特許 6774619 高分子量ポリオキシエチレン誘導体のマトリクス支援レーザー脱離質量分析法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6774619

(24)【登録日】2020年10月7日

(45)【発行日】2020年10月28日

(54)【発明の名称】高分子量ポリオキシエチレン誘導体のマトリクス支援レーザー脱離質量分析法

(51)【国際特許分類】

   G01N 27/62 20060101AFI20201019BHJP

【ＦＩ】

   G01N27/62 V

   G01N27/62 F

【請求項の数】6

【全頁数】19

(21)【出願番号】特願2016-65358(P2016-65358)

(22)【出願日】2016年3月29日

(65)【公開番号】特開2016-194513(P2016-194513A)

(43)【公開日】2016年11月17日

【審査請求日】2019年3月11日

(31)【優先権主張番号】特願2015-71739(P2015-71739)

(32)【優先日】2015年3月31日

(33)【優先権主張国】JP

(73)【特許権者】

【識別番号】000004341

【氏名又は名称】日油株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100097490

【弁理士】

【氏名又は名称】細田 益稔

(74)【代理人】

【識別番号】100097504

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 純雄

(72)【発明者】

【氏名】神谷 昌樹

(72)【発明者】

【氏名】松木 亮太

【審査官】 吉田 将志

(56)【参考文献】

【文献】 特開２０１４−０７１０７５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１１／０１９８８２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 MIGUEL et al.，Poly(γ-benzyl-L-glutamate)-PEG-alendronate multivalent nanoparticles for bone targeting，International Journal of Pharmaceutics，２０１４年 １月，Vol.460/Iss.1-2，PP.73-82

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｇ０１Ｎ ２７／６２−７４

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

分子量４００００以上のポリエチレングリコール誘導体とマトリクスとを含む混合物にレーザー光を照射することで、前記ポリエチレングリコール誘導体を前記マトリクスとともに気化させて分子量を測定するマトリクス支援レーザー脱離質量分析法であって、
前記ポリエチレングリコール誘導体が式（１）および式（２）で表され、
前記マトリクスとして１−オクタノール／水分配係数（ｌｏｇＰｏｗ）が４．１〜４．８の低極性マトリクスを用いることを特徴とする方法。

【化1】

（上記式（１）および上記式（２）において、
Ｚは２〜８個の水酸基を持つ化合物から、すべての水酸基を除いた残基であり、
ＯＡ^１、ＯＡ^２、ＯＡ^３はオキシエチレン基であり、
ａ、ｂ、ｃは０〜５０００であり、
Ｌ^１、Ｌ^２、Ｌ^３は、それぞれ独立して、エステル結合、ウレタン結合、アミド結合、ウレア結合、エーテル結合、チオエーテル結合をアルキレン鎖中又は末端に有していてもよいアルキレン基であり、Ｌ^１、Ｌ^２、Ｌ^３は一分子中で互いに同一又は異なっていてよく、
ｐ、ｑ、ｒは、それぞれ独立して、０または１であり、
ｓ、ｔは、それぞれ独立して、０〜８であり、
Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３は、それぞれ独立して、アルコキシ基、または生理活性物質と特異的に反応する活性基を示し、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３は一分子中で互いに同一又は異なっている。）

【請求項2】

前記ポリエチレングリコール誘導体の分子量が６００００以上であることを特徴とする、請求項１記載の方法。

【請求項3】

前記マトリクスがｔｒａｎｓー２−［３−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−２−メチルー２−プロペニリデン］マロノニトリルであることを特徴とする、請求項１または２記載の方法。

【請求項4】

分子量４００００以上のポリエチレングリコール誘導体およびマトリクス支援レーザー脱離質量分析法に用いるマトリクスを含む組成物であって、
前記マトリックスが１−オクタノール／水分配係数（ｌｏｇＰｏｗ）が４．１〜４．８の低極性マトリクスであり、
前記ポリエチレングリコール誘導体が式（１）および式（２）で表され、
前記マトリクスとして１−オクタノール／水分配係数（ｌｏｇＰｏｗ）が４．１〜４．８の低極性マトリクスを用いることを特徴とする組成物。

