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特許6817287キラルジアリール大環状分子及びその使用

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6817287

(24)【登録日】2020年12月28日

(45)【発行日】2021年1月20日

(54)【発明の名称】キラルジアリール大環状分子及びその使用

(51)【国際特許分類】

A61K 31/529 20060101AFI20210107BHJP

A61P 43/00 20060101ALI20210107BHJP

A61P 35/00 20060101ALI20210107BHJP

A61P 17/06 20060101ALI20210107BHJP

A61P 19/02 20060101ALI20210107BHJP

A61P 29/00 20060101ALI20210107BHJP

A61P 7/00 20060101ALI20210107BHJP

A61P 1/04 20060101ALI20210107BHJP

A61P 25/02 20060101ALI20210107BHJP

A61P 35/02 20060101ALI20210107BHJP

【ＦＩ】

A61K31/529

A61P43/00 111

A61P43/00 105

A61P35/00

A61P17/06

A61P19/02

A61P29/00 101

A61P7/00

A61P1/04

A61P25/02

A61P35/02

【請求項の数】65

【全頁数】88

(21)【出願番号】特願2018-502668(P2018-502668)

(86)(22)【出願日】2016年7月20日

(65)【公表番号】特表2018-524382(P2018-524382A)

(43)【公表日】2018年8月30日

(86)【国際出願番号】US2016043132

(87)【国際公開番号】WO2017015367

(87)【国際公開日】20170126

【審査請求日】2019年7月19日

(31)【優先権主張番号】62/195,081

(32)【優先日】2015年7月21日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】62/302,231

(32)【優先日】2016年3月2日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】516221454

【氏名又は名称】ターニング・ポイント・セラピューティクス・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＴｕｒｎｉｎｇＰｏｉｎｔＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．

(74)【代理人】

【識別番号】100101454

【弁理士】

【氏名又は名称】山田卓二

(74)【代理人】

【識別番号】100156144

【弁理士】

【氏名又は名称】落合康

(72)【発明者】

【氏名】ジンロン・ジーン・ツイ

(72)【発明者】

【氏名】イーシャン・リー

(72)【発明者】

【氏名】エバン・ダブリュー・ロジャーズ

(72)【発明者】

【氏名】ダヨン・ジャイ

(72)【発明者】

【氏名】ウェイ・デン

(72)【発明者】

【氏名】ジョンドン・ホアン

【審査官】梅田隆志

(56)【参考文献】

【文献】特許第６４９０７１３（ＪＰ，Ｂ２）

【文献】特表２０１２−５３２８８８（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１５−５０９５３４（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１４−５２１７５０（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ３１／５２９

Ａ６１Ｐ１／０４

Ａ６１Ｐ７／００

Ａ６１Ｐ１７／０６

Ａ６１Ｐ１９／０２

Ａ６１Ｐ２５／０２

Ａ６１Ｐ２９／００

Ａ６１Ｐ３５／００

Ａ６１Ｐ３５／０２

Ａ６１Ｐ４３／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

（７Ｓ，１３Ｒ）−１１−フルオロ−７，１３−ジメチル−６，７，１３，１４−テトラヒドロ−１，１５−エテノピラゾロ［４，３−ｆ]［１，４，８，１０]ベンゾキサトリアザシクロトリデシン（ｂｅｎｚｏｘａｔｒｉａｚａｃｙｃｌｏｔｒｉｄｅｃｉｎ）−４（５Ｈ）−オン、又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む、患者の疾患を治療するための医薬組成物であって、前記疾患が、ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、ＴＲＫＣ、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＳＲＣ、ＦＹＮ、ＬＹＮ、ＹＥＳ、ＦＧＲ、ＦＡＫ、ＡＲＫ５、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるチロシンキナーゼによって媒介されるものである、医薬組成物。

【請求項2】

前記疾患が、受容体チロシンキナーゼによって媒介される、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項3】

前記受容体チロシンキナーゼが、ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ及びＴＲＫＣからなる群から選択される、請求項２に記載の医薬組成物。

【請求項4】

前記疾患が、非受容体キナーゼによって媒介される、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項5】

前記非受容体キナーゼが、ＪＡＫ２、ＦＹＮ、ＬＹＮ、ＹＥＳ、ＦＧＲ、ＳＲＣ、ＦＡＫ又はＡＲＫ５である、請求項４に記載の医薬組成物。

【請求項6】

前記疾患が、癌、乾癬、関節リウマチ、真性多血症、本態性血小板血症、潰瘍性大腸炎、及び骨髄線維症を伴う骨髄化生並びに疼痛からなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項7】

前記疾患が癌である、請求項６に記載の医薬組成物。

【請求項8】

前記疾患がＡＬＫによって媒介される癌である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項9】

前記疾患が、遺伝子改変されたＡＬＫによって媒介される癌である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項10】

前記疾患が、ＡＬＫ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片、及びＮＰＭ、ＥＭＬ４、ＴＰＲ、ＴＦＧ、ＡＴＩＣ、ＣＬＴＣ１、ＴＰＭ４、ＭＳＮＡＬＯ１７及びＭＹＨ９からなる群から選択される遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項11】

前記融合タンパク質が、ＡＬＫ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＥＭＬ４遺伝子、ＮＰＭ遺伝子、又はＴＰＲ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む、請求項１０に記載の医薬組成物。

【請求項12】

前記遺伝子改変されたＡＬＫが、ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合タンパク質、ＮＰＭ−ＡＬＫ融合タンパク質、又はＴＰＲ−ＡＬＫ融合タンパク質である、請求項９に記載の医薬組成物。

【請求項13】

前記ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合タンパク質、又はＴＰＲ−ＡＬＫ融合タンパク質が、少なくとも１つの耐性変異を含む、請求項１２に記載の医薬組成物。

【請求項14】

前記ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合タンパク質が、Ｌ１１９６Ｍ、Ｇ１２０２Ｒ、Ｄ１２０３Ｒ、Ｌ１１５２Ｐ／Ｒ、Ｆ１１７４Ｃ／Ｌ／Ｖ、Ｃ１１５６Ｙ、Ｉ１１７１Ｎ、Ｇ１１２３Ｓ、Ｓ１２０６Ｙ、Ｇ１２６９Ｓ／Ａ、及び１１５１Ｔ挿入からなる群から選択される少なくとも１つの変異を含む、請求項１３に記載の医薬組成物。

【請求項15】

前記ＴＰＲ−ＡＬＫ融合タンパク質が、Ｌ１１９６Ｍ点変異を含む、請求項１４に記載の医薬組成物。

【請求項16】

前記疾患が、１以上の点変異を有するＡＬＫによって媒介される癌である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項17】

前記疾患が、Ｒ１０５０Ｈ、Ｆ１１７４Ｃ／Ｉ／Ｌ／Ｓ／Ｖ、Ｆ１２４５Ｃ／Ｉ／Ｌ／Ｖ、Ｒ１２７Ｌ／Ｑ、Ｔ１１５１Ｍ、Ｍ１１６６Ｒ、Ｉ１１７０Ｎ、Ｉ１１７０Ｓ、Ｉ１１７１Ｎ、Ｉ１１８３Ｔ、Ｌ１１９６Ｍ、Ａ１２００Ｖ、Ｌ１２０４Ｆ、Ｌ１２４０Ｖ、Ｄ１２７０Ｇ、Ｙ１２７８Ｓ、Ｒ１１９２Ｐ、Ｇ１１２８Ａ、Ｇ１２８６Ｒ、及びＴ１３４３Ｉからなる群から選択される１以上の点変異を有するＡＬＫによって媒介される癌である、請求項１〜３又は１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項18】

前記癌が、ＡＬＣＬ、ＮＳＣＬＣ、神経芽腫、炎症性筋線維芽細胞腫瘍、成人の腎細胞癌、小児腎細胞癌、乳癌、結腸腺癌、神経膠芽腫、多形神経膠芽腫及び未分化甲状腺癌からなる群から選択される、請求項８〜１７のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項19】

前記疾患がＲＯＳ１によって媒介される癌である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項20】

前記疾患が、遺伝子改変されたＲＯＳ１によって媒介される癌である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項21】

前記疾患が、ＲＯＳ１遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＦＩＧ、ＴＰＭ３、ＳＤＣ４、ＳＬＣ３４Ａ２、ＣＤ７４、ＥＺＲ、及びＬＲＩＧ３からなる群から選択される遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項22】

前記遺伝子改変されたＲＯＳ１が、ＣＤ７４−ＲＯＳ１融合タンパク質、ＳＤＣ４−ＲＯＳ１融合タンパク質、又はＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合タンパク質である、請求項２０に記載の医薬組成物。

【請求項23】

前記ＣＤ７４−ＲＯＳ１融合タンパク質、ＳＤＣ４−ＲＯＳ１融合タンパク質、又はＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合タンパク質が、少なくとも１つの耐性変異を含む、請求項２２に記載の医薬組成物。

【請求項24】

前記ＣＤ７４−ＲＯＳ１融合タンパク質がＧ２０３２Ｒ、Ｌ２０２６Ｍ又はＤ２０３３Ｎ点変異を含む、前記ＳＤＣ４−ＲＯＳ１融合タンパク質がＧ２０３２Ｒ点変異を含む、又はＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合タンパク質がＧ２０３２Ｒ点変異を含む、請求項２２に記載の医薬組成物。

【請求項25】

前記癌が、神経膠芽腫、多形神経膠芽腫、ＮＳＣＬＣ、胆管癌、卵巣癌、胃腺癌、結腸直腸癌、炎症性筋線維芽細胞腫瘍、血管肉腫、及び類上皮血管内皮腫からなる群から選択される、請求項１９〜２４のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項26】

前記疾患が、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、又はＴＲＫＣによって媒介される癌である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項27】

前記疾患が、遺伝子改変されたＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、又はＴＲＫＣによって媒介される癌である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項28】

前記疾患が、ＴＲＫＡ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＴＰＭ３遺伝子又はＬＭＮＡ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項29】

前記遺伝子改変されたＴＲＫＡが、ＴＰＭ３−ＴＲＫＡ又はＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ融合タンパク質である、請求項２７に記載の医薬組成物。

【請求項30】

ＴＰＭ３−ＴＲＫＡ又はＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ融合タンパク質が、少なくとも１つの耐性変異を含む、請求項２９に記載の医薬組成物。

【請求項31】

前記癌がＮＳＣＬＣである、請求項７〜３０のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項32】

前記疾患が、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２又はＪＡＫ３によって媒介される癌である、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項33】

前記疾患が、遺伝子改変されたＪＡＫ２によって媒介される癌である、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項34】

前記疾患が、ＪＡＫ２遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＴＥＬ又はＰＣＭ１遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項35】

前記遺伝子改変されたＪＡＫ２が、ＴＥＬ−ＪＡＫ２融合タンパク質、又はＰＣＭ−ＪＡＫ２融合タンパク質である、請求項３３に記載の医薬組成物。

【請求項36】

前記遺伝子改変されたＪＡＫ２が、Ｖ６１７Ｆ点変異を含む、請求項３３に記載の医薬組成物。

【請求項37】

患者の疾患を治療するための医薬組成物であって、前記疾患が、ＳＲＣによって媒介される癌である、（７Ｓ，１３Ｒ）−１１−フルオロ−７，１３−ジメチル−６，７，１３，１４−テトラヒドロ−１，１５−エテノピラゾロ［４，３−ｆ]［１，４，８，１０]ベンゾキサトリアザシクロトリデシン−４（５Ｈ）−オン、又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む、医薬組成物。

【請求項38】

前記癌が、神経膠芽腫、多形神経膠芽腫、ＮＳＣＬＣ、胆管癌、肝内胆管癌、結腸直腸癌、甲状腺乳頭癌、スピッツ腫瘍、肉腫、星細胞腫、脳の低グレードの神経膠腫、分泌乳癌、乳腺相似癌、乳癌、急性骨髄性白血病、先天性中胚葉性腎腫、先天性線維肉腫、Ｐｈ−様急性リンパ芽球性白血病、結腸腺癌、甲状腺癌、皮膚黒色腫、頭頸部扁平上皮癌及び小児神経膠腫からなる群から選択される、請求項３７に記載の医薬組成物。

【請求項39】

患者の疾患を治療するための医薬組成物であって、前記疾患が、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ又はＴＲＫＣによって媒介される疼痛である、（７Ｓ，１３Ｒ）−１１−フルオロ−７，１３−ジメチル−６，７，１３，１４−テトラヒドロ−１，１５−エテノピラゾロ［４，３−ｆ]［１，４，８，１０]ベンゾキサトリアザシクロトリデシン−４（５Ｈ）−オン、又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む、医薬組成物。

【請求項40】

前記疾患が、バイパス耐性を示す癌である、請求項１、４又は５のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項41】

遺伝子改変されたチロシン又はセリン／スレオニンキナーゼを発現することが以前に示された患者の癌を治療するための医薬組成物であって、（７Ｓ，１３Ｒ）−１１−フルオロ−７，１３−ジメチル−６，７，１３，１４−テトラヒドロ−１，１５−エテノピラゾロ［４，３−ｆ]［１，４，８，１０]ベンゾキサトリアザシクロトリデシン−４（５Ｈ）−オン、又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む、前記医薬組成物。

【請求項42】

前記遺伝子改変されたチロシンキナーゼが、遺伝子改変されたＡＬＫ、遺伝子改変されたＲＯＳ１、遺伝子改変されたＴＲＫ及び遺伝子改変されたＪＡＫからなる群から選択される、請求項４１に記載の医薬組成物。

【請求項43】

前記遺伝子改変されたＡＬＫが、ＡＬＫ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片並びにＮＰＭ、ＥＭＬ４、ＴＰＲ、ＴＦＧ、ＡＴＩＣ、ＣＬＴＣ１、ＴＰＭ４、ＭＳＮＡＬＯ１７及びＭＹＨ９からなる群から選択される遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質である、請求項４２に記載の医薬組成物。

【請求項44】

前記融合タンパク質が、ＡＬＫ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＥＭＬ４遺伝子、ＮＰＭ遺伝子、又はＴＰＲ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む、請求項４３に記載の医薬組成物。

【請求項45】

前記遺伝子改変されたＡＬＫが、ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合タンパク質、ＮＰＭ−ＡＬＫ融合タンパク質、又はＴＰＲ−ＡＬＫ融合タンパク質である、請求項４２に記載の医薬組成物。

【請求項46】

前記ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合タンパク質、又はＴＰＲ−ＡＬＫ融合タンパク質が、少なくとも１つの耐性変異を含む、請求項４５に記載の医薬組成物。

【請求項47】

前記ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合タンパク質が、Ｌ１１９６Ｍ、Ｇ１２０２Ｒ、Ｄ１２０３Ｒ、Ｌ１１５２Ｐ／Ｒ、Ｆ１１７４Ｃ／Ｌ／Ｖ、Ｃ１１５６Ｙ、Ｉ１１７１Ｎ、Ｇ１１２３Ｓ、Ｓ１２０６Ｙ、Ｇ１２６９Ｓ／Ａ、及び１１５１Ｔ挿入からなる群から選択される少なくとも１つの変異を含む、請求項４５に記載の医薬組成物。

【請求項48】

前記ＴＰＲ−ＡＬＫ融合タンパク質が、Ｌ１１９６Ｍ点変異を含む、請求項４６に記載の医薬組成物。

【請求項49】

前記癌がバイパス耐性機構を示す、請求項４１〜４８のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項50】

前記バイパス耐性機構がＳＲＣによって媒介される、請求項４９に記載の医薬組成物。

【請求項51】

前記癌が、ＡＬＣＬ、ＮＳＣＬＣ、神経芽腫、炎症性筋線維芽細胞腫瘍、成人の腎細胞癌、小児腎細胞癌、乳癌、結腸腺癌、神経膠芽腫、多形神経膠芽腫及び未分化甲状腺癌からなる群から選択される、請求項４１〜５０のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項52】

前記癌がＮＳＣＬＣである、請求項４１〜５０のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項53】

前記遺伝子改変されたＲＯＳ１が、ＲＯＳ１遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＦＩＧ、ＴＰＭ３、ＳＤＣ４、ＳＬＣ３４Ａ２、ＣＤ７４、ＥＺＲ、及びＬＲＩＧ３からなる群から選択される遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質である、請求項４２に記載の医薬組成物。

【請求項54】

前記遺伝子改変されたＲＯＳ１が、ＣＤ７４−ＲＯＳ１融合タンパク質、ＳＤＣ４−ＲＯＳ１融合タンパク質、又はＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合タンパク質である、請求項５３に記載の医薬組成物。

【請求項55】

前記ＣＤ７４−ＲＯＳ１融合タンパク質、ＳＤＣ４−ＲＯＳ１融合タンパク質、又はＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合タンパク質が、少なくとも１つの耐性変異を含む、請求項５４に記載の医薬組成物。

【請求項56】

前記ＣＤ７４−ＲＯＳ１融合タンパク質が、Ｇ２０３２Ｒ、Ｌ２０２６Ｍ又はＤ２０３３Ｎ点変異を含む、前記ＳＤＣ４−ＲＯＳ１融合タンパク質がＧ２０３２Ｒ点変異を含む、又はＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合タンパク質がＧ２０３２Ｒ点変異を含む、請求項５４に記載の医薬組成物。

【請求項57】

前記癌が、神経膠芽腫、多形神経膠芽腫、ＮＳＣＬＣ、胆管癌、卵巣癌、胃腺癌、結腸直腸癌、炎症性筋線維芽細胞腫瘍、血管肉腫、及び類上皮血管内皮腫からなる群から選択される、請求項４１、４２又は５３〜５６のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項58】

前記癌がＮＳＣＬＣである、請求項４１、４２又は５３〜５７のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項59】

前記遺伝子改変されたＴＲＫが、ＴＲＫＡ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＴＰＭ３遺伝子又はＬＭＮＡ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質である、請求項４２に記載の医薬組成物。

【請求項60】

前記遺伝子改変されたＴＲＫが、ＴＰＭ３−ＴＲＫＡ又はＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ融合タンパク質である、請求項４２に記載の医薬組成物。

【請求項61】

前記ＴＰＭ３−ＴＲＫＡ又はＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ融合タンパク質が、少なくとも１つの耐性変異を含む、請求項６０に記載の医薬組成物。

【請求項62】

【請求項63】

前記癌がＮＳＣＬＣである、請求項４１、４２又は５９〜６２のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項64】

前記遺伝子改変されたＪＡＫが、ＪＡＫ２遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＴＥＬ又はＰＣＭ１遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質である、請求項４２に記載の医薬組成物。

【請求項65】

前記遺伝子改変されたＪＡＫが、ＴＥＬ−ＪＡＫ２融合タンパク質、又はＰＣＭ−ＪＡＫ２融合タンパク質である、請求項４２に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）に基づき、２０１５年７月２１日出願の米国仮出願第６２／１９５，０８１号及び２０１６年３月２日出願の米国仮出願第６２／３０２，２３１号の優先権を主張するものであり、その両方は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

本開示は、哺乳動物の疾患の治療における、特定のジアリール大環状化合物、具体的には、（７Ｓ，１３Ｒ）−１１−フルオロ−７，１３−ジメチル−６，７，１３，１４−テトラヒドロ−１，１５−エテノピラゾロ［４，３−ｆ]［１，４，８，１０]ベンゾキサトリアザシクロトリデシン（ｂｅｎｚｏｘａｔｒｉａｚａｃｙｃｌｏｔｒｉｄｅｃｉｎ）−４（５Ｈ）−オンの使用に関する。本開示はまた、そのような化合物を含む組成物、及び哺乳動物、特にヒトの疾患の治療においてそのような組成物を使用する方法に関する。

【背景技術】

【0003】

プロテインキナーゼは、細胞成長、増殖及び生存のための重要な調節因子である。遺伝的及びエピジェネティックな変化は、癌細胞内に蓄積すると、悪性プロセスを促進するシグナル伝達経路の異常な活性化をもたらす。（Ｍａｎｎｉｎｇ，Ｇ．；Ｗｈｙｔｅ，Ｄ．Ｂ．；Ｍａｒｔｉｎｅｚ，Ｒ．；Ｈｕｎｔｅｒ，Ｔ．；Ｓｕｄａｒｓａｎａｍ，Ｓ．ヒトゲノムのタンパク質キナーゼ補体（Ｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｏｆｔｈｅｈｕｍａｎｇｅｎｏｍｅ），Ｓｃｉｅｎｃｅ２００２，２９８，１９１２−１９３４）。これらのシグナル伝達経路の薬理学的阻害は、標的癌治療のための有望な介入の機会を提供する（Ｓａｗｙｅｒｓ，Ｃ．標的癌療法（Ｔａｒｇｅｔｅｄｃａｎｃｅｒｔｈｅｒａｐｙ），Ｎａｔｕｒｅ２００４，４３２，２９４−２９７）。

【0004】

未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）は、白血球チロシンキナーゼ（ＬＴＫ）と共に、受容体チロシンキナーゼのインスリン受容体（ＩＲ）スーパーファミリーに属する。ＡＬＫは、主に、中枢神経系及び末梢神経系で発現しており、神経系の正常な発達及び機能における潜在的役割が示唆される（ＰｕｌｆｏｒｄＫ．らＣｅｌｌＭｏｌ．ＬｉｆｅＳｃｉ．２００４，６１，２９３９）。ＡＬＫは、１９９４年に、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）細胞株におけるｔ（２；５）（ｐ２３；ｑ３５）染色体転位から生じる融合遺伝子によってコードされる融合タンパク質ＮＰＭ（ヌクレオフォスミン）−ＡＬＫとして最初に発見された（ＭｏｒｒｉｓＳＷ．らＳｃｉｅｎｃｅ１９９４，２６３，１２８１）。２０を超える異なるＡＬＫ転位パートナーが、ＡＬＣＬ（６０〜９０％の発生率）、炎症性筋線維芽細胞腫瘍（ＩＭＴ、５０〜６０％）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ、３〜７％）、結腸直腸癌（ＣＲＣ、０〜２．４％）、乳癌（０〜２．４％）、及びまれな発生率の他の癌腫を含む多くの癌で発見された（ＧｒａｎｄｅＥ．らＭｏｌ．ＣａｎｃｅｒＴｈｅｒ．２０１１，１０，５６９）。ＡＬＫの発癌性点変異は、家族性と散発性の両方の神経芽腫症例で発見された（ＭｏｓｓｅＹＰ．らＮａｔｕｒｅ２００８，４５５，９３０−９３５）。融合及び変異型の両方のＡＬＫは、高度に発癌性であり、異常なＡＬＫ遺伝子を有する造血性腫瘍、固形腫瘍、及び間葉系腫瘍の治療のためのＡＬＫ阻害剤の開発には、かなりの関心と努力を要する（Ｇｒａｎｄｅ，Ｅ．らＭｏｌ．ＣａｎｃｅｒＴｈｅｒ．２０１１，１０，５６９−５７９）。クリゾチニブは、ＡＬＫ陽性非小細胞肺癌の治療のために米国食品医薬品局により承認された。キナーゼ阻害剤の多くの標的療法と同様に、クリゾチニブの薬剤耐性が約１０ヶ月で生じた。薬剤耐性機構には、標的遺伝子の増幅又は過剰発現、二次ミスセンス変異の発生、及び代替シグナル伝達経路の使用（いわゆる「バイパス耐性」）が含まれる。その結果、野生型及び多くの変異型ＡＬＫに対してより強力である第二世代のＡＬＫ阻害剤が開発されてきた。そのような１つの変異は、ゲートキーパー変異ＡＬＫ^{Ｌ１１９６Ｍ}である。セリチニブは、疾患の進行を示すか、又はクリゾチニブに不耐性であるＡＬＫ陽性非小細胞肺癌患者の治療のために米国食品医薬品局により承認された。多くの第二世代のＡＬＫ阻害剤が、臨床試験で検討されてきたが、第二世代のＡＬＫ阻害剤に耐性を示す新しいＡＬＫ変異が出現した。例えば、Ｇ１２０２Ｒ変異は、クリゾチニブ、セリチニブ、及びアレクチニブに耐性を示す腫瘍に見出されている（ＰｏｌｉｔｉＫ，ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２０１４，２０，５５７６）。主に細胞内チロシンキナーゼドメインからなるＡＬＫの新規アイソフォームは、正常組織ではなく、黒色腫の約１１％及び他のヒトの癌タイプで散発的に発現することが見出された（ＷｉｅｓｎｅｒＴ．らＮａｔｕｒｅ２０１５，５２６，４５３−４５７）。これらの新しいＡＬＫアイソフォームは、複数の発癌性シグナル伝達経路を刺激し、ＡＬＫ阻害剤に感受性であることから、ＡＬＫ阻害からの臨床的利益の可能性が示唆される。

【0005】

ＡＬＫ遺伝子が再配列した非小細胞肺癌は、ＡＬＫ阻害剤クリゾチニブによる治療に感受性がある。しかしながら、薬剤耐性の出現は、普遍的であり、急速に臨床適用性を制限する。耐性機構には、ＡＬＫ遺伝子増幅、ＡＬＫミスセンス変異の獲得、バイパス経路の活性化、及び上皮間葉転換（ＥＭＴ）（ＫａｔａｙａｍａＲ２０１２）が含まれる（ＫａｔａｙａｍａＲ．らＳｃｉＴｒａｎｓｌＭｅｄ．２０１２，４（１２０）：１２０ｒａ１７）。バイパス及びＥＭＴは、獲得された耐性集団の大部分を構成する。ＡＬＫ融合陽性患者の３０〜４０％が、ＡＬＫ阻害剤治療に対する内因性耐性を有することに留意することは価値がある。ＡＬＫ再配列ＮＳＣＬＣは、典型的には、転移性表現型としばしば関連し、上皮間葉転換（ＥＭＴ）表現型と関係する固形の印環細胞パターンによって特徴付けられる腺癌である（ＶｏｅｎａＣ．らＯｎｃｏｔａｒｇｅｔ，２０１６，Ａｐｒｉｌ２３，８９５５）。ＥＭＬ４−ＡＬＫｖ３融合遺伝子を有するＨ２２２８細胞株は、間葉表現型を示し、Ｅ−カドヘリンを直接抑制し、ビメンチン発現及びＥＭＴに関与する他の遺伝子の発現を上方制御する。Ｈ２２２８細胞株は、クリゾチニブ及び他のＡＬＫ阻害剤に対する内因性耐性を与える。したがって、ＥＭＴ及び転移を標的にすることができる複合薬理学的ＡＬＫ阻害剤を開発する必要がある。細胞の生存及び増殖を促進するために、元のドライバーオンコジーン及び二次的バイパストラックが重複して下流のシグナル伝達を維持する場合、バイパス耐性が生じる。例えば、患者由来のＡＬＫモデルにおけるＡＬＫ阻害は、ＳＲＣ活性を上方制御することが示されている。ＡＬＫ阻害剤とＳｒｃチロシンキナーゼ阻害剤の組み合わせは、患者由来のＡＬＫモデルにおいてインビトロ及びインビボで、下流のシグナル伝達を効果的に抑制することが示され、相乗阻害効果をもたらし、ＡＬＫ阻害剤に再感作した（ＣｒｙｓｔａｌＡＳ，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１４，３４６，１４８０）。ＡＬＫ^{Ｇ１２０２Ｒ}を含む幅広い二次的ＡＬＫ変異に対抗し、Ｓｒｃシグナル伝達を阻害することができる新たなＡＬＫ阻害剤の特定が、重要であり、ＡＬＫ薬剤耐性を効果的に克服し、ＡＬＫ阻害剤治療に対する応答を維持することが非常に望ましい。

【0006】

ＲＯＳ１タンパク質は、ＡＬＫ／ＬＴＫ及びインスリン受容体キナーゼファミリーに密接関連する受容体チロシンキナーゼである。ヒトＲＯＳ１キナーゼの正常な生理学的機能は、完全には理解されていないが、ＲＯＳ１キナーゼの異常な発現及び可変の構成的活性化融合形態は、神経膠芽細胞腫、非小細胞肺癌、胆管癌、卵巣癌、胃腺癌、結腸直腸癌、炎症性筋線維芽細胞腫瘍、血管肉腫、及び類上皮血管内皮腫を含むいくつかの癌で報告されている（ＫｕｒｔｉｓＤＤ，らＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ２０１３，１９（１５），１．）。ＦＩＧ−ＲＯＳ１融合タンパク質は、ヒト多形神経膠芽腫において２００３年に発見されたＲＯＳ１の第一の融合タンパク質であった（ＣｈａｒｅｓｔＡ，らＧｅｎｅｓＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓＣａｎｃｅｒ２００３，３７，５８）。ＴＰＭ３、ＳＤＣ４、ＳＬＣ３４Ａ２、ＣＤ７４、ＥＺＲ、及びＬＲＩＧ３を含むＲＯＳ１キナーゼを有するいくつかの融合タンパク質が、ヒト肺癌から報告されており、肺癌におけるＲＯＳ１キナーゼの発癌性の役割が示唆されている（ＴａｋｅｕｃｈｉＫ，らＮａｔ．Ｍｅｄ．２０１２，１８，３７８）。２３人の胆管癌患者における活性化されたチロシンキナーゼシグナル伝達の調査により、胆管癌患者の８．７％にＦＩＧ−ＲＯＳキナーゼ融合の存在が確認された（ＧｕＴＬ，らＰＬｏＳＯｎｅ．２０１１，６，ｅ１５６４０）。ＫＤＥＬＲ２、ＣＣＤＣ６、ＭＳＮ、ＬＩＭＡ１、ＣＬＴＣ、ＮＦκＢ２、ＮＣＯＲ２、ＣＥＰ８５Ｌ、ＴＭＥＭ１０６Ｂ、ＨＬＡ−Ａ、ＭＹＯ５Ａ、ＰＰＦＩＢＰ１、ＥＲＣ１、ＰＷＷＰ２Ａ、ＣＬＩＰ１、ＺＣＣＨＣ８、ＳＨＴＮ１、ＴＦＧ、及びＹＷＨＡＥを含むＲＯＳ１融合パートナーが、様々なヒト癌からますます報告されている（ＵｑｕｅｎＡ，らＦｕｔｕｒｅＯｎｃｏｌ．２０１６，Ｊｕｎｅ３印刷前の電子出版）。まとめると、ＲＯＳ１キナーゼは、異常なＲＯＳキナーゼ活性を有する癌に対する有望な分子ベースの標的候補である。ＡＬＫ／ＭＥＴ／ＲＯＳ１阻害剤クリゾチニブは、ＲＯＳ１遺伝子異常について腫瘍が陽性であるＮＳＣＬＣ患者で顕著な有効性を実証した（ＳｈａｗＡＴ，らＮＥｎｇｌＪＭｅｄ２０１５，３７２，６８３）。ＲＯＳ１が再配列したと予想される、クリゾチニブに応答した陽性患者は、最終的には、疾患進行を経験した。ＲＯＳ１^{Ｇ２０３２Ｒ}二次変異及びバイパスシグナル伝達は、耐性と関連している（ＡｗａｄＭＭ，らＮＥｎｇｌＪＭｅｄ２０１３，３６８，２３９５）。耐性を克服するために、次世代のＲＯＳ１阻害剤の開発が望まれている。

