特許 6827113 シェーグレン症候群の治療におけるペオニフロリン−６’−Ｏ−ベンゼンスルホン酸の使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6827113

(24)【登録日】2021年1月20日

(45)【発行日】2021年2月10日

(54)【発明の名称】シェーグレン症候群の治療におけるペオニフロリン−６’−Ｏ−ベンゼンスルホン酸の使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/7048 20060101AFI20210128BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20210128BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20210128BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/7048

   A61P37/06

   A61K45/00

【請求項の数】9

【全頁数】22

(21)【出願番号】特願2019-527134(P2019-527134)

(86)(22)【出願日】2017年2月14日

(65)【公表番号】特表2019-537615(P2019-537615A)

(43)【公表日】2019年12月26日

(86)【国際出願番号】CN2017073540

(87)【国際公開番号】WO2018133139

(87)【国際公開日】20180726

【審査請求日】2019年5月17日

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2017/071998

(32)【優先日】2017年1月21日

(33)【優先権主張国】CN

(73)【特許権者】

【識別番号】520169753

【氏名又は名称】広州白雲山漢方現代薬業有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＧＵＡＮＧＺＨＯＵ ＨＡＮＦＡＮＧ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．，ＬＴＤ．

(74)【代理人】

【識別番号】110001139

【氏名又は名称】ＳＫ特許業務法人

(74)【代理人】

【識別番号】100130328

【弁理士】

【氏名又は名称】奥野 彰彦

(74)【代理人】

【識別番号】100130672

【弁理士】

【氏名又は名称】伊藤 寛之

(72)【発明者】

【氏名】魏偉

(72)【発明者】

【氏名】呉華勲

(72)【発明者】

【氏名】顧芳

(72)【発明者】

【氏名】徐軍

(72)【発明者】

【氏名】謝宏偉

(72)【発明者】

【氏名】徐広

(72)【発明者】

【氏名】付劼

(72)【発明者】

【氏名】王学政

【審査官】 鶴見 秀紀

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１６−５３９９２７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００７−１７６９０６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許出願公開第２０１４／０１８７５９９（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 米国特許出願公開第２０１３／０００４４９１（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 International Immunopharmacology，２０１５年，Vol.28，pp.115-120

【文献】 International Immunopharmacology，２０１６年，Vol.30，pp.27-35

【文献】 Journal of Ethnopharmacology，２０１６年，Vol.189，pp.194-201

【文献】 Acta Pharmacologica Sinica，２０１３年，Vol.34,Supplement，p.90

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３１／００−３１／８０

Ａ６１Ｋ ４５／００

Ａ６１Ｐ ３７／０６

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ペオニフロリン−６'−Ｏ−ベンゼンスルホン酸を含む、哺乳類のシェーグレン症候群の治療薬。

【請求項2】

ペオニフロリン−６'−Ｏ−ベンゼンスルホン酸の投与量が１７．５ｍｇ/ｋｇ〜７０ｍｇ/ｋｇであることを特徴とする請求項１に記載の哺乳類のシェーグレン症候群の治療薬。

【請求項3】

ペオニフロリン−６'−Ｏ−ベンゼンスルホン酸の投与量が１７．５ｍｇ/ｋｇ〜３５ｍｇ/ｋｇであることを特徴とする請求項１に記載の哺乳類のシェーグレン症候群の治療薬。

【請求項4】

ペオニフロリン−６'−Ｏ−ベンゼンスルホン酸の投与量が１７．５ｍｇ/ｋｇであることを特徴とする請求項１に記載の哺乳類のシェーグレン症候群の治療薬。

【請求項5】

前記治療薬は、ペオニフロリン−６'−Ｏ−ベンゼンスルホン酸に加えて、他の治療薬を含む併用薬であることを特徴とする請求項１〜請求項４の何れか１つに記載の哺乳類のシェーグレン症候群の治療薬。

【請求項6】

前記他の治療薬は、自己免疫疾患の治療薬、他のシェーグレン症候群の治療薬、及びシェーグレン症候群の治療に促進作用を有する治療薬から選択される１種または複数種であることを特徴とする請求項５に記載の哺乳類のシェーグレン症候群の治療薬。

【請求項7】

前記自己免疫疾患の治療薬は、
Ｈｕｍｉｒａ（ヒュミラ，アダリムマブ）、Ｅｎｂｒｅｌ（エンブレル，エタネルセプト）、Ｒｅｍｉｃａｄｅ（レミケード，インフリキシマブ）、Ｓｉｍｐｏｎｉ（ｇｏｌｉｍｕｍａｂ，ゴリムマブ）、Ｃｉｍｚｉａ（Ｃｅｒｔｏｌｉｚｕｍａｂ ｐｅｇｏｌ，セルトリズマブ ペゴル）、エタネルセプトを含むＴＮＦαターゲットに作用する生物学的製剤；
Ａｃｔｅｍｒａ（Ｏｃｉｌｉｚｕｍａｂ，トシリズマブ）、Ｏｒｅｎｃｉａ（Ａｂａｔａｃｅｐｔ，アバタセプト）、Ｓｔｅｌａｒａ（ｕｓｔｅｋｉｎｕｍａｂ）を含む他の自己免疫疾疾患の治療に用いる生物学的製剤；
Ｘｅｌｊａｎｚ（Ｔｏｆａｃｉｔｉｎｉｂ，トファシチニブ）、Ｂａｒｉｃｉｔｉｎｉｂ（バリシチニブ）を含むＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＴＹＫ２等のターゲットに作用するＪＡＫ阻害剤；
Ｏｔｅｚｌａ（Ａｐｒｅｍｉｌａｓｔ，アプレミラスト）を含む選択的ホスホジエステラーゼ４（ＰＤＥ４）阻害剤から選択される1種または複数種であることを特徴とする請求項６に記載の哺乳類のシェーグレン症候群の治療薬。

