特許 6874217 新規なＮ−（２，２−ジフルオロエチル）−Ｎ−［（ピリミジニルアミノ）プロパニル］アリールカルボキサミド

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6874217

(24)【登録日】2021年4月23日

(45)【発行日】2021年5月19日

(54)【発明の名称】新規なＮ−（２，２−ジフルオロエチル）−Ｎ−［（ピリミジニルアミノ）プロパニル］アリールカルボキサミド

(51)【国際特許分類】

   C07D 239/42 20060101AFI20210510BHJP

   C07D 403/12 20060101ALI20210510BHJP

   A61K 31/506 20060101ALI20210510BHJP

   A61P 25/20 20060101ALI20210510BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20210510BHJP

【ＦＩ】

   C07D239/42 ZCSP

   C07D403/12

   A61K31/506

   A61P25/20

   A61P25/00

【請求項の数】5

【全頁数】23

(21)【出願番号】特願2020-517933(P2020-517933)

(86)(22)【出願日】2018年9月26日

(65)【公表番号】特表2020-535191(P2020-535191A)

(43)【公表日】2020年12月3日

(86)【国際出願番号】EP2018076108

(87)【国際公開番号】WO2019063605

(87)【国際公開日】20190404

【審査請求日】2020年3月27日

(31)【優先権主張番号】17193649.5

(32)【優先日】2017年9月28日

(33)【優先権主張国】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】503385923

【氏名又は名称】ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング

(74)【代理人】

【識別番号】100094569

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 伸一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100103610

【弁理士】

【氏名又は名称】▲吉▼田 和彦

(74)【代理人】

【識別番号】100109070

【弁理士】

【氏名又は名称】須田 洋之

(74)【代理人】

【識別番号】100119013

【弁理士】

【氏名又は名称】山崎 一夫

(74)【代理人】

【識別番号】100123777

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 さつき

(74)【代理人】

【識別番号】100111796

【弁理士】

【氏名又は名称】服部 博信

(72)【発明者】

【氏名】リーター ドリス

(72)【発明者】

【氏名】ハイネ ニクラス

(72)【発明者】

【氏名】レッセル ウータ フリーデリーケ

(72)【発明者】

【氏名】ショイアラー シュテファン

【審査官】 三木 寛

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１７−５２７５６９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１７／１３９６０３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２００５−５１９０３８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１７／１２９８２９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２０１７−５２４００５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０２０−５２８４６０（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ ２３９／４２

Ｃ０７Ｄ ４０３／１２

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

【化1】

からなる群から選択される化合物。

【請求項2】

請求項１に記載の化合物の薬学的に許容される塩。

【請求項3】

請求項１または２に記載の化合物を含む医薬組成物。

【請求項4】

さらに、薬学的に許容される補助剤、希釈剤および／または担体を含む、請求項３記載の医薬組成物。

【請求項5】

衝動制御欠如と関連する精神医学的または神経学的状態の処置において使用するための、請求項３または４に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、新規なＮ−（２，２−ジフルオロエチル）−Ｎ−［（ピリミジニルアミノ）プロパニル］アリールカルボキサミド誘導体、それらの調製のための方法、それらを含有する医薬組成物、および治療における、特にオレキシンサブタイプ１受容体との関連を有する状態の処置または防止におけるそれらの使用に関する。

【背景技術】

【0002】

オレキシンは、覚醒状態、覚醒、食欲、食物摂取、認知、動機付け行動、報酬、気分およびストレスなど、多くの生理学的挙動の調節において重要な役割を果たす視床下部ニューロペプチドである。ヒポクレチン１とも称されるオレキシンＡは、３３のアミノ酸で構成されるペプチドであり、ヒポクレチン２とも称されるオレキシンＢは、２８のアミノ酸で構成されるペプチドである。両方とも、プレ−プロ−オレキシンと称される共通前駆体ペプチドから誘導される［Sakurai et al., Cell, 1998 Feb 20; 92(4):573-85、およびDe Lecea et al., Proc. Nat. Acad. Sci., 1998 Jan 6;95(1):322-7）。オレキシンは、中枢神経系および末梢器官、例えば副腎、性腺および腸において広く分布される２つのオーファンＧ−タンパク質共役型受容体、オレキシン受容体１型（ＯＸ１Ｒ）およびオレキシン受容体２型（ＯＸ２Ｒ）に結合する。オレキシンＡはＯＸ１Ｒに優勢に結合する一方で、オレキシンＢはＯＸ１ＲおよびＯＸ２Ｒの両方に結合できる。
オレキシンは、例えば情動および報酬、認知、衝動制御の調節、自律神経機能および神経内分泌機能、覚醒状態、警戒ならびに睡眠−覚醒の状態の調節を含めて、広範囲の行動の調節に関与する（Muschamp et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2014 Apr 22; 111(16):E1648-55；近年の概説については、Sakurai, Nat. Rev. Neurosci., 2014; Nov; 15(11):719-31； Chen et al., Med. Res. Rev., 2015; Jan;35(1):152-97； Gotter et al., Pharmacol. Rev., 2012, 64:389-420およびさらに多くのものを参照されたい）。

【0003】

小分子によるＯＸ１ＲおよびＯＸ２Ｒの二重拮抗作用は、不眠症の処置において臨床的に効力があり、このため、薬物スボレキサント、［［（７Ｒ）−４−（５−クロロ−１，３−ベンゾオキサゾール−２−イル）−７−メチル−１，４−ジアゼパン−１−イル］［５−メチル−２−（２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−２−イル）フェニル］メタノン］は販売承認を受けている（Kishi et al., PLoS One, 2015; 10(8):e0136910）。二重オレキシン受容体アンタゴニストの睡眠誘発効果は、ＯＸ２Ｒを介して優勢に媒介され（Bonaventure et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., March 2015, 352, 3, 590-601）、一方、他の生理学的状態、例えば情動および報酬、認知、衝動制御、自律神経性機能および神経内分泌機能、覚醒状態ならびに警戒の調節は、むしろＯＸ１Ｒを介して媒介される。

