特許 6859336 骨格筋の健康のためポリフェノールを使用する組成物及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6859336

(24)【登録日】2021年3月29日

(45)【発行日】2021年4月14日

(54)【発明の名称】骨格筋の健康のためポリフェノールを使用する組成物及び方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/05 20060101AFI20210405BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20210405BHJP

   A61K 31/7048 20060101ALI20210405BHJP

   A61K 31/352 20060101ALI20210405BHJP

   A61K 31/12 20060101ALI20210405BHJP

   A61K 31/20 20060101ALI20210405BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20210405BHJP

   A61K 38/02 20060101ALI20210405BHJP

   A61K 35/20 20060101ALI20210405BHJP

   A61K 36/48 20060101ALI20210405BHJP

   A23L 33/10 20160101ALI20210405BHJP

   A23L 33/12 20160101ALI20210405BHJP

   A23L 33/17 20160101ALI20210405BHJP

   A23L 2/52 20060101ALI20210405BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/05

   A61P21/00

   A61K31/7048

   A61K31/352

   A61K31/12

   A61K31/20

   A61P43/00 121

   A61K38/02

   A61K35/20

   A61K36/48

   A23L33/10

   A23L33/12

   A23L33/17

   A23L2/00 F

【請求項の数】8

【全頁数】19

(21)【出願番号】特願2018-518599(P2018-518599)

(86)(22)【出願日】2016年11月17日

(65)【公表番号】特表2018-534278(P2018-534278A)

(43)【公表日】2018年11月22日

(86)【国際出願番号】EP2016078014

(87)【国際公開番号】WO2017085190

(87)【国際公開日】20170526

【審査請求日】2019年11月5日

(31)【優先権主張番号】62/256,401

(32)【優先日】2015年11月17日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】590002013

【氏名又は名称】ソシエテ・デ・プロデュイ・ネスレ・エス・アー

(74)【代理人】

【識別番号】100088155

【弁理士】

【氏名又は名称】長谷川 芳樹

(74)【代理人】

【識別番号】100107456

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 成人

(74)【代理人】

【識別番号】100162352

【弁理士】

【氏名又は名称】酒巻 順一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100140453

【弁理士】

【氏名又は名称】戸津 洋介

(72)【発明者】

【氏名】ホルカジャダ， マリー ノエル

(72)【発明者】

【氏名】メンブレ， ファニー

(72)【発明者】

【氏名】ブレイユ， デニス

(72)【発明者】

【氏名】ブートリー クレア

【審査官】 伊藤 幸司

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００８−５２０２１９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００９−１６１４５９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許出願公開第２０１３／００５９９２０（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 特表２０１２−５２４０３３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１４／１７０２４５（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特開２０１６−１９９５３６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１４−５３４９６０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１２／０９７０６１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１５／０９４７７２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１５／１６６８８７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１５／１５９２７２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００６／１２９５６９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 AGE，２０１４年，36，pp.73-88

【文献】 Mol. Nutr. Food Res.，２０１３年，57，pp.2079-2085

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ

Ａ２３Ｌ

Ａ６１Ｐ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ｉ）サルコペニアを有する個体のサルコペニアを治療すること、（ｉｉ）個体のサルコペニアを予防すること、（ｉｉｉ）個体の筋機能の低下を軽減すること、（ｉｖ）個体の筋機能を向上させること、又は（ｖ）個体の筋萎縮又は筋損傷後の筋機能の回復を改善することのうちの少なくとも１つに関して治療的に有効な量のポリフェノールを含む組成物であって、
前記ポリフェノールが、オレウロペインを含み、
前記組成物が、ｎ−３脂肪酸を含み、
前記組成物が、ホエイタンパク質、カゼイン、エンドウ豆タンパク質、大豆タンパク質、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるタンパク質源を含む組成物。

【請求項2】

前記ポリフェノールが、ルチン、ケルセチン、クルクミン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される化合物を更に含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記組成物が、食品組成物、栄養補助食品、栄養組成物、ニュートラシューティカルズ、摂取前に水又は乳で再構成される粉末栄養製剤、食品添加物、医薬品、ドリンク、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。

【請求項4】

前記組成物が、ルチンを含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項5】

前記組成物が、クルクミンを含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項6】

前記タンパク質源がホエイタンパク質を含む、請求項４又は５に記載の組成物。

【請求項7】

（ｉｉｉ）個体の筋機能の低下を軽減すること、（ｉｖ）個体の筋機能を向上させること、又は（ｖ）個体の筋萎縮又は筋損傷後の筋機能の回復を改善することのうちの少なくとも１つに関するものであり、
前記筋機能が、筋力、歩行速度、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される特性を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項8】

前記個体がサルコペニアを有する、又は移動能力障害若しくは筋力低下を有する高齢者である、請求項１に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

[0001]本開示は、概して、骨格筋の健康の向上又は維持のため１種以上のポリフェノールを使用する組成物及び方法に関する。より詳細には、本開示は、サルコペニアの進行の治療、予防、若しくは軽減；筋機能（例えば、筋力、歩行速度など）低下の軽減；筋機能の向上、及び／又は筋萎縮若しくは筋損傷後の筋機能の回復の改善のため、１種以上のポリフェノールを含む組成物を投与することに関する。

【0002】

[0002]筋力低下は、サルコペニアなどの生命を脅かすいくつかの疾患において顕在化する。萎縮（減少）と肥大（増大）とのバランスが、骨格筋量維持の鍵となる。しかしながら骨格筋は最終分化を起こしているため、この可塑性を可能とする機序を理解することが長期の健康及び生存の要となる。

【0003】

[0003]サルコペニアは、加齢に伴う筋量及び筋機能（筋力及び歩行速度を含む）の低下として定義される。筋機能及び身体能力は筋量の低下に伴い衰える。筋機能障害は、高齢での寝たきり、能力低下、及び死亡の発生についての高度な予測指標となる。高齢者人口の増加に伴い、サルコペニアの有病率は高まりつつあり、米国高齢者集団の４５％が中等度から重度の症状を有する。米国におけるサルコペニアに起因する直接的及び間接的な医療コストは１９０億ドル近くに上る。したがって、サルコペニアの予防及び／又は治療は、我々の社会の健康及びクオリティ・オブ・ライフ、ひいては医療関連の経済に多大な影響を及ぼし得る。残念ながら、サルコペニアの病因及び生理病理学的機序は未だほとんど解明されておらず、予防又は治療のための有効な対策が困難となっている。

【0004】

[0004]加齢に伴い観察される進行性の筋力低下を説明するために立てられた主要な仮説の一つに、栄養素による筋タンパク質合成の刺激が減ることに起因して食事摂取の同化作用が減少するというものがある。この仮説は、筋同化抵抗性と呼称される。加えて、酸化的ストレス及び／又は軽度の炎症もまた、高齢者のフレイルに関連することが示されており、直接、あるいは筋肉のインスリン感受性の低下を介して、同化抵抗性の一因になっている可能性がある。

