特許 6846694 体重又は内臓脂肪増加抑制剤若しくは体重又は内臓脂肪増加抑制用食品組成物若しくは体重又は内臓脂肪増加抑制用飼料組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6846694

(24)【登録日】2021年3月4日

(45)【発行日】2021年3月24日

(54)【発明の名称】体重又は内臓脂肪増加抑制剤若しくは体重又は内臓脂肪増加抑制用食品組成物若しくは体重又は内臓脂肪増加抑制用飼料組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/744 20150101AFI20210315BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20210315BHJP

   A61K 35/74 20150101ALI20210315BHJP

   C12N 1/20 20060101ALI20210315BHJP

   A23L 33/135 20160101ALI20210315BHJP

   A23K 10/16 20160101ALI20210315BHJP

【ＦＩ】

   A61K35/744

   A61P3/04

   A61K35/74 A

   C12N1/20 E

   A23L33/135

   A23K10/16

【請求項の数】4

【全頁数】8

(21)【出願番号】特願2016-184144(P2016-184144)

(22)【出願日】2016年9月21日

(65)【公開番号】特開2018-48087(P2018-48087A)

(43)【公開日】2018年3月29日

【審査請求日】2019年9月18日

【微生物の受託番号】NPMD  NITE P-02318

(73)【特許権者】

【識別番号】391056871

【氏名又は名称】アダプトゲン製薬株式会社

(73)【特許権者】

【識別番号】591175332

【氏名又は名称】イチビキ株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100098741

【弁理士】

【氏名又は名称】武蔵 武

(72)【発明者】

【氏名】西村 篤寿

(72)【発明者】

【氏名】浅井 紀之

【審査官】 原口 美和

(56)【参考文献】

【文献】 特開２０１８−０４２５５７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２００９／００５１２３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００９／００５１２４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 日本食における味噌が肥満に与える効果，第８８回日本生化学会大会，２０１５年，2T17P-03(2P0576)

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３５／７４４

Ａ２３Ｋ １０／１６

Ａ２３Ｌ ３３／１３５

Ａ６１Ｋ ３５／７４

Ａ６１Ｐ ３／０４

Ｃ１２Ｎ １／２０

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

テトラジェノコッカス属の乳酸菌のテトラジェノコッカス・ハロフィラスの菌体及び／又はその培養物を有効成分とする体重又は内臓脂肪増加抑制剤。

【請求項2】

テトラジェノコッカス属の乳酸菌のテトラジェノコッカス・ハロフィラスの菌体及び／又はその培養物を有効成分とする体重又は内臓脂肪増加抑制用食品組成物。

【請求項3】

テトラジェノコッカス属の乳酸菌のテトラジェノコッカス・ハロフィラスの菌体及び／又はその培養物を有効成分とする体重又は内臓脂肪増加抑制用飼料組成物。

【請求項4】

前記テトラジェノコッカス・ハロフィラスは、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに［受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−０２３１８］として寄託されている株菌体であることを特徴とする請求項１に記載の体重又は内臓脂肪増加抑制剤又は請求項２に記載の体重又は内臓脂肪増加抑制用食品組成物又は請求項３に記載の体重又は内臓脂肪増加抑制用飼料組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、体重又は内臓脂肪の増加を抑制し得る抑制剤若しくは食品組成物若しくは飼料組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

体重又は内臓脂肪が正常の範囲を越えるいわゆる肥満が、人或はペット等の動物の健康に悪影響を及ぼし得る危険因子であることは、広く知られている。
このような肥満を防止すべく、体重又は内臓脂肪の増加を抑制する機能を有する抑制剤が、例えば特許文献１などに記載されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0003】

【特許文献1】特開２００１−２５７６号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

前記した特許文献１の体重増加抑制剤は、ローヤルゼリーを原料とするものである。
しかしながらローヤルゼリーは、蜜蜂の分泌腺（下咽頭腺、大腮腺）から分泌される天然の物質であって、第１に高価であり、第２に傷みやすいため取り扱いにくく、第３に品質・収量にばらつきがある、などの問題があった。

【0005】

ところで、味噌の醸造工程でテトラジェノコッカス（Tetragenococcus）属の乳酸菌が発酵に関与していることは広く知られているが、本出願人は、このテトラジェノコッカス属の乳酸菌に、従来知られていなかった体重又は内臓脂肪の増加を抑制する機能があることを実験により見いだした。

【0006】

本発明は、上記知見に基づきなされたもので、その目的は、安全性、量産性、品質の安定性に優れた体重又は内臓脂肪増加抑制剤等を提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0007】

