ−１の生成および局在化の増加には、メラニン細胞におけるチロシナーゼの量の増加が並行した。別々に、ＳＣＦ（同じくケラチノサイトによって生成される）はメラニン細胞上のｃ−ＫＩＴ受容体に結合する。日光黒子損傷性上皮では、ＳＣＦ ｍＲＮＡ転写物およびタンパク質の発現レベルが非損傷性対照と比較して上昇する［Costin GE、Hearing VJ. Human skinpigmentation: melanocytes modulate skin color in response to stress. FASEB J. ２００７年４月；２１巻（４号）：９７６〜９４頁］。

【0018】

しかし、皮膚中の他のカスケードも日光黒子においてみられる色素沈着過剰の一因となり得る。日光黒子病変におけるメラニン細胞幹細胞の分化を誘発するＷｎｔシグナル伝達経路は、メラニン細胞幹細胞の分化の加速に関係づけられ、ＳＬの形成に関与する。Ｗｎｔシグナル伝達経路は、メラニン細胞の生物学と密接に関連する。このシグナル伝達経路は、メラニン細胞幹細胞を、濾胞メラニン細胞および上皮メラニン細胞に分化するよう誘発することに関しても重要である。Ｗｎｔシグナル伝達経路の阻害剤であるタンパク質ｄｉｃｋｋｏｐｆ ＷＮＴシグナル伝達経路阻害剤１（ＤＫＫ１）は、メラニン形成を妨げ、メラニン細胞の密度が低下する。ＤＫＫ１は、小眼球関連転写因子（ＭＩＴＦ）およびｂ−カテニンを調節することによってメラニン細胞の機能および成長を抑制する［Yamaguchi Y、Morita A、Maeda A、Hearing VJ. Regulation of skinpigmentation and thickness by Dickkopf 1 (DKK1).、JInvestig Dermatol Symp Proc. ２００９年８月；１４巻（１号）：７３〜５頁］［YamadaT、Hasegawa S、Inoue Y、Date Y、Arima M、YagamiA、Iwata Y、Takahashi M、Yamamoto N、Mizutani H、Nakata S、Matsunaga K、Akamatsu H. Accelerated differentiation of melanocyte stem cellscontributes to the formation of hyperpigmented maculae. Exp Dermatol.、２０１４年９月；２３巻（９号）：６５２〜８頁］。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0019】

【非特許文献1】Bonta M、DainaL、Mutiu G. The process of ageing reflected by histological changes in theskin. Rom J Morphol Embryol.、２０１３年；５４巻（補遺３号）：７９７〜８０４頁

【非特許文献2】Pageon H. Reaction of glycationand human skin: the effects on the skin and its components, reconstructed skinas a model. Pathol Biol（Paris）、２０１０年６月；５８巻（３号）：２２６〜３１頁

【非特許文献3】Ranu H、ThngS、Goh BK、Burger A、Goh CL. Periorbital hyperpigmentation in Asians: an epidemiologicstudy and a proposed classification. Dermatol Surg.、２０１１年９月；３７巻（９号）：１２９７〜３０３頁

【非特許文献4】Stillman AE. Jaundice. ClinicalMethods： The History, Physical, and Laboratory Examinations.、第３版、Boston： Butterworths；１９９０年、８７章

【非特許文献5】Ito S.、WakamatsuK.、およびOzeki, H. Chemical analysis of melanins and itsapplication to the study of the regulation of melanogenesis. Pigment Cell Res.、２０００年：１３巻、補遺８号、１０３〜９頁

【非特許文献6】Hearing. V. J. The melanosome:the perfect model for cellular response to the environment Pigment Cell Res.、２０００年；１３巻、補遺８号、２３〜４頁

【非特許文献7】Hoashi T、WatabeH、Muller J、Yamaguchi Y、Vieira WD、Hearing VJ. MART-1 is required forthe function of the melanosomal matrix protein PMEL17/GP100 and the maturationof melanosomes. J Biol Chem.、２００５年４月８日；２８０巻（１４号）：１４００６〜１６頁、Epub ２００５年１月２８日

【非特許文献8】Zhang P、LiuW、Zhu C、Yuan X、Li D、Gu W、Ma H、Xie X、Gao T. Silencing of GPNMB by siRNAinhibits the formation of melanosomes in melanocytes in a MITF-independentfashion. PLoS One.、２０１２年；７巻（８号）：ｅ４２９５５頁

【非特許文献9】Costin GE、Hearing VJ. Human skin pigmentation: melanocytes modulate skin colorin response to stress. FASEB J. ２００７年４月；２１巻（４号）：９７６〜９４頁

【非特許文献10】Yamaguchi Y、Morita A、Maeda A、HearingVJ. Regulation of skin pigmentation and thickness by Dickkopf 1 (DKK1).、J Investig Dermatol Symp Proc. ２００９年８月；１４巻（１号）：７３〜５頁

【非特許文献11】Yamada T、Hasegawa S、Inoue Y、DateY、Arima M、Yagami A、Iwata Y、Takahashi M、YamamotoN、Mizutani H、Nakata S、Matsunaga K、Akamatsu H. Accelerateddifferentiation of melanocyte stem cells contributes to the formation ofhyperpigmented maculae. Exp Dermatol.、２０１４年９月；２３巻（９号）：６５２〜８頁

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0020】

したがって、メラニン生合成経路を阻害することまたはそれに直接作用することができる活性薬剤には、皮膚に対するライトニング効果または脱色効果があり、例えば、チロシナーゼ活性を阻害すること、メラニン細胞におけるメラニンの生成を阻害すること、またはメラニン形成プロセスに関与する遺伝子の発現に影響を及ぼすことができる活性薬剤は、脱色剤としての機能を果たし得る。皮膚に対するライトニング効果、ホワイトニング効果または脱色効果を有することにおいて有効な新しい活性薬剤が必要とされている。
本発明は、上で確認された問題の一部または全部を解決し、上で確認された必要性の一部または全部を満たそうとするものである。

【課題を解決するための手段】

【0021】

（発明の要旨）
第１の態様では、本発明は、Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株由来の発酵エキスに関する。Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株由来の発酵エキスは、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧処置および／またはケアにおいて特に有効であることが見出された。

【0022】

本発明の文脈では、化粧処置および／またはケアは、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の色の脱色またはホワイトニングまたはライトニング；年齢に伴う斑の色の脱色またはホワイトニングまたはライトニング；目のくまの皮膚の色の脱色またはホワイトニングまたはライトニング；皮膚の明度の維持または改善；皮膚老化の症状の軽減または防止；眼窩周囲の皺などの皮膚皺の処置；目の下のくまの処置；目の腫れの処置；涙袋の処置；皮膚皺の引き伸ばしまたは減少；目の腫れまたは涙袋の体積の減少；皮膚の弾力の維持または改善；皮膚の抵抗性、張りまたは引張強度の維持または改善を含む。

【0023】

驚くべきことに、本発明者らは、Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株由来の発酵エキスが、皮膚皺を引き伸ばすことおよび目の腫れの体積または涙袋の体積を減少させることにおいて有効であることを見出した。本発明者らは、Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株由来の発酵エキスによって、それぞれコラーゲンおよび弾性線維を形成するコラーゲンおよびエラスチンの合成を促進することができること、コラーゲンおよびエラスチンの分解に関与する酵素を阻害することが可能であること、およびコラーゲンの糖化を阻害することが可能であることも見出した。さらに、本発明者らは、Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株由来の発酵エキスによって、目の腫れおよび涙袋において形成される浮腫に関係づけられる血管透過性を低下させることができることを見出した。一実施形態では、化粧処置および／またはケアは、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の色のライトニング、ホワイトニングまたは脱色を含む。驚くべきことに、本発明者らは、本発明の発酵エキスが、年齢に伴う斑などの色素沈着過剰の皮膚、および目のくまの色のライトニングまたは脱色において特に有効であることを見出した。本発明者らは、Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株由来の発酵エキスが、チロシナーゼ活性を阻害すること、メラニン細胞におけるメラニンの生成を阻害すること、およびメラニン形成プロセスに関与する遺伝子の発現に影響を及ぼすことができ、したがって、皮膚の脱色剤／ホワイトニング剤／色のライトニング剤として作用することができることを見出した。さらに、本発明者らは、この効果が、色素沈着過剰の皮膚、例えば、年齢に伴う斑においてより顕著であることを見出した。本発明者らは、Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株由来の発酵エキスが、目の周囲のくまの皮膚における暗い色素沈着の原因となる２種の色素であるビリルビンおよびメラニンの濃度を低下させることができることを見出した。

【0024】

第２の態様では、本発明は、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧処置および／またはケアのための、Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株由来の発酵エキスの使用を提供する。

【0025】

第３の態様では、本発明は、美容のために有効な量の、Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株由来の発酵エキスを含む化粧品組成物を提供する。

【0026】

第４の態様では、本発明は、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧処置および／またはケアにおける、前記組成物の使用を提供する。

【0027】

第５の態様では、本発明は、Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株由来の発酵エキスまたはそれを含む組成物を局所投与することを含む、皮膚を処置するための化粧方法を提供する。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株由来の発酵エキス。
（項目２）
Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株を水性培養培地中で発酵させること、および発酵生成物を単離することによって得られる、項目１に記載の発酵エキス。
（項目３）
遊離アミノ酸、ペプチド、炭水化物および脂質を含む、項目１または２に記載の発酵エキス。
（項目４）
３４００Ｄａ未満の分子量を有する、前記項目のいずれか一項に記載の発酵エキス。
（項目５）
Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の前記菌株が、寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１の菌株である、前記項目のいずれか一項に記載の発酵エキス。
（項目６）
皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧処置および／またはケアのための、前記項目のいずれか一項に記載の発酵エキスの使用。
（項目７）
前記化粧処置および／またはケアが、前記皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の色の脱色またはホワイトニングまたはライトニング；年齢に伴う斑の色の脱色またはホワイトニングまたはライトニング；目のくまの皮膚の色の脱色またはホワイトニングまたはライトニング；皮膚の明度の維持または改善；皮膚老化の症状の軽減または防止；眼窩周囲の皺などの皮膚皺の処置；目の下のくまの処置；目の腫れの処置；涙袋の処置；皮膚皺の引き伸ばしまたは減少；目の腫れまたは涙袋の体積の減少；皮膚の弾力の維持または改善；皮膚の抵抗性、張りまたは引張強度の維持または改善である、項目６に記載の使用。
（項目８）
前記化粧処置および／またはケアが、前記皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の色の前記脱色または前記ホワイトニングまたは前記ライトニングである、項目７に記載の使用。
（項目９）
前記化粧処置および／またはケアが、前記皮膚の化粧処置および／またはケアである、項目７または項目８に記載の使用。
（項目１０）
前記皮膚の化粧処置および／またはケアが、前記皮膚老化の症状の軽減または防止である、項目７に記載の使用。
（項目１１）
前記皮膚の化粧処置および／またはケアが、年齢に伴う斑、皮膚皺；目のくま；目の腫れ；および涙袋のうちの少なくとも１つの処置である、項目７または項目１１に記載の使用。
（項目１２）
前記化粧処置および／またはケアが、皮膚皺、好ましくは眼窩周囲の皺の引き伸ばしまたは減少である、項目１１に記載の使用。
（項目１３）
前記化粧処置および／またはケアが、目の腫れまたは涙袋の体積の減少である、項目１１に記載の使用。
（項目１４）
前記化粧処置および／またはケアが、目のくまの皮膚の色のライトニングまたは脱色もしくはホワイトニングである、項目９または項目１１に記載の使用。
（項目１５）
前記化粧処置および／またはケアが、年齢に伴う斑の色のライトニングまたは脱色もしくはホワイトニングである、項目９または項目１１に記載の使用。
（項目１６）
前記化粧処置および／またはケアが、前記皮膚の明度の維持または改善である、項目７または項目１０に記載の使用。
（項目１７）
前記化粧処置および／またはケアが、前記皮膚の弾力の維持または改善である、項目７または項目１０に記載の使用。
（項目１８）
前記化粧処置および／またはケアが、前記皮膚の抵抗性、張りまたは引張強度の維持または改善である、項目７または項目１０に記載の使用。
（項目１９）
発酵エキスにより、皮膚において、コラーゲン生成が促進され、エラスチン生成が促進され、コラゲナーゼ活性が阻害され、エラスターゼ活性が阻害され、ＡＧＥの生成が阻害され、血管透過性が阻害され、メラニン形成が阻害され、チロシナーゼ活性が阻害され、かつ／またはビリルビンの分解が促進される、項目７から１８のいずれか一項に記載の使用。
（項目２０）
項目６から１９までのいずれか一項に記載の化粧処置および／またはケアにおける使用のための、項目１から５のいずれか一項に記載の発酵エキス。
（項目２１）
美容のために有効な量の、項目１から５のいずれか一項に記載のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株由来の発酵エキス、ならびに少なくとも１種の美容のために許容される賦形剤、アジュバントおよび／または成分を含む化粧品組成物。
（項目２２）
前記発酵エキスが、リポソーム、混合リポソーム、オレオソーム、ニオソーム、エトソーム、ミリ粒子、マイクロ粒子、ナノ粒子および固体脂質ナノ粒子、ナノ構造の脂質担体、スポンジ、シクロデキストリン、小胞、ミセル、界面活性剤の混合ミセル、界面活性剤−リン脂質の混合ミセル、ミリスフェア、ミクロスフェアおよびナノスフェア、リポスフェア、ミリカプセル、マイクロカプセル、ナノカプセル、マイクロエマルションおよびナノエマルションによって形成される群から選択される、美容のために許容される送達系または徐放系に組み込まれるか、または、タルク、ベントナイト、シリカ、デンプンまたはマルトデキストリンによって形成される群から選択される固体有機ポリマーまたは固体無機支持体上に吸着される、項目２１に記載の化粧品組成物。
（項目２３）
多重エマルション、溶液、液晶、無水組成物、水性分散液、油、乳液、バルサム、フォーム、水性もしくは油性ローション、水性もしくは油性ジェル、クリーム、溶液、ハイドロアルコール溶液、ハイドログリコール溶液、ヒドロゲル、リニメント、美容液、石けん、シャンプー、コンディショナー、フェイスマスク、ヘアスプレー、セラム、多糖類膜、軟膏、ムース、ポマード、ペースト、パウダー、棒状物質、ペンシル、スプレーまたはエアロゾルによって形成される群から選択される製剤で提供される、項目２１または項目２２に記載の化粧品組成物。
（項目２４）
布、不織布または医療デバイスに組み込まれる、項目２１から２３のいずれか一項に記載の化粧品組成物。
（項目２５）
前記賦形剤、アジュバントおよび／または成分が、皮脂生成を減少させる薬剤、抗脂漏剤、艶消し剤、抗座瘡剤、真皮もしくは上皮高分子の合成を刺激し、かつ／またはそれらの分解を阻害もしくは防止することができる薬剤、コラーゲン合成刺激剤、エラスチン合成刺激剤、デコリン合成刺激剤、ラミニン合成刺激剤、デフェンシン合成刺激剤、シャペロン合成刺激剤、ｃＡＭＰ合成刺激剤、ＡＱＰ−３をモジュレートする薬剤、アクアポリン合成をモジュレートする薬剤、アクアポリンファミリーのタンパク質、ヒアルロン酸合成刺激剤、グリコサミノグリカン合成刺激剤、フィブロネクチン合成刺激剤、サーチュイン合成刺激剤、熱ショックタンパク質、熱ショックタンパク質合成刺激剤、神経細胞の開口分泌を阻害する薬剤、他の抗コリン作用剤、筋収縮を阻害する薬剤、老化防止剤、皺取り剤、制汗剤、抗炎症剤および／もしくは鎮痛剤、抗そう痒剤、鎮静剤、麻酔薬、アセチルコリン受容体凝集の阻害剤、アセチルコリンエステラーゼを阻害する薬剤、皮膚弛緩剤、メラニン合成の刺激剤もしくは阻害剤、ホワイトニング剤もしくは脱色剤、色素沈着促進剤、セルフタンニング剤、ＮＯシンターゼ阻害剤、５α還元酵素阻害剤、リシルおよび／もしくはプロリルヒドロキシラーゼ阻害剤、抗酸化剤、フリーラジカルスカベンジャーおよび／もしくは抗大気汚染剤、反応性カルボニル種スカベンジャー、抗糖化剤、抗ヒスタミン剤、抗ウイルス剤、駆虫剤、乳化剤、皮膚軟化剤、有機溶媒、液体噴霧剤、皮膚コンディショナー、保湿剤、保湿物質、アルファヒドロキシ酸、ベータヒドロキシ酸、モイスチャー化粧品、上皮加水分解酵素、ビタミン、アミノ酸、タンパク質、顔料もしくは着色剤、染料、バイオポリマー、ゲル化ポリマー、増粘剤、界面活性剤、軟化剤、乳化剤、結合剤、保存剤、目の下のたるみを低減もしくは処置することができる薬剤、角質除去剤、角質溶解剤（ｋｅｒａｔｏｌｙｔｉｃ ａｇｅｎｔ）、角質溶解剤（ｄｅｓｑｕａｍａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、抗微生物剤、抗真菌剤、静真菌剤、殺菌剤、静菌剤、脂質および角質層構成成分の合成を刺激する薬剤、セラミド、脂肪酸、コラーゲン分解を阻害する薬剤、マトリックスメタロプロテイナーゼを阻害する薬剤、エラスチン分解を阻害する薬剤、セリンプロテアーゼを阻害する薬剤、線維芽細胞増殖を刺激する薬剤、ケラチノサイト増殖を刺激する薬剤、脂肪細胞増殖を刺激する薬剤、メラニン細胞増殖を刺激する薬剤、ケラチノサイト分化を刺激する薬剤、脂肪細胞分化を刺激するもしくは遅延させる薬剤、抗過角化症剤、面皰溶解剤、抗乾癬剤、ＤＮＡ修復剤、ＤＮＡ保護剤、幹細胞保護剤、安定剤、敏感肌の処置および／もしくはケアのための薬剤、引締め剤、抗ストレッチマーク剤、結合剤、脂肪分解剤もしくは脂肪分解を刺激する薬剤、脂肪生成剤、ＰＧＣ−１α発現をモジュレートする薬剤、ＰＰＡＲγの活性をモジュレートする薬剤、脂肪細胞のトリグリセリド含量を増加させるもしくは低減する薬剤、抗セルライト剤、ＰＡＲ−２の活性を阻害する薬剤、治癒を刺激する薬剤、コアジュバント治癒剤、上皮再形成を刺激する薬剤、コアジュバント上皮再形成剤、サイトカイン成長因子、毛細血管循環および／もしくは微小循環に作用する薬剤、血管新生を刺激する薬剤、血管透過性を阻害する薬剤、静脈強壮剤、細胞代謝に作用する薬剤、真皮−上皮結合を改善する薬剤、発毛誘導剤、発毛阻害剤もしくは発毛遅延剤、抜け毛遅延剤、保存剤、香料、臭気吸収剤および／もしくは体臭マスキング用のデオドラント、キレート剤、植物エキス、エッセンシャルオイル、海産物エキス、生物工学的プロセスから得られた薬剤、ミネラル塩、細胞エキス、日焼け止めならびに紫外Ａおよび／もしくはＢ線および／もしくは赤外Ａ線に対して活性な有機もしくは無機光防護剤、またはそれらの混合物によって形成される群から選択される、項目２１から２４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２６）
前記組成物中の前記発酵エキスの有効な量が、前記エキスの乾燥重量に基づいて、前記組成物の総重量に対して、組成物の総重量に基づいて、重量で、０．０００００００００１％〜２０％である、項目２１から２５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２７）
前記発酵エキスが、項目２１から２６のいずれか一項に記載の組成物中に提供される、項目６から１９のいずれか一項に記載の使用。
（項目２８）
個体に、有効な量の、項目１から５のいずれか一項に記載のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株由来の発酵エキスを局所投与することを含む、皮膚の化粧処置および／またはケアのための化粧方法。
（項目２９）
前記皮膚の前記化粧処置および／またはケアが、皮膚老化の症状を軽減または防止するためのものである、項目２８に記載の化粧方法。
（項目３０）
前記皮膚の前記化粧処置および／またはケアが、皮膚皺、目の下のくま、目の腫れおよび／または涙袋のうちの少なくとも１つの化粧処置のためのものである、項目２８に記載の化粧方法。
（項目３１）
前記皮膚の前記化粧処置および／またはケアが、皮膚の弾力、皮膚の明度、皮膚の抵抗性、皮膚の張りおよび／または皮膚の引張強度を改善するためのものである、項目２８に記載の化粧方法。
（項目３２）
前記皮膚の前記化粧処置および／またはケアが、皮膚の色のライトニング、ホワイトニングまたは脱色のためのものである、項目２８に記載の化粧方法。
（項目３３）
前記皮膚の前記化粧処置および／またはケアが、年齢に伴う斑の色のライトニング、ホワイトニングまたは脱色のためのものである、項目３２に記載の化粧方法。
（項目３４）
個体に、項目２１から２６のいずれか一項に記載の組成物を局所投与することを含む、項目２８から３３のいずれか一項に記載の化粧方法。
（項目３５）
前記個体が、コーカサス人またはアジア人である、項目２８から３４のいずれか一項に記載の化粧方法。
（項目３６）
前記個体が、２０歳超である、項目２８から３５のいずれか一項に記載の化粧方法。
（項目３７）
皮膚の化粧処置および／またはケアにおける使用のための、項目２１から２６のいずれか一項に記載の組成物。

【発明を実施するための形態】

【0028】

（発明の説明）
以下に記載する好ましい実施形態は、上記の本発明の態様の全てに適用可能である。
（定義）

【0029】

本発明の文脈では、「皮膚」は、最上層または角質層から、最下層または皮下組織まで、その両方を含み皮膚を含む層であると理解される。これらの層は、中でもケラチノサイト、線維芽細胞、メラニン細胞および／または脂肪細胞などの異なるタイプの細胞から構成される。本発明の文脈では、用語「皮膚」は頭皮を含む。用語「皮膚」は、ヒト皮膚を包含する。

【0030】

用語「処置」は、「化粧用（美容のため）：ｃｏｓｍｅｔｉｃ」または「非治療用：ｎｏｎ−ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ」という但し書きを伴わずに本明細書の文脈で使用される場合、疾患もしくは障害を軽減するか、もしくは治癒させるため、または、この疾患もしくは障害と関連する１つもしくは複数の症状を低減もしくは排除するため、または疾患もしくは障害の生理的結果を軽減もしくは排除するために、本発明による化合物を投与することを意味する。

【0031】

用語「処置」または「ケア」は、「化粧（美容のため）」という限定を伴う場合、処置またはケアは非治療的なものであり、皮膚の美的外見を改善することを目的とする。これは、皮膚の化粧外見に影響を及ぼす皮膚の特性、例えば限定されるものではないが、水和（ｈｙｄｒａｔｉｏｎ）レベル、弾力、張り、艶、緊張または質感を改善することによるものであり得る。用語「ケア」は、本明細書の文脈では、皮膚の特性の維持を指す。皮膚の特性は、健康な被験体、ならびに皮膚および／または粘膜の疾患および／または障害、例えば限定されるものではないが、中でも皮膚の潰瘍および病変、乾癬、皮膚炎、座瘡、または酒さを呈している被験体の両方における、皮膚の化粧処置および／またはケアによって改善され、維持される。

【0032】

本発明で使用される用語「防止」は、疾患または障害または皮膚の特性／特徴の出現または発生を、その出現前に防止する、遅延させる、または妨害する、本発明の活性物質の能力を指す。

【0033】

本発明の文脈では、用語「老化」は、年齢と共に（経年老化（ｃｈｒｏｎｏａｇｉｎｇ））、あるいは太陽（光老化）への、またはたばこの煙、寒冷、高温もしくは風の極度の気候条件、化学的夾雑物（ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｎｔａｍｉｎａｎｔ）もしくは汚染物質（ｐｏｌｌｕｔａｎｔ）などの環境物質への曝露により、皮膚が受ける変化を指し、外部の目に見えるおよび／または触って知覚できるあらゆる変化、例えば限定されるものではないが、皮膚の不連続性の発生、例えば皺、小皺、深い皺、不規則性または粗さ、毛穴のサイズの増大、弾力の喪失、張りの喪失、滑らかさの喪失、変形から回復する能力の喪失、皮膚のたるみ、例えば中でも頬のたるみ、目の下のたるみの出現または二重顎の出現、皮膚色の変化、例えば斑点、発赤、目の下のたるみまたは色素沈着過剰領域、例えば中でも年齢に伴う斑もしくはそばかすの出現、異常な分化、角質増殖、弾性線維症、角化症、脱毛、オレンジピールスキン、コラーゲン構造の喪失、および中でも角質層、真皮、上皮、血管系（例えばクモ状静脈または毛細血管拡張症の出現）または皮膚近辺の組織の他の組織学的変化を含む。用語「光老化」は、皮膚の早期老化をもたらし、老化と同じ身体的特徴、例えば限定されるものではないが、弛緩状態、たるみ、色の変化または色素沈着の不規則性、異常なおよび／または過度の角質化を呈する、紫外線放射への皮膚の長期曝露に起因する一連のプロセスをまとめる。老化（例えば、経年老化、光老化および／または環境老化）に起因する皮膚の変化は、本明細書では、皮膚老化の症状または徴候としても言及される。

【0034】

第１の態様では、本発明は、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧処置および／またはケアにおいて有用である、Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株由来の発酵エキスに関する。本発明者らは、新しい化粧成分；Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株由来の発酵エキスを見出した。有利なことに、この新しい美容のための活性物質は、天然資源に由来するものであり、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧処置および／またはケアにおいて驚くほど有効である。特に、この新しい美容のための活性物質は、皮膚老化の徴候の軽減または防止において有効である。さらに、この新しい美容のための活性物質は、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の色のライトニング、ホワイトニングまたは脱色において有効である。

