特許 6851322 神経疾患を治療する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6851322

(24)【登録日】2021年3月11日

(45)【発行日】2021年3月31日

(54)【発明の名称】神経疾患を治療する方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20210322BHJP

   C07K 16/00 20060101ALI20210322BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20210322BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20210322BHJP

【ＦＩ】

   A61K39/395 NZNA

   A61K39/395 D

   C07K16/00

   A61P25/00

   A61P43/00 121

【請求項の数】16

【全頁数】46

(21)【出願番号】特願2017-561376(P2017-561376)

(86)(22)【出願日】2016年5月25日

(65)【公表番号】特表2018-522826(P2018-522826A)

(43)【公表日】2018年8月16日

(86)【国際出願番号】EP2016061824

(87)【国際公開番号】WO2016189045

(87)【国際公開日】20161201

【審査請求日】2019年2月14日

(31)【優先権主張番号】15169367.8

(32)【優先日】2015年5月27日

(33)【優先権主張国】EP

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】514232085

【氏名又は名称】ユーシービー バイオファルマ エスアールエル

(74)【代理人】

【識別番号】110000855

【氏名又は名称】特許業務法人浅村特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ゴダール、パトリス マリー シャルル

(72)【発明者】

【氏名】カミンスキー、ラファル マリアン

(72)【発明者】

【氏名】ルクレルク、カリーヌ ジョゼ ジャンヌ

(72)【発明者】

【氏名】ファン エイル、ジョナサン マリー エム

【審査官】 新熊 忠信

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１５−５１０５１０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１５／０２８４５５（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 Neuron，２０１４年，Vol.82，p.380-97

【文献】 NABIL N DAGHER，COLONY-STIMULATING FACTOR 1 RECEPTOR INHIBITION PREVENTS MICROGLIAL PLAQUE ASSOCIATION AND 以下備考，JOURNAL OF NEUROINFLAMMATION，英国，BIOMED CENTRAL LTD.，２０１５年 ８月，VOL:12, NR:1，PAGE(S):139 (1 - 14)，IMPROVES COGNITION IN 3XTG-AD MICE，ＵＲＬ，http://dx.doi.org/10.1186/s12974-015-0366-9

【文献】 RICE R A，ELIMINATION OF MICROGLIA IMPROVES FUNCTIONAL OUTCOMES FOLLOWING EXTENSIVE NEURONAL LOSS 以下備考，THE JOURNAL OF NEUROSCIENCE，米国，２０１５年 ７月 ８日，VOL:35, NR:27，PAGE(S):9977 - 9989，IN THE HIPPOCAMPUS，ＵＲＬ，http://dx.doi.org/10.1523/JNEUROSCI.0336-15.2015

【文献】 ADRIAN OLMOS-ALONSO，PHARMACOLOGICAL TARGETING OF CSF1R INHIBITS MICROGLIAL PROLIFERATION AND PREVENTS THE 以下備考，BRAIN，英国，２０１６年 １月 ８日，VOL:139, NR:3，PAGE(S):891 - 907，PROGRESSION OF ALZHEIMER’S-LIKE PATHOLOGY，ＵＲＬ，http://dx.doi.org/10.1093/brain/awv379

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３９／００−３９／４４

Ｃ０７Ｋ １６／００−１６／４６

Ａ６１Ｐ ２５／００

Ａ６１Ｐ ４３／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

てんかん(epilepsy)、てんかん発作(epileptogenesis)、発作(seizures)、痙攣(convulsions)又は側頭葉てんかん（ＴＬＥ）の治療および／または予防に使用するためのＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤であって、
前記阻害剤は、抗体またはその機能的に活性な断片もしくは誘導体であり、前記抗体またはその断片もしくは誘導体が、重鎖の可変ドメインおよび軽鎖の可変ドメインを含み、前記重鎖の可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｈ１について配列番号４に示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｈ２について配列番号５に示される配列を有するＣＤＲ、およびＣＤＲ−Ｈ３について配列番号６に示される配列を有するＣＤＲを含み、前記軽鎖の可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｌ１について配列番号１に示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｌ２について配列番号２に示される配列を有するＣＤＲ、およびＣＤＲ−Ｌ３について配列番号３に示される配列を有するＣＤＲを含み、前記抗体またはその断片もしくは誘導体が、ＣＳＦ−１Ｒに結合する、阻害剤。

【請求項2】

前記抗体またはその断片もしくは誘導体が、モノクローナルまたはポリクローナルである、請求項１に記載の阻害剤。

【請求項3】

前記抗体またはその断片もしくは誘導体が、キメラ、ヒト化またはヒトである、請求項１または２に記載の阻害剤。

【請求項4】

前記抗体またはその断片もしくは誘導体が、二重特異性または多重特異性である、請求項１から３のいずれか一項に記載の阻害剤。

【請求項5】

前記抗体が、
全長重鎖および軽鎖を有する完全抗体分子、並びに
Ｆａｂ、修飾Ｆａｂ、Ｆａｂ’、修飾Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、二価、三価もしくは四価抗体、Ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ及び上記のいずれかのエピトープ結合断片を含む群から選択されるその断片
を含む群から選択される、請求項１から４のいずれか一項に記載の阻害剤。

【請求項6】

前記抗体またはその断片もしくは誘導体が、神経疾患に罹患している患者の治療および／または予防に十分な治療上有効量、血液脳関門（ＢＢＢ）を横切って脳内に到達する、請求項１から５のいずれか一項に記載の阻害剤。

【請求項7】

配列番号９に示される配列を含む重鎖および／又は配列番号７に示される配列を含む軽鎖を有する、請求項１から６のいずれか一項に記載の阻害剤。

【請求項8】

てんかん(epilepsy)、てんかん発作(epileptogenesis)、発作(seizures)、痙攣(convulsions)又は側頭葉てんかん（ＴＬＥ）を治療および／または予防するための医薬品を製造するためのＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤の使用であって、
前記阻害剤は、抗体またはその機能的に活性な断片もしくは誘導体であり、前記抗体またはその断片もしくは誘導体が、重鎖の可変ドメインおよび軽鎖の可変ドメインを含み、前記重鎖の可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｈ１について配列番号４に示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｈ２について配列番号５に示される配列を有するＣＤＲ、およびＣＤＲ−Ｈ３について配列番号６に示される配列を有するＣＤＲを含み、前記軽鎖の可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｌ１について配列番号１に示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｌ２について配列番号２に示される配列を有するＣＤＲ、およびＣＤＲ−Ｌ３について配列番号３に示される配列を有するＣＤＲを含み、
前記抗体またはその断片もしくは誘導体がＣＳＦ−１Ｒに結合する、使用。

【請求項9】

前記抗体またはその断片もしくは誘導体が、モノクローナルまたはポリクローナルである、請求項８に記載の阻害剤の使用。

【請求項10】

前記抗体またはその断片もしくは誘導体が、キメラ、ヒト化またはヒトである、請求項８または９に記載の阻害剤の使用。

【請求項11】

前記抗体またはその断片もしくは誘導体が、二重特異性または多重特異性である、請求項８から１０のいずれか一項に記載の阻害剤の使用。

【請求項12】

前記抗体が、
全長重鎖および軽鎖を有する完全抗体分子、並びに
Ｆａｂ、修飾Ｆａｂ、Ｆａｂ’、修飾Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、二価、三価もしくは四価抗体、Ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ及び上記のいずれかのエピトープ結合断片を含む群から選択されるその断片
を含む群から選択される、請求項８から１１のいずれか一項に記載の阻害剤の使用。

【請求項13】

前記抗体またはその断片もしくは誘導体が、神経疾患に罹患している患者の治療および／または予防に十分な治療上有効量、血液脳関門（ＢＢＢ）を横切って脳内に到達する、請求項８から１２のいずれか一項に記載の阻害剤の使用。

【請求項14】

配列番号９に示される配列を含む重鎖および／又は配列番号７に示される配列を含む軽鎖を有する、請求項８から１３のいずれか一項に記載の阻害剤の使用。

【請求項15】

薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体の１つまたは複数と組み合わせて、請求項１から７のいずれか一項に記載の阻害剤を含む医薬組成物。

【請求項16】

他の有効成分をさらに含む、請求項１５に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、概して、神経疾患を治療する方法、より具体的には、神経疾患を治療するための抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体に関する。

【背景技術】

【0002】

神経炎症応答に関連する多種多様な神経疾患が存在し、最も重要なものは、例えば、一般にアルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、自閉症、クロイツフェルト・ヤコブ病、髄膜炎、多発性硬化症、パーキンソン病、脳卒中、外傷性脳傷害またはてんかん、てんかん発作および発作障害および痙攣である。

【0003】

世界保健機関（ＷＨＯ）および国際抗てんかん連盟（ＩＬＡＥ）は、てんかんを、神経脳細胞における過剰かつ無秩序な放電によって引き起こされる発作現象からなる慢性、再発性、反復性神経障害として定義している。その発生率には、小児期および青年期のピークと２つ目の６０歳以上のより顕著なピークの２つのピークがある。国際てんかん協会（ＩＢＥ）によると、世界中で約５千万の人々がてんかんに罹患しており、その２０〜３０％が１か月当たり２回以上の発作を患っている（Ｆｏｒｓｇｒｅｎら、Ｅｕｒ Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ ２００５；１２：２４５〜５３）。

【0004】

全世界の年間の新規てんかん症例の数は、１０万人当たり２４〜５３症例に及ぶ。欧州では、様々な国および年に実施された有病率調査から、９０万人の小児および青年、１９０万人の２０歳〜６４歳の成人、および６０万人の６５歳以上の高齢者がてんかんに罹患していると計算された（Ｆｏｒｓｇｒｅｎら、Ｅｕｒ Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ ２００５；１２：２４５〜５３）。

【0005】

てんかんは、発作を特徴とする多様な一連の慢性神経障害を含むと考えられている。これらの発作は再発性および非刺激誘発性であり得る、または将来の発作の機会を増加させる脳の変化と合わせて単一発作を構成し得る。てんかん発作は、典型的には、脳における異常な、過剰なまたは過同期性（hypersynchronous）の神経活動に起因する。

【0006】

てんかんは、世界人口において約１％の有病率を有する最も一般的な神経疾患の１つである。国際抗てんかん連盟によって提供される最も最近の定義によると、「てんかん発作は脳における異常な過剰のまたは同期性の神経活動による徴候および／または症状の一過的発生であり」、「てんかんはてんかん発作をもたらす永続する素因ならびにこの状態の神経生物学的、認識、心理学的および社会的結果を特徴とする脳の障害である」（Ｆｉｓｈｅｒら、２０１４）。

【0007】

てんかんの原因に関する知識は、全ゲノムシーケンシング技術の出現およびヒトゲノムの理解の増大から急速に進化している。さらに、分子細胞生物学および遺伝学における新しい概念および技術が、てんかん病態生理学の理解に革命をもたらした。神経画像処理技術が現在、発作の発生およびてんかんの進行に関与する脳回路および構造の前例のない理解を可能にしている。最後に、脳波記録法（ＥＥＧ）またはインビトロ電気生理学などの神経生理学的技術が、てんかんにおける神経回路網の役割についてのさらなる情報を提供する。

【0008】

異なるタイプの発作およびてんかん病因、例えば全般発作、部分発作および原因不明の発作が存在する。部分発作は、一方の半球（大脳皮質の特定の領域を含む）に限定されたネットワーク内のある点から発生するものとして概念化される一方、全般発作は、両側に分布するネットワーク（大脳皮質全体を含む）内のおよびこれらのネットワークを急速に結合するある点から発生するものとして概念化される（ＢｅｒｇおよびＳｃｈｅｆｆｅｒ、２０１１）。Ｂｅｒｇら、２０１０によって出版されている国際抗てんかん連盟（ＩＬＡＥ）による発作の現在の分類は、ａ）特に強直間代（任意の組み合わせ）、欠伸（定型、非定型、特別な特徴を有する欠伸、ミオクローヌス欠神、眼瞼ミオクロニー）、ミオクローヌス（ミオクローヌス、ミオクローヌス脱力、ミオクローヌス強直、間代、強直、脱力）を意味する全般発作、ｂ）意識または認識の障害を伴うおよび伴わない部分発作、ならびにｃ）原因不明の発作（点頭てんかん）を含む。

【0009】

意識または認識の障害を伴わない部分発作は、ｉ）観察可能な運動または自律神経性構成要素を有する。これは、大まかに「単純部分発作」の概念に相当し、それによると「焦点運動」および「自律神経性」は、発作症状に応じてこの概念を適切に伝えることができる用語である。または、ｉｉ）主観的感覚または精神的現象のみを伴うことに相当する。これは「アウラ」の概念に相当する。

【0010】

意識または認識の障害を伴う部分発作は大まかに複雑部分発作の概念に相当し、両側性、痙攣発作（強直性、間代性または強直間代性構成要素を含む）に発展している。この表現は、「続発性全般発作」という用語に取って代わる。

【0011】

また、主要な病因が現今ではよりよく定義されている：１）遺伝的原因：発作が障害の核心症状である既知または推定上の遺伝的欠陥（複数可）の直接的結果；２）構造的／代謝的原因：てんかんを発症するリスクの実質的な増加に関連することが証明されている明確な構造的または代謝的な状態または疾患；３）未知の原因、根本原因の性質を決定することができない場合（ＢｅｒｇおよびＳｃｈｅｆｆｅｒ、２０１１）。

【0012】

さらに、てんかんにつながる過程、すなわちてんかん発作に関する新規な概念が現在導入されており、この分野におけるさらなる研究努力を推進している。てんかん発作は、（１）てんかん状態の発症および／または（２）状態が確立された後の進行をもたらす自発的発作を生じさせることができる組織の発達および伸長を指す（Ｐｉｔｋａｎｅｎら（２０１３））。疾患または症候群の修正には、抗てんかん発作および併存症修正の２つの要素がある。

【0013】

抗てんかん発作は、予防、発作修正および治癒を含む、てんかん発作の効果に対抗する過程である。予防に関して、完全な予防はてんかんの発症を中止する。部分的な予防は、てんかんの発症を遅らせる、またはその重症度を軽減することができる。例えば、発作は起こるが、頻度が少ない、短期である、または軽度の発作型（発作修正）であり得る。抗てんかん発作はまた、既に確立された後のてんかんの進行を予防または軽減することもできる。

【0014】

併存症修正は、不安、うつ病、身体−運動障害または認知低下などのてんかん関連合併症の症状の発達または進行を緩和または逆転させる治療を意味する。

【0015】

治癒的治療は、治療を止めた後に発作が起こらないようなてんかんの完全かつ永続的な反転として定義される（Ｐｉｔｋａｎｅｎら、２０１３）。

【0016】

てんかん発症の前または後に疾患修正剤を投与することができる場合の、てんかんにおける疾患修正を目的とする新規な治療アプローチが提案されている。このような治療をてんかん発症前に行う場合、てんかん発症を予防または遅延させることができる可能性がある。このような治療をてんかん診断後に行う場合、発作重症度を軽減する、てんかんの進行を予防もしくは軽減する、または発作を薬剤耐性から薬剤感受性に変えることができる可能性がある。

【0017】

上記の治療概念は、神経興奮機序を標的とし、それによって抗発作効果のみを提供する抗てんかん薬（ＡＥＤ）を含むてんかんにおける現在の標準治療とは根本的に異なる。これらの薬物は、てんかんの根本的な原因または病態生理学に対処しておらず、てんかん患者の３０〜４０％は、市場で入手可能な２０種超のＡＥＤという印象的な医療手段（armamentarium）にもかかわらず、この疾患に関連する制御不能な発作および併存症に苦しんでいる。

【0018】

このため、神経疾患修正特性を有するより有効な薬物を提供するための重要な非充足の医学的要求がある。

【0019】

炎症は、ヒトてんかんおよびてんかん発作の病態生理学において指標的役割を有すると認識される。特に、ミクログリア細胞活性化は、ヒト側頭葉てんかん（ＴＬＥ）、ＴＬＥの実験モデルおよびてんかん発作において観察される主要な炎症促進性経路の誘導に関連する。これは主に、ＴＬＥの患者と齧歯動物モデルの両方から得られた脳組織に対して行われた一定範囲の試験によって示唆されており、いくつかのケモカインおよび炎症促進性サイトカインを含む免疫／炎症経路に関連する遺伝子の強力な上方制御を示している。慢性的に活性化されたミクログリア細胞が、炎症促進性サイトカイン（例えば、ＴＮＦａ、ＩＬ１ｂ）を放出し、次いで、これが神経興奮性を高め、発作を誘因するよう作用すると仮定される。これは、実験モデルで発作活動を悪化させることができるＩＬ１ｂについて最もよく記載されており、ＩＬ１ｂ産生の遺伝子ノックダウンまたは阻害は、抗痙攣効果を有し、実験モデルで疾患の経過を修正し得る。

【0020】

しかしながら、ミクログリア活性を制御する現在利用可能な有効な薬物標的はむしろ希少であり、既存の治療アプローチは主に新規化学成分（ＮＣＥ）に焦点を当てている。例えば、小分子化合物（ＰＬＸ３３９７）を使用してコロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ−１Ｒ）を阻害した研究を公開したＥｌｍｏｒｅら、２０１４は、この受容体がミクログリア機能および生存能の重要な調節因子であることを確認するデータを提供した。

【0021】

コロニー刺激因子１（ＣＳＦ−１）および構造的に類似しているが配列の関連性がない分子インターロイキン３４（ＩＬ−３４）は、マクロファージおよびミクログリアによってもっぱら発現されるＣＳＦ１Ｒの２つの内因性リガンドである。マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）としても知られるコロニー刺激因子１（ＣＳＦ−１）は、種々の細胞によって産生されるサイトカインである。ＣＳＦ−１は、生物学的に活性な二量体ＣＳＦ−１タンパク質を形成する２つの「単量体」ポリペプチドで構成される。代替ＲＮＡスプライシング、タンパク質前駆体のタンパク質分解プロセシングならびにグリコシル化およびプロテオグリカンの付加を含む翻訳後修飾により、ＣＳＦ−１は少なくとも３つの成熟形態で存在する（Ｃｅｒｒｅｔｔｉ ＤＰら、１９８８、Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２５（８）７６１；Ｐｉｘｌｅｙ ＦＪおよびＳｔａｎｌｅｙ ＥＲ、２００４、Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ、１４（１１）６２８〜３８；Ｄｏｕｇｌａｓｓ，ＴＧら、２００８、Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ、８、１３５４〜７６参照）。種々の形態のＣＳＦ−１タンパク質は、２つの分泌分子を含み、一方はグリコシル化され、他方はより長いアミノ末端配列およびプロテオグリカン修飾を含む。別の変種は、グリコシル化されているがプロテオグリカン部分を有さない膜貫通（ＴＭ）分子である。この膜形態は、タンパク質分解的切断を介して脱落されて、活性な可溶性分子を放出することができる。全ての形態は、アミノ末端に３２アミノ酸シグナル配列、カルボキシル末端に近い約２３アミノ酸の推定膜貫通領域および短い細胞質ＣＯＯＨ−末端尾部を有する前駆体ポリペプチドとして産生される。その後、前駆体ペプチドはアミノ末端およびカルボキシル末端タンパク質分解切断によって処理され、同一で受容体結合ドメインを構成する残基１〜１４９を有するＣＳＦ−１の成熟形態を生成することができる。インビボでは、ＣＳＦ−１モノマーがグリコシル化され、ジスルフィド結合を介して二量体化される。ＣＳＦ−１は、血液細胞の産生を促進する生物学的アゴニストのグループに属する。具体的には、これは単核食細胞系統の骨髄前駆細胞の増殖、分化および生存因子として作用する。さらに、ＣＳＦ−１は、応答細胞上の特異的受容体を介してマクロファージの生存、増殖および機能を刺激する。他の実験により、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）が、難治性ＴＬＥ患者からの生検後に培養された成人ヒトミクログリアの表現型を変化させることが示された（Ｓｍｉｔｈら、２０１３）。他の最近のデータは、ＣＳＦ−１Ｒ遺伝子の突然変異が、発作およびてんかんに関連する遺伝性びまん性白質脳症を引き起こすことを示している（Ｒａｄｅｍａｋｅｒｓら、２０１１；Ｇｕｅｒｒｅｉｒｏら、２０１３）。

