特許 6795861 インドリノン化合物及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6795861

(24)【登録日】2020年11月17日

(45)【発行日】2020年12月2日

(54)【発明の名称】インドリノン化合物及びその使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/404 20060101AFI20201119BHJP

   A61K 31/4155 20060101ALI20201119BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20201119BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20201119BHJP

   A61K 31/475 20060101ALI20201119BHJP

   A61K 31/704 20060101ALI20201119BHJP

   A61K 31/136 20060101ALI20201119BHJP

   A61K 31/7048 20060101ALI20201119BHJP

   A61K 31/407 20060101ALI20201119BHJP

   A61K 38/02 20060101ALI20201119BHJP

   A61K 31/519 20060101ALI20201119BHJP

   A61K 31/337 20060101ALI20201119BHJP

   A61K 38/13 20060101ALI20201119BHJP

   A61K 31/706 20060101ALI20201119BHJP

   A61K 31/52 20060101ALI20201119BHJP

   A61K 31/167 20060101ALI20201119BHJP

   A61K 31/19 20060101ALI20201119BHJP

   A61K 31/165 20060101ALI20201119BHJP

   A61K 31/18 20060101ALI20201119BHJP

   A61K 31/245 20060101ALI20201119BHJP

   A61K 31/4045 20060101ALI20201119BHJP

   A61K 31/506 20060101ALI20201119BHJP

   A61K 31/403 20060101ALI20201119BHJP

   A61K 31/7068 20060101ALI20201119BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/404

   A61K31/4155

   A61K45/00

   A61P43/00 121

   A61K31/475

   A61K31/704

   A61K31/136

   A61K31/7048

   A61K31/407

   A61K38/02

   A61K31/519

   A61K31/337

   A61K38/13

   A61K31/706

   A61K31/52

   A61K31/167

   A61K31/19

   A61K31/165

   A61K31/18

   A61K31/245

   A61K31/4045

   A61K31/506

   A61K31/403

   A61K31/7068

【請求項の数】45

【全頁数】70

(21)【出願番号】特願2019-223835(P2019-223835)

(22)【出願日】2019年12月11日

(62)【分割の表示】特願2017-538916(P2017-538916)の分割

【原出願日】2015年10月7日

(65)【公開番号】特開2020-59736(P2020-59736A)

(43)【公開日】2020年4月16日

【審査請求日】2019年12月11日

(31)【優先権主張番号】62/062,086

(32)【優先日】2014年10月9日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】517123690

【氏名又は名称】オンターナル セラピューティック インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＯＮＣＴＥＲＮＡＬ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ， ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】100121728

【弁理士】

【氏名又は名称】井関 勝守

(74)【代理人】

【識別番号】100165803

【弁理士】

【氏名又は名称】金子 修平

(72)【発明者】

【氏名】ベルニエ， ジャン ミッシェル

【審査官】 伊藤 幸司

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１３／１５５３４１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００８／０８３３２６（ＷＯ，Ａ２）

【文献】 国際公開第２０１０／０４２２２５（ＷＯ，Ａ２）

【文献】 国際公開第２０１０／０８３５０５（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 FILE REGISTRY ON STN, RN 309928-53-8, Entered STN: 20 Dec 2000

【文献】 PAJOUHESH H; PARSON R AND POPP F D，SYNTHESIS OF 3-HYDROXY-3-PHENACYLOXINDOLE ANALOGS，JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES，AMERICAN CHEMICAL SOCIETY AND AMERICAN PHARMACEUTI，１９７９年，VOL:68, NR:4，PAGE(S):519 - 520，ＵＲＬ，http://dx.doi.org/10.1002/JPS.2600680437

【文献】 HOSSEIN PAJOUHESH; ET AL，POTENTIAL ANTICONVULSANTS VI: CONDENSATION OF ISATINS WITH CYCLOHEXANONE AND OTHER CYCLIC KETONES，JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES，AMERICAN CHEMICAL SOCIETY AND AMERICAN PHARMACEUTI，１９８３年，VOL:72, NR:3，PAGE(S):318 - 321，ＵＲＬ，http://dx.doi.org/10.1002/JPS.2600720330

【文献】 SURESH ALLU; ET AL，ENANTIOSELECTIVE ORGANOCATALYTIC ALDOL REACTION OF UNACTIVATED KETONES WITH ISATINS，TETRAHEDRON LETTERS，NL，ELSEVIER，２０１１年 ５月１１日，VOL:52, NR:32，PAGE(S):4080 - 4083，ＵＲＬ，http://dx.doi.org/10.1016/J.TETLET.2011.05.013

【文献】 BECERRA D; INSUASTY B; COBO J; GLIDEWELL C，HYDROGEN-BONDING PATTERNS IN 3-ALKYL-3-HYDROXYINDOLIN-2-ONES，ACTA CRYSTALLOGRAPHICA SECTION C. CRYSTAL STRUCTURE COMMUNICATIONS，デンマーク，MUNKSGAARD，２０１０年 １月２２日，VOL:66, NR:2，PAGE(S):O79 - O86，ＵＲＬ，http://dx.doi.org/10.1107/S0108270110001058

【文献】 WEN-BING CHEN; ET AL，CATALYST-FREE ALDOL CONDENSATION OF KETONES AND ISATINS UNDER MILD REACTION CONDITIONS 以下備考，GREEN CHEMISTRY，英国，ROYAL SOCIETY OF CHEMISTRY，２００９年，VOL:11, NR:9，PAGE(S):1465 - 1476，IN DMF WITH MOLECULAR SIEVES 4 Å AS ADDITIVE，ＵＲＬ，http://dx.doi.org/10.1039/B906684E

【文献】 NAGLE A A; REDDY S A; ET AL，3-(2-OXOETHYLIDENE)INDOLIN-2-ONE DERIVATIVES ACTIVATE NRF2 AND INHIBIT NF-κB: POTENTIAL 以下備考，CHEMMEDCHEM，WILEY-VCH，２０１４年，VOL:9, NR:8，PAGE(S):1763 - 1774，CANDIDATES FOR CHEMOPREVENTION，ＵＲＬ，http://dx.doi.org/10.1002/CMDC.201402038

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｐ

Ｃ０７Ｄ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉａ）：

【化1】

（式中、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、及びＲ_４は、それぞれ独立して、Ｈ及びＣｌからなる群より選ばれ、
Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_１０、及びＲ_１１は、それぞれ独立して、Ｈ及びハロゲンからなる群より選ばれ、
Ｒ_９は、独立して、シクロプロピル、アジリジニル、アゼチジニル、及びピロリジニルからなる群より選ばれる）
で表される構造を有する化合物、もしくは、その立体異性体、その薬学的に許容される塩、又はその溶媒和物の使用であり、
相溶性のある薬学的活性物質の少なくとも１つと併用しての、併用療法に用いる医薬組成物を調製するための使用。

【請求項2】

前記式（Ｉａ）における前記Ｒ_９は、アジリジニル、アゼチジニル、及びピロリジニルからなる群より選ばれる、請求項１に記載の使用。

【請求項3】

前記式（Ｉａ）における前記Ｒ_９は、シクロプロピルである、請求項１に記載の使用。

【請求項4】

式（Ｉａ）：

【化2】

（式中、
Ｒ_１及びＲ_４は、Ｃｌであり、
Ｒ_２及びＲ_３は、Ｈであり、
Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_１０、及びＲ_１１は、それぞれ独立して、Ｈ及びハロゲンからなる群より選ばれ、
Ｒ_９は、Ｃ_３−８シクロアルキルである）
で表される構造を有する化合物、もしくは、その立体異性体、その薬学的に許容される塩、又はその溶媒和物の使用であり、
相溶性のある薬学的活性物質の少なくとも１つと併用しての、併用療法に用いる医薬組成物を調製するための使用。

【請求項5】

前記相溶性のある薬学的活性物質は、補助的抗菌剤、止痒剤、収斂剤、局所麻酔剤、抗炎症剤、還元剤、免疫抑制剤、及び化学療法剤からなる群より選ばれる、請求項１〜３のいずれか１つ、又は、請求項４に記載の使用。

【請求項6】

前記化学療法剤は、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン、アントラセン、及びエピポドフィロトキシンからなる群より選ばれる、請求項５に記載の使用。

【請求項7】

前記化学療法剤は、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ビスアントレン、ミトキサントロン、エトポシド、テニポシド、アクチノマイシンＤ、マイトマイシンＣ、ミトラマイシン、メトトレキサート、ドセタキセル、エトポシド（ＶＰ−１６）、パクリタキセル、及びアドリアマイシンからなる群より選ばれる、請求項５に記載の使用。

【請求項8】

前記免疫抑制剤は、シクロスポリンＡ、タクロリムス、６−メルカプトプリン、及びアザチオプリンからなる群より選ばれる、請求項５に記載の使用。

【請求項9】

前記相溶性のある薬学的活性物質は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（ＨＤＡＣ）、オーロラキナーゼ阻害剤、脱メチル化剤、ナチュラルキラー細胞による免疫療法剤、ＩＧＦ−ＩＲ抗体、ユーイング抗原抗体、及びヒドロキシウレアからなる群より選ばれる、請求項１〜３のいずれか１つ、又は、請求項４に記載の使用。

【請求項10】

前記ヒストンデアセチラーゼ阻害剤は、ボリノスタット、ロミデプシン、パノビノスタット、バルプロ酸、ベリノスタット、モセチノスタット（ｍｏｃｅｔｉｎｏｓｔａｔ）、ギビノスタット（ｇｉｖｉｎｏｓｔａｔ）、及びトリコスタチンＡからなる群より選ばれ、
前記オーロラキナーゼ阻害剤は、ＺＭ４４７４３９、ヘスペラジン（ｈｅｓｐｅｒａｄｉｎ）、及びＶＸ−６８０からなる群より選ばれ、
前記脱メチル化剤は、５−アザシチジン、５−アザデオキシシチジン、及びプロカインからなる群より選ばれる、請求項９に記載の使用。

【請求項11】

収納容器からなるキットであり、
前記収納容器は、式（Ｉａ）：

【化3】

（式中、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、及びＲ_４は、それぞれ独立して、Ｈ及びＣｌからなる群より選ばれ、
Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_１０、及びＲ_１１は、それぞれ独立して、Ｈ及びハロゲンからなる群より選ばれ、
Ｒ_９は、独立して、シクロプロピル、アジリジニル、アゼチジニル、及びピロリジニルからなる群より選ばれる）
で表される構造を有する化合物、もしくは、その立体異性体、その薬学的に許容される塩、又はその溶媒和物を含む、キット。

【請求項12】

前記式（Ｉａ）における前記Ｒ_９は、アジリジニル、アゼチジニル、及びピロリジニルからなる群より選ばれる、請求項１１に記載のキット。

【請求項13】

前記式（Ｉａ）における前記Ｒ_９は、シクロプロピルである、請求項１１に記載のキット。

【請求項14】

収納容器からなるキットであり、
前記収納容器は、式（Ｉａ）：

【化4】

（式中、
Ｒ_１及びＲ_４は、Ｃｌであり、
Ｒ_２及びＲ_３は、Ｈであり、
Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_１０、及びＲ_１１は、それぞれ独立して、Ｈ及びハロゲンからなる群より選ばれ、
Ｒ_９は、Ｃ_３−８シクロアルキルである）
で表される構造を有する化合物、もしくは、その立体異性体、その薬学的に許容される塩、又はその溶媒和物を含む、キット。

【請求項15】

前記収納容器は、少なくとも１つの付加的治療薬をさらに含む、請求項１１〜１３のいずれか１つ、又は、請求項１４に記載のキット。

【請求項16】

前記付加的治療薬は、シクロスポリンＡ、タクロリムス、６−メルカプトプリン、及びアザチオプリンからなる群より選ばれる免疫抑制剤である、請求項１５に記載のキット。

【請求項17】

前記付加的治療薬は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（ＨＤＡＣ）、オーロラキナーゼ阻害剤、脱メチル化剤、ナチュラルキラー細胞による免疫療法剤、ＩＧＦ−ＩＲ抗体、ユーイング抗原抗体、及びヒドロキシウレアからなる群より選ばれる、請求項１５に記載のキット。

【請求項18】

前記ヒストンデアセチラーゼ阻害剤は、ボリノスタット、ロミデプシン、パノビノスタット、バルプロ酸、ベリノスタット、モセチノスタット（ｍｏｃｅｔｉｎｏｓｔａｔ）、ギビノスタット（ｇｉｖｉｎｏｓｔａｔ）、及びトリコスタチンＡからなる群より選ばれ、
前記オーロラキナーゼ阻害剤は、ＺＭ４４７４３９、ヘスペラジン（ｈｅｓｐｅｒａｄｉｎ）、及びＶＸ−６８０からなる群より選ばれ、
前記脱メチル化剤は、５−アザシチジン、５−アザデオキシシチジン、及びプロカインからなる群より選ばれる、請求項１７に記載のキット。

【請求項19】

前記付加的治療薬は、化学療法剤である、請求項１５に記載のキット。

【請求項20】

前記化学療法剤は、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン、アントラセン、及びエピポドフィロトキシンからなる群より選ばれる、請求項１９に記載のキット。

【請求項21】

前記化学療法剤は、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ビスアントレン、ミトキサントロン、エトポシド、テニポシド、アクチノマイシンＤ、マイトマイシンＣ、ミトラマイシン、メトトレキサート、ドセタキセル、エトポシド（ＶＰ−１６）、パクリタキセル、及びアドリアマイシンからなる群より選ばれる、請求項１９に記載のキット。

【請求項22】

前記収納容器は、前記式（Ｉａ）で表される構造を有する化合物、もしくは、その立体異性体、その薬学的に許容される塩、又はその溶媒和物を、順次又は連続投与のために、個別投与量で含む、請求項１１〜１３のいずれか１つ、又は、請求項１４に記載のキット。

【請求項23】

さらに、少なくとも１つの診断ツール及び使用説明からなる、請求項１１〜１３のいずれか１つ、又は、請求項１４に記載のキット。

【請求項24】

さらに、
送達デバイスと、
前記式（Ｉａ）で表される構造を有する化合物、もしくは、その立体異性体、その薬学的に許容される塩、又はその溶媒和物、及び、前記付加的治療薬を投与するための使用説明と
からなる、請求項１５に記載のキット。

【請求項25】

さらに、
前記式（Ｉａ）で表される構造を有する化合物、もしくは、その立体異性体、その薬学的に許容される塩、又はその溶媒和物、及び、前記付加的治療薬の、一部又は全てを、保管、再構成、及び／又は投与するための使用説明
からなる、請求項１５に記載のキット。

【請求項26】

式（Ｉａ）：

【化5】

（式中、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、及びＲ_４は、それぞれ独立して、Ｈ及びＣｌからなる群より選ばれ、
Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_１０、及びＲ_１１は、それぞれ独立して、Ｈ及びハロゲンからなる群より選ばれ、
Ｒ_９は、独立して、シクロプロピル、アジリジニル、アゼチジニル、及びピロリジニルからなる群より選ばれる）
で表される構造を有する化合物、もしくは、その立体異性体、その薬学的に許容される塩、又はその溶媒和物と、
ビンカアルカロイド、アントラサイクリン、アントラセン、エピポドフィロトキシン、アクチノマイシンＤ、マイトマイシンＣ、ミトラマイシン、メトトレキサート、ドセタキセル、パクリタキセル、及びアドリアマイシンからなる群より選ばれる抗癌剤；脱メチル化剤；ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（ＨＤＡＣ）；オーロラキナーゼ阻害剤；並びにヒドロキシウレアからなる群より選ばれる少なくとも１種の物質と
からなる、医薬組成物。

【請求項27】

前記式（Ｉａ）における前記Ｒ_９は、シクロプロピルである、請求項２６に記載の医薬組成物。

【請求項28】

前記式（Ｉａ）における前記Ｒ_１及びＲ_４は、Ｃｌであり、前記式（Ｉａ）における前記Ｒ_２及びＲ_３は、Ｈである、請求項２６に記載の医薬組成物。

【請求項29】

前記化合物は、

【化6】

からなる群より選ばれる、請求項２６に記載の医薬組成物。

【請求項30】

前記化合物は、

【化7】

からなる群より選ばれる、請求項２６に記載の医薬組成物。

【請求項31】

前記化合物は、

【化8】

からなる群より選ばれる、請求項２６に記載の医薬組成物。

【請求項32】

前記化合物は、

【化9】

からなる群より選ばれる、請求項２６に記載の医薬組成物。

【請求項33】

前記化合物は、

【化10】

である、請求項２６に記載の医薬組成物。

【請求項34】

前記化合物は、

【化11】

である、請求項２６に記載の医薬組成物。

【請求項35】

前記化合物は、

【化12】

である、請求項２６に記載の医薬組成物。

【請求項36】

前記ビンカアルカロイドは、ビンブラスチン及びビンクリスチンからなる群より選ばれる、請求項２６〜３５のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【請求項37】

前記アントラサイクリンは、ドキソルビシン、ダウノルビシン、及びエピルビシンからなる群より選ばれる、請求項２６〜３５のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【請求項38】

前記アントラセンは、ビスアントレン及びミトキサントロンからなる群より選ばれる、請求項２６〜３５のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【請求項39】

前記エピポドフィロトキシンは、エトポシド及びテニポシドからなる群より選ばれる、請求項２６〜３５のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【請求項40】

