特許 6813720 ２、６−ジアミノピリジン化合物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B1)

(11)【特許番号】6813720

(24)【登録日】2020年12月21日

(45)【発行日】2021年1月13日

(54)【発明の名称】２、６−ジアミノピリジン化合物

(51)【国際特許分類】

   C07D 401/14 20060101AFI20201228BHJP

   A61K 31/4439 20060101ALI20201228BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20201228BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20201228BHJP

   A61P 9/04 20060101ALI20201228BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20201228BHJP

【ＦＩ】

   C07D401/14CSP

   A61K31/4439

   A61P1/16

   A61P3/10

   A61P9/04

   A61P13/12

【請求項の数】12

【全頁数】26

(21)【出願番号】特願2020-537626(P2020-537626)

(86)(22)【出願日】2019年8月29日

(86)【国際出願番号】US2019048788

(87)【国際公開番号】WO2020051058

(87)【国際公開日】20200312

【審査請求日】2020年7月7日

(31)【優先権主張番号】62/726,520

(32)【優先日】2018年9月4日

(33)【優先権主張国】US

【早期審査対象出願】

(73)【特許権者】

【識別番号】594197872

【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 浩

(74)【代理人】

【識別番号】100095360

【弁理士】

【氏名又は名称】片山 英二

(74)【代理人】

【識別番号】100120134

【弁理士】

【氏名又は名称】大森 規雄

(74)【代理人】

【識別番号】100209037

【弁理士】

【氏名又は名称】猪狩 俊博

(74)【代理人】

【識別番号】100104282

【弁理士】

【氏名又は名称】鈴木 康仁

(72)【発明者】

【氏名】ドゥラハム，ティモシー バレット

【審査官】 池上 佳菜子

(56)【参考文献】

【文献】 米国特許出願公開第２０１７／０１８３３２８（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 HUARD, Kim et al.，Discovery of Fragment-Derived Small Molecules for in Vivo Inhibition of Ketohexokinase(KHK)，Journal of Medicinal Chemistry，２０１７年 ８月３０日，vol.60, no.18，pp.7835-7849

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ ４０１／１４

Ａ６１Ｋ ３１／４４２７

Ａ６１Ｐ １／１６

Ａ６１Ｐ ３／１０

Ａ６１Ｐ ９／０４

Ａ６１Ｐ １３／１２

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

以下の式：

【化1】

（式中、ｎが１または２である）
の化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項2】

ｎが１である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項3】

前記化合物が、以下：

【化2】

の構造の化合物である、請求項２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項4】

ｎが２である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項5】

前記化合物が、以下：

【化3】

の構造の化合物である、請求項４に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項6】

前記化合物が、以下：

【化4】

の構造の化合物である、請求項５に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項7】

請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容できる担体、希釈剤、または賦形剤とともに含む、医薬品組成物。

【請求項8】

請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容できる担体、希釈剤、または賦形剤と混合することを含む、医薬品組成物の調製方法。

【請求項9】

請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、２型糖尿病を治療するための医薬品組成物。

【請求項10】

請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、心不全を治療するための医薬品組成物。

【請求項11】

請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、糖尿病性腎臓病を治療するための医薬品組成物。

【請求項12】

請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、非アルコール性脂肪肝炎を治療するための医薬品組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、新規なケトヘキソキナーゼ（ＫＨＫ）阻害剤化合物、これらの化合物を含む医薬品組成物、ならびに、２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）、心不全、糖尿病腎臓疾患および非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）のような、ある種の代謝状態の治療のための化合物の用途に関する。

【背景技術】

【0002】

代謝症候群は、一般に、栄養過多及び運動不足の生活様式を反映する状態の集合として定義され、その症状としては、Ｔ２ＤＭ、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、肥満、脂質異常症、心不全および腎臓疾患が挙げられる。

【0003】

Ｔ２ＤＭは、膵臓β細胞機能障害および標的器官におけるインスリン抵抗性に起因する相対的インスリン欠損症によって特徴付けられる。それは糖尿病患者の９０％より多くを占め、健康管理システムに多大な負担をかけながら患者に重大な心理的および肉体的苦痛を引き起こす微小血管および大血管合併症をもたらす（Ｄａｖｉｅｓ，Ｍ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．；Ｌａｎｃｅｔ，３８９，２２３９−２２５１，２０１７）。

【0004】

心不全は、休止時またはストレス時の心臓内圧力を上昇させる、または心拍出量を低下させる、構造的または機能的な心臓異常によって引き起こされる症候群である。心不全は、世界的に罹患率および死亡率の主要なおよび、増加しつつある原因である（Ｔｅｅｒｌｉｎｋ，Ｊ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．；Ｌａｎｃｅｔ，３９０，１９８１−１９９５，２０１７）。

【0005】

Ｔ２ＤＭを有する患者のほぼ半分に糖尿病性腎臓病が発症し、世界中で慢性腎臓病の主要な原因である．糖尿病に関連する代謝変化は、糸球体過剰濾過、進行性アルブミン尿、糸球体濾過速度の低下、および最終的に末期腎疾患をもたらす（Ａｌｉｃｉｃ，Ｒ．Ｚ．，ｅｔ ａｌ．；Ｃｌｉｎ．Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．，１２：２０３２−２０４５，２０１７）。

【0006】

ＮＡＦＬＤは、進行性ＮＡＳＨ、線維症、および最終的に肝細胞癌および肝不全にいたりえる、ある範囲の肝臓疾患を表す。次の２０年間で、ＮＡＦＬＤは、肝臓関連の罹患率および死亡率の主要な原因となりまた、肝臓移植のための主要な適用症となるだろうと見積もられている（Ｂｅｒｔｏｔ，Ｌ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．；Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．，１７（５），７７４，２０１６）。

【0007】

フルクトキナーゼとも呼ばれるＫＨＫは、フルクトース代謝に関与する律速酵素である。これは、フルクトースのフルクトース−１−リン酸（Ｆ１Ｐ）へのリン酸化を触媒し、これにより細胞ＡＴＰレベルの付随的な枯渇を引き起こす。グルコースとは対照的に、フルクトース代謝は、フィードバック阻害を欠いており、それは、例えば、脂質形成、グルコース新生および酸化的リン酸化に関与する、下流の中間体の蓄積を引き起こす。（Ｈａｎｎｏｕ，Ｓ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．；Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１２８（２），５４４−５５５，２０１８）。これは、多くの重篤な代謝障害に関連する不利な代謝的な結果を有する。

【0008】

ＫＨＫは、エキソン３が異なるＫＨＫ−ＣおよびＫＨＫ−Ａからなる２つの代替的にスプライシングされたイソ型で存在する。ＫＨＫ−Ｃは、主として、肝臓、腎臓および腸において発現され、一方ＫＨＫ−Ａは、より広く分布する。両方のアイソフォームを欠損したマウスは、フルクトース誘発性代謝症候群から完全に保護されている。しかし、ＫＨＫ−Ａのみを欠くマウスにおいては、有害な代謝作用が悪化する（Ｉｓｈｉｍｏｔｏ Ｔ，ｅｔ ａｌ．；Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０９（１１），４３２０−４３２５，２０１２）。