【0004】

それらの睡眠誘発効果により、二重ＯＸ１ＲおよびＯＸ２Ｒアンタゴニストは、物質使用障害などの嗜癖、境界性人格障害などの人格障害、過食性障害などの摂食障害、または注意欠陥多動性障害において見られる通りの衝動制御欠如に関連した障害を処置することに適当でない。そのため、衝動制御欠如の処置のためのＯＸ１Ｒ選択的アンタゴニストを提供することが望ましい。
様々な構造クラスのオレキシン受容体アンタゴニストは、Roecker et al.（J. Med. Chem. 2015, 59, 504-530）に概説されている。国際公開第０３／０５１８７２号、国際公開第２０１３／１８７４６６号、国際公開第２０１６／０３４８８２号、国際公開第２０１７／１２９８２９号、およびBioorganic & Medicinal Chemistry 2015, 23, 1260-1275は、オレキシン受容体アンタゴニストを記載している。

【0005】

発明の詳細な説明
本発明は、予想外に極めて強力なＯＸ１Ｒアンタゴニストであり（アッセイＡ）、
１）ＯＸ２受容体に対する高い選択性（アッセイＢ）、
２）ヒト肝臓ミクロソームにおける中程度から高い安定性（アッセイＣ）、および
３）全く無いまたは低いＭＤＣＫ（メイディン−ダービー・イヌ腎臓）排出（アッセイＤ）
をさらに特徴とする、新規なＮ−（２，２−ジフルオロエチル）−Ｎ−［（ピリミジニルアミノ）プロパニル］アリール−カルボキサミド誘導体を提供する。
本発明の化合物は、以下の鍵となる薬力学的および薬物動態学的なパラメーター：
１）ＯＸ１Ｒアンタゴニストとしての効力、
２）ＯＸ２受容体に対する選択性、
３）ヒト肝臓ミクロソームにおける安定性、
４）ＭＤＣＫ排出、および
５）分布の体積
の組合せの点から、従来技術に開示されているものよりも優れている。

【0006】

ヒト肝臓ミクロソームにおける安定性は、好ましい薬物動態学的特性を有する薬物を選択および／または設計するという観点から、生体内転換に対する化合物の感受率を指す。多くの薬物にとっての代謝の主要部位は、肝臓である。ヒト肝臓ミクロソームは、シトクロムＰ４５０（ＣＹＰ）を含有し、したがって、インビトロでの薬物代謝を研究するためのモデル系を表す。ヒト肝臓ミクロソームにおける安定性の増強は、より低いおよび頻繁でない患者の投薬を可能にし得る生物学的利用能の増加およびより長い半減期を含めて、いくつかの利点と関連する。したがって、ヒト肝臓ミクロソームにおける安定性の増強は、薬物のために使用されるべき化合物にとって好ましい特徴である。

【0007】

ＭＤＣＫアッセイは、血液脳関門を通過するという化合物の潜在性に関する情報を提供する。透過性フィルター支持体上で成長させた極性化されたコンフルエントなＭＤＣＫ−ＭＤＲ１細胞単層にわたる透過性測定は、インビトロ吸収モデルとして使用され：ＭＤＣＫ−ＭＤＲ１細胞単層にわたる化合物の見かけ透過係数（ＰＥ）は、頂端から基底（ＡＢ）および基底から頂端（ＢＡ）への輸送方向で測定される（ｐＨ７．４、３７℃）。ＡＢ透過性（ＰＥＡＢ）は血液から脳内への薬物吸収を表し、ＢＡ透過性（ＰＥＢＡ）は脳から血液中へ戻る薬物排出を表し、受動的透過性、ならびに過剰発現されたヒトＭＤＲ１ Ｐ−ｇｐによって優勢にＭＤＣＫ−ＭＤＲ１細胞上に発現される排出および取込み輸送体によって媒介される能動的輸送機序の両方を介する。両輸送方向における同一または同様の透過性は受動的透過を示し、ベクトルの透過性は追加の能動的輸送機序を指す。ＰＥＡＢよりも高いＰＥＢＡ（ＰＥＢＡ／ＰＥＡＢ＞５）は、ＭＤＲ１ Ｐ−ｇｐによって媒介される能動的排出の関与を示し、これは、十分な脳曝露を達成するという目標を損なうことがある。そのため、このアッセイは、さらなるインビボ試験に適用可能な化合物の選択のための貴重な支持を提供する。血液脳関門での排出によって制限されない高い透過性は、主にＣＮＳにおいて作用する薬物のために使用されるべき化合物にとって好ましい特徴である。

【0008】

本発明の化合物は、それらがＮ−メチル−［ブタン−２−イル］アミノ部分の代わりに中央Ｎ−（２，２−ジフルオロエチル）−（プロパン−２−イル）アミノ部分を含有するという点において、国際公開第２０１６／０３４８８２号における実施例８４および９１（最も近い従来技術の化合物）と構造的に異なる。これらの構造差は、予想外にも、以下の鍵となる薬力学的および薬物動態学的なパラメーター：
１）ＯＸ１Ｒアンタゴニストとしての効力、
２）ＯＸ２受容体に対する選択性、
３）ヒト肝臓ミクロソームにおける安定性、
４）ＭＤＣＫ排出、および
５）分布の体積
の優れた組合せをもたらす。
ＯＸ１Ｒでのそれらの高い効力およびＯＸ２Ｒに対する選択性により、本発明の化合物は、インビボモデルにおいて効力があること、および効力と眠気または睡眠などの所望されない効果との間に十分なウィンドウを有することの両方が予想される。

【0009】

鍵となる薬力学的および薬物動態学的なパラメーター（１〜５番）の優れた組合せにより、本発明の化合物は、適切な脳曝露を実証すること、ならびに中程度から低いインビボクリアランスを有し、したがって、より長い作用持続期間およびより高い忍容性を有することが予想される。その結果として、本発明の化合物は、ヒト使用に、より実現可能であるに違いない。
一般的定義
本明細書において具体的に定義されていない用語は、本開示および文脈に照らして、当業者によってそれらに与えられている意味が与えられるべきである。

【0010】

立体化学：
具体的に示されていない限り、本明細書および添付の特許請求の範囲の全体にわたって、所与の化学式または名前は、互変異性体および全ての立体異性体、光学異性体および幾何異性体（例えばエナンチオマー、ジアステレオ異性体、Ｅ／Ｚ異性体など）、およびそのラセミ体、ならびに別々のエナンチオマーの異なる割合での混合物、ジアステレオ異性体の混合物、または前述の形態のいずれかの混合物を包含し、ここで、こうした異性体およびエナンチオマーは、薬学的に許容される塩を含めた塩と同様に存在する。
塩：
「薬学的に許容される」という成句は、本明細書において、健全な医学的判断の範疇内で、過度の毒性、刺激性、アレルギー応答または他の問題もしくは合併症なくヒトおよび動物の組織との接触における使用に適当であるとともに妥当な利益／リスク比に相応する、それらの化合物、材料、組成物および／または剤形を指すために用いられる。