【0035】

本発明において使用される、Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株由来の発酵エキスは、Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株の発酵生成物である。発酵エキスは、発酵プロセスに供されたＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株由来のエキスであり、発酵ブロスから分離されたＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の細胞由来のエキスであり得るか、または、Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の細胞をなお含有する発酵ブロス自体に由来するエキスであり得る。これは、本明細書では、発酵エキス、または単にエキスと称される。

【0036】

発酵エキスは、Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株を適切な水性培養培地中で発酵させることによって得ることができる。発酵ブロスを、従来のように、所望の生成物の合成および培養培地への分泌を可能にするために撹拌し曝気し、その後、発酵エキスの単離および精製を行う。発酵は、１５℃〜４０℃、典型的には２５℃の温度で撹拌し曝気した培地中で行うことができ、この培地は、ｐＨ５〜９、典型的には約７．５を有するが、発酵の間にｐＨは必要に応じて調整される。発酵の継続時間は、２〜１０日間、一実施形態では３〜８日間、他の実施形態では、４〜７日間である。

【0037】

発酵ブロスからの発酵エキスの単離および精製の方法は、遠心分離、破壊および抽出などの当業者に公知の方法によって行うことができる。例えば、第１のステップにおいて、遠心分離を使用して、培養ブロスからのＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株から細胞を分離することができ、第２のステップにおいて、破壊を使用して、細胞内化合物を放出させることができ、第３のステップにおいて、細胞内化合物の抽出を実施して発酵エキスを得ることができる。エキスは、抽出溶媒に可溶性の細胞内化合物を含む。発酵エキスは、単に発酵ブロスを抽出することによって、つまり、遠心分離ステップおよび破壊ステップを伴わずに得ることができる。しかし、所望の生成物の収量を最大にするために、破壊ステップを利用することが好ましい。

【0038】

Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株の発酵では、外部からの糖、例えば限定されるものではないが、ガラクトース、グルコース、マンノース、マンニトール、アミグダリン、セロビオース、マルトース、デンプン、グリコーゲン、ラクトース、それらの混合物および／またはこれらの糖の混合物を含有するエキスを含有する培養培地を、炭素供給源として使用することができる。一実施形態では、２〜４０ｇ／Ｌ、または３〜１０ｇ／Ｌのマンニトールの外部からの供給を提供することができる。

【0039】

培養培地は、酵母エキス、麦芽エキスまたはペプトンなどの追加の窒素または炭素供給源を含むことができ、これら構成成分のそれぞれの濃度は、０．１〜２０ｇ／Ｌ、または０．５〜１０ｇ／Ｌである。

【0040】

培養培地は、海塩を含んでよい。海塩は、５〜４０ｇ／Ｌ、または２５〜３５ｇ／Ｌの濃度のミネラル塩である。一実施形態では、海塩に加えてまたはその代わりに、ミネラル塩も、発酵培養培地に提供される。これらの塩は、イオンであるＮａ^＋、Ｋ^＋、ＮＨ_４^＋、Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋、ＰＯ_４^３−、ＳＯ_４^２−、Ｃｌ⁻、Ｆ⁻、Ｉ⁻、ＣＯ_３^２−、ＮＯ_３⁻、クエン酸イオン、または微量元素、例えばＣｕ、Ｍｎ、Ｍｏ、Ｆｅ、Ｓｒ、Ｂ、Ｂｒ、Ｓｉ、Ａｌ、Ｌｉ、およびＺｎを提供する塩の中から選択される。

【0041】

抽出ステップは、イソプロパノールなどの溶媒を使用して行われる。エタノール、アセトンおよび酢酸エチルなどの他の溶媒を使用することができる。

【0042】

Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株由来の発酵エキスは、典型的には、ペプチド、遊離アミノ酸、炭水化物および脂質を含有する。一実施形態では、発酵エキスは、百分率の合計が１００％を超えないという条件で、３１〜７９％のペプチド、１〜８％の遊離アミノ酸、１０〜２７％の炭水化物、および１５〜４０％の脂質である相対的な種の百分率を含む。別の実施形態では、発酵エキスは、百分率の合計が１００％を超えないという条件で、３５〜７３％のペプチド、２〜７％の遊離アミノ酸、１２〜２５％の炭水化物、および１７〜３７％の脂質である相対的な種の百分率を示す。別の実施形態では、発酵エキスは、百分率の合計が１００％を超えないという条件で、３９．４〜６５．６％のペプチド、２．２〜６．４％の遊離アミノ酸、１３．３〜２２％の炭水化物、および１８．８〜３２．８％の脂質である相対的な種の百分率を示す。別の実施形態では、発酵エキスは、百分率の合計が１００％を超えないという条件で、３９〜４６％のペプチド、３〜７％の遊離アミノ酸、２１〜２２％の炭水化物、および２９〜３３％の脂質である相対的な種の百分率を示す。これらの百分率は、重量百分率である。

【0043】

典型的には、発酵エキスは、３，４００Ｄａ未満の分子量を有する。これは、サイズ排除カラムＴＳＫ ｇｅｌ Ｇ２０００ＳＷＸＬを用い、実施例２に詳述されている条件下で、クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析によって測定される。サイズ排除カラムは、内径７．８ｍｍ、長さ３０．０ｃｍ、粒径５ｍｍおよび細孔径１２５Åを有する。溶出液は、０．１Ｍのリン酸緩衝液、ｐＨ６．７＋０．１ＭのＮａ_２ＳＯ_４であり、溶出は、１ｍＬ／分の流速で、均一濃度に保った。Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種に由来する発酵エキスは、１１．５〜１３．５分のピーク、滞留時間１０〜２０分を有するガウス分布を伴うピークを示す。

【0044】

例示的な好ましい実施形態では、Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株は、寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株である。この菌株は、１９７７年４月２８日の微生物寄託の国際認識に関するブダペスト条約に従って、前記目的について法的に認められている機関としての、Ｃｏｌｅｃｃｉｏｎ Ｅｓｐａｎｏｌａ ｄｅ Ｃｕｌｔｉｖｏｓ Ｔｉｐｏ（ＣＥＣＴ）（Ｅｄｉｆｉｃｉｏ ３ ＣＵＥ、Ｐａｒｃ Ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｔ ｄｅ Ｖａｌｅｎｃｉａ、Ｃａｔｅｄｒａｔｉｃｏ Ａｇｕｓｔｉｎ Ｅｓｃａｒｄｉｎｏ ９、４６９８０ Ｐａｔｅｒｎａ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、Ｓｐａｉｎ）において、２０１４年３月２０日に寄託されたものである。

【0045】

第２の態様では、本発明は、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧処置および／またはケアのための、発酵エキスの使用を提供する。特に、発酵エキスが、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の色の脱色またはホワイトニングまたはライトニング；年齢に伴う斑の色の脱色またはホワイトニングまたはライトニング；目のくまの皮膚の色の脱色またはホワイトニングまたはライトニング；皮膚の明度の維持または改善；皮膚老化の症状の軽減または防止；眼窩周囲の皺などの皮膚皺の処置；目の下のくまの処置；目の腫れの処置；涙袋の処置；皮膚皺の引き伸ばしまたは減少；目の腫れまたは涙袋の体積の減少；皮膚の弾力の維持または改善；皮膚の抵抗性、張りまたは引張強度の維持または改善を含めた、皮膚の化粧処置および／またはケアにおいて特に有効であることが見出されている。発酵エキスが、コラーゲンおよびエラスチン合成を促進すること、コラゲナーゼの作用に起因するコラーゲンの分解を阻害すること、およびエラスターゼの作用に起因するエラスチンの分解を阻害することが可能であることが見出されている。前記発酵エキスは、老化した皮膚におけるコラーゲンレベルおよびエラスチンレベルを補充および維持し、したがって、皮膚の弾力、皮膚の抵抗性および／または皮膚の引張強度を維持および改善するために役立つと考えられる。これにより、たるみおよび／または皺の傾向が少ない、より緊張し、より張りのある皮膚がもたらされる。前記発酵エキスが終末糖化産物（ＡＧＥ）の形成を阻害することが可能であることも見出されている。これにより、発酵エキスの、老化した皮膚のコラーゲン（Ｉ型コラーゲン）レベルの維持、および、結果として、皮膚の弾力の維持を補助する能力がさらに強まると考えられる。さらに、ＡＧＥの形成を阻害するこの能力により、エラスチンの減少と共に皮膚鈍麻を引き起こすと考えられる化合物の形成の減少が導かれ、したがって、この美容のための活性物質の使用により、皮膚の明度を改善することができる。したがって、本発明の第２の態様の一実施形態では、皮膚の弾力の維持または改善、皮膚の抵抗性、皮膚の張り、皮膚の引張強度および／または皮膚の明度ための、前記発酵エキスの化粧用使用が提供される。本発明は、皮膚の弾力、皮膚の抵抗性、皮膚の引張強度および／または皮膚の明度の維持または改善における化粧用使用のための前記発酵エキス、ならびに、皮膚引き締め剤および緊張剤および／または皮膚増白剤としての前記発酵エキスの化粧用使用を提供する。

【0046】

さらに、本発明の発酵エキスは、皮膚皺、特に、カラスの足跡などの眼窩周囲の皺の引き伸ばしまたはそのサイズの縮小において有効であることが見出されている。したがって、本発明の第２の態様の一実施形態では、皺の処置ための、前記発酵エキスの化粧用使用が提供される。本発明は、皺の処置における化粧用使用のための前記発酵エキス、ならびに、皮膚皺取り剤としての前記発酵エキスの化粧用使用を提供する。

【0047】

本発明の発酵エキスは、涙袋の体積を減少させることにおいて有効であることも見出されている。これは、少なくとも一部において、血管透過性を低下させ（血管透過性の増大が老化した皮膚に関連する）、したがって、目の下の皮膚に保持される流体の量を減少させることにおける発酵エキスの効果に起因すると考えられる。したがって、本発明の第２の態様の一実施形態では、涙袋および／または目の腫れの処置のための、前記発酵エキスの化粧用使用が提供される。本発明は、涙袋および／または目の腫れの処置における化粧用使用のための前記発酵エキス、ならびに、涙袋および／または目の腫れを処置する薬剤としての前記発酵エキスの化粧用使用を提供する。

【0048】

本発明の発酵エキスは、皮膚の色のライトニングまたは脱色もしくはホワイトニングにおいて有効であることも見出されている。これは、一部において、メラニン細胞におけるメラニン形成を阻害すること、チロシナーゼ活性を阻害すること、および／またはメラニン形成プロセスに関与する遺伝子の発現に影響を及ぼすことにおける発酵エキスの効果に起因すると考えられる。したがって、本発明の第２の態様の一実施形態では、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の色のライトニングまたはホワイトニングもしくは脱色ための、前記発酵エキスの化粧用使用が提供される。本発明は、皮膚の色のホワイトニングまたはライトニングまたは脱色に関する化粧用使用のための前記発酵エキス、ならびに、皮膚ホワイトニング剤または皮膚色ライトニング剤または皮膚脱色剤としての前記発酵エキスの化粧用使用を提供する。特に、発酵エキスは、色素沈着過剰の皮膚、例えば、年齢に伴う斑の色のライトニングまたは脱色もしくはホワイトニングにおいて有効である。年齢に伴う斑に影響を及ぼすこの能力は、一部において、ＥＤＮＲＢ遺伝子発現の下方調節ならびにメラニン細胞でのＷｎｔシグナル伝達経路における阻害効果（遺伝子ＤＫＫ１の上方調節およびこの経路に関与する遺伝子の下方調節）における発酵エキスの効果に起因すると考えられる。したがって、本発明の第２の態様の一実施形態では、年齢に伴う斑の処置のための、前記発酵エキスの化粧用使用が提供される。本発明は、年齢に伴う斑の処置における化粧用使用のための前記発酵エキス、ならびに、年齢に伴う斑を処置する薬剤としての前記発酵エキスの化粧用使用を提供する。本発明の発酵エキスは、目のくまにおける皮膚の暗色のライトニングにおいても特に有効である。これは、一部において、ビリルビン分解を促進することにおける発酵エキスの効果、ならびにメラニン形成に影響を及ぼす発酵エキスの能力に起因すると考えられる。したがって、本発明の第２の態様の一実施形態では、目のくまの処置のための、前記発酵エキスの化粧用使用が提供される。本発明は、目のくまの処置における化粧用使用のための前記発酵エキス、ならびに、目のくまを処置する薬剤としての前記発酵エキスの化粧用使用を提供する。この皮膚色ライトニング能力は、皮膚の明度を維持および／または改善する発酵エキスの能力にも寄与する。

【0049】

本発明の第２の態様の一実施形態では、皮膚老化の症状または徴候の軽減および／または防止のための、本発明の発酵エキスの使用が提供される。したがって、本発明は、皮膚老化の症状の軽減および／または防止における化粧用使用のための前記発酵エキス、ならびに、皮膚老化防止剤としての前記発酵エキスの化粧用使用を提供する。皮膚老化の症状または徴候としては、皮膚皺、目のくま、年齢に伴う斑、目の腫れおよび／または涙袋の出現、皮膚の艶がなくなること、皮膚の弾力、皮膚の抵抗性、皮膚の張りおよび／または皮膚の引張強度の喪失が挙げられる。したがって、本実施形態では、化粧処置および／またはケアは、皮膚皺、目のくま、年齢に伴う斑、目の腫れおよび／または涙袋の処置；皮膚皺の引き伸ばしまたは皮膚皺のサイズの縮小；目の腫れおよび／または涙袋の体積の減少；目のくまの皮膚の色のライトニング；年齢に伴う斑の色のライトニング；皮膚の弾力の維持または改善、皮膚の明度、皮膚の抵抗性、皮膚の張りおよび／または皮膚の引張強度を含む。一実施形態では、化粧処置および／またはケアは、皮膚のライトニング、ホワイトニングまたは脱色であり、目のくまの皮膚の色のライトニングおよび／または年齢に伴う斑および／または皮膚の明度の維持または改善を含む。一実施形態では、化粧処置および／またはケアは、目領域の周囲の皮膚の処置であり、皮膚皺、目のくま、目の腫れおよび／または涙袋の処置を含む。

【0050】

本発明の一実施形態では、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧処置および／またはケアは、環境に最も曝露する皮膚、例えば顔の皮膚、手および前腕の皮膚、デコルテおよび脚に対するものである。本発明の一実施形態では、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧処置および／またはケアが、色のライトニング、ホワイトニングまたは脱色のためのものである場合、処置および／またはケアは、より明るい色が個体により美容上望まれる皮膚、例えば年齢に伴う斑などの色素沈着過剰の皮膚、またはメラニン含量が高いことに起因して天然に暗い皮膚、例えば乳頭の皮膚に対するものである。

【0051】

一実施形態では、化粧処置および／またはケアは、コーカサス人またはアジア人である個体に対するものである。一実施形態では、化粧処置および／またはケアは、２０歳を超えた個体に対するものである。

【0052】

本発明の第３の態様に従って、美容のために有効な量の、Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株由来の発酵エキス、ならびに少なくとも１種の美容のために許容される賦形剤、アジュバントおよび／または成分を含む化粧品組成物が提供される。発酵エキスは、本発明の第１の態様に記載されている。前記組成物は、当業者に公知の従来の方法によって調製することができる［「Harry’s Cosmeticology」、第７版、（１９８２年）、Wilkinson J.B.、Moore R.J.編 Longman House、Essex、GB］。

【0053】

本発明の組成物中の発酵エキスの美容のために有効な量、ならびにその投与量は、患者の年齢、状態、皮膚老化の徴候の性質または重症度、処置および／またはケアされる皮膚の暗さ、エキスの投与の経路および頻度を含む数々の要因に応じて決まる。

【0054】

「美容のために有効な量」は、非毒性であり、所望の効果をもたらすのに十分な発酵エキスの量と理解される。本発明の発酵エキスは、所望の化粧的効果を達成するための濃度で使用され、それらとして、エキスの乾燥重量に基づいて、組成物の総重量に対して、０．０００００００００１ｗｔ％〜２０ｗｔ％または０．０００００００１ｗｔ％〜１０ｗｔ％、または０．０００００１ｗｔ％〜５ｗｔ％、または０．０００００１ｗｔ％または０．００００５〜１ｗｔ％が挙げられる。

【0055】

本発明の発酵エキスは、美容のための送達系および／または徐放系に組み込むことができる。

【0056】

用語「送達系」は、本発明のエキスと共に投与される希釈剤、アジュバント、ビヒクルまたは添加剤に関する。これらの化粧品担体は、水、油または界面活性剤などの液体であってよく、これらには、石油、動物、植物または合成起源のもの、例えば限定されるものではないが、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油、ヒマシ油、ポリソルベート、ソルビタンエステル、エーテルサルフェート、サルフェート、ベタイン、グリコシド、マルトシド、脂肪アルコール、ノノキシノール、ポロキサマー、ポリオキシエチレン、ポリエチレングリコール、デキストロース、グリセロール、ジギトニンなどが含まれる。当業者は、本発明の発酵エキスを投与できる異なる送達系において使用することができる希釈剤、アジュバントまたは添加剤について承知している。

【0057】

用語「徐放」は、ある期間にわたり化合物を徐々に放出する送達系を記載する従来の意味で使用される。一実施形態では、当該送達系により、ある期間にわたり化合物の比較的一定な放出レベルを提供する。

【0058】

送達系または徐放系の例として、本発明の活性成分のより高い浸透を達成するために添加され得る、リポソーム、混合リポソーム、オレオソーム、ニオソーム、エトソーム、ミリ粒子、マイクロ粒子、ナノ粒子および固体脂質ナノ粒子、ナノ構造の脂質支持体、スポンジ、シクロデキストリン、小胞、ミセル、界面活性剤の混合ミセル、界面活性剤−リン脂質の混合ミセル、ミリスフェア、ミクロスフェアおよびナノスフェア、リポスフェア、ミリカプセル、マイクロカプセルおよびナノカプセル、ならびにマイクロエマルションおよびナノエマルションが挙げられる。一実施形態では、送達系または徐放系は、リポソーム、界面活性剤−リン脂質の混合ミセルおよびマイクロエマルション、内部逆ミセル構造を有する油中水マイクロエマルション、およびマイクロエマルションを含有するナノカプセルから選択される。

【0059】

徐放系は、先行技術で公知の方法によって調製することができ、それらを含有する組成物は、例えば、接着パッチ、非接着パッチ、閉塞パッチおよび微小電気パッチを含めた局所投与または経皮投与によって投与することができる。一実施形態では、徐放系は、相対的に一定量の本発明のエキスを放出するべきである。徐放系に含有されているエキスの量は、例えば、組成物が投与される場所、本発明のエキスの放出の反応速度および継続時間、ならびに処置または防止される状態、障害および／または疾患の性質に応じて決まる。

【0060】

また、本発明の発酵エキスを含有する組成物は、例えば限定されるものではないが、中でもタルク、ベントナイト、シリカ、デンプンまたはマルトデキストリンなどの、固体有機ポリマーまたは固体無機支持体上に吸着され得る。

【0061】

発酵エキスを含有する組成物は、皮膚に直接接触する布、不織布または医療デバイスに組み込むこともでき、したがって、本発明のエキスを、布、不織布もしくは医療デバイスへの結合系の生分解によって、またはそれらと身体との摩擦に起因して、身体の水分、皮膚のｐＨもしくは体温に起因して放出することができる。さらに、本発明のエキスは、身体に直接接触する衣類の製造に使用される布および不織布に組み込むことができる。

【0062】

上記の送達系および／または徐放系が含まれる、布、不織布、衣類、医療デバイスおよびそれらに化合物を固定化するための手段の例は、文献に見出すことができ、従来技術で公知である［Schaab C.K.（１９８６年）HAPPI １９８６年５月；Nelson G.、「Application of microencapsulation in textiles」、（２００２年）、Int. J. Pharm.、２４２巻（１〜２号）、５５〜６２頁；「Biofunctional Textiles and the Skin」（２００６年） Curr. Probl. Dermatol. ３３巻、Hipler U.C.およびElsner P.、編S. Karger AG、Basel、Switzerland；Malcolm R.K.ら、「Controlled release of a model antibacterial drug from a novel self-lubricating silicone biomaterial」、（２００４年）、J. Cont. Release、９７巻（２号）、３１３〜３２０頁］。好ましい布、不織布、衣類および医療デバイスは、包帯、ガーゼ、Ｔシャツ、ソックス、タイツ、下着、ガードル、手袋、おむつ、生理用ナプキン、包帯剤、ベッドカバー、拭き取り材、接着パッチ、非接着パッチ、閉塞パッチ、微小電気パッチおよび／またはフェイスマスクである。

【0063】

本発明の発酵エキスを含有する化粧品組成物は、任意選択で所望の投与形態を製剤化するのに必要な、美容のために許容される賦形剤を含む、局所または経皮適用の異なるタイプの組成物に使用することができる。

【0064】

本発明の化粧品組成物は、局所または経皮適用用であり得、任意の固体、液体または半固体製剤に、例えば限定されるものではないが、リーブオン製剤およびリンスオフ製剤を含めた、クリーム、多重エマルション、例えば限定されるものではないが、水中油および／または水中シリコーンエマルション、油中水および／またはシリコーン中水エマルション、水／油／水または水／シリコーン／水タイプのエマルション、および油／水／油またはシリコーン／水／シリコーンタイプのエマルション、無水組成物、水性分散液、油、乳液、バルサム、フォーム、ローション、ジェル、クリームジェル、ハイドロアルコール溶液、ハイドログリコール溶液、ヒドロゲル、リニメント、美容液（sera）、石けん、シャンプー、コンディショナー、セラム、多糖類膜、軟膏、ムース、ポマード、パウダー、棒状物質、ペンシル、ならびにスプレーまたはエアロゾル（スプレー）に生成され得る。これらの局所または経皮適用製剤は、当業者に公知の技法を使用して、異なるタイプの固体付属品に、例えば限定されるものではないが、中でも包帯、ガーゼ、Ｔシャツ、ソックス、タイツ、下着、ガードル、手袋、おむつ、生理用ナプキン、包帯剤、ベッドカバー、拭き取り材、接着パッチ、非接着パッチ、閉塞パッチ、微小電気パッチもしくはフェイスマスクに組み込まれ得、または異なるメーキャップ製品に、例えばメーキャップファンデーション、例えばリキッドファンデーションおよびコンパクトファンデーション、メーキャップ除去ローション、メーキャップ除去乳液、目の下用のコンシーラー、アイシャドウ、リップスティック、リッププロテクター、リップグロス、ならびにパウダーに組み込まれ得る。

【0065】

本発明の化粧品組成物は、本発明の化合物の経皮吸収を増大する剤、例えば限定されるものではないが、中でもジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド、界面活性剤、アゾン（１−ドデシルアザシクロヘプタン−２−オン）、アルコール、尿素、エトキシジグリコール、アセトン、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールを含み得る。さらに、本発明の化粧品組成物または皮膚医薬組成物は、本発明のエキスのより高い浸透を達成するために、イオン導入、ソノフォレーシス、エレクトロポレーション、微小電気パッチ、機械的圧力、浸透圧勾配、閉塞治療、マイクロインジェクションもしくは圧力を用いる無針注射、例えば酸素圧による注射、またはそれらの任意の組合せを用いることによって、処置される局所領域に適用され得る。適用領域は、処置および／または防止される状態、障害および／または疾患の性質によって決定される。