【化1】

（上記式（１）および上記式（２）において、
Ｚは２〜８個の水酸基を持つ化合物から、すべての水酸基を除いた残基であり、
ＯＡ^１、ＯＡ^２、ＯＡ^３はオキシエチレン基であり、
ａ、ｂ、ｃは０〜５０００であり、
Ｌ^１、Ｌ^２、Ｌ^３は、それぞれ独立して、エステル結合、ウレタン結合、アミド結合、ウレア結合、エーテル結合、チオエーテル結合をアルキレン鎖中又は末端に有していてもよいアルキレン基であり、Ｌ^１、Ｌ^２、Ｌ^３は一分子中で互いに同一又は異なっていてよく、
ｐ、ｑ、ｒは、それぞれ独立して、０または１であり、
ｓ、ｔは、それぞれ独立して、０〜８であり、
Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３は、それぞれ独立して、アルコキシ基、または生理活性物質と特異的に反応する活性基を示し、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３は一分子中で互いに同一又は異なっている。）

【請求項5】

前記ポリエチレングリコール誘導体の分子量が６００００以上であることを特徴とする、請求項４記載の組成物。

【請求項6】

前記マトリクスがｔｒａｎｓー２−［３−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−２−メチルー２−プロペニリデン］マロノニトリルであることを特徴とする、請求項４または５記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、高分子量ポリエチレングリコール誘導体のマトリクス支援レーザー脱離（以下、ＭＡＬＤＩと称する）質量分析法に関する。

【背景技術】

【0002】

ＭＡＬＤＩ質量分析法は、マトリクスとポリマーを混合したものにレーザー光を照射することで、ポリマーをマトリクスとともに気化、イオン化し、ポリマーの分子量を測定する分析法である。ＭＡＬＤＩ質量分析法におけるマトリクスの役割として、レーザー光のエネルギーをポリマーに伝えイオン化することが挙げられる。そのため、マトリクスとポリマーの親和性は重要である。親和性の目安として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの高極性ポリマーの測定にはα―シアノー４−ヒドロキシ桂皮酸（ＣＨＣＡ）や２，５−ジヒドロキシ安息香酸（ＤＨＢ）などの高極性マトリクスを使用することが推奨されている。また、ポリスチレン（ＰＳ）などの低極性ポリマーの測定には、ジスラノールやレチノイン酸（ＲＡ）などの低極性マトリクスを使用することが推奨されている（非特許文献１、２）。更に、分子量１００００のポリエチレングリコールにおけるＭＡＬＤＩ質量分析では、高極性マトリクスであるＣＨＣＡが最良であることが示されている（非特許文献３）。

【0003】

一方で、高分子量のポリマーはＭＡＬＤＩ質量分析での測定が困難であることが一般的に知られている。分子量の増加に伴いイオン化が困難になることから、照射するレーザー強度を強くする必要があるが、レーザー照射によるポリマー分子の分解が起こりやすくなるためである。そのためポリエチレングリコールを例としてあげると、測定結果が報告されているのは分子量２５０００以下のものしかない（非特許文献２）。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0004】

【非特許文献1】ケミカル・レビューズ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ）、２００１年、ｖｏｌ．１０１、ｐ．５２７−５６９

【非特許文献2】マススペクトロメトリ・レビューズ（Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ）、１９９９年、ｖｏｌ．１８、ｐ．３０９−３４４

【非特許文献3】アナリティカル・ケミストリー（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、２００４年、ｖｏｌ．７６、ｐ．５１５７−５１６４

