特許 6836231 ＨＤＡＣ抑制活性を有するメチレンエーテル・ウルシオール・ヒドロキサム酸誘導物の合成方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6836231

(24)【登録日】2021年2月9日

(45)【発行日】2021年2月24日

(54)【発明の名称】ＨＤＡＣ抑制活性を有するメチレンエーテル・ウルシオール・ヒドロキサム酸誘導物の合成方法

(51)【国際特許分類】

   C07D 317/60 20060101AFI20210215BHJP

   C07D 317/62 20060101ALI20210215BHJP

   A61K 31/36 20060101ALN20210215BHJP

   A61P 35/00 20060101ALN20210215BHJP

【ＦＩ】

   C07D317/60

   C07D317/62

   !A61K31/36

   !A61P35/00

【請求項の数】7

【全頁数】20

(21)【出願番号】特願2019-229788(P2019-229788)

(22)【出願日】2019年12月19日

(65)【公開番号】特開2021-1158(P2021-1158A)

(43)【公開日】2021年1月7日

【審査請求日】2019年12月19日

(31)【優先権主張番号】201910546356.8

(32)【優先日】2019年6月20日

(33)【優先権主張国】CN

(73)【特許権者】

【識別番号】510311241

【氏名又は名称】中国林▲業▼科学研究院林▲産▼化学工▲業▼研究所

(74)【代理人】

【識別番号】100088063

【弁理士】

【氏名又は名称】坪内 康治

(72)【発明者】

【氏名】王成章

(72)【発明者】

【氏名】周昊

【審査官】 神谷 昌克

(56)【参考文献】

【文献】 Gene，２０１７年，Vol.637，pp.63-71

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ

Ａ６１Ｋ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

化合物１、２及び３を含み、
前記化合物１、２及び３の化学名は、それぞれ５ -（１０ -（ベンゾ [ｄ ][１，３ ]
ジオキソラン -４ -イル）デカン -２ -エン -１ -イル） -Ｎ -ヒドロキシル -２ -メチ
ルシクロヘキサン -３ -エン -１ -ホルムアミド、５ -（１０ -（ベンゾ [ｄ ][１，３
]ジオキソラン -４ -イル） -３ -ヒドロキシル -デカン） -Ｎ -ヒドロキシル -２ -メ
チルシクロヘキサン -３ -エン -１ -ホルムアミド及び５ -（１０ -（７−ニトロベンゾ
[ｄ ][１，３ ]ジオキソラン -４ -イル）デカン -２ -エン -１ -イル） -Ｎ -ヒドロ
キシル -２ -メチルシクロヘキサン -３ -エン -１ -ホルムアミドであり、
前記化合物１、２及び３の化学式は、それぞれ

化合物１

化合物２

化合物３
であるＨＤＡＣ抑制活性を有するメチレンエーテル・ウルシオール・ヒドロキサム酸誘導
物の合成方法であって、
前記化合物１の合成方法は、

（１）化合物Iウルシオールを原料として、一定量のウルシオールを取ってＤＭＦとＤＣ
Ｍ中に溶解させ、一定量のＮａＨを入れて、アルゴンガスの保護の下で、１２時間還流さ
せ、室温まで冷却してからゆっくりと一定量の水を入れて、ＤＣＭで３回抽出し、有機層
を合併し、飽和食塩水で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧・蒸発させ、
カラムクロマトグラフィーを行い、ＰＥで溶出し、溶出液を減圧・蒸発させて化合物IIを
得るステップと、
（２）一定量の化合物IIを取ってトルエン中に溶解させ、一定量のアクリル酸エステルを
入れて、アルゴンガスの保護の下で、３６時間加熱還流させて、溶媒を減圧・蒸発させ、
一定量のエタノールとＫＯＨを入れて、１０分間加熱還流させて、溶媒を減圧・蒸発させ
、一定量の水を入れて、ＥＡで３回抽出し、抽出液を合併して無水硫酸ナトリウムで乾燥
した後、減圧・乾燥させ、カラムクロマトグラフィーを行い、ＰＥ−ＥＡで溶出し、溶出
液を減圧・蒸発させて、化合物IIIを得るステップと、
（３）一定量の化合物IIIを取って、無水ＤＭＦ中に溶解させ、一定量のＤＩＰＥＡ、シ
リコン保護ヒドロキシルアミン及びＨＡＴＵを入れて、反応・攪拌しながら１２時間過ご
し、溶媒を減圧・蒸発させ、直接カラムクロマトグラフイーを行い、ジクロロメタン―メ
タノールで溶出し、溶出液を減圧・蒸発させた後、産物を一定量のＴＢＡＦ-ＴＨＦ溶液
中に入れて、室温で４０分間攪拌し、減圧・蒸発させ、直接カラムクロマトグラフィーを
行い、ＤＣＭ−ＭｅＯＨで溶出し、溶出液を減圧・蒸発させ、産物をさらにＨＰＬＣで純
化させて、目標化合物１を得るステップと、
を含む、ことを特徴とするＨＤＡＣ抑制活性を有するメチレンエーテル・ウルシオール・
ヒドロキサム酸誘導物の合成方法。

【請求項2】

前記化合物２の合成方法は、

（１）化合物IIIを原料として、一定量の化合物IIIをジクロロメタン中に溶解させ、一定
量のｍCPBAを入れて、室温の下で攪拌しながら１２時間過ごし、飽和重炭酸ナトリウムで
３回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧・蒸発させて無色油状物が得られるが、
その全部を無水テトラヒドロフラン中に入れて、ゆっくりと一定量の１００ｍｇ／ｍL水
素化アルミニウムリチウムを混濁液中に滴り、その後温度を７０℃に上げて２時間反応さ
せ、室温まで冷却してから、ゆっくりと一定量の水を入れて、再び一定量の１５％水酸化
ナトリウム溶液を入れてから、再び一定量の水を入れて、３０分後ろ過し、テトラヒドロ
フランで洗浄し、ろ過液を減圧してテトラヒドロフランを除去し、一定量の水を入れて、
酢酸エチルで4回抽出し、抽出液を合併して飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウム
で乾燥させ、減圧・蒸発させ、シリカゲールカラムクロマトグラフィーを行い、ＰＥ-Ｅ
Ａで溶出し、溶出液を減圧・蒸発させて、化合物IVを得るステップと、
（２）化合物IVを一定量のアセトン中に溶解させ、氷水バス中で温度を下げ、一定量のジ
ョーンズ試薬を入れて、室温にて３０分間反応させた後、一定量のイソプロパノールを入
れて、２０分間攪拌し、一定量の飽和塩化ナトリウム溶液を入れて、ＥＡで５回抽出し、
抽出液を合併して、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧・蒸発させ、シリカゲールカラ
ムクロマトグラフィーを行い、ＰＥ−ＥＡで溶出し、溶出液を減圧・蒸発させて、化合物
Ｖを得るステップと、
（３）化合物Ｖを一定量のメタノール中に溶解させ、一定量のＮａＢＨ_４を入れて、室温
にて３０分間反応させ、減圧・蒸発させてから、一定量のＥＡで溶解させ、飽和食塩水で
２回洗浄し、ＥＡで２回抽出し、抽出液を合併して、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶
媒を減圧・蒸発させ、真空条件下で２時間乾燥させ、一定量のＤＣＭ、ＮＨ_２ＯＴＨＰ、
ＥＤＣ．Ｃｌ及びＴＥＡを入れて、反応させがながら１２時間過ごし、５％のクエン酸水
溶液で２回洗浄した後、ＤＣＭで２回抽出し、有機層を合併して、溶媒を減圧・乾燥させ
、メタノール溶液を入れて、氷水バスにて温度を下げ、一定量の１０％ＨＣｌ溶液を入れ
て、１時間反応させてから、溶媒を減圧・蒸発させ、メタノールで溶解させ、微細孔ろ過
膜でろ過し、さらにＨＣｌで純化させて、目標化合物２を得るステップと、
を含む、ことを特徴とする請求項１に記載のＨＤＡＣ抑制活性を有するメチレンエーテル
・ウルシオール・ヒドロキサム酸誘導物の合成方法。

