6797794 レタスヒゲナガアブラムシ（Ｎａｓｏｎｏｖｉａ ｒｉｂｉｓｎｉｇｒｉ）バイオタイプ１に対する抵抗性を含んでなるレタス植物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6797794

(24)【登録日】2020年11月20日

(45)【発行日】2020年12月9日

(54)【発明の名称】レタスヒゲナガアブラムシ（Ｎａｓｏｎｏｖｉａ ｒｉｂｉｓｎｉｇｒｉ）バイオタイプ１に対する抵抗性を含んでなるレタス植物

(51)【国際特許分類】

   A01H 5/00 20180101AFI20201130BHJP

   A01H 5/12 20180101ALI20201130BHJP

   A01H 5/10 20180101ALI20201130BHJP

   C12Q 1/68 20180101ALI20201130BHJP

   C12N 15/11 20060101ALN20201130BHJP

【ＦＩ】

   A01H5/00 ZZNA

   A01H5/12

   A01H5/10

   C12Q1/68

   !C12N15/11

【請求項の数】14

【全頁数】86

(21)【出願番号】特願2017-523205(P2017-523205)

(86)(22)【出願日】2015年10月29日

(65)【公表番号】特表2017-532056(P2017-532056A)

(43)【公表日】2017年11月2日

(86)【国際出願番号】EP2015075127

(87)【国際公開番号】WO2016066748

(87)【国際公開日】20160506

【審査請求日】2018年10月25日

(31)【優先権主張番号】14191135.4

(32)【優先日】2014年10月30日

(33)【優先権主張国】EP

【微生物の受託番号】NCIMB  NCIMB 42086

(73)【特許権者】

【識別番号】517030099

【氏名又は名称】ヌンヘムス、ベスローテン、フェンノートシャップ

【氏名又は名称原語表記】ＮＵＮＨＥＭＳ Ｂ．Ｖ．

(74)【代理人】

【識別番号】100091982

【弁理士】

【氏名又は名称】永井 浩之

(74)【代理人】

【識別番号】100091487

【弁理士】

【氏名又は名称】中村 行孝

(74)【代理人】

【識別番号】100082991

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 泰和

(74)【代理人】

【識別番号】100105153

【弁理士】

【氏名又は名称】朝倉 悟

(74)【代理人】

【識別番号】100126099

【弁理士】

【氏名又は名称】反町 洋

(72)【発明者】

【氏名】ロベルト、テオドルス、ゲラルドゥス、シャーレマン

(72)【発明者】

【氏名】バンサン、ピエール、アンドレ、トマ

(72)【発明者】

【氏名】アドリアヌス、イェー．エム．ファン、デア、アーレント

(72)【発明者】

【氏名】ロベルト、ヨハンネス、マルティヌス、ラエッドツ

(72)【発明者】

【氏名】オルガ、ユリアン、ロドリゲス

【審査官】 斉藤 貴子

(56)【参考文献】

【文献】 米国特許出願公開第２０１４／０２８９８８３（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 米国特許出願公開第２０１２／０１４４５１３（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 特表２０１３−５１０５６５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１３−５４４０９３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 CID M，NEW SOURCES OF RESISTANCE TO LETTUCE APHIDS IN LACTUCA SPP.，ARTHROPOD-PLANT INTERACTIONS，SPRINGER，２０１２年 ７月２７日，VOL:6, NR:4,，PAGE(S):655 - 669，ＵＲＬ，http://dx.doi.org/10.1007/s11829-012-9213-4

【文献】 EENINK A H，RESISTANCE OF LETTUCE (LACTUCA) TO THE LEAF APHID NASONOVIA RIBIS NIGRI. 1. TRANSFER OF RESISTANCE FROM L. VIROSA TO L. SATIVA BY INTERSPECIFIC CROSSES AND SELECTION OF RESISTANT BREEDING LINES，EUPHYTICA，NL，KLUWER ACADEMIC PUBLISHERS，１９８２年，VOL:31, NR:2,，PAGE(S):291 - 299，ＵＲＬ，http://dx.doi.org/10.1007/BF00021643

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ０１Ｈ ５／００−５／１２

Ｃ１２Ｎ １５／００−１５／９０

Ｃ１２Ｑ １／６８

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

レタスヒゲナガアブラムシ（Nasonovia ribisnigri）バイオタイプ１（Ｎｒ：１）に対する抵抗性を付与する、ＮＣＩＭＢ４２０８６として寄託された種子から入手可能である、それぞれＱＴＬ６．１およびＱＴＬ７．１と命名された量的形質遺伝子座を含んでなる６番染色体上および／または７番染色体上のワイルドレタス（Lactuca virosa）由来遺伝子移入断片を含んでなるレタス（Lactuca sativa）植物であって、
前記６番染色体上遺伝子移入断片が、以下のマーカー：
ａ） 配列番号２３内の一塩基多型マーカーＳＮＰ１．２３のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｂ） 配列番号２内の一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｃ） 配列番号２４内の一塩基多型マーカーＳＮＰ２．２４のＴＴまたはＣＴ遺伝子型；および
ｄ） 配列番号３内の一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０３のＡＡまたはＡＣ遺伝子型
を含み、
７番染色体上遺伝子移入断片が、以下のマーカー：
ａ） 配列番号１７内の一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１７のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｂ） 配列番号２５内の一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１７．２５のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｃ） 配列番号１８内の一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１８のＧＧまたはＧＣ遺伝子型；および
ｄ） 配列番号１９内の一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１９のＧＧまたはＧＡ遺伝子型
を含む、植物。

【請求項2】

６番染色体上の遺伝子移入断片および７番染色体上の遺伝子移入断片の両方を含んでなる、請求項１に記載の植物。

【請求項3】

前記６番染色体上遺伝子移入断片が、以下の分子マーカー：
ａ） 配列番号２６内（もしくは配列番号２６に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内）の一塩基多型マーカーＶＳＰ１のＧＧもしくはＧＴ遺伝子型、または
ｂ） 配列番号２７内（もしくは配列番号２７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内）の一塩基多型マーカーＶＳＰ３のＡＡもしくはＡＣ遺伝子型
をさらに含む、請求項１または２に記載の植物。

【請求項4】

前記７番染色体上遺伝子移入断片が、以下の分子マーカー：
ａ） 配列番号２８内の、もしくは配列番号２８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＶＳＰ２のＣＣもしくはＣＡ遺伝子型、または
ｂ） 配列番号２９内の、もしくは配列番号２９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＶＳＰ４のＧＧもしくはＧＡ遺伝子型
をさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の植物。

【請求項5】

自由選択試験条件および非選択試験条件の両方の下でレタスヒゲナガアブラムシ（Nasonovia ribisnigri）バイオタイプ１に対する抵抗性を含んでなる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の植物。

【請求項6】

同一条件下で育成された場合に、植物上のバイオタイプ１のアブラムシの平均数が、レタス品種Ｍａｆａｌｄａ等のＮｒ：１感受性対照植物上に見られるバイオタイプ１のアブラムシの平均数の多くとも５０％である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の植物。

【請求項7】

同一条件下で育成された場合に、植物上のバイオタイプ１のアブラムシの平均数が１０匹未満であり、一方、Ｍａｆａｌｄａ品種等のＮｒ：１感受性対照植物上のバイオタイプ１のアブラムシの平均数が少なくとも１００匹である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の植物。

【請求項8】

レタス（Lactuca sativa）植物が、ルーズリーフレタス、ロメインレタス、クリスプヘッドレタス、バターヘッドレタス、バタビアレタスおよびステムレタスからなる群から選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の植物。

【請求項9】

請求項１〜８のいずれか一項に記載の植物に成長可能な、種子。

【請求項10】

請求項１〜８のいずれか一項に記載の植物の、葉または結球。

【請求項11】

請求項１〜８のいずれか一項に記載のレタス植物の子孫植物であって、ＱＴＬ６．１を含んでなる６番染色体および／またはＱＴＬ７．１を含んでなる７番染色体上に遺伝子移入断片を保持する、子孫植物。

【請求項12】

６番染色体および／または７番染色体上の前記遺伝子移入断片を含んでなる、請求項１〜８のいずれか一項に記載のレタス植物の細胞または請求項１１に記載の子孫植物の細胞。

【請求項13】

ＱＴＬ６．１および／またはＱＴＬ７．１を含んでなる野生レタス（Lactuca virosa）植物を特定するための方法であって、
ａ） １つの野生レタス（Lactuca virosa）植物または複数の野生レタス（Lactuca virosa）植物を用意する工程；
ｂ） 所望により、前記野生レタス（Lactuca virosa）植物または複数の植物を、Ｎｒ：１抵抗性アッセイにおいてＮｒ：１抵抗性について試験する工程；
ｃ） ａ）の前記植物もしくは複数の植物の、または所望によりｂ）で特定されたＮｒ：１抵抗性植物もしくは複数の植物のみのゲノムＤＮＡを、ＱＴＬ６．１を示す、および／またはＱＴＬ７．１を示す、一つまたは複数のマーカーの存在について、スクリーニングする工程であって、
ＱＴＬ６．１を示すマーカーが、
− 配列番号２３内の一塩基多型マーカーＳＮＰ１．２３のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
− 配列番号２内の一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
− 配列番号２４内の一塩基多型マーカーＳＮＰ２．２４のＴＴまたはＣＴ遺伝子型；および
− 配列番号３内の一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０３のＡＡまたはＡＣ遺伝子型
であり、
ＱＴＬ７．１を示すマーカーが、
− 配列番号１７内の一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１７のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
− 配列番号２５内の一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１７．２５のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
− 配列番号１８内の一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１８のＧＧまたはＧＣ遺伝子型；および
− 配列番号１９内の一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１９のＧＧまたはＧＡ遺伝子型
である、工程；並びに
ｄ） 前記ｃ）のマーカーのうちの一つまたは複数を含んでなる植物を特定する工程；
ｅ） 所望により、ｄ）の植物を、Ｎｒ：１抵抗性アッセイにおいてＮｒ：１抵抗性について試験する工程
を含んでなる、方法。

【請求項14】

ＮＣＩＭＢ４２０８６として寄託された種子から入手可能であるＱＴＬ６．１および／またはＱＴＬ７．１の存在について、レタス（Lactuca sativa）系統または品種をスクリーニングするための方法であって、
ａ） １つのレタス（Lactuca sativa）植物または複数のレタス（Lactuca sativa）植物を用意する工程；
ｂ） 所望により、前記レタス（Lactuca sativa）植物または複数の植物を、Ｎｒ：１抵抗性アッセイ（例えば自由選択および／または非選択）においてＮｒ：１抵抗性について試験する工程；
ｃ） ａ）の前記植物もしくは複数の植物の、または所望によりｂ）で特定されたＮｒ：１抵抗性植物もしくは複数の植物のみのゲノムＤＮＡを、ＱＴＬ６．１を示す、および／またはＱＴＬ７．１を示す、一つまたは複数のマーカーの存在について、スクリーニングする工程であって、
ＱＴＬ６．１を示すマーカーが、
− 配列番号２３内の一塩基多型マーカーＳＮＰ１．２３のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
− 配列番号２内の一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
− 配列番号２４内の一塩基多型マーカーＳＮＰ２．２４のＴＴまたはＣＴ遺伝子型；および
− 配列番号３内の一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０３のＡＡまたはＡＣ遺伝子型
であり、
ＱＴＬ７．１を示すマーカーが、
− 配列番号１７内の一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１７のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
− 配列番号２５内の一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１７．２５のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
− 配列番号１８内の一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１８のＧＧまたはＧＣ遺伝子型；および
− 配列番号１９内の一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１９のＧＧまたはＧＡ遺伝子型
である、工程；並びに
ｄ） 前記ｃ）のマーカーのうちの一つまたは複数を含んでなる植物を特定する工程；
ｅ） 所望により、ｄ）の植物を、Ｎｒ：１抵抗性アッセイにおいてＮｒ：１抵抗性について試験する工程
を含んでなる、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、６番染色体および／または７番染色体上にワイルドレタス（Lactuca virosa）等の野生レタス由来の一つまたは複数の遺伝子移入断片を含んでなり、前記遺伝子移入断片が、ＱＴＬ６．１（６番染色体上のＱＴＬについて）並びにＱＴＬ７．１および７．２（７番染色体上の２つのＱＴＬについて）と称される、レタスヒゲナガアブラムシ（Nasonovia ribisnigri）バイオタイプ１（本明細書ではＮｒ：１またはバイオタイプＮｒ：１とも称される）に対する抵抗性のための量的形質遺伝子座（ＱＴＬ）を含んでなる、栽培レタス（レタス（Lactuca sativa））種子、植物および植物部分に関する。また本発明は、ＱＴＬ６．１および／またはＱＴＬ７．１（および／またはＱＴＬ７．２）を含んでなるワイルドレタス（L. virosa）由来の遺伝子移入断片の存在により、レタスヒゲナガアブラムシ（Nasonovia ribisnigri）バイオタイプ１に対して抵抗性である、栽培レタス（レタス（Lactuca sativa））種子、前記種子から成長した植物および植物部分、並びに、前記植物の子孫および前記植物を生産するための繁殖材料に関する。本発明はさらに、Ｎｒ：１抵抗性レタス植物の育種で使用するための抵抗性付与ＱＴＬの野生レタス供給源に関する。

【背景技術】

【0002】

レタスヒゲナガアブラムシ（lettuce aphid）（レタスヒゲナガアブラムシ（Nasonovia ribisnigri (Mosley)））は、世界中でレタスに発生する主な害虫である。この問題は北西ヨーロッパにおける１９７０年台のレタス生産において深刻になり始め、ヨーロッパの至る所へと急速に拡大した。その後、１９８０年台に、前記アブラムシはカナダにおいて検出された。やがて、この問題は米国（カリフォルニア州およびアリゾナ州）において報告された。つい最近になって、レタスヒゲナガアブラムシはニュージーランドおよびオーストラリアにおいて発見された。

【0003】

レタスヒゲナガアブラムシは、あらゆる植物段階でレタス植物に定着することができ、より若い葉から摂食することを好む。植物上の大量のアブラムシは、植物成長を低減し、結球の形状を変形させ得るが、その結果、レタス結球は市場性が無くなる。レタス結球における大量のアブラムシの存在は、小売業者が栽培者からレタスの購入を拒む理由となる。若い植物時期に、殺虫剤を用いてレタスヒゲナガアブラムシを防除することが可能である。いくつかの製品がアブラムシ集団の防除に効果的であると報告された。しかし、化学薬品に対する抵抗性がいくつかのアブラムシ集団において報告された。さらに、より遅い発生段階になると、殺虫剤を用いてアブラムシを防除することはできず、化学製品もレタス結球に進入することができない。

【0004】

２００７以来、レタスヒゲナガアブラムシの２つのバイオタイプがヨーロッパにおいて知られており、これらはバイオタイプＮｒ：０およびＮｒ：１と命名された。レタスヒゲナガアブラムシ（Nasonovia ribisnigri）バイオタイプＮｒ：０に対する完全および部分的な抵抗性が、レタスの近縁野生種であるワイルドレタス（Lactuca virosa）において見出された（Eenink and Dieleman, Euphytica 32(3), 691-695 (1982)）。完全抵抗性はＮｒ遺伝子と称される１つの優性遺伝子によるものであった。Ｎｒ遺伝子がワイルドレタス（L. virosa）アクセッションＩＶＴ２８０から栽培レタス（L. sativa）に導入されたところ、非常に効果的であった（Arend et al. 1999, Eucarpia Leafy Vegetables ’99. Palacky University, Olomouc, Czech Republic, p149-157）。

【0005】

しかし、レタスヒゲナガアブラムシに対して抵抗性の品種の発売（release）が容易なものではないことを、育種家は経験している。Ｎｒ耐性遺伝子が、強力な負の副作用を付与する劣性遺伝子に強固に連結していることが分かった。Ｎｒ遺伝子についてホモ接合性の植物は、成長遅延、より薄い緑色および古い葉における葉緑素の分解加速を示した。この負の表現型は、「小型成長および急速老化（Compact Growth and Rapid Ageing）」表現型または「ＣＲＡ表現型」とも称された。Ｎｒ遺伝子がホモ接合型で存在するが、ＣＲＡ表現型が発現されない組換えレタス植物を発見することができた（例えば、欧州特許第０９２１７２０Ｂ１号参照）。Ｎｒ遺伝子および連結した劣性遺伝子の間で組換え現象（すなわち減数分裂乗換え）が起こったこれらの組換え植物は、負の副作用表現型に関連していないＮｒ耐性遺伝子の供給源としての役割を果たした。

【0006】

ＩＶＴ２８０（ＣＧＮ０４６８３）由来のＮｒ耐性遺伝子は、市販のレタス栽培品種、例えば、栽培品種「Ｂａｒｃｅｌｏｎａ」、「Ｍａｆａｌｄａ」（共にニュンヘムズＢ．Ｖ．（Nunhems B.V.）社）および他の多くの栽培品種で広く使用されている。

【0007】

単一の耐性遺伝子の大規模な使用は抵抗性崩壊の恐れに直面することから、バイオタイプＮｒ：０抵抗性の他の供給源が今なお探索中である。異なる抵抗性機構を有する遺伝子はこのような場合に効果的に採用することができる。例えば、新たなバイオタイプＮｒ：０耐性遺伝子が、ラクツカ・セリオラ（L. serriola）アクセッションＰＩ４９１０９３およびワイルドレタス（L. virosa）アクセッションＰＩ２７４３７８において発見された（Mc Creight 2008 HortScience 43:1355-1358; McCreight and Liu (2012), HortScience 47(2):179-184）。ＰＩ２７４３７８で発見された抵抗性は、完全抵抗性であり、ＩＶＴ２８０由来のＮｒ遺伝子の対立形質であることが分かった。ＰＩ４９０９３では、部分的な抵抗性が見出され、前記著者らは、この抵抗性対立遺伝子をＮｒ０^Ｐと命名すると提唱した（ＰＩ２７４３７８で見出された完全抵抗性対立遺伝子に対するＮｒ０^Ｃとは対照をなす）。前記著者らは、Ｎｒ抵抗性に打ち克つアブラムシバイオタイプの発生を遅延または防止するために、この部分的抵抗性対立遺伝子を、完全抵抗性対立遺伝子がまだ広く採用されていない地域で使用することを提唱した。

【0008】

また、レタスヒゲナガアブラムシ（Nasonovia ribisnigri）バイオタイプＮｒ：１に対する抵抗性も必要とされている。耐性遺伝子の使用を延長させるために、Ｎｒ：１に関して、異なる耐性遺伝子および抵抗性機構も求められている。大規模使用ある種の抵抗性機構を有する１つの耐性遺伝子でできている場合、新たなレタスヒゲナガアブラムシ（Nasonovia ribisnigri）バイオタイプＮｒ：１が出現した際、ヨーロッパにおいてＮｒ遺伝子に対し２００７年に起こったように、抵抗性がアブラムシ集団によって克服される確率は高い。従って、現状、アブラムシバイオタイプＮｒ：０は、ＩＶＴワイルドレタス（L. virosa）アクセッション由来の単一のＮｒ遺伝子によってまだ防除可能である（例えば、バイオタイプＮｒ：１がまだ発生していない米国において）が、この遺伝子はヨーロッパで見られるアブラムシバイオタイプＮｒ：１に対しては無効である。Ｎｒ：１バイオタイプは最初は中央ヨーロッパでのみ見られたが、今では他の地域に広がっており、２０１０年にはスペインの圃場でも見つかった（Cid et al. 2012, Arthropod-Plant Interactions 6: 655-669）。

【0009】

いくつかの刊行物に、レタスヒゲナガアブラムシバイオタイプＮｒ：１に対する抵抗性遺伝子を含有することが示唆される供給源が記載されている。例えば、３つのアクセッション（ＣＧＮ１３３６１、ＣＧＮ１６２６６、ＣＧＮ１６２７２）が、アブラムシバイオタイプＮｒ：０およびＮｒ：１の両方に対して抵抗性であると記載され（匿名、4. Nov. 2008, IP.COM document 000176078）、複合型Ｎｒ：０およびＮｒ：１抵抗性レタスの育種に使用されることが提唱された。この論文では、ワイルドレタス（L. virosa）アクセッションＣＧＮ１６２７２およびＣＧＮ１６２６６が、それぞれ栽培品種Ｄａｇｕａｎ（シンジェンタ社（Syngenta））および栽培品種Ｆｕｎｌｙ（シンジェンタ社）（これらの栽培品種は共にナソノビア属（Nasonovia）耐性遺伝子を欠く）との戻し交雑計画に使用されるといわれ、その子孫はドナーアクセッションの抵抗性と類似した抵抗性を示すといわれる。また、ＣＧＮ１６２７２の耐性遺伝子のマーカーが、ＣＧＮ１６２７２と栽培品種Ｃｏｂｈａｍ Ｇｒｅｅｎとの交雑から開発されるといわれる（匿名、4. Nov. 2008、上記）。また、これら３つのアクセッションはCid et al.（2012、上記）において解析され、高度なＮｒ：０抵抗性を含んでなるが、バイオタイプＮｒ：１抵抗性は部分的にしか含んでならないことが分かった。

【0010】

Cid et al.（2012、上記）はまた、バイオタイプＮｒ：１およびＮｒ：０の両方に対していくらかの抵抗性を有する３つのワイルドレタス（L. virosa）アクセッション、すなわちＣＧＮ１６２７４、ＣＧＮ２１３９９およびＣＧＮ０５１４８、を特定した。この研究において、前記著者らの目的は、単一の野生アキノノゲシ属（Lactuca）アクセッションにおいて、レタスヒゲナガアブラムシバイオタイプＮｒ：０およびＮｒ：１の両方に対する抵抗性を発見することであった。しかし、バイオタイプＮｒ：１のアブラムシは、感受性対照上よりも低い程度ではあるが、これらの野生アクセッション上で摂食および繁殖することが可能である（図４参照）。

【0011】

国際公開第２０１１／０５８１９２号は、ラクツカ・セリオラ（L. serriola）１０Ｇ．９１３５７１がバイオタイプＮｒ：１に対して抵抗性であると報告しているが、この主張を実証するデータは提供されておらず、抵抗性のレベルの表示もこれを測定する方法も与えられていない。

【0012】

国際公開第２０１２／０６６００８号および国際公開第２０１２／０６５６２９号も、ラクツカ・セリオラ（L. serriola）アクセッション由来のＮｒ：１抵抗性が、１０Ｇ．９１３５６９と命名されたバルク種子試料に導入されることを報告している。同じく、データは提供されておらず、抵抗性レベルの表示も抵抗性を測定する方法も与えられていない。

【0013】

このように、匿名2008（上記）およびCid et al. 2012（上記）等の先行技術では、Ｎｒ：１アブラムシの量がある程度減少される野生アクセッションはほんの少ししか特定されておらず、遺伝学的根拠も提供されていない。

【0014】

Ｎｒ：１抵抗性を含んでなる栽培レタスを開発するために、バイオタイプＮｒ：１に対する抵抗性を付与することができる遺伝子の特定が、依然として必要とされている。本発明者らは、バイオタイプＮｒ：０のアブラムシに対して感受性であると考えられたアクセッションを、これらのアクセッションにおいてバイオタイプＮｒ：１に対する（新たな）耐性遺伝子を特定するために、探索した。さらに、本発明者らは、自由選択抵抗性および非選択抵抗性の両方を付与することができる遺伝子の特定も求めた。本発明者らは、自由選択条件および非選択条件の両方の下でバイオタイプＮｒ：１に対する高レベルの抵抗性を含んでなるワイルドレタス（L. virosa）アクセッション（その代表的な種子試料はＮＣＩＭＢ４２０８６として寄託された）を見出し、いくつの、およびどのワイルドレタス（L. virosa）ゲノム領域がＮｒ：１抵抗性付与に関与するかを特定するために、抵抗性のマッピングを試みることを決定した。

【0015】

抵抗性のマッピングを試みる際、本発明者らは、ＱＴＬマッピングに使用可能な植物集団（すなわち、レタス（L. sativa）ゲノムとワイルドレタス（L. virosa）ゲノムとの間で染色体減数分裂性組換えを起こした個体からなるマッピング集団）の作製において、深刻な問題に遭遇した。２つの異なる種であるワイルドレタス（L. virosa）およびレタス（L. sativa）の染色体が全く異なっており、これにより、交雑障害および生殖不能、並びに減数分裂および乗換え中の潜在的な問題が引き起こされ得るためである。使用可能なＦ２集団を作製することができず、様々な反復親と多くの交雑をして初めて、本発明者らは、マッピング研究に使用可能な十分に大きな戻し交雑ファミリーを作製することに成功した。これらのマッピング集団は、分子マーカーおよび表現型検査を用いた解析も容易ではなかった。すなわち、本発明者らが、反復親とワイルドレタス（L. virosa）アクセッションとの間で多型性であるＳＮＰマーカーを含む遺伝子地図を首尾よく作成し、ナソノビア属（Nasonovia）Ｎｒ：１抵抗性をその地図上にマッピングすることもできたことは、実に驚くべきことであった。

【0016】

驚くべきことに、最初のＱＴＬマッピング研究（ＢＣ１集団を使用）において、本発明者らは、単一の遺伝子ではなく、Ｎｒ：１抵抗性に寄与する、ワイルドレタス（L. virosa）の２つの異なる染色体上の３つのゲノム領域（そのうち２つのみが後に異なる戻し交雑集団においても発見された）を発見した。制御環境下接種（自由選択および非選択）並びに圃場データ（自由選択および非選択）の両方が、３つの地理的に異なるＮｒ：１バイオタイプ（ドイツ、フランスおよびスペイン）に対する高レベルのＮｒ：１抵抗性を示した。実際に、スペイン（ムルシア）における圃場評価では、アクセッションＮＣＩＭＢ４２０８６の半成体および成体植物は、自由選択試験および非選択試験の両方において、それらの葉上にいかなるＮｒ：１アブラムシも有さなかった。

【0017】

後のマッピング研究において、２つのＱＴＬ（ＱＴＬ６．１およびＱＴＬ７．１）が再度発見され、ＱＴＬ領域を絞ることができた。この第二のマッピング研究は第一の研究の結果を無効にするものではなく、３つ全てのＱＴＬが本明細書に包含される。

【発明の概要】

【0018】

本発明の目的は、バイオタイプＮｒ：１に対する抵抗性を含んでなる栽培レタス植物を作製するために使用することができる、ワイルドレタス（L. virosa）由来の３つのＱＴＬ（ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２と命名）を提供することである。

【0019】

また、ワイルドレタス（L. virosa）等の野生レタスからレタス（L. sativa）ゲノムに遺伝子移入された１つまたは２つまたは３つのＱＴＬ（ＱＴＬ６．１および／またはＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２）を含んでなり、遺伝子移入によってバイオタイプＮｒ：１に対する抵抗性が付与された、栽培レタス植物を提供することも、本発明の目的である。

【0020】

従って、様々な栽培レタス植物が本明細書に包含される：ａ）ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１およびＱＴＬ７．２から選択される、Ｎｒ：１抵抗性を付与する１つのみのＱＴＬを含んでなる栽培レタス植物；ｂ）ＱＴＬ６．１およびＱＴＬ７．１およびＱＴＬ７．２から選択される、Ｎｒ：１抵抗性を付与する２つのＱＴＬを含んでなる栽培レタス植物（一つの態様においては、ＱＴＬ６．１およびＱＴＬ７．１の両方を含んでなる植物が、特定の実施態様である）；ｃ）ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１およびＱＴＬ７．２から選択される、Ｎｒ：１抵抗性を付与する３つのＱＴＬを含んでなる栽培レタス植物。

【0021】

また、ワイルドレタス（L. virosa）等の野生レタスからレタス（L. sativa）ゲノムに遺伝子移入された、ＱＴＬ６．１およびＱＴＬ７．１から選択される１つまたは２つのＱＴＬを含んでなり、遺伝子移入によってバイオタイプＮｒ：１に対する抵抗性が付与された、栽培レタス植物を提供することも、本発明の目的である。

【0022】

一つの態様において、前記ＱＴＬは、受入番号ＮＣＩＭＢ４２０８６として寄託された種子から入手可能である（その中に存在する）。前記ＱＴＬを含んでなる遺伝子移入断片は、少なくとも１、２、３、４つ、またはそれ以上のマーカーを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である。別の態様では、前記ＱＴＬは、他のＮｒ：１抵抗性野生レタスアクセッション、特にワイルドレタス（L. virosa）アクセッションから入手可能であり（その中に存在し）、遺伝子移入断片は、少なくとも１、２、３、４つ、またはそれ以上の（すなわち５、６、７、８、９、１０、１１、１２、またはそれ以上の）本明細書で開示されるマーカーを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である。一つの態様において、ワイルドレタス（L. virosa）アクセッションは、２種類のアクセッションのうちの一方であり、遺伝子移入断片は、あるワイルドレタス（L. virosa）アクセッションに対して共に特異的であるＶＳＰ１およびＶＳＰ２、並びに、別のワイルドレタス（L. virosa）アクセッションに対して共に特異的であるＶＳＰ３およびＶＳＰ４から選択される、ワイルドレタス（L. virosa）アクセッション特異的ＳＮＰマーカー（ワイルドレタス特異的（Virosa Specific）からＶＳＰと命名）を含んでなる。

【0023】

上記の種間ＱＴＬマッピングには不妊症、分離ひずみ等のような問題があるが、本来見られるＱＴＬ領域（６番染色体上の６０〜２４０Ｍｂ；およびＱＴＬ７．１については７番染色体上の１７０〜２３５Ｍｂ；並びにＱＴＬ７．２については７０〜１５０Ｍｂに亘る物理的領域に本来はマッピングされた）は、（ＱＴＬ６．１を含んでなる）６番染色体上の７７Ｍｂ〜１６１ＭｂおよびＱＴＬ７．１を含んでなる７番染色体上の２０３Ｍｂ〜２１９Ｍｂに亘る領域にマッピングすることができた。

【0024】

そのため、一つの態様において、それぞれホモ接合型またはヘテロ接合型の６番染色体（ＱＴＬ６．１を含んでなる）上および／または７番染色体（ＱＴＬ７．１を含んでなる）上の遺伝子移入断片を含んでなり、前記遺伝子移入断片がレタスヒゲナガアブラムシ（Nasonovia ribisnigri）バイオタイプ１（Ｎｒ：１）に対する抵抗性を付与する、栽培レタス（Lactuca sativa）植物が提供される。一つの態様において、遺伝子移入断片は、６番染色体上の７７Ｍｂから開始し６番染色体上の１６１Ｍｂで終結する領域の全てもしくは一部を含んでなり、および／または、遺伝子移入断片は、７番染色体上の２０３Ｍｂから開始し７番染色体上の２１９Ｍｂで終結する領域の全てまたは一部を含んでなる。例えば、抵抗性付与ＱＴＬであるＱＴＬ６．１およびＱＴＬ７．１、またはその異型を含んでなる、ワイルドレタス（L. virosa）アクセッション（例えばＮＣＩＭＢ４２０８６）等の野生Ｎｒ：１抵抗性アクセッション由来の遺伝子移入断片が灰色の棒によって図示されている、レタス（L. sativa）の６番および７番染色体を示す図３Ｂを参照されたい。一つの態様において、ＱＴＬ７．２を含んでなる遺伝子移入断片が、所望により、栽培レタス植物に存在していてもよい。

【0025】

ＱＴＬ６．１（または異型）を保持するより小さな遺伝子移入断片（すなわち、６番染色体の７７Ｍｂ〜１６１Ｍｂに亘る上記領域の抵抗性付与部分を含んでなる）は、８０Ｍｂ、７０Ｍｂ、６０Ｍｂ、５０Ｍｂ、４０Ｍｂ、３０Ｍｂ、２０Ｍｂ、１０Ｍｂ、５Ｍｂ、２．５Ｍｂ、２Ｍｂ、１Ｍｂ、０．５Ｍｂ、１００ｋｂ、５０ｋｂまたはそれ以下のサイズを有し、ＱＴＬ６．１またはその異型を含んでなる断片であり得ると理解される。一つの態様において、前記部分は少なくとも５ｋｂ、１０ｋｂ、２０ｋｂまたはそれ以上のサイズである。

【0026】

さらに、ＱＴＬ７．１（または異型）を保持するより小さな遺伝子移入断片（すなわち、７番染色体の２０３Ｍｂ〜２１９Ｍｂに亘る上記領域の抵抗性付与部分を含んでなる）は、１５Ｍｂ、１０Ｍｂ、５Ｍｂ、２．５Ｍｂ、２Ｍｂ、１Ｍｂ、０．５Ｍｂ、１００ｋｂ、５０ｋｂまたはそれ以下のサイズを有し、ＱＴＬ７．１またはその異型を含んでなる断片であり得ると理解される。一つの態様において、前記部分は少なくとも５ｋｂ、１０ｋｂ、２０ｋｂまたはそれ以上のサイズである。

【0027】

一つの態様において、６番染色体上の遺伝子移入断片は、以下からなる群から選択されるマーカーのうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２または３または４または５つ（またはそれ以上）を検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号２３内の（または配列番号２３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ１．２３のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｂ） 配列番号２内の（または配列番号２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｃ） 配列番号２４内の（または配列番号２４に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ２．２４のＴＴまたはＣＴ遺伝子型；
配列番号３内の（または配列番号３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０３のＡＡまたはＡＣ遺伝子型；
ｄ） ＳＮＰ１．２３およびＳＮＰ＿０３の間（例えばＳＮＰ１．２３およびＳＮＰ２．２４、ＳＮＰ１．２３およびＳＮＰ＿０２の間）；またはＳＮＰ＿０２およびＳＮＰ＿０３の間（例えばＳＮＰ＿０２およびＳＮＰ２．２４の間）；またはＳＮＰ２．２４およびＳＮＰ＿０３の間に物理的に位置する、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、特に、ワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー；
ｅ） ＳＮＰ１．２３、ＳＮＰ＿０２、ＳＮＰ２．２４、またはＳＮＰ＿０３から選択されるあらゆるマーカーの１０Ｍｂの距離内、好ましくは５Ｍｂ以内に位置する、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、特にワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0028】

所望により、一つの態様において、遺伝子移入断片は、配列番号２６内（または配列番号２６に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内）の一塩基多型マーカーＶＳＰ１のＧＧまたはＧＴ遺伝子型および配列番号２７内（または配列番号２７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内）の一塩基多型マーカーＶＳＰ３のＡＡまたはＡＣ遺伝子型から選択されるワイルドレタス（L. virosa）アクセッション特異的マーカーを含んでなる（且つ、それによって検出可能である）。ＳＮＰマーカーＶＳＰ１およびＶＳＰ３を用いることで、２つの異なるワイルドレタス（L. virosa）型アクセッション由来のＱＴＬ６．１を含んでなる遺伝子移入断片を区別することができる。