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

以上述べたように、高分子量ポリエチレングリコール誘導体の分子量は、ＭＡＬＤＩ質量分析での測定が困難である。また、特に、分岐型構造を有するポリマーは、レーザー照射による分解が顕著に見られ、シグナル強度が十分でない場合が多い。このため、高分子量ポリエチレングリコール誘導体の分子量をＭＡＬＤＩ質量分析で測定できるようにすることが望まれる。

【0006】

本発明の課題は、高分子量ポリエチレングリコール誘導体のＭＡＬＤＩ質量分析法において、従来よりも強度の高いシグナルが得られるようにすることである。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明は以下のものである。
（１） 分子量４００００以上のポリエチレングリコール誘導体とマトリクスとを含む混合物にレーザー光を照射することで、前記ポリエチレングリコール誘導体を前記マトリクスとともに気化させて分子量を測定するマトリクス支援レーザー脱離質量分析法であって、
前記マトリクスとして１−オクタノール／水分配係数（ｌｏｇＰｏｗ）が４．１〜４．８の低極性マトリクスを用いることを特徴とする方法。
（２） 前記ポリエチレングリコール誘導体の分子量が６００００以上であることを特徴とする、（１）の方法。
（３） 前記マトリクスがｔｒａｎｓー２−［３−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−２−メチルー２−プロペニリデン］マロノニトリルであることを特徴とする、（１）または（２）の方法。
（４） 分子量４００００以上のポリエチレングリコール誘導体のマトリクス支援レーザー脱離質量分析法に用いるマトリクスであって、１−オクタノール／水分配係数（ｌｏｇＰｏｗ）が４．１〜４．８の低極性マトリクス。
（５） 前記ポリエチレングリコール誘導体の分子量が６００００以上であることを特徴とする、（４）のマトリクス。

【発明の効果】

【0008】

本発明者は、高極性ポリマーであるポリエチレングリコール誘導体の分子量をＭＡＬＤＩ質量分析法によって測定するのに際して、ポリエチレングリコール誘導体が４００００以上という高分子量の場合には、上述のような低極性マトリクスを用いることで、ポリマーの分解を抑制し、十分なシグナル強度が得られることを見いだし、本発明に到達した。

【0009】

本発明のＭＡＬＤＩ質量分析法を用いることで、高分子量のポリエチレングリコール誘導体の分解を抑制し、高いシグナル強度を得られ、開発や品質管理に好適に用いることができるため工業的に極めて有用である。

【0010】

なお、本発明以前には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの高極性ポリマーの測定には、α―シアノー４−ヒドロキシ桂皮酸（ＣＨＣＡ）や２，５−ジヒドロキシ安息香酸（ＤＨＢ）などの高極性マトリクスが推奨されており、高極性マトリクスを用いたほうが良好な分析結果が得られると報告されている。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1】実施例１で得られたマススペクトルを示すチャートである。

