特許 6860568 水溶性トリアザピリジノファン系錯化剤および対応する蛍光性ランタニド錯体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6860568

(24)【登録日】2021年3月30日

(45)【発行日】2021年4月14日

(54)【発明の名称】水溶性トリアザピリジノファン系錯化剤および対応する蛍光性ランタニド錯体

(51)【国際特許分類】

   C07D 471/22 20060101AFI20210405BHJP

   A61K 49/00 20060101ALI20210405BHJP

   C07F 5/00 20060101ALI20210405BHJP

   G01N 33/533 20060101ALI20210405BHJP

【ＦＩ】

   C07D471/22CSP

   A61K49/00

   C07F5/00 D

   G01N33/533

【請求項の数】18

【全頁数】54

(21)【出願番号】特願2018-530138(P2018-530138)

(86)(22)【出願日】2016年12月9日

(65)【公表番号】特表2019-500354(P2019-500354A)

(43)【公表日】2019年1月10日

(86)【国際出願番号】FR2016053296

(87)【国際公開番号】WO2017098180

(87)【国際公開日】20170615

【審査請求日】2019年11月11日

(31)【優先権主張番号】1562068

(32)【優先日】2015年12月9日

(33)【優先権主張国】FR

(73)【特許権者】

【識別番号】514064671

【氏名又は名称】シスビオ バイオアッセイズ

(73)【特許権者】

【識別番号】510139564

【氏名又は名称】ユニヴェルシテ ポール サバティエ トゥールーズ トロワ

(73)【特許権者】

【識別番号】305023584

【氏名又は名称】サントル・ナシオナル・ド・ラ・ルシェルシュ・シアンティフィック

【氏名又は名称原語表記】ＣＥＮＴＲＥ ＮＡＴＩＯＮＡＬ ＤＥ ＬＡ ＲＥＣＨＥＲＣＨＥ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＱＵＥ

(74)【代理人】

【識別番号】110000914

【氏名又は名称】特許業務法人 安富国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ラマルク， ローラン

(72)【発明者】

【氏名】ピカール， クロード

(72)【発明者】

【氏名】ガロー， シャンタル

(72)【発明者】

【氏名】レギュ， ナディーヌ

(72)【発明者】

【氏名】ズヴィール， ユリアーン

(72)【発明者】

【氏名】ブリエ， エマニュエル

【審査官】 高森 ひとみ

(56)【参考文献】

【文献】 特表平０８−５１１００３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００１−５０６００２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１４−５２７１７９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 CASTRO, G. et al.，Pyridinophane platform for stable lanthanide(III) complexation，Inorganic Chemistry，２０１３年，Vol.52，pp.6062-6072

【文献】 DELBIANCO, M. et al.，Bright, highly water-soluble triazacyclononane europium complexes to detect ligand binding with time-resolved FRET microscopy，Angew. Chem. Int. Ed.，２０１４年，Vol.53，pp.10718-10722

【文献】 WOLFBEIS, O. S.，The click reaction in the luminescent probing of metal ions, and its implications on biolabeling techniques，Angew Chem. Int. Ed.，２００７年，Vol.46，pp.2980-2982

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記式（Ｉ）の錯化剤。

【化1】

［式中、
各Ｒ_１基は同一であり、−ＣＯ_２Ｈ、−ＰＯ（ＯＨ）Ｒから選択され、Ｒは、フェニル、−ＳＯ_３Ｈ基によって置換されたフェニル、ベンジル、メチル、エチル、プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチルから選択され、
Ａ_１、Ａ_２基は同一または異なり、式−Ｌ_１−Ｅの基、下記式（ＩＩ）または（ＩＩ’）の基から選択され、
Ａ_３基は、式−Ｏ−Ｌ_３−Ｇの基、下記式（ＩＩ）、（ＩＩ’）、（ＩＩＩ）または（ＩＩＩ’）の基から選択され（ただし、Ａ_１、Ａ_２基が式−Ｌ_１−Ｅの基で、Ａ_３基が−Ｏ−Ｌ_３−Ｇである場合を除く）、

【化2】

Ｌ_１、Ｌ_２およびＬ_３は同一または異なり、二価の連結基を表し、
Ｅは、−ＳＯ_３Ｈ、−ＰＯ（ＯＨ）_２、−ＣＯ_２Ｈ、−Ｎ^＋Ａｌｋ_１Ａｌｋ_２Ａｌｋ_３、炭水化物残基、スルホベタイン、ＰＥＧ基から選択され、
炭水化物残基は、環状または直鎖状のグルコース残基、または、式−（ＣＨＯＨ）_ｋ−ＣＨ_２ＯＨの基（ｋは３〜１２の整数である）であり、
スルホベタインは、

【化3】

（式中、Ｒ_２は、１〜６個の炭素原子を有するアルキル基を表し、ｑは、１、２、３、４、５または６である）
から選択される基であり、
ＰＥＧ基は、式−ＣＨ_２−（ＣＨ_２ＯＣＨ_２）_ｙ−ＣＨ_２ＯＣＨ_３（ｙは１〜５の整数である）のポリエチレングリコール基であり、
Ｇは、−ＣＯＯＨ、−ＣＯ_２Ｍｅ、−ＣＯ_２ｔＢｕ、−ＮＨ_２、−ＮＨＢｏｃ、−ＮＨ−ＮＨ_２、または、

【化4】

（式中、ｗは０〜８の範囲であり、ｖは０または１であり、Ａｒは、１〜３個のヘテロ原子を含む飽和または不飽和の５員または６員ヘテロ環であり、ハロゲン原子で置換されていてもよい）
から選択される基であり、
Ａｌｋ_１、Ａｌｋ_２、Ａｌｋ_３は同一でも異なってもよく、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキルを表す］

【請求項2】

Ａ_１およびＡ_２が同一であり、式（ＩＩ）の基であり、Ａ_３が式（ＩＩＩ）の基であることを特徴とする、請求項１に記載の錯化剤。

【請求項3】

Ａ_１が式（ＩＩ）の基であり、Ａ_２が−Ｌ_１−Ｅ基であり、Ａ_３が式（ＩＩＩ）の基であることを特徴とする、請求項１に記載の錯化剤。

【請求項4】

Ａ_１およびＡ_２が同一であり、式−Ｌ_１−Ｅの基であり、Ａ_３が式（ＩＩＩ）の基であることを特徴とする、請求項１に記載の錯化剤。

【請求項5】

Ａ_１およびＡ_２が同一であり、式（ＩＩ’）の基であり、Ａ_３が式（ＩＩＩ’）の基であることを特徴とする、請求項１に記載の錯化剤。

【請求項6】

Ａ_１が式（ＩＩ’）の基であり、Ａ_２が−Ｌ_１−Ｅ基であり、Ａ_３が式（ＩＩＩ’）の基であることを特徴とする、請求項１に記載の錯化剤。

【請求項7】

Ａ_１およびＡ_２が同一であり、式−Ｌ_１−Ｅの基であり、Ａ_３が式（ＩＩＩ’）の基であることを特徴とする、請求項１に記載の錯化剤。

【請求項8】

上記基Ｌ_１、Ｌ_２およびＬ_３は、存在している場合、以下の基から選択されることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の錯化剤。
・１つまたは複数の二重または三重結合を含んでいてもよい直鎖状または分枝状Ｃ_１〜Ｃ_２０アルキレン基
・Ｃ_５〜Ｃ_８シクロアルキレン基またはＣ_６〜Ｃ_１４アリーレン基
ただし、上記アルキレン、シクロアルキレンまたはアリーレン基は、酸素、窒素、硫黄、リンなどの１個もしくは複数のヘテロ原子または１個もしくは複数のカルバモイルもしくはカルボキサミド基を含んでいてもよく、上記アルキレン、シクロアルキレンまたはアリーレン基は、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、Ｃ_６〜Ｃ_１４アリール、スルホナートまたはオキソ基によって置換されていてもよい
・下記式の二価の基から選択される基

【化5】

［式中、ｎ、ｍ、ｐ、ｑは１〜１６の整数である］

【請求項9】

上記−Ｌ_３−Ｇ基は、存在する場合、（ｉ）−ＣＯＯＨ、−ＣＯ_２Ｍｅ、−ＣＯ_２ｔＢｕ、−ＮＨ_２、−ＮＨＢｏｃ、−ＮＨ−ＮＨ_２、スクシンイミジルエステル、ハロアセトアミド、ヒドラジン、イソチオシアナート、マレイミド基から選択される反応性基Ｇと、（ｉｉ）１〜５個の炭素原子を含むアルキレン基からなる基Ｌ_３とからなることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の錯化剤。

【請求項10】

Ｌ_１は、存在する場合、下記式の二価の基であることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の錯化剤。

【化6】

［式中、ｎは１〜１６の整数である］

【請求項11】

ｎが１〜５の整数である、請求項１０に記載の錯化剤。

【請求項12】

Ｌ_２は、存在する場合、下記式の二価の基であることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の錯化剤。

【化7】

［式中、ｎおよびｍは１〜１６の整数である］

【請求項13】

ｎおよびｍが１〜５の整数である、請求項１２に記載の錯化剤。

【請求項14】

Ｌ_３は、存在する場合、下記式の二価の基であることを特徴とする、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の錯化剤。

【化8】

［式中、ｎは１〜１６の整数である］

【請求項15】

ｎが１〜５の整数である、請求項１４に記載の錯化剤。

【請求項16】

請求項１〜１５のいずれか一項に記載の錯化剤と、Ｅｕ^３＋、Ｓｍ^３＋、Ｔｂ^３＋から選択されるランタニドとを含むランタニド錯体。

【請求項17】

下記式（ＩＶ）、（Ｖ）、（ＶＩ）または（ＶＩＩ）のランタニド錯体。

【化9】

［式中、
Ｌｎ^３＋は、Ｅｕ^３＋、Ｔｂ^３＋、Ｓｍ^３＋から選択され、
Ｒ_３は、以下の基：ＯＨ；

【化10】

から選択される］

【請求項18】

請求項１６または１７に記載のランタニド錯体を所望の分子と接触させることによって得られる所望の分子の蛍光性コンジュゲートであって、上記錯体が反応性基Ｇを含む、蛍光性コンジュゲート。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、トリアザピリジノファン型大環状分子を主体とした新規水溶性錯化剤、上記錯化剤から得られる蛍光性ランタニド錯体、および、分子を標識し、時間分解蛍光法で検出するための上記蛍光性ランタニド錯体の使用に関する。

【背景技術】

【0002】

ユウロピウムおよびテルビウム錯体は、今後、好まれる蛍光性プローブとして科学界全体から受け入れられるものである（非特許文献１、非特許文献２）。実際に、これらの分子は非常に特異的な光物理的特性を有することから産業界で広く使用されており、生命科学の分野において大学の研究室で研究されている。これらの蛍光性化合物は、適合するフルオロフォアと共に使用してＦＲＥＴ（フェルスター共鳴エネルギー移動）測定を実施するのに特に適しており、その生体分子間の相互作用の研究への応用が、Ｃｉｓｂｉｏ Ｂｉｏａｓｓａｙｓ社およびそのＨＴＲＦ（登録商標）製品群を含めていくつかの企業により商業的に利用されている。ランタニド錯体の発光寿命が比較的長いことにより、時間分解蛍光測定、すなわちフルオロフォア励起後に遅延時間をおく測定の実施も可能になり、そのため測定媒体による蛍光干渉を制限することができる。後者の特徴は、測定媒体が、多数のタンパク質を含むためそれらの蛍光が試験化合物の蛍光に干渉するおそれがある生物学的媒体に近いものとなるほどいっそう有用である。

【0003】

多くのランタニド錯体が開示されており、一部は商業的に利用されている。特に、ランタニドの大多環状クリプタート（特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５）、ジエチレントリアミン五酸単位に結合したクマリンに由来する単位を含むランタニド錯体（特許文献６）や、ピリジン誘導体（特許文献７、特許文献８）、ビピリジン誘導体（特許文献９）またはテルピリジン誘導体（特許文献１０、特許文献１１、特許文献１２）を含むランタニド錯体が挙げられる。

【0004】

特許文献１３には、トリアザピリジノファンの窒素３個が（カルボンまたはホスホン）酸基で置換されている誘導体、およびこれらの化合物のガドリニウム、マンガンまたは鉄原子との錯体が記載されている。記載されている錯体は非蛍光性であり、造影剤として使用することができる。特許文献１３によるトリアザピリジノファンは、大環状かごのサイズが水分子の交換が比較的容易にできるようなものであるため、蛍光性錯体の調製にはあまり適していない。このトリアザピリジノファン大環状分子の合成は収率２％で行われた。この化合物は直接的には得られず、必ず中間体の使用を介するものであり、大環状分子に属している窒素原子３個はその中間体のトシル基で保護されている。後者は、過激な条件下で合成終了時に取り除かれる。

【0005】

つい最近、Ｌｅｅらによって報告された合成における改良では収率の向上が達成された（非特許文献３）。大環状化合物は、８ステップを含む収束型合成法に従って得られ、その最後のステップは、トシル基をこの場合も高酸性媒体中で脱保護することからなる。これらの大環状分子は錯化リガンドとしては使用されていない。

【0006】

２００８年、Ｎｏｌａｎらは、Ｌｅｅにより記載された合成方法を再現しようと試みたが失敗した。そのため、彼らは新規な収束型合成戦略を開発することとなった（非特許文献４）。最終のトシル脱保護ステップは、またしても極めて酸性の媒体で行われる。

【0007】

最近、Ｃａｓｔｒｏらによるトリアザピリジノファン型大環状系に関する研究（非特許文献５および非特許文献６）によって、対応するランタニド錯体をＸ線回折により特徴付けることが可能となった。しかし、使用した合成方法は、Ｌｅｅらによる前述の方法と同じである。

【0008】

先行技術によるトリアザピリジノファン大環状分子は、ＦＲＥＴバイオアッセイの用途に適していない。
・前述のユウロピウムまたはテルビウム原子と錯体を形成しているトリアザピリジノファン大環状分子は、最適吸収波長が２６７ｎｍであり、ＦＲＥＴ測定のための蛍光性ドナー化合物としての使用に許容されない。具体的には、バイオアッセイでドナーフルオロフォアを励起させるのに使用されるレーザー光源は各種波長：３３７ｎｍ（窒素レーザー）、３５５ｎｍ（Ｎｄ：ＹＡＧレーザー）、３４９ｎｍ（Ｎｄ：ＹＬＦ）で発光し、また、フラッシュランプは３１０ｎｍと３５０ｎｍとの間の励起を可能にするが、これらのデバイスでは、２６７ｎｍで最適な吸収を示す先行技術の化合物を励起させることができない。
・先行技術によるトリアザピリジノファン大環状分子は比較的疎水性であり、このことは、それらをバイオアッセイにおいて水性媒体中で使用する際に問題であり、ＦＲＥＴ測定において非特異的シグナルがかなり生じるおそれがある。さらに、水性媒体への溶解性があまり高くない錯体をごく簡単に使用することはできない。
・これらの大環状分子を合成する方法は複数のステップを含み、その最後のステップは、トシル基で保護された第二級アミン官能基の脱離のために極めて過激な実験条件、すなわち１２０℃で濃硫酸中、数時間の反応を必要とする。これは、ＦＲＥＴ型バイオアッセイにおいてフルオロフォアとして使用可能なより精巧な分子の合成にとって現実的な障害である。というのは、これらの条件が、これらの条件に敏感な官能基の付加と適合しないからである。
・文献に記載されたトリアザピリジノファンを合成する方法は、Ｃ_３対称の化合物を実現できるだけであり、したがってＦＲＥＴバイオアッセイにおいてフルオロフォアとしての使用に適した化合物を得るために３個のピリジン環に保持された置換基を区別することはできないということに留意することがさらに重要である。