前記脱メチル化剤は、５−アザシチジン、５−アザデオキシシチジン、及びプロカインからなる群より選ばれる、請求項２６〜３５のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【請求項41】

前記ヒストンデアセチラーゼ阻害剤は、ボリノスタット、ロミデプシン、パノビノスタット、バルプロ酸、ベリノスタット、モセチノスタット（ｍｏｃｅｔｉｎｏｓｔａｔ）、ギビノスタット（ｇｉｖｉｎｏｓｔａｔ）、及びトリコスタチンＡからなる群より選ばれる、請求項２６〜３５のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【請求項42】

前記オーロラキナーゼ阻害剤は、ＺＭ４４７４３９、ヘスペラジン（ｈｅｓｐｅｒａｄｉｎ）、及びＶＸ−６８０からなる群より選ばれる、請求項２６〜３５のいずれか１つに記載の医薬組成物。

【請求項43】

細胞の増殖を阻害する薬剤を調製するための医薬組成物の使用であり、
前記細胞は、ＥＴＳ遺伝子を過剰発現させるか、又はＥＴＳ融合遺伝子からなる、請求項２６〜４２のいずれか１つに記載の医薬組成物の使用。

【請求項44】

前記細胞は、癌細胞である、請求項４３に記載の使用。

【請求項45】

前記癌は、ユーイング肉腫、前立腺癌、膠芽細胞腫、急性骨髄性白血病、乳癌、頭部癌、頸部癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌、及び子宮癌からなる群より選ばれる、請求項４４に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

［関連出願］
本出願は、米国仮出願第６２／０６２０８６号（発明の名称「インドリノン化合物及びその使用」、２０１４年１０月９日出願）の利益を主張するものである。その内容は、本明細書に参考として組み込まれる。

【0002】

ＥＷＳ−ＦＬＩ１転写因子阻害剤として機能するインドリノン誘導体化合物が提供される。また、該インドリノン誘導体の医薬組成物、その合成方法、それを用いた治療方法、及びＥＷＳ−ＦＬＩ１癌タンパクの阻害を同定するためのアッセイが提供される。

【背景技術】

【0003】

莫大な各種ユーイング肉腫ファミリー腫瘍（ＥＳＦＴ）に存在するＥＷＳ−ＦＬＩ１転写因子が、１０年以上前に特徴付けられた。子供及び青年の２番目に一般的な骨腫瘍であるユーイング肉腫の治療における進歩により、局部腫瘍を有する患者の生存性が向上してきた。しかしながら、転移した患者は、未だに悪い状態であり、治療によって短期間及び長期間の毒性が付与される。その連続した発現がＥＳＦＴ細胞の生存にとっての臨界であると考えられている腫瘍形成融合転写因子上に、ＥＷＳ−ＦＬＩ１を生じる染色体転座によって、ユーイング肉腫ファミリー腫瘍（ＥＳＦＴ）は特徴付けられる（Ｂａｌａｍｕｔｈ，ＮＪ、Ｗｏｍｅｒ，ＲＢ．、Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １１ １８４−１９２（２０１０））。

【0004】

腫瘍性タンパク質であるＥＷＳ−ＦＬＩ１がＲＮＡヘリカーゼＡ（ＲＨＡ）に結合するのを阻害することにより、ＥＳＦＴ細胞株の増殖が減少し、腫瘍量が減少することが、インビトロ及びインビボ研究で実証されてきている。ＥＷＳ−ＦＬＩ１には酵素活性がない。しかしながら、ＲＮＡヘリカーゼＡ（ＲＨＡ）とＥＷＳ−ＦＬＩ１との間のタンパク質−タンパク質相互作用は、腫瘍形成を変調する。したがって、該相互作用は、腫瘍増殖の維持に必要とされる（Ｈｙａｒｉｙｅ Ｎ Ｅｒｋｉｚａｎ ｅｔ ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １５（７） ７５０−７５６（２００９））。重要なタンパク質相互作用を破壊するパラダイムは、類似の転座を有する肉腫及びＭＬＬ転座を有する白血病を含む疾病の治療において、実用性を有するかもしれない（Ｈｅｌｍａｎ ＬＪ、Ｍｅｌｔｚｅｒ Ｐ．、Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｓａｒｃｏｍａ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ ２００３；３（９）：６８５−９４、及びＰｕｉ ＣＨ，ｅｔ ａｌ．、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００４；３５０（１５）：１５３５−４８）。さらに変性タンパク質は、固有の生化学的性質に基づいて、優れた治療標的となり得る（Ｃｈｅｎｇ Ｙ、ＬｅＧａｌｌ Ｔ、Ｏｌｄｆｉｅｌｄ ＣＪ，ｅｔ ａｌ．、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００６；２４（１０）：４３５−４２）。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0005】

【非特許文献1】Ｂａｌａｍｕｔｈ，ＮＪ，Ｗｏｍｅｒ，ＲＢ．，Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １１ １８４−１９２（２０１０）

【非特許文献2】Ｈｙａｒｉｙｅ Ｎ Ｅｒｋｉｚａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １５（７） ７５０−７５６（２００９）

【非特許文献3】Ｈｅｌｍａｎ ＬＪ，Ｍｅｌｔｚｅｒ Ｐ．，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｓａｒｃｏｍａ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ ２００３；３（９）：６８５−９４

【非特許文献4】Ｐｕｉ ＣＨ，ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００４；３５０（１５）：１５３５−４８

【非特許文献5】Ｃｈｅｎｇ Ｙ，ＬｅＧａｌｌ Ｔ，Ｏｌｄｆｉｅｌｄ ＣＪ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００６；２４（１０）：４３５−４２

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

ＥＷＳ−ＦＬＩ１に向けられる、アンチセンス及びｓｉＲＮＡを用いたインビトロ及び異種移植の研究が長年に渡って行われてきたが、送達及び安定性が不充分であり、これまでヒトの治療として実用的なものはない。したがって、ＥＳＦＴのような疾患を治療するために、治療法の改善が必要とされる。

【0007】

ＦＬＩ１は、通常、発育中の胚においては活性を示すが、生後は示さないＥＴＳファミリー転写因子のメンバーである。該ファミリー転写因子には２９のメンバーがあるが、これらのうちの４つ、ＦＬＩ−１、ＥＴＶ１、ＥＴＶ４、及びＥＲＧは、広範囲の癌と関係してきている。

【0008】

ＦＬＩ−１、ＥＴＶ１、ＥＴＶ４、又はＥＲＧの腫瘍形成融合タンパク質、もしくはこれら自身の転写因子の結合を阻害することを標的としている治療化合物は、ユーイング肉腫ファミリー腫瘍、膵臓癌、前立腺癌、神経膠芽腫、非小細胞肺癌、及び数種の他の癌を含む癌の治療に実用的であろう。好適な実施形態は、これらの要求を満足し、そのうえ他の利点も提供する。

【課題を解決するための手段】

【0009】

ここに開示するいくつかの実施形態は、以下の式（Ｉ）の化合物に関する。該化合物は、立体異性体、遊離体、薬学的に許容される塩又はエステル、溶媒和物、もしくはこれらの組み合わせ等の形態を含む。式（Ｉ）中、Ａ、Ｄ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、及びＲ_１２は、本明細書で定義のとおりである。

【化1】

【0010】

ここに開示するいくつかの実施形態は、哺乳動物における癌治療の方法に関する。該方法は、哺乳動物に、１種又はそれ以上の前記式（Ｉ）の化合物、もしくは１種又はそれ以上の前記式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物を、有効量で投与することからなる。該化合物は、立体異性体、遊離体、又は薬学的に許容される塩の形態を含む。ここに開示する他の実施形態は、癌の治療用の薬剤の製造における、１種又はそれ以上の前記式（Ｉ）の化合物の使用に関する。該化合物は、立体異性体、遊離体、又は薬学的に許容される塩の形態を含む。

【0011】

ここに開示するさらなる他の実施形態は、癌の治療のための、前記式（Ｉ）の化合物に関する。該化合物は、立体異性体、遊離体、又は薬学的に許容される塩の形態を含む。該癌は、ユーイング肉腫、膠芽細胞腫、急性骨髄性白血病、乳癌、頭部及び頸部癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、及び子宮癌からなる群より選ばれる。

【発明を実施するための形態】

【0012】

以下の記載及び実施例では、本発明の好適な実施形態を詳細に説明する。当業者は、その範囲に含まれる本発明の多数の変更及び修飾が存在することを理解するであろう。したがって、好適な実施形態の記載により、本発明の範囲が限定されるものではない。

【0013】

腫瘍形成転写因子を生じる染色体転座は、多くの肉腫を含む、各種腫瘍の特質である。ユーイング肉腫ファミリー腫瘍（ＥＳＦＴ）は、この腫瘍の高い悪性形質の原因となる、ユーイング肉腫ブレイクポイントリージョン１及びフレンド白血病ウイルスインテグレーション１（ＥＷＳ−ＦＬＩ１）融合転移因子を生じるｔ（１１；２２）（ｑ２４；ｑ１２）転座によって、特徴付けられる。ＥＷＳ−ＦＬＩ１の連続した発現は、ＥＳＦＴ細胞の生存にとっての臨界であると考えられる。ＥＷＳ−ＦＬＩ１は、その悪性細胞特異性の点から、ユーイング肉腫に対する魅力的な治療の標的である。さらに、ＥＷＳ／ＦＬＩ発現は、ユーイング肉腫腫瘍細胞にとって不可欠であることが、実験によって証明されている。インビトロにおいて、アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド及びＲＮＡインターフェアランス（ＲＮＡｉ）でＥＷＳ−ＦＬＩ１を標的にすることにより、潜在的治療様相としてのＥＷＳ−ＦＬＩ１減衰をサポートする、ユーイング肉腫細胞の生存能力、増殖、及び腫瘍形成形質転換が阻害される。好適な実施形態に係る治療剤は、より大きな腫瘍群に対して広く適用可能であり、化学療法耐性肉腫及び白血病等の悪性腫瘍、並びにユーイング肉腫等の治療が困難な腫瘍に関連した他の腫瘍形成転写因子の治療のための治療薬として有用である。

【0014】

＜定義＞
本明細書で使用される全ての技術的及び科学的用語は、特に定義がない限り、当業者が通常理解しているものと同じ意味を有する。本明細書で引用される全ての特許、出願、公開出願、及び他の公開物は、特に規定がない限り、もっぱら参考として組み込まれている。本明細書の用語について複数の定義がある場合には、特に規定がない限り、該セクションにおける定義を優先する。

【0015】

本明細書において、例えば、限定はないが、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、及びＲ_１２等のいずれかの「Ｒ」基は、指定される原子に結合できる置換基を示す。Ｒ基は、置換されていてもよく、非置換であってもよい。２つの「Ｒ」基が「一緒になって」と記載される場合、Ｒ基とそれらが結合する原子とにより、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、又は複素環を形成できる。例えば、限定はないが、ＮＲ^ａＲ^ｂ基におけるＲ^ａ及びＲ^ｂは、「一緒になって」と示される場合、Ｒ^ａとＲ^ｂとは互いに共有結合して下記のような環：

【化2】

を形成することを意味する。さらに、２つの「Ｒ」基が、それらが結合する原子で「一緒になって」と記載され、選択肢として環を形成する場合、「Ｒ」基は、先に定義の可変基又は置換基に限定されない。

【0016】

本明細書において、「アルキル」は、完全に飽和した（二重結合又は三重結合を有しない）炭化水素基を含む直鎖状又は分岐鎖状の炭化水素鎖を指す。アルキル基は、１個〜２０個の炭素原子（本定義は数値範囲が指定されていない用語「アルキル」の存在も包含するが、本明細書で示される場合、「１〜２０」等の数値範囲は、その指定された範囲における各整数を指す。例えば、「１個〜２０個の炭素原子」は、１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子等の、２０個以下の炭素原子からなり得るアルキル基を意味する）を有してもよい。アルキル基は、１個〜１０個の炭素原子を有する中間サイズのアルキルであってもよい。アルキル基は、１個〜６個の炭素原子を有する低級アルキルであってもよい。化合物のアルキル基は、「Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル」又は類似の名称として示されてもよい。例として、「Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル」は、アルキル鎖において１個〜６個の炭素原子があることを示す。すなわち、アルキル鎖は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル（直鎖状及び分岐鎖状）、及びヘキシル（直鎖状及び分岐鎖状）から選ばれる。典型的なアルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル（直鎖状及び分岐鎖状）、及びヘキシル（直鎖状及び分岐鎖状）が含まれるが、これらに限定されない。アルキル基は、置換されていてもよく、非置換であってもよい。

【0017】

本明細書において、「シクロアルキル」は、完全に飽和した（二重結合又は三重結合を有しない）単環式又は多環式炭化水素環系を指す。２つ又はそれ以上の環から構成される場合、それらの環は、縮合環の形で互いに結合されてもよい。シクロアルキル基は、環に３個〜１０個の原子、又は３個〜８個の原子を含んでもよい。シクロアルキル基は、置換されていてもよく、非置換であってもよい。典型的なシクロアルキル基としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、及びシクロオクチルが含まれるが、これらに限定されない。

【0018】

本明細書において、「アリール」は、すべての環にわたって完全に非局在化したπ電子系を有する炭素環式（すべて炭素）の単環式又は多環式芳香環系（２つの炭素環が化学結合を共有する縮合環系を含む）を指す。アリール基の炭素原子数は変更可能である。例えば、アリール基は、Ｃ_６〜Ｃ_１４アリール基、Ｃ_６〜Ｃ_１０アリール基、又はＣ_６アリール基であってもよい。アリール基の例としては、ベンゼン、ナフタレン、及びアズレンが含まれるが、これらに限定されない。アリール基は、置換されていてもよく、非置換であってもよい。

【0019】

本明細書において、「ヘテロアリール」は、１つ又はそれ以上のヘテロ原子（例えば、１個〜５個のヘテロ原子）、すなわち炭素以外の元素を含む単環式又は多環式芳香環系（完全に非局在化したπ電子系を有する環系）を指す。そのヘテロ原子としては、チッ素、酸素、及び硫黄が含まれるが、これらに限定されない。ヘテロアリール基の環の原子数は変更可能である。例えば、ヘテロアリール基は、環に４個〜１４個の原子、環に５個〜１０個の原子、又は環に５個〜６個の原子を含んでもよい。さらに、用語「ヘテロアリール」は縮合環系を含み、その縮合環系において、２つの環、例えば少なくとも１つのアリール環及び少なくとも１つのヘテロアリール環、又は少なくとも２つのヘテロアリール環は、少なくとも１つの化学結合を共有する。ヘテロアリール環の例としては、フラン、フラザン、チオフェン、ベンゾチオフェン、フタラジン、ピロール、オキサゾール、ベンゾオキサゾール、１，２，３−オキサジアゾール、１，２，４−オキサジアゾール、チアゾール、１，２，３−チアジアゾール、１，２，４−チアジアゾール、ベンゾチアゾール、イミダゾール、ベンズイミダゾール、インドール、インダゾール、ピラゾール、ベンゾピラゾール、イソオキサゾール、ベンゾイソオキサゾール、イソチアゾール、トリアゾール、ベンゾトリアゾール、チアジアゾール、テトラゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、プリン、プテリジン、キノリン、イソキノリン、キナゾリン、キノキサリン、シンノリン、及びトリアジンが含まれるが、これらに限定されない。ヘテロアリール基は、置換されていてもよく、非置換であってもよい。

【0020】

本明細書において、「ヘテロシクロアルキル」は、炭素原子と１個〜５個のヘテロ原子とにより構成される、三員、四員、五員、六員、七員、八員、九員、十員、十八員までの単環式、二環式、及び三環式の環系を指す。複素環は、このように位置している１つ又はそれ以上の不飽和結合を任意に含んでもよいが、完全に非局在化したπ電子系がすべての環にわたって発生することはない。ヘテロ原子は、酸素、硫黄、及びチッ素を含む、炭素以外の元素であるが、これらに限定されるものではない。複素環は、ラクタム、ラクトン、環状イミド、環状チオイミド、及び環状カルバマート等のオキソ系及びチオ系を含むように定義されるために、１つ又はそれ以上のカルボニル又はチオカルボニル官能基をさらに含んでもよい。２つ又はそれ以上の環から構成される場合、それらの環は、縮合環の形で互いに結合されてもよい。また、ヘテロシクロアルキルにおける任意のチッ素は、四級化されてもよい。ヘテロシクロアルキル基は、置換されていてもよく、非置換であってもよい。このようなヘテロシクロアルキル基の例としては、１，３−ジオキシン、１，３−ジオキサン、１，４−ジオキサン、１，２−ジオキソラン、１，３−ジオキソラン、１，４−ジオキソラン、１，３−オキサチアン、１，４−オキサチイン、１，３−オキサチオラン、１，３−ジチオール、１，３−ジチオラン、１，４−オキサチアン、テトラヒドロ−１，４−チアジン、２Ｈ−１，２−オキサジン、マレイミド、スクシンイミド、バルビツール酸、チオバルビツール酸、ジオキソピペラジン、ヒダントイン、ジヒドロウラシル、トリオキサン、ヘキサヒドロ−１，３，５−トリアジン、イミダゾリン、イミダゾリジン、イソオキサゾリン、イソオキサゾリジン、オキサゾリン、オキサゾリジン、オキサゾリジノン、チアゾリン、チアゾリジン、モルホリン、オキシラン、ピペリジン−Ｎ−オキシド、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、ピロリドン、ピロリジオン、４−ピペリドン、ピラゾリン、ピラゾリジン、２−オキソピロリジン、テトラヒドロピラン、４Ｈ−ピラン、テトラヒドロチオピラン、チアモルホリン、チアモルホリンスルホキシド、チアモルホリンスルホン、及びそれらのベンゾ縮合類似物（例えば、ベンズイミダゾリジノン、テトラヒドロキノリン、３，４−メチレンジオキシフェニル）が含まれるが、これらに限定されない。