【図2】比較例１−１で得られたマススペクトルを示すチャートである。

【図3】比較例１−２で得られたマススペクトルを示すチャートである。

【図4】実施例２で得られたマススペクトルを示すチャートである。

【図5】比較例２−１で得られたマススペクトルを示すチャートである。

【図6】比較例２−２で得られたマススペクトルを示すチャートである。

【図7】実施例３で得られたマススペクトルを示すチャートである。

【図8】比較例３−１で得られたマススペクトルを示すチャートである。

【図9】比較例３−２で得られたマススペクトルを示すチャートである。

【図10】実施例４で得られたマススペクトルを示すチャートである。

【図11】比較例４−１で得られたマススペクトルを示すチャートである。

【図12】比較例４−２で得られたマススペクトルを示すチャートである。

【図13】実施例５で得られたマススペクトルを示すチャートである。

【図14】比較例５−１で得られたマススペクトルを示すチャートである。

【図15】比較例５−２で得られたマススペクトルを示すチャートである。

【図16】実施例６で得られたマススペクトルを示すチャートである。

【図17】比較例６−１で得られたマススペクトルを示すチャートである。

【図18】比較例６−２で得られたマススペクトルを示すチャートである。

【発明を実施するための形態】

【0012】

以下に本発明について詳しく説明する。
本発明の分析対象となるポリエチレングリコール誘導体は、直鎖状でも分岐状でも良い。本発明の分析方法では、従来のＭＡＬＤＩ質量分析法とは異なり、特に分岐構造を有するポリエチレングリコール誘導体であっても分解を抑制し、分子量を測定することができることから、分岐状で２以上のポリエチレングリコール鎖を有することが好ましい。ポリエチレングリコール鎖の数の上限は特にないが、例えば、最大８本のポリエチレングリコール鎖を有する場合でも分析可能である。より典型的には、ポリエチレングリコール誘導体のポリエチレングリコール鎖数が２、３、４、６あるいは８本である。

【0013】

ポリエチレングリコール誘導体の分子量は４００００以上である。また、ポリエチレングリコール誘導体の分子量は、６００００以上とすることもできる。また、ポリエチレングリコール誘導体の分子量は、１００００００以下が好ましく、２０００００以下が更に好ましい。本発明は、従来の高極性マトリクスを用いた測定方法とは異なり、高分子量でも高い精度で分析することが可能である。

【0014】

分子量が４００００以上のポリエチレングリコール誘導体の場合、先行技術文献の記載とは反対に、高極性マトリクスを用いた場合にはシグナル強度が小さくなった。

【0015】

本発明の分析対象となるポリエチレングリコール誘導体は、式（１）および（２）で表される。

【化1】

【0016】

ここで、Ｚは２〜８個の水酸基を持つ化合物から、すべての水酸基を除いた残基である。
ＯＡ^１、ＯＡ^２、ＯＡ^３はオキシエチレン基であり、ａ、ｂ、ｃは０〜５０００（好ましくは０〜３０００、更に好ましくは０〜１０００）である。
Ｌ^１、Ｌ^２、Ｌ^３は、それぞれ独立して、エステル結合、ウレタン結合、アミド結合、ウレア結合、エーテル結合、チオエーテル結合をアルキレン鎖中又は末端に有していてもよいアルキレン基である。Ｌ^１、Ｌ^２、Ｌ^３は一分子中で互いに同一又は異なっている。
ｐ、ｑ、ｒは、それぞれ独立して、０または１である。
ｓ、ｔは、それぞれ独立して、０〜８（特に好ましくは２、３、４、６、８）である。
Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３は、それぞれ独立して、水酸基、メトキシ基、t-ブトキシ基、ベンジロキシ基等のアルコキシ基、またはタンパク質やポリペプチド、薬物などの生理活性物質と特異的に反応する活性基を示す。Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３は一分子中で互いに同一又は異なっている。

【0017】

こうした活性基として、具体的には、アルデヒド基、アセタール基、ニトロフェニルカーボネート基、スクシンイミジルカーボネート基、スクシンイミジルエステル、メルカプト基、マレイミド基、アルケニル基、アルキニル基、アジド基、アミノ基、カルボキシル基などが挙げられ、好ましくはアルデヒド基、ニトロフェニルカーボネート基、スクシンイミジルカーボネート基、スクシンイミジルエステル、メルカプト基、マレイミド基、アルキニル基、アジド基、アミノ基、カルボキシル基が挙げられる。

【0018】

本発明において用いることができるＭＡＬＤＩ質量分析用低極性マトリクスは、１−オクタノール／水分配係数が４．１〜４．８(より好ましくは４．３〜４．８)の低極性マトリクスである。マトリクスの１−オクタノール／水分配係数は、ＯＥＣＤテストガイドライン１１７記載の高速液体クロマトグラフィー法にて測定した数値である。

【0019】

本発明で用いる低極性マトリクスとしては、炭素、水素、窒素の３元素より構成される芳香族化合物を用いることができ、特に好ましくはｔｒａｎｓー２−［３−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−２−メチルー２−プロペニリデン］マロノニトリルが挙げられる。

