特許 6807094 クロザピン又はその誘導体の血中薬剤濃度上昇リスク判定方法及び薬剤投与量判定方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6807094

(24)【登録日】2020年12月9日

(45)【発行日】2021年1月6日

(54)【発明の名称】クロザピン又はその誘導体の血中薬剤濃度上昇リスク判定方法及び薬剤投与量判定方法

(51)【国際特許分類】

   C12Q 1/68 20180101AFI20201221BHJP

   A61K 31/551 20060101ALI20201221BHJP

   A61P 25/18 20060101ALI20201221BHJP

   A61K 31/5513 20060101ALI20201221BHJP

   A61K 31/554 20060101ALI20201221BHJP

   C12Q 1/6827 20180101ALN20201221BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20201221BHJP

【ＦＩ】

   C12Q1/68ZNA

   A61K31/551

   A61P25/18

   A61K31/5513

   A61K31/554

   !C12Q1/6827 Z

   !C12N15/12

【請求項の数】14

【全頁数】19

(21)【出願番号】特願2016-92152(P2016-92152)

(22)【出願日】2016年4月29日

(65)【公開番号】特開2017-195862(P2017-195862A)

(43)【公開日】2017年11月2日

【審査請求日】2019年4月24日

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用 第２５回日本医療薬学会年会講演要旨集（平成２７年１０月２３日発行、平成２７年１０月３０日頒布）第２５回日本医療薬学会年会事務局発行、第２０７頁「２１−６−Ｏ１２−１９」欄に発表

(73)【特許権者】

【識別番号】504409543

【氏名又は名称】国立大学法人秋田大学

(74)【代理人】

【識別番号】100149168

【弁理士】

【氏名又は名称】若山 俊輔

(72)【発明者】

【氏名】赤嶺 由美子

(72)【発明者】

【氏名】三浦 昌朋

【審査官】 野村 英雄

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１０−５０９２００（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１１−５１１８４５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 CECCON, F.,，"Clozapine clinical response variability in schizophrenic patients: plasmatic levels and CYP450 1A2 and P glycoprotein genetic polymorphysms relation."，2ND WORKSHOP PH.D. SCHOOL OF MEDICAL SCIENCES UNIVERSITY OF INSUBRIA，２０１２年 ３月 ８日，p.16，ＵＲＬ，www.dbsm.uninsubria.it/dottbcm/phD_cmb/files.pdf/phDDay2012.pdf

【文献】 YAMASAKI, Y., et al.，"Pharamacogenetic characterization of sulfasalazine disposition based on NAT2 and ABCG2 (BCRP) gene polymorphisms in humans."，CLINICAL PHARMACOLOGY & THERAPEUTICS，２００８年 ７月，Vol.84, No.1，pp.95-103

【文献】 TAKAHASHI, N., et al.，"Influence of CYP3A5 and drug transporter polymorphisms on imatinib trough concentration and clinical response among patients with chronic phase chronic myeloid leukemia."，JOURNAL OF HUMAN GENETICS，２０１０年，Vol.55，pp.731-737

【文献】 赤嶺由美子、外６名，「Clozapine体内動態への薬剤トランスポータならびに薬物代謝酵素遺伝子多型の影響」，日本医療薬学会年会講演要旨集，２０１５年１０月２３日，Vol.25th，p.207，[21-6-O12-19]

【文献】 WANG, J.S., et al.，"Antipsychotic drugs inhibit the function of breast cancer resistance protein."，BASIC CLIN. PHARMACOL. TOXICOL.，２００８年１０月，Vol.103, No.4，pp.336-341，doi: 10.1111/j.1742-7843.2008.00298.x.

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ１２Ｑ １／００− ３／００

Ｃ１２Ｎ １５／００−１５／９０

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＰｕｂＭｅｄ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

被験者に由来するＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出し、
検出された前記塩基の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである場合には、クロザピン、オランザピン及びクエチアピンからなる群から選択される１種又は２種以上の薬剤を前記被験者に投与すると前記薬剤の血中濃度を上昇させるリスクがあると判定する
ことを含む血中薬剤濃度上昇リスク判定方法。

【請求項2】

前記１種又は２種以上の薬剤がクロザピンである、請求項１に記載の血中薬剤濃度上昇リスク判定方法。

【請求項3】

前記被験者が統合失調症の患者である、請求項１又は２に記載の血中薬剤濃度上昇リスク判定方法。

【請求項4】

被験者から採取された生体試料中のＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出するために使用する核酸と、
検出された前記塩基の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである前記被験者は、クロザピン、オランザピン及びクエチアピンからなる群から選択される１種又は２種以上の薬剤を投与すると、前記薬剤の血中濃度が上昇するリスクが高いことを記載した説明書と
を含む血中薬剤濃度上昇リスク判定キット。

【請求項5】

被験者から採取された生体試料中のＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出するために使用する核酸と、
検出された前記塩基の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである前記被験者に対しては、クロザピン、オランザピン及びクエチアピンからなる群から選択される１種又は２種以上の薬剤を投与する際に、前記薬剤の投与量を減らすべきであることを記載した説明書と
を含む薬剤投与量判定キット。

【請求項6】

被験者から採取された生体試料中のＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出するために使用する核酸と、
検出された前記塩基の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである前記被験者に対しては、クロザピンの１日あたりの経口投与量を前記被験者の体重１ｋｇあたり３．０〜５．６ｍｇの範囲内の所定の量にすべきと記載し、オランザピンの１日あたりの経口投与量を前記被験者の体重１ｋｇあたり０．１５〜０．２８ｍｇの範囲内の所定の量にすべきと記載し、又は、クエチアピンの１日あたりの経口投与量を前記被験者の体重１ｋｇあたり３．９〜７．３ｍｇの範囲内の所定の量にすべきと記載した説明書と
を含む薬剤投与量判定キット。

【請求項7】

前記説明書が、さらに、検出された前記塩基の遺伝子型がＣ／Ｃである前記被験者に対しては、クロザピンの１日あたりの経口投与量を前記被験者の体重１ｋｇあたり５．９〜９．０ｍｇの範囲内の所定の量にすべきと記載し、オランザピンの１日あたりの経口投与量を前記被験者の体重１ｋｇあたり０．３０〜０．４５ｍｇの範囲内の所定の量にすべきと記載し、又は、クエチアピンの１日あたりの経口投与量を前記被験者の体重１ｋｇあたり７．７〜１１．７ｍｇの範囲内の所定の量にすべきと記載している、
請求項６に記載の薬剤投与量判定キット。

【請求項8】

前記説明書が、さらに、前記被験者にクロザピンを投与した後、前記被験者から採取された血液中のクロザピンの濃度を測定する方法を記載している、請求項５〜７のいずれか１項に記載の薬剤投与量判定キット。

【請求項9】

前記説明書が、前記被験者から採取された血液中のクロザピンの濃度が、下側閾値よりも低い場合には、クロザピンの投与量を増やすべきであると記載し、上側閾値よりも血中クロザピン濃度が高い場合には、クロザピンの投与量を減らすべきであると記載しており、
前記下側閾値として、３００〜４００ｎｇ／ｍｌの範囲より選択される値が記載されており、前記上側閾値として、７００〜９００ｎｇの範囲より選択される値が記載されている、請求項８に記載の薬剤投与量判定キット。