【0029】

別の態様では、（７番染色体の２０３Ｍｂ〜２１９Ｍｂの物理的位置に）ＱＴＬ７．１を含んでなる７番染色体の遠端における遺伝子移入断片は、以下からなる群から選択されるマーカーのうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２または３または４または５つ（またはそれ以上）を検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ． 配列番号１７内の（または配列番号１７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１７のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｂ． 配列番号２５内の（または配列番号２５に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ１７．２５のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｃ． 配列番号１８内の（または配列番号１８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１８のＧＧまたはＧＣ遺伝子型；
ｄ． 配列番号１９内の（または配列番号１９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１９のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｅ． ＳＮＰ＿１７とＳＮＰ＿１９との間、またはＳＮＰ＿１７とＳＮＰ＿１８との間、またはＳＮＰ＿１７とＳＮＰ１７．２５との間、またはＳＮＰ１７．２５とＳＮＰ＿１９との間、またはＳＮＰ１７．２５とＳＮＰ＿１８との間、またはＳＮＰ＿１８とＳＮＰ＿１９との間に物理的に位置する、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、特に、ワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー；
ｆ． ＳＮＰ＿１７、ＳＮＰ＿１７．２５、ＳＮＰ＿１８およびＳＮＰ＿１９から選択されるあらゆるマーカーの１２Ｍｂ、１０Ｍｂの距離内、好ましくは５Ｍｂ以内に位置する、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、特にワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0030】

所望により、一つの態様において、遺伝子移入断片は、配列番号２８内（または配列番号２８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内）の一塩基多型マーカーＶＳＰ２のＣＣまたはＡＣ遺伝子型および配列番号２９内（または配列番号２９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内）の一塩基多型マーカーＶＳＰ４のＧＧまたはＧＡ遺伝子型から選択されるワイルドレタス（L. virosa）アクセッション特異的マーカーを含んでなる（且つ、それによって検出可能である）。ＳＮＰマーカーＶＳＰ２およびＶＳＰ４を用いることで、２つの異なる種類のワイルドレタス（L. virosa）アクセッション由来のＱＴＬ７．１を含んでなる遺伝子移入断片を区別することができる。

【0031】

一つまたは複数のマーカー「を検出する分子マーカーアッセイによって検出可能」である遺伝子移入断片に言及する場合、これは、遺伝子移入断片がそのマーカーの抵抗性遺伝子型を含んでなることを意味する。

【0032】

さらなる態様において、ＱＴＬ６．１および／またはＱＴＬ７．１（および所望によりＱＴＬ７．２）を含んでなる野生レタス由来の、例えばワイルドレタス（L. virosa）由来の遺伝子移入断片を含んでなり、前記遺伝子移入断片によってレタスヒゲナガアブラムシ（Nasonovia ribisnigri）バイオタイプＮｒ：１に対する抵抗性が付与される、種子、植物および植物部分または栽培レタスが提供される。一つの態様において、遺伝子移入断片は、ワイルドレタス（L. virosa）由来、特に、本明細書に記載の自由選択試験および非選択試験の両方におけるＮｒ：１抵抗性を含んでなるワイルドレタス（L. virosa）アクセッション由来である。一つの態様において、遺伝子移入断片は、アクセッションＮＣＩＭＢ４２０８６由来であり、あるいは、アクセッションＮＣＩＭＢ４２０８６、またはその子孫（progeny）もしくは子孫（descendant）から入手可能である。

【0033】

別の態様において、遺伝子移入断片は、以下のワイルドレタス（L. virosa）アクセッション特異的ＳＮＰマーカーを含んでなるワイルドレタス（L. virosa）アクセッション由来である：ＶＳＰ１マーカーと命名された、配列番号２６の（または配列番号２６に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）ヌクレオチド７１における、ＧＧ遺伝子型（ホモ接合性）またはＧＴ遺伝子型（ヘテロ接合性）；並びに、ＶＳＰ２と命名された、配列番号２８の（または配列番号２８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）ヌクレオチド７１における、ＣＣ遺伝子型（ホモ接合性）またはＡＣ遺伝子型（ヘテロ接合性）。ＶＳＰ１およびＶＳＰ２は、ＮＣＩＭＢ４２０８６等のＮｒ：１抵抗性アクセッションに見られる。

【0034】

別の態様において、遺伝子移入断片は、以下のワイルドレタス（L. virosa）アクセッション特異的ＳＮＰマーカーを含んでなるワイルドレタス（L. virosa）アクセッション由来である：ＶＳＰ３マーカーと命名された、配列番号２７の（または配列番号２７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）ヌクレオチド７１における、ＡＡ遺伝子型（ホモ接合性）またはＡＣ遺伝子型（ヘテロ接合性）；並びに、ＶＳＰ４と命名された、配列番号２９の（または配列番号２９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）ヌクレオチド７１における、ＧＧ遺伝子型（ホモ接合性）またはＡＧ遺伝子型（ヘテロ接合性）。ＶＳＰ３およびＶＳＰ４は、Ｎｒ：１抵抗性アクセッションに見られる。

【0035】

また、６番染色体（ＱＴＬ６．１を含んでなる）および／または７番染色体（ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２を含んでなる）上に野生レタス由来、例えばワイルドレタス（L. virosa）由来、の遺伝子移入を含んでなる栽培レタス植物を作製および／または特定および／または選抜するための方法も提供され、ＱＴＬを異なる栽培レタス植物系統または品種に、特にＮｒ：１感受性レタス系統または品種に導入するための方法も提供される。

【0036】

定義
不定冠詞「ａ」または「ａｎ」は、文脈が１つの要素が存在することおよび１つのみの要素が存在することを明白に要求していない限り、２つ以上の前記要素が存在する可能性を排除しない。従って、不定冠詞「ａ」または「ａｎ」は、通常、「少なくとも１つの」を意味する。

【0037】

「植物品種（plant variety）」は、（植物育種者権の承認条件が満たされているか否かにかかわらず）ある特定の遺伝子型または遺伝子型の組合せからもたらされる特徴の発現に基づいて定義可能であり、それらの特徴のうちの少なくとも１つの発現によって他のあらゆる植物と区別可能であり、いかなる変化も無しに繁殖可能であるため、独立体として認識可能である、既知の最下位の同一植物分類群内の植物群である。従って、用語「植物品種」は、植物が同じ種類であったとしても、全てが１つまたは２つまたは３つの遺伝子座または遺伝子（またはこれらの特定の遺伝子座もしくは遺伝子による表現型的特徴）の存在を特徴とするが、ゲノム内のその他の遺伝子座または遺伝子に関しては著しく互いに異なり得る場合、植物群を表すのに使用することはできない。

【0038】

「レタス」または「栽培レタス」または「栽培レタス（Lactuca sativa）」は、本明細書において、ヒトにより食用に育種され、良好な農学的特徴を有する、レタス（Lactuca sativa L.）種の植物（または前記植物に成長可能な種子）、およびそのような植物の一部を指す。これには、あらゆる種類の育種系統（例えば、戻し交雑系統、近交系）、栽培品種および品種等の、あらゆる栽培レタスが包含される。一般的に、レタスの結球型と非結球型とが区別される。結球型としては例えばクリスプヘッド型、バターヘッド型およびロメイン（コス）型が挙げられ、一方、非結球型としてはリーフ型が挙げられる。栽培レタス植物は、「野生レタス」植物または「野生アキノノゲシ属（Lactuca）」植物、すなわち、栽培植物よりもかなり乏しい生産量および乏しい農学的特徴を一般的に有し、例えば野生集団において天然に生育する植物、ではない。

【0039】

「野生レタス」または「野生アキノノゲシ属（Lactuca）」アクセッションは、ワイルドレタス（Lactuca virosa）、ラクツカ・セリオラ（Lactuca serriola）、ラクツカ・サリグナ（Lactuca saligna）、ラクツカ・ペレニス（Lactuca perennis）等の、栽培レタス（Lactuca sativa）以外の植物種を指す。このような野生レタスは、所望により、胚救出法（Maisonneuve 1987, Agronomique 7: 313-319およびMaisonneuve et al. 1995, Euphytica 85:281-285を参照）および／もしくは染色体倍加法（Thompson and Ryder 1961, US Dept Agric Tech Bul. 1224）、またはラクツカ・セリオラ（L. serriola）等の橋渡し種を介して遺伝子をレタス（L. sativa）に導入可能な方法（Eenink et al. 1982、上記）を用いて、レタス（L. sativa）と他花受精可能な、アキノノゲシ属（Lactuca）種を含んでなる、またはそれらからなることが好ましい。

【0040】

本明細書で使用される場合、用語「植物」には、種子（前記植物に成長可能）、植物全体またはあらゆる部分、例えば、それが得られる植物と同じ遺伝子構造（または非常に似た遺伝子構造）を有することが好ましい、植物器官（例えば、収穫された、または収穫されていない葉等）、植物細胞、植物プロトプラスト、植物細胞もしくは組織の培養物、植物カルス、植物細胞集塊、植物移植片、実生、植物内で無処置の植物細胞、植物クローンもしくはマイクロプロパゲーション、または植物の一部（例えば、収穫された組織または器官）、例えば、植物の挿穂、栄養繁殖、胚、花粉、胚珠、花、葉、結球、種子（自家受精または他家受精の後に植物上に生み出される）、クローン増殖植物（clonally propagated plant）、根、茎、柄、根端、移植片、これらのいずれかの一部等、またはこれらの誘導体が包含される。また、実生、発根前もしくは発根後の挿穂、成熟したおよび／もしくは未成熟な植物または成熟したおよび／もしくは未成熟な葉等の、あらゆる発生段階も包含される。「植物の種子」が言及される場合、これらは、前記植物に成長可能な種子または自家受精または他家受精後に前記植物上に生み出される種子を指す。

【0041】

「体細胞（somatice cell）」および「生殖細胞」は区別可能であり、体細胞は配偶子（例えば胚珠および花粉）、生殖細胞および生殖母細胞以外の細胞である。配偶子、生殖細胞および生殖母細胞は「生殖細胞」である。

【0042】

「組織培養物」または「細胞培養物」は、同一もしくは異なる種類の単離細胞を含んでなるインビトロ組成物または植物組織に組織化されたそのような細胞の集合を指す。レタスの組織培養物および細胞培養物、並びにそれからのレタス植物の再生は、周知であり、広く公表されている（例えば、Teng et al., HortScience. 1992, 27(9): 1030-1032 Teng et al., HortScience. 1993, 28(6): 669-1671, Zhang et al., Journal of Genetics and Breeding. 1992, 46(3): 287-290を参照）。

【0043】

「収穫された植物材料」は、本明細書において、さらなる貯蔵および／またはさらなる使用のために集められた植物部分（例えば、植物全体から脱離した葉、葉の一部または結球）を指す。

【0044】

「収穫された種子」は、系統または品種から収穫された、例えば、自家受精または他家受精後に生み出され、収集された、種子を指す。

【0045】

「収穫された葉」または「収穫された結球」は、本明細書で使用される場合、レタスの葉、または葉の一部または結球、すなわち、根系が無い植物、例えば、実質的に全ての（収穫された）葉、を指す。葉は全体であってもコマ切れであってもよい。

【0046】

「子孫（progeny）」または「子孫（progenies）」または「子孫（descendants）」は、本明細書で使用される場合、本明細書に記載の、ホモ接合型もしくはヘテロ接合型の一つもしくは複数のＮｒ：１抵抗性を付与するＱＴＬおよび／またはＮｒ：１抵抗性表現型を含んでなる（保持する）、子孫（offspring）、すなわち、本発明の植物に由来する（それから入手される）（それに由来し得る、またはそれから入手され得る）第一および全てのさらなる子孫、を指す。子孫は、細胞培養物もしくは組織培養物、もしくは植物の一部の再生によって、または植物の自家受粉によって、または植物の種子の生産によって、発生し得る。さらなる実施態様では、子孫には、少なくとも１つのレタス植物と、同一もしくは別の品種もしくは（育種）系統の別のレタス植物、もしくは野生アキノノゲシ属（Lactuca）植物との交雑、戻し交雑、植物への遺伝子座の挿入、または変異から得られるレタス植物も包含され得る。子孫は、例えば、第一世代の子孫である。すなわち、子孫は、例えば、伝統的な育種法（自家受粉および／または交雑）または再生または形質転換によって親植物から直接的に由来する、入手される、入手可能である、または由来し得る。しかし、用語「子孫」は、一般的には、第二、第三、第四、第五、第六、第七またはそれ以降の世代等のさらなる世代、すなわち、例えば伝統的な育種法、再生または遺伝子形質転換法によって、前の世代から由来する、入手される、入手可能である、または派生し得る植物の世代も包含する。例えば、第二世代の子孫は、上記の方法のいずれかによって第一世代の子孫から生み出すことができる。また、倍加半数体植物も子孫である。

【0047】

「植物系統」または「育種系統」とは、植物表現型において高度に均一な植物およびその子孫を指す。本明細書で使用される場合、用語「近交系」とは、繰り返し同系繁殖された、全ての対立遺伝子がほとんどホモ接合性のである植物系統を指す。従って、「近交系」または「親系統」とは、数世代（例えば、少なくとも４、５、６、７またはそれ以上）の同系交配を経て、その結果高度な均一性を有する植物系統を得た植物を指す。

【0048】

「Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３等」は、２つの親植物間または親系統間の交雑後の連続的な近縁世代を指す。２つの植物または系統を交雑することにより生産された種子から成長した植物はＦ１世代と称される。Ｆ１植物の自家受粉により、Ｆ２世代等がもたらされる。

【0049】

「雑種」とは、ある植物系統または品種と別の植物系統または品種との交雑から収穫された種子、および前記種子から成長した植物または植物部分を指す。

【0050】

「Ｆ１雑種」植物（またはＦ１雑種種子）は、２つの非同質遺伝子近交系親系統の交雑から得られる世代である。従って、Ｆ１雑種種子は、Ｆ１雑種植物に成長する種子である。

【0051】

「種間雑種」とは、ある種の植物（例えばレタス（L. sativa））と、別の種の植物（例えばワイルドレタス（L. virosa））との交雑からつくられた雑種を指す。

【0052】

「交雑」とは、２つの親植物の交配を指す。同様に「他家受粉」とは、異なる親からの２つの配偶子の合体による受精を指す。

【0053】

「自家受粉（selfing）」とは、植物の自家受粉（self-pollination）、すなわち、同一の親からの配偶子の合体を指す。

【0054】

「戻し交雑」とは、一つまたは複数のＮｒ：１抵抗性付与ＱＴＬ等の形質を下位の遺伝的背景（例えば、野生レタス；「ドナー」とも称される）から上位の遺伝的背景（「反復親」とも称される）（例えば、栽培レタス）に導入することができる育種法を指す。交雑種（例えば、野生のＮｒ：１抵抗性レタスと栽培されたＮｒ：１感受性レタスとの交雑によって得られたＦ１植物；またはＦ１の自家受粉から得られたＦ２植物もしくはＦ３植物等）の子孫は、上位の遺伝的背景を有する親に対して、例えば栽培されたＮｒ：１感受性の親に対して、「戻し交雑」される。反復的な戻し交雑の後、下位の遺伝的背景の形質が上位の遺伝的背景に組み込まれる。これに関連して、用語「遺伝子変換した（gene converted）」または「変換植物（conversion plant）」または「一／二／三遺伝子座変換体（single /double/ triple locus conversion）」とは、供与親から導入された一つまたは複数のＱＴＬ（例えば、Ｎｒ：１抵抗性を付与するＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２）に加えて、反復親の所望の形態的および／または生理的特徴の本質的に全てが戻された、戻し交雑によって生じた植物を指す。

【0055】

本明細書では、用語「伝統的育種法」には、例えば、本明細書においてＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２と称される一つまたは複数のＮｒ：１抵抗性付与ＱＴＬを入手、同定、選択、および／または導入することができる、育種家に公知の、交雑、戻し交雑、自家受粉、選抜、染色体倍加、倍加半数体作出、胚救出、橋渡し種の使用、原形質融合、マーカー支援選抜、突然変異育種等（すなわち、遺伝子改変／形質転換／遺伝子導入法以外の方法）が包含される。

【0056】

「再生」とは、インビトロ細胞培養または組織培養または栄養繁殖からの植物の発達を指す。

【0057】

「栄養繁殖」、「栄養生殖」または「クローン繁殖」は、本明細書において同義的に使用され、植物の一部を取り、その植物部分に少なくとも根を形成させる方法を意味し、ここで、植物部分は、例えば、葉、花粉、胚、子葉、胚軸、細胞、プロトプラスト、分裂組織細胞、根、根端、雌ずい、葯、花、茎頂、苗条、茎、果実、および葉柄と定義される、またはそれらに由来する（例えば切り取りによって）。植物全体が栄養繁殖によって再生された場合、それは「栄養繁殖体」または「栄養繁殖植物」とも称される。

【0058】

「一（または二または三）遺伝子座変換（converted）（変換（conversion）））植物」とは、例えば戻し交雑法を介して植物に導入された１つの遺伝子座（または２つもしくは３つの遺伝子座）の特徴に加えて、レタス植物の所望の形態的および／または生理的特徴の本質的に全てが戻される、戻し交雑を含んでなる、または戻し交雑からなる植物育種法によって生じた植物を指す。

【0059】

「導入遺伝子」または「キメラ遺伝子」とは、形質転換によってレタス植物のゲノムに導入されたＤＮＡ配列を含んでなる遺伝子座を指す。そのゲノムに安定に組み込まれた導入遺伝子を含んでなる植物は「遺伝子導入植物」と称される。

【0060】

「実質的に等価な」または「有意に異なっていない」または「統計的に有意に異なっていない」とは、例えば２つの植物系統または品種の間で比較した場合に等価またはほぼ同一である特徴を指す。言い換えれば、２つの植物系統または品種の間で「実質的に等価な」特徴は、前記特徴の平均値が１０％未満（例えば９、８、７、６、５、４、３、２、１％またはそれ未満）異なること、およびＡＮＯＶＡを用いたこの差異の統計的有意性が０．０５以上のｐを有さないことを意味する。

【0061】

「平均値」とは、本明細書では、相加平均を指す。用語「平均値（mean）」は、いくつかの測定値の相加平均を指す。植物系統または品種の表現型がある程度生育条件に依存すること、および、それ故、少なくとも１０、１５、２０、３０、４０、５０またはそれ以上の植物の相加平均が、好ましくは、何回かの反復実験および同一実験における同一条件下で育成された適切な対照植物を伴う無作為化された実験計画において測定されることが、当業者によって理解される。

【0062】

「統計的に有意な」または「統計的に有意に」異なる、または「有意に」異なるとは、適切な対照（例えば、本明細書においては、ＱＴＬを欠く遺伝的対照系統、またはＮｒ：１感受性対照品種、例えばＭａｆａｌｄａ）と比較した場合に、その特徴において対照（の平均値）と統計的に有意な差異（例えば、ｐ値が０．０５未満、ｐ＜０．０５、ＡＮＯＶＡ使用）を示す、Ｎｒ：１抵抗性等の植物系統または品種の特徴を指す。そのため、例えば、平均して対照よりも「統計的に有意により少ない」アブラムシまたは「有意により少ない」アブラムシを有する植物系統または品種または遺伝子型は、平均アブラムシ数における差異が対照植物から統計的に有意である植物である。

【0063】

「レタスヒゲナガアブラムシ」とは、レタスヒゲナガアブラムシ（Nasonovia ribisnigri）種のアブラムシを指す。

【0064】

「バイオタイプＮｒ：０」とは、ＩＶＴ２８０由来のＮｒ遺伝子によって抵抗性を与えられたレタスヒゲナガアブラムシのバイオタイプを指し、すなわち、このバイオタイプのレタスヒゲナガアブラムシはＭａｆａｌｄａ（ニュンヘムズ社（Nunhems））、Ｂａｒｃｅｌｏｎａ（ニュンヘムズ社）等のＮｒ遺伝子を含んでなる品種上で摂食および繁殖することができない。

【0065】

「バイオタイプＮｒ：１」とは、ＩＶＴ２８０由来のＮｒ遺伝子によって抵抗性を与えられていないレタスヒゲナガアブラムシのバイオタイプを指す。従って、このバイオタイプのレタスヒゲナガアブラムシは、Ｍａｆａｌｄａ（ニュンヘムズ社）、Ｂａｒｃｅｌｏｎａ（ニュンヘムズ社）等のＮｒ遺伝子を含んでなる品種および系統上で摂食および繁殖することができる。

【0066】

制御された環境条件下（例えばクライメイトセル（climate cell）内）で実行される抵抗性試験に言及する場合、バイオタイプＮｒ：０またはＮｒ：１の単一の選択されたアブラムシのクローンコロニーが言及されることが好ましい。これらは本明細書ではアブラムシ「単離物」とも称される。

【0067】

野生または栽培レタス植物系統、品種またはアクセッションは、バイオタイプＮｒ：０の繁殖（バイオタイプＮｒ：０のアブラムシによる外寄生の後、例えば約７、１４、２１、２８、３５日および／またはそれ以上の日数後に、周期的に計数された、植物当たりのアブラムシの平均数）が、感受性品種Ｓａｌｉｎａｓ（異名Ｓａｌａｄｉｎ；育種家Ｒｙｄｅｒ Ｅ．Ｊ．、米国農務省、農業調査局、カリフォルニア、米国、が最初に開発）等の、レタスヒゲナガアブラムシ耐性遺伝子を欠く対照植物と比較して、統計的に有意に減少している場合、「Ｎｒ：０抵抗性植物」、または「バイオタイプＮｒ：０に対して抵抗性の植物」、または「Ｎｒ：０抵抗性」を有する植物、または「Ｎｒ：０抵抗性表現型」であると言われる。バイオタイプＮｒ：０の繁殖の有意な減少は、当該技術分野において公知の、例えばMcCreight and Liu, 2012, HortScience 47(2)の材料と方法等の記載される、例えば温室試験または囲い圃場試験（caged field test）を用いて、決定することができる。温室試験または囲い圃場試験は、自由選択試験（free-choice test）（アブラムシがいくつかの植物系統または品種上で摂食および繁殖することが可能）および／または非選択試験（non-choice test）（アブラムシが１つの植物系統または品種上でのみ摂食および繁殖することが可能）であり得る。あるいは、品種Ｓａｌｉｎａｓ（異名Ｓａｌａｄｉｎ）等の感受性対照の天然の外寄生がモニターされ、対照上の外寄生が多数である場合に、アブラムシが試験植物および対照上で計数される、開放圃場試験が実行され得る。前記用語は、「部分的Ｎｒ：０抵抗性」（McCreight and Liu, 2012に記載のＰＩ４９１０９３におけるような）および「完全Ｎｒ：０抵抗性」（ＩＶＴ２８０におけるような、McCreight and Liu 2012（同上）を参照）の両方を包含する。完全Ｎｒ：０抵抗性植物上では、バイオタイプＮｒ：０のアブラムシは、接種後または外寄生後に測定される週１回の時点において、実質的に摂食および繁殖しない。

【0068】

野生または栽培レタス植物系統、品種またはアクセッションは、バイオタイプＮｒ：１のアブラムシによる外寄生後に（例えば、圃場への実生の移植から２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４週もしくはそれ以上の週数後；および／または、植物が３〜４本葉期以降に達した後、すなわち、最終成体サイズの３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％もしくは１００％に達した際に）一つまたは複数の時点において計数された植物当たりのバイオタイプＮｒ：１のアブラムシの平均数が、レタスヒゲナガアブラムシ耐性遺伝子を欠く対照植物（例えば、品種Ｓａｌｉｎａｓ（異名Ｓａｌａｄｉｎ））と比較して、並びに／または、Ｎｒ耐性遺伝子を有する対照植物、例えば、品種Ｍａｆａｌｄａ（ニュンヘムズ社）、および／もしくは前記遺伝子移入断片を欠くが、その他の点では遺伝子移入断片を含んでなる植物と遺伝的に同一もしくは遺伝的に非常に類似した遺伝的対照と比較して、統計的に有意に減少している場合、「Ｎｒ：１抵抗性植物」、または「バイオタイプＮｒ：１に対して抵抗性の植物」、または「Ｎｒ：１抵抗性」を有する植物、または「Ｎｒ：１抵抗性表現型」、または「有意に低減した感受性を有する植物」、または「有意に増強された抵抗性」であると言われる。一つの態様において、有意な減少とは、Ｎｒ：１抵抗性植物上のアブラムシの平均数が、同一条件下で育成された場合の、品種Ｍａｆａｌｄａ等のＮｒ：１感受性品種（またはＮｒ遺伝子を含んでなる他のＮｒ：１感受性品種）上に、または遺伝的対照上に見られるアブラムシの平均数の、多くとも５０％、４９％、４８％、４７％、４５％、好ましくは多くとも４０％、好ましくは多くとも３０％、２０％または１０％、より好ましくは多くとも５％、３％、２％、または１％であることを指す。一つの実施態様では、植物は、Ｎｒ：１アブラムシを含まない、または実質的に含まない（植物系統または品種につき平均１０、９、８、７、６、５、４、３未満のアブラムシ）。Ｎｒ：１抵抗性は、実施例において定義および記載されるＮｒ：１抵抗性アッセイで決定することができる。

【0069】

「Ｎｒ：１抵抗性アッセイ」は、例えば実施例に記載される、非選択試験（アブラムシが１つの植物系統または品種上でのみ摂食および繁殖することが可能）および／または（自由）選択試験であり得る。選択試験または非選択試験は、クライメイトセル等の制御された環境内であるか、または圃場内（選択試験に対する開放圃場、または、非選択試験に対する囲い圃場）であり得る。抵抗性についての選択試験は、アブラムシが摂食および繁殖のために様々な植物遺伝子型の中から選択をすることができる試験を指す。一般的に、選択試験は、抗生性（antixenosis）（非選好性（non-preference））抵抗性、すなわち、植物遺伝子型を魅力のないものにする要素によって引き起こされる抵抗性、を特定するために使用される。抵抗性についての非選択試験は、アブラムシが摂食および繁殖のために様々な植物遺伝子型の中から選択をすることができず、１つの遺伝子型上でのみ摂食および繁殖することが許された、試験を指す。これにより抗生作用の検出が可能になる。Ｍａｆａｌｄａ等のＮｒ：１感受性対照植物上で、アブラムシは、約５０、１００、１５０、２００、２５０、３００匹またはそれ以上まで繁殖することができる。非選択条件下で有効な抵抗性は昆虫それ自体に影響を与え、例えば、昆虫は死ぬか、より少ない子孫を産むか、またはよりゆっくりと成長する。

【0070】

形質を付与する遺伝因子、遺伝子座、遺伝子移入断片または遺伝子または対立遺伝子（例えば、レタスヒゲナガアブラムシ（N. ribisnigri）バイオタイプＮｒ：１に対する抵抗性を付与する一つまたは複数のＱＴＬ）は、前記遺伝因子、遺伝子座、遺伝子移入断片、遺伝子または対立遺伝子によって付与される形質（Ｎｒ：１抵抗性）の追加を除いて、受容植物の表現型変化をもたらすこと無く、伝統的育種法を用いて、それが存在する植物または種子から、それが存在しない別の植物または種子（例えば、系統または品種）に、導入可能である場合に、植物または種子「から入手可能」である、または「から入手され」得る、または「由来し得る」、または「由来し」得る、または「に存在する」または「に見られる」と言われる。前記用語は同義的に使用され、前記遺伝因子、遺伝子座、遺伝子移入断片、遺伝子または対立遺伝子は、従って、前記形質を欠く他のあらゆる遺伝的背景に導入することができる。寄託され、前記遺伝因子、遺伝子座、遺伝子移入断片、遺伝子または対立遺伝子を含んでなる種子のみが使用可能であるだけでなく、寄託された種子またはその子孫から開発された市販の品種等の、前記遺伝因子、遺伝子座、遺伝子移入断片、遺伝子または対立遺伝子を保持するよう選抜された係る種子に由来する子孫（progeny）／子孫（descendant）も使用可能であり、本明細書に包含される。植物（または植物のゲノムＤＮＡ、細胞もしくは組織）が、寄託された種子から入手可能なものと同じ遺伝因子、遺伝子座、遺伝子移入断片、遺伝子または対立遺伝子を含んでなるかどうかは、当該技術分野において公知の一つまたは複数の手法、例えば、表現型アッセイ、全ゲノム配列決定、分子マーカー解析（例えば、本明細書で開示されるマーカーの一つまたは複数または全てを使用）、形質マッピング、染色体彩色、対立性検定等、または手法の組合せを用いて、当業者により、決定することができる。

【0071】

用語「対立遺伝子」は、特定の遺伝子座の遺伝子の一つまたは複数の別形態のいずれかを意味し、これらの対立遺伝子は全て、特定の遺伝子座における１つの形質または特徴に関連している。生物の二倍体細胞では、所与の遺伝子の対立遺伝子は、染色体上の特定の位置、すなわち遺伝子座（locus）（複数形ではloci）に位置している。１つの対立遺伝子が、相同染色体対の各染色体上に存在している。二倍体植物種は、特定の遺伝子座に多数の異なる対立遺伝子を含み得る。これらは、遺伝子の同一対立遺伝子（ホモ接合性）または２つの異なる対立遺伝子（ヘテロ接合性）であり得る。

【0072】

用語「遺伝子」は、細胞内でメッセンジャーＲＮＡ分子（ｍＲＮＡ）に転写される領域（転写領域）、および機能的に連結された調節領域（例えば、プロモーター）を含んでなる（ゲノム）ＤＮＡ配列を意味する。従って、ある遺伝子の異なる対立遺伝子は、例えば、ゲノムＤＮＡ配列（例えばプロモーター配列、エクソン配列、イントロン配列等）、ｍＲＮＡおよび／またはコードされるタンパク質のアミノ酸配列の一つまたは複数のヌクレオチドにおける差異の形態であり得る、前記遺伝子の異なる別の形態である。

【0073】

「対立性検定」とは、２つの植物系統または品種に見られる２つの表現型（例えば２つのＮｒ：１抵抗性）が、同じ遺伝子によって決定されるか、異なる遺伝子によって決定されるかを検定することができる、遺伝子検査を指す。例えば、試験される植物が互いに交雑され、Ｆ１が同系繁殖され、Ｆ２子孫の中での表現型の分離が決定される。分離比は、その細胞が対立形質であるかどうかを示す。

【0074】

用語「遺伝子座（locus）」（複数形ではloci）は、例えば遺伝子または遺伝子マーカーが存在する、染色体上の特定の１つもしくは複数の場所または部位を意味する。Ｎｒ：１抵抗性遺伝子座（またはＮｒ１抵抗性付与遺伝子座）は、従って、野生レタス、特にワイルドレタス（Lactuca virosa）アクセッション、例えば（限定はされないが）ＮＣＩＭＢ４２０８６、のゲノム内の場所であり、Ｎｒ：１抵抗性付与ＱＴＬは、６番染色体上（ＱＴＬ６．１）および／または７番染色体上（ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２）に見られる。本発明の栽培レタスでは、Ｎｒ：１抵抗性を付与する一つまたは複数のＱＴＬが、該ＱＴＬのうちの一つまたは複数を含んでなる野生レタスアクセッション、例えば、受入番号ＮＣＩＭＢ４２０８６で寄託された野生ワイルドレタス（L. virosa）アクセッション、から遺伝子移入される。

【0075】

「量的形質遺伝子座」、または「ＱＴＬ」は、連続的に分布した（定量的な）表現型の発現度に影響を与える一つまたは複数の対立遺伝子をコードする染色体座である。抵抗性を付与する量的形質遺伝子座は、本明細書では、ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１およびＱＴＬ７．２と称される。

【0076】

「レタスゲノム」および「レタスゲノム上の物理的位置」および「６番染色体上の物理的位置」および／または「７番染色体上の物理的位置」とは、栽培レタスの物理的なゲノム、ワールドワイドウェブｌｇｒ．ｇｅｎｏｍｅｃｅｎｔｅｒ．ｕｃｄａｖｉｓ．ｅｄｕ（６番染色体、指定Ｌｓａｔ＿１＿ｖ４＿ｌｇ６、および７番染色体、指定Ｌｓａｔ＿１＿ｖ４＿ｌｇ７、を含んでなる、Ｌｅｔｔｕｃｅ ｖｅｒｓｉｏｎ ３．２データベース）、および物理的な染色体、並びに染色体上の物理的位置を指す。そのため、例えばＳＮＰ＿０１は、０〜２４４．７Ｍｂの物理的サイズを有する、６番染色体のヌクレオチド６０，６８８，９３９に物理的に位置するヌクレオチド（または「塩基」）に位置する。同様に、ＳＮＰ＿０８は、０〜２４２．９Ｍｂの物理的サイズを有する、７番染色体の７２，７７２，１０４に位置するヌクレオチド（または「塩基」）に位置する。

【0077】

同一染色体上の遺伝子座間（例えば分子マーカー間および／または表現型マーカー間）の「物理的距離」は、実際には、ベースもしくは塩基対（ｂｐ）、キロベースもしくはキロ塩基対（ｋｂ）またはメガベースもしくはメガ塩基対（Ｍｂ）で表される物理的距離である。

【0078】

同一染色体上の遺伝子座間（例えば分子マーカー間および／または表現型マーカー間）の「遺伝的距離」は、乗換えの頻度、すなわち組み換え頻度（ＲＦ）、によって測定され、センチモルガン（ｃＭ）で示される。１ｃＭは１％の組み換え頻度に相当する。組換えを見つけることができない場合、ＲＦはゼロであり、遺伝子座は物理的に互いに極度に近接しているか、あるいは同一のものである。２つの遺伝子座が離れているほど、ＲＦはより高くなる。

【0079】

「遺伝子移入断片」または「遺伝子移入セグメント」または「遺伝子移入領域」とは、交雑または伝統的育種法(例えば、戻し交雑)によって同一または近縁種の別の植物に導入された染色体断片（または染色体部分または領域）を指し、すなわち、遺伝子移入された断片は、動詞「遺伝子移入する」で言及される伝統的な育種法（例えば、戻し交雑）の結果である。レタスにおいて、野生レタスアクセッションは、野生ゲノム（例えばワイルドレタス（L. virosa））の断片を栽培レタス、レタス（L. sativa）のゲノムに遺伝子移入するのに使用され得る。このような栽培レタス植物は、従って、「栽培レタス（L. sativa）のゲノム」を有するが、ゲノム内に、１つの野生レタスの断片（または２つもしくは３つの断片）、例えば、ワイルドレタス（L. virosa）等の近縁野生アキノノゲシ属（Lactuca）ゲノムの１つの遺伝子移入断片（または２つもしくは３つ）を含んでなる。用語「遺伝子移入断片」は、染色体全体を決して包含せず、染色体の一部のみを包含すると理解される。遺伝子移入断片は、巨大（例えば染色体の半分）な場合があるが、より小さいことが好ましく、例えば、約８０Ｍｂ、７４Ｍｂ、７３Ｍｂ、７０Ｍｂ、５０Ｍｂ、３０Ｍｂ、２０Ｍｂ、１５Ｍｂ以下、例えば、約１０Ｍｂ以下、約９Ｍｂ以下、約８Ｍｂ以下、約７Ｍｂ以下、約６Ｍｂ以下、約５Ｍｂ以下、約４Ｍｂ以下、約３Ｍｂ以下、約２Ｍｂ以下、約１Ｍｂ（＝１，０００，０００塩基対）以下、または約０．５Ｍｂ（＝５００，０００塩基対）以下、例えば約２００，０００ｂｐ（＝２００キロ塩基対）以下、約１００，０００ｂｐ（１００ｋｂ）以下、約５０，０００ｂｐ（５０ｋｂ）以下、約２５，０００ｂｐ（２５ｋｂ）以下が好ましい。