【0022】

ＣＳＦ−１受容体（ＣＳＦ−１Ｒ）は、ｃ−ｆｍｓ遺伝子産物またはＣＤ１１５とも呼ばれる。ＣＳＦ−１Ｒは、ＩＩＩ型受容体チロシンキナーゼファミリーに属する１６５ｋＤａの１型ＴＭ糖タンパク質である。さらに、ＣＳＦ−１受容体は、ミクログリアを含む単核食細胞の増殖、分化および生存の調節を担う。ＣＳＦ−１Ｒを欠くマウスは、末梢組織におけるマクロファージの数の減少を示す。重要なことに、ＣＳＦ−１Ｒ欠損マウスはまた脳におけるミクログリアを欠いており、これは致命的な表現型に関連する。実際、ミクログリアは、正常な条件下でＣＳＦ−１Ｒを発現する脳内の唯一の細胞であるが、低レベルのＣＳＦ−１Ｒが培養ニューロンで観察されている。リガンドＣＳＦ−１とＣＳＦ−１Ｒの結合は、チロシンキナーゼドメインの作用を通して、１個または複数のチロシン残基上の受容体のリン酸化をもたらす。リン酸化後にのみ受容体に結合する抗体（例えば、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙのＰｈｏｓｐｈｏ−Ｍ−ＣＳＦ受容体（Ｔｙｒ５４６）抗体＃３０８３）が入手可能であるために、このリン酸化を検出することができる。

【0023】

ＣＳＦ−１Ｒに対する抗体は当技術分野で公知である。Ｓｈｅｒｒ，Ｃ．Ｊ．ら、Ｂｌｏｏｄ ７３（１９８９）１７８６〜１７９３には、ＣＳＦ−１活性を阻害するＣＳＦ−１Ｒに対する抗体が記載されている（Ｓｈｅｒｒ，Ｃ．Ｊ．ら、Ｂｌｏｏｄ ７３（１９８９）１７８６〜１７９３）。国際公開第０９／０２６３０３号パンフレットは、ヒトＣＳＦ−１Ｒに結合する抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体および抗マウスＣＳＦ−１Ｒ抗体を用いたインビボマウス腫瘍モデルを開示している。国際公開第１１／１２３３８１号パンフレットは、ＣＳＦ−１Ｒを内部移行し、ＡＤＣＣ活性を有する抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体を開示している。国際公開第１１／１２３３８１号パンフレットは、抗マウスＣＳＦ−１Ｒ抗体を用いたインビボマウス腫瘍モデルを開示している。国際公開第１１／１４０２４９号パンフレットは、ＣＳＦ−１とＣＳＦ−１Ｒの結合を遮断する抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体を開示しており、これはがんの治療に有用であると述べられている。国際公開第０９／１１２２４５号パンフレットは、ＣＳＦ−１とＣＳＦ−１Ｒの結合を阻害し、がん、炎症性腸疾患および関節リウマチの治療に有用であると述べられている抗ＣＳＦ−１Ｒ ＩｇＧ１抗体を開示している。国際公開第１１／１３１４０７号パンフレットは、ＣＳＦ−１とＣＳＦ−１Ｒの結合を阻害し、骨量減少およびがんの治療に有用であると述べられている抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体を開示している。国際公開第１１／１０７５５３号パンフレットは、ＣＳＦ−１とＣＳＦ−１Ｒの結合を阻害し、骨量減少およびがんの治療に有用であると述べられている抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体を開示している。国際公開第１１／０７００２４号パンフレットは、ヒトＣＳＦ−１Ｒ断片ｄｅｌＤ４に結合する抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体を開示している。国際公開第１５／０２８４５５号パンフレットは、ＣＳＦ−１とＣＳＦ−１Ｒの結合を阻害し、線維症およびがんの治療に有用であると述べられている抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体を開示している。

【0024】

しかしながら、例えば、抗体などの大きな生体分子の血液脳関門（ＢＢＢ）透過性に関連する深刻な制限および懸念が依然として存在する。今のところ、大きな分子または抗体によって脳の炎症を調節することは成功していない。むしろ、ＩｇＧ１抗体に融合した臨床的に使用される組換えＴＮＦ受容体であるエタネルセプトは、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過せず、齧歯動物において全身投与後に脳におけるＴＮＦ−αによって駆動される炎症に影響しないことが示されている（Ｚｈｏｕら、２０１１）。臨床における典型的な投与経路である全身注射抗体の中枢媒介性の治療効果の可能性については、依然として重大な疑義が存在する。これは、ＣＳＦ１Ｒが脳毛細血管の内皮細胞においても発現され、その天然リガンドであるＩＬ−３４によるこの受容体の活性化がＢＢＢの完全性を回復し、その透過性を制限することが示されているため、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体にとって特に問題である（Ｊｉｎら、２０１４）。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0025】

【特許文献1】国際公開第０９／０２６３０３号パンフレット

【特許文献2】国際公開第１１／１２３３８１号パンフレット

【特許文献3】国際公開第１１／１４０２４９号パンフレット

【特許文献4】国際公開第０９／１１２２４５号パンフレット

【特許文献5】国際公開第１１／１３１４０７号パンフレット

【特許文献6】国際公開第１１／１０７５５３号パンフレット

【特許文献7】国際公開第１１／０７００２４号パンフレット

【特許文献8】国際公開第１５／０２８４５５号パンフレット

【非特許文献】

【0026】

【非特許文献1】Ｆｏｒｓｇｒｅｎら、Ｅｕｒ Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ ２００５；１２：２４５〜５３

【非特許文献2】Ｃｅｒｒｅｔｔｉ ＤＰら、１９８８、Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２５（８）７６１

【非特許文献3】Ｐｉｘｌｅｙ ＦＪおよびＳｔａｎｌｅｙ ＥＲ、２００４、Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ、１４（１１）６２８〜３８

【非特許文献4】Ｄｏｕｇｌａｓｓ，ＴＧら、２００８、Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ、８、１３５４〜７６

【非特許文献5】Ｓｈｅｒｒ，Ｃ．Ｊ．ら、Ｂｌｏｏｄ ７３（１９８９）１７８６〜１７９３

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0027】

結果として、神経疾患の改善された、安全かつ有効な治療的処置および／または予防のための未だ満たされていない医学的要求が現在も依然として存在する。したがって、本発明の目的は、神経疾患、より具体的にはてんかんの新たな治療方法を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0028】

一態様では、本発明は、神経疾患の治療および／または予防に使用するためのＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤を提供する。

【0029】

一態様では、本発明の阻害剤は核酸である。さらなる態様では、本発明の阻害剤は、抗体またはその機能的に活性な断片もしくは誘導体である。

【0030】

一態様では、本発明は、側頭葉てんかん（ＴＬＥ）の動物モデルにおける抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の全身注射がミクログリア遺伝子の発現の変化によって証明されるミクログリア機能を調節することができることを示す結果を提示する。結果として、提示された結果は、神経疾患の治療および／または予防に使用するためのＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤としての強力な実行可能な治療的生物学的実体（ＮＢＥ）を提供する。

【0031】

したがって、本発明は、満たされていない必要性に対処し、神経疾患の治療および／または予防に使用するためのＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤を提供する。本発明はさらに、てんかん、てんかん発作、発作および痙攣の治療および／または予防に使用するためのＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤を提供する。

【0032】

本発明の一態様では、神経疾患を治療および／または予防するための医薬品を製造するためのＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤の使用が提供される。

【0033】

本発明はさらに、ＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤を含む医薬組成物を提供する。さらに、本発明は、神経疾患に罹患しているまたは神経疾患を発症するリスクがあるヒト対象を治療および／または予防する方法であって、治療上有効量のＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤を投与するステップを含む方法を提供する。

【発明を実施するための形態】

【0034】

本発明の一実施形態では、神経疾患の治療および／または予防に使用するために提供されるＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤が核酸である。さらなる態様では、本発明の阻害剤は、抗体またはその機能的に活性な断片もしくは誘導体である。

【0035】

本発明において、「神経疾患」という用語は以下の疾患を指す：アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アンジェルマン症候群、注意欠陥多動障害、自閉スペクトラム症、双極性障害、脳損傷、脳傷害、脳腫瘍、中枢痛症候群、大脳萎縮症、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、慢性疼痛、複雑な局所疼痛症候群、クロイツフェルト・ヤコブ病、認知症、ダウン症候群、ドラベ症候群、脳炎、本態性振戦、フリードライヒ運動失調症、脆弱Ｘ症候群、脆弱Ｘ関連振戦／失調症候群（ＦＸＴＡＳ）、頭部傷害、頭痛、帯状疱疹、ハンチントン病、低酸素症、免疫媒介性脳脊髄炎、点頭てんかん、頭蓋内圧亢進、ラフォラ病、ランドウ・クレフナー症候群、レノックス・ガストー症候群、白質ジストロフィー、白質消滅を伴う白質脳症、レビー小体病、脳回欠損、ライム病−神経性続発症、巨脳症、髄膜炎、小頭症、偏頭痛、小発作（一過性虚血発作）、運動ニューロン疾患−筋萎縮性側索硬化症参照、多発脳梗塞性認知症、多発性硬化症、乳児のミオクローヌス脳症、ミオクローヌス、ＡＩＤＳの神経症状、ループスの神経性続発症、神経セロイドリポフスチン症、ニューロパチー、ニーマン・ピック病、大田原症候群、パーキンソン病、経産婦新生物障害、原発性側索硬化症、プリオン病、進行性多巣性白質脳症、進行性核上性麻痺、ラスムッセン脳炎、下肢静止不能症候群、レット症候群、全身硬直症候群、脳卒中、一過性虚血発作、外傷性脳傷害、振戦、結節性硬化症、ウンフェルリヒト・ルントボルク病、鉤状回てんかん、ウエスト症候群、ウィルソン病。

【0036】

神経疾患の好ましい例としては、アンジェルマン症候群、注意欠陥多動障害、自閉スペクトラム症、脳傷害、脳腫瘍、クロイツフェルト・ヤコブ病、ダウン症候群、ドラベ症候群、脳炎、脆弱Ｘ症候群、脆弱Ｘ関連振戦／失調症候群（ＦＸＴＡＳ）、頭部傷害、帯状疱疹、低酸素症、免疫媒介性脳脊髄炎、点頭てんかん、ラフォラ病、ランドウ・クレフナー症候群、レノックス・ガストー症候群、白質ジストロフィー、白質消滅を伴う白質脳症、脳回欠損、ライム病−神経性続発症、髄膜炎、多発性硬化症、乳児のミオクローヌス脳症、ミオクローヌス、ループスの神経性続発症、大田原症候群、プリオン病、ラスムッセン脳炎、レット症候群、外傷性脳傷害、結節性硬化症、ウンフェルリヒト・ルントボルク病、鉤状回てんかんまたはウエスト症候群が挙げられる。

【0037】

本発明において、神経疾患の治療は、好ましくはてんかん、てんかん発作、発作障害および痙攣に関連する。

【0038】

発症時の年齢によって整理されるてんかん症候群の例には、新生児期（良性家族性新生児てんかん（ＢＦＮＥ）、早期ミオクロニー脳症（ＥＭＥ）、大田原症候群）、乳児期（遊走性部分発作を伴う乳児てんかん、ウエスト症候群、乳児ミオクロニーてんかん（ＭＥＩ）、良性乳児てんかん、良性家族性乳児てんかん、ドラベ症候群、非進行性疾患のミオクロニー脳症）、小児期（乳児期に発症し得る熱性痙攣プラス（ＦＳ＋）、パナイトポーラス症候群（ｐａｎａｙｉｏｔｏｐｏｕｌｏｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ミオクロニー脱力（旧用語：失立）発作を伴うてんかん、中心側頭部棘波を示す良性てんかん（ＢＥＣＴＳ）、常染色体優性夜間前頭葉てんかん（ＡＤＮＦＬＥ）、遅発性小児後頭葉てんかん（Ｇａｓｔａｕｔ型）、ミオクロニー欠神てんかん、レノックス・ガストー症候群、睡眠時持続性棘徐波（ＣＳＷＳ）ｂを示すてんかん性脳症、ランドウ・クレフナー症候群（ＬＫＳ）、小児欠神てんかん（ＣＡＥ））、青年期／成人期（若年欠神てんかん（ＪＡＥ）、若年ミオクロニーてんかん（ＪＭＥ）、全般強直間代発作のみを示すてんかん、進行性ミオクローヌスてんかん（ＰＭＥ）、聴覚症状を伴う常染色体優性てんかん（ＡＤＥＡＦ）、その他の家族性側頭葉てんかん）、年齢との関連性が低いもの（多様な焦点を示す家族性焦点性てんかん（小児期から成人期）、反射てんかん）、明確な特定症状群（海馬硬化症を伴うまたは伴わない内側側頭葉てんかん（ＨＳを伴うまたは伴わないＭＴＬＥ）、ラスムッセン症候群、視床下部過誤腫による笑い発作、片側痙攣−片麻痺−てんかん、これらの診断カテゴリーのいずれにも該当しないてんかんは、最初に既知の構造的／代謝性疾患（推定される原因）の有無、次に主な発作の発現様式（全般または焦点性）に基づいて識別することができる）、構造的−代謝性の原因に帰するおよびこれらの原因によって整理されるてんかん（大脳皮質形成異常（片側巨脳症、異所形成等）、神経皮膚症候群（結節性硬化症複合体、スタージ・ウェーバー症候群等）、腫瘍、感染、外傷、血管腫、周産期脳障害、脳卒中）、それ自体はてんかん型として従来は診断されない原因不明のてんかんおよびてんかん発作を伴う状態（良性新生児発作（ＢＮＳ）、熱性痙攣（ＦＳ））がある。

【0039】

より好ましい実施形態では、本発明は、てんかんの治療および／または予防に使用するための阻害剤であって、てんかんのタイプが全般発作、部分発作および原因不明の発作を含む群から選択される阻害剤を提供する。最も好ましい実施形態では、本発明は、側頭葉てんかん（ＴＬＥ）の治療および／または予防に使用するための阻害剤を提供する。

【0040】

本明細書で使用される「ＣＳＦ−１Ｒ活性」という用語は、ＣＳＦ−１Ｒ、特にヒトＣＳＦ−１Ｒおよびそのアイソフォーム、例えば１、２、３または全てのアイソフォームの活性について当技術分野で理解されている活性のスペクトルを指す。例えば、リガンドと受容体の結合は、特異的チロシン残基でのＣＳＦ−１Ｒのリン酸化を誘導し（Ｂｏｕｒｅｔｔｅ ＲＰおよびＲｏｈｒｓｃｈｎｅｉｄｅｒ ＬＲ、２０００、Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ １７：１５５〜１６６）、その後のシグナル伝達事象のカスケードは細胞移動、生存、分化および増殖を媒介することができる（Ｓｕｚｕ Ｓら、１９９７、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１５９、１８６０〜７；Ｙｅｕｎｇ Ｙ−ＧおよびＳｔａｎｌｅｙ ＥＲ、２００３、Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ、２、１１４３〜５５；Ｙｕ Ｗら２００８、Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ８４（３）、８５２〜６３）。選択されたチロシン残基の代わりにフェニルアラニン残基を含む変異体ＣＳＦ−１Ｒ受容体分子のトランスフェクト細胞における発現は、特異的チロシン残基と生存、増殖および形態などの細胞結果との関連を明らかにした（ＹｕらＪ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ ２００８年９月８４（３）：８５２〜８６３）。分子特異的抗体と共に抗ホスホチロシン抗体を用いるプロテオミクスアプローチおよび免疫ブロット技術は、受容体のリガンド刺激後にこれらの細胞機能を媒介することに関与するいくつかの細胞内分子を同定した（Ｙｅｕｎｇ Ｙ−Ｇら、１９９８、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．１３、２７３（４６）：１７１２８〜３７；Ｈｕｓｓｏｎ Ｈら、１９９７、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １５、１４（１９）：２３３１〜８。

【0041】

本発明によるＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤は、例えば、ＣＳＦ−１Ｒの活性、特に神経疾患におけるＣＳＦ−１Ｒの活性を妨害する、例えば低下させる／阻害する、遮断するまたはこれに競合する薬剤である。アルツハイマー病、パーキンソン病、てんかん、てんかん発作、発作および痙攣におけるＣＳＦ−１Ｒの活性を妨害する薬剤が特に好ましい。本発明による阻害剤は、ＣＳＦ−１Ｒ活性を部分的または完全に阻害することができる。本発明において使用する阻害剤には、限定されないが、ＩＬ−３４、ＣＳＦ−１もしくはＣＳＦ−１受容体（ＣＳＦ−１Ｒ）またはＩＬ−３４、ＣＳＦ−１もしくはＣＳＦ−１Ｒをコードする核酸分子と相互作用する（例えば、結合するまたは認識する）ことができる、あるいはＩＬ−３４、ＣＳＦ−１もしくはＣＳＦ−１Ｒの発現を阻害することができるまたはＣＳＦ−１ＲとＣＳＦ−１および／もしくはＩＬ−３４との間の相互作用を阻害することができる阻害剤が含まれる。このような阻害剤は、限定されないが、抗体、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡおよびｓｉＲＮＡ）、炭水化物、脂質、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、ペプチド模倣物および他の薬物であり得る。

【0042】

適切な阻害剤の例としては、それだけに限らないが、ＣＳＦ−１に結合し、天然ＣＳＦ−１受容体への結合を妨害するＣＳＦ−１受容体の合成機能的断片、ＣＳＦ−１受容体に結合し、天然ＣＳＦ−１受容体への結合を妨害するＣＳＦ−１の合成機能的断片、ＣＳＦ−１受容体に結合し、天然ＣＳＦ−１受容体への結合を妨害するＩＬ−３４の合成機能的断片、ＣＳＦ−１もしくはＩＬ−３４にまたはＣＳＦ−１受容体に結合し、ＣＳＦ−１受容体−リガンド相互作用を妨害する抗体、ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４もしくはＣＳＦ−１受容体をコードするｍＲＮＡと特異的にハイブリダイズするアンチセンス核酸分子、またはＩＬ−３４、ＣＳＦ−１もしくはＣＳＦ−１Ｒの活性を阻害する他の薬物が挙げられる。

【0043】

ＣＳＦ−１受容体活性の阻害剤は、このような阻害剤を同定および産生する方法であるものとして当技術分野で公知である。中和抗ＣＳＦ−１抗体は、例えば、Ｗｅｉｒら、１９９６、Ｊ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．Ｉ １，１４７４〜１４８１および抗ＣＳＦ−ｌＲ抗体も記載しているＨａｒａｎ−Ｇｈｅｒａら、１９９７、Ｂｌｏｏｄ、８９，２５３７〜２５４５によって記載されている。ＣＳＦ−１のアンチセンスアンタゴニストもまた記載されている（欧州特許第１２２３９８０号明細書）。

【0044】

適切な阻害剤であり得る薬剤は、多種多様な候補薬剤から選択することができる。候補薬剤の例としては、それだけに限らないが、核酸（例えば、ＤＮＡおよびＲＮＡ）、炭水化物、脂質、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、ペプチド模倣物および他の薬物が挙げられる。薬剤は、生物学的ライブラリー；空間的にアドレス可能な並列固相または溶液相ライブラリー；逆重畳積分を必要とする合成ライブラリー法；「１ビーズ１化合物」ライブラリー法；およびアフィニティークロマトグラフィー選択を用いる合成ライブラリー法を含む当技術分野で公知のコンビナトリアルライブラリー法における多数のアプローチのいずれかを用いて得ることができる。生物学的ライブラリーアプローチはペプチドライブラリーに適しているが、他の４つのアプローチはペプチド、非ペプチドオリゴマーまたは化合物のライブラリーに適用可能である（Ｌａｍ、１９９７、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．１２：１４５；米国特許第５７３８９９６号明細書および米国特許第５８０７６８３号明細書）。

【0045】

分子ライブラリーを合成するための本記載に基づく適切な方法の例は、当技術分野で、例えば、ＤｅＷｉｔｔら、１９９３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６９０９；Ｅｒｂら、１９９４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：１１４２２；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら、１９９４、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：２６７８；Ｃｈｏら、１９９３、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６１：１３０３；Ｃａｒｒｅｌｌら、１９９４、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．ｈｉｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０５９；Ｃａｒｅｌｌら、１９９４、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０６１；およびＧａｌｌｏｐら、１９９４、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１２３３に見出すことができる。