【発明の概要】

【0005】

[0005]理論に束縛されるものではないが、本発明者らは、筋サテライト細胞及び筋芽細胞は骨格筋量の増加／減少において中心的な役割を果たしている可能性があり、ひいては筋消耗する疾患及び加齢に治療介入的に関与する可能性が高いと考えている。本開示は、肥大の向上又は萎縮の軽減についての栄養学的な解決法を提供し、ひいては、加齢中のサルコペニアの進行を制限して、筋機能の低下を軽減すること、筋機能を向上させること、及び／又は筋萎縮後の筋機能の回復を改善することを目的とする。

【0006】

[0006]ポリフェノールは強力な抗酸化特性及び／又は抗炎症特性を有しており、ココア、茶、及びベリー類などの果物といった多くの植物素材中に存在している。しかしながら、本発明者の知る限りでは、オレウロペイン又はルチンなどのポリフェノールは筋肥大のトリガーとなり、又は萎縮症を抑制し、結果として全部の筋量（の維持、又は低下抑制）に影響を及ぼすことは知られておらず、あるいは公開されていない。

【0007】

[0007]したがって、一般的な実施形態では、本開示は、個体の筋機能の低下を軽減する、個体の筋機能を向上させる、及び／又は個体の筋萎縮後の筋機能の回復を改善する方法を提供する。同化抵抗性を制限又は回避する助けにもなる。本方法は、ポリフェノールを含む組成物を個体に投与することを含む。

【0008】

[0008]一実施形態では、ポリフェノールは、オレウロペイン、ルチン、ケルセチン、クルクミン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0009】

[0009]一実施形態では、本組成物は更に脂肪酸を含む。脂肪酸はｎ−３脂肪酸であってもよい。

【0010】

[0010]一実施形態では、組成物はタンパク質源を更に含む。タンパク質源は、ホエイタンパク質、カゼイン、エンドウ豆タンパク質、大豆タンパク質、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるタンパク質を含み得る。

【0011】

[0011]一実施形態では、組成物は、タンパク質源、ルチン、及びｎ−３脂肪酸を含む。

【0012】

[0012]別の実施形態では、組成物は、タンパク質源、クルクミン、及びｎ−３脂肪酸を含む。

【0013】

[0013]一実施形態では、筋機能としては、筋力、歩行速度、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される特性が含まれる。

【0014】

[0014]一実施形態では、個体はサルコペニアを有する。

【0015】

[0015]別の実施形態では、個体は、移動能力障害又は筋力低下を有する高齢者である。

【0016】

[0016]別の実施形態では、本開示は、（ｉ）サルコペニアを有する個体のサルコペニアを治療すること、（ｉｉ）個体のサルコペニアを予防すること、（ｉｉｉ）個体の筋機能の低下を軽減すること、（ｉｖ）個体の筋機能を向上させること、又は（ｖ）個体の筋萎縮後の筋機能の回復を改善することのうちの少なくとも１つに関して治療的に有効である栄養学的な量でポリフェノールを含む組成物を提供する。

【0017】

[0017]一実施形態では、ポリフェノールは、オレウロペイン、ルチン、ケルセチン、クルクミン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0018】

[0018]一実施形態において、本組成物は、食品組成物、栄養補助食品、栄養組成物、ニュートラシューティカルズ、摂取前に水又は乳で再構成される粉末栄養製剤、食品添加物、医薬品、ドリンク、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0019】

[0019]別の実施形態では、本開示は、個体においてサルコペニアを予防する方法を提供する。本方法は、ポリフェノールを含む組成物をサルコペニアのリスクのある個体に投与することを含む。

【0020】

[0020]一実施形態では、ポリフェノールは、オレウロペイン、ルチン、ケルセチン、クルクミン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0021】

[0021]別の実施形態では、本開示は、食品組成物の製造方法を提供する。本方法は、ポリフェノールを別の成分に加えて食品組成物を形成することを含み、ポリフェノールは、個体における筋機能の低下を軽減し、個体の筋機能を向上させ、及び／又は個体における筋萎縮後の筋機能の回復を改善する、治療的に有効な量で添加される。

【0022】

[0022]本開示の利点は、個体におけるサルコペニアを治療する食品製品又は補助食品などといった組成物を提供することである。

【0023】

[0023]本開示の別の利点は、サルコペニアを予防する組成物、例えば食品製品又は補助食品を提供することである。

【0024】

[0024]本開示の更に別の利点は、個体の筋機能（例えば筋力、歩行速度等）の低下を、その組成物を含まない食事を摂取している場合に起こるであろう低下と比較して軽減する組成物、例えば食品製品又は補助食品を提供することである。

【0025】

[0025]本開示の更なる利点は、個体の筋機能（例えば筋力、歩行速度等）を、その組成物を含まない食事の摂取によって呈するであろう筋機能（例えば筋力、歩行速度等）と比較して向上させる組成物、例えば食品製品又は補助食品を提供することである。

【0026】

[0026]本開示の別の利点は、個体の筋萎縮後の筋機能（例えば筋力、歩行速度等）の回復を、その組成物を含まない食事の摂取によって呈するであろう回復と比較して改善する組成物、例えば食品製品又は補助食品を提供することである。

【0027】

[0027]本開示の更に別の利点は、有利には、個体のサルコペニアの軽減、予防、又は治療を促進することである。

【0028】

[0028]本開示の別の利点は、個体におけるサルコペニアの発症を軽減する、特に高齢者の筋機能（例えば筋力、歩行速度等）の低下を軽減する栄養戦略を提供することである。

【0029】

[0029]追加の特徴及び利点は、以降の発明の詳細な説明及び図面に記載され、これらにより明らかとなろう。

【図面の簡単な説明】

【0030】

[0030]［図１］〜［図１３］本明細書に開示する実験例のデータである。
[0031]

【図1】１．０μＭでのオレウロペイン（ＯＬＰ）のクレアチンキナーゼ活性（ＣＫ）に対する効果。オレウロペインを添加又は非添加で、マウス筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２）を４日間単層培養した。タンパク質含量についてデータを正規化し、結果を平均±標準誤差で表した。

【図2】１．５μＭでのオレウロペイン（ＯＬＰ）のＭｙｏＤ発現に対する効果。オレウロペインを添加又は非添加で、マウス筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２）を４日間単層培養した。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素）のｍＲＮＡレベルについてデータを正規化し、結果を平均±標準誤差で表した。

【図3】１．５μＭでのオレウロペイン（ＯＬＰ）のミオゲニン（ＭｙｏＧ）発現に対する効果。オレウロペインを添加又は非添加で、マウス筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２）を４日間単層培養した。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素）のｍＲＮＡレベルについてデータを正規化し、結果を平均±標準誤差で表した。

【図4】１．５μＭでのオレウロペイン（ＯＬＰ）のケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１（ＣＸＣＬ−１）発現に対する効果。ＴＮＦ−α刺激（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下又は非存在下、オレウロペインを添加又は非添加で、マウス筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２）を４日間単層培養した。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素）のｍＲＮＡレベルについてデータを正規化し、結果を平均±標準誤差で表した。

