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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】6863742
(24)【登録日】2021年4月5日
(45)【発行日】2021年4月21日
(54)【発明の名称】新規アントラニルアミドとその使用
(51)【国際特許分類】
A61K 31/166 20060101AFI20210412BHJP
A61K 31/495 20060101ALI20210412BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20210412BHJP
A61P 35/04 20060101ALI20210412BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20210412BHJP
【ＦＩ】
A61K31/166
A61K31/495
A61P35/00
A61P35/04
A61P43/00 111
【請求項の数】11
【全頁数】58
(21)【出願番号】特願2016-542095(P2016-542095)
(86)(22)【出願日】2014年9月11日
(65)【公表番号】特表2016-530317(P2016-530317A)
(43)【公表日】2016年9月29日
(86)【国際出願番号】US2014055143
(87)【国際公開番号】WO2015038743
(87)【国際公開日】20150319
【審査請求日】2017年9月6日
【審判番号】不服2019-12182(P2019-12182/J1)
【審判請求日】2019年9月13日
(31)【優先権主張番号】61/876,645
(32)【優先日】2013年9月11日
(33)【優先権主張国】US
(73)【特許権者】
【識別番号】506392492
【氏名又は名称】ジ・アドミニストレーターズ・オブ・ザ・チューレーン・エデュケーショナル・ファンド
(73)【特許権者】
【識別番号】516073381
【氏名又は名称】デュケイン・ユニヴァーシティ・オブ・ザ・ホーリー・ゴースト
(74)【代理人】
【識別番号】100108453
【弁理士】
【氏名又は名称】村山 靖彦
(74)【代理人】
【識別番号】100110364
【弁理士】
【氏名又は名称】実広 信哉
(74)【代理人】
【識別番号】100133400
【弁理士】
【氏名又は名称】阿部 達彦
(72)【発明者】
【氏名】スラヴィ・チャクラバティ
(72)【発明者】
【氏名】パトリック・ティー・フラハティ
(72)【発明者】
【氏名】ダーリーン・モンリッシュ
(72)【発明者】
【氏名】ジェーン・イー・カヴァノー
(72)【発明者】
【氏名】マシュー・イー・バロウ
(72)【発明者】
【氏名】スティーヴン・エリオット
(72)【発明者】
【氏名】ヴァン・ティー・ホアン
【合議体】
【審判長】
藤原 浩子
【審判官】
小川 知宏
【審判官】
穴吹 智子
(56)【参考文献】
【文献】
Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ（２００７），５０，５０９０−５１０２
(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）
A61K31/00-31/80,A61P35/00-35/04,A61P43/00
ＣＡＰｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記の式を有する化合物
(式中Ｒ１は独立して：
であり、
Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ８、及びＲ９はそれぞれ独立して、水素またはフッ素、塩素、臭素、もしくはヨウ素などのハロゲンであり、
Ｒ４は、水素であり、
Ｒ２及びＲ７はフッ素であり、
Ｒ１０は水素またはフッ素、塩素、臭素、もしくはヨウ素などのハロゲンである)、
および薬学的に許容可能な担体を含む、前立腺がん、膵臓がんおよび乳がんから成る群から選択されるがんの抑制または治療のための医薬組成物。
【化1】
【化2】
Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ８、及びＲ９はそれぞれ独立して、水素またはフッ素、塩素、臭素、もしくはヨウ素などのハロゲンであり、
Ｒ４は、水素であり、
Ｒ２及びＲ７はフッ素であり、
Ｒ１０は水素またはフッ素、塩素、臭素、もしくはヨウ素などのハロゲンである)、
および薬学的に許容可能な担体を含む、前立腺がん、膵臓がんおよび乳がんから成る群から選択されるがんの抑制または治療のための医薬組成物。
【請求項2】
Ｒ６はフッ素である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項3】
前記化合物が、（３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロフェニル）アミノ）フェニル）（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノンモノフマル酸塩（ＳＣ−２−４５）である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項4】
経口投与、静脈投与、経皮投与、筋内投与、及び皮下投与用に製剤化された、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項5】
濃縮物、乾燥粉末、液体、カプセル、丸薬、及び錠剤を含む経口デリバリー用の製品を含む、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項6】
薬剤の製造における請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
【請求項7】
前記乳がんはトリプルネガティブな乳がんを含む請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項8】
前記乳がんは初期の乳がんを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項9】
前記がんは転移がんを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項10】
対象者における上皮間葉細胞転換を抑制または逆行させるための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項11】
対象者におけるＭＥＫ１／２及び／またはＭＥＫ５酵素活性を抑制するための、
請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、例えば様々な種類のがんの治療において、ＭＥＫ５及び／またはＭＥＫ１／２などのＭＥＫキナーゼの抑制に使用可能なアントラニルアミド化合物に関する。
【背景技術】
【0002】
関連する出願についてクロスリファレンス本願は、２０１３年９月１１日に出願された米国仮出願第６１／８７６，６４５号に基づく利益を主張するものであり、その全体の内容を参照により含むものである。
【0003】
政府支援についての通知本発明は、国立衛生研究所により承認された政府支援（承認番号Ｒ０１ＣＡ１２５８０６とＲ１５ ＣＡ１７６４９６）により完成されたものである。米国政府は、本発明について所定の権利を有する。
【0004】
がんは、米国において、心臓病に次いで２番目に多い死亡原因である。がんは、正常な生物機能を制御する細胞経路の異常調整の結果による腫瘍細胞の制御不能な増殖と全身播種を特徴とする。マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）は、タンパク質セリン／トレオニンキナーゼの一群である。これらキナーゼは、胚形成、細胞分化、細胞増殖、及び細胞死を制御する経路の主成分である。マイトジェン、浸透ストレス、熱ショック及び炎症性サイトカインなどの様々な刺激に対する細胞の応答がＭＡＰＫにより制御される。ＭＡＰＫの活性は、リン酸化反応をトリガする複雑な分岐経路があるシグナル伝達カスケードを必要とする。ＭＡＰＫ経路はＭＡＰキナーゼキナーゼキナーゼ（ＭＥＫＫ）が次のＭＡＰキナーゼキナーゼ（ＭＥＫ）をリン酸化し、次にＭＥＫが下流のＭＡＰキナーゼ（ＥＲＫ）をリン酸化するというリン酸化反応カスケード反応を伴う。
【0005】
ＭＥＫ５シグナル経路は、細胞に酸化的ストレスを生き延びさせるもので、マイトジェン（ＥＧＦ及びＧ−ＣＳＦ）、サイトカイン（ＬＩＦ及びＣＴ−１）及びストレス（Ｈ２Ｏ２、及びソルビトール）により活性化される。ＥＲＫ５は、ＭＥＫ５の基質として知られている唯一のものであり、Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ（ＴＥＹ）活性化モチーフ内のＴｈｒとＴｙｒ残基においてリン酸化される。ＥＲＫ５は、ＥＧＦ誘起細胞増殖をｃＡＭＰ応答要素（ＣＲＥ）を介してＧ１／Ｓ細胞周期の移行を促進するものである。ＥＲＫ５は、放射線、パリトキシン、及びホルボールエステル処理等のストレス要因に応じて上方制御される。ＭＥＫ５は、５０％の腫瘍やその他のガンにおいて過剰発現しており、扁平上皮がん、前立腺がん、初期及びトリプルネガティブ乳がんにおいて非常に上方制御されていると報告されている。ＭＥＫ５は、ＭＥＫ１と、ＡＴＰ結合ポケットとおよそ８７％の相同性を有する。
【0006】
上皮細胞と間葉細胞間の形態変換は、胚発達における重要なプロセスであり、がん発生時にもこの反応が起こっていると考えられている。上皮細胞状の形態の細胞は、運動性を有さず、より密集しているが、間葉細胞の形態の細胞は、より線維芽細胞様、または紡錘状であり、運動性が高い。
【0007】
ＭＥＫ／ＥＲＫ経路などの様々なシグナル経路は、ある種のがんにおいて非常に上方制御されており、より侵襲性の表現型への移行において役割を果たしていると考えられる。がん細胞の種類をより均一なものとして現在の治療法を最適化し、がん細胞がより急激に増殖し侵襲性の表現型に変化することを防ぐために、ＥＭＴ（上皮間葉）またはＭＥＴ（間葉上皮）転換を伴う細胞型の転換を変化させる小さな分子ががん治療の分野において求められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0008】
【非特許文献1】Ｌｏｕｄｏｎ, Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ 第４版（ニューヨーク、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ社、２００２年、ｐｐ．３６０−３６１，１０８４−１０８５）
【発明の概要】
【0009】
本願は、以下の化学式のアントラニルアミドとその誘導体を開示する。
【0010】
【化1】
【0011】
第１級または第３級アミン、ＯＲ１１、またはアミノ酸であり、式中Ｒ１１は独立して、水素、アルキル、アルケン、またはアルキンであり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アルケン、アルキン、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素などのハロゲン、炭素−炭素二重または三重結合を含んでいてもよいＣ１〜Ｃ４などのアルコキシ、シアノ基、またはニトリル基である。アントラニルアミドの誘導体の具体例としては、３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）安息香酸（ＳＣ−１−１８０）、３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）ベンズアミド（ＳＣ−１−１５１第１級アミド）、Ｎ，Ｎ−ジエチル−３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）ベンズアミド（ＳＣ−１−６５）、３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルベンズアミド（ＳＣ−１−６９）、３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）−Ｎ−メチルベンズアミド（ＳＣ−１−７２アミド）、３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）安息香酸メチル（ＳＣ−１−７２エステル）、Ｔｅｒｔ−ブチル４−（３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）ベンゾイル）ピペラジン−１−カルボン酸（ＳＣ−１−７５）、（３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）フェニル）（ピペラジン−１−イル）メタノン塩酸塩、（ＳＣ−１−７９）、Ｎ−エチル−３，４−ジルフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）ベンズアミド（ＳＣ−１−８０）、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）−Ｎメチルベンズアミド塩酸塩（ＳＣ−１−１２２）、２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）フェニル）（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノン塩酸塩（ＳＣ−１−２４アミド）、２−（フェニルアミノ）安息香酸（ＳＣ−１−３９酸）、（４−メチルピペラジン−１−イル）（２−（フェニルアミノ）フェニル）メタノン（ＳＣ−１−１７７アミド）、３，４−ジフルオロ−２−（フェニルアミノ）安息香酸（ＳＣ−１−１７５酸）、３，４−ジフルオロ−２−（フェニルアミノ）フェニル）（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノン（ＳＣ−１−１８１）、３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロフェニル）アミノ）安息香酸（ＳＣ−２−２５ 酸）、（３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロフェニル）アミノ）フェニル）（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノンモノフマル酸（ＳＣ−２−４５）、３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロフェニル）アミノ）ベンズアミド（ＳＣ−２−３７）、または３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）（メチル）アミノ）安息香酸（ＳＣ−２−３２酸）の内の１つが挙げられる。
【0012】
また、アントラニルアミド誘導体を含む医薬組成物などの組成物、薬剤の製造におけるアントラニルアミド誘導体の使用も開示する。
【0013】
対象者におけるがんの抑制や治療を行う方法も開示する。上記開示された方法は、開示されたアントラニルアミド誘導体の有効量を対象者に投与して、がんの抑制や治療を行うことを含む。いくつかの実施例では、上記がんは固形腫瘍、扁平上皮がん、前立腺がん、乳がん、膵臓がんなどを含む。いくつかの実施例では、上記がんは転移がんを含む。
【0014】
また、対象者において上皮間葉転換を抑制、または逆行させる方法も開示する。上記方法は、開示されたアントラニルアミド誘導体の有効量を対象者に投与して、上皮間葉転換の抑制または逆行を行うことを含む。
【0015】
また、対象者においてＭＥＫ１／２及び／またはＭＥＫ５酵素活性の抑制をする方法も開示する。上記方法は、開示されたアントラニルアミド誘導体の有効量を対象者に投与して、ＭＥＫ１／２及び／またはＭＥＫ５酵素活性の抑制を行うことを含む。
【0016】
本開示の上記及びその他の特徴や効果は添付の図面を参照して記される、以下の詳細な説明においてより明白になるであろう。
【図面の簡単な説明】
【0017】
【図9】図９は、強力ＭＥＫ５阻害剤のウェスタンブロット分析を示す棒グラフである。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１トリプルネガティブの乳がん細胞株を化合物（１０μＭ）にて３０分前処理し、上皮増殖因子（ＥＧＦ、５０ｎｇ／ｍＬ）にて１５分間刺激した。賦形剤で処理した細胞をＤＭＳＯで３０分間前処理し、その後ＥＧＦで１５分間刺激した。タンパク質の可視化と定量化分析をＬＩ−ＣＯＲオデッセイ撮像装置を用いて行った。＊Ｐ＜０．０５ｖｓ．賦形剤、一元配置分散分析、その後テューキー＝クレーマー法（ｎ＝３）。
【図11】図１１は、ＭＤＡ−ＭＢ２３１増殖実験の結果を示すグラフである。トリプルネガティブのがん表現型を示すという理由で、ＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞を使用した。ＭＥＫ１／２とＭＥＫ５の両方の抑制に有効なので、化合物３を選択した。５％活性炭デキストラン処理済み培地を用いた９６ウェルＴＣプレートにＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞をウェル毎に１万個蒔き、５％ＣＯ２雰囲気下１晩３７℃にて培養した。次の日、上記細胞を薬剤または賦形剤で処理した。プレートは、３日目、５日目、７日目に採取され、クリスタルバイオレットで染色された。細胞の形態の変化を倒立顕微鏡で観察した。細胞を洗浄し、溶解させ、生体細胞で失われるクリスタルバイオレットの吸光度を６３０ｎＭで測定した。ウェルは重複して作製された。実験は３回実施された。細胞は初期細胞数にて正常化された。
【図12】図１２は、化合物３で処理された細胞の、可動性かつ侵襲性の間葉表現型を特徴とする細長く、くぎ状の細胞形態から、可動性や侵襲性が比較的低い上皮表現型を特徴とするより円形の細胞形態への転換を示すデジタル画像である。
【図17】図１７は、１μＭで処理されたＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳がん細胞のＥカドヘリン発現を示す棒グラフである。本化合物は、転移性乳がん細胞のＥＭＴ遺伝子の発現に影響を及ぼす。ＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞を５％活性炭処理無フェノールレッドＤＭＥＭ培地にて４８時間培養し、化合物（１μＭ）で処理した。２４時間後、細胞を採取し、Ｅ−カドヘリンのｑＰＣＲ分析を行った。
