特許 6790189 ＨＳＶ−２のためのワクチン

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6790189

(24)【登録日】2020年11月6日

(45)【発行日】2020年11月25日

(54)【発明の名称】ＨＳＶ−２のためのワクチン

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/245 20060101AFI20201116BHJP

   A61K 39/39 20060101ALI20201116BHJP

   A61K 9/107 20060101ALI20201116BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20201116BHJP

   A61P 31/22 20060101ALI20201116BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20201116BHJP

   C07K 14/035 20060101ALN20201116BHJP

   C12N 15/38 20060101ALN20201116BHJP

【ＦＩ】

   A61K39/245ZNA

   A61K39/39

   A61K9/107

   A61K9/08

   A61P31/22

   A61P37/04

   !C07K14/035

   !C12N15/38

【請求項の数】10

【外国語出願】

【全頁数】73

(21)【出願番号】特願2019-133412(P2019-133412)

(22)【出願日】2019年7月19日

(62)【分割の表示】特願2018-19053(P2018-19053)の分割

【原出願日】2013年5月16日

(65)【公開番号】特開2019-194255(P2019-194255A)

(43)【公開日】2019年11月7日

【審査請求日】2019年7月19日

(31)【優先権主張番号】61/714,158

(32)【優先日】2012年10月15日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】61/679,387

(32)【優先日】2012年8月3日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】61/647,764

(32)【優先日】2012年5月16日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】514247791

【氏名又は名称】イミューン デザイン コーポレイション

(74)【代理人】

【識別番号】100114188

【弁理士】

【氏名又は名称】小野 誠

(74)【代理人】

【識別番号】100119253

【弁理士】

【氏名又は名称】金山 賢教

(74)【代理人】

【識別番号】100124855

【弁理士】

【氏名又は名称】坪倉 道明

(74)【代理人】

【識別番号】100129713

【弁理士】

【氏名又は名称】重森 一輝

(74)【代理人】

【識別番号】100137213

【弁理士】

【氏名又は名称】安藤 健司

(74)【代理人】

【識別番号】100143823

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 英彦

(74)【代理人】

【識別番号】100183519

【弁理士】

【氏名又は名称】櫻田 芳恵

(74)【代理人】

【識別番号】100196483

【弁理士】

【氏名又は名称】川嵜 洋祐

(74)【代理人】

【識別番号】100203035

【弁理士】

【氏名又は名称】五味渕 琢也

(74)【代理人】

【識別番号】100185959

【弁理士】

【氏名又は名称】今藤 敏和

(74)【代理人】

【識別番号】100160749

【弁理士】

【氏名又は名称】飯野 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100160255

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 祐輔

(74)【代理人】

【識別番号】100202267

【弁理士】

【氏名又は名称】森山 正浩

(74)【代理人】

【識別番号】100146318

【弁理士】

【氏名又は名称】岩瀬 吉和

(74)【代理人】

【識別番号】100127812

【弁理士】

【氏名又は名称】城山 康文

(72)【発明者】

【氏名】トーマス ダブリュー． ドゥベンスキー ジュニア

(72)【発明者】

【氏名】ナンシー エー． ホスケン

(72)【発明者】

【氏名】スコット エイチ． ロビンス

(72)【発明者】

【氏名】マーガレット ディー． ムーア

【審査官】 伊藤 基章

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１０／１３５７４７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 BOWMAN, B.R. et al.，EMBO J.，２００３年，Vol.22, No.4，pp.757-765

【文献】 RHEA N. COLER，PLOS ONE，２０１０年 １月 １日，Vol. 5, No. 10，e13677（pp.1-11）

【文献】 POSAVAD, C.M. et al.，J. Immunol.，２０１０年，Vol.184，pp.3250-3259

【文献】 LAING, K.J. et al.，Clin. Exp. Immunol.，２０１１年，Vol.167，pp.47-58

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３９／００

Ａ６１Ｋ ９／００

Ｃ０７Ｋ １４／００

Ｃ１２Ｎ １５／００

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

ＰｕｂＭｅｄ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

免疫原性薬学的組成物であって、
（ａ）（ｉ） 配列番号４のアミノ酸１〜４５０のうちの少なくとも７５％が欠けており、配列番号４の１０５５〜１３７４のアミノ酸のうちの少なくとも７５％が欠けている、ＵＬ１９ポリペプチドの免疫原性断片であるＨＳＶ−２ポリペプチドの免疫原性断片、または前記免疫原性断片の配列の全長にわたり少なくとも８５％のアミノ酸同一性を保持する、その免疫原性変異体；
（ｉｉ）ＨＳＶ−２ ＵＬ２５タンパク質またはその免疫原性断片；および
（ｉｉｉ）ＨＳＶ−２ ｇＤ２タンパク質またはその免疫原性断片と、
（ｂ） モノホスホリル脂質Ａアジュバントと、
（ｃ） 薬学的に許容される担体と、を含み、
ここで、ＵＬ１９ポリペプチドの免疫原性断片は、異種ペプチドに融合されている、免疫原性薬学的組成物。

【請求項2】

異種ペプチドが、タグまたはマーカー配列である、請求項１に記載の免疫原性薬学的組成物。

【請求項3】

タグが、開裂配列を含んでいてもよいヒスチジンタグである、請求項２に記載の免疫原性薬学的組成物。

【請求項4】

免疫原性薬学的組成物であって、
（ａ）（ｉ） 配列番号４のアミノ酸１〜４５０のうちの少なくとも７５％が欠けており、配列番号４の１０５５〜１３７４のアミノ酸のうちの少なくとも７５％が欠けている、ＵＬ１９ポリペプチドの免疫原性断片であるＨＳＶ−２ポリペプチドの免疫原性断片、または前記免疫原性断片の配列の全長にわたり少なくとも８５％のアミノ酸同一性を保持する、その免疫原性変異体；
（ｉｉ）ＨＳＶ−２ ＵＬ２５タンパク質またはその免疫原性断片；および
（ｉｉｉ）ＨＳＶ−２ ｇＤ２タンパク質またはその免疫原性断片と、
（ｂ） モノホスホリル脂質Ａアジュバントと、
（ｃ） 薬学的に許容される担体と、を含み、
ここで、ｇＤ２タンパク質またはその免疫原性断片、および／または、ＵＬ２５タンパク質またはその免疫原性断片が、異種ペプチドに融合されている、免疫原性薬学的組成物。

【請求項5】

前記モノホスホリル脂質Ａアジュバントは、ＧＬＡである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項6】

前記ＧＬＡは、水中油型エマルジョンの形態であるか、または水性形態である、請求項５に記載の組成物。

【請求項7】

前記水中油型エマルジョンは、スクアレンを含む、請求項６に記載の組成物。

【請求項8】

対象においてＨＳＶ−２感染を治療するための請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項9】

対象においてＨＳＶ−２に対する免疫応答を生じさせるための請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項10】

皮内、粘膜、筋肉内、皮下、舌下、直腸内、または膣内投与されることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法１１９条（ｅ）に基づき、２０１２年５月１６日に出願された米国仮特許出願第６１／６４７，７６４号、２０１２年８月３日に出願された同第６１／６７９，３８７号、および２０１２年１０月１５日に出願された同第６１／７１４，１５８号の利益を主張するものであり、それらは全て参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
配列表への参照

【0002】

本特許出願の配列表は、「４７７３３＿ＳｅｑＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」と題するファイルに別途提供される。本ファイルの内容は、２０１３年５月１６日に作成され、４５，９６９バイトで構成されており、その全体が組み込まれる。
（技術分野）

【0003】

単純ヘルペスウイルス−２感染のためのワクチン、ならびに関連する方法および組成物。

【背景技術】

【0004】

ＨＳＶ−２（単純ヘルペスウイルス−２）は、ヘルペトウイルスファミリーのメンバーであり、皮膚損傷（例えば、水痘および熱性疱疹）をもたらすことが多く、また潜伏感染および再発性感染を特徴とするＤＮＡウイルスの群である。ＨＳＶ−２は、生殖器潰瘍の主因であり、該生殖器潰瘍は、破裂して有痛性のびらんを形成し、治癒までに数週間を要する小さい水疱の塊として現れる。追加の症状としては、熱、全身の倦怠感、筋肉痛、排尿時の痛み、膣分泌物、および鼠径部領域の肥大した圧痛を伴うリンパ節を挙げることができる。再発の可能性は高い。ウイルスは、一生にわたって感染した対象の神経細胞内に存在し得、不規則な間隔で再活性化させ、皮膚潰瘍を形成する。実際の潰瘍が存在しない場合であってさえも、ウイルスは、産生され、個体から個体へと広がり得る。これは、現在治療不能である。

【0005】

生殖器ヘルペスは、最も流行している性感染症である。米国では、人口の１６％超または約６人に１人がＨＳＶ−２に感染しており、女性に偏っており（女性の約２０％および男性の約１２％）、またアフリカ系アメリカ人に偏っている（人口の約４０％およびアフリカ系アメリカ人女性の５０％近く）。（Ｍｏｒｂｉｄｉｔｙ ａｎｄ Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ Ｗｅｅｋｌｙ Ｒｅｐｏｒｔ，５９：４５６−４５９，Ａｐｒｉｌ ２３，２０１０）。まとめると、米国内の約５千万人が、感染しており、そのうちの約８０％は自身の感染に気付いていないが、依然感染性であり得る。世界中の他の場所においても、ＨＳＶ−２は、蔓延している。ＷＨＯチームは、２００３年に世界中で５億３千６百万人が感染しており、また新規の感染は、毎年約２千３百万起こっていると概算した（Ｌｏｏｋｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｂｕｌｌ Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎ．８６： ８０５−８１２， ２００８）。有病率は地域により変動するが、概して、有病率は年齢とともに増加し、男性より女性において高かった。それに加えて、ＨＳＶ−２の有病率は、先進国より発展途上国において高いが、高いＨＳＶ−２有病率を有する北米と、比較的低いＨＳＶ−２有病率を有する南アジアは例外である。最も高い有病率は、サハラ以南のアフリカ地域で見出され、女性の８０％および男性の４５％近くがＨＳＶ−２に感染している。他の地域、特に東アジアおよび東南アジアは、このレベルに到達している。性感染に加えて、ＨＳＶ−２は、女性から赤ん坊に、典型的には出産時に移され得る。米国の成人人口におけるＨＳＶ−２の蔓延に伴い、新生児感染の事例も、劇的に増加してきている。新生児ＨＳＶ感染のうち約１，８００の事例は、毎年米国で起こっており、これは、新生児ＨＩＶ感染の事例より高い数である。

【0006】

ＨＳＶ−２感染の健康への影響は大きい。感染した個体の圧倒的多数は、無症状であるが、ウイルスは依然、移され得る。症状を有する個体は、その生殖器および肛門領域に有痛性のびらんを罹患し、しばしば熱および腺の腫れ等のインフルエンザ様症状を罹患する。不幸なことに、ＨＳＶ−２を初めて発症するものは、１年目以内だけで複数のさらなる発症（典型的には４または５回）をする可能性がある。症状の深刻さに関わらず、感染を認識することは、ストレスを引き起こすことが多く、また生活の質に悪影響を及ぼし得る（Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ， ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｘ Ｔｒａｎｓｍ Ｉｎｆｅｃｔ．８２： １５４， ２００６； Ｃｒｏｓｂｙ ｅｔ ａｌ Ｓｅｘ Ｈｅａｌｔｈ， ５：２７９−２８３， ２００８）。ＨＳＶ−２に感染した新生児において、ＨＳＶ感染に由来する新生児脳炎は、治療を受けていても１５％超の死亡率を有し、ＨＳＶ−２に感染した幼児における神経系の疾病率は、生存事例のさらなる３０〜５０％である。ＨＳＶ−２の高い有病率と合わせて、ＨＳＶ−２感染は、ＨＩＶ−１の感染および感染の危険性を実質的に増加させるという厳しい認識が存在する。アフリカのデータは、ＨＳＶ−２感染は、ＨＩＶ感染の危険性を７倍も増加させ得ること、および新規に感染するＨＩＶ事例の最大半分は、ＨＳＶ−２感染に直接的に起因していることを示している。総じて、ＨＩＶ感染の危険性は、ＨＳＶ−２に感染した個体において２倍超増加する。ＨＩＶ感染に対する相乗効果は、任意の他の性感染症に対するよりもＨＳＶ−２に対して大きく、現在のＨＳＶ−２の蔓延の効果を最小にすることができる有効な公衆衛生対策の必要性を強調する。

【0007】

成人および小児人口におけるＨＳＶ−２の増加する有病率は、薬理学的介入の広範な普及にも関わらず続いている。感染の早期に高用量で与えられるアシクロビル等の抗ウイルス薬物は、ＨＳＶ感染を低減することができるが、これは、ニューロン神経節の潜伏感染を予防しない。抗ウイルス療法は、副作用としての嘔気、嘔吐、皮疹、および腎臓機能の低下、等を含む多数の難点を有し、またそれらは、成長途中の胚に対して催奇形性および毒性であり得るため、慎重に使用されなくてはならない。さらに、バルシクロビルの継続的な抑制的投与は、早期介入にも関わらず、ＨＳＶ感染を５０％未満しか低減しなかった。仮に、この効果のレベルが許容されたとしても、このアプローチは、高いコストおよび感染者の８０％が自身の状態に無自覚であることを考慮すると、非実践的である。局所用殺菌薬等の抗ウイルス薬に代わるものは、臨床的に確認されておらず、また物理的バリア（例えば、コンドーム）は、「現実世界の」有効性をほとんど有さない。これらの理由のため、ワクチン接種は、ＨＳＶ−２感染の健康への影響を食い止め、縮小するために不可欠である。

【0008】

ＨＳＶに対する最初のワクチンは、１９２０年代に開発され、それ以降、種々のワクチンアプローチが試みられているが、全て効果がない。不活性化全ウイルス、弱毒化生ウイルス、修飾生ウイルス、および細胞培養由来サブユニットを含む従来の伝統的な種類のワクチンは、大部分は成功していないか、または低い有効性を有した（Ｓｔａｎｂｅｒｒｙ，Ｈｅｒｐｅｓ １１（Ｓｕｐｐｌ ３）１６１Ａ−１６９Ａ，２００４）。組換えＤＮＡ技術の出現とともに、組換えサブユニットワクチンが開発されている。これらのワクチンは、エンベロープ糖タンパク質のうちの１つまたは２つをアジュバントと組み合わせて含んだ。糖タンパク質は、それらが中和抗体の標的であり、ＨＳＶ−２株の中で高度に保存されることを主な理由として、魅力的な候補であった。過去１０年間、Ｃｈｉｒｏｎによって開発されたものとＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅによって開発されたものとの２つの候補ワクチンにおける広範囲な臨床試験は、どちらも不十分な有効性のために中止された。Ｃｈｉｒｏｎのワクチンは、切断された形態の２つのＨＳＶ−２糖タンパク質、ｇＤ２およびｇＢ２を、アジュバントＭＦ５９と組み合わせて含んだ。ＨＳＶ−２に対する高い力価の抗体に関わらず、ＨＳＶ−２に対する最良の提供された一時的な防御におけるワクチンが、生成された（Ｓｔａｎｂｅｒｒｙ，ｉｂｉｄ）。ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ（ＧＳＫ）は、類似のワクチンを開発および試験したが、しかしながら、それは単一の糖タンパク質、ｇＤ２のみと、アジュバントとしてミョウバンおよびＭＰＬとを含有した。８年間の研究および臨床試験後、２０１０年１０月に、ＧＳＫはこれを失敗であるとして発表した。ワクチンは、有益であると思われた初期の臨床試験の有一の群であった血清反応陰性の女性における感染の予防に、成功しなかった。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0009】

【非特許文献1】Ｍｏｒｂｉｄｉｔｙ ａｎｄ Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ Ｗｅｅｋｌｙ Ｒｅｐｏｒｔ，５９：４５６−４５９，Ａｐｒｉｌ ２３，２０１０

【非特許文献2】Ｌｏｏｋｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｂｕｌｌ Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎ．８６： ８０５−８１２， ２００８

【非特許文献3】Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ， ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｘ Ｔｒａｎｓｍ Ｉｎｆｅｃｔ．８２： １５４， ２００６

【非特許文献4】Ｃｒｏｓｂｙ ｅｔ ａｌ Ｓｅｘ Ｈｅａｌｔｈ， ５：２７９−２８３， ２００８

【非特許文献5】Ｓｔａｎｂｅｒｒｙ，Ｈｅｒｐｅｓ １１（Ｓｕｐｐｌ ３）１６１Ａ−１６９Ａ，２００４

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0010】

本開示の一実施形態では、（ａ）配列番号４のアミノ酸１〜４５０のうちの少なくとも７５％が欠けており、また配列番号４の１０５５〜１３７４のアミノ酸のうちの少なくとも７５％が欠けている、ＵＬ１９ポリペプチドの免疫原性断片、（ｂ）配列番号１２に記載される配列、（ｃ）少なくとも１５個の隣接アミノ酸にわたり少なくとも８５％のアミノ酸同一性を保持する、（ａ）または（ｂ）の免疫原性変異体、（ｄ）（ａ）または（ｂ）の免疫原性断片、および（ｅ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、または（ｄ）のキメラ融合物から成る群から選択される、ＨＳＶ−２ポリペプチドの免疫原性断片が提供される。別の実施形態では、前述のポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドが提供される。

【0011】

また、薬学的組成物も本開示によって提供される。一実施形態では、（ｉ）（ａ）配列番号４のアミノ酸１〜４５０のうちの少なくとも７５％が欠けており、また配列番号４の１０５５〜１３７４のアミノ酸のうちの少なくとも７５％が欠けている、ＵＬ１９ポリペプチドの免疫原性断片、（ｂ）配列番号１２に記載される配列、（ｃ）少なくとも１５個の隣接アミノ酸にわたり少なくとも８５％のアミノ酸同一性を保持する、（ａ）または（ｂ）の免疫原性変異体、（ｄ）（ａ）または（ｂ）の免疫原性断片、および（ｅ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、または（ｄ）のキメラ融合物から成る群から選択される、ＨＳＶ−２ポリペプチドの免疫原性断片と、（ｉｉ）任意に、先天性免疫を活性化する薬剤と、（ｉｉｉ）薬学的に許容される担体と、を含む、免疫原性薬学的組成物が提供される。

【0012】

別の実施形態では、ＵＬ２５またはその免疫原性断片をさらに含む、前述の組成物が提供される。また別の実施形態では、組成物は、ｇＤ２またはその免疫原性断片をさらに含む。

【0013】

本開示のまた別の実施形態では、該薬剤がアジュバントである、前述の組成物が提供される。一実施形態では、アジュバントは、ＧＬＡである。別の実施形態では、ＧＬＡは、水中油型エマルジョンの形態であるか、または水性形態である。特定の実施形態では、水中油型エマルジョンは、スクアレンを含む。

【0014】

本開示のさらに別の実施形態では、対象においてＨＳＶ−２感染を治療するための方法であって、対象に、前述の組成物を投与することを含む、方法が提供される。別の実施形態では、対象において免疫応答を生じさせる方法であって、対象に、前述の組成物を投与することを含む、方法が提供される。また別の実施形態では、対象にＨＳＶ−２に対して免疫付与するための方法であって、対象に、前述の組成物を投与することを含む、方法が提供される。本開示の種々の実施形態による、投与経路が、皮内、粘膜、筋肉内、皮下、舌下、直腸内、または膣内である前述の方法が提供される。また別の実施形態では、対象に、請求項３〜８のいずれか１項に記載の第２、第３、または第４の組成物を投与することをさらに含む、前述の方法が提供される。

【0015】

本願発明は、対象、好ましくはヒトにおいて、ＨＳＶ−２（単純ヘルペスウイルス２）感染を予防または治療するのに有用な組成物および方法に関し、一実施形態では、ヒトは女性であり、一方別の実施形態では、ヒトは男性である。組成物は、（ｉ）ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質またはＨＳＶ−２エンベロープ糖タンパク質の免疫原性断片と、（ｉｉ）ＨＳＶ−２構造タンパク質またはＨＳＶ−２構造タンパク質の免疫原性断片であって、該構造タンパク質が、該エンベロープ糖タンパク質のものではない、ＨＳＶ−２構造タンパク質またはＨＳＶ−２構造タンパク質の免疫原性断片と、（ｉｉｉ）対象において先天性免疫を活性化する薬剤と、（ｉｖ）薬学的に許容される担体とを含む。特定の実施形態では、エンベロープ糖タンパク質は、ｇＤ２であり、組成物は、ｇＤ２か、または代替的実施形態では、ｇＤ２に由来する免疫原性断片かのいずれかを有する。幾つかの実施形態では、構造タンパク質は、ＵＬ４７、ＩＣＰ０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ４７、ＵＬ５、ＵＬ８、ＵＬ１５、ＵＬ１９、ＵＬ２５、ＵＬ３０、ＵＬ３２、ＵＬ４６、ＵＬ３９（ＩＣＰ１０）、ＵＬ７、ＵＬ４０、ＵＬ５４、およびＵＬ２６のうちの１つ以上であり、また免疫原性断片が存在する場合、それはＵＬ４７、ＩＣＰ０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ４７、ＵＬ５、ＵＬ８、ＵＬ１５、ＵＬ１９、ＵＬ２５、ＵＬ３０、ＵＬ３２、ＵＬ４６、ＵＬ３９（ＩＣＰ１０）、ＵＬ７、ＵＬ４０、ＵＬ５４、および／またはＵＬ２６に由来する。タンパク質の正確な配列は、あるヘルペスウイルスから別のヘルペスウイルスにわたり様々であり得、またしたがって、ＨＳＶ−２タンパク質への全ての参照は、任意の自然発生的ＨＳＶ−２から獲得可能な任意のかかるタンパク質を包括することが理解される。他の実施形態では、ＵＬ１９およびＵＬ２５の両方、またはＵＬ１９（例えば、配列番号１２、上方ドメイン断片（Ｕｐｐｅｒ Ｄｏｍａｉｎ Ｆｒａｇｍｅｎｔ）の一種）およびＵＬ２５に由来する断片、または総タンパク質および断片の混合物、例えば、任意にＵＬ４７またはその断片を伴う、全長ＵＬ２５とＵＬ１９、例えば、配列番号１２との断片の混合物が存在する。先天性免疫を活性化する薬剤は、アジュバントである場合もある。具体的には、アジュバントは、ＧＬＡまたは別のＭＡＬＡアジュバントであり得る。一実施形態では、免疫原性薬学的組成物は、ｇＤ２と、ＧＬＡまたは別のＭＡＬＡアジュバントと、ＵＬ２５、ＵＬ１９、およびＵＬ４７の全長または断片から選択される２または３つの抗原と、薬学的に許容される担体とを含む。関連する実施形態では、免疫原性薬学的組成物は、ＭＡＬＡアジュバント、好ましくは図１の構造式を有するＧＬＡと、ｇＤ２と、ＵＬ２５と、ＵＬ１９上方ドメイン断片と、薬学的に許容される担体とを含み、任意に、そのような組成物は、１つ以上のさらなるＨＳＶ−２構造タンパク質またはその断片をさらに含む。

【0016】

幾つかの実施形態では、組成物は、ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質の抗原部分と薬学的に許容される担体とを含む。用語「免疫原性断片」および「免疫学的断片」および「抗原部分」は、本明細書において互換的に使用され、全長タンパク質に関する特異性（交差反応性）を保持する抗体応答または細胞障害応答を引き起こすタンパク質の断片または部分を指す。特定の実施形態では、抗原部分は、中和抗体に結合する。特定の実施形態では、抗原部分は、ｇＤ２またはｇＢ２に由来し、また他の実施形態では、抗原部分は、ｇＤ２かｇＢ２かまたは別のエンベロープ糖タンパク質に由来するかに関わらず、リーダー配列の少なくとも一部、および所望により全部を含む。実施形態のうちの任意のものにおいて、抗原部分は、２つ以上の線状エピトープを含むか、またはエンベロープ糖タンパク質に由来する２つ以上の不連続エピトープを含む。実施形態のうちの任意のものにおいて、組成物は、先天性免疫を活性化する薬剤をさらに含む。薬剤は、例えば、米国公開第２００９／０１８１０７８号に開示されるように、ＧＬＡ等のアジュバントであってもよい。

【0017】

方法は、ＨＳＶ−２感染を治療するため、またはＨＳＶ−２感染を予防もしくは改善する可能性がある免疫応答を生じさせるために使用され得る。本方法に好適な対象としては、ＨＳＶ−２に関して血清反応陽性のもの、およびＨＳＶ−２に関して血清反応陰性のものが挙げられる。本方法では、本明細書で説明される組成物のうちの１つが、対象に投与される。

【0018】

本発明のいくつかの例示的な説明を、記号表示（ｘｙ）を用いて以下のように示し、ｘおよびｙの各々は文字を表し、実施形態、または複数の（ｘｙ）が１つの実施形態中に特定される場合は実施形態の群を表す記号表示である。（ＡＡ）（ｉ）ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質、またはその免疫学的断片と、（ｉｉ）ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質以外のＨＳＶ−２の構造タンパク質、またはその免疫学的断片と、（ｉｉｉ）先天性免疫を活性化する薬剤、および（ｉｖ）薬学的に許容される担体とを含む、免疫原性薬学的組成物。（ＡＢ）ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質が、ｇＤ２であり、組成物がｇＤ２を含む、組成物（ＡＡ）。（ＡＣ）組成物が、ｇＤ２の免疫学的断片を含む、組成物（ＡＡ）。（ＡＤ）ＨＳＶ−２の構造タンパク質が、ＵＬ４７、ＩＣＰ０、ＵＬ２５、ＵＬ４６、ＵＬ３９、ＵＬ７、およびＵＬ２６から成る群から選択される１つ以上のタンパク質である、（ＡＡ）、（ＡＢ）、および（ＡＣ）のうちの任意の１つ以上の組成物。（ＡＥ）ＨＳＶ−２の構造タンパク質が、ＵＬ１９である、組成物（ＡＡ）。（ＡＦ）ＨＳＶ−２の構造タンパク質が、ＵＬ１９である、（ＡＢ）の組成物。（ＡＧ）ＨＳＶ−２の構造タンパク質が、ＵＬ１９の免疫学的断片、例えば、配列番号１２である、組成物（ＡＡ）。（ＡＨ）ＨＳＶ−２の構造タンパク質が、その免疫学的断片ＵＬ４７である、組成物（ＡＢ）。（ＡＩ）ＨＳＶ−２の構造タンパク質が、ＵＬ２５である、組成物（ＡＡ）。（ＡＪ）ＨＳＶ−２の構造タンパク質が、ＵＬ２５である、組成物（ＡＢ）。（ＡＫ）ＨＳＶ−２の構造タンパク質が、ＵＬ２５の免疫学的断片である、組成物（ＡＡ）。（ＡＬ）ＨＳＶ−２の構造タンパク質が、ＩＣＰ０である、組成物（ＡＢ）。（ＡＭ）ＨＳＶ−２の構造タンパク質が、ＵＬ４７である、組成物（ＡＡ）。（ＡＮ）ＨＳＶ−２の構造タンパク質が、ＵＬ４７の断片である、組成物（ＡＢ）。（ＡＯ）ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質以外のＨＳＶ−２の構造タンパク質が、ＵＬ４７であり、かつその免疫学的断片である、組成物（ＡＡ）。（ＡＰ）ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質以外のＨＳＶ−２の構造タンパク質が、ＵＬ４７であり、かつその免疫学的断片である、組成物（ＡＢ）。（ＡＱ）ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質以外の第２のＨＳＶ−２の構造タンパク質、またはその免疫学的断片をさらに含む、（ＡＡ）、（ＡＢ）、（ＡＣ）、（ＡＤ）、（ＡＥ）、（ＡＦ）、（ＡＧ）、（ＡＨ）、（ＡＩ）、（ＡＪ）、（ＡＫ）、（ＡＬ）、（ＡＭ）、（ＡＮ）、（ＡＯ）、（ＡＰ）のうちの任意の１つ以上の組成物。（ＡＲ）ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質以外の第２のＨＳＶ−２の構造タンパク質が、ＵＬ１９、ＵＬ２５、およびＵＬ４７から成る群から選択され、第２の構造タンパク質が、該構造タンパク質に非同一である、組成物（ＡＱ）。（ＡＳ）第２の構造タンパク質を含む、組成物（ＡＲ）。（ＡＴ）第２の構造タンパク質の免疫学的断片を含む、組成物（ＡＲ）。（ＡＵ）ＵＬ２５をさらに含む、（ＡＥ）、（ＡＦ）、（ＡＧ）、および／または（ＡＨ）のうちの任意の１つ以上の組成物。（ＡＶ）ＵＬ２５の免疫学的断片をさらに含む、（ＡＥ）、（ＡＦ）、（ＡＧ）、および／または（ＡＨ）のうちの任意の１つ以上の組成物。（ＡＷ）ＵＬ４７をさらに含む、（ＡＥ）、（ＡＦ）、（ＡＧ）、および／または（ＡＨ）のうちの任意の１つ以上の組成物。（ＡＸ）ＵＬ４７の免疫学的断片をさらに含む、（ＡＥ）、（ＡＦ）、（ＡＧ）、および／または（ＡＨ）のうちの任意の１つ以上の組成物。（ＡＹ）ＵＬ１９をさらに含む、（ＡＩ）、（ＡＪ）、（ＡＫ）、および／または（ＡＬ）のうちの任意の１つ以上の組成物。（ＡＺ）ＵＬ１９の免疫学的断片、例えば、配列番号１２をさらに含む、（ＡＩ）、（ＡＪ）、（ＡＫ）、および／または（ＡＬ）のうちの任意の１つ以上の組成物。（ＢＡ）ＵＬ４７をさらに含む、（ＡＩ）、（ＡＪ）、（ＡＫ）、および／または（ＡＬ）のうちの任意の１つ以上の組成物。（ＢＢ）ＵＬ４７の免疫学的断片をさらに含む、（ＡＩ）、（ＡＪ）、（ＡＫ）、および／または（ＡＬ）のうちの任意の１つ以上の組成物。（ＢＣ）ＵＬ１９をさらに含む、（ＡＭ）、（ＡＮ）、（ＡＯ）、および／または（ＡＰ）のうちの任意の１つ以上の組成物。（ＢＤ）ＵＬ１９の免疫学的断片をさらに含む、（ＡＭ）、（ＡＮ）、（ＡＯ）、および／または（ＡＰ）のうちの任意の１つ以上の組成物。（ＢＥ）ＵＬ２５をさらに含む、（ＡＭ）、（ＡＮ）、（ＡＯ）、および／または（ＡＰ）のうちの任意の１つ以上の組成物。（ＢＦ）ＵＬ２５の免疫学的断片をさらに含む、（ＡＭ）、（ＡＮ）、（ＡＯ）、および／または（ＡＰ）のうちの任意の１つ以上の組成物。（ＢＧ）薬剤が、アジュバントである、（ＡＡ）、（ＡＢ）、（ＡＣ）、（ＡＤ）、（ＡＥ）、（ＡＦ）、（ＡＧ）、（ＡＨ）、（ＡＩ）、（ＡＪ）、（ＡＫ）、（ＡＬ）、（ＡＭ）、（ＡＮ）、（ＡＯ）、（ＡＰ）、（ＡＱ）、（ＡＲ）、（ＡＳ）、（ＡＴ）、（ＡＵ）、（ＡＶ）、（ＡＷ）、（ＡＸ）、（ＡＹ）、（ＡＺ）、（ＢＡ）、（ＢＢ）、（ＢＣ）、（ＢＤ）、（ＢＥ）、および（ＢＦ）のうちの任意の１つ以上の組成物。（ＢＨ）アジュバントが、ＧＬＡまたは別のＭＡＬＡアジュバントであり、また（ＢＧ）におけるオプションのうちの各々が、本発明の別個の実施形態として独立して選択される、（ＢＧ）から選択される組成物。（ＢＩ）ｇＤ２と、ＵＬ２５と、ＵＬ１９と、ＧＬＡまたは別のＭＡＬＡアジュバントと、薬学的に許容される担体とを含む、組成物（ＡＡ）。（ＢＪ）ｇＤ２と、ＵＬ２５と、ＵＬ１９の免疫学的断片とを含む、組成物（ＡＡ）。（ＢＫ）ｇＤ２と、ＵＬ１９と、ＵＬ２５の免疫学的断片とを含む、組成物（ＡＡ）。（ＢＬ）ＵＬ４７をさらに含む、（ＢＩ）、（ＢＪ）、および（ＢＫ）のうちの任意の１つ以上の組成物。（ＢＭ）ＵＬ４７の免疫学的断片をさらに含む、（ＢＩ）、（ＢＪ）、および（ＢＫ）のうちの任意の１つ以上の組成物。（ＢＮ）対象においてＨＳＶ−２感染を治療するための方法であって、該対象に、（ＡＡ）、（ＡＢ）、（ＡＣ）、（ＡＤ）、（ＡＥ）、（ＡＦ）、（ＡＧ）、（ＡＨ）、（ＡＩ）、（ＡＪ）、（ＡＫ）、（ＡＬ）、（ＡＭ）、（ＡＮ）、（ＡＯ）、（ＡＰ）、（ＡＱ）、（ＡＲ）、（ＡＳ）、（ＡＴ）、（ＡＵ）、（ＡＶ）、（ＡＷ）、（ＡＸ）、（ＡＹ）、（ＡＺ）、（ＢＡ）、（ＢＢ）、（ＢＣ）、（ＢＤ）、（ＢＥ）、（ＢＦ）、（ＢＧ）、（ＢＨ）、（ＢＩ）、（ＢＪ）、（ＢＫ）、（ＢＬ）、および（ＢＭ）のうちの任意の１つ以上の組成物を投与することを含む、方法。（ＢＯ）対象においてＨＳＶ−２に対して免疫応答を生じさせるための方法であって、該対象に、（ＡＡ）、（ＡＢ）、（ＡＣ）、（ＡＤ）、（ＡＥ）、（ＡＦ）、（ＡＧ）、（ＡＨ）、（ＡＩ）、（ＡＪ）、（ＡＫ）、（ＡＬ）、（ＡＭ）、（ＡＮ）、（ＡＯ）、（ＡＰ）、（ＡＱ）、（ＡＲ）、（ＡＳ）、（ＡＴ）、（ＡＵ）、（ＡＶ）、（ＡＷ）、（ＡＸ）、（ＡＹ）、（ＡＺ）、（ＢＡ）、（ＢＢ）、（ＢＣ）、（ＢＤ）、（ＢＥ）、（ＢＦ）、（ＢＧ）、（ＢＨ）、（ＢＩ）、（ＢＪ）、（ＢＫ）、（ＢＬ）、（ＢＭ）、および（ＢＮ）のうちの任意の１つ以上の組成物を投与することを含む、方法。（ＢＱ）対象が、ＨＳＶ−２に関して血清反応陽性、およびＨＳＶ−１に関して血清反応陽性である、方法（ＢＯ）。（ＢＲ）対象が、ＨＳＶ−２に関して血清反応陽性およびＨＳＶ−１に関して血清反応陰性である、方法（ＢＯ）。