【請求項10】

前記血液中のクロザピンの濃度を測定する方法が、ＨＰＬＣを用いた測定方法である、請求項８又は９に記載の薬剤投与量判定キット。

【請求項11】

前記ＨＰＬＣを用いた測定方法が、前記被験者の血液由来の血漿成分に、内部標準としてドキセピンを加えて、ＨＰＬＣにより測定を行う方法である、請求項１０に記載の薬剤投与量判定キット。

【請求項12】

前記ＨＰＬＣを用いた測定方法が、ＨＰＬＣの移動相として、アセトニトリルを含む溶媒を用いる方法である、請求項１０又は１１に記載の薬剤投与量判定キット。

【請求項13】

クロザピンを有効成分とする統合失調症治療剤において、
ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである統合失調症の患者に対して、前記患者の体重１ｋｇあたり３．０〜５．６ｍｇの範囲内の所定の量のクロザピンを１日あたり経口投与することを特徴とする、
統合失調症治療剤。

【請求項14】

クエチアピンを有効成分とする統合失調症治療剤において、
ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである統合失調症の患者に対して、前記患者の体重１ｋｇあたり３．９〜７．３ｍｇの範囲内の所定の量のクエチアピンを１日あたり経口投与することを特徴とする、
統合失調症治療剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、被験者のＡＢＣＧ２遺伝子の一塩基多型（ＳＮＰ）を検出することにより、統合失調症の治療薬であるクロザピン又はその誘導体を被験者に投与した場合に、血中の薬剤濃度が上昇するリスクを判定する方法及びその方法に使用するキットに関する。また、本発明は、被験者のＡＢＣＧ２遺伝子の一塩基多型（ＳＮＰ）を検出することにより、クロザピン又はその誘導体の好適な投与量を判定する方法及びその方法に使用するキットに関する。さらに、本発明は、統合失調症の患者のＡＢＣＧ２遺伝子の一塩基多型（ＳＮＰ）の遺伝子型に応じて投与量を定めた、テーラーメード医療を可能とする統合失調症の治療剤を提供する。

【背景技術】

【0002】

クロザピン（Clozapine）は、治療抵抗性を示す統合失調症の最も有効な治療薬の一つであるが、無顆粒球症、てんかん発作、心筋炎等の重篤な副作用を引き起こすリスクがある治療薬である。これらの副作用のうち、無顆粒球症は、白血球が危険な水準まで減少してしまう致命的な副作用である。クロザピンは、この致命的な副作用により一度は自主的に販売が停止されたが、他の精神病薬が効かない治療抵抗性の統合失調症にも効果があることから、使用が再開されたものである。したがって、クロザピンの投与を受けている患者は、重篤な副作用を回避するため、定期的な血球数のモニタリングが必要となる。

【0003】

クロザピンの血中濃度と治療効果や副作用との関係について検証がされており、クロザピンの血中濃度が250ng/mL以下になると統合失調症が再発してしまい、750ng/mL以上となると薬物中毒となるリスクがあり、1000ng/mL以上となると中枢神経に悪影響を及ぼして、てんかん発作や精神錯乱等の症状が現れるリスクがあることが報告されている。このため、クロザピンの投与を受けている場合には、治療薬物モニタリング（Therapeutic Drug Monitoring，TDM）として、血中のクロザピン濃度を測定することが推奨されている（非特許文献１）。

【0004】

クロザピンは有効性の高い統合失調症の治療薬であるが、クロザピンに化学構造が類似する誘導体からなる治療薬として、オランザピン（Olanzapine）とクエチアピン（Quetiapine）が開発されており、いずれも統合失調症の治療薬として用いられている。オランザピンとクエチアピンは、クロザピンと比較すると副作用が弱いものの、無顆粒球症等の重篤な副作用を引き起こし得る治療薬である。

【0005】

クロザピンは、経口投与された後、すみやかに吸収されて肝臓で代謝される。クロザピンの代謝には、代謝酵素であるＣＹＰ１Ａ２とＣＹＰ３Ａとが関わっている。ＣＹＰ１Ａ２は、クロザピンをＮ−脱メチル化してＮ−デスメチルクロザピン（N-desmethylclozapine）とする代謝において重要な役割を果たし、また、ＣＹＰ３Ａは、クロザピンをＮ−酸化してクロザピン−Ｎ−オキシド（clozapine-N-oxide）とする代謝において重要な役割を果たしている。クロザピンのＮ−脱メチル化には、代謝酵素ＣＹＰ２Ｄ６も一部関わっている。Ｎ−デスメチルクロザピンは、クロザピンと同様の薬理作用を有する活性代謝物である一方、クロザピン−Ｎ−オキシドは、薬理作用が格段に低い非活性代謝物である。

【0006】

最近の研究では、クロザピンの薬物動態にトランスポーターが関わっていることが報告されている（非特許文献２及び３）。非特許文献２には、Ｐ糖タンパク質（P-glycoprotein; P-gp）がクロザピンの薬物動態に影響することが報告されている。Ｐ糖タンパク質は、ＡＢＣＢ１遺伝子によりコードされるタンパク質であり、ＡＢＣスーパーファミリーに属し、ＡＴＰのエネルギー依存的に細胞外排出を行うトランスポーターである。このＰ糖タンパク質は、３４３５番目の塩基に一塩基多型（ＳＮＰ）を有しているが、クロザピンを投与した患者のうち、この一塩基多型（ＳＮＰ）において遺伝子型がＴ／Ｔの患者は、そうでない遺伝子型である患者と比較して血中クロザピン濃度が１．６倍高いことが非特許文献２に報告されている。
また、非特許文献３には、Ｐ糖タンパク質をコードするＡＢＣＢ１遺伝子の３４３５番目の一塩基多型（ＳＮＰ）の遺伝子型がＣＣである患者は、遺伝子型がＣＴ又はＴＴである患者よりも多量のクロザピン投与が必要であることが報告されている。

【0007】

クロザピンは、ＢＣＲＰ（Breast cancer resistance protein）に作用することも報告されている。ＢＣＲＰは、ＡＢＣＧ２遺伝子によりコードされるタンパク質であり、こちらもＡＢＣスーパーファミリーに属するトランスポーターである。クロザピンはＢＣＲＰの阻害剤として作用することがin vitro系での実験で示されている（非特許文献４）。

【0008】

ＢＣＲＰをコードするＡＢＣＧ２遺伝子には多数の一塩基多型が存在しているが、これらの一塩基多型のうち、ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基における多型に関しては、ガン細胞株を用いた実験により、塩基がＣではなくＡの場合に抗ガン剤への耐性が低下することが報告されている（非特許文献５）。また、抗ガン剤であるイマチニブを投与した患者において、ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基がＡである場合に、Ｃ／Ｃの患者と比較して血中のイマチニブ濃度が高いことが報告されている（非特許文献６）。また、特許文献１には、動物細胞を用いた実験により、ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基がＣではなくＡの場合には、トポイソメラーゼ阻害剤の細胞外への排出能力が低下することが記載されている。
しかしながら、いずれの先行技術文献においても、クロザピンの薬物動態とＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の一塩基多型についての関連性については報告されていない。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0009】

