特許 6861301 移植片拒絶の予防に使用するための抗ＣＤ４０抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6861301

(24)【登録日】2021年3月31日

(45)【発行日】2021年4月21日

(54)【発明の名称】移植片拒絶の予防に使用するための抗ＣＤ４０抗体

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20210412BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20210412BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20210412BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20210412BHJP

【ＦＩ】

   A61K39/395 NZMD

   A61P37/06

   C07K16/28ZNA

   !C12N15/13

【請求項の数】4

【全頁数】76

(21)【出願番号】特願2019-562323(P2019-562323)

(86)(22)【出願日】2019年4月11日

(65)【公表番号】特表2020-519634(P2020-519634A)

(43)【公表日】2020年7月2日

(86)【国際出願番号】IB2019052976

(87)【国際公開番号】WO2019198019

(87)【国際公開日】20191017

【審査請求日】2019年11月11日

(31)【優先権主張番号】62/657,172

(32)【優先日】2018年4月13日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】18208332.9

(32)【優先日】2018年11月26日

(33)【優先権主張国】EP

【早期審査対象出願】

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】504389991

【氏名又は名称】ノバルティス アーゲー

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 浩

(74)【代理人】

【識別番号】100095360

【弁理士】

【氏名又は名称】片山 英二

(74)【代理人】

【識別番号】100120134

【弁理士】

【氏名又は名称】大森 規雄

(74)【代理人】

【識別番号】100196966

【弁理士】

【氏名又は名称】植田 渉

(74)【代理人】

【識別番号】100104282

【弁理士】

【氏名又は名称】鈴木 康仁

(72)【発明者】

【氏名】エスピー，パスカル

(72)【発明者】

【氏名】ハラルドソン，ボリエ

(72)【発明者】

【氏名】ラッシュ，ジェイムズ

【審査官】 西 賢二

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１４−５００７２０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 Cordoba, F. et al.，"A novel, blocking, Fc-silent anti-CD40 monoclonal antibody prolongs nonhuman primate renal allograft survival in the absence of B cell depletion"，Am. J. Transplant.，２０１５年，Vol. 15，pp. 2825-2836

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｋ １／００−１９／００

Ｃ１２Ｎ １５／００−１５／９０

Ａ６１Ｋ ３９／００−３９／４４

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒト対象における実質臓器移植における移植片拒絶の予防に使用するための抗ＣＤ４０抗体を含む組成物であって、前記抗体が、配列番号９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列を含み、治療期間全体を通して、抗ＣＤ４０抗体の維持された血漿又は血清中濃度が少なくとも４０μｇ／ｍＬかつ最大４００μｇ／ｍＬであるように用量が調整され、抗ＣＤ４０抗体が、負荷投薬および維持投薬を通して投与され、負荷投薬は、第１の用量の１、２、３、または４回の静脈内投与からなり、維持投薬は、第２の用量の毎週または隔週の皮下注射からなり、第１の用量は、対象のｋｇあたり少なくとも１０ｍｇかつ最大３０ｍｇの抗ＣＤ４０抗体であり、それに３００ｍｇ〜６００ｍｇである維持投薬が続く、組成物。

【請求項2】

負荷用量が、対象のｋｇあたり少なくとも１０ｍｇかつ最大３０ｍｇの抗ＣＤ４０抗体の単回用量を含み、第１日に１回静脈内に投与され、それに続いて、少なくとも３００ｍｇの単位用量を含む維持用量が、毎週または隔週、皮下に投与される、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記実質臓器移植が、腎移植、肝移植、心臓移植、肺移植、膵移植、腸移植、または複合組織移植である、請求項１〜２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項4】

薬学的に許容し得る１種以上の担体をさらに含む医薬組成物である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、ＣＦＺ５３３などの抗ＣＤ４０抗体を用いることによる、実質臓器移植における移植片拒絶の予防のための方法、治療レジメン、使用、キット、および治療法に関する。

【背景技術】

【0002】

ＣＤ４０は、Ｂ細胞、ならびに単球、マクロファージ、および樹状細胞（ＤＣ）などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）上に恒常的に発現される膜貫通型糖タンパク質である。

【0003】

ＣＤ４０は、血小板上でも発現され、ある種の条件下では、好酸球、および実質細胞上で発現される可能性がある。ＣＤ４０に対するリガンド（ＣＤ１５４、ＣＤ４０リガンド、またはＣＤ４０Ｌ）は、活性化Ｔ細胞、血小板、およびＢ細胞を含めた様々な細胞型上に誘導可能である。

【0004】

ＣＤ４０へのＣＤ１５４の結合は、細胞型に依存する様々な活性化という結果をもたらす、ＮＦ−κＢを介するシグナル伝達、およびＭＡＰＫ経路を誘発する。例えば、この経路を介するシグナル伝達は、一次Ｔ細胞依存性抗体反応（ＴＤＡＲ）、Ｂ細胞増殖、胚中心（ＧＣ）形成、免疫グロブリン（Ｉｇ）アイソタイプスイッチ、体細胞変異、およびメモリーＢおよび形質細胞の分化を含めた、適応免疫系のいくつかの重要なエフェクター機能にとって不可欠である。ＣＤ４０経路活性化は、Ｂ細胞に対する効果に加えて、ＤＣ成熟および機能、ならびに単球およびマクロファージ生存およびサイトカイン分泌にとって重要なシグナルを提供する。より最近、ＣＤ４０−ＣＤ１５４経路シグナル伝達は、炎症組織における実質細胞の機能と関連付けられており、腎臓、唾液腺、および皮膚由来の活性化された上皮細胞は、ＣＤ４０ライゲーションに応答してケモカインを産生する。

【0005】

ＣＤ４０を発現する細胞型の多様性、ならびに、ＣＤ４０−ＣＤ１５４相互作用の下流のエフェクター機能の多様性は、この経路を標的にすることが、様々な適応症の治療可能性を有する可能性があることを示唆する。この概念の裏付けとして、受容体またはリガンド遮断抗体を使用するこの共刺激経路の阻害は、前臨床モデルにおいて、自己免疫疾患病態を改善し、同種移植片生着を延長させた。さらに、抗ＣＤ１５４抗体の使用が、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）および免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）を有する患者において有益であることが示されている。残念ながら、抗ＣＤ１５４抗体での治療は、診療現場において、また非ヒト霊長類（ＮＨＰ）において、血栓塞栓症を誘発する。

【0006】

過去数十年にわたって、臓器同種移植は、末期の腎不全、心不全、肝不全、または肺不全を有する患者の生活の質を拡大および向上させることへの大きな影響を伴い、一般的な医療処置となってきている。有効性を最大にし、かつ有害作用を最小にするために、現在の免疫抑制（ＩＳ）レジメンは、ＩＳ薬の組み合わせを使用する。異なる作用機序を有する準最大用量の個々の薬剤の、毒性が重なることを回避しながらの投与を介して相乗的または相加的な免疫抑制効果を達成することには注意が払われる。今日の大抵の治療レジメンは、導入薬と共にまたは伴わずに、２種以上の主要なおよび補助的なＩＳを含む。導入薬は、他のＩＳ薬剤が有効な濃度に到達しつつある間に、レシピエントの免疫系、および同種移植片に対する免疫応答の初回抗原刺激を抑制するために、移植後最初の数時間ないし数日の間に投与される。導入薬としては、抗ＣＤ２５ ｍＡｂバシリキシマブ（Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）またはポリクローナル抗Ｔ細胞グロブリン（Ｔｈｙｍｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（登録商標）、ウサギＡＴＧ、ｒＡＴＧ、Ｇｅｎｚｙｍｅ）が挙げられる。高感作患者では、長期のリンパ球枯渇をもたらす抗ＣＤ５２ ｍＡｂ、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ ＳＡ）での導入が使用されている。移植後１〜２日以内に、次の薬剤のうちの２種以上を用いて、維持治療レジメンが開始される：シクロスポリン（ＣｓＡ、Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）若しくはタクロリムス（Ｔａｃ、ＦＫ５０６、Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標）、Ａｓｔｅｌｌａｓ）などのカルシニューリン阻害剤（ＣＮＩ）、それと共にミコフェノール酸（ＭＰＡ；Ｍｙｆｏｒｔｉｃ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）若しくはミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ；ＣｅｌｌＣｅｐｔ（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ）などのリンパ球増殖抑制剤、またはエベロリムス（Ｚｏｒｔｒｅｓｓ（登録商標）、Ｃｅｒｔｉｃａｎ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）若しくはシロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）などの増殖シグナル阻害剤。より最近、融合タンパク質であるＴ細胞共刺激遮断薬ベラタセプトＮｕｌｏｊｉｘ（登録商標）、ＢＭＳ）が、ＭＰＡを用いるカルシニューリンを使用しない治療レジメンにおいて、生物学的薬剤がＣＮＩに代わる可能性を示した。

【0007】

現在の標準治療レジメンは、急性拒絶反応率が非常に低い、優れた短期的有効性を提供するが、長期の移植片生着および患者生存を向上させる可能性が依然として存在する。移植後１年目および５年での腎臓同種移植片移植片生着の現在の割合は、それぞれ９５％および６８％（Ｍａｔａｓ ｅｔ ａｌ ２０１３）であり、その後、急速に低下する。１２か月での推定される糸球体濾過量は、その後の移植不全と強く関係している（Ｋａｓｉｓｋｅ ｅｔ ａｌ ２０１１）。したがって、腎臓同種移植片の機能はまた、移植片生着の重要な予測因子である。ドナー年齢、急性拒絶反応、および血管リモデリングなどの他の因子も、移植片生着全般に影響を及ぼす可能性があるが、カルシニューリン阻害剤の腎毒性影響は、不可逆的な腎機能悪化と直接的に関係がある（Ｎａｅｓｅｎｓ ｅｔ ａｌ ２００９）。治療レジメンからＣＮＩを排除することによって、腎毒性、高血圧、脂質異常症、神経毒性、胃腸および血液毒性、および／または糖尿病誘発効果などの機構に基づく副作用を最小限にするまたはなくすことができる。新規の治療法の探索においては、同種移植片に対する免疫応答、特に急性の細胞性拒絶反応および慢性の体液性または抗体関連型拒絶反応において役割を果たすＢ細胞、形質細胞、および抗体への関心が高まっている（Ｃｌａｔｗｏｒｔｈｙ ２０１１）。ＴおよびＢ細胞の初回抗原刺激、およびその後のドナー特異的抗体の産生を低下させる特異的治療を開発し、ＣＮＩを排除することによって、慢性拒絶反応を最小限にすることができ、かつ長期の移植片生着を向上することができると仮定される。したがって、新規の免疫抑制剤のかなりの必要性が存在する。

【0008】

ＣＦＺ５３３は、ヒトＣＤ４０に対して誘導されるヒトモノクローナル抗体である。これは、ＩｇＧ１アイソタイプサブクラスに属し、ＦｃγＲ結合ならびにＡＤＣＣおよびＣＤＣのような関連するエフェクター機能を無効にするＦｃ−サイレンシング変異（Ｎ２９７Ａ）を含む。ＣＦＺ５３３は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８８２８３９６号明細書および米国特許第９２２１９１３号明細書に開示されている。

【発明の概要】

【0009】

ＡＤＣＣ活性が抑制されたヒト、抗ＣＤ４０モノクローナル抗体が、ＣＤ４０−ＣＤ１５４経路のシグナル伝達と関連する疾患の治療または予防に、例えば実質臓器移植における移植片拒絶の予防に好適であることが判明した。具体的には、抗体ＣＦＺ５３３が、概念実証研究において、実質臓器移植における移植片拒絶の予防の新規の治療モダリティを提供する見込みを示した。

【0010】

詳細な説明では、ＣＤ４０経路関連のインビトロおよびインビボモデル系におけるＣＦＺ５３３の機能特性の特徴を説明する、また、ＣＦＺ５３３曝露とＰＤ効果との関係を追求する、いくつかの具体例を提供する。

【0011】

本発明の第１の態様によれば、ＣＤ４０−ＣＤ１５４経路のシグナル伝達に関連する疾患の治療または予防に使用するための抗ＣＤ４０抗体が提供される。

【0012】

好ましい実施態様では、実質臓器移植における移植片拒絶の予防に使用するための抗ＣＤ４０抗体が提供される。

【0013】

実質臓器移植は、腎移植または肝移植であり得る。

【0014】

実質臓器移植は、腎移植、肝移植、心臓移植、肺移植、膵移植、腸移植、または複合組織移植であり得る。

【0015】

抗体は、以下からなる群から選択することができる：
ａ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｂ．配列番号１、配列番号２、および配列番号３として記述した高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５、および配列番号６として記述した高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｃ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｄ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体；および
ｅ．サイレントＦｃ ＩｇＧ１領域、または抗体が細胞枯渇を媒介できないようにするアミノ酸変異を含む抗ＣＤ４０抗体。

【0016】

抗体は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列および配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列；または配列番号１１の重鎖アミノ酸配列および配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含むことができる。

【0017】

一実施態様では、第１の態様による使用のための治療有効量の抗体と、薬学的に許容し得る１種以上の担体とを含む医薬組成物が提供される。

【0018】

一実施態様では、投与経路は、第１の態様による抗体の皮下若しくは静脈内、または皮下若しくは静脈内の組み合わせである。

【0019】

用量は、抗体の血漿または血清中濃度が少なくとも４０μｇ／ｍＬであるように調整することができる。

【0020】

用量は、ヒト対象のキログラムあたり３ｍｇ超の活性成分（ｍｇ／ｋｇ）、例えば１０ｍｇ／ｋｇ以上、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２１ｍｇ／ｋｇ、２２ｍｇ／ｋｇ、２３ｍｇ／ｋｇ、２４ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、２６ｍｇ／ｋｇ、２７ｍｇ／ｋｇ、２８ｍｇ／ｋｇ、２９ｍｇ／ｋｇ、または３０ｍｇ／ｋｇ以上であり得る。

【0021】

一実施態様では、用量は、ヒト対象のキログラムあたり約３ｍｇ〜約３０ｍｇの活性成分、例えば静脈内に（ＩＶ）投与された場合にキログラムあたり約３ｍｇ〜約３０ｍｇの活性成分である。

【0022】

一実施態様では、用量は、ヒト対象のキログラムあたり約１０ｍｇの活性成分、例えばＩＶでのキログラムあたり約１０ｍｇの活性成分である。

【0023】

一実施態様では、用量は、約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇの活性成分、例えば皮下に（ＳＣ）投与された場合に約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇである。

【0024】

一実施態様では、用量は、約３００ｍｇまたは４５０ｍｇの活性成分、例えば約３００ｍｇまたは４５０ｍｇ（ＳＣ）である。

【0025】

一実施態様では、抗体は、第１の負荷投薬および第２の維持投薬を通して投与される

【0026】

一実施態様では、負荷投薬は、第１の用量の１、２、３、または４回の毎週の静脈内または皮下注射からなり、維持投薬は、第２の用量の毎週または隔週の皮下注射からなり、ここでは、第１の用量は、第２の用量よりも高い。

【0027】

一実施態様では、第１の用量は、約３００ｍｇ〜約６００ｍｇであり、第２の用量は、約３００ｍｇ、約４５０ｍｇ、または約６００ｍｇである。

【0028】

一実施態様では、負荷投薬は、第１の用量の１または２回の静脈内投与からなり、維持投薬は、第２の用量の毎週または隔週の皮下注射からなる。

【0029】

一実施態様では、第１の用量は、約１０ｍｇ／ｋｇまたは約３０ｍｇ／ｋｇであり、第２の用量は、約３００ｍｇ〜約６００ｍｇである。

【0030】

第２の態様によれば、ＣＤ４０−ＣＤ１５４経路のシグナル伝達と関連する疾患の治療または予防の方法が提供される。

【0031】

好ましい実施態様では、ヒト対象における実質臓器移植における移植片拒絶を予防する方法であって、治療有効用量の抗ＣＤ４０抗体を前記対象に投与することを含む方法が提供される。

【0032】

実質臓器移植は、腎移植または肝移植であり得る。別の実施態様では、実質臓器移植は、腎移植、肝移植、心臓移植、肺移植、膵移植、腸移植、または複合組織移植であり得る。

【0033】

一実施態様では、抗体は、以下からなる群から選択される：
ａ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｂ．配列番号１、配列番号２、および配列番号３として記述した高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５、および配列番号６として記述した高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｃ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｄ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体；および
ｅ．サイレントＦｃ ＩｇＧ１領域を含む抗ＣＤ４０抗体。

【0034】

一実施態様では、抗体は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列および配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列；または配列番号１１の重鎖アミノ酸配列および配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含む。

【0035】

一実施態様では、抗体は、薬学的に許容し得る１種以上の担体と共に投与される。

【0036】

一実施態様では、抗体は、皮下若しくは静脈内に、または皮下または静脈内の組み合わせで投与される。

【0037】

一実施態様では、抗体は、抗体の血漿または血清中濃度が少なくとも４０μｇ／ｍＬであるように投与される。

【0038】

用量は、ヒト対象のキログラムあたり３ｍｇ超の活性成分（ｍｇ／ｋｇ）、例えば１０ｍｇ／ｋｇ以上、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２１ｍｇ／ｋｇ、２２ｍｇ／ｋｇ、２３ｍｇ／ｋｇ、２４ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、２６ｍｇ／ｋｇ、２７ｍｇ／ｋｇ、２８ｍｇ／ｋｇ、２９ｍｇ／ｋｇ、または３０ｍｇ／ｋｇ以上であり得る。

【0039】

一実施態様では、抗体は、ヒト対象のキログラムあたり約３ｍｇ〜約３０ｍｇの活性成分、例えば静脈内に（ＩＶ）投与された場合にキログラムあたり約３ｍｇ〜約３０ｍｇの活性成分の用量として投与される。

【0040】

一実施態様では、用量は、ヒト対象のキログラムあたり約１０ｍｇの活性成分、例えばＩＶでのキログラムあたり約１０ｍｇの活性成分である。

【0041】

一実施態様では、抗体は、約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇの活性成分、例えば皮下に（ＳＣ）投与された場合に約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇの用量として投与される。

【0042】

一実施態様では、用量は、約３００ｍｇまたは４５０ｍｇの活性成分、例えば約３００ｍｇまたは４５０ｍｇ（ＳＣ）である。

【0043】

一実施態様では、抗体は、負荷投薬および維持投薬で投与される。

【0044】

一実施態様では、負荷投薬は、第１の用量の１、２、３、または４回の毎週の皮下注射からなり、維持投薬は、第２の用量の毎週または隔週の皮下注射からなり、ここでは、第１の用量は、第２の用量よりも高い。

【0045】

一実施態様では、第１の用量は、約３００ｍｇ〜約６００ｍｇであり、第２の用量は、約３００ｍｇ、約４５０、または約６００ｍｇである。

【0046】

一実施態様では、負荷投薬は、１または２回の静脈内投与からなり、維持投薬は、第２の用量の毎週または隔週の皮下注射からなる。

【0047】

一実施態様では、第１の用量は、約１０ｍｇ／ｋｇまたは約３０ｍｇ／ｋｇであり、第２の用量は、約３００ｍｇである。

【0048】

第３の態様によれば、実質臓器移植における移植片拒絶の予防のための医薬品の製造のための、抗ＣＤ４０抗体、緩衝液、安定剤、および可溶化剤を含む液体医薬組成物の使用、ならびに抗ＣＤ４０抗体を実質臓器移植患者に静脈内または皮下投与するための手段が提供され、ここでは、抗ＣＤ４０抗体は：
ａ．第１の負荷投薬で、静脈内または皮下に投与されることとなり；
ｂ．その後、第２の維持投薬で、静脈内または皮下に投与されることとなり、ここでは、維持用量は、負荷用量とは異なり、かつ、前記抗ＣＤ４０抗体は、以下からなる群から選択される：
ｉ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｉｉ．配列番号１、配列番号２、および配列番号３として記述した高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５、および配列番号６として記述した高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｉｉｉ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｉｖ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｖ．サイレントＦｃ ＩｇＧ１領域を含む抗ＣＤ４０抗体；および
ｖｉ．配列番号９の重鎖アミノ酸配列および配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列；または配列番号１１の重鎖アミノ酸配列および配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含む抗ＣＤ４０抗体。

【0049】

本開示の追加の態様は、実質臓器移植における移植片拒絶の予防のための医薬品の製造のための、抗ＣＤ４０抗体を含む液体医薬組成物の使用に関し、ここでは、抗ＣＤ４０抗体は：
ａ．第１の負荷投薬で、静脈内または皮下に投与されることとなり；
ｂ．その後、第２の維持投薬で、静脈内または皮下に投与されることとなり、ここでは、維持用量は、負荷用量とは異なり、かつ、前記抗ＣＤ４０抗体は、以下からなる群から選択される：
ｉ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｉｉ．配列番号１、配列番号２、および配列番号３として記述した高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５、および配列番号６として記述した高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｉｉｉ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｉｖ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｖ．サイレントＦｃ ＩｇＧ１領域を含む抗ＣＤ４０抗体；および
ｖｉ．配列番号９の重鎖アミノ酸配列および配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列；または配列番号１１の重鎖アミノ酸配列および配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含む抗ＣＤ４０抗体。

【0050】

第４の実施態様では、本開示は、その治療が長期の移植片拒絶の予防をもたらす、実質臓器移植患者の治療に使用するためのＣＦＺ５３３に関する。

【0051】

第５の実施態様では、本開示は、実質臓器移植患者における移植片機能損失の長期の予防に使用するためのＣＦＺ５３３に関する。

【0052】

第６の実施態様では、本開示は、その治療が長期の移植片生着をもたらす、実質臓器移植患者の治療に使用するためのＣＦＺ５３３に関する。

【0053】

第７の実施態様では、本開示は、（ｉ）移植片機能損失の予防、（ｉｉ）臓器移植片機能損失の欠如、または（ｉｉｉ）移植片生着が、移植後少なくとも３年間持続する、実施態様４〜６による使用のためのＣＦＺ５３３に関する。

【0054】

第８の実施態様では、本開示は、ＣＦＺ５３３治療が移植後に行われ、かつ抗体が、抗体の血漿または血清中濃度が少なくとも４０μｇ／ｍＬであるように投与される、実施態様４〜７による使用のためのＣＦＺ５３３に関する。

【0055】

第９の実施態様では、本開示は、ヒト対象のキログラムあたり約３ｍｇ〜約３０ｍｇの活性成分の用量として投与される、実施態様８による使用のためのＣＦＺ５３３に関する。

【0056】

第１０の実施態様では、本開示は、その用量が、ヒト対象のキログラムあたり約１０ｍｇの活性成分である、実施態様９による使用のためのＣＦＺ５３３に関する。

【0057】

第１１の実施態様では、本開示は、約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇの活性成分の用量として投与される、実施態様９による使用のためのＣＦＺ５３３に関する。

【0058】

第１２の実施態様では、本開示は、その用量が、約３００ｍｇ、約４５０ｍｇ、または約６００ｍｇの活性成分である、実施態様１１による使用のためのＣＦＺ５３３に関する。

【0059】

第１３の実施態様では、本開示は、負荷投薬および維持投薬で投与される、実施態様８〜１２による使用のためのＣＦＺ５３３に関する。

【0060】

第１４の実施態様では、本開示は、負荷投薬が、第１の用量の１、２、３、または４回の毎週の皮下注射からなり、維持投薬が、第２の用量の毎週または隔週の皮下注射からなり、ここでは、第１の用量が、第２の用量よりも高い、実施態様１３による使用のためのＣＦＺ５３３に関する。

【0061】

第１５の実施態様では、本開示は、第１の用量が、約３００ｍｇ〜約６００ｍｇであり、第２の用量が、約３００ｍｇ、約４５０、または約６００ｍｇである、実施態様１４による使用のためのＣＦＺ５３３に関する。

【0062】

第１６の実施態様では、本開示は、負荷投薬が、第１の用量の１、２、３、または４回の静脈内投与からなり、維持投薬が、第２の用量の毎週の皮下注射からなる、実施態様１５による使用のためのＣＦＺ５３３に関する。

【0063】

第１７の実施態様では、本開示は、第１の用量が、約１０ｍｇ／ｋｇであり、第２の用量が、約３００ｍｇ、約４５０、または約６００ｍｇの活性成分である、実施態様１６による使用のためのＣＦＺ５３３に関する。

【0064】

第１８の実施態様では、本開示は、患者が治療有効量のＣＦＺ５３３で治療される、実質臓器移植患者における長期の移植片生着を確実にする方法に関する。

【0065】

第１９の実施態様では、本開示は、患者が治療有効量のＣＦＺ５３３で治療される、実質臓器移植患者における移植片機能損失の長期の予防の方法に関する。

【0066】

第２０の実施態様では、本開示は、ＣＦＺ５３３治療が移植後に行われ、かつ抗体が、抗体の血漿または血清中濃度が少なくとも４０μｇ／ｍＬであるように投与される、実施態様１８および１９による方法に関する。

【0067】

第２１の実施態様では、本開示は、抗体が、ヒト対象のキログラムあたり約３ｍｇ〜約３０ｍｇの活性成分の用量として投与される、実施態様２０による方法に関する。

【0068】

第２２の実施態様では、本開示は、その用量が、ヒト対象のキログラムあたり約１０ｍｇの活性成分である、第２１の実施態様による方法に関する。

【0069】

第２３の実施態様では、本開示は、抗体が、約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇの活性成分の用量として投与される、第２２の実施態様による方法に関する。

【0070】

第２４の実施態様では、本開示は、その用量が、約３００ｍｇ、約４５０ｍｇ、または約６００ｍｇの活性成分である、第２３の実施態様による方法に関する。

【0071】

第２５の実施態様では、本開示は、抗体が、負荷投薬および維持投薬で投与される、第２４の実施態様による方法に関する。

【0072】

第２６の実施態様では、本開示は、負荷投薬が、第１の用量の１、２、３、または４回の毎週の皮下注射からなり、維持投薬が、第２の用量の毎週または隔週の皮下注射からなり、ここでは、第１の用量が、第２の用量よりも高い、第２５の実施態様による方法に関する。

【0073】

第２７の実施態様では、本開示は、第１の用量が、約３００ｍｇ〜約６００ｍｇであり、第２の用量が、約３００ｍｇ、約４５０、または約６００ｍｇである、第２６の実施態様による方法に関する。

【0074】

第２８の実施態様では、本開示は、負荷投薬が、第１の用量の１、２、３、または４回の静脈内投与からなり、維持投薬が、第２の用量の毎週の皮下注射からなる、第２６の実施態様による方法に関する。

【0075】

第２９の実施態様では、本開示は、第１の用量が、約１０ｍｇ／ｋｇであり、第２の用量が、約３００ｍｇ、約４５０、または約６００ｍｇである、第２８の実施態様による方法に関する。

【0076】

第３０の実施態様では、本開示は、実質臓器移植が、腎移植、肝移植、心臓移植、肺移植、膵移植、腸移植、または複合組織移植である、実施態様４〜１７による使用のためのＣＦＺ５３３、または実施態様１８〜２９による方法に関する。