【0009】

いくつかの疫学的および実験的研究は、フルクトースの消費の増加、およびより正確には、フルクトース代謝の増加が、代謝症候群の発症において、特にＴ２ＤＭ（Ｓｏｆｔｉｃ ｅｔ ａｌ．；Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１２７（１１），４０５９−４０７４，２０１７）、心不全（Ｍｉｒｔｓｃｈｉｎｋ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．；Ｅｕｒ．Ｈｅａｒｔ Ｊ．，３９，２４９７−２５０５，２０１８），糖尿病性腎臓病（Ｃｉｒｉｌｌｏ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．；Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．，２０，５４５−５５３，２００９）、およびＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ（Ｖｏｓ，Ｍ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ．；Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，５７，２５２５−２５３１，２０１３）の発症に重要な役割を果たす可能性があることを報告している。ＫＨＫの標的阻害は、フルクトース代謝を制限し、多くの代謝性障害のための効果的な治療の選択肢を提供することが期待される。

【0010】

ＵＳ２０１７／０１８３３２８Ａｌは、ＫＨＫ阻害剤としての３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンを開示している。

【発明の概要】

【0011】

Ｔ２ＤＭ、心不全、糖尿病性腎臓病およびＮＡＳＨ等の、代謝症候群および関連する徴候のための代替的な治療の必要性が存在する。特に、これらの疾患の治療の選択肢を提供するために、ＫＨＫ阻害活性を有する化合物の必要性が存在する。さらに、経口生物学的利用能、毎日の投与量を裏付けるのに十分な半減期、または限定された薬物−薬物相互作用プロフィールのような、ヒトにおける治療的用途に重要である特性を有する、効能のあるＫＨＫ阻害剤の必要がある。

【0012】

したがって、本発明は、式Ｉ：

【化1】

（式中、ｎが１または２である）
の化合物またはその薬学的に許容される塩。

【0013】

式Ｉは、それらの全ての個々のエナンチオマーおよびジアステレオマー、並びにエナンチオマーの混合物及びラセミ体を含む。

【0014】

特定の実施形態において、本発明の化合物は、式：

【化2】

の化合物またはその薬学的に許容される塩である。

【0015】

一実施形態では、ｎは１である。この実施形態では、本発明の化合物は、式：

【化3】

の化合物またはその薬学的に許容される塩である。好ましい実施形態において、本発明の化合物は、式：

【化4】

の化合物またはその薬学的に許容される塩である。

【0016】

別の実施形態では、ｎは２である。この実施形態では、本発明の化合物は、式：

【化5】

の化合物またはその薬学的に許容される塩である。好ましい実施形態において、本発明の化合物は、式：

【化6】

の化合物またはその薬学的に許容される塩である。さらに好ましい実施形態において、本発明の化合物は、式：

【化7】

の化合物またはその薬学的に許容される塩である。この実施形態では，本発明の化合物は、２−［（３Ｒ）−１−［５−シアノ−６−［（２Ｓ）−２−メチルアゼチジン−ｌ−イル］−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ピロリジン−３−イル］酢酸またはその薬学的に許容される塩である。

【0017】

一実施形態において、本発明はまた、有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、そのような治療を必要とする患者のＴ２ＤＭを治療する方法を提供する。好ましい実施形態では、本方法は、２−［（３Ｒ）−１−［５−シアノ−６−［（２Ｓ）−２−メチルアゼチジン−１−イル］−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ピロリジン−３−イル］酢酸またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。

【0018】

一実施形態では、本発明は、また有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、そのような治療を必要とする患者の心不全を治療する方法を提供する。好ましい実施形態では、本方法は、２−［（３Ｒ）−１−［５−シアノ−６−［（２Ｓ）−２−メチルアゼチジン−１−イル］−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ピロリジン−３−イル］酢酸またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。

【0019】

一実施形態において、本発明はまた、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、そのような治療を必要とする患者の糖尿病腎臓疾患を治療する方法を提供する。好ましい実施形態では、本方法は、２−［（３Ｒ）−１−［５−シアノ−６−［（２Ｓ）−２−メチルアゼチジン−１−イル］−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ピロリジン−３−イル］酢酸またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。

【0020】

一実施形態では、本発明は、また有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、そのような治療を必要とする患者のＮＡＳＨを治療する方法を提供する。好ましい実施形態では、本方法は、２−［（３Ｒ）−１−［５−シアノ−６−［（２Ｓ）−２−メチルアゼチジン−１−イル］−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ピロリジン−３−イル］酢酸またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。

【0021】

一実施形態では、本発明はまた、有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、そのような治療を必要とする患者の慢性腎臓病を治療する方法を提供する。好ましい実施形態では、本方法は、２−［（３Ｒ）−１−［５−シアノ−６−［（２Ｓ）−２−メチルアゼチジン−１−イル］−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ピロリジン−３−イル］酢酸またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。

【0022】

一実施形態において、本発明は、代謝症候群、ＮＡＦＬＤ、肥満、糖尿病合併症、例えば糖尿病性網膜症、心血管疾患、冠状動脈疾患、および脂質異常症、からなる群から選択される疾患を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者において、有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む方法を、さらに提供する。好ましい実施形態では、本方法は、２−［（３Ｒ）−１−［５−シアノ−６−［（２Ｓ）−２−メチルアゼチジン−１−イル］−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ピロリジン−３−イル］酢酸またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。

【0023】

さらに、一実施形態では、本発明は、治療に使用するため、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。特定の実施形態では、本発明は、Ｔ２ＤＭの治療に使用するため、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。特定の実施形態では、本発明は、心不全の治療に使用するため、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。特定の実施形態において、本発明は、糖尿病腎臓疾患の治療に使用するため、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。特定の実施形態では、本発明は、ＮＡＳＨの治療に使用するため、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。特定の実施形態において、本発明はまた、慢性腎臓病の治療に使用するため、式Ｉの化合物または、その薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態において、本発明はまた、代謝症候群、ＮＡＦＬＤ、肥満、糖尿病合併症、例えば糖尿病性網膜症、心血管疾患、冠状動脈疾患、または脂質異常症、の治療に使用するため、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。好ましい形態において、上記治療用途における式Ｉの化合物は、２−［（３Ｒ）−ｌ−［５−シアノ−６−［（２Ｓ）−２−メチルアゼチジン−ｌ−イル］−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ピロリジン−３−イル］酢酸またはその薬学的に許容される塩である。

【0024】

さらに、一実施形態では、本発明は、Ｔ２ＤＭを治療するための医薬を製造するため、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の用途を提供する。一実施形態では、本発明は、心不全を治療するための医薬を製造するため、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容されるその塩の用途を提供する。一実施形態において、本発明は、糖尿病性腎臓病を治療するための医薬の製造のための、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の用途を提供する一実施形態では、本発明は、ＮＡＳＨを治療するための医薬の製造のための、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の用途を提供する。一実施形態において、本発明は、慢性腎臓病を治療するための医薬の製造のための、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の用途を提供する。一実施形態では、本発明はまた、代謝症候群、ＮＡＦＬＤ、肥満、糖尿病合併症、例えば糖尿病性網膜症、心血管疾患、冠状動脈疾患、または脂質異常症を治療するための、医薬の製造のための、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の用途を提供する。好ましい態様において、式Ｉの化合物は、２−［（３Ｒ）−ｌ−［５−シアノ−６−［（２Ｓ）−２−メチルアゼチジン−ｌ−イル］−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ピロリジン−３−イル］酢酸またはその薬学的に許容される塩である。