【0021】

「薬学的に許容される塩」という用語は、それが投与され、化合物の生物活性及び特性を破棄することがない有機体に、重篤な刺激を生じさせない化合物の塩を指す。いくつかの実施形態では、該塩は、化合物の酸付加塩である。薬学的な塩は、化合物と、ハロゲン化水素酸（例えば、塩酸又は臭化水素酸）、硫酸、硝酸、及びリン酸等の無機酸との反応によって得られる。薬学的な塩はまた、化合物と、例えば、ギ酸、酢酸、コハク酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、ニコチン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、又はナフタレンスルホン酸等の脂肪族又は芳香族カルボン酸もしくは脂肪族又は芳香族スルホン酸との反応によって得られる。医薬的な塩はまた、化合物と、アンモニウム塩、ナトリウム塩又はカリウム塩といったアルカリ金属塩、カルシウム塩又はマグネシウム塩といったアルカリ土類金属塩、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン、Ｃ_１〜Ｃ_７アルキルアミン、シクロヘキシルアミン、トリエタノールアミン、エチレンジアミン等の有機塩基の塩、並びにアルギニン及びリシンといったアミノ酸を有する塩等の塩を形成する塩基との反応によって得られる。

【0022】

本明細書に記載の、１つ又はそれ以上の不斉中心を有するいくつかの化合物では、絶対立体化学式が明確に示されていないのであれば、各中心は独立して、（Ｒ）体、又は（Ｓ）体、又はこれらの混合物のものであればよいと理解される。このように、本明細書にて提供される化合物は、エナンチオ異性的に純粋なものであるか、エナンチオ異性的に強化されたものであるか、ラセミ体混合物であるか、ジアステレオ異性的に純粋なものであるか、ジアステレオ異性的に強化されたものであるか、又は立体異性体混合物であればよい。さらに、本明細書に記載の、Ｅ又はＺとして定義される幾何異性体を生成する１つ又はそれ以上の二重結合を有するいくつかの化合物では、各二重結合は独立して、Ｅ、又はＺ、又はこれらの混合物であればよい。

【0023】

本明細書に開示の化合物は未充足原子価を有し、該原子価は、水素又はその同位元素、例えば水素１（軽水素）及び水素２（重水素）によって充足されるべきであると理解される。

【0024】

本明細書に記載の化合物は、同位体標識され得ると理解される。重水素等の同位元素での置換は、より優れた代謝的安定性による、例えば、インビボでの半減期の増大又は必要摂取量の減少といった、特定の治療上の利点をもたらす。化合物構造において表されている各化学元素は、該元素の同位元素のいずれかを含んでいてもよい。例えば、化合物構造において水素原子は、明らかに開示されているか、又は化合物中に存在していることが理解されている。化合物において水素原子が存在しているいずれかの位置で、水素原子は水素の同位元素であり得る。該水素の同位元素には水素１（軽水素）及び水素２（重水素）が含まれるが、これらに限定されない。このように、本明細書で参照される化合物は、特に明記しない限り、全ての潜在的な同位体形を含む。

【0025】

本明細書に記載の方法及び組み合わせは、結晶形（「多形」としても既知、その化合物と同じ元素組成であって、異なる結晶パッキング配列を含むもの）、非晶形相、塩、溶媒和物、及び水和物を含むと理解される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の化合物は、水、エタノール等の薬学的に許容される溶媒と共に、溶媒和物の形態で存在する。他の実施形態においては、本明細書に記載の化合物は、非溶媒和物の形態で存在する。溶媒和物は、化学量論的な、又は非化学量論的な量の溶媒を含有しており、水、エタノール等の薬学的に許容される溶媒での結晶化の過程において形成される。水和物は、溶媒が水の場合に形成され、アルコラートは、溶媒がアルコールの場合に形成される。さらに、本明細書において提供される化合物は、溶媒和物の形態だけでなく、非溶媒和物の形態でも存在する。通常、本明細書において提供される化合物及び方法の目的に対して、溶媒和物の形態は、非溶媒和物の形態と同等であると考えられる。

【0026】

数値範囲を提供する場合、上限及び下限、並びにその範囲における上限と下限との間の各介在値は、実施形態の範囲内に包含されると理解されるべきである。

【0027】

＜化合物＞
第１の局面において、式（Ｉ）で表される化合物、もしくは、その立体異性体、その薬学的に許容される塩、又はその溶媒和物が提供される。

【化3】

式中、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、及びＲ_４は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃｌ、−ＣＮ、及び−ＣＦ_３からなる群より選ばれ、
Ａは、Ｈ及びＣ_１−６アルキルからなる群より選ばれ、
Ｄは、−ＯＨ及び−Ｏ（Ｃ_１−６アルキル）からなる群より選ばれ、
Ｒ_５及びＲ_６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｆ、及びＣ_１−６アルキルからなる群より選ばれるか、もしくは、置換又は非置換のシクロアルキル環を一緒になって形成しており、
Ｒ_１２は、独立して、Ｃ_３−８シクロアルキル及び

【化4】

（ここで、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、及びＲ_１１は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、ＣＦ_３、Ｃ_１−６アルキル、アリール、ヘテロアリール、−Ｏ（アリール）、−Ｏ（ヘテロアリール）、−ＣＯ_２Ｈ、−ＣＯ_２（Ｃ_１−６アルキル）、−ＮＨＳＯ_２（Ｃ_１−６アルキル）、−ＮＨＳＯ_２（アリール）、−ＮＨＣＯＮＨ（Ｃ_１−６アルキル）、−ＮＨＣＯＮ（Ｃ_１−６アルキル）_２、−Ｎ（Ｃ_１−６アルキル）ＣＯＮＨ_２、−Ｎ（Ｃ_１−６アルキル）ＣＯＮＨ（Ｃ_１−６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−６アルキル）ＣＯＮ（Ｃ_１−６アルキル）_２、−ＳＯ_２（Ｃ_１−６アルキル）、−ＳＯ_２ＮＨ_２、−ＳＯ_２ＮＨ（Ｃ_１−６アルキル）、−ＳＯ_２Ｎ（Ｃ_１−６アルキル）_２、Ｃ_３−８シクロアルキル、及びＣ_３−８ヘテロシクロアルキルからなる群より選ばれる）からなる群より選ばれる。

【0028】

第１の局面の一実施形態において、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、及びＲ_４は、それぞれ独立して、水素及びＣｌからなる群より選ばれる。

【0029】

第１の局面の一実施形態において、Ｒ_５及びＲ_６は、置換又は非置換のシクロアルキル環を一緒になって形成している。

【0030】

第１の局面の一実施形態において、Ａは、Ｈである。

【0031】

第１の局面の一実施形態において、Ｄは、ＯＨである。

【0032】

第１の局面の一実施形態において、ＡはＨであり、ＤはＯＨである。

【0033】

第１の局面の一実施形態において、Ｒ_９は、アジリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、及びモルホリノリルからなる群より選ばれる。

【0034】

第１の局面の一実施形態において、Ｒ_９は、イソプロピル及びシクロプロピルからなる群より選ばれる。

【0035】

第１の局面の一実施形態において、式（Ｉａ）で表される化合物、もしくは、その立体異性体、その薬学的に許容される塩、又はその溶媒和物が提供される。

【化5】

式中、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、及びＲ_４は、それぞれ独立して、Ｈ及びＣｌからなる群より選ばれ、
Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_１０、及びＲ_１１は、それぞれ独立して、Ｈ及びハロゲンからなる群より選ばれ、
Ｒ_９は、独立して、Ｃ_３−８シクロアルキル及びＣ_３−８ヘテロシクロアルキルからなる群より選ばれる。

【0036】

第１の局面の一実施形態において、Ｒ_１及びＲ_４は、Ｃｌであり、Ｒ_２及びＲ_３は、Ｈである。

【0037】

第１の局面の一実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、

【化6】

【化7】

【化8】

からなる群より選ばれる化合物、もしくは、その立体異性体、その薬学的に許容される塩、そのエステル、又はその溶媒和物である。

【0038】

第１の局面の一実施形態において、化合物は、

【化9】

からなる群より選ばれる化合物、もしくは、その立体異性体、その薬学的に許容される塩、そのエステル、又はその溶媒和物である。

【0039】

第２の局面において、第１の局面のいずれかの実施形態又はそれ自身のいずれかの実施形態の化合物と、薬学的に許容される担体とからなる医薬組成物が提供される。

【0040】

第３の局面において、第１の局面のいずれかの実施形態又はそれ自身のいずれかの実施形態の化合物と、薬学的に許容される賦形剤とからなる医薬組成物が提供される。

【0041】

第４の局面において、第１の局面のいずれかの実施形態又はそれ自身のいずれかの実施形態の化合物と、少なくとも１つの追加の医薬活性剤とからなる医薬組成物が提供される。

【0042】

第５の局面において、癌を治療する方法が提供される。該方法は、第１の局面又はそのいずれかの実施形態の化合物を、有効量で、それを必要とする対象に投与することからなる。

【0043】

第５の局面の一実施形態において、対象は哺乳動物である。

【0044】

第５の局面の一実施形態において、対象はヒトである。

【0045】

第５の局面の一実施形態において、癌は、ユーイング肉腫、前立腺癌、膠芽細胞腫、急性骨髄性白血病、乳癌、頭部及び頸部癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌、並びに子宮癌からなる群より選ばれる。

【0046】

第６の局面において、腫瘍細胞を殺傷する、又は腫瘍細胞の増殖を阻害する方法が提供される。該方法は、細胞を、有効量の、第１の局面又はそのいずれかの実施形態の化合物に接触させることからなる。

【0047】

第６の局面の一実施形態において、細胞は哺乳動物のものである。

【0048】

第６の局面の一実施形態において、細胞はヒトのものである。

【0049】

第６の局面の一実施形態において、細胞はインビトロのものである。

【0050】

第６の局面の一実施形態において、細胞はインビボのものである。

【0051】

第６の局面の一実施形態において、細胞は癌細胞であり、該癌は、ユーイング肉腫、前立腺癌、膠芽細胞腫、急性骨髄性白血病、乳癌、頭部及び頸部癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌、並びに子宮癌からなる群より選ばれる。

【0052】

第７の局面において、細胞の増殖を阻害する方法が提供される。該方法において、細胞は、ＥＴＳ遺伝子を過剰発現させるか、又はＥＴＳ融合遺伝子からなる。該方法は、細胞を、有効量の、第１の局面又はそのいずれかの実施形態の化合物に接触させることからなる。

【0053】

第７の局面の一実施形態において、ＥＴＳ遺伝子又はＥＴＳ融合遺伝子は、ＦＬＩ１、ＥＲＧ、ＥＴＶ１、及びＥＴＶ４からなる群より選ばれる。

【0054】

第７の局面の一実施形態において、細胞は哺乳動物のものである。

【0055】

第７の局面の一実施形態において、細胞はヒトのものである。

【0056】

第７の局面の一実施形態において、細胞はインビトロのものである。

【0057】

第７の局面の一実施形態において、細胞はインビボのものである。

【0058】

第７の局面の一実施形態において、細胞は癌細胞であり、該癌は、ユーイング肉腫、前立腺癌、膠芽細胞腫、急性骨髄性白血病、乳癌、頭部及び頸部癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌、並びに子宮癌からなる群より選ばれる。

【0059】

＜合成方法＞

【化10】

本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物は、種々の方法にて調製される。本明細書では、式（Ｉ）の化合物を合成する通常のルートを示し、説明する。本明細書に示して説明するルートは単なる実例であり、いかなる場合でも、本請求の範囲を限定することを意味するものではないと解釈される。当業者によって、開示された合成方法の変更が可能であり、本明細書の開示に基づく代替ルートの考案も可能である。このような変更及び代替ルートは、全て本請求の範囲の範囲内である。

【0060】

置換基の存在により、小分子阻害剤は、薬学的に許容される塩の形であってもよい。本明細書において、「薬学的に許容される塩」は、広義の用語であり、当業者にとって通常かつ慣用的な意味である（特別な意味又はカスタマイズされた意味に限定されるべきではない）。また、薬学的に許容される非毒性の酸又は塩基で調製される塩を指すが、これに限定されない。適切な薬学的に許容される塩としては、アルミニウム及び亜鉛の塩、リチウム、ナトリウム、及びカリウムの塩等のアルカリ金属塩、カルシウム及びマグネシウムの塩等のアルカリ土類金属塩が例示される金属塩；リジン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）、プロカイン、及びトリスヒドロキシメチルアミノメタンの塩等が例示される有機塩；遊離酸及び遊離塩基の塩；硫酸塩、塩酸塩、及び臭化水素酸塩等が例示される無機塩；並びに；例えばＭｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘのような当業者に周知の情報源に記載され、現在広範な医薬用途に用いられる他の塩が含まれる。いずれかの好適な成分を選択し、本明細書でいう治療薬の塩を製造することが可能である。これらの塩は、非毒性で、所望の活性を実質上阻害しない。

【0061】

好適な実施形態に係る化合物は、異性体、ラセミ体、光学異性体、エナンチオマー、ジアステレオマー、互変異性体、及びシス／トランス配座異性体を含んでいてもよい。これらの異性体は全て、これらの混合物を含み、混合物も好適な実施形態の範囲内に含まれる。前記のとおり、好適な実施形態に係る化合物は、不斉中心を有していてもよい。例えば、これらの化合物が不斉炭素原子を含んでいるのであれば、これらの化合物は、エナンチオマー又はジアステレオ異性体の形か、これらの混合物、例えばラセミ体として存在してもよい。不斉炭素原子は、（Ｒ）体又は（Ｓ）体に存在しているか、もしくは（Ｒ）体及び（Ｓ）体の混合物に存在していてもよい。以下に、式（Ｉ）の化合物の異性体を示す。

【化11】

【化12】

【化13】

【化14】

【化15】

【化16】

【0062】

これらの化合物は、非晶形であってもよく、結晶形であってもよい。好適な実施形態に係る化合物の結晶形は、好適な実施形態に含まれる多形であってもよい。さらに、好適な実施形態に係るいくつかの化合物は、水又は他の有機溶媒とともに溶媒和物を形成していてもよい。このような溶媒和物は、同様に、好適な実施形態の範囲内に含まれる。

【0063】

＜特定の医薬組成物＞
一般に、好適な実施形態に係る阻害剤を、静脈内又は皮下の単位剤形で投与することが好ましいが、他の投与経路も考えられる。考えられる投与経路としては、経口、非経口、静脈内、及び皮下が含まれるが、これらに限定されない。好適な実施形態に係る阻害剤は、例えば経口投与等のための液体製剤に製剤化することができる。適切な剤形には、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等が含まれる。経口投与のための特に好適な単位剤形には、錠剤及びカプセル剤が含まれる。単位剤形は、１日１回投与するように構成されることが特に好ましいが、特定の実施形態において、１日２回又はそれ以上の回数で投与するように構成されることが望ましい場合もある。

【0064】

好適な実施形態に係る医薬組成物は、受容者の血液又は他の体液と等張であることが好ましい。組成物の等張性は、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコール、もしくは他の無機又は有機溶質によって得られる。塩化ナトリウムは特に好ましい。例えば、酢酸及びその塩、クエン酸及びその塩、ホウ酸及びその塩、並びにリン酸及びその塩等の緩衝剤を使用することができる。非経口用賦形剤には、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース及び塩化ナトリウム、乳酸リンゲル、又は不揮発性油が含まれる。静脈内用賦形剤には、流体及び栄養補充液、電解質補充液（例えば、リンゲルデキストロースに基づくもの）等が含まれる。

【0065】

医薬組成物の粘度は、薬学的に許容される増粘剤を使用して、選択されたレベルに維持することができる。メチルセルロースは、容易に入手可能かつ経済的に利用可能で、使い易いので好ましい。他の適切な増粘剤としては、例えば、キサンタンガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボマー等が含まれる。増粘剤の好適な濃度は、選択された増粘剤によって決定される。選択された粘度が得られるような量で使用することが好ましい。粘性組成物は、通常、このような増粘剤を添加することによって溶液で調製される。

【0066】

薬学的に許容される保存剤は、医薬組成物の貯蔵寿命を増長させるために使用することができる。例えば、パラベン、チメロサール、クロロブタノール、又は塩化ベンザルコニウムを含む種々の保存剤を使用できるが、ベンジルアルコールが適切である。選択された保存剤に応じて、多い量が望ましい場合も、少ない量が望ましい場合もあるが、保存剤の適切な濃度は、典型的に、組成物の総重量に基づいて約０．０２％〜約２％である。前記のごとき還元剤の使用は、製剤の良好な貯蔵寿命を維持するために有利である。