【0007】

トロポミオシン関連受容体チロシンキナーゼ（Ｔｒｋ）は、神経成長因子（ＮＧＦ）ファミリーのニューロトロフィン（ＮＴ）に高親和性の受容体である。Ｔｒｋは、もともと細胞外ドメインでトロポミオシン遺伝子と融合した癌遺伝子としてクローニングされた。ＴＲＫファミリーにおける染色体再配列又は変異によって引き起こされる活性化変異が、多くの癌で報告されている（ＶａｉｓｈｎａｖｉＡ，らＣａｎｃｅｒＤｉｓｃｏｖ．２０１５，５，２５）。Ｔｒｋが、疼痛の感覚だけでなく、腫瘍細胞の増殖及び生存のシグナル伝達に重要な役割を果たしているので、Ｔｒｋ受容体キナーゼの阻害剤は、疼痛及び癌治療に利益を提供する可能性がある。

【0008】

キナーゼのヤヌスファミリー（ＪＡＫ）は、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３及びＴＹＫ２を含み、サイトカイン及び成長因子の生理的シグナル伝達に必要な細胞質非受容体チロシンキナーゼである（Ｑｕｉｎｔａｓ−ＣａｒｄａｍａＡ．ら，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ．２０１１，１０（２），１２７）。ＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路の異常な制御が、癌（ＪＡＫ２）及び関節リウマチ（ＪＡＫ１、ＪＡＫ３）を含む複数のヒトの病理学的疾患に関与している。ＪＡＫ２の機能獲得型変異（ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ）が、ＭＰＮ患者において高頻度で発見されている（ＬｅｖｉｎｅＲＬ，らＣａｎｃｅｒＣｅｌｌ２００５，７，３８７）。ＪＡＫ２のＪＨ２シュードキナーゼドメインにおける変異は、構成的キナーゼ活性をもたらす。ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ変異を含有する細胞は、サイトカイン非依存性増殖能を獲得し、腫瘍になる場合が多く、標的治療としてＪＡＫ阻害剤の開発に強力な理論的根拠を提供する。加えて、ＪＡＫ２／シグナルトランスデューサー及び転写活性化因子３（ＪＡＫ２／ＳＴＡＴ３）の過剰活性が、異常な樹状細胞分化及び癌における免疫抑制骨髄細胞の蓄積につながる異常な樹状細胞分化に関与する（ＮｅｆｅｄｏｖａＹ，らＣａｎｃｅｒＲｅｓ２００５，６５，９５２５）。Ｐｔｅｎヌル老化腫瘍において、ＪＡＫ２／ＳＴＡＴ３経路が活性化されると、腫瘍成長及び化学療法耐性に寄与する免疫抑制腫瘍の微小環境が確立する（ＴｏｓｏＡ，らＣｅｌｌＲｅｐｏｒｔｓ２０１４，９，７５）。ＴＥＬ（ＥＴＶ６）とＪＡＫ２遺伝子の融合（ＴＥＬ−ＪＡＫ２）及びＰＣＭ１遺伝子とＪＡＫ２遺伝子の融合が、白血病患者において見出された（ＬａｃｒｏｎｉｑｕｅＶ，らＳｃｉｅｎｃｅ１９９７，２７８，５３４１，１３０９−１２．ＲｅｉｔｅｒＡ，らＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２００５，６５，７，２６６２−７）。ＪＡＫ２／ＳＴＡＴ３シグナル伝達経路がＥＧＦＲ阻害剤耐性ＥＧＦＲ変異型非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞で異常に増加されることが報告され、ＪＡＫ２の阻害は、ＥＧＦＲ依存性ＮＳＣＬＣの治療のためのＪＡＫとＥＧＦＲ阻害剤の併用療法の使用を指示するＥＧＦＲ阻害剤に対する獲得耐性を克服する（ＧａｏＳＰ，らＳｃｉＳｉｇｎａｌ．２０１６，９（４２１）：ｒａ３３）。ＪＡＫ２／ＳＴＡＴ３シグナル伝達は、抗腫瘍免疫を抑制しつつ、増殖、生存、血管新生、腫瘍代謝を含む、腫瘍及びその環境における癌の顕著な特徴を促進する（ＢｕｃｈｅｒｔＭ，らＯｎｃｏｇｅｎｅ，２０１６，３５，９３９−９５１）。ＪＡＫ阻害剤でＪＡＫ２／ＳＴＡＴ３経路のサイトカイン依存性活性化を阻害すると、薬剤耐性を獲得した他の癌遺伝子による癌細胞のための直交性治療の機会も与えられ得る。ＪＡＫ２遺伝子の局所的増幅が、９ｐ２４増幅腫瘍のグループにおける化学療法後のトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）で観察され、腫瘍形成及び化学療法耐性における役割が示唆された（ＢａｌｋｏＪＭ，らＳｃｉＴｒａｎｓｌＭｅｄ．２０１６，８（３３４）：ｒａ５３）。したがって、ＪＡＫ２シグナル伝達経路の薬理学的阻害は、抗腫瘍活性を増強するための重要な新しい治療戦略であり得る。ｃ−Ｓｒｃは、非受容体チロシンキナーゼである。Ｓｒｃファミリー（ＳＦＫ）は、ヒトでは８つのメンバー（Ｓｒｃ、Ｆｙｎ、Ｙｅｓ、Ｌｙｎ、Ｌｃｋ、Ｈｃｋ、Ｂｌｋ及びＦｇｒ）を含み、分子量は５２〜６２ｋＤａである。Ｓｒｃ及びそのファミリーメンバーは、多くの種類の癌において脱制御される。Ｓｒｃは、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、及びｃ−Ｍｅｔを含む多くのＲＴＫの主要な下流のトランスデューサーである。Ｓｒｃシグナル伝達の活性化は、標的化抗内分泌療法、受容体チロシンキナーゼ療法、伝統的な化学療法、及び放射線療法に対する治療耐性の付与に関与している（ＺｈａｎｇＳ，らＴｒｅｎｄｓＰｈａｒｍａｃｏｌＳｃｉ．２０１２，３３，１２２）。ＳＲＣは、ＤＮＡ合成、受容体代謝回転の調節、アクチン細胞骨格再編成、遊走、接着、浸潤、運動性、及び生存に必要なシグナル伝達経路の関与を含むいくつかの方法で成長因子受容体からのシグナル伝達を促進することができる（ＢｒｏｍａｎｎＰＡ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ２００４，２３，７９５７−７９６８）。上皮間葉転換（ＥＭＴ）及び転移の発生などの腫瘍進行に関連する事象において、Ｓｒｃ活性を阻害することによって癌細胞の移動を制御する強力な転移抑制因子であるＮ−ｍｙｃ下流制御遺伝子１（ＮＤＲＧ１）との相互作用を介したＳｒｃの重要な役割が報告されている（ＬｉｕＷ，らＯｎｃｏｔａｒｇｅｔ．２０１５，６：３５５２２−３５５４１）。ＥＧＦＲ阻害剤は、ＥＧＦＲ活性化変異を保有するＮＳＣＬＣ患者の大半で大きな成功を収めているが、ＥＧＦＲ変異を有する患者の一部は、ＥＧＦＲ−ＴＫＩに不応性である。ＥＧＦＲ阻害剤に対する耐性が、ＳＲＣ活性化及び上皮間葉転換（ＥＭＴ）の誘導に関与することが報告されている。ＥＧＦＲ−ＴＫＩに対する一次耐性は、より高レベルのＣＲＩＰＴＯ１発現に関連付けられている。ＣＲＩＰＴＯ１は、ＳＲＣ及びＺＥＢ１を活性化し、マイクロＲＮＡ−２０５（ｍｉＲ−２０５）下方制御を介してＥＭＴを促進した。したがって、ＥＧＦＲとＳＲＣの両方を標的化すると、ＣＲＩＰＴＯ１陽性ＥＧＦＲ変異型ＮＳＣＬＣを有する患者における内因性のＥＧＦＲ阻害剤耐性が克服され得る（Ｐａｒｋ，Ｋ−Ｓ，らＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ．２０１４，１２４（７）：３００３−３０１５）。接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）は、１２５ｋＤａの非受容体チロシンキナーゼであり、接着、生存、運動性、転移、血管新生、リンパ脈管新生、癌幹細胞機能、腫瘍微小環境及び上皮間葉転換（ＥＭＴ）において重要な役割を果たしている（ＧｏｌｕｂｏｖｓｋａｙａＶＭ，ＦｒｏｎｔＢｉｏｓｃｉ（ＬａｎｄｍａｒｋＥｄ）．；１９：６８７−７０６）。核内ＦＡＫは、ケモカイン転写、Ｔｒｅｇ、及び抗腫瘍免疫の回避を調節し、小分子ＦＡＫキナーゼ阻害剤ＶＳ−４７１８は、Ｔｒｅｇの枯渇を促進し、ＣＤ８＋Ｔ細胞媒介性抗腫瘍応答を促進する（ＳｅｒｒｅｌｓＡ，らＣｅｌｌｓ２０１５，１６３，１６０−１７３）。したがって、ＦＡＫ阻害剤は、免疫媒介性腫瘍退行を誘発し得る。ＦＡＫは、ヒト膵管腺癌（ＰＤＡＣ）で過剰活性され、免疫抑制腫瘍微小環境（ＴＭＥ）と関係する。接着斑キナーゼを標的化すると、マウスモデルにおいて線維性及び免疫抑制ＰＤＡＣＴＭＥを克服することによって、膵臓癌がチェックポイント免疫療法に応答するようになる（ＪｉａｎｇＨ，らＮａｔＭｅｄ．２０１６，Ｊｕｌ４［印刷前の電子出版]）。最近、選択的ＳＲＣ阻害剤のサラカチニブが、ＡＬＫ阻害剤耐性細胞株を再感作することができることが報告され、ＡＬＫ阻害剤耐性の克服におけるＳＲＣ阻害の治療的役割が実証された（ＣｒｙｓｔａｌＡＳ，らＳｃｉｅｎｃｅ２０１４，３４６，１４８０−１４８６）。したがって、ＳＲＣ／ＦＡＫ阻害剤は、組み合わせレジメンで、現在の抗癌治療に対する耐性を克服し、転移再発、ＥＭＴ及び癌治療耐性を防止することにおいて重要な役割を果たしている可能性がある。ＮＡＵＫ１とも呼ばれるＡＭＰ活性化プロテインキナーゼファミリーメンバー５（ＡＲＫ５）は、ＡＭＰＫの上流制御因子であり、ラパマイシン１（ｍＴＯＲＣ１）シグナル伝達経路の阻害を介してタンパク質合成を制限する。ＡＲＫ５は、ミトコンドリア呼吸鎖複合体の発現及び効率的なグルタミン代謝のための呼吸能力を維持する。ＡＲＫ５は、原発性ＮＳＣＬＣ組織及び細胞株の両方で高度に発現しており、ＮＳＣＬＣ転移と機能的に関連しており、ＮＳＣＬＣ患者の予後不良の予測因子である。ＡＲＫ５は、ＮＳＣＬＣ細胞の遊走及び浸潤を調節し、ｍＴＯＲ経路で重要な役割を果たした（ＳｈｉＬ，らＢｒＪＣａｎｃｅｒ．２０１４，１１１（１２）：２３１６−２７）。ＡＲＫ５が、ＥＭＴの誘導を介してＨＣＣでドキソルビシン耐性を与えることが報告された（ＸｕＴ，らＣａｎｃｅｒＬｅｔｔ．２０１６，３７７（２）：１４０−８）。ＭＹＣ腫瘍性タンパク質の脱調節発現は、多くのヒト腫瘍と関連している。ＭＹＣは、細胞の成長と増殖を促進し、細胞の代謝を変える。ＡＲＫ５を阻害すると、脱調節ＭＹＣを発現する細胞において細胞ＡＴＰレベルが崩壊し、ＭＹＣ駆動型肝細胞癌マウスモデルの生存が延長する（ＬｉｕＬ，らＮａｔｕｒｅ，２０１２，４８３，６０８−６１２）。したがって、ＡＲＫ５阻害剤による細胞エネルギー恒常性の標的化は、ＭＹＣ発現が脱調節された腫瘍細胞を排除するための有効な治療戦略である。

【0009】

Ｓｒｃは、多くの種類の癌において脱調節されている非受容体チロシンキナーゼであり、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、及びｃ−Ｍｅｔを含む多くのＲＴＫの重要な下流のトランスデューサーである。Ｓｒｃシグナル伝達の活性化は、標的化抗内分泌療法、受容体チロシンキナーゼ療法、伝統的な化学療法、及び放射線療法に対する治療耐性の付与に関与している（ＺｈａｎｇＳ，らＴｒｅｎｄｓＰｈａｒｍａｃｏｌＳｃｉ．２０１２，３３，１２２）。Ｓｒｃの阻害剤は、組合せレジメンで、現在の抗癌療法に対する耐性の克服及び転移の再発防止において重要な役割を果たし得る。Ｓｒｃファミリーの細胞質チロシンキナーゼ（ＳＦＫ）（非受容体チロシンキナーゼとしても知られる）は、成長因子及びインテグリンを含む多数の細胞外刺激によって誘導されるシグナル伝達に重要な役割を果たしている。ＳＦＫ活性の上昇は、ヒト結腸直腸癌（ＣＲＣ）の８０％超に見られ、これは不良の臨床転帰と関連づけられている（ＳｕｍｍｙＪＭ，らＣａｎｃｅｒＭｅｔａｓｔａｓｉｓＲｅｖ．２００３，２２，３３７−３５８）。ＳＦＫメンバーのＹｅｓは、ｃ−Ｓｒｃと共有されていない、結腸癌の進行に重要な特定の発癌性シグナル伝達経路を制御する（ＳｃａｎｃｉｅｒＦ．らＰＬｏＳＯｎｅ．２０１１，６（２）：ｅ１７２３７）。ＷＡＳＦ２−ＦＧＲ融合遺伝子が、肺扁平上皮癌、卵巣漿液性嚢胞腺癌、及び皮膚黒色腫に見出された（ＳｔｒａｎｓｋｙＮ，らＮａｔｕｒｅＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ２０１４，５，４８４６）。エストロゲン受容体陽性（ＥＲ^＋）乳癌は、ホルモン欠乏に適応し、抗エストロゲン療法に対して耐性になる。ＳＲＣファミリーキナーゼ（ＳＦＫ）ＬＹＮの阻害ＳＨ２ドメイン中の変異は、アロマターゼ阻害剤レトロゾールによる治療後にも高度に増殖性のままであるＥＲ^＋腫瘍に関連していた。ＬＹＮは、長期エストロゲン欠乏に耐性を示す複数のＥＲ^＋乳癌株において上方制御された（ＳｃｈｗａｒｚＬＪ，らＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ．２０１４，１２４，５４９０−５５０２）。したがって、ＬＹＮの標的化は、ＥＲ^＋乳癌のサブセットにおいて抗エストロゲンからの回避を克服する合理的な戦略である。ＬＹＮは、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）において過剰発現しており、ＡＲ転写活性を増強し、ＣＲＰＣ進行を加速させることが報告され、Ｌｙｎキナーゼの標的化は、分子シャペロンＨｓｐ９０からのＡＲ解離を誘導し、そのユビキチン化及びプロテアソーム分解をもたらした（ＺａｒｄａｎＡ，らＯｎｃｏｇｅｎｅｓｉｓ２０１４，３，ｅ１１５）。Ｌｙｎチロシンキナーゼは、ＣＲＰＣの治療のための潜在的な治療標的である。ＳｒｃファミリーキナーゼＦＹＮは、神経系のシグナル伝達経路、並びに通常の生理学的条件下でのＴリンパ球の発達及び活性化に関与している。Ｆｙｎの活性化は、メラノーマ、グリア芽細胞腫、扁平上皮癌、前立腺癌及び乳癌を含む様々な癌で観察される（ＥｌｉａｓＤ，らＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ２０１５，１００，２５０−２５４）。Ｆｙｎは、タモキシフェン耐性乳癌細胞株において上方制御されており、耐性機構において重要な役割を果たしている。末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）は、予後不良の侵襲性非ホジキンリンパ腫の異種グループである。ＦＹＮ活性化変異が、ＰＴＣＬに見出され、活性化ＦＹＮ変異型対立遺伝子の発現によって形質転換された細胞の成長を促進した。ＳＲＣキナーゼ阻害剤は、ＰＴＣＬの治療に重要な役割を果たし得る（ＣｏｕｒｏｎｎｅＬ，らＢｌｏｏｄ２０１３，１２２，８１１）。

【0010】

ジスコイジンドメイン受容体（ＤＤＲ）は、マトリックスコラーゲンによって活性化され、増殖、分化、接着、遊走、及び浸潤などの多数の細胞機能に関与している。ＤＤＲは、それらの周囲のコラーゲンマトリックスと腫瘍細胞の相互作用を制御することにより、癌の進行において役割を果たしている。ＤＤＲ１は、ｐ５３転写の直接的な標的であり、ＤＤＲ１の活性化は、ｐ５３依存性ＤＮＡ損傷と関連付けられている。ＤＤＲ１は、Ｒａｓ依存的にＭＡＰＫカスケードを活性化した。ＤＤＲ１機能を阻害すると、遺伝毒性ストレスに応答して、カスパーゼ依存性経路を介して野生型ｐ５３含有細胞のアポトーシスが増加した（ＯｎｇｕｓａｈａＰＰ，らＥＭＢＯＪ．２００３，２２，１２８９−１３０１）。ＤＤＲは、肺癌（ＨａｍｍｅｒｍａｎＰＳ，らＣａｎｃｅｒＤｉｓｃｏｖ．２０１１，１，７８−８９）、漿液性および明細胞子宮体癌（ＲｕｄｄＭＬ，らＢＭＣＣａｎｃｅｒ２０１４，１４，８８４）、及び急性骨髄性白血病（ＴｏｍａｓｓｏｎＭＨ，らＢｌｏｏｄ２００８，１１１：４７９７−４８０８）において体細胞変異を有するいくつかの主要な活性化チロシンキナーゼのうちの１つとして特定された。進行型のキルステンラット肉腫ウイルス癌遺伝子ホモログ（ＫＲＡＳ）−変異型肺腺癌は、効果的な標的療法の不足のために治療が難しい。ＤＤＲ１とＮｏｔｃｈの両方のシグナル伝達の同時阻害は、ＫＲＡＳ；ＴＰ５３変異型の患者由来の肺異種移植片（ＰＤＸ）の退行を誘導し、ＤＤＲ１とＮｏｔｃｈシグナル伝達の組み合わせ阻害が、ＫＲＡＳ変異型肺腺癌患者に効果的な標的化療法であり得ることが示された（ＡｍｂｒｏｇｉａＣ，らＮａｔｕｒｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，２０１６，２２，２７０−２７７）。

【0011】

疾患駆動性キナーゼ阻害剤に対する活性を有する化合物、特に、疾患の治療における治療剤として使用するための複数の遺伝的に改変されたキナーゼを含む複数のキナーゼに対する活性を有する化合物を調製することが望ましい。複合薬理学プロファイルを有する新しい化合物はまた、二次変異、バイパスシグナル伝達、ＥＭＴ、癌の幹細胞性、及び転移を含む主要な癌遺伝子ドライバー並びにそれらの獲得耐性機構を標的化することが望ましい。

【発明の概要】

【0012】

概要
式Ｉ

【化1】

（式中、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５、Ｚ^６、Ｚ^７、Ｍ、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５及びＲ^６は、本明細書に記載のとおり定義されている）の化合物は、野生型及び変異型ＡＬＫ（未分化リンパ腫キナーゼ）、野生型及び変異型ＲＯＳ１（ＲＯＳ１癌原遺伝子受容体チロシンキナーゼ）、キナーゼのＴＲＫファミリー（トロポミオシン関連受容体チロシンキナーゼ、ＴＲＫＡ／Ｂ／Ｃ）、キナーゼのヤヌスファミリーのＪＡＫ２及びＳＲＣ（タンパク質チロシンキナーゼのｃ−Ｓｒｃファミリー（ＳＦＫ））に対する活性を有することが示されている。

【0013】

１つのそのような化合物は、（７Ｓ，１３Ｒ）−１１−フルオロ−７，１３−ジメチル−６，７，１３，１４−テトラヒドロ−１，１５−エテノピラゾロ［４，３−ｆ]［１，４，８，１０]ベンゾキサトリアザシクロトリデシン−４（５Ｈ）−オン（本明細書では「化合物１」とも呼ばれる）であり、式

【化2】

で表され、野生型及び変異型ＡＬＫ（未分化リンパ腫キナーゼ）、野生型及び変異型ＲＯＳ１（ＲＯＳ１癌原遺伝子受容体チロシンキナーゼ）、キナーゼのＴＲＫファミリー（トロポミオシン関連受容体チロシンキナーゼ、ＴＲＫＡ／Ｂ／Ｃ）、キナーゼのヤヌスファミリーのＪＡＫ２及びＳＲＣ（タンパク質チロシンキナーゼのｃ−Ｓｒｃファミリー（ＳＦＫ））に対する活性を示す強力な小分子多標的キナーゼ阻害剤であることが示されている。化合物１は、受容体及び非受容体チロシンキナーゼの阻害を介して薬理学的に媒介される抗腫瘍特性を含む特性を有する。化合物１は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０１２５９７に開示されている。

【0014】

一態様において、本開示は、患者の疾患を治療する方法であって、治療有効量の式Ｉ

【化3】

（式中、
Ｍは、ＣＲ^４ａ又はＮであり；
Ｘ^１及びＸ^２は、独立して、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）_２、Ｏ又はＮ（Ｒ^９）であり；
Ｒ^１は、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、Ｃ_６−Ｃ_１０アリール、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ^７又は−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^７Ｒ^８であり；ここで、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル及びＣ_６−Ｃ_１０アリールの各水素原子は、独立して、重水素、ハロゲン、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨ_２、−ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨＳ（Ｏ）（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨＳ（Ｏ）_２（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨＳ（Ｏ）ＮＨ_２、−ＮＨＳ（Ｏ）_２ＮＨ_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）ＮＨ_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２ＮＨ_２、−ＮＨＳ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨＳ（Ｏ）_２ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨＳ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＮＨＳ（Ｏ）_２Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＣＯ_２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＳＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｓ（Ｏ）Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｓ（Ｏ）_２Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｓ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）_２ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｐ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｐ（Ｏ）（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、又は３〜７員のヘテロシクロアルキルで任意に置換されており；

【0015】

Ｒ_２及びＲ_３の各々は独立して、Ｈ、重水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、Ｃ_６−Ｃ_１０アリール、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ^７又は−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^７Ｒ^８であり；ここで、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル及びＣ_６−Ｃ_１０アリールの各水素原子は、独立して、重水素、ハロゲン、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨ_２、−ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨＳ（Ｏ）（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨＳ（Ｏ）_２（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨＳ（Ｏ）ＮＨ_２、−ＮＨＳ（Ｏ）_２ＮＨ_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）ＮＨ_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２ＮＨ_２、−ＮＨＳ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨＳ（Ｏ）_２ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨＳ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＮＨＳ（Ｏ）_２Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＣＯ_２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＳＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｓ（Ｏ）Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｓ（Ｏ）_２Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｓ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）_２ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｐ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｐ（Ｏ）（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、又は３〜７員のヘテロシクロアルキルで任意に置換されており；
Ｒ^４、Ｒ^４ａ及びＲ^５は、それぞれ独立して、Ｈ、フルオロ、クロロ、ブロモ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−ＯＨ、−ＣＮ、ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２又は−ＣＦ_３であり；
Ｒ^６は、Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル又は３〜７員のヘテロシクロアルキルであり、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル又は３〜７員のヘテロシクロアルキルの各水素原子は、独立して、ハロゲン、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨ_２、−ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＣＯ_２Ｈ、−ＣＯ_２Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−ＣＯＮＨ_２、−ＣＯＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、シクロアルキル、又は単環式ヘテロシクロアルキルで任意に置換されており；
各Ｒ^７及びＲ^８は、独立して、Ｈ、重水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、３〜７員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６−Ｃ_１０アリール又はヘテロアリールであり；
各Ｒ^９は、独立して、Ｈ、重水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、３〜７員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６−Ｃ_１０アリール、又は単環式若しくは二環式ヘテロアリールであり；ここで、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、３〜７員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６−Ｃ_１０アリール、又は単環式若しくは二環式ヘテロアリールの各水素原子は、独立して、重水素、ハロゲン、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_１−Ｃ_６ハロアルキル又は−ＯＲ^７で任意に置換されており；
各Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５、Ｚ^６又はＺ^７は、独立して、Ｎ、ＮＨ、又はＣ（Ｒ^１０）であり、各Ｒ^１０は、独立して、Ｈ、重水素、ハロゲン、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＯＨ、−ＮＨ_２、−ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨ（フェニル）、−ＮＨ（ヘテロアリール）、−ＣＮ、又は−ＣＦ_３であり；
但し、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５、Ｚ^６又はＺ^７のうちの少なくとも１つは、Ｎ又はＮＨである）
の化合物又はその薬学的に許容される塩を該患者に投与することを含む方法を提供する。

【0016】

別の態様において、本開示は、遺伝子改変されたチロシン又はセリン／スレオニンキナーゼを発現することが以前に示された患者の癌を治療する方法であって、治療有効量の式Ｉ

【化4】

【0017】

【0018】

別の態様において、本開示は、患者の癌を治療する方法であって、
ｉ．該患者において遺伝子改変されたチロシン又はセリンスレオニンキナーゼを特定すること、及び
ｉｉ．治療有効量の式Ｉ

【化5】

【0019】

【0020】

別の態様において、本開示は、式Ｉ

【化6】

【0021】

Ｒ_２及びＲ_３の各々は独立して、Ｈ、重水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、Ｃ_６−Ｃ_１０アリール、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ^７又は−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^７Ｒ^８であり；ここで、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル及びＣ_６−Ｃ_１０アリールの各水素原子は、独立して、重水素、ハロゲン、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨ_２、−ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨＳ（Ｏ）（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨＳ（Ｏ）_２（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨＳ（Ｏ）ＮＨ_２、−ＮＨＳ（Ｏ）_２ＮＨ_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）ＮＨ_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２ＮＨ_２、−ＮＨＳ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨＳ（Ｏ）_２ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨＳ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＮＨＳ（Ｏ）_２Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＣＯ_２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＳＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｓ（Ｏ）Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｓ（Ｏ）_２Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｓ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）_２ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｐ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｐ（Ｏ）（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、又は３〜７員のヘテロシクロアルキルで任意に置換されており；
Ｒ^４、Ｒ^４ａ及びＲ^５は、それぞれ独立して、Ｈ、フルオロ、クロロ、ブロモ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−ＯＨ、−ＣＮ、ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２又は−ＣＦ_３であり；
Ｒ^６は、Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル又は３〜７員のヘテロシクロアルキルであり、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル又は３〜７員のヘテロシクロアルキルの各水素原子は、独立して、ハロゲン、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨ_２、−ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＣＯ_２Ｈ、−ＣＯ_２Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−ＣＯＮＨ_２、−ＣＯＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、シクロアルキル、又は単環式ヘテロシクロアルキルで任意に置換されており；
各Ｒ^７及びＲ^８は、独立して、Ｈ、重水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、３〜７員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６−Ｃ_１０アリール又はヘテロアリールであり；
各Ｒ^９は、独立して、Ｈ、重水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、３〜７員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６−Ｃ_１０アリール、又は単環式若しくは二環式ヘテロアリールであり；ここで、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、３〜７員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６−Ｃ_１０アリール、又は単環式若しくは二環式ヘテロアリールの各水素原子は、独立して、重水素、ハロゲン、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_１−Ｃ_６ハロアルキル又は−ＯＲ^７で任意に置換されており；
各Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５、Ｚ^６又はＺ^７は、独立して、Ｎ、ＮＨ、又はＣ（Ｒ^１０）であり、各Ｒ^１０は、独立して、Ｈ、重水素、ハロゲン、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＯＨ、−ＮＨ_２、−ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨ（フェニル）、−ＮＨ（ヘテロアリール）、−ＣＮ、又は−ＣＦ_３であり；
但し、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５、Ｚ^６又はＺ^７のうちの少なくとも１つは、Ｎ又はＮＨである）
の化合物又はその薬学的に許容される塩での治療のための患者を特定する方法であって、遺伝子改変されたチロシン又はセリン／スレオニンキナーゼによって媒介される癌を有する患者を診断することを含む方法を提供する。

【0022】

別の態様において、本開示は、患者の疾患の治療のための薬剤の調製における式Ｉ

【化7】

【0023】

【0024】

別の態様において、本開示は、患者の癌を治療するための式Ｉ

【化8】

【0025】

【0026】

別の態様において、本開示は、患者の疼痛を治療するための式Ｉ

【化9】

【0027】

【0028】

別の態様において、本開示は、遺伝子改変されたチロシン又はセリン／スレオニンキナーゼを発現することが以前に示された患者の癌を治療するための式Ｉ

【化10】

【0029】

【0030】

別の態様において、本開示は、患者の癌を治療するための式Ｉ

【化11】

【0031】

Ｒ_２及びＲ_３の各々は独立して、Ｈ、重水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、Ｃ_６−Ｃ_１０アリール、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ^７又は−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^７Ｒ^８であり；ここで、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル及びＣ_６−Ｃ_１０アリールの各水素原子は、独立して、重水素、ハロゲン、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨ_２、−ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨＳ（Ｏ）（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨＳ（Ｏ）_２（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨＳ（Ｏ）ＮＨ_２、−ＮＨＳ（Ｏ）_２ＮＨ_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）ＮＨ_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２ＮＨ_２、−ＮＨＳ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨＳ（Ｏ）_２ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨＳ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＮＨＳ（Ｏ）_２Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＣＯ_２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＳＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｓ（Ｏ）Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｓ（Ｏ）_２Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｓ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）_２ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｐ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｐ（Ｏ）（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、又は３〜７員のヘテロシクロアルキルで任意に置換されており；
Ｒ^４、Ｒ^４ａ及びＲ^５は、それぞれ独立して、Ｈ、フルオロ、クロロ、ブロモ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−ＯＨ、−ＣＮ、ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２又は−ＣＦ_３であり；
Ｒ^６は、Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル又は３〜７員のヘテロシクロアルキルであり、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル又は３〜７員のヘテロシクロアルキルの各水素原子は、独立して、ハロゲン、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨ_２、−ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＣＯ_２Ｈ、−ＣＯ_２Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−ＣＯＮＨ_２、−ＣＯＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、シクロアルキル、又は単環式ヘテロシクロアルキルで任意に置換されており；
各Ｒ^７及びＲ^８は、独立して、Ｈ、重水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、３〜７員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６−Ｃ_１０アリール又はヘテロアリールであり；
各Ｒ^９は、独立して、Ｈ、重水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、３〜７員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６−Ｃ_１０アリール、又は単環式若しくは二環式ヘテロアリールであり；ここで、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、３〜７員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６−Ｃ_１０アリール、又は単環式若しくは二環式ヘテロアリールの各水素原子は、独立して、重水素、ハロゲン、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_１−Ｃ_６ハロアルキル又は−ＯＲ^７で任意に置換されており；
各Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５、Ｚ^６又はＺ^７は、独立して、Ｎ、ＮＨ、又はＣ（Ｒ^１０）であり、各Ｒ^１０は、独立して、Ｈ、重水素、ハロゲン、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＯＨ、−ＮＨ_２、−ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨ（フェニル）、−ＮＨ（ヘテロアリール）、−ＣＮ、又は−ＣＦ_３であり；
但し、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５、Ｚ^６又はＺ^７のうちの少なくとも１つは、Ｎ又はＮＨである）
の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用であって、該患者は以前に癌治療薬で治療され、該癌治療薬に耐性を示すようになった癌を治療するための使用を提供する。