【図面の簡単な説明】

【0077】

【図1】比較研究の第１のおよび第２のコホートの研究デザインの模式図である。

【図2】比較研究の第３のコホートの研究デザインの模式図である。

【図3】研究を開始する前の予備的なシミュレートした薬物動態プロフィールを示すグラフである。

【図4】静脈内投与の後の薬物動態プロフィールを示すグラフである。

【図5】ｒＣＤ１５４誘導性の経路活性化のＣＦＺ５３３阻害を示すグラフである。

【図6】インビトロでのＣＦＺ５３３最小刺激活性を示すグラフである。

【図7】ＣＦＺ５３３が細胞枯渇を媒介しないことを示すグラフである。

【図8】個々のＲＩ−１ Ｂ細胞の代表的な画像である。

【図9】非ヒト霊長類におけるＣＦＺ５３３の薬物動態特性を示すグラフである。

【図10】図１０Ａは、実験設計模式図である。図１０Ｂは、抗ＫＬＨ ＩｇＧおよび血漿ＣＦＺ５３３濃度を示すグラフである。図１０Ｃは、組織学的分析の結果を示す。

【図11】実際のＣＦＺ５３３血漿中濃度と共にプロットされた、新規腎移植患者におけるおよび維持腎移植患者における、ＣＦＺ５３３についての予測される血漿中濃度−時間プロフィールを表している。

【図12】研究デザインの模式的全体像である。

【図13A】図１３：研究デザインの模式的提示である。図１３Ａは、パート１の設計を示し、図１３Ｂは、パート２の設計を示す。

【図13B】（上記の通り。）

【図14】研究を開始する前の、シミュレートした薬物動態プロフィールを示すグラフである。

【図15】非ヒト霊長類（ＮＨＰ）腎移植研究において得られたＢａｎｆｆスコアを示す。ＮＨＰは、移植後に、ＣｓＡ（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓａｎｄｉｍｍｕｎ Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＣＦＺ５３３、およびＣＦＺ５３３とＣｓＡとの組み合わせで治療した。Ｂａｎｆｆスコアの合計を示す。

【図16】ＣＦＺ５３３で最大２５か月間継続的に治療された５人の患者から、また、タクロリムスで同じ期間治療された７人の患者から得られた生検データを示す（ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０１、本明細書には開示しない）。移植片の質を、慢性同種移植片損傷指数（Ｃｈｒｏｎｉｃ Ａｌｌｏｇｒａｐｈ Ｄａｍａｇｅ Ｉｎｄｅｘ）（ＣＡＤＩ）（Ｉｓｏｎｉｅｍｉ ｅｔ ａｌ．１９９２ ａｎｄ １９９４）を使用して推定した。ここでは、≦１のスコアは、正常な腎臓組織像を反映し、より高いスコアは、長期転帰の不良と相関する（Ｈａｙｒｙ ｅｔ ａｌ． ２００４，Ｙｉｌｍａｚ ｅｔ ａｌ． ２００７，Ｙｉｌｍａｚ ｅｔ ａｌ． ２００３）。元のままの腎臓組織像は、イスカリマブ（ｉｓｃａｌｉｍａｂ）（６０％）では５人の患者のうちの３人において見られ、タクロリムス（０％）で治療された７人にはいずれにも見られなかった。平均ＣＡＤＩは、タクロリムス（ｎ＝７）の５．１４±０．８０に対して、ＣＦＺ５３３（ｎ＝５）については１．６０±０．６０であった（平均±ＳＥＭ、スチューデントｔを使用してｐ＜０．０１）。

【図17】Ｙｉｌｍａｚ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．２００３（Ｐｒｏｔｏｃｏｌ ｃｏｒｅ ｎｅｅｄｌｅ ｂｉｏｐｓｙ ａｎｄ ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ａｌｌｏｇｒａｆｔ Ｄａｍａｇｅ Ｉｎｄｅｘ （ＣＡＤＩ） ａｓ ｓｕｒｒｏｇａｔｅ ｅｎｄ ｐｏｉｎｔ ｆｏｒ ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ ｇｒａｆｔ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ ｓｔｕｄｉｅｓ．Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ，１４（３），ｐｐ．７７３−９）から得られ、低ＣＡＤＩスコアと移植後の移植片生着／機能損失との関連を図示する。

【発明を実施するための形態】

【0078】

開示の詳細な説明
ＣＤ４０−ＣＤ１５４（ＣＤ１５４はＣＤ４０Ｌである）経路は、実質臓器移植における移植片の生着において重要な役割を果たすと考えられている。

【0079】

したがって、ＡＤＣＣ活性が抑制された抗ＣＤ４０抗体などの、ＣＤ４０−ＣＤ１５４シグナル伝達を遮断する能力があるあらゆる抗ＣＤ４０モノクローナル抗体は、実質臓器移植における移植片機能損失の予防に適している可能性がある。

【0080】

理論に拘泥されることは望まないが、本発明者らは、少なくとも約４０μｇ／ｍＬに維持された血漿中濃度のＣＦＺ５３３抗体が、実質臓器移植患者における標的組織におけるＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ経路を遮断するのに必要であることを明らかにした。したがって、罹患した組織においてＣＤ４０発現が亢進されるであろう状況（状態の重症度、免疫系移植後の活性化）において、治療期間全体を通して、少なくとも４０μｇ／ｍＬ、最大４００μｇ／ｍＬの維持された血漿中濃度を提供する投薬レジメンが、治療効果について考慮される。定常状態での観察される最大血漿中濃度は、約４００μｇ／ｍｌであり、感染症のリスク増大を示唆する重大なシグナルは存在せず概ね安全かつ良好な耐容性を示した。血栓塞栓症は観察されなかった。

【0081】

適切な投薬量は、例えば、個々のＣＤ４０経路アンタゴニスト、例えば、用いられることとなる抗ＣＤ４０抗体若しくはその抗原結合断片（例えば、ｍＡｂ１（本明細書ではＣＦＺ５３３とも呼ばれる）、ｍＡｂ２、ＡＳＫＰ１２４０）または抗ＣＤ４０Ｌ抗体（例えばＢＩＩＢ０６３）若しくはその抗原結合断片、治療の対象、投与様式、および治療される状態の性質および重症度に応じて、また、患者が受けてきた前治療の性質に応じて変わることとなる。最終的に、担当する医療提供者が、それぞれ個々の患者を治療するＣＤ４０経路アンタゴニストの量を決定することとなる。いくつかの実施態様では、担当する医療提供者は、低用量のＣＤ４０経路アンタゴニストを投与し、患者の反応を観察することができる。他の実施態様では、患者に投与されるＣＤ４０経路アンタゴニストの初回用量は高く、その後、再発の徴候が生じるまで下向きに用量調整される。患者にとって最適な治療効果が得られるまで、より大きい用量のＣＤ４０経路アンタゴニストを投与することができ、この投薬量は、一般に、それ以上増大させない。

【0082】

本開示の治療の方法または使用のいくつかを実施する際には、治療有効量のＣＤ４０経路アンタゴニスト、例えば抗ＣＤ４０抗体若しくはその抗原結合断片（例えば、ｍＡｂ１（本明細書ではＣＦＺ５３３とも呼ばれる）、ｍＡｂ２、ＡＳＫＰ１２４０）または抗ＣＤ４０Ｌ抗体若しくはその抗原結合断片が、患者、例えば哺乳類（例えばヒト）に投与される。開示する方法が、ＣＤ４０経路アンタゴニスト（例えば、ｍＡｂ１／ＣＦＺ５３３、ｍＡｂ２、ＡＳＫＰ１２４０）を使用して、実質臓器移植患者における移植片機能損失の予防を提供することが理解されるが、これは、患者が最終的にＣＤ４０経路アンタゴニストで治療されることとなるならば、こうしたＣＤ４０経路アンタゴニスト療法が必然的に単剤療法であることを排除しない。実際、患者が、ＣＤ４０経路アンタゴニストでの治療について選択されるならば、ＣＤ４０経路アンタゴニスト（例えば、ｍＡｂ１／ＣＦＺ５３３、ｍＡｂ２、ＡＳＫＰ１２４０）は、本開示の方法に従って、単独で、または他の薬剤および治療法と組み合わせて投与することができる。

【0083】

一実施態様では、本開示は、ｍＡｂ１／ＣＦＺ５３３、ｍＡｂ２、またはＡＳＫＰ１２４０を、次の薬剤のうちの２種以上と組み合わせて使用する、実質臓器移植患者における移植片機能損失の予防のための方法を提供する：シクロスポリン（ＣｓＡ、Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）若しくはタクロリムス（Ｔａｃ、ＦＫ５０６、Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標）、Ａｓｔｅｌｌａｓ）などのカルシニューリン阻害剤（ＣＮＩ）、ミコフェノール酸（ＭＰＡ；Ｍｙｆｏｒｔｉｃ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）若しくはミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ；ＣｅｌｌＣｅｐｔ（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ）などのリンパ球増殖抑制剤、またはエベロリムス（Ｚｏｒｔｒｅｓｓ（登録商標）、Ｃｅｒｔｉｃａｎ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）若しくはシロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）などの増殖シグナル阻害剤、またはベラタセプト（Ｎｕｌｏｊｉｘ（登録商標）、ＢＭＳ）などのＴ細胞共刺激遮断薬。

【0084】

別の実施態様では、本開示は、ｍＡｂ１／ＣＦＺ５３３、ｍＡｂ２、またはＡＳＫＰ１２４０を、カルシニューリンを使用しない治療レジメンにおいて、ベラタセプト（Ｎｕｌｏｊｉｘ（登録商標）、ＢＭＳ）などのＴ細胞共刺激遮断薬と組み合わせて使用する、実質臓器移植患者における移植片機能損失の予防のための方法を提供する。

【0085】

追加の実施態様では、本開示は、ｍＡｂ１／ＣＦＺ５３３、ｍＡｂ２、またはＡＳＫＰ１２４０を、ＣｓＡ、（Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、タクロリムス（Ｔａｃ、ＦＫ５０６、Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標）、Ａｓｔｅｌｌａｓ）、および／またはｍＴｏｒ阻害剤（エベロリムス（Ｚｏｒｔｒｅｓｓ（登録商標）、Ｃｅｒｔｉｃａｎ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）など）と組み合わせて使用する、実質臓器移植患者における移植片機能損失の予防のための方法を提供する。

【0086】

一実施態様では、本開示は、ｍＡｂ１／ＣＦＺ５３３、ｍＡｂ２、またはＡＳＫＰ１２４０を使用する（ここでは、ｍＡｂ１／ＣＦＺ５３３、ｍＡｂ２、またはＡＳＫＰ１２４０が、唯一の医薬品有効成分として投与される）、実質臓器移植患者における移植片機能損失の単剤療法による予防のための方法を提供する。ある種の実質臓器移植患者、例えば、用いられることとなるＣＤ４０経路アンタゴニスト、例えば抗ＣＤ４０抗体若しくはその抗原結合断片（例えば、ｍＡｂ１（本明細書ではＣＦＺ５３３とも呼ばれる）、ｍＡｂ２、ＡＳＫＰ１２４０）または抗ＣＤ４０Ｌ抗体若しくはその抗原結合断片での治療に対して不十分な反応を呈する患者にとっては、レジメン変更が適切であり得ることが理解されよう。したがって、投与（例えばｍＡｂ１／ＣＦＺ５３３またはｍＡｂ２）は、毎月の投薬よりも高頻度、例えば、隔月投薬（２週に１回）、毎週の投薬であり得る。

【0087】

患者は、静脈内または皮下への負荷レジメン（例えば、数週間毎週［例えば、１〜５週、例えば、０、１、２、３および／または４週での投薬］、または数週間隔週（例えば、２〜８週、例えば、０、２、４、および／または６週での投薬）、それに続く維持レジメン、例えば毎週、隔週、または毎月の維持レジメンから恩恵を受ける可能性が高い。

【0088】

例えば、ｍＡｂ１／ＣＦＺ５３３またはｍＡｂ２にとって適切なレジメンは、毎日、２日に１回、３日に１回、４日に１回、５日に１回、６日に１回、または数週間毎週［例えば、１〜５週、例えば、０、１、２、３および／または４週での投薬］、それに続く毎月の維持レジメンであり得る。

【0089】

別の例では、ｍＡｂ１／ＣＦＺ５３３またはｍＡｂ２にとって適切なレジメンは、数週間毎週または隔週［例えば、２〜８週、例えば、０、２、４、および／または６週での投薬］、それに続く毎週、隔週、または毎月の維持レジメンである。

【0090】

投与（例えばｍＡｂ１／ＣＦＺ５３３またはｍＡｂ２について）は、毎月の投薬よりも低頻度、例えば、６週おき、８週おき（２か月おき）、年４回（３か月おき）の投薬などであり得ることも理解されよう。

【0091】

ある種の実質臓器移植患者、例えば、用いられることとなるＣＤ４０経路アンタゴニスト、例えば抗ＣＤ４０抗体若しくはその抗原結合断片（例えば、ｍＡｂ１（本明細書ではＣＦＺ５３３とも呼ばれる）、ｍＡｂ２、ＡＳＫＰ１２４０）または抗ＣＤ４０Ｌ抗体若しくはその抗原結合断片での治療に対して不十分な反応を呈する患者にとっては、疾患の重症度に基づいて、用量漸増が適切であり得ることが理解されよう。したがって、皮下（ＳＣ）投薬量は、約１５０ｍｇ〜約９００ｍｇ（ＳＣ）、例えば、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１７５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇなどよりも大きい可能性があり；同様に、静脈内（ＩＶ）投薬量は、約１０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇなどよりも大きい可能性がある。ある種の実質臓器移植患者、例えば、ＣＤ４０経路アンタゴニスト、例えば抗ＣＤ４０抗体若しくはその抗原結合断片（例えば、ｍＡｂ１（本明細書ではＣＦＺ５３３とも呼ばれる）、ｍＡｂ２、ＡＳＫＰ１２４０）または抗ＣＤ４０Ｌ抗体若しくはその抗原結合断片での治療に対する有害事象または有害反応を呈する患者にとっては、用量低下が適切である可能性もあることも理解されよう。したがって、ＣＤ４０経路アンタゴニスト（例えば抗ＣＤ４０抗体若しくはその抗原結合断片（例えば、ｍＡｂ１（本明細書ではＣＦＺ５３３とも呼ばれる）、ｍＡｂ２、ＡＳＫＰ１２４０）または抗ＣＤ４０Ｌ抗体若しくはその抗原結合断片）の投薬量は、約１５０ｍｇ〜約９００ｍｇ（ｓ．ｃ．）、例えば、約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１７５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇなどよりも小さい可能性がある。

【0092】

いくつかの実施態様では、ＣＤ４０アンタゴニスト、例えば抗ＣＤ４０抗体若しくはその抗原結合断片（例えば、ｍＡｂ１（本明細書ではＣＦＺ５３３とも呼ばれる）、ｍＡｂ２、ＡＳＫＰ１２４０）または抗ＣＤ４０Ｌ抗体若しくはその抗原結合断片は、最大３０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）または６００ｍｇ（ＳＣ）の初回用量で、複数回（毎週、隔週）、患者に投与することができ、この用量はその後、医師によって決定される通りに、必要に応じて、毎週または隔週ＳＣ送達される１５０ｍｇまたは３００ｍｇまたは４５０ｍｇに調整することができる。

【0093】

いくつかの実施態様では、ＣＤ４０アンタゴニスト、例えば抗ＣＤ４０抗体若しくはその抗原結合断片（例えば、ｍＡｂ１（本明細書ではＣＦＺ５３３とも呼ばれる）、ｍＡｂ２、ＡＳＫＰ１２４０）または抗ＣＤ４０Ｌ抗体若しくはその抗原結合断片は、ｉ．ｖ．送達される１０ｍｇ／ｋｇの初回用量で患者に投与することができ、この用量はその後、医師によって決定される通りに、必要に応じて、ｓ．ｃ．送達される１５０ｍｇまたは３００ｍｇまたは４５０ｍｇに調整することができる

【0094】

具体的実施態様では、第１日（Ｄ１）、第１５日（Ｄ１５）、第２９日（Ｄ２９）、第５７日（Ｄ５７）、第８５日（Ｄ８５）、第９９日（Ｄ９９）、第１１３日（Ｄ１１３）、および第１１４日（Ｄ１４１）に、３ｍｇ／ｋｇ ＣＦＺ５３３がｓ．ｃ．投与される。

【0095】

別の具体的実施態様では、Ｄ１、Ｄ１５、Ｄ２９、Ｄ５７、Ｄ８５、Ｄ９９、Ｄ１１３、およびＤ１４１に、１０ｍｇ／ｋｇ ＣＦＺ５３３がｉ．ｖ．投与される。

【0096】

さらに別の具体的実施態様では、６００ｍｇ ＣＦＺ５３３の４つの単位用量を含む負荷用量が、週１回（Ｑ１Ｗ）、ｓ．ｃ．投与され（すなわちＤ１、Ｄ８、Ｄ１５、およびＤ２２での６００ｍｇ ＣＦＺ５３３（ｓ．ｃ．））、それに続いて、３００ｍｇの単位用量を含む維持用量が、週１回（Ｑ１Ｗ）、ｓ．ｃ．投与される（すなわちＤ２９からＤ８５までの週１回の３００ｍｇ ＣＦＺ５３３（ｓ．ｃ．））。

【0097】

さらなる具体的実施態様では、対象１ｋｇあたり少なくとも１０ｍｇかつ最大３０ｍｇのＣＦＺ５３３の単回用量を含む負荷用量が、第１日に１回、および移植後１週で場合によっては再びＩＶ投与され、それに続いて、少なくとも３００ｍｇの単位用量を含む維持用量が、毎週（Ｑ１Ｗ）または隔週（Ｑ２Ｗ）、ＳＣ投与される（すなわちＤ８からＤ８５までの週１回の３００ｍｇ ＣＦＺ５３３（ｓ．ｃ．））。

【0098】

ＣＦＺ５３３は、年４回、毎月、毎週、または隔週、例えば、約７５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約４５０ｍｇ、または約６００ｍｇの単位用量で、皮下注射によって、約７５ｍｇ〜約６００ｍｇまたは約１５０ｍｇ〜約３００ｍｇが投与される投薬で、皮下に投与することができる。

【0099】

ＣＦＺ５３３は、約３００ｍｇ〜約６００ｍｇ、好ましくは約６００ｍｇの負荷用量で、毎週、皮下注射によって投与することができ、ここでは、負荷用量は、１〜４週の間、好ましくは４週の間投与される。

【0100】

負荷用量はまた、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇのｉ．ｖ．投与であり得る。

【0101】

負荷用量のＣＦＺ５３３に、毎週、隔週、または毎月投与される維持用量が続くことが好ましい。維持用量は、週１回、３００ｍｇ（ｓ．ｃ．）であることが好ましい。

【0102】

抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合断片は、ＣＦＺ５３３、その機能性誘導体、またはそのバイオ後続品であり得る。

【0103】

本明細書で定義される場合、「単位用量」は、約７５ｍｇ〜９００ｍｇ、例えば約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇ、例えば約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇ、例えば約３００ｍｇ〜約６００ｍｇ、または例えば約１５０ｍｇ〜約３００ｍｇから構成され得るｓ．ｃ．用量を指す。例えば、単位ｓ．ｃ．用量は、約７５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５５０ｍｇ、約６００ｍｇである。

【0104】

定義
本明細書で使用する場合、ＣＤ４０は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー５とも呼ばれる、表面抗原分類４０を指す。用語ＣＤ４０は、別段の記述がない限り、配列番号１９において定義される通りのヒトＣＤ４０を指す。

【0105】

数値ｘに関する用語「約」は、例えば＋／−１０％を意味する。数値範囲または数の列挙の前に使用される場合、用語「約」は、系列内のそれぞれの数に適用される。例えば、表現「約１〜５」は、「約１〜約５」と解釈されるべきである。または、例えば、表現「約１、２、３、４」は、「約１、約２、約３、約４など」と解釈されるべきである。

【0106】

単語「実質的に」は、「完全に」を排除しない。例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを「完全に含まない」可能性がある。必要に応じて、単語「実質的に」は、本開示の定義から省くことができる。

【0107】

用語「を含むこと」は、「が含まれること」ならびに「からなること」を包含し、例えば、Ｘ「を含む」組成物は、もっぱらＸのみからなる可能性もあるし、何か追加のものが含まれる（例えば、Ｘ＋Ｙ）可能性もある。

【0108】

ＡＵＣ０−ｔは、時間０から時間「ｔ」（ここでは、ｔは、投与後の定義された時点である）までの血漿中濃度−時間曲線下面積を示す［質量×時間／体積］。

【0109】

ＡＵＣｔｘ−ｔｙは、時間「ｘ」から時間「ｙ」（ここでは、「時間ｘ」および「時間ｙ」は、投与後の定義された時点である）までの血漿中濃度−時間曲線下面積を表す。

【0110】

Ｃ_ｍａｘは、薬物投与後に観察される最大血漿中濃度である［質量／体積］。

【0111】

Ｃ_ｍｉｎは、薬物投与後に観察される最小血漿中濃度である。

【0112】

Ｃ_トラフは、投薬期間の開始の直前に、または投薬間隔の最後に観察される血漿中濃度である。

【0113】

Ｔ_ｍａｘは、薬物投与後に最大濃度に到達するまでの時間である［時間］。

【0114】

ｓｓ（下付き文字）は、パラメータが定常状態で定義されることを示す。

【0115】

「血漿中濃度」は、患者の血液の血漿中濃度である。

【0116】

本明細書で使用する場合の用語「抗体」または「抗ＣＤ４０抗体」などは、ＣＤ４０と（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布によって）相互作用する抗体全体を指す。天然起源の「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互連結された少なくとも２本の重（Ｈ）鎖と２本の軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略される）および重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略される）および軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬからなる。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される、より保存される領域と共に散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される高頻度可変性の領域に、さらに細分化することができる。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端まで次の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配列される、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなる。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１成分（Ｃｌｑ）を含めた宿主組織または因子への、免疫グロブリンの結合を媒介することができる。用語「抗体」には、例えば、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ抗体、またはキメラ抗体が含まれる。抗体は、あらゆるアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）、またはサブクラスのもの、好ましくはＩｇＧ、最も好ましくはＩｇＧ１であり得る。例示的な抗体としては、表１に記述した通り、ＣＦＺ５３３（本明細書ではｍＡｂ１とも呼ばれる）およびｍＡｂ２が挙げられる。

【0117】

軽鎖と重鎖は両方とも、構造的および機能的相同性の領域に分けられる。用語「定常」および「可変」は、機能に関して使用される。この点に関しては、軽（ＶＬ）鎖部分と重（ＶＨ）鎖部分の両方の可変ドメインが、抗原認識および特異性を決定するということを理解されたい。逆に、軽鎖（ＣＬ）および重鎖（ＣＨ１、ＣＨ２、またはＣＨ３）の定常ドメインは、分泌、経胎盤移動性、Ｆｃ受容体結合、補体結合などの重要な生物学的性質を与える。慣例によって、定常領域ドメインの付番は、抗体の抗原結合部位またはアミノ末端から遠位になるにつれて増加する。Ｎ末端は、可変領域であり、Ｃ末端は、定常領域であり；ＣＨ３およびＣＬドメインは、それぞれ、重鎖および軽鎖のカルボキシ末端を事実上含む。具体的には、用語「抗体」には、特に、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ型が含まれる。

【0118】

抗体の用語「抗原結合部分」（または単に「抗原部分」）は、本明細書で使用する場合、抗原またはエピトープと特異的に結合する能力を保持するタンパク質などの、抗体の全長または１つまたは複数の断片（例えば、ＣＤ４０の一部）を指す。

【0119】

「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（“Ｋａｂａｔ”ナンバリングスキーム）、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）ＪＭＢ ２７３，９２７−９４８（“Ｃｈｏｔｈｉａ”ナンバリングスキーム）およびＩｍＭｕｎｏＧｅｎＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）ナンバリング（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．，Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ，７，１３２−１３６（１９９９）；Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７，５５−７７（２００３）（“ＩＭＧＴ”ナンバリングスキーム）によって記載されているものを含めた、いくつかの周知のスキームのいずれかを使用して決定される境界を伴うアミノ酸配列である。ＩＭＧＴでは、抗体のＣＤＲ領域は、ＩＭＧＴ／ＤｏｍａｉｎＧａｐ Ａｌｉｇｎプログラムを使用して決定することができる。

【0120】

本明細書で使用する場合の用語「エピトープ」は、免疫グロブリンに高い親和性で結合する能力があるあらゆる決定基を指す。エピトープは、その抗原を特異的に標的にする抗体によって結合される抗原の領域であり、抗原がタンパク質である場合、抗体と直接的に接触する特異的なアミノ酸が含まれる。エピトープは、タンパク質上に存在することが最も多いが、核酸などの他の種類の分子上に存在する場合もあり得る。エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、またはスルホニル基などの分子の、化学的に活性な表面集団（ｇｒｏｕｐｉｎｇ）を含むことができ、特異的な三次元構造特性および／または特異的な電荷特性を有することができる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは、別の遺伝子によってコードされるが、これらが単一のタンパク質鎖（ここでは、ＶＬ領域とＶＨ領域が対合して、一価の分子を形成する）としてふるまうことを可能にする合成のリンカーによって、組換え方法を使用して、これらを連結することができる（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知；例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：５８７９−５８８３を参照のこと）。

【0121】

表現「単離された抗体」は、本明細書で使用する場合、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す（例えば、ＣＤ４０と特異的に結合する単離された抗体は、ＣＤ４０以外の抗原と特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかし、ＣＤ４０と特異的に結合する単離された抗体は、他の種由来のＣＤ４０分子などの他の抗原との交差反応性を有することができる。さらに、単離された抗体は、他の細胞材料および／または化学物質を実質的に含まない可能性がある。本明細書で使用する場合の用語「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」は、単一分子組成の抗体分子の調製を指す。用語「ヒト抗体」には、本明細書で使用する場合、フレームワークもＣＤＲ領域もヒト起源の配列に由来する可変領域を有する抗体が含まれることが意図される。「ヒト抗体」は、ヒト、ヒト組織、またはヒト細胞によって産生される必要はない。本開示のヒト抗体は、ヒト配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダムまたは部位特異的変異誘発によって、抗体遺伝子の組換え中のインビボでのジャンクションでのＮ−ヌクレオチド付加によって、またはインビボでの体細胞変異によって導入される変異）を含むことができる。

【0122】

天然のポリペプチドおよびその機能性誘導体に関する「同一性」は、本明細書では、最大の同一性（％）を得るために、必要であれば、配列を整列し、ギャップを導入した後の、対応する天然のポリペプチドの残基と同一である候補配列内のアミノ酸残基の割合と定義され、いかなる保存的置換も配列同一性の一部とはみなされない。Ｎ−またはＣ−末端伸長部も挿入も、同一性を低下させると解釈されないものとする。アラインメントのための方法およびコンピュータプログラムは、周知である。同一性（％）は、標準のアラインメントアルゴリズム、例えば、Ａｌｔｓｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３ ４１０）によって記載されているＢａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）；Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．（（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４８：４４４ ４５３）のアルゴリズム；またはＭｅｙｅｒｓ ｅｔ ａｌ．（（１９８８）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，４：１１ １７）のアルゴリズムによって決定することができる。一連のパラメータは、１２というギャップペナルティ、４というギャップ伸長ペナルティ、および５というフレームシフトギャップペナルティを伴うＢｌｏｓｕｍ ６２スコア行列であり得る。２つのアミノ酸またはヌクレオチド配列間の同一性（％）は、ＰＡＭ１２０重み（ｗｅｉｇｈｔ）剰余テーブル、１２というギャップ長ペナルティ、および４というギャップペナルティを使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０）に組み込まれているＥ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ，４：１１−１７）のアルゴリズムを使用して決定することもできる。