【図18】図１８は、トリプルネガティブの乳がん細胞の移動をＳＣ−１−１５１が抑制することを示す棒グラフである。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１またはＭＤＡ−ＭＢ−１５７細胞は、５％ＣＳ無フェノールＤＭＥＭにて４８時間培養し、ＳＣ−１−１５１または賦形剤で３日間処理した後、２．５ｘ１０４個の細胞をトランスウェルインサート法で播種した。２４時間後、細胞を固定化し、クリスタルバイオレットで染色して、移動した細胞数をカウントした。各バーは、２００ｘの倍率での対照群に対する移動細胞数±標準誤差％を示す。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図19】図１９は、トリプルネガティブの乳がん細胞の移動をＳＣ−１−１５１が抑制することを示す棒グラフである。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１またはＢＴ−５４９細胞を、５％ＣＳ無フェノールＤＭＥＭ培地にて４８時間培養し、ＳＣ−１−１５１または賦形剤にて３日間処理した。その後２．５ｘ１０４個の細胞をトランスウェルインサート法にて播種した。２４時間後、細胞を固定化し、クリスタルバイオレットで染色して、移動した細胞数をカウントした。各バーは、２００ｘの倍率での対照群に対する移動細胞数±標準誤差％を示す。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図20】図２０は、ＳＣ−１−１５１がインビボで腫瘍形成を抑制することを示す棒グラフである。両側に１ｘ１０６ＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞を注射されたＳＣＩＤメスマウスの終点時の腫瘍体積、ｎ＝１０。実験動物に対して、０日目（細胞注入日）にＤＭＳＯもしくはＳＣ−１−１５１を投与した（２５ｍｇ／ｋｇ）。腫瘍サイズを３０日間、デジタルキャリパーを使用して２週間毎に測定した。各バーは、最終平均腫瘍体積±標準誤差を示す。
【図21】図２１Ａと図２１Ｂは、デジタル画像であり、ＳＣ−１−１５１が膵臓がん細胞を上皮表現型に誘導することを示す棒グラフである。（Ａ）Ｍｉａ−ＰａＣａ２細胞を９６ウェルプレートに各ウェルに１，０００個の細胞密度で播種し、賦形剤（ＤＭＳＯ）とＳＣ−１−１５１で処理した。３日後、細胞をグルタルアルデヒドで固定化し、クリスタルバイオレットで染色した。（ｂ）ＥＭＴ制御された遺伝子についてｑＰＣＲを行い、ＳＣ−１−１５１で処理した。膵臓がん細胞を５％ＣＳ無フェノールＤＭＥＭにて４８時間培養し、その後賦形剤（ＤＭＳＯ）またはＳＣ−１−１５１（１μＭ）で２４時間処理した。サイクル数をβ−アクチンで正常化し、賦形剤処理した細胞を１とする。ｎ＝３。
【発明を実施するための形態】
【0018】
Ｉ．用語の説明別途説明がない限り、本明細書において使用される全ての技術的及び科学的用語は、本開示された主題が属する分野の当業者が通常理解するものと同じ意味を持つ。化学用語の一般用語の定義については、Ｔｈｅ ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ（１９８５年）やＴｈｅ Ｃｏｎｄｅｎｓｅｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ（１９８１年）などを参照されたい。分子生物学の一般用語の定義については、Ｂｅｎｊａｍｉｎ Ｌｅｗｉｎ著のＧｅｎｅｓ ＩＸ（Ｊｏｎｅｓ ａｎｄ Ｂａｒｔｌｅｔ社、２００８年）（ＩＳＢＮ０７６３７５２２２３）、Ｋｅｎｄｒｅｗら編のＴｈｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ社、１９９４年）（ＩＳＢＮ０６３２０２１８２９）やＲｏｂｅｒｔ Ａ． Ｍｅｙｅｒｓ編のＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ： ａ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ社、１９９５年）（ＩＳＢＮ ９７８０４７１１８５７１０）、その他の同様の参考文献を参照されたい。本明細書において、「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」などの単数形の単語は、別途文脈上明白に示されていない限り、複数の場合も包含するものである。同様に、「または」という単語は、別途文脈上明白に示されていない限り、複数の場合も包含するものである。また、本明細書では、「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」は「ｉｎｃｌｕｄｅｓ」と同じ意味である。よって、「ＡまたはＢを含む」は、Ａ、Ｂ、またはＡ及びＢを有することを意味する。別途記載が無い限り、全ての数値は、「約」や「およそ」等の単語がある場合でもない場合でも近似値である。本明細書で示された物質、方法、及び例は、説明のためだけに挙げられているもので、本発明を限定するものではない。全ての分子量は近似値であり、説明のためだけに挙げられているものである。別段記載が無い限り、本発明の方法と手法の実施は、本分野で公知の従来の方法に基づいて通常実施でき、また本明細書において引用され、言及される様々な一般的またはより専門的な文献で説明されているように実施可能である。例えばＬｏｕｄｏｎ著Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ 第４版（ニューヨーク、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ社、２００２年、ｐｐ．３６０−３６１，１０８４−１０８５）；Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｍａｒｃｈ著、Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ， Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ， ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ 第５版（Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ社、２００１年、またはＶｏｇｅｌ著、Ａ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ 第４版（ニューヨーク：Ｌｏｎｇｍａｎ社、１９７８年）などを参照されたい。
【0019】
対立が生じた場合は、用語の説明を有する本願が優先する。
【0020】
本開示の様々な実施形態の検討に資するため、以下に特別な用語の説明を行う。
【0021】
投与：開示されたアントラニルアミド誘導体を含む医薬組成物等の組成物を対象者に、任意の有効な経路で与えることである。投与経路の例としては、注射（皮下注射、筋肉内注射、皮内注射、腹腔内注射（ｉｐ）、静脈注射（ｉｖ））、経口投与、舌下投与、経皮投与、及び吸入投与が挙げられるが、これらに限定されない。
【0022】
アルコキシ：Ｏ−Ｒ構造を有する基（または置換基）（式中、Ｒは置換されていても置換されていなくてもよいアルキルである）。メトキシ（ＯＣＨ３）がアルコキシ基の一例として挙げられる。置換されたアルコキシにおいて、Ｒは非妨害性の置換基で置換されたアルキルである。「チオアルコキシ」とは−Ｓ−Ｒ（Ｒは置換されていてもよいアルキル）を示す。「ハロアルキロキシ」とは、ＯＲ基（式中、Ｒはハロアルキル）を示す。いくつかの実施例では、アルコキシ基は、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシである。いくつかの実施例では、アルコキシ基は、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシである。いくつかの実施例では、アルコキシ基は、メトキシである。
【0023】
アルケニル：炭素数が１〜１０（例えば、Ｃ２〜１０アルケニル）、または１〜６、または１〜４の不飽和の一価炭化水素であり、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有し、アルケンの１つの炭素原子から水素原子を除いて得られる。アルケニル基は、分岐、直鎖、環状、シス、またはトランス（例えば、ＥまたはＺ）であってもよい。いくつかの実施例では、アルケニルは、Ｃ２〜４アルケニルである。
【0024】
アルキニル：炭素数が１〜１０（例えば、Ｃ２〜１０アルキニル）、または１〜６、または１〜４の不飽和の一価炭化水素であり、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有し、アルキンの１つの炭素原子から水素原子を除いて得られる。アルキニル基は、分岐、直鎖、または環状であってもよい。いくつかの実施例では、アルケニルはＣ２〜４アルキニルである。
【0025】
アルキル：非環式の、飽和した、分岐または直鎖の炭化水素基であり、別途記載がない限り、炭素数は１〜１５、例えば、１〜１０、１〜６、または１〜４である。この用語は、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、またはドデシルを含む。「低級アルキル」とは、炭素数１〜４のアルキル基を示す。別途明確に「非置換のアルキル」とされていない限り、アルキル基は、置換されたものでも、置換されていないものでもよい。アルキル基は、１つ以上の置換基で置換されていてもよい（例えば、アルキル鎖の各メチレン炭素について２つまでの置換基）。アルキル置換基の例としては、アミノ基、アミド、スルフォンアミド、ハロゲン、シアノ、カルボキシ、ヒドロキシ、メルカプト、トリフルオロメチル、アルキル、アルコキシ（例えばメトキシ）、アルキルチオ、チオアルコキシ、アリールアルキル、ヘテロアリール、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルスルファノ、ケト、その他の官能基が挙げられる。
【0026】
抗増殖作用：少なくとも１種の細胞の増殖を抑制する、開示されたアントラニルアミド誘導体などの、例えば小分子である分子の作用であり、複数の異なる種類の細胞（例えば、異なる細胞株、異なる種等）の増殖を（絶対的意味合いまたは反応速度的の意味合いで）抑制するものであってもよい。具体的な実施形態では、開示されたアントラニルアミド誘導体の抗増殖作用は、固体腫瘍などのがんと診断された対象者から得られた細胞に対して顕著であろう。
【0027】
抗細胞移動性または抗細胞侵襲性作用：少なくとも１種の細胞において、細胞外基質（ＥＣＭ）を介して細胞の運動性や細胞侵襲性を抑制する、開示されたアントラニルアミド誘導体などの、例えば小分子である分子の作用であり、複数の異なる種類の細胞（例えば、異なる細胞株、異なる種等）の細胞の運動性や細胞侵襲性を（絶対的意味合いまたは反応速度的の意味合いで）抑制するものであってもよい。具体的な実施形態では、マトリゲルの抗細胞運動性や抗細胞侵襲性が、固体腫瘍などのがんと診断された対象者から得られた細胞に対して顕著であろう。
【0028】
上皮間葉間転換（ＥＭＴ）上皮細胞が自身の細胞極性と細胞間接着を失い、運動性と侵襲性を得て、間葉細胞になるプロセス。ＥＭＴは、がんの進行における転移の開始時において発生すると証明されている。いくつかの実施形態では、開示されたアントラニルアミド誘導体は、ＥＭＴ転換の抑制剤として機能する。
【0029】
生体シグナル経路：チロシンキナーゼなどのタンパク質と他の分子が、協働で内外のシグナルに対する細胞の応答の仲介をするシステム。いくつかの実施例では、生体シグナル経路は、ＭＥＫ／ＥＲＫ経路を含む。いくつかの実施例では、開示されたアントラニルアミド誘導体は、ＭＥＫ／ＥＲＫ経路の抑制剤として機能する。
【0030】
がん：異常または無制限の細胞増殖を特徴とする悪性腫瘍がんに伴うその他の特徴は、移転、隣接する細胞の正常の機能への干渉、サイトカインやその他の分泌物の異常分泌、炎症や免疫応答の抑制や悪化、周辺または遠隔の組織やリンパ腺などの器官の侵襲等が挙げられる。「転移性疾患」とは、元の腫瘍箇所を離れて身体の他の箇所に例えば血管やリンパ系を介して転移するがん細胞を指す。
【0031】
血液系腫瘍の例としては、急性白血病（例えば急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤白血病など）及び慢性白血病（例えば、慢性骨髄性（顆粒球）白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病など）を含む白血病、真性赤血球増加症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（無痛、及びハイグレード形）、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖病、骨髄異形成症候群、有毛細胞白血病、及び骨髄異形成などが挙げられる。
【0032】
肉腫及びがん腫症などの固体腫瘍の例としては線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、その他の肉腫、滑液腫瘍、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、大腸がん、リンパ性悪性疾患、膵臓がん、乳がん（腺がんなど）、肺がん、婦人科がん（子宮のがん（子宮内膜がんなど）、頸がん（子宮頸がん、未腫瘍化子宮頸部形成異常など）、卵巣（卵巣がん、漿液性嚢胞腺がん、ムチン性嚢胞腺がん、子宮内膜性腫瘍、腹部芽細胞腫、明細胞がん、分類不能がん、顆粒膜卵胞膜細胞腫、セルトリー・ライデッグ細胞腫、未分化胚細胞腫、悪性奇形腫など）、陰門（扁平上皮細胞がん、上皮内がん、腺がん、線維肉腫、黒色腫など）、膣（明細胞がん、扁平上皮細胞がん、ブドウ状肉腫など）、胎児性横紋筋肉腫、卵管（上皮性悪性腫瘍など）、前立腺がん、肝細胞がん、扁平上皮細胞がん、基底細胞がん、腺がん、汗腺がん、甲状腺髄様がん、甲状腺乳頭がん、黒色真菌症、乳頭がん、乳頭状腺腫、髄様がん、気管支がん、腎細胞がん、肝臓がん、胆管がん、絨毛がん、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、精巣睾丸腫瘍、精上皮腫、膀胱がん、中枢神経腫瘍（神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫など）及び皮膚がん（黒色腫や非黒色腫皮膚がんなど）が挙げられる。
【0033】
細胞運動性：細胞の移動する能力であり、アクチノミオシン細胞骨格の細胞突出と再組織化の形成を特徴とする。様々な細胞増殖を判定する方法が本技術分野の当業者に知られている。
【0034】
細胞侵襲性：細胞外基質（マトリゲル、ラミニン、コラーゲンなど）を介して侵襲する細胞の能力であり、葉状仮足の形成と、マトリクスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）等のタンパク質を改変し破壊する基質の活性を特徴とする。局所の細胞への侵襲は、転移カスケードの第１段階である。様々な細胞侵襲を判定する方法が本技術分野における当業者に知られている。
【0035】
細胞増殖：例えば、細胞分裂の繰り返しによる、細胞の増える能力。様々な細胞増殖を判定する方法が本技術分野の当業者に知られている。
【0036】
化学的治療法：がんの治療において、化学的治療法とは、腫瘍やがん細胞などの急速に増加する細胞を破壊したり、その再生を遅らせる１つ以上の薬剤（化学的治療剤）を投与することを意味する。具体的な実施例では、化学的治療法とは、対象者の腫瘍細胞の数を著しく減少させる、例えば、少なくとも約５０％（ＩＣ５０投与量）減少させる１つ以上の薬剤を投与することを意味する。「化学的治療剤」は、がんの治療において治療的に有用な任意の化学剤を含む。
【0037】
化学的治療剤の例については、例えばＨａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第１４版の第８６章、Ｓｌａｐａｋ及びＫｕｆｅ著、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙや、Ａｂｅｌｏｆｆ， Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ第２版の第１７章、Ｐｅｒｒｙら著、Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、２０００年、Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ社、及びＢａｌｔｚｅｒ及びＢｅｒｋｅｒｙ共編、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｐｏｃｋｅｔ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、第２版 （Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ， Ｍｏｓｂｙ−Ｙｅａｒ Ｂｏｏｋ社、１９９５年）、Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｋｎｏｂｆ及びＤｕｒｉｖａｇｅ共編、Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ 第４版（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ， Ｍｏｓｂｙ−Ｙｅａｒ Ｂｏｏｋ社、１９９３年）などを参照されたい。開示されたアントラニルアミド誘導体などのＭＥＫ／ＥＲＫ経路抑制剤などの対象に使用される化学的治療剤は、がんの兆候や病状を抑制、またはがんの進行、転移及び／または増殖の抑制や停止、逆行を行うことができる。
【0038】
接触：固体と液体の両方の場合を含む直接的に物理的接続を持たせること。接触は、例えば薬剤を対象者に投与するなどして、インビボで実施可能である。
【0039】
診断：転移性乳がんなどのがん等の病態の存在や性質を特定すること。異なる診断方法は、その感度や特異度において異なる。診断アッセイの「感度」とは、陽性と診断された病人の割合（真陽性の割合）である。診断アッセイの「特異度」とは、１マイナス偽陽性の割合で、ここで偽陽性の割合とは、陽性と診断されたものが病気でなかった場合の割合である。病状の確かな診断を提供できない診断方法であっても、その方法が診断の材料を提供するものであれば十分である。「予後」とは、病態の発症（例えば、重体化）の確率である。
【0040】
疾患の抑制や治療：例えば固体腫瘍などのがん等の疾患のリスクがある対象者における疾患や病態の完全な発症を抑制すること。「治療」とは、発症後に疾患や病態の兆候や病状を改善する治療的介入である。「改善」とは、疾患や病態に関して、治療上の観察できる有益な効果である。有益な効果としては、例えば、疑いのある対象者における該疾患の臨床病状の発症の遅延、該疾患の臨床病状の一部ないし全ての重症度の軽減、該疾患の進行の遅延、転移数の減少、対象者の全体的な健康や状態の向上や、任意の疾患の他の臨床的または生理学的パラメータにより明らかにすることができる。「予防」的治療とは、疾患の兆候が見られない、または初期の兆候のみを示す対象者に対して、発病のリスクを減らす為に行われる治療である。
【0041】
抑制：計測可能な程度に下げること。例えば、酵素の活性を下げたり、細胞の増殖、運動性、または侵襲性を抑制することである。いくつかの実施例では、ＭＥＫ１／２及び／またはＭＥＫ５の酵素活性は、例えば、開示されたアントラニルアミド誘導体などのＭＥＫ１／２及び／またはＭＥＫ５の小分子抑制剤を用いて抑制される。
【0042】
