特許 6772214 食餌性脂肪酸の要求を満たすための方法、組成物、及び装置

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6772214

(24)【登録日】2020年10月2日

(45)【発行日】2020年10月21日

(54)【発明の名称】食餌性脂肪酸の要求を満たすための方法、組成物、及び装置

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/232 20060101AFI20201012BHJP

   A61K 31/202 20060101ALI20201012BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20201012BHJP

   A61P 3/02 20060101ALI20201012BHJP

   A23C 9/152 20060101ALI20201012BHJP

   A61J 15/00 20060101ALI20201012BHJP

   C12N 11/08 20200101ALI20201012BHJP

   A23L 33/12 20160101ALI20201012BHJP

   C12M 1/40 20060101ALI20201012BHJP

   C12P 7/64 20060101ALI20201012BHJP

   C12N 9/16 20060101ALI20201012BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/232

   A61K31/202

   A61K9/08

   A61P3/02

   A23C9/152

   A61J15/00 A

   C12N11/08

   A23L33/12

   C12M1/40 Z

   C12P7/64

   C12N9/16

【請求項の数】18

【外国語出願】

【全頁数】69

(21)【出願番号】特願2018-84169(P2018-84169)

(22)【出願日】2018年4月25日

(62)【分割の表示】特願2017-186308(P2017-186308)の分割

【原出願日】2013年2月14日

(65)【公開番号】特開2018-150318(P2018-150318A)

(43)【公開日】2018年9月27日

【審査請求日】2018年4月25日

(31)【優先権主張番号】61/600,207

(32)【優先日】2012年2月17日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】61/719,173

(32)【優先日】2012年10月26日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】514206363

【氏名又は名称】アルクレスタ セラピューティクス， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】アレクシー エル． マーゴリン

(72)【発明者】

【氏名】ロバート ガロット

(72)【発明者】

【氏名】バミ シェノイ

【審査官】 飯濱 翔太郎

(56)【参考文献】

【文献】 特開平０１−２７３５７９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開昭６０−０２７３８０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開昭５４−１３２２９１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０１−２３１８４８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００４−２４８６７１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表平１１−５０２４５０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００８−５１６９６５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２００４／０５２１１５（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１２／０１９１８６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１１／０９２２９９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表平１１−５０２１２８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 J. Agric. Food Chem.，１９９８年，Vol.46，pp.3411-3414

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ９／００−９／７２

Ａ６１Ｋ ３１／００−３１／８０

Ａ６１Ｋ ３３／００−３３／４４

Ａ６１Ｋ ４７／００−４７／６９

Ａ６１Ｐ １／００−４３／００

Ａ６１Ｊ １／００−１９／０６

Ａ６１Ｍ ３／００−３９／２８

Ａ２３Ｃ ９／１５２

Ａ２３Ｌ ５／４０− ５／４９

Ａ２３Ｌ ３１／００−３３／２９

Ｃ１２Ｍ １／００− ３／１０

Ｃ１２Ｎ １１／００−１３／００

Ｃ１２Ｐ １／００−４１／００

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

栄養調合物を調製する方法であって、該方法は、
牛乳、乳児用調乳、または経小腸調合物のうちの少なくとも１つを供給源から経小腸装置へと受容するステップであって、該牛乳、乳児用調乳、または経小腸調合物が、多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）トリグリセリドおよび／またはＰＵＦＡエステルを含み、該装置が、
該牛乳、乳児用調乳、または経小腸調合物を受容するための容器と
該容器における少なくとも１つの開口部と、
該容器内に固定化されたリパーゼと
を含む、ステップと、
該牛乳、乳児用調乳、または経小腸調合物を該装置を通過させて、該牛乳、乳児用調乳、または経小腸調合物を該装置内の該固定化されたリパーゼに曝露して、該ＰＵＦＡトリグリセリドおよび／またはＰＵＦＡエステルを加水分解して、該栄養調合物を形成するステップと、
該装置から該栄養調合物を出力するステップと
を含み、
該牛乳、乳児用調乳、または経小腸調合物の該リパーゼへの曝露の間、該リパーゼの固定化により、該牛乳、乳児用調乳、または経小腸調合物へと放出されるリパーゼの量が、該リパーゼに曝露されるＰＵＦＡ １ミリグラムあたり０．１ミリグラム以下に制限される、方法。

【請求項2】

前記リパーゼが、前記栄養調合物が前記容器に存在する場合、前記リパーゼが前記容器内に留まるように固定化されている、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記リパーゼが、前記容器の内面に固定化されている、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記リパーゼが、前記容器内の構造に固定化されている、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

前記構造が、前記容器内のボールまたはビーズを含む、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

前記栄養調合物が、前記装置から栄養補給チューブに出力される、請求項１に記載の方法。

【請求項7】

前記装置を前記栄養補給チューブに接続するステップをさらに含む、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

前記栄養補給チューブが、経鼻胃チューブまたは経鼻空腸チューブである、請求項６に記載の方法。

【請求項9】

前記リパーゼが、吸着、イオン結合、共有結合、架橋、カプセル化、または閉じ込めのうちの１つ以上によって固定化される、請求項１に記載の方法。

【請求項10】

前記栄養調合物が対象による摂取のためのものである、請求項１に記載の方法。

【請求項11】

前記牛乳、乳児用調乳、または経小腸調合物のうちの少なくとも１つが、対象による摂取前６０分間以下で前記リパーゼに曝露される、請求項１に記載の方法。

【請求項12】

前記栄養調合物の摂取が、前記対象におけるビタミンＡおよび／またはビタミンＥの血漿レベルを増加させる、請求項１０に記載の方法。

【請求項13】

前記リパーゼが、クロモバクテリウム・ビスコサムリパーゼ、シュードモナス・フルオレセンスリパーゼ、およびリゾプス・オリゼーリパーゼからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。

【請求項14】

栄養調合物を調製する方法であって、該方法は、
牛乳、乳児用調乳、または経小腸調合物のうちの少なくとも１つを注射器へと吸引するステップと、
該牛乳、乳児用調乳、または経小腸調合物を固定化されたリパーゼに曝露することによって、多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）トリグリセリドおよび／またはＰＵＦＡエステルを該牛乳、乳児用調乳、または経小腸調合物のうちの少なくとも１つの中で加水分解して、該栄養調合物を形成するステップと、
該注射器から対象による摂取のための栄養補給チューブへと該栄養調合物を出力するステップと
を含み、
該牛乳、乳児用調乳、または経小腸調合物の該リパーゼへの曝露の間、該リパーゼの固定化により、該牛乳、乳児用調乳、または経小腸調合物へと放出されるリパーゼの量が、該リパーゼに曝露されるＰＵＦＡ １ミリグラムあたり０．１ミリグラム以下に制限される、方法。

【請求項15】

前記栄養補給チューブが、経鼻胃チューブまたは経鼻空腸チューブである、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

前記リパーゼが、前記注射器と流体連通する構造に固定化されている、請求項１４に記載の方法。

【請求項17】

前記リパーゼが、前記栄養調合物に進入するリパーゼの量を制限するために固定化されている、請求項１４に記載の方法。

【請求項18】

前記牛乳、乳児用調乳、または経小腸調合物のうちの少なくとも１つが、摂取前６０分間以下で前記リパーゼに曝露される、請求項１４に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本願は、２０１２年２月１７日出願の米国仮特許出願第６１／６００，２０７号及び２０１２年１０月２６日出願の米国仮特許出願第６１／７１９，１７３号の関連出願であり、米国特許法第１１９条により、これらの仮出願に基づく優先権を主張する。

【背景技術】

【0002】

長鎖脂肪酸は、ヒトの健康及び発達に重要である。食事で消費される長鎖脂肪酸は、主としてトリグリセリド（ＴＧ）の形であり、ここでは３つの長鎖脂肪酸がエステル結合を介してグリセロール分子に結合している。長鎖トリグリセリドの吸収は、まず初めにリパーゼ（例えば、膵臓リパーゼ）の酵素作用を必要とし、これは加水分解によってトリグリセリドを消化し、これらをモノグリセリドに、更に遊離脂肪酸に分解する。一旦利用可能な状態になると、これらモノグリセリド及び遊離脂肪酸は、小腸内の内皮細胞によって吸収され、ここでこれらは再エステル化を受け、その後肝臓に輸送され、様々な生理学的目的のために最終的に体内の組織に輸送される（Ｄ．Ｋａｓｐｅｒら著、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 第１６版（２００４年）参照）。中鎖トリグリセリドは、腸内管腔を介して吸収され得るが、長鎖トリグリセリドはこれが不可能であり、したがって、膵臓リパーゼは、適切な長鎖脂肪酸加水分解及び吸収のために必須である（Ｃ．Ｊｅｎｓｅｎら著、Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．４３：７４５−７５１（１９８６年）を参照）。しかしながら、例えば、膵臓の生産活動の欠陥、吸収不良又は膵機能不全に罹患している患者などの一部の人は、長鎖トリグリセリドを適切に分解することができず、結果として、健康を維持するために不適切である脂肪酸の吸収に悩まされる可能性がある。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0003】

【非特許文献1】Ｄ．Ｋａｓｐｅｒら著、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 第１６版（２００４年）

【非特許文献2】Ｃ．Ｊｅｎｓｅｎら著、Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．４３：７４５−７５１（１９８６年）

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

長鎖トリグリセリドの加水分解を改善するために、市販のリパーゼ栄養補助剤が食事に添加される場合がある。しかしながら、種々の理由から、リパーゼ栄養補助剤は、長鎖トリグリセリドを分解するための能力が低下しているか、あるいは別の理由で必須脂肪酸を受ける必要がある全ての人の低脂肪酸吸収の問題を必ずしも解決するわけではない。例えば、大部分の市販されているリパーゼ栄養補助剤は、動物の膵臓リパーゼから生成され、これは、ｐＨ７以下で著しく不安定であることが知られている。例えば、米国特許出願第２０１０／０２３９５５９号；Ｄ．Ｋａｓｐｅｒら著、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 第１６版（２００４年）を参照されたい。このようなリパーゼが胃を通過するまでに、相当量が不活性化されている可能性が高い。更に、所与の長鎖脂肪酸の加水分解に対して全てのリパーゼが同程度まで作用するわけではなく、このことは、リパーゼ特異性が重要な検討項目であることを示唆している（Ｒ．Ｊｅｎｓｅｎら著、Ｌｉｐｉｄｓ １８（３）：２３９−２５２（１９８３年）参照）。その上、早期産児又は集中治療室内の患者などの膵機能不全を有する一部の集団においては、栄養調合物は厳密に調節されている。このような制御下にある集団に、承認済み調合物を追加の成分で補充することは望ましくないか、又は実現可能ではない場合がある。更に、多くの脂肪酸が補充された調合物は、中鎖トリグリセリドを含有し得るが、長鎖脂肪酸を食事から摂取することに明らかな医学的利点がある。したがって、長鎖トリグリセリドの加水分解を増強する改善された方法が求められている。

【0005】

長鎖多価不飽和トリグリセリド（ＴＧ−ＬＣＰＵＦＡ）の適切な加水分解は、種々の理由で特に重要である。長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）は、神経及び網膜の発達に極めて重要である。更に、その一部は「必須脂肪酸」とされ、ヒトがこれらを合成できず、食事源から取得する必要がある。ｎ−３ ＬＣ−ＰＵＦＡのドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）及びエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）についての主要な食事源は、それらの前駆体の、必須脂肪酸であるα−リノレン酸（ＡＬＡ）である。しかしながら、内因性酵素は、ＡＬＡのＤＨＡ及びＥＰＡへの変換において非常に非効率的である。「Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｆａｔｔｙ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｌｉｐｉｄｓ」（ＩＳＳＦＡＬ）による公式発表によれば、ＡＬＡのＤＨＡへの変換は、乳児では約１％であり、成人ではかなり低い（Ｂｒｅｎｎａら著、Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ Ｌｅｕｋｏｔ Ｅｓｓｅｎｔ Ｆａｔｔｙ Ａｃｉｄｓ、８０（２−３）：８５−９１（２００９年）を参照）。したがって、ＤＨＡ及びＥＰＡはそれ自体、必須脂肪酸ではないが、ＤＨＡ及びＥＰＡの食事源は重要である。ｎ−６ ＬＣ−ＰＵＦＡのアラキドン酸（ＡＲＡ又はＡＡ）の主要な食事源は、必須脂肪酸であるリノール酸（ＬＡ）である。

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明の実施形態は、（ｉ）例えば、長鎖多価不飽和トリグリセリド及びエステルなどの特定の長鎖トリグリセリド及びエステルを加水分解することにおいて、他のよりも著しく効率の高いリパーゼを提供すること、（ｉｉ）例えば、ＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド、ＬＣ−ＰＵＦＡ脂肪酸エステル、及び／又はその他の長鎖トリグリセリド又は長鎖脂肪酸エステルの前加水分解成分（すなわち、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸）を含む医療用栄養調合物又は乳児用調乳などの栄養調合物を提供すること、（ｉｉｉ）ＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド、ＬＣ−ＰＵＦＡ脂肪酸エステル、及び／又はその他の長鎖トリグリセリド又は長鎖脂肪酸エステルを含有する調合物がリパーゼに一時的に曝される方法を含む、このような栄養調合物を生成する方法を提供すること、並びに（ｉｖ）モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸、例えば、ＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド及び／又はＬＣ−ＰＵＦＡ脂肪酸エステルを含む栄養調合物を提供するよう設計された装置を提供することにより、これらの種々の問題を解決する。調合物がリパーゼに一時的に曝され、リパーゼが摂取前に調合物から除去又は分離される実施形態において、本発明は、外因性リパーゼの摂取を必要とすることなく、ＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド、ＬＣ−ＰＵＦＡ脂肪酸エステル、及び／又はその他の長鎖トリグリセリド又は長鎖脂肪酸エステルの分解を確実にする利点を提供する。

【0007】

したがって、本発明の一部の実施形態は栄養調合物を提供する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、ＬＣ−ＰＵＦＡを含む。一部の実施形態において、総ＬＣ−ＰＵＦＡの２％超は、モノグリセリド及び遊離脂肪酸の形である、すなわち、総ＬＣ−ＰＵＦＡの９８％未満は、トリグリセリド又はエステルの形である。一部の実施形態において、ＬＣ−ＰＵＦＡモノグリセリド及び遊離脂肪酸は、栄養調合物中に２．５％超、３％超、４％超、５％超、６％超、７％超、８％超、１０％超、１２％超、１５％超、２０％超、２５％超、３０％超、４０％超、５０％超、又は７５％超の総ＬＣ−ＰＵＦＡを含む。特定の実施形態において、トリグリセリド及びエステルに対するＬＣ−ＰＵＦＡモノグリセリド及び遊離脂肪酸の比は、少なくとも０．０８：１、少なくとも０．０９：１、少なくとも０．１：１、少なくとも０．２５：１、少なくとも０．５：１、少なくとも１：１、少なくとも２：１、少なくとも３：１、少なくとも４：１、少なくとも５：１、少なくとも８：１、少なくとも１０：１、又は少なくとも２０：１である。

【0008】

特定の実施形態において、栄養調合物は、未熟児への投与用に調合される。本明細書により包含される他の栄養調合物は、ＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド、ＬＣ−ＰＵＦＡ脂肪酸エステル、及び／又はその他の長鎖トリグリセリド又は長鎖脂肪酸エステルを加水分解するための低下した能力を有する、若しくは追加の必須食事性ＬＣ−ＰＵＦＡ及び／又は他の長鎖脂肪酸を単に必要とする乳児、幼児、子供、又は成人用に調合される。一部の実施形態において、本発明の栄養調合物は、１歳未満である対象のためのものである。一部の実施形態において、この対象は、１歳〜４歳である。一部の実施形態において、この対象は、１歳〜６歳である。

【0009】

特定の実施形態において、本発明の栄養調合物は、医療用栄養調合物、すなわち、処方箋のもとに病院又は薬局を通じて分配されるものなど、医療管理下で経口的又は経腸的に消費又は投与されるよう調合される。典型的には、医療用栄養調合物は、特殊な栄養要求が存在する特定の医学的障害、疾患、又は異常状態の食事管理用に調合される。医療用栄養調合物は、「Ｇｅｎｅｒａｌｌｙ Ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ Ａｓ Ｓａｆｅ（一般に安全と認められる）」ステータスを有し、ラベリング、製品要求事項、及び製造に関するＦＤＡ規定に準拠する必要がある。

【0010】

一部の実施形態において、栄養調合物は、追加のリパーゼを含有しない。他の実施形態において、栄養調合物はリパーゼを含有する。一部の実施形態において、このリパーゼは、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、ブルコルデリア・セパシア（Ｂｕｒｃｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）、及びリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）のリパーゼから選択される。

【0011】

一部の実施形態において、この栄養調合物は、ＥＰＡ、ＤＨＡ、ＡＲＡ、ＬＡ、及び／又はＡＬＡを含む。

【0012】

遊離多価不飽和脂肪酸は不安定かつ急速に分解するために、本発明は、対象による摂取の直前に、本発明の栄養調合物を調製するための利便性が高く効果的な方法も提供する。特定の実施形態において、この方法は、追加の食事性ＬＣ−ＰＵＦＡ及び／又はその他の長鎖脂肪酸を必要としている個人による摂取前に、ＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド、ＬＣ−ＰＵＦＡ脂肪酸エステル、並びに／若しくはその他の長鎖トリグリセリド及び／又は長鎖脂肪酸のエステルを含む液体栄養組成物をリパーゼに曝す工程を含む。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、摂取前に、少なくとも１分間、少なくとも２分間、少なくとも３分間、少なくとも５分間、少なくとも８分間、少なくとも１０分間、少なくとも１５分間、少なくとも３０分間、少なくとも４５分間、又は少なくとも６０分間リパーゼに曝される。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、１分間以下、２分間以下、３分間以下、５分間以下、８分間以下、１０分間以下、１５分間以下、３０分間以下、４５分間以下、６０分間以下でリパーゼに曝される。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、２４時間以下でリパーゼに曝される。特定の実施形態において、リパーゼは、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、ブルコルデリア・セパシア（Ｂｕｒｃｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）、及びリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）のリパーゼから選択される。特定の実施形態において、このリパーゼは、摂取前に栄養調合物から除去され得る。他の実施形態において、ＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド、ＬＣ−ＰＵＦＡ脂肪酸エステル、並びに／若しくはその他の長鎖トリグリセリド及び／又はエステルを含む液体栄養組成物は、摂取前に固体支持体に固定化されたリパーゼに曝される。一部の実施形態において、このリパーゼは、共有結合、イオン結合、又は架橋結合により固体支持体に固定化される。特定の実施形態において、固定化リパーゼは、透過性膜内に封入されるか、又は透過性膜に付着される。

【0013】

本発明の別の態様は、腸管内で長鎖トリグリセリド又は長鎖脂肪酸エステルを分解するための能力が低下している人、膵機能不全に罹患している人、栄養失調に罹患している人、及び完全静脈栄養を受容した人などの食事性ＬＣ−ＰＵＦＡ及び／又はその他の長鎖脂肪酸を必要とする対象に、本発明の調合物を投与することにより栄養を提供する方法である。一部の実施形態において、この対象は、未熟児である。他の実施形態において、この対象は、満期産児又は幼児である。特定の実施形態において、この対象は５０歳を超える、６０歳を超える、又は７０歳を超える。一部の実施形態において、この対象は、膵機能不全に罹患している。他の実施形態において、この調合物は、栄養補給チューブを通して投与される。一部の実施形態において、本発明の栄養調合物は、あらゆる年齢の人において認知能力を改善するため、早期産児における慢性肺疾患を予防するために、早期産児の神経学的発達を増強させるため、若しくは、例えばＥＰＡ、ＤＨＡ、ＡＲＡ、ＬＡ、及びＡＬＡなどの長鎖脂肪酸の摂取の増加による改善に関連するその他多くの状態を治療又は予防するために投与される。このような状態としては、アルツハイマー病、双極性障害、抑鬱症、敗血症、急性呼吸ストレス、創傷治癒、癌、心血管疾患、卒中、パーキンソン病、精神分裂症、糖尿病、多発性硬化症、栄養失調症、ＧＩ機能障害、並びにリウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス、及び炎症性大腸疾患などの慢性炎症性疾患が挙げられるが、これらに限定されない。

【0014】

本発明の別の実施形態は、本発明の栄養調合物を投与することによる、患者が完全静脈栄養を必要する時間を低減するための方法を提供する。この結果、このような患者において、長期にわたる（２４時間を超える）完全静脈栄養に関連する腸管萎縮及び他の合併症のリスクが低減する。このような方法は、例えば、吸収障害、短腸症候群、ＩＢＤ、膵機能不全、手術、化学療法又は放射線療法の前後の栄養失調症、若しくは栄養失調のその他の原因、癌、創傷、並びに圧迫潰瘍などのＧＩ機能障害に罹患している患者の回復時間を短縮するために使用することが可能である。このような患者は、本発明の栄養調合物を、経鼻胃チューブを介して受容することができる。この供給方法は、患者が腸運動性の変化、全身性炎症反応症候群による膵臓酵素分泌の不全、又はＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド、ＬＣ−ＰＵＦＡ脂肪酸エステル、及び／又はその他の長鎖トリグリセリド又は長鎖脂肪酸のエステルの切断又は吸収の不全を引き起こすその他の状態に陥る状況において有利であり得る。胃を迂回することが有利である代替実施形態において、本発明の栄養調合物は、経鼻空腸チューブを介して投与され得る。供給装置の他のタイプもまた本発明の調合物を送達させるために使用されてもよい。

【0015】

また、健常な対象も、例えば心血管疾患のリスクを低減することによって、ＬＣ−ＰＵＦＡの吸収の増大から恩恵を受けることができる。したがって、一部の実施形態において、本発明は、健常な対象において脂肪吸収を改善する方法を提供し、当該方法は、対象に本発明の栄養調合物を供給する工程を含む。