【0123】

「アミノ酸」は、例えば、すべての天然に存在するＬ−α−アミノ酸を指し、Ｄ−アミノ酸が含まれる。表現「アミノ酸配列変異体」は、本開示による配列と比較するとそのアミノ酸配列がいくらか違う分子を指す。例えば特定の配列の、本開示による抗体のアミノ酸配列変異体は、ヒトＣＤ４０と結合する能力を依然として有するままである。アミノ酸配列変異体には、置換変異体（本開示によるポリペプチド内の少なくとも１つのアミノ酸残基が除去され、その代わりに同じ位置に別のアミノ酸が挿入されたもの）、挿入変異体（本開示によるポリペプチド内の特定の位置のアミノ酸のすぐ隣に１つまたは複数のアミノ酸が挿入されたもの）、および欠失変異体（本開示によるポリペプチド内の１つまたは複数のアミノ酸が除去されたもの）が含まれる。

【0124】

本明細書で使用する場合の用語「Ｆｃ領域」は、抗体の定常ドメインのＣＨ３、ＣＨ２、およびヒンジ領域の少なくとも一部分を含むポリペプチドを指す。場合によっては、Ｆｃ領域には、いくつかの抗体クラスに存在するＣＨ４ドメインが含まれる可能性がある。Ｆｃ領域は、抗体の定常ドメインのヒンジ領域全体を含むことができる。一実施態様では、本発明は、抗体のＦｃ領域およびＣＨ１領域を含む。一実施態様では、本発明は、抗体のＦｃ領域のＣＨ３領域を含む。別の実施態様では、本発明は、抗体の定常ドメイン由来のＦｃ領域、ＣＨ１領域、およびＣ_κ／λ領域を含む。一実施態様では、本発明の結合分子は、定常領域、例えば、重鎖定常領域を含む。一実施態様では、こうした定常領域は、野生型の定常領域と比較して改変される。すなわち、本明細書で開示される本発明のポリペプチドは、３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、またはＣＨ３）の１つまたは複数に対する、および／または軽鎖定常領域ドメイン（ＣＬ）に対する変更または改変を含むことができる。改変の例としては、１つまたは複数のドメイン内の１つまたは複数のアミノ酸の付加、欠失、または置換が含まれる。こうした変更は、エフェクター機能、半減期などを最適化するために含めることができる。

【0125】

本明細書で使用する場合、用語「親和性」は、単一の抗原部位での抗体と抗原との間の相互作用の強さを指す。各抗原部位内では、抗体「アーム」の可変領域は、多数の部位で、弱い非共有結合性の力を通じて、抗原と相互作用する；相互作用が多いほど、親和性が強くなる。本明細書で使用する場合、ＩｇＧ抗体またはその断片（例えばＦａｂ断片）に関する用語「高親和性」は、標的抗原に対する１０^−８Ｍ以下、１０^−９Ｍ以下、または１０^−１０Ｍ、または１０^−１１Ｍ以下、または１０^−１２Ｍ以下、または１０^−１３Ｍ以下のＫ_Ｄを有する抗体を指す。しかし、高親和性結合は、他の抗体アイソタイプについては異なる可能性がある。例えば、ＩｇＭアイソタイプについての高親和性結合は、１０^−７Ｍ以下、または１０^−８Ｍ以下のＫ_Ｄを有する抗体を指す。

【0126】

本明細書で使用する場合、ＣＤ４０ポリペプチドと特異的に結合する抗体またはタンパク質は、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下のＫＤでヒトＣＤ４０ポリペプチドと結合する抗体またはタンパク質を指すことが意図される。

【0127】

「ＣＤ４０以外の抗原と交差反応する」抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下のＫ_Ｄで抗原と結合する抗体を指すことが意図される。「特定の抗原と交差反応しない」抗体は、１００ｎＭ以上のＫ_Ｄ、または１μＭ以上のＫＤ、または１０μＭ以上のＫ_Ｄで抗原と結合する抗体を指すことが意図される。ある種の実施態様では、抗原と交差反応しないこうした抗体は、標準の結合アッセイにおいて、これらのタンパク質に対する本質的に検出不可能な結合を呈する。

【0128】

用語「Ｋ_{ａｓｓｏｃ}」または「Ｋ_ａ」は、本明細書で使用する場合、ある特定の抗体−抗原相互作用の会合速度を指すことが意図されるのに対して、用語「Ｋ_ｄｉｓ」または「Ｋ_ｄ」は、本明細書で使用する場合、ある特定の抗体−抗原相互作用の解離速度を指すことが意図される。

【0129】

用語「Ｋ_Ｄ」は、本明細書で使用する場合、Ｋ_ａに対するＫ_ｄの比（すなわちＫ_ｄ／Ｋ_ａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される、解離定数を指すことが意図される。抗体についてのＫ_Ｄ値は、当技術分野で十分に確立された方法を使用して決定することができる。抗体のＫ_Ｄを決定するための方法は、表面プラズモン共鳴を使用する、またはＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを使用することによるものである。

【0130】

本明細書で使用する場合、用語「ＡＤＣＣ」または「抗体依存性細胞傷害」活性は、細胞枯渇活性を指す。ＡＤＣＣ活性は、当業者に周知のＡＤＣＣアッセイによって測定することができる。

【0131】

本明細書で使用する場合、用語「サイレント」抗体は、ＡＤＣＣアッセイにおいて測定された場合にＡＤＣＣ活性を呈さないまたは低いＡＤＣＣ活性を呈する抗体を指す。

【0132】

一実施態様では、用語「ＡＤＣＣ活性なしまたは低いＡＤＣＣ活性」は、サイレント抗体が、標準のＡＤＣＣアッセイにおいて測定された場合に５０％未満の特異的細胞溶解、例えば１０％未満の特異的細胞溶解であるＡＤＣＣ活性を呈することを意味する。「ＡＤＣＣ活性なし」は、サイレント抗体が、１％未満であるＡＤＣＣ活性（特異的細胞溶解）を呈することを意味する。

【0133】

エフェクター機能の抑制は、抗体のＦｃ領域内の変異によって得ることができ、当技術分野で記載されている：ＬＡＬＡおよびＮ２９７Ａ（Ｓｔｒｏｈｌ，Ｗ．，２００９，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．ｖｏｌ．２０（６）：６８５−６９１）；ならびにＤ２６５Ａ（Ｂａｕｄｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｊ．ｌｍｍｕｎｏｌ．１８１：６６６４−６９；Ｓｔｒｏｈｌ，Ｗ．，上記）。サイレントＦｃ ＩｇＧ１抗体の例は、ＩｇＧ１ Ｆｃアミノ酸配列内のＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ変異を含む、いわゆるＬＡＬＡ変異体を含む。サイレントＩｇＧ１抗体の別の例は、Ｄ２６５Ａ変異を含む。別のサイレントＩｇＧ１抗体は、Ｎ２９７Ａ変異を含み、これは、グリコシル化／非グリコシル化抗体をもたらす。

【0134】

用語「治療」または「治療する」は、本明細書では、本発明による抗ＣＤ４０抗体またはタンパク質、例えばｍＡｂ１またはｍＡｂ２抗体の、対象への適用または投与、または本発明の前記抗ＣＤ４０抗体またはタンパク質を含む医薬組成物の、対象由来の単離された組織若しくは細胞株への適用または投与（ここでは、対象は、自己免疫疾患および／または炎症性疾患、自己免疫疾患および／または炎症性疾患に随伴する症状、または自己免疫疾患および／または炎症性疾患の発症の素因を有し、その目的は、自己免疫疾患および／または炎症性疾患、自己免疫疾患および／または炎症性疾患のあらゆる随伴症状、または自己免疫疾患および／または炎症性疾患の発症の素因を軽減、回復、または改善することである）と定義される。

【0135】

「治療」はまた、本発明の抗ＣＤ４０抗体またはタンパク質、例えばｍＡｂ１またはｍＡｂ２抗体を含む医薬組成物の、対象への適用または投与、または本発明の前記抗ＣＤ４０抗体またはタンパク質を含む医薬組成物の、対象由来の単離された組織若しくは細胞株への適用または投与（ここでは、対象は、自己免疫疾患および／または炎症性疾患、自己免疫疾患および／または炎症性疾患に随伴する症状、または自己免疫疾患および／または炎症性疾患の発症の素因を有し、その目的は、自己免疫疾患および／または炎症性疾患、自己免疫疾患および／または炎症性疾患のあらゆる随伴症状、または自己免疫疾患および／または炎症性疾患の発症の素因を軽減、回復、または改善することである）を意図する。

【0136】

用語「予防する」または「予防すること」は、予防的または防止的処置を指し；疾患、障害、および／またはそれに随伴する症状の発症を遅らせること、またはこれらの発症を予防することに関する。

【0137】

本明細書で使用する場合、対象は、こうした対象が、こうした治療から、生物学的に、医学的に、または生活の質において恩恵を受けるならば、治療「を必要として」いる。

【0138】

用語「薬学的に許容し得る」は、活性成分の生物学的活性の有効性を邪魔しない非毒性の材料を意味する。

【0139】

本明細書で使用する場合、対象化合物の用語「投与」または「投与すること」は、治療を必要としている対象に対して本発明の化合物およびそのプロドラッグを提供することを意味する。１つまたは複数のさらなる治療薬「と組み合わせた」投与には、任意の順序での任意の投与経路での同時（並行）および連続的投与が含まれる。

【0140】

本明細書で使用する場合、「治療有効量」は、患者（ヒトなど）への単一用量または反復用量投与時に、障害または再発性の障害の症状を治療する、予防する、発症を予防する、治癒させる、遅らせる、重症度を低下させる、回復させる、または患者の生存をこうした治療が存在しない場合に予測される生存よりも延長させるのに有効である、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合断片、例えばｍＡｂ１の量を指す。単独で投与される個々の活性成分（例えば抗ＣＤ４０抗体、例えばｍＡｂ１）に適用される場合、この用語は、その成分単独を指す。組み合わせに適用される場合、この用語は、組み合わせで、連続的に、または同時に投与されるかにかかわらず、治療効果をもたらす活性成分の合わせた量を指す。

【0141】

表現「治療レジメン」は、病気を治療するために使用されるレジメン、例えば、実質臓器移植における移植片機能損失の予防中に使用される投薬プロトコルを意味する。治療レジメンには、導入レジメンおよび維持レジメンが含まれ得る。

【0142】

表現「導入レジメン」または「導入期間」は、疾患の初期治療のために使用される、治療レジメン（または治療レジメンの一部）を指す。いくつかの実施態様では、開示される方法、使用、キット、プロセス、およびレジメン（例えば、実質臓器移植における移植片機能損失を予防する方法）は、導入レジメンを用いる。いくつかの場合では、導入期間は、最大の有効性に到達するまでの期間である。導入レジメンの一般的目標は、治療レジメンの最初の期間中に、患者に対して高レベルの薬物を提供することである。導入レジメンは、医師が維持レジメン中に用いるであろうよりも多い用量の薬物を投与すること、または医師が維持レジメン中に投与するであろうよりも頻繁に薬物を投与すること、またはその両方を含むことができる「負荷レジメン」または「負荷投薬」を（部分的にまたは全体的に）用いることができる。用量漸増は、導入レジメン中または後に行うことができる。

【0143】

表現「維持レジメン」または「維持期間」は、病気の治療中の患者の維持のために、例えば、患者を導入期間後に長期間（数か月または数年）、寛解状態に維持するために使用される、治療レジメン（または治療レジメンの一部）を指す。いくつかの実施態様では、開示される方法、使用、およびレジメンは、維持レジメンを用いる。維持レジメンは、継続療法（例えば、例えば毎週、毎月［４週ごと］、毎年などの一定の間隔で薬物を投与すること）、または間欠療法（例えば、断続的治療、間欠治療、再発時の治療、または特定のあらかじめ定められた基準の到達［例えば、疼痛、疾患顕在化など］時の治療）を用いることができる。用量漸増は、維持レジメン中に行うことができる。

【0144】

表現「投与するための手段」は、限定はされないが、プレフィルドシリンジ、バイアルおよびシリンジ、ペン型注射器、自己注射器、点滴静注バッグ、ポンプ、パッチ式ポンプなどを含めた、患者に薬物を全身的に投与するためのあらゆる利用可能な道具を示すために使用される。こうしたものを用いて、患者が、薬物を自己投与する（すなわち、薬物を自分自身のために投与する）こともできるし、医師が、薬物を投与することもできる。

【0145】

移植患者における用語「移植片拒絶の長期の予防」、「移植片機能損失の長期の予防」、「長期の移植片生着」は、特に実質臓器移植患者では、移植された組織または臓器または移植片が、移植後少なくとも３年、または少なくとも４年、または少なくとも５年の期間の間、生存かつ機能する状況を指す。移植患者における用語「移植片拒絶の長期の予防」、「移植片機能損失の長期の予防」、「長期の移植片生着」は、特に実質臓器移植患者では、組織または臓器または移植片の移植が、患者の人生において１度しか必要とされない状況を指すこともできる。

本発明の様々な実施形態を以下に示す。
１．実質臓器移植における移植片拒絶の予防に使用するための抗ＣＤ４０抗体。
２．前記実質臓器移植が、腎移植、肝移植、心臓移植、肺移植、膵移植、腸移植、または複合組織移植である、上記１に記載の使用のための抗体。
３．前記抗体が、
ａ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｂ．配列番号１、配列番号２、および配列番号３として記述した高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５、および配列番号６として記述した高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｃ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｄ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体；および
ｅ．サイレントＦｃ ＩｇＧ１領域を含む抗ＣＤ４０抗体
からなる群から選択される、上記１または２に記載の使用のための抗体。
４．前記抗体が、配列番号９の重鎖アミノ酸配列および配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列；または配列番号１１の重鎖アミノ酸配列および配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含む、上記３に記載の使用のための抗体。
５．上記１〜４のいずれかに記載の使用のための治療有効量の抗体と、薬学的に許容し得る１種以上の担体とを含む医薬組成物。
６．投与経路が、皮下若しくは静脈内、または皮下若しくは静脈内の組み合わせである、上記１〜５のいずれかに記載の使用のための抗体。
７．用量が、抗体の血漿または血清中濃度が少なくとも４０μｇ／ｍＬであるように調整される、上記１〜６のいずれかに記載の使用のための抗体。
８．前記用量が、ヒト対象のキログラムあたり約３ｍｇ〜約３０ｍｇの活性成分である、上記１〜７のいずれかに記載の使用のための抗体。
９．前記用量が、ヒト対象のキログラムあたり約１０ｍｇの活性成分である、上記８に記載の使用のための抗体化合物。
１０．前記用量が、約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇの活性成分である、上記１〜７のいずれかに記載の使用のための抗体。
１１．前記用量が、約３００ｍｇ、約４５０ｍｇ、または約６００ｍｇの活性成分である、上記１０に記載の使用のための抗体化合物。
１２．前記抗体が、負荷投薬および維持投薬を通して投与される、上記１〜１１のいずれかに記載の使用のための抗体。
１３．前記負荷投薬が、第１の用量の１、２、３、または４回の毎週の皮下注射からなり、前記維持投薬が、第２の用量の毎週または隔週の皮下注射からなり、かつ、前記第１の用量が、前記第２の用量よりも高い、上記１２に記載の使用のための抗体。
１４．前記第１の用量が、約３００ｍｇ〜約６００ｍｇであり、前記第２の用量が、約３００ｍｇ、約４５０、または約６００ｍｇである、上記１３に記載の使用のための抗体。
１５．前記負荷投薬が、第１の用量の１、２、３、または４回の静脈内投与からなり、前記維持投薬が、第２の用量の毎週または隔週の皮下注射からなる、上記１２に記載の使用のための抗体。
１６．前記第１の用量が、約１０ｍｇ／ｋｇまたは約３０ｍｇ／ｋｇであり、前記第２の用量が、約３００ｍｇ、約４５０、または約６００ｍｇである、上記１５に記載の使用のための抗体。
１７．ヒト対象における実質臓器移植における移植片拒絶を予防する方法であって、治療有効用量の抗ＣＤ４０抗体を前記対象に投与することを含む方法。
１８．前記実質臓器移植が、腎移植、肝移植、心臓移植、肺移植、膵移植、腸移植、または複合組織移植である、上記１７に記載の方法。
１９．前記抗体が、
ａ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｂ．配列番号１、配列番号２、および配列番号３として記述した高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５、および配列番号６として記述した高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｃ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｄ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体；および
ｅ．サイレントＦｃ ＩｇＧ１領域を含む抗ＣＤ４０抗体
からなる群から選択される、上記１７または１８に記載の方法。
２０．前記抗体が、配列番号９の重鎖アミノ酸配列および配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列；または配列番号１１の重鎖アミノ酸配列および配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含む、上記１９に記載の治療の方法。
２１．前記抗体が、薬学的に許容し得る１種以上の担体と共に投与される、上記１７〜２０のいずれかに記載の方法。
２２．前記抗体が、皮下若しくは静脈内に、または皮下または静脈内の組み合わせで投与される、上記１７〜２１のいずれかに記載の方法。
２３．前記抗体が、抗体の血漿または血清中濃度が少なくとも４０μｇ／ｍＬであるように投与される、上記１７〜２２のいずれかに記載の方法。
２４．前記抗体が、ヒト対象のキログラムあたり約３ｍｇ〜約３０ｍｇの活性成分の用量として投与される、上記１７〜２３のいずれかに記載の方法。
２５．前記用量が、前記ヒト対象のキログラムあたり約１０ｍｇの活性成分である、上記２４に記載の方法。
２６．前記抗体が、約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇの活性成分の用量として投与される、上記１７〜２３のいずれかに記載の方法。
２７．前記用量が、約３００ｍｇ、約４５０ｍｇ、または約６００ｍｇの活性成分である、上記２６に記載の方法。
２８．前記抗体が、負荷投薬および維持投薬で投与される、上記１７〜２７のいずれかに記載の方法。
２９．前記負荷投薬が、第１の用量の１、２、３、または４回の毎週の皮下注射からなり、前記維持投薬が、第２の用量の毎週または隔週の皮下注射からなり、かつ、前記第１の用量が、前記第２の用量よりも高い、上記２８に記載の方法。
３０．前記第１の用量が、約３００ｍｇ〜約６００ｍｇであり、前記第２の用量が、約３００ｍｇ、約４５０、または約６００ｍｇである、上記２９に記載の方法。
３１．前記負荷投薬が、第１の用量の１、２、３、または４回の静脈内投与からなり、前記維持投薬が、第２の用量の毎週の皮下注射からなる、上記２８に記載の方法。
３２．前記第１の用量が、約１０ｍｇ／ｋｇであり、前記第２の用量が、約３００ｍｇ、約４５０、または約６００ｍｇである、上記３１に記載の方法。
３３．実質臓器移植における移植片拒絶の予防のための医薬品の製造のための、抗ＣＤ４０抗体を含む液体医薬組成物の使用であって、前記抗ＣＤ４０抗体は：
ａ．第１の負荷投薬で、静脈内または皮下に投与されることとなり；
ｂ．その後、第２の維持投薬で、静脈内または皮下に投与されることとなり、前記維持投薬は、前記負荷投薬とは異なり、かつ、前記抗ＣＤ４０抗体は、
ｉ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含むグロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｉｉ．配列番号１、配列番号２、および配列番号３として記述した高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５、および配列番号６として記述した高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｉｉｉ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｉｖ．配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｖ．サイレントＦｃ ＩｇＧ１領域を含む抗ＣＤ４０抗体；および
ｖｉ．配列番号９の重鎖アミノ酸配列および配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列；または配列番号１１の重鎖アミノ酸配列および配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含む抗ＣＤ４０抗体
からなる群から選択される使用。

【実施例】

【0146】

実施例１．抗ＣＤ４０抗体
ＣＤ４０は、Ｂ細胞、ならびに単球、マクロファージ、および樹状細胞（ＤＣ）などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）上に恒常的に発現される膜貫通型糖タンパク質である。ＣＤ４０は、血小板上でも発現され、特定の条件下では、好酸球および活性化された実質細胞上で発現される可能性がある。Ｂ細胞上のＣＤ４０のライゲーションは、Ｂ細胞生存の増進および重要なエフェクター機能（クローン性増殖、サイトカイン分泌、分化、胚中心形成、メモリーＢ細胞の発生、親和性成熟、免疫グロブリン（Ｉｇ）アイソタイプスイッチ、抗体産生、および抗原提示の延長が含まれる）をもたらす下流シグナル伝達をもたらす。抗原提示細胞（ＡＰＣ）のＣＤ１５４介在性の活性化はまた、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の交差提示および活性化の調節に関与する、サイトカイン分泌の導入および表面活性化分子（ＣＤ６９、ＣＤ５４、ＣＤ８０、およびＣＤ８６が含まれる）の発現をもたらす。

【0147】

ＣＤ１５４は、２つの形態；膜結合型および可溶型で存在する。膜結合型ＣＤ１５４は、活性化されたＣＤ４＋、ＣＤ８＋、およびＴ−リンパ球、マスト細胞、単球、好塩基球、好酸球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、活性化された血小板上に発現される膜貫通型糖タンパク質であり、また、Ｂ細胞上で報告されている。これはまた、血管内皮細胞上に低レベルで発現され、局所炎症中に上方調節される可能性がある。可溶型ＣＤ１５４（ｓＣＤ１５４）は、膜結合型ＣＤ１５４のタンパク質分解後に形成され、細胞活性化後にリンパ球および血小板からシェディングされる。いったんシェディングされると、ｓＣＤ１５４は、機能性のままであり、ＣＤ４０受容体と結合するその能力を保持する。

【0148】

インビボでのＣＤ４０／ＣＤ１５４相互作用の重要な役割は、ＣＤ４０またはそのリガンドの機能喪失型変異の結果として高免疫グロブリンＭ（ＨＩＧＭ）を患う患者によって最も良く説明される。ＨＩＧＭを有する患者は、Ｔ細胞依存性抗体反応の重度の障害、Ｂ細胞記憶の欠如、およびほとんどまたは全くない循環ＩｇＧ、ＩｇＡ、またはＩｇＥを示す。ＣＤ４０シグナル伝達の変異を有する患者において、同様の表現型および疾患発現が記載されている（ｖａｎ ＫｏｏｔｅｎおよびＢａｎｃｈｅｒｅａｕ ２０００）。

【0149】

ＡＤＣＣ活性が抑制された抗ＣＤ４０ ｍＡｂが、参照によって本明細書にその全体が組み込まれる米国特許第８８２８３９６号明細書および米国特許第９２２１９１３号明細書に開示されている。ＡＤＣＣ活性が抑制された抗ＣＤ４０ ｍＡｂは、他の抗ＣＤ４０抗体と比較して改善された安全性プロフィールを有することが予測され、特に、実質臓器移植における移植片拒絶の予防、特に腎移植または肝移植における移植片拒絶の予防などの非腫瘍性の適応症に、より適している可能性がある。本明細書で開示される抗ＣＤ４０抗体は、実質臓器移植における移植片拒絶の予防、特に腎移植、肝移植、心臓移植、肺移植、膵移植、腸移植、または複合組織移植における移植片拒絶の予防に適している可能性がある。

【0150】

本発明者らの拘束力のない仮説によれば、ｍＡｂ１およびｍＡｂ２と呼ばれる、米国特許第８８２８３９６号明細書および米国特許第９２２１９１３号明細書による２種のｍＡｂは、移植の治療に適した化合物であると考えられる。ＣＦＺ５３３とも呼ばれる抗体ｍＡｂ１が、特に好ましい。

【0151】

ｍＡｂ１は、インビトロでのＣＤ１５４誘導性の活性化、ならびにインビボでのＴ細胞依存性抗体形成および胚中心形成を阻害する。移植患者では、ｍＡｂ１でのＣＤ４０遮断が、新規の治療モダリティを提供することが示されている（実施例７）。

【0152】

当業者が本発明を実施できるようにするために、ｍＡｂ１およびｍＡｂ２のアミノ酸およびヌクレオチド配列を、下の表１に提供する。

【0153】

当技術分野で公知の別の抗ＣＤ４０ ｍＡｂは、例えば、参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第８５６８７２５Ｂ２号明細書に記載されている通りのＡｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ／Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｉｒｉｎ ＣｏからのＡＳＫＰ１２４０である。

【0154】

当技術分野で公知のさらに別の抗ＣＤ４０ ｍＡｂは、例えば、参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第８５９１９００号明細書に記載されている通りのＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ ＩｎｇｅｌｈｅｉｍからのＢＩ６５５０６４である。

【0155】

当技術分野で公知のさらなる抗ＣＤ４０ ｍＡｂは、例えば、参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第８６６９３５２号明細書に記載されている通りのＦａｓｔ Ｆｏｒｗａｒｄ ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによるＦＦＰ１０４である。

【0156】

別の治療モダリティは、抗ＣＤ４０Ｌ−Ｔｎ３融合タンパク質であるＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａからのＭＥＤＩ４９２０、またはＢｉｏｇｅｎからの抗ＣＤ４０Ｌ抗体ＢＩＩＢ０６３であり得る。

【0157】

上に言及した抗体と同じ作用様式をもつ抗体、いわゆるバイオ後続品も、当業者によって理解されるであろう通り、本開示によって包含される。

【0158】

【表1-1】

【0159】

【表1-2】

【0160】

【表1-3】

【0161】

【表1-4】

【0162】

【表1-5】

【0163】

【表1-6】

【0164】

一実施態様では、抗ＣＤ４０抗体が提供され、前記抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む。

【0165】

一実施態様では、抗ＣＤ４０抗体が提供され、前記抗体は、配列番号１、配列番号２、および配列番号３として記述した高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５、および配列番号６として記述した高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む。

【0166】

一実施態様では、抗ＣＤ４０抗体が提供され、前記抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む。

【0167】

一実施態様では、抗ＣＤ４０抗体が提供され、前記抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む。

【0168】

一実施態様では、抗ＣＤ４０抗体が提供され、前記抗体は、サイレントＦｃ ＩｇＧ１領域を含む。

【0169】

好ましい実施態様では、ｍＡｂ１と呼ばれる抗ＣＤ４０抗体が提供される。具体的には、ｍＡｂ１は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列と配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列とを含み；ｍＡｂ２は、配列番号１１の重鎖アミノ酸配列と配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列とを含む。

【0170】

１．発現系
軽鎖および重鎖の発現のために、重鎖および軽鎖をコードする発現ベクターを、標準の技術によって宿主細胞に遺伝子導入する。様々な形式の用語「遺伝子導入」が、外来性ＤＮＡの原核生物または真核生物宿主細胞への導入のために一般に使用される様々な技術、例えば、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラン遺伝子導入などを包含することが意図される。理論的には、本発明の抗体を、原核生物宿主細胞か真核生物宿主細胞のいずれかにおいて発現させることが可能である。真核細胞、例えば哺乳類宿主細胞、酵母、または糸状菌における抗体の発現が論じられている。なぜなら、こうした真核細胞、特に哺乳類の細胞が、原核細胞よりも、適切にフォールディングされた免疫学的に活性な抗体をアセンブルおよび分泌する可能性が高いからである。

