特許 6814162 結腸に治療剤を送達するための組成物及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6814162

(24)【登録日】2020年12月22日

(45)【発行日】2021年1月13日

(54)【発明の名称】結腸に治療剤を送達するための組成物及び方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/58 20060101AFI20201228BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20201228BHJP

   A61K 9/06 20060101ALI20201228BHJP

   A61K 47/34 20170101ALI20201228BHJP

   A61K 47/24 20060101ALI20201228BHJP

   A61K 31/606 20060101ALI20201228BHJP

   A61K 31/635 20060101ALI20201228BHJP

   A61K 31/573 20060101ALI20201228BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/58

   A61P1/04

   A61K9/06

   A61K47/34

   A61K47/24

   A61K31/606

   A61K31/635

   A61K31/573

【請求項の数】16

【全頁数】12

(21)【出願番号】特願2017-558481(P2017-558481)

(86)(22)【出願日】2016年5月4日

(65)【公表番号】特表2018-515511(P2018-515511A)

(43)【公表日】2018年6月14日

(86)【国際出願番号】US2016030682

(87)【国際公開番号】WO2016179227

(87)【国際公開日】20161110

【審査請求日】2019年4月25日

(31)【優先権主張番号】62/156,682

(32)【優先日】2015年5月4日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】503115205

【氏名又は名称】ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー

(74)【代理人】

【識別番号】100139594

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 健次郎

(74)【代理人】

【識別番号】100185915

【弁理士】

【氏名又は名称】長山 弘典

(74)【代理人】

【識別番号】100090251

【弁理士】

【氏名又は名称】森田 憲一

(72)【発明者】

【氏名】シンハ，シダールタ ランジート

(72)【発明者】

【氏名】ラジャダス，ジャヤクマール

(72)【発明者】

【氏名】ハブテツィオン，アイーダ

(72)【発明者】

【氏名】パムナニ，ラビンダー ディー．

【審査官】 梅田 隆志

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００９−５４３８７３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１３−５４４７９５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 PLOS ONE, 2013, Vol.8, No.8，e71037

【文献】 Drug Dev. Ind. Pharm.，2001, Vol.27, No.4, pp.351-357

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３１／５８

Ａ６１Ｋ ９／０６

Ａ６１Ｋ ３１／５７３

Ａ６１Ｋ ３１／６０６

Ａ６１Ｋ ３１／６３５

Ａ６１Ｋ ４７／２４

Ａ６１Ｋ ４７／３４

Ａ６１Ｐ １／０４

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ａ）ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのブロックからなるポリマー混合物又はポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのブロックからなる非イオン性ブロックコポリマー；
（ｂ）リン脂質、又はリン脂質混合物；
（ｃ）コルチコステロイド；及び
（ｄ）水；
を含む、浣腸組成物であって、
前記の非イオン性ブロックコポリマー又はポリマー混合物の濃度が２００〜４００ｇ／Ｌであり；
前記のリン脂質又はリン脂質混合物の濃度が０．０４〜４ｇ／Ｌであり；
前記コルチコステロイドの濃度が０．０５〜５ｇ／Ｌであり；
体積の残りが水を含み、そして、
その結果、前記成分（ａ）〜（ｄ）を含むゲルが、３２〜３８℃のゲル転移温度を示す、前記浣腸組成物。

【請求項2】

（ａ）ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのブロックとからなるポリマー混合物又はポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのブロックからなる非イオン性ブロックコポリマー；
（ｂ）リン脂質、又はリン脂質混合物；
（ｃ）メサラジン、スルファサラジン、オルサラジン、及びバルサラジドから選択されるサリチル酸誘導体；及び
（ｄ）水；
を含む、浣腸組成物であって、
前記の非イオン性ブロックコポリマー又はポリマー混合物の濃度が、１００〜３００ｇ／Ｌであり；
前記のリン脂質又はリン脂質混合物の濃度が４〜４０ｇ／Ｌであり；
前記サリチル酸誘導体の濃度が５０〜１００ｇ／Ｌであり；
体積の残りが水を含み、そして、
その結果、成分（ａ）〜（ｄ）を含むゲルが、ゲル転移温度３２〜３８℃を示す、前記浣腸組成物。

【請求項3】

前記ブロックコポリマー及びポリマー混合物の少なくとも１つが、約４，０００ｇ／ｍｏｌのポリオキシプロピレン分子量及び約７０％のポリオキシエチレン含有量を有する、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのトリブロックコポリマーである、請求項１又は２に記載の浣腸組成物。