【0016】

本発明は、本発明の栄養調合物を調製するための装置を更に提供する。一部の実施形態において、この装置は、少なくとも１種のリパーゼを収容するチャンバを備え、このチャンバは、液体栄養組成物をリパーゼに曝すように、液体栄養調合物を保持することができる。一部の実施形態において、容器内のリパーゼは、容器の内面に固定化されている。他の実施形態において、リパーゼは、チャンバ内の支持体に固定化されている。一部の実施形態において、この装置は、透過性膜からなり、チャンバ内の固定化リパーゼを包含するチャンバを備えることで、液体栄養組成物は透過性膜を通過して、リパーゼに接触するが、リパーゼは透過性膜を通過することができない。一部の実施形態において、本発明の装置のチャンバ内に収容されたリパーゼは、微生物リパーゼである。いくつかの実勢形態において、このリパーゼは細菌リパーゼから選択される。一部の実施形態において、このリパーゼは、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）リパーゼ、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）リパーゼ、ブルコルデリア・セパシア（Ｂｕｒｃｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）リパーゼ、及びリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）のリパーゼから選択される。一部の実施形態において、このリパーゼは、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）リパーゼ、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）リパーゼ、及びリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）のリパーゼから選択される。一部の実施形態において、このリパーゼは、リゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）リパーゼである。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）を含む栄養調合物であって、前記ＬＣ−ＰＵＦＡの５％超が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である、栄養調合物。
（項目２）
前記ＬＣ−ＰＵＦＡが、ＤＨＡ、ＡＲＡ、及びＥＰＡからなる群から選択される１種以上のＬＣ−ＰＵＦＡを含む、項目１に記載の栄養調合物。
（項目３）
前記ＬＣ−ＰＵＦＡが、ＤＨＡを含む、項目２に記載の栄養調合物。
（項目４）
前記ＬＣ−ＰＵＦＡが、ＥＰＡを含む、項目２に記載の栄養調合物。
（項目５）
前記ＬＣ−ＰＵＦＡが、ＡＲＡを含む、項目２に記載の栄養調合物。
（項目６）
前記ＬＣ−ＰＵＦＡが、ＤＨＡ及びＥＰＡを含む、項目２に記載の栄養調合物。
（項目７）
前記ＬＣ−ＰＵＦＡが、ＤＨＡ、及びＡＲＡを含む、項目２に記載の栄養調合物。
（項目８）
前記ＬＣ−ＰＵＦＡが、ＤＨＡ、ＥＰＡ、及びＡＲＡを含む、項目２に記載の栄養調合物。
（項目９）
前記栄養調合物が、乳児用調乳である、項目１〜８のいずれか一項に記載の栄養調合物。
（項目１０）
クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）リパーゼ、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）リパーゼ、及びリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）リパーゼから選択されるリパーゼを更に含む、項目１〜９のいずれか一項に記載の栄養調合物。
（項目１１）
ＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．１ミリグラム以下のリパーゼを含む、項目１０に記載の栄養調合物。
（項目１２）
前記栄養調合物が、追加のリパーゼを含まない、項目１〜９のいずれか一項に記載の栄養調合物。
（項目１３）
クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）リパーゼ、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）リパーゼ、及びリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）リパーゼから選択されるリパーゼを含む栄養調合物。
（項目１４）
更にＤＨＡを含み、前記ＤＨＡの５％超が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である、項目１３に記載の栄養調合物。
（項目１５）
更にＡＲＡを含み、前記ＡＲＡの５％超が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である、項目１３又は１４に記載の栄養調合物。
（項目１６）
更にＥＰＡを含み、前記ＥＰＡの５％超が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である、項目１３〜１５のいずれか一項に記載の栄養調合物。
（項目１７）
ＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．１ミリグラム以下のリパーゼを含む、項目１３〜１６のいずれか一項に記載の栄養調合物。
（項目１８）
対象による摂取の前に、栄養調合物を調製する方法であって、ＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド及び／又はＬＣ−ＰＵＦＡエステルを含む液体栄養組成物をリパーゼに曝す工程を含む方法。
（項目１９）
前記リパーゼが、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）リパーゼ、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）リパーゼ、及びリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）リパーゼからなる群から選択される、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記液体栄養組成物が、摂取前に少なくとも１分間リパーゼに曝される、項目１８又は項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記液体栄養組成物が、摂取前に６０分以下リパーゼに曝される、項目１８〜２０のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
飲用液体を、ＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド及び／又はＬＣ−ＰＵＦＡエステル並びにリパーゼを含む固体又は粉末組成物に添加することにより液体組成物を調製し、これによって、ＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド及び／又はＬＣ−ＰＵＦＡエステルを含む液体組成物をリパーゼに曝す工程を含む、項目１８〜２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
（ａ）飲用液体をＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド及び／又はＬＣ−ＰＵＦＡエステルを含む固体又は粉末組成物に添加することにより液体組成物を調製する工程と、
（ｂ）リパーゼを前記液体組成物に曝し、これによって、前記ＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド及び／又はＬＣ−ＰＵＦＡエステルを前記リパーゼに曝す工程と、を含む項目１８〜２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
前記ＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド及び／又はＬＣ−ＰＵＦＡエステルを前記リパーゼに曝す工程の後に、前記リパーゼを前記液体組成物から除去する工程を更に含む、項目１８〜２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記リパーゼが、
（ａ）前記液体組成物中の前記リパーゼを前記リパーゼに結合する分子に曝す工程であり、前記分子が固体支持体に固定化されていることによって、前記リパーゼを前記固体支持体に結合させる工程と、
（ｂ）前記液体組成物を前記固体支持体から分離する工程と、を含むプロセスにより除去される、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記液体組成物中の前記ＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド及び／又はＬＣ−ＰＵＦＡエステルが、固体支持体に固定化されているリパーゼに曝され、前記液体組成物を前記固体支持体から分離することにより、前記リパーゼが除去される、項目２４に記載の方法。
（項目２７）
前記液体組成物中の前記ＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド及び／又はＬＣ−ＰＵＦＡエステルが、前記リパーゼに曝され、次いで、前記液体組成物にチャンバを通過させることで前記リパーゼから分離され、前記リパーゼが前記チャンバの内面の少なくとも一部に固定されている、項目２４に記載の方法。
（項目２８）
前記液体組成物中の前記ＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド及び／又はＬＣ−ＰＵＦＡエステルが、前記リパーゼに曝され、次いで前記液体組成物にチャンバを通過させる前記工程を含むプロセスによって前記リパーゼから分離され、前記リパーゼが前記チャンバ内に収容されている固体基材に固定されている、項目２４に記載の方法。
（項目２９）
前記チャンバがカラムである、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
ＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド及び／又はＬＣ−ＰＵＦＡエステルを含む前記液体組成物が、前記リパーゼに曝され、次いでＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド及び／又はＬＣ−ＰＵＦＡエステルを含む前記液体組成物を固体支持体に固定化されたリパーゼを含有する容器に曝す前記工程を含むプロセスによって、前記リパーゼから分離され、前記容器の前記内面の少なくとも一部が、ＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド及びＬＣ−ＰＵＦＡエステルに対しては透過性であるが、前記固体支持体に対し不透過性である、項目２６に記載の方法。
（項目３１）
前記調製された栄養調合物中の前記ＬＣ−ＰＵＦＡの５％超が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である、項目１８〜３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
前記ＬＣ−ＰＵＦＡが、ＤＨＡ、ＡＲＡ、及びＥＰＡからなる群から選択される１つ以上を含む、項目１８〜３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
前記液体栄養組成物が、摂取前に、６０分以下でリパーゼに曝される、項目１８〜２０及び項目２２〜３２のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
前記液体栄養組成物が、前記液体栄養組成物中のＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．１ミリグラム以下のリパーゼに曝される、項目１８〜３３のいずれか一項に記載の方法。
（項目３５）
前記液体栄養組成物が、摂取前に、３０分以下でリパーゼに曝される、項目１８〜３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
項目１８〜３５のいずれか一項に記載の方法により調製される栄養調合物。
（項目３７）
対象に栄養を提供する方法であって、前記対象に、項目１〜１７及び項目３６のいずれか一項に記載の前記栄養調合物を供給する工程を含む方法。
（項目３８）
前記栄養調合物が、乳児用調乳である、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
対象において脂肪吸収を改善する方法であって、項目１〜１７及び項目３６のいずれか一項に記載の前記栄養調合物を前記対象に供給する工程を含む方法。
（項目４０）
前記方法が、少なくとも５０％まで、前記対象の大便中の総脂肪レベルを低減する、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
前記方法が、前記対象の大便中の、ＤＨＡ、ＡＲＡ、及びＥＰＡからなる群から選択される少なくとも１つのＬＣ−ＰＵＦＡの前記レベルを少なくとも５０％まで低減する、項目３９又は項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記方法が、前記対象の血漿中のＤＨＡ、ＡＲＡ、又はこれら双方の前記レベルを増加させる、項目３９〜４１のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
前記方法が、前記対象の網膜中のＤＨＡ、ＡＲＡ、又はこれら双方の前記レベルを増加させる、項目３９〜４２のいずれか一項に記載の方法。
（項目４４）
前記方法が、前記対象の心臓中のＤＨＡ、ＡＲＡ、又はこれら双方の前記レベルを増加させる、項目３９〜４３のいずれか一項に記載の方法。
（項目４５）
前記対象が、膵機能不全、膵臓の生産活動の欠陥、ＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド又はＬＣ−ＰＵＦＡエステルを加水分解するための能力の低下、又はＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド又はＬＣ−ＰＵＦＡエステルを吸収する能力が低下している、項目３９〜４４のいずれか一項に記載の方法。
（項目４６）
前記栄養調合物が、栄養補給チューブを介して前記対象に供給される、項目３９〜４５のいずれか一項に記載の方法。
（項目４７）
前記対象が、早期産児である、項目３９〜４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目４８）
前記対象が、少なくとも５０歳である、項目３９〜４６のいずれか一項に記載の方法。（項目４９）
前記対象が、６歳以下である、項目３９〜４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目５０）
５０歳を超える対象において認知能力を改善するための方法であって、項目１〜１７及び項目３６のいずれか一項に記載の前記栄養調合物を前記対象に供給する工程を含む方法。
（項目５１）
乳児における慢性肺疾患を予防するための方法であって、項目１〜１７及び項目３６のいずれか一項に記載の前記栄養調合物を前記乳児に供給する工程を含む方法。
（項目５２）
少なくとも第１及び第２の区画を含む容器であって、前記第１の区画が栄養調合物を収容し、前記第２の区画がリパーゼを収容する、容器。
（項目５３）
前記リパーゼが、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）リパーゼ、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）リパーゼ、及びリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）リパーゼからなる群から選択される、項目５２に記載の容器。
（項目５４）
前記栄養調合物が、粉末形態である、項目５２又は項目５３に記載の容器。
（項目５５）
前記栄養調合物が、液体形態である、項目５２又は項目５３に記載の容器。
（項目５６）
前記第２の区画が、前記第１の区画内に収容される前記栄養調合物中のＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．１ミリグラム以下のリパーゼを収容する、項目５２〜５５のいずれか一項に記載の容器。
（項目５７）
調乳を調製するための装置であって、
液体を収容するための本体壁と、
前記容器内に収容された少なくとも１種のリパーゼと、を含む装置。
（項目５８）
前記少なくとも１種のリパーゼが、前記容器内に固定化されている、項目５７に記載の装置。
（項目５９）
前記少なくとも１種のリパーゼが、前記容器の内部と流体連通する構造に付着されている、項目５８に記載の装置。
（項目６０）
前記少なくとも１種のリパーゼが、構造内の共有結合、イオン結合、又は架橋結合の少なくとも１つにより前記構造に付着される、項目５９に記載の装置。
（項目６１）
前記構造が、前記容器の内面を含む、項目５９又は項目６０に記載の装置。
（項目６２）
前記構造が、前記容器のキャップを含む、項目５９又は項目６０に記載の装置。
（項目６３）
前記構造が、前記容器内の表面突起部を含む、項目５９又は項目６０に記載の装置。
（項目６４）
前記構造が、前記容器内の粒子を含む、項目５９又は項目６０に記載の装置。
（項目６５）
前記粒子が、ボール又はビーズを含む、項目６４に記載の装置。
（項目６６）
前記少なくとも１種のリパーゼが、脂肪酸に対しては透過性であるが前記リパーゼに対し不透過性である材料内に封入されている、項目６１〜６５のいずれか一項に記載の装置。
（項目６７）
前記容器が、前記容器内の少なくとも１つの開口部を更に含む、項目５７〜６６のいずれか一項に記載の装置。
（項目６８）
前記開口部が、栄養補給チューブに接続するよう構成されている、項目６７に記載の装置。
（項目６９）
弁を更に含む、項目６７又は項目６８に記載の装置。
（項目７０）
瓶の閉鎖部材用のキャップを含む調乳を調製するための装置であって、前記キャップが、前記瓶の内部との流体接触のために配置された表面上又は表面内に固定化された少なくとも１種のリパーゼを含む、装置。
（項目７１）
前記少なくとも１種のリパーゼが、共有結合、イオン結合、又は前記構造内の封入の少なくとも１つにより、前記表面上又は前記表面内に固定化されている、項目７０に記載の装置。
（項目７２）
前記表面が、前記キャップの内面を含む、項目７０又は項目７１に記載の装置。
（項目７３）
前記表面が、容器内に延伸するよう構成された突起部を含む、項目７０〜７２のいずれか一項に記載の装置。
（項目７４）
前記少なくとも１種のリパーゼが、脂肪酸に対しては透過性であるが、前記リパーゼに対し不透過性である材料内に封入されている、項目７０〜７３のいずれか一項に記載の装置。
（項目７５）
栄養調合物中のトリグリセリド及び／又は脂肪酸エステルを加水分解するための装置であって、固体支持体に付着されたリパーゼを含む装置。
（項目７６）
前記リパーゼが、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）リパーゼ、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）リパーゼ、及びリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）リパーゼからなる群から選択される、項目５７〜７５のいずれか一項に記載の装置。
（項目７７）
容器を含み、前記リパーゼが、前記容器の内側表面の少なくとも一部に固定化されている、項目７５に記載の装置。
（項目７８）
容器を含み、前記リパーゼが、前記容器内に収容された固体基材に固定化されている、項目７５に記載の装置。
（項目７９）
前記リパーゼが、共有結合又は架橋結合により固定化されている、項目７７又は項目７８に記載の装置。
（項目８０）
前記容器に取り付けられた栄養補給チューブを更に含む、項目７５〜７９のいずれか一項に記載の装置。
（項目８１）
患者が完全静脈栄養を必要とする時間の長さを短縮するための方法であり、項目１〜１７及び項目３６のいずれか一項に記載の前記栄養調合物を経腸的に投与する工程を含む、方法。
（項目８２）
前記方法が、前記対象の赤血球中のＤＨＡ、ＡＲＡ、又はこれら双方のレベルを増加させる、項目３９〜４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目８３）
前記方法が、トリグリセリド、コレステロール、ＨＤＬ、及びＬＤＬからなる群から選択される１つ以上の血漿成分の前記レベルを増加させる、項目３９〜５１のいずれか一項に記載の方法。
（項目８４）
前記方法が、前記肝臓中の脂肪の前記蓄積を有意に増加させない、項目３９〜５１のいずれか一項に記載の方法。
（項目８５）
前記調合物が、成人用栄養調合物である、項目１〜８又は項目１０〜１７のいずれか一項に記載の栄養調合物。
（項目８６）
前記対象が、１歳未満である、項目４９に記載の方法。
（項目８７）
前記対象が、１歳〜６歳である、項目４９に記載の方法。
（項目８８）
前記方法が、前記血漿中のビタミンＡ、ビタミンＥ、又はこれら双方の前記レベルを増加させる、項目３９〜４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目８９）
ビタミンＡ及びビタミンＥからなる群から選択される少なくとも１つのビタミンの前記血漿レベルを増加させるための方法であって、項目１〜１７及び項目３６のいずれか一項に記載の前記栄養調合物を前記対象に供給する工程を含む、方法。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1】特定の実施形態に係る、乳児に栄養を提供するための装置及び方法を示す。

【図2A】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図2B】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図2C】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図3A】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図3B】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図3C】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図4A】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図4B】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図5A】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図5B】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図6A】ポリマービーズ上に固定化されたリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）リパーゼのバイアルの写真である。

【図6B】特定の実施形態に係る、栄養調合物を処理し、投与するための装置を示す。

【図6C】特定の実施形態に係る、栄養調合物を処理し、投与するための装置を示す。

【図6D】図６Ｃで図示された装置の大写しを示す。

【図7】リゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）（ＲＯ）リパーゼによるＤＨＡトリグリセリドの加水分解を示す。

【図8】リゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）リパーゼによるＡＲＡトリグリセリドの加水分解を示す。

【図9A】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図9B】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図9C】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図10A】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図10B】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図10C】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図11A】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図11B】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図11C】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図12】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図13A】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図13B】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図14】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図15】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図16】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図17A】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図17B】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置の部分的断面図を示す。

【図18】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置を示す。

【図19】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置の部分的断面図を示す。

【図20】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置の部分的断面図を示す。

【図21】特定の実施形態に係る、調合物を処理するための装置の部分的断面図を示す。

【図22】（図２２A）処置週（「Ｔｒｅａｔ ｗｅｅｋ」、その間、ブタに、非加水分解された（「ＣＯＮＴ」）、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）リパーゼ（「ＣＶ」）で前加水分解された、又はリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）リパーゼ（「ＲＯ」）で前加水分解されたいずれかの同一の強化調乳を供給された）と対比した、対照週（「Ｃｏｎｔ ｗｅｅｋ」、その間、ブタにＴＧ−ＬＣＰＵＦＡ強化乳児用調乳が供給された）の間のＥＰＩブタにおける大便の重量を示す。（図２２Ｂ）ブタの同一の３群における処置週の最後の３日にわたる総糞便脂肪含量を示す。（図２２Ｃ）脂肪吸収係数（％ＣＦＡ）を示す。

【図23】非加水分解調乳（「ＣＯＮＴ」）、ＣＶリパーゼで前加水分解された調乳（「ＣＶ」）、又はＲＯリパーゼで前加水分解された調乳を供給されたＥＰＩブタの糞便中のＡＲＡ（Ａ）、ＥＰＡ（Ｂ）、及びＤＨＡ（Ｃ）のレベルを示す。星印は、ｐ＜０．００１を示す。

【図24】非加水分解調乳（「ＣＯＮＴ」）、ＣＶリパーゼで前加水分解された調乳（「ＣＶ」）、又はＲＯリパーゼで前加水分解された調乳の供給の７日後のＥＰＩブタの血漿中のＡＲＡ（Ａ）、及びＤＨＡ（Ｂ）のレベルを示す。星印は、ｐ＜０．０５を示す。

【図25】非加水分解調乳（「ＣＯＮＴ」）、ＣＶリパーゼで前加水分解された調乳（「ＣＶ」）、又はＲＯリパーゼで前加水分解された調乳（「ＲＯ」）の供給の７日後のＥＰＩブタの網膜（Ａ）及び脂肪組織（Ｂ）中のＡＲＡ及びＤＨＡのレベルを示す。星印は、ｐ＜０．０５を示す。

【図26】非加水分解調乳（「ＣＯＮＴ」）、ＣＶリパーゼで前加水分解された調乳（「ＣＶ」）、又はＲＯリパーゼで前加水分解された調乳（「ＲＯ」）の供給の７日後のＥＰＩブタの心臓（Ａ）及び腎臓組織（Ｂ）中のＡＲＡ及びＤＨＡのレベルを示す。星印は、ｐ＜０．０５を示す。

【図27】１００ｍｇ（Ａ）、５００ｍｇ（Ｂ）、１０００ｍｇ（Ｃ）、又は２０００ｍｇ（Ｄ）の固定化ＲＯリパーゼを有するＥｎｆａｌａｃ調乳中のＤＨＡ及びＡＲＡのパーセント加水分解を示す。

【図28】ＲＯリパーゼ又はパンクレアチンによるＤＨＡ（Ａ）及びＡＲＡ（Ｂ）のパーセント加水分解を示す。

【図29】実施例１０に記載されている６週間のブタ試験についての試験計画を示す。

【図30】ＴＧ−ＬＣＰＵＦＡ強化乳児用調乳を供給した健常なブタ（「Ｈｅａｌｔｈｙ」）、ＴＧ−ＬＣＰＵＦＡ強化乳児用調乳を供給した外科的に誘発された膵外分泌機能不全を有するブタ（「ＥＰＩ」）、及び固定化ＲＯリパーゼにより前加水分解されたＴＧ−ＬＣＰＵＦＡ強化乳児用調乳を供給した外科的に誘発された膵外分泌機能不全を有するブタ（「ＥＰＩ＋ｉＲＯ」）から採集した赤血球中のＡＲＡ及びＤＨＡのレベルを示す。

【発明を実施するための形態】

【0018】

長鎖多価不飽和脂肪酸
長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）は、二重結合を２つ以上有する炭化水素鎖である。メチル末端に対する第１の二重結合の位置に応じて、ＬＣ−ＰＵＦＡは、オメガ−３（ｎ−３）又はオメガ−６（ｎ−６）脂肪酸として分類することが可能である。ＡＬＡ及びＬＡは、それぞれｎ−３及びｎ−６ＰＵＦＡファミリーの親脂肪酸である。これらは「必須脂肪酸」とされ、ヒトがこれらを合成することができないが、むしろ食事によって取得する必要がある。この理由は、哺乳動物が、脂肪酸中に炭素９及び１０を超えて二重結合を導入することができないためである（Ｂｌｏｓｏｖｅｒら著、Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｓｈｏｒｔ Ｃｏｕｒｓｅ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．３９（２０１１年）参照）。しかしながら、ヒトは、ＡＬＡ及びＬＡで開始する追加の長鎖ＰＵＦＡを生成することは可能である。

【0019】

ＡＬＡ及びＬＡの双方は、一連の脱飽和及び伸長工程によって代謝されその他の長鎖ＰＵＦＡを生成する。例えば、ＡＬＡはＥＰＡに代謝され、最終的にＤＨＡになる。ＬＡは、ｎ６−脂肪酸であるＡＲＡに代謝される。しかしながら、ＡＬＡのＤＨＡ及びＥＰＡの変換及びＬＡのＡＲＡの変換は、それほど効率的ではない（Ｌ．Ａｒｔｅｒｂｕｒｎら著、Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．８３（追補）：１４６７Ｓ−１４７６Ｓ（２００６年）参照）。研究により、ヒトにおけるＤＨＡへのＡＬＡの変換が５％未満であると推定された（Ｂ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ及びＤ．Ｍａ著、Ｌｉｐｉｄｓ Ｈｅａｌｔｈ Ｄｉｓ．８：３３（２００９年）参照）。肝臓は、ＡＬＡをＤＨＡに変換しかつＬＡをＡＲＡに変換するために最も活性な組織を含有し、したがって、肝臓は脳などの低い活性の組織又は器官にＤＨＡ及びＡＲＡを提供する上で重要な役割を果たす（Ｍ．Ｍａｒｔｉｎｅｚら著、Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．１２０：Ｓ１２９−Ｓ１３８（１９９２年）参照）。あるいは、これらＬＣ−ＰＵＦＡは、食事から直接的に消費され得る。ＤＨＡ及びＥＰＡは、魚、クルミ、及びアマニ油で見出され、一方ＡＲＡは、動物性脂肪源、コーン油、ダイズ油及びヒマワリ種子油から取得可能である。

【0020】

ｎ−３脂肪酸
ｎ−３脂肪酸ＤＨＡは、神経及び網膜の発達並びに機能に重要である。これは神経膜中の主要な長鎖ＰＵＦＡであり、脳機能、脳回路の構築、及び神経インパルスの伝達に必須である。結合膜成分として、ＤＨＡは、シナプス構造、神経伝達、及びシナプス可塑性を維持するために重要である膜流動性に寄与する（Ｇ．Ｊｉｃｈａら著、Ｃｌｉｎ．Ｉｎｔｅｒｖ．Ａｇｉｎｇ５：４５−６１（２０１０年）参照）。また、ＤＨＡは、ニューロン分化及び生存に必須であるシグナリング事象に影響を与え、神経伝達物質及びエイコサノイドのレベル及び代謝に及ぼす作用を有する。脳内のＤＨＡ蓄積の大部分は、生後二年間の第三期の始めに生じる。齧歯類及び霊長類において、この期間中のｎ−３ ＰＵＦＡの不適切な供給が、学習能力及び神経伝達の不全を引き起こすことが示されている（Ｍ．Ｍａｒｔｉｎｅｚら著、Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．１２０：Ｓ１２９−Ｓ１３８（１９９２年）参照）。事前にＤＨＡ欠乏食餌に制限されたラットにおけるＤＨＡの補充は、記憶及び学習課題における遂行能力をレスキューする（Ｗ．Ｃｈｕｎｇら著、Ｊ．Ｎｕｔｒ．１３８（６）：１１６５−１１７１（２００８年）参照）。健常な思春期の少年の試験において、ＤＨＡの８週間の補充が、プラセボと比較して活性化課題の遂行時に背側方前頭前皮質中の機能活性化を著しく増大させた（Ｒ．ＭｃＮａｍａｒａら著、Ａｍ．Ｊ．Ｎｕｔｒ．９１：１０６０−７（２０１０年）参照）。したがって、ＤＨＡは、発達のみならず、ニューロン機能の維持においても重要であると考えられる。