【0046】

化合物のライブラリーは、例えば、溶液（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ、１９９２、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １３：４１２〜４２１）またはビーズ（Ｌａｍ、１９９１、Ｎａｔｕｒｅ ３５４：８２〜８４）、チップ（Ｆｏｄｏｒ、１９９３、Ｎａｔｕｒｅ ３６４：５５５〜５５６）、細菌（米国特許第５２２３４０９号明細書）、胞子（米国特許第５５７１６９８号明細書；米国特許第５４０３４８４号明細書および米国特許第５２２３４０９号明細書）、プラスミド（Ｃｕｌｌら、１９９２、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１８６５〜１８６９）またはファージ（ＳｃｏｔｔおよびＳｍｉｔｈ、１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３８６〜３９０；Ｄｅｖｌｉｎ、１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：４０４〜４０６；Ｃｗｉｒｌａら、１９９０、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：６３７８〜６３８２；およびＦｅｌｉｃｉ、１９９１、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：３０１〜３１０）で提示することができる。

【0047】

一例において、本発明において使用するための阻害剤は核酸であってもよい。特に、ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒ核酸分子をアンチセンス分子として使用して、相補的核酸に結合することによってそれぞれのポリペプチドの発現を変化させることができる。ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒ核酸は、例えばゲノムＤＮＡもしくはｃＤＮＡからの標準的なクローニング技術を用いて得ることができる、または周知の市販の技術を用いて合成することができる。ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒ核酸は、ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒ核酸のヌクレオチド配列に１つまたは複数のヌクレオチド置換、付加または欠失を含むことができる。例えば部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介突然変異誘発を含む当業者に公知の標準的な技術を用いて、突然変異を導入することができる。本発明によるアンチセンス核酸は、それぞれのポリペプチドをコードするＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）の一部に対するいくらかの配列相補性によりハイブリダイズすることができるＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒ核酸を含む。アンチセンス核酸は、このようなポリペプチドをコードするｍＲＮＡのコード領域および／または非コード領域に相補的であり得る。最も好ましくは、アンチセンス核酸は、ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒポリペプチドの発現の阻害をもたらす。本発明はまた、治療上有効量のＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤を対象に投与するステップを含む、神経疾患に罹患しているまたは神経疾患を発症するリスクがあるヒト対象の治療および／または予防に使用するためのＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤であって、ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒポリペプチドをコードする遺伝子またはｃＤＮＡに対してアンチセンスである少なくとも８個のヌクレオチド（例えば、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１または２２ヌクレオチドなどの１５〜２２ヌクレオチド）を含む単離ＤＮＡである阻害剤を提供する。

【0048】

一実施形態では、神経疾患の治療および／または予防に使用するための阻害剤が、ＣＳＦ−１またはＩＬ−３４と相互作用する（すなわち、これと結合するまたはこれを認識する）抗体である。別の実施形態では、抗体がＣＳＦ−１またはＩＬ−３４と選択的に相互作用する。選択的に相互作用する（例えば、認識または結合する）とは、抗体がＣＳＦ−１またはＩＬ−３４ポリペプチドに対して他のポリペプチドよりも大きな親和性を有することを意味する。適切な抗体の例には、例えばＣＳＦ−１またはＩＬ−３４とその受容体の結合を妨げることによって、ＣＳＦ−１またはＩＬ−３４が生物学的に活性になるのを防ぐようにＣＳＦ−１またはＩＬ−３４に結合することによってＣＳＦ−１またはＩＬ−３４の活性を阻害する抗体がある。

【0049】

本発明の一実施形態は、神経疾患の治療および／または予防に使用するための阻害剤であって、抗体またはその断片もしくは誘導体がＣＳＦ−１Ｒに結合する阻害剤を提供する。最も好ましくは、神経疾患の治療および／または予防に使用するための阻害剤が、ＣＳＦ−１Ｒと相互作用する（すなわち、これと結合するまたはこれを認識する）またはＣＳＦ−１Ｒの活性を阻害する抗体である。一実施形態では、抗体がＣＳＦ−１Ｒと選択的に相互作用する。選択的に相互作用する（例えば、認識または結合する）とは、抗体がＣＳＦ−１Ｒポリペプチドに対して他のポリペプチドよりも大きな親和性を有することを意味する。適切な抗体の例には、ＣＳＦ−１Ｒが生物学的に活性になるのを防ぐようにＣＳＦ−１Ｒに結合することによってＣＳＦ−１Ｒの活性を阻害する抗体がある。

【0050】

一実施形態では、抗体がＣＳＦ−１Ｒのアイソフォーム、例えばヒトＣＳＦ−１Ｒおよびそのアイソフォームを認識する。

【0051】

一実施形態では、本発明による神経疾患の治療および／または予防に使用するためのＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤がＣＳＦ−１と受容体ＣＳＦ−１Ｒの結合を遮断する。

【0052】

本明細書で使用される「遮断」とは、受容体を閉塞するなどの物理的な遮断を指すが、抗体または断片が、例えば受容体に対する天然のリガンドがもはや結合しないことを意味する立体配座変化を引き起こすエピトープに結合する場合も含む。（本明細書ではアロステリック遮断またはアロステリック阻害と呼ばれる）。

【0053】

一実施形態では、本開示の抗体が、ＣＳＦ−１Ｒの全てのアイソタイプ、例えばＶ２３Ｇ、Ａ２４５Ｓ、Ｈ２４７Ｐ、Ｖ２７９Ｍおよび前記変異体の２つ、３つまたは４つの組み合わせなどの、ＥＣＤドメインにおける変異を有するものに結合する。ＣＳＦ−１およびＩＬ−３４は共にＣＳＦ−１Ｒのリガンドであり、本発明において使用するための抗体は、好ましくは、機能的な細胞スクリーンにおいてＣＳＦ−１とＩＬ−３４の両方の活性を阻害する。本発明により使用するための抗体はまた、好ましくは、ＣＳＦ−１Ｒ活性化および／またはＣＳＦ−１Ｒ内部移行を引き起こさない。

【0054】

ＣＳＦ−１Ｒを遮断する抗体の能力を決定するのに適したアッセイは、本明細書の実施例に記載されており、実施例２を参照されたい。

【0055】

ＢＩＡｃｏｒｅは、結合速度論を測定するために使用されるアッセイの一例であり、ＥＬＩＳＡアッセイまたは単球もしくはＴＨＰ−１細胞を使用する細胞ベースのアッセイも有用であり得る。ＣＳＦ−１とＩＬ−３４は共にＣＳＦ−１Ｒのリガンドであり、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体はＣＳＦ−１またはＩＬ−３４とＣＳＦ−１Ｒの結合を遮断し得るが、好ましくはＣＳＦ−１とＩＬ−３４の両方とＣＳＦ−１Ｒの結合を遮断する。抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体はまた、好ましくはＣＳＦ−１Ｒ活性化もＣＳＦ−１Ｒ内部移行も引き起こさない。抗体がＣＳＦ−１Ｒ活性化またはＣＳＦ−１Ｒ内部移行を引き起こす能力を決定するのに適したアッセイは、実施例に記載されており、ＣＳＦ−１依存性増殖を測定するアッセイを記載する実施例２を参照されたい。

【0056】

ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４もしくはＣＳＦ−１Ｒポリペプチドまたは前記ポリペプチドを発現する細胞を使用して、前記ポリペプチドを特異的に認識する抗体を産生することができる。

【0057】

ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４およびＣＳＦ−１Ｒポリペプチドは、「成熟」ポリペプチドまたはその生物学的に活性な断片もしくは誘導体であり得る。好ましくは、ＣＳＦ−１ポリペプチドは、生物学的活性にとって重要であると考えられるアミノ酸１〜１４９を含む。

【0058】

本明細書で使用されるＣＳＦ−１Ｒは、ＣＳＦ−１Ｒ（配列番号１１に示される）と命名されるタンパク質、そのアイソフォームおよびその生物学的に活性な断片を指す。配列番号１１は、ヒトＣＳＦ１−Ｒの完全９７２アミノ酸配列を示し、ここで残基１〜１９は予測されるシグナルペプチドである。好ましくは、ＣＳＦ−１Ｒポリペプチドは、ＣＳＦ−１Ｒ配列の予測される細胞外領域を表す、ヒトのアミノ酸２０〜５１７を含む。ＣＳＦ−１Ｒの代替形態が知られている。一実施形態では、ＣＳＦ−１Ｒがヒトタンパク質またはそのアイソフォームである。一般に、本発明で使用される抗体は、ＣＳＦ−１Ｒの細胞外ドメインに向けられる。図２（配列番号１５）に示されるヒトＣＳＦ−１ＲはＵｎｉＰｒｏｔデータベースにＰ０７３３３で登録されている。

【0059】

ＣＳＦ−１およびＣＳＦ−１Ｒポリペプチドは、発現系を含む遺伝子改変宿主細胞から当技術分野で周知の方法によって調製され得る、またはこれらは天然の生物源から回収され得る。一実施形態では、図２（配列番号１５）に示される配列が適切な細胞株にトランスフェクトされ得、ポリペプチドが細胞表面上で発現され得る。アミノ酸断片をＧＰＩアンカーに融合して前記発現を促進することができる。次いで、細胞を使用して宿主を免疫することができる。

【0060】

本出願において、「ポリペプチド」という用語は、ペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質を含む。他に指定されない限り、これらは互換的に使用される。ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒポリペプチドは、いくつかの例では、例えばアフィニティータグに融合した融合タンパク質などのより大きなタンパク質の一部であり得る。

【0061】

これらのポリペプチドに対して産生される抗体は、周知の慣習的なプロトコルを用いてポリペプチドまたはこれを発現する細胞を動物、好ましくはヒト以外の動物に投与することによって得ることができる（例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ（編者）、第４巻、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｏｘｆｏｒｄ、英国、１９８６参照）。ウサギ、マウス、ラット、ヒツジ、ウシまたはブタなどの多くの温血動物を免疫することができる。しかしながら、マウス、ウサギ、ブタおよびラットが一般的に好ましい。

【0062】

一実施形態では、本発明によって提供される阻害剤が、抗体またはその機能的に活性な断片もしくは誘導体である。別の実施形態では、本発明によって提供される阻害剤が、モノクローナルまたはポリクローナル抗体である。別の実施形態では、本発明によって提供される阻害剤が、キメラ、ヒト化またはヒト抗体である抗体またはその断片もしくは誘導体である。

【0063】

モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術（ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、１９７５、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５〜４９７）、トリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ、４：７２）およびＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、７７〜９６頁、Ａｌａｎ Ｒ Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、１９８５）などの当技術分野で公知の任意の方法によって調製することができる。

【0064】

本発明で使用するための抗体はまた、例えば、Ｂａｂｃｏｏｋ，Ｊ．ら、１９９６、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３（１５）：７８４３〜７８４８、国際公開第９２／０２５５１号パンフレットおよび国際公開第２００４／０５１２６８号パンフレットおよび国際公開第２００４／１０６３７７号パンフレットによって記載される方法により、特異的抗体を産生するために選択される単一リンパ球から産生された免疫グロブリン可変領域ｃＤＮＡをクローニングおよび発現することによる単一リンパ球抗体法を用いて産生することもできる。

【0065】

本明細書で使用される特異的とは、特異的である抗原のみを認識する抗体、または非特異的である抗原への結合と比較して特異的である抗原に対して有意に高い結合親和性、例えば少なくとも５、６、７、８、９、１０倍高い結合親和性を有する抗体を指すことを意図している。

【0066】

キメラ抗体は、軽鎖および重鎖遺伝子が異なる種に属する免疫グロブリン遺伝子セグメントで構成されるように遺伝子改変された免疫グロブリン遺伝子によってコードされる抗体である。これらのキメラ抗体は抗原性が低い可能性が高い。二価抗体は、当技術分野で公知の方法によって作製することができる（Ｍｉｌｓｔｅｉｎら、１９８３、Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７〜５３９；国際公開第９３／０８８２９号パンフレット、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、１９９１、ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５〜３６５９）。多価抗体は複数の特異性を含み得る、または単一特異性であり得る（例えば、国際公開第９２／２２８５３号パンフレット参照）。

【0067】

本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体分子」という用語は、重鎖および／または軽鎖が、アクセプター抗体（例えば、ヒト抗体）の重鎖および／または軽鎖可変領域フレームワークにグラフトされたドナー抗体（例えば、マウスモノクローナル抗体）からの１つまたは複数のＣＤＲ（所望であれば、１つまたは複数の修飾ＣＤＲを含む）を含む抗体分子を指す（例えば、米国特許第５５８５０８９号明細書；国際公開第９１／０９９６７号パンフレット参照）。概要については、Ｖａｕｇｈａｎら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１６、５３５〜５３９、１９９８を参照されたい。

【0068】

一実施形態では、全ＣＤＲが移されるのではなく、上記の本明細書に記載されるＣＤＲのいずれか１つからの特異性決定残基の１つまたは複数のみがヒト抗体フレームワークに移される（例えば、Ｋａｓｈｍｉｒｉら、２００５、Ｍｅｔｈｏｄｓ、３６、２５〜３４参照）。一実施形態では、上記の本明細書に記載されるＣＤＲの１つまたは複数からの特異性決定残基のみがヒト抗体フレームワークに移される。別の実施形態では、上記の本明細書に記載されるＣＤＲの各々からの特異性決定残基のみがヒト抗体フレームワークに移される。

【0069】

本発明のヒト化抗体において、フレームワーク領域は、アクセプター抗体のものと全く同じ配列を有する必要はない。例えば、異常な残基は、そのアクセプター鎖クラスまたはタイプのより頻繁に生じる残基に変化し得る。あるいは、アクセプターフレームワーク領域の選択された残基は、それらがドナー抗体の同じ位置に見られる残基に対応するように変化し得る（Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら、１９９８、Ｎａｔｕｒｅ、３３２、３２３〜３２４参照）。このような変化は、ドナー抗体の親和性を回復するのに必要な最小限に保たれるべきである。変更される必要のあるアクセプターフレームワーク領域の残基を選択するためのプロトコルは国際公開第９１／０９９６７号パンフレットに示されている。

【0070】

ＣＤＲまたは特異性決定残基を移植する場合、ＣＤＲが由来するドナー抗体のクラス／タイプ（マウス、霊長類およびヒトフレームワーク領域を含む）に関して、任意の適切なアクセプター可変領域フレームワーク配列を用いることができる。

【0071】

適切には、ヒト化抗体は、ヒトアクセプターフレームワーク領域ならびにＣＤＲの１つまたは複数を含む可変ドメインを有する。したがって、一実施形態では、可変ドメインがヒトアクセプターフレームワーク領域およびヒト以外のドナーＣＤＲを含む、ヒトＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒに結合するヒト化抗体が提供される。

【0072】

本発明において使用することができるヒトフレームワークの例には、ＫＯＬ、ＮＥＷＭ、ＲＥＩ、ＥＵ、ＴＵＲ、ＴＥＩ、ＬＡＹおよびＰＯＭがある（Ｋａｂａｔら、上記）。例えば、ＫＯＬおよびＮＥＷＭは重鎖に使用することができ、ＲＥＩは軽鎖に使用することができ、ＥＵはＬＡＹおよびＰＯＭは重鎖と軽鎖の両方に使用することができる。あるいは、ヒト生殖系列配列を使用してもよい；これらはｈｔｔｐ：／／ｖｂａｓｅ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／で入手可能である。

【0073】

本発明のヒト化抗体において、アクセプター重鎖および軽鎖は、必ずしも同じ抗体に由来する必要はなく、所望であれば、異なる鎖由来のフレームワーク領域を有する複合鎖を含んでいてもよい。

【0074】

本発明において使用するための抗体は、当技術分野で公知の種々のファージディスプレイ法を用いて作製することもでき、これにはＢｒｉｎｋｍａｎら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１９９５、１８２：４１〜５０）、Ａｍｅｓら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１９９５、１８４：１７７〜１８６）、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４、２４：９５２〜９５８）、Ｐｅｒｓｉｃら（Ｇｅｎｅ、１９９７ １８７ ９〜１８）、Ｂｕｒｔｏｎら（Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９４、５７：１９１〜２８０）ならびに国際公開第９０／０２８０９号パンフレット；国際公開第９１／１０７３７号パンフレット；国際公開第９２／０１０４７号パンフレット；国際公開第９２／１８６１９号パンフレット；国際公開第９３／１１２３６号パンフレット；国際公開第９５／１５９８２号パンフレット；国際公開第９５／２０４０１号パンフレット；ならびに米国特許第５６９８４２６号明細書；第５２２３４０９号明細書；第５４０３４８４号明細書；第５５８０７１７号明細書；第５４２７９０８号明細書；第５７５０７５３号明細書；第５８２１０４７号明細書；第５５７１６９８号明細書；第５４２７９０８号明細書；第５５１６６３７号明細書；第５７８０２２５号明細書；第５６５８７２７号明細書；第５７３３７４３号明細書および第５９６９１０８号明細書によって開示されているものが含まれる。米国特許第４９４６７７８号明細書に記載されている一本鎖抗体などの一本鎖抗体を産生する技術を適合させてＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒポリペプチドに対する一本鎖抗体を産生することもできる。また、トランスジェニックマウス、または他の哺乳動物を含む他の生物を使用して、ヒト化抗体を発現させることができる。

【0075】

本発明の一実施形態は、二重特異性または多重特異性である抗体またはその断片もしくは誘導体であるＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤を提供する。本発明のさらなる実施形態では、神経疾患の治療および／または予防に使用するための抗体が、全長重鎖および軽鎖を有する完全抗体分子、またはＦａｂ、修飾Ｆａｂ、Ｆａｂ’、修飾Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨまたはＶＬまたはＶＨＨ）、ｓｃＦｖ、二価、三価もしくは四価抗体、Ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）および上記のいずれかのエピトープ結合断片を含む群から選択されるその断片を含む群から選択され得る（例えば、ＨｏｌｌｉｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ、２００５、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３（９）：１１２６〜１１３６；ＡｄａｉｒおよびＬａｗｓｏｎ、２００５、Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ Ｒｅｖｉｅｗｓ−Ｏｎｌｉｎｅ ２（３）、２０９〜２１７参照）。

【0076】

これらの抗体断片を作製および製造する方法は、当技術分野において周知である（例えば、Ｖｅｒｍａら、１９９８、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ、２１６、１６５〜１８１参照）。本発明において使用するための他の抗体断片には、国際特許出願である国際公開第２００５／００３１６９号パンフレット、国際公開第２００５／００３１７０号パンフレットおよび国際公開第２００５／００３１７１号パンフレットに記載されるＦａｂおよびＦａｂ’断片が含まれる。多価抗体は、複数特異性を含み得る、例えば二重特異性であり得る、または単一特異性であり得る（例えば、国際公開第９２／２２８５３号パンフレット、国際公開第０５／１１３６０５号パンフレット、国際公開第２００９／０４０５６２号パンフレットおよび国際公開第２０１０／０３５０１２号パンフレット参照）。

【0077】

一実施形態では、抗体が、例えば全て参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２００９／０４０５６２号パンフレット、国際公開第２０１０／０３５０１２号パンフレット、国際公開第２０１１／０３０１０７号パンフレット、国際公開第２０１１／０６１４９２号パンフレットおよび国際公開第２０１１／０８６０９１号パンフレットに記載されている、免疫グロブリン部分、例えばＦａｂまたはＦａｂ’断片、およびそこに直接または間接的に連結した１つまたは２つの単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）を含むＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒ結合抗体融合タンパク質として提供される。

【0078】

一実施形態では、融合タンパク質が、例えば、場合によりジスルフィド結合によって連結された可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）対形成として、２つのドメイン抗体を含む。

【0079】

一実施形態では、融合タンパク質のＦａｂまたはＦａｂ’要素が、１つまたは複数の単一ドメイン抗体と同一または類似の特異性を有する。一実施形態では、ＦａｂまたはＦａｂ’が、１つまたは複数の単一ドメイン抗体と異なる特異性を有する、すなわち、融合タンパク質が多価である。一実施形態では、本発明による多価融合タンパク質がアルブミン結合部位を有し、例えばその中のＶＨ／ＶＬ対がアルブミン結合部位を提供する。