【0032】

【化12】

【0033】

Ｒ_２及びＲ_３の各々は独立して、Ｈ、重水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、Ｃ_６−Ｃ_１０アリール、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ^７又は−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^７Ｒ^８であり；ここで、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル及びＣ_６−Ｃ_１０アリールの各水素原子は、独立して、重水素、ハロゲン、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨ_２、−ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨＳ（Ｏ）（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨＳ（Ｏ）_２（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨＳ（Ｏ）ＮＨ_２、−ＮＨＳ（Ｏ）_２ＮＨ_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）ＮＨ_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２ＮＨ_２、−ＮＨＳ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨＳ（Ｏ）_２ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨＳ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＮＨＳ（Ｏ）_２Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＣＯ_２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＳＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｓ（Ｏ）Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｓ（Ｏ）_２Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｓ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）_２ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｐ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−Ｐ（Ｏ）（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、又は３〜７員のヘテロシクロアルキルで任意に置換されており；
Ｒ^４、Ｒ^４ａ及びＲ^５は、それぞれ独立して、Ｈ、フルオロ、クロロ、ブロモ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−ＯＨ、−ＣＮ、ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨＣ_１−Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２又は−ＣＦ_３であり；
Ｒ^６は、Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル又は３〜７員のヘテロシクロアルキルであり、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル又は３〜７員のヘテロシクロアルキルの各水素原子は、独立して、ハロゲン、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＮＨ_２、−ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、−ＣＯ_２Ｈ、−ＣＯ_２Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−ＣＯＮＨ_２、−ＣＯＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、シクロアルキル、又は単環式ヘテロシクロアルキルで任意に置換されており；
各Ｒ^７及びＲ^８は、独立して、Ｈ、重水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、３〜７員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６−Ｃ_１０アリール又はヘテロアリールであり；
各Ｒ^９は、独立して、Ｈ、重水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、３〜７員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６−Ｃ_１０アリール、又は単環式若しくは二環式ヘテロアリールであり；ここで、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、３〜７員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６−Ｃ_１０アリール、又は単環式若しくは二環式ヘテロアリールの各水素原子は、独立して、重水素、ハロゲン、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_１−Ｃ_６ハロアルキル又は−ＯＲ^７で任意に置換されており；
各Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５、Ｚ^６又はＺ^７は、独立して、Ｎ、ＮＨ、又はＣ（Ｒ^１０）であり、各Ｒ^１０は、独立して、Ｈ、重水素、ハロゲン、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、−ＯＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＯＨ、−ＮＨ_２、−ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、−ＮＨ（フェニル）、−ＮＨ（ヘテロアリール）、−ＣＮ、又は−ＣＦ_３であり；
但し、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５、Ｚ^６又はＺ^７のうちの少なくとも１つは、Ｎ又はＮＨである）
の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用であって、該患者は以前に癌治療薬で治療され、該癌治療薬に耐性を示すようになった癌を治療するための使用を提供する。

【0034】

上記の態様のいくつかの実施形態において、該化合物は、（７Ｓ，１３Ｒ）−１１−フルオロ−７，１３−ジメチル−６，７，１３，１４−テトラヒドロ−１，１５−エテノピラゾロ［４，３−ｆ]［１，４，８，１０]ベンゾキサトリアザシクロトリデシン−４（５Ｈ）−オン、又はその薬学的に許容される塩である。

【0035】

いくつかの実施形態において、該疾患は、ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、ＴＲＫＣ、ＪＡＫ２、ＳＲＣ、ＦＡＫ、ＡＲＫ５、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるチロシン又はセリン／スレオニンキナーゼによって媒介される。いくつかの実施形態において、該疾患は、受容体チロシンキナーゼによって媒介される。いくつかの実施形態において、該受容体チロシンキナーゼは、ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ及びＴＲＫＣからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、該受容体チロシンキナーゼは、ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ及びＴＲＫＣからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、該疾患は、非受容体キナーゼによって媒介される。いくつかの実施形態において、該非受容体キナーゼは、ＪＡＫ２、ＦＹＮ、ＬＹＮ、ＹＥＳ、ＦＧＲ、ＳＲＣ、ＦＡＫまたはＡＲＫ５である。いくつかの実施形態において、該非受容体キナーゼは、ＪＡＫ２、ＳＲＣ、ＦＡＫ又はＡＲＫ５である。いくつかの実施形態において、該疾患は、非受容体チロシンキナーゼによって媒介される。いくつかの実施形態において、該非受容体チロシンキナーゼは、ＪＡＫ２、ＳＲＣ又はＦＡＫある。いくつかの実施形態において、該疾患は、非受容体セリン／スレオニンキナーゼによって媒介される。いくつかの実施形態において、該非受容体セリン／スレオニンキナーゼはＡＲＫ５ある。いくつかの実施形態において、該疾患は、タンパク質チロシンキナーゼによって媒介される。いくつかの実施形態において、該タンパク質チロシンキナーゼはＴＸＫである。いくつかの実施形態において、該疾患は、ジスコイジンドメイン受容体によって媒介される。いくつかの実施形態において、該ジスコイジンドメイン受容体は、ＤＤＲ１である。いくつかの実施形態において、該疾患は、癌、乾癬、関節リウマチ、真性多血症、本態性血小板血症、潰瘍性大腸炎、及び骨髄線維症を伴う骨髄化生並びに疼痛からなる群から選択される。

【0036】

いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＡＬＫによって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、遺伝子改変されたＡＬＫによって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＡＬＫ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びタンパク質の二量体化又はオリゴマー化を促進するようにコイルドコイル相互作用を形成するタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＡＬＫ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片、及びＮＰＭ、ＥＭＬ４、ＴＰＲ、ＴＦＧ、ＡＴＩＣ、ＣＬＴＣ１、ＴＰＭ４、ＭＳＮＡＬＯ１７及びＭＹＨ９からなる群から選択される遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該融合タンパク質は、ＡＬＫ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＥＭＬ４遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む。いくつかの実施形態において、遺伝子改変されたＡＬＫは、ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合タンパク質は、野生型タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合タンパク質は、少なくとも１つの耐性変異を含む。いくつかの実施形態において、該ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合タンパク質は、Ｌ１１９６Ｍ、Ｇ１２０２Ｒ、Ｄ１２０３Ｒ、Ｌ１１５２Ｐ／Ｒ、Ｆ１１７４Ｃ／Ｌ／Ｖ、Ｃ１１５６Ｙ、Ｉ１１７１Ｎ、Ｇ１１２３Ｓ、Ｓ１２０６Ｙ、Ｇ１２６９Ｓ／Ａ、及び１１５１Ｔ挿入からなる群から選択される少なくとも１つの変異を含む。

【0037】

いくつかの実施形態において、該融合タンパク質は、ＡＬＫ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＮＰＭ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む。いくつかの実施形態において、遺伝子改変されたＡＬＫは、ＮＰＭ−ＡＬＫ融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、該融合タンパク質は、ＡＬＫ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＴＰＲ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む。いくつかの実施形態において、遺伝子改変されたＡＬＫは、ＴＰＲ−ＡＬＫ融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＴＰＲ−ＡＬＫ融合タンパク質は、野生型タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＴＰＲ−ＡＬＫ融合タンパク質は、少なくとも１つの耐性変異を含む。いくつかの実施形態において、該ＴＰＲ−ＡＬＫ融合タンパク質は、Ｌ１１９６Ｍ点変異を含む。

【0038】

いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＡＬＫによって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、遺伝子改変されたＡＬＫによって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、１以上の点変異を有するＡＬＫによって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、Ｒ１０５０Ｈ、Ｆ１１７４Ｃ／Ｉ／Ｌ／Ｓ／Ｖ、Ｆ１２４５Ｃ／Ｉ／Ｌ／Ｖ、Ｒ１２７Ｌ／Ｑ、Ｔ１１５１Ｍ、Ｍ１１６６Ｒ、Ｉ１１７０Ｎ、Ｉ１１７０Ｓ、Ｉ１１７１Ｎ、Ｉ１１８３Ｔ、Ｌ１１９６Ｍ、Ａ１２００Ｖ、Ｌ１２０４Ｆ、Ｌ１２４０Ｖ、Ｄ１２７０Ｇ、Ｙ１２７８Ｓ、Ｒ１１９２Ｐ、Ｇ１１２８Ａ、Ｇ１２８６Ｒ、及びＴ１３４３Ｉからなる群から選択される１以上の点変異を有するＡＬＫによって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該点変異はＦ１１７４での変異である。いくつかの実施形態において、該点変異は、Ｆ１２４５でのＡＬＫの変異である。いくつかの実施形態において、該点変異は、Ｒ１２７５でのＡＬＫの変異である。

【0039】

いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＲＯＳ１によって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、遺伝子改変されたＲＯＳ１によって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＲＯＳ１遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びタンパク質の二量体化又はオリゴマー化を促進するようにコイルドコイル相互作用を形成するタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＲＯＳ１遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＦＩＧ、ＴＰＭ３、ＳＤＣ４、ＳＬＣ３４Ａ２、ＣＤ７４、ＥＺＲ、及びＬＲＩＧ３からなる群から選択される遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該融合タンパク質は、ＲＯＳ１遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＣＤ７４遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む。いくつかの実施形態において、遺伝子改変されたＲＯＳ１は、ＣＤ７４−ＲＯＳ１融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＣＤ７４−ＲＯＳ１融合タンパク質は、野生型タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＣＤ７４−ＲＯＳ１融合タンパク質は、少なくとも１つの耐性変異を含む。いくつかの実施形態において、該ＣＤ７４−ＲＯＳ１融合タンパク質は、Ｇ２０３２Ｒ点変異を含む。いくつかの実施形態において、該ＣＤ７４−ＲＯＳ１融合タンパク質は、Ｌ２０２６Ｍ点変異を含む。いくつかの実施形態において、該ＣＤ７４−ＲＯＳ１融合タンパク質は、Ｄ２０３３Ｎ点変異を含む。いくつかの実施形態において、遺伝子改変されたＲＯＳ１は、ＳＤＣ４−ＲＯＳ１融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＳＤＣ４−ＲＯＳ１融合タンパク質は、野生型タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＳＤＣ４−ＲＯＳ１融合タンパク質は、少なくとも１つの耐性変異を含む。いくつかの実施形態において、該ＳＤＣ４−ＲＯＳ１融合タンパク質は、Ｇ２０３２Ｒ点変異を含む。いくつかの実施形態において、遺伝子改変されたＲＯＳ１は、ＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合タンパク質は、野生型タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合タンパク質は、少なくとも１つの耐性変異を含む。いくつかの実施形態において、該ＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合タンパク質は、Ｇ２０３２Ｒ点変異を含む。

【0040】

いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＴＲＫＡによって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、遺伝子改変されたＴＲＫＡによって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＴＲＫＡ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びタンパク質の二量体化又はオリゴマー化を促進するようにコイルドコイル相互作用を形成するタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＴＲＫＡ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＴＰＭ３遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、遺伝子改変されたＴＲＫＡは、該ＴＰＭ３−ＴＲＫＡ融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＴＰＭ３−ＴＲＫＡ融合タンパク質は、野生型タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＴＰＭ３−ＴＲＫＡ融合タンパク質は、少なくとも１つの耐性変異を含む。

【0041】

いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＴＲＫＡ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＬＭＮＡ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、遺伝子改変されたＴＲＫＡは、ＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ融合タンパク質は、野生型タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ融合タンパク質は、少なくとも１つの耐性変異を含む。いくつかの実施形態において、該ＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ融合タンパク質は、野生型タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ融合タンパク質は、Ｇ５９５Ｒ点変異を含む少なくとも１つの耐性変異を含む。

【0042】

いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＴＲＫＢによって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、遺伝子改変されたＴＲＫＢによって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＴＲＫＢ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片、及びタンパク質の二量体化又はオリゴマー化を促進するようにコイルドコイル相互作用を形成するタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＴＲＫＢ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＱＫＩ遺伝子又はＴＥＬ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＴＲＫＢ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＱＫＩ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＴＲＫＢ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＴＥＬ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、遺伝子改変されたＴＲＫＢは、ＱＫＩ−ＴＲＫＢ又はＴＥＬ−ＴＲＫＢ融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、遺伝子改変されたＴＲＫＢは、ＴＥＬ−ＴＲＫＢ融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、遺伝子改変されたＴＲＫＢは、ＱＫＩ−ＴＲＫＢ融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＱＫＩ−ＴＲＫＢ又はＴＥＬ−ＴＲＫＢ融合タンパク質は、野生型タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＱＫＩ−ＴＲＫＢ融合タンパク質は、野生型タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＴＥＬ−ＴＲＫＢ融合タンパク質は、野生型タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＱＫＩ−ＴＲＫＢ又はＴＥＬ−ＴＲＫＢ融合タンパク質は、少なくとも１つの耐性変異を含む。いくつかの実施形態において、該ＱＫＩ−ＴＲＫＢ融合タンパク質は、少なくとも１つの耐性変異を含む。いくつかの実施形態において、該ＴＥＬ−ＴＲＫＢ融合タンパク質は、少なくとも１つの耐性変異を含む。いくつかの実施形態において、該ＴＥＬ−ＴＲＫＢ融合タンパク質は、Ｇ６３９Ｒ点変異を含む。

【0043】

いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＴＲＫＣによって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、遺伝子改変されたＴＲＫＣによって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＴＲＫＣ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片、及びタンパク質の二量体化又はオリゴマー化を促進するようにコイルドコイル相互作用を形成するタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＴＲＫＣ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＥＴＶ６遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、遺伝子改変されたＴＲＫＣは、ＥＴＶ６−ＴＲＫＣ融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＥＴＶ６−ＴＲＫＣ融合タンパク質は、野生型タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＥＴＶ６−ＴＲＫＣ融合タンパク質は、少なくとも１つの耐性変異を含む。いくつかの実施形態において、該ＥＴＶ６−ＴＲＫＣ融合タンパク質は、Ｇ６２３Ｒ点変異を含む。

【0044】

いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２又はＪＡＫ３によって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、遺伝子改変されたＪＡＫ２によって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＪＡＫ２遺伝子によってコードされるタンパク質の断片、及びタンパク質の二量体化又はオリゴマー化を促進するようにコイルドコイル相互作用を形成するタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＪＡＫ２遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＴＥＬ又はＰＣＭ１遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、遺伝子改変されたＪＡＫ２は、ＴＥＬ−ＪＡＫ２融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、遺伝子改変されたＪＡＫ２は、ＰＣＭ１−ＪＡＫ２融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＪＡＫ２の点変異（複数可）によって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、遺伝子改変されたＪＡＫ２は、ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ変異を有する。

【0045】

いくつかの実施形態において、該疾患は疼痛である。いくつかの実施形態において、該疾患は、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ又はＴＲＫＣによって媒介される疼痛である。いくつかの実施形態において、該疼痛は、ＴＲＫＡによって媒介される。いくつかの実施形態において、該疼痛は、ＴＲＫＢによって媒介される。いくつかの実施形態において、該疼痛は、ＴＲＫＣによって媒介される。いくつかの実施形態において、該疾患は、乾癬、関節リウマチ、真性多血症、本態性血小板血症、潰瘍性大腸炎、及び骨髄線維症を伴う骨髄化生からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、バイパス耐性を示す癌である。

【0046】

いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、ＦＧＲによって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該疾患又は癌は、遺伝子改変されたＦＧＲによって媒介される癌である。いくつかの実施形態において、該融合タンパク質は、ＦＧＲ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＷＡＳＦ２遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む。いくつかの実施形態において、遺伝子改変されたＦＧＲは、ＷＡＳＦ２−ＦＧＲ融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＷＡＳＦ２−ＦＧＲ融合タンパク質は、野生型タンパク質である。いくつかの実施形態において、該ＷＡＳＦ２−ＦＧＲ融合タンパク質は、少なくとも１つの耐性変異を含む。

【0047】

いくつかの実施形態において、該癌は、ＡＬＣＬ、ＮＳＣＬＣ、神経芽腫、炎症性筋線維芽細胞腫瘍、成人の腎細胞癌、小児腎細胞癌、乳癌、結腸腺癌、神経膠芽腫、多形神経膠芽腫及び未分化甲状腺癌からなる群から選択される。

【0048】

いくつかの実施形態において、該癌は、神経膠芽腫、多形神経膠芽腫、ＮＳＣＬＣ、胆管癌、卵巣癌、胃腺癌、結腸直腸癌、炎症性筋線維芽細胞腫瘍、血管肉腫、及び類上皮血管内皮腫からなる群から選択される。

【0049】

いくつかの実施形態において、該癌は、神経膠芽腫、多形神経膠芽腫、ＮＳＣＬＣ、胆管癌、肝内胆管癌、結腸直腸癌、甲状腺乳頭癌、スピッツ腫瘍、肉腫、星細胞腫、脳の低グレードの神経膠腫、分泌乳癌、乳腺相似癌（ｍａｍｍａｒｙａｎａｌｏｇｕｅｃａｒｃｉｎｏｍａ）、乳癌、急性骨髄性白血病、先天性中胚葉性腎腫、先天性線維肉腫、Ｐｈ−様急性リンパ芽球性白血病、結腸腺癌、甲状腺癌、皮膚黒色腫、頭頸部扁平上皮癌及び小児神経膠腫からなる群から選択される。

【0050】

いくつかの実施形態において、該癌は、ＮＳＣＬＣ、神経芽腫、乳癌、結腸癌及び前立腺癌からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、該癌はＮＳＣＬＣである。いくつかの実施形態において、該癌は神経芽腫である。いくつかの実施形態において、該癌は結腸直腸癌である。

【0051】

いくつかの実施形態において、該患者は、癌治療薬で以前に治療されている。いくつかの実施形態において、該患者は、癌治療薬で以前に治療されており、該癌は該癌治療薬に対する耐性を発症した。いくつかの実施形態において、該耐性は一次内因性耐性である。いくつかの実施形態において、該耐性は、変異（複数可）からの獲得耐性である。いくつかの実施形態において、該耐性はバイパス耐性である。いくつかの実施形態において、該耐性はＥＭＴベース耐性である。

【0052】

本開示のさらなる実施形態、特徴、及び利点は、以下の発明を実施するための形態から、及び本開示の実践を通して明らかとなるであろう。本開示の化合物は、以下の列挙された条項のいずれかの中の実施形態として記載され得る。本明細書に記載の実施形態のいずれかは、実施形態が互いに矛盾しない程度に本明細書に記載の任意の他の実施形態に関連して使用することができることを理解されたい。

【0053】

１．患者の疾患を治療する方法であって、治療有効量の（７Ｓ，１３Ｒ）−１１−フルオロ−７，１３−ジメチル−６，７，１３，１４−テトラヒドロ−１，１５−エテノピラゾロ［４，３−ｆ]［１，４，８，１０]ベンゾキサトリアザシクロトリデシン−４（５Ｈ）−オン、又はその薬学的に許容される塩を該患者へ投与することを含む、前記方法。

【0054】

２．該疾患が、ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、ＴＲＫＣ、ＪＡＫ２、ＳＲＣ、ＦＹＮ、ＬＹＮ、ＹＥＳ、ＦＧＲ、ＦＡＫ、及びＡＲＫ５、及びこれらの組み合わせ；又はＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、ＴＲＫＣ、ＪＡＫ２、ＳＲＣ、ＦＡＫ、及びＡＲＫ５、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるチロシン又はセリン／スレオニンキナーゼによって媒介される、条項１に記載の方法。

【0055】

３．該疾患が、受容体チロシンキナーゼによって媒介される、条項１に記載の方法。

【0056】

４．該受容体チロシンキナーゼが、ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ及びＴＲＫＣからなる群から選択される、条項３に記載の方法。

【0057】

５．該疾患が、非受容体キナーゼによって媒介される、条項１に記載の方法。

【0058】

６．該非受容体キナーゼが、非受容体チロシンキナーゼＪＡＫ２、ＦＹＮ、ＬＹＮ、ＹＥＳ、ＦＧＲ、ＳＲＣ若しくはＦＡＫを含むＪＡＫ２、ＦＹＮ、ＬＹＮ、ＹＥＳ、ＦＧＲ、ＳＲＣ、ＦＡＫ若しくはＡＲＫ５、又は非受容体セリン／スレオニンキナーゼＡＲＫ５である、条項５に記載の方法。

【0059】

７．該疾患が、癌、乾癬、関節リウマチ、真性多血症、本態性血小板血症、潰瘍性大腸炎、及び骨髄線維症を伴う骨髄化生並びに疼痛からなる群から選択される、条項１〜６のいずれか一項に記載の方法。

【0060】

８．該疾患が癌である、条項１〜６のいずれか一項に記載の方法。

【0061】

９．該疾患がＡＬＫによって媒介される癌である、条項１〜４、７又は８のいずれか一項に記載の方法。

【0062】

１０．該疾患が、遺伝子改変されたＡＬＫによって媒介される癌である、条項１〜４、７又は８のいずれか一項に記載の方法。

【0063】

１１．該疾患が、ＡＬＫ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片、並びにＮＰＭ、ＥＭＬ４、ＴＰＲ、ＴＦＧ、ＡＴＩＣ、ＣＬＴＣ１、ＴＰＭ４、ＭＳＮＡＬＯ１７及びＭＹＨ９からなる群から選択される遺伝子よってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である、条項１〜４、７又は８のいずれか一項に記載の方法。

【0064】

１２．該融合タンパク質が、ＡＬＫ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＥＭＬ４遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む、条項１１に記載の方法。

【0065】

１３．遺伝子改変されたＡＬＫが、ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合タンパク質である、条項１０に記載の方法。

【0066】

１４．該ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合タンパク質が、野生型タンパク質である、条項１３に記載の方法。

【0067】

１５．該ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合タンパク質が、少なくとも１つの耐性変異を含む、条項１３に記載の方法。

【0068】

１６．該ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合タンパク質が、Ｌ１１９６Ｍ、Ｇ１２０２Ｒ、Ｄ１２０３Ｒ、Ｌ１１５２Ｐ／Ｒ、Ｆ１１７４Ｃ／Ｌ／Ｖ、Ｃ１１５６Ｙ、Ｉ１１７１Ｎ、Ｇ１１２３Ｓ、Ｓ１２０６Ｙ、Ｇ１２６９Ｓ／Ａ、及び１１５１Ｔ挿入からなる群から選択される少なくとも１つの変異を含む、条項１３に記載の方法。

【0069】

１７．該変異がＬ１１９６Ｍである、条項１６に記載の方法。

【0070】

１８．該変異がＧ１２０２Ｒである、条項１６に記載の方法。

【0071】

１９．該変異がＬ１１５２Ｐである、条項１６に記載の方法。

【0072】

２０．該変異がＦ１１７４Ｃである、条項１６に記載の方法。

【0073】

２１．該変異がＣ１１５６Ｙである、条項１６に記載の方法。

【0074】

２２．該変異がＩ１１７１Ｎである、条項１６に記載の方法。

【0075】

２３．該変異がＧ１２６９Ｓである、条項１６に記載の方法。

【0076】

２４．該変異が１１５１Ｔ挿入である、条項１６に記載の方法。

【0077】

２５．該融合タンパク質が、ＡＬＫ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＮＰＭ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む、条項１１に記載の方法。

【0078】

２６．遺伝子改変されたＡＬＫが、ＮＰＭ−ＡＬＫ融合タンパク質である、条項１０に記載の方法。

【0079】

２７．該融合タンパク質が、ＡＬＫ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＴＰＲ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む、条項１１に記載の方法。

【0080】

２８．遺伝子改変されたＡＬＫが、ＴＰＲ−ＡＬＫ融合タンパク質である、条項１０に記載の方法。

【0081】

２９．該ＴＰＲ−ＡＬＫ融合タンパク質が、野生型タンパク質である、条項２８に記載の方法。

【0082】

３０．該ＴＰＲ−ＡＬＫ融合タンパク質が、少なくとも１つの耐性変異を含む、条項２８に記載の方法。

【0083】

３１．該ＴＰＲ−ＡＬＫ融合タンパク質が、Ｌ１１９６Ｍ点変異を含む、条項２８に記載の方法。

【0084】

３２．該疾患が、１以上の点変異を有するＡＬＫによって媒介される癌である、条項１〜４のいずれか一項に記載の方法。

【0085】

３３．該疾患が、Ｒ１０５０Ｈ、Ｆ１１７４Ｃ／Ｉ／Ｌ／Ｓ／Ｖ、Ｆ１２４５Ｃ／Ｉ／Ｌ／Ｖ、Ｒ１２７Ｌ／Ｑ、Ｔ１１５１Ｍ、Ｍ１１６６Ｒ、Ｉ１１７０Ｎ、Ｉ１１７０Ｓ、Ｉ１１７１Ｎ、Ｉ１１８３Ｔ、Ｌ１１９６Ｍ、Ａ１２００Ｖ、Ｌ１２０４Ｆ、Ｌ１２４０Ｖ、Ｄ１２７０Ｇ、Ｙ１２７８Ｓ、Ｒ１１９２Ｐ、Ｇ１１２８Ａ、Ｇ１２８６Ｒ、及びＴ１３４３Ｉからなる群から選択される１以上の点変異を有するＡＬＫによって媒介される癌である、条項１〜４又は３２のいずれか一項に記載の方法。

【0086】

３４．該点変異が、Ｆ１１７４でのＡＬＫの変異である、条項１〜４、３２又は３３項のいずれか一項に記載の方法。

【0087】

３５．該点変異が、Ｆ１２４５でのＡＬＫの変異である、条項１〜４、３２又は３３項のいずれか一項に記載の方法。

【0088】

３６．該点変異が、Ｒ１２７５でのＡＬＫの変異である、条項１〜４、３２又は３３項のいずれか一項に記載の方法。

【0089】

３７．該癌が、ＡＬＣＬ、ＮＳＣＬＣ、神経芽腫、炎症性筋線維芽細胞腫瘍、成人の腎細胞癌、小児腎細胞癌、乳癌、結腸腺癌、神経膠芽腫、多形神経膠芽腫及び未分化甲状腺癌からなる群から選択される、条項９〜３６のいずれか一項に記載の方法。

【0090】

３８．該癌がＮＳＣＬＣである、条項９〜３７のいずれか一項に記載の方法。

【0091】

３９．該疾患がＲＯＳ１によって媒介される癌である、条項１〜４、７又は８のいずれか一項に記載の方法。

【0092】

４０．該疾患が、遺伝子改変されたＲＯＳ１によって媒介される癌である、条項１〜４、７又は８のいずれか一項に記載の方法。

【0093】

４１．該疾患が、ＲＯＳ１遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＦＩＧ、ＴＰＭ３、ＳＤＣ４、ＳＬＣ３４Ａ２、ＣＤ７４、ＥＺＲ、及びＬＲＩＧ３からなる群から選択される遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である、条項１〜４、７又は８のいずれか一項に記載の方法。

【0094】

４２．該融合タンパク質が、ＲＯＳ１遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＣＤ７４遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む、条項４１に記載の方法。

【0095】

４３．該遺伝子改変されたＲＯＳ１が、ＣＤ７４−ＲＯＳ１融合タンパク質である、条項４０に記載の方法。

【0096】

４４．該ＣＤ７４−ＲＯＳ１融合タンパク質が、野生型タンパク質である、条項４３に記載の方法。

【0097】

４５．該ＣＤ７４−ＲＯＳ１融合タンパク質が、少なくとも１つの耐性変異を含む、条項４３に記載の方法。

【0098】

４６．該ＣＤ７４−ＲＯＳ１融合タンパク質が、Ｇ２０３２Ｒ、Ｌ２０２６Ｍ又はＤ２０３３Ｎ点変異を含む、条項４３に記載の方法。

【0099】

４７．該遺伝子改変されたＲＯＳ１が、ＳＤＣ４−ＲＯＳ１融合タンパク質である、条項４０に記載の方法。

【0100】

４８．該ＳＤＣ４−ＲＯＳ１融合タンパク質が、野生型タンパク質である、条項４７に記載の方法。

【0101】

４９．該ＳＤＣ４−ＲＯＳ１融合タンパク質が、少なくとも１つの耐性変異を含む、条項４７に記載の方法。

【0102】

５０．該ＳＤＣ４−ＲＯＳ１融合タンパク質が、Ｇ２０３２Ｒ点変異を含む、条項４７に記載の方法。

【0103】

５１．該遺伝子改変されたＲＯＳ１が、ＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合タンパク質である、条項４０に記載の方法。

【0104】

５２．該ＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合タンパク質が、野生型タンパク質である、条項５１に記載の方法。

【0105】

５３．該ＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合タンパク質が、少なくとも１つの耐性変異を含む、条項５１に記載の方法。

【0106】

５４．該ＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合タンパク質が、Ｇ２０３２Ｒ点変異を含む、条項５１に記載の方法。

【0107】

５５．該癌が、神経膠芽腫、多形神経膠芽腫、ＮＳＣＬＣ、胆管癌、卵巣癌、胃腺癌、結腸直腸癌、炎症性筋線維芽細胞腫瘍、血管肉腫、及び類上皮血管内皮腫からなる群から選択される、条項１〜４、７、８、又は３９〜５４のいずれか一項に記載の方法。