【0067】

好適な実施形態に係る阻害剤は、適切な担体、希釈剤、又は滅菌水、生理食塩水、グルコース等の賦形剤と混合されてもよく、所望の投与経路及び製剤に応じて、湿潤又は乳化剤、ｐＨ緩衝剤、ゲル化又は増粘剤、保存剤、香料、着色剤等の補助物質を含んでいてもよい。例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ；２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｊｕｎｅ １，２００３）、及び「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．；１８ｔｈ ａｎｄ １９ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎｓ（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ １９８５，ａｎｄ Ｊｕｎｅ １９９０，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）を参照する。このような製剤としては、錯化剤、金属イオン、ポリ酢酸、ポリグリコール酸、ヒドロゲル、デキストラン等の高分子化合物、リポソーム、マイクロエマルジョン、ミセル、単層又は多層ベシクル、赤血球ゴースト、もしくはスフェロプラストを含んでいてもよい。リポソーム製剤に適した脂質としては、モノグリセリド、ジグリセリド、スルファチド、リゾレシチン、リン脂質、サポニン、胆汁酸等が含まれるが、これらに限定されない。このような追加成分の存在は、物理的状態、溶解度、安定性、インビボ放出速度、及びインビボクリアランス速度に影響を与えることができるので、例えば、担体の特性が選択された投与経路に合わさるように、意図された用途に応じて選択される。

【0068】

経口投与の場合、医薬組成物は、錠剤、水性又は油性懸濁液、分散性粉末又は顆粒剤、エマルジョン、硬カプセル剤又は軟カプセル剤、シロップ剤、もしくはエリキシル剤として提供することができる。経口用組成物は、医薬組成物を製造するための当技術分野で既知の任意の方法に応じて調製することができ、甘味料、香料、着色剤、及び保存剤のうちの１つ又はそれ以上の添加剤を含んでもよい。水性懸濁剤は、水性懸濁剤の製造に適した賦形剤と混合される活性成分を含んでもよい。

【0069】

経口使用のための製剤は、活性成分が炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、又はカオリン等の不活性固体希釈剤と混合されている硬ゼラチンカプセル剤として提供されてもよく、軟ゼラチンカプセル剤として提供されてもよい。軟カプセル剤において、阻害剤は、水や、ピーナッツ油、オリーブ油、脂肪油、流動パラフィン、又は液体ポリエチレングリコール等の油媒体のような適切な液体に溶解又は懸濁させることができる。経口投与用の安定剤及びミクロスフェアを使用することができる。カプセル剤には、ゼラチンからなるプッシュフィットカプセル剤と、ゼラチン及びグリセロール又はソルビトール等の可塑剤からなる軟密閉カプセル剤とが含まれていてよい。プッシュフィットカプセル剤は、ラクトース等の充填剤、デンプン等のバインダー、及び／又は、タルクもしくはステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤、並びに任意に選択した安定剤と混合される活性成分を含んでいてもよい。

【0070】

錠剤は、素錠であってもよく、又は、崩壊及び消化管での吸収を遅らせることによって、長期間にわたって持続作用が提供されるように、既知の方法でコーティングされていてもよい。例えば、モノステアリン酸グリセリン等の時間遅延材料を使用することができる。錠剤等の固形の薬剤を投与する場合、固形の薬剤は典型的に、約０．００１重量％以上、約５０重量％以下の活性成分を含み、好ましくは、約０．００５重量％、０．０１重量％、０．０２重量％、０．０３重量％、０．０４重量％、０．０５重量％、０．０６重量％、０．０７重量％、０．０８重量％、０．０９重量％、０．１重量％、０．２重量％、０．３重量％、０．４重量％、０．５重量％、０．６重量％、０．７重量％、０．８重量％、０．９重量％、又は１重量％から、約２重量％、３重量％、４重量％、５重量％、６重量％、７重量％、８重量％、９重量％、１０重量％、１５重量％、２０重量％、２５重量％、３０重量％、３５重量％、４０重量％、又は４５重量％までの活性成分を含む。

【0071】

錠剤は、不活性物質を含む非毒性の薬学的に許容される賦形剤と混合される活性成分を含んでいてもよい。例えば、錠剤は、任意に１つ又はそれ以上の追加成分とともに、圧縮又は成形によって製造することができる。圧縮錠剤は、粉末又は顆粒等の自由流動形態の活性成分を、バインダー、潤滑剤、不活性希釈剤、界面活性剤、又は分散剤と任意に混合して、適当な機械で圧縮することによって製造することができる。成形錠剤は、不活性液体希釈剤に濡れた粉状阻害剤を混合して、適切な機械で成形することによって製造することができる。

【0072】

好適には、各錠剤又はカプセル剤は、約１ｍｇ以上、約１０００ｍｇ以下の好適な実施形態に係る阻害剤を含み、より好適には、約１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、又は１００ｍｇから、約１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、又は９００ｍgまでの好適な実施形態に係る阻害剤を含む。最も好適には、錠剤又はカプセル剤は、分割投与を可能にするための用量範囲で提供される。患者に適した投与量及び１日当たりの投与回数をこのように選択することができ、便利である。特定の実施形態において、２つ又はそれ以上の治療薬を併用して単一の錠剤又は他の剤形で投与する（例えば、併用療法において）ことが好ましいが、他の実施形態においては、別個の剤形で治療薬を提供することが好ましい。

【0073】

適切な不活性物質には、炭水化物、マンニトール、ラクトース、無水ラクトース、セルロース、スクロース、修飾デキストラン、及びデンプン等の希釈剤、又は、三リン酸カルシウム、リン酸カルシウム、リン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、炭酸マグネシウム、及び塩化ナトリウム等の無機塩類が含まれる。製剤には崩壊剤又は造粒剤が含まれていてもよく、崩壊剤又は造粒剤としては、例えば、コーンスターチ等のデンプン、アルギン酸、デンプングリコール酸ナトリウム、アンバーライト、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ウルトラミロペクチン、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、オレンジピール、酸カルボキシメチルセルロース、天然スポンジ及びベントナイト、不溶性陽イオン交換樹脂、寒天、カラヤゴム又はトラガカントゴム等の粉末ゴム、もしくは、アルギン酸又はその塩等が含まれる。

【0074】

硬い錠剤を形成するために、バインダーを使用することができる。バインダーとしては、アカシア、トラガカント、デンプン及びゼラチン、メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等の天然物由来の材料が含まれる。

【0075】

錠剤製剤には、例えば、ステアリン酸もしくはそのマグネシウム塩又はカルシウム塩、ポリテトラフルオロエチレン、流動パラフィン、植物油及びワックス、ラウリル硫酸ナトリウムス、ラウリル硫酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、デンプン、タルク、焼成シリカ、シリコアルミネート水和物等の潤滑剤を含むことができる。

【0076】

界面活性剤もまた使用することができ、界面活性剤としては、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム、及びジオクチルスルホン酸ナトリウム等の陰イオン界面活性剤、塩化ベンザルコニウム又は塩化ベンゼトニウム等の陽イオン界面活性剤、もしくは、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、モノステアリン酸グリセロール、ポリソルベート、ショ糖脂肪酸エステル、メチルセルロース、又はカルボキシメチルセルロース等の非イオン界面活性剤が含まれる。

【0077】

拡散機構又は浸出機構のいずれかにより放出を可能にする不活性マトリクスにアミホスチン又はその類似物が組み込まれている放出制御製剤を使用することができる。徐々に変性するマトリクスを、製剤に組み込むことができる。他の送達システムには、徐放、遅延放出、又は持続放出送達システムが含まれる。

【0078】

コーティングを使用することができ、コーティングとしては、例えば、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、プロビドン、及びポリエチレングリコール類等の非腸溶性材料、又は、フタル酸エステル等の腸溶性材料が含まれる。染料又は顔料を、識別のため、又は阻害剤の用量の異なる組み合わせを特徴づけるために添加することができる。

【0079】

液体形態で経口投与する場合、水、石油等の液体担体、ピーナッツ油、鉱油、大豆油、又はゴマ油等の動物性油もしくは植物性油もしくは合成油を、活性成分に添加することができる。また、生理食塩水溶液、デキストロース、又は他の糖溶液、もしくは、エチレングリコール、プロピレングリコール、又はポリエチレングリコール等のグリコール類は、適切な液体担体である。医薬組成物は、水中油型エマルジョンの形態であってもよい。油相は、オリーブ油又はラッカセイ油等の植物油、流動パラフィン等の鉱油、もしくはこれらの混合物であってもよい。適切な乳化剤としては、アカシアゴム及びトラガカントゴム等の天然ゴムと、大豆レシチン等の天然リン脂質と、モノオレイン酸ソルビタン等の、脂肪酸及び無水ヘキシトールに由来するエステル又は部分エステルと、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン等の、それらの部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物とが含まれる。エマルジョンは、甘味料及び香料を含んでいてもよい。

【0080】

また、肺送達を利用することができる。化合物は、吸入の間に肺に送達され、肺上皮層を透過して血流に達する。治療薬の肺送達のために設計された種々の機器を使用することができる。該機器としては、当業者に周知のネブライザー、定量吸入器、及び粉末吸入器が含まれるが、これらに限定されない。これらの機器には、化合物の投薬に適した製剤を使用する。典型的に、各製剤は、使用する機器の種類に応じて特定され、治療に有効な希釈剤、補助剤、及び／又は担体に加え、適切な噴射剤材料を使用することができる。

【0081】

化合物及び／又は他の任意の活性成分は、有利には、０．１μｍ以上、１０μｍ以下、より好適には約０．２μｍ、０．３μｍ、０．４μｍ、０．５μｍ、０．６μｍ、０．７μｍ、０．８μｍ、又は０．９μｍから、約１．０μｍ、１．５μｍ、２．０μｍ、２．５μｍ、３．０μｍ、３．５μｍ、４．０μｍ、４．５μｍ、５．０μｍ、５．５μｍ、６．０μｍ、６．５μｍ、７．０μｍ、７．５μｍ、８．０μｍ、８．５μｍ、９．０μｍ、又は９．５μｍまでの平均粒径を有する微粒子の形態で、肺送達のために調製される。阻害剤の肺送達のための、薬学的に許容される担体としては、トレハロース、マンニトール、キシリトール、スクロース、ラクトース、及びソルビトール等の炭水化物が含まれる。製剤に使用する他の成分は、ＤＰＰＣ、ＤＯＰＥ、ＤＳＰＣ、及びＤＯＰＣを含んでもよい。天然又は合成の界面活性剤を使用することができ、該界面活性剤としては、ポリエチレングリコールと、シクロデキストラン等のデキストランとが含まれる。セルロース及びセルロース誘導体と同様に、胆汁酸塩類及び他の関連するエンハンサー類、並びにアミノ酸類もまた使用することができる。リポソーム、マイクロカプセル、ミクロスフェア、包接錯体、及び他の種類の担体を使用することもできる。

【0082】

ジェット式又は超音波式のいずれかのネブライザーでの使用に適している医薬製剤は、典型的に、水に溶解又は懸濁される阻害剤を、約０．０１ｍｇ／ｍＬ以上、約１００ｍｇ／ｍＬ以下の、溶液における阻害剤の濃度で、好適には約０．１ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、６ｍｇ／ｍＬ、７ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ、９ｍｇ／ｍＬ、又は１０ｍｇ／ｍＬから、約１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、３５ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、４５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、５５ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、６５ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、８０ｍｇ／ｍＬ、８５ｍｇ／ｍＬ、又は９０ｍｇ／ｍＬまでの、溶液における阻害剤の濃度で含む。また、製剤は、緩衝液及び単糖を含んでいてもよい（例えば、タンパク質安定化及び浸透圧の調節のために）。ネブライザー製剤には、エアロゾルを形成する際の、溶液の噴霧化による阻害剤の表面誘起凝集を減少又は防止するために、界面活性剤が含まれていてもよい。

【0083】

定量吸入装置とともに使用するための製剤は、一般的に、界面活性剤の助けを借りて噴射剤に懸濁される活性成分を含有する微粉を含む。噴射剤は、クロロフルオロカーボン、ヒドロクロロフルオロカーボン、ヒドロフルオロカーボン、及び炭化水素等の従来の噴射剤を含んでいてもよい。好ましい噴射剤としては、トリクロロフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタノール、１，１，１，２−テトラフルオロエタン、及びこれらの組み合わせが含まれる。適切な界面活性剤としては、ソルビタントリオレート、大豆レシチン、及びオレイン酸が含まれる。

【0084】

粉末吸入装置から投薬するための製剤は、典型的に、阻害剤を含有するとともに、ラクトース、ソルビトール、スクロース、マンニトール、トレハロース、又はキシリトール等の充填剤を任意に含有する乾燥微粉砕粉末を含む。該乾燥微粉砕粉末は、装置からの粉末の分散を促進する量で、典型的に、製剤の約１重量％以上、約９９重量％以下、好適には製剤の約５重量％、１０重量％、１５重量％、２０重量％、２５重量％、３０重量％、３５重量％、４０重量％、４５重量％、又は５０重量％から、５５重量％、６０重量％、６５重量％、７０重量％、７５重量％、８０重量％、８５重量％、又は９０重量％までの量で含まれる。

【0085】

好適な実施形態に係る化合物は、静脈内、非経口、又は他の注射経路により投与される場合、発熱物質を含まない、非経口的に許容される水溶液又は油性懸濁液の形態であることが好ましい。懸濁液は、当技術分野で周知の方法にしたがって、適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を用いて調製することができる。適切なｐＨ、等張性、安定性等を有し、許容される水溶液の調製方法は、当業者に周知の範囲内にある。好適な注射用医薬組成物は、１，３−ブタンジオール、水、等張塩化ナトリウム溶液、リンゲル溶液、デキストロース溶液、デキストロース及び塩化ナトリウム溶液、乳酸リンゲル溶液等の等張賦形剤、又は当技術分野で周知の他の賦形剤を含むことが好ましい。さらに、滅菌不揮発性油は、従来の溶媒又は懸濁媒体として使用することができる。この目的のために、合成のモノグリセリド又はジグリセリドを含む任意の無菌性不揮発性油を使用することができる。さらに、オレイン酸等の脂肪酸を、同様に、注射用製剤の調製に使用することができる。医薬組成物は、安定剤、保存剤、緩衝液、抗酸化剤、又は当業者に周知の他の添加剤を含んでいてもよい。

【0086】

注射持続時間には、種々の要因に応じて調整することができ、数秒以内の間に投与される単回注射時間と、０．０５時間、０．１時間、０．２５時間、０．５時間、０．７５時間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、又は２４時間以上の持続静脈内投与時間とが含まれていてもよい。

【0087】

好適な実施形態に係る化合物は、医薬組成物によく見られる従来の補助成分を、それらの技術分野で慣用の方法、及び慣用のレベルでさらに使用することができる。したがって、例えば、組成物は、併用療法のために添加される相溶性のある薬学的活性物質（例えば、補助的抗菌剤、止痒剤、収斂剤、局所麻酔剤、抗炎症剤、還元剤、化学療法剤等）を含んでいてもよく、また、好適な実施形態に係る種々の剤形を物理的に調製するのに有用である特定の材料、例えば賦形剤、染料、増粘剤、安定剤、保存剤又は抗酸化剤等を含んでいてもよい。好適な実施形態に係る化合物と併用可能である抗癌剤は、ビンブラスチン及びビンクリスチン等のビンカアルカロイド；ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン等のアントラサイクリン；ビスアントレン及びミトキサントロン等のアントラセン；エトポシド及びテニポシド等のエピポドフィロトキシン；アクチノマイシンＤ、マイトマイシンＣ、ミトラマイシン、メトトレキサート、ドセタキセル、エトポシド（ＶＰ−１６）、パクリタキセル、及びアドリアマイシン等のその他の抗癌剤；並びに免疫抑制剤（例えば、シクロスポリンＡ、タクロリムス）を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される化合物、組成物、及び方法は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（ＨＤＡＣ）、オーロラキナーゼ阻害剤、脱メチル化剤、ナチュラルキラー細胞による免疫療法剤、ＩＧＦ−ＩＲ抗体、ユーイング抗原抗体、免疫抑制薬、及びヒドロキシウレアと併用されてもよい。ヒストンデアセチラーゼ阻害剤の例としては、ボリノスタット、ロミデプシン、パノビノスタット、バルプロ酸、ベリノスタット、モセチノスタット（ｍｏｃｅｔｉｎｏｓｔａｔ）、ギビノスタット（ｇｉｖｉｎｏｓｔａｔ）、及びトリコスタチンＡが含まれる。オーロラキナーゼ阻害剤の例としては、ＺＭ４４７４３９、ヘスペラジン（ｈｅｓｐｅｒａｄｉｎ）、及びＶＸ−６８０が含まれる。脱メチル化剤の例としては、５−アザシチジン、５−アザデオキシシチジン、及びプロカインが含まれる。免疫抑制薬の例としては、６−メルカプトプリン、及びアザチオプリンが含まれる。