【0009】

最後に、先行技術によるトリアザピリジノファン大環状分子は、その分光学的特性および疎水性のためにＦＲＥＴ型バイオアッセイにおけるフルオロフォアとしての使用に適していないだけでなく、さらには、記載されたそれらの合成方法を用いると、これらの分子を本出願に適合させることが全く不可能になる（Ｃ_３対称性分子、アミンの脱保護のための過度に過激な条件）。

【0010】

したがって、トリアザピリジノファン大環状分子およびＦＲＥＴ型バイオアッセイに使用可能な対応するランタニド錯体が求められている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0011】

【特許文献1】欧州特許第０１８０４９２号明細書

【特許文献2】欧州特許第０３２１３５３号明細書

【特許文献3】欧州特許第０６０１１１３号明細書

【特許文献4】国際公開第２００１／９６８７７号

【特許文献5】国際公開第２００８／０６３７２１号

【特許文献6】米国特許第５，６２２，８２１号明細書

【特許文献7】米国特許第４，９２０，１９５号明細書

【特許文献8】米国特許第４，７６１，４８１号明細書

【特許文献9】米国特許第５，２１６，１３４号明細書

【特許文献10】米国特許第４，８５９，７７７号明細書

【特許文献11】米国特許第５，２０２，４２３号明細書

【特許文献12】米国特許第５，３２４，８２５号明細書

【特許文献13】米国特許第５，３８５，８９３号明細書

【非特許文献】

【0012】

【非特許文献1】Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１４年、５３巻、１８５４頁

【非特許文献2】Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗ、２０１０年、１１０巻、２７２９頁

【非特許文献3】Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９６年、６１巻、８３０４頁

【非特許文献4】Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ、２００８年、４９巻、１９９３頁

【非特許文献5】Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１５年、５４巻、１６７１頁

【非特許文献6】Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１３年、５２巻、６０６２頁

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0013】

本発明は、先行技術による化合物の欠点を克服し、３１０ｎｍと３５０ｎｍとの間で励起させた場合に先行技術による化合物より優れた輝度を示し、可能であれば水性媒体に対する良好な溶解性、ＦＲＥＴ実験における使用に適した発光スペクトルを有し、さらに生体分子を標識するのに非常に簡便である蛍光性ランタニド錯体を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0014】

本発明者らは、大環状かごのサイズが水分子の交換が比較的容易にできるようなものであるため、トリアザピリジノファンが蛍光性錯体の調製にはあまり適していないという技術的先入観を乗り越えることができた。上記課題は、トリアザピリジノファン大環状分子で構成された錯化剤の調製を可能にする合成プロトコールの創造により解決された。該トリアザピリジノファン大環状分子のピリジンは、パラ−メトキシフェニルアセチレンまたは２，４，６−トリメトキシフェニル基で置換されており、これらの基自体は、大環状分子の水溶性を高めることができる基を有しており、さらに、大環状分子と、蛍光性化合物で標識することが望まれる他の分子、特に生体分子とのコンジュゲーションを可能にする基を有していてもよい。

【0015】

したがって、本発明は、トリアザピリジノファン大環状分子を主体とした錯化剤、本発明に係る錯化剤により錯化したランタニド原子からなる蛍光性ランタニド錯体、および本発明に係る錯体により標識された所望の有機分子に関する。

【0016】

＜錯化剤＞
本発明に係る錯化剤は下記式（Ｉ）の化合物である。

【0017】

【化1】

【0018】

［式中、
各Ｒ_１基は同一であり、−ＣＯ_２Ｈ、−ＰＯ（ＯＨ）Ｒから選択され、Ｒは、フェニル、−ＳＯ_３Ｈ基によって好ましくはオルトまたはパラ位が置換されたフェニル、ベンジル、メチル、エチル、プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチルから選択され、
Ａ_１、Ａ_２基は同一または異なり、式−Ｌ_１−Ｅの基、下記式（ＩＩ）または（ＩＩ’）の基から選択され、
Ａ_３基は、式−Ｏ−Ｌ_３−Ｇの基、下記式（ＩＩ）、（ＩＩ’）、（ＩＩＩ）または（ＩＩＩ’）の基から選択され、

【0019】

【化2】

【0020】

Ｌ_１、Ｌ_２およびＬ_３は同一または異なり、二価の連結基を表し、
Ｅは、上記錯化剤を水溶性にする基であり、−ＳＯ_３Ｈ、−ＰＯ（ＯＨ）_２、−ＣＯ_２Ｈ、−Ｎ^＋Ａｌｋ_１Ａｌｋ_２Ａｌｋ_３、炭水化物残基、スルホベタイン、ＰＥＧ基から選択され、
Ｇは反応性基であり、
Ａｌｋ_１、Ａｌｋ_２、Ａｌｋ_３は同一でも異なってもよく、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキルを表す］

【0021】

炭水化物は、環状または直鎖状のグルコース残基、またはさらには式−（ＣＨＯＨ）_ｋ−ＣＨ_２ＯＨの基（ｋは３〜１２の整数、好ましくは４である）を意味すると理解される。

【0022】

スルホベタインは、

【0023】

【化3】

【0024】

［式中、Ｒ_２は、１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、好ましくはメチルまたはエチルを表し、ｑは、１、２、３、４、５または６であり、好ましくは１または２である］
から選択される基を意味すると理解され、式−（ＣＨ_３）_２Ｎ^＋−（ＣＨ_２）_３−ＳＯ_３⁻のスルホベタインが好ましい。

【0025】

ｐＨに応じて、−ＳＯ_３Ｈ、−ＣＯ_２Ｈおよび−ＰＯ（ＯＨ）_２基は、脱プロトン化形態であってもよい。したがって、これらの基は、本明細書中以下、−ＳＯ_３⁻、−ＣＯ_２⁻および−ＰＯ（ＯＨ）Ｏ⁻基も表し、その逆も表す。

【0026】

ＰＥＧ基は、式−ＣＨ_２−（ＣＨ_２ＯＣＨ_２）_ｙ−ＣＨ_２ＯＣＨ_３のポリエチレングリコール基を意味すると理解され、ｙは１〜５の整数である。

【0027】

（ＩＩ）、（ＩＩ’）、（ＩＩＩ）および（ＩＩＩ’）基は、フルオロフォアの分光学的特性に寄与するアンテナの形成に寄与する。−Ｌ_１−Ｅ、（ＩＩ）および（ＩＩ’）基は、上記錯化剤を水溶性にするＥ基を有し、−Ｏ−Ｌ_３−Ｇ、（ＩＩＩ）および（ＩＩＩ’）基は、本発明に係る蛍光性錯体と、標識することが望まれる所望の分子とのコンジュゲーションを可能にする反応性基Ｇを有する。

【0028】

本発明によれば、上記アンテナは、２，４，６−メトキシフェニル（ＩＩ’）、（ＩＩＩ’）基またはパラ−メトキシフェニルアセチレン（ＩＩ）、（ＩＩＩ）基を含み、後者が好ましい。さらに、本発明に係る化合物は１、２または３個のアンテナを含んでもよく、したがって本発明に係る錯化剤は、パラ−メトキシフェニルアセチレンアンテナに基づいて、以下の好ましいサブファミリーに細分することができる。
・Ａ_１およびＡ_２が同一であり、式（ＩＩ）の基であり、Ａ_３が式（ＩＩＩ）の基である式（Ｉ）の化合物に対応する、２個の可溶化基および１個の反応性基を含む３個のアンテナを備えた錯化剤
・Ａ_１が式（ＩＩ）の基であり、Ａ_２が−Ｌ_１−Ｅ基であり、Ａ_３が式（ＩＩＩ）の基である式（Ｉ）の化合物に対応する、２個の可溶化基および１個の反応性基を含む２個のアンテナを備えた錯化剤
・Ａ_１およびＡ_２が同一であり、式（ＩＩ）の基であり、Ａ_３が式−Ｏ−Ｌ_３−Ｇの基である式（Ｉ）の化合物に対応する、２個の可溶化基および１個の反応性基を含む２個のアンテナを備えた錯化剤
・Ａ_１およびＡ_２が同一であり、式−Ｌ_１−Ｅの基であり、Ａ_３が式（ＩＩＩ）の基である式（Ｉ）の化合物に対応する、２個の可溶化基および１個の反応性基を含む１個のアンテナを備えた錯化剤

【0029】

パラ−メトキシフェニルアンテナに基づく同じサブファミリーは、式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の基をそれぞれ式（ＩＩ’）および（ＩＩＩ’）の基で置換することによって区別される。すなわち以下である。
・Ａ_１およびＡ_２が同一であり、式（ＩＩ’）の基であり、Ａ_３が式（ＩＩＩ’）の基である式（Ｉ）の化合物に対応する、２個の可溶化基および１個の反応性基を含む３個のアンテナを備えた錯化剤
・Ａ_１が式（ＩＩ’）の基であり、Ａ_２が−Ｌ_１−Ｅ基であり、Ａ_３が式（ＩＩＩ’）の基である式（Ｉ）の化合物に対応する、２個の可溶化基および１個の反応性基を含む２個のアンテナを備えた錯化剤
・Ａ_１およびＡ_２が同一であり、式（ＩＩ’）の基であり、Ａ_３が式−Ｏ−Ｌ_３−Ｇの基である式（Ｉ）の化合物に対応する、２個の可溶化基および１個の反応性基を含む２個のアンテナを備えた錯化剤
・Ａ_１およびＡ_２が同一であり、式−Ｌ_１−Ｅの基であり、Ａ_３が式（ＩＩＩ’）の基である式（Ｉ）の化合物に対応する、２個の可溶化基および１個の反応性基を含む１個のアンテナを備えた錯化剤

【0030】

これらのサブファミリーのそれぞれについて、ランタニドの錯化に関与するＲ_１基は、カルボキシラート−ＣＯ_２Ｈまたは上に定義したホスフィナート−ＰＯ（ＯＨ）Ｒのいずれであってもよい（好ましくは、後者の場合はメチルホスフィナート）。

【0031】

これらのサブファミリーのそれぞれについて、Ｅ基が−ＳＯ_３⁻基、またはグルコース残基、またはアンモニウム−Ｎ^＋（ＣＨ_３）_３、またはさらには下記式のスルホベタインである化合物が好ましい。

【0032】

【化4】

【0033】

Ｅ基が−ＳＯ_３⁻基、またはグルコース残基、または上記式のスルホベタインである化合物が特に好ましい。

【0034】

スペーサーアームＬ_３に保持された反応性基Ｇによって、本発明に係る化合物と、蛍光性にすることが望まれる化学種、例えば有機分子、ペプチドまたはタンパク質とのカップリングが可能になる。２つの有機分子をコンジュゲーションする方法は、反応性基の使用に基づいており、当業者の一般知識の範囲内である。これらの従来方法は、例えばＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、Ｇ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、第２版、２００８年、１６９〜２１１頁に記載されている。

【0035】

典型的には、反応性基は、それぞれ適当な求核性、求電子性、ジエノフィルまたはジエン基の存在下に置かれると共有結合を形成することができる求電子性、求核性、ジエンまたはジエノフィル基である。反応性基を含む本発明に係る化合物と官能基を有する有機分子、ペプチドまたはタンパク質とのコンジュゲーション反応によって、反応性基の１個または複数の原子を含む共有結合が形成されることとなる。

【0036】

好ましくは、上記反応性基Ｇは、以下の化合物の１つに由来する基である：アクリルアミド、活性化アミン（例えばカダベリンまたはエチレンジアミン）、活性化エステル、アルデヒド、ハロゲン化アルキル、無水物、アニリン、アジド、アジリジン、カルボン酸、ジアゾアルカン、ハロアセトアミド、モノクロロトリアジンまたはジクロロトリアジンなどのハロトリアジン、ヒドラジン（ヒドラジドを含む）、イミドエステル、イソシアナート、イソチオシアナート、マレイミド、ハロゲン化スルホニル、チオール、ケトン、アミン、酸ハロゲン化物、スクシンイミジルエステル、ヒドロキシスクシンイミジルエステル、ヒドロキシスルホスクシンイミジルエステル、アジドニトロフェニル、アジドフェニル、グリオキサール、トリアジン、アセチレン基、および下記式の基：

【0037】

【化5】

【0038】

［式中、ｗは０〜８の範囲であり、ｖは０または１であり、Ａｒは、１〜３個のヘテロ原子を含む飽和または不飽和の５員または６員ヘテロ環であり、ハロゲン原子で置換されていてもよい］。

【0039】

好ましくは、上記反応性基Ｇは、カルボン酸、アミン、好ましくは脂肪族アミン（−ＮＨＢｏｃとして保護されていてもよい）、スクシンイミジルエステル、ハロアセトアミド、ヒドラジン、イソチオシアナート、マレイミド基またはカルボン酸（−ＣＯ_２Ｍｅまたは−ＣＯ_２ｔＢｕ基として保護されていてもよい）である。その場合、上記酸は、求核性種と反応することができるようにエステルとして活性化されなければならない。

【0040】

したがって、本発明に係る化合物によって標識されることが可能な有機分子、ペプチドまたはタンパク質は、ランタニド錯体または錯化剤の反応性基が反応する官能基を含む。例えば、上記有機分子、タンパク質またはペプチドは、以下の基の１つを含む：アミン、アミド、チオール、アルコール、アルデヒド、ケトン、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、第二級アミン、ハライド、エポキシド、エステル（アルキルカルボキシラート）、カルボン酸、二重結合を含む基、またはこれらの官能基の組合せ。タンパク質に天然に存在しているアミンまたはチオール基は、これらの分子の標識を実施するのに使用されることが多い。