【0171】

具体的には、クローニングまたは発現ベクターは、適切なプロモーター配列に動作可能なように連結される、次のコード配列（ａ）〜（ｂ）：
（ａ）ｍＡｂ１の全長重鎖および軽鎖をそれぞれコードする配列番号１５および配列番号１６；または
（ｂ）ｍＡｂ２の全長重鎖および軽鎖をそれぞれコードする配列番号１７および配列番号１８
のいずれかの少なくとも１つを含むことができる。

【0172】

本発明の組換え抗体を発現させるための哺乳類宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣（Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｈａｍｓｔｅｒ Ｏｖａｒｙ）（ＣＨＯ細胞）（例えばＲ．Ｊ．ＫａｕｆｍａｎおよびＰ．Ａ．Ｓｈａｒｐ，１９８２ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１に記載されている通りのＤＨ ＦＲ選択可能マーカーと共に使用される、ＵｒｌａｕｂおよびＣｈａｓｉｎ，１９８０ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６−４２２０に記載されているｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞が含まれる）、ＣＨＯＫ１ ｄｈｆｒ＋細胞株、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞、およびＳＰ２細胞が含まれる。特に、ＮＳＯ骨髄腫細胞との使用のためには、別の発現系は、ＰＣＴ公報国際公開第８７／０４４６２号パンフレット、国際公開第８９／０１０３６号パンフレット、および欧州特許第０３３８８４１号明細書に示されているＧＳ遺伝子発現系である。

【0173】

抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターを、哺乳類宿主細胞に導入する場合、抗体は、宿主細胞における抗体の発現または宿主細胞が成長する培養培地への抗体の分泌を可能にするのに十分な期間、宿主細胞を培養することによって産生される。抗体は、標準のタンパク質精製方法を使用して、培養培地から回収することができる（例えば、Ａｂｈｉｎａｖ ｅｔ ａｌ．２００７，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ８４８：２８−３７を参照のこと）。

【0174】

宿主細胞は、ｍＡｂ１またはｍＡｂ２の発現および産生に適した条件下で培養することができる。

【0175】

２．医薬組成物
治療用抗体は、典型的には、すぐに投与可能な水性の形態で、または投与前の適切な希釈剤での再構成のための凍結乾燥物（ｌｙｏｐｈｉｌｉｓａｔｅ）として製剤化される。抗ＣＤ４０抗体は、凍結乾燥物として、または例えばプレフィルドシリンジに入れた水性の組成物として製剤化することができる。

【0176】

適切な製剤は、再構成して患者への送達のための高濃度の抗体活性成分および低レベルの抗体凝集を含む溶液を与えることができる、水性の医薬組成物または凍結乾燥物を提供することができる。高濃度の抗体は、これにより、患者に送達されなければならない材料の量が低下するので、有用である。投薬体積の低下により、患者に一定用量を送達するためにかかる時間が最小限になる。高濃度の抗ＣＤ４０抗体を含む本発明の水性組成物は、皮下投与に特に適している。

【0177】

したがって、本発明は、ｍＡｂ１またはｍＡｂ２などの抗ＣＤ４０抗体を含む、対象における投与に、例えば皮下投与に適した水性医薬組成物を提供する。

【0178】

抗ＣＤ４０抗体は、薬学的に許容し得る担体と組み合わせた場合に、医薬組成物として使用することができる。こうした組成物は、ｍＡｂ１またはｍＡｂ２などの抗ＣＤ４０抗体に加えて、担体、種々の希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、安定剤、可溶化剤、および当技術分野で周知の他の材料を含有することができる。担体の特性は、投与経路に依存することとなる。開示する方法に使用するための医薬組成物はまた、標的とされる特定の障害の治療のための追加の治療薬を含有することができる。

【0179】

ある具体的実施態様では、組成物は、６．０のｐＨを有する水性製剤から調製される、以下を含む凍結乾燥製剤である：
（ｉ）１５０ｍｇ／ｍＬ ｍＡｂ１またはｍＡｂ２
（ｉｉ）２７０ｍＭ スクロース（安定剤として）、
（ｉｉｉ）３０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン（緩衝薬として）、および
（ｉｖ）０．０６％ Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ２０（界面活性剤として）。

【0180】

別の具体的実施態様では、医薬組成物は、６．０のｐＨを有する、以下を含む水性医薬組成物である：
（ｉ）１５０ｍｇ／ｍＬ ｍＡｂ１またはｍＡｂ２
（ｉｉ）２７０ｍＭ スクロース（安定剤として）、
（ｉｉｉ）３０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン（緩衝薬として）、および
（ｉｖ）０．０６％ Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ２０（界面活性剤として）。

【0181】

別の具体的実施態様では、組成物は、以下を含む凍結乾燥または液体製剤である：
（ｉ）ｍＡｂ１またはｍＡｂ２
（ｉｉ）スクロース（安定剤として）、
（ｉｉｉ）Ｌ−ヒスチジン（緩衝薬として）、および
（ｉｖ）Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ２０（界面活性剤として）、および、シクロスポリン（例えばＣｓＡ、Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）若しくはタクロリムス（Ｔａｃ、ＦＫ５０６、Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標）、Ａｓｔｅｌｌａｓ）などのカルシニューリン阻害剤（ＣＮＩ）、ミコフェノール酸（例えばＭＰＡ；Ｍｙｆｏｒｔｉｃ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）若しくはミコフェノール酸モフェチル（例えばＭＭＦ；ＣｅｌｌＣｅｐｔ（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ）などのリンパ球増殖抑制剤、またはエベロリムス（例えばＺｏｒｔｒｅｓｓ（登録商標）、Ｃｅｒｔｉｃａｎ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）若しくはシロリムス（例えばＲａｐａｍｕｎｅ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）などの増殖シグナル阻害剤、またはベラタセプト（例えばＮｕｌｏｊｉｘ（登録商標）、ＢＭＳ）などのＴ細胞共刺激遮断薬からなる群から選択される少なくとも１種の追加の医薬品有効成分。

【0182】

３．投与経路
典型的には、抗体またはタンパク質は、注射によって、例えば、静脈内に、腹腔内に、または皮下に投与される。この投与を実行するための方法は、当業者に公知である。局所的にまたは経口的に投与することができる、または、粘膜を透過する能力がある可能性がある組成物を得ることも可能である。当業者によって理解されるであろう通り、選択された特定の投与経路に対して適切であるような、投与するのに適したあらゆる手段を使用することができる。

【0183】

可能な投与経路の例としては、非経口（例えば、静脈内（ｉ．ｖ．若しくはＩ．Ｖ．若しくはｉｖ若しくはＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）、皮内、皮下（ｓ．ｃ．若しくはＳ．Ｃ．若しくはｓｃ若しくはＳＣ）、または注入）、経口および肺内（例えば、吸入）、経鼻、経皮（局所）、経粘膜、および直腸内投与が挙げられる。非経口、皮内、または皮下適用のために使用される液剤または懸濁剤は、次の構成成分を含むことができる：無菌の希釈剤、例えば注射用水、生理食塩溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒；抗菌剤、例えばベンジルアルコールまたはメチルパラベン；酸化防止剤、例えばアスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えばエチレンジアミン四酢酸；緩衝液、例えば酢酸、クエン酸、またはリン酸、および張度の調整のための薬剤、例えば塩化ナトリウムまたはデキストロース。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基を用いて調整することができる。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器、または反復投与バイアルに封入することができる。

【0184】

抗ＣＤ４０療法は、場合によっては、本発明の抗体またはタンパク質の「負荷用量／レジメン」を、抗ＣＤ４０療法を必要としている対象に施すことによって開始することができる。「負荷用量／レジメン」は、対象に投与される本発明の抗ＣＤ４０抗体またはタンパク質の初回用量／レジメン（ここでは、投与される本発明の抗体またはタンパク質の用量は、より高い投薬範囲（すなわち、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇまで、例えば約３０ｍｇ／ｋｇ）の範囲内にある）を意図する。「負荷用量／レジメン」は、単回投与、例えば、単回注入（ここでは、抗体またはその抗原結合断片は、ＩＶ投与される）として、または「負荷用量／レジメン」全体が、約２４時間以内に（または、疾患の重症度に基づいて、反復静脈内投与が必要とされるならば、最初の１か月以内に）施される限りは反復投与、例えば、反復注入（ここでは、抗体またはその抗原結合断片は、ＩＶ投与される）として投与することができる。次いで、「負荷用量／レジメン」の施与後に、１種または複数の追加の治療有効量の本発明の抗ＣＤ４０抗体またはタンパク質を対象に投与する。その後の治療有効量は、例えば、毎週の投薬スケジュールに従って、または２週に１回（隔週）、または３週に１回、または４週に１回投与することができる。こうした実施態様では、その後の治療有効量は、一般に、より低い投薬範囲（すなわち、約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、例えば約１０ｍｇ／ｋｇ、例えば１０ｍｇ／ｋｇ）の範囲内にある。

【0185】

あるいは、いくつかの実施態様では、「負荷用量／レジメン」の後に、その後の治療有効量の本発明の抗ＣＤ４０抗体またはタンパク質が、「維持スケジュール」（ここでは、本発明の治療有効用量の抗体またはタンパク質は、毎週、隔週、または１か月に１回、６週に１回、２か月に１回、１０週に１回、３か月に１回、１４週に１回、４か月に１回、１８週に１回、５か月に１回、２２週に１回、６か月に１回、７か月に１回、８か月に１回、９か月に１回、１０か月に１回、１１か月に１回、または１２か月に１回投与される）に従って投与される。こうした実施態様では、本発明の抗ＣＤ４０抗体またはタンパク質の治療有効量は、特に、その後の用量が、より高頻度の間隔で、例えば、２週に１回から月１回投与される場合には、より低い投薬範囲（すなわち、約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、例えば約１０ｍｇ／ｋｇ、例えば１０ｍｇ／ｋｇ）の範囲内に、または、特に、その後の用量が、より低頻度の間隔で投与される場合、例えば、その後の用量が、１か月〜１２か月離れて投与される場合には、より高い投薬範囲（すなわち、１０ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇまで、例えば３０ｍｇ／ｋｇ）の範囲内にある。

【0186】

投薬のタイミングは、一般に、「ベースライン」としても公知である、活性な化合物（例えば、ｍＡｂ１）の第１の用量の日から測定される。しかし、異なる医療提供者が、異なる命名規則を使用する。

【0187】

特に、第０週は、医療提供者によっては第１週とみなされる可能性があり、一方で、第０日は、医療提供者によっては第１日とみなされる可能性がある。したがって、異なる医師が、例えば、ある用量を、同じ投薬スケジュールを指すのに、３週の間／第２１日に、３週の間／第２２日に、４週の間／第２１日に、４週の間／第２２日に与えられると称することとなる可能性がある。一貫性を保つために、投薬の最初の週は、本明細書では、第０週とみなすこととするのに対して、投薬の最初の日は、第１日とみなすこととする。しかし、この命名規則は、単に一貫性を保つために使用され、制限的なものと解釈されるべきではない、すなわち、医師が、ある特定の週を「第１週」と呼ぶか「第２週」と呼ぶかにかかわらず、毎週の投薬は、抗ＣＤ４０抗体（例えば、ｍＡｂ１）の毎週の用量の規定であることが、当業者によってことが理解されよう。本明細書に記述する投薬計画の例は、図１および２において参照される。ある用量が、厳密な時点で提供される必要はないことが理解されよう。例えば、およそ第２９日の予定である用量は、これが、適切な週に提供されるのであれば、例えば、第２４日〜第３４日、例えば第３０日に提供される可能性がある。

【0188】

本明細書で使用する場合、表現「［指定された用量］の送達を可能にするのに十分な量の抗ＣＤ４０抗体を有する容器」は、所与の容器（例えば、バイアル、ペン（ｐｅｎ）、シリンジ）が、所望される用量を提供するために使用することができる、（例えば、医薬組成物の一部としての）ある体積の抗ＣＤ４０抗体を、その中に配置していることを意味するために使用される。一例としては、所望される用量が５００ｍｇであるならば、臨床医は、２５０ｍｇ／ｍｌの濃度を有する抗ＣＤ４０抗体製剤を含有する容器から２ｍｌ、５００ｍｇ／ｍｌの濃度を有する抗ＣＤ４０抗体製剤を含有する容器から１ｍｌ、１０００ｍｇ／ｍｌの濃度を有する抗ＣＤ４０抗体製剤を含有する容器から０．５ｍｌ、などを使用することができる。こうした各場合において、これらの容器は、所望される５００ｍｇ用量の送達を可能にするのに十分な量の抗ＣＤ４０抗体を有する。

【0189】

本明細書で使用する場合、表現「［指定された用量］の［投与経路］送達を可能にするための投薬量で製剤化される」は、所与の医薬組成物が、指定された投与経路（例えば、ＳＣまたはＩＶ）を介して、所望される用量の抗ＣＤ４０抗体（例えば、ｍＡｂ１）を提供するために使用することができることを意味するために使用される。一例としては、所望される皮下用量が５００ｍｇであるならば、臨床医は、２５０ｍｇ／ｍｌの濃度を有する抗ＣＤ４０抗体製剤の２ｍｌ、５００ｍｇ／ｍｌの濃度を有する抗ＣＤ４０抗体製剤の１ｍｌ、１０００ｍｇ／ｍｌの濃度を有する抗ＣＤ４０抗体製剤の０．５ｍｌ、などを使用することができる。こうした各場合において、これらの抗ＣＤ４０抗体製剤は、抗ＣＤ４０抗体の皮下送達を可能にするのに十分に高い濃度である。皮下送達は、典型的には、約１ｍＬまたはそれ以上（例えば２ｍＬ）の体積の送達を必要とする。しかし、例えばパッチ／ポンプ機構を使用して、時間をかけて、より高い体積を送達することができる。

【0190】

本明細書で開示されるのは、患者における実質臓器移植における移植片拒絶の予防のための医薬品（ここでは、医薬品は、容器を含むように製剤化され、各容器は、単位用量あたり少なくとも約７５ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇ、または６００ｍｇの抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合断片（例えば、ｍＡｂ１）の送達を可能にするのに十分な量の抗ＣＤ４０抗体を有する）の製造のための抗ＣＤ４０抗体（例えば、ｍＡｂ１）の使用である。

【0191】

本明細書で開示されるのは、患者における実質臓器移植における移植片拒絶の予防のための医薬品（ここでは、医薬品は、単位用量あたり７５ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇ、または６００ｍｇの抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合断片（例えば、ｍＡｂ１）の全身送達（例えば、ＩＶまたはＳＣ送達）を可能にするための投薬量で製剤化される）の製造のための抗ＣＤ４０抗体（例えば、ｍＡｂ１）の使用である。

【0192】

４．キット
本開示はまた、場合に応じて抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合断片、例えばｍＡｂ１で、移植患者を治療するためのキットを包含する。こうしたキットは、（例えば、液体または凍結乾燥形態の）抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合断片、例えばｍＡｂ１、または（上に記載した）抗ＣＤ４０抗体を含む医薬組成物を含む。さらに、こうしたキットは、抗ＣＤ４０抗体を投与するための手段（例えば、シリンジおよびバイアル、プレフィルドシリンジ、プレフィルドペン、パッチ／ポンプ）および使用のための説明書を含むことができる。説明書は、具体的な投薬レジメンの一部として、患者に抗ＣＤ４０抗体（例えば、ｍＡｂ１）を提供することを明らかにすることができる。これらのキットは、乾癬を治療するための、例えば、封入される抗ＣＤ４０抗体、例えば、ｍＡｂ１と組み合わせた送達のための、（上に記載した）追加の治療薬も含有することができる。

【0193】

表現「投与するための手段」は、限定はされないが、プレフィルドシリンジ、バイアルおよびシリンジ、ペン型注射器、自己注射器、点滴静注バッグ、ポンプ、パッチ／ポンプなどを含めた、患者に薬物を全身的に投与するためのあらゆる利用可能な道具を示すために使用される。こうしたものを用いて、患者が、薬物を自己投与する（すなわち、薬物を自分自身のために投与する）こともできるし、介護者または医師が、薬物を投与することもできる。

【0194】

一実施態様では、自己注射器などの投与するための手段は、薬物の血漿中濃度をリアルタイムで検出および処理するための手段を含むシステムの一部である。好ましい実施態様では、このシステムは、薬物の血漿中濃度を閾値と比較し、それによって用量を調整するための手段を含む。

【0195】

本明細書で開示されるのは、以下を含む、移植患者の治療のためのキットである：ａ）治療有効量の抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物；ｂ）抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合断片を患者に投与するための手段；およびｃ）抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合断片の投与を、ヒト対象の１キログラムあたり約３〜約３０ｍｇの活性成分の用量で、それを必要とする患者に（複数回）提供する説明書。

【0196】

ある具体的実施態様では、実質臓器移植における移植片拒絶の予防のための医薬品の製造のための、ａ）抗ＣＤ４０抗体、緩衝液、安定剤、および可溶化剤を含む、液体医薬組成物、およびｂ）抗ＣＤ４０抗体を移植患者に皮下投与するための手段、の使用が提供され、ここでは、抗ＣＤ４０抗体は：
ｉ）ヒト対象の１キログラムあたり約３〜約３０ｍｇ、例えば１０ｍｇの活性成分の用量で、１週おきに、３回、患者に皮下投与されることとなる；
ｉｉ）その後、ヒト対象の１キログラムあたり約３〜約３０ｍｇ、例えば１０ｍｇの活性成分という毎月の用量として、患者に皮下投与されることとなり、
ここでは、前記抗ＣＤ４０抗体は、以下からなる群から選択される：
ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｂ）配列番号１、配列番号２、および配列番号３として記述した高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号４、配列番号５、および配列番号６として記述した高頻度可変領域を含む免疫グロブリンＶＬドメインとを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１３のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬドメインと、配列番号１４のＦｃ領域とを含む抗ＣＤ４０抗体；
ｅ）サイレントＦｃ ＩｇＧ１領域を含む抗ＣＤ４０抗体；および
ｆ）配列番号９の重鎖アミノ酸配列および配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列；または配列番号１１の重鎖アミノ酸配列および配列番号１２の軽鎖アミノ酸配列を含む抗ＣＤ４０抗体。

【0197】

実施例２．薬理学
１．第１の薬理学
ｍＡｂ１は、ヒトＣＤ４０と高親和性（０．３ｎＭのＫ_ｄ）で結合する。しかし、これは、Ｆｃγ受容体（ＣＤ１６が含まれる）とは結合しないし、抗体依存性細胞傷害も補体依存性細胞傷害も媒介しない。ｍＡｂ１は、ヒト白血球の組換えＣＤ１５４（ｒＣＤ１５４）誘導性の活性化を阻害するが、単球由来樹状細胞（ＤＣ）によるＰＢＭＣ増殖またはサイトカイン産生を誘発しない。ｍＡｂ１は、非常に類似の親和性で、ヒトおよび非ヒト霊長類ＣＤ４０と結合する。

【0198】

ｍＡｂ１は、インビボで、一次および二次Ｔ細胞依存性抗体反応（ＴＤＡＲ）を阻止し、非ヒト霊長類における腎臓同種移植片の生存を延長させることができる（Ｃｏｒｄｏｂａ ｅｔ ａｌ ２０１５）。さらに、ｍＡｂ１は、インビボで、構築された胚中心（ＧＣ）を崩壊させることができる。

【0199】

ＣＤ４０受容体占有率と機能活性を、ヒト全血培養を使用して、インビトロで同時に評価した。機能活性は、ＣＤ２０陽性細胞（Ｂ細胞）上のＣＤ６９（活性化マーカー）のＣＤ１５４誘導性の発現を介して定量化し、ＣＤ４０占有は、蛍光標識したｍＡｂ１を使用して観察した。ｒＣＤ１５４誘導性のＣＤ６９発現の十分な阻害のためには、ｍＡｂ１によるほぼ完全なＣＤ４０占有が必要であった。

【0200】

２．第２の薬理学
血小板機能および止血に対するｍＡｂ１の効果を研究し、ｍＡｂ１は、血小板凝集反応を誘発せず、むしろ、高濃度で、血小板凝集に対するある種の穏やかな抑制効果を呈することが示された。

【0201】

実施例３．非臨床の毒性学および安全性薬理学
ｍＡｂ１を用いる毒性研究は、抗ＣＤ１５４ ｍＡｂを用いる臨床試験において報告された場合に血栓塞栓症の証拠がなかったことを含めて、いずれの有意な臓器毒性も示さなかった（Ｋａｗａｉ ｅｔ ａｌ ２０００）。１３週のＧＬＰアカゲザル研究（１０、５０、および１５０ｍｇ／ｋｇでの毎週の投薬）では、５／２２匹の動物において、進行中の感染症に起因すると考えられるリンパの細胞充実性の増大が認められ、観察結果は、ｍＡｂ１の薬理学と一致していた。５０ｍｇ／ｋｇの２匹の動物の腎臓および肺において、炎症性病変が認められ、２匹の動物のうちの１匹では、眼および気管における病変も認められた。腎臓および肺に対するｍＡｂ１の直接的影響は、排除することができないが、日和見病原体の確認を含めた証拠の重みは、これらの所見が、ｍＡｂ１介在性の免疫抑制に続発する可能性が高く、感染症由来のものであることを示唆する。これらの炎症所見を考慮して、１３週の毒性研究についての無毒性量（ＮＯＡＥＬ）を、１０ｍｇ／ｋｇに設定した。カニクイザルにおける２６週の慢性毒性研究では、有害なｍＡｂ１関連の所見は発見されなかった。これらのデータに基づいて、ＮＯＡＥＬを１５０ｍｇ／ｋｇ（２６週）に設定した。平均（全動物）Ｃ_{ｍａｘ，ｓｓ}は、１、５０、および１５０（ＮＯＡＥＬ）ｍｇ／ｋｇ（Ｓ．Ｃ．、毎週）で、それぞれ４４、３２３５、および９６９０μｇ／ｍＬであった。２６週のカニクイザル研究から得られたＮＯＡＥＬは、臨床投薬レジメンを裏付けるために最も適切であると考えられる。

【0202】

死後の組織学的および免疫組織学的評価は、脾臓の皮質Ｂ細胞領域、およびリンパ組織におけるＧＣの低下を示した。回復動物は、正常なＴ細胞領域と増大したＢ細胞領域を伴うリンパ節細胞充実性の増大といういくつかの症例を示し、これは、退薬後のＧＣの再構成と一致していた。回復動物は、ｍＡｂ１の血中濃度が、十分な受容体占有に必要な濃度未満に低下した直後に、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）に対する一次ＴＤＡＲを開始することができた。

【0203】

Ｔ細胞依存性抗体反応（ＴＤＡＲ）の完全な阻害が原因で、ＫＬＨ、すなわちｍＡｂ１に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）の形成が期待されず、したがって、ｍＡｂ１の濃度が継続的に薬理学的レベルに維持される場合、ＡＤＡ関連の副作用の可能性は低いと考えられる。

【0204】

組織交差反応性研究は、ＣＤ４０が、免疫細胞上に存在するだけでなく、種々の／様々な組織内に存在することを示した。これは、主として、内皮および上皮細胞（ここでは、ＣＤ４０が、創傷治癒プロセスに応答することなどのシグナル伝達、ウイルス防御の上方調節、および炎症関連メディエーターに関与する）上でのその発現に起因する。ｍＡｂ１のような拮抗性の抗ＣＤ４０モノクローナル抗体は、炎症プロセスに寄与することが期待されない。これは、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を使用するインビトロ研究によって確認された。

【0205】

完全にガイドラインに従う生殖毒性研究は、これまでのところ行われていない。しかし、適切な生殖毒性学種としてのウサギを確認するために、ウサギにおける用量範囲設定、胚−胎児発生（ＥＦＤ）研究が行われている。胚−胎児発生に対する影響は見られず、いずれの群においても治療関連の胎児外部奇形は存在しなかった。

【0206】

実施例４．非臨床の薬物動態および薬力学
１．薬物動態（ＰＫ）
ＩｇＧ免疫グロブリンに典型的であるが、ｍＡｂ１の排除の主要な経路は、血漿と平衡状態にある部位で起こるタンパク質分解性の異化作用を介する可能性が高い。さらに、ｍＡｂ１−ＣＤ４０複合体の結合および内在化は、迅速な飽和性のクリアランス経路をもたらした。これは、約１０〜２０μｇ／ｍＬでの屈曲点を示す、非線形のｍＡｂ１血清中濃度−時間プロフィールによって示された。クリアランス全体に対するＣＤ４０介在性のクリアランスの寄与は、ＣＤ４０発現、内在化、および受容体代謝回転速度のレベルと共に、ｍＡｂ１濃度に依存する。ｍＡｂ１＞１０〜２０μｇ／ｍＬの血清中濃度については、線形の動態が予想されるのに対し、より低い濃度では、非線形動態が明らかになる。

【0207】

２．薬力学（ＰＤ）
カニクイザルにおけるＰＫ／ＰＤ研究では、ＰＫプロフィールにおける屈曲点（約１０μｇ／ｍＬ）は、独立したリンパ球標的飽和アッセイにおいて決定される場合のＣＤ４０飽和の低下と関係があった。したがって、この屈曲点は、ＣＤ４０の飽和のレベルおよび標的エンゲージメント（ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）を示す証拠についてのマーカーとみなされる。

【0208】

ＣＤ４０占有率と薬力学的活性との関連を、ＫＬＨで免疫を受けたアカゲザルにおいて、さらに実証した。サルは、ＫＬＨで３回免疫を受けた（１回目は、投薬の約３週前であり、２回目は、ｍＡｂ１投与の２週後であり、３回目は、ｍＡｂ１の完全なウォッシュアウト後であった）。第２のＫＬＨワクチン接種時の血漿中濃度＞４０μｇ／ｍＬのｍＡｂ１によるＣＤ４０占有は、リコール抗体反応を完全に予防した。ｍＡｂ１がなくなると、すべての動物は、第３のＫＬＨに対する十分なメモリー抗体反応を開始した。これらの結果は、既存のメモリーＢ細胞の機能が、影響を受けなかったことを示唆する。ｍＡｂ１の完全な排除後、破傷風トキソイド（ＴＴｘ）での免疫化は、治療されていない動物と同様の抗ＴＴｘ−ＩｇＧ／ＩｇＭ力価をもたらし、ｍＡｂ１排除後に十分なＴＤＡＲが回復したことを実証した。

【0209】

３．免疫原性
免疫抑制薬から予測される通り、アカゲザル（単一用量）における免疫原性データは、ＫＬＨ−ＴＤＡＲ実験（ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ）からの結果と一致しており、ｍＡｂ１による十分なＣＤ４０占有下では、ｍＡｂ１に対する免疫応答は開始されない可能性があることを裏付けた。