【0021】

また、ＤＨＡは、網膜中で高度に濃縮され、光受容体分化及び視覚色素ロドプシンの活性化に及ぼす重要な作用を有する（Ｈ．Ｌａｕｒｉｔｚｅｎら著、Ｐｒｏｇ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．４０：１−９４（２００１年）；Ｍ．Ｃｌａｎｄｉｎｉｎら著、Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．１２５：Ｓ２５−３２（１９９４年）参照）。霊長類及び齧歯類の発達の初期段階におけるＤＨＡの不十分な供給は、異常な網膜生理及び視力を低下させる（Ｍ．Ｒｅｉｓｂｉｃｋら著、Ｄｅｖ．Ｐｓｙｃｈｏｌ．３３：３８７−３９５（１９９７年）；Ｊ．ＭｃＣａｎｎら著、Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．８２：２８１−２９５（２００５年）参照）。同様に、ヒトにおいて、ＤＨＡを含まない調乳を生後１２ヶ月間供給された乳児は、ＤＨＡ補充調乳を供給された乳児よりも視力が低下することが示されている（Ｅ．Ｂｉｒｃｈら著、Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．９１（４）：８４８−８５９（２０１０年）参照）。ＤＨＡ欠乏はまた、胎児アルコール症候群、注意欠陥多動障害、嚢胞性線維症、フェニルケトン尿症、単極性うつ病、攻撃的敵対、及び副腎白質委縮症にも関連している（Ａ．Ｈｏｒｒｏｃｋｓら著、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓ．４０（３）：２１１−２２５（１９９９年）参照）。

【0022】

ＤＨＡ及びその他のｎ−３脂肪酸の摂取の増大の有益性は、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）、双極性障害（ＢＰ）、大うつ病性障害（ＭＤＤ）及び産後うつ病を含むうつ病、敗血症、急性呼吸ストレス、創傷治癒、癌、心血管疾患、卒中、パーキンソン病、精神分裂症、糖尿病、多発性硬化症、並びにリウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス、及び炎症性大腸疾患などの慢性炎症性疾患を含む様々な疾患について記述されている。

【0023】

例えば、ＡＤ患者に対する臨床試験により、ＤＨＡが治療効果を与えることが示されている。ＡＤにおけるＤＨＡの効果を評価する試験の検討については、Ｇ．Ｊｉｃｈａ及びＷ．Ｍａｒｋｅｓｂｅｒｙ著、Ｃｌｉｎ．Ｉｎｔｅｒｖ．Ａｇｉｎｇ ５：４５−６１（２０１０年）を参照されたい。ＡＤのインビトロアッセイ、細胞培養系、及びネズミモデルからのデータは、脳内のアミロイド処理におけるｎ−３ ＰＵＦＡの直接的役割を支持している。その上、アミロイドを産生するＡＤの遺伝子導入モデルにおいて、ＤＨＡの補充は、αβのレベルを低下させる（Ｍ．Ｏｋｓｍａｎら著、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｄｉｓ．２３（３）：５６３−５７２（２００６年）参照）。ＡＤを有する患者における有効な臨床試験データに加えて、軽度の記憶愁訴を有する健常な高齢者における大規模試験により、ＤＨＡを投与された被験者が、プラセボ服用被験者と比べて、６ヶ月後に学習及び記憶試験で優れていることが示された。（Ｍａｒｔｅｋ Ｐｒｅｓｓ Ｒｅｌｅａｓｅ、２０１０年５月４日）。したがって、ＤＨＡは、ＡＤを予防する上で有益な役割も果たすことができる。

【0024】

ＤＨＡの治療的用途も、ＢＰ及びＭＤＤを有する患者において検討されてきた。ＢＰにおけるＤＨＡの作用の検討については、Ｖ．Ｂａｌｅｎｃｉａ−Ｍａｒｔｉｎｅｚら著、Ｅｘｐｅｒｔ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｔｈｅｒ．１１（７）：１０２９−１０４７（２０１１年）を参照されたい。ヒト患者から得た脳組織中のＤＨＡレベルを評価することの難しさのために、血液試料から得た赤血球膜中の脂肪酸組成が評価され、健常な対照よりもＢＰ及びＭＤＤを有する患者で、はるかに少ないＤＨＡを含有することが見出された（Ｒ．ＭｃＮａｍａｒａら著、Ｊ．Ａｆｆｅｃｔ．Ｄｉｓｏｒｄ．１２６（１−２）：３０３−３１１（２０１０年）参照）。剖検試験において、眼窩前頭皮質の脂肪酸組成物は、正常な対照に比べ、ＢＰ患者ではＤＨＡのレベルがはるかに低かった（Ｒ．ＭｃＮａｍａｒａら著、Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ Ｒｅｓ．１６０（３）：２８５−２９９（２００８年）参照）。その上、４ヶ月、二重盲検プラセボ対照試験において、ｎ−３脂肪酸を服用したＢＰ患者は、プラセボ群よりもはるかに長い寛解期を有した（Ｓｔｏｌｌら著、Ａｒｃｈ．Ｇｅｎ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ５６（５）：４０７−４１２（１９９９年）参照）。これら試験は、ＤＨＡが特にその精神安定作用により、ＢＤ及びＭＤＤにおいて治療的に有益であることを示唆している。

【0025】

ＤＨＡは、その他の型のうつ病に罹患している患者にも有益であることが示されている。この検討については、Ａ．Ｌｏｇａｎら著、Ｌｉｐｉｄｓ Ｈｅａｌｔｈ Ｄｉｓ．３：２５−３２（２００４年）を参照されたい。多くの研究が、うつ病患者の血中のｎ−３レベルが低下していることを見出している。同様に、血漿ＤＨＡの増大は、産後うつ病の症状を報告している女性の人数の減少に関連していた。いくつかのプラセボ対照試験により、ｎ−３処置が、抑うつ系を改善することが発見されている。ｎ−３レベルとうつ病の間の関係の検討については、Ａ．Ｌｏｇａｎら著、Ｌｉｐｉｄｓ Ｈｅａｌｔｈ Ｄｉｓ．３：２５−３２（２００４年）を参照されたい。

【0026】

敗血症においては、ＥＰＡ、γ−リノレン酸、及び酸化防止剤が富化された経腸食が、重症の敗血症の患者又は機械的換気を必要とする敗血症ショックを有する患者において、院内転帰を改善し、死亡を低減した（Ａ．Ｐｏｎｔｅｓ−Ａｒｒｕｄａら著、Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．３４（９）：２３２５−２３３３（２００６年）参照）。ｖｅｎｔｉｌａｔｏｒ−ｆｒｅｅ ｄａｙｓ（人工呼吸器を装着しなかった日数）、ＩＣＵ−ｆｒｅｅ ｄａｙｓ（ＩＣＵに入らなかった日数）における同様な有益性は、新たな臓器障害を低減し、長鎖ＰＵＦＡ及び酸化防止剤が富化された食事を供給された急性呼吸ストレスを有する患者において、死亡率の低下が報告されている（Ｊ。Ｇａｄｅｋら著、Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．２７（８）：１４０９−１４２０（１９９９年）参照）。

【0027】

ｎ−３脂肪酸は、創傷治癒にも有益な作用を有することが報告されている。脂質微細環境を変更することを通して、ｎ−３脂肪酸は、上皮細胞の再構成を増強し、炎症を低減することにも役立つことができる（Ｄ．Ｒｕｔｈｉｇ及びＫ．Ｍｅｃｋｌｉｎｇ−Ｇｉｌｌ著、Ｊ．Ｎｕｔｒ．１２９：１７９１−１７９８（１９９９年）；Ｊ．ＭｃＤａｎｉｅｌら著、Ｗｏｕｎｄ Ｒｅｐａｉｒ Ｒｅｇｅｎ．１９（２）：１８９−２００（２０１１年）参照）。

【0028】

ＥＰＡ及びＤＨＡは、前立腺癌及び乳癌などの癌において保護作用を示す。この有益な作用は、抗炎症特性、並びにＮＦ−κＢのダウンレギュレーションなどにより増殖を低減し、アポトーシスを促進するメカニズムによるためのものであり得る。癌におけるｎ−３脂肪酸に関する考察については、Ｂ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ及びＤ．Ｍａ著、Ｌｉｐｉｄｓ Ｈｅａｌｔｈ Ｄｉｓ．８：３３（２００９年）を参照されたい。

【0029】

ｎ−３脂肪酸は、心血管疾患を有する患者における並びに健康な人の心血管疾患のリスクを低減する上での有益な作用にも関連している。同様な有効な作用は卒中においても報告されている。したがって、アメリカ心臓学会、並びにその他の健康関連機関は、食事中のｎ−３脂肪酸の摂取増加に関する推奨を発表した（Ｐ．Ｋｒｉｓ−Ｅｔｈｅｒｔｏｎら著、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １０６：２７４７−２７５７（２００２年）参照）。心血管健康状態に及ぼすｎ−３脂肪酸の観察された作用についての可能なメカニズムとしては、トリグリセリド濃度低下作用、血圧降下作用、血小板凝集の低下、及び心筋それ自体に及ぼす安定化作用が挙げられる。

【0030】

いくつかの病態におけるｎ−３脂肪酸の有益性は、広範な抗炎症作用に起因する可能性がある。ＥＰＡ及びＤＨＡは、炎症消散及び免疫調節機能を備えた抗炎症性調節因子であるレゾルビン類を生成する。例えば、ＥＰＡ及びＤＨＡは、白血球走化性に及ぼす阻害作用を呈し、免疫細胞中のＮＦ−κＢの活性化を低下させることを通して、炎症性サイトカインの産生を変更する（Ｐ．Ｃａｌｄｅｒ著、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：５０６−５３４（２００９年）参照）。一般に、ｎ−３ ＰＵＦＡは、炎症誘発性Ｔ細胞応答の低下に関連している。動物飼料中のｎ−３脂肪酸が増加された場合、脂質ラフト中のＴ細胞膜マイクロドメイン組成が変わり、ＮＦ−κＢ活性化、ＩＬ−２産生、及び細胞増殖を低下させる。具体的には、ｎ−３ ＰＵＦＡは、タンパク質キナーゼＣなどのＴ細胞活性化の最初の信号伝達調節因子の分布及び分配に影響を与える（Ｙ．Ｆａｎら著、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：６１５１−６１６０（２００４年）参照）。また、ｎ−３脂肪酸は、樹状細胞のＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させて、Ｔ細胞に対する抗原提示を効果的に低減することが示されている一方、ｎ−６脂肪酸は、抗原提示活性の増大に関連している（Ｓａｎｄｅｒｓｏｎら著、Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．６２：７７１−７７７（１９９７年）参照）。単核細胞系及び腹腔内マクロファージにおいて、ＤＨＡ及びＥＰＡは、Ｇタンパク質結合受容体１２０（ＧＰＲ１２０）を媒介する抗炎症特性を有する。この結果として、これら脂肪酸は、マクロファージ誘導組織炎症を抑制することを介して、インビボで抗糖尿病作用を示す（Ｄ．Ｏｈら著、Ｃｅｌｌ １４２（５）：６８７−６９８（２０１０年）参照）。ｎ−３ ＰＵＦＡの種々の免疫調節機能は、これらが多くのヒト疾患において影響力を有し得ることを示唆している。

【0031】

ｎ−６脂肪酸
ｎ−３脂肪酸と同様に、ＡＲＡなどのｎ−６脂肪酸は、出生前及び出生後の発達の間に脳内のＡＲＡ蓄積を伴い、神経発達及び脳機能において極めて重要な役割を果たす（Ｂ．Ｋｏｌｅｔｚｏら著、Ｊ．Ｐｅｒｉｎａｔ．Ｍｅｄ．３６（１）：５−１４（２００８年）参照）。ｎ−６脂肪酸は、一般的に、正常な発達及び免疫性に重要であり、皮膚及び頭髪の成長も刺激し、骨の健康状態を維持し、代謝を調節し、生殖系を維持する。

【0032】

長鎖ＰＵＦＡ栄養補助剤
１０年にわたり、健康関連機関は、ｎ−３脂肪酸の健康上の有益性のために、食事でのｎ−３脂肪酸の消費を推奨してきた。ＤＨＡ及びＥＰＡは、栄養補助剤又は医療用薬品中のトリグリセリド又はエステル化された形態として市販されている（例えば、ＬＯＶＡＺＡ（登録商標）、ＯＭＡＣＯＲ（登録商標）、及びＶａｓｃｅｐａ（商標））。ＤＨＡ栄養補助剤は、魚油から、若しくはアマニ油又は藻類などの菜食源から誘導され得る。栄養補助剤は、粉剤、液体飲料、又は経管栄養調合物であり得る。

【0033】

乳児用調乳は、連邦食品医薬品化粧品法の対象とされ、「母乳を模倣するものであること、又は母乳の完全若しくは部分的代替物として好適であることを理由として、乳児向け食品として単独で特殊な食事に使用されることを謳っている又はそれが説明されている食品」として定義されている。ＦＤＡは、乳児を１２ヶ月以下の個人として定義している（２１ＣＦＲ １０５．３（ｅ））。母乳中の主要なｎ−３脂肪酸はＤＨＡであり、平均で７〜８ｍｇ／ｄＬを含む（総脂肪酸の０．１７％〜１．０％に及ぶ）（Ｒ．Ｙｕｈａｓら著、Ｌｉｐｉｄｓ ４１（９）：８５１−８５８（２００６年）参照）。母乳中のＤＨＡの量は、母体におけるＤＨＡ摂取をほぼ反映している。

【0034】

市販のＴＧ−ＬＣＰＵＦＡ補充乳児用調乳としては、Ｅｎｆａｍｉｌ ＬＩＰＩＬ（登録商標）及びＥｎｆａｍｉｌ ＰＲＥＭＩＵＭ（登録商標）などのＥｎｆａｍｉｌ調乳、Ｂａｂｏｏ、Ｅａｒｔｈ’ｓ Ｂｅｓｔ Ｏｒｇａｎｉｃ、Ｎｅｓｔｌｅ Ｇｅｒｂｅｒ ＧＯＯＤ ＳＴＡＲＴ（登録商標））及びＮｅｓｔｌｅ ＮＡＮ（登録商標）などのＮｅｓｔｌｅ調乳、ＮＥＯＣＡＴＥ（登録商標）及びＡＰＴＡＭＩＬ（登録商標）などのＮｕｔｒｉｃｉａ調乳、Ｐａｒｅｎｔ’ｓ Ｃｈｏｉｃｅ Ｏｒｇａｎｉｃ、Ｐｆｉｚｅｒ’ｓＳＭＡ ＧＯＬＤ（登録商標）、Ｓｉｍｉｌａｃ ＡＤＶＡＮＣＥ（登録商標）、Ｓｉｍｉｌａｃ ＥＡＲＬＹ ＳＨＩＥＬＤ（登録商標）、及びＩＳＯＭＩＬ（登録商標）などのＳｉｍｉｌａｃ調乳、並びにＵｌｔｒａ Ｂｒｉｇｈｔ Ｂｅｇｉｎｎｉｎｇｓが挙げられる。その他の乳児用調乳もまた、ＴＧ−ＬＣＰＵＦＡで補充されることが可能である。ＴＧ−ＬＣＰＵＦＡ補充調乳は、牛乳又はダイズを主成分としてよく、有機質であり得る。合衆国では、ＴＧ−ＬＣＰＵＦＡ補充乳児用調乳は製品販売の約９０％を占める（Ｍｅａｄ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ）。

【0035】

ＴＧ−ＬＣＰＵＦＡはまた、フォローオン調乳並びに長鎖脂肪酸を含む栄養補給又は食事栄養補充を必要としている幼児、高齢者、及びその他の人のための飲料に添加されてもよい。このような製品としては、ＥＮＳＵＲＥ（登録商標）、ＰＥＤＩＡＳＵＲＥ（登録商標）、ＣＡＲＮＡＴＩＯＮ（登録商標）、ＢＯＯＳＴ（登録商標）、ＣＥＲＥＬＡＣ（登録商標）、及びＳＯＵＶＥＮＡＩＤ（登録商標）が挙げられる。これに加えて、ＴＧ−ＬＣＰＵＦＡ又はＬＣ−ＰＵＦＡのエステルで補充されている特定化調合物が、経管栄養を必要とする患者において、本発明の方法及び装置と組み合わせて使用することが可能である。例えば、経小腸調合物は、早期産児、腎不全、胃腸疾患又はＧＩ機能障害を生じる状態、腸管切除、脂肪吸収障害、栄養失調症、膵炎、高血糖症／糖尿病、肝不全、急性及び慢性肺疾患、又は免疫不全状態を有する患者で一般的に使用することが可能である。市販の経小腸調合物の検討については、Ａ．Ｍａｌｏｎｅ著、Ｐｒａｃｔ．Ｇａｓｔｒ．２９（６）：４４−７４（２００５年）を参照されたい。栄養調合物は、患者の疾患又は状態に基づいて標準的、基本的であってもよく、又は特殊化されてもよい。一般的に使用される標準的配合物としては、例えば、ＩＳＯＣＡＬ（登録商標）、ＮＵＴＲＥＮ １．０（登録商標）、ＮＵＴＲＥＮ １．５（登録商標）、ＮＵＴＲＥＮ ２．０（登録商標）、ＯＳＭＯＬＩＴＥ １．０（登録商標）、ＯＳＭＯＬＩＴＥ １．２（登録商標）、ＦＩＢＥＲＳＯＵＲＣＥ １．２（登録商標）、ＪＥＶＩＴＹ １．２（登録商標）、ＪＥＶＩＴＹ １．５（登録商標）、ＰＲＯＢＡＬＡＮＣＥ（登録商標）、ＩＳＯＳＯＵＲＣＥ １．５（登録商標）、ＤＥＬＩＶＥＲ ２．０（登録商標）、ＮＯＶＯＳＯＵＲＣＥ ２．０（登録商標）、及びＴＷＯＣＡＬ ＨＮ（登録商標）が挙げられる。基本的配合物は、ポリマー配合物及び加水分解配合物を含む巨大栄養物を含有してもよく、繊維強化されてもよい。疾患特異的配合物としては、例えば、ＭＡＧＮＡＣＡＬ ＲＥＮＡＬ（登録商標）、ＮＥＰＲＯ（登録商標）、ＮＯＶＡＳＯＵＲＣＥ ＲＥＮＡＬ（登録商標）、ＳＵＰＬＥＮＡ（登録商標）及びＮＵＴＲＩ−ＲＥＮＡＬ（登録商標）などの腎臓用調合物が挙げられる。

【0036】

胃腸（ＧＩ）用調合物は、重度のタンパク質又は脂肪吸収障害、広範囲にわたる腸管切除、嚢胞性線維症、脳性小児麻痺、短小腸症候群、ＩＢＤ、膵炎、クローン病、下痢症、胃腸瘻孔、セリアック病、吸収障害症候群、外傷／手術、放射線腸炎、腸不全、乳糜胸症を有する患者を含むＧＩ機能障害を有する患者の栄養管理に使用することができる。また、これらの調合物は、術後初期の栄養補給、栄養供給、完全静脈栄養（ＴＰＮ）代替物、及びＴＰＮとの二重栄養補給にも使用される。ＧＩ用調合物としては、例えば、ＰＥＰＴＡＭＥＮ（登録商標）（これは、脂肪吸収障害の可能性を低減するために７０％の中鎖トリグリセリド及び３０％の長鎖トリグリセリドからなる）、ＶＩＶＯＮＥＸ ＰＬＵＳ（登録商標））、及びＶＩＶＯＮＥＸ ＰＥＤＩＡＴＲＩＣ（登録商標）が挙げられる。

【0037】

しかしながら、例えば、膵臓の生産活動に欠陥がある人、又は膵機能不全に罹患している人など、長鎖トリグリセリド又は長鎖脂肪酸のエステルを加水分解する能力の障害に罹患している人では、このような調合物をＤＨＡ、ＥＰＡ、及びその他のｎ−３脂肪酸で補充しても、これら化合物に関連する有益性を実現するために十分でない場合もある。長鎖トリグリセリド又は脂肪酸エステルは、腸管内で適切に吸収されるために、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸に代謝されねばならない。本発明は、既存の市販されている長鎖ＰＵＦＡ栄養補助剤又は長鎖ＰＵＦＡで補充された新しく設計した調合物を利用して、有意に高濃度の長鎖モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸を含有するすぐに使用可能な調合物を与える方法を提供する。一部の実施形態において、この方法は、ＤＨＡ、ＥＰＡ、及びＡＲＡトリグリセリド若しくはエステル化ＤＨＡ、ＥＰＡ、及びＡＲＡから生成された長鎖モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の提供において特に効果的であるので、この調合物は、別の方法でこれら重要な脂肪酸を加水分解し吸収することができない人に、これら重要な脂肪酸に関連する最大利益を提供するであろう。

【0038】

長鎖トリグリセリド及び脂肪酸エステルを加水分解するための能力の低下
膵機能不全は、長鎖トリグリセリドを加水分解するための能力の低下につながる状態の１つである。膵機能不全は、膵臓リパーゼを含む膵外分泌酵素の不十分な産生によって特徴付けられる。膵機能不全は、ヒトの一生の種々の段階で自然に発生する可能性がある。例えば、膵臓リパーゼの分泌は、妊娠３０週頃から低レベルで開始し、生後１年の間低レベルのままである。したがって、乳児、特に早期産児は、膵機能不全を経験する可能性がある。結果的に、彼らが母乳栄養でない場合、これら乳児は不良な脂肪酸加水分解及び吸収に罹りやすく、ＤＨＡ、ＥＰＡ、及びその他のＬＣ−ＰＵＦＡの摂取に関連する利益を受けられない。

【0039】

この対極として、他の点では健常な高齢者もまた、自然の老化作用の一部として生じる膵臓における変化のために、膵機能不全又はＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド又はエステル化ＬＣ−ＰＵＦＡを加水分解するための能力の他の低下を経験する。これらの変化としては、膵臓の萎縮、線維化、硬化、又は脂肪腫を挙げることができる。この結果的として、高齢者は、膵外分泌酵素の低下のために、栄養失調症、脂肪便、下痢症、腹部痛及び体重減少を含む消化不良の症状を経験する可能性がある（Ｋ．Ｈｅｒｚｉｇら著、ＢＭＣ Ｇｅｒｉａｔｒｉｃｓ １１：４−８（２０１１年）参照）。

【0040】

また、膵機能不全又はＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド又はエステル化ＬＣ−ＰＵＦＡを加水分解する能力のその他の低下は、疾患又は外傷から生じる場合もある。例えば、膵炎は膵臓における炎症の状態であり、これが膵機能不全を引き起こす。膵炎は、急性又は慢性のいずれかであり得、アルコール依存症により発症する膵炎、突発性慢性膵炎、遺伝性膵炎、外傷性膵炎、急性壊死性膵炎、及び自己免疫性膵炎を含む。嚢胞性線維症は、特に小児及び青年に発症する膵機能不全の原因でもある。ガストリノーマ（ゾリンジャー−エリソン症候群）などの十二指腸内のｐＨを低下させる障害は、リパーゼを不活性化し、膵機能不全を引き起こす可能性がある。膵機能不全は、胃又は膵臓の一部が除去される胃腸管の手術、膵臓癌、胃潰瘍、セリアック病、又はクローン病などの胃腸障害、若しくは全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）又は炎症性腸疾患（ＩＢＤ）などの自己免疫障害によって引き起こされる可能性もある。

【0041】

ＴＧ−ＬＣＰＵＦＡ、エステル化ＬＣ−ＰＵＦＡ、及び／又はその他の長鎖トリグリセリド及び脂肪酸エステルを消化するための能力の低下のその他の原因としては、例えば、過敏性腸症候群、高トリグリセリド血症、タンパク質−カロリー栄養失調症を含む栄養失調症、膵臓及び十二指腸新生物、腹部放射線治療、ヘモクロマトーシス、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性肝硬変、シュワヒマン症候群、トリプシノーゲン欠損症、エンテロキナーゼ欠損症、又はリパーゼ単独欠損症が挙げられる（Ｄ．Ｋａｓｐｅｒら著、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第１６版（２００４年）参照））。また、長鎖トリグリセリド又はエステル化長鎖ＰＵＦＡを消化するための能力の低下は、腸管切除、嚢胞性線維症、脳性小児麻痺、短腸症候群、ＩＢＤ、膵炎、クローン病、下痢症、胃腸瘻孔、セリアック病、吸収障害症候群、外傷／手術（特にＧＩ外傷又は手術）、放射線腸炎、腸不全、乳糜胸症、癌（特に、膵臓癌又はＧＩ癌）、及び／又は創傷治癒から生じる場合もある。正確な原因は知られていないが、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）を有する小児においても、ＬＣ−ＰＵＦＡのレベルが低下している（Ｂｕｒｇｒｅｓｓら著、Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒｉ．７１（追補）：３２７Ｓ−３０Ｓ（２０００年）参照）。