【0066】

本発明に記載されている化粧品組成物に含有されている、美容のために許容される賦形剤、アジュバントおよび／または成分の中には、化粧品組成物に一般に使用される追加の成分があり、例えば限定されるものではないが、皮脂生成を減少させる薬剤、抗脂漏剤、艶消し剤（ｍａｔｔｉｆｙｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、抗座瘡剤、真皮もしくは上皮高分子の合成を刺激し、かつ／またはそれらの分解を阻害もしくは防止することができる薬剤、他のコラーゲン合成刺激剤、他のエラスチン合成刺激剤、デコリン合成刺激剤、ラミニン合成刺激剤、デフェンシン合成刺激剤、シャペロン合成刺激剤、ｃＡＭＰ合成刺激剤、ＡＱＰ−３をモジュレートする薬剤、アクアポリン合成をモジュレートする薬剤、アクアポリンファミリーのタンパク質、ヒアルロン酸合成刺激剤、グリコサミノグリカン合成刺激剤、フィブロネクチン合成刺激剤、サーチュイン合成刺激剤、熱ショックタンパク質、熱ショックタンパク質合成刺激剤、神経細胞の開口分泌を阻害する薬剤、他の抗コリン作用剤、筋収縮を阻害する薬剤、他の老化防止剤、他の皺取り剤、制汗剤、抗炎症剤および／もしくは鎮痛剤、抗そう痒剤、鎮静剤、麻酔薬、アセチルコリン受容体凝集の阻害剤、アセチルコリンエステラーゼを阻害する薬剤、皮膚弛緩剤、他のメラニン合成阻害剤、ホワイトニング剤もしくは脱色剤、ＮＯシンターゼ阻害剤、５α還元酵素阻害剤、リシルおよび／もしくはプロリルヒドロキシラーゼ阻害剤、抗酸化剤、フリーラジカルスカベンジャーおよび／もしくは抗大気汚染剤、反応性カルボニル種スカベンジャー、抗糖化剤、抗ヒスタミン剤、抗ウイルス剤、駆虫剤、乳化剤、皮膚軟化剤、有機溶媒、液体噴霧剤、皮膚コンディショナー、保湿剤、保湿物質、アルファヒドロキシ酸、ベータヒドロキシ酸、モイスチャー化粧品、上皮加水分解酵素、ビタミン、アミノ酸、タンパク質、顔料もしくは着色剤、染料、バイオポリマー、ゲル化ポリマー、増粘剤、界面活性剤、軟化剤、乳化剤、結合剤、保存剤、目の下のたるみを低減もしくは処置することができる薬剤、角質除去剤（ｅｘｆｏｌｉａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、角質溶解剤（ｋｅｒａｔｏｌｙｔｉｃ ａｇｅｎｔ）、角質溶解剤（ｄｅｓｑｕａｍａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、抗微生物剤、抗真菌剤、静真菌剤、殺菌剤、静菌剤、脂質および角質層構成成分の合成を刺激する薬剤、セラミド、脂肪酸、他のコラーゲン分解を阻害する薬剤、マトリックスメタロプロテイナーゼを阻害する薬剤、他のエラスチン分解を阻害する薬剤、セリンプロテアーゼを阻害する薬剤、例えばカリクレイン、白血球エラスターゼもしくはカテプシンＧ、線維芽細胞増殖を刺激する薬剤、ケラチノサイト増殖を刺激する薬剤、脂肪細胞増殖を刺激する薬剤、メラニン細胞増殖を刺激する薬剤、ケラチノサイト分化を刺激する薬剤、脂肪細胞分化を刺激するもしくは遅延させる薬剤、抗過角化症剤、面皰溶解剤、抗乾癬剤、ＤＮＡ修復剤、ＤＮＡ保護剤、幹細胞保護剤、安定剤、敏感肌の処置および／もしくはケアのための薬剤、引締め剤、抗ストレッチマーク剤、結合剤、脂肪分解剤もしくは脂肪分解を刺激する薬剤、脂肪生成剤、ＰＧＣ−１α発現をモジュレートする薬剤、ＰＰＡＲγの活性をモジュレートする薬剤、脂肪細胞のトリグリセリド含量を増加させ、もしくは低減する薬剤、抗セルライト剤、ＰＡＲ−２の活性を阻害する薬剤、治癒を刺激する薬剤、コアジュバント治癒剤、上皮再形成を刺激する薬剤、コアジュバント上皮再形成剤、サイトカイン成長因子、毛細血管循環および／もしくは微小循環に作用する薬剤、血管新生を刺激する薬剤、血管透過性を阻害する薬剤、静脈強壮剤（ｖｅｎｏｔｏｎｉｃ ａｇｅｎｔ）、細胞代謝に作用する薬剤、真皮−上皮結合を改善する薬剤、発毛誘導剤、発毛阻害剤もしくは発毛遅延剤、抜け毛遅延剤、保存剤、香料、臭気吸収剤および／または体臭マスキング用のデオドラント、キレート剤、植物エキス、エッセンシャルオイル、海産物エキス、生物工学的プロセスから得られた薬剤、ミネラル塩、細胞エキス、日焼け止めならびに紫外Ａおよび／もしくはＢ線および／もしくは赤外Ａ線に対して活性な有機もしくは無機光防護剤、またはそれらの混合物が含まれ、ただしこれらは、組成物の構成成分の残り、および特にＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株によって生成された発酵エキスと、物理的かつ化学的に適合性がある。同様に、これらの追加の成分の性質は、本発明のエキスの利益を容認しがたく変えるべきではない。これらの追加の成分の性質は、合成であってよく、もしくは植物エキスなどのように天然であってよく、または生物工学的プロセスから得ることができ、または合成プロセスと生物工学的プロセスの組合せから得ることができる。さらなる例は、CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary & Handbook、第１２版（２００８年）に見出すことができる。本発明の文脈では、生物工学的プロセスは、生物またはその一部において、活性成分またはその一部を生成するための任意のプロセスであると理解される。

【0067】

一実施形態では、本発明の化粧品組成物は、
− ０．０００００００００１％（重量）〜２０％（重量）の、Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株由来の発酵エキス；
− ０．１％（重量）〜２０％（重量）の、（ＩＮＣＩ名）グリセリン、プロピレングリコール、ブチレングリコール、ペンチレングリコール、カプリリルグリコール、乳酸、尿素、ヒアルロン酸ナトリウムの群から選択される保湿剤、
− ０．１％（重量）〜２０％（重量）の、（ＩＮＣＩ名）ジメチコン、ステアリン酸グリセリル、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、セテアリルアルコール、レシチン、Ｃ１２〜１５安息香酸アルキル、スクアラン、ラノリン、ベヘニルアルコール、トコフェロール酢酸エステル、パンテノール、Ｂｕｔｙｒｏｓｐｅｒｍｕｍ Ｐａｒｋｉｉバター、パルミチン酸レチニル、レチノールの群から選択される皮膚軟化剤または皮膚コンディショニング剤、
− ０．１％（重量）〜２０％（重量）の、（ＩＮＣＩ名）キサンタンガム、ラウレス硫酸ナトリウム、ステアリン酸（Steraric Acid）、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ステアリルアルコール、セチルアルコール、ステアレス−２、セテアレス−２０、コカミドプロピルベタインの群から選択される界面活性剤
を含有する。

【0068】

組成物は、皮脂生成を減少させる薬剤、抗脂漏剤、艶消し剤および／または抗座瘡剤、例えば限定されるものではないが、中でも、Ｍａｔ−ＸＳ Ｃｌｉｎｉｃａｌ［ＩＮＣＩ：サルコシン、キサンタンガム］、Ｍａｔ−ＸＳ Ｂｒｉｇｈｔ［ＩＮＣＩ：Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ Ｓｔａｍｉｎｅｕｓ葉エキス、マルトデキストリン、キサンタンガム］、Ｂｅｔａｐｕｒ［ＩＮＣＩ：Ｐｅｕｍｕｓ Ｂｏｌｄｕｓ葉エキス、キサンタンガム］またはＮｅｕｒｏｂｉｏｘ［ＩＮＣＩ：Ａｃｈｉｌｌｅａ Ｍｉｌｌｅｆｏｌｉｕｍエキス、キサンタンガム］（ＢＡＳＦによって販売）、Ｅｖｅｒｍａｔ［ＩＮＣＩ：Ｅｎａｎｔｉａ Ｃｈｌｏｒａｎｔｈａ樹皮エキス、オレアノール酸］、Ａｃ．ｎｅｔ［ＩＮＣＩ：ブチレングリコール、ＰＥＧ−６０アーモンド脂肪酸グリセリル、カプリリルグリコール、グリセリン、カルボマー、ノルジヒドログアイアレチン酸、オレアノール酸］またはＳｅｂｕｌｅｓｓ［ＩＮＣＩ：マルトデキストリン、Ｓｙｒｉｎｇａ Ｖｕｌｇａｒｉｓ（ライラック）エキス］（Ｓｅｄｅｒｍａ／Ｃｒｏｄａによって販売）、Ｐｈｙｔｅｓｓｅｎｃｅ Ｐｕｒｐｌｅ Ｇｉｎｓｅｎｇ［ＩＮＣＩ：グリセリンまたはＰｏｌｙｇｏｎｕｍ Ｂｉｓｔｏｒｔａ根エキス］（Ｃｒｏｄａｒｏｍによって販売）、Ｐ−Ｒｅｆｉｎｙｌ［ＩＮＣＩ：Ｌｅｎｓ Ｅｓｃｕｌｅｎｔａ（ヒラマメ）種子エキス］（Ｓｉｌａｂによって販売）、ＥＰＳ Ｓｅａｍａｔ［ＩＮＣＩ：プラクトン菌体外多糖体−５、フェノキシエタノール］またはＥｐｉｄｅｒｍｉｓｔ ４．０［ＩＮＣＩ：プラクトンエキス］（Ｃｏｄｉｆによって販売）、Ｓｅｂｏｒａｍｉ［ＩＮＣＩ：Ｓｉｓｙｍｂｒｉｕｍ Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅエキス、Ａｒｃｔｉｕｍ Ｌａｐｐａ根エキス、クエン酸、グリコール酸、ＰＣＡ亜鉛、スクレロチウムガム］（Ａｌｂａｎ Ｍｕｌｌｅｒによって販売）、Ｐｏｒｅａｗａｙ［ＩＮＣＩ：Ｐｉｓｔａｃｉａ Ｌｅｎｔｉｓｃｕｓ樹脂／Ｐｉｓｔａｃｉａ Ｌｅｎｔｉｓｃｕｓ（マスチック）樹脂、レシチン］（Ｍｉｂｅｌｌｅによって販売）、Ｃｉｔｒｕｓｔｅｍ［ＩＮＣＩ：キサンタンガム、安息香酸ナトリウム、グルコノラクトン、グルコン酸カルシウム］またはＡｆｆｉｐｏｒｅ［ＩＮＣＩ：Ｂａｒｏｓｍａ Ｂｅｔｕｌｉｎａ葉エキス、クエン酸］（Ｐｒｏｖｉｔａｌによって販売）、Ｓｗｅｅｔｏｎｅ［ＩＮＣＩ：糖水解物、マルトデキストリン］（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｅｘｐａｎｓｃｉｅｎｃｅによって販売）、Ｓｅｂｏｘｙｌ［ＩＮＣＩ：Ｒｉｂｅｓ Ｎｉｇｒｕｍ（クロフサスグリ）葉エキス、Ｒｕｂｕｓ Ｉｄａｅｕｓ（ヨーロッパキイチゴ）葉エキス］またはＳａｎｉｓｋｉｎ［ＩＮＣＩ：Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ Ｃｕｓｐｉｄａｔｕｍ根エキス、ミリスチルアルコール］（Ｓｏｌａｂｉａによって販売）、Ａｌｐａｆｌｏｒ Ａｌｐ−Ｓｅｂｕｍ［ＩＮＣＩ：Ｅｐｉｌｏｂｉｕｍ Ｆｌｅｉｓｃｈｅｒｉエキス、クエン酸、ソルビン酸カリウム］またはＲｅｇｕ−Ｓｅｂ［ＩＮＣＩ：Ａｒｇａｎｉａ Ｓｐｉｎｏｓａ核エキス、Ｓｅｒｅｎｏａ Ｓｅｒｒｕｌａｔａ果実エキス、Ｓｅｓａｍｕｍ Ｉｎｄｉｃｕｍ（ゴマ）種子エキス］（ＤＳＭによって販売）、Ｂｏｄｙｆｅｎｓｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：アミノヘキサン酸アセチルジペプチド−３］、Ｍａｔｍａｒｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：シュードアルテロモナス発酵エキス］（Ｌｉｐｏｔｅｃ／Ｌｕｂｒｉｚｏｌによって販売）、Ｄｅｒｍａｃｌａｒｉｎｅ［ＩＮＣＩ：加水分解卵タンパク（および）プロテアーゼ］（Ａｑｕａ Ｂｉｏ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙによって販売）、Ｌｉｎｕｍｉｎｅ［ＩＮＣＩ：Ｌｉｎｕｍ Ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ（アマ）種子エキス］（Ｌｕｃａｓ Ｍｅｙｅｒによって販売）、Ｇｒａｎａｃｔｉｖｅ Ａｃｎｅ［ＩＮＣＩ：Ｏｒｙｚａ Ｓａｔｉｖａ（コメ）ヌカエキス、Ｂｏｓｗｅｌｌｉａ Ｓｅｒｒａｔａエキス、ハチミツエキス、オリゴペプチド−１０］（Ｅｖｏｎｉｋによって販売）、Ｓｅｐｉｃｏｎｔｒｏｌ Ａ５［ＩＮＣＩ：カプリロイルグリシン、サルコシン、Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ Ｚｅｙｌａｎｉｃｕｍ樹皮エキス］（Ｓｅｐｐｉｃによって販売）、Ｓｙｍｐｅｐｔｉｄｅ ３８０［ＩＮＣＩ：ミリストイルヘキサペプチド−２３］（Ｓｙｍｒｉｓｅによって販売）、またはＳｅｂａｒｙｌ［ＩＮＣＩ：ナイアシンアミド、酵母エキス、Ａｅｓｃｕｌｕｓ Ｈｉｐｐｏｃａｓｔａｎｕｍ（セイヨウトチノキ（Horse Chestnunt））種子エキス、グリチルリチン酸アンモニウム、パンテノール、プロピレングリコール、グルコン酸亜鉛、カフェイン、ビオチン］（Ｌａｂｏｒａｔｏｉｒｅｓ Ｓｅｒｏｂｉｏｌｏｇｉｑｕｅｓ／Ｃｏｇｎｉｓ／ＢＡＳＦによって販売）によって形成される群から選択される薬剤をさらに含み得る。

【0069】

組成物は、例えば限定されるものではないが、中でも、Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ、Ｒｏｓａ ｃａｎｉｎａ、Ｃｕｒｃｕｍａ ｌｏｎｇａ、Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ ｃａｃａｏ、Ｇｉｎｋｇｏ ｂｉｌｏｂａ、Ｌｅｏｎｔｏｐｏｄｉｕｍ ａｌｐｉｎｕｍもしくはＤｕｎａｌｉｅｌｌａ ｓａｌｉｎａのエキスもしくは加水分解エキス、中でも、Ｍａｔｒｉｘｙｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：パルミトイルペンタペプチド−４］、Ｍａｔｒｉｘｙｌ（登録商標）３０００（登録商標）［ＩＮＣＩ：パルミトイルテトラペプチド−７、パルミトイルオリゴペプチド］、Ｍａｔｒｉｘｙｌ（登録商標）Ｓｙｎｔｈｅ’６（商標）［ＩＮＣＩ：グリセリン、水、ヒドロキシプロピルシクロデキストリン、パルミトイルトリペプチド−３８］、Ｅｓｓｅｎｓｋｉｎ（商標）［ＩＮＣＩ：カルシウムヒドロキシメチオニン］、Ｒｅｎｏｖａｇｅ［ＩＮＣＩ：テプレノン］、Ｒｅｓｉｓｔｅｍ（商標）［ＩＮＣＩ：Ｇｌｏｂｕｌａｒｉａ Ｃｏｒｄｉｆｏｌｉａ発酵物］、Ｂｅａｕｔｉｆｅｙｅ［ＩＮＣＩ：Ａｌｂｉｚｉａ Ｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎ樹皮エキス、ダルトシド］、Ｍｅｉｒｉｔａｇｅ［ＩＮＣＩ：Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ Ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ根エキス、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｉｄｅｓ Ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａ根エキス、Ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ Ｆａｌｃａｔｕｍ根エキス］、Ｓｅｎｅｓｔｅｍ［ＩＮＣＩ：Ｐｌａｎｔａｇｏ Ｌａｎｃｅｏｌａｔａ葉エキス］、Ｂｅａｕｔｉｆｅｙｅ（商標）［ＩＮＣＩ：ＡＬｂｉｚｉａ Ｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎ樹皮エキス］、Ｖｅｎｕｃｅａｎｅ［ＩＮＣＩ：Ｔｈｅｒｍｕｓ Ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｌｕｓ発酵物］もしくはＤｅｒｍａｘｙｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：パルミトイルオリゴペプチド］（Ｓｅｄｅｒｍａ／Ｃｒｏｄａによって販売）、Ｖｉａｌｏｘ（登録商標）［ＩＮＣＩ：ペンタペプチド−３］、Ｓｙｎ（登録商標）−Ａｋｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：ジペプチドジアミノブチロイルベンジルアミドジアセテート］、Ｓｙｎ（登録商標）−Ｃｏｌｌ［ＩＮＣＩ：パルミトイルトリペプチド−５］、Ｐｈｙｔａｌｕｒｏｎａｔｅ［ＩＮＣＩ：ローカストビーン（Ｃｅｒａｔｏｎｉａ ｓｉｌｉｑｕａ）ガム］、Ｒｅｇｕ−Ｓｃｅｎｃｅ［ＩＮＣＩ：Ａｓｐａｒａｇｕｓ Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ茎エキス、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸カリウム、グルコノラクトン、グルコン酸カルシウム］、Ｓｙｎ−ＴＣ［ＩＮＣＩ：トリフルオロ酢酸テトラデシルアミノブチロイルバリルアミノ酪酸ウレア、パルミトイルトリペプチド−５、パルミトイルジペプチド−５ジアミノブチロイルヒドロキシトレオニン］もしくはＰｒｅｒｅｇｅｎ（登録商標）［ＩＮＣＩ：Ｇｌｙｃｉｎｅ ｓｏｊａ（ダイズ）タンパク質、オキシドレダクターゼ］（Ｐｅｎｔａｐｈａｒｍ／ＤＳＭによって販売）、Ｍｙｏｘｉｎｏｌ（商標）［ＩＮＣＩ：加水分解Ｈｉｂｉｓｃｕｓ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｓエキス］、Ｓｙｎｉｏｒａｇｅ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルテトラペプチド−１１］、Ｄｅｒｍｉｃａｎ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルテトラペプチド−９］、Ｓｈａｄｏｗｎｙｌ［ＩＮＣＩ：藻類エキス、へキシレングリコール、カプリリルグリコール、キサンタンガム］もしくはＤＮ ＡＧＥ（商標）ＬＳ［ＩＮＣＩ：Ｃａｓｓｉａ ａｌａｔａ葉エキス］（Ｌａｂｏｒａｔｏｉｒｅｓ Ｓｅｒｏｂｉｏｌｏｇｉｑｕｅｓ／Ｃｏｇｎｉｓ／ＢＡＳＦによって販売）、Ａｌｇｉｓｕｍ Ｃ（登録商標）［ＩＮＣＩ：マンヌロン酸メチルシラノール］、Ｅｘａｇｅ［ＩＮＣＩ：イミダゾリルエチルジアミノプロパンアミド］もしくはＨｙｄｒｏｘｙｐｒｏｌｉｓｉｌａｎｅ ＣＮ（登録商標）［ＩＮＣＩ：アスパラギン酸メチルシラノールヒドロキシプロリン］（Ｅｘｓｙｍｏｌによって販売）、Ａｒｇｉｒｅｌｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：アセチルヘキサペプチド−８］、ＳＮＡＰ−７［ＩＮＣＩ：アセチルヘプタペプチド−４］、ＳＮＡＰ−８［ＩＮＣＩ：アセチルオクタペプチド−３］、Ｓｅｒｉｌｅｓｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：ヘキサペプチド−１０］、Ｌｅｕｐｈａｓｙｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：ペンタペプチド−１８］、Ｉｎｙｌｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：アセチルヘキサペプチド−３０］、Ａｌｄｅｎｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：加水分解（Ｈｙｄｒｏｌｉｚｅｄ）コムギタンパク質、加水分解ダイズタンパク質、トリペプチド−１］、Ｐｒｅｖｅｎｔｈｅｌｉａ（登録商標）［ＩＮＣＩ：ジアミノプロピオノイルトリペプチド−３３］、Ｄｅｃｏｒｉｎｙｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：トリペプチド−１０シトルリン］、Ｄｅｃｏｒｉｎｏｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：トリペプチド−９シトルリン］、Ｔｒｙｌａｇｅｎ（登録商標）［ＩＮＣＩ：シュードアルテロモナス発酵エキス、加水分解コムギタンパク質、加水分解ダイズタンパク質、トリペプチド−１０シトルリン、トリペプチド−１］、Ｅｙｅｓｅｒｙｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：アセチルテトラペプチド−５］、Ｐｅｐｔｉｄｅ ＡＣ２９［ＩＮＣＩ：アセチルトリペプチド−３０シトルリン］、Ｒｅｌｉｓｔａｓｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：アセチルアルギニルトリプトフィルジフェニルグリシン］、Ｔｈｅｒｍｏｓｔｒｅｓｓｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：アセチルテトラペプチド−２２］、Ｌｉｐｏｃｈｒｏｍａｎ（商標）［ＩＮＣＩ：ジメチルメトキシクロマノール］、Ｃｈｒｏｍａｂｒｉｇｈｔ（登録商標）［ＩＮＣＩ：パルミチン酸ジメチルメトキシクロマニル］、Ａｎｔａｒｃｔｉｃｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：シュードアルテロモナス発酵エキス］、ｄＧｌｙａｇｅ（商標）［ＩＮＣＩ：リシンＨＣｌ、レシチン、トリペプチド−９シトルリン］、Ｖｉｌａｓｔｅｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：リシンＨＣｌ、レシチン、トリペプチド−１０シトルリン］、Ｈｙａｄｉｓｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：シュードアルテロモナス発酵エキス］、Ｈｙａｎｉｆｙ（商標）［ＩＮＣＩ：異性化糖］、Ｄｉｆｆｕｐｏｒｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルヘキサペプチド−３７］、Ｓｉｌｕｓｙｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：ダイズ（Ｇｌｙｃｉｎｅ Ｓｏｊａ）油、セスキオレイン酸ソルビタン、イソヘキサデカン、ヒアルロン酸ナトリウム、ラウリルジモニウムヒドロキシプロピル加水分解ダイズタンパク質、アセチルヘキサペプチド−３９］、Ａｄｉｆｙｌｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルヘキサペプチド−３８］、Ｕｐｌｅｖｉｔｙ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルテトラペプチド−２］、Ｊｕｖｅｌｅｖｅｎ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルヘキサペプチド−５１アミド］もしくはＴｅｌａｎｇｙｎ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルテトラペプチド−４０］（Ｌｉｐｏｔｅｃ／Ｌｕｂｒｉｚｏｌによって販売）、Ｋｏｌｌａｒｅｎ（登録商標）［ＩＮＣＩ：トリペプチド−１、デキストラン］（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｅｕｒｏｐｅｅｎ ｄｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｅ Ｃｅｌｌｕｌａｉｒｅによって販売）、Ｃｏｌｌａｘｙｌ（登録商標）ＩＳ［ＩＮＣＩ：ヘキサペプチド−９］、Ｌａｍｉｎｉｘｙｌ ＩＳ（商標）［ＩＮＣＩ：ヘプタペプチド］、Ｏｒｓｉｒｔｉｎｅ（商標）ＧＬ［ＩＮＣＩ：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ（コメ）エキス］、Ｄ’Ｏｒｉｅｎｔｉｎｅ（商標）ＩＳ［ＩＮＣＩ：Ｐｈｏｅｎｉｘ ｄａｃｔｙｌｉｆｅｒａ（デーツ）種子エキス］、Ｐｈｙｔｏｑｕｉｎｔｅｓｃｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：ヒトツブコムギ（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ｍｏｎｏｃｏｃｃｕｍ）エキス］、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｑ１０［ＩＮＣＩ：トリフルオロ酢酸ペンタペプチド−３４］、Ｔｅｌｏｓｅｎｓｅ［ＩＮＣＩ：加水分解酵母タンパク質、加水分解ダイズタンパク質］もしくはＱｕｉｎｔｅｓｃｉｎｅ（商標）ＩＳ［ＩＮＣＩ：ジペプチド−４］（Ｖｉｎｃｉｅｎｃｅ／ＩＳＰ／Ａｓｈｌａｎｄによって販売）、ＢＯＮＴ−Ｌ−Ｐｅｐｔｉｄｅ［ＩＮＣＩ：パルミトイルヘキサペプチド−１９］（Ｉｎｆｉｎｉｔｅｃ Ａｃｔｉｖｏｓによって販売）、Ｄｅｅｐａｌｉｎｅ（商標）ＰＶＢ［ＩＮＣＩ：パルミトイル加水分解コムギタンパク質］もしくはＳｅｐｉｌｉｆｔ（登録商標）ＤＰＨＰ［ＩＮＣＩ：ジパルミトイルヒドロキシプロリン］（Ｓｅｐｐｉｃによって販売）、Ｇａｔｕｌｉｎｅ（登録商標）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［ＩＮＣＩ：Ａｃｍｅｌｌａ ｏｌｅｒａｃｅａエキス］、Ｇａｔｕｌｉｎｅ（登録商標）Ｉｎ−Ｔｅｎｓｅ［ＩＮＣＩ：Ｓｐｉｌａｎｔｈｅｓ ａｃｍｅｌｌａ花エキス］もしくはＧａｔｕｌｉｎｅ（登録商標）Ａｇｅ Ｄｅｆｅｎｓｅ ２［ＩＮＣＩ：Ｊｕｇｌａｎｓ ｒｅｇｉａ（クルミ）種子エキス］（Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅによって販売）、Ｔｈａｌａｓｓｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：藻類エキス］（Ｂｉｏｔｅｃｈｍａｒｉｎｅによって販売）、ＣｈｒｏＮＯｌｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：カプロオイルテトラペプチド−３］もしくはＴｈｙｍｕｌｅｎ−４［ＩＮＣＩ：アセチルテトラペプチド−２］（Ａｔｒｉｕｍ／Ｕｎｉｐｅｘ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓによって販売）、ＥｑｕｉＳｔａｔ［ＩＮＣＩ：Ｐｙｒｕｓ ｍａｌｕｓ果実エキス、Ｇｌｙｃｉｎｅ ｓｏｊａ種子エキス］もしくはＪｕｖｅｎｅｓｃｅ［ＩＮＣＩ：エトキシジグリコールおよびカプリル酸トリグリセリド、レチノール、ウルソール酸、フィトナジオン、イロマスタット］、Ｅｐｉｇｅｎｉｓｔ（商標）［ＩＮＣＩ：Ｖｏａｎｄｚｅｉａ Ｓｕｂｔｅｒｒａｎｅａ種子エキス］、ＬＯＸ−ＡＧＥ（商標）［ＩＮＣＩ：Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ Ｉｎｔｙｂｕｓ（キクニガナ）葉エキス］（Ｃｏｌｅｔｉｃａ／Ｅｎｇｅｌｈａｒｄ／ＢＡＳＦによって販売）、Ａｍｅｌｉｏｘ［ＩＮＣＩ：カルノシン、トコフェロール、Ｓｉｌｙｂｕｍ ｍａｒｉａｎｕｍ果実エキス］、Ｐｈｙｔｏｃｅｌｌｔｅｃ Ｓｙｍｐｈｙｔｕｍ［ＩＮＣＩ：イソマルト、Ｓｙｍｐｈｙｔｕｍ Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ根の細胞培養物、レシチン、安息香酸ナトリウム］、Ｓｎｏｗ Ａｌｇａｅ Ｐｏｗｄｅｒ［ＩＮＣＩ：クラミドカプサエキス、マルトデキストリン、レシチン］、Ｄｅｒｍｃｏｍ［ＩＮＣＩ：アカシアセネガルガム、Ｃｒｏｃｕｓ Ｃｈｙｒｓａｎｔｈｕｓ球根エキス］、Ａｎａｇａｉｎ［ＩＮＣＩ：Ｐｉｓｕｍ Ｓａｔｉｖｕｍ（エンドウマメ）、芽エキス］もしくはＰｈｙｔｏＣｅｌｌＴｅｃ Ｍａｌｕｓ Ｄｏｍｅｓｔｉｃａ［ＩＮＣＩ：Ｍａｌｕｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ果実細胞培養物］（Ｍｉｂｅｌｌｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙによって販売）、Ｂｉｏｘｉｌｉｆｔ［ＩＮＣＩ：Ｐｉｍｐｉｎｅｌｌａ ａｎｉｓｕｍエキス］、Ｖｉｔａｇｅｎｙｌ［ＩＮＣＩ：Ｐｒｕｎｕｓ Ｐｅｒｓｉｃａ（モモ）葉エキス］もしくはＳＭＳ Ａｎｔｉ−Ｗｒｉｎｋｌｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：Ａｎｎｏｎａ ｓｑｕａｍｏｓａ種子エキス］（Ｓｉｌａｂによって販売）、Ｓｙｍｖｉｔａｌ Ａｇｅｒｅｐａｉｒ［ＩＮＣＩ：Ｚｉｎｇｉｂｅｒ Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ（ショウガ）根エキス］（Ｓｙｍｒｉｓｅによって販売）、Ｃｉｔｒｕｓｔｅｍ［ＩＮＣＩ：キサンタンガム、安息香酸ナトリウム、グルコノラクトン、グルコン酸カルシウム］、Ｍｅｌａｖｏｉｄ［ＩＮＣＩ：Ｂｏｅｒｈａｖｉａ Ｄｉｆｆｕｓａ根エキス］、Ｄａｒｋｏｕｔ［ＩＮＣＩ：Ｈｙｐｏｘｉｓ Ｒｏｏｐｅｒｉ根茎エキス、Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ Ｓｐｉｎｏｓａガム］もしくはＬｉｎｅｆｉｌｌ［ＩＮＣＩ：ジメチルイソソルビド、Ｓｅｓａｍｕｍ Ｉｎｄｉｃｕｍ（ゴマ）種子エキス］（Ｐｒｏｖｉｔａｌによって販売）、Ａｄｉｐｏｆｉｌｌ’ｉｎ［ＩＮＣＩ：オルニチン、リン脂質、糖脂質］、Ｅｌｉｘ−ＩＲ［ＩＮＣＩ：Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ Ａｖｉｃｕｌａｒｅエキス］もしくはＰｒｏｇｅｌｉｎｅ［ＩＮＣＩ：トリフルオロアセチルトリペプチド−２］（Ｌｕｃａｓ Ｍｅｙｅｒによって販売）、Ａｍｉｐｅｒｆｅｃｔ［ＩＮＣＩ：Ｇａｕｌｔｈｅｒｉａ Ｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓ（ウィンターグリーン）葉エキス］もしくはＲｅｐｕｌｐａｍｉ ＥＲ［ＩＮＣＩ：Ａｄａｎｓｏｎｉａ Ｄｉｇｉｔａｔａ果肉エキス、Ｈｉｂｉｓｃｕｓ Ｓａｂｄａｒｉｆｆａ花エキス］（Ａｌｂａｎ Ｍｕｌｌｅｒによって販売）、Ｃｅｌｌｏｘｙｌ［ＩＮＣＩ：Ｕａｐａｃａ Ｂｏｊｅｒｉ葉エキス］もしくはＲｅｓｉｓｔｒｅｓｓ［

