特許 6871942 安定性を向上させたエポプロステノールナトリウムの製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6871942

(24)【登録日】2021年4月20日

(45)【発行日】2021年5月19日

(54)【発明の名称】安定性を向上させたエポプロステノールナトリウムの製造方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/5585 20060101AFI20210510BHJP

   A61K 9/19 20060101ALI20210510BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20210510BHJP

   A61P 9/12 20060101ALI20210510BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20210510BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/5585

   A61K9/19

   A61K47/02

   A61P9/12

   A61P11/00

【請求項の数】9

【全頁数】15

(21)【出願番号】特願2018-549828(P2018-549828)

(86)(22)【出願日】2017年3月21日

(65)【公表番号】特表2019-510765(P2019-510765A)

(43)【公表日】2019年4月18日

(86)【国際出願番号】EP2017056690

(87)【国際公開番号】WO2017162668

(87)【国際公開日】20170928

【審査請求日】2020年3月9日

(31)【優先権主張番号】P1600211

(32)【優先日】2016年3月23日

(33)【優先権主張国】HU

(73)【特許権者】

【識別番号】594129552

【氏名又は名称】キノイン・ジヨージセル・エーシユ・ベジエーセテイ・テルメーケク・ジヤーラ・ゼー・エル・テー

(74)【代理人】

【識別番号】100127926

【弁理士】

【氏名又は名称】結田 純次

(74)【代理人】

【識別番号】100140132

【弁理士】

【氏名又は名称】竹林 則幸

(72)【発明者】

【氏名】イレーン・ホルトバージ

(72)【発明者】

【氏名】イシュトバーン・ラースローフィ

(72)【発明者】

【氏名】ジュジャンナ・カルドス

(72)【発明者】

【氏名】ヨーゼフ・モルナール

(72)【発明者】

【氏名】ラースロー・タカーチ

(72)【発明者】

【氏名】ローベルトネー・トールマーシィ

【審査官】 伊藤 幸司

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００９−５２５３４４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 Tetrahedron Letters，１９７７年，(30)，pp.2627-2628

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｐ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

少なくとも３年間、深冷凍庫（−２０±５℃）で貯蔵できる安定なエポプロステノールナトリウム医薬組成物であって、エポプロステノールナトリウム塩、および、エポプロステノールナトリウム塩の量に関して３〜７．５質量％の水酸化ナトリウムからなることを特徴とする、医薬組成物。

【請求項2】

エポプロステノールナトリウム塩、および、エポプロステノールナトリウム塩の量に関して４質量％の水酸化ナトリウムからなることを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項3】

エポプロステノールナトリウム塩、および、エポプロステノールナトリウム塩の量に関して５質量％の水酸化ナトリウムからなることを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項4】

エポプロステノールナトリウム塩、および、エポプロステノールナトリウム塩の量に関して６質量％の水酸化ナトリウムからなることを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項5】

少なくとも３年間、深冷凍庫（−２０±５℃）に保存することができる安定なエポプロステノールナトリウム医薬組成物の製造方法であって、エポプロステノールナトリウム塩の水溶液を、媒体を確実にｐＨ＞１１とする量の水酸化ナトリウムの存在下で凍結乾燥し、その凍結乾燥物が、エポプロステノールナトリウム塩の量に関連して、３〜７．５質量％の過剰な水酸化ナトリウムを含有することを特徴とする上記製造方法。

【請求項6】

エポプロステノールナトリウム塩の水溶液を、媒体を確実にｐＨ＞１１とする量の水酸化ナトリウムの存在下で凍結乾燥し、その凍結乾燥物が、エポプロステノールナトリウム塩の量に関連して、４〜６質量％の過剰な水酸化ナトリウムを含有することを特徴とする請求項５に記載の方法。