【請求項8】

前記他のシェーグレン症候群の治療薬は、
ピロカルピン、シクロスポリン、シクロペンチルケトン、セビメリン、人工涙液を含む局所乾燥症状を緩和する治療薬；
メトトレキサート、レフルノミド、シクロホスファミド、アザチオプリン、クロヅル、タクロリムス、ミコフェノール酸モフェチルを含む全身治療に用いる免疫阻害剤；
プレドニゾン、メチルプレドニゾロンを含む糖質コルチコイド類治療薬；及び
ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、抗ＣＤ２０を含む他の自己免疫疾患の治療薬から選択される1種または複数種であることを特徴とする請求項６に記載の哺乳類のシェーグレン症候群の治療薬。

【請求項9】

前記併用薬におけるペオニフロリン−６'−Ｏ−ベンゼンスルホン酸及び他の治療薬は、併用して投与されるか、或いは、それぞれ独立して同時または順次に投与されることを特徴とする請求項５に記載の哺乳類のシェーグレン症候群の治療薬。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は医療分野に関し、特に、シェーグレン症候群の治療におけるペオニフロリン−６'−Ｏ−ベンゼンスルホン酸の使用に関する。

【背景技術】

【0002】

シェーグレン症候群（Ｓｊｏｇｒｅｎ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ， ＳＳ）は、唾液腺と涙腺を侵入することを特徴とする慢性炎症性自己免疫疾患であり、上記疾患の主な病理学的特徴は、Ｂリンパ球機能亢進とＴ細胞抑制機能低下である。シェーグレン症候群は、複数要因が総合的に作用する疾患であり、その発病原因は遺伝的環境、ウイルス要因及び免疫学要因と関連する可能性がある。シェーグレン症候群（ｐｒｉｍａｒｙ Ｓｊｏｇｒｅｎ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ， ｐＳＳ）は世界的疾患であり、中国での発病率は０．３３％〜０．７７％であり、女性と高齢者によく発生し、男女割合は約１：９〜１：２０である。口渇、ドライアイは、上記疾患の典型的な臨床症状であり、一部の患者には慢性おたふく風邪と後期のランパントカリエスが発生する。それ以外には、その他異型全身症状と全身ダメージを含み、例えば、一般的な関節痛、腎臓損害と肺病変などがある。

【0003】

シェーグレン症候群の治療に関しては、臨床的に主に症状緩和と全身治療２種類の薬品を含む。人工唾液或は人工涙液の代替治療は局所乾燥症状を軽減できる。Ｍ３受容体アゴニスト、例えば、ピロカルピン（ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ）或はセビメリン（ｃｅｖｉｍｅｌｉｎｅ）は、唾液腺、涙腺受容体を刺激することにより、唾液と涙液を産生させ、患者の口渇、ドライアイの症状を顕著に改善することができる。適切な投与量の糖質コルチコイドは損害を受けた組織臓器を保護し、全身性炎症反応を軽減する。免疫阻害剤、例えば、ヒドロキシクロロキン（ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ, ＨＣＱ）は、炎症性免疫反応を抑制し、外分泌腺の炎症性浸潤を減らし、損傷した外分泌腺と臓器機能を保護する。

【0004】

人工代替品（例えば、人工唾液）は長期的に口腔を乾燥清潔な環境を維持することが困難である。Ｍ３受容体アゴニストの治療効果は外分泌腺の症状に対して一定の緩和作用があるだけで、免疫阻害剤は免疫反応を抑制する同時に、たくさんの副作用がある。これら症状の改善と代替治療の薬品は、上記疾患により発生した臓器の損害を根本的に解決できず、また、免疫阻害剤などの副作用があるため、現在、臨床診療では良好な治療効果と少ない副作用を有する薬品が欠けている。

【発明の概要】

【0005】

本発明の目的はシェーグレン症候群の治療に用いる物質を提供することであり、前記物質はペオニフロリン−６'−Ｏ−ベンゼンスルホン酸（Ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ−６'−０−ｂｅｎｚｅｎｅ ｓｕｌｆｏｎａｔｅ，略語ＣＰ−２５）であり、シャクヤクからペオニフロリン（Ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ，Ｐａｅ）を抽出し、ペオニフロリンの構造を変化させることにより得た化合物である。その抗炎症開始時間及び作用効力は、シャクヤクの総グルコシド及びペオニフロリンよりはるかに優れる。

【0006】

ペオニフロリン6'-O-ベンゼンスルホン酸の分子量は６２０．６２であり、分子式はＣ_２９Ｈ_３２Ｏ_１３Ｓであり、化学構造は下記の式Iに示すようである。

【0007】

（式I）

【0008】

本発明の第１観点は、哺乳類のシェーグレン症候群の治療薬の製造におけるペオニフロリン−６'−Ｏ−ベンゼンスルホン酸の使用に関する。

【0009】

本発明の第２観点は、第１観点の使用に関し、ペオニフロリン−６'−Ｏ−ベンゼンスルホン酸の投与量が１７．５ｍｇ/ｋｇ〜７０ｍｇ/ｋｇであることを特徴とする。

【0010】

本発明の第３観点は、第１観点の使用に関し、ペオニフロリン−６'−Ｏ−ベンゼンスルホン酸の投与量が１７．５ｍｇ/ｋｇ〜３５ｍｇ/ｋｇであることを特徴とする。

【0011】

本発明の第４観点は、第１観点の使用に関し、ペオニフロリン−６'−Ｏ−ベンゼンスルホン酸の投与量が１７．５ｍｇ/ｋｇであることを特徴とする。

【0012】

本発明の第５観点は、第１〜第４観点のうちいずれか一つの使用に関し、前記薬品は、ペオニフロリン−６'−Ｏ−ベンゼンスルホン酸に加えて、他の薬品を含む併用薬であることを特徴とする。