【0080】

「均一性」または「均一な」は、植物系統または品種の遺伝的特徴および表現型的特徴に関する。近交系は、数世代の同系交配によって生み出されるため、遺伝的に高度に均一である。

【0081】

用語「Ｎｒ：１対立遺伝子」または「Ｎｒ：１抵抗性対立遺伝子」とは、本発明の一つの態様において、野生レタスから、特にワイルドレタス（L. virosa）アクセッションから、栽培レタスに（栽培レタス（L. sativa）の６番染色体および／または７番染色体上に）遺伝子移入される、遺伝子座ＱＴＬ６．１またはＱＴＬ７．１またはＱＴＬ７．２に見られる対立遺伝子を指す。用語「Ｎｒ：１対立遺伝子」は、従って、異なる野生レタスアクセッションから入手可能なＮｒ：１対立遺伝子も包含する。１つまたは２つのＮｒ：１対立遺伝子がゲノム内の特定の遺伝子座に存在する場合（すなわち、それぞれヘテロ接合型またはホモ接合型で）、植物系統または品種は、前記ＱＴＬを欠く遺伝的対照と比較して有意に増強されたＮｒ：１抵抗性を有する。前記遺伝子移入断片を欠く栽培レタス植物において、６番染色体および／または７番染色体上の同一遺伝子座に見られるレタス（L. sativa）対立遺伝子は、本明細書では「野生型」対立遺伝子（ｗｔ）と称される。従って、Ｎｒ：１に対し感受性であり６番染色体および７番染色体上のＱＴＬを欠く栽培レタスはｗｔ／ｗｔと名付けられ、一方、ＱＴＬ６．１／ｗｔ植物および／またはＱＴＬ７．１／ｗｔ植物および／またはＱＴＬ７．２／ｗｔ植物、並びにＱＴＬ６．１／ＱＴＬ６．１植物および／またはＱＴＬ７．１／ＱＴＬ７．１植物および／またはＱＴＬ７．２／ＱＴＬ７．２植物は、それぞれヘテロ接合型またはホモ接合型でＱＴＬを保有する栽培レタス植物である。また、本明細書において提供されるＳＮＰマーカーの遺伝子型は、野生型遺伝子型、またはホモ接合型もしくはヘテロ接合型であるＱＴＬを含んでなる遺伝子移入断片を示すものである。例えば、ＱＴＬ６．１を示すＳＮＰ＿０１の遺伝子型は「ＡＴ」（ＱＴＬ６．１／ｗｔを示す）または「ＡＡ」（ＱＴＬ６．１／ＱＴＬ６．１を示す）であり、一方、野生型を示す遺伝子型は「ＴＴ」（ｗｔ／ｗｔ）である。他の全てのＳＮＰについては本明細書の別の場所を参照されたい。従って、本明細書において、ＳＮＰマーカーまたはＳＮＰ遺伝子型に対する言及が為される場合、Ｎｒ：１抵抗性を付与するＱＴＬを含んでなる遺伝子移入断片を示すマーカーの遺伝子型が言及される（ホモ接合型またはヘテロ接合型で）。

【0082】

「異型」もしくは「オルソロガス」配列または「異型ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１もしくはＱＴＬ７．２」は、ＮＣＩＭＢ４２０８６に存在するＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１およびＱＴＬ７．２（およびこれらを含んでなるゲノム領域）とは異なる野生レタス植物（特に、異なるワイルドレタス（L. virosa）植物またはアクセッション）に由来し、ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２に連結されたＳＮＰの一つまたは複数または全てを含んでなり、異型ゲノム配列がＳＮＰ（配列番号１〜２２、ＳＮＰ１．２３、ＳＮＰ２．２４、ＳＮＰ１７．２５、ＶＳＰ１〜ＶＳＰ４のいずれか１つ）を含んでなる配列番号に対する実質的な配列同一性、すなわち、少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を含んでなる、ＱＴＬ（ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１またはＱＴＬ７．２）、またはこれらを含んでなる遺伝子移入断片を指す。従って、特定のゲノム配列におけるある特定のＳＮＰ遺伝子型（配列番号１〜配列番号２２、ＳＮＰ１．２３、ＳＮＰ２．２４、ＳＮＰ１７．２５、ＶＳＰ１〜ＶＳＰ４から選択）に対して言及が為される場合、これは、前記ゲノム配列の異型におけるＳＮＰ遺伝子型、すなわち、言及された配列（配列番号１〜配列番号２２、ＳＮＰ１．２３、ＳＮＰ２．２４、ＳＮＰ１７．２５、ＶＳＰ１〜ＶＳＰ４から選択）に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を含んでなるゲノム配列におけるＳＮＰ遺伝子型も包含する。従って、配列番号１〜２２、ＳＮＰ１．２３、ＳＮＰ２．２４、ＳＮＰ１７．２５、ＶＳＰ１〜ＶＳＰ４のいずれか１つに対する本明細書におけるあらゆる言及は、一つの態様においては、配列番号１〜２２、ＳＮＰ１．２３、ＳＮＰ２．２４、ＳＮＰ１７．２５、ＶＳＰ１〜ＶＳＰ４のいずれか１つの異型も包含し、前記異型は、前記配列に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を含んでなる。

【0083】

「遺伝的対照」は、６番染色体および７番染色体上の遺伝子移入を欠く、すなわち、６番染色体および７番染色体が「野生型」（ｗｔ／ｗｔ）、すなわち栽培レタスゲノムであることを除き、６番染色体上（ＱＴＬ６．１）および／または７番染色体上（ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２）の遺伝子移入を含んでなる栽培レタス植物と同一または非常に類似した栽培ゲノム（cultivated genome）を有する、レタスの系統、品種または雑種である。

【0084】

用語「マーカーアッセイ」は、栽培レタス（L. sativa）の６番染色体および／または７番染色体上に、Ｎｒ：１抵抗性付与ＱＴＬ（ＱＴＬ６．１および／もしくはＱＴＬ７．１および／もしくはＱＴＬ７．２、またはこれらの異型）を含んでなる野生レタス由来の遺伝子移入が存在するかどうか（あるいは、野生レタスがそれらのゲノム内にＱＴＬ６．１および／もしくはＱＴＬ７．１および／もしくはＱＴＬ７．２またはこれらの異型を含んでなるかどうか）の、以下による検査のために使用することができる、分子マーカーアッセイを指す：
ＱＴＬ６．１（または異型）に連結されたあらゆる一つまたは複数のマーカーの遺伝子型、例えば、ＳＮＰ＿０１〜ＳＮＰ＿０７、並びに／または、ＳＮＰマーカーＳＮＰ＿０１とＳＮＰ＿０７との間の、および／もしくはこれらのマーカーのいずれか１つの７ｃＭ以内もしくは５ｃＭ以内の、および／もしくはこれらのマーカーのいずれか１つの５Ｍｂ、３Ｍｂ、２Ｍｂ、１Ｍｂ、０．５Ｍｂ、０．１Ｍｂ、５０ｋｂ、２０ｋｂ以下以内のあらゆる野生レタス（特に、ワイルドレタス（L. virosa））ゲノム特異的マーカーから選択される、一つまたは複数のＳＮＰマーカーの遺伝子型の決定；
あるいはＱＴＬ６．１（または異型）に連結されたあらゆる一つまたは複数のマーカーの遺伝子型、例えば、ＳＮＰ１．２３、ＳＮＰ＿０２、ＳＮＰ２．２４およびＳＮＰ＿０３（所望によりＶＳＰ１またはＶＳＰ３も）、並びに／またはＳＮＰマーカーＳＮＰ１．２３、ＳＮＰ＿０２、ＳＮＰ２．２４およびＳＮＰ＿０３（所望によりＶＳＰ１またはＶＳＰ３も）の間の、および／もしくはこれらのマーカーのいずれか１つの７ｃＭ以内もしくは５ｃＭ以内の、および／もしくはこれらのマーカーのいずれか１つの１２Ｍｂ、１０Ｍｂ、５Ｍｂ、３Ｍｂ、２Ｍｂ、１Ｍｂ、０．５Ｍｂ、０．１Ｍｂ、５０ｋｂ、２０ｋｂ以下以内のあらゆる野生レタス（特に、ワイルドレタス（L. virosa））ゲノム特異的マーカーから選択される、一つまたは複数のＳＮＰマーカーの遺伝子型；
並びに／または、ＱＴＬ７．１（または異型）に連結されたあらゆる一つまたは複数のマーカーの遺伝子型、例えば、ＳＮＰ＿１５〜ＳＮＰ＿２２、並びに／またはＳＮＰマーカーＳＮＰ＿１５とＳＮＰ＿２２との間の、および／もしくはこれらのマーカーのいずれか１つの７ｃＭ以内もしくは５ｃＭ以内の、および／もしくはこれらのマーカーのいずれか１つの５Ｍｂ、３Ｍｂ、２Ｍｂ、１Ｍｂ、０．５Ｍｂ、０．１Ｍｂ、５０ｋｂ、２０ｋｂ以下以内のあらゆる野生レタスゲノム特異的マーカーから選択される、一つまたは複数のＳＮＰマーカーの遺伝子型の決定；
あるいは、ＱＴＬ７．１（または異型）に連結されたあらゆる一つまたは複数のマーカーの遺伝子型、例えば、ＳＮＰ＿１７、ＳＮＰ＿１７．２５、ＳＮＰ＿１８およびＳＮＰ＿１９（所望によりＶＳＰ２またはＶＳＰ４も）、並びに／または、ＳＮＰマーカーＳＮＰ＿１７、ＳＮＰ＿１７．２５、ＳＮＰ＿１８およびＳＮＰ＿１９（所望によりＶＳＰ２またはＶＳＰ４も）の間の、および／もしくはこれらのマーカーのいずれか１つの７ｃＭ以内もしくは５ｃＭ以内の、および／もしくはこれらのマーカーのいずれか１つの１２Ｍｂ、１０Ｍｂ、５Ｍｂ、３Ｍｂ、２Ｍｂ、１Ｍｂ、０．５Ｍｂ、０．１Ｍｂ、５０ｋｂ、２０ｋｂ以下以内のあらゆる野生レタス（特に、ワイルドレタス（L. virosa））ゲノム特異的マーカーから選択される、一つまたは複数のＳＮＰマーカーの遺伝子型；
並びに／または、ＱＴＬ７．２（または異型）に連結されたあらゆる一つまたは複数のマーカーの遺伝子型、例えば、ＳＮＰ＿０８〜ＳＮＰ＿１４、並びに／または、ＳＮＰマーカーＳＮＰ＿０８とＳＮＰ＿１４との間の、および／もしくはこれらのマーカーのいずれか１つの７ｃＭ以内もしくは５ｃＭ以内の、および／またはこれらのマーカーのいずれか１つの５Ｍｂ、３Ｍｂ、２Ｍｂ、１Ｍｂ、０．５Ｍｂ、０．１Ｍｂ、５０ｋｂ、２０ｋｂ以下以内のあらゆる野生レタスゲノム特異的マーカーから選択される、一つまたは複数のＳＮＰマーカーの遺伝子型の決定。２つのマーカー「の間の」マーカーは、染色体上のこれらのマーカーの間に物理的に位置する。

【0085】

「組換え染色体」とは、相同染色体間の乗換えを通じて生じた新たな遺伝子構造を有する染色体、例えば、「組換え６番染色体」または「組換え７番染色体」、すなわち、親植物のいずれにも存在せず、それぞれ６番または７番染色体対の相同染色体間の稀な乗換えイベントを通じて生じる６番染色体または７番染色体、を指す。本明細書においては、例えば、それぞれＮｒ：１抵抗性ＱＴＬを含んでなる、組換えレタス６番および７番染色体が提供される。

【0086】

「マーカー支援選抜」または「ＭＡＳ」は、特定の遺伝子座または特定の染色体領域（例えば遺伝子移入断片）に遺伝的に連結された分子マーカーの存在を利用して、特定の遺伝子座または領域（遺伝子移入断片）の存在について植物を選抜する方法である。例えば、Ｎｒ：１ＱＴＬに遺伝的に連結された分子マーカーを用いて、６番および／または７番染色体上にＮｒ：１ＱＴＬを含んでなるレタス植物を検出および／または選抜することができる。遺伝子座に対する分子マーカーの遺伝子連鎖が近いほど（例えば、約７ｃＭ、６ｃＭ、５ｃＭ、４ｃＭ、３ｃＭ、２ｃＭ、１ｃＭ、０．５ｃＭまたはそれ以下）、マーカーが減数分裂性組換えを通じて遺伝子座から分離しにくくなる。同様に、２つのマーカーが互いにより近く連結されているほど（例えば、７ｃＭまたは５ｃＭ、４ｃＭ、３ｃＭ、２ｃＭ、１ｃＭまたはそれ以下以内）、２つのマーカーは互いに分離しにくくなる（且つ、ユニットとして同時分離し易くなる）。

【0087】

別のマーカーの「７ｃＭ以内または５ｃＭ以内の」マーカーは、マーカー（すなわちマーカーのいずれかの端）に隣接する７ｃＭまたは５ｃＭ領域内に遺伝的に位置するマーカーを指す。同様に、別のマーカーの１０Ｍｂ、５Ｍｂ、３Ｍｂ、２．５Ｍｂ、２Ｍｂ、１Ｍｂ、０．５Ｍｂ、０．４Ｍｂ、０．３Ｍｂ、０．２Ｍｂ、０．１Ｍｂ、５０ｋｂ、２０ｋｂ、１０ｋｂ、５ｋｂまたはそれ以下以内のマーカーは、マーカー（すなわちマーカーのいずれかの端）に隣接するゲノムＤＮＡ領域の５Ｍｂ、３Ｍｂ、２．５Ｍｂ、２Ｍｂ、１Ｍｂ、０．５Ｍｂ、０．４Ｍｂ、０．３Ｍｂ、０．２Ｍｂ、０．１Ｍｂ、５０ｋｂ、２０ｋｂ、１０ｋｂ、５ｋｂまたはそれ以下以内に物理的に位置するマーカーを指す。

【0088】

「ロッドスコア」（オッズの対数（底１０））は、動物集団および植物集団における連鎖解析にしばしば使用される統計検定を指す。ロッドスコアは、２つの遺伝子座（分子マーカー遺伝子座および／または表現型形質遺伝子座）が実際に連鎖している場合の試験データを得る尤度を、全く偶然に同一データを得る尤度と比較する。正のロッドスコアは連鎖の存在を裏付け、３．０より大きいロッドスコアは連鎖の証拠と見なされる。＋３のロッドスコアは、観察中の連鎖が偶然に生じなかったことの、１０００：１のオッズを示す。

【0089】

「単離核酸配列」または「単離ＤＮＡ」とは、それが単離された天然環境、例えば、細菌宿主細胞内の、または植物の核内ゲノムもしくは色素体ゲノム内の核酸配列、の中にはもはや存在しない、核酸配列を指す。

【0090】

「宿主細胞」または「組換え宿主細胞」または「形質転換細胞」は、少なくとも１つの核酸分子が前記細胞に導入された結果として生じる、新たな個々の細胞（または生物）を指す用語である。宿主細胞は植物細胞またはバクテリア細胞であることが好ましい。宿主細胞は、核酸を染色体外（エピソーム）複製分子として含有していてもよく、あるいは、宿主細胞の核ゲノムもしくは色素体ゲノムに組み込まれた、または導入された染色体（例えばミニ染色体）としての、核酸を含んでなってもよい。

【0091】

「配列同一性」および「配列類似性」は、包括的または局所的なアラインメントアルゴリズムを用いる、２つのペプチド配列または２つのヌクレオチド配列のアラインメントによって決定することができる。配列は、例えばＧＡＰプログラムまたはＢＥＳＴＦＩＴプログラムまたはＥｍｂｏｓｓプログラム「Ｎｅｅｄｌｅ」（初期パラメータを使用、下記参照）によって最適にアラインメントされ、少なくともある特定の最小パーセンテージの配列同一性（以下で詳述）を共有する場合に、「実質的に同一な」または「実質的に類似した」と称され得る。これらのプログラムは、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈの包括的アラインメントアルゴリズムを使用して、２つの配列をそれらの全長に亘ってアラインメントし、一致数を最大化し、ギャップ数を最小化する。一般的には初期パラメータが使用され、ギャップ生成ペナルティーは１０であり、ギャップ伸長ペナルティーは０．５である（ヌクレオチドアラインメントおよびタンパク質アラインメントの両方で）。ヌクレオチドにおいては、使用される初期スコア行列はＤＮＡＦＵＬＬであり、タンパク質においては、初期スコア行列はＢｌｏｓｕｍ６２である（Henikoff & Henikoff, 1992, PNAS 89, 10915-10919）。配列アラインメントおよび配列同一性パーセントのスコアは、例えば、ebi.ac.uk/Tools/psa/emboss_needle/）においてワールドワイドウェブ上で利用可能なＥＭＢＯＳＳ等のコンピュータプログラムを用いて決定され得る。あるいは、配列類似性または配列同一性は、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ等のデータベースに対して検索をかけることによって決定され得るが、ヒットを回収し、ペアワイズアラインメントにかけて、配列同一性を比較するべきである。２つのタンパク質または２つのタンパク質ドメイン、または２つの核酸配列は、配列同一性パーセントが少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％またはそれ以上（例えば、少なくとも９９．１、９９．２ ９９．３ ９９．４、９９．５、９９．６、９９．７、９９．８、９９．９またはそれ以上である場合に（Ｅｍｂｏｓｓ「ｎｅｅｄｌｅ」によって決定、初期パラメータ、すなわち、ギャップ生成ペナルティー＝１０、ギャップ伸長ペナルティー＝０．５、を使用、核酸にはスコア行列ＤＮＡＦＵＬＬ、タンパク質にはＢｌｏｓｕｍ６２を使用）、「実質的な配列同一性」を有する。

【0092】

参照配列「に対する実質的な配列同一性」を有する、または参照配列に対して少なくとも８０％、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．２％、９９．５％、９９．９％の核酸配列同一性の配列同一性を有する、核酸配列（例えばＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）に対して言及が為される場合、一つの実施態様では、前記ヌクレオチド配列は、所与のヌクレオチド配列と実質的に同一であると見なされ、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件を用いて特定され得る。別の実施態様では、核酸配列は、所与のヌクレオチド配列と比較して一つまたは複数の変異を含むが、それでもなお、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件を用いて特定され得る。

【0093】

「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」を用いることで、所与のヌクレオチド配列と実質的に同一なヌクレオチド配列を特定することができる。ストリンジェントな条件は、配列依存的であり、異なる環境下では異なってくる。一般的に、ストリンジェントな条件は、規定のイオン強度およびｐＨにおける特定の配列の融解温度（thermal melting point）（Ｔｍ）よりも約５℃低くなるように選択される。Ｔｍは、標的配列の５０％が完全一致プローブにハイブリダイズする（規定のイオン強度およびｐＨ下での）温度である。典型的には、塩濃度がｐＨ７において約０．０２モル濃度であり、温度が少なくとも６０℃である、ストリンジェントな条件が選択されることとなる。塩濃度の低下および／または温度の上昇はストリンジェンシーを増加させる。ＲＮＡ−ＤＮＡハイブリダイゼーション（例えば１００ｎｔのプローブを使用するノーザンブロット）のストリンジェントな条件は、例えば、６３℃で２０分間の０．２×ＳＳＣ中での少なくとも１回の洗浄を含む条件、または等価条件である。ＤＮＡ−ＤＮＡハイブリダイゼーション（例えば１００ｎｔのプローブを使用するサザンブロット）のストリンジェントな条件は、例えば、少なくとも５０℃の温度、通常は約５５℃で、２０分間の０．２×ＳＳＣ中での少なくとも１回の洗浄（通常２回）を含む条件、または等価条件である。Sambrook et al. (1989)およびSambrook and Russell (2001)も参照されたい。

【図面の簡単な説明】

【0094】

【図1】Ａ．接種の７、１４、２１、２８および３５日後の、非選択試験における、感受性対照品種Ｍａｆａｌｄａ上およびＮＣＩＭＢ４２０８６上のアブラムシ（Ｎｒ：１のドイツ単離物（German isolate））の平均数を示すグラフ。ＢはＡと同じであるが、より詳細なスケールのグラフを示す。

【図2】接種の７、１４、２１、２８および３５日後の、自由選択試験における、ＮＣＩＭＢ４２０８６上のアブラムシの平均数を示すグラフ。Ａはファルツ地域由来のドイツＮｒ：１単離物に関し、一方、Ｂはペルピニャン地域由来のフランスＮｒ：１単離物に関する。

【図3A】６番染色体上のワイルドレタス（L. virosa）アクセッションＮＣＩＭＢ４２０８６由来の遺伝子移入断片（太棒で例示、本明細書に描かれるものよりも長いまたは短い場合がある）（ＱＴＬ６．１を含んでなる）、および７番染色体上のワイルドレタス（L. virosa）アクセッションＮＣＩＭＢ４２０８６由来の２つの遺伝子移入断片（ＱＴＬ７．１およびＱＴＬ７．２を含んでなる）、並びに、遺伝子移入断片およびレタスゲノム上のそれらの物理的位置を示すＳＮＰマーカーを含んでなる、レタス（L. sativa）の６番染色体および７番染色体の模式的なグラフ（縮尺なし）。星（^＊）の数は、ロッドスコアが有意（星１つ）または高度に有意（星２つまたは３つ）であることを示す。

【図3B】６番染色体上（ＱＴＬ６．１またはその異型を含んでなる）および７番染色体上（ＱＴＬ７．１またはその異型を含んでなる）の野生ワイルドレタス（L. virosa）由来（例えば、アクセッションＮＣＩＭＢ４２０８６由来）の遺伝子移入断片（灰色の棒）を含んでなる、レタス（L. sativa）の６番染色体および７番染色体の模式的なグラフ（縮尺なし）。^＊は、２つの野生ワイルドレタス（L. virosa）アクセッションに対して特異的なＳＮＰマーカー、６番染色体上のＳＮＰマーカーＶＳＰ１およびＶＳＰ３並びに７番染色体上のＶＳＰ２およびＶＳＰ４を示す（よって、ＶＳＰ１およびＶＳＰ２は前記アクセッションの１つに対して特異的であり、ＶＳＰ３およびＶＳＰ４はその他のアクセッションに対して特異的である 。

【図4】Ｎｒ：０抵抗性品種Ｍａｆａｌｄａ上の３００匹超のアブラムシと比較した、ＮＣＩＭＢ４２０８６上のゼロ匹のアブラムシを示す、スペインのムルシアで行われた非選択圃場アッセイの結果。

【発明の具体的説明】

【0095】

本発明は、野生レタスから遺伝子移入された１つまたは２つまたは３つのＱＴＬを含んでなる栽培レタス植物、レタス（Lactuca sativa）に関し、前記ＱＴＬは、レタスヒゲナガアブラムシ（N. ribisnigri）バイオタイプ１（Ｎｒ：１）に対する抵抗性を付与する。特に、Ｎｒ：１抵抗性は、栽培レタス６番染色体（ＱＴＬ６．１を含んでなる）および／または７番染色体（ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２を含んでなる）上の遺伝子移入断片によって付与され、前記遺伝子移入断片は野生レタス植物、具体的にはワイルドレタス（Lactuca virosa）種の植物に由来する。

【0096】

従って、一つの態様において、６番染色体上および／または７番染色体上の野生レタス植物由来の遺伝子移入断片を含んでなるレタス（Lactuca sativa）植物が提供され、前記６番染色体上遺伝子移入断片はＱＴＬ６．１と称される量的形質遺伝子座（ＱＴＬ）を含んでなり、前記７番染色体上遺伝子移入断片はＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２と称される量的形質遺伝子座を含んでなり、前記６番染色体および／または７番染色体上遺伝子移入断片はレタスヒゲナガアブラムシ（Nasonovia ribisnigri）バイオタイプ１（Ｎｒ：１）に対する抵抗性を付与する。遺伝子移入断片のそれぞれはホモ接合型であってもヘテロ接合型であってもよい。一つの態様において、遺伝子移入断片はホモ接合型である。一つの態様において、植物が２つ以上の遺伝子移入断片、すなわち２つまたは３つの断片、を含んでなる場合、これらは同一の野生レタスアクセッションに由来する。本発明の一つの実施態様において、この野生レタスアクセッションはワイルドレタス（L. virosa）アクセッション（例えば、ＮＣＩＭＢ４２０８６またはその子孫）である。一つの態様において、野生アクセッションは、ワイルドレタス（L. virosa）アクセッション特異的マーカーＶＳＰ１およびＶＳＰ２を含んでなるアクセッション；またはワイルドレタス（L. virosa）アクセッション特異的マーカーＶＳＰ３およびＶＳＰ４を含んでなるアクセッションから選択されるワイルドレタス（L. virosa）アクセッションである。

【0097】

本明細書において、Ｎｒ：１抵抗性付与ＱＴＬを有する６番染色体および／または７番染色体上の遺伝子移入断片が言及される場合、これには様々なサイズの遺伝子移入断片、例えば、全てのＳＮＰマーカー（６番染色体（ＱＴＬ６．１を含んでなる）上の断片については、ＳＮＰ＿０１〜ＳＮＰ＿０７、または選択的にＳＮＰ１．２３、ＳＮＰ＿０２、ＳＮＰ２．２４およびＳＮＰ＿０３、またはこれらの間にあるあらゆるマーカーを含んでなる断片；７番染色体（ＱＴＬ７．２を含んでなる）上の断片については、ＳＮＰ＿０８〜ＳＮＰ＿１４、またはこれらの間にあるあらゆるマーカー；ＱＴＬ７．１を含んでなる７番染色体上の断片については、ＳＮＰ＿１５〜ＳＮＰ＿２２、または選択的にＳＮＰ＿１７、ＳＮＰ１７．２５、ＳＮＰ＿１８およびＳＮＰ＿１９、またはこれらの間にあるあらゆるマーカー）が包含され、より小さな遺伝子移入断片（例えば前記ＳＮＰマーカーのうちの１、２、３または４つを含んでなる）も包含されるが、遺伝子移入断片が栽培レタスゲノムにおいてヘテロ接合型またはホモ接合型である場合、前記断片はＮｒ：１抵抗性を付与するのに充分に巨大なままである。

【0098】

本明細書において遺伝子移入断片（および遺伝子移入断片上に存在するＮｒ：１ＱＴＬ）の存在を示すＳＮＰマーカーに言及する場合、遺伝子移入断片の存在を示すＳＮＰ遺伝子型、すなわち、表１、２および３、または表４、５、６および７、並びに本明細書の以下に提供されるＳＮＰ遺伝子型が言及されると理解される。なお、ＳＮＰマーカー遺伝子型は、これらの表に示されるように、ホモ接合型またはヘテロ接合型である遺伝子移入断片を区別することができる。ホモ接合型ではヌクレオチドは同一であり、一方、ヘテロ接合型ではヌクレオチドは同一でない。遺伝子移入断片を欠く「野生型」染色体のＳＮＰ遺伝子型は他の遺伝子型であり、また、表１〜３および表４〜７（レタス（L. sativa）親の遺伝子型の下）に列挙される。そのため、例えば、ＱＴＬ６．１を含んでなる遺伝子移入断片を示すＳＮＰ＿０１の遺伝子型は「ＡＴ」（ＱＴＬ６．１／ｗｔ、すなわち、抵抗性付与ＱＴＬについてヘテロ接合性）または「ＡＡ」（ＱＴＬ６．１／ＱＴＬ６．１、すなわち、抵抗性付与ＱＴＬについてホモ接合性）であり、一方、野生型／遺伝的対照（遺伝子移入断片を欠く）を示すＳＮＰ遺伝子型は「ＴＴ」（ｗｔ／ｗｔ）である。従って、ホモ接合型またはヘテロ接合型で遺伝子移入断片を含んでなる植物または植物部分（例えば細胞）に言及する場合、遺伝子移入断片に連結されたＳＮＰマーカーは対応するＳＮＰ遺伝子型を有すると理解される。例えば、ＱＴＬ６．１を含んでなる遺伝子移入断片についてホモ接合性である本発明の植物は、ＳＮＰマーカーをホモ接合型で含んでなる。

【0099】

そのため、一つの態様において、ホモ接合型またはヘテロ接合型の６番染色体上および／または７番染色体上の遺伝子移入断片を含んでなる栽培レタス（L. sativa）植物が提供され、前記遺伝子移入断片はバイオタイプＮｒ：１に対する抵抗性を付与する。好ましい態様では、遺伝子移入断片の１つ、２つまたは３つ全てがホモ接合型である（且つ、ＱＴＬを示すＳＮＰマーカーは言及されたヌクレオチドについてホモ接合性である）。

【0100】

Ｎｒ：１に対する抵抗性は、表現型的に、同じ環境下で育成された場合の、６番染色体および７番染色体上の遺伝子移入断片を欠く対照系統または品種と比較して、ホモ接合型またはヘテロ接合型の６番染色体（ＱＴＬ６．１を含んでなる）および／または７番染色体（ＱＴＬ７．１および／または７．２を含んでなる）上の遺伝子移入断片を含んでなる栽培レタス植物系統または品種の植物上の（統計的に）有意により少ないバイオタイプＮｒ：１のアブラムシの平均数として表される。対照系統または品種は、Ｎｒ：１に対して感受性の栽培レタス系統または品種である。一つの態様においては、対照系統または品種は、Ｎｒ：０およびＮｒ：１に対して感受性の（すなわち、レタスヒゲナガアブラムシ（N. ribisnigri）抵抗性を欠く）品種から選択される。別の好ましい態様では、対照系統または品種は、優性のＮｒ遺伝子によって付与されるＮｒ：０抵抗性を含んでなる系統または品種、例えば品種Ｍａｆａｌｄａ（またはその他、例えば、Ｓｕｓａｎａ、Ｓｙｌｖｅｓｔａ、Ｖｅｒｏｎｉｑｕｅ、および多くの他の品種、ワールドワイドウェブat nunhems.nlを参照、Ｎｒ：０抵抗性を有する品種は「ＨＲ」として表される）である。さらに別の態様では、対照系統または品種は、遺伝的対照系統または品種である。

【0101】

従って、ホモ接合型もしくはヘテロ接合型の６番染色体（ＱＴＬ６．１もしくはその異型を含んでなる）上の遺伝子移入断片を含んでなる；またはホモ接合型もしくはヘテロ接合型の７番染色体（ＱＴＬ７．１もしくはその異型を含んでなる）上の遺伝子移入断片を含んでなる；またはホモ接合型もしくはヘテロ接合型の７番染色体（ＱＴＬ７．２もしくはその異型を含んでなる）上の遺伝子移入断片を含んでなる；または２つの遺伝子移入断片（ＱＴＬ６．１およびＱＴＬ７．１もしくはこれらのいずれかの異型；もしくはＱＴＬ６．１およびＱＴＬ７．２もしくはこれらのいずれかの異型；もしくはＱＴＬ７．１およびＱＴＬ７．２もしくはこれらのいずれかの異型；ここで、２つのＱＴＬは互いに独立してホモ接合型またはヘテロ接合型であり得る）もしくは３つ全ての遺伝子移入断片（ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１およびＱＴＬ７．２もしくはこれらのいずれかの異型）（これらの３つのＱＴＬのいずれか１つは独立してホモ接合型またはヘテロ接合型である）を含んでなる、様々な栽培レタス植物が本明細書において提供される。

【0102】

従って、本発明の植物は、１つもしくは２つの組換え６番染色体および／または１つもしくは２つの組換え７番染色体を有する、栽培レタスのゲノムを含んでなる。組換え染色体は、分子マーカー解析（例えば本明細書において提供されるマーカーを使用）、全ゲノム配列決定、染色体彩色および同様の手法によって栽培レタスゲノムと容易に区別可能である、野生レタス（特にワイルドレタス（L. virosa）；一つの態様においては、ワイルドレタス（L. virosa）アクセッションＮＣＩＭＢ４２０８６もしくはその子孫、または別のワイルドレタス（L. virosa）、例えば、ＶＳＰ１およびＶＳＰ２を含んでなる、もしくはＶＳＰ３およびＶＳＰ４を含んでなるアクセッション）の断片を含んでなる。

【0103】

一つの態様において、植物または植物細胞または植物組織のゲノム（またはそれから抽出されたＤＮＡ）内の６番染色体および／または７番染色体上の遺伝子移入断片の存在は、遺伝子移入断片の一つまたは複数の分子マーカーを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である。しかし、上記のように、他の手法が使用されてもよく、例えば、マーカーのＳＮＰ遺伝子型は、配列決定によって、または、本明細書において提供されるＳＮＰマーカーの間もしくは本明細書において提供されるマーカーの７ｃＭ以内、もしくは５ｃＭ以内；もしくは本明細書において提供されるマーカーの１０Ｍｂ、５Ｍｂ、３Ｍｂ、２．５Ｍｂ、２Ｍｂ、１Ｍｂ、０．５Ｍｂ、０．４Ｍｂ、０．３Ｍｂ、０．２Ｍｂ、０．１Ｍｂ、５０ｋｂ、２０ｋｂ、１０ｋｂ、５ｋｂもしくはそれ以下以内に位置する別のマーカーの使用によって、決定されてもよい。

【0104】

６番染色体上の遺伝子移入断片（ＱＴＬ６．１またはその異型を含んでなる）を含んでなるレタス植物
第一のＱＴＬマッピングの結果に基づくと、以下の栽培レタス植物が本明細書に包含される。