【請求項7】

ヨウ素による環化及びヨウ化水素消去による安定なエポプロステノールナトリウム医薬組成物の製造方法であって、
ａ）出発材料として、保護されていないＰＧＦ₂αを適用し、
ｂ）ヨウ素源として、ヨウ化ナトリウム−ヨウ素酸ナトリウム混合物を適用し、
ｃ）環化とヨウ化水素の除去を、同一の溶媒中で実施し、
ｄ）エポプロステノールナトリウム塩の水性溶液を、媒体を確実にｐＨ＞１１とする量の水酸化ナトリウムの存在下で凍結乾燥させ、その凍結乾燥物が、エポプロステノールナトリウム塩の量に関連して、３〜７．５質量％の過剰な水酸化ナトリウムを含有することを特徴とする上記製造方法。

【請求項8】

ＰＧＦ₂α：ヨウ化ナトリウム：ヨウ素酸ナトリウム＝３：２：１の比である反応混合物を適用することを特徴とする、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

溶媒としてテトラヒドロフランを適用することを特徴とする、請求項７に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明の主題は深冷凍庫（−２０±５℃）中で少なくとも３年間貯蔵できる、安定なエポプロステノールナトリウム、及びその製造方法である。

【0002】

式Ｉのエポプロステノールナトリウムは、合成により製造した、式ＩＶの天然プロスタサイクリンのナトリウム塩である。名称のプロスタサイクリンＮａ、及びエポプロステノールＮａは、等しいものである。

【0003】

エポプロステノールＮａの主な治療分野は、肺高血圧症（ＰＡＨ）の治療である（非特許文献１）。

【化1】

【背景技術】

【0004】

１９７６年に単離して以来（非特許文献２）、プロスタサイクリンはアラキドン酸の代謝産物であり、強力な血管拡張性と血小板凝集阻害効果を有することが知られている。

【0005】

又、その分子は、中性又は酸性の水溶液中で化学的に非常に不安定であり、生物学的に不活性な、式Ｖの６−オキソ−ＰＧＦ_１αに変換することが、非常に早く明らかにされた（スキーム１）。

【化2】

【0006】

その分解が非常に速い（生理的ｐＨにおける水溶液中での半減期は３〜４分である）理由は、エノール−エーテル構造であることに加えて、鎖端カルボキシル基がそのプロトン化形態及びイオン化形態の両方への分解を促進するからである（非特許文献３）。最初に、そして構造を証明するための合成は、Ｃｏｒｅｙ及び彼のグループによりＴＨＰ_２−ＰＧＦ_２から出発して実施した（非特許文献４）。プロセスをスキーム２に示す。

【化3】

【0007】

この方法において、式ＶＩのＴＨＰ_２−ＰＧＦ_２αをＮ−ブロモスクシンイミドと反応させ、式ＶＩＩ及びＶＩＩＩのブロモエーテルジアステレオマーを得た。ＴＨＰ−基（テトラヒドロピラニル基）を消去した後、式ＩＸ及びＸのジアステレオマーをクロマトグラフィーにより分離した。立体障害の少ない（エキソ）位置にブロモ置換基を含む式ＩＸの異性体は、ｔｅｒｔ−ブタノール中カリウムｔｅｒｔ−ブチラートで処理すると臭化水素の消去条件下で、１．５時間以内に式ＩＶのエノールエーテルに変換した。エノール−エーテルを高速エーテル抽出により、穏やかな酸性水溶液から分離し、次いでジアゾメタンで式ＸＩのメチルエステルに変換した。

【0008】

立体障害（エンド）位置にブロモ置換基を含む式Ｘの異性体は、上記の条件下では、わずかな程度しか反応しなかった。

【0009】

酸性媒体中の式ＸＩのメチルエステルは式ＸＩＩの６−オキソ−ＰＧＦ_2αメチルエステルに変換されるが、然し、この変換はプロスタサイクリンの加水分解よりも遅い（スキーム３）。

【化4】

【0010】

最初の合成の後は、他の多くの調製物が、ほぼ同時に追従した。合成における重要な段階は、ＰＧＦ_２α又はその誘導体のハロ環化、続いて塩基の効果によるハロゲン化水素の消去である。遊離酸が化学的不安定性であるため、生成物は常に単離し、その塩の形態で保存した。