【0025】

一実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩、それと共に、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬品組成物を提供する。一実施形態において、本発明は、さらに式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を、１種以上の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と混合することを含む、医薬品組成物を調製するための方法を提供する。

【発明を実施するための形態】

【0026】

本明細書で使用される場合、「治療」または「治療すること」という用語は、既存の症状または障害の進行または重症度を抑制すること、遅延させること、停止させること、または逆転させることを含む。

【0027】

本明細書で使用されるとき、「患者」という用語は、哺乳動物をさす。好ましくは、患者はヒトである。

【0028】

本明細書で使用されるとき、用語「有効量」は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の量または用量を指し、これは、患者への単回または複数回の投与の際に、診断または治療中の患者に所望の効果を提供する。

【0029】

当業者であれば、公知の技術を用い及び類似の状況下で得られた結果を観察することにより、有効量を決定することができる。患者のための有効量を決定する際には、患者の人種；患者のサイズ、年齢、および健康状態全般；関与する特定の疾患または障害；疾患または障害の程度または関与度もしくは重症度；個々の患者の応答；投与される特定の化合物；投与の様式；投与される製剤の生物学的利用能特性；選択された投薬計画；併用薬の使用；ならびに他の関連する状況を含むがこれらに限定されない、多数の要因が考慮される。本発明の化合物は、体重１ｋｇあたり約０．１〜約１５ｍｇの範囲内に入る１日当たりの投薬量で有効である。

【0030】

本発明の化合物は、本化合物を生物学的に利用可能にする、いずれか経路によって投与される医薬品組成物として処方される。好ましくは、そのような組成物は経口投与用である。そのような医薬品組成物およびその調製方法は、当該技術分野において周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｊ．Ｐ．，“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”，Ｌ．Ｖ．Ａｌｌｅｎ，Ｅｄｉｔｏｒ，２２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２０１２、参照）。式Ｉの化合物およびその薬学的に許容される塩は、本発明の治療方法において特に有用であり、一定の構成が好ましい。

【0031】

式Ｉの化合物およびその薬学的に許容される塩は、本発明の治療方法において特に有用であり、一定の構成が好ましい。本発明の化合物の以下のリストは、そのような構成を述べる。これらの選択は、本発明の化合物、ならびに治療方法、治療用途および医薬品組成物に適用され得ることが理解されるであろう。

【0032】

本発明の化合物は、

【化8】

およびその薬学的に許容される塩を含む。

【0033】

本発明のさらなる化合物は、

【化9】

およびその薬学的に許容される塩を含む。

【0034】

本発明のさらなる化合物は、

【化10】

およびその薬学的に許容される塩を含む。

【0035】

本発明は、すべての個々のエナンチオマーおよびジアステレオマーならびに、ラセミ体等のそれらの混合物を意図するが、式Ｉａ、式ＩＩａおよびＩＩＩａ”の化合物、およびその薬学的に許容される塩が特に好ましい。

【0036】

本発明の化合物の合成において任意の好都合な点で、選択的結晶化技術、キラルクロマトグラフィー（例えば、Ｊ．Ｊａｃｑｕｅｓ，ｅｔ ａｌ．，”Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ”，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９８１，及びＥ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ ａｎｄ Ｓ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ，”Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４参照）または、超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）（例えば，Ｔ．Ａ．Ｂｅｒｇｅｒ；“Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ Ｆｌｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ｐｒｉｍｅｒ，”Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｊｕｌｙ ２０１５参照）のような方法によって、個々のエナンチオマーを当業者によって分離または分割することができる。

【0037】

本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、例えば、当該分野で周知の標準的条件下、適切な溶媒中で、本発明の化合物の適当な中性形態と適切な薬学的に許容される酸または塩基との反応により形成することができる（例えば、Ｂａｓｔｉｎ，Ｒ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．；Ｏｒｇ．Ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．，４，４２７−４３５，２０００およびＢｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．；Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，６６，１−１９，１９７７参照）。

【0038】

本発明の化合物またはその塩は、当技術分野の当業者に既知のさまざまな手順によって調製されてもよく、そのうちのいくつかが、以下のスキーム、調製法、および実施例で説明されている。以下のスキームにおける各ステップの生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、濾過、粉砕、および結晶化を含む、当技術分野で周知の従来の方法によって回収することできる。以下のスキームにおいて、すべての置換基は、別途指示のない限り、すでに定義されたとおりである。試薬および出発材料は、当業者にとって容易に入手可能である。本発明の範囲を限定することなく、以下のスキーム、調製物、および実施例は、本発明をさらに説明するために提供される。さらに、当業者は、当業者によって調製され得る、対応する所望の立体化学的配置を有する出発物質または中間体を使用することによって、式Ｉの化合物を合成できることができることを理解する。

【0039】

特定の略語は以下のように定義される。「ＡＢＴ」は、ｌ−アミノベンゾトリアゾールを意味する。「ＡＣＮ」は、アセトニトリルを意味する。「ＢＳＡ」は、ウシ血清アルブミンをする。「ＣＡＳ＃」は、ケミカルアブストラクト登録番号を意味する。「ＤＣＭ」は、塩化メチレンまたはジクロロメタンを意味する。「ＤＩＰＥＡ」は、ジイソプロピルエチルアミンを意味する。「ＤＭＥＭ」はダルベッコ改変イーグル培地を意味する。「ＤＭＳＯ」は、ジメチルスルホキシドを意味する。「ＥＬＳＤ」は、蒸発光散乱検出器を意味する。「ＥＳ／ＭＳ」は、エレクトロスプレー質量分析を意味する。「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを意味する。「ＥｔＯＨ」は、エタノールまたはエチルアルコールを意味する。「ＦＢＳ」はウシ胎仔血清を意味する。「ｈ」は時間を意味する。「ＨＰＬＣ」は高性能液体クロマトグラフィーを意味する。「Ｍｅ」は、メチルを意味する。「ＭｅＯＨ」は、メタノールを意味する。「ＭＴＢＥ」はメチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテルを意味する。；「ｍｉｎ」は分を意味する。「ｍ／ｚ」は質量対電荷の比率を意味する。「ＰＢＳ」は、リン酸緩衝生理食塩水を意味する。「Ｐｈ」はフェニルを意味する。「ＲＢＦ」は丸底フラスコを意味する。「ＲＴ」は室温を意味する。「ＳＣＸ」は選択的カチオン交換を意味する。「ＳＦＣ」は、超臨界流体クロマトグラフィーを意味する。「ＴＨＦ」は、テトラヒドロフランを意味する。

【0040】

【化11】

【0041】

スキーム１は、式Ｉの化合物の一般的な合成を示す。工程１では、３−シアノ−２、６−ジクロロ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン（１）および環状アミン（２）を、ＥｔＯＨまたはＭｅＯＨ中で、ＮａＨＣＯ_３、またはＤＩＰＥＡのような塩基の存在下で反応させて、アミノピリジン（３）を得る。あるいは、この工程のための反応溶媒はＤＣＭであってもよい。工程２では、化合物（３）を高温で、ＮａＨＣＯ_３、またはＤＩＰＥＡのよう塩基の存在下ＥｔＯＨまたはＭｅＯＨ中で、２−メチルアゼチジン（４）と反応させてジアミノピリジン（５）を得る。あるいは、この工程のための反応溶媒はＴＨＦであってもよい工程（３）では、ＭｅＯＨまたはＴＨＦ中でＮａＯＨまたはＬｉＯＨのような塩基を用いて、高温でエステル部分を加水分解して式Ｉａの化合物を得る。あるいは、この工程は、マイクロ波反応器中で同じ試薬を用いて実施することができる。