【0042】

例えば嚢胞性線維症（ＣＦ）患者は、ＬＣ−ＰＵＦＡのレベルの低下を有することが示されている（Ｐｅｒｅｔｔｉら著、Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ＆ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ２：１１−２８（２００５年）参照）。膵臓酵素置換療法を受けているＣＦ患者は、多くの場合、継続的に脂肪吸収障害に罹患する（Ｋａｌｉｖｉａｎａｋｉｓ著、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ６９：１２７−１３４（１９９９年）参照）。一部の実施形態において、本発明は、ＣＦ患者においてＬＣ−ＰＵＦＡなどの脂肪の吸収を改善するための調合物及び方法を提供する。一部の実施形態において、本発明は、ＣＦ患者において体重増加を誘発するための調合物を提供する。

【0043】

進行期における組織の異化状態、栄養の流路変更、及び吸収障害による悪液質及び体重減少は、多くの癌の進行期に共通するが、膵臓癌（ＰＣ）は、体重減少及び吸収障害が例外的であり、診断の時点で患者の８０％〜９０％で存在する。体重減少の大きな要因である外分泌欠陥から生じる吸収障害は、膵臓柔組織の損失、酵素が腸管まで到達することを抑制する膵管の遮断、及び外科手術手技に起因する。これらメカニズムの全ての共通の最終結果は、脂肪便症及び体重減少である（Ｄａｍｅｒｌａら著、Ｊ ｏｆ Ｓｕｐｐｏｒｔ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ６：３９３−３９６（２００８年）参照）。ＰＣにおける体重の安定化は、生存及び生活の質の改善に関連する（Ｄａｖｉｄｓｏｎら著、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ２３、２３９−２４７（２００４年）参照）。一部の実施形態において、本発明は、ＰＣ患者において、例えば、ＬＣ−ＰＵＦＡなどの脂肪の吸収を改善するための調合物及び方法を提供する。一部の実施形態において、本発明は、ＰＣ患者において、体重増加を誘発するための調合物及び方法を提供する。

【0044】

本発明の一部の実施形態は、ＴＧ−ＬＣＰＵＦＡ、エステル化ＬＣ−ＰＵＦＡ、及び／又はその他の長鎖トリグリセリド及び脂肪酸エステルを加水分解する能力を低下させる膵機能不全及びその他の状態に対する現行の治療選択肢を改善する。ＴＧ−ＬＣＰＵＦＡ、エステル化ＬＣ−ＰＵＦＡ、及び／又はその他の長鎖トリグリセリド及び脂肪酸エステルを加水分解するための低下した能力を有する患者において、加水分解を改善することなく単にこれら栄養の消費を増加させることは、脂肪便、腹部痛、筋痙攣、下痢症、及びその他の胃腸合併症を引き起こす可能性がある。膵臓酵素置換療法もまた、合併症につながる可能性がある。大量の膵臓消化酵素は、大腸に損傷を与え、線維化結腸疾患を引き起こす可能性があることが観察されている（Ｄ．Ｂａｎｓｉら著、Ｇｕｔ ４６：２８３−２８５（２０００年）；Ｄ．Ｂｏｒｏｗｉｔｚら著、Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．１２７：６８１−６８４（１９９５年）参照）。リパーゼ栄養補助剤により引き起こされる別の重大な危険性はアレルギー反応であり、これは多くの市販のリパーゼ栄養補助剤が動物源に由来するためである。したがって、前加水分解された長鎖トリグリセリド又は長鎖ＰＵＦＡエステルを提供する本発明の実施形態は、リパーゼが追加の有無を問わず、膵機能不全又は長鎖トリグリセリド又はエステル化長鎖ＰＵＦＡを消化するためのその他の能力の低下を治療するためのより良好かつ安全な方法を提供するであろう。

【0045】

ｎ−３及びｎ−６脂肪酸の双方は、発達時に重要であるが、ｎ−３脂肪酸は、人生後期でｎ−６脂肪酸よりも一層重要であると考えられている。一部の対象、特に一部の成人において、（ＤＨＡ及びＥＰＡ）：ＡＲＡの比を増加させることが望ましい場合がある。特に、嚢胞性線維症患者は、彼らの血漿中の（ＤＨＡ及びＥＰＡ）：ＡＲＡの比を増加させることから利益を受ける可能性がある。しかしながら、現在使用可能な成人用調合物は、一般的にｎ−３：ｎ−６脂肪酸の低い比を有する。更に、ＴＧ−ＬＣＰＵＦＡの加水分解に障害がある対象において、ｎ−３ ＴＧ−ＬＣＰＵＦＡの消費を単純に増加させることは、対象の（ＤＨＡ及びＥＰＡ）：ＡＲＡの比を大幅に改善する可能性は低く、結果として生じる未消化のＴＧ−ＬＣＰＵＦＡの増加は、胃腸障害を引き起こす場合がある。

【0046】

したがって、本発明の一部の実施形態は、対象、特に成人対象において、（ＤＨＡ及びＥＰＡ）：ＡＲＡの比を増加させるための調合物及び方法を提供する。例えば、一部の実施形態は、ｎ−３トリグリセリド及び／又はエステルを含む調合物が、そこでｎ−３トリグリセリド及び／又はエステルを加水分解するリパーゼに曝される成人用調合物を調製する方法を提供する。一部の実施形態において、調製された調合物は、リパーゼ処理がない対応する調合物よりもｎ−３：ｎ−６モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の高い比、例えば、遊離ＡＲＡに対する遊離ＤＨＡ及びＥＰＡの高い比を含む。一部の実施形態において、この調合物は、ｎ−６モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸よりも多くのｎ−３モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸を含む（例えば、遊離ＡＲＡよりも多くの遊離ＤＨＡ及びＥＰＡを含む）。一部の実施形態において、この調合物は、これを、ｎ−６トリグリセリド及び／又はエステルよりもｎ−３トリグリセリド及び／又はエステルに対してより高い活性を有するリパーゼに曝すことにより調製される。一部の実施形態において、酵素はＲＯ酵素である。本発明はまた、ｎ−３：ｎ−６遊離脂肪酸及び／又はモノグリセリドの比が対象の血漿中に見出されるｎ−３：ｎ−６脂肪酸の比よりも高い調合物、例えば、遊離ＡＲＡに対する遊離ＤＨＡ及びＥＰＡの比が対象の血漿中のものよりも高い調合物を提供する。本発明はまた、このような調合物が成人対象に投与される方法も提供する。一部の実施形態において、この対象は嚢胞性線維症を有する。

【0047】

早期産児における長鎖脂肪酸を加水分解するための能力の低下
長鎖ＰＵＦＡは、正常な神経系及び網膜発達のために乳児で重要であり、脳及び網膜の細胞膜中に高度に蓄積され、これは妊娠３０週から開始する（Ｃ．Ｍａｒｔｉｎら著、Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．１５９（５）：７４３−７４９（２０１１年）；Ａ．Ｌａｐｉｌｌｏｎｅら著、Ｌｅｕｋｏｔｒｉｎｅｓ Ｅｓｓ．Ｆａｔｔｙ Ａｃｉｄｓ ８１：１４３−１５０（２００９年）；Ｊ．ＭｃＣａｎｎら著、Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．８２：２８１−２９５（２００５年）、Ｍ．Ｍａｒｔｉｎｅｚら著、Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．１２０：Ｓ１２９−Ｓ１３８（１９９２年）参照）。ＤＨＡ、ＥＰＡ、及びＡＲＡを含む通常の脂肪酸、並びにこれら脂肪酸をモノグリセリド及び遊離脂肪酸に分解するために必要なリパーゼは、胎盤を通して胎児に提供され、その後乳児に母乳を通して提供される。早期産児は、誕生後の彼らの脂肪酸の外部供給源への依存後に、短縮された妊娠期間のために脂肪酸の不十分な供給の有意に高いリスクにある（Ｃ．ｍａｒｔｉｎら著、Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．１５９（５）：７４３−７４９（２０１１年）参照）。更に、早期産児は、十分なレベルの膵臓リパーゼを産生しないために、彼らは結果的にその調乳で提供されるいかなる長鎖脂肪酸も加水分解することが困難である。

【0048】

早期産児は、満期産児と比較して、脳及び網膜の双方でより少ないＤＨＡ及びより低いＤＨＡ／ＡＲＡ比を有することが示されている（Ｍ．Ｍａｒｔｉｎｅｚら著、Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．１２０：Ｓ１２９−Ｓ１３８（１９９２年）参照）。これに加えて、早期産児の脂肪酸プロファイルの後ろ向き研究において、不適切なレベルの長鎖ＰＵＦＡは、おそらく、免疫応答調節異常に起因する、慢性肺疾患及び敗血症の増加に関連した（Ｃ．Ｍａｒｔｉｎら著、Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．１５９（５）：７４３−７４９（２０１１年）参照）。これら研究などは、ＤＨＡ及びその他の長鎖トリグリセリド又は長鎖脂肪酸エステルで補充された調乳を使用しても、早期産児において適切なレベルの長鎖ＰＵＦＡを確立することは、重要かつ潜在的な未達成の問題であることを示唆している。本発明の調合物、方法、及び装置は、早期産児が十分な量の長鎖脂肪酸を受け取り、関連する医学的有益性を認識することを可能にするであろう。

【0049】

人工栄養乳児における長鎖脂肪酸を加水分解するための能力の低下
また、脂肪酸が補充されない人工栄養児も、長鎖ＰＵＦＡが欠乏する可能性がある。長鎖ＰＵＦＡのレベルは、母乳栄養児に比べて、非補充人工栄養児で低下することが認められている（Ｂ．Ｋｏｌｅｔｚｏら著、Ｊ．Ｐｅｒｉｎａｔ．Ｍｅｄ．３６（１）：５−１４（２００８年）参照）。母乳栄養児であっても、母乳中のＤＨＡの量が変動し、母体の食事摂取に関連するために、ｎ−３脂肪酸が欠乏する可能性がある。母乳中のＤＨＡの量と母乳栄養乳児における視覚及び言語発達との間の正相関が説明されている（Ｓ．Ｉｎｎｉｓ著、Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．１４３：Ｓ１−Ｓ８（２００３年）参照）。したがって、ＤＨＡを含有する食事が授乳中の女性に推奨される。人工栄養児については、全ての主要な調乳製造業者が、ＤＨＡ及びＡＲＡを含有する脂肪を含む特別な乳児用調乳を導入している。しかしながら、これらＤＨＡ及びＡＲＡ富化調乳の有益性に関する報告は、まちまちである。一部の研究では、乳児が長鎖ＰＵＦＡ含有調乳を受容する場合、認知発達において顕著な効果を示したが、他の研究では示されていない（Ｂ．Ｋｏｌｅｔｚｏら著、Ｊ．Ｐｅｒｉｎａｔ．Ｍｅｄ．３６（１）：５−１４（２００８年）；Ｅ．Ｓａｒｋａｄｉ−Ｎａｇｙら著、Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．４５：７１−８０（２００４年）参照）。最近、生後１年間、ＤＨＡ及びＡＲＡを含有するＥｎｆａｍｉｌ ＬＩＰＩＬ（登録商標）を供給された乳児が、脂質を含まない同一の調乳を供給された乳児に比べて、呼吸器の健康状態の改善を含む免疫の転帰の改善を経験したことが示されている（Ｅ．Ｂｉｒｃｈら著、Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．１５６（６）：９０２−９０６（２０１０年）参照）。しかしながら、全体として、前臨床データ間は、現行の長鎖ＰＵＦＡ補充調乳の乳児発達についての一貫した有益性を示してはいない。

【0050】

これら研究の矛盾した結果についての１つの説明は、一部の乳児が、長鎖トリグリセリド又は長鎖脂肪酸エステルで補充された調乳を摂取する場合、腸管から必要量の重要な脂肪酸を吸収することができないことである。この脂肪酸を吸収することが不可能な点は、乳児の低レベルの内因性膵臓リパーゼに起因するものである可能性がある。リパーゼは一般的には母乳を通して乳児に運ばれるために、人工栄養児は、腸管による吸収のために、長鎖ＰＵＦＡ又はＰＵＦＡエステルをモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸まで分解するためのリパーゼの十分なレベルを有することができない。この結果、ＬＣ−ＰＵＦＡ補充調乳を供給された乳児は、母乳栄養児と比べてＬＣ−ＰＵＦＡのより少ない吸収量をなお有する。改めて、単に脂肪酸栄養補助剤を提供するだけではなく、これら脂肪酸の加水分解及び吸収を可能にする明確な必要性が存在する。

【0051】

法律で定められた乳児用調乳（又は、例えば、医療用栄養調合物）にリパーゼを添加することは、好適なリパーゼ栄養補助剤をスクリーニングし、安定化及び製剤化するために相当な開発研究を必要とする可能性がある。十分な試験が行われていない未調節の調乳においては、リパーゼの安定性、特異性の欠如、純度、及び／又は他の物質との干渉に関わる問題が、酵素を過剰なレベル又は潜在的に有害なレベルにする場合がある。規制のハードルを越える新しい物質の大量の添加は、長鎖トリグリセリドを加水分解するための低い能力を有する個人、特に乳児がどれほど十分に調合物に忍容性があるかの別の変数を更に持ち込む。この問題は、例えば、米国特許第５，９０２，６１７号（Ｐａｂｓｔ）及び米国特許第４，９４４，９４４号（Ｔａｎｇ）に記載されている調合物に存在する。

【0052】

本発明の実施形態は、乳児の腸管を通して容易に吸収され得る必須モノグリセリド及び遊離脂肪酸の増量を提供する栄養調合物をａｓ−ｆｅｄ（現物として）提供することによって、これらの種々の問題を解決する。この結果的として、調乳供給対象は、ＤＨＡ、ＥＰＡ、及びＡＲＡの有益性を供与され得る。一部の実施形態において、この栄養調合物は、既存の調乳中に存在する前加水分解された脂肪以外に新しい成分を導入することはない。特定の実施形態において、人工栄養児は、リパーゼ栄養補助剤に曝されることなく、母乳栄養児が取得する脂肪酸の有益性を供与される。他の実施形態において、本発明の栄養調合物は、長鎖モノグリセリド及び遊離脂肪酸、特にＤＨＡ、ＥＰＡ、及びＡＲＡの増量を提供するために、乳児用調乳に添加されたリパーゼの最小量の使用を可能にする高度に特異的なリパーゼを含有する。

【0053】

一部の実施形態において、この栄養調合物は、脂肪酸吸収を改善する。一部の実施形態において、対象はこの栄養調合物を、３日間、５日間、７日間、１０日間、１４日間、３０日間、６０日間、又はそれ以上にわたって摂取する。一部の実施形態において、本発明の栄養調合物のこのような摂取は、大便中の総脂肪を低減し、具体的には、大便中のＤＨＡ、ＡＲＡ、及び／又はＥＰＡのレベルを低減することが可能である。一部の実施形態において、この低減は、この栄養調合物の摂取を開始する前の対象の大便組成に対して測定される。一部の実施形態において、この低減は、摂取前に、現在使用可能な栄養調合物などのリパーゼに曝されていない栄養調合物を供給された対象の大便組成に対して測定される。大便中の総脂肪、ＤＨＡ、ＡＲＡ、及び／又はＥＰＡのレベルは、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又はそれ以上まで低減され得る。特定の実施形態において、大便中の総脂肪、ＤＨＡ、ＡＲＡ、及び／又はＥＰＡのレベルは、５０％と８０％の間まで低減される。一部の実施形態において、大便中の総脂肪のレベルは、少なくとも５０％まで低減される。一部の実施形態において、大便中の少なくとも１つのＬＣ−ＰＵＦＡ（ＤＨＡ、ＡＲＡ、又はＥＰＡなど）のレベルは、少なくとも５０％まで低減される。一部の実施形態において、大便中の少なくとも１つのＬＣ−ＰＵＦＡ（ＤＨＡ、ＡＲＡ、又はＥＰＡなど）のレベルは、少なくとも６０％まで低減される。一部の実施形態において、大便中のＤＨＡ、ＡＲＡ、又はＥＰＡのレベルは、それぞれ少なくとも５０％まで低減される。一部の実施形態において、大便中のＤＨＡ、ＡＲＡ、又はＥＰＡのレベルは、それぞれ少なくとも６０％まで低減される。一部の実施形態において、この栄養調合物の摂取は、ＤＨＡ及びＡＲＡのレベルを含む脂肪レベルの血漿、赤血球、及び組織集積を改善する。組織は、網膜、心臓、脂肪、及び腎臓組織を含むことができる。一部の実施形態において、この栄養調合物の摂取は、血漿、赤血球、又はこれら双方におけるＤＨＡ、ＡＲＡ、又はこれら両者のレベルを増大させる。一部の実施形態において、この栄養調合物の摂取は、網膜中のＤＨＡ、ＡＲＡ、又はこれら両者のレベルを増大させる。一部の実施形態において、この栄養調合物の摂取は、心臓中のＤＨＡ、ＡＲＡ、又はこれら両者のレベルを増大させる。一部の実施形態において、この栄養調合物の摂取は、トリグリセリド、コレステロール、ＨＤＬ、及び／又はＬＤＬの血漿レベルを増大させる。一部の実施形態において、この栄養調合物の摂取は、対象の血漿中のＬＤＬに対するＨＤＬの比を増大させる。

【0054】

一部の実施形態において、この栄養調合物の摂取は、ビタミンＡ及び／又はビタミンＥの血漿レベルを増加させる。理論によって束縛されるつもりはないが、この増加は、ビタミンＡ及びＥが、典型的には、加水分解されるべきであるエステルとして提供されることに起因すると考えられる。本発明の種々の方法及び組成物におけるリパーゼへの曝露は、これらビタミンエステルの加水分解を向上させ、これが血漿中のビタミンＡ及びＥをより一層蓄積させる。

【0055】

一部の実施形態において、この栄養調合物の摂取は、肝臓中の脂肪の蓄積を著しく増加させることなく、有益な作用を有する。脂肪肝疾患（ＦＬＤ）は、肝細胞中の脂肪、特にトリグリセリドの蓄積の増加によって特徴付けられる。この状態は、脂肪代謝に影響を与えるその他の疾患にも関連する。肝臓は、それ自体でいくつかの脂肪を含有することは正常であり、このことが症状を誘発することはない。一部の患者において、脂肪肝は、肝臓の炎症及び肝細胞死（脂肪性肝炎）を伴う場合がある。肝臓癌（肝細胞癌）との関連も存在する。インスリン抵抗性、並びに炭水化物及び飽和脂肪酸の消費の増加、及び繊維及びオメガ−３脂肪酸の低摂取は、全てがＦＬＤの病因に明らかに関連する。

【0056】

ＦＬＤの原因としては、食事、薬物治療、疾患、及び医学的症状が挙げられる。過剰なカロリーの消費は、ＦＬＤを誘発し、過剰なカロリー摂取は、脂肪を通常の様式で代謝する肝臓の能力を圧倒し、これが肝臓中の脂肪蓄積を引き起こす。タモキシフェン、アミオダロン注射、アミオダロン経口投与、及びメトトレキサートなどを含む多くの薬物治療は、ＦＬＤに関連する。脂肪肝はまた、ＩＩ型糖尿病、肥満症、及び血中の高トリグリセリドレベル、セリアック病、及びウィルソン病（銅代謝の異常）、急激な体重減少、並びに栄養失調とも関連している。

【0057】

リパーゼ
膵機能不全及び長鎖トリグリセリド又は長鎖脂肪酸エステルを加水分解するための能力の低下に関連するその他の状態は、現在、膵臓リパーゼを含む補助的な消化酵素で治療されている。しかしながら、膵臓酵素、特にこれら栄養補助剤中に存在する膵臓リパーゼは、多くの場合、胃酸及びペプシンによる分解作用に対して感受性であるので、摂取された酵素のごくわずかな部分だけが活性な形態で十二指腸に到達する（Ｅ．Ｖｉｌｌｅら著、Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ６５：７３−８１（２００１年）参照）。しかしながら、酸保護コーティングの多くは、送達される重量のかなりの部分がプラスチックコーティングであるために、乳児集団又は免疫不全患者に対して潜在的に安全上の問題を有する。更に、酸保護コーティングが役立っても、ある程度の吸収不良が持続し、膵機能不全を有する患者に酵素栄養補助剤の投与量増加を必要とさせる。経腸コーティング酵素の脂肪酸吸収不良のこの存在は、膵機能不全を有する患者の十二指腸及び上部空腸が多くの場合酸性環境であることで、ｐＨの期待される上昇が達成されず、酵素を放出するために保護コーティングが適切に溶解されないという事実に起因する可能性がある（Ｄ．Ｇｒａｈａｍ著、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊ．Ｍｅｄ．２９６（２３）：１３１４−１３１７（１９７７年）参照）。これら問題の双方は、投与されるリパーゼの用量を増加させることにより解決されてきた。しかしながら、前述した通り、膵臓酵素栄養補助剤の高投与量は、線維化結腸疾患に関連することが見出されている。したがって、本発明の一部の実施形態は、追加のリパーゼなしで、長鎖モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸のより高い含有率を含む栄養調合物を提供する。一部の実施形態は、本明細書に記載されているリパーゼの最適用量を含む栄養調合物を提供する。

【0058】

リパーゼは、動物、植物、並びに多くの天然又は遺伝子操作微生物から得ることが可能である。大部分ではないにしても多くの市販の食餌性リパーゼ栄養補助剤は、動物に由来し、消化酵素による分解作用を特に受けやすい。使用頻度の低い代替物は、微生物リパーゼ、すなわち、細菌又は例えば酵母などの真菌類で産生されるリパーゼである。微生物リパーゼは、動物又は植物リパーゼよりも広いｐＨ範囲にわたって活性を保持し、したがって腸溶錠の必要性を排除する。しかしながら、微生物酵素は、小腸内でトリプシンによって分解されやすく、これによって腸管内でトリグリセリド及びエステルを分解するためのこれらの利用可能性を低下させる。特定の実施形態において、本発明の調合物、方法、又は装置で使用されるリパーゼは、細菌リパーゼ、真菌類リパーゼ、又はこれらの双方である。

【0059】

個々のリパーゼの特異性及び動態は、大きく変化する可能性がある。リパーゼの特異性は、酵素の分子特性、基質の構造及び基質への酵素の結合に影響を与える因子によって制御される。特異性の種類としては、基質特異性（すなわち、所与のリパーゼが、別のリパーゼよりも１つの種の脂肪酸を分解する上で活性であり得ること）、及び位置特異性（これは、トリグリセリドのグリセロール骨格の１位及び／又は３位中のエステル結合の優先的加水分解を伴う）が挙げられる。

【0060】

現在、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、ブルコルデリア・セパシア（Ｂｕｒｃｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）、及びリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）により産生されるリパーゼが、カンジダ・ルゴーサ（Ｃａｎｄｉｄａ ｒｕｇｏｓａ）、リゾムコール・ミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ）、ペニシリウム・カメムベルチ（Ｐｅｎｉｃｉｌｉｕｍ ｃａｍｅｍｂｅｒｔｉ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、及びアスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｉｓ ｏｒｙｚａｅ）により産生されるリパーゼなどの他のリパーゼよりも、ＤＨＡ、ＥＰＡ、及びＡＲＡに対して大きな特異性を有することが明らかにされている。この結果、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、ブルコルデリア・セパシア（Ｂｕｒｃｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）、及び／又はリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）を含むリパーゼ栄養補助剤、又はリパーゼ補充栄養製品は、ＴＧ−ＤＨＡ、ＴＧ−ＥＰＡ、及び／又はＴＧ−ＡＲＡの加水分解の増大を提供するであろう。したがって、本発明の一態様は、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）リパーゼ、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）リパーゼ、ブルコルデリア・セパシア（Ｂｕｒｃｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）リパーゼ、及び／又はリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）リパーゼを含むリパーゼ栄養補助剤、又はリパーゼ補充栄養製品を提供する。一部の実施形態において、このリパーゼは、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）リパーゼ、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）リパーゼ、又はリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）リパーゼである。特定の実施形態において、このリパーゼは、リゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）リパーゼである。