【0020】

ポリエチレングリコール誘導体とＭＡＬＤＩ質量分析用マトリクスの比率については、特に限定されないが、ポリエチレングリコール誘導体：ＭＡＬＤＩ質量分析用マトリックス＝１：１００（モル比）から１：１００００００（モル比）が好ましく、１：５００（モル比）から１：１０００００（モル比）がさらに好ましい。

【0021】

本発明の分析用試料の調製方法において、ＭＡＬＤＩ質量分析用マトリクス、ポリエチレングリコール誘導体を含む液を作製するために用いることができる溶剤としては、ＭＡＬＤＩ質量分析用マトリクスとポリエチレングリコール誘導体を溶解させることのできるものが望ましい。具体的には、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ヘキサフルオロイソプロピルアルコール、アセトン、メチルエチルケトン、アセトニトリル、酢酸エチル、塩化メチレン、クロロホルム、四塩化炭素等を挙げることができる。また、これらの溶剤は、単独でも、あるいは２種以上混合して用いることもできる。これらのＭＡＬＤＩ質量分析用マトリクスあるいはポリエチレングリコール誘導体を溶剤に溶解させたときの濃度は、１〜１００ｍｇ／ｍＬが好ましい。

【0022】

ＭＡＬＤＩ質量分析用マトリクスには、イオン化剤を含有させることができる。イオン化剤としては、具体的には、トリフルオロ酢酸ナトリウムやトリフルオロ酢酸銀、硝酸銅、塩化ナトリウム、塩化カリウム等の金属塩やアンモニウム塩、有機塩等を挙げることができる。
含有させるイオン化剤とＭＡＬＤＩ質量分析用マトリクスの比率については、イオン化剤：ＭＡＬＤＩ質量分析用マトリクス＝１：１（モル比）から１：１００００（モル比）が好ましく、１：１０（モル比）から１：５０００（モル比）がさらに好ましい。

【0023】

イオン化剤を溶剤に溶解させた後に、ＭＡＬＤＩ質量分析用マトリクスと混合させることもでき、その場合、溶剤に溶解させた時のイオン化剤の濃度は、０．１〜１００ｍｇ／ｍＬ程度が好ましい。

【0024】

このようにして本発明の分析用試料の調製方法により調製したＭＡＬＤＩ質量分析用試料は、レーザー強度を弱くしても高いシグナル強度を与えるので、本発明の分析用試料の調製方法により調製されたＭＡＬＤＩ質量分析用試料を用いて行うＭＡＬＤＩ質量分析方法は、ポリマーの分解を抑制し、正確な分子量を測定できることから、ポリエチレングリコール誘導体の品質管理に好適に用いることができる。

【実施例】

【0025】

以下、実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。
（実施例１）
ｔｒａｎｓー２−［３−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−２−メチルー２−プロペニリデン］マロノニトリル（サンタクルーズ社製、純度９９％以上：１−オクタノール／水分配係数４．６）をＭＡＬＤＩ質量分析用マトリクスとし、分岐型ポリエチレングリコール誘導体ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ＧＬ２−６００ＨＯ（日油製、分子量６００００、化合物１）を試料とし、これにトリフルオロ酢酸ナトリウムをイオン化剤として用いた。ＭＡＬＤＩ質量分析用マトリクスのテトラヒドロフラン溶液（濃度２０ｍｇ／ｍＬ）、分岐型ポリエチレングリコール誘導体のテトラヒドロフラン溶液（濃度６０ｍｇ／ｍＬ）、トリフルオロ酢酸ナトリウム（イオン化剤）のテトラヒドロフラン溶液（濃度２ｍｇ／ｍＬ）を１００：１：２（容量比）で混合した。