【0105】

一つの態様において、６番染色体上の遺伝子移入断片は、以下からなる群から選択されるマーカーのうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２もしくは３つ、または少なくとも４、５、６、もしくは７つを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号１内の（または配列番号１に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０１のＡＡまたはＡＴ遺伝子型；
ｂ） 配列番号２内の（または配列番号２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｃ） 配列番号３内の（または配列番号３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０３のＡＡまたはＡＣ遺伝子型；
ｄ） 配列番号４内の（または配列番号４に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０４のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｅ） 配列番号５内の（または配列番号５に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０５のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｆ） 配列番号６内の（または配列番号６に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０６のＣＣまたはＣＡ遺伝子型；
ｇ） 配列番号７内の（または配列番号７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０７のＧＧまたはＧＴ遺伝子型；
ｈ） ＳＮＰ＿０１およびＳＮＰ＿０７の間（例えばＳＮＰ＿０１およびＳＮＰ＿０６、ＳＮＰ＿０１およびＳＮＰ＿０５、ＳＮＰ＿０１およびＳＮＰ＿０４、ＳＮＰ＿０１およびＳＮＰ＿０３、ＳＮＰ＿０１およびＳＮＰ＿０２の間）；またはＳＮＰ＿０２およびＳＮＰ＿０７の間（例えばＳＮＰ＿０２およびＳＮＰ＿０６、ＳＮＰ＿０２およびＳＮＰ＿０５、ＳＮＰ＿０２およびＳＮＰ＿０４、ＳＮＰ＿０２およびＳＮＰ＿０３の間）；またはＳＮＰ＿０３およびＳＮＰ＿０７の間（例えばＳＮＰ＿０３およびＳＮＰ＿０６、ＳＮＰ＿０３およびＳＮＰ＿０５、ＳＮＰ＿０３およびＳＮＰ＿０４の間）；またはＳＮＰ＿０４およびＳＮＰ＿７の間（例えばＳＮＰ＿０４およびＳＮＰ＿０６、ＳＮＰ＿０４およびＳＮＰ＿０５の間）；またはＳＮＰ＿０５およびＳＮＰ＿０７の間（例えばＳＮＰ＿０５およびＳＮＰ＿０６の間）；またはＳＮＰ＿０６およびＳＮＰ＿０７の間に物理的に位置する、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、特に、ワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0106】

上記のように、当業者は、マーカーＳＮＰ＿０１とＳＮＰ＿０７との間の、および／またはＳＮＰ＿０１〜ＳＮＰ＿０７のいずれか１つの７ｃＭ以内もしくは５ｃＭ以内の、および／またはＳＮＰ＿０１〜ＳＮＰ＿０７のいずれか１つの５Ｍｂ、３Ｍｂ、２．５Ｍｂ、２Ｍｂ、１Ｍｂ、０．５Ｍｂ、０．４Ｍｂ、０．３Ｍｂ、０．２Ｍｂ、０．１Ｍｂ、５０ｋｂ、２０ｋｂ、１０ｋｂ、５ｋｂもしくはそれ以下以内の、他の分子マーカー、例えば、野生ワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカーを開発することもできる。このようなマーカーは、一続きのヌクレオチド、ＣＡＰＳマーカー、ＩＮＤＥＬ等であってもよい。当業者は、例えば、遺伝子移入断片またはＱＴＬ領域を配列決定し、その配列情報を使用して、新たなマーカーおよびマーカーアッセイを開発することができる。

【0107】

別の態様では、（ＱＴＬ６．１または異型を含んでなる）６番染色体上の遺伝子移入断片は、以下からなる群から選択されるマーカーのうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２もしくは３つ、または少なくとも４、５、６、もしくは７つ全てを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号１内の（または配列番号１に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０１のＡＡまたはＡＴ遺伝子型；
ｂ） 配列番号２内の（または配列番号２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｃ） 配列番号３内の（または配列番号３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０３のＡＡまたはＡＣ遺伝子型；
ｄ） 配列番号４内の（または配列番号４に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０４のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｅ） 配列番号５内の（または配列番号５に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０５のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｆ） 配列番号６内の（または配列番号６に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０６のＣＣまたはＣＡ遺伝子型；
ｇ） 配列番号７内の（または配列番号７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０７のＧＧまたはＧＴ遺伝子型。

【0108】

別の態様において、ホモ接合型またはヘテロ接合型の６番染色体上の遺伝子移入断片を含んでなる栽培レタス（L. sativa）植物が提供され、前記遺伝子移入断片はＮｒ：１抵抗性を付与し、前記遺伝子移入断片は、以下からなる群から選択される少なくとも２、３または４つ（または少なくとも５、６もしくは７つ全ての）連続したマーカーを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号１内の（または配列番号１に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０１のＡＡまたはＡＴ遺伝子型；
ｂ） 配列番号２内の（または配列番号２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｃ） 配列番号３内の（または配列番号３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０３のＡＡまたはＡＣ遺伝子型；
ｄ） 配列番号４内の（または配列番号４に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０４のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｅ） 配列番号５内の（または配列番号５に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０５のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｆ） 配列番号６内の（または配列番号６に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０６のＣＣまたはＣＡ遺伝子型；
ｇ） 配列番号７内の（または配列番号７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０７のＧＧまたはＧＴ遺伝子型。

【0109】

ＳＮＰマーカーＳＮＰ＿０１〜ＳＮＰ＿０７は、遺伝子移入断片上に所与の順番で位置する。連続したマーカーとは、同一の連続した順番のマーカーを指し、そのため、例えば、２つの連続したマーカーはＳＮＰ＿０１およびＳＮＰ＿０２；ＳＮＰ＿０２およびＳＮＰ＿０３；ＳＮＰ＿０３およびＳＮＰ＿０４等であり得、３つの連続したマーカーはＳＮＰ＿０１およびＳＮＰ＿０２およびＳＮＰ＿０３；ＳＮＰ＿０２およびＳＮＰ＿０３およびＳＮＰ＿０４；等であり得る。

【0110】

断片は、従って、より小さく、前記マーカーのうちの１、２、３、４、５またはさらには６つを欠く場合があるが、それでもなお、栽培レタス植物に対してＮｒ：１抵抗性を付与し得る、すなわち、それでもなお、Ｎｒ：１対立遺伝子を含んでなり得る。このようなより小さな遺伝子移入断片は本発明の１つの実施態様である。

【0111】

より小さな遺伝子移入断片を有する植物は、例えば、大きな遺伝子移入断片を含んでなる植物から開始して、そのような植物を別の栽培レタス植物と交雑し、前記交雑種の子孫を自家受粉して、６番染色体上のより小さな遺伝子移入断片を有する組換え体を含有し得る植物集団を作製することによって、作製することができる。マーカーアッセイを使用することで、より小さな遺伝子移入断片のサイズを決定することができる。ＳＮＰマーカーＳＮＰ＿０１〜ＳＮＰ＿０７のうちの一つまたは複数は欠損していてもよい（すなわち、前記植物は前記ＳＮＰマーカーのうちの１、２、３、４、５、６つのみを含んでなり得る）。次いで、このようなより小さな遺伝子移入断片を含んでなる植物のＮｒ：１抵抗性表現型は、本明細書に記載のように（すなわち、遺伝子移入断片を欠く適切な対照植物と一緒に、制御された環境または圃場実験においてより小さな遺伝子移入断片を含んでなる複数の植物を育成する）、決定することができる。本明細書において特定される抵抗性は両タイプの抵抗性を付与するため、前記アッセイは自由選択アッセイであっても非選択アッセイであってもよい。対照植物は、遺伝的対照または感受性品種、例えばＭａｆａｌｄａ、が好ましい。Ｎｒ：１抵抗性が対照においてよりも有意に高いままである場合、より小さな遺伝子移入断片はＱＴＬ６．１（またはその異型）を保持している。

【0112】

あるいは、同一または異型ＱＴＬ（ＱＴＬ６．１または異型ＱＴＬ６．１）が異なる野生供給源から遺伝子移入されてもよく、これによって、所望により、本明細書で開示される全てのＳＮＰマーカーが存在していなくてもよい。このような代替的な野生供給源はワイルドレタス（L. virosa）アクセッションであることが好ましい。これらは、マーカーＳＮＰ＿０１〜ＳＮＰ＿０７またはＳＮＰ＿０１とＳＮＰ＿０７との間のあらゆるマーカーの遺伝子型を検出するためのマーカーアッセイを用いて、野生生殖質（例えばワイルドレタス（L. virosa）アクセッション）をスクリーニングすることによって、本明細書において提供されるＳＮＰマーカーを用いて、特定することができる。あるいは、このような野生供給源は、表現型によって特定することができ、所望により、記載されたマーカーのうちの一つまたは複数の存在について後期にスクリーニングされ得、あるいは、所望により、このようなアクセッションとの交雑からの子孫が、前記マーカーについてスクリーニングされ得る。他の供給源由来の同一または異型ＱＴＬ６．１を含んでなる植物も、本発明の１つの実施態様である。前記ＳＮＰのうちの少なくとも１、２、３、４、５、６つまたはそれ以上、好ましくはＳＮＰ＿０１〜ＳＮＰ＿０７のうちの少なくとも２、３、４、５、６またはそれ以上の連続したＳＮＰマーカーが前記ＱＴＬを示すＳＮＰ遺伝子型も有する限り、植物はＱＴＬ６．１（またはその異型）を含んでなる。当業者は、本明細書に記載のＮｒ：１抵抗性を付与するために、ＱＴＬ６．１（またはその異型）を栽培レタスに遺伝子移入することができる。

【0113】

特定の実施態様において、本発明の植物は、ＳＮＰマーカーの少なくとも一部、すなわち、以下からなる群から選択される以下のマーカーのうちの少なくとも１、２、３、４、または５つ全てを含んでなる遺伝子移入断片を含んでなる：
ａ） 配列番号２内の（または配列番号２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｂ） 配列番号３内の（または配列番号３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０３のＡＡまたはＡＣ遺伝子型；
ｃ） 配列番号４内の（または配列番号４に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０４のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｄ） 配列番号５内の（または配列番号５に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０５のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｅ） 配列番号６内の（または配列番号６に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０６のＣＣまたはＣＡ遺伝子型；および所望により、
ｆ） ＳＮＰ＿０２とＳＮＰ＿０６との間の、あらゆる野生レタス、特に、ワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0114】

本発明の植物は、少なくともＳＮＰマーカーＳＮＰ＿０３、ＳＮＰ＿０４、ＳＮＰ＿０５および／またはＳＮＰ＿０６（またはこれらのいずれかの間にあるあらゆるマーカー）、特に、少なくともＳＮＰ＿０４、ＳＮＰ＿０５および／またはＳＮＰ＿０６（またはこれらのいずれかの間にあるあらゆるマーカー）を含んでなる遺伝子移入断片を含んでなることが好ましい。

【0115】

従って、遺伝子移入断片（および遺伝子移入断片を含んでなる栽培レタス植物または植物部分、例えば、細胞）は、マーカーアッセイにおいて、上記マーカーのうちの一つまたは複数または全ての遺伝子移入断片の（すなわち、野生レタス、例えばワイルドレタス（L. virosa）生殖質の）ＳＮＰ遺伝子型を検出することによって、検出することができる。

【0116】

さらなる別の態様において、本発明の植物は、少なくともＳＮＰ＿０４を含んでなる遺伝子移入断片を含んでなり、すなわち、遺伝子移入断片が、配列番号４内の一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０４のＧＧまたはＧＡ遺伝子型を検出するマーカーアッセイにおいて検出される。また、所望により、隣接マーカー、ＳＮＰ＿０３および／またはＳＮＰ＿０５が検出され、すなわち、遺伝子移入断片が、少なくともＳＮＰ＿０４および所望により以下のマーカーのうちの少なくとも１つも検出するマーカーアッセイにおいて検出される：
配列番号５内の（または配列番号５に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０５のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；および／または
配列番号３内の（または配列番号３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０３のＡＡまたはＡＣ遺伝子型；および所望により
ＳＮＰ＿０３とＳＮＰ＿０５との間の、あらゆる野生レタス、特に、ワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0117】

６番染色体上の遺伝子移入断片（ＱＴＬ６．１またはその異型を含んでなる）を含んでなるレタス植物
後のＱＴＬマッピングデータに基づいて、ＱＴＬ領域を特定することができ、遺伝子移入断片がＱＴＬ６．１（またはその異型）を含んでなり、これにより遺伝子移入断片が６番染色体上の７７Ｍｂから開始して６番染色体上の１６１Ｍｂで終結する領域の全てまたは一部を含んでなる、ワイルドレタス（Lactuca virosa）由来の遺伝子移入断片を含んでなる栽培レタス植物が提供される。

【0118】

従って、一つの態様において、レタスヒゲナガアブラムシ（Nasonovia ribisnigri）バイオタイプ１（Ｎｒ：１）に対する抵抗性を付与する量的形質遺伝子座を含んでなり、６番染色体上の遺伝子移入断片が６番染色体の７７Ｍｂから開始し１６１Ｍｂで終結する領域の全てまたは一部を含んでなる、６番染色体上のワイルドレタス（Lactuca virosa）由来の遺伝子移入断片を含んでなるレタス（Lactuca sativa）植物が提供される。

【0119】

ＱＴＬ６．１（または異型）を保持するより小さな遺伝子移入断片（すなわち、６番染色体の７７Ｍｂ〜１６１Ｍｂに亘る上記領域の抵抗性付与部分を含んでなる）は、８０Ｍｂ、７０Ｍｂ、６０Ｍｂ、５０Ｍｂ、４０Ｍｂ、３０Ｍｂ、２０Ｍｂ、１０Ｍｂ、５Ｍｂ、２．５Ｍｂ、２Ｍｂ、１Ｍｂ、０．５Ｍｂ、１００ｋｂ、５０ｋｂまたはそれ以下のサイズを有し、ＱＴＬ６．１またはその異型を含んでなる断片であり得ると理解される。一つの態様において、前記部分は少なくとも５ｋｂ、１０ｋｂ、２０ｋｂまたはそれ以上のサイズである。

【0120】

一つの態様において、６番染色体上の遺伝子移入断片は、以下からなる群から選択されるマーカーのうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２または３または４または５つ（またはそれ以上）を含んでなり、それを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号２３内の（または配列番号２３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ１．２３のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｂ） 配列番号２内の（または配列番号２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｃ） 配列番号２４内の（または配列番号２４に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ２．２４のＴＴまたはＣＴ遺伝子型；
配列番号３内の（または配列番号３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０３のＡＡまたはＡＣ遺伝子型；
ｄ） ＳＮＰ１．２３およびＳＮＰ＿０３の間（例えばＳＮＰ１．２３およびＳＮＰ２．２４、ＳＮＰ１．２３およびＳＮＰ＿０２の間）；またはＳＮＰ＿０２およびＳＮＰ＿０３の間（例えばＳＮＰ＿０２およびＳＮＰ２．２４の間）；またはＳＮＰ２．２４およびＳＮＰ＿０３の間に物理的に位置する、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、特に、ワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー；
ｅ） ＳＮＰ１．２３、ＳＮＰ＿０２、ＳＮＰ２．２４、またはＳＮＰ＿０３から選択されるあらゆるマーカーの１０Ｍｂの距離内、好ましくは５Ｍｂ以内に位置する、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、特にワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0121】

所望により、一つの態様において、遺伝子移入断片は、配列番号２６内（または配列番号２６に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内）の一塩基多型マーカーＶＳＰ１のＧＧまたはＧＴ遺伝子型および配列番号２７内（または配列番号２７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内）の一塩基多型マーカーＶＳＰ３のＡＡまたはＡＣ遺伝子型から選択されるワイルドレタス（L. virosa）アクセッション特異的マーカーを含んでなる（且つ、それによって検出可能である）。ＳＮＰマーカーＶＳＰ１およびＶＳＰ３を用いることで、様々なワイルドレタス（L. virosa）型アクセッション由来のＱＴＬ６．１を含んでなる遺伝子移入断片を区別することができる。

【0122】

遺伝子移入断片は、ＳＮＰ遺伝子型によって示されるように、ヘテロ接合型であってもホモ接合型であってもよい。そのため、一つの態様において、遺伝子移入断片はホモ接合型であり、ＳＮＰマーカー遺伝子型はホモ接合性遺伝子型である。

【0123】

上記の通り、ＱＴＬ６．１の異型が、種々のＮｒ：１抵抗性ワイルドレタス（Lactuca virosa）アクセッションから、特定および遺伝子移入され得る。このような異型は、本明細書において提供される配列に対して１００％同一でないが、同一長のゲノム配列がアラインメントされた場合に実質的な配列同一性（例えば、少なくとも８５％、９０％またはそれ以上）をなお有し得る、ゲノム配列を含んでなり得る。ＱＴＬ６．１が位置するＱＴＬ領域に差異があることは、アクセッション特異的ＳＮＰマーカーが、共に抵抗性付与ＱＴＬ６．１を含んでなる、２つの異なるワイルドレタス（L. virosa）アクセッション由来のＱＴＬ６．１の遺伝子移入において特定することができたという事実から、理解することができる。そのため、ＶＳＰ１を含んでなる遺伝子移入断片は、ＶＳＰ３を含んでなるものとは異なる遺伝子移入断片であるが、共にＱＴＬ６．１を含んでなる。ＱＴＬ６．１を含んでなる野生ワイルドレタス（L. virosa）アクセッション内には、従って、６番染色体上の７７Ｍｂ〜１６１Ｍｂに亘る領域におけるゲノム変動が存在し得る。しかし、このようなアクセッションは、本発明の植物を作製するために、６番染色体の７７Ｍｂから開始し１６１Ｍｂで終結する領域の全てまたは一部をＮｒ：１感受性栽培レタスに遺伝子移入するのに等しく使用され得る。前記領域がＱＴＬを含んでなるという、本発明の知識を用いて、当業者は同一の領域またはより小さな抵抗性付与部分を栽培レタスに遺伝子移入することができる。

【0124】

一つの態様において、６番染色体上の遺伝子移入断片は、以下からなる群から選択されるマーカーのうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２もしくは３もしくは４つを含んでなり、それを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号２３内の、または配列番号２３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ１．２３のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｂ） 配列番号２内の、または配列番号２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｃ） ｃ） 配列番号２４内の、または配列番号２４に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ２．２４のＴＴまたはＣＴ遺伝子型；
ｄ） 配列番号３内の、または配列番号３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０３のＡＡまたはＡＣ遺伝子型。

【0125】

一つの態様において、遺伝子移入断片はＮＣＩＭＢ４２０８６として寄託された種子またはその子孫に由来し得る。

【0126】

一つの態様において、遺伝子移入断片は、別のＮｒ：１抵抗性ワイルドレタス（L. virosa）アクセッション、例えば、配列番号２７内（または配列番号２７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内）の一塩基多型マーカーＶＳＰ３のＡＡまたはＡＣ遺伝子型を含んでなるアクセッション、に由来する。

【0127】

別の態様において、遺伝子移入断片は、別のＮｒ：１抵抗性ワイルドレタス（L. virosa）アクセッション、例えば、配列番号２６内（または配列番号２６に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内）の一塩基多型マーカーＶＳＰ１のＧＧまたはＧＴ遺伝子型を含んでなるアクセッション、に由来する。

【0128】

第一のＱＴＬ解析およびマーカーＳＮＰ＿０１〜ＳＮＰ＿０７に基づいて本明細書の別の場所に記載される他の態様は、同様に、この後の解析で特定されるマーカーおよび遺伝子移入に適用される。そのため、例えば、ＱＴＬ６．１は、例えば戻し交雑によって、あらゆる栽培レタス、特にＮｒ：１感受性系統または品種に遺伝子移入することができる。ＱＴＬ６．１は、栽培レタスにおいて、ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２を含んでなる組換え７番染色体とも組み合わせることができる。

【0129】

７番染色体上の遺伝子移入断片（ＱＴＬ７．１および／もしくはＱＴＬ７．２またはこれらの異型）を含んでなるレタス植物
第一のＱＴＬマッピングの結果に基づくと、以下の栽培レタス植物が本明細書に包含される。

【0130】

一つの態様において、７番染色体上のＱＴＬ７．２またはその異型を含んでなる遺伝子移入断片（および前記遺伝子移入断片を含んでなる栽培レタス植物または植物部分）は、以下からなる群から選択されるマーカーのうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２もしくは３つ、または少なくとも４、５、６、もしくは７つを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号８内の（または配列番号８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０８のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｂ） 配列番号９内の（または配列番号９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０９のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｃ） 配列番号１０内の（または配列番号１０に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１０のＡＡまたはＡＧ遺伝子型；
ｄ） 配列番号１１内の、または配列番号１１に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１１のＣＣまたはＣＡ遺伝子型；
ｅ） 配列番号１２内の（または配列番号１２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｆ） 配列番号１３内の（または配列番号１３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１３のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｇ） 配列番号１４内の（または配列番号１４に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１４のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｈ） ＳＮＰ＿０８およびＳＮＰ＿１４の間（例えばＳＮＰ＿０８およびＳＮＰ＿１３、ＳＮＰ＿０８およびＳＮＰ＿１２、ＳＮＰ＿０８およびＳＮＰ＿１１、ＳＮＰ＿０８およびＳＮＰ＿１０、ＳＮＰ＿０８およびＳＮＰ＿０９の間）；またはＳＮＰ＿０９およびＳＮＰ＿１４の間（例えばＳＮＰ＿０９およびＳＮＰ＿１３、ＳＮＰ＿０９およびＳＮＰ＿１２、ＳＮＰ＿０９およびＳＮＰ＿１１、ＳＮＰ＿０９およびＳＮＰ＿１０の間）；またはＳＮＰ＿１０およびＳＮＰ＿１４の間（例えばＳＮＰ＿１０およびＳＮＰ＿１３、ＳＮＰ＿１０およびＳＮＰ＿１２、ＳＮＰ＿１０およびＳＮＰ＿１１の間）；またはＳＮＰ＿１１およびＳＮＰ＿１４の間（例えばＳＮＰ＿１１およびＳＮＰ＿１３、ＳＮＰ＿１１およびＳＮＰ＿１２の間）；またはＳＮＰ＿１２およびＳＮＰ＿１４の間（例えばＳＮＰ＿１２およびＳＮＰ＿１３の間）；またはＳＮＰ＿１３およびＳＮＰ＿１４の間に物理的に位置する、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、特に、ワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0131】

上記のように、当業者は、マーカーＳＮＰ＿０８とＳＮＰ＿１４との間の、および／またはＳＮＰ＿０８〜ＳＮＰ＿１４のいずれか１つの７ｃＭ以内もしくは５ｃＭ以内の、および／またはＳＮＰ＿０８〜ＳＮＰ＿１４のいずれか１つの５Ｍｂ、３Ｍｂ、２．５Ｍｂ、２Ｍｂ、１Ｍｂ、０．５Ｍｂ、０．４Ｍｂ、０．３Ｍｂ、０．２Ｍｂ、０．１Ｍｂ、５０ｋｂ、２０ｋｂ、１０ｋｂ、５ｋｂもしくはそれ以下以内の、他の分子マーカー、例えば、野生レタスゲノム特異的マーカー、例えば、ワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカーを開発することもできる。このようなマーカーは、一続きのヌクレオチド、ＣＡＰＳマーカー、ＩＮＤＥＬ等であってもよい。

【0132】

別の態様では、（ＱＴＬ７．２または異型を含んでなる）７番染色体上の遺伝子移入断片は、以下からなる群から選択されるマーカーのうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２もしくは３つ、または少なくとも４、５、６、もしくは７つ全てを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号８内の（または配列番号８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０８のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｂ） 配列番号９内の（または配列番号９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０９のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｃ） 配列番号１０内の（または配列番号１０に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１０のＡＡまたはＡＧ遺伝子型；
ｄ） 配列番号１１内の、または配列番号１１に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１１のＣＣまたはＣＡ遺伝子型；
ｅ） 配列番号１２内の（または配列番号１２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｆ） 配列番号１３内の（または配列番号１３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１３のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｇ） 配列番号１４内の（または配列番号１４に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１４のＣＣまたはＣＴ遺伝子型。

【0133】

別の態様において、ホモ接合型またはヘテロ接合型の７番染色体上の遺伝子移入断片を含んでなる栽培レタス植物が提供され、前記遺伝子移入断片はＮｒ：１抵抗性を付与するＱＴＬ７．２を含んでなり、前記遺伝子移入断片は、以下からなる群から選択される少なくとも２、３または４つ（または少なくとも５、６、７つ）の連続したマーカーを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号８内の（または配列番号８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０８のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｂ） 配列番号９内の（または配列番号９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０９のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｃ） 配列番号１０内の（または配列番号１０に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１０のＡＡまたはＡＧ遺伝子型；
ｄ） 配列番号１１内の、または配列番号１１に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１１のＣＣまたはＣＡ遺伝子型；
ｅ） 配列番号１２内の（または配列番号１２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｆ） 配列番号１３内の（または配列番号１３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１３のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｇ） 配列番号１４内の（または配列番号１４に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１４のＣＣまたはＣＴ遺伝子型。

【0134】

ＳＮＰマーカーＳＮＰ＿０８〜ＳＮＰ＿１４は、遺伝子移入断片上に所与の順番で位置する。連続したマーカーとは、同一の連続した順番のマーカーを指し、そのため、例えば、２つの連続したマーカーはＳＮＰ＿０８およびＳＮＰ＿０９；ＳＮＰ＿０９およびＳＮＰ＿１０；ＳＮＰ＿１０およびＳＮＰ＿１１等であり得、３つの連続したマーカーはＳＮＰ＿０８およびＳＮＰ＿０９およびＳＮＰ＿１０；ＳＮＰ＿０９およびＳＮＰ＿１０およびＳＮＰ＿１１；等であり得る。

【0135】

断片は、従って、より小さく、前記マーカーのうちの１、２、３、４、５、６つを欠く場合があるが、それでもなお、栽培レタス植物に対してＮｒ：１抵抗性を付与し得る、すなわち、それでもなお、Ｎｒ：１対立遺伝子を含んでなり得る。このようなより小さな遺伝子移入断片は本発明の１つの実施態様である。より小さな遺伝子移入断片を有する植物は、例えば、大きな遺伝子移入断片を含んでなる植物から開始して、そのような植物を別の栽培レタス植物と交雑し、前記交雑種の子孫を自家受粉して、７番染色体上のより小さな遺伝子移入断片を有する組換え体を含有し得る植物集団を作製することによって、作製することができる。マーカーアッセイを使用することで、より小さな遺伝子移入断片のサイズを決定することができる。ＳＮＰマーカーＳＮＰ＿０８〜ＳＮＰ＿１４のうちの一つまたは複数は欠損していてもよい（すなわち、前記植物は前記ＳＮＰマーカーのうちの１、２、３、４、５、または６つのみを含んでなり得る）。次いで、このようなより小さな遺伝子移入断片を含んでなる植物のＮｒ：１抵抗性は、本明細書に記載の、すなわち、遺伝子移入断片を欠く適切な対照植物と一緒に、圃場実験においてより小さな遺伝子移入断片を含んでなる複数の植物を育成する、Ｎｒ：１アッセイにおいて、決定することができる。対照植物は、遺伝的対照または感受性対照、例えばＭａｆａｌｄａ、が好ましい。Ｎｒ：１抵抗性が対照においてよりも有意に高いままである場合、より小さな遺伝子移入断片はＱＴＬ７．２（または異型）を保持している。

【0136】

あるいは、同一または異型ＱＴＬ（ＱＴＬ７．２または異型ＱＴＬ７．２）が異なる野生供給源、例えば異なるワイルドレタス（L. virosa）アクセッション、から遺伝子移入されてもよく、これによって、所望により、本明細書で開示される全てのＳＮＰマーカーが存在していなくてもよい。このような代替的な野生供給源は、マーカーＳＮＰ＿０８〜ＳＮＰ＿１４またはこれらの間のマーカーの遺伝子型を検出するためのマーカーアッセイを用いて、野生生殖質、例えばワイルドレタス（L. virosa）アクセッション、をスクリーニングすることによって、本明細書において提供されるＳＮＰマーカーを用いて、特定することができる。あるいは、このような野生供給源は、表現型によって特定することができ、所望により、記載されたマーカーのうちの一つまたは複数の存在について後期にスクリーニングされ得、あるいは、所望により、このようなアクセッションとの交雑からの子孫が、前記マーカーについてスクリーニングされ得る。他の供給源由来のＱＴＬ７．２または異型ＱＴＬ７．２を含んでなる植物も、本発明の１つの実施態様である。前記ＳＮＰのうちの少なくとも１、２、３、４、５、６、もしくは７またはそれ以上、好ましくはＳＮＰ＿０８〜ＳＮＰ＿１４のうちの少なくとも２、３、４、５、６、もしくは７つの連続したＳＮＰマーカーが前記ＱＴＬを示すＳＮＰ遺伝子型も有する限り、植物はＱＴＬ７．２（またはその異型）を含んでなる。当業者は、本明細書に記載のＮｒ：１抵抗性を生み出すために、ＱＴＬ７．２（またはその異型）を栽培レタスに遺伝子移入することができる。

【0137】

特定の実施態様において、本発明の植物は、ＳＮＰマーカーの少なくとも一部、すなわち、以下からなる群から選択される以下のマーカーのうちの少なくとも１、２、３、４または５つ全てを含んでなる遺伝子移入断片を含んでなる：
ａ） 配列番号８内の（または配列番号８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０８のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｂ） 配列番号９内の（または配列番号９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０９のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｃ） 配列番号１０内の（または配列番号１０に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１０のＡＡまたはＡＧ遺伝子型；
ｄ） 配列番号１１内の、または配列番号１１に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１１のＣＣまたはＣＡ遺伝子型；
ｅ） 配列番号１２内の（または配列番号１２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；および所望により、
ｆ） マーカーＳＮＰ＿０８とＳＮＰ＿１２との間の、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、例えばワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0138】

特に、一つの態様において、本発明の栽培レタス植物は、以下からなる群から選択される少なくとも１、２または３つのマーカーを含んでなる：
ａ） 配列番号９内の（または配列番号９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０９のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｂ） 配列番号１０内の（または配列番号１０に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１０のＡＡまたはＡＧ遺伝子型；
ｃ） 配列番号１１内の、または配列番号１１に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１１のＣＣまたはＣＡ遺伝子型；および所望により、
ｄ） マーカーＳＮＰ＿０９とＳＮＰ＿１１との間の、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、例えばワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0139】

従って、遺伝子移入断片（および遺伝子移入断片を含んでなる栽培レタス植物または植物部分、例えば、細胞）は、マーカーアッセイにおいて、上記マーカーのうちの一つまたは複数または全ての遺伝子移入断片の（すなわち、野生レタス生殖質の）ＳＮＰ遺伝子型を検出することによって、検出することができる。

【0140】

一つの態様において、７番染色体上のＱＴＬ７．１を含んでなる遺伝子移入断片（および前記遺伝子移入断片を含んでなる栽培レタス植物または植物部分）は、以下からなる群から選択されるマーカーのうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２もしくは３つ、または少なくとも４、５、６、７もしくは８つを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号１５内の（または配列番号１５に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１５のＴＴまたはＴＡ遺伝子型；
ｂ） 配列番号１６内の（または配列番号１６に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１６のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｃ） 配列番号１７内の（または配列番号１７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１７のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｄ） ） 配列番号１８内の（または配列番号１８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１８のＧＧまたはＧＣ 遺伝子型；
ｅ） 配列番号１９内の（または配列番号１９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１９のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｆ） 配列番号２０内の（または配列番号２０に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿２０のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｇ） 配列番号２１内の（または配列番号２１に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿２１のＣＣまたはＣＡ遺伝子型；
ｈ） 配列番号２２内の（または配列番号２２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿２２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｉ） ＳＮＰ＿１５およびＳＮＰ＿２２の間（例えば、ＳＮＰ＿１５およびＳＮＰ＿２１、ＳＮＰ＿１５およびＳＮＰ＿２０、ＳＮＰ＿１５およびＳＮＰ＿１９、ＳＮＰ＿１５およびＳＮＰ＿１８、ＳＮＰ＿１５およびＳＮＰ＿１７、ＳＮＰ＿１５およびＳＮＰ＿１６の間）；またはＳＮＰ＿１６およびＳＮＰ＿２２の間（例えばＳＮＰ＿１６およびＳＮＰ＿２１、ＳＮＰ＿１６およびＳＮＰ＿２０、ＳＮＰ＿１６およびＳＮＰ＿１９、ＳＮＰ＿１６およびＳＮＰ＿１８、ＳＮＰ＿１６およびＳＮＰ＿１７の間）；またはＳＮＰ＿１７およびＳＮＰ＿２２の間（例えばＳＮＰ＿１７およびＳＮＰ＿２１、ＳＮＰ＿１７およびＳＮＰ＿２０、ＳＮＰ＿１７およびＳＮＰ＿１９、ＳＮＰ＿１７およびＳＮＰ＿１８の間）；またはＳＮＰ＿１８およびＳＮＰ＿２２の間（例えばＳＮＰ＿１８およびＳＮＰ＿２１、ＳＮＰ＿１８およびＳＮＰ＿２０、ＳＮＰ＿１８およびＳＮＰ＿１９の間）；またはＳＮＰ＿１９およびＳＮＰ＿２２の間（例えばＳＮＰ＿１９およびＳＮＰ＿２１、ＳＮＰ＿１９およびＳＮＰ＿２０の間）；またはＳＮＰ＿２０およびＳＮＰ＿２２の間；またはＳＮＰ＿２１およびＳＮＰ＿２２の間に物理的に位置する、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、特に、ワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0141】

上記のように、当業者は、マーカーＳＮＰ＿１５とＳＮＰ＿２２との間の、および／またはＳＮＰ＿１５〜ＳＮＰ＿２２のいずれか１つの７ｃＭ以内もしくは５ｃＭ以内の、および／またはＳＮＰ＿１５〜ＳＮＰ＿２２のいずれか１つの５Ｍｂ、３Ｍｂ、２．５Ｍｂ、２Ｍｂ、１Ｍｂ、０．５Ｍｂ、０．４Ｍｂ、０．３Ｍｂ、０．２Ｍｂ、０．１Ｍｂ、５０ｋｂ、２０ｋｂ、１０ｋｂ、５ｋｂもしくはそれ以下以内の、他の分子マーカー、例えば、野生レタスゲノム特異的マーカー、例えば、ワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカーを開発することもできる。このようなマーカーは、一続きのヌクレオチド、ＣＡＰＳマーカー、ＩＮＤＥＬ等であってもよい。

【0142】

別の態様では、（ＱＴＬ７．１または異型を含んでなる）７番染色体上の遺伝子移入断片は、以下からなる群から選択されるマーカーのうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２もしくは３つ、または少なくとも４、５、６、７もしくは８つ全てを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号１５内の（または配列番号１５に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１５のＴＴまたはＴＡ遺伝子型；
ｂ） 配列番号１６内の（または配列番号１６に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１６のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｃ） 配列番号１７内の（または配列番号１７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１７のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｄ） 配列番号１８内の（または配列番号１８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１８のＧＧまたはＧＣ遺伝子型；
ｅ） 配列番号１９内の（または配列番号１９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１９のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｆ） 配列番号２０内の（または配列番号２０に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿２０のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｇ） 配列番号２１内の（または配列番号２１に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿２１のＣＣまたはＣＡ遺伝子型；
ｈ） 配列番号２２内の（または配列番号２２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿２２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型。