【0011】

Ｔｏｅｍｏｅｓｋｏｅｚｉと彼の共同研究者は
・ブロモ及びヨード環化反応は、保護されていないＰＧＦ_２α及びそのメチルエステルからも実現可能であり、
・ハロエーテルジアステレオマーは、両方共、塩基の効果によりシス−ビニルエーテル誘導体（プロスタサイクリン）に変換され、
・ヨウ素誘導体の場合、ハロゲン化水素の脱離がより速く、ヨウ化水素は、炭酸カリウムの効果の場合でさえ、ヨード誘導体から消去する、
ということを最初に証明した（非特許文献５）。

【0012】

ハロ環化反応において、
・ヨウ素源として、溶媒としての酢酸−水混合物中のＫＩＯ_３＋ＫＩ、又はピリジン中のＩ_２、又はアセトニトリル中のＩＣ１を適用し、
・臭素源としてジクロロメタン中のＮ−ブロモスクシンイミド又はジクロロメタン及びアセトニトリル中のジブロモジメチルヒダントイン、又はジクロロメタン中のＮ−ブロモカンファーイミドを適用した。

【0013】

ハロゲン化水素の消去は、適切なアルコール中で、カリウムエチラート又はカリウムｔｅｒｔ−ブチレート塩基を用いて行った。ヨード置換基の場合には、炭酸カリウムの効果でさえ消去が起こった。

【0014】

最初に、凍結乾燥プロスタサイクリンナトリウム塩を調製したのは、ジョンソンとその共同研究者（非特許文献６）であり、式ＸＩのメチルエステルを、メタノール：水＝１：１の混合物中で、当量の水酸化ナトリウムで加水分解し、続いて得られたエポプロステノールナトリウム塩を含む反応混合物を凍結乾燥した。その凍結乾燥物は、白色粉末であり、−３０℃で少なくとも２ヶ月間安定を保った。

【0015】

メチルエステルは、ＰＧＦ_２αメチルエステルから炭酸ナトリウムの存在下、水中又はジクロロメタン溶媒中でヨウ素源としてＫＩ−Ｉ_２試薬を適用して調製した。

【0016】

ヨウ化水素消去の反応条件：
・痕跡量の過塩素酸の存在下でのテトラヒドロフラン中の炭酸銀と、
・ベンゼン中の１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノン−５−エン（ＤＢＮ）塩基と、
・ジメチルホルムアミド中、１８−クラウンエーテルの存在下で、超酸化カリウム（ＫＯ_２）と。

【0017】

Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ（非特許文献７）は、ＰＧＦ_２αメチルエステルから式ＸＩＶのヨードエーテルジアステレオマーを調製した。ヨウ素源として、水性ＫＩ−Ｉ_２試薬をＰＧＦ_２αメチルエステルのエーテル溶液に滴加し、エーテルを炭酸水素ナトリウム水溶液で予め飽和させた。ヨウ素をエーテル又はジクロロメタンに溶解させた方が良い結果が得られた。

【0018】

ヨードエーテルジアステレオマーをメタノール中、１０当量のナトリウムメチラートで処理した。ヨウ化水素を消去した後、エステル基を１Ｎ水酸化ナトリウム溶液で加水分解した。濃縮した水性反応混合物から、エポプロステノールナトリウム塩が微細な針状に結晶化した。

【0019】

塩を濾別し、１Ｎ水酸化ナトリウムで洗浄し、大気中で乾燥したところ、結晶表面の約３．５％が炭酸ナトリウムで覆われ、これがエノール−エーテル構造生成物を保護した。ナトリウム塩を密封管に貯蔵した。この工程をスキーム４において、表示した。

【化5】

【0020】

Ｎｉｃｏｌａｕ及び彼の共同研究者（非特許文献８）は、炭酸カリウムの存在下、式ＸＩＩＩのＰＧＦ_２αメチルエステルをジクロロメタン中のヨウ素と反応させた。式ＸＩＶのジアステレオマーからのヨウ化水素の消去は、１，５−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−５−エン（ＤＢＵ）塩基又は、より好ましくはメタノール中、ナトリウムメチラートの存在下、１１０℃でトルエン中で行った。