【請求項4】

前記ブロックコポリマー及びポリマー混合物の少なくとも１つが、約１，８００ｇ／ｍｏｌのポリオキシプロピレン分子量及び約８０％のポリオキシエチレン含有量を有する、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのトリブロックコポリマーである、請求項１又は２に記載の浣腸組成物。

【請求項5】

２５０〜３５０ｇ／Ｌの前記ブロックコポリマーを含む、請求項１に記載の浣腸組成物。

【請求項6】

１５０〜２５０ｇ／Ｌの前記ブロックコポリマーを含む、請求項２に記載の浣腸組成物。

【請求項7】

前記のリン脂質又はリン脂質混合物が、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）及び１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）のいずれか一方又は両方である、請求項１又は２に記載の浣腸組成物。

【請求項8】

前記コルチコステロイドが、ブデソニド、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、及びプレドニゾンから選択される、請求項１に記載の浣腸組成物。

【請求項9】

前記コルチコステロイドがブデソニド及びヒドロコルチゾンから選択される、請求項８に記載の浣腸組成物。

【請求項10】

前記コルチコステロイドがブデソニドである、請求項９に記載の浣腸組成物。

【請求項11】

（ａ）約４，０００ｇ／ｍｏｌのポリオキシプロピレン分子量及び約７０％のポリオキシエチレン含有量を有する、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとの２５０〜３５０ｇ／Ｌのトリブロックコポリマー；
（ｂ）ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）及び１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）の０．１〜１ｇ／Ｌの１：１混合物；
（ｃ）０．０５〜０．２ｇ／Ｌのブデソニド；及び
（ｄ）残りの水；
からなる、請求項１０に記載の浣腸組成物。

【請求項12】

前記サリチル酸誘導体がメサラジンである、請求項２に記載の浣腸組成物。

【請求項13】

（ａ）約４，０００ｇ／ｍｏｌのポリオキシプロピレン分子量及び約７０％のポリオキシエチレン含量を有する、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとの１５０〜２５０ｇ／Ｌのトリブロックコポリマー；
（ｂ）ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）と１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）との５〜２０ｇ／Ｌの１：１混合物；
（ｃ）６０〜８０ｇ／Ｌのメサラジン；及び
（ｄ）残りの水；
からなる、請求項１２に記載の浣腸組成物。

【請求項14】

総体積が６０ｍＬ〜１００ｍＬである、請求項１１又は１３に記載の浣腸組成物。

【請求項15】

前記浣腸組成物が組成物の前記ゲル転移温度より低い温度で投与される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の浣腸組成物。

【請求項16】

前記浣腸組成物が、投与される際に３０℃未満である、請求項１５に記載の浣腸組成物。

【発明の詳細な説明】

【連邦政府による資金提供を受けた研究】

【0001】

本発明は、国立衛生研究所から与えられた契約（ＤＫ００７０５６）に基づく政府の支援によりなされたものである。政府は本発明についての一定の権利を有する。

【技術分野】

【0002】

本発明は、コルチコステロイド又はサリチル酸誘導体を含有する浣腸組成物に関する。この組成物は、室温では液体であるが、体温ではゲルに変わる。これらは、炎症性腸疾患の治療に有用である。

【背景技術】

【0003】

炎症性腸疾患（ＩＢＤ：Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｂｏｗｅｌ Ｄｉｓｅａｓｅ）は、慢性の難治性の疾患であり、この疾患は、遺伝的に病気に罹りやすい個人における腸内細菌に対する過剰な免疫応答のせいであると考えられている。約１５０万人のアメリカ人が、クローン病（ＣＤ：Ｃｒｏｈｎ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ）又は潰瘍性大腸炎（ＵＣ：Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ Ｃｏｌｉｔｉｓ）のいずれかの炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を患っており、その罹患率は世界的に増加している。どちらの疾患も生涯にわたっており、そして、誘発及びその後の維持療法を必要とする疾患を再発する。ＩＢＤの患者は、しばしば、出血性の下痢や腹痛のような多くの衰弱症状を呈し、（特に制御できない疾患を伴う）結腸直腸癌のリスクが高くなる。