【0041】

上記反応性基および可溶化基Ｅは、以下の基から選択される二価の有機基によって形成されることが有利なスペーサーアーム（Ｌ_１、Ｌ_２、Ｌ_３）を介して上記錯化剤に結合している。
・１つまたは複数の二重または三重結合を含んでいてもよい直鎖状または分枝状Ｃ_１〜Ｃ_２０アルキレン基
・Ｃ_５〜Ｃ_８シクロアルキレン基またはＣ_６〜Ｃ_１４アリーレン基
ただし、上記アルキレン、シクロアルキレンまたはアリーレン基は、酸素、窒素、硫黄、リンなどの１個もしくは複数のヘテロ原子または１個もしくは複数のカルバモイルもしくはカルボキサミド基を含んでいてもよく、上記アルキレン、シクロアルキレンまたはアリーレン基は、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、Ｃ_６〜Ｃ_１４アリール、スルホナートまたはオキソ基によって置換されていてもよい
・下記式の二価の基から選択される基

【0042】

【化6】

【0043】

［式中、ｎ、ｍ、ｐ、ｑは１〜１６の整数、好ましくは１〜５の整数である］

【0044】

好ましくは、−Ｌ_３Ｇ基は、カルボン酸（−ＣＯ_２Ｍｅまたは−ＣＯ_２ｔＢｕ基として保護されていてもよい）、アミン、好ましくは脂肪族アミン（−ＮＨＢｏｃとして保護されていてもよい）、スクシンイミジルエステル、ハロアセトアミド、ヒドラジン、イソチオシアナート、マレイミド基から選択される反応性基Ｇと、１〜５個の炭素原子を含むアルキレン鎖からなるスペーサーアームＬ_３とからなる。さらにより好ましくは、−Ｌ_３Ｇ基は、１〜５個の炭素原子を含むアルキレン鎖に保持されたアミンである。

【0045】

Ｌ_１に関して、以下の二価の基が好ましい。

【0046】

【化7】

【0047】

［式中、ｎは１〜１６の整数、好ましくは１〜５の整数である］

【0048】

Ｌ_２に関して、以下の二価の基が好ましい。

【0049】

【化8】

【0050】

［式中、ｎおよびｍは１〜１６の整数、好ましくは１〜５の整数である］

【0051】

Ｌ_３に関して、以下の二価の基が好ましい。

【0052】

【化9】

【0053】

［式中、ｎは１〜１６の整数、好ましくは１〜５の整数である］

【0054】

同時に、Ｌ_１が下記式の二価の基：

【0055】

【化10】

【0056】

であり、
Ｌ_２が下記式の二価の基：

【0057】

【化11】

【0058】

であり、かつ
Ｌ_３が下記式の二価の基：

【0059】

【化12】

【0060】

であるサブファミリーも好ましい。

【0061】

＜錯体＞
本発明はまた、上述の錯化剤により錯化したランタニド原子からなる蛍光性ランタニド錯体にも関する。好ましくは、上記ランタニドはＴｂ^３＋、Ｅｕ^３＋またはＳｍ^３＋であり、さらにより好ましくはＥｕ^３＋である。

【0062】

これらの錯体は、本発明に係る錯化剤とランタニド塩とを接触させることによって調製される。したがって、ｐＨ６の水性媒体中での１当量の錯化剤と１〜５当量のランタニド塩（塩化物形態などのユウロピウム、テルビウムまたはサマリウム）との反応によって、室温で数時間またはさらには数日間反応後、対応する錯体が生じる。

【0063】

上述したように、得られた蛍光性錯体は、特にそれらの量子効率、それらの発光寿命、および約３３７ｎｍでのレーザー励起に非常によく適したそれらの励起スペクトルに関して、優れた光物理的特性を有する。さらに、それらの発光スペクトルのバンド分布は約６２０ｎｍを中心としており、それにより、シアニンまたはアロフィコシアニン型アクセプター（Ｃｉｓｂｉｏ Ｂｉｏａｓｓａｙｓ社販売のＸＬ６６５など）と共にＦＲＥＴを用いた場合に非常に好ましい並はずれた特性が錯体に付与される。

【0064】

有利なことには、本発明は以下の錯体に関する。

【0065】

【化13】

【0066】

［式中、
Ｌｎ^３＋は、Ｅｕ^３＋、Ｔｂ^３＋、Ｓｍ^３＋から選択され、
Ｒ_３は、以下の基：ＯＨ、

【0067】

【化14】

【0068】

から選択される］

【0069】

＜コンジュゲート＞
反応性基を含む本発明に係る錯化剤および錯体は、反応性基と反応して共有結合を形成することができる官能基を含む有機または生体分子を標識するのに特に適している。したがって、本発明はまた、生体分子（タンパク質、抗体、酵素、ホルモンなど）を標識するための錯体の使用にも関する。

【0070】

本発明はまた、本発明に係る錯体で標識された分子にも関する。反応性基と反応することができる官能基を有する場合、有機または生体分子はすべて本発明に係る錯体とコンジュゲーションすることができる。特に、本発明に係るコンジュゲートは、本発明に係る錯体と、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、抗体、糖、炭水化物鎖、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、酵素基質（特に、ベンジルグアニンまたはベンジルシトシンなどの酵素自殺基質（ＳＮＡＰ−タグ（登録商標）およびＣＬＩＰ−タグ（登録商標）という名称で販売されている酵素の基質））、クロロアルカン（Ｈａｌｏ−タグという名称で販売されている酵素の基質）、補酵素Ａ（ＡＣＰ−タグまたはＭＣＰ−タグという名称で販売されている酵素の基質）から選択される分子とを含む。本発明のコンジュゲートは、反応性基Ｇを含む本発明に係るランタニド錯体を所望の分子と接触させることによって得られる。

【0071】

＜合成＞
本発明に係る錯化剤およびランタニド錯体の調製を以下で概略的に説明し、実験の部でさらに詳細に説明する。

【0072】

＜トリアンテナ（ピリジル−アセチレン−４−Ｏ−フェニル）系の合成＞
３個のアンテナ、２個の可溶化基および１個の反応性基を含む錯体の合成がスキーム１〜４に記載されており、収束型合成に基づくものである。他の可溶化基／反応性基を含む化合物を中間体２４から同様に調製することもできる。

【0073】

【化15】

【0074】

後でスルホナート、スルホベタイン、アンモニウムまたは糖誘導体型の可溶化官能基の付加を可能にするエステル官能基の導入は、４−ヨードフェノールに対するアルキル化反応によって行われる。誘導体２とトリメチルシリルアセチレンとの薗頭型カップリング反応により化合物３を得ることができる。メタノール−ジクロロメタン溶媒の混合物を使用して炭酸カリウムの存在下で（トリメチルシリル）保護基を除去する。これらの条件によって、加水分解に比較的敏感なメチルエステル官能基を残しておくことができる。ジオール８は、文献（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、２００５年、６１巻、１７５５頁；Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、２００８年、６４巻、３９９頁；Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００２年、２１巻、３６８０頁）に記載されているようにケリダム酸から３ステップで得られる。モノトシル化反応は銀塩の存在下で行われる。これらの条件は、非ハロゲン化類似体に対して開発された（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、２００４年、４９巻、１１１１７頁；およびＡｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ、２０１４年、５３巻、５８７２頁）。縮合反応によって、ジピリジニル部分１０を得ることができ、それに対して二重薗頭反応が行われて、第１の重要なシントンの骨格が得られる。ジオール官能基は、モノトシル化と全く同様の条件下でトシル基を導入することによって活性化される。

【0075】

【化16】

【0076】

第２の重要なシントン２３の合成をスキーム２に記載する。このシントンは、抗体または生体分子とのバイオコンジュゲーション反応などを可能にするマスクされた（Ｂｏｃ保護基）アミン官能基を有する。化合物１７を文献（国際公開第２０１４／１１１６６１号）に記載された手順に従って調製した。ジオール８をジトシラートとして活性化し、次いで化合物１９と縮合させると、化合物２１が良好な収率で得られる。薗頭反応後、ノシル基の脱保護を行うことにより、シントン２３を得ることができる。

【0077】

【化17】

【0078】

最も慎重な対処を要するステップをスキーム３に表す。最適化後にリガンド２４が極めて妥当な収率で得られた大環状化ステップである。この中間体は、スキーム４に記載されている様々な可溶化基を有する一連のランタニド（ユウロピウム、テルビウムおよびサマリウム）錯体を製造するプラットホームを成す。

【0079】

【化18】

【0080】

類似した戦略を用いて、モノアンテナおよびジアンテナピリジノファン錯体を調製することができる。合成スキームを以下で説明する。

【0081】

＜モノアンテナ（ピリジニル−アセチレン−４−Ｏ−フェニル）系の合成＞
これらの系の合成をスキーム５〜７に記載する。

【0082】

【化19】

【0083】

イソニコチン酸メチルを酸化条件下で処理すると、ジオール２８が収率２８％で得られる。この収率はあまり良くないが、この反応によって、２個のヒドロキシメチレン基をピリジニル環の２位および６位に１ステップで同時に導入することができる。ジオールのモノクロル化により化合物２９を得ることができ、次いで化合物１８と反応して、ジピリジニル骨格３０が得られる。アルコール官能基はトシラートとして活性化され、次いで大環状化ステップがトリアンテナ系に対して前述のように行われ、重要な中間体３２が得られる。

【0084】

【化20】

【0085】

【化21】

【0086】

２個のメチルエステル官能基の加水分解により二酸化合物３４が生じ、それに対して２個の水可溶化官能基（アニオン性３５ａ、双性イオン性３５ｂ、中性３５ｃまたはカチオン性３５ｄ）がグラフトされる。ブチルエステルおよびＢｏｃ保護基の脱保護が、純粋なトリフルオロ酢酸の存在下で行われる。ランタニド原子は、リガンドをＨＥＰＥＳ緩衝液中、塩化ユウロピウムまたはサマリウムの水溶液の存在下で処理するとリガンドの空洞で錯化する。

【0087】

＜ジアンテナ（ピリジニル−アセチレン−４−Ｏ−フェニル）系の合成＞
これらの系の合成をスキーム８〜１０に記載する。

【0088】

【化22】

【0089】

ジアンテナ系に関して、合成は、市販されているケリダム酸３６に対するエステル化反応から始まる（Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０００年、３９巻、４６７８頁に記載された手順）。錯体と生体分子との間の連結部の役割を果たすアームを、この合成レベルにおいて光延反応を利用して導入する（Ｏｒｇａｎｉｃ Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１２年、１０巻、９１８３頁に記載された手順）。エタノール中で水素化ホウ素ナトリウムを使用する二重還元反応によりジオール３９が得られ、次いでそれを引き続いてジトシラートとして活性化する（Ｏｒｇａｎｉｃ＆Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１２年、１０巻、９１８３頁に記載された手順）。シントン４２は、１９を４０（Ｏｒｇａｎｉｃ＆Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１２年、１０巻、９１８３頁に記載された手順に従って調製）と縮合させ、次いでノシル保護基を脱保護することによって、上記（トリアンテナ系）のように調製される。２つの化合物１２および４２は、ジアンテナ系のベースを構成する重要な中間体４３の調製に使用される（スキーム９および１０）。

【0090】

【化23】

【0091】

【化24】

【0092】

エステル官能基を加水分解し、水可溶化官能基を上記のように導入するが、今回はアンテナに対して直接導入する。合成の残りの工程は、トリアンテナおよびモノアンテナ系について記載したことと同一である。

【0093】

これらの蛍光性プローブは、従来の官能基であるＮＨＳエステル、アジド、マレイミドまたはイソチオシアナートを導入することによって活性化することができる。一例として、タンパク質またはｃＡＭＰ型二次メッセンジャーへのバイオコンジュゲーションを可能にするマレイミドとしての活性化を説明する。スキーム１１および１２は、これらの分子の例を２つ示す。

【0094】

【化25】

【0095】

【化26】

【0096】

＜トリアンテナ（ピリジニル−２，４，５−Ｏ−フェニル）系の合成＞
ピリジニルトリメトキシフェニル系もＦＲＥＴ技術と適合する発色団である。スキーム１３〜１５は、対応する錯体（Ｃ８〜Ｃ１０シリーズ）を得るために従った方法を示す。手順は、上記手順と同一であるか、または文献で入手可能である。詳細は実験の部に記載する。

【0097】

【化27】

【0098】

【化28】

【0099】

【化29】

【図面の簡単な説明】

【0100】

【図1】錯体Ｃ１ａの吸収スペクトルを示す。

【図2】錯体Ｃ１ａの発光スペクトルを示す。

【発明を実施するための形態】

【0101】

［実験の部］
一般的情報
＜使用した略語＞
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
Ｂｏｃ−Ｏｓｕ：Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルオキシ）スクシンイミド
ｃＡＭＰ：環状アデノシン一リン酸
ｍ−ＣＰＢＡ：メタ−クロロ過安息香酸
ｄ：日
ＤＢＵ：１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン
ＤＣＣ：ジシクロヘキシル尿素
ＤＣＭ：ジクロロメタン
δ：化学シフト
ＤＩＡＤ：アゾジカルボン酸ジイソプロピル
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＥｔＯＨ：エタノール
ＥＳＩ：エレクトロスプレーイオン化
ｈ：時間
ＨＡＴＵ：１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム−３−オキシドヘキサフルオロホスファート
ＨＥＰＥＳ：４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＨＲＭＳ：高分解能質量分析法
ＨＴＲＦ：ホモジニアス時間分解蛍光
Ｈｚ：ヘルツ
ＭｅＣＮ：アセトニトリル
ＭｅＯＨ：メタノール
ｍｉｎ：分
Ｍｏｐｓ：３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸
ＭＰ：融点
ＭＳ：質量分析
Ｍｓ：メシル
ＮＢＳ：Ｎ−ブロモスクシンイミド
ＮＨＳ：Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
ＮＩＳ：Ｎ−ヨードスクシンイミド
ＮＭＲ：核磁気共鳴
Ｎｓ：ノシル
ＰＥ：石油エーテル
ＰＥＧ：ポリエチレングリコール
Ｐｈ：フェニル
ｐｐｍ：百万分率
ＲＴ：室温
ＳＭＰＨ：スクシンイミジル−６−（（β−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノアート
Ｓｐｈｏｓ：２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジメトキシビフェニル
ＴＥＡまたはＥｔ_３Ｎ：トリエチルアミン
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
ＴＭＳ：トリメチルシリル
ＴｓＣｌ：トシルクロリド
ＴＳＴＵ：Ｏ−（Ｎ−スクシンイミジル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート

【0102】

＜クロマトグラフィー＞
アルミニウムシート上のＭｅｒｃｋ６０Ｆ_２５４シリカゲルプレートまたはアルミニウムシート上のＭｅｒｃｋ６０Ｆ_２５４中性酸化アルミニウムプレート（タイプＥ）で薄層クロマトグラフィー法を行った。