【0061】

クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）リパーゼ、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）リパーゼ、ブルコルデリア・セパシア（Ｂｕｒｃｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）リパーゼ、及びリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）リパーゼなどの特定の種のリパーゼへの言及は、このリパーゼが野生宿主腫から直接的に調製されたことを必ずしも必要とするものではない。例えば、同一のリパーゼは、別の宿主細胞中で組換え的に産生されることができる。

【0062】

本発明の別の態様は、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、ブルコルデリア・セパシア（Ｂｕｒｃｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）、及びリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）リパーゼの１つ以上を食事栄養補助剤として投与することにより、又はこれら酵素の１つ以上でＤＨＡ、ＥＰＡ、及び／又はＡＲＡを含有する調合物を前加水分解することにより、ＤＨＡ、ＥＰＡ、及び／又はＡＲＡの吸収を増大させる方法である。一部の実施形態において、このリパーゼは、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）リパーゼ、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）リパーゼ、又はリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）リパーゼである。本発明の追加の態様は、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）によって決定され、実施例１に記載されているようなクロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、ブルコルデリア・セパシア（Ｂｕｒｃｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）、及びリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）の１つ以上の特異的活性に匹敵するＤＨＡ、ＥＰＡ、及び／又はＡＲＡに対して特異的活性を有するリパーゼを提供する。一部の実施形態において、このリパーゼは、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）リパーゼ、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）リパーゼ、又はリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）リパーゼの１つ以上の特異的活性に匹敵するＤＨＡ、ＥＰＡ、及び／又はＡＲＡに対する特異的活性を有する。本発明の一実施形態は、５，０００単位未満のリパーゼを含有する栄養調合物である（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｎｚｙｍｅｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ Ａｓｓａｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ、Ｒ．Ｒｕｙｓｓｅｎ及びＡ．Ｌａｕｗｅｒｓ（編集）、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｇｈｅｎｔ、Ｇｅｌｇｉｕｍ（１９７８年）に記載されているものなどの、標準オリーブ油アッセイで評価される単位を使用）。他の実施形態において、この栄養調合物は、３，０００単位未満のリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、１，０００単位未満を含有する。特定の形態において、５，０００未満、３，０００未満、又は１，０００単位未満のリパーゼを含有する調合物は、乳児用調乳又は医療用栄養調合物である。

【0063】

固定化リパーゼ
酵素及びその他のタンパク質を不溶性支持体に固定化するプロセスは周知であり、文献中に記載されている。リパーゼの固定化は、酵素の安定性を改善し、これを再使用可能にし、製品がリパーゼにより汚染されることなくこの酵素から容易に分離させることを可能にする。一部の実施形態において、リパーゼは固体支持体に共有結合されているが、非共有結合も使用されてもよい。リパーゼの固定化の適切な方法としては、例えば、吸着、イオン結合、共有結合、架橋結合、カプセル化、並びに疎水性又は親水性ポリマーマトリクス及び無機マトリクスへの閉じ込めが挙げられる。Ｙ．Ｒｅｎら著、ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１１：６３（２０１１年）；Ｖ．Ｒ．Ｍｕｒｔｙら著、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇ．７：５７−６６（２００２年）を参照されたい。リパーゼは、支持体材料に直接的に結合することによって、又はリンカーを通して結合することによって固定されてもよい。例えば、Ｓｔａｒｋ及びＨｏｌｍｂｅｒｇ著、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇ．３４（７）：９４２―９５０（１９８９年）を参照されたい。

【0064】

吸着による固定化は可逆的であり、典型的には疎水性相互作用が関与する。これは簡便かつ安価であるが、不完全な固定化又は不溶性支持体からの酵素の漏出の欠点を有する。この方法を使用する固定化リパーゼの例は、Ｅ．Ｌｉｅら著、Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．５０：５４９−５５３（１９９１年）（カンジダ・シリンドラセー（Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）リパーゼ、ゼオライト支持体）；Ｍ．Ｂａｓｒｉら著、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．５９：３７−４４（１９９４年）（カンジダ・ルゴーサ（Ｃａｎｄｉｄａ ｒｕｇｏｓａ）リパーゼ；ポリマー支持体）；Ｈ．Ｇｕｎｎｌａｕｇｈｓｄｏｔｔｉｒら著、Ｅｎｚｙｍｅ ａｎｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｔｅｃｈ．２２：３６０−３６７（１９９８年）（フミコラ・ラヌギノーサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｌａｎｕｇｉｎｏｓｅ）リパーゼ；ガラスビーズ支持体）で見出すことができる。吸着による固定化に好適な支持体としては、例えばＴｏｙｏｎｉｔｅ（東洋電化工業株式会社）などのセラミックビーズが挙げられる。

【0065】

イオン結合は、リパーゼと、固体支持体上のＤＥＡＥ−セルロース又はＤＥＡＥ−セファデックスなどのマトリクス上の異なる電荷のイオン基との間の静電相互作用に基づく。イオン結合は、リパーゼの形に最小の変化を引き起こし、多くの場合、高活性を有する固定化リパーゼを生じる。しかしながら、酵素と支持体との間の結合力は、吸着を使用する場合よりも強いが、共有結合ほど強くはなく、したがって支持体からのリパーゼの漏出が発生する場合があることを理解されたい。

【0066】

共有結合は、支持材料とリパーゼの表面上のアミノ酸上の官能基との間の共有結合に基づく。支持体への酵素のこの結合において起こり得る官能基は、リパーゼの触媒活性に必須ではないアミノ、カルボキシル、スルフヒドリル、ヒドロキシル、イミダゾール、又はフェノール基であり得る。活性部位を保護するために、固定化は、基質又は競合的阻害因子の存在下で実施することが可能である。リパーゼの支持材料への共有結合を使用することの大きな利点は、結合の強さ、すなわち、固定化の安定性である。共有結合によるリパーゼ固定化の例については、Ｓ．Ｅｍｉら著、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ ３０（５）：５８９−５９５（１９９４年）を参照されたい。共有結合に好適な支持体としては、例えば、Ｉｍｍｏｂｅａｄ（商標）（ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ）が挙げられる。

【0067】

架橋結合は、リパーゼをそれ自体に結合させて三次元構造を形成するか又は架橋剤を使用してリパーゼを固体構造に結合させることを伴う。例えば、リパーゼは、キトサンビーズに架橋結合され得る。Ｓ．Ｈ．Ｃｈｉｏｕら著、Ｐｒｅｐ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３７（３）：２６５−２７５（２００７年）を参照されたい。カプセル化によるリパーゼの固定化は、通常、リパーゼの周囲の多孔質コーティング又は半透膜の形成を伴い、これによって、リパーゼは多孔質材料の内側に収容されるが、トリグリセリド及びエステルは自由に通過できる。閉じ込めによるリパーゼの固定化は、酵素を格子構造内に閉じ込めることにより、酵素の移動を制限することを伴う。アルギン酸塩ビーズを、この種の固定化に使用してもよい（Ｉ．Ｂｕｓｈａｎら著、Ｊ．Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ２３（６）：５５２−５６２（２００８年）参照）。合成及び天然ポリマーを使用してもよい。Ｇ．Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｌｏｒｅｎｔｅら著、Ｊ．Ａｍ．Ｏｉｌ Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（２０１０年１２月１４日にオンラインで公開）及びＧ．Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｌｏｒｅｎｔｅら著、Ｊ．Ａｍ．Ｏｉｌ Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８８：１１７３−１１７８（２０１１年）も参照されたい。

【0068】

特定の実施形態において、本発明の調合物、方法、及び装置は、カプセル化などの固定化の別の形態を伴い又は伴わず、安定性を向上させるために、米国特許第６，５４１，６０６号（Ｍａｒｇｏｌｉｎ）で記載されている結晶化かつ架橋結合されたリパーゼを利用してもよい。

【0069】

一部の実施形態において、リパーゼは、磁気ナノ粒子（ＭＮＰ）に固定化される。これらＭＮＰは、リパーゼが反応するアミノ又はエポキシ官能基を含有するリンカー又はポリマーによってコーティングされ得る。ＭＮＰに好適なコーティングの１つは、例えば、ポリドーパミンである。例えば、Ｙ．Ｒｅｎら著、ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １１：６３（２０１１年）を参照されたい。リパーゼ固定化にＭＮＰを使用することは、生体適合性、超磁性、小型であること、及び低毒性などの利点を有する。ナノ粒子の磁気特性は、リパーゼの溶液からの除去を容易にし、ＭＮＰ−リパーゼを固体支持体に付着するための別の手段も提供する。

【0070】

一部の実施形態において、固定化リパーゼは、微生物リパーゼである。一部の実施形態において、固定化リパーゼは、細菌リパーゼから選択される。一部の実施形態において、固定化リパーゼは、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、ブルコルデリア・セパシア（Ｂｕｒｃｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）、及びリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）から選択される１種以上のリパーゼである。

【0071】

特定の実施形態において、（固定の有無を問わず）リパーゼは、調合物に１、２、３、４、５、１０、２０、３０分間又はそれ以上にわたって添加される。ＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド及びエステルの加水分解は、ＲＰ−ＨＰＬＣにより測定される。特定の実施形態において、ＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド及びエステルのパーセント加水分解は、３０分までに１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％である。実施形態において、ＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド及びエステルのパーセント加水分解は、２０分までに１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％である。実施形態において、ＬＣ−ＰＵＦＡトリグリセリド及びエステルのパーセント加水分解は、１０分までに１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％である。特定の実施形態において、このリパーゼは、リゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）リパーゼである。

【0072】

固定化リパーゼを含む装置
様々な実施形態によれば、本開示は、栄養製品を調製するための装置及び方法を提供する。この装置及び方法は、消費前に、乳児用調乳又はその他の栄養製品をリパーゼに曝すために使用することができる。したがって、リパーゼは、引き続いての遊離脂肪酸及びモノグリセリドの放出を伴い、脂肪及び油を分解する。この装置及び方法は、調乳又はその他の栄養製品を調製するための便利な手段を可能にするであろう。一部の実施形態において、この装置及び方法は、この製品を消費する乳児又は他者に外因性リパーゼを消費することを回避させる。一部の実施形態において、この装置及び方法は、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸を含むが、（ＥＬＩＳＡにより決定される）いかなる多量のリパーゼも含有しない調合物の産生を可能にする。

【0073】

図１、２Ａ〜２Ｃ、３Ａ〜３Ｃ、４Ａ〜４Ｂ、５Ａ〜４Ｂ、９Ａ〜９Ｃ、１０Ａ〜１０Ｃ、１１Ａ〜１１Ｃ、１２、１３Ａ〜１３Ｂ、１４、１５、１６、１７Ａ〜１７Ｂ、１８、１９、２０、及び２１は、本開示の様々な実施形態に係る装置を図示する。図１に示すように、本開示の装置１００は、乳児用調乳１２０又はその他の液体栄養製品を保持するよう構成された容器１１０を含むことができる。以下に詳細に説明するように、容器１１０は、経鼻胃チューブ１１４又はその他の授乳メカニズム（例えば、哺乳瓶）を通して乳児に供給される調乳１２０が、リパーゼをいずれの認識し得る量で含有しないように、固定化されているリパーゼを含むことができる。例えば、リパーゼが容器内で調乳１２０に流体接触するように、リパーゼは、壁に沿って見られる構造上又は構造内に固定化されるか若しくはその他の方法で容器内に固定化され得る。更に、以下の様々な実施形態を参照して説明するように、容器１１０内のリパーゼの酵素処理を可能にする種々の方法で、調乳は、容器１１０に加えることができる。例えば、流体は、チューブ１１２を通して供給するか、又は容器に注ぐことが可能であり、その後、供給のために経鼻胃チューブ又はその他の装置を通過することが可能である。

【0074】

本開示全体を通して、装置及び方法は、例えば、乳児用調乳及び医療用栄養調合物などの栄養調合物を処理又は調製する上での使用について言及するであろう。この装置及び方法は、消費前にリパーゼ処理を提供することが有益であり得る任意のタイプの栄養調合物を処理又は調製するために使用することが可能であることを理解されたい。このような製品は、膵機能不全を有する人によって、又は長鎖トリグリセリド又はエステル化長鎖ＰＵＦＡを加水分解するための能力が低下した他者によって消費される任意の栄養調合物を含むことができる。

【0075】

図２Ａ〜２Ｃ及び３Ａ〜３Ｃは、様々な実施形態に係る、より詳細な装置を図示する。示すように、装置２００〜２０２、３００〜３０２は、液体調合物を保持するための容器２１０，３１０を含むことができる。容器２１０，３１０は、種々の異なるタイプ及び形状を含むことができる。例えば、容器２１０，３１０は、ガラス製又はプラスチック製のジャー又はバイアル、バッグ（例えば、ＩＶ生理食塩水バッグに似たシリコーン又はその他の可撓性材料）、注射器外管などの円筒状容器、若しくは調乳又はその他の製品の所望の量を保持するよう寸法決めされ形づけられたその他の容器を含むことができる。

【0076】

前に述べたように、本開示の装置は、所望の酵素作用を得るために、調乳をリパーゼに曝させることが可能であり、一方で、その後リパーゼを消費することなく調乳を好都合に消費させることが可能である。したがって、様々な実施形態において、調乳が除去される場合（例えば、経鼻胃チューブ、哺乳瓶の乳首を通して、又は調乳を別の容器に移すことによって）、リパーゼが容器２１０，３１０内に留まるように、若しくは消費前に調乳から除去されることができるように、リパーゼは容器２１０，３１０内に固定化される。他の実施形態において、リパーゼは、容器２１０，３１０内、例えば、取り外し可能な固体支持体上に固定化されることで、後の消費のために調乳を容器内にそのまま残すと同時に、リパーゼは容器から容易に除去されることが可能である。

【0077】

図２Ａ〜２Ｃは、容器２１０内にリパーゼを固定化するための特定の実施形態と共に、容器２１０の１つの構成を示す。前述したように、容器２１０は、種々の異なる材料、寸法及び形状を有してもよい。これに加えて、容器２１０は、調乳２６０の容器に流入し容器から流出する流れを制御するために、１つ以上のアクセスポート２２０，２３０を備えてもよい。

【0078】

リパーゼは種々の方法で容器２１０内に固定化され得る。例えば、リパーゼは、容器２１０の内側に位置する構造２５０，２５２内に固定化又は収容され得る（図２Ａ及び２Ｃ）。これに加えて、又はこの代わりに、リパーゼ２５１は、容器２１０の壁の内部に固定化又は収容されることも可能である（図２Ｂ）。したがって、調乳２６０が容器の内部に配置されると同時に、調合物２６０は、リパーゼに接触し、所望の酵素作用を生じる。

【0079】

前述したように、リパーゼを容器内の構造２５０，２５２及び／又は容器の壁２５１に結合することにより、リパーゼは容器内に固定化され得る。容器内の構造は、種々の形状を有することができる。例えば、特定の実施形態において、この構造は、ビーズ、ボール、又は構造が調乳内で流動するように容器内でそれ自体が可動性であり得る任意のその他の構造を備えてもよい。例えば、図４Ａに示すように、構造２５０は、リパーゼ２５７が結合することができる表面壁２５６を有するビーズ又はボールを含むことができる。更に、構造２５０，２５２は種々の異なる形状又は構成（例えば、立方体様、卵形体、棒状）を有することが可能であることを理解されたい。

【0080】

構造２５０，２５２及び／又は容器２１０の壁の構成は、許容可能な時間の間に調乳が十分な量のリパーゼに接触することができる所望の表面積を提供するよう構成することが可能である。例えば、構造２５０，２５２は、十分な量のリパーゼに結合するための高表面積を提供するために、多数のビーズ２５０（図２Ａ）又は棒状構造２５２（図２Ｃ）を含むことができる。あるいは、調合物をリパーゼとインキュベートするためにより長時間が利用可能である場合、及び／又は高い酵素活性を備えるリパーゼが使用される場合、より少量のリパーゼが好適であり得る。

【0081】

様々な実施形態において、構造２５０，２５２及び／又は容器は、調乳２６０が消費又は貯蔵のために容器から取り出されると同時に、リパーゼが調乳２６０内に保持されないように構成される。例えば、ビーズ２５０又は棒状構造は、これらが比較的小さなアクセスポート２３０を通過しないように寸法決めすることが可能である。これに代えて、又はこれに加えて、構造は、容器の壁に取り付けることが可能であり、及び／又は容器が調合物２６０を含む構造が移動することを防止するよう寸法決めされているスクリーン又はフィルターを備えてもよい。更に、構造２５０，２５２は、調乳からのそれらの分離を容易にするその他の特性を有することが可能である。例えば、構造２５０は、磁気フィルターに結合することにより除去することができる磁気ビーズから形成されることができる。

【0082】

一部の実施形態において、容器２１０内の構造及び／又は容器の壁への付着によりリパーゼを固定するよりはむしろ、リパーゼ２５７’は、構造２５０，２５２及び／又は容器の壁２５１内に収容されている。図４Ｂは、１つのこのような実施形態を図示する。示すように、構造２５０’は、壁２５６’を有するビーズ又はその他の形状を含むことができる。この壁は、調乳２６０の流入及び流出を許可するがリパーゼ２５７’の流入及び流出を許可しない半透過性材料から形成することができる。このような封入は、壁の表面が半透過性材料を有し、その内部にリパーゼが収容され得るように、その他の構造（例えば２５２）及び／又は容器の壁に同様に使用されてもよい。

【0083】

容器は、増加量のリパーゼ、及び／又はリパーゼの調乳２６０との接触の増加を提供する表面形状を同様に有してもよい。例えば、容器の壁は、表面積を増大させるためにリッジ又はその他の表面改変を有してもよい。更に、容器は、単一の開放空間を含有するよりはむしろ、流路の変形（例えば、リパーゼに対する長期又は長時間の曝露を可能にする巻き経路、及び／又はリパーゼが固定化され、それを通して調乳が流れることができるチャネル又はチューブの集合体）を含有してもよい。例えば、図１の要素１５０、及び図２１の要素２１０１を参照されたい。

【0084】

特定の実施形態において、容器は、製造され、本明細書に記載されている実施形態のいずれかにおけるリパーゼと共に予めパッケージされてもよい。使用時に、容器を開けることができ、調乳を容器内に配置し、十分な時間にわたってリパーゼと接触させて、所望の酵素作用を生じることができる。他の実施形態において、構造の表面に固定化された又はその内部に収容／封入されたリパーゼを有するビーズ２５０などの構造又は棒状構造は、パッケージされかつ配給され、これら構造は、調乳を含有する別個の容器内に配置することが可能である。一部の実施形態において、固定化リパーゼ及び調乳を含む容器を一定時間にわたって振蕩又は撹拌することが効果的であり得る。

【0085】

述べたように、調乳２６０は、様々なアクセスポートを介して容器２１０内に配置することが可能である。例えば、容器は、頂部アクセスポート２２０及び／又は底部アクセスポート２３０を含むことができる。ポート２２０，２３０は、それぞれ調乳の流入及び流出に使用することができる。これに加えて、単一のポートを使用することが可能であり、又は複数のポートを使用してもよい。これらポートは、流体の供給又は移転に使用され得るその他の装置に係合するよう構成された構造を含むことができる。例えば、これらポートは、ルアーロック接続部、ねじ部、及び／又は経鼻胃チューブに係合することができる導管又はチューブなどのコネクタを含むことができる。これに加えて、これらポートは、哺乳瓶、哺乳瓶乳首、若しくは供給において別の容器への流体の移転を容易にする、又は供給で補助するための任意の他の構造に係合するよう構成されることが可能である。更に、ポート２２０，２３０の一方又は両方は、弁１４０（図１）、２４０（図２Ａ）又はその他の流体流動制御機構を備えてもよい。

【0086】

図３Ａ〜３Ｃは、特定の実施形態に係る、本開示の装置を図示する。示すように、装置３００〜３０２は、調乳２６０を受容するための容器３１０を含む。これに加えて、容器３１０は、ジャー又は瓶用のねじ切り頂部などのキャップ３２２又はその他の閉鎖用具を含むことができる。図２Ａ〜２Ｃに示す実施形態と同様に、この装置は、その表面に固定化された及び／又はその中に封入されたリパーゼを含有する構造３５０，３５１，３５１’及び３５３を備えてもよい。

【0087】

図３Ａ〜３Ｃの実施形態は、リパーゼを含有する構造からの調乳のより迅速な分離を提供することが可能である。例えば、図３Ａに示すように、棒状構造３５０は、リパーゼを含有することが可能であり、調乳の酵素処理後に、キャップ３２２が取り外され、これと同時に構造３５０及びリパーゼを同時に除去することができる。更にキャップ３２２は、別のキャップ、哺乳瓶乳首、又はその他の流体接続部で置き換えられることが可能である。同様に、ボール又はビーズ３５１，３５１’に似たその他の構成を有する構造（図３Ｂ）は、調合物２６０からの容易な除去のために寸法決めすることが可能である。例えば、示すように、ビーズ３５１，３５１’は、これらが手動で又は濾過により容易に除去され得るように寸法決めされている。更に、容器３１０は、その内面３５３に固定化され又は収容されているリパーゼを提供することができ、酵素処理後に、調乳２６０は、別の容器に移転されることができ、若しくはキャップ３２２を哺乳瓶乳首又はその他の供給システムへの接続部に交換することで消費されることができる。

【0088】

これに代えて、又はこれに加えて、構造３５０，３５１，３５１’は、構造内に収容された固定化リパーゼを提供する追加の構成部品を備える透過性の外部壁を有することが可能である。例えば、構造３５１’（図３Ｂ）は、構造３５１’が多数のビーズ２５０を包囲する透過性の外部壁を有する１つの実施形態を図示する。外部壁は、ビーズ２５０との接触を提供するために、メッシュ若しくは調合物の構造３５１’に向かう及び構造からの容易な移動を可能にするその他の構成を備えてもよい。更に、上記の様々な実施形態で記載されている通り、ビーズは、ビーズの表面に固定化され又はその内部に封入されることが可能であるリパーゼを提供することができる。

【0089】

上述したように、リパーゼを含有するこの構造は、製造され、容器３１０と共に予めパッケージされた構成部品として配給されることが可能である。これに代えて、又はこれに加えて、構造は容器とは別個にパッケージされ配給されてもよい。例えば、その内部に収容されているか又はそこに固定化されているリパーゼを有する棒状構造３５０又はビーズ３５１，３５１’、若しくは他のものを含有するキャップ３２２が、製造されかつ配給されてもよい。このキャップは、調乳を含有し得る標準的哺乳瓶、水筒、若しくは他の容器又は器具との接続用に構成されてもよい。

【0090】

他の実施形態において、調乳が容器内に配置されると同時に、及び／又は授乳中又は容器からの取り外し時に、リパーゼが調乳と接触するように、リパーゼは提供され得る。例えば、図５Ａは、例示的な実施形態に係る、１つの装置５００を図示する。装置５００は、標準哺乳瓶乳首を含み得、リパーゼは、乳首の周縁部又は乳首それ自体の内表面５１０に固定化され得る。このようにして、通常の使用時に、調乳はリパーゼと接触するであろう。同様に、リパーゼは、経鼻胃栄養供給装置の流体用チューブなどの供給に使用され得るその他の構造の内部又はその上に収容され得る。

