特許 6824738 放射性トレーサー組成物及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6824738

(24)【登録日】2021年1月15日

(45)【発行日】2021年2月3日

(54)【発明の名称】放射性トレーサー組成物及び方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 51/02 20060101AFI20210121BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20210121BHJP

   A61K 38/17 20060101ALI20210121BHJP

   A61K 47/10 20060101ALI20210121BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20210121BHJP

   A61K 47/18 20060101ALI20210121BHJP

   A61K 47/50 20170101ALI20210121BHJP

【ＦＩ】

   A61K51/02 200

   A61K9/08

   A61K38/17

   A61K47/10

   A61K47/12

   A61K47/18

   A61K47/50

【請求項の数】12

【全頁数】25

(21)【出願番号】特願2016-539089(P2016-539089)

(86)(22)【出願日】2014年12月18日

(65)【公表番号】特表2017-502946(P2017-502946A)

(43)【公表日】2017年1月26日

(86)【国際出願番号】EP2014078609

(87)【国際公開番号】WO2015091882

(87)【国際公開日】20150625

【審査請求日】2017年11月20日

【審判番号】不服2019-8971(P2019-8971/J1)

【審判請求日】2019年7月4日

(31)【優先権主張番号】1322456.3

(32)【優先日】2013年12月18日

(33)【優先権主張国】GB

(73)【特許権者】

【識別番号】305040710

【氏名又は名称】ジーイー・ヘルスケア・リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 浩

(74)【代理人】

【識別番号】100093676

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 純子

(74)【代理人】

【識別番号】100120134

【弁理士】

【氏名又は名称】大森 規雄

(74)【代理人】

【識別番号】100131990

【弁理士】

【氏名又は名称】大野 玲恵

(74)【代理人】

【識別番号】100104282

【弁理士】

【氏名又は名称】鈴木 康仁

(72)【発明者】

【氏名】エンゲル，トルグリム

(72)【発明者】

【氏名】ゲトヴォルドセン，ガレス・サイモン

(72)【発明者】

【氏名】メイジャー，アンドレアス・リチャード

(72)【発明者】

【氏名】カーン，イミティアス・アハメド

(72)【発明者】

【氏名】ナイルネ，ロバート・ジェイムズ

(72)【発明者】

【氏名】マクロビー，グラエム

【合議体】

【審判長】 原田 隆興

【審判官】 西村 亜希子

【審判官】 大久保 元浩

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１３−５４０７０２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００６−５０５６１０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許出願公開第２０１３／０２０９３５８（ＵＳ，Ａ１）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

A61K 51/00-51/12

A61K 38/00-38/21

A61K 47/00-47/69

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

放射性医薬組成物であって、
（ｉ）放射性トレーサーであって、５００〜７００ＭＢｑ／ｍＬの放射能濃度（ＲＡＣ）の式（ＩＩ）の放射性トレーサーを含む、放射性トレーサーと、

【化1】

（ｉｉ）４−アミノ安息香酸又はその生体適合性陽イオンとの塩を含む放射線防護剤と、
（ｉｉｉ）エタノール含有量０．１〜１０ｖ／ｖ％のエタノール水溶液を含む生体適合性担体と
を哺乳類への投与に適した形態で含み、
^１８Ｆ放射能含有量の９０％以上が式（ＩＩ）の放射性トレーサーであり、^１８Ｆ放射能含有量の１０％未満が［^１８Ｆ］−４−フルオロベンズアルデヒドと［^１８Ｆ］−４−フルオロベンゾニトリルの合計であり、
Ｃ^ａ〜Ｃ^ｄの各々はシステイン残基であって、残基Ｃ^ａと残基Ｃ^ｂ及び残基Ｃ^ｃと残基Ｃ^ｄは環化して２つの独立したジスルフィド結合を形成している、放射性医薬組成物。

【請求項2】

^１８Ｆ放射能含有量の９２％以上が式（ＩＩ）の放射性トレーサーであり、^１８Ｆ放射能含有量の５％未満が［^１８Ｆ］−４−フルオロベンズアルデヒドと［^１８Ｆ］−４−フルオロベンゾニトリルの合計である、請求項１記載の放射性医薬組成物。

【請求項3】

前記放射性医薬組成物における前記４−アミノ安息香酸の濃度が、１．５〜２．５ｍｇ／ｍＬである、請求項１又は２に記載の放射性医薬組成物。

【請求項4】

前記放射性医薬組成物における前記エタノールの濃度が、６．５〜８．５ｖ／ｖ％である、請求項１乃至３のいずれか１項に記載の放射性医薬組成物。

【請求項5】

前記放射性医薬組成物における前記生体適合性担体の水性成分が、ｐＨ６〜８のリン酸緩衝液である、請求項１乃至４のいずれか１項に記載の放射性医薬組成物。

【請求項6】

請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載の放射性医薬組成物の調製方法であって、
（Ａ）以下の（ｉ）〜（ｖｉ）：
（ｉ）［^１８Ｆ］フッ化物と反応して［^１８Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドを生成させることができる第１の非放射性前駆体と、
（ｉｉ）［^１８Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドと反応して式（ＩＩ）の放射性トレーサーを生成させることができる次の式（ＩＩＩ）の第２の非放射性前駆体（式中、Ｃ^ａ〜Ｃ^ｄの各々はシステイン残基であって、残基Ｃ^ａと残基Ｃ^ｂ及び残基Ｃ^ｃと残基Ｃ^ｄは環化して２つの独立したジスルフィド結合を形成している）と、

【化2】

（ｉｉｉ）逆相固相抽出カラムと、
（ｉｖ）前記放射線防護剤の供給源と、
（ｖ）反応容器と、
（ｖｉ）適当な溶媒と
を備える単回使用カセットを用意するステップと、
（Ｂ）第１の前駆体を［^１８Ｆ］−フッ化物と反応させて［^１８Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドを得るステップと、
（Ｃ）ステップ（Ｂ）の［^１８Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドを第２の前駆体と反応させて式（ＩＩ）の放射性トレーサーを得るステップと、
（Ｄ）放射線防護剤をステップ（Ｃ）の式（ＩＩ）の放射性トレーサーへ添加するステップと、
（Ｅ）逆相固相抽出カラムを使用して、ステップ（Ｄ）の式（ＩＩ）の放射性トレーサーを精製するステップと、
（Ｆ）任意には、ステップ（Ｅ）の精製［^１８Ｆ］−放射性トレーサーを生体適合性担体で希釈するステップと、
（Ｇ）任意には、ステップ（Ｆ）の希釈溶液を無菌濾過して放射性医薬組成物を得るステップと
を含んでおり、カセットが自動合成装置に着脱自在かつ交換可能に取り付けられ、少なくともステップ（Ｂ）〜（Ｅ）を実施するのに自動合成装置が使用される、放射性医薬組成物の調製方法。

【請求項7】

ステップ（Ｂ）〜（Ｇ）を実施するのに自動合成装置が用いられる、請求項６記載の方法。

【請求項8】

ステップ（Ｄ）の放射性トレーサー溶液が、放射性トレーサーを５〜２５ｖ／ｖ％のアセトニトリル含有量のアセトニトリル水溶液中に含む、請求項６又は請求項７記載の方法。

【請求項9】

ステップ（Ｄ）の放射性トレーサー溶液が０．５〜５ｖ／ｖ％のエタノールをさらに含む、請求項８記載の方法。

【請求項10】

精製ステップ（Ｅ）が以下の通り実施される、請求項６乃至請求項９のいずれか１項記載の方法。
（ｉ）ステップ（Ｄ）の放射性トレーサー溶液を逆相ＳＰＥカートリッジに流して、放射性トレーサーをＳＰＥカートリッジに保持し、
（ｉｉ）ステップ（ｉ）のＳＰＥカートリッジを、アセトニトリル含有量１５〜２５ｖ／ｖ％の放射線防護剤のアセトニトリル水溶液を含む洗浄溶液で１回以上洗浄し、
（ｉｉｉ）任意に、ステップ（ｉｉ）のＳＰＥカートリッジを、水又は水性緩衝液で１回以上洗浄し、
（ｉｖ）精製ステップ（Ｅ）がステップ（ｉｉｉ）を含まない場合にはステップ（ｉｉ）の洗浄済みＳＰＥカートリッジを、又は精製ステップ（Ｅ）がステップ（ｉｉｉ）を含む場合にはステップ（ｉｉｉ）の洗浄済みＳＰＥカートリッジを、エタノール含有量３５〜８０ｖ／ｖ％のエタノール水溶液中に放射線防護剤を含む溶出溶媒で溶出して、溶出溶媒中に精製放射性トレーサーを含む溶出液を得る。

【請求項11】

（Ｈ）ステップ（Ｇ）の［^１８Ｆ］−放射性トレーサー放射性医薬組成物を１以上の注射器に分注するステップ
をさらに含む、請求項６乃至請求項１０のいずれか１項記載の方法。