【0011】

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される塩」は、親化合物が酸とともに塩を形成する、開示化合物の誘導体を指す。塩基部分を含有する親化合物とともに薬学的に許容される塩を形成する酸についての例としては、鉱酸または有機酸、例えばベンゼンスルホン酸、安息香酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、ゲンチジン酸、臭化水素酸、塩酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、４−メチル−ベンゼンスルホン酸、リン酸、サリチル酸、コハク酸、硫酸または酒石酸が挙げられる。
本発明の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法によって、塩基性または酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。一般に、こうした塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基形態を、十分な量の適切な塩基または酸と、水中であるいはエーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノールもしくはアセトニトリルまたはその混合物のような有機希釈剤中で反応させることによって調製することができる。
例えば本発明の化合物を精製または単離するのに有用であるような上に記述されているもの以外の酸の塩（例えば、トリフルオロアセテート塩）も、本発明の一部を構成する。

【0012】

生物学的アッセイ
略語：
ＩＰ１ Ｄ−Ｍｙｏ−イノシトール−１−ホスフェート
ＩＰ３ Ｄ−ミオ−イノシトール−１，４，５−トリホスフェート
ＨＥＰＥＳ ４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸
ＨＢＳＳ ハンクス平衡塩類溶液
ＢＳＡ ウシ血清アルブミン
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＣＨＯ チャイニーズハムスター卵巣

【0013】

細胞株において発現されたオレキシン受容体の活性化は、細胞内ＩＰ３濃度の増加をもたらす。ＩＰ３の下流代謝物のＩＰ１は、受容体活性化に続いて細胞中に蓄積し、ＬｉＣｌの存在下で安定である。Ｌｕｍｉ４−Ｔｂクリプテート（Ｃｉｓｂｉｏ Ｂｉｏａｓｓａｙ．から市販されている）および適当な蛍光プレートリーダーを用いる均一時間分解蛍光科学技術を使用する。この機能的応答は、Trinquet et al. Anal. Biochem. 2006, 358, 126-135、Degorce et al. Curr. Chem. Genomics 2009, 3, 22-32に記載されている通り、検出可能および定量化可能である。この技法は、オレキシン受容体の薬理学的修飾を特徴付けるために使用される。

【0014】

化合物の生物学的活性は、以下の方法によって決定される：
Ａ．ＯＸ１Ｒ効力のインビトロ試験：ＯＸ１Ｒ ＩＰ１
ＩＰ１測定を、全長ヒトオレキシン１受容体およびエクオリン発光タンパク質を安定して発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞において行う。細胞を、３７℃、９５％湿度および５％のＣＯ₂のインキュベーターの中にて、１０％ウシ胎児血清を有するＨａｍ栄養混合物Ｆ１２培地中で培養する。ＣＨＯ−Ｋ１／ｈＯｘ１細胞塊を、より大きい細胞数に拡大する。細胞をクライオ−バイアル中で凍結細胞として得て、使用まで−１５０℃で貯蔵する。解凍した後の細胞の生存能は、９０％超である。

【0015】

アッセイに備えて、アッセイの２４時間前に、細胞を３７℃で解凍し、直ちに細胞培養培地で希釈する。遠心分離後、細胞ペレットを培地中に再懸濁し、次いで、アッセイプレート中に１ウェル当たり１００００細胞／２５μＬの密度で分布する。プレートを１時間の間室温でインキュベートすることで、エッジ効果を低減した後に、それらを２４時間の間３７℃／５％のＣＯ₂でインキュベートする。化合物を、ＤＭＳＯ中の８点系列希釈、ならびにアッセイにおいて１％の最終ＤＭＳＯ濃度を確実にするためのアッセイ緩衝液（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．１％のＢＳＡおよび５０ｍＭのＬｉＣｌを有するＨＢＳＳ、ｐＨ７．４）中への最終希釈ステップによって調製する。

【0016】

アッセイの当日に、プレート中の細胞を、６０μＬのアッセイ緩衝液で２回洗浄し（洗浄した後に、２０μＬの緩衝液がウェルに残った）、続いて、アッセイ緩衝液中に希釈された１ウェル当たり５μＬの化合物を添加する。室温でのインキュベーションの１５分後、アッセイ緩衝液中に溶解させた１ウェル当たり５μＬのオレキシンＡペプチド（最終濃度：０．５ｎＭおよび／または５０ｎＭ）をアッセイプレートに添加する。アッセイプレートを６０分間３７℃でインキュベートする。次いで、１ウェル当たり５μｌの抗−ＩＰ１−クリプテートＴｂ溶液および１ウェル当たり５μｌのＩＰ１−ｄ２希釈物を添加し、プレートをさらに６０分間、光保護されて室温でインキュベートする。ＥｎＶｉｓｉｏｎリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して、６１５ｎｍおよび６６５ｎｍ（励起波長：３２０ｎｍ）での発光を測定する。６６５ｎｍおよび６１５での発光の間の比をリーダーによって算出する。
８点の４パラメーター非線形曲線フィッティングならびにＩＣ₅₀値およびＨｉｌｌ勾配の決定を、正規の分析ソフトウェア、例えばＡｓｓａｙＥｘｐｌｏｒｅｒ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ）を使用して行う。アゴニスト濃度非依存性パラメーターを確立するために、以下の等式を使用してＫｂ値を算出する：ＩＣ₅₀／（（２＋（Ａ／ＥＣ₅₀）ⁿ）^1/n−１）（ここで、Ａ＝濃度アゴニスト、ＥＣ₅₀＝ＥＣ₅₀アゴニスト、ｎ＝Ｈｉｌｌ勾配アゴニスト）（P. Leff, I. G. Dougall, Trends Pharmacol. Sci. 1993, 14(4),110-112を参照されたい）。