【0091】

あるいは、リパーゼは、通常の流体の流れの間に、調乳のリパーゼとの接触を可能にするよう構成された別個の要素で提供することができる。例えば、一実施形態において、リパーゼは、乳首（図５Ａ）又は哺乳瓶キャップ／頂部（図５Ｂ）などの哺乳瓶閉鎖部材との係合用に構成されたハウジング５２０内に収容されることが可能である。ハウジング５２０は、調乳に壁量を通過させ、その中に提供されたリパーゼと接触させる透過性壁を含むことができる。

【0092】

ハウジング５２０内に収容されているリパーゼは、種々の形態で提供され得る。例えば、一部の実施形態において、リパーゼは、前述されたように、結合又は封入によってハウジング５２０内のビーズ５５０の上に固定化されている。更に、ハウジング５２０は、調乳にそれを通過させる開放メッシュ又はその他の構成を含むことができる。例えば、図５Ａに示す哺乳瓶構成を使用して、開放メッシュ又はハウジング５２０を通る流路は、授乳中に調乳が哺乳瓶を出ると同時に、調乳をリパーゼに接触させるであろう。あるいは、図５Ｂに示すように、調乳は、ハウジングの頂部５３０に注入又はそこから注出され、容器３１０を充填又は空にする間に、調乳をリパーゼに接触させることができる。ハウジング５２０の頂部５３０及び／又はその他のどの部分も、種々の材料から形成することが可能である。例えば、ハウジング５２０は、制御された流体の流れを可能にする膜から形成され得る。更に、頂部５３０は、流体（調乳）がそれを通して流れることを許可するが、リパーゼの通過を許可しない半透過膜から形成され得る。したがって、頂部５３０を形成している膜は、別の方法でリパーゼを容器３１０内に結合又は固定化することなく、容器３１０内にリパーゼを固定化するために役立ち得る。

【0093】

様々な実施形態において、上記記載の装置は、リパーゼ活性を改善する又は別の方法で制御するための変更形態を備えてもよい。例えば、容器１１０，２１０，３１０は、インキュベーションの間に調乳の連続的移動を可能にする攪拌システムを含むことができることにより、リパーゼが流体容量全体にわたって見出される脂肪酸に接触することを可能にする。更に、この装置は、リパーゼ活性を改善又は制御するために温度を制御するためのシステムを含むことができる。

【0094】

本発明の特定の実施形態は、栄養調合物及びリパーゼを含有する容器を提供する。一部の実施形態において、リパーゼは、容器内で栄養調合物と接触状態にある。他の実施形態において、リパーゼ及び栄養調合物は、容器内で接触状態にはない。一部の実施形態において、栄養調合物及びリパーゼは、容器内の別個の区画内に収容されている。一部の実施形態において、栄養調合物は乾燥形態である。一部の実施形態において、栄養調合物は液体形態である。一部の実施形態において、リパーゼを、栄養調合物を含有する区画内に放出することにより、リパーゼを栄養調合物に接触させる。一部の実施形態において、リパーゼ及び栄養調合物を別の容器に移すことによって（例えば、他の容器に移して、リパーゼ区画及び栄養調合物区画を空にすることによって）、リパーゼを栄養調合物に接触させる。一部の実施形態において、リパーゼ及び栄養調合物を他の容器に移す前又は移した後に、液体が他の容器に添加される。

【0095】

本開示による装置は、多くの異なる形状及び／又は構成を有することが可能である。例えば、図９Ａ〜９Ｃ、１０Ａ〜１０Ｃ、１１Ａ〜１１Ｃ、１２、１３Ａ−１３Ｂ、１４、１５、１６、１７Ａ〜１７Ｂ、１８、１９、２０、２１は、種々の追加の形状及び／又は構成を図示する。これら図面について述べられたそれぞれの構成において、リパーゼは、（例えば、装置内のビーズなどの構造上にリパーゼを固定化することにより、及び／又は装置の壁の内部又は壁上若しくは他の表面上にリパーゼを固定化することにより）上記記載の方法のいずれかを使用して固定化することが可能である。更に、特定の構成が、表面積、容積、リパーゼの量、及び／又は酵素に対する物質の曝露時間などの多種多様な特徴を提供するよう選択されてもよい。

【0096】

図９Ａ〜９Ｃ、１０Ａ〜１０Ｃ、１１Ａ〜１１Ｃ、１２、１３Ａ〜１３Ｂ、１４、１５、１６、１７Ａ〜１７Ｂ、１８、１９、２０、２１に図示されている装置は、種々の方法でリパーゼの接触を可能にするよう構成することができる。例えば、様々な実施形態において、調乳とリパーゼとの間の接触を可能にするために、装置の一部又は全体を調乳を含む容器内に挿入することができる。他の実施形態において、装置は、調乳のインライン処理用に構成されている。

【0097】

図９Ａ〜９Ｃは、調乳を処理するために、容器内に配置され得る装置のための構成を図示する。示すように、装置９００，９２０（図９Ａ及び図９Ｃ）は、リパーゼを取り囲む外部壁９０１，９０１”から形成された多様な形状を有することができる。上に示したように、リパーゼ９０２は、ビーズへの付着を含む多様な方法で固定化され得る。更には、装置９１０（図９Ｂ）は、１つ以上の壁９０１’内に形成された複数のポケット又は開口部９０３を含むことができる。特定の構成、ポケット又は開口部の数、並びにリパーゼの量及び／又は装置の容積は、使用目的に応じて及び／又はリパーゼ反応速度を制御するために変動することができる。

【0098】

特定の実施形態において、装置は、その寸法又は形状における変化を可能にするよう構成され得る。例えば、図１０Ａ〜１０Ｃは、装置１０００を図示し、これは、例えば使用前の容器１００１内での貯蔵用に圧縮することが可能である。必要に応じて、容器１００１は開けることができ、装置の壁１００３は、容器容積に対するリパーゼ容積１００２の所望の比を生じるように膨張することが可能である。一部の実施形態において、装置１０００は、構造的支持を提供し、及び／又は装置が所望の形状及び／又は容積を維持するよう補助するコイル又はバネ１００４を含む。

【0099】

一部の実施形態において、装置は、調乳の容積内のリパーゼの配置及び除去を容易にするための棒状延長部を含むことができる。例えば、図１１Ａ〜１１Ｃ、１２、１３Ａ〜１３Ｂ、１４及び１５は、棒状延長部を含む装置についての種々の例示的な構成を図示する。示すように、装置１１００，１１００’，１１００”，１２００，１３００，１４００，１５００は、棒状延長部１１０２，１２０２，１３０２，１４０２，１５０２の遠位領域の近くに種々の構成で配置された１つ以上のポケット又は開口部１１０１，１２０１，１３０１，１４０１，１５０１のいずれかを含むことができる。一部の実施形態において、例えば、図１３Ａ〜１３Ｂに示すように、例えば使用時に狭い開口部内への挿入を可能にするために及び／又は貯蔵空間を最小限に抑えるために、ポケット又は開口部１３０１の配向を調節することが可能である。

【0100】

様々な実施形態において、リパーゼは、瓶又はジャーのキャップ又は閉鎖部材の一部に付着され得ることで、キャップ又は閉鎖部材が瓶又はジャーに配置される場合、リパーゼは瓶又はジャー内に収容されている流体に接触することができる。例えば、本明細書に示されている装置のいずれかは、瓶又はジャー内で調乳容器に接触させるために、キャップ又は閉鎖部材の表面に取り付けられてもよい。キャップ又は閉鎖部材１６０２，１７０２，１８０２，１９０２，２００２に付着されたリパーゼを含む装置１６００，１７００，１８００，１９００，２０００の種々の構成が、図１６、１７Ａ〜１７Ｂ、１８、１９、及び２０に図示されている。示すように、リパーゼは、種々の形状又は構成を有するポケット又は開口部１６０１，１７０５，１８０５，１９０１，２００１内に収容され得る。更に、一部の実施形態において、キャップ又は閉鎖部材１９０２、２００２は、容器から流体を挿入又は除去するための開口部１９１０，２０１０を含むことが可能であり、このような開口部１９１０，２０１０は、流体チューブ用のコネクタ、例えばルアー型コネクタを含むことができる。

【0101】

一部の実施形態において、調乳がチューブを通過しているときに（例えば、図１に示すような調乳供給中、又は調乳を１つの容器から別の容器に転移中に）調乳を処理することが望ましい場合もある。図２１は、リパーゼのインライン処理用の別の装置２１００を図示する。装置２１００は、上述のように固定化され得るリパーゼを含有するポケット又は開口部２１０１を含むことができる。更に、ポケット又は開口部２１０１は、リパーゼと調乳との間のより長い接触時間を可能にするために、曲がりくねった又は曲線流路を有してもよい。これに加えて、装置２１００は、調乳の流入又は流出のためのチューブ又は導管への接続を可能にするために、両端で開口部２１１０を含んでもよい。

【0102】

様々な実施形態において、装置はリパーゼが患者によって摂取される調乳に流入することを防止するためにスクリーン又はメッシュとして作動する材料を含んでもよい。例えば、図１９及び図２１に示す装置は、ビーズ又はその他の構造上に固定化されたリパーゼが摂取される調乳に移動することを防止するために、１つ以上のメッシュ又はスクリーン１９０６，２１０６を含むことができる。

【0103】

一部の実施形態において、リパーゼが、更なるステップが開始されるまで調乳と接触しないように、リパーゼは容器の構成部品内又はその上に固定化され得る。例えば、一実施形態において、リパーゼは、キャップ又は閉鎖部材の一部の内部に又はその上に収容されてもよく、このキャップ又は閉鎖部材は、固定化されたリパーゼを容器内に放出するための機構を含むことができる。例えば、リパーゼは、ビーズ又はその他の構造（例えば、図１８の要素１８０５を参照）上又はその内部に収容されることが可能であり、ビーズ又はその他の構造は、キャップに取り付けられ又はキャップ内に収容されていて、必要に応じて、（例えば、キャップを捩ることによって、又はバリア／取り付け機構を取り外すことによって）リパーゼが容器に滴下され得る。同様に、リパーゼは、容器の壁又はその他の構造に付着されても又はこれらに収容され、ビーズ又はその他の材料の上に固定されてもよく、（例えば、リパーゼを容器内に放出するか、又はリパーゼの上を覆うバリアを取り外すことによって）所望の場合にのみ、リパーゼを調乳に接触させることが可能である。

【0104】

図６Ａは、ポリマービーズ上に固定化されたリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）のリパーゼを含有するバイアルの写真である。固定化リパーゼは、図６Ｂ〜Ｄに示した装置などの本発明による装置の容器又はチャンバに添加することができる乾燥顆粒形態で存在する。チャンバの流出端部に、調乳を通過させるのに十分に大きな孔を含有するが、固定化リパーゼをチャンバ内に保持するフィルターを単に提供することによって、調乳がチャンバを通過しチャンバから出ることを許可する一方、固定化リパーゼは、装置のチャンバ内に捕捉されてもよい。あるいは、調乳がチャンバを通過すると同時に調乳がリパーゼに曝されるように、装置の内部チャネル又はチャンバをコーティングすることにより、リパーゼは固定化されてもよい。このような装置内のリパーゼは、リパーゼの安定性及び再利用可能性の増加のために、長期間にわたる連続的供給に使用することが可能である。

【0105】

栄養調合物
本発明の特定の実施形態は、栄養調合物を提供する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、乳児用調乳である。一部の実施形態において、栄養調合物は、医療用栄養調合物である。一部の実施形態において、栄養調合物は、摂取前にリパーゼに曝される。一部の実施形態において、この曝露は、栄養調合物中の少なくともいくつかの脂質の前加水分解を可能にする。したがって、一部の実施形態において、栄養調合物は、「ａｓ−ｆｅｄ、現物としての」調合物すなわち、対象による摂取の直前に構成されるような液体調合物であり、製造業者により販売されている調合物とは組成で異なる。用語「栄養調合物」とは、摂取後の対象の体内の組成物を包含しない。

【0106】

一部の実施形態において、この栄養調合物は、長鎖脂肪酸を含む。一部の実施形態において、この栄養調合物は、ＤＨＡ、ＡＲＡ、及びＥＰＡなどの１種以上のＬＣ−ＰＵＦＡを含む。一部の実施形態において、この栄養調合物は、ＤＨＡを含む。一部の実施形態において、この栄養調合物は、ＡＲＡを含む。一部の実施形態において、この栄養調合物は、ＤＨＡ及びＡＲＡを含む。一部の実施形態において、この栄養調合物は、ＤＨＡ。ＡＲＡ、及びＥＰＡを含む。

【0107】

一部の実施形態において、この栄養調合物中の総長鎖脂肪酸の５％超が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡの５％超が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形で存在する。一部の実施形態において、ＤＨＡの５％超が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、ＡＲＡの５％超が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、ＥＰＡの５％超が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。

【0108】

一部の実施形態において、この栄養調合物中の総長鎖脂肪酸の１０％超、１５％超、２０％超、３０％超、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、９５％超、又は１００％が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡの１０％超、１５％超、２０％超、３０％超、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、９５％超、又は１００％が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、このＤＨＡの１０％超、１５％超、２０％超、３０％超、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、９５％超、又は１００％が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、このＡＲＡの１０％超、１５％超、２０％超、３０％超、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、９５％超、又は１００％が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、このＥＰＡの１０％超、１５％超、２０％超、３０％超、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、９５％超、又は１００％が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、双方のこのＤＨＡ及びＡＲＡの１０％超、１５％超、２０％超、３０％超、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、９５％超、又は１００％が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。特定の実施形態において、双方のこのＤＨＡ及びＡＲＡの９０％超が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。特定の実施形態において、双方のこのＤＨＡ及びＡＲＡの９５％超が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。

【0109】

一部の実施形態において、この栄養調合物中の総長鎖脂肪酸の少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡの少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、このＤＨＡの少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、このＡＲＡの少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、このＥＰＡの少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、双方のこのＤＨＡ及びＡＲＡの少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。特定の実施形態において、双方のこのＤＨＡ及びＡＲＡの少なくとも９０％が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。特定の実施形態において、双方のこのＤＨＡ及びＡＲＡの少なくとも９５％が、モノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。

【0110】

本発明の一部の実施形態において、本発明の栄養調合物のおよそのサービングサイズは、未熟児用調乳については約１００〜１１０ｍＬであり、満期産児用調乳については９０〜１５０ｍＬ（例えば、１４８ｍＬ）であり、経腸栄養については２３０〜５００ｍＬ（例えば、２３５〜２５０ｍＬ）であり、小児用調合物及び成人用調合物については２３０〜２５０ｍＬである。一部の実施形態において、各摂取量は、約１０〜３５ｍｇのＡＲＡ遊離脂肪酸及びモノグリセリド（現在使用可能な早期産児及び満期産児用調乳中のＴＧ−ＡＲＡの完全な加水分解から得られるものとして）若しくは約４０〜５０ｍｇのＡＲＡ遊離脂肪酸又はモノグリセリド（現在使用可能な成人用調合物中のＴＧ−ＡＲＡの完全な加水分解から得られるものとして）を含有する。一部の実施形態において、各摂取量は、約７〜２０ｍｇのＤＨＡ遊離脂肪酸及びモノグリセリド（現在使用可能な早期産児及び満期産児用調乳中のＴＧ−ＤＨＡの完全な加水分解から得られるものとして）若しくは約１０〜４０ｍｇのＤＨＡ遊離脂肪酸又はモノグリセリド（現在使用可能な小児用及び成人用調合物中のＴＧ−ＤＨＡの完全な加水分解から得られるものとして）を含有する。２３０〜２５０ｍＬの成人摂取量は、約１，１００ｍｇのＥＰＡ遊離脂肪酸及びモノグリセリド並びに約２４０ｍｇのＤＨＡ遊離脂肪酸及びモノグリセリド（ＰｒｏＳｕｒｅ（登録商標）などのいくつかの現在使用可能な成人用調合物中のＴＧ−ＥＰＡ及びＴＧ−ＤＨＡの完全な加水分解から得られるものとして）を含有する。しかしながら、本発明の一部の実施形態において、摂取前にＴＧ−ＬＣＰＵＦＡを前加水分解するための能力は、現在使用可能な調合物中よりも高いレベルのＬＣ−ＰＵＦＡを有する調合物が生成されることを可能にする。したがって、一部の実施形態において、ＡＲＡ及び／又はＤＨＡの遊離脂肪酸及び／又はモノグリセリドの量は、現在使用可能な調合物中のＴＧ−ＬＣＰＵＦＡの完全な加水分解から得ることができる量を超える。一部の実施形態において、本発明の栄養調合物の摂取量は、５０〜１００ｍｇのＬＣ−ＰＵＦＡ遊離脂肪酸及び／又はモノグリセリドを含有する。一部の実施形態において、本発明の栄養調合物の摂取量は、１００〜２００ｍｇのＬＣ−ＰＵＦＡ遊離脂肪酸及び／又はモノグリセリドを含有する。一部の実施形態において、本発明の栄養調合物の摂取量は、２００〜３００ｍｇのＬＣ−ＰＵＦＡ遊離脂肪酸及び／又はモノグリセリドを含有する。一部の実施形態において、本発明の栄養調合物の摂取量は、２５０〜５００ｍｇのＬＣ−ＰＵＦＡ遊離脂肪酸及び／又はモノグリセリドを含有する。一部の実施形態において、本発明の栄養調合物の摂取量は、５００〜１０００ｍｇのＬＣ−ＰＵＦＡ遊離脂肪酸及び／又はモノグリセリドを含有する。一部の実施形態において、本発明の栄養調合物の摂取量は、１〜２ｇのＬＣ−ＰＵＦＡ遊離脂肪酸及び／又はモノグリセリドを含有する。一部の実施形態において、本発明の栄養調合物の摂取量は、２〜３ｇのＬＣ−ＰＵＦＡ遊離脂肪酸及び／又はモノグリセリドを含有する。

【0111】

一部の実施形態において、栄養調合物は、脂肪、炭水化物、及びタンパク質（又はアミノ酸）を含む。一部の実施形態において、本発明の乳児用調乳は、脱脂乳、乳糖、植物油（例えば、パームオレイン油、ココナッツ油、ダイズ油、及び高オレイン酸ヒマワリ油）、ホエータンパク質濃縮物、糖類、ＬＣ−ＰＵＦＡ、ビタミン、及び鉱物の１つ、複数又は全てを含む。一部の実施形態において、栄養調合物は、中鎖脂肪酸からなる脂肪及び長鎖脂肪酸からなる脂肪を含む。一部の実施形態において、栄養調合物は、ｎ−６脂肪酸からなる脂肪及びｎ−３脂肪酸からなる脂肪を含む。一部の実施形態において、栄養調合物は、ＬＡ及びＡＬＡを含む。

【0112】

一部の実施形態において、本発明の栄養調合物は、追加のリパーゼを含まない。一部の実施形態において、本発明の装置及び／又は方法は、栄養調合物をリパーゼに曝すために使用されるが、栄養調合物は供給前にリパーゼから離隔されているので、「ａｓ−ｆｅｄ、現物の」栄養調合物は、追加のリパーゼを含まない。追加のリパーゼを含まない栄養調合物とは、例えば、固定化リパーゼが固体支持体から調合物に浸出するために、リパーゼが検出不能であるか、又はリパーゼが非常に低いレベルで存在する調合物を指す。一部の実施形態において、栄養調合物は、０．０２％（ｗ／ｗ）以下のリパーゼ、０．０１％（ｗ／ｗ）以下のリパーゼ、０．００５％（ｗ／ｗ）以下のリパーゼ、０．００２％（ｗ／ｗ）以下のリパーゼ、０．００１％（ｗ／ｗ）以下のリパーゼ、０．０００５％（ｗ／ｗ）以下のリパーゼ、０．０００２％（ｗ／ｗ）以下のリパーゼ、又は０．０００１％（ｗ／ｗ）以下のリパーゼを含む。一部の実施形態において、栄養調合物は、０．０２％（ｗ／ｗ）未満のリパーゼ、０．０１％（ｗ／ｗ）未満のリパーゼ、０．００５％（ｗ／ｗ）未満のリパーゼ、０．００２％（ｗ／ｗ）未満のリパーゼ、０．００１％（ｗ／ｗ）未満のリパーゼ、０．０００５％（ｗ／ｗ）未満のリパーゼ、０．０００２％（ｗ／ｗ）未満のリパーゼ、又は０．０００１％（ｗ／ｗ）未満のリパーゼを含む。

【0113】

一部の実施形態において、この栄養調合物は、リパーゼを含む。一部の実施形態において、このリパーゼは、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）リパーゼ、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）リパーゼ、ブルコルデリア・セパシア（Ｂｕｒｃｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）リパーゼ、及びリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）のリパーゼから選択される。一部の実施形態において、このリパーゼは、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）リパーゼ、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）のリパーゼ、及びリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）のリパーゼから選択される。一部の実施形態において、このリパーゼは、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）のリパーゼである。一部の実施形態において、このリパーゼは、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）のリパーゼである。一部の実施形態において、このリパーゼは、リゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）のリパーゼである。

【0114】

一部の実施形態において、栄養調合物の摂取量は、５，０００単位未満のリパーゼを含有する（これは、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｎｚｙｍｅｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ Ａｓｓａｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ、Ｒ．Ｒｕｙｓｓｅｎ及びＡ．Ｌａｕｗｅｒｓ（編集）、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｇｈｅｎｔ、Ｂｅｌｇｉｕｍ（１９７８年）などの標準オリーブアッセイで評価された単位を使用する）。他の実施形態において、栄養調合物の摂取量は、３，０００単位未満のリパーゼを含有する。一部の実施形態において、栄養調合物の摂取量は、１，０００単位未満のリパーゼを含有する。特定の実施形態において、摂取量当たり５，０００単位未満、３，０００単位未満、又は１，０００単位未満のリパーゼを含有する調合物は、乳児用調乳又は医療用栄養調合物である。

【0115】

一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総脂肪（遊離脂肪酸、モノグリセリド、エステル、又はトリグリセリド形態であっても）のグラム当たり０．０１ｍｇ〜１ｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総脂肪のグラム当たり０．１〜５００ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総脂肪のグラム当たり０．１〜２５０ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総脂肪のグラム当たり０．１〜２００ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総脂肪のグラム当たり０．１〜１５０ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総脂肪のグラム当たり０．１〜１００ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総脂肪のグラム当たり０．１〜５０ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総脂肪のグラム当たり１〜５０ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総脂肪のグラム当たり２５〜７５ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総脂肪のグラム当たり１〜１００ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総脂肪のグラム当たり５０ｍｇ以下のリパーゼを含有する。

【0116】

一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡ（遊離脂肪酸、モノグリセリド、エステル、又はトリグリセリド形態であっても）のミリグラム当たり０．００１〜１０ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．００１〜５ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．００１〜３ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．００１〜１ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．００１〜０．５ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．００１〜０．１ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．００１〜０．０５ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．０１〜０．１ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．０２〜０．０８ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．０４〜０．０６ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．１ｍｇ以下のリパーゼを含有する。

【0117】

一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＤＨＡ（遊離脂肪酸、モノグリセリド、エステル、又はトリグリセリド形態であっても）のミリグラム当たり０．００１〜１０ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＤＨＡのミリグラム当たり０．００１〜５ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＤＨＡのミリグラム当たり０．００１〜３ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＤＨＡのミリグラム当たり０．００１〜１ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＤＨＡのミリグラム当たり０．００１〜０．５ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＤＨＡのミリグラム当たり０．００１〜０．１ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＤＨＡのミリグラム当たり０．００１〜０．０５ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＤＨＡのミリグラム当たり０．０１〜０．１ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＤＨＡのミリグラム当たり０．０２〜０．０８ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＤＨＡのミリグラム当たり０．０４〜０．０６ｍｇのリパーゼを含有する。