【図5】１．５μＭでのオレウロペイン（ＯＬＰ）の、ＲＡＮＴＥＳ（活性化制御で、発現、分泌される正常Ｔ細胞：regulated on activation, normal T cell expressed and secreted）としても知られるケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド５（ＣＣＬ−１５）の発現に対する効果。ＴＮＦ−α刺激（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下又は非存在下、オレウロペインを添加又は非添加で、マウス筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２）を４日間単層培養した。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素）のｍＲＮＡレベルについてデータを正規化し、結果を平均±標準誤差で表した。

【図6】１．５μＭでのオレウロペイン（ＯＬＰ）の、トロンボスポンジンモチーフ４を有するディスインテグリン（A disintegrin）及びメタロプロテイナーゼ（ＡＤＡＭＴＳ−４）の発現に対する効果。ＴＮＦ−α刺激（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下又は非存在下、オレウロペインを添加又は非添加で、マウス筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２）を４日間単層培養した。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素）のｍＲＮＡレベルについてデータを正規化し、結果を平均±標準誤差で表した。

【図7】１．５μＭでのオレウロペイン（ＯＬＰ）のＮＦ−κＢ（活性化Ｂ細胞の核因子κ軽鎖エンハンサー：nuclear factor kappa−light−chain−enhancer of activated B cells）の発現に対する効果。ＴＮＦ−α刺激（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下又は非存在下、オレウロペインを添加又は非添加で、マウス筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２）を４日間単層培養した。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素）のｍＲＮＡレベルについてデータを正規化し、結果を平均±標準誤差で表した。

【図8】１．５μＭでのオレウロペイン（ＯＬＰ）の、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）としても知られるプロスタグランジン−エンドペルオキシドシンターゼ２の発現に対する効果。ＴＮＦ−α刺激（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下又は非存在下、オレウロペインを添加又は非添加で、マウス筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２）を４日間単層培養した。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素）のｍＲＮＡレベルについてデータを正規化し、結果を平均±標準誤差で表した。

【図9】１．５μＭでのオレウロペイン（ＯＬＰ）の、インターロイキン−６（ＩＬ−６）発現に対する効果。ＴＮＦ−α刺激（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下又は非存在下、オレウロペインを添加又は非添加で、マウス筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２）を４日間単層培養した。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素）のｍＲＮＡレベルについてデータを正規化し、結果を平均±標準誤差で表した。

【図10】１．５μＭでのオレウロペイン（ＯＬＰ）の、フォークヘッドボックスＯ３（ＦＯＸＯ３）発現に対する効果。ＴＮＦ−α刺激（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下又は非存在下、オレウロペインを添加又は非添加で、マウス筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２）を４日間単層培養した。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素）のｍＲＮＡレベルについてデータを正規化し、結果を平均±標準誤差で表した。

【図11】ルチン及びｎ−３脂肪酸（ＲＵＴ＋ｎ−３ ＦＡ）の、老齢ラットにおける除脂肪部分増加に対する効果。２０ヶ月齢のラットに、対照飼料又はルチンとｎ−３ＦＡとを添加した同じ飼料のいずれかを３ヶ月間給餌した。結果を平均±標準誤差で表した。

【図12】老齢ラットにおいてベースラインから３ヶ月の補給までの歩行速度の変化に対するルチン及びｎ−３脂肪酸（ＲＵＴ＋ｎ−３ ＦＡ）の効果。２０ヶ月齢のラットに、対照飼料又はルチンとｎ−３ＦＡとを添加した同じ飼料のいずれかを３ヶ月間給餌した。結果を平均±標準誤差で表した。

【図13】老齢ラットにおける、ルチン及びｎ−３脂肪酸（ＲＵＴ＋ｎ−３ ＦＡ）の、軽度の炎症（α２マクログロブリン）に対する効果。２０ヶ月齢のラットに、対照飼料又はルチンとｎ−３ＦＡとを添加した同じ飼料のいずれかを３ヶ月間給餌した。結果を平均±標準誤差で表した。

【発明を実施するための形態】

【0031】

[0044]パーセンテージは全て、特に明記しない限り組成物の総重量に対する重量によるものとする。同様に、比は全て、特に明記しない限り重量によるものとする。ｐＨについての参照がなされるとき、値は標準的な装置により２５℃にて測定されるｐＨに相当する。本明細書で使用するとき、「約」、「およそ」、及び「実質的に」は、数値範囲内、例えば、参照数字の−１０％から＋１０％の範囲、好ましくは−５％から＋５％の範囲内、より好ましくは、参照数字の−１％から＋１％の範囲内、最も好ましくは参照数字の−０．１％から＋０．１％の範囲内の数を指すものと理解される。

【0032】

[0045]更に、本明細書における全ての数値範囲は、その範囲内の全ての整数（integers，whole）又は分数を含むと理解されるべきである。更に、これらの数値範囲は、この範囲内の任意の数字又は数字の部分集合を対象とする請求（claim）を支持するために与えられていると解釈すべきである。例えば、１〜１０という開示は、１〜８、３〜７、１〜９、３．６〜４．６、３．５〜９．９等の範囲を支持するものと解釈すべきである。

【0033】

[0046]本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、別途文脈が明らかに示していない限り、単数形の単語は複数形を含む。したがって、「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」の言及には、概してそれぞれの用語の複数形が包含される。例えば、「成分（an ingredient）」又は「方法（a method）」と言及する際は、複数の、かかる「原材料」又は「方法」が含まれる。「Ｘ及び／又はＹ」の文脈で使用される用語「及び／又は」は、「Ｘ」若しくは「Ｙ」又は「Ｘ及びＹ」として解釈すべきである。

【0034】

[0047]同様に、用語「含む（comprise）」、「含む（comprises）」、及び「含んでいる（comprising）」は、排他的にではなく、包括的に解釈される。同様にして、用語「含む（include）」、「含む（including）」及び「又は（or）」は全て、このような解釈が文脈から明確に妨げられない限りは包括的なものであると解釈される。しかし、本開示により提供される実施形態は、本明細書にて具体的に開示されない任意の要素を欠く場合がある。したがって、用語「含む（comprising）」を用いて規定される実施形態の開示は、開示される構成要素「から本質的になる」、及び「からなる」実施形態の開示でもある。本明細書において使用されるとき、用語「例（example）」は、特に、後に用語の列挙が続く場合に、単に例示的なものであり、かつ説明のためのものであり、排他的又は包括的なものであるとみなすべきものではない。本明細書で開示される全ての実施形態は、特に明示的に示されない限り、本明細書で開示される任意の別の実施形態と組み合わせることができる。

【0035】

[0048]「動物」としては、齧歯類、水生哺乳類、イヌ及びネコ等の飼育動物、ヒツジ、ブタ、ウシ及びウマ等の家畜、並びにヒトを含むがこれらに限定されない哺乳類が挙げられるが、これらに限定されない。「動物」、「哺乳類」、又はこれらの複数形が用いられる場合、これらの用語には、本節の文脈により効果が示され得る、又は示されるように意図され得るあらゆる動物が当てはまる。本明細書で使用するとき、用語「患者」は、本明細書において定義されるとおりの治療を受ける又は治療を受けることが意図される動物、特に哺乳類、及び更にはヒトを含むものと理解される。用語「個体」及び「患者」は、本明細書で使用するとき、多くの場合、ヒトを指して使用されるが、本開示はヒトに限定されはしない。したがって、用語「個体」及び「患者」は、治療により効果を得ることのできる任意の動物、哺乳類又はヒトを指す。