【0017】

Ｂ．ＯＸ２Ｒ効力のインビトロ試験：ＯＸ２Ｒ ＩＰ１
ＩＰ１測定を、全長ヒトオレキシン２受容体およびエクオリン発光タンパク質を安定して発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞中で行う。細胞を、３７℃、９５％湿度および５％のＣＯ₂のインキュベーターの中にて、１０％のウシ胎児血清を有するＨａｍ栄養混合物Ｆ１２培地中で培養する。ＣＨＯ−Ｋ１／ｈＯｘ２細胞塊を、より大きい細胞数に拡大する。細胞をクライオ−バイアル中で凍結細胞として得て、使用まで−１５０℃で貯蔵する。解凍した後の細胞の生存能は、９０％超である。
アッセイに備えて、アッセイの２４時間前に、細胞を３７℃で解凍し、直ちに細胞培養培地で希釈する。遠心分離後、細胞ペレットを培地中に再懸濁し、次いで、アッセイプレート中に１ウェル当たり５０００細胞／２５μＬの密度で分布する。プレートを１時間の間室温でインキュベートすることで、エッジ効果を低減した後に、それらを２４時間の間３７℃／５％のＣＯ₂でインキュベートする。化合物を、ＤＭＳＯ中の８点系列希釈、ならびにアッセイにおいて１％の最終ＤＭＳＯ濃度を確実にするためにアッセイ緩衝液（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．１％のＢＳＡおよび５０ｍＭのＬｉＣｌを有するＨＢＳＳ、ｐＨ７．４）中への最終希釈ステップによって調製する。

【0018】

アッセイの当日に、プレート中の細胞を、６０μＬのアッセイ緩衝液で２回洗浄し（洗浄した後に２０μＬ緩衝液がウェル中に残った）、続いて、アッセイ緩衝液中に希釈された１ウェル当たり５μＬの化合物を添加する。室温でのインキュベーションの１５分後、アッセイ緩衝液中に溶解させた１ウェル当たり５μＬのオレキシンＡペプチド（最終濃度：０．５ｎＭ）をアッセイプレートに添加する。アッセイプレートを６０分間３７℃でインキュベートする。次いで、１ウェル当たり５μｌの抗−ＩＰ１−クリプテートＴｂ溶液および１ウェル当たり５μｌのＩＰ１−ｄ２希釈物をプレートの全てのウェルに添加し、プレートをさらに６０分間、光保護されて室温でインキュベートする。ＥｎＶｉｓｉｏｎリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して、６１５ｎｍおよび６６５ｎｍ（励起波長：３２０ｎｍ）での発光を測定する。６６５ｎｍおよび６１５での発光の間の比をリーダーによって算出する。

【0019】

８点の４パラメーター非線形曲線フィッティングおよびＩＣ₅₀値およびＨｉｌｌ勾配の決定を、正規の分析ソフトウェア、例えばＡｓｓａｙＥｘｐｌｏｒｅｒ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ）を使用して行う。アゴニスト濃度非依存性パラメーターを確立するために、以下の等式を使用してＫｂ値を算出する：ＩＣ₅₀／（（２＋（Ａ／ＥＣ₅₀）ⁿ）^1/n−１）（ここで、Ａ＝濃度アゴニスト、ＥＣ₅₀＝ＥＣ₅₀アゴニスト、ｎ＝Ｈｉｌｌ勾配アゴニスト）（P. Leff, I. G. Dougall, Trends Pharmacol. Sci. 1993, 14(4),110-112を参照されたい）。
アッセイＡ（ＯＸ１Ｒ）およびアッセイＢ（ＯＸ２Ｒ）からのＫｂ値は、次いで、アゴニスト（オレキシンＡ）濃度に非依存性である選択性比を提供することができる。

【0020】

Ｃ．ヒト肝臓ミクロソームにおける代謝安定性の判定（ヒトのＭＳＴ）
本発明による化合物の代謝安定性は、以下の通りに調査することができる：
試験化合物の代謝分解を、プールされたヒト肝臓ミクロソームを用いて３７℃でアッセイする。１時点当たり１００μＬの最終インキュベーション体積は、室温でｐＨ７．６のトリス緩衝液（０．１Ｍ）、ＭｇＣｌ₂（５ｍＭ）、ミクロソームタンパク質（１ｍｇ／ｍＬ）および試験化合物を１μＭの最終濃度で含有する。３７℃での短い予備インキュベーション期間に続いて、反応を、ベータ−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェート、還元形態（ＮＡＤＰＨ、１ｍＭ）の添加によって開始し、異なる時点の後にアリコートを溶媒中に移すことによって停止させる。遠心分離（１００００ｇ、５分）後、上澄みのアリコートをＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって親化合物の量についてアッセイする。半減期（ｔ_1/2)を濃度−時間プロファイルの片対数プロットの勾配によって決定される。

【0021】

Ｄ．ヒトのＭＤＲ１遺伝子でトランスフェクトされたメイディン−ダービー・イヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞における排出の判定
ＭＤＣＫ−ＭＤＲ１細胞単層にわたる該化合物の見かけ透過係数（ＰＥ）を、頂端から基底（ＡＢ）および基底から頂端（ＢＡ）の輸送方向で測定する（ｐＨ７．４、３７℃）。ＡＢ透過性（ＰＥＡＢ）は血液から脳内への薬物吸収を表し、ＢＡ透過性（ＰＥＢＡ）は脳から血液中に戻る薬物排出を表し、受動的透過性、ならびに過剰発現されたヒトＭＤＲ１ Ｐ−ｇｐによって優勢に、ＭＤＣＫ−ＭＤＲ１細胞上で発現される排出および取込み輸送体によって媒介される能動的輸送機序の両方を介する。該ＡＢ透過性と、ヒトにおいて公知のインビトロ透過性および経口吸収を有する基準化合物のＡＢ透過性との比較によって、該化合物を透過性／吸収クラスに割り当てる。両輸送方向における同一または同様の透過性は受動的透過を示し、ベクトル透過性は追加の能動的輸送機序を指す。ＰＥＡＢよりも高いＰＥＢＡは、ＭＤＲ１ Ｐ−ｇｐによって媒介される能動的排出の関与を示す。能動的輸送は、濃度−依存的に飽和可能である。