【特許文献1】特表２００５−５２９６１８号公報

【非特許文献】

【0010】

【非特許文献1】Hiemke C 外２６名、Pharmacopsychiatry誌、２０１１年発行、Vol.44、No.6、pp.195-235

【非特許文献2】Eveline Jaquenoud Sirot 外８名、Journal of Clinical Psychopharmacology誌（略号 J Clin Psychopharmacol）、２００９年発行、Vol.29、No.4、pp.319-326

【非特許文献3】Giorgio Consoli 外９名、Pharmacogenomics誌、２００９年発行、Vol.10、No.8、pp.1267-1276

【非特許文献4】Jun-Sheng Wang 外５名、Basic & Clinical Pharmacology & Toxicology誌（略号 Basic Clin Pharmacol Toxicol）、２００８年発行、Vol.103、No.4、pp.336-341

【非特許文献5】Yasuo Imai 外７名、Molecular Cancer Therapeutics誌（略号 Mol Cancer Ther）、２００２年発行、Vol.1、pp.611-616

【非特許文献6】Naoto Takahashi 外10名、Journal of Human Genetics誌（略号 J Hum Genet）、２０１０年発行、Vol.55、pp.731-737

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0011】

クロザピンは重篤な副作用を引き起こすリスクがあるため、クロザピンを投与した後に血中濃度を測定することが推奨されているが、クロザピンを投与すること自体にリスクがあるとも考えられるため、クロザピンを投与する前に血中濃度が上昇するリスクを判定できることが望ましい。従来、Ｐ糖タンパク質をコードするＡＢＣＢ１遺伝子の一塩基多型（ＳＮＰ）が、血中クロザピン濃度と関係することが報告されているが、血中濃度上昇のリスクを判定するためには十分な指標となるものではなかった。
そこで、本発明は、クロザピン又はその誘導体の血中濃度上昇リスクを判定する方法を開発するとともに、最適な投与量を決定する薬剤投与量判定方法を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0012】

上記課題を解決するために、本発明者らは鋭意研究し、クロザピンの血中濃度と関連性のある遺伝子多型を探索した結果、ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基における一塩基多型（ＳＮＰ）が有意な関連性を示し、当該多型において遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである被験者にクロザピンを投与すると、血中のクロザピン濃度が有意に高くなりやすいことを見出し、本発明を完成するに至った。

【0013】

すなわち、本発明は、血中薬剤濃度上昇リスク判定方法に関する第１の発明と、血中薬剤濃度上昇リスク判定キットに関する第２の発明と、薬剤投与量判定キットに関する第３の発明と、統合失調症治療剤に関する第４の発明を提供する。
第１の発明は、血中薬剤濃度上昇リスク判定方法に関する発明であり、ｉ）被験者に由来するＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出し、ii）検出された前記塩基の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである場合には、クロザピン、オランザピン及びクエチアピンからなる群から選択される１種又は２種以上の薬剤を被験者に投与すると薬剤の血中濃度を上昇させるリスクがあると判定することを含むことを特徴とする。
第１の発明においては、薬剤がクロザピンであることが好ましい。
また、前記いずれかの血中薬剤濃度上昇リスク判定方法においては、被験者が統合失調症の患者であることが好ましい。
第２の発明は、血中薬剤濃度上昇リスク判定キットに関する発明であり、ｉ）被験者から採取された生体試料中のＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出するために使用する核酸と、ii）検出された塩基の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである被験者は、クロザピン、オランザピン及びクエチアピンからなる群から選択される１種又は２種以上の薬剤を投与すると、薬剤の血中濃度が上昇するリスクが高いことを記載した説明書とを含むことを特徴とする。
第２の発明においては、薬剤がクロザピンであることが好ましい。
また、前記いずれかの血中薬剤濃度上昇リスク判定方法においては、被験者が統合失調症の患者であることが好ましい。
第３の発明は、薬剤投与量判定キットに関する発明であり、ｉ）被験者から採取された生体試料中のＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出するために使用する核酸と、ii）検出された塩基の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである被験者に対しては、クロザピン、オランザピン及びクエチアピンからなる群から選択される１種又は２種以上の薬剤を投与する際に、薬剤の投与量を減らすべきであることを記載した説明書とを含むことを特徴とする。
第３の発明においては、薬剤投与量判定キットが、ｉ）被験者から採取された生体試料中のＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出するために使用する核酸と、ii）検出された塩基の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである被験者に対しては、クロザピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり３．０〜５．６ｍｇの範囲内の所定の量にすべきと記載し、オランザピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり０．１５〜０．２８ｍｇの範囲内の所定の量にすべきと記載し、又は、クエチアピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり３．９〜７．３ｍｇの範囲内の所定の量にすべきと記載した説明書とを含むキットであってもよい。
この場合には、説明書が、さらに、検出された塩基の遺伝子型がＣ／Ｃである被験者に対しては、クロザピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり５．９〜９．０ｍｇの範囲内の所定の量にすべきと記載し、オランザピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり０．３０〜０．４５ｍｇの範囲内の所定の量にすべきと記載し、又は、クエチアピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり７．７〜１１．７ｍｇの範囲内の所定の量にすべきと記載していることが好ましい。
前記のいずれかの薬剤投与量判定キットにおいては、薬剤がクロザピンであることが好ましい。
薬剤がクロザピンである薬剤投与量判定キットにおいては、さらに、被験者にクロザピンを投与した後、被験者から採取された血液中のクロザピン濃度を測定する方法を説明書に記載していることが好ましい。
この場合には、説明書が、被験者から採取された血液中のクロザピンの濃度が、下側閾値よりも低い場合には、クロザピンの投与量を増やすべきであると記載し、上側閾値よりも血中クロザピン濃度が高い場合には、クロザピンの投与量を減らすべきであると記載しており、下側閾値として、３００〜４００ｎｇ／ｍｌの範囲より選択される値が記載されており、上側閾値として、７００〜９００ｎｇの範囲より選択される値が記載されていることが好ましい。
ここで、血液中のクロザピン濃度を測定する方法としては、ＨＰＬＣを用いた測定方法が好ましく、より好ましくは、被験者の血液由来の血漿成分に、内部標準としてドキセピンを加えて、ＨＰＬＣにより測定を行う方法が好ましく、また、ＨＰＬＣを用いて測定を行う場合には、ＨＰＬＣの移動相として、アセトニトリルを含む溶媒を用いることが好ましい。
また、前記いずれかの薬剤投与量判定キットにおいては、被験者が統合失調症の患者であることが好ましい。
第４の発明は、統合失調症治療剤に関する発明であり、ｉ）クロザピンを有効成分とする統合失調症治療剤において、ii）ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである統合失調症の患者に対して、患者の体重１ｋｇあたり３．０〜５．６ｍｇの範囲内の所定の量のクロザピンを１日あたり経口投与することを特徴とする、統合失調症治療剤を提供する。
また、第４の発明の統合失調症治療剤は、ｉ）クエチアピンを有効成分とする統合失調症治療剤において、ii）ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである統合失調症の患者に対して、患者の体重１ｋｇあたり３．９〜７．３ｍｇの範囲内の所定の量のクエチアピンを１日あたり経口投与することを特徴とする、統合失調症治療剤を提供する。