【0088】

＜特定のキット＞
好適な実施形態に係る化合物は、キットの形で、医師又は他の医療専門家による投与に提供される。キットは、適切な医薬組成物における化合物の収納容器、及び対象に医薬組成物を投与するための使用説明を収容するパッケージである。また、キットは、例えば、本明細書に記載される肉腫の治療に現在使用されている化学療法薬等の１つ又はそれ以上の付加的治療薬を任意に含んでもよい。例えば、１つ又はそれ以上の付加的化学療法薬と組み合わせて、好適な実施形態に係る化合物が含まれる１つ又はそれ以上の組成物を含有するキットを提供することができる。また、好適な実施形態に係る阻害剤が含まれる医薬組成物と付加的治療薬とを分割するキットを提供することができる。キットは、順次又は連続投与のために、個別投与量の好ましい実施形態に係る化合物を含んでもよい。キットは、１つ以上の診断ツール及び使用説明を任意に含んでもよい。キットは、例えば注射器などの適切な送達デバイスを、阻害剤及び他の任意の治療薬を投与するための使用説明とともに含んでもよい。キットは、それに含まれる一部又は全ての治療薬の保管、再構成（必要な場合）、及び投与のための使用説明を任意に含んでもよい。キットは、対象への投与回数に相応する複数の容器を含んでもよい。

【0089】

＜使用方法＞
本明細書で提供されるいくつかの実施形態は、ユーイング肉腫ファミリー腫瘍（ＥＳＦＴ）を治療する方法に関する。ＥＳＦＴは、特有の融合タンパク質であるＥＷＳ−ＦＬＩ１を含む。ＥＳＦＴは、３歳〜４０歳の患者に影響を与え、ほとんどの場合１０代の患者に発生する。ＥＳＦＴの由来となる発生学的細胞型は不明であるにもかかわらず、腫瘍は骨に近接して成長する場合が多いが、軟組織塊として発生する可能性もある。転位性ＥＳＦＴを呈する患者の７５％〜８０％は、高用量の化学療法にもかかわらず、５年以内に死亡することになる一方、局所腫瘍を呈する患者のうち４０％を超える患者は、再発性疾患を発症するとともに、これらの患者の大部分は、ＥＳＦＴで死亡することになる（Ｇｒｉｅｒ ＨＥ，Ｋｒａｉｌｏ ＭＤ，Ｔａｒｂｅｌｌ ＮＪ，ｅｔ ａｌ．Ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ ａｎｄ ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ ｔｏ ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ ａｎｄ ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ ｎｅｕｒｏｅｃｔｏｄｅｒｍａｌ ｔｕｍｏｒ ｏｆ ｂｏｎｅ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００３；３４８（８）：６９４−７０１）。これらの患者の生存率は、用量強化化学治療（ｄｏｓｅ−ｉｎｔｅｎｓｉｆｙｉｎｇｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）後でも、過去２０年間に改善していない。生存率を改善し、治療関連死亡率を減少させるために、好適な実施形態で提供されるような、ＥＳＦＴ患者を治療するための新規標的戦略を使用することができる。

【0090】

９５％の腫瘍において、２２番染色体に存在するＥＷＳ遺伝子（ユーイング肉腫）の中央エクソンとｅｔｓファミリー遺伝子の中央エクソンとの間、すなわち、１１番染色体に存在するＦＬＩ１（フレンド白血病統合体）との間 ｔ（１１;２２）又は２１番染色体に存在するＥＲＧとの間 ｔ（２１;２２）、で発生する転座によって、ＥＳＦＴは特徴付けられる。ＥＷＳ−ＦＬＩ１融合転写物は、２つのプライマリドメインを有する５５ｋＤａタンパク質（約６８ｋＤの電気泳動移動度）をコードする。ＥＷＳドメインは、強力な転写活性化因子であり、一方、ＦＬＩ１ドメインは、高度に保存されたｅｔｓＤＮＡ結合ドメインを含有する（Ｍａｙ ＷＡ，Ｌｅｓｓｎｉｃｋ ＳＬ，Ｂｒａｕｎ ＢＳ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ ＥＷＳ／ＦＬＩ−１ ｆｕｓｉｏｎ ｇｅｎｅ ｅｎｃｏｄｅｓ ａ ｍｏｒｅ ｐｏｔｅｎｔ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ａｎｄ ｉｓ ａ ｍｏｒｅ ｐｏｗｅｒｆｕｌ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｅｎｅ ｔｈａｎ ＦＬＩ−１．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １９９３；１３（１２）：７３９３−８）。得られたＥＷＳ−ＦＬＩ１融合タンパク質は、異常な転写因子として作用する。マウス線維芽細胞のＥＷＳ−ＦＬＩ１形質転換には、ＥＷＳ及びＦＬＩ１双方の機能ドメインが無傷であることが必要である（Ｍａｙ ＷＡ，Ｇｉｓｈｉｚｋｙ ＭＬ，Ｌｅｓｓｎｉｃｋ ＳＬ，ｅｔ ａｌ．Ｅｗｉｎｇ ｓａｒｃｏｍａ １１；２２ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｅｓ ａ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｔｈａｔ ｒｅｑｕｉｒｅｓ ｔｈｅ ＤＮＡ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ ｅｎｃｏｄｅｄ ｂｙ ＦＬＩ１ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９９３；９０（１２）：５７５２−６）。

【0091】

ＥＷＳ−ＦＬＩ１は、腫瘍細胞のみで発現され、ＥＳＦＴ細胞株の増殖を維持するために必要とされる点において、優れた治療標的である。アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）（Ｔｏｒｅｔｓｋｙ ＪＡ，Ｃｏｎｎｅｌｌ Ｙ，Ｎｅｃｋｅｒｓ Ｌ，Ｂｈａｔ ＮＫ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＥＷＳ−ＦＬＩ−１ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｏｎｃｏｌ １９９７；３１（１−２）：９−１６；Ｔａｎａｋａ Ｋ，Ｉｗａｋｕｍａ Ｔ，Ｈａｒｉｍａｙａ Ｋ，Ｓａｔｏ Ｈ，Ｉｗａｍｏｔｏ Ｙ．ＥＷＳ−Ｆｌｉ１ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ ａｎｄ ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ ｎｅｕｒｏｅｃｔｏｄｅｒｍａｌ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １９９７；９９（２）：２３９−４７）、又は低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）（Ｏｕｃｈｉｄａ Ｍ，Ｏｈｎｏ Ｔ，Ｆｕｊｉｍｕｒａ Ｙ，Ｒａｏ ＶＮ，Ｒｅｄｄｙ ＥＳ．Ｌｏｓｓ ｏｆ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＲＮＡ ｔｏ ＥＷＳ−ｆｕｓｉｏｎ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １９９５；１１（６）：１０４９−５４；Ｍａｋｓｉｍｅｎｋｏ Ａ，Ｍａｌｖｙ Ｃ，Ｌａｍｂｅｒｔ Ｇ，ｅｔ ａｌ．Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｔａｒｇｅｔｅｄ ａｇａｉｎｓｔ ａ ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｏｎｃｏｇｅｎｅ ａｒｅ ｍａｄｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｂｙ ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ．Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ ２００３；２０（１０）：１５６５−７；Ｋｏｖａｒ Ｈ，Ａｒｙｅｅ ＤＮ，Ｊｕｇ Ｇ，ｅｔ ａｌ．ＥＷＳ／ＦＬＩ−１ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ ｉｎｄｕｃｅ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｗｉｎｇ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ １９９６；７（４）：４２９−３７）の使用によってＥＷＳ−ＦＬＩ１の発現量が減少し、ヌードマウスにおいてＥＳＦＴ細胞株の増殖減少及び腫瘍の退縮が誘発される。ナノテクノロジーの近年の進歩により、ｓｉＲＮＡの送達及び制御放出は改善されたが、ヒトにおいて、アンチセンスＯＤＮ又はｓｉＲＮＡでＥＷＳ−ＦＬＩ１を減少させることは、現在の技術では不可能である（Ｍａｋｓｉｍｅｎｋｏ Ａ，Ｍａｌｖｙ Ｃ，Ｌａｍｂｅｒｔ Ｇ，ｅｔ ａｌ．Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｔａｒｇｅｔｅｄ ａｇａｉｎｓｔ ａ ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｏｎｃｏｇｅｎｅ ａｒｅ ｍａｄｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｂｙ ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ．Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ ２００３；２０（１０）：１５６５−７；Ｌａｍｂｅｒｔ Ｇ，Ｂｅｒｔｒａｎｄ ＪＲ，Ｆａｔｔａｌ Ｅ，ｅｔ ａｌ．ＥＷＳ ｆｌｉ−１ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｎａｎｏｃａｐｓｕｌｅｓ ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｅｗｉｎｇ ｓａｒｃｏｍａ−ｒｅｌａｔｅｄ ｔｕｍｏｒ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ２０００；２７９（２）：４０１−６）。ＥＷＳ−ＦＬＩ１標的の興味深いアプローチの１つでは、Ａｒａ−Ｃによる現在の臨床試験につながる、ＥＷＳ−ＦＬＩ１を減少させるｓｉＲＮＡと小分子ライブラリとの間の比較発現が利用されていた（Ｓｔｅｇｍａｉｅｒ Ｋ，Ｗｏｎｇ ＪＳ，Ｒｏｓｓ ＫＮ，ｅｔ ａｌ．Ｓｉｇｎａｔｕｒｅ−ｂａｓｅｄ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ｃｙｔｏｓｉｎｅ ａｒａｂｉｎｏｓｉｄｅ ａｓ ａｎ ＥＷＳ／ＦＬＩ ｍｏｄｕｌａｔｏｒ ｉｎ Ｅｗｉｎｇ ｓａｒｃｏｍａ．ＰＬｏＳ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２００７；４（４）：ｅ１２２）。Ａｒａ−Ｃを同定するこの方法では、ドキソルビシン及びピューロマイシンがＥＷＳ−ＦＬＩ１レベルを減少させることも示された。ドキソルビシンは、現在ＥＳＦＴ患者の標準的治療として使用されているが、生存率が許容範囲にあるとは言えなかった（Ｇｒｉｅｒ ＨＥ，Ｋｒａｉｌｏ ＭＤ，Ｔａｒｂｅｌｌ ＮＪ，ｅｔ ａｌ．Ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ ａｎｄ ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ ｔｏ ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ ａｎｄ ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ ｎｅｕｒｏｅｃｔｏｄｅｒｍａｌ ｔｕｍｏｒ ｏｆ ｂｏｎｅ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００３；３４８（８）：６９４−７０１）。ＥＳＦＴ患者におけるＡｒａ−Ｃの使用は、現在、第二相試験で評価されている。これは必要な臨床突破口を示すと期待されている一方、ＥＷＳ−ＦＬＩ１の小分子標的の重要性を確実に示している。好適な実施形態は、重要なタンパク質パートナーからＥＷＳ−ＦＬＩ１を破壊する小分子タンパク質間相互作用阻害剤（ＳＭＰＰＩＩ）を提供することによって、ＥＷＳ−ＦＬＩ１の腫瘍特異性及びより正確な標的を達成する。

【0092】

ＥＷＳ−ＦＬＩ１は、腫瘍細胞のみで発現するので、重要な治療標的であるが、その腫瘍特異性がん遺伝子を標的とする能力は、これまでは充分に発揮されていない。小分子の開発に向けた課題の１つは、ＥＷＳ−ＦＬＩ１が、標的治療に重要であると考えられる任意の既知の酵素ドメインを欠いていることである。さらに、ＥＷＳ−ＦＬＩ１は、構造情報に基づく医薬品設計に利用できるような強固な構造が見られないことを示す変性タンパク質である（Ｕｒｅｎ Ａ，Ｔｃｈｅｒｋａｓｓｋａｙａ Ｏ，Ｔｏｒｅｔｓｋｙ ＪＡ．Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＥＷＳ−ＦＬＩ１ ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００４；４３（４２）：１３５７９−８９）。実際には、ＥＷＳ−ＦＬＩ１の変性特質は、その転写調節にとって重要である（Ｎｇ ＫＰ，Ｐｏｔｉｋｙａｎ Ｇ，Ｓａｖｅｎｅ ＲＯ，Ｄｅｎｎｙ ＣＴ，Ｕｖｅｒｓｋｙ ＶＮ，Ｌｅｅ ＫＡ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ａｒｏｍａｔｉｃ ｓｉｄｅ ｃｈａｉｎｓ ｗｉｔｈｉｎ ａ ｄｉｓｏｒｄｅｒｅｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｒｅ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＥＷＳ ｆａｍｉｌｙ ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ２００７；１０４（２）：４７９−８４）。変性タンパク質は、特に、それらの生化学的変性特性のため、小分子タンパク質間相互作用阻害剤のより魅力的な標的と考えられる（Ｃｈｅｎｇ Ｙ，ＬｅＧａｌｌ Ｔ，Ｏｌｄｆｉｅｌｄ ＣＪ，ｅｔ ａｌ．Ｒａｔｉｏｎａｌ ｄｒｕｇ ｄｅｓｉｇｎ ｖｉａ ｉｎｔｒｉｎｓｉｃａｌｌｙ ｄｉｓｏｒｄｅｒｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００６；２４（１０）：４３５−４２）。

【0093】

ＥＷＳ−ＦＬＩ１は、インビトロ及びインビボでＲＮＡヘリカーゼＡを結合する。ＥＷＳ−ＦＬＩ１のタンパク質間相互作用は、その発癌性に寄与する可能性があると考えられるので、新規タンパク質は、ＥＷＳ−ＦＬＩ１と直接に相互作用し、かつＥＷＳ−ＦＬＩ１を機能的に調節すると考えられる。転写活性のある組み換えＥＷＳ−ＦＬＩ１（Ｕｒｅｎ Ａ，Ｔｃｈｅｒｋａｓｓｋａｙａ Ｏ，Ｔｏｒｅｔｓｋｙ ＪＡ．Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＥＷＳ−ＦＬＩ１ ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００４；４３（４２）：１３５７９−８９）は、市販のペプチドファージディスプレイライブラリをスクリーニングするための標的として使用されている。ＥＷＳ−ＦＬＩ１と特異的に結合している２８個の新規ペプチドは、ファージシークエンシングから同定される。これらのペプチドと相同のヒトタンパク質を検索するための国立生物工学情報センターのデータベースは、ヒトＲＮＡヘリカーゼＡのａａ８２３−８３２と相同のペプチドを同定した（ＲＨＡ、遺伝子バンク登録番号Ａ４７３６３）（Ｔｏｒｅｔｓｋｙ ＪＡ，Ｅｒｋｉｚａｎ Ｖ，Ｌｅｖｅｎｓｏｎ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ＥＷＳ−ＦＬＩ１ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｓ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｂｙ ＲＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００６；６６（１１）：５５７４−８１）。

【0094】

ＥＷＳ−ＦＬＩ１がＥＳＦＴ細胞に非常に特異的である一方、ＥＷＳ及びＲＨＡは、遍在的に発現される。ＥＷＳ−ＦＬＩ１は腫瘍のみで発現されるとともに、ＲＨＡとの相互作用点が特有であるので、ＥＷＳ−ＦＬＩ１とＲＨＡとの間の領域は、特異性のある分子治療薬の標的とされる。治療薬、すなわち、小分子タンパク質間相互作用阻害剤は、ＥＷＳ−ＦＬＩ１機能を阻害するように本明細書中で提供される。

【0095】

ＥＳＦＴを含むほとんどの転座融合タンパク質肉腫は、予後不良の前兆となる。特有で重要な融合タンパク質ＥＷＳ−ＦＬＩ１につながる染色体転座ｔ（１１；２２）は、完全な癌標的である。他の多くの肉腫は、同様の転座変異体を共有する（Ｈｅｌｍａｎ ＬＪ，Ｍｅｌｔｚｅｒ Ｐ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｓａｒｃｏｍａ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ ２００３；３（９）：６８５−９４の表２）。

【0096】

ＥＷＳ−ＦＬＩ１転座は、膵臓の充実性偽乳頭腫瘍（ｓｏｌｉｄ ｐｓｅｕｄｏｐａｐｉｌｌａｒｙｎｅｏｐｌａｓｍｓ）で報告されている（Ｍａｉｔｒａ Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔ（１１；２２）（ｑ２４；ｑ１２）ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ＥＷＳ−ＦＬＩ−１ ｆｕｓｉｏｎ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ ｉｎ ａ ｃａｓｅ ｏｆ ｓｏｌｉｄ ｐｓｅｕｄｏｐａｐｉｌｌａｒｙ ｔｕｍｏｒ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｎｃｒｅａｓ．Ｐｅｄｉａｔｒ Ｄｅｖ Ｐａｔｈｏｌ ２０００；３：６０３−６０５）が、全ての充実性偽乳頭腫瘍におけるＥＷＳ−ＦＬＩ１の役割は、まだ解明されていない（Ｋａｔｈａｒｉｎａ Ｔｉｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｏｌｉｄ ｐｓｅｕｄｏｐａｐｉｌｌａｒｙ ｎｅｏｐｌａｓｍｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｎｃｒｅａｓ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＦＬＩ−１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｂｕｔ ｎｏｔ ｗｉｔｈ ＥＷＳ／ＦＬＩ−１ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ）。