【0021】

式ＸＩＶのヨードエーテルジアステレオマーを水５％を含有するメタノール中、ナトリウムメチラートで処理すると、ヨウ化水素の消去のほかにエステル基の加水分解も起こり（スキーム５）、得られたエポプロステノールナトリウム塩はその溶液中で安定に残存した。生物学的研究用には、プロスタサイクリンＮａ貯蔵溶液は更に希釈した後に使用した。

【化6】

【0022】

Ｊｏｈｎｓｏｎと彼の共同研究者は、１９７８年の出版物（非特許文献９）に、プロスタサイクリンＮａ及びその異性体の不純物の調製について記載している。合成に関する最も詳細な記述（非特許文献１０）は１９８２年に発表された。それは、プロスタサイクリンＮａの合成に関する。

【0023】

出発物質は式ＸＩＩＩのＰＧＦ_２αメチルエステルであり、これをジクロロメタンに溶解し、その溶液に炭酸水素ナトリウム飽和溶液を添加し、得られた懸濁液に、０℃で激しく撹拌しながら、ジクロロメタン中のヨウ素溶液を添加した。反応終了時に、相を分離し、水相をジクロロメタンで抽出し、合一した有機相を、先ず亜硫酸ナトリウム溶液で、次に塩飽和溶液で洗浄し、次いで硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、真空蒸発させた。生成物は、式ＸＩＶのヨード−エーテルジアステレオマーの１０：１比混合物である。

【0024】

水を含まないジエチルエーテルにヨード−エーテルジアステレオマーを溶解し、ＤＢＮ又はＤＢＵ塩基を用いてヨウ化水素の消去を実行した。反応終了時に、エーテルを真空中で留去し、生成物をエーテル：ヘキサン：トリエチルアミン＝１：１：０．０２混合物で抽出し、次いでクロマトグラフィーで精製した。蒸発した主要画分であるプロスタサイクリンメチルエステルは、次の工程に直接運ぶことも、又はエーテル：ヘキサン：０．０１％トリエチルアミン溶媒混合物から結晶化することも出来る。収率：６０％、ｍｐ：５６−５８℃。

【0025】

得られたプロスタサイクリンメチルエステルを二酸化炭素を含まないメタノールに溶解し、等モル量の１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を添加し、その混合物を不活性雰囲気下、４０℃で３時間反応させた。加水分解の終了時に、メタノールを加え、反応混合物を濃縮した。残渣を水に溶解し、アセトニトリルで結晶化させた。ふわふわしたプロスタサイクリンＮａ結晶が得られ、これを真空乾燥機中に保持した。収率：８２％。

【0026】

特許文献１に記載の方法に従って、式ＸＩＩＩのＰＧＦ_２αメチルエステルをジエチルエーテルに溶解し、この溶液に先ず、炭酸水素ナトリウム水溶液を添加し、次にヨウ化カリウム-ヨウ素水溶液を滴加した。その混合物を室温で一晩撹拌し、次いでエーテルを加え、混合物をチオ硫酸ナトリウム水溶液で、次に水で洗浄し、乾燥し、蒸発させた。残留物（式ＸＩＶのヨード−エーテルジアステレオマー）をメタノール中のナトリウムメチラートと、不活性雰囲気下で反応させ、次いでメタノールを真空中で消去した。残渣（式ＸＩのプロスタサイクリンメチルエステル、無定形固体物質）をベンゼンで洗浄し、１Ｎ水酸化ナトリウムで処理すると、無色針状のプロスタサイクリンＮａに変換した。

【0027】

その著者らは、ヨードエーテルジアステレオマーの蒸発を省略することによって方法を簡略化し、代わりに１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液をメタノール溶液中のナトリウムメチラート溶液に添加した。 加水分解の終了時に、メタノールを除去すると、次に、残った水溶液からプロスタサイクリンナトリウムが結晶化し微細な針状を形成した。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0028】

【特許文献1】英国特許明細書ＧＢ １５８３９６１号

【非特許文献】

【0029】

【非特許文献1】Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｈｅａｒｔ Ｊ．２００４，２５，２２４３−２２７８

【非特許文献2】Ｎａｔｕｒｅ、１９７６，２６３，６６３〜６６５

【非特許文献3】ＪＣＳ Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．１９７９、１２９−１３０

【非特許文献4】Ｊ．Ａ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１９７７，９９，２００６−２００８