【0036】

[0049]用語「高齢者」は、６０歳を超える人、好ましくは６３歳を超える人、及びより好ましくは６５歳を超える人を意味する。用語「フレイル」は、身体的に虚弱で、即ち丈夫でなく、脆弱な人を指す。

【0037】

[0050]用語「治療」及び「治療すること」には、状態又は疾患（障害）の改善をもたらす任意の効果、例えば状態又は疾患を和らげること、軽減すること、制御すること、又は解消させることが含まれる。この用語は、対象が完治するまで治療されることを必ずしも意味するものではない。状態又は疾患を「治療すること」又は「その治療」の非限定的な例としては、（１）状態又は疾患を阻害すること、すなわち状態若しくは疾患又はその臨床症状の発症を止めること、及び（２）状態又は疾患を緩和すること、すなわち状態若しくは疾患又はその臨床症状の一時的又は永続的な消退を生じさせることが挙げられる。治療は患者に関連するものであってもよく、又は医師に関連するものであってもよい。

【0038】

[0051]用語「予防」又は「予防すること」は、状態又は障害にさらされ得る又はそれに罹り易い傾向があり得るが、まだ状態又は障害の症状を呈していない又はそれが現れていない個体において、言及される状態又は障害の臨床症状を発症させないことを意味する。用語「状態」及び「疾患／障害」は、任意の疾患、状態、症状、又は徴候を意味する。

【0039】

[0052]相対語「改善された（improved）」、「向上された（increased）」、及び「増強された（enhanced）」などは、１種以上のポリフェノール（本明細書において開示される）を含む組成物の効果を、ポリフェノールを含まないことを除き同一である組成物と比較して示すものである。

【0040】

[0053]用語「食品」、「食品製品」、及び「食品組成物」は、ヒトなどの個体による摂取、並びにかかる個体に対する少なくとも１種の栄養分の提供が意図された、製品又は組成物を意味する。本明細書に記載の多くの実施形態を含む本開示の組成物は、本明細書に記載の必須成分（essential elements）及び制限に加え、本明細書に記載の、又は食事療法に有用な、任意の追加の若しくは任意選択的な成分、構成成分、又は制限を含んでよく、これらから構成されてよく、又は本質的にこれらから構成されてよい。

【0041】

[0054]本明細書で使用するとき、「完全栄養」は、その組成物が投与される動物にとって、唯一の栄養源とするのに十分な、十分な種類及びレベルの主要栄養素（タンパク質、脂質及び炭水化物）及び微量栄養素を含有する。個体は、このような完全栄養組成物から、個体が必要とする栄養分の１００％を受容可能である。

【0042】

[0055]「ポリフェノール」は、官能性誘導体を含む１種以上のヒドロキシ置換基を有する芳香環を含む、化合物である。ポリフェノールを含む抗酸化剤としては、植物、藻類、若しくは真菌抽出物、又はフラボノイド類（イソフラボン類、アントシアニン類、プロアントシアニジン類及びアントシアニジン類、フラバン類、フラボノール類、フラボン類及びフラバノン類）を含むポリフェノールに富む画分が挙げられる。バイオフラボノイドの具体例には、カテキン類（カテキン、エピカテキン、ガロカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガラート、エピガロカテキンガラート）、オレウロペイン、ケルセチン、ルチン、ヘスペリジン、クルクミン、及びゲニステインがある。

【0043】

[0056]本開示の一態様は、哺乳類、例えばヒトなどの個体において、サルコペニアを治療又は予防する、筋機能（例えば筋力、歩行速度等）の低下を軽減する、筋機能（例えば筋力、歩行速度等）を向上させる、及び／又は筋萎縮後の筋機能（例えば筋力、歩行速度等）の回復を改善するための、１種以上のポリフェノールを含む組成物である。本開示の別の態様は、１種以上のポリフェノールを含む治療的に有効な量の組成物を個体に投与して、かかる個体のサルコペニアを治療すること、個体におけるサルコペニアを予防すること、個体における筋機能（例えば、筋力、歩行速度など）の低下を軽減すること、個体における筋機能（例えば、筋力、歩行速度など）を向上させること、及び／又は個体における筋萎縮後の筋機能（例えば、筋力、歩行速度など）の回復を改善することを含む方法である。一実施形態では、組成物は、合計濃度約１μＭで１種以上のポリフェノールを含む。

【0044】

[0057]本開示により治療又は予防されるとおりの筋萎縮は、多くの理由で生じ得る。例えば、筋萎縮は、寝たきりになるなどして身体活動が不足するか、又は加齢（老化に伴うサルコペニア）、股関節部骨折回復、若しくは、例えば癌、ＡＩＤＳ、うっ血性心不全、ＣＯＰＤ（慢性閉塞性肺疾患）、腎不全、外傷、敗血症、及び重度の熱傷など、いくつかの共存疾患に伴い身体活動が低くなっているために起こり得る。筋萎縮はまた、栄養不足若しくは適当でない栄養又は飢餓によっても起こり得る。極めてよく見られるところでは、筋萎縮はそれぞれの筋肉の廃用又は使用不足によって起こる。

【0045】

[0058]本開示において言及される筋肉は、好ましくは骨格筋である。例えば、本明細書において開示される組成物を使用して、個体の腕及び／又は脚における筋機能の低下を軽減することができる。筋肉は、以下、即ち、腓腹筋、脛骨筋、ヒラメ筋、長趾伸筋（ＥＤＬ）、大腿二頭筋、半腱様筋、半膜様筋、又は大殿筋のうち１つ以上であり得る。

【0046】

[0059]筋萎縮は、サルコペニア障害、即ち加齢に起因する筋肉の量、サイズ、及び機能の低下を引き起こし得る。筋萎縮の程度は、高齢者の極度のフレイルに見られるような重度の筋萎縮など、様々であり得る。極度のフレイルの高齢者は日常活動及び自己管理が困難となり得る。重症度が低い筋萎縮では、いくらかの動作及びいくらかの筋活動が可能であるものの、そうした筋活動は完全な筋組織の維持には不十分である。加齢に伴うサルコペニアの治療又は予防に関わる機序は、若年者の筋機能低下の治療又は予防とは異なる。

【0047】

[0060]本明細書において開示される組成物は１種以上のポリフェノールを含み、かかる組成物を含まない食事と比較して、組成物を投与された個体の筋機能の低下を軽減し及び／又は筋機能を改善することができる。好ましい実施形態では、１種以上のポリフェノールは、食品等級のポリフェノールである。化合物は、それが一般に認められており、かつ食品用途に安全であるとみなされる場合に、「食品等級」とみなされる。

【0048】

[0061]２種以上のポリフェノールなど、ポリフェノールの混合物が用いられてもよい。ポリフェノールはまた、ポリフェノールが豊富に含まれる食品組成物又はその抽出物として提供されてもよい。ポリフェノールが豊富である又はポリフェノールが濃縮されている植物抽出物は特に本発明に好適である。