請求項１に記載したように、テトラジェノコッカス属の乳酸菌のテトラジェノコッカス・ハロフィラスの菌体及び／又はその培養物を有効成分とする体重又は内臓脂肪増加抑制剤を提供する。
また、請求項２に記載したように、テトラジェノコッカス属の乳酸菌のテトラジェノコッカス・ハロフィラスの菌体及び／又はその培養物を有効成分とする体重又は内臓脂肪増加抑制用食品組成物を提供する。
また、請求項３に記載したように、テトラジェノコッカス属の乳酸菌のテトラジェノコッカス・ハロフィラスの菌体及び／又はその培養物を有効成分とする体重又は内臓脂肪増加抑制用飼料組成物を提供する。
なお、前記乳酸菌の培養物は、菌体の他、培地において菌体内外に生成された成分を含むものである。

【0009】

また、請求項４に記載したように、前記テトラジェノコッカス・ハロフィラスは、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに［受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−０２３１８］として寄託されている株菌体である請求項１に記載の体重又は内臓脂肪増加抑制剤又は請求項２に記載の体重又は内臓脂肪増加抑制用食品組成物又は請求項３に記載の体重又は内臓脂肪増加抑制用飼料組成物を提供する。

【発明の効果】

【0010】

本発明の体重又は内臓脂肪増加抑制剤、体重又は内臓脂肪増加抑制用食品組成物、体重又は内臓脂肪増加抑制用飼料組成物を経口摂取することにより、体重又は内臓脂肪の増加を有効に抑制することができる（後述する実験結果参照。）。
しかもテトラジェノコッカス属の乳酸菌は、食品原料である醤油とぶどう糖があれば生育できるため、培地に高価な原料を用いなくても培養可能であり、また、食中毒菌等の有害菌が生育しない塩分濃度で培養できるため、約８０℃程度の殺菌レベルの簡易なタンクでの培養が可能であり、さらに商業レベルでの培養で、その培養中に例え雑菌が混入しても増殖しないなど、安全性、品質の安定性に優れ、低コストに量産することができる。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1】投与期間中の平均体重の経時変化を示すグラフである。

【図2】投与後５６日目の平均体重を示すグラフである。

【図3】投与後５６日目の腸間膜の平均重量を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0012】

本発明の体重又は内臓脂肪増加抑制剤、体重又は内臓脂肪増加抑制用食品組成物、体重又は内臓脂肪増加用飼料組成物は、テトラジェノコッカス属の乳酸菌（以下テトラジェノコッカス属乳酸菌ともいう。）及び／又はその培養物を有効成分とする。

【0013】

［テトラジェノコッカス属乳酸菌］
テトラジェノコッカス（Tetragenococcus）属乳酸菌は、ヒスタミン生産能の低いものが好ましく、例えば味噌の醸造工程で単離されるものがよい。このような味噌の醸造工程で単離されるテトラジェノコッカス属乳酸菌は、言うまでもなく味噌由来であるため、食経験が豊富で安全性が高く、食中毒菌等の有害微生物が成育できない高塩分濃度の培地で簡単に培養できるからである。
ここで、味噌の醸造工程で単離される乳酸菌とは、味噌醸造工程の「蔵」、「室（ムロ）」、「桶」などに定着している微生物のことで、より具体的には、味噌の仕込工程〜熟成工程において増殖し得る乳酸菌のことをいう。
さらにテトラジェノコッカス属乳酸菌は、テトラジェノコッカス・ハロフィラス（Tetragenococcus. halophilus）であることが好ましく、特に、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに［受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−０２３１８、識別の表示Ｎｏ．１］として寄託されている乳酸菌のテトラジェノコッカス・ハロフィラス株（以下「ＬＴＫ−１株」という。）がよい。
なお、テトラジェノコッカス属乳酸菌は、上記以外でも味噌の醸造工程で単離され且つ体重又は内臓脂肪増加抑制効果を有するものであればどのような菌でもよい。

【0014】

［テトラジェノコッカス属乳酸菌の培養方法］
本発明のテトラジェノコッカス属乳酸菌の培養方法は、上記のテトラジェノコッカス属乳酸菌を、塩分濃度が１１〜１８ｗ／ｖ％である培地で培養する。なお、「ｗ／ｖ％」は、（質量／体積）％を意味する。
このような条件で培養することにより、本発明のテトラジェノコッカス属乳酸菌を簡単且つ良好に培養することができる。
培地としては、窒素源及び炭素源を含有するものを用いることができる。
窒素源としては、特に制限はなく、例えば、醤油、味噌、肉エキス、ペプトン、グルテン、カゼイン、酵母エキス、アミノ酸等を挙げることができる。
また、炭素源としては、特に制限はなく、例えば、グルコース、麹消化液、米の糖化液、スクロース、澱粉、粉飴、グリセリン等を挙げることができる。
さらに、窒素源および炭素源の他に、無機質として、例えば、酢酸ナトリウム、マグネシウム、マンガン、鉄等の無機塩などを含有していてもよく、ビタミン類などを含有していてもよい。
培地の塩分濃度は、上記のように１１〜１８ｗ／ｖ％とすることが好ましく、その中でも１１〜１６ｗ／ｖ％とすることがより好ましく、さらには１２〜１４ｗ／ｖ％とすることが最も好ましい。かかる塩分濃度の培地であれば、食中毒菌等の有害微生物が生育できないため、高い安全性を簡単に確保することができる。
培養温度は、２０〜４０℃が好ましく、その中でも２８〜３７℃がより好ましい。
培養時間は、２４〜１２０時間程度あり、培養中に攪拌してもよい。
また、培地のｐＨは、５〜９が好ましく、さらに６〜７がより好ましい。