【発明の効果】

【0014】

第１の発明に係る血中薬剤濃度上昇リスク判定方法及び第２の発明に係る血中薬剤濃度上昇リスク判定キットは、ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出することにより、クロザピン、オランザピン及びクエチアピンからなる群から選択される１種又は２種以上の薬剤を被験者に投与した場合に、これらの薬剤の血中濃度が上昇するリスクを判定することができるので、これらの薬剤の投与により副作用を引き起こすリスクを把握することができるという効果を奏する。
第３の発明に係る薬剤投与量判定キットは、ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出し、検出された塩基の遺伝子型に応じて被験者に投与すべき薬剤の量を判定するので、クロザピン、オランザピン又はクエチアピンの投与による副作用の発生リスクを低下させることができるという効果を奏する。
第４の発明に係る統合失調症治療薬は、クロザピン又はクエチアピンを有効成分としており、統合失調症の患者のＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出して、検出された塩基の遺伝子型に応じて、適した量の薬剤を１日あたり経口投与されるように用いられるので、副作用の発生リスクを低下させることができるという効果を奏する。

【発明を実施するための形態】

【0015】

１．血中薬剤濃度上昇リスク判定方法
本発明の血中薬剤濃度上昇リスク判定方法は、ｉ）被験者に由来するＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出し、ii）検出された塩基の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである場合には、クロザピン、オランザピン及びクエチアピンからなる群から選択される１種又は２種以上の薬剤を被験者に投与すると薬剤の血中濃度を上昇させるリスクがあると判定することを含む方法である。

【0016】

本発明の血中薬剤濃度上昇リスク判定方法は、後記実施例に記載した実験により得られた知見に基づく発明である。実施例では、クロザピンを投与している統合失調症の患者に対して、ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基の遺伝子型を検出するとともに、血中クロザピン濃度を測定し、クロザピン投与量に対する血中クロザピン濃度の比（Ｃ_０／Ｄ）を求めた。ここで、Ｃ_０／Ｄの値は、クロザピンを投与した場合に血中クロザピン濃度がどれほど上昇しやすいかを示す指標となる値である。その結果、Ｃ／Ｃの遺伝子型を有する患者よりも、Ｃ／Ａ又はＡ／Ａの遺伝子型を有する患者の方がＣ_０／Ｄの値が有意に高いことが明らかとなった。また、かかる一塩基多型（ＳＮＰ）だけでなく、他の遺伝子多型や、年齢、体重、肝機能／腎機能検査値も含めて多変量解析を行ったところ、Ｃ_０／Ｄに対して有意な相関が認められたのは、ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基における一塩基多型（ＳＮＰ）だけであった。

【0017】

ＡＢＣＧ２遺伝子がコードするＢＣＲＰは、ＡＢＣスーパーファミリーに属するトランスポーターであり、肝実質細胞、腎近位尿細管等でも発現が認められていることから、体内の不要物質を胆汁、尿へ排出することに関わっているトランスポーターであると考えられている。
ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基がＣ（シトシン）からＡ（アデニン）に変化すると、ＡＢＣＧ２遺伝子がコードするＢＣＲＰの１４１番目のアミノ酸残基がグルタミンからリジンに変化するアミノ酸変異が生じる。
したがって、ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基がＣからＡに変化することにより、ＢＣＲＰのタンパク質が変異してクロザピン排出機能が低下することにより、血中のクロザピン濃度が上昇すると考えられる。ここで、オランザピンとクエチアピンは、クロザピンに構造が類似する誘導体であることから、クロザピンと同様にＢＣＲＰにより排出されると考えられ、ＢＣＲＰによる排出機能の低下により血中濃度が上昇してしまうのである。

【0018】

本発明において「クロザピン」とは、ＩＵＰＡＣ命名法に従えば、８−クロロ−１１−（４−メチル−１−ピペラジニル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンと命名される化合物であり、次の構造式で示される化合物であり、その塩を含む。

【0019】

【化1】

【0020】

本発明において「オランザピン」とは、ＩＵＰＡＣ命名法に従えば、２−メチル−４−（４−メチル−１−ピペラジニル）−１０Ｈ−チエノ［２，３−ｂ］［１，５］ベンゾジアゼピンと命名される化合物であり、次の構造式で示される化合物であり、その塩を含む。

【0021】

【化2】

【0022】

本発明において「クエチアピン」とは、ＩＵＰＡＣ命名法に従えば、２−［２−［４−（ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−１１−イル）ピペラジノ]エトキシ］エタノールと命名される化合物であり、次の構造式で示される化合物であり、その塩を含む。

【0023】

【化3】

【0024】

上記構造式に示されるように、クロザピン、オランザピン及びクエチアピンは、化学構造が互いに類似している。

【0025】

尚、クロザピンは、ＣＹＰ１Ａ２等によって、同様の薬学活性を有するＮ−デスメチルクロザピンに代謝されるが、その化学構造は以下のとおりである。

【0026】

【化4】

【0027】

本発明において、「被験者」とは、遺伝子型を検出する対象となるヒトを意味し、ヒトであれば人種は特に限定されず、モンゴロイド、コーカソイド、ネグロイド、オーストラロイドのいずれであっても、血中薬剤濃度上昇リスクを判定することができる。しかしながら、ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基がＣ（シトシン）ではなくＡ（アデニン）となっている人の割合は、中国人と日本人で高いことから（非特許文献６）、モンゴロイドを被験者とすることが、本発明の血中薬剤濃度上昇リスク判定方法において、より意義があるといえる。
また、本発明は、統合失調症の治療薬であるクロザピン、オランザピン及びクエチアピンの血中薬剤濃度上昇リスクを判定する方法であることから、「被験者」とは、統合失調症の患者であることが好ましい。

【0028】

本発明において「ＡＢＣＧ２遺伝子」とは、ＡＢＣスーパーファミリーに属するトランスポーターであるＢＣＲＰ（Breast cancer resistance protein）をコードする遺伝子であり、後記配列表の配列番号１に示される塩基配列を有する遺伝子である。
尚、配列表の配列番号１においては、ＡＢＣＧ２遺伝子の塩基配列の他に、その塩基配列がコードするタンパク質も塩基配列のコドンに対応させて記載してある。そして、配列番号１の４２１番目の塩基は、一塩基多型（ＳＮＰ）となる塩基であり、Ｃ又はＡであり、Ｃ又はＡであることを示す塩基のＩＵＰＡＣ表記である「ｍ」で示されている。４２１番目の塩基がＣ（シトシン）である場合には、１４１番目のアミノ酸がグルタミンとなり、４２１番目の塩基がＡ（アデニン）である場合には、１４１番目のアミノ酸がリジンとなる。

【0029】

尚、ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基にある一塩基多型（ＳＮＰ）は、ＮＣＢＩ（National Center for Biotechnology Information）のＳＮＰデータベース（ｄｂＳＮＰ）上において、「ｒｓ２２３１１４２」の番号が付与されている一塩基多型（ＳＮＰ）である。