【0103】

分析および分取高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法を２台の機器で行った。
・分析ＨＰＬＣ：ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｐ４０００クォータナリーポンプ、重水素ランプ（１９０〜３５０ｎｍ）を備えたＵＶ１０００検出器、Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、３．５μｍ、４．６×１００ｍｍ分析カラム
・分取ＨＰＬＣ：Ｓｈｉｍａｄｚｕ社、２台のＬＣ−８Ａポンプ、ＶａｒｉａｎＰｒｏＳｔａｒ ＵＶダイオードアレイ検出器、Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｐｒｅｐ．Ｃ１８、５μｍ：１９×１００ｍｍまたは５０×１５０ｍｍ分取カラム

【0104】

シリカカラムによるクロマトグラフィー法をＭｅｒｃｋ６０シリカゲル（０．０４０〜０．０６３ｍｍ）で行った。アルミナカラムによるクロマトグラフィー法を活性化された中性のＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ酸化アルミニウムであるＢｒｏｃｋｍａｎｎ Ｉで行った。

【0105】

グラジエントＡ
Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ_１８、３００Å、３．５μｍ、４．６×１００ｍｍカラム、Ａ／水 ０．１％ギ酸−Ｂ／アセトニトリル ０．１％ギ酸、ｔ＝０分、５％Ｂ−ｔ＝１５分 １００％Ｂ−１ｍｌ／分
グラジエントＢ
Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ_１８、５μｍ、１９×１００ｍｍカラム、Ａ／水 ０．１％ギ酸 Ｂ／アセトニトリル ｔ＝０分、５０％Ｂ−ｔ＝１７分、１００％Ｂ−２０ｍｌ／分
グラジエントＣ
Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ_１８、５μｍ、５０×１５０ｍｍカラム、Ａ／水 ０．１％ギ酸 Ｂ／アセトニトリル ｔ＝０分、１５％Ｂ−ｔ＝２分、１５％Ｂ−ｔ＝２０分、１００％Ｂ−１００ｍｌ／分
グラジエントＤ
Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ_１８、５μｍ、１９×１００ｍｍカラム、Ａ／水 ０．１％ギ酸 Ｂ／アセトニトリル ｔ＝０分、１５％Ｂ−ｔ＝２分 １５％Ｂ−ｔ＝２０分 １００％Ｂ−２０ｍｌ／分
グラジエントＥ
Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ_１８、３００Å、３．５μｍ、４．６×１００ｍｍカラム、Ａ／Ｈ_２Ｏ ５ｍＭ酢酸アンモニウム ｐＨ６．５−Ｂ／アセトニトリル−ｔ＝０分 ２％Ｂ−ｔ＝１５分 ４０％Ｂ．１ｍｌ／分
グラジエントＦ
Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ_１８、５μｍ、５０×１５０ｍｍカラム、Ａ／水 ２５ｍＭ酢酸トリエチルアンモニウム Ｂ／アセトニトリル ｔ＝０分 ２％Ｂ−Ｂ−ｔ＝１７分 ４０％Ｂ−１００ｍｌ／分
グラジエントＧ
Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ_１８、５μｍ、１９×１００ｍｍカラム、Ａ／水 ２５ｍＭ酢酸トリエチルアンモニウム Ｂ／アセトニトリル ｔ＝０分 ５％Ｂ−Ｂ−ｔ＝１７分 ４０％Ｂ−２０ｍｌ／分
グラジエントＨ
Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ_１８、３００Å、５μｍ、１０×１００ｍｍカラム−水 ２５ｍＭ酢酸トリエチルアンモニウム Ｂ／アセトニトリル ｔ＝０分 ２％Ｂ−Ｂ−ｔ＝１９分 ４０％Ｂ−５ｍｌ／分
グラジエントＩ
Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｃ_１８、３００Å、１．７μｍ、２．１×５０ｍｍカラム−Ａ／水 ０．１％ギ酸 Ｂ／アセトニトリル ０．１％ギ酸 ｔ＝０分 ５％Ｂ−ｔ＝０．２分 ５％Ｂ−ｔ＝５分 １００％Ｂ−０．６ｍｌ／分
グラジエントＪ
Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ_１８、５μｍ、５０×１５０ｍｍカラム−Ａ／水 ２５ｍＭ ＴＥＡＡｃ ｐＨ７ Ｂ／アセトニトリル ｔ＝０分 ５０％Ｂ−ｔ＝２０分 １００％Ｂ−１００ｍｌ／分
グラジエントＫ
Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ_１８、５μｍ、５０×１５０ｍｍカラム−Ａ／水 ２５ｍＭ ＴＥＡＡｃ ｐＨ７ Ｂ／アセトニトリル ｔ＝０分 １５％Ｂ−ｔ＝１９分 ８０％Ｂ−８０ｍｌ／分
グラジエントＬ
Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ_１８、３００Å、５μｍ、１９×１００ｍｍカラム−Ａ／水 ２５ｍＭ ＴＥＡＡｃ ｐＨ７ Ｂ／アセトニトリル ｔ＝０分 ２０％Ｂ−ｔ＝１９分 ８０％Ｂ−１００ｍｌ／分
グラジエントＭ
Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ_１８、５μｍ、５０×１５０ｍｍカラム−Ａ／水 ２５ｍＭ ＴＥＡＡｃ ｐＨ７ Ｂ／アセトニトリル ｔ＝０分 ２％Ｂ−ｔ＝１８分 ４０％Ｂ−８０ｍｌ／分
グラジエントＮ
Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｃ_１８、３００Å、１．７μｍ、２．１×５０ｍｍカラム−Ａ／水 ５ｍＭ酢酸アンモニウム ｐＨ５ Ｂ／アセトニトリル ｔ＝０分 ２％Ｂ−ｔ＝０．２分 ２％Ｂ−ｔ＝５分 ４０％Ｂ−０．６ｍｌ／分
グラジエントＯ
Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ_１８、５μｍ、５０×１５０ｍｍカラム−Ａ／水 ０．１％ギ酸 Ｂ／アセトニトリル ｔ＝０分 ４０％Ｂ−ｔ＝２０分 １００％Ｂ−１００ｍｌ／分

【0106】

＜分光測定＞
ａ．核磁気共鳴
ＮＭＲスペクトル（^１Ｈ、^１３Ｃおよび^３１Ｐ）は、直径５ｍｍの多核種ＢＢＦＯ測定用プローブを備えたグラジエントＺおよび^２ＨロックのＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ４００ＭＨｚ ＮａｎｏＢａｙ分光計（９．４テスラの磁石）を使用して取得した。化学シフト（δ）は百万分率（ｐｐｍ）で表される。以下の略語を使用する。
ｓ：一重線、ｂｓ：ブロードな一重線、ｄ：二重線、ｔ：三重線、ｑ：四重線、ｍ：多重線、ｄｄ：二重線の二重線、ｄｔ：三重線の二重線、ｄｑ：四重線の二重線、ｄｄｄ：二重線の二重線の二重線

【0107】

ｂ．質量分析
（ＬＣ−ＭＳ）質量スペクトルは、Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ_１８、３．５μｍ、４．６×１００ｍｍカラムを備えたＥＳＩ／ＡＰＣＩマルチモードソースを有するシングル四重極型Ｗａｔｅｒｓ ＺＱ ２０００分光計を使用して取得した。

【0108】

ｃ．高分解能質量分析
空気圧支援大気圧イオン化（ＡＰＩ）源を備えたＱＳｔａｒ Ｅｌｉｔｅ質量分析計（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＳＣＩＥＸ）を使用して分析を行った。試料をポジティブエレクトロスプレーモードにて以下の条件下でイオン化した：エレクトロスプレー電圧（ＩＳＶ）：５５００Ｖ；オリフィス電圧（ＯＲ）：２０Ｖ；スプレー用ガス（空気）圧：２０ｐｓｉ。飛行時間（ＴＯＦ）分析器を用いて、より高い分解能の質量スペクトル（ＭＳ）を得た。正確な質量の測定は、二重内部標準を用いて三連で行った。

【0109】

＜その他＞
融点機器：Ｂ−５４０ ＢＵＣＨＩ融点機器を使用して融点を取得した。

【0110】

化合物１：市販品。

【0111】

化合物２：国際公開第２００４／０９４３８６号に記載された手順に従って、化合物２を調製した。

【0112】

化合物３：Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１３年、５６巻、４９９０頁の論文に記載された手順に従って、化合物３を調製した。

【0113】

化合物４
無水ＭｅＯＨ（３０ｍｌ）および無水炭酸カリウム（１５．８ｇ、１１４ｍｍｏｌ）を０℃で化合物３（２０ｇ、３８．１ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（２０ｍｌ）溶液に続けて添加した。懸濁液を０℃で１５分間、次いで室温で１時間撹拌し、次いでろ過し、減圧下で濃縮した。残渣をＤＣＭ（１００ｍｌ）で希釈し、次いで水（８０ｍｌ）を添加した。有機相を分離し、水相をＤＣＭ（２回×６０ｍｌ）で抽出した。有機相を１つにまとめ、硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、減圧下で濃縮して、やや褐色の固体として化合物４（１２ｇ、８３％）を得た。それをさらに精製することなく合成の残りの工程において使用した。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ７．４５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），４．６５（ｓ，２Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），３．０３（ｓ，１Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，１００ＭＨｚ）δ１６８．９，１５８．０，１３３．６，１１５．４，１１４．６，８３．３，７６．３，６５．１，５２．３．ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_１１Ｈ_１１Ｏ_３［Ｍ＋Ｈ］^＋，ｍ／ｚの計算値１９１．０７，実測値１９１．７０．

【0114】

化合物５：市販品。

【0115】

化合物６：Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、２００５年、６１巻、１７５５頁の論文に記載された手順に従って、化合物６を調製した。

【0116】

化合物７：Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、２００８年、６４巻、３９９頁の論文に記載された手順に従って、化合物７を調製した。

【0117】

化合物８：Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００２年、２１巻、３６８０頁の論文に記載された手順に従って、化合物８を調製した。

【0118】

化合物９
化合物８（３ｇ、１１．３ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（５０ｍｌ）懸濁液を−２０℃に冷却し、それに酸化銀（３．９３ｇ、１７．０ｍｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（０．３７ｇ、２．２ｍｍｏｌ）、次いで小分けしたＴｓＣｌ（２．３７ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１６時間撹拌し、次いでセライトでろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、残留油状物を、溶離液としてＤＣＭを使用したシリカカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物９に相当する白色固体（２．１ｇ、４４％）を得た。融点：９７〜９８℃。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ７．８４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．６４（ｓ，１Ｈ），７．６２（ｓ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），５．１０（ｓ，２Ｈ），４．６７（ｓ，２Ｈ），３．２０（ｂｓ，１Ｈ），２．４８（ｓ，３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，１００ＭＨｚ）δ１６０．０，１５３．４，１４５．４，１３２．６，１３０．０，１２９．４，１２９．３，１２８．０，１０６．９，７０．５，６３．４，２１．７．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_１４Ｈ_１５ＮＯ_４ＩＳ［Ｍ＋Ｈ］^＋，ｍ／ｚの計算値４１９．９７６６，実測値４１９．９７５９．

【0119】

化合物１０
無水炭酸カリウム（１．８８ｇ、１３．６ｍｍｏｌ）をｔｅｒｔ−ブチルグリシナート塩酸塩（０．７６ｇ、４．５ｍｍｏｌ）の無水ＭｅＣＮ（７６ｍｌ）懸濁液に添加し、この混合物を５５℃で３０分間加熱し、次いで室温に冷却した。化合物９（４．０ｇ、９ｍｍｏｌ）をこの懸濁液に添加し、次いで混合物を６０℃で２０時間加熱した。混合物が室温に戻ったら、混合物をろ過し、ろ液を減圧下で濃縮し、ＡｃＯＥｔ−ＭｅＯＨ溶媒グラジエントを９７／３から９０／１０まで１％ずつ変化させたシリカカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製して、発泡体として化合物１０（２．５ｇ、９０％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ７．７９（ｓ，２Ｈ），７．５３（ｓ，２Ｈ），４．７０（ｓ，４Ｈ），３．９６（ｓ，４Ｈ），３．８６（ｂｓ，２Ｈ），３．４０（ｓ，２Ｈ），１．５３（ｓ，９Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，１００ＭＨｚ）δ１７０．１，１５９．６，１５８．８，１３１．０，１２８．３，１０６．８，８１．６，６３．６，５９．２，５６．７，３８．２．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_２０Ｈ_２６Ｎ_３Ｏ_４Ｉ［Ｍ＋Ｈ］^＋，ｍ／ｚの計算値６２６．００１３，実測値６２６．００１５．

【0120】

化合物１１
ＴＨＦ（７．５ｍｌ）とＴＥＡ（７．５ｍｌ）の混合液中の化合物１０（１．６４ｇ、２．６２ｍｍｏｌ）および化合物４（１．５ｇ、７．８７ｍｍｏｌ）の溶液をアルゴン気流により１５分間脱気した。次いで、この混合物に１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（０．６４ｇ、０．７８ｍｍｏｌ）およびヨウ化銅（０．３ｇ、１．５７ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物をマイクロ波（１００Ｗ）下で３０分間照射し、次いで室温に冷却し、最後にセライト層でろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、ＤＣＭ／ＡｃＯＥｔ／ＭｅＯＨ溶媒グラジエントを１／０／０、５／５／０、０／１／０から０／９／１まで５％ずつ変化させたシリカカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製して、所望の化合物１１（１．３９ｇ、７１％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ７．５１（ｓ，２Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，４Ｈ），７．１９（ｓ，２Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，４Ｈ），４．７５（ｓ，４Ｈ），４．６８（ｓ，４Ｈ），４．１６（ｂｓ，２Ｈ），４．０３（ｓ，４Ｈ），３．８４（ｓ，６Ｈ），３．４３（ｓ，２Ｈ），１．５３（ｓ，９Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，１００ＭＨｚ）δ１７０．４，１６８．９，１５８．５，１５８．３，１５８．０，１３３．６，１３２．６，１２３．７，１２０．５，１１５．３，１１４．７，９３．６，８６．２，８１．４，６５．１，６３．９，５９．５，５６．４，５２．３，２８．２．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_４２Ｈ_４４Ｎ_３Ｏ_１０［Ｍ＋Ｈ］^＋，ｍ／ｚの計算値７５０．３０２７，実測値７５０．３０２２．