【0080】

抗体断片およびこれらを産生する方法は、当技術分野で周知である（例えば、Ｖｅｒｍａら、１９９８、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ、２１６、１６５〜１８１参照）。本発明において使用するための抗体断片の特定の例には、天然または修飾ヒンジ領域を有するＦａｂ’断片がある。いくつかの修飾ヒンジ領域は、例えば、米国特許第５６７７４２５号明細書、国際公開第９９／１５５４９号パンフレットおよび国際公開第９８／２５９７１号パンフレットに既に記載されており、これらは参照により本明細書に組み込まれる。本発明において使用するための特定の抗体断片のさらなる例としては、国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ２００４／００２８１０、ＰＣＴ／ＧＢ２００４／００２８７０およびＰＣＴ／ＧＢ２００４／００２８７１（全て２００４年７月１日出願）に記載されているものが挙げられる。特に、国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ２００４／００２８１０に記載される修飾抗体Ｆａｂ断片が好ましい。

【0081】

一実施形態では、抗体重鎖がＣＨ１ドメインを含み、抗体軽鎖がＣＬドメイン（κまたはλのいずれか）を含む。

【0082】

一実施形態では、抗体重鎖がＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含み、抗体軽鎖がＣＬドメイン（κまたはλのいずれか）を含む。

【0083】

存在する場合、本発明の抗体分子の定常領域ドメインは、抗体分子の提案された機能、特に必要とされ得るエフェクター機能を考慮して選択することができる。例えば、定常領域ドメインはヒトＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧまたはＩｇＭドメインであり得る。特に、抗体分子が治療的使用を意図し、抗体エフェクター機能が必要とされる場合、特にＩｇＧ１およびＩｇＧ３アイソタイプのヒトＩｇＧ定常領域ドメインを使用することができる。あるいは、抗体分子が治療目的を意図しており、抗体エフェクター機能が必要でない場合、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４アイソタイプを使用することができる。

【0084】

特定の実施形態では、本発明の抗体がＩｇＧ２またはＩｇＧ４抗体である。これらの定常領域ドメインの配列変異体も使用することができることが理解されるであろう。例えば、Ａｎｇａｌら、１９９３、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９３、３０：１０５〜１０８に記載される、２４１位のセリンがプロリンに変化したＩｇＧ４分子を使用することができる。単一アミノ酸置換は、キメラマウス／ヒト（ＩｇＧ４）抗体の異種性を消滅させる。Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１０５〜１０８）は、ＩｇＧ４抗体の半分子形成を最小化する部位特異的突然変異誘発アプローチを記載している。この報告では、コアヒンジＳ２４１Ｐ内の単一のアミノ酸置換が実質的に少ない半分子形成をもたらした。したがって、抗体がＩｇＧ４抗体である実施形態では、抗体が変異Ｓ２４１Ｐを含み得る。異なるＩｇＧアイソタイプによる示差ＡＤＣＣ誘導は、ＦｃγＲに対するこれらの残基の親和性に依存する。ヒトにおいて、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３はエフェクター機能を誘導することが知られているが、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４はエフェクター機能を弱く誘導する。好ましい実施形態では、本発明において使用するための抗体がＡＤＣＣを含む、エフェクター機能を弱く誘導するＩｇＧ２またはＩｇＧ４抗体である。エフェクター機能を有する抗体の使用は、患者における副作用を付加する可能性を有するＣＳＦ−１Ｒを発現する細胞の枯渇増強を引き起こし得るので、本発明の神経疾患の治療に使用するための抗体が、限られたエフェクター機能を有することが特に好ましい。

【0085】

抗体が種々の翻訳後修飾を受け得ることも当業者によって理解されるであろう。これらの修飾のタイプおよび程度は、抗体を発現するために使用される宿主細胞株ならびに培養条件にしばしば依存する。このような修飾には、グリコシル化、メチオニン酸化、ジケトピペラジン形成、アスパラギン酸異性化およびアスパラギン脱アミド化のバリエーションが含まれ得る。頻繁な修飾は、カルボキシペプチダーゼの作用によるカルボキシ末端塩基性残基（リジンまたはアルギニンなど）の損失である（Ｈａｒｒｉｓ，ＲＪ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ７０５：１２９〜１３４、１９９５に記載）。したがって、抗体重鎖のＣ末端リジンは存在しなくてもよい。

【0086】

別の実施形態では、ＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤が神経疾患の治療および／または予防に使用され得、血液脳関門（ＢＢＢ）を横切って脳内に到達する抗体またはその断片もしくは誘導体が神経疾患に罹患している患者の治療および／または予防に十分な治療上有効量である。

【0087】

本明細書で使用される「治療上有効量」という用語は、標的とされる疾患または状態を治療、改善もしくは予防するため、または検出可能な治療的、薬理学的もしくは予防的効果を示すために必要な治療剤の量を指す。任意の抗体について、治療上有効量は、細胞培養アッセイまたは動物モデル、通常は齧歯動物、ウサギ、イヌ、ブタもしくは霊長類のいずれかで最初に推定することができる。動物モデルを使用して適切な濃度範囲および投与経路を決定することもできる。その後、このような情報を使用して、ヒトにおける投与のための有用な用量および経路を決定することができる。

【0088】

ヒト対象の正確な治療上有効量は、疾患状態の重症度、対象の健康全般、対象の年齢、体重および性別、食事、投与の時間および頻度、薬物の組み合わせ（複数可）、反応感受性ならびに治療に対する耐容性／応答に依存する。この量は日常的な実験によって決定することができ、臨床医の判断の範囲内である。一般に、治療上有効量は０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ〜２００ｍｇ／ｋｇ、例えば１００ｍｇ／Ｋｇであるだろう。

【0089】

別の実施形態では、神経疾患の治療および／または予防に使用するための阻害剤が重鎖および軽鎖を含む抗体またはその断片もしくは誘導体であり、重鎖の可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｈ１について配列番号４に示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｈ２について配列番号５に示される配列を有するＣＤＲ、およびＣＤＲ−Ｈ３について配列番号６に示される配列を有するＣＤＲの少なくとも１つを含む。

【0090】

本発明はまた、神経疾患の治療および／または予防に使用するための阻害剤であって、抗体またはその断片もしくは誘導体が重鎖および軽鎖を含み、軽鎖の可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｌ１について配列番号１に示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｌ２について配列番号２に示される配列を有するＣＤＲ、およびＣＤＲ−Ｌ３について配列番号３に示される配列を有するＣＤＲの少なくとも１つを含む阻害剤を提供する。

【0091】

別の実施形態では、神経疾患の治療および／または予防に使用するための阻害剤が重鎖および軽鎖を含む阻害剤であり、重鎖の可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｈ１について配列番号４に示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｈ２について配列番号５に示される配列を有するＣＤＲ、およびＣＤＲ−Ｈ３について配列番号６に示される配列を有するＣＤＲの少なくとも１つを含み、軽鎖の可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｌ１について配列番号１に示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｌ２について配列番号２に示される配列を有するＣＤＲ、およびＣＤＲ−Ｌ３について配列番号３に示される配列を有するＣＤＲの少なくとも１つを含む。

【0092】

別の実施形態では、神経疾患の治療および／または予防に使用するための阻害剤が、重鎖が配列番号９に示される配列を含む阻害剤である。

【0093】

本発明はまた、軽鎖が配列番号７に示される配列を含む、神経疾患の治療および／または予防に使用するための阻害剤を提供する。

【0094】

本発明はまた、配列番号９に示される配列を含む重鎖および配列番号７に示される配列を含む軽鎖を有する、神経疾患の治療および／または予防に使用するための阻害剤を提供する。

【0095】

本発明の一態様では、重鎖の可変ドメインが３つのＣＤＲを含み、ＣＤＲ−Ｈ１の配列が配列番号４に示される配列と少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％または９５％の同一性または類似性を有し、ＣＤＲ−Ｈ２の配列が配列番号５に示される配列と少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％または９５％の同一性または類似性を有し、ＣＤＲ−Ｈ−３の配列が配列番号６に示される配列と少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％または９５％の同一性または類似性を有する、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体またはその結合断片もしくは誘導体が提供される。好ましくは、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体またはその結合断片が、軽鎖の可変ドメインが３つのＣＤＲを含み、ＣＤＲ−Ｌ１の配列が配列番号１に示される配列と少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％または９５％の同一性または類似性を有し、ＣＤＲ−Ｌ２の配列が配列番号２に示される配列と少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％または９５％の同一性または類似性を有し、ＣＤＲ−Ｌ３の配列が配列番号３に示される配列と少なくとも６０％の同一性または類似性を有する、軽鎖をさらに含む。一実施形態では、本明細書に開示される可変領域配列と少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％または９５％の同一性または類似性を有する可変領域が提供される。

【0096】

本明細書で使用される「同一性」は、整列した配列中の任意の特定の位置で、アミノ酸残基が配列間で同一であることを示す。本明細書で使用される「類似性」は、整列した配列中の任意の特定の位置で、アミノ酸残基が配列間で類似の種類であることを示す。例えば、ロイシンをイソロイシンまたはバリンと置き換えてもよい通常互いに置換することができる他のアミノ酸には、それだけに限らないが、
−フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファン（芳香族側鎖を有するアミノ酸）；
−リジン、アルギニンおよびヒスチジン（塩基性側鎖を有するアミノ酸）；
−アスパラギン酸およびグルタミン酸（酸性側鎖を有するアミノ酸）；
−アスパラギンおよびグルタミン（アミド側鎖を有するアミノ酸）；
−システインおよびメチオニン（硫黄含有側鎖を有するアミノ酸）
が含まれる。同一性および類似性の程度は容易に計算することができる（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク、１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ．Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ、Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク、１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ、Ｐａｒｔ １、Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．およびＧｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、ニュージャージー、１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９８７、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ、Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．およびＤｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．編、Ｍ Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク、１９９１、ＮＣＢＩから入手可能なＢＬＡＳＴ（商標）ソフトウェア（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、１９９０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０；Ｇｉｓｈ，Ｗ．およびＳｔａｔｅｓ，Ｄ．Ｊ．１９９３、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．３：２６６〜２７２．Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．ら、１９９６、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：１３１〜１４１；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、１９９７、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９〜３４０２；Ｚｈａｎｇ，Ｊ．およびＭａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．１９９７、Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．７：６４９〜６５６）。

【0097】

本発明の一実施形態では、神経疾患の治療および／または予防に使用するための阻害剤が、抗体またはその断片もしくは誘導体が、ＢＩＡｃｏｒｅ法により決定される１０ｐＭ以下のヒトＣＳＦ−１Ｒに対する結合親和性［Ｋ_Ｄ］を有する阻害剤である。

【0098】

本発明の一実施形態では、神経疾患の治療および／または予防に使用するための阻害剤が、抗体またはその断片もしくは誘導体が、ＢＩＡｃｏｒｅ法により決定される１００ｐＭ以下の親和性［Ｋ_Ｄ］で抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の結合を交差遮断する（ｃｒｏｓｓ−ｂｌｏｃｋ）阻害剤である。

【0099】

本発明の抗体またはその断片もしくは誘導体は、適切には高い結合親和性を有する。親和性は、単離された天然または組換えＣＳＦ−１Ｒまたは適切な融合タンパク質／ポリペプチドを用いた表面プラズモン共鳴、例えばＢＩＡｃｏｒｅなどの技術を含む、当技術分野で公知の任意の適切な方法を用いて測定することができる。例えば、組換えヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメインを用いて親和性を測定することができる。使用するための組換えヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメインはモノマーであってもよい。適切には、本発明の使用のための抗体分子は、約１ｎＭ以下の単離されたヒトＣＳＦ−１Ｒに対する結合親和性を有する。一実施形態では、本発明の抗体分子が約５００ｐＭ以下の結合親和性を有する。一実施形態では、本発明の抗体分子が約２５０ｐＭ以下の結合親和性を有する。一実施形態では、本発明の抗体分子が約２００ｐＭ以下の結合親和性を有する。一実施形態では、本発明は、約１００ｐＭ以下の結合親和性を有する抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体を提供する。一実施形態では、本発明は、約１００ｐＭ以下、好ましくは約１０ｐＭ以下、より好ましくは約５ｐＭ以下の結合親和性を有するヒト化抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体を提供する。別の実施形態では、本発明は、約１００ｐＭ以下、好ましくは約１０ｐＭ以下、より好ましくは約５ｐＭ以下の結合親和性を有するヒト化抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体を提供する。

【0100】

親和性の数値が低いほど、抗原に対する抗体または断片の親和性が高くなる。

【0101】

本発明の一実施形態では、神経疾患の治療および／または予防に使用するための阻害剤が、抗体またはその断片もしくは誘導体が遮断する抗体と同じエピトープに結合することによって結合を交差遮断する阻害剤である。適切な交差遮断アッセイの例は、国際公開第１５／０２８４５５号パンフレットに記載されている。

【0102】

本発明はまた、抗体またはその断片もしくは誘導体が配列番号１５のヒトｃ−ｆｍｓの細胞外ドメインとの結合について、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の抗体またはその断片もしくは誘導体と競合する、神経疾患の治療および／または予防に使用するための阻害剤を提供する。

【0103】

同じエピトープについて競合する抗原結合タンパク質（例えば、中和抗原結合タンパク質または中和抗体）の文脈で使用される場合、「競合する」という用語は、抗原結合タンパク質間の競合が、試験下の抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはその免疫学的に機能性の断片もしくは誘導体）が参照抗原結合タンパク質（例えば、リガンドまたは参照抗体）と共通の抗原（例えば、ｃ−ｆｍｓまたはその断片）の特異的結合を防止または阻害するアッセイによって決定されることを意味する。例えば、固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉら、１９８３、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ＿２：２４２〜２５３）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（例えば、Ｋｉｒｋｌａｎｄら、１９８６、Ｊ ｌｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４〜３６１９）、固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、１９８８、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ）；Ｉ−１２５標識を用いる固相直接標識ＲＩＡ（例えば、Ｍｏｒｅｌら、１９８８、Ｍｏｌｅｃ．ｌｍｍｕｎｏｌ．２５：７〜１５）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（例えば、Ｃｈｅｕｎｇら、１９９０、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６〜５５２）；および直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒら、１９９０、Ｓｃａｎｄ．Ｊ ｌｍｍｕｎｏｌ．３２：７７〜８２）など多数の種類の競合結合アッセイを使用することができる。典型的には、このようなアッセイは、固体表面に結合した精製抗原またはこれらのいずれかを有する細胞、非標識試験抗原結合タンパク質および標識参照抗原結合タンパク質の使用を含む。競合阻害は、試験抗原結合タンパク質の存在下で固体表面または細胞に結合した標識の量を測定することによって測定される。通常、試験抗原結合タンパク質は過剰に存在する。競合アッセイによって同定される抗原結合タンパク質（競合抗原結合タンパク質）は、参照抗原結合タンパク質と同じエピトープに結合する抗原結合タンパク質、および参照抗原結合タンパク質によって結合されたエピトープに立体障害が起こるのに十分に近接した隣接エピトープに結合する抗原結合タンパク質を含む。通常、競合抗原結合タンパク質が過剰に存在する場合、これは、参照抗原結合タンパク質と共通抗原の特異的結合を、少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％または７５％阻害する。いくつかの例では、結合が少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９７％またはそれ以上阻害される。

【0104】

本発明の一実施形態では、神経疾患の治療および／または予防に使用するための阻害剤が、ＣＳＦ−１Ｒ抗体の阻害剤としてヒトＣＳＦ−１Ｒのエピトープに結合する阻害剤である。

【0105】

本発明の一実施形態では、神経疾患の治療および／または予防に使用するための阻害剤が、ヒトＣＳＦ−１Ｒのエピトープに結合する抗体である。

【0106】

ヒトＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒポリペプチドのこの特定の領域またはエピトープは、本発明によって提供される抗体のいずれか１つと組み合わせて当技術分野で公知の任意の適切なエピトープマッピング法によって同定することができる。このような方法の例としては、抗体によって認識されるエピトープの配列を含む抗体に特異的に結合することができる最小の断片を有する本発明の抗体への結合についてのＣＳＦ−１Ｒに由来する様々な長さのペプチドのスクリーニングが挙げられる。ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒペプチドは、合成的にまたはＣＳＦ−１、ＩＬ−３４もしくはＣＳＦ−１Ｒポリペプチドのタンパク質分解消化によって産生され得る。抗体に結合するペプチドは、例えば、質量分析法によって同定することができる。別の例では、ＮＭＲ分光法またはＸ線結晶学を使用して本発明の抗体が結合するエピトープを同定することができる。いったん同定されると、本発明の抗体に結合するエピトープ断片を、必要に応じて、同じエピトープに結合するさらなる抗体を得るための免疫原として使用することができる。

【0107】

抗体または断片などの生物学的分子は、酸性および／または塩基性官能基を含有し、それによって分子に正味の正または負の電荷を与える。全体的な「観察される」電荷の量は、実体の絶対的アミノ酸配列、３Ｄ構造における帯電基の局所的環境および分子の環境条件に依存する。等電点（ｐＩ）は、特定の分子またはその溶媒接近可能表面が正味の電荷を持たないｐＨである。一例では、ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒ抗体および断片は、適切な等電点を有するように操作され得る。これにより、より強固な特性、特に適切な溶解性および／または安定性プロファイルおよび／または改善された精製特性を有する抗体および／または断片が得られる。

【0108】

したがって、一態様では、本発明は、最初に同定された抗体とは異なる等電点を有するように操作されたヒト化ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒ抗体を提供する。抗体を、例えば、酸性アミノ酸残基を１個または複数の塩基性アミノ酸残基で置き換えるなど、アミノ酸残基を置き換えることによって操作することができる。あるいは、塩基性アミノ酸残基を導入してもよいし、または酸性アミノ酸残基を除去してもよい。あるいは、分子が許容できないほど高いｐＩ値を有する場合、必要に応じて酸性残基を導入してｐＩを低下させることができる。ｐＩを操作する場合、抗体または断片の望ましい活性を保持するために注意を払わなければならないことが重要である。したがって、一実施形態では、操作された抗体または断片が、「未修飾」抗体または断片と同じまたは実質的に同じ活性を有する。

【0109】

＊＊ＥｘＰＡＳＹ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｘｐａｓｙ．ｃｈ／ｔｏｏｌｓ／ｐｉ＿ｔｏｏｌ．ｈｔｍｌおよびｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｕｔ−ａｒｌｅｓ．ｕｐ．ｕｎｉｖ−ｍｒｓ．ｆｒ／ｗ３ｂｂ／ｄ＿ａｂｉｍ／ｃｏｍｐｏ−ｐ．ｈｔｍｌなどのプログラムを使用して抗体または断片の等電点を予測することができる。

【0110】

本発明によって提供される抗体の親和性を当技術分野で公知の任意の適切な方法を使用して変化させることができることが理解されるであろう。そのため、本発明はまた、ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒに対する改善された親和性を有する、本発明の抗体分子の変異体に関する。このような変異体は、ＣＤＲを変異させること（Ｙａｎｇら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２５４、３９２〜４０３、１９９５）、鎖シャッフリング（Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０、７７９〜７８３、１９９２）、大腸菌のミューテータ菌株の使用（Ｌｏｗら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２５０、３５９〜３６８、１９９６）、ＤＮＡシャッフリング（Ｐａｔｔｅｎら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、８、７２４〜７３３、１９９７）、ファージディスプレイ（Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２５６、７７〜８８、１９９６）および性的ＰＣＲ（Ｃｒａｍｅｒｉら、Ｎａｔｕｒｅ、３９１、２８８〜２９１、１９９８）を含むいくつかの親和性成熟プロトコルによって得ることができる。Ｖａｕｇｈａｎら（上記）は、これらの親和性成熟方法を論じている。

【0111】

所望であれば、本発明において使用するための抗体を１個または複数のエフェクター分子にコンジュゲートしてもよい。本発明の一実施形態は、神経疾患の治療および／または予防に使用するための抗体であって、抗体またはその断片もしくは誘導体が１個または複数のエフェクター分子にコンジュゲートしている抗体を提供する。