【0030】

本発明の血中薬剤濃度上昇リスク判定方法において、「被験者に由来するＡＢＣＧ２遺伝子」とは、被験者の細胞に含まれるＡＢＣＧ２遺伝子を意味し、「ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出する」とは、ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基がＡ（アデニン）であるかＣ（シトシン）であるかという違いを検出することや、Ａ（アデニン）、Ｇ（グアニン）、Ｃ（シトシン）、Ｔ（チミン）のいずれであるかを決定することを含む、ＳＮＰタイピングを行うことを意味する。
ここで、ヒトのＡＢＣＧ２遺伝子は、２つの相同染色体（第４染色体）の同一の遺伝子座に存在しており、２つの対立遺伝子が存在する。したがって、ＳＮＰタイピングにより、２つの対立遺伝子の塩基の組み合わせが遺伝子型として検出される。例えば、Ｃ／Ｃ、Ｃ／Ａ、Ａ／Ａといった遺伝子型を検出することができる。この検出においては、Ｃ又はＡがどちらの対立遺伝子に由来するものであるかを決定することは必須でない。

【0031】

本発明において、「ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出する」ために使用するＳＮＰタイピング法としては、これらに限定されるわけではないが、例えば、ＰＣＲ−ＲＦＬＰ法、インベーダー法、ＴａｑＭａｎ（登録商標）法、ダイレクト・シークエンス法、ＲＣＡ法、質量分析計を用いたＳＮＰタイピング法、ＤＮＡチップを用いたＳＮＰタイピング法等を用いることができる。

【0032】

これらのＳＮＰタイピング法のうち、「ＰＣＲ−ＲＦＬＰ法」とは、Polymerase Chain Reaction−Restriction Fragment Length Polymorphismの略である。簡単に説明すると、ＰＣＲ−ＲＦＬＰ法とは、ＳＮＰが制限酵素認識配列と重なっている場合には、一塩基の違いによって、制限酵素で切断させる場合とされない場合に分かれることを利用して、ＳＮＰをタイピングする方法である。ＰＣＲ−ＲＦＬＰでは、標的配列をＰＣＲ法により増幅した後、増幅核酸を制限酵素で処理し、電気泳動してバンドを確かめることにより、遺伝子型を特定することができる。

【0033】

また、ＳＮＰタイピング法のうち、「インベーダー法」とは、インベーダープローブ、アレルプローブと名付けられる２種の核酸プローブを用い、被験者由来の標的核酸にこれらのプローブをハイブリダイゼーションさせて特殊な構造を形成し、この特殊な構造を認識して切断するｃｌｅａｖａｓｅという酵素を用いることにより、一塩基多型（ＳＮＰ）をタイピングする方法である。インベーダー法については、例えば、Lyamichevらの論文（Lyamichev V. 外１１名、Nature Biotechnology 誌、１９９９年発行、Vol.17、No.3、pp.292-296）や、特許第４０１６０５０号等を参照して、実施することができる。
インベーダー法においては、一塩基多型（ＳＮＰ）を含む標的核酸は、ＳＮＰの位置を境界として第１の部位と第２の部位に分けられる。インベーダープローブは、標的核酸の第１の部位に相補的な配列を有するポリヌクレオチドである。そして、アレルプローブは、標的核酸の第２の部位に相補的な配列を有するとともに、その５´末端には、標的核酸とは無関係の配列を有するフラップと呼ばれる部分を含むポリヌクレオチドである。インベーダープローブとアレルプローブが、標的核酸に第１の部位と第２の部位にハイブリダイズすると、ＳＮＰの位置にインベーダープローブの３´末端が侵入して、特殊な構造を形成する。この特殊な構造は、ｃｌｅｖａｓｅという酵素により認識され、フラップ部分が切断される。遊離したフラップはあらかじめ標識しておくことにより検出することができる。また、フラップの検出には、蛍光色素と消光物質（クエンチャー）で標識されたＦＲＥＴプローブを用いて検出することもできる。アレルプローブのＳＮＰ位置に対応する塩基が、標的核酸のＳＮＰ位置の塩基と相補的である（マッチする）場合には上記のような反応が生じるが、相補的でない（マッチしない）場合には上記のような反応が生じない。このため、ＳＮＰ位置の塩基をタイピングすることが可能となる。

【0034】

ＳＮＰタイピング法のうち、「Ｔａｑｍａｎ法」とは、Ｔａｑｍａｎプローブと名付けられる核酸プローブを用いて、被験者由来の標的核酸を増幅することにより、一塩基多型（ＳＮＰ）をタイピングする方法である。Ｔａｑｍａｎ法については、例えば、Livakらの論文（Kenneth J. Livak、Genetic Analysis: Biomolecular Engineering 誌（略号 Genet Anal）、１９９９年発行、Vol.14、No.5-6、pp.143-149）を参照して、実施することができる。
Ｔａｑｍａｎ法においては、蛍光色素と消光物質（クエンチャー）により標識したＴａｑｍａｎプローブを用い、ＳＮＰ位置を含む標的核酸にＴａｑｍａｎプローブをハイブリダイズさせて、標的核酸を増幅するように設計したプライマーでＰＣＲを行うと、プライマーからの伸長反応が進むと同時にＴａｑポリメラーゼの５´ヌクレアーゼ活性によりハイブリダイズしたＴａｑｍａｎプローブが切断される。この切断により蛍光色素が消光物質（クエンチャー）と離れて蛍光が生じる。ＴａｑｍａｎプローブのＳＮＰ位置に対応する塩基が、標的核酸のＳＮＰ位置の塩基と相補的である（マッチする）場合には上記のような反応が生じるが、相補的でない（マッチしない）場合には上記のような反応が生じない。このため、ＳＮＰ位置の塩基をタイピングすることが可能となる。

【0035】

ＳＮＰのタイピングは、例えば、これらに限定されるわけではないが、被験者から採取された血液、口腔粘膜、唾液、毛根等の生体試料を用いて行うことができる。また、ＳＮＰタイピングを行うにあたっては、ＡＢＣＧ２遺伝子を予め増幅することもできる。遺伝子を増幅する方法としては、これらに限定されるわけではないが、例えば、ＰＣＲ法、ＬＡＭＰ法、ＳＤＡ法等を用いることができる。

【0036】

本発明の血中薬剤濃度上昇リスク判定方法は、被験者から得られたＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基の一塩基多型（ＳＮＰ）に関する情報を用い、統計学的データに基づく本発明の知見に照らして、一塩基多型の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａであることは、クロザピン又はその誘導体の血中濃度を上昇させるリスクを示すものであると分析し、リスクを判定するものである。したがって、本発明の血中薬剤濃度上昇リスク判定方法は、「人間を診断する方法」には該当しない。

【0037】

本発明の血中薬剤濃度上昇リスク判定方法によれば、ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出することにより、クロザピン、オランザピン及びクエチアピンからなる群から選択される１種又は２種以上の薬剤を被験者に投与した場合に、これらの薬剤の血中濃度が上昇するリスクを判定することができる。これらの薬剤の血中濃度の上昇は、副作用を引き起こす可能性の増大に直結することから、本発明の血中薬剤濃度上昇リスク判定方法によれば、これらの薬剤の投与により副作用を引き起こすリスクを把握することができるという効果を奏する。