【0143】

別の態様において、ホモ接合型またはヘテロ接合型の７番染色体上の遺伝子移入断片を含んでなる栽培レタス植物が提供され、前記遺伝子移入断片はＮｒ：１抵抗性を付与するＱＴＬ７．１を含んでなり、前記遺伝子移入断片は、以下からなる群から選択される少なくとも２、３または４つ（または少なくとも５、６、７、８つ）の連続したマーカーを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号１５内の（または配列番号１５に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１５のＴＴまたはＴＡ遺伝子型；
ｂ） 配列番号１６内の（または配列番号１６に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１６のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｃ） 配列番号１７内の（または配列番号１７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１７のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｄ） 配列番号１８内の（または配列番号１８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１８のＧＧまたはＧＣ遺伝子型；
ｅ） 配列番号１９内の（または配列番号１９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１９のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｆ） 配列番号２０内の（または配列番号２０に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿２０のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｇ） 配列番号２１内の（または配列番号２１に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿２１のＣＣまたはＣＡ遺伝子型；
ｈ） 配列番号２２内の（または配列番号２２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿２２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型。

【0144】

ＳＮＰマーカーＳＮＰ＿１５〜ＳＮＰ＿２２は、遺伝子移入断片上に所与の順番で位置する。連続したマーカーとは、同一の連続した順番のマーカーを指し、そのため、例えば、２つの連続したマーカーはＳＮＰ＿１２およびＳＮＰ＿１３；ＳＮＰ＿１３およびＳＮＰ＿１４；ＳＮＰ＿１４およびＳＮＰ＿１５等であり得、３つの連続したマーカーはＳＮＰ＿１２およびＳＮＰ＿１３およびＳＮＰ＿１４；ＳＮＰ＿１３およびＳＮＰ＿１４およびＳＮＰ＿１５；等であり得る。

【0145】

断片は、従って、より小さく、前記マーカーのうちの１、２、３、４、５、６または７つを欠く場合があるが、それでもなお、栽培レタス植物に対してＮｒ：１抵抗性を付与し得る、すなわち、それでもなお、Ｎｒ：１対立遺伝子を含んでなり得る。このようなより小さな遺伝子移入断片は本発明の１つの実施態様である。より小さな遺伝子移入断片を有する植物は、例えば、大きな遺伝子移入断片を含んでなる植物から開始して、そのような植物を別の栽培レタス植物と交雑し、前記交雑種の子孫を自家受粉して、（ＱＴＬ７．１または異型を含んでなる）７番染色体上のより小さな遺伝子移入断片を有する組換え体を含有し得る植物集団を作製することによって、作製することができる。マーカーアッセイを使用することで、より小さな遺伝子移入断片のサイズを決定することができる。ＳＮＰマーカーＳＮＰ＿１５〜ＳＮＰ＿２２のうちの一つまたは複数は欠損していてもよい（すなわち、前記植物は前記ＳＮＰマーカーのうちの１、２、３、４、５、６または７つのみを含んでなり得る）。次いで、このようなより小さな遺伝子移入断片を含んでなる植物のＮｒ：１抵抗性は、本明細書に記載の、すなわち、遺伝子移入断片を欠く適切な対照植物と一緒に、圃場実験においてより小さな遺伝子移入断片を含んでなる複数の植物を育成する、Ｎｒ：１アッセイにおいて、決定することができる。対照植物は、遺伝的対照または感受性対照、例えばＭａｆａｌｄａ、が好ましい。Ｎｒ：１抵抗性が対照においてよりも有意に高いままである場合、より小さな遺伝子移入断片はＱＴＬ７．１（または異型）を保持している。

【0146】

あるいは、同一または異型ＱＴＬ（ＱＴＬ７．１または異型ＱＴＬ７．１）が異なる野生供給源、例えば異なるワイルドレタス（L. virosa）アクセッション、から遺伝子移入されてもよく、これによって、所望により、本明細書で開示される全てのＳＮＰマーカーが存在していなくてもよい。このような代替的な野生供給源は、マーカーＳＮＰ＿１５〜ＳＮＰ＿２２またはこれらの間のマーカーの遺伝子型を検出するためのマーカーアッセイを用いて、野生生殖質、例えばワイルドレタス（L. virosa）アクセッション、をスクリーニングすることによって、本明細書において提供されるＳＮＰマーカーを用いて、特定することができる。あるいは、このような野生供給源は、表現型によって特定することができ、所望により、記載されたマーカーのうちの一つまたは複数の存在について後期にスクリーニングされ得、あるいは、所望により、このようなアクセッションとの交雑からの子孫が、前記マーカーについてスクリーニングされ得る。他の供給源由来のＱＴＬ７．１または異型ＱＴＬ７．１を含んでなる植物も、本発明の１つの実施態様である。前記ＳＮＰのうちの少なくとも１、２、３、４、５、６、７もしくは８またはそれ以上、好ましくはＳＮＰ＿１５〜ＳＮＰ＿２２のうちの少なくとも２、３、４、５、６、７もしくは８つの連続したＳＮＰマーカーが前記ＱＴＬを示すＳＮＰ遺伝子型も有する限り、植物はＱＴＬ７．１（またはその異型）を含んでなる。当業者は、本明細書に記載のＮｒ：１抵抗性を生み出すために、ＱＴＬ７．１（またはその異型）を栽培レタスに遺伝子移入することができる。

【0147】

特定の実施態様において、本発明の植物は、ＳＮＰマーカーの少なくとも一部、すなわち、以下からなる群から選択される以下のマーカーのうちの少なくとも１、２、３、４または５つ全てを含んでなる遺伝子移入断片を含んでなる：
ａ） 配列番号１７内の（または配列番号１７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１７のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｂ） 配列番号１８内の（または配列番号１８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１８のＧＧまたはＧＣ遺伝子型；
ｃ） 配列番号１９内の（または配列番号１９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１９のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｄ） 配列番号２０内の（または配列番号２０に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿２０のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｅ） 配列番号２１内の（または配列番号２１に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿２１のＣＣまたはＣＡ遺伝子型；および所望により、
ｆ） マーカーＳＮＰ＿１９とＳＮＰ＿２１との間の、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、例えばワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0148】

特に、一つの態様において、本発明の栽培レタス植物は、以下からなる群から選択される少なくとも１、２または３つのマーカーを含んでなる：
ａ） 配列番号１９内の（または配列番号１９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１９のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｂ） 配列番号２０内の（または配列番号２０に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿２０のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｃ） 配列番号２１内の（または配列番号２１に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿２１のＣＣまたはＣＡ遺伝子型；および所望により、
ｄ） マーカーＳＮＰ＿１９とＳＮＰ＿２１との間の、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、例えばワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0149】

従って、遺伝子移入断片（および遺伝子移入断片を含んでなる栽培レタス植物または植物部分、例えば、細胞）は、マーカーアッセイにおいて、上記マーカーのうちの一つまたは複数または全ての遺伝子移入断片の（すなわち、野生レタス生殖質の）ＳＮＰ遺伝子型を検出することによって、検出することができる。

【0150】

７番染色体上の遺伝子移入断片（ＱＴＬ７．１またはその異型）を含んでなるレタス植物
後のＱＴＬマッピングデータに基づいて、ＱＴＬ７．１領域を特定することができ、遺伝子移入断片がＱＴＬ７．１（またはその異型）を含んでなり、これにより遺伝子移入断片が７番染色体上の２０３Ｍｂから開始して７番染色体上の２１９Ｍｂで終結する領域の全てまたは一部を含んでなる、ワイルドレタス（Lactuca virosa）由来の遺伝子移入断片を含んでなる栽培レタス植物が提供される。

【0151】

従って、一つの態様において、レタスヒゲナガアブラムシ（Nasonovia ribisnigri）バイオタイプ１（Ｎｒ：１）に対する抵抗性を付与する量的形質遺伝子座を含んでなり、７番染色体上の遺伝子移入断片が７番染色体の２０３Ｍｂから開始し７番染色体の２１９Ｍｂで終結する領域の全てまたは一部を含んでなる、７番染色体上のワイルドレタス（Lactuca virosa）由来の遺伝子移入断片を含んでなるレタス（Lactuca sativa）植物が提供される。

【0152】

ＱＴＬ７．１（または異型）を保持するより小さな遺伝子移入断片（すなわち、７番染色体の２０３Ｍｂ〜２１９Ｍｂに亘る上記領域の抵抗性付与部分を含んでなる）は、１５Ｍｂ、１０Ｍｂ、５Ｍｂ、２．５Ｍｂ、２Ｍｂ、１Ｍｂ、０．５Ｍｂ、１００ｋｂ、５０ｋｂまたはそれ以下のサイズを有し、ＱＴＬ７．１またはその異型を含んでなる断片であり得ると理解される。一つの態様において、前記部分は少なくとも５ｋｂ、１０ｋｂ、２０ｋｂまたはそれ以上のサイズである。

【0153】

一つの態様において、７番染色体上の遺伝子移入断片は、以下からなる群から選択されるマーカーのうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２または３または４または５つ（またはそれ以上）を含んでなり、それを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号１７内の（または配列番号１７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１７のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｂ） 配列番号２５内の（または配列番号２５に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１７．２５のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｃ） 配列番号１８内の（または配列番号１８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１８のＧＧまたはＧＣ遺伝子型；
ｄ） 配列番号１９内の（または配列番号１９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１９のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｅ） ＳＮＰ＿１７およびＳＮＰ＿１９の間（例えばＳＮＰ＿１７およびＳＮＰ＿１８の間、ＳＮＰ＿１７およびＳＮＰ１７．２５の間；またはＳＮＰ１７．２５およびＳＮＰ＿１９の間、またはＳＮＰ１７．２５およびＳＮＰ＿１８の間、またはＳＮＰ＿１８およびＳＮＰ＿１９の間）に物理的に位置する、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、特に、ワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー；
ｆ） ＳＮＰ＿１７、ＳＮＰ＿１７．２５、ＳＮＰ＿１８およびＳＮＰ＿１９から選択されるあらゆるマーカーの１２Ｍｂまたは１０Ｍｂの距離内、好ましくは５Ｍｂ以内に位置する、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、特にワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0154】

所望により、一つの態様において、遺伝子移入断片は、配列番号２８内（または配列番号２８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内）の一塩基多型マーカーＶＳＰ２のＣＣまたはＡＣ遺伝子型および配列番号２９内（または配列番号２９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内）の一塩基多型マーカーＶＳＰ４のＧＧまたはＧＡ遺伝子型から選択されるワイルドレタス（L. virosa）アクセッション特異的マーカーを含んでなる（且つ、それによって検出可能である）。ＳＮＰマーカーＶＳＰ２およびＶＳＰ４を用いることで、２つの異なる種類のワイルドレタス（L. virosa）アクセッション由来のＱＴＬ７．１を含んでなる遺伝子移入断片を区別することができる。

【0155】

遺伝子移入断片は、ＳＮＰ遺伝子型によって示されるように、ヘテロ接合型であってもホモ接合型であってもよい。そのため、一つの態様において、遺伝子移入断片はホモ接合型であり、ＳＮＰマーカー遺伝子型はホモ接合性遺伝子型である。

【0156】

上記の通り、ＱＴＬ７．１の異型が、種々のＮｒ：１抵抗性ワイルドレタス（Lactuca virosa）アクセッションから、特定および遺伝子移入され得る。このような異型は、本明細書において提供される配列に対して１００％同一でないが、同一長のゲノム配列がアラインメントされた場合に実質的な配列同一性（例えば、少なくとも８５％、９０％またはそれ以上）をなお有し得る、ゲノム配列を含んでなり得る。ＱＴＬ７．１が位置するＱＴＬ領域に差異があることは、アクセッション特異的ＳＮＰマーカーが、共に抵抗性付与ＱＴＬ７．１を含んでなる、２つの異なるワイルドレタス（L. virosa）アクセッション由来のＱＴＬ７．１の遺伝子移入において特定することができたという事実から、理解することができる。そのため、ＶＳＰ２を含んでなる遺伝子移入断片は、ＶＳＰ４を含んでなるものとは異なる遺伝子移入断片であるが、共にＱＴＬ７．１を含んでなる。ＱＴＬ７．１を含んでなる野生ワイルドレタス（L. virosa）アクセッション内には、従って、７番染色体上の２０３Ｍｂ〜２１９Ｍｂに亘る領域におけるゲノム変動が存在し得る。しかし、このようなアクセッションは、本発明の植物を作製するために、７番染色体の２０３Ｍｂから開始し２１９Ｍｂで終結する領域の全てまたは一部をＮｒ：１感受性栽培レタスに遺伝子移入するのに等しく使用され得る。前記領域がＱＴＬを含んでなるという、本発明の知識を用いて、当業者は同一の領域またはより小さな抵抗性付与部分を栽培レタスに遺伝子移入することができる。

【0157】

一つの態様において、７番染色体上の遺伝子移入断片は、以下からなる群から選択されるマーカーのうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２もしくは３もしくは４つを含んでなり、それを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号１７内の（または配列番号１７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１７のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｂ） 配列番号２５内の（または配列番号２５に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１７．２５のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｃ） 配列番号１８内の（または配列番号１８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１８のＧＧまたはＧＣ遺伝子型；
ｄ） 配列番号１９内の（または配列番号１９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１９のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；

【0158】

一つの態様において、遺伝子移入断片はＮＣＩＭＢ４２０８６として寄託された種子またはその子孫に由来し得る。

【0159】

一つの態様において、遺伝子移入断片は、別のＮｒ：１抵抗性ワイルドレタス（L. virosa）アクセッション、例えば、配列番号２９内（または配列番号２９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内）の一塩基多型マーカーＶＳＰ４のＧＧまたはＧＡ遺伝子型を含んでなるアクセッション、に由来する。

【0160】

別の態様において、遺伝子移入断片は、別のＮｒ：１抵抗性ワイルドレタス（L. virosa）アクセッション、例えば、配列番号２８内（または配列番号２８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内）の一塩基多型マーカーＶＳＰ２のＣＣまたはＣＡ遺伝子型を含んでなるアクセッション、に由来する。

【0161】

ＱＴＬ７．１の第一のＱＴＬ解析およびマーカーＳＮＰ＿１５〜ＳＮＰ＿２２に基づいて本明細書の別の場所に記載される他の態様は、同様に、この後の解析で特定されるマーカーおよび遺伝子移入に適用される。そのため、例えば、ＱＴＬ７．１は、例えば戻し交雑によって、あらゆる栽培レタス、特にＮｒ：１感受性系統または品種に遺伝子移入することができる。ＱＴＬ７．１は、栽培レタスにおいて、ＱＴＬ６．１を含んでなる組換え６番染色体と、および／または７番染色体上の第二ＱＴＬ、すなわちＱＴＬ７．２と、組み合わせることもできる。

【0162】

従って、一つの態様において、栽培レタス品種または育種系統に別々にまたは組み合わせて導入（遺伝子移入）された場合に、およびヘテロ接合型またはホモ接合型で存在する場合に、栽培レタス植物にＮｒ：１抵抗性を付与する、３つの量的形質遺伝子座（ＱＴＬ６．１および／またはＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２）が、野生レタス（特に、ワイルドレタス（L. virosa）、例えばアクセッションＮＣＩＭＢ４２０８６）の６番染色体および７番染色体上に存在することが分かった。一つの態様において、栽培レタス植物は、６番染色体および／または７番染色体の一方のみに遺伝子移入断片を含んでなり、一方、前記対の相同染色体６および７は、遺伝子移入断片を欠く栽培レタスの非組換え６番染色体および／または７番染色体であり得る。別の態様では、栽培レタス植物は、相同対の６番染色体および／または７番染色体の両方に遺伝子移入断片を含んでなる（遺伝子移入がホモ接合型である）。栽培レタス植物の遺伝子型は、従って、単一の遺伝子移入断片を含んでなる植物の遺伝子型：ＱＴＬ６．１／ｗｔ、ＱＴＬ６．１／ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１／ｗｔ、ＱＴＬ７．１／ＱＴＬ７．１、ＱＴＬ７．２／ｗｔ、ＱＴＬ７．２／ＱＴＬ７．２；２つの遺伝子移入断片（６番染色体上の１つおよび７番染色体上の１つ）を含んでなる植物の遺伝子型：ＱＴＬ６．１／ｗｔ＋ＱＴＬ７．１／ｗｔ、ＱＴＬ６．１／ＱＴＬ６．１＋ＱＴＬ７．１／ｗｔ、ＱＴＬ６．１／ＱＴＬ６．１＋ＱＴＬ７．１／ＱＴＬ７．１、ＱＴＬ６．１／ｗｔ＋ＱＴＬ７．１／ＱＴＬ７．１；ＱＴＬ６．１／ｗｔ＋ＱＴＬ７．２／ｗｔ、ＱＴＬ６．１／ＱＴＬ６．１＋ＱＴＬ７．２／ｗｔ、ＱＴＬ６．１／ＱＴＬ６．１＋ＱＴＬ７．２／ＱＴＬ７．２、ＱＴＬ６．１／ｗｔ＋ＱＴＬ７．２／ＱＴＬ７．２；７番染色体上に２つの遺伝子移入断片を含んでなる植物の遺伝子型：ＱＴＬ７．２／ｗｔ＋ＱＴＬ７．１／ｗｔ、ＱＴＬ７．２／ＱＴＬ７．２＋ＱＴＬ７．１／ｗｔ、ＱＴＬ７．２／ＱＴＬ７．２＋ＱＴＬ７．１／ＱＴＬ７．１、ＱＴＬ７．２／ｗｔ＋ＱＴＬ７．１／ＱＴＬ７．１であり得る。上記の２つの遺伝子移入断片（６番染色体上の１つおよび７番染色体上の１つ）を含んでなる植物は、さらに、ヘテロ接合型またはホモ接合型の７番染色体上の第三のＱＴＬを含んでなり得る。

【0163】

遺伝子移入断片は、同一のアクセッション由来であってよいが、異なるアクセッション由来であってもよい。一つの態様において、６番染色体上の遺伝子移入断片は、７番染色体上の遺伝子移入断片と同じアクセッション由来である。しかし、異なるアクセッション由来の遺伝子移入断片を組み合わせることも可能であり、例えば、６番染色体上の遺伝子移入断片があるアクセッション由来であり、７番染色体上の遺伝子移入断片が別のアクセッション由来であってもよい。例えば、マーカーＶＳＰ１およびＶＳＰ２はあるアクセッション由来であり、一方、マーカーＶＳＰ３およびＶＳＰ４は異なるアクセッション由来である。一つの態様において、６番染色体上の遺伝子移入断片はＶＳＰ１マーカーを含んでなり、７番染色体上の遺伝子移入断片はＶＳＰ２マーカーを含んでなる。別の態様では、６番染色体上の遺伝子移入断片はＶＳＰ３マーカーを含んでなり、７番染色体上の遺伝子移入断片はＶＳＰ４マーカーを含んでなる。しかし、６番染色体および７番染色体上の遺伝子移入断片は、異なるアクセッション由来であってもよく、そのため、例えば、６番染色体上の遺伝子移入断片がＶＳＰ１を含んでなり、一方７番染色体上の遺伝子移入断片がＶＳＰ４を含む場合があり、あるいは、６番染色体上の断片がＶＳＰ３マーカーを含んでなり、７番染色体上の断片がＶＳＰ２マーカーを含む場合がある。同様に、例えばＱＴＬ６．１を含んでなる遺伝子移入断片についてホモ接合性の植物は、同じ断片をホモ接合型で含有し得るが、２つの異なる遺伝子移入断片を含有する場合もある。

【0164】

本発明の３つのＱＴＬの供給源は特定の野生供給源であるが、これらは、６番染色体および／または７番染色体上の同一の遺伝子座にＱＴＬ６．１および／またはＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２を含んでなる他の野生レタスアクセッション（特に、ワイルドレタス（L. virosa）アクセッション）である可能性がある。このような遺伝子座は、わずかに異なるヌクレオチド配列を有するＮｒ：１対立遺伝子、すなわち、この中に見られる対立遺伝子の異型（ＱＴＬ）を含んでなり得る。このような異型ＱＴＬを、本明細書に記載のように、特定し、栽培レタスに遺伝子移入して、栽培レタス（L. sativa）のゲノム並びに組換え６番染色体および／または７番染色体を含んでなる栽培レタス植物を作製することもでき、それにより、組換え６番染色体および／または７番染色体は、ホモ接合型またはヘテロ接合型で存在する場合に栽培レタス植物にＮｒ：１抵抗性を付与する、野生アキノノゲシ属（Lactuca）種遺伝子移入断片（特に、ワイルドレタス（L. virosa））を含んでなる。

【0165】

ＱＴＬ６．１および／またはＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２（または異型ＱＴＬ）を含んでなるそのような野生レタス植物を特定するために、野生アクセッションが、例えば、マーカーアッセイにおいて、または配列比較もしくは他の方法によって、本明細書において提供されるＳＮＰマーカーのうちの一つまたは複数の存在について、スクリーニングされ得る。推定上のＮｒ：１抵抗性付与ＱＴＬ（または異型ＱＴＬ）を次に、例えば、所望によりＭＡＳ（マーカー支援選抜）を用いて、すなわち、本明細書において提供されるＳＮＰマーカー（またはこれらの間のマーカー）の一つまたは複数（または全て）を用いて、栽培レタスに遺伝子移入することにより、組換え６番染色体および／または７番染色体を含んでなる子孫植物（例えば戻し交雑植物）を検出および／または選抜することができる。選抜された植物、すなわち、６番染色体および／または７番染色体上の遺伝子移入断片を含んでなり、６番染色体上の遺伝子移入断片がＳＮＰマーカーＳＮＰ＿０１〜ＳＮＰ＿０７のうちの一つもしくは複数、もしくはＳＮＰマーカーＳＮＰ１．２３、ＳＮＰ＿０２、ＳＮＰ２．２４もしくはＳＮＰ＿０３、もしくはこれらのいずれかの間にあるマーカーのうちの一つもしくは複数（本明細書の別の場所に記載）によって検出可能であり、並びに／または、７番染色体上の遺伝子移入断片が、ＱＴＬ７．２もしくはその異型を検出するＳＮＰマーカーＳＮＰ＿０８〜ＳＮＰ＿１４、もしくはこれらの間にあるマーカーのうちの一つまたは複数（本明細書の別の場所に記載）、および／もしくは、ＱＴＬ７．１もしくはその異型を検出するＳＮＰマーカーＳＮＰ＿１５〜ＳＮＰ＿２２、もしくはＳＮＰ＿１７、ＳＮＰ１７．２５、ＳＮＰ＿１８もしくはＳＮＰ＿１９、もしくはこれらのいずれかの間にあるマーカーのうちの一つまたは複数（本明細書の別の場所に記載）によって検出可能である、栽培レタス植物は次に、遺伝子移入断片が実際にＮｒ：１抵抗性を付与しているかどうかを判定するために、適切な対照植物、好ましくは少なくとも遺伝的対照および／またはＭａｆａｌｄａ等のＮｒ：１感受性植物と共に、Ｎｒ：１抵抗性について表現型決定され得る。記述された一つまたは複数のＮｒ：１抵抗性アッセイが使用され得る。

【0166】

ワイルドレタス（L. virosa）等の、野生レタスのアクセッションは、ＵＳＤＡ国立植物遺伝資源システムコレクションまたはヴァーヘニンゲンのＣＧＮ等の他の種子コレクションから入手可能であり、従って、例えば本明細書に記載のマーカーアッセイを用いて、ＱＴＬ６．１（もしくは異型）および／またはＱＴＬ７．１（もしくは異型）および／またはＱＴＬ７．２（もしくは異型）の存在についてスクリーニングされ得、ＱＴＬ６．１もしくは異型を示すＳＮＰマーカーのうちの一つもしくは複数を含んでなる；および／またはＱＴＬ７．２もしくは異型を示すＳＮＰマーカーのうちの一つもしくは複数を含んでなる；および／またはＱＴＬ７．１もしくは異型を含んでなるＳＮＰマーカーのうちの一つもしくは複数を含んでなるアクセッションが、正常な野生型の非組換え６番染色体および７番染色体を有する栽培レタス植物と交雑され得る。Ｆ２世代（またはさらなる世代、例えばＦ３、または好ましくは戻し交雑世代、例えばＢＣ１、ＢＣ２、ＢＣ３もしくはＢＣ１Ｓ１等）が次に、本明細書に記載の分子マーカーアッセイを用いて、遺伝子移入断片またはその抵抗性付与部分を有する組換え植物についてスクリーニングされ得る。あるいは、野生アクセッションが、Ｎｒ：１抵抗性アッセイを用いて表現型についてスクリーニングされ得、係る野生アクセッションとの交雑から得られた子孫植物のみがマーカー（および遺伝子移入断片）の存在についてスクリーニングされ得る。このような子孫植物も本発明の範囲に含まれる。

【0167】

特定の実施態様において、Ｎｒ：１抵抗性付与ＱＴＬ６．１および／またはＮｒ：１抵抗性付与ＱＴＬ７．１および／またはＮｒ：１抵抗性付与ＱＴＬ７．２を含んでなる遺伝子移入断片は、受入番号ＮＣＩＭＢ４２０８６として寄託された代表試料である種子から、またはその子孫から、由来し得る（または由来する）または入手可能である（または入手される；またはその中に存在する）。前記子孫は、上記のＱＴＬを示す一つまたは複数（または全て）のＳＮＰマーカーを保持するあらゆる子孫であり得る。従って、子孫は寄託物のＦ１またはＦ２子孫に限定されず、自家受粉によって得られるか、および／または別のレタス植物との交雑によって得られるかにかかわらず、あらゆる子孫であり得る。

【0168】

一つの実施態様では、遺伝子移入断片は、本明細書の別の場所に記載されるマーカー、特に、以下のうちの一つまたは複数によって同定可能である：６番染色体上の遺伝子移入断片（ＱＴＬ６．１または異型）については、マーカーＳＮＰ＿０１〜ＳＮＰ＿０７（もしくはこれらの間にあるあらゆるマーカー）、またはＳＮＰ１．２３、ＳＮＰ＿０２、ＳＮＰ２．２４および／もしくはＳＮＰ＿０３（もしくはこれらの間にあるあらゆるマーカー）、また所望によりＶＳＰ１もしくはＶＳＰ３；および、ＱＴＬ７．２（または異型）と称される７番染色体上の遺伝子移入断片については、ＳＮＰ＿０８〜ＳＮＰ＿１４（またはこれらの間にあるあらゆるマーカー）、および、ＱＴＬ７．１（または異型）と称される７番染色体上の遺伝子移入断片については、ＳＮＰ＿１５〜ＳＮＰ＿２２（もしくはこれらの間にあるあらゆるマーカー）、またはＳＮＰ＿１７、ＳＮＰ１７．２５、ＳＮＰ＿１８および／もしくはＳＮＰ＿１９（もしくはこれらの間にあるあらゆるマーカー）、所望によりＶＳＰ２もしくはＶＳＰ４。

【0169】

一つの態様において、本発明は、レタス（L. sativa）のゲノムを有する栽培レタス植物系統または品種を提供し、前記系統または品種はＮｒ：１抵抗性を含んでなり、Ｎｒ：１抵抗性は栽培レタスの６番染色体および／または７番染色体上の遺伝子移入断片によって付与され、前記遺伝子移入断片は、Ｎｒ：１抵抗性ワイルドレタス（L. virosa）植物（ＱＴＬに連結された、本明細書で開示される一つまたは複数のマーカーを含んでなる）を栽培レタス植物と交雑することにより、入手される（または入手可能である）。

【0170】

さらなる態様において、本発明は、レタス（L. sativa）のゲノムを有する栽培レタス植物系統または品種を提供し、前記系統または品種はＮｒ：１抵抗性を含んでなり、Ｎｒ：１抵抗性は栽培レタスの６番染色体および／または７番染色体上の遺伝子移入断片によって付与され、前記遺伝子移入断片は、ＮＣＩＭＢ４２０８６として寄託された種子から育成された植物またはこの植物の子孫（ＱＴＬに連結された、本明細書で開示される一つまたは複数のマーカーを含んでなる）を栽培レタス植物と交雑することにより、入手される（または入手可能である）。

【0171】

さらに別の実施態様では、本発明は、本発明の植物、すなわち、ホモ接合型またはヘテロ接合型の６番染色体および／または７番染色体上の野生レタス由来の遺伝子移入断片を含んでなり、前記遺伝子移入断片が、番号ＮＣＩＭＢ４２０８６として寄託された種子に見られるＱＴＬを含んでなるゲノム配列の異型である、すなわち、Ｎｒ：１ＱＴＬを含んでなるが、ゲノム配列は異なっていてもよい、栽培レタス（L. sativa）植物に関する。野生アクセッションは遺伝的に多岐にわたるため、他の野生レタスアクセッション（例えば、受入番号ＮＣＩＭＢ４２０８６として寄託されたもの以外の、他のワイルドレタス（L. virosa）アクセッション）由来のＱＴＬ６．１またはＱＴＬ７．１またはＱＴＬ７．２（これらのＱＴＬは本明細書においてＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１およびＱＴＬ７．２の異型またはオルソログとも称される）を含んでなる遺伝子移入断片のゲノム配列は、前記ゲノム配列と同一でない可能性が高く、Ｎｒ：１抵抗性付与遺伝子（プロモーター、イントロンおよびエクソンを含んでなる）でさえヌクレオチド配列において多岐にわたり得るが、機能は同一であり得る、すなわちＮｒ：１抵抗性を付与する。（異型）ＱＴＬ６．１および／または（異型）ＱＴＬ７．１および／または（異型）ＱＴＬ７．２に連結されたある特定のＳＮＰマーカーは様々なアクセッションに一般に存在し得るが、一方で、他のＳＮＰマーカーは特定のアクセッションにのみ存在し得ることが、相違として見て取れる。そのため、例えば、ＳＮＰ＿０１〜ＳＮＰ＿７のどれも、または、ＳＮＰ１．２３、ＳＮＰ＿０２、ＳＮＰ２．２４もしくはＳＮＰ＿０３、および／もしくはＳＮＰ＿０８〜ＳＮＰ＿１４および／もしくはＳＮＰ＿１５〜ＳＮＰ＿２２、もしくはＳＮＰ＿１７、ＳＮＰ１７．２５、ＳＮＰ＿１８もしくはＳＮＰ＿１９のどれも、他のＮｒ：１抵抗性野生レタス（例えばワイルドレタス（L. virosa）アクセッション）に存在せず、一方で、これらのアクセッションが同一領域にＱＴＬ異型を含んでなる場合がある。同様に、前記ＳＮＰマーカーのそれぞれを含んでなるゲノム配列は、本明細書において提供される配列と１００％同一でなくてもよく、本明細書において提供される配列に対して、すなわち配列番号１〜配列番号２２および配列番号２３〜２９のいずれか１つに対して、（少なくとも）８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有していればよい。しかし、Ｎｒ：１抵抗性付与ＱＴＬ６．１（または異型）およびＱＴＬ７．１（または異型）およびＱＴＬ７．２（または例えばＮｒ：１対立遺伝子の異型もしくはオルソログを含んでなる異型）が、このような野生アクセッションに存在する場合がある。当業者は、過度の負担無く、他の野生レタスアクセッション（特に、ワイルドレタス（L. virosa）アクセッション；具体的には、Ｎｒ：１に対する自由選択抵抗性および非選択抵抗性の両方を含んでなるワイルドレタス（L. virosa）アクセッション）に見られる領域を含んでなる（異型）ＱＴＬ６．１および／または（異型）ＱＴＬ７．１および／または（異型）ＱＴＬ７．２を、特定し、栽培レタスに遺伝子移入することができる。

【0172】

一つの実施態様において、ＱＴＬ６．１（または異型）を含んでなる遺伝子移入断片、または６番染色体領域（または異型もしくはオルソロガス６番染色体領域）の存在は、以下からなる群から選択される少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２、３、４、５、６、またはそれ以上（または７つ全て）の一塩基多型（ＳＮＰ）マーカーを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号１内の（または配列番号１に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０１のＡＡまたはＡＴ遺伝子型；
ｂ） 配列番号２内の（または配列番号２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｃ） 配列番号３内の（または配列番号３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０３のＡＡまたはＡＣ遺伝子型；
ｄ） 配列番号４内の（または配列番号４に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０４のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｅ） 配列番号５内の（または配列番号５に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０５のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｆ） 配列番号６内の（または配列番号６に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０６のＣＣまたはＣＡ遺伝子型；
ｇ） 配列番号７内の（または配列番号７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０７のＧＧまたはＧＴ遺伝子型；
ｈ） マーカーＳＮＰ＿０１とＳＮＰ＿０７との間の、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、例えばワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0173】

従って、一つの実施態様において、本発明の植物は以下を含んでなる：配列番号１（ＳＮＰ＿０１と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号１に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのチミン（ＴＴ）ではなく、少なくとも１つのアデニン（Ａ）（すなわち、ＡＡもしくはＡＴ遺伝子型）；および／または、配列番号２（ＳＮＰ＿０２と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号２に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのチミン（ＴＴ）ではなく、少なくとも１つのシトシン（Ｃ）（すなわち、ＣＣもしくはＣＴ遺伝子型）；および／または、配列番号３（ＳＮＰ＿０３と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号３に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのシトシン（ＣＣ）ではなく、少なくとも１つのアデニン（Ａ）（すなわち、ＡＡもしくはＡＣ遺伝子型）；および／または、配列番号４（ＳＮＰ＿０４と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号４に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのアデニン（ＡＡ）ではなく、少なくとも１つのグアニン（Ｇ）（すなわち、ＧＧまたはＧＡ遺伝子型）；および／または、配列番号５（ＳＮＰ＿０５と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号５に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのシトシン（ＣＣ）ではなく、少なくとも１つのチミン（Ｔ）（すなわち、ＴＴもしくはＴＣ遺伝子型）；および／または、配列番号６（ＳＮＰ＿０６と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号６に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのアデニン（ＡＡ）ではなく、少なくとも１つのシトシン（Ｃ）（すなわち、ＣＣもしくはＣＡ遺伝子型）；および／または、配列番号７（ＳＮＰ＿０７と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号７に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのチミン（ＴＴ）ではなく、少なくとも１つのグアニン（Ｇ）（すなわち、ＧＧもしくはＧＴ遺伝子型）。