【0004】

全身性及び結腸粘膜に直接適用される局所性療法が存在する。抗ＴＮＦ剤、免疫調節剤、及びステロイドなどの現在の全身療法は、効果的であるが、感染及び悪性腫瘍のリスク増加を含む多くの既知及び潜在的な副作用を有する。直腸内に送達される局所療法は、全身性薬物と比較した場合に有効性及び副作用が少ないことを考慮すると、第一選択療法として推奨される。局所療法は、急性炎症の治療及び多くの患者の寛解の維持に有効である。実際、６６％のＵＣ患者及び１４％のＣＤ患者が、それぞれ、遠位結腸及び直腸のみに病気を有するので、ＩＢＤ患者の約半数が局所療法単独で有益である可能性がある。

【0005】

局所療法の主流は浣腸である。その利点にもかかわらず、活動性遠位大腸炎を有する患者（最も有益であろう患者）は、しばしば、緊急性／突発性のため、並びに推奨される投与及び時間枠（１日１回又は２回、１〜３時間保持）の間に液体溶液を保持することが緊急性／突発性に関連してできなくなるせいで、浣腸を許容することができない。治療剤の担体として、液体の浣腸は、炎症が存在し得る結腸のすべての領域に到達させるのに有効である。しかし、液状浣腸剤は、液体が存在すると直ちに排便するとの緊急の刺激があるため、患者が時間の経過とともに保持させることが最も困難となる。治療薬が担体としての浣腸液から消化管の粘膜壁に拡散する時間を最大限にするためには、流体の保持が重要である。必要な時間は、一般的に数時間であるが、液体浣腸中に腸から排泄させたいという刺激は通常直ぐ（５〜１０分）である。局所療法のための浣腸の代替としては、フォーム又は坐薬製剤が挙げられる。これらの選択肢は、維持を容易にする傾向にあるが、浣腸によって近づくことができる左結腸の近位領域には到達することができないという著しい欠点を有する。局所療法の有効性にもかかわらず、既存の選択肢に関連する不便さ及び不快感のせいで、付着させることは非常に低いままである。ＩＢＤ患者の現在の治療法は、特に有益ではあるが、改善（特に、近位結腸に関係する大腸炎用浣腸と同様に効果的であるが、より耐容性があり、低い全身性の副作用を維持する局所療法）の重要な余地が残っている。

【発明の概要】

【0006】

第一の観点において、本発明は、
（ａ）ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのブロックからなるポリマー混合物又は非イオン性ブロックコポリマー；
（ｂ）リン脂質、又はリン脂質の混合物；
（ｃ）コルチコステロイド；及び
（ｄ）水；
を含む、浣腸組成物であって、
非イオン性ブロックコポリマー又はポリマー混合物の濃度が２００〜４００ｇ／Ｌであり；
リン脂質又はリン脂質混合物の濃度が０．０４〜４ｇ／Ｌであり；
コルチコステロイドの濃度が０．０５〜５ｇ／Ｌであり（ここで、上記全濃度は、全組成物に対する濃度である）；
体積の残りが水を含み、そして、
その結果、成分（ａ）〜（ｄ）を含むゲルが、３２〜３８℃のゲル転移温度を示す、前記浣腸組成物に関する。

【0007】

第二の観点において、本発明は
（ａ）ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのブロックとからなるポリマー混合物又は非イオン性ブロックコポリマー；
（ｂ）リン脂質、又はリン脂質混合物；
（ｃ）サリチル酸誘導体；及び
（ｄ）水；
を含む、浣腸組成物であって、
前記非イオン性ブロックコポリマー又はポリマー混合物の濃度が、前記組成物の１００〜３００ｇ／Ｌであり；
前記リン脂質又はリン脂質混合物の濃度が４〜４０ｇ／Ｌであり；
前記サリチル酸誘導体の濃度が５０〜１００ｇ／Ｌであり；
体積の残りが水を含み、そして、
その結果、成分（ａ）〜（ｄ）を含むゲルが、３２〜３８℃のゲル転移温度を示す、前記浣腸組成物に関する。

【0008】

別の観点では、本発明は、前記の浣腸組成物を投与することを含む、炎症性腸疾患を治療する方法に関する。

【発明の詳細な説明】

【0009】

液体浣腸の保持と座薬及び泡の制限に関する既知の問題を考慮して、我々は、液体浣腸の利点（より近位の送達）を有するが、液体に関連する保持の問題がない熱感受性の浣腸組成物を開発した。簡潔に言えば、これは、室温（２３℃）に近い低い温度で液体であり、そして、次に、体温（３７℃）に近い温度で粘性ゲルに移行する組成物によって達成される。前記組成物の１つの成分は、親水性ポリエチレングリコールと疎水性ポリプロピレングリコールとのブロックからなる非イオン性界面活性剤コポリマーである。温度が上昇すると、コポリマーはミセルを形成し、より高温では、ポリマーゲルマトリックスを形成する。