【0038】

２．血中薬剤濃度上昇リスク判定キット
本発明の血中薬剤濃度上昇リスク判定キットは、ｉ）被験者から採取された生体試料中のＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出するために使用する核酸と、ii）検出された塩基の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである被験者は、クロザピン、オランザピン及びクエチアピンからなる群から選択される１種又は２種以上の薬剤を投与すると、薬剤の血中濃度が上昇するリスクが高いことを記載した説明書、とを含むことを特徴とする。

【0039】

本発明において、「被験者から採取された生体試料」とは、これらに限定されるわけではないが、例えば、被験者から採取された血液、口腔粘膜、唾液、毛根等を用いることができる。

【0040】

本発明において、「ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出するために使用する核酸」とは、これらに限定されるわけではないが、例えば、核酸プローブ又は核酸プライマーである。「核酸」は、検出に使用するＳＮＰタイピング方法に応じて、後記配列表の配列番号１で示されるＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基の周辺配列に基づいて適宜設計したものを用いることができる。
例えば、ＳＮＰタイピング方法として、ＰＣＲ−ＲＦＬＰ法を用いる場合には、ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を含む標的配列を増幅するための核酸プライマーを設計して用いることができる。
また、例えば、ＳＮＰタイピング方法としてインベーダー法を使用する場合には、核酸プローブとして、インベーダープローブとアレルプローブを設計する。インベーダープローブとして、ＡＢＣＧ２遺伝子の４３１番目の塩基から３´側の配列に相補的な配列を有するポリヌクレオチドを設計する。また、アレルプローブとして、ＡＢＣＧ２遺伝子の４３１番目の塩基から５´側の配列に相補的な配列を含むポリペプチドを設計し、そのポリペプチドの５´側にＡＢＣＧ２遺伝子とは無関係な配列のポリペプチドからなるフラップを設ける。インベーダープローブのＳＮＰに対応する位置の塩基は、任意の塩基とすることができる。また、アレルプローブのＳＮＰに対応する位置の塩基は、Ｇ（グアニン）又はＴ（チミン）を用いる。ここで、Ｇ（グアニン）を用いた場合には、Ｃ（シトシン）を検出する核酸プローブとすることができ、また、Ｔ（チミン）を用いた場合には、Ａ（アデニン）を検出する核酸プローブとすることができる。

【0041】

本発明の血中薬剤濃度上昇リスク判定キットに含まれる「説明書」は、検出された塩基の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである被験者は、クロザピン、オランザピン及びクエチアピンからなる群から選択される１種又は２種以上の薬剤を投与すると、薬剤の血中濃度が上昇するリスクが高いことを記載したものである。
さらに、この説明書は、検出された遺伝子型がＣ／Ｃである被験者は、クロザピン、オランザピン及びクエチアピンからなる群から選択される１種又は２種以上の薬剤を投与すると、薬剤の血中濃度が上昇するリスクが少ないことを記載していることが好ましい。

【0042】

本発明の血中薬剤濃度上昇リスク判定キットに含まれる「説明書」は、さらに他の記載を含んでいてもよく、例えば、これらに限定されるわけではないが、核酸を用いてＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出するためのプロトコールや、キットの保存方法等を記載していてもよい。

【0043】

本発明の血中薬剤濃度上昇リスク判定キットによれば、ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出することにより、クロザピン、オランザピン及びクエチアピンからなる群から選択される１種又は２種以上の薬剤を被験者に投与した場合に、これらの薬剤の血中濃度が上昇するリスクを判定することができる。これらの薬剤の血中濃度の上昇は、副作用を引き起こす可能性の増大に直結することから、本発明の血中薬剤濃度上昇リスク判定キットによれば、これらの薬剤の投与により副作用を引き起こすリスクを把握することができるという効果を奏する。

【0044】

３．薬剤投与量判定方法
本発明の薬剤投与量判定方法は、ｉ）被験者から採取された生体試料中に含まれるＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出し、ii）検出された塩基の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである場合には、クロザピン、オランザピン及びクエチアピンからなる群から選択される１種又は２種以上の薬剤を被験者に投与する際に、薬剤の投与量を減らすべきであると判定することを含むことを特徴とする。
本発明の薬剤投与量判定方法において、「被験者から採取された生体試料中に含まれるＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出」するためには、前記「１．血中薬剤濃度上昇リスク判定方法」で説明したものと同様の手法を用いることができる。

【0045】

尚、本発明の薬剤投与量判定方法は、「被験者から採取された生体試料」を分析して、好ましい薬剤の投与量を判定する方法であるため、「人間を手術、治療又は診断する方法の発明」には該当しない。

【0046】

また、本発明の薬剤投与量判定方法においては、検出された塩基の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである場合には、クロザピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり３．０〜５．６ｍｇの範囲内の所定の量であると判定し、オランザピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり０．１５〜０．２８ｍｇの範囲内の所定の量であると判定し、又は、クエチアピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり３．９〜７．３ｍｇの範囲内の所定の量であると判定することを含むことが好ましい。
また、検出された塩基の遺伝子型がＣ／Ｃである場合には、クロザピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり５．９〜９．０ｍｇの範囲内の所定の量であると判定し、オランザピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり０．３０〜０．４５ｍｇの範囲内の所定の量であると判定し、又はクエチアピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり７．７〜１１．７ｍｇの範囲内の所定の量であると判定することを含むことが好ましい。

【0047】

本発明において、「〜の範囲内の所定の量」とは、「〜」で記述される数値範囲内のうち、特定の量又は特定の範囲の量であると判定することを意味する。
例えば、「クロザピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり３．０〜５．６ｍｇの範囲内の所定の量であると判定し」とは、「クロザピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり４．５ｍｇであると判定する」ことや、「クロザピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり４．０〜５．０ｍｇと判定する」ことを含む。また、被験者の体重を、例えば、５０ｋｇと仮定して、「クロザピンの１日あたりの経口投与量を２２５ｍｇであると判定する」ことや、「クロザピンの１日あたりの経口投与量を２００〜２５０ｍｇであると判定する」ことも含む。

【0048】

本発明の薬剤投与量判定方法において、薬剤としてクロザピンを用いる場合には、さらに、被験者にクロザピンを投与した後、被験者から採取された血液中のクロザピンの濃度を測定し、その濃度に応じて、最適なクロザピン投与量を判定することが好ましい。
具体的には、３００〜４００ｎｇ／ｍｌの範囲より選択される下側閾値よりも血中クロザピン濃度が低い場合には、クロザピンの投与量を増やすべきであると判定し、７００〜９００ｎｇ／ｍｌの範囲より選択される上側閾値よりも血中クロザピン濃度が高い場合には、クロザピンの投与量を減らすべきであると判定することを含むことが好ましい。
例えば、下側閾値を３５０ｎｇ／ｍｌとし、上側閾値を８００ｎｇ／ｍｌとした場合について説明すると、血中クロザピン濃度の測定値が、３５０〜８００ｎｇ／ｍｌの範囲内であれば、薬剤の投与量は正しいと判定される。そして、血中クロザピン濃度の測定値が、３５０ｎｇ／ｍｌ未満であれば、クロザピンの投与量を増やすべきであると判定し、血中クロザピン濃度の測定値が、８００ｎｇ／ｍｌよりも大きい場合には、クロザピンの投与量を減らすべきであると判定する。