ＩＮＣＩ：Ｓｏｐｈｏｒａ Ｊａｐｏｎｉｃａ花エキス］（Ｓｏｌａｂｉａによって販売）、Ａｃｔｉｐｏｒｉｎｅ ８Ｇ［ＩＮＣＩ：Ｊａｎｉａ Ｒｕｂｅｎｓエキス］もしくはＥＰＳ Ｓｅａｆｉｌｌ［ＩＮＣＩ：プラクトンエキス］、Ｌａｋｅｓｉｓ［ＩＮＣＩ：Ｐｉｓｔａｃｉａ Ｌｅｎｔｉｓｃｕｓ（マスチック）樹脂］（Ｃｏｄｉｆによって販売）、Ｎｏｖｈｙａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｇ［ＩＮＣＩ：アセチルグルコサミンリン酸二ナトリウム］もしくはＲｕｂｉｘｙｌ［ＩＮＣＩ：ヘキサペプチド−４７］（Ｉｎｄｕｃｈｅｍによって販売）、Ｃａ^２＋チャネルのアンタゴニスト、例えば限定されるものではないが、アルベリン、マンガンもしくはマグネシウム塩、ある特定の第二級もしくは第三級アミン、レチノールおよびその誘導体、イデベノンおよびその誘導体、補酵素Ｑ１０およびその誘導体、ボスウェル酸およびその誘導体、ＧＨＫおよびその誘導体および／もしくは塩、カルノシンおよびその誘導体、ＤＮＡ修復酵素、例えば限定されるものではないが、光回復酵素もしくはＴ４エンドヌクレアーゼＶ、もしくは塩素チャネルアゴニスト、ならびに／またはこれらの混合物によって形成される群から選択される追加の皺取り剤および／または老化防止剤をさらに含み得る。

【0070】

組成物は、例えば限定されるものではないが、マデカッソシドのエキス、エチナシのエキス、アマランス種子油、ビャクダン油、ピーチツリー葉のエキス、Ａｌｏｅ ｖｅｒａ、Ａｒｎｉｃａ ｍｏｎｔａｎａ、Ａｒｔｅｍｉｓｉａ ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ａｓａｒｕｍ ｍａｘｉｍｕｍ、Ｃａｌｅｎｄｕｌａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ、Ｃａｐｓｉｃｕｍ、Ｃｅｎｔｉｐｅｄａ ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｉｉ、Ｃｈａｍｏｍｉｌｌａ ｒｅｃｕｔｉｔａ、Ｃｒｉｎｕｍ ａｓｉａｔｉｃｕｍ、Ｈａｍａｍｅｌｉｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ、Ｈａｒｐａｇｏｐｈｙｔｕｍ ｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓ、Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｐｅｒｆｏｒａｔｕｍ、Ｌｉｌｉｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ、Ｍａｌｖａ ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ、Ｍｅｌａｌｅｕｃａ ａｌｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ、Ｏｒｉｇａｎｕｍ ｍａｊｏｒａｎａ、Ｏｒｉｇａｎｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｐｒｕｎｕｓ ｌａｕｒｏｃｅｒａｓｕｓ、Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉａｌｉｓ、Ｓａｌｉｘ ａｌｂａ、Ｓｉｌｙｂｕｍ ｍａｒｉａｎｕｍ、Ｔａｎａｃｅｔｕｍ ｐａｒｔｈｅｎｉｕｍ、Ｔｈｙｍｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｕｎｃａｒｉａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓもしくはＶａｃｃｉｎｕｍ ｍｙｒｔｉｌｌｕｓのエキス、オメガ−３脂肪酸およびオメガ−６脂肪酸、Ｎｅｕｔｒａｚｅｎ（商標）［ＩＮＣＩ：水、ブチレングリコール、デキストラン、パルミトイルトリペプチド−８］（Ａｔｒｉｕｍ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ／Ｕｎｉｐｅｘ Ｇｒｏｕｐによって販売）、Ｄｅｌｉｓｅｎｓ（商標）［提唱ＩＮＣＩ：アセチルヘキサペプチド−４６］（Ｌｉｐｏｔｅｃ／Ｌｕｂｒｉｚｏｌによって販売）、Ｍｅｌｉｐｒｅｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：デキストラン、アセチルヘプタペプチド−１］（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｅｕｒｏｐｅｅｎ ｄｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｅ Ｃｅｌｌｕｌａｉｒｅ／Ｕｎｉｐｅｘ Ｇｒｏｕｐによって販売）、Ｓｋｉｎａｓｅｎｓｙｌ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルテトラペプチド−１５］もしくはＡｎａｓｅｎｓｙｌ（商標）［ＩＮＣＩ：マンニトール、グリチルリチン酸アンモニウム、カフェイン、Ｈｉｐｐｏｃａｓｔａｎｕｍ（マロニエ）エキス］、Ｓｈａｗｄｏｎｙｌ［ＩＮＣＩ：藻類エキス、へキシレングリコール、カプリリルグリコール、キサンタンガム］（Ｌａｂｏｒａｔｏｉｒｅｓ Ｓｅｒｏｂｉｏｌｏｇｉｑｕｅｓ／Ｃｏｇｎｉｓ／ＢＡＳＦによって販売）、ＭＡＸｎｏｌｉａ［ＩＮＣＩ：Ｍａｇｎｏｌｉａ Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ樹皮エキス、Ｖｉｔｉｓ Ｖｉｎｉｆｅｒａ／Ｖｉｔｉｓ Ｖｉｎｉｆｅｒａ（ブドウ）種子エキス、トコフェロール］、ＣＭ−Ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ−Ｃｈａｌｃｏｎｅ［ＩＮＣＩ：テトラカルボキシメチルナリンゲニンカルコン４ナトリウム］（Ｍｉｂｅｌｌｅによって販売）、Ｕｎｉｓｏｏｔｈ［ＩＮＣＩ：没食子酸プロピル、没食子酸グルコシド、エピガロカテチンガレチルグルコシド（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｈｅｃｈｉｎ Ｇａｌｌｅｔｙｌ Ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ）］（Ｉｎｄｕｃｈｅｍによって販売）、Ｃａｌｍｏｓｅｎｓｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルジペプチド−１］（Ｓｅｄｅｒｍａ／Ｃｒｏｄａによって販売）、補酵素Ｑ１０またはアルキルグリセリルエーテルによって形成される群から選択される抗炎症剤および／または鎮痛剤をさらに含み得る。

【0071】

組成物は、例えば限定されるものではないが、中でもＭａｌｐｉｇｈｉａ ｐｕｎｉｃｉｔｏｌｉａ、Ｃｙｎａｒａ ｓｃｏｌｙｍｕｓ、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｈｅｒｂａｃｅｕｍ、Ａｌｏｅ Ｂａｒｂａｄｅｎｓｉｓ、Ｐａｎｉｃｕｍ ｍｉｌｉａｃｅｕｍ、Ｍｏｒｕｓ ｎｉｇｒａ、Ｓｅｓａｍｕｍ ｉｎｄｉｃｕｍ、Ｇｌｙｃｉｎｅ ｓｏｊａ、Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ｖｕｌｇａｒｅのエキス、Ｐｒｏｎａｌｅｎ（登録商標）Ｒｅｆｉｒｍｉｎｇ ＨＳＣ［ＩＮＣＩ：Ｔｒｉｔｉｃｕｍ Ｖｕｌｇａｒｅ、Ｓｉｌｙｂｕｍ Ｍａｒｉａｎｕｍ、Ｇｌｙｃｉｎｅ Ｓｏｙ、Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ Ａｒｖｅｎｓｅ、Ａｌｃｈｅｍｉｌｌａ Ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｍｅｄｉｃａｇｏ Ｓａｔｉｖａ、Ｒａｐｈａｎｕｓ Ｓａｔｉｖｕｓ］、Ｌｉｐｏｕｔ［ＩＮＣＩ：プランクトンエキス］もしくはＰｏｌｙｐｌａｎｔ（登録商標）Ｒｅｆｉｒｍｉｎｇ［ＩＮＣＩ：Ｃｏｎｅｆｌｏｗｅｒ、Ａｓｉａｔｉｃ Ｃｅｎｔｅｌｌａ、ヒバマタ、フェヌグリーク］（Ｐｒｏｖｉｔａｌによって販売）、Ｌａｎａｂｌｕｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：ソルビトール、藻類エキス］（Ａｔｒｉｕｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ／Ｕｎｉｐｅｘ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓによって販売）、Ｐｅｐｈａ（登録商標）−Ｎｕｔｒｉｘ［ＩＮＣＩ：天然栄養因子］（Ｐｅｎｔａｐｈａｒｍ／ＤＳＭによって販売）、イソフラボンを含有する植物エキス、Ｂｉｏｐｅｐｔｉｄｅ ＥＬ（商標）［ＩＮＣＩ：パルミトイルオリゴペプチド］、Ｂｉｏｐｅｐｔｉｄｅ ＣＬ（商標）［ＩＮＣＩ：パルミトイルオリゴペプチド］、Ｖｅｘｅｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：水（アクア）、プロピレングリコール、レシチン、カフェイン、パルミトイルカルニチン］、Ｍａｔｒｉｘｙｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：パルミトイルペンタペプチド−３］、Ｍａｔｒｉｘｙｌ（登録商標）３０００［ＩＮＣＩ：パルミトイルテトラペプチド−３、パルミトイルオリゴペプチド］もしくはＢｉｏ−Ｂｕｓｔｙｌ（商標）［ＩＮＣＩ：ポリメタクリル酸グリセリル、ラーネラ属ダイズタンパク質発酵物、水（アクア）、プロピレングリコール、グリセリン、ＰＥＧ−８、パルミトイルオリゴペプチド］（Ｓｅｄｅｒｍａ／Ｃｒｏｄａによって販売）、Ｄｅｒｍｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ（登録商標）ＨＣ［ＩＮＣＩ：グリセリン、水（アクア）、グリコサミノグリカン、グリコーゲン］、Ａｇｌｙｃａｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：マンニトール、シクロデキストリン、グリコーゲン、Ａｒａｔｏｓｔａｐｈｙｌｏｓ Ｕｖａ Ｕｒｓｉ葉エキス］、Ｃｙｔｏｋｉｎｏｌ（登録商標）ＬＳ［ＩＮＣＩ：加水分解カゼイン、加水分解酵母タンパク質、リシンＨＣｌ］もしくはＦｉｒｍｉｄｅｒｍ（登録商標）ＬＳ９１２０［ＩＮＣＩ：Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ Ｃａｔａｐｐａ葉エキス、Ｓａｍｂｕｃｕｓ Ｎｅｇｒａ花エキス、ＰＶＰ、タンニン酸］（Ｌａｂｏｒａｔｏｉｒｅｓ Ｓｅｒｏｂｉｏｌｏｇｉｑｕｅｓ／Ｃｏｇｎｉｓ／ＢＡＳＦによって販売）、Ｌｉｆｔｌｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：加水分解コムギタンパク質］、Ｒａｆｆｅｒｍｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：加水分解ダイズ粉］もしくはＲｉｄｕｌｉｓｓｅ Ｃ（登録商標）［加水分解ダイズタンパク質］（Ｓｉｌａｂによって販売）、Ｓｅｒｉｌｅｓｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：ヘキサペプチド−１０］、Ｄｅｃｏｒｉｎｙｌ（商標）［ＩＮＣＩ：トリペプチド−１０シトルリン］、Ｔｒｙｌａｇｅｎ（登録商標）［ＩＮＣＩ：シュードアルテロモナス発酵エキス、加水分解コムギタンパク質、加水分解ダイズタンパク質、トリペプチド−１０シトルリン、トリペプチド−１］、Ｓｉｌｕｓｙｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：ダイズ（Ｇｌｙｃｉｎｅ Ｓｏｊａ）油、セスキオレイン酸ソルビタン、イソヘキサデカン、ヒアルロン酸ナトリウム、ラウリルジモニウムヒドロキシプロピル加水分解ダイズタンパク質、アセチルヘキサペプチド−３９］もしくはＡｄｉｆｙｌｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルヘキサペプチド−３８］（Ｌｉｐｏｔｅｃ／Ｌｕｂｒｉｚｏｌによって販売）、Ｕｒｓｏｌｉｓｏｍｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：レシチン、ウルソール酸、アテロコラーゲン、キサンタンガム、コンドロイチン硫酸ナトリウム］、Ｅｐｅｒｕｌｉｎｅ［ＩＮＣＩ：マルトデキストリン、Ｅｐｅｒｕａ Ｆａｌｃａｔａ樹皮エキス］もしくはＣｏｌｌａｌｉｆｔ（登録商標）［ＩＮＣＩ：加水分解麦芽エキス］（Ｃｏｌｅｔｉｃａ／Ｅｎｇｅｌｈａｒｄ／ＢＡＳＦによって販売）、Ｓｙｎ（登録商標）−Ｃｏｌｌ［ＩＮＣＩ：パルミトイルトリペプチド−５］（Ｐｅｎｔａｐｈａｒｍ／ＤＳＭによって販売）、Ｈｙｄｒｉａｍｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：水（アクア）、グリコサミノグリカン、スクレロチウムガム］（Ａｔｒｉｕｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ／Ｕｎｉｐｅｘ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓによって販売）、Ｓｐｈｉｎｇｏｋｉｎｅ ＮＰ［ＩＮＣＩ：カプロオイルフィトスフィンゴシン］（Ｅｖｏｎｉｋによって販売）、Ｂｏｄｙ３ Ｃｏｍｐｌｅｘ［ＩＮＣＩ：ベントナイト、Ｂｕｔｙｒｏｓｐｅｒｍｕｍ Ｐａｒｋｉｉ（シア）実エキス、Ｐｅｒｓｅａ Ｇｒａｔｉｓｓｉｍａ（アボカド）果実エキス］（Ｌｕｃａｓ Ｍｅｙｅｒによって販売）、Ｐｒｏｓｙｎｅｒｇｅｎ ＤＦ［ＩＮＣＩ：Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ／Ｕｌｋｅｎｉａ Ａｍｏｅｂｏｉｄｅａ発酵エキス濾液］（Ｌｏｎｚａによって販売）、またはＩＰ２０００［ＩＮＣＩ：デキストラン、トリフルオロアセチルトリペプチド−２］（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｅｕｒｏｐｅｅｎ ｄｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｅ Ｃｅｌｌｕｌａｉｒｅ／Ｕｎｉｐｅｘ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓによって販売）によって形成される群から選択される、追加の引締め剤および／または再高密度化剤（redensifying agent）および／または再構成剤をさらに含むことができる。