【0049】

[0062]ココア、コーヒー及び茶には、ポリフェノールが多く含まれる。果実エキス又はドライフルーツ、例えば、セイヨウナシ、リンゴ、ブドウ、クランベリー、ブルーベリー、ブラックベリー、ラズベリー、イチゴ、クロスグリ、サクランボ、プラム、及び／又はザクロが、ポリフェノール源として用いられてもよい。また、クリ、ヘーゼルナッツ及びアマニなど、一部の堅果類及び種子類にもポリフェノールが豊富に含まれる。ポリフェノールを豊富に含む野菜の非限定的な例は、キャベツ、ブロッコリー、ビートルート、アーティチョークのつぼみ、黒オリーブ、黒豆、セロリ、玉ねぎ、パセリ、及びほうれん草である。

【0050】

[0063]１種以上のポリフェノールは、精製化合物又は一部精製された化合物であってよい。好適なポリフェノールの非限定的な例は、フェノール酸；フラボノール類、フラボン類、イソフラボン類、フラバノン類、アントシアニン類、及びフラバノール類などのフラボノイド類；スチルベン類；及びリグナン類である。一実施形態では、１種以上のポリフェノールは、フラボノール及び／又はフラボノールグリコシドを含む。非限定的な例として、１種以上のポリフェノールは、オレウロペイン、ルチン、クルクミン、又はケルセチンのうちの１種以上を含み得る。

【0051】

[0064]１種以上のポリフェノールは、１回の提供当たりそれぞれ０．０１ｍｇ〜約１ｇ、好ましくは０．１ｍｇ〜１ｇ、更により好ましくは１ｍｇ〜約１ｇの量で存在させることができる。

【0052】

[0065]治療効果を達成するのに必要とされる本発明の組成物の有効量は、当然のことながら、具体的な組成物、投与経路、対象者の年齢及び状態、並びに処置する具体的な障害又は疾患によって異なり得る。

【0053】

[0066]実例として、ＲＴＤ（レディ・トゥ・ドリンク）は、各活性成分を１回の提供当たり０．０１ｍｇ〜５００ｍｇ、より好ましくは１回の提供当たり約２５０ｍｇ含有することになる。

【0054】

[0067]１種以上のポリフェノールに加え、組成物は、動物又は植物由来のタンパク質源、例えば、乳タンパク質、大豆タンパク質、及び／又はエンドウ豆タンパク質を更に含み得る。好ましい実施形態において、タンパク質源は、ホエイタンパク質；カゼインタンパク質；エンドウ豆タンパク質；大豆タンパク質；小麦タンパク質；トウモロコシタンパク質；米タンパク質；マメ科植物、禾穀類及び穀粒類由来のタンパク質；及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。それに加えて又は代えて、タンパク質源は、堅果類及び／又は種子類由来のタンパク質を含み得る。

【0055】

[0068]タンパク質源はホエイタンパク質を含み得る。ホエイタンパク質は非加水分解又は加水分解ホエイタンパク質であってもよい。ホエイタンパク質は任意のホエイタンパク質であってよく、例えばホエイタンパク質は、ホエイタンパク質濃縮物、ホエイタンパク質分離物、ホエイタンパク質ミセル、ホエイタンパク質加水分解物、酸ホエイ、スイートホエイ、変性スイートホエイ（カゼイノ−グリコマクロペプチドが除去されたスイートホエイ）、ホエイタンパク質の画分、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択され得る。好ましい実施形態において、ホエイタンパク質はホエイタンパク質分離物及び／又は変性スイートホエイを含む。

【0056】

[0069]上述のとおり、タンパク質源は動物又は植物由来であってもよく、例えば、乳タンパク質、大豆タンパク質、及び／又はエンドウ豆タンパク質であり得る。一実施形態において、タンパク質源はカゼインを含む。カゼインは任意の哺乳類から得ることができるが、好ましくは牛乳から、及び好ましくはミセルカゼインとして得られる。

【0057】

[0070]本発明の一実施形態では、組成物は、タンパク質、好ましくはホエイを、５〜５０ｇ／日、例えば１２〜４０ｇ／日、好ましくは１５〜３０ｇ／日、例えば１６〜２５ｇ／日、更により好ましくは２０ｇ／日で摂取する量でタンパク質を含む。

【0058】

[0071]本組成物は１つ以上の分枝鎖アミノ酸を含み得る。例えば、本組成物は、ロイシン、イソロイシン及び／又はバリンを含み得る。本組成物のタンパク質源は、遊離形態のロイシン、及び／又はペプチド及び／又は乳タンパク質、動物性タンパク質若しくは植物性タンパク質などのタンパク質として結合したロイシンを含み得る。一実施形態において、本組成物は、組成物の乾燥物質の最大１０重量％の量のロイシンを含む。ロイシンは、Ｄ−又はＬ−ロイシン、好ましくはＬ型として存在し得る。本組成物がロイシンを含む場合、本組成物は、体重１ｋｇ当たり０．０１〜０．０４ｇのロイシン、好ましくは体重１ｋｇ当たり０．０２〜０．０３５ｇのロイシンを提供する１日用量で投与することができる。かかる用量は、特に完全栄養組成物に妥当であるが、当業者は、これらの用量をどのように経口栄養補助食品（ＯＮＳ）に適合させればよいかを容易に認識するであろう。

【0059】

[0072]一実施形態では、１種以上のポリフェノールを含む組成物は、脂肪酸を更に含む。脂肪酸は任意の脂肪酸であってよく、脂肪酸の組み合わせなど、１つ以上の脂肪酸であり得る。脂肪酸は好ましくは、必須多価不飽和脂肪酸、即ちリノール酸（Ｃ１８：２ｎ−３）及びα−リノレン酸（Ｃ１８：３ｎ−３）など、必須脂肪酸を含む。脂肪酸は、エイコサペンタエン酸（Ｃ２０：５ｎ−３）、アラキドン酸（Ｃ２０：４ｎ−６）、ドコサヘキサエン酸（Ｃ２２：６ｎ−３）、又はこれらの任意の組み合わせなど、長鎖多価不飽和脂肪酸を含み得る。好ましい実施形態において、脂肪酸はｎ−３（ω３）脂肪酸及び／又はｎ−６（ω６）脂肪酸を含む。脂肪酸は好ましくは、エイコサペンタエン酸を含む。

【0060】

[0073]脂肪酸は、ヤシ油、ナタネ油、ダイズ油、トウモロコシ油、ベニバナ油、パーム油、ヒマワリ油又は卵黄など、脂肪酸を含有する任意の好適な供給源に由来し得る。脂肪酸の供給源は、好ましくは魚油である。

【0061】

[0074]本発明によるｎ−３脂肪酸は、通常、総脂肪含量に基づき少なくとも１０重量％、好ましくは少なくとも１５重量％である。好ましい実施形態では、一日量は、５００ｍｇ〜２．５ｇ、好ましくは１ｇ〜１．５ｇ／日のｎ−３脂肪酸である。

