特許 6845812 添加剤、表面処理剤、表面改質ラテックス粒子、表面改質ラテックス粒子の製造方法、ラテックス凝集反応用試薬、キット、及び標的物質の検出方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6845812

(24)【登録日】2021年3月2日

(45)【発行日】2021年3月24日

(54)【発明の名称】添加剤、表面処理剤、表面改質ラテックス粒子、表面改質ラテックス粒子の製造方法、ラテックス凝集反応用試薬、キット、及び標的物質の検出方法

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/543 20060101AFI20210315BHJP

【ＦＩ】

   G01N33/543 581J

   G01N33/543 583

【請求項の数】18

【全頁数】35

(21)【出願番号】特願2017-566998(P2017-566998)

(86)(22)【出願日】2017年2月9日

(86)【国際出願番号】JP2017004730

(87)【国際公開番号】WO2017138608

(87)【国際公開日】20170817

【審査請求日】2019年12月18日

(31)【優先権主張番号】特願2016-25316(P2016-25316)

(32)【優先日】2016年2月12日

(33)【優先権主張国】JP

(73)【特許権者】

【識別番号】000004178

【氏名又は名称】ＪＳＲ株式会社

(73)【特許権者】

【識別番号】513133022

【氏名又は名称】ＪＳＲライフサイエンス株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】110000084

【氏名又は名称】特許業務法人アルガ特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】徐 盈佳

(72)【発明者】

【氏名】宮路 正昭

(72)【発明者】

【氏名】田守 功二

(72)【発明者】

【氏名】澤井 時男

(72)【発明者】

【氏名】本間 博之

(72)【発明者】

【氏名】林 直樹

(72)【発明者】

【氏名】表 信也

【審査官】 大瀧 真理

(56)【参考文献】

【文献】 特開平１１−２８７８０２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２０１４−１５３１４０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０７−０８３９２３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００２−３６５２９６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０８−１１０３４０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００９−１３３８０９（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｇ０１Ｎ ３３／４８ − ３３／９８

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ラテックス凝集反応用試薬に用いられるラテックス粒子に添加するための添加剤であって、
前記ラテックス粒子が、ブロッキング処理されていないラテックス粒子であり、
親水性繰り返し単位（Ａ）：全繰り返し単位中、６０質量％超９９質量％以下と、疎水性繰り返し単位（Ｂ）：全繰り返し単位中、１質量％以上４０質量％未満とを有し、前記繰り返し単位（Ａ）として、下記式（６）で表される親水性繰り返し単位を少なくとも有し且つ重量平均分子量が３０００以上のポリマーを含む、
添加剤。

【化1】

〔式（６）中、
Ｒ²¹は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ²²及びＲ²³は、それぞれ独立して、炭素数１〜３のアルカンジイル基を示す。〕

【請求項2】

ラテックス凝集反応用試薬に用いられるラテックス粒子の表面処理に使用するための表面処理剤であって、
親水性繰り返し単位（Ａ）：全繰り返し単位中、６０質量％超９９質量％以下と、疎水性繰り返し単位（Ｂ）：全繰り返し単位中、１質量％以上４０質量％未満とを有し、前記繰り返し単位（Ａ）として、下記式（６）で表される親水性繰り返し単位を少なくとも有し且つ重量平均分子量が３０００以上のポリマーを含む、
表面処理剤。

【化2】

〔式（６）中、
Ｒ²¹は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ²²及びＲ²³は、それぞれ独立して、炭素数１〜３のアルカンジイル基を示す。〕

【請求項3】

前記ポリマーが、前記繰り返し単位（Ａ）として、ポリアルキレングリコール鎖を側鎖に有する親水性繰り返し単位をさらに有する、請求項１又は２に記載の剤。

【請求項4】

前記ポリマーが、前記繰り返し単位（Ａ）として、双性イオン構造を側鎖に有する親水性繰り返し単位をさらに有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の剤。

【請求項5】

前記双性イオン構造を側鎖に有する親水性繰り返し単位が、下記式（３）又は（４）で表される親水性繰り返し単位である、請求項４に記載の剤。

【化3】

〔式（３）中、
Ｒ⁶は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ⁷は、炭素数２〜４のアルカンジイル基を示し、
Ｒ⁸は、炭素数１〜１０のアルカンジイル基を示し、
Ｒ⁹、Ｒ¹⁰及びＲ¹¹は、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜８の炭化水素基を示し、
ｑは、平均値で１〜１０を示す。〕

【化4】

〔式（４）中、
Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ^-、−（Ｏ＝Ｓ＝Ｏ）Ｏ^-、−Ｏ（Ｏ＝Ｓ＝Ｏ）Ｏ^-、−（Ｓ＝Ｏ）Ｏ^-、−Ｏ（Ｓ＝Ｏ）Ｏ^-、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ¹⁷）Ｏ^-、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｒ¹⁷）Ｏ^-、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ¹⁷）Ｏ^-、又は−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ¹⁷）Ｏ^-を示し（Ｒ¹⁷は炭素数１〜３のアルキル基を示す）、
Ｒ¹²は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ¹³及びＲ¹⁴は、それぞれ独立して、炭素数１〜１０の２価の有機基を示し、
Ｒ¹⁵及びＲ¹⁶は、それぞれ独立して、炭素数１〜１０の炭化水素基を示す。〕

【請求項6】

前記ポリマーが、前記繰り返し単位（Ａ）として、下記式（５）で表される親水性繰り返し単位をさらに有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の剤。

【化5】

〔式（５）中、
Ｒ¹⁸は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ¹⁹及びＲ²⁰は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基又はヒドロキシアルキル基を示す。〕

【請求項7】

前記ポリマーが、前記繰り返し単位（Ｂ）に、ケト基、エステル結合、アミド結合及び芳香族炭化水素基から選ばれる１種又は２種以上を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の剤。

【請求項8】

前記ポリマーが、前記繰り返し単位（Ｂ）として、（メタ）アクリルアミド系モノマーに由来する疎水性繰り返し単位、（メタ）アクリレート系モノマーに由来する疎水性繰り返し単位、及びスチレン系モノマーに由来する疎水性繰り返し単位から選ばれる１種又は２種以上を有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の剤。

【請求項9】

前記ポリマーが、前記繰り返し単位（Ｂ）として、下記式（７）で表される疎水性繰り返し単位及び下記式（８）で表される疎水性繰り返し単位から選ばれる１種又は２種以上を有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の剤。

【化6】

〔式（７）中、
Ｒ³¹は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ³²は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ³⁴−、＊−ＮＲ³⁴−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ³⁴は、水素原子又は炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（７）中のＲ³¹が結合している炭素原子と結合する位置を示す）又はフェニレン基を示し、
Ｒ³³は、炭化水素基を示す。〕

【化7】

〔式（８）中、
Ｒ³⁵は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｚは、ホルミル基又はケト基を有する有機基を示す。〕

【請求項10】

前記ポリマーの重量平均分子量が３０００〜１００万である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の剤。

【請求項11】

前記ポリマーが水溶性である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の剤。

【請求項12】

前記ラテックス粒子が、標的物質に対するリガンドが固定化されたラテックス粒子である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の剤。

【請求項13】

親水性繰り返し単位（Ａ）：全繰り返し単位中、６０質量％超９９質量％以下と、疎水性繰り返し単位（Ｂ）：全繰り返し単位中、１質量％以上４０質量％未満とを有し、前記繰り返し単位（Ａ）として、下記式（６）で表される親水性繰り返し単位を少なくとも有し且つ重量平均分子量が３０００以上のポリマーをラテックス粒子の表面に有する、
表面改質ラテックス粒子。

【化8】

〔式（６）中、
Ｒ²¹は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ²²及びＲ²³は、それぞれ独立して、炭素数１〜３のアルカンジイル基を示す。〕

【請求項14】

親水性繰り返し単位（Ａ）：全繰り返し単位中、６０質量％超９９質量％以下と、疎水性繰り返し単位（Ｂ）：全繰り返し単位中、１質量％以上４０質量％未満とを有し、前記繰り返し単位（Ａ）として、下記式（６）で表される親水性繰り返し単位を少なくとも有し且つ重量平均分子量が３０００以上のポリマーとラテックス粒子とを接触させる接触工程を含む、
表面改質ラテックス粒子の製造方法。

【化9】

〔式（６）中、
Ｒ²¹は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ²²及びＲ²³は、それぞれ独立して、炭素数１〜３のアルカンジイル基を示す。〕

【請求項15】

請求項１４に記載の製造方法により得られた、
表面改質ラテックス粒子。

【請求項16】

請求項１３又は１５に記載の表面改質ラテックス粒子を含む、
ラテックス凝集反応用試薬。

【請求項17】

ラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出に用いるためのキットであって、
請求項１６に記載のラテックス凝集反応用試薬を備える、
キット。

【請求項18】

請求項１６に記載のラテックス凝集反応用試薬と検体とを混合する混合工程、及び
前記混合工程により生じた凝集反応を光学的に検出する検出工程を含む、
標的物質の検出方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、添加剤、表面処理剤、表面改質ラテックス粒子、表面改質ラテックス粒子の製造方法、ラテックス凝集反応用試薬、キット、及び標的物質の検出方法に関する。

【背景技術】

【0002】

抗原（抗体）等の標的物質とこれに対する抗体（抗原）との間で生じる凝集反応を利用したラテックス凝集法が、臨床検査、生化学研究等の領域において広く活用されている（特許文献１）。このラテックス凝集法は、例えば、標的物質を含む可能性のある検体とバッファー等の第１試薬とを混合し、この混合液と、標的物質に対する抗体（抗原）が固定化されたラテックス粒子を含むラテックス凝集反応用試薬（第２試薬）とを混合するなどして行われる。そして、検体中に標的物質が存在する場合には、抗原抗体反応の結果として生じるラテックス粒子の凝集反応が検出される。

【0003】

しかしながら、ラテックス凝集法は、粒径が小さいラテックス粒子を用いた場合などに検出感度不足が指摘されることがある。
そのため、ラテックス凝集反応を促進する増感剤が提案されている。このような増感剤として、ポリエチレングリコール、多価アルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、アルギン酸、アミノエタンスルホン酸誘導体、アミノプロパンスルホン酸誘導体等の水溶性高分子が知られており（特許文献２〜４）、これら水溶性高分子を試薬に添加し一定の条件下にすることで検出感度を増大させている。

【0004】

しかしながら、上記水溶性高分子は、抗原抗体反応以外の要因（非特異吸着等）によるラテックス粒子の凝集を引き起こすという欠点があり、この凝集によりノイズが生じる、或いはラテックス凝集反応用試薬に上記水溶性高分子を配合して保存した場合に試薬中のラテックス粒子が凝集する等といった問題がある。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【特許文献1】特開２００６−２６６９７０号公報