キナーゼ：ある分子から他の分子へリン酸基の移動を触媒する酵素。キナーゼは、細胞の増殖、生存、分化、代謝、運動性、移動、及び侵襲の制御を担うものである。いくつかの実施例では、キナーゼはＭＥＫ１／２及び／またはＭＥＫ５である。
【0043】
薬学的に許容される担体：薬学的に許容される担体の使用は従来技術である。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ （Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ著、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， ＰＡ、 第１９版、１９９５年）に、本明細書で開示された組成物の薬学的な運搬に適した組成や処方が示されている。
【0044】
一般に、担体の性質は、採用される投与方法による。例えば、非経口の処方は、水や生理食塩水、平衡塩類溶液、Ｄ型グルコース水溶液、グリセロール等の薬学的かつ生理学的に許容される液体を賦形剤として含む注射用液体を通常含む。固体の組成物の場合（粉末、ピル、タブレット、またはカプセルなど）、従来の毒性のない固体担体としては、例えば、薬学的な品質のマンニトール、ラクトース、でんぷん、またはステアリン酸マグネシウムでありうる。生物学的に天然の担体に加え、投与される薬学的な組成物は、酢酸ナトリウムやソルビタンラウリン酸モノエステルなどの、少量の毒性のない補助物質、例えば、湿潤剤や乳化剤、保存料、ｐＨ緩衝剤等を含んでいてもよい。
【0045】
予後：疾患プロセスの予想される経過や結果。いくつかの実施例では、がんの対象者の予後は、生存率、無再発生生存率及び／または全生存率を示すものであってもよい。がんの対象者の予後は、その対象者が、約１年、約２年、約３年、約４年、約５年、または約１０年等のある一定期間生存する可能性を示すものであってもよい。また、がんの対象者の予後は、治癒の可能性、対象者が治療後、約１年、約２年、約３年、約４年、約５年、または約１０年等のある一定期間に再発症しない状態でいる可能性を示すものであってもよい。
【0046】
小分子：典型的には、分子量が約１０００ダルトンより小さい分子であり、幾つかの実施例では、約５００ダルトンより小さい分子である。該分子は、チロシンキナーゼの活性を抑制するなどのターゲットの分子の活性を計測可能な程度に調整することができるものである。いくつかの実施例では、小分子は開示されたアントラニルアミド誘導体である。
【0047】
対象者：「対象者」とは、ヒトと動物の対象者を包含し、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、犬、猫、馬、ラット、マウス、及び牛が挙げられる。同様に、哺乳類とはヒトと非ヒトの哺乳類を包含する。
【0048】
治療薬：適切に対象者に投与された場合に所望の治療的または予防的効果を及ぼすことができる化合物、小分子、または他の組成物である。
【0049】
治療有効量または有効量：開示されたアントラニルアミド誘導体などの化学的治療剤等の、任意の病気や疾患の病状及び／または根本原因を予防、治療（予防的治療を含む）、抑制、及び／または改善、例えばがんの予防、抑制、及び／または治療をするのに十分な使用量。
【0050】
本開示の実施や試験に適切な方法や物質を下記に説明する。これら方法や物質は、説明のためだけに挙げるもので、本発明を限定する意図があるものではない。これらに類似や同様の他の方法や物質も使用可能である。例えば、本開示が属する技術分野において公知の従来の方法が、例えば下記のような様々な一般的またはより専門的な文献に記載されている。Ｓａｍｂｒｏｏｋら著、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， 第２版．， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， １９８９年；Ｓａｍｂｒｏｏｋら著、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， 第３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ， ２００１年； Ａｕｓｕｂｅｌら著、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、 １９９２年（及び２０００年に追補）； Ａｕｓｕｂｅｌら著、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｒｏｍ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， 第４版， Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， １９９９年； Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ， Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， １９９０年；及びＨａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ著、Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， １９９９年。また、物質、方法、及び実施例は、説明のためだけに挙げるもので、本発明を限定する意図があるものではない。
【0051】
ＩＩ．実施形態の説明Ａ．序文
マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）は、タンパク質セリン／トレオニンキナーゼの一群である。これらキナーゼは、胚形成、細胞分化、細胞増殖、及び細胞死を制御する経路の主成分である。ＭＥＫ５シグナル経路は、細胞に酸化的ストレスを生き延びさせるもので、マイトジェン（ＥＧＦ及びＧ−ＣＳＦ）、サイトカイン（ＬＩＦ及びＣＴ−１）及びストレス（Ｈ２Ｏ２、及びソルビトール）により活性化される。ＭＥＫ／ＥＲＫ経路を含むいくつかのシグナル経路は、ある種のがんでは顕著に上方制御されており、より侵襲性の間葉表現型への移行において役割を担っていると考えられている。
【0052】
近年、多くの文献がＭＥＫ１／２抑制剤について言及しているが、酵素ＭＥＫ５の選択的抑制剤についてはそのような文献はない。当初、ＭＥＫ１／２抑制剤は、ＡＴＰのトリフォスフェート端部を擬態し、ＡＴＰ結合ポケットに似ているが異なる疎水性のポケットから延びるように設計されたものである。その後の研究により、ＭＥＫ１／２抑制剤は、この疎水ポケットに結合されるが、ＡＴＰのトリフォスフェート端部を擬態しないと分かった。結果、これら化合物はＡＴＰに対して競合的結合をしなかった。この種の抑制剤は、現在タイプＩＩＩ抑制剤と呼ばれている。
【0053】
合理的薬物設計アプローチにより、化合物はＭＥＫ５を選択的に抑制するように設計された。ＰＤＢデータベースに有効なＭＥＫ５のＸ線結晶構造がないので、ＭＥＫ５のコンピュータモデルが作製された。誘導体設計戦略が、アリール環の置換とアシル基の置換について検討し、許容不可、許容可そして活性向上の置換について計画した。まず、約７０種の具体的な化合物が、本明細書に開示のＭＥＫ５及び／またはＭＥＫ１／２抑制剤の典型例として調製された。典型的なアントラニルアミド誘導体の構造を表１に示す。これらの化合物は、ＭＥＫ５及び／またはＭＥＫ１／２の異なる抑制を示し、がん細胞増殖の抑制について試験された。また、化合物の中には選択的に間葉表現型をより上皮表現型に逆行させるものもある。表現型の逆行は、がんの治療や予防に使用できる。上皮細胞の間葉表現型への転換を阻害または防止することができる化合物についての調査はなされているが、間葉表現型から正常な上皮表現型へ細胞を逆行させる小分子化合物について言及している文献はない。
【0054】
本明細書に開示された新規のアントラニルアミド誘導体は、様々ながんの治療及び／または予防の組成物と方法を提供し、ＭＥＫ１／２及び／またはＭＥＫ５シグナル経路が関与または関係する他の疾患の治療及び／または予防の方法をも提供しえる。また、開示されたアントラニルアミド誘導体化合物は、例えばＭＥＫ１／２及び／またはＭＥＫ５の抑制モデルとして、インビトロで使用することができ、例えば酵素アッセイなどのこれら酵素を抑制する他の抑制剤の能力の細胞試験を細胞システムまたは非細胞システムにおいて行う際に使用可能である。よって、上記開示された化合物は全て実質的な有用性を有する。
【0055】
Ｂ．アントラニルアミド誘導体本明細書にて総称してアントラニルアミド誘導体と称される化合物を開示する。これらアントラニルアミド誘導体は、例えば乳がん、膵臓がん、扁平上皮がん、前立腺がん及び／または初期またはトリプルネガティブな乳がんなどの固形腫瘍等のがんの治療に使用可能である。上記化合物は、例えば、がんの進行時、特にがんの転移時において、特に上皮間葉間転換の防止、予防及び／または逆行に効果的である。上記化合物の他の使用としては、下記のように、インビトロ及びインビボアッセイ両方での上皮間葉（ＥＭＴ）遺伝子の発現の抑制が挙げられる。具体的な実施例において、化合物は小分子治療用である。
【0056】
開示された実施形態の一部では、アントラニルアミド誘導体は、下記に示す式の多環化合物である。
【0057】
【化2】
【0058】
第１級または第３級アミン、ＯＲ１１、またはアミノ酸であり、式中Ｒ１１は独立して水素、アルキル、アルケニル、アルケニルであり、Ｒ２は独立して水素、アルキル、アルケニル、アルケニル、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素などのハロゲン、１つないし複数の炭素−炭素二重結合または三重結合を含んでいてもよいＣ１〜Ｃ４などのアルコキシ、シアノ基、またはニトリル基であり、Ｒ３は独立して水素、アルキル、アルケニル、アルケニル、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素などのハロゲン、１つないし複数の炭素−炭素二重結合または三重結合を含んでいてもよいＣ１〜Ｃ４などのアルコキシ、シアノ基、またはニトリル基であり、Ｒ４は独立して水素、アルキル、アルケニル、アルケニル、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素などのハロゲン、１つないし複数の炭素−炭素二重結合または三重結合を含んでいてもよいＣ１〜Ｃ４などのアルコキシ、シアン基、またはニトリル基であり、Ｒ５は独立して水素、アルキル、アルケニル、アルケニル、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素などのハロゲン、１つないし複数の炭素−炭素二重結合または三重結合を含んでいてもよいＣ１〜Ｃ４などのアルコキシ、シアン基、またはニトリル基であり、Ｒ６は独立して水素、アルキル、アルケニル、アルケニル、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素などのハロゲン、１つないし複数の炭素−炭素二重結合または三重結合を含んでいてもよいＣ１〜Ｃ４などのアルコキシ、シアノ基、またはニトリル基であり、Ｒ７は独立して水素、アルキル、アルケニル、アルケニル、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素などのハロゲン、１つないし複数の炭素−炭素二重結合または三重結合を含んでいてもよいＣ１〜Ｃ４などのアルコキシ、シアノ基、またはニトリル基であり、Ｒ８は独立して水素、アルキル、アルケニル、アルケニル、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素などのハロゲン、１つないし複数の炭素−炭素二重結合または三重結合を含んでいてもよいＣ１〜Ｃ４などのアルコキシ、シアノ基、またはニトリル基であり、Ｒ９は独立して水素、アルキル、アルケニル、アルケニル、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素などのハロゲン、１つないし複数の炭素−炭素二重結合または三重結合を含んでいてもよいＣ１〜Ｃ４などのアルコキシ、シアノ基、またはニトリル基であり、及びＲ９は独立して水素、アルキル、アルケニル、アルケニル、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素などのハロゲン、１つないし複数の炭素−炭素二重結合または三重結合を含んでいてもよいＣ１〜Ｃ４などのアルコキシ、シアノ基、またはニトリル基である。上記Ｒ基の一部または全ての置換基はいずれも如何なる組み合わせまたはサブコンビネーションで選択されても良いものであることは当業者には明白であろう。
【0059】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素の何れか１つなどのハロゲンである。いくつかの実施形態では、Ｒ２はフッ素である。
【0060】
いくつかの実施形態では、Ｒ３は水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素の何れか１つなどのハロゲンである。
【0061】
いくつかの実施形態では、Ｒ４は水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ４は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素の何れか１つなどのハロゲンである。いくつかの実施形態では、Ｒ４はヨウ素である。
【0062】
いくつかの実施形態では、Ｒ５は水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ５は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素の何れか１つなどのハロゲンである。
【0063】
いくつかの実施形態では、Ｒ６は水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ６は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素の何れか１つなどのハロゲンである。いくつかの実施形態では、Ｒ６はフッ素である。
【0064】
いくつかの実施形態では、Ｒ７は水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ７は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素の何れか１つなどのハロゲンである。いくつかの実施形態では、Ｒ７はフッ素である。
【0065】
いくつかの実施形態では、Ｒ８は水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ８は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素の何れか１つなどのハロゲンである。
【0066】
いくつかの実施形態では、Ｒ９は水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ９は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素の何れか１つなどのハロゲンである。
【0067】
いくつかの実施形態では、Ｒ１０は水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ１０は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素の何れか１つなどのハロゲンである。
【0068】
開示された実施形態の一部では、開示されたアントラニルアミド誘導体は下記に示す式の化合物である。
【0069】
【化3】
【0070】
開示された実施形態の一部では、開示されたアントラニルアミド誘導体は下記に示す式の化合物である。
【0071】
【化4】
【0072】
開示された実施形態の一部では、開示されたアントラニルアミド誘導体は下記に示す式の化合物である。
【0073】
【化5】
【0074】
開示された実施形態の一部では、開示されたアントラニルアミド誘導体は下記に示す式の化合物である。
【0075】
【化6】
【0076】
開示された実施形態の一部では、開示されたアントラニルアミド誘導体は下記に示す式の化合物である。
【0077】
【化7】
【0078】
開示された実施形態の一部では、開示されたアントラニルアミド誘導体は下記に示す式の化合物である。
【0079】
【化8】
【0080】
開示された実施形態の一部では、開示されたアントラニルアミド誘導体は下記に示す式の化合物である。
【0081】
【化9】
【0082】
式中、Ｒ基は式Ｉに対して上述されたものであり、Ｒ１２とＲ１３は、それぞれ独立して水素、アルキル、アルケニル、またはアルケニル、または窒素と結合して
【0083】
【化10】
【0084】
上記Ｒ基の一部または全ての置換基はいずれも如何なる組み合わせまたはサブコンビネーションで選択されても良いものであることは当業者には明白であろう。
【0085】
具体的実施例では、開示されたアントラニルアミド誘導体は、３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）安息香酸（ＳＣ−１−１８０）、３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）ベンズアミド（ＳＣ−１−１５１第一級アミド）、Ｎ，Ｎ−ジエチル−３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）ベンズアミド（ＳＣ−１−６５）、３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルベンズアミド（ＳＣ−１−６９）、３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）−Ｎ−メチルベンズアミド（ＳＣ−１−７２ アミド）、３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）安息香酸メチル（ＳＣ−１−７２エステル）、Ｔｅｒｔ−ブチル−４−（３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）ベンゾイル）ピペラジン−１−カルボン酸塩（ＳＣ−１−７５）、（３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）フェニル）（ピペラジン−１−イル）メタノン塩酸塩（ＳＣ−１−７９）、Ｎ−エチル−３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）ベンズアミド（ＳＣ−１−８０）、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）−Ｎ−メチルベンズアミド塩酸塩（ＳＣ−１−１２２）、２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）安息香酸（ＳＣ−１−１４ 酸）、（２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）フェニル）（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノン塩酸塩（ＳＣ−１−２４ アミド）、２−（フェニルアミノ）安息香酸（ＳＣ−１−３９ 酸）、（４−メチルピペラジン−１−イル）（２−（フェニルアミノ）フェニル）メタノン（ＳＣ−１−１７７ アミド）、３，４−ジフルオロ−２−（フェニルアミノ）安息香酸（ＳＣ−１−１７５ 酸）、３，４−ジフルオロ−２−（フェニルアミノ）フェニル）（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノン（ＳＣ−１−１８１）、３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロフェニル）アミノ）安息香酸（ＳＣ−２−２５ 酸）、（３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロフェニル）アミノ）フェニル）（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノンモノフマル酸塩（ＳＣ−２−４５）、３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロフェニル）アミノ）ベンズアミド（ＳＣ−２−３７）、及び３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）（メチル）アミノ）安息香酸（ＳＣ−２−３２ 酸）またはこれらの任意の組み合わせの１つから選択される。