【0022】

ＭＤＣＫ−ＭＤＲ１細胞（１〜２×１０ｅ５細胞／１ｃｍ２面積）を、フィルター挿入体（ＣｏｓｔａｒトランスウェルポリカーボネートまたはＰＥＴフィルター、０．４μｍの孔サイズ）上に播種し、７日間培養（ＤＭＥＭ）する。引き続いて、細胞を５ｍＭの酪酸ナトリウムで、完全培地中にて２日間培養することによって、ＭＤＲ１発現をブーストする。化合物を適切な溶媒（ＤＭＳＯなど、１−２０ｍＭのストック溶液）中に溶解させる。ストック溶液をＨＴＰ−４緩衝液（１２８．１３ｍＭのＮａＣｌ、５．３６ｍＭのＫＣｌ、１ｍＭのＭｇＳＯ₄、１．８ｍＭのＣａＣｌ₂、４．１７ｍＭのＮａＨＣＯ₃、１．１９ｍＭのＮａ₂ＨＰＯ₄×７Ｈ₂Ｏ、０．４１ｍＭのＮａＨ₂ＰＯ₄×Ｈ２Ｏ、１５ｍＭのＨＥＰＥＳ、２０ｍＭのグルコース、０．２５％のＢＳＡ、ｐＨ７．４）で希釈することで、輸送溶液（０．１〜３００μＭの化合物、最終ＤＭＳＯ＜＝０．５％）を調製する。Ａ−ＢまたはＢ−Ａ透過性（３つのフィルターレプリケート）をそれぞれ測定するために、輸送溶液（ＴＬ）を頂端または側底のドナー側に適用する。レシーバー側は、ドナー側と同じ緩衝液を含有する。試料を、ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳまたはシンチレーションカウンティングによる濃度測定のために、実験の開始および終了時にドナーから、および最大２時間までの間の様々な時間間隔でレシーバー側からも回収する。試料採取されたレシーバー体積を新鮮なレシーバー溶液と置き換える。

【0023】

生物学データ

【表1】

【0024】

本発明の化合物
本発明の全ての化合物の鍵となる生物学的特性（ＯＸ１ＲおよびＯＸ２Ｒ効力、ヒト肝臓ミクロソームにおける安定性、ならびにＭＤＣＫ排出を含める）と、それぞれ国際公開第２０１６／０３４８８２号における対応する最も近い従来技術の化合物との完全および詳細な比較は、表１に示されている。

【0025】

【表2】

【0026】

本発明の実施例１および２は、それがＮ−メチル−［ブタン−２−イル］アミノ部分の代わりに中央Ｎ−（２，２−ジフルオロエチル）−（プロパン−２−イル）アミノ部分を含有するという点において、国際公開第２０１６／０３４８８２号における実施例９１、即ち最も近い従来技術化合物と構造的に異なる。さらに、実施例１は、フェニル環に異なる置換パターンを有する２個のフッ素原子を含有し、他方、実施例２は、フェニル環の異なる位置に１個のフッ素原子を含有する。これらの構造差は、予想外にも、ＯＸ１Ｒでより強力であるとともにより選択的であり、国際公開第２０１６／０３４８８２号における実施例９１と比較した場合にヒト肝臓ミクロソームにおいて匹敵する代謝安定性およびＭＤＣＫ排出を有する実施例１および２をもたらす。

【0027】

本発明の実施例３、４および５は、Ｎ−メチル−［ブタン−２−イル］アミノ部分の代わりに中央Ｎ−（２，２−ジフルオロエチル）−（プロパン−２−イル）アミノ部分を含有するという点において、国際公開第２０１６／０３４８８２号における実施例８４、即ち最も近い従来技術の化合物と構造的に異なる。さらに、それらは、メチル置換ピリジル環の代わりにフッ素原子で、異なって置換されているフェニル環を含有する。これらの構造差は、予想外にも、より高い効力および選択性の増加、ならびに国際公開第２０１６／０３４８８２号における実施例８４と比較した場合に匹敵するＭＤＣＫ排出とともにヒト肝臓ミクロソームにおける有意により良好な安定性を実証する実施例３、４および５をもたらす。

【0028】

これらの結果は、本発明の化合物が、予想外にも、匹敵するまたはより高いミクロソーム安定性を有する、より強力なＯＸ１Ｒアンタゴニストであり、それぞれ国際公開第２０１６／０３４８８２号に開示されている構造的に最も同様の実施例（最も近い従来技術の化合物）よりもＯＸ２受容体に対して選択的であることを実証している。

【0029】

処置における使用／使用の方法
本発明は、ＯＸ１Ｒの拮抗作用が、以下に限定されないが、衝動制御欠如と関連する精神医学的および神経学的状態の処置および／または防止を含めて治療的利益である、疾患、障害および状態の処置において有用である化合物を対象とする。こうした衝動制御欠如は、物質使用障害を含めた嗜癖；境界性人格障害などの人格障害；過食性障害などの摂食障害；または注意欠陥多動性障害において見られる。本発明のさらなる態様によると、本発明の化合物は、覚醒状態／覚醒、食欲／食物摂取、認知、動機付け行動／報酬、気分およびストレスにおけるＯＸ１Ｒ関連の病態生理学的障害の処置に有用である。