【特許文献2】特開平８−２７８３０８号公報

【特許文献3】特開２００３−２９４７５３号公報

【特許文献4】特開２００６−１０５９１０号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

上記のような背景の下、抗原抗体反応以外の要因による凝集を抑制（ブロッキング）するために、アルブミン、カゼイン、ゼラチン、スキムミルク等の生物由来物質が表面処理剤としてラテックス粒子の表面に処理されている。
しかしながら、上記のような生体由来物質を表面処理剤として用いた場合、ＢＳＥに代表される生物汚染問題や製品のロット間差の問題などが懸念される。

【0007】

本発明が解決しようとする課題は、合成ポリマーを有効成分とするにも拘らず、ラテックス凝集反応用試薬保存中における当該試薬に含まれるラテックス粒子の凝集を抑制できる添加剤、表面処理剤を提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0008】

そこで、本発明者らは鋭意検討した結果、親水性繰り返し単位と疎水性繰り返し単位をそれぞれ特定量有し且つ特定の重量平均分子量をもつポリマーを、ブロッキング処理されていないラテックス粒子に添加すること、すなわち、上記ポリマーを用いてラテックス粒子の表面を処理することによって、上記ラテックス粒子の凝集が抑制されることを見出した。

【0009】

すなわち、本発明は、以下の〔１〕〜〔１８〕を提供するものである。

【0010】

〔１〕 ラテックス凝集反応用試薬に用いられるラテックス粒子に添加するための添加剤であって、前記ラテックス粒子が、ブロッキング処理されていないラテックス粒子であり、親水性繰り返し単位（Ａ）（以下、単に繰り返し単位（Ａ）とも称する）：全繰り返し単位中、６０質量％超９９質量％以下と、疎水性繰り返し単位（Ｂ）（以下、単に繰り返し単位（Ｂ）とも称する）：全繰り返し単位中、１質量％以上４０質量％未満とを有し、重量平均分子量が３０００以上のポリマー（以下、特定ポリマーとも称する）を含む、添加剤（以下、本発明の添加剤とも称する）。
〔２〕 ラテックス凝集反応用試薬に用いられるラテックス粒子の表面処理に使用するための表面処理剤であって、特定ポリマーを含む、表面処理剤（以下、本発明の表面処理剤とも称する）。
〔３〕 前記繰り返し単位（Ａ）に、ポリアルキレングリコール鎖、双性イオン構造、複素環基、エステル結合、アミド結合、ヒドロキシ基、エポキシ基、イソシアナート基、ブロックイソシアナート基、無水カルボン酸基及びアミノ基から選ばれる１種又は２種以上を含む、前記〔１〕又は〔２〕に記載の剤。
〔４〕 前記繰り返し単位（Ａ）に、ポリアルキレングリコール鎖、双性イオン構造、複素環基、エステル結合及びアミド結合から選ばれる１種又は２種以上を含む、前記〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の剤。
〔５〕 前記繰り返し単位（Ａ）として、（メタ）アクリルアミド系モノマーに由来する親水性繰り返し単位及び（メタ）アクリレート系モノマーに由来する親水性繰り返し単位から選ばれる１種又は２種以上を有する、前記〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載の剤。
〔６〕 前記（メタ）アクリレート系モノマーに由来する親水性繰り返し単位が、ポリアルキレングリコール鎖又は双性イオン構造を側鎖に有するものである、前記〔５〕に記載の剤。
〔７〕 前記繰り返し単位（Ｂ）に、ケト基、エステル結合、アミド結合及び芳香族炭化水素基から選ばれる１種又は２種以上を含む、前記〔１〕〜〔６〕のいずれかに記載の剤。
〔８〕 前記繰り返し単位（Ｂ）として、（メタ）アクリルアミド系モノマーに由来する疎水性繰り返し単位、（メタ）アクリレート系モノマーに由来する疎水性繰り返し単位、及びスチレン系モノマーに由来する疎水性繰り返し単位から選ばれる１種又は２種以上を有する、前記〔１〕〜〔７〕のいずれかに記載の剤。
〔９〕 前記繰り返し単位（Ｂ）として、下記式（７）で表される疎水性繰り返し単位及び下記式（８）で表される疎水性繰り返し単位から選ばれる１種又は２種以上を有する、前記〔１〕〜〔６〕のいずれかに記載の剤。

【0011】

【化1】

【0012】

〔式（７）中、
Ｒ³¹は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ³²は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ³⁴−、＊−ＮＲ³⁴−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ³⁴は、水素原子又は炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（７）中のＲ³¹が結合している炭素原子と結合する位置を示す）又はフェニレン基を示し、
Ｒ³³は、炭化水素基を示す。〕

【0013】

【化2】

【0014】

〔式（８）中、
Ｒ³⁵は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｚは、ホルミル基又はケト基を有する有機基を示す。〕

【0015】

〔１０〕 前記ポリマーの重量平均分子量が３０００〜１００万である、前記〔１〕〜〔９〕のいずれかに記載の剤。
〔１１〕 前記ポリマーが水溶性である、前記〔１〕〜〔１０〕のいずれかに記載の剤。
〔１２〕 前記ラテックス粒子が、標的物質に対するリガンドが固定化されたラテックス粒子である、前記〔１〕〜〔１１〕のいずれかに記載の剤。

【0016】

〔１３〕 特定ポリマーをラテックス粒子の表面に有する、表面改質ラテックス粒子（以下、本発明の表面改質ラテックス粒子とも称する）。

【0017】

〔１４〕 特定ポリマーとラテックス粒子とを接触させる接触工程を含む、表面改質ラテックス粒子の製造方法（以下、本発明の表面改質ラテックス粒子の製造方法とも称する）。
〔１５〕 前記〔１４〕に記載の製造方法により得られた、表面改質ラテックス粒子。

【0018】

〔１６〕 前記〔１３〕又は〔１５〕に記載の表面改質ラテックス粒子を含む、ラテックス凝集反応用試薬（以下、本発明のラテックス凝集反応用試薬とも称する）。
〔１７〕 ラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出に用いるためのキットであって、前記〔１６〕に記載のラテックス凝集反応用試薬を備える、キット（以下、本発明のキットとも称する）。
〔１８〕 前記〔１６〕に記載のラテックス凝集反応用試薬と検体とを混合する混合工程、及び前記混合工程により生じた凝集反応を光学的に検出する検出工程を含む、標的物質の検出方法（以下、本発明の標的物質の検出方法とも称する）。

【発明の効果】

【0019】

本発明の添加剤を、ブロッキング処理されていないラテックス粒子に添加することによって、ラテックス粒子をラテックス凝集反応用試薬に含有せしめて保存した場合におけるラテックス粒子の凝集を抑制できる。
本発明の表面処理剤でラテックス粒子を表面処理することによって、ラテックス粒子をラテックス凝集反応用試薬に含有せしめて保存した場合におけるラテックス粒子の凝集を抑制できる。
本発明の表面改質ラテックス粒子は、ラテックス凝集反応用試薬中で保存された場合でも凝集しにくいものである。

【図面の簡単な説明】

【0020】

【図1】共重合体（Ｐ１）、（Ｐ３）、（Ｐ４）を用いてラテックス粒子を表面処理した場合のプロゾーン抑制効果を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0021】

＜添加剤、表面処理剤＞
本発明の添加剤は、ラテックス凝集反応用試薬に用いられるラテックス粒子に添加するための添加剤であって、前記ラテックス粒子が、ブロッキング処理されていないラテックス粒子であり、親水性繰り返し単位（Ａ）：全繰り返し単位中、６０質量％超９９質量％以下と、疎水性繰り返し単位（Ｂ）：全繰り返し単位中、１質量％以上４０質量％未満とを有し、重量平均分子量が３０００以上のポリマーを含むことを特徴とするものである。
本発明の表面処理剤は、ラテックス凝集反応用試薬に用いられるラテックス粒子の表面処理に使用するための表面処理剤であって、親水性繰り返し単位（Ａ）：全繰り返し単位中、６０質量％超９９質量％以下と、疎水性繰り返し単位（Ｂ）：全繰り返し単位中、１質量％以上４０質量％未満とを有し、重量平均分子量が３０００以上のポリマーを含むことを特徴とするものである。
ここで、本明細書において、「ブロッキング処理されていないラテックス粒子」とは、アルブミン、カゼイン、ゼラチン、スキムミルク等の生物由来物質、ブロッキング試薬Ｎ１０１（日油社）、ブロッキング試薬Ｎ１０２（日油社）、Ｌｉｐｉｄｕｒｅ（登録商標）−ＢＬ１０３、ＢＬ２０３、ＢＬ８０２（日油社）等の合成ポリマー等を用いたブロッキング処理（表面処理）が未だ施されていないラテックス粒子のことをいう。
また、本明細書において、「表面処理」とは、特定ポリマーがラテックス粒子の表面の一部又は全部に付着するように特定ポリマーとラテックス粒子とを直接接触させることをいう。
なお、本発明の添加剤、表面処理剤は、特定ポリマーに該当するもののうち、１種のみを含んでいても２種以上を含んでいてもよい。また、本明細書において、数値範囲等を表す「Ａ〜Ｂ」はＡ以上、Ｂ以下を意味し、Ａ及びＢをその数値範囲に含む。
次に、特定ポリマーについて説明する。

【0022】

（繰り返し単位（Ａ））
特定ポリマーは、親水性繰り返し単位（Ａ）を有する。これにより、添加剤、表面処理剤を用いた際に、ラテックス粒子への非特異吸着を抑制しやすくなる。
また、特定ポリマーは、親水性繰り返し単位（Ａ）を、全繰り返し単位中６０質量％超９９質量％以下有する。繰り返し単位（Ａ）の含有量が６０質量％以下であると、ラテックス凝集反応用試薬保存中における凝集が発生しやすくなる。また、９９質量％を超えると、特定ポリマーがラテックス粒子に充分に付着せず、上記と同様にラテックス凝集反応用試薬保存中における凝集が発生しやすくなる。

【0023】

また、「親水性」とは、水との親和力が強い性質を持つことを意味する。具体的には１種の繰り返し単位のみからなるホモポリマー（実施例の測定法による数平均分子量が１万程度のもの）とした場合に、常温（２５℃）において純水１００ｇに対して１ｇ以上溶解する場合にはその繰り返し単位は親水性である。

【0024】

上記繰り返し単位（Ａ）の含有量は、ラテックス凝集反応用試薬保存中における凝集を抑制する観点から、全繰り返し単位中、好ましくは６５質量％以上、より好ましくは７０質量％以上、特に好ましくは７５質量％以上であり、また、特定ポリマーを粒子に付着させた後に、粒子表面から剥離しにくくなる観点から、全繰り返し単位中、好ましくは９７．５質量％以下、特に好ましくは９５質量％以下である。
特に、繰り返し単位（Ａ）の含有量を７５質量％以上とすることによって、ラテックス凝集反応用試薬を高温条件下で長期間保存した場合でもラテックス粒子が凝集しにくくなる。
なお、各繰り返し単位の含有量は¹³Ｃ−ＮＭＲ等により測定可能である。