【0108】

５６．該癌がＮＳＣＬＣである、条項１〜４、７、８、又は３９〜５５のいずれか一項に記載の方法。

【0109】

５７．該疾患が、ＴＲＫＡによって媒介される癌である、条項１〜４、７又は８のいずれか一項に記載の方法。

【0110】

５８．該疾患が、遺伝子改変されたＴＲＫＡによって媒介される癌である、条項１〜４、７又は８のいずれか一項に記載の方法。

【0111】

５９．該疾患が、ＴＲＫＡ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＴＰＭ３遺伝子又はＬＭＮＡ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である、条項１〜４、７又は８のいずれか一項に記載の方法。

【0112】

６０．該遺伝子改変されたＴＲＫＡが、ＴＰＭ３−ＴＲＫＡ又はＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ融合タンパク質である、条項５８に記載の方法。

【0113】

６１．該ＴＰＭ３−ＴＲＫＡ又はＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ融合タンパク質が、野生型タンパク質である、条項６０に記載の方法。

【0114】

６２．該ＴＰＭ３−ＴＲＫＡ又はＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ融合タンパク質が、Ｇ５９５Ｒ点変異を含むＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ融合タンパク質を含めて、少なくとも１つの耐性変異を含む、条項６０に記載の方法。

【0115】

６３．該疾患が、ＴＲＫＢによって媒介される癌である、条項１〜４、７又は８のいずれか一項に記載の方法。

【0116】

６４．該疾患が、ＱＫＩ−ＴＲＫＢ又はＧ６３９Ｒ点変異を含むＴＥＬ−ＴＲＫＢを含むＴＥＬ−ＴＲＫＢを含めて、遺伝子改変されたＴＲＫＢによって媒介される癌である、条項１〜４、７又は８のいずれか一項に記載の方法。

【0117】

６５．該疾患が、ＴＲＫＣによって媒介される癌である、条項１〜４、７又は８のいずれか一項に記載の方法。

【0118】

６６．該疾患が、ＥＴＶ６−ＴＲＫＣ融合タンパク質、遺伝子改変されたＥＴＶ６−ＴＲＫＣ融合タンパク質、Ｇ３２６Ｒ点変異を含むＥＴＶ６−ＴＲＫＣ融合タンパク質を含めて、遺伝子改変されたＴＲＫＣによって媒介される癌である、条項１〜４、７又は８のいずれか一項に記載の方法。

【0119】

６７．該癌が、神経膠芽腫、多形神経膠芽腫、ＮＳＣＬＣ、胆管癌、肝内胆管癌、結腸直腸癌、甲状腺乳頭癌、スピッツ腫瘍、肉腫、星細胞腫、脳の低グレードの神経膠腫、分泌乳癌、乳腺相似癌、乳癌、急性骨髄性白血病、先天性中胚葉性腎腫、先天性線維肉腫、Ｐｈ−様急性リンパ芽球性白血病、結腸腺癌、甲状腺癌、皮膚黒色腫、頭頸部扁平上皮癌及び小児神経膠腫からなる群から選択される、条項１〜４、７、８、又は５７〜６６のいずれか一項に記載の方法。

【0120】

６８．該癌がＮＳＣＬＣである、条項１〜４、７、８又は５７〜６７のいずれか一項に記載の方法。

【0121】

６９．該癌が結腸直腸癌である、条項１〜４、７、８又は５７〜６７のいずれか一項に記載の方法。

【0122】

７０．該疾患が、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２又はＪＡＫ３によって媒介される癌である、条項１〜４、７又は８のいずれか一項に記載の方法。

【0123】

７１．該疾患が、遺伝子改変されたＪＡＫ２によって媒介される癌である、条項１〜４、７又は８のいずれか一項に記載の方法。

【0124】

７２．該疾患が、ＪＡＫ２遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＴＥＬ又はＰＣＭ１遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質によって媒介される癌である、条項１〜４、７又は８のいずれか一項に記載の方法。

【0125】

７３．該遺伝子改変されたＪＡＫ２が、ＴＥＬ−ＪＡＫ２融合タンパク質である、条項７１に記載の方法。

【0126】

７４．該遺伝子改変されたＪＡＫ２が、ＰＣＭ１−ＪＡＫ２融合タンパク質である、条項７１に記載の方法。

【0127】

７５．該遺伝子改変されたＪＡＫ２が、Ｖ６１７Ｆ点変異を含む、条項７１に記載の方法。

【0128】

７６．該疾患が、ＳＲＣによって媒介される癌である、条項１〜４、７又は８のいずれか一項に記載の方法。

【0129】

７７．該癌が、神経膠芽腫、多形神経膠芽腫、ＮＳＣＬＣ、胆管癌、肝内胆管癌、結腸直腸癌、甲状腺乳頭癌、スピッツ腫瘍、肉腫、星細胞腫、脳の低グレードの神経膠腫、分泌乳癌、乳腺相似癌、乳癌、急性骨髄性白血病、先天性中胚葉性腎腫、先天性線維肉腫、Ｐｈ−様急性リンパ芽球性白血病、結腸腺癌、甲状腺癌、皮膚黒色腫、頭頸部扁平上皮癌及び小児神経膠腫からなる群から選択される、条項７６に記載の方法。

【0130】

７８．該疾患が疼痛である、条項１〜４のいずれか一項に記載の方法。

【0131】

７９．該疾患が、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ又はＴＲＫＣによって媒介される疼痛である、条項１〜４のいずれか一項に記載の方法。

【0132】

８０．該疼痛がＴＲＫＡによって媒介される、条項７９に記載の方法。

【0133】

８１．該疼痛がＴＲＫＢによって媒介される、条項７９に記載の方法。

【0134】

８２．該疼痛がＴＲＫＣによって媒介される、条項７９に記載の方法。

【0135】

８３．該疾患が、乾癬、関節リウマチ、真性多血症、本態性血小板血症、潰瘍性大腸炎、及び骨髄線維症を伴う骨髄化生からなる群から選択される、条項１〜３、５又は６のいずれか一項に記載の方法。

【0136】

８４．該疾患が、バイパス耐性を示す癌である、条項１、５、６又は８のいずれか一項に記載の方法。

【0137】

８５．遺伝子改変されたチロシン又はセリン／スレオニンキナーゼを発現することが以前に示された患者の癌を治療する方法であって、治療有効量の（７Ｓ，１３Ｒ）−１１−フルオロ−７，１３−ジメチル−６，７，１３，１４−テトラヒドロ−１，１５−エテノピラゾロ［４，３−ｆ]［１，４，８，１０]ベンゾキサトリアザシクロトリデシン（ｂｅｎｚｏｘａｔｒｉａｚａｃｙｃｌｏｔｒｉｄｅｃｉｎ）−４（５Ｈ）−オン、又はその薬学的に許容される塩を該患者に投与することを含む、前記方法。

【0138】

８６．該遺伝子改変されたチロシンキナーゼが、遺伝子改変されたＡＬＫ、遺伝子改変されたＲＯＳ１、遺伝子改変されたＴＲＫ及び遺伝子改変されたＪＡＫからなる群から選択される、条項８５に記載の方法。

【0139】

８７．該遺伝子改変されたＡＬＫが、ＡＬＫ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片並びにＮＰＭ、ＥＭＬ４、ＴＰＲ、ＴＦＧ、ＡＴＩＣ、ＣＬＴＣ１、ＴＰＭ４、ＭＳＮＡＬＯ１７及びＭＹＨ９からなる群から選択される遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質である、条項８６に記載の方法。

【0140】

８８．該融合タンパク質が、ＡＬＫ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＥＭＬ４遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む、条項８７に記載の方法。

【0141】

８９．該遺伝子改変されたＡＬＫが、ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合タンパク質である、条項８６に記載の方法。

【0142】

９０．該ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合タンパク質が、野生型タンパク質である、条項８９に記載の方法。

【0143】

９１．該ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合タンパク質が、少なくとも１つの耐性変異を含む、条項８９に記載の方法。

【0144】

９２．該ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合タンパク質が、Ｌ１１９６Ｍ、Ｇ１２０２Ｒ、Ｄ１２０３Ｒ、Ｌ１１５２Ｐ／Ｒ、Ｆ１１７４Ｃ／Ｌ／Ｖ、Ｃ１１５６Ｙ、Ｉ１１７１Ｎ、Ｇ１１２３Ｓ、Ｓ１２０６Ｙ、Ｇ１２６９Ｓ／Ａ、及び１１５１Ｔ挿入からなる群から選択される少なくとも１つの変異を含む、条項８９に記載の方法。

【0145】

９３．該融合タンパク質が、ＡＬＫ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＮＰＭ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む、条項８７に記載の方法。

【0146】

９４．該遺伝子改変されたＡＬＫが、ＮＰＭ−ＡＬＫ融合タンパク質である、条項８６に記載の方法。

【0147】

９５．該融合タンパク質が、ＡＬＫ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＴＰＲ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む、条項８７に記載の方法。

【0148】

９６．該遺伝子改変されたＡＬＫが、ＴＰＲ−ＡＬＫ融合タンパク質である、条項８６に記載の方法。

【0149】

９７．該ＴＰＲ−ＡＬＫ融合タンパク質が、野生型タンパク質である、条項９６に記載の方法。

【0150】

９８．該ＴＰＲ−ＡＬＫ融合タンパク質が、少なくとも１つの耐性変異を含む、条項９６に記載の方法。

【0151】

９９．該ＴＰＲ−ＡＬＫ融合タンパク質が、Ｌ１１９６Ｍ点変異を含む、条項９８に記載の方法。

【0152】

１００．該癌がバイパス耐性機構を示す、条項８５〜９９のいずれか一項に記載の方法。

【0153】

１０１．該バイパス耐性機構が、ＳＲＣによって媒介される、条項１００に記載の方法。

【0154】

１０２．該癌が、ＡＬＣＬ、ＮＳＣＬＣ、神経芽腫、炎症性筋線維芽細胞腫瘍、成人の腎細胞癌、小児腎細胞癌、乳癌、結腸腺癌、神経膠芽腫、多形神経膠芽腫及び未分化甲状腺癌からなる群から選択される、条項８５〜１０１のいずれか一項に記載の方法。

【0155】

１０３．該癌がＮＳＣＬＣである、条項８５〜１０２のいずれか一項に記載の方法。

【0156】

１０４．該遺伝子改変されたＲＯＳ１が、ＲＯＳ１遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＦＩＧ、ＴＰＭ３、ＳＤＣ４、ＳＬＣ３４Ａ２、ＣＤ７４、ＥＺＲ、及びＬＲＩＧ３からなる群から選択される遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質である、条項８６に記載の方法。

【0157】

１０５．該融合タンパク質が、ＲＯＳ１遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＣＤ７４遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む、条項１０４に記載の方法。

【0158】

１０６．該遺伝子改変されたＲＯＳ１が、ＣＤ７４−ＲＯＳ１融合タンパク質である、条項１０４に記載の方法。

【0159】

１０７．該ＣＤ７４−ＲＯＳ１融合タンパク質が、野生型タンパク質である、条項１０６に記載の方法。

【0160】

１０８．該ＣＤ７４−ＲＯＳ１融合タンパク質が、少なくとも１つの耐性変異を含む、条項１０６に記載の方法。

【0161】

１０９．該ＣＤ７４−ＲＯＳ１融合タンパク質が、Ｇ２０３２Ｒ、Ｌ２０２６Ｍ又はＤ２０３３Ｎ点変異を含む、条項１０６に記載の方法。

【0162】

１１０．該遺伝子改変されたＲＯＳ１が、ＳＤＣ４−ＲＯＳ１融合タンパク質である、条項１０５に記載の方法。

【0163】

１１１．該ＳＤＣ４−ＲＯＳ１融合タンパク質が、野生型タンパク質である、条項１１０に記載の方法。

【0164】

１１２．該ＳＤＣ４−ＲＯＳ１融合タンパク質が、少なくとも１つの耐性変異を含む、条項１１０に記載の方法。

【0165】

１１３．該ＳＤＣ４−ＲＯＳ１融合タンパク質が、Ｇ２０３２Ｒ点変異を含む、条項１１０に記載の方法。

【0166】

１１４．該遺伝子改変されたＲＯＳ１が、ＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合タンパク質である、条項１０５に記載の方法。

【0167】

１１５．該ＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合タンパク質が、野生型タンパク質である、条項１１４に記載の方法。

【0168】

１１６．該ＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合タンパク質が、少なくとも１つの耐性変異を含む、条項１１４に記載の方法。

【0169】

１１７．該ＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合タンパク質が、Ｇ２０３２Ｒ点変異を含む、条項１１４に記載の方法。

【0170】

１１８．該癌が、神経膠芽腫、多形神経膠芽腫、ＮＳＣＬＣ、胆管癌、卵巣癌、胃腺癌、結腸直腸癌、炎症性筋線維芽細胞腫瘍、血管肉腫、及び類上皮血管内皮腫からなる群から選択される、条項８５、８６又は１０４〜１１７のいずれか一項に記載の方法。

【0171】

１１９．該癌がＮＳＣＬＣである、条項８５、８６又は１０４〜１１８のいずれか一項に記載の方法。

【0172】

１２０．該遺伝子改変されたＴＲＫが、ＴＲＫＡ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＴＰＭ３遺伝子又はＬＭＮＡ遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質である、条項８６に記載の方法。

【0173】

１２１．該遺伝子改変されたＴＲＫが、ＴＰＭ３−ＴＲＫＡ又はＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ融合タンパク質である、条項８６に記載の方法。

【0174】

１２２．該ＴＰＭ３−ＴＲＫＡ又はＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ融合タンパク質が、野生型タンパク質である、条項１２１に記載の方法。

【0175】

１２３．該ＴＰＭ３−ＴＲＫＡ又はＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ融合タンパク質が、少なくとも１つの耐性変異を含む、条項１２１に記載の方法。

【0176】

１２４．該癌が、神経膠芽腫、多形神経膠芽腫、ＮＳＣＬＣ、胆管癌、肝内胆管癌、結腸直腸癌、甲状腺乳頭癌、スピッツ腫瘍、肉腫、星細胞腫、脳の低グレードの神経膠腫、分泌乳癌、乳腺相似癌、乳癌、急性骨髄性白血病、先天性中胚葉性腎腫、先天性線維肉腫、Ｐｈ−様急性リンパ芽球性白血病、結腸腺癌、甲状腺癌、皮膚黒色腫、頭頸部扁平上皮癌及び小児神経膠腫からなる群から選択される、条項８６、８７又は１２０〜１２３のいずれか一項に記載の方法。

【0177】

１２５．該癌がＮＳＣＬＣである、条項８５、８６又は１２０〜１２３のいずれか一項に記載の方法。

【0178】

１２６．該癌が結腸直腸癌である、条項７９、８０又は１２０〜１２３のいずれか一項に記載の方法。

【0179】

１２７．該遺伝子改変されたＪＡＫが、ＪＡＫ２遺伝子によってコードされるタンパク質の断片及びＴＥＬ又はＰＣＭ１遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を含む融合タンパク質である、条項８６に記載の方法。

【0180】

１２８．該遺伝子改変されたＪＡＫが、ＴＥＬ−ＪＡＫ２融合タンパク質である、条項８６に記載の方法。

【0181】

１２９．該遺伝子改変されたＪＡＫが、ＰＣＭ１−ＪＡＫ２融合タンパク質である、条項８６に記載の方法。

【0182】

１３０．患者の癌を治療する方法であって、
ｉ．該患者において遺伝子改変されたチロシン又はセリン／スレオニンキナーゼを特定すること、及び
ｉｉ．治療有効量の（７Ｓ，１３Ｒ）−１１−フルオロ−７，１３−ジメチル−６，７，１３，１４−テトラヒドロ−１，１５−エテノピラゾロ［４，３−ｆ]［１，４，８，１０]ベンゾキサトリアザシクロトリデシン−４（５Ｈ）−オン、又はその薬学的に許容される塩を該患者へ投与することを含む、前記方法。

【0183】

１３１．特定する工程が、ＦＩＳＨ、ＩＨＣ、ＰＣＲ及び遺伝子配列決定からなる群から選択される試験に患者試料を供することを含む、条項１３０に記載の方法。

【0184】

１３２．（７Ｓ，１３Ｒ）−１１−フルオロ−７，１３−ジメチル−６，７，１３，１４−テトラヒドロ−１，１５−エテノピラゾロ［４，３−ｆ]［１，４，８，１０]ベンゾキサトリアザシクロトリデシン−４（５Ｈ）−オン、又はその薬学的に許容される塩での治療のための患者を特定する方法であって、遺伝子改変されたチロシン又はセリン／スレオニンキナーゼによって媒介される癌を有する患者を診断することを含む、前記方法。

【0185】

１３３．該診断が、ＦＩＳＨ、ＩＨＣ、ＰＣＲ及び遺伝子配列決定からなる群から選択される生物学的試験又は生物学的アッセイに患者試料を供することを含む、条項１３２に記載の方法。

【0186】

１３４．該患者が、癌治療薬で以前に治療されている、条項１〜１３３のいずれか一項に記載の方法。

【0187】

１３５．該患者が癌治療薬で以前に治療されており、該癌が該癌治療薬に対する耐性を発症している、条項１〜１３４のいずれか一項に記載の方法。

【0188】

１３６．該耐性が獲得耐性である、条項１２９に記載の方法。

【0189】

１３７．該耐性がバイパス耐性である、条項１２９に記載の方法。

【0190】

１３８．患者の疾患の治療のための薬剤の調製における（７Ｓ，１３Ｒ）−１１−フルオロ−７，１３−ジメチル−６，７，１３，１４−テトラヒドロ−１，１５−エテノピラゾロ［４，３−ｆ]［１，４，８，１０]ベンゾキサトリアザシクロトリデシン−４（５Ｈ）−オン、又はその薬学的に許容される塩の使用。

【0191】

１３９．患者の癌を治療するための（７Ｓ，１３Ｒ）−１１−フルオロ−７，１３−ジメチル−６，７，１３，１４−テトラヒドロ−１，１５−エテノピラゾロ［４，３−ｆ]［１，４，８，１０]ベンゾキサトリアザシクロトリデシン−４（５Ｈ）−オン、又はその薬学的に許容される塩の使用。

【0192】

１４０．患者の疼痛を治療するための（７Ｓ，１３Ｒ）−１１−フルオロ−７，１３−ジメチル−６，７，１３，１４−テトラヒドロ−１，１５−エテノピラゾロ［４，３−ｆ]［１，４，８，１０]ベンゾキサトリアザシクロトリデシン−４（５Ｈ）−オン、又はその薬学的に許容される塩の使用。

【0193】

１４１．遺伝子改変されたチロシン又はセリン／スレオニンキナーゼを発現することが以前に示された患者の癌を治療するための（７Ｓ，１３Ｒ）−１１−フルオロ−７，１３−ジメチル−６，７，１３，１４−テトラヒドロ−１，１５−エテノピラゾロ［４，３−ｆ]［１，４，８，１０]ベンゾキサトリアザシクロトリデシン−４（５Ｈ）−オン、又はその薬学的に許容される塩の使用。

【0194】

１４２．患者の癌を治療するための（７Ｓ，１３Ｒ）−１１−フルオロ−７，１３−ジメチル−６，７，１３，１４−テトラヒドロ−１，１５−エテノピラゾロ［４，３−ｆ]［１，４，８，１０]ベンゾキサトリアザシクロトリデシン−４（５Ｈ）−オン、又はその薬学的に許容される塩の使用であって、該患者が癌治療薬で以前に治療されており、該癌が該癌治療薬に対する耐性を発症している、前記使用。

【0195】

１４３．遺伝子改変されたチロシン又はセリン／スレオニンキナーゼを発現することが以前に示された患者の癌を治療するための（７Ｓ，１３Ｒ）−１１−フルオロ−７，１３−ジメチル−６，７，１３，１４−テトラヒドロ−１，１５−エテノピラゾロ［４，３−ｆ]［１，４，８，１０]ベンゾキサトリアザシクロトリデシン−４（５Ｈ）−オン、又はその薬学的に許容される塩の使用であって、該患者が癌治療薬で以前に治療されており、該癌が該癌治療薬に対して耐性を発症している、前記使用。

【図面の簡単な説明】

【0196】

【図1】Ｋａｒｐａｓ−２９９細胞のアポトーシスに対する化合物１の効果を示す。図１Ａは、４８時間、様々な濃度の化合物１でインキュベートした後のＫａｒｐａｓ−２９９細胞のアポトーシスを示す。図１Ｂは、Ｋａｒｐａｓ−２９９細胞を収集し、溶解し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析し、ＰＡＲＰ及びアクチン抗体を用いて免疫ブロットした結果を示す。

【図2】ＨＣＣ７８及びＨＴ−１０８０細胞における創傷治癒に対する化合物１の効果を示す。

【図3】化合物１がＥＧＦＲ発現を下方制御することを実証するゲルを示す。図３Ａは、０ｎＭ、３０ｎＭ、１００ｎＭ、３００ｎＭ及び１０００ｎＭで化合物１に４時間暴露した後の結果を示す。図３Ａは、０ｎＭ、３０ｎＭ、１００ｎＭ、３００ｎＭ及び１０００ｎＭで化合物１に２４時間暴露した後の結果を示す。

【図4】ＣＤ４４発現の下方制御を示さないクリゾチニブを用いた同じ実験と比較して、化合物１がＣＤ４４発現を下方制御することを実証するゲルを示す。図４Ａは、０ｎＭ、３０ｎＭ、１００ｎＭ、３００ｎＭ及び１０００ｎＭで化合物１に曝露した後の結果を示す。図４Ａは、０ｎＭ、３０ｎＭ、１００ｎＭ、３００ｎＭ及び１０００ｎＭでクリゾチニブへ曝露した後の結果を示す。

【図5】インビボモデルのＫａｒｐａｓ−２９９における腫瘍成長に対する様々な用量（〇）対照、（■）１５ｍｇ／ｋｇ、（●）５０ｍｇ／ｋｇでの化合物１の効果を示す。

【図6】様々な用量（〇）対照、（■）１５ｍｇ／ｋｇ、（●）５０ｍｇ／ｋｇでの化合物１の投与後のインビボモデルのＫａｒｐａｓ−２９９における動物の体重の安定性を示す。

【図7】インビボモデルのＮＩＨ３Ｔ３ＥＭＬ４−ＡＬＫＷＴにおける腫瘍成長に対する様々な用量（〇）対照、（■）１５ｍｇ／ｋｇ、（●）５０ｍｇ／ｋｇの化合物１の効果を示す。

【図8】様々な用量（〇）対照、（■）１５ｍｇ／ｋｇ、（●）５０ｍｇ／ｋｇでの化合物１の投与後のインビボモデルのＮＩＨ３Ｔ３ＥＭＬ４−ＡＬＫＷＴにおける動物の体重の安定性を示す。

【図9】インビボモデルのＮＩＨ３Ｔ３ＳＤＣ４−ＲＯＳ１ＷＴにおける腫瘍成長に対する様々な用量（〇）対照、（■）１５ｍｇ／ｋｇ、（●）５０ｍｇ／ｋｇの化合物１の効果を示す。

【図10】インビボモデルのＫＭ１２における腫瘍成長に対する様々な用量（〇）対照、（■）１５ｍｇ／ｋｇ、（●）７５ｍｇ／ｋｇの化合物１の効果を示す。

【図11】様々な用量（〇）対照、（■）１５ｍｇ／ｋｇ、（●）７５ｍｇ／ｋｇでの化合物１の投与後のインビボモデルのＫＭ１２における動物の体重の安定性を示す。

【図12】インビボモデルのＫａｒｐａｓ−２９９における化合物１によるＮＰＭ−ＡＬＫリン酸化の阻害を示す。

【図13】インビボモデルのＫＭ１２における腫瘍成長に対する様々な用量（〇）対照、（■）１ｍｇ／ｋｇ、（●）３ｍｇ／ｋｇ、（▲）１５ｍｇ／ｋｇの化合物１の効果を示す。

【図14】様々な用量（〇）対照、（■）１ｍｇ／ｋｇ、（●）３ｍｇ／ｋｇ、（▲）１５ｍｇ／ｋｇでの化合物１の投与後のインビボモデルのＫＭ１２における動物の体重の安定性を示す。

【図15】インビボモデルのＢａ／Ｆ３ＥＭＬ４−ＡＬＫＷＴにおける腫瘍成長に対する様々な用量（〇）対照、（■）１５ｍｇ／ｋｇ、（●）７５ｍｇ／ｋｇの化合物１の効果を示す。

【図16】様々な用量（〇）対照、（■）１５ｍｇ／ｋｇ、（●）７５ｍｇ／ｋｇでの化合物１の投与後のインビボモデルのＢａ／Ｆ３ＥＭＬ４−ＡＬＫＷＴにおける動物の体重の安定性を示す。

【図17】インビボモデルのＢａ／Ｆ３ＥＭＬ４−ＡＬＫＧ１２０２Ｒにおける腫瘍成長に対する様々な用量（〇）対照、（■）１５ｍｇ／ｋｇ、（●）７５ｍｇ／ｋｇの化合物１の効果を示す。

【図18】様々な用量（〇）対照、（■）１５ｍｇ／ｋｇ、（●）７５ｍｇ／ｋｇでの化合物１の投与後のインビボモデルのＢａ／Ｆ３ＥＭＬ４−ＡＬＫＧ１２０２Ｒにおける動物の体重の安定性を示す。

【図19】インビボモデルのＢａ／Ｆ３ＣＤ７４−ＲＯＳ１ＷＴにおける腫瘍成長に対する様々な用量（〇）対照、（■）１５ｍｇ／ｋｇ、（●）７５ｍｇ／ｋｇの化合物１の効果を示す。

【図20】様々な用量（〇）対照、（■）１５ｍｇ／ｋｇ、（●）７５ｍｇ／ｋｇでの化合物１の投与後のインビボモデルのＢａ／Ｆ３ＣＤ７４−ＲＯＳ１ＷＴにおける動物の体重の安定性を示す。

【図21】インビボモデルのＢａ／Ｆ３ＣＤ７４−ＲＯＳ１Ｇ２０３２Ｒにおける腫瘍成長に対する様々な用量（〇）対照、（■）１５ｍｇ／ｋｇ、（●）７５ｍｇ／ｋｇの化合物１の効果を示す。

【図22】様々な用量（〇）対照、（■）１５ｍｇ／ｋｇ、（●）７５ｍｇ／ｋｇでの化合物１の投与後のインビボモデルのＢａ／Ｆ３ＣＤ７４−ＲＯＳ１Ｇ２０３２Ｒにおける動物の体重の安定性を示す。

【図23】インビボモデルのＮＩＨ３Ｔ３ＬＭＮＡ−ＴＲＫＡＷＴにおける腫瘍成長に対する様々な用量（〇）対照、（■）３ｍｇ／ｋｇ、（●）１５ｍｇ／ｋｇの化合物１の効果を示す。

【図24】様々な用量（〇）対照、（■）３ｍｇ／ｋｇ、（●）１５ｍｇ／ｋｇでの化合物１の投与後のインビボモデルのＮＩＨ３Ｔ３ＬＭＮＡ−ＴＲＫＡＷＴにおける動物の体重の安定性を示す。

【図25】インビボモデルのＮＩＨ３Ｔ３ＬＭＮＡ−ＴＲＫＡＧ５９５Ｒにおける腫瘍成長に対する様々な用量（〇）対照、（■）３ｍｇ／ｋｇ、（●）１５ｍｇ／ｋｇ、（▲）６０ｍｇ／ｋｇの化合物１の効果を示す。

【図26】様々な用量（〇）対照、（■）３ｍｇ／ｋｇ、（●）１５ｍｇ／ｋｇ、（▲）６０ｍｇ／ｋｇでの化合物１の投与後のインビボモデルのＮＩＨ３Ｔ３ＬＭＮＡ−ＴＲＫＡＧ５９５Ｒにおける動物の体重の安定性を示す。

【発明を実施するための形態】

【0197】

本開示をさらに説明する前に、本開示は、記載された特定の実施形態に限定されるものではなく、もちろん変化し得ることを理解されたい。本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるので、本明細書で使用する用語は、特定の態様のみを説明する目的のためのものであり、限定することを意図するものではないことも理解されたい。

【0198】

特に定義しない限り、本明細書で使用する全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で言及する全ての特許、出願、公開された出願及び他の刊行物は、その全体が参照により組み込まれる。この節に記載の定義は、参照により本明細書に組み込まれる特許、出願、又は他の刊行物に記載の定義に反するか、又はそうでなければ矛盾する場合は、この節に記載の定義が、参照により本明細書に組み込まれる定義に優先する。

【0199】

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する単数形「１つ（ａ）」「１つ（ａｎ）」及び「その」は、文脈が明確に指示しない限り、複数の対象を含む。さらに、特許請求の範囲は、任意の要素を除外することができることに留意されたい。このように、この説明は、特許請求の要素の列挙、又は「負」の制限の使用に関連して、「単に」及び「のみ」などの排他的用語の使用のための前提として役割を果たすことを意図する。

【0200】

本明細書で使用する用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有する」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、そのオープンで非限定的な意味で使用される。

【0201】

より簡潔な説明を提供するために、本明細書に示す量的表現のいくつかは、用語「約」により修飾されない。用語「約」が明示的に用いられるか否かに拘わらず、本明細書に示す全ての量は、実際の所定値を指すことを意味し、そのような所与値の実験条件及び／又は測定条件による同等物及び近似を含めて、当業者に基づいて合理的に推測されるそのような所定値の近似を指すことを意味すると理解されたい。収率が百分率で与えられているときはいつでも、特定の化学量論的条件下で得ることができる同じ実体の最大量に対して収率が与えられるため、そのような収率は実体の質量を指す。異なる指示がない限り、百分率で与えられる濃度は質量比を指す。

【0202】

特に記載のない限り、本実施形態の方法及び技術は、当技術分野で周知の、かつ本明細書を通して引用及び議論される様々な一般的で、より具体的な参考文献に記載されている従来の方法に従って一般的に行われる。例えば、Ｌｏｕｄｏｎ、有機化学、第４版、ＮｅｗＹｏｒｋ：ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ，２００２，ｐｐ．３６０−３６１，１０８４−１０８５；Ｓｍｉｔｈ及びＭａｒｃｈ，マーチ有機化学（Ｍａｒｃｈ’ｓＡｄｖａｎｃｅｄＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ）：反応、機構、及び構造（Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄＳｔｒｕｃｔｕｒｅ）、第５版、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，２００１を参照されたい。