【請求項3】

前記化合物３の合成方法は、

（１）化合物IIIを原料として、一定量の化合物IIIを新しく蒸発させた無水酢酸に入れて
、温度を０℃まで下げ、激しく攪拌しながら一定量の無水硝酸銅を入れ、２時間後一定量
の無水硝酸銅を入れ、３時間後一定量の水を入れて、２０分間攪拌した後酢酸エチルで２
回抽出し、有機層を合併して、飽和重炭酸ナトリウム溶液で２回洗浄し、無水硫酸マグネ
シウムで乾燥させ、減圧・蒸発させて、淡黄色油状物を得るステップと、
（２）ステップ１から得た淡黄色油状物をメタノール中に溶解させ、一定量の水と水酸化
カリウムを入れて、３時間加熱・還流してから、溶媒を減圧・蒸発させ、一定量の水を入
れて、酢酸エチルで３回抽出し、抽出液を合併して、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグ
ネシウムで乾燥させ、減圧・蒸発させて、淡黄色油状物を得るステップと、
（３）ステップ２から得た淡黄色油状物を４５℃の真空下で乾燥させ、５時間後無水ジク
ロロメタン中に溶解させ、一定量のＮＨ_２ＯＴＨＰ、ＴＢＴＵ及びＤＩＰＥＡを入れて、
室温にて６時間反応させた後、１０％クエン酸水溶液で２回洗浄し、さらに飽和重炭酸ナ
トリウム溶液で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶剤を減圧・蒸発させて、
シリカゲールカラムクロマトグラフィーを行い、ＰＥ−ＥＡで溶出し、溶出液を減圧・蒸
発させて無色油状物を得るステップと、
（４）ステップ３から得た無色油状物をメタノール中に溶解させ、一定量の６Ｍ塩酸溶液
を入れて、室温にて２時間攪拌し、溶媒を減圧・蒸発させ、一定量の水を入れて、酢酸エ
チルで３回抽出し、抽出液を合併して、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、さらに飽和
食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧・蒸発させて淡黄色油状物
を得るが、それをクロマトグラムメタノール中に溶解させて、微細孔ろ過膜でろ過し、さ
らにＨＰＬＣで純化して、目標化合物３を得るステップと、
を含む、ことを特徴とする請求項１に記載のＨＤＡＣ抑制活性を有するメチレンエーテル
・ウルシオール・ヒドロキサム酸誘導物の合成方法。

【請求項4】

ステップ（１）中の前記ウルシオールはラッカーに由来し、ラッカーを原料として、メタ
ノールで抽出することによって得られ、そのウルシオールの純度は９０％以上である、こ
とを特徴とする請求項１に記載のＨＤＡＣ抑制活性を有することを特徴とするメチレンエ
ーテル・ウルシオール・ヒドロキサム酸誘導物の合成方法。

【請求項5】

ステップ（３）中の前記ＨＰＬＣ純化方法は、クロマトグラフィーカラムはC18調製カラ
ムであり、流動相はアセトニトリル―水であり、割合は７５：２５であり、測定波長は２
１０nmである、ことを特徴とする請求項１に記載のＨＤＡＣ抑制活性を有することを特徴
とするメチレンエーテル・ウルシオール・ヒドロキサム酸誘導物の合成方法。

【請求項6】

ステップ（３）中の前記ＨＰＬＣ純化方法は、クロマトグラフィーカラムはC18調製カラ
ムであり、流動相はアセトニトリル―水であり、割合は６８：３２であり、測定波長は２
１０nmである、ことを特徴とする請求項２に記載のＨＤＡＣ抑制活性を有するメチレンエ
ーテル・ウルシオール・ヒドロキサム酸誘導物の合成方法。

【請求項7】

ステップ（３）中の前記ＨＰＬＣ純化方法は、クロマトグラフィーカラムはC18調製カ
ラムであり、流動相はアセトニトリル―水であり、割合は７０：３０であり、測定波長は
２１０nmである、ことを特徴とする請求項３に記載のＨＤＡＣ抑制活性を有するメチレン
エーテル・ウルシオール・ヒドロキサム酸誘導物の合成方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は薬物合成技術分野に属し、メチレンエーテル・ウルシオール・ヒドロキサム酸誘
導物の合成方法及びそのＨＤＡＣ抑制活性に関するものである。

【背景技術】

【0002】

ウルシオールはウルシ（ Toxicodendron verniciflum(Stokes)F.A.Barkl.）の分泌物ラッ
カー中の天然活性成分であり、中国の重要な林産物であり、世界上８５％のラッカーは中
国から産出されている。ウルシオールはピロカテコール構造のアルキルフェノール系化合
物であり、その側鎖は異なる飽和度のＣ１５アルカンである。ウルシオールは優れた抗腫
瘍生体活性を有し、人体の９種の臓器と２９種の腫瘍細胞に対して抑制作用があり、作用
メカニズムとしては、腫瘍アポトーシス誘導、腫瘍細胞増殖抑制、腫瘍血管生成抑制、核
転写因子抑制、腫瘍細胞毒殺などが含まれる。ウルシオールは腫瘍補助治療の漢方薬とし
て、我が国ですでに数千年の歴史を持っている。そのため、ウルシオールを抗癌剤として
開発することが非常に期待されているものの、ウルシオールの化学構造が不安定で、酸化
・重合され易く、その抗腫瘍治療効果を大きく低下させるので、不飽和ウルシオールの抗
腫瘍済としての開発と応用を制限している。

【0003】

ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）は国内外で公認されている癌治療の重要なターゲ
ットである。ＨＤＡＣ異常によるヒストンアセチル化状態のアンバランスは腫瘍の発生及
び発展と密接な関係があり、ＨＤＡＣの過剰発現はすでに多数の腫瘍細胞から発見されて
いる。ＨＤＡＣ抑制剤は細胞内のアセチル化レベルを変えることによって、遺伝子の翻訳
過程調節、細胞成長抑制、アポトーシス又は分化の誘発、腫瘍細胞血管再生抑制などの面
で抗腫瘍活性を発生するのである。従って、低毒性、高効率のＨＤＡＣ抑制剤系類似物の
設計・開発はすでに国内外における抗腫瘍ターゲット剤研究のホットスポットとなってい
る。ＨＤＡＣは、その構造の特徴によって、ヒドロキサム酸系やベンズアミド系、求電子
性ケトン系及びシクロペプチド系など４種類に分けられる。そのうち、ヒドロキサム酸系
化合物は特異性が強く、抗腫瘍活性が良く、毒副作用が小さいなどの優位があって、目下
研究が最も幅広く且つ深く行われているＨＤＡＣ抑制剤であり、典型的なヒドロキサム系
抑制剤の構造は、機能別に表面認識エリア、スペーサーアームエリア及び亜鉛イオン結合
エリアなど３部分に分けられる。表面認識エリアは主に疎水性セグメントからなり、通常
はベンゼンリング誘導物であり、スパーサーアームエリアは脂肪鎖であり、亜鉛イオン結
合エリアの官能基はヒドロキサム酸である。研究によれば、ヒドロキサム酸官能基はＨＤ
ＡＣ抑制剤のキーポイント薬效官能基であり、直接ＨＤＡＣ酵素のＺｎ２＋構造と結合す
ることによって、ＨＤＡＣ抑制剤の活性を効果的に抑制することができる。目下、Ｍｅｒ
ｃｋ社のヒドロキサム酸系ＨＤＡＣ抑制剤Ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ（ＳＡＨＡ）はすでに米
国ＦＤＡによりリンパ癌治療薬として許可されており、これほかにも、複数のヒドロキサ
ム酸系ＨＤＡＣ抑制剤が臨床研究段階に入っている。

【0004】

研究によれば、不飽和ウルシオールは一定のＨＤＡＣ抑制活性を有し、その構造はＦＤＡ
により使用が許可されたＨＤＡＣ抑制剤ＳＡＨＡの構造と相似しているが、ＨＤＡＣ抑制
のキーポイント構造ユニットである亜鉛イオン結合エリアが欠けている。そのため、本発
明では不飽和ウルシオールを原料として、エーテル化反応を通じてウルシオールの酸化・
重合を遮断し、Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ、加水分解及びアミノヒドロキシル化などの反応
を通じて、ウルシオールの側鎖の尾部にヒドロキサム酸基を導入するとともに、そのベン
ゼンリング又はアルキル基鎖にニトロ基とヒドロキシル基などの異なる薬效の基を導入し
て、三種のメチレンエーテルウルシオール・ヒドロキサム酸誘導物を合成したが、３種化
合物はいずれもＨＤＡＣの活性ポケットと良く結合でき、その残基と安定した水素結合相
互作用を形成し、活性ポケット底部のＺｎ２＋と安定したキレートを形成し、優れたＨＤ
ＡＣ抑制活性を持ち、化合物１、２及び３のＨＤＡＣ２に対する半数抑制濃度（ＩＣ５０
）は、それぞれ０．２７、０．２５及び０．２２ｕｇ／ｍＬであり、ＨＤＡＣ８に対する
半数抑制濃度（ＩＣ５０）は、それぞれ０．２９、０．２６及び０．２４ｕｇ／ｍＬであ
り、ＦＤＡにより許可されたＨＤＡＣ抑制剤ＳＡＨＡのＩＣ５０値と相当していて、臨床
抗腫瘍薬剤中に使用することができ、付加価値が高く、臨床上新型ウルシオール基ＨＤＡ
Ｃ抑制剤を開発する新技術として使用することができる。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