【非特許文献5】Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ、１９７７、３０、２６２７−２６２８

【非特許文献6】Ｊ．Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、１９７７、９９、４１８２−４１８４

【非特許文献7】Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ、１９７７，３２，２８０５−２８０８

【非特許文献8】Ｊ．Ｃ．Ｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．Ｃｏｍｍ．１９７７，６３０−６３１

【非特許文献9】Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ、１９７８、１００、７６９０−７７０５

【非特許文献10】Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１９８２，８６，４５９−４４６

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0030】

引用文献から、化学面に関しては、ＰＧＦ_２αから出発するエポプロステノールＮａ（プロスタサイクリンＮａ）の調製が解決済であることは判明している。
然しながら、エポプロステノールが化学的不安定であるために、医薬物質及び医薬品をどのように保持するかという問題は依然として残されていた。

【0031】

上記記載の方法は、
・凍結乾燥したナトリウム塩を−３０℃で２ヶ月間保存し、又は、
・結晶化により単離し、次に結晶表面を炭酸ナトリウムで被覆し、安定化し、その後、密閉管に保管し、空気から保護し、又は、
・ナトリウム塩から貯蔵溶液を調製し、これを溶液の形態で貯蔵するか、又は、結晶性塩を真空乾燥器に貯蔵するという方法である。

【0032】

エポプロステノールＮａの安定性を向上させるためには、原薬と完成品は重要な対象である、何故なら無菌の薬学的組成物は、室温で１２時間原薬含量を維持することが期待されるか、又はそれに達しない場合、４℃で１２時間安定でなければならないからである。

【0033】

エポプロステノールＮａ原薬「静注用に製剤された注射滅菌ナトリウム塩」を含有する医薬品ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ、１９９５）は、その安定性を確実にするため、ｐＨを約１０．５の値に設定している。

【0034】

ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）は白色又は略白色の粉末である。各アンプルは、エポプロステノール０．５ｍｇ又は１．５ｍｇに当量のナトリウム塩、グリシン３．７６ｍｇ、塩化ナトリウム２．９３ｍｇ、マンニトール５０ｍｇ、更にｐＨ調整のために水酸化ナトリウムを含有する。

【0035】

静脈内に適用するためには、ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）は、特定の溶解混合物（グリシン９４ｍｇ、塩化ナトリウム７３．３ｍｇ、注射調製に適した水及び水酸化ナトリウムからなる無色緩衝液５０ｍｌ）に溶解させなければならない。

【0036】

ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）溶液のｐＨは１０．２〜１０．８である。調製したＦＬＯＬＡＮ（登録商標）溶液を直ぐに使用しない場合は、２〜８℃で最大２日間、光から保護しながら保存してもよく、かつ、再度凍結してはいけない。
より低いｐＨ値では、ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）溶液の安定性は著しく低下する。

【0037】

国際特許出願ＷＯ２００７／０９２３４３号に記載された方法の新規性は、ｐＨ＞１１という高ｐＨ値で少なくとも１種のアルカリ化剤の存在下で、エポプロステノール溶液の安定性がＦＬＯＬＡＮ（登録商標）のそれと比較して顕著に増加することである。
その明細書には、エポプロステノール又はエポプロステノール塩、１種のアルカリ化剤及び賦形剤を含有するバルク溶液の調製が記載され、その溶液のｐＨはｐＨ＞１１、好ましくは１２．５−１３．５、好ましくは１３に設定されている。このようにして得られた溶液をその後凍結乾燥し、凍結乾燥工程のパラメーターも明細書に提示されている。
静脈内適用の前に、凍結乾燥物を溶解し、得られる（希釈した）溶液のｐＨも又、＞１１である。

【0038】

この高ｐＨの溶液は、ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）溶液と同等の治療目的に使用することができる。ｐＨがより高いために、室温におけるその溶液は、１４〜４８時間、その活性成分含量の９０％を保持する。