【0203】

定義
本明細書で使用する用語「アルキル」は、任意に分岐しており、１〜２０個の炭素原子を含有する炭素原子の鎖を含む。さらに、特定の実施形態において、アルキルは、都合よくＣ_１〜Ｃ_１２、Ｃ_１〜Ｃ_１０、Ｃ_１〜Ｃ_９、Ｃ_１〜Ｃ_８、Ｃ_１〜Ｃ_７、Ｃ_１〜Ｃ_６、及びＣ_１〜Ｃ_４を含む限定された長さのものであり得ることが理解されるであろう。例示的には、Ｃ_１〜Ｃ_８、Ｃ_１〜Ｃ_７、Ｃ_１〜Ｃ_６、及びＣ_１〜Ｃ_４などを含むそのような特定の限定された長さのアルキル基は、「低級アルキル」と呼ばれることもあり得る。例示的なアルキル基には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、２−ペンチル、３−ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、及びオクチルなどが含まれるが、これらに限定されない。アルキルは、置換又は非置換であり得る。典型的な置換基には、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、シアノ、ハロ、カルボニル、オキソ（＝Ｏ）、チオカルボニル、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、ニトロ、及びアミノ、又は本明細書で提供される様々な実施形態に記載のものが含まれる。「アルキル」は、上記に提供したものなどの他の基と組み合わせて、官能化アルキル基を形成することができることが理解されるであろう。一例として、「カルボキシ」基と本明細書に記載の「アルキル」基の組み合わせは、「カルボキシアルキル」基と呼ぶことができる。他の非限定的な例としては、ヒドロキシアルキル、及びアミノアルキルなどが挙げられる。

【0204】

本明細書で使用する用語「アルケニル」は、任意に分岐しており、２〜２０個の炭素原子を含有する炭素原子の鎖を含み、また少なくとも１つの炭素−炭素二重結合（すなわち、Ｃ＝Ｃ）を含む。特定の実施形態において、アルケニルは、都合よく、Ｃ_２〜Ｃ_１２、Ｃ_２〜Ｃ_９、Ｃ_２〜Ｃ_８、Ｃ_２〜Ｃ_７、Ｃ_２〜Ｃ_６、及びＣ_２〜Ｃ_４を含む限定された長さのものであり得ることが理解されるであろう。例示的には、Ｃ_２〜Ｃ_８、Ｃ_２〜Ｃ_７、Ｃ_２〜Ｃ_６、及びＣ_２〜Ｃ_４を含むそのような特定の限定された長さのアルケニル基は、「低級アルケニル」と呼ばれ得る。アルケニルは、アルキルについて記載した通り、若しくは本明細書に提供する様々な実施形態に記載した通り、非置換であるか又は置換され得る。例示的なアルケニル基には、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−、２−、又は３−ブテニルなどが含まれるが、これらに限定されない。

【0205】

本明細書で使用する用語「アルキニル」は、任意に分岐しており、２〜２０個の炭素原子を含有する炭素原子の鎖を含み、また少なくとも１つの炭素−炭素三重結合（すなわち、Ｃ≡Ｃ）を含む。特定の実施形態において、アルキニルは、都合よく、Ｃ_２〜Ｃ_１２、Ｃ_２〜Ｃ_９、Ｃ_２〜Ｃ_８、Ｃ_２〜Ｃ_７、Ｃ_２〜Ｃ_６、及びＣ_２〜Ｃ_４を含む限定された長さのものであり得ることが理解されるであろう。例示的には、Ｃ_２〜Ｃ_８、Ｃ_２〜Ｃ_７、Ｃ_２〜Ｃ_６、及びＣ_２〜Ｃ_４を含むそのような特定の限定された長さのアルキニル基は、「低級アルキニル」と呼ばれ得る。アルケニルは、アルキルについて記載した通り、若しくは本明細書に提供する様々な実施形態に記載した通り、非置換であるか又は置換され得る。例示的なアルケニル基には、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−、２−、又は３−ブチニルなどが含まれるが、これらに限定されない。

【0206】

本明細書で使用する用語「アリール」は、完全に共役したπ電子系を有する６〜１２個の炭素原子の全炭素単環式又は縮合環多環式基を指す。特定の実施形態において、アリールは、都合よく、Ｃ_６〜Ｃ_１０アリールなどの限られたサイズであり得ることが理解されるであろう。例示的なアリール基には、フェニル、ナフタレニル及びアントラセニルが含まれるが、これらに限定されない。アリール基は、アルキルについて記載した通り、若しくは本明細書に提供する様々な実施形態に記載した通り、非置換であるか又は置換され得る。

【0207】

本明細書で使用する用語「シクロアルキル」は、全炭素５員／６員又は６員／６員の縮合二環式環又は多環式縮合環（「縮合」環系は系中の各環が系内の他の各環と隣接炭素原子対を共有することを意味する）基を含む３〜１５員の全炭素単環式環を指し、環の１以上が１以上の二重結合を含有してよいが、シクロアルキルは、完全に共役したπ電子系を含有しない。特定の実施形態において、シクロアルキルは、都合よく、Ｃ_３〜Ｃ_１３、Ｃ_３〜Ｃ_９、Ｃ_３〜Ｃ_６及びＣ_４〜Ｃ_６などの限られたサイズであり得ることが理解されるであろう。例示的なシクロアルキル基には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロペンタジエニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル、アダマンチル、ノルボルニル、ノルボルネニル、及び９Ｈ−フルオレン−９−イルなどが含まれるが、これらに限定されない。グラフィカル表示した例示的なシクロアルキル基の例としては、適切に結合された部分の形態の以下の実体が挙げられる。

【化13】

【0208】

本明細書で使用する用語「ヘテロシクロアルキル」は、少なくとも１個の環原子が、窒素、酸素又は硫黄などのヘテロ原子であり、残りの環原子が炭素原子である、３〜１２個の環原子の環（複数可）を有する単環式基又は縮合環基を指す。ヘテロシクロアルキルは、任意に１個、２個、３個又は４個のヘテロ原子を含有してよい。ヘテロシクロアルキルはまた、窒素との二重結合（例えば、Ｃ＝Ｎ又はＮ＝Ｎ）を含む複数の二重結合の１つを有してよいが、完全共役のπ電子系を含有しない。特定の実施形態において、ヘテロシクロアルキルは、都合よく、３〜７員のヘテロシクロアルキル、及び５〜７員のヘテロシクロアルキなどの限られたサイズであり得ることが理解されるであろう。ヘテロシクロアルキルは、アルキルについて記載した通り、若しくは本明細書に提供する様々な実施形態に記載した通り、非置換であるか又は置換され得る。例示的なヘテロシクロアルキル基には、オキシラニル、チアナリル（ｔｈｉａｎａｒｙｌ）、アゼチジニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、ピロリジニル、テトラヒドロピラニル、ピペリジニル、１，４-ジオキサニル、モルホリニル、１，４−ジチアニル、ピペラジニル、オキセパニル、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラニル、５，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラニル、２Ｈ−ピラニル、及び１，２，３，４−テトラヒドロピリジニルが含まれるが、これらに限定されない。グラフィカル表示した例示的なヘテロシクロアルキル基の例としては、適切に結合された部分の形態の以下の実体が挙げられる。

【化14】

【0209】

本明細書で使用する用語「ヘテロアリール」は、窒素、酸素及び硫黄から選択される１個、２個、３個又は４個の環ヘテロ原子を含有し、残りの環原子が炭素原子であり、完全に共役したπ電子系も有する５〜１２個の環原子の単環式又は縮合環基を指す。特定の実施形態において、ヘテロアリールは、都合よく、３〜７員のヘテロアリール、及び５〜７員のヘテロアリールなどの限られたサイズであり得ることが理解されるであろう。ヘテロアリールは、アルキルについて記載した通り、若しくは本明細書に提供する様々な実施形態に記載した通り、非置換であるか又は置換され得る。例示的なヘテロアリール基には、ピロリル、フラニル、チオフェニル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、キノリニル、イソキノリニル、プリニル、テトラゾリル、トリアジニル、ピラジニル、テトラジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、チエニル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンズイソチアゾリル及びカルバゾリルなどが含まれるが、これらに限定されない。グラフィカル表示した例示的なヘテロアリール基の例としては、適切に結合された部分の形態の以下の実体が挙げられる。

【化15】

【0210】

本明細書で使用する「ヒドロキシ」又は「ヒドロキシル」は、−ＯＨ基を指す。

【0211】

本明細書で使用する「アルコキシ」は、−Ｏ−（アルキル）又は−Ｏ−（非置換シクロアルキル）基の両方を指す。代表例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、及びシクロヘキシルオキシなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0212】

本明細書で使用する用語「アリールオキシ」は、−Ｏ−アリール、又は−Ｏ−ヘテロアリール基を指す。代表例としては、フェノキシ、ピリジニルオキシ、フラニルオキシ、チエニルオキシ、ピリミジニルオキシ、及びピラジニルオキシなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0213】

本明細書で使用する「メルカプト」は、−ＳＨ基を指す。

【0214】

本明細書で使用する「アルキルチオ」は、−Ｓ−（アルキル）又は−Ｓ−（非置換シクロアルキル）基を指す。代表例としては、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、ブチルチオ、シクロプロピルチオ、シクロブチルチオ、シクロペンチルチオ、及びシクロヘキシルチオなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0215】

本明細書で使用する「アリールチオ」は、−Ｓ−アリール又は−Ｓ−ヘテロアリール基を指す。代表例としては、フェニルチオ、ピリジニルチオ、フラニルチオ、チエニルチオ、及びピリミジニルチオなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0216】

本明細書で使用する「ハロ」又は「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素を指す。

【0217】

本明細書で使用する「シアノ」は−ＣＮ基を指す。

【0218】

用語「オキソ」は、カルボニル酸素を表す。例えば、オキソで置換されたシクロペンチルはシクロペンタノンである。

【0219】

用語「置換された」は、特定の基又は部分が１以上の置換基を有することを意味する。用語「非置換」は、特定の基が置換基を持たないことを意味する。用語「置換」を用いて構造系を説明する場合、置換は、系上の任意の原子価許容位置に起こることを意味する。いくつかの実施形態において、「置換」は、特定の基又は部分が、１個、２個、又は３個の置換基を有することを意味する。他の実施形態において、「置換」は、特定の基又は部分が１個又は２個の置換基を有することを意味する。さらに他の実施形態において、「置換」は、特定の基又は部分が１個の置換基を有することを意味する。

【0220】

本明細書で使用する「任意の」又は「任意に」は、続いて記載される事象又は状況が生じてもよいが、生じる必要がないことを意味し、その説明には、その事象又は状況が生じる場合及び生じない場合が含まれることを意味する。例えば、「Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_２〜Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル、３〜７員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６〜Ｃ_１０アリール、又は単環式若しくは二環式ヘテロアリールの各水素原子は、独立して、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルと任意に置換されている」とは、アルキルは存在するが、各アルキル基の水素原子の置換によってＣ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_２〜Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル、３〜７員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６〜Ｃ_１０アリール、又は単環式若しくは二環式ヘテロアリールのいずれかの上に存在する必要がないことを意味し、その説明は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_２〜Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル、３〜７員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６〜Ｃ_１０アリール、又は単環式若しくは二環式ヘテロアリールがアルキル基で置換されている状況、及びＣ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_２〜Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル、３〜７員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６〜Ｃ_１０アリール、又は単環式若しくは二環式ヘテロアリールがアルキル基で置換されていない状況を含む。

【0221】

本明細書で使用する「独立して」は、続いて記載される事象又は状況が他の同様の事象又は状況に対して独自に読まれるべきであることを意味する。例えば、いくつかの等価な水素基がその状況で記載された別の基で任意に置換されている状況で、「独立して、任意に」の使用は、基上の水素原子の各場合が別の基で置換されてよいことを意味し、水素原子のそれぞれを置換する基は同じでも異なっていてもよい。あるいは、例えば、基の全てが可能性のセットから選択することができる複数の基が存在する場合、「独立して」の使用は、基のそれぞれが任意の他の基とは別々の可能性のセットから選択することができることを意味し、その状況の中で選択される基は同一であっても、又は異なっていてもよい。

【0222】

本明細書で使用する用語「薬学的に許容される塩」は、医薬品に使用することができるイオンに対抗する塩を指す。一般に、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら、「薬学的塩（ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳａｌｔｓ）」、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，１９７７，６６，１−１９を参照されたい。好ましい薬学的に許容される塩は、薬理学的に有効で、過度の毒性、刺激、又はアレルギー反応なしに対象の組織と接触するのに適するものである。本明細書に記載の化合物は、十分に酸性の基、十分に塩基性の基、両方のタイプの官能基、又は各種類の複数を保有してよく、したがって、幾種類かの無機塩基又は有機塩基、並びに無機酸及び有機酸と反応して、薬学的に許容される塩を形成する。このような塩には、以下のものが含まれる：

【0223】

（１）塩酸、臭化水素酸、硝酸、リン酸、硫酸、及び過塩素酸などの無機酸と親化合物の遊離塩基との反応、又は酢酸、シュウ酸、（Ｄ）若しくは（Ｌ）リンゴ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸若しくはマロン酸などの有機酸と親化合物の遊離塩基との反応により得ることができる酸付加塩；又は

【0224】

（２）親化合物に存在する酸性プロトンが、金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、若しくはアルミニウムイオンによって置換されるか、又はエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トリメタミン、及びＮ−メチルグルカミンなどの有機塩基と配位する時に形成される塩。

【0225】

薬学的に許容される塩は、当業者に周知であり、任意のそのような薬学的に許容される塩は、本明細書に記載の実施形態と関連して企図され得る。薬学的に許容される塩の例としては、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオン酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン−１，４−ジオエート、ヘキシン−１，６−ジオエート、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、安息香酸メチル、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、スルホン酸塩、メチルスルホン酸塩、プロピルスルホン酸塩、ベシル酸塩、キシレンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、γ−ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、酒石酸塩、及びマンデル酸塩が挙げられる。他の適切な薬学的に許容される塩のリストは、レミントンの薬学、第１７版、ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ、ペンシルバニア州イーストン、１９８５の中に見出される。

【0226】

塩基性窒素を含有する式Ｉの化合物については、薬学的に許容される塩は、当技術分野で利用可能な任意の適切な方法、例えば、塩酸、臭化水素、硫酸、スルファミン酸、硝酸、ホウ酸、及びリン酸などの無機酸での遊離塩基の処理、又は酢酸、フェニル酢酸、プロピオン酸、ステアリン酸、乳酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、イセチオン酸、コハク酸、吉草酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、オレイン酸、パルミチン酸、ラウリン酸、ピラノシジル酸、例えば、グルクロン酸若しくはガラクツロン酸、アルファ−ヒドロキシ酸、例えば、マンデル酸、クエン酸、若しくは酒石酸、アミノ酸、例えば、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、芳香族酸、例えば、安息香酸、２−アセトキシ安息香酸、ナフトエ酸、若しくは桂皮酸、スルホン酸、例えば、ラウリルスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、若しくはエタンスルホン酸、又は本明細書の実施例として挙げたものなどの任意の酸の適合性混合物、並びにこの科学技術における技術の通常レベルの観点から代替物若しくは許容される置換基と見なされる任意の他の酸並びにその混合物などの有機酸での遊離塩基の処理によって調製することができる。

【0227】

本開示はまた、式Ｉの化合物の薬学的に許容されるプロドラッグ、及びそのような薬学的に許容されるプロドラッグを用いる治療方法に関する。用語「プロドラッグ」は、対象への投与後に、加溶媒分解又は酵素的切断などの化学的又は生理学的プロセスを介して、又は生理学的条件下で、インビボで化合物を生じる（例えば、生理学的ｐＨにされると、プロドラッグは式Ｉの化合物に変換される）指定された化合物の前駆体を意味する。「薬学的に許容されるプロドラッグ」は、非毒性で、生物学的に許容でき、かつそうでなければ対象への投与に生物学的に適するプロドラッグである。適切なプロドラッグ誘導体の選択及び調製についての例示的な手順は、「プロドラッグの設計」、Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編集，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、１９８５に記載されている。

【0228】

本開示はまた、式Ｉの化合の薬学的に活性のある代謝物、及び本開示の方法におけるそのような代謝物の使用に関する。「薬学的に活性のある代謝物」は、式Ｉの化合物又はその塩の、体内における薬理学的に活性のある代謝産物を意味する。化合物のプロドラッグ及び活性代謝物は、当技術分野で公知又は利用可能な通常の技術を用いて決定することができる。例えば、Ｂｅｒｔｏｌｉｎｉら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９７，４０，２０１１−２０１６；Ｓｈａｎら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１９９７，８６（７），７６５−７６７；Ｂａｇｓｈａｗｅ，ＤｒｕｇＤｅｖ．Ｒｅｓ．１９９５，３４，２２０−２３０；Ｂｏｄｏｒ，Ａｄｖ．ＤｒｕｇＲｅｓ．１９８４，１３，２５５−３３１；Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，プロドラッグの設計（ＤｅｓｉｇｎｏｆＰｒｏｄｒｕｇｓ）（ＥｌｓｅｖｉｅｒＰｒｅｓｓ，１９８５）；並びにＬａｒｓｅｎ，プロドラッグの設計及び応用、薬物の設計と開発（ＤｅｓｉｇｎａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＰｒｏｄｒｕｇｓ，ＤｒｕｇＤｅｓｉｇｎａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）（Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ−Ｌａｒｓｅｎら編集，ＨａｒｗｏｏｄＡｃａｄｅｍｉｃＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９１）を参照されたい。

【0229】

本明細書に示される任意の式は、その構造式の化合物並びに特定の変形又は形態を表すことが意図される。例えば、本明細書に与えられる式は、ラセミ体、又は１以上の鏡像異性体、ジアステレオマー、若しくは幾何異性体、又はそれらの混合物を含むことが意図される。さらに、本明細書に与えられる任意の式は、そのような化合物の水和物、溶媒和物、若しくは多形体、又はそれらの混合物も指すことが意図される。

【0230】

本明細書で使用する用語「遺伝子改変された」は、遺伝子によってコードされるタンパク質配列に変化をもたらすことができる遺伝子を構成するＤＮＡ配列における永久的な変化を指す。本明細書に記載される「遺伝子改変」された遺伝子は、ＤＮＡ配列、及び／又はＤＮＡ配列によってコードされるタンパク質配列に、サイズ範囲が例えば、１つのヌクレオチドの中に変化を有する（別名、単一ヌクレオチド多型、ＳＮＰ又は点変異）、複数のヌクレオチド多型の中に変化を有する（ＭＮＰ）、及び遺伝子融合などの複数の遺伝子を含む染色体の大きなセグメントの中に変化を有することができる。遺伝子融合の例としては、ＥＭＬ４−ＡＬＫなどの、１以上の遺伝子をコードする染色体ＤＮＡの一部が再配列して、ＤＮＡ配列中の通常は関連しない２つの遺伝子が融合する染色体逆位の結果であるもの（例えば、Ｓｏｄａ，Ｍ．ら，Ｎａｔｕｒｅ，２００７，４４８，５６１−５６７を参照されたい）、ＴＭＰＲＳＳ２−ＥＲＧなどの、染色体のＤＮＡ配列の一部が欠失して、ＤＮＡ配列中の通常は関連しない２つの遺伝子が融合するＤＮＡ配列中の欠失の結果（中間部欠損）であるもの（例えば、ＹｕＪ．ら，ＣａｎｃｅｒＣｅｌｌ，２０１０，１７，５，４４３−５４を参照されたい）、又はＢＣＲ−ＡＢＬなどの、染色体ＤＮＡの一部が同じ若しくは異なる染色体にスプライシング及び挿入され、ＤＮＡ配列中の通常は関連しない２つの遺伝子が融合する転位の結果であるもの（例えば、Ａｄｖａｎｉ，Ａ．Ｓ．ら、ＬｅｕｋｅｍｉａＲｅｓｅａｒｃｈ，２００２，２６，８，７１３−７２０を参照されたい）が挙げられるが、これらに限定されない。当業者は、そのような遺伝子融合を、遺伝子融合が生じた個体に依存する複数の変異型の中で見つけることができること、かつそのような変異型の各々が、本明細書に記載の方法によって企図されることを容易に理解するであろう。

【0231】

「遺伝子改変された」遺伝子、若しくはそのような遺伝子によりコードされるタンパク質は、親から継承することができ、時には生殖細胞変異と呼ばれる遺伝的変異として生じ得るか、又は「遺伝子改変された」遺伝子、若しくはそのような遺伝子によってコードされるタンパク質は、人生の中のいくつかの時点で生じる獲得（若しくは体細胞）変異として生じ得る。場合によって、「遺伝子改変された」遺伝子は、デノボ（新規）変異として記載することができ、かつ遺伝性又は体細胞性のいずれかであり得る。さらに、「遺伝子改変」は、ＳＮＰ（又は点変異）及び転位などの本明細書に記載のＤＮＡ配列中の変化の２以上が同時に患者で生じ得る状況を指すことができることが理解されるであろう。そのような状況は、キナーゼ阻害剤で治療されている患者が、治療の有効性を低下させるＤＮＡ配列中の変異を発症し得る、いわゆる「獲得耐性」から生じるが、単なる「獲得耐性」の結果ではない。そのような獲得耐性変異の非限定的な例としては、ＥＭＬ４−ＡＬＫ遺伝子融合に生じる点変異Ｌ１１９６Ｍ、Ｇ１２０２Ｒ、Ｌ１１５２Ｐ、Ｆ１１７４Ｃ、Ｃ１１５６Ｙ、Ｉ１１７１Ｎ、Ｇ１２６９Ｓ、及び１１５１Ｔ挿入が挙げられる。

【0232】

本明細書で使用する用語「内因性耐性」とは、薬物治療、特に化学療法治療に対する疾患細胞、特に癌細胞の既存の耐性を指す。内因性耐性は、単一の薬物、構造的に関連する薬物の小グループ、又は異なる化学構造のいくつかの薬物に対する細胞の耐性（いわゆる「多剤耐性」又は「ＭＤＲ」）をもたらすことができることが理解されるであろう（Ｍｏｎｔｉ，Ｅ．２００７．癌細胞及び腫瘍における内因性多剤耐性の分子決定（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓｏｆＩｎｔｒｉｎｓｉｃＭｕｌｔｉｄｒｕｇＲｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓａｎｄＴｕｍｏｒｓ），Ｂ．Ｔｅｉｃｈｅｒ（編），癌の薬剤耐性（ＣａｎｃｅｒＤｒｕｇＲｅｓｉｓｔａｎｃｅ）（ｐｐ．２４１−２６０）．Ｔｏｔｏｗａ，ＮｅｗＪｅｒｓｅｙ：ＨｕｍａｎａＰｒｅｓｓＩｎｃ．）。内因性耐性が、１以上の宿主関連要因及び／又は細胞の遺伝的構成の結果であり得ることが理解されるであろう。このような要因には、免疫調節；改変されたＡＤＭＥ又は薬物誘発性副作用に対する低い耐性による薬物の最適な血清レベルを達成し損なう薬理遺伝学的要因；腫瘍部位への薬物のアクセスの制限；及び微小環境の合図が含まれるが、これらに限定されない。そのような遺伝的構成要因には、薬物トランスポーターの発現の変化；薬物標的（複数可）の質的変化；薬物標的（複数可）の定量的変化；細胞内薬物処理／代謝の変化；ＤＮＡ修復活性の変化、及びアポトーシス経路の変化が含まれるが、これらに限定されない（Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ，Ｍ．Ｍ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．，２００２，５３，５１６−５２７）。

【0233】

本明細書で使用する用語「治療有効量」は、治療される疾患若しくは障害の症状の軽減を含む、患者における生物学的若しくは医学的応答を誘発する活性化合物又は医薬品の量を指す。一態様では、治療有効量は、疾患若しくは症状を治療又は軽減することができる量である。任意の特定の患者のための特定の治療有効用量レベルは、治療される障害及び障害の重症度；使用される特定の化合物の活性；使用される特定の組成物；患者の年齢、体重、一般的健康状態、性別及び食事；投与時間、投与経路、及び使用される特定の化合物の排泄速度；治療期間；並びに使用される特定の化合物と組み合わせて又は同時に使用される薬物などの要因を含む様々な要因に依存する。例示的な用量は、１日約０．１ｍｇ〜１ｇ、又は１日約１ｍｇ〜５０ｍｇ、又は１日約５０〜２５０ｍｇ、又は１日約２５０ｍｇ〜１ｇの範囲である。総用量は、単一又は分割用量単位（例えば、１日２回、１日３回、１日４回）で与えられ得る。

【0234】

本明細書で使用する用語「疾患」には、癌、疼痛、乾癬、関節リウマチ、真性多血症、本態性血小板血症、潰瘍性大腸炎、及び骨髄線維症を伴う骨髄化生が含まれるが、これらに限定されない

【0235】

本明細書で使用する用語「癌」には、ＡＬＣＬ、ＮＳＣＬＣ、神経芽腫、炎症性筋線維芽細胞腫瘍、成人の腎細胞癌、小児腎細胞癌、乳癌、ＥＲ^＋乳癌、結腸腺癌、神経膠芽腫、多形神経膠芽腫、未分化甲状腺癌、胆管癌、卵巣癌、胃腺癌、結腸直腸癌、炎症性筋線維芽細胞腫瘍、血管肉腫、類上皮血管内皮腫、肝内胆管癌、甲状腺乳頭癌、スピッツ腫瘍、肉腫、星細胞腫、脳の低グレードの神経膠腫、分泌乳癌、乳腺相似癌、急性骨髄性白血病、先天性中胚葉性腎腫、先天性線維肉腫、Ｐｈ−様急性リンパ芽球性白血病、甲状腺癌、皮膚黒色腫、頭頸部扁平上皮癌、小児神経膠腫ＣＭＬ、前立腺癌、肺扁平上皮癌、卵巣漿液性嚢胞腺癌、皮膚黒色腫、去勢抵抗性前立腺癌、ホジキンリンパ腫、及び漿液性および明細胞子宮内膜癌が含まれるが、これらに限定されない。

【0236】

実施形態
いくつかの実施形態において、本明細書に記載する方法は、疾患の治療であって、治療を必要とする患者に、ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＴＲＫ、ＪＡＫ及びＳＲＣからなる群から選択される少なくとも１つのチロシンキナーゼに対して活性を有する治療有効量の化合物を投与することを含む治療に関する。いくつかの実施形態において、該化合物は、ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、ＴＲＫＣ、ＪＡＫ２、ＳＲＣ、ＦＡＫ及びＡＲＫ５からなる群から選択される少なくとも１つのチロシン又はセリン／スレオニンキナーゼに対して活性を有する。いくつかの実施形態において、該化合物は、ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、ＴＲＫＣ、ＪＡＫ２、ＳＲＣ、ＦＡＫ及びＡＲＫ５からなる群から選択される少なくとも２つのチロシン又はセリン／スレオニンキナーゼに対して活性を有する。いくつかの実施形態において、チロシン又はセリン／スレオニンキナーゼのうちの少なくとも１つ、又は少なくとも２つは、遺伝的に改変されている。いくつかの実施形態において、該化合物は、式Ｉ

【化16】

（式中、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｚ^４、Ｚ^５、Ｚ^６、Ｚ^７、Ｍ、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５及びＲ^６は、本明細書に記載の通りに定義されている）
のもの又はその薬学的に許容される塩である。

【0237】

該疾患は、式Ｉの化合物がそれに対する活性を有する、本明細書に記載のチロシンキナーゼに関連するいくつかの疾患のいずれかであり得ることが理解されるであろう。例えば、本明細書に記載の方法は、癌、疼痛、乾癬、関節リウマチ、真性多血症、本態性血小板血症、潰瘍性大腸炎、及び骨髄線維症を伴う骨髄化生などの疾患の治療に使用することができる。該疾患は、本明細書に記載のチロシンキナーゼの活性に関連する任意の疾患であり得ることが理解されるであろう。さらに、該疾患は、ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、ＴＲＫＣ、ＪＡＫ２、ＳＲＣ、ＦＡＫ及びＡＲＫ５からなる群から選択される遺伝子改変されたチロシン又はセリン／スレオニンキナーゼに関連する任意の疾患であり得ることが理解されるであろう。さらに、該疾患は、ＪＡＫ２、ＳＲＣ、ＦＡＫ又はＡＲＫ５の上方制御に関連する任意の疾患であり得ることが理解されるであろう。いくつかの実施形態において、該疾患は、チロシンキナーゼによって媒介されるか、又はチロシンキナーゼに関連する癌である。いくつかの実施形態において、該疾患は、セリン／スレオニンキナーゼによって媒介されるか、又はセリン／スレオニンキナーゼに関連する癌である。いくつかの実施形態において、該疾患は、遺伝子改変チロシンキナーゼによって媒介されるか、又は遺伝子改変チロシンキナーゼに関連する癌である。いくつかの実施形態において、該疾患は、遺伝子改変セリン／スレオニンキナーゼによって媒介されるか、又は遺伝子改変セリン／スレオニンキナーゼに関連する癌である。いくつかの実施形態において、該疾患は、ＪＡＫ２、ＳＲＣ、ＦＡＫ又はＡＲＫ５の上方制御によって媒介されるか、又はＪＡＫ２、ＳＲＣ、ＦＡＫ又はＡＲＫ５の上方制御に関連する癌である。いくつかの実施形態において、該疾患は、ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、ＴＲＫＣ、ＪＡＫ２、ＳＲＣ及びＦＡＫからなる群から選択される遺伝子改変チロシンキナーゼによって媒介されるか、又は遺伝子改変チロシンキナーゼに関連する癌である。いくつかの実施形態において、該疾患は、ＡＲＫ５などの遺伝子改変セリン／スレオニンキナーゼによって媒介されるか、又は遺伝子改変セリン／スレオニンキナーゼに関連する癌である。

【0238】

該癌は、ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、ＴＲＫＣ及びＪＡＫ２からなる群から選択される遺伝子改変チロシンキナーゼによって媒介されるか、又は遺伝子改変チロシンキナーゼに関連するか、又はＪＡＫ２、ＳＲＣ、ＦＡＫ若しくはＡＲＫ５の上方制御によって媒介されるか、又はそれらの上方制御に関連する任意の癌であり得、ＡＬＣＬ、ＮＳＣＬＣ、神経芽腫、炎症性筋線維芽細胞腫瘍、成人の腎細胞癌、小児腎細胞癌、乳癌、結腸腺癌、神経膠芽腫、多形神経膠芽腫、未分化甲状腺癌、胆管癌、卵巣癌、胃癌、結腸直腸癌、炎症性筋線維芽細胞腫瘍、血管肉腫、類上皮血管内皮腫、肝内胆管癌、甲状腺乳頭癌、スピッツ腫瘍、肉腫、星細胞腫、脳の低グレードの神経膠腫、分泌乳癌、乳腺相似癌、急性骨髄性白血病、先天性中胚葉性腎腫、先天性線維肉腫、Ｐｈ−様急性リンパ芽球性白血病、甲状腺癌、皮膚黒色腫、頭頸部扁平上皮癌及び小児神経膠腫ＣＭＬ、及び前立腺癌を含むが、これらに限定されないことが理解されるであろう。いくつかの実施形態において、該癌はＮＳＣＬＣである。いくつかの実施形態において、該癌は結腸直腸癌である。いくつかの実施形態において、該癌は神経芽腫である。