【0086】
「溶媒和物」は、１つ以上の溶媒分子と化合物との物理的結合物である。この物理的結合は、異なる程度のイオン結合と共有結合を有し、例えば共有結合付加物と水素結合溶媒和物が挙げられる。一例として、溶媒和物は、例えば１つ以上の溶媒分子が結晶性固体の結晶格子に取り込まれた場合に、単離可能である。「溶媒和物」は、溶液相と単離可能な溶媒和物の両方を包含する。典型的溶媒和物は、エタノール結合化合物、メタノール結合化合物等を包含する。「水和物」は、溶媒分子がＨ２Ｏである溶媒和物である。
【0087】
また、開示された化合物は塩を包含し、もし塩を形成する基がいくつかある場合は、混合塩及び／または内部塩も包含する。塩は、通常、非毒性の薬学的に許容可能な塩である。塩は、どのようなタイプのものであってもよく（有機でも無機でもよい）、フマル酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩などが挙げられる。一実施例では、塩は、周期表のＶＩＩ属の非金属（例えば、ハロゲン）を含む。例えば、化合物は、臭化水素酸塩として提供されてもよい。
【0088】
塩を形成する基のその他の例は、好適な基材と塩を形成できるカルボキシル基、ホスホン酸基、またはボロン酸基などが挙げられるが、これらに限定されない。これらの塩は、例えば、周期表のＩＡ、ＩＢ、ＩＩＡ、ＩＩＢ属の金属由来の非毒性の金属カチオンを含んでいてもよい。一実施形態では、リチウム、ナトリウム、カリウムなどのイオンなどのアルカリ金属カチオンやマグネシウムやカルシウムのイオンなどのアルカリ土類金属カチオンが使用可能である。また、塩は亜鉛カチオンやアンモニウムカチオンであってもよい。塩は、好適な有機アミンと形成される。例えば、置換されていない、またはヒドロキシで置換されているモノ−、ジ−またはトリ−アルキルアミン、特にモノ−、ジ−またはトリ−アルキルアミン、または第４級アンモニウム化合物（例えば、Ｎ−メチル−Ｎ−エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、モノ−、ビス−またはトリス−（２−ヒドロキシ−低級アルキル）アミン（例えば、モノ−、ビス−またはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミン）、２−ヒドロキシ−ｔ−ブチルアミンまたはトリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジ−低級アルキル−Ｎ−（ハイドロキシ−低級アルキル）アミン（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アミンまたはトリ−（２−ヒドロキシエチル）アミン、またはＮ−メチル−Ｄ−グルカミン）、または第４級アンモニウム化合物（テトラブチルアンモニウム塩など）。
【0089】
その他の薬学的に許容可能な塩を形成する対イオンは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 第２２版（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０１２年）に記載されている。一態様において、薬学的に許容可能な塩を使用して組成物の浸透圧の調整を行ってもよい。
【0090】
いくつかの実施形態では、本方法に使用される上記化合物は、提供され、多形である。よって、上記化合物は、異なる結晶形、結晶構造、液体結晶構造、または非結晶（非結晶質）形など２種類以上の物理的形状で提供されてもよい。
【0091】
Ｃ．薬剤の製造における使用上記の化合物（例えば、アントラニルアミド誘導体や、その水和物や薬学的に許容可能な塩）または、その組み合わせのいずれもがんの治療薬の製造において使用されることを意図するものである。そのような薬剤に好適な処方と、その貢献を受けえる対象者、そしてその他の特徴は、本明細書の他の箇所に記載されている。
【0092】
Ｄ．化合物の合成方法の例上記開示されたアントラニルアミド誘導体は、本技術分野において公知の任意の方法で合成してもよい。上記開示された化合物の合成に使用可能な一般的な化学合成スキームと条件を記載した一般的な参考文献は多い（例えば、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｍａｒｃｈ著、Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ， Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ， ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ第５版（Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、２００１年）、またはＶｏｇｅｌ著、Ａ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ、第４版（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｌｏｎｇｍａｎ，１９７８年を参照）。方法の例をいくつか下記と実施例に示す。
【0093】
本明細書に記載の化合物は、ＨＰＬＣや分取薄層クロマトグラフィ、フラッシュカラムクロマトグラフィ、及びイオン交換クロマトグラフィなどのクロマトグラフィ的手段を含む公知の如何なる手段によって精製されてもよい。順相や逆相、イオン樹脂等の好適な任意の固定相を使用しても良い。最も典型的には、上記開示された化合物は、オープンカラムクロマトグラフィや分取クロマトグラフィにより精製される。
【0094】
テトラハロ・コアの合成：３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）安息香酸（３９） テトラハロジフェニルアミンコア（３９）の合成は、リチウムアミド置換アプローチによりなされる（スキーム１）。この手順は、所望の化合物５７（ＳＣ−１−１５１）の動物実験に必要な４ｇまでスケールアップされた。
【0095】
【化11】
【0096】
スキーム１：リチウムアミド置換アプローチ
【0097】
好ましい置換は、上述したようにオルト位に起こる。２，３，４−トリフルオロ安息香酸，２−フルオロ−４−ヨードアニリン、及び３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）安息香酸の１９Ｆ ＮＭＲスペクトルの測定を、ヘテロ核広域プローブを用いた５００ＭＨｚの測定器にて行った。
【0098】
テトラハロアミドの合成。適切なアミンを、カルボン酸（３９）から調製された酸塩化物に付加することで、単純アミドは容易に得られるであろうと考えられた。酸（３９）は、対応する酸塩化物に容易に変換されることが分かった（スキーム２）。塩化オキサリルと、触媒としてＤＭＦを試薬として採用した。このシステムは、純粋な塩化オキサリルを、上記酸、ＤＭＣ及び触媒としてＤＭＦを含む反応混合液に添加することを利用する。ＤＭＦは、下記のようにクロリジニウム（ｃｈｌｏｒｉｄｉｎｉｕｍ）中間体を生成する働きをする。このクロリジニウム類（８４）は、カルボン酸に働きかけ、上記酸塩化物を生成する。この反応は、０℃にて拡散律速で進み、黄色のクロリジニウム類の急速な形成と消失で示される（スキーム３）。全体の反応は、室温またはそれ以下の温度で、２時間で完了し、常時酸塩化物（７９）を生成する。
【0099】
【化12】
【0100】
スキーム２：酸塩化物の形成
【0101】
【化13】
【0102】
スキーム３：上記酸塩化物法を用いた単純アミドの合成
【0103】
塩基性アミンを有するアミドの場合、この方法は成功しなかった。ＤＣＣとＤＩＣ結合により効果的に上記補助結合を形成することができることがわかった。どの場合でも、ＤＣＣを使用すると、純粋な製品を単離することができない複合混合物が得られた。多くの場合、ＤＩＣとの反応は、ＤＣＣとの場合よりも比較的良好なクリーンアップで進行した。
【0104】
トリハロコアの合成３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロフェニル）アミノ）安息香酸（６８）３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロフェニル）アミノ）安息香酸、つまり、またはジフェニルアミン酸（６８）の脱ヨード変異型を、２−フルオロアニリンのリチウムアミドを２，３，４−トリフルオロ安息香酸におけるＳＮＡｒ置換に用いて合成した。この変換の単離収率は、５９％であった。
【0105】
【化14】
【0106】
スキーム４：リチウムアミド置換方法（ＤａｖｉｓらＯｒｇ．Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓ．Ｄｅｖ． ２００５年、９，８４３−８４６参照）
【0107】
ＥＤＣＩ結合は成功し、生成物６９のフマル酸塩が単離された（スキーム５）。ＥＤＣＩからの副生物は、ＤＩＣ結合の副生物と比較してより効率的に除去でき、生成物を含む塩基性アミンの純粋な単離が可能であった。上記化合物の遊離塩基形は、硬化や結晶化が困難なのでフマル酸塩の形成が必要とされ、結果、この生成物の直接的な元素分析は成功しなかった。６９のＨＣｌ塩の形成により、非常に吸湿性が高く、自由流動性の固体に適切に乾燥することができない化合物が得られた。フマル酸塩の形成により、所望の生成物の単離と特性解析の問題を簡単かつ効率的に解決された。
【0108】
【化15】
【0109】
スキーム５：ＥＤＣＩ結合による６９フマル酸塩の合成
【0110】
下記のような様々な末端環の第１級アミド誘導体が合成された。
【0111】
ジハロコアの合成：３，４−ジフルオロ−２−（フェニルアミノ）安息香酸（７１）。ジハロコアである、３，４−ジルフルオロ−２−（フェニルアミノ）安息香酸は、中央の３，４−ジフェニル環を残すが、末端アレーン環上にハロゲンがない点で変異している。上述のリチウムアミド置換法によるこの化合物の単離収率は、４３％であった。
【0112】
【化16】
【0113】
スキーム６：リチウムアミド置換法による７１の合成ジハロアミドの合成
カルボン酸７１の酸塩化物を介して進行する一般的合成戦略は有効だったが、複雑なものであった。ジハロ酸７１から開始する化学的経路は、上述のテトラハロ酸（３９）よりも収率が低かった。これは、結合したジフェニルアミンが（３９）より（７１）において電子欠損が低いことが原因である可能性がある。カルボン酸（７１）が、上記のテトラハロ酸（３９）に誘導するように反応すると予想されたが、電子欠損が低いジフェニルアミンは、分子内または分子間でのジフェニルアミンと塩化アシルの縮合を伴う副反応に参加したであろう。
【0114】
【化17】
【0115】
スキーム７：７２の合成のＥＤＣＩ結合
【0116】
また、これら誘導体の第１級アミドをスキーム８で示すように調製した。
【0117】
【化18】
【0118】
スキーム８：第１級アミド（５７）、（７３）、及び（７０）の合成
【0119】
無ハロゲンコアの合成：２−（フェニルアミノ）安息香酸
【0120】
所望の各誘導体には異なる基質が必要なので、異なる合成戦略が必要であった。異なるアリールへの窒素結合戦略を検討した（上記参照）。最終的に、２−ヨード安息香酸の炭素−ハロゲン結合へのアニリンの付加を用いるウルマン結合戦略を選択した。このアプローチは、安価な市販の出発材料を用い、電子が豊富なアニリンから電子が欠損している２−ヨード安息香酸への適度な電子の流れを利用するものである。ウルマン結合戦略における上記所望の酸の単離収率は４４％であった。最近のバリエーションの検討によれば、最終的に選択され、スキーム１０にて示される条件が推奨される。採用された具体的方法は、ヨウ化銅、炭酸カリウム、及びＤＭＦと水が９対１の混合溶媒システムを用いた。マイクロ波照射により効率的に加熱を行った。
【0121】
【化19】
【0122】
スキーム９：２５を合成するウルマン結合戦略
【0123】
無ハロゲンジフェニルアミンである化合物２５の場合、異なるアミド形成戦略が必要であった。上記の酸塩化物法は、有効ではなかった。この戦略の失敗の原因は、おそらく、電子吸引性の基が無い為、化合物２５のアミンの求核性は、上記で合成した化合物よりも高いことが一因であろう。化合物９５では電子密度が高い為、分子内または分子間自己縮合が起こり得る。この説明は、出発物質は単離可能な生成物を生成せずに消費された観察結果と一致する。
【0124】
化合物７５の合成を試みた次のアプローチでは、ピペラジン誘導体に変換後、Ｂｏｃ−ピペラジン誘導体９６の合成を行う。エシュバイラー・クラーク反応を利用した第３級アミンの合成を計画した。しかし、エシュバイラー・クラーク反応の生成物は単離されなかった（スキーム１０）。上述の反応を検討した結果、スキーム１１に示す経路（ＤＩＣ結合）がより効率的なため、この戦略は放棄された。このＤＩＣ結合は成功し、単離された生成物の収率は、高くはないが十分な１７％であった。
【0125】
【化20】
【0126】
スキーム１１：７５を合成するＤＩＣ結合方法
【0127】
過剰のリチウムアミドのＴＨＦ溶液を用い、現行の標準的Ｄａｖｉｓ手法を使用した２−フルオロ−４−ヨードアナリンのリチウムアミドの２−ヨード安息香酸への試みたＳＮＡｒ求核性は成功しなかった。これは恐らく、上述の基質である２，３，４−トリフルオロ安息香酸と比較して、２位炭素がより陽性であるためである。また、上述の観察によれば、ウルマン結合を利用するように合成戦略を変換する試みは成功し、安定的に単離され再結晶されたものの収率が４０〜６０％で進行した。
【0128】
【化21】
【0129】
スキーム１２：アミド７５及び７４の合成Ｎ−メチルジフェニルアミンコアの合成：
エシュバイラー・クラーク反応を、３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）（メチル）アミノ）安息香酸である化合物７６を調製する初期戦略として検討した。標準のマイクロ波反応条件を用いることを検討したが、所望の生成物は単離できなかった。ヨウ化メチルを用いたアルキル化の前にジフェニルアミンの窒素原子からプロトンを分離する水酸化ナトリウム分離を利用する他の戦略を試した。粗ＴＬＣ分析では多くのスポットが見られ、カラムクロマトグラフィによる分離は失敗したことが分かった。
【0130】
２つの合成アプローチが失敗した後、非常に異なる戦略を試した。アルキル化を単純アニリン前駆体である２−フルオロ−４−ヨードアニリンに行い、モノＮ−メチル化生成物である、２−フルオロ−４−ヨード−Ｎ−メチルアニリンをスキーム３４．１１４に示すように調製することに成功した。この第２級アニリンを標準ＳＮＡｒリチウムアミド置換アプローチにて２，３，４−トリフルオロ安息香酸に結合した。
【0131】
【化22】
【0132】
スキーム１３：化合物３８のモノメチル化反応
【0133】
【化23】
【0135】
【表1】
【0136】
Ｅ．治療方法がんの対象者、がんの疑いのある対象者、またはがんを発症するリスクが高い対象者を、上記開示されたアントラニルアミド誘導体で治療する方法を本明細書で開示する。本方法は、例えば乳がん腫瘍、前立腺がん腫瘍及び／または膵臓腫瘍などの固形腫瘍と診察された対象者、がんの対象者などの必要のあるまたは治療の個人を選択することを含む。開示されたアントラニルアミド誘導体での治療の対象となる典型的な対象者は、ヒトや非ヒト霊長類やマウスなどその他の動物を含む。選択後、対象者は、開示されたアントラニルアミド誘導体の治療有効量を投与され、がんを治療する。いくつかの例では、上記開示されたアントラニルアミド誘導体は、薬学的組成物として提供される。また、例えば、対象者に開示されたアントラニルアミド誘導体の効果的補正を投与するなどの、対象者においてＭＥＫ１／２及び／またはＭＥＫ５を抑制する方法を開示する。さらに、例えばがん細胞などにおいて上皮間葉間転換を抑制及び／または逆行する方法を開示する。
【0137】
上記開示されたアントラニルアミド誘導体の投与は、予防目的のものでも、治療目的のものでもよい。予防目的で提供される場合は、上記アントラニルアミド誘導体は、病状がでる前に提供される。上記化合物の予防的投与は、以後の疾患経過を防止または軽減するために作用する。治療目的で提供される場合は、上記化合物は疾患の発症時（またはそのすぐ後）や、その疾患の進行時の任意の時点で提供される。
【0138】
予防目的及び治療目的の場合、上記開示されたアントラニルアミド誘導体は、対象者に対し、一回のボーラス投与、連続投与（例えば、連続経皮、粘膜、または、静脈投与）を、ある一定期間、または反復投与プロトコール（例えば、毎時、毎日、毎週の反復投与プロトコール）で投与されてもよい。上記化合物の治療有効量は、対象の疾患や状態が伴う１つ以上の病状や検知可能な状態を軽減する治療的に顕著な結果をなす予防的または治療的投与計画中の反復投与量として提供されてもよい。
【0139】
効果的投与量の決定は、典型的には動物モデル研究とその後の人体臨床実験に基づいて決定され、対象者における対象の疾患の病状や状態の発生や程度を顕著に軽減する投与プロトコールによりガイドされる。この点について、適切なモデルは、例えば、マウス、ラット、ぶた、ねこ、非ヒト霊長類、及びその他の、本技術分野で公知の許容された動物モデルである。または、有効投与量は、インビトロモデル（例えば、免疫学及び組織病理学アッセイ）を用いて決定されてもよい。このようなモデルを使用すれば、上記開示されたアントラニルアミド誘導体の治療有効量（例えば、対象の疾患や状態の１つ以上の疾患を軽減するのに有効な量）を投与するのに適切な濃度と投与量の決定には通常の計算と調整のみが必要とされる。別の実施形態では、上記開示されたアントラニルアミド誘導体の有効量や有効投与量は、疾患や状態に関する１つ以上の選択された生物的活性を単純に抑制または向上するものであってもよい。