【0013】

本発明の第６観点は、第５観点の使用に関し、前記他の薬品は、自己免疫疾患の治療薬、他のシェーグレン症候群の治療薬、及びシェーグレン症候群の治療に促進作用を有する薬品から選択される１種または複数種である。

【0014】

本発明の第７観点は、第６観点の使用に関し、前記自己免疫疾患薬品は、
ＴＮＦαターゲットに作用する生物学的製剤、例えば、Ｈｕｍｉｒａ（ヒュミラ，アダリムマブ）、Ｅｎｂｒｅｌ（エンブレル，エタネルセプト）、Ｒｅｍｉｃａｄｅ（レミケード，インフリキシマブ）、Ｓｉｍｐｏｎｉ（ｇｏｌｉｍｕｍａｂ，ゴリムマブ）、Ｃｉｍｚｉａ（Ｃｅｒｔｏｌｉｚｕｍａｂ ｐｅｇｏｌ，セルトリズマブ ペゴル）、エタネルセプト；
その他自己免疫疾疾患の治療に用いる生物学的製剤、例えば、Ａｃｔｅｍｒａ（Ｏｃｉｌｉｚｕｍａｂ，トシリズマブ）、Ｏｒｅｎｃｉａ（Ａｂａｔａｃｅｐｔ，アバタセプト）、Ｓｔｅｌａｒａ（ｕｓｔｅｋｉｎｕｍａｂ）；
ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＴＹＫ２等のターゲットに作用するＪＡＫ阻害剤、例えば、Ｘｅｌｊａｎｚ（Ｔｏｆａｃｉｔｉｎｉｂ，トファシチニブ）、Ｂａｒｉｃｉｔｉｎｉｂ（バリシチニブ）；
選択的ホスホジエステラーゼ４（ＰＤＥ４）阻害剤、例えば、Ｏｔｅｚｌａ（Ａｐｒｅｍｉｌａｓｔ，アプレミラスト）から選択される1種または複数種である。

【0015】

本発明の第８観点は、第６観点の使用に関し、前記他のシェーグレン症候群の治療薬は、
局所乾燥症状を緩和する薬品、例えば、ピロカルピン、シクロスポリン、シクロペンチルケトン、セビメリン、人工涙液；
全身治療に用いる免疫阻害剤、例えば、メトトレキサート、レフルノミド、シクロホスファミド、アザチオプリン、クロヅル、タクロリムス、ミコフェノール酸モフェチル；
糖質コルチコイド類薬品、例えば、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン；及び
その他自己免疫疾患の薬品、例えば、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、抗ＣＤ２０から選択される1種または複数種である。

【0016】

本発明の第９観点は、第６観点の使用に関し、前記シェーグレン症候群の治療に促進作用を有する薬品は、以下の特許/出願に記載されている物質から選択される1種または複数種：ＷＯ２０１６２０４４２９（Ａ１）、ＣＡ２９５０８９３（Ａ１）、ＫＲ２０１６０１２６７３４（Ａ）、ＨＫ１２１６９９４（Ａ１）、ＵＳ２０１６３６２４６２（Ａ１）、ＵＳ２０１６３６１４０７（Ａ１）、ＵＳ２０１６３６１３６０（Ａ１）、ＵＳ２０１６３６１４２８（Ａ１）、ＵＳ２０１６３６１３００（Ａ１）、ＷＯ２０１６２００４４７（Ａ１）、ＣＡ２９５０４２３（Ａ１）、ＵＳ２０１６３４８０７２（Ａ１）、ＵＳ２０１５０６５３５２（Ａ１）、ＵＳ９５１２４８７（Ｂ２）、ＵＳ２０１６３５６７８８（Ａ１）、ＵＳ２０１６３５５５９１（Ａ１）、ＵＳ２０１６３５５４６４（Ａ１）、ＵＳ２０１６３５４４３７（Ａ１）、ＴＷ２０１６３２５５９（Ａ）、ＴＷ２０１６３０９３８（Ａ）、ＴＷ２０１６３０８８０（Ａ）、ＷＯ２０１６１９６４２９（Ａ１）、ＷＯ２０１６１９６３９３（Ａ２）、ＭＤ２０１６００６９（Ａ２）、ＣＡ２９４９９６６（Ａ１）、ＵＳ２０１６３４６３２８（Ａ１）、ＵＳ２０１６３４６３５５（Ａ１）、ＵＳ２０１６３４５５４７（Ａ１）、ＮＺ７０２４５８（Ａ）、ＷＯ２０１６１９１５４５（Ａ１）、ＷＯ２０１６１９０６３０（Ａ１）、ＷＯ２０１６１９１６３４（Ａ１）、ＡＵ２０１５２５３９１５（Ａ１）、ＡＵ２０１５２４４０２５（Ａ１）、ＡＵ２０１５２５４８１８（Ａ１）、ＡＵ２０１５２５４０３７（Ａ１）、ＵＳ２０１６３３９０５３（Ａ１）、ＵＳ２０１６３３９０４９（Ａ１）、ＵＳ２０１６３４０３３７（Ａ１）、ＵＳ２０１６３３８９８４（Ａ１）、ＵＳ２０１６３３８９５３（Ａ１）、ＷＯ２０１６１８５４７６（Ａ１）、ＨＲＰ２０１６１１９１（Ｔ１）、ＲＵ２６０１４１０（Ｃ１）、ＵＳ２０１６３３３０８９（Ａ１）、ＵＳ２０１６３３３１０３（Ａ１）、ＵＳ２０１６３３３４０９（Ａ１）、ＵＳ２０１６３３１８３４（Ａ１）、ＵＳ２０１６３３１８１６（Ａ１）、ＡＵ２０１６２５０３７２（Ａ１）、ＡＵ２０１６２４７１８２（Ａ１）。