【0097】

ＥＷＳ又はＦＬＩ１のホモログ（相同物）は、広範囲の肉腫及び白血病で発生する転座のパートナーである。ＥＷＳ、もしくはそのホモログであるＴＬＳ又はＦＵＳは、明細胞肉腫、粘液性脂肪肉腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、軟骨肉腫、及び急性骨髄性白血病の染色体転座に関与する。ＦＬＩ１は、遺伝子のｅｔｓファミリーに属する。ＦＬＩ１のホモログであるＥＲＧは、約１０％のユーイング肉腫及び２０％の急性骨髄性白血病で転座する。これによって、ＥＷＳ−ＦＬＩ１は、多数の患者に影響する疾患群（転座パートナーによって関連付けられる）に影響を与える可能性のあるモデルシステムとして役立つことが示唆される（Ｕｒｅｎ Ａ．，Ｔｃｈｅｒｋａｓｓｋａｙａ Ｏ．ａｎｄ Ｔｏｒｅｔｓｋｙ Ｊ．Ａ．Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＥＷＳ−ＦＬＩ１ ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４３（４２）１３５７９−８９（２００４））。

【0098】

また、ＥＲＧは、ＴＭＰＲＳＳ２：ＥＲＧ融合が疾患進行のリスクを定義できる特異的な分子サブタイプを示唆する前立腺がんにおいても、転座することがある（Ｆ．Ｄｅｍｉｃｈｅｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，ＴＭＰＲＳＳ２：ＥＲＧ ｇｅｎｅ ｆｕｓｉｏｎ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｌｅｔｈａｌ ｃａｎｃｅｒ ｉｎ ａ ｗａｔｃｈｆｕｌ ｗａｉｔｉｎｇ ｃｏｈｏｒｔ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２００７）２６，４５９６−４５９９）。ＥＷＳ又はＦＬＩ１ファミリーメンバーの転座が認められる他の疾患は、前立腺癌、膠芽細胞腫、急性骨髄性白血病、乳癌、頭部及び頸部癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌、並びに子宮癌を含む（Ｊａｎｋｎｅｃｈｔ，Ｒａｌｆ；Ｓｈｉｎ，Ｓｏｏｋ，ａｎｄ Ｏｈ，Ｓａｎｇｐｈｉｌ，ＥＴＶ１，４ ａｎｄ ５：Ａｎ Ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ Ｓｕｂｆａｍｉｌｙ ｏｆ ＥＴＳ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒｓ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １８２６（１），１−１２（２０１２））。

【0099】

したがって、好適な実施形態に係る治療薬は、他の多くの腫瘍に適用する可能性がある。さらに広くは、最も困難な白血病のいくつかもまた、混合系統白血病遺伝子（ＭＬＬ，１１ｑ２３）に関与する転座発生融合タンパク質を有し、発明者らの研究は、非常に治療抵抗性のある癌グループのためのパラダイムとして役立つ（Ｐｕｉ ＣＨ，Ｃｈｅｓｓｅｌｌｓ ＪＭ，Ｃａｍｉｔｔａ Ｂ，ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ ｉｎ ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｗｉｔｈ １１ｑ２３ ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔｓ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ ２００３；１７（４）：７００−６．）。このように、本発明に係る実施形態は、転座が発生した癌を含む。転座融合遺伝子を、表１に示す。

【0100】

【表1】

【0101】

多数の疾患が、ＥＴＳ遺伝子の過剰発現又はＥＴＳ遺伝子融合、すなわち、ＥＴＳ遺伝子を含む遺伝子転座からなる。このようなＥＴＳ遺伝子の例には、ＦＬＩ１、ＥＲＧ、ＥＴＶ１、及びＥＴＶ４が含まれる。融合遺伝子の例には、ＥＷＳ−ＦＬＩ、ＴＭＰＲＳＳ２−ＥＲＧが含まれる。１つ又はそれ以上のＥＴＳ遺伝子ファミリーメンバーの過剰発現及び／又は再編成が見られる数種の癌を、表１Ａに示す。

【0102】

【表2】

【0103】

＜適応＞
本明細書で提供される特定の化合物、組成物、及び方法を、例えば表１に示されるような転座遺伝子融合からなる腫瘍又は腫瘍細胞、例えば、ユーイング肉腫、前立腺癌、膠芽細胞腫、急性骨髄性白血病、乳癌、頭部及び頸部癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌、及び子宮癌といった、多数の疾患の治療のために使用することができる。本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態には、細胞の増殖を阻害する方法が含まれる。いくつかの実施形態において、該細胞はＥＴＳ遺伝子を過剰発現する。いくつかの実施形態において、過剰発現したＥＴＳ遺伝子には、ＦＬＩ１、ＥＲＧ、ＥＴＶ１、又はＥＴＶ４が含まれる。いくつかの実施形態において、該細胞はＥＴＳ融合遺伝子からなる。いくつかの実施形態において、該ＥＴＳ融合遺伝子には、ＦＬＩ１、ＥＲＧ、ＥＴＶ１、及びＥＴＶ４等のＥＴＳ遺伝子が含まれる。

【実施例】

【0104】

＜式（Ｉ）の化合物の調製＞

【化17】

【0105】

式（Ｉ）の化合物を、前記合成スキームにしたがって調製した。メタノール（５ｍＬ）中、ジエチルアミン（１０滴）の存在下で、式（II）のケトン（４．０当量）を式（III）のイサチン誘導体（１．０当量）と縮合させ、混合物を室温で２４時間撹拌した。ジクロロメタン／メタノールを溶離液として用いたフラッシュクロマトグラフィーにて、反応混合物を濃縮及び精製し、純物質を得た。メタノールを用いた再結晶によって、さらに精製を行った。以下のとおり、ケトン及びイサチン誘導体における各置換基を選択し、得られた式（Ｉ）の化合物を各々実施例１〜２６とした。Ｖａｒｉａｎ−４００スペクトロメーター（４００ＭＨｚ）を用い、実施例１〜２６の各化合物について、^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを測定した。化学シフトは、内部標準物質としてのテトラメチルシランからのｐｐｍダウンフィールドにて得られ、カップリング定数（Ｊ値）は、ヘルツ（Ｈｚ）にて得られた。

【0106】

メタノール／塩化メチレン（４／１）混合物又は純メタノール中で異性体混合物を溶解させることにより、キラル分離を行い、ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＡカラム（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、粒子サイズ５μｍ）を用いた超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）にて分離を行い、メタノール／ＣＯ_２（５０／５０）混合物を用いて溶出させた。真空下で溶媒を除去し、純エナンチオマーを得た。

【0107】

いくつかの実施形態において、以下の合成スキームにしたがって化合物を調製することができる。

【化18】

【0108】

これらのスキームにおいて、ケトン（４．０当量）及び触媒量のジエチルアミン（１０滴）は、メタノール（５ｍＬ）中の置換イサチン（１．０当量）溶液に添加される。混合物は、出発物質（置換イサチン）が完全になくなるまで、室温で撹拌される。結果生じた溶液は濃縮され、フラッシュクロマトグラフィーに供され、ヘキサン／酢酸エチルで溶出されて、定量的収率で純物質が得られる。ヘキサン／酢酸エチルを用いた再結晶によって、さらに精製が行われる。

【0109】

前記スキームによって合成される化合物の例には、４，７−ジクロロ−３−ヒドロキシ−３−［２−（４−メトキシフェニル−２−オキソエチル）］−１，３−ジヒドロインドール−２−オンが含まれる。
白色固体
融点：１４９〜１５１℃
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）： d １０．９３（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），７．２６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），６．９８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），６．８６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），６．３９（ｓ，１Ｈ），４．３１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１８．０Ｈｚ），３．８０（ｓ，３Ｈ），３．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１８．０Ｈｚ）

【化19】

【0110】

いくつかの実施形態において、以下の合成スキームにしたがって化合物を調製することができる。

【化20】

【0111】

このような実施形態において、触媒量のジエチルアミンの存在下で、適切なアセトフェノンと４，７−ジクロロイサチンとを縮合させ、定量的収率で所望の化合物を調製した。合成例には以下のスキームが含まれる。

【化21】

【0112】

チッ素ガスライン、オーバーヘッドメカニカル攪拌機及び温度プローブを備えた２Ｌ容量の三つ首丸底フラスコに、４，７−ジクロロイサチン（３０．０５ｇ、１３９．１ｍｍｏｌ、１．０当量、Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ ロットＮｏ．１０１７３５５９）及びメタノール（４５０ｍＬ、１５体積）を投入した。ジエチルアミン（３．２５ｇ、０．３２当量、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ ロットＮｏ．ＳＨＢＤ５３１３Ｖ）を、３分間にわたって添加した（スラリーは濃赤色になる）。非常に僅かな温度上昇（１７．５℃から１８．８℃へ）が観測された。その後、プラスチック漏斗から１−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］エタノン（２）（４４．３ｇ、１．９５当量、ＡｒｋＰｈａｒｍ ロットＮｏ．００００１９７−１３０７１７０００）を添加し、漏斗をメタノール（７５ｍＬ、２．５体積）で濯いだ。反応温度が１５．１℃へ低下するのが観測された。数分間の撹拌により、未溶解の粒子を少し含む濃赤色溶液が観察された。溶液を大気温度で撹拌し、工程内管理（ＩＰＣ）のために、ＨＰＬＣによって定期的にサンプリングした。反応の２３時間後、シリンジから追加のジエチルアミン（１．４２ｇ、０．１４当量）を添加し、大気温度での撹拌を続けた。４０．５時間後、軽いスラリーが生成した。合計４．４７当量のアセトフェノン（２）に対して、固体（２）（５４．１ｇ、２．３８当量、ＡｒｋＰｈａｒｍ ロットＮｏ．００００１９７−１３０７１７０００及び３．２ｇ、０．１４当量、ＴＣＩ ロットＮｏ．ＧＫ０１−ＢＲＡＨ）を部分的に添加した。反応の８８時間後、ＨＰＬＣによるＩＰＣで、反応混合物中に存在するイサチン（１）は１％未満のＡＵＣであることが示された。重い沈殿物が生成した。４．５日後、反応混合物を減圧下で濃縮し（水浴＜４０℃）、その後、高真空下で約８４ｇの固体混合物（ロットＮｏ．ＢＩＯ−Ｗ−２２−１１）を得た。ジクロロメタン（３８５ｍＬ）及びメタノール（１４０ｍＬ）の混合物中で固体を溶解させ、１００ｇのシリカゲルに吸収させた。減圧下で溶媒を除去し、フラッシュクロマトグラフィー精製のために、乾燥生成物／シリカの混合物を、シリカゲル（１ｋｇ、ヘプタンにてプレパック）を含むカラムへ入れた。ヘプタン中の１０％酢酸エチルで溶出を開始し、１００％酢酸エチルまで勾配させた後、酢酸エチル中の１０％メタノールに変更した。５００ｍＬのフラクションを２Ｌまで回収した。フラクションを含む生成物（沈殿を開始している）を合わせて濃縮し、約１Ｌにした。結果生じた沈殿物を濾過して取り除き、酢酸エチル／メタノール（比率７５／２５、２００ｍＬ）中で再スラリー化させ、濾過し、メタノールで洗浄して、化合物の第１収穫物を得た。第１濾過物を濃縮して体積を減少させ、メタノールを添加し、化合物の第２収穫物を沈殿させた。両収穫物の単離からの濾過物を合わせて、濃縮して体積を減少させ、２５ｍＬのメタノール中に溶解させ、結果生じた固体を濾過して化合物の第３収穫物を得た。３つ全ての収穫物を、高真空下、大気温度で１日間、４０℃で４日間乾燥させた。合計量は４０．０３ｇで、化合物に対する収率７６％に相当した（精製によって未回収又は溶媒容量）。固体は、生成色（微淡黄色乃至桃色の陰影あり）である。

【0113】

他の合成例には、以下のスキームが含まれる。

【化22】

【0114】

チッ素ガスライン、オーバーヘッドメカニカル攪拌機及び温度プローブを備えた２５０ｍＬ容量の三つ首丸底フラスコに、４，７−ジクロロイサチン（４．２６ｇ、１９．７ｍｍｏｌ、１当量、Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ ロットＮｏ．１０１７３５５９）及びメタノール（７０ｍＬ、１６．４体積）を投入した。ジエチルアミン（０．４３ｇ、０．３０当量、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ ロットＮｏ．ＳＨＢＤ５３１３Ｖ）を、シリンジから１分間にわたって添加した（スラリーは濃赤色になる）。１５分間にわたって、プラスチック漏斗から１−［４−（メチルアミノ）フェニル］エタノン（３）（１１．４ｇ、３．９当量、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ ロットＮｏ．０１１２９ＨＨＶ）を部分的に添加した。漏斗をメタノール（２×１５ｍＬ、７．０体積）で濯いだ。反応系を大気温度（約１８〜２０℃）で撹拌し、工程内管理（ＩＰＣ）のために、ＨＰＬＣによって定期的にサンプリングした。反応の４０時間後、シリンジから追加のジエチルアミン（０．１６ｇ、０．１１当量）を反応系に添加し、大気温度での撹拌を続けた。６４時間後、軽いスラリーが生成した。シリンジから追加のジエチルアミン（０．１３ｇ、０．０９当量）を反応系に添加し、大気温度での撹拌を続けた。反応の９２時間後、ＨＰＬＣによるＩＰＣで、反応混合物中に存在するイサチン（１）は２．１％のＡＵＣであることが示された。シリンジから追加のジエチルアミン（０．０７ｇ、０．０５当量）を反応系に添加し、合計０．５５当量の塩基として、週末にかけて大気温度での撹拌を続けた。合計７日間の後、反応系を減圧下で濃縮し（水浴＜４０℃）、ジクロロメタン（４５０ｍＬ）及びメタノール（５０ｍＬ）の混合物中、３０℃で固体残留物を溶解させ、２０ｇ超のシリカゲルに吸収させた。ＲｅｄｉＳｅｐディスポーザブルフラッシュ ２２０ｇシリカゲルカラム（カタログＮｏ．６９−２２０３−４２２）を備えたＣｏｍｂｉｆｌａｓｈ（登録商標） Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ（登録商標） ＸＬシステムにおいて、精製を行った。残留した出発物質（３）の溶出は、ジクロロメタン（約２０カラム体積）にて行い、一方、生成物ＴＫ−２０２は、ジクロロメタン中の１０％メタノールで溶出させた。フラクションを含む生成物（沈殿を開始している）について、２つの異なるロットを合わせ、減圧下で部分的に濃縮した。結果生じたスラリーを濾過し、固体塊をメタノールで洗浄して、２つのフラクションを得た。これらのフラクションを、高真空下、大気温度で２４時間、次いで５０度で２４時間乾燥し、ロットＮｏ．ＢＩＯ−Ｗ−３０−１７及びロットＮｏ．ＢＩＯ−Ｗ−３０−１８の生成物をえた。両結晶体からの濾過物を合わせ、溶出のために、ジクロロメタンからジクロロメタン中の５％メタノールまでの勾配を用い、第２のクロマトグラフィー精製（４０ｇ ＲｅｄｉＳｅｐゴールドカラム、カタログＮｏ．６９−２２０３−３４７）に供した。フラクションを含む生成物（ＨＰＬＣによる９９％ＡＵＣよりも高い純度）を合わせ、２時間にわたって生成物を沈殿させた。固体を濾過して取り除き、メタノールで洗浄し、高真空下、５０℃で２４時間乾燥して、ロットＮｏ．ＢＩＯＷ−３０−１９の生成物をえた。ＨＰＬＣによる約９５％ＡＵＣの純度の生成物を含むフラクションの第２のセットを合わせ、固体を濾過して取り除き、ジクロロメタン中で再溶解させ、２０％メタノールを添加して、一晩にわたって沈殿させた。沈殿したＴＫ−２０２を濾過し、メタノールで洗浄した後、高真空下、５０℃で２４時間乾燥して、ロットＮｏ．ＢＩＯＷ−３０−１６の生成物をえた。合計量は５．９９ｇで、化合物に対する収率８３％に相当した。固体は、生成色（微淡桃色乃至黄褐色の陰影あり）である。

【0115】

４，７−ジクロロ−３−ヒドロキシ−３−（２−（４−（メチルスルフォニル）フェニル）−２−オキソエチル）インドリン−２−オン（実施例１）
生成色固体
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）： d ３．２８（ｓ，３Ｈ），３．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），４．４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），６．５３（ｓ，１Ｈ），６．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．３２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），８．０５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），８．１７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），１１．０４（ｓ，１Ｈ）

【0116】

３−（２−（４−（アジリジン−１−イル）フェニル）−２−オキソエチル）−４，７−ジクロロ−３−ヒドロキシインドリン−２−オン（実施例２）

【化23】

【0117】

１５ｍＬのメタノール中、４，７−ジクロロインドリン−２，３−ジオン（Ａ）（３００ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ）に、１−（４−（アジリジン−１−イル）フェニル）エタノン（Ｂ）（０．９ｇ、５．５ｍｍｏｌ）及び１０滴のジエチルアミン（２）を添加した。反応系を５０℃で２４時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（０〜５％メタノール／ＣＨ_２Ｃｌ_２）にて精製して、生成色の固体を得た。

【0118】

３−（２−（４−（アジリジン−１−イル）フェニル）−２−オキソエチル）−４，７−ジクロロ−３−ヒドロキシインドリン−２−オン（実施例２）
生成色固体
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）： d ２．１６（ｓ，４Ｈ），３．６４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），４．３２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），６．４１（ｓ，１Ｈ），６．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．０５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．８０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），１０．９５（ｓ，１Ｈ）