【0019】

一実施形態では、ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質またはその免疫学的断片と、ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質以外の２つのＨＳＶ−２の構造タンパク質、またはその免疫学的断片と、先天性免疫を活性化する薬剤と、薬学的に許容される担体とを含む組成物が、提供される。例は、ｇＤ２、ＵＬ２５、および配列番号１２（ＵＬ１９の断片）、および例えば、ＧＬＡ等のモノホスホリル脂質Ａ（ＭＡＬＡ）アジュバントを含む組成物である。ｇＤ２特異的抗体応答に加えて、この組成物を用いたワクチン接種は、強固なＨＳＶ−２抗原特異的ＣＤ４およびＣＤ８エフェクター、および生ウイルスによるその後の感染に応答する記憶Ｔ細胞を引き起こすことができる。特に、この組成物を用いた予防的免疫付与は、生殖器粘膜および後根神経節の両方に殺菌免疫を有するＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて、致死的膣内ＨＳＶ−２感染に対して、大幅にまたは完全に防御することができる。この組成物は、ＨＳＶ−２の弱毒化された株による以前の感染によって誘発される、ＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞の両方に拡大することができる。これと一致して、モルモットにおける再発性のＨＳＶ−２損傷のための療法として適用されるとき、この組成物は、再発性の損傷の頻度を低減することができる。

【0020】

また、キットも提供される。幾つかのキットでは、ＨＳＶ−２エンベロープ糖タンパク質の抗原部分と薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物を含む、バイアルが存在する。

【0021】

本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
（ａ）配列番号４のアミノ酸１〜４５０のうちの少なくとも７５％が欠けており、また配列番号４の１０５５〜１３７４のアミノ酸のうちの少なくとも７５％が欠けている、ＵＬ１９ポリペプチドの免疫原性断片、
（ｂ）配列番号１２に記載される配列、
（ｃ）少なくとも１５個の隣接アミノ酸にわたり少なくとも８５％のアミノ酸同一性を保持する、（ａ）または（ｂ）の免疫原性変異体、
（ｄ）（ａ）または（ｂ）の免疫原性断片、および
（ｅ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、または（ｄ）のキメラ融合物から成る群から選択される、ＨＳＶ−２ポリペプチドの免疫原性断片。
（項目２）
項目１に記載のポリペプチドをコードする、単離されたポリヌクレオチド。
（項目３）
免疫原性薬学的組成物であって、
（ｉ）
（ａ）配列番号４のアミノ酸１〜４５０のうちの少なくとも７５％が欠けており、また配列番号４の１０５５〜１３７４のアミノ酸のうちの少なくとも７５％が欠けている、ＵＬ１９ポリペプチドの免疫原性断片、
（ｂ）配列番号１２に記載される配列、
（ｃ）少なくとも１５個の隣接アミノ酸にわたり少なくとも８５％のアミノ酸同一性を保持する、（ａ）または（ｂ）の免疫原性変異体、
（ｄ）（ａ）または（ｂ）の免疫原性断片、および
（ｅ）（ａ）、（ｂ）、または（ｃ）のキメラ融合物から成る群から選択される、ＨＳＶ−２ポリペプチドの免疫原性断片と、
（ｉｉ） 任意に、先天性免疫を活性化する薬剤と、
（ｉｉｉ） 薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。
（項目４）
ＵＬ２５またはその免疫原性断片をさらに含む、項目３に記載の組成物。
（項目５）
ｇＤ２またはその免疫原性断片をさらに含む、項目３および４のいずれか１項に記載の組成物。
（項目６）
前記薬剤は、アジュバントである、項目３〜５のいずれかに記載の組成物。
（項目７）
前記アジュバントは、ＧＬＡである、項目６に記載の組成物。
（項目８）
前記ＧＬＡは、水中油型エマルジョンの形態であるか、または水性形態である、項目７に記載の組成物。
（項目９）
前記水中油型エマルジョンは、スクアレンを含む、項目８に記載の組成物。
（項目１０）
対象においてＨＳＶ−２感染を治療するための方法であって、前記対象に、項目３〜９のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含む、方法。
（項目１１）
対象において免疫応答を生じさせる方法であって、前記対象に、項目３〜９のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含む、方法。
（項目１２）
対象に、ＨＳＶ−２に対して免疫付与するための方法であって、前記対象に、項目３〜９のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含む、方法。
（項目１３）
前記投与経路が、皮内、粘膜、筋肉内、皮下、舌下、直腸内、または膣内である、項目９〜１２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４）
前記対象に、項目３〜９のいずれか１項に記載の第２、第３、または第４の組成物を投与することをさらに含む、項目９〜１３のいずれかに記載の方法。
本発明のこれらのおよび他の態様および実施形態は、以下の詳細な説明および添付の図面への参照により、明らかになるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0022】

【図1】ＧＬＡ（実施例にて使用されるアジュバント）の図面、および界面活性剤ホスファチヂコリンおよびプルロニックＦ６８の例示的な油滴の概略図を提供する。

【図2】ｇＤ２特異的ＣＤ４Ｔ細胞応答を示す。データは、Ｂａｌｂ／ｃマウス（４匹／群）に、指定の通り様々なレベルの組み換えタンパク質およびＧＬＡを含む二価ワクチンを用いて２８日の間隔を空けて筋肉内に２回免疫付与した後に、獲得した。グラフは、ＩＬ−２、ＴＮＦ−α、およびＩＦＮ−γの細胞内産生に関するフローサイトメトリ分析の結果である。

【図3】Ｄ２５プライム後（Ｄ４ブースト後）に分析されたＯＶＡ２５７ペプチドに対する脾臓ＣＤ８Ｔ細胞応答を示す。組換えＯＶＡ＝５μｇ；ＳＥ＝２％；皮下送達されたレンチウイルス；筋肉内送達された組換えＯＶＡ。

【図4】ブーストの４日後に測定されたサイトカイン陽性ＣＤ８Ｔ細胞の割合を示すグラフである。プライムは、第０日、ブーストは第２１日に行った。コラムＨＡ１、第０日 ＨＢＳＳ、第２１日、ＰＢＳ；ＨＡ２、第０日 ＬＶ−ＯＶＡ、第２１日、ＰＢＳ；ＨＡ３、第０日 ＬＶ−ＯＶＡ、第２１日 ＬＶ−ＯＶＡ；ＨＡ４、第０日 ＬＶ−ＯＶＡ、第２１日 ２０μｇ ＧＬＡ−ＳＥ；ＨＡ５、第０日 ＬＶ−ＯＶＡ、第２１日 ＯＶＡ＋ＳＥ；ＨＡ６、第０日 ＬＶ−ＯＶＡ、第２１日 ＯＶＡ＋２０μｇ ＧＬＡ−ＳＥ；ＨＡ７、第０日 ＬＶ−ＯＶＡ、第２１日、４μｇ ＯＶＡ＋ＧＬＡ−ＳＥ；ＨＡ８、第０日 ＬＶ−ＯＶＡ、第２１日 ＯＶＡ＋０．８μｇ ＧＬＡ−ＳＥ。

【図5A】Ｃ５７ＢＬ／６マウスの群（５匹／群）に、５μｇの組換えｇＤか、ＵＬ１９か、またはＵＬ２５タンパク質かのいずれかを用いて、５μｇのＧＬＡ−ＳＥと組み合わせてプライム／ブースト免疫付与レジメン（第０日プライム／第２１日ブースト）を介して免疫付与した後に獲得したデータを示す。脾臓ＣＤ４Ｔ細胞応答は、対応する組換えタンパク質免疫原に関するＣＤ４エピトープを含有すると先行して同定されている１５−ｍｅｒペプチドを用いた生体外再刺激の後に、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−２に関する細胞内染色によって、ブーストの４日後に測定された。Ａ）対応する組換えタンパク質免疫原を用いて免疫付与されたマウスにおいて示唆された、各１５−ｍｅｒペプチドに対するＣＤ４Ｔ細胞応答の代表的なＩＣＳドットプロット。Ｂ）サイトカイン陽性ＣＤ４Ｔ細胞の割合が、各群に関して示される。

【図5B】Ｃ５７ＢＬ／６マウスの群（５匹／群）に、５μｇの組換えｇＤか、ＵＬ１９か、またはＵＬ２５タンパク質かのいずれかを用いて、５μｇのＧＬＡ−ＳＥと組み合わせてプライム／ブースト免疫付与レジメン（第０日プライム／第２１日ブースト）を介して免疫付与した後に獲得したデータを示す。脾臓ＣＤ４Ｔ細胞応答は、対応する組換えタンパク質免疫原に関するＣＤ４エピトープを含有すると先行して同定されている１５−ｍｅｒペプチドを用いた生体外再刺激の後に、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−２に関する細胞内染色によって、ブーストの４日後に測定された。Ａ）対応する組換えタンパク質免疫原を用いて免疫付与されたマウスにおいて示唆された、各１５−ｍｅｒペプチドに対するＣＤ４Ｔ細胞応答の代表的なＩＣＳドットプロット。Ｂ）サイトカイン陽性ＣＤ４Ｔ細胞の割合が、各群に関して示される。

【図6A】５匹のＣ５７ＢＬ／６マウスの群に、等モル基準（それぞれ、０、８、３．３、および１．４μｇのタンパク質）で組み合わせて送達および処方された組換えｇＤ、ＵＬ１９、およびＵＬ２５タンパク質を用いて、５．５μｇのＧＬＡ−ＳＥと組み合わせてプライム／ブーストレジメン（第０日プライム／第２１日ブースト）を介して免疫付与した後に獲得したデータを示す。脾臓ＣＤ４Ｔ細胞応答は、各組換えタンパク質免疫原に関するＣＤ４Ｔ細胞エピトープを含有すると先行して同定されている１５−ｍｅｒペプチドを用いた生体外再刺激の後に、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−２に関する細胞内染色によって、ブーストの４日後に測定された。各ペプチドライブラリからのＣＤ４Ｔ細胞を欠く個々のペプチドは、陰性対照として含まれた。Ａ）サイトカイン陽性ＣＤ４Ｔ細胞の割合が、各群に関して示される。Ｂ）三価ワクチン内の各組換えタンパク質免疫原に関するＩｇＧ１サブクラスの抗原特異的抗体についての血清終点力価（バックグラウンドの２倍を超える最も高い血清希釈の逆数として定義される）。

【図6B】５匹のＣ５７ＢＬ／６マウスの群に、等モル基準（それぞれ、０、８、３．３、および１．４μｇのタンパク質）で組み合わせて送達および処方された組換えｇＤ、ＵＬ１９、およびＵＬ２５タンパク質を用いて、５．５μｇのＧＬＡ−ＳＥと組み合わせてプライム／ブーストレジメン（第０日プライム／第２１日ブースト）を介して免疫付与した後に獲得したデータを示す。脾臓ＣＤ４Ｔ細胞応答は、各組換えタンパク質免疫原に関するＣＤ４Ｔ細胞エピトープを含有すると先行して同定されている１５−ｍｅｒペプチドを用いた生体外再刺激の後に、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−２に関する細胞内染色によって、ブーストの４日後に測定された。各ペプチドライブラリからのＣＤ４Ｔ細胞を欠く個々のペプチドは、陰性対照として含まれた。Ａ）サイトカイン陽性ＣＤ４Ｔ細胞の割合が、各群に関して示される。Ｂ）三価ワクチン内の各組換えタンパク質免疫原に関するＩｇＧ１サブクラスの抗原特異的抗体についての血清終点力価（バックグラウンドの２倍を超える最も高い血清希釈の逆数として定義される）。

【図7A】Ｃ５７ＢＬ／６マウスの群（５匹／群）に、５μｇのＧＬＡ−ＳＥと組み合わせて送達された５μｇの組換えＵＬ１９タンパク質を用いて、プライム（第０日）またはプライムブースト（第０日プライム／第２１日ブースト）免疫付与レジメンを介して免疫付与したときに獲得されたデータを示す。脾臓ＣＤ４Ｔ細胞応答は、ＵＬ１９に関するＣＤ４Ｔ細胞エピトープを含有すると先行して同定されている１５−ｍｅｒペプチドを用いた生体外再刺激の後に、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−１２に関して免疫付与後の第４日または第１０日にＩＣＳによって測定された。Ａ）対応する組換えタンパク質免疫原を用いて免疫付与されたマウスにおいて示唆された、ＵＬ１９ １５−ｍｅｒペプチド２９７に対するＣＤ４Ｔ細胞応答の代表的なＩＣＳドットプロット。サイトカイン陽性ＤＣ４Ｔ細胞の割合が、各群に関して示される。Ｂ）ＵＬ１９ １５−ｍｅｒ２５０または２９７に応答するサイトカイン陽性ＣＤ４Ｔ細胞の割合が、各群に関して示される。

【図7B】Ｃ５７ＢＬ／６マウスの群（５匹／群）に、５μｇのＧＬＡ−ＳＥと組み合わせて送達された５μｇの組換えＵＬ１９タンパク質を用いて、プライム（第０日）またはプライムブースト（第０日プライム／第２１日ブースト）免疫付与レジメンを介して免疫付与したときに獲得されたデータを示す。脾臓ＣＤ４Ｔ細胞応答は、ＵＬ１９に関するＣＤ４Ｔ細胞エピトープを含有すると先行して同定されている１５−ｍｅｒペプチドを用いた生体外再刺激の後に、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−１２に関して免疫付与後の第４日または第１０日にＩＣＳによって測定された。Ａ）対応する組換えタンパク質免疫原を用いて免疫付与されたマウスにおいて示唆された、ＵＬ１９ １５−ｍｅｒペプチド２９７に対するＣＤ４Ｔ細胞応答の代表的なＩＣＳドットプロット。サイトカイン陽性ＤＣ４Ｔ細胞の割合が、各群に関して示される。Ｂ）ＵＬ１９ １５−ｍｅｒ２５０または２９７に応答するサイトカイン陽性ＣＤ４Ｔ細胞の割合が、各群に関して示される。

【図8A】Ｃ５７ＢＬ／６マウスの群（５匹／群）に、単独でまたは５μｇのＳＥもしくはＧＬＡ−ＳＥと組み合わせて送達された５μｇの組換えＵＬ１９タンパク質を用いて、プライム（第０日）またはプライムブースト（第０日プライム／第２１日ブースト）免疫付与レジメンを介して免疫付与したときに獲得されたデータを示す。脾臓ＣＤ４Ｔ細胞応答は、ＵＬ１９に関するＣＤ４Ｔ細胞エピトープを含有すると先行して同定されている１５−ｍｅｒペプチドを用いた生体外再刺激の後に、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−１２に関して免疫付与後の第５日または第１０日にＩＣＳによって測定された。Ａ）対応する組換えタンパク質免疫原を用いて免疫付与されたマウスにおいて示唆された、ＵＬ１９ １５−ｍｅｒペプチド２９７に対するＣＤ４Ｔ細胞応答の代表的なＩＣＳドットプロット。サイトカイン陽性ＣＤ４Ｔ細胞の割合が、各群に関して示される。Ｂ）ＵＬ１９ １５−ｍｅｒ２５０または２９７に応答するサイトカイン陽性ＣＤ４Ｔ細胞の割合が、各群に関して示される。

【図8B】Ｃ５７ＢＬ／６マウスの群（５匹／群）に、単独でまたは５μｇのＳＥもしくはＧＬＡ−ＳＥと組み合わせて送達された５μｇの組換えＵＬ１９タンパク質を用いて、プライム（第０日）またはプライムブースト（第０日プライム／第２１日ブースト）免疫付与レジメンを介して免疫付与したときに獲得されたデータを示す。脾臓ＣＤ４Ｔ細胞応答は、ＵＬ１９に関するＣＤ４Ｔ細胞エピトープを含有すると先行して同定されている１５−ｍｅｒペプチドを用いた生体外再刺激の後に、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−１２に関して免疫付与後の第５日または第１０日にＩＣＳによって測定された。Ａ）対応する組換えタンパク質免疫原を用いて免疫付与されたマウスにおいて示唆された、ＵＬ１９ １５−ｍｅｒペプチド２９７に対するＣＤ４Ｔ細胞応答の代表的なＩＣＳドットプロット。サイトカイン陽性ＣＤ４Ｔ細胞の割合が、各群に関して示される。Ｂ）ＵＬ１９ １５−ｍｅｒ２５０または２９７に応答するサイトカイン陽性ＣＤ４Ｔ細胞の割合が、各群に関して示される。

【図9】Ｃ５７ＢＬ／６マウスの群（５匹／群）に、等モル基準かまたは等質量基準かのいずれかで処方された組換えタンパク質を用いて、プライムブースト（第０日プライム／第２１日ブースト）免疫付与レジメンを介して免疫付与したときに獲得されたデータを示す。送達された総タンパク質は、５μｇかまたは１５μｇかのいずれかであった。脾臓ＣＤ４Ｔ細胞応答は、ＣＤ４Ｔ細胞エピトープを含有すると先行して同定されている１５−ｍｅｒペプチドを用いた生体外再刺激の後に、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−１２に関して免疫付与後の第５日に細胞内染色によって測定された。Ａ）ｇＤペプチドに応答するサイトカイン陽性ＣＤ４Ｔ細胞の割合が、示される。Ｂ）ＵＬ１９ペプチドに応答するサイトカイン陽性ＣＤ４Ｔ細胞の割合が、示される。Ｃ）ＵＬ２５ペプチドに応答するサイトカイン陽性ＣＤ４Ｔ細胞の割合が、示される。

【図10】ＢＡＬＢ／ｃマウスの群（５匹／群）に、１００μｌ（一肢当たり５０μｌ）で筋肉内に送達される４μｇのＧＬＡ−ＳＥか、ＳＥ単独か、またはＰＢＳ媒介物かのいずれかと組み合わせて、４μｇの組換えｇＤタンパク質を用いて、プライム／ブースト免疫付与レジメン（第０日プライム／第２１日ブースト）を介して免疫付与したときに獲得されたデータを示す。ＩｇＧ、ＩｇＧ１、およびＩｇＧ２ａアイソタイプのＨＳＶ−２ｇＤ２特異的抗体が、ＥＬＩＳＡによって測定された。

【図11】５匹のＣ５７ＢＬ／６マウスの群に、５μｇのＧＬＡ−ＳＥまたは対照ワクチン物品と組み合わせて、各々５μｇの組換えｇＤ２、ＵＬ１９ｕｄ、およびＵＬ２５から成る三価ワクチンの単一筋肉内免疫付与を与えたときに獲得されたデータを示す。抗原特異的脾臓ＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞応答が、ｇＤ２、ＵＬ１９、またはＵＬ２５ペプチドを用いた５時間にわたる脾臓細胞培養物の生体外再刺激の後に、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−２に関して、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）によって、免疫付与後第６日目に測定された。Ａ）ｇＤ２、ＵＬ１９ｕｄ、またはＵＬ２５からのペプチドに応答する、ＣＤ４Ｔ細胞の頻度およびサイトカイン表現型。Ｂ）ＵＬ１９ペプチドに応答する、ＣＤ８Ｔ細胞の頻度およびサイトカイン表現型。Ｃ）ＧＬＡ−ＳＥとともに三価ワクチンを用いて４週間前に免疫付与され、弱毒化されたＨＳＶ−２チミジンキナーゼ欠損（ＴＫ−）ウイルスを用いて皮下に攻撃されたマウスにおける、ＵＬ１９ペプチドに応答するＣＤ８Ｔ細胞の頻度。

【図12】１０匹のＣ５７ＢＬ／６マウスの群に、５μｇのＧＬＡ−ＳＥかまたは５％デキストロース媒介物かのいずれかと組み合わせて、各５μｇの組換えｇＤ２およびＵＬ１９ｕｄから成る二価ワクチンの２回の筋肉内免疫付与を２８日空けて付与したときに獲得されたデータを示す。５μｇのＧＬＡ−ＳＥ単独で免疫付与されたマウスは、陰性対照の役割を果たした。第２の免疫付与の２２日後、マウスは、デポ型酢酸メドロキシプロゲステロンで処理され、次いで６日後に、５０ｘＬＤ_５０用量の野生型ＨＳＶ−２で膣内に攻撃された。マウスは、生殖器損傷形成および生存に関して毎日モニタリングされた。感染後第１日目、第３日目、および第５日目に、膣内スワブをＰＣＲによるＨＳＶ−２ＤＮＡの定量化のために収集した。感染の約２カ月後、後根神経節を生存したマウスから採取し、潜伏ＨＳＶ−２ＤＮＡをＰＣＲによって定量化した。図１２パネルＡに示されるように、ＧＬＡ−ＳＥと共にｇＤ２およびＵＬ１９ｕｄを用いて免疫付与されたマウスは、ｇＤ２およびＵＬ１９ｕｄ単独か、またはＧＬＡ−ＳＥ単独かのいずれかを用いて免疫付与されたマウスと比較して、損傷形成を劇的に低減させ、また生存率を増加させている。同様に、図１２パネルＢに示されるように、ＧＬＡ−ＳＥとともにｇＤ２およびＵＬ１９ｕｄを用いて免疫付与された１０匹のマウスのうち９匹は、第５日までに検出可能なＨＳＶ−２ＤＮＡを有さず、一方、いずれかの対照群のマウスは、第５日までを通して膣内に持続したレベルのＨＳＶ−２を有した。図１２パネルＣに示されるように、ＧＬＡ−ＳＥのみの群において３匹しか生存しなかったが、これら３匹のマウスのうち２匹は、後根神経節における潜伏ＨＳＶ−２の著しいレベルを示し、ＧＬＡ−ＳＥとともにｇＤ２およびＵＬ１９ｕｄを用いて免疫付与されたマウスは、神経節における検出可能なＨＳＶ−２をほとんどまたは全く示さなかった。

【図13】Ｃ５７ＢＬ／６マウス（５匹／群）を、致死未満用量の弱毒化ＨＳＶ−２チミジンキナーゼ欠損（ＴＫ−）ウイルスで皮下に感染させ、次いで２８日後に、各５μｇの組換えｇＤ２、ＵＬ１９ｕｄ、およびＵＬ２５から成る三価ワクチンを用いて、５μｇのＧＬＡ−ＳＥまたは５％デキストロース媒介物と組み合わせて免疫付与したときに獲得されたデータを示す。対照群は、ＧＬＡ−ＳＥ単独または媒介物単独で処理された感染したマウス、および媒介物単独で処理されたナイーブマウスを含んだ。免疫付与の６日後、ＵＬ１９特異的ＣＤ８（上側パネル）およびＣＤ４（下側パネル）Ｔ細胞応答が、ＵＬ１９ペプチドを用いた刺激の後に、ＩＣＳによって測定された。

【図14】モルモット（７匹／群）を、致死未満用量のＨＳＶ−２株３３３ウイルスで膣内に感染させ、次いで感染後第１３日目および第２７日目に、各５μｇの組換えｇＤ２、ＵＬ１９ｕｄ、およびＵＬ２５からなる三価ワクチンを用いて、５μｇのＧＬＡ−ＳＥと組み合わせて処理したときに獲得されたデータを示す。ＧＬＡ−ＳＥ単独で処理した感染したモルモットは、陰性対照の役割を果たした。動物は、膣内損傷に関して毎日モニタリングされ、０〜４のスコアが各損傷日に対して割り当てられた。各群の毎日の損傷スコアが平均化され、時間に対してプロットされた。

【図15】１０匹のＣ５７ＢＬ／６マウスの群に、５μｇのＧＬＡ−ＳＥかまたは５％デキストロース媒介物かのいずれかと組み合わせて、各５μｇの組換えｇＤ２、ＵＬ１９ｕｄ（配列番号１２参照）、およびＵＬ２５から成る三価ワクチンの２回の筋肉内免疫付与を２８日空けて与えたときに獲得されたデータを示す。５μｇのＧＬＡ−ＳＥ単独を用いて免疫付与されたマウスは、陰性対照の役割を果たした。追加の対照群は、５μｇのＧＬＡ−ＳＥ、および飲料水中の１ｍｌ当たり１ミリグラムのアシクロビル（ＡＣＶ）を用いて、攻撃の２４時間後に開始して免疫付与されたマウスで構成された。第２の免疫付与の２２日後、マウスは、デポ型酢酸メドロキシプロゲステロンで処理され、次いで６日後に、５０ｘＬＤ_５０用量の野生型ＨＳＶ−２で膣内に攻撃された。マウスは、生殖器損傷形成（パネルＡ）および生存（パネルＢ）に関して毎日モニタリングされた。

【図16】三価ｇＤ２、ＵＬ１９ｕｄ（配列番号１２）、およびＵＬ２５ ワクチンを用いて免疫付与されたマウスにおける、膣内ＨＳＶ−２ＤＮＡレベルを示す（マウスの群の説明については図１５を参照）。膣内スワブは、ＰＣＲによるＨＳＶ−２ＤＮＡの定量化のため、感染後第１日目、第３日目、および第５日目に収集された。

【発明を実施するための形態】

【0023】

本開示は、免疫原性薬学的組成物、および、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２感染を含む単純ヘルペスウイルス感染の治療のため、またはその予防のための方法を提供する。組成物は、免疫原性ＨＳＶ−２ウイルスタンパク質または該ウイルスタンパク質の断片もしくはペプチド等の免疫原性部分と、先天性免疫系を活性化する少なくとも１つの薬剤、好ましくは、例えば、本明細書で説明されるＭＡＬＡアジュバント等のＴＬＲ４作動薬とを含む。ウイルスタンパク質（および断片およびペプチド）は、少なくとも１つのエンベロープ糖タンパク質と、エンベロープ糖タンパク質以外の少なくとも１、２、３、または４つの構造タンパク質とを含む。別法として、ウイルスタンパク質（および断片およびペプチド）は、少なくとも１つの抗原エピトープを含み、またエンベロープタンパク質のリーダーペプチドの一部または全部を含んでもよい。免疫原性断片が使用されてもよい。組成物において有用な幾つかの特定の薬剤としては、アジュバント、抗原に対する免疫応答を強化する物質が挙げられる。タンパク質および断片は典型的には、タンパク質（単数または複数）または断片（単数または複数）が培養された細胞中で発現される組換え技術によって産生される。ペプチドは、化学的に合成することもできる。
Ａ． ワクチンの構成要素としてのＨＳＶ−２タンパク質

【0024】

ＨＳＶ−２（単純ヘルペスウイルス２型）は、エンベロープされたウイルスである。そのゲノムは、７５個以上の異なるタンパク質を発現する。タンパク質の多くは、構造的であり、カプシドおよびテグメントを形成するために使用され、一方で他の幾つかは、エンベロープの一部である。主要なカプシドタンパク質としては、読み取り枠（一般名がＯＲＦ名と異なる場合、タンパク質名は括弧内である）ＵＬ６、ＵＬ１８（ＶＰ２３）、ＵＬ１９（ＶＰ５）、ＵＬ３５（ＶＰ２６）、およびＵＬ３８から発現されるものが挙げられ、主要なテグメントタンパク質としては、ＵＬ７、ＵＬ１１、ＵＬ１３、ＵＬ１４、ＵＬ１６、ＵＬ１７、ＵＬ２１、ＵＬ２５、ＵＬ３６、ＵＬ３７、ＵＬ４１、ＵＬ４６（ＶＰ１１／１２）、ＵＬ４７（ＶＰ１３／１４）、ＵＬ４８（ＶＰ１６）、ＵＬ４９、ＵＬ５１、およびＵＳ１１が挙げられ、主要なエンベロープタンパク質としては、ＵＬ１（糖タンパク質Ｌ（ｇＬ））、ＵＬ１０（ｇＭ）、ＵＬ２０、ＵＬ２２（ｇＨ）、ＵＬ２７（ｇＢ）、ＵＬ４３、ＵＬ４４（ｇＣ）、ＵＬ４９Ａ（ｇＮ）、ＵＬ５３（ｇＫ）、ＵＳ４（ｇＧ）、ＵＳ５、（ｇＪ）、ＵＳ６（ｇＤ）、ＵＳ７（ｇＩ）、およびＵＳ８（ｇＥ）が挙げられる。（文献中、他のタンパク質名が使用されている場合もある。）例示的なＨＳＶ−２ゲノム配列は、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＣ００１７９８．１（更新日２０１０年４月２３日２：１６ｐｍ、２０１１年１月１０日にアクセスした。その全体が組み込まれる）に見出される。一般的に使用されるタンパク質名は、遺伝子名と異なる場合があり、例えば、ＵＬ１９は、ＶＰ５をコードするが、本明細書における遺伝子名への参照は、コードされるタンパク質への参照と同じであることが理解される。また、タンパク質の正確な配列は、あるヘルペスウイルスから別のヘルペスウイルスにわたり様々であり得、またしたがって、ＨＳＶ−２タンパク質（構造またはエンベロープまたは非エンベロープ）への全ての参照は、任意の自然発生的ＨＳＶ−２から獲得可能な任意のかかるタンパク質を包括することも理解される。配列の数は、既知であり、データベースに蓄積される。代替的配列を有するＨＳＶ−２タンパク質をコードする核酸は、適切なオリゴヌクレオチドプローブまたはプライマー（例えば、ストリンジェントな条件下で、参照配列に特異的にハイブリダイズするもの）を有する１つ以上のＨＳＶ−２（例えば、蓄積されたＨＳＶ−２または臨床単離物）から容易に単離または増幅することができる。例えば、ＵＬタンパク質等のＨＳＶ−２タンパク質をコードする核酸の群の中で、群のある核酸は、ストリンジェントな条件下で群内の別の核酸の補体にハイブリダイズするであろう。