【0121】

化合物１２
ヨウ化カリウム（２２ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）および酸化銀（２３１ｍｇ、１ｍｍｏｌ）をジオール１１（２５０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（８ｍｌ）溶液に添加した。この混合物を−５℃に冷却し、ＴｓＣｌ（１９０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を一度に添加した。次いで、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣでモニターした。この後、溶媒を加圧下で除去し、ＤＣＭ−ＭｅＯＨ溶離液グラジエントを９９／１から９８／２まで０．２％ずつ変化させたシリカカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製して、ベージュ色油状物（３００ｍｇ、８８％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３；３００ＭＨｚ）δ１．４６（ｓ，９Ｈ）；２．４（ｓ，６Ｈ），３．３２（ｓ，２Ｈ），３．８０（ｓ，６Ｈ），３．８７（ｓ，４Ｈ），４．６５（ｓ，４Ｈ），５．０７（ｓ，４Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，４Ｈ），７．２８（ｓ，２Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，４Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，４Ｈ），７．５２（ｓ，２Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，４Ｈ）．^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３；７５ＭＨｚ）δ１７０．０，１６８．８，１５９．０，１５８．３，１５３．１，１４５．０，１３３．５，１３３．０，１３２．６，１２９．８，１２８．０，１２４．２，１２１．６，１１５．１，１１４．７，９４．１，８５．９，８１．２，７１．３，６５．０，５９．５，５６．０，５２．３，２８．１，２１．５．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_５６Ｈ_５６Ｎ_３Ｏ_１４Ｓ_２［Ｍ＋Ｈ］^＋，ｍ／ｚの計算値１０５８．３２０４，実測値１０５８．３２４１．

【0122】

化合物１３：市販品。

【0123】

化合物１４：市販品。

【0124】

化合物１５：Ｏｒｇａｎｉｃ Ｌｔｔｅｒｓ、２００６年、８巻、４２５１頁の論文に記載された手順に従って、化合物１５を調製した。

【0125】

化合物１６：Ｏｒｇａｎｉｃ Ｌｅｔｔｅｒｓ、２００６年、８巻、４２５１頁の論文に記載された手順に従って、化合物１６を調製した。

【0126】

化合物１７：国際公開第２０１４／１１１６６１号に記載された手順に従って、化合物１７を調製した。

【0127】

化合物１８：市販品。

【0128】

化合物１９：Ｏｒｇａｎｉｃ Ｌｅｔｔｅｒｓ、２００７年、９巻、１６３５頁の論文に記載された手順に従って、化合物１９を調製した。

【0129】

化合物２０
水酸化ナトリウム（１．３６ｇ、３４ｍｍｏｌを１０ｍｌの水に溶解させた）水溶液を室温で化合物８（３．０ｇ、１１．３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液に添加した。この混合物を０℃に冷却し、ＴｓＣｌ（６．４７ｇ、３４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液を添加し、室温で２０時間撹拌した。この懸濁液に、ＤＣＭ（１００ｍｌ）および飽和塩水溶液（５０ｍｌ）を添加した。デカンテーションした後、水相をＤＣＭ（２回×１００ｍｌ）で抽出した。有機相を１つにまとめ、硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、減圧下で濃縮した。シクロヘキサン／ＤＣＭ溶離液グラジエントを５０／５０から０／１００までとしたシリカカラムクロマトグラフィーにより粗生成物を精製して、白色固体として化合物２０（５．４１ｇ、８４％）を得た。融点：１４３．５〜１４４．５℃。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ７．８１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，４Ｈ），７．６４（ｓ，２Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，４Ｈ），５．０１（ｓ，４Ｈ），２．４７（ｓ，６Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，１００ＭＨｚ）δ１５４．１，１４５．３，１３２．６，１３０．３，１３０．０，１２８．０，１０６．９，７０．３８，２１．７２．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_２１Ｈ_２１ＮＯ_６ＩＳ_２［Ｍ＋Ｈ］^＋，ｍ／ｚの計算値５７３．９８５５，実測値５７３．９８５４．

【0130】

化合物２１
炭酸ナトリウム（２．７７ｇ、２６．２ｍｍｏｌ）を化合物１９（１．８３ｇ、５．７５ｍｍｏｌ）の無水ＭｅＣＮ（３６ｍｌ）溶液に添加し、次いでその懸濁液を８０℃で１時間撹拌した。この懸濁液を室温に冷却し、化合物２０（１．５ｇ、２．６２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を８０℃で７２時間撹拌した。この後、反応混合物を室温に冷却し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。ＡｃＯＥｔ／ＭｅＯＨ溶離液グラジエントを９８／２から９５／５まで０．５％ずつ変化させたシリカカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製して、黄色がかった油状物として化合物２１（２．０ｇ、８９％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ８．０８（ｄｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１．６Ｈｚ，２Ｈ），７．７５−７．６６（ｍ，６Ｈ），７．６０（ｓ，２Ｈ），４．６３（ｓ，４Ｈ），４．１５（ｓ，４Ｈ），１．３９（ｓ，１８Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，１００ＭＨｚ）δ１６７．３，１５６．３，１４７．７，１３３．７，１３３．５，１３１．７，１３０．８，１３０．４，１２４．２，１０７．３，８２．６，５２．８，４９．２，２８．０．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_３１Ｈ_３７Ｎ_５Ｏ_１２ＩＳ_２［Ｍ＋Ｈ］^＋，ｍ／ｚの計算値８６２．０９２５，実測値８６２．０９２７．

【0131】

化合物２２
ＴＥＡ（４２ｍｌ）と無水ＴＨＦ（４２ｍｌ）の混合液中の化合物１７（２．５８ｇ、９．４ｍｍｏｌ）および化合物２１（８．２ｇ、８．５４ｍｍｏｌ）の溶液をアルゴン気流下で１５分間脱気した。次いで、この混合物に１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（１．３９ｇ、１．７０ｍｍｏｌ）およびヨウ化銅（０．４９ｇ、１．５７ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌しながら６０℃で２０時間加熱した。この混合物を室温に冷却し、セライト層でろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、シクロヘキサン／ＤＣＭ／ＡｃＯＥｔ溶離液グラジエントを５／２／３から２／５／３までとしたシリカカラムクロマトグラフィーにより粗生成物を精製して、黄色発泡体として化合物２２（４．９ｇ、５７％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ８．１０（ｄｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１．７Ｈｚ，２Ｈ），７．７５−７−６５（ｍ，６Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．３２（ｓ，２Ｈ），６．９２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），４．７６（ｂｓ，１Ｈ），４．６８（ｓ，４Ｈ），４．１７（ｓ，４Ｈ），４．０８（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．３６（ｍ，２Ｈ），２．０３（ｍ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ），１．３８（ｓ，１８Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，１００ＭＨｚ）δ１６７．４，１５９．７，１５６．０，１５５．８，１４７．９，１３３．８，１３３．６，１３３．６，１３１．８，１３０．８，１２４．２，１２２．７，１１４．７，１１３．８，９５．３，８５．５，８２．４，７９．３，６５．９，５３．０，４９．２，３７．８，２９．５，２８．４，２７．９．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_４７Ｈ_５７Ｎ_６Ｏ_１５Ｓ_２［Ｍ＋Ｈ］^＋，ｍ／ｚの計算値１００９．３３２３ 実測値１００９．３３２２．

【0132】

化合物２３
化合物２２（０．１ｇ、０．０９９ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（４．３ｍｌ）溶液に、撹拌しながら２−メルカプトエタノール（７６μｌ、１．０９ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（６７μｌ、０．４４５ｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で４５分間撹拌した。反応の進行をＴＬＣでモニターした。この後、反応は完了した。溶媒を減圧下で除去し、ＡｃＯＥｔ／ＭｅＯＨ混合物（９８／０２から９６／０４）を溶離液として使用したシリカカラムクロマトグラフィーにより粗生成物を精製して、ベージュ色油状物として化合物２３（３５ｍｇ、５５％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）δ１．４６（ｓ，９Ｈ），１．４９（ｓ，１８Ｈ），２．０１（ｍ，２Ｈ），３．３３（ｍ，２Ｈ），３．４０（ｓ，４Ｈ），３．９４（ｓ，４Ｈ），４．０６（ｍ，２Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）；７．３２（ｓ，２Ｈ）；７．４８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）．^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ）δ，１７１．３，１５９．４，１５９．０，１５６．０，１３３．４，１３２．６，１２２．０，１１４．６，１１４．３，９３．７，８６．１，８１．２，７９．２，６５．８，５４．３，５１．１，３７．８，２９．５，２８．３，２８．１，ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_３５Ｈ_５１Ｎ_４Ｏ_７［Ｍ＋Ｈ］^＋，ｍ／ｚの計算値６３９．３７５８，実測値６３９．３７８４．

【0133】

化合物２４
無水ＭｅＣＮ（１４０ｍｌ）中のジトシル化誘導体１２（３１２ｍｇ、０．２９５ｍｍｏｌ）および誘導体２３（１８８ｍｇ、０．２９５ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸ナトリウム（３１２ｍｇ、２．９５ｍｍｏｌ）およびヨウ化ナトリウム（４．４ｍｇ、０．０２９５ｍｍｏｌ）を添加した。懸濁液を還流下で４０時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣでモニターした。この後、反応は完了した。反応混合物を室温に冷却し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物（９８／０２から９７／０３）を溶離液として使用したアルミナカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製して、ベージュ色油状物として化合物２４（２９７ｍｇ、７４％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）δ１．４７（ｓ，９Ｈ），１．５２（ｓ，２７Ｈ），２．０２（ｍ，２Ｈ），３．３７（ｍ，２Ｈ），３．４３（ｓ，４Ｈ），３．４５（ｓ，２Ｈ），３．８４（ｓ，６Ｈ），３．９０（ｍ，１２Ｈ），４．０２（ｍ，２Ｈ），４．６２（ｓ，４Ｈ），６．６９（ｍ，６Ｈ），７．２２（ｍ，４Ｈ），７．２５（ｓ，２Ｈ），７．３５（ｍ，６Ｈ）．^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ）δ１７０．６，１６８．９，１５９．１，１５８．４９，１５８．４５，１５８．４，１５７．８，１５６．０，１３３．４３，１３３．４１，１３２．０，１３１．７，１２３．０，１２２．９７，１２２．８，１１５．８，１１４．６，１１４．４，１１４．３，９２．９，９２．４，８６．６，８６．４，８１．１，７９．２，６５．７，６５．０，６０．３，６０．２，６０．１，５９．０，５８．７，５２．３，３７．７，２９．４，２８．４，２８．２．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_７７Ｈ_９０Ｎ_７Ｏ_１５［Ｍ＋Ｈ］^＋，ｍ／ｚの計算値１３５２．６４９５，実測値１３５２．６５２１．

【0134】

化合物２５
化合物２４（２１．１ｍｇ、１５．６μｍｏｌ）のＭｅＣＮ（２．１１ｍｌ）溶液に１Ｍ水酸化リチウム（１５６μｌ、１５６μｍｏｌ）水溶液を添加した。溶液を室温で１時間撹拌した。反応の進行をＬＣ−ＭＳ（グラジエントＡ）でモニターした。この後、反応は完了した。分取ＨＰＬＣ（グラジエントＢ）により溶液を直接精製し、所望の化合物であると同定された化合物２５（９．４ｍｇ、４５％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_７５Ｈ_８６Ｎ_７Ｏ_１５［Ｍ＋Ｈ］^＋，ｍ／ｚの計算値１３２４．６１８２，実測値１３２４．６１８５．ＨＰＬＣ（グラジエントＡ）保持時間＝１３．９５分

【0135】

化合物２６ａ
化合物２５（３４ｍｇ、２５．７μｍｏｌ）の無水ＤＭＳＯ（１２７５μｌ）溶液に、タウリン（１２．８５ｍｇ、１０２．７μｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（２６．４μｌ、１９．９ｍｇ、１５４μｍｏｌ）、最後にＨＡＴＵ（３９ｍｇ、１０２．７μｍｏｌ）を添加した。溶液を室温で４０分間撹拌した。反応の進行をＬＣ−ＭＳ（グラジエントＡ）でモニターした。この後、反応は完了した。分取ＨＰＬＣ（グラジエントＣ）により溶液を直接精製し、所望の化合物であると同定された化合物２６ａ（３０ｍｇ、７６％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_７９Ｈ_９７Ｎ_９Ｏ_１９Ｓ_２［Ｍ＋２Ｈ］^２＋，ｍ／ｚの計算値７６９．８１７１，実測値７６９．８１６６．ＨＰＬＣ（グラジエントＡ）保持時間＝１１．３３分

【0136】

化合物２６ｂ
国際公開第２０１１／１４６５９５号およびＯｒｇａｎｉｃ＆Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１２年、１０巻、１８８３頁に記載された手順に従って、３−（（２−アミノエチル）ジメチルアンモニオ）プロパン−１−スルホナートを調製した。化合物２５（１５ｍｇ、１１．３μｍｏｌ）の無水ＤＭＳＯ（５６２μＬ）溶液に、３−（（２−アミノエチル）ジメチルアンモニオ）プロパン−１−スルホナート（１５ｍｇ、７１．５８μｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１１．６μｌ、８．８ｍｇ、６７．９μｍｏｌ）、最後にＨＡＴＵ（１７．２ｍｇ、４５．３μｍｏｌ）を添加した。溶液を室温で１０分間撹拌した。反応の進行をＬＣ−ＭＳ（グラジエントＡ）でモニターした。この後、反応は完了した。分取ＨＰＬＣ（グラジエントＤ）により溶液を直接精製し、所望の化合物であると同定された化合物２６ｂ（１１．６ｍｇ、６０％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_８９Ｈ_１１９Ｎ_１１Ｏ_１９Ｓ_２［Ｍ＋２Ｈ］^２＋，ｍ／ｚの計算値８５４．９０６２，実測値８５４．９０５４．ＨＰＬＣ（グラジエントＡ）保持時間＝１１．１４分

【0137】

化合物２６ｃ
化合物２５（１５ｍｇ、１１．３μｍｏｌ）の無水ＤＭＳＯ（５６２μＬ）溶液に、グルコサミン（９．７７ｍｇ、４５．３μｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１１．６μｌ、８．８ｍｇ、６７．９μｍｏｌ）、最後にＨＡＴＵ（１７．２ｍｇ、４５．３μｍｏｌ）を添加した。溶液を室温で１０分間撹拌した。反応の進行をＬＣ−ＭＳ（グラジエントＡ）でモニターした。この後、反応は完了した。分取ＨＰＬＣ（グラジエントＤ）により溶液を直接精製し、所望の化合物であると同定された化合物２６ｃ（１６．３ｍｇ、８７％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_８７Ｈ_１０８Ｎ_９Ｏ_２３［Ｍ＋Ｈ］^＋，ｍ／ｚの計算値１６４６．７５５８，実測値１６４６．７５５８．ＨＰＬＣ（グラジエントＡ）保持時間＝１１．６２分

【0138】

化合物２６ｄ：２６ａ〜ｃの合成に使用された手順と同じ手順に従い、対応するアミンを選択することによって、この化合物を調製した。

【0139】

錯体Ｃ１ａ−Ｃ２ａ−Ｃ３ａ
ＴＦＡ（５００μｌ）を化合物２６ａ（３０ｍｇ、１９．５μｍｏｌ）に添加した。溶液を室温で２時間撹拌した。反応の進行をＬＣ−ＭＳ（グラジエントＡ）でモニターした。この後、反応は完了した。溶媒を減圧下で除去した。残渣を二分した。一方をユウロピウム錯体Ｃ１ａの調製に使用し、他方をテルビウム錯体Ｃ２ａの調製に使用した。