【0119】

４，７−ジクロロ−３−ヒドロキシ−３−（２−（４−イソプロピルフェニル）−２−オキソエチル）インドリン−２−オン（実施例３）
生成色固体
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）： d １．２１（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝４Ｈｚ），２．９５（ｍ，１Ｈ），３．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），４．３９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），６．４５（ｓ，１Ｈ），６．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．３８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．８５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），１０．９８（ｓ，１Ｈ）

【0120】

４，７−ジクロロ−３−（１−（４−（ジメチルアミノ）フェニル）−１−オキソプロパン−２−イル）−３−ヒドロキシインドリン−２−オン（実施例４）
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）： d １．４８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），３．００（ｓ，６Ｈ），４．７８（ｍ，１Ｈ），６．３５（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），６．７６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．１７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．６９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），１０．７４（ｓ，１Ｈ）

【0121】

４，７−ジクロロ−３−（２−（４−シクロプロピルフェニル）−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシインドリン−２−オン（実施例７）

【化24】

【0122】

１５ｍＬのメタノール中、４，７−ジクロロインドリン−２，３−ジオン（Ａ）（３００ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ）に、１−（４−シクロプロピルフェニル）エタノン（Ｂ）（０．９ｇ、５．５ｍｍｏｌ）及び１０滴のジエチルアミン（２）を添加した。反応系を５０℃で２４時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（０〜５％メタノール／ＣＨ_２Ｃｌ_２）にて精製して、生成色の固体を得た。

【0123】

４，７−ジクロロ−３−（２−（４−シクロプロピルフェニル）−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシインドリン−２−オン（実施例７）
生成色固体
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）： d ０．７６（ｍ，２Ｈ），１．０６（ｍ，２Ｈ），２．０（ｍ，１Ｈ），３．６５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），４．３５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），６．４３（ｓ，１Ｈ），６．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．１９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．７９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），１０．９７（ｓ，１Ｈ）

【0124】

３−（２−（４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル）−２−オキソエチル）−４，７−ジクロロ−３−ヒドロキシインドリン−２−オン（実施例８）
生成色固体
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）： d ３．７２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），４．４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），６．４７（ｓ，１Ｈ），６．６２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４Ｈｚ），６．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．３１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．８４，（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４Ｈ），７．９９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），８．０６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），８．６６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４Ｈｚ），１０．９８（ｓ，１Ｈ）

【0125】

４，７−ジクロロ−３−ヒドロキシ−３−（２−オキソ−２−（４−（ピロリジン−１−イル）フェニル）エチル）インドリン−２−オン（実施例１０）

【化25】

【0126】

８００ｍＬのメタノール中、４，７−ジクロロインドリン−２，３−ジオン（Ａ）（１２．５ｇ、０．０６ｍｏｌ）に、１−（４−（ピロリジン−１−イル）フェニル）エタノン（Ｂ）（４５ｇ、０．２４ｍｏｌ）及び０．５ｍＬのジエチルアミン（２）を添加した。反応系を室温で２４時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（０〜５％メタノール／ＣＨ_２Ｃｌ_２）にて精製して、茶色の固体１３．５ｇを得た。これを、酢酸エチル／ヘキサンを用いたフラッシュクロマトグラフィーにて再度精製し、生成色の固体１１．５ｇを得た。同じスケールでの反応を繰り返し行い、別の生成物１１．５ｇを得た。生成物の２つのバッチを合わせて、メタノールから再結晶させて、生成色の固体２０．５ｇを得た。

【0127】

４，７−ジクロロ−３−ヒドロキシ−３−（２−オキソ−２−（４−（ピロリジン−１−イル）フェニル）エチル）インドリン−２−オン（実施例１０）
生成色固体
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）： d １．９６（ｍ，４Ｈ），３．３０（ｍ，４Ｈ），３．６５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），４．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），６．３４（ｓ，１Ｈ），６．５３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），６．８８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．２８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．７２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），１０．９７（ｓ，１Ｈ）

【0128】

キラル分離を以下の条件にて行った。
次の条件による予備検討方法
ＲｅｇｉｓＣｅｌｌカラム Ｌ：２５０ｍｍ，ＩＳ：５０ｍｍ，粒子径：５μｍ、移動相：メタノール／ＣＯ_２，比率：３５／６５、検出波長：２５４ｎｍ、フロー速度：３２５ｇ／ｍｉｎ、共溶媒フロー速度：１１３．７５ｍｌ／ｍｉｎ、溶解度：メタノール１０００ｍＬ中１９．７２ｇ，濃度：０．０２０ｇ／ｍｌ、注入容量：２５．００ｍｌ，総量：０．５００ｇ／ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ、収量（＋）：９．７３ｇ，旋光度：＋２４７（２０℃）、収量（−）：９．２６ｇ

【0129】

４−（２−（４，７−ジクロロ−３−ヒドロキシ−２−オキソインドリン−３−イル）アセチル）ベンゼンスルホンアミド（実施例１１）
生成色固体
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）： d ３．７８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），４．４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），６．５１（ｓ，１Ｈ），６．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．３１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．５６（ｓ，２Ｈ），７．９１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），８．１１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），１０．９８（ｓ，１Ｈ）

【0130】

４，７−ジクロロ−３−（２−（３−フルオロ−４−（ピロリジン−１−イル）フェニル）−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシインドリン−２−オン（実施例１２）
生成色固体
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）： d １．９１（ｍ，４Ｈ），３．４６（ｍ，４Ｈ），３．５７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），４．２７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），６．３６（ｓ，１Ｈ），６．７１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝４Ｈｚ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．４６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４Ｈｚ），７．６４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），１１．０１（ｓ，１Ｈ）

【0131】

３−（２−（４−（アゼチジン−１−イル）フェニル）−２−オキソエチル）−４，７−ジクロロ−３−ヒドロキシインドリン−２−オン（実施例１３）

【化26】

【0132】

１５ｍＬのメタノール中、４，７−ジクロロインドリン−２，３−ジオン（Ａ）（３００ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ）に、１−（４−（アゼチジン−１−イル）フェニル）エタン−１−オン（Ｂ）（９７２ｍｇ、５．５ｍｍｏｌ）及び数滴のジエチルアミン（２）を添加した。反応系を室温で２４時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（０〜５％メタノール／ＣＨ_２Ｃｌ_２）にて精製して、生成色の固体を得た。

【0133】

３−（２−（４−（アゼチジン−１−イル）フェニル）−２−オキソエチル）−４，７−ジクロロ−３−ヒドロキシインドリン−２−オン（実施例１３）
生成色固体
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）： d ２．３２（ｍ，２Ｈ），３．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），３．９５（ｍ，４Ｈ），４．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），６．３５（ｓ，１Ｈ），６．３６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），６．８７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．２８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．７３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），１０．８９（ｓ，１Ｈ）

【0134】

４，７−ジクロロ−３−ヒドロキシ−３−（２−（４−メトキシシクロヘキシル）−２−オキソエチル）インドリン−２−オン（実施例１４）
生成色固体
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）： d １．２４（ｍ，４Ｈ），１．９２（ｍ，２Ｈ），２．０８（ｍ，２Ｈ），２．３２（ｍ，１Ｈ），３．０６（ｍ，１Ｈ），３．２６（ｓ，３Ｈ），３．３３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），３．６９（ｓ，１Ｈ），３．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），６．９１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．２０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．６１（ｓ，１Ｈ）

【0135】

４，７−ジクロロ−３−ヒドロキシ−３−（２−（４−メトキシビシクロ［２．２．２］オクタン−１−イル）−２−オキソエチル）インドリン−２−オン（実施例１５）
生成色固体
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）： d １．５９（ｍ，１２Ｈ），３．１６（ｓ，３Ｈ），３．２２（ｄ，Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），３．５８（ｓ，１Ｈ），４．１４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），６．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．２３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．６７（ｓ，１Ｈ）

【0136】

４，７−ジクロロ−３−（２−（４−（ジメチルアミノ）ビシクロ［２．２．２］オクタン−１−イル）−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシインドリン−２−オン（実施例１６）
生成色固体
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）： d １．５９（ｍ，１２Ｈ），２．５（ｓ，３Ｈ），３．１８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），３．８５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），６．３１（ｓ，１Ｈ），６．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），１０．９５（ｓ，１Ｈ）

【0137】

４，７−ジクロロ−３−（２−（４−シクロプロピル−３−フルオロフェニル）−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシインドリン−２−オン（実施例１７）

【化27】

【0138】

１５ｍＬのメタノール中、４，７−ジクロロインドリン−２，３−ジオン（Ａ）（２６１ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）に、１−（４−シクロプロピル−３−フルオロフェニル）エタノン（Ｂ）（２８０ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ）及び１０滴のジエチルアミン（２）を添加した。反応系を５０℃で２４時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（０〜５％メタノール／ＣＨ_２Ｃｌ_２）にて精製して、生成色の固体を得た。

【0139】

４，７−ジクロロ−３−（２−（４−シクロプロピル−３−フルオロフェニル）−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシインドリン−２−オン（実施例１７）
生成色固体
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）： d ０．８３（ｍ，２Ｈ），１．０８（ｍ，２Ｈ），２．１１（ｍ，１Ｈ），３．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），４．３４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），６．４３（ｓ，１Ｈ），６．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．１１（ｍ，１Ｈ），７．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．６０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），１０．９６（ｓ，１Ｈ）

【0140】

前記と実質同様の条件にてキラル分離を行った。
ＬＣスクリーニング カラム：ＡＤ−Ｈ，２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ，ヘキサン／エタノール（６５／３５），１．５ｍｌ／ｍｉｎ，注入容量：１０．０μｌ，圧力：１０２．９ｂａｒ、ピーク１ リテンションタイム：５．４０ｍｉｎ，幅：０．１７１ｍｉｎ，面積：４５０２．２１，面積％：５０．０８、ピーク２ リテンションタイム：７．２３ｍｉｎ，幅：０．２３９ｍｉｎ，面積：４４８８．４３，面積％：４９．９２

【0141】

４，７−ジクロロ−３−（２−（４−シクロプロピル−２−フルオロフェニル）−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシインドリン−２−オン（実施例１８）

【化28】

【0142】

１５ｍＬのメタノール中、４，７−ジクロロインドリン−２，３−ジオン（Ａ）（２６１ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）に、１−（４−シクロプロピル−２−フルオロフェニル）エタノン（Ｂ）（２８０ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ）及び１０滴のジエチルアミン（２）を添加した。反応系を５０℃で２４時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（０〜５％メタノール／ＣＨ_２Ｃｌ_２）にて精製して、生成色の固体を得た。

【0143】

４，７−ジクロロ−３−（２−（４−シクロプロピル−２−フルオロフェニル）−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシインドリン−２−オン（実施例１８）
生成色固体
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）： d ０．８２（ｍ，２Ｈ），１．０７（ｍ，２Ｈ），２．０１（ｍ，１Ｈ），３．６６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），４．２６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），６．４４（ｓ，１Ｈ），６．９１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．０１（ｍ，２Ｈ），７．３１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．５７（ｍ，１Ｈ），１０．９６（ｓ，１Ｈ）

【0144】

前記と実質同様の条件にてキラル分離を行った。
ＬＣスクリーニング カラム：ＲｅｇｉｓＣｅｌｌ，２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ，ヘキサン／ＩＰＡ（８０／２０），１．５ｍｌ／ｍｉｎ，注入容量：２．０μｌ，圧力：５１．５ｂａｒ、ピーク１ リテンションタイム：５．１６ｍｉｎ，幅：０．２３８ｍｉｎ，面積：３７１６．２０，面積％：４９．７８、ピーク２ リテンションタイム：６．４９ｍｉｎ，幅：０．３２４ｍｉｎ，面積：３７４９．５５，面積％：５０．２２

【0145】

４−クロロ−７−フルオロ−３−ヒドロキシ−３−（２−（４−メトキシフェニル）−２−オキソエチル）インドリン−２−オン（実施例１９）
生成色固体
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）： d ３．６３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），３．８４（ｓ，３Ｈ），４．３６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），６．３８（ｓ，１Ｈ），６．８８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．０２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．１６（ｍ，１Ｈ），７．８９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），１１．０１（ｓ，１Ｈ）

【0146】

４，７−ジクロロ−３−ヒドロキシ−３−（２−（４−モルホリノフェニル）−２−オキソエチル）インドリン−２−オン（実施例２０）
生成色固体
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）： d ３．２８（ｍ，４Ｈ），３．５３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），３．７１（ｍ，４Ｈ），４．３３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），６．３７（ｓ，１Ｈ），６．８７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），６．９７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．７７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），１０．９５（ｓ，１Ｈ）

【0147】

４，７−ジクロロ−３−ヒドロキシ−３−（２−オキソ−２−（ピリジン−４−イル）エチル）インドリン−２−オン（実施例２１）
生成色固体
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）： d ３．７８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），４．３９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），６．５３（ｓ，１Ｈ），６．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．３２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．７９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝４Ｈｚ），８．８０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝４Ｈｚ），１１．０３（ｓ，１Ｈ）

【0148】

４，７−ジクロロ−３−ヒドロキシ−３−（２−オキソ−２−（ピリジン−３−イル）エチル）インドリン−２−オン（実施例２２）
生成色固体
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）： d ３．７８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），４．３９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），６．５０（ｓ，１Ｈ），６．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．５７（ｍ，１Ｈ），８．２８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４Ｈｚ），８．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４Ｈｚ），９．０９（ｓ，１Ｈ），１１．０３（ｓ，１Ｈ）

【0149】

４，７−ジクロロ−３−ヒドロキシ−３−（２−オキソ−２−（ピリジン−２−イル）エチル）インドリン−２−オン（実施例２３）
生成色固体
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）： d ３．７８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），４．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），６．５０（ｓ，１Ｈ），６．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４Ｈｚ），７．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４Ｈｚ），７．９８（ｍ，１Ｈ），８．７６（ｓ，１Ｈ），１１．０１（ｓ，１Ｈ）

【0150】

４−（２−（４，７−ジクロロ−３−ヒドロキシ−２−オキソインドリン−３−イル）アセチル）ベンズアミド（実施例２４）
生成色固体
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）： d ３．７４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），４．４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），６．４９（ｓ，１Ｈ），６．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．３１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．５７（ｓ，１Ｈ），７．９５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．９７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），８．１０（ｓ，１Ｈ），１１．０１（ｓ，１Ｈ）

【0151】

４，７−ジクロロ−３−ヒドロキシ−３−（２−（４−ヒドロキシフェニル）−２−オキソエチル）インドリン−２−オン（実施例２５）
生成色固体
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）： d ３．６０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），４．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），６．３９（ｓ，１Ｈ），６．８２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），６．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．８０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），１０．４５（ｓ，１Ｈ），１０．９３（ｓ，１Ｈ）

【0152】

４，７−ジクロロ−３−（２−（３，４−ジフルオロフェニル）−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシインドリン−２−オン（実施例２６）
生成色固体
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）： d ３．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），４．３７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），６．４８（ｓ，１Ｈ），６．９１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．５６（ｍ，１Ｈ），７．９６（ｍ，１Ｈ），８．０１（ｍ，１Ｈ），１１．０１（ｓ，１Ｈ）

【0153】

＜化合物の生物活性＞
表２に示す特定化合物の生物活性を確認した。

【0154】

【表3】

【表4】

【表5】

【表6】

【表7】

【表8】

【表9】

【表10】

【表11】

【表12】

【表13】

【0155】

＜化合物の活性＞
ＣＣＫ−８キット（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ；Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を用いた修飾テトラゾリウム塩アッセイにより、ヒト腫瘍細胞増殖の阻害を測定した。腫瘍細胞（５０００〜７５００／ウェル）を９６ウェルプレートに播種し、４〜５時間にわたって接着させた。化合物を段階的に希釈し、０．０２〜５μＭの濃度で３種添加した。ＤＭＳＯをビヒクルコントロールとして含ませた。化合物の存在下、細胞を３日間インキュベートした。インキュベーション後、各ウェルにＣＣＫ−８試薬を添加し、２〜４時間インキュベートした。波長４５０ｎｍにおける分光光度測定により、生細胞を定量した。以下のとおり、各サンプルの生存率（％）をＡ４５０値から算出した。
生存率（％）＝（サンプルのＡ４５０値／ＤＮＳＯ処理細胞のＡ４５０値×１００）
細胞生存率を５０％阻害した濃度をＩＣ_５０と定義した。ＳＫＥＳ細胞（ユーイング肉腫細胞株）を用いて、特定化合物のＩＣ_５０活性を判定した。以下の表３に結果を纏める。以下の表４に示す細胞株を用いて、特定化合物のＩＣ_５０活性を判定した。