【0010】

いくつかの実施態様における上記の浣腸組成物は、約４，０００ｇ／ｍｏｌのポリオキシプロピレン分子量及び約７０％のポリオキシエチレン含有量を有するか、又は約１，８００ｇ／ｍｏｌのポリオキシプロピレン分子量及び約８０％のポリオキシエチレン含有量を有する、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのトリブロックコポリマーを含む。そのようなＰＥＯ／ＰＰＯブロックコポリマーの市販品の例は、下記のとおりである。

【0011】

【表1】

【0012】

市販の材料は、適切な酸化防止剤をさらに含有することができる。上記の表は、http://www.newdruginfo.com/pharmacopeia/usp28/v28230/usp28nf23s0_m66210.htmから入手したものである。コポリマーは複合混合物であるので、それらは、「約」ｘの平均分子量、又は「約」ｙｇ／ｍｏｌの分子量、又は「約」７０％のＰＥＧ含有量を有するものとして通常記載される。当業者は、高い正確さは全く実用的ではなく、この文脈で「約」という用語の使用は明確であることを認識している。数値を割り当てる必要がある場合には、ほとんどの当業者は、平均分子量又は分子量に関して±４０％、モノマー含有量のパーセンテージに関して±５％を（上記の数字に基づいて）おそらく問題なく受け入れるであろう。ポロキサマー４０７は、平均分子量が約１２．５ＫＤａであり、そしてＰＥＯ／ＰＰＯ比が約２：１であるトリブロック（ＰＥＯ−ＰＰＯ−ＰＥＯ）コポリマーである（Ｂｏｈｏｒｑｕｅｚら、Ｊ Ｃｏｌｌｏｉｄ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ Ｓｃｉ １９９９；２１６：３４−４０）。

【0013】

最も好都合な実施態様（すなわち、冷凍を必要としない実施形態）では、転移温度の実用的な下限は約２５℃であり、他の転移温度としては、２６℃、２７℃、２８℃、２９℃、３０℃、３１℃、３２℃、３３℃、３４℃、３５℃又は３６℃が可能である。最適には、組成物は３７℃付近で粘性ゲルに移行する。ゲル形成の転移温度は、それを決定するために使用される測定システムにある程度依存すると考えられる。回転がゲル形成を妨害する場合には回転試験は明らかに転移温度を上昇させる可能性があるので、振動測定（例えば、ＨＡＡＫＥ ＲｈｅｏＳｔｒｅｓｓ ６０００、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）は、回転方法よりもわずかに低い温度及び鋭い曲線となる。本発明者らは、研究のために平行プレートレオメーターを使用したが、請求項を目的とするゲル転移で規定される温度は、振動測定によって、決定することができる。ゾル−ゲル転移温度は、１ラジアン／秒で振動測定を行い、温度を２℃／分で上昇させることによって決定する。ゾル−ゲル転移温度は、貯蔵弾性率（Ｇ’）を温度の関数としてプロットすることによって決定される。本発明の目的のために、貯蔵弾性率と温度との曲線の傾きを１Ｈｚで測定し摂氏１度につき５ｋＰａを超える温度として、ゲル転移温度を定義するであろう。

【0014】

いくつかの実施態様において、浣腸組成物は、１００〜４００ｇ／Ｌのコポリマーを含む。他の実施態様において、浣腸組成物は、１００〜３００ｇ／Ｌのコポリマーを含む。他の実施態様では、浣腸組成物は、２００〜４００ｇ／Ｌ、１５０〜２５０ｇ／Ｌ、２５０〜３５０ｇ／Ｌ、１００〜２００ｇ／Ｌ、２００〜３００ｇ／Ｌ、３００〜４００ｇ／Ｌ、１００〜１５０ｇ／Ｌ、１５０〜２００ｇ／Ｌ、２００〜２５０ｇ／Ｌ、２５０〜３００ｇ／Ｌ、３００〜３５０ｇ／Ｌ、又は３５０〜４００ｇ／Ｌである。

【0015】

いくつかの実施態様において、リン脂質又はリン脂質の混合物は、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ：ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）及び１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ：１，２−ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ）のいずれか一方又は両方である。好ましいリン脂質は、グリセロリン脂質（例えば、ホスファチジン酸、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルコリン（レシチン）、ホスファチジルセリン及びホスホイノシチド）である。ホスファチジルコリンが、特に好ましい。