【0025】

用語「ストリンジェントな条件」は、その下で、プローブがその標的サブ配列に優先的にハイブリダイズし、他の配列にはより少ない範囲でハイブリダイズするか、または全くハイブリダイズしないであろう条件を指す。サザンおよびノーザンハイブリダイゼーション等の核酸ハイブリダイゼーション実験の文脈における「ストリンジェントなハイブリダイゼーション」および「ストリンジェントなハイブリダイゼーション洗浄条件」は、配列依存性であり、また異なる環境パラメータ下で異なる。核酸のハイブリダイゼーションに対する広範な手引きは、“Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｏｆ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｂｅ ａｓｓａｙｓ” Ｅｌｓｅｖｉｅｒ （Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９９３）の第２章パートＩ、Ｔｉｊｓｓｅｎ，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ−−Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｐｒｏｂｅｓに見出される。特定の実施形態では、高度にストリンジェントなハイブリダイゼーションおよび洗浄条件は、定められたイオン強度およびｐＨにおける特定の配列に対する熱溶融点（Ｔ_ｍ）より約５℃低い。Ｔ_ｍは、標的配列の５０％が、完全に合致するプローブにハイブリダイズする（定められたイオン強度およびｐＨにおける）温度である。特定の実施形態では、極めてストリンジェントな条件は、特定のプローブに関するＴ_ｍに等しい。

【0026】

サザンまたはノーザンブロット法においてフィルタ上に１００個以上の相補的残基を有する相補的核酸のハイブリダイゼーションのためのストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の例は、４２℃で、１ｍｇのヘパリンを伴う５０％のホルマリンであり、ハイブリダイゼーションは一晩実施される。高度にストリンジェントな洗浄条件は、７２℃で約１５分間の０．１５ＭのＮａＣｌである。ストリンジェントな洗浄条件の例は、６５℃で１５分間の０．２ｘＳＳＣ洗浄である（ＳＳＣ緩衝液の説明についてはＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．を参照）。高ストリンジェンシー洗浄は、バックグラウンドプローブシグナルを除去するために、低ストリンジェンシー洗浄に先行され得る。例えば、１００個を超えるヌクレオチドの２本鎖に関する、中ストリンジェンシー洗浄の例は、４５℃で１５分間の１ｘＳＳＣである。例えば、１００個を超えるヌクレオチドの２本鎖に関する、低ストリンジェンシー洗浄の例は、４０℃で１５分間の４〜６ｘＳＳＣである。概して、特定のハイブリダイゼーション分析における関連しないプローブに関して観察される比率の２倍の（またはそれより高い）シグナルのノイズに対する比率は、特定のハイブリダイゼーションの検出を示唆する。

【0027】

１つ以上のエンベロープタンパク質が宿主細胞へのウイルス侵入に関与するため、エンベロープタンパク質に対する抗体は、ウイルスを中和する、すなわちウイルスによる感染または再感染を予防することができる。メカニズム理論に拘束されることを望みはしないが、細胞侵入に必要なそのエンベロープタンパク質のうちの１つ以上に対する抗体を引き起こすことは、中和抗体を獲得する１つの方法である。全ウイルス、典型的には不活性化ウイルスを含むワクチンは、エンベロープタンパク質を免疫細胞に自然に提示する。個々のウイルスタンパク質を含むワクチンに関して、中和抗体応答を獲得する１つの戦略は、１つ以上のエンベロープタンパク質、もしくは免疫原性タンパク質断片、もしくは免疫原性ペプチド、またはこれらの幾つかの組み合わせをワクチン中に含むことである。

【0028】

ＨＳＶ−２は、１４個以上のエンベロープ関連タンパク質をコードし、そのうちの少なくとも幾つかは、細胞侵入に関与し、ｇＢ、ｇＤ、ｇＨ、およびｇＬを含むがこれらに限定されない。ｇＤは、細胞上でＨＳＶ−２受容体に特異的に結合すると考えられ、ｇＢは、ヘテロ二量体ｇＨ／ｇＬとともに、膜融合を媒介すると考えられる。したがって、これらの４つのエンベロープ糖タンパク質は、これらのエンベロープ糖タンパク質に対して引き起こされる抗体は中和抗体を含み得るため、ワクチン中への含有のための免疫原として優れた選択である。別法として、またはそれに加えて、ウイルス出芽に関与するエンベロープ糖タンパク質も、ワクチン中への含有のための免疫原としての候補である。

【0029】

エンベロープタンパク質以外のＨＳＶ−２の構造タンパク質の大部分は、カプシドおよびテグメント内に見出される。テグメントは、カプシドとエンベロープとの間の空間を占める。テグメント内に見出される約２０個のウイルスタンパク質が存在する。テグメントタンパク質は、免疫調整、ウイルス組み立て、および最終的な放出を含む、種々のウイルス機能にとって重要である。カプシドタンパク質は、ビリオンの核酸ゲノムを包囲する構造を形成する。ＶＰ５、ＵＬ１９の産生物は、主要なカプシドタンパク質である。細胞応答はしばしば、構造タンパク質に対して、および種々のＨＳＶタンパク質に対して引き起される（Ｈｏｓｋｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌ ８０：５５０９−５５５１５，２００６）。概して、細胞応答は、ＨＳＶ感染の食い止めにおいて役割を果たす細胞型、ＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞の両方に関与する。

【0030】

本明細書で開示される免疫原性薬学的組成物（例えば、ワクチン）は、免疫源として２つ以上の構造タンパク質を含み、そのうちのあるものは、エンベロープ糖タンパク質であり、別のものは、エンベロープ糖タンパク質以外である。構造タンパク質の任意のものが使用され得るが、選択は、産生の容易さ、薬学的組成物への製剤化能力、タンパク質構造に関する情報、および高い発現レベルによって導かれ得る。Ｔ細胞応答は、典型的にはＭＨＣに制限されているため、ワクチンは概して、最高数のＭＨＣ型によって応答されるタンパク質またはペプチドを含有し、また、応答する個数を増加させるために、複数のタンパク質またはペプチドを含有してもよい。

【0031】

免疫原性薬学的組成物は、好ましくは、無菌であり、他のウイルス汚染物を含まないかまたは実質的に含まず、またＬＰＳ等の発熱物質を含まないかまたは実質的に含まない。そのような組成物は、ワクチンとして有用である。

【0032】

ワクチンにおける免疫原としての使用のためのエンベロープおよび非エンベロープ構造タンパク質は、典型的には全長であるが、前駆体タンパク質、断片、または融合タンパク質の一部であることも可能である。全長タンパク質は、成熟タンパク質を指し、例えば、エンベロープタンパク質の場合では、成熟タンパク質は、エンベロープ内に見出される形態（例えば、リーダーペプチドを欠く）である。前駆体タンパク質（プレタンパク質）は、任意の処理が生じる前の新生の翻訳されたタンパク質、または部分的に処理されたタンパク質である。融合タンパク質の一部として、ＨＳＶ−２タンパク質は、前駆体または全長タンパク質またはタンパク質断片として存在してもよい。タンパク質の断片は、免疫原性であり、免疫応答を引き起こす１つ以上のエピトープを含有するべきである。

【0033】

幾つかの実施形態では、本明細書で開示される免疫原性薬学的組成物（例えば、ワクチン）は、免疫源として、（ｉ）ＨＳＶ−２のα群遺伝子産生物、もしくはその免疫学的断片、および／または（ｉｉ）ＨＳＶ−２のβ１群遺伝子産生物、もしくはその免疫学的断片、および／または（ｉｉｉ）ＨＳＶ−２のβ２群遺伝子産生物、もしくはその免疫学的断片、および／または（ｉｖ）ＨＳＶ−２のγ１群遺伝子産生物、もしくはその免疫学的断片、および／または（ｖ）ＨＳＶ−２のγ２群遺伝子産生物、もしくはその免疫学的断片を含む。α、β１、β２、γ１、およびγ２遺伝子は、当技術分野において周知である。例えば、Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、第２９章、１９８６を参照されたい。

【0034】

したがって、本明細書における用語「免疫原」の使用は、（ａ）全長抗原、（２）抗原の免疫原性断片（３）全長抗原の免疫原性変異体、または免疫原性断片の変異体、（４）異なるポリペプチドの部分を含む、そのキメラ融合物、および（５）その共役体である、ポリペプチドの群全体を指す。種々の実施形態において、ワクチンにおける使用のためのエンベロープおよび非エンベロープ構造タンパク質は、その免疫原性断片、または該タンパク質に特異的な免疫応答を誘発し得るその変異体のうちの任意のものを含む、ポリペプチドを含む。

【0035】

例えば、免疫原性変異体は、抗原の少なくとも１０個の隣接アミノ酸にわたり、少なくとも９０％のアミノ酸同一性を、または抗原の少なくとも１５個の隣接アミノ酸にわたり、少なくとも８５％のアミノ酸同一性を保持する（例えば、エンベロープタンパク質または非エンベロープ構造タンパク質）。他の例としては、抗原の少なくとも５０個の隣接アミノ酸にわたる、または抗原の少なくとも１００個の隣接アミノ酸にわたる、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性が挙げられる。一実施形態では、免疫原性変異体は、特定の抗原の全長にわたり、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する。幾つかの実施形態では、変異体は、自然発生的変異体である。

【0036】

別の例として、免疫原性断片、およびその変異体は、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４８、または５０個の、抗原の隣接アミノ酸を含む。免疫原性断片は、前述の間の任意の数の隣接アミノ酸を含むことができ、その結果、例えば、免疫原性断片は、約６〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜１００個、またはそれを超える、免疫原性ポリペプチドの隣接アミノ酸である。

【0037】

短い断片は、ペプチドと称されることが多く、Ｔ細胞受容体に結合するためにＭＨＣ分子と複合体を形成するように選択され、また概して、最大約３０個のアミノ酸の長さ、または最大約２５個のアミノ酸の長さ、または最大約２０個のアミノ酸の長さ、または最大約１５個のアミノ酸の長さ、または最大約１２個のアミノ酸の長さ、最大約９個のアミノ酸の長さ、最大約８個のアミノ酸の長さである。概して、より短いペプチドは、ＭＨＣクラスＩ分子に結合し、または関連付けられ、より長いペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合し、または関連付けられる。好適なペプチドは、任意の数の生物情報学プログラムを用いて予測することができ、また周知の方法を用いて試験することができる。短い断片は、本明細書において「ペプチド」とも称され、典型的には、１５〜１００個のアミノ酸の長さであり、より長い断片は、典型的には、１００個のアミノ酸から最大で全長の長さであるが、ただしペプチド（短い断片）およびより長い断片に関する長さの範囲は、厳密ではない。

【0038】

本明細書で開示される通り、好適なタンパク質としては、前駆体タンパク質、成熟タンパク質、断片、融合タンパク質、およびペプチドが挙げられる。組成物中、タンパク質は、同じ形態で存在してもよく、またはこれらの形態の混合物として存在してもよい。例えば、エンベロープ糖タンパク質は、成熟タンパク質として、および構造タンパク質は、断片として存在してもよく、またはエンベロープ糖タンパク質は、断片として、および構造タンパク質は、断片として存在してもよい。糖タンパク質の細胞産生に関して、シグナルペプチドは、前駆体タンパク質の一部であってもよい。シグナルペプチドとしては、糖タンパク質Ｄ天然配列または当技術分野において既知の他のものが挙げられる。また、膜貫通領域または細胞内領域またはその両方を有さないタンパク質を使用することも望ましい場合がある。

【0039】

本明細書で述べられる通り、断片とも称されるエンベロープ糖タンパク質の１つ以上の部分は、中和抗体に結合する１つ以上のエピトープを含有するために選択される。エピトープを含有する部分は、分析、例えば、細胞のウイルス感染における中和抗体の阻害等によって、同定され得る。手短に述べると、ＨＳＶ−２エンベロープ糖タンパク質の重複する部分は、中和抗体（例えば、感染した動物またはヒトに由来する血清）と混合され、また混合物は、ＨＳＶ−２および許容状態の細胞株に添加される。部分が抗体に結合するエピトープを有する場合、細胞株は、ＨＳＶ−２に感染するであろう。部分がエピトープを有さない場合、細胞株は、感染しないであろう。

【0040】

免疫原性ＨＳＶ−２ポリペプチドの少なくとも１つの免疫原性断片を含む組成物は、免疫原として使用され得る。幾つかの実施形態では、免疫原性断片は、本明細書で説明される組換え発現ベクターによってコードされる。免疫原性断片は、少なくとも６、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００個、またはそれを超える、免疫原性ポリペプチドの隣接アミノ酸から成り得る。免疫原性断片は、前述の間の任意の数の隣接アミノ酸を含むことができ、その結果、例えば、免疫原性断片は、約６〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜１００個、またはそれを超える、免疫原性ポリペプチドの隣接アミノ酸である。免疫原性断片は、線状エピトープを形成する十分な数の隣接アミノ酸を含むことができ、および／または、断片が、該断片が由来する全長ポリペプチドと同じ（または十分に類似した）３次元配座に折り畳まり、非線状エピトープもしくはエピトープ（当技術分野では配座エピトープとも称される）を提示する十分な数の隣接アミノ酸を含むことができる。免疫原性断片が、全長ポリペプチドに匹敵する配座に折り畳まるかを評価する分析としては、例えば、タンパク質の、天然のまたは折り畳まれていないエピトープに特異的であるモノクローナルまたはポリクローナル抗体と反応する能力、他のリガンド結合機能の保持、およびプロテアーゼによる消化に対するポリペプチド断片の感受性または耐性が挙げられる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， ３ｄ ｅｄ．， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， ＮＹ （２００１）参照）。したがって、例として、ポリペプチド断片の３次元配座は、全長ポリペプチドに特異的に結合する抗体の結合能力および結合のレベルが、断片に対して、全長ポリペプチドに対するものと実質的に同じである（すなわち、結合のレベルが、例示的なまたは野生型の全長抗原の免疫原性と比較して、統計的、臨床的、および／または生物学的に十分な度合に保持されている）とき、全長ポリペプチドに十分に類似する。

【0041】

分析においてスクリーニングされる断片、例えば、上に説明されるものは、概して短い。概して、候補となる断片の長さは、最大約４０個のアミノ酸の長さ、または最大約２５個のアミノ酸の長さ、または最大約２０個のアミノ酸の長さ、または最大約１５個のアミノ酸の長さ、または最大約１２個のアミノ酸の長さ、または最大約９個のアミノ酸の長さ、または最大約８個のアミノ酸の長さである。スクリーニングに使用される断片は、典型的には重複している。例えば、一組の断片は、１６個のアミノ酸を重複する２０個のアミノ酸の長さの断片を含んでもよい（すなわち、アミノ酸４個おきにずれる）。典型的には、重複する組は、未処理の糖タンパク質のＮ末端で開始し、すなわち、リーダー配列を含有し、細胞外ドメインのＣ末端アミノ酸で終了する。

【0042】

中和抗体に結合する断片は、本明細書で開示されるように、選択され、また薬学的組成物に使用され得る。断片は、「そのままで」、またはさらに操作されて、または他の断片と組み合わせて使用され得る。免疫原性であるのに十分に大きく、また十分に複雑な断片に関して、それらは、薬学的組成物に使用され得る。約１０００ＭＷ未満の断片は、免疫原性である可能性は低いが、ただし、複雑性も断片が免疫原性であるかどうかにおいて役割を果たし得る。例えば、単一のアミノ酸の反復単位から成るホモポリマーは、そのサイズに関わらず不良な免疫源であり、一方、２または３個のアミノ酸のコポリマーは、良好な免疫原である。グルタミン酸およびリジンのコポリマーは、免疫原性であるために少なくとも約３０〜４０，０００ＭＷである必要がある。芳香族側鎖を有するアミノ酸は、免疫原性を増加させ、その結果、チロシンおよびフェニルアラニンを含む僅か約４０００ＭＷの断片は、免疫原性である。免疫原性であるには短すぎる、または複雑ではない断片は、例えば、ＫＬＨ（キーホールリンピットヘモシアニン）、オボアルブミム、ウシ血清アルブミン、もしくは薬学的組成物を受ける対象にとって異質である他のタンパク質等の、担体タンパク質に共役されてもよく、または断片は、合わせて結合されて、免疫原性タンパク質を作成してもよい。断片が免疫原性であるかどうかは、動物において決定され得る。例えば、断片は、プライム−ブーストレジメンで動物に投与され、断片に対する抗体は、例えば、ブーストの７〜１０日後に取り出した血清を用いてＥＬＩＳＡで分析され得る。検出可能なシグナルは、断片が免疫原性であることを示す。より高いシグナルが望ましい。免疫原性に関する他の分析は、当業者に周知である。

【0043】

幾つかの実施形態では、組成物に使用される断片は、合成長鎖ペプチドである。「合成長鎖ペプチド」（ＳＬＰ）とは、生体外で製造され、約２５個のアミノ酸ほどの短い長さ、および約１００個のアミノ酸ほどの長い長さを有する、タンパク質配列を指す。ＳＬＰは、ＭＨＣクラスＩまたはクラスＩＩ分子を伴う細胞表面上の提示のために、樹状細胞によって取り込まれ、処理されるのに十分な長さであるべきである。ＳＬＰは、それに対して免疫応答が所望されるタンパク質に由来するペプチドである。一実施形態では、免疫応答は、Ｔ細胞応答である。タンパク質は、既知の抗原であってもよく、または、幾つかのタンパク質の場合、候補抗原であってもよい。

【0044】

ＳＬＰは、少なくとも１つのＣＤ４エピトープ、または少なくとも１つのＣＤ８エピトープ、または少なくとも１つのＣＤ４と少なくとも１つのＣＤ８エピトープとを含む。ＣＤ４エピトープは、クラスＩＩ ＭＨＣに結合するアミノ酸配列を指し、またＣＤ８エピトープは、クラスＩ ＭＨＣに結合するアミノ酸配列を指す。エピトープ配列は、免疫原のアミノ酸配列に由来し、手短に述べると、生体内で、免疫原は、抗原を処理する細胞（例えば、樹状細胞）によって取り込まれ、または合成されて、ペプチドに分解され、該ペプチドは、ＭＨＣ分子に関連付けられ、ＭＨＣペプチド複合体として細胞表面上に提示される。ＭＨＣクラスＩ分子と複合されたペプチドは、ＣＤ８＋Ｔ細胞上でＴ細胞抗原受容体およびＣＤ８と相互作用し、これらのペプチドは、ＣＤ８エピトープと呼ばれ、ＭＨＣクラスＩＩ分子と複合されたペプチドは、ＣＤ４＋Ｔ細胞上でＴ細胞抗原受容体およびＣＤ４と相互作用し、これらのペプチドは、ＣＤ４エピトープと呼ばれる。活性化されたＣＤ８＋Ｔ細胞は、細胞毒性Ｔ細胞となり、それはＭＨＣクラスＩ−ＣＤ８エピトープを表す標的細胞を認識し、死滅させる。標的細胞は、感染した細胞または腫瘍細胞であることが多い。活性化されたＣＤ４＋Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞となり、またその亜型に応じて、Ｂ細胞が抗体を産生するか、またはナチュラルキラー細胞、単核食細胞、およびＣＤ８＋Ｔ細胞を活性化するのを助ける。ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の両方の活性化は、総合的な細胞性免疫応答に寄与する。

【0045】

上に開示される通り、ＳＬＰは、樹状細胞によって取り込まれて処理され、ＭＨＣ分子とともにその細胞表面上に提示されるのに十分な長さであるべきである。ＭＨＣクラスＩ分子と複合されたペプチドは、概して８〜１１個のアミノ酸の長さであり、またＭＨＣクラスＩＩ分子と複合されたペプチドは、概して１３〜１７個のアミノ酸の長さであるが、ただし、より長いまたはより短い長さも稀ではない。したがって、ＳＬＰは典型的には、少なくとも２５個のアミノ酸の長さ、および１００個ものアミノ酸の長さ（例えば、少なくとも３０ａａ、少なくとも３５ａａ、少なくとも４０ａａ、少なくとも４５ａａ、少なくとも５０ａａ、少なくとも５５ａａ、少なくとも６０ａａ、少なくとも６５ａａ、少なくとも７０ａａ、少なくとも７５ａａ、少なくとも８０ａａ、少なくとも８５ａａ、少なくとも９０ａａ、少なくとも９５ａａ）であろう。ＳＬＰの長さは、概して約４５ａａまたは約５０ａａの長さであろう。

【0046】

エピトープは、既知の配列または未知の配列を有することができる。多量のタンパク質が、ＣＤ４およびＣＤ８エピトープに関してマッピングされている。これらのエピトープのうちの１つ以上を含むＳＬＰに関して、長さは、典型的には約４５ａａである。さらに、エピトープは、Ｎ末端において、およびＣ末端部位において、約１５ａａ隣り合ってもよい。隣り合う配列は、典型的には、天然タンパク質内のエピトープ配列と隣り合う配列である。上述の通り、ＳＬＰは、１つ以上のエピトープを含むことができ、複数のエピトープは、全てＣＤ４もしくはＣＤ８エピトープであってもよく、またはＣＤ４およびＣＤ８エピトープの混合物であってもよい。さらに、エピトープは、配列内で重複し得る（重複するエピトープを含む幾つかの例示的なＳＬＰについては、実施例１を参照）。使用されるＳＬＰの総数は、全ての既知のＣＤ４およびＣＤ８エピトープが表されるようなものであり得る。

【0047】

ＳＬＰは、種々の方法のうちの任意のものによって合成され得る（合成方法の総合的考察については、Ｃｏｒｒａｄｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄ ２：１， ２０１０を参照）。自動ペプチド合成装置は、市販されており、また多くの企業は合成サービスを提供している（例えば、Ａｂｂｉｏｔｅｃ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｃｏｍｐａｎｙ，ＡｎａＳｐｅｃ，Ｂａｃｈｅｍ，Ｃｏｖａｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）。合成後、ペプチドは、精製され、典型的にはＨＰＬＣによるが、ただしイオン交換クロマトグラフィおよびゲル濾過クロマトグラフィ等の代替的な精製方法が使用されてもよい。許容される純度は、分析的ＨＰＬＣによって評価する際に、少なくとも９０％または少なくとも９５％または少なくとも９８％である。

【0048】

タンパク質が、ＣＤ４エピトープまたはＣＤ８エピトープまたはその両方に関してマッピングされていないとき、タンパク質配列全体を含む一組のＳＬＰが、合成されてもよい。各ＳＬＰは、典型的には約５０ａａであり、また連続したＳＬＰは、配列内で約２５ａａだけ重複し得る。別法として、またはそれに加えて、アルゴリズムおよびコンピュータプログラムが、ＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ分子に結合するであろう配列を予測するために使用され得る。そのようなプログラムは、容易に入手可能であり、例えば、ＲＡＮＫＰＥＰ（Ｒｅｃｈｅ ｅｔ ａｌ．， Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ６３： ７０１， ２００２）、Ｅｐｉｐｒｅｄｉｃｔ（Ｊｕｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ ２９： １７９， ２００１）、およびＭＨＣＰｒｅｄ（Ｇｕａｎ ｅｔ ａｌ． Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ３１： ３６２１， ２００３ ａｎｄ Ｇｕａｎ ｅｔ ａｌ．， Ａｐｐｌ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ５： ５５， ２００６）、ＥｐｉＭａｔｒｉｘ（ＥｐｉＶａｘ，Ｉｎｃ．）である。

【0049】

ＳＬＰの配列は、最適な産生のために必要に応じて整えられ得る。例えば、天然配列に由来するペプチドの端部の１つ以上のアミノ酸は、可溶性または安定性を向上させるために、または全体の電荷を増加もしくは減少させるために排除されてもよい。特定の例として、高含有量の疎水性アミノ酸を有するペプチド配列は、可溶化が困難であり得る。目安として、疎水性の内容物は、理想的には５０％未満である。システイン、メチオニン、またはトリプトファン残基、特に複数のＣｙｓ、Ｍｅｔ、またはＴｒｐ残基を含有するペプチドは、合成が困難であり得る。ヒドロキシプロリン、γ−アミノ酪酸、ノルロイシン等の、標準的なアミノ酸かまたは非標準的なアミノ酸かのいずれかの別のアミノ酸の置換は、合成効率または純度を向上させ得る。ＳＬＰの設計における他の考慮事項としては、β−シート形成の範囲、Ｎ末端アミノ酸（例えば、Ｎ末端Ｇｌｎは環化し得る）、隣接するＳｅｒおよびＰｒｏ残基の最小化が挙げられる。

【0050】

薬学的組成物における含有に特に有用な幾つかの構造タンパク質としては、ＵＬ１９（配列番号４）、ＵＬ１９上方ドメイン断片（配列番号１２）、ＵＬ２５（配列番号５）、およびＵＬ４７（配列番号６）が挙げられる。ウイルスタンパク質の構造は、ＮＣＢＩのＭＭＤＢ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｏｄｅｌｉｎｇ Ｄａｔａｂａｓｅ）に見出すことができる。分子構造情報は、ＵＬ２５（ＭＭＤＢ ＩＤ：３７７０６、Ｂｏｗｍａｎ ｅｔ ａｌ． Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８０：２３０９， ２００６、その全体が組み込まれる）、ＶＰ５（ＵＬ１９の産生物）（ＭＭＤＢ ＩＤ：２６００５、Ｂｏｗｍａｎ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ． ２２： ７５７−７６５， ２００３、その全体が組み込まれる）、ＶＰ１３／１４（ＵＬ４７の産生物）（ＭＭＤＢ ＩＤ：６０２２）、およびエンベロープタンパク質ｇＤ２（ＭＭＤＢ ＩＤ：３６２４４、Ｋｒｕｍｍｅｎａｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ． ＥＭＢＯ Ｊ ２４：４１４４−４１５３， ２００５、その全体が組み込まれる）、ＩＣＰ３４．５、ならびに多くの他のＨＳＶ−２タンパク質に関して入手可能である。加えて、幾つかのウイルスタンパク質のＴ細胞エピトープが、既知である（Ｋｏｅｌｌｅ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７４：１０９３０−１０９３８， ２０００；Ｍｕｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ ９０：１１５３−１１６３， ２００９；Ｋｏｅｌｌｅ ｅｔ ａｌｌ， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６６：４０４９−４０５８， ２００１；ＢｅｎＭｏｈａｍｅｄ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７７：９４６３−９４７３， ２００３；米国特許第６，８５５，３１７号；ＰＣＴ公開第ＷＯ２００４／００９０２１号、それらの参照の全ては、その全体が組み込まれる）。

【0051】

これらのタンパク質のうちの任意のものの免疫原性断片、変異体、および融合タンパク質、特に、ＵＬ１９、ＵＬ１９上方ドメイン断片、ＵＬ２５、およびＵＬ４７は、本明細書における免疫原性組成物における使用に特に企図される。したがって、本開示は、少なくとも１０個のその隣接アミノ酸にわたり少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または少なくとも１５個のその隣接アミノ酸にわたり少なくとも８５％のアミノ酸同一性を保持する配列番号４、５、６、または１２のうちの任意のものの断片または変異体を含む。別の例として、本開示は、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４８、もしくは５０個の配列の隣接アミノ酸、または約６〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜１００個、またはそれを超える配列の隣接アミノ酸を含む、免疫原性断片を含む。本開示はまた、少なくとも５０個の配列の隣接アミノ酸にわたり、または少なくとも１００個の配列の隣接アミノ酸にわたり、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する変異体を含む。幾つかの実施形態では、変異体は、自然発生的変異体であり、好ましくは、ストリンジェントな条件下で、配列番号４、５、６、または１２のうちのいずれかをコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズするものである。

【0052】

本明細書で開示される通り、ペプチドを含む、非エンベロープ構造タンパク質（例えば、配列番号９および１０に記載されるＵＬ１９ペプチド、ならびに配列番号１１に記載されるＵＬ２５ペプチド）およびエンベロープタンパク質（例えば、ｇＤ２（配列番号７および８））の免疫原性断片は、使用されてもよく、またはタンパク質に由来するより長い配列（すなわち、断片）の一部であってもよい。本明細書で使用するとき、ペプチドは、アミノ酸の短い配列を指し、概して少なくとも１５個の残基から、および概して最大で約１００個の残基、または約２０個の残基〜約８０個の残基、または約３０個の残基〜約７０残基である。本明細書で使用するとき、断片は、全長タンパク質未満の任意の長さのポリペプチドを指し、概して少なくとも１００個のアミノ酸の長さであるが、ただし、断片のサイズ範囲はペプチドのサイズ範囲と重複し得る（例えば、約５０個の残基の長さからの断片）。具体的には、ＵＬ１９上方ドメイン断片は、ＵＬ１９の残基１〜４５０および残基１０５５〜１３７４のうちの少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または全てを欠失する。したがって、上方ドメイン断片は、例えば、残基３３７〜４５１のうちのいずれかで開始し、また残基１０５５〜１２９４のうちのいずれかで終了する（および、少なくとも配列番号４のアミノ酸１〜３３６および１２９５〜１３７４を欠く）ことができる。例えば、ＵＬ１９断片は、約残基４５１〜約１０５４に由来してもよい（配列番号１２）。ＵＬ１９上方ドメイン断片は、配列番号１２の約５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、または５００個以上のアミノ酸を含むことができる。

【0053】

加えて、本明細書のペプチドおよび断片は、異種ペプチドに融合され得る。異種ペプチドの例としては、他のタンパク質に由来する配列（例えば、ＵＬ１９の場合、ＵＬ１９上方ドメイン断片は、ＵＬ１９ではない別のタンパク質に由来する配列に融合され得る）、または、概してＮ末端かもしくはＣ末端かのいずれかに位置する、ヘキサヒスチジン等のタグ配列が挙げられる。したがって、本明細書で説明される免疫原性断片または変異体は、免疫原性を強化する別のペプチド、タグもしくはマーカーとして働く別のペプチド、または別のＨＳＶ−２構造タンパク質に由来する別のペプチドに融合され得る。したがって、免疫原性ポリペプチドは、ＨＳＶ−２構造タンパク質の指定の断片から成る断片を含み得る。一実施形態では、免疫原性ポリペプチドは、任意に、非ＵＬ１９ペプチドに融合される、配列番号１２から成るＵＬ１９の断片または配列番号１２の断片を含む。別の例では、免疫原性ポリペプチドは、任意に、非ＵＬ１９ペプチドに融合される、配列番号１２の５０個の隣接アミノ酸にわたり少なくとも８０％または９０％同一であるアミノ酸配列から成る、ペプチドを含む。

【0054】

驚くべきことに、本明細書の実施例は、ＵＬ１９上方ドメイン断片は、ＨＳＶ−２感染に対する防御抗体を引き起こす能力を有し、その結果ＵＬ１９タンパク質の残りが免疫原として必要とされないことを示す。この驚くべき発見は、困難であると証明されている全長ＵＬ１９を発現する試みとして思いがけないものである。例えば、大腸菌および他の発現系における全長ＵＬ１９の発現、およびその後の可溶性全長ＵＬ１９の精製は、困難であることが証明されている。

【0055】

細胞中の発現は、典型的にはリーダー配列（シグナルペプチドとしても既知である）が欠けている成熟タンパク質をもたらすため、典型的には、薬学的組成物中のタンパク質は、前駆体タンパク質以外のものであろう。ｇＤのリーダー配列は、概ね残基１〜２５を包括する。ｇＢのリーダー配列は、概ね残基１〜２２を包括する。糖タンパク質Ｄ（配列番号２）は、３９３個のアミノ酸タンパク質であり、概ね残基２６〜３４０に及ぶ細胞外領域、概ね残基３４１〜３６１に及ぶ膜貫通領域、および概ね残基３６２〜３９３に及ぶ細胞質領域、および残基１１９、１４６、２８７における多数のＮ結合型糖鎖合成部位（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ取得番号Ｑ６９４６７、エントリーのバージョン４９および配列のバージョン１）を有する。例示的なｇＤ断片（本明細書では、代替的にｇＤ２と称される）は、配列番号３に示される配列を含む。