【0072】

組成物は、脂肪細胞のトリグリセリド含量を低減する薬剤、脂肪細胞分化遅延剤、抗セルライト剤、脂肪分解剤、静脈強壮剤、ＰＧＣ−１α発現を阻害する薬剤またはＰＰＡＲγの活性を阻害する薬剤をさらに含み得る。そのような薬剤は、例えば限定されるものではないが、中でも、Ａｌｃｈｅｍｉｌｌａ ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ａｎｇｅｌｉｃａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ａｒｍｅｎｉａｃｅａ ｓｐ．、Ａｒｎｉｃａ ｍｏｎｔａｎａ Ｌ、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｉｓ ｐｌａｔｉｃｏｄｏｎ、ｂａｍｂｏｏ、Ｂｅｔｕｌａ ａｌｂａ、Ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ、Ｃａｌｅｎｄｕｌａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ、ｃａｎｇｚｈｕ、Ｃｅｃｒｏｐｉａ ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ、Ｃｅｌｏｓｉａ ｃｒｉｓｔａｔａ、Ｃｅｎｔｅｌｌａ ａｓｉａｔｉｃａ、Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉｕｍ ｑｕｉｎｏａ、Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｌｌｕｍ ｉｎｄｉｃｕｍ、Ｃｉｍｉｆｕｇａ ｒａｃｅｍｏｓａ、Ｃｉｔｒｕｓ ａｕｒａｎｔｉｕｍ ａｍａｒａ、Ｃｎｉｃｕｓ ｂｅｎｅｄｉｃｔｕｓ、Ｃｏｆｆｅａ ａｒａｂｉｃａ、Ｃｏｌａ ｎｉｐｉｄａ、Ｃｏｌｅｕｓ ｂａｒｂａｔｕｓ、Ｃｏｌｅｕｓ ｂｌｕｍｅｉ、Ｃｏｌｅｕｓ ｅｓｑｕｉｒｏｌｉｉ、Ｃｏｌｅｕｓ ｆｏｒｓｋｏｈｌｉｉ、Ｃｏｌｅｕｓ ｓｃｕｔｅｌｌａｒｏｉｄｅｓ、Ｃｏｌｅｕｓ ｓｐ．、Ｃｏｌｅｕｓ ｘａｎｔｈａｎｔｕｓ、Ｃｏｍｍｉｐｈｏｒａ ｍｙｒｒｈａ、Ｃｒｉｔｈｍｕｍ ｍａｒｉｔｉｍｕｍ、Ｃｕｍｉｎｕｍ ｃｙｍｉｎｕｍ、Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ ｃｏｌｅｔｔｉｉ、Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ ｖｉｌｌｏｓａ、Ｅｕｇｅｎｉａ ｃａｒｙｏｐｈｙｌｌｕｓ、Ｆｉｌｉｐｅｎｄｕｌａ ｕｌｍａｒｉａ Ｌ、Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、Ｇｅｌｉｄｉｕｍ Ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｅｕｍ、Ｇｉｎｋｇｏ ｂｉｌｏｂａ、ｇｉｎｋｇｏ ｂｉｌｏｂａ、Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ、Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｇｌａｂｒａ、Ｈｅｄｅｒａ ｈｅｌｉｘ（セイヨウキヅタエキス）、Ｈｉｂｉｓｃｕｓ ｓａｂｄａｒｉｆｆａ、Ｈｏｒｄｅｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｈｕｍｕｌｕｓ ｌｕｐｕｌｕｓ、Ｈｙｐｅｒｙｃｕｍ ｐｅｒｆｏｒａｔｕｍ、Ｉｌｅｘ ｐａｒａｇｕａｒｉｅｎｓｉｓ、Ｋｉｇｅｌｉａ ａｆｒｉｃａｎａ、Ｌａｍｉｎａｒｉａ ｄｉｇｉｔａｔａ、Ｌｕｐｉｎｕｓ ｐｅｒｅｎｎｉｓ、Ｎｅｌｕｍｂｉｕｍ ｓｐｅｃｉｏｓｕｍ、Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｃｕｓ ｂｅｎｔｈ、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｕｌｌｉｎｉａ ｃｕｐａｎａ、Ｐｅｕｍｕｓ ｂｏｌｄｕｓ、Ｐｈｙｌｌａｃａｎｔｈａ ｆｉｂｒｏｓａ、Ｐｉｐｅｒ ｍｅｔｈｙｓｔｉｃｕｍ、Ｐｉｐｅｒ ｎｉｇｒｕｍ、Ｐｒｕｎｅｌｌａ ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｐｒｕｎｕｓ ａｍｙｇｄａｌｕｓ ｄｕｌｃｉｓ、Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ、Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕｓ（ブッチャーブルームのエキス）、Ｓａｌｖｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ Ｌ、Ｓａｍｂｕｃｕｓ ｎｉｇｒａ、Ｓｅｒｅｎｏａ ｒｅｐｅｎｓ、Ｓｍｉｌａｘ ａｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉａｅｆｏｌｉａ、Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ ａｌｇａｅ、Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｅｒｙｔｈｒｏｓｐｅｒｍｕｍ、Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ、ｇｒｅｅｎ ｔｅａ、Ｕｌｍｕｓ ｒｕｂｒａ、Ｕｎｃａｒｉａ ｔｏｍｅｎｔｏｓａ、Ｖｅｒｂｅｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ、Ｖｉｔｅｘ ａｇｎｕｓ−ｃａｓｔｕｓ、Ｄｙｓｍｏｒｐｈｏｃｏｃｃｕｓ ｇｌｏｂｏｓｕｓのエキスまたは加水分解エキス、中でも、アルベリン、クエン酸アルベリン、ジヒドロミリセチン、補酵素Ａ、リパーゼ、セルレニン、ルチン、グラウシン、エスクリン、ビスナジン、カフェイン、テオフィリン、テオブロミン、アミノフィリン、キサンチン、カルニチン、フォルスコリン、エスシン、ルスコゲニン、ヘデリン、トリエタノールアミンヨウ化物、ＡＭＰｃ合成誘発剤、Ｌａｎａｃｈｒｙｓ（登録商標）［ＩＮＣＩ：Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｌｌｕｍ Ｉｎｄｉｃｕｍエキス］（Ａｔｒｉｕｍ／Ｕｎｉｐｅｘによって販売）、Ｓｌｉｍ−Ｅｘｃｅｓｓ（商標）［ＩＮＣＩ：水、ブチレングリコール、塩化ナトリウム、加水分解カラギーナン、キサンタンガム］、Ｓｖｅｌｔｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：水、ブチレングリコール、カルニチン、レシチン、カフェイン、カルボマー、サリチル酸、アテロコラーゲン、Ｃｅｎｔｅｌｌａ Ａｓｉａｔｉｃａエキス、エスクリン、コンドロイチン硫酸ナトリウム］、Ｐｅｒｕ Ｌｉａｎａ［ＩＮＣＩ：Ｕｎｃａｒｉａ Ｔｏｍｅｎｔｏｓａエキス］もしくはＦｌａｖｅｎｇｅｒ（商標）［ＩＮＣＩ：カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、ジメチルシリル化シリカ、オレイン酸グリセリル、カプリル酸クェルセチン］（ＢＡＳＦによって販売）、Ｓｃｏｐａｒｉａｎｅ［ＩＮＣＩ：Ｓｐｈａｃｅｌａｒｉａ Ｓｃｏｐａｒｉａ］、Ｐｈｙｃｏ Ｒ７５［ＩＮＣＩ：Ｌａｍｉｎａｒｉａ Ｄｉｇｉｔａｔａ］、Ｐｈｅｏｓｌｉｍ［ＩＮＣＩ：Ｐｈｙｌｌａｃａｎｔｈａ Ｆｉｂｒｏｓａエキス］、Ｂｕｃｋｗｈｅａｔ Ｗａｘ［ＩＮＣＩ：Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ ｆａｇｏｐｙｒｕｍ］もしくはＡｒｅａｕｍａｔ Ｓａｍｐｈｉｒａ［ＩＮＣＩ：Ｃｒｉｔｈｍｕｍ Ｍａｒｉｔｉｍｕｍエキス］、Ａｃｔｉｐｏｒｉｎｅ ８．Ｇ［グリセリン、アクア、Ｊａｎｉａ ｒｕｂｅｎｓエキス］（Ｃｏｄｉｆによって販売）、Ｓｌｉｍｍｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ Ｋａｒｋａｄｅ（商標）［ＩＮＣＩ：Ｈｉｂｉｓｃｕｓ Ｓａｂｄａｒｉｆｆａ］（Ｃｏｓｍｅｔｏｃｈｅｍによって販売）、Ｌｉｐｏｓｕｃｔｉｏｎｉｎｅ［提唱ＩＮＣＩ：アセチルヘキサペプチド］（Ｉｎｆｉｎｉｔｅｃ Ａｃｔｉｖｏｓによって販売）、Ｘａｎｔａｌｇｏｓｉｌ Ｃ（登録商標）［ＩＮＣＩ：マンヌロン酸アセフィリンメチルシラノール］、Ｔｈｅｏｐｈｙｌｌｉｓｉｌａｎｅ Ｃ（登録商標）［ＩＮＣＩ：アルギン酸メチルシラノールカルボキシメチルテオフィリン］、Ｇｌｕｔｒａｐｅｐｔｉｄｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：ピログルタミルアミドエチルインドール］もしくはＣａｆｅｉｓｉｌａｎｅ Ｃ［ＩＮＣＩ：アルギン酸シロキサントリオール、カフェイン、ブチレングリコール］（Ｅｘｓｙｍｏｌによって販売）、Ｔｉｍｉｌｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：ポリグルクロン酸］（Ｇｒｅｅｎｔｅｃｈによって販売）、Ｖｉｓｎａｄｉｎｅ［ＩＮＣＩ：ビスナジン］もしくはＧｉｎｋｇｏ Ｂｉｌｏｂａ Ｄｉｍｅｒｉｃ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ Ｐｈｙｔｏｓｏｍｅ［ＩＮＣＩ：リン脂質、Ｇｉｎｋｇｏ Ｂｉｌｏｂａ葉エキス］（Ｉｎｄｅｎａによって販売）、Ｓｌｉｍｆｉｔ（登録商標）ＬＳ ９５０９［ＩＮＣＩ：Ｃｅｃｒｏｐｉａ Ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ樹皮エキス］（Ｌａｂｏｒａｔｏｉｒｅｓ Ｓｅｒｏｂｉｏｌｏｇｉｑｕｅｓ／Ｃｏｇｎｉｓ／ＢＡＳＦによって販売）、Ｓｉｌｕｓｙｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：ダイズ（Ｇｌｙｃｉｎｅ Ｓｏｊａ）油、セスキオレイン酸ソルビタン、イソヘキサデカン、ヒアルロン酸ナトリウム、ラウリルジモニウムヒドロキシプロピル加水分解ダイズタンパク質、アセチルヘキサペプチド−３９］もしくはＬｉｐｏｒｅｄｕｃｔｙｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：水、グリセリン、レシチン、カフェイン、ブッチャーブルーム（Ｒｕｓｃｕｓ Ａｃｕｌｅａｔｕｓ）根エキス、マルトデキストリン、シリカ、ヨウ化水素Ｔｅａ、プロピレングリコール、セイヨウキヅタ（Ｈｅｄｅｒａ Ｈｅｌｉｘ）エキス、カルニチン、エスシン、トリペプチド−１、キサンタンガム、カラギーナン（Ｃｈｏｎｄｒｕｓ Ｃｒｉｓｐｕｓ）、ＥＤＴＡ二ナトリウム］（Ｌｉｐｏｔｅｃ／Ｌｕｂｒｉｚｏｌによって販売）、Ｉｓｏ−Ｓｌｉｍ Ｃｏｍｐｌｅｘ［ＩＮＣＩ：ダイズイソフラボン、カフェイン、カルニチン、Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ Ｐｌａｔｅｎｓｉｓエキス、ポリソルベート８０、アルコール、フェノキシエタノール、アクア］、Ｈａｐｐｙｂｅｌｌｅ−ＰＥ［ＩＮＣＩ：レシチン、Ｖｉｔｅｘ Ａｇｎｕｓ Ｃａｓｔｕｓエキス、グリセリン、テトラヘキシルデカン酸アスコルビル、トコフェロール、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、シクロデキストリン、アルコール、水］もしくはＡｍａｒａＳｈａｐｅ［ＩＮＣＩ：レシチン、カフェイン、Ｃｉｔｒｕｓ Ａｕｒａｎｔｉｕｍ Ａｍａｒａエキス、ペンチレングリコール、アルコール、水］（Ｍｉｂｅｌｌｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙによって販売）、Ｒｅｇｕ（登録商標）−Ｓｌｉｍ［ＩＮＣＩ：マルトデキストリン、カフェイン、Ｐａｕｌｌｉｎｉａ Ｃｕｐａｎａ種子エキス、カルニチン、微結晶セルロース、システイン酸、パンテテイン（Pantheine）スルホン酸］もしくはＲｅｇｕ（登録商標）−Ｓｈａｐｅ［ＩＮＣＩ：異性化リノール酸、レシチン、グリセリン、ポリソルベート８０］（Ｐｅｎｔａｐｈａｒｍ／ＤＳＭによって販売）、Ｐｒｏｖｉｓｌｉｍ（商標）［ＩＮＣＩ：プロパンジオール、水（アクア）、フィセチン、ラズベリーケトン］、Ｍｙｒｉｃｅｌｉｎｅ［ＩＮＣＩ：ジヒドロミリセチン］、Ｄｒｅｎａｌｉｐ［ＩＮＣＩ：Ｒｕｓｃｕｓ Ａｃｕｌｅａｔｕｓ根エキス、Ｃｉｔｒｕｓ Ｍｅｄｉｃａ Ｌｉｍｏｎｕｍ果皮エキス、Ｓｏｌｉｄａｇｏ Ｖｉｒｇａｕｒｅａエキス、Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ Ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ根エキス］もしくはＬｉｐｏｕｔ（商標）［ＩＮＣＩ：プラクトンエキス］（Ｐｒｏｖｉｔａｌによって販売）、Ａｃｔｉｓｃｕｌｐｔ［ＩＮＣＩ：Ｃｏｍｍｉｐｈｏｒａ Ｍｙｒｒｈａエキス、Ｃｏｌｅｕｓ Ｆｏｒｓｋｏｈｌｉｉ根エキス］（Ｇｉｖａｕｄａｎによって販売）、Ｐｅｒｆｅｌｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：水、カルニチン、カフェイン、Ｒｕｓｃｕｓ Ａｃｕｌｅａｔｕｓエキス］もしくはＣｅｌｌＡｃｔｉｖｅ（登録商標）Ｓｈａｐｅ［ＩＮＣＩ：Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ Ｖｕｌｇａｒｉｓ／Ｌｕｐｉｎｕｓ Ａｌｂｕｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ発酵物、Ｃｏｌｅｕｓ Ｆｏｒｓｋｏｈｌｉｉ、カフェイン］（Ｒａｈｎによって販売）、ＰｒｏＣｏｎｔｏｕｒ（商標）［ＩＮＣＩ：水、アルコール、レシチン、カフェイン、カルニチン、Ｃｅｎｔｅｌｌａ Ａｓｉａｔｉｃａ葉エキス、リン酸カリウム、Ｃｏｌｅｕｓ Ｆｏｒｓｋｏｈｌｉｉ根エキス］（Ｒｏｖｉ Ｃｏｓｍｅｔｉｃｓによって販売）、Ｕｎｉｓｌｉｍ（商標）［ＩＮＣＩ：Ｉｌｅｘ Ｐａｒａｇｕａｒｉｅｎｓｉｓ（葉）エキス、水、ブチレングリコール、Ｃｏｆｆｅａ Ａｒａｂｉｃａ（コーヒー）種子エキス（マメ）、ＰＥＧ−６０アーモンド脂肪酸グリセリル、グリセリン、セチルヒドロキシエチルセルロース］、Ｒｅｄｕｌｉｔｅ（商標）［ＩＮＣＩ：グリセリン、アクア、エトキシジグリコール、Ｓａｍｂｕｃｕｓ Ｎｉｇｒａ、ポリアクリル酸ナトリウム］、Ｐｌｅｕｒｉｍｉｎｃｙｌ（商標）［ＩＮＣＩ：カフェイン、Ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ Ｃｈｉｎｅｎｓｉｓエキス］、Ｐｈｙｔｏｔａｌ（商標）ＳＬ［ＩＮＣＩ：グリセリン、Ｖｅｒｂｅｎａ Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓエキス、ブチレングリコール、Ｓａｍｂｕｃｕｓ Ｎｉｇｒａ花エキス、Ｅｕｇｅｎｉａ Ｃａｒｙｏｐｈｙｌｌｕｓ（クローブ）花エキス、レシチン］、Ｐｈｙｔｏｓｏｎｉｃ（商標）［ＩＮＣＩ：アクア、Ｅｕｇｌｅｎａ Ｇｒａｃｉｌｉｓエキス、カフェイン、Ｇｌａｕｃｉｕｍ Ｆｌａｖｕｍ葉エキス］、Ｏｖａｌｉｓｓ（商標）［ＩＮＣＩ：グリセリン、アクア、ヤシ油アルキルグルコシド、カプリリルグリコール、アルコール、グラウシン］、Ｌｉｐｏｃａｒｅ（商標）［ＩＮＣＩ：カフェイン、補酵素（Coenzym）Ａ、Ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ Ｃｈｉｎｅｎｓｉｓエキス］、Ｃｙｃｌｏｌｉｐａｓｅ（商標）［ＩＮＣＩ：ポリメタクリル酸グリセリル、水、カフェイン、リパーゼ、アデノシンリン酸］、Ｃｏａｘｅｌ（商標）［ＩＮＣＩ：カフェイン、補酵素Ａ、カルニチン、水、グリセリン］、Ｂｏｄｙｆｉｔ（商標）［ＩＮＣＩ：グリセリン、アクア（水）、ヤシ油アルキルグルコシド、カプリリルグリコール、アルコール、グラウシン］、Ｉｎｔｅｎｓｌｉｍ（商標）［ＩＮＣＩ：Ｇｌｏ

ｂｕｌａｒｉａ Ｃｏｒｄｉｆｏｌｉａカルス培養エキス、Ｚｉｎｇｉｂｅｒ Ｚｅｒｕｍｂｅｔエキス、カフェイン］もしくはＶｅｘｅｌ［ＩＮＣＩ：アクア、プロピレングリコール、レシチン、カフェイン、パルミトイルカルニチン］（Ｓｅｄｅｒｍａ／Ｃｒｏｄａによって販売）、Ｖｏｌｕｆｏｒｍ［ＩＮＣＩ：パルミトイルイソロイシン］、Ａｄｉｐｏｌｅｓｓ［ＩＮＣＩ：ブチレングリコール、Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉｕｍ Ｑｕｉｎｏａ種子エキス］（Ｓｅｐｐｉｃによって販売）、Ｓｌｉｍａｃｔｉｖｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：Ｐｅｕｍｕｓ Ｂｏｌｄｕｓ葉エキス］、Ｒｅｍｏｄｕｌｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：Ｃｉｔｒｕｓ Ａｕｒａｎｔｉｕｍ Ａｍａｒａ花エキス］、Ｐｒｏ−Ｓｖｅｌｔｙｌ［ＩＮＣＩ：Ｎｅｌｕｍｂｉｕｍ Ｓｐｅｃｉｏｓｕｍエキス］、Ｂｉｏｓｃｕｌｐｔｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：加水分解Ｃｅｌｏｓｉａ Ｃｒｉｓｔａｔａ花／種子エキス、加水分解Ｐｒｕｎｅｌｌａ Ｖｕｌｇａｒｉｓエキス］、Ａｆｆｉｎｅｓｓ（登録商標）［ＩＮＣＩ：加水分解Ｃｏｒｉａｎｄｒｕｍ Ｓａｔｉｖｕｍ果実エキス、Ｃｉｔｒｕｓ Ａｕｒａｎｔｉｕｍ Ｄｕｌｃｉｓ（オレンジ）果実エキス］もしくはＳｔｅｍｓｖｅｌｔ［ＩＮＣＩ：水、ブチレングリコール、Ｓｉｌｙｂｕｍ ｍａｒｉｎｕｍエキス］（Ｓｉｌａｂによって販売）、Ｄｅｌｉｐｉｄｏｌ［ＩＮＣＩ：プニカ酸チロシル（Ｔｙｒｏｓｙｌ Ｐｕｎｉｃａｔｅ）］、Ｇｕａｒａｓｌｉｍ（登録商標）［ＩＮＣＩ：ブチレングリコール、水、カフェイン、Ｐａｕｌｌｉｎｉａ Ｃｕｐａｎａ種子エキス、Ｐｔｙｃｈｏｐｅｔａｌｕｍ Ｏｌａｃｏｉｄｅｓ樹皮エキス］もしくはＣａｏｂｒｏｍｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ Ｃｏｃｏａ Ｓｈｅｌｌエキス］（Ｓｏｌａｂｉａによって販売）、Ａｂｄｏｌｉａｎｃｅ［ＩＮＣＩ：パルミチン酸スクロース、ポリソルベート２０、リノレン酸グリセリル、Ｐａｕｌｌｉｎｉａ Ｃｕｐａｎａ種子エキス、マルトデキストリン、Ｐｒｕｎｕｓ Ａｍｙｇｄａｌｕｓ Ｄｕｌｃｉｓ（スイートアーモンド）油、レシチン、水、Ｃｉｔｒｕｓ Ａｕｒａｎｔｉｕｍ Ａｍａｒａ（ビターオレンジ）果皮エキス、フェノキシエタノール、トコフェロール］、Ｂｅｔａｐｈｒｏｌｉｎｅ［ＩＮＣＩ：Ｔｅｐｈｒｏｓｉａ Ｐｕｒｐｕｒｅａ種子エキス］もしくはＰＲＯ−ＤＧ［ＩＮＣＩ：水、プラクトンエキス］（Ｓｏｌｉａｎｃｅによって販売）、ＵＣＰｅｐｔｉｄｅ（商標）Ｖ［ＩＮＣＩ：水、ブチレングリコール、ペンタペプチド］もしくはＡＴＰｅｐｔｉｄｅ（商標）ＩＳ［ＩＮＣＩ：トリペプチド−３］（Ｖｉｎｃｉｅｎｃｅ／ＩＳＰによって販売）、またはそれらの混合物から選択することができる。

【0073】

組成物は、例えば、Ｌｅｇａｃｔｉｆ［ＩＮＣＩ：Ｒｕｓｃｕｓ Ａｃｕｌｅａｔｕｓ根エキス、Ｃｉｔｒｕｓ Ｌｉｍｏｎ（レモン）果皮エキス、Ｓｏｌｉｄａｇｏ Ｖｉｒｇａｕｒｅａ（ヨーロッパアキノキリンソウ）エキス（Ｐｒｏｖｉｔａｌによって販売、Ｌｅｇａｎｃｅ（商標）［ＩＮＣＩ：Ｚｉｎｇｉｂｅｒ Ｚｅｒｕｍｂｅｔエキス］およびＥｙｅｌｉｓｓ［ＩＮＣＩ：ヘスペリジンメチルカルコン、ジペプチド−２、パルミトイルテトラペプチド−７］（Ｓｅｄｅｒｍａ／Ｃｒｏｄａによって販売）、Ｓｉｌｉｄｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：Ｐｒｏｐｈｙｒｉｄｉｕｍ Ｃｒｕｅｎｔｕｍ滲出液（Exsudate）］（Ｇｒｅｅｎｔｅｃｈによって販売）、Ｂｉｏｐｈｙｔｅｘ［ＩＮＣＩ：エスシン、Ｒｕｓｃｕｓ Ａｃｕｌｅａｔｕｓ根エキス、グリチルリチン酸アンモニウム、Ｃｅｎｔｅｌｌａ Ａｓｉａｔｉｃａエキス、加水分解酵母タンパク質、Ｃａｌｅｎｄｕｌａ Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ花エキス］（Ｌ．Ｓｅｒｏｂｉｏｌｏｇｉｑｕｅｓ／ＢＡＳＦによって販売）、Ｃｙｔｏｂｉｏｌ Ｌｕｍｉｎ−Ｅｙｅ［ＩＮＣＩ：ナイアシンアミド、Ｆｒａｎｘｉｕｓ Ｅｘｃｅｌｓｉｏｒ樹皮エキス、シラントリオール、クエン酸カリウム］（Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅによって販売）、Ｒｅｇｕ（登録商標）−Ａｇｅ［ＩＮＣＩ：加水分解コメタンパク、オキシドレダクターゼ、Ｇｌｙｃｉｎｅ Ｓｏｊａ（ダイズ（Soyben））タンパク質］（ＤＳＭによって販売）から選択される、抗浮腫特性有し、血管透過性／微小循環を改善する少なくとも１種のさらなるエキスを有し得る。

【0074】

組成物は、例えば、限定されるものではないが、中でもＡｃｈｉｌｌｅａ ｍｉｌｌｅｆｏｌｉｕｍ、Ａｌｏｅ ｖｅｒａ、Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ、Ｏｓｍｕｎｄａ ｊａｐｏｎｉｃａ、Ａｒｔｏｃａｒｐｕｓ ｉｎｃｉｓｕｓ、Ｂｉｄｅｎｓ ｐｉｌｏｓａ、Ｂｒｏｕｓｓｏｎｅｔｉａ ｐａｐｙｒｉｆｅｒａ、Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ ｒａｃｅｍｏｓａ、Ｅｍｂｌｉｃａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ、Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｇｌａｂｒａ、Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ、Ｉｌｅｘ ｐｕｒｐｕｒｅａ、Ｌｉｇｕｓｔｉｃｕｍ ｌｕｃｉｄｕｍ、Ｌｉｇｕｓｔｉｃｕｍ ｗａｌｌｉｃｈｉｉ、Ｍｉｔｒａｃａｒｐｕｓ ｓｃａｂｅｒ、Ｍｏｒｉｎｄａ ｃｉｔｒｉｆｏｌｉａ、Ｍｏｒｕｓ ａｌｂａ、Ｍｏｒｕｓ ｂｏｍｂｙｃｉｓ、Ｎａｒｉｎｇｉ ｃｒｅｎｕｌａｔａ、Ｐｒｕｎｕｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ、Ｐｓｅｕｄｏｓｔｅｌｌａｒｉａｅ ｒａｄｉｘ、Ｒｕｍｅｘ ｃｒｉｓｐｕｓ、Ｒｕｍｅｘ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ、Ｓａｐｉｎｄｕｓ ｍｕｋｕｒｏｓｓｉ、Ｓａｘｉｆｒａｇａ ｓａｒｍｅｎｔｏｓａ、Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｇａｌｅｒｉｃｕｌａｔａ、Ｓｅｄｕｍ ｓａｒｍｅｎｔｏｓｕｍ Ｂｕｎｇｅ、Ｓｔｅｌｌａｒｉａ ｍｅｄｉｃａ、Ｔｒｉｔｉｃｕｍ Ｖｕｌｇａｒｅ、Ｕｖａ ｕｒｓｉもしくはＷｉｔｈａｎｉａ ｓｏｍｎｉｆｅｒａのエキスなど、ならびに／または、少なくとも１種の、脱色活性を有する、バイオ発酵プロセスに由来する合成化合物、エキスもしくは生成物、例えば、限定されるものではないが、Ａｃｔｉｗｈｉｔｅ（商標）ＬＳ９８０８［ＩＮＣＩ：アクア、グリセリン、ジラウリン酸スクロース、ポリソルベート２０、Ｐｉｓｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ（エンドウマメ）エキス］、Ｄｅｒｍａｗｈｉｔｅ（登録商標）ＮＦ ＬＳ９４１０［ＩＮＣＩ：マンニトール、アルギニンＨＣｌ、フェニルアラニン、ＥＤＴＡ二ナトリウム、クエン酸ナトリウム、コウジ酸、クエン酸、酵母エキス］もしくはＲａｄｉａｎｓｋｉｎ（商標）［ＩＮＣＩ：ヒドロキシフェノキシプロピオン酸］（Ｌａｂｏｒａｔｏｉｒｅｓ Ｓｅｒｏｂｉｏｌｏｇｉｑｕｅｓ／ＢＡＳＦによって販売）、Ｌｕｍｉｓｋｉｎ（商標）［ＩＮＣＩ：カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、ジアセチルボルジン］、Ｍｅｌａｃｌｅａｒ（商標）［ＩＮＣＩ：グリセリン、アクア、ジチアオクタンジオール、グルコン酸、スチレインズ、ベータ−カロチン］もしくはＥｔｉｏｌｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：グリセリン、ブチレングリコール、Ａｒｃｔｏｓｔａｐｈｙｌｏｓ ｕｖａ ｕｒｓｉ葉エキス、Ｍｉｔｒａｃａｒｐｕｓ ｓｃａｂｅｒエキス］、Ｏ．Ｄ．Ａ．Ｗｈｉｔｅ（商標）［ＩＮＣＩ：オクタデセン二酸］、Ｗｏｎｄｅｒｌｉｇｈｔ（商標）［ＩＮＣＩ：Ｈｕｍｕｌｕｓ Ｌｕｐｕｌｕｓ（ホップ）球果］（Ｓｅｄｅｒｍａによって販売）、Ｓｅｐｉｗｈｉｔｅ（商標）ＭＳＨ［ＩＮＣＩ：ウンデシレノイルフェニルアラニン］もしくはＳｅａｓｈｉｎｅ ［ＩＮＣＩ：藻類エキス、Ｕｎｄａｒｉａ Ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａエキス］（Ｓｅｐｐｉｃによって販売）、Ａｃｈｒｏｍａｘｙｌ［ＩＮＣＩ：アクア、Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓエキス］（Ｖｉｎｃｉｅｎｃｅによって販売）、Ｇｉｇａｗｈｉｔｅ（商標）［ＩＮＣＩ：アクア、グリセリン、Ｍａｌｖａ ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ（ゼニアオイ）エキス、Ｍｅｎｔｈａ ｐｉｐｅｒｉｔａ葉エキス、Ｐｒｉｍｕｌａ ｖｅｒｉｓエキス、Ａｌｃｈｅｍｉｌｌａ ｖｕｌｇａｒｉｓエキス、Ｖｅｒｏｎｉｃａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓエキス、Ｍｅｌｉｓｓａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ葉エキス、Ａｃｈｉｌｌｅａ ｍｉｌｌｅｆｏｌｉｕｍエキス］、Ｍｅｌａｗｈｉｔｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：白血球エキス、ＡＨＡ］（白血球エキス、アルファヒドロキシ酸）、Ｍｅｌｆａｄｅ（登録商標）−Ｊ［ＩＮＣＩ：アクア、Ａｒｃｔｏｓｔａｐｈｙｌｏｓ ｕｖａ−ｕｒｓｉ葉エキス、グリセリン、リン酸アスコルビルマグネシウム］もしくはＲｅｇｕ（登録商標）−Ｆａｄｅ［ＩＮＣＩ：レスベラトロール］（Ｐｅｎｔａｐｈａｒｍ／ＤＳＭによって販売）、Ａｌｂａｔｉｎ（登録商標）［ＩＮＣＩ：アミノエチルリン酸、ブチレングリコール、アクア］（Ｅｘｓｙｍｏｌによって販売）、Ｔｙｒｏｓｔａｔ（商標）１１［ＩＮＣＩ：アクア、グリセリン、Ｒｕｍｅｘ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓエキス］もしくはＭｅｌａｎｏｓｔａｔｉｎｅ（登録商標）−５［ＩＮＣＩ：デキストラン、ノナペプチド−１］（Ａｔｒｉｕｍ／Ｌｕｃａｓ Ｍｅｙｅｒによって販売）、β−Ｗｈｉｔｅ［ＩＮＣＩ：オリゴペプチド−６８］（Ｕｎｉｐｅｘによって販売）、Ｄａｒｋｏｕｔ（商標）［ＩＮＣＩ：Ｈｙｐｏｘｉｓ Ｒｏｏｐｅｒｉ Ｒｈｙｚｏｍｅエキス、Ｃａｅｓａｌｐｉｎａ Ｓｐｉｎｏｓａガム］（Ｐｒｏｖｉｔａｌによって販売）、Ｖｉｖｉｌｌｕｍｅ（商標）［ＩＮＣＩ：Ｓｔｒｅｌｉｔｚｉａ Ｎｉｃｏｌａｉ Ｓｅｅｄ Ａｒｉｌエキス］（Ｌｏｎｚａによって販売）、Ｓｕｐｅｒｏｘ−Ｃ（商標）［ＩＮＣＩ：Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ Ｆｅｒｄｉｎａｎｄｉａｎａ果実エキス］（Ｌｕｃａｓ Ｍｅｙｅｒによって販売）、アルブチンおよびその異性体、コウジ酸およびその誘導体、ビタミンＣおよびその誘導体、例えば、限定されるものではないが、中でも、６−Ｏ−パルミトイルアスコルビン酸、ジパルミトイルアスコルビン酸、アスコルビン酸−２−リン酸（ＭＡＰ）のマグネシウム塩、アスコルビン酸−２−リン酸のナトリウム塩（ＮＡＰ）、アスコルビルグルコシドもしくはテトラヘキシルデカン酸アスコルビル（ＶＣＩＰ）など、レチノール、およびトレチノインおよびイソトレチノインを含めたその誘導体、イデベノン、ヒドロキシ安息香酸およびその誘導体、フラボノイド、ダイズエキス、レモンエキス、オレンジエキス、イチョウエキス、キュウリエキス、ゼラニウムエキス、クマコケモモエキス、イナゴマメエキス、シナモンエキス、マジョラムエキス、ローズマリーエキス、クローブエキス、可溶性甘草エキス、ブラックベリー葉エキス、ナイアシンアミド、リクイリチン、レゾルシノールおよびその誘導体、ハイドロキノン、α−トコフェノール、γ−トコフェノール、アゼライン酸、レスベラトロール、水銀塩、リノール酸、α−リポ酸、ジヒドロリポ酸、アルファヒドロキシ酸、ベータヒドロキシ酸、エラグ酸、フェルラ酸、ケイ皮酸、オレアノール酸、アロエシンおよびその誘導体など、ならびに／またはセリンプロテアーゼ阻害剤、例えば、限定されるものではないが、中でも、トリプターゼ、トリプシンまたはＰＡＲ−２阻害剤などの、脱色活性を有する少なくとも１種の追加のエキスを含み得る。