【0210】

実施例５．ヒト安全性および忍容性データ
ｍＡｂ１の安全性、忍容性、ＰＫ、およびＰＤ活性は、健康な対象および関節リウマチ（ＲＡ）を患う患者における、ｍＡｂ１の進行中の、無作為化された、二重盲検の、プラセボ対照の、単一用量漸増研究において評価されている。合計４８人の対象が登録されている：最大３ｍｇ／ｋｇ（ＩＶまたはＳ．Ｃ．）の単一用量のｍＡｂ１を受けた３６人の健康な対象、およびＲＡを有する１２人の患者（そのうちの６人は、１０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）の単一用量のｍＡｂ１を受けた）。全体的に見ると、健康なボランティアにおける最大３ｍｇ／ｋｇ ｍＡｂ１までの単一用量、およびＲＡ患者における単一の１０ｍｇ／ｋｇ ｍＡｂ１は、安全かつ良好な耐容性を示しており、重篤な有害事象の疑い（ＳＡＥ）は発生していない。３０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）用量の研究は、ＲＡ患者において進行中である。この研究は、依然として進行中であるので、すべての臨床データは、事実上、予備的であり、ＲＡ患者において最大１０ｍｇ／ｋｇの用量で行われた中間解析に基づいている。

【0211】

実施例６．ヒト薬物動態および薬力学（健康なボランティアおよび関節リウマチ患者）
単回ＩＶまたはＳＣ投与後の、健康な対象ならびに関節リウマチを患う患者では、ＣＦＺ５３３ ＰＫプロフィールは、標的介在性消失と一致しており、ＣＤ４０受容体占有率が、およそ９０％未満に低下した場合、非線形ＰＫプロフィールおよびより急速なクリアランスがもたらされた。

【0212】

中国人対象からのＰＫプロフィールの、いくらかの個人間の変動性にもかかわらず、中国人対象におけるＣＦＺ５３３の消失は、概して、非中国人対象と同様であり、３ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）ＣＦＺ５３３後（約４週）の標的エンゲージメントも同様であった。この用量レベルで、血漿中の遊離ＣＦＺ５３３プロフィール、遊離ＣＤ４０および総ＣＤ４０を測定する末梢Ｂ細胞上のＣＤ４０占有率、ならびに血漿中の総ＣＤ４０濃度を通じて、同様のＰＫ／ＰＤプロフィールが示された。

【0213】

健康な対象におけるＳＣ投与後、ＣＦＺ５３３は、急速に吸収され、ヒトにおける典型的なＩｇＧ１抗体について予測されるものと一致して分配された。３ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）では、ＣＦＺ５３３は概して、投与後３日（２人の対象については７日）でピークになり、投薬の１週後、血漿中濃度は、ＩＶ後と同じ範囲であった。３ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）では、標的エンゲージメントの期間は、やはり約４週であった。

【0214】

関節リウマチを患う１０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）の患者では、投与前平均と比較される全血Ｂ細胞上の遊離ＣＤ４０、および血漿中の総ｓＣＤ４０プロフィールによって測定された場合、十分なＣＤ４０占有は、概して、８週間維持された。３０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）では、ＰＫおよび血漿中の総ｓＣＤ４０プロフィールは、標的エンゲージメントの期間と一致していた。

【0215】

健康な対象では、ＣＦＺ５３３によるＣＤ４０エンゲージメントは、Ｂ細胞上の遊離ＣＤ４０によって測定される場合のＢ細胞上のＣＤ４０占有率を追跡すると、概して、末梢Ｂ細胞上の総ＣＤ４０の約５０％の減少をもたらした。これは、ＣＦＺ５３３への結合時の膜結合型ＣＤ４０の内在化および／またはシェディングに起因する可能性が高い。関節リウマチを患う患者では、末梢Ｂ細胞上の総ＣＤ４０の減少は確認されなかった。

【0216】

血漿中のＣＦＺ５３３と、全血Ｂ細胞上のＣＤ４０占有率（Ｂ細胞上の遊離ＣＤ４０）との関係が明らかにされ、０．３〜０．４μｇ／ｍＬのＣＦＺ５３３濃度が、全血Ｂ細胞上の十分な（≧９０％と定義される）ＣＤ４０占有と関係があった。

【0217】

より一般的には、ＣＦＺ５３３について、非特異的および特異的な排除経路が特定されている。ＦｃＲｎ受容体によって介在される非特異的な高容量の経路は、一般に、内在性ＩｇＧによって共有される。ＣＦＺ５３３の特異的な標的介在性の消失は、（その後のリソソーム分解を伴って）部分的に内在化される、および／または膜からシェディングされる、ＣＦＺ５３３−ＣＤ４０複合体の形成をもたらした。標的介在性のプロセスは、ＣＦＺ５３３の飽和性のおよび非線形消失をもたらした。ＣＦＺ５３３−ＣＤ４０複合体の形成は、用量／濃度依存性であり、高濃度のＣＦＺ５３３で飽和が生じた。

【0218】

全体的に見ると、ＣＦＺ５３３の消失は、ＣＦＺ５３３のクリアランス全体に対する、特異的な（標的介在性の）および非特異的な排除経路の相対的寄与に依存する。ＣＦＺ５３３濃度が標的の濃度よりも低い場合には、非線形ＰＫ挙動が観察されたのに対し、ＣＤ４０受容体が飽和している、より高い濃度では、非特異的経路が優勢であり、ＣＦＺ５３３の排除は線形であった。

【0219】

膜結合型受容体を標的にし、かつ標的介在性の消失を示す、典型的なＩｇＧ１抗体について予測される通り、ＣＦＺ５３３の曝露の程度（ＡＵＣｌａｓｔ）は、用量の増大よりも大きく（比例を超えて）増大した。したがって、これは、より高い用量でのＣＦＺ５３３の分布容積およびクリアランスの低下と関係があることが予測される。

【0220】

１ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）ＣＦＺ５３３（１週 十分なＣＤ４０占有）の１人の対象は、ＣＦＺ５３３に対する特異的な抗体を生じた。これは、ＣＦＺ５３３血漿中濃度が定量化の限界未満になり、組織内でいずれかのＣＤ４０経路関連の影響を遮断するのには確実に低すぎるようになってから６週後に検出された。この対象における抗薬物抗体（ＡＤＡ）の存在は、曝露を損なわず、免疫関連の安全性シグナルとは関係がなかった。この研究では、これは、２％のＡＤＡ発生率に相当する。

【0221】

３ｍｇ／ｋｇ（ＩＶおよびＳＣ）の単一用量のＣＦＺ５３３は、十分な（≧９０％）受容体占有率に相当するＣＦＺ５３３濃度で、第１のＫＬＨ免疫化に対する抗ＫＬＨ反応を一時的に抑制した（約３〜４週間）。抗ＫＬＨ一次反応は、ＣＦＺ５３３濃度として、すべての対象において検出され、それに伴って受容体占有率が低下した。すべての対象は、第２のＫＬＨ免疫化（受容体占有の喪失が予測された後に投与される）に対するリコール反応を開始することができた。

【0222】

データは、ＣＦＺ５３３によるＣＤ４０エンゲージメントが、ヒト全血における組換え型ヒトＣＤ１５４（ｒＣＤ１５４）介在性のＢ細胞活性化を防止することを示唆する。Ｂ細胞上のｒＣＤ１５４誘導性ＣＤ６９発現は、概して、Ｂ細胞上の十分なＣＤ４０占有に相当する期間中に抑制された。ＣＤ４０占有が不完全であった場合、ｒＣＤ１５４の機能活性は回復した。

【0223】

免疫表現型検査データに対するＣＦＺ５３３のいかなる影響の証拠も存在しなかった。

【0224】

実施例７．臨床試験
腎移植における移植片拒絶の予防などの、ＣＤ４０−ＣＤ１５４経路のシグナル伝達と関連する疾患の治療または予防においてＡＤＣＣ活性が抑制されたヒト、抗ＣＤ４０モノクローナル抗体を利用する適合性を評価するために、本明細書ではｍＡｂ１とも呼ばれる抗体ＣＦＺ５３３を使用して、臨床研究を設計および実行した。

【0225】

１．研究デザイン
新規腎移植レシピエントにおける、タクロリムス（Ｔａｃ）を含むおよび含まない、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）および副腎皮質ステロイド（ＣＳ）と組み合わせた、抗ＣＤ４０モノクローナル抗体、ＣＦＺ５３３の、安全性、忍容性、薬物動態／薬力学（ＰＫ／ＰＤ）、および有効性を評価する、１２か月の、無作為化された、反復投与の、非盲検の研究。

【0226】

この適応的な２パートの研究の目的は、ＣＦＺ５３３が、標準的な基準のドナーからの同種移植片を受容している新規腎移植集団において同様の速度の急性拒絶反応予防およびより良い腎機能を提供しながら、カルシニューリン阻害剤（ＣＮＩ）を置き換える可能性を調べることである。

【0227】

図１２は、研究デザインの模式的全体像である。

【0228】

この試験のパート１は、標準治療、ＣＮＩに基づく免疫抑制の状況における、ＣＦＺ５３３のＩＶ投与とＳＣ投与との両方についての反復投与の薬物動態（ＰＫ）、薬力学（ＰＤ）、および忍容性をプロファイリングすることに焦点を合わせることとなる。

【0229】

第１群については、合計６人の患者が登録されて、標準曝露タクロリムス（全血トラフ濃度４〜１１ｎｇ／ｍＬ）、ＭＭＦ、およびＣＳと共に、３ｍｇ／ｋｇ ＣＦＺ５３３の、ＩＶ導入（第１日）、および第１５日、２９日、４３日、および７１日でのＳＣ投与を受けることとなる。

【0230】

パート１の第１の目的は、治療および追跡調査期間にわたって、新規腎移植患者における、ＭＭＦ、ＣＳ、およびＴａｃ（標準曝露）と組み合わせた、反復ＩＶおよびＳＣ用量のＣＦＺ５３３の安全性、忍容性、および薬物動態を評価することである。パート１の第２の目的は、
・末梢血ＣＤ４０占有率（Ｂ細胞上の遊離ＣＤ４０および総ＣＤ４０）の大きさおよび期間を定量化すること；
・末梢血の総可溶型ＣＤ４０および総可溶型ＣＤ１５４の、ベースラインからの変化および回復を定量化すること；および
・抗ＣＦＺ５３３抗体の定量的分析を介して、ＣＦＺ５３３の免疫原性を評価すること
である。

【0231】

パート２は、最大１２か月間の、補助的なＭＭＦおよびバシリキシマブ導入療法と組み合わせた、ＣＮＩの非存在下でのＣＦＺ５３３の安全性および有効性を評価することとなる。

【0232】

２：１の無作為化後、４５人の患者が、並行方式で、第２Ａ群および第２Ｂ群に登録されることとなる。第２Ａ群は、バシリキシマブ導入、ＭＭＦ、およびＣＳと共に、静脈内ＣＦＺ５３３ １０ｍｇ／ｋｇ反復投与を受けることとなり；第２Ｂ群（対照）は、バシリキシマブ導入、ＭＭＦ、およびＣＳと共に、標準曝露タクロリムス（全血トラフ濃度４〜１１ｎｇ／ｍＬ）を受けることとなる。

【0233】

パート２の第１の目的は、ＣＦＺ５３３が、移植後第３か月に、治療を要した生検で確認された急性拒絶反応（ｔＢＰＡＲ）によって評価される場合に、新規腎移植患者における、ＭＭＦを伴う、ＣＮＩを使用しないレジメンにおいて、主要な免疫抑制剤として作用する可能性を評価することである。

【0234】

パート２の第２の目的は、
・ＭＭＦおよびＣＳ（最大３か月）と組み合わせて長期間投与されたＣＦＺ５３３の、対照に対する安全性および忍容性を評価すること；
・１２か月の治療期間中の、反復ＩＶ用量のＣＦＺ５３３の薬物動態を評価すること；
・反復ＩＶ用量のＣＦＺ５３３の後の治療期間中の、末梢血ＣＤ４０占有（Ｂ細胞上の遊離ＣＤ４０および総ＣＤ４０）の大きさおよび期間を定量化すること；
・以下によって評価される、移植後第３か月での、ＣＦＺ５３３治療群における腎機能を、対照と比較すること：
・腎疾患における食事改善（Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｅｔ ｉｎ Ｒｅｎａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ）（ＭＤＲＤ）を使用する、推定される糸球体濾過量（ＧＦＲ）；
・推定されるＧＦＲ（ｅＧＦＲ）が＜６０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２である患者の割合；
・負のｅＧＦＲ勾配を有する患者の割合；
・抗ＣＦＺ５３３抗体の定量的分析を介して、反復ＩＶ用量のＣＦＺ５３３の免疫原性を評価すること；および
・反復ＩＶ用量のＣＦＺ５３３の後の治療期間中の、末梢血の総可溶型ＣＤ４０の、ベースラインからの変化および回復を定量化すること。

【0235】

（１）主な選択基準
・書面によるインフォームドコンセント；
・男性または女性患者≧１８歳；
・心拍動減少、非血縁生体、またはヒト白血球抗原（ＨＬＡ）が一致しない血縁生体ドナーからの移植のレシピエント；および
・冷阻血時間（ＣＩＴ）が＜３０時間である腎臓のレシピエント；

【0236】

（２）主な除外基準
・ｏ多臓器移植レシピエント；
・ｏ心停止ドナーからの臓器のレシピエント；
・ＡＢＯ不適合の同種移植片または補体依存性リンパ球毒性（ＣＤＣ）クロスマッチ陽性移植；
・第１の同種移植片が術後の合併症に起因して失われた場合以外の第２の腎臓同種移植片の受け取り；
・抗ドナー反応性の評価のための、地域診療によって決定される、拒絶反応の高い免疫学的リスク（例えば、高いパネル反応性抗体（ＰＲＡ）＞２０％、既存のドナー特異的抗体（ＤＳＡ）の存在）；
・結核（ＴＢ）のリスクがある；
・抗ＨＩＶ陽性、ＨＢｓＡｇ陽性、または抗ＨＣＶ陽性；
・エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）陰性（パート１でのみ）；
・移植後の腎臓生検を不可能にするであろう、凝固障害の病歴、または長期の抗凝固を必要とする医学的状態；
・活動性感染症；
・妊娠中または授乳中（泌乳中）の女性；および
・妊娠の可能性のある女性（投薬中、また、研究薬物が中止された後の１２週間、避妊の高度に有効な方法を使用していない限り、妊娠することが生理学的に可能なすべての女性と定義される）。

【0237】

（３）研究的および参照基準（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）療法
パート１（図１３Ａ）；第１群、ｎ＝６：３．０ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）のＣＦＺ５３３（５回投与；第１の用量はＩＶであり、第１５日、２９日、４３日、および７１日にＳＣ）＋タクロリムス（４〜１１ｎｇ／ｍＬ）＋ＭＭＦ １．０ｇ ＢＩＤ＋ＣＳ。
パート２（図１３Ｂ）；第２Ａ群、ｎ＝３０：バシリキシマブ２０ｍｇ（第１日、４日）＋１０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）のＣＦＺ５３３（１７回投与）＋ＭＭＦ １．０ｇ ＢＩＤ＋ＣＳ；および第２Ｂ群 対照／標準治療、ｎ＝１５：バシリキシマブ２０ｍｇ（第１日、４日）＋タクロリムス（４〜１１ｎｇ／ｍＬ）＋ＭＭＦ １．０ｇ ＢＩＤ＋ＣＳ。

【0238】

（４）併用治療
ＣＭＶ、ＰＣＰ、ＨＢＶ、およびＢＫウイルス予防；ならびに経口のカンジダ治療。

【0239】

（５）有効性評価
治療を要した生検で確認された急性拒絶反応（ｔＢＰＡＲ）、移植片機能損失、死亡、推定される糸球体濾過量（ＧＦＲ）。

【0240】

治療を要した生検で確認された急性拒絶反応（ｔＢＰＡＲ）
治療を要したＢＰＡＲは、対象が抗拒絶反応治療を受け、かつ組織学的に急性拒絶反応と診断された、あらゆる状態である（Ｂａｎｆｆ ２００９基準またはＢａｎｆｆ ２０１３基準に従う。境界の組織学的所見は、地域診療によって解釈され、抗拒絶反応治療が施されるならば、ｔＢＰＡＲの基準を満たす）。

【0241】

腎臓生検は、急性拒絶反応の疑いがあるすべての場合について採取されることとなる。

【0242】

腎臓同種移植片生検
拒絶反応の疑いがあるすべてのエピソードについて、抗拒絶反応治療の開始にかかわらず、好ましくは４８時間以内に、地域診療によって同種移植片生検を実施しなければならない。生検は、更新されたＢａｎｆｆ ２００９基準（または地域診療次第でＢａｎｆｆ ２０１３基準）に従って、地域の病理医によって読み取りが行われることとなる。地域の病理医によって読み取りが行われた生検の結果は、腎臓同種移植片生検の電子症例報告／記録書（ｅＣＲＦ）に収載されることとなる。これらの結果は、急性拒絶反応に対する対象管理のために使用されることとなる。地域の病理医には、治療は盲検化されたままであることとなる。地域診療によって実施された（例えば、理由を問わない）いかなる生検も、記録されるべきである。パート２では、拒絶反応および他の腎臓疾患関連事象の疑いがあることから実施された生検はまた、独立した判定委員会（Ａｄｊｕｄｉｃａｔｉｏｎ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）によって中心的に評価されることとなる。

【0243】

移植片機能損失
同種移植片は、対象が透析を開始した日に機能喪失し、その後、透析から逃れることはできないと推定されることとなる。対象が、永久透析を開始する前に同種移植片腎摘除術を受けるならば、腎摘除術の日が、移植片機能損失の日である。移植片機能損失の理由は、移植片機能損失ｅＣＲＦに記録されることとなる。これは、研究中止の理由として移植片機能損失を用いて、研究完了（Ｓｔｕｄｙ Ｃｏｍｐｌｅｔｉｏｎ）ｅＣＲＦおよび治療段階消失（Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｐｈａｓｅ Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ）ｅＣＲＦに、また、無作為化された治療の間に死亡が発生したならば、適切な用法用量記録（Ｄｏｓａｇｅ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ｒｅｃｏｒｄ）ｅＣＲＦに記録されることとなる。移植片機能損失は、ＳＡＥとみなされ、有害事象（Ａｄｖｅｒｓｅ Ｅｖｅｎｔ）ｅＣＲＦに、（重篤として）報告されるべきであり、ＳＡＥは、２４時間以内に、地域のＮｏｖａｒｔｉｓ Ｄｒｕｇ Ｓａｆｅｔｙおよび疫学課（Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ）の地域のＮｏｖａｒｔｉｓ Ｄｒｕｇ Ｓａｆｅｔｙおよび疫学課（ＤＳ＆Ｅ）（Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ （ＤＳ＆Ｅ） Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ）に報告されるべきである。

【0244】

死亡
対象死亡の場合には、死亡に至るＳＡＥが、２４時間以内にＮｏｖａｒｔｉｓ ＤＳ＆Ｅに報告されるべきである。死亡に至る事象は、有害事象（Ａｄｖｅｒｓｅ Ｅｖｅｎｔ）ｅＣＲＦに入力するべきであり、死亡は、（無作為化された治療の間に死亡が発生したならば）適切な用法用量記録（Ｄｏｓａｇｅ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ｒｅｃｏｒｄ）ｅＣＲＦに、また、研究完了（Ｓｔｕｄｙ Ｃｏｍｐｌｅｔｉｏｎ）ｅＣＲＦに、また、治療段階消失（Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｐｈａｓｅ Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ）ｅＣＲＦに示されるべきである。

【0245】

（６）安全性評価
安全性評価は、以下の変数を測定することによって実施される：
腎機能、有害事象および重篤な有害事象、感染症、サイトカイン、ドナー特異的抗体、移植後発症糖尿病（ＮＯＤＡＴ）、ＥＢＶ、ＣＭＶサーベイランス、ウイルス血清学的検査、免疫原性、心電図（ＥＣＧ）、バイタルサインおよびＢＫウイルス徴候および結核徴候、および臨床検査。

【0246】

有害事象（ＡＥ）は、対象または臨床的研究対象における、あらゆる不都合な医学的出来事（すなわち、あらゆる好ましくないおよび意図されたものではない徴候［異常な検査所見が含まれる］、症状、または疾患）である。したがって、ＡＥは、医薬（研究）生成物の使用と時間的にまたは必然的に関係がある可能性もない可能性もある。

【0247】

インフォームドコンセントに署名をしており、かつ研究に登録されているすべての対象について、インフォームドコンセントに署名した後に発生したすべての有害事象は、有害事象（Ａｄｖｅｒｓｅ Ｅｖｅｎｔ）ｅＣＲＦに記録されることとなる。既存の医学的状態／疾患（すなわち、病歴）は、それが、書面によるインフォームドコンセントを提供した後に悪化したならば、ＡＥとみなされる。異常な検査値または検査結果は、これらが臨床徴候または症状を誘発する、または臨床的に有意であると考えられる、またはこれらが治療法を必要とする場合にのみ、ＡＥに相当する。

【0248】

ＡＥの発生は、研究中の各来診時に、対象に対する非指示的な質問によって探るべきである。ＡＥはまた、来診中または来診と来診の間に、または身体検査、臨床検査、または他の評価を通じて、対象が申し出る場合に見つけることができる。ＡＥは、徴候、症状、またはこれに関連する診断に基づいて、有害事象（Ａｄｖｅｒｓｅ Ｅｖｅｎｔ）ｅＣＲＦに記録されなければならない。

【0249】

ＳＡＥは、以下の基準のいずれか１つを満たす、あらゆるＡＥと定義される：
・致死的であるまたは生命を脅かす
・持続性のまたは重大な能力障害／不能をもたらす
・先天異常／先天性欠損となる
・入院が以下の目的である場合を除いて、入院患者の入院または現在の入院の延長を必要とする：
・状態のいかなる悪化とも関係がない、日常治療または研究される適応症の観察
・研究中の適応症と関連せず、かつ、インフォームドコンセント用紙に署名してからは悪化していない、既存の状態に対する待機的または事前計画治療
・上に示したＳＡＥの定義のいずれかを満たさない、かつ入院にはつながらない事象に対する、緊急の外来患者としての治療
・対象の全身状態のいかなる悪化もない場合の、社会的理由およびレスパイトケア
・医学的に有意である、すなわち、患者を危険にさらす、または、上に列挙した転帰のうちの１つを予防するための医学的または外科的介入を必要とする可能性がある事象と定義される。

【0250】

すべての悪性新生物は、他の重症度基準を満たさなければ、「医学的に有意」に基づいて重篤と評価することとなる。

【0251】

（７）他の評価
薬物動態（血漿中の遊離ＣＦＺ５３３；Ｔａｃトラフレベル；ＭＰＡトラフレベル；ならびに血漿中の可溶型ＣＤ４０および可溶型ＣＤ１５４）、移植片生着、患者生存、ならびにリンパ節／組織生検などの、他の変数も評価される。

【0252】

２．投薬レジメン
あらゆる研究関連の評価が実施される前に、患者は、書面によるインフォームドコンセントを与えなければならない。同意が得られたら、移植前スクリーニングおよびベースライン評価を行い、移植の最大２８日前に開始する研究に参加するための患者の適格性を決定することとなる。スクリーニング、ベースライン、および研究第１日の来診は、互いに近接して（すなわち、１２時間の時間枠内で）行う。評価からのデータ収集は、医学的標準治療の一部として、臨床現場で実施したが、移植前に短時間で（すなわち２４時間以内−第１日のベースラインウインドウを第１日に一致させる）、選択基準および除外基準に沿って評価されるならば、死亡したドナーから臓器を受ける患者について、患者の適格性を確認するために、事前のＩＣＦ承認が許容される。

【0253】

第１日は、無作為化／登録および移植の日と定義される。このプロトコルは、１週に対して７日、および研究１か月（Ｓｔｕｄｙ Ｍｏｎｔｈ）に対して４週（または２８日）を定義する。例えば、第２週は、第８日に開始するとみなされ、研究第２か月目（Ｓｔｕｄｙ Ｍｏｎｔｈ ２）は、第５週／第２９日に開始するとみなされる。無作為化／登録は、移植前の２４時間以内に行うべきであり、薬物投与は、無作為化／登録後に開始することとなる。ＣＦＺ５３３が投与されることとなるならば、第１の用量のＣＦＺ５３３は、移植前または手術中にＩＶ投与されることとなり、クランプを外す時までに完了しなければならない。他の研究薬物は、移植後２４時間以内に、または地域診療に従って開始しなければならない。

【0254】

無作為化／登録されたが移植されなかった患者は、交代させられることとなる。すべての無作為化された／登録された対象は、無作為化された／割り当てられた治療中であるかどうかにかかわらず、第６か月（パート１）または第１２か月（パート２）まで研究を継続することが期待される。すべての対象は、標準治療（ＳｏＣ）での治療の患者について、その最終用量のＣＦＺ５３３の後およそ３か月間、または、研究終了（ＥｏＳ）の来診後２か月間、安全性（例えば、ＳＡＥ）について追跡調査されることとなる。

【0255】

拒絶反応速度が、先験的に定義された停止規則（示さない）を満たす、あらゆる治療群は、研究中のいかなる時点でも、直ちに中断されることとなる。

【0256】

ある群から次への移行（パート１〜２が含まれる）は、先験的に定義された規則に基づくこととなる。投薬または研究の臨床的実施のあらゆる変更は、この研究の承認を担う倫理委員会によって、また、地方条例によって規定される場合には地域保健所によって承認された改正を介して実行されることとなる。

【0257】

安全性評価には、身体検査、ＥＣＧ、バイタルサイン、標準の臨床検査評価（血液学、血液化学、尿分析）、ＡＥおよびＳＡＥモニタリング、ならびに特別な評価が含まれることとなる。

【0258】

選択基準を満たすおよそ６人の患者が、移植前のおよそ１２時間以内に登録され、第１日（ＩＶ）、１５日、２９日、４３日、および７１日に、標準曝露Ｔａｃ（全血トラフ濃度４〜１１ｎｇ／ｍＬ）、ミコフェノール酸モフェチル１．０ｇ ＢＩＤ、およびＣＳと共に、３ｍｇ／ｋｇのＩＶおよびＳＣ ＣＦＺ５３３を受けることとなる（図１３Ａ）。

【0259】

第１の用量のＣＦＺ５３３は、移植前または手術中にＩＶ投与されることとなる。薬物投与は、登録後に開始することとなり、クランプを外す時までに完了しなければならない。その後の用量のＣＦＺ５３３は、およそ３か月の期間、ＳＣ投与されることとなる。

【0260】

他の研究薬物は、移植後２４時間以内に開始しなければならない。

【0261】

登録および移植の日が、研究の第１日であるとみなされることとなる。その後、移植後の入院が行われることとなり、次いで、患者は、第１〜３か月（最長およそ第７１日まで）の間は毎週、次いで、第４〜６か月（最長およそ第１５５日まで）の間はおよそ１週おきに、研究来診に訪れることとなる。

【0262】

累積的な有効性および安全性データは、研究の実行中、継続的に収集されることとなる。

【0263】

ＰＫ、ＰＤ、およびｔＢＰＡＲは、臨床試験チームによって継続的に審査されることとなる。観察されるｔＢＰＡＲの数が、先験的に定義された中止基準を超えた時にはいつでも、研究は中止されることとなる。