【0056】

幾つかの実施形態では、エンベロープ糖タンパク質に由来する抗原性および免疫原性断片は、シグナルペプチドと呼ばれることもあるリーダー配列の一部または全部を含み得る。リーダー配列は、通常、約１５〜２０個のアミノ酸であり、また正常な細胞処理において、細胞の装置によって開裂され得るが、無傷のビリオン中の糖タンパク質のうちの幾つかは、リーダー配列を有し得る。リーダー配列は、通常、Ｎ末端に幾つかの極性アミノ酸を有し、内部のアミノ酸は、概して疎水性である。上に説明される通り、ＨＳＶ−２エンベロープ糖タンパク質のうちの幾つかについてのリーダー配列は、決定されている。他のＨＳＶ−２エンベロープ糖タンパク質に関しては、コンピュータプログラムを使用して、シグナルペプチドを予測することができる。これらのプログラムのうちの幾つかとしては、ＳＩＧ−Ｐｒｅｄ（ｂｍｂｐｃｕ３６．ｌｅｅｄｓ．ａｃ．ｕｋ／ｐｒｏｔ＿ａｎａｌｙｓｉｓ／Ｓｉｇｎａｌ．ｈｔｍｌ），ＰｒｅｄｉＳｉ（ｗｗｗ．ｐｒｅｄｉｓｉ．ｄｅ），ＯＣＴＯＰＵＳ（ｏｃｔｏｐｕｓ．ｃｂｒ．ｓｕ．ｓｅ）、およびｓｉｇｃｌｅａｖｅ（ｅｍｂｏｓｓ．ｓｏｕｒｃｅｆｏｒｇｅ．ｎｅｔ／ａｐｐｓ／ｃｖｓ／ｅｍｂｏｓｓ／ａｐｐｓ／ｓｉｇｃｌｅａｖｅ．ｈｔｍｌ）が挙げられる。

【0057】

本明細書で説明される組成物における使用のためのリーダー配列を含有する抗原性または免疫原性断片の細胞産生の間に、種々の技術が、シグナルペプチドの開裂を阻害するために使用され得る。例えば、開裂部位に隣り合うアミノ酸のうちの１つ以上は、異なるアミノ酸へと改変され、細胞の装置によって認識または開裂されない配列をもたらし得る。この方法に関して、改変は、当技術術分野において既知の開裂部位に基づいて設計され、グリシンは、いずれの位置においても優先的に使用されず、チロシンは、開裂部位後の初めの幾つかの位置には稀にしか見出されず、それに対してプロリンは、＋１位置を除く多くの開裂部位にてしばしば見出され、またグルタミンは、＋１残基にて一般的に見出される（Ｚｈａｎｇ ａｎｄ Ｈｅｎｚｅｌ， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．１３： ２１９，２００４）。提案された配列は、開裂が阻害され得るかを決定するための予測プログラムをもちいて評価され得る。開裂の可能性があれば、次にさらなる改変がなされ、新しく提案された配列が再評価される。シグナルペプチドの開裂を阻害するための他の技術としては、認識配列および開裂配列における１つ以上のアミノ酸の追加、追加されたシグナルペプチドが優先的に開裂されるようなシグナルペプチドおよび認識配列のＮ末端追加、ならびにシグナルペプチドを開裂する機構を欠く宿主細胞における産生が挙げられる。

【0058】

特定の実施形態では、断片は、リーダー配列を含む、ＨＳＶ−２糖タンパク質を含む。他の実施形態では、断片は、リーダー配列から膜貫通ドメインの開始までを含むＨＳＶ−２糖タンパク質の部分を含む。さらに他の実施形態では、断片は、リーダー配列から細胞外ドメイン内部の終わりまでのＨＳＶ−２糖タンパク質の部分を含む。他の実施形態では、断片は、ＨＳＶ−２糖タンパク質の非隣接部分を含み、該部分のうちの１つは、リーダー配列内の抗原エピトープを含む。さらに他の実施形態では、断片は、ＨＳＶ−２糖タンパク質の非隣接部分を含み、該部分はエピトープを含み、または断片は、異なるＨＳＶ−２糖タンパク質に由来する部分を含み、該部分は、エピトープを含む。

【0059】

糖タンパク質Ｂ（配列番号１）は、概ね残基２３〜７７１に及ぶ細胞外領域、概ね残基７７２〜７９２に及ぶ膜貫通領域、および概ね残基７９３〜９０４に及ぶ細胞質領域、および残基８２、１３６、３９３、４２５、４８６、６７１における多数のＮ結合型糖鎖合成部位を有する（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ取得番号Ｐ０８６６６、エントリーのバージョン６０および配列のバージョン２）。糖タンパク質Ｋは、そのＮ末端部に３０アミノ酸のリーダー配列を有する３３８アミノ酸のタンパク質である（Ｒａｍａｓｗａｒｍｙ ａｎｄ Ｈｏｌｌａｎｄ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １８６：５７９−５８７，１９９２）。糖タンパク質Ｃは、予測された２７アミノ酸のリーダー配列であり、糖タンパク質Ｅは、予測された２３アミノ酸のリーダー配列を有し、また糖タンパク質Ｌは、予測された１６アミノ酸のリーダー配列を有する（Ｓｉｇｎａｌ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ，ｐｒｏｌｉｎｅ．ｂｉｃ．ｎｕｓ．ｅｄｕ．ｓｇ、２０１１年１０月６日に評価）。

【0060】

タンパク質またはタンパク質断片は、好ましくは免疫原性である。「免疫原」は、免疫応答を誘発することができる。免疫原性ペプチド配列は概して、少なくとも幾つかの血清反応陽性の対象において、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４またはＣＤ８Ｔ細胞）によって認識される。ペプチド配列は、概して、一連の重複するペプチドを用いて、完全な配列に由来するペプチドをスクリーニングすることによって同定され得る。種々の分析が、Ｔ細胞がペプチドを認識したか、およびペプチドに応答したかを決定するために使用され得る。例えば、クロム放出細胞毒性分析（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８１：６６０４−６６１５， ２００８、その分析プロトコルに関して組み込まれる）、ＥＬＩＳＰＯＴ分析、細胞内サイトカイン染色分析、およびＭＨＣマルチマー染色（Ｎｏｖａｋ
ｅｔ ａｌ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １０４：Ｒ６３−Ｒ６７， １９９９；Ａｌｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７４：９４−９６， １９９６）が、とりわけ好適な分析である。場合により、断片（単数または複数）は、免疫優勢ペプチド配列を含む。幾つかの免疫優勢エピトープが、ＨＳＶ−２糖タンパク質および構造タンパク質に関して同定されている（例えば、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ． Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８１：６６０４−６６１５， ２００８；Ｃｈｅｎｔｏｕｆｉ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｖｉｒｏｌ．８２：１１７９２−１１８０２， ２００８；Ｋｏｅｌｌｅ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １００：１２８９９−１２９０４， ２００３、全ての参考文献はその全体が本明細書に組み込まれる）。 免疫原性ペプチドはまた、生物情報学ソフトウエアによって予測され得る（Ｆｌｏｗｅｒ， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．４０９， ２００７）幾つかの例示的なプログラムおよびデータベースとしては、ＦＲＥＤ（Ｆｅｌｄｈａｈｎ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １５：２７５８−９， ２００９）、ＳＶＭＨＣ（Ｄoｎｎｅｓ ａｎｄ Ｋｏｈｌｂａｃｈｅｒ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ３４：Ｗ１９４０１９７，２００６）、ＡｎｔｉｇｅｎＤＢ（Ａｎｓａｒｉ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ３８：Ｄ８４７−８５３，２０１０）、ＴＥＰＩＴＯＰＥ（Ｂｉａｎ ａｎｄ Ｈａｍｍｅｒ Ｍｅｔｈｏｄｓ ３４：４６８−４７５， ２００４）が挙げられる。

【0061】

前駆体タンパク質、成熟タンパク質、およびペプチドを含む断片を含む、ＨＳＶ−２タンパク質のうちのいずれも、融合タンパク質の一部として組み込まれ得る。融合パートナー（単数または複数）は、ＨＳＶ−２タンパク質または非ＨＳＶ−２タンパク質配列のうちの任意のものであり得る。融合タンパク質を使用する幾つかの一般的な理由は、発現を向上させる、または結果として生じるタンパク質の精製を助けることである。例えば、発現系の宿主細胞に合わせて作成したシグナルペプチド配列は、ＨＳＶ−２タンパク質に結合されることができ、または、タンパク質精製に使用するためのタグ配列が、結合されることができ、その後、開裂配列が同様に組み込まれていれば、開裂される。タンパク質のうちの１つ以上に由来する複数のペプチドエピトープが、融合されることができ、またはタンパク質のうちの１つ以上に由来する断片が、融合されることができる。例えば、構造タンパク質または構造タンパク質の断片は、結合されることができ、例えば、ＶＰ１３／１４（ＵＬ４７）の融合タンパク質、ならびに主要カプシドタンパク質（ＵＬ１９）、またはＵＬ２５およびＵＬ４７またはＵＬ２５およびＵＬ１９等である。融合タンパク質のセグメントは、任意の順番であってよく、すなわち、ＵＬ１９およびＵＬ４７の融合物に関して、いずれかのタンパク質はＮ末端にあり得る。同様に、複数のペプチドエピトープは、任意の順番であり得る。

【0062】

前駆体タンパク質、断片、および融合タンパク質を含む、ＨＳＶ−２タンパク質の製造は概して、培養した細胞内の発現によって、または化学合成によって、達成される。（本明細書において、「ＨＳＶ−２タンパク質」は、全てのこれらの形態を含むように使用される。）短い断片は一般的には、機械（多数のものが市販されている）を用いてか、または手動でかのいずれかにより化学的に合成される。細胞によって産生される場合、原核細胞系および真核細胞系の両方の種々の好適な発現系が、周知であり、また使用され得る。タンパク質の産生に使用されることが多く、また好適である宿主細胞としては、大腸菌、酵母、昆虫、およびほ乳類が挙げられる。発現ベクターおよび宿主細胞は、市販されており（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ、米国）、または構築されてもよい。例示的なベクターは、関心のタンパク質をコードする配列に関するプロモーターおよびクローン作成部位を含み、その結果プロモーターおよび配列は、動作可能に結合される。他の要素が存在してもよく、例えば、分泌シグナル配列（リーダー配列と呼ばれることもある）、タグ配列（例えば、ヘキサ−Ｈｉｓ）、転写終結シグナル、特にベクターが染色体外で複製される場合は、複製の起点、および選択可能な産生物をコードする配列等である。宿主細胞を形質移入する方法および手順も、周知である。

【0063】

発現されたタンパク質は、収集され、「そのままで」使用されてもよく、または典型的には、分析され、さらに精製されてもよい。純度または量を決定するための典型的な手順としては、ゲル電気泳動、Ｗｅｓｔｅｒｎブロット法、質量分光法、およびＥＬＩＳＡが挙げられる。タンパク質の活性は概して、実施例に説明されるもの等の生物学的分析において評価される。必要に応じてまたは所望により、タンパク質は、さらに精製されてもよい。多くの精製方法が、周知であり、またサイズクロマトグラフィ、アニオンまたはカチオン交換クロマトグラフィ、親和性クロマトグラフィ、沈降、および免疫沈降が挙げられる。タンパク質の意図される使用は、典型的には精製の範囲を決定し、ヒトにおける使用は最高レベルの純度を要する可能性が高い。
Ｂ． 先天性免疫を活性化する薬剤

【0064】

先天性免疫系は、他の有機体による感染に対する防衛を非特異的な様式で提供する細胞を含む。先天性免疫は、即時の防衛であるが、持続しないか、またはさらなる攻撃に対して防御的ではない。概して先天性免疫において役割を果たす免疫系細胞は、マクロファージおよび樹状細胞等、食作用を有する。先天性免疫系は、適応（後天性とも呼ばれる）免疫系と種々の方法で相互作用する。先天性免疫系の細胞は、適応免疫系の細胞への抗原提示に関与することができ、他の細胞を活性化するリンホカインの発現、侵入者に特異的であり得る細胞を引き付ける走化性分子の放射、ならびに適応免疫系の細胞を補充および活性化するサイトカインの分泌を含む。本明細書で開示される免疫原性薬学的組成物は、組成物の有効性を強化するための先天性免疫を活性化する薬剤を含む。

【0065】

多くの種類の薬剤が、先天性免疫を活性化し得る。細菌およびウイルス等の有機体は、先天性免疫を活性化することができ、有機体の構成要素として、２’−５’オリゴＡ、細菌内毒素、ＲＮＡ２本鎖、単鎖ＲＮＡ、および他の分子等の化学物質が可能である。薬剤の多くは、分子のファミリー、トール様受容体（ＴＬＲ）を通して作用する。ＴＬＲの係合はまた、サイトカインおよびケモカインの産生ならびに樹状細胞の活性化および成熟、後天性免疫の発達に関与する構成要素につながり得る。ＴＬＲファミリーは、リポタンパク質、ペプチドグリカン、フラジェリン、イミダゾキノリン、ＣｐＧ ＤＮＡ、リポ多糖類、および二重鎖ＲＮＡを含む、種々の薬剤に応答し得る（Ａｋｉｒａ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ３１：６３７−６４２， ２００３）。これらの種類の薬剤は、病原体（または病原菌）関連分子パターンと呼ばれることもある。

【0066】

一態様では、１つ以上のアジュバントが、先天性免疫を活性化する薬剤（単数または複数）を提供するために、組成物中に含まれる。アジュバントは、免疫応答を増加させる抗原に組み込まれる、またはそれと同時に投与される物質である。種々の機構が、どのように異なるアジュバントが働くのかを説明するために提案されている（例えば、抗原補給所（ａｎｔｉｇｅｎ ｄｅｐｏｔ）、樹状細胞の活性化因子、マクロファージ）。理論によって拘束されることを望みはしないが、ある機構は、先天性免疫系の活性化を含み、ケモカインおよびサイトカインの産生をもたらし、それらは次に、適応（後天性）免疫応答を活性化する。具体的には、アジュバントは、ＴＬＲを通して樹状細胞を活性化する。したがって、アジュバントは、ＨＳＶ−２に対するワクチンにおいて使用され得る先天性免疫系を活性化する薬剤の一種類である。アジュバントは、他の方法でも後天性免疫応答を強化するように作用し得る。好ましくは、アジュバントは、ＴＬＲ４作動薬である。

【0067】

本明細書で説明される組成物において使用され得る１つのアジュバントは、一酸脂質Ａ（ＭＡＬＡ）型分子である。例示的なＭＡＬＡは、Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ， ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ， Ｐｏｗｅｌｌ， Ｍ．Ｆ． ａｎｄ Ｎｅｗｍａｎ， Ｍ．Ｊ．， ｅｄｓ．Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ， ＮＹ １９９５の中の第２１章、Ｕｌｒｉｃｈ Ｊ．Ｔ． ａｎｄ Ｍｙｅｒｓ， Ｋ．Ｒ．， “Ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ Ｌｉｐｉｄ Ａ ａｓ ａｎ Ａｄｊｕｖａｎｔ”で説明されるような、ＭＰＬ（登録商標）アジュバントである。別の例示的なＭＡＬＡは、化学式（Ｉ）：

【化1】

【0068】

によって説明され、式中、部分Ａ^１およびＡ^２は、水素、リン酸エステル（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、リン酸塩、カルボン酸エステル（ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）、カルボン酸塩、硫酸エステル（ｓｕｌｆａｔｅ）、亜硫酸エステル（ｓｕｌｆｉｔｅ）、亜硫酸塩、アスパラギン酸エステル（ａｓｐａｒｔａｔｅ）、アスパラギン酸塩、コハク酸エステル（ｓｕｃｃｉｎａｔｅ）、コハク酸塩、カルボキシメチルホスフェート、およびカルボキシメチルホスフェート塩の群から独立して選択される。ナトリウムおよびカリウムは、リン酸塩およびカルボン酸塩に対する例示的な対イオンである。Ａ^１およびＡ^２のうちの少なくとも１つは、水素である。部分Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６は、Ｃ_３〜Ｃ_２３によって表される、３〜２３個の炭素を有するヒドロカルビル、好ましくは直鎖アルキルの群から独立して選択される。さらに明確にするために、ある部分が、複数の構成要素を有する特定群「から独立して選択される」ときに、第１の部分に選択される構成要素は、第２の部分に選択される構成要素の選択肢に決して影響を及ぼさない、または選択肢を限定しないことが理解されるべきであると説明されるであろう。Ｒ^１、Ｒ^３、Ｒ^５、およびＲ^６が接合される炭素原子は、非対称であり、したがって、ＲまたはＳ立体化学のいずれか一方の中に存在してもよい。一実施形態では、これらの炭素原子の全てがＲ立体化学内にある一方で、別の実施形態では、これらの炭素原子の全てはＳ立体化学内にある。

【0069】

「ヒドロカルビル」または「アルキル」は、完全に水素および炭素から形成された化学部分を指し、炭素原子の配列は、直鎖または分岐、非環状または環状であってもよく、隣接炭素原子間の結合は、完全に単結合であってもよく、すなわち、飽和ヒドロカルビルを提供し、または任意の２つの隣接炭素原子の間に二重または三重結合が存在してもよく、すなわち、不飽和ヒドロカルビルを提供し、ヒドロカルビル基の中の炭素原子の数は、３個から２４個の炭素原子である。ヒドロカルビルは、アルキルであってもよく、代表的な直鎖アルキルは、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル等を含む、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、および同等物を含む一方で、分岐アルキルは、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチル、および同等物を含む。代表的な飽和環状ヒドロカルビルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、および同等物を含む一方で、不飽和環状ヒドロカルビルは、シクロペンタニルおよびシクロヘキサニル、および同等物を含む。不飽和ヒドロカルビルは、隣接する炭素原子の間に少なくとも１つの二重または三重結合を含有する（ヒドロカルビルが非環状である場合、それぞれ「アルケニル」または「アルキニル」と称され、またヒドロカルビルが少なくとも部分的に環状である場合、それぞれシクロアルケニおよびシクロアルキニルと称される）。代表的な直鎖および分岐アルケニルとしては、エチレニル、プロピレニル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブチレニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−メチル−１−ブテニル、２−メチル−２−ブテニル、２，３−ジメチル−２−ブテニル、および同類のものが挙げられ、一方代表的な直鎖および分岐アルキニルとしては、アセチレニル、プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−メチル−１−ブチニル、および同類のものが挙げられる。例えば、「Ｃ６〜１１アルキル」は、それぞれ、６〜１１個の炭素原子を含有する、上に定義されるアルキルを意味する。

【0070】

式（Ｉ）のアジュバントは、当技術分野で公知である合成方法、例えば、参照することにより本明細書に組み込まれるＰＣＴ国際公開第ＷＯ ２００９／０３５５２８号、ならびに第ＷＯ ２００９／０３５５２８号で識別される出版物で開示されている合成方法によって得られてもよく、これらの出版物のうちのそれぞれもまた、参照することにより本明細書に組み込まれる。アジュバントのうちのあるものはまた、商業的に得られてもよい。好ましいアジュバントは、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ａｌａｂａｓｔｅｒ ＡＬのカタログ中で特定される製品番号６９９８００であり、式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、ウンデシルであり、Ｒ２およびＲ４は、トリデシルである。

【0071】

本発明の種々の実施形態において、アジュバントは、式（Ｉ）の化学構造を有するが、部分Ａ１、Ａ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は、リン酸エステルまたはリン酸塩であるＡ１から選択され、およびＡ２は水素であり、またＲ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、Ｃ７〜Ｃ１５アルキルから選択され、またＲ２およびＲ４は、Ｃ９〜Ｃ１７ヒドロカルビルから選択される。本発明の好ましい実施形態では、本明細書の実施例にて使用されるＧＬＡは、図１に記載される構造式を有し、式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は、ウンデシルであり、Ｒ２およびＲ４は、トリデシルである。

【0072】

上述のＭＡＬＡアジュバントは、本明細書で説明される免疫原性薬学的組成物における使用に好ましいアジュバントの種類である。しかしながら、以下のアジュバントのうちの任意のものも、単独で、またはＭＡＬＡアジュバントと組み合わせて、免疫原性薬学的組成物の製剤化に使用されることができる。

【0073】

アジュバントは、ミョウバンであってもよく、この用語は、リン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）および水酸化アルミニウム（Ａｌ（ＯＨ）３）等のアルミニウム塩を指す。ミョウバンがアジュバントとしてまたは共アジュバントとして使用されるとき、ミョウバンは、約１００〜１，０００μｇ、または２００〜８００μｇ、または３００〜７００μｇ、または４００〜６００μｇの量で、免疫原性薬学的組成物の用量中に存在してもよい。式（Ｉ）アジュバントがミョウバンとともに製剤化される場合、式（Ｉ）のアジュバントは、典型的には、ミョウバンの量未満の量で存在し、種々の態様では、式（１）のアジュバントは、重量基準で、ミョウバンの重量に対して０．１〜１％、または１〜５％、または１〜１０％、または１〜１００％で存在する。本発明の一態様において、組成物は、ミョウバンの存在を除く。

【0074】

アジュバントは、ワクチンアジュバント性質を有するエマルジョンであってもよい。そのようなエマルジョンは、水中油型エマルジョンを含む。フロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）が、１つのそのようなアジュバントである。別の好適な水中油型エマルジョンは、スクアレン、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（Ｔｗｅｅｎ（商標）８０表面活性剤としても知られている）、およびトリオレイン酸ソルビタンを含有する、ＭＦ−５９（商標）アジュバントである。スクアレンは、本来は、サメ肝油から得られる天然有機化合物であるが、アマランス種子、米ぬか、小麦胚芽、およびオリーブを含む、植物源（主に植物油）からも入手可能である。他の好適なエマルジョンアジュバントは、鉱油ベースのアジュバントである、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ（商標）ＩＳＡ ５０Ｖ、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ（商標）ＩＳＡ ２０６、およびＭｏｎｔａｎｉｄｅ（商標）ＩＭＳ １３１２を含む、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ（商標）アジュバント（Ｓｅｐｐｉｃ Ｉｎｃ．， Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ ＮＪ）である。一実施形態では、鉱油がアジュバント内に存在してもよい一方で、本発明の組成物の油構成要素は、全て代謝可能な油である。

【0075】

アジュバントは、ＡＳ０２（商標）アジュバントまたはＡＳ０４（商標）アジュバントであってもよい。ＡＳ０２（商標）アジュバントは、ＭＰＬ（商標）アジュバントおよびＱＳ−２１（商標）アジュバント（本明細書の他の場所で考察されるサポニンアジュバント）の両方を含有する水中油型エマルジョンである。ＡＳ０４（商標）アジュバントは、ＭＰＬ（商標）アジュバントおよびミョウバンを含有する。アジュバントは、Ｍａｔｒｉｘ−Ｍ（商標）アジュバントであってもよい。

【0076】

アジュバントは、キラヤサポナリア樹種の樹皮に由来するもの等のサポニン、または修飾されたサポニンであってもよく、例えば、米国特許第５，０５７，５４０号、同第５，２７３，９６５号、同第５，３５２，４４９号、同第５，４４３，８２９号、および同第５，５６０，３９８号を参照されたい。Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，ＭＡによって販売される製品ＱＳ−２１（商標）アジュバントは、式（Ｉ）のアジュバントとともに使用され得る例示的なサポニン含有共アジュバントである。元々はＩｓｃｏｔｅｃ（スウェーデン）によって開発され、典型的には、キラヤサポナリアに由来するサポリン、または全てハチの巣様構造に形成される合成類自体、コレステロール、およびリン脂質から形成される、ＩＳＣＯＭ（商標）族のアジュバントは、サポニンに関連する。

【0077】

アジュバントは、アジュバントとして機能するサイトカインであってもよく、例えば、Ｌｉｎ Ｒ．ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｆｅｃ．Ｄｉｓ．２１（６）：１４３９−１４４９（１９９５）；Ｔａｙｌｏｒ，Ｃ．Ｅ．，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６３（９）：３２４１−３２４４（１９９５）；およびＥｇｉｌｍｅｚ，Ｎ．Ｋ．、Ｖａｃｃｉｎｅ Ａｄｊｕｖａｎｔｓ ａｎｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（２００７）の第１４章を参照されたい。種々の実施形態において、サイトカインは、例えば、Ｃｈａｎｇｅ Ｄ．Ｚ．ｅｔ ａｌ． Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ９（３）：２０７−２１５ （２００４），Ｄｒａｎｏｆｆ，Ｇ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１８８：１４７−１５４（２００２）および米国特許第５，６７９，３５６号を参照されたいが、例えば、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）であってもよく、あるいは例えば、Ｂｏｅｈｍ，Ｕ．ｅｔ ａｌ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：７４９−７９５ （１９９７）およびＴｈｅｏｆｉｌｏｐｏｕｌｏｓ，Ａ．Ｎ．ｅｔ ａｌ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：３０７−３３６ （２００５）を参照されたいが、例えば、インターフェロン−α（ＩＦＮ−α）もしくはインターフェロン−β（ＩＦＮ−β）等のＩ型インターフェロン、または例えば、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）等のＩＩ型インターフェロン等のインターフェロンであってもよく、インターロイキン、具体的には、例えば、Ｎｅｌｓｏｎ，Ｂ．Ｈ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２（７）：３９８３−３９８８ （２００４）を参照されたいが、インターロイキン−１α（ＩＬ−１α）、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）；例えば、Ｐｏｒｔｉｅｌｊｅ，Ｊ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２（３）：１３３−１４４（２００３）およびＴｒｉｎｃｈｉｅｒｉ．Ｇ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３（２）：１３３−１４６（２００３）を参照されたいが、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−７（ＩＬ−７）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）；インターロイキン−１５（Ｉｌ−１５）、インターロイキン−１８（ＩＬ−１８）を含む、インターロイキンであってもよく、胎児肝臓チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ３Ｌ）であってもよく、あるいは腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）であってもよい。

【0078】

アジュバントは、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドであってもよく、任意に、本明細書で説明される抗原に共役される。

【0079】

共アジュバントとして本明細書で説明される方法の実践で使用され得る、免疫増強物質の実施例は、ＭＰＬ（商標）、ＭＤＰおよび誘導体、オリゴヌクレオチド、二本鎖ＲＮＡ、代替的な病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰＳ）、サポニン、小分子免疫増強物質（ＳＭＩＰ）、サイトカイン、およびケモカインを含む。

【0080】

様々な実施形態では、共アジュバントは、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ から市販されている（本来はＲｉｂｉ ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， Ｉｎｃ． Ｈａｍｉｌｔｏｎ， ＭＴによって開発された）、ＭＰＬ（商標）アジュバントである。例えば、Ｕｌｒｉｃｈ ａｎｄ Ｍｙｅｒｓ， Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ： Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ， Ｐｏｗｅｌｌ ａｎｄ Ｎｅｗｍａｎ， ｅｄｓ．Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９９５）からの第２１章を参照されたい。ＡＳ０２（商標）アジュバントおよびＡＳ０４（商標）アジュバントは、ＭＰＬ（商標）アジュバントに関連し、また本明細書で説明される組成物および方法における使用のための共アジュバントとして好適である。ＡＳ０２（商標）アジュバントは、ＭＰＬ（商標）アジュバントおよびＱＳ−２１（商標）アジュバント（本明細書の他の場所で考察されるサポニンアジュバント）の両方を含有する水中油型エマルジョンである。ＡＳ０４（商標）アジュバントは、ＭＰＬ（商標）アジュバントおよびミョウバンを含有する。ＭＰＬ（商標）アジュバントは、サルモネラミネソタＲ５９５のリポ多糖類（ＬＰＳ）から、ＬＰＳを弱酸および塩基加水分解で処理し、次に修飾されたＬＰＳを精製することによって、調製される。

【0081】

２つのアジュバントが組み合わせて利用されるとき、２つのアジュバントの相対量は、抗原単独と比較して、アジュバントを含有する組成物に関して所望の性能性質を達成するように選択され得る。例えば、アジュバントの組み合わせは、抗原の抗体応答を強化するように、および／または対象の先天性免疫系応答を強化するように選択され得る。先天性免疫系の活性化は、ケモカインおよびサイトカインの産生をもたらし、それらは次に、適応（後天性）免疫応答を活性介し得る。適応免疫応答の活性化の重要な結果は、宿主が抗原に再び遭遇したときに、免疫応答がより迅速におよび概してより良い質で生じるような、記憶免疫細胞の形成である。

【0082】

アジュバント（単数または複数）は、ＨＳＶ−２タンパク質と組み合わせる前に、事前に製剤化され得る。一実施形態において、アジュバントは、０．２μｍ未満の安定した水性懸濁液として提供されてもよく、またリン脂質、脂肪酸、界面活性剤、洗剤、サポニン、フッ素添加脂質、および同類のものから成る群から選択される少なくとも１つの構成要素をさらに含んでもよい。アジュバント（単数または複数）は、アジュバントが油相中に組み込まれる水中油型エマルジョンにおいて製剤化されてもよい。ヒトにおける使用に関して、油は、好ましくは代謝可能である。油は、任意の植物油、魚油、動物油、または合成油であってよく、油は、受容者に毒性であってはならず、また代謝によって変換可能であるべきである。ナッツ（ピーナッツ油等）、種子、および穀物は、野菜油の一般的な源である。特に好適な代謝可能な油としては、スクアレン（２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２−テトラコサヘキサン）が挙げられ、多くの異なる油に見出される不飽和油である、サメ肝油中に多量にある。スクアレンは、コレステロールの生合成における中間物である。加えて、水中油型エマルジョンは、典型的には、α−トコフェロール（ビタミンＥ、米国特許第５，６５０，１５５号、米国特許第６，６２３，７３９号）等の酸化防止剤を含む。トリグリセリド、等張性を付与する成分、および他の成分の安定剤が、添加されてもよい。スクアレンを用いる例示的な水中油型エマルジョンは、「ＳＥ」として既知であり、スクアレン、グリセロール、ホスファチジルコリン、またはレシチン、または他のブロックコポリマーを、ｐＨ５．１のα−トセラフォール（ａｌｐｈａ−ｔｏｃｅｒａｐｈｏｌ）を伴うリン酸アンモニウム緩衝液中に界面活性剤として含む。

【0083】

水中油型エマルジョンを産生する方法は、当業者に周知である。一般的に、方法は、油相を、ホスファチジルコリン、ポロキサマ、ブロックコポリマー、またはＴＷＥＥＮ８０（登録商標）溶液等の界面活性剤と混合した後、ホモジナイザーを用いて均質化することを含む。例えば、混合物を、注射針を通して１、２、またはそれ以上通過させることを含む方法は、少量の液体を均質化するために好適である。同様に、マイクロフルイダイザー（Ｍ１１０Ｓマイクロフルイディクスマシーン、最大５０通過、最大入力圧６バール（出力圧約８５０バール）で２分間）における乳化処理は、より小さいまたはより大きい体積のエマルジョンを産生するために適応され得る。この適応は、結果として生じるエマルジョンを、所望の直径の油滴を伴う調製物が達成されるまで測定することを含む、日常的な実験によって達成され得る。エマルジョンを生成するための他の設備またはパラメータも、使用され得る。エマルジョン組成物およびその調製の方法の開示は、例えば、米国特許第５，６５０，１５５号、同第５，６６７，７８４号、同第５，７１８，９０４号、同第５，９６１，９７０号、同第５，９７６，５３８号、同第６，５７２，８６１号、および同第６，６３０，１６１号に見出され得る。
Ｃ． 薬学的組成物および使用
１． 製剤

【0084】

請求される薬学的組成物は、ＨＳＶ−２糖タンパク質またはその免疫原性断片、エンベロープ糖タンパク質以外のＨＳＶ−２構造タンパク質またはその免疫原性断片、先天性免疫系に関する作動薬である薬剤、および薬学的に許容される担体を含む。組成物は、複数の糖タンパク質（または断片）、複数の構造タンパク質（または断片）、または複数の薬剤を含んでもよい。

【0085】

幾つかの態様では、薬学的組成物は、ＨＳＶ糖タンパク質の抗原部分、薬学的に許容される担体、および任意に、先天性免疫系に関する作動薬である薬剤を含む。組成物は、複数の糖タンパク質部分および１つ以上の薬剤を含んでもよい。担体は、任意に、アジュバント性質を含んでもよく、例えば、幾つかのエマルジョン担体は、アジュバント性質を有する。本明細書では主に、考察されるＨＳＶ糖タンパク質はＨＳＶ−２に由来するが、ＨＳＶ−１に由来する糖タンパク質も、使用され得る。

【0086】

特定の実施形態では、糖タンパク質または構造タンパク質またはその両方は、前駆体タンパク質、成熟タンパク質、断片、融合タンパク質、またはペプチドであり得る。糖タンパク質および構造タンパク質要素は、同一のまたは異なる融合タンパク質の一部であってもよい。同様に、複数の糖タンパク質または複数の構造タンパク質が存在する場合、それらは、単一の融合タンパク質の一部であってもよく、または別々の融合タンパク質の一部であってもよい。複数の糖タンパク質または複数の構造タンパク質が存在する場合、複数のタンパク質の各々は、前駆体タンパク質、成熟タンパク質、断片等であり得、すなわち、例えば、２つの糖タンパク質は、断片およびペプチド、または例えば、同一の糖タンパク質の２つの異なる断片、または例えば、異なる糖タンパク質の２つの断片を含んでもよい。