【0075】

組成物は、例えば限定されるものではないが、中でも、コラーゲン合成刺激剤、エラスチン合成刺激剤、デコリン合成刺激剤、ラミニン合成刺激剤、シャペロン合成刺激剤、サーチュイン合成刺激剤、サーチュイン活性化剤、アクアポリン合成をモジュレートする薬剤、フィブロネクチン合成刺激剤、コラーゲン分解を阻害する薬剤、エラスチン分解を阻害する薬剤、セリンプロテアーゼを阻害する薬剤、例えばカリクレイン、白血球エラスターゼもしくはカテプシンＧ、線維芽細胞増殖を刺激する薬剤、脂肪細胞増殖を刺激する薬剤、脂肪細胞分化を加速するもしくは遅延させる薬剤、ならびにＤＮＡ修復剤および／もしくはＤＮＡ保護剤によって形成される群から選択される、真皮もしくは上皮高分子の合成を刺激する追加の薬剤、例えば限定されるものではないが、Ｃｅｎｔｅｌｌａ ａｓｉａｔｉｃａ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｉｖｉｓｉａｅ、Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ、Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ、Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉｕｍのエキス、藻類Ｍａｃｒｏｃｙｓｔｉｓ ｐｙｒｉｆｅｒａ、Ｐａｄｉｎａ ｐａｖｏｎｉｃａのエキス、ダイズ、麦芽、亜麻、セージ、レッドクローバー、葛根、白色ルピナス植物体のエキス、ヘーゼルナッツエキス、トウモロコシエキス、酵母エキス、ブナノキ（ｂｅｅｃｈ ｓｈｏｏｔ）エキス、マメ科種子エキス、植物ホルモンエキス、例えばジベレリン、オーキシンもしくはサイトカイニン、または中でも、ｓａｌｉｎｅ動物プランクトンのエキス、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ Ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓを含む乳の発酵生成物、アシアチコシドおよびそれらの誘導体、ビタミンＣおよびその誘導体、ケイ皮酸およびその誘導体、Ｍａｔｒｉｘｙｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：パルミトイルペンタペプチド−３］、Ｍａｔｒｉｘｙｌ（登録商標）３０００［ＩＮＣＩ：パルミトイルテトラペプチド−３、パルミトイルオリゴペプチド］もしくはＢｉｏｐｅｐｔｉｄｅ ＣＬ（商標）［ＩＮＣＩ：ポリメタクリル酸グリセリル、プロピレングリコール、パルミトイルオリゴペプチド］（Ｓｅｄｅｒｍａ／Ｃｒｏｄａによって販売）、Ａｎｔａｒｃｔｉｃｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：シュードアルテロモナス発酵エキス］、Ｄｅｃｏｒｉｎｙｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：トリペプチド−１０シトルリン］、Ｓｅｒｉｌｅｓｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：ヘキサペプチド−１０］、Ｌｉｐｅｐｔｉｄｅ［ＩＮＣＩ：加水分解野菜タンパク質］、Ａｌｄｅｎｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：加水分解コムギタンパク質、加水分解ダイズタンパク質、トリペプチド−１］、Ｒｅｌｉｓｔａｓｅ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルアルギニルトリプトフィルジフェニルグリシン］、Ｔｈｅｒｍｏｓｔｒｅｓｓｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルテトラペプチド−２２］、Ｐｅｐｔｉｄｅ ＡＣ２９［ＩＮＣＩ：アセチルトリペプチド−３０シトルリン］、Ｄｉｆｆｕｐｏｒｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルヘキサペプチド−３７］、Ｓｉｌｕｓｙｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：ダイズ（Ｇｌｙｃｉｎｅ Ｓｏｊａ）油、セスキオレイン酸ソルビタン、イソヘキサデカン、ヒアルロン酸ナトリウム、ラウリルジモニウムヒドロキシプロピル加水分解ダイズタンパク質、アセチルヘキサペプチド−３９］もしくはＡｄｉｆｙｌｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルヘキサペプチド−３８］（Ｌｉｐｏｔｅｃ／Ｌｕｂｒｉｚｏｌによって販売）、Ｄｒｉｅｌｉｎｅ（登録商標）ＰＦ［ＩＮＣＩ：酵母ベータグルカン］（Ａｌｂａｎ Ｍｕｌｌｅｒによって販売）、Ｐｈｙｔｏｖｉｔｙｌ Ｃ（登録商標）［ＩＮＣＩ：アクア、Ｚｅａ Ｍａｙｓエキス］（Ｓｏｌａｂｉａによって販売）、Ｃｏｌｌａｌｉｆｔ（登録商標）［ＩＮＣＩ：加水分解麦芽エキス］（Ｃｏｌｅｔｉｃａ／Ｅｎｇｅｌｈａｒｄ／ＢＡＳＦによって販売）、Ｐｈｙｔｏｃｏｈｅｓｉｎｅ ＰＳＰ（商標）［ＩＮＣＩ：ベータシトステロール硫酸ナトリウム］（Ｖｉｎｃｉｅｎｃｅ／ＩＳＰ／Ａｓｈｌａｎｄによって販売）、Ｎｅｏｄｅｒｍｙｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：メチルグルコシドリン酸プロリンリシン銅錯体（Ｍｅｔｈｙｌ Ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｐｒｏｌｉｎｅ Ｌｙｓｉｎｅ Ｃｏｐｐｅｒ Ｃｏｍｐｌｅｘ）］、ミネラル、例えばカルシウム、中でも、レチノイドおよびそれらの誘導体、イソフラボノイド、カロテノイド、特にリコペン、シュードジペプチド、レチノイドおよびそれらの誘導体、例えばレチノールもしくはパルミチン酸レチニル、または中でもヘパリノイドを含み得る。

【0076】

別の態様では、本発明は、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧処置および／またはケアのための化粧品組成物の調製における、本明細書に記載の発酵エキスの使用を提供する。化粧処置および／またはケアは、本明細書に記載されている通りである。

【0077】

本発明の第４の態様では、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧処置および／またはケアのための、本発明の発酵エキスの使用であって、発酵エキスが、本明細書に記載の組成物中に提供される、使用が提供される。したがって、本発明の第４の態様は、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧処置および／またはケアのための、美容のために有効な量の、Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株由来の発酵エキスを含む化粧品組成物に関する。化粧品組成物は、本明細書に記載されている通りであり得る。化粧処置および／またはケアは、本明細書に記載されている通りである。

【0078】

本発明の第５の態様では、美容のために有効な量の発酵エキスを皮膚に投与することを含む、皮膚の処置および／またはケアの化粧方法が提供される。化粧処置および／またはケアは、本明細書に記載されている通りである。一実施形態では、投与は局所的なものである。一実施形態では、投与は経皮的なものである。一実施形態では、局所または経皮適用は、イオン導入、ソノフォレーシス、エレクトロポレーション、機械的圧力、浸透圧勾配、閉塞治療、マイクロインジェクション、圧力を用いる無針注射、微小電気パッチ、フェイスマスクまたはそれらの任意の組合せによって行われる。本発明の本態様では、発酵エキスは、化粧品組成物、例えば本明細書に記載の化粧品組成物中に提供することができる。したがって、本発明は、美容のために有効な量の発酵エキスを含む化粧品組成物を皮膚に投与することを含む、皮膚の処置および／またはケアの化粧方法を提供する。

【0079】

美容のために有効な量の発酵エキスの適用または投与の頻度は、各被験体の必要に応じて広く変わり得るが、月１回から１日１０回、週１回から１日４回、週３回から１日３回、または１日１回もしくは１日２回の、様々な適用または投与が示唆される。

【0080】

別の態様では、本発明は、美容のために有効な量の発酵エキスをヒト真皮線維芽細胞（皮膚）に投与することを含む、コラーゲンまたはエラスチン合成を刺激する方法を指す。
生物学的材料の寄託

【0081】

Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株は、Ｃｏｌｅｃｃｉｏｎ Ｅｓｐａｎｏｌａ ｄｅ Ｃｕｌｔｉｖｏｓ Ｔｉｐｏ（ＣＥＣＴ）（Ｅｄｉｆｉｃｉｏ ３ ＣＵＥ、Ｐａｒｃ Ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｔ ｄｅ Ｖａｌｅｎｃｉａ、Ｃａｔｅｄｒａｔｉｃｏ Ａｇｕｓｔｉｎ Ｅｓｃａｒｄｉｎｏ ９、４６９８０ Ｐａｔｅｒｎａ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、Ｓｐａｉｎ）において、ブダペスト条約の条件下で寄託された。寄託は、２０１４年３月２０日に行われ、寄託番号はＣＥＣＴ−２０９０１であった。

【0082】

上に言及した文書のそれぞれは、上で具体的に列挙されていても列挙されていなくても、従来の任意の特許出願文書を含む参照によって本明細書に組み込まれ、それから優先権が特許請求される。いかなる文書への言及も、このような文書が従来技術とみなされ、または任意の管轄の当業者の一般知識を構成すると認めるものではない。実施例またはそれ以外で明確に示されている場合を除き、材料の量、反応条件、分子量、炭素原子数等を特定する本記載におけるすべての数量は、近似と理解されるべきであり、すなわち示した値の±５％、±３％、±１％、±０．１％、または±０．０１％超で変動する。本明細書に記載の量、範囲および比の上限および下限は、独立に組み合わせることができると理解されたい。同様に、本明細書に記載の技術の要素ごとの範囲および量は、その他の要素のいずれかの範囲または量と一緒に使用することができる。

【0083】

ここで本発明を以下の非限定的な実施例によって例示する。

【実施例】

【0084】

（実施例１）
寄託番号ＣＥＣＴ−２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍの菌株によって生成される発酵エキスの調製
Ａ）寄託番号ＣＥＣＴ−２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍの菌株の培養プロセス。

【0085】

寄託番号ＣＥＣＴ−２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍの菌株を、発酵槽中、２５℃およびｐＨ７．５で、水と、炭素供給源としての５ｇ／Ｌのマンニトールと、５ｇ／Ｌの酵母エキスと、炭素および窒素供給源としての５ｇ／Ｌのダイズペプトンと、３０ｇ／Ｌの海塩とを含有する培養培地で培養する。培養培地に、５％体積の成長前培養物を接種する。発酵をおよそ１週間にわたって実施し、その間、培養物に、十分な空気を供給し、撹拌速度１５０〜３５０ｒｐｍで撹拌する。
Ｂ）寄託番号ＣＥＣＴ−２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍの菌株によって生成される発酵エキスの単離。

【0086】

Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ細胞を、ステップＡ）によって生成された発酵ブロスから、およそ１０，０００ｇで連続的に遠心分離することによって分離する。上清ブロスを廃棄し、Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ細胞を、リンガー１／４緩衝液（２．２５ｇ／Ｌの塩化ナトリウム、０．１０５ｇ／Ｌの塩化カリウム、０．１２ｇ／Ｌの塩化カルシウム六水和物および０．０５ｇ／Ｌの炭酸水素ナトリウム）に再浮遊させる。この後、細胞を、フレンチプレスを使用し、４０ＫＰｓｉで２サイクルの操作で破砕する。次に、破砕されたブロスを、イソプロパノール（イソプロパノール：破砕されたブロスの体積比４．７：１．０）を用い、撹拌容器中、３時間にわたって抽出する。次に、エキスの精製を、エキスを４０〜５０℃の温度でロータエバポレーションすることによって実施する。次に、試料エキスの乾燥重量を、（液体）エキスを１１０℃で恒量に達するまで乾燥させることによって得る。詳細には、エキス２ｍＬを１１０℃で恒量に達するまで乾燥させる。次に、乾燥エキスの恒量を使用して、エキスの乾燥重量濃度（試料の乾燥重量を試料の重量で割ったもの）を算出した。これにより、１０％（Ｗ／Ｗ）の値が得られる。本実施例では、別段の指定がなければ、発酵エキスは、液体（すなわち、乾燥されていない）形態で使用され、また、エキスの重量に言及されている場合には、これは、エキスの相当する乾燥重量である。液体エキスは、さらに使用されるまで−２０℃の温度で保たれる。
（実施例２）
寄託番号ＣＥＣＴ−２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍの菌株によって生成される発酵エキスの物理化学的特徴付け。

【0087】

発酵エキスの物理化学的特徴付けのために、寄託番号ＣＥＣＴ−２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ菌株に由来するエキスの３つの異なるバッチについて、遊離アミノ酸およびペプチド分析、炭水化物分析（フェノール−硫酸法）、および脂質含量分析を行う。バッチ１は、実施例１に従って得られたものである。バッチ２および３は、実施例１に記載されている連続的な遠心分離条件と同等の非連続的な遠心分離を使用したことのみ異なって、実施例１に記載されているプロトコールに従って得られたものである。
遊離アミノ酸およびペプチド分析

【0088】

遊離アミノ酸の分析とペプチドの分析には、同じ方法を使用するが、遊離アミノ酸には、加水分解（パートｉ）を実施せず、ペプチドにはそれを実施することが異なる。
ｉ．加水分解
寄託番号ＣＥＣＴ−２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ菌株に由来する発酵エキスの３つのバッチの乾燥重量は以下の通りである：バッチ１の乾燥重量濃度は１０％（Ｗ／Ｗ）であり、バッチ２の乾燥重量濃度は１８．４％（Ｗ／Ｗ）であり、バッチ３の乾燥重量濃度は１９．９％（Ｗ／Ｗ）である。各バッチについて、エキス２５ｍｇを１０ｍＬの清潔な加水分解チューブに入れる。６ＮのＨＣｌ＋０．５％フェノール１ｍＬを添加し、混合物を２４時間にわたって１１０℃まで加熱する。その後、加水分解された試料を凍結乾燥させ、２０ｍＭのＨＣｌ ３ｍＬに再溶解させる。
ｉｉ．アミノ酸誘導体化
ＡｃｃＱ−Ｆｌｕｏｒ試薬に基づくＡＣＣＱ−ＴＡＧケミストリーパッケージ（ＷＡＴＥＲＳ Ｃｒｏｍａｔｏｇｒａｆｉａ、ＳＡ）を使用してアミノ酸を分析する。加熱ブロックを５５℃に予め加熱した。全てのＡｃｃＱ． Ｆｌｕｏｒ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｐｏｗｄｅｒがバイアルの底にあることを確実にするために、Ｔａｐ Ｖｉａｌ ２Ａを少し前に開封する。清潔なマイクロピペットを、Ｖｉａｌ ２ＢからＡｃｃＱ・Ｆｌｕｏｒ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｄｉｌｕｅｎｔ １ｍＬを吸い出して廃棄することによってすすぐ。ＡｃｃＱ・Ｆｌｕｏｒ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｄｉｌｕｅｎｔ １ｍＬをＶｉａｌ ２ＢからＶｉａｌ ２Ａ中のＡｃｃＱ・Ｆｌｕｏｒ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｐｏｗｄｅｒに移す。ｖｉａｌ ２Ａに軽くふたをし、１０秒間ボルテックスする。再構成したＡｃｃＱ・Ｆｌｕｏｒ Ｒｅａｇｅｎｔは、デシケーター中、室温で最大１週間にわたって保管することができる。その後、較正標準（１〜５０ｐｍｏｌ／μＬであるシステインを除いて、各アミノ酸を２〜１００ｐｍｏｌ／μＬで含有する）を誘導体化しなければならない。較正標準１０μＬを清潔な試料チューブの底部に添加し、次に、ＡｃｃＱ．Ｆｌｕｏｒ Ｂｏｒａｔｅ Ｂｕｆｆｅｒ ７０μＬを試料チューブに添加し、短時間ボルテックスする。その後、再構成したＡｃｃＱ．Ｆｌｕｏｒ Ｒｅａｇｅｎｔ ２０μＬを試料チューブに添加し、数秒間ボルテックスした。混合物を室温で１分間インキュベートし、次に、バイアルを５５℃で１０分間する。
試料を用いて同じ方法に従った（較正標準を加水分解された試料に置き換える）。分析に使用するカラムは、ＡｃｃＱ・Ｆｌｕｏｒ Ｃｏｌｕｍｎ（ＷＡＴＥＲＳ製）であり、溶出液はＡ）ＡｃｃＱ・Ｆｌｕｏｒ Ｅｌｕｅｎｔ Ａ、およびＢ）水／アセトニトリル（４０：６０）である。溶出勾配を、０％のＢで開始し、０．２分間で２％のＢまで上昇させる。次に、１５分の時点で、Ｂ濃度を７％まで上昇させ、１９分の時点で、Ｂを１０％まで上昇させる。Ｂの濃度の上昇を継続し、３２分の時点でのＢの濃度は３３％である。次に、濃度を１分間安定させ、その後、Ｂの濃度を１分間で１００％まで上昇させる。カラムを洗浄するために１００％のＢを３分間一定に保ち、最終的に濃度を０％まで戻して再度開始する。流速は全ての分析の間一定にし（１ｍＬ／分）、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｏｒにおいて検出を行う（λ_ｅｘ＝２５０ｎｍ；λ_ｅｍ＝３９５ｎｍ）。注入体積は、１０μＬであり、オーブン温度は３７℃である。
遊離アミノ酸（加水分解されていない試料）の濃度およびペプチドの濃度（遊離アミノ酸濃度を差し引くことができる総濃度）を較正標準に基づいて算出する。
炭水化物分析（フェノール−硫酸法）

【0089】

グルコースの種々の標準を、水に種々の濃度（２０〜５００μｇ／ｍＬ）で溶解させる。別々に、５％フェノール溶液を調製するためにフェノール５００ｍｇを水１０ｍＬに溶解させる。寄託番号ＣＥＣＴ−２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ菌株に由来する発酵エキスの各バッチを水中１０ｍｇ／ｍＬに調製する。次に、この溶液（または標準のうちの１つ）１００μＬに、５％フェノール溶液１００μＬを添加する。得られた溶液を混合し、次に、硫酸５００μＬを添加する。混合後、反応溶液を４０℃で３０分間インキュベートする。その後、反応を室温で１５〜２０分間保ち、４９０ｎｍにおける吸光度を読み取る。グルコース標準を用いて実施した較正に基づいて、試料の炭水化物濃度を算出する。
脂質含量分析（ヘキサン抽出試験）

【0090】

バッチ１、２および３それぞれ５ｇをヘキサン１０ｍＬに溶解させる。この溶液を１０分間超音波処理し、５分間ボルテックスで混合する。その後、固体を分離するために、溶液を４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離する。液相を回収し、次に、固体を、全ての脂質を抽出するためにヘキサン５ｍＬで２回洗浄し、次に、廃棄する。有機相を混合し、窒素流を通して蒸発させる。その後、抽出から得られた固体を凍結乾燥器中で終夜乾燥させ、秤量する。試料の脂質の濃度を、秤量された総試料に対する抽出され秤量された固体の百分率として算出する。
脂質含量分析（二クロム酸塩試験）

【0091】

この方法は、上記のヘキサン抽出試験の代替法であり、試料が少量である場合に有用である。バッチ１、２および３それぞれ３０ｍｇをヘキサン２．５ｍＬに溶解させる。この溶液を１０分間超音波処理し、５分間ボルテックスで混合する。その後、固体を分離するために、溶液を４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離する。液相を回収し、次に、固体を、全ての脂質を抽出するためにヘキサン５ｍＬで２回洗浄し、次に、廃棄する。有機相を混合し、窒素流を通して蒸発させる。その後、反応溶液（Ｋ_２Ｃｒ_２Ｏ_７ ２．５ｇを３６ＮのＨ_２ＳＯ_４ １Ｌに溶解させたもの）３ｍＬを添加し、４５分間にわたって１００℃まで加熱し、種々の時点で３回混合する。試料を室温まで冷まし、０．２ｍＬのアリコートを水２．５ｍＬ中に希釈する。その後、３５０ｎｍにおける吸光度を読み取り、ブランク（試料を用いずに同じ処理を行ったもの）から差し引く。差異は脂質量に比例する。吸光度の差異を比較することによって脂質含量が分かっていない試料中の脂質を算出するために標準試料を使用する。

【0092】

寄託番号ＣＥＣＴ−２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ菌株からの３つの異なるバッチに対して実施した遊離アミノ酸およびペプチド分析、炭水化物分析、および脂質含量分析からの結果を表１に示す。バッチ１についての脂質分析の結果は、ヘキサン抽出試験を使用して得たものであり、バッチ２および３についての脂質分析の結果は二クロム酸塩試験を使用して得たものである。

【表1】

ＨＰＬＣによる特徴付け

【0093】

実施例１に従って得られた寄託番号ＣＥＣＴ−２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ菌株に由来する発酵エキスを水／２−プロパノール（１：４、ｖ／ｖ）に１ｍｇ／ｍＬで希釈し、ＨＰＬＣにより、サイズ排除カラムＴＳＫｇｅｌ Ｇ２０００ＳＷＸＬを用い、以下の条件を使用して分析する：カラムはＴＳＫｇｅｌ Ｇ２０００ＳＷＸＬ（ＩＤ７．８ｍｍ×長さ３０．０ｃｍ、粒径５ｍｍ、細孔径１２５Å）である。溶出液は０．１Ｍのリン酸緩衝液、ｐＨ６．７＋０．１ＭのＮａ_２ＳＯ_４であり、溶出は、１ｍＬ／分の流速を使用して均一濃度に保つ。検出器は、ＵＶ（λ＝２２０ｎｍ）であり、注入量は２５μＬであり、オーブン温度は３７℃である。

【0094】

発酵エキスは、１２分および１２．３分の時点でピークを示し、滞留時間１０〜２０分のガウス分布を伴う。総面積の７３．５％は１１〜１６分に位置し、総面積の６５％は１１〜１４分に位置する。分子量の異なる種々の標準（サイログロブリン、６７０，０００Ｄａ；アルブミン、６６，０００Ｄａ；リボヌクレアーゼ、１３，７００Ｄａおよびアミノ安息香酸、１２２Ｄａ）を使用して、保持時間から分子量を算出する。発酵エキスのピーク（１２分および１２．３分）の分子量は３２５，９Ｄａ〜２２９，２Ｄａであり、標準を使用して算出した場合に３，４００Ｄａ〜１２２Ｄａ（これは標準の最小重量である）の間隔を有するガウス分布を伴う。標準を用いて算出した場合、ガウス分布下面積の７３．５％は１０５３．９Ｄａ〜１２２Ｄａの分子量を有する。
（実施例３）
酵素結合免疫吸着測定アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によるヒト真皮線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン合成のｉｎ ｖｉｔｒｏ研究。

【0095】

Ｉ型コラーゲンは、皮膚に存在するコラーゲンの主要な型であり、皮膚の強度および弾力性に関与する。コラーゲンは、年齢と共に変性し、溶解する。線維芽細胞は、コラーゲンの主要な生成細胞である。したがって、ヒト真皮線維芽細胞（ＨＤＦａ）を候補美容のための活性物質で処理した結果としてのコラーゲン合成の誘導のｉｎ ｖｉｔｒｏにおける定量により、その候補が皮膚老化防止剤として有効か否かに関する指標がもたらされる。候補によりコラーゲン合成がもたらされる場合、これは、その候補が皮膚老化防止剤として有効であるという指標である。

【0096】

化粧生成物によるコラーゲン誘導は、酵素結合免疫吸着測定アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって評価される。

【0097】

ヒト真皮線維芽細胞をトリプシンで処理し、５×１０^４個の細胞／ウェルを４８ウェルプレートに播種する。３７℃、５％ＣＯ_２加湿空気中で２４ｈ（時間）インキュベートした後、新鮮な培地を、実施例１に従って得られた寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株のエキスのスカラー希釈物と共に、２０〜０．１μｇ／ｍＬで添加する。各濃度を３連で試験する。無処理の細胞を対照として４８ウェルプレートの６ウェルに播種する。細胞を、３７℃、５％ＣＯ_２加湿空気中さらに４８ｈインキュベートする。次に、ウェルの培地を、ＥＬＩＳＡによって分析することができるように収集する。標準曲線を、仔ウシの皮膚由来のＩ型コラーゲン（Ｓｉｇｍａ）を用い、１ｍｇ／ｍｌのストック溶液から開始して調製する。標準曲線希釈物および細胞培養処理物から収集した上清を９６ウェルプレートに移す。試料中および標準曲線希釈物中のコラーゲンにより９６ウェルプレートの壁が覆われ、それを４℃、加湿雰囲気中で終夜保つ。次に、ウェルプレートをＰＢＳ−０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０（ｖ：ｖ）（Ｓｉｇｍａ）で３回洗浄し、３％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（ｗ：ｖ）（Ｓｉｇｍａ）を用いて１ｈブロッキングする。ブロッキング後、ウェルプレートを、抗Ｉ型コラーゲン抗体（Ｓｉｇｍａ）と共に２ｈインキュベートする。このインキュベーションの後、二次抗体ＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）を添加する。この時点で、ウェルプレートを、ホスファターゼ基質（ＯＰＤ、Ｓｉｇｍａ）と共に撹拌しながら３０分インキュベートする。３ＭのＨ_２ＳＯ_４を添加することによって反応を停止させ、マイクロタイタープレートリーダーＴＥＣＡＮ ＧＥＮｉｏｓで４９０ｎｍにおける吸光度を読み取る。Ｉ型コラーゲン標準曲線の線形回帰を使用してコラーゲン濃度を決定する。表２に示されている通り、コラーゲン合成の結果は、無処理の細胞（対照）に対して増大する。