【0062】

[0075]１種以上のポリフェノールに加え、別の抗炎症化合物又は抗酸化物質を組成物に使用することもできる。例えば、追加の抗酸化物質が、抗酸化物質が豊富に含まれる食品組成物として、又はその抽出物として提供され得る。「抗酸化物質が豊富に含まれる」食品組成物は、ＯＲＡＣ（酸素ラジカル吸収能）の評点が組成物１００ｇ当たり少なくとも１００である。

【0063】

[0076]最も好ましい一実施形態では、組成物は、少なくともタンパク質源、ルチン、及びｎ−３脂肪酸を含む。タンパク質源は、好ましくはホエイを含む。

【0064】

[0077]別の好ましい実施形態では、組成物は、少なくともタンパク質源、クルクミン、及びｎ−３脂肪酸を含む。タンパク質源は、好ましくはホエイを含む。より好ましい実施形態では、本組成物は、一日量で約２０ｇのホエイ、５００ｍｇのポリフェノール（例えば、クルクミン又はルチン）、１５００ｍｇのｎ−３脂肪酸を提供するべく投与される。

【0065】

[0078]一実施形態では、組成物は、ビタミンＤを更に含む。本発明による組成物は、例えば、１回の提供当たり８００〜１２００ＩＵの量でビタミンＤを含む。

【0066】

[0079]１種以上のポリフェノールを含む組成物は、ヒト、例えば、高齢者などの個体に、治療的に有効な用量で投与され得る。治療的に有効な用量は当業者により決定され得るものであり、状態の重症度並びに個体の体重及び全身状態など、当業者に公知のいくつもの要因によって異なり得る。

【0067】

[0080]本組成物は、個体においてサルコペニア状態がまだ発症していない場合に、サルコペニアを予防するのに、又はその発症リスクを少なくとも部分的に軽減するのに十分な量で個体に投与され得る。かかる量は「予防的に有効な用量」と定義される。この場合もまた、正確な量は、体重、健康状態及び筋機能（例えば筋力、歩行速度等）がどの程度低下しているかなど、個体に関連するいくつもの要因によって異なる。

【0068】

[0081]本組成物は、好ましくは個体の食事に対する補給剤として毎日又は少なくとも週２回投与される。一実施形態において、本組成物は、個体に数日間にわたり連続的に、好ましくは投与前と比較して筋機能（例えば筋力、歩行速度等）の向上が達成されるまで投与される。例えば、本組成物を、少なくとも３０日間、６０日間又は９０日間連続で毎日個体に投与することができる。別の例として、本組成物を、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０年の期間など、より長期間にわたって個体に投与することができる。

【0069】

[0082]好ましい実施形態において、本組成物を、少なくとも３ヶ月間、例えば３ヶ月〜１年の期間、好ましくは少なくとも６ヶ月間にわたって個体に投与する。

【0070】

[0083]上記の投与例は、間断のない連日投与を必要とするものではない。それよりむしろ、投与期間中の２〜４日間の中断など、投与には何回かの短期間の中断があってもよい。本組成物の理想的な投与継続期間は当業者により決定され得る。

【0071】

[0084]好ましい実施形態では、本組成物は、個体に経口投与又は経腸投与（例えば経管栄養法）される。例えば、本組成物は、飲料、カプセル、錠剤、散剤又は懸濁液剤として個体に投与することができる。

【0072】

[0085]本組成物は、ヒト及び／又は動物が摂取するのに好適ないかなる種類の組成物であってもよい。例えば、本組成物は、食品組成物、栄養補助食品、栄養組成物、ニュートラシューティカルズ、摂取前に水又は乳で再構成される粉末栄養製剤、食品添加物、医薬品、飲料及びドリンクからなる群から選択され得る。一実施形態では、本組成物は、経口栄養補助食品（ＯＮＳ）、完全栄養配合物、医薬品、薬剤又は食品製品である。好ましい実施形態では、本組成物は個体に飲料として投与される。本組成物は粉末としてサシェに保存され、次に使用の際に水などの液体中に懸濁されてもよい。

【0073】

[0086]経口又は経腸投与が不可能であるか、又は推奨されない一部の場合には、本組成物はまた、非経口投与されてもよい。

【0074】

[0087]一部の実施形態では、本組成物は単回投与剤形で個体に投与され、即ち、食事と一緒に個体に与えられる１つの製剤中に全ての化合物が存在している。他の実施形態では、組成物は、別個の剤形で併用投与され、例えば、１種以上のポリフェノールは、組成物のその他の成分のうち１種以上と別個に投与され、及び／又は１種以上のポリフェノールのうち一部分は、１種以上のポリフェノールのうち別の部分とは別個に投与される。
[0088]

【実施例】

【0075】

[0089]以下の非限定的な例は、１種以上のポリフェノールを含む組成物を投与して、組成物を投与された個体におけるサルコペニアを治療する、サルコペニアを予防する、筋機能（例えば、筋力、歩行速度など）の低下を軽減する、筋機能（例えば、筋力、歩行速度など）を向上させる、及び／又は筋機能（例えば、筋力、歩行速度など）の回復を改善するという概念を展開しかつ支持する科学的データを示す。

【0076】

[0090]マウスＣ２Ｃ１２筋芽細胞株（大腿筋由来のサテライト細胞）は、筋萎縮及び肥大の良好な説明となる。Ｃ２Ｃ１２細胞は、多核化筋管に分化する。筋芽細胞の分化、ひいては筋管形成は、Ｃ２Ｃ１２細胞におけるクレアチンキナーゼ（ＣＫ）活性を測定することにより生化学的に観察される。

【0077】

[0091]実施例１：本発明者らが使用するモデルにおいて、Ｃ２Ｃ１２細胞を２種類のポリフェノール、すなわちオレウロペイン（オリーブ葉由来）及びケルセチン（アグリコン形態のルチン）で処理した。腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）は、多くの状態及び加齢における筋消耗のメディエーターとして関係付られている多面発現性のサイトカインであり、これを筋萎縮の対照として使用した。ＴＮＦ−αの存在下又は非存在下でポリフェノール治療を行った。更に、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）を肥大の対照として使用した（図１）。

【0078】

[0092]結果として、１μＭでのオレウロペインは筋管の分化（肥大）を向上可能であったことが示された。

【0079】

[0093]実施例２：本発明者らにより使用されるモデルにおいて、ＴＮＦ−α（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下又は非存在下で４日間、Ｃ２Ｃ１２筋芽細胞をオレウロペイン（１．５μＭ）で処理した。ＴＮＦ−α（腫瘍壊死因子−α）は、多くの状態及び加齢における筋消耗のメディエーターとして関係付られている多面発現性のサイトカインであり、これを筋萎縮の対照として使用した。ＴＮＦ−αも使用して、Ｃ２Ｃ１２に炎症状態を誘導した。第３日目及び第４日目では、オレウロペインにより、非炎症状態において、筋管分化についてのマーカーであるミオゲニンＤ（ＭｙｏＤ）（図２）及びＭｙｏＧ（図３）が増加したことから、筋肥大の刺激が示唆される。炎症状態（ＴＮＦ−αによる）において、特定の筋炎症性サイトカイン、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフリガンド１（ＣＸＣＬ−１）（図４）及びＣ−Ｃモチーフリガンド５（ＣＣＬ−５）（図５）の発現は、第４日目にオレウロペインにより減少したことから、筋肉細胞の炎症応答の低下が示唆される。その他の筋特異性ではない炎症性サイトカイン（活性化Ｂ細胞の核因子κ軽鎖エンハンサー、すなわちＮＦＫ−Ｂ（図７）、シクロオキシゲナーゼ−２、すなわちＣｏｘ−２（図８）及びインターロイキン−６、すなわちＩＬ−６（図９）が減少していたことから、オレウロペインの抗炎症特性が示される。最終的に、トロンボスポンジンモチーフ４を有するディスインテグリン及びメタロプロテイナーゼ（ＡＤＡＭＴＳ−４）（図６）もオレウロペインにより減少した。我々のモデルにおいて、フォークヘッドボックスＯ３（ＦＯＸＯ３）を測定することにより筋タンパク質の分解を評価したところ（図１０）、３日目と４日目でオレウロペインにより減少していた。