【0140】
上記開示されたアントラニルアミド誘導体の実際の投与量は、対象者の所望の活性や生物的応答を誘発する上記開示されたアントラニルアミド誘導体の具体的な薬効薬理だけでなく、疾患の病状や対象者の具体的な状態（例えば、対象者の年齢、サイズ、体調、病状の程度、感受性因子等）、投与の時間と経路、同時に処方される他の薬剤や治療に基づいて変化する。投与計画は、最適な予防または治療反応をえるために調整されうる。
【0141】
治療的有効量は、上記化合物及び／またはその他の生物的活性薬剤の有毒または有害副作用を治療の点で薬効が上回る量である。本開示の方法や製材における開示されたアントラニルアミド誘導体の治療有効量は、限定されるものではないが、体重に対して、投与量あたり、例えば、約０．０００１μｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇであり、例えば約０．０００１μｇ／ｋｇ〜約０．００１μｇ／ｋｇ、約０．００１μｇ／ｋｇ〜約０．０１μｇ／ｋｇ、約０．０１μｇ／ｋｇ〜約０．１μｇ／ｋｇ、約０．１μｇ／ｋｇ〜約１０μｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ〜約１００μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ〜約５００μｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ〜約１０００μｇ／ｋｇ、または約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇである。
【0142】
対象の場所の所望の濃度を保つ投与量は、担当の臨床医によって変更されても良い。例えば、経皮投与、直腸投与、経口投与、経肺投与、経鼻投与、静脈投与、または皮下投与などの投与方法により、より高いまたはより低い濃度を選択してもよい。同じ血清濃度を得る為に、例えば、放出速度が５ナノモル（標準状態）の徐放粒子の場合は、放出速度が１０ナノモルの粒子の投与量の約２倍の量を投与する。
【0143】
開示されたアントラニルアミド誘導体を対象者に投与する場合、投与は一度であっても連続的であっても良い。連続的投与は、所望の効果が得られるのであれば、どの様な時間で分けられてもよい。本明細書に記載の組成物の複数回の投与も可能である。
【0144】
具体的な対象者への具体的な投与量と投与の頻度は様々であり、その化合物の活性、既存の疾患活性の程度、年齢、体重、一般的な健康状態、性別、食習慣、投与経路と投与時、排出速度、薬剤の組み合わせ、実施中の対象者の治療法の状態の重症度などの様々な要因に依存する。
【0145】
Ｆ．医薬組成物治療的または医薬組成物などの組成物は、開示されたアントラニルアミド誘導体の１つまたは複数を含んで提供される。ＭＥＫ１／２及び／またはＭＥＫ５活性の抑制剤を医薬組成物、例えば、細胞増殖または細胞の移動、または細胞の普及障害を抑制または治療する目的に適切な医薬組成物として準備するのが望ましい。よって、開示されたアントラニルアミド誘導体を含む薬剤や医薬組成物を製造する方法も本発明は包含する。上記開示されたアントラニルアミド誘導体のみを投与するために生成されてもよく、他の化学治療薬などの他の活性成分と共に投与されるために生成されてもよい。
【0146】
開示されたアントラニルアミド誘導体を含む医薬組成物は、様々な経路で対象者に投与することができる。例えば、経口、経鼻（経鼻など）、経眼、経口腔、経腸、硝子体内、その他の経粘膜（直腸や膣）、または局所投与を含む。または、投与は、同所性、皮内投与、皮下投与、筋内投与、非経口、腹腔内、または静脈注射により行われてもよい。そのような医薬組成物は、通常、生理学的に許容可能な担体、バッファー、その他の賦形剤を含む薬学的に許容可能な組成物として投与される。
【0147】
典型的には、（例えば、薬剤として使用される、薬剤の製造に使用される）医薬組成物の製造は、実質的に発熱物質や人や動物に有害でありうる他の不純物を含まない医薬組成物を製造することを包含する。上記開示されたアントラニルアミド誘導体は、医薬組成物（治療的または予防的処方）に含まれ、通常、１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤や担体、及び任意で他の治療的成分と組み合わされたものであってもよい。
【0148】
医薬組成物の処方は、開示されたアントラニルアミド誘導体は、さまざまな薬理的の許容可能な添加剤、及び上記化合物の分散のための基材や賦形剤と組み合わされたものであってもよい。所望の添加剤は、アルギニン、水酸化ナトリウム、グリシン、塩酸、クエン酸などのｐＨ制御剤を包含するが、これに限定されるものではない。また、局所麻酔剤（例えば、ベンジルアルコール）、等張化剤（例えば、塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトール）、吸収抑制剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０）、溶解向上剤（例えば、シクロデキストリンとその誘導体）、安定剤（例えば、血清アルブミン）及び還元剤（例えば、グルタチオン）も挙げられる。組成物が液体の場合、製剤の毒性は、０．９％（ｗ／ｖ）生理食塩水の毒性を対照にして測定され、通常は実質的に不可逆的な組織障害が投与箇所で誘発されない値に調整される。一般に、溶液の毒性は、約０．３から約３．０の値に調整され、例えば約０．５から約２．０に、または約０．８から約１．７に調整される。
【0149】
上記開示されたアントラニルアミド誘導体は、該化合物と任意の所望の添加剤を分散する能力を有する親水性化合物を含む基剤や賦形剤に分散されたものであってもよい。基剤は、広範囲の適切な化合物から選択されえる。例えば、ポリカルボキシル酸及びその塩、他のモノマー（例えば、メチル（メタ）アクリレート、アクリル酸等）が付随した無水カルボキシ酸（例えば、無水マレイン酸）、親水性ビニルポリマー（ポリビニルアセテート、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンなど）、セルロース誘導体（ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースなど）、及び天然ポリマー（キトサン、コラーゲン、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、ヒアルロン酸、及び無毒性金属塩等が挙げられるが、これに限定されるものではない。しばしば、例えば、ポリ乳酸、ポリ（乳酸−グリコール酸）共重合体、ポリヒドロキシ酪酸、ポリ（ヒドロキシ酪酸−グリコール酸）共重合体、及びその混合物などの生分解性ポリマーが基剤や賦形剤として選択される。その代替として、またはそれに加えて、ポリグリセリン脂肪酸エステル、スクロース脂肪酸エステル等の合成脂肪酸エステルも賦形剤として使用可能である。親水性ポリマーとその他の賦形剤は、単体で使用されてもよく、組み合わされて使用されてもよい。また、部分的結晶化、イオン結合、架橋、そのほかにより強化された構造的一体性を付与された賦形剤でもよい。賦形剤は、液体、粘性液体、ジェル、ペースト、粉末、及びマイクロスフェアなどさまざまな形態で提供されてもよい。
【0150】
上記開示されたアントラニルアミド誘導体は、方法の種類により上記基剤や賦形剤と組合すことが可能であり、上記化合物の放出は、分散、賦形剤の分解、または水路の形成により行われることができる。場合により、上記化合物は、例えば、イソブチル２−シアノアクリレート（例えば、Ｍｉｃｈａｅｌ著， Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｙ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４３：１−５，１９９１年を参照下さい）などの適切なポリマーから生成されたマイクロカプセル（マイクロスフェア）やナノカプセル（ナノスフェア）に分散される。または、投与と生物的活性を長時間持続する生体適合性分散媒質に分散される。
【0151】
または、上記開示されたアントラニルアミド誘導体は、生理学的状態を得るのに必要な薬理的に許容可能な賦形剤物質を含んでいてもよく、そのような賦形剤物質としては、例えば酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、ソルビタンラウリン酸モノエステル、及びトリエトキシシランなどのｐＨ調整剤や、バッファー剤、毒性調整剤、湿潤剤等が挙げられる。固体組成物の場合、従来の無毒の薬学的に許容可能な賦形剤を使用可能であり、そのような賦形剤としては、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、でんぷん、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウム等が挙げられる。
【0152】
上記開示されたアントラニルアミド誘導体を投与するための医薬組成物は、高濃度の活性成分に対して適切な溶液、マイクロエマルション、その他の秩序構造として製剤されてもよい。賦形剤は、溶液でも分散媒体であってもよく、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等）やその適切な混合物が挙げられる。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤を使用したり、分散可能な製剤の場合は所望の粒度を維持したり、表面活性剤を使用したりして維持することができる。多くの場合、例えば、砂糖、マンニトールやソルビトールなどのポリアルコール類、塩化ナトリウムなどの等脹剤を組成物に含むことが望ましいであろう。上記化合物の持続的吸収は、組成物に、例えばモノステアリン酸塩やゼラチンなどの吸収を遅らせる薬剤を含めることで行うことができる。
【0153】
予防目的及び治療目的の場合、上記医薬組成物は、対象者に対し、一回のボーラス投与、連続投与（例えば、連続経皮、粘膜、または、静脈投与）を、ある一定期間、または反復投与プロトコール（例えば、毎時、毎日、毎週の反復投与プロトコール）で投与されてもよい。上記化合物の治療有効量は、対象の疾患や状態が伴う１つ以上の病状や検知可能な状態を軽減する治療的に顕著な結果をなす予防的または治療的投与計画中の反復投与量として提供されてもよい。
【0154】
開示されたアントラニルアミド誘導体を含む治療的組成物は、ポンプ（Ｌａｎｇｅｒ， ｓｕｐｒａ；Ｓｅｆｔｏｎ， ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ． Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ． １４：２０１， １９８７；Ｂｕｃｈｗａｌｄら著Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７， １９８０；Ｓａｕｄｅｋら著、Ｎ． Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４， １９８９年を参照）を使用したり例えば、ミニポンプを使用する連続的皮下注入を行ったりすることにより投与することができる。静脈バック溶液も使用可能である。適切な投与量の選択における一つのファクタは、本明細書で開示される方法で測定され、医師により適切に判断される、得られる結果である。他の制御放出システムはＬａｎｇｅｒ（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−３３， １９９０年）に記載されている。
【0155】
一実施例において、ポンプがインプラントされている（例えば、米国特許第６，４３６，０９１号；同第５，９３９，３８０号及び同第５，９９３，４１４号参照）。患者に長期にわたり一定の投与量を供給したり、治療薬の注入を行うために、インプラント可能な薬剤注入装置が使用できる。その様な装置は、主動的または受動的であるとカテゴリー分けすることができる。
【0156】
主動的薬剤またはプログラム可能注入装置では、ポンプや計量システム等であり、薬剤を患者のシステム内に投与するものである。現在市販されているこのような主動的注入装置の一例は、Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ ＳＹＮＣＨＲＯＭＥＤ（商標）プログラマブルポンプである。一方、受動的注入装置は、ポンプではなく、加圧薬剤タンクを利用して薬剤を投与するものである。このような装置の一例はＭｅｄｔｒｏｎｉｃ ＩＳＯＭＥＤＴＭである。
【0157】
具体例としては、治療的組成物は、持続的放出システムによって管理されている。持続的放出システムの適切な例としては、好適なポリマー材料（例えば、フィルムやマイクロカプセルなどに成型された半透過性のポリマー基質）、好適な疎水性材料（例えば許容可能なオイルのエマルション）、またはイオン交換樹脂及び難溶性誘導体（例えば若干難溶性の塩）が挙げられる。持続的放出組成物は、経口投与、非経口投与、大槽内、腹腔内投与、局所投与（粉体、軟膏、ジェル、飴、経皮パッチなど）、または経口または経鼻スプレーとして投与することが可能である。持続的放出基質としては、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号、ＥＰ特許第５８，４８１号）、Ｌ−グルタミン酸及びガンマ−エチル−Ｌ−グルタミン酸塩の共重合体（Ｓｉｄｍａｎら著、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２：５４７−５５６，１９８３年、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタアクリレート）；（Ｌａｎｇｅｒら．，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７，１９８１年；Ｌａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５，１９８２年、エチレンビニルアセテート（Ｌａｎｇｅｒら．，Ｉｄ．）、ポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ特許第１３３，９８８号）が挙げられる。
【0158】
ポリマーをイオン制御放出に使用することができる。薬剤を制御しながら投与するために使用可能な様々な分解可能または分解不能なポリマーの基質がこの技術分野で知られている（Ｌａｎｇｅｒ， Ａｃｃｏｕｎｔｓ Ｃｈｅｍ． Ｒｅｓ．２６：５３７、１９９３年）。例えば、ブロック共重合体、ポラクサマー４０７は、低温では粘性であるが流動性を有する液体であるが、体内温度では半固体のジェルを形成する。これは、組み換え型インターロイキン−２とウレアーゼの製剤と持続的投与用の効果的な賦形剤であることが証明されている（Ｊｏｈｎｓｔｏｎら著、Ｐｈａｒｍ． Ｒｅｓ．９：４２５， １９９２年、及びＰｅｃ， Ｊ． Ｐａｒｅｎｔ． Ｓｃｉ． Ｔｅｃｈ． ４４（２）：５８，１９９０）。または、ヒドロキシアパタイトは、タンパク質の制御放出用のマイクロキャリアとして使用されている（Ｉｊｎｔｅｍａら著、Ｉｎｔ． Ｊ． Ｐｈａｒｍ．１１２：２１５、１９９４年）。その他の態様では、リポソームが、脂質カプセル化薬剤の薬剤標的の他、制御放出のためにも使用されている（Ｂｅｔａｇｅｒｉら著、Ｌｉｐｏｓｏｍｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｔｅｃｈｎｏｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｉｎｃ．， Ｌａｎｃａｓｔｅｒ， ＰＡ， １９９３年）。その他にも多くの治療用タンパク質の制御放出のシステムが知られている。（例えば、米国特許第５，０５５，３０３号；米国特許第５，１８８，８３７号；米国特許第４，２３５，８７１号；米国特許第４，５０１，７２８号；米国特許第４，８３７，０２８号；米国特許第４，９５７，７３５号；及び米国特許第５，０１９，３６９号；米国特許第５，０５５，３０３号；米国特許第５，５１４，６７０号；米国特許第５，４１３，７９７号；米国特許第５，２６８，１６４号；米国特許第５，００４，６９７号；米国特許第４，９０２，５０５号；米国特許第５，５０６，２０６号；米国特許第５，２７１，９６１号；米国特許第５，２５４，３４２号；及び米国特許第５，５３４，４９６号）。
【0159】
本開示の主題を以下の非限定的な実施例によりさらに説明する。
【実施例】
【0160】
実施例１実験
図１及び図２は、ＭＡＰＫシグナル経路とＭＥＫ５シグナル経路をそれぞれ示す。ＭＥＫ５を抑制する化合物を設計する戦略を開発するため、ＥＧＦを介したｐＥＲＫイソ型の形成の抑制の細胞アッセイをＨＥＫ２９３（腎臓）とＢＴ−４７４細胞株の合成済みの抑制剤で行った。設計戦略は、図３に示す４つのエリアについて検討した。側鎖のバリエーションを、溶解度を変化させるためにターゲットとし、ＭＥＫ５の予想された反応を調べるために使用した。設計戦略エリア２及び３は、それぞれ、アミド変化形と中央のアレーンに集中した。第４のエリアは、末端アレーンであり、ゴールは置換の必要性を最小限にすることと、ＭＥＫ５の選択的相互反応を促進することである。
【0161】
化合物の合成は、大きく分けて２種類のアプローチにより多数のスキームを使用して行った。第１のアプローチは、リチウムアミドの置換である。化合物９ａ〜９ｊを図４に示すスキームで合成した。化合物１５は、図５に示すようにＥＤＣＩカップリングで合成した。図６は、第１アミド化合物３、１８、１９の合成を示すものである。
【0162】
第２のアプローチはウルマン結合である。化合物２３と化合物２４は、酸塩化物を介して図７に示されるスキームにより合成された。化合物２３の合成は、ＤＩＣ結合により図８に示すように向上した。
【0163】
ＭＥＫ５抑制剤である可能性について、多数の化合物をテストした。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１トリプルネガティブ乳がん細胞株を１０μＭの化合物２４、９ｂ、９ａ、９ｃ、９ｅ、９ｆ、９ｄ、９ｈ、２３、７、及び１５で３０分間前処理し、その後上皮成長因子（ＥＧＦ、５０ｎｇ／ｍＬ）で１５分間刺激した。賦形剤処理をした細胞と公知のＭＥＫ１／２抑制剤細胞をそれぞれＤＭＳＯとＵ０１２６とで３０分間前処理し、その後ＥＧＦ刺激を１５分間行った。タンパク質可視化と定量分析をＬＩ−ＣＯＲオデッセイイメージャーを用いて行った。ウェスタンブロット分析の結果を図９に示す。＊Ｐ＜０．０５ｖｓ．賦形剤、一元配置分散分析、その後テューキー＝クレーマー法（ｎ＝３）。ｐＥＲＫイソ型のＥＧＦ介在形成の抑制についての細胞アッセイの結果の表を図１０に示す。
【0164】