【0174】

別の実施態様において、ＱＴＬ６．１（または異型）を含んでなる遺伝子移入断片、または６番染色体領域（または異型もしくはオルソロガス６番染色体領域）の存在は、以下からなる群から選択される一塩基多型（ＳＮＰ）マーカーのうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２、３または４つを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号２３内の、または配列番号２３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ１．２３のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｂ） 配列番号２内の、または配列番号２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｃ） 配列番号２４内の、または配列番号２４に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ２．２４のＴＴまたはＣＴ遺伝子型；
ｄ） 配列番号３内の、または配列番号３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０３のＡＡまたはＡＣ遺伝子型；
ｅ） マーカーＳＮＰ１．２３とＳＮＰ＿０３との間のあらゆるワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0175】

従って、一つの実施態様において、本発明の植物は以下を含んでなる：配列番号２３（ＳＮＰ１．２３と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号２３に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのチミン（ＴＴ）ではなく、少なくとも１つのシトシン（Ｃ）（すなわち、ＣＣもしくはＣＴ遺伝子型）；および／または、配列番号２（ＳＮＰ＿０２と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号２に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのチミン（ＴＴ）ではなく、少なくとも１つのシトシン（Ｃ）（すなわち、ＣＣもしくはＣＴ遺伝子型）；および／または、配列番号２４（ＳＮＰ２．２４と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号２４に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのシトシン（ＣＣ）ではなく、少なくとも１つのチミン（Ｔ）（すなわち、ＴＴもしくはＣＴ 遺伝子型）；および／または、配列番号３（ＳＮＰ＿０３と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号３に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのシトシン（ＣＣ）ではなく、少なくとも１つのアデニン（Ａ）（すなわちＡＡもしくはＡＣ遺伝子型）。

【0176】

一つの実施態様において、ＱＴＬ７．２（または異型）を含んでなる遺伝子移入断片、または７番染色体領域（または異型もしくはオルソロガス７番染色体領域）の存在は、以下からなる群から選択される少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２、３、４、５、６、またはそれ以上（または７つ全て）の一塩基多型（ＳＮＰ）マーカーを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号８内の（または配列番号８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０８のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｂ） 配列番号９内の（または配列番号９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０９のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｃ） 配列番号１０内の（または配列番号１０に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１０のＡＡまたはＡＧ遺伝子型；
ｄ） 配列番号１１内の、または配列番号１１に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１１のＣＣまたはＣＡ遺伝子型；
ｅ） 配列番号１２内の（または配列番号１２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｆ） 配列番号１３内の（または配列番号１３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１３のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｇ） 配列番号１４内の（または配列番号１４に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１４のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｈ） マーカーＳＮＰ＿０８とＳＮＰ＿１４との間の、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、例えばワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0177】

従って、一つの実施態様において、本発明の植物は以下を含んでなる：配列番号８（ＳＮＰ＿０８と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号８に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのシトシン（ＣＣ）ではなく、少なくとも１つのチミン（Ｔ）（すなわち、ＴＴもしくはＴＣ遺伝子型）；および／または、配列番号９（ＳＮＰ＿０９と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号９に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのチミン（ＴＴ）ではなく、少なくとも１つのシトシン（Ｃ）（すなわち、ＣＣもしくはＣＴ遺伝子型）；および／または、配列番号１０（ＳＮＰ＿１０と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号１０に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのグアニン（ＧＧ）ではなく、少なくとも１つのアデニン（Ａ）（すなわち、ＡＡもしくはＡＧ遺伝子型）；および／または、配列番号１１（ＳＮＰ＿１１と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号１１に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのアデニン（ＡＡ）ではなく、少なくとも１つのシトシン（Ｃ）（すなわち、ＣＣもしくはＣＡ遺伝子型）；および／または、配列番号１２（ＳＮＰ＿１２と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号１２に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのチミン（ＴＴ）ではなく、少なくとも１つのシトシン（Ｃ）（すなわち、ＣＣもしくはＣＴ遺伝子型）；および／または、配列番号１３（ＳＮＰ＿１３と称される）のヌクレオチド１３６における、もしくは配列番号１３に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのアデニン（ＡＡ）ではなく、少なくとも１つのグアニン（Ｇ）（すなわち、ＧＧもしくはＧＡ遺伝子型）；および／または、配列番号１４（ＳＮＰ＿１４と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号１４に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのチミン（ＴＴ）ではなく、少なくとも１つのシトシン（Ｃ）（すなわち、ＣＣもしくはＣＴ遺伝子型）。

【0178】

一つの実施態様において、ＱＴＬ７．１（または異型）を含んでなる遺伝子移入断片、または７番染色体領域（または異型もしくはオルソロガス７番染色体領域）の存在は、以下からなる群から選択される少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２、３、４、５、６、７またはそれ以上（または８つ全て）の一塩基多型（ＳＮＰ）マーカーを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号１５内の（または配列番号１５に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１５のＴＴまたはＴＡ遺伝子型；
ｂ） 配列番号１６内の（または配列番号１６に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１６のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｃ） 配列番号１７内の（または配列番号１７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１７のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｄ） 配列番号１８内の（または配列番号１８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１８のＧＧまたはＧＣ遺伝子型；
ｅ） 配列番号１９内の（または配列番号１９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１９のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｆ） 配列番号２０内の（または配列番号２０に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿２０のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｇ） 配列番号２１内の（または配列番号２１に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿２１のＣＣまたはＣＡ遺伝子型；
ｈ） 配列番号２２内の（または配列番号２２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿２２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｉ） マーカーＳＮＰ＿１５とＳＮＰ＿２２との間の、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、例えばワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0179】

従って、一つの実施態様において、本発明の植物は以下を含んでなる：配列番号１５（ＳＮＰ＿１５と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号１５に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのアデニン（ＣＣ）ではなく、少なくとも１つのチミン（Ｔ）（すなわち、ＴＴもしくはＴＡ遺伝子型）；および／または、配列番号１６（ＳＮＰ＿１６と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号１６に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのアデニン（ＡＡ）ではなく、少なくとも１つのグアニン（Ｇ）（すなわち、ＧＧもしくはＧＡ遺伝子型）；および／または、配列番号１７（ＳＮＰ＿１７と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号１７に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのシトシン（ＣＣ）ではなく、少なくとも１つのチミン（Ｔ）（すなわち、ＴＴもしくはＴＣ遺伝子型）；および／または、配列番号１８（ＳＮＰ＿１８と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号１８に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのシトシン（ＣＣ）ではなく、少なくとも１つのグアニン（Ｇ）（すなわち、ＧＧもしくはＧＣ遺伝子型）；および／または、配列番号１９（ＳＮＰ＿１９と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号１９に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのアデニン（ＡＡ）ではなく、少なくとも１つのグアニン（Ｇ）（すなわち、ＧＧもしくはＧＡ遺伝子型）；および／または、配列番号２０（ＳＮＰ＿２０と称される）のヌクレオチド７２における、もしくは配列番号２０に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのシトシン（ＣＣ）ではなく、少なくとも１つのチミン（Ｔ）（すなわち、ＴＴもしくはＴＣ遺伝子型）；および／または、配列番号２１（ＳＮＰ＿２１と称される）のヌクレオチド４１における、もしくは配列番号２１に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのアデニン（ＡＡ）ではなく、少なくとも１つのシトシン（Ｃ）（すなわち、ＣＣもしくはＣＡ遺伝子型）；および／または、配列番号２２（ＳＮＰ＿２２と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号２２に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのチミン（ＴＴ）ではなく、少なくとも１つのシトシン（Ｃ）（すなわち、ＣＣもしくはＣＴ遺伝子型）。

【0180】

さらなる実施態様において、ＱＴＬ７．１（または異型）を含んでなる遺伝子移入断片、または７番染色体領域（または異型もしくはオルソロガス７番染色体領域）の存在は、以下からなる群から選択される一塩基多型（ＳＮＰ）マーカーのうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２、３、４つを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号１７内の（または配列番号１７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１７のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｂ） 配列番号２５内の（または配列番号２５に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１７．２５のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｃ） 配列番号１８内の（または配列番号１８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１８のＧＧまたはＧＣ遺伝子型；
ｄ） 配列番号１９内の（または配列番号１９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１９のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｅ） ＳＮＰ＿１７とＳＮＰ＿１９との間に物理的に位置する、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、特に、ワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0181】

従って、一つの実施態様において、本発明の植物は以下を含んでなる：配列番号１７（ＳＮＰ＿１７と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号１７に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのシトシン（ＣＣ）ではなく、少なくとも１つのチミン（Ｔ）（すなわち、ＴＴもしくはＴＣ遺伝子型）；配列番号２５（ＳＮＰ１７．２５と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号２５に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのシトシン（ＣＣ）ではなく、少なくとも１つのチミン（Ｔ）（すなわち、ＴＴもしくはＴＣ遺伝子型）；および／または、配列番号１８（ＳＮＰ＿１８と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号１８に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのシトシン（ＣＣ）ではなく、少なくとも１つのグアニン（Ｇ）（すなわち、ＧＧもしくはＧＣ遺伝子型）；および／または、配列番号１９（ＳＮＰ＿１９と称される）のヌクレオチド７１における、もしくは配列番号１９に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチドにおける、２つのアデニン（ＡＡ）ではなく、少なくとも１つのグアニン（Ｇ）（すなわち、ＧＧもしくはＧＡ遺伝子型）。

【0182】

ＳＮＰ遺伝子型とは、２つのヌクレオチド、および各々の６番染色体（ＳＮＰ＿０１〜ＳＮＰ＿０７またはＳＮＰ１．２３、ＳＮＰ＿０２、ＳＮＰ２．２４もしくはＳＮＰ＿０３の場合）または７番染色体（ＳＮＰ＿０８〜ＳＮＰ＿１４およびＳＮＰ＿１５〜ＳＮＰ＿２２またはＳＮＰ＿１７、ＳＮＰ１７．２５、ＳＮＰ＿１８もしくはＳＮＰ＿１９の場合）上に、これら２つのヌクレオチドの一方を含んでなるゲノム配列を指す。そのため、ＳＮＰ＿２２についてＣＣ遺伝子型を有する植物は両方の染色体上で同一のヌクレオチド（Ｃ）を有し、一方、ＳＮＰ＿２２についてＣＴ遺伝子型を有する植物は、配列番号２２のヌクレオチド７１（または配列番号２２に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチド）にＣを有する１つの染色体、および、配列番号２２のヌクレオチド７１（または配列番号２２に対する実質的な配列同一性を含んでなるゲノム配列の等価なヌクレオチド）にＴを有する１つの染色体を有する。本明細書において提供されるＳＮＰマーカーの周囲のゲノム配列は他の野生レタスアクセッション由来の遺伝子移入断片においてわずかに異なり得るため（すなわち、異型またはオルソロガス６番染色体または７番染色体領域）、ＳＮＰの前後のヌクレオチド配列が本明細書において提供される配列と１００％同一でない場合があることは明らかである。従って、本明細書において提供される配列に対して実質的な配列同一性を有するが、同一のＳＮＰを含んでなる配列が、本明細書に包含される。また、ある態様において、遺伝子移入がホモ接合型であると、ＳＮＰマーカー遺伝子型が該ＱＴＬについてホモ接合性の遺伝子型になることは明らかである。

【0183】

遺伝子移入断片は、Ｎｒ：１抵抗性付与部分が保持されている限り、染色体の半分ほども巨大であってもよく、または小さくてもよい。一つの態様において、６番染色体および／または７番染色体上の遺伝子移入断片は、１２０Ｍｂ、１００Ｍｂ、８４Ｍｂ、８０Ｍｂ、７５Ｍｂ、７４Ｍｂ、７３Ｍｂ、６０Ｍｂ、５０Ｍｂ、４０Ｍｂ、３０Ｍｂ、２０Ｍｂ、１６Ｍｂ、１５Ｍｂ、１０Ｍｂのサイズ以下、好ましくは８Ｍｂのサイズ以下、より好ましくは６、５、４、３または２．５Ｍｂのサイズ以下、例えば２Ｍｂ以下である。一つの態様において、遺伝子移入断片は、少なくとも０．２Ｍｂ、０．５Ｍｂ、１．０Ｍｂ、１．５Ｍｂ、１．９Ｍｂ、２．０Ｍｂ、２．５Ｍｂまたは３Ｍｂのサイズである。従って、様々な範囲の遺伝子移入サイズが本明細書に包含される。サイズは、例えばQi et al. 2013 (Nature Genetics December 2013, Vol 45, No. 12, pages 1510-1518)またはHuang et al. 2009 (Nature Genetics, Volume 41, Number 12, p1275-1283)に記載される、例えば全ゲノムシークエンシングまたは次世代シークエンシングによって、容易に決定することができる。特に、遺伝子移入領域内には大量の遺伝的変異（ＳＮＰ、ＩＮＤＥＬ等）があるため、遺伝子移入領域は栽培（cultivated）ゲノム領域と容易に区別可能である。

【0184】

本明細書に記載のＱＴＬまたはオルソログまたは異型のいずれか１つの存在について、野生レタス、例えばワイルドレタス（L. virosa）、をスクリーニングおよび特定する方法は、当業者に公知である。例えば、種々のワイルドレタス（L. virosa）アクセッションが、まず、それらのＮｒ：１抵抗性、特に自由選択抵抗性および／または非選択抵抗性をアッセイすることにより表現型によって選抜され、一つの態様においては、自由選択抵抗性および非選択抵抗性の両方を含んでなるアクセッションが選抜され得る。あるいは、種々のワイルドレタス（L. virosa）アクセッションが、本明細書に記載のＳＮＰマーカー（またはＳＮＰマーカーの間にあるマーカー）のうちの一つまたは複数の存在について、直接的にスクリーニングされ得る。候補野生レタス、例えばワイルドレタス（L. virosa）、が特定された後の、伝統的育種法を用いる、本発明のＱＴＬのうちの１つ、２つまたは３つ全てを野生レタスから栽培レタスに導入する方法は、当業者に公知である。例えば、寄託された種子（ＮＣＩＭＢ４２０８６）から成長した植物等の、野生アクセッションから成長した植物を、栽培レタス植物と交雑することで、Ｆ１種子を得ることができる。Ｆ１植物を一回または複数回自家受粉することで、Ｆ２もしくはＦ３植物（もしくはさらなる自家受粉世代）が作製され得、および／または、Ｆ１、Ｆ２植物もしくはＦ３植物等が栽培レタス親に戻し交雑され得る。ＱＴＬを含んでなる組換え６番染色体および／または７番染色体を含んでなる植物を特定するために、ＱＴＬ６．１（もしくは異型）および／またはＱＴＬ７．１（もしくは異型）および／またはＱＴＬ７．２（もしくは異型）を含んでなる子孫植物が、上記ＳＮＰマーカー（またはそれらのマーカーのいずれかの間にあるマーカー）の一つまたは複数または全ての存在によって、スクリーニングおよび選抜され得る。種間交雑（例えば、レタス（L. sativa）およびワイルドレタス（L. virosa））から子孫を得るのに、胚救出等の手法の使用が必要である場合がある。

【0185】

本発明のさらに別の実施態様において、ＱＴＬ６．１（または異型）を含んでなる、栽培レタス植物内の遺伝子移入断片、または６番染色体領域（またはオルソロガス６番染色体領域）の存在は、以下からなる群から選択されるマーカーのうちの少なくとも１つを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号１内の（または配列番号１に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０１のＡＡまたはＡＴ遺伝子型；
ｂ） 配列番号７内の（または配列番号７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０７のＧＧまたはＧＴ遺伝子型；
ｃ） マーカーＳＮＰ＿０１とＳＮＰ＿０７との間のあらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー；
ｄ） マーカーＳＮＰ＿０１〜ＳＮＰ＿０７のいずれか１つの７ｃＭ、５ｃＭ、３ｃＭまたはそれ以下以内に遺伝的に連結されたあらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー；および
ｅ） マーカーＳＮＰ＿０１〜ＳＮＰ＿０７のいずれか１つの５Ｍｂ、３Ｍｂ、２Ｍｂ、１Ｍｂ、０．５Ｍｂもしくは０．２Ｍｂまたはそれ以下以内に物理的に連結されたあらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー。

【0186】

一つの態様において、ｃ）のマーカーは、ＳＮＰ＿０２〜ＳＮＰ＿０６のうちの一つまたは複数である。

【0187】

一つの態様では、上記のａ）、ｂ）および／またはｃ）のマーカーから、少なくとも１つ、２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つまたはそれ以上のマーカーが検出される。別の態様では、上記のａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）および／またはｅ）のマーカーから、少なくとも１つ、２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つまたはそれ以上のマーカーが検出される。一つの実施態様では、少なくともａ）および／またはｂ）のマーカーが検出され、所望により、ｃ）、ｄ）および／またはｅ）の少なくとも１つ、２つ、３つまたはそれ以上のマーカーが検出される。一つの態様では、ｃ）の少なくとも１、２、または３つのマーカーが検出され、特に、少なくともＳＮＰ＿０４、ＳＮＰ＿０５および／またはＳＮＰ＿０６が検出される。

【0188】

ａ）およびｂ）のマーカーの間にあるあらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー（例えば、ワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的）は、マーカーＳＮＰ＿０１とＳＮＰ＿０７との間の６番染色体領域に遺伝的に位置し、且つ／または、マーカーＳＮＰ＿０１とＳＮＰ＿０７との間に物理的に位置し、且つ、野生レタス６番染色体領域を示す、あらゆる分子マーカーを指す。これは、マーカーが栽培レタスゲノムと野生レタスゲノムとの間で多型であることを意味する。一つの態様では、マーカーは一塩基多型（ＳＮＰ）であるが、他の分子マーカー、例えばＲＦＬＰ、ＡＦＬＰ、ＲＡＰＤ、ＤＮＡ塩基配列決定法等は同様に使用され得る。

【0189】

本発明の別の実施態様において、ＱＴＬ６．１（または異型）を含んでなる、栽培レタス植物内の遺伝子移入断片、または６番染色体領域（またはオルソロガス６番染色体領域）の存在は、以下からなる群から選択されるマーカーのうちの少なくとも１つを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号２３内の（または配列番号２３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ１．２３のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｂ） 配列番号３内の、または配列番号３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０３のＡＡまたはＡＣ遺伝子型；
ｃ） マーカーＳＮＰ１．２３とＳＮＰ＿０３との間に物理的に位置するあらゆるワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。
ｄ） マーカーＳＮＰ１．２３〜ＳＮＰ＿０３のいずれか１つの１０Ｍｂ、５Ｍｂ、３Ｍｂ、２Ｍｂ、１Ｍｂ、０．５Ｍｂもしくは０．２Ｍｂまたはそれ以下以内に物理的に連結されたあらゆるワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0190】

一つの態様において、ｃ）のマーカーは、ＳＮＰ＿０２、ＳＮＰ２．２４、所望によりＶＳＰ１および／またはＶＳＰ３のうちの一つまたは複数である。

【0191】

一つの態様では、少なくとも１つ、２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つまたはそれ以上のマーカーが、上記のａ）、ｂ）および／またはｃ）のマーカーから検出される。別の態様では、上記のａ）、ｂ）、ｃ）および／またはｄ）のマーカーから、少なくとも１つ、２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つまたはそれ以上のマーカーが検出される。一つの実施態様では、少なくともａ）および／またはｂ）のマーカーが検出され、所望により、ｃ）および／またはｄ）の少なくとも１つ、２つ、３つまたはそれ以上のマーカーが検出される。一つの態様では、ｃ）の少なくとも１、２、または３つのマーカーが検出され、特に、少なくともＳＮＰ＿０２および／またはＳＮＰ２．２４が検出される。

【0192】

あらゆるワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカーとは、マーカーが遺伝子移入断片およびワイルドレタス（L. virosa）ゲノムの存在を示すこと、すなわち、マーカーが栽培レタスゲノムと野生ワイルドレタス（L. virosa）レタスゲノムとの間で多型であること、を示す。一つの態様では、マーカーは一塩基多型（ＳＮＰ）であるが、他の分子マーカー、例えばＲＦＬＰ、ＡＦＬＰ、ＲＡＰＤ、ＤＮＡ塩基配列決定法等は同様に使用され得る。

【0193】

同様に、本発明の一つ実施態様において、ＱＴＬ７．２（または異型）を含んでなる、栽培レタス植物内の遺伝子移入断片、または７番染色体領域（またはオルソロガス７番染色体領域）の存在は、以下からなる群から選択されるマーカーのうちの少なくとも１つを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号８内の（または配列番号８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０８のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｂ） 配列番号１４内の（または配列番号８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１４のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｃ） マーカーＳＮＰ＿０８とＳＮＰ＿１４との間のあらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー；
ｄ） マーカーＳＮＰ＿０８〜ＳＮＰ＿１４のいずれか１つの７ｃＭ、５ｃＭ、３ｃＭまたはそれ以下以内に遺伝的に連結されたあらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー；および
ｅ） マーカーＳＮＰ＿０８〜ＳＮＰ＿１４のいずれか１つの５Ｍｂ、３Ｍｂ、２Ｍｂ、１Ｍｂ、０．５Ｍｂもしくは０．２Ｍｂまたはそれ以下以内に物理的に連結されたあらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー。

【0194】

一つの態様において、ｃ）のマーカーは、ＳＮＰ＿０９〜ＳＮＰ＿１３のうちの一つまたは複数である。

【0195】

一つの態様では、上記のａ）、ｂ）および／またはｃ）のマーカーから、少なくとも１つ、２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つまたはそれ以上のマーカーが検出される。別の態様では、上記のａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）および／またはｅ）のマーカーから、少なくとも１つ、２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つまたはそれ以上のマーカーが検出される。一つの実施態様では、少なくともａ）および／またはｂ）のマーカーが検出され、所望により、ｃ）、ｄ）および／またはｅ）の少なくとも１つ、２つ、３つまたはそれ以上のマーカーが検出される。一つの態様では、ｃ）の少なくとも１、２、または３つのマーカーが検出され、特に、ＳＮＰ＿０９、ＳＮＰ＿１０および／またはＳＮＰ＿１１が検出される。

【0196】

ａ）およびｂ）のマーカーの間にあるあらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー（例えば、ワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的）は、マーカーＳＮＰ＿０８とＳＮＰ＿１４との間の６番染色体領域に遺伝的に位置し、且つ／または、マーカーＳＮＰ＿０８とＳＮＰ＿１４との間に物理的に位置し、且つ、野生レタス７番染色体領域を示す、あらゆる分子マーカーを指す。これは、マーカーが栽培レタスゲノムと野生レタスゲノムとの間で多型であることを意味する。一つの態様では、マーカーは一塩基多型（ＳＮＰ）であるが、他の分子マーカー、例えばＲＦＬＰ、ＡＦＬＰ、ＲＡＰＤ、ＤＮＡ塩基配列決定法等は同様に使用され得る。

【0197】

同様に、本発明の一つ実施態様において、ＱＴＬ７．１（または異型）を含んでなる、栽培レタス植物内の遺伝子移入断片、または７番染色体領域（またはオルソロガス７番染色体領域）の存在は、以下からなる群から選択されるマーカーのうちの少なくとも１つを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号１５内の（または配列番号１５に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０８のＴＴまたはＴＡ遺伝子型；
ｂ） 配列番号２２内の（または配列番号２２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１４のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｃ） マーカーＳＮＰ＿１５とＳＮＰ＿２２との間のあらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー；
ｄ） マーカーＳＮＰ＿１５〜ＳＮＰ＿２２のいずれか１つの７ｃＭ、５ｃＭ、３ｃＭまたはそれ以下以内に遺伝的に連結されたあらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー；および
ｅ） マーカーＳＮＰ＿１５〜ＳＮＰ＿２２のいずれか１つの５Ｍｂ、３Ｍｂ、２Ｍｂ、１Ｍｂ、０．５Ｍｂもしくは０．２Ｍｂまたはそれ以下以内に物理的に連結されたあらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー。

【0198】

一つの態様において、ｃ）のマーカーは、ＳＮＰ＿１６〜ＳＮＰ＿２１のうちの一つまたは複数である。

【0199】

一つの態様では、上記のａ）、ｂ）および／またはｃ）のマーカーから、少なくとも１つ、２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つまたはそれ以上のマーカーが検出される。別の態様では、上記のａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）および／またはｅ）のマーカーから、少なくとも１つ、２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つまたはそれ以上のマーカーが検出される。一つの実施態様では、少なくともａ）および／またはｂ）のマーカーが検出され、所望により、ｃ）、ｄ）および／またはｅ）の少なくとも１つ、２つ、３つまたはそれ以上のマーカーが検出される。一つの態様では、ｃ）の少なくとも１、２、または３つのマーカーが検出され、特に、SNP_19、SNP_20および／またはSNP_21が検出される。

【0200】

ａ）およびｂ）のマーカーの間にあるあらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー（例えば、ワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的）は、マーカーＳＮＰ＿１５とＳＮＰ＿２２との間の６番染色体領域に遺伝的に位置し、且つ／または、マーカーＳＮＰ＿１５とＳＮＰ＿２２との間に物理的に位置し、且つ、野生レタス７番染色体領域を示す、あらゆる分子マーカーを指す。これは、マーカーが栽培レタスゲノムと野生レタスゲノムとの間で多型であることを意味する。一つの態様では、マーカーは一塩基多型（ＳＮＰ）であるが、他の分子マーカー、例えばＲＦＬＰ、ＡＦＬＰ、ＲＡＰＤ、ＤＮＡ塩基配列決定法等は同様に使用され得る。

【0201】

本発明の別の実施態様において、ＱＴＬ７．１（または異型）を含んでなる、栽培レタス植物内の遺伝子移入断片、または７番染色体領域（またはオルソロガス７番染色体領域）の存在は、以下からなる群から選択されるマーカーのうちの少なくとも１つを検出する分子マーカーアッセイによって検出可能である：
ａ） 配列番号１７内の（または配列番号１７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１７のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｂ） 配列番号１９内の（または配列番号１９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１９のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｃ） マーカーＳＮＰ１７とＳＮＰ＿１９との間に物理的に位置するあらゆるワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。
ｄ） マーカーＳＮＰ１７〜ＳＮＰ＿１９のいずれか１つの１２Ｍｂ、１０Ｍｂ、５Ｍｂ、３Ｍｂ、２Ｍｂ、１Ｍｂ、０．５Ｍｂもしくは０．２Ｍｂまたはそれ以下以内に物理的に連結されたあらゆるワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0202】

一つの態様において、ｃ）のマーカーは、ＳＮＰ１７．２５、ＳＮＰ＿１８、所望によりＶＳＰ４のうちの一つまたは複数である。

【0203】

一つの態様において、ｄ）のマーカーはＶＳＰ２またはＳＮＰ＿１６である。

【0204】

一つの態様では、上記のａ）、ｂ）および／またはｃ）のマーカーから、少なくとも１つ、２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つまたはそれ以上のマーカーが検出される。別の態様では、上記のａ）、ｂ）、ｃ）および／またはｄ）のマーカーから、少なくとも１つ、２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つまたはそれ以上のマーカーが検出される。一つの実施態様では、少なくともａ）および／またはｂ）のマーカーが検出され、所望により、ｃ）および／またはｄ）の少なくとも１つ、２つ、３つまたはそれ以上のマーカーが検出される。一つの態様では、ｃ）の少なくとも１、２、または３つのマーカーが検出され、特に、少なくともＳＮＰ１７．２５および／またはＳＮＰ１８が検出される。

【0205】

あらゆるワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカーとは、マーカーが遺伝子移入断片およびワイルドレタス（L. virosa）ゲノムの存在を示すこと、すなわち、マーカーが栽培レタスゲノムと野生ワイルドレタス（L. virosa）レタスゲノムとの間で多型であること、を示す。一つの態様では、マーカーは一塩基多型（ＳＮＰ）であるが、他の分子マーカー、例えばＲＦＬＰ、ＡＦＬＰ、ＲＡＰＤ、ＤＮＡ塩基配列決定法等は同様に使用され得る。

【0206】

本発明の植物に成長可能である種子も提供され、本発明の植物から収穫され、それらのゲノム内に組換え６番染色体および／または７番染色体を含んでなる、レタスの葉（またはその一部）および結球も同様に提供される。同様に、少なくとも１つの組換え６番染色体および／または７番染色体を含んでなり、前記組換え６番染色体および／または７番染色体が野生レタス由来の遺伝子移入断片を含んでなり、前記遺伝子移入断片がＮｒ：１抵抗性を付与するＱＴＬを含んでなる、植物または種子の植物細胞、組織または植物部分が提供される。

【0207】

本明細書に記載の分子マーカーは、標準方法によって検出され得る。例えば、ＳＮＰマーカーは、ＫＡＳＰアッセイ（www.kpbioscience.co.uk参照）または他のアッセイを用いて容易に検出することができる。ＫＡＳＰアッセイを開発するために、例えば、ＳＮＰの７０塩基対上流および７０塩基対下流が選択され得、２つの対立遺伝子特異的フォワードプライマーおよび１つの対立遺伝子特異的リバースプライマーが設計され得る。ＫＡＳＰアッセイ法については、例えば、Allen et al. 2011, Plant Biotechnology J. 9, 1086-1099、特にp097-1098を参照されたい。

【0208】

従って、一つの態様においては、ＳＮＰマーカーおよびＱＴＬに関連するマーカーの存在／非存在は、ＫＡＳＰアッセイを用いて決定されるが、他のアッセイも同様に使用することができる。例えば、所望により、ＤＮＡ塩基配列決定法を使用してもよい。

【0209】

遺伝子移入断片の物理的サイズは、物理的マッピング、配列決定または蛍光インサイツハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）画像を用いた遺伝子移入の可視化（Verlaan et al. 2011, Plant Journal 68: 1093-1103）等の、様々な方法によって決定することができる。

【0210】

６番染色体および／または７番染色体上に様々なサイズの遺伝子移入断片を有する植物は、栽培レタス植物（遺伝子移入を欠く）とＮｒ：１抵抗性ワイルドレタス（L. virosa）植物との間の、または栽培レタスと本発明の植物（組換え６番染色体および／または７番染色体を含んでなる栽培レタス）との間の交雑種に由来する植物集団から組換え植物を作製し、様々な遺伝子移入サイズを有する子孫を選抜することによって、作製することができる。

【0211】

方法
本明細書において特定されるマーカーおよびゲノム領域は様々な方法で使用することができ、ＱＴＬが同一であるために、これは、特定される第一の領域およびマーカー（例えば図３Ａ参照）並びに特定される後の領域およびマーカー（例えば図３Ｂ参照）に当てはまる。本発明はいくつかの方法、すなわち：
１）ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２（またはこれらのうちのいずれかの異型）のうちの一つまたは複数を含んでなる野生レタス植物、特にワイルドレタス（L. virosa）アクセッション、を特定するための方法；
２）ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２（またはこれらのうちのいずれかの異型）から選択されるＱＴＬのうちの一つまたは複数を、野生レタス植物（例えば、ワイルドレタス（L. virosa））から栽培レタス（レタス（L. sativa））に導入して、Ｎｒ：１抵抗性栽培レタスを作製するための方法；
３） ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２（またはこれらのうちのいずれかの異型）から選択されるＱＴＬのうちの一つまたは複数の存在について、栽培レタス系統または品種をスクリーニングするための方法；並びに
４）ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２（またはこれらのうちのいずれかの異型）から選択されるＱＴＬのうちの一つまたは複数を、栽培レタス（レタス（L. sativa））から別の栽培レタスに、例えばＮｒ：１感受性レタス植物系統または品種に導入するための方法；
５）Ｎｒ：１抵抗性栽培レタスを作製するために、受入番号ＮＣＩＭＢ４２０８６として寄託された種子、またはその子孫を使用するための方法；
６）レタスヒゲナガアブラムシ（N. ribisnigri）バイオタイプＮｒ：１が存在する地域において、本発明の植物、すなわち、ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２（またはこれらのうちのいずれかの異型）から選択されるＱＴＬのうちの一つまたは複数を含んでなる、Ｎｒ：１抵抗性レタス（L. sativa）植物を栽培するための方法、を提供する。

【0212】

ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２（またはこれらのうちのいずれかの異型）のうちの一つまたは複数を含んでなる野生レタスを特定するための方法
一つの態様において、ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２（またはその異型）のうちの一つまたは複数を含んでなる野生レタス植物を特定するための方法が提供され、前記方法は、以下の段階を含んでなる：
ａ） １つの野生レタス植物または複数の野生レタス植物を用意する段階；
ｂ） 所望により、前記野生レタス植物または複数の植物を、Ｎｒ：１抵抗性アッセイにおいて、Ｎｒ：１抵抗性について試験する段階；
ｃ） ａ）の前記植物もしくは複数の植物の、または所望によりｂ）で特定されたＮｒ：１抵抗性植物もしくは複数の植物のみのゲノムＤＮＡを、ＱＴＬ６．１もしくはその異型を示す、および／またはＱＴＬ７．１もしくはその異型を示す、および／またはＱＴＬ７．２もしくはその異型を示す、一つまたは複数のマーカーの存在について、スクリーニングする段階；並びに
ｄ） 前記ｃ）のマーカーのうちの一つまたは複数を含んでなる植物を特定する段階；
ｅ） 所望により、ｄ）の植物を、Ｎｒ：１抵抗性アッセイにおいて、Ｎｒ：１抵抗性について試験する段階；
ｆ） 所望により、ｄ）の野生レタス植物を栽培レタス植物と交雑する段階。

【0213】

所望により、前記方法はさらに、ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２（またはその異型）を、栽培レタス、特にＮｒ：１感受性レタス、に遺伝子移入し、遺伝子移入断片のうちの一つまたは複数によって付与されるＮｒ：１抵抗性を含んでなるレタス（L. sativa）植物を作製することを含んでなる。これは例えば、戻し交雑によって行うことができる。所望により、マーカー支援選抜を使用してもよい。

【0214】

段階ａ）の植物または複数の植物は、例えば異なる地理的領域に由来する、ワイルドレタス（L. virosa）であることが好ましい。

【0215】

段階ｂ）またはｅ）において、Ｎｒ：１に対して抵抗性であることから、推定的にＱＴＬのうちの一つまたは複数を含んでなる植物を選抜するために、表現型Ｎｒ：抵抗性アッセイ（例えば、圃場試験または制御環境試験）を行うことができる。Ｎｒ：１抵抗性アッセイは、自由選択アッセイおよび／または非選択アッセイであり得る。