【表2】

【0098】

結果は、本発明のエキスによって、ヒト線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン合成が促進することを示している。
（実施例４）
コラゲナーゼ活性についてのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ

【0099】

コラーゲンは、皮膚結合組織における最も豊富なタンパク質である。コラーゲンは、新しい細胞が成長するにしたがってそれらを支持しながら必要な柔軟性をもたらすことを支援するメッシュ様構造を形成する。皮膚では継続的なコラーゲンの合成とコラーゲンの分解がなされ、それらプロセスのバランスにより、皮膚の引張強度および弾力の両方が決定される。コラーゲン分解は、年齢と共に増加する。コラゲナーゼは、コラーゲンを切断して断片にするメタロプロテイナーゼである。コラゲナーゼ活性を阻害することができる美容のための活性物質は、皮膚の抵抗性を改善することおよび皮膚老化防止剤として作用することにおいて有効であり得るということになる。

【0100】

コラゲナーゼ活性は、ＥｎｚＣｈｅｋ Ｇｅｌａｔｉｎａｓｅ／Ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）を用いて測定される。寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株のエキスを実施例１に従って得、反応緩衝液中１０ｍｇ／ｍｌのエキスおよび０ｍｇ／ｍｌのエキス（対照）の濃度の溶液にする。これらの溶液を黒色９６ウェルマイクロプレートに添加する。各濃度を２連で試験する。次に、１ｍｇ／ｍｌのＤＱ Ｇｅｌａｔｉｎ ２０μｌを各ウェルおよびコラゲナーゼ１００μｌに添加する。プレートを室温で、光から保護して２時間にわたってインキュベートし、多数の時点で蛍光を測定する。マイクロタイタープレートリーダーＴｅｃａｎ ＧＥＮｉｏｓでλ_ｅｘｃ＝４９５ｎｍおよびλ_ｅｍ＝５１５ｎｍにおける蛍光を読み取る。

【0101】

表３は、２回のアッセイの最小値についての対照に対する蛍光の百分率の平均値として表された結果を示す。

【表3】

【0102】

結果は、本発明のエキスによってコラゲナーゼ活性を阻害することが可能であることを示している。
（実施例５）
ヒト真皮線維芽細胞におけるエラスチン誘導の評価

【0103】

エラスチンは、弾性であり、皮膚を柔軟だが緊密なように保つのを補助し、皮膚を引っ張った場合の弾み反応をもたらす、結合組織内のタンパク質である。線維芽細胞がエラスチンの主要な生成細胞である。この理由で、ヒト真皮線維芽細胞における美容のための活性物質によるエラスチン誘導のｉｎ ｖｉｔｒｏにおける定量により、美容のための活性物質が皮膚に対して有し得る潜在的な抗老化効果に関する情報がもたらされる。美容のための活性物質によってコラーゲン合成が誘導されれば、これは、美容のための活性物質が皮膚老化防止剤として有効であることの指標である。

【0104】

美容のための活性物質によるエラスチン誘導は、Ｆａｓｔｉｎ Ｅｌａｓｔｉｎ Ａｓｓａｙ（Ｔｅｂｕ−Ｂｉｏ）によって評価される。

【0105】

ヒト真皮線維芽細胞をトリプシンで処理し、３×１０^５個の細胞／ウェルを培養フラスコに播種する。３７℃、５％ＣＯ_２加湿空気中で７２時間インキュベートした後、新鮮な培地を、実施例１に従って得られた寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株のエキス、１μｇ／ｍＬ、０．１μｇ／ｍＬおよび０．０１μｇ／ｍＬの濃度と共に添加する。無処理の細胞を、エラスチン合成についての陰性対照として播種する。各濃度を２連で試験する。細胞を、３７℃、５％ＣＯ_２加湿空気中さらに４８ｈインキュベートする。次に、エラスチンを細胞から抽出する。これを行うために、細胞培地を除去し、細胞をＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ）で２回洗浄し、次に、Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｓｉｇｍａ）を添加する。細胞懸濁液を微量遠心分離チューブに移し、１Ｍのシュウ酸を添加し、１００℃で１ｈインキュベートする。エラスチンが可溶化されたら、アッセイキットに付随して供給されるα−エラスチンを使用して標準を調製する。その時点から、試料および標準を、エラスチンの単離および染料に関するキットの説明書に従って一緒に処理する。最後に、キットに付随して供給されるＤｙｅ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔを用いて染料を抽出し、マイクロタイタープレートリーダーＴＥＣＡＮ ＧＥＮｉｏｓで５４０ｎｍにおける吸光度を測定する。

【0106】

表４では、３回のアッセイの最小値についての、陰性対照に対するエラスチン誘導の百分率の平均値が示されている。

【表4】

【0107】

結果は、本発明のエキスによってヒト真皮線維芽細胞におけるエラスチン合成が促進することを示している。
（実施例６）
エラスターゼ活性についてのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ

【0108】

皮膚の弾力は、コラーゲンおよびグリコサミノグリカンと共に結合組織を構成する真皮内のタンパク質であるエラスチンによる影響を受ける機械的特性である。結合組織のタンパク質の代謝は老化プロセスの間に低下し、酵素、主に、エラスチンおよびコラーゲンの分解の原因となるエラスターゼおよびコラゲナーゼがますます多く存在する。したがって、結果として皮膚の弾力が喪失するのを防止するための１つの可能性のある方法は、エラスターゼ酵素の活性を阻害することができる活性成分を使用することである。

【0109】

エラスターゼ活性は、ＥｎｚＣｈｅｋ Ｅｌａｓｔａｓｅ Ａｓｓａｙ ｋｉｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）を用いて測定される。

【0110】

寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株のエキスを実施例１に従って得、反応緩衝液中１０ｍｇ／ｍｌのエキス、５ｍｇ／ｍｌのエキス、２ｍｇ／ｍｌのエキス、１ｍｇ／ｍｌのエキスおよび０ｍｇ／ｍｌのエキス（対照）の濃度の溶液にする。溶液を黒色９６ウェルマイクロプレートに添加する。各濃度を２連で試験する。エラスチン使用液（１ｍｇ／ｍｌ）５０μｌを、希釈した酵素１００μｌと共に各ウェルに添加する。マイクロプレートを室温で、光から保護して４時間にわたってインキュベートし、多数の時点で蛍光を測定する。マイクロタイタープレートリーダーＴＥＣＡＮ ＧＥＮｉｏｓでλ_ｅｘｃ＝４９０ｎｍおよびλ_ｅｍ＝５３５ｎｍにおける蛍光を読み取る。

【0111】

表５には、２回のアッセイの最小値についての対照に対する蛍光の百分率の平均値が示されている。

【表5】

【0112】

結果は、本発明のエキスによってエラスターゼ活性を阻害することが可能であることを示している。
（実施例７）
終末糖化産物の形成のｉｎ ｖｉｔｒｏにおける評価

【0113】

糖化は、タンパク質とグルコースなどの還元糖との間の非酵素的反応である。この反応により、終末糖化産物（ＡＧＥ）として公知のものが形成される。糖化により、タンパク質の構造および機能が変化し、それによりタンパク質の機能障害が導かれる。皮膚では、Ｉ型コラーゲンの糖化が皮膚鈍麻の発生および皮膚の弾力の低下に関連すると考えられている。糖化は年齢と共に増加する。したがって、ＡＧＥ形成を阻害することができる美容のための活性物質には、皮膚の弾力および明度の改善に対する効果があり得る。そのような美容のための活性物質は、有効な皮膚老化防止剤であると思われる。

【0114】

０．２Ｍのグルコースおよび０．６％（ｖ：ｖ）のコラーゲンを、実施例１に従って得られた寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株のエキスの濃度、１００μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌおよび０μｇ／ｍｌ（基礎対照）の存在下インキュベートする。各濃度を２連で試験する。全ての溶液を６０℃でインキュベートし、０日目および３日目に試料採取し、ＡＧＥ形成を測定する。

【0115】

グルコースとＩ型コラーゲンとの間のＡＧＥ形成は、ＯｘｉＳｅｌｅｃｔ（商標）Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ Ｅｎｄ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ）を用いて評価される。次に、試料またはＡＧＥ−ＢＳＡ標準を、ＡＧＥコンジュゲートを予め吸収させたＥＬＩＳＡプレートに添加する。短時間インキュベートした後、抗ＡＧＥポリクローナル抗体を添加し、その後、ＨＲＰ（西洋ワサビペルオキシダーゼ）とコンジュゲートした二次抗体を添加する。二次抗体と共にインキュベートした後、基質溶液と共にインキュベートしたウェルプレートを、停止溶液を添加することによって反応を停止させる。マイクロタイタープレートリーダーＴＥＣＡＮ ＧＥＮｉｏｓで４５０ｎｍにおける吸光度を測定する。

【0116】

表６は、３回のアッセイについての、対照に対するＡＧＥの百分率の平均値を示す。

【表6】

【0117】

結果は、１μｇ／ｍｌの濃度の本発明のエキスによりＡＧＥの生成が阻害される（生成されるＡＧＥの量が、エキスが存在しない場合に生成される量の８０．６％である）ことを示している。エキスの量を１００μｇ／ｍｌまで増加させることにより、ＡＧＥの生成の阻害が増大し、生成されるＡＧＥの量は、エキスが存在しない場合に生成されるＡＧＥの量の７０．３％まで下がる。
（実施例８）
血管透過性についてのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ

【0118】

目の腫れおよび目の下のたるみはいくつかの寄与因子によって引き起こされるが、目領域の下の過剰な流体の保持または浮腫が主な原因であると考えられている。流体は不十分なリンパ循環および毛細血管透過性の増大を含めたいくつかの理由で構築される。したがって、血管透過性を低下させ、したがって、間質内区画内に蓄積する流体の量を減少させる美容のための活性物質が、目の腫れおよび目の下のたるみの化粧処置に関する良好な候補になり得る。

【0119】

ヒト臍静脈内皮細胞をトリプシンで処理し、５×１０^４個の細胞／ウェルを、９６ウェル組織培養プレート中の、１．０μｍの対称的な細孔を含有するインサートに播種する。３７℃、５％ＣＯ_２加湿空気中で７２時間インキュベートした後、内皮単層が形成され、それにより膜細孔が閉塞される。この時点で、新鮮な培地を、実施例１に従って得られた寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株のエキス、５μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬおよび０．２μｇ／ｍＬの濃度と共に添加する。無処理の細胞を血管透過性についての対照として使用する。各濃度を３連で試験する。全ての細胞を３７℃、５％ＣＯ_２で２４時間インキュベートする。

【0120】

処理後、ＦＩＴＣ−デキストランを細胞の上部に添加し、それにより、細胞単層を透過させる。２０分後にマイクロタイタープレートリーダーＴＥＣＡＮ ＧＥＮｉｏｓでλ_ｅｘｃ＝４８５ｎｍおよびλ_ｅｍ＝５３５ｎｍにおけるプレートウェル溶液の蛍光を測定することによって透過性の程度を決定する。

【0121】

表７は、３回のアッセイの最小値についての、対照に対する血管透過性の阻害の百分率の平均値を示す。

【表7】

【0122】

結果は、本発明のエキスが、エキスが存在する場合に、エキスが存在しない場合と比較して、細胞単層を透過するＦＩＴＣ−デキストランの量が最大２０．８％少ないという点で、血管透過性の阻害に役立つことを示している。
（実施例９）
ビリルビン分解における影響についてのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ

【0123】

近年、ビリルビンが目の周囲のくまの存在の要因であると考えられている。目の周囲の微小循環がくま形成の最も重要な要因のひとつであることが周知である。目の周囲の浮腫における血管漏出により、ビリルビンが蓄積し、これにより、色が黄色から青色まで変動し得るくまが生じる。したがって、目の周囲のビリルビンの分解を促進することができる美容のための活性物質が、目のくまの低減を補助する良好な化粧剤になり得る。

【0124】

ビリルビンの酸化を避けるために、光から保護したバイアル中で試験を実施する。水／２−プロパノール（１：１、ｖ／ｖ）中０．１％ビリルビン溶液１ｍＬを１０ｍＬのメスフラスコに添加する。その後、２５ｍｇ／ｍＬの水／２−プロパノール（１：１、ｖ／ｖ）中溶液中の、実施例１に従って得られた寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株のエキス４ｍＬを添加し、次に、フラスコに水／２−プロパノール（１：１、ｖ／ｖ）を充填して１０ｍＬを満たす。これらの条件では、菌株Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍのエキスの最終濃度は１％である。同時に、２５ｍｇ／ｍＬのＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍエキス溶液を伴わない陰性対照を、０．１％ビリルビン溶液１ｍＬおよび１０ｍＬのメスフラスコを満たすために必要な体積の水／２−プロパノール（１：１、ｖ／ｖ）を添加して調製する。両方の溶液が調製されたら、それらを光から保護したガラスバイアルに移し、室温で、一定の撹拌しながら保つ。ビリルビンの濃度を種々の時点でＨＰＬＣによって追跡する。

【0125】

３回の反復実験を比較するために、ゼロ時間における抱合型ビリルビンの面積を１００％に正規化した。２４時間後、１％のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍエキス溶液によりビリルビン濃度を１９．３６％低下させることができる。表８には、異なる時点におけるビリルビンの正規化された面積が示されている。

【表8】

【0126】

結果は、２４時間後、本発明のエキスを含有する試料中に存在するビリルビンの量が対照試料の８０．６４％であることを示している。したがって、通常の分解と比較して、１９．３６％のビリルビンの減少が達成される。
（実施例１０）
寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株の発酵エキスを含む化粧品組成物の調製

【0127】

成分が以下の表９に記載されている化粧品組成物を調製する。適切な容器内で、Ａ相の成分を溶解させ、Ａ１相成分を、完全な分散が達成されるまで撹拌しながら少しずつ添加する。次に、Ａ２相成分を添加し、得られた成分の混合物を、溶解するまで一定に撹拌し、７０〜７５℃まで加熱した。

【0128】

別の容器内で、Ｂ相成分７０〜７５℃で融解させ、それを、Ａ相、Ａ１相およびＡ２相の成分の混合物にタービンで撹拌しながら少しずつ添加した。

【0129】

次に、４０℃で、Ｃ相の成分を少しずつ添加し、撹拌する。続いて、Ｄ相の構成成分を完全に分散するまで撹拌しながら少しずつ添加し、Ｅ相の構成成分を完全に分散するまで撹拌しながら少しずつ添加する。水酸化ナトリウムを撹拌しながら添加することによってｐＨを６．０〜６．５に調整し（ｑ．ｓ、このｐＨに調整するのに十分な量）（Ｆ相）、それにより、表９に示されている割合を有する化粧品組成物を得た。組成物は、局所投与に適したクリームである。

【表9】

（実施例１１）
女性志願者においてカラスの足跡皺の処置に関する寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株の発酵エキスの有効性を試験する、実施例１０の組成物を用いたｉｎ ｖｉｖｏ研究

【0130】

本研究は１４日間にわたって実施し、測定を最初に時間＝０において、次に、１４日後に行う。４０〜５４歳のコーカサス人女性である２０名の志願者を含める。被験体は、寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株の発酵エキスを含む実施例１０のクリームを一方の目の輪郭（左側または右側）に塗布し、プラセボクリームを他方の目の輪郭に塗布する。クリームを１日２回（朝晩）塗布する。被験体は自身の参照としての役割を果たし、種々の時点で得られる結果を最初のゼロ時点で得られる結果と比較する。さらに、活性クリームを用いて得られる結果を、プラセボクリームを用いて得られる結果と比較する。

【0131】

生成物の有効性は、縞投影システムによるカラスの足跡（眼窩周囲の）皺の粗さパラメータ（Ｒａ、Ｒｚ、Ｒｔ）の評価によって評価される：
Ｒａ（平均粗さ）：絶対的な高さの値の算術平均
Ｒｚ（平均軽減）：最高点と最低点の間の距離（５つのピークおよび５つの谷）
Ｒｔ（総粗さ）：最も高いピークと最も低い谷の間の距離（評価の長さに沿って見出される）

【表10】

【0132】

表１０に示されている結果は、１４日間の処置期間にわたって、寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株の発酵エキスを含有するクリームが、眼窩周囲の皺に起因する皮膚の粗さの低減において有効であることを実証するものである。つまり、皺のサイズが縮小し、皺のある皮膚がより滑らかになる。
（実施例１２）
寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株の発酵エキスを含む化粧品組成物の調製

【0133】

成分が以下の表１１に記載されている化粧品組成物を調製する。適切な容器内で、Ａ相の成分を溶解させ、Ａ１相成分を、完全な分散が達成されるまで撹拌しながら少しずつ添加する。次に、Ａ２相成分を添加し、これらの成分の混合物を、溶解するまで一定に撹拌し、７０〜７５℃まで加熱した。

【0134】

別の容器内で、Ｂ相成分７０〜７５℃で融解させ、得られた混合物をＡ相、Ａ１相およびＡ２相の成分の混合物にタービンで撹拌しながら少しずつ添加する。

【0135】

次に、４０℃で、Ｃ相の成分を少しずつ添加し、撹拌する。

【0136】

この後、Ｄ相の構成成分を完全に分散するまで撹拌しながら少しずつ添加し、Ｅ相の構成成分を少しずつ添加し、完全に分散するまで撹拌する。水酸化ナトリウムを撹拌しながら添加することによってｐＨを６．０〜６．５に調整し（ｑ．ｓ、このｐＨに調整するのに十分な量）（Ｆ相）、表１１に示されている割合を有する化粧品組成物を得た。化粧品組成物は、局所使用に適したクリームである。

【表11】

（実施例１３）
コーカサス人の皮膚型の女性志願者における、目の下のくまの処置に関する寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株の発酵エキスの有効性を試験する、実施例１２の組成物を用いたｉｎ ｖｉｖｏ研究。

【0137】

本研究は、２８日間にわたって実施し、測定を、最初のゼロ時点、次に、２８日後に行う。２２〜６５歳のコーカサス人女性である２１名の志願者を含める。被験体は、寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株の発酵エキスを含有する実施例１２のクリームを一方の目の輪郭（左側または右側）に塗布し、プラセボクリームを他方の目の輪郭に塗布する。クリームを１日２回（朝晩）塗布する。被験体は自身の参照としての役割を果たし、種々の時点で得られる結果を最初のゼロ時点で得られる結果と比較する。さらに、活性クリームを用いて得られる結果を、プラセボクリームを用いて得られる結果と比較する

【0138】

生成物の有効性は、くまの、血管構成成分の分析に使用される交差偏光下でのデジタル写真によって評価され、結果を表１２に示す。

【表12】

【0139】

表１２に示されている結果は、２８日間の処置期間にわたって、寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株の発酵エキスを含有するクリームが、目の下のくまの皮膚の暗さの低減（すなわち、色のライトニング）において有効であることを実証するものである。
（実施例１４）
寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株の発酵エキスを含む化粧品組成物の調製

【0140】

成分が以下の表ＸＸに記載されている化粧品組成物を調製する。適切な容器内で、Ａ相の構成成分を溶解させ、Ａ１相構成成分を、完全な分散が達成されるまで撹拌しながら少しずつ添加する。次に、Ａ２相構成成分を添加し、成分のこの混合物を、溶解するまで一定に撹拌し、７０〜７５℃まで加熱した。

【0141】

別の容器内で、Ｂ相構成成分を７０〜７５℃で融解させ、混合物を、Ａ相、Ａ１相およびＡ２相の構成成分の混合物にタービンで撹拌しながら少しずつ添加する。次に、４０℃で、Ｃ相の成分を撹拌しながら少しずつ添加する。続いて、Ｄ相の構成成分を完全に分散するまで撹拌しながら少しずつ添加し、Ｅ相の構成成分を少しずつ添加し、完全に分散するまで撹拌する。水酸化ナトリウムを撹拌しながら添加することによってｐＨを６．０〜６．５に調整し（ｑ．ｓ、このｐＨに調整するのに十分な量）（Ｆ相）、表１３に示されている割合を有する化粧品組成物を得た。組成物は、局所適用に適したクリームである。

【表13】

（実施例１５）
女性志願者において、涙袋の処置に関する有効性を試験する、実施例１４の組成物を用いたｉｎ ｖｉｖｏ研究

【0142】

本研究は、２８日間にわたって実施し、測定を、最初のゼロ時点、次に、１４日後、次に、２８日後に行う。４１〜６６歳のコーカサス人女性である２０名の志願者を含める。被験体は、寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株の発酵エキスを含む実施例１４のクリームを一方の目の輪郭（左側または右側）に塗布し、プラセボクリームを他方の目の輪郭に塗布する。クリームを１日２回（朝晩）塗布する。被験体は自身の参照としての役割を果たし、種々の時点で得られる結果と最初の時点で得られる結果を比較する。さらに、活性クリームを用いて得られる結果を、プラセボクリームを用いて得られる結果と比較する。

【0143】

生成物の有効性は、縞投影システムによる涙袋の体積の評価によって評価され、結果を表１４に示す。

【表14】

【0144】

表１４に示されている結果は、１４日間および２８日間の処置期間にわたって、寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株の発酵エキスを含有するクリームは、涙袋の体積の減少において有効であることを実証するものである。
（実施例１６）
ヒト上皮メラニン細胞におけるメラニン形成についてのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ

【0145】

メラニン形成は、皮膚におけるメラニン細胞内で起こるプロセスであり、それにより、皮膚色の色素決定因子であるメラニンが合成される。美容のための活性物質によって誘導されるｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるメラニン定量により、美容のための活性物質の潜在的なホワイトニング効果に関する情報がもたらされる。

【0146】

ヒトメラニン細胞をトリプシンで処理し、６ウェルプレートにおいて、２×１０^５個の細胞／ウェルの密度でプレーティングする。３７℃、５％ＣＯ_２で終夜インキュベートした後、実施例１に従って得られた寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株のエキスを１０μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬおよび０．２μｇ／ｍＬで用いた最初の処理を行う。無処理の細胞を対照として使用する。各濃度を２連で試験する。処理を３日目、６日目、８日目および１０日目に反復する。最後に、細胞を、最後の処理後に３７℃、５％ＣＯ_２でさらに７２時間インキュベートする。

【0147】

最後のインキュベーションの後、細胞を、細胞計数およびメラニン測定のために分離する。細胞懸濁液を３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離し、ペレットを、１０％ＤＭＳＯ（ｖ：ｖ）を伴う１ＮのＮａＯＨ １ｍｌに溶解させる。細胞を８０℃で２時間にわたって溶解させ、１２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離する。メラニン濃度を、プレートリーダーＴＥＣＡＮ ＧＥＮｉｏｓで４５０ｎｍにおける吸光度を測定することによって決定し、値をウェル当たりの細胞の数に関して正規化する。メラニン濃度を、合成メラニンを既知濃度で用いてプロットした標準曲線から、細胞当たりのピコグラム数（ｐｇ／細胞）の単位で決定する。

【0148】

表１５には、３回のアッセイについての、対照に対するメラニンの百分率の平均値が示されている。

【表15】

【0149】

表１５に示されている結果は、本発明のエキスが、ヒト上皮メラニン細胞におけるメラニン形成（メラニン合成）の阻害において有効であることを実証するものである。
（実施例１７）
チロシナーゼ活性についてのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ

【0150】

メラニン形成は、メラニン細胞内で起こるプロセスであり、それにより、皮膚色の色素決定因子であるメラニンが合成される。メラニン形成において重要な酵素は、チロシナーゼである。チロシナーゼにより、チロシンがメラニンに変換される反応のカスケードが開始する。したがって、チロシナーゼ活性を阻害することができる美容のための活性物質には、皮膚ホワイトニング剤としての潜在性がある。

【0151】

チロシナーゼ活性は、ＨｕｍａｎＬｉｋｅ Ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｆｅｌｄａｎ）を用いて測定される。２００μｌ／ウェルの反応混合物をマイクロプレートウェルに添加し、実施例１に従って得られた寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株のエキス１０μｌの試料を１００μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌおよび１μｇ／ｍｌで添加する。各濃度を２連で試験する。最後に、酵素２μｌをローディングする。酵素を伴わないウェルをブランクとして使用する。マイクロタイタープレートリーダーＴＥＣＡＮ ＧＥＮｉｏｓ（Ｇｅｎｉｏｓ、Ｔｅｃａｎ）でλ＝４９０ｎｍにおける吸光度を読み取る。

【0152】

表１６には、３回のアッセイについての、対照に対する吸光度の百分率の平均値が示されている。

【表16】

【0153】

表１６に示されている結果は、本発明のエキスが、チロシナーゼ活性の阻害において有効であることを実証するものである。
（実施例１８）
ヒト上皮メラニン細胞の遺伝子発現のプロファイルの研究

【0154】

ヒトメラニン細胞をトリプシンで処理し、６ウェルプレートにおいて、２×１０^５個の細胞／ウェルの密度でプレーティングする。３７℃、５％ＣＯ_２で終夜インキュベートした後、実施例１に従って得られた寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株のエキスを１０μｇ／ｍＬで用いた最初の処理を行う。無処理の細胞を対照として使用する。各濃度を１０ウェルで試験する。処理を３日目、６日目、８日目および１０日目に反復する。最後に、細胞を、最後の処理後に３７℃、５％ＣＯ_２でさらに７２時間インキュベートする。

【0155】

最後のインキュベーションの後、細胞をウェル中で直接溶解させ、ＲＮＡを抽出し、ＲＮｅａｓｙＰｌｕｓ Ｍｉｎｉ ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）により、製造者のプロトコールに従って、各レプリカおよび各条件から精製する。簡潔には、溶解した細胞をホモジナイズし、ＲＮａｓｅｓを不活化する。ゲノムＤＮＡを、ｇＤＮＡ Ｅｌｉｍｉｎａｔｏｒスピンカラムを使用することによって試料から除去する。次に、試料を、特別なＲＮＡ結合カラムを通過させ、数回の微量遠心分離洗浄を行って、夾雑物および不純物を排除した後、精製されたＲＮＡを、超純水５０μｌで溶出する。