増殖研究を、トリプルネガティブがん表現型を示すＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞を使用して行った。ＭＥＫ１／２とＭＥＫ５の両方を抑制する可能性があるので、化合物３を選択した。５％活性炭デキストラン処理済み培地を用いた９６ウェルＴＣプレートにＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞をウェル毎に１万個蒔き、５％ＣＯ２雰囲気下１晩３７℃にて培養した。次の日、上記細胞を薬剤または賦形剤で処理した。プレートは、３日目、５日目、７日目に採取され、クリスタルバイオレットで染色された。細胞の形態の変化を倒立顕微鏡で観察した。細胞を洗浄し、溶解させ、生体細胞で失われるクリスタルバイオレットの吸光度を６３０ｎＭで測定した。ウェルは重複して作製された。実験は３回実施された。細胞は初期細胞数にて正常化された。結果を図１１に示す。
【0165】
増殖試験により、化合物３には用量応答効果があることが示された。未処理の試料（ＤＭＳＯ）と比較し、７日目に増殖が７０％減少した。飽和濃度でも化合物３からは明らかな細胞死は見られなかった。
【0166】
増殖試験期間中にＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞を試験した。未処理（ＤＭＳＯ）細胞は、移動性かつ侵襲性の間葉表現型である細長い、くぎ状の細胞形態を示した。該細胞を１μＭの化合物３で処理すると、大多数の細胞の表現型が変化したことが観察された。この処理濃度が増殖を抑制した。より高濃度（１０μＭ）の化合物３で処理すると、殆ど全ての細胞が、より丸い表現型である、移動性が低く、侵襲性も低い上皮表現型に戻ったことが観察された。観察された表現型の転換は、間葉表現型に戻ることなく１４日間持続した。図１２を参照。
【0167】
表２は、最も活性が高いか最も可能性が高い化合物を５種類示したものである。
【0168】
【表2】
【0169】
これら結果は、共に、本明細書で開示された化合物が、様々ながんの治療及び／または予防、特にＭＥＫ５が過剰発現また顕著に上方制御されたがんの治療及び／または予防をする組成物または方法を提供することを示す。また、これら化合物は、ＭＥＫ１／２及び／またはＭＥＫ５シグナル経路に関する他の疾患の治療及び／または予防のための組成物や方法を提供する。
【0170】
実施例２合成方法
全ての溶媒と試薬は、別途記載がないかぎり、受領された状態そのままで使用された。全ての反応は、別途記載が無い限り乾いたガラス器具を用いて、アルゴン雰囲気下で行われた。シールしたチューブ内でマイクロ波反応を行い、マルチモードマイルストーンスタート装置を使用して、記載の電力と制御パラメータで放射を行った。融点は、ＭｅｌＴｅｍｐ装置で測定され、修正は行わなかった。全てのプロトンＮＭＲスペクトルは、ブルーカーアヴァンスシステム（Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ｓｙｓｔｅｍ）で制御されたオックスフォードスペクトロスピンクリオスタット（Ｏｘｆｏｒｄ ｓｐｅｃｔｒｏｓｐｉｎ ｃｒｙｏｓｔａｔ）を用いて５００ＭＨｚまたは４００ＭＨｚで測定され、ブルーカートップスピン２．０取得ソフト（Ｂｒｕｋｅｒ ＴＯＰＳＰＩＮ２．０ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ ｓｏｆｔｗａｒｅ）で取得された。取得したＦＩＤを、ＭｅｓｔＲｅＣ３．２を用いて分析した。元素分析は、アトランティックマイクロラブを用いて実施され、理論的に±０．４である。全ての１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、別途記載が無い限りＣＤＣｌ３を用いて測定された。内部標準であるＴＭＳに対するｐｐｍとして報告する。カップリング値をヘルツで報告する。全てのＴＬＣは、厚さ２００μｍのソルベントテクノロジーポリエステルバックドシリカＧ ＴＬＣプレートで測定された。
【0171】
一般方法Ａ３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）安息香酸（ＳＣ−１−１８０）（３９） ２５０ｍＬの丸底フラスコに２−フルオロ−４−ヨードアニリン（３８；２．３８ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、２，３，４−トリフルオロ安息香酸（３７；１．８０ｇ，１０．２ｍｍｏｌ）、そして無水ＴＨＦ（３０ｍＬ）を仕込んだ。該反応混合液を氷水浴で０℃に冷却し、ＬｉＮＨ２（５６１．２ｍｇ，２４．４５ｍｍｏｌ）を３回に分けて１０分かけて添加した。その後、反応は、内部温度５８℃まで温め、１２時間攪拌した。該混合液を０℃まで冷却し、反応混合液の温度を０℃に保ちながら１ＮのＨＣｌを添加して、最終ｐＨ１．０を得た（ピハイドリン紙（ｐＨｙｄｒｉｏｎ ｐａｐｅｒ）で赤）。次に反応混合液を１０ｍＬのＥｔ２Ｏを用いて３回抽出し、５ｍＬの１ＮのＨＣｌで３回洗浄し、ＮａＣｌ（飽和水溶液）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。抽出物をデカントし、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を２：１ヘキサン／ＥＡを用いてＳｉＯ２で単離し、白色の固体を２．１１ｇ（５３％）得た。ＭＰ＝１９９．０−２００．１℃（ｌｉｔ．ＭＰ＝２００−２０１℃） ＳｉＯ２ ＴＬＣ Ｒｆ ０．５１（２：１へキサン／ＥＡ） １Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ−ｄ４）：δ６．７４（ｍ， １Ｈ， Ａｒ），６．９１（ｍ， １Ｈ， Ａｒ），７．３８−７．４５（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝８．５Ｈｚ，Ａｒ），７．４７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１．８Ｈｚ ａｎｄ Ｊ２＝１０．５Ｈｚ，Ａｒ），７．８９（ｂｒ， １Ｈ， Ａｒ） 計算値 Ｃ１３Ｈ７Ｆ３ＩＮＯ２：Ｃ，３９．７２；Ｈ，１．７９；Ｎ，３．５６．実測値：Ｃ，３９．４１；Ｈ，１．９１；Ｎ，３．５２．
【0172】
一般手順Ｂ：アミド合成の酸塩化物アプローチ乾燥した１００ｍＬの丸底フラスコに３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）安息香酸（３９）及びＤＣＭを５ｍＬ仕込んだ。該反応混合液を氷水浴で０℃に冷却した。無水ＤＭＦを１００μＬ添加し、純粋な塩化オキサリル（２当量）を５分かけて滴下した。該反応液を２３℃で４時間攪拌した。次に溶媒を減圧下で除いた。余剰の塩化オキサリルを、減圧下で２ｘ５ｍＬのＤＣＭと共沸させて除去した。該粗生成物を５ｍＬのＤＣＭに溶解し、適切なアミンを精確に０℃で添加した。１０分後氷水浴を除き、該反応液を放置して室温にした。その後該反応液を２３℃で６時間攪拌し、反応が終了したことをＴＬＣで確認した。１０ｍＬのＨ２Ｏと１０ｍＬのＥｔ２Ｏの混合液を添加し、結果得られた混合液をＥｔ２Ｏで抽出し、ＮａＣｌ（飽和水溶液）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。抽出物をデカントし、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物をヘキサン／ＥＡを用いてＳｉＯ２で単離した。
【0173】
３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）安息香酸（ＳＣ−１−１５１）（５７）：手順Ｂを用いて、３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）安息香酸（３９；１．２ｇ，３．０ｍｍｏｌ）と７ＮのＮＨ３（メタノール溶液）（２ｍＬ，１５．７３ｍｍｏｌ）から合成した。粗生成物を２：１ヘキサン／ＥＡを用いてＳｉＯ２で単離し、ピンク〜白色の粉末を９００ｍｇ（７３％）得た。ＭＰ＝１６０．９−１６２．０℃。 ＳｉＯ２ＴＬＣ Ｒｆ ０．２９（２：１ヘキサン／ＥＡ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ５．７２−６．２２（ｂｒ． ｄ， ２Ｈ， ＮＨ２），６．６０−６．６４（ｍ， １Ｈ， ＮＨ）， ６．８５−６．９０（ｍ， １Ｈ， Ａｒ），７．３４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ， Ａｒ），７．３９−７．４３（ｍ， ２Ｈ， Ａｒ），８．７１（ｓ， １Ｈ， Ａｒ）．計算値 Ｃ１３Ｈ８Ｆ３ＩＮ２Ｏ：Ｃ，３９．８２；Ｈ，２．０６；Ｎ，７．１４．実測値：Ｃ，３９．８６；Ｈ，２．１８；Ｎ，７．２４．
【0174】
Ｎ，Ｎ−ジエチル−３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）ベンズアミド（ＳＣ−１−６５）（５９）：化合物５９を手順Ｂ（酸塩化物アプローチ）を用いて、３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）安息香酸（３９；２００ｍｇ，０．５１ｍｍｏｌ）とジエチルアミン（０．１６ｍＬ，１．５３ｍｍｏｌ）から合成した。粗生成物を１：１ヘキサン／ＥＡを用いてＳｉＯ２で単離し、ヘキサンから再結晶させて、白色の固体を１００．２ｍｇ（４５％）得た。ＭＰ＝７８．９−８０．１℃。 ＳｉＯ２ＴＬＣ Ｒｆ０．７（１：１ヘキサン／ＥＡ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１．０７（ｂｒ， ６Ｈ）， ３．２２−３．４６（ｂｒ．ｄ， ４Ｈ， ２Ｎ−ＣＨ２），６．５０（ｓ， １Ｈ， ＮＨ）６．５１−６．５５（ｍ， １ Ｈ， Ａｒ），６．９−７．０４（ｍ，２Ｈ， Ａｒ），７．２７−７．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，Ａｒ），７．３４−７．３７（ｄｄ， １Ｈ， Ｊ１＝１．９Ｈｚ ａｎｄ Ｊ２＝１０．５Ｈｚ， Ａｒ）． 計算値 Ｃ１７Ｈ１６Ｆ３ＩＮ２Ｏ：Ｃ， ４５．５； Ｈ， ３．６０； Ｎ， ６．２５； Ｆ， １２．７２； Ｉ， ２８．３１．実測値：Ｃ， ４５．２５； Ｈ， ３．５７； Ｎ， ６．２５； Ｆ， １２．８６； Ｉ， ２８．２２．
【0175】
３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルベンズアミド（ＳＣ−１−６９）（５８）：化合物５８を手順Ｂにより、３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）安息香酸（３９；２００．０ｍｇ，０．５１ｍｍｏｌ）及びジメチルアミンＨＣｌ（４０８ｍｇ，５．０ｍｍｏｌ）から合成した。ジメチルアミンＨＣｌを５ｍＬのＨ２Ｏに溶かした溶液をＮａ２ＣＯ３（７ｍｍｏｌ）、Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）、ＤＣＭ（２５ｍＬ）、及びＤＭＡＰ（５．０ｍｇ，０．０４ｍｍｏｌ）の懸濁液に０℃で滴下した。酸塩化物のＤＣＭ溶液を５分かけて添加し、該反応液を２３℃で２時間攪拌した。１０ｍＬのＨ２Ｏと５０ｍＬのＤＣＭの混合液を添加し、得られた混合液をＨ２Ｏ（２ｘ１０ｍＬ）で洗浄し、ＮａＣｌ（飽和水溶液）で洗浄し、そしてＮａ２ＳＯ４で乾燥した。粗生成物を２：１ヘキサン／ＥＡを用いてＳｉＯ２で単離し、白色固体を４７ｍｇ（２２％）得た。ＭＰ＝１１５．４−１１７．７℃。 ＳｉＯ２ ＴＬＣ Ｒｆ ０．６１（２：１ヘキサン／ＥＡ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ２．９６（ｂｒ， ３Ｈ， ＣＨ３）， ２．９１（ｂｒ， ３Ｈ， ＣＨ３）， ６．５３−６．５９ （ｍ， １Ｈ， Ａｒ）， ６．８２（ｓ， １Ｈ， ＮＨ）， ６．９１−６．９５ （ｍ， １Ｈ， Ａｒ）， ７．０２−７．０６ （ｍ， １Ｈ， Ａｒ）， ７．２９−７．３１（ｄ，１Ｈ，Ｊ ＝ ８．５Ｈｚ， Ａｒ）， ７．３６−７．３９（ｄｄ， １Ｈ， Ｊ１ ＝１．９ Ｈｚ ａｎｄ Ｊ２ ＝ １０．４Ｈｚ， Ａｒ）．計算値 Ｃ１５Ｈ１２Ｆ３ＩＮ２Ｏ：Ｃ，４２．８；Ｈ，２．８；Ｎ，６．６７；Ｆ，１３．５；Ｉ，３０．２．実測値：Ｃ，４２．６９；Ｈ，２．８９；Ｎ，６．５３；Ｆ，１３．４５；Ｉ，２９．９９．
【0176】
３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）−Ｎ−メチルベンズアミド（ＳＣ−１−７２ アミド）（６０）：手順Ｂを用い３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）安息香酸（３９；３１５ｍｇ，０．８ｍｍｏｌ）とメチルアミン（メタノール溶液）（０．５ｍＬ，４ｍｍｏｌ，８Ｍ）から合成した粗生成物をＳｉＯ２で５：１ヘキサン／ＥＡを用いて単離し、加温されたＥｔＯＨから再結晶されて白色の固体を２０３ｍｇ（６３％）得た。ＭＰ＝１５９．０−１６０．２℃。 ＳｉＯ２ＴＬＣ Ｒｆ ０．５１（１：１ヘキサン／ＥＡ）。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ２．９５（ｄ， ３Ｈ， Ｊ＝４．８Ｈｚ）， ６．２３（ｂｒ， １Ｈ， ＮＨ）， ６．５４−６．５９ （ｍ， １Ｈ， Ａｒ）， ６．８２−６．８８（ｍ， １Ｈ， Ａｒ）， ７．２８−７．３２（ｍ， ２Ｈ， Ａｒ）， ７．４０ （ｄｄ， １ Ｈ， Ｊ＝１．９Ｈｚ ａｎｄ Ｊ ＝１０．３Ｈｚ， Ａｒ）， ８．６１（ｓ， １Ｈ， ＮＨ）．計算値 Ｃ１４Ｈ１０Ｆ３ＩＮ２Ｏ：Ｃ，４１．４０；Ｈ，２．４８；Ｎ，６．９０；Ｆ，１４．０３；Ｉ，３１．２５．実測値：Ｃ，４１．６７；Ｈ，２．５１；Ｎ，６．７９；Ｆ，１３．７９；Ｉ，３１．３５．
【0177】
３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）安息香酸メチル（ＳＣ−１−７２エステル）（６２）：手順Ｂを用いた化合物６０を３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）安息香酸（３９；３１５ｍｇ，０．８ｍｍｏｌ）とメチルアミン（メタノール溶液）（０．５ｍＬ，４ｍｍｏｌ，８Ｍ）から合成する際の副産物として得た。該生成物は６０ｍｇ（１７％）の白色の固体として得られた。ＭＰ＝１１８．５−１１１．４℃。 ＳｉＯ２ ＴＬＣ Ｒｆ ０．８２（２：１ヘキサン／ＥＡ）．１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）：δ３．９１（ｓ， ３Ｈ），６．６５−６．７１（ｍ，１Ｈ， Ａｒ）， ６．７４−６．８０ （ｍ， １Ｈ， Ａｒ）， ７．３５（ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．６Ｈｚ）， ７．４２ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ＝１．９Ｈｚ ａｎｄ Ｊ＝１０．２Ｈｚ， Ａｒ）， ７．７８−７．８２（ｍ， １Ｈ， Ａｒ）， ９．０４ （ｓ， １Ｈ， ＮＨ）．計算値 Ｃ１４Ｈ９Ｆ３ＩＮＯ２：Ｃ，４１．３０；Ｈ，２．２３；Ｎ，３．４４；Ｆ，１４．００；Ｉ，３１．１７．実測値：Ｃ，４１．４３；Ｈ，２．０８；Ｎ，３．５２；Ｆ，１４．１８；Ｉ，３１．３１．
【0178】
Ｔｅｒｔ−ブチル４−（３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）ベンゾイル）ピペラジン−１−カルボン酸塩（ＳＣ−１−７５）（６４）：化合物６４を、手順Ｂを用い３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）安息香酸（３９；１．００ｇ，２．５４ｍｍｏｌ）及びＮ−Ｂｏｃ−ピペラジン（２．８５ｇ，５．０８ｍｍｏｌ）から合成した。酸塩化物を６ｍＬのＤＣＭに溶解した溶液をＮ−Ｂｏｃ−ピペラジン、ＴＥＡ（０．７０ｍＬ， ５．０８ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（１２ｍＬ）及びＤＭＡＰ（５．０ｍｇ，０．０４ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で滴下し、該反応液を２３℃で２時間攪拌した。粗生成物をＳｉＯ２で２：１ヘキサン／ＥＡを用いて単離し、６３０ｍｇ（４４％）の白色の固体を得た。ＭＰ＝１８８．４℃。 ＳｉＯ２ＴＬＣ Ｒｆ０．５（１：１ヘキサン／ＥＡ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）：δ１．４５（ｓ， ９Ｈ）， ３．３４−３．５５（ｍ， ８Ｈ），６．５３−６．５８（ｍ，１Ｈ，Ａｒ）， ６．６２ （ｓ， １Ｈ， ＮＨ），６．９２−６．９６（ｍ， １Ｈ，Ａｒ）， ７．０３（ｍ， １Ｈ， Ａｒ），７．３０（ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．９Ｈｚ， Ａｒ），７．３９（ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １．９Ｈｚ ａｎｄ Ｊ＝１０．４Ｈｚ， Ａｒ）．計算値 Ｃ２２Ｈ２３Ｆ３ＩＮ３Ｏ３：Ｃ，４７．０７；Ｈ，４．１３；Ｎ，７．４９；Ｆ，１０．１５；Ｉ，２２．６１．実測値：Ｃ，４７．２２；Ｈ，４．１８；Ｎ，７．４０；Ｆ，９．９４；Ｉ，２２．６４．
【0179】
（３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）フェニル）（ピペラジン−１−イル）メタノン塩酸塩（ＳＣ−１−７９）（６３）：化合物６４（５３０ｍｇ， ０．９４ｍｍｏｌ）と１：１の１５ｍＬ（ｖ／ｖ）のＨＣｌ／ジオキサンから合成した。化合物６４の溶液を２５０ｍＬのＲＢＦに仕込み、１５ｍＬの１：１濃度のＨＣｌのＤｉｏｘａｎｅ溶液を添加して、２３℃で３．５時間攪拌した。粗生成物を高温のＥｔＯＨから再結晶させ、３４０ｍｇ（７９％）の白色の固体を得た。ＭＰ＝２０１．２−２０３．６℃。 １Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＭｅＯＤ−ｄ４）：δ３．０８（ｂｒ， ４Ｈ），３．６０（ｍ， ４Ｈ）， ６．５８−６．６２（ｔ， １Ｈ， Ａｒ），７．１２−７．２２（ｍ， ２Ｈ， Ａｒ）， ７．３２（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝８．５Ｈｚ， Ａｒ） ７．４６ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ＝１．９Ｈｚ ａｎｄ Ｊ ＝１０．８Ｈｚ， Ａｒ）．計算値 Ｃ１７Ｈ１５Ｆ３ＩＮ３Ｏ：Ｃ，４１．０３；Ｈ，３．２４；Ｎ，８．４４；Ｆ，１１．４５；Ｉ，２５．５０．実測値：Ｃ，４０．７７；Ｈ，３．３８；Ｎ，８．３４；Ｆ，１１．２０；Ｉ，２５．２４．
【0180】