【0087】

各ワクチン用量におけるタンパク質または免疫学的な断片の各々の量は、典型的には、約０．５μｇ〜約５０μｇの範囲、または約０．５μｇ、約１．０μｇ、約２μｇ、約５μｇ、約１０μｇ、約１５μｇ、約２０μｇ、約３０μｇ、約４０μｇ、約５０μｇ、約７５μｇ、約１００μｇ、または約１５０μｇ、または約２００μｇ、または約２５０μｇ、またはＨＳＶ−２に対して有効性を提供すると決定される任意の他の好適な量である。タンパク質または免疫学的な断片は、等しいエピトープ表現を提供する等モル比、および等しい質量の個々のタンパク質を提供する等質量比を含む、種々の比率で存在することができる。等価物の約２０％（例えば、０．８：１．２）の範囲内、または約１０％（例えば、０．９：１．１）の範囲内、または約５％（例えば、０．９５：１．０５）の範囲内である等モルおよび等質量比は、依然、等モルまたは等質量であると見なされる。用量は、典型的には、組成物の薬理学的活性、目的（治療的または予防的）、ならびに対象のサイズおよび条件によって決定されるであろう。

【0088】

タンパク質は、溶液として供給されてもよいが、同様に乾燥して（乾いて）いることもでき、その場合、使用者は必要な液体を添加する。典型的には、緩衝液、安定剤、等張化剤、界面活性剤、防腐剤、担体、および他の非活性成分等の添加剤が、同様に存在するであろう。添加剤は典型的には、薬学的に許容され、また生体適合性である。好ましくは、添加剤、免疫原、薬剤等は、他の内毒素、毒性化合物、および不要な副作用を引き起こし得る汚染物を実質的に含まない。製剤は、投与の経路に従って様々であってもよい。例えば、筋肉内注射による投与用の製剤は、概して等張性および水性であり、一方、経口投与用の製剤は、除法型としてカプセル化されてもよく、または香味料を含有してもよい。エアロゾル投与用の形式は、概して圧力下でパッケージ化され、推進剤を含有するであろう。

【0089】

アジュバントであってもよい薬剤は、溶液として、乾燥して、または乳化されて、概して安定した水中油型エマルジョンとして提供され得る。一実施形態において、薬剤は、０．２μｍ未満の安定した水性懸濁液として提供されてもよく、リン脂質、脂肪酸、界面活性剤、洗剤、サポニン、フッ素添加脂質、および同類のものから成る群から選択される少なくとも１つの構成要素をさらに含んでもよい。そのような安定した水性製剤は、ミセル製剤であってもよい。別の実施形態では、薬剤は、エアロゾル化され得る様式で、粉末製剤かまたは液体製剤かのいずれかとして製剤化されてもよい。

【0090】

これらのうちのいずれも、緩衝液、安定剤、防腐剤、担体、または他の非活性成分も含むことができる。添加剤は典型的には、薬学的に許容され、また生体適合性である。複数の薬剤が存在してもよく、薬剤のうちの１つ、幾つか、または全ては、アジュバントまたは共アジュバントであることもできる。それに加えて、同様に薬剤ではないアジュバントまたは共アジュバントも、提供され得る。油または少なくとも幾つかのオイルエマルジョン等の抗原補給所も、存在し得る。

【0091】

ＧＬＡまたは別のＭＡＬＡアジュバント等のアジュバント剤の量は、典型的には、約０．５μｇ、約１μｇ、約２μｇ、約２．５μｇ、約５μｇ、約７．５μｇ、約１０μｇ、約１５μｇ、約２０μｇ、または約２５μｇである。ＳＥ等のエマルジョンは、約０．１％、約０．５％、約１．０％、約１．５％、約２％、約２．５％、約３％、約４％、約５％、約７．５％、または約１０％で存在し得る。

【0092】

薬剤およびタンパク質は、別個のコンテナで提供され、現場で混合されるか、または事前に混合されてもよい。加えて、タンパク質は、別個のコンテナで提供されてもよく、または単一のコンテナ内で組み合わされてもよい。薬剤およびタンパク質は、濃縮された形態で提供され、また希釈剤と共に提供されてもよい。好適な希釈剤としては、生理食塩水およびＰＢＳが挙げられる。コンテナは、バイアル、アンプル、管、マルチウェルデバイスのウェル、貯蔵容器、注射器、または任意の他の種類のコンテナであり得る。コンテナまたはコンテナ類は、キットとして提供されてもよい。コンテナのうちの１つ以上が乾燥した成分を含む場合、再構成のための液体は、同様にキット内に提供されてもよく、または使用者によって提供されてもよい。各コンテナ中の溶液の量、または各コンテナに添加される溶液の量は、投与の経路および何回分の用量が各コンテナにあるかに応じる。注射によって付与されるワクチンは、典型的には、約０．１ｍｌ〜約２．０ｍｌであり、一方、経口で付与されるワクチンは、例えば、約１ｍｌ〜約１０ｍｌ等、より大きい体積であり得る。好適な体積も、対象のサイズおよび年齢に従って様々であり得る。
２． 投与

【0093】

組成物は、対象におけるＨＳＶ−２感染の治療のために使用され得る。本明細書で使用するとき、「治療」は、治療的または予防的であり得る臨床的介入である。治療的用途において、薬学的組成物または薬物は、ＨＳＶ−２感染を有する疑いのある、または有することが既知である対象に投与される。組成物は、疾病の症状およびその合併症を治癒し得るまたは少なくとも部分的に止め得る免疫応答を生じさせる（誘発する）のに十分な量で付与される。予防的用途では、薬学的組成物または薬物は、ＨＳＶ−２感染が疑われる、ないしはその危険性がある対象に、感染を阻害する、または疾病の発生の危険性を低減するもしくは遅延する、または感染の１つ以上の効果を改善するであろう、免疫応答を誘発するのに十分な量で、投与される。これを遂行するのに適した量は、治療的に有効なまたは薬学的に有効な用量と定義される。そのような量は、単一の投与量として投与されることができ、または、それによって有効となるレジメンに従って投与されることができる。量は、疾病を治癒し得るが、しかし典型的には、疾病の症状を改善するため、または疾病もしくは障害の発症の予防に効果をもたらすために投与される。

【0094】

治療的レジメおよび予防的レジメの療法において、薬剤は通常、十分な免疫応答が達成されるまで複数の投与量で投与される。典型的には、免疫応答は、モニタリングされ、免疫応答が衰え始めると反復投与量が付与される。治療は、疾病を完全に排除しなくてもよく、対象が疾病または障害に罹患するのを完全に予防しなくてもよい。幾つかの実施形態では、単一の投与量のみが投与される。より多くの場合、複数の投与量が投与される。概して、１回目の投与量は、「プライム」投与量と呼ばれ、２回目およびその後の投与量は、「ブースト」投与量と呼ばれる。複数の投与量は、２回の投与、３回の投与、４回の投与、および場合により５回以上の投与からなり得る。理想的には、数は、１回また２回の投与である。複数の投与が提供されるとき、２回目およびその後の投与のタイミングは、概して、最後の投与の少なくとも２週間後となり、最後の投与の少なくとも１ヵ月、２カ月、３カ月、６カ月、または１年後であってもよい。理想的には、免疫応答は、複数の投与量が有益であるかを決定するためにモニタリングされる。複数の投与量は、等量の免疫原および作動薬を含有してもよく、または異なる量のこれらの成分を含有してもよい。例えば、ブースト投与量は、より低量の免疫原を含み得る。さらに、添加剤は、投与量間で異なってもよい。

【0095】

幾つかの実施形態において、対象に投与されるプライム組成物は、弱毒化された生ＨＳＶ−２ウイルスであり、また対象に投与されるブースト組成物は、本明細書で請求かつ説明される任意の組成物である。幾つかの実施形態において、対象に投与されるプライム組成物は、本明細書で請求かつ説明される任意の組成物であり、また対象に投与されるブースト組成物は、弱毒化された生ＨＳＶ−２ウイルスである。

【0096】

予防的として使用されるか治療的として使用されるかに関わらず、投与は、好ましくは、ＨＳＶ−２に対する免疫応答を生じさせる。免疫応答は、液性（抗体媒介性）または細胞性（典型的には、Ｔ細胞媒介性であるが、ただしこれに限らない）またはその両方であり得る。免疫付与された対象はまた、活性化された単球、マクロファージ、ＮＫ細胞、樹状細胞、および他の先天性免疫細胞型を有してもよい。免疫応答に関する分析は、本明細書で説明され、また当業者に周知である。

【0097】

ワクチンは、有益な治療的応答、例えば、疾病もしくは感染の症状を改善、緩和、治癒、もしくは部分的に改善するような有効な免疫応答をもたらすのに十分な用量（治療的に有効な用量）で、または例えば、感染もしくは疾病症状を予防する予防的応答をもたらすのに十分な用量で投与される。有益な治療的応答の指標は、任意の所与の発生におけるより少ないヘルペス損傷、または平均してより少ない数の損傷、またはより少ない頻度の発生である。他の指標としては、より小さい損傷、より早く癒え、より痛みの少ない損傷等である。また他の指標は、ＨＳＶ−２ワクチン構成要素に対する抗体の発生であり、具体的には、ＨＳＶ−２エンベロープ糖タンパク質に対する抗体、例えば、ｇＤ２に対する抗体の存在であり、また具体的には、中和抗体の発生である。抗体を検出および定量化するための多くの周知の手順があり、ＥＬＩＳＡおよびウイルス感染の阻害（中和）分析が挙げられる。一実装では、ＥＬＩＳＡ分析は、マルチウェルプレートのウェルをｇＤ２タンパク質でコーティングし、プレート上で血清に由来するｇＤ２特異的抗体を捕捉し、標識した抗ヒト抗体を用いてｇＤ２特異的抗体を検出した後、標識を読み取ることによって実施される。標識は、放射性であり得るが、しかしより一般的には、セイヨウワサビペルオキシダーゼ等の、基材を比色分析で検出され得るものに転換する酵素である。例示的なＨＳＶ中和分析は、血小板分析に基づき、該分析では、中和抗体は、血小板形成の阻害によって検出される。他の指標としては、ＨＳＶ−２に応答するＣＤ８またはＣＤ４Ｔ細胞の増加された量または機能または頻度、ウイルス出芽における低減、性交渉の相手へのウイルス感染における低減、および症候性損傷のサイズまたは頻度またはその両方における低減が挙げられる。

【0098】

Ｔ細胞機能に関する分析としては、ＩＦＮ−γＥＬＩＳＰＯＴおよびＩＣＳ（細胞内サイトカイン染色）が挙げられる。インターフェロン−γを検出するＥＬＩＳＰＯＴ分析は、候補ワクチンに応答するＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞を定量化するために広く使用される。ＥＬＩＳＰＯＴ分析は、固定された抗体によって捕えられ、また酵素に結合した二次抗体によって可視化される、サイトカインの抗原誘発性分泌を検出する、ＥＬＩＳＡの原理に基づく。ＩＣＳは、作動薬、例えば、Ｔ細胞表面分子に対する抗体またはＭＨＣクラス分子に結合するペプチド等による刺激の後のサイトカイン発現に基づいて細胞毒性Ｔ細胞を定量化するための、日常的に使用される方法である。ＩＣＳおよびＥＬＩＳＰＯＴの例示的な手順は、下に説明される。

【0099】

ワクチンを受ける対象としては、ＨＳＶ−２血清反応陽性の個体およびＨＳＶ−２血清反応陰性の個体の両方が挙げられる。血清反応陽性の個体に関して、ワクチンは、治療的であることを意図される。血清反応陰性の個体に関して、ワクチンは、防御的であることを意図される。対象は、ＨＳＶ−２の状態と独立して、ある場合ではＨＳＶ−１に関して血清反応陽性であり、また他の場合ではＨＳＶ−１に関して血清反応陰性である。すなわち、対象は、ＨＳＶ−１血清反応陽性／ＨＳＶ−２血清反応陽性、ＨＳＶ−１血清反応陰性／ＨＳＶ−２血清反応陽性、ＨＳＶ−１血清反応陽性／ＨＳＶ−２血清反応陰性、ＨＳＶ−１血清反応陰性／ＨＳＶ−２血清反応陰性であるものを含んでよい。さらに、対象は、ヒトおよびＨＳＶ−２によって感染され得る他のほ乳類対象を含む。

【0100】

ワクチンは、皮内、粘膜（例えば、鼻腔内、経口）、筋肉内、皮下、舌下、直腸内、および膣内等の任意の好適な送達経路によって投与され得る。他の送達経路は、等技術分野において周知である。

【0101】

筋肉内経路は、組成物のための１つの好適な経路である。 好適な筋肉内送達デバイスとしては、針および注射器、無針注射デバイス（例えば、Ｂｉｏｊｅｃｔｏｒ，Ｂｉｏｊｅｃｔ，ＯＲ、米国）、またはインスリンもしくはエピネフリンを送達するために自宅で自己注射に使用されるもの等のペン注射デバイスが挙げられる。皮内および皮下送達は、他の好適な経路である。好適なデバイスとしては、注射器および針、短針付注射器、およびジェット注射デバイスが挙げられる。

【0102】

組成物は、粘膜経路によって、例えば、鼻腔内に投与されてもよい。多くの鼻腔内送達デバイスが、入手可能であり、当技術分野において周知である。噴霧デバイスは、そのようなデバイスの１つである。経口投与は、嚥下するために対象に溶液を提供することのように単純であり得る。

【0103】

ワクチンは、単一の部位に投与されてもよく、または複数の部位に投与されてもよい。複数の部位の場合、投与の経路は、例えば、異なる筋肉への注射等、各部位で同じであってもよく、または例えば、筋肉への注射および鼻腔内噴霧等、異なっていてもよい。さらに、ワクチンは、単一の時点にて投与されてもよく、または複数の時点にて投与されてもよい。概して、複数の時点にて投与される場合、用量間の時間は、免疫応答を向上させるように決定されている。
組換え発現ベクター、ウイルスベクター、およびウイルス様粒子

【0104】

一実施形態では、少なくとも１つのＨＳＶ２免疫原であって、該免疫原およびその対応する指定の抗原に対する免疫応答を誘発する、ＨＳＶ２免疫原をコードするポリヌクレオチド配列を含む、組換え発現ベクターが提供される。免疫原の効率的な転写および翻訳を得るために、各ベクターの中のコード化ポリヌクレオチド配列は、コード化ポリヌクレオチド配列に動作可能に結合され、本明細書でさらに詳細に説明される、少なくとも１つの適切な発現制御配列（調節発現配列または特徴とも呼ばれる）（例えば、プロモーター、エンハンサー、リーダー）を含む。したがって、これらの組換え発現ベクターは、組換え発現ベクターまたは組換え発現ベクターを含有するベクター粒子を用いて変換、形質導入、または形質移入された任意の適切な宿主細胞において、免疫原の発現を方向付ける、または少なくとも２つの免疫原の共発現を方向付けるために提供される。

【0105】

本明細書で説明される組換え発現ベクターは、１つ以上の ＨＳＶ−２ 免疫原（すなわち、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つの免疫原等）をコードしてもよく、その免疫原は、本明細書でさらに詳細に説明される。特定の実施形態では、ＨＳＶ−２に由来する少なくとも１、２、または３つ以上の免疫原が、組換え発現ベクターによってコードされ得る。例として、免疫原は、ＨＳＶ−２タンパク質、例えば、ＵＬ１９（例えば、ＵＬ１９上方ドメイン断片またはその免疫原性断片もしくは変異体）および／またはｇＤ（またはその免疫原性断片もしくは変異体）およびまたはＵＬ４７（またはその免疫原性断片もしくは変異体）等であってもよく、またはＨＳＶ−２タンパク質の別の免疫原性断片もしくは領域であってもよい。
Ａ． タンパク質の組換え産生

【0106】

免疫原をコードするポリヌクレオチド配列を含む組換え発現ベクターは、免疫原の産生のために使用され得る。組換え発現ベクターは、プロモーターまたはエンハンサー等の、免疫原をコードするポリヌクレオチドに動作可能に結合される少なくとも１つの調節発現配列を含む。発現ベクターの各々は、適切な宿主細胞を、対応する免疫原の組換え産生のために変換するために、変換器に、または形質移入するために使用され得る。免疫原の産生に好適な宿主細胞としては、原核生物、酵母、および高等真核細胞（例えば、ＣＨＯおよびＣＯＳ）が挙げられる。免疫原はそれぞれ、タンパク質分野において既知であり、また日常的に実践される種々の単離方法（例えば、濾過、血液透析濾過、クロマトグラフィ（親和性クロマトグラフィ、高圧液体クロマトグラフィを含む）、および分取電気泳動）のうちの任意のものを用いて、それぞれの宿主細胞または宿主細胞培養物から単離され得る。特定の実施形態では、本明細書で説明される通り、単離された免疫原は、次に薬学的に好適な賦形剤とともに製剤化されて、免疫原性組成物を提供することができる。

【0107】

組換え的にポリペプチドを産生するための特定の方法は、概して周知であり、日常的に使用される。例えば、分子生物学手順は、Ｓａｍｂｒｏｏｋらによって説明される（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， ２ｎｄ ｅｄ．， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８９、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， ３ｒｄ ｅｄ．， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， （２００１）も参照）。 ＤＮＡ配列決定は、Ｓａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７４：５４６３ （１９７７））およびＡｍｅｒｓｈａｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｐｌｃ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｈａｎｄｂｏｏｋに説明されるように実施され得、またそれに対する改良を含む。
Ｂ． 対象へのタンパク質の送達のための組換え発現ベクター

【0108】

組換え発現ベクターは、本明細書で説明される免疫原のうちのいずれか１つ以上の発現に使用されてもよい。特定の実施形態では、組換え発現ベクターは、所望の免疫応答（すなわち、特異的液性応答（すなわち、Ｂ細胞応答）ならびに／または免疫原特異的ＣＤ４および／もしくはＣＤ８Ｔ細胞応答を含んでもよく、ＣＤ８Ｔ細胞応答は、細胞毒性Ｔ細胞（ＣＴＬ）応答を含んでもよい、特異的細胞媒介免疫応答の誘発）を誘発するであろう、適切な細胞（例えば、抗原提示細胞、すなわち、樹状細胞等の、その細胞表面上でペプチド／ＭＨＣ複合体を表す細胞）または組織（例えば、リンパ系組織）に送達される。したがって、組換え発現ベクターはまた、例えば、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、または樹状細胞特異的ＴＲＥ等のリンパ系組織特異的転写調節要素（ＴＲＥ）を含んでもよい。リンパ系組織特異的ＴＲＥは、当技術分野において既知である（例えば、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１２， １０４３−５３（１９９２）； Ｔｏｄｄ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７７， １６６３−７４（１９９３）； Ｐｅｎｉｘ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７８：１４８３−９６
（１９９３）を参照）。

【0109】

特定の実施形態では、組換え発現ベクターは、プラスミドＤＮＡまたはコスミドＤＮＡである。本明細書で説明されるような免疫原をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含有する、プラスミドＤＮＡまたはコスミドＤＮＡは、当技術分野で周知である標準技法を使用して、容易に構築される。ベクターゲノムは、パッケージングまたは産生細胞株に形質移入することができる、プラスミド形態で典型的に構築されてもよい。プラスミドは、概して、細菌の中のプラスミドの複製に有用な配列を含む。そのようなプラスミドは、当技術分野で周知である。加えて、複製の原核生物起源を含むベクターもまた、その発現が薬剤耐性等の検出可能または選択可能なマーカーを与える、遺伝子を含んでもよい。典型的な細菌薬剤耐性生成物は、アンピシリンまたはテトラサイクリンに対する耐性を与えるものである。正しいヌクレオチド配列がプラスミドに組み込まれていることを確認する分析のために、プラスミドは、大腸菌の中で複製され、精製され、制限エンドヌクレアーゼ消化および／または従来の方法によって判定されるそのヌクレオチド配列によって分析されてもよい。
Ｃ． ウイルスベクター

【0110】

他の特定の実施形態では、組換え発現ベクターは、ウイルスベクターである。例示的な組換え発現ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターゲノム、ポックスウイルスベクターゲノム、ワクシニアウイルスベクターゲノム、アデノウイルスベクターゲノム、アデノウイルス随伴ウイルスベクターゲノム、ヘルペスウイルスベクターゲノム、およびアルファウイルスベクターゲノムを含む。ウイルスベクターは、生、弱毒化、複製条件付き、または複製欠損性であってもよく、典型的には、非病原性（欠損性）の複製可能なウイルスベクターである。

【0111】

一例として、具体的実施形態では、ウイルスベクターがワクシニアウイルスベクターゲノムであるときに、目的とする免疫原をコードするポリヌクレオチドが、ワクシニアウイルスベクターの非必須部位に挿入されてもよい。そのような非必須部位は、例えば、Ｐｅｒｋｕｓ ｅｔ ａｌ．， Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １５２：２８５ （１９８６）； Ｈｒｕｂｙ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０：３４１１ （１９８３）； Ｗｅｉｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．４６：５３０ （１９８３）で説明されている。ワクシニアウイルスとともに使用するための好適なプロモーターは、Ｐ７．５（例えば、Ｃｏｃｈｒａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．５４：３０ （１９８５）を参照）、Ｐ１１（例えば、Ｂｅｒｔｈｏｌｅｔ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：２０９６ （１９８５）を参照）、およびＣＡＥ−１（例えば、Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：９４３１ （１９８８）を参照）を含むが、それらに限定されない。ワクシニアの高度に弱毒化された株は、ヒトで使用するためにより容認可能であり、特異的ゲノム欠損を含有する、Ｌｉｓｔｅｒ、ＮＹＶＡＣ（例えば、Ｇｕｅｒｒａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．８０：９８５−９８ （２００６）；
Ｔａｒｔａｇｌｉａ ｅｔ ａｌ．， ＡＩＤＳ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ ８：１４４５−４７ （１９９２）を参照）、またはＭＶＡ（例えば、Ｇｈｅｒａｄｉ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．８６：２９２５−３６ （２００５）； Ｍａｙｒ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ３：６−１４ （１９７５）を参照）を含む。また、Ｈｕ ｅｔ ａｌ．（癌治療用のベクターとしてのヤバ様疾患ウイルスの使用を説明する、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５：１０３００−３０８ （２００１））、米国特許第５，６９８，５３０号および第６，９９８，２５２号も参照されたい。また、例えば、米国特許第５，４４３，９６４号も参照されたい。また、米国特許第７，２４７，６１５号および第７，３６８，１１６号も参照されたい。

【0112】

ある実施形態では、アデノウイルスベクターまたはアデノウイルス随伴ウイルスベクターが、目的とする免疫原を発現するために使用されてもよい。いくつかのアデノウイルスベクター系およびベクターを投与するための方法が説明されている（例えば、Ｍｏｌｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．７２：８３５８−６１ （１９９８）； Ｎａｒｕｍｉ ｅｔ ａｌ．， Ａｍ Ｊ． Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９：９３６−４１ （１９９８）； Ｍｅｒｃｉｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１：６１８８−９３ （２００４）；米国特許第６，１４３，２９０号、第６，５９６，５３５号、第６，８５５，３１７号、第６，９３６，２５７号、第７，１２５，７１７号、第７，３７８，０８７号、第７，５５０，２９６号を参照）。

【0113】

レトロウイルスベクターゲノムは、マウス白血病ウイルス（ＭｕＬＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）、同種指向性レトロウイルス、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、および組み合わせに基づくものを含んでもよい（例えば、Ｂｕｃｈｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．６６：２７３１−３９ （１９９２）； Ｊｏｈａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．６６：１６３５−４０ （１９９２）； Ｓｏｍｍｅｒｆｅｌｔ ｅｔ ａｌ．， Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５８−５９ （１９９０）； Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．６３：２３７４−７８ （１９８９）； Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．６５：２２２０−２４ （１９９１）； Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１０：４２３９ （１９９０）； Ｋｏｌｂｅｒｇ， ＮＩＨ Ｒｅｓ．４：４３ １９９２； Ｃｏｒｎｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．， Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２：２１５ （１９９１）を参照）。
Ｄ． レンチウイルスベクター

【0114】

より具体的な実施形態では、組換え発現ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターゲノムである。ゲノムは、ヒト遺伝子治療用途のために識別されるものを含む、多数の好適で利用可能なレンチウイルスゲノムベースのベクターのうちのいずれかに由来することができる（例えば、Ｐｆｅｉｆｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．２：１７７−２１１ （２００１）を参照）。好適なレンチウイルスベクターゲノムは、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ−１）、ＨＩＶ−２、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、およびマエディ／ビスナウイルスに基づくものを含む。レンチウイルスの望ましい特性は、それらが分裂および非分裂細胞の両方に感染することができるが、標的細胞は分裂細胞である必要はなく、または分裂するように刺激される必要がない。概して、ゲノムおよびエンベロープ糖タンパク質は、結果として生じるウイルスベクター粒子が偽型であるように、異なるウイルスに基づくであろう。ベクターゲノムの安全性特徴が、望ましくは組み込まれる。安全性特徴は、自己不活性化ＬＴＲおよび非統合ゲノムを含む。例示的なベクターは、パッケージングシグナル（ｐｓｉ）、Ｒｅｖ応答要素（ＲＲＥ）、スプライスドナー、スプライス受容体、中央ポリプリン路（ｃＰＰＴ）、およびＷＰＲＥ要素を含有する。ある例示的な実施形態では、ウイルスベクターゲノムは、ＨＩＶ−１ゲノムまたはＳＩＶゲノム等のレンチウイルスゲノムからの配列を含む。ウイルスゲノム構造は、レンチウイルスの５’および３’ＬＴＲからの配列を含んでもよく、具体的には、レンチウイルスの５’ＬＴＲおよびレンチウイルスの不活性化または自己不活性化３’ＬＴＲからのＲおよびＵ５配列を含む。ＬＴＲ配列は、任意の種からの任意のレンチウイルスからのＬＴＲ配列であってもよい。例えば、それらは、ＨＩＶ、ＳＩＶ、ＦＩＶ、またはＢＩＶからのＬＴＲ配列であってもよい。典型的には、ＬＴＲ配列は、ＨＩＶ ＬＴＲ配列である。

【0115】

ベクターゲノムは、不活性化または自己不活性化３’ＬＴＲを含んでもよい（例えば、Ｚｕｆｆｅｒｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．７２： ９８７３， １９９８； Ｍｉｙｏｓｈｉ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．７２：８１５０， １９９８を参照、その両方ともそれらの全体で組み込まれる）。自己不活性化ベクターは、概して、ベクター統合中に５’ＬＴＲの中へコピーされる、３’長末端反復（ＬＴＲ）からのエンハンサーおよびプロモーター配列の欠失を有する。ある場合において、３’ＬＴＲのＵ３要素は、そのエンハンサー配列、ＴＡＴＡボックス、Ｓｐ１、およびＮＦ−カッパＢ部位の欠失を含有する。自己不活性化３’ＬＴＲの結果として、入力および逆転写後に生成されるプロウイルスは、不活性化５’ＬＴＲを含むであろう。根拠は、ベクターゲノムの動員のリスクおよび近くの細胞プロモーターに対するＬＴＲの影響を低減することによって、安全性を向上させることである。自己不活性化３’ＬＴＲは、当技術分野で公知である任意の方法によって構築されてもよい。

【0116】

任意に、レンチウイルス５’ＬＴＲからのＵ３配列は、異種プロモーター配列等のウイルス構造の中のプロモーター配列と交換されてもよい。これは、パッケージング細胞株から回収されたウイルスの力価を増加させることができる。エンハンサー配列もまた、含まれてもよい。パッケージング細胞株の中のウイルスＲＮＡゲノムの発現を増加させる、任意のエンハンサー／プロモーターの組み合わせが使用されてもよい。一実施例では、ＣＭＶエンハンサー／プロモーター配列が使用される（例えば、米国特許第５，３８５，８３９号および第５，１６８，０６２号を参照）。

【0117】

ある実施形態では、統合欠損性となるようにレンチウイルスベクターゲノムを構築することによって、挿入突然変異のリスクが最小限化される。非統合ベクターゲノムを産生するように、種々のアプローチを追求することができる。これらのアプローチは、不活性インテグラーゼでタンパク質をコードするように、ｐｏｌ遺伝子のインテグラーゼ酵素構成要素に対する突然変異を操作することを伴う。ベクターゲノム自体は、例えば、一方または両方の付着部位を突然変異または欠失させること、あるいは欠失または修飾を通して３’ＬＴＲ近位ポリプリン路（ＰＰＴ）を非機能的にすることによって、統合を防止するように修飾することができる。加えて、非遺伝学的アプローチが利用可能であり、これらは、インテグラーゼの１つ以上の機能を阻害する医薬剤を含む。アプローチは、相互排他的ではなく、つまり、それらのうちの１つよりも多くを一度に使用することができる。例えば、インテグラーゼおよび付着部位は、非機能的となり得る、またはインテグラーゼおよびＰＰＴ部位は、非機能的となり得る、または付着部位およびＰＰＴ部位は、非機能的となり得る、またはそれらの全ては、非機能的となり得る。

【0118】

インテグラーゼは、ウイルス二本鎖平滑末端ＤＮＡの開裂、および染色体標的部位の二本鎖の中の５’−リン酸塩に末端を接合することに関与する。インテグラーゼは、亜鉛結合モチーフ（ＨＨＣＣ）を含有するＮ末端ドメイン、触媒コアおよび逆ＤＤ３５Ｅモチーフ（ＨＩＶ−１の中のＤ６４、Ｄ１１６、Ｅ１５２）を含有する中央ドメインコア、およびＤＮＡ結合性質を有するＣ末端ドメインといった、３つの機能ドメインを有する。インテグラーゼに導入される点突然変異は、正常な機能を乱すために十分である。多くのインテグラーゼ突然変異が構築され、特徴付けられている（例えば、Ｐｈｉｌｐｏｔｔ ａｎｄ Ｔｈｒａｓｈｅｒ， Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １８：４８３， ２００７； Ａｐｏｌｏｎｉａ， Ｔｈｅｓｉｓ ｓｕｂｍｉｔｔｅｄ ｔｏ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｌｏｎｄｏｎ， Ａｐｒｉｌ ２００９， ｐｐ， ８２−９７； Ｅｎｇｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．６９： ２７２９， １９９５； Ｎｉｇｈｔｉｎｇａｌｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒａｐｙ， １３： １１２１， ２００６を参照）。インテグラーゼタンパク質をコードする配列は、好ましくは、逆転写酵素活性または核標的化を有意に低下することなく、タンパク質を不活性にするように欠失または突然変異させることができ、それにより、標的細胞ゲノムに対するプロウイルスの統合を防止するのみである。容認可能な突然変異は、インテグラーゼ触媒作用、鎖移転、ａｔｔ部位に対する結合、宿主染色体ＤＮＡに対する結合、および他の機能を低減することができる。例えば、ＨＩＶまたはＳＩＶインテグラーゼの残基３５における単一のアスパラギン酸からアスパラギンに対する置換が、ウイルスＤＮＡ統合を完全に無効にする。インテグラーゼの欠失は、概して、Ｃ末端ドメインに限定されるであろう。残基２３５−２８８のためのコード配列の欠失は、有用な非機能的インテグラーゼをもたらす（例えば、Ｅｎｇｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．６９：２７２９， １９９５を参照）。さらなる実施例として、例えば、Ａｓｐ６４（残基番号がＨＩＶ−１に対して与えられ、他のレンチウイルスまたはレトロウイルスからのインテグラーゼに対する対応残基番号は、当業者によって容易に判定することができる）（例えば、Ｄ６４Ｅ、Ｄ６４Ｖ）、Ａｓｐ１１６（例えば、Ｄ１１６Ｎ）、Ａｓｎ１２０（例えば、Ｎ１２０Ｋ）、Ｇｌｕ１５２、Ｇｌｎ１４８（例えば、Ｑ１４８Ａ）、Ｌｙｓ１５６、Ｌｙｓ１５９、Ｔｒｐ２３５（例えば、Ｗ２３５Ｅ）、Ｌｙｓ２６４（例えば、Ｋ２６４Ｒ）、Ｌｙｓ２６６（例えば、Ｋ２６６Ｒ）、Ｌｙｓ２７３（例えば、Ｋ２７３Ｒ）といった、突然変異を生成することができる。他の突然変異を構築し、統合、導入遺伝子発現、および任意の他の望ましいパラメータについて試験することができる。これらの機能の分析は周知である。突然変異は、核酸配列の部位指向性突然変異生成および化学合成を含む、種々の技法のうちのいずれかによって生成することができる。１つの突然変異を行うことができ、またはこれらの突然変異のうちの１つより多くは、インテグラーゼの中に存在することができる。例えば、インテグラーゼは、２つのアミノ酸、３つのアミノ酸、４つのアミノ酸等において突然変異を有してもよい。