【0112】

エフェクター分子が、単一エフェクター分子、または本発明の抗体に結合することができる単一部分を形成するよう連結された２個以上のこのような分子を含み得ることが理解される。エフェクター分子に連結された抗体断片を得ることが望まれる場合、これは、抗体断片が直接またはカップリング剤を介してエフェクター分子に連結される標準的な化学的または組換えＤＮＡ手順によって調製され得る。このようなエフェクター分子を抗体にコンジュゲートさせるための技術は、当技術分野で周知である（Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、第２版、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら編、１９８７、６２３〜５３頁；Ｔｈｏｒｐｅら、１９８２、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．、６２：１１９〜５８およびＤｕｂｏｗｃｈｉｋら、１９９９、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、８３、６７〜１２３参照）。特定の化学的手順には、例えば、国際公開第９３／０６２３１号パンフレット、国際公開第９２／２２５８３号パンフレット、国際公開第８９／００１９５号パンフレット、国際公開第８９／０１４７６号パンフレットおよび国際公開第０３／０３１５８１号パンフレットに記載されているものが含まれる。あるいは、エフェクター分子がタンパク質またはポリペプチドである場合、例えば国際公開第８６／０１５３３号パンフレットおよび欧州特許第０３９２７４５号明細書に記載されている組換えＤＮＡ手順を用いて結合を達成することができる。

【0113】

本明細書で使用されるエフェクター分子という用語は、例えば、抗悪性腫瘍剤、薬物、毒素、生物学的に活性なタンパク質、例えば酵素、他の抗体または抗体断片、合成または天然に存在するポリマー、核酸およびその断片、例えばＤＮＡ、ＲＮＡおよびその断片、放射性核種、特に放射性ヨウ化物、放射性同位体、キレート化金属、ナノ粒子および蛍光化合物またはＮＭＲもしくはＥＳＲ分光法によって検出され得る化合物などのレポーター基を含む。

【0114】

エフェクター分子の例としては、細胞に有害な（例えば、死滅させる）任意の薬剤を含む細胞毒または細胞傷害剤が挙げられる。例としては、コンブレタスタチン、エポチロン、スタウロスポリン、マイタンシノイド、スポンジスタチン、リゾキシン、ハリコンドリン、ロリジン、ヘミアステルリン、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシンならびにこれらの類似体またはホモログが挙げられる。

【0115】

エフェクター分子には、それだけに限らないが、代謝拮抗薬（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパ（ｔｈｉｏｅｐａ）クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロトスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣおよびシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前はダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、アントラマイシン（ＡＭＣ）、カリケアマイシンまたはデュオカルマイシン）および抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）も含まれる。

【0116】

他のエフェクター分子には、^１１１Ｉｎおよび^９０Ｙ、Ｌｕ^１７７、ビスマス^２１３、カリフォルニウム^２５２、イリジウム^１９２およびタングステン^１８８／レニウム^１８８などのキレート化放射性核種；またはそれだけに限らないが、アルキルホスホコリン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、タキソイドおよびスラミンなどの薬物も含まれ得る。

【0117】

他のエフェクター分子には、タンパク質、ペプチドおよび酵素が含まれる。対象となる酵素には、それだけに限らないが、タンパク質分解酵素、加水分解酵素、リアーゼ、イソメラーゼ、トランスフェラーゼが含まれる。対象となるタンパク質、ポリペプチドおよびペプチドには、それだけに限らないが、免疫グロブリン、毒素（アブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素もしくはジフテリア毒素など）、タンパク質（インスリンなど）、腫瘍壊死因子、α−インターフェロン、β−インターフェロン、β−インターフェロン、神経成長因子、血小板由来成長因子もしくは組織プラスミノーゲン活性化因子、血栓剤もしくは抗血管新生剤、例えば、アンジオスタチンもしくはエンドスタチン、または生体応答修飾物質（リンホカイン、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）もしくは他の成長因子など）および免疫グロブリンが含まれる。

【0118】

他のエフェクター分子は、例えば診断において有用な検出可能な物質を含み得る。検出可能な物質の例としては、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性核種、陽電子放出金属（陽電子放出断層撮影に使用するため）、および非放射性常磁性金属イオンが挙げられる。診断剤として使用するために抗体にコンジュゲートさせることができる金属イオンについては、一般的に米国特許第４７４１９００号明細書を参照されたい。適切な酵素には西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが含まれ；適切な補欠分子族には、ストレプトアビジン、アビジンおよびビオチンが含まれ；適切な蛍光物質にはウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドおよびフィコエリトリンが含まれ；適切な発光物質にはルミノールが含まれ；適切な生物発光物質にはルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンが含まれ；適切な放射性核種には^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１１１Ｉｎおよび^９９Ｔｃが含まれる。

【0119】

別の例では、エフェクター分子は、インビボでの抗体の半減期を延長する、および／または抗体の免疫原性を低下さる、および／または免疫系に対する上皮障壁を横切る抗体の送達を増強することができる。この種の適切なエフェクター分子の例としては、ポリマー、アルブミン、アルブミン結合タンパク質、またはアルブミン結合化合物（国際公開第０５／１１７９８４号パンフレットに記載されているものなど）が挙げられる。

【0120】

一実施形態では、ＣＳＦ−１Ｒと独立したエフェクター分子によって提供される半減期が有利である。

【0121】

エフェクター分子がポリマーである場合、これは一般に、合成または天然に存在するポリマー、例えば場合により置換された直鎖もしくは分枝鎖ポリアルキレン、ポリアルケニレンもしくはポリオキシアルキレンポリマーまたは分岐もしくは非分岐多糖、例えばホモ−もしくはヘテロ−多糖であり得る。

【0122】

上記合成ポリマー上に存在し得る具体的な任意の置換基には、１個または複数のヒドロキシ、メチルまたはメトキシ基が含まれる。

【0123】

合成ポリマーの具体例としては、場合により置換された直鎖または分岐鎖ポリ（エチレングリコール）、ポリ（プロピレングリコール）ポリ（ビニルアルコール）またはこれらの誘導体、特に場合により置換されたポリ（エチレングリコール）、例えばメトキシポリ（エチレングリコール）またはその誘導体が挙げられる。

【0124】

具体的な天然に存在するポリマーとしては、ラクトース、アミロース、デキストラン、グリコーゲンまたはその誘導体が挙げられる。

【0125】

一実施形態では、ポリマーがアルブミンまたはその断片、例えばヒト血清アルブミンまたはその断片である。

【0126】

本発明において使用される「誘導体」は、反応性誘導体、例えば、マレイミドなどのチオール選択的反応性基を含むことが意図される。反応性基は、直接またはリンカーセグメントを介してポリマーに結合していてもよい。このような基の残基は、いくつかの場合、抗体断片とポリマーとの間の連結基として生成物の一部を形成することが理解されるであろう。

【0127】

ポリマーサイズは、所望により変えることができるが、一般に、５００Ｄａ〜５００００Ｄａ、例えば５０００〜４００００Ｄａ、例えば２００００〜４００００Ｄａの平均分子量範囲にある。ポリマーサイズは、特に、製品の意図した使用、例えば脳、腫瘍などの一定の組織に局在する能力、または循環半減期を延長する能力に基づいて選択され得る（概要については、Ｃｈａｐｍａｎ、２００２、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ、５４、５３１〜５４５参照）。したがって、例えば、製品が循環を離れて組織に浸透することが意図されている場合、例えば脳または腫瘍の治療に使用することが意図されている場合、分子量の小さなポリマー、例えば約５０００Ｄａの分子量を有するポリマーを使用することが有利となり得る。製品が循環中に留まる用途では、例えば２００００Ｄａ〜４００００Ｄａの範囲の分子量を有するより高分子量のポリマーを使用することが有利となり得る。

【0128】

適切なポリマーには、ポリ（エチレングリコール）または特にメトキシポリ（エチレングリコール）またはその誘導体などのポリアルキレンポリマー、特に約１５０００Ｄａ〜約４００００Ｄａの範囲の分子量を有するものが含まれる。

【0129】

一例では、本発明において使用するための抗体は、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）部分に結合される。１つの特定の例では、抗体は抗体断片であり、ＰＥＧ分子は、抗体断片に位置する任意の利用可能なアミノ酸側鎖または末端アミノ酸官能基、例えば任意の遊離アミノ、イミノ、チオール、ヒドロキシルまたはカルボキシル基を通して結合され得る。このようなアミノ酸は抗体断片中に天然に存在してもよい、または組換えＤＮＡ法を用いて断片に操作されてもよい（例えば、米国特許第５２１９９９６号明細書；米国特許第５６６７４２５号明細書；国際公開第９８／２５９７１号パンフレット、国際公開第２００８／０３８０２４号パンフレット参照）。一例では、本発明の抗体分子は修飾Ｆａｂ断片であり、修飾はエフェクター分子の結合を可能にするための１個または複数のアミノ酸のその重鎖のＣ末端への付加である。適切には、追加のアミノ酸がエフェクター分子が結合し得る１個または複数のシステイン残基を含む修飾ヒンジ領域を形成する。複数の部位を使用して２個以上のＰＥＧ分子を結合させることができる。

【0130】

適切には、ＰＥＧ分子は、抗体断片中に位置する少なくとも１個のシステイン残基のチオール基を通して共有結合される。修飾された抗体断片に結合した各ポリマー分子は、断片中に位置するシステイン残基の硫黄原子に共有結合することができる。共有結合は、一般的にジスルフィド結合、または特に硫黄−炭素結合である。チオール基を結合点として使用する場合、適切に活性化されたエフェクター分子、例えば、マレイミドおよびシステイン誘導体などのチオール選択的誘導体を使用することができる。活性化されたポリマーを、上記のポリマー修飾抗体断片の調製に出発材料として使用することができる。活性化ポリマーは、α−ハロカルボン酸またはエステルなどのチオール反応性基、例えばイミドアセトアミド、イミド、例えば、マレイミド、ビニルスルホンまたはジスルフィドを含む任意のポリマーであり得る。このような出発材料は商業的に入手することができる（例えば、Ｎｅｋｔａｒ、以前はＳｈｅａｒｗａｔｅｒ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ Ｉｎｃ．、Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ、ＡＬ、米国製）、または市販の出発材料から従来の化学的手順を用いて調製することができる。特定のＰＥＧ分子には、２０Ｋメトキシ−ＰＥＧ−アミン（Ｎｅｋｔａｒ、以前はＳｈｅａｒｗａｔｅｒ；Ｒａｐｐ Ｐｏｌｙｍｅｒｅ；およびＳｕｎＢｉｏから入手可能）およびＭ−ＰＥＧ−ＳＰＡ（Ｎｅｋｔａｒ、以前はＳｈｅａｒｗａｔｅｒから入手可能）が含まれる。

【0131】

一実施形態では、抗体が、例えば欧州特許第０９４８５４４号明細書または欧州特許第１０９００３７号明細書に開示される方法による、ＰＥＧ化された、すなわち共有結合したＰＥＧ（ポリ（エチレングリコール））を有する修飾Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片またはジＦａｂである［「Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、１９９２、Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ Ｈａｒｒｉｓ（編者）、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク、「Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、１９９７、Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ ＨａｒｒｉｓおよびＳ．Ｚａｌｉｐｓｋｙ（編者）、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣおよび「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｕｐｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、１９９８、Ｍ．ＡｓｌａｍおよびＡ．Ｄｅｎｔ、Ｇｒｏｖｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｃｈａｐｍａｎ，Ａ．２００２、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２００２、５４：５３１〜５４５も参照］。一例では、ＰＥＧはヒンジ領域中のシステインに結合している。一例では、ＰＥＧ修飾Ｆａｂ断片は、修飾ヒンジ領域中の単一のチオール基に共有結合したマレイミド基を有する。リジン残基は、マレイミド基に共有結合していてもよく、リジン残基上のアミン基の各々に、約２００００Ｄａの分子量を有するメトキシポリ（エチレングリコール）ポリマーが結合していてもよい。そのため、Ｆａｂ断片に結合したＰＥＧの総分子量は約４００００Ｄａであり得る。

【0132】

特定のＰＥＧ分子には、ＰＥＧ２ＭＡＬ４０Ｋ（Ｎｅｋｔａｒ、以前はＳｈｅａｒｗａｔｅｒから入手可能）としても知られているＮ，Ｎ’−ビス（メトキシポリ（エチレングリコール）ＭＷ２００００）修飾リジンの２−［３−（Ｎ−マレイミド）プロピオンアミド］エチルアミドが含まれる。

【0133】

ＰＥＧリンカーの代替供給源には、ＧＬ２−４００ＭＡ３（以下の構造式中ｍは５である）およびＧＬ２−４００ＭＡ（ｍは２である）を供給するＮＯＦが含まれ、ｎが約４５０である。

【化1】

【0134】

すなわち、各ＰＥＧは約２００００Ｄａである。

【0135】

したがって、一実施形態では、ＰＥＧが、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ＧＬ２−４００ＭＡ３として知られている２，３−ビス（メチルポリオキシエチレンオキシ）−１−｛［３−（６−マレイミド−１−オキソヘキシル）アミノ］プロピルオキシ｝ヘキサン（２アーム分岐ＰＥＧ、−ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯ ＣＨ_２）_５−ＭＡＬ、Ｍｗ４００００である。

【0136】

以下の種類のさらなる代替ＰＥＧエフェクター分子：

【化2】

【0137】

一実施形態では、（連続番号付けによる）鎖中のアミノ酸２２６、例えば重鎖のアミノ酸２２６またはその付近のシステインアミノ酸残基を通して結合した、ＰＥＧ化された（例えば、本明細書に記載されるＰＥＧを有する）全長抗体などの抗体が提供される。

【0138】

一実施形態では、本開示が、１つまたは複数のＰＥＧポリマー、例えば１つまたは複数の４０ｋＤａポリマーなどの１つまたは２つのポリマーを含むＦａｂ’ＰＥＧ分子を提供する。本開示によるＦａｂ−ＰＥＧ分子は、Ｆｃ断片と独立した半減期を有するという点で特に有利であり得る。一実施形態では、ＰＥＧ分子、デンプン分子またはアルブミン分子などのポリマーにコンジュゲートしたｓｃＦｖが提供される。一実施形態では、抗体または断片が、例えば、半減期を増加させるために、デンプン分子にコンジュゲートされる。米国特許第８０１７７３９号明細書に記載されているタンパク質へのコンジュゲートを開始する方法は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0139】

ＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤を同定するために、いくつかの異なるアプローチが当業者によって行われ得る。一例では、ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒと相互作用する薬剤を最初に同定し、その後、これらの薬剤を試験してＣＳＦ−１Ｒ活性を阻害する薬剤を同定することによって阻害剤が同定される。このような一例では、薬剤が抗体である。

【0140】

ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ１−Ｒと相互作用する薬剤または阻害剤は、任意の適切な方法を用いて、例えば、ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒポリペプチドを候補薬剤と接触させ、候補薬剤がポリペプチドと相互作用する能力を決定する、無細胞または細胞ベースのアッセイシステムを用いることによって同定することができる。好ましくは、候補薬剤がＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒポリペプチドと相互作用する能力を参照範囲または対照と比較する。所望であれば、複数のＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒポリペプチド試料を用いて、このアッセイを使用して、複数（例えば、ライブラリー）の候補薬剤をスクリーニングすることができる。無細胞アッセイの一例では、天然または組換えＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒポリペプチドを含む第１および第２の試料を候補薬剤または対照薬剤と接触させ、候補薬剤がポリペプチドと相互作用する能力を、候補薬剤と対照薬剤との間の相互作用の差を比較することによって決定する。好ましくは、例えば、ポリペプチドをこれを特異的に認識し、これに結合する固定化抗体と接触させる、またはポリペプチドの精製調製物をタンパク質に結合するよう設計された表面と接触させることによって、ポリペプチドを最初に固定化する。ポリペプチドは、部分的もしくは完全に精製してもよい（例えば、部分的もしくは完全に他のポリペプチドを含まない）または細胞溶解物の一部であってもよい。さらに、ポリペプチドは、ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４もしくはＣＳＦ１−Ｒポリペプチドまたはその生物学的に活性な部分と、グルタチオニン−Ｓ−トランスフェラーゼまたはＩｇＧｌのＦｃ領域などのドメインとを含む融合タンパク質であってもよい。あるいは、ポリペプチドを当業者に周知の技術（例えば、ビオチン化キット、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ；Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）を用いてビオチン化することができる。候補薬剤がポリペプチドと相互作用する能力は、当業者に公知の方法、例えばＥＬＩＳ Ａ、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）、フローサイトメトリーまたは蛍光微量アッセイ技術（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｍｉｃｒｏｖｏｌｕｍｅ ａｓｓａｙ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）（ＦＭＡＴ）によって決定することができる。細胞ベースのアッセイを使用する別の例では、ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒを発現する細胞集団を候補薬剤と接触させ、候補薬剤がポリペプチドと相互作用する能力を決定する。好ましくは、候補薬剤がＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒと相互作用する能力を参照範囲または対照と比較する。細胞は、例えば、真核生物起源（例えば、酵母または哺乳動物）であり得、内因的にＣＳＦ−１、ＩＬ−３４もしくはＣＳＦ−１Ｒポリペプチドを発現することができる、またはポリペプチドを発現するように遺伝子操作され得る。いくつかの例では、ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４もしくはＣＳＦ−１Ｒポリペプチドまたは候補薬剤を、例えば放射性標識（Ｐ、ＳもしくはＩなど）または蛍光標識（フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルアルデヒドもしくはフルオレサミンなど）で標識して、ポリペプチドと候補薬剤との間の相互作用の検出を可能にする。ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリーおよびＦＭＡＴなどの代替方法を使用することもできる。ＣＳＦ−１Ｒ活性を阻害する薬剤を、任意の適切な方法によって、例えば、（ｉ）候補薬剤の存在下でのＣＳＦ−１Ｒの活性を候補薬剤の非存在下または対照薬剤の存在下での前記ポリペプチドの活性と比較すること；および（ｉｉ）候補薬剤がＣＳＦ−１Ｒの活性を阻害するかどうかを決定することによって同定することができる。このようなアッセイを、臨床モニタリングまたは薬物開発において使用して候補薬剤をスクリーニングすることができる。上記のように、適当な場合（例えば、抗体）、ＣＳＦ−１Ｒ活性を阻害する能力について、結合する薬剤をスクリーニングする前に、薬剤を事前スクリーニングして、ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒと相互作用する薬剤を同定することができる。一例では、細胞ベースのアッセイシステムを使用して、ＣＳＦ−１Ｒの活性を阻害することができる薬剤を同定する。１つの特定の例では、ＣＳＦ−１活性またはＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤を同定するために使用されるアッセイは、ＣＳＦ−１がマクロファージコロニーの形成を刺激することができる、Ｍｅｔｃａｌｆ、１９７０、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．７６〜８９の標準的なインビトロコロニー刺激アッセイである。潜在的な阻害剤をアッセイに添加し、マクロファージの増殖を、^３Ｈチミジン取り込みまたはホルマザン色素変換などの任意の適切な方法によって測定する。そのため、阻害は対照と比較して増殖の減少として測定される。

【0141】

別の例では、ＣＳＦ−１Ｒの阻害剤がＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒポリペプチド、例えばアンチセンス阻害剤の発現を下方制御することができる。このような阻害剤は、当技術分野で公知の任意の方法によって同定することができる。一例では、このような阻害剤を細胞ベースのアッセイシステムで同定する。したがって、ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４もしくはＣＳＦ−１Ｒポリペプチドまたは核酸を発現する細胞集団を候補薬剤と接触させ、候補薬剤がＣＳＦ−１、ＩＬ−３４もしくはＣＳＦ−１Ｒポリペプチドまたは核酸の発現を変化させる能力を、参照範囲または対照と比較することによって決定する。一例では、ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ１−Ｒポリペプチドを発現する細胞集団を候補薬剤または対照薬剤と接触させ、候補薬剤がＣＳＦ−１、ＩＬ−３４もしくはＣＳＦ−１Ｒポリペプチドまたは核酸の発現を変化させる能力を、ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４もしくはＣＳＦ１−Ｒポリペプチドまたは核酸の発現レベルの差を、処理細胞集団と対照細胞集団間で比較することによって決定する。所望であれば、このアッセイを使用して、複数（例えば、ライブラリー）の候補薬剤をスクリーニングすることができる。細胞は、例えば、真核生物起源（例えば、酵母または哺乳動物）であり得、内因的にＣＳＦ−１、ＩＬ−３４もしくはＣＳＦ−１Ｒポリペプチドを発現することができる、またはＣＳＦ−１、ＩＬ−３４もしくはＣＳＦ−１Ｒポリペプチドを発現するように遺伝子操作され得る。候補薬剤が前記ポリペプチドまたは核酸の発現を変化させる能力は、当業者に公知の方法、例えばおよび限定されないが、フローサイトメトリー、放射標識、シンチレーションアッセイ、免疫沈降、ウェスタンブロット分析、ノーザンブロット分析またはＲＴ−ＰＣＲによって決定することができる。