Ｎ−エチル−３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）ベンズアミド（ＳＣ−１−８０）（６１）：手順Ｂにより３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）安息香酸（３９；３１５ｍｇ，０．８ｍｍｏｌ）及びエチルアミンの２ＭのＴＨＦ溶液（２．２５ｍＬ， ４．５ｍｍｏｌ）から合成した。粗生成物をＳｉＯ２で２：１ヘキサン／ＥＡを用いて単離し、加温されたＥｔＯＨから再結晶されて白色の固体を１５５ｍｇ（４１％）得た。ＭＰ＝１７２．５−１７３．６℃。 ＳｉＯ２ＴＬＣ Ｒ＿ｆ＿ ＿０．７ （２：１ヘキサン／ＥＡ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）：δ１．１９（ｔ， ３Ｈ， Ｊ＝７．３Ｈｚ）， ３．３８−３．４５（ｍ， ２ Ｈ）， ６．２２（ｂｒ， １Ｈ， ＮＨ）， ６．５４−６．５９ （ｍ， １Ｈ， Ａｒ）， ６．８２−６．８９（ｍ， １Ｈ， Ａｒ）， ７．３１ （ｍ， ２Ｈ， Ａｒ）， ７．４０ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ＝２．０Ｈｚ， Ｊ＝１０．３Ｈｚ， Ａｒ）， ８．５２ （ｓ， １ Ｈ， ＮＨ）．計算値 Ｃ１５Ｈ１２Ｆ３ＩＮ２Ｏ：Ｃ， ４２．８８； Ｈ， ２．８８； Ｎ， ６．６７； Ｆ， １３．５６； Ｉ， ３０．２０．実測値：Ｃ， ４２．８９； Ｈ， ２．８９； Ｎ， ６．６０； Ｆ， １３．５７； Ｉ， ３０．４７．
【0181】
Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）−Ｎ−メチルベンズアミド塩酸塩（ＳＣ−１−１２２）（６５）：手順Ｂを用いて３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）安息香酸（３９；３６０ｍｇ，０．８８ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ，Ｎ’−トリメチルエタン−１，２−ジアミン（０．３４ｍｌ，２．６４ｍｍｏｌ）から合成した。Ｎ，Ｎ，Ｎ’−トリメチルエタン−１，２−ジアミン（０．３４ ｍｌ， ２．６４ ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ （０．３７ ｍＬ， ２．６４ ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（６ｍｇ，０．０５ ｍｍｏｌ）を３ｍＬのＤＣＭに溶解した溶液を、酸塩化物をＤＣＭに溶解した溶液に５分かけて滴下し、該反応液を２３℃で１２時間攪拌した。粗組成物をＳｉＯ２でＣＨＣｌ３と５％ ＭｅＯＨを用いて単離し、２９０ｍｇを得た。ＨＣｌ塩をＨＣｌのエーテル溶液から生成し、高温のエタノールから再結晶して、１６８．２ｍｇ（４０％）の白色の固体を得た。ＭＰ＝２１１−２１３℃。 ＳｉＯ２ ＴＬＣ Ｒｆ０．７（ＤＣＭ／ ５％ＭｅＯＨ／０．１％ ＮＨ４ＯＨ）。１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） ：δ ２．７８ （ｓ， ６ Ｈ， ２ＣＨ３）， ２．８４ （ｓ， ３ Ｈ， ＣＨ３）， ３．１３（ｍ， ２ Ｈ， ＣＨ２）， ３．６１（ｔ， ２ Ｈ， ＣＨ２）， ６．５９−６．６３ （ｔ， １ Ｈ， Ａｒ）， ７．２７−７．３３ （ｍ， ２ Ｈ， Ａｒ），７．５２−７．５３ （ｄｄ， １ Ｈ， Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ， Ｊ ＝ １１．３ Ｈｚ， Ａｒ）， ８．０５ （ｓ， １ Ｈ， Ａｒ）， １０．０６ （ｓ， １ Ｈ， ＮＨ）．計算値 Ｃ１８Ｈ２０ＣｌＦ３ＩＮ３Ｏ：Ｃ， ４２．０８； Ｈ， ３．９２； Ｎ， ８．１８； Ｆ， １１．０９； Ｉ， ２４．７０．実測値：Ｃ， ４２．２１； Ｈ， ３．９８； Ｎ， ８．０９； Ｆ， １１．２２； Ｉ， ２４．５２．
【0182】
手順Ｃ（ウルマン結合）２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）安息香酸（ＳＣ−１−１４）（９８）：マイクロ波反応器チューブにオルト−ヨード安息香酸（４９６ｍｇ， ２ｍｍｏｌ）、２−フルオロ−４−ヨードアニリン（２３７ｍｇ， １ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（４１６ｍｇ，３ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（２００ｍｇ，１．０４ｍｍｏｌ）及び５ｍＬのＤＭＦ／Ｈ２Ｏ（９：１）を仕込んだ該反応液を、内部温度を１００℃に保ちながら２時間３００Ｗのマイクロ波放射に晒した。完了後、該反応液をＴＬＣで分析し、１ＮのＨＣｌ（約４ ｍＬ）を該反応混合液に添加して、最終的な溶液ｐＨ６．０を得た。その後溶媒を減圧下で除去した。 粗生成物をＳｉＯ２で１：１ヘキサン／ＥＡを用いて単離し、２１７ｍｇ（６１％）の白色の固体を得た。ＭＰ＝１８６．２−１８６．５℃。ＳｉＯ２ ＴＬＣ Ｒｆ ０．７０（１：１ ヘキサン／ＥＡ）。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ６．８５ （ｔ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， Ａｒ）， ７．１１（ｄ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ８．６ Ｈｚ， Ａｒ）， ７．２０ （ｔ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， Ａｒ）， ７．４２ （ｍ， ２ Ｈ， Ａｒ）， ７．５０ （ｄｄ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ ａｎｄ Ｊ ＝ ９．８ Ｈｚ， Ａｒ）， ８．０６ （ｄｄ， １ Ｈ， Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ ａｎｄ Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ， Ａｒ）， ９．２５ （ｓ， １ Ｈ， ＣＯ２Ｈ）．計算値 Ｃ１３Ｈ９ＦＩＮＯ２：Ｃ， ４３．７２； Ｈ， ２．５４； Ｎ， ３．９２．実測値：Ｃ， ４３．８１； Ｈ， ２．６５； Ｎ， ３．８０．
【0183】
（２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）フェニル）（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノン塩酸塩（ＳＣ−１−２４）（７４）：乾燥した１００ｍＬの丸底フラスコに化合物９８（１４０ｍｇ， ０．３９ｍｍｏｌ）と５ｍＬのＤＣＭを仕込んだ。該反応混合液を氷水浴で０℃に冷却した。１００μＬの無水ＤＭＦを添加し、その後塩化オキサリル（７０マイクロＬ， ０．８ｍｍｏｌ）を２分かけて０℃で滴下した。該反応液を２３℃で２時間攪拌した。その後溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を５ｍＬのＤＣＭに溶解し、Ｎ−メチルピペラジン（０．５ｍＬ，４．５ｍｍｏｌ）を精確に２３℃で添加した。反応の終了は、ＴＬＣにて確認した。１０ｍＬのＤＣＭと５ｍＬの５％のＮａ２ＣＯ３の混合液を添加し、得られた混合物をＤＣＭで抽出し、ＮａＣｌ（飽和水溶液）で洗浄して、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。抽出物をデカントし、その後溶媒を減圧下で除去し、トルエンで水を除去した。粗生成物をＳｉＯ２でＥＡ／０．５％ ＴＥＡ／１０％エタノールを用いて単離し、ＨＣｌ塩（ＨＣｌエーテル溶液）から再結晶させて２０ｍｇ（１２％）の灰色がかった白色の粉末を得た。ＭＰ＝２１７．２−２１７．５℃。 ＳｉＯ２ ＴＬＣ Ｒｆ ０．２４ （２０％ ＥＡ／ＥｔＯＨ）．１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ−ｄ４）：δ １．１８ （ｔ， ４ Ｈ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ）， ２．８９ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．４９ （ｑ， ２ Ｈ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ）， ３．６０ （ｑ， ２ Ｈ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ）， ６．９２ （ｔ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ）， ７．０９ （ｔ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ）， ７．１５ （ｄ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ８．２ Ｈｚ）， ７．３４−７．４２ （ｍ， ３ Ｈ）， ７．４９ （ｄｄ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ ａｎｄ Ｊ ＝ １０．７ Ｈｚ）．計算値 Ｃ１８Ｈ２０ＣｌＦＩＮ３Ｏ．０．３８ ％ ＥｔＯＨ：Ｃ， ４５．６８； Ｈ， ４．５５； Ｎ， ８．５１； Ｆ， ３．８５； Ｉ， ２５．７１； Ｃｌ， ７．１８．実測値：Ｃ， ４５．９； Ｈ， ４．４９； Ｎ， ８．５４； Ｆ， ３．６６； Ｉ， ２５．６８； Ｃｌ， ７．４９．
【0184】
２−（フェニルアミノ）安息香酸（ＳＣ−１−３９）（２５）：マイクロ波反応器チューブにオルト−ヨード安息香酸（４９６ｍｇ， ２ｍｍｏｌ）、アニリン（２４）（０．４５ｍＬ， ４ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（８３２ｍｇ， ６ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（４００ｍｇ，２．０８ｍｍｏｌ）及び１０ｍＬのＤＭＦ／Ｈ２Ｏ（９：１）を仕込んだ。該反応液を、内部温度を１００℃に保ちながら１時間３００Ｗのマイクロ波放射に晒した。完了後、該反応液をＴＬＣで分析し、１ＮのＨＣｌ（約９ｍＬ）を該反応混合液に添加して、最終的な溶液ｐＨ６．０を得た。その後溶媒を減圧下で除去し、３ｘ１０ｍＬのトルエンと共沸させて水を除去した。粗生成物をＳｉＯ２でヘキサン／ＥＡを用いて単離し、トルエンから再結晶させて２６７ｍｇ（６３％）の白色固体を得た。ＭＰ＝１７６．６−１７７．０℃。 １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）：δ ６．７６ （ｔ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， Ａｒ）， ７．１３ （ｔ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ， Ａｒ）， ７．２３ （ｄ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ， Ａｒ）， ７．２６−７．２８ （ｍ， ２ Ｈ， Ａｒ）， ７．３３−７．３９ （ｍ， ３ Ｈ， Ａｒ）， ８．０４ （ｄｄ， １ Ｈ， Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ ａ
【0185】
手順Ｄ（ＤＩＣ結合）（４−メチルピペラジン−１−イル）（２−（フェニルアミノ）フェニル）メタノン（ＳＣ−１−１７７アミド）（７５）：乾燥させた１００ｍＬの丸底フラスコに化合物２５（１．００ｇ， ４．６９ｍｍｏｌ）と１２ｍＬのＤＣＭを仕込んだ。Ｎ−メチルピペラジン（２．５９ｍＬ， ２３．４５ｍｍｏｌ）とＤＭＡＰ（９ｍｇ，０．０７ｍｍｏｌ）を添加し、その後、ＤＩＣ（１．０８ｍＬ，７ｍｍｏｌ）を添加した。該反応混合液を２３℃で２２時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去した。１０ｍＬのエーテルとＨＣｌの混合液を添加し、得られた混合液をＨＣｌ（３ｘ５ｍＬ）に抽出して、エーテル（２ｘ５ｍＬ）で洗浄した。水相を５％Ｎａ２ＣＯ３でアルカリ化し、粗生成物をＤＣＭ（３ｘ８ｍＬ）に抽出した。粗生成物をＳｉＯ２に充填し、クロロフォルム：メタノール（９５：５）で溶出した。適切な分画を採取し、溶媒を除去して、高温のエタノールから再結晶させて、２３２ｍｇ（１７％）の透明無色の針状の物質を得た。ＭＰ＝１０５．９−１０８．０℃。 ＳｉＯ２ ＴＬＣ Ｒｆ ０．３５ （ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ／ １％ メタノール）．１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ−ｄ４）：δ ２．２３ （ｓ， ３ Ｈ， ＣＨ３）， ２．３５ （ｂｒ， ４ Ｈ， ２ＣＨ２）， ３．７３−３．８２ （ｍ， ４ Ｈ， ２ＣＨ２）， ６．８８ （ｔ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ）， ６．９７−７．０１ （ｍ， ３ Ｈ， Ａｒ）， ７．１９−７．２６ （ｍ， ４ Ｈ， Ａｒ）， ７．３０−７．３４ （ｍ， １ Ｈ， Ａｒ）．計算値 Ｃ１８Ｈ２１Ｎ３Ｏ：Ｃ， ７３．１９； Ｈ， ７．１７； Ｎ， １４．２３．実測値：Ｃ， ７３．１４； Ｈ， ７．２２； Ｎ， １４．２３．
【0186】
３，４−ジフルオロ−２−（フェニルアミノ）安息香酸（ＳＣ−１−１７５ 酸）（７１）：２５０ｍＬの丸底フラスコにアニリン（２４）（０．５７ｍＬ， ５．７ｍｍｏｌ）、２，３，４−トリフルオロ安息香酸（３７）（１ｇ， ５．７ｍｍｏｌ）、及び１５ｍＬの無水ＴＨＦを仕込んだ。該反応混合液を氷水浴で０℃に冷却し、ＬｉＮＨ２（３２７ｍｇ， １４．２５ｍｍｏｌ）を２回に分けて１０分かけて添加した。次に該反応液を５８℃まで昇温し（外部温度）、７時間攪拌した。次に１ＮのＨＣｌを０℃で該反応混合液に添加し、最終ｐＨ１．０（ピハイドリン紙（ｐＨｙｄｒｉｏｎ ｐａｐｅｒ）で赤）。該反応混合液を５ｍＬのＥｔ２Ｏで３回抽出し、５ｍＬの１ＮのＨＣｌで３回洗浄し、ＮａＣｌ（飽和水溶液）で洗浄して、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。該抽出物をデカントし、溶媒を減圧下で除去した。該粗生成物をＳｉＯ２でヘキサン／ＥＡを用いて単離し、６０６ｍｇ（４４％）の黄色の結晶を得た。ＭＰ＝１６２．１−１６２．６℃。 ＳｉＯ２ＴＬＣ Ｒｆ０．６１（２：１ ヘキサン／ＥＡ）．１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）：δ ６．７３−６．７８ （ｍ， １ Ｈ， Ａｒ）， ７．０５ （ｄ， ２ Ｈ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， Ａｒ）， ７．１０ （ｔ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ）， ７．３２ （ｔ， ２ Ｈ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ）， ７．８７−７．９０ （ｍ， １ Ｈ， Ａｒ）， ８．９９ （ｓ， １ Ｈ， ＯＨ）．
【0187】
手順Ｅ（ＥＤＣＩ結合）３，４−ジフルオロ−２−（フェニルアミノ）フェニル）（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノン（ＳＣ−１−１８１）（７２）：化合物７１（２４９ｍｇ，１ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルピペラジン（０．２５ｍＬ， ２ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（６ｍｇ， ０．０５ｍｍｏｌ）の溶液を１０ｍＬの無水ＴＨＦに溶解して準備し、ＥＤＣＩ（３８２ｍｇ， ２ｍｍｏｌ）を一度に添加した。反応混合液を２３℃で１２時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、エーテル５０ｍＬとＨ２Ｏ１ｍＬを添加した。得られた混合液を１ｍＬのＨ２Ｏで３回洗浄し、５ｍＬの飽和ＮａＣｌで洗浄し、その後無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。粗生成物をＳｉＯ２でＣＨＣｌ３、１％ＭｅＯＨ、１％ＴＥＡを用いて単離し、２０４ｍｇ（６２％）の白色の固体を得た。ＭＰ＝１５３．０−１５５．３℃。 １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）：δ ２．２２ （ｓ， ４ Ｈ， ２ＣＨ２）， ２．２７（ｂｒ， ３ Ｈ， ＣＨ３），３．４７ （ｂｒ， ４ Ｈ， ２ＣＨ２）， ６．６０ （ｓ， １ Ｈ， ＮＨ）， ６．８２−６．９５ （ｍ， ４ Ｈ， Ａｒ）， ６．９９−７．０３ （ｍ， １ Ｈ， Ａｒ）， ７．２２−７．２４ （ｍ， ２ Ｈ， Ａｒ）．計算値 Ｃ１８Ｈ１９Ｆ２Ｎ３Ｏ：Ｃ， ６５．２４； Ｈ， ５．７８； Ｎ， １２．６８； Ｆ， １１．４７．実測値：Ｃ， ６５．３８； Ｈ， ５．８９； Ｎ， １２．７２； Ｆ， １１．４６．
【0188】
３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロフェニル）アミノ）安息香酸（ＳＣ−２−２５酸）（６８）：１００ｍＬの乾燥した丸底フラスコに２−フルオロアニリン（０．２７ｍＬ， ２．９７ｍｍｏｌ）、２，３，４−トリフルオロ安息香酸（５２８ｍｇ，３ｍｍｏｌ）及び７ｍＬの無水ＴＨＦを仕込んだ。該反応混合液を氷水浴で０℃に冷却し、ＬｉＮＨ２（１６５．２ｍｇ， ７．２ｍｍｏｌ）を２回に分けて１０分間隔で添加した。該反応液を５８℃（外部温度）まで昇温し、４時間攪拌した。その後１ＮのＨＣｌを０℃で該反応混合液に添加して、最終ｐＨ１．０（ピハイドリン紙（ｐＨｙｄｒｉｏｎ ｐａｐｅｒ）で赤）を得た。該反応混合液を３回５ｍＬのＥｔ２Ｏで抽出し、３回５ｍＬの１ＮのＨＣｌで洗浄し、ＮａＣｌ（飽和水溶液）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。該抽出物をデカントし、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物をＳｉＯ２でヘキサン／ＥＡを用いて単離し、４７１ｍｇ（５９％）の白色の結晶を得た。ＭＰ＝１７０−１７２℃。 ＳｉＯ２ ＴＬＣ Ｒｆ ０．５５ （２：１ヘキサン／ＥＡ）．１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）：δ ６．７２−６．７８ （ｄｔ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ ａｎｄ Ｊ ＝ ９．１ Ｈｚ， Ａｒ）， ７．００−７．１３ （ｍ， ４ Ｈ， Ａｒ）， ７．８７−７．９１ （ｄｄｄ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ２．１ Ｈｚ， Ｊ ＝ ５．８ Ｈｚ ａｎｄ Ｊ ＝ ９．１ Ｈｚ， Ａｒ）， ８．９２ （ｓ， １ Ｈ， ＣＯ２Ｈ）．計算値 Ｃ１３Ｈ８Ｆ３ＮＯ２：Ｃ， ５８．４４； Ｈ， ３．０２； Ｎ， ５．２４．実測値：Ｃ， ５８．４１； Ｈ， ３．０２； Ｎ， ５．２３．
【0189】