【請求項12】

請求項６乃至請求項１０のいずれか１項記載の方法に用いられる、請求項６記載の単回使用カセット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、インビボイメージング用の放射性医薬品の分野、特に¹⁸Ｆ標識ｃ−Ｍｅｔ結合ペプチドを含む放射性トレーサー組成物に関する。本発明は、かかる組成物並びに自動合成法及びカセットを提供する。

【背景技術】

【0002】

分散因子（ＳＦ）としても知られる肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）は、創傷治癒や血管形成のような各種の生理学的プロセスに関与する増殖因子である。ＨＧＦとその受容体（ｃ−Ｍｅｔ）との高親和性相互作用は、腫瘍の増殖、浸潤及び転移に関係している。

【0003】

ｃ−Ｍｅｔは、上皮由来の多くのヒト癌における腫瘍の増殖、浸潤及び転移に関与することが示されている。ｃ−Ｍｅｔはほとんどの癌腫で発現され、正常組織と対比したときのその発現亢進は肺癌、乳癌、結腸直腸癌、膵臓癌、頭頸部癌、胃癌、肝細胞癌、卵巣癌、腎臓癌、神経膠腫、黒色腫及び多数の肉腫で検出されている。結腸直腸癌（ＣＲＣ）では、この疾患の最も早期の前癌病変である異形成の異常陰窩巣でｃ−Ｍｅｔの過剰発現が検出されている。頭頸部の扁平上皮細胞癌では、ｃ−Ｍｅｔは原発腫瘍の略８０％で発現又は過剰発現されると報告されている。前立腺癌の骨への転移では、ｃ−Ｍｅｔは骨転移の８０％超で過剰発現されると報告されている。

【0004】

正常状態では、ｃ−Ｍｅｔは上皮細胞で発現され、間葉由来ＨＧＦによりパラクリン様に活性化される。正常細胞におけるｃ−Ｍｅｔの活性化は一過性の事象であって厳密に制御されている。しかし、腫瘍細胞では、ｃ−Ｍｅｔは構成的活性型となり得る。癌では、ｃ−Ｍｅｔ増幅／過剰発現によって異常ｃ−Ｍｅｔ刺激が達成されることがあり、自己分泌シグナル伝達ループの創成によってｃ−Ｍｅｔ突然変異（例えば構造変化）が活性化され、自律的増殖制御が獲得される。さらに、ｃ−Ｍｅｔ受容体の不完全な下方調節も細胞膜での異常ｃ−Ｍｅｔ発現に寄与する。ｃ−Ｍｅｔの過剰発現はＨＧＦ依存性であるが（オートクリン／パラクリン）、突然変異に起因する構造変化はＨＧＦに依存しない（例えば細胞外ドメインの損失）。

【0005】

Ｐｏｅｔｈｋｏ他［Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，４５（５），８９２−９０２（２００４）］には、放射性同位体¹⁸Ｆによるペプチドの放射性標識法であって、以下に示すように、アミノオキシ官能化ペプチドを［¹⁸Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドと縮合させてオキシム

【0006】

【化1】

Ｓｃｈｏｔｔｅｌｉｕｓ他［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１９（６），１２５６−１２６８（２００８）］には、Ｐｏｅｔｈｋｏ他の方法の発展法が記載されている。Ｓｃｈｏｔｔｅｌｉｕｓ他は、アミノオキシ基のアミンをＮ−Ｂｏｃ（Ｂｏｃ＝ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）保護基で保護したアミノオキシ官能化ペプチドを用いている。所望のアミノオキシ官能化ペプチドは、［¹⁸Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドの存在下、酸性ｐＨ（ｐＨ＝２）、７５℃でのＮ−Ｂｏｃ基の脱保護によってインサイチュで生成する。Ｓｃｈｏｔｔｅｌｉｕｓ他では、脱保護が反応条件下で定量的ではなかったので、５倍モル過剰のＢｏｃ保護前駆体を使用している。

【0007】

Ｍｅｚｏ他［Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｓｃｉ．，１７，３９−４６（２０１０）］には、Ｂｏｃ保護アミノオキシ官能化ペプチドの上述のオキシムライゲーション化学に関する幾つかの問題について記載されている。例えば、Ｂｏｃ−アミノオキシ試薬は、生成したＢｏｃ保護アミノオキシペプチドをアシル化して、不都合な副生物を生じかねないことが知られている。また、官能化ペプチドの遊離アミノオキシ基のカルボニル化合物に対する反応性が高いことも知られている。その結果、不要な縮合が起こるおそれがあり、反応混合物又は後段の精製工程でアルデヒド又はケトンが紛れ込んでしまうおそれがある。かかるアルデヒド又はケトンとして、使用した溶媒中に存在する痕跡量のアセトン、又はホルムアルデヒド（例えば可塑剤に由来するもの）がある。Ｍｅｚｏ他の関心は、抗癌剤及び［¹⁸Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドとペプチドとの連結反応のためにこの問題を解決することである。Ｍｅｚｏ他では、この問題を解決するため、「カルボニル捕獲剤」としての１０倍モル過剰の遊離（アミノオキシ）酢酸（Ａｏａ）の存在下でＢｏｃ−アミノオキシペプチドの脱保護を行っている。次いで、脱保護アミノオキシペプチドと過剰のＡｏａを凍結乾燥し、４℃で保存する。オキシムライゲーション反応の直前に、凍結乾燥混合物を再構成し、過剰のＡｏａをＨＰＬＣ又はＳｅｐ−ＰａｋプラスＣ１８カートリッジで分離する。Ｍｅｚｏ他には、この技術を用いて非放射性（¹⁹Ｆ）４−フルオロベンズアルデヒドをアミノオキシ官能化ソマトスタチンペプチドとコンジュゲートした例が記載されている。Ｍｅｚｏ他には、¹⁸Ｆ−放射性標識に関するデータは記載されていない。

【0008】

国際公開第２０１２／０２２６７６号には、以下の式Ｉの¹⁸Ｆ放射性標識１８〜３０量体ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチド（ｃＭＢＰ）を含んでなるイメージング剤が開示されている。
Ｚ¹−［ｃＭＢＰ］−Ｚ² （Ｉ）
式中、
ｃＭＢＰは次の式ＩＩのものであり、
−（Ａ）_x−Ｑ−（Ａ'）_y− （ＩＩ）
（式中、Ｑは次のアミノ酸配列（配列番号１）であり、
−Ｃｙｓ^a−Ｘ¹−Ｃｙｓ^c−Ｘ²−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ³−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ^d−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ^b−Ｔｙｒ−Ｘ⁴−Ｘ⁵−Ｘ⁶−
（式中、Ｘ¹はＡｓｎ、Ｈｉｓ又はＴｙｒであり、Ｘ²はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、Ｘ³はＴｈｒ又はＡｒｇであり、Ｘ⁴はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、Ｘ⁵はＳｅｒ又はＴｈｒであり、Ｘ⁶はＡｓｐ又はＧｌｕであり、Ｃｙｓ^a-dの各々はシステイン残基であって、残基ａとｂ及び残基ｃとｄは環化して２つの独立したジスルフィド結合を形成している。）
Ａ及びＡ’は独立にＣｙｓ以外の任意のアミノ酸であって、Ａ及びＡ’の少なくとも一方が存在してＬｙｓであることを条件とし、
ｘ及びｙは独立に０〜１３の値を有する整数であって、［ｘ＋ｙ］＝１〜１３となるように選択される。）
Ｚ¹はｃＭＢＰのＮ末端に結合していて、Ｈ又はＭ^IGであり、
Ｚ²はｃＭＢＰのＣ末端に結合していて、ＯＨ、ＯＢ^c（式中、Ｂ^cは生体適合性陽イオンである。）又はＭ^IGであり、
各Ｍ^IGは独立に、ｃＭＢＰペプチドのインビボ代謝を阻害又は抑制する生体適合性基である代謝阻害基であり、
ｃＭＢＰはＡ又はＡ’基のＬｙｓ残基において¹⁸Ｆで標識されている。

【0009】

国際公開第２０１２／０２２６７６号には、上記イメージング剤を医薬組成物として使用できることも開示されており、標記組成物は、好ましくは１種以上の放射線防護剤、好ましくはエタノール、アスコルビン酸、ｐ−アミノ安息香酸（即ち、４−アミノ安息香酸又はｐＡＢＡ）、ゲンチシン酸（即ち、２，５−ジヒドロキシ安息香酸）及びかかる酸と生体適合性陽イオンとの塩から選択される放射線防護剤を含む。

【0010】

国際公開第２０１２／０７２７３６号には、官能化生体分子のアミノオキシ基のための別の保護基化学の使用が開示されている。保護アミノオキシ基は、次式のものである。

【0011】

【化2】

式中、Ｒ¹及びＲ²は独立にＣ_1-3アルキル、Ｃ_1-3フルオロアルキル又はＣ_4-6アリールから選択される。

【0012】

米国特許出願公開第２０１３／０２０９３５８号には、¹⁸Ｆ−フルシクラチドが、高い放射能濃度で放射線分解を受けるおそれがあると開示されている。

【0013】

【化3】

米国特許出願公開第２０１３／０２０９３５８号には、¹⁸Ｆ−フルシクラチドはエタノールでは安定化されないこと、アスコルビン酸は自動放射性合成に理想的ではないが、４−アミノ安息香酸（又はその塩）が有効であると報告されている。米国特許出願公開第２０１３／０２０９３５８号には、最初に¹⁸Ｆ−フルシクラチドを調製し、次いで放射線防護剤を添加することが教示されている。