【0025】

また、特定ポリマーとしては、ポリアルキレングリコール鎖、双性イオン構造、複素環基（モルホリノ基等）、エステル結合、アミド結合、ヒドロキシ基、エポキシ基、イソシアナート基、ブロックイソシアナート基、無水カルボン酸基及びアミノ基から選ばれる１種又は２種以上を繰り返し単位（Ａ）に含むものが好ましい。なお、特定ポリマーは、上記ポリアルキレングリコール鎖等を繰り返し単位（Ａ）の主鎖に有していても側鎖に有してもよいが、繰り返し単位（Ａ）の側鎖に有するのが好ましい。上記特定ポリマーの中では、ポリアルキレングリコール鎖、双性イオン構造、複素環基、エステル結合及びアミド結合から選ばれる１種又は２種以上を繰り返し単位（Ａ）に含む特定ポリマーがより好ましい。
双性イオン構造としては、第４級アンモニウム塩型カチオン性官能基と、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ^-、−ＳＯ₃^-及び−Ｏ−（Ｏ＝Ｐ−Ｏ^-）−Ｏ−から選ばれる１価又は２価のアニオン性官能基とを有するものが好ましい。
ポリアルキレングリコール鎖としては、−（Ｒ¹Ｏ）ｎ−で表されるものが好ましい（Ｒ¹は、炭素数２〜４のアルカンジイル基を示し、ｎは、平均値で２〜１００を示す）。
Ｒ¹で示されるアルカンジイル基の炭素数は、好ましくは２又は３であり、より好ましくは２である。
また、Ｒ¹で示されるアルカンジイル基は直鎖状でも分岐状でもよく、具体的には、エタン−１，２−ジイル基、プロパン−１，２−ジイル基、プロパン−１，３−ジイル基、プロパン−２，２−ジイル基、ブタン−１，２−ジイル基、ブタン−１，３−ジイル基、ブタン−１，４−ジイル基等が挙げられる。これらの中でも、本発明の所望の効果や入手容易性等の観点から、エタン−１，２−ジイル基が好ましい。なお、ｎ個のＲ¹は同一でも異なっていてもよい。
ｎは、平均値で２〜１００を示すが、好ましくは平均値で４〜９０であり、より好ましくは平均値で８〜９０であり、更に好ましくは平均値で８〜６０であり、更に好ましくは平均値で８〜４０であり、特に好ましくは平均値で９〜２５である。
なお、本明細書における各「平均値」はＮＭＲで測定できる。例えば、下記式（２）の構造について、¹Ｈ−ＮＭＲを測定し、Ｒ¹で示されるアルカンジイル基と、Ｒ²で示されるアルキル基の末端のメチル基との、それぞれのプロトンピークの積分値を比較することで、ｎの平均値を算出可能である。

【0026】

繰り返し単位（Ａ）としては、不飽和結合を末端又は非末端に有するモノマーに由来する繰り返し単位が挙げられる。具体的には、（メタ）アクリルアミド系モノマーに由来する繰り返し単位（以下、（メタ）アクリルアミド系繰り返し単位とも称する）、（メタ）アクリレート系モノマーに由来する繰り返し単位（以下、（メタ）アクリレート系繰り返し単位とも称する）、スチレン系モノマーに由来する繰り返し単位（以下、スチレン系繰り返し単位とも称する）、不飽和ポリアルキレングリコールエーテル系モノマーに由来する繰り返し単位等が挙げられる。なお、繰り返し単位（Ａ）としてこれらのうち１種を単独で用いても２種以上を組み合わせて用いてもよい。
これらの中でも、繰り返し単位（Ａ）としては、（メタ）アクリルアミド系繰り返し単位、（メタ）アクリレート系繰り返し単位、スチレン系繰り返し単位が好ましく、（メタ）アクリルアミド系繰り返し単位、（メタ）アクリレート系繰り返し単位がより好ましい。なお、（メタ）アクリレート系繰り返し単位の含有量は、繰り返し単位（Ａ）全量に対して、０〜９０質量％が好ましく、０〜８０質量％がより好ましく、０〜７０質量％が特に好ましい。
なお、上記のとおり繰り返し単位（Ａ）は、ポリアルキレングリコール鎖、双性イオン構造や、モルホリノ基等の複素環基等を側鎖等に有していてもよい。また、これら基のうち１種を単独で有していても２種以上を有していてもよい。

【0027】

ここで、繰り返し単位（Ａ）のうち、ポリアルキレングリコール鎖を側鎖に有する親水性繰り返し単位（以下、繰り返し単位（Ａ−１）とも称する）について具体的に説明する。
繰り返し単位（Ａ−１）としては、上記不飽和結合を末端又は非末端に有するモノマーとして例示したモノマー種と同様のモノマーに由来する繰り返し単位が挙げられるが、（メタ）アクリレート系繰り返し単位が特に好ましい。

【0028】

また、繰り返し単位（Ａ−１）は、ポリアルキレングリコール鎖の末端に水素原子又は炭素数１〜４のアルキル基が結合していることが好ましい。このような繰り返し単位（Ａ−１）としては、例えば、下記式（１）で表される構造を側鎖に有する親水性繰り返し単位が挙げられ、斯かる場合、下記式（２）で表される親水性繰り返し単位が好ましい。

【0029】

【化3】

【0030】

〔式（１）中、
Ｒ²は、水素原子又は炭素数１〜４のアルキル基を示し、
Ｒ¹及びｎは、前記と同義である。〕

【0031】

【化4】

【0032】

〔式（２）中、
Ｒ³は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ⁴は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−ＮＲ⁵−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ⁵は、水素原子又は炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（２）中のＲ³が結合している炭素原子と結合する位置を示す）又はフェニレン基を示し、
その他の記号は式（１）中の記号と同義である。〕

【0033】

ここで、式（１）及び（２）中の各記号について説明する。

【0034】

Ｒ²は、水素原子又は炭素数１〜４のアルキル基を示す。Ｒ²で示されるアルキル基の炭素数は、本発明の所望の効果や入手容易性等の観点から、好ましくは１〜３であり、より好ましくは１又は２であり、更に好ましくは１である。また、Ｒ²で示されるアルキル基は直鎖状でも分岐状でもよく、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基が挙げられる。
斯様なＲ²の中でも、本発明の所望の効果や入手容易性等の観点から、水素原子、炭素数１〜３のアルキル基が好ましく、水素原子、炭素数１又は２のアルキル基がより好ましく、水素原子又はメチル基が更に好ましく、メチル基が特に好ましい。

【0035】

また、Ｒ⁴は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−ＮＲ⁵−（Ｃ＝Ｏ）−又はフェニレン基を示す。斯かるフェニレン基としては、１，２−フェニレン基、１，３−フェニレン基、１，４−フェニレン基が挙げられる。

【0036】

また、上記Ｒ⁵で示される有機基の炭素数は１〜１０であるが、好ましくは１〜６である。上記有機基としては、炭化水素基が挙げられる。斯かる炭化水素基は、脂肪族炭化水素基、脂環式炭化水素基及び芳香族炭化水素基を包含する概念である。

【0037】

上記Ｒ⁵における脂肪族炭化水素基は直鎖状でも分岐状でもよく、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基等のアルキル基が挙げられる。
また、上記脂環式炭化水素基は、単環の脂環式炭化水素基と橋かけ環炭化水素基に大別される。上記単環の脂環式炭化水素基としては、シクロプロピル基、シクロヘキシル基等のシクロアルキル基が挙げられる。また、橋かけ環炭化水素基としては、イソボルニル基等が挙げられる。
また、上記芳香族炭化水素基としては、フェニル基等のアリール基が挙げられる。

【0038】

上述のようなＲ⁴の中でも、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−が特に好ましい。

【0039】

繰り返し単位（Ａ−１）を構成するモノマーとしては、ポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、ポリプロピレンレングリコール（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコールポリプロピレングリコール（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコールポリテトラメチレングリコール（メタ）アクリレート、ポリプロピレングリコールポリテトラメチレングリコール（メタ）アクリレート、メトキシポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、エトキシポリエチレングリコール（メタ）アクリレート等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて用いたものでもよい。

【0040】

次に、繰り返し単位（Ａ）のうち、双性イオン構造を側鎖に有する親水性繰り返し単位（以下、繰り返し単位（Ａ−２）とも称する）について具体的に説明する。
繰り返し単位（Ａ−２）としては、上記不飽和結合を末端又は非末端に有するモノマーとして例示したモノマー種と同様のモノマーに由来する繰り返し単位が挙げられるが、（メタ）アクリレート系繰り返し単位が特に好ましい。具体的には、下記式（３）又は（４）で表される親水性繰り返し単位が挙げられる。なお、式（３）で表される親水性繰り返し単位と式（４）で表される親水性繰り返し単位の両方を含んでいてもよい。

【0041】

【化5】

【0042】

〔式（３）中、
Ｒ⁶は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ⁷は、炭素数２〜４のアルカンジイル基を示し、
Ｒ⁸は、炭素数１〜１０のアルカンジイル基を示し、
Ｒ⁹、Ｒ¹⁰及びＲ¹¹は、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜８の炭化水素基を示し、
ｑは、平均値で１〜１０を示す。〕

【0043】

【化6】

【0044】

〔式（４）中、
Ｙは、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ^-、−（Ｏ＝Ｓ＝Ｏ）Ｏ^-、−Ｏ（Ｏ＝Ｓ＝Ｏ）Ｏ^-、−（Ｓ＝Ｏ）Ｏ^-、−Ｏ（Ｓ＝Ｏ）Ｏ^-、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ¹⁷）Ｏ^-、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｒ¹⁷）Ｏ^-、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ¹⁷）Ｏ^-、又は−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ¹⁷）Ｏ^-を示し（Ｒ¹⁷は炭素数１〜３のアルキル基を示す）、
Ｒ¹²は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ¹³及びＲ¹⁴は、それぞれ独立して、炭素数１〜１０の２価の有機基を示し、
Ｒ¹⁵及びＲ¹⁶は、それぞれ独立して、炭素数１〜１０の炭化水素基を示す。〕

【0045】

式（３）中、Ｒ⁷は、炭素数２〜４のアルカンジイル基を示す。なお、Ｒ⁷が複数ある場合、Ｒ⁷は同一でも異なっていてもよい。
また、Ｒ⁷で示されるアルカンジイル基の炭素数は、好ましくは２又は３であり、より好ましくは２である。
また、Ｒ⁷で示されるアルカンジイル基は直鎖状でも分岐状でもよく、具体的には、エタン−１，２−ジイル基、プロパン−１，２−ジイル基、プロパン−１，３−ジイル基、プロパン−２，２−ジイル基、ブタン−１，２−ジイル基、ブタン−１，３−ジイル基、ブタン−１，４−ジイル基等が挙げられる。これらの中でも、本発明の所望の効果や入手容易性等の観点から、エタン−１，２−ジイル基が好ましい。