【0026】

ＭＡＬＤＩ質量分析用マトリクス、分岐型ポリエチレングリコール誘導体、イオン化剤混合溶液をＭＡＬＤＩ質量分析用ターゲット上にマイクロピペットで１μＬ滴下し、乾燥させた後、そのターゲットをブルカー・ダルトニクス社製ＡｕｔｏＦｌｅｘＩＩＩ型ＭＡＬＤＩ質量分析装置内に挿入した。その後、加速電圧２０．０ｋＶ、レーザー強度を適宜調整し、レーザーショット２５００回積算の正イオン化モードにて測定を行った。シグナル強度の評価は、得られたマススペクトルにおけるピークトップのシグナル強度を用いることとした。
実施例１のＭＡＬＤＩ質量分析用試料の調製方法を用いた場合のシグナル強度は１０３８９カウントであった。実施例１で得られたマススペクトルチャートを図１に示す。

【0027】

【化2】

【0028】

（比較例１−１）
マトリクスとしてα―シアノー４−ヒドロキシ桂皮酸（ＣＨＣＡ：(１−オクタノール／水分配係数０．９)を用いた以外は、実施例１と同一の条件で測定および評価を行った。比較例１−１のＭＡＬＤＩ質量分析用試料の調製方法を用いた場合のシグナル強度は、９７８カウントであった。比較例１−１で得られたマススペクトルチャートを図２に示す。

【0029】

（比較例１−２）
マトリクスとして２，５−ジヒドロキシ安息香酸（ＤＨＢ：(１−オクタノール／水分配係数０．６)を用いた以外は、実施例１と同一の条件で測定および評価を行った。比較例１−２のＭＡＬＤＩ質量分析用試料の調製方法を用いた場合、シグナルは検出されなかった。比較例１−２で得られたマススペクトルチャートを図３に示す。

【0030】

【表1】

【0031】

（実施例２）
ポリエチレングリコール誘導体としてＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ＧＬ４−８００ＨＯ（日油製、分子量８００００、化合物２）の８０ｍｇ／ｍＬテトラヒドロフラン溶液を用いた以外は、実施例１と同一の条件で測定および評価を行った。実施例２のＭＡＬＤＩ質量分析用試料の調製方法を用いた場合のシグナル強度は２３，７３４カウントであった。実施例２で得られたマススペクトルチャートを図４に示す。

【0032】

【化3】

【0033】

（比較例２−１）
マトリクスとしてＣＨＣＡを用いた以外は、実施例２と同一の条件で測定および評価を行った。比較例２−１のＭＡＬＤＩ質量分析用試料の調製方法を用いた場合のシグナル強度は２，００５カウントであった。比較例２−１で得られたマススペクトルチャートを図５に示す。

【0034】

（比較例２−２）
マトリクスとしてＤＨＢを用いた以外は、実施例２と同一の条件で測定および評価を行った。比較例２−２のＭＡＬＤＩ質量分析用試料の調製方法を用いた場合、シグナルは検出されなかった。比較例２−２で得られたマススペクトルチャートを図６に示す。

【0035】

【表2】

【0036】

（実施例３）
ポリエチレングリコール誘導体としてＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ＭＥＨ−４０Ｔ（日油製、分子量４００００、化合物４）の４０ｍｇ／ｍＬテトラヒドロフラン溶液を用いた以外は、実施例１と同一の条件で測定および評価を行った。実施例３のＭＡＬＤＩ質量分析用試料の調製方法を用いた場合のシグナル強度は１，３９０カウントであった。実施例３で得られたマススペクトルチャートを図７に示す。

【0037】

【化4】

【0038】

（比較例３−１）
マトリクスとしてＣＨＣＡを用いた以外は、実施例３と同一の条件で測定および評価を行った。比較例３−１のＭＡＬＤＩ質量分析用試料の調製方法を用いた場合のシグナル強度は３９カウントであった。比較例３−１で得られたマススペクトルチャートを図８に示す。