本発明はＨＤＡＣ抑制活性を有するメチレンエーテル・ウルシオール・ヒドロキサム酸誘
導物の合成方法を提供することを目的とする。当該方法は三種のメチレンエーテル・ウル
シオール・ヒドロキサム誘導物を合成した。３種化合物はいずれもＨＤＡＣの活性ポケッ
トと良く結合でき、ＨＤＡＣ２とＨＤＡＣ８に対する半数抑制濃度（ＩＣ５０）はＦＤＡ
により許可されたＨＤＡＣ抑制剤ＳＡＨＡのＩＣ５０値と相当していて、優れたＨＤＡＣ
抑制活性を有し、新型ウルシオール基ＨＤＡＣ抑制剤を開発して抗腫瘍薬剤中に使用する
ことができ、付加価値が極めて高い。

【課題を解決するための手段】

【0006】

１．化合物１、２及び３を含み、化学名はそれぞれ５ -（１０ -（ベンゾ [ｄ ][１，３
]ジオキソラン -４ -イル）デカン -２ -エン -１ -イル） -Ｎ -ヒドロキシル -２ -メ
チルシクロヘキサン -３ -エン -１ -ホルムアミド、５ -（１０ -（ベンゾ [ｄ ][１，
３ ]ジオキソラン -４ -イル） -３ -ヒドロキシル -デカン） -Ｎ -ヒドロキシル -２ -
メチルシクロヘキサン -３ -エン -１ -ホルムアミド及び５ -（１０ -（７−ニトロベン
ゾ [ｄ ][１，３ ]ジオキソラン -４ -イル）デカン -２ -エン -１ -イル） -Ｎ -ヒド
ロキシル -２ -メチルシクロヘキサン -３ -エン -１ -ホルムアミドであり、その化学式
は、

化合物１

化合物２

化合物３
であるＨＤＡＣ抑制活性を有するメチレンエーテル・ウルシオール・ヒドロキサム酸誘導
物。

【0007】

２．前記化合物１の合成方法は以下ステップが含まれる。
（１）化合物Iウルシオールを原料として、一定量のウルシオールを取ってＤＭＦとＤＣ
Ｍ中に溶解させ、一定量のＮａＨを入れて、アルゴンガスの保護の下で、１２時間還流さ
せ、室温まで冷却してからゆっくりと一定量の水を入れて、ＤＣＭで３回抽出し、有機層
を合併し、飽和食塩水で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧・蒸発させ、
カラムクロマトグラフィーを行い、ＰＥで溶出し、溶出液を減圧・蒸発させて化合物IIを
得る。
（２）一定量の化合物IIを取ってトルエン中に溶解させ、一定量のアクリル酸エステルを
入れて、アルゴンガスの保護の下で、３６時間加熱還流させて、溶媒を減圧・蒸発させ、
一定量のエタノールとＫＯＨを入れて、１０分間加熱還流させて、溶媒を減圧・蒸発させ
、一定量の水を入れて、ＥＡで３回抽出し、抽出液を合併して無水硫酸ナトリウムで乾燥
した後、減圧・乾燥させ、カラムクロマトグラフィーを行い、ＰＥ−ＥＡで溶出し、溶出
液を減圧・蒸発させて、化合物IIIを得る。
（３）一定量の化合物IIIを取って、無水ＤＭＦ中に溶解させ、一定量のＤＩＰＥＡ、シ
リコン保護ヒドロキシルアミン及びＨＡＴＵを入れて、反応・攪拌しながら１２時間過ご
し、溶媒を減圧・蒸発させ、直接カラムクロマトグラフイーを行い、ジクロロメタン―メ
タノールで溶出し、溶出液を減圧・蒸発させた後、産物を一定量のＴＢＡＦ -ＴＨＦ溶液
中に入れて、室温で４０分間攪拌し、減圧・蒸発させ、直接カラムクロマトグラフィーを
行い、ＤＣＭ−ＭｅＯＨで溶出し、溶出液を減圧・蒸発させ、産物をさらにＨＰＬＣで純
化させて、目標化合物１を得る。
ステップ（１）中の前記ウルシオールはラッカーに由来し、ラッカーを原料としてメタノ
ールで抽出して得るが、得られるウルシオールの純度は９０％以上である。
ステップ（３）中の前記 HPLC純化方法は、そのクロマトグラフィーカラムは C18調製カ
ラムであり、流動相はアセトニトリル―水であり、割合は７５：２５であり、測定波長は
２１０nmである。
化合物１の合成ルートは以下のとおり：

【0008】

３．前記化合物２の合成方法は以下ステップが含まれる。
（１）化合物IIIを原料として、一定量の化合物IIIをジクロロメタン中に溶解させ、一定
量のｍCPBAを入れて、室温の下で攪拌しながら１２時間過ごし、飽和重炭酸ナトリウムで
３回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧・蒸発させて無色油状物が得られるが、
その全部を無水テトラヒドロフラン中に入れて、ゆっくりと一定量の１００ｍｇ／ｍ L水
素化アルミニウムリチウムを混濁液中に滴り、その後温度を７０℃に上げて２時間反応さ
せ、室温まで冷却してから、ゆっくりと一定量の水を入れて、再び一定量の１５％水酸化
ナトリウム溶液を入れてから、再び一定量の水を入れて、３０分後ろ過し、テトラヒドロ
フランで洗浄し、ろ過液を減圧してテトラヒドロフランを除去し、一定量の水を入れて、
酢酸エチルで 4回抽出し、抽出液を合併して飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウム
で乾燥させ、減圧・蒸発させ、シリカゲールカラムクロマトグラフィーを行い、ＰＥ-Ｅ
Ａで溶出し、溶出液を減圧・蒸発させて、化合物IVを得る。
（２）化合物IVを一定量のアセトン中に溶解させ、氷水バス中で温度を下げ、一定量のジ
ョーンズ試薬(Ｊｏｎｅｓ試薬、酸化剤として用いられる無水クロム酸（酸化クロム(VI)
）の濃硫酸溶液である。なお、ジョーンズ酸化とは、クロム酸を使って1級または2級アル
コールをカルボン酸またはケトンに酸化する化学反応である。）を入れて、室温にて３０
分間反応させた後、一定量のイソプロパノールを入れて、２０分間攪拌し、一定量の飽和
塩化ナトリウム溶液を入れて、ＥＡで５回抽出し、抽出液を合併して、無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥させ、減圧・蒸発させ、シリカゲールカラムクロマトグラフィーを行い、ＰＥ−
ＥＡで溶出し、溶出液を減圧・蒸発させて、化合物Ｖを得る。
（３）化合物Ｖを一定量のメタノール中に溶解させ、一定量のＮａＢＨ_４を入れて、室温
にて３０分間反応させ、減圧・蒸発させてから、一定量のＥＡで溶解させ、飽和食塩水で
２回洗浄し、ＥＡで２回抽出し、抽出液を合併して、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶
媒を減圧・蒸発させ、真空条件下で２時間乾燥させ、一定量のＤＣＭ、ＮＨ_２ＯＴＨＰ、
ＥＤＣ．Ｃｌ及びＴＥＡを入れて、反応させがながら１２時間過ごし、５％のクエン酸水
溶液で２回洗浄した後、ＤＣＭで２回抽出し、有機層を合併して、溶媒を減圧・乾燥させ
、メタノール溶液を入れて、氷水バスにて温度を下げ、一定量の１０％ＨＣｌ溶液を入れ
て、１時間反応させてから、溶媒を減圧・蒸発させ、メタノールで溶解させ、微細孔ろ過
膜でろ過し、さらにＨＣｌで純化させて、目標化合物２を得る。
ステップ（３）中の前記ＨＰＬＣ純化方法において、そのクロマトグラフィーカラムは C
18調製カラムであり、流動相はアセトニトリル―水であり、割合は６８：３２であり、測
定波長は２１０nmである。
化合物２の合成ルートは以下のとおり：