【実施例】

【0042】

調製物および実施例
以下の調製法および実施例は、本発明をさらに説明し、本発明の化合物の典型的な合成を表す。試薬および出発材料は、当業者によって容易に入手可能であるか、または容易に合成され得る。調製法および実施例は限定ではなく例示として説明され、当業者によりさまざまな変更が行われ得ることを理解すべきである。

【0043】

ＬＣ−ＥＳ／ＭＳは、ＡＧＩＬＥＮＴ（登録商標）ＨＰ１１００液体クロマトグラフィーシステムにおいて行われる。ＥＬＳＤを有していても有していなくてもよいＨＰＬＣに接続された質量選択性検出器四重極質量分析計において、エレクトロスプレー質量分析測定（正および／または負のモードで取得）が行われる。ＬＣ−ＭＳ条件（低ｐＨ）：カラム、ＰＨＥＮＯＭＥＮＥＸ（登録商標）ＧＥＭＩＮＩ（登録商標）ＮＸ Ｃ１８ ２．０ｘ５０ｍｍ３．０μｍ、１１０Å、グラジエント、１．５分で、５〜９５％Ｂ、次いで０．５分間、９５％Ｂ、カラム温度、５０℃＋／−１０℃、流速：１．２ｍＬ／分、１μＬ注入量、溶媒Ａ：０．１％ＨＣＯＯＨを含む脱イオン水、溶媒Ｂ、０．１％ギ酸を含むＡＣＮ、波長２００−４００ｎｍおよび２１２−２１６ｎｍ。ＨＰＬＣがＥＬＳＤを備えている場合、設定は、４５℃の蒸発器温度、４０℃のネブライザ温度、および１．６ＳＬＭのガス流速である。代替のＬＣ−ＭＳ条件（高ｐＨ）カラム、ＷａｔｅｒｓｘＢｒｉｄｇｅ（登録商標）Ｃｌ８カラム２．１×５０ｍｍ、３．５μｍ、グラジエントｌ．５分で５−９５％Ｂ、次いで９５％Ｂ、０．５０分間、カラム温度、５０℃＋／−１０℃、流速：１．２ｍＬ／分、注入量１μＬ、溶媒Ａ、１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３，ｐＨ９、溶媒Ｂ、ＡＣＮ、波長：２００−４００ｎｍおよび２ｌ２−２ｌ６ｎｍ、ＥＬＳＤのある場合、４５℃の蒸発器温度、４０℃のネブライザ温度および１．６０ＳＬＭガス流速である。

【0044】

調製物１
（２Ｓ）−ｌ−ベンズヒドリル−２−メチル−アゼチジン［（１Ｒ、４Ｓ）−７、７−ジメチル−２−オキソ−ノルボルナン−１−イル］メタンスルホン酸塩

【0045】

【化12】

【0046】

滴下漏斗、窒素注入口および温度計アダプタを備えた２０００ｍｌの３頸ＲＢＦを組み立てる。窒素で容器をパージし、（３Ｒ）−ブタン−１，３−ジオール（２５ｇ、２７７．４ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１２７ｍｌ、７３１ｍｍｏｌ）およびＡＣＮ（５５６ｍｌ）を加える。−３０℃に冷却する。無水トリフルオロメタンスルホン酸（１０１ｍＬ、６０１ｍｍｏｌ）を３時間かけて滴下し、内部温度を−３５〜−３０℃に維持する．添加終了後、−３５〜−３０℃で１０分間攪拌する。１５分間かけてＤＩＰＥＡ（１２７ｍＬ、７３１ｍｍｏｌ）を滴下し、内部温度を−３５〜−３０℃に維持する。添加終了後、−３５〜−３０℃で１０分間攪拌する。１５分間かけてＤＩＰＥＡ（１２７ｍＬ、７３１ｍｍｏｌ）を滴下し、内部温度を−３５〜−３０℃に維持する。添加終了後、−３５〜−３０℃で１０分間攪拌する。窒素下で別のフラスコ中で、アミノジフェニルメタン（４８．０ｍＬ、２７０ｍｍｏｌ）をＡＣＮ（４９．０ｍＬ、９３５ｍｍｏｌ）に溶解させ、得られた溶液を滴下漏斗に移す。内温が−２０〜−３５℃に維持されるように、アミン溶液を４０分かけて冷却したトリフレートに滴下する。添加終了後、−３５〜−３０℃で３０分間撹拌する。反応物を水浴に移し、３０分かけてゆっくりと加温する。浴を除去し、反応物を３０分かけて室温まで昇温させる。容器を加熱マントルに移し、反応物を４５℃まで３０分間加温し、次いでＲＴまで冷却する。得られた混合物を１２００ｍＬの水に注ぎ、トルエンで抽出する。（４００ｍＬ ｘ３）．抽出物を併せ、水、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し，無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し，ろ過しそしてロータリーエバポレーターで濃縮する。得られたものを真空下で一晩乾燥させる。残留物をＤＣＭ（４００ｍＬ）中に溶解させる。フリットロート上にシリカパッドを調製し、それを１：１ヘプタン／ＥｔＯＡｃで平衡化する。生成物溶液をシリカパッド上に加え、１６００ｍＬの１：１ヘプタン／ＥｔＯＡｃで洗浄する。濾液を濃縮して赤色油を得る。油をＭｅＯＨ（２５０ｍＬ）中に溶解し、フラスコを水浴（〜１０℃）に入れる。内部温度を２０℃未満に保ちながらＬ（−）−カンファースルホン酸（６１．６ｇ、２６５ｍｍｏｌ）を一部ずつ添加する。得られた混合物を１５分間攪拌し、次いでロータリーエバポレーターで濃縮して、褐色の泡状物質を得る。２時間、泡状物質を真空ポンプで乾燥する。１３０ｍＬのＤＣＭ中に泡状物質を溶解させる。滴下漏斗をフラスコに取り付ける。漏斗を使用して、１１００ｍＬのＥｔＯＡｃを攪拌中の溶液にゆっくりと添加する。得られた混合物を４０００ｍＬのビーカーに移し、大気に開放下一晩撹拌する。ビーカーを氷浴中で１０分間冷却する。最小量の氷冷ＥｔＯＡｃで真空濾過洗浄することにより、フリット漏斗に沈殿を回収する。フリット上の固体を２時間乾燥させる。得られた白色固体を最小量のＤＣＭに溶解し、２０００ｍＬのビーカーに移し、次いで、透明な溶液が曇ってくるまで、ＥｔＯＡｃでゆっくりと希釈する。この懸濁液を大気に開放しながら４時間攪拌する。フリット漏斗を用いて真空濾過により固体を集め、フリット上で一晩乾燥させて、標題化合物（１１１．８ｇ，２３８．０６ｍｍｏｌ，収率８６％）を白色固体として得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４０ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）：１０．５４−１０．４７（ｍ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，５Ｈ），７．４７−７．３７（ｍ，７Ｈ），５．８５（ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１Ｈ），４．６８−４．６１（ｍ，１Ｈ），３．９１−３．８３（ｍ，２Ｈ），３．３７（ｓ，８Ｈ），２．９９（ｄ，Ｊ＝１４．６Ｈｚ，１Ｈ），２．７７−２．６８（ｍ，１Ｈ），２．５１−２．４４（ｍ，４Ｈ），２．３０−２．１６（ｍ，２Ｈ），１．９１−１．８１（ｍ，２Ｈ），１．４２−１．２８（ｍ，３Ｈ），１．０８（ｓ，３Ｈ），１．０１（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），０．７７（ｓ，４Ｈ）；＞９８％ ｅｅ ［ＨＰＬＣ：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪ（１０ｃｍｘ ４．６ｍｍ，５μｍ），５ｍＬ／ｍｉｎ，４０℃定組成１０％ＥｔＯＨ（０．２％^ｉＰｒＮＨ_２）／ＣＯ_２］。