【0046】

また、Ｒ⁸は、炭素数１〜１０のアルカンジイル基を示す。
Ｒ⁸で示されるアルカンジイル基の炭素数は、好ましくは１〜６であり、より好ましくは１〜４であり、更に好ましくは２又は３であり、特に好ましくは２である。
また、Ｒ⁸で示されるアルカンジイル基は直鎖状でも分岐状でもよく、好適な具体例としては、上記Ｒ⁷で示されるアルカンジイル基と同様のものが挙げられる。

【0047】

また、Ｒ⁹、Ｒ¹⁰及びＲ¹¹は、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜８の炭化水素基を示すが、炭素数１〜８の炭化水素基が好ましい。斯かる炭化水素基の炭素数は、好ましくは１〜４であり、より好ましくは１又は２であり、特に好ましくは１である。
また、上記炭化水素基としては、アルキル基；フェニル基等のアリール基；ベンジル基等のアラルキル基が挙げられるが、アルキル基が好ましい。
上記アルキル基は直鎖状でも分岐状でもよく、好適な具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基が挙げられる。

【0048】

また、ｑは、平均値で１〜１０を示すが、好ましくは平均値で１〜７であり、より好ましくは平均値で１〜４であり、更に好ましくは１である。

【0049】

式（３）で表される繰り返し単位を構成するモノマーとしては、２−（メタ）アクリロイルオキシエチル−２'−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、（２−（メタ）アクリロイルオキシエチルホスホリルコリン）、３−（メタ）アクリロイルオキシプロピル−２'−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、４−（メタ）アクリロイルオキシブチル−２'−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（メタ）アクリロイルオキシエトキシエチル−２'−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（メタ）アクリロイルオキシジエトキシエチル−２'−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（メタ）アクリロイルオキシエチル−２'−（トリエチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（メタ）アクリロイルオキシエチル−２'−（トリブチルアンモニオ）エチルホスフェート等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて用いたものでもよい。

【0050】

式（４）中、Ｙとしては、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ^-が好ましい。なお、Ｒ¹⁷で示されるアルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基が挙げられる。
また、式（４）中、Ｒ¹³及びＲ¹⁴は、それぞれ独立して、炭素数１〜１０の２価の有機基を示す。斯かる２価の有機基の炭素数は、好ましくは１〜８、より好ましくは１〜６である。
また、上記２価の有機基としては、２価の炭化水素基が好ましく、２価の脂肪族炭化水素基がより好ましい。当該２価の脂肪族炭化水素基は、直鎖状でも分岐状でもよい。また、２価の脂肪族炭化水素基としては、アルカンジイル基が好ましい。例えば、メタン−１，１−ジイル基、エタン−１，２−ジイル基、プロパン−１，１−ジイル基、プロパン−１，２−ジイル基、プロパン−１，３−ジイル基、プロパン−２，２−ジイル基、ブタン−１，４−ジイル基、ペンタン−１，５−ジイル基、ヘキサン−１，６−ジイル基等が挙げられる。

【0051】

また、式（４）中、Ｒ¹⁵及びＲ¹⁶は、それぞれ独立して、炭素数１〜１０の炭化水素基を示す。当該炭化水素基の炭素数は、好ましくは１〜６、より好ましくは１〜４である。
Ｒ¹⁵及びＲ¹⁶で示される炭化水素基としては、アルキル基；フェニル基等のアリール基；ベンジル基等のアラルキル基が挙げられるが、アルキル基が好ましい。当該アルキル基は、直鎖状でも分岐状でもよく、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基が挙げられる。

【0052】

式（４）で表される繰り返し単位を構成するモノマーとしては、Ｎ−（メタ）アクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン、Ｎ−（メタ）アクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−プロピルスルホベタイン等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて用いたものでもよい。

【0053】

ここで、特定ポリマーとしては、繰り返し単位（Ａ）として（メタ）アクリルアミド系繰り返し単位を少なくとも含むものが好ましい。（メタ）アクリルアミド系繰り返し単位の含有量は、繰り返し単位（Ａ）全量に対して、１０〜１００質量％が好ましく、２０〜１００質量％がより好ましく、３０〜１００質量％が特に好ましい。

【0054】

（メタ）アクリルアミド系繰り返し単位は、上記ポリアルキレングリコール鎖や双性イオン構造を側鎖に有するものであってもよいが、下記式（５）又は（６）で表される親水性繰り返し単位が特に好ましい。なお、式（５）で表される親水性繰り返し単位と式（６）で表される親水性繰り返し単位の両方を含んでいてもよい。また、繰り返し単位（Ａ）としては、ラテックス凝集反応用試薬保存中における凝集を抑制する観点から、式（６）で表される親水性繰り返し単位を少なくとも含むものがより好ましい。

【0055】

【化7】

【0056】

〔式（５）中、
Ｒ¹⁸は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ¹⁹及びＲ²⁰は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基又はヒドロキシアルキル基を示す。〕

【0057】

【化8】

【0058】

〔式（６）中、
Ｒ²¹は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ²²及びＲ²³は、それぞれ独立して、炭素数１〜３のアルカンジイル基を示す。〕

【0059】

式（５）中、Ｒ¹⁹及びＲ²⁰は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又はヒドロキシアルキル基を示す。

【0060】

Ｒ¹⁹、Ｒ²⁰で示されるアルキル基の炭素数は、好ましくは１〜３である。
また、上記Ｒ¹⁹、Ｒ²⁰で示されるアルキル基は直鎖状でも分岐状でもよく、好適な具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基が挙げられる。

【0061】

また、Ｒ¹⁹、Ｒ²⁰で示されるヒドロキシアルキル基の炭素数は、好ましくは１〜６であり、より好ましくは１〜３である。ヒドロキシアルキル基に含まれるアルキル基は直鎖状でも分岐状でもよく、ヒドロキシアルキル基の好適な具体例としては、ヒドロキシメチル基、ヒドロキシエチル基、ヒドロキシプロピル基、ヒドロキシイソプロピル基が挙げられる。なお、ヒドロキシアルキル基におけるヒドロキシ基の置換位置は任意である。

【0062】

式（５）で表される繰り返し単位を構成するモノマーとしては、ジメチル（メタ）アクリルアミド、ジエチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−イソプロピル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−（ヒドロキシメチル）（メタ）アクリルアミド、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）（メタ）アクリルアミド等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて用いてもよい。

【0063】

式（６）中、Ｒ²²及びＲ²³は、それぞれ独立して、炭素数１〜３のアルカンジイル基を示す。斯かるアルカンジイル基の炭素数は、好ましくは１〜２である。
また、上記アルカンジイル基は直鎖状でも分岐状でもよいが、直鎖状が好ましい。好適な具体例としては、メタン−１，１−ジイル基、エタン−１，２−ジイル基が挙げられる。

【0064】

式（６）で表される繰り返し単位を構成するモノマーとしては、４−（メタ）アクリロイルモルホリン等が挙げられる。

【0065】

なお、特定ポリマーは、繰り返し単位（Ａ）として、アニオン性繰り返し単位を含んでいてもよい。当該繰り返し単位としては、カルボキシ基、スルホ基、リン酸基等のアニオン性基を有する繰り返し単位が挙げられ、これらを１個有していてもよく、２個以上有していてもよい。繰り返し単位（Ａ）が有するアニオン性基は、塩を形成していてもよく、その場合の塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩；有機アンモニウム塩等が挙げられる。
アニオン性繰り返し単位を構成するモノマーとしては、フマル酸、マレイン酸、イタコン酸等の不飽和ジカルボン酸又はその塩；（メタ）アクリル酸等の不飽和カルボン酸又はその塩；エチレンスルホン酸、アリルスルホン酸、メタアリルスルホン酸、２−スルホエチル（メタ）アクリレート、２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸等のスルホ基含有重合性不飽和モノマー又はその塩；２−（メタ）アクリロイルオキシエチルアシッドホスフェート、２−（メタ）アクリロイルオキシプロピルアシッドホスフェート等のリン酸基含有重合性不飽和モノマー又はその塩が挙げられる。また、アニオン性繰り返し単位を構成するモノマーは、アクリル酸エステルの加水分解物；無水マレイン酸、無水イタコン酸等の不飽和ジカルボン酸の酸無水物の加水分解物；グリシジルメタクリレートや（４−ビニルベンジル）グリシジルエーテル等のエポキシ基への酸性基含有チオールの付加物などを用いて得ることもできる。アニオン性繰り返し単位は、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて用いたものでもよい。

【0066】

（繰り返し単位（Ｂ））
本発明の特定ポリマーは、疎水性繰り返し単位（Ｂ）を有する。これにより、添加剤、表面処理剤を用いた際に特定ポリマーがラテックス粒子に付着しやすくなる。

【0067】

また、「疎水性」とは、水との親和力が弱い性質を持つことを意味する。具体的には１種の繰り返し単位のみからなるホモポリマー（実施例の測定法による数平均分子量が１万程度のもの）とした場合に、常温（２５℃）において純水１００ｇに対して１ｇ未満しか溶解しない場合にはその繰り返し単位は疎水性である。

【0068】

繰り返し単位（Ｂ）の含有量は、全繰り返し単位中、１質量％以上４０質量％未満である。繰り返し単位（Ｂ）の含有量が１質量％未満であると、特定ポリマーがラテックス粒子に充分に付着せず、ラテックス凝集反応用試薬保存中における凝集が発生しやすくなる。また、４０質量％以上の場合も、ラテックス凝集反応用試薬保存中における凝集が発生しやすくなる。
上記繰り返し単位（Ｂ）の含有量は、特定ポリマーが粒子に付着しやすくなる観点から、全繰り返し単位中、好ましくは２．５質量％以上、特に好ましくは５質量％以上であり、また、ラテックス凝集反応用試薬保存中における凝集を抑制する観点から、全繰り返し単位中、好ましくは３８質量％以下、より好ましくは３５質量％以下、さらに好ましくは３０質量％以下、特に好ましくは２５質量％以下である。
特に、繰り返し単位（Ｂ）の含有量を２５質量％以下とすることによって、ラテックス凝集反応用試薬を高温条件下で長期間保存した場合でもラテックス粒子が凝集しにくくなる。
また、特定ポリマーとしては、ケト基、エステル結合、アミド結合及び芳香族炭化水素基（例えば、フェニル基等のアリール基、フェニレン基等のアリーレン基）から選ばれる１種又は２種以上を繰り返し単位（Ｂ）に含むものが好ましい。なお、特定ポリマーは、上記ケト基等を繰り返し単位（Ｂ）の主鎖に有していても側鎖に有してもよいが、繰り返し単位（Ｂ）の側鎖に有するのが好ましい。