【0119】

代替として、またはインテグラーゼ突然変異体の使用と組み合わせて、Ｕ３およびＵ５の中の付着部位（ａｔｔ）も突然変異させることができる。インテグラーゼは、これらの部位に結合し、３’−末端ジヌクレオチドは、ベクターゲノムの両端において開裂される。ＣＡジヌクレオチドは、陥凹３’末端に位置し、ＣＡは、処理のために必要とされ、ヌクレオチドの突然変異は、宿主染色体に対する統合を阻止する。ＣＡジヌクレオチドのＡは、統合のための最重要ヌクレオチドであり、ゲノムの両端における突然変異は、最良の結果を生じるであろう（例えば、Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．７３：９０１１ （１９９９）を参照）。１つの例示では、各端におけるＣＡは、ＴＧに変更される。他の例示では、各端におけるＣＡは、一方の端ではＴＧ、他方の端ではＧＴに変更される。他の例示では、各端におけるＣＡが欠失され、他の例示では、ＣＡのＡが各端において欠失される。

【0120】

統合はまた、３’ＬＴＲの近位に位置する、ポリプリン路（ＰＰＴ）の突然変異または欠失によって阻害することもできる（例えば、第ＷＯ ２００９／０７６５２４号を参照）。ＰＰＴは、プラス鎖ＤＮＡ合成のためのプライマー結合部位としての機能を果たすことができる、約１５個のヌクレオチドのポリプリン配列である。この場合において、ＰＰＴの突然変異または欠失は、逆転写過程を標的にする。特定の機構にとらわれることを所望するわけではないが、ＰＰＴを突然変異または欠失させることによって、線形ＤＮＡの産生が根本的に低減され、本質的に１−ＬＴＲ ＤＮＡサークルのみが産生される。統合は、線形二本鎖ＤＮＡベクターゲノムを必要とし、統合は、それがないと本質的に排除される。本明細書で記述されるように、ＰＰＴは、突然変異によって、または欠失によって、非機能的にすることができる。典型的には、約１５ｎｔのＰＰＴ全体が欠失されるが、いくつかの実施形態では、１４ｎｔ、１３ｎｔ、１２ｎｔ、１１ｎｔ、１０ｎｔ、９ｎｔ、８ｎｔ、７ｎｔ、６ｎｔ、５ｎｔ、４ｎｔ、３ｎｔ、および２ｎｔのより短い欠失が行われてもよい。突然変異が行われるときに、典型的には、特にＰＰＴの５’半分の中で行われる（例えば、ＭｃＷｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．７７：１１１５０， ２００３を参照）が、最初の４つの塩基の中の単一または二重突然変異は、依然として転写を低減させる。ＰＰＴの３’末端において行われる突然変異は、概して、より劇的な影響を及ぼす（例えば、Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．７０：５２８８， １９９６を参照）。

【0121】

Ｕ３領域は、直接上流にＰＰＴ（ポリプリン路）配列を含んでもよい。ある具体的実施形態では、（３’末端における）少なくとも３つの異なるＵ３領域のうちのいずれか１つが、レンチウイルスベクターに含まれてもよい（配列番号１３−１５を参照）。構造は、Ｕ３領域内に欠失を含有する。ＳＩＮ構造は、ＴＡＴＡボックスを除去し、それにより、ＬＴＲプロモーター活性を無効にする、Ｕ３内の約１３０個のヌクレオチドの欠失を有する（例えば、Ｍｉｙｏｓｈｉ， ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．７２： ８１５０， １９９８； Ｙｕ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３： ３１９４， １９８６を参照）。構造７０３および７０４内の欠失は、レンチウイルスベクターからの発現を増加させる（例えば、Ｂａｙｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒａｐｙ １６： １９６８， ２００８を参照）。加えて、構造７０４は、ベクターの統合を減少させる、３’ＰＰＴの欠失を含有する（例えば、第ＷＯ ２００９／０７６５２４号を参照）。また、それぞれ参照によりその全体が組み込まれる、米国特許出願第１２／８４２，６０９号および国際特許出願公開第ＷＯ２０１１／０１１５８４号（国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ１０／０４２８７０号）も参照されたい。

【0122】

ベクターゲノムを非統合性にするためのこれらの異なるアプローチは、個別に、または組み合わせて使用され得る。複数のアプローチを使用することは、重複機構を通してフェイルセーフベクターを構築するために使用されてもよい。したがって、ＰＰＴ突然変異もしくは欠失は、ａｔｔ部位突然変異もしくは欠失と、またはインテグラーゼ突然変異と組み合わせることができ、あるいはＰＰＴ突然変異もしくは欠失は、ａｔｔ部位突然変異もしくは欠失およびインテグラーゼ突然変異の両方と組み合わせることができる。同様に、ａｔｔ部位突然変異もしくは欠失およびインテグラーゼ突然変異は、相互に組み合わせられてもよく、またはＰＰＴ突然変異もしくは欠失と組み合わせられてもよい。

【0123】

本明細書で説明される通り、レンチウイルスベクター構造はまた、ほ乳類細胞内での発現のためのプロモーターを含有してもよい。本明細書でさらに詳細に考察されるプロモーターとしては、例えば、ヒトユビキチンＣプロモーター（ＵｂｉＣ）、サイトメガロウイルス前初期プロモーター（ＣＭＶ）、およびラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーターが挙げられる。
Ｅ． ウイルス様粒子

【0124】

種々の実施形態では、免疫原およびそのそれぞれの指定の抗原に対する免疫応答を誘発する少なくとも１つのＨＳＶ２免疫原を含むウイルス様粒子（ＶＬＰ）が、提供される。

【0125】

ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２ウイルス様粒子は、ＶＰ５、ＶＰ１９、ＶＰ２３、ＶＰ２２ａ、および成熟プロテアーゼ（ＵＬ２６遺伝子産生物）を生体外で自己組織化させることによって、調製され得る。例えば、Ｎｅｗｃｏｍｂ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ， Ｓｅｐｔ．１９９４， ６０５９−６０６３．；Ｎｅｗｃｏｍｂ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．， ２６３；４３２−４４６ （１９９６）；Ｔｈｏｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌ， Ａｐｒｉｌ １９９４， ２４４２−２４５７を参照されたく、全てその全体が参照により組み込まれる。本明細書で説明されるウイルス様粒子は、１つ以上のＨＳＶ−２免疫原（すなわち、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つの免疫原等）を含むことができ、その免疫原は、本明細書でさらに詳細に説明される。特定の実施形態では、ＨＳＶ−２に由来する少なくとも１つ、２つ、または３つ以上の免疫原が、ウイルス様粒子内に封入され得る、またはそれと関連付けられ得る。例として、免疫原は、ＨＳＶ−２タンパク質、例えば、ＵＬ１９（例えば、ＵＬ１９上方ドメイン断片またはその免疫原性断片もしくは変異体）および／またはｇＤ（またはその免疫原性断片もしくは変異体）および／またはＵＬ４７（またはその免疫原性断片もしくは変異体）等であってもよく、またはＨＳＶ−２タンパク質の別の免疫原性断片もしくは領域であってもよい。
調節発現配列

【0126】

本明細書で説明されるように、組換え発現ベクターは、少なくとも１つの調節発現配列を含む。ある実施形態では、組換え発現ベクターがウイルスベクターゲノムを含むときに、少なくとも１つの免疫原の発現が、特定の標的細胞内で所望される。典型的には、例えば、レンチウイルスベクターでは、免疫原をコードするポリヌクレオチド配列が、５’ＬＴＲおよび３’ＬＴＲ配列の間に位置する。さらに、コード化ヌクレオチド配列は、好ましくは、他の遺伝子または調節配列または特徴、例えば、特定の方式で免疫原の発現を調節する、プロモーターまたはエンハンサーを含む転写調節配列との機能的関係で、動作可能に結合される。ある場合においては、有用な転写調節配列は、時間的および空間的の両方で、活性に対して高度に調節されるものである。コードされたポリペプチドの発現を調節するために使用され得る、発現制御要素は、当技術分野で公知であり、誘導型プロモーター、構成的プロモーター、分泌シグナル、エンハンサー、および他の調節配列を含むが、それらに限定されない。

【0127】

免疫原および任意の他の発現可能配列をコードする、ポリヌクレオチドは、典型的には、内部プロモーター／エンハンサー調節配列と機能的関係にある。レンチウイルスベクター構造に関して、「内部」プロモーター／エンハンサーは、ウイルスベクター内の５’ＬＴＲおよび３’ＬＴＲ配列の間に位置し、目的とするコード化ポリヌクレオチド配列に動作可能に結合されるものである。内部プロモーター／エンハンサーは、それと機能的関係にある遺伝子の発現を増加させることが知られている、任意のプロモーター、エンハンサー、またはプロモーター／エンハンサーの組み合わせであってもよい。「機能的関係」および「動作可能に結合される」とは、制限なく、プロモーターおよび／またはエンハンサーが適切な分子と接触させられたときに目的とする配列が発現されるように、配列が、プロモーターおよび／またはエンハンサーに対して正しい場所および配向にあることを意味する。

【0128】

内部プロモーター／エンハンサーの選択肢は、免疫原の所望の発現パターンおよび既知のプロモーター／エンハンサーの特異的性質に基づく。したがって、内部プロモーターは、構成的に活性であってもよい。使用され得る、構成的プロモーターの非限定的実施例は、ユビキチン（例えば、米国特許第５５１０４７４号、第ＷＯ ９８／３２８６９号を参照）、ＣＭＶ（例えば、Ｔｈｏｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６５９， １９８４；米国特許第５１６８０６２号を参照）、ベータアクチン（Ｇｕｎｎｉｎｇ ｅｔ ａｌ． １９８９ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：４８３１−４８３５）、およびｐｇｋ（例えば、Ａｄｒａ ｅｔ ａｌ． １９８７ Ｇｅｎｅ ６０：６５−７４； Ｓｉｎｇｅｒ−Ｓａｍ ｅｔ ａｌ． １９８４ Ｇｅｎｅ ３２：４０９−４１７；およびＤｏｂｓｏｎ ｅｔ ａｌ． １９８２ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１０：２６３５−２６３７を参照）のためのプロモーターを含む。

【0129】

代替として、プロモーターは、組織特異的プロモーターであってもよい。いくつかの実施形態では、プロモーターは、標的細胞特異的プロモーターである。樹状細胞を標的することは、免疫応答、特に、ＨＳＶ−２に関する免疫に有用な細胞障害応答を強化し得る。例えば、プロモーターは、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１０３、ＴＬＲ、ＤＣ−ＳＩＧＮ、ＢＤＣＡ−３、ＤＥＣ−２０５、ＤＣＩＲ２、マンノース受容体、デクチン−１、Ｃｌｅｃ９Ａ、ＭＨＣクラスＩＩを含む、樹状細胞によって発現される任意の生成物から由来のものとなり得る。加えて、プロモーターは、免疫原の誘発型発現を可能にするように選択されてもよい。テトラサイクリン応答系、ｌａｃオペレーター・リプレッサー系、ならびに熱ショック、メタロチオネインプロモータ等の金属イオン、インターフェロン、低酸素症、プロゲステロンまたはグルココルチコイド受容体プロモーター等のステロイド、ＶＥＧＦプロモーター等の放射を含む、種々の環境または生理学的変化に応答するプロモーターを含む、誘導型発現のためのいくつかの体系が当技術分野で公知である。プロモーターの組み合わせはまた、免疫原をコードするポリヌクレオチド配列のうちのそれぞれの所望の発現を得るために使用されてもよい。当業者であれば、生物または目的とする標的細胞内のポリヌクレオチド配列の所望の発現パターンに基づいて、プロモーターを選択することができるであろう。

【0130】

ウイルスベクターゲノムを含む、組換え発現ベクターは、少なくとも１つのＲＮＡポリメラーゼＩＩまたはＩＩＩ応答プロモーターを含んでもよい。このプロモーターは、目的とするポリヌクレオチド配列に動作可能に結合することができ、また、終止配列に結合することもできる。加えて、１つよりも多くのＲＮＡポリメラーゼＩＩまたはＩＩＩプロモーターが組み込まれてもよい。ＲＮＡポリメラーゼＩＩおよびＩＩＩプロモーターは、当業者に周知である。好適な一連のＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーターは、例えば、Ｐａｕｌｅ ａｎｄ Ｗｈｉｔｅ， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．， Ｖｏｌ．２８， ｐｐ １２８３−１２９８ （２０００）で見出すことができる。ＲＮＡポリメラーゼＩＩまたはＩＩＩプロモーターはまた、下流ＲＮＡコード配列を転写するようにＲＮＡポリメラーゼＩＩまたはＩＩＩに指図することができる、任意の合成または工学的ＤＮＡ断片を含む。さらに、ＲＮＡポリメラーゼＩＩまたはＩＩＩ（Ｐｏｌ ＩＩまたはＩＩＩ）プロモーター、あるいはウイルスベクターゲノムの一部として使用されるプロモーターは、誘導型となり得る。任意の好適な誘導型Ｐｏｌ ＩＩまたはＩＩＩプロモーターを、本明細書で説明される方法とともに使用することができる。特に適するＯｈｋａｗａ
ａｎｄ Ｔａｉｒａ， Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ， １１：５７７−５８５ （２０００）およびＭｅｉｓｓｎｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．， ２９：１６７２−１６８２ （２００１）に提供されるＰｏｌ ＩＩまたはＩＩＩプロモーターとしては、テトラサイクリン応答プロモーターが挙げられる。

【0131】

内部エンハンサーはまた、目的とするポリヌクレオチド配列の発現を増加させるように、ウイルスベクターゲノムを含む組換え発現ベクターの中に存在してもよい。例えば、ＣＭＶエンハンサー（例えば、Ｂｏｓｈａｒｔ ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ ４１：５２１， １９８５を参照）が使用されてもよい。ＨＩＶ、ＣＭＶ等のウイルスゲノム内、およびほ乳類ゲノム内の多くのエンハンサーが識別され、特徴付けられている（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ等の公的に利用可能なデータベースを参照）。エンハンサーは、異種プロモーターと組み合わせて使用することができる。当業者であれば、所望の発現パターンに基づいて適切なエンハンサーを選択することができるであろう。

【0132】

特定の標的細胞に対するウイルスベクターゲノムを含む組換え発現ベクターの送達を標的にするとき、ベクターゲノムは、通常、標的細胞によって認識され、目的とする配列、ウイルス構成要素（ベクターがウイルスベクターであるとき）、および本明細書で論議される他の配列に動作可能に結合される、プロモーターを含有するであろう。プロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼに対する結合および転写が起こることを可能にする、核酸配列によって形成される発現制御要素である。プロモーターは、誘発型、構成的、時間的に活性、または組織特異的であってもよい。誘発型プロモーターの活性は、生物または非生物因子の存在または不在によって誘発される。誘発型プロモーターは、生物の発達のある段階、その製造、または特定の細胞で、それらが動作可能に結合される遺伝子の発現をオンまたはオフにすることができるため、遺伝子工学において有用なツールとなり得る。誘導型プロモーターは、化学的に調節されたプロモーター、および物理的に調節されたプロモーターとしてグループ化することができる。典型的な化学的に調節されたプロモーターは、アルコール調節プロモーター（例えば、アルコールデヒドロゲナーゼＩ（ａｌｃＡ）遺伝子プロモーター）、テトラサイクリン調節プロモーター（例えば、テトラサイクリン応答プロモーター）、ステロイド調節プロモーター（例えば、ラットグルココルチコイド受容体（ＧＲ）ベースのプロモーター、ヒトエストロゲン受容体（ＥＲ）ベースのプロモーター、蛾のエクジソン受容体ベースのプロモーター、およびステロイド／レチノイド／甲状腺受容体スーパーファミリーに基づくプロモーター）、金属調節プロモーター（例えば、メタロチオネイン遺伝子ベースのプロモーター）、および病原性関連プロモーター（例えば、シロイヌナズナおよびトウモロコシ病原体関連（ＰＲ）タンパク質ベースのプロモーター）を含むが、それらに限定されない。典型的な物理的に調節されたプロモーターは、温度調節プロモーター（例えば、熱ショックプロモーター）、および光調節プロモーター（例えば、ダイズＳＳＵプロモーター）を含むが、それらに限定されない。他の例示的なプロモーターは、他の場所で、例えば、米国特許商標局のデータベースを検索することによって識別することができる、特許および公開特許出願で説明されている。

【0133】

当業者であれば、特定の状況に基づいて適切なプロモーターを選択することができるであろう。プロモーターを発現されるポリヌクレオチド配列に動作可能に結合するための方法のように、多くの異なるプロモーターが当技術分野で周知である。天然プロモーター配列および多くの異種プロモーターの両方が、パッケージング細胞および標的細胞内の発現を指図するために使用されてもよい。典型的には、異種プロモーターは、概して、天然プロモーターと比較して、所望のタンパク質のより優れた転写および高い収率を可能にするために使用される。

【0134】

プロモーターは、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、およびシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）等のウイルスのゲノムから得られてもよい。プロモーターはまた、そのようなプロモーターが標的細胞と適合するならば、例えば、異種ほ乳類プロモーター、例えば、アクチンプロモーターまたは免疫グロブリンプロモーター、熱ショックプロモーター、または天然配列と通常は関連付けられるプロモーターである。一実施形態では、プロモーターは、ウイルス発現系内の天然発生ウイルスプロモーターである。いくつかの実施形態では、プロモーターは、樹状細胞特異的プロモーターである。樹状細胞特異的プロモーターは、例えば、ＣＤ１１ｃプロモーターとなり得る。

【0135】

転写は、エンハンサー配列をベクターに挿入することによって増加させられてもよい。エンハンサーは、典型的には、通常約１０〜３００塩基対の長さであり、プロモーターに作用してその転写を増加させる、ＤＮＡのｃｉｓ作用要素である。多くのエンハンサー配列は、現在、ほ乳類遺伝子（グロブリン、エラスターゼ、アルブミン、アルファフェトプロテイン、およびインスリン）から、および真核細胞ウイルスから知られている。例としては、複製起点の後半側のＳＶ４０エンハンサー（塩基対１００〜２７０）、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後半側のポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。エンハンサーは、抗原特異的ポリヌクレオチド配列に対する位置５’または３’においてベクターに挿入されてもよいが、好ましくは、プロモーターからの部位５’に位置する。

【0136】

発現ベクターはまた、転写の終止のため、およびｍＲＮＡを安定させるために必要な配列を含有してもよい。これらの配列は、しばしば、真核生物またはウイルスＤＮＡまたはｃＤＮＡの５’および時には３’非翻訳領域で見出され、当技術分野で周知である。

【0137】

ウイルスベクターゲノムを含む、組換え発現構造はまた、付加的な遺伝要素を含有してもよい。構造に含まれ得る要素の種類は、決して限定されず、特定の結果を達成するように選択されてもよい。例えば、標的細胞内の組換え発現ベクターまたはウイルスゲノムの核移行を促進するシグナルが、含まれてもよい。そのようなシグナルの実施例は、ＨＩＶ−１フラップシグナルである。標的細胞内のプロウイルス統合部位の特性化を促進する、付加的な調節配列が含まれてもよい。例えば、ｔＲＮＡアンバーサプレッサー配列が、構造に含まれてもよい。例えば、ニワトリβ−グロビンからの絶縁体配列もまた、ウイルスゲノム構造に含まれてもよい。この要素は、メチル化および異質染色質化により、標的細胞内の統合プロウイルスをサイレンシングする機会を低減させる。加えて、絶縁体は、染色体上の統合部位における周辺ＤＮＡからの正または負の位置効果から、内部エンハンサー、プロモーター、および外因性ポリヌクレオチド配列を保護してもよい。加えて、ベクターゲノムを含む組換え構造は、目的とする遺伝子の発現を強化するように設計されている、１つ以上の遺伝要素を含有してもよい。例えば、ウッドチャック肝炎ウイルス応答要素（ＷＲＥ）が、構造の中へ配置されてもよい（例えば、Ｚｕｆｆｅｒｅｙ ｅｔ ａｌ． １９９９．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：３６６８−８１； Ｄｅｇｌｏｎ ｅｔ ａｌ．， ２０００．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１１：１７９−９０を参照）。

【0138】

組換え発現ベクターがウイルスベクターゲノムであるときに、ウイルスベクターゲノムは、典型的には、ウイルスベクターゲノム構造の産生のためにパッケージングまたは産生細胞株に形質移入され得る、プラスミド内で構築される。プラスミドは、概して、細菌内のプラスミドの複製のために有用な配列を含む。そのようなプラスミドは、当技術分野で周知である。加えて、複製の原核生物起源を含むベクターもまた、その発現が薬剤耐性等の検出可能または選択可能なマーカーを与える、遺伝子を含んでもよい。典型的な細菌薬剤耐性生成物は、アンピシリンまたはテトラサイクリンに対する耐性を与えるものである。

【0139】

ある構成では、組換え発現ベクターは、樹状細胞（ＤＣ）成熟／刺激因子をコードする、ポリヌクレオチド配列を含有する。例示的な刺激性分子は、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＴＮＦα、Ｂ７．１、Ｂ７．２、４−１ＢＢ、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）、薬剤誘発型ＣＤ４０（ｉＣＤ４０）、および同等物を含む。これらのポリヌクレオチドは、典型的には、樹状細胞内のコード配列の発現を指図する、１つ以上の調節要素の制御下にある。特定の他の具体的実施形態では、免疫原およびＧＭ−ＣＳＦの両方をコードするヌクレオチド配列の発現を方向付ける、およびそれを含む組換え発現ベクターは、除外される。樹状細胞の成熟は、成功したワクチン接種に寄与する（例えば、Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：２９６−３０６ （２００５）； Ｓｃｈｕｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：１３８−１４７ （２００３）； Ｆｉｇｄｏｒ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１０：４７５−４８０ （２００４）を参照）。成熟は、Ｔ細胞プライミングのために特殊化された細胞の中への抗原捕捉に活発に関与する細胞からＤＣを変換することができる。例えば、ＣＤ４−ヘルパーＴ細胞上のＣＤ４０ＬによるＣＤ４０の係合は、ＤＣ成熟のための重要なシグナルであり、ＣＤ８＋Ｔ細胞の強力な活性化をもたらす。そのような刺激性分子はまた、成熟因子または成熟刺激因子とも呼ばれる。免疫チェックポイントは、癌における機能的細胞生免疫の活性化に対する有意な障壁を表し、ＣＴＬＡ４およびプログラム死１（ＰＤ−１）を含むＴ細胞上の阻害リガンドに特異的なアンタゴニスト抗体は、臨床で評価されている標的作用物質の実施例である。慢性感染症および癌における有意な耐性機構は、高レベルのＰＤ−１を発現する、抗原特異的Ｔ細胞の機能的消耗である。慢性感染症および癌における有意な耐性機構は、高レベルのＰＤ−１を発現する、抗原特異的Ｔ細胞の機能的消耗である。非限定的実施例として、治療免疫の有効性が、免疫チェックポイント制御との組み合わせによって有意に強化されることが示されているため、免疫チェックポイントを阻害することに対する代替的なアプローチは、プログラム死（ＰＤ）リガンド１および２（ＰＤ−Ｌ１／Ｌ２）の発現を阻害することであると当業者によって理解することができる。阻害を達成するための１つの方法は、関連分子のうちの１つ以上をコードする、レンチウイルスベクターゲノム等のウイルスベクターゲノムが形質導入されたＤＣ内のＰＤ−Ｌ１／Ｌ２の発現を抑制する、本明細書で説明されるもの等のＲＮＡ分子の発現によるものである。ＤＣの成熟または免疫チェックポイント、例えば、ＰＤ−１リガンド等の特定の要素の発現は、ＭＨＣ ＩＩ等の表面マーカーの上方調節のフローサイトメトリ分析によって、ならびに例えば、本明細書で説明される技法および方法を行うことによる、発現されたケモカインおよびサイトカインのプロファイリングによって、特徴付けることができる。

【0140】

検出可能な生成物、通常は、タンパク質をコードする配列を、所望の免疫原を発現している細胞の識別を可能にするように含むことができる。例えば、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）等の蛍光マーカータンパク質が、目的とするポリヌクレオチド配列とともに組換え発現構造に組み込まれる（すなわち、少なくとも１つの免疫原をコードする）。他の場合において、タンパク質は、抗体によって検出可能であってもよく、またはタンパク質は、検出可能な生成物を生じるように物質に作用する酵素であってもよく、または形質移入あるいは形質導入標的細胞の選択を可能にする、例えば、ハイグロマイシン耐性等の薬剤耐性を与える、タンパク質生成物であってもよい。典型的な選択遺伝子は、真核細胞で使用するために好適な抗生物質または他の毒素、例えば、当技術分野で公知である中でも、ネオマイシン、メトトレキサート、ブラストサイジンに対する耐性を与える、または栄養要求性欠損を補完する、または媒体から保留された重要な栄養素を供給する、タンパク質をコードする。選択可能なマーカーは、任意に、別個のプラスミド上に存在し、共トランスフェクションによって導入することができる。

【0141】

本明細書で説明されるベクター粒子に関して、免疫原をコードするポリヌクレオチド配列、および本明細書で説明されるようなエンベロープ分子をコードする配列、またはパッケージング細胞内の所望のベクター粒子の産生のために必要な１つ以上のＤＣ突然変異因子のうちの２つ以上を含む、１つ以上のマルチシストロン性発現単位が使用されてもよい。マルチシストロン性ベクターの使用は、必要とされる核酸分子の総数を削減し、したがって、複数のベクターゲノムからの協調発現と関連付けられる、起こり得る困難を回避するかもしれない。マルチシストロン性ベクターでは、発現される種々の要素は、１つ以上のプロモーター（および必要に応じて他の発現制御要素）に動作可能に結合される。いくつかの構成では、マルチシストロン性ベクターは、少なくとも１つの（すなわち、１つ以上の）目的とする免疫原をコードする配列、レポーター生成物をコードする配列、および１つ以上のベクター粒子構成要素をコードする配列を含む。組換え構造が免疫原をコードするポリヌクレオチドを含む、ある実施形態では、構造は、任意に、ＤＣ成熟因子をコードする。ある他の実施形態では、マルチシストロン性ベクターは、免疫原、ＤＣ成熟因子、および任意に発現ベクターがウイルス発現ベクターであるときにウイルス構成要素のうちのそれぞれをコードする、ポリヌクレオチド配列を含む。また他の実施形態では、マルチシストロン性ベクターは、発現を方向付け、少なくとも２つ以上の免疫原をコードする。

【0142】

マルチシストロン性発現ベクター内で発現される各構成要素は、同一のプロモーターからの種々のタンパク質の別個の発現を可能にするように、例えば、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）要素またはウイルス２Ａ要素によって、分離されてもよい。ＩＲＥＳ要素および２Ａ要素は、当技術分野で公知である（例えば、米国特許第４，９３７，１９０号；ｄｅ Ｆｅｌｉｐｅ ｅｔ ａｌ． ２００４．Ｔｒａｆｆｉｃ ５： ６１６−６２６を参照）。一実施形態では、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）、およびゾーシーアシグナウイルス（ＴａＶ）（例えば、Ｓｚｙｍｃｚａｋ ｅｔ
ａｌ． ２００４ Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２２： ５８９−５９４を参照）に由来する２Ａ様配列と結合されたフーリン開裂部位配列（ＲＡＫＲ）（例えば、Ｆａｎｇ ｅｔ ａｌ． ２００５ Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． ２３： ５８４−５９０を参照）等のオリゴヌクレオチドが、マルチシストロン性ベクター内の遺伝要素を分離するために使用される。特定のマルチシストロン性ベクターの有効性は、標準プロトコルを用いて遺伝子の各々の発現を検出することによって、容易に試験され得る。

【0143】

特定の例示では、ウイルスベクターゲノムは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサー／プロモーター配列、ＨＩＶ５’ＬＴＲからのＲおよびＵ５配列、パッケージング配列（ψ）、ＨＩＶ−１フラップシグナル、内部エンハンサー、内部プロモーター、目的とする遺伝子、ウッドチャック肝炎ウイルス応答要素、ｔＲＮＡアンバーサプレッサー配列、そのエンハンサー配列の欠失を伴うＵ３要素、ニワトリβ−グロビン絶縁体、ならびに３’ＨＩＶ ＬＴＲのＲおよびＵ５配列を含む。いくつかの例示では、ベクターゲノムは、無傷レンチウイルス５’ＬＴＲおよび自己不活性化３’ＬＴＲを含む（例えば、Ｉｗａｋｕｍａ ｅｔ ａｌ． Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １５：１２０， １９９９を参照）。

【0144】

ベクターゲノムの構築は、制限なく、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（１９８９ ａｎｄ ２００１ ｅｄｉｔｉｏｎｓ； Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， ＮＹ）； Ｃｏｆｆｉｎ ｅｔ ａｌ． （Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｎ．Ｙ．（１９９７））；および“ＲＮＡ Ｖｉｒｕｓｅｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ” （Ａｌａｎ Ｊ． Ｃａｎｎ， Ｅｄ．， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， （２０００）で説明されているような、制限エンドヌクレアーゼ消化、ライゲーション、変換、プラスミド精製、およびＤＮＡ配列決定の標準技法を含む、当技術分野で公知である任意の好適な遺伝子工学技法を使用して達成することができ、先述のそれぞれは、その全体で参照することにより本明細書に組み込まれる。

【0145】

ほ乳類細胞内の一過性の発現のために構築されたベクターもまた、使用されてもよい。宿主細胞が発現ベクターの多くのコピーを蓄積し、順に、発現ベクター内の免疫原特異的ポリヌクレオチドによってコードされる高レベルのポリペプチドを合成するように、一過性の発現は、宿主細胞内で効率的に複製することができる発現ベクターの使用を伴う。上記のＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， ｐｐ．１６．１７−１６．２２， １９８９を参照されたい。ポリペプチドの発現に対する適応のために好適な他のベクターおよび方法は、当技術分野で周知であり、特定の状況に容易に適合される。

【0146】

本明細書で提供される教示および当技術分野での知識を使用することによって、当業者であれば、レポータータンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含むベクターでパッケージング細胞を形質移入し、好適な技法を使用して発現を測定する、例えば、緑色蛍光タンパク質複合体からの蛍光を測定することによって、特定の発現系の有効性を試験することができると認識するであろう。他の好適なレポーター遺伝子も、当技術分野で周知である。

【0147】

例示的実施形態

【0148】

先述の詳細に説明される実施形態のいずれかに加えて、以下のうちのいずれかまたはその任意の組み合わせを含む実施形態が企図される。

【0149】

１． 免疫原性薬学的組成物であって、

【0150】

（ｉ） ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質、またはその免疫学的断片と、

【0151】

（ｉｉ） ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質以外のＨＳＶ−２の構造タンパク質、またはその免疫学的断片と、

【0152】

（ｉｉｉ） 任意に、先天性免疫を活性化する薬剤と、

【0153】

（ｉｖ） 薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。

【0154】

２． ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質は、ｇＤ２である、実施形態１の組成物。

【0155】

３． エンベロープ糖タンパク質ｇＤ２の免疫学的断片を含む、実施形態１の組成物。

【0156】

４． ＨＳＶ−２の構造タンパク質は、ＵＬ４７、ＩＣＰ０、ＵＬ１９、ＵＬ２５、ＵＬ４６、ＵＬ３９、ＵＬ７、およびＵＬ２６から成る群から選択される、実施形態１〜３のいずれか１つの組成物。