【0264】

選択基準を満たすおよそ４５人の患者は、移植前の２４時間以内に２：１様式で無作為化され、２つの治療群のうちの１つに入ることとなる（図１３Ｂ）：１．第２Ａ群、ｎ＝３０：バシリキシマブ２０ｍｇ（第１日、４日）＋１０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）のＣＦＺ５３３（１７回投与）＋ＭＭＦ １．０ｇ ＢＩＤ＋ＣＳ；２．第２Ｂ群 対照／ＳｏＣ、ｎ＝１５：バシリキシマブ２０ｍｇ（第１日、４日）＋Ｔａｃ（４〜１１ｎｇ／ｍＬ）＋ＭＭＦ １．０ｇ ＢＩＤ＋ＣＳ。

【0265】

導入療法は、移植前の２時間以内に、または地域診療に従って開始しなければならない。

【0266】

第１の用量のＣＦＺ５３３は、移植前または手術中にＩＶ投与されることとなる。薬物投与は、無作為化後に開始することとなり、クランプを外す時までに完了しなければならない。その後の用量のＣＦＺ５３３は、１２か月の期間にわたってＩＶ（第２Ａ群）投与されることとなる。

【0267】

他の研究薬物（バシリキシマブは別として）は、移植後２４時間以内に開始しなければならない。第２の用量のバシリキシマブは、第４日に、または地域診療に従って投与されることとなる。

【0268】

無作為化および移植の日が、研究の第１日であるとみなされることとなる。研究の第３日、７日、１５日、２９日、４３日、５７日に、次いで、その後第１２か月まで（最長およそ第３３７日まで）毎月、さらなる治療が施されることとなる。次いで、対象は、研究完了時（Ｓｔｕｄｙ Ｃｏｍｐｌｅｔｉｏｎ）評価を受けることとなる。

【0269】

成功基準（安全性およびｔＢＰＡＲ）が満たされているかどうかを判定するために、パート２の主要評価項目を評価することとなる。注意すべきＡＥまたは安全性が、先験的に定義された中止基準を満たすことに関与するならば、計画された用量レベルの１つを、改正を介して変更または中断することができる。

【0270】

対象は、試験の最後に、研究完了時（Ｓｔｕｄｙ Ｃｏｍｐｌｅｔｉｏｎ）評価を受けることとなる。

【0271】

３．用量／レジメン、治療の期間の理論的根拠
この前向きな多施設研究のパート１に選択された非盲検の適応的デザインは、３か月間の、ＭＭＦ＋ＴａｃおよびＣＳに加えた場合の、反復投与ＣＦＺ５３３の安全性、忍容性、ＰＫ、およびＰＤの注意深い比較および評価を可能にすることとなる。パート２は、成人の新規腎移植レシピエントにおける臓器拒絶反応の初期および維持予防法のために、バシリキシマブ導入＋ＭＭＦおよびＣＳを伴う、十分な検出力をもつＣＮＩを使用しないレジメンにおいて、ＣＦＺ５３３の臨床活性および曝露反応を評価するために、パート１で得られた知識を発展させる。

【0272】

理想的な研究は、この適応的な研究の固有の複雑性（複数の群、頻繁な来診、中間解析、および広範な調査）を考慮して、偏りを最小限にするために、二重盲検のダブルダミー方法論を用いるであろうが、非盲検の設計を利用することが決定されている。この非盲検の設計は、たとえ、突発的なＳＡＥなどの迅速な介入の必要性が生じたとしても、ＣＦＺ５３３の初期検討中の患者のリスクを最小限にすることとなるだけでなく、ＣＦＺ５３３群におけるＴａｃプラセボおよび対照グループにおけるプラセボ注射／注入に関するみせかけの用量調整に伴うさらなる困難および誤りを回避する。研究者バイアスが、特に非盲検の研究設定において、調査的治療を受ける患者の管理に影響を与える可能性があることが認識される。一般に、こうした精査は、研究を対照群に有利に偏らせる。したがって、ＣＦＺ５３３治療群についてのまたはＣＦＺ５３３治療群に対する偏りを最小限にするための取り組みは、同様の標準治療および患者管理を行う限られた数の質の高い移植センターの使用を通じて成し遂げられることとなる。パート２において、非盲検設計によって導入されるあらゆる偏りを克服するために、盲検化された外部の独立した判定委員会（ＡＣ）が設立され、偏りのない、標準化された、盲検化された方式で、疑われる拒絶反応および他の腎臓疾患関連事象について、採取されたすべての生検が中心的に評価されている。判定結果は、ｅＣＲＦに入力され、追加の出力が提供されることとなる。

【0273】

このファースト・イン移植研究には、臨床研究プロトコルにまとめた選択基準および除外基準に従ってドナーから腎臓を受ける新規患者集団が登録されることとなる。この集団は、これらが典型的には、最高レベルの免疫抑制を必要とせずに、移植片機能の遅延を含めた移植後合併症の最も低いリスクを示す、また臨床活性の適正な評価を提供することから選択した。安全性リスクは、重篤な感染症およびそれに関係する悪性病変（例えば、ＰＴＬＤ）、ならびに血栓塞栓症に特に注意して、外部ＤＭＣによって、定期的に審査されることとなる。

【0274】

治療を要したＢＰＡＲおよびＧＦＲの有効性評価項目は、臨床転帰（すなわち、死亡および移植片機能損失）と共にまたは伴わずに、従来の有効性評価項目（例えば、ｔＢＰＡＲ、ＢＰＡＲ）だけではなく移植片機能の評価を含めることに関して、最近のＨＡガイダンス（ＣＨＭＰ／ＥＷＰ／２６３１４８／０６ ２００９）および考察（ＦＤＡ Ｗｏｒｋｓｈｏｐ ２０１２）と一致している。

【0275】

ｔＢＰＡＲ、移植片機能損失、または死亡の複合が、腎移植指標において、多くの以前の研究において評価項目として使用されており、この指標での登録目的のために、保健所によって広く受け入れられている。

【0276】

全体的に見ると、この設計は、腎移植における免疫抑制レジメンの臨床開発のために広域の保健所によって十分に確立された先例と一致している。

【0277】

ＩＶ経路と ＳＣ経路を介して新規腎移植患者に投与されることとなる初回ＣＦＺ５３３用量は、どちらも３ｍｇ／ｋｇ ＣＦＺ５３３である（パート１）。すべてのＣＦＺ５３３治療レジメンについて、第１の用量のＣＦＺ５３３は、クランプを外す時点での末梢のＢ細胞上の十分なＣＤ４０の標的占有および移植された臓器の血管再生を確実にするために、移植手術前にまたは移植手術中にＩＶ投与されることとなる；このタイミングは、外来抗原が最初から存在する中での免疫反応の開始を回避する。患者の好都合および投与の容易さのために、ＳＣ経路が好ましいが、高用量、および手術中の初回用量の投与のために、ＩＶ経路が残されている。

【0278】

以下のセクションは、ＣＦＺ５３３用量全体の理論的根拠、およびパート１および２についての詳細を順に論じている：パート１についての用量選択：健康なボランティアでは、３ｍｇ／ｋｇ（ＩＶまたはＳＣ）が、約４週間、Ｂ細胞上の十分な（＞９０％）ＣＤ４０飽和をもたらした。にもかかわらず、膜結合型標的（Ｌｏｗｅ ｅｔ ａｌ ２０１０）と可溶型標的（Ｓｃｈｗａｂｅ ｅｔ ａｌ １９９９，Ｃｏｎｔｉｎ ｅｔ ａｌ ２００３，Ｋｏｍｕｒａ ｅｔ ａｌ ２００７）の発現レベルおよび／またはターンオーバーの差が、治療用抗体のＰＫ／ＰＤプロフィールに影響を与える可能性があることが認識される。新規腎移植患者における反復投与ＣＦＺ５３３ ＰＫおよびＰＤをプロファイリングするために、３ｍｇ／ｋｇ ＣＦＺ５３３のＩＶ投与とＳＣ投与の両方を、この研究のパート１において、約２ １／２か月かけて調べることとする。さらに、患者間の変動性についてより良く制御する、また、４倍の免疫抑制にさらされる患者の数を最小限にするために、同じ６人の患者内で、ＩＶ投与と隔週および毎月のＳＣ投与との両方を評価することが計画される。パート１のために計画された、予測されるＣＦＺ５３３ ＰＫおよびＣＤ４０受容体占有のシミュレーションを、図１４に示す。移植の時点でのＩＶ負荷用量を用いるＳＣ投与のＣＦＺ５３３ ＰＫ／ＰＤシミュレーションが示される。第１５日、２９日、４３日、および７１日にＳＣ投与。注：黒の太い曲線は、経時的なＣＦＺ５３３濃度を表す（日）。左のｙ軸は、ＣＦＺ５３３濃度をμｇ／ｍＬで表す。灰色の破線は、経時的なＢ細胞上の末梢ＣＤ４０受容体占有を表し、右のｙ軸は、ＣＤ４０受容体占有をパーセント（％）で表す。

【0279】

正常な健康な対象と腎移植患者との間でＣＦＺ５３３の消失が保存されるならば、計画された３回のｑ２ｗｋ ＳＣ投与後のＣ_ｍａｘは、５０μｇ／ｍＬに近づくであろう。ＣＦＺ５３３クリアランスが低下する場合には、ＣＦＺ５３３濃度は、ＩＶ注入の濃度（約８０μｇ／ｍＬ）に近づくまたは上回ることが可能である。

【0280】

このＣＦＺ５３３レジメンは、治療期間にわたる末梢の全血における完全なＣＤ４０抑制をもたらすことが期待される。パート１からの結果は、この試験のパート２で調べることとなるＩＶおよびＳＣ投薬レジメンのモデル化および選択についてより良く知るために使用することとなるＰＫおよびＰＤデータを提供することとなる。過剰免疫抑制のリスクをさらに最小限にするために、試験のこのパートに参加している患者に、バシリキシマブなしの導入療法が施されることとなる。患者はまた、ＣＭＶおよびＰＣＰの予防法を受けることとなり、ＥＢＶの血清学的検査が陰性のレシピエントは除外されることとなる。

【0281】

最終ＣＦＺ５３３用量の投与完了時に、患者は、定義された地域診療に基づいて管理されることとなるＳｏＣを続けることとなり、研究プロトコルあたり６か月を通して観察されることとなる。

【0282】

この試験のパート２では、ＣＦＺ５３３が、１０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）（７回の投与からなる負荷レジメンが、最初の２か月に使用され、次いで、毎月の（ｑ４ｗ）投薬が、研究第５７日に開始する）で調べることとなる。

【0283】

ヒトにおいて確認される安全性および忍容性：単一用量漸増（０．０３〜３０ｍｇ／ｋｇ）のＣＦＺ５３３（ｉ．ｖ．）および３ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）を試験する第１相研究（ＣＣＦＺ５３３Ｘ２１０１）が完了し、試験された最大用量（１０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．））まで、安全上の大きな懸念は示されなかった。臨床経験に基づくと、１０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．）の投薬レジメンは、安全でありかつＴｘ患者において容認できると予測される。

【0284】

前臨床毒性学的研究から得られる適切な安全域：これまでのＧＬＰ毒性研究は、（ｉ）アカゲザルにおける、１０、５０、および１５０ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．およびｉ．ｖ．）での１３週間の毎週のｓ．ｃ．投薬、および（ｉｉ）カニクイザルにおける、１、５０、および１５０ｍｇ／ｋｇでの２６週間の毎週のｓ．ｃ．投薬で、ＣＦＺ５３３を試験している。これらの研究は、１２週または２４週間の提案された静脈内レジメンでのＣＦＺ５３３の使用を妨げることとなるいかなる主要所見も示さなかった。カニクイザルにおける２６週の毒性研究では、定常状態で、１５０ｍｇ／ｋｇ（ＮＯＡＥＬ）での毎週の投薬後に、８３００μｇ／ｍＬ（Ｃａｖ，ｓｓ）の平均濃度が得られた。１か月の期間にわたる相当する全身曝露（ＡＵＣ、定常状態条件）は、２３２４００日＊μｇ／ｍＬであろう。これは、最初の１か月にわたる予測される全身的血漿曝露よりも約５７倍高い（ＡＵＣ０−２８日；図３）。２６週の毒性研究では、ＮＯＡＥＬで、Ｃｍａｘ，ｓｓは、９４９５μｇ／ｍＬであった。これは、ｔｘ患者における提案された静脈内レジメンについての予測されるＣ_ｍａｘ（約４００μｇ／ｍＬ）よりも２４倍高い（図３）。

【0285】

図３は、１０ｍｇ／ｋｇ（コホート２）で静脈内に与えられるＣＦＺ５３３についての、予測される平均血漿中濃度−時間プロフィールを示す。研究第１日、１５日、２９日、および５７日（プラセボ対照期間）、および研究第８５日、９９日、１１３日、および１４１日（非盲検期間）に与えられる１０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．）ＣＦＺ５３３についての平均ＰＫプロフィールをシミュレートした。健康な対象におけるＦＩＨ研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２１０１からのコホート５（３ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．））ＰＫデータの予備的モデルに基づく集団分析から得られたパラメータを使用して、ミカエリスメンテンモデルを適用した。抗ＣＤ４０遮断剤を用いた以前の経験は、ヒトｔｘにおいては存在せず、健康な対象とｔｘ患者との間のＣＤ４０（発現、ターンオーバー）の生物学のいかなる潜在的な違いも、分かっていなかった。提案されたｉ．ｖ．レジメンは、治療期間全体を通して、ｔｘ患者における標的組織におけるＣＤ４０発現の増大について予測するための、４０μｇ／ｍＬを超えて維持される血漿中濃度を提供することが期待された。４０μｇ／ｍＬでの水平な点線は、標的組織における十分なＣＤ４０占有および経路遮断が期待される濃度を超える、血漿中濃度を表している（カニクイザル−１ｍｇ／ｋｇ用量グループにおける２６週の毒性研究からのＰＤデータに基づく）。最初の１か月（より高い（ｈｉｇｈｅｒ）投薬頻度）の間の予測される全身曝露は、４０８７日＊μｇ／ｍＬであり（カニクイザル−毎週の１５０ｍｇ／ｋｇのＮＯＡＥＬにおける２６週の毒性研究における定常状態での１か月にわたって観察された全身的血漿曝露よりも５７倍低い）、予測されるＣ_ｍａｘは、約４００μｇ／ｍＬである。

【0286】

非ヒト霊長類における組織における関連するＰＤ効果：２６週の毒性学的研究（１ｍｇ／ｋｇ用量グループ）では、平均の定常状態血漿中濃度が≧３８μｇ／ｍＬである動物は、リンパ節の皮質Ｂ細胞領域における胚中心の完全な抑制を有していた。１０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．）レジメンは、治療期間全体（プラセボ対照および非盲検、図３参照）を通して、ｔｘ患者における、より高いＣＤ４０発現について予測するための、４０μｇ／ｍＬを超えて維持される血漿中濃度、および標的飽和の喪失に起因する、標的組織における不完全なＰＤ効果を提供することが期待された。

【0287】

ＡＳＫＰ１２４０、ＣＤ４０を遮断するモノクローナル抗体からのデータ：実質臓器移植における、Ａｓｔｅｌｌａｓの抗ＣＤ４０抗体ＡＳＫＰ１２４０からの開示されたＰＫ／有効性データの最近の分析（Ｈａｒｌａｎｄ ｅｔ ａｌ ２０１５）は、組織における効率的な標的介在性の抗体クリアランスが、標的組織における標的発現の有意な増大の結果として、ＣＤ４０遮断の喪失、および有効性の喪失の可能性をもたらす可能性があることを実証した。提案された静脈内レジメンは、治療期間全体を通して、より高いＣＤ４０発現が起こり得る状態で、ＣＤ４０排除経路を飽和させることを目的としている。

【0288】

図１は、進行中の比較研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３（開示しない）のコホート１および２の研究デザインの模式図である。

【0289】

コホート３は、２つの期間を含む：
１．非盲検治療期間（第１日、第１週の投薬から、最終用量まで、および第８５日、第１３週の評価の完了）、
２．追跡調査期間（最終用量の完了後の第１３週から、第１４１日、第２１週まで）（患者が、研究薬物を受けずに８週間追跡される場合）

【0290】

非盲検治療期間では、治療群１の投薬は、ＣＦＺ５３３ ６００ｍｇ（ｓ．ｃ．）（週１回、４週間）で開始し；治療群２では、投薬は、第１日のＣＦＺ５３３ １０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．）で開始する。

【0291】

その後、それぞれ、週１回、４週間（治療群１）および９週間（治療群２）のＣＦＺ５３３ ３００ｍｇ（ｓ．ｃ．）で、投薬を継続する。

【0292】

図２は、進行中の研究比較研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３（開示しない）のコホート３の研究デザインの模式図である。

【0293】

図４は、ＣＦＺ５３３−１０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）の薬物動態を示すグラフである。ＩＶレジメンは、標的組織における十分な標的飽和および完全なＣＤ４０経路遮断を提供した。血漿中濃度＞４０μｇ／ｍＬ（グラフ内の点線）で、組織中のＣＤ４０経路遮断が予測される（ＧＣ発達およびＴ依存性抗原反応の抑制）。１２／２４週の治療後、患者によっては、ＣＤ４０発現が下方調節されるという徴候が現れた。

【0294】

（１）対照薬およびバックグラウンド薬物
成人の新規腎移植レシピエントでは、Ｔａｃ、ＭＭＦ、およびＣＳの使用は、承認されたレジメン（例えばＰｒｏｇｒａｆ（登録商標）ＰＩ ２０１３）であり、世界的に腎移植の８０％超に使用されている現在の標準治療である。Ｔａｃが、ＭＰＡベースのレジメンと、また、ＩＬ−２アンタゴニストを使用する導入と組み合わせられる場合、Ｔａｃについての標識されたトラフ濃度範囲は、４〜１１ｎｇ／ｍＬであり（例えばＰｒｏｇｒａｆ（登録商標）ＰＩ ２０１３）、この範囲が、この臨床研究に用いられることとなる。

【0295】

ＣＦＺ５３３は、パート１では、Ｔａｃ、ＭＭＦ、およびＣＳに加えて、パート２では、ＭＭＦおよび導入療法を用いるＴａｃ／ＣＮＩを使用しないレジメンにおいて試験されることとなる。すべての併用薬物は、ラベルに従って使用されることとなる。

【0296】

（２）タクロリムス（Ｔａｃ）
Ｔａｃは、Ｔ細胞活性化およびＩＬ−２転写を阻止するカルシニューリン阻害剤である。Ｔａｃ（例えばＰｒｏｇｒａｆ（登録商標））は、同種腎移植を受けている患者における臓器拒絶反応の予防について示されている。Ｔａｃは、アザチオプリンまたはミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）または副腎の副腎皮質ステロイドと併用することが推奨される。Ｔａｃを受けているすべての患者について、治療薬物モニタリングが推奨される。腎移植患者では、初回用量のＴａｃ（例えばＰｒｏｇｒａｆ（登録商標））を、移植から２４時間以内に投与することができるが、腎機能が回復するまで遅らせるべきである。ＭＭＦ／ＩＬ−２受容体アンタゴニストと組み合わせて、０．１ｍｇ／ｋｇ／日の開始用量、および４〜１１ｎｇ／ｍＬの最初の１２か月中の標的トラフ濃度が推奨される。腎移植患者における最も一般的な有害反応（≧３０％）は、感染症、振戦、高血圧、異常腎機能、便秘、下痢、頭痛、腹痛、不眠、悪心、低マグネシウム血症、尿路感染症、低リン血症、末梢性浮腫、無力症、疼痛、高脂血症、高カリウム血症、貧血であった。Ｔａｃに関するより多くの情報については、個別の添付文書（例えばＰｒｏｇｒａｆ（登録商標）ＰＩ ２０１３）を参照されたい。

【0297】

（３）ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）
ＭＭＦ（例えばＣｅｌｌＣｅｐｔ（登録商標））は、ミコフェノール酸（ＭＰＡ）、すなわち、Ｔ細胞およびＢ細胞の成長に必要であるプリン（グアニン）生合成におけるイノシン１リン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）の可逆的阻害剤の、プロドラッグである。他の細胞は、別のサルベージ経路を介してプリンを回収することが可能であるので、この影響を逃れることが可能であり、したがって、ＭＭＦは、リンパ球に対する強力な細胞増殖抑制効果を有する。ＭＭＦは、同種腎移植、心臓移植、または肝移植を受けている患者における臓器拒絶反応の予防について示されている。ＭＭＦは、シクロスポリンおよび副腎皮質ステロイドと併用するべきである。腎移植患者に使用するためには、１ｇの用量が１日２回、経口的に投与されること（１日量は２ｇ）が推奨される。ＭＭＦ（例えばＣｅｌｌＣｅｐｔ（登録商標））は、妊娠している可能性のある女性患者に対する警告を載せている。ＭＭＦのいくつかの製造業者は、男性避妊（コンドーム）を推奨している。妊娠中の使用は、第一期妊娠喪失および先天性奇形のリスク上昇を伴う。生殖可能な女性（ＦＲＰ）は、妊娠予防および計画に関して助言を受けなければならない。ＭＭＦの他の一般的な副作用には、下痢、嘔吐、疼痛、腹部疼痛、下腿、足首、および足のむくみ、高血圧が含まれる。より多くの情報については、個別の添付文書（例えばＣｅｌｌＣｅｐｔ（登録商標）ＰＩ ２０１３）を参照されたい。

【0298】

（４）バシリキシマブ
バシリキシマブ（例えばＳｉｍｕｌｅｃｔ（登録商標））は、ＩｇＧ１アイソタイプのキメラＣＤ２５モノクローナル抗体である。これは、活性化されたＴリンパ球の表面上の高親和性ＩＬ−２受容体（ＣＤ２５）のｐ５５サブユニット（Ｔａｃ抗原）のインターロイキン−２（ＩＬ−２）結合部位で、アンタゴニストとして作用する。バシリキシマブは、シクロスポリンおよび副腎皮質ステロイドを含有する免疫抑制レジメンの一部として使用される場合の、腎移植を受けている患者における急性臓器拒絶反応の予防について示されている。バシリキシマブは、もっぱら中心または末梢ＩＶ投与用である。再構成されたバシリキシマブは、ボーラス注射静注として与えられる、または通常の生理食塩水またはデキストロース５％で２５ｍＬ（１０ｍｇバイアル）若しくは５０ｍＬ（２０ｍｇ／バイアル）の体積に希釈されて２０〜３０分かけてＩＶ注入として投与されるべきである。成人の患者のための推奨されるレジメンは、２回の２０ｍｇ用量であり；第１の用量は、移植前の２時間以内に与えられることが示唆され、第２の用量は、移植の４日後に与えられることが示唆される。ボーラス投与は、悪心、嘔吐、および疼痛を含めた局所的反応を伴う可能性がある。

【0299】

４．治療
この研究では、以下の薬物が使用されることとなり、このプロトコル、および適用可能な場合には地域の現在の標識法に従って投与されることとなる。地域の承認状況および規制に依存して、列挙されたすべての剤形が、それぞれの国において利用可能というわけではない。対象が無作為化される治療レジメンは、最大４つの構成成分：ＭＭＦ（すべての研究パート）、ＣＳ（すべての研究パート）、ＣＦＺ５３３および／またはＴａｃ（パート１では両方；パート２ではいずれか一方）、およびバシリキシマブ（パート２のみ）を含む。

【0300】

ＣＦＺ５３３は、再構成を必要とする、１５０ｍｇ／ｍＬの凍結乾燥された非盲検のバルク薬物として提供される。注入液／注射液のためのＣＦＺ５３３ １５０ｍｇ／ｍＬ濃縮物（バイアル中の液体）が、導入されることとなる。調製および投与についての指示が、別の薬学マニュアルに記載されるべきである。

【0301】

併用薬物は、ラベルに従って使用されることとなる。Ｔａｃ（例えばＰｒｏｇｒａｆ（登録商標）またはＧｅｎｅｒｉｃｓ）０．５ｍｇ、１．０ｍｇ、若しくは５．０ｍｇカプセル剤または錠剤として。ミコフェノール酸モフェチル（例えばＣｅｌｌＣｅｐｔ（登録商標）またはＧｅｎｅｒｉｃｓ）２５０ｍｇ若しくは５００ｍｇフィルムコート錠、または２５０ｍｇカプセル剤、またはＩＶ投与のための５００ｍｇバイアル。滅菌水での再構成後のＩＶ投与のための２０ｍｇ凍結乾燥バイアルとしてのバシリキシマブ。経口およびＩＶ投与のための副腎皮質ステロイド（ＣＳ）、ＭＭＦ、Ｔａｃ、およびバシリキシマブは、局所的に与えられることとなる。

【0302】

プロトコルにより定義される以外の追加の免疫抑制剤は、使用することができない。

【0303】

パート１では、対象は、第１群に登録されることとなる。パート２では、対象は、群２Ａ〜２Ｂの１つに無作為に割り付けることとなる。研究治療は、次の通りに定義される。

【0304】

パート１：第１群、ｎ＝６：３．０ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）のＣＦＺ５３３（５回の投与；第１の用量ＩＶ）＋Ｔａｃ（４〜１１ｎｇ／ｍＬ）＋ＭＭＦ １．０ｇ ＢＩＤ＋ＣＳ。パート２：第２Ａ群、ｎ＝３０：バシリキシマブ２０ｍｇ（第１日、４日）＋１０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）のＣＦＺ５３３（１７回の投与）＋ＭＭＦ １．０ｇ ＢＩＤ＋ＣＳ。第２Ｂ群 対照／標準治療、ｎ＝１５：バシリキシマブ２０ｍｇ（第１日、４日）＋Ｔａｃ（４〜１１ｎｇ／ｍＬ）＋ＭＭＦ １．０ｇ ＢＩＤ＋ＣＳ。

【0305】

被験薬ＣＦＺ５３３は、Ｎｏｖａｒｔｉｓによって調製され、非盲検化されたバルク薬物として研究者に供給されることとなる。

【0306】

パート２における研究薬物の調製のために、盲検化されていない薬剤師または指名された人が、研究者のサイトで、治療コードを受け取るために、ＩＲＴシステムにログインすることが必要となる。さらに、盲検化されていない薬剤師または指名された人は、研究者のサイトで、別の薬学マニュアルに基づいて、対象への投与のための薬物を調製することとなる。対象特有の分配プロセスの適切な文書化が継続されるべきである。バルク薬物ラベルは、現地の言葉となり、各国の法的必要条件に従うこととなり、対象に関する情報ではなく薬物についての保管条件が含まれることとなる。

【0307】

（１）導入療法
対照群、またはＴａｃ、ＭＭＦ、および／またはステロイドがプロトコルに従って投与されることとなる群に無作為に割り付けられた患者に対して、センターの診療に従って移植前に投与することができるが、こうした診療は、所与のセンターのすべての対象に対して常に変わることなく適用されなければならない。無作為化／登録では、すべての対象は、割り当てられたレジメンに従わなければならない。導入療法、およびＴａｃまたはＭＭＦも含めた移植前免疫抑制は、免疫抑制カテゴリー内の併用薬物（Ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ）ｅＣＲＦに記録されるべきである。

【0308】

（２）バシリキシマブ導入療法
導入療法を受けるために無作為化された対象は、ＩＶ投与される２×２０ｍｇ用量のバシリキシマブを受けることとなる。第１の用量は、移植手術の前の２時間以内に与えられるべきであり、第２の用量は、移植後第４日に、または地域診療に従って投与されるべきである。