【0047】

調製物２
［（１Ｒ，４Ｓ）−７、７−ジメチル−２−オキソ−ノルボルナン−ｌ−イル］メタンスルホネート（２Ｓ）−２−メチルアゼチジン−ｌ−イウム塩

【0048】

【化13】

【0049】

２２５０ｍＬのＰａｒｒ容器に、２０重量％のＰｄ（ＯＨ）_２／カーボン（６．６２ｇ）を加える。ボトルを窒素でパージし、２５０ｍＬのＭｅＯＨを加える。得られた懸濁液に、２５０ｍＬのＭｅＯＨ中に溶解した（２Ｓ）−ｌ−ベンズヒドリル−２−メチル−アゼチジン［（１Ｒ、４Ｓ）−７、７−ジメチル−２−オキソ−ノルボルナン−ｌ−イル］メタンスルホン酸塩（１１１ｇ，２３６ｍｍｏｌ）をゆっくり加える。容器を密封する。窒素でパージし、続いて水素を加え、６０ｐｓｉに加圧する。ＲＴで１５時間、ＰＡＲＲシェーカー装置内で反応容器を激しく振とうする。容器を窒素でパージし、次いで、反応混合物をセライトのパッドを通して濾過し、ＭｅＯＨで洗浄する。濾液を濃縮して白色固体を得、真空下で乾燥させる。固体を７８０ｍｌの１：１のＭＴＢＥ／ＥｔＯＡｃ中に懸濁させ、混合物を６５℃に２０時間加熱し、次いでＲＴに冷却し、一晩攪拌する。濾過により固体を収集する。固体を３８０ｍＬのＭＴＢＥに懸濁させ、ＲＴで２４時間攪拌する。白色固体を濾過により回収して、標題化合物を得る（４１．５ｇ，１３６．７８ｍｍｏｌ，収率５８％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）：８．６８−８．５５（ｍ，１Ｈ），４．５１−４．４２（ｍ，１Ｈ），３．９１−３．７５（ｍ，１Ｈ），３．３６（ｓ，３Ｈ），２．９１（ｄ，Ｊ＝１４．６Ｈｚ，１Ｈ），２．６９−２．６１（ｍ，１Ｈ），２．５２−２．４６（ｍ，２Ｈ），２．２８−２．２２（ｍ，１Ｈ），２．１７−２．１０（ｍ，１Ｈ），１．９６（ｔ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），１．８９−１．７９（ｍ，１Ｈ），１．４３（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），１．３６−１．２６（ｍ，１Ｈ），１．０５（ｓ，２Ｈ），０．７５（ｓ，２Ｈ）。

【0050】

調製物３
メチル２−［（３Ｒ）−ｌ−［６−クロロ−５−シアノ−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ピロリジン−３−イル］アセテート

【0051】

【化14】

【0052】

ＲＢＦに、３−シアノ−２、６−ジクロロ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン（１２３ｍｍｏｌ、２９．６ｇ）およびＥｔＯＨ（２３０ｍＬ）を加える。混合物を０℃に冷却する。ＮａＨＣＯ_３（３６８ｍｍｏｌ，３１ｇ）を加え、続いて、ＥｔＯＨ（２３０ｍＬ）中のメチル（Ｒ）−ピロリジン−３−アセテート塩酸塩（２３ｇ，１２３ｍｍｏｌ）の溶液を加える。得られた混合物をＲＴまで一晩加温する。ロータリーエバポレーターで反応混合物を蒸発させて乾燥させる。水（２００ｍＬ）を添加し、ＭＴＢＥ（２×２００ｍＬ）で抽出する。抽出物を併せて蒸発乾固させる。ヘキサン／ＭＴＢＥを用いたシリカゲル上のクロマトグラフィー（グラジエント：２０−７０％）により精製して、標題化合物（３４．７ｇ、９９．８９ｍｍｏｌ、収率８１％）を白色固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３４８．０，３５０．０Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0053】

調製物４
メチル２−［（３Ｒ）−ｌ−［５−シアノ−６−［（２Ｓ）−２−メチルアゼチジン−ｌ−イル］−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ピロリジン−３−イル］アセテート

【0054】

【化15】

【0055】

ＲＢＦに、メチル２−［（３Ｒ）−ｌ−［６−クロロ−５−シアノ−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ピロリジン−３−イル］アセテート（２５．５ｇ、７３．３ｍｍｏｌ）、［（１Ｒ，４Ｓ）−７、７−ジメチル−２−オキソ−ノルボルナン−ｌ−イル］メタンスルホネート（２Ｓ）−２−メチルアゼチジン−ｌ−イウム塩（８８．０ｍｍｏｌ、２６．７ｇ）、ＭｅＯＨ（２５５ｍＬ）、およびＮａＨＣＯ_３（２２０ｍｍｏｌ、１８．５ｇ）を加える。６５℃で１６時間攪拌する。［（１Ｒ、４Ｓ）−７、７−ジメチル−２−オキソ−ノルボルナン−ｌ−イル］メタンスルホネート（２Ｓ）−２−メチルアゼチジン−１−イウム塩（２２．０ｍｍｏｌ、，６．６８ｇ）およびＮａＨＣＯ_３（１４７ｍｍｏｌ、１２．３ｇ）を添加し、３２時間攪拌を継続したロータリーエバポレーターで溶媒を除去する。残留物に水（３００ｍＬ）を加え、ＭＴＢＥで抽出する（２×２００ｍＬ）。抽出液を併せ、無水ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、シリカゲルを介して濾過し、濃縮乾固させて、標題化合物（２８．０ｇ、７３．２ｍｍｏｌ、収率９９％）を白色固体として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８３．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0056】

調製物５
メチル２−［ｌ−［６−クロロ−５−シアノ−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］アゼチジン−３−イル］アセテート

【0057】

【化16】

【0058】

３−シアノ−２、６−ジクロロ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン（５００ｍｇ，２．０３ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１５ｍＬ）の溶液に、ＮａＨＣＯ_３（０．５４９ｇ，６．５１ｍｍｏｌ）およびメチル２−（アゼチジン−３−イル）アセテートトリフルオロ酢酸塩（０．４９４ｇ，２．０３ｍｍｏｌ）を加える。混合物をＲＴで１６時間攪拌する。反応混合物を飽和ＮａＣｌ水溶液（３０ｍＬ）で希釈する。ＥｔＯＡｃで抽出する（２０ｍＬｘ３）。抽出液を併せ飽和ＮａＣｌ水溶液（３０ｍＬ）で．洗浄し，無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、ろ過し，そして濃縮する。シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（グラジエント０−３０％）により，石油エーテル中のＥｔＯＡｃで溶出して残留物を精製して、標題化合物（４７０ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ、６６％収率）を白色固体として得るＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）＝３３３．９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0059】