【0015】

［テトラジェノコッカス属乳酸菌の調製方法］
本発明のテトラジェノコッカス属乳酸菌は、培養後、殺菌などの処理を行って調製することができる。具体的には、培養終了後、遠心分離などの手段により食塩を含む培地成分を取り除き、濃縮・精製する。そして、加熱殺菌を行い、そのまま濃縮液として使用しても良いし、或はその後、凍結乾燥・減圧乾燥・熱風乾燥、などの手段により乾燥・濃縮して、粉末状、顆粒状などにしても良い。このようにして、本発明のテトラジェノコッカス属乳酸菌を調製することができる。
なお、加熱殺菌は、特に制限はないが、具体的にはオートクレーブ殺菌（１２１℃、１５分）またはそれと同等の殺菌条件が好ましい。

【0016】

［体重又は内臓脂肪増加抑制剤］
本発明の体重又は内臓脂肪増加抑制剤は、上記のテトラジェノコッカス属乳酸菌の菌体及び／又はその培養物を含有するものである。テトラジェノコッカス属乳酸菌の含有割合は、有効成分として含有する限り特に制限はなく、例えば上記で調整したものを医薬品或はサプリメントとして、１回当たり菌数で１００億個（約２.５ｍｇ相当）〜１兆個（約２５０ｍｇ相当）程度を食前又は食後に経口摂取すればよい。これにより体重又は内臓脂肪の増加を抑制することができる。しかも味噌由来のテトラジェノコッカス属乳酸菌を含有したものは、食経験上きわめて安全性が高い。
なお、本発明の体重又は内臓脂肪増加抑制剤は、上記したテトラジェノコッカス属乳酸菌自体の他、その他の成分として、難消化性デキストリン、オリゴ糖、デキストリン、二酸化ケイ素、粉末セルロース、ショ糖脂肪酸エステル、還元麦芽糖水あめ、乳糖、ダイオウ、トウキ、ケイガイ、センキュウ、カンゾウ、ハッカ、カルニチン、ギムネマ、酵素、クロロゲン酸、亜麻仁油、カプサイシン、アミノ酸、ポリフェノール、カテキン、ギムネマ、キトサン、メチオニン、イノシトール、レシチン、オルニチン、αリポ酸、CLA（共役リノール酸）、ガラナ、カフェイン、ロディオラロデアエキス、コエンザイムQ10、コレウスフォルスコリエキス、ローズヒップ、DHA、EPA、オメガ３脂肪酸、Ｌ−プロリン、プロテイン、アルギニン、ラクトフェリン、ミドリムシ、酵母、パパイン、L-リジン、L-チロシン、BCAA、7-KETO、ピルビン酸、ヨウ素、シネフリン、HCA（ヒドロキシクエン酸）、ヨヒンベ、ヒハツ、黒酢、サラシア、黒しょうが、グラボノイド、コーヒークロロゲン酸、大豆ペプチド、アンセリン、パラミロン、杜仲エキス、桑の葉、ケルセチン、ココナッツオイル、サイリウム、石連花などを含ませることができる。

【0017】

［体重又は内臓脂肪増加抑制用食品組成物・同飼料組成物］
本発明の体重又は内臓脂肪増加抑制用食品組成物は、上記のように調整したテトラジェノコッカス属乳酸菌の菌体及び／又はその培養物を、飲料を含む適宜食品（例えば即席味噌汁）に、菌数で１００億個（約２.５ｍｇ相当）〜１０００億個（約２５ｍｇ相当）程度になる分量を予め添加したものである。
また、体重又は内臓脂肪増加抑制用飼料組成物も、同様に上記テトラジェノコッカス属乳酸菌の菌体及び／又はその培養物を適宜ペットフード等に、菌数で１００億個（約２.５ｍｇ相当）〜１０００億個（約２５ｍｇ相当）程度になる分量を予め添加したものである。

【実施例1】

【0018】

以下、本発明を実施例１によりさらに具体的に説明する。
［ＬＴＫ−１株菌体の調製］
ＬＴＫ−１株菌体は、前記のように独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに［受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−０２３１８、識別の表示Ｎｏ．１］として寄託されており、これを次のような培地で培養して粉末状に加工する。