【0049】

ここで、血液中の薬剤の濃度を測定する方法としては、一定の正確性をもって薬剤の濃度を測定できる方法であれば如何なる方法を用いることもでき、これらに限定されるわけではないが、例えば、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）を用いた測定方法や、免疫吸着法を用いた測定方法を用いることができる。

【0050】

本発明の薬剤投与量判定方法によれば、ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出し、検出された塩基の遺伝子型に応じて被験者に投与すべき薬剤の量を判定するので、クロザピン、オランザピン又はクエチアピンの投与による副作用の発生リスクを低下させることができるという効果を奏する。

【0051】

４．薬剤投与量判定キット
本発明の薬剤投与量判定キットは、ｉ）被験者から採取された生体試料中のＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出するために使用する核酸と、ii）検出された塩基の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである被験者に対しては、クロザピン、オランザピン及びクエチアピンからなる群から選択される１種又は２種以上の薬剤を投与する際に、薬剤の投与量を減らすべきであることを記載した説明書とを含むことを特徴とする。

【0052】

また、本発明の薬剤投与量判定キットは、ｉ）被験者から採取された生体試料中のＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出するために使用する核酸と、ii）検出された塩基の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである被験者に対しては、クロザピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり３．０〜５．６ｍｇの範囲内の所定の量にすべきと記載し、オランザピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり０．１５〜０．２８ｍｇの範囲内の所定の量にすべきと記載し、又は、クエチアピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり３．９〜７．３ｍｇの範囲内の所定の量にすべきと記載した説明書とを含むものであってもよい。

【0053】

この場合には、説明書が、さらに、検出された塩基の遺伝子型がＣ／Ｃである被験者に対しては、クロザピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり５．９〜９．０ｍｇの範囲内の所定の量にすべきと記載し、オランザピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり０．３０〜０．４５ｍｇの範囲内の所定の量にすべきと記載し、又は、クエチアピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり７．７〜１１．７ｍｇの範囲内の所定の量にすべきと記載していることが好ましい。

【0054】

本発明の薬剤投与量判定キットにおける「被験者から採取された生体試料」とは、前記２．で記載したものを用いることができる。
また、本発明の薬剤投与量判定キットにおける「ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出するために使用する核酸」についても、前記２．で記載したものを用いることができる。

【0055】

本発明の薬剤投与量判定キットにおける「説明書」において、「〜の範囲内の所定の量にすべきと記載し」とは、「〜」で記述される数値範囲内のうち、特定の量又は特定の範囲の量を記載することを意味する。
例えば、「クロザピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり３．０〜５．６ｍｇの範囲内の所定の量にすべきと記載し」とは、「クロザピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり４．５ｍｇにすべき」旨を記載することや、「クロザピンの１日あたりの経口投与量を被験者の体重１ｋｇあたり４．０〜５．０ｍｇにすべき」旨を記載することを含む。また、被験者の体重を、例えば、５０ｋｇと仮定して、「クロザピンの１日あたりの経口投与量を２２５ｍｇにすべき」旨を記載することや、「クロザピンの１日あたりの経口投与量を２００〜２５０ｍｇにすべき」旨を記載することも含む。

【0056】

本発明の薬剤投与量判定キットに含まれる「説明書」は、さらに他の記載を含んでいてもよく、例えば、これらに限定されるわけではないが、核酸を用いてＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出するためのプロトコールや、キットの保存方法等を記載していてもよい。

【0057】

本発明の薬剤投与量判定キットによれば、ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出し、検出された塩基の遺伝子型に応じて被験者に投与すべき薬剤の量を判定するので、クロザピン、オランザピン又はクエチアピンの投与による副作用の発生リスクを低下させることができるという効果を奏する。

【0058】

５．統合失調症治療剤
本発明の統合失調症治療剤は、ｉ）有効成分がクロザピンである場合には、ii）ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである統合失調症の患者に対しては、患者の体重１ｋｇあたり３．０〜５．６ｍｇの範囲内の所定の量のクロザピンが１日あたり経口投与され、iii）塩基の遺伝子型がＣ／Ｃである統合失調症の患者に対しては、患者の体重１ｋｇあたり５．９〜９．０ｍｇの範囲内の所定の量のクロザピンが１日あたり経口投与されるように用いられることを特徴とする。

【0059】

また、本発明の統合失調症治療剤は、ｉ）有効成分がオランザピンである場合には、ii）ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである統合失調症の患者に対しては、患者の体重１ｋｇあたり０．１５〜０．２８ｍｇの範囲内の所定の量のオランザピンが１日あたり経口投与され、iii）塩基の遺伝子型がＣ／Ｃである統合失調症の患者に対しては、患者の体重１ｋｇあたり０．３０〜０．４５ｍｇの範囲内の所定の量のオランザピンが１日あたり経口投与されるように用いられることを特徴とする。

【0060】

さらに、本発明の統合失調症治療剤は、ｉ）有効成分がクエチアピンである場合には、ii）ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである統合失調症の患者に対しては、患者の体重１ｋｇあたり３．９〜７．３ｍｇの範囲内の所定の量のクエチアピンが１日あたり経口投与され、iii）塩基の遺伝子型がＣ／Ｃである統合失調症の患者に対しては、患者の体重１ｋｇあたり７．７〜１１．７ｍｇの範囲内の所定の量のクエチアピンが１日あたり経口投与されるように用いられることを特徴とする。

【0061】

本発明の統合失調症治療剤は、クロザピン、オランザピン又はクエチアピンを有効成分とし、用途及び用法を限定した治療剤に関する発明である。
本発明の統合失調症治療剤において、「〜の範囲内の所定の量」とは、前記３．のとおり、「〜」で記述される数値範囲内のうち、特定の量又は特定の範囲の量であると判定することを意味する。

【0062】

本発明の統合失調症治療剤においては、有効成分の他に、これらに限定されるわけではないが、例えば、賦形剤、安定化剤、保存剤、溶解補助剤などを加えて適宜混合することにより製剤としてもよい。

【0063】

本発明の統合失調症治療薬によれば、クロザピン、オランザピン又はクエチアピンを有効成分としており、統合失調症の患者のＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基を検出して、検出された塩基の遺伝子型に応じて、適した量の薬剤を１日あたり経口投与されるように用いられるので、副作用の発生リスクを低下させることができるという効果を奏する。

【0064】

以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

【実施例1】

【0065】

（血中クロザピン濃度の測定）
インフォームドコンセントを得た３８名の統合失調症である被験者（男性１３名、女性２５名）を対象として血中クロザピン濃度の測定を行った。