【0216】

前記方法によって得られるＮｒ：１抵抗性レタス（L. sativa）植物も、本発明の実施態様である。

【0217】

段階ｃ）のゲノムＤＮＡは、上記でさらに説明されるように、例えば、以下からなる群から選択される一つまたは複数のマーカーの存在を判定することにより、ＱＴＬ６．１またはその異型を示す一つまたは複数のマーカーの存在についてスクリーニングされ得る：
ａ） 配列番号１内の、もしくは配列番号１に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０１のＡＡもしくはＡＴ遺伝子型；および／または
ｂ） 配列番号２内の、もしくは配列番号２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０２のＣＣもしくはＣＴ遺伝子型；および／または
ｃ） 配列番号３内の、もしくは配列番号３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０３のＡＡもしくはＡＣ遺伝子型；および／または
ｄ） 配列番号４内の、もしくは配列番号４に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０４のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；および／または
ｅ） 配列番号５内の、もしくは配列番号５に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０５のＴＴもしくはＴＣ遺伝子型；および／または
ｆ） 配列番号６内の、もしくは配列番号６に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０６のＣＣもしくはＣＡ遺伝子型；および／または
ｇ） 配列番号７内の、もしくは配列番号７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０７のＧＧもしくはＧＴ遺伝子型；および／または
ｈ） ＳＮＰ＿０１とＳＮＰ＿０７との間に、例えばＳＮＰ＿０１〜ＳＮＰ＿０７のうちのいずれか２つのマーカーの間に物理的に位置する、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、特に、ワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0218】

あるいは、段階ｃ）のゲノムＤＮＡは、上記でさらに説明されるように、例えば、以下からなる群から選択される一つまたは複数のマーカーの存在を判定することにより、ＱＴＬ６．１またはその異型を示す一つまたは複数のマーカーの存在についてスクリーニングされ得る：
ａ） 配列番号２３内の（または配列番号２３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ１．２３のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｂ） 配列番号２内の（または配列番号２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｃ） 配列番号２４内の（または配列番号２４に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ２．２４のＴＴまたはＣＴ遺伝子型；
配列番号３内の（または配列番号３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０３のＡＡまたはＡＣ遺伝子型；
ｄ） ＳＮＰ１．２３およびＳＮＰ＿０３の間（例えばＳＮＰ１．２３およびＳＮＰ２．２４、ＳＮＰ１．２３およびＳＮＰ＿０２の間）；またはＳＮＰ＿０２およびＳＮＰ＿０３の間（例えばＳＮＰ＿０２およびＳＮＰ２．２４の間）；またはＳＮＰ２．２４およびＳＮＰ＿０３の間に物理的に位置する、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、特に、ワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー；
ｅ） ＳＮＰ１．２３、ＳＮＰ＿０２、ＳＮＰ２．２４、またはＳＮＰ＿０３から選択されるあらゆるマーカーの１０Ｍｂの距離内、好ましくは５Ｍｂ以内に位置する、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、特にワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0219】

また所望により、ワイルドレタス（L. virosa）特異的マーカー（ＶＳＰ１またはＶＳＰ３）をスクリーニングすることで、ＱＴＬを含んでなるアクセッションタイプを特定および／または区別することができる。

【0220】

段階ｃ）のゲノムＤＮＡは、上記でさらに説明されるように、例えば、以下からなる群から選択される一つまたは複数のマーカーの存在を判定することにより、ＱＴＬ７．２またはその異型を示す一つまたは複数のマーカーの存在についてスクリーニングされ得る：
ａ） 配列番号８内の、もしくは配列番号８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０８のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｂ）配列番号９内の、もしくは配列番号９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿０９のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｃ）配列番号１０内の、もしくは配列番号１０に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１０のＡＡまたはＡＧ遺伝子型；
ｄ）配列番号１１内の、もしくは配列番号１１に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１１のＣＣまたはＣＡ遺伝子型；
ｅ）配列番号１２内の、もしくは配列番号１２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｆ）配列番号１３内の、もしくは配列番号１３に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１３のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｇ）配列番号１４内の、もしくは配列番号１４に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１４のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｈ） ＳＮＰ＿０８とＳＮＰ＿１４との間に、例えばＳＮＰ＿０８〜ＳＮＰ＿１４のうちのいずれか２つのマーカーの間に物理的に位置する、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、特に、ワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0221】

段階ｃ）のゲノムＤＮＡは、上記でさらに説明されるように、例えば、以下からなる群から選択される一つまたは複数のマーカーの存在を判定することにより、ＱＴＬ７．１またはその異型を示す一つまたは複数のマーカーの存在についてスクリーニングされ得る：
ｉ． 配列番号１５内の、もしくは配列番号１５に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１５のＴＴまたはＴＡ遺伝子型；
ｉｉ． 配列番号１６内の、もしくは配列番号１６に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１６のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｉｉｉ． 配列番号１７内の、もしくは配列番号１７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１７のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｉｖ． 配列番号１８内の、もしくは配列番号１８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１８のＧＧまたはＧＣ遺伝子型；
ｖ． 配列番号１９内の、もしくは配列番号１９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１９のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ｖｉ． 配列番号２０内の、もしくは配列番号２０に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿２０のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
ｖｉｉ． 配列番号２１内の、もしくは配列番号２１に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿２１のＣＣまたはＣＡ遺伝子型；
ｖｉｉｉ． 配列番号２２内の、もしくは配列番号２２に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の、一塩基多型マーカーＳＮＰ＿２２のＣＣまたはＣＴ遺伝子型；
ｉｘ． ＳＮＰ＿１５とＳＮＰ＿２２との間に、例えばＳＮＰ＿１５〜ＳＮＰ＿２２のうちのいずれか２つのマーカーの間に物理的に位置する、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、特に、ワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0222】

あるいは、段階ｃ）のゲノムＤＮＡは、上記でさらに説明されるように、例えば、以下からなる群から選択される一つまたは複数のマーカーの存在を判定することにより、ＱＴＬ７．１またはその異型を示す一つまたは複数のマーカーの存在についてスクリーニングされ得る：
配列番号１７内の（または配列番号１７に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１７のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
配列番号２５内の（または配列番号２５に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１７．２５のＴＴまたはＴＣ遺伝子型；
配列番号１８内の（または配列番号１８に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１８のＧＧまたはＧＣ遺伝子型；
配列番号１９内の（または配列番号１９に対する実質的な配列同一性を含んでなる配列内の）一塩基多型マーカーＳＮＰ＿１９のＧＧまたはＧＡ遺伝子型；
ＳＮＰ＿１７およびＳＮＰ＿１９の間（例えばＳＮＰ＿１７およびＳＮＰ＿１８の間、ＳＮＰ＿１７およびＳＮＰ１７．２５の間；またはＳＮＰ１７．２５およびＳＮＰ＿１９の間、またはＳＮＰ１７．２５およびＳＮＰ＿１８の間、またはＳＮＰ＿１８およびＳＮＰ＿１９の間）に物理的に位置する、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、特に、ワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー；
ＳＮＰ＿１７、ＳＮＰ＿１７．２５、ＳＮＰ＿１８およびＳＮＰ＿１９から選択されるあらゆるマーカーの１２Ｍｂ、１０Ｍｂの距離内、好ましくは５Ｍｂ以内に位置する、あらゆる野生レタスゲノム特異的マーカー、特にワイルドレタス（L. virosa）ゲノム特異的マーカー。

【0223】

また所望により、ワイルドレタス（L. virosa）アクセッション特異的マーカー（ＶＳＰ２またはＶＳＰ４）をスクリーニングすることで、ＱＴＬを含んでなるアクセッションタイプを区別することができる。

【0224】

マーカースクリーニングは、当業者に公知の、例えばＰＣＲに基づく手法、配列決定に基づく手法等の、あらゆる適切な手法または手法の組合せによって、行うことができる。ゲノムＤＮＡのスクリーニングは、植物、植物部分、種子に対して、またはそれから単離されたゲノムＤＮＡに対して、行うことができると理解される。

【0225】

前記方法の段階ｄ）において、マーカーのうちの一つまたは複数、例えば、ＳＮＰ＿０１〜ＳＮＰ＿０７のうちの少なくとも１、２、３、４、５、６もしくは７つ全て、および／もしくは、ＳＮＰ＿０１とＳＮＰ＿０７との間にあるあらゆるマーカー；または、ＳＮＰ１．２３、ＳＮＰ＿０２、ＳＮＰ２．２４もしくはＳＮＰ＿０３（および所望によりＶＳＰ１もしくはＶＳＰ３）のマーカーのうちの一つまたは複数、および／もしくは、ＳＮＰ１．２３とＳＮＰ＿０３との間にあるあらゆるマーカー；少なくとも、ＳＮＰ＿０８〜ＳＮＰ＿１４のうちの少なくとも１、２、３、４、５、６もしくは７つ全て、および／もしくは、ＳＮＰ＿０８とＳＮＰ＿１４との間にあるあらゆるマーカー；ＳＮＰ＿１５〜ＳＮＰ＿２２のうちの少なくとも１、２、３、４、５、６、７もしくは８つ全て、および／もしくは、ＳＮＰ＿１５とＳＮＰ＿２２との間にあるあらゆるマーカー；または、ＳＮＰ＿１７、ＳＮＰ１７．２５、ＳＮＰ＿１８もしくはＳＮＰ＿１９（および所望によりＶＳＰ２もしくはＶＳＰ４）、もしくは、ＳＮＰ＿１７とＳＮＰ＿１９との間にあるあらゆるマーカーを含んでなる植物が特定される。

【0226】

従って、一つの態様において、Ｎｒ：１抵抗性を含んでなる栽培レタス植物を作製するための方法が提供され、前記方法は以下の段階を含んでなる：
ａ） ＱＴＬ６．１（もしくは異型）を示す１、２、３、４、５、もしくはそれ以上のＳＮＰマーカー；および／または、ＱＴＬ７．２（もしくは異型）を示す１、２、３、４、５、もしくはそれ以上のＳＮＰマーカー、および／またはＱＴＬ７．１（もしくは異型）を示す１、２、３、４、５、もしくはそれ以上のＳＮＰマーカーを含んでなる、野生レタス、特にワイルドレタス（Lactuca virosa）植物、を用意する段階；
ｂ） 前記野生レタス、特に前記ワイルドレタス（Lactuca virosa）植物を、レタスヒゲナガアブラムシＮｒ：１に対して感受性の栽培レタス植物と交雑して、Ｆ１種子を生産する段階；
ｃ） 所望により、Ｆ１種子から成長した植物を一回または複数回自家受粉させて、Ｆ２、Ｆ３またはさらなる世代の自家受粉子孫を生産する段階；
ｄ） 前記Ｆ１またはさらなる世代の自家受粉子孫を段階ｂ）の栽培レタス植物に対して交雑して、戻し交雑子孫を生産する段階；
ｅ） バイオタイプＮｒ：１に対する抵抗性を含んでなる戻し交雑子孫を選抜する段階。

【0227】

前記方法によって生産されるレタス植物も、本明細書に包含される。

【0228】

ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２（またはその異型）から選択されるＱＴＬのうちの一つまたは複数を、野生レタス（例えば、ワイルドレタス（L. virosa））から栽培レタス（レタス（L. sativa））に導入して、Ｎｒ：１抵抗性栽培レタスを作製するための方法
別の態様において、ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２（またはその異型）から選択されるＱＴＬのうちの一つまたは複数を、野生レタス（例えば、ワイルドレタス（L. virosa））から栽培レタス（レタス（L. sativa））に導入して、Ｎｒ：１抵抗性栽培レタスを作製するための方法が提供され、前記方法は以下を含んでなる：
ａ） ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２（またはその異型）を含んでなる野生レタス植物を用意すること；
ｂ） ａ）の野生レタス植物を栽培レタス植物と交雑してＦ１を作製すること；
ｃ） 所望により、Ｆ１を一回または複数回自家受粉させてさらなる自家受粉子孫を作製すること；
ｄ） Ｆ１またはさらなる自家受粉子孫を一回または複数回、段階ｂ）の栽培レタス植物（反復親）に対して戻し交雑すること；
ｅ） ６番染色体上および／または７番染色体上にａ）の野生レタス植物（供与親）由来の遺伝子移入断片を含んでなる段階ｂ）の栽培レタス植物（反復親）のゲノムを含んでなる戻し交雑子孫を特定および／または選抜すること。

【0229】

一つの態様において、ａ）の野生レタス植物はワイルドレタス（L. virosa）である。一つの態様において、ワイルドレタス（L. virosa）は、Ｎｒ：１抵抗性アッセイで試験された場合に、Ｎｒ：１抵抗性である。一つの態様において、ａ）のワイルドレタス（L. virosa）親は、ＮＣＩＭＢ４２０８６、または自家受粉および／もしくは交雑によって得られるその子孫であり、前記子孫はＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２を含んでなる。別の態様では、ａ）の植物は、ビロサ（virosa）特異的マーカーＶＳＰ１および／もしくはＶＳＰ２を含んでなる、または、ビロサ（virosa）特異的マーカーＶＳＰ３および／もしくはＶＳＰ４を含んでなる、ワイルドレタス（L. virosa）アクセッションである（表６および７に示される）。

【0230】

上記の方法（および本発明のあらゆる他の方法）における段階ｂ）の栽培レタスは、近交系または品種等のあらゆるレタス（L. sativa）であり得る。前記栽培レタスは、リーフまたはルーズリーフレタス、バターヘッドまたはビッブレタス、ロメインまたはコスレタス、クリスプヘッドまたはアイスバーグレタス、セルタスまたはステムレタスレタス等の、あらゆる種類のレタスであり得る。１つの植物系統または品種にＮｒ：１抵抗性遺伝子座を積み重ねるために、前記栽培レタスは、異なる遺伝子座によって付与されるＮｒ：１抵抗性を含んでなる植物であってもよいが、Ｎｒ：１感受性植物であることが好ましい。前記栽培レタスは、Ｎｒ：０抵抗性植物であり得る。前記栽培レタスは、優性のＮｒ遺伝子を含んでなり得る。

【0231】

戻し交雑および戻し交雑子孫に言及する場合、これは、戻し交雑（ＢＣ）および自家受粉（Ｓ）によって得られる子孫、例えばＢＣ１Ｓ１、ＢＣ１Ｓ２、ＢＣ２Ｓ１等、も包含し得る。

【0232】

段階ｅ）では、本明細書に記載のマーカーおよびマーカーアッセイのいずれも使用可能である。

【0233】

前記方法によって得られる植物も、本明細書の別の場所に記載されるように、本発明の一つの実施態様である。これらの植物は従って、ホモ接合型またはヘテロ接合型で、６番染色体（ＱＴＬ６．１もしくは異型）および／または７番染色体（ＱＴＬ７．１および／もしくはＱＴＬ７．２もしくは異型）上に、本発明のＱＴＬのうちの一つまたは複数を含んでなる、（あらゆる種類の）栽培レタス（L. sativa）植物である。

【0234】

レタス（L. sativa）とワイルドレタス（L. virosa）等の野生レタス植物との間には生殖不能障壁（sterility barrier）が存在し得るため、ワイルドレタス（L. virosa）植物（例えば、受入番号ＮＣＩＭＢ４２０８６を有する種子から成長した植物または他のワイルドレタス（L. virosa）アクセッション）がラクツカ・セリオラ（L. serriola）等の橋渡し種と交雑されることで（Eenink et al. 1982, Euphytica 31:291-299）、および／または、四倍体化等の他の方法が使用されることで、生殖不能障壁が克服され得る。Thompson and Ryder（1961；米国農務省、Tech. Bulletin no. 1244）は、例えば、ワイルドレタス（L. virosa）を（ラクツカ・セリオラ（L. serriola）×レタス（L. sativa））雑種と交雑して、不稔性のＦ１種間雑種を生産した。しかし、Ｆ１の四倍体化、並びにその後の交雑および二倍体化によって、ワイルドレタス（L. virosa）からレタス（L. sativa）への形質の遺伝子移入が可能となった。また、胚救出を用いることで、種間交雑から生存可能な胚が回収され得る（Maisonneuve et al. 1995, Euphytica 85: 281-285）。従って、本明細書のあらゆる場所において、ワイルドレタス（L. virosa）植物を栽培レタス植物と交雑することにより入手可能な、Ｎｒ：１抵抗性を付与する一つまたは複数のＱＴＬを含んでなる栽培レタス植物（レタス（L. sativa））が言及される場合、これは、橋渡し種、胚救出および／またはコルヒチン処理（染色体倍加）の使用等の、生殖不能障壁を克服する段階を含んでなり得る（ただし限定はされない）。

【0235】

ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２（またはこれらのうちのいずれかの異型）から選択されるＱＴＬのうちの一つまたは複数の存在について、栽培レタス系統または品種をスクリーニングするための方法
この方法は、前記ＱＴＬのうちの一つまたは複数を含んでなる野生レタス植物を特定するための方法と類似しているが、本明細書においては、栽培レタス植物、すなわちレタス（L. sativa）植物、がスクリーニングされる。

【0236】

前記方法は従って、以下の段階を含んでなる：
ａ） １つの栽培レタス植物または複数の栽培レタス植物を用意する段階；
ｂ） 所望により、前記栽培レタス植物または複数の植物を、Ｎｒ：１抵抗性アッセイ（例えば自由選択および／または非選択）において、Ｎｒ：１抵抗性について試験する段階；
ｃ） ａ）の前記植物もしくは複数の植物の、または所望によりｂ）で特定されたＮｒ：１抵抗性植物もしくは複数の植物のみのゲノムＤＮＡを、ＱＴＬ６．１もしくはその異型を示す、および／またはＱＴＬ７．１もしくはその異型を示す、および／またはＱＴＬ７．２もしくはその異型を示す、一つまたは複数のマーカーの存在について、スクリーニングする段階；並びに
ｄ） 前記ｃ）のマーカーのうちの一つまたは複数を含んでなる植物を特定する段階；
ｅ） 所望により、ｄ）の植物を、Ｎｒ：１抵抗性アッセイにおいて、Ｎｒ：１抵抗性について試験する段階。

【0237】

この方法を用いて、例えば市販の競合品種を、それらが本発明のＱＴＬのうちの一つまたは複数を含有するかどうかを判定するために、スクリーニングすることができる。

【0238】

ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２（またはその異型）から選択されるＱＴＬのうちの一つまたは複数を、栽培レタス（レタス（L. sativa））から別の栽培レタスに、例えばＮｒ：１感受性レタス植物系統または品種に導入するための方法
当然ながら、本発明のＱＴＬは、Ｎｒ：１抵抗性である様々な種類および様々な品種のレタスを作製するために、ある栽培レタス（L. sativa）植物から別の栽培レタス（L. sativa）植物に導入することもできる。

【0239】

この方法は以下の段階を含んでなる：
ａ） ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／もしくはＱＴＬ７．２またはこれらのうちのいずれかの異型の一つまたは複数または全てを含んでなるレタス（L. sativa）植物を用意する段階；
ｂ） ａ）のレタス（L. sativa）植物を第二のレタス（L. sativa）植物と交雑する段階；
ｃ） 前記交雑種からＦ１種子を収集し、所望により、前記Ｆ１植物を一回または複数回自家受粉させて、Ｆ２またはＦ３またはさらなる自家受粉集団を生産する段階、
ｄ） 所望により、Ｆ１植物またはＦ２またはＦ３またはさらなる自家受粉植物をｂ）の第二のレタス（L. sativa）植物に対して戻し交雑して、戻し交雑集団を生産する段階、
ｅ） 所望により、戻し交雑集団を一回または複数回自家受粉させる段階、
ｆ） ６番染色体上の遺伝子移入断片（ＱＴＬ６．１）を示す、および／または、７番染色体上の遺伝子移入断片（ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２）を示す、ＳＮＰマーカー遺伝子型の一つまたは複数または全てを含んでなる、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、さらなる自家受粉植物または戻し交雑植物を特定する段階。

【0240】

ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１およびＱＴＬ７．２（またはこれらのうちのいずれかの異型）を含んでなる遺伝子移入断片は、全て一緒に、または個別に、別の栽培レタス植物に導入することができる。

【0241】

一つの態様において、ｂ）の第二の栽培レタス植物は、Ｎｒ：１感受性レタス植物、または少なくとも、ａ）のドナーから受け取るＱＴＬを欠く植物である。

【0242】

生産される新たなレタス植物は、繰り返しになるが、あらゆる種類およびあらゆる系統または品種であり得る。従って、ＱＴＬは、伝統的な育種によって、ある栽培レタスから別の栽培レタスに、例えば、バターヘッドからロメインに、ステムレタスからビッブに、ロメインからルーズリーフに等、導入され得る。導入中に、遺伝子移入断片のサイズは組換えによって減少する場合があり、それにより、マーカーのいくつかが得られる植物に存在しない場合がある。

【0243】

この方法によって生産される植物も、一つの本発明の実施態様である。

【0244】

従って、Ｎｒ：１抵抗性を含んでなる栽培レタス植物を作製するための方法が提供され、前記方法は以下の段階を含んでなる：
ａ） ＱＴＬ６．１（もしくは異型）を示す１、２、３、４、５、もしくはそれ以上のＳＮＰマーカー；；および／または、ＱＴＬ７．２（もしくは異型）を示す１、２、３、４、５、もしくはそれ以上のＳＮＰマーカー、および／またはＱＴＬ７．１（もしくは異型）を示す１、２、３、４、５、もしくはそれ以上のＳＮＰマーカーを含んでなる、栽培レタス植物を用意する段階；
ｂ） 前記栽培レタス植物を、レタスヒゲナガアブラムシＮｒ：１に対して感受性の別の栽培レタス植物と交雑して、Ｆ１種子を生産する段階；
ｃ） 所望により、Ｆ１種子から成長した植物を一回または複数回自家受粉させて、Ｆ２、Ｆ３またはさらなる世代の自家受粉子孫を生産する段階；
ｄ） Ｎｒ：１抵抗性表現型を有する、且つ／または遺伝子移入断片もしくは遺伝子移入断片の抵抗性付与部分を含んでなる、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３またはさらなる世代の自家受粉子孫から成長したレタス植物を特定する段階；
ｅ） 所望により、前記特定されたＦ１子孫または自家受粉子孫を段階ｂ）の栽培レタス植物と交雑して、戻し交雑子孫を生産する段階；
ｆ） 所望により、バイオタイプＮｒ：１に対する抵抗性を含んでなる、且つ／または遺伝子移入断片もしくは遺伝子移入断片の抵抗性付与部分を含んでなる、戻し交雑子孫を選抜する段階。

【0245】

段階ｄ）および／またはｆ）では、本明細書に記載のマーカーを使用することができる。

【0246】

前記方法によって生産されるレタス植物も、本明細書に包含される。

【0247】

Ｎｒ：１抵抗性栽培レタスを作製するために、受入番号ＮＣＩＭＢ４２０８６として寄託された種子、またはその子孫を使用するための方法
ＮＣＩＭＢ４２０８６は、３つ全てのＱＴＬをホモ接合型で含んでなり、従って、既に記載されたように、前記ＱＴＬのうちの一つまたは複数を含んでなる栽培レタス系統または品種を作製するのに使用することができる。同様に、前記ＱＴＬのうちの一つまたは複数を保持するＮＣＩＭＢ４２０８６の子孫も、前記ＱＴＬのうちの一つまたは複数を含んでなる栽培レタス系統または品種を作製するのに使用することができる。

【0248】

レタスヒゲナガアブラムシ（N. ribisnigri）バイオタイプＮｒ：１が存在する地域において、本発明の植物、すなわち、ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２（またはその異型）から選択されるＱＴＬのうちの一つまたは複数を含んでなる、Ｎｒ：１抵抗性レタス（L. sativa）植物を栽培するための方法
本発明の植物は、天然のＮｒ：１外寄生地域において栽培することができる。本明細書において特定されるＱＴＬは、自由選択条件下だけでなく、非選択条件下においても、レタスヒゲナガアブラムシ（N. ribisnigri）バイオタイプＮｒ：１に対する抵抗性を与えるため、前記昆虫が摂食および繁殖のための別の選択肢を有さない場合であっても良好な収量を期待できることから、前記抵抗性は圃場において非常に有効である。自由選択条件下でのみ存在する抵抗性の使用は、アブラムシが、他の好ましい選択肢が利用可能でない場合に、摂食および繁殖のために該植物を選択する場合があるため、危険である。

【0249】

さらに、本発明のＱＴＬは、ドイツ、フランスおよびスペイン等の様々な国に由来する、様々なバイオタイプＮｒ：１単離物に対する抵抗性を与えることが示された。従って、前記抵抗性は、ドイツ、フランス、スペイン、英国および他のヨーロッパの国々、並びにバイオタイプＮｒ：１が発見され得る世界の他の国々において、有効であり、且つ持続的であると期待される。

【0250】

一つの態様において、本発明のＱＴＬは、バイオタイプＮｒ：０に対する、少なくともヨーロッパのバイオタイプＮｒ：０に対する（すなわち、少なくともドイツ、フランスおよびスペインのバイオタイプＮｒ：１に対する）抵抗性も与える。従って、一つの態様において、本発明の（前記ＱＴＬのうちの一つまたは複数を含んでなる）栽培レタス植物は、Ｎｒ：１に対して、且つ少なくともヨーロッパのバイオタイプＮｒ：０に対しても、抵抗性である。一つの態様において、これはまだ試験されていないが、前記植物は米国またはカリフォルニアのバイオタイプＮｒ：０に対して感受性である。

【0251】

バイオタイプＮｒ：１に対する本発明の（前記ＱＴＬのうちの一つまたは複数を含んでなる）植物の圃場抵抗性は、Ｍａｆａｌｄａ等の感受性対照よりも、有意により高い（すなわち、有意により少ないアブラムシ平均数によって測定可能）。これは、例えば、天然Ｎｒ：１外寄生地域における（例えば、ムルシア、スペインにおける）開放圃場試験で、ゲノム内に前記遺伝子移入断片のうちの一つまたは複数を含んでなる系統または品種のレタス植物を、圃場に、感受性品種Ｍａｆａｌｄａおよび／または遺伝的対照系統等の適切な対照と一緒に、播種または栽培することによって、試験することができる。系統または品種当たり少なくとも約１０、１５、２０またはそれ以上の植物が含まれること、および、少なくとも２回または好ましくは３回反復することが好ましい。植物は毎週監視され得、十分な外寄生が感受性対照上に見られた後（例えば、少なくとも１００匹またはそれ以上のアブラムシ）、各系統または品種の代表数の植物上のレタスヒゲナガアブラムシの数が計数され得る。圃場条件において、バイオタイプＮｒ：１のアブラムシの平均数は、Ｍａｆａｌｄａ等の感受性対照と比較して、本発明の植物上で有意により少ないことが好ましい。アブラムシの平均数は、稚苗（３〜４本葉期未満）上では測定されないことが好ましいが、というのも、そのような若い植物上では、抵抗性がまだ十分に期待されないと実施例において判明したためである。

【0252】

ＮＣＩＭＢ４２０８６の（３つ全てのＱＴＬをホモ接合型で含んでなる）植物は、スペインで行われた自由選択および非選択の圃場試験においてＮｒ：１アブラムシを完全に含まないと判明したが、（推測には限定されないが）前記ＱＴＬ（または異型）のうちの１つのみもしくは２つのみ、または前記ＱＴＬ（もしくは異型）を含んでなる３つ全てでない遺伝子移入をホモ接合型で含んでなる栽培レタス植物は、Ｎｒ：１に対して完全には抵抗性でない場合があり得る。従って、一つの態様において、前記ＱＴＬ（ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／もしくはＱＴＬ７．２またはこれらのうちのいずれかの異型）のうちの一つまたは複数をホモ接合型またはヘテロ接合型で含んでなる本発明の栽培レタス植物は、同一条件下で育成された場合の、品種Ｍａｆａｌｄａ（もしくは異なるＮｒ：１感受性品種、好ましくはＮｒ遺伝子を含んでなる）、または遺伝的対照上に見られるアブラムシの平均数の、５０％、４９％、４８％、４７％、４６％、４５％、４４％、４３％４０％、３０％、２０％、１０％、５％、３％、２％または１％以下である、バイオタイプＮｒ：１のアブラムシの平均数を含んでなる。本発明の植物上および対照植物上のＮｒ：１アブラムシの平均数を決定するために、例えば自由選択試験または非選択試験が、実施例に記載されるように、圃場において行われ得る。

【0253】

一つの態様において、本発明の栽培レタス植物は、平均５０匹以下のレタスヒゲナガアブラムシ（N. ribisnigri）バイオタイプＮｒ：１アブラムシ、または平均４０、３０、２０、もしくは１０匹以下のＮｒ：１アブラムシを含んでなる。別の態様では、本発明の栽培レタス植物は、圃場で育成された場合に、（平均して）ゼロ匹のＮｒ：１アブラムシまたは本質的にゼロ匹のＮｒ：１アブラムシ（平均５匹以下のアブラムシ）を含んでなり、一方、Ｍａｆａｌｄａ等の対照植物は、かなりの数のバイオタイプＮｒ：１アブラムシを含んでなる。かなりの数とは、平均して少なくとも１００匹のアブラムシ、１５０、２００、２５０匹またはそれ以上のアブラムシである。

【0254】

別の態様では、本発明の栽培レタス植物は、平均５０匹以下のレタスヒゲナガアブラムシ（N. ribisnigri）アブラムシ（あらゆるバイオタイプの、すなわち、バイオタイプＮｒ：０およびバイオタイプＮｒ：１の）、または平均４０、３０、２０、もしくは１０匹以下のレタスヒゲナガアブラムシ（N. ribisnigri）アブラムシを含んでなる。別の態様では、本発明の栽培レタス植物は、圃場で育成された場合に、（平均して）ゼロ匹のレタスヒゲナガアブラムシ（N. ribisnigri）または本質的にゼロ匹のアブラムシ（平均５匹以下のアブラムシ）を含んでなり、一方、Ｍａｆａｌｄａ等の対照植物はかなりの数のバイオタイプＮｒ：１アブラムシを含んでなり、さらに一方、Ｎｒ：０感受性品種はかなりの数のバイオタイプＮｒ：０を含んでなる。かなりの数とは、平均して少なくとも１００匹のアブラムシ、１５０、２００、２５０匹またはそれ以上のアブラムシである。

【0255】

本発明の栽培レタス植物はあらゆる種類の栽培レタス植物であり得る。本発明の栽培レタス植物は、緑色レタスまたは赤色レタス、緑色および赤色レタス（例えばまだらの）、ベビーリーフ、リトルジェムレタス、ルーズリーフレタス（カッティング（cutting）レタスまたはバンチング（bunching）レタスとも称される）、バターヘッドレタス、ビッブレタス、バタビア（またはサマークリスプ）レタス、ヘッディングレタス、ロメイン（またはコス）レタス、クリスプヘッド（またはアイスバーグ）レタス、マルチリーフレタス、グレートレイクスグループレタス、バンガードグループレタス、サリナスグループレタス、イースタン（イサカ）グループレタス、セルタスまたはステムまたはラテンレタス等の種類であり得る。本発明の栽培レタス植物はまた、市場間取引タイプのレタス、例えば、アイスバーグレタスの特徴を有するコスレタス、またはコスレタスの特徴を有するアイスバーグ等であり得る。本発明の栽培レタス植物は、近交系、Ｆ１雑種、倍加半数体、遺伝子導入植物、変異植物等であり得る。

【0256】

一つの態様において、ＱＴＬ６．１、７．１および／もしくは７．２（または異型）のうちの一つまたは複数を含んでなる遺伝子移入断片は、本発明の栽培レタス植物においてホモ接合型である。一回または複数回の自家受粉は、遺伝子移入断片がホモ接合型となり、ＳＮＰマーカーもホモ接合性の遺伝子型を示すことを確実にする。

【0257】

さらなる態様において、本発明の栽培レタス植物は、良好な繁殖性を有し、他の栽培レタス系統または品種と容易に交雑可能である。前記ＱＴＬと同時に導入され、低い繁殖力および／または矮性成長等の栽培植物におけるあらゆる負の特徴を付与するあらゆる野生ゲノム断片（例えばワイルドレタス（L. virosa））が、取り除かれることが好ましい。これは、より短い遺伝子移入断片を有するが、Ｎｒ：１抵抗性付与部分を保持する組換え体を選抜することによって、実行することができる。

【0258】

本発明の植物を用いることで、前記ＱＴＬ（または異型）およびＮｒ：１抵抗性表現型を有するまたは保持する子孫（progeny）（または子孫（descendant））を作製することができる。子孫を作製するために、本発明の栽培レタスは、別のレタス植物と一回または複数回、自家受粉および／または交雑され、種子が収集され得る。

【0259】

また、本発明の植物のいずれかに成長可能な種子も提供される。

【0260】

一つの実施態様では、Ｎｒ：１抵抗性栽培レタス植物を作製するための、その代表的な種子が受入番号ＮＣＩＭＢ４２０８６として寄託されたレタス植物、またはその子孫（例えば自家受粉によって得られる）の使用が提供される。

【0261】

別の実施態様では、Ｎｒ：１抵抗性栽培レタス植物を作製するための、受入番号ＮＣＩＭＢ４２０８６として寄託された種子またはその子孫（例えば自家受粉によって得られる）に存在する／から入手可能な一つまたは複数のＱＴＬによって付与されるＮｒ：１抵抗性表現型を含んでなる栽培レタス植物の使用が、提供される。

【0262】

種子
また、本発明の植物のいずれかに成長可能な種子も提供され、そのような種子を含有するまたは含んでなる容器またはパッケージも提供される。種子は、一つまたは複数のＱＴＬの存在（本明細書に記載の分子マーカー試験を用いて試験可能）によって、および表現型的に、他の種子と区別可能である。

【0263】

一つの態様において、種子は小型容器および／または大型容器（例えば、袋、ボール箱、缶等）内に詰められる。種子は、パッケージング前にペレッティング（pelleted）（ピルまたはペレットを形成）してもよく、および／または、種々の化合物で処理してもよい（例えば種子粉衣）。

【0264】

種子ペレッティング（seed pelleting）は、フィルムコーティングと組み合わせることができる（Halmer, P. 2000. Commercial seed treatment technology. In: Seed technology and its biological basis. Eds: Black, M. and Bewley, J. D., pages 257-286）。ペレッティングは、現代の種蒔き機で容易に播種される、丸いまたは丸められた形状を作り出す。ペレッティング混合物は、典型的には、種子および少なくとも接着剤（glue）および充填剤を含有する。後者は、例えば、粘土、雲母、白亜またはセルロースであり得る。さらに、ある種の添加剤を含ませることで、ペレットの特定の特性を向上させることができ、例えば、少なくとも１つの殺虫性、殺ダニ性、殺線虫性または殺真菌性の化合物を含んでなる種子処理製剤が、ペレッティング混合物に直接、または別々の層状に、添加され得る。種子処理製剤は、これらの種類の化合物のうちの１つのみ、２つ以上の同じ種類の化合物の混合物、または、一つもしくは複数の同じ種類の化合物と、少なくとも１つの他の殺虫剤、殺ダニ剤、殺線虫剤もしくは殺真菌剤との混合物を含み得る。