【0039】

（比較例３−２）
マトリクスとしてＤＨＢを用いた以外は、実施例３と同一の条件で測定および評価を行った。比較例３−２のＭＡＬＤＩ質量分析用試料の調製方法を用いた場合、シグナルは検出されなかった。比較例３−２で得られたマススペクトルチャートを図９に示す。

【0040】

【表3】

【0041】

（実施例４）
ポリエチレングリコール誘導体としてＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ＭＥ−４００ＧＳ（日油製、分子量４００００、化合物５）の４０ｍｇ／ｍＬテトラヒドロフラン溶液を用いた以外は、実施例１と同一の条件で測定および評価を行った。実施例４のＭＡＬＤＩ質量分析用試料の調製方法を用いた場合のシグナル強度は１，９７１カウントであった。実施例４で得られたマススペクトルチャートを図１０に示す。

【0042】

【化5】

【0043】

（比較例４−１）
マトリクスとしてＣＨＣＡを用いた以外は、実施例４と同一の条件で測定および評価を行った。比較例４−１のＭＡＬＤＩ質量分析用試料の調製方法を用いた場合のシグナル強度は３９カウントであった。比較例４−１で得られたマススペクトルチャートを図１１に示す。

【0044】

（比較例４−２）
マトリクスとしてＤＨＢを用いた以外は、実施例４と同一の条件で測定および評価を行った。比較例４−２のＭＡＬＤＩ質量分析用試料の調製方法を用いた場合、シグナルは検出されなかった。比較例４−２で得られたマススペクトルチャートを図１２に示す。

【0045】

【表4】

【0046】

（実施例５）
ポリエチレングリコール誘導体としてＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ＧＬ２−４００ＨＯ（日油製、分子量４００００、化合物６）の４０ｍｇ／ｍＬテトラヒドロフラン溶液を用いた以外は、実施例１と同一の条件で測定および評価を行った。実施例５のＭＡＬＤＩ質量分析用試料の調製方法を用いた場合のシグナル強度は４，４６９カウントであった。実施例５で得られたマススペクトルチャートを図１３に示す。

【0047】

【化6】

【0048】

（比較例５−１）
マトリクスとしてＣＨＣＡを用いた以外は、実施例５と同一の条件で測定および評価を行った。比較例５−１のＭＡＬＤＩ質量分析用試料の調製方法を用いた場合のシグナル強度は８５カウントであった。比較例５−１で得られたマススペクトルチャートを図１４に示す。

【0049】

（比較例５−２）
マトリクスとしてＤＨＢを用いた以外は、実施例５と同一の条件で測定および評価を行った。比較例５−２のＭＡＬＤＩ質量分析用試料の調製方法を用いた場合、シグナルは検出されなかった。比較例５−２で得られたマススペクトルチャートを図１５に示す。

【0050】

【表5】

【0051】

（実施例６）
ポリエチレングリコール誘導体としてＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ＰＴＥ−４００００（日油製、分子量４００００、化合物７）の４０ｍｇ／ｍＬテトラヒドロフラン溶液を用いた以外は、実施例１と同一の条件で測定および評価を行った。実施例６のＭＡＬＤＩ質量分析用試料の調製方法を用いた場合のシグナル強度は１０，１３８カウントであった。実施例６で得られたマススペクトルチャートを図１６に示す。

【0052】

【化7】

【0053】

（比較例６−１）
マトリクスとしてＣＨＣＡを用いた以外は、実施例６と同一の条件で測定および評価を行った。比較例６−１のＭＡＬＤＩ質量分析用試料の調製方法を用いた場合のシグナル強度は５６４カウントであった。比較例６−１で得られたマススペクトルチャートを図１７に示す。

【0054】

（比較例６−２）
マトリクスとしてＤＨＢを用いた以外は、実施例６と同一の条件で測定および評価を行った。比較例６−２のＭＡＬＤＩ質量分析用試料の調製方法を用いた場合、シグナルは検出されなかった。比較例６−２で得られたマススペクトルチャートを図１８に示す。

【0055】

【表6】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】