【0309】

２０ｍｇバイアルが、５ｍＬ滅菌水で再構成されるべきである。生じた溶液は、等張性であり、ＩＶボーラスとして注射することができる。あるいは、この溶液を、滅菌した生理食塩水および５％デキストロースで５０ｍＬの体積に希釈して、３０分かけて注入として投与することができる。ボーラス投与後に静脈刺激が生じたならば、次の用量は、（適切な場合）３０分の注入として投与されるべきである。維持用量は存在せず、導入療法には他の抗体は許容されない。すべてのバシリキシマブ用量および変更は、免疫抑制カテゴリー内の併用薬物（Ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ）ｅＣＲＦに記録されなければならない。

【0310】

（３）ＣＦＺ５３３療法
ＣＦＺ５３３は、それぞれの来診時に、権限が与えられた研究スタッフによって、ＩＶ注入またはＳＣ注射によって患者に投与されることとなる。

【0311】

第１の用量のＣＦＺ５３３は、移植前または手術中にＩＶ投与されることとなる。薬物投与は、無作為化／登録後に開始することとなり、クランプを外す最大６時間前に、またはクランプを外す時までに完了しなければならない。

【0312】

研究薬物調製および投与ガイドラインは、別の薬学マニュアルに記載されている。対象は、ベースライン来診時に体重測定することとなり、この体重値は、最初の研究薬物調製および用量の算出のために使用されることとなる。ほとんどの実際の体重は、さらなる用量算出の根拠として役立つこととなる。

【0313】

対象に処方および投薬されるすべての投薬量、ならびに研究中のすべての用量変更は、にＣＦＺ５３３用量投与記録（Ｄｏｓｅ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ｒｅｃｏｒｄ）ｅＣＲＦに記録されなければならない。患者は、研究者によって適切であるとみなされるならば、それぞれの治療後に、解放することができる。

【0314】

（４）ＭＭＤ投与
ミコフェノール酸モフェチルは、５００ｍｇの２錠または２５０ｍｇの４カプセル（ｂ．ｉ．ｄ．）（２ｇ／日）となる。移植後＞２４時間挿管されたままである、および／または他の理由で経口薬物を飲み込むことができない患者については、経口への転換が可能になるまで、ＩＶ ＭＭＦに置換することができる。

【0315】

第１の用量のＭＭＦは、無作為化／登録の直後に、および同種移植片の移植片血流再開後２４時間以内に、または地域診療に従って投与されることとなる。

【0316】

すべてのＭＭＦ用量および変更は、用量投与記録（Ｄｏｓｅ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ｒｅｃｏｒｄ）ｅＣＲＦ（パート１）、および免疫抑制カテゴリー内の併用薬物（Ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ）ｅＣＲＦ（パート２）に記録されなければならない。

【0317】

（５）タクロリムス投与
Ｔａｃは、ＰＯカプセル剤（ｂ．ｉ．ｄ．）として投与され、４〜１１ｎｇ／ｍＬの目標範囲内に維持するように調整されることとなる。Ｔａｃは、可能な限り早く、また、移植片の血流再開後２４時間以内に開始されるべきである。この研究におけるＴａｃの最も低い可能な投薬は、０．５ｍｇ（ｂ．ｉ．ｄ．）である。Ｔａｃが、連続して２１日よりも長い間、中断されるならば、研究レジメンを継続することはできず、患者は、無作為化された治療を中断され、地域診療によって管理されなければならない。その研究レジメンを中断する対象は、研究において、パート１における第６か月またはパート２における第１２か月まで、標準治療を維持することが期待される。

【0318】

Ｔａｃ投薬は、研究者によって必要に応じて変更され、それぞれの来診時に、タクロリムス用法用量記録（Ｄｏｓａｇｅ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ｒｅｃｏｒｄ）（パート１）および併用薬物（Ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ）（パート２）ｅＣＲＦに記録されることとなる。Ｔａｃ不耐性（例えば、腎毒性、神経毒性）の場合には、Ｔａｃの用量低下が必要である可能性がある。Ｔａｃトラフレベルが、必要とされる目標レベル外であることが起こるならば、研究者は、用量低下の開始日および理由を、タクロリムス用法用量記録（Ｄｏｓａｇｅ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ｒｅｃｏｒｄ）（パート１）および併用薬物（Ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ）（パート２）ｅＣＲＦに記録するために、意図されるＴａｃトラフレベルを確認することを求めることとなる。

【0319】

Ｔａｃ代謝を妨げることが知られている薬物の同時投与は、可能ならば避けられるべきである。これらの薬物が必要とされるならば、研究者は、Ｔａｃトラフレベルを慎重に監視するべきである。

【0320】

患者は、採血の前日の最終投与の時間を記録し、朝の用量を、血液採取が完了した後に投与することができるように、来診時にするように指示されることとなる。

【0321】

（６）副腎皮質ステロイド
副腎皮質ステロイド（ＣＳ）は、それぞれのサイトに登録されたすべての患者において一致するように、地域の標準診療に従って投与されることとなる。ＣＳの投薬は、免疫抑制カテゴリー内の併用薬物（Ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ）ｅＣＲＦに記録されるべきである。

【0322】

５．結果
ＣＤ４０シグナル伝達は、自己免疫疾患（ＡＤ）の病因と関連しており、全身性ＡＤを患う患者は一般に、ＣＤ４０発現の増大および血清／血漿ＣＤ４０レベルの上昇を呈する。

【0323】

ＣＦＺ５３３は、標的介在性消失（ＴＭＤ）、すなわち、（用量に相関して）かなりの割合のＣＦＺ５３３がＣＤ４０と高親和性で結合され、その結果、この相互作用が、ＣＦＺ５３３のＰＫプロフィールに反映されるプロセスを受ける。こうした状況では、実質臓器移植患者を治療するための適切な用法用量を定義するために検討するための追加の因子には、体内のＣＤ４０発現レベル、ＣＤ４０合成および分解（標的の生物学）、ならびにＣＦＺ５３３−ＣＤ４０結合動態が含まれる。

【0324】

健康なボランティア、関節リウマチ、一次性シェーグレン症候群、腎移植、肝移植、グレーブス病、および重症筋無力症患者におけるＣＦＺ５３３の以前の臨床経験は、ＣＤ４０発現の上昇が、ＣＤ４０が十分には飽和していなければ、ＣＦＺ５３３の高い排除（クリアランス）速度は、標的エンゲージメントの喪失、および標的組織におけるＣＤ４０経路遮断の喪失と関連することを示している。十分なＣＤ４０占有下では、ＣＦＺ５３３のクリアランス全体へのＣＤ４０の寄与は最小限であり、ＣＦＺ５３３の消失は、主として、ＦｃＲｎ受容体（再利用／サルベージによるＩｇＧ恒常性を担う高能力受容体）へのＣＦＺ５３３結合の結果である。図４は、図１および２、研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３（本明細書には開示しない）に開示されたレジメンに従って投与された患者におけるＣＦＺ５３３の血漿中濃度を示す。

【0325】

薬物動態／薬力学的展望および用量設定戦略から、患者における適切な用法用量が、負荷レジメン、それに続く維持レジメンを含むであろう可能性が高い。

【0326】

おそらく最初の１か月の間、ＩＶまたはＳＣ投与を通した負荷レジメンが正当化される。なぜなら、ＣＦＺ５３３は、ＣＤ４０介在性の排除を受けるからである。治療の開始時にＣＤ４０が十分には飽和されていないならば、ＣＤ４０発現の上昇の状況で、ＣＦＺ５３３の高い排除（クリアランス）速度は、標的エンゲージメントの喪失、および標的組織におけるＣＤ４０経路遮断の喪失と関連する可能性が高い。負荷期間の後、患者における進行中の研究ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０３（本明細書には開示しない）からのＰＫデータを使用する予備的なモデル化に基づいて、ＳＣ維持レジメンが、標的組織における十分なＣＤ４０経路遮断を確実にするように選択されることとなる。

【0327】

図１１は、実際のＣＦＺ５３３血漿中濃度と共にプロットされた、新規腎移植患者におけるおよび維持腎移植患者における、ＣＦＺ５３３についての予測される血漿中濃度−時間プロフィールを表している。

【0328】

これらの線は、典型的な移植患者についてのＣＦＺ５３３血漿中濃度の予測される時間経過を表す（新規移植患者；６００ｍｇ（ＳＣ）Ｑ２Ｗ維持レジメン−長破線、または３００ｍｇ（ＳＣ）Ｑ２Ｗ維持レジメン−実線；または４５０ｍｇ（ＳＣ）Ｑ２Ｗ維持レジメン−短破線）。これらのレジメンのそれぞれについて、定常状態でのトラフＣＦＺ５３３血漿中濃度についての９０％予測区間を示す。これらの予測は、体重の範囲が５０〜１２０ｋｇである患者についてのものである。別の研究において測定されたＣＦＺ５３３血漿中濃度を、灰色の点として示す。予測は、ファースト・イン・ヒューマン研究および移植研究からのデータに適合させたモデルに基づく。

【0329】

事後平均ｔＢＰＡＲ率を、９５％信用区間、ｔＢＰＡＲを患う患者の数、および閾値、１０％、１５％、２０％、および２５％を超える事後確率と共に示した。ｔＢＰＡＲ率についての事後確率分布のプロットを提供した。

【0330】

あらかじめ定義した成功基準は、ＣＦＺ５３３群と対照グループとの間のｔＢＰＡＲ率の、（少なくとも６０％の証明のレベル（ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｐｒｏｏｆ）を用いた）２０パーセントポイント未満の差であるとみなされた。

【0331】

研究の全体的な結果を、表２に示す。

【0332】

【表2】

【0333】

薬物動態パラメータの全体像は、表３において参照される。

【0334】

【表3】

【0335】

治療を要した生検で確認された急性拒絶反応（ｔＢＰＡＲ）の頻度および重症度（Ｂａｎｆｆ分類）によって定義される有効性を、表４に示す（判定されたデータ）。

【0336】

【表4】

【0337】

有効性データの統計解析の全体像を、表５に示す。

【0338】

【表5-1】

【0339】

【表5-2】

【0340】

パート２におけるｅＧＦＲを、表６に示す。

【0341】

【表6】

【0342】

有害事象（ＡＥ）の概要は、表７において参照される。ＡＥは、第１の患者の第１の来診（ＦＰＦＶ）から最終の患者の最終の来診（ＬＰＬＶ）まで収集した。

【0343】

【表7】

【0344】

結論として、この研究は、ＣＦＺ５３３群の患者が、研究全体を通して、有意に良好な腎機能を有しており；ｅＧＦＲの差はおよそ１０ｍＬ／分であり、急性拒絶反応のリスクは、Ｔａｃで治療された患者のリスクと同様であったことを示す。

【0345】

報告されたＢＰＡＲの割合は、どちらの治療群においてもかなり高かった。これは、最近失敗した競合者の試験後の研究者の特別な警戒による可能性が最も高い。したがって、独立した盲検化されたＡＣが、試験の成功のために不可欠であり、将来の移植研究についての重要な学びを提供した。

【0346】

この研究はまた、ＮＯＤＡＴのリスクが、ＣＦＺ５３３患者では、はるかに低いように見え（ＴＡＣ＋ＭＭＦで治療された患者の１６．６７％（パート２）と比較して；ＣＦＺ５３３＋ＴＡＣ＋ＭＭＦで治療された患者の０％（パート１）；ＣＦＺ５３３＋ＭＭＦで治療された患者の８．８２％）、どちらかと言えば、合併症が、ＣＦＺ５３３を用いると、Ｔａｃを用いるよりも少ない傾向があったことを示す。したがって、ＣＦＺ５３３は、良好な耐容性を示し、安全性プロフィール、ＰＫ、および有効性の結果は、第ＩＩ／ＩＩＩ相試験へのさらなる進行を裏付ける。

【0347】

実施例８．ＣＦＺ５３３、すなわち遮断性の非細胞枯渇抗ＣＤ４０モノクローナル抗体のインビトロおよびインビボ特性の特徴
１．方法
ＣＤ４０に対するＣＦＺ５３３の親和性の表面プラズモン共鳴分析
組換えＣＦＺ５３３の結合分析を、ランニング緩衝液としてＨＢＳ−ＥＰ＋を用いて２５℃で実施した。典型的な結合分析サイクルは、３つのステップ（ｉ）チップ表面上に固定されたタンパク質Ａを介する抗体の捕捉、（ｉｉ）捕捉された抗ＣＤ４０抗体へのＣＤ４０抗原の結合、および（ｉｉｉ）タンパク質Ａ表面の再生から構成されていた。抗原−抗体結合相互作用の反応速度定数（ｋｉｎｅｔｉｃ ｒａｔｅ ｃｏｎｓｔａｎｔ）を決定するために、ブランク注射からの反応を二重参照して、結合データを処理した。結合曲線を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ１００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアの１：１相互作用モデルを使用して局所的に適合させて、反応速度定数を決定した。平衡解離定数（ＫＤ）の値を、速度定数ｋｄ／ｋａの比として算出した。すべての結合測定は、２つの独立した実験で実施した。

【0348】

ＦｃγＲＩＩＩＡに対するＣＦＺ５３３の親和性の表面プラズモン共鳴分析
４−アミノ酸精製タグ（４ＡＰＰ；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）およびＡｖｉビオチン標識タグ（ＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ；Ａｖｉｄｉｔｙ）でタグ付けされたヒトＦｃγＲＩＩＩＡの細胞外ドメインを、Ｇｅｎｅａｒｔ：ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）１５８Ｖ（Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０８６３７、１７−１９９）、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ １５８Ｆ（Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０８６３７、１７−１９９）によって合成し、ＨＥＫ２９３細胞において発現させ、抗４ＡＰＰ親和性クロマトグラフィーを用いて精製した。受容体を、ストレプトアビジンセンサーチップ（Ｇｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ）に結合させたＢｉｒＡ（Ａｖｉｄｉｔｙ）を用いて部位特異的にビオチン標識し、異なるＡｂの平衡−結合レベルを、記載されている通りに（Ｗａｒｎｃｋｅ ｅｔ ａｌ．２０１２）表面プラズモン共鳴（Ｔ１００、Ｇｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ）によって分析した。平衡解離定数（ＫＤ）は、１：１モデルによって算出した。

【0349】

ヒト白血球培養
全血バフィーコートは、健康なボランティア（Ｂｌｕｔｓｐｅｎｄｅｚｅｎｔｒｕｍ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）から、または、Ｓｗｉｓｓ Ｈｕｍａｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｃｔおよび責任ある倫理委員会（Ｅｔｈｉｋｋｏｍｍｉｓｓｉｏｎ Ｎｏｒｄｗｅｓｔ−ｕｎｄ Ｚｅｎｔｒａｌｓｃｈｗｅｉｚ；ＥＫＮＺ）の承認に従ってインフォームドコンセント下で提供された健康なボランティアから採取された全血から得た。ヒト扁桃試料は、Ｅｒｇｏｌｚ Ｋｌｉｎｉｋ（Ｌｉｅｓｔａｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）（研究プロトコルＮｏ．１０００２４４ ｖ．０３；Ｅｔｈｉｋｋｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｂｅｉｄｅｒ Ｂａｓｅｌ；ＥＫＢＢによって承認されている）とＫａｎｔｏｎｓｐｉｔａｌ（Ｌｉｅｓｔａｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）（研究プロトコルＮｏ．ＴＲＩ０１４９ ｖ．０１；ＥＫＮＺによって承認されている）の両方から得た。インビトロ培養実験については、詳細な方法についての補足資料を参照されたい。簡単に言うと、全血、単離されたＰＢＭＣ、インビトロで得られた単球ＤＣまたはヒト扁桃Ｂ細胞を、単一濃度のまたは用量漸増のＣＦＺ５３３または適切な対照抗体と共にインキュベートした。経路遮断実験については、これらの培養物は、ＥＣ８０濃度の組換えヒトＣＤ１５４（５μｇ／ｍｌ）およびＩＬ−４（７５ｎｇ／ｍｌ）も含んでいた。インビトロアッセイの読み取りには、チミジン取り込み（^３Ｈ−ＴｄＲ）によって評価される増殖、Ｂ細胞上の活性化分子ＣＤ６９の発現のフローサイトメトリーに基づく評価、およびＥＬＩＳＡによって評価されるサイトカイン分泌が含まれていた。ＮＨＰ全血およびＰＢＭＣについて、同様のアッセイを使用した。いくつかのヒト全血実験では、蛍光的にタグ付けしたＣＦＺ５３３を使用して、ＣＤ４０受容体占有も調べた。適切な場合には、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（登録商標）ソフトウェアにおける線形回帰に基づく曲線適合を使用して、ＩＣ５０値を推定した。

【0350】

インビトロ細胞枯渇アッセイ
詳細な方法についての補足資料を参照されたい。簡単に言うと、ＣＦＺ５３３がＣＤ２０^ｐｏｓＢ細胞の枯渇を媒介する能力を、Ｂ細胞枯渇抗体リツキシマブと比較して、３日の期間にわたって、ヒト全血においてモニタリングした。ＣＤＣについては、ＣＦＺ５３３またはリツキシマブを、ウサギ補体の存在または非存在下で、ＲＡＪＩ Ｂ細胞と共にインキュベートし、細胞溶解を発光によって評価した。

【0351】

ＣＦＺ５３３の内在化
蛍光的にタグ付けしたＣＦＺ５３３およびｒＣＤ１５４の内在化を、ヒトＢ細胞株ＲＩ−１（Ｔｈ’ｎｇ ｅｔ ａｌ，１９８７）を使用して、インビトロで評価した。ＣＦＺ５３３内在化のＣＤ４０依存性は、ＣＤ４０ノックアウトＲＩ−１細胞株を使用して評価した。内在化は、製造業者の指示書に従ってＡｍｎｉｓ（登録商標）イメージフローサイトメーター（ｉｍａｇｅ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）（Ｍｅｒｃｋ ＫＨａＡ，Ｄａｒｎｓｔａｄｔ）を使用して評価し、データはＩｍａｇｅＳｔｒｅａｍ（登録商標）^Ｘソフトウェアを使用して解析した。

【0352】

インビボ研究
単一用量薬物動態／薬力学的（ＰＫ／ＰＤ）研究は、７．５〜８．５歳（６．５±２．６ｋｇ）の、フィリピン（Ｓｉｃｏｎｂｒｅｃ，Ｍａｋａｔｉ Ｃｉｔｙ，Ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｓ）で飼育下繁殖された、生物製剤治療を受けていないカニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）を利用した。動物の取り扱い、世話、薬物治療、および血液採取は、動物保護に関するＳｗｉｓｓ Ｆｅｄｅｒａｌ Ｌａｗに従って実施される（動物ライセンスＢＳ ＃１９００、ＢＳ＃１４９５）。リコール免疫化実験については、本発明者らは、Ｃｏｖａｎｃｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ＧｍｂＨ，Ｍｕｅｎｓｔｅｒ，Ｇｅｒｍａｎｙで行われた毒性研究からの動物を利用した（論文準備中）。この研究は、動物福祉法および認められている動物福祉の標準に関して国の法的規制の徹底順守で、認可された研究プロトコルおよび地域の標準の手術手順に従って実施した。

【0353】

ＰＫ研究では、ＣＦＺ５３３が、１６．２（５５３２）、１８．５（５５３１）、および２０（５５３０）ｍｇ／ｋｇという計算された単一用量で、３匹の動物に投与された。ＣＦＺ５３３血清中濃度、末梢ＴおよびＢリンパ球の数、およびＣＦＺ５３３による末梢Ｂ細胞上のＣＤ４０占有の分析のために、血液を採取した。リコールＴＤＡＲ実験については、動物は、研究第８日（初回抗原刺激）および４３日（リコール；ＣＦＺ５３３治療中）に、それぞれ、Ａｌｕｍ中のキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）で免疫を受けた。初回抗原刺激およびリコール免疫化の１日前、および７、１４、および２１日後に、血清を採取した。ＫＬＨ特異的なＩｇＭ／ＩｇＧ力価は、標準としてカニクイザル抗ＫＬＨ ＩｇＭ／ＩｇＧ標準血清を使用するサンドイッチＥＬＩＳＡを用いて決定した。ＰＫ評価は、上に記載している通りに実施した。ＰＫおよびＴＤＡＲ実験の追加的詳細については、補足資料を参照されたい。

【0354】

胚中心の組織学的分析
ホルマリン固定し、パラフィンワックスに包埋した（ＦＦＰＥ）脾臓、およびリンパ節（腋窩、下顎、および腸間膜）の切片を、ヘマトキシリンおよびエオジンで、ならびに、以下のマーカー：抗ＣＤ２０抗体（Ｍ０７５５、Ｄａｋｏ）、抗ＣＤ８抗体（ＲＭ−９１１６−ＳＯ、Ｍｅｄａｃ）、およびＫｉ６７（Ｍ７２４０、Ｄａｋｏ）を用いる間接的な免疫ペルオキシダーゼ方法（ＤａｋｏによるＨＲＰ＋ＤＡＢ）で染色した。すべてのスライドを、評価し、染色の強度に従って（陰性から強度まで）等級分けした。さらに、組織内のあらゆる免疫組織化学的染色された細胞の染色パターンおよび分布も記載した。

【0355】

２．結果
ＣＦＺ５３３は、ヒトＣＤ４０と結合し、複数のＣＤ４０発現細胞型のｒＣＤ１５４誘導性の活性化を阻害する。

【0356】

表３は、組換えヒトＣＤ４０に対するＣＦＺ５３３のＫＤが、表面プラズモン共鳴によって０．３ｎＭと決定され、したがってその親抗体ＨＣＤ１２２（ＣＦＺ５３３の野生型ＩｇＧ１バージョン）と非常に類似していたことを示す。

【0357】

【表8】

【0358】

図５Ａは、複数のドナー（それぞれ、５、３２、および６人のドナー）からの、ヒト全血培養物、ＰＢＭＣ、および単離された扁桃Ｂ細胞の、ｒＣＤ１５４およびＩＬ−４介在性の増殖（３Ｈ−ＴｄＲ）に対する、ＣＦＺ５３３の効果を示す。データは、正規化されたｃｐｍとして示す（ｒＣＤ１５４＋ＩＬ−４＝１００；点線）。図５Ｂは、ＣＦＺ５３３が、一晩の培養後のｒＣＤ１５４刺激されたｍｏＤＣによるＴＮＦ−α産生を阻害したことを示す。図５Ｃは、ＣＦＺ５３３の遅延添加（ｄｅｌａｙｅｄ ａｄｄｉｔｉｏｎ）が、ｒＣＤ１５４＋ＩＬ−４介在性のヒトＰＢＭＣ増殖を阻害したことを示す。ｒＣＤ１５４＋ＩＬ−４での刺激の１時間前、同時、または２および６時間後に、ＣＦＺ５３３をヒトＰＢＭＣに添加し、その後の４日間の培養の後に、増殖（３Ｈ−ＴｄＲ）を評価した（点線および破線は、ｒＣＤ１５４＋ＩＬ−４、および細胞＋培地対照を表す）。すべてのデータについて、ｒＣＤ１５４誘導性の刺激の読み取りの平均値およびＳＤを、対数変換したＣＦＺ５３３濃度の関数としてグラフで示した。適切な場合には、ＩＣ５０値を、線形回帰に基づく曲線適合を使用して決定した。図５Ｄは、ＣＦＺ５３３によるＣＤ４０占有と経路遮断との関係を示す。１０人のドナーからのヒト全血を、用量漸増のＣＦＺ５３３の存在下で、ｒＣＤ１５４と共に、一晩培養した。経路活性化の程度（Ｂ細胞上の％ＣＤ６９ｐｏｓ）、およびＣＤ４０占有の程度（ＣＦＺ５３３をＡｌｅｘａＦｌｏｕｒ ４８８標識して染色）を評価した。白丸および黒丸は、それぞれ、ＣＦＺ５３３によって占有されるＣＤ４０の割合、およびＣＤ２０ｐｏｓ Ｂ細胞上のＣＤ６９ｐｏｓ発現細胞の割合を、対数変換したＣＦＺ５３３濃度の関数として示す（平均値およびＳＤを示す）。点線および破線は、すべてのドナーに対して正規化された、ｒＣＤ１５４誘導性のＣＤ６９発現、および細胞＋培地対照培養物を表す。

【0359】

図５Ａは、ＣＦＺ５３３が、複数のドナーからのヒト全血培養物、ＰＢＭＣ、ならびに精製された扁桃Ｂ細胞のｒＣＤ１５４誘導性の増殖を、それぞれ０．０２４μｇ／ｍｌ（０．１６ｎＭ）、０．０１７μｇ／ｍｌ（０．１２ｎＭ）、および０．０７１μｇ／ｍｌ（０．４７ｎＭ）の力価（ＩＣ５０値）で、完全に阻害したことを示す。さらに、本発明者らは、ＣＦＺ５３３が、初代単球由来樹状細胞（ｍｏＤＣ）によるｒＣＤ１５４誘導性のＴＮＦ産生を、０．０４μｇ／ｍｌ（０．２７ｎＭ）のＩＣ５０で完全に阻止したことを実証することができた（図５Ｂ）。

【0360】

以前に公表されている通り、ＣＦＺ５３３は、カニクイザル由来のＰＢＭＣのｒＣＤ１５４誘導性の増殖を阻害した（Ｃｏｒｄｏｂａ ｅｔ ａｌ．，２０１５）。ＣＦＺ５３３は、ヒト、アカゲザル、およびカニクイザル動物由来のＰＢＭＣのｒＣＤ１５４誘導性の増殖を、同様の力価（それぞれ０．０２、０．０３、および０．０１μｇ／ｍｌのＩＣ５０）で阻害し、また、これらの種由来のＢ細胞上のＣＤ４０と、およそ０．２μｇ／ｍｌのＥＣ５０値で結合することができた（表４参照）。

【0361】

【表9】

【0362】

上の細胞データは、ＣＦＺ５３３が、ｒＣＤ１５４の前にまたはｒＣＤ１５４と同時に添加される実験から得られ、これは、この抗体が、内在性リガンドの結合を妨げることができることを示している。本発明者らはまた、ｒＣＤ１５４を含有する白血球培養の開始の最大６時間後のＣＦＺ５３３の添加が、最小限の力価の損失を伴って、細胞活性化の完全な阻害をもたらすことを実証することができ、これは、ＣＦＺ５３３が、ＣＤ４０から内在性リガンドを外して取って代わることができることを示している（図５Ｃ）。

【0363】

本発明者らはまた、ＣＦＺ５３３によるＣＤ４０占有の程度と、経路阻害の程度との間の関係を評価することを望んでいた。それを行うために、本発明者らは、複数のドナーからの全血において、ＣＦＺ５３３によるＣＤ４０受容体占有と、ｒＣＤ１５４誘導性のＣＤ６９を、同時に評価した。図５Ｄは、少なくとも９０％の、ＣＦＺ５３３によるＣＤ４０受容体占有が、ＣＤ４０経路活性化の完全な遮断のために必要とされていたことを示す。受容体占有と経路阻害との間の同様の関係はまた、ＣＤ４０経路活性化の読み取りとしてＣＤ２３およびＣＤ５４を使用して認められた（データは示さない）。