【0017】

本発明の第１０観点は、第５観点の使用に関し、前記併用薬におけるペオニフロリン−６'−Ｏ−ベンゼンスルホン酸及び他の薬品は、併用して投与されるか、或いは、それぞれ独立して同時または順次に投与される。

【0018】

本発明は、事前にランダムにグループ化した各グループのシェーグレン症候群モデルマウスに、低（１７．５ｍｇ/ｋｇ）、中（３５ｍｇ/ｋｇ）、高（７０ｍｇ/ｋｇ）三つの投与量勾配のＣＰ−２５を、胃内投与の方法により2週間投与した。投与前、投与１週間目、投与２週間目に、マウスの摂水量、唾液量と顎下腺病理及び評価を測定した。各グループにおいて薬投与前後の各指標の変化を比較し、ＣＰ−２５のシェーグレン症候群の治療に対する効果を評価した。

【0019】

動物実験：
シェーグレン症候群モデルマウス：モデル作製に成功したＳＰＦレベル環境でのＣ５７ＢＬ/６雌マウス（同種類マウスの顎下腺抗原を複数回尾背側皮内複数箇所注射することにより動物モデルを作製した）。

【0020】

モデルの構築及びグループ化：
同種類マウスの顎下腺ホモジネートを複数回尾背側皮内複数箇所注射することにより作製した動物モデルを、マウスの総合状況に従い、ランダムに各グループへ分配し、できるだけ各グループマウスの体重状態が類似することを保証した。

【0021】

ペオニフロリン−６'−Ｏ−ベンゼンスルホン酸の調剤及び投与：
生体内投与前にペオニフロリン−６'−Ｏ−ベンゼンスルホン酸（白色の結晶性粉末、純度は９８．５％）を微量エタノールで溶かし（４０μＬエタノールごとに本製品７５ｍｇを溶かす）、その後カルボキシメチルセルロースナトリウムを添加して懸濁液を作製し、それぞれ低（１７．５ｍｇ/ｋｇ）、中（３５ｍｇ/ｋｇ）、高（７０ｍｇ/ｋｇ）の3つの投与量勾配の本製品を調整し、４℃冷蔵庫に保管した。高投与量の本製品は、使用前に半時間インキュベーションする必要がある。

【0022】

摂水量指標の検出：
投与群マウスの摂水量は、投与前に増加する傾向を示し、投与１週間後から摂水量が減少する現象が見えたが、モデル群は常に増加する傾向を見せた。

【0023】

唾液量指標の検出：
測定前に２．４％のペントバルビタールナトリウム０．０５ｍｌをマウスの腹腔内に注射し、安定した呼吸、角膜反射の消失、四肢の筋肉の弛緩を麻酔の基準とした。完全麻酔後、マウスの頭を少し傾けた状態にし（ヒーターを使用して温度を上げ、腹腔内注射０．０２５ｍｇ/ｍｌのピロカルピン溶液を０．１ｍｌ腹腔内注射し、５ｍｉｎ後、事前に計量した綿球をマウスの口中に置き、１０ｍｉｎ後取り出した。湿重量法によりマウス唾液重量を算出した。モデル群マウスの唾液量は顕著に減少し、投与後１週間、２週間後、治療群マウスの唾液量は顕著に回復した。

【0024】

顎下腺組織病理学的検出：
投与2週間後マウスを殺し、各群から４匹のマウスを取って顎下腺の病理検査を行った。顎下腺の処理は、まず１０％のホルマリンに２４ｈ浸した後、順番に洗浄、脱水と透明化、蝋浸、包埋、パラフィン切片及び最終的なHE染色を行った。モデル群顎下腺には異なる程度のリンパ球の浸潤が存在し、徐々に増加したが、投与群は病理変化を顕著に改善できた。結果に対して病理学的各付を行う。

【0025】

本発明の利点：
本発明者は以下のような予想外の発見をした。本発明のペオニフロリン−６'−Ｏ−ベンゼンスルホン酸は、従来薬品の投与量よりはるかに低い薬物の用量で同様またはより良いシェーグレン症候群の治療有効性を達成し、副作用を大幅に低減し、患者の服薬コンプライアンスを顕著に上昇させることにより、優れた治療効果を得ることができた。

【図面の簡単な説明】

【0026】

【図1】ＣＰ−２５のＳＳモデルマウスの顎下腺の病理に対する影響を示す（ＨＥ×１００）図である。Ａ：対照群；Ｂ：モデル群；Ｃ：ＣＰ−２５低投与量群；Ｄ：ＣＰ−２５中投与量群；Ｅ：ＣＰ−２５高投与量群；Ｆ：ＴＧＰ群；Ｇ：Ｐａｅ群；Ｈ：ＨＣＱ群。