調製物６
メチル２−［ｌ−［５−シアノ−６−［（２Ｓ）−２−メチルアゼチジン−ｌ−イル］−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］アゼチジン−３−イル］アセテート

【0060】

【化17】

【0061】

メチル２−［ｌ−［６−クロロ−５−シアノ−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］アゼチジン−３−イル］アセテート（２００ｍｇ、０．５６９ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（６ｍＬ）の溶液に、ＮａＨＣＯ_３（０．１７３ｇ，２．０５ｍｍｏｌ）および［（１Ｒ、４Ｓ）−７、７−ジメチル−２−オキソ−ノルボルナン−ｌ−イル］メタンスルホネート（２Ｓ）−２−メチルアゼチジン−ｌ−イウム塩（０．１９４ｇ、０．６２６ｍｍｏｌ）を加える。混合物を８０℃で１６時間加熱する。水（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する（４０ｍＬｘ ３）。抽出液を併せ、飽和ＮａＣｌ水溶液（５０ｍＬ）で洗浄し無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、ろ過、濃縮する。シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（０％−ｌ０％、石油エーテル中ＥｔＯＡｃ）により残留物を精製して、標題化合物（１７６ｍｇ，０．４６ｍｍｏｌ，収率７７％）を白色固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８３．１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0062】

実施例１
２−［（３Ｒ）−ｌ−［５−シアノ−６−［（２Ｓ）−２−メチルアゼチジン−ｌ−イル］−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ピロリジン−３−イル］酢酸

【0063】

【化18】

【0064】

ＲＢＦに、メチル２−［（３Ｒ）−ｌ−［５−シアノ−６−［（２Ｓ）−２−メチルアゼチジン−ｌ−イル］−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ピロリジン−３−イル］アセテート（２６．５ｇ、６９．３ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（（２６５ｍＬ）および２Ｍ ＮａＯＨ水溶液（４１６ｍｍｏｌ，２０８ｍＬ）を添加する。混合物を６０℃で３時間攪拌し、ＲＴに冷却し、ロータリーエバポレーターでＭｅＯＨを除去する。濃縮ＨＣｌ水溶液を用いて水相をｐｈ３−４に酸性化する。ＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）で抽出する。有機層を水（２００ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４，で乾燥し、濾過し、濃縮して乾燥させて、標題化合物を白色泡状物質として得る（２２．５ｇ，６１．１１ｍｍｏｌ，収率８８％）ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３６９．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0065】

実施例２
２−［ｌ−［５−シアノ−６−［（２Ｓ）−２−メチルアゼチジン−ｌ−イル］−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］アゼチジン−３−イル］酢酸

【0066】

【化19】

【0067】

ＴＨＦ（５．００ｍＬ）と水（１．００ｍＬ）中のメチル２−［ｌ−［５−シアノ−６−［（２Ｓ）−２−メチルアゼチジン−ｌ−イル］−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］アゼチジン−３−イル］アセテート（１７６ｍｇ，０．４７８ｍｍｏｌ）の混合物へＬｉＯＨ（０．０４ｇ，０．９５５ｍｍｏｌ）を加える。得られた混合物をＲＴで２ｈ攪拌する。ＥｔＯＡｃ（４ｍＬ）で希釈し水層をＥｔＯＡｃで抽出する（２ｍＬｘ３）。有機抽出層を併せ、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し（３ｍＬｘ２）、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、濃縮し標題化合物を白色固体として得る（１２８ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ、収率７８％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）３５４．９［Ｍ＋Ｈ］＋。

【0068】

活性評価
ヒトＫＨＫ−Ｃ及びヒトＫＨＫ−Ａに関するＫＨＫ酵素活性評価
化合物の固有の効力は、Ｆ１Ｐの産生を測定する酵素アッセイを用いて測定することができる。化合物はＤＭＳＯ中で調製され、１０ポイントの濃度曲線で試験され、２０μＭ〜１．０ ｎＭの範囲で９６ウェルプレートに化合物の３倍の連続希釈を作成する。アッセイ緩衝液［５０ｍＭ４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−ｌ−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、１０ｍｍ塩化カリウム、１００ｍｍ塩化マグネシウム、２ｍＭトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、０．０１％ｎ−オクチルグルコシド］で酵素を調製し、ＲＴで１５分間化合物とインキュベートする。反応は、基質濃度のフルクトース（ＫＨＫ−Ｃアッセイ用の２５０μＭ、ＫＨＫ−Ａアッセイ用の１．２５ｍＭ）およびＡＴＰ（両イソ型について１５０μＭ）を含む１００μＬ容量で実施され、これをさらにＲＴで２０分間インキュベートする。次いで、反応は停止バッファー、０．２％ギ酸および１μｇ／ｍｌ^１３Ｃ_６−フルクトース−６−リン酸（^１３Ｃ_６−Ｆ６Ｐ）内部標準からなる、の添加によって停止される。プレートはＲａｐｉｄＦｉｒｅＭＳ分析まで−２０℃で貯蔵される。

【0069】

Ｆ１Ｐの定量のためのＲａｐｉｄＦｉｒｅ ＭＳ分析
３つのＨＰＬＣクォータナリポンプを有するＡｇｉｌｅｎｔ ３００ ＲａｐｉｄＦｉｒｅ自動抽出システム（Ａｇｉｌｅｎｔ，Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ））は、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）インターフェース源を備えたＡｇｉｌｅｎｔ ６４９５三連四重極質量分析計（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）に結合される。ＲａｐｉｄＦｉｒｅ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃシステムは、再使用可能なＲａｐｉｄＦｉｒｅ Ｃ１８（ｔｙｐｅ Ｃ）固相抽出（ＳＰＥ）カートリッジ（Ｇ９２０５）を備えている。

【0070】

溶媒Ａ、試料のローディングおよび洗浄に使用される，は酢酸を用いてｐＨ５．０にされた６ｍＭオクチルアミン（Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ １２９４９５０００）である。溶媒Ｂ、試料の溶出に使用される，０．１％ギ酸を含むＡＣＮ中の２０％水である。試料は、マルチウェルプレートから直接、真空下で収集ループ上へと１０μＬを吸引することによって連続的に分析される。１０μＬ の試料はＣ１８カートリッジへ充填され、そして１．２５ｍＬ／ｍｉｎの流速で溶媒Ａを使って、５０００ｍｓ間洗浄される。次いで、保持された検体を、溶媒Ｂを用いて、１．２５ｍＬ／分の流速で５０００ｍｓ間、質量分析計へ溶出させるシステムは、溶媒Ａを用いて、１．２５ｍＬ／分の流量で２０００ｍｓ間、再平衡化される。

【0071】

三連四重極質量分析計は、ＥＳＩ源を備え、分析物は、ネガティブモード［Ｍ−Ｈ］−で選択反応モニタリング（ＳＲＭ）を用いてモニターされる。Ｆ１Ｐはｍ／ｚ２５９．０２／９６．９で、及び^１３Ｃ_６−フルクトース−６−リン酸塩は、ｍ／ｚ２６４．９９／９７でモニターされる。内部標準として^１３Ｃ_６−フルクトース−６−リン酸塩を用いてＦ１Ｐの面積比値を計算する。