【0016】

いくつかの実施態様において、コルチコステロイドは、ブデソニド、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、及びプレドニゾンから選択される。いくつかにおいて、コルチコステロイドはブデソニド及びヒドロコルチゾンから選択される。下記の実施例では、コルチコステロイドは、ブデソニドである。

【0017】

一実施態様では、浣腸組成物は３０℃未満で投与される。別の実施態様では、浣腸組成物は２５℃未満で投与される。

【0018】

極めて特定の実施態様では、浣腸組成物は、実質的に、
（ａ）約４，０００ｇ／ｍｏｌのポリオキシプロピレン分子量及び約７０％のポリオキシエチレン含有量を有する、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとの２５０〜３５０ｇ／Ｌのトリブロックコポリマー；
（ｂ）ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）と１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）との０．１〜１ｇ／Ｌの１：１混合物；
（ｃ）０．０５〜０．２ｇ／Ｌのブデソニド；及び
（ｄ）残りの水；
からなる。
いくつかの実施態様において、サリチル酸誘導体は、メサラジン、スルファサラジン、オルサラジン、及びバルサラジドから選択される。メサラジンが好ましい。メサラジン（ＩＮＮ、ＢＡＮ）は、メサラミン（ＵＳＡＮ）又は５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）としても知られている。

【0019】

極めて特定の実施態様では、浣腸組成物は、実質的に
（ａ）約４，０００ｇ／ｍｏｌのポリオキシプロピレン分子量及び約７０％のポリオキシエチレン含量を有する、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとの１５０〜２５０ｇ／Ｌのトリブロックコポリマー；
（ｂ）ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）と１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）との５〜２０ｇ／Ｌの１：１混合物；
（ｃ）６０〜８０ｇ／Ｌのメサラジン；及び
（ｄ）残りの水；
からなる。

【0020】

本発明の組成物はゲルであるので、その組成物は、噴射剤（例えば、炭化水素ガス）を含まず、そして、発泡体に必要であるが、ゲルには不必要な成分を含まない。本願明細書において記載されている組成物は、通常、発泡安定剤及び発泡剤（例えば、ナトリウムラウリル硫酸エステル、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ヤシ油、カラギナン、ステアリン酸モノエタノールアミン、トラガカントゴム、アルギン酸塩、ゼラチン、ＣＭＣナトリウム、ポリビニルグリコール、グリセロール、ソルビトール、硬化ヒマシ油、ポリソルベート２０、コカミドプロピルベタイン、及びカプリル酸／カプリン酸グリセリド）を含まない。他の療法と比較して、より高い快適性及びより大きな体積を収容する性能が、投与スケジュールをより少なくするために更に提供されてもよい。

【0021】

結腸内に保持される浣腸組成物の能力を試験するために、３％メチレンブルーを本明細書に記載の製剤に加え、そして浣腸がＣ５７ＢＬ／６マウスに投与された。メチレンブルーを含有する本発明の組成物は、従来の液体浣腸溶液中におけるメチレンブルーより明らかに良好に保持されていた。

【0022】

ブデソニド（ｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅ）［ブデソニド、ポリマー（ｐｏｌｙｍｅｒ）、脂質（ｌｉｐｉｄ）については「ＢＰＬ」と称する］を有する組成物は、本発明に従って調製した。
含有量：
１０ｍｇのブデソニド（０．１ｍｇ／ｍＬ）、３０ｇのポロキサマー（Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）４０７（３０％溶液）、２０ｍｇのＤＳＰＣ（０．２ｍｇ／ｍＬ）及び２０ｍｇのＤＰＰＣ（０．２ｍｇ／ｍＬ）。
方法：
ＤＰＰＣ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）（２０ｍｇ）及びブデソニド（１０ｍｇ）を、丸底フラスコ中に５ｍＬのエタノールを溶解した。溶媒をロータリーエバポレーターで蒸発させて、フラスコの内面に薄膜を形成させた。フィルムを水（２０ｍＬ）に懸濁して、３０分間超音波処理してリポソーム溶液を得た。これにポロキサマー３０ｇを添加し、４℃の水で１００ｍＬまで体積を調製した。これを３０分間攪拌し、遠心分離によってトラップした気泡を除去し、均質な溶液が得られるまで撹拌を続けた。ブデソニドを十分な溶液に溶解して０．１ｍｇ／ｍＬの濃度を得た。