【図2】ＣＰ−２５のＳＳモデルマウスの顎下腺の病理に対する影響を示す（ＨＥ×４００）図である。Ａ：対照群；Ｂ：モデル群；Ｃ：ＣＰ−２５低投与量群；Ｄ：ＣＰ−２５中投与量群；Ｅ：ＣＰ−２５高投与量群；Ｆ：ＴＧＰ群；Ｇ：Ｐａｅ群；Ｈ：ＨＣＱ群。

【図3】ＣＰ−２５のＳＳモデルマウスの脾臓Ｂリンパ球の増殖に対する影響を示す図である。**Ｐ<０．０１ｖｓ正常群； #Ｐ<０．０５ ， ##Ｐ<０．０１ｖｓモデル群図３に示すように、ＣＰ−２５はモデルマウスのＢリンパ球の増殖を顕著に抑制できる。

【図4】ＣＰ−２５のＳＳモデルマウスの脾臓のＣＤ４⁺ＩＬ-１７Ａ⁺Ｔリンパ球に対する影響を示す図である。*Ｐ<０．０５ｖｓ正常群；#Ｐ<０．０５ｖｓモデル群図４に示すように、ＣＰ−２５はモデルマウスのＣＤ４⁺ＩＬ-１７Ａ⁺Ｔｈ１７細胞割合を顕著に低減させる。

【図5】ＣＰ−２５のＳＳモデルマウスの脾臓のＣＤ４⁺ＣＤ２５⁺ＦＯＸＰ３⁺Ｔリンパ球に対する影響を示す図である。

【図6】ＣＰ−２５のＳＳモデルマウスの脾臓のＣＤ４⁺ＣＤ２５⁺ＦＯＸＰ３⁺Ｔリンパ球に対する影響を示す図である。**Ｐ<０．０１ｖｓ正常群; #Ｐ<０．０５ｖｓモデル群図６に示すように、ＣＰ−２５はモデルマウスの脾臓のＣＤ４⁺ＣＤ２５⁺ＦＯＸＰ３⁺Ｔｒｅｇ細胞割合を増加させる。

【図7】ＣＰ−２５のＳＳモデルマウスの脾臓のＣＤ１９⁺ＣＤ２７⁺Ｂリンパ球に対する影響を示す図である。*Ｐ<０．０５ｖｓ正常群; #Ｐ<０．０５ｖｓモデル群図７に示すように、ＣＰ−２５はモデルマウスの脾臓のＣＤ１９⁺ＣＤ２７⁺Ｂ細胞割合を顕著に増加させる。

【図8】ＣＰ−２５のＳＳモデルマウスの脾臓のＣＤ１１Ｃ⁺ＣＤ８０⁺ＤＣに対する影響を示す図である。**Ｐ<０．０１ｖｓ正常群； ^#Ｐ<０．０５ｖｓモデル群，^{# #}Ｐ<０．０１ｖｓモデル群図８に示すように、ＣＰ−２５はモデルマウスの脾臓のＣＤ１１Ｃ⁺ＤＣ表面分子ＣＤ８０⁺の発現を顕著に抑制する。

【図9】ＣＰ−２５のＳＳモデルマウスの脾臓のＣＤ１１Ｃ⁺ＭＨＣ-II⁺ＤＣに対する影響を示す図である。**Ｐ<０．０１ｖｓ正常群；^#Ｐ<０．０５ｖｓモデル群 ^##Ｐ<０．０１ｖｓモデル群図９に示すように、ＣＰ−２５はモデルマウスの脾臓のＣＤ１１Ｃ⁺ＤＣ表面分子ＭＨＣ-II⁺の発現を顕著に抑制する。

【図10】ＣＰ−２５のＮＯＤモデルマウスの顎下腺の病理に対する影響を示す（ＨＥ×１００）図である。Ａ：対照群；Ｂ：モデル群；Ｃ：ＣＰ−２５低投与量群；Ｄ：ＣＰ−２５中投与量群；Ｅ：ＣＰ−２５高投与量群；Ｆ：ＴＧＰ群；Ｇ：Ｐａｅ群；Ｈ：ＨＣＱ群。

【図11】ＣＰ−２５のＮＯＤモデルマウスの顎下腺の病理に対する影響を示す（ＨＥ×４００）図である。Ａ：対照群；Ｂ：モデル群；Ｃ：ＣＰ−２５低投与量群；Ｄ：ＣＰ−２５中投与量群；Ｅ：ＣＰ−２５高投与量群；Ｆ：ＴＧＰ群；Ｇ：Ｐａｅ群；Ｈ：ＨＣＱ群。

【図12】ＣＰ−２５のＮＯＤモデルマウスのＴ、Ｂリンパ球の増殖に対する影響を示す図である。Ａ：Ｔ細胞；Ｂ：リンパ球図１２に示すように、ＣＰ−２５はモデルマウスのＴ、Ｂリンパ球の増殖を顕著に抑制する。

【図13】ＣＰ−２５のＮＯＤモデルマウスの脾臓のＣＤ４⁺ＩＬ-１７Ａ⁺Ｔリンパ球に対する影響を示す図である。**Ｐ<０．０１ｖｓ正常群；^#Ｐ<０．０５，^##Ｐ<０．０５，ｖｓモデル群図１３に示すように、ＣＰ−２５はモデルマウスの脾臓のＣＤ４⁺ＩＬ-１７Ａ⁺Ｔｈ１７細胞割合を顕著に低減させる。