【0265】

種子処理としての適用に特に適した製剤は、ペレット中またはペレット上のコーティングの使用の可能性も含めて、並びに、ペレット混合物中への直接的な種子処理製剤を含めて、フィルムコーティングの形態で種子に加えることができる。特徴として、フィルムコーティングは均一、無塵、透水性のフィルムであり、全ての個々の種子の表面を均等に被覆する（Halmer, P. 2000. Commercial seed treatment technology. In: Seed technology and its biological basis. Eds: Black, M. and Bewley, J. D., pages 257-286）。前記製剤に加え、コーティング混合物は一般的に、水、接着剤（典型的には重合体）、充填剤、顔料および特定のコーティング特性を向上させるためのある種の添加剤等の、他の成分も含有する。いくつかのコーティングを単一の種子上で組み合わせることができる。

【0266】

さらに、フィルムコーティングとのいくつかの組合せが可能であり：フィルムコーティングは、ペレットの外側に、ペレッティング材の２層の間に、およびペレッティング材が加えられる前に種子上に直接、加えることができる。また、１より多いフィルムコーティング層を単一のペレットに組み込むことができる。特殊なタイプのペレッティングとしてエンクラスティングがある。この手法はより少ない充填剤を使用し、結果として生じるものは「ミニペレット」である。

【0267】

種子はプライミングしてもよい。全ての商業的に栽培された野菜種子の中で、レタスは最も頻繁にプライミングされる。プライミングは、土壌からの発芽および出芽（emergence）の均一性を増加させることで、野菜スタンドの確立を増進するための、種子上に行われる水性工程（water-based process）である。プライミングは、第一実生および最終実生の出芽間の期間を減少させる。レタス種子をプライミングする方法は、当該技術分野において周知である（例えば、Hill et al HortScience 42(6): 1436, 2007を参照）。

【0268】

植物部分および栄養生殖
さらなる態様において、本発明の植物から得られる（から入手可能な）植物部分、および前記植物部分を含んでなる容器またはパッケージが、本明細書において提供される。あらゆる植物部分は、組換え６番および／または７番染色体の存在によって、すなわち、６番染色体および／または７番染色体上の、野生レタス由来の、例えばワイルドレタス（L. virosa）由来の、遺伝子移入断片の存在によって、他のレタス植物部分と区別可能である。これは、本明細書に記載のマーカーのうちの一つまたは複数または全ての存在によって、容易に試験することができる。

【0269】

好ましい実施態様では、植物部分は、本発明の栽培レタス植物の葉もしくは結球、好ましくは収穫された葉もしくは結球、またはこれらの一部である。

【0270】

本発明の植物の他の植物部分としては、茎、挿穂、葉柄、子葉、花、葯、花粉、子房、根、根端、プロトプラスト、カルス、小胞子、柄、胚珠、苗条、種子、胚、胚嚢、細胞、分裂組織、芽等が挙げられる。種子には、例えば、自家受粉後または別のレタス植物由来の花粉との受粉後に本発明の植物上に生産される種子が含まれる。

【0271】

さらなる態様において、植物部分は植物細胞または植物組織である。さらに別の態様において、植物部分は、非再生可能細胞または再生可能細胞である。別の態様において、植物細胞は体細胞である。さらなる態様において、植物細胞は、胚珠または花粉等の生殖細胞である。これらの細胞は一倍体である。それらが植物全体に再生した場合、それらは開始植物の１倍体ゲノムを含んでなる。染色体倍加が起こる場合（例えば、化学的処理を通じて）、倍加半数体植物が再生され得る。一つの態様において、本発明の植物は、一倍体または倍加半数体のレタス植物である。

【0272】

さらに、例えば、限定はされないが、葉、花粉、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、根、根端、葯、花、種子または茎、体細胞、生殖細胞等の上記の植物部分に由来する、本発明のレタス植物のインビトロ細胞培養物または組織培養物が提供される。例えば、葉、胚軸または茎の挿穂が組織培養に使用され得る。

【0273】

特定の態様において、本発明のレタス植物のインビトロ細胞培養物または組織培養物が提供され、前記細胞培養物または組織培養物は上記の植物部分に由来し、そのような植物部分は生殖細胞を含んでならない。別の実施態様では、細胞培養物または組織培養物は再生可能な細胞を含んでならない。一つの態様において、本発明の非増殖性細胞が提供され、本発明の非増殖性細胞を含む、またはそれからなる細胞培養物または組織培養物が提供される。

【0274】

また、前述の植物部分から再生される、または前述の細胞培養物もしくは組織培養物から再生されるレタス植物が提供され、前記再生された植物はＮｒ：１抵抗性を有し、すなわち、Ｎｒ：１抵抗性を付与する遺伝子移入断片を保持する。これらの植物も、本発明の植物の栄養繁殖と称され得る。

【0275】

また、本発明の植物の収穫された葉および／または結球、並びに本発明の植物の複数の葉および／または結球、例えば、１、２、３、４、５、１０、１２、２０個の結球、を含んでなるパッケージが提供される。

【0276】

本発明はまた、本明細書に記載の植物部分を含んでなる、またはそれからなる、食品または飼料製品を提供する。食品または飼料製品は、新鮮なものであってもよく、あるいは加工されたもの、例えば、缶詰にした、蒸した、ボイルした、揚げた、湯通しした、および／または冷凍したもの等であってもよい。例としては、本発明の植物の葉または葉の一部を含んでなるサラダまたはサラダミックスがある。

【0277】

Ｎｒ：１抵抗性表現型および遺伝子移入断片を保持する本発明のレタス植物またはその子孫、および上述の植物の一部は、例えば、輸送および／または新鮮なままの販売のために適切にパッケージングされ得る。そのような一部は、限定はされないが、結球、挿穂、花粉、葉、葉の一部等の、実生または植物から入手可能なあらゆる細胞、組織および器官を包含する。結球および葉は、ベビーリーフとして、またはそれ以後に、収穫され得る。植物、複数の植物（plants）またはその一部は、単独で、または他の植物または物質と一緒に、容器（例えば、袋、ボール箱、缶等）内にパッケージングされ得る。一部は、貯蔵および／またはさらに加工され得る。従って、本発明の植物、その子孫および上述の植物の一部から入手可能な、そのような一部、そのような葉またはその一部のうちの一つまたは複数を含んでなる食品または飼料製品も包含される。本発明の（新鮮および／または加工された）植物の植物部分を含んでなる、例えば、缶、箱、木箱、袋、ボール箱、調整雰囲気包装、フィルム（例えば生分解性フィルム）等の容器もまた、本明細書において提供される。

【0278】

植物および子孫（progeny）（子孫（descendant））
別の実施態様において、例えば、種子から育成された、有性生殖もしくは栄養生殖によって生産された、前述の植物部分から再生された、または細胞もしくは組織培養から再生された、本発明のレタス植物の植物および一部、並びに本発明のレタス植物の子孫が提供され、繁殖された（種子繁殖または栄養生殖された）植物は、Ｎｒ：１抵抗性表現型（および従って、Ｎｒ：１抵抗性を付与する遺伝子移入断片）を含んでなる。

【0279】

上記のように、植物、子孫または栄養繁殖がＮｒ：１抵抗性表現型を含んでなるかどうかは、表現型によって、例えば、上記のように、もしくは実施例におけるように、選択試験および／もしくは非選択試験、圃場試験または制御環境試験を用いて、並びに／または、分子マーカー解析（本明細書に記載のマーカーの一つもしくは複数もしくは全てを使用）、ＤＮＡ塩基配列決定法（例えば、ワイルドレタス（L. virosa）遺伝子移入を特定するための全ゲノム配列決定）、染色体彩色等の分子技法を用いて、試験することができる。

【0280】

一つの実施態様では、ＮＣＩＭＢ４２０８６または他の野生レタス（例えば他のＮｒ：１抵抗性ワイルドレタス（L. virosa）アクセッション）から入手可能な（から入手される）Ｎｒ：１抵抗性ＱＴＬは、他のＮｒ：１耐性遺伝子（例えば、異なる染色体上の単一遺伝子もしくはＱＴＬ）等の他の遺伝子と、Ｎｒ：０耐性遺伝子（例えばＮｒ遺伝子）と、または、べと病、菌核病、ボトリチス属（Botrytis）、ウドンコ病、炭疽病、尻腐病、褐色根腐病（corky root rot）、レタスモザイクウイルス、ビッグベイン、レタスヒゲナガアブラムシ、テンサイ西部萎黄病およびアスター萎黄病に対する抵抗性等の他の形質と、組み合わせることができる。以下の有害生物のうちの一つまたは複数に対する抵抗性も、本発明の植物に、存在し得る、または導入され得る：スクレロティニア・ミノル（Sclerotinia minor）（落葉病）、スクレロティニア・スクレロティオルム（Sclerotinia sclerotiorum）（落葉病）、リゾクトニア・ソラニ（Rhizoctonia solani）（根元落下（bottom drop））、エリシフェ・キコラケアルム（Erysiphe cichoracearum）（ウドンコ病）、フザリウム・オキシスポーラム・フォルマ・スペシャリス・ラクチュケ（Fusarium oxysporum f. sp. lactucae）（フザリウム属凋枯症）抵抗性。病原性ウイルス（例えば、レタス伝染性黄斑ウイルス（ＬＩＹＶ）、レタスモザイクウイルス（ＬＭＶ）、キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）、ビート西部萎黄ウイルス（ＢＷＹＶ）、アルファルファモザイクウイルス（ＡＭＶ））、真菌、細菌またはレタス有害生物に対する他の耐性遺伝子も、導入され得る。

【0281】

さらに、本発明は、例えば、一回もしくは複数回の自家受粉、および／または、本発明の植物の、異なる品種もしくは育種系統の別のレタス植物との、もしくは本発明のレタス植物との、一回または複数回の他家受粉によって得られる子孫等の、本発明のＮｒ：１抵抗性付与ＱＴＬを含んでなる、または保持する子孫（progeny）（または子孫（descendant））を提供する。具体的には、本発明は、ＮＣＩＭＢ４２０８６に見られるＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２を保持する子孫を提供する。一つの態様において、本発明は、自家受粉、交雑、変異、倍加半数体作出または形質転換からなる群から選択される一つまたは複数の方法によって、Ｎｒ：１抵抗性を含んでなる本発明の栽培レタス植物から生産される子孫植物等の、Ｎｒ：１抵抗性を含んでなる子孫植物を提供する。

【0282】

変異は、自然突然変異または人為的変異または体細胞繁殖系変異であり得る。例えば、Mou 2011, Mutations in lettuce improvement, International Journal of Plant Genomics Volume 2011, Article ID 723518を参照されたい。

【0283】

一つの実施態様では、植物の一つまたは複数の特徴を変化させるために、本発明の植物または種子が（例えば、照射、化学的突然変異誘発、加熱処理、ＴＩＬＬＩＮＧ等によって）変異され得、および／または、変異された種子または植物が選抜され得る（例えば、天然変異体、体細胞繁殖系変異体等）。同様に、本発明の植物が形質転換および再生され得、これにより、一つまたは複数のキメラ遺伝子が植物に導入される。形質転換は、標準方法、例えば、アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Agrobacterium tumefaciens）介在性形質転換または微粒子銃、それに続く、形質転換細胞の選択および植物への再生、を用いて行うことができる。所望の形質（例えば、有害生物または病気に対する抵抗性、除草剤、殺真菌剤または殺虫剤に対する抵抗性等を付与する遺伝子）は、本発明の植物またはその子孫を所望の形質を付与する導入遺伝子で形質転換することによって、植物またはその子孫に導入することができ、形質転換された植物はＮｒ：１抵抗性付与遺伝子移入を保持し、所望の形質を含有する。

【0284】

Ｎｒ：１抵抗性付与ＱＴＬは、さらなる育種によって子孫に、特に他の栽培レタス植物に、導入され得る。一つの態様において、子孫は、本発明の栽培レタス植物を別の植物と交雑することによって得られたＦ_１子孫、または本発明の植物を自家受粉させることによって得られたＳ１子孫である。また、一つまたは複数のＱＴＬを保持する、Ｆ１植物の自家受粉によって得られたＦ２子孫、自家受粉および／または戻し交雑によって得られたＦ３、Ｆ４またはさらなる子孫も包含される。「さらなる育種」には、伝統的育種法（例えば、自家受粉、交雑、戻し交雑）、マーカー支援育種、および／または突然変異育種が包含される。一つの実施態様では、子孫は、ＮＣＩＭＢ４２０８６に存在するＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／またはＱＴＬ７．２を含んでなる。

【0285】

一つの態様において、本発明の植物の一倍体植物および／または倍加半数体植物が本明細書に包含される。一倍体および倍加半数体（ＤＨ）植物は、例えば、葯または小胞子の培養および植物全体への再生によって、生産することができる。ＤＨ生産において、染色体倍加は、コルヒチン処理等の公知の方法を用いて誘導され得る。そのため、一つの態様において、倍加半数体植物である、上記の一つまたは複数のＮｒ：１抵抗性付与ＱＴＬを含んでなる栽培レタス植物が提供される。

【0286】

別の実施態様において、本発明は、本発明の栽培レタス植物をそれ自体または他のレタス植物と交雑し、得られる種子を収穫することを含んでなる、レタス種子を生産するための方法に関する。さらなる実施態様において、本発明は、この方法に従って生産された種子、および／または、そのような種子を育成することによって生産されたレタス植物に関する。

【0287】

従って、一つの態様において、本発明の栽培レタス植物の子孫が提供され、前記子孫植物は自家受粉、交雑、変異、倍加半数体作出または形質転換によって生産され、前記子孫は本明細書に記載のＮｒ：１抵抗性を保持する。

【0288】

さらにまた別の態様において、本発明は、植物のゲノムにおいて、少なくとも第一の多型性（例えば、本明細書に記載のマーカーのうちの一つまたは複数）を検出することを含んでなる、本発明の植物の遺伝子型を決定する方法を提供する。前記方法は、ある実施態様では、植物のゲノム内の複数の多型性（例えば、ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１、ＱＴＬ７．２またはこれらのうちのいずれかの異型を示す、本明細書に記載のマーカーのうちの２つ以上）を検出することを含み得る。例えば、核酸の試料が植物から得られ、前記核酸において１つの多型性または複数の多型性が検出される。前記方法はさらに、複数の多型性を検出する段階の結果をコンピューター可読媒体上に保存することを含んでなり得る。

【0289】

本明細書において提供されるＳＮＰマーカーとは別に、より多くの分子マーカー、例えば、本明細書において提供されるマーカーの間にあるマーカー、または他の新たなマーカー、例えば、ＱＴＬ６．１、ＱＴＬ７．１および／もしくはＱＴＬ７．２の異型に連結したマーカーが、当業者によって開発され得る。分子マーカーを開発する方法は当業者に公知である。例えば、これは、本発明のＮｒ：１抵抗性レタス植物（栽培レタスまたは野生レタス、例えばＮＣＩＭＢ４２０８６）をＮｒ：１感受性レタス植物と交雑し、その交雑種から分離集団（例えば、Ｆ２または戻し交雑集団）を発生させることによって、行うことができる。分離集団は、次に、Ｎｒ：１抵抗性について表現型決定され、例えば、ＳＮＰ（一塩基多型）、ＡＦＬＰ（増幅断片長多型（Amplified Fragment Length Polymorphism）；例えば、ＥＰ５３４８５８を参照）等の分子マーカーを用いて遺伝子型決定され得、ソフトウェア解析によって、分離集団においてＮｒ：１抵抗性表現型と同時分離する分子マーカーが特定され得る。

【0290】

一つの態様において、それに由来するＱＴＬ６．１もしくは異型、ＱＴＬ７．１もしくは異型および／またはＱＴＬ７．２もしくは異型のいずれかのＱＴＬが栽培レタスに遺伝子移入される、野生ワイルドレタス（L. virosa）アクセッションは、以下のアクセッションではない：ＣＧＮ１３３６１、ＣＧＮ１６２６６、ＣＧＮ１６２７２、ＣＧＮ０４７５７、ＣＧＮ０４９３０、ＣＧＮ０４９７３、ＣＧＮ１６２７４、ＣＧＮ２１３９９またはＣＧＮ０５１４８。

【0291】

寄託情報
本発明のＱＴＬは、ドイツ（バーデン＝ヴュルテンベルク）に由来する、野生ワイルドレタス（L. virosa）アクセッション、ＰＩ２７３５９７（供給源は米国ＮＧＲＰ；国立遺伝資源プログラム（National Genetic Resource Program）、www.ars-grin.gov）の試料の子孫において特定され、それから得られた。下記の実施例で特定されたＮｒ：１抵抗性植物は育成および繁殖せられ、種子の代表試料が、受入番号ＮＣＩＭＢ４２０８６として２０１２年１２月５日にニュンヘムズＢ．Ｖ．社によって寄託された。このようにして、ワイルドレタス（L. virosa）ＮＣＩＭＢ４２０８６の合計２５００個の種子が、ＮＣＩＭＢ社（NCIMB Ltd.）（Ferguson Building, Craibstone Estate, Bucksburn, Aberdeen AB21 9YA、連合王国（ＮＣＩＭＢ））において、２０１２年１２月５日にニュンヘムズＢ．Ｖ．社によって寄託された。寄託物へのアクセスは、請求に応じて権利を有すると米国特許庁長官が定めた人物が、本願の係属中は利用可能である。特許が付与された際は、米国特許法施行規則§１．８０８（ｂ）に従って、寄託された材料の公衆への利用可能性に対して寄託者により課される全ての制限は、変更不能に取り除かれる。寄託物は、３０年間、または最終請求の後５年間、またはいずれか長い方の特許の権利行使可能期間、維持され、その期間中に生育不能になった場合は置き換えられる。出願人は、本願の本発明に基づきまたは植物品種保護法（7 USC 2321 et seq.）に基づき付与されたいかなる権利も放棄しない。

【0292】

本発明の範囲および精神から逸脱しない、記載された本発明の製品および方法の様々な変更形態および変形形態は、当業者には明らかである。本発明は特定の好ましい実施態様と関連付けて記述されたが、特許請求された発明がそのような特定の実施態様に不当に限定されるべきでないことは理解されるべきである。実際に、植物育種、化学、生物学、植物病理学または関連分野における当業者には明らかである、本発明を実施するための記載された様式の様々な変更形態は、以下の特許請求の範囲の範囲内であると意図される。

【0293】

本発明は以下の実施例においてさらに説明されるが、実施例は、説明のみを目的として与えられ、本発明を限定することを決して意図していない。

【実施例】

【0294】

実施例１：自由選択試験におけるＮｒ：１抵抗性
１．１ 植物材料
種子をプラスチックトレー（４×７の鉢）に播種した。プラスチックトレーに２つの異なるピート供給源から構成される土壌混合物を充填した。播種後、トレーをプラスチック製の箱の中に配置する。次に、これらの箱をクライメイトセル内の棚上に配置した（蛍光灯を用いて１６／８時間の昼／夜サイクル；光強度はおよそ５０μｍｏｌ．ｍ^−２．ｓ^−１ＰＡＲ（光合成有効放射）であった；昼／夜期の温度は２０／１６℃であった；相対湿度は８０％一定に設定した）。播種中、１〜２個の種子をそれぞれの鉢に設置した。発芽のおよそ１週間後、発芽した小植物を必要に応じて間引き、すなわち、鉢当たり１つのみの小植物を維持した。前記植物を実験終了までクライメイトセル（試験全体を通じて上記の環境条件を維持）内で維持した。灌水は必要な場合に行った。

【0295】

１．２：繁殖性（multiplier）植物材料
繁殖性植物は、試験に必要とされるアブラムシ集団を生産するために使用される植物である。繁殖性植物は１週目に播種した。種子を発芽させ、植物を試験植物材料と同様に維持した。開放圃場バターヘッド品種Ｍａｆａｌｄａ（ニュンヘムズ社／バイエル・クロップ・サイエンス・ベジタブル・シード社（Bayer CropScience Vegetable Seeds））を繁殖性植物として使用したが、他のＮｒ：０抵抗性植物も同様に使用可能であった。

【0296】

１．３：試験設計
クライメイトセルは最大６つの可搬性棚ユニット（ＭＳＵ）を収容可能であった。各ユニットは３つの棚／プラトー（plateau）から構成されていた。それぞれ最大２８の植物を含有する最大３つのプラスチック製の箱を１つの棚上に保管することができた。

【0297】

野生アクセッションＮＣＩＭＢ４２０８６を、１３の他の野生アクセッションと一緒に、バイオタイプＮｒ：１に対するそれらの抵抗性レベルについて比較した。クライメイトセル内で、３６個の箱を使用した。それぞれの箱は各植物系統／アクセッションの２つの植物を含有した（それぞれの箱内での植物の位置は無作為化した）。次に、３６個の箱を、６つのＭＳＵのうちの下から２つのプラトーに配置した。既知の感受性候補は含まれなかった。

【0298】

１．４：昆虫
１つのＮｒ：１アブラムシ単離物は、本来、ドイツのファルツ地方のレタス圃場に由来するものであった。他のＮｒ：１アブラムシ単離物は、本来、フランスのペルピニャン付近のレタス圃場に由来するものであった。

【0299】

アブラムシが試験目的に必要でなかった場合、昆虫の小コロニーを、クライメイトセル内のＭａｆａｌｄａ「維持系統（maintainer）」植物（５〜１０の個々の植物）上に保持した。前記植物は１つの箱内に維持した。

【0300】

１．５：接種材料生産
試験に使用されるアブラムシ集団（すなわち、「接種材料」）の飼育は計画の第４週目に開始された。飼育は、若虫および成体（無翅）アブラムシを３週齢Ｍａｆａｌｄａ植物の頂部に落すことにより開始された。２８の植物を含有する箱に対しておよそ５００匹のアブラムシを使用した。植物およびアブラムシを箱内に保管し、上記の環境条件を用いて、クライメイトセル内の棚上で開いたままにした。接種後、アブラムシ集団を３週間、すなわち試験の接種に必要とされるまで、前記繁殖性植物上で発育させた。

【0301】

１．６：試験接種
第７週、すなわち植物が３週齢になった際に、試験植物に接種した。

【0302】

正確に２０匹のアブラムシをそれぞれの試験植物の頂部に移した。これは、絵筆を用いて、昆虫を繁殖性植物から拾い、それらを試験植物の芯に置くことにより達成された。不確定の若虫および成体のみを使用した。明白に有翅であったアブラムシは含まれなかった。

【0303】

１．７：試験計画

【表1】

【0304】

１．８：結果の収集および解析
それぞれの植物上に存在するアブラムシの数を計数した。計数は接種後の５週間、毎週行った（上記の試験計画を参照）。

【0305】

１．９：自由選択試験の結果
（自由）選択試験の結果を図２Ａおよび図２Ｂに示す。結果は、ドイツ（図２Ａ）およびフランス（図２Ｂ）Ｎｒ：１単離物の両方において、ＮＣＩＭＢ４２０８６の植物は非常に少数のアブラムシを有し、従って、より高いレベルのＮｒ：１抵抗性を有したことを示している。ＮＣＩＭＢ４２０８６上の平均アブラムシ数は最初増加したが、２２（ドイツ単離物）および２２．５（フランス単離物）の平均数までである。アブラムシ数の最初の増加の後、数は着実に減少し、やがて、ＮＣＩＭＢ４２０８６上で５週間後に１．９５（ドイツ単離物）および２．７９（フランス単離物）の平均値に達した。

【0306】

このように、約８週齢の若い植物において、Ｎｒ：１アブラムシは自由選択条件下でＮＣＩＭＢ４２０８６上に実質的に見つからなかった。

【0307】

実施例２：非選択試験におけるＮｒ：１抵抗性
２．１：Ｎｒ：１非選択試験のプロトコルの説明
非選択試験中に使用したプロトコルは、実施例１における選択試験の１つとほぼ同じであった。それでもなお、試験された植物材料の設定、クライメイトセルおよび試験それ自体の設計には差異があった。

【0308】

選択試験とは異なり、非選択試験では、箱はビニール製テント内に個々に入れられた。

【0309】

さらに、それぞれの箱／ケージユニットには単一の植物遺伝子型（単一の系統／アクセッション）を使用し：言い換えれば、箱は組み合わされた試験植物系統を含まなかった。

【0310】

ＮＣＩＭＢ４２０８６および３つの他のアクセッションに存在する抵抗性レベルを非選択試験において比較した。品種Ｍａｆａｌｄａを負の対照として使用した。

【0311】

それぞれの植物系統において、４つのケージを使用した。単一系統の１８の植物を含有する箱をケージ内に設置した。次に、ケージを半無作為的にクライメイトセル内に設置した。合計２０のケージおよび３６０の植物を使用した（系統またはアクセッション当たり７２の植物）。

【0312】

ドイツＮｒ：１単離物のみを試験したこと以外は実施例１に記載の通りに、アブラムシ接種および結果の収集を行った。

【0313】

２．２：非選択試験の結果
非選択試験の結果を、図１Ａ、およびより大きな尺度を示す図１Ｂに示す。

【0314】

図から分かるように、ＮＣＩＭＢ４２０８６はバイオタイプＮｒ：１に対する抵抗性を有し、すなわち、アブラムシの平均数が感受性対照品種Ｍａｆａｌｄａにおけるよりも有意により少ない。平均アブラムシ数は、最初僅かに増加したが、３０匹を超えず（ＮＣＩＭＢ４２０８６においては、平均アブラムシ数は２週間後に２８匹であった）、その後、ゼロ匹まで持続的に減少した。

【0315】

このように、約８週齢の若い植物において、Ｎｒ：１アブラムシは非選択条件下でＮＣＩＭＢ４２０８６上に見つからなかった。

【0316】

実施例２：半成体および成体植物の圃場試験（自由選択および非選択）
２．１：自由選択圃場試験
２．１．１：植物成長
それぞれの試験において、種子を、個々の混合型混合土／ピート「プラグ（plug）」に播種し、無加温温室内で発芽させた。播種からおよそ７〜９週間後、発芽した小植物を圃場内の揚床に移した。圃場はスペインのムルシア州に位置した。灌水は、植物の列の間に、揚床の上部に配置された灌水用管を用いて行った。植物は試験終了までこの位置に維持した。

【0317】

２．１．２：試験設計
２つの独立した試験を、第１年度および第２年度（それぞれＹ_１およびＹ_２）と称される、連続した２年の間に実施した。同じ試験設計を両試験に対して使用した。前記試験設計を以下に詳述する。

【0318】

５つの異なる植物系統を圃場内で試験した。これらのうち、ＮＣＩＭＢ４２０８６並びに対照品種ＭａｆａｌｄａおよびＳｃａｌａ（共にニュンヘムズ社／バイエル・クロップサイエンス・ベジタブル・シード社（Bayer CropScience Vegetable Seeds）の品種）。ＭａｆａｌｄａおよびＳｃａｌａは共に、Ｎｒ：０抵抗性であるが、Ｎｒ：１感受性である。Ｓｃａｌａはコス／ロメイン種である。

【0319】

揚床をそれぞれの試験に使用した。それぞれの揚床上に、植物を１６植物のレプリケートで播種し、揚床当たり５つのレプリケートを播種した。試験を部分的に無作為化し、すなわち、植物系統のそれぞれがそれぞれの揚床上に現れ、ただしそれぞれの揚床において、レプリケートの順番が無作為化されるように、試験を移転した。

【0320】

２．１．３：昆虫および接種
試験の目的は、圃場条件下でレタスヒゲナガアブラムシ（N. ribisnigri）Ｎｒ：１抵抗性を調べることであった。植物には意図的な接種を行わず、自然発生的なＮｒ：１アブラムシ集団を外寄生させた。顕微鏡下の同定のために、昆虫の試料を試験終了時に採取した。

【0321】

２．１．４：結果の収集および解析
試験された様々な植物系統の抵抗性を、それぞれの植物上に存在するアブラムシの数を計数することにより評価した。計数は、試験Ｙ_１中の移植の１４週間後および試験Ｙ_２中の移植の１１週間後に行った。

【0322】

２．１．５：第１年度および第２年度の自由選択圃場試験の結果
両試験において、ＮＣＩＭＢ４２０８６の成体植物（１８〜２０週齢）はアブラムシを全く有さなかったが、一方、対照品種ＭａｆａｌｄａおよびＮｒ：１感受性品種Ｓｃａｌａは共にかなりの数のバイオタイプＮｒ：１のアブラムシを有した。

【0323】

２．２：非選択圃場試験
２．２．１：植物成長
第２年度の間、非選択ケージ試験を上記の自由選択試験と一緒に圃場で行った。上記と同様に、植物を無加温温室内で発芽させ、その後、播種の約７〜９週間後に圃場内の揚床に移した。また、揚床の上部に植物の間に配置された管を介して、水を供給した。しかし、自由選択試験とは異なり、防虫網（網目の寸法はアザミウマの進入を防ぐのに十分な寸法）と共に組み立てられたケージ（それぞれおよそ１０ｍ^３）内に植物を囲い込んだ。

【0324】

２．２．２：試験設計
２つの個々のケージを圃場内で使用した。それぞれのケージで２つの揚床を使用した。それぞれの揚床に２０の植物、すなわちケージ当たり４０の植物、を使用した。

【0325】

単一の植物系統、すなわちＮＣＩＭＢ４２０８６またはＭａｆａｌｄａのいずれか、をそれぞれのケージ内に移植した。

【0326】

２．２．３：昆虫および接種
試験植物材料の接種に必要とされるレタスヒゲナガアブラムシ（N. ribisnigri）は、近くの圃場で成長しているＭａｆａｌｄａ植物の小区画地で生じたものである。前記小区画地は、自然発生的なＮｒ：１アブラムシ集団に受動的に外寄生された。

【0327】

接種の当日に（植物は約８週齢であった）、無翅成体をＭａｆａｌｄａ植物から採集した。次に、採集したアブラムシを、絵筆を用いてそれぞれの試験植物の頂部に個々に移した。正確に１０匹の昆虫をそれぞれの試験植物上に置いた。

【0328】

２．２．４：データの収集および解析
試験された様々な植物系統の抵抗性を、それぞれの植物上に存在するアブラムシの数を計数することにより評価した。計数は接種のおよそ３週間後に行った。

【0329】

２．２．５：半成体植物（約１１週齢植物）の非選択圃場試験の結果
結果を図４に示す。ＮＣＩＭＢ４２０８６はアブラムシを全く有さなかったが、一方、対照品種Ｍａｆａｌｄａはかなりの数のバイオタイプＮｒ：１のアブラムシを有した（３００匹超）。

【0330】

２．２．６：半成体および成体植物の自由選択圃場試験および非選択圃場試験の結論
前記結果は、クライメイトセル内のＮＣＩＭＢ４２０８６の若い植物（実施例１、およそ８週齢植物）で見られたＮｒ：１抵抗性が、半成体および成体植物の自由選択試験および非選択試験の両方で、圃場において非常に効果的であることを示している。圃場における抵抗性は、自由選択条件および非選択条件の両方の下で、完全（アブラムシが全くいない）であると思われる。ＮＣＩＭＢ４２０８６は従って、異なるＮｒ：１集団（ドイツ、フランスおよびスペイン）に対して抵抗性である。

【0331】

実施例３：Ｎｒ：１抵抗性のＱＴＬマッピング
いくつの遺伝子座およびその遺伝子座がＮＣＩＭＢ４２０８６のＮｒ：１抵抗性に関与しているかを特定するために、ＮＣＩＭＢ４２０８６をレタスヒゲナガアブラムシ（N. ribisnigri）感受性レタス栽培品種と交雑した。Ｆ１をレタス（L. sativa）親に対して戻し交雑して、ＢＣ１集団を作製し、それをＱＴＬマッピングに用いた。

【0332】

表現型検査データ（植物当たりのバイオタイプＮｒ：１のアブラムシの総数）を、バイオタイプＮｒ：１のアブラムシとの、接種後の２つの時点、接種の２週間後および３週間後に収集した。

【0333】

結果
以下および図３に示されるように、３つのＱＴＬを、１つは６番染色体上で、２つは７番染色体上で、特定した。染色体上の物理的位置は、公開されたレタスゲノム（lgr.genomecenter.ucdavis.edu）に基づく。

【0334】

【表2】

【0335】

【表3】

【0336】

【表4】

【0337】

実施例４：Ｎｒ：１抵抗性のＱＴＬマッピング
２つの戻し交雑集団において新たな遺伝子型検査およびマーカー解析を行い、Ｎｒ：１抵抗性をマッピングした。遺伝子型検査は上記と同様に行った。

【0338】

有意なロッドスコアを有する２つのＱＴＬを、ＱＴＬ６．１およびＱＴＬ７．１を含んでなる６番染色体および７番染色体番染色体上でマッピングした。結果は図３Ｂにも示される。

【0339】

【表5】

【0340】

【表6】

【0341】

ＱＴＬ６．１およびＱＴＬ７．１を２つの異なるＮｒ：１抵抗性ワイルドレタス（L. virosa）アクセッションタイプにおいて特定し、遺伝子移入および遺伝子移入の起源を識別可能なアクセッション特異的マーカーを特定した。マーカーＶＳＰ１およびＶＳＰ２はＮＣＩＭＢ４２０８６によって代表される１つのアクセッションタイプで特定され、マーカーＶＳＰ３およびＶＳＰ４は別のアクセッションタイプで特定される。

【0342】

【表7】

【0343】

【表8】

【0344】

実施例５：クリップ・オン・ケージ（clip-on cage）実験
上記の２つの野生ワイルドレタス（L. virosa）アクセッションは、同様に高レベルのＮｒ：１抵抗性を含んでなるが、クリップ・オン・ケージ実験で判明したように、他のワイルドレタス（L. virosa）アクセッションと比較して、Ｎｒ：１の若虫の発生がＮＣＩＭＢ４２０８６の植物上で早期に止まることから、ＮＣＩＭＢ４２０８６はさらにより良好な抵抗性を有する。

【0345】

前記実験は１日齢の若虫を用いて行った。植物当たり、少なくとも３匹の成体アブラムシを含有する１つのケージを配置した。接種の１日後、全ての成体を取り除き、ケージ当たり３匹のみの若虫を残した。成体の除去から１２日後、成体の数（生存）、新たな若虫および外皮の数を計数した。前記実験は、２８のレプリカ（１ケージ／植物）を伴う、完全無作為化設計において行った。変数を変換し、ＡＮＯＶＡで解析し、後にＬＳＤ試験を行った。

【0346】

生存および新たな若虫の数は、両方の野生ワイルドレタス（L. virosa）アクセッションにおいてゼロであり、一方、感受性対照においては０．８６（平均生存）および１７．５７（新たな若虫の平均数）であった。しかし、野生アクセッションは脱皮された外皮の平均数において異なり（ＮＣＩＭＢ４２０８６における平均数は０．８５であり、一方、他のアクセッションにおける平均数は２．１１であり、感受性対照においては５．８５であった）、ＮＣＩＭＢ４２０８６は有意により少ない脱皮外皮の平均数を有し、これは、若虫発生がＮＣＩＭＢ４２０８６において早期に止められたことを示している。

【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図4】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]