【0009】

４．前記化合物３の合成方法は以下ステップが含まれる。
（１）化合物IIIを原料として、一定量の化合物IIIを新しく蒸発させた無水酢酸に入れて
、温度を０℃まで下げ、激しく攪拌しながら一定量の無水硝酸銅を入れ、２時間後一定量
の無水硝酸銅を入れ、３時間後一定量の水を入れて、２０分間攪拌した後酢酸エチルで２
回抽出し、有機層を合併して、飽和重炭酸ナトリウム溶液で２回洗浄し、無水硫酸マグネ
シウムで乾燥させ、減圧・蒸発させて、淡黄色油状物を得る。
（２）ステップ１から得た淡黄色油状物をメタノール中に溶解させ、一定量の水と水酸化
カリウムを入れて、３時間加熱・還流してから、溶媒を減圧・蒸発させ、一定量の水を入
れて、酢酸エチルで３回抽出し、抽出液を合併して、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグ
ネシウムで乾燥させ、減圧・蒸発させて、淡黄色油状物を得る。
（３）ステップ２から得た淡黄色油状物を４５℃の真空下で乾燥させ、５時間後無水ジク
ロロメタン中に溶解させ、一定量のＮＨ_２ＯＴＨＰ、ＴＢＴＵ及びＤＩＰＥＡを入れて、
室温にて６時間反応させた後、１０％クエン酸水溶液で２回洗浄し、さらに飽和重炭酸ナ
トリウム溶液で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶剤を減圧・蒸発させて、
シリカゲールカラムクロマトグラフィーを行い、ＰＥ−ＥＡで溶出し、溶出液を減圧・蒸
発させて無色油状物を得る。
（４）ステップ３から得た無色油状物をメタノール中に溶解させ、一定量の６Ｍ塩酸溶液
を入れて、室温にて２時間攪拌し、溶媒を減圧・蒸発させ、一定量の水を入れて、酢酸エ
チルで３回抽出し、抽出液を合併して、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、さらに飽和
食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧・蒸発させて淡黄色油状物
を得るが、それをクロマトグラムメタノール中に溶解させて、微細孔ろ過膜でろ過し、さ
らにＨＰＬＣで純化して、目標化合物３を得る。
ステップ（３）中の前記ＨＰＬＣ純化方法において、そのクロマトグラフィーカラムは C
18調製カラムであり、流動相はアセトニトリル―水であり、割合は７０：３０であり、測
定波長は２１０nmである。
化合物３の合成ルートは以下のとおり：

【0010】

本発明はトルエンアルキル・ウルシオールを出発原料として、ジクロロメタンとＮａＨで
エーテル化反応を行い、メチレンエーテルウルシオールを生成し、ウルシオールの酸化・
重合を効果的に遮断することができ、ウルシオールのアルキル側鎖の共役二重結合を利用
して、アクリル酸エステルとＤｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応を行い、さらに加水分解を通じ
て、シクロヘキサ−１−エンカルボン酸構造を有する中間化合物IIIを得るが、化合物III
をシリコン基保護ヒドロキシルアミン及びＨＡＴＵと反応させて、側鎖の尾部にキサム酸
基を有する目標化合物１を得る。ウルシオールのベンゼンリングと脂肪鎖上に官能基を導
入することのＨＤＡＣ抑制活性に対する影響を考察するために、目標化合物２と３を合成
した。中間化合物IIIを原料として、先ずｍＣＰＢＡと反応させて、脂肪鎖上の二重結合
をケトンに酸化させて、さらに水素化アルミニウムリチウムヒドロキシル基を還元するが
、化合物IIIの側鎖尾部のカルボニル基もヒドロキシル基に還元されるので、引き続きジ
ョーンズ試薬で酸化反応を行わせ、ＮａＢＨ_４と還元反応を行わせて中間化合物IVを得る
が、化合物IVをＮＨ_２ＯＴＰＨと反応させて、脂肪鎖上にヒドロキシル基構造を有する目
標化合物２を得る。中間化合物IIIを原料として、先ず無水硝酸銅で反応を行わせ、ベン
ゼンリング上にニトロ基を導入し、さらにＮＨ_２ＯＴＰＨと反応させて、ベンゼンリング
上にニトロ基構造を有する目標化合物３を得る。本発明は１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ
、ＥＳＩ−ＭＳ、ＩＲなどの技術手段を利用して、３種の目標化合物の構造に対する確証
を行なう。

【0011】

本発明では、分子シミュレーションソフトを用いて、３種化合物分子がそれぞれＨＤＡＣ
２とＨＤＡＣ８結晶体に対する分子ドッキング研究を行った。Ｇｌｉｄｅ採点結果によれ
ば、化合物１、２及び３とＨＤＡＣ２とのドッキング点数はそれぞれ、−７．７２４、−
７．９１４及びー７．９６４であり、ＨＤＡＣ８との対応する点数はそれぞれー９．２３
０、−９．８３５及びー９．８３５であって、３種化合物はいずれもＨＤＡＣ２とＨＤＡ
Ｃ８の活性ポケットと良く結合することができ、そのキサム酸基はいずれもポケット底部
のＺｎ２＋と安定したキレートを形成することができ、３種化合物はＨＤＡＣ２酵素のＨ
ｉｓ１４３、Ｔｙｒ３０８、Ｇｌｕ１０３及びＡｓｐ１０４などの残基と安定した水素結
合相互作用を形成することができ、ＨＤＡＣ８酵素のＧｌｙ１４０、Ｈｉｓ１４３、Ｌｙ
ｓ３３、Ａｌａ３２、Ｈｉｓ１４２及びＴｙｒ１５４など残基と安定した水素結合相互作
用を形成することができた。３種化合物中の化合物２と３は比較的高いＧｌｉｄ点数を示
したが、これはウルシオールのアルキル基側鎖中に電子提供基カルボニル基を導入するか
、或いはベンゼンリング上にニトロ基など置換基を導入することによって、ＨＤＡＣ２と
ＨＤＡＣ８との結合相性を著しく向上するということを説明する。なぜならば、これらは
残基とより強い水素結合相互作用を形成するからである。

【0012】

本発明ではＨＤＡＣ検査試薬キットを用いて、３種化合物のＨＤＡＣ２とＨＤＡＣ８に対
する抑制活性を測定した。化合物１、２及び３はＨＤＡＣ２とＨＤＡＣ８に対して、いず
れも優れたあ抑制作用があり、抑制率は濃度が増えるにつれ、上昇する傾向を見せ、濃度
が２０ｕｇ／ｍＬである時に、化合物１、２及び３のＨＤＡＣ２に対する抑制率はそれぞ
れ９５．６％、９６．５％及び９７．９％、ＨＤＡＣ８に対する抑制率はそれぞれ９４．
８％、９５．４％及び９６．９％であり、化合物１、２及び３のＨＤＡＣ２に対する半数
抑制濃度（Ｉ５０）はそれぞれ０．２７、０．２５及び０．２２ｕｇ／ｍＬ、ＨＤＡＣ８
に対する半数抑制濃度（Ｉ５０）はそれぞれ０．２９、０．２６及び０．２４ｕｇ／ｍＬ
であり、３種化合物のＩＣ５０値は陽性薬ＳＡＨＡのＩＣ５０値と相当していた。

【発明の効果】

【0013】

（１）本発明は天然ウルシオールを原料として、ＨＤＡＣ抑制剤を合成するが、ウルシオ
ールはウルシの分泌物であり、その出所が多くて得やすく、環境に優しくて安全でリサイ
クル利用が可能であるだけでなく、ウルシオールは優れた抗腫瘍活性を有し、その構造は
ＦＤＡにより許可されたＨＤＡＣ抑制剤ＳＡＨＡの構造と相似しているので、ウルシオー
ルを原料として開発された天然ターゲット抗腫瘍薬剤は優れた応用前景がある。
（２）本発明はウルシオールを原料として、エーテル化反応を通じてウルシオールの酸化
・重合を遮断し、ウルシオールの化学構造を安定化させ、Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ、加水
分解及びヒドロキシルアミン化など反応を通じて、ウルシオール側鎖の尾部にＨＤＡＣ抑
制のキーポイント薬效基であるキサム酸を導入して、そのターゲットをＨＤＡＣ酵素のポ
ケット部位に作用させて、ＨＤＡＣ酵素中の亜鉛イオンと効果的にキレートして、選択的
にＨＤＡＣ酵素を抑制する効果を達成するとともに、不飽和ウルシオールの生体相性を改
善することができ、ウルシオールのベンゼンリング又はアルキル鎖にニトロ基とヒドロキ
シル基などの薬效基を導入することによって、そのＨＤＡＣ抑制活性を増強し、ＨＤＡＣ
酵素に対する認識と結合力を向上することができる。
（３）本発明によって合成される３種のメチレンエーテル・ウルシオール・キサム酸誘導
物は、いずれもＨＤＡＣの活性ポケットと良く結合することができ、残基と安定した水素
結合相互作用を形成するとともに、活性ポケット底部のＺｎ２＋と安定したキレートを形
成することができ、優れたＨＤＡＣの抑制活性を有し、３種化合物のＨＤＡＣ２に対する
半数抑制濃度（ＩＣ５０）は、それぞれ０．２７、０，２５及び０．２２ｕｇ／ｍＬ、Ｈ
ＤＡＣ８に対する半数抑制濃度（ＩＣ５０）は、それぞれ０．２９、０．２６及び０．２
４ｕｇ／ｍＬであり、ＦＤＡにより許可されたＨＤＡＣ抑制剤ＳＡＨＡのＩＣ５０値と相
当していたので、本発明により合成されるメチレンエーテル・ウルシオール・キサム酸誘
導物は新型天然ＨＤＡＣ抑制剤として開発される可能性が非常に大きく、ターゲット抗腫
瘍薬剤中に応用されて、天然ウルシオールの付加価値を効果的に向上することができる。