【図14】ＣＰ−２５のＮＯＤモデルマウスの脾臓のＣＤ４⁺ＣＤ２５⁺ＦＯＸＰ３⁺Ｔリンパ球に対する影響を示す図である。**Ｐ<０．０１ｖｓ正常群；^##Ｐ<０．０１ｖｓモデル群図１４に示すように、ＣＰ−２５はモデルマウスの脾臓のＣＤ４⁺ＣＤ２５⁺ＦＯＸＰ３⁺Ｔｒｅｇ細胞割合を顕著に増加させる。

【発明を実施するための形態】

【0027】

次に、具体的な実施例を用いて、本発明を詳しく説明する。

【0028】

1.分類診断基準（中華リウマチ雑誌２０１０；１４（１１）：７６６-７６８）：

【0029】

【表1】

表１ シェーグレン症候群分類基準項目

【0030】

【表2】

表２ 分類基準項目の具体的分類

【0031】

その中：抗核抗体（ＡＮＡ）陽性者は９２％；リウマトイド因子（ＲＦ）陽性者は７０％-８０％；抗ＳＳＡ/Ｒｏ抗体陽性者は７０％；抗ＳＳＢ/ＬＡ抗体陽性者は４５％；高IgE症候群患者は９０％を占める。

【0032】

2.シェーグレン症候群モデルマウス：モデル作製に成功したＳＰＦレベル環境でのＣ５７ＢＬ/６雌マウス（同種類マウスの顎下腺ホモジネートを複数回尾背側皮内複数箇所注射することにより動物モデルを作製した）

【0033】

3.機器試薬：分析天びん、電気ヒーター、眼科用ハサミ、眼科ピンセット、１ｍｌ注射器；ＣＰ−２５、カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ-ＮＡ）、２．４％ペントバルビタールナトリウム（ｐｅｎｔｏｂａｒｂｉｔａｌ ｓｏｄｉｕｍ）、０．０２５ｍｇ/ｍｌのピロカルピン（ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ）。

【0034】

4.モデルの構築及びグループ化：
同種類マウスの顎下腺ホモジネートを複数回尾背側皮内複数箇所注射することにより作製した動物モデルを、マウスの総合状況に従い、ランダムに各グループへ分配し、できるだけ各グループマウスの体重状態が類似することを保証した。

【0035】

5.ペオニフロリン−６'−Ｏ−ベンゼンスルホン酸の調剤及び投与：
生体内投与前にペオニフロリン−６'−Ｏ−ベンゼンスルホン酸（白色の結晶性粉末、純度は９８．５％）を微量エタノールで溶かし（４０μＬエタノールごとに本製品７５ｍｇを溶かす）、その後カルボキシメチルセルロースナトリウムを添加して懸濁液を作製し、それぞれ低（１７．５ｍｇ/ｋｇ）、中（３５ｍｇ/ｋｇ）、高（７０ｍｇ/ｋｇ）の3つの投与量勾配の本製品を調整し、４℃冷蔵庫に保管した。高投与量の本製品は、使用前に半時間インキュベーションする必要がある。

【0036】

6.摂水量指標の検出：
投与群マウスの摂水量は、投与前に増加する傾向を示し、投与１週間後から摂水量が減少する現象が見えたが、モデル群は常に増加する傾向を見せた。

【0037】

7.唾液量指標の検出：
測定前に２．４％のペントバルビタールナトリウム０．０５ｍｌをマウスの腹腔内に注射し、安定した呼吸、角膜反射の消失、四肢の筋肉の弛緩を麻酔の基準とした。完全麻酔後、マウスの頭を少し傾けた状態にし（ヒーターを使用して温度を上げ、腹腔内注射０．０２５ｍｇ/ｍｌのピロカルピン溶液を０．１ｍｌ腹腔内注射し、５ｍｉｎ後、事前に計量した綿球をマウスの口中に置き、１０ｍｉｎ後取り出した。湿重量法によりマウス唾液重量を算出した。モデル群マウスの唾液量は顕著に減少し、投与後１週間、２週間後、治療群マウスの唾液量は顕著に回復した。

【0038】

【表3】

表３ 異なる薬物の投与前、投与１週間目、投与２週間目の唾液量（ｍｇ/１０ｍｉｎ）

^△△Ｐ<０．０１ｖｓ正常群；^#Ｐ<０．０５，^##Ｐ<０．０１，ｖｓモデル群，*Ｐ<０．０５ｖｓＴＧＰ、Ｐａｅ、ＨＣＱ群の比較

【0039】

マウス唾液量に基づく分析によると、高投与量のＣＰ−２５はシェーグレン症候群動物モデルマウスの治療に関して、投与後１週間目に効果があることに対し、ＴＧＰ、Ｐａｅ、ＨＣＱは、投与後１週間目の時に顕著な作用が見られなかった。投与時間の伸びに伴い、２週間後、ＣＰ−２５の効果はさらに顕著になった。これは、ＣＰ−２５がシェーグレン症候群の治療に対して効果が早くて効能が良いことを示す。

【0040】

顎下腺組織病理学的検出：
投与2週間後マウスを殺し、各群から４匹のマウスを取って顎下腺の病理検査を行った。顎下腺の処理は、まず１０％のホルマリンに２４ｈ浸した後、順番に洗浄、脱水と透明化、蝋浸、包埋、パラフィン切片及び最終的なHE染色を行った。モデル群顎下腺には異なる程度のリンパ球の浸潤が存在し、徐々に増加したが、投与群は病理変化を顕著に改善できた。結果に対して病理学的グレードを行う。