【0157】

５． ＨＳＶ−２の構造タンパク質は、ＵＬ１９である、実施形態１の組成物。

【0158】

６． ＨＳＶ−２の構造タンパク質は、ＵＬ１９である、実施形態２の組成物。

【0159】

７． ＵＬ１９の免疫学的断片を含む、実施形態１の組成物。

【0160】

８． ＵＬ１９の免疫学的断片、例えば、配列番号１２を含む、実施形態２の組成物。

【0161】

９． ＨＳＶ−２の構造タンパク質は、ＵＬ２５である、実施形態１の組成物。

【0162】

１０． ＨＳＶ−２の構造タンパク質は、ＵＬ２５である、実施形態２の組成物。

【0163】

１１． ＵＬ２５の免疫学的断片を含む、実施形態１の組成物。

【0164】

１２． ＵＬ２５の免疫学的断片を含む、実施形態２の組成物。

【0165】

１３． ＨＳＶ−２の構造タンパク質は、ＵＬ４７である、実施形態１の組成物。

【0166】

１４． ＨＳＶ−２の構造タンパク質は、ＵＬ４７である、実施形態２の組成物。

【0167】

１５． ＵＬ４７の免疫学的断片を含む、実施形態１の組成物。

【0168】

１６． ＵＬ４７の免疫学的断片を含む、実施形態２の組成物。

【0169】

１７． 第２のＨＳＶ−２の構造タンパク質、またはその免疫学的断片をさらに含む、実施形態１〜１６のいずれかの組成物。

【0170】

１８． 第２のＨＳＶ−２の構造タンパク質は、ＵＬ４７、ＩＣＰ０、ＵＬ１９、ＵＬ２５、ＵＬ４６、ＵＬ３９、ＵＬ７、およびＵＬ２６から成る群から選択され、第２の構造タンパク質は、第１の構造タンパク質に非同一である、実施形態１７の組成物。

【0171】

１９． 第２の構造タンパク質は、全長タンパク質である、実施形態１８の組成物。

【0172】

２０． 第２の構造タンパク質は、第２の構造タンパク質の免疫学的断片である、実施形態１８の組成物。

【0173】

２１． ＵＬ２５をさらに含む、実施形態５〜８のいずれかの組成物。

【0174】

２２． ＵＬ２５の免疫学的断片をさらに含む、実施形態５〜８のいずれかの組成物。

【0175】

２３． ＵＬ４７をさらに含む、実施形態５〜８のいずれかの組成物。

【0176】

２４． ＵＬ４７の免疫学的断片をさらに含む、実施形態５〜８のいずれかの組成物。

【0177】

２５． ＵＬ１９をさらに含む、実施形態９〜１２のいずれかの組成物。

【0178】

２６． ＵＬ１９の免疫学的断片、例えば、配列番号１２をさらに含む、実施形態９〜１２のいずれかの組成物。

【0179】

２７． ＵＬ４７をさらに含む、実施形態９〜１２のいずれかの組成物。

【0180】

２８． ＵＬ４７の免疫学的断片をさらに含む、実施形態９〜１２のいずれかの組成物。

【0181】

２９． ＵＬ１９を含む、実施形態１３〜１６のいずれかの組成物。

【0182】

３０． ＵＬ１９の免疫学的断片、例えば、配列番号１２をさらに含む、実施形態１３〜１６のいずれかの組成物。

【0183】

３１． ＵＬ２５をさらに含む、実施形態１３〜１６のいずれかの組成物。

【0184】

３２． ＵＬ２５の免疫学的断片をさらに含む、実施形態１３〜１６のいずれかの組成物。

【0185】

３３． 薬剤は、アジュバントである、実施形態１〜３２のいずれかの組成物。

【0186】

３４． アジュバントは、ＧＬＡである、実施形態３３の組成物。

【0187】

３５． ｇＤ２、ＵＬ２５、ＵＬ１９、ＧＬＡアジュバント、および薬学的に許容される担体を含む、実施形態１の組成物。

【0188】

３６． ｇＤ２、ＵＬ２５、およびＵＬ１９の免疫学的断片、例えば、配列番号１２を含む、実施形態１の組成物。

【0189】

３７． ｇＤ２、ＵＬ１９、およびＵＬ２５の免疫学的断片を含む、実施形態１の組成物。

【0190】

３８． ＵＬ４７をさらに含む、実施形態３５〜３７のいずれかの組成物。

【0191】

３９． ＵＬ４７の免疫学的断片をさらに含む、実施形態３５〜３７のいずれかの組成物。

【0192】

４０． ＩＣＰ０またはその免疫学的断片と、ＵＬ４７またはその免疫学的断片、ＵＬ１９またはその免疫学的断片、ＵＬ２５またはその免疫学的断片、ＵＬ４６またはその免疫学的断片、ＵＬ３９またはその免疫学的断片、ＵＬ７またはその免疫学的断片、およびＵＬ２６またはその免疫学的断片のうちの１つ以上と、を含む、実施形態１の組成物。

【0193】

４１． ＩＣＰ０またはその免疫学的断片と、ＵＬ４７またはその免疫学的断片、ＵＬ１９またはその免疫学的断片、ＵＬ２５またはその免疫学的断片、ＵＬ４６またはその免疫学的断片、ＵＬ３９またはその免疫学的断片、ＵＬ７またはその免疫学的断片、およびＵＬ２６またはその免疫学的断片のうちの１つ以上と、を含む、実施形態２の組成物。

【0194】

４２． ＩＣＰ０またはその免疫学的断片、および２つのさらなる構造タンパク質またはその免疫学的断片を含む、実施形態４０または４１の組成物。

【0195】

４３． ＵＬ４６またはその免疫学的断片と、ＵＬ４７またはその免疫学的断片、ＵＬ１９またはその免疫学的断片、ＵＬ２５またはその免疫学的断片、ＩＣＰ０またはその免疫学的断片、ＵＬ３９またはその免疫学的断片、ＵＬ７またはその免疫学的断片、およびＵＬ２６またはその免疫学的断片のうちの１つ以上と、を含む、実施形態１の組成物。

【0196】

４４． ＵＬ４６またはその免疫学的断片と、ＵＬ４７またはその免疫学的断片、ＵＬ１９またはその免疫学的断片、ＵＬ２５またはその免疫学的断片、ＩＣＰ０またはその免疫学的断片、ＵＬ３９またはその免疫学的断片、ＵＬ７またはその免疫学的断片、およびＵＬ２６またはその免疫学的断片のうちの１つ以上と、を含む、実施形態２の組成物。

【0197】

４５． ＵＬ４６またはその免疫学的断片、および２つのさらなる構造タンパク質またはその免疫学的断片を含む、実施形態４３または４４の組成物。

【0198】

４６． 対象においてＨＳＶ−２感染を治療するための方法であって、対象に、実施形態１〜４５のいずれか１つの組成物を投与することを含む、方法。

【0199】

４７． 対象においてＨＳＶ−２に対する免疫応答を生じさせるための方法であって、対象に、実施形態１〜４５のいずれか１つの組成物を投与することを含む、方法。

【0200】

４８． 対象は、ＨＳＶ−２に関して血清反応陽性、およびＨＳＶ−１に関して血清反応陽性である、実施形態４７の方法。

【0201】

４９． 対象は、ＨＳＶ−２に関して血清反応陽性、およびＨＳＶ−１に関して血清反応陰性である、実施形態４７の方法。

【0202】

５０． 薬学的組成物であって、

【0203】

ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質の抗原部分と薬学的に許容される担体とを含み、抗原部分は、ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質のリーダー配列を含む、組成物。

【0204】

５１． 抗原部分は、中和抗体に結合する、実施形態５０の組成物。

【0205】

５２． ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質は、ｇＤ２またはｇＢ２である、実施形態５０の組成物。

【0206】

５３． 抗原部分は、エンベロープ糖タンパク質に由来する２つ以上の線状エピトープを含む、実施形態５０〜５２の組成物。

【0207】

５４． 抗原部分は、エンベロープ糖タンパク質に由来する２つ以上の不連続エピトープを含む、実施形態５０〜５２の組成物。

【0208】

５５． 先天性免疫を活性化する薬剤をさらに含む、実施形態５０〜５４のいずれかの組成物。

【0209】

５６． 薬剤は、アジュバントである、実施形態５５の組成物。

【0210】

５７． アジュバントは、ＧＬＡである、実施形態５６の組成物。

【0211】

５８． 対象においてＨＳＶ−２またはＨＳＶ−１感染を治療するための方法であって、対象に、実施形態５０〜５７のいずれか１つの組成物を投与することを含む、方法。

【0212】

５９． 対象においてＨＳＶ−２またはＨＳＶ−１に対する免疫応答を生じさせるための方法であって、対象に、実施形態５０〜５７のいずれか１つの組成物を投与することを含む、方法。

【0213】

６０． 対象は、ＨＳＶ−２に関して血清反応陽性、およびＨＳＶ−１に関して血清反応陽性である、実施形態５８〜５９の方法。

【0214】

６１． 対象は、ＨＳＶ−２に関して血清反応陽性、およびＨＳＶ−１に関して血清反応陰性である、実施形態５８〜５９の方法。

【0215】

６２． 実施形態５０の組成物を含むバイアルを含む、キット。

【0216】

６３． 配列番号４の少なくともアミノ酸１〜３３６および１２９５〜１３７４が欠けている、ＵＬ１９の単離された断片。

【0217】

６４． 配列番号１２またはその断片から成るＵＬ１９の断片を含む、単離されたポリペプチド。

【0218】

６５． ＵＬ１９の断片に融合される非ＵＬ１９ペプチドをさらに含む、実施形態６４のポリペプチド。

【0219】

６６． 配列番号１２の５０個の隣接アミノ酸にわたり少なくとも８０％同一であるアミノ酸から成るペプチドを含み、任意に、非ＵＬ１９ペプチドに融合される、単離されたポリペプチド。

【0220】

６７． 免疫原性薬学的組成物であって、

【0221】

（ｉ） 配列番号１２のアミノ酸配列またはその免疫学的変異体もしくは断片を含むポリペプチド、あるいは実施形態６３〜６７のいずれかの断片もしくはポリペプチドと、

【0222】

（ｉｉ） アジュバントと、

【0223】

（ｉｉｉ） 薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。

【0224】

６８． アジュバントは、ＴＬＲ４作動薬である、実施形態６７の組成物。

【0225】

６９． アジュバントは、ＧＬＡ（図１）である、実施形態６８の組成物。

【0226】

７０． （ａ）ＨＳＶ−２のエンベロープタンパク質、（ｂ）ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質以外のＨＳＶ−２の構造タンパク質、または（ｃ）（ａ）もしくは（ｂ）の免疫学的断片のうちの任意の１つ以上をさらに含む、実施形態６７の組成物。

【0227】

７１． ＨＳＶ−２の構造タンパク質をさらに含む、実施形態６７の組成物。

【0228】

７２． 構造タンパク質は、ＵＬ４７、ＩＣＰ０、ＵＬ２５、ＵＬ４６、ＵＬ３９、ＵＬ７、およびＵＬ２６から成る群から選択される、実施形態７１の組成物。

【0229】

７３． ｇＤ２またはその免疫学的断片、ＵＬ２５またはその免疫学的断片、および任意に、ＵＬ４７またはその免疫学的断片をさらに含む、実施形態６７の組成物。

【0230】

７４． 免疫原性薬学的組成物であって、

【0231】

（ｉ） ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質、またはその免疫学的断片と、

【0232】

（ｉｉ） ＧＬＡ（図１）と、

【0233】

（ｉｉｉ） 薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。

【0234】

７５． ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質またはその免疫学的断片は、ｇＤ２またはその免疫学的断片である、実施形態７４の組成物。

【0235】

７６． 免疫原性薬学的組成物であって、

【0236】

（ｉ） ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質以外のＨＳＶ−２の構造タンパク質、またはその免疫学的断片と、

【0237】

（ｉｉ） ＧＬＡと、

【0238】

（ｉｉｉ） 薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。

【0239】

７７． ＨＳＶ−２の構造タンパク質またはその免疫学的断片は、ＵＬ４７、ＩＣＰ０、ＵＬ１９、ＵＬ２５、ＵＬ４６、ＵＬ３９、ＵＬ７、およびＵＬ２６、またはこれらのいずれかの免疫学的断片から成る群から選択される、実施形態７６の組成物。

【0240】

７８． 第２のアジュバントをさらに含む、実施形態３３、３４、５６、５７、６６、６７、および７１〜７７のいずれか１つの組成物。

【0241】

７９． 第２のアジュバントは、例えば、ＴＬＲ７作動薬またはＴＬＲ９作動薬等のＴＬＲ作動薬、ミョウバン、エマルジョン、サポニン、サイトカイン、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド、および修飾サポニンから成る群から選択される、実施形態７８の組成物。

【0242】

８０． 第２のアジュバントは、フロイント不完全アジュバント、ＭＦ−５９（商標）、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ（商標）、ＡＳ０２（商標）、ＡＳ０４（商標）、ＱＳ−２１（商標）、およびＩＳＣＯＭ（商標）から成る群から選択される、実施形態７８の組成物。

【0243】

８１． 免疫原性薬学的組成物であって、

【0244】

（ｉ） ＩＣＰ４またはその免疫学的断片と、

【0245】

（ｉｉ） ｇＤ２またはその免疫学的断片と、

【0246】

（ｉｉｉ） ＧＬＡ（図１）と、

【0247】

（ｉｉｉ） 薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。

【0248】

８２． 免疫原性薬学的組成物であって、

【0249】

（ｉ） ＨＳＶ−２のα群遺伝子産生物、もしくはその免疫学的断片、および／または

【0250】

（ｉｉ） ＨＳＶ−２のβ１遺伝子産生物、もしくはその免疫学的断片、および／または

【0251】

（ｉｉｉ） ＨＳＶ−２のβ２遺伝子産生物、もしくはその免疫学的断片、および／または

【0252】

（ｉｖ） ＨＳＶ−２のγ１遺伝子産生物、もしくはその免疫学的断片、および／または

【0253】

（ｖ） ＨＳＶ−２のγ２遺伝子産生物、もしくはその免疫学的断片、および／または

【0254】

（ｖｉ） アジュバント、好ましくはＧＬＡ（図１）、および

【0255】

（ｖｉｉ） 薬学的に許容される担体を含む、組成物。

【0256】

８３． 界面活性剤をさらに含む、実施形態１〜４５、５０〜５７、および６５〜８２のいずれか１つの組成物。

【0257】

８４． 対象においてＨＳＶ−２感染またはＨＳＶ−１感染を治療するための方法であって、対象に、実施形態６５〜８３のいずれか１つの組成物を投与することを含む、方法。

【0258】

８５． 対象においてＨＳＶ−２またはＨＳＶ−１感染に対する免疫応答を生じさせるための方法であって、対象に、実施形態６５〜８３のいずれか１つの組成物を投与することを含む、方法。

【0259】

８６． 対象は、ＨＳＶ−２に関して血清反応陽性、およびＨＳＶ−１に関して血清反応陽性である、実施形態８４〜８５のいずれか１つの方法。

【0260】

８７． 対象は、ＨＳＶ−２に関して血清反応陽性、およびＨＳＶ−１に関して血清反応陰性である、実施形態８５〜８５のいずれか１つの方法。

【0261】

８８． 投与経路は、皮内、粘膜、筋肉内、皮下、舌下、直腸内、または膣内である、実施形態８３〜８７のいずれか１つの方法。

【0262】

８９． 対象からＨＳＶ−２の感染を低減するための方法であって、対象に、実施形態１〜４５、５０〜５７、および６５〜８３のいずれか１つの組成物を投与することを含む、方法。

【0263】

９０． 対象においてＨＳＶ−２の出芽を低減するための方法であって、対象に、実施形態１〜４５、５０〜５７、および６５〜８３のいずれか１つの組成物を投与することを含む、方法。

【0264】

９１． ＨＳＶ−２感染を有する対象において損傷の頻度を低減するための方法であって、対象に、実施形態１〜４５、５０〜５７、および６５〜８３のいずれか１つの組成物を投与することを含む、方法。

【0265】

９２． ＨＳＶ−２感染を有する対象において、ＨＩＶに罹患する危険性を低減するための方法であって、対象に、実施形態１〜４５、５０〜５７、および６５〜８３のいずれか１つの組成物を投与することを含む、方法。

【0266】

９３． 対象においてＨＳＶ−２に対する殺菌免疫を誘発するための方法であって、対象に、実施形態１〜４５、５０〜５７、および６５〜８３のいずれか１つの組成物を投与することを含む、方法。

【0267】

９４． 実施形態１〜４５、５０〜５７、および６５〜８３のいずれか１つの組成物を含む、キット。

【0268】

９５． 弱毒化されたＨＳＶ１またはＨＳＶ２ウイルスをさらに含む、実施形態９４のキット。

【0269】

９６． 不活性化されたＨＳＶ１またはＨＳＶ２ウイルスをさらに含む、実施形態９４のキット。

【0270】

９７． ＨＳＶ１またはＨＳＶ２抗原をコードするポリヌクレオチドを含むウイルスベクターをさらに含む、実施形態９４のキット。

【0271】

９８． ＨＳＶ１またはＨＳＶ２抗原をコードするポリヌクレオチドを含むウイルス様粒子をさらに含む、実施形態９４のキット。

【0272】

９９． ＨＳＶ１またはＨＳＶ２抗原をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、実施形態９４のキット。

【0273】

１００． エンベロープ糖タンパク質および／または構造タンパク質は、異種ペプチドに融合される、実施形態１〜４５のいずれか１つの組成物。

【0274】

１０１． ＨＳＶ１および／またはＨＳＶ２抗原をコードするポリヌクレオチドを投与することをさらに含む、実施形態５８〜６１および８４〜９３のいずれか１つの方法。

【0275】

１０２． ポリヌクレオチドは、ウイルスベクターのゲノムの一部である、実施形態１０１の方法。

【0276】

１０３． 不活性化または弱毒化されたＨＳＶ１またはＨＳＶ２ウイルスを投与することをさらに含む、実施形態５８〜６１および８４〜９３のいずれか１つの方法。

【0277】

１０４． ＨＳＶ１またはＨＳＶ２抗原をコードするポリヌクレオチドを含むウイルス様粒子を投与することをさらに含む、実施形態５８〜６１および８４〜９３のいずれか１つの方法。

【0278】

１０５． 免疫原性薬学的組成物であって、

【0279】

（ｉ） ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質またはその免疫学的断片をコードする、第１のポリヌクレオチドと、

【0280】

（ｉｉ） ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質以外のＨＳＶ−２の構造タンパク質またはその免疫学的断片をコードする、第２のポリヌクレオチドと、

【0281】

（ｉｉｉ） 任意に、アジュバント等の先天性免疫を活性化する薬剤と、

【0282】

（ｉｖ） 薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。

【0283】

１０６． ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質は、ｇＤ２である、実施形態１０５の組成物。

【0284】

１０７． エンベロープ糖タンパク質ｇＤ２の免疫学的断片を含む、実施形態１０５の組成物。

【0285】

１０８． ＨＳＶ−２の構造タンパク質は、ＵＬ４７、ＩＣＰ０、ＵＬ１９、ＵＬ２５、ＵＬ４６、ＵＬ３９、ＵＬ７、およびＵＬ２６から成る群から選択される、実施形態１０５〜１０７のいずれか１つの組成物。

【0286】

１０９． ＨＳＶ−２の構造タンパク質またはその免疫学的断片は、ＵＬ１９またはその免疫学的断片である、実施形態１０５〜１０７のいずれかの組成物。

【0287】

１１０． 第２のポリヌクレオチドは、ＵＬ１９をコードする、実施形態１０５〜１０７のいずれかの組成物。

【0288】

１１１． 第２のポリヌクレオチドは、ＵＬ１９の免疫学的断片をコードし、任意に、実施形態６３〜６６のいずれか１つのポリペプチドの断片をコードする、実施形態１０５〜１０７のいずれかの組成物。

【0289】

１１２． 第２のポリヌクレオチドは、配列番号１２をコードする、実施形態１０５〜１０７のいずれかの組成物。

【0290】

１１３． ＨＳＶ−２の構造タンパク質またはその免疫学的断片は、ＵＬ２５またはその免疫学的断片である、実施形態１０５〜１０７のいずれかの組成物。

【0291】

１１４． 第２のポリヌクレオチドは、ＵＬ２５をコードする、実施形態１０５〜１０７のいずれかの組成物。

【0292】

１１５． 第２のポリヌクレオチドは、ＵＬ２５の免疫学的断片をコードする、実施形態１０５〜１０７のいずれかの組成物。

【0293】

１１６． ＨＳＶ−２の構造タンパク質またはその免疫学的断片は、ＵＬ４７またはその免疫学的断片である、実施形態１０５〜１０７のいずれかの組成物。

【0294】

１１７． 第２のＨＳＶ−２の構造タンパク質、またはその免疫学的断片をコードする第３のポリヌクレオチドをさらに含む、実施形態１０５〜１１６のいずれかの組成物。

【0295】

１１８． 第２のＨＳＶ−２の構造タンパク質は、ＵＬ４７、ＩＣＰ０、ＵＬ１９、ＵＬ２５、ＵＬ４６、ＵＬ３９、ＵＬ７、およびＵＬ２６から成る群から選択され、第２の構造タンパク質は、第１の構造タンパク質に非同一である、実施形態１１７の組成物。

【0296】

１１９． 第２の構造タンパク質は、全長タンパク質またはその免疫学的断片である、実施形態１１８の組成物。

【0297】

１２０． ＵＬ２５またはその免疫学的断片をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、実施形態１００〜１１２のいずれかの組成物。

【0298】

１２１． ＵＬ４７またはその免疫学的断片をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、実施形態１０６〜１０９のいずれかの組成物。

【0299】

１２２． ＵＬ１９をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、実施形態１１３〜１１５のいずれかの組成物。

【0300】

１２３． 配列番号１２をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、実施形態１１３〜１１５のいずれかの組成物。

【0301】

１２４． ＵＬ４７またはその免疫学的断片をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、実施形態１１３〜１１５のいずれかの組成物。

【0302】

１２５． ＵＬ１９をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、実施形態１１６のいずれかの組成物。

【0303】

１２６． 配列番号１２をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、実施形態１１６のいずれかの組成物。

【0304】

１２７． ＵＬ２５またはその免疫学的断片をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、実施形態１１６のいずれかの組成物。

【0305】

１２８． 薬剤は、アジュバント、任意に、ＴＬＲ４作動薬である、実施形態１０５〜１２７のいずれかの組成物。

【0306】

１２９． アジュバントは、ＧＬＡである、実施形態１２８の組成物。

【0307】

１３０． 第１のポリヌクレオチドは、ｇＤ２をコードし、第２のポリヌクレオチドは、ＵＬ２５をコードし、またＵＬ１９をコードする第３のポリヌクレオチドと、ＧＬＡアジュバントと、薬学的に許容される担体とをさらに含む、実施形態１０５の組成物。

【0308】

１３１． 第１のポリヌクレオチドは、ｇＤ２をコードし、第２のポリヌクレオチドは、ＵＬ２５をコードし、また配列番号１２をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、実施形態１０５の組成物。

【0309】

１３２． 第１のポリヌクレオチドは、ｇＤ２をコードし、第２のポリヌクレオチドは、ＵＬ１９をコードし、またＵＬ２５の免疫学的断片をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、実施形態１０５の組成物。

【0310】

１３３． ＵＬ４７またはその免疫学的断片をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、実施形態１３０〜１３２のいずれかの組成物。

【0311】

１３４． ＩＣＰ０またはその免疫学的断片をコードするポリヌクレオチドと、ＵＬ４７またはその免疫学的断片、ＵＬ１９またはその免疫学的断片、ＵＬ２５またはその免疫学的断片、ＵＬ４６またはその免疫学的断片、ＵＬ３９またはその免疫学的断片、ＵＬ７またはその免疫学的断片、およびＵＬ２６またはその免疫学的断片をコードするポチヌクレオチドのうちの１つ以上とを含む、実施形態１０５または１０６の組成物。

【0312】

１３５． ＩＣＰ０またはその免疫学的断片をコードするポリヌクレオチド、および２つのさらなる構造タンパク質またはその免疫学的断片を含む、実施形態１３４の組成物。

【0313】

１３６． ＵＬ４６またはその免疫学的断片をコードするポリヌクレオチドと、ＵＬ４７またはその免疫学的断片、ＵＬ１９またはその免疫学的断片、ＵＬ２５またはその免疫学的断片、ＩＣＰ０またはその免疫学的断片、ＵＬ３９またはその免疫学的断片、ＵＬ７またはその免疫学的断片、およびＵＬ２６またはその免疫学的断片をコードするポリヌクレオチドのうちの１つ以上とを含む、実施形態１０５または１０６の組成物。

【0314】

１３８． ＵＬ４６またはその免疫学的断片をコードするポリヌクレオチド、および２つのさらなる構造タンパク質またはその免疫学的断片をコードするポリヌクレオチドを含む、実施形態１３６の組成物。

【0315】

１３９． 免疫原性薬学的組成物であって、

【0316】

（ｉ） 配列番号１２のアミノ酸配列またはその免疫学的変異体もしくは断片を含むポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドと、

【0317】

（ｉｉ） 任意に、アジュバント等の先天性免疫を活性化する薬剤と、

【0318】

（ｉｉｉ） 薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。

【0319】

１４０． 薬剤は、アジュバントである、実施形態１３９の組成物。

【0320】

１４１． アジュバントは、ＧＬＡである、実施形態１４０の組成物。

【0321】

１４２． ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質以外のＨＳＶ−２の構造タンパク質、またはその免疫学的断片をコードする、第２のポリヌクレオチドをさらに含む、実施形態１３９の組成物。

【0322】

１４３． ＵＬ１９（ｕｄ）に加えて、ＨＳＶ−２の構造タンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドをさらに含む、実施形態１３９の組成物。

【0323】

１４４． 構造タンパク質は、ＵＬ４７、ＩＣＰ０、ＵＬ２５、ＵＬ４６、ＵＬ３９、ＵＬ７、およびＵＬ２６から成る群から選択される、実施形態１４３の組成物。

【0324】

１４５． 免疫原性薬学的組成物であって、

【0325】

（ｉ） ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質またはその免疫学的断片をコードする、第１のポリヌクレオチドと、

【0326】

（ｉｉ） ＧＬＡと、

【0327】

（ｉｉｉ） 薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。

【0328】

１４６． ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質は、ｇＤ２である、実施形態１４５の組成物。

【0329】

１４７． 免疫原性薬学的組成物であって、

【0330】

（ｉ） ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質以外のＨＳＶ−２の構造タンパク質、またはその免疫学的断片をコードする、第１のポリヌクレオチドと、

【0331】

（ｉｉ） ＧＬＡと、

【0332】

（ｉｉｉ） 薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。

【0333】

１４８． ＨＳＶ−２の構造タンパク質は、ＵＬ４７、ＩＣＰ０、ＵＬ１９、ＵＬ２５、ＵＬ４６、ＵＬ３９、ＵＬ７、およびＵＬ２６から成る群から選択される、実施形態１４７の組成物。

【0334】

１４９． 第２のアジュバントをさらに含む、実施形態１０５１４９のいずれか１つの組成物。

【0335】

１５０． 第２のアジュバントは、ＴＬＲ作動薬、ミョウバン、エマルジョン、サポニン、サイトカイン、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド、および修飾サポニンから成る群から選択される、実施形態１４９の組成物。

【0336】

１５１． 第２のアジュバントは、フロイント不完全アジュバント、ＭＦ−５９（商標）、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ（商標）、ＡＳ０２（商標）、ＡＳ０４（商標）、ＱＳ−２１（商標）、およびＩＳＣＯＭ（商標）から成る群から選択される、実施形態１４９の組成物。

【0337】

１５２． 免疫原性薬学的組成物であって、

【0338】

（ｉ） ＩＣＰ４、またはその免疫学的断片をコードする、第１のポリヌクレオチドと、

【0339】

（ｉｉ） ｇＤ２、またはその免疫学的断片をコードする、第２のポリヌクレオチドと、

【0340】

（ｉｉｉ） ＧＬＡと、

【0341】

（ｉｉｉ） 薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。

【0342】

１５３． 免疫原性薬学的組成物であって、

【0343】

（ｉ） ＨＳＶ−２の前初期遺伝子産生物、またはその免疫学的断片をコードする、第１のポリヌクレオチドと、

【0344】

（ｉｉ） ＨＳＶ−２の前初期遺伝子産生物、またはその免疫学的断片をコードする第２のポリヌクレオチドと、

【0345】

（ｉｉｉ） ＨＳＶ−２の後期遺伝子産生物、またはその免疫学的断片をコードする、第３のポリヌクレオチドと、

【0346】

（ｉｖ） 薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。

【0347】

１５４． 界面活性剤をさらに含む、実施形態１０５〜１５３のいずれか１つの組成物。

【0348】

１５５． ポリヌクレオチドは、１つ以上の組換え発現ベクター内に存在する、実施形態１０５〜１５４のいずれ１つの組成物。

【0349】

１５６． 組換え発現ベクターは、ウイルスベクターまたはウイルス様粒子である、実施形態１５５の組成物。

【0350】

１５７． 対象においてＨＳＶ−２またはＨＳＶ−１感染を治療するための方法であって、対象に、実施形態１０５〜１５６のいずれか１つの組成物を投与することと、アジュバントを含む第２の組成物を共投与することと、を含む、方法。

【0351】

１５８． アジュバントは、ＴＬＲ４作動薬である、実施形態１５７の方法。

【0352】

１５９． ＴＬＲ４作動薬は、ＧＬＡである、実施形態１５８の方法。

【0353】

１６０． 対象においてＨＳＶ−２またはＨＳＶ−１に対する免疫応答を所持させるための方法であって、対象に、実施形態１０５〜１５６のいずれか１つの組成物を投与することと、アジュバントを含む第２の組成物を共投与することと、を含む、方法。

【0354】

１６１． アジュバントは、ＴＬＲ４作動薬である、実施形態１６０の方法。

【0355】

１６２． ＴＬＲ４作動薬は、ＧＬＡである、実施形態１６１の方法。

【0356】

１６３． ウイルス様粒子をさらに含み、該ウイルス様粒子は、実施形態１〜４５のいずれか１つの、ＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質もしくはその免疫学的断片、およびＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質以外のＨＳＶ−２の構造タンパク質もしくはその免疫学的断片、実施形態５０〜５７のいずれか１つのＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質の抗原部分、実施形態６３〜６５のいずれか１つのＵＬ１９の断片、実施形態６６〜７３のいずれか１つのポリペプチド、実施形態７４〜７５のいずれか１つのＨＳＶ−２のエンベロープ糖タンパク質またはその免疫学的断片、実施形態７６〜７７のいずれか１つの構造タンパク質、または実施形態８１の、ＩＣＰ４もしくはその免疫学的断片、およびｇＤ２もしくはその免疫学的断片を含む、実施形態１〜４５、５０〜５７、および６６〜８３のいずれか１つの組成物。

【0357】

１６４． 対象においてＨＳＶ−２感染またはＨＳＶ−１感染を治療するための方法であって、対象に弱毒化された生ＨＳＶウイルスを投与することを含むプライムステップと、対象に実施形態１〜４５、５０〜５７、６６〜８３、および１０５〜１５６のいずれか１つの組成物を投与することを含むブーストステップと、を含む、方法。

【0358】

１６５． 対象においてＨＳＶ−２またはＨＳＶ−１感染に対する免疫応答を生じさせるための方法であって、対象に弱毒化された生ＨＳＶウイルスを投与することを含むプライムステップと、対象に実施形態１〜４５、５０〜５７、６６〜８３、および１０５〜１５６のいずれか１つの組成物を投与することを含むブーストステップと、を含む、方法。

【0359】

１６６． 対象においてＨＳＶ−２感染またはＨＳＶ−１感染を治療するための方法であって、対象に実施形態１〜４５、５０〜５７、６６〜８３、および１０５〜１５６のいずれか１つの組成物を投与することを含むプライムステップと、対象に弱毒化された生ＨＳＶウイルスを投与することを含むブーストステップと、を含む、方法。

【0360】

１６７． 対象においてＨＳＶ−２またはＨＳＶ−１感染に対する免疫応答を生じさせるための方法であって、対象に実施形態１〜４５、５０〜５７、６６〜８３、および１０５〜１５６のいずれか１つの組成物を投与することを含むプライムステップと、対象に弱毒化された生ＨＳＶウイルスを投与することを含むブーストステップと、を含む、方法。