【発明を実施するための形態】

【0014】

以下実施例は、本発明をさらに詳しく説明するものであり、本発明はこれに限らない。
実施例１
目標化合物１の合成
（１）化合物Iウルシオール３ｇを５０ｍＬのＤＭＦと５０ｍＬのＤＣＭ中に溶解させ、
０．８ｇのＮａＨを入れて、アルゴンガスの保護の下で還流して１２時間過ごし、室温ま
で冷却した後、ゆっくりと１００ｍＬの水を入れて、ＤＣＭで３回抽出して毎度の使用量
を６０ｍＬとし、抽出液を合併して、飽和食塩水で２回洗浄し、毎度の使用量を９０ｍＬ
とし、無水硫酸ナトリウムで乾燥させてから、減圧蒸発させ、カラムクロマトグラフィー
を行い、ＰＥで溶出し、溶出液を減圧・蒸発させて化合物IIを得る。
（２）化合物II１．２ｇを２ｍＬのトルエン中に溶解させ、２ｍＬのアクリル酸エステル
を入れて、アルゴンガスの保護の下で、３６時間還流させ、溶媒を減圧・蒸発させ、１０
ｍＬのエタノールと１．２ｇのＫＯＨを入れて、１０分間加熱・還流させ、溶媒を減圧・
蒸発させ、１０ｍＬの水を入れて、ＥＡで３回抽出して毎度の使用量を１５ｍＬとし、抽
出液を合併して、無水硫酸ナトリウムで乾燥させてから、減圧・蒸発させ、カラムクロマ
トグラフィーを行い、ＰＥ−ＥＡで溶出し、ＰＥ：ＥＡ＝１００：１〜３：１とし、溶出
液を減圧・蒸発させて化合物IIIを得る。
（３）化合物III３０ｍｇを１ｍLの無水 DMF中に溶解させ、３０uLのDIPEA、１１０ｍｇ
のシリコン基保護ヒドロキシルアミンと５７ｍｇのＨＡＴＵを入れて、反応させて攪拌し
ながら１２時間過ごし、減圧・蒸発させ、直接クロマトグラフィーを行い、ジクロロメタ
ン―メタノールで溶出し、ジクロロメタン：メタノール＝２００：１とし、溶出液を減圧
・蒸発させた後、産物を２ｍLのＴＢＡＦ−ＴＨＦ溶液中に溶解させ、室温にて４０分間
攪拌し、減圧・蒸発させてから、直接カラムクロマトグラフィーを行い、ＤＣＭ―ＭｅＯ
Ｈで溶出し、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５０：１とし、溶出液を減圧・蒸発させ、産物をＨＰＬ
Ｃで純化させ、クロマトグラフィーカラムはＣ１８調製カラムであり、流動相はアセトニ
トリル―水であり、割合は７５：２５であり、測定波長は２１０nmであり、目標成分を収
集して減圧・蒸発して１１．６ｍｇの目標化合物１を得る。

【0015】

目標化合物２の合成
（１）化合物III４１５ｇを５ｍLのジクロロメタン中に溶解させ、２５０ｍｇのｍCPBAを
入れて、室温の下で攪拌しながら１２時間過ごし、飽和重炭酸ナトリウムで３回洗浄し、
毎度の使用量を５ｍLとし、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧・蒸発させて無色油状物
が得られるが、その全部を２ｍLの無水テトラヒドロフラン中に入れて、ゆっくりと５ｍL
の５００ｍｇ水素化アルミニウムリチウムを含有する混濁液中に滴り、その後温度を７０
℃に上げて２時間反応させ、室温まで冷却してから、ゆっくりと０．５ｍLの水を入れて
、再び０．５ｍLの１５％水酸化ナトリウム溶液を入れてから、再び１．５ｍLの水を入れ
て、３０分後ろ過し、５ｍLのテトラヒドロフランで洗浄し、ろ過液を減圧してテトラヒ
ドロフランを除去し、３ｍLの水を入れて、酢酸エチルで 4回抽出し、毎度の使用量を３
ｍLとし、抽出液を合併して飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減
圧・蒸発させ、シリカゲールカラムクロマトグラフィーを行い、ＰＥ -ＥＡで溶出し、Ｐ
Ｅ：ＥＡ＝３：１〜２：１として、溶出液を減圧・蒸発させて、化合物IVを得る。
（２）化合物IV５９ｍｇを０．５ｍLのアセトン中に溶解させ、氷水バス中で温度を下げ
、２００ｕ Lのジョーンズ試薬を入れて、室温にて３０分間反応させた後、１００ｕＬの
イソプロパノールを入れて、２０分間攪拌し、２ｍＬの飽和塩化ナトリウム溶液を入れて
、ＥＡで５回抽出し、毎度の使用量を２ｍＬとし、抽出液を合併して、無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥させ、減圧・蒸発させ、シリカゲールカラムクロマトグラフィーを行い、ＰＥ−
ＥＡで溶出し、ＰＥ：ＥＡ＝１：１とし、溶出液を減圧・蒸発させて、化合物Ｖを得る。
（３）化合物Ｖ５５ｍｇを０．５ｍＬのメタノール中に溶解させ、１０ｍｇのＮａＢＨ_４
を入れて、室温にて３０分間反応させ、減圧・蒸発させてから、３ｍＬのＥＡで溶解させ
、飽和食塩水で２回洗浄し、ＥＡで２回抽出し、毎度の使用量を３ｍＬとし、抽出液を合
併して、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧・蒸発させ、真空条件下で２時間乾
燥させ、１ｍＬのＤＣＭ、１３ｍｇのＮＨ_２ＯＴＨＰ、１５ｍｇのＥＤＣ．Ｃｌ及び２０
ｕＬのＴＥＡを入れて、反応させがながら１２時間過ごし、２ｍＬの５％のクエン酸水溶
液で２回洗浄した後、ＤＣＭで２回抽出し、毎度の使用量を３ｍＬとし、有機層を合併し
て、溶媒を減圧・乾燥させ、０．８ｍＬのメタノール溶液を入れて、氷水バスにて温度を
下げ、１ｍＬの１０％ＨＣｌ溶液を入れて、１時間反応させてから、溶媒を減圧・蒸発さ
せ、２ｍＬのメタノールで溶解させ、微細孔ろ過膜でろ過し、さらにＨＣｌで純化させて
、クロマトグラフィーカラムはＣ１８調製カラムであり、流動相はアセトニトリル―水で
あり、割合は６８：３２であり、測定波長は２１０nmであり、目標成分を収集して減圧・
蒸発して３０ｍｇの目標化合物２を得る。