【0069】

繰り返し単位（Ｂ）としては、不飽和結合を末端又は非末端に有するモノマーに由来する繰り返し単位が挙げられる。具体的には、（メタ）アクリルアミド系モノマーに由来する繰り返し単位、（メタ）アクリレート系モノマーに由来する繰り返し単位、スチレン系モノマーに由来する繰り返し単位等が挙げられる。また、繰り返し単位（Ｂ）としてこれらのうち１種を単独で用いても２種以上を組み合わせて用いてもよい。なお、スチレン系モノマーとしては、スチレン、４−メチルスチレン、２，４−ジメチルスチレン、２，４，６−トリメチルスチレン、４−エチルスチレン、４−イソプロピルスチレン、４−ｔｅｒｔ−ブチルスチレン、α−メチルスチレン等が挙げられる。
これらの中でも、繰り返し単位（Ｂ）としては、（メタ）アクリルアミド系繰り返し単位、（メタ）アクリレート系繰り返し単位、スチレン系繰り返し単位が好ましく、（メタ）アクリルアミド系繰り返し単位、（メタ）アクリレート系繰り返し単位がより好ましい。

【0070】

繰り返し単位（Ｂ）としては、疎水性の向上や非特異吸着抑制の観点から、下記式（７）又は（８）で表される疎水性繰り返し単位が好ましく、アルキル（メタ）アクリレート由来の疎水性繰り返し単位、式（８）で表される疎水性繰り返し単位がより好ましい。
なお、式（７）で表される疎水性繰り返し単位と式（８）で表される疎水性繰り返し単位の両方を含んでいてもよい。

【0071】

【化9】

【0072】

〔式（７）中、
Ｒ³¹は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ³²は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ³⁴−、＊−ＮＲ³⁴−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ³⁴は、水素原子又は炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（７）中のＲ³¹が結合している炭素原子と結合する位置を示す）又はフェニレン基を示し、
Ｒ³³は、炭化水素基を示す。〕

【0073】

【化10】

【0074】

〔式（８）中、
Ｒ³⁵は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｚは、ホルミル基又はケト基を有する有機基を示す。〕

【0075】

式（７）中の各記号について説明する。
式（７）中、Ｒ³²は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ³⁴−、＊−ＮＲ³⁴−（Ｃ＝Ｏ）−又はフェニレン基を示す。斯かるフェニレン基としては、１，２−フェニレン基、１，３−フェニレン基、１，４−フェニレン基が挙げられる。
Ｒ³²の中でも、本発明の所望の効果や入手容易性等の観点から、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ³⁴−、フェニレン基が好ましく、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ³⁴−がより好ましく、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−が特に好ましい。

【0076】

また、Ｒ³³は、炭化水素基を示す。当該炭化水素基の炭素数は、好ましくは１〜３０であり、より好ましくは１〜２４であり、更に好ましくは１〜１８であり、特に好ましくは１〜１４である。
また、Ｒ³⁴で示される有機基の炭素数は１〜１０であるが、好ましくは１〜６である。上記有機基としては、炭化水素基が挙げられる。

【0077】

ここで、Ｒ³³、Ｒ³⁴における炭化水素基は、脂肪族炭化水素基、脂環式炭化水素基及び芳香族炭化水素基を包含する概念である。また、直鎖状、分岐状のいずれでもよく、環構造を含んでいてもよい。
上記Ｒ³³、Ｒ³⁴における脂肪族炭化水素基は直鎖状でも分岐状でもよく、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基等のアルキル基が挙げられる。
また、上記脂環式炭化水素基は、単環の脂環式炭化水素基と橋かけ環炭化水素基に大別される。上記単環の脂環式炭化水素基としては、シクロプロピル基、シクロヘキシル基等のシクロアルキル基が挙げられる。また、橋かけ環炭化水素基としては、イソボルニル基等が挙げられる。
また、上記芳香族炭化水素基としては、フェニル基等のアリール基が挙げられる。
これらの中でもＲ³³としては、アルキル基が好ましい。その炭素数は上記と同様に、好ましくは１〜３０であり、より好ましくは１〜２４であり、更に好ましくは１〜１８であり、特に好ましくは１〜１４である。

【0078】

式（７）で表される繰り返し単位を構成するモノマーとしては、アルキル（メタ）アクリレートが好ましい。具体的には、メチル（メタ）アクリレート、２−エチルヘキシル（メタ）アクリレート、ラウリル（メタ）アクリレート、ステアリル（メタ）アクリレート等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて用いてもよい。

【0079】

次に、式（８）中の各記号について説明する。
式（８）中、Ｒ³⁵は、水素原子又はメチル基を示すが、好ましくは水素原子である。

【0080】

また、Ｚは、ホルミル基又はケト基を有する有機基を示す。当該有機基の総炭素数としては、４以上が好ましく、４〜１３がより好ましく、５〜１１が更に好ましく、６〜９が特に好ましい。ホルミル基又はケト基の個数は特に限定されず１個以上であればよいが、１個が好ましい。
また、Ｚとしては、エステル結合又はアミド結合を有するものが好ましい。エステル結合又はアミド結合の個数は特に限定されないが、１個が好ましい。
Ｚとしては、ホルミル基又はケト基を１個有し、且つエステル結合又はアミド結合を１個有する有機基が好ましく、下記式（９）で表される基がより好ましい。

【0081】

【化11】

【0082】

〔式（９）中、
Ｘ¹は、−Ｏ−又は−ＮＨ−を示し、
Ｘ²は、ホルミル基又はケト基を有する炭素数３〜１２（好ましくは炭素数４〜１０、より好ましくは炭素数５〜８）の有機基を示し、
＊は、結合手を示す。〕

【0083】

Ｘ¹としては、−ＮＨ−が好ましい。
Ｘ²としては、下記式（１０）で表される基が好ましい。

【0084】

【化12】

【0085】

〔式（１０）中、
Ｒ³⁶は、炭素数２〜１０（好ましくは炭素数３〜８、より好ましくは炭素数４〜６）の直鎖状又は分岐状のアルカンジイル基を示し、
Ｘ³は、ホルミル基又は−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ₃を示し、
＊は、結合手を示す。〕

【0086】

Ｘ²の好適な具体例としては、下記式（１１）又は（１２）で表される基が挙げられる。中でも、式（１１）で表される基がより好ましく、式（１３）で表される基が特に好ましい。

【0087】

【化13】

【0088】

〔式（１１）中、
Ｒ³⁷〜Ｒ⁴⁰は、それぞれ独立して、水素原子、メチル基又はエチル基を示し、
＊は、結合手を示す。〕

【0089】

【化14】

【0090】

〔式（１２）中、
Ｒ⁴¹〜Ｒ⁴⁴は、それぞれ独立して、水素原子、メチル基又はエチル基を示し、
＊は、結合手を示す。〕

【0091】

【化15】

【0092】

〔式（１３）中、＊は、結合手を示す。〕

【0093】

式（８）で表される繰り返し単位を構成するモノマーとしては、ジアセトン（メタ）アクリルアミドが挙げられる。

【0094】

なお、特定ポリマーは、繰り返し単位（Ａ）及び繰り返し単位（Ｂ）をそれぞれ、１種以上ずつ含有していればよい。また、特定ポリマーは、繰り返し単位（Ａ）及び（Ｂ）以外の繰り返し単位を含有していてもよい。

【0095】

（分子量）
本発明で用いる特定ポリマーの重量平均分子量は３０００以上である。重量平均分子量が３０００未満であると、粒子表面に付着しにくくなり、ラテックス凝集反応用試薬保存中における凝集が発生しやすくなる。
特定ポリマーの重量平均分子量（Ｍｗ）は、粒子表面への吸着力、プロゾーン抑制効果の観点から、好ましくは４０００以上、より好ましくは５０００以上、更に好ましくは６０００以上、更に好ましくは７０００以上、更に好ましくは８０００以上、更に好ましくは９０００以上、更に好ましくは１万以上、更に好ましくは１．５万以上、更に好ましくは２万以上、更に好ましくは５万以上、更に好ましくは７万以上、更に好ましくは１０万以上、更に好ましくは１２．５万以上、特に好ましくは１５万以上であり、また、粒子表面にリガンドを固定した場合の、リガンドにおける抗体抗原反応の感度を維持する等の観点から、好ましくは１００万以下、より好ましくは３０万以下、更に好ましくは２７万以下、更に好ましくは２５万以下、特に好ましくは２２．５万以下である。
また、特定ポリマーの数平均分子量（Ｍｎ）としては、５００〜１０万が好ましく、７００〜９５０００がより好ましく、１０００〜９００００が更に好ましく、１５００〜８５０００が更に好ましく、３０００〜８００００が更に好ましく、１００００〜７５０００が特に好ましい。
また、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）としては、１〜１０が好ましく、１．５〜８がより好ましく、１．８〜７が更に好ましく、２〜６が特に好ましい。
なお、上記重量平均分子量、数平均分子量及び分子量分布は、後述する実施例に記載の方法に従い測定すればよい。
なお、プロゾーンとは、標的物質（抗原等）が過剰状態となる場合に、リガンドと標的物質との反応（抗原抗体反応等）による粒子の凝集が抑制されて、標的物質の濃度を正確に測定できなくなる現象をいう。

【0096】

（その他物性）
特定ポリマーとしては水溶性のものが好ましい。また、特定ポリマーとしては、水の他に、有機溶媒（例えば、アセトン、エタノール、Ｎ−メチルピロリドン等）に溶解するものであってもよい。
ここで、本明細書において、０．５質量％のポリマー固形分となるように特定ポリマーを水（２５℃）に添加・混合した場合に目視で透明となるときは、その特定ポリマーは水溶性というものとする。
また、０．５質量％のポリマー固形分となるように特定ポリマーを上記有機溶媒（２５℃）に添加・混合した場合に目視で透明となるときは、その特定ポリマーは上記有機溶媒に溶解するというものとする。

【0097】

また、特定ポリマーは共重合体であればよく、ブロック共重合体、ランダム共重合体、交互共重合体、グラフト共重合体のいずれであってもよい。

【0098】

また、特定ポリマーは、例えば、各繰り返し単位を誘導するモノマーを混合し、この混合物を、必要に応じて、水、アセトニトリル、エクアミドＢ−１００（出光興産社製）等の溶媒に溶解又は分散させ、重合開始剤を加えてラジカル重合することにより得ることができる。

【0099】

上記重合開始剤としては、通常のラジカル重合開始剤であれば特に限定されるものではないが、例えば、過酸化ベンゾイル、過酸化ラウロイル、ジイソプロピルペルオキシジカーボネート、ｔ−ブチルペルオキシ−２−エチルヘキサノエート、ｔ−ブチペルオキシピバレート、ｔ−ブチルペルオキシジイソブチレート、アゾビスイソブチロニトリル、アゾビスイソジメチルバレロニトリル、２，２’−アゾビス（２−メチルプロピオンアミジン）・二塩酸塩、過硫酸塩、過硫酸塩一亜硫酸水素塩系等が挙げられる。
また、重合開始剤の使用量は、全モノマーの合計１００質量部に対して、０．００１〜１０質量部が好ましく、０．０１〜５質量部がより好ましい。また、重合温度は２０〜１００℃が好ましく、重合時間は０．５〜４８時間が好ましい。