【0014】

そこで、¹⁸Ｆ標識ｃ−Ｍｅｔペプチド放射性トレーサーの改良調製及び精製法であって、インビボ放射性医薬品用途に適した高純度組成物を与える方法に対するニーズが依然として存在する。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0015】

【特許文献1】国際公開第２０１２／０２２６７６号

【発明の概要】

【0016】

本発明者らは、¹⁸Ｆ標識ｃ−Ｍｅｔターゲティングペプチドに存在する放射化学的不純物を同定し、かかる不純物レベルが経時的にどのように変動するかを分析した。そうした検討の結果、精製の際のインプロセス放射線分解がＲＣＰ（放射化学的純度）の問題の根本原因であったとの知見が得られた。

【0017】

これは以下のように理解することができる。例えば、本発明の放射性トレーサーは、精製してインビボ用に製剤化する際、約５００〜７００ＭＢｑ／ｍＬ（０．５〜０．７ＧＢｑ／ｍＬ）の放射能濃度（ＲＡＣ）で存在する。放射性トレーサーは、かかるＲＡＣ条件下で十分な安定性又は最小限の分解を示す。ただし、それは、ＲＡＣが約１０〜１５ＧＢｑ／ｍＬの範囲内にある粗反応混合物から得られる。さらに、本発明者らは、精製時（つまり放射性合成の最後）に、クロマトグラフィーカラムの容積１ｍＬ未満の密なバンドに約４５ＧＢｑの放射能が濃縮されるという知見を得た。これは精製時に＞４５ＧＢｑ／ｍＬのインプロセスＲＡＣを招く。精製は１０〜１５分かかるので、インプロセス放射線分解のリスクは高い。

【0018】

本発明は、精製を実施しながら放射性トレーサーを安定化する方法を提供し、向上した放射能収率及び組成物も提供する。本発明は、¹⁸Ｆ標識ｃ−Ｍｅｔターゲティングペプチドを含む放射性トレーサーの精製方法を提供する。実際には、本方法は精製方法であるとともに放射線安定化（つまり放射能分解に対する安定化）方法でもある。例えば、精製時のインプロセス放射線分解の防止によって、不純物の生成が抑制されるので、本発明は放射化学的純度も向上させる。本方法は、クロマトグラフィーの際のインプロセス損失が最小限に抑制されるので、放射化学的収率も向上させる。

【発明を実施するための形態】

【0019】

第１の態様では、本発明は、放射性医薬品であって、
（ｉ）¹⁸Ｆで標識された式Ｉのｃ−Ｍｅｔ結合ペプチドを含む放射性トレーサーと、
Ｚ¹−［ｃＭＢＰ］−Ｚ² （Ｉ）
（ｉｉ）４−アミノ安息香酸又は又はその生体適合性陽イオンとの塩を含む放射線防護剤と、
（ｉｉｉ）エタノール含有量０．１〜１０ｖ／ｖ％のエタノール水溶液を含む生体適合性担体と
を哺乳類への投与に適した形態で含む、放射性医薬品を提供する。
式中、ｃＭＢＰは以下のアミノ酸配列を有するｃ−Ｍｅｔ結合ペプチドであり、
Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ^a−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ^c−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ^d−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ^b−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ
（式中、Ｃｙｓ^a-dの各々はシステイン残基であって、残基ａとｂ及び残基ｃとｄは環化して２つの独立したジスルフィド結合を形成している。）
Ｚ¹はｃＭＢＰのＮ末端に結合していて、Ｍ^IGであり、
Ｚ²はｃＭＢＰのＣ末端に結合していて、Ｍ^IGであり、
各Ｍ^IGは独立に、ｃＭＢＰペプチドのインビボ代謝を阻害又は抑制する生体適合性基である代謝阻害基であり、
「放射性トレーサー」という用語は、その通常の意味を有し、生理学的又は生物学的プロセスに影響を与えずにそれらを追跡するために使用される放射性医薬品をいう。「放射性医薬品」という用語は、その通常の意味を有し、イメージング又は治療のため哺乳類の身体にインビボで投与される放射性標識化合物をいう。クロマトグラフィー精製の際、例えばＳＰＥカラムの上にロードされて小さな体積に濃縮される際、放射性トレーサーは一時的に非常に高い放射能濃度（「ＲＡＣ」）に曝露されることがある。そのため、放射線安定性とみえる放射性トレーサーであっても、精製を試みる際に不安定を示し、放射化学的純度（「ＲＣＰ」）及び／又は放射化学的収率が損なわれかねない。

【0020】

「放射線防護剤」という用語は、水の放射線分解で生じる含酸素フリーラジカルのような反応性の高いフリーラジカルを捕捉することによって、酸化還元反応のような分解反応を抑制する化合物を意味する。本発明の放射線防護剤は、好適には、アスコルビン酸、パラ−アミノ安息香酸（つまり４−アミノ安息香酸）及びその生体適合性陽イオンとの塩から選択される。「生体適合性陽イオン」という用語は、イオン化した負荷電基と塩を形成する正荷電の対イオンを意味するが、正荷電対イオンも無毒性であって哺乳類の身体（特に人体）への投与に適している。好適な生体適合性陽イオンの具体例としては、アルカリ金属であるナトリウム及びカリウム、アルカリ土類金属であるカルシウム及びマグネシウム、並びにアンモニウムイオンが挙げられる。好ましい生体適合性陽イオンはナトリウム及びカリウムであり、最も好ましくはナトリウムである。

【0021】

「生体適合性担体」とは、放射性コンジュゲートを懸濁又は好ましくは溶解できる流体、特に液体であって、組成物が生理学的に認容できるもの、つまり毒性も耐え難い不快感も伴わずに哺乳類の身体に投与することができるようなものである。生体適合性担体は好適には注射可能な担体液であり、例えば、パイロジェンフリーの注射用滅菌水、食塩液のような水溶液（これは注射用の最終製剤が等張性となるように調整するのに都合がよい）、生体適合性緩衝剤を含む水性緩衝液（例えばリン酸緩衝液）、１種以上の張度調節物質（例えば血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えばグルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えばソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えばグリセロール）その他の非イオン性ポリオール材料（例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液である。好ましくは、生体適合性担体はパイロジェンフリーの注射用水又は等張食塩水又はリン酸緩衝液である。

【0022】

「哺乳類への投与に適した形態」という記載は、無菌でパイロジェンフリーであり、毒性又は有害作用を生じる化合物を含まず、生体適合性ｐＨ（約ｐＨ４．０〜１０．５）で製剤化される組成物を意味する。かかる組成物は、インビボで塞栓を生じる危険性のある粒状物質を含んでおらず、しかも体液（例えば、血液）と接触しても沈殿を生じないように製剤化される。かかる組成物は、生物学的に適合性の賦形剤のみを含み、好ましくは等張性である。

【0023】

「ペプチド」という用語は、ペプチド結合（つまり、あるアミノ酸のアミンと別のアミノ酸のカルボキシルとを連結するアミド結合）で連結した２以上のアミノ酸（以下で定義）を含む化合物を意味する
「アミノ酸」という用語は、Ｌ−又はＤ−アミノ酸、アミノ酸類似体（例えば、ナフチルアラニン）又はアミノ酸模倣体を意味し、天然のものでも純粋な合成品であってもよく、光学的に純粋つまり単一の鏡像異性体（したがってキラルなもの）であってもよいし、鏡像異性体の混合物であってもよい。本明細書では、アミノ酸の慣用三文字略語又は一文字略語を用いる。好ましくは、本発明のアミノ酸は光学的に純粋なものである。

【0024】

「代謝阻害基（Ｍ^IG）」という用語は、アミノ末端又はカルボキシ末端でのｃＭＢＰの酵素（特にカルボキシペプチダーゼのようなペプチダーゼ）代謝を阻害又は抑制する生体適合性基を意味する。こうした基がないと急速に代謝して選択的結合親和性が失われると予測されるので、かかる基はインビボ用途で特に重要であり、当業者に周知であり、好適には、ペプチドアミン末端に関してはＮ−アシル化基−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^G（式中、アシル基−（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^Gは、Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_3-10アリールから選択されるＲ^Gを有しているか或いはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成ブロックを含む。）から選択される。かかるアミノ末端Ｍ^IG基として好ましいのはアセチル、ベンジルオキシカルボニル又はトリフルオロアセチルであり、最も好ましくはアセチルである。