【0072】

実施例１と２の化合物は、主に下記のように試験された。

【0073】

【表1】

【0074】

これらの結果は、実施例１及び２の化合物がＫＨＫ−ＣとＫＨＫ−Ａの両方の酵素活性を阻害することを示す。

【0075】

ＫＨＫ細胞活性評価
細胞のＫＨＫによるフルクトースのＦ１Ｐへの変換の阻害について細胞アッセイを用いて、効力を測定することができる。ＨｅｐＧ２細胞を、９６ウェル細胞培養プレート上、増殖培地［ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）高グルコース、１０％熱不活化ウシ胎児血清（ＨＩ ＦＢＳ）、１×ペニシリン／ストレプトマイシン］中に加え、３７℃で、インキュベーター中で一晩付着させる。増殖培地を洗浄しＧｉｂｃｏ ＯｐｔｉＭＥＭ１低減血清培地、０．１％カゼイン、８．３３ｍＭ Ｄ−フルクトース−^１３Ｃ_６，、及び１００μＭ〜０．００５１μＭ までの範囲の濃度の化合物（１０−点濃度曲線）からなる評価用培地と置き換える。プレートは３７℃で３ｈインキュベートされる。その後評価用培地は、細胞ウェルから吸引される。次に、８０％メタノール，２ｍＭ酢酸アンモニウム，及び５０ｎｇ／ｍＬフルクトース−６−ホスフェート−^１３Ｃ_６からなる停止溶液が細胞に加えられる。プレートはＲａｐｉｄＦｉｒｅ ＭＳ分析（上記）まで−２０℃で貯蔵される。

【0076】

実施例１と２の化合物は、主に下記のように試験された。

【0077】

【表2】

【0078】

これらの結果は実施例１と２の化合物がフルクトースのＦ１Ｐへの代謝を阻害することを示す。

【0079】

薬物動態評価のためのタンデム質量分析を備えた液体クロマトグラフ（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）。内部標準および２５μＬ（齧歯類試料）または５０μＬ（非齧歯類試料）の血漿を含む１８０μＬのＭｅＯＨ：ＡＣＮ（１：１、ｖ／ｖ）を加えることによるタンパク質沈殿を用いて試料を抽出する。その後、試料をＭｅＯＨ：水（１：１，ｖ／ｖ）で希釈し、標準曲線の範囲内の濃度とする。希釈された試料は、ＴｕｒｂｏＩｏｎＳｐｒａｙに接続しかつ、陽イオンモードで操作される、Ｓｃｉｅｘ ＡＰＩ４０００三連四重極質量分析計（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ／ＭＤＳ；Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を用いたＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって分析される。分析物はＴｈｅｒｍｏ Ｂｅｔａｓｉｌ Ｃ１８ ５ｕｍ ２０Ｘ２．１ｍｍ Ｊａｖｅｌｉｎカラム（齧歯類試料）またはＡｄｖａｎｔａｇｅ ＥＣＨＩＥＬＯＮ Ｃ１８ ４ｕｍ ２０ｍｍｘ２．１ｍｍ ＩＤカラム（非齧歯類試料）を使ってクロマトグラフィーにより分離される。ＬＣ条件は水／１Ｍ 重炭酸アンモニウム，（２０００：１０，ｖ／ｖ）（移動相Ａ），及びＭｅＯＨ／Ｍ重炭酸アンモニウム，（２０００：１０，ｖ／ｖ）（移動相Ｂ）である。

【0080】

マウスにおける薬物動態
実施例１の処置におけるｉｎ ｖｉｖｏ薬物動態学的特性とＯＡＴＰ１Ａ／１Ｂトランスポーターの関与は、ＦＶＢ野生型マウスおよびＯＡＴＰ１Ａ／１Ｂノックアウトマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ ＃１０７０７）（絶食；ｎ＝４／遺伝子型）を使用して実証される。実施例１は、ビヒクル中で単回静脈投与される（ＩＶ；１ｍｇ／ｋｇ；ｖｏｌｕｍｅ ｏｆ １ｍＬ／ｋｇ）。動物ごとに、投与後０，０．０８，０．２５，０．５，１，２，４，８，１２，及び２４ｈで採血される。投与後２４ｈで肝臓、脾臓及び膵臓が摘出され，秤量され、および灌流される。実施例１の血漿及び組織濃度は上記のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法により決定される。

【0081】

ＦＶＢマウスでは，実施例１は５．４３時間の半減期，６．９１ｍＬ／ｈｒ／ｋｇの平均クリアランス，２．７４Ｌ／ｋｇの分布容量，６７．５の平均肝臓非結合分配係数（Ｋ_ｐｕｕ）を有する。ＯＡＴＰ１Ａ／１Ｂノックアウトマウスでは，実施例１は９．３６時間の半減期，１．３４ｍＬ／ｈｒ／ｋｇの平均クリアランス，０．９８６Ｌ／ｋｇの分布容量、２４．２の平均肝臓非結合分配係数（Ｋ_ｐｕｕ）を有する。このデータは、マウスにおける実施例１の肝臓取り込みにＯＡＴＰが関与し、このトランスポーターの関与がクリアランスに影響を及ぼすことを示している。

【0082】

イヌにおける薬物動態
実施例１のｉｎ ｖｉｖｏの薬物動態学的特性はビーグル犬を使って示される。（給餌，ｎ＝３−４）実施例１は、ビヒクル中で単回経口投与（経口３ｍｇ／ｋｇ、容量２ｍＬ／ｋｇ）または静脈投与（静注、１ｍｇ／ｋｇ、容量１ｍＬ／ｋｇ）される。各動物から投与後０，０．０３（静注群のみ），０．０８（静注），０．２５，０．５，１，２，４，８，１２，２４，３２（静注），４８（静注）、７２（静注）ｈに採血される。実施例１の血漿濃度は上記ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法により決定される。

【0083】

経口投与について，実施例１の平均半減期はｉｓ ６．９時間であり、生物学的利用能は〜９３％である。静脈投与について，実施例１の平均半減期は７．４時間であり、平均クリアランスは２．５２ｍＬ／ｈｒ／ｋｇであり低い分布容量（１．３３Ｌ／ｋｇ）を伴う。このデータは、イヌにおいて実施例１が低い総クリアランス、低い分布容量と高い経口生物学的利用能を有することを示す。

【0084】

ｉｎ ｖｉｖｏでの主要な排泄経路の特性が、胆管にカニューレを挿管（ＢＤＣ）したビーグル犬（給餌、ｎ＝３）を用いて示される。実施例１は、ビヒクル中で単回静脈投与（ＩＶ、１ｍｇ／ｋｇ、容量１ｍＬ／ｋｇ）される。投与後０，０．０３３，０．０８３，０．２５，０．５，１，２，４，８，１２，２４，３２，４８，７２ｈに各動物から採血される。投与後１，２，３，４，５，６，１２，１８，２４，３２，４８，７２ｈに各動物から胆液が採取される。投与後１２，２４，４８，７２ｈに採尿、および２４，４８，７２ｈに糞便が収集される。実施例１の血漿、胆液、尿および糞便中の濃度は上記ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法により決定される。

【0085】

実施例１の平均半減期は２．９時間、また平均クリアランス４．６９ｍＬ／ｈｒ／ｋｇであり、低い分布容量を伴う（０．５４６Ｌ／ｋｇ）。実施例１尿中濃度は無視でき、また静脈投与量の〜１０％は胆液に回収される。このデータは実施例１が低い腎臓及び胆液排泄を有することを示す。全体として、胆管にカニューレが挿管されたイヌの排泄半減期は、２．９ｈであり、処置されていないイヌで測定された半減期、７．４ｈｒより速く、腸肝循環を示唆している。