【0142】

ＣＳＦ−１Ｒの活性を阻害する薬剤を同定またはさらに試験して、例えば、１つまたは複数の動物モデルにおいて治療上有効量を決定することができる。適切な動物の例としては、それだけに限らないが、マウス、ラット、ウサギ、サル、モルモット、イヌおよびネコが挙げられる。薬剤がＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒの発現を阻害する一例では、第１の群および第２の群の哺乳動物に候補薬剤または対照薬剤を投与し、候補薬剤がＣＳＦ−１、ＩＬ−３４もしくはＣＳＦ−１Ｒポリペプチドまたは核酸の発現を阻害する能力を、第１の群の哺乳動物と第２の群の哺乳動物との間の発現レベルの差を比較することによって決定する。所望であれば、第１の群の哺乳動物および第２の群の哺乳動物におけるＣＳＦ−１、ＩＬ−３４もしくはＣＳＦ−１Ｒポリペプチドまたは核酸の発現レベルを、対照群の哺乳動物におけるＣＳＦ−１、ＩＬ−３４もしくはＣＳＦ−１Ｒポリペプチドまたは核酸のレベルと比較することができる。候補薬剤または対照薬剤は、当技術分野で公知の手段（例えば、経口、直腸または非経口、例えば、腹腔内または静脈内または全身）によって投与することができる。ポリペプチドまたは核酸の発現の変化は、上に概説される方法によって評価することができる。

【0143】

アルツハイマー病またはパーキンソン病の齧歯動物モデルの例が、例えば、Ｗｉｒｔｈｓら、２０１０によって証明されている。アルツハイマー病のＡＰＰ／ＰＳ１ＫＩトランスジェニックマウスモデルにおけるミクログリア活性化およびＩｂａ１の発現増加が証明されている。同様に、Ｄｅｐｂｏｙｌｕら、２０１２は、パーキンソン病のＭＰＴＰ誘発モデルにおけるＩｂａ１発現に関連する強力なミクログリア活性化を示した。重要なことに、強いミクログリア活性化表現型および増加したＩｂａ１シグナルが、αシヌクレインの過剰発現を誘導されたパーキンソン病の齧歯動物モデルと非ヒト霊長類モデルの両方で観察された（Ｂａｒｋｈｏｌｔら、２０１２、Ｌｕｋら、２０１２）。

【0144】

別の例では、ＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害を、疾患症状の回復もしくは改善、および／または疾患の発症の遅延もしくは進行の遅延を監視することによって決定することができる。例えば、限定されないが、神経疾患、例えばとりわけてんかん、アルツハイマー病またはパーキンソン病の場合、これは脳または組織培養物中のミクログリア活性化またはミクログリア細胞のマーカーの減少として現れ得るだろう。神経疾患を有する患者におけるＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害はまた、他の原因がない場合、疾患活動の急速な悪化として定義される憎悪の軽減などの臨床事象を監視することによって決定することができる。よって、一実施形態では、ＣＳＦ−１Ｒの阻害剤を使用することによって以下のアルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アンジェルマン症候群、注意欠陥多動障害、自閉スペクトラム症、双極性障害、脳損傷、脳傷害、脳腫瘍、中枢痛症候群、大脳萎縮症、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、慢性疼痛、複雑な局所疼痛症候群、クロイツフェルト・ヤコブ病、認知症、ダウン症候群、ドラベ症候群、脳炎、本態性振戦、フリードライヒ運動失調症、脆弱Ｘ症候群、脆弱Ｘ関連振戦／失調症候群（ＦＸＴＡＳ）、頭部傷害、頭痛、帯状疱疹、ハンチントン病、低酸素症、免疫媒介性脳脊髄炎、点頭てんかん、頭蓋内圧亢進、ラフォラ病、ランドウ・クレフナー症候群、レノックス・ガストー症候群、白質ジストロフィー、白質消滅を伴う白質脳症、レビー小体病、脳回欠損、ライム病−神経性続発症、巨脳症、髄膜炎、小頭症、偏頭痛、小発作（一過性虚血発作）、運動ニューロン疾患−筋萎縮性側索硬化症参照、多発脳梗塞性認知症、多発性硬化症、乳児のミオクローヌス脳症、ミオクローヌス、ＡＩＤＳの神経症状、ループスの神経性続発症、神経セロイドリポフスチン症、ニューロパチー、ニーマン・ピック病、大田原症候群、パーキンソン病、経産婦新生物障害、原発性側索硬化症、プリオン病、進行性多巣性白質脳症、進行性核上性麻痺、ラスムッセン脳炎、下肢静止不能症候群、レット症候群、全身硬直症候群、脳卒中、一過性虚血発作、外傷性脳傷害、振戦、結節性硬化症、ウンフェルリヒト・ルントボルク病、鉤状回てんかん、ウエスト症候群、ウィルソン病の１つまたは複数の減少が提供され得る。

【0145】

本発明の好ましい例では、阻害剤がてんかん、てんかん発作、発作および痙攣の治療および／または予防に使用され得る。本発明のさらに好ましい実施形態では、阻害剤が、全般発作、部分発作および原因不明の発作を含む群から選択される特別なタイプのてんかんの治療および／または予防に使用され得る。本発明のより好ましい実施形態では、阻害剤が側頭葉てんかん（ＴＬＥ）の治療および／または予防に使用され得る。

【0146】

神経疾患に精通した医師に知られている技術を使用して、候補薬剤が疾患に関連する１つまたは複数の症状を変化させたかどうかを判定することができる。神経疾患のいくつかの異なるモデルが当技術分野で公知である。例えば、ミクログリア活性化に関連する神経炎症のモデルは、神経疾患において観察されるミクログリア表現型を模倣するミクログリア活性化を誘導することが報告されているリポ多糖（ＬＰＳ）細菌内毒素の全身注射に基づく。このモデルは齧歯動物種で使用することができるが、最近の研究では、ＬＰＳモデルをミクログリア活性化の強い活性化にも関連する非ヒト霊長類にも使用できることが示された（Ｈａｎｎｅｓｔａｄら、２０１２）。

【0147】

神経疾患またはミクログリア活性化状態の画像化技術は、活性化ミクログリアにおいて強力な誘導を示す（Ｈａｎｎｅｓｔａｄら、２０１２）、トランスロケータタンパク質（ＴＳＰＯ）に結合する放射性トレースを用いる陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）であり得る。ＴＳＰＯは、その誘導がてんかん、アルツハイマー病、パーキンソン病などのいくつかの神経疾患の経過において報告されているので、ミクログリア活性化の翻訳マーカーとみなされている（Ａｍｈａｏｕｌら、２０１４；Ｈｏｍｍｅｔら、２０１４；Ｅｄｉｓｏｎら、２０１３）。

【0148】

本発明の一実施形態は、核酸である、神経疾患を治療および／または予防するための阻害剤を提供する。

【0149】

さらなる実施形態では、本発明は、ＣＳＦ−１Ｒ活性を阻害する抗体の重鎖および／または軽鎖（複数可）をコードする単離されたＤＮＡ配列である阻害剤を提供する。好ましい実施形態では、単離されたＤＮＡ配列が重鎖および軽鎖を含む抗体またはその断片もしくは誘導体の重鎖および／または軽鎖（複数可）をコードし、重鎖の可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｈ１について配列番号４に示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｈ２について配列番号５に示される配列を有するＣＤＲ、およびＣＤＲ−Ｈ３について配列番号６に示される配列を有するＣＤＲの少なくとも１つを含み、軽鎖の可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｌ１について配列番号１に示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｌ２について配列番号２に示される配列を有するＣＤＲ、およびＣＤＲ−Ｌ３について配列番号３に示される配列を有するＣＤＲの少なくとも１つを含む。

【0150】

別の例では、阻害剤が核酸である場合、これは遺伝子治療を介して投与され得る（例えば、Ｈｏｓｈｉｄａ，Ｔ．ら、２００２、Ｐａｎｃｒｅａｓ、２５：１１１〜１２１；Ｉｋｕｎｏ、Ｙ．２００２、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ Ｓｃｉ．２００２ ４３：２４０６〜２４１１；Ｂｏｌｌａｒｄ，Ｃ、２００２、Ｂｌｏｏｄ ９９：３１７９〜３１８７；Ｌｅｅ Ｅ．、２００１、Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７：７７３〜７８２参照）。遺伝子治療は、発現したまたは発現可能な核酸の対象への投与を指し一例では、これはＣＳＦ−１、ＩＬ−３４もしくはＣＳＦ−ＩＲ核酸またはその部分のいずれかである。当技術分野で利用可能な遺伝子治療のための方法のいずれも、本発明により使用することができる。治療用核酸の患者への送達は、直接インビボ遺伝子治療（すなわち、患者が核酸または核酸含有ベクターに直接曝露される）または間接エクスビボ遺伝子治療（すなわち、細胞が最初にインビトロで核酸により形質転換され、次いで、患者に移植される）であり得る。

【0151】

例えば、インビボ遺伝子治療のために、ＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−ＩＲ核酸を含有する発現ベクターを、それが細胞内になるように、すなわち、例えば、米国特許第４９８０２８６号明細書またはＲｏｂｂｉｎｓら、１９９８、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．８０：３５〜４７に記載される欠陥もしくは弱毒化レトロウイルスまたは他のウイルスを用いた感染によって、投与することができる。当技術分野で公知の種々のレトロウイルスベクターは、例えばＭｉｌｌｅｒら（１９９３、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５８１〜５９９）に記載されているものであり、これらは、ウイルスゲノムのパッケージ化およびその後の宿主細胞ＤＮＡへの取り込みに必要とされないレトロウイルス配列を欠失させるよう修飾された。また、非分裂細胞に感染する能力のために有利なアデノウイルスベクターを使用することができ、このような高能力アデノウイルスベクターは、Ｋｏｃｈａｎｅｋ（１９９９、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、１０：２４５１〜２４５９）に記載されている。使用することができるキメラウイルスベクターは、Ｒｅｙｎｏｌｄｓら（１９９９、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｔｏｄａｙ、１：２５〜３１）によって記載されているものである。ハイブリッドベクターも使用することができ、Ｊａｃｏｂｙら（１９９７、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、４：１２８２〜１２８３）によって記載されている。ネイキッドＤＮＡの直接注入または微粒子照射（例えば、Ｇｅｎｅ Ｇｕｎ（登録商標）；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ、Ｄｕｐｏｎｔ）の使用またはこれを脂質でコーティングすることも遺伝子治療に使用することができる。細胞表面受容体／トランスフェクション化合物、またはリポソーム、微粒子もしくはマイクロカプセルへのカプセル封入を通して、または核に入ることが知られているペプチドとの結合で核酸を投与することによって、または受容体媒介エンドサイトーシスに敏感なリガンドとの結合でこれを投与すること（ＷｕおよびＷｕ、１９８７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６２：４４２９〜４４３２参照）を使用して、対象となる受容体を特異的に発現する細胞型を標的化することができる。エキソビボ遺伝子治療では、遺伝子を組織培養を用いてインビトロで細胞に移し、皮下注射、細胞の皮膚移植片への施用および組換え血液細胞（造血幹細胞または前駆細胞など）の静脈内注射などの種々の方法によって患者に送達する。遺伝子治療の目的でＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−ＩＲ核酸を導入することができる細胞には、例えば、上皮細胞、内皮細胞、ケラチノサイト、線維芽細胞、筋細胞、肝細胞および血液細胞が含まれる。使用することができる血液細胞には、例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファージ、好中球、好酸球、巨核球、顆粒球、造血細胞または前駆細胞、ミクログリアなどが含まれる。

【0152】

本発明の一態様は、神経疾患を治療および／または予防するための医薬品を製造するためのＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤の使用である。本発明のＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤のこの使用および以下のより具体的な使用は、それだけに限らないが、上記のおよび説明によって提供される全ての定義も関連する阻害剤を含む。

【0153】

本発明の一実施形態では、神経疾患を治療および／または予防するための医薬品を製造するための阻害剤の使用が核酸を含む。

【0154】

本発明の別の実施形態では、神経疾患を治療および／または予防するための医薬品を製造するための阻害剤の使用が、抗体またはその機能的に活性な断片もしくは誘導体に関する。したがって、本発明の抗体またはその機能的に活性な断片もしくは誘導体の使用は、モノクローナルまたはポリクローナル抗体を含む。さらに、本発明における抗体またはその機能的に活性な断片もしくは誘導体の使用は、キメラ、ヒト化またはヒト抗体に関する。本発明の一実施形態では、神経疾患を治療および／または予防するための医薬品を製造するための抗体またはその断片もしくは誘導体の使用が、二重特異性または多重特異性抗体を含む。したがって、本発明の抗体またはその機能的に活性な断片もしくは誘導体の使用は、全長重鎖および軽鎖を有する完全抗体分子、またはＦａｂ、修飾Ｆａｂ、Ｆａｂ’、修飾Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、単一ドメイン抗体（ＶＨまたはＶＬまたはＶＨＨ）、ｓｃＦｖ、二価、三価もしくは四価抗体、Ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディおよび上記のいずれかのエピトープ結合断片を含む群から選択されるその断片を含む群から選択される抗体に関する。

【0155】

本発明の別の実施形態は、１つまたは複数のエフェクター分子にコンジュゲートした阻害剤を含む神経疾患を治療および／または予防するための医薬品を製造するための阻害剤の使用を提供する。

【0156】

本発明の別の実施形態では、ＣＳＦ−１Ｒに結合する抗体である神経疾患を治療および／または予防するための医薬品を製造するための抗体の使用が提供される。

【0157】

抗体またはその断片もしくは誘導体が神経疾患に罹患している患者の治療および／または予防に十分な治療上有効量、血液脳関門（ＢＢＢ）を横切って脳内に到達する、抗体であるＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤の使用も本発明により提供される。

【0158】

本発明の別の実施形態では、神経疾患を治療および／または予防するための医薬品を製造するための抗体またはその断片もしくは誘導体の使用が重鎖および軽鎖を有する抗体を含み、重鎖の可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｈ１について配列番号４に示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｈ２について配列番号５に示される配列を有するＣＤＲ、およびＣＤＲ−Ｈ３について配列番号６に示される配列を有するＣＤＲの少なくとも１つを含む。

【0159】

さらに、本発明は、神経疾患を治療および／または予防するための医薬品を製造するための抗体またはその断片もしくは誘導体の使用であって、抗体またはその断片もしくは誘導体が重鎖および軽鎖を含み、軽鎖の可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｌ１について配列番号１に示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｌ２について配列番号２に示される配列を有するＣＤＲ、およびＣＤＲ−Ｌ３について配列番号３に示される配列を有するＣＤＲの少なくとも１つを含む使用を提供する。

【0160】

本発明の別の実施形態では、神経疾患を治療および／または予防するための医薬品を製造するための抗体またはその断片もしくは誘導体の使用が重鎖および軽鎖を有する抗体を含み、重鎖の可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｈ１について配列番号４に示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｈ２について配列番号５に示される配列を有するＣＤＲ、およびＣＤＲ−Ｈ３について配列番号６に示される配列を有するＣＤＲの少なくとも１つを含み、軽鎖の可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｌ１について配列番号１に示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｌ２について配列番号２に示される配列を有するＣＤＲ、およびＣＤＲ−Ｌ３について配列番号３に示される配列を有するＣＤＲの少なくとも１つを含む。

【0161】

本発明の別の実施形態では、神経疾患を治療および／または予防するための医薬品を製造するための抗体またはその断片もしくは誘導体の使用が、配列番号９に示される配列を含む重鎖を有する抗体を含む。

【0162】

本発明の別の実施形態では、神経疾患を治療および／または予防するための医薬品を製造するための抗体またはその断片もしくは誘導体の使用が、配列番号７に示される配列を含む軽鎖を有する抗体を含む。

【0163】

本発明はさらに、配列番号９に示される配列を含む重鎖および配列番号７に示される配列を含む軽鎖を有する、神経疾患を治療および／または予防するための医薬品を製造するための抗体またはその断片もしくは誘導体の使用を提供する。

【0164】

本発明はまた、神経疾患を治療および／または予防するための医薬品を製造するための抗体またはその断片もしくは誘導体の使用であって、抗体またはその断片もしくは誘導体が１０ｐＭ以下のヒトＣＳＦ−１Ｒに対する結合親和性［Ｋ_Ｄ］を有する使用を提供する。

【0165】

本発明はまた、神経疾患を治療および／または予防するための医薬品を製造するための抗体またはその断片もしくは誘導体の使用であって、抗体またはその断片もしくは誘導体が１００ｐＭ以下の親和性［Ｋ_Ｄ］で請求項１３に記載の抗体の結合を交差遮断する使用を提供する。

【0166】

本発明の別の実施形態は、神経疾患を治療および／または予防するための医薬品を製造するための抗体またはその断片もしくは誘導体の使用であって、抗体またはその断片もしくは誘導体が遮断する抗体と同じエピトープに結合することによって結合を交差遮断する使用である。

【0167】

本発明の別の実施形態は、神経疾患を治療および／または予防するための医薬品を製造するための抗体またはその断片もしくは誘導体の使用であって、抗体またはその断片もしくは誘導体が図２（配列番号１５）のヒトＣＳＦ−１Ｒ（ｃ−ｆｍｓ）の細胞外ドメインへの結合について抗体またはその断片もしくは誘導体と競合する使用である。

【0168】

本発明の一実施形態は、ヒトＣＳＦ−１Ｒのエピトープに結合する、神経疾患を治療および／または予防するための医薬品を製造するための抗体またはその断片もしくは誘導体の使用を提供する。

【0169】

本発明の別の実施形態は、本発明に適した抗体の重鎖および／または軽鎖（複数可）をコードする単離されたＤＮＡ配列である、神経疾患を治療および／または予防するための医薬品を製造するための抗体またはその断片もしくは誘導体の使用を提供する。

【0170】

本明細書に記載されるように、ＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤を神経疾患の治療および／または予防に使用することができる。このような使用のために、薬剤は、一般に医薬組成物の形態で投与される。薬学的に許容される希釈剤、賦形剤および／または担体と組み合わせたＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤を含む医薬組成物も提供される。本発明の医薬組成物は、他の有効成分をさらに含むことができる。

【0171】

「治療」という用語は、治療的および／または予防的療法のいずれかを含む。本明細書において、特定の阻害剤または阻害剤の組み合わせを用いて神経疾患または状態を治療および／または予防する方法に言及する場合、このような言及は、神経疾患を治療および／または予防するための医薬品を製造するためのその阻害剤または阻害剤の組み合わせの使用を含むことを意図していることを理解すべきである。

【0172】

組成物は、通常、薬学的に許容される担体を通常含む無菌の医薬組成物の一部として供給される。この組成物は、（患者に投与する所望の方法に応じて）任意の適切な形態であり得る。本発明における使用の阻害剤は、好ましくは、対象に経口的にまたは直腸内に投与されるが、経皮的、皮下的、鼻腔内、静脈内および筋肉内などの種々の他の経路によって投与されてもよい。任意の所与の場合における投与に最も適した経路は、特定の阻害剤、対象ならびに疾患の性質および重症度ならびに対象の身体状態に依存する。

【0173】

本発明における使用の阻害剤は、例えば、抗神経療法であり得る１種または複数の他の治療的に活性な化合物と組み合わせて、例えば同時に、順次または別々に投与することができる。