【0039】

この増強した安定性により、溶解のための特定の溶媒を必要とせず、商業的に入手出来る如何なる静脈内適用の溶液でも使用出来る。

【0040】

この溶液は微生物に対してより耐性がある。

【0041】

前記特許の明細書によれば、
・エポプロステノール又はエポプロステノール塩とアルカリ化剤との量比は、１：２５〜１：２００でも良い。
媒体を確実にアルカリ性にするアルカリ化剤は、塩基性水酸基を含まず、アルギニン、リジン、メグルミン、Ｎ−メチル−グルコサミン、ｐＫａ＞９．０アミノ酸、三リン酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、ＥＤＴＡ四ナトリウム塩でも良い。
・賦形剤の量は１〜１０％である。
賦形剤は、ヒドロキシエチルデンプン、ソルビット、ラクトース、デキストラン、マルトース、マンノース、リボース、スクロース、マンナイト、トレハロース、シクロデキストリン、グリシン及びポリビニルピロリドンでも良い。
・エポプロステノール塩は、好ましくはナトリウム塩である。
・その溶液のｐＨは無機又は有機塩基で設定する。
無機塩基は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化マグネシウム又は水酸化アンモニウムである。
有機塩基は、芳香族アミン又は芳香族アルコールである。
・溶液を滅菌バイアル中で凍結乾燥する。

【0042】

最も好ましく処方した組成物は、エポプロステノール（又は等量の塩）０．５ｍｇ、アルギニン５０ｍｇ及びマンナイト５０ｍｇを含有し、次いで溶液のｐＨを１３に設定し、凍結乾燥したものである。

【0043】

凍結乾燥物を溶媒５０ｍｌに溶解すると、得られた溶液のｐＨは＞１１（実施例によると、１１．５８−１１．６）となる。

【0044】

こうして調製したエポプロステノール溶液は、同様のｐＨ（ｐＨ＝１３）に設定した後の、ＦＬＯＬＡＮ（登録商標）溶液よりも安定である。

【0045】

我々の本発明によれば、エポプロステノールナトリウムは、保護されていないＰＧＦ_２α（式ＩＩＩ）から出発する２段階反応であり、最短経路で調製される（スキーム６）。

【化7】

【0046】

本発明の方法の利点は、以前の方法と比較して、ハロゲン化溶媒や他の環境的に有害な溶媒を含まないことである。

【0047】

両方の反応段階はテトラヒドロフラン中で行われるので、第１段階の後に反応混合物を濃縮することで十分であり、長々と時間を浪費し、敏感な式ＩＩのヨード誘導体に害を及ぼし得る完全な蒸発は不要である。

【0048】

ヨード環化のためのヨウ素源は、酸性媒体中で起こるヨウ化ナトリウム−ヨウ素酸ナトリウムの反応である。

【0049】

反応の間、生成物と並行して形成するヨウ化ナトリウムは、連続的にヨウ素酸ナトリウムと反応し、得られたヨウ素はヨード環化に使用される。

【0050】

もし、反応混合物として、ＰＧＦ_２α：ＮａＩ：ＮａＩＯ_３＝３：２：１を選択すると、ヨウ素の利用率は、略１００％であり、これは我々の方法が環境を汚染しないことを意味する。

【0051】

ヨウ化水素の消去はナトリウムメチラート試薬を用いて行う。反応終了時に、テトラヒドロフランを真空中で留去し、残渣に水酸化ナトリウム溶液を添加し、エポプロステノールＮａ塩を結晶化させる。析出したナトリウム塩を水に溶解し、凍結乾燥する。

【0052】

本発明者らは、塩形成に使用した水酸化ナトリウム量が酸感受性エポプロステノールＮａの安定性に及ぼす影響を研究した。

【0053】

この目的のために、エポプロステノールＮａ塩中に存在し得る過剰のアルカリを強酸性カチオン交換ＤＯＷＥＸ樹脂を用いて除去し、過剰のアルカリを含まない塩の水溶液に、種々な量の水酸化ナトリウムを添加し、得られた溶液を凍結乾燥した。