【0019】

［培地調製］
培地は、醤油を２０ｖ／ｖ％とし、ぶどう糖を１．７ｗ／ｖ％とし、さらに、塩分濃度が１４ｗ／ｖ％となるように食塩の添加量を調整すると共に食品添加物の水酸化ナトリウムを添加してｐＨを７.０に調整し、これを１２１℃・１５分間オートクレーブで滅菌した。

【0020】

［培養方法］
継代培養を想定して、同培地で前培養しておいたＬＴＫ-１株の培養液を前記培地に１ｖ／ｖ％添加し、３５℃の恒温器の中で４８時間静置培養した。
この培養が終了した後、培養液全てを１００Ｌ容ジャーファーメンター中の本培養液７０Ｌに接種した。
その後、培養温度３５℃、撹拌速度５０ｒｐｍ、通気なしの条件で４８時間本培養を実施した。培養中の培養液のｐＨは、食品添加物用２５％水酸化ナトリウム溶液を使用して６.８〜７.２に調整した。

【0021】

［菌数の測定］
４８時間本培養した後のＬＴＫ-１株菌体の総菌数（生菌と死菌の合計（最終収量））について、顕微鏡下で血球計算板を用いて菌数を計測した。
その結果、培養４８時間後のＬＴＫ-１株菌体の総菌数は、６×１０^９個／ｍｌであった。
以上の培養工程を６回繰り返し、合計約４００Ｌの培養液を得た。

【0022】

［集菌・水洗・濃縮］
上記のようにして得られた培養液約４００ＬをＭＦ膜濃縮機ＭＬ１×１（クラレアクア（株）製）を通して濃縮・水洗し、約３０Ｌまで濃縮した。

【0023】

［乾燥］
上記で得られた濃縮液約３０Ｌをステンレス容器に移し、１２０℃・１５分間オートクレーブで滅菌した後、その濃縮液を噴霧乾燥装置Ｌ-１２型（大川原化工機（株）製）を用いて乾燥した。
これにより体重又は内臓脂肪増加抑制剤たる粉末状のＬＴＫ-１株菌体５０８ｇを得た。

【0024】

［マウスによる効果の確認］
上記で得られたＬＴＫ−１株菌体の効果を確認するため、マウスによる以下の実験を行った。

【0025】

［実験方法］
ＩＣＲ雄性マウスの一つの群に通常の実験用飼料にラード（マリンフード（株）製）１５％を添加してなる飼料を５６日間連続摂取させ（ラード添加飼料群）、もう一つの群に通常の実験用飼料に前記ラード１５％と前記ＬＴＫ−１株菌体１％を添加してなる飼料を５６日間連続摂取させ（本発明飼料群）、さらにもう一つの群に通常の実験用飼料を５６日間連続摂取させ、そうして各群のマウスの体重を１週間ごとに測定した。
なお、正規性の検定と分散が等しいかどうかをバートレット検定により確認し、正規分布で等分散であった場合Fisher'sＰＬＳＤで、正規分布ではないか、等分散とみなせない場合Scheffe'sＦで多重比較検定を行った。
また、内臓脂肪の増加抑制効果を確認するため、５６日目に腸間膜の重量を測定した。

【0026】

［実験結果１］
通常飼料群、ラード添加飼料群および本発明飼料群の間には、実験開始時点で平均体重に有意差は見られなかった。
しかし、５６日後の平均体重では、次の表１及び図２に示したように、ラード添加飼料群に対して通常飼料群（Ｐ＝０.０４２）と本発明飼料群（Ｐ＝０.０２１）が有意に低値を示した。
これにより本発明の体重増加抑制効果が確認された。

【0027】

【表1】

【0028】

［実験結果２］
腸管膜の重量は、脂肪が蓄積すると大きくなる。
ラード添加飼料群における５６日目の平均腸間膜重量は、図３のグラフに示したように約０.６４ｇであり、これは通常飼料群の約０.５４ｇに対して大きな値であった。
一方、本発明飼料群における５６日目の平均腸間膜重量は、図３のグラフに示したように約０.４４ｇとラード添加飼料群よりも小さく、通常飼料群と比較しても小さな値であった。
これは体重の傾向と同様であり、マウスの体重増加抑制が内臓脂肪の増加抑制と密接に関係していることが分かった。
これにより本発明の内脂肪増加抑制効果が確認された。

【0029】

以上、本発明を実施の形態及び実施例１により説明したが、もちろん本発明は上記実施形態等に限定されるものではなく、本発明の趣旨を逸脱しない範囲で、適宜変更、改良等を加えてもよい。

【図1】

【図2】

【図3】