【0174】

医薬組成物は、１用量当たり所定量の本発明の活性薬剤を含有する単位用量形態で都合よく提供され得る。このような単位は、例えば、限定されないが、治療している状態、投与経路ならびに対象の年齢および体重および状態に応じて、１０００ｍｇ／ｋｇ〜０．０１ｍｇ／ｋｇ、例えば７５０ｍｇ／ｋｇ〜０．１ｍｇ／ｋｇ、例えば１００ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇを含有し得る。

【0175】

本発明において使用するための薬学的に許容される担体は、例えば、投与経路に応じて多種多様な形態をとることができる。

【0176】

経口投与のための組成物は液体であっても固体であってもよい。経口液体製剤は、例えば、水性もしくは油性の懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップもしくはエリキシルの形態であってもよいし、または使用前に水もしくは他の適切なビヒクルで再構成するための乾燥生成物として提供されてもよい。経口液体製剤は、当技術分野で公知の懸濁化剤を含有してもよい。散剤、カプセル剤および錠剤などの経口固形製剤の場合、デンプン、糖、微結晶セルロース、造粒剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤などの担体を含めることができる。その投与の容易さのために、錠剤およびカプセル剤は、最も有利な経口投与単位形態となり、この場合、固形医薬担体が一般に使用される。

【0177】

上に示される一般的な剤形に加えて、本発明の活性剤を、制御放出手段および／または送達装置によって投与することもできる。錠剤およびカプセル剤は、結合剤、例えばシロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガカントまたはポリビニルピロリドン；充填剤、例えば乳糖、糖、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトールまたはグリシン；錠剤用潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコールまたはシリカ；崩壊剤、例えばジャガイモデンプン；または許容される湿潤剤、例えばラウリル硫酸ナトリウムなどの慣用的な担体または賦形剤を含むことができる。錠剤は、標準的な製薬実務において周知の方法により、標準的な水性または非水性技術によってコーティングすることができる。

【0178】

経口投与に適した本発明の医薬組成物は、各々が所定量の活性剤を含有するカプセル剤、カシェ剤もしくは錠剤などの別個の単位として、散剤もしくは顆粒剤として、または水性液体、非水性液体、非水性液体中の溶液もしくは懸濁液、水中油型エマルジョンもしくは油中水型液体エマルジョンとして提供することができる。このような組成物は、薬学方法のいずれかによって調製することができるが、全ての方法が活性剤を１種または複数の必要な成分を構成する担体と会合させるステップを含む。一般に、組成物は、活性剤を液体担体もしくは細かく分割された固体担体または両方と均一かつ密接に混合し、次いで、必要に応じて生成物を所望の形態に成形することによって調製される。例えば、錠剤は、場合により１種または複数の副成分を用いて、圧縮または成形によって調製することができる。

【0179】

非経口投与に適した医薬組成物は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と適切に混合された水中の本発明の活性薬剤の溶液または懸濁液として調製することができる。分散液は、油中のグリセロール、液体ポリエチレングリコールおよびこれらの混合物で調製することもできる。通常の保存および使用条件下では、これらの調製物は微生物の増殖を防ぐために保存剤を含有する。注射使用に適した医薬形態には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤および組成物を意図されたレシピエントの血液と等張にする溶質を含有することができる水性または非水性滅菌注射溶液、ならびに懸濁化剤およびｔＷｃｋｅｎｉｎｇ剤を含むことができる水性および非水性滅菌懸濁液が含まれる。即時注射溶液、分散液および懸濁液は、滅菌粉末、顆粒および錠剤から調製することができる。医薬組成物は、当技術分野で公知の医療機器を用いて投与することができる。例えば、好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物を、米国特許第５３９９１６３号明細書；第５３８３８５１号明細書；第５３１２３３５号明細書；第５０６４４１３号明細書；第４９４１８８０号明細書；第４７９０８２４号明細書；または第４５９６５５６号明細書に開示されている装置などの無針皮下注射装置で投与することができる。本発明において有用な周知のインプラントおよびモジュールの例としては、制御された速度で薬物を分配するための埋め込み可能な微量注入ポンプを開示する米国特許第４４８７６０３号明細書；皮膚を通して医薬品を投与するための治療装置を開示している米国特許第４４８６１９４号明細書；正確な注入速度で医薬品を送達するための薬物注入ポンプを開示している米国特許第４４４７２３３号明細書；連続的な薬物送達のための可変流量の埋め込み可能な注入装置を開示している米国特許第４４４７２２４号明細書；マルチチャンバ区画を有する浸透圧薬物送達システムを開示している米国特許第４４３９１９６号明細書；および浸透圧薬物送達システムを開示している米国特許第４４７５１９６号明細書が挙げられる。多くの他のこのようなインプラント、送達システムおよびモジュールが当業者に知られている。

【0180】

局所投与に適した医薬組成物は、軟膏、クリーム、懸濁液、ローション、散剤、溶液、ペースト、ゲル、含浸包帯、スプレー、エアゾールまたはオイル、経皮デバイス、散粉剤などとして製剤化することができる。これらの組成物は、活性剤を含有する慣用的な方法を介して調製することができる。したがって、これらはまた、保存剤、薬物浸透を助けるための溶媒、クリームまたは軟膏の皮膚軟化剤ならびにローションのためのエタノールまたはオレイルアルコールなどの適合性の慣用的な担体および添加剤を含んでもよい。このような担体は、組成物の約１％〜最大約９８％として存在し得る。より一般的には、これらは組成物の最大約８０％を形成する。単なる例示として、クリームまたは軟膏は、所望の粘稠度を有するクリームまたは軟膏を製造するのに十分な量の約５〜１０重量％の化合物のを含有する、十分な量の親水性材料および水を混合することによって調製される。経皮投与に適した医薬組成物は、長期間にわたりレシピエントの表皮と緊密に接触したままであることを意図された別個のパッチとして提供され得る。例えば、活性剤をイオン泳動によってパッチからすることができる。外部組織、例えば口および皮膚への施用のために、組成物は、好ましくは、局所軟膏またはクリームとして施用される。軟膏に製剤化する場合、活性薬剤をパラフィン系または水混和性の軟膏基剤のいずれかと共に使用することができる。あるいは、活性薬剤を、水中油型クリーム基剤または油中水型基剤を含むクリームに製剤化することができる。口内の局所投与に適した医薬組成物には、ロゼンジ、トローチおよび口内洗浄剤が含まれる。眼への局所投与に適した医薬組成物には、活性剤が適当な担体、特に水性溶媒に溶解または懸濁した点眼剤が含まれる。これらには、上記の局所軟膏またはクリームも含まれる。担体が固体である直腸投与に適した医薬組成物は、最も好ましくは単位用量坐剤として提供される。適切な担体には、カカオ脂もしくは他のグリセリドまたは当技術分野で一般的に使用されている材料が含まれ、坐剤は、軟化または溶融したカピエル（ｃａｐｉｅｒ）（複数可）との組み合わせの混和、引き続いて冷却および成形によって好都合に形成することができる。これらを浣腸として投与することもできる。

【0181】

ＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤の投与量は、特定の阻害剤、神経疾患の種類、対象、ならびに疾患の性質および重症度、ならびに対象の身体状態、ならびに選択された投与経路によって変化し、適切な投与量は、当業者によって容易に決定され得る。ヒトおよび動物における神経疾患を治療および／または予防するために、注射および抗体ベースの臨床製品などの臨床製品について当技術分野で公知の他の投与経路などの任意の適切な投与経路を用いて、抗体を含む医薬組成物を、治療上または予防上有効投与量（例えば、神経疾患の阻害および／または神経疾患症状の軽減をもたらす投与量）で患者（例えば、ヒト対象）に投与することができる。組成物は、投与方法に応じて、少なくとも０．０５重量％、例えば０．５〜５０重量％、例えば１〜１０重量％またはそれ以上の本発明の阻害剤を含有することができる。本発明の阻害剤の個々の投与量の最適な量および間隔は、治療している状態の性質および程度、投与の形態、経路および部位、治療している特定の対象の年齢および状態によって決定され、医師が使用される適切な投与量を最終的に決定することが当業者によって認識されるだろう。この投与量は、適宜繰り返すことができる。副作用が発生する場合、投与の量および／または頻度を、正常な臨床診療に従って、変更または減少させることができる。

【0182】

一態様では、本発明の医薬組成物はＣＳＦ−１、ＩＬ−３４またはＣＳＦ−１Ｒ核酸を含み、前記核酸は適切な宿主中でＣＳＦ１、ＩＬ−３４もしくはＣＳＦ−１Ｒポリペプチドまたはそのキメラタンパク質を発現する発現ベクターの一部である。特に、このような核酸は、ポリペプチドコード領域に作動可能に連結されたプロモーターを有し、前記プロモーターは誘導性または構成型である（かつ場合により組織特異的である）。

【0183】

本発明の一態様は、神経疾患の治療および／または予防に使用するための医薬組成物を提供する。

【0184】

本発明はさらに、神経疾患に罹患しているまたは神経疾患を発症するリスクがあるヒト対象を治療および／または予防する方法であって、治療上有効量のＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤を対象に投与するステップを含む方法を提供する。本発明の一実施形態では、神経疾患に罹患しているまたは神経疾患を発症するリスクがあるヒト対象を治療および／または予防する方法が、治療上有効量の本発明による阻害剤または本発明による医薬組成物を対象に投与することに関する。

【0185】

本発明はさらに、神経疾患に罹患しているまたは神経疾患を発症するリスクがあるヒト対象を治療および／または予防する方法であって、ＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤が１種または複数の他の治療的に活性な化合物と組み合わせて投与される方法を提供する。本発明の別の態様は、他の治療的に活性な化合物が別の抗てんかん治療剤である方法を提供する。

【0186】

本発明は、神経疾患がアルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アンジェルマン症候群、注意欠陥多動障害、自閉スペクトラム症、双極性障害、脳損傷、脳傷害、脳腫瘍、中枢痛症候群、大脳萎縮症、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、慢性疼痛、複雑な局所疼痛症候群、クロイツフェルト・ヤコブ病、認知症、ダウン症候群、ドラベ症候群、脳炎、本態性振戦、フリードライヒ運動失調症、脆弱Ｘ症候群、脆弱Ｘ関連振戦／失調症候群（ＦＸＴＡＳ）、頭部傷害、頭痛、帯状疱疹、ハンチントン病、低酸素症、免疫媒介性脳脊髄炎、点頭てんかん、頭蓋内圧亢進、ラフォラ病、ランドウ・クレフナー症候群、レノックス・ガストー症候群、白質ジストロフィー、白質消滅を伴う白質脳症、レビー小体病、脳回欠損、ライム病−神経性続発症、巨脳症、髄膜炎、小頭症、偏頭痛、小発作（一過性虚血発作）、運動ニューロン疾患−筋萎縮性側索硬化症参照、多発脳梗塞性認知症、多発性硬化症、乳児のミオクローヌス脳症、ミオクローヌス、ＡＩＤＳの神経症状、ループスの神経性続発症、神経セロイドリポフスチン症、ニューロパチー、ニーマン・ピック病、大田原症候群、パーキンソン病、経産婦新生物障害、原発性側索硬化症、プリオン病、進行性多巣性白質脳症、進行性核上性麻痺、ラスムッセン脳炎、下肢静止不能症候群、レット症候群、全身硬直症候群、脳卒中、一過性虚血発作、外傷性脳傷害、振戦、結節性硬化症、ウンフェルリヒト・ルントボルク病、鉤状回てんかん、ウエスト症候群、ウィルソン病からなる群から選択される、神経疾患の治療および／または予防に使用するためのＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤、神経疾患を治療および／または予防するための医薬品を製造するためのＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤の使用、神経疾患の治療および／または予防に使用するためのＣＳＦ−１Ｒ活性の阻害剤を含む医薬組成物、あるいは神経疾患に罹患しているまたは神経疾患を発症するリスクがあるヒト対象を治療および／または予防する方法を提供する。

【0187】

本発明の実施形態では、神経疾患が、好ましくはアンジェルマン症候群、注意欠陥多動障害、自閉スペクトラム症、脳傷害、脳腫瘍、クロイツフェルト・ヤコブ病、ダウン症候群、ドラベ症候群、脳炎、脆弱Ｘ症候群、脆弱Ｘ関連振戦／失調症候群（ＦＸＴＡＳ）、頭部傷害、帯状疱疹、低酸素症、免疫媒介性脳脊髄炎、点頭てんかん、ラフォラ病、ランドウ・クレフナー症候群、レノックス・ガストー症候群、白質ジストロフィー、白質消滅を伴う白質脳症、脳回欠損、ライム病−神経性続発症、髄膜炎、多発性硬化症、乳児のミオクローヌス脳症、ミオクローヌス、ループスの神経性続発症、大田原症候群、プリオン病、ラスムッセン脳炎、レット症候群、外傷性脳傷害、結節性硬化症、ウンフェルリヒト・ルントボルク病、鉤状回てんかんまたはウエスト症候群を含む群から選択される。

【0188】

本発明の別の実施形態では、神経疾患がてんかん、てんかん発作、発作および痙攣を含む群から選択される。本発明のさらなる実施形態では、てんかんのタイプが全般発作、部分発作および原因不明の発作を含む群から選択される。本発明の別の実施形態では、神経疾患が側頭葉てんかん（ＴＬＥ）である。

【0189】

最も好ましい実施形態として、国際公開第１５／０２８４５５号パンフレットに開示される抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0190】

本発明をここで以下の実施例を参照して説明するが、これらは単なる例示であり、本発明の範囲を限定するものと決して解釈すべきではない。

【図面の簡単な説明】

【0191】

【図1】一定のアミノ酸およびポリヌクレオチド配列（配列番号１〜配列番号１４）を示す図である。

【図2】細胞表面での発現に適したポリヌクレオチドによってコードされるヒトＣＳＦ−１Ｒ細胞外ドメインの配列（配列番号１５）を示す図である。

【図3】Ｍ−ＮＦＳ−６０細胞上の受容体結合ＣＳＦ−１がこの方法によって検出可能であることを確認するフローサイトメトリーデータを示す図である。

【図4】組織培養ウェルの表面に固定化された、または溶液中に遊離しているＡｂ５３５が、使用された濃度でＣＳＦ−１の非存在下でＭ−ＮＦＳ−６０細胞の増殖を支持しなかったことを示す図である。

【図5】抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体による処理（ｓ．ｃ．）後のマウスにおけるＣＳＦ−１Ｒ転写標的関与を示す図である。ＣＳＦ−１Ｒの４つの転写標的遺伝子、例えばＡｉｆ１（パネルＡ、Ｂ）、Ｃｔｓｅ（パネルＣ、Ｄ）、Ｅｍｒ１（パネルＥ、Ｆ）およびＩｒｆ８（パネルＧ、Ｈ）の発現を、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体または陰性対照としての対照ＩｇＧの皮下注射後のてんかんマウス（左パネル）およびナイーブ動物（右パネル）の海馬においてｑＰＣＲによって測定した。

【図6】抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体による処理（ｓ．ｃ．）後にマウス脳切片（海馬の歯状回）で行った免疫組織化学実験の結果を示す図である。活性化ミクログリアのマーカーであるＩｂａ１タンパク質を赤色で標識し、細胞核をＤＡＰＩによって青色で染色した（パネルＡ〜Ｃ）。１ｍｍ^２当たりのＩｂａ１発現ミクログリア細胞の密度をパネルＤで定量した。

【図7】ピロカルピンマウスモデルにおけるてんかん発作の頻度に対する抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の防御効果を示す図である。

【実施例1】

【0192】

抗マウスＣＳＦ−１Ｒ抗体の単離
２匹のウサギに、マウスＣＳＦ−１Ｒ（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｅｎｔｒｙ ｐ０９５８１）の残基１〜５１２を一過的に発現する細胞で５回の免疫化を受けさせた。２μｇ／ｍｌのマウスＣＳＦ−１Ｒ−ウサギＦｃでコーティングしたＮｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐプレートを用いてＥＬＩＳＡで抗体反応を監視した。両方のウサギで１：１０００００希釈までの血清力価が観察された。血清とＭ−ＮＦＳ−６０細胞の結合（Ｍｅｔｃａｌｆら、１９７０）もＦＡＣＳによって決定した。中央ＦＬ１を抗体希釈に対してプロットした。１：１００００の希釈までの結合が観察された。

【0193】

ＣＳＦ−１依存性Ｍ−ＮＦＳ−６０細胞株（Ｍｅｔｃａｌｆら、１９７０）を用いると、両方のウサギ由来の血清がＣＳＦ−１依存性細胞生存を１：１００の希釈まで阻害することができることが示された（データ図示せず）。

【0194】

１００個の９６ウェルプレートに１ウェル当たり１０００〜５０００個のウサギＰＢＭＣを播種し、ＥＬ４−Ｂ５マウス胸腺腫細胞およびウサギＴ細胞馴化培地（ＴＳＮ）の存在下、３７Ｃで１週間培養した。次いで、抗体含有上清を、Ｍ−ＮＦＳ−６０細胞および抗ウサギＦｃ特異的Ｃｙ５コンジュゲートを使用するＦＭＡＴアッセイでスクリーニングした。６７８個のＣＳＦ−１Ｒ結合剤を同定した。これらから、約３％が細胞アッセイでＣＳＦ−１依存性Ｍ−ＮＦＳ−６０増殖をブロッキングした。２μｇ／ｍｌのＣＳＦ−１Ｒ−ウサギＦｃでコーティングしたプレートを用いて結合剤をＥＬＩＳＡでスクリーニングし、結合を抗ウサギＦ（ａｂ’）２−ＨＲＰコンジュゲートで明らかにした。結合剤をＥＬＩＳＡに基づく固相ブロッキングアッセイでもスクリーニングした。このアッセイのために、Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ３８４ウェルプレートを０．５μｇ／ｍｌのＣＳＦ−１Ｒ−ウサギＦｃでコーティングし、その後、ＰＢＳ／０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０／１％ＰＥＧ２００００でブロッキングした。プレートを洗浄した後、次いで、培養上清をプレートに添加し、室温で１時間超インキュベートした。次いで、ＣＳＦ−１を最終濃度１０ｎｇ／ｍｌで上清に添加し、室温でさらに１時間インキュベートした。プレートを洗浄し、次いで、０．５μｇ／ｍｌのビオチン化ヤギ抗マウスＣＳＦ−１抗体（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）と共にインキュベートした。受容体へのＣＳＦ−１の結合は、ストレプトアビジン−ＨＲＰを用いて明らかにした。進行のために８つのウェルを選択した。全てが細胞およびタンパク質との結合を証明し、Ｍ−ＮＦＳ−６０アッセイおよびＥＬＩＳＡでブロックされた。

【0195】

蛍光に基づく方法を使用して、陽性ウェルから抗原特異的Ｂ細胞を同定した。陽性ウェルからの免疫グロブリン分泌Ｂ細胞を、ビオチン化マウスＣＳＦ−１Ｒ−ウサギＦｃおよびヤギＦ（ａｂ’）２抗ウサギＦ（ａｂ’）２断片特異的ＦＩＴＣコンジュゲート（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）でコーティングしたストレプトアビジンビーズと混合した。３７Ｃで１時間インキュベートした後、抗原特異的Ｂ細胞から分泌された抗体をそのＢ細胞の近傍のビーズ上に捕捉した。ＦＩＴＣコンジュゲートの存在は、抗体コーティングビーズの標識および抗原特異的Ｂ細胞周辺の蛍光焦点の形成をもたらした。次いで、蛍光顕微鏡を用いて同定したこれらの個々のＢ細胞をマイクロマニピュレーターで採取し、ＰＣＲチューブに入れた。抗体可変領域遺伝子を、逆転写（ＲＴ）−ＰＣＲによって単一細胞から回収した。次いで、ウサギＶ領域を、ヒトＩｇＧ４キメラ抗体またはＦａｂとして、ＣＨＯ一過性発現系で発現させた。８つのウェルのうちの４つのウェルが組換え抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体を産生した。次いで、組換え抗体による中和活性をＭ−ＮＦＳ−６０アッセイで確認した。また、ＢＩＡｃｏｒｅもＦａｂ分子を用いて実施して、ＣＳＦ−１ＲウサギＦｃに対する親和性を決定した（表１）。中和活性および親和性に基づいて、Ａｂ５３５を抗マウスＣＳＦ−１Ｒ試薬として選択した。その後、この抗体をマウス化し、哺乳動物系において全長ネズミＩｇＧ１として発現させ、精製した。