【0016】

目標化合物３の合成
（１）化合物III６２０ｍｇを５ｍＬの新しく蒸発させた無水酢酸に入れて、温度を０℃
まで下げ、激しく攪拌しながら３００ｍｇの無水硝酸銅を入れ、２時間後２９５ｍｇの無
水硝酸銅を入れ、３時間後１５ｍＬの水を入れて、２０分間攪拌した後酢酸エチルで２回
抽出し、毎度の使用量を１０ｍＬとし、有機層を合併して、飽和重炭酸ナトリウム溶液で
２回洗浄し、毎度の使用量を２０ｍＬとし、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧・蒸
発させて、淡黄色油状物を得る。
（２）ステップ１から得た淡黄色油状物を１０ｍＬのメタノール中に溶解させ、０．５ｍ
Lの水と１．１ｇの水酸化カリウムを入れて、３時間加熱・還流してから、溶媒を減圧・
蒸発させ、５ｍLの水を入れて、酢酸エチルで３回抽出し、毎度の使用量を５ｍLとし、抽
出液を合併して、１０ｍLの飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減
圧・蒸発させて、淡黄色油状物を得る。
（３）ステップ２から得た淡黄色油状物を４５℃の真空下で乾燥させ、５時間後、５ｍL
の無水ジクロロメタン中に溶解させ、１６０ｍｇのＮＨ_２ＯＴＨＰ、４００ｍｇＴＢＴＵ
及び０．６ｍLのＤＩＰＥＡを入れて、室温にて６時間反応させた後、１０％クエン酸水
溶液で２回洗浄し、毎度の使用量を５ｍLとし、さらに飽和重炭酸ナトリウム溶液で２回
洗浄し、毎度の使用量を１０ｍLとし、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶剤を減圧・蒸
発させて、シリカゲールカラムクロマトグラフィーを行い、ＰＥ−ＥＡで溶出し、ＰＥ：
ＥＡ＝３：１〜２：１とし、溶出液を減圧・蒸発させて無色油状物を得る。
（４）ステップ３から得た無色油状物を３ｍＬのメタノール中に溶解させ、０．５ｍＬの
６Ｍ塩酸溶液を入れて、室温にて２時間攪拌し、溶媒を減圧・蒸発させ、３ｍＬの水を入
れて、酢酸エチルで３回抽出し、毎度の使用量を３ｍＬとし、抽出液を合併して、５ｍＬ
の飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、さらに５ｍＬの飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナ
トリウムで乾燥させ、溶媒を減圧・蒸発させて淡黄色油状物を得るが、それを１ｍＬのク
ロマトグラムメタノール中に溶解させて、微細孔ろ過膜でろ過し、さらにＨＰＬＣで純化
して、クロマトグラフィーカラムはＣ１８調製カラムであり、流動相はアセトニトリル―
水であり、割合は７０：３０であり、測定波長は２１０nmであり、目標成分を収集して減
圧・蒸発して２００ｍｇの目標化合物３を得る。

【0017】

実施例２
目標化合物１の合成
（１）化合物Iウルシオール４ｇを６０ｍＬのＤＭＦと６０ｍＬのＤＣＭ中に溶解させ、
０．８５ｇのＮａＨを入れて、アルゴンガスの保護の下で還流して１２時間過ごし、室温
まで冷却した後、ゆっくりと１００ｍＬの水を入れて、ＤＣＭで３回抽出して毎度の使用
量を６０ｍＬとし、抽出液を合併して、飽和食塩水で２回洗浄し、毎度の使用量を１００
ｍＬとし、無水硫酸ナトリウムで乾燥させてから、減圧蒸発させ、カラムクロマトグラフ
ィーを行い、ＰＥで溶出し、溶出液を減圧・蒸発させて化合物IIを得る。
（２）化合物II１．５ｇを３ｍＬのトルエン中に溶解させ、３ｍＬのアクリル酸エステル
を入れて、アルゴンガスの保護の下で、３６時間還流させ、溶媒を減圧・蒸発させ、１５
ｍＬのエタノールと１．５ｇのＫＯＨを入れて、１０分間加熱・還流させ、溶媒を減圧・
蒸発させ、１５ｍＬの水を入れて、ＥＡで３回抽出して毎度の使用量を１５ｍＬとし、抽
出液を合併して、無水硫酸ナトリウムで乾燥させてから、減圧・蒸発させ、カラムクロマ
トグラフィーを行い、ＰＥ−ＥＡで溶出し、ＰＥ：ＥＡ＝１００：１〜３：１とし、溶出
液を減圧・蒸発させて化合物IIIを得る。
（３）化合物III４０ｍｇを２ｍLの無水 DMF中に溶解させ、４０uLの DIPEA、１２０ｍｇ
のシリコン基保護ヒドロキシルアミンと６０ｍｇのＨＡＴＵを入れて、反応させて攪拌し
ながら１２時間過ごし、減圧・蒸発させ、直接クロマトグラフィーを行い、ジクロロメタ
ン―メタノールで溶出し、ジクロロメタン：メタノール＝２００：１とし、溶出液を減圧
・蒸発させた後、産物を３ｍLのＴＢＡＦ−ＴＨＦ溶液中に溶解させ、室温にて４０分間
攪拌し、減圧・蒸発させてから、直接カラムクロマトグラフィーを行い、ＤＣＭ―ＭｅＯ
Ｈで溶出し、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５０：１とし、溶出液を減圧・蒸発させ、産物をＨＰＬ
Ｃで純化させ、クロマトグラフィーカラムはＣ１８調製カラムであり、流動相はアセトニ
トリル―水であり、割合は７５：２５であり、測定波長は２１０nmであり、目標成分を収
集して減圧・蒸発して１２．５ｍｇの目標化合物１を得る。

【0018】

目標化合物２の合成
（１）化合物III４５０ｇを６ｍLのジクロロメタン中に溶解させ、３００ｍｇのｍCPBAを
入れて、室温の下で攪拌しながら１２時間過ごし、飽和重炭酸ナトリウムで３回洗浄し、
毎度の使用量を６ｍLとし、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧・蒸発させて無色油状物
が得られるが、その全部を３ｍLの無水テトラヒドロフラン中に入れて、ゆっくりと６ｍL
の６００ｍｇ水素化アルミニウムリチウムを含有する混濁液中に滴り、その後温度を７０
℃に上げて２時間反応させ、室温まで冷却してから、ゆっくりと０．８ｍLの水を入れて
、再び０．８ｍLの１５％水酸化ナトリウム溶液を入れてから、再び２．０ｍLの水を入れ
て、３０分後ろ過し、５ｍLのテトラヒドロフランで洗浄し、ろ過液を減圧してテトラヒ
ドロフランを除去し、４ｍLの水を入れて、酢酸エチルで４回抽出し、毎度の使用量を４
ｍLとし、抽出液を合併して飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減
圧・蒸発させ、シリカゲールカラムクロマトグラフィーを行い、ＰＥ -ＥＡで溶出し、Ｐ
Ｅ：ＥＡ＝３：１〜２：１として、溶出液を減圧・蒸発させて、化合物IVを得る。
（２）化合物IV６０ｍｇを０．５ｍLのアセトン中に溶解させ、氷水バス中で温度を下げ
、２００ｕ Lのジョーンズ試薬を入れて、室温にて３０分間反応させた後、１００ｕＬの
イソプロパノールを入れて、２０分間攪拌し、３ｍＬの飽和塩化ナトリウム溶液を入れて
、ＥＡで５回抽出し、毎度の使用量を３ｍＬとし、抽出液を合併して、無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥させ、減圧・蒸発させ、シリカゲールカラムクロマトグラフィーを行い、ＰＥ−
ＥＡで溶出し、ＰＥ：ＥＡ＝１：１とし、溶出液を減圧・蒸発させて、化合物Ｖを得る。
（３）化合物Ｖ６０ｍｇを０．６ｍＬのメタノール中に溶解させ、１０ｍｇのＮａＢＨ_４
を入れて、室温にて３０分間反応させ、減圧・蒸発させてから、４ｍＬのＥＡで溶解させ
、飽和食塩水で２回洗浄し、ＥＡで２回抽出し、毎度の使用量を４ｍＬとし、抽出液を合
併して、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧・蒸発させ、真空条件下で２時間乾
燥させ、１ｍＬのＤＣＭ、１５ｍｇのＮＨ_２ＯＴＨＰ、１５ｍｇのＥＤＣ．Ｃｌ及び２０
ｕＬのＴＥＡを入れて、反応させがながら１２時間過ごし、３ｍＬの５％のクエン酸水溶
液で２回洗浄した後、ＤＣＭで２回抽出し、毎度の使用量を４ｍＬとし、有機層を合併し
て、溶媒を減圧・乾燥させ、０．８ｍＬのメタノール溶液を入れて、氷水バスにて温度を
下げ、１ｍＬの１０％ＨＣｌ溶液を入れて、１時間反応させてから、溶媒を減圧・蒸発さ
せ、３ｍＬのメタノールで溶解させ、微細孔ろ過膜でろ過し、さらにＨＣｌで純化させて
、クロマトグラフィーカラムはＣ１８調製カラムであり、流動相はアセトニトリル―水で
あり、割合は６８：３２であり、測定波長は２１０nmであり、目標成分を収集して減圧・
蒸発して３２ｍｇの目標化合物２を得る。