【0239】

いくつかの実施形態において、本開示は、１以上の治療剤で前治療を受けた患者の疾患を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、該患者は、１以上の化学療法剤で以前に治療された。さらに他の実施形態において、該患者は、１以上の化学療法剤で以前に治療され、治療に対する獲得耐性を発症した。さらに他の実施形態において、該患者は、１以上の化学療法剤で以前に治療され、治療に対するバイパス耐性を発症した。さらに他の実施形態において、該患者は、１以上の化学療法剤で以前に治療され、ＳＲＣ又はＪＡＫ２によって調節される治療に対するバイパス耐性を発症した。

【0240】

本明細書に記載の化合物の１以上を用いた治療の前に該患者を治療することができる他の化学療法剤には、キナーゼ阻害剤、アドレノコルチコイド及びコルチコステロイド、アルキル化剤、ペプチド及びペプチド模倣シグナル伝達阻害剤、抗アンドロゲン、抗エストロゲン、アンドロゲン、アクラマイシン及びアクラマイシン誘導体、エストロゲン、代謝拮抗剤、白金化合物、アマニチン、植物アルカロイド、マイトマイシン、ディスコデルモリド、微小管阻害剤、エポチロン、炎症剤及び炎症促進剤、プリン類似体、ピリミジン類似体、カンプトテシン及びドラスタチンが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の１以上の化合物を用いた治療の前に該患者が受け取る化学療法剤は、アファチニブ、アキシチニブ、アレクチニブ、ボスチニブ、ブリガチニブ、カボザンチニブ、セリチニブ、クリゾチニブ、ダブラフェニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、エベロリムス、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ニロチニブ、ニンテダニブ、パルボシクリブ、パゾパニブ、ポナチニブ、レゴラフェニブ、ルキソリチニブ、シロリムス、ソラフェニブ、スニチニブ、トファシチニブ、テムシロリムス、トラメチニブ、バンデタニブ、ベムラフェニブ、メトトレキセート、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、タモキシフェン、タキソール、パクリタキセル、ドセタキセル、シトシンアラビノシド、シクロホスファミド、ダウノマイシン、リゾキシン、プレドニゾン、ヒドロキシ尿素、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、エリブリン、カンプトテシン、イリノテカン、ゲルダナマイシン、エストラムスチン及びノコダゾールのうちの１以上であり得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される方法は、アファチニブ、アレクチニブ、アキシチニブ、ボスチニブ、ブリガチニブ、カボザンチニブ、セリチニブ、クリゾチニブ、ダブラフェニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、エベロリムス、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ニロチニブ、ニンテダニブ、パルボシクリブ、パゾパニブ、ポナチニブ、レゴラフェニブ、ルキソリチニブ、シロリムス、ソラフェニブ、スニチニブ、トファシチニブ、テムシロリムス、トラメチニブ、バンデタニブ、及びベムラフェニブからなる群から選択されるキナーゼ阻害剤で以前に治療された患者の治療を提供する。いくつかの実施形態において、該患者は、クリゾチニブで以前に治療された。

【0241】

医薬組成物
治療目的では、本明細書に記載の化合物を含む医薬組成物は、さらに、１以上の薬学的に許容される賦形剤を含んでよい。薬学的に許容される賦形剤は、非毒性であり、そうでなければ対象への投与に生物学的に適する物質である。そのような賦形剤は、本明細書に記載の化合物の投与を容易にし、有効成分と適合性がある。薬学的に許容される賦形剤の例としては、安定剤、滑剤、界面活性剤、希釈剤、抗酸化剤、結合剤、着色剤、増量剤、乳化剤、又は味覚改質剤が挙げられる。好ましい実施形態において、本発明による医薬組成物は滅菌組成物である。医薬組成物は、当業者に公知の配合技術を用いて調製することができるか、又は当業者に利用可能になり得る。

【0242】

滅菌組成物も、本発明によって企図され、そのような組成物を管理する国又は地方の規制と一致する組成物を含む。

【0243】

本明細書に記載の医薬組成物及び化合物は、適切な薬学的溶媒若しくは担体に溶液、エマルジョン、懸濁液、又は分散液として、又は様々な剤形を調製するための当技術分野で公知の従来の方法に従って固体担体と一緒の丸剤、錠剤、トローチ剤、坐剤、サシェ剤、糖衣錠、顆粒剤、散剤、再構成のための粉末、若しくはカプセルとして製剤化することができる。本発明の医薬組成物は、経口、非経口、直腸、経鼻、局所又は眼経路など、又は吸入により、送達に適切な経路によって投与することができる。好ましくは、該組成物は、静脈内又は経口投与用に製剤化される。

【0244】

経口投与については、本発明の化合物は、錠剤又はカプセルなどの固体形態で、又は溶液、エマルジョン、若しくは懸濁液として提供することができる。経口組成物を調製するために、本発明の化合物は、例えば、１日約０．１ｍｇ〜１ｇ、又は１日約１ｍｇ〜５０ｍｇ、又は１日約５０〜２５０ｍｇ、又は１日約２５０ｍｇ〜１ｇの投与量をもたらすように製剤化することができる。経口錠剤は、希釈剤、崩壊剤、結合剤、滑剤、甘味剤、香味剤、着色剤及び防腐剤などの適合性のある薬学的に許容される賦形剤と混合した有効成分（複数可）を含んでよい。適切な不活性充填剤には、炭酸ナトリウム及び炭酸カルシウム、リン酸ナトリウム及びリン酸カルシウム、ラクトース、澱粉、糖、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、及びソルビトールなどが含まれる。代表的な液体経口賦形剤には、エタノール、グリセロール、及び水などが含まれる。澱粉、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、デンプングリコール酸ナトリウム、微結晶性セルロース、及びアルギン酸が、代表的な崩壊剤である。結合剤には、デンプン及びゼラチンが含まれ得る。滑剤は、存在する場合、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、又はタルクであってよい。所望であれば、該錠剤は、胃腸管での吸収を遅延させるためにグリセリルモノステアレート又はグリセリルジステアレートなどの材料でコーティングしてよく、又は腸溶コーティングでコーティングしてもよい。

【0245】

経口投与用のカプセル剤には、硬ゼラチンカプセル及び軟ゼラチンカプセルが含まれる。硬ゼラチンカプセルを調製するために、有効成分（複数可）は、固体、半固体、又は液体の希釈剤と混合することができる。軟ゼラチンカプセルは、水、落花生油又はオリーブ油、流動パラフィン、短鎖脂肪酸のモノグリセリドとジグリセリドの混合物、ポリエチレングリコール４００、又はプロピレングリコールなどの油と有効成分を混合することによって調製することができる。

【0246】

経口投与用の液体は、懸濁液、溶液、エマルジョン、又はシロップ剤の形態であってもよく、又は凍結乾燥されるか、又は使用前に水若しくは他の適当なビヒクルで再構成するための乾燥製品として提供してもよい。そのような液体組成物は、必要に応じて、懸濁剤（例えば、ソルビトール、メチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、及びステアリン酸アルミニウムゲルなど）；非水性ビヒクル、例えば、油（例えば、アーモンド油又は分別ヤシ油）、プロピレングリコール、エチルアルコール、又は水；防腐剤（例えば、メチル若しくはプロピルｐ−ヒドロキシベンゾエート又はソルビン酸）；レシチンなどの湿潤剤；所望であれば、香味剤又は着色剤などの薬学的に許容される賦形剤を含有してよい。

【0247】

静脈内、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、又は皮下経路を含む非経口使用については、本発明の薬剤は、適切なｐＨ及び等張性に緩衝化した滅菌水性溶液若しくは懸濁液、又は非経口的に許容される油で提供することができる。適切な水性ビヒクルには、リンゲル液及び等張塩化ナトリウムが含まれる。そのような形態は、アンプル又は使い捨て注射器具などの単位用量形態、適切な用量を引き出すことができるバイアルなどの複数回用量形態、又は注射製剤を調製するために用いることができる固体形態又は事前濃縮物で提示することができる。薬剤の例示的な輸液用量は、数分から数日の範囲の期間にわたって医薬担体と混合された約１〜１０００μｇ／ｋｇ／分の範囲である。

【0248】

鼻腔、吸入、又は経口投与については、本発明の医薬組成物は、例えば、適切な担体を含有するスプレー製剤を使用して投与することができる。本発明の組成物は、坐剤として直腸投与用に製剤化することができる。

【0249】

局所適用については、本発明の化合物は、好ましくは、局所投与に適するクリーム又は軟膏又は同様のビヒクルとして製剤化される。局所投与については、本発明の化合物は、ビヒクルへの薬物の約０．１％〜約１０％の濃度で医薬担体と混合してよい。本発明の薬剤を投与する別の様式は、経皮送達を達成するためにパッチ製剤を利用することができる。

【0250】

本明細書に示すいかなる式も、化合物の非標識形態及び同位体標識形態を表すことを意図している。同位体標識化合物は、１個の以上の原子が選択された原子質量又は質量数を有する原子によって置き換えられていること以外は、本明細書に示す式で示される構造を有する。本開示の化合物に組み込むことができる同位体の例としては、それぞれ^２Ｈ、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^１８Ｏ、^１７Ｏ、^３１Ｐ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^１８Ｆ、^３６Ｃｌ、及び^１２５Ｉなどの水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素、塩素、及びヨウ素の同位体が挙げられる。そのような同位体標識化合物は、代謝研究（好ましくは、^１４Ｃを用いた）、反応速度研究（例えば、^２Ｈ若しくは^３Ｈを用いた）、薬物若しくは物質の組織分布アッセイを含む検出技術又はイメージング技術［陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）若しくは単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）など］、又は患者の放射線治療において有用である。さらに、重水素（すなわち、^２Ｈ）などのより重い同位体との置換は、より大きな代謝安定性、例えば、インビボ半減期の延長又は必要投与量の減少から生じる特定の治療上の利点を与えることができる。同位体標識された本開示の化合物及びそのプロドラッグは、一般的に、以下に記載のスキーム又は実施例及び調製に開示されている手順を行うことにより、非同位体標識試薬と容易に入手可能な同位体標識試薬を置換することによって調製することができる。

【0251】

薬物の組合せ
本明細書に記載の化合物は、本明細書に記載の疾患及び障害の治療において、１以上の追加の有効成分と組み合わせた医薬組成物又は方法において使用することができる。さらに、追加の有効成分は、意図した疾患標的のための治療薬の悪影響を緩和する他の治療薬又は薬剤を含む。そのような組合せは、効力を増加させるか、他の疾患症状を改善するか、１以上の副作用を低減するか、又は本発明の化合物の必要な用量を減少させるのに役立ち得る。追加の有効成分は、本発明の化合物とは別々の医薬組成物で投与され得るか、又は本発明の化合物と共に単一の医薬組成物中に含めてもよい。追加の有効成分は、本発明の化合物の投与と同時に、本発明の化合物の投与の前又は後に投与することができる。

【0252】

追加の有効成分を含む併用剤は、疾患に関連する別の標的に対して活性のあるものを含めて、本明細書に記載の疾患及び障害を治療するのに有効であることが知られているか、又は発見されたものである。例えば、本発明の組成物及び製剤、並びに治療方法は、さらに、他の薬物又は医薬品、例えば、標的疾患又は関連症状若しくは状態の治療に有用であるか、又は緩和する他の活性薬剤を含むことができる。

【0253】

本明細書に記載の方法と組み合わせて使用するのに適する他の化学療法剤には、キナーゼ阻害剤、アドレノコルチコイド及びコルチコステロイド、アルキル化剤、ペプチド及びペプチド模倣シグナル伝達阻害剤、抗アンドロゲン、抗エストロゲン、アンドロゲン、アクラマイシン及びアクラマイシン誘導体、エストロゲン、代謝拮抗剤、白金化合物、アマニチン、植物アルカロイド、マイトマイシン、ディスコデルモリド、微小管阻害剤、エポチロン、炎症剤及び炎症促進剤、プリン類似体、ピリミジン類似体、カンプトテシン及びドラスタチンが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法で併用治療に適する化学療法剤には、アファチニブ、アレクチニブ、アキシチニブ、ボスチニブ、ブリガチニブ、カボザンチニブ、セリチニブ、クリゾチニブ、ダブラフェニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、エベロリムス、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ニロチニブ、ニンテダニブ、パルボシクリブ、パゾパニブ、ポナチニブ、レゴラフェニブ、ルキソリチニブ、シロリムス、ソラフェニブ、スニチニブ、トファシチニブ、テムシロリムス、トラメチニブ、バンデタニブ、ベムラフェニブ、メトトレキセート、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、タモキシフェン、タキソール、パクリタキセル、ドセタキセル、シトシンアラビノシド、シクロホスファミド、ダウノマイシン、リゾキシン、プレドニゾン、ヒドロキシ尿素、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、エリブリン、カンプトテシン、イリノテカン、ゲルダナマイシン、エストラムスチン及びノコダゾールのうちの１以上が含まれるが、これらに限定されない。本明細書に記載の方法で併用治療に適する化学療法剤には、アファチニブ、アレクチニブ、アキシチニブ、ボスチニブ、ブリガチニブ、カボザンチニブ、セリチニブ、クリゾチニブ、ダブラフェニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、エベロリムス、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ニロチニブ、ニンテダニブ、パルボシクリブ、パゾパニブ、ポナチニブ、レゴラフェニブ、ルキソリチニブ、シロリムス、ソラフェニブ、スニチニブ、トファシチニブ、テムシロリムス、トラメチニブ、バンデタニブ及びベムラフェニブからなる群から選択される１以上のキナーゼ阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、該患者は、クリゾチニブで以前に治療された。疼痛の適応症の場合、適切な併用剤には、ＮＳＡＩＤなどの抗炎症剤が含まれる。本発明の医薬組成物は、そのような活性剤のうちの１以上をさらに含むことができ、治療方法は、さらに、有効量のそのような活性剤のうちの１以上を投与することを含むことができる。

【0254】

診断試験
いくつかの実施形態において、本開示は、遺伝子融合体などの遺伝子改変されたチロシン又はセリン／スレオニンキナーゼを有するものとして以前に特定された患者の疾患を治療するための方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、遺伝子融合体などの遺伝子改変されたチロシン又はセリン／スレオニンキナーゼを有するものとして以前に特定された患者の癌を治療するための方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、患者の疾患を治療する方法であって、（ｉ）該患者において遺伝子改変さチロシン又はセリン／スレオニンキナーゼを特定すること、及び（ｉｉ）該患者に、そのような疾患の治療に有用な治療有効量の化合物を投与すること、を含む方法を提供する。

【0255】

遺伝子改変されたチロシン又はセリンスレオニンキナーゼを有するものとして患者を診断又は特定することは、当業者に公知のいくつかの診断試験によって達成することができることが理解されるであろう。例えば、そのような診断試験には、蛍光インサイツハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、免疫組織化学（ＩＨＣ）、全ゲノム配列決定、及び次世代シークエンシングなどが含まれるが、これらに限定されない。また、当技術分野で公知であり、本開示に関連した患者の診断又は患者の特定に適用できる方法のいずれかは、対象が遺伝子改変されたチロシン又はセリンスレオニンキナーゼを有するか否かを決定するために使用することができる改変試料を提供するために、直接的な改変、合成又は直接的な非共有結合により物質の１つの状態から別の状態に生体試料を変換することを含むことが理解されるであろう。いくつかの実施形態において、患者の疾患状態に関する「診断」又は「特定」は、患者から得られた生体試料に、ＦＩＳＨ、ＰＣＲ又はＩＨＣなどの診断試験を適用することを意味する。

【0256】

ＦＩＳＨは、人の細胞に遺伝物質を「マッピングする」試験であることが理解されるであろう。この試験は、特定の遺伝子又は遺伝子の部分を視覚化するために使用することができる。ＦＩＳＨは、配列相補性の高い染色体の部分のみに結合する蛍光プローブを使用する細胞遺伝学的技術である。そのようなＦＩＳＨ試験は、当技術分野で公知の任意の方法によって遺伝子改変されたチロシン又はセリン／スレオニンキナーゼを有する患者を特定するために使用することができ、そのような試験は、治療のための患者の事前の特定、又は治療のための患者の同時特定の手段のいずれかとして、本明細書に記載の方法と組み合わせて使用することができる。

【0257】

ＩＨＣは、生体組織中の抗原に特異的に結合する抗体の原理を利用して、組織切片の細胞において抗原（例えば、タンパク質）を検出するプロセスを指すことが理解されるであろう。免疫組織化学染色は、癌性腫瘍に見られるものなどの異常細胞の診断に広く使用される。特異的分子マーカーは、増殖又は細胞死（アポトーシス）などの特定の細胞事象に特有である。抗体−抗原相互作用を可視化することは、いくつかの方法で達成することができる。最も一般的な例において、抗体は、発色反応を触媒することができるペルオキシダーゼなどの酵素にコンジュゲートされる。あるいは、抗体は、フルオレセイン又はローダミンなどの蛍光団にタグ付けすることもできる。そのようなＩＨＣ試験は、当技術分野で公知の任意の方法によって、遺伝子改変されたチロシン又はセリン／スレオニンキナーゼを有する患者を特定するために使用することができ、そのような試験は、治療のための患者の事前の特定、又は治療のための患者の同時特定の手段のいずれかとして、本明細書に記載の方法と組み合わせて使用することができる。

【0258】

ＰＣＲは、数桁にわたってＤＮＡの断片の１コピー又は数コピーを増幅し、特定のＤＮＡ配列の数千〜数百万コピーを生成するために使用される分子生物学技術を指すことが理解されるであろう。そのようなＰＣＲ試験は、当技術分野で公知の任意の方法によって、遺伝子改変されたチロシン又はセリン／スレオニンキナーゼを有する患者を特定するために使用することができ、そのような試験は、治療のための患者の事前の特定、又は治療のための患者の同時特定の手段のいずれかとして、本明細書に記載の方法と組み合わせて使用することができる。

【0259】

全ゲノム配列決定又は次世代シークエンシングは、生物のゲノムの完全なＤＮＡ配列を一度に決定するプロセスを指すことが理解されるであろう。これは、生物の染色体ＤＮＡ及びミトコンドリアに含有されるＤＮＡの全ての塩基配列決定を伴う。そのような全ゲノム配列決定試験は、当技術分野で公知の任意の方法によって遺伝子改変されたチロシン又はセリン／スレオニンキナーゼを有する患者を特定するために使用することができ、そのような試験は、治療のための患者の事前の特定、又は治療のための患者の同時特定の手段のいずれかとして、本明細書に記載の方法と組み合わせて使用することができる

【0260】

実施例
以下に提供する実施例及び調製物は、さらに、本開示の実施形態の特定の態様を説明し、例示する。本開示の範囲は、以下の実施例の範囲によって決して限定されないことを理解されたい。

【0261】

略語
本明細書に記載の実施例は、当業者に公知の以下の略号で記載されるものを含むが、これらに限定されない材料を使用する。

【表1】

【0262】

化合物１の合成
化合物１を、以下の合成スキームに従って調製した。

【化17】

【0263】

実施例１：５−クロロピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボキシレート（１ａ）の調製
工程１：エチル５−オキソ−４Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ]ピリミジン−３−カルボキシレート（１−２）の調製
ＤＭＦ（３．２Ｌ）中のエチル５−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、１５０．００ｇ、１．０８ｍｍｏｌ）及びエチル（Ｅ）−３−エトキシプロパ−２−エノエート（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、２９２．１６ｇ、２．０３ｍｏｌ）の混合物に、Ｎ_２下、２０℃で一度にＣｓ_２ＣＯ_３（６５６．７７ｇ，２．０２ｍｏｌ）を添加した。この混合物を６時間１１０℃で撹拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１：１）は、反応が完了したことを示した。この混合物を２０℃に冷却し、セライトパッドを通して濾過した。フィルターケーキを酢酸エチル（３×３０ｍＬ）で洗浄した。濾液をＨ_２Ｏ（２Ｌ）に加え、ｐＨ＝４にＨＯＡｃで酸性化した。得られた沈殿物を濾過して、白色固体として１−２（１７３．００ｇ、８３４．９８ｍｍｏｌ、８６．３６％の収率）を得た：^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ８．５４（ｄ，Ｊ＝７．９１Ｈｚ，１Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ），６．１３（ｄ，Ｊ＝７．９１Ｈｚ，１Ｈ），４．２７（ｑ，Ｊ＝７．１１Ｈｚ，２Ｈ），１．２８（ｔ，Ｊ＝７．０９Ｈｚ，３Ｈ）。

【0264】

工程２：５−クロロピラゾロ［１，５−ａ]ピリミジン−３−カルボキシレート（１）の調製
ＭｅＣＮ（１．６Ｌ）中の１−２（１５８．００ｇ、７６２．５９ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｎ_２下、２０℃でＰＯＣｌ_３（５８４．６４ｇ、３．８１ｍｏｌ）を加えた。この混合物を２時間１００℃で撹拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝１：１）は、反応が完了したことを示した。この混合物を２０℃に冷却し、０℃で少しずつ氷水（５０００ｍＬ）に注ぎ、２０分間撹拌した。沈殿物を濾過し、乾燥させ、白色固体として１ａ（１１０．００ｇ、４８７．５２ｍｍｏｌ、６３．９３％の収率）を得た：^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．３３（ｄ，Ｊ＝７．２８Ｈｚ，１Ｈ），８．６６（ｓ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝７．１５Ｈｚ，１Ｈ），４．３１（ｑ，Ｊ＝７．１５Ｈｚ，２Ｈ），１．３２（ｔ，Ｊ＝７．０９Ｈｚ，３Ｈ）。

【0265】

実施例２：（Ｒ）−２−（１−アミノエチル）―４−フルオロフェノール（２）の調製
工程１：（Ｒ）−Ｎ−（５−フルオロ−２−ヒドロキシベンジリデン）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（２−２）の調製
ＤＣＭ（２．００Ｌ）中の（Ｒ）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、１５０．００ｇ、１．２４ｍｏｌ、１．００当量）及び５−フルオロ−２−ヒドロキシベンズアルデヒド（２−１）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、１７３．７４ｇ、１．２４ｍｏｌ、１．００当量）の溶液に、Ｃｓ_２ＣＯ_３（６４６．４３ｇ、１．９８ｍｏｌ、１．６０当量）を添加した。混合物を１６時間、１６℃で撹拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝５：１）は、反応が完了したことを示した。反応混合物を０℃でＨ_２Ｏ（１０００ｍＬ）の添加によりクエンチし、次いで、ＥｔＯＡＣ（５００ｍＬ×４）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、２−２（２３０．００ｇ、９４５．３３ｍｍｏｌ、７６．２４％の収率）を得た。^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ８．６４（ｓ，１Ｈ），７．２２−７．１１（ｍ，２Ｈ），７．０３−６．９５（ｍ，１Ｈ），１．２８（ｓ，９Ｈ）。

【0266】

工程２：（Ｒ）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）エチル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（２−３Ｒ）の調製
ＴＨＦ（２．５Ｌ）中の（Ｒ）−Ｎ−（５−フルオロ−２−ヒドロキシベンジリデン）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（２−２）（２００．００ｇ、８２２．０３ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液に、−６５℃、Ｎ_２下で３０分かけてＭｅＭｇＢｒ（４９０．０９ｇ、４．１１ｍｏｌ、５．００当量）を滴加した。次いで、混合物を周囲温度に温め、１８時間撹拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１：１）は、反応が２つのジアステレオマーを生成して完了したことを示した。反応混合物を、０℃でＨ_２Ｏ（２Ｌ）の添加によりクエンチし、混合物をＥｔＯＡＣ（５００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を、ブライン（５００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、残留物を得た。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、石油エーテル／酢酸エチル＝５０／１〜１：１）により精製し、（Ｒ）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）エチル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（２−３Ｒ）（１２５ｇ、上部、Ｒｆ：０．５を有する極性の低いスポット、ＰＥ：ＥＡ＝１：１）を得た。^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ：９．１７（ｓ，１Ｈ），６．６８（ｄｄ，Ｊ＝３．０，８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．４７（ｄｔ，Ｊ＝３．０，８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．３１（ｄｄ，Ｊ＝４．８，８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．１１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２８（ｑｕｉｎ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），１．４３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．２０（ｓ，９Ｈ）。

【0267】

工程３：（Ｒ）−２−（１−アミノエチル）―４−フルオロフェノール（２）の調製
ＨＣｌ／ジオキサン（１．５Ｌ、４Ｎ）中の（Ｒ）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）エチル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（２−３Ｒ）（１２５ｇ、４８１．９９ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液を、周囲温度で２時間撹拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝２：１）は反応が完了したことを示した。混合物を濾過し、白色固体として（Ｒ）−２−（１−アミノエチル）−４−フルオロフェノール（２）ＨＣｌ塩（８５ｇ、４４３．５６ｍｍｏｌ、９０．０３％の収率）を得た。^１ＨＮＭＲ（ｄ−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）δ１０．２４（ｓ，１Ｈ），８．４８（ｂｒ．Ｓ．，３Ｈ），７．３１（ｄｄ，Ｊ＝２．９，９．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０５−６．９９（ｍ，１Ｈ），６．９８−６．９３（ｍ，１Ｈ），４．５９−４．４５（ｍ，１Ｈ），１．４６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。

【0268】

実施例３：（７Ｓ，１３Ｒ）−１１−フルオロ−７，１３−ジメチル−６，７，１３，１４−テトラヒドロ−１，１５−エテノピラゾロ［４，３−ｆ]［１，４，８，１０]ベンゾキサトリアザシクロトリデシン−４（５Ｈ）−オン（化合物１）の調製
工程１：エチル（Ｒ）−５−（（１−（５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ]ピリミジン−３−カルボキシレート（３）の調製
ｎ−ＢｕＯＨ（２Ｌ）中の（Ｒ）−２−（１−アミノエチル）−４−フルオロフェノール（２）（８５ｇ、４４３．５６ｍｍｏｌ、１．００当量）及びエチル５−クロロピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボキシレート（１ａ）（１００．０８ｇ、４４３．５６ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液に、ＤＩＥＡ（３４３．９６ｇ、２．６６ｍｏｌ、６．００当量）を添加した。混合物を２時間１２０℃で撹拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ）＝１：１）は反応が完了したことを示した。反応混合物を、１６℃で、Ｈ_２Ｏ（５００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を、ブライン（５００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させた、濾過し、減圧下で濃縮して、残留物を得た。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、石油エーテル／酢酸エチル＝１０／１〜１：３）により精製し、白色固体としてエチル（Ｒ）−５−（（１−（５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ]ピリミジン−３−カルボキシレート（３）（１２２ｇ、３４９．３４ｍｍｏｌ、７８．７６％の収率、ｅｅ＞９９％純度）を得た。^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ９．２８（ｂｒ．Ｓ．，１Ｈ），８．２６（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．９５−６．８９（ｍ，２Ｈ），６．８７−６．８０（ｍ，１Ｈ），６．１８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），５．９８（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），５．７１−５．５４（ｍ，１Ｈ），４．５０−４．３５（ｍ，２Ｈ），１．６０（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．４２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。

【0269】

工程２：エチル５−（（（Ｒ）−１−（２−（（（Ｓ）−１−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン−２−イル）オキシ）−５−フルオロフェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ]ピリミジン−３−カルボキシレート（４）の調製
エチル（Ｒ）−５−（（１−（５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ]ピリミジン−３−カルボキシレート（３）（１０．００ｇ、２９．０４ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−（２−ヒドロキシプロピル）カルバメート（Ｃｏｍｂｉ−Ｂｌｏｃｋｓ、７．６３ｇ、４３．５６ｍｍｏｌ）の混合物は、ＤＣＭ／トルエンから乾燥させた共沸混合物であり、次いで、ＤＣＭ（１１．６２ｍＬ）に再溶解した。この溶液にＰＰｈ_３（１１．４３ｇ、４３．５６ｍｍｏｌ）を添加し、出発物質が完全に溶解するまで混合物を攪拌した。この溶液に、混合しながら５分間かけてＤＥＡＤ（８．８１ｇ、４３．５６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を３時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（１２５ｍＬ）で希釈し、その後、ＮａＯＨ水溶液（２Ｍ、１００ｍＬ）を添加した。混合物を１２時間激しく撹拌し、層を分離した。水層をさらにＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＴｅｌｅｄｙｎｅＩＳＣＯｓｙｓｔｅｍ、シリカ（３３０ｇ）、ヘキサン中の０〜４０％酢酸エチル）を用いて精製し、エチル５−（（（Ｒ）−１−（２−（（（Ｓ）−１−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン−２−イル）オキシ）−５−フルオロフェニル）エチル）アミノ）−ピラゾロ［１，５−ａ]ピリミジン−３−カルボキシレート（４）（８．８８ｇ、６０．９％の収率）を得た。ＬＣ−ＭＳｍ／ｚ５０２．２（Ｍ＋Ｈ）^＋。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ８．２４（ｓ，１Ｈ），８．２１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），６．１３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），５．９１（ｂｒ.ｓ.，１Ｈ），４．５８（ｄ，Ｊ＝３.６Ｈｚ，１Ｈ），４．４３−４．２８（ｍ，２Ｈ），３．５２−３．３４（ｍ，２Ｈ），１．５４（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．４７−１．３６（ｍ，１２Ｈ），１．３０（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）。

【0270】

工程３：５−（（（Ｒ）−１−（２−（（（Ｓ）−１−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン−２−イル）オキシ）−５−フルオロフェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ]ピリミジン−３−カルボン酸（５）の調製
メタノール（６５ｍＬ）及びＴＨＦ（２０ｍＬ）中のエチル５−（（（Ｒ）−１−（２−（（（Ｓ）−１−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン−２−イル）オキシ）−５−フルオロフェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ]ピリミジン−３−カルボキシレート（４）（６．９８ｇ、１３．９２ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＬｉＯＨ（２Ｍ、４７．９ｍＬ、９５．８ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を、３時間、７０℃で加熱し、周囲温度に冷却し、次いで、水性ＨＣｌ（２Ｍ、９５．８ｍＬ）でクエンチし、ｐＨ＜５に調整した。反応混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（３×５０ｍＬ）で抽出し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させた。濾過、蒸発、及び高真空乾燥の後、白色固体の５−（（（Ｒ）−１−（２−（（（Ｓ）−１−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン−２−イル）オキシ）−５−フルオロフェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ]ピリミジン−３−カルボン酸（５）を得て、さらに精製することなく次の工程で使用した。ＬＣ−ＭＳｍ／ｚ４７４．２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0271】