【0361】

以下の実施例は、例証の目的のために提供され、限定する目的のためではない。

【実施例】

【0362】

実施例１
マウスにおいて、複数のワクチン接種後にアジュバントＧＬＡ−ＳＥとともに処方したときの、ＨＳＶ−２ＧＤ２タンパク質に対するＣＤ４Ｔ細胞ベースの免疫原性の強化

【0363】

この実施例では、組換えタンパク質ワクチンを用いたマウスの免疫付与後の、ＣＤ４Ｔ細胞応答を増大させるＧＬＡ−ＳＥの能力を評価した。

【0364】

５匹のＢａｌｂ／ｃマウスの群に、１００μｌ（一肢当たり５０μｌ）で筋肉内に送達した０．８μｇか、４μｇか、もしくは２０μｇかのいずれかのＧＬＡ−ＳＥ（本研究および以下の研究において、ＳＥの割合は、２％である）、ＳＥ単独、またはＰＢＳと組み合わせて、０．８μｇか、４μｇか、もしくは２０μｇかのいずれかの組換えｇＤタンパク質を用いて、プライム／ブースト免疫付与レジメン（第０日プライム／第２１日ブースト）を介して免疫付与した。組換えタンパク質を用いず、ＧＬＡ−ＳＥ、ＳＥ単独、またはＰＢＳを用いて免疫付与したマウスは、陰性対照の役割を果たした。Ｈ−２ｄハプロタイプとともにマウスに提示されるｇＤ２においてＣＤ４Ｔ細胞エピトープとして先行して同定されているｇＤ_{２７２−２８５}ペプチドを用いて、５時間にわたり脾臓細胞培養物を生体外再刺激した後、抗原特異的脾臓ＣＤ４Ｔ細胞応答を、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−２に関して、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）によって、ブースト後第４日目に測定した。図２で示されるように、各用量のｇＤ２組換えタンパク質による免疫付与に対するＣＤ４Ｔ細胞応答は、ＧＬＡ−ＳＥかまたはＳＥかのいずれかがアジュバントとして含まれたときにのみ観察された。各用量の組換えｇＤ２抗原および各用量のＧＬＡ−ＳＥにおいて、ｇＤ２特異的ＣＤ４Ｔ細胞応答の規模は、ＳＥ単独とともに処方された同一量の組換えｇＤ２抗原に対して観察された応答を上回って増加した。加えて、応答する抗原特異的ＣＤ４Ｔ細胞集団の質は、応答するＣＤ４Ｔ細胞集団内のＩＦＮ−γ＋、ＴＮＦ−α＋、かつＩＬ−２＋ＣＤ４Ｔ細胞（三重陽性）の頻度によって測定した際に、各用量の組換えｇＤ２タンパク質および各用量のＧＬＡにおいて、ｇＤ２がＳＥ単独とともに処方されたときに観察されたものを上回って増加した。この研究のデータは、組換えＨＳＶ−２タンパク質抗原を伴うアジュバントＧＬＡ−ＳＥの製剤は、ワクチンの性能を、細胞性免疫応答の規模および質の両方によって測定した際に、組換えタンパク質単独またはＳＥ単独とともに処方される組換えタンパク質を用いた免疫付与によって達成されるものよりも実質的に増加させることを示唆している。
実施例２
ＧＬＡは、マウスにおいてＣＤ８Ｔ細胞応答を増大させる

【0365】

この実施例では、組換えタンパク質ワクチンを用いたマウスの免疫付与後の、ＣＤ８Ｔ細胞応答を増大させるＧＬＡ−ＳＥの能力を評価した。

【0366】

オボアルビミンを、モデルタンパク質として使用した。雌のＣ５７Ｂｌ／６マウスに、レンチウイルスコード化オボアルビミン（図３および図４の「ＬＶ−ＯＶＡ」）を皮下注射し、第２１日に、種々の用量のＧＬＡ−ＳＥ（図３および図４の「ＯＶＡ＋ＧＬＡ／ＳＥ」）でアジュバント化した組換えオボアルビミンを用いた筋肉内注射によって、ブーストした。４日後に、脾臓Ｔ細胞応答を、以下の生体外刺激剤に対する細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）によって測定した：ＯＶＡ ＭＨＣクラスＩペプチド５５−６２および２５７−２６４およびＭＨＣクラスＩＩペプチド３２３−３３９、またはＣＤ３およびＣＤ２８に対する抗体。ＣＤ８Ｔ細胞は、サイトカイン、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２およびＴＮＦ−αのいずれかを分泌するものとして同定される。

【0367】

図３で示されるように、抗原のブーストを受けたマウスにおける、より高い割合のＣＤ８Ｔ細胞があり、ブーストにおいて抗原とともにＧＬＡ−ＳＥを受けたマウスにおいて、最も高い割合であった。図４は、４つのＣＤ８Ｔ細胞のサブセットの比率の実験の詳細を提供する。この結果、組換えＯＶＡタンパク質＋ＧＬＡ−ＳＥによる筋肉内ワクチン「ブースト」は、先行するＬＶワクチン接種を介して生成された既存のＣＤ８Ｔ細胞をブーストした。中間用量（４μｇ）および低用量（０．８μｇ）のＧＬＡは、これらの実験設定下で、最も高いＣＤ８Ｔ細胞の増加を提供した。したがって、これらのデータは、ＧＬＡアジュバントタンパク質は、該タンパク質に特異的な既存のＣＤ８記憶Ｔ細胞応答をブーストするために使用され得ることを示す。ＣＤ８記憶細胞の活性化は、感染した個体の治療に関するＨＳＶ−２の治療的ワクチンの所望の性質であると考えられ、ＧＬＡアジュバントタンパク質がＨＳＶ−２ワクチンに付与し得る優れた性質を強調する。
実施例３
マウスにおける複数のワクチン接種後の、個々のＨＳＶ−２ ＧＤ２、ＵＬ１９、およびＵＬ２５タンパク質に対するＣＤ４Ｔ細胞ベースの免疫原性

【0368】

この研究セットの目的は、ワクチンにおける各タンパク質サブユニットに対するＣＤ４Ｔ細胞ベースの免疫原性を評価し得る、単一のマウス株を同定することであった。この目的のために、マウスにおいて、異なるＭＨＣハプロタイプ（すなわち、ＢＡＬＢ／ｃ（Ｈ−２^ｄ）、Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ−２^ｂ）、およびＣＢ６Ｆ１（Ｈ−２^ｄ＋２^ｂ））の文脈で、各ＨＳＶ−２抗原（すなわち、ｇＤ２、ＵＬ１９、およびＵＬ２５）内の個々のＣＤ４Ｔ細胞エピトープを同定するための一連の実験を実施した。実験戦略は、プライム／ブースト免疫付与レジメン（第０日プライム／第２１日ブースト）の文脈において、１００μｌ（一肢当たり５０μｌ）の筋肉内注射での５μｇのＧＬＡ−ＳＥとともに処方される一価免疫原として、５μｇの各組換えタンパク質抗原を用いてナイーブマウスを免疫付与することで構成された。抗原特異的ＣＤ４Ｔ細胞応答を、その配列が一価免疫原の対応するアミノ酸配列に由来する１５−ｍｅｒペプチドライブラリ（１１ａａペプチド間重複）を用いて、ブースト後第４日目に分析した。一次スクリーニングにおいて、脾臓ＣＤ４細胞を、抗原をコードする個々のＨＳＶ−２に対応するペプチドライブラリに由来する個々の１５−ｍｅｒペプチドのプールを用いた脾臓培養物の生体外刺激に応答するＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−２の産生に関して分析した。観察されたペプチドプールにおけるＣＤ４Ｔ細胞応答を、陽性ヒットと見なし、その後、二次（および、場合により三次）スクリーニングを、生体外刺激としての先行するスクリーニングからの陽性プール内の個々のペプチドかまたは異なる組み合わせで再プールした先行するスクリーニングからの陽性プール内のペプチドかのいずれかを用いて、同一の免疫付与および分析戦略で実施した。図５Ａ〜Ｂに示されるように、これらの研究は、ＭＨＣハプロタイプＨ−２ｂ （Ｃ５７ＢＬ／６マウス）の文脈において、ワクチン内の個々の組換えＨＳＶ−２タンパク質（すなわち、ｇＤ２、ＵＬ１９、およびＵＬ２５）の各々に関する抗原特異的ＣＤ４Ｔ細胞応答が観察され得た、個々の１５−ｍｅｒペプチドを同定した。
実施例４
マウスにおける、三価製剤の複数のワクチン接種の後の、それぞれの個々のＨＳＶ−２サブユニットタンパク質に対するＣＤ４Ｔ細胞およびＢ細胞ベースの免疫原性

【0369】

この実施例は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける、ＧＬＡ−ＳＥを伴う三価製剤として一緒に送達されるときの、ワクチン内の個々の組換えタンパク質サブユニットの各々に対するＣＤ４Ｔ細胞およびＢ細胞ベースの免疫原性を実証する。実験戦略は、２つの５匹のＣ５７ＢＬ／６マウスの群を用いて構成した。１つの群は、組換えＨＳＶ−２ ｇＤ２、ＵＬ１９、およびＵＬ２５タンパク質を、等モル基準（それぞれ０．８、３．３、および１．４μｇのタンパク質）で組み合わせて送達および処方して用いて、１００μｌ（一肢当たり５０μｌ）で筋肉内送達した５．５μｇのＧＬＡ−ＳＥと組み合わせて、プライム／ブースト免疫付与レジメン（第０日プライム／第２１日ブースト）を介して免疫付与した。第２の群は、媒介物（ＰＢＳ）を用いて疑似的に免疫付与した。脾臓および（心穿刺を介する）末梢血の採取のため、動物を、ブースト後第４日目に屠殺した。抗原特異的脾臓ＣＤ４Ｔ細胞応答を、三価ワクチン内の各組換えタンパク質免疫原に関するＣＤ４Ｔ細胞エピトープを含有するとして先行して同定されている１５−ｍｅｒペプチドを用いた脾臓細胞培養物の生体外再刺激の後、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、およびＩＬ−２に関してＩＣＳによって測定した（実施例３参照）。ワクチン接種および疑似ワクチン接種した各マウスの血清を、三価ワクチン内の組換えタンパク質免疫原の各々に対するＩｇＧ１サブクラスの抗原特異的抗体の存在に関して、直接ＥＬＩＳＡによって分析した。図６Ａ〜Ｂに示されるように、抗原特異的ＣＤ４Ｔ細胞および抗体応答は、ＧＬＡ−ＳＥを伴う三価製剤として一緒に送達したときに、ＨＳＶ−２組換えタンパク質抗原の各々に対して観察された。これらのデータは、三価ワクチンの顕著な免疫原性、およびＨＳＶ−２タンパク質に対する総合的な免疫応答（液性および細胞性の両方）を引き起こすその能力を支持する。予想外に、生じた免疫応答の規模は、ＵＬ１９抗原に関して最も大きかった。ＵＬ１９は、ヒトにおいてＨＳＶ−２感染の治療または予防のための投与されるこれまでの組換えサブユニットベースワクチンのいずれの構成要素としても、含まれていない。これらのデータは、請求されるワクチンは、先行技術のワクチンを上回る優れた性質を表すという証拠を提供する。
実施例５
マウスにおけるＧＬＡ−ＳＥを伴うＨＳＶ−２ＵＬ１９の単一および複数の免疫付与の後の、抗原特異的ＣＤ４Ｔ細胞応答

【0370】

この実施例は、マウスにおける、ＧＬＡ−ＳＥとともに処方されるＨＳＶ−２ ＵＬ１９の単一および反復免疫付与によって生成される、ＣＤ４Ｔ細胞ベースの免疫原性を示す。この研究に関して、５μｇの組換えＵＬ１９タンパク質抗原を一価免疫原として用いて、５μｇのＧＬＡ−ＳＥとともに、５匹のＣ５７ＢＬ／６マウスの２つの群に１回免疫付与し、また５匹のｃ５７ＢＬ／６の２つの群に２回免疫付与した（２１日間空けた）。抗原特異的ＣＤ４Ｔ細胞応答の分析のため、マウスの群を、最終免疫付与の後、第４日かまたは第１０日かのいずれかに屠殺した。４つの全ての群のマウスが、抗原特異的ＣＤ４Ｔ細胞応答の分析に関して同日に屠殺されるように、それぞれの分析群が受けた免疫付与は、時間的にずれていた。免疫原に対する抗原特異的ＣＤ４Ｔ細胞応答を、ＵＬ１９に特異的なＣＤ４Ｔ細胞エピトープを含有すると先に同定されている個々のＵＬ１９ １５−ｍｅｒペプチド数２５０および２９７を用いた、脾臓細胞の生体外刺激に応答するＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−２の産生によって、測定した（実施例３参照）。図７Ａ〜Ｂに示されるように、最終免疫付与後第４日目において、ＵＬ１９特異的ＣＤ４Ｔ細胞応答は、２回の免疫付与を受けた動物にのみ検出され、一方、ＵＬ１９特異的ＣＤ４Ｔ細胞応答は、本実験のプライム群とおよびプライム／ブースト群の両方にて最終免疫付与後第１０日目において検出された。最終免疫付与後第１０日目において、応答の規模は、単一の免疫付与のみを受けた動物と比較して、２回の免疫付与を受けた動物において顕著に増加した（約２．５倍）。これらの発見は、組換えＨＳＶ−２タンパク質＋ＧＬＡ−ＳＥを含有するワクチンの反復投与は、次の抗原特異的ＣＤ４Ｔ細胞応答の応答および規模を増加させるための優れたプロトコルであることを示している。

【0371】

ワクチンの反復投与後のＣＤ４Ｔ細胞応答における増加の、ＧＬＡ−ＳＥへの依存性を試験するために、同様の実験を実施し、該実験では、マウスの群に、ＵＬ１９タンパク質単独を用いて、またはＳＥ単独もしくはＧＬＡ−ＳＥとともに処方したタンパク質を用いて免疫付与した。抗原特異的ＣＤ４Ｔ細胞応答の分析のため、マウスの群を、最終免疫付与の後、第５日かまたは第１０日かのいずれかに屠殺した。免疫原に対する抗原特異的ＣＤ４Ｔ細胞応答を、ＵＬ１９に特異的なＣＤ４Ｔ細胞エピトープを含有すると先行して同定されている個々のＵＬ１９ １５−ｍｅｒペプチド数２５０および２９７を用いた、脾臓細胞の生体外刺激に応答するＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−２の産生によって、測定した（実施例３参照）。図８Ａ〜Ｂに示されるように、２回の免疫付与を受けた動物は、単一の免疫付与のみを受けた動物と比較して、抗原特異的ＣＤ４Ｔ細胞応答において顕著な増加を表し、先行実験の結果を確証した。重要なことに、この増加は、免疫原が、ＧＬＡの不在化で単独でまたはＳＥとともに投与されるときに、２回の免疫付与を受けたマウスが顕著なＣＤ４Ｔ細胞応答を表さなかったように、ＧＬＡ−ＳＥアジュバントに依存していることが見出された。
実施例６
マウスにおけるＧＬＡ−ＳＥとともに処方される三価ＨＳＶワクチンを用いた免疫付与の後の、抗原特異的ＣＤ４Ｔ細胞応答

【0372】

この実験は、組換えタンパク質が、等モルおよび等質量基準で処方されるときに、ＣＤ４Ｔ細胞応答は、ＧＬＡ−ＳＥとともに処方されるｇＤ２、ＵＬ１９、およびＵＬ２５抗原を含む三価サブユニットワクチンの各サブユニットに対して、生じ得ることを示す。雌のＣ５７ＢＬ／６マウスの群（５マウス／群）を、三価ワクチンを用いて免疫付与し、総タンパク質は、等モル基準かまたは等質量基準かのいずれかで、５μｇかまたは１５μｇかのいずれかであった。マウスに、同種の製剤で第２１日に第２の免疫付与を与え、最終免疫付与の５日後に、Ｔ細胞応答を、適切なペプチドによる生体外再刺激後にＩＣＳによって測定した。図９に示されるように、エピトープ特異的ＣＤ４Ｔ細胞応答が、三価ＨＳＶ−２サブユニットワクチンの個々の各構成要素に対して生じる。組換えタンパク質構成要素が等モル基準で処方されるかまたは等質量基準で処方されるかに関わらず、正の応答が観察され、応答は、ワクチンの相対的タンパク質組成に基づいて有意に影響を受けない、または改変されないことを示唆している。
実施例７
マウスにおいて、複数のワクチン接種後にアジュバントＧＬＡ−ＳＥとともに処方したときの、ＨＳＶ−２ＧＤ２タンパク質に対する抗体ベースの免疫原性の強化

【0373】

この実施例では、組換えタンパク質ワクチンを用いたマウスの免疫付与後の、ＣＤ４Ｔ細胞応答を増大させるＧＬＡ−ＳＥの能力を評価した。

【0374】

５匹のＢａｌｂ／ｃマウスの群に、１００μｌ（一肢当たり５０μｌ）で筋肉内に送達した４μｇのＧＬＡ−ＳＥか、ＳＥ単独か、ＰＢＳ媒介物かのいずれかと組み合わせて、４μｇの組換えｇＤタンパク質を用いてプライム／ブースト免疫付与レジメン（第０日プライム／第２１日ブースト）を介して免疫付与した。ＩｇＧ、ＩｇＧ１、およびＩｇＧ２ａアイソタイプのＨＳＶ−２ ｇＤ２特異的抗体を、ＥＬＩＳＡによって測定した。図１０に示されるように、ＧＬＡ−ＳＥアジュバントは、ＨＳＶ−２ ｇＤ２に対するＩｇＧ応答全体を強化し、抗原特異的ＩｇＧ１の産生を低減し、抗原特異的ＩｇＧ２ａの産生を増加させた。
実施例８
アジュバントＧＬＡ−ＳＥとともに処方したときの、ＨＳＶ−２ ＵＬ１９ＵＤタンパク質に対するＣＤ８Ｔ細胞ベースの免疫原性の強化

【0375】

この実施例では、組換えＨＳＶ−２ ｇＤ２、ＵＬ１９上方ドメイン（ＵＬ１９ｕｄ、配列番号１２）、およびＵＬ２５を含有する三価ワクチンを用いたマウスの免疫付与の後の、機能的なＨＳＶ−２ ＵＬ１９特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答を誘発するＧＬＡ−ＳＥの能力を評価した。

【0376】

５匹のＣ５７ＢＬ／６マウスの群に、５μｇのＧＬＡ−ＳＥかまたは５％デキストロース媒介物かのいずれかと組み合わせて、各々５μｇの組換えｇＤ２、ＵＬ１９ｕｄ、およびＵＬ２５から成る三価ワクチンの単一の筋肉内免疫付与を行った。媒介物単独で免疫付与したマウスは、陰性対照の役割を果たした。抗原特異的脾臓ＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞応答を、免疫付与後第６日目に、ｇＤ２、ＵＬ１９、またはＵＬ２５ペプチドを用いた５時間にわたる脾細胞培養物の生体外再刺激の後、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−２に関して、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）によって測定した。図１１パネルＡに示されるように、三価ワクチンの各構成要素（ｇＤ２、ＵＬ１９ｕｄ、およびＵＬ２５）に対するＣＤ４Ｔ細胞応答は、ＧＬＡ−ＳＥがアジュバントとして含まれるときに観察された。とりわけ、図１１パネルＢに示されるように、ＣＤ８Ｔ細胞応答は、ＧＬＡ−ＳＥとともに付与されるときに、ＵＬ１９ｕｄ抗原に対して観察された。これらのＣＤ８Ｔ細胞が機能的であることを確認して、免疫付与されていない、またはＧＬＡ−ＳＥとともに三価ワクチンを用いて４週早く免疫付与されたマウスを、弱毒化されたＨＳＶ−２チミジンキナーゼ欠損（ＴＫ−）ウイルスを用いて皮下に攻撃し、ＵＬ１９特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答を、ＩＣＳによって測定した。図１１パネルＣに示されるように、ウイルス攻撃時のＣＤ８Ｔ細胞応答の規模は、ワクチンを用いて先に免疫付与されたマウスにおいてより大きかった。
実施例９
アジュバントＧＬＡ−ＳＥとともに処方されるときの、組換えＨＳＶ−２タンパク質ワクチンの予防的抗ウイルス有効性の強化

【0377】

この実施例では、致死的ＨＳＶ−２攻撃に対して防御するための二価組換えＨＳＶ−２タンパク質ワクチンの能力を強化する、ＧＬＡ−ＳＥの能力を評価した。

【0378】

１０匹のＣ５７ＢＬ／６マウスの群に、５μｇのＧＬＡ−ＳＥかまたは５％デキストロース媒介物かのいずれかと組み合わせて、各々５μｇの組換えｇＤ２およびＵＬ１９ｕｄから成る二価ワクチンの２回の筋肉内免疫付与を、２８日空けて行った。５μｇのＧＬＡ−ＳＥ単独を用いて免疫付与したマウスは、陰性対照の役割を果たした。第２の免疫付与の２２日後、マウスは、デポ型酢酸メドロキシプロゲステロンで処理され、次いで６日後に、５０ｘＬＤ_５０用量の野生型ＨＳＶ−２で膣内に攻撃された。マウスは、生殖器損傷形成および生存に関して毎日モニタリングされた。感染後第１日目、第３日目、および第５日目に、膣内スワブをＰＣＲによるＨＳＶ−２ＤＮＡの定量化のために収集した。感染の約２カ月後、後根神経節を生存したマウスから採取し、潜伏ＨＳＶ−２ＤＮＡをＰＣＲによって定量化した。図１２パネルＡに示されるように、ＧＬＡ−ＳＥと共にｇＤ２およびＵＬ１９ｕｄを用いて免疫付与されたマウスは、ｇＤ２およびＵＬ１９ｕｄ単独か、またはＧＬＡ−ＳＥ単独かのいずれかを用いて免疫付与されたマウスと比較して、損傷形成を劇的に低減させ、また生存率を増加させている。同様に、図１２パネルＢに示されるように、ＧＬＡ−ＳＥとともにｇＤ２およびＵＬ１９ｕｄを用いて免疫付与された１０匹のマウスのうち９匹は、第５日までに検出可能なＨＳＶ−２ＤＮＡを有さず、一方、いずれかの対照群のマウスは、第５日までを通して膣内に持続したレベルのＨＳＶ−２を有した。図１２パネルＣに示されるように、ＧＬＡ−ＳＥのみの群において３匹の生存しかないが、これら３匹のマウスのうち２匹は、後根神経節における潜伏ＨＳＶ−２の著しいレベルを示し、ＧＬＡ−ＳＥとともにｇＤ２およびＵＬ１９ｕｄを用いて免疫付与されたマウスは、神経節における検出可能なＨＳＶ−２をほとんどまたは全く示さなかった。
実施例１０
アジュバントＧＬＡ−ＳＥとともに処方されるときの、組換えＨＳＶ−２タンパク質ワクチンによる既存の記憶ＣＤ８Ｔ細胞の拡大の強化

【0379】

この実施例では、ＨＳＶ−２感染によって先に誘発された記憶ＣＤ８Ｔ細胞を拡大するための三価組換えＨＳＶ−２タンパク質ワクチンの能力を強化する、ＧＬＡ−ＳＥの能力を評価した。

【0380】

５匹のＣ５７ＢＬ／６マウスの群を、致死未満用量の弱毒化されたＨＳＶ−２チミジンキナーゼ欠損（ＴＫ−）ウイルスを用いて皮下に感染させた。２８日後、感染したまたは感染していないマウスに、５μｇのＧＬＡ−ＳＥまたは５％デキストロース媒介物と組み合わせて、各々５μｇの組換えｇＤ２、ＵＬ１９ｕｄ（配列番号１２）、およびＵＬ２５から成る三価ワクチンを用いて免疫付与した。対照群は、ＧＬＡ−ＳＥ単独または媒介物単独で処理された感染したマウス、および媒介物単独で処理されたナイーブマウスを含んだ。免疫付与の６日後、ＵＬ１９特異的ＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞応答を、ＩＣＳによって測定した。図１３に示されるように、ＵＬ１９特異的なＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞の頻度は、先に感染させたマウスの免疫付与後により高く、感染に誘発される記憶Ｔ細胞の呼び戻しがあったことを示唆している。重要なことに、組換えタンパク質ワクチンによるこれらの記憶Ｔ細胞の最大拡大は、ＧＬＡ−ＳＥアジュバンの存在を必要とした。
実施例１１
モルモットにおける再発性ＨＳＶ−２を治療する組換えＨＳＶ−２タンパク質ワクチンの能力

【0381】

この実施例では、再発性ＨＳＶ−２損傷の頻度を低減させる三価組換えＨＳＶ−２タンパク質ワクチンの能力を評価した。

【0382】

７匹のモルモットの群を、致死未満用量のＨＳＶ−２株３３３ウイルスを用いて膣内に感染させた。感染後第１３日目および第２７日目に、モルモットに、５μｇのＧＬＡ−ＳＥと組み合わせて、各々５μｇの組換えｇＤ２、ＵＬ１９ｕｄ（配列番号１２参照）、およびＵＬ２５から成る三価ワクチンを用いて免疫付与した。ＧＬＡ−ＳＥ単独で処理した感染したモルモットは、陰性対照の役割を果たした。動物は、膣内損傷に関して毎日モニタリングされ、０〜４のスコアが各損傷日に対して割り当てられた。各群の毎日の損傷スコアが平均化され、時間に対してプロットされた。図１４に示されるように、三価ワクチンおよびＧＬＡ−ＳＥを用いて処理した動物は、ＧＬＡ−ＳＥ単独を用いて処理した動物と比較して、再発性の損傷において約５０％の低減を有した。
実施例１２
ＨＳＶ−２エンベロープ糖タンパク質に由来し、リーダー配列を含有する、免疫原性タンパク質の構築

【0383】

この実施例では、免疫原性タンパク質は、ｇＤ２配列から構築され、またｇＤ２リーダー配列を含む。

【0384】

ｇＤ２のリーダー配列は、４０個のアミノ酸の長さである（配列番号１内の残基１〜４０）。１００個のアミノ酸断片（残基１〜１００）をコードするヌクレオチド配列は、発現ベクターとして挿入される。特定部位の突然変異誘発は、ＣｙｓＡｌａＬｙｓＴｙｒ（配列番号１６）からＧｌｙＬｅｕＡｌａＶａｌ（配列番号１７）までの残基３８〜４２、またはタンパク質合成中に開裂されない他の配列を変化させるために使用される。ＣＨＯ細胞は、改変された配列を含有するベクターとともに変換され、ｇＤ２タンパク質が、単離される。別法として、ヌクレオチド配列が、バキュロウイルス発現ベクター内に挿入され、タンパク質がＳｆ９細胞から単離される。リーダー配列が存在するという検証は、ＨＰＬＣ分析によって獲得される。
実施例１３
有毒なＨＳＶ−２による致死的攻撃に対するＧＬＡ／ＳＥおよび組換え三価タンパク質ワクチンの防御的有効性

【0385】

この実施例では、致死的ＨＳＶ−２に対して防御する、三価組換えＨＳＶ−２タンパク質ワクチンおよびＧＬＡアジュバントの能力を評価した。
１０匹のＣ５７ＢＬ／６マウスの群に、５μｇのＧＬＡ−ＳＥかまたは５％デキストロース媒介物かのいずれかと組み合わせて、各々５μｇの組換えｇＤ２、ＵＬ１９ｕｄ（配列番号１２参照）、およびＵＬ２５から成る三価ワクチンの２回の筋肉内免疫付与を、２８日空けて行った。５μｇのＧＬＡ−ＳＥ単独で免疫付与したマウスは、陰性対照の役割を果たした。追加の対照群は、５μｇのＧＬＡ−ＳＥ、および飲料水中の１ｍｌ当たり１ミリグラムのアシクロビル（ＡＣＶ）を用いて、攻撃の２４時間後に開始して免疫付与されたマウスで構成された。第２の免疫付与の２２日後、マウスは、デポ型酢酸メドロキシプロゲステロンで処理され、次いで６日後に、５０ｘＬＤ_５０用量の野生型ＨＳＶ−２で膣内に攻撃された。マウスは、生殖器損傷形成および生存に関して毎日モニタリングされた。感染後第１日目、第３日目、および第５日目に、膣内スワブをＰＣＲによるＨＳＶ−２ＤＮＡの定量化のために収集した。
図１５に示されるように、三価組換えｇＤ２、ＵＬ１９ｕｄ、およびＵＬ２５を用いてＧＬＡ−ＳＥとともに免疫付与したマウスは、三価タンパク質ワクチン単独かまたはＧＬＡ−ＳＥ単独かのいずれかを用いて免疫付与したマウスと比較して、劇的に低減された損傷形成（パネルＡ）を有し、また増加された生存率（パネルＢ）を有する。同様に、図１６に示されるように、ＧＬＡ−ＳＥとともにｇＤ２／ＵＬ１９ｕｄ／ＵＬ２５を用いて免疫付与した１０匹のマウスのうち７匹は、第５日までに検出可能な膣内ＨＳＶ−２ＤＮＡを有さず、一方、３つの全ての対照群のマウスは、第５日までを通して膣内に持続したレベルのＨＳＶ−２を有した。アシクロビルを受けた動物もまた、第１日、第３日、および第５日に、同程度に高いＨＳＶ−２ＤＮＡウイルス負荷を有した。ＧＬＡ／ＳＥおよびｇＤ２／ＵＬ１９ｕｄ／ＵＬ２５の活性ワクチンを受けた動物は、特により低いウイルス負荷を有し、第５日までに多くの動物が無菌であった（すなわち、検出可能なウイルス負荷がなかった）。要約すると、これらの実験は、ＧＬＡ／ＳＥ＋組換え三価ｇＤ２／ＵＬ１９ｕｄ／ＵＬ２５タンパク質ワクチンの、有毒なＨＳＶ−２による致死的攻撃に対する生体内の防御的有効性を実証する。
実施例１４
ヒトにおけるワクチンの安全性および免疫原性

【0386】

上に説明されるＧＬＡ−ＳＥまたはＳＥ単独とともに処方される免疫原の安全性および免疫原性は、ＨＳＶ−２血清反応陰性の対象（予防的ワクチンの標的）およびＨＳＶ−２血清反応陽性の対象（免疫療法ワクチンの標的）を用いて、フェーズ１Ａ／１Ｂ研究デザインで試験することができる。この研究デザインは、ＨＩＶ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｔｒｉａｌｓ Ｎｅｔｗｏｒｋ（ＨＶＴＮ）によって確立され、また過去１０年間に４０名のヒトＨＩＶ−１フェーズＩＡワクチン試験において使用されているデザインに従うことができる。

【0387】

これらのフェーズ１Ａ試験のデザインは、１群当たり１２名の対象（１０ワクチン−２偽薬）の標準化されたフォーマットから成り、１５％有病率で重篤な有害事象を定義する能力に基づく。免疫原性でないワクチン（１０名の対象中２名未満が免疫を獲得）も、定義される。ＨＳＶ−２フェーズ１Ａ研究では、対象は、１μｇまたは２．５μｇのＧＬＡ−ＳＥの３回の筋肉内免疫付与を４週間隔で受ける。合計で４８名のＨＳＶ血清反応陰性およびＨＳＶ−２血清反応陽性の対象（ＨＳＶ−１血清反応陽性またはＨＳＶ−１血清反応陰性）が、フェーズ１Ａ試験で免疫付与される。

【0388】

ＨＳＶ−２血清反応陰性の対象は、第０日にＷｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔによって定義する。安全性評価に加えて、試験中の対象は、可能性のあるワクチン誘発性のＨＳＶ−２特異的免疫液性および細胞性免疫応答、ならびに生殖器潰瘍の再発の頻度（ＨＳＶ−２血清反応陽性の対象のみ）についてモニタリングされ得る。ＨＳＶ−２感染集団に関して、２つの事前ワクチン接種時点が、ｇＤ２に対する抗体を確立するために使用され得る。ＨＳＶ−２組換えタンパク質に対する細胞免疫は、ＩＦＮ−γ ＥＬＩＳＰＯＴおよびＩＣＳ分析によって評価することができ、またｇＤ２特異的液性免疫は、ＥＬＩＳＡおよび中和抗体分析によって評価することができる。

【0389】

先述から、特定の実施形態が本明細書で例証の目的のために説明されているが、種々の修正が、本発明の精神および範囲から逸脱することなく行われてもよいことが理解されるであろう。したがって、本発明は、添付の特許請求の範囲の通り以外には限定されない。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【図7A】

【図7B】

【図8A】

【図8B】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]