【0023】

また、メサラジン（ｍｅｓａｌａｚｉｎｅ）［メサラジン、ポリマー、脂質について「ＭＰＬ」と称する］を有する組成物も調製した。
方法：
リン脂質１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）（５０ｍｇ）、（ＣｏｒｄｅｎＰｈａｒｍａ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）（５０ｍｇ）、（Ｃｏｒｄｅｎ Ｐｈａｒｍａ）及びメサラジン（６６７ｍｇ）（ＡＫ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を丸底フラスコ中の３０ｍＬのエタノールに溶解した。エタノールをロータリーエバポレーターで蒸発させて、フラスコの内面に薄膜を形成した。フィルムを水（３．５ｍＬ）に懸濁し、３０分間超音波処理して均質なリポソーム溶液を得た。次に５ｍＬの水中に２ｇのポロキサマーを含む溶液を４℃でリポソームに添加した。混合物を３０分間撹拌し、トラップした気泡をＨｅｒａｅｕｓ Ｌａｂｏｆｕｇｅ−４００遠心分離機で６００×ｇでの遠心分離によって除去した。水（〜１ｍＬ）を４℃で添加して、最終体積を１０ｍＬとし、６７ｍｇ／ｍＬの濃度を得た。均質な溶液（メサラジン−ポロクサマー−脂質、ＭＰＬ）が得られるまで、撹拌を４℃で続けた。最終溶液は、メサラジン（６７ｍｇ／ｍＬ）、リン脂質（１０ｍｇ／ｍＬ）、及びポロキサマー（２０％ｗ／ｖ）を水中に含有していた。

【0024】

リン脂質１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）（５０ｍｇ）、（ＣｏｒｄｅｎＰｈａｒｍａ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）（５０ｍｇ）、（ＣｏｒｄｅｎＰｈａｒｍａ）、及びメサラジン（６６７ｍｇ）（ＡＫ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を丸底フラスコ中のエタノール３０ｍＬに溶解した。エタノールをロータリーエバポレーターで蒸発させて、フラスコの内面に薄膜を形成した。フィルムを水（３．５ｍＬ）に懸濁し、３０分間超音波処理して均質なリポソーム溶液を得た。次に、５ｍＬの水中に２ｇのポロキサマーを含む溶液を４℃でリポソームに添加した。混合物を３０分間撹拌し、トラップした気泡をＨｅｒａｅｕｓ Ｌａｂｏｆｕｇｅ−４００遠心分離機で６００×ｇでの遠心分離によって除去した。水（〜１ｍＬ）を４℃で添加して最終体積を１０ｍＬとし、６７ｍｇ／ｍＬの濃度を得た。均質な溶液（メサラジン−ポロクサマー−脂質、ＭＰＬ）が得られるまで、撹拌を４℃で続けた。最終溶液はメサラジン（６７ｍｇ／ｍＬ）、リン脂質（１０ｍｇ／ｍＬ）及びポロキサマー（２０％ｗ／ｖ）を水中に含有していた。

【0025】

また、総体積６０ｍＬ中の６．６％メサラジンを有する別のメサラジン組成物も調製した。
方法：
１０ｇのポロキサマー４０７（０．７９ｍｍｏｌ）を６０℃でそのまま溶融し、０．３ｇのＤＳＰＣ（０．７７ｍｍｏｌ）を添加し、続いて０．３ｇのＤＰＰＣ（０．４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を撹拌し、４ｇの５−アミノサリチル酸（２６．１２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を機械的に約１時間撹拌し、次いで４℃に冷却した。６０ｍＬの脱イオン水を加え、混合物を４℃で一晩撹拌した。得られた液体は、３２〜３３℃の転移温度を示した。

【0026】

前述の製剤は、同じ総質量の製剤（メサラジンについては４ｇ、ブデソニドについては６ｍｇ）で１００ｍＬの総体積に拡張することができる。もちろん、濃度は１００ｍＬの溶液中ではより低いが、依然として有効である。メサラジンについては、濃度は４０ｍｇ／ｍＬであり、ブデソニドについては０．０６ｍｇ／ｍＬである。