【0364】

ＣＦＺ５３３はインビトロで最小限の刺激の可能性を呈する
ＣＦＺ５３３がヒト白血球の活性化を刺激する能力を、全血におけるＢ細胞上の活性化分子ＣＤ６９の増殖および上方調節を使用して評価した。図６Ａは、以下に関するデータを示す。ｉ．複数のドナー（ｎ＝１３）からのヒト全血を、用量漸増のＣＦＺ５３３と共にインキュベートし、培養の３日後に増殖（^３Ｈ−ＴｄＲ）を評価した。ｉｉ．複数のドナー（ｎ＝２６）からのヒトＰＢＭＣを、用量漸増のＣＦＺ５３３と共にインキュベートし、培養の３日後に増殖（^３Ｈ−ＴｄＲ）を評価した。どちらのグラフについても、データは、対数変換したＣＦＺ５３３濃度の関数として、正規化されたｃｐｍの平均値およびＳＤとして示す（ｒＣＤ１５４＋ＩＬ−４＝１００；点線、細胞＋培地＝０；破線）。図６Ｂは、ＣＦＺ５３３が、追加の刺激の存在下で、ヒトＰＢＭＣ増殖を誘発しないことを示す。ヒトＰＢＭＣを、ＩＬ−４（ｉ）または抗ＩｇＭ Ｆ（ａｂ’）２．（ｉｉ）の存在下で、用量漸増のＣＦＺ５３３で３日間刺激した。３Ｈ−ＴｄＲ（ｃｐｍ）の平均およびＳＤを、対数変換したＣＦＺ５３３濃度の関数として示す。図６Ｃでは、刺激なし、ＣＦＺ５３３、アイソタイプ対照、またはｒＣＤ１５４を伴うヒト全血（４１人のドナー）が、どのように一晩培養されたか、また、Ｂ細胞上のＣＤ６９発現がＦＡＣＳによってどのように評価されたかを示す。それぞれの点は、単一のドナーからのデータを表し、平均の％ＣＤ６９値は、水平な赤線によって示される。

【0365】

図６Ａは、ＣＦＺ５３３が、ｒＣＤ１５４と対照的に、ヒト全血（１：１０希釈）またはＰＢＭＣによるチミジン取り込みを誘発できなかったことを示す。ＣＦＺ５３３が増殖を誘発できないことは、ＩＬ−４または抗ＩｇＭなどの追加の共刺激物質の添加によって影響を受けなかった（図６Ｂ）。本発明者らはまた、ＣＦＺ５３３が、やはりｒＣＤ１５４と対照的に、複数のドナーからの全血におけるＢ細胞上のＣＤ６９の上方調節を誘発できなかったことを実証することができた（図６Ｃ）。最後に、ＣＦＺ５３３は、ＣＤ４０を発現している単球由来ＤＣまたはヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）によるサイトカイン産生を誘発できなかった（データは示さない）。

【0366】

ＣＦＺ５３３は細胞枯渇を媒介しない
ＣＦＺ５３３を、ＦｃγＲ結合を阻止し、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介できないことをもたらすことが以前に示されているＮ２９７Ａ変異を含有するように操作した。ＣＦＺ５３３は、ＨＣＤ１２２（野生型ＩｇＧ１）と比較すると、ＦｃγＲＩＩＩＡと結合することができず（表５）、本発明者らは、結合のこの欠如が、ＣＦＺ５３３が細胞枯渇を媒介する能力にどのようにして影響を与えるかを調べることを望んでいた。

【0367】

【表10】

【0368】

図７Ａは、用量漸増のＣＦＺ５３３または５０μｇ／ｍｌリツキシマブの存在下で７２時間インキュベートされた、ヒト全血培養物からのデータを示す。Ｂ細胞数は、リンパ球ＦＳＣ（前方散乱光）／ＳＳＣ（側方散乱光）ゲートの範囲内にあるＣＤ４５ｐｏｓおよびＣＤ１９ｐｏｓ事象に基づいて決定した。個々の抗体濃度についての結果を、治療していない試料に関して、残存するＢ細胞（パーセント）として算出し、対数変換した抗体濃度の関数としてグラフで示した（１００％に補正し、点線として示した）。データは、８人の独立したドナーの平均値およびＳＤを表す。図７Ｂは、異なる濃度のリツキシマブまたはＣＦＺ５３３、および一定濃度のウサギ補体と共にインキュベートしたＲａｊｉ Ｂ細胞からの結果を示す。Ｒａｊｉ細胞の濃度依存性の死滅を、２時間後に分析し、ここでは、細胞の生存率を、ルシフェラーゼを使用する各ウェル内のＡＴＰ濃度の決定によって測定した。結果は、対数変換した抗体濃度の関数として、アイソタイプ対照に対して正規化された相対ルシフェラーゼ単位（ＲＬＵ）として示す。

【0369】

図７Ａは、枯渇抗ＣＤ２０抗体リツキシマブが、ヒト全血におけるＢ細胞のおよそ８０％を排除することができたのに対して、ＣＦＺ５３３は、細胞枯渇を媒介できなかったことを示す。さらに、ＣＦＺ５３３は、リツキシマブとは対照的に、Ｒａｊｉ Ｂ細胞の補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を媒介することができなかった（図７Ｂ）。

【0370】

ＣＦＺ５３３はＢ細胞によってＣＤ４０依存的に内在化される
本発明者らは、次に、ＣＦＺ５３３が、ヒトＢ細胞株ＲＩ−１において発現しているＣＤ４０によって内在化される可能性があるかどうかを調べることを望んでいた。図８Ａは、ｒＣＤ１５４が、非許容条件（４℃）と比較して、許容条件（３７℃）下で内在化された（ここでは、ｒＣＤ１５４の弱い染色を、原形質膜上に観察することができた）ことを示す。ＣＦＺ５３３も内在化されたが、３７℃で、残留する膜染色が確かにあるように見えた。図８Ｂは、ｒＣＤ１５４の内在化の程度が、ＣＦＺ５３３について観察されるものよりも大きいように見えることを示した。本発明者らは、ＣＤ４０ノックアウトＲＩ−１ Ｂ細胞株を使用して、ＣＦＺ５３３（図８Ｃ）およびｒＣＤ１５４（データは示さない）の結合および内在化が、ＣＤ４０依存性であることを実証することができた。

【0371】

図８Ａは、ＡｌｅｘａＦｌｏｕｒ ４８８で標識したｒＣＤ１５４またはＣＦＺ５３３と共に、３７℃または４℃で３時間培養した、個々のＲＩ−１ Ｂ細胞の代表的な画像を示す。図８Ｂ．許容条件下でのＣＦＺ５３３およびｒＣＤ１５４の相対的な内在化浸食（ｉｎｔｅｒｎａｌｉｓａｔｉｏｎ ｅｒｏｄｅ）（非許容浸食値を引いたもの）。それぞれの点は、個々の（ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ）実験からのデータを表し、集団平均は、水平な赤線として示される。図８Ｃ．Ａｌｅｘａ４８８で標識したＣＦＺ５３３と共に３７℃で３時間培養した、個々のＣＤ４０発現またはＣＤ４０ノックアウトＲＩ−１細胞の代表的な画像。すべての実験において、細胞膜の境界をはっきりさせるために、細胞は、ＡｌｅｘａＦｌｏｕｒ ６４７標識されたＣＤ４５で共染色した。

【0372】

非ヒト霊長類におけるＣＦＺ５３３の薬物動態特性
図９Ａ．１６．２（５５３２）、１８．５（５５３１）、および２０（５５３０）ｍｇ／ｋｇ（静脈内）という計算された用量での単一用量投与後の３匹のカニクイザルにおけるＣＦＺ５３３の血清中濃度。図９Ｂ．ＣＤ４０占有率：利用可能なＣＤ４０（パーセント）（ｉ）および総ＣＤ４０（パーセント）（ｉｉ） Ｃ．末梢Ｂ／Ｔ細胞：単回投与後の末梢血Ｂ細胞の割合。第０日は、ＣＦＺ５３３が投与された時である。

【0373】

上のデータは、ＣＦＺ５３３が、ＮＨＰ ＣＤ４０に結合し、ＮＨＰ Ｂ細胞のｒＣＤ１５４誘導性の活性化を、同様の力価で阻害することができたことを示した。これは、カニクイザルおよびアカゲザルが、ＣＦＺ５３３ ＰＫとＰＤとの間の関係を調べるインビボ研究に適した種であろうことを示唆している。図９Ａ内のデータは、ＣＦＺ５３３の単回静脈内投与（１６．２、１８．５、および２０ｍｇ／ｋｇという計算された用量）後の、３匹のカニクイザルのＰＫプロフィールを示す。内在化している膜結合型抗原を標的にするモノクローナル抗体に典型的であるが（Ｍａｇｅｒ ｅｔ ａｌ．２００６およびＮｇ ｅｔ ａｌ．２００６）、ＣＦＺ５３３濃度の時間経過は、明らかな標的介在性の消失を呈し、非線形ＰＫプロフィールならびに濃度依存性のクリアランス速度および半減期がもたらされた。ＰＫプロフィールにおいて観察される屈曲点は、標的エンゲージメントのマーカーであり、ＣＦＺ５３３のクリアランス全体へのＣＤ４０の寄与の増大、およびより短い半減期と関連している。さらに、ＰＫプロフィールにおける屈曲点は、ＣＤ４０飽和の低下が観察される時間と一致していた（図９Ｂ、ｉ）。これは、ＣＦＺ５３３が、より急速な排除を受けた場合に、およそ１０〜２０μｇ／ｍｌで起こった。すべての動物において、細胞上のＣＤ４０受容体発現の喪失は存在しなかった（図９Ｂ、ｉｉ）。さらに、ＣＦＺ５３３は、研究全体を通したいくつかの観察される変動にもかかわらず、末梢血Ｂ細胞（図９Ｃ）またはＴ細胞（データは示さない）が枯渇されなかった。

【0374】

ＣＦＺ５３３はリコールＴ細胞依存性抗体産生を阻害する
図１０Ａは、リコールＴＤＡＲに対するＣＦＺ５３３の効果を評価するための実験設計の模式図を示す。ｘ軸よりも下の矢印は、一次および二次ＫＬＨ免疫化を強調する。単一用量の１０ｍｇ／ｋｇ ＣＦＺ５３３のタイミングを、上に示す。アスタリスクは、抗ＫＬＨ ＩｇＧおよび／またはＣＦＺ５３３濃度が測定された時点を示す。図１０Ｂ．各グラフは、個々の動物についての抗ＫＬＨ ＩｇＧ（黒塗記号）および血漿ＣＦＺ５３３濃度（対数スケール；実線）を示す。対照動物からの平均抗ＫＬＨ ＩｇＧレベル（白抜き記号）を、比較目的で、各グラフに重ね合わせる。図１０Ｃ．ＣＦＺ５３３を使用する１ｍｇ／ｋｇ／週の皮下反復投与（２６週研究）から得られるアカゲザルからのｍＬＮにおける胚中心（Ｋｉ６７染色）の組織学的分析。６匹の動物からの代表的なｍＬＮ切片を、（ｉ）対照の画像（ｉｉ）．ｉｉｉ．治療期間の最後の個々の動物からの、投薬期間にわたる平均の定常状態ＣＦＺ５３３血清中濃度と共に示す。

【0375】

遮断されるＣＤ４０の予測される狙い通りのＰＤ効果は、ＴＤＡＲの阻害である（Ｋａｗａｂｅ ｅｔ ａｌ．１９９４）。ＣＦＺ５３３は、ＮＨＰおよびヒトにおける一次ＴＤＡＲを阻害し、本発明者らはまた、リコールＴＤＡＲに対するこの抗体の効果を調べることを望んでいた。その実験設計の概要を、図１０Ａに示す。簡単に言うと、４匹のアカゲザルは、研究第１日の１０ｍｇ／ｋｇでのＣＦＺ５３３の単回静脈内投与の前、研究第−２８日（初回抗原刺激）に、Ａｌｕｍ中のＫＬＨで免疫を受け、それに続いて、研究第１５日に第２のＫＬＨ免疫化を行った。

【0376】

図１０Ｂは、４匹のそれぞれの動物における、免疫を受けた対照（ＣＦＺ５３３なし）からのデータと比較した、抗ＫＬＨ ＩｇＧリコール反応に対するＣＦＺ５３３の効果を示す。ＣＦＺ５３３のＰＫプロフィールでは、動物間の変動性が存在しており、動物＃１および＃３では、より迅速なＣＦＺ５３３の排除が観察された。動物＃２および＃４では、より長い期間、より高い血漿中濃度が観察された。興味深いことに、これらの動物は、研究第１５日での抗ＫＬＨ ＩｇＧ（およびＩｇＭ；データは示さない）リコール反応の完全な抑制を示した（すべての動物は、ＫＬＨに対する一次ＴＤＡＲを開始したことに留意されたい）。対照的に、より迅速なＣＦＺ５３３のクリアランスを有する動物（動物＃１と比較すると、動物＃３が、より大きな遅延）では、特に、血清ＣＦＺ５３３濃度が、第２のＫＬＨ免疫化の時点で、およそ４０μｇ／ｍｌ未満である場合に、抗ＫＬＨ ＩｇＧ反応が（いくらかの遅れを伴ってはいるが）観察された。移植された（Ｃｏｒｄｏｂａ ｅｔ ａｌ．２０１５）および移植されていない（図９Ｂ）動物における、ＣＦＺ５３３での以前のインビボ実験で観察されている通り、末梢Ｂ細胞枯渇は観察されなかった（データは示さない）。

【0377】

上の結果は、ＮＨＰにおけるリコールＴＤＡＲの完全な抑制のためには、およそ４０μｇ／ｍｌよりも高いＣＦＺ５３３血清中濃度が必要であることを示した。本発明者らは、ＣＦＺ５３３曝露とＣＤ４０経路関連の組織薬力学的効果との間の関係をさらに調べることを望んでいた。１ｍｇ／ｋｇ／週のＣＦＺ５３３（皮下）での２６週の毒性研究の停止時に、本発明者らは、腸間膜リンパ節（ｍＬＮ）におけるＧＣの組織学的および分子的分析を実施した。図１０Ｃ（ｉ）は、本発明者らが、投与された６匹の動物のうち、３匹の個体においてＧＣの完全な抑制を観察することができたのに対して、残りの動物のｍＬＮにおいては、依然としてＧＣが観察されたことを示す。図１０Ｃ（ｉｉｉ）は、少なくとも３８μｇ／ｍＬの血清中濃度（投薬期間にわたる平均の定常状態濃度）が、リンパ節の皮質Ｂ細胞領域におけるＧＣ発達の完全な抑制を伴っていたのに対して、全血ＣＤ２０^ｐｏｓＢ細胞上の十分なＣＤ４０占有にもかかわらず（動物２６８４２および２６７７２；データは示さない）、ＧＣの不完全な抑制（動物２６８４２）または抑制なし（動物２６７７２および２６８３７）が、２０μｇ／ｍＬ未満の血清中濃度で観察されたことを示す。末梢Ｂ細胞枯渇の証拠は存在しなかった（データは示さない）。

【0378】

考察
ＣＦＺ５３３は、ＣＤ４０−ＣＤ１５４共刺激経路の調節不全を伴う実質臓器移植および自己免疫疾患の潜在的治療法として開発されている。本発明者らは、本明細書に、ＣＤ４０経路関連のインビトロおよびインビボモデル系におけるＣＦＺ５３３の機能特性の特徴を記載し、また、ＣＦＺ５３３曝露とＰＤ効果との関係を追求する。

【0379】

ＣＦＺ５３３は、ＣＤ４０と結合し、Ｂ細胞およびＤＣを含めた様々なヒト免疫細胞型上のｒＣＤ１５４誘導性の経路活性化を完全に妨げることができた。さらに、ＣＦＺ５３３が全血における経路活性化を完全に遮断するためには、９０％を超えるＣＤ４０占有が必要とされたように見える。まとめると、これらのデータは、十分な受容体占有が得られると仮定すれば、ＣＦＺ５３３が、細胞型に関係なくＣＤ４０経路依存性エフェクター機能を阻止する可能性を有することを示唆する。本発明者らのデータはまた、ＰＢＭＣでは、ＣＦＺ５３３が、ＣＤ４０から、あらかじめ結合されているｒＣＤ１５４を外して取って代わることができたことを示し、これは、ｍＡｂと生理的リガンドのエピトープが重複する可能性があること；構造研究における調査段階にある概念を示唆している。

【0380】

単一用量ＰＫ研究では、ＣＦＺ５３３について、インビボでの濃度依存性のクリアランス速度および半減期が観察された。このＰＫプロフィールは、ＣＤ４０受容体発現が、ＣＦＺ５３３の排除に影響を与えることを示唆していた。低いＣＦＺ５３３濃度（すなわち不完全な標的飽和）では、ＣＦＺ５３３のクリアランス全体へのＣＤ４０の寄与は上昇し、半減期は、ＩｇＧ１型抗体について通常観察されるよりもいくらか短かった。完全な標的飽和（および十分な機能上経路阻害）に相当する、より高い濃度では、ＣＦＺ５３３のクリアランス全体への受容体の寄与は制限され、は半減期増大した。ＣＦＺ５３３の標的介在性のクリアランスは、インビトロで観察されたＣＦＺ５３３のＣＤ４０介在性の内在化（この複合体のリソソーム分解がこれに続くと思われる）と一致していた。

【0381】

ＰＫ／ＰＤ研究からの追加の発見は、ＣＦＺ５３３が末梢Ｂ細胞をインビボで枯渇できないことを裏付けた（Ｃｏｒｄｏｂａ ｅｔ ａｌ．２０１５）。言及した通り、ＣＦＺ５３３がＣＤ４０発現細胞を枯渇できないことは、ヒンジ領域内のＮ結合型グリコシル化の欠如をもたらし、ＦｃγＲＩＩＩＡと結合できないようにまたはＡＤＣＣまたはＣＤＣを媒介できないようにする、抗体におけるＮ２９７Ａ変異の存在に起因する。ＣＤ４０発現細胞型（特に炎症条件下での、免疫および非免疫細胞型上のこの受容体の広い組織分布に特に関心が持たれる）の枯渇を防止するために、ＣＦＺ５３３のＦｃ−サイレンシングを行った。

【0382】

ＮＨＰ腎移植における有効性（Ｃｏｒｄｏｂａ ｅｔ ａｌ．２０１５）に加えて、本明細書で開示される結果は、ＣＦＺ５３３が、リコールＴＤＡＲを完全に阻害することを示した。この結果は、Ｔ細胞依存性抗原に対するメモリーＢ細胞の反応が、ＣＤ４０−ＣＤ１５４相互作用に十分に依存していることを示唆していた。リコール反応の阻害の程度は、ＣＦＺ５３３の濃度に関連するように見え、（追加免疫後の少なくとも１週間の）３０〜４０μｇ／ｍｌを超える血清レベルが、抗原特異的な抗体反応の十分な抑制のために必要である。血清中濃度と、ＣＤ４０経路関連の組織ＰＤ読み取りとの間のこの関係はまた、腸間膜リンパ節ＧＣに対するＣＦＺ５３３の効果を調べる場合に適用され、ここでは、平均の定常状態血清ＣＦＺ５３３濃度の最小閾値が、ＧＣの完全な抑制のために必要であった。これらのデータは、投薬戦略を提供するための、末梢の薬物曝露と、組織における標的関連のＰＤ効果との間の関係を確立することの重要性を指し示す。ＣＤ４０−ＣＤ１５４共刺激経路を標的にするいくつかの生物製剤が、様々な自己免疫疾患のために開発されている。血栓塞栓症のリスクの可能性（Ｂｏｕｍｐａｓ ｅｔ ａｌ．，２００３）にもかかわらず、ＣＦＺ５３３のような抗ＣＤ４０ ｍＡｂに加えて、抗ＣＤ１５４ ｍＡｂが、引き続き臨床中である。最近の結果は、Ｆｃサイレンシングおよびペグ化Ｆ（ａｂ’）２手法が、ＣＤ１５４を標的にする抗体の血栓塞栓傾向を排除することができることを示唆している。しかし、Ｆｃサイレント抗ＣＤ１５４ ｍＡｂが、効果が低い可能性があるという報告が存在する。これまでに、前臨床モデルにおけるまたは臨床中の複数の抗ＣＤ４０抗体の投与に伴う血栓塞栓症の証拠は存在しない。

【0383】

結論として、本発明者らのデータは、ＣＦＺ５３３が、最小のアゴニスト特性を有する、経路遮断性の非細胞枯渇抗ＣＤ４０抗体であることを示す。十分な、薬理学的に適切な曝露で、ＣＦＺ５３３は、ＣＤ４０発現細胞型を枯渇せずに、リコールＴＤＡＲを完全に阻害する、また、胚中心を抑制することができる。これらのデータは、腎移植における前臨床有効性と組み合わせて、腎移植、肝移植、心臓移植、肺移植、膵移植、腸移植、または複合組織移植のような選択された自己免疫疾患および実質臓器移植におけるＣＦＺ５３３の臨床的有用性の可能性の確固たる科学的な理論的根拠を提供する。

【0384】

非ヒト霊長類研究：ＣＦＺ５３３は移植された腎臓移植片の質を保つ
本研究の目標は、腎臓同種移植片拒絶のＮＨＰモデルにおいて、単剤療法としてまたはシクロスポリンＡと組み合わせて与えられた場合の、ＣＦＺ５３３の有益な効果を評価することであった

【0385】

非ヒト霊長類（ＮＨＰ）は、腎臓同種移植片拒絶のモデルとして使用されている。レシピエントＮＨＰは、生命を維持するための腎臓同種移植片を移植された。腎移植および術後モニタリングは、（例えば、Ｃｏｒｄｏｂａ Ｆ ｅｔ ａｌ，２０１５に記載されている通りの）標準の技術を使用して実施した。動物は、（第−１日、０日、および１日の負荷用量の後）毎週の研究薬物ＣＦＺ５３３で、および毎日のシクロスポリンＡ（ＣｓＡ）（例えばＳａｎｄｉｍｍｕｎ Ｎｅｏｒａｌ（登録商標），Ｎｏｖａｒｔｉｓ）で治療した。経口投与のためのＣｓＡは、マイクロエマルジョン予備濃縮製剤であった（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎ Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）飲用液剤、１００ｍｇ／ｍｌ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｐｈａｒｍａ ＡＧ ａｎｄ Ｓａｎｄｉｍｍｕｎ（登録商標）注入用濃縮製剤、５０ｍｇ／ｍｌ、ＮｏｖａｒｔｉｓＰｈａｒｍａ ＡＧ）。治療は、移植（Ｔｘ）の１日前に開始した。採取したすべての組織（移植片生検、または屍検にて、表２〜５）を、肉眼で検査し、４％緩衝ホルマリン中で固定した。脱水後、これらをパラフィンワックスに包埋した。パラフィン塊から３μｍ厚の切片を切り出し、ヘマトキシリンおよびエオシン（ＨＥ）、過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）、トリクローム、およびヴァーヘフ−ワンギーソン染色で染色した。生検および屍検試料は、腎臓同種移植片病理学のＢａｎｆｆ１５分類に従ってスコア付けした（Ｌｏｕｐｙ ２０１７）。Ｂａｎｆｆ等級付けには、Ｃ４ｄスコアは含まれなかった。

【0386】

この研究で使用されたカニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）は、飼育下繁殖された（ＳＩＣＯＮＢＲＥＣ Ｉｎｃ，Ｍａｋａｔｉ Ｃｉｔｙ，Ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｓ）若い大人であり、正常な血液学、血清／尿化学を有し、結核、サルモネラ菌／赤痢菌、ウイルス感染（ヘルペスＢ、ＳＴＬＶ、ＳＩＶ、ＳＲＶ Ｄ型、Ｂ型肝炎）、および外部および内部寄生生物について陰性であった。１匹の動物のみ、Ｎａｆｏｖａｎｎｙ，Ｌｏｎｇ Ｔｈａｎｈ，Ｖｉｅｔｎａｍから入手した。

【0387】

【表11】

【0388】

移植後の日数は、さらなる分析のために生検が採取された時点を指す。ＣｓＡのｓ．ｃ．適用のためには、Ｓａｎｄｉｍｍｕｎ（登録商標）が使用され；ＣｓＡのｐ．ｏ適用のためには、Ｓａｎｄｉｍｕｎ Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）が使用された。ＣｓＡ用量２０ｍｇ／ｋｇ（ｐ．ｏ．）は、効果がない用量とみなされる。

【0389】

ＣｓＡ（２０ｍｇ／ｋｇ（ｐ．ｏ．））との併用療法として、または単剤療法として適用される場合、ＣＦＺ５３３は、ＮＨＰにおける腎臓同種移植片の生着を増大させることにおいて有効性を示し、Ｂａｎｆｆスコアの合計によって示される通りに移植片形態を十分に維持した（図１５）。結論として、この研究の結果は、腎移植片拒絶の予防のための妥当な治療としての、単剤療法としてのまたは併用療法でのＣＦＺ５３３の使用を裏付ける。さらに、こうした組み合わせ治療は、優れた安全性プロフィールを示す。

【0390】

カルシニューリン（ＣＮＩ）を使用しない、ＣＦＺ５３３での治療法は、移植された腎臓移植片の質を保つ
ＣＦＺ５３３を使用する新規腎移植（ＣＣＦＺ５３３Ｘ２１０１／ＮＣＴ０２２１７４１０）におけるＰｏＣ研究を実施した。この多施設の無作為化された対照試験では、ＣＦＺ５３３は、タクロリムスと比較して向上された腎機能を示した。研究患者のサブセットに対して、同種移植片生検を実施した。治療法に対して盲検化された病理医が、確立されたＢａｎｆｆ基準を使用して、すべての生検スライドを検査およびスコア付けし、慢性同種移植片損傷指数（ＣＡＤＩ、Ｎｉｃｋｅｒｓｏｎ Ｐ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｇｅｎｄｒｅ Ｃ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｒｏｎ Ｄ ｅｔ ａｌ．，）を算出した。１以下のＣＡＤＩは、「正常な腎臓組織像」とみなされた。２人の患者は、わずか２か月後に治療法を切り替えたので、分析から除外した。この試験の結果を、図１６に示す。これらの結果は、ＣＦＺ５３３を受けている５人の患者のうちの３人（６０％）が「正常な腎臓組織像」を有していたのに対して、タクロリムスを受けている７人はいずれも有していなかったことを示す（ｐ＜０．０１）。最終の生検での平均ＣＡＤＩは、ＣＦＺ５３３については１．６±０．６、タクロリムスについては５．１±０．８であった（ｐ＜０．０１）。

【0391】

結論：現在の標準治療と比較して、ＣＦＺ５３３は、より低いＣＡＤＩスコアを伴い、高い割合の同種移植片において、正常な組織像に近い組織像が維持されるように見え、したがって、ＣＦＺ５３３は、実質臓器移植の長期の転帰を改善する可能性を有する。これらの所見は、非ヒト霊長類における知見を裏付ける。

【0392】

ＣＡＤＩスコアは、移植後の移植片機能損失／移植片生着と直接的な相関性がある。ＣＦＺ５３３治療の結果として、移植後にＣＡＤＩスコア（Ｙｉｌｍａｚ ｅｔ ａｌ．，２００３）によって測定される、正常な腎臓組織像は、移植患者における長期の移植片生着を確実にする方法を提供する。

【0393】

参考文献
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【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13A】

【図13B】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]