【0118】

一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＡＲＡ（遊離脂肪酸、モノグリセリド、エステル、又はトリグリセリド形態であっても）のミリグラム当たり０．００１〜１０ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＡＲＡのミリグラム当たり０．００１〜５ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＡＲＡのミリグラム当たり０．００１〜３ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＡＲＡのミリグラム当たり０．００１〜１ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＡＲＡのミリグラム当たり０．００１〜０．５ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＡＲＡのミリグラム当たり０．００１〜０．１ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＡＲＡのミリグラム当たり０．００１〜０．０５ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＡＲＡのミリグラム当たり０．０１〜０．１ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＡＲＡのミリグラム当たり０．０２〜０．０８ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＡＲＡのミリグラム当たり０．０４〜０．０６ｍｇのリパーゼを含有する。

【0119】

一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＥＰＡ（遊離脂肪酸、モノグリセリド、エステル、又はトリグリセリド形態であっても）のミリグラム当たり０．００１〜１０ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＥＰＡのミリグラム当たり０．００１〜５ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＥＰＡのミリグラム当たり０．００１〜３ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＥＰＡのミリグラム当たり０．００１〜１ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＥＰＡのミリグラム当たり０．００１〜０．５ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＥＰＡのミリグラム当たり０．００１〜０．１ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＥＰＡのミリグラム当たり０．００１〜０．０５ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＥＰＡのミリグラム当たり０．０１〜０．１ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＥＰＡのミリグラム当たり０．０２〜０．０８ｍｇのリパーゼを含有する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、栄養調合物中の総ＥＰＡのミリグラム当たり０．０４〜０．０６ｍｇのリパーゼを含有する。

【0120】

一部の実施形態において、栄養調合物は、本明細書に開示されている方法によって調製される。一部の実施形態において、栄養調合物は、本明細書に開示されている装置を使用して調製される。

【0121】

栄養調合物を調製する方法
様々な実施形態によれば、本開示はまた、栄養調合物を調製する方法を提供する。一部の実施形態において、この栄養調合物は、乳児用調乳である。一部の実施形態において、この栄養調合物は、医療用栄養調合物である。一部の実施形態では、この栄養調合物は成人用の栄養飲料（完全栄養飲料、例えば、ＥＮＳＵＲＥ、ＰＥＤＩＡＳＵＲＥなど）である。

【0122】

一部の実施形態において、栄養調合物を調製する方法は、液体栄養組成物をリパーゼに曝す工程を含む。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、ＬＣ−ＰＩＦＡトリグリセリド又はＬＣ−ＰＵＦＡエステルを含む。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、ＤＨＡ、ＡＲＡ、及びＥＰＡからなる群から選択される１種以上のＬＣ−ＰＵＦＡのトリグリセリド又はエステルを含む。

【0123】

一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）リパーゼ、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）リパーゼ、ブルコルデリア・セパシア（Ｂｕｒｃｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）リパーゼ、及びリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）リパーゼから選択されるリパーゼに曝される。一部の実施形態において、このリパーゼは、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）リパーゼ、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）リパーゼ、及びリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）リパーゼから選択される。一部の実施形態において、このリパーゼは、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）リパーゼである。一部の実施形態において、このリパーゼは、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）リパーゼである。一部の実施形態において、このリパーゼは、リゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）リパーゼである。

【0124】

これら方法に関与する成分は、様々な順序で混合されてもよい。一部の実施形態において、リパーゼは液体栄養組成物に添加され、これによって、液体栄養組成物中の脂質をリパーゼに曝す。一部の実施形態において、液体栄養組成物は、飲用液体を栄養調合物の固体又は粉末形態に添加することにより調製される。一部の実施形態において、リパーゼは、飲用液体の添加前に栄養組成物の固体又は粉末形態中に存在する。他の実施形態において、リパーゼは、液体栄養組成物が調製された後に添加される。一部の実施形態において、このリパーゼ及び栄養組成物の固体又は粉末形態は、同時に飲用液体に添加される。

【0125】

一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、摂取前に、少なくとも１分間、少なくとも２分間、少なくとも３分間、少なくとも５分間、少なくとも８分間、少なくとも１０分間、少なくとも１５分間、少なくとも３０分間、少なくとも４５分間、又は少なくとも６０分間にわたってリパーゼに曝される。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、３０秒間以下、１分間以下、２分間以下、３分間以下、５分間以下、８分間以下、１０分間以下、１５分間以下、３０分間以下、４５分間以下、６０分間以下、２時間以下、４時間以下、６時間以下、１２時間以下、又は２４時間以下にわたってリパーゼに曝される。

【0126】

一部の実施形態において、この方法は、この栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡの少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である栄養調合物を結果として生じる。一部の実施形態において、ＤＨＡの少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、ＡＲＡの少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、ＥＰＡの少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。

【0127】

この使用の目的のために、栄養組成物又は調合物のリパーゼに対する曝露とは、液体栄養組成物又は液体調合物が、溶液中にあるか又は固定化され得るリパーゼに接触状態にある一定時間を指す。この使用の目的のために、リパーゼに対する曝露は、調合物が対象により摂取される時、又は液体調合物をリパーゼが固定化されている固体支持体から分離することによりリパーゼが除去される時に終了する。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに１０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＤＨＡの少なくとも２０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに１０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＡＲＡの少なくとも２０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに１０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡの少なくとも２０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。

【0128】

一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに１０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＤＨＡの少なくとも４０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに１０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＡＲＡの少なくとも４０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに１０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡの少なくとも４０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。

【0129】

一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに１０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＤＨＡの少なくとも５０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに１０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＡＲＡの少なくとも５０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに１０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡの少なくとも５０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。

【0130】

一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに１０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＤＨＡの少なくとも６０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに１０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＡＲＡの少なくとも６０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに１０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡの少なくとも６０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。

【0131】

一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに１０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＤＨＡの少なくとも７０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに１０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＡＲＡの少なくとも７０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに１０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡの少なくとも７０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。

【0132】

一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに２０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＤＨＡの少なくとも２０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに２０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＡＲＡの少なくとも２０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに２０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡの少なくとも２０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。

【0133】

一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに２０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＤＨＡの少なくとも４０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに２０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＡＲＡの少なくとも４０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに２０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡの少なくとも４０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。

【0134】

一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに２０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＤＨＡの少なくとも５０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに２０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＡＲＡの少なくとも５０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに２０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡの少なくとも５０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。

【0135】

一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに２０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＤＨＡの少なくとも８０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに２０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＡＲＡの少なくとも８０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに２０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡの少なくとも８０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。

【0136】

一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに２０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＤＨＡの少なくとも９０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに２０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＡＲＡの少なくとも９０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに２０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡの少なくとも９０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。

【0137】

一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに３０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＤＨＡの少なくとも２０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに３０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＡＲＡの少なくとも２０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに３０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡの少なくとも２０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。

【0138】

一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに３０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＤＨＡの少なくとも４０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに３０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＡＲＡの少なくとも４０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに３０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡの少なくとも４０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。

【0139】

一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに３０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＤＨＡの少なくとも６０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに３０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＡＲＡの少なくとも６０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに３０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡの少なくとも６０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。

【0140】

一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに３０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＤＨＡの少なくとも７０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに３０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＡＲＡの少なくとも７０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに３０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡの少なくとも７０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。

【0141】

一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに３０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＤＨＡの少なくとも８０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに３０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中のＡＲＡの少なくとも８０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。一部の実施形態において、この液体栄養組成物は、リパーゼに３０分間以下で曝され、得られた栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡの少なくとも８０％がモノグリセリド及び／又は遊離脂肪酸の形である。

【0142】

一部の実施形態において、栄養調合物が対象に供給される場合、このリパーゼは栄養調合物中にそのまま留まる。他の実施形態において、このリパーゼは、液体栄養組成物が対象に供給される前に、液体栄養組成物から除去される。一部の実施形態において、このリパーゼは、リパーゼを含んでいる液体栄養組成物をリパーゼに結合する分子に固定化された固体支持体に曝し、これによってリパーゼを固体支持体に結合させ、液体栄養組成物を固体支持体から分離することにより除去される。リパーゼが固体支持体に固定化されているために、液体栄養組成物を固体支持体から分離することは、リパーゼを液体栄養組成物から除去する作用を有する。一部の実施形態において、リパーゼが液体栄養組成物に曝される前に、リパーゼは固体支持体に固定化され、このリパーゼは、液体栄養組成物を固体支持体から分離することにより除去される。一部の実施形態において、このリパーゼは、チャンバの内面の少なくとも一部又はチャンバ内に収納されている固体支持体に固定化され、液体栄養組成物は、チャンバを通過することによりリパーゼに一時的に曝される。一部の実施形態において、チャンバはカラムである。一部の実施形態において、液体栄養組成物は、固体支持体に固定化されたリパーゼを含有する容器に対して曝され、この容器の内面の少なくとも一部は、トリグリセリド及びエステルに対しては透過性であるが、固体支持体に対し不透過性である材料からなる。

【0143】

一部の実施形態において、この方法は、追加のリパーゼを含まない栄養調合物を産生する。一部の実施形態において、栄養調合物はリパーゼに曝されるが、この栄養調合物は、供給の前にリパーゼから分離されることで、ａｓ−ｆｅｄ（現物の）栄養調合物は、追加のリパーゼを含むことはない。追加のリパーゼを含まない（又は含有しない）栄養調合物は、例えば、固定化されたリパーゼが固体支持体から調合物に浸出するために、リパーゼが検出不能であるか又は非常に低いレベルでのみ存在する調合物を指す。一部の実施形態において、栄養調合物は、０．０２％（ｗ／ｗ）以下のリパーゼ、０．０１％（ｗ／ｗ）以下のリパーゼ、０．００５％（ｗ／ｗ）以下のリパーゼ、０．００２％（ｗ／ｗ）以下のリパーゼ、０．００１％（ｗ／ｗ）以下のリパーゼ、０．０００５％（ｗ／ｗ）以下のリパーゼ、０．０００２％（ｗ／ｗ）以下のリパーゼ、又は０．０００１％（ｗ／ｗ）以下のリパーゼを含む。一部の実施形態において、栄養調合物は、０．０２％（ｗ／ｗ）未満のリパーゼ、０．０１％（ｗ／ｗ）未満のリパーゼ、０．００５％（ｗ／ｗ）未満のリパーゼ、０．００２％（ｗ／ｗ）未満のリパーゼ、０．００１％（ｗ／ｗ）未満のリパーゼ、０．０００５％（ｗ／ｗ）未満のリパーゼ、０．０００２％（ｗ／ｗ）未満のリパーゼ、又は０．０００１％（ｗ／ｗ）未満のリパーゼを含む。

【0144】

一部の実施形態において、この方法は、摂取量当たり５，０００単位未満のリパーゼ（これは、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｎｚｙｍｅｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ Ａｓｓａｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ、Ｒ．Ｒｕｙｓｓｅｎ及びＡ．Ｌａｕｗｅｒｓ（編集）、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｇｈｅｎｔ、Ｂｅｌｇｉｕｍ（１９７８年）などの標準オリーブアッセイで評価された単位で）に栄養調合物を曝す工程を含む。他の実施形態において、栄養調合物は、摂取量当たり３，０００単位未満のリパーゼに曝される。一部の実施形態において、栄養調合物は、摂取量当たり１，０００単位未満のリパーゼに曝される。特定の実施形態において、摂取量当たり５，０００単位未満、３，０００単位未満、又は１，０００単位未満のリパーゼに曝された調合物は、乳児用調乳又は医療用栄養調合物である。

【0145】

一部の実施形態において、本発明の方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総脂肪（遊離脂肪酸、モノグリセリド、エステル、又はトリグリセリド形態であっても）のグラム当たり０．０１ｍｇ〜１ｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、本発明の方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総脂肪のグラム当たり０．１〜５００ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、本発明の方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総脂肪のグラム当たり０．１〜２５０ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、本発明の方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総脂肪のグラム当たり０．１〜２００ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、本発明の方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総脂肪のグラム当たり０．１〜１５０ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、本発明の方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総脂肪のグラム当たり０．１〜１００ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、本発明の方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総脂肪のグラム当たり０．１〜５０ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、本発明の方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総脂肪のグラム当たり１〜５０ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、本発明の方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総脂肪のグラム当たり２５〜７５ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、本発明の方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総脂肪のグラム当たり１〜１００ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、本発明の方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総脂肪のグラム当たり５０ｍｇ以下のリパーゼに曝す。

【0146】

一部の実施形態において、この方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡ（遊離脂肪酸、モノグリセリド、エステル、又はトリグリセリド形態であっても）のミリグラム当たり０．００１〜１０ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、この方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．００１〜５ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、この方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．００１〜３ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、この方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．００１〜１ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、この方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．００１〜０．５ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、この方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．００１〜０．１ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、この方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．００１〜０．０５ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、この方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．０１〜０．１ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、この方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．０２〜０．０８ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、この方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．０４〜０．０６ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、この方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総ＬＣ−ＰＵＦＡのミリグラム当たり０．１ｍｇ以下のリパーゼに曝す。

【0147】

一部の実施形態において、この方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総ＤＨＡ（遊離脂肪酸、モノグリセリド、エステル、又はトリグリセリド形態であっても）のミリグラム当たり０．００１〜１０ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、この方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総ＤＨＡのミリグラム当たり０．００１〜５ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、この方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総ＤＨＡのミリグラム当たり０．００１〜３ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、この方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総ＤＨＡのミリグラム当たり０．００１〜１ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、この方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総ＤＨＡのミリグラム当たり０．００１〜０．５ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、この方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総ＤＨＡのミリグラム当たり０．００１〜０．１ｍｇのリパーゼを曝す。一部の実施形態において、この方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総ＤＨＡのミリグラム当たり０．００１〜０．０５ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、この方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総ＤＨＡのミリグラム当たり０．０１〜０．１ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、この方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総ＤＨＡのミリグラム当たり０．０２〜０．０８ｍｇのリパーゼに曝す。一部の実施形態において、この方法は、栄養調合物を、栄養調合物中の総ＤＨＡのミリグラム当たり０．０４〜０．０６ｍｇのリパーゼに曝す。

【0148】

一部の実施形態において、栄養調合物を調製する方法は、液体栄養組成物を本明細書に記載されている装置に曝す工程を含む。

【実施例】

【0149】

実施例１：ＤＨＡ及びＡＲＡに対するリパーゼの特異的活性
様々なリパーゼのＤＨＡ及び／又はＡＲＡトリグリセリドに及ぼす酵素活性を評価するために、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝液、ｐＨ７．７及び基質ＤＨＡ又はＡＲＡトリグリセリドを含有する（磁気撹拌棒が備わった）２ｍＬのガラスバイアルにおいて実験を行った。リパーゼ溶液を添加することにより、反応を開始させた。リパーゼは、以下の市販供給源から得た：リゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）（Ａｍａｎｏ ＤＦ−１５、天野エンザイム株式会社、名古屋、日本）、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）（ＥＭＤ ＣａｌＢｉｏｃｈｅｍ、ＥＭＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）、及びシュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）（Ａｍａｎｏ ＡＫ、天野エンザイム株式会社、名古屋、日本）。その他のリパーゼもまた、カンジダ・ルゴーサ（Ｃａｎｄｉｄａ ｒｕｇｏｓａ）（Ａｍａｎｏ ＡＹ ３０又はＡｍａｎｏ ３０、天野エンザイム株式会社、名古屋、日本）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）（Ａｍａｎｏ ＤＳ、天野エンザイム株式会社、名古屋、日本）、ペニシリウム・カメムベルチ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃａｍｅｍｂｅｒｔｉｉ）（Ａｍａｎｏ ５０、天野エンザイム株式会社、名古屋、日本）、リゾムコール・ミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ）（Ｌ４２７７、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｉｓ ｏｒｙｚａｅ）（６２２８５、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、及びブルコルデリア・セパシア（Ｂｕｒｃｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）（５３４６４１、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）など、市販供給源から入手可能である。リパーゼ溶液は、Ｂ．ｃｅｐａｃｉａリパーゼを精製して均一なものとした以外は、更なる精製を行うことなく、これら市販のリパーゼから調製した。

【0150】

バイアルを、磁気撹拌器上に配置した３７℃の水浴に移した。５０μｌの試料を異なる時間間隔、０、１５、３０、４５、６０、９０、及び１２０分に採取し、９５０μｌの移動緩衝液（３０％の１０ｍＭリン酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ３．０及び７０％のアセトニトリル）を含有するＨＰＬＣバイアルに加えた。次いで試料を、Ａｇｉｌｅｎｔ ＨＰＬＣ １１００シリーズ及びＣ８ ＲＰカラムを使用し、２１５及び２２０ｎｍでモニタリングして、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）によって、ＤＨＡ遊離酸又はＡＲＡ遊離酸のいずれかについて分析した。市販の標準物質：ＤＨＡトリグリセリド（Ｎｕ−ｃｈｅｃｋ Ｐｒｅｐ、Ｉｎｃ．ロット番号Ｔ−３１０−Ｄ７−Ｖ）、ＡＲＡトリグリセリド（Ｎｕ−ｃｈｅｃｋ Ｐｒｅｐ，Ｉｎｃ．ロット番号Ｔ−２９５−ＪＹ１４−Ｖ）、ＤＨＡ遊離酸型（Ｎｕ−ｃｈｅｃｋ Ｐｒｅｐ、Ｉｎｃ．ロット番号Ｕ−８４Ａ−ＡＵ２０−Ｕ）、及びＡＲＡ遊離酸型（Ｎｕ−ｃｈｅｃｋ Ｐｒｅｐ，Ｉｎｃ．ロット番号Ｕ−７１Ａ−Ｎ１１−Ｕ）を使用して、保持時間により遊離酸ピークを特定した。このアッセイにおけるリパーゼのパネルのＤＨＡ及びＡＲＡに対する特異的活性を表１に概説する。本発明者の見解では、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）（ＣＶ）、ブルコルデリア・セパシア（Ｂｕｒｃｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）（ＢＣ）、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）（ＰＦ）、及びリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）（ＲＯ）は、カンジダ・ルゴーサ（Ｃａｎｄｉｄａ ｒｕｇｏｓａ）（ＣＲ）を含む試験されたその他のリパーゼと比べて、ＤＨＡ及び／又はＡＲＡに対して実質的により高い特異的活性を有した。

【表1】

【0151】

実施例２：乳児用調乳中のＤＨＡ、ＡＲＡ、及びＥＰＡに対するクロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）及びリゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）のリパーゼの酵素活性
乳児用調乳に補充される場合のＤＨＡ、ＡＲＡ、及びＥＰＡに及ぼすＣＶ及びＲＯリパーゼの酵素活性を評価するために、牛乳を主成分とする乳児用調乳を、３５ｍＬの水に１０ｇのＥＮＦＡＭＩＬ（登録商標）末を溶解することにより調製した。基質ＥＰＡを含有する乳児用調乳、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝液、ｐＨ７．７、並びに２．７ｍｇの基質ＤＨＡ（Ｎｕ−ｃｈｅｃｋ Ｐｒｅｐ，Ｉｎｃ．ロット番号Ｔ−３１０−Ｄ７−Ｖ）及び５．４ｍｇのＡＲＡ（Ｎｕ−ｃｈｅｃｋ Ｐｒｅｐ，Ｉｎｃ．ロット番号Ｔ−２９５）を１ｍＬのガラスバイアル（磁気撹拌棒を含む）に加えた。酵素（すなわち、リパーゼ）を加えることで反応を開始させ、各酵素の４つの濃度を試験した。バイアルを、磁気撹拌器上に配置した３７℃の水浴に移した。各試料の５０μｌを異なる時点、０、１０、２０、３０、４５、及び６０分で採取し、９５０μｌのＨＰＣＬ移動緩衝液（３０％の１０ｍＭリン酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ３．０及び７０％のアセトニトリル）を含有するＨＰＬＣバイアルに加えた。次いで、上記の通りにＰＲ−ＨＰＬＣにより、試料をＤＨＡ酸、ＡＲＡ酸、又はＥＰＡ酸のいずれかについて分析した。

【0152】

総トリグリコシドのパーセントは、遊離酸及びモノグリセリドの量が増加するにつれて経時的に減少した。例えば、ＲＯで加水分解された場合、ＤＨＡ遊離酸の量は、時間と共に増加した（図７）。同様に、ＲＯで加水分解された場合、ＡＲＡ遊離酸の量は、時間と共に増加した（図８）。

【0153】

このアッセイにおける各々のリパーゼの特異的活性を、乳児用調乳中で放出された遊離ＤＨＡ酸、ＡＲＡ酸、又はＥＰＡ酸の量に基づいて計算し、表２に示す。

【表2】

【0154】

実施例３：ＤＨＡトリグリセリド及びＡＲＡトリグリセリドスケールアップの加水分解
乳児用調乳を補充するために使用することができる量までスケールアップされる場合、リパーゼを、ＴＧ−ＤＨＡ及びＴＧ−ＡＲＡを加水分解するためのそれらの能力について評価した。乳児用調乳（ミルク）を、水道水（熱水、温度は３７℃であった）６４８ｍＬ中に１６２ｇのＥｎｆａｍｉｌ末を溶解することにより調製した。ＤＨＡトリグリセリド（４４２ｍｇ、ＤＨＡの最終濃度は０．５４ｇ、総脂肪の１．２％）及びＡＲＡトリグリセリド（８８５ｍｇ、ＡＲＡの最終濃度は１．０８ｇ、総脂肪の２．４％）を実施例２と同一の供給源から正確に秤量し、水を加える前に乳児用調乳末と混合した。反応は、一定の撹拌状態で、水浴中で行った。ＣＶ又はＲＯリパーゼのいずれかを添加することにより、脂肪加水分解を開始させた。調乳試料を０、１５、及び３０分で取り出し、上記記載の通りに、ＲＰ−ＨＰＬＣによりＤＨＡ及びＡＲＡの加水分解について分析を行った。結果を以下の表３に示す。

【表3】

【0155】

実施例４：乳児用調乳及び緩衝液中のＴＧ−ＤＨＡ又はＴＧ−ＡＲＡに及ぼす固定化リゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）リパーゼの酵素活性
乳児用調乳に補充される場合、ＴＧ−ＤＨＡ又はＴＧ−ＡＲＡに及ぼす固定化ＲＯリパーゼの酵素活性を評価するために、牛乳を主成分とする乳児用調乳を、３５ｍＬの水に１０ｇのＥＮＦＡＭＩＬ（登録商標）末を溶解することにより調製した。反応を次の通りに行った。０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝液、ｐＨ７．７、及び基質（ＴＧ−ＤＨＡ又はＴＧ−ＡＲＡ）を１ｍＬのガラスバイアル（磁気撹拌棒を具備した）に添加した。リパーゼを添加することによって反応を開始した。バイアルを磁気撹拌器上に配置した３７℃の水浴に移した。各試料５０μｌを、０、１０、２０、及び３０分の異なる時点で採取し、９００μｌのＨＰＬＣ移動緩衝液（３０％の１０ｍＭリン酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ３．０及び７０％のアセトニトリル）を含有するＨＰＬＣバイアルに加えた。次いで試料を、上記記載の通りにＲＰ−ＨＰＬＣにより、ＤＨＡ酸又はＡＲＡ酸のいずれかについて分析した。

【0156】

ＴＧ−ＤＨＡ及びＴＧ−ＡＲＡの加水分解についてのリパーゼの特異的活性を、乳児用調乳内で放出された遊離ＤＨＡ酸又はＡＲＡ酸の量に基づいて計算し、その結果を表４に示す。

【表4】

【0157】

実施例５：動物及び手術手順
５．１ 動物
スウェーデン農業大学（Ｓｗｅｄｉｓｈ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ａｎｄ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙのＯｄａｒｓｌｏｖにおいて大学が飼育したブタで、それぞれ約１０±２ｋｇの体重のものから得た１２匹のブタ（９＋３）で、実験を行った。動物を、０６．００〜１８．００（６ａｍ〜６ｐｍ）の時間帯で明るくし、１８．００〜０６．００（６ｐｍ〜６ａｍ）の時間帯で暗くした状態で、１２時間の昼夜サイクルで維持した。ブタを、乾燥試料トラフ、飲用乳首及び一定の加熱ランプ（１５０Ｗ）を備えた代謝ケージ又は個別の畜舎に個々に収容した。ブタは畜舎内で自由に移動させ、互いに視認できるようにさせた。