【0066】

３８名の被験者は、少なくとも４週間にわたり継続的にクロザピンの経口投与を受けた。クロザピンは、ノバルティスファーマ社製のクロザリル（Clozaril）を用いた。クロザピンの投与量は、１日あたり１００〜６００ｍｇの範囲で固定し、午前９時及び／又は午後９時の１日１回又は２回の投与とした。被験者に対しては、クロザピン以外の薬剤としては、１日あたり２００〜８００ｍｇのリチウム、１日あたり６００〜１２００ｍｇのバルプロ酸（valproate）、１日あたり１６〜２４ｍｇのブロナンセリン（blonanserin）が投与されていた。
血液サンプルを午前８時３０分の時点で採取し、その血漿成分を−２０℃で保存した。血漿中のクロザピン及びＮ−デスメチルクロザピンの濃度は、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）を用いて、紫外線（ＵＶ）検出法により測定した。簡単にその方法について説明すると、２００μｌの血漿に、内部標準（ＩＳ）として三環系の化合物である１μｇのドキセピン（doxepin）を加え、８００μｌの水で希釈して、３０秒間ボルテックスミキサーを用いて懸濁し、混合液とした。事前にアセトニトリルと水で活性化させたＯＡＳＩＳ（登録商標）ＨＬＢ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｃａｒｔｒｉｄｇｅに、この混合液をロードした。このカートリッジを１ｍｌの４０％アセトニトリル水溶液で洗浄した後、１．０ｍｌの１００％アセトニトリルで溶出した。ロータリーエバポレーター（ＩＷＡＫＩ社製）を用いて、７０℃下に減圧して、溶出液を蒸発乾固させた。蒸発乾固した残留物を５０μｌの移動相となる液体に溶解させ、３０秒間ボルテックスした。この溶解液から３０μｌを分取して、ＨＰＬＣ装置に注入した。ＨＰＬＣシステムとして、島津製作所社製Ｎｅｘｅｒａを使用した。ＨＰＬＣのカラムは、Ｃ１８ ＳＴＲ ＯＤＳ−II（１５０ｍｍ × 内径４．６ｍｍ、粒子径５μｍ、信和化工社製）を分析カラムとして使用した。ＨＰＬＣの移動相として、０．５МＫＨ_２ＰＯ_４、アセトニトリル、酢酸を６５：３５：０．１の容積比で混合したものを用いた。カラムの温度は４０℃とし、流速は０．５ｍｌ／分とした。波長を２５４ｎｍにセットしたＵＶ検出器を用いてピークを検出した。クロザピンとＮ−デスメチルクロザピンの定量は、ピーク面積に基づいて行った。

【0067】

（遺伝子多型のタイピング）
ＱＩＡａｍｐ Ｂｌｏｏｄ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ社製）を用いて、被験者から採取した抹消血試料からＤＮＡを抽出し、使用するまで−８０℃で保存した。ＡＢＣＢ１遺伝子のエキソン２６のＣ及びＴの対立遺伝子（３４３５Ｃ＞Ｔ）について、Cascorbiらの論文（Cascorbi I 外９名、Clinical Pharmacology & Therapeutics誌（略号：Clin Pharmacol Ther）、２００１年発行、Vol.69、No.3、pp.169-174）に記載されたＰＣＲ−ＲＦＬＰ法を用いて、遺伝子型を特定する操作を行った。ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基がＣ又はＡである遺伝子多型については、Kobayashiらの論文（Kobayashi D 外１２名、Drug Metabolism & Disposition誌（略号Drug Metab Dispos）、２００５年発行、Vol.33、No.1、pp.94-101）に記載されたＰＣＲ−ＲＦＬＰ法を用いて遺伝子型を特定した。解析した異なる遺伝子座の遺伝子頻度は全て、ハーディ・ワインベルグの法則に従うものとした。

【0068】

（血中クロザピン濃度と遺伝子多型との関係）
前記のとおり測定した被験者の血中クロザピン濃度と、被験者の遺伝子多型との関係を統計学的に分析した結果を次の表１及び表２に示す。

【0069】

【表1】

【0070】

【表2】

【0071】

血中クロザピン濃度と遺伝子多型との関係の統計学的な分析において、分布の評価には、シャピロ−ウィルク検定（The Shapiro-Wilk test）を用いた。グループ間の相関を評価するためにスピアマンの順位相関係数（The Spearman’s rank correlation coefficient）を用い、その結果を相関係数（ｒ）で表した。また、グループ間の差を検定するために、クラスカル・ワオリスの検定（Kruskal-Wallis tests）とマン・ホイットニーのＵ検定（Mann-Whitney U tests）を用いた。クロザピン及びＮ−デスメチルクロザピンのＣ_０値（血中濃度）を、クロザピンの投与量で補正し、Ｃ_０／投与量（Ｃ_０／Ｄ）の中央値を統計学的な分析に用いた。単変量解析での因子の影響を評価するために、段階式線形重回帰分析を行った。統計学的分析には、ＳＰＳＳ（Version 20.0、ＳＰＳＳ社製）を用いた。Ｐ値が０．０５より小さな差である場合には、統計学的に有意であるとした。
表１に示すように、血中クロザピン濃度／クロザピン投与量（Ｃ_０／Ｄ）の値は、ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の一塩基多型における遺伝子型がＣ／Ｃである被験者に比べて、遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａである被験者の方が有意に高かった（Ｐ値＝０．０２４）。しかしながら、表２に示すように、血中Ｎ−デスメチルクロザピン濃度／クロザピン投与量の値や、血中Ｎ−デスメチルクロザピン濃度／血中クロザピン濃度の値は、ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の一塩基多型における遺伝子型がＣ／Ｃでも、Ｃ／Ａ又はＡ／Ａでも、有意な違いは見られなかった。
そして、表１に示すように、ＡＢＣＢ１遺伝子の一塩基多型（３４３５Ｃ＞Ｔ）は、血中クロザピン濃度／クロザピン投与量の値や、血中Ｎ−デスメチルクロザピン濃度／クロザピン投与量の値とは相関していなかった。また、表２に示すとおり、血中Ｎ−デスメチルクロザピン濃度／血中クロザピン濃度についても、ＡＢＣＢ１遺伝子の一塩基多型による有意差は見られなかった。

【0072】

（多変量解析）
前記の遺伝子多型のみならず、年齢、体重、血液検査データを含めて多変量解析を行った結果、ＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基における一塩基多型のみが、血中クロザピン濃度／クロザピン投与量に対して有意に相関していた。

【産業上の利用可能性】

【0073】

本発明の血中薬剤濃度上昇リスク判定方法は、被験者から得られたＡＢＣＧ２遺伝子の４２１番目の塩基の一塩基多型（ＳＮＰ）に関する情報を用い、統計学的データに基づく本発明の知見に照らして、一塩基多型の遺伝子型がＣ／Ａ又はＡ／Ａであることは、クロザピン又はその誘導体の血中濃度を上昇させるリスクを示すものであると分析し、リスクを判定するものである。したがって、本発明の血中薬剤濃度上昇リスク判定方法は、「人間を診断する方法」には該当せず、臨床検査等の分野で産業上有用な発明である。
また、本発明の薬剤投与量判定方法は、「被験者から採取された生体試料」を分析して、好ましい薬剤の投与量を判定する方法であるため、「人間を手術、治療又は診断する方法の発明」には該当せず、臨床検査等の分野で産業上有用な発明である。
さらに、本発明の血中薬剤濃度上昇リスク判定キット、薬剤投与量判定キット及び統合失調症治療剤は、臨床検査薬及び医薬等の分野で産業上有用な発明である。

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]