【0030】

それらの薬理効果を考慮すると、本発明の化合物は、以下からなるリストから選択される疾患または状態の処置における使用に適当である：
（１）物質乱用／依存／探索または嗜癖の処置または防止、ならびに再発防止（以下に限定されないが、薬物、例えばコカイン、アヘン剤、例えばモルヒネ、バルビツレート、ベンゾジアゼピン、アンフェタミン、ニコチン／タバコおよび他の覚醒剤を含める）、アルコール依存症およびアルコール関連障害、薬物乱用もしくは嗜癖または再発、麻薬に対する耐性または麻薬の禁断症状、
（２）摂食障害、例えば過食、神経性過食症、神経性拒食症、他の特定摂取障害または摂食障害、肥満、過体重、悪液質、食欲／味覚障害、嘔吐、吐き気、プラダー・ウィリー症候群、過食症、食欲／味覚障害、
（３）注意欠陥多動性障害、行為障害、注意力不足および関連障害、睡眠障害、不安障害、例えば全般性不安障害、パニック障害、恐怖症、外傷後ストレス障害、統合失調症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病およびジル・ドゥ・ラ・トゥレット症候群、下肢静止不能症候群、認知症、ジスキネジー、重度精神遅滞、疾病分類学的実体、例えば脱抑制−認知症−パーキンソン症−筋萎縮症症候群、淡蒼球橋黒質変性症（ｐａｌｌｉｄｏ−ｐｏｎｔｏ−ｎｉｇｒａｌ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）を含めた神経変性障害、
（４）精神医学的または神経学的障害における認知機能不全、統合失調症、アルツハイマー病ならびに他の神経学的および精神医学的障害と関連する認知機能欠如、
（５）気分障害、双極性障害、躁病、うつ病、躁うつ病、境界性人格障害、反社会性の人格障害、攻撃性、例えば衝動的攻撃性、自殺傾向、前頭側頭型認知症、強迫性障害、精神錯乱、情動神経症／障害、抑うつ神経症／障害、不安神経症、気分変調性障害、
（６）性的障害、性機能不全、精神性的障害、
（７）衝動制御障害、例えば病的賭博、抜毛癖、間欠性爆発性障害、窃盗癖、放火癖、強迫性購買、インターネット嗜癖、性的衝動、
（８）睡眠障害、例えばナルコレプシー、時差ボケ、睡眠時無呼吸、不眠症、睡眠時異常行動、生物学的リズムおよび概日リズムの障害、精神医学的および神経学的障害と関連する睡眠妨害、
（９）任意の精神医学的および／または神経学的状態における、衝動性および／または衝動制御欠如および／または行動脱抑制の処置、防止および再発制御、
（１０）人格障害、例えば境界性人格障害、反社会性人格障害、妄想性人格障害、統合失調質および統合失調型の人格障害、演技性人格障害、自己愛性人格障害、回避性人格障害、依存性人格障害、他の特定および非特定人格障害、
（１１）神経学的疾患、例えば大脳浮腫および血管浮腫、例えばパーキンソン病およびアルツハイマー病のような大脳認知症、老年認知症；多発性硬化症、てんかん、側頭葉てんかん、薬物抵抗性てんかん、発作障害、脳卒中、重症筋無力症、脳脊髄炎のような脳および髄膜感染症、髄膜炎、ＨＩＶ、ならびに統合失調症、妄想性障害、自閉症、情動障害およびチック障害。
本発明の化合物の適用可能な日用量は、０．１ｍｇ〜２０００ｍｇで変動することができる。
実際の薬学的に有効な量または治療用量は、患者の年齢および体重、投与の経路、ならびに疾患の重症度など、当業者によって知られている因子に依存する。いずれの場合においても、該薬物物質は、患者の状態に適切である薬学的に有効な量が送達されるのを可能にする用量および方式で投与されるべきである。

【0031】

医薬組成物
本発明の化合物を投与するのに適当な調製は、当技術分野における通常の技術者に明らかであり、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、坐剤、ロゼンジ剤、トローチ剤、液剤、シロップ剤、エリキシル剤、サシェ剤、注射剤、吸入剤、散剤などが挙げられる。薬学的に活性な化合物の含有量は、全体としての組成物の０．１〜９５質量％、好ましくは５．０質量％〜９０質量％の範囲において変動することができる。
適当な錠剤は、例えば、本発明の化合物を公知の賦形剤、例えば不活性希釈剤、担体、崩壊剤、補助剤、界面活性剤、結合剤および／または滑沢剤と混合することによって、ならびに結果として得られた混合物をプレスすることで錠剤を形成することによって得ることができる。
併用療法
本発明による化合物は、処置が本発明の焦点にある適応症のいずれかの処置に関連して当技術分野において使用されることが知られている他の処置選択肢と組み合わせることができる。

【0032】

本発明による処置との組合せに適当であると考えられるような処置選択肢の中には以下がある：
− 抗うつ薬
− 気分安定薬
− 抗精神病薬
− 抗不安薬
− 抗てんかん薬
− 睡眠薬
− 向知性薬
− 刺激薬
− 注意欠陥多動性障害用非刺激薬
− 追加の向精神薬。

【実施例】

【0033】

実験項
略語のリスト

【表3】

【0034】

ＨＰＬＣ方法：
方法名：Ａ
カラム：ＢＥＨ Ｃ１８ １．７ｍｍ ２．１×５０ｍｍ
カラム供給元：Ｗａｔｅｒｓ

【表4】

【0035】

方法名：Ｂ
カラム：Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ、２．５μｍ、４．６×５０ｍｍ
カラム供給元：Ｗａｔｅｒｓ

【表5】

【0036】

方法名：Ｃ
カラム：Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ フェニル−ヘキシル、４．６×５０ｍｍ、２．５μｍ、
カラム供給元：Ｗａｔｅｒｓ

【表6】

【0037】

方法名：Ｄ
カラム：Ｖｅｎｕｓｉｌ、２．１×５０ｍｍ、５μｍ
カラム供給元：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｉｇｉｅｓ

【表7】

【0038】

方法名：Ｅ
カラム：Ｖｅｎｕｓｉｌ、２．１×５０ｍｍ、５μｍ
カラム供給元：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｉｇｉｅｓ

【表8】

【0039】

中間体の調製
酸中間体

【表9】

【0040】

２−フルオロ−６−ピリミジン−２−イル−安息香酸Ａ−４

【化1】

Ａ−４は、上に記載されている手順に類似して調製される。ＥＳＩ−ＭＳ：２１９［Ｍ＋Ｈ］⁺；ＨＰＬＣ（Ｒｔ）：０．９３分（方法Ｅ）。

【0041】

５−フルオロ−２−ピリミジン−２−イル−安息香酸Ａ−５：

【化2】

ステップ１：ジオキサン中のＡ−５．１（２０．０ｇ、８１．５ｍｍｏｌ）、Ａ−５．２（２５．０ｇ、９３．５ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ₂（ｄｐｐｆ）（３．７ｇ、４．３ｍｍｏｌ）およびＫＯＡｃ（３２．８ｇ、３１７．４ｍｍｏｌ）の混合物を、窒素雰囲気下にて２時間の間１００℃で撹拌する。セライトを介して反応混合物を濾過し、ＥＡで抽出する。有機相をＨ₂Ｏで洗浄し、乾燥させ、蒸発させる。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーによってシリカゲル上で（１００／０〜８０／２０のシクロヘキサン／ＥＡを使用する）精製することで、２２ｇのＡ−５．３が提供される。ＴＬＣ（Ｒｆ）：０．３（シリカゲル；９／１のシクロヘキサン／ＥＡ）。
ステップ２：２−メチル−ＴＨＦおよびＨ₂Ｏの混合物中のＡ−５．３（１２．０ｇ、３８．６ｍｍｏｌ）、Ａ−５．４（５．４ｇ、４６．３ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ₂（ｄｐｐｆ）（１．３７ｇ、１．６６ｍｍｏｌ）およびＮａ₂ＣＯ₃（１３．３ｇ、１２４．４ｍｍｏｌ）の混合物を、窒素雰囲気下にて８０℃で終夜撹拌する。反応混合物をＴＢＭＥおよびＨ₂Ｏで処理し、セライトを介して濾過する。有機相を分離、乾燥および蒸発させる。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーによってシリカゲル上で（３／１のＰＥ／ＥＡを使用する）精製することで、７．０ｇのＡ−５．５が提供される。ＴＬＣ（Ｒｆ）：０．３（シリカゲル；６／４のシクロヘキサン／ＥＡ）。
ステップ３：２−メチル−ＴＨＦおよびＨ₂Ｏ（５０ｍＬ）の３：１混合物中のＡ−５．５（３．５ｇ、１６．６ｍｍｏｌ）の混合物に、ＮａＯＨ（１．５ｇ、３６．６ｍｍｏｌ）を添加し、７０℃で２時間の間撹拌する。有機相を分離し、水性相をＴＢＭＥで抽出する。水性相をＨＣｌ（３６％水溶液）でｐＨ１に酸性化し、沈殿物を濾別する。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーによってシリカゲル上で（２０／１のＤＣＭ／ＭｅＯＨを使用する）精製することで、２．１ｇのＡ−５が提供される。ＥＳＩ−ＭＳ：２１９［Ｍ＋Ｈ］⁺；ＨＰＬＣ（Ｒｔ）：３．４２分（方法Ｄ）。

【0042】

アミン中間体の合成
Ｎ−（（Ｓ）−２−アミノ−１−メチル−エチル）−Ｎ−（２，２−ジフルオロエチル）−３−フルオロ−２−ピリミジン−２−イル−ベンズアミドＢ−１：

【化3】

【0043】

ステップ１：乾燥ＤＣＭ（１５．０ｍＬ）中のＴＥＡ（１１．１ｍＬ；７９．９ｍｍｏｌ）の溶液を、滴下により、乾燥ＤＣＭ（１５．０ｍＬ）中のＢ−１．１（３．０ｇ、３９．９ｍｍｏｌ）およびＢ−１．２（６．０ｇ、３９．９ｍｍｏｌ）の溶液に撹拌下で添加する。反応混合物をＲＴで終夜撹拌する。反応混合物に、飽和ＮＨ₄Ｃｌ水溶液（１５．０ｍＬ）を添加し、ＤＣＭで抽出する。有機相を分離、乾燥および蒸発させることで、７．０ｇのＢ−１．３を得る。ＥＳＩ−ＭＳ：１８９［Ｍ＋Ｈ］⁺；ＨＰＬＣ（Ｒｔ）：０．８６分（方法Ａ）。
ステップ２：乾燥ＤＭＡおよび乾燥ＡＣＮ中のＡ−２（２．１ｇ、９．６ｍｍｏｌ）、Ｂ−１．３（２．０ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３．６ｍＬ、２１．０ｍｍｏｌ）の混合物に、窒素雰囲気下で、Ｂ−１．４（４．７ｇ、１６．９ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をＲＴで５時間の間撹拌する。反応混合物を冷Ｈ₂Ｏに注ぎ入れ、ＥＡで抽出する。有機相を希釈クエン酸で洗浄し、乾燥させ、濃縮する。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーによってシリカゲル上で（８０／２０／１のＥＡ／ｎ−ヘキサン／ＭｅＯＨを使用する）精製することで、６００ｍｇのＢ−１．５が提供される。ＥＳＩ−ＭＳ：３８９［Ｍ＋Ｈ］⁺；ＨＰＬＣ（Ｒｔ）：１．３０分（方法Ａ）。
ステップ３：乾燥ＤＭＦ（９．０ｍＬ）中のＢ−１．５（６７０ｍｇ、３．６６ｍｍｏｌ）に、ＮａＨ（１１０ｍｇ、２．７５ｍｍｏｌ）を０℃で添加する。３０分後、Ｂ−１．６（７１０ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ）を０℃で添加する。反応混合物をＲＴに加温し、１６時間撹拌する。反応混合物を冷ＮＨ₄Ｃｌ溶液に注ぎ入れ、ＥＡで抽出する。有機相を分離、乾燥および蒸発させる。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーによってシリカゲル上で（８０／２０のｎ−ヘキサン／ＥＡを使用する）精製することで、６７０ｍｇのＢ−１．７が提供される。ＥＳＩ−ＭＳ：４５３［Ｍ＋Ｈ］⁺；ＨＰＬＣ（Ｒｔ）：１．５９分（方法Ａ）。
ステップ４：乾燥ＴＨＦ（９．０ｍＬ）中のＢ−１．７（６６０ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）に、Ｂ−１．８（１．６ｍＬ、１．６０ｍｍｏｌ）を撹拌下にて０℃で添加する。反応混合物を０℃で１時間の間撹拌する。溶媒を蒸発し、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーによってシリカゲル上で（９７／３のＤＣＭ／ＭｅＯＨを使用する）精製することで、４５０ｍｇのＢ−１．９が提供される。ＥＳＩ−ＭＳ：３３９［Ｍ＋Ｈ］⁺；ＨＰＬＣ（Ｒｔ）：０．７６分（方法Ａ）。
ステップ５：乾燥ＴＨＦ（３．６ｍＬ）中のＢ−１．９（３７０ｍｇ、７．０９ｍｍｏｌ）およびＢ−１．１０（３３０μＬ、２．２１ｍｍｏｌ）に、Ｂ−１．１１（３５０μＬ、１．６２ｍｍｏｌ）を滴下により窒素雰囲気下で添加する。反応混合物をＲＴで１６時間の間撹拌する。溶媒を蒸発させ、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーによってシリカゲル上で（４０／６０／１のＥＡ／ｎ−ヘキサン／ＭｅＯＨを使用する）精製することで、２７０ｍｇのＢ−１．１２が提供される。ＥＳＩ−ＭＳ：３６４［Ｍ＋Ｈ］⁺；ＨＰＬＣ（Ｒｔ）：１．０３分（方法Ａ）。
ステップ６：ＴＨＦ（１５．０ｍＬ）およびＨ₂Ｏ（０．８ｍＬ）中のＢ−１．１２（２６０ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）に、Ｂ−１．１３（５００ｍｇ、１．９１ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で添加し、反応混合物をＲＴで１６時間の間撹拌する。反応混合物を蒸発させ、残留物をＨＣｌ（１Ｍ、水溶液）で処理し、ＥＡで抽出する。有機相を分離する。水性相をＮＨ₄ＯＨでｐＨ１０〜１１に塩基性化し、ＤＣＭで抽出する。有機相を乾燥および蒸発させることで、２４０ｍｇのＢ−１を得る。ＥＳＩ−ＭＳ：３３８［Ｍ＋Ｈ］⁺；ＨＰＬＣ（Ｒｔ）：０．６２分（方法Ａ）。