【0158】

５．２ 飼料
手術後及び前処置期間中に、ブタには、５０００ＩＥ／ｋｇのビタミンＡ、５００ＩＥ／ｋｇのビタミンＤ、及び８５ｍｇ／ｋｇのビタミンＥと共に、１７．５％の粗タンパク質、３．９％の粗繊維、３．５％の粗脂肪、及び５．２％の灰分を含有する標準ブタ用飼料（「５３９０８ Ｖａｘｔｉｌｌ ３２０ Ｐ ＢＫ」、Ｌａｎｔｍａｎｎｅｎ、スウェーデン）を与えた。ブタには、０９：００〜１０：００の時間帯（９ａｍ〜１０ａｍ）及び１７：００〜１８：００の時間帯（５ｐｍ〜６ｐｍ）に、一日２回飼料を与えた（食餌ごとに体重の２．０％）。実験を開始する前の数日間、すなわち適応期間中に、ブタを乳児用調乳（ＮＡＮ Ｐｒｏ １ Ｇｏｌｄ Ｉｎｆａｎｔ Ｆｏｒｍｕｌａ、Ｎｅｓｔｌｅ）を消費するよう訓練した。ブタは大量の液体を飲むことを好まないために、調乳は、適切な消費を可能にするために製造元により推奨されるような１：７の希釈に代えて、水道水で１：４の希釈として調製した。一日の栄養必要量は４００ｋＬ／ｋｇ体重であり、これは４０ｇの調乳末／ｋｇ体重に相当する。一日分の飼料を４つの部分に分け、第１番目の食餌を９ａｍに開始し、その後３時間ごとに与え、最後の食餌を６ａｍに与えた。１００ｇのＮＡＮ調乳は、約２７．７％の脂肪、９．６％のタンパク質、及び５７．８％の炭水化物を含有する。

【0159】

５．３ ＤＨＡ及びＡＲＡトリグリセリドで強化された乳児用調乳
製造元によると、ＮＡＮ Ｐｒｏ １ Ｇｏｌｄ（Ｎｅｓｔｌｅ）は、栄養学的に完全であり、出生から健康な乳児用に特別に調合されている上質の乳漿優位型授乳開始乳児用調乳である。これは、脳及び視覚の発達を支援するために魚油も含有する。（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｅｓｔｌｅｂａｂｙ．ｃｏｍ／ａｕ／ｂａｂｙ＿ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｉｎｆａｎｔ＿ｆｏｒｍｕｌａ／）
ＮＡＮ Ｐｒｏ １ Ｇｏｌｄの成分：乳固形分、植物油（ダイズを含有する）、鉱物（クエン酸カルシウム、クエン酸カリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸亜鉛、リン酸カルシウム、硫酸銅、硫酸マンガン、ヨウ化カリウム、セレン酸ナトリウム）、オメガＬＣＰＵＦＡ（魚油から得たＤＨＡ、ＡＡ）、乳化剤（ダイズレシチン）、ビタミン類［アスコルビン酸ナトリウム（ｖｉｔ Ｃ）、ｄ−ｌアルファトコフェリル酢酸（ｖｉｔ Ｅ）、ナイアシンアミド（ナイアシン）、パントテン酸カルシウム、レチニル酢酸（ｖｉｔ Ａ）、チアミン硝酸塩（ｖｉｔ Ｂ１）、ピリドキシン塩酸塩（ｖｉｔ Ｂ６）、リボフラビン（ｖｉｔ Ｂ２）、葉酸、フィロキノン（ｖｉｔ Ｋ１）、ビオチン、コレカルシフェロール（ｖｉｔ Ｄ３）］、シアノコバラミン（Ｂ１２）、Ｌ−ヒスチジン、タウリン、イノシトール、ヌクレオチド（シチジン５’−一リン酸、ウリジン５’−一リン酸、アデノシン５’−一リン酸、グアノシン５’−一リン酸）、Ｌ−カルニチン、培養物（ビフィダス）。
以下の表５は、これら実験における使用のための乳児用調乳及びブタ用調乳と共に、母乳及び乳児用調乳^＊の脂質組成を概説する。

【表5】

ＮＡＮ調乳中のＴＧ−ＤＨＡ及びＴＧ−ＡＡの全濃度は０．２２％であり、これは１％の推奨レベルより低い。したがって、ＮＡＮ調乳を、魚油から得たＴＧ−ＤＨＡ及びＴＧ−ＡＡで強化し（ＮｕＣｈｅｃｋ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｕ−ｃｈｅｋｐｒｅｐ．ｃｏｍ、〜４０％のＴＧ−ＤＨＡ及びＴＧ−ＡＲＡ）、それぞれ１％のＴＧ−ＤＨＡ及び２％のＴＧ−ＤＨＡの最終濃度に到達させた。

【0160】

５．４ 膵外分泌機能不全（ＥＰＩ）の誘発のための膵管結紮術
６〜８週齢の１２＋２匹の幼若ブタでＥＰＩ誘発手術を行った。ＥＰＩは、一般的には術後３〜４週間で十分に発症する。完全な膵機能不全の発症を、成長停止（最小限の体重増加又は体重増加なし）及び／又は脂肪便の発症によって確認した。

【0161】

実施例６：実験計画、手順
６．１ 試験計画
試験は３つの期間：適応、対照、及び試験を包含した。７日間の適応期間中に、ブタは、ＴＧ−ＤＨＡ及びＴＧ−ＡＲＡで強化された乳児用調乳を飲むよう訓練された。７日間の対照期間中には、ブタはＴＧ−ＤＨＡ及びＴＧ−ＡＲＡで強化された乳児用調乳を与えられ続けた。７日間の試験期間には、ブタは、（ａ）加水分解されていない、（ｂ）ＣＶリパーゼで前加水分解された、又は（ｃ）ＲＯリパーゼで前加水分解された、のいずれかのＴＧ−ＤＨＡ及びＴＧ−ＡＲＡで強化された乳児用調乳を与えられた。調乳消費を毎日測定し、糞便試料を各試験期間の最後の３日間採集し（７２時間の採集）、血液試料を対照及び試験期間の７日目に採集した。

【0162】

６．２ リパーゼ投与量
リパーゼの用量及び前加水分解時間を、インビトロの結果（実施例３）及びブタの１日の栄養必要量に基づいて決定した。リパーゼＲＯ又はＣＶ（〜１３００Ｕ／ｇの総脂肪）と混合したＮＡＮ調乳を３７℃で１５分間振蕩しながらインキュベートした。
提案された調合調製物及びリパーゼ混合物：
−１１〜１４ｋｇの範囲のブタの体重
−飼料必要量：４０ｇの調乳末／ｋｇ体重
−一日必要量：５００ｇの粉末／ブタ
−一日当たり４回の食餌
−１２５ｇの粉末／ブタ／食餌
食餌の調製：５００ｇの粉末＋１．５Ｌの水（１：４の希釈）
−初めに乾燥末を加える
−ＴＧ−ＰＵＦＡ油（７．５ｍＬのＤＨＡ及び１５ｍＬのＡＲＡ）を加え、十分に混合し、３７℃の水浴から水道水を加え、十分に混合する。
−リパーゼ処理調乳については、ＣＶ又はＲＯリパーゼ中で混合する
−水を加え、最終容量にする
−全てを３７℃の水浴中で１５分間混合する
−４つのバケツに分け、約６００ｍＬの調乳を各ブタに与える

【0163】

６．２．１ 適応期間（７〜１０日間）
適応期間前の約７〜１０日間、ブタ１２匹を代謝ケージ内に配置し、ＴＧ−ＰＵＦＡで富化された調乳を飲むよう訓練した。適応期間の最初の朝に、朝の食餌前に体重を記録した。

【0164】

６．２．２ 対照期間（７日間）
全ての選択されたブタに、乳児用調乳を、一日当たり４回、単一の食餌供給源として与えた。毎日の調乳消費の合計を、全実験中に測定した。対照期間の最初の日の朝に、朝の食餌前に体重を記録した。３×２４時間の大便試料を、５日目〜７日目に採集した。血液試料を、この期間の最後の日に、食前１時間、食後１、２、及び３時間にて採集した。

【0165】

６．２．３ 試験期間（７日間）
全ての選択されたブタに、ＴＧ−ＰＵＦＡ富化乳児用調乳を、一日当たり４回、単一の食餌供給源として与えた。毎日の調乳消費の合計を、全実験中に測定した。試験期間の最初の日の朝に、朝の食餌前に体重を記録した。３×２４時間の大便試料を、５日目〜７日目に採集した。血液試料を、この期間の最後の日に、食前１時間、食後１、２、及び３時間にて採集した。

【0166】

この期間の開始前に、体重及び調乳を飲もうとする意欲に基づいて、ブタを以下の３つの群に無作為割り付けした。
１）ＥＰＩブタの３分の１（ｎ＝４）にＲＯリパーゼで前加水分解した調乳を与えた
２）ＥＰＩブタの３分の１（ｎ＝４）にＣＶリパーゼで前加水分解した調乳を与えた
３）ＥＰＩブタの３分の１（ｎ＝４）に調乳のみを与えた
調乳及びリパーゼ混合物の調製は、上記段落[００２０１]（[０１５７]）に記載した。

【0167】

６．３ 陽性反応の基準
２％のＴＧ−ＡＲＡ及び１％のＴＧ−ＡＡで補充された調乳のみを与えられたＥＰＩブタと比較する場合、糞便中のＬＣＰＵＦＡの著しい減少、脂肪吸収係数（％ＣＦＡ）の増加、及び血漿ＬＣＰＵＦＡの濃度の増加が認められた。
６．４データ分析

【0168】

個々のデータは、これらが発生した時点で記録した。スチューデントのｔ−検定を使用して、統計分析を行った。差は、ｐ＜０．０５の場合、有意であるとみなされた。

【0169】

実施例７：ＲＯ及びＣＶリパーゼは、ＥＰＩブタにおいて脂肪酸吸収を改善する
十分に確立された外科的モデルである膵外分泌機能不全（ＥＰＩ）を有するブタを、膵外分泌機能に欠陥がある、ヒトの早期産児又は満期産児を模倣するモデルとして使用した。ＥＰＩ外科的ブタモデルを本質的に実施例５及び実施例６に記載されている通りに使用して、非加水分解乳児用調乳と比較した時のＣＶリパーゼ又はＲＯリパーゼで前加水分解された乳児用調乳の脂肪酸吸収に及ぼす作用を評価した。ＥＰＩブタは１０週齢（＋／−２週）であり、これは、ヒトの乳児の生後約６ヶ月に相当する。ブタに、魚油（ＮｕＣｈｅｃｋ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｕ−ｃｈｅｋｐｒｅｐ．ｃｏｍ、〜４０％のＴＧ−ＤＨＡ及びＴＧ−ＡＲＡ）から得た２％のＡＲＡトリグリセリド（ＴＧ−ＡＲＡ）及び１％のＤＨＡトリグリセリド（ＴＧ−ＤＨＡ）で富化されたＮｅｓｔｌｅ（ＮＡＮ Ｐｒｏ １ Ｇｏｌｄ）調乳を与えた。食餌供給は、一日当たり４回、３時間ごとに行った。前加水分解された調乳を受容するブタの群において、調乳を、ＣＶリパーゼ又はＲＯリパーゼと３７℃で混合することにより、供給前１５分に前加水分解した。実験の持続時間は１週間であり、その後、糞便中のＬＣ−ＰＵＦＡ濃度、血漿のＬＣ−ＰＵＦＡの吸収、及び組織（網膜、心臓、肝臓、腎臓、赤血球、脳、及び脂肪）中のＬＣ−ＰＵＦＡの集積を分析した。

【0170】

図２２Ａに示すように、ＣＶリパーゼ又はＲＯリパーゼで前加水分解された調乳を与えられたＥＰＩブタは、大便重量が有意に減少した（ＣＶ：＞６０％の減少、ｐ＜０．００１；ＲＯ：〜３０％の減少、ｐ＜０．０５）。ＣＶリパーゼ又はＲＯリパーゼによる脂肪の前加水分解はまた、対照ＥＰＩブタと比較して糞便中の総脂肪含量を有意に低下し（図２２Ｂ）、対照と比較して脂肪吸収係数（％ＣＦＡ）を有意に増加させ（図２２Ｃ）、ここで、％ＣＦＡ＝（脂肪摂取量（ｇ／２４時間）−糞便中の脂肪（ｇ／２４時間））／（脂肪摂取量（ｇ／２４時間））、ｎ＝３／群、ｐ＝０．００２（ＣＶ対対照）、及びｐ＝０．００３（ＲＯ対対照）である。対照と比較するとき、ＣＶリパーゼ又はＲＯリパーゼのいずれかによる前加水分解は、糞便中のＡＲＡ（それぞれ３６％及び６５％の減少）、ＥＰＡ（いずれの酵素でも７８％の減少）、及びＤＨＡ（それぞれ６８％及び６０％の減少）の有意な減少を引き起こした（図２３）。これらデータは、ＣＶ又はＲＯリパーゼによる調乳の前加水分解が、総脂肪、ＡＲＡ、ＤＨＡ、及びＥＰＡの糞便中のレベルを減少させ、これがω−３、ω−６、及び総脂肪酸の吸収における改善を示唆していることを示す。

【0171】

加えて、前加水分解された調乳を与えられたブタは、対照ブタと比較して、７日間の供給後にＡＲＡ及びＤＨＡの血漿及び組織レベルの有意な増加を有した。これら試験について、対照及びＣＶリパーゼ群は４匹のブタからなり、ＲＯリパーゼ群は３匹のブタからなった。食餌前の血漿飼料は、処置から７日後、一晩の絶食の後に採取した。ＡＲＡ及びＤＨＡの血漿レベルは、非加水分解調乳を与えられたブタと比較して、ＲＯリパーゼで前加水分解された調乳を与えられたブタで有意に高かった（それぞれ６０％及び３０％、ｐ＜０．０５）（図２４）。ＡＲＡの血漿レベルもまた、非加水分解調乳を与えられたブタと比較して、ＣＶリパーゼで前加水分解された調乳を与えられたブタで有意に高かった（４０％、ｐ＜０．０５）（図２４）。ＡＲＡ及びＤＨＡレベルは、非加水分解調乳を与えられたブタと比較して、ＲＯリパーゼで前加水分解された調乳を与えられたブタの網膜（図２５Ａ）及び脂肪組織（図２５Ｂ）でも有意に増加した（ｐ＜０．０５）。ＡＲＡの網膜レベルは、非加水分解調乳を与えられたブタと比較して、ＣＶリパーゼで前加水分解された調乳を与えられたブタでも有意に高かった（ｐ＜０．０５）（図２５Ａ）。ＣＶ又はＲＯリパーゼで前加水分解された調乳を与えられたブタにおいて、ＡＲＡレベルは、非加水分解調乳を与えられたブタと比較して、ブタの心臓（図２６Ａ、それぞれ６０％及び２０％の増加）及び腎臓（図２６Ｂ）でも有意に増加した（ｐ＜０．０５）。ＤＨＡレベルは、皮加水分解調乳を与えられたブタと比較して、ＣＶリパーゼで前加水分解された調乳を与えられたブタの心臓で有意に増加した（６０％、ｐ＜０．０５）（図２６Ａ）。肝臓、赤血球、及び脳では最小限の変化があったか、又は変化がなく、これは、この試験の処置の比較的短い持続時間（７日間）によって説明することが可能である。

【0172】

実施例８：「ティーバッグ」中の固定化リパーゼによる乳児用調乳中のＴＧ−ＤＨＡ及びＴＧ−ＡＲＡの加水分解
リゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）（ＲＯ）リパーゼをアクリルビーズに共有結合させ、ティーバッグに似た器具内に収容した。Ｅｎｆａｌａｃ乳児用調乳（２５ｇ）を３７℃で水道水（８８ｍＬ）と合わせた。１００ｍＬの乳児用調乳及び１００、５００、１０００、又は２０００ｍｇの固定化ＲＯリパーゼを含有するティーバッグを含むガラス瓶内で反応を行った。各反応物を、瓶を倒置しながら３７℃で３０分間インキュベートした。試料を０、１、２、３、４、５、１０、２０、及び３０分の時点で採取した。逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）により、試料をＤＨＡ及びＡＲＡについて分析した。

【0173】

固定化ＲＯリパーゼの各濃度において、ＤＨＡ及びＡＲＡの加水分解率は、固定化ＲＯリパーゼの量が増加するにつれて増加した（図２７）。これらデータは、調乳をリパーゼで前加水分解するためのティーバッグ器具の実用可能性を裏付けている。

【0174】

実施例９：カートリッジ内の固定化リパーゼによる乳児調乳中のＴＧ−ＤＨＡ及びＴＧ−ＡＲＡの加水分解
リゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）（ＲＯ）リパーゼ及びクロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓｕｍ）（ＣＶ）リパーゼを、マクロ多孔質アクリルポリマービーズ（Ｉｍｍｏｂｅａｄｓ（商標）；ＣｈｉｒａｌＶｉｓｉｏｎ）に固定化した。ビーズの１グラム当たり約２００ｍｇのＲＯリパーゼを使用した。ＣＶリパーゼコーティングビーズの試料を照射し（ＣＶＩ）、固定化リパーゼの効力に及ぼす照射の効果を決定した。約１．７ｇの各ビーズ調製物（ＲＯ、ＣＶ、及びＣＶＩ）を約５ｍＬの床容積を有するカラムに充填した。ＤＨＡ及びＡＲＡトリグリセリドを含有する乳児用調乳を、７５ｍＬ／時の流速でカラム上を通過させた。カラム溶出物を、ＨＰＬＣによりＤＨＡ及びＡＲＡの加水分解について分析した。ＣＶ、ＣＶＩ、及びＲＯリパーゼによるＤＨＡ及びＡＲＡトリグリセリドの加水分解％を表６に示す。

【表6】

【0175】

実施例１０：ＲＯリパーゼ対パンクレアチン
リゾプス・オリゼー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）（ＲＯ）リパーゼは、膵臓リパーゼ、プロテアーゼ、及びアミラーゼの混合物を含有するブタパンクレアチン（Ｚｅｎｐｅｐ（登録商標））よりもＤＨＡ及びＡＲＡトリグリセリドに対する大きな活性を示した。１．４ｍＬの乳児用調乳を、１００ｕＬのリパーゼ（パンクレアチン又はＲＯリパーゼのいずれか）及び１００ｕＬのＤＨＡ及びＡＲＡの各々のトリグリセリドと混合した。反応物を３７℃で１５分間インキュベートした。試料を０、１、２、４、６、８、１０、及び１５分の時点で採取し、ＤＨＡ及びＡＲＡについてＲＰ−ＨＰＬＣで分析した。ＤＨＡ（図２８Ａ）及びＡＲＡ（図２８Ｂ）トリグリセリドは、ＲＯリパーゼで経時的に加水分解されたが、パンクレアチンによって加水分解されなかった。

【0176】

実施例１１：６週間試験：固定化リパーゼにより前加水分解された調乳によるブタの長期栄養供給
６匹の健常なブタ及び外科的に誘発された膵外分泌機能不全（ＥＰＩ）を有する２０匹のブタ（実施例５を参照）に、２週間の適応／対照期間、その後の６週間の試験期間を受けさせた（図２９）。適応期間中には、全てのブタに、ＮＡＮ Ｐｒｏ １ Ｇｏｌｄ乳児用調乳（Ｎｅｓｔｌｅ）を与えた（「ＩＦ」）。試験期間中には、健康なブタ（「Ｈｅａｌｔｙ」）及びＥＰＩを有するブタ（「ＥＰＩ」）の６匹に、ＴＧ−ＬＣＰＵＦＡで強化された乳児用調乳を与え（実施例５及び実施例６を参照）、ＥＰＩを有するブタの７匹に、「ティーバッグ」器具を使用して固定化ＲＯ酵素で前加水分解されているＴＧ−ＬＣＰＵＦＡ強化乳児用調乳を与えた（「ＥＰＩ＋ｉＲＯ」）。残りのブタは、様々な理由、例えば完全なＥＰＩを外科的に誘発することの失敗のために、試験から外された。

【0177】

前加水分解については、２リットルのＮＡＮ Ｐｒｏ １ Ｇｏｌｄ（Ｎｅｓｔｌｅ）乳児用調乳を、３７℃の水１．５リットルを５０ｍｇ／ｋｇのＴＧ−ＤＨＡ及び１００ｍｇ／ｋｇのＴＧ−ＡＲＡで強化された粉末調乳５００ｇと混合することにより調製した（実施例５、セクション５．３を参照）。ビーズ上に固定化されたＲＯリパーゼを含有する５つのティーバッグ様器具（各「ティーバッグ」中に１グラムの固定化リパーゼを含有する）を、２リットルの調乳に加え、磁気撹拌器を一定混合速度で使用して、室温で１５分間混合した。これは、強化調乳中の総脂肪（６０Ｕ／ｇの総脂肪）の１５０グラム当たり９，０００単位（オリーブ油に対して測定された）の固定化ＲＯリパーゼに相当する。加水分解の前に、強化調乳は１７．４ミリモル／リットルの非エステル化脂肪酸を含有した。加水分解後には、この調乳は、１０７．６ミリモル／リットルの非エステル化脂肪酸を含有した。

【0178】

食餌消費を毎日測定した。血液及び大便試料を、適応期間の終わり（「基底」）、処置期間の１、４、及び６週間後に採集した。基底試料については、糞便を４８時間にわたって（２×２４時間）採集した。１、４、及び６週の試料については、糞便を７２時間にわたって（３×２４時間）採集した。処置期間の完了時に、吸収及び安全性試験用に器官及び組織を採集した。

【0179】

前加水分解調乳は、食餌摂取、成長、器官（肉眼的検査による）、又は一般的な健康状態において投与による変化がなく耐用性は良好であった。ブタを６週間試験の終わりに屠殺したとき、肉眼による肝臓検査により脂肪肝の発症はなかった。

【0180】

６週間後に、前加水分解されていないＴＧ−ＬＣＰＵＦＡ強化調乳を与えられたＥＰＩブタ（ＥＰＩ）と比べたとき、前加水分解調乳を与えられたＥＰＩブタ（ＥＰＩ＋ｉＲＯ）において、赤血球中のＡＲＡ（図３０Ａ）及びＤＨＡレベル（図３０Ｂ）で統計的に有意な増加が存在した（それぞれ２０％及び３６％）。ＡＲＡ及びＤＨＡの赤血球レベルは、健常なブタと前加水分解調乳を６週間与えられたＥＰＩブタの間で有意差は認められなかった。

【0181】

表７に示すように、前加水分解調乳を６週間与えられたＥＰＩブタにおいて、トリグリセリド、コレステロール、ＨＤＬ、及びＬＤＬの血漿レベルで統計的に有意な増加が存在した。トリグリセリド、コレステロール、ＨＤＬ、及びＬＤＬの血漿レベルは、健常なブタと６週間にわたって前加水分解調乳を与えられたＥＰＩブタとの間で有意な差は認められなかった。

【表7】

【0182】

表８に示すように、前加水分解調乳を６週間にわたって与えられたブタは、ビタミンＡ及びビタミンＥの血漿レベルを増加させたが、ビタミンＤについては、有意差は認められなかった。ＥＰＩとＥＰＩ＋ｉＲＯ群との間でビタミンＥの血漿レベルにおいて統計的な有意な差が存在した（ｐ＜０．０５）。ビタミンＡについては、ＥＰＩと健常群との間で統計的に有意な差が存在したが（ｐ＜０．０５）、ＥＰＩ＋ｉＲＯと健常群との間では存在しなかった。

【表8】

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4A】

【図4B】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図7】

【図8】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【図12】

【図13A】

【図13B】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17A】

【図17B】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】