【0054】

１％凍結乾燥水溶液からｐＨを測定し、密閉ガラス容器中、室温で安定性の加速試験を開始した。

【0055】

安定性試料の活性成分含有量の変化を、０、２４、４８及び１４４時間後にＨＰＬＣで追跡した。

【0056】

測定した活性成分含有量から、エポプロステノールＮａの分解率を計算した（表１）。

【表1】

【0057】

驚くべきことに、我々は、添加した過剰の水酸化ナトリウムの効果について、エポプロステノールＮａの安定性が５．５質量％までは顕著に増加し、次いでそれが、わずかに減少し始めることを見出した。
この増強した安定性に到達するために、アミノ酸又は他の緩衝効果賦形剤が存在する必要はなかった。

【0058】

これら予想外の実験結果に基づき、我々は新技術を改良し、漏斗湿潤結晶性エポプロステノールナトリウム塩を水中に溶解し、この水性溶液に、凍結乾燥した後の生成物が４質量％過剰の水酸化ナトリウムを含むような量で２Ｍ ＮａＯＨ溶液を添加した。

【発明の効果】

【0059】

この新しい方法で調製したエポプロステノールＮａの安定性は卓越しており、深冷凍庫（−２０±５℃）で少なくとも３年間貯蔵することが出来る。生成物の分解を特徴付ける６−オキソ−ＰＧＦ_１α不純物の量は、貯蔵時間中に如何なる変化も示さなかった（表２）。

【表2】

【0060】

この新しい方法により、調製したエポプロステノールＮａは、冷蔵庫（５±３℃）で少なくとも６ヶ月間貯蔵することが出来る（表３）。

【表3】

【0061】

本発明者らの新しい方法によれば、ＰＧＦ_2αをテトラヒドロフランに溶解させる。ヨード環化のためのヨウ素源は、酸性媒体中で進行するヨウ化ナトリウム−ヨウ素酸ナトリウム反応である。環化反応の終了時に飽和塩化ナトリウム溶液を反応混合物に加え、生成物をテトラヒドロフラン−ヘキサン混合物で抽出する。過剰のヨウ素をメタ重亜硫酸ナトリウム溶液で除去する。生成物溶液を洗浄し、乾燥させ、所定の重量まで濃縮し、さらに精製することなく次のヨウ化水素消去工程に移す。

【0062】

ヨウ化水素の消去は、ナトリウムメチラート塩基を用いてテトラヒドロフラン溶液中で実施する。反応終了時に、２Ｍ水酸化ナトリウム溶液を反応混合物に添加し、テトラヒドロフランを蒸留により消去し、エポプロステノールＮａ生成物を結晶化させる。その結晶を濾別し洗浄し、生成物に、凍結乾燥後のナトリウム塩が４質量％過剰の水酸化ナトリウムを含むような量で２Ｍ ＮａＯＨ溶液を、加える。次いで、溶液を凍結乾燥する。
凍結乾燥物は白色又はほぼ白色の粉末で、深冷凍庫（−２０±５℃）で少なくとも３年間、冷蔵庫（５±３℃）で少なくとも６ヶ月間貯蔵することが出来る。

【0063】

上記と全く一致するが、本発明の主題は、深冷凍庫（−２０±５℃）内で、少なくとも３年間、貯蔵出来る安定なエポプロステノールナトリウムであり、エポプロステノールナトリウム及び無機塩基又は塩基性の加水分解性無機塩が、エポプロステノールナトリウムに関して、３−７．５質量％の量であり、凍結乾燥形態で貯蔵することを特徴とする。

【0064】

更に、本発明の主題は、少なくとも３年間深冷凍庫（−２０±５℃）で貯蔵出来る安定なエポプロステノールナトリウムの製造方法であり、エポプロステノールナトリウム塩の水性溶液が、媒体を確実にｐＨ＞１１とする無機塩基又は塩基性加水分解性無機塩の存在下で凍結乾燥することを特徴としている。

【0065】

媒体を確実にｐＨ＞１１とする無機塩基又は塩基性加水分解性無機塩としては、ナトリウムカチオン含有塩基又は塩を適用する。

【0066】

ナトリウムカチオンを含有する無機塩基は、水酸化ナトリウム又は炭酸ナトリウム、好ましくは水酸化ナトリウムでも良く、塩基性加水分解無機塩はリン酸三ナトリウムでも良い。