【0025】

ペプチドカルボキシル末端に適した代謝阻害基には、カルボキサミド、ｔｅｒｔ−ブチルエステル、ベンジルエステル、シクロヘキシルエステル、アミノアルコール及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成ブロックがある。ｘＭＢＰペプチドのカルボキシ末端アミノ酸残基に適したＭ^IG基は、アミノ酸残基の末端アミンをＣ_1-4アルキル基（好ましくはメチル基）でＮ−アルキル化したものである。かかるＭ^IG基として好ましいのはカルボキサミド又はＰＥＧであり、最も好ましい基はカルボキサミドである。

【0026】

放射性トレーサー及び生体適合性担体は各々、無菌健全性及び／又は放射能安全性、さらに適宜ヘッドスペースの不活性ガス（例えば、窒素又はアルゴン）を維持できるとともに、注射器又はカニューレでの溶液の添加及び吸引も行うことのできる密封容器からなる適当なバイアル又は容器に入れた状態で供給される。かかる容器として好ましいのは、セプタムシールバイアルであり、気密蓋をオーバーシール（通常はアルミニウム製）と共にクリンプオンする。蓋は、無菌健全性を維持したまま皮下注射針で１回又は複数回穿刺するのに適したもの（例えば、クリンプオン式セプタムシール蓋）である。かかる容器は、所望に応じて（例えばヘッドスペースガスの交換又は溶液の脱気のため）真空に蓋が耐えるとともに、酸素や水蒸気のような外部雰囲気ガスを侵入させずに減圧のような圧力変化に耐えるという追加の利点がある。

【0027】

好ましい多用量用容器は、患者の複数回分の用量を収容した単一バルクバイアルからなり、臨床症状に応じて製剤の有効期間中様々な時間間隔で１回分の用量を臨床グレードの注射器に吸引することができる。プレフィルド型注射器は患者の１回分の用量つまり「単位用量」を収容するように設計され、そのため好ましくは使い捨てその他臨床用に適した注射器である。

【0028】

放射性医薬組成物は、抗菌保存剤、ｐＨ調整剤、充填剤、可溶化剤又はモル浸透圧濃度調整剤のような追加の添加剤を適宜含んでいてもよい。「充填剤」という用語は、製造及び凍結乾燥時における材料の取扱いを容易にすることができる薬学的に許容される増量剤を意味する。好適な充填剤には、塩化ナトリウムのような無機塩、及びスクロース、マルトース、マンニトール又はトレハロースのような水溶性の糖又は糖アルコールがある。

【0029】

「可溶化剤」という用語は、組成物に存在する添加剤であって、溶媒中での薬剤の溶解度を高める添加剤を意味する。かかる溶媒として好ましいのは水性媒質であり、従って可溶化剤は好ましくは水中での溶解度を高める。かかる可溶化剤として適したものとしては、Ｃ_1-4アルコール、グリセリン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノオレエート、ポリソルベート、ポリ（オキシエチレン）ポリ（オキシプロピレン）ポリ（オキシエチレン）ブロック共重合体（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ（商標））、シクロデキストリン（例えば、α−、β−又はγ−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン或いはヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン）及びレシチンがある。

【0030】

「抗菌保存剤」という用語は、細菌、酵母又はカビなどの有害微生物の増殖を阻害する薬剤を意味する。抗菌保存剤は、使用する用量に応じてある程度の殺菌作用を示すこともある。本発明の抗菌保存剤の主な役割は、医薬組成物におけるかかる微生物の増殖を阻止することである。ただし、抗菌保存剤は、投与に先立って組成物の製造に使用されるキットの１種以上の成分における有害微生物の増殖の防止にも適宜使用できる。好適な抗菌保存剤には、パラベン類（即ち、メチル、エチル、プロピル又はブチルパラベン或いはこれらの混合物）、ベンジルアルコール、フェノール、クレゾール、セトリミド及びチオメルサールがある。好ましい抗菌保存剤はパラベン類である。

【0031】

「ｐＨ調整剤」という用語は、組成物のｐＨがヒト又は哺乳類への投与のための許容範囲（約ｐＨ４．０〜１０．５）内に確実に収まるようにするのに有用な化合物又は化合物混合物を意味する。好適なかかるｐＨ調整剤には、トリシン、リン酸塩又はＴＲＩＳ［つまりトリス（ヒドロキシルメチル）アミノメタン］のような薬学的に許容される緩衝剤、及び炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム又はこれらの混合物のような薬学的に許容される塩基がある。組成物をキットの形態で使用する場合には、キットのユーザーが多段操作の一部としてｐＨを調整できるように、ｐＨ調整剤を適宜別個のバイアル又は容器に入れて供給してもよい。

【0032】

好ましい特徴
第１の態様の放射性医薬組成物において、Ｚ¹は好ましくはアセチルであり、Ｚ²は好ましくは第一アミドである。

【0033】

¹⁸Ｆは好ましくはオキシム結合でｃＭＢＰに結合され、さらに好ましくは、アミノオキシ官能化ｃＭＢＰに結合される。「アミノオキシ官能化」という用語は、ｃＭＢＰがアミノオキシ基で官能化されているか、或いはアミノオキシ基と結合していることを意味する。「アミノオキシ基」という用語は、その通常の意味を有し、式−Ｏ−ＮＨ₂の置換基、好ましくは−ＣＨ₂Ｏ−ＮＨ₂をいう。第１の態様の放射性トレーサーは、好ましくは次の式ＩＩの放射性トレーサーである。

【0034】

【化4】

式中、慣用一文字略語を用いた。

【0035】

第１の態様の組成物における４−アミノ安息香酸濃度は、好ましくは１．５〜２．５ｍｇ／ｍＬ、さらに好ましくは１．８〜２．２ｍｇ／ｍＬ、最も好ましくは約２．０ｍｇ／ｍＬである。

【0036】

第１の態様の組成物におけるエタノール濃度は、好ましくは６．５〜８．５ｖ／ｖ％である。

【0037】

第１の態様の組成物における生体適合性担体の水性成分は、好ましくはｐＨ６〜８の緩衝液、さらに好ましくはリン酸緩衝液である。

【0038】

第１の態様の放射性医薬組成物において、好ましくは、¹⁸Ｆ放射能含有量の９０％以上は式（Ｉ）の放射性トレーサーであり、¹⁸Ｆ放射能含有量の１０％未満が［¹⁸Ｆ］−４−フルオロベンズアルデヒドと［¹⁸Ｆ］−４−フルオロベンゾニトリルの合計である。さらに好ましくは、¹⁸Ｆ放射能含有量の９２％以上が式（Ｉ）の放射性トレーサーであり、¹⁸Ｆ放射能含有量の５％未満が［¹⁸Ｆ］−４−フルオロベンズアルデヒドと［¹⁸Ｆ］−４−フルオロベンゾニトリルの合計である。フルオロベンゾニトリルはＦ−Ｐｈ−ＣＮの化合物であり、Ｐｈは１，４−フェニレンである。これらの放射性不純物は、本発明の¹⁸Ｆ標識ｃＭＢＰの従前認識されていなかったインプロセス放射線分解に起因し、その制御によって改良放射性医薬組成物が得られる。

【0039】

第１の態様の放射性医薬組成物は、第２の態様（後述）で説明するようにして調製することができる
第２の態様では、本発明は、第１の態様の放射性医薬組成物の調製方法を提供するが、当該方法は、
（Ａ）以下の（ｉ）〜（ｖｉ）：
（ｉ）［¹⁸Ｆ］フッ化物と反応して［¹⁸Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドを生成させることができる第１の非放射性前駆体と、
（ｉｉ）［¹⁸Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドと反応して第１の態様で定義した式ＩＩの放射性トレーサーを生成させることができる次の式ＩＩＩの第２の非放射性前駆体と、

【0040】

【化5】

（ｉｉｉ）逆相固相抽出カラムと、
（ｉｖ）第１の態様で定義した放射線防護剤の供給源と、
（ｖ）反応容器と、
（ｖｉ）適当な溶媒と
を含む単回使用カセットを用意するステップと、
（Ｂ）第１の前駆体を［¹⁸Ｆ］−フッ化物と反応させて［¹⁸Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドを得るステップと、
（Ｃ）ステップ（Ｂ）の［¹⁸Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドを第２の前駆体と反応させて式ＩＩの放射性トレーサーを得るステップと、
（Ｄ）放射線防護剤をステップ（Ｃ）の式ＩＩの放射性トレーサーに添加して放射性トレーサー溶液を得るステップと、
（Ｅ）逆相固相抽出カラムを使用して、ステップ（Ｄ）の放射性トレーサー溶液を精製するステップと、
（Ｆ）任意には、ステップ（Ｅ）の精製［¹⁸Ｆ］−放射性トレーサーを生体適合性担体で希釈するステップと、
（Ｇ）任意には、ステップ（Ｆ）の希釈溶液を無菌濾過して放射性医薬組成物を得るステップと
を含んでおり、カセットは自動合成装置にに着脱自在かつ交換可能に取り付けられ、少なくともステップ（Ｂ）〜（Ｅ）を実施するのに自動合成装置が使用される。