【0196】

ＢＩＡｃｏｒｅ法
抗体を、精製された組換えＣＳＦ−１Ｒ／Ｆｃ融合タンパク質に対する結合速度論の測定により、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイにおいてＣＳＦ−１Ｒに結合する能力にいて試験した。

【0197】

アッセイフォーマットは、固定化抗ヒトＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）_２による抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の捕捉、次いで捕捉された表面上のｈＣＳＦ−１Ｒ／Ｆｃの滴定であった。ＢＩＡｃｏｒｅ ３０００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＡＢ）を用いてＢＩＡ（Ｂｉａｍｏｌｅｃｕｌａｒ相互作用分析）を行った。全ての実験は２５℃で行ったＡｆｆｉｎｉｐｕｒｅ Ｆ（ａｂ’）_２断片ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）_２断片特異性（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を、アミンカップリング化学反応を介して、ＣＭ５センサーチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＡＢ）に約６０００応答単位（ＲＵ）のレベルまで固定化した。ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＡＢ）を泳動緩衝液として流量１０μｌ／分で使用した。抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体の注入を行って、固定化抗ヒトＩｇＧ、Ｆ（ａｂ）_２上に約１００ＲＵの捕捉レベルを得た。

【0198】

流量３０μｌ／分で３分間、捕捉された抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体上２．５ｎＭから７８ｐＭまで倍加希釈し、引き続いて８分の解離期によって、組換えヒトＣＳＦ−１Ｒ／Ｆｃを滴定した（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）。これらのセンサーグラムを使用して会合速度を作成した。４０ｍＭ ＨＣｌの２回連続１０μｌ注入、引き続いて１０ｍＭ ＮａＯＨの５μｌ注入によって、流量１０μｌ／分で表面を再生した。二重参照バックグラウンドを引いた結合曲線を、標準的な手順に従ってＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（バージョン４．１）を用いて分析した。速度パラメータを当てはめアルゴリズムから決定した。

【0199】

Ａｂ５５３についての結果を表１に示す。

【0200】

【表1】

【実施例2】

【0201】

Ａｂ５３５のインビトロ分析
Ａｂ５３５はインビトロでマウスＣＳＦ−１とＣＳＦ−１受容体陽性細胞株の結合を遮断する
受容体結合Ａｂ５３５が、ＣＳＦ−１がＣＳＦ−１Ｒと結合するのを阻害する能力を調査した。マウスＣＳＦ−１Ｒ陽性細胞株、Ｍ−ＮＦＳ−６０をアッセイに使用し、細胞をＣＳＦ−１に曝露する前に、Ａｂ５３５または対照抗体とプレインキュベートした。次いで、蛍光標識抗体およびフローサイトメトリーを用いて、受容体結合ＣＳＦ−１を検出した。細胞蛍光強度のＡｂ５３５依存性低下を、受容体結合Ａｂ５３５がＣＳＦ−１とＣＳＦ−１Ｒの結合を阻害する能力を示すものとして解釈した。

【0202】

Ｍ−ＮＦＳ−６０細胞（ＬＧＣ Ｐｒｏｍｏｃｈｅｍ、Ｔｅｄｄｉｎｇｔｏｎ、英国）を、１０％ウシ胎児血清（ＰＡＡ）、Ｈｅｐｅｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、最終濃度１０ｍＭ）、ピルビン酸ナトリウム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、最終濃度１ｍＭ）、グルコース（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、最終濃度４．５ｇ／ｌ）、重炭酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、最終濃度１．５％）、β−メルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、最終濃度０．０５ｍＭ）、組換えマウスＣＳＦ−１（Ｐｒｅｐｒｏｔｅｃｈ、最終濃度３．３ｎｇ／ｍｌ）を補充した基礎ＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に懸濁で維持した。

【0203】

Ｍ−ＮＦＳ−６０細胞を、０．２％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、０．０９％アジ化ナトリウム（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を補充した流動緩衝液（ＰＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））中１×１０Ｅ６個細胞／ｍｌの濃度で調製した。Ａｂ５３５またはネズミＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体の連続希釈を流動緩衝液中で調製し、１００μｌの細胞アリコートに添加して、２００μｌ体積中２０、５、１．２５、０．３２、０．０８μｇ／ｍｌの最終濃度を達成し、氷上で１時間インキュベートした。その後、細胞を流動緩衝液中で２回洗浄し、０．５μｇ／ｍｌ組換えマウスＣＳＦ−１と共に氷上で３０分間インキュベートし、流動緩衝液中で２回洗浄した。受容体結合ＣＳＦ−１を検出するために、細胞をビオチン化抗マウスＣＳＦ−１抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、５μｇ／ｍｌ）と共に氷上で３０分間インキュベートし、流動緩衝液中で２回洗浄し、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ ４８８コンジュゲートストレプトアビジン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１：２００希釈）と共に氷上で１５分間インキュベートした後、最終的な洗浄ステップおよび細胞を流動緩衝液５００μｌ中に再懸濁することによって結合抗体を標識した。細胞をＦＡＣＳＣａｌｉｂｅｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いたフローサイトメトリーによって蛍光について評価し、データをＷｉｎＭＤＩソフトウェアを用いて分析した。

【0204】

フローサイトメトリーデータの分析により、Ｍ−ＮＦＳ−６０細胞上の受容体結合ＣＳＦ−１がこの方法によって検出可能であることが確認された（図３ａ）。ＣＳＦ−１を添加する前に、使用した濃度のいずれかでＡｂ５３５と共に細胞をインキュベートすることによって、ＣＳＦ−１とＣＳＦ−１Ｒの結合が（図３ｂ）のように妨げられた。使用した濃度のいずれかでアイソタイプ対照抗体と共に細胞をインキュベーションすることによって、ＣＳＦ−１の結合および検出に対する効果はなかった（図３ｃ）。

【0205】

Ａｂ５３５とＣＳＦ−１Ｒの結合は、インビトロにおけるＣＳＦ−１依存性細胞株の増殖および生存においてＣＳＦ−１に取って代わらない
Ａｂ５３５がＣＳＦ−１依存性細胞の生存および増殖を支持する能力についてＣＳＦ−１に取って代わる能力を、溶液中遊離のおよびプラスチックに固定化したＡｂ５３５に細胞を曝露することを含む細胞増殖アッセイで、Ｍ−ＮＦＳ−６０細胞を用いて調べた。

【0206】

固定化Ａｂ５３５がＣＳＦ−１依存性細胞を支持する能力を評価するために、９６ウェル丸底組織培養プレートのウェルを、Ａｂ５３５または無関係なアイソタイプ対照抗体で２４時間事前コーティングした後、ＰＢＳ中１０μｇ／ｍｌまたは１μｇ／ｍｌの抗体を含有する溶液を５０μｌ／ウェル添加し、４℃でインキュベートすることにより細胞増殖アッセイを開始した。ウェルを吸引し、１００μｌのＰＢＳで各ウェルを２回洗浄することによって未結合抗体を除去した。

【0207】

上記のように維持した増殖Ｍ−ＮＦＳ−６０細胞を、ＣＳＦ−１を含まない増殖培地５０μｌ中、１ウェルあたり１００００個の細胞の密度で９６ウェル丸底組織培養プレートに播種した。組換えマウスＣＳＦ−１、Ａｂ５３５を補充したまたは補足物を含まないさらに５０μｌの増殖培地を適切なウェルに添加した。プレートを７２時間インキュベートし、製造者の指示（Ｐｒｏｍｅｇａ）に従ってＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏキットを用いて細胞数を決定し、試験した条件の各々についてＡＴＰレベル、したがって細胞数に比例する測定可能な発光読み取り値を作成した。全ての条件を３連で行った。

【0208】

データの分析により、ＣＳＦ−１を含まない増殖培地で維持されたものと比較してＣＳＦ−１を補充されたウェルにおける有意に高い細胞数によって反映されるように、Ｍ−ＮＦＳ−６０が増殖に関してＣＳＦ−１に依存することが確認された。さらに、組織培養ウェルの表面に固定化された、または溶液中に遊離しているＡｂ５３５は、使用された濃度でＣＳＦ−１の非存在下でＭ−ＮＦＳ−６０細胞の増殖を支持しなかった（図４）。

【実施例3】

【0209】

側頭葉てんかんのピロカルピンマウスモデル
側頭葉てんかんおよびてんかん発作のピロカルピンモデルをＭａｚｚｕｆｅｒｉら、２０１２に記載されるように行った。ナイーブまたはピロカルピンによる側頭葉てんかんの誘発の１９週間後のてんかんマウス（ｎ＝８〜１０）に、実験の１日目および４日目に１００ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）の抗ＣＳＦ−１Ｒ（Ａｂ５３５）またはビヒクルを投与した。８日目に、動物を屠殺し、その脳を頭蓋骨から取り出した。

【0210】

ピロカルピン誘発側頭葉てんかんは、両脳半球の対称的変化と関連している（Ｍａｚｚｕｆｅｒｉら、２０１２）。海馬を右半球から迅速に解剖し、−８０℃で凍結させてｑＲＴ−ＰＣＲのＲＮＡ抽出を行った。組織学的検査（免疫組織化学）を行うために、左半球を４％ＰＦＡに浸漬することによって固定した。

【0211】

抗体による受容体遮断の分子結果を示すために、Ｔｈｏｍｓｏｎ−Ｒｅｕｔｅｒｓ Ｍｅｔａｂａｓｅ（ｈｔｔｐ：／／ｌｓｒｅｓｅａｒｃｈ．ｔｈｏｍｓｏｎｒｅｕｔｅｒｓ．ｃｏｍ／ｐａｇｅｓ／ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ／１０／ｍｅｔａｂａｓｅ）、生物学的経路および遺伝子制御の手動で精選されたデータベースを用いて、ＣＳＦ−１Ｒの下流転写標的遺伝子を同定した。標的ＣＳＦ−１Ｒ遺伝子のうち、Ａｉｆ１、Ｉｒｆ８、Ｃｔｓｅ１およびＥｍｒ１遺伝子を、海馬で発現することが知られているので選択した。これらの発現を測定し、ｑＲＴ−ＰＣＲによって比較した。

【0212】

ＣＳＦ−１Ｒ、Ａｉｆ１の上記の標的遺伝子の１つは、ミクログリア活性化の広く確立されたマーカーであるＩｂａ１タンパク質をコードしている。Ｉｂａ１の発現は、ヒトてんかんおよびてんかんのマウスモデル、例えばピロカルピンモデル（Ｖｅｚｚａｎｉら、２０１３）において見出されるミクログリア細胞において一貫して増加する。そのため、本発明者らは、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体で処理したピロカルピンてんかんマウスの海馬におけるその発現の免疫組織化学的評価を行った。Ｉｂａ１（ミクログリアマーカー）およびＤＡＰＩ（核マーカー）を認識する特異的抗体を使用し、４０倍レンズ（ＮａｎｏＺｏｏｍｅｒ）による画像取得後の海馬の歯状回におけるＩｂａ１陽性細胞の数を定量化した（細胞／ｍｍ^２）。

【0213】

結果
ＣＳＦ−１Ｒの４つの転写標的遺伝子、例えばＡｉｆ１（図５パネルＡ、Ｂ）、Ｃｔｓｅ（図５パネルＣ、Ｄ）、Ｅｍｒ１（図５パネルＥ、Ｆ）およびＩｒｆ８（図５パネルＧ、Ｈ）の発現を、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体または陰性対照としての対照ＩｇＧの皮下注射後のてんかんマウス（左パネル）およびナイーブ動物（右パネル）の海馬においてｑＰＣＲによって測定した。

【0214】

ピロカルピンマウスにおいて、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体処理（ｓ．ｃ．）は、対照（図５−パネルＡ、Ｃ、ＥおよびＧ）と比較して、４つの選択された標的遺伝子（Ａｉｆ１、Ｃｔｓｅ、Ｅｍｒ１およびＩｒｆ８）全ての発現を有意に減少させた。これは、ＣＳＦ−１Ｒが、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体で処理したてんかんマウスの海馬において効率的に阻害されることを証明している。

【0215】

ナイーブ動物におけるＡｉｆ１、ＣｔｓｅおよびＩｒｆ８遺伝子の発現は、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体によって影響されない（図５−パネルＢ、ＤおよびＨ）。これは、抗ＣＳＦ−１Ｒが脳内でその効果を有するためには、疾患状態（てんかん）が必要であることを示唆している。しかしながら、Ｅｍｒ１の発現はナイーブマウス（図１−パネルＦ）でも影響を受けており、ＣＳＦ−１Ｒのいくつかの標的遺伝子は疾患の背景に依存し得るが、他はそうではないことを示唆している。

【0216】

てんかんマウスにおいて、抗ＣＳＦ−１Ｒは、ナイーブ動物において観察される発現レベル（パネルＡ、Ｃ、ＥおよびＧ）までこれらの４つの遺伝子の発現レベルを少なくとも部分的に回復させており、てんかんのあるマウスの脳における標的関与を示している。ナイーブ動物では、この効果はＩｒｆ８標的遺伝子（パネルＦ）でのみ見ることができ、他の３つの標的遺伝子（パネルＢ、ＤおよびＨ）では見られず、ピロカルピン誘発てんかん動物と比較したナイーブ動物における抗ＣＳＦ−１Ｒ曝露の異なる標的関与を示している。

【実施例4】

【0217】

マウス脳切片で行った免疫組織化学実験
遺伝子発現データに基づいて実施例３に記載される所見を脳組織学によって確認した。図６は、活性化ミクログリア細胞のマーカーであるＩｂａ１マーカー（赤色）について抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体による処理（ｓ．ｃ．）後のマウス脳切片（海馬の歯状回）で行った免疫組織化学結果を示す；細胞核はＤＡＰＩによって青色で染色した。１ｍｍ^２当たりのＩｂａ１発現ミクログリア細胞の密度をパネルＤで定量した。

【0218】

Ｉｂａ１タンパク質は、ＣＳＦ−１Ｒの直接下流標的遺伝子である実施例３に記載のＡｉｆ１遺伝子によってコードされる。明確に示されるように（図６−パネルＢおよびパネルＤの定量化）、ナイーブマウスと比較して、てんかんピロカルピンマウスにおいてＩｂａ１陽性細胞のミクログリア活性化および染色の強い増加がある（図６−パネルＡおよびパネルＤの定量化）。抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体による注射（ｓ．ｃ．）は、てんかん動物におけるＩｂａ１陽性細胞の堅牢な減少をもたらし（図６パネルＣ）、これはミクログリア活性の低下と一致する。したがって、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体による処理は、Ｉｂａ１染色の対照レベルへの正常化を誘導した（図６−パネルＣおよびパネルＤにおける定量化）。

【実施例5】

【0219】

パーキンソン病のＭＰＴＰマウスモデル
パーキンソン病の特徴である、ドーパミン作動性細胞の選択的急性変性を、例えばマウスでは、１−メチル−４−フェニル−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン（ＭＰＴＰ）などの毒素によって誘発することができる。ＭＰＴＰの注射後、ドーパミン作動性細胞は数日間にわたって変性し、これはミクログリアの活性化を伴う（Ｄｅｐｂｏｙｌｕら、２０１２）。

【0220】

実験の１日目および４日目に、２つの群の未処理マウス（ｎ＝８〜１０）に１００ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）の抗ＣＳＦ−１Ｒ（Ａｂ５３５）またはビヒクルを投与した。８日目に、両群のマウスにＭＰＴＰ（１２．５ｍｇ／ｋｇ；ｓ．ｃ）を注射する。ＭＰＴＰの全身注射によって両脳半球の対称的変化が迅速に誘導されたので、毒素注射の１０〜１２時間後にマウスを屠殺した。線条体を右半球から迅速に解剖し、−８０℃で凍結させてｑＲＴ−ＰＣＲのＲＮＡ抽出を行った。組織学的検査（免疫組織化学）を行うために、左半球を４％ＰＦＡに浸漬することによって固定した。

【0221】

抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体による受容体遮断の分子結果を示すために、下流転写標的遺伝子Ａｉｆ１、Ｉｒｆ８、Ｃｔｓｅ１およびＥｍｒ１の発現を測定し、ｑＲＴ−ＰＣＲによって比較した。活性化ミクログリア細胞および細胞核（ＤＡＰＩ）のマーカーであるＩｂａ１を染色した選択抗体とした。１ｍｍ^２当たりのＩｂａ１発現ミクログリア細胞の密度を線条体で定量した。

【実施例6】

【0222】

パーキンソン病におけるα−シヌクレイン既形成原繊維（ＰＦＦ）マウスモデルへの化合物の試験
精製組換えマウス野生型α−シヌクレインＰＦＦを高速で遠心分離し、上清を回収する。ＰＦＦをマイクロ遠心チューブに集め、５日間振盪する（１０００ＲＰＭ）。アリコートをドライアイスで凍結し、−８０℃で保存する。ＰＦＦを室温で解凍し、超音波処理する。使用前の懸濁液の濃度は、ＰＢＳ中２．５μｇ／μｌタンパク質である。その後、１０週齢の雄および／または雌のマウスＣ５７Ｂｌ／６Ｊをケタミン／メデトミジンで麻酔し、ＰＦＦを以下の座標ＡＰ＋０．２ｍｍ、ＭＬ−２．０ｍｍ、ＤＶ−３．０ｍｍ（０．１μＬ／分で総体積２μＬ）で右線条体に注射する。抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体（Ａｂ５３５；１００ｍｇ／ｋｇ；ｓ．ｃ．）を、ＰＦＦ注射の翌日から始めて１か月間、１週間に１回投与する。この時間の後、動物を、ロータロッド、ビーム試験、ワイヤー吊り下げ試験および歩行分析などの一定範囲の行動試験で評価する。行動試験の後、動物を屠殺し、脳を取り出す。組織学的検査（免疫組織化学）を行うために、右半球を４％ＰＦＡに浸漬することによって固定する。

【0223】

抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体による受容体遮断の分子結果を示すために、Ｉｂａ１ミクログリアタンパク質の発現を定量的免疫組織化学によって測定する（実施例４と同様に）。最後に、ｐＳ１２９α−シヌクレインの脳を横切る分布、総α−シヌクレインの測定、線条体および黒質におけるドーパミン作動性ニューロンのカウントも行う。

【実施例7】

【0224】

ピロカルピンマウスモデルにおける発作頻度に対する抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の保護効果
ピロカルピンてんかんマウスの群（方法に記載されるように調製）は、有効性試験に入る前に自発的な再発発作を示すことを確認するために継続的な監視を受けた。発作監視は、３Ｄ加速度計およびビデオカメラを用いた歩行運動活動の同時記録を使用する独自のシステム（ＵＣＢ Ｐｈａｒｍａ）を用いて行った。このシステムは、加速度計信号の分析によって行動発作の自動検出を可能にする。次いで、検出アルゴリズムによって同定された全ての行動発作を、対応するビデオクリップを慎重に見直している間に、経験豊富な技術者が採点した。自発的再発発作の存在を確認した後、マウス（ｎ＝６４）は、処理を開始する前に、ベースライン発作頻度を確立するために同じシステムで１４日間の連続監視を受けた。その後、別の１４日間の連続発作監視中に、マウス（１群につきｎ＝３２）を対照ＩｇＧまたは抗Ｃｓｆ１Ｒ抗体（１００ｍｇ／ｋｇ）で、１週間に２回（合計４回注射）処理した。次いで、発作頻度の変化率を、この式：
発作頻度の変化％＝（処理中の発作頻度／ベースライン中の発作頻度）×１００
に従って計算した。

【0225】

対照ＩｇＧ抗体による注射は、ベースラインに対する発作頻度の増加をもたらしたが、このような増加は、抗Ｃｓｆ１Ｒ抗体による処理後には観察されなかった。結果として、対照と活性抗体群を比較すると、処理段階の間に発作頻度に統計的に有意な差があった（図７）。

【図1-1】

【図1-2】

【図1-3】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]