【0080】

[0094]図１は、１．０μＭでのオレウロペイン（ＯＬＰ）のクレアチンキナーゼ活性（ＣＫ）に対する効果を示す。オレウロペインを添加又は非添加で、マウス筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２）を４日間単層培養した。タンパク質含量についてデータを正規化し、結果を平均±標準誤差で表した。ベースライン：増殖培地中で分化させた非分化細胞についての基礎対照。対照：分化培地（２％ウマ血清、１％ペニシリンストレプトマイシン、ＤＭＥＭ高グルコース）についての基礎対照（ＤＭ）。ＴＮＦａ １０ｎｇ／ｍＬ：ＤＭ（萎縮症の対照）中１０ｎｇ／ｍＬの濃度の腫瘍壊死因子α。ＩＧＦ−１ １０ｎＭ：ＤＭ（肥大の対照）中１０ｎＭの濃度のインスリン様増殖因子１。ＯＬＰ １μＭ：ＤＭ中１．０μＭ濃度のオレウロペイン。

【0081】

[0095]図２は、１．５μＭでのオレウロペイン（ＯＬＰ）のＭｙｏＤ発現に対する効果を示す。オレウロペインを添加又は非添加で、マウス筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２）を４日間単層培養した。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素）のｍＲＮＡレベルについてデータを正規化し、結果を平均±標準誤差で表した。ＤＭ：分化培地（２％ウマ血清、１％ペニシリンストレプトマイシン、ＤＭＥＭ高グルコース）についての基礎対照。ＯＬＰ １．５μＭ：ＤＭ中１．５μＭ濃度のオレウロペイン。

【0082】

[0096]図３は、１．５μＭでのオレウロペイン（ＯＬＰ）のミオゲニン（ＭｙｏＧ）の発現に対する効果を示す。オレウロペインを添加又は非添加で、マウス筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２）を４日間単層培養した。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素）のｍＲＮＡレベルについてデータを正規化し、結果を平均±標準誤差で表した。ＤＭ：分化培地（２％ウマ血清、１％ペニシリンストレプトマイシン、ＤＭＥＭ高グルコース）についての基礎対照。ＯＬＰ １．５μＭ：ＤＭ中１．５μＭ濃度のオレウロペイン。

【0083】

[0097]図４は、１．５μＭでのオレウロペイン（ＯＬＰ）のケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１（ＣＸＣＬ−１）発現に対する効果を示す。ＴＮＦ−α刺激（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下又は非存在下、オレウロペインを添加又は非添加で、マウス筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２）を４日間単層培養した。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素）のｍＲＮＡレベルについてデータを正規化し、結果を平均±標準誤差で表した。ＤＭ：分化培地（２％ウマ血清、１％ペニシリンストレプトマイシン、ＤＭＥＭ高グルコース）についての基礎対照。ＴＮＦａ １０ｎｇ／ｍＬ：ＤＭ中１０ｎｇ／ｍＬの濃度の腫瘍壊死因子α。ＯＬＰ １．５μＭ：ＤＭ中１．５μＭ濃度のオレウロペイン。ＴＮＦａ １０ｎｇ／ｍＬ＋ＯＬＰ １．５μＭ：ＤＭ中、１０ｎｇ／ｍＬの濃度の腫瘍壊死因子α及び１．５μＭ濃度のオレウロペイン。

【0084】

[0098]図５は、１．５μＭでのオレウロペイン（ＯＬＰ）の、ＲＡＮＴＥＳ（活性化制御で、発現、分泌される正常Ｔ細胞）としても知られるケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド５（ＣＣＬ−１５）の発現に対する効果を示す。ＴＮＦ−α刺激（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下又は非存在下、オレウロペインを添加又は非添加で、マウス筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２）を４日間単層培養した。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素）のｍＲＮＡレベルについてデータを正規化し、結果を平均±標準誤差で表した。ＤＭ：分化培地（２％ウマ血清、１％ペニシリンストレプトマイシン、ＤＭＥＭ高グルコース）についての基礎対照。ＴＮＦａ １０ｎｇ／ｍＬ：ＤＭ中１０ｎｇ／ｍＬの濃度の腫瘍壊死因子α。ＯＬＰ １．５μＭ：ＤＭ中１．５μＭ濃度のオレウロペイン。ＴＮＦａ １０ｎｇ／ｍＬ＋ＯＬＰ １．５μＭ：ＤＭ中、１０ｎｇ／ｍＬの濃度の腫瘍壊死因子α及び１．５μＭ濃度のオレウロペイン。

【0085】

[0099]図６は、１．５μＭでのオレウロペイン（ＯＬＰ）の、トロンボスポンジンモチーフ４を有するディスインテグリン及びメタロプロテイナーゼ（ＡＤＡＭＴＳ−４）の発現に対する効果を示す。ＴＮＦ−α刺激（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下又は非存在下、オレウロペインを添加又は非添加で、マウス筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２）を４日間単層培養した。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素）のｍＲＮＡレベルについてデータを正規化し、結果を平均±標準誤差で表した。

【0086】

[0100]ＤＭ：分化培地（２％ウマ血清、１％ペニシリンストレプトマイシン、ＤＭＥＭ高グルコース）についての基礎対照。ＴＮＦａ １０ｎｇ／ｍＬ：ＤＭ中１０ｎｇ／ｍＬの濃度の腫瘍壊死因子α。ＯＬＰ １．５μＭ：ＤＭ中１．５μＭ濃度のオレウロペイン。ＴＮＦａ １０ｎｇ／ｍＬ＋ＯＬＰ １．５μＭ：ＤＭ中、１０ｎｇ／ｍＬの濃度の腫瘍壊死因子α及び１．５μＭ濃度のオレウロペイン。

【0087】

[0101]図７は、１．５μＭオレウロペイン（ＯＬＰ）のＮＦ−κＢ（活性化Ｂ細胞の核因子κ軽鎖エンハンサー）の発現に対する効果を示す。ＴＮＦ−α刺激（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下又は非存在下、オレウロペインを添加又は非添加で、マウス筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２）を４日間単層培養した。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素）のｍＲＮＡレベルについてデータを正規化し、結果を平均±標準誤差で表した。ＤＭ：分化培地（２％ウマ血清、１％ペニシリンストレプトマイシン、ＤＭＥＭ高グルコース）についての基礎対照。ＴＮＦａ １０ｎｇ／ｍＬ：ＤＭ中１０ｎｇ／ｍＬの濃度の腫瘍壊死因子α。ＯＬＰ １．５μＭ：ＤＭ中１．５μＭ濃度のオレウロペイン。ＴＮＦａ １０ｎｇ／ｍＬ＋ＯＬＰ １．５μＭ：ＤＭ中、１０ｎｇ／ｍＬの濃度の腫瘍壊死因子α及び１．５μＭ濃度のオレウロペイン。