【0041】

第２の態様における放射性トレーサー及び放射線防護剤の好ましい実施形態は、第１の態様（上述）に記載の通りである。

【0042】

「逆相」という用語は「逆相クロマトグラフィー精製」をいい、この用語はその通常の意味を有し、固定相が親油性で移動相が親水性（通例、水性媒体を含むもの）であるクロマトグラフィーをいう。本発明のクロマトグラフィー技術は、ＳＰＥカラム（「ＳＰＥカートリッジ」ともいう。）を用いた固相抽出（ＳＰＥ）である。かかるＳＰＥカラムは、単回使用（つまり使い捨て）であり、放射性トレーサーの相互汚染のリスクがないという利点を有する。第２の態様の逆相ＳＰＥカートリッジは、好ましくは２．７〜１７％の炭素量を有するもの、さらに好ましくはＣ１８ ＳＰＥカートリッジ、最も好ましくはｔＣ１８ ＳＰＥカートリッジである。本発明での使用に適した逆相ＳＰＥカートリッジは、Ｗａｔｅｒｓ社（英国、ハートフォードシャー、エスストリー、センテニアル・パーク、センテニアル・コート７３０−７４０）から入手できる。

【0043】

放射性医薬組成物を得るために第２の態様の方法は、各工程を自動合成装置を用いて実施する無菌製造技術を用いて実施される。「自動合成装置」という用語は、Ｓａｔｙａｍｕｒｔｈｙ他［Ｃｌｉｎ．Ｐｏｓｉｔｒ．Ｉｍａｇ．，２（５），２３３−２５３（１９９９）］に記載されているような単位操作の原理に基づく自動化モジュールを意味する。「単位操作」という用語は、複雑なプロセスが一連の簡単な操作又は反応に集約されることを意味し、広範な材料に適用できる。かかる自動合成装置は、本発明の方法、特に放射性医薬組成物が所望される場合の本発明の方法に好ましい。これらは、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、ＣＴＩ社．、Ｉｏｎ Ｂｅａｍ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ社（ベルギー国、Ｂ−１３４８ルヴァン・ラ・ヌーブ、シュマン・デュ・シクロトロン３）、Ｒａｙｔｅｓｔ社（ドイツ）及びＢｉｏｓｃａｎ社（米国）を始めとする様々な供給業者から市販されている［Ｓａｔｙａｍｕｒｔｈｙ他、上掲］。

【0044】

市販の自動合成装置は、放射性医薬品の製造で生じる液体放射性廃棄物用の適当な容器も提供する。自動合成装置は、適切に設計された放射能作業セル内で使用するように設計されているので、通例、放射線遮蔽が設けられていない。放射能作業セルは、潜在的な放射線量からオペレーターを保護するのに適した放射線遮蔽をもたらすとともに、化学薬品蒸気及び／又は放射性蒸気を除去するための換気装置を与える。自動合成装置は、好ましくはカセットを備える。

【0045】

「カセット」という用語は、合成装置の可動部材の機械的運動がカセットの外側から（つまり外部から）カセットの動作を制御するように、自動合成装置（上述）に着脱自在かつ交換可能に装着できるように設計された装置の単位部品を意味する。好適なカセットは直線状に並んだ弁の列を含み、その各々は倒立セプタムシールバイアルの針穿刺又は気密連結継手によって試薬又はバイアルを装着することができるポートに結合している。各弁は、自動合成装置の対応する可動アームとかみ合うはめ込み型継手を有している。カセットを自動合成装置に装着した場合、アームの外部回転が弁の開閉を制御する。自動合成装置の追加の可動部材は、注射器のプランジャー先端をつかみ、注射器外筒を上昇又は降下させるように設計されている。

【0046】

カセットは汎用性であって、通例は試薬を装着することができる複数の位置、及び試薬のシリンジバイアル又はクロマトグラフィーカートリッジ（例えば、固相抽出（ＳＰＥ））を装着するのに適した複数の位置を有している。カセットは常に反応容器を含んでいる。かかる反応容器は好ましくは１〜１０ｃｍ³、最も好ましくは２〜５ｃｍ³の容積を有しており、カセットの様々なポートから試薬又は溶媒を移送できるように、カセットの３以上のポートが反応容器に連結されるように構成されている。好ましくは、カセットは直線状に並んだ１５〜４０個の弁、最も好ましくは２０〜３０個の弁を有しており、２５個の弁が特に好ましい。カセットの弁は好ましくは各々同一であり、最も好ましくは三方弁である。本発明のカセットは放射性医薬品の製造に適するように設計され、医薬グレードの材料であって理想的には放射線分解にも耐える材料で製造される。

【0047】

本発明に適した自動合成装置は、放射性フッ素化された放射性医薬品の所定バッチの製造を実施するのに必要なすべての試薬、反応容器及び機器を含むディスポーザブルつまり使い捨てカセットを備える。かかるカセットは、単にカセットを交換するだけで、自動合成装置が相互汚染のリスクを最小限に抑えながら各種の放射性医薬品を製造できる柔軟性をもつことを意味する。カセット方式には、装置構成の単純化とそれに伴うオペレーターエラーのリスクの低減、ＧＭＰ（Good Manufacturing Practice）コンプライアンスの向上、マルチトレーサー能力、生産作業間の迅速な変更、カセット及び試薬の作業前自動診断検査、実施すべき合成と化学試薬との自動バーコードクロスチェック、試薬のトレーサビリティ、使い捨てであり、そのため相互汚染のリスクがなく、改竄及び誤用を防ぐことができるという利点がある。

【0048】

第２の態様の方法では、好ましくはステップ（Ｂ）〜（Ｇ）を実施するのに自動合成装置が用いられる。

【0049】

「第１の非放射性前駆体」は、［¹⁸Ｆ］−フッ化物と反応して［¹⁸Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドを一段階で生成するように設計される。かかる前駆体として適したものは、当技術分野で公知である。かかる前駆体として好ましいのは前駆体１（後述）である。

【0050】

第２の非放射性前駆体は上述の式（ＩＩＩ）の非放射性前駆体である。かかるアミノオキシ官能化ペプチドは、Ｐｏｅｔｈｋｏ他［Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，４５，８９２−９０２（２００４）］，Ｓｃｈｉｒｒｍａｃｈｅｒ他［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１８，２０８５−２０８９（２００７）］、Ｉｎｄｒｅｖｏｌｌ他［Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ，１６，６１９０−６１９３（２００６）］、Ｇｌａｓｅｒ他［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１９，９５１−９５７（２００８）］又はＤａｌｌ’Ａｎｇｅｌｏ他［Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１１，４５５１−４５５８（２０１３）］に記載の方法で調製できる。アミノオキシ基は、適宜２段階でコンジュゲートすることができる。第１段階で、Ｎ−保護アミノオキシカルボン酸又はＮ−保護アミノオキシ活性化エステルを、（例えばＬｙｓ残基のアミン基へのコンジュゲート或いは従来の固相合成によって）ペプチドにコンジュゲートする。第２段階で、中間体のＮ−保護アミノオキシ官能化ペプチドを脱保護し、所望の生成物を得る［上掲のＳｏｌｂａｋｋｅｎ及びＧｌａｓｅｒ参照］。Ｂｏｃ−アミノオキシ酢酸［Ｂｏｃ−ＮＨ−Ｏ−ＣＨ₂（Ｃ＝Ｏ）ＯＨ］及びＥｅｉ−Ｎ−Ｏ−ＣＨ₂（Ｃ＝Ｏ）ＯＨのようなＮ−保護アミノオキシカルボン酸は、例えばＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社及びＩＲＩＳ社から市販されている。

【0051】

「保護」とは保護基の使用をいう。「保護基」という用語は、その通常の意味を有し、望ましくない化学反応を阻止又は抑制するが、分子の残部を変質させない程度の穏和な条件下で問題の官能基から脱離させるのに十分な反応性をもつように設計された基を意味する。脱保護後には所望の生成物が得られる。アミン保護基は当業者に周知であり、好適にはＢｏｃ（Ｂｏｃはｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルである。）、Ｅｅｉ（Ｅｅｉはエトキシエチリデンである。）、Ｆｍｏｃ（Ｆｍｏｃはフルオレニルメトキシカルボニルである。）、トリフルオロアセチル、アリルオキシカルボニル、Ｄｄｅ［即ち１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル］又はＮｐｙｓ（即ち３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル）から選択される。その他の保護基の使用については、‘Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’，Ｔｈｅｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９１）に記載されている。好ましいアミン保護基は、Ｂｏｃ及びＥｅｉであり、最も好ましくはＥｅｉである。

【0052】

第２の態様の方法において、ステップ（Ｄ）の放射性トレーサー溶液は、５〜２５ｖ／ｖ％のアセトニトリル含有量のアセトニトリル水溶液中に放射性トレーサーを含む。ステップ（Ｄ）の放射性トレーサー溶液は、好ましくはエタノールを含んでおり、さらに好ましくはアセトニトリルとエタノールを共に含む。エタノールは潜在的に複数の機能を有しており、水混和性有機溶媒（上述）、放射線防護剤又は放射線安定剤、「生体適合性担体」（上述）及び抗菌保存剤（上述）として作用し得る。本発明者らは、「放射線防護剤」（上述）とエタノールとの組合せが、本発明の放射性トレーサーを放射線分解から安定化するのに最も有効であるという知見を得た。放射性トレーサー溶液のエタノール含有量は好ましくは０．５〜５ｖ／ｖ％エタノールである。