【0067】

本発明によれば、エポプロステノールナトリウム凍結乾燥物は、ナトリウム塩に関して、無機塩基又は塩基性加水分解性無機塩を３〜７．５質量％の量で含有する。

【0068】

この方法は、エポプロステノールナトリウム塩の水溶液が、凍結乾燥物の３〜７．５質量％、好ましくは４〜６質量％過剰の水酸化ナトリウムを含むような量の水酸化ナトリウム溶液の存在下で凍結乾燥されることを含む。本発明者らは、好ましいＮａＯＨの過剰量４〜５〜６％は貯蔵の実施において同等に良好であることを見出した。

【0069】

本発明の別の主題は、ヨード環化及びヨウ化水素消去による安定なエポプロステノールナトリウムの製造方法であって、
ａ）出発材料として、保護されていないＰＧＦ_２αを使用し、
ｂ）ヨウ素源として、ヨウ化ナトリウム−ヨウ素酸ナトリウム混合物を適用し、
ｃ）環化とヨウ化水素の消去とを同一溶媒中で実施し、
ｄ）エポプロステノールナトリウム塩の水性溶液を、媒体を確実にｐＨ＞１１とする無機塩基又は塩基性加水分解性無機塩の存在下で凍結乾燥する方法である。

【0070】

本発明の好ましい実施形態によれば、ＰＧＦ_２α：ヨウ化ナトリウム：ヨウ素酸ナトリウム＝３：２：１の比の反応混合物を適用する。

【0071】

溶媒としてテトラヒドロフランを用いる。

【0072】

本発明の詳細を実施例において更に実証するが本発明を実施例に限定する訳ではない。

【実施例】

【0073】

5ζ-ヨード-9-デオキシ-6ζ、9α-エポキシプロスタグランジンF_1α（5-I-PGI₁）

【化8】

硫酸水素ナトリウム１Ｍ溶液を、水３リットル、濃硫酸８７．７ｍｌ及び硫酸ナトリウム２４７ｇから調製した。この溶液に水１．２ｌを添加し、次に攪拌しながら、水１．２ｌ中ヨウ素酸ナトリウム９５．１ｇ溶液、テトラヒドロフラン１．５リットル中プロスタグランジンＦ２アルファ４７３．４ｇ溶液、そして最後に水０．４４ｌ中ヨウ化ナトリウム１４８．１ｇ溶液を添加した。反応終了時に塩化ナトリウム飽和溶液とテトラヒドロフラン：ヘキサン＝１：１混合物とを反応混合物に注入する。相を分離し、水相をテトラヒドロフラン：ヘキサン＝１：１の混合物で抽出する。合一した有機相を５％メタ重亜硫酸ナトリウム溶液で洗浄し、次いで希釈した、及び、飽和した塩溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮して約１ｋｇにした。
５−Ｉ−ＰＧＩ_１中間体は、さらに精製することなく次の反応段階に移した。

【0074】

（5Z、9α、11α、13E、15S）-6,9-エポキシ-11,15-ジヒドロキシプロスタ-5,13-ジエン-1-酸ナトリウム塩(PGI₂-Na)

【化9】

前工程で得た５−Ｉ−ＰＧＩ_１中間体（約１ｋｇに濃縮）に、水を含まないテトラヒドロフラン１２．４Ｌ及びナトリウムメチラート７２１ｇを添加し、混合物を室温で撹拌した。反応終了時に、水酸化ナトリウム２Ｍ溶液を反応混合物に添加し、テトラヒドロフランを真空中で留去した。大量の結晶が析出するまで混合物を室温で撹拌し、次いで０℃に冷却して結晶析出を完了させる。結晶を濾別し、２Ｍの、次いで１Ｍの水酸化ナトリウム溶液で洗浄した。次いで、この結晶を、生成物が４質量％過剰の水酸化ナトリウムを含むような量の２Ｍ水酸化ナトリウム溶液に溶解した。溶液を凍結乾燥した。
収量：ＰＧＦ_２ａについて計算して２５０ｇ（５０％）、生成物は白色粉末であった。