【0100】

また、本発明の添加剤、表面処理剤中、特定ポリマーの含有量としては、０．０１〜１００質量％が好ましく、０．１〜８０質量％がより好ましい。

【0101】

本発明の添加剤、表面処理剤は特定ポリマーの他に溶剤を含んでいてもよい。溶剤としては、水；エタノール、メタノール、イソプロパノール等の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン等のケトン；酢酸エチル、酢酸ブチル等の酢酸エステル；ジメチルホルムアミド等のアミド；ジメチルスルホキシド等のスルホキシド等が挙げられる。

【0102】

そして、後記実施例に示すように、ブロッキング処理されていないラテックス粒子に特定ポリマーを添加すること、特定ポリマーを用いてラテックス粒子の表面を処理することによって、ラテックス粒子をラテックス凝集反応用試薬に含有せしめて保存した場合におけるラテックス粒子の凝集が抑制され、ラテックス粒子の保存安定性が向上する。また、非特異吸着によるラテックス粒子の凝集が引き起こす検出ノイズを低減する効果も期待できる。さらに、プロゾーン抑制効果等も有する。
したがって、特定ポリマーは、ブロッキング処理されていないラテックス粒子への添加剤、ラテックス粒子の表面処理剤として有用であり、表面処理方法に使用することができる。また、本発明の添加剤、表面処理剤は、ブロッキング剤、ラテックス粒子凝集抑制剤、ラテックス粒子保存安定化剤、検出ノイズ低減剤などとして使用することができ、また、プロゾーン抑制剤として使用してもよい。特定ポリマーは、ブロッキング剤として従来用いられてきたアルブミン、カゼイン、ゼラチン、スキムミルク等の生物由来物質の代替品としての利用が期待できる。
なお、本明細書において、「ブロッキング」とは、ラテックス粒子への非特異吸着を抑制することをいう。ラテックス粒子への非特異吸着の抑制は、ラテックス粒子への非特異吸着に起因するラテックス粒子の凝集が引き起こす検出ノイズを低減することを包含する概念である。

【0103】

＜表面改質ラテックス粒子＞
本発明の表面改質ラテックス粒子は、特定ポリマーをラテックス粒子の表面に有するものである。
本明細書において、「ラテックス粒子」とは、ラテックス凝集反応用試薬に用いられるラテックス粒子を意味し、溶剤に分散している状態のラテックス粒子、溶剤と共存していない状態のラテックス粒子のいずれをも包含する概念である。本発明の表面改質ラテックス粒子において、ラテックス粒子としては、特定ポリマー以外の物質ではブロッキング処理されていないラテックス粒子が好ましい。
また、「表面改質ラテックス粒子」は、ラテックス粒子表面の一部又は全部に特定ポリマーが直接接触しているものをいう。

【0104】

ラテックス粒子の平均粒子径としては、０．０１〜１０μｍが好ましく、０．０５〜１μｍがより好ましい。平均粒子径を０．０５μｍ以上とすることにより、光学シグナルの増感効果が向上する。また、１０μｍ以下とすることにより、溶剤中での分散安定性が向上する。
ラテックス粒子の平均粒子径は、レーザー回析・散乱粒子径分布測定により測定される、リガンド固定化及び表面処理前の体積平均粒子径を意味する。

【0105】

ラテックス粒子としては、標的物質に対するリガンドが固定化されたものが好ましい。リガンドとしては標的物質に対する抗体又は抗原が挙げられる。
また、リガンドは、ラテックス粒子に化学結合で固定化されていても、物理吸着で固定化されていてもよいが、化学結合で固定化されているのが好ましい。本発明によれば、リガンドとラテックス粒子が化学結合で固定化された場合におけるプロゾーンを抑制することができる。
なお、ラテックス粒子の調製やリガンドの固定化は常法に従って行えばよい。例えば、化学結合法による固定化は、ラテックス粒子の表面に化学修飾し、或いは官能基を導入するなどして行えばよい。

【0106】

ラテックス粒子としては、重合性不飽和芳香族化合物、重合性不飽和カルボン酸化合物、重合性不飽和スルホン酸化合物又はその塩、重合性カルボン酸エステル化合物、重合性不飽和カルボン酸アミド化合物、重合性不飽和ニトリル化合物、ハロゲン化ビニル化合物、及び共役ジエン化合物からなる群より選ばれる少なくとも１種の化合物を用いて得られる粒子が好ましく、重合性不飽和芳香族化合物、重合性不飽和カルボン酸化合物、重合性不飽和スルホン酸化合物又はその塩、及び重合性カルボン酸エステル化合物からなる群より選ばれる少なくとも１種の化合物を用いて得られる粒子がより好ましい。

【0107】

このような化合物として、具体的には、スチレン、クロロスチレン、α−メチルスチレン、ジビニルベンゼン、ビニルトルエン、ビニルナフタレン、ジビニルナフタレン、（メタ）アクリル酸α−ナフチル、（メタ）アクリル酸β−ナフチルなどの重合性不飽和芳香族化合物；（メタ）アクリル酸、イタコン酸、マレイン酸、フマル酸などの重合性不飽和カルボン酸化合物；スチレンスルホン酸ソーダなどの重合性不飽和スルホン酸化合物又はその塩；（メタ）アクリル酸メチル、（メタ）アクリル酸エチル、（メタ）アクリル酸ｎ−ブチル、（メタ）アクリル酸２−ヒドロキシエチル、（メタ）アクリル酸グリシジル、エチレングリコール−ジ−（メタ）アクリル酸エステル、（メタ）アクリル酸トリブロモフェニルなどの重合性カルボン酸エステル化合物等が挙げられる。また、上記化合物として、（メタ）アクリロニトリル、（メタ）アクロレイン、（メタ）アクリルアミド、Ｎ−メチロール（メタ）アクリルアミド、メチレンビス（メタ）アクリルアミド、ブタジエン、イソプレン、酢酸ビニル、ビニルピリジン、Ｎ−ビニルピロリドン、塩化ビニル、塩化ビニリデン、臭化ビニルなどを用いてもよい。

【0108】

これらのうち、化学結合により固定化させる場合には、重合性不飽和芳香族化合物由来の繰り返し単位と、重合性不飽和カルボン酸化合物及び重合性不飽和スルホン酸化合物又はその塩から選ばれる少なくとも１種由来の繰り返し単位とを含む共重合体が好ましく、特に、スチレンと、重合性不飽和カルボン酸化合物及び重合性不飽和スルホン酸化合物又はその塩から選ばれる少なくとも１種との共重合体がより好ましい。
一方、物理吸着により固定化させる場合にはポリスチレンのみにより粒子を製造することもできる。

【0109】

＜表面改質ラテックス粒子の製造方法＞
本発明の表面改質ラテックス粒子の製造方法は、特定ポリマーとラテックス粒子とを接触させる接触工程を含むことを特徴とするものである。斯かる製造方法において、ラテックス粒子としては、ブロッキング処理されていないラテックス粒子が好ましい。
上記接触は、液相中で行うのが好ましい。この場合に用いる溶媒としては、上記添加剤、表面処理剤に配合できる溶剤と同様のものが挙げられる。
また、接触とは、特定ポリマーがラテックス粒子の表面の一部又は全部に付着するように特定ポリマーとラテックス粒子とを直接接触させることをいう。具体的には、シェーカー等を用いて特定ポリマーを含む液相中でラテックス粒子を分散させる方法等が挙げられる。
接触時間は通常１０分間〜１０時間である。接触温度は特に限定されないが、通常１０〜６０℃である。
なお、本発明の表面改質ラテックス粒子の製造方法は、接触工程の後、残余の特定ポリマーを遠心分離等により分離する分離工程を含んでいてもよい。

【0110】

＜ラテックス凝集反応用試薬＞
本発明のラテックス凝集反応用試薬は、本発明の表面改質ラテックス粒子又は本発明の表面改質ラテックス粒子の製造方法により得られた表面改質ラテックス粒子を含むものである。
本発明のラテックス凝集反応用試薬中、表面改質ラテックス粒子の含有量は、０．１〜３質量％が好ましく、０．１〜１質量％がより好ましく、０．１〜０．６質量％が特に好ましい。
本発明のラテックス凝集反応用試薬は、表面改質ラテックス粒子の他に、水溶性高分子、溶剤を含んでいてもよい。水溶性高分子としては、例えば、ポリエチレングリコール、多価アルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、サッカロース、デキストラン、プルラン、ポリアミノ酸、アルギン酸、アミノエタンスルホン酸誘導体、アミノプロパンスルホン酸誘導体のほか、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、カゼイン、ブロックエース、アラビアゴム、蛋白質分解物、アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド等が挙げられる。溶剤は、上記表面処理剤に配合できる溶剤の他、リン酸緩衝液、グリシン緩衝液、グッド緩衝液、トリス緩衝液、アンモニア緩衝液等の各種緩衝液が挙げられる。
さらに、本発明のラテックス凝集反応用試薬は、必要に応じて、塩類、界面活性剤、防腐剤等を含んでいてもよい。
本発明のラテックス凝集反応用試薬は、ラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出に有用である。

【0111】

＜キット＞
本発明のラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出に用いるためのキットは、本発明のラテックス凝集反応用試薬を備えることを特徴とするものである。
本発明のキットとしては、本発明のラテックス凝集反応用試薬（第２試薬とも称する）に加えて、反応緩衝液（第１試薬とも称する）を更に備えるものが好ましい。
第１試薬は、上記水溶性高分子を含んでいてもよい。また、第１試薬は、溶剤、ラテックス凝集測定用増感剤を含んでいてもよい。溶剤としては水性媒体が挙げられる。該水性媒体としては、上記各種緩衝液が挙げられる。
また、上記ラテックス凝集測定用増感剤としては、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。
また、本発明のキットは、上記第１試薬及び第２試薬の他に、陽性コントロール、陰性コントロール、血清希釈液等を備えていてもよい。陽性コントロール、陰性コントロールの媒体は、測定しうる標的物質が含まれていない血清、生理食塩水のほか、上記水性媒体等の溶剤でもよい。

【0112】

本発明のキットは、一般的な、ラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出に用いるためのキットと同様にして、標的物質の検出に使用できる。また、常法に従い標的物質の濃度も測定できる。

【0113】

＜標的物質の検出方法＞
本発明の標的物質の検出方法は、本発明のラテックス凝集反応用試薬と検体とを混合する混合工程、及び前記混合工程により生じた凝集反応を光学的に検出する検出工程を含むことを特徴とするものである。
標的物質とは、通常、抗原、ウイルス、病原体、抗体、自己抗体など免疫反応を引き起こすおそれがあり、検出する対象となるものをいう。
標的物質としては、例えば、レセプター、酵素、血中タンパク（例えばガン胎児性タンパク）、感染症関連抗原（例えばＢ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、梅毒病原体、ヒト免疫不全ウイルス、病原性大腸菌等の抗原）等の抗原や、これら抗原に対する抗体が挙げられる。抗体には、特定の抗原に対する結合性を有する限り、抗体のフラグメント等も含まれる。