【0053】

精製ステップ（Ｅ）は、ＳＰＥカラムに結合した状態で残る化学種、例えば非常に親油性の化学種又は粒状物を除去する。ステップ（Ｅ）は、ＳＰＥカラムの固定相に対する親和性の低い親水性不純物を除去し、これらは、ローディングステップ及び洗浄ステップで除去される。かかる親水性不純物としては、塩又はイオン種（フッ素イオンなど）、触媒（アニリン又など）並びに放射性トレーサー溶液由来の水混和性有機溶媒が挙げられる。

【0054】

放射性トレーサーは通常、¹⁸Ｆ−フルオロベンズアルデヒド（又は類似体）とアミノオキシ官能化生体ターゲティング部分前駆体との連結反応で得られ、連結したフルオロベンズアルデヒド基は、コンジュゲートに追加の親油性をもたらす。そのため、放射性トレーサーは、逆相ＳＰＥカラムに保持される傾向があるが、非放射性前駆体自体（もっと親水性である）は、ローディングステップ及び洗浄ステップで除去される傾向がある。洗浄ステップは、水混和性有機溶媒の除去にも重要である。このようにして放射性トレーサー溶液は精製され、生体ターゲティング部分に基づく不要な非放射性不純物が除去されるが、かかる非放射性不純物が存在していると、インビボで問題とする生体部位に対して放射性トレーサーと競合しかねない。さらに親水性の¹⁸Ｆ標識放射性不純物も、同様に除去される傾向にある。したがって、調製時の化合物２の初期レベルは５ｍｇであったが、精製放射性トレーサーでは約２００μｇ（０．２ｍｇ）に低下していた。

【0055】

第２の態様のＳＰＥカートリッジは、好ましくは、使用前にまず水混和性有機溶媒、次いでコンディショニング溶液で処理することによってコンディショニングされる。水混和性有機溶媒は、好ましくはエタノールであり、コンディショニング溶液は好適には４０〜６０％水性／水混和性有機溶媒混合物、さらに好ましくは５０％エタノール水溶液である。

【0056】

ステップ（Ｃ）の放射性トレーサー及び／又はステップ（Ｄ）の放射性トレーサー溶液は、好ましくは１８〜３７℃、さらに好ましくは１８〜３０℃の範囲内の温度に冷却される。

【0057】

第２の態様の精製ステップ（Ｅ）は、好ましくは以下の通り実施される。
（ｉ）ステップ（Ｄ）の放射性トレーサー溶液を逆相ＳＰＥカートリッジに流して、放射性トレーサーをＳＰＥカートリッジに保持し、
（ｉｉ）ステップ（ｉ）のＳＰＥカートリッジを、アセトニトリル含有量１５〜２５ｖ／ｖ％の放射線防護剤のアセトニトリル水溶液を含む洗浄溶液で１回以上洗浄し、
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）のＳＰＥカートリッジを、水又は水性緩衝液で１回以上洗浄し、
（ｉｖ）ステップ（ｉｉ）又は（ｉｉｉ）の洗浄済みＳＰＥカートリッジを、エタノール含有量３５〜８０ｖ／ｖ％のエタノール水溶液中に放射線防護剤を含む溶出溶媒で溶出して、溶出溶媒中に精製放射性トレーサーを含む溶出液を得る。

【0058】

「アセトニトリル含有量１５〜２５ｖ／ｖ％の放射線防護剤のアセトニトリル水溶液」という用語は、水溶液（例えば、水自体、生理食塩水、水性緩衝液又はこれらの混合物）をアセトニトリル及び適宜エタノール（下記参考）と混合したものいう。アセトニトリルは、放射性トレーサーに対する良好な溶媒であり、酸性でも塩基性でもなく、比較的非反応性であり、そのため広範な官能基と適合性であり、水との混和性が高く、方法のステップ（ｉｉｉ）及び（ｉｖ）におけるＳＰＥカラムの洗浄で容易かつ完全に（或いは少なくともｐｐｍレベルまで）除去されるという利点を有する。アセトニトリルは、アニリンを始めとする放射性トレーサー中の不純物の除去に最も効率的な溶媒であることが判明した。放射性トレーサー溶液及び洗浄溶液のアセトニトリル含有量は好ましくは２５ｖ／ｖ％以下であり、それよりも高レベルでは、ＳＰＥカラムからの溶出による放射性トレーサー生成物の損失を招くおそれがある。洗浄溶液中のアセトニトリル含有量は、好ましくは１８〜２２ｖ／ｖ％、さらに好ましくは２０〜２１ｖ／ｖ％である。

【0059】

ステップ（ｉｖ）の溶出溶媒は、好ましくは３５〜７０ｖ／ｖ％エタノール水溶液、さらに好ましくは４０〜６０％、最も好ましくは４８〜５２％エタノール水溶液を含み、特に好ましくは５０％エタノール水溶液を含む。

【0060】

放射性トレーサー溶液、洗浄溶液及び溶出溶媒の水性成分のｐＨは好ましくは７．５〜８．５である。これは、好ましくは緩衝液、さらに好ましくはリン酸緩衝液を使用して達成される。

【0061】

放射線防護剤が４−アミノ安息香酸ナトリウムである場合、放射性トレーサー溶液中の好ましい濃度は５ｍｇ／ｍＬであり、洗浄溶液及び溶出溶媒中の好ましい濃度は２．５ｍｇ／ｍＬである。特に好ましい放射性トレーサー溶液は、５ｍｇ／ｍＬの４−アミノ安息香酸ナトリウム、７９ｇのリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７．５）及び１６．５ｇのアセトニトリルの混合物中２％のエタノールを含む。特に好ましい洗浄溶液は、リン酸緩衝食塩水（ｐＨ７．５）中５ｍｇ／ｍＬの４−アミノ安息香酸ナトリウムを含む。

【0062】

精製ステップと精製ステップの間に、ＳＰＥカートリッジを、窒素ではなく空気でフラッシュするのが好ましい。本発明者らは、酸素が除外される状況とは対照的に、空気の存在下で放射線防護剤４−アミノ安息香酸がより効率的に機能するという知見を得た。

【0063】

ステップ（ｉｖ）の精製放射性トレーサーは、好ましくは放射線防護剤として４−アミノ安息香酸又はその生体適合性陽イオンとの塩を３５〜７０％エタノール水溶液中に含む。放射性医薬品用途向けには、好ましくは、放射性医薬品は水性生体適合性担体で希釈して、最終エタノール含有量０．１〜１０ｖ／ｖ％とする。

【0064】

第２の態様の方法は、好ましくは、
（Ｈ）ステップ（Ｇ）の［¹⁸Ｆ］−放射性トレーサー放射性医薬組成物を１以上の注射器に分注するステップ
をさらに含む。

【0065】

第３の態様では、本発明は、第２の態様で定義した単回使用カセットを提供する。第３の態様におけるカセットの好ましい実施形態は、第２の態様（上述）に記載の通りである。

【0066】

第４の態様では、本発明は、第２の態様の調製方法を実施するための第２の態様で定義した自動合成装置の使用を提供する。第４の態様における自動合成装置及び付属カセットの好ましい実施形態は、第２の態様（上述）に記載した通りであるである。

【0067】

第５の態様では、本発明は、第２の態様の調製方法を実施するための第２及び第３の態様で定義したカセットの使用を提供する。第５の態様における合成装置及び付属カセットの好ましい実施形態は、第２の態様（上述）に記載した通りである。

【図面の簡単な説明】

【0068】

【図1】ＦａｓｔＬａｂの様々な位置に配置した６個の放射能検出器を用いた、ローディング、洗浄及び溶出プロセスの際のＳＰＥカラムを通過する化合物３の放射能溶出プロファイルを示す図である。

【図2】化合物３の自動放射合成及び自動精製のためのＦａｓｔＬａｂカセットの構成を示す図である。

【実施例】

【0069】

以下に詳しく記載する非限定的な実施例で本発明を説明する。例１は、本発明のｃ−Ｍｅｔターゲティングペプチド（「ペプチド１」）の合成について提示する。例２は、アミノオキシ官能基を保護基（Ｅｅｉ）で保護したアミノオキシ官能化ペプチド１（「化合物１」）の合成とその後で化合物２を得るための脱保護について提示する。例３は、［¹⁸Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドの放射性合成について提示する。例４は比較例であり、本発明の方法を用いない¹⁸Ｆ標識コンジュゲート化合物３の放射性合成について提示する。この場合のＲＣＰは合成終了時点で比較的低い（７９％）。