【0140】

Ｃ１ａ
残渣（２２．２ｍｇ、１８μｍｏｌ）に、水（６ｍｌ）、ＭｅＣＮ（２ｍｌ）および３Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を添加して、ｐＨ７の溶液を得た。この溶液に、塩化ユウロピウム（２６．４ｍｇ、７２μｍｏｌ）および３Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を添加して、ｐＨ６の溶液を得た。溶液を室温で終夜撹拌した。反応の進行をＬＣ−ＭＳ（グラジエントＥ）でモニターした。この後、反応は完了した。分取ＨＰＬＣ（グラジエントＦ）により溶液を直接精製し、所望の化合物であると同定された錯体Ｃ１ａ（９．７ｍｇ、３８％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_６２Ｈ_６３Ｎ_９Ｏ_１７Ｓ_２Ｅｕ［Ｍ］^３＋，ｍ／ｚの計算値４７３．４３２２，実測値４７３．４３１９．ＨＰＬＣ（グラジエントＥ）

【0141】

Ｃ２ａ
第１のステップにおいて得られた残渣（１．９ｍｇ、１．５μｍｏｌ）に、水（３７５μｌ）、塩化テルビウム（２．２４ｍｇ、６μｍｏｌ）および３Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を添加して、ｐＨ６の溶液を得た。溶液を室温で終夜撹拌した。反応の進行をＬＣ−ＭＳ（グラジエントＥ）でモニターした。この後、反応は完了した。分取ＨＰＬＣ（グラジエントＧ）により溶液を直接精製し、所望の化合物であると同定された錯体Ｃ２ａ（１０７μｇ、５％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_６２Ｈ_６３Ｎ_９Ｏ_１７Ｓ_２Ｔｂ［Ｍ＋３Ｈ］^３＋，ｍ／ｚの計算値４７６．１０１２，実測値４７６．１００５．ＨＰＬＣ（グラジエントＥ）

【0142】

Ｃ３ａ：Ｃ１ａおよびＣ２ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、この錯体を調製した。

【0143】

錯体Ｃ１ｂ−Ｃ２ｂ−Ｃ３ｂ
ＴＦＡ（２５０μｌ）を化合物２６ｂ（１１．６ｍｇ、７μｍｏｌ）に添加した。溶液を室温で２時間撹拌した。反応の進行をＬＣ−ＭＳ（グラジエントＡ）でモニターした。この後、反応は完了した。溶媒を減圧下で除去した。残渣を二分した。一方をユウロピウム錯体Ｃ１ｂの調製に使用し、他方をテルビウム錯体Ｃ２ｂの調製に使用した。

【0144】

Ｃ１ｂ
既に得られた残渣（７．９ｍｇ、５．５μｍｏｌ）に、水（３．１５ｍｌ）、塩化ユウロピウム（８．１ｍｇ、２２μｍｏｌ）および３Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を添加して、ｐＨ６の溶液を得た。溶液を室温で終夜撹拌した。反応の進行をＬＣ−ＭＳ（グラジエントＥ）でモニターした。この後、反応は完了した。分取ＨＰＬＣ（グラジエントＦ）により溶液を直接精製し、所望の化合物であると同定された錯体Ｃ１ｂ（３．５８ｍｇ、４１％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_７２Ｈ_８３Ｎ_１１Ｏ_１７Ｓ_２Ｅｕ［Ｍ＋Ｈ］^３＋，ｍ／ｚの計算値５３０．１５４０，実測値５３０．１５８０．ＨＰＬＣ（グラジエントＥ）保持時間＝８．５６および８．８１分（５８％〜４２％異性体混合物）

【0145】

Ｃ２ｂ
第１のステップにおいて得られた残渣（２．２ｍｇ、１．５μｍｏｌ）に、水（８５７μｌ）、塩化テルビウム（２．２４ｍｇ、６μｍｏｌ）および３Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を添加して、ｐＨ６の溶液を得た。溶液を室温で終夜撹拌した。反応の進行をＬＣ−ＭＳ（グラジエントＥ）でモニターした。この後、反応は完了した。分取ＨＰＬＣ（グラジエントＧ）により溶液を直接精製し、所望の化合物であると同定された錯体Ｃ２ｂ（２３１μｇ、１０％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_７２Ｈ_８５Ｎ_１１Ｏ_１７Ｓ_２Ｔｂ［Ｍ＋３Ｈ］^３＋，ｍ／ｚの計算値５３２．８２７３，実測値５３２．８２６８．ＨＰＬＣ（グラジエントＥ）保持時間＝８．７１および８．９４分（３５％〜６５％異性体混合物）

【0146】

Ｃ３ｂ：Ｃ１ｂおよびＣ２ｂの合成に使用された手順と同じ手順に従って、この錯体を調製した。

【0147】

錯体Ｃ１ｃ−Ｃ２ｃ
ＴＦＡ（２５０μｌ）を化合物２６ｃ（１６．３ｍｇ、１１．８μｍｏｌ）に添加した。溶液を室温で２時間撹拌した。反応の進行をＬＣ−ＭＳ（グラジエントＡ）でモニターした。この後、反応は完了した。溶媒を減圧下で除去した。水（４ｍｌ）および３Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を残渣に添加して、ｐＨ７の溶液を得た。この溶液を二分した。一方をユウロピウム錯体Ｃ１ｃの調製に使用し、他方をテルビウム錯体Ｃ２ｃの調製に使用した。

【0148】

Ｃ１ｃ
既に得られた溶液（１６．３ｍｇ、１１．８μｍｏｌ、３．５ｍｌ）に、塩化ユウロピウム（１５．１ｍｇ、４１．２μｍｏｌ）および３Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を添加して、ｐＨ６の溶液を得た。溶液を室温で終夜撹拌した。反応の進行をＬＣ−ＭＳ（グラジエントＥ）でモニターした。この後、反応は完了した。分取ＨＰＬＣ（グラジエントＦ）により溶液を直接精製し、所望の化合物であると同定された錯体Ｃ１ｃ（３．２５ｍｇ、１８％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_７０Ｈ_７２Ｎ_９Ｏ_２１Ｅｕ［Ｍ＋］^２＋，ｍ／ｚの計算値７６３．７０２７，実測値７６３．７０９３．ＨＰＬＣ（グラジエントＥ）保持時間＝８．６８分

【0149】

Ｃ２ｃ
既に得られた溶液（２．１ｍｇ、１．５μｍｏｌ、５０８μＬ）に、水（５０８μｌ）、塩化テルビウム（２．２４ｍｇ、６μｍｏｌ）および３Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を添加して、ｐＨ６の溶液を得た。溶液を室温で終夜撹拌した。反応の進行をＬＣ−ＭＳ（グラジエントＥ）でモニターした。この後、反応は完了した。分取ＨＰＬＣ（グラジエントＧ）により溶液を直接精製し、所望の化合物であると同定された錯体Ｃ２ｃ（１８４μｇ、８％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_７０Ｈ_７４Ｎ_９Ｏ_２１Ｔｂ［Ｍ＋２Ｈ］^２＋，ｍ／ｚの計算値７６７．７１２６，実測値７６７．７１４１．ＨＰＬＣ（グラジエントＥ）保持時間＝８．３０および８．７８分（２５％〜７５％異性体混合物）

【0150】

Ｃ３ｃ：Ｃ１ｃおよびＣ２ｃの合成に使用された手順と同じ手順に従って、この錯体を調製した。

【0151】

Ｃ１ｄ、Ｃ２ｄ、Ｃ３ｄ：Ｃ１ｃおよびＣ２ｃの合成に使用された手順と同じ手順に従って、これらの錯体を調製した。

【0152】

Ｃ１ａ−マレイミド
無水ＤＭＦ（５０μｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．２μｌ、１５５μｇ、１．２μｍｏｌ）中のスクシンイミジル−６−（（β−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノアート（０．２３ｍｇ、６００ｎｍｏｌ）の溶液をピリジノファン錯体Ｃ１ａ（０．５６ｍｇ、４００ｎｍｏｌ）に添加した。混合物を室温で２時間撹拌した。反応の進行をＬＣ−ＭＳ（グラジエントＥ）保持時間＝１０．６４分でモニターした。この後、反応は完了した。分取ＨＰＬＣ（グラジエントＨ）により溶液を直接精製し、所望の化合物であると同定された錯体Ｃ１ａ−マレイミド（３５３μｇ、２１０ｎｍｏｌ、５２％）を得た。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_７５Ｈ_７７Ｎ_１１Ｏ_２１Ｓ_２Ｅｕ［Ｍ＋Ｈ］^＋，ｍ／ｚの計算値１６８４．３９３３，実測値１６８４．６５．ＨＰＬＣ（グラジエントＥ）保持時間＝１０．６４分

【0153】

Ｃ１ａ−ＣＡＭＰ
無水ＤＭＦ（５０μｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．１μｌ、７７．５μｇ、６００ｎｍｏｌ）中で溶液状態のＴＳＴＵ（０．１３ｍｇ、４４０ｎｍｏｌ）をＣＡＭＰ−Ｇｌｕ−酸（０．２５ｍｇ、４００ｎｍｏｌ）に添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。この溶液に、５０ｍＭ（ｐＨ７）リン酸緩衝液（３５０μｌ）中で溶液状態の錯体Ｃ１ａ（０．２８ｍｇ、２００ｎｍｏｌ）を添加した。反応の進行をＬＣ−ＭＳ（グラジエントＥ）保持時間＝９．１分でモニターした。この後、反応は完了した。分取ＨＰＬＣ（グラジエントＨ）により溶液を直接精製し、所望の化合物であると同定された錯体Ｃ１ａ−ＣＡＭＰ（３０３μｇ、１５０ｎｍｏｌ、７５％）を得た。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_８４Ｈ_９２Ｎ_１６Ｏ_２８ＰＳ_２Ｅｕ［Ｍ＋２Ｈ］^２＋，ｍ／ｚの計算値１０１０．２３２９，実測値１０１０．８９．ＨＰＬＣ（グラジエントＥ）保持時間＝９．１分

【0154】

化合物２７：市販品。

【0155】

化合物２８：欧州特許出願公開第５３３１３１号明細書に記載された手順に従って、化合物２８を調製した。

【0156】

化合物２９
化合物２８（２．６ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）のクロロホルム（２６５ｍｌ）懸濁液にトリフェニルホスフィン（４．２ｇ、１６．１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で完全に溶解するまで（３０分間）撹拌した。この溶液に四塩化炭素（３７ｍｌ）を添加し、混合物を室温で２０時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣでモニターした。この後、反応は完了した。溶媒を減圧下で除去した。３／７シクロヘキサン−ＡｃＯＥｔ溶離液を使用したシリカカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製して、所望の化合物（０．８ｇ、２８％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）δ７．９６（ｓ，１Ｈ），７．８１（ｓ，１Ｈ），４．８６（ｓ，２Ｈ），４．７４（ｓ，２Ｈ），３．９９（ｓ，３Ｈ），３．４５（ｓｌ １Ｈ）．

【0157】

化合物３０
化合物２９（０．８ｇ、３．７ｍｍｏｌ）の無水ＭｅＣＮ（１５ｍｌ）懸濁液に、炭酸ナトリウム（１．２５ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）およびアミン１８（２５０μｌ、１．８５ｍｍｏｌ）を添加した。不均一な混合物を還流下で２０時間加熱し、次いで室温に冷却した。この混合物に、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（２０ｍｌ）、水（１５ｍｌ）、次いでＤＣＭ（５０ｍｌ）を添加した。有機相を分離し、水相をＤＣＭ（２回×５０ｍｌ）で抽出した。有機相を１つにまとめ、硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、減圧下で濃縮した。ＤＣＭ−ＭｅＯＨ溶離液グラジエントを９７／３から９０／１０まで１％ずつ変化させたシリカカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製して、化合物３０（０．６ｇ、６６％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）δ７，９７（ｓ，２Ｈ），７．６７（ｓ，２Ｈ），４．８２（ｓ，２Ｈ），４．８１（ｓ，２Ｈ），４．１２（ｓ，４Ｈ），４．０２（ｓ，２Ｈ），３．９８（ｓ，６Ｈ），３．４３（ｓ，２Ｈ），１．５３（ｓ，９Ｈ）．

【0158】

化合物３１
ジオール化合物３０（５０ｍｇ、１０２μｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍｌ）溶液に、ヨウ化カリウム（７ｍｇ、４２．５μｍｏｌ）および酸化銀（７１ｍｇ、３０６μｍｏｌ）を添加した。この混合物を不活性雰囲気中で−２０℃に冷却し、ＴｓＣｌ（３９ｍｇ、２０４μｍｏｌ）を添加した。溶液を室温に再加熱し、次いで不活性雰囲気中で２０時間撹拌した。この後、９０／１０ＤＣＭ−ＡｃＯＥｔ溶離液混合液を使用したシリカカラムクロマトグラフィーにより反応混合物を直接精製して、無色油状物としてジトシル化誘導体３１（５７ｍｇ、７１％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ１．４６（ｓ，９Ｈ）；２．４２（ｓ，６Ｈ）；３．３３（ｓ，２Ｈ）；３．９４（ｓ，６Ｈ）；３．９６（ｓ，４Ｈ）；５．１３（ｓ，４Ｈ）；７．３１−７．３３（ｄ，４Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ）；７．７５（ｓ，２Ｈ）；７．８０−７．８３（ｄ，４Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）；７．９６（ｓ，２Ｈ）．^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ＝２１．７；２８．２；５２．８；５９．４；５６．１；７１．３；８１．４；１１９．３；１２２．１；１２８．１；１２９．９；１３２．７；１３８．９；１４５．２；１５４．４；１６０．４；１６５．３；１７０．１．ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝７９８．５［Ｍ＋Ｈ^＋］（１００％）．ＩＲ（ｃｍ^−１）ν３４４４，２９５８，１７３２，１３６８，１１７７．