【0086】

カニクイザルにおける薬物動態
実施例１のｉｎ ｖｉｖｏ薬物動態特性が、カニクイザルを用いて示される。この化合物はビヒクルを用いて単回経口投与（経口、１０ｍｇ／ｋｇ、容量、５ｍＬ／ｋｇ）される。投与後０，０．２５，０．５，１，２，４，８，１２，２４，３２，４８，７２ｈで各動物から採血される。実施例１の血漿濃度は上記ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法により決定される。

【0087】

実施例１の平均半減期は１５．３時間である。このデータは、実施例１が、サルにおいて経口による生物学的な利用が可能であり、またゆっくりと排泄されることを示す。

【0088】

ヒト肝細胞における固有クリアランス（−／＋ＡＢＴ）
本方法は肝細胞における基質減少によるｉｎ ｖｉｔｒｏ代謝クリアランスを特定することを意図している。汎ＣＹＰ４５０酵素阻害剤、ＡＢＴの存在および非存在下でのインキュベーションを用いてＣＹＰを媒介した代謝の寄与を評価する。低温保存されたヒト肝細胞を３７℃で解凍し、スピンダウンし、肝細胞維持培地中で、１×１０^６生存細胞／ｍｌの密度まで再構成する。予め温められた９６ウェルプレートに対し、各ウェルに１９６μＬの肝細胞懸濁液を加える。細胞は、ＡＢＴ存在下及び非存在下で以下のように予備インキュベートされる。ＡＢＴ予備インキュベーションのため、２μＬの１００ｍＭ ＡＢＴ溶液が加えられる（ＡＢＴを含まない２μＬの培地が対照試料に加えられる），そしてプレートは一定の振とう（〜６００ｒｐｍ）を受けながら３７℃で３０分間インキュベーションされる。続いて、試験試料の３０μＭストック溶液、２μＬが加えられ、０，１５，３０，６０，１２０，２４０分に２０μＬが抜き取られ、内部標準を含むＡＣＮに移されて反応が停止される。４０００ｒｐｍで３０分遠心後，上澄液の濃度がＬＣ−ＭＳ／ＭＳで決定される。クリアランスが経過時間に対する残存化合物の％の傾きから計算される。

【0089】

ヒト肝細胞において、実施例１のクリアランスはＡＢＴにより〜１２％阻害され、これは、実施例１の肝臓クリアランスにおいてＣＹＰ酵素の関与が限定的であることを示唆する。

【0090】

ＯＡＴＰ１Ｂ１およびＯＡＴＰ１Ｂ３の阻害
ＯＡＴＰ１Ｂ１、ＯＡＴＰ１Ｂ３、およびベクターコントロール（ＶＣ）細胞が、１０％ＦＢＳ、５０μｇ／ｍＬゲンタマイシン、および５μｇ／ｍＬブラストサイジン（ｂｌａｓｔｉｃｉｄｉｎ）を加えたＤＭＥＭ中で加湿雰囲気、３７℃で５％ＣＯ_２中で培養される。この細胞が２４−ウェルＢｉｏＣｏａｔ Ｐｏｌｙ−Ｄ−リジンプレートに接種される。この細胞は、試験２４ｈ前に、添加物を加えたＤＭＥＭ中の５ｍＭブタン酸ナトリウムで処置される。細胞培養体は試験前に予め加温したＰＢＳで２度洗浄される。洗浄後、全ての種類の細胞が３７℃で３０分間、２００ｍＬ緩衝液、緩衝液に種々の濃度の試験試料を加えたもの、または適当な陽性対照を加えたものの中で培養される。予備データに基づき、ＯＡＴＰ１Ｂ１について０．０２５〜１２．５μＭの濃度、及びＯＡＴＰ１Ｂ３について、０．２０〜１００μＭ（名目値）が試験される。予備インキュベーションの開始時、５０μＬの緩衝液が抜き取られ、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ．によるウェル内の試験試料の濃度が決定される。予備インキュベーション後、緩衝液が除去される。２００μＬの基質溶液（１．４ｎＭの重水素化ロスバスタチンを含む４００ｎＭロスバスタチン総量）を加えて試験が開始される。インキュベーションは、阻害剤存在下または非存在下で行われる。各細胞系に使用される陽性対照阻害剤は、５０μＭリファマイシンＳＶである。３７℃で１分間実験を行い、反応を停止させ、ウェル当たり１０００μＬの氷冷ＰＢＳを加えて洗浄する。次いで各ウェルを吸引し、氷冷ＰＢＳでさらに２回洗浄する。各ウェル内の細胞を、ＰＢＳ中の４００μＬ１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００（容積）で溶解する。プレートの各ウェルから試料を採取し、放射能をカウントし、各ウェル内のタンパク質濃度をビシンコニン酸法により決定する。ＩＣ_５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを用いて、データを適合させて決定される。適合の前、名目濃度は実測濃度に変換される。

【0091】

実施例１は、ＯＡＴＰ１Ｂ１をＯＡＴＰ１Ｂ３よりも強力に阻害し、ＩＣ５０ｖａｌｕｅｓは、それぞれ０．１２および５．５μＭであった。
本発明は以下の態様を含みうる。
［１］以下の式：

【化20-1】

（式中、ｎが１または２である）
の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［２］ｎが１である、上記［１］に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［３］前記化合物が、以下：

【化20-2】

の構造の化合物である、上記［２］に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［４］ｎが２である、上記［１］に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［５］前記化合物が、以下：

【化20-3】

の構造の化合物である、上記［４］に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［６］前記化合物が、以下：

【化20-4】

の構造の化合物である、上記［５］に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［７］患者の２型糖尿病を治療する方法であって、有効量の上記［１］〜［６］のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を、前記治療が必要な患者に投与することを含む、方法。
［８］患者の心不全を治療する方法であって、有効量の上記［１］〜［６］のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を、前記治療が必要な患者に投与することを含む、方法。
［９］患者の糖尿病性腎臓病を治療する方法であって、有効量の上記［１］〜［６］のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を、前記治療が必要な患者に投与することを含む、方法。
［１０］患者の非アルコール性脂肪肝炎を治療する方法であって、有効量の上記［１］〜［６］のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を、前記治療が必要な患者に投与することを含む、方法。
［１１］治療に使用するための上記［１］〜［６］のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［１２］２型糖尿病の治療に使用するための上記［１］〜［６］のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［１３］心不全の治療に使用するための上記［１］〜［６］のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［１４］糖尿病性腎臓病の治療に使用するための上記［１］〜［６］のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［１５］非アルコール性脂肪肝炎の治療に使用するための上記［１］〜［６］のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［１６］上記［１］〜［６］のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容できる担体、希釈剤、または賦形剤とともに含む、医薬品組成物。
［１７］上記［１］〜［６］のいずれか１項の上記［に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容できる担体、希釈剤、または賦形剤と混合することを含む、医薬品組成物の調製方法。

【要約】

本発明は式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩、および２型糖尿病、心不全、糖尿病性腎臓病及び非アルコール性脂肪肝炎などの代謝状態を治療するための式Ｉの化合物の使用を提供する。
【化１】