【0070】

例５は、例４に従って精製した低ＲＣＰ化合物３における放射化学的不純物の同定及び経時的変化について提示する。本例は、クロマトグラフィー精製の際のインプロセス放射線分解が低ＲＣＰの原因であることの証拠を示す。例５は、ＳＰＥ精製時のＳＰＥカラムを通過する放射能の動向に関する情報を与え、ＳＰＥプロセスの際のＲＡＣが４５ＧＢｑ／ｍＬを超えることを例証する。この極めて高いが、時間限定的なＲＡＣも、インプロセス放射線分解の指標である。

【0071】

例７は、自動合成装置及びカセットを使用した化合物３の自動合成及び精製について提示する。２．５ｍｇ／Ｎａ−ｐＡＢＡを含有するＭｅＣＮ／ＰＢＳ精製溶液の調合によって、ＥＯＳ収率は顕著な増加したが、ＥＯＳ ＲＣＰは依然として低く、高ＲＡＣの影響を受けやすい（２５ｍＬの製剤で、ＲＡＣが６６０ＭＢｑ／ｍＬのときのＲＣＰ＝８９％、ＲＡＣが８４４ＭＢｑ／ｍｌのときのＲＣＰ＝８５％）。ＥＯＳ時の高いＲＡＣは、精製プロセスの後段でのカートリッジでさらに高いＲＡＣを示す。ＲＣＰは、放射性トレーサー溶液のＮａ−ｐＡＢＡ含有量を５ｍｇ／ｍＬに増加することによってさらに向上して８９〜９１％となった。ｐＡＢＡ洗浄溶液にＨＣｌを添加してそのｐＨを４とすることによって、ＲＣＰはさらに向上した。エタノール（２％）を放射性トレーサー溶液及び洗浄溶液に添加することによって、ＲＣＰはさらに向上して＞９２％となった。例７のプロセスは、ペプチド関連不純物の８５％及び本質的にすべてのアニリンを除去する（精製前の粗生成物中に存在する１０００００μｇのアニリンのうち残存していたのは２０μｇであった）。ｐＡＢＡ及びエタノールの添加は、化学不純物の除去に関するＳＰＥ精製の性能に悪影響を与えなかった。

【0072】

【表1】

略語
慣用の一文字又は三文字アミノ酸略語を使用する。
Ａｃ：アセチル
Ａｃｍ：アセトアミドメチル
ＡＣＮ又はＭｅＣＮ：アセトニトリル
ＡｃＯＨ：酢酸
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
ＢＴＭ：生体ターゲティングペプチド
ｔＢｕ：第三ブチル
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
Ｅｅｉ：エトキシエチリデン
Ｅｅｉ−ＡＯＡｃ−ＯＳｕ：Ｎ−（１−エトキシエチリデン）−２−アミノオキシ酢酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル
ＥＯＳ：合成終了時
ＦＢＡ：４−フルオロベンズアルデヒド
Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメトキシカルボニル
ＨＢＴＵ：Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＭＷ：分子量
ＮＨＳ：Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド
ＮＭＭ：Ｎ−メチルモルホリン
ＮＭＰ：１−メチル−２−ピロリジノン
Ｐｂｆ：２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル
ＲＡＣ：放射能濃度
ＲＣＰ：放射化学的純度
ＲＰ−ＨＰＬＣ：逆相高速液体クロマトグラフィー
ｔＢｕ：ｔｅｒｔ−ブチル
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＩＳ：トリイソプロピルシラン
Ｔｒｔ：トリチル。

【0073】

例１：ペプチド１の合成。

【0074】

ステップ（ａ）：保護前駆体線状ペプチドの合成
前駆体線状ペプチドは、構造：Ａｃ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂を有する。

【0075】

０．１ｍｍｏｌのＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ Ｎｏｖａｇｅｌ樹脂から出発してＦｍｏｃ化学を使用してＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ４３３Ａペプチド合成装置で、ペプチジル樹脂Ｈ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｈｒ（ψ^Me,Meｐｒｏ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ポリマーを構築した。カップリングステップでは、過剰の１ｍｍｏｌ予備活性化アミノ酸（ＨＢＴＵを使用）をアプライした。Ｇｌｕ−Ｔｈｒシュードプロリン（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ ０５−２０−１１２２）を配列に組み込んだ。樹脂を窒素バブラー装置に移し、ＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解した無水酢酸（１ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（１ｍｍｏｌ）の溶液で６０分間処理した。無水物溶液を濾過により除去し、樹脂をＤＣＭで洗浄し、窒素気流下で乾燥した。

【0076】

２．５％のＴＩＳ、２．５％の４−チオクレゾール及び２．５％の水を含有するＴＦＡ（１０ｍＬ）中で、側鎖保護基の同時除去及び樹脂からのペプチドの切断を２時間３０分行った。樹脂を濾過により除去し、ＴＦＡを減圧除去し、残渣にジエチルエーテルを添加した。生じた沈殿をジエチルエーテルで洗浄し、風乾して２６４ｍｇの粗ペプチドを得た。

【0077】

分取ＨＰＬＣ（勾配：２０〜３０％Ｂ、４０分間、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３０分）によって粗ペプチドを精製して、１００ｍｇの純粋なペプチド１線状前駆体を得た。分析ＨＰＬＣ（勾配：１０〜４０％Ｂ、１０分間、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ ２１４ｎｍ、生成物の保持時間：６．５４分）によって、純粋な生成物を分析した。エレクトロスプレー質量分析を使用して、生成物の追加の特性確認を行った（ＭＨ₂²⁺計算値：１４６４．６、ＭＨ₂²⁺実測値：１４６５．１）。

【0078】

ステップ（ｂ）：単環式Ｃｙｓ４−１６ジスルフィド架橋の形成
Ｃｙｓ４−１６；Ａｃ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂
ステップ（ａ）の線状前駆体（１００ｍｇ）を５％ＤＭＳＯ／水（２００ｍＬ）に溶解し、アンモニアを用いて溶液をｐＨ６に調整した。反応混合物を５日間撹拌した。次いで、ＴＦＡを使用してこの溶液をｐＨ２に調整し、真空中で蒸発によって溶媒の大半を除去した。生成物の精製のため、残留物（４０ｍＬ）を分取ＨＰＬＣカラムに少しずつ注入した。

【0079】

分取ＨＰＬＣ（勾配：０％Ｂで１０分間、次いで０〜４０％Ｂで４０分間、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ ２１４ｎｍ、生成物の保持時間：４４分）によって残留物を精製して、７２ｍｇの純粋なペプチド１単環式前駆体を得た。分析ＨＰＬＣ（勾配：１０〜４０％Ｂ、１０分間、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ ２１４ｎｍ、生成物の保持時間：５．３７分間（Ｐ１）；５．６１分間（Ｐ２）；６．０５分間（Ｐ３））によって、純粋な生成物（異性体Ｐ１〜Ｐ３の混合物）を分析した。エレクトロスプレー質量分析を使用して、生成物の追加の特性確認を行った（ＭＨ₂²⁺計算値：１４６３．６、ＭＨ₂²⁺実測値：１４６４．１ Ｐ１）；１４６４．４（Ｐ２）；１４６４．３（Ｐ３））。

【0080】

ステップ（ｃ）：第２のＣｙｓ６−１４ジスルフィド架橋（ペプチド１）の形成
窒素雰囲気下で、工程（ｂ）の単環式前駆体（７２ｍｇ）を７５％ＡｃＯＨ／水（７２ｍＬ）に溶解した。１Ｍ ＨＣｌ（７．２ｍＬ）及び０．０５Ｍ Ｉ₂のＡｃＯＨ（４．８ｍＬ）溶液をこの順に添加し、混合物を４５分間撹拌した。１Ｍアスコルビン酸（１ｍＬ）を添加して、無色の混合物を得た。溶媒の大半を真空中で蒸発させ、残留物（１８ｍＬ）を水／０．１％ＴＦＡ（４ｍＬ）で希釈し、分取ＨＰＬＣを使用して生成物を精製した。分取ＨＰＬＣ（勾配：０％Ｂで１０分間、次いで２０〜３０％Ｂで４０分間、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ ２１４ｎｍ、生成物の保持時間：４３〜５３分）によって残留物を精製して、５２ｍｇの純粋なペプチド１を得た。分析ＨＰＬＣ（勾配：１０〜４０％Ｂ、１０分間、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ ２１４ｎｍ、生成物の保持時間：６．５４分）によって、純粋な生成物を分析した。エレクトロスプレー質量分析を使用して、生成物の追加の特性確認を行った（ＭＨ₂²⁺計算値：１３９１．５、ＭＨ₂²⁺実測値：１３９２．５）。