【0019】

目標化合物３の合成
（１）化合物III７００ｍｇを６ｍＬの新しく蒸発させた無水酢酸に入れて、温度を０℃
まで下げ、激しく攪拌しながら ３５０ｍｇの無水硝酸銅を入れ、２時間後３００ｍｇの
無水硝酸銅を入れ、３時間後２０ｍＬの水を入れて、２０分間攪拌した後酢酸エチルで２
回抽出し、毎度の使用量を１５ｍＬとし、有機層を合併して、飽和重炭酸ナトリウム溶液
で２回洗浄し、毎度の使用量を２０ｍＬとし、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧・
蒸発させて、淡黄色油状物を得る。
（２）ステップ１から得た淡黄色油状物を１０ｍＬのメタノール中に溶解させ、０．６ｍ
Lの水と１．２ｇの水酸化カリウムを入れて、３時間加熱・還流してから、溶媒を減圧・
蒸発させ、６ｍLの水を入れて、酢酸エチルで３回抽出し、毎度の使用量を６ｍLとし、抽
出液を合併して、１５ｍLの飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減
圧・蒸発させて、淡黄色油状物を得る。
（３）ステップ２から得た淡黄色油状物を４５℃の真空下で乾燥させ、５時間後、６ｍL
の無水ジクロロメタン中に溶解させ、１６０ｍｇのＮＨ_２ＯＴＨＰ、４００ｍｇＴＢＴＵ
及び０．６ｍLのＤＩＰＥＡを入れて、室温にて６時間反応させた後、１０％クエン酸水
溶液で２回洗浄し、毎度の使用量を６ｍLとし、さらに飽和重炭酸ナトリウム溶液で２回
洗浄し、毎度の使用量を１０ｍLとし、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶剤を減圧・蒸
発させて、シリカゲールカラムクロマトグラフィーを行い、ＰＥ−ＥＡで溶出し、ＰＥ：
ＥＡ＝３：１〜２：１とし、溶出液を減圧・蒸発させて無色油状物を得る。
（４）ステップ３から得た無色油状物を４ｍＬのメタノール中に溶解させ、０．６ｍＬの
６Ｍ塩酸溶液を入れて、室温にて２時間攪拌し、溶媒を減圧・蒸発させ、５ｍＬの水を入
れて、酢酸エチルで３回抽出し、毎度の使用量を５ｍＬとし、抽出液を合併して、５ｍＬ
の飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、さらに５ｍＬの飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナ
トリウムで乾燥させ、溶媒を減圧・蒸発させて淡黄色油状物を得るが、それを１ｍＬのク
ロマトグラムメタノール中に溶解させて、微細孔ろ過膜でろ過し、さらにＨＰＬＣで純化
して、クロマトグラフィーカラムはＣ１８調製カラムであり、流動相はアセトニトリル―
水であり、割合は７０：３０であり、測定波長は２１０nmであり、目標成分を収集して減
圧・蒸発して２１０ｍｇの目標化合物３を得る。

【0020】

実施例３
目標化合物１の合成
（１）化合物Iウルシオール５ｇを９０ｍＬのＤＭＦと９０ｍＬのＤＣＭ中に溶解させ、
１．２ｇのＮａＨを入れて、アルゴンガスの保護の下で還流して１２時間過ごし、室温ま
で冷却した後、ゆっくりと１５０ｍＬの水を入れて、ＤＣＭで３回抽出して毎度の使用量
を１００ｍＬとし、抽出液を合併して、飽和食塩水で２回洗浄し、毎度の使用量を１００
ｍＬとし、無水硫酸ナトリウムで乾燥させてから、減圧蒸発させ、カラムクロマトグラフ
ィーを行い、ＰＥで溶出し、溶出液を減圧・蒸発させて化合物IIを得る。
（２）化合物II２．０ｇを４ｍＬのトルエン中に溶解させ、４ｍＬのアクリル酸エステル
を入れて、アルゴンガスの保護の下で、３６時間還流させ、溶媒を減圧・蒸発させ、１６
ｍＬのエタノールと１．９ｇのＫＯＨを入れて、１０分間加熱・還流させ、溶媒を減圧・
蒸発させ、１５ｍＬの水を入れて、ＥＡで３回抽出して毎度の使用量を１５ｍＬとし、抽
出液を合併して、無水硫酸ナトリウムで乾燥させてから、減圧・蒸発させ、カラムクロマ
トグラフィーを行い、ＰＥ−ＥＡで溶出し、ＰＥ：ＥＡ＝１００：１〜３：１とし、溶出
液を減圧・蒸発させて化合物IIIを得る。
（３）化合物III５０ｍｇを２ｍLの無水 DMF中に溶解させ、４８uLの DIPEA、１７０ｍｇ
のシリコン基保護ヒドロキシルアミンと９０ｍｇのＨＡＴＵを入れて、反応させて攪拌し
ながら１２時間過ごし、減圧・蒸発させ、直接クロマトグラフィーを行い、ジクロロメタ
ン―メタノールで溶出し、ジクロロメタン：メタノール＝２００：１とし、溶出液を減圧
・蒸発させた後、産物を３．５ｍLのＴＢＡＦ−ＴＨＦ溶液中に溶解させ、室温にて４０
分間攪拌し、減圧・蒸発させてから、直接カラムクロマトグラフィーを行い、ＤＣＭ―Ｍ
ｅＯＨで溶出し、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５０：１とし、溶出液を減圧・蒸発させ、産物をＨ
ＰＬＣで純化させ、クロマトグラフィーカラムはＣ１８調製カラムであり、流動相はアセ
トニトリル―水であり、割合は７５：２５であり、測定波長は２１０nmであり、目標成分
を収集して減圧・蒸発して１９ｍｇの目標化合物１を得る。

【0021】

目標化合物２の合成
（１）化合物III６５０ｇを９ｍLのジクロロメタン中に溶解させ、４００ｍｇのｍCPBAを
入れて、室温の下で攪拌しながら１２時間過ごし、飽和重炭酸ナトリウムで３回洗浄し、
毎度の使用量を８ｍLとし、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧・蒸発させて無色油状物
が得られるが、その全部を３ｍLの無水テトラヒドロフラン中に入れて、ゆっくりと８ｍL
の８００ｍｇ水素化アルミニウムリチウムを含有する混濁液中に滴り、その後温度を７０
℃に上げて２時間反応させ、室温まで冷却してから、ゆっくりと０．８ｍLの水を入れて
、再び０．８ｍLの１５％水酸化ナトリウム溶液を入れてから、再び２．５ｍLの水を入れ
て、３０分後ろ過し、８ｍLのテトラヒドロフランで洗浄し、ろ過液を減圧してテトラヒ
ドロフランを除去し、５ｍLの水を入れて、酢酸エチルで 4回抽出し、毎度の使用量を５
ｍLとし、抽出液を合併して飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減
圧・蒸発させ、シリカゲールカラムクロマトグラフィーを行い、ＰＥ -ＥＡで溶出し、Ｐ
Ｅ：ＥＡ＝３：１〜２：１として、溶出液を減圧・蒸発させて、化合物IVを得る。
（２）化合物IV９５ｍｇを０．８ｍLのアセトン中に溶解させ、氷水バス中で温度を下げ
、３００ｕ Lのジョーンズ試薬を入れて、室温にて３０分間反応させた後、１６０ｕＬの
イソプロパノールを入れて、２０分間攪拌し、３ｍＬの飽和塩化ナトリウム溶液を入れて
、ＥＡで５回抽出し、毎度の使用量を３ｍＬとし、抽出液を合併して、無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥させ、減圧・蒸発させ、シリカゲールカラムクロマトグラフィーを行い、ＰＥ−
ＥＡで溶出し、ＰＥ：ＥＡ＝１：１とし、溶出液を減圧・蒸発させて、化合物Ｖを得る。
（３）化合物Ｖ８５ｍｇを０．８ｍＬのメタノール中に溶解させ、１６ｍｇのＮａＢＨ_４
を入れて、室温にて３０分間反応させ、減圧・蒸発させてから、５ｍＬのＥＡで溶解させ
、飽和食塩水で２回洗浄し、ＥＡで２回抽出し、毎度の使用量を５ｍＬとし、抽出液を合
併して、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧・蒸発させ、真空条件下で２時間乾
燥させ、１．５ｍＬのＤＣＭ、２０ｍｇのＮＨ_２ＯＴＨＰ、２０ｍｇのＥＤＣ．Ｃｌ及び
３０ｕＬのＴＥＡを入れて、反応させがながら１２時間過ごし、３ｍＬの５％のクエン酸
水溶液で２回洗浄した後、ＤＣＭで２回抽出し、毎度の使用量を５ｍＬとし、有機層を合
併して、溶媒を減圧・乾燥させ、１．２ｍＬのメタノール溶液を入れて、氷水バスにて温
度を下げ、１．５ｍＬの１０％ＨＣｌ溶液を入れて、１時間反応させてから、溶媒を減圧
・蒸発させ、３ｍＬのメタノールで溶解させ、微細孔ろ過膜でろ過し、さらにＨＣｌで純
化させて、クロマトグラフィーカラムはＣ１８調製カラムであり、流動相はアセトニトリ
ル―水であり、割合は６８：３２であり、測定波長は２１０nmであり、目標成分を収集し
て減圧・蒸発して４７ｍｇの目標化合物２を得る。