【0156】

【表14】

【表15】

【0157】

特定化合物のＩＣ_５０について、結果を以下に纏める。
化合物１：
ＳＫＥＳ：Ｃ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物２：
ＳＫＥＳ：Ｂ； Ａ４５７３：Ｂ； ＴＣ７１：Ｂ； ＬＮＣａｐ：Ｂ； ＰＣ３：Ａ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｂ； ＭＣＦ７：Ａ； ＢｘＰＣ３：Ｂ； 及び ＰＡＮＣ１：Ａ
化合物３：
ＳＫＥＳ：Ｃ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物４：
ＳＫＥＳ：Ａ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物５：
ＳＫＥＳ：Ｃ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物６：
ＳＫＥＳ：Ｃ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物７：
ＳＫＥＳ：Ｃ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物８：
ＳＫＥＳ：Ｂ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物９：
ＳＫＥＳ：Ａ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物１０：
ＳＫＥＳ：Ａ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物１１：
ＳＫＥＳ：Ｂ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物１２：
ＳＫＥＳ：Ｃ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物１３：
ＳＫＥＳ：Ａ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物１４：
ＳＫＥＳ：Ｂ； Ａ４５７３：Ｂ； ＴＣ７１：Ｂ； ＬＮＣａｐ：Ｂ； ＰＣ３：Ａ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｂ； ＭＣＦ７：Ａ； ＢｘＰＣ３：Ｂ； 及び ＰＡＮＣ１：Ａ
化合物１５：
ＳＫＥＳ：Ｃ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物１６：
ＳＫＥＳ：Ａ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物１７：
ＳＫＥＳ：Ａ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物１８：
ＳＫＥＳ：Ｂ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物１９：
ＳＫＥＳ：Ｃ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物２０：
ＳＫＥＳ：Ａ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物２１：
ＳＫＥＳ：Ａ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物２２：
ＳＫＥＳ：Ｂ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物２３：
ＳＫＥＳ：Ａ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物２４：
ＳＫＥＳ：Ａ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物２５：
ＳＫＥＳ：Ａ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物２６：
ＳＫＥＳ：Ｂ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物２７：
ＳＫＥＳ：Ｂ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物２８：
ＳＫＥＳ：Ａ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物２９：
ＳＫＥＳ：Ａ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物３０：
ＳＫＥＳ：Ａ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物３１：
ＳＫＥＳ：Ａ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物３２：
ＳＫＥＳ：Ａ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物３３：
ＳＫＥＳ：Ａ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物３４：
ＳＫＥＳ：Ａ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物３５：
ＳＫＥＳ：Ａ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物３６：
ＳＫＥＳ：Ｃ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ．
化合物３７：
ＳＫＥＳ：Ｃ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物３８：
ＳＫＥＳ：Ｃ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ
化合物３９：
ＳＫＥＳ：Ｃ； Ａ４５７３：Ｃ； ＴＣ７１：Ｃ； ＬＮＣａｐ：Ｃ； ＰＣ３：Ｃ； ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：Ｃ； ＭＣＦ７：Ｃ； ＢｘＰＣ３：Ｃ； 及び ＰＡＮＣ１：Ｃ

【0158】

前記結果において、ＡはＩＣ_５０＞５μＭ、ＢはＩＣ_５０＜５μＭ、Ｃは判定なしである。異種移植研究において、Ａ４５７３腫瘍細胞をマウスにインプラントした。マウスを特定化合物で処置した（１日２回経口投与）。種々の時間でＡ４５７３腫瘍の平均体積を測定した。ビヒクルコントロールと比較して、化合物１４は、１００ｍｇ／ｋｇの１日２回投与で、５７％の腫瘍増殖阻害（ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ、ＴＧＩ）を示したが、化合物２は、２００ｍｇ／ｋｇの１日２回投与で、ＴＧＩを示さなかった。同様のラット異種移植研究において、各々ビヒクルコントロールと比較して、化合物２は、８７％のＴＧＩを示し、化合物１４は、５３％のＴＧＩを示した。

【0159】

＜特定化合物の代謝活性＞
ＮＡＤＰＨ再生系及び標準プロトコルを用い、特定化合物の代謝活性を肝ミクロソームでアッセイした。要約すると、単離したヒト、ラット、イヌ、又はマウスの肝ミクロソームで化合物をインキュベートした。９６ウェルプレートにおいて、ＮＡＤＰＨ再生系（β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸、イソクエン酸、及びイソクエン酸脱水素酵素）の添加によって反応を開始させた。５分、１０分、２０分、３０分、及び６０分の時点で、冷アクリロニトリルで反応系を急冷し、振盪し、４０００ｒｐｍで２０分間にわたって遠心分離した。検出された分析化合物を含む上澄みをＬＣ／ＭＳ／ＭＳを用いて解析した。条件は次のとおりである。
ＬＣ：Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＬＣ ２０−ＡＤ
ＭＳ：ＡＰＩ４０００
オートサンプラー：ＣＴＣ ＰＡＬ
使用カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＳ−ＲＨ １５０＊４．６ｍｍ，５μｍ Ｐａｒｔ Ｎｏ．ＡＳＲＨＣＤ−ＫＫ００８、及び、Ａｃｅ ５ Ｐｈｅｎｙｌ，５０×２．１ｍｍ，Ｐａｒｔ Ｎｏ．ＡＣＥ−１２５−０５０２
データ解析：下記一次速度論の方程式を用いてＴ_１／２及びＣＬを算出
Ｃ_ｔ＝Ｃ_０＊ｅ^−ｋｔ
Ｃ_ｔ＝（１／２）＊Ｃ_０
Ｔ_１／２＝（ｌｎ２）／ｋ＝０．６９３／ｋ
ＣＬ＝Ｖ_ｄ＊ｋ
Ｖ_ｄ＝２ｍＬ／ｍｇ
以下の表５〜８に結果を纏める。表５〜８において、Ｒ^２は速度定数を決定するための線形回帰の相関係数、Ｔ_１／２は半減期、ＮＣＦは補因子なしである。

【0160】

【表16】

【表17】

【表18】

【表19】

【0161】

＜特定化合物の代謝安定性＞
特定化合物について、ヒト肝ミクロソーム及びヒト肝細胞で、半減期及びクリアランス率をアッセイした。５％ＣＯ_２で、９５％に加湿されたインキュベーターにおいて、ヒト肝ミクロソーム（又はヒト肝細胞）の存在下で化合物をインキュベートし、反応を開始させた。各時点（０分、５分、１５分、３０分、６０分、及び９０分）で反応を停止させ、ボルテックス及び遠心分離を行った。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析まで上澄みを凍結させた。以下の表９及び表１０に、各々ヒト肝ミクロソーム及びヒト肝細胞についての結果を纏める。

【0162】

【表20】

【表21】

【0163】

別の研究において、種々の種からの肝細胞における化合物の代謝を検討した。肝細胞を化合物に接触させて、化合物の半減期を決定した。以下の表１１に結果を纏める。

【0164】

【表22】

【0165】

特定の化合物をヒト肝ミクロソーム（ＨＬＭ）及びヒト肝細胞でアッセイし、代謝物を検出した。要約すると、あるＴＡ濃度（例えば、１μＭ）で２回、代謝安定性を試験した。ＮＡＤＰＨあり及びなしのＨＬＭ（０．５ｍｇ／ｍＬ）において０分、５分、１０分、２０分、３０分、及び４５分の時点で、並びに、肝細胞（０．５×１０^６細胞／ｍＬ）において０分、１５分、３０分、６０分、１２０分、及び２４０分の時点で、試験物の経年損失を評価した。ポジティブコントロール（ジクロフェナク）及びネガティブコントロール（煮沸ＨＬＭ又は熱失活肝細胞）を含めた。ジクロフェナクは、試験物と同じインキュベーション時間でモニターした。一方、ネガティブコントロールについては、ＨＬＭにおいて０分及び４５分で測定し、肝細胞において０分及び２４０分で測定した。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを用いた代謝物同定のために、インキュベーションを保存して用いた。時間＝０のピーク面積比を１００％として、親（プリカーサ）分析物／内部標準ピーク面積比を残留薬剤のパーセンテージに換算した。残留ｌｏｇパーセンテージとインキュベーション時間との関係からの線形回帰の傾き（−ｋ）を、線形回帰の当て嵌めによって決定した。個々のｌｏｇパーセンテージ残留時間プロフィールから、平均半減期及び固有クリアランスをレポートした。信憑性のある試験物に対してＵＨＰＬＣ−ＨＲＭＳ実験又はＵＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳ実験を行い、可能な共通フラグメントイオンについてチェックした。０分、１０分、２０分、及び４５分アリコートからの、並びに、０分、６０分、１２０分、及び２４０分肝細胞インキュベーションアリコートからの選択されたミクロソームサンプルを、予備代謝物同定に使用した。代謝物を、これらの質量分析ピーク面積に基づいて纏めた。以下の表１２、表１３、及び表１４に、各々化合物１、１２、及び７についての結果を纏める。

【0166】

【表23】

【表24】

【表25】

【0167】

＜特定化合物の薬物動態＞
インビボにおける静脈内投与及び経口投与での特定化合物について、特定の薬物動態パラメータを決定した。要約すると、化合物を処方し、急速静脈内投与、持続静脈内投与、又は経口投与を行った。２４時間にわたって複数時点で血液を採取し、プラズマを得た。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを用い、親（母体）についてプラズマを解析した。特定化合物について、特定パラメータを２回得た。以下の表１５に、ラット又はイヌにおける化合物１４の持続投与試験の結果を纏める。以下の表１６に、ＢＡＬＢ／ｃマウス又はＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおける試験の結果を纏める。

【0168】

【表26】

【表27】

【0169】

本開示は、図面及び前述の記載で詳しく例証及び説明されるが、このような例証及び説明は、実例又は例示にすぎず、限定的に解釈されるべきではない。本開示は、開示された実施形態に限定されるものではない。特許請求された開示を実施する際に、開示された実施形態の変形は、図面、本開示、及び添付された特許請求の範囲への研究から、当業者によって理解及び達成され得る。

【0170】

本明細書で引用した全ての参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。参考として組み込まれる刊行物及び特許又は特許出願は、本明細書に含まれる開示と矛盾する場合、本明細書は任意のこのような矛盾する素材に優先することを意図している。

【0171】

別段の定めがない限り、すべての用語（技術用語及び科学用語を含む）は、当業者に通常かつ慣用の意味を与えるものであり、本明細書で明白に定義しない限り、特別な又はカスタマイズされた意味に限定されるものではない。本開示の特定の特徴又は様態を説明する場合に特定の専門用語の使用は、専門用語が関連する本開示の特徴又は様態の任意の特定の特性を含むように制限されるために、本明細書中でその専門用語が再定義される意味に解釈されるべきではないことを注意すべきである。

【0172】

数値範囲を提供する場合、上限及び下限、並びにその範囲における上限と下限との間の各介在値は、実施形態の範囲内に包含されると理解されるべきである。

【0173】

本願に使用される用語及び表現、並びにそれらの変形は、特に添付の特許請求の範囲において、特に明記しない限り、制限に対立する開放式として解釈されるべきである。前述の実施例に示すように、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は「含むが、これらに限らない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ,ｗｉｔｈｏｕｔ ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎ）」、「含むが、これらに限定されない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｂｕｔ ｎｏｔ ｌｉｍｉｔｅｄ ｔｏ）」などの意味に解釈されるべきである。本明細書で使用される用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、又は「特徴づけられる（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ）」と同義で、包含的又は開放式であり、追加、記載されていない要素又は方法ステップを除外しない。用語「有する（ｈａｖｉｎｇ）」は、「少なくとも有する」と解釈されるべきである。用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」は、「含むが、これらに限定されない（ｉｎｃｌｕｄｅｓ ｂｕｔ ｉｓ ｎｏｔ ｌｉｍｉｔｅｄ ｔｏ）」と解釈されるべきである。用語「（実施）例（ｅｘａｍｐｌｅ）」は、討論されるアイテムの典型的な事例を提供するために使用され、それらの完全又は限定的なリストではない。「既知の（ｋｎｏｗｎ）」、「慣用の（ｎｏｒｍａｌ）」、「標準の（ｓｔａｎｄａｒｄ）」などの形容詞、及び類似した意味の用語は、所定の期間に記載されるアイテム、又は所定の時点で利用可能なアイテムに限定されるものとして解釈されるべきではないが、その代わりに、現在又は将来の任意の時点で入手可能又は知られる、既知、慣用又は標準の技術を包含すると解釈されるべきである。「好ましい（ｐｒｅｆｅｒａｂｌｙ）」、「好ましい（ｐｒｅｆｅｒｒｅｄ）」、「所望（ｄｅｓｉｒｅｄ）」、又は「所望（ｄｅｓｉｒａｂｌｅ）」などの用語、及び類似した意味の言葉の使用は、特定の特徴が本発明の構造や機能に対して重大、本質的、又は重要であることを意味すると理解すべきではないが、その代わりに、単に、本発明の特定の実施形態に利用可能又は利用できない代替的又は追加の特徴を強調することを意図している。同様に、接続詞「及び（ａｎｄ）」に関連しているアイテムグループは、それらのアイテムの一つ一つがグルーピングに存在する必要があると理解されるべきではないが、別段の記載がない限り、むしろ、「及び／又は（ａｎｄ／ｏｒ）」として理解されるべきである。同様に、接続詞「又は（ｏｒ）」に関連しているアイテムグループは、それらのグループの間で相互排他性を必要とすることが理解されるべきではないが、別段の記載がない限り、むしろ、「及び／又は（ａｎｄ／ｏｒ）」と理解されるべきである。

【0174】

本明細書で実質的に任意の複数形及び／又は単数形の用語の使用に関して、当業者は、複数形から単数形への変換、及び／又は、単数形から複数形への変換を文脈及び／又は適用に合わせるように行うことができる。種々の単数形/複数形の置き換えは、明確にするために、本明細書に明示的に説明されてもよい。不定冠詞「ａ」又は「ａｎ」は複数を除外しない。特定の手段が互に異なる従属請求項に記載されるという単なる事実は、これらの手段の組み合わせを有利に使用できないことを示すものではない。特許請求の範囲における任意の引用符号は、本発明の範囲を限定すると解釈されるべきではない。

【0175】

導入される請求項の記載における特定の数字が意図される場合に、そのような意図が請求項に明確に記載される一方、そのような記載が存在しない場合に、そのような意図は存在しないことは、当業者にとって理解されるであろう。例えば、理解の助けとして、以下に添付される特許請求の範囲は、請求項の記載を導入する導入句「少なくとも１つ（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ）」及び「１つ又はそれ以上（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）」の使用を含むことができる。しかしながら、このような語句の使用は、同一の請求項が導入句「１つ又はそれ以上（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）」又は「少なくとも１つ（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ）」、及び「ａ」又は「ａｎ」などの不定冠詞（例えば、「ａ」及び／又は「ａｎ」は、一般的に、「少なくとも１つ（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ）」又は「１つ又はそれ以上（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）」を意味すると解釈されるべきである）を含む場合であっても、不定冠詞「ａ」又は「ａｎ」による請求項の記載の導入が、そのような導入された請求項の記載を含む任意の特定の請求項を、このような記載の１つのみを含む実施形態に限定すると解釈されるべきではない。請求項の記載を導入するために使用される定冠詞の使用についても同じである。さらに、導入された請求項の記載における特定の数字を明示的に記載する場合であっても、そのような記載が典型的に少なくとも記載の数を意味するように解釈されるべきであることは、当業者にとって理解されるであろう（例えば、他の修飾のない「２つの記載」という最低限の記載は、典型的に、少なくとも２つの記載、又は２つ以上の記載を意味する）。さらに、「Ａ、Ｂ、及びＣなどの少なくとも１つ」に類似している慣例を使用するこれらの例において、一般的に、このような構成は、その慣例について当業者が理解する意味で意図されている（例えば、「Ａ、Ｂ、及びＣの少なくとも１つを有するシステム」は、単独のＡ、単独のＢ、単独のＣ、ＡとＢを一緒に、ＡとＣを一緒に、ＢとＣを一緒に、及び／又は、ＡとＢとＣとを一緒になどを有するシステムを含むが、これらに限定されない。）。「Ａ、Ｂ、及びＣなどの少なくとも１つ」に類似している慣例を使用するこれらの例において、一般的に、このような構成は、その慣例について当業者が理解する意味で意図されている（例えば、「Ａ、Ｂ、及びＣの少なくとも１つを有するシステム」は、単独のＡ、単独のＢ、単独のＣ、ＡとＢを一緒に、ＡとＣを一緒に、ＢとＣを一緒に、及び／又は、ＡとＢとＣとを一緒になどを有するシステムを含むが、これらに限定されない。）。２つ以上の選択可能な用語が存在する実質的に任意の離接語及び／又は語句は、明細書、特許請求の範囲、又は図面にあるなしを問わず、その選択可能な用語の１つ、いずれか一方、又は両方ともを含む可能性を意図すると理解されるべきであることは当業者にとってさらに理解されるであろう。例えば、語句「Ａ又はＢ」は、「Ａ」又は「Ｂ」又は「Ａ及びＢ」の可能性を含むと理解されるであろう。

【0176】

明細書中で使用される成分、反応条件などの数量を表すすべての数字は、すべての例において用語「約（ａｂｏｕｔ）」により修飾されるものとして理解されるべきである。それで、反対に示されない限り、本明細書で説明される数値パラメータは、得ようとする所望の特性に応じて変更できる近似値である。本出願の優先権を主張する任意の出願における任意の特許請求の範囲に対しては、少なくとも均等論が適用されるが、これに限定されず、各数値パラメータは、有効数字及び通常の丸めアプローチの数字に照らして解釈されるべきである。

【0177】

さらに、前述において、明瞭さ及び理解のために例示及び実施例を手段として多少詳しく述べられるが、特定の変更及び修飾が実施できることは、当業者にとって明らかである。したがって、説明及び実施例は、本発明の範囲を本明細書に記載される特定の実施形態及び実施例に限定するものとして解釈されるべきではないが、むしろ、本発明の真の範囲及び趣旨に伴うすべての修飾及び代替物を包含する。