【0159】

化合物３２
無水ＭｅＣＮ（１６０ｍｌ）中で溶液状態のジトシル化化合物３１（２５５ｍｇ、０．３１９ｍｍｏｌ）に、アルゴン下で化合物２３（２０４ｍｇ、０．３１９ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（３３８ｍｇ、３．１９ｍｍｏｌ）およびヨウ化ナトリウム（４．８ｍｇ、０．０３１９ｍｍｏｌ）を添加した。懸濁液を還流下で４０時間撹拌した。混合物をろ過し、真空下で蒸発させ、アルミナカラムクロマトグラフィー（１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２から９９／１ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨまで０．５％ずつ変化）により残渣を精製した。次いで、遊離形態およびナトリウム錯体の形態の化合物の混合物に相当する回収画分を最少量のＤＣＭに再溶解し、水で数回洗浄した。所望の化合物３２が黄色粉末（２０８ｍｇ、６０％）として得られた。Ｒ_ｆ＝０．１８（アルミナ、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ９８／２）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）δ７．５８（ｓ，４Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．１６（ｓ，２Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），４．７７（ｓ，１Ｈ），４．０３（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ），３．９５（ｓ，４Ｈ），３．９２（ｓ，４Ｈ），３．８４（ｓ，４Ｈ），３．７９（ｓ，６Ｈ），３．４３（ｓ，２Ｈ），３．３９（ｓ，４Ｈ），３．３５−３．２８（ｍ，２Ｈ），２．０２−１．９４（ｍ，２Ｈ），１．４７（ｓ，２７Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ）δ１７０．４，１６５．８，１５９．６，１５９．３，１５８．４，１５５．９，１３７．６，１３３．３，１３１．８，１２２．８，１２０．５，１２０．３，１１４．６，１１４．５，９２．８，８６．３，８１．１９，８１．１５，７９．２，６５．８，６０．０，５９．９，５８．９，５８．７，５２．３，３７．８，２９．５，２８．３，２８．１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_５９Ｈ_７８Ｎ_７Ｏ_１３［Ｍ＋Ｈ］^＋，ｍ／ｚの計算値１０９２．５６５８，実測値１０９２．５６３６；ＩＲ（ｃｍ^−１）：ν３４２９，２９７７，２９３２，２２１０，１７２９，１５９６，１５１１，１３６７，１２２５，１１５９．

【0160】

化合物３４
２５ｍｌの丸底フラスコ中で、化合物３２（５０．０ｍｇ、４６μｍｏｌ）をＭｅＣＮ（１ｍｌ）に溶解させて、無色溶液を得た。反応混合物に、水（４５８μｌ）中で溶液状態の水酸化リチウム（１１．１９ｍｇ、４５８μｍｏｌ）を一度に添加した。溶液を室温で３０分間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）でモニターした。この後、反応は完了した。溶液を分取ＨＰＬＣ（グラジエントＪ）により直接精製し、所望の化合物であると同定された化合物３４（３５ｍｇ、７１％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_５７Ｈ_７４Ｎ_７Ｏ_１３［Ｍ＋Ｈ］^＋，ｍ／ｚの計算値１０６４．５３３９，実測値１０６４．５３４１．ＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）保持時間＝３．８２分

【0161】

化合物３５ａ
５０ｍｌの丸底フラスコ中で、化合物３４（３５．０ｍｇ、３３μｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１ｍｌ）とＭｅＣＮ（４ｍｌ）の混合液に溶解させて、無色溶液を得た。反応混合物に、ＤＩＰＥＡ（３４μｌ、１９７μｍｏｌ）、タウリン（１２．４７ｍｇ、９９μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２５．８ｍｇ、６５．８μｍｏｌ）を一度に添加した。溶液を室温で２時間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）でモニターした。この後、反応は完了した。溶液を分取ＨＰＬＣ（グラジエントＫ）により直接精製し、所望の化合物であると同定された化合物３５ａ（３１．７ｍｇ、７５％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_６１Ｈ_８５Ｎ_９Ｏ_１７Ｓ_２［Ｍ＋２Ｈ］^２＋，ｍ／ｚの計算値６３９．７７４７，実測値６３９．７７４７．ＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）保持時間＝３．３６分

【0162】

化合物３５ｂ
国際公開第２０１１／１４６５９５号およびＯｒｇａｎｉｃ＆Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１２年、１０巻、１８８３頁に記載された手順に従って、３−（（２−アミノエチル）ジメチルアンモニオ）プロパン−１−スルホナートを調製した。５ｍｌの丸底フラスコ中で、３−（（２−アミノエチル）ジメチルアンモニオ）プロパン−１−スルホナート（１０．５６ｍｇ、５０．０μｍｏｌ）および化合物３４（１０．６４ｍｇ、１０μｍｏｌ）をＤＭＳＯ（６００μｌ）に溶解させて、黄色溶液を得た。反応混合物に、ＤＩＰＥＡ（１２．０６μｌ、７０．０μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１５．２１ｍｇ、４０．０μｍｏｌ）を一度に添加した。溶液を室温で１５分間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）でモニターした。この後、反応は完了した。溶液を分取ＨＰＬＣ（グラジエントＬ）により直接精製し、所望の化合物であると同定された化合物３５ｂ（８．６ｍｇ、５９％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_７１Ｈ_１０７Ｎ_１１Ｏ_１７Ｓ_２［Ｍ＋２Ｈ］^２＋，ｍ／ｚの計算値７２４．８６３８，実測値７２４．８６４４．ＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）保持時間＝３．２４分

【0163】

化合物３５ｃ：３５ａおよび３５ｂの合成に使用された手順と同じ手順に従って、この化合物を調製した。

【0164】

化合物３５ｄ
Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１４年、８６巻、１０００６頁に記載された手順に従って、２−トリメチルアンモニウムエチルアミン塩酸塩を調製した。５ｍｌの丸底フラスコ中で、２−トリメチルアンモニウムエチルアミン塩酸塩（６．９８ｍｇ、５０．０μｍｏｌ）および化合物３４（１０．６４ｍｇ、１０μｍｏｌ）をＤＭＳＯ（６００μｌ）に溶解させて、黄色溶液を得た。反応混合物に、ＤＩＰＥＡ（１６．６８μｌ、１００μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１５．２１ｍｇ、４０．０μｍｏｌ）を一度に添加した。溶液を室温で１５分間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）でモニターした。この後、反応は完了した。溶液を分取ＨＰＬＣ（グラジエントＬ）により直接精製し、所望の化合物であると同定された化合物３５ｄ（６．８ｍｇ、５５％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_６７Ｈ_９９Ｎ_１１Ｏ_１１［Ｍ＋２Ｈ］^２＋，ｍ／ｚの計算値６１６．８７５７，実測値６１６．８７５９．ＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）保持時間＝２．９７分

【0165】

錯体Ｃ４ａ
５０ｍｌの丸底フラスコ中で、化合物３５ａ（３１．７ｍｇ、２５μｍｏｌ）をＴＦＡ（２００μｌ）に溶解させて、黄色溶液を得た。溶液を室温で３０分間撹拌した。脱保護の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）でモニターした。この後、脱保護は完了した。ＴＦＡを減圧下で蒸発させた。残渣を水（６ｍｌ）およびＭｅＣＮ（１ｍｌ）に溶解させ、３Ｍ水酸化ナトリウム溶液でｐＨを７に調整した。反応混合物に、撹拌しながら塩化ユウロピウム（ＩＩＩ）六水和物（３６．３ｍｇ、９９μｍｏｌ）を一度に添加した。３Ｍ水酸化ナトリウムを加えてｐＨを７に調整した。溶液を室温で５日間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）でモニターした。この後、反応は完了した。溶液を分取ＨＰＬＣ（グラジエントＭ）により直接精製し、所望の化合物であると同定された錯体Ｃ４ａ（１５．６ｍｇ、５５％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_４４Ｈ_５０Ｎ_９Ｏ_１５Ｓ_２Ｅｕ［Ｍ＋２Ｈ］^２＋，ｍ／ｚの計算値５７９．６０２８，実測値５７９．６０２６．ＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＮ）、異性体１保持時間＝１．３２分および異性体２保持時間＝１．６４分

【0166】

錯体Ｃ５ａ：Ｃ４ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、この錯体を調製した。

【0167】

錯体Ｃ４ｂ
２５ｍｌの丸底フラスコ中で、化合物３５ｂ（８．６ｍｇ、５．９３μｍｏｌ）をＴＦＡ（１３０μｌ）に溶解させて、黄色溶液を得た。溶液を室温で３０分間撹拌した。脱保護の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）でモニターした。この後、脱保護は完了した。ＴＦＡを減圧下で蒸発させた。残渣を５０ｍＭ（ｐＨ７．４）ＨＥＰＥＳ緩衝液（２ｍｌ）に溶解させた。反応混合物に、撹拌しながら塩化ユウロピウム（ＩＩＩ）六水和物（１３．０３ｍｇ、３６μｍｏｌ）を一度に添加した。溶液を室温で４０時間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）でモニターした。この後、反応は完了した。溶液を分取ＨＰＬＣ（グラジエントＭ）により直接精製し、所望の化合物であると同定された錯体Ｃ４ｂ（６．５ｍｇ、８３％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_５４Ｈ_７３Ｎ_１１Ｏ_１５Ｓ_２Ｅｕ［Ｍ＋３Ｈ］^３＋，ｍ／ｚの計算値４４４．１３１０，実測値４４４．１３０９．ＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）保持時間＝０．３４分

【0168】

錯体Ｃ５ｂ：Ｃ４ｂの合成に使用された手順と同じ手順に従って、この錯体を調製した。

【0169】

錯体Ｃ４ｃ：Ｃ４ｂの合成に使用された手順と同じ手順に従って、この錯体を調製した。

【0170】

錯体Ｃ５ｃ：Ｃ４ｂの合成に使用された手順と同じ手順に従って、この錯体を調製した。

【0171】

錯体Ｃ４ｄ
２５ｍｌの丸底フラスコ中で、化合物３５ｄ（６．８ｍｇ、５．５１μｍｏｌ）をＴＦＡ（２００μｌ）に溶解させて、黄色溶液を得た。溶液を室温で５時間撹拌した。脱保護の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）でモニターした。この後、脱保護は完了した。ＴＦＡを減圧下で蒸発させた。残渣を５０ｍＭ（ｐＨ７．４）ＨＥＰＥＳ緩衝液（２ｍｌ）に溶解させた。反応混合物に、撹拌しながら塩化ユウロピウム（ＩＩＩ）六水和物（１２．０９ｍｇ、３３μｍｏｌ）を一度に添加した。溶液を室温で１８時間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）でモニターした。この後、反応は完了した。溶液を分取ＨＰＬＣ（グラジエントＭ）により直接精製し、所望の化合物であると同定された錯体Ｃ４ｄ（３ｍｇ、１９％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_５０Ｈ_６４Ｎ_１１Ｏ_９Ｅｕ［Ｍ＋２Ｈ］^２＋，ｍ／ｚの計算値５５７．７０４８，実測値５５７．７０５０．ＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）保持時間＝０．３２分

【0172】

錯体Ｃ５ｄ：Ｃ４ｂの合成に使用された手順と同じ手順に従って、この錯体を調製した。

【0173】

錯体Ｃ４ｅ：Ｃ４ｂの合成に使用された手順と同じ手順に従って、この錯体を調製した。

【0174】

錯体Ｃ５ｅ：Ｃ４ｂの合成に使用された手順と同じ手順に従って、この錯体を調製した。

【0175】

化合物３７
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ−Ａ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ、２００８年、１４巻、１７２６頁の論文に記載された手順に従って、化合物３７を調製した。ケリダム酸一水和物５（３ｇ、１５ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（６０ｍｌ）中、９７％硫酸（０．６ｍｌ）の存在下、還流下で１６時間加熱した。溶媒を減圧下で蒸発させ、残留している白色残渣を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で中和し、ＤＣＭで抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、蒸発乾固すると、ジエステル３７が白色固体（２．２７ｇ、６３％）として得られた。Ｒ_ｆ＝０．１０（シリカ、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ９９／１）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）δ７．３１（ｓ，２Ｈ），４．４６（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，４Ｈ），１．４２（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，６２．５ＭＨｚ）δ１６６．０，１６４．３，１４９．９，１１５．２，６１．４，１４．１．

【0176】

化合物３８
Ｏｒｇａｎｉｃ＆Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１２年、１０巻、９１８３頁の論文に記載された手順に従って、化合物３８を調製した。無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）中に希釈したトリフェニルホスフィン（１．１３ｇ、４．３１ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチル−（３−ヒドロキシプロピル）カルバマート（０．７７ｇ、４．４１ｍｍｏｌ）を、アルゴン下でケリダム酸ジエチル３７（０．５ｇ、２．０９ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（５０ｍｌ）溶液に添加した。次いで、ＤＩＡＤ（０．８３ｍｌ、４．１９ｍｍｏｌ）を１０分かけて滴下し、反応媒体を７０℃で１６時間撹拌した。媒体を減圧下で蒸発させ、得られた黄色粘稠残渣をフラッシュシリカカラムクロマトグラフィー（ＡｃＯＥｔ／ＥＰ ５０／５０）により精製した。化合物３８が白色粉末（０．８２ｇ、９９％）として得られた。Ｒ_ｆ＝０．２３（シリカ、ＡｃＯＥｔ／ＥＰ ５０／５０）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）δ７．７７（ｓ，２Ｈ），４．６８（ｓ，１Ｈ），４．４７（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，４Ｈ），４．１９（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．３９−３．２８（ｍ，２Ｈ），２．１０−１．９９（ｍ，２Ｈ），１．４５（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ），１．４３（ｓ，９Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ）δ１６６．８，１６４．７，１５６．０，１５０．２，１１４．３，７９．４，６６．６，６２．４，３７．５，２９．４，２８．４，１４．２．

【0177】

化合物３９
Ｏｒｇａｎｉｃ＆Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１２年、１０巻、９１８３頁の論文に記載された手順に従って、化合物３９を調製した。化合物３８（１．７０ｇ、４．３０ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（８５ｍｌ）溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（８１７ｍｇ、２１．５９５ｍｍｏｌ）を小分けして添加した。反応媒体を還流下で２時間加熱した。次いで、混合物を室温に冷却し、７０ｍｌの水を添加し、エタノールを減圧下で除去した。水相をＤＣＭ（４回×２０ｍｌ）で抽出した。有機相を塩化アンモニウム飽和溶液（２０ｍｌ）、次いで水（２０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下で蒸発させた。次いで、化合物３９が白色固体（１．０２ｇ、７６％）として得られた。Ｒ_ｆ＝０．３０（シリカ、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ９０／１０）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）δ６．７２（ｓ，２Ｈ），４．７１（ｓ，４Ｈ），４．６８（ｓ，１Ｈ），４．０９（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），３．３７−３．２３（ｍ，２Ｈ），２．７７（ｓ，２Ｈ），２．０７−１．９３（ｍ，２Ｈ），１．４３（ｓ，９Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ）δ１６６．５，１６１．２，１５６．３，１０５．６，７９．４，６５．７，６４．４，３７．６，２９．４，２８．５．

【0178】

化合物４０
Ｏｒｇａｎｉｃ＆Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１２年、１０巻、９１８３頁の論文に記載された手順に従って、化合物４０を調製した。０℃のＴＨＦ／水（１：１、１７ｍｌ）混合液中の化合物３９（４４０ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）の溶液に、撹拌しながら水酸化ナトリウム（３３８ｍｇ、８．４５ｍｍｏｌ）とＴｓＣｌ（１．０７ｇ、５．６４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２３ｍｌ）溶液とを添加した。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、次いでデカンテーションし、水相をＤＣＭ（１０ｍｌ）で洗浄した。有機相をまとめて、５％炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、ろ過し、蒸発乾固した。化合物４０が白色粉末（８４１ｍｇ、９６％）として得られた。Ｒ_ｆ＝０．４０（シリカ、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ９８／２）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）δ７．８０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，４Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，４Ｈ），６．８１（ｓ，２Ｈ），４．９８（ｓ，４Ｈ），４．６８（ｓ，１Ｈ），４．０３（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．３６−３．２３（ｍ，２Ｈ），２．４４（ｓ，６Ｈ），２．０６−１．９１（ｍ，２Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ）δ１６６．７，１５６．１，１５３．３，１４５．３，１３２．８，１３０．１，１２８．２，１０７．７，７９．６，７１．３，６６．１，３７．６，２９．４，２８．５，２１．８．