【0081】

例２：化合物２の合成、精製及び凍結乾燥
ペプチド１（０．７９７ｇ）及びＥｅｉ−ＡＯＡｃ−ＯＳｕ（ＩＲＩＳ Ｂｉｏｔｅｃｈ；１２７ｍｇ）をＤＭＦ（１２ｍＬ）に溶解した。ＤＩＰＥＡ（１００μＬ）を添加し、反応混合物を２６分間振盪した。ＤＩＰＥＡ（８０μＬ）の第２のアリコートを添加し、反応混合物を２時間振盪した。次いで、１０％ＡＣＮ／水／０．ｌ％酢酸アンモニウム（４０ｍＬ）で反応混合物を希釈し、Ａ＝０．１％ＴＦＡ／水及びＢ＝ＡＣＮ（２０〜４０％Ｂ、４０分間の勾配溶出）を使用して分取ＨＰＬＣによって精製した。純粋な生成物を含有する画分（化合物１と化合物２の混合物が存在する）をフラスコにプールし、アルゴンでフラスコをフラッシュした。この溶液を一晩撹拌して、Ｅｅｉ保護基を完全に除去した。脱保護生成物を凍結乾燥して、５５０ｍｇ（収率６９％）の化合物２を得た。

【0082】

分析ＬＣ−ＭＳ（勾配：１０〜４０％Ｂ、５分間、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ ＴＦＡ、流速：０．６ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）２０×２ｍｍ、検出：ＵＶ ２１４ｎｍ、生成物の保持時間：３．００分）によって、純粋な生成物を分析した。ＭＨ₂²⁺計算値：１４２８．１、ＭＨ₂²⁺実測値：１４２７．９）。

例３：［¹⁸Ｆ］−フルオロベンズアルデヒド（¹⁸Ｆ−ＦＢＡ）の放射性合成
銀標的を有するＧＥＭＳ ＰＥＴｔｒａｃｅサイクロトロンを用いた［¹⁸Ｏ］（ｐ，ｎ）［¹⁸Ｆ］核反応によって［¹⁸Ｆ］−フッ化物を生成させた。３．２〜４．８ｍＬの全目標体積を使用した。放射性フッ化物を（炭酸塩でプレコンディショニングした）Ｗａｔｅｒｓ ＱＭＡカートリッジ上に捕捉し、水（８００μＬ）及びアセトニトリル（２００μＬ）中のＫｒｙｐｔｏｆｉｘ_2.2.2.（５．１４ｍｇ）及び重炭酸カリウム（１．４０ｍｇ）の溶液でフッ化物を溶出した。この溶液を、窒素を使用してＱＭＡカートリッジから反応容器に移した。定常窒素気流及び真空下、［¹⁸Ｆ］−フッ化物を１２０℃で９分間乾燥させた。ＤＭＳＯ（２．０ｍＬ）中のトリメチルアンモニウムベンズアルデヒドトリフレート［前駆体１；Ｈａｋａ他，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，２７，８２３−８３３（１９８９）］（３．７ｍｇ）を乾燥［¹⁸Ｆ］−フッ化物に添加し、混合物を８０℃で２分間加熱して、４−［¹⁸Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドを生成させた。

【0083】

例４：化合物３の放射性合成（比較例）
例２の化合物２を、例３の¹⁸Ｆ−ＦＢＡを使用して¹⁸Ｆで放射標識し、次いで本発明のインプロセス放射線安定化を使用せずに、ＭＣＸ＋ＳＰＥカラムを使用して精製して、ＲＣＰが７９％の化合物３を得た。

【0084】

例５：低ＲＣＰ化合物３における放射化学的不純物
例３の通り調製した化合物３のＲＣＰを時間の関数として調べた。ＲＣＰは、時間が経過しても（最大８時間）それ以上低下せず、
（ｉ）化合物３は、ＳＰＥプロセス終了時に存在するＲＡＣ条件で比較的放射線安定性であること、
（ｉｉ）ＲＣＰはＳＰＥプロセス終了時に既に低下していることを示していた。

【0085】

例４の化合物３（つまり本発明の放射線安定化方法を使用せず、低いＲＣＰ（７９％）を示すもの）の分析から、２種類の放射線分解生成物が低ＲＣＰの主な原因であることが判明した。これらは、分析ＨＰＬＣにおける保持時間及び非放射性アナログの基準試料の保持時間との比較によって同定された。これら２種類の放射線分解生成物は、［¹⁸Ｆ］４−フルオロベンズアルデヒド（ＦＢＡ）及び［¹⁸Ｆ］４−フルオロベンゾニトリル（ＦＰｈＣＮ）であり、これらは合計で、例４の低ＲＣＰの化合物３の標品に存在する放射能の１２％をなしていた。

【0086】

これらの時間が経過してもさほど増加しない主要な放射化学的不純物は、化合物３の放射線分解生成物及びひいてはインプロセス放射線分解を代表する。

【0087】

例６：化合物３の精製におけるＳＰＥ溶出プロファイル
ＦＡＳＴｌａｂカセットに沿って６個の放射能検出器を配置し、６番目の検出器は、例７による調製のＳＰＥカラムの底に配置した。こうして、ＳＰＥ精製プロセスのローディング、洗浄及び溶出ステップの際の放射能の動向を追跡した。

【0088】

結果を図１に示す。粗生成物は、ＳＰＥカートリッジの上端に捕捉されることが判明した。精製の進行に伴って、放射能はカートリッジを下って、高い番号の検出器に向かって移動し、それらのシグナルが増大した。これは、放射能がカートリッジ全体に広がらずに、密なバンドに濃縮されることを示している。精製時、すべての放射能が１ｍＬ未満の体積に濃縮され、精製中（１２〜１４分）のＲＣＡは４５０００ＭＢｑ／ｍＬつまり４５ＧＢｑ／ｍＬであった。

【0089】

例７：化合物３の自動合成及び精製
カセット付きのＦＡＳＴｌａｂ自動合成装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製）を使用した。ｔＣ１８カートリッジはＷａｔｅｒｓ社（住所は上記の通り）から入手した。前駆体１はＦａｓｔｌａｂ上で例３に従って［¹⁸Ｆ］−フッ化物と反応させ、［¹⁸Ｆ］−ＦＢＡを得た。［¹⁸Ｆ］−ＦＢＡを次いでＦａｓｔＬａｂ上で化合物２（ペプチド１のアミノオキシ誘導体）と反応させて、粗化合物３を得た。

【0090】

精製
カセットの構成を図２に示す。３個の外部溶媒バイアルをＳＰＥ精製用カセットで使用した。
位置１７＝無水エタノール；
位置１８＝７９ｇＰＢＳ／１６．５ｇＭｅＣＮ中５ｍｇ／ｍＬのＮａ−ｐＡＢＡ及び２％ＥｔＯＨの洗浄溶液、ＨＣｌでｐＨ４に調整；
位置２０＝８０ｍｇのＮａ−ｐＡＢＡを含有する３４ｍＬＰＢＳの配合用緩衝液。

【0091】

他のカセット位置：
位置２１：位置２２のｔＣ１８カートリッジへの配管；
位置２２：ｔＣ１８カートリッジ（９００ｍｇ）；
位置２３：滅菌フィルター。

【0092】

ＦＡＳＴｌａｂ手順
以下、Ｐ１７などはカセットの位置１７をいう。Ｓ２及びＳ３は注射器２及び注射器３をいう。
（ｉ）精製プロセスの最初の部分は、Ｐ１７からエタノールを完全に充填したＳ２でコンディショニングし、次いでＰ１８からＭｅＣＮ／ＰＢＳ溶液を完全に充填したＳ２でコンディショニングすることであった。
（ｉｉ）連結ステップ由来のエタノール水溶液溶液中の粗化合物３を、Ｐ２０から配合用緩衝液で１：１に希釈した。これは２つの部分で実施した：反応容器の粗生成内容物の半分をＳ２に移し、次いでＰ２０からの同量の配合用緩衝液と混合した。この混合物を、次いで、ｔＣ１８カートリッジにゆっくりと捕捉した。初回の捕捉後、粗生成物の残りの半分に同じ手順を繰り返した。
（ｉｉｉ）Ｓ２を水で濯ぎ、次いでＰ１８からＭｅＣＮ洗浄溶液でＳ２を完全に充填した。ＭｅＣＮ洗浄溶液を、ｔＣ１８カートリッジを通してゆっくりと押出し、廃棄した。これをさらに５回繰返し、かかる洗浄を合計６回行った（注：Ｅｅｉ保護基での合成では、合計３回の洗浄しか必要とされなかった。）。
（ｉｖ）ｔＣ１８カートリッジのＭｅＣＮを溶媒交換により除去した。まずＰ２０から配合用緩衝液でＳ２を２回完全に充填し、その後ウォーターバッグからの水で１回Ｓ２を完全に充填した。
（ｖ）溶出液を、Ｐ１７からの３ｍＬのエタノールとＰ２０からの３ｍＬの配合用緩衝液とをＳ２で混合することによって調製した。溶出液の最初の１ｍＬをｔＣ１８に通して廃棄し、次いで４ｍＬの溶出液をｔＣ１８に通し、精製化合物３をＳ３に回収した。溶出後、生成物をＦＡＳＴｌａｂからＰ１９を通して製品バイアルに移動させた。

【0093】

この例での放射化学的純度（ＲＣＰ）は９２％であった。

【図1】

【図2】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]