【0041】

注釈：顎下腺Ｃｈｉｓｈｏｌｍ及びＭａｓｏｎ評価基準：０級、リンパ球浸潤なし；I級、軽度のリンパ球浸潤；II級、中程度のリンパ球浸潤；III級、1個のリンパ球浸潤巣/４ｍｍ^２；IV級、1個以上のリンパ球浸潤巣/４ｍｍ^２（注釈：1個のリンパ球浸潤巣は、５０個またはそれ以上のリンパ球を指す）。

【0042】

【表4】

表４ 各組マウスの顎下腺の病理学的基準の影響
^△△Ｐ<０．０１ｖｓ正常群；^#Ｐ<０．０５，^##Ｐ<０．０１，ｖｓモデル群

【0043】

顎下腺のHE染色評価結果の順位和検定が示されるように、高投与量のＣＰ−２５は、シェーグレン症候群の治療への効果が顕著であり、顎下腺病理変化を顕著に改善できる。

【実施例1】

【0044】

ＣＰ−２５のＣ５７ＢＬ/６マウスの誘導型シェーグレン症候群の治療に対する作用

【0045】

【表5】

表５ ＣＰ−２５のＳＳモデルマウスの唾液量に対する影響
注釈：^△△Ｐ<０．０１ｖｓ正常群；^#Ｐ<０．０５，^##Ｐ<０．０１，ｖｓモデル群，*Ｐ<０．０５ｖｓＴＧＰ、Ｐａｅ、ＨＣＱ群の比較
ＣＰ−２５はモデルマウスの唾液量を顕著に上昇させ、ＴＧＰ、Ｐａｅ、ＨＣＱ群より薬物の効果発揮開始時間早かった。

【実施例2】

【0046】

【表6】

表６ ＣＰ−２５のＳＳモデルマウスの臓器指数に対する影響（ｍｇ/ｇ）
注釈：^△Ｐ<０．０５ｖｓ正常群，^#Ｐ<０．０５，^##Ｐ<０．０１，ｖｓモデル群
ＣＰ−２５は上昇するモデルマウスの顎下腺指数を顕著に抑制する。

【実施例3】

【0047】

【表7】

表７ ＣＰ−２５のＳＳモデルマウスの顎下腺病理学的評価に対する影響
^△△Ｐ<０．０１ｖｓ正常群；^#Ｐ<０．０５,ｖｓモデル群
ＣＰ−２５はモデルマウスの顎下腺の病理学的変化を顕著に改善する。

【実施例4】

【0048】

ＣＰ−２５のＮＯＤマウスの治療に対する作用

【0049】

【表8】

表８ ＣＰ−２５のＮＯＤモデルマウスの唾液量に対する影響（ｍｇ/匹/１０ｍｉｎ）
^*Ｐ<０．０５, ^**Ｐ<０．０１ｖｓ正常群；^#Ｐ<０．０５，^##Ｐ<０．０１ｖｓモデル群; △Ｐ<０．０５ｖｓＴＧＰ、Ｐａｅ群
ＣＰ−２５はモデルマウスの唾液量を顕著に上昇させ、ＴＧＰ、Ｐａｅ群より薬物の効果発揮開始時間早かった。

【実施例5】

【0050】

【表9】

表９ ＣＰ−２５のＮＯＤモデルマウスの臓器指数に対する影響（ｍｇ/ｇ）
注釈：^*Ｐ<０．０５ｖｓ正常群；^#Ｐ<０．０５ｖｓモデル群
ＣＰ−２５は上昇するモデルマウスの顎下腺指数を顕著に抑制する。

【実施例6】

【0051】

【表10】

表１０ ＣＰ−２５のＮＯＤモデルマウスの顎下腺病理学的評価に対する影響
^*Ｐ<０．０５ｖｓ正常群；^#Ｐ<０．０５,ｖｓモデル群
ＣＰ−２５はモデルマウスの顎下腺の病理学的変化を顕著に改善する。

分析と結論

【0052】

上記実施例に基づいて、本発明者は実験データに対して分析を行った。その結果、ＣＰ−２５高投与量群は、一部の治療指標において、ＣＰ−２５中低投与量群より効きが早く（例えば、表５． ＣＰ−２５のＳＳモデルマウス唾液量に対する影響（ｍｇ/１０ｍｉｎ）に示す）、一部の治療指標において、ＣＰ−２５中低投与量群と相当する（例えば、表６． ＣＰ−２５のＳＳモデルマウスの臓器指数に対する影響（ｍｇ/ｇ）に示す）。シェーグレン症候群の発病特徴は比較的に病態の進展が遅くて期間が長いことを考え、その他疾患の患者と異なり、シェーグレン症候群患者は薬物の用量が少なくて治療効果が良い期待を有し、同時に、患者は効能の持続性に対して比較的高い期待を持つ。前記疾患及び患者の治療特徴により、ＣＰ−２５中低投与量群は、ＣＰ−２５高投与量群及びＴＧＰ、Ｐａｅ、ＨＣＱ群と比較して、優れた実質的な効能と顕著な進展を有する。以上より、シェーグレン症候群の早期治療において、短期的にＣＰ−２５高中投与量を用いて治療し、その後、長期的にＣＰ−２５中低投与量を用いて治療する。好ましくは、シェーグレン症候群早期治療において、短期的にＣＰ−２５高投与量を用いて治療し、その後、長期的にＣＰ−２５中投与量を用いて治療し、続いて、長期的にＣＰ−２５低投与量を用いて治療する。より好ましくは、シェーグレン症候群早期治療において、短期的にＣＰ−２５中投与量を用いて治療し、その後、長期的にＣＰ−２５低投与量を用いて治療する。最も好ましくは、シェーグレン症候群治療の全般において、ＣＰ−２５低投与量を用いて治療する。
併用薬