【0022】

目標化合物３の合成
（１）化合物III９５０ｍｇを８ｍＬの新しく蒸発させた無水酢酸に入れて、温度を０℃
まで下げ、激しく攪拌しながら５００ｍｇの無水硝酸銅を入れ、２時間後４５０ｍｇの無
水硝酸銅を入れ、３時間後２５ｍＬの水を入れて、２０分間攪拌した後酢酸エチルで２回
抽出し、毎度の使用量を１５ｍＬとし、有機層を合併して、飽和重炭酸ナトリウム溶液で
２回洗浄し、毎度の使用量を３０ｍＬとし、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧・蒸
発させて、淡黄色油状物を得る。
（２）ステップ１から得た淡黄色油状物を１６ｍＬのメタノール中に溶解させ、０．８ｍ
Lの水と１．６ｇの水酸化カリウムを入れて、３時間加熱・還流してから、溶媒を減圧・
蒸発させ、８ｍLの水を入れて、酢酸エチルで３回抽出し、毎度の使用量を８ｍLとし、抽
出液を合併して、１５ｍLの飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減
圧・蒸発させて、淡黄色油状物を得る。
（３）ステップ２から得た淡黄色油状物を４５℃の真空下で乾燥させ、５時間後、８ｍL
の無水ジクロロメタン中に溶解させ、２５０ｍｇのＮＨ_２ＯＴＨＰ、６５０ｍｇＴＢＴＵ
及び０．９ｍLのＤＩＰＥＡを入れて、室温にて６時間反応させた後、１０％クエン酸水
溶液で２回洗浄し、毎度の使用量を８ｍLとし、さらに飽和重炭酸ナトリウム溶液で２回
洗浄し、毎度の使用量を１５ｍLとし、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶剤を減圧・蒸
発させて、シリカゲールカラムクロマトグラフィーを行い、ＰＥ−ＥＡで溶出し、ＰＥ：
ＥＡ＝３：１〜２：１とし、溶出液を減圧・蒸発させて無色油状物を得る。
（４）ステップ３から得た無色油状物を５ｍＬのメタノール中に溶解させ、０．８ｍＬの
６Ｍ塩酸溶液を入れて、室温にて２時間攪拌し、溶媒を減圧・蒸発させ、５ｍＬの水を入
れて、酢酸エチルで３回抽出し、毎度の使用量を５ｍＬとし、抽出液を合併して、８ｍＬ
の飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、さらに８ｍＬの飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナ
トリウムで乾燥させ、溶媒を減圧・蒸発させて淡黄色油状物を得るが、それを２ｍＬのク
ロマトグラムメタノール中に溶解させて、微細孔ろ過膜でろ過し、さらにＨＰＬＣで純化
して、クロマトグラフィーカラムはＣ１８調製カラムであり、流動相はアセトニトリル―
水であり、割合は７０：３０であり、測定波長は２１０nmであり、目標成分を収集して減
圧・蒸発して３１５ｍｇの目標化合物３を得る。

【0023】

実施例４
３種化合物の構造鑑定
１ Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、ＥＳＩ−ＭＳ、ＩＲなどの手段を用いて、合成された
化合物１、２及び３の化学構造に対する鑑定を確証を行い、３種化合物の理化学性質とス
ペクトラムデータは表１を参照。
表１ 化合物１、２及び３の理化学定数とスペクトラムデータ

【0024】

実施例５
３種化合物とＨＤＡＣ２及びＨＤＡＣ８との分子ドッキング
本発明はＧＬＩＤＥプログラムを用いて、化合物１、２及び３の分子をそれぞれＨＤＡＣ
２の結晶体構造（ＰＤＢ ＩＤ：４ＬＸＺ）及びＨＤＡＣ８の結晶体構造（ＰＤＢ ＩＤ
：３ＳＦＦ）とドッキングさせるとともに、Ｇｒｉｄ採点関数を用いて、化合物とＨＤＡ
Ｃ２及びＨＤＡＣ８とのドッキング効果を評価した。その結果、化合物１、２及び３とＨ
ＤＡＣ２とのドッキング点数はそれぞれー７．７２４、−７．９１４及びー７．９４６で
あり、ＨＤＡＣ８とのドッキング点数はそれぞれー９．２３０、−９．５８３及びー９．
８３５であって、３種化合物はいずれもＨＤＡＣ２及びＨＤＡＣ８の活性ポケットと良く
結合できることを表明し、３種化合物の脂肪鎖部分はポケット中の細長いチューブ部位を
占めており、キサム酸基はいずれもチューブの底部に位置し、キサム酸基はいずれもポケ
ット底部のＺｎ２＋と安定したキレートを形成することができ、キサム酸基中のヒドロキ
シルとカルボニルはＨＤＡＣ２酵素のＨｉｓ１４５及びＴｒｙ３０８残基と安定した水素
結合相互作用を形成することができ、ＨＤＡＣ８酵素のＧｌｙ１４０及びＨｉｓ１４３残
基と安定した水素結合相互作用を形成することができ、また、化合物２の脂肪鎖上のカル
ボニル基と化合物３のベンゼンリング上のニトロ基はＨＤＡＣ２酵素のＧｌｕ１０３及び
Ａｓｐ１０４などの残基と安定した水素結合相互作用を形成することができ、ＨＤＡＣ８
酵素のＬｙｓ３３、Ａｌａ３２、Ｈｉｓ１４２及びＴｙｒ１５４など残基と安定した水素
結合相互作用を形成することができる。３種化合物中の化合物２と３は比較的高いＧｌｉ
ｄ点数を示したが、これはウルシオールのアルキル基側鎖中に電子提供基カルボニル基を
導入するか、或いはベンゼンリング上にニトロ基など置換基を導入することによって、Ｈ
ＤＡＣ２とＨＤＡＣ８との結合相性を著しく向上するということを表明する。なぜならば
、これらは残基とより強い水素結合相互作用を形成するからである。

【0025】

実施例６
３種化合物のＨＤＡＣ２とＨＤＡＣ８に対する抑制活性評価
本発明ではＨＤＡＣ検査試薬キットを用いて、３種化合物のＨＤＡＣ２とＨＤＡＣ８に対
する抑制活性を測定した。化合物１、２及び３はＨＤＡＣ２とＨＤＡＣ８に対して、いず
れも優れたあ抑制作用があり、抑制率は濃度が増えるにつれ、上昇する傾向を見せ、明ら
かな濃度依頼性を示した。濃度が２０ｕｇ／ｍＬである時に、化合物１、２及び３のＨＤ
ＡＣ２に対する抑制率はそれぞれ９５．６％、９６．５％及び９７．９％、ＨＤＡＣ８に
対する抑制率はそれぞれ９４．８％、９５．４％及び９６．９％であり、化合物１、２及
び３のＨＤＡＣ２に対する半数抑制濃度（Ｉ５０）はそれぞれ０．２７、０．２５及び０
．２２ｕｇ／ｍＬ、ＨＤＡＣ８に対する半数抑制濃度（Ｉ５０）はそれぞれ０．２９、０
．２６及び０．２４ｕｇ／ｍＬであり、３種化合物のＩＣ５０値は陽性薬ＳＡＨＡのＩＣ
５０値と相当していた。また、化合物２と化合物３のＨＤＡＣ２とＨＤＡＣ８に対する抑
制効果は化合物１にくらべて優れており、３種化合物のＨＤＡＣ２及びＨＤＡＣ８に対す
る抑制結果は分子ドッキング結果と一致しており、これはウルシオールのアルキル基側鎖
中に電子提供基カルボニル基を導入するか、或いはベンゼンリング上にニトロ基など置換
基を導入することによって、ＨＤＡＣ２とＨＤＡＣ８に対する抑制活性を著しく向上でき
るということを表明する。

【0026】

表２ 異なる濃度化合物のＨＤＡＣ２とＨＤＡＣ８抑制率に対する影響