【0114】

（混合工程）
混合工程は、本発明のラテックス凝集反応用試薬と検体とを混合する工程である。
検体としては、血清や血漿、尿、唾液等の各種生物学的液体サンプル、糞便や食品の検体粉砕物等が挙げられる。測定サンプルとして、アルブミンやグロブリン等のタンパク質、ｐＨ緩衝液、アミノ酸、界面活性剤等で検体を希釈した検体希釈液を用いてよい。

【0115】

混合工程における混合温度は、通常４〜５０℃の範囲であり、好ましくは１５〜４０℃の範囲、より好ましくは３０〜４０℃の範囲である。
また、混合時間は、通常６０分間以下である。混合液のｐＨは、通常５〜１０の範囲であり、抗体と抗原との複合体の安定性がより良好になる点で、混合液のｐＨは６〜９の範囲がより好ましい。

【0116】

（検出工程）
検出工程は、混合工程により生じた凝集反応を光学的に検出する工程である。この工程により、検体中の標的物質が検出され、更に標的物質の濃度も測定できる。

【0117】

検出工程は、粒子凝集の度合いを自動的に追跡できる公知の装置を用いて行えばよい。このような装置としては、例えば、散乱光強度、透過光強度、吸光度等を検出できる光学機器が挙げられる。
粒子凝集の度合いを光学的に検出する方法としては、公知の方法を用いることができ、例えば、（１）凝集の形成を濁度の増加としてとらえる比濁法、（２）凝集の形成を粒度分布又は平均粒径の変化としてとらえる方法、（３）凝集の形成による前方散乱光の変化を積分球を用いて測定し、透過光強度との比を比較する積分球濁度法等が挙げられる。
上記の測定法においては、例えば、異なる時点で少なくとも２つの測定値を得、これらの時点間における測定値の増加分、すなわち、増加速度に基づき凝集の度合いを求める速度試験（レートアッセイ）や、反応の終点と考えられるある時点で１つの測定値を得、この測定値に基づき凝集の度合いを求める終点試験（エンドポイントアッセイ）を利用できるが、測定の簡便性、迅速性の点から、比濁法による速度試験が好ましい。

【0118】

本発明の標的物質の検出方法を用いた免疫ラテックス凝集反応測定に適する臨床検査自動機としては、例えば、日立７０７０、７１５０、７１７０、７１８０、ＬＰＩＡ−Ａ７００、Ｓ５００などの市販の自動分析機が挙げられる。

【0119】

そして、本発明の標的物質の検出方法によれば、濁度又は吸光度の計測において、低値領域の吸光度変化とバックグラウンドとの差が明瞭となる。これにより、標的物質の検出感度を高めることができる。また、プロゾーンの発生を抑制することができる。

【実施例】

【0120】

以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。なお、実施例７及び８は参考例である。

【0121】

実施例における分子量の測定条件は以下に示すとおりである。
重量平均分子量（Ｍｗ）及び数平均分子量（Ｍｎ）は、東ソー社製ＴＳＫｇｅｌ α−Ｍカラムを用い、流量：０．５ミリリットル／分、溶出溶媒：ＮＭＰ溶媒（Ｈ₃ＰＯ₄：０．０１６Ｍ、ＬｉＢｒ：０．０３０Ｍ）、カラム温度：４０℃の分析条件で、ポリスチレンを標準とするゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）により測定した。

【0122】

〔合成例１〕
４−アクリロイルモルホリン（以下、ＡＣＭＯと称する（興人フィルム＆ケミカルズ社製））２．０ｇ、エチレンオキシドの平均付加モル数９のメトキシポリエチレングリコールメタクリレート（以下、Ｍ９０Ｇと称する（新中村化学工業社製））２．５ｇ及びジアセトンアクリルアミド（以下、ＤＡＡＭと称する）０．５ｇからなるモノマー組成物を、水４０．０５ｇに混合してフラスコに入れ、撹拌子で撹拌した。これに窒素を吹き込みながら６０℃まで昇温し、重合開始剤として２，２’−アゾビス（２−メチルプロピオンアミジン）・二塩酸塩の１０質量％水溶液５ｇ、及び連鎖移動剤としてα−チオグリセロール０．０１ｇを添加した。これを３時間重合させた後、室温まで冷却した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ１）とする。
得られた共重合体（Ｐ１）のＧＰＣによる重量平均分子量（Ｍｗ）は１０７４００であり、Ｍｗ／Ｍｎは４．０１であった。

【0123】

〔合成例２〕
モノマー組成物を、ＡＣＭＯ ２．０ｇ、Ｍ９０Ｇ ２．２５ｇ、Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン（以下、ＧＬＢＴと称する（大阪有機化学工業社製））０．２５ｇ及びメチルメタクリレート（以下、ＭＭＡと称する）０．５ｇからなるモノマー組成物に変更した以外は、合成例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ２）とする。

【0124】

〔合成例３〕
モノマー組成物を、ＡＣＭＯ １．５ｇ、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド（以下、ＤＭＡＡと称する）０．２５ｇ、Ｍ９０Ｇ １．０ｇ、エチレンオキシドの平均付加モル数２３のメトキシポリエチレングリコールメタクリレート（以下、Ｍ２３０Ｇと称する（新中村化学工業社製））１．２５ｇ、ＧＬＢＴ ０．７５ｇ及びＭＭＡ ０．２５ｇからなるモノマー組成物に変更した以外は、合成例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ３）とする。

【0125】

〔合成例４〕
モノマー組成物を、ＡＣＭＯ １．０ｇ、ＤＭＡＡ ０．５ｇ、Ｍ９０Ｇ １．２５ｇ、Ｍ２３０Ｇ １．２５ｇ及びＤＡＡＭ １．０ｇからなるモノマー組成物に変更した以外は、合成例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ４）とする。

【0126】

〔合成例５〕
モノマー組成物を、ＡＣＭＯ ２．０ｇ、ＤＭＡＡ ２．５ｇ及びＤＡＡＭ ０．５ｇからなるモノマー組成物に変更した以外は、合成例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ５）とする。

【0127】

〔合成例６〕
モノマー組成物を、ＡＣＭＯ １．０ｇ、ＤＭＡＡ １．７５ｇ、Ｍ２３０Ｇ １．０ｇ、ＧＬＢＴ ０．２５ｇ及びＭＭＡ １．０ｇからなるモノマー組成物に変更した以外は、合成例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ６）とする。

【0128】

〔合成例７〕
モノマー組成物を、ＤＭＡＡ ２．０ｇ、Ｍ９０Ｇ １．５ｇ及びＤＡＡＭ １．５ｇからなるモノマー組成物に変更した以外は、合成例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ７）とする。

【0129】

〔合成例８〕
モノマー組成物を、ＤＭＡＡ ３．５ｇ及びＤＡＡＭ １．５ｇからなるモノマー組成物に変更した以外は、合成例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ８）とする。

【0130】

〔合成例９〕
モノマー組成物を、ＡＣＭＯ １．０ｇ、ＤＭＡＡ ３．０ｇ及びＭＭＡ １．０ｇからなるモノマー組成物に変更した以外は、合成例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ９）とする。

【0131】

〔合成例１０〕
モノマー組成物を、ＡＣＭＯ ２．０ｇ、Ｍ９０Ｇ ２．７５ｇ及びＭＭＡ ０．２５ｇからなるモノマー組成物に変更した以外は、合成例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ１０）とする。

【0132】

〔合成例１１〕
モノマー組成物を、ＡＣＭＯ １．０ｇ、Ｍ２３０Ｇ ２．２５ｇ及びＤＡＡＭ １．７５ｇからなるモノマー組成物に変更した以外は、合成例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ１１）とする。

【0133】

〔比較合成例１〕
モノマー組成物を、ＡＣＭＯ ２．０ｇ、Ｍ９０Ｇ ２．５ｇ、ＤＡＡＭ ０．５ｇからなるモノマー組成物に変更した以外は、合成例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ１２）とする。

【0134】

〔比較合成例２〕
モノマー組成物を、ＡＣＭＯ ０．５ｇ、Ｍ９０Ｇ ２．２５ｇ、ＧＬＢＴ ０．２５ｇ及びＭＭＡ ２．０ｇからなるモノマー組成物に変更した以外は、合成例１と同様にして共重合体を合成した。得られた共重合体を共重合体（Ｐ１３）とする。

【0135】

〔参考例〕
ＡＣＭＯ由来の繰り返し単位からなるホモポリマー、ＤＭＡＡ由来の繰り返し単位からなるホモポリマー、Ｍ９０Ｇ由来の繰り返し単位からなるホモポリマー、Ｍ２３０Ｇ由来の繰り返し単位からなるホモポリマー、ＧＬＢＴ由来の繰り返し単位からなるホモポリマーをそれぞれ合成し（いずれも数平均分子量約１万）、ホモポリマー１ｇを純水１００ｇに添加したところ、常温（２５℃）で溶解した。
また、ＤＡＡＭ由来の繰り返し単位からなるホモポリマー、ＭＭＡ由来の繰り返し単位からなるホモポリマーをそれぞれ合成し（いずれも数平均分子量約１万）、ホモポリマー１ｇを純水１００ｇに添加したところ、常温（２５℃）で溶解しきらなかった。

【0136】

〔調製例１ Ｒ１バッファーの調製〕
ＨＥＰＥＳ １．１９ｇ及び塩化ナトリウム１ｇを蒸留水７０ｇに溶解した。得られた水溶液をアジ化ナトリウムの２質量％水溶液４．５ｇと混合した後、ｐＨを約７．５に調整し、合計１００ｇの水溶液を得た。
得られた水溶液を、Ｒ１バッファーとする。なお、Ｒ１バッファーにおいて、アジ化ナトリウムの濃度は０．０９質量％である。

【0137】

〔調製例２ Ｒ２バッファーの調製（１）〕
ＨＥＰＥＳ １．１９ｇ及び塩化ナトリウム１ｇを蒸留水７０ｇに溶解した。得られた水溶液をアジ化ナトリウムの２質量％水溶液４．５ｇと混合した後、ｐＨを約７．５に調整し、合計１００ｇの水溶液を得た。
得られた水溶液を、Ｒ２バッファー（１）とする。なお、Ｒ２バッファー（１）において、アジ化ナトリウムの濃度は０．０９質量％である。

【0138】

〔調製例３ Ｒ２バッファーの調製（２）〕
ＨＥＰＥＳ １．１９ｇ及び塩化ナトリウム１ｇを蒸留水７０ｇに溶解した。得られた水溶液をアジ化ナトリウムの２質量％水溶液４．５ｇと混合し、これに共重合体（Ｐ５）の１０質量％水溶液を加えた後、ｐＨを約７．５に調整し、合計１００ｇの水溶液を得た。
得られた水溶液を、Ｒ２バッファー（２）とする。なお、Ｒ２バッファー（２）において、共重合体（Ｐ５）の濃度は２質量％、アジ化ナトリウムの濃度は０．０９質量％である。