【0156】

得られたＲＮＡの純度、完全性および濃度を、分光光度法（Ｎａｎｏｄｒｏｐ）を用いて、バイオアナライザ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ）で評価する。４つの対照試料および４つの処理試料を純度および完全性の結果に従って選択する。

【0157】

後に、標識化を行い、試料を、ヒト遺伝子発現マイクロアレイ（ＡＳｕｒｅＰｒｉｎｔ Ｇ３、Ａｇｉｌｅｎｔ）でハイブリッド形成させる。

【0158】

処理で得られた正規化値を、陰性対照で得られた正規化値と比較して、差次的発現を有する遺伝子を得る。次に、データのパラメトリック分析を、Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒソフトウェアによって行う。次に、得られた値を、ＧＳＥＡ（Ｇｅｎｅ Ｓｅｔ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ）によって評価して、ジーンオントロジーおよび生物学的経路に関して、差次的発現を有する遺伝子をグループ化する。

【0159】

選択されたメラニン形成に関与する遺伝子について得られたＬｏｇＦｃの結果は次表に示されている通りである。ＬｏｇＦＣは、倍数変化（ＦＣ）の対数（基数２）である。ＦＣは、遺伝子の発現レベルの変化を測定するためのマイクロアレイにおける遺伝子発現データの解析において使用される。倍数変化は、比較される２つの実験条件間の量の変化がどのくらいであるかを記述する評価基準として、または、比較される２つの実験条件間の強度の比として定義される。この意味では、ＬｏｇＦＣが負の値である遺伝子は、対照と比較して下方調節されており、ＬｏｇＦＣが正の値である遺伝子は、対照と比較して上方調節されている。

【表17】

【表18】

【表19】

【0160】

表１８に示されている結果は、本発明のエキスが、遺伝子を上方調節または下方調節し、その結果、メラニン形成の阻害をもたらすことができることを実証するものである。表１９および表１７に示されている結果は、本発明のエキスが、メラノソームバイオジェネシスに直接関与する遺伝子およびメラニン合成に関与する酵素をコードする遺伝子を下方調節することができることを実証するものである。遺伝子調節におけるこれらの効果の全てに関して、本発明のエキスは、メラニン形成プロセスを阻害し、その結果、ホワイトニング効果を得ることに役立つ。
（実施例１９）
寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株の発酵エキスの化粧品組成物の調製

【0161】

適切な容器内で、Ａ相の成分を溶解させ、Ａ１相を少しずつ添加し、完全な分散が達成されるまで撹拌する。次に、Ａ２相を添加し、成分のこの混合物を、溶解するまで一定に撹拌し、７０〜７５℃まで加熱する。

【0162】

別の容器内で、Ｂ相成分７０〜７５℃で融解させ、それを、Ａ相、Ａ１相およびＡ２相の成分の混合物にタービンで撹拌しながら少しずつ添加する。

【0163】

次に、４０℃で、Ｃ相の成分を少しずつ添加し、撹拌する。

【0164】

続いて、Ｄ相の構成成分を完全に分散するまで撹拌しながら少しずつ添加し、Ｅ相の構成成分を少しずつ添加し、完全に分散するまで撹拌する。水酸化ナトリウム（ｑ．ｓ、このｐＨに調整するのに十分な量）（Ｆ相）を撹拌しながら添加することによってｐＨを６．０〜６．５に調整し、表２０に示されている割合を有する化粧品組成物を得た。

【表20】

（実施例２０）
アジア人の皮膚型の志願者における、年齢に伴う斑の処置および皮膚ライトニング効果についての寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株の発酵エキスの有効性を試験する、実施例１９の組成物を用いたｉｎ ｖｉｖｏ研究。

【0165】

本研究は、５６日間実施し、測定を、最初の時点および８週間の処置後に行う。３８〜５３歳の女性アジア人志願者２２名のパネルに、実施例１９のクリームを顔の半分に、およびプラセボクリームを顔のもう一方の半分に、１日２回（朝晩）塗布する。被験体は自身の参照としての機能を果たし、種々の時点で得られた結果を最初の時点で得られた結果と比較した。さらに、活性クリームを用いて得られた結果を、プラセボクリームを用いて得られた結果と比較した。

【0166】

生成物の有効性を以下によって評価した：
−光のスペクトル反射による皮膚色の測定、パラメータＬ＊、ｂ＊およびＩＴＡ°（ｎ＝２２）、結果を表２１に示す
Ｌ＊：ルミナンスパラメータ（暗い〜明るい；皮膚の明るさまたは明度）
ｂ＊：クロミナンスパラメータ（青色〜黄色；皮膚の黄色さ）
ＩＴＡ°（個別類型角（Ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ Ｔｙｐｏｌｏｇｙ Ａｎｇｌｅ））：［アークタンジェント（（Ｌ＊−５０）／ｂ＊）］×１８０／３．１４１５９

【表21】

【0167】

種々の時点で（ベースラインおよび８週間）、各志願者について各パラメータ（Ｌ＊、ｂ＊およびＩＴＡ）を測定する。後に、各パラメータについて平均値を算出し、表２１に含まれる％は、［（８週の時点での平均値−０週の時点での平均値）／０週の時点での平均値］（％）である。皮膚コントラストは、非色素沈着過剰領域におけるパラメータの値から色素沈着過剰領域におけるパラメータの値を引いたものである、すなわち、コントラストは、処置終了時に皮膚色がより均一であるか否かの皮膚色の均質性に関するパラメータである。したがって、コントラストが負の値であることにより、皮膚色均質性の改善が示される。コントラストを各志願者およびパラメータについて、Ｌ＊を例として以下の通り算出する：Ｌ＊コントラスト＝Ｌ＊非色素沈着過剰−Ｌ＊過剰色素。平均コントラスト値を算出し、それを使用して処置中のコントラストの進展を算出する：％コントラスト＝［（８週の時点での平均値−０週の時点での平均値）／０週の時点での平均値］。この％は、表２１中にコントラストの見出しで含まれる。

【0168】

表２１に示されている結果は、８週間の処置期間にわたって、寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株の発酵エキスを含有するクリームは、皮膚の色素沈着過剰領域（年齢に伴う斑）における皮膚明るさ（Ｌ＊およびＩＴＡ°）の増大および皮膚の黄色さ（ｂ＊）の低減において有効であることを実証するものである。さらに、色素沈着過剰領域と非色素沈着過剰領域の間のコントラストが低下し、これにより、年齢に伴う斑のホワイトニング効果が示される。

【0169】

反射型共焦点顕微鏡による色素沈着過剰領域におけるメラニンの強度の分析（ｎ＝２）、結果は表２２に示されている通りである。

【表22】

【0170】

表２２に示されている結果は、８週間の処置期間にわたって、寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株の発酵エキスを含有するクリームは、皮膚の色素沈着過剰領域（年齢に伴う斑）におけるメラニン強度の低下において有効であることを実証するものである。
（実施例２１）
寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株の発酵エキスを含むマイクロエマルションの調製。

【0171】

適切な容器内で、ドクサートナトリウムＵＳＰ［ＩＮＣＩ：スルホコハク酸ジエチルヘキシルナトリウム］およびイソステアリン酸［ＩＮＣＩ：イソステアリン酸］を混合する（Ａ相）。

【0172】

別の容器内で、実施例１に従って得られた寄託番号ＣＥＣＴ２０９０１のＥｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｕｓｔａｃｅｕｍ種の菌株の発酵エキスと水［ＩＮＣＩ：水（アクア）］およびブチレングリコール１，３［ＩＮＣＩ：ブチレングリコール］の混合物を、エタノール［ＩＮＣＩ：アルコール］に溶解する（Ｂ相）。Ｂ相を、撹拌しながらＡ相にゆっくり添加する。表２３参照。

【表23】

（実施例２２）
実施例２１のマイクロエマルションを含む脂質ナノ粒子組成物の調製

【0173】

水［ＩＮＣＩ：水（アクア）］、Ａｍｉｇｅｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：スクレロチウムガム］、Ｚｅｍｅａ（商標）［ＩＮＣＩ：プロパンジオール］、ヒアルロン酸［ＩＮＣＩ：ヒアルロン酸ナトリウム］およびフェノキシエタノール［ＩＮＣＩ：フェノキシエタノール］（Ａ相成分）を、この順序で適切な容器に添加し、均質性が達成されるまで撹拌した。

【0174】

実施例ＸＸのマイクロエマルション、精製ダイズ油ＩＰ Ｐｈ． Ｅｕｒ．［ＩＮＣＩ：ＧＬＹＣＩＮＥ ＳＯＪＡ（ダイズ）油］、Ａｒｌａｃｅｌ ８３［ＩＮＣＩ：セスキオレイン酸ソルビタン］、およびＭａｓｓｏｃａｒｅ ＨＤ［ＩＮＣＩ：イソヘキサデカン］（Ｂ相成分）を含む混合物を別の容器に添加した。

【0175】

次に、Ｂ相成分の混合物を、エマルションが形成されるまでタービンで撹拌しながらＡ相成分の混合物に添加した。

【0176】

次に、混合物を、高圧ホモジナイズシステムであるＭｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（登録商標）を用いてホモジナイズした。

【0177】

最後に、ＳＥＮＳＯＭＥＲ ＣＴ−４００［ＩＮＣＩ：カッシアヒドロキシプロピルトリモニウムクロリド］を撹拌しながらゆっくり添加した（Ｃ相）。表２４参照。

【表24】

（実施例２３）
再構築されたヒト色素沈着上皮におけるメラニン形成阻害についてのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ

【0178】

色素沈着過剰は、誇大なメラニン生成によって引き起こされる障害である。中でも、過剰な日光への曝露、老化、ホルモンの変化、炎症、アレルギーなどの因子により、メラニン生成および分布プロセスの不均衡が引き起こされ、その結果、皮膚染色が生じる。日光黒子（ＳＬ）（老人性黒子、そばかす、肝斑、または年齢に伴う斑としても公知）は、限局性の色素沈着した斑であり、典型的には、身体のＵＶ曝露領域において見出される。日光黒子の出現に関して現在提唱されている分子機序は、Ｗｎｔ経路を含めた上皮シグナル伝達経路の刺激を伴う。ＷＮＴ−１は、日光黒子に関与するＷｎｔシグナル伝達経路の活性化因子である。

【0179】

再構築されたヒト色素沈着上皮（ＲＨＰＥ）、１０日齢、フォトタイプＩＶ（ＳｋｉｎＥｔｈｉｃ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、到着直後にマルチウェルプレートのアガロース栄養溶液から取り出し、各ウェルに予めＳｋｉｎＥｔｈｉｃ成長培地（ＳｋｉｎＥｔｈｉｃ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を充填しておいた６ウェルプレートに入れる。３７℃、５％ＣＯ_２で終夜インキュベートした後、組換えヒトＷＮＴ−１（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）を２００ｎｇ／ｍｌで用いて、または実施例１に従って得られたエキスを２００μｇ／ｍｌまたは１００μｇ／ｍｌでＷＮＴ−１と共に用いて最初の処理を行う。各ウェルの培地を吸引し、新鮮な培地（組換えヒトＷＮＴ−１、またはエキスおよび組換えヒトＷＮＴ−１のいずれかを含有する）を添加する。各アッセイは、ＲＨＰＥを成長培地だけで処理する対照（基本条件）ウェルを有する。処置を６日目まで、すなわち５日間、毎日反復し、そこで、組織モデルを、Ｃｒｙｏ−Ｍ−Ｂｅｄ（Ｂｒｉｇｈｔ）に包埋する。

【0180】

５日間の処置後、組織モデルを４℃で３時間、４％パラホルムアルデヒド（Ｓｉｇｍａ）で固定し、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（Ｓｉｇｍａ）で４回洗浄した。次に、試料を０．６モル濃度〜２．３モル濃度のスクロース勾配にかけ、室温で３時間インキュベートする。最後のインキュベーションの後、組織モデルをＣｒｙｏ−Ｍ−Ｂｅｄに包埋する。１０μｍの切片を、クリオスタット（Ｌｅｉｃａ）を用いて切り、切片中のメラニンを、Ｆｏｎｔａｎａ−Ｍａｓｓｏｎ Ｓｔａｉｎ ｋｉｔ（Ａｂｃａｍ）を使用して染色する。

【0181】

組織切片を、アンモニア銀液５８〜６０℃に予め温めたと共に０〜６０分インキュベートする。組織切片が、黄色がかった／茶色になったら、それらを、蒸留水を何回か換えながらすすぐ。次に、組織切片を塩化金溶液中で３０秒間インキュベートし、再度すすぐ。組織切片をチオ硫酸ナトリウム溶液中で１〜２分間インキュベートし、水道水で２分間すすぎ、その後、蒸留水を２回換えてすすぐ。切片を、Ｎｕｃｌｅａｒ Ｆａｓｔ Ｒｅｄ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ中で５分間インキュベートし、水道水で２分間すすぎ、その後、蒸留水を２回換えてすすぐ。最後に、切片を、無水アルコールを３回換えて脱水し、きれいにし、Ｎｅｏ−Ｍｏｕｎｔ（登録商標）（Ｍｅｒｃｋ）で標本にする。

【0182】

切片を、Ｚｅｉｓｓ光学顕微鏡を使用して観察し、Ｚｅｎソフトウェアを使用して画像を取得する。各画像から、染色された領域の量を定量する。

【0183】

表２５は、３回のアッセイの最小値についての、基本条件に対するメラニン含量の誘導倍率を示す。

【表25】

【0184】

結果は、本発明のエキスが、色素沈着過剰のヒト皮膚モデルにおけるメラニン含量の有意な減少を、試験濃度で誘導することを示している。
（実施例２４）
遺伝子発現分析についてのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ

【0185】

本研究の目的は、実施例１に従って得られたエキスの脱色有効性を、暗く色素沈着したメラニン細胞におけるメラニン形成経路の遺伝子の発現をＲＴ−ｑＰＣＲアレイ系を使用して評価することによって調査することである。

【0186】

新生児の、暗く色素沈着したドナー（ＨＥＭｎ−ＤＰ）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）由来のヒト上皮メラニン細胞をトリプシン処理し、６ウェル培養プレートにおいて、ヒトＭｅｌａｎｏｃｙｔｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ−２（ＨＭＧＳ−２−（ＰＭＡフリー））（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＭｅｄｉｕｍ ２５４中に３×１０^５個の細胞／ウェルの密度でプレーティングする。３７℃、５％ＣＯ_２で終夜インキュベートした後、実施例１に従って得られたエキスを１μｇ／ｍｌを用いるかまたは培地だけを用いる（基本条件）最初の処理を行う。各ウェルの培地を吸引し、次に、新鮮な培地（エキスまたは培地だけのいずれかを含有する）を添加する。処理を３日目、６日目、８日目および１０日目に反復する。最後に、細胞を、最後の処理後に３７℃、５％ＣＯ_２でさらに７２時間インキュベートする。

【0187】

最後のインキュベーションの後、細胞を、Ａｕｒｕｍ Ｔｏｔａｌ ＲＮａ Ｍｉｎｉ ｋｉｔ（ＢｉｏＲａｄ）に記載されているプロトコールに従い、製造者のプロトコールに従って、ウェル中で直接溶解させる。溶解した細胞をホモジナイズし、ＲＮａｓｅｓを不活化する。次に、試料を、特別なＲＮＡ結合カラムを通過させ、数回の微量遠心分離洗浄を行って夾雑物および不純物を排除した後、精製されたＲＮＡを、溶出溶液８０μｌで溶出する。ＲＮＡ溶出の後、ＲＮＡ試料の純度の定量および分析を、暗順応計（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）を用いて実施する。

【0188】

高品質ＲＮＡ０．４μｇを、最終体積２０μｌでｉＳｃｒｉｐｔ ａｄｖａｎｃｅｄ（ＢｉｏＲａｄ）を用いて逆転写する（ｒｅｔｒｏｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ）。完全な反応混合物を、サーマルサイクラー（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）中、４２℃で３０分間インキュベートし、反応は８５℃において５分間で停止する。相補的ＤＮＡを、リアルタイムＰＣＲサーモサイクラー（ＢｉｏＲａｄ）で、ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ（ＢｉｏＲａｄ）と共に使用するためのヒトメラニン形成９６ウェルパネルにおいて、ＳｓｏＡｄｖａｎｃｅｄ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−Ｔｏｌｅｒａｎｔ ＳＹＢＲｇｒｅｅｎ ｓｕｐｅｒｍｉｘ（ＢｉｏＲａｄ）を使用して、ｑＰＣＲによって増幅する。ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎは、二本鎖ＤＮＡ分子に結合して、蛍光を発光し、この蛍光が定量され、それはＰＣＲ反応における生成物の量に比例する。ＢｉｏＲａｄ ＣＦＸ９６機器のサイクリング条件は、９５℃で３分間、その後９５℃で５秒の変性、６０℃で３０秒間のアニーリングおよび伸長の４０サイクルである。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼ）、ＴＢＰ（ＴＡＴＡボックス結合タンパク質）およびＨＲＰＴ１（ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ１）を、内在性対照として使用する。試料遺伝子および参照遺伝子の発現に対する倍数変化を、ＣＦＸ Ｍａｎａｇｅｒソフトウェア（ＢｉｏＲａｄ）を使用し、正規化発現（ΔΔ（Ｃｔ））法を使用してデフォルト閾値を用いて算出する。

【0189】

表２６は、３回のアッセイの最小値についての、示されている種々の遺伝子の発現の基本条件に対する相対レベルを示す。

【表26】

【0190】

結果は、本発明のエキスが、ヒトメラニン細胞におけるメラニン形成遺伝子の発現の有意な低減を試験濃度で、およびＤＫＫ１遺伝子の有意な増大を誘導することを示している。ＤＫＫ１遺伝子は、ＷＮＴ経路を通じたメラニン細胞の増殖の阻害剤でもあるファゴサイトーシス阻害剤をコード化する。
（実施例２５）
ＥＬＩＳＡによるチロシナーゼ定量についてのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ

【0191】

メラニン形成において重要な酵素は、チロシンがバイオポリマーメラニンに変換される反応のカスケードを開始するチロシナーゼである。この酵素は、２つの異なる反応：モノフェノール化合物のｏ−ジフェノールへの水酸化；およびｏ−ジフェノールのｏ−キノンへの酸化を触媒する。この酵素は、チロシンを３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン（Ｌ−ドーパ）に変換し、Ｌ−ドーパを酸化してドパキノンを形成させる。Ｌ−ドーパは、メラニン生合成に顕著に関与する。

【0192】

新生児の、暗く色素沈着したドナー（ＨＥＭｎ−ＤＰ）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）由来のヒト上皮メラニン細胞をトリプシン処理し、９６ウェル培養プレートにおいて、ヒトＭｅｌａｎｏｃｙｔｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ−２（ＨＭＧＳ−２−（ＰＭＡフリー））（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＭｅｄｉｕｍ ２５４中に５×１０^３個の細胞／ウェルの密度でプレーティングする。３７℃、５％ＣＯ_２で終夜インキュベートした後、実施例１に従って得られたエキスを５０または１０μｇ／ｍｌで用いるか、または培地だけ（基本条件）を用いる最初の処理を行う。各ウェルの培地を吸引し、次に、新鮮な培地（５０μｇ／ｍｌもしくは１０μｇ／ｍｌのエキス、または培地だけを含有する）を添加する。処理を３日目、６日目、８日目および１０日目に反復する。１３日間の培養後、培養細胞において、Ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ Ｃｅｌｌ−Ｂａｓｅｄ ＥＬＩＳＡ ｋｉｔ（Ａｂｎｏｖａ）を使用して酵素定量を行う。まず、細胞をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で２回すすぎ、４％ホルムアルデヒドで２０分間固定する。次に、細胞を洗浄緩衝液で３回洗浄し、クエンチング緩衝液を添加し、２０分間インキュベートする。プレートを再度洗浄し、ブロッキング緩衝液を用いて１ｈブロッキングする。ブロッキング後、ウェルプレートを、抗チロシナーゼ抗体または抗ＧＡＰＤＨ抗体と共に１６時間インキュベートする。各条件について合計６ウェルを使用し、そのうちの３つは抗チロシナーゼ抗体と共にインキュベートし、他の３つは抗ＧＡＰＤＨ抗体と共にインキュベートする。このインキュベーションの後、二次抗体（抗チロシナーゼ抗体と共にインキュベートしたウェルについてはＨＲＰコンジュゲート抗ウサギＩｇＧ、または抗ＧＡＰＤＨ抗体と共にインキュベートしたウェルについてはＨＲＰコンジュゲート抗マウスＩｇＧ）を対応するウェルに添加し、１．５時間インキュベートする。次に、ウェルプレートを、ＴＭＢ ｏｎｅ−Ｓｔｅｐ Ｓｏｌｕｔｉｏｎと共に、暗所中、穏やかに振とうしながら３０分間インキュベートする。各ウェルに停止溶液を添加することによって反応を停止させる。マイクロタイタープレートリーダー（Ｃｌａｒｉｏｓｔａｒ、ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）で４５０ｎｍにおける吸光度を読み取る。ＧＡＰＤＨシグナルをチロシナーゼ値の正規化のために使用する。

【0193】

表２７は、３回のアッセイの最小値についての、基本条件に対するチロシナーゼレベル発現阻害の平均百分率を示す。

【表27】

【0194】

結果は、本発明のエキスが、メラニン細胞培養物におけるチロシナーゼタンパク質レベルの有意な低下を試験濃度で誘導することを示している。
（実施例２６）
ミクロスフェアに基づくファゴサイトーシスについてのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ

【0195】

皮膚色素沈着は、メラニン細胞から付近のケラチノサイトへのメラニン色素の移動によって、および基底上の上皮層におけるメラニン細胞の分布パターン、ならびに、メラニン細胞において合成されるメラニンの量および型によって決定される。メラニン色素は、メラノソームと称される特殊な膜結合型細胞小器官において合成され、貯蔵される。メラノソームは、細胞体からメラニン細胞中で周囲に輸送され、メラニン細胞の樹状突起から隣接するケラチノサイトに移動する。移動後、メラノソームは核に向かって輸送されて、ケラチノサイトにおいて内部サンスクリーンとして作用するメラニンキャップを形成する。

【0196】

メラニン細胞の培養物の上清を、６ウェル培養プレートにおいて、Ｈｕｍａｎ Ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ−２（ＨＭＧＳ−２−（ＰＭＡフリー）、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＭｅｄｉｕｍ ２５４（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中に３×１０^５個の細胞／ウェルの密度で播種した、新生児の、暗く色素沈着したドナー（ＨＥＭｎ−ＤＰ）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）由来のヒト上皮メラニン細胞から得る。２４ｈ後、培地を除去し、細胞を、実施例１に従って得られたエキス、１μｇ／ｍｌと共に、または培地だけ（上清対照）と共に、３７℃、ＣＯ_２インキュベーター中で１３日間インキュベートする。処理を３日目、６日目、８日目および１０日目に反復する。１３日目に、上清を収集し、ヒト上皮ケラチノサイトを処置するために使用する。

【0197】

ヒト上皮ケラチノサイト（ＨＥＫａ）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）をトリプシン処理し、３×１０^５個の細胞／ウェルを、Ｅｐｉｌｉｆｅ Ｄｅｆｉｎｅｄ Ｇｒｏｗｔｈ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（ＥＤＧＳ）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＥｐｉｌｉｆｅ培地中のコーティングマトリックスで予めコーティングしたカバーガラスを伴う１２ウェル培養プレートに播種する。３７℃、５％ＣＯ_２加湿空気中で２４時間インキュベートした後、１００ｎｇ／ｍｌのＤＫＫ１（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）または処理されたメラニン細胞の上清を含有する新鮮な培地を添加する。各プレートは、培地だけ（基本条件）で処理した対照ウェルを有する。プレートを、３７℃、５％ＣＯ_２で３０分間インキュベートする。処理後、培地を除去し、細胞を、ＦｌｕｏＳｐｈｅｒｅｓ（登録商標）カルボン酸改変赤色蛍光ミクロスフェア（直径０．５μｍ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、３×１０^８個／ｍｌと共に４時間インキュベートする。ミクロスフェアを、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（Ｓｉｇｍａ）を用い、製造者の指示書に従って予めコーティングする。インキュベーションの後、細胞をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（Ｓｉｇｍａ）で広範に洗浄して、内部移行していないミクロスフェアを除去し、３．７％（Ｖ／Ｖ）パラホルムアルデヒド（Ｓｉｇｍａ）で１０分間固定する。細胞をＰＢＳで洗浄し、冷たいアセトン中で３分間インキュベートする。試料を、ＰＢＳ中１％（Ｗ／Ｖ）ＢＳＡで３０分間ブロッキングする。細胞の輪郭を可視化するために、細胞を、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８ファロイジン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて暗所中、２０分間標識する。細胞の核を染色し、カバーガラスを、ＤＡＰＩを有するＰｒｏＬｏｎｇ Ｇｏｌｄ退色防止試薬（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）とともにマウントする。細胞を、Ｚｅｉｓｓ蛍光顕微鏡を使用して観察し、定量のためにＺｅｎソフトウェアを使用して画像を取得する。

【0198】

ミクロスフェア取り込みの定量分析のために、３回の異なる実験においてランダムに取得した６つの顕微鏡視野内に存在するミクロスフェアおよび核の数を各条件について計数する。各画像のミクロスフェアの数を、各画像中の核の数で正規化する。

【0199】

表２８は、３回のアッセイの最小値についての、基本条件に対するファゴサイトーシスの平均誘導倍率を示す。

【表28】

【0200】

結果は、本発明のエキスが、ケラチノサイトによるミクロスフェア取り込みまたはファゴサイトーシスの有意な阻害を試験濃度で誘導することを示している。