【0027】

本発明者らは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて、確立された大腸炎モデル、硫酸デキストランナトリウム（ＤＳＳ）（経口投与）モデルにおいてＢＰＬの動物研究を行った。ＤＳＳを飲料水に加え、０日目から開始して毎日与えた。マウスは、４日目及び６日目に浣腸処置を行った。体重は、大腸炎モデルにおける治療反応を決定するために最も一般的に使用される測定基準の１つである。ＢＰＬグループは、元の体重と比較して体重減少が少ないことからも分かるように、水及びポリマーコントロールに対して改善を示し、更にブデソニド液（ＢＬ）を超える改善を示した。これらの結果は、合計５０匹のマウスにおける２つのさらなる実験において再現された。体重に加えて、全てのマウスにおける処置後の結腸の長さも測定した。ＢＰＬで治療したマウスは、他の治療群及びコントロール群と比較して、（良好に形成された便ペレットを伴う）より長い結腸を有していた。取り出されたマウス結腸の切片の組織病理学は、他の群と比較して、ＢＰＬマウスにおける白血球浸潤の減少及びより保存された上皮構造を示した。

【0028】

次に、標準液体処理浣腸（ＢＬ）と比較してＢＰＬの保持動力学及び近位分布を確立するための実験を行った。ＢＰＬを有する浣腸がＢＬと同様の近位分布を有することを確認するために、健康なマウスとＤＳＳ誘発大腸炎マウスとの両方に対して、バリウムコントラストを有する標準化された浣腸を行った。次いで、マウスを、所定の間隔（０．５，１．５及び３時間）でコンピュータ断層撮影法で画像化して、浣腸によって到達される最大の逆行距離を評価した。ＢＰＬは、健康なマウス及び大腸炎のマウスの両方において、ＢＬよりも実際に良好な逆行分布を有することが示された。さらに、ＢＰＬ対ＢＬの可能性のある粘膜付着性を決定するために、我々は、同じ所定の間隔で保持される浣腸体積を評価するために３−Ｄイメージングソフトウェアを利用した。また、測定された全ての時点で保持された浣腸体積は、健常マウス及び大腸炎のマウスの両方においてＢＬよりもＢＰＬが実質的に大きかった。

【0029】

ＢＰＬによる実験と同様に、ＭＰＬ製剤は、元の体重と比較して体重の減少が少ないことからも分かるように、水及びポリマーコントロールに対して改善を示し、更にメサラジン液体（ＭＬ）を超える改善を示した。これらの結果は、合計３３匹のマウスを用いたさらなる実験において再現された。ＭＰＬで処置したマウスは、他の処置及びコントロール群と比較して、より長い結腸を有していた。外植されたマウス結腸の切片の組織病理は、他の群と比較して、ＭＰＬマウスにおいてより健康な粘膜を示した。

【0030】

大腸炎を治療する際の治療の頑健性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）をさらに試験するために、別の一般的に使用されるＩＢＤ大腸炎モデル−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）誘発急性大腸炎モデルもＢａｌｂ／ｃマウスにおいて、本明細書に記載の組成物を試験するために使用した。我々は、ＢＰＬ対ＢＬ及び水コントロールを試験した。また、ＢＰＬ群は、ＴＮＢＳ浣腸を受けて、次に一回の治療又は水浣腸を受けた後において、他の２つの群よりも早く体重を回復した。この実験は矛盾の無い結果で繰り返された。

【0031】

上記で特に言及した成分に加えて、本発明の製剤は、医薬ゲルの分野において従来使用されている他の薬剤を含むことができることを理解すべきである。

【0032】

本明細書において、用語「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「緩和する（ｐａｌｌｉａｔｉｎｇ）」、又は「改善する（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｎｇ）」は、治療効果及び／又は予防効果に限定されないものを含む、有益な又は所望の結果を得るためのアプローチを指している。患者が依然として基礎障害を患っているにもかかわらず、改善が患者において観察されるような基礎疾患に関連する１以上の生理学的症状の根絶又は改善によって、治療効果が達成される。組成物は、炎症性腸疾患の診断が行われていない場合でも、炎症性腸疾患に関する１以上の生理学的システムを示す患者に投与することができる。

【0033】

材料及び方法

【0034】

Ｃ５７ＢＬ／６マウスをＴａｃｏｎｉｃ（Ｈｕｄｓｏｎ、ＮＹ）から購入し、実験の１週間前に飼育した。Ｂａｌｂ／ｃマウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）から購入し、ＴＮＢＳ大腸炎研究のために大学内で飼育した。動物のケア及び使用は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈガイドラインに準拠し、スタンフォード大学の機関動物保護及び使用委員会によって承認されていた。