【0179】

化合物４１
化合物１９（９４３ｍｇ、２．９８ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（２６ｍｌ）溶液に、アルゴン下で炭酸セシウム（１．０１ｇ、３．１２ｍｍｏｌ）および化合物４０（８４４ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で４０時間撹拌し、ろ過し、蒸発乾固し、得られた粗生成物をシリカカラムクロマトグラフィー（１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２から９０／１０ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＡｃＯＥｔ）により精製して、化合物４１を白色粉末（９８０ｍｇ、７９％）として得た。Ｒ_ｆ＝０．５８（シリカ、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＡｃＯＥｔ９０／１０）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）δ８．１１−８．０４（ｍ，２Ｈ），７．７２−７．６０（ｍ，６Ｈ），６．７６（ｓ，２Ｈ），４．７０（ｓ，１Ｈ），４．６０（ｓ，４Ｈ），４．１２（ｓ，４Ｈ），４．０２−３．９２（ｍ，２Ｈ），３．３５−３．２１（ｍ，２Ｈ），２．０３−１．８７（ｍ，２Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ），１．３５（ｓ，１８Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ）δ１６７．４，１６６．６，１５７．２，１５５．９，１４７．９，１３３．５８，１３３．５５，１３１．８，１３０．９，１２４．１，１０７．６，８２．３，７９．４，６５．７，５３．２，４９．１，３７．５，２９．２，２８．４，２７．８；ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_３９Ｈ_５３Ｎ_６Ｏ_１５Ｓ_２［Ｍ＋Ｈ］^＋，ｍ／ｚの計算値９０９．３０，実測値９０９．３０．

【0180】

化合物４２
ジノシル化化合物４１（１．１２ｇ、１．２３ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（５４ｍｌ）溶液に、撹拌しながら２−メルカプトエタノール（９４９μｌ、１３．５７４ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（８２８μｌ、５．５５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３０分間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、次いでＤＣＭ（２０ｍｌ）を添加し、混合物を水（２回×１０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、ろ過し、減圧下で蒸発させた。得られた粗生成物をシリカカラムクロマトグラフィー（９５／５から９０／１０ＡｃＯＥｔ／ＭｅＯＨ）により精製して、化合物４２を黄色固体（５２３ｍｇ、７９％）として得た。Ｒ_ｆ＝０．２４（シリカ、ＡｃＯＥｔ／ＭｅＯＨ９０／１０）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）δ６．７３（ｓ，２Ｈ），４．７９−４−７５（ｍ，１Ｈ），４．０４（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ），３．８４（ｓ，４Ｈ），３．７３（ｓ，２Ｈ），３．３４（ｓ，４Ｈ），３．３１−３．２５（ｍ，２Ｈ），２．００−１．９２（ｍ，２Ｈ），１．４４（ｓ，１８Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ）δ１７１．４，１６６．１，１６０．５，１５６．０，１０６．７，８１．２，７９．３，６５．５，５４．５，５１．２，３７．６，２９．３，２８．４，２８．１；ＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ_２７Ｈ_４７Ｎ_４Ｏ_７［Ｍ＋Ｈ］^＋，ｍ／ｚの計算値５３９．３４４５，実測値５３９．３４４５．

【0181】

化合物４３
化合物１２（９４５ｍｇ、０．８９３ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（４４７ｍｌ）溶液に、アルゴン下で化合物４２（４８０ｍｇ、０．８９３ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（９４７ｍｇ、８．９３ｍｍｏｌ）およびヨウ化ナトリウム（１３ｍｇ、０．０８９３ｍｍｏｌ）を添加した。懸濁液を還流下で６５時間撹拌した。残渣をろ過し、減圧下で蒸発させ、アルミナカラムクロマトグラフィー（１００％ＤＣＭから９５／５ＤＣＭ／ＭｅＯＨまで１％ずつ変化）により精製した。次いで、遊離形態およびナトリウム錯体の形態の化合物の混合物に相当する回収画分を最少量のＤＣＭに再溶解し、水で数回洗浄した。所望の化合物４３が黄色粉末（６９０ｍｇ、６２％）として得られた。Ｒ_ｆ＝０．３３（アルミナ、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ９７／３）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）δ７．４０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，４Ｈ），７．２４（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，２Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，２Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，４Ｈ），６．６４（ｓ，２Ｈ），４．７１（ｓ，１Ｈ），４．６４（ｓ，４Ｈ），４．０１−３．９６（ｍ，２Ｈ），３．８６−３．８３（ｍ，１２Ｈ），３．８１（ｓ，６Ｈ），３．３９（ｓ，６Ｈ），３．１７−３．０８（ｍ，２Ｈ），１．８２−１．７０（ｍ，２Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ），１．４６（ｓ，１８Ｈ），１．４１（ｓ，９Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ）δ１７０．５，１６８．９，１６６．２，１５８．５，１５８．１，１５５．９，１３３．４，１３１．７，１２３．２，１２２．９，１１５．６，１１４．７，１０７．９，９２．６，８６．６，８１．２，８１．１，７９．０，６５．８，６５．１，６０．１，５９．８，５９．６，５８．３１，５８．２８，５２．３，３７．５，２９．６，２８．４，２８．２．ＭＳ（ＥＳＩ＋）：ｍ／ｚ６２６．８［Ｍ＋２Ｈ］^２＋，４２％，６４５．８［Ｍ＋Ｋ＋Ｈ］^２＋，１００％），１２５２．６（［Ｍ＋Ｈ］^＋，１５％）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ_６９Ｈ_８６Ｎ_７Ｏ_１５［Ｍ＋Ｈ］^＋，ｍ／ｚの計算値１２５２．６１８２，実測値１２５２．６１９４；ＩＲ（ｃｍ^−１）：ν３４２５，２９７６，２９３１，２２１０，１７５８，１７３３，１５９６，１５１０，１３６７，１２１３，１１５８．

【0182】

化合物４４
５ｍｌの丸底フラスコ中で、化合物４３（２７．０ｍｇ、２２μｍｏｌ）をＭｅＣＮ（１ｍｌ）に溶解させて、無色溶液を得た。反応混合物に、水（５００μｌ）中で溶液状態の水酸化リチウム（２．６６ｍｇ、１０９μｍｏｌ）を一度に添加した。溶液を室温で３０分間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）でモニターした。この後、反応は完了した。溶液を分取ＨＰＬＣ（グラジエントＯ）により直接精製し、所望の化合物であると同定された化合物４４（２２．９ｍｇ、８６％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_６７Ｈ_８２Ｎ_７Ｏ_１５［Ｍ＋Ｈ］^＋，ｍ／ｚの計算値１２２４．５８６３，実測値１２２４．５８６７．ＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）保持時間＝３．８７分

【0183】

化合物４５ａ
２５ｍｌの丸底フラスコ中で、化合物４４（２２．９０ｍｇ、１９μｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１ｍｌ）に溶解させて、無色溶液を得た。反応混合物に、タウリン（１１．８２ｍｇ、９４μｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（２２μｌ、１３１μｍｏｌ）、次いでＨＡＴＵ（２９．３ｍｇ、７４．８μｍｏｌ）を一度に添加した。溶液を室温で２時間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）でモニターした。この後、反応は完了した。溶液を分取ＨＰＬＣ（グラジエントＫ）により直接精製し、所望の化合物であると同定された化合物２６ａ（２７ｍｇ、７０％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_７１Ｈ_９３Ｎ_９Ｏ_１９Ｓ_２［Ｍ＋２Ｈ］^２＋，ｍ／ｚの計算値７１９．８００９，実測値７１９．８０１１．ＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）保持時間＝３．２２分

【0184】

化合物４５ｂ：４５ａの合成に使用された手順と同じ手順に従い、対応するアミンを選択することによって、この化合物を調製した。

【0185】

化合物４５ｃ：４５ａの合成に使用された手順と同じ手順に従い、対応するアミンを選択することによって、この化合物を調製した。

【0186】

化合物４５ｃ：４５ａの合成に使用された手順と同じ手順に従い、対応するアミンを選択することによって、この化合物を調製した。

【0187】

化合物４５ｄ：４５ａの合成に使用された手順と同じ手順に従い、対応するアミンを選択することによって、この化合物を調製した。

【0188】

錯体Ｃ６ａ：
１０ｍｌの丸底フラスコ中で、化合物４５ａ（１８．９ｍｇ、１３μｍｏｌ）をＴＦＡ（２００μＬ）に溶解させて、黄色溶液を得た。溶液を室温で３０分間撹拌した。脱保護の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）でモニターした。この後、脱保護は完了した。ＴＦＡを減圧下で除去した。残渣を５０ｍＭ（ｐＨ７．４）ＨＥＰＥＳ緩衝液（６．２ｍｌ）に溶解させた。反応混合物に、撹拌しながら塩化ユウロピウム（ＩＩＩ）六水和物（２７．５ｍｇ、７５μｍｏｌ）を一度に添加した。溶液を室温で４日間撹拌した。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）でモニターした。この後、反応は完了した。溶液を分取ＨＰＬＣ（グラジエントＭ）により直接精製し、所望の化合物であると同定された錯体Ｃ６ａ（０．８９ｍｇ、５％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_５４Ｈ_５８Ｎ_９Ｏ_１７Ｓ_２Ｅｕ［Ｍ＋２Ｈ］^２＋，ｍ／ｚの計算値６６０．６２９９，実測値６６０．６２９９．ＵＰＬＣ−ＭＳ（グラジエントＩ）、異性体１保持時間＝１．５分および異性体２保持時間＝１．５５分

【0189】

錯体Ｃ７ａ：Ｃ６ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、この錯体を調製した。

【0190】

錯体Ｃ７ａ：Ｃ６ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、この錯体を調製した。

【0191】

錯体Ｃ６ｂ：Ｃ６ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、この錯体を調製した。

【0192】

錯体Ｃ７ｂ：Ｃ６ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、この錯体を調製した。

【0193】

錯体Ｃ６ｃ：Ｃ６ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、この錯体を調製した。

【0194】

錯体Ｃ６ｄ：Ｃ６ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、この錯体を調製した。

【0195】

錯体Ｃ７ｄ：Ｃ６ａの合成に使用された手順と同じ手順に従って、この錯体を調製した。

【0196】

化合物４６：市販品。

【0197】

化合物４７：Ｊｏｕｒｎａｌ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９８７年、５２巻、２０２９頁に記載された手順に従って、化合物４７を調製した。

【0198】

化合物４８：欧州特許出願公開第２２１６３３０号明細書に記載された手順に従って、化合物４８を調製した。

【0199】

化合物４９：類似化合物について欧州特許出願公開第２２１６３３０号明細書に記載された手順に従って、化合物４９を調製した。

【0200】

化合物５０：類似化合物について欧州特許出願公開第２２１６３３０号明細書に記載された手順に従って、化合物５０を調製した。

【0201】

化合物５１：１５の合成に使用された手順と同じ手順に従って、この化合物を調製した。

【0202】

化合物５２：Ｏｒｇａｎｉｃ Ｌｅｔｔｅｒｓ、２０１４年、１６巻、１２９０頁に記載された手順に従って、化合物５２を調製した。

【0203】

化合物５３：２０の合成に使用された手順と同じ手順に従って、この化合物を調製した。

【0204】

化合物５４：２１の合成に使用された手順と同じ手順に従って、この化合物を調製した。

【0205】

化合物５５：２３の合成に使用された手順と同じ手順に従って、この化合物を調製した。

【0206】

化合物５６：９の合成に使用された手順と同じ手順に従って、この化合物を調製した。

【0207】

化合物５７：１０の合成に使用された手順と同じ手順に従って、この化合物を調製した。

【0208】

化合物５８：１２の合成に使用された手順と同じ手順に従って、この化合物を調製した。

【0209】

化合物５９：２４の合成に使用された手順と同じ手順に従って、この化合物を調製した。

【0210】

化合物６０：２５の合成に使用された手順と同じ手順に従って、この化合物を調製した。

【0211】

化合物６１ａ〜ｄ：２６ａ〜ｄの合成に使用された手順と同じ手順に従って、これらの化合物を調製した。

【0212】

錯体Ｃ８ａ〜ｄ：Ｃ１ａ〜ｄの合成に使用された手順と同じ手順に従って、これらの錯体を調製した。

【0213】

錯体Ｃ９ａ〜ｄ：Ｃ２ａ〜ｄの合成に使用された手順と同じ手順に従って、これらの錯体を調製した。

【0214】

錯体Ｃ１０ａ〜ｄ：Ｃ３ａ〜ｄの合成に使用された手順と同じ手順に従って、これらの錯体を調製した。

【0215】

＜光物理的測定＞

【0216】

【化30】

【0217】

本発明を代表する錯体の光物理的特性を以下の表で報告する。

【0218】

【表1】

【0219】

ベースとなるピリジノファン（先行技術）は水（生物学的緩衝媒体）に可溶であるが、発色団（ピリジン）は、この錯体の吸収極大が２６７ｎｍであるため３１０〜３５０ｎｍの励起（フラッシュランプまたは窒素レーザーによる励起）には適していない。可溶化基を含まないこれらのピリジノファン系に発色団を導入することによって（化合物６２、６３）、これらの錯体がレーザーまたはフラッシュ励起源（約３２０〜３３０ｎｍの吸収６２および６３）と適合するが、これらの錯体は水（生物学的緩衝媒体）に不溶である。この溶解性の欠如によって、ＨＴＲＦ型イムノアッセイにおける６２および６３の使用が不可能になる。一方、６２および６３に可溶化基が導入されて、本発明の錯体（実施例Ｃ１ａ〜ｃまたはＣ４ａ〜ｂ、Ｃ４ｄ）に対応するものとなりさえすれば、これらの化合物は生物学的緩衝媒体に可溶になり、錯体をＨＴＲＦ型イムノアッセイ、顕微鏡検査または他の生命科学の用途で使用することができる。

【0220】

図１および図２は、錯体Ｃ１ａの吸収および発光スペクトルを示す。吸収スペクトルは３２０ｎｍに極大を示す。したがって、この錯体シリーズは、レーザーおよびフラッシュランプ励起と申し分なく適合している。発光スペクトルは６２０ｎｍに極大を示し、そのため、適合するアクセプターとの最適な重なりを示すことができる。

【図1】

【図2】