（３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロフェニル）アミノ）フェニル）（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノンモノフマル酸（ＳＣ−２−４５）（６９）：手順Ｅを用いて化合物６８、Ｎ−メチルピペラジン及びＥＤＣＩから合成した。化合物６８（４３０ｍｇ， １．６１ ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルピペラジン（０．３５ｍＬ， ３．２２ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（６ｍｇ， ０．０５ｍｍｏｌ）を１２ｍＬの無水ＴＨＦに用解した溶液にＥＤＣＩ（６１５ｍｇ， ３．２２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合液を２３℃で６時間攪拌し、ＴＬＣ後に反応を終了した。粗組成物をＳｉＯ２でＣＨＣｌ３、１％ ＭｅＯＨ、１％ ＴＥＡを用いて単離した。この化合物のフタル酸塩をフタル酸（１８６ｍｇ，１．６１ｍｍｏｌ）から生成し、高温のＥｔＯＨから再結晶させて、８１ｍｇ（１４％）の白色の固体を得た。ＭＰ＝１５５．０−１６０℃。 ＳｉＯ２ ＴＬＣ Ｒｆ ０．２ （ＣＨＣｌ３ ＋ ２％ ＭｅＯＨ）．１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）：δ ２．６８ （ｓ， ３ Ｈ， ＣＨ３）， ２．８３−２．９４ （ｂｒ， ４ Ｈ， ２ＣＨ２）， ３．５７（ｂｒ， ４ Ｈ， ２ＣＨ２）， ６．７２ （ｓ， ２ Ｈ， ＣＨ＝ＣＨ），６．８２−６．８６ （ｍ， １ Ｈ， Ａｒ）， ６．８９−６．９４ （ｍ， １ Ｈ， Ａｒ）， ６．９７−７．０１ （ｍ， １ Ｈ， Ａｒ）， ７．０４−７．１２ （ｍ， ２ Ｈ， Ａｒ）， ７．１４−７．１８ （ｍ， １ Ｈ， Ａｒ）．計算値 Ｃ２２Ｈ２２Ｆ３Ｎ３Ｏ５． ０．５５ ％ フタル酸０．７８ ％ ＥＡ：Ｃ， ５４．８７； Ｈ， ５．１３； Ｎ， ７．０２．実測値：Ｃ， ５４．９８； Ｈ， ４．８８； Ｎ， ６．８６．
【0190】
３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロフェニル）アミノ）ベンズアミド（ＳＣ−２−３７）（７０）：手順Ｂを用いて、化合物６８（２６７ｍｇ， １ｍｍｏｌ）と７ＮのＮＨ３（メタノール溶液）（０．６５ｍＬ， ５．０３ｍｍｏｌ）から合成した。粗組成物をＳｉＯ２にヘキサン／ＥＡを用いて単離し、９６ｍｇ（３６％）の白色粉体を得た。ＭＰ＝１５７．６−１６１．２℃。 １ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ６．８２−６．８８ （ｍ， ２ Ｈ， ＮＨ２），６．９１−６．９７ （ｍ， １ Ｈ， Ａｒ）， ６．９９−７．１０ （ｍ， ３ Ｈ， Ａｒ）， ７．４４ （ｄｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ２．１ Ｈｚ， Ｊ ＝ ５．５ Ｈｚ ａｎｄ Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， Ａｒ）， ８．４５ （ｓ， １ Ｈ， Ａｒ）．計算値 Ｃ１３Ｈ９Ｆ３Ｎ２Ｏ：Ｃ， ５８．６５； Ｈ， ３．４１； Ｎ， １０．５２； Ｆ， ２１．４１．実測値：Ｃ， ５８．２２； Ｈ， ３．２７； Ｎ， １０．２０； Ｆ， ２１．７１．
【0191】
２−フルオロ−４−ヨード−Ｎ−メチルアニリン（ＳＣ−２−２０ アミン）（１０８）：２−フルオロ−４−ヨードアニリン（４７４ｍｇ，２ｍｍｏｌ）を、乾燥した１００ｍＬの丸底フラスコのＮａＯＭｅ（５４０ｍｇ， １０ｍｍｏｌ）懸濁液（ＭｅＯＨ溶液）（５ｍＬ）に添加した。この混合物をパラフォルムアルデヒド（８４ｍｇ， ２．８ｍｍｏｌ）の無水ＭｅＯＨ懸濁液（４ｍＬ）に添加し、該反応混合物を２５℃で５時間攪拌した。５時間後、ＮａＢＨ４（７５ｍｇ， ２ｍｍｏｌ）を添加し、９０℃で２．５時間還流した。溶媒を蒸発させ、反応混合液を５ｍＬの１ＭのＫＯＨで処理した。生成物を抽出し、ジエチルエーテル（２ｘ８ｍＬ）に抽出してＮａ２ＳＯ４で乾燥した。該抽出物をデカントし、溶媒を減圧下で除去した。粗組成物をＳｉＯ２で２０％のＥＡ／ヘキサンで単離し、２７０ｍｇ（５４％）の白色の針状の固体をえた。ＭＰ＝４４℃。 ＳｉＯ２ ＴＬＣ Ｒｆ ０．７５ （２：１ ヘキサン／ＥＡ）．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ２．８５ （ｄ， ３ Ｈ， Ｊ ＝ ４．６ Ｈｚ）， ３．９７ （ｓ， １ Ｈ， ＮＨ）， ６．４３ （ｔ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ）， ７．２２−７．２６ （ｍ， １ Ｈ， Ａｒ）， ７．３０ （ｄ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ９．３ Ｈｚ， Ａｒ）．計算値 Ｃ７Ｈ７ＦＩＮ：Ｃ， ３３．３９； Ｈ， ２．８１； Ｎ， ５．５８．実測値：Ｃ， ３３．６９； Ｈ， ２．６７； Ｎ， ５．６４．
【0192】
３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）（メチル）アミノ）安息香酸（ＳＣ−２−３２）（７６）：１００ｍＬの乾燥させた丸底フラスコに２−フルオロ−４−ヨード−Ｎ−メチルアニリン（２７０ｍｇ，１．０７ｍｍｏｌ）、２，３，４−トリフルオロ安息香酸（１９２ｍｇ，１．０９ｍｍｏｌ）と１０ｍＬの無水ＴＨＦを仕込んだ。反応混合物を氷水浴で０℃に冷却し、ＬｉＮＨ２（６０ｍｇ， ２．６ｍｍｏｌ）を２回に分けて５分かけて添加した。該反応液を５８℃に加熱し、（外部温度）、４８時間攪拌した。１ＮのＨＣｌを０℃で該混合液に添加して、最終ｐＨ１．０を得た（ピハイドリン紙（ｐＨｙｄｒｉｏｎ ｐａｐｅｒ）で赤）。反応混合液を３回５ｍＬのＥｔ２Ｏで抽出し、３回５ｍＬの１ＮのＨＣｌで洗浄し、ＮａＣｌ（飽和水溶液）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。該抽出物をデカントし、溶媒を減圧下で除去した。粗組成物をＳｉＯ２で３：１ヘキサン／ＥＡを用いて単離し、トルエンとヘキサンから再結晶させて２８６ｍｇ（６６％）の茶色の結晶を得た。ＭＰ＝８６．２−８９．１℃。 ＳｉＯ２ ＴＬＣ Ｒｆ ０．４５ （２：１ ヘキサン／ＥＡ）．１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）：δ ３．３４ （ｓ， ３ Ｈ）， ６．９７ （ｔ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， Ａｒ）， ７．２４−７．２７ （ｍ， １ Ｈ， Ａｒ）， ７．３５−７．３７ （ｄｄ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ ａｎｄ Ｊ ＝ １１．４ Ｈｚ， Ａｒ）， ７．５０ （ｄ， １ Ｈ， Ｊ ＝ ８．６ Ｈｚ， Ａｒ）， ８．０７−８．１０ （ｍ， １ Ｈ， Ａｒ）．計算値 Ｃ１４Ｈ９Ｆ３ＩＮＯ２．０．０４３６ ％ Ｃ６Ｈ５ＣＨ３：Ｃ， ４１．７８； Ｈ， ２．２９； Ｎ， ３．４０．実測値：Ｃ， ４１．７７； Ｈ， ２．４２； Ｎ， ３．３５．
【0193】
実施例３生物的評価
細胞の培養と処理
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、１０ｃｍ細胞培養プレート［Ｓａｒｓｔｅｄｔ］中のダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ； Ｇｉｂｃｏ）にハムＦ１２栄養混合物（１：１）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１０％熱不活性化ＦＢＳ［Ａｔｌａｎｔａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ及び０．５％ペニシリン／ストレプトマイシン［Ｇｉｂｃｏ］を添加した培地にて培養した。細胞を５％ＣＯ２の雰囲気下３７℃で保持された。処理の３６時間前に３５ｍｍの培養プレート［Ｓａｒｓｔｅｄｔ］への細胞の播種を行い、コンフルエンスさせた。ＭＥＫ−５抑制剤をテストする為、化合物での処理の前に３０分、細胞を上皮成長因子（ＥＧＦ； Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）にて処理した。ＥＧＦの添加１５分後に、細胞を１ＸＰＢＳ ［Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ］で洗浄し、２０ｍＭトリス（ｐＨ ６．８）、１３７ｍＭのＮａＣｌ、２５ｍＭのベータグリセロリン酸エステル、２ｍＭのＮａＰＰｉ、２ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＮａ３ＶＯ４、１０％のグリセロール、５μｇ／ｍＬのロイペプチン、５μｇ／ｍＬのアプロチニン、２ｍＭのベンズアミジン、０．５ｍＭのＤＴＴ、及び１ｍＭのＰＭＳＦを含有した１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００バッファーで溶解した。溶解物を４℃において１０，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。
【0194】
ウェスタンブロット分析トータルタンパク質含有量をブラッドフォードバイオラドタンパク質アッセイ（Ｃａｔ．Ｎｏ．５００−０００６， Ｂｉｏ−Ｒａｄ， Ｈｅｒｃｕｌｅｓ， ＣＡ）で分析し、３０μｇのタンパク質を８％ＳＤＳ−ＰＡＧＥジェルに充填して、リン酸化とトータルＥＲＫ１／２及びＥＲＫ５タンパク質とした。試料を準備後、ジェルをニトロセルロース薄膜（Ｃａｔ．Ｎｏ． ９２６−３１０９２， Ｌｉｃｏｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｌｉｎｃｏｌｎ， ＮＥ）に移した。移動後、該薄膜を５分間１ｘＰＢＳで洗浄し、１時間カゼインブロッキングバッファー（Ｃａｔ．Ｎｏ．９２７−４０２００，Ｌｉｃｏｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で室温にてブロックした。該薄膜を０．２％ Ｔｗｅｅｎ−２０を添加したＣＢＢ中にて第１抗体と共に一晩４℃で培養した。抗体はラビットアンチフォスフォ−ＥＲＫ１／２（希釈 １：１０００， Ｃａｔ．Ｎｏ． ９１０１， Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ， Ｂｅｖｅｒｌｙ， ＭＡ）マウスアンチ−トータルＥＲＫ１／２ （希釈 １：１０００， Ｃａｔ．Ｎｏ． ９１０７， Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）、及びラビットアンチートータルＥＲＫ５（希釈 １：１，０００， Ｃａｔ．Ｎｏ． ３３７２， Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を含んでいた。マウスアンチα−チューブリン（希釈 １：１０，０００， Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｔ５１６８， Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）をローディングコントロールとして用いた。第１抗体との培養後、ブロットを０．２％ Ｔｗｅｅｎ−２０を添加した１ｘＰＢＳ溶液（１ｘＰＢＳ−Ｔ）で洗浄し、ゴートアンチ−ラビット（希釈 １：１０，０００， Ｃａｔ．Ｎｏ． ９２６−６８０２１， ＬＩＣＯＲ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）と、ゴートアンチ−マウス（希釈 １： １０，０００， Ｃａｔ．Ｎｏ． ９２６−３２２１０， ＬＩＣＯＲ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）第２抗体で、１時間室温にて培養した。該薄膜を１ｘＰＢＳ−Ｔで洗浄し、タンパク質バンドをオデッセイ赤外線撮像装置で可視化して、オデッセイソフト（ＬＩＣＯＲ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で定量化した。
【0195】
【表3】
【0196】
クリスタルバイオレット増殖アッセイトリネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）細胞ＭＤＡ−ＭＢ−２３１を９６ウェルプレートに５％活性炭処理無フェノールＤＭＥＭが入った各ウェルに２，０００個播種した。一晩放置して付着させた後、ＤＭＳＯとＭＥＫ抑制剤化合物で２回処理した。プレートは、３日目、５日目、７日目に採取され、クリスタルバイオレットで染色された。細胞の形態の変化を倒立顕微鏡で観察した。細胞を洗浄し、３３％の酢酸で溶解して、バイオテックシナジープレートリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ ｐｌａｔｅ ｒｅａｄｅｒ）を用いて吸光度を６３０ｎｍにて測定した。データを、各２回測定した３回の実験からの賦形剤処理±ＳＥＭで正常化した平均細胞生存率として得た。
【0197】
量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）
【0198】
がん細胞を５％活性炭処理無フェノールＤＭＥＭで４８時間培養し、化合物（１μＭ）で処理した。２４時間後、細胞を採取し、製造者の指示（Ｑｉａｇｅｎ， Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ， ＭＤ）に従ってトータルＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙキットを用いて抽出した。ＲＮＡの量と濃度を分光光度法で２６０ｎｍと２８０ｎｍにて測定した。トータルＲＮＡ（１μｇ）をｉＳｃｒｉｐｔキット（ＢｉｏＲａｄ， Ｈｅｒｃｕｌｅｓ， ＣＡ）を用いて逆転写した。サイクル数をβ−アクチンで正常化し、賦形剤処理した細胞を１とする。ｎ＝３。
【0199】
移動アッセイＴＮＢＣ細胞を５％ＣＳ無フェノールＤＭＥＭにて４８時間培養し、ＳＣ−１−１５１または賦形剤で処理して、３日間培養した。その後、２．５ｘ１０４個の細胞をトランスウェルインサートで播種した。２４時間後、細胞を固定化し、クリスタルバイオレットで染色して、移動した細胞数をカウントした。データを２００ｘの視野中のコントロールに対する移動した細胞±ＳＥＭとして得た。実験は３回行った。
【0200】
動物異種移植片実験免疫低下したＳＣＩＤ／ベージュのメスのマウス（生後２９日〜３２日目）をチャールズリバーラボラトリー（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ， ＭＡ）から得た。該動物を消毒済みの無菌の環境にて食料と水を不断給餌して適応させた。乳がん細胞ＭＤＡ−ＭＢ−２３１を５％ＦＢＳ無フェノールＤＭＥＭにて５日間培養し、採取した。生存細胞をＰＢＳとマトリゲル減衰因子（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｓａｎ Ｊｏｓｅ， ＣＡ）と混合した。０日（１３年７月５日）に乳腺脂肪体の両側に注射した（１ｘ１０６細胞／注射）。動物に対する全ての手順は、マスクで供給されたイソフルレンと酸素の混合気を用いた麻酔状態で行われた。動物は０日にＤＭＳＯまたはＳＣ−１−１５１（２５ｍｇ／ｋｇ）で処理された。腫瘍サイズを、３０日間デジタルキャリパーを使用して２週間毎に測定した。腫瘍体積を以下の式で算出した。４／３πＬＭ２、式中Ｌは最大半径であり、Ｍは最小半径である。３１日目に、腫瘍を切除し、ＯＣＴ化合物でブロックした。マウスを毎日観察し、手術後の生存を確認した。マウスを１４日間観察下に置き、転移に対する薬剤治療の効果を調べた。
【0201】
統計分析グラフパッドプリズムソフト（Ｇｒａｐｈ−Ｐａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ， Ｉｎｃ．， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ）を用いて統計分析を行った。データをペアにしていないスチューデントテストにて分析した。ｐ＜０．０５を統計的に顕著だと判断した。
【0202】
実施例４対象者の処理
本実施例は、開示されたアントラニルアミド誘導体で治療可能な、がんなどの具体的な疾患や状態を有する対象者の治療に使用できる方法を説明するものである。その様な治療は、単独でも他の治療（化学的治療など）と組み合わされて使用されてもよい。
【0203】
具体例では、本方法は、開示されたアントラニルアミド誘導体で治療可能な任意の疾患や状態を有するまたは有すると思われる対象者をスクリーニングすることを含む。疾患の病状や状態が分かっていない対象者については、開示されたアントラニルアミド誘導体にて、例えば本明細書に記載する方法で治療可能な疾患か状態であるかを判定するために、該対象者を検査してもよい。
【0204】
対象者は、開示されたアントラニルアミド誘導体の治療量を投与される。開示されたアントラニルアミド誘導体の投与量は、体重に対して、投与量あたり、０．０００１μｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．０００１μｇ／ｋｇ〜０．００１μｇ／ｋｇ、０．００１μｇ／ｋｇ〜０．０１μｇ／ｋｇ、０．０１μｇ／ｋｇ〜０．１μｇ／ｋｇ、０．１μｇ／ｋｇ〜１０μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ〜５００μｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇ〜１０００μｇ／ｋｇ、または１．０ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである。しかし、具体的な投与量は、スキルを有する臨床医により決定することが可能である。開示されたアントラニルアミド誘導体は、数回に分けて投与されてもよく、例えば連続的、毎日、毎週、毎月投与されてもよい。投与は、他の薬剤と同時でも連続でもよい。
【0205】
投与の方法は、本技術分野において使用される如何なるものであってもよい。対象者に投与される、開示されたアントラニルアミド誘導体の量は、臨床医によって決定することができる、また、具体的な治療対象の対象者にも依存して決定されてもよい。投与量の具体的例は本明細書に例示されているが、この開示は投与量を限定するものではない。
【0206】
疾患や状態に伴う１つ以上の兆候や病状が１０％軽減されたら、治療は有効である。
【0207】
本発明の原理が応用可能な多くの可能実施形態に鑑み、ここに説明された実施形態は本発明の好ましい例であるだけであり、本発明の範囲を限定するものではない。本発明の範囲は、以下の請求項の範囲により定義されるものである。よって、我々は、これら請求項の範囲の範囲と精神を越えない範囲で本発明について請求するものである。