工程４：５−（（（Ｒ）−１−（２−（（（Ｓ）−１−アミノプロパン−２−イル）オキシ）−５−フルオロフェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ]ピリミジン−３−カルボン酸（６）の調製
ＣＨ_２Ｃｌ_２（１３０ｍＬ）中の５−（（（Ｒ）−１−（２−（（（Ｓ）−１−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン−２−イル）オキシ）−５−フルオロフェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ]ピリミジン−３−カルボン酸（５）（６．５９ｇ、１３．９２ｍｍｏｌ）の溶液に、ジオキサン中のＨＣｌ（４Ｍ、３０．４ｍＬ）を添加した。ＬＣ−ＭＳによって反応が完了したことが示されるまで、室温で２時間攪拌し続けた。反応混合物を濃縮し、高真空乾燥させ、白色固体として化合物６を得、さらに精製することなく次の工程で使用した。ＬＣ−ＭＳｍ／ｚ３７４．２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0272】

工程５：（７Ｓ，１３Ｒ）−１１−フルオロ−７，１３−ジメチル−６，７，１３，１４−テトラヒドロ−１，１５−エテノピラゾロ［４，３−ｆ]［１，４，８，１０]ベンゾキサトリアザシクロトリデシン−４（５Ｈ）−オン（化合物１）の調製
５−（（（Ｒ）−１−（２−（（（Ｓ）−１−アミノプロパン−２−イル）オキシ）−５−フルオロフェニル）エチル）アミノ）ピラゾロ［１，５−ａ]ピリミジン−３−カルボン酸（６）（５．２０ｇ、１３．９３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（７５ｍＬ）に溶解し、溶液Ａを作製した。ＤＭＦ（１５０ｍＬ）及びＤＣＭ（３５０ｍＬ）中のヒューニッヒ塩基（ＤＩＰＥＡ）（１４．４０ｇ、１１１．４ｍｍｏｌ）の溶液に、順次、溶液Ａ（２５ｍＬ）及び全量の三分の一のＦＤＰＰ（５．６２ｇ、１４．６３ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を１時間撹拌し、ＬＣ−ＭＳは、カップリング反応の完了を示した。同じプロセスを２回以上繰り返した。最終溶液を６３時間（又はＬＣ−ＭＳによって反応が完了したことが示されるまで）周囲温度で撹拌した。反応を水性のＮａ_２ＣＯ_３溶液（２Ｍ、１５０ｍＬ）の添加によりクエンチし、混合物を１５分間撹拌し、ＤＣＭ（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ＴｅｌｅｄｙｎｅＩＳＣＯｓｙｓｔｅｍ、シリカ（２２０ｇ）、ジクロロメタン中０〜７．５％のメタノール）で精製し、白色固体として（７Ｓ，１３Ｒ）−１１−フルオロ−７，１３−ジメチル−６，７，１３，１４−テトラヒドロ−１，１５−エテノピラゾロ［４，３−ｆ]［１，４，８，１０]ベンゾキサトリアザシクロトリデシン−４（５Ｈ）−オン（化合物１）（４．３８ｇ、１２．３３ｍｍｏｌ、８８．５％の収率）を得た。ＬＣ−ＭＳ：ｍ/ｚ［Ｍ＋Ｈ］^＋３５６．２。^１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ９．８２（ｄｄ，Ｊ＝８．０２，２．２９Ｈｚ，１Ｈ），８．８１（ｄ，Ｊ＝６．８７Ｈｚ，１Ｈ），８．５８（ｄ，Ｊ＝７．４５Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（ｓ，１Ｈ），７．１２（ｄｄ，Ｊ＝９．４５，３．１５Ｈｚ，１Ｈ），６．９９−７．０５（ｍ，１Ｈ），６．９４−６．９９（ｍ，１Ｈ），６．３６（ｄ，Ｊ＝７．４５Ｈｚ，１Ｈ），５．５３（ｍ，１Ｈ），４．４５−４．５２（ｍ，１Ｈ），３．９０（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．４６，８．３１，４．０１Ｈｚ，１Ｈ），３．１０−３．１７（ｍ，１Ｈ），１．４６（ｄ，Ｊ＝６．３０Ｈｚ，３Ｈ），１．４４（ｄ，Ｊ＝７．４５Ｈｚ，３Ｈ）。

【0273】

インビトロアッセイ
材料及び方法
キナーゼ結合アッセイ法
キナーゼ結合アッセイを、一般的なＫＩＮＯＭＥｓｃａｎＫ_ｄプロトコルを使用してＤｉｓｃｏｖｅＲｘで行った（Ｆａｂｉａｎ，Ｍ．Ａ．ら，「臨床キナーゼ阻害剤についての低分子−キナーゼ相互作用マップ（Ａｓｍａｌｌｍｏｌｅｃｕｌｅ−ｋｉｎａｓｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｍａｐｆｏｒｃｌｉｎｉｃａｌｋｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）」、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００５，２３（３）：３２９−３６）。ほとんどのアッセイについて、キナーゼタグＴ７ファージ株を、ＢＬ２１株由来の大腸菌宿主で調製した。大腸菌を、対数期まで増殖させ、Ｔ７ファージに感染させ、溶解するまで３２℃で振盪しながらインキュベートした。可溶化液を遠心分離し、濾過して、細胞破片を除去した。残りのキナーゼを、ＨＥＫ−２９３細胞で産生させ、その後、ｑＰＣＲ検出のためのＤＮＡでタグ付けした。ストレプトアビジン被覆磁気ビーズを、室温で３０分間、ビオチン化小分子リガンドで処理し、キナーゼアッセイのための親和性樹脂を作製した。リガンド結合ビーズを、過剰のビオチンでブロックし、非結合リガンドを除去し、非特異的結合を低減するためにブロッキング緩衝液（ＳｅａＢｌｏｃｋ（Ｐｉｅｒｃｅ）、１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、１ｍＭＤＴＴ）で洗浄した。１×結合緩衝液（２０％ＳｅａＢｌｏｃｋ、０．１７×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、６ｍＭＤＴＴ）中にキナーゼ、リガンド結合親和性ビーズ、及び試験化合物を組み合わせることによって、結合反応を構築した。全ての反応を、０．１３５ｍＬの最終体積で、ポリスチレン９６ウェルプレート中で行った。アッセイプレートを１時間振盪しながら室温でインキュベートし、親和性ビーズを洗浄緩衝液（１×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）で洗浄した。次いで、ビーズを溶出緩衝液（１×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．５μΜ 非ビオチン化親和性リガンド）に再懸濁し、３０分間振盪しながら室温でインキュベートした。溶出液中のキナーゼ濃度を、ｑＰＣＲによって測定した。

【0274】

結合定数（Ｋ_ｄｓ）を、ヒル式：反応＝バックグラウンド＋（シグナル−バックグラウンド）／（１＋（Ｋｄ^ヒル勾配／用量^ヒル勾配））を用いて、標準的な用量応答曲線を用いて計算した。ヒル勾配は−１に設定した。曲線を、レーベンバーグ・マルカートアルゴリズムと非線形最小二乗フィットを用いて適合させた。

【0275】

生化学的キナーゼアッセイ法
生化学的なキナーゼアッセイを、参考文献（ＡｎａｓｔａｓｓｉａｄｉｓＴ．ら、ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１，２９，１０３９）に記載の手順に従って、ＲｅａｃｔｉｏｎＢｉｏｌｏｇｙＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（ｗｗｗ.ｒｅａｃｔｉｏｎｂｉｏｌｏｇｙ．ｃｏｍ，Ｍａｌｖｅｒｎ，ＰＡ）で行った。必要な補因子と共に特異的キナーゼ／基質対を反応緩衝液；２０ｍＭＨｅｐｅｓｐＨ７．５、１０ｍＭＭｇＣｌ_２、１ｍＭのＥＧＴＡ、０．０２％Ｂｒｉｊ３５、０．０２ｍｇ／ｍｌＢＳＡ、０．１ｍＭＮａ_３ＶＯ_４、２ｍＭＤＴＴ、１％ＤＭＳＯで調製した（個々のキナーゼ反応成分についての具体的な詳細は、補足表２を参照されたい）。化合物を反応中に移し、約２０分後、１０μΜの最終濃度になるまでＡＴＰ（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．ＬｏｕｉｓＭＯ）及び^３３ＰＡＴＰ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，ＷａｌｔｈａｍＭＡ）の混合物を添加した。反応を室温で１２０分間行い、その後、Ｐ８１イオン交換濾紙（Ｗｈａｔｍａｎ社、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）上に反応物をスポッティングした。０．７５％のリン酸で濾紙を徹底的に洗浄することにより、未結合リンを除去した。不活性酵素を含有する対照反応に由来するバックグラウンドを差し引いた後、ビヒクル（ジメチルスルホキシド）反応と比較して、試験試料中の残りのキナーゼ活性の割合としてキナーゼ活性データを表した。ＩＣ_５０値及び曲線フィットは、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア）を使用して得た。

【0276】

細胞株及び細胞培養：
ヒト肺癌細胞株ＮＣＩ−Ｈ２２２８をＡＴＣＣから入手した。細胞株２９３Ｔ、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｂａ／Ｆ３、及びＨＣＣ７８は、ＤＳＭＺから購入した。Ｋａｒｐａｓ−２９９細胞株はＳｉｇｍａから購入した。ＫＭ１２細胞株はＮＣＩから入手した。

【0277】

ＮＩＨ３Ｔ３を、１０％ウシ胎児血清及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭ培地中で維持した。ＨＣＣ７８、Ｋａｒｐａｓ−２９９及びＨ２２２８を、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン／ストレプトマイシンと共に１０％ウシ胎児血清を補充したＲＰＭＩ−１６４０中で維持した。Ｂａ／Ｆ３細胞を、１０％ウシ胎児血清、ＷＩＨＩ−３Ｂ骨髄単球ＩＬ−３分泌細胞からの１０％（体積／体積）馴化培地及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ−１６４０中で維持した。Ｂａ／Ｆ３安定細胞株を、１０％ウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、及び０．５μｇ／ｍＬのピューロマイシン溶液を補充したＲＰＭＩ−１６４０中で維持した。

【0278】

クローニング及びＢａ／Ｆ３又はＮＩＨ３Ｔ３の安定細胞株の作製
ＥＭＬ４−ＡＬＫ遺伝子（変異型１）を、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社で合成し、ｐＣＤＨ−ＣＭＶ−ＭＣＳ−ＥＦ１−ピューロプラスミド（ＳｙｓｔｅｍＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）にクローニングした。ＥＭＬ４−ＡＬＫの点変異のＧ１２０２Ｒ、Ｌ１１９６Ｍ、Ｌ１１５２Ｐ、Ｆ１１７４Ｃ、Ｃ１１５６Ｙ、Ｉ１１７１Ｎ、Ｇ１２６９Ｓ、及び１１５１Ｔ挿入を、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社でＰＣＲによって作製し、配列決定によって確認した。ＥＭＬ４−ＡＬＫ野生型又は変異型を含有するレンチウイルスでＢａ／Ｆ３細胞に形質導入することによって、Ｂａ／Ｆ３−ＥＭＬ４−ＡＬＫ野生型及び変異型を作製した。安定細胞株をピューロマイシン処理により選択し、その後ＩＬ−３を中止した。簡潔に述べると、８μｇ／ｍＬのプロタミン硫酸塩の存在下で、レンチウイルス上清で５×１０^６個のＢａ／Ｆ３細胞に形質導入した。その後、形質導入細胞を、１０％ＦＢＳを加えたＩＬ３含有培地ＲＰＭＩ１６４０の存在下で、１μｇ／ｍＬのピューロマイシンで選択した。選択の１０〜１２日後に、生存細胞を、さらに、ＩＬ３非依存性増殖について選択した。

【0279】

ＳＤＣ４−ＲＯＳ１野生型、ＣＤ７４−ＲＯＳ１野生型、及びそれらのＧ２０３２Ｒ変異遺伝子を、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ社で合成し、ｐＣＤＨ−ＣＭＶ−ＭＣＳ−ＥＦ１−ピューロプラスミド（ＳｙｓｔｅｍＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）にクローニングし、配列決定によって確認した。融合遺伝子を含有するレンチウイルスでＢａ／Ｆ３細胞に形質導入することによって、Ｂａ／Ｆ３ＳＤＣ４−ＲＯＳ１、ＣＤ７４−ＲＯＳ１及び対応するＧ２０３２Ｒ変異型を作製した。安定細胞株をピューロマイシン処理により選択し、その後ＩＬ−３を中止した。簡潔に述べると、８μｇ／ｍＬのプロタミン硫酸塩の存在下で、レンチウイルス上清で５×１０^６個のＢａ／Ｆ３細胞に形質導入した。その後、形質導入細胞を、１０％ＦＢＳを加えたＩＬ３含有培地ＲＰＭＩ１６４０の存在下で、１μｇ／ｍＬのピューロマイシンで選択した。選択の１０〜１２日後に、生存細胞を、さらに、ＩＬ３非依存性増殖について選択した。

【0280】

Ｂａ／Ｆ３ＴＰＲ−ＡＬＫ及びＢａ／Ｆ３ＴＰＲ−ＡＬＫＬ１１９６Ｍ細胞株を、ＡｄｖａｎｃｅｄＣｅｌｌｕｌａｒＤｙｎａｍｉｃｓ社で作製し、そこで細胞増殖アッセイを行った。ＡＣＤパネル自体は、共通リンパ系細胞株（マウスＢａ／Ｆ３細胞）中で個々に発現する９２種の固有のキナーゼから構成されている。各細胞株は、生存について、組換えキナーゼ活性に依存している。

【0281】

ＳＤＣ４−ＲＯＳ１Ｌ２０２６Ｍ及びＤ２０３３Ｎ変異遺伝子を、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社で合成し、ｐＣＤＨ−ＣＭＶ−ＭＣＳ−ＥＦ１−ピューロプラスミド（ＳｙｓｔｅｍＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）にクローニングし、配列決定によって確認した。融合遺伝子を含有するレンチウイルスでＢａ／Ｆ３細胞に形質導入することによって、Ｂａ／Ｆ３ＣＤ７４−ＲＯＳ１Ｌ２０２６Ｍ及びＤ２０３３Ｎ変異型を作製した。安定細胞株をピューロマイシン処理により選択し、その後ＩＬ−３を中止した。簡潔に述べると、８μｇ／ｍＬのプロタミン硫酸塩の存在下で、レンチウイルス上清で５×１０^６個のＢａ／Ｆ３細胞に形質導入した。その後、形質導入細胞を、１０％ＦＢＳを加えたＩＬ３含有培地ＲＰＭＩ１６４０の存在下で、１μｇ／ｍＬのピューロマイシンで選択した。選択の１０〜１２日後に、生存細胞を、さらに、ＩＬ３非依存性増殖について選択した。

【0282】

ＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ野生型、及びそのＧ５９５Ｒ変異遺伝子を、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社で合成し、ｐＣＤＨ−ＣＭＶ−ＭＣＳ−ＥＦ１−ピューロプラスミド（ＳｙｓｔｅｍＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）にクローニングし、配列決定によって確認した。融合遺伝子を含有するレンチウイルスでＢａ／Ｆ３細胞に形質導入することによって、Ｂａ／Ｆ３ＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ及び対応するＧ５９５Ｒ変異型を作製した。安定細胞株をピューロマイシン処理により選択し、その後ＩＬ−３を中止した。簡潔に述べると、８μｇ／ｍＬのプロタミン硫酸塩の存在下で、レンチウイルス上清で５×１０^６個のＢａ／Ｆ３細胞に形質導入した。その後、形質導入細胞を、１０％ＦＢＳを加えたＩＬ３含有培地ＲＰＭＩ１６４０の存在下で、１μｇ／ｍＬのピューロマイシンで選択した。選択の１０〜１２日後に、生存細胞を、さらに、ＩＬ３非依存性増殖について選択した。

【0283】

ＴＥＬ−ＴＲＫＢ（ＥＴＶ６−ＴＲＫＢとも命名された）野生型及びそのＧ６３９Ｒ変異遺伝子を、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社で合成し、ｐＣＤＨ−ＣＭＶ−ＭＣＳ−ＥＦ１−ピューロプラスミド（ＳｙｓｔｅｍＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）にクローニングし、配列決定によって確認した。融合遺伝子を含有するレンチウイルスでＢａ／Ｆ３細胞に形質導入することによって、Ｂａ／Ｆ３ＴＥＬ−ＴＲＫＢ及び対応するＧ６３９Ｒ変異型を作製した。安定細胞株をピューロマイシン処理により選択し、その後ＩＬ−３を中止した。簡潔に述べると、８μｇ／ｍＬのプロタミン硫酸塩の存在下で、レンチウイルス上清で５×１０^６個のＢａ／Ｆ３細胞に形質導入した。その後、形質導入細胞を、１０％ＦＢＳを加えたＩＬ３含有培地ＲＰＭＩ１６４０の存在下で、１μｇ／ｍＬのピューロマイシンで選択した。選択の１０〜１２日後に、生存細胞を、さらに、ＩＬ３非依存性増殖について選択した。

【0284】

ＴＥＬ−ＴＲＫＣ（ＥＴＶ６−ＴＲＫＣとも命名された）野生型及びそのＧ６２３Ｒ変異遺伝子を、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社で合成し、ｐＣＤＨ−ＣＭＶ−ＭＣＳ−ＥＦ１−ピューロプラスミド（ＳｙｓｔｅｍＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）にクローニングし、配列決定によって確認した。融合遺伝子を含有するレンチウイルスでＢａ／Ｆ３細胞に形質導入することによって、Ｂａ／Ｆ３ＴＥＬ−ＴＲＫＣ及び対応するＧ６２３Ｒ変異型を作製した。安定細胞株をピューロマイシン処理により選択し、その後ＩＬ−３を中止した。簡潔に述べると、８μｇ／ｍＬのプロタミン硫酸塩の存在下で、レンチウイルス上清で５×１０^６個のＢａ／Ｆ３細胞に形質導入した。その後、形質導入細胞を、１０％ＦＢＳを加えたＩＬ３含有培地ＲＰＭＩ１６４０の存在下で、１μｇ／ｍＬのピューロマイシンで選択した。選択の１０〜１２日後に、生存細胞を、さらに、ＩＬ３非依存性増殖について選択した。

【0285】

ＥＭＬ４−ＡＬＫ野生型及びＧ１２０２Ｒ変異遺伝子、ＳＤＣ４−ＲＯＳ１野生型、ＣＤ７４−ＲＯＳ１野生型及びそのＧ２０３２Ｒ変異遺伝子を含有するレンチウイルスで細胞に形質導入することによって、ＮＩＨ３Ｔ３ＡＬＫ又はＲＯＳ１安定細胞株を作製した。その後、形質導入細胞を１μｇ／ｍＬのピューロマイシンで選択した。

【0286】

それぞれ、ＣＤ７４−ＲＯＳ１Ｌ２０２６Ｍ及びＤ２０３３Ｎ変異遺伝子、ＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ野生型及びＧ５９５Ｒ変異遺伝子、ＴＥＬ−ＴＲＫＢ野生型及びＧ６３９Ｒ変異遺伝子、ＴＥＬ−ＴＲＫＢ野生型及びＧ６２３Ｒ変異遺伝子を含有するレンチウイルスで細胞に形質導入することによって、ＮＩＨ３Ｔ３ＲＯＳ１、又はＴＲＫＡ、又はＴＲＫＢ、又はＴＲＫＣ安定細胞株を作製した。その後、形質導入細胞を１μＧ／ｍＬのピューロマイシンを用いて選択した。

【0287】

細胞増殖アッセイ：
１ウェルあたり２０００個の細胞を２４時間、３８４ウェル白色プレートに播種し、次いで、化合物で７２時間（３７℃、５％ＣＯ_２）処理した。製造会社のプロトコルに従って、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−ＧｌｏルシフェラーゼベースのＡＴＰ検出アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて細胞増殖を測定した。ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ社、ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いてＩＣ_５０の決定を行った。

【0288】

Ｂａ／Ｆ３ＴＰＲ−ＡＬＫ及びＢａ／Ｆ３ＴＰＲ−ＡＬＫＬ１１９６Ｍ細胞株の細胞増殖アッセイを、ＡｄｖａｎｃｅｄＣｅｌｌｕｌａｒＤｙｎａｍｉｃｓ社で行った。キナーゼ活性の阻害は、細胞死をもたらし、それを、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いてＡＴＰ濃度を介して監視した。細胞株を、１０％ウシ胎児血清及び抗生物質を含有するＲＰＭＩ−１６４０培地中で維持した。対数増殖期の細胞を採取し、５，０００個の細胞を５０μＬの増殖培地で３８４ウェルプレートの各ウェルに分配した。親細胞（のみ）を、細胞の増殖及び生存を支持するために１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−３の存在下で播種した。５０ナノリットルの希釈化合物を二重に、適切なウェルに添加し、細胞を５％ＣＯ_２の加湿雰囲気中３７℃で４８時間培養した。１５μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏを添加し、発光を測定することにより生存率を決定し、秒あたりのカウントで測定した相対光単位（ＲＬＵ）として報告する。

【0289】

細胞キナーゼリン酸化アッセイのための免疫ブロット
ＮＳＣＬＣ細胞株Ｈ２２２８（内因性ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合遺伝子を保有する）、ＨＣＣ７８細胞（内因性ＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合遺伝子を保有する）、Ｋａｒｐａｓ−２９９細胞（内因性ＮＰＭ−ＡＬＫ融合遺伝子を保有する）又はＳＥＴ−２（内因性ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ活性化変異を保有する）をＲＰＭＩ培地で培養し、ＫＭ１２（内因性ＴＰＭ３−ＴＲＫＡ融合遺伝子を保有する）細胞株をＤＭＥＭ培地で培養し、両方に１０％ウシ胎児血清及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン／ストレプトマイシンを補充した。上述した通り、ＡＬＫ又はＲＯＳ１（ＷＴ又は変異型）を安定に発現するＢａ／Ｆ３及びＮＩＨ３Ｔ３細胞を培養した。ウェルあたり５０万個の細胞を２４時間、２４ウェルプレートに播種し、次いで、４時間化合物で処理した。細胞を処理した後に回収し、１０ｍＭＥＤＴＡ、１×Ｈａｌｔプロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を補充したＲＩＰＡ緩衝液（５０ｍＭトリス、ｐＨ７．４、１５０ｍＭＮaＣｌ、１％ＮＰ−４０、０．５％デオキシコール酸、０．１％ＳＤＳ）に溶解した。タンパク質溶解物（約２０μｇ）を、４〜１２％ボルトビス−トリスプレキャストゲル上にＭＥＳ泳動バッファー（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて分離し、トランスブロットターボトランスファーシステム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いてニトロセルロース膜に転写し、リン酸化ＡＬＫＹ１６０４（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、総ＡＬＫ（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、リン酸化されたＲＯＳ１及び総ＲＯＳ１（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、リン酸化ＴＲＫＡ／Ｂ（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ））、総ＴＲＫＡ抗体（ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｇｙ）、リン酸化ＳＴＡＴ３及びＳＴＡＴ５、総ＳＴＡＴ３及びＳＴＡＴ５（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、リン酸化ＡＫＴ（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、総ＡＫＴ（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、リン酸化ＥＲＫ（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、総ＥＲＫ（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）及びチューブリン（Ｓｉｇｍａ）を標的とする抗体を用いて検出した。抗体は、典型的には、穏やかに振盪しながら４℃で一晩インキュベートし、洗浄した後に、適切なＨＲＰ結合二次抗体とインキュベートした。膜を、室温で５分間、化学発光基質（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌＷｅｓｔＦｅｍｔｏ，ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）とインキュベートした。化学発光画像を、Ｃ−ＤｉＧｉｔイメージングシステム（ＬＩ−ＣＯＲＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で取得した。化学発光バンドの相対密度を、ＬＩＣＯＲ社のＩｍａｇｅＳｔｕｄｉｏＤｉｇｉｔｓを介して定量した。半分の阻害濃度（ＩＣ_５０）値を、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ社、ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ）を介して非線形回帰分析を使用して計算する。

【0290】

ＮＳＣＬＣ細胞株Ｈ２２２８（内因性ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合遺伝子を保有する）を、１０％ウシ胎児血清及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ培地で培養した。上述した通り、ＲＯＳ１、又はＴＲＫＡ、又はＴＲＫＢ、又はＴＲＫＣ（ＷＴ又は変異型）を安定に発現するＢａ／Ｆ３及びＮＩＨ３Ｔ３細胞を培養した。ウェルあたり５０万個の細胞を２４時間、２４ウェルプレートに播種し、次いで、４時間化合物で処理した。細胞を処理した後に回収し、１０ｍＭＥＤＴＡ、１×Ｈａｌｔプロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を補充したＲＩＰＡ緩衝液（５０ｍＭトリス、ｐＨ７．４、１５０ｍＭＮaＣｌ、１％ＮＰ−４０、０．５％デオキシコール酸、０．１％ＳＤＳ）に溶解した。タンパク質溶解物（約２０μｇ）を、４〜１２％ボルトビス−トリスプレキャストゲル上にＭＥＳ泳動バッファー（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて分離し、トランスブロットターボトランスファーシステム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いてニトロセルロース膜に転写し、リン酸化ＲＯＳ１及び総ＲＯＳ１（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、リン酸化ＴＲＫＡ／Ｂ（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、総ＴＲＫＡ抗体（ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｇｙ）、リン酸化ＳＲＣＹ４１６（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、総ＳＲＣ（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、リン酸化ＦＡＫＹ５７６／５７７（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、総ＦＡＫ（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、リン酸化パキシリンＹ１１８（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、総パキシリン（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、リン酸化ＥＧＦＲ及び総ＥＧＦＲ、ＣＤ４４、並びにチューブリン（Ｓｉｇｍａ）を標的とする抗体を用いて検出した。抗体を、典型的には、穏やかに振盪しながら４℃で一晩インキュベートし、洗浄した後に、適切なＨＲＰ結合二次抗体とインキュベートした。膜を、室温で５分間、化学発光基質（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌＷｅｓｔＦｅｍｔｏ，ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）とインキュベートした。化学発光画像を、Ｃ−ＤｉＧｉｔイメージングシステム（ＬＩ−ＣＯＲＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で取得した。化学発光バンドの相対密度を、ＬＩＣＯＲ社のＩｍａｇｅＳｔｕｄｉｏＤｉｇｉｔｓを介して定量した。半分の阻害濃度（ＩＣ_５０）値を、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ社、ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ）を介して非線形回帰分析を使用して計算する。

【0291】

アポトーシス／カスパーゼ活性アッセイ
Ｋａｒｐａｓ−２９９細胞を、１０％ウシ胎児血清及び抗生物質を補充したＲＰＭＩ培地で維持した。ウェル当たり５０万個の細胞を１２ウェルプレートに播種し、様々な濃度の化合物を導入し、４８時間インキュベートした。次いで、細胞を回収し、Ｈａｌｔプロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を補充した溶解バッファー（２０ｍＭＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭＮaＣｌ、１０ｍＭＫＣｌ、５ｍＭＥＤＴＡ、１％ＮＰ４０）に溶解した。カスパーゼアッセイのために、約２０μｇの細胞溶解物を、２０μｌのカスパーゼ−３ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）と共にインキュベートし、３７℃で２０分間のインキュベーション後に、発光の放出によって酵素活性を測定した。ウェスタンブロッティングのために、細胞溶解物を、沸騰させ、抗カスパーゼ−３（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、抗ＰＡＲＰ（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、又は抗アクチン（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）抗体を用いるＳＤＳ−ＰＡＧＥ／免疫ブロットによって分析した。抗体は、典型的には、穏やかに振盪しながら４℃で一晩インキュベートし、その後、洗浄して、適切なＨＲＰ結合二次抗体とインキュベートした。膜を、室温で５分間、化学発光基質（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌＷｅｓｔＦｅｍｔｏ，ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）とインキュベートし、化学発光画像を、Ｃ−ＤｉＧｉｔイメージングシステム（ＬＩ−ＣＯＲＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で取得した。

【0292】

ひっかき傷治癒アッセイ
１０％ウシ胎児血清及び抗生物質を補充したＲＰＭＩ培地中のＨＴ１０８０又はＨＣＣ７８細胞を、２４ウェルプレートに播種した。１２〜２４時間後、コンフルエントな細胞単層を、滅菌ピペットチップで穏やかに掻き取り、傷を形成した。プレートを新鮮な培地で洗浄し、細胞を、培地単独又は様々な濃度の化合物を含む培地でインキュベートした。１２〜２４時間後、細胞単層の再シール形成を監視するために、ＥＶＯＳＦＬ顕微鏡（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）にプレートをよって調べ、記録した。

【0293】

インビボ方法
細胞株
細胞株を、５％ＣＯ_２を含む加湿雰囲気中、３７℃で、１０％ウシ胎児血清（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を有するＤＭＥＭ又はＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｃｏｒｎｉｎｇ社）で、標準的な技術を用いて培養した。移植のために、細胞を回収し、２分間２５０ｇで遠心分離することによってペレット化した。細胞を、一度洗浄し、必要に応じて５０％マトリゲル（ｖ／ｖ）と共に無血清培地に再懸濁した。

【0294】

免疫低下マウスにおける皮下異種移植片モデル
メス無胸腺ヌードマウス及びＳＣＩＤ／ベージュマウス（５〜８週齢）をチャールズリバー研究所（ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ）から入手し、齧歯類用固形飼料及び水を自由に摂取できる状態で、ＨＥＰＡフィルター付き換気ラック上でＩｎｎｏｖｉｖｅ社製ＩＶＣ使い捨てケージの中で飼育した。１００μＬの無血清培地中で５００万個の細胞をマウスの右脇腹領域に皮下移植した。Ｋａｒｐａｓ２９９細胞をＳＣＩＤ／ベージュマウスに移植した。ＫＭ１２細胞、ＮＩＨ３Ｔ３ＥＭＬ４−ＡＬＫ野生型変異細胞、及びＮＩＨ３Ｔ３ＳＣＤ４−ＲＯＳ１野生型変異細胞を、それぞれ無胸腺ヌードマウスに移植した。ＫＭ１２を除く全てのモデルに、培地中５０％マトリゲル（Ｃｏｒｎｉｎｇ社）を移植した。腫瘍サイズ及び体重を指定日に測定した。腫瘍の大きさを電子ノギスで測定し、長さ×幅^２×０．５の積として腫瘍体積を計算した。腫瘍体積が約１００〜２００ｍｍ^３に達したときに、腫瘍サイズによりマウスを治療群に無作為化し、決定した投与量で化合物１を経口投与した（１日２回）。