【0139】

〔実施例１〕
（ラテックス粒子への抗体固定化）
免疫診断用ラテックス粒子（カルボキシ基を表面に有するタイプ、平均粒子径：０．０８２μｍ（ＪＳＲライフサイエンス製ＩＭＭＵＴＥＸ Ｐ００１１））の５．３質量％水分散液１．４ｍＬ、０．５Ｍ ＨＥＰＥＳバッファー０．７５ｍＬ、及び蒸留水４．９ｍＬを混合した。この粒子分散液に、抗ＣＲＰ抗体（ウサギ）の１６．３ｍｇ／ｍＬ水溶液を０．４６ｍＬ添加し、室温で１時間撹拌した。次いで、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（以下、ＷＳＣと称する（同仁化学社製））の１質量％水溶液を０．１５ｍＬ添加し、室温で１時間撹拌した。次に、この粒子分散液を０．５１ｍＬずつ遠心管に移し替え、１５，０００ｒｐｍにて１０分間遠心分離して、未反応の抗ＣＲＰ抗体やＷＳＣを含む上清を除去し、抗体固定化ラテックス粒子を沈殿として回収した。
（表面処理剤によるラテックス粒子の表面処理（ブロッキング処理されていないラテックス粒子への添加剤の添加））
次いで、共重合体（Ｐ１）の０．５質量％水溶液１ｍＬを準備し、これを上記抗体固定化ラテックス粒子に添加し、アルミブロックシェーカーで１時間分散させた。次に、得られた粒子分散液を１５，０００ｒｐｍにて１０分間遠心分離し、残余の共重合体（Ｐ１）を含む上清を除去した。このようにして、共重合体（Ｐ１）で表面処理された抗体固定化ラテックス粒子の分散液（表面改質ラテックス粒子分散液）を得た。
（ラテックス凝集反応用試薬の調製）
次いで、上記表面処理された抗体固定化ラテックス粒子の分散液に、調製例２で得たＲ２バッファー（１）５ｍＬを添加し、ラテックス凝集反応用試薬１を得た。

【0140】

〔実施例２〜４〕
共重合体（Ｐ１）を、共重合体（Ｐ２）、共重合体（Ｐ３）、共重合体（Ｐ４）にそれぞれ変更した以外は、実施例１と同様にしてラテックス凝集反応用試薬２〜４を得た。

【0141】

〔実施例５、６〕
カルボキシ基を表面に有するタイプの免疫診断用ラテックス粒子を、カルボキシ基を表面にもたないタイプの免疫診断用ラテックス粒子（平均粒子径：０．１２１μｍ、ＪＳＲライフサイエンス製ＩＭＭＵＴＥＸ Ｐ２１１７）に変更し、共重合体（Ｐ１）を、共重合体（Ｐ５）、共重合体（Ｐ６）に変更した以外は、実施例１と同様にしてラテックス凝集反応用試薬５、６を得た。

【0142】

〔実施例７〜１１〕
共重合体（Ｐ１）を、共重合体（Ｐ７）、共重合体（Ｐ８）、共重合体（Ｐ９）、共重合体（Ｐ１０）、共重合体（Ｐ１１）にそれぞれ変更した以外は、実施例１と同様にしてラテックス凝集反応用試薬７〜１１を得た。

【0143】

〔比較例１〕
共重合体（Ｐ１）を、共重合体（Ｐ１２）に変更した以外は、実施例１と同様にしてラテックス凝集反応用試薬１２を得た。

【0144】

〔比較例２〕
共重合体（Ｐ１）を、共重合体（Ｐ１３）に変更した以外は、実施例１と同様にしてラテックス凝集反応用試薬１３を得た。

【0145】

〔比較例３〕
共重合体（Ｐ１）を、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）に変更した以外は、実施例１と同様にしてラテックス凝集反応用試薬１４を得た。

【0146】

〔比較例４〕
カルボキシ基を表面に有するタイプの免疫診断用ラテックス粒子を、カルボキシ基を表面にもたないタイプの免疫診断用ラテックス粒子（平均粒子径：０．１２１μｍ、ＪＳＲライフサイエンス製ＩＭＭＵＴＥＸ Ｐ２１１７）に変更し、共重合体（Ｐ１）を、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）に変更した以外は、実施例１と同様にしてラテックス凝集反応用試薬１５を得た。

【0147】

〔比較例５〕
共重合体（Ｐ５）を表面処理剤（ブロッキング処理されていないラテックス粒子への添加剤）でなく増感剤として使用した比較例として、牛血清アルブミンで予め表面処理された抗体固定化ラテックス粒子と共重合体（Ｐ５）とを分散媒中に添加したラテックス凝集反応用試薬を調製した。
すなわち、カルボキシ基を表面にもたないタイプの免疫診断用ラテックス粒子（平均粒子径：０．１２１μｍ、ＪＳＲライフサイエンス製ＩＭＭＵＴＥＸ Ｐ２１１７）の５．３質量％水分散液１．４ｍＬ、０．５Ｍ ＨＥＰＥＳバッファー０．７５ｍＬ、及び蒸留水４．９ｍＬを混合した。この粒子分散液に、抗ＣＲＰ抗体（ウサギ）の１６．３ｍｇ／ｍＬ水溶液を０．４６ｍＬ添加し、室温で１時間撹拌した。次に、この粒子分散液を遠心管に移し替え、１５，０００ｒｐｍにて１０分間遠心分離して、未反応の抗ＣＲＰ抗体を含む上清を除去し、抗体固定化ラテックス粒子を沈殿として回収した。
次いで、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）の０．５質量％水溶液１ｍＬを準備し、これを上記抗体固定化ラテックス粒子に添加し、アルミブロックシェーカーで１時間分散させた。次に、得られた粒子分散液を１５，０００ｒｐｍにて１０分間遠心分離し、残余の牛血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む上清を除去した。このようにして、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）で表面処理された抗体固定化ラテックス粒子の分散液を得た。
次いで、上記表面処理された抗体固定化ラテックス粒子の分散液に、調製例３で得たＲ２バッファー（２）５ｍＬを添加し、ラテックス凝集反応用試薬１６を得た。

【0148】

〔比較例６〕
共重合体（Ｐ１）の０．５質量％水溶液を、蒸留水に変更した以外は、実施例１と同様にしてラテックス凝集反応用試薬１７を得た。

【0149】

〔比較例７〕
カルボキシ基を表面に有するタイプの免疫診断用ラテックス粒子を、カルボキシ基を表面にもたないタイプの免疫診断用ラテックス粒子（平均粒子径：０．１２１μｍ、ＪＳＲライフサイエンス製ＩＭＭＵＴＥＸ Ｐ２１１７）に変更し、共重合体（Ｐ１）の０．５質量％水溶液を、蒸留水に変更した以外は、実施例１と同様にしてラテックス凝集反応用試薬１８を得た。

【0150】

〔試験例１ 安定性評価試験〕
各実施例及び比較例で調製したラテックス凝集反応用試薬を４℃で一晩静置し、沈殿の有無を目視で観察し以下の基準で評価した。また、各実施例及び比較例で調製したラテックス凝集反応用試薬を４℃で一晩静置した後、更に３７℃で一週間静置し、沈殿の有無を目視で観察し以下の基準で評価した。これらの結果を表１〜２に示す。
（安定性評価基準）
ＡＡ：粒子の沈殿が確認されなかった
Ａ：粒子の沈殿がほとんど確認されなかった
Ｂ：粒子の沈殿が僅かに確認された
Ｃ：粒子の沈殿がはっきりと確認された

【0151】

【表1】

【0152】

【表2】

【0153】

表１に示すとおり、共重合体（Ｐ１）〜（Ｐ１１）を用いて抗体固定化ラテックス粒子の表面を処理した場合（実施例１〜１１）は、粒子の沈殿の発生が抑制されていた。このことから、本発明の特定ポリマーを、ブロッキング処理されていないラテックス粒子に添加すること、すなわち、本発明の特定ポリマーを用いてラテックス粒子の表面を処理することによって、ラテックス凝集反応用試薬保存中におけるラテックス粒子の凝集を抑制できることがわかる。
表２に示すとおり、重量平均分子量が３０００未満の共重合体（Ｐ１２）を用いて抗体固定化ラテックス粒子の表面を処理した場合（比較例１）や、繰り返し単位（Ａ）の含有量が６０質量％、繰り返し単位（Ｂ）の含有量が４０質量％の共重合体（Ｐ１３）を用いて抗体固定化ラテックス粒子の表面を処理した場合（比較例２）、ＢＳＡを用いて抗体固定化ラテックス粒子の表面を処理した場合（比較例３、４）には、粒子の沈殿がはっきりと確認された。
また、抗体固定化ラテックス粒子と共重合体（Ｐ５）とを分散媒中に添加した場合（比較例５）も、粒子の沈殿がはっきりと確認された。比較例５で用いた抗体固定化ラテックス粒子はＢＳＡで既に表面処理されているため、試薬中で共重合体（Ｐ５）が抗体固定化ラテックス粒子の表面に処理されるものではない。このことから、本発明の特定ポリマーを増感剤等のように試薬中に単に共存させるのみでは粒子の沈殿は抑制されず、粒子の沈殿を抑制するためには、本発明の特定ポリマーを、ブロッキング処理されていないラテックス粒子に添加すること、すなわち、本発明の特定ポリマーを用いてラテックス粒子の表面を処理することが必要であることがわかった。

【0154】

〔試験例２ 抗原抗体反応性評価試験〕
検体として標的物質（ＣＲＰ抗原）の生理食塩水希釈液又は生理食塩水３μＬ、及び第１試薬として調製例１で得たＲ１バッファー１００μＬを測定セルに加えて撹拌した。次いで、第２試薬として実施例１で調製したラテックス凝集反応用試薬１００μＬを測定セルに加え撹拌した後、日立７１８０形自動分析装置を使用し、主波長：５７０ｎｍ、副波長：８００ｎｍ、測定温度：３７℃の条件にて免疫ラテックス凝集測定を行い、抗原抗体反応の反応性を確認した。なお、標的物質の生理食塩水希釈液の濃度は、０ｍｇ／ｄＬ、０．０５ｍｇ／ｄＬ、０．１ｍｇ／ｄＬ、０．２５ｍｇ／ｄＬ、０．５ｍｇ／ｄＬ、１ｍｇ／ｄＬ、２ｍｇ／ｄＬ、４ｍｇ／ｄＬとしてそれぞれ試験を行った。
また、実施例３、実施例４、比較例３のラテックス凝集反応用試薬を第２試薬として用いて、上記と同様にして抗原抗体反応の反応性を確認した。
試験例２の結果を図１に示す。図１に示すとおり、共重合体（Ｐ１）、（Ｐ３）、（Ｐ４）を用いて抗体固定化ラテックス粒子の表面を処理した場合（実施例１、３、４）は、プロゾーン抑制効果が得られた。

【図1】