【0053】

当業者は、以下のことを容易に知ることができる。ＣＰ−２５は、自己免疫疾患薬品と共に併用薬としてシェーグレン症候群の治療へ用いられることが可能である。併用薬の中で自己免疫疾患薬品として用いられるのは次のようなものを含むが、これに限れない。ＴＮＦαターゲットに作用する生物学的製剤、例えば、Ｈｕｍｉｒａ（ヒュミラ，アダリムマブ）、Ｅｎｂｒｅｌ（エンブレル，エタネルセプト）、Ｒｅｍｉｃａｄｅ（レミケード，インフリキシマブ）、Ｓｉｍｐｏｎｉ（ｇｏｌｉｍｕｍａｂ，ゴリムマブ）、Ｃｉｍｚｉａ（Ｃｅｒｔｏｌｉｚｕｍａｂ ｐｅｇｏｌ，セルトリズマブ ペゴル）、エタネルセプト； その他自己免疫疾疾患の治療に用いる生物学的製剤、例えば、Ａｃｔｅｍｒａ（Ｏｃｉｌｉｚｕｍａｂ，トシリズマブ）、Ｏｒｅｎｃｉａ（Ａｂａｔａｃｅｐｔ，アバタセプト）、Ｓｔｅｌａｒａ（ｕｓｔｅｋｉｎｕｍａｂ）； ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＴＹＫ２等のターゲットに作用するＪＡＫ阻害剤、例えば、Ｘｅｌｊａｎｚ（Ｔｏｆａｃｉｔｉｎｉｂ，トファシチニブ）、Ｂａｒｉｃｉｔｉｎｉｂ（バリシチニブ）； 選択的ホスホジエステラーゼ４（ＰＤＥ４）阻害剤、例えば、Ｏｔｅｚｌａ（Ａｐｒｅｍｉｌａｓｔ，アプレミラスト）。

【0054】

同様に、当業者は、以下のことを容易に知ることができる。ＣＰ−２５は、可以与その他シェーグレン症候群を治療する薬品と共に併用薬としてシェーグレン症候群の治療へ用いられることが可能である。併用薬の中でその他シェーグレン症候群を治療する薬品は次のようなものを含むが、これに限れない。局所乾燥症状を緩和する薬品、例えば、ピロカルピン、シクロスポリン、シクロペンチルケトン、セビメリン、人工涙液； 全身治療に用いる免疫阻害剤、例えば、メトトレキサート、レフルノミド、シクロホスファミド、アザチオプリン、クロヅル、タクロリムス、ミコフェノール酸モフェチル；糖質コルチコイド類薬品、例えば、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン；及びその他自己免疫疾患の薬品、例えば、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、抗ＣＤ２０。

【0055】

本発明における前記併用薬の中その他薬品は、シェーグレン症候群の治療に対して促進効果を有する薬品を含み、下記特許出願/特許中の前記1種または複数種物質を含むが、これに限定されない。

【0056】

【表11】

表11. 併用薬の中その他薬品に関する一部の特許出願/特許

人用投与量と治療有効量

【0057】

ＣＰ−２５投与量：
本発明において、動物実験で使用したＣＰ−２５の投与量は、１７．５、３５、７０ｍｇ/ｋｇ/日である。前記投与量は、動物実験において一般的な投与量であり、体表面積による換算では、成人に対応するのは約１．７５〜７．０ｍｇ/ｋｇ/日であり、６０ｋｇ/人の大人で計算すると、一回の投与量は約１０５〜４２０ｍｇになり、一日3回取ることであれば、大人は毎日約３１５〜１２６０ｍｇである。

【0058】

以上より、当業者は本発明によると、当業者は、本発明の前記投与量は治療有効量、すなわち、本発明の前記シェーグレン症候群を有効に治療および/または予防する投与量を指すことを理解できると考えられる。ＣＰ−２５を有効成分とした投与量、及び前記その他薬品或はその他物質と共に有効成分として用いられる総投与量及び各自の投与量を含む。当業者は本発明を通して、本発明の治療有効量は本発明の重要構成要素であり、本発明のその他部分と共に本発明を構成することを知ることができる。
薬品製剤

【0059】

本発明の医薬組成物は、製薬分野の当業者が既知の方法で製造しても良い。前記組成物は、本発明の治療有効量のＣＰ−２５、または治療有効量の上前記その他薬品または他の物質の組合せ、および活性成分の担体または媒体に適した担体または賦形剤を含む。前記担体または賦形剤は、本分野の既知のものである。前記薬品組成物は、経口投与が好ましい。前記組成物は、異なる形式での投与でも良いが、錠剤またはカプセルの形が好ましい。その他の形式、例えば、座薬、溶液、懸濁液、乾燥懸濁液、シロップ剤などでもよい。本分野で既知の多くの異なる徐放技術と製剤を本発明に用いても良い。徐放と胃保護の複合作用を有する製剤を本発明に用いても良い。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】