【0295】

メス無胸腺ヌードマウス及びＳＣＩＤ／ベージュマウス（５〜８週齢）をチャールズリバー研究所から入手し、齧歯類用固形飼料及び水を自由に摂取できる状態で、ＨＥＰＡフィルター付き換気ラック上でＩｎｎｏｖｉｖｅ社製ＩＶＣ使い捨てケージの中で飼育した。１００μＬの無血清培地中で５００万個の細胞をマウスの右脇腹領域に皮下移植した。Ｂａ／Ｆ３ＥＭＬ４−ＡＬＫ野生型及びＧ１２０２Ｒ変異細胞、Ｂａ／Ｆ３ＣＤ７４−ＲＯＳ１野生型及びＧ２０３２Ｒ変異細胞をＳＣＩＤ／ベージュマウスに移植した。ＮＩＨ３Ｔ３ＣＤ７４−ＲＯＳ１Ｇ２０３２変異細胞、ＮＩＨ３Ｔ３ＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ野生型及びＧ５９５Ｒ変異型細胞を、それぞれ無胸腺ヌードマウスに移植した。全てのモデルに、培地中５０％マトリゲル（Ｃｏｒｎｉｎｇ社）を移植した。腫瘍サイズ及び体重を指定日に測定した。腫瘍の大きさを電子ノギスで測定し、長さ×幅^２×０．５の積として腫瘍体積を計算した。腫瘍体積が約１００〜２００ｍｍ^３に達したときに、腫瘍サイズによりマウスを治療群に無作為化し、決定した投与量で化合物１を経口投与した（１日２回）。

【0296】

インビボでの薬力学的研究のための腫瘍の処理及び免疫ブロッティング
異種移植片腫瘍を保有するマウスを人道的に安楽死させ、腫瘍を切除し、液体窒素で急速凍結し、−８０℃で保存した。凍結腫瘍試料を４℃で、１×細胞溶解緩衝液（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で処理し、タンパク質を抽出した。３容量のタンパク質溶解物に１容量の４×ＬＤＳ試料緩衝液（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を添加することにより、ＳＤＳローディング試料を調製した。腫瘍ＳＤＳタンパク質試料を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって処理し、ウサギ抗リン酸化ＡＬＫ及びマウス抗アクチン抗体（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いて免疫ブロットした。免疫ブロットからのシグナルを、ＬＩ−ＣＯＲ社製Ｃ−ＤｉＧｉｔブロットスキャナーにより検出し、イメージスタジオＤｉｇｉｔソフトウェア（ＬＩ−ＣＯＲ）を用いてシグナル強度を定量した。

【0297】

データ及び結果：
実施例４ａ：キナーゼ結合親和性及び化合物１の酵素キナーゼ活性
化合物１のキナーゼ結合親和性を、ＤｉｓｃｏｖｅＲｘで４６０個のキナーゼのパネルをスクリーニングし、その後、ヒットについてＫ_ｄを決定した。化合物１は、ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＴＲＫＡ／Ｂ／Ｃ、ＪＡＫ２、ＳＲＣ、ＦＡＫ及びＡＲＫ５（表１）との強い結合親和性を実証した。さらに、１０μＭのＡＴＰ濃度で化合物１の酵素キナーゼ阻害活性をＲｅａｃｔｉｏｎＢｉｏｌｏｇｙで決定し、ＩＣ_５０の結果を表１にまとめた。
表１

【表2】

【0298】

実施例４ｂ：化合物１の酵素キナーゼ活性
化合物１のキナーゼ結合親和性をＤｉｓｃｏｖｅＲｘで４６０個のキナーゼのパネルをスクリーニングした。化合物１のキナーゼヒットを、さらに、ＲｅａｃｔｉｏｎＢｉｏｌｏｇｙで１０μΜのＡＴＰ濃度を用いて再結合酵素キナーゼ阻害アッセイで確認し、ＩＣ_５０の結果を表１ｂにまとめた。

【表3】

【0299】

実施例５：ＡＬＫ変異のパネルに対する化合物１の活性の評価
化合物１を、ＲｅａｃｔｉｏｎＢｉｏｌｏｇｙ社で１０μΜのＡＴＰ濃度での酵素キナーゼアッセイにおけるＡＬＫ耐性変異に対して評価した。結果を表２にまとめた。野生型及び変異型のＡＬＫ並びに野生型及び変異型のＲＯＳ１間で化合物１による強力な阻害を観察した。

【表4】

【0300】

実施例６：ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＴＲＫＡ又はＪＡＫ２の発癌性融合又は変異遺伝子を有する主要細胞株における化合物１での強力な細胞増殖阻害
ＡＬＫ融合体は、ＮＰＭ−ＡＬＫ融合遺伝子を保有するリンパ腫細胞株Ｋａｒｐａｓ−２９９、ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合遺伝子を保有する非小細胞肺癌細胞株Ｈ２２２８、ＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合遺伝子を保有する非小細胞肺癌細胞株ＨＣＣ７８、ＴＰＭ３−ＴＲＫＡ融合遺伝子を保有する結腸直腸癌細胞株ＫＭ１２、及びＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ変異を保有する白血病細胞株ＳＥＴ−２を含む複数の癌の種類並びに癌細胞株における主要な悪性ドライバーである。これらの細胞株に対する化合物１の抗増殖活性を評価し、結果を表３にまとめた。

【0301】

実施例７：遺伝子操作したＢａ／Ｆ３細胞株におけるＡＬＫ遺伝子変異のパネルに対する化合物１活性の評価
さらに、本発明者らは、野生型のＥＭＬ４−ＡＬＫ融合遺伝子及び変異型ＥＭＬ４−ＡＬＫを発現するように操作されたＢａ／Ｆ３細胞を用いた。Ｂａ／Ｆ３細胞の増殖は、インターロイキン（ＩＬ−３）に依存している。ＥＭＬ４−ＡＬＫ遺伝子の異所性発現と共に、Ｂａ／Ｆ３細胞の増殖は、ＩＬ−３非依存性になり、発癌性融合ＡＬＫのキナーゼ活性に依存する。化合物１は、野生型及び変異型ＥＭＬ４−ＡＬＫの遺伝子操作された発現により様々なＢａ／Ｆ３細胞株の細胞増殖を強力に阻害し、その結果を表３にまとめた。

【0302】

Ｂａ／Ｆ３ＴＰＲ−ＡＬＫ及びＢａ／Ｆ３ＴＰＲ−ＡＬＫＬ１１９６Ｍ細胞株の細胞増殖の阻害を、ＡｄｖａｎｃｅｄＣｅｌｌｕｌａｒＤｙｎａｍｉｃｓで行った。化合物１は、両方の細胞株において強力な阻害を示した（表３）。

【0303】

実施例８：遺伝子操作したＢａ／Ｆ３細胞株におけるＲＯＳ１に対する化合物１の活性の評価
発癌性ＳＤＣ４−ＲＯＳ１、ＳＤＣ４−ＲＯＳ１^{Ｇ２０３２Ｒ}、ＣＤ７４−ＲＯＳ１、及びＣＤ７４−ＲＯＳ１^{Ｇ２０３２Ｒ}の融合遺伝子をそれぞれ発現するように、Ｂａ／Ｆ３細胞を遺伝子操作した。融合ＲＯＳ１遺伝子を有するように遺伝子操作したＢａ／Ｆ３細胞を使用して、野生型及び変異型ＲＯＳ１融合遺伝子に対する化合物１の阻害活性を調べた。細胞増殖阻害の結果を表３にまとめた。

【0304】

それぞれ発癌性ＣＤ７４−ＲＯＳ１^{Ｌ２０２６Ｍ}、及びＣＤ７４−ＲＯＳ１^{Ｄ２０３３Ｎ}の融合遺伝子を発現するように、Ｂａ／Ｆ３細胞を遺伝子操作した。融合ＲＯＳ１遺伝子を有するように遺伝子操作したＢａ／Ｆ３細胞を使用して、化合物１の阻害活性を調べた。細胞増殖阻害の結果を表３にまとめた。

【0305】

それぞれ発癌性ＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ及びＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ^{Ｇ５９５Ｒ}の融合遺伝子を発現するように、Ｂａ／Ｆ３細胞を遺伝子操作した。融合ＴＲＫＡ遺伝子を有するように操作したＢａ／Ｆ３細胞を使用して、化合物１の阻害活性を調べた。細胞増殖阻害の結果を表３にまとめた。

【0306】

それぞれ発癌性ＴＥＬ−ＴＲＫＢ（ＥＴＶ６−ＴＲＫＢとも命名されている）及びＴＥＬ−ＴＲＫＢ^{Ｇ６３９Ｒ}の融合遺伝子を発現するように、Ｂａ／Ｆ３細胞を遺伝子操作した。融合ＴＲＫＢ遺伝子を有するように遺伝子操作したＢａ／Ｆ３細胞を使用して、化合物１の阻害活性を調べた。細胞増殖阻害の結果を表３にまとめた。

【0307】

それぞれ発癌性ＴＥＬ−ＴＲＫＣ（ＥＴＶ６−ＴＲＫＣとも命名されている）、及びＴＥＬ−ＴＲＫＣ^{Ｇ６２３Ｒ}の融合遺伝子を発現するように、Ｂａ／Ｆ３細胞を遺伝子操作した。融合ＴＲＫＣ遺伝子を有するように遺伝子操作したＢａ／Ｆ３細胞を使用して、化合物１の阻害活性を調べた。細胞増殖阻害の結果を表３にまとめた。

【表5】

【0308】

実施例９：細胞における化合物１の作用機構
ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＴＲＫＡ及びＳＲＣに対する化合物１の薬力学的阻害活性、並びに細胞内の対応する下流のシグナル伝達を評価し、その結果を表４にまとめた。化合物１は、ＮＰＭ−ＡＬＫ融合遺伝子を保有するＫａｒｐａｓ−２９９細胞株において約１〜３ｎＭのＩＣ_５０で、ＡＬＫの自己リン酸化並びに下流のＳＴＡＴ３及びＡＫＴのリン酸化を抑制した。化合物１は、ＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合遺伝子を保有するＨＣＣ７８細胞株において約１〜３ｎＭのＩＣ_５０で、ＲＯＳ１の自己リン酸化並びに下流のＳＴＡＴ３及びＡＫＴのリン酸化を阻害した。化合物１は、ＴＰＭ３−ＴＲＫＡ融合遺伝子を保有するＫＭ１２細胞株において約０．３ｎＭのＩＣ_５０で、ＴＲＫＡの自己リン酸化並びに下流のＡＫＴ及びＥＲＫのリン酸化を阻害した。化合物１は、ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ変異を保有するＳＥＴ−２細胞株において約１５８ｎＭのＩＣ_５０でＳＴＡＴ５のリン酸化を阻害した。化合物１は、野生型又はＧ１２０２Ｒ変異型ＥＭＬ４−ＡＬＫｖ１融合遺伝子をコードするように遺伝子操作したＢａ／Ｆ３安定細胞株において２０〜３０ｎＭのＩＣ_５０で、ＡＬＫの自己リン酸化を阻害した。化合物１は、野生型又はＧ２０３２Ｒ変異型ＣＤ７４−ＲＯＳ１又はＳＤＣ４−ＲＯＳ１融合遺伝子をコードするように遺伝子操作したＢａ／Ｆ３安定細胞株において、ＲＯＳ１の自己リン酸化を阻害した。細胞内でのＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、ＴＲＫＣ、及びＦＡＫシグナル伝達に対する化合物１の薬力学阻害活性を評価し、その結果を表４ａにまとめた。化合物１は、ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合遺伝子を保有し、ＳＲＣ及びＦＡＫシグナル伝達が上方制御されたＮＣＩ−Ｈ２２２８細胞株において約１０３ｎＭのＩＣ_５０で、ＦＡＫのリン酸化並びにＳＲＣ基質パキシリンのリン酸化を阻害した。化合物１は、Ｌ２０２６Ｍ、又はＤ２０３３Ｎ変異型ＣＤ７４−ＲＯＳ１融合遺伝子をコードするように遺伝子操作したＢａ／Ｆ３において、ＲＯＳ１の自己リン酸化を阻害した。化合物１は、野生型又はＧ５９５Ｒ変異型ＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ融合遺伝子をコードするように遺伝子操作したＮＩＨ３Ｔ３安定細胞株においてＴＲＫＡの自己リン酸化を阻害した。化合物１は、野生型又はＥＴＶ６−ＴＲＫＢ融合遺伝子とも命名されたＧ６３９Ｒ変異型ＴＥＬ−ＴＲＫＢをコードするように遺伝子操作したＮＩＨ３Ｔ３安定細胞株においてＴＲＫＢの自己リン酸化を阻害した。

【表6】

【0309】

化合物１は、アポトーシスＫａｒｐａｓ−２９９細胞の数を増加させた。化合物１での処理の４８時間後に、Ｋａｒｐａｓ−２９９細胞を、溶解し、カスパーゼ３／７の切断カスパーゼ３ｇｌｏアッセイ又はウェスタンブロットアッセイにおけるＰＡＲＰで評価した。その結果を図１に示した。

【0310】

化合物１は、スクラッチ創傷治癒アッセイで１２時間処理した後のＨＣＣ７８又はＨＴ１０８０細胞遊走を阻害した。その結果を図２に示した。

【0311】

化合物１は、Ｈ２２２８細胞においてＥＧＦＲ発現を下方制御する
ＳＲＣキナーゼ活性の活性化は、ＲＴＫ発現レベルを上方制御し、バイパスシグナル伝達経路の耐性をもたらす。ＳＲＣの阻害は、ＲＴＫの下方制御をもたらす。図３に示す通り、化合物１は、用量及び時間依存的にＥＧＦＲ発現を下方制御する。

【0312】

化合物１は、Ｈ２２２８細胞においてＥＧＦＲ発現を下方制御する
ＣＤ４４は、癌幹細胞性のバイオマーカーである。高発現レベルのＣＤ４４が、Ｈ２２２８細胞で発見された。図４に示す通り、化合物１は、処理の４８時間後に濃度依存的にＨ２２２８細胞におけるＣＤ４４発現レベルを抑制し、化合物１が、癌幹細胞性を阻害する可能性があることが示された。

【0313】

インビボ研究
異種移植腫瘍モデルにおける化合物１の抗腫瘍効果
化合物１の抗腫瘍効果を、ＡＬＫ、ＲＯＳ１又はＴＲＫＡの調節不全が関与する癌集団を表すいくつかの腫瘍異種移植モデルにおいて評価した。

【0314】

実施例１０：Ｋａｒｐａｓ−２９９ＡＬＣＬモデル
Ｋａｒｐａｓ−２９９細胞におけるＮＰＭ−ＡＬＫ融合遺伝子は、腫瘍成長のドライバーとして証明されている。Ｋａｒｐａｓ−２９９腫瘍（平均腫瘍サイズ１６０ｍｍ^３）を担持するＳＣＩＤ／ベージュマウスに、１日２回、７日間、化合物１を経口投与した（図５）。対照群のマウスにはビヒクルのみを与えた。腫瘍体積（ＴＭＶ）を、指定日にノギスで測定し、図５に平均値±ｓｅｍで示す。Ａｎ^＊は、繰り返しのある２元配置分散分析、その後の事後解析によって決定される通り、平均ＴＭＶが、対照群のそれと比較して治療群において有意に低いことを意味する（ｐ＜０．０５）。ＴＭＶ_治療群 _{治療の最後の日}≧ＴＭＶ_治療群 _{治療の最初の日}の時に、腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）を、１００％×{１−［（ＴＭＶ_治療群 _{治療の最後の日}−ＴＭＶ_治療群 _{治療の最初の日}）／（ＴＭＶ_対照群 _{治療の最後の日}−ＴＭＶ_対照群 _{治療の最初の日}）］}として計算した。ＴＭＶ_治療群 _{治療の最後の日}＜ＴＭＶ_治療群 _{治療の最初の日}の場合は、腫瘍退縮（ＲＥＧ）を、１００％×（１−ＴＭＶ_治療群 _{治療の最後の日}／ＴＭＶ_治療群 _{治療の最初の日}）として計算した。この研究では、化合物１は、１日２回、１５ｍｇ／ｋｇ及び５０ｍｇ／ｋｇの投与量でそれぞれ腫瘍成長を５９％及び９４％阻害する能力を示した。加えて、５０ｍｇ／ｋｇの治療群の８匹中４匹のマウスが腫瘍退縮を示した。マウスの体重をそのマウスの指定日に測定し、化合物１の治療群には体重減少が観察されなかった（図６）。

【0315】

実施例１１：ＮＩＨ３Ｔ３ＥＭＬ４−ＡＬＫ野生型（ＷＴ）モデル
ＮＩＨ３Ｔ３ＥＭＬ４−ＡＬＫＷＴ腫瘍（平均腫瘍サイズ１２０ｍｍ^３）を担持する無胸腺ヌードマウスに、１日２回、１２日間、化合物１を経口投与した（図７）。対照群のマウスにはビヒクルのみを与えた。腫瘍体積を指定日にノギスで測定し、図７に平均値±ｓｅｍで示す。Ａｎ^＊は、繰り返しのある２元配置分散分析、その後の事後解析によって決定される通り、平均腫瘍体積が、対照群のそれと比較して治療群において有意に低いことを意味する（ｐ＜０．０５）。この研究では、１日２回の５０ｍｇ／ｋｇでの化合物１の治療が４１％の腫瘍退縮をもたらし、８匹中８匹のマウスが腫瘍退縮を示した。１日２回の１５ｍｇ／ｋｇの投与量での化合物１は、９０％のＴＧＩで腫瘍成長を阻害する能力を示し、８匹中２匹のマウスが腫瘍退縮を示した。マウスの体重をそのマウスの指定日に測定し、化合物１の治療群には体重減少が観察されなかった（図８）。

【0316】

実施例１２：ＮＩＨ３Ｔ３ＳＤＣ４−ＲＯＳ１ＷＴモデル
ＳＤＣ４−ＲＯＳ１融合遺伝子は、ＮＳＣＬＣにおける腫瘍進行のためのドライバーであると考えられる。ＮＩＨ３Ｔ３ＳＤＣ４−ＲＯＳ１ＷＴ腫瘍（平均腫瘍サイズ１００ｍｍ^３）を担持する無胸腺ヌードマウスに、１日２回、２６日間、化合物１を経口投与した（図９）。対照群のマウスにはビヒクルのみを与えた。腫瘍体積を指定日にノギスで測定し、図９に平均値±ｓｅｍで示す。Ａｎ^＊は、繰り返しのある２元配置分散分析、その後の事後解析によって決定される通り、平均腫瘍体積が、対照群のそれと比較して治療群において有意に低いことを意味する（ｐ＜０．０５）。この研究では、５０ｍｇ／ｋｇでの化合物１の治療が６９％の腫瘍退縮をもたらし、７匹中７匹のマウスが腫瘍退縮を示した。１５ｍｇ／ｋｇの化合物１の群のマウスも３９％の腫瘍退縮を実証し、この群の８匹中７匹のマウスが腫瘍退縮を示した。

【0317】

実施例１３：ＫＭ１２結腸直腸癌モデル
ＴＰＭ３−ＴＲＫＡの異常な活性は、ＫＭ１２モデルにおける腫瘍成長のための基礎となるドライバーと考えられる。ＫＭ１２腫瘍（平均腫瘍サイズ１００ｍｍ^３）を担持する無胸腺ヌードマウスに、１日２回、７日間、化合物１を経口投与した（図１０）。腫瘍体積を指定日にノギスで測定し、図１０に平均値±ｓｅｍで示す。Ａｎ^＊は、繰り返しのある２元配置分散分析、その後の事後解析によって決定される通り、平均腫瘍体積が、対照群のそれと比較して治療群において有意に低いことを意味する（ｐ＜０．０５）。この研究では、１５ｍｇ／ｋｇ及び７５ｍｇ／ｋｇの投与量での化合物１が、それぞれ１３％及び１１％腫瘍退縮をもたらした。１５ｍｇ／ｋｇの群では、８匹中８匹のマウスが腫瘍退縮を示した。７５ｍｇ／ｋｇの群では、８匹中５匹のマウスが腫瘍退縮を示した。ビヒクル対照のそれと比較して、化合物１で治療したマウスにおいて体重の減少は観察されなかった（図１１）。

【0318】

実施例１４：化合物１の経口投与後の抗腫瘍効果とＡＬＫ阻害の関係
ＡＬＫリン酸化の阻害に対する化合物１の効果を評価するために、反復投与試験における化合物１（７日間、１日２回、１５ｍｇ／ｋｇ又は５０ｍｇ／ｋｇ）の最終投与後３時間又は１２時間のいずれかに、Ｋａｒｐａｓ２９９腫瘍を摘出した。ＡＬＫリン酸化のレベルを、イメージスタジオＤｉｇｉｔソフトウェアによるシグナルの定量化と組み合わせて、免疫ブロット法によって決定した。ＡＬＫリン酸化を阻害する化合物１の能力を、図１２に示した。５０ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＬＫリン酸化は、化合物１の経口投与後３時間の時点で対照レベルの５％未満まで減少し、投与後１２時間の時点で対照レベルの約１０％に維持された。このリン酸化阻害のレベルは、９４％のＴＧＩに相当する。１５ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＬＫリン酸化は、経口投与後３時間の時点で対照レベルの１０％未満まで減少し、投与後１２時間の時点で対照レベルの約２１％に維持された。このＡＬＫリン酸化のレベルは、５９％のＴＧＩに相当する。これらの結果は、ＮＰＭ−ＡＬＫ依存性腫瘍モデルにおけるＡＬＫの阻害、化合物１の標的と抗腫瘍効果の程度との間の関係を支持する。

【0319】

実施例１５：ＫＭ１２結腸直腸癌モデルにおける用量依存性の研究
ＫＭ１２結腸直腸癌モデルにおける腫瘍阻害に対する化合物１の用量依存効果を調べるために、ＫＭ１２腫瘍（平均腫瘍サイズ１２５ｍｍ^３）を担持する無胸腺ヌードマウスに、１５ｍｇ／ｋｇ以下の投与量で、１日２回、７日間、化合物１を経口投与した（図１３）。腫瘍体積を指定日にノギスで測定し、図１３に平均値±ｓｅｍで示す。Ａｎ^＊は、繰り返しのある２元配置分散分析、その後の事後解析によって決定される通り、平均腫瘍体積が、対照群のそれと比較して治療群において有意に低いことを意味する（ｐ＜０．０５）。この研究では、化合物１が、用量依存的に腫瘍成長を阻害した。１５ｍｇ／ｋｇの投与量の化合物１での治療が１％腫瘍退縮をもたらし、１０匹中５匹のマウスが腫瘍退縮を示した。３ｍｇ／ｋｇの投与量での化合物１は、９１％のＴＧＩで腫瘍成長を阻害する能力を示し、１０匹中２匹のマウスが腫瘍退縮を示した。１ｍｇ／ｋｇの投与量での化合物１は、７７％のＴＧＩで腫瘍成長を阻害する能力を示した。ビヒクル対照のそれと比較して、化合物１で治療したマウスにおいて体重の減少は観察されなかった（図１４）。

【0320】

実施例１６：Ｂａ／Ｆ３ＥＭＬ４−ＡＬＫＷＴモデル
Ｂａ／Ｆ３ＥＭＬ４−ＡＬＫＷＴ腫瘍（平均腫瘍サイズ１９０ｍｍ^３）を担持するＳＣＩＤ／ベージュマウスに、１日２回、１４日間、化合物１を経口投与した（図１５）。対照群のマウスにはビヒクルのみを与えた。腫瘍体積を指定日にノギスで測定し、図１５に平均値±ｓｅｍで示す。Ａｎ^＊は、繰り返しのある２元配置分散分析、その後の事後解析によって決定される通り、平均腫瘍体積が、対照群のそれと比較して治療群において有意に低いことを意味する（ｐ＜０．０５）。この研究では、７５ｍｇ／ｋｇの化合物１での治療が、５４％腫瘍退縮をもたらし、８匹中６匹のマウスが腫瘍退縮を示した。１日２回の１５ｍｇ／ｋｇの投与量での化合物１は、７４％のＴＧＩで腫瘍成長を阻害する能力を示した。マウスの体重を指定日に測定し、化合物１の治療群において体重の減少は観察されなかった（図１６）。

【0321】

実施例１７：Ｂａ／Ｆ３ＥＭＬ４−ＡＬＫＧ１２０２Ｒモデル
薬剤耐性溶媒フロント変異を含有する腫瘍の成長阻害に対する化合物１の効果を調べるために、Ｂａ／Ｆ３ＥＭＬ４−ＡＬＫＧ１２０２Ｒ腫瘍（平均腫瘍サイズ２１０ｍｍ^３）を担持するＳＣＩＤ／ベージュマウスに、１日２回、１７日間、化合物１を経口投与した（図１７）。対照群のマウスにはビヒクルのみを与えた。腫瘍体積を指定日にノギスで測定し、図１７に平均値±ｓｅｍで示す。Ａｎ^＊は、繰り返しのある２元配置分散分析、その後の事後解析によって決定される通り、平均腫瘍体積が、対照群のそれと比較して治療群において有意に低いことを意味する（ｐ＜０．０５）。この研究では、７５ｍｇ／ｋｇの化合物１での治療が、９９％のＴＧＩで腫瘍成長阻害をもたらした。この群では、８匹中４匹のマウスが腫瘍退縮を示した。１５ｍｇ／ｋｇの投与量での化合物１は、５６％のＴＧＩで腫瘍成長を阻害する能力を示した。マウスの体重を指定日に測定し、化合物１の治療群において体重の減少は観察されなかった（図１８）。

【0322】

実施例１８：Ｂａ／Ｆ３ＣＤ７４−ＲＯＳ１ＷＴモデル
ＣＤ７４−ＲＯＳ１融合遺伝子は、ＮＳＣＬＣにおける腫瘍進行のドライバーの１つとして考えられている。Ｂａ／Ｆ３ＣＤ７４−ＲＯＳ１ＷＴ腫瘍（平均腫瘍サイズ２００ｍｍ^３）を担持するＳＣＩＤ／ベージュマウスに、１日２回、１２日間、化合物１を経口投与した（図１９）。対照群のマウスにはビヒクルのみを与えた。腫瘍体積を指定日にノギスで測定し、図１９に平均値±ｓｅｍで示す。Ａｎ^＊は、繰り返しのある２元配置分散分析、その後の事後解析によって決定される通り、平均腫瘍体積が、対照群のそれと比較して治療群において有意に低いことを意味する（ｐ＜０．０５）。この研究では、７５ｍｇ／ｋｇの化合物１での治療が、１００％の腫瘍退縮をもたらし、８匹中８匹のマウスが完全な腫瘍退縮を示した。１５ｍｇ／ｋｇの化合物１群のマウスも、９７％の腫瘍退縮を示し、この群の８匹中８匹のマウスが腫瘍退縮を示した。マウスの体重を指定日に測定し、化合物１の治療群において体重の減少は観察されなかった（図２０）。

【0323】

実施例１９：Ｂａ／Ｆ３ＣＤ７４−ＲＯＳ１Ｇ２０３２Ｒモデル
薬剤耐性溶媒フロント変異を含有する腫瘍の成長阻害に対する化合物１の効果を調べるために、Ｂａ／Ｆ３ＣＤ７４−ＲＯＳ１Ｇ２０３２Ｒ腫瘍（平均腫瘍サイズ２１０ｍｍ^３）を担持するＳＣＩＤ／ベージュマウスに、１日２回、１１日間、化合物１を経口投与した（図２１）。対照群のマウスにはビヒクルのみを与えた。腫瘍体積を指定日にノギスで測定し、図２１に平均値±ｓｅｍで示す。Ａｎ^＊は、繰り返しのある２元配置分散分析、その後の事後解析によって決定される通り、平均腫瘍体積が、対照群のそれと比較して治療群において有意に低いことを意味する（ｐ＜０．０５）。この研究では、７５ｍｇ／ｋｇの化合物１での治療が、１００％の腫瘍退縮をもたらし、８匹中８匹のマウスが完全な腫瘍退縮を示した。１日２回の１５ｍｇ／ｋｇの投与量での化合物１は、９９％のＴＧＩで腫瘍成長を阻害する能力を示し、この群の８匹中２匹のマウスが腫瘍退縮を示した。マウスの体重を指定日に測定し、化合物１の治療群において体重の減少は観察されなかった（図２２）。

【0324】

実施例２０：ＮＩＨ３Ｔ３ＬＭＮＡ−ＴＲＫＡＷＴモデル
ＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ融合遺伝子は、結腸直腸癌における腫瘍進行のドライバーの１つと考えられている。ＮＩＨ３Ｔ３ＬＭＮＡ−ＴＲＫＡＷＴ腫瘍（平均腫瘍サイズ２４０ｍｍ^３）を担持する無胸腺ヌードマウスに、１日２回、５日間、化合物１を経口投与した（図２３）。腫瘍体積を指定日にノギスで測定し、図２３に平均値±ｓｅｍで示す。Ａｎ^＊は、繰り返しのある２元配置分散分析、その後の事後解析によって決定される通り、平均腫瘍体積が、対照群のそれと比較して治療群において有意に低いことを意味する（ｐ＜０．０５）。この研究では、１５ｍｇ／ｋｇの投与量の化合物１での治療が、２８％腫瘍退縮をもたらし、８匹中７匹のマウスが腫瘍退縮を示した。３ｍｇ／ｋｇの投与量での化合物１は、１００％のＴＧＩで腫瘍成長を阻害する能力を示し、８匹中３匹のマウスが腫瘍退縮を示した。ビヒクル対照と比較して、化合物１で治療したマウスにおいて体重の減少は観察されなかった（図２４）。

【0325】

実施例２１：ＮＩＨ３Ｔ３ＬＭＮＡ−ＴＲＫＡＧ５９５Ｒモデル
薬剤耐性溶媒フロント変異を含有する腫瘍の成長阻害に対する化合物１の効果を調べるために、ＮＩＨ３Ｔ３ＬＭＮＡ−ＴＲＫＡＧ５９５Ｒ腫瘍（平均腫瘍サイズ２３０ｍｍ^３）を担持する無胸腺ヌードマウスに、１日２回、５日間、化合物１を経口投与した（図２５）。対照群のマウスにはビヒクルのみを与えた。腫瘍体積を指定日にノギスで測定し、図２５に平均値±ｓｅｍで示す。Ａｎ^＊は、繰り返しのある２元配置分散分析、その後の事後解析によって決定される通り、平均腫瘍体積が、対照群のそれと比較して治療群において有意に低いことを意味する（ｐ＜０．０５）。この研究では、６０ｍｇ／ｋｇの化合物１での治療が、２３％腫瘍退縮をもたらし、１０匹中１０匹のマウスが腫瘍退縮を示した。１５ｍｇ／ｋｇの投与量での化合物１は、９７％のＴＧＩで腫瘍成長を阻害する能力を示し、８匹中３匹のマウスが腫瘍退縮を示した。３ｍｇ／ｋｇの投与量での化合物１は、５６％のＴＧＩで腫瘍成長を阻害する能力を示した。マウスの体重を指定日に測定し、化合物１の治療群において体重の減少は観察されなかった（図２６）。

【図1】