【0088】

[0102]図８は、１．５μＭでのオレウロペイン（ＯＬＰ）の、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）としても知られるプロスタグランジン−エンドペルオキシドシンターゼ２の発現に対する効果を示す。ＴＮＦ−α刺激（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下又は非存在下、オレウロペインを添加又は非添加で、マウス筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２）を４日間単層培養した。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素）のｍＲＮＡレベルについてデータを正規化し、結果を平均±標準誤差で表した。ＤＭ：分化培地（２％ウマ血清、１％ペニシリンストレプトマイシン、ＤＭＥＭ高グルコース）についての基礎対照。ＴＮＦａ １０ｎｇ／ｍＬ：ＤＭ中１０ｎｇ／ｍＬの濃度の腫瘍壊死因子α。ＯＬＰ １．５μＭ：ＤＭ中１．５μＭ濃度のオレウロペイン。ＴＮＦａ １０ｎｇ／ｍＬ＋ＯＬＰ １．５μＭ：ＤＭ中、１０ｎｇ／ｍＬの濃度の腫瘍壊死因子α及び１．５μＭ濃度のオレウロペイン。

【0089】

[0103]図９は、１．５μＭでのオレウロペイン（ＯＬＰ）の、インターロイキン−６（ＩＬ−６）発現に対する効果を示す。ＴＮＦ−α刺激（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下又は非存在下、オレウロペインを添加又は非添加で、マウス筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２）を４日間単層培養した。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素）のｍＲＮＡレベルについてデータを正規化し、結果を平均±標準誤差で表した。ＤＭ：分化培地（２％ウマ血清、１％ペニシリンストレプトマイシン、ＤＭＥＭ高グルコース）についての基礎対照。ＴＮＦａ １０ｎｇ／ｍＬ：ＤＭ中１０ｎｇ／ｍＬの濃度の腫瘍壊死因子α。ＯＬＰ １．５μＭ：ＤＭ中１．５μＭ濃度のオレウロペイン。ＴＮＦα １０ｎｇ／ｍＬ＋ＯＬＰ １．５μＭ：ＤＭ中、１０ｎｇ／ｍＬの濃度の腫瘍壊死因子α及び１．５μＭ濃度のオレウロペイン。

【0090】

[0104]図１０は、１．５μＭでのオレウロペイン（ＯＬＰ）の、フォークヘッドボックスＯ３（ＦＯＸＯ３）発現に対する効果を示す。ＴＮＦ−α刺激（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下又は非存在下、オレウロペインを添加又は非添加で、マウス筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２）を４日間単層培養した。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素）のｍＲＮＡレベルについてデータを正規化し、結果を平均±標準誤差で表した。ＤＭ：分化培地（２％ウマ血清、１％ペニシリンストレプトマイシン、ＤＭＥＭ高グルコース）についての基礎対照。ＴＮＦα １０ｎｇ／ｍＬ：ＤＭ中１０ｎｇ／ｍＬの濃度の腫瘍壊死因子α。ＯＬＰ １．５μＭ：ＤＭ中１．５μＭ濃度のオレウロペイン。ＴＮＦα １０ｎｇ／ｍＬ＋ＯＬＰ １．５μＭ：ＤＭ中、１０ｎｇ／ｍＬの濃度の腫瘍壊死因子α及び１．５μＭ濃度のオレウロペイン。

【0091】

[0105]これらの結果を併せて、オレウロペインは、炎症経路を介した炎症の影響を抑えてタンパク質分解を制限し、筋肥大を刺激することが示唆された。

【0092】

[0106]実施例３：老齢のラットは、加齢に関連する筋肉の衰えにおける栄養介入効果を評価するに当たり良好なモデルである。このモデルにより、ヒトの場合と同様、加齢に伴う筋量の減少及び機能の低下を観察することができる。本発明者らが使用したこのモデルでは、２０ヶ月齢のラットには、通常の飼料、あるいはポリフェノール、ルチン、及びｎ−３脂肪酸（ｎ−３ ＦＡ）のうちの１種を添加した同じ飼料のいずれかを３ヶ月間給餌した。核磁気共鳴（ＮＭＲ）による測定では、除脂肪部分増加量は、対照群と比較してルチン＋ｎ−３ ＦＡ群において有意に大きかった。移動能力についてのパラメータである、加齢に伴って観察される歩行速度の減少は、ルチン＋ｎ−３ ＦＡの補給により有意に軽減した。α−２マクログロブリン循環濃度を測定することにより、軽度の炎症を評価したところ、かかる炎症はルチン及びｎ−３ＦＡにより減少した。（図１１〜１３）
図１１は、ルチン及びｎ−３脂肪酸（ＲＵＴ＋ｎ−３ ＦＡ）の、老齢ラットにおける除脂肪部分増加に対する効果を示す。２０ヶ月齢のラットに、対照飼料又はルチンとｎ−３ＦＡとを添加した同じ飼料のいずれかを３ヶ月間給餌した。結果を平均±標準誤差で表した。ＣＴＬ：対照飼料。ＲＵＴ＋ｎ−３ ＦＡ：ルチン及びｎ−３脂肪酸を添加した対照飼料。

【0093】

[0107]次に、図１２は、老齢ラットにおいてベースラインから３ヶ月の補給までの歩行速度の変化に対するルチン及びｎ−３脂肪酸（ＲＵＴ＋ｎ−３ ＦＡ）の効果を示す。２０ヶ月齢のラットに、対照飼料又はルチンとｎ−３ＦＡとを添加した同じ飼料のいずれかを３ヶ月間給餌した。結果を平均±標準誤差で表した。ＣＴＬ：対照飼料。ＲＵＴ＋ｎ−３ ＦＡ：ルチン及びｎ−３脂肪酸を添加した対照飼料。

【0094】

[0108]同様にして、図１３は、老齢ラットにおける、ルチン及びｎ−３脂肪酸（ＲＵＴ＋ｎ−３ ＦＡ）の、軽度の炎症（α２マクログロブリン）に対する効果を示す。２０ヶ月齢のラットに、対照飼料又はルチンとｎ−３ＦＡとを添加した同じ飼料のいずれかを３ヶ月間給餌した。結果を平均±標準誤差で表した。ＣＴＬ：対照飼料。ＲＵＴ＋ｎ−３ ＦＡ：ルチン及びｎ−３脂肪酸を添加した対照飼料。

【0095】

[0109]これらの結果を併せて、ルチン及びｎ−３ ＦＡの補給により、老齢ラットにおいて筋量の低下が軽減され、かつ機能が改善したことが示された。これは、軽度の炎症の軽減に関連付けられる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】