【0035】

コポリマーサーモゲルに関するせん断弾性率及び粘度は、平行プレート形状で正確な温度制御のためのオーブンを備えたＡｒｅｓ（登録商標）レオメータ（Ｒｈｅｏｍｅｔｒｉｃ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（登録商標））で測定した。１％の一定の歪みを維持しながら、周波数走査測定（０．５〜２００ラジアン／秒）を各温度に対して行った。

【0036】

実験の間、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに２％（ｗ／ｖ）デキストラン硫酸ナトリウム塩（３６，０００−５０，０００Ｍ．Ｗ．；ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ，ＬＬＣ；Ｓｏｌｏｎ、ＯＨ）を飲料水中で与えた。マウスの体重を毎日測定し、血便、下痢、及び一般的な健康問題の有無を評価した。治療（ＢＰＬ、ＢＬ）及びコントロール（水、ポリマーのみ）の浣腸は、４日目及び６日目に行った。イソフロランで麻酔をかけたマウスに、２３Ｇ針及びポリエチレンチューブ（０．０４８Ｏ．Ｄ．ｉｎ）を取り付けた１ｍＬ Ｌｕｅｒ Ｌｏｃｋシリンジを介して、指示された溶液１５０μＬを直腸に投与した。この際、チューブを〜２ｃｍ挿入した。瀕死又はそれらの体重減少が２０％を超えた場合、動物は９日目以前に屠殺した。

【0037】

Ｂａｌｂ／ｃマウスをケタミンで麻酔し、ＴＮＢＳ大腸炎の誘導において先に記載したように、１００μＬ体積中の２ｍｇのピクリルスルホン酸（２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸溶液；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ；Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）で直腸処置した。コントロールマウスに１００μＬのビヒクル（４０％エタノール）を与えた。翌日（１日目）、マウスをイソフルランで麻酔し、ＤＳＳ結腸炎モデルと同様に、処置又はコントロールに浣腸１５０μＬを与えた。動物の体重を測定し、毎日評価し、体重の２０％減少時又はその減少以前に屠殺した。

【0038】

組織学的評価のために、最も遠位の１ｃｍ結腸セグメントをヘマトキシリン及びエオシン染色のために、１０％ホルマリン緩衝液で固定し、パラフィン包埋し、そして切片化した。病理組織学は、Ｏｓｔａｎｉｎらの「慢性大腸炎のＴ細胞移入モデル：概念、考察、及び要領」（Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ．Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ａｎｄ ｌｉｖｅｒ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ２９６，Ｇ１３５−１４６（２００９））で記載されたように、ブラインド法で採点された。

【0039】

統計分析は、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を用いて行い、使用された統計学的試験を図に示し、ｐ値は０．０５未満を有意と見なした。

【0040】

ＣＴイメージングのために、２％（ｗ／ｖ）ＤＳＳを含有する水をＣ５７ＢＬ／６マウスに与え、そして、（血便が明らかである場合の）６日目に、１５０μＬのＢＰＬ、又は５％（ｖ／ｖ）バリウム硫酸塩懸濁液（ＥＺ−ＥＭ，Ｉｎｃ．；Ｌａｋｅ Ｓｕｃｃｅｓｓ、ＮＹ）を含有するＢＬ浣腸を行った。浣腸チューブを、０．５〜１．０ｃｍの間の挿入で標準化された様式で挿入した。動物は、Ｉｎ−Ｖｉｖｏ Ｉｍａｇｉｎｇ（Ｓｔａｎｆｏｒｄ、ＣＡ）におけるスタンフォード・イノベーションセンターで、大型フィールドＣＴスキャナー（Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ＵＳＡ，Ｉｎｃ．、Ｈｏｆｆｍａｎ Ｅｓｔａｔｅｓ、ＩＬ）を有するＩｎｖｅｏｎ ＰＥＴ−ＣＴで画像化された。逆行距離及び浣腸体積を計算した。

【0041】

動物研究は、局所的に適用された腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α阻害剤が、動物モデルにおいて大腸炎の重篤度を改善することを示唆している。適切な濃度の（ＴＮＦ）−αは、ブデソニド及びメサラジンのものと同様に処方され得る。

【0042】

本発明は、多くの異なる形態で実施可能であるが、本発明の好ましい実施形態が示されている。しかしながら、本開示は、本発明の原理の例示として考慮されるべきであり、本発明を図示の実施形態に限定することを意図するものではないことを理解されるであろう。