【0044】

（Ｓ）−Ｎ^*２^*−（ジフルオロエチル）−Ｎ^*１^*（５−トリフルオロメチル−ピリミジン−２−イル）−プロパン−１，２−ジアミンＢ−２：

【化4】

ステップ１：乾燥ＴＨＦ（１８０ｍＬ）中のＢ−２．１（２．０ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）、Ｂ−２．２（２．２ｇ、１４．９ｍｍｏｌ）およびＰＰｈ₃（３．９ｇ、１４．９ｍｍｏｌ）の混合物に、滴下により０℃でＮ₂雰囲気下にて、ＤＩＡＤ（３．０ｍＬ、１６．６ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物をＲＴに加温し、１６時間の間撹拌する。反応混合物を濃縮し、残留物を水で処理し、ＥＡで抽出する。有機層を分離、乾燥および濃縮する。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーによってシリカゲル上で（７０／３０のｎ−ヘキサン／ＥＡの溶媒混合物を使用する）精製することで、３．４ｇのＢ−２．３を得る。ＥＳＩ−ＭＳ：３０４［Ｍ＋Ｈ］⁺；ＨＰＬＣ（Ｒｔ）：１．０６分（方法Ａ）。
ステップ２：乾燥ＤＭＦ中のＢ−２．３（２．３ｇ、７．５６ｍｍｏｌ）およびＢ−１．６（１．２ｍＬ、８．９７ｍｍｏｌ）に、ＮａＨ（６０％、３４０ｍｇ、８．５０ｍｍｏｌ）を０℃でおよび窒素雰囲気下にて添加する。反応混合物をＲＴで１６ｈの間撹拌する。反応混合物を冷ＮＨ₄Ｃｌ（水溶液）に注ぎ入れ、ＥＡで抽出する。有機相をＨ₂Ｏで洗浄し、乾燥させ、蒸発させる。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーによってシリカゲル上で（８０／２０のｎ−ヘキサン／ＥＡの溶媒混合物を使用する）精製することで、１．６ｇのＢ−２．４を得る。ＥＳＩ−ＭＳ：３６８；ＴＬＣ（Ｒｆ）：０．６（シリカゲル；ＰＥ／ＥＡ５／１）。
ステップ３：ＥｔＯＨ（１５０ｍＬ）中のＢ−２．４（１３．５ｇ、３６．５ｍｍｏｌ）およびヒドラジン水和物（９．３０ｇ、１８２．７ｍｍｏｌ）の混合物を、ＲＴで２０時間の間撹拌する。反応混合物を濾過し、濾液を蒸発させる。残留物をＨ₂Ｏ中に溶解させ、ＥＡで抽出する。水性相をＨＣｌ（０．０５Ｍ、水溶液）でｐＨ６に酸性化し、濾過する。濾液を凍結乾燥することで、８．５ｇのＢ−２．５を得る。ＥＳＩ−ＭＳ：２３９；ＴＬＣ（Ｒｆ）：０．５（シリカゲル；ＰＥ／ＥＡ５／１）。
ステップ４：乾燥ＮＭＰ（２５．０ｍＬ）中のＢ−２．５（４．０ｇ、１４．６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２．７４ｍＬ、１６．０ｍｍｏｌ）に、Ｂ−２．６（２．７ｇ、１４．６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をマイクロ波中にて１００℃で１時間の間撹拌する。反応混合物をＨ₂Ｏに注ぎ入れ、ＥＡで抽出する。有機相を、希釈クエン酸（水溶液）で洗浄し、乾燥させ、蒸発させる。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーによってシリカゲル上で（９５／５〜６０／４０のシクロヘキサン／ＥＡの溶媒混合物を使用する）精製することで、２．９ｇのＢ−２．７を得る。ＥＳＩ−ＭＳ：３８４［Ｍ＋Ｈ］⁺；ＨＰＬＣ（Ｒｔ）：１．３２分（方法Ａ）。
ステップ５：乾燥１，４−ジオキサン（５．０ｍＬ）中のＢ−２．７（２．９ｇ、７．５２ｍｍｏｌ）に、ＨＣｌ（ジオキサン中４Ｍ、１０．０ｍＬ、４０．０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をＲＴで終夜撹拌する。溶媒を減圧下で除去し、残留物をＨ₂ＯおよびＮＨ₄ＯＨで処理し、ＤＣＭで抽出する。有機相を乾燥および蒸発させることで、２．１ｇのＢ−２を得る。ＥＳＩ−ＭＳ：２８４［Ｍ＋Ｈ］⁺；ＨＰＬＣ（Ｒｔ）：１．０１分（方法Ａ）。

【0045】

本発明の化合物の調製
（実施例２）

【化5】

【0046】

ＣＩＰ（６５ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を、乾燥ＡＣＮ（２．０ｍＬ）中のＡ−１（５０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、Ｂ−２（６５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１１０μＬ、０．６４ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に添加し、反応混合物をＲＴで終夜撹拌する。反応混合物を濾過し、分取ＬＣＭＳによって（ＮＨ₄ＯＨを用いる溶媒勾配Ｈ₂Ｏ／ＡＣＮを使用する）精製することで、５０ｍｇの化合物実施例２を得る。ＥＳＩ−ＭＳ：４７４［Ｍ＋Ｈ］⁺；ＨＰＬＣ（Ｒｔ）：３．５９分（方法Ｂ）。

【0047】

（実施例３）

【化6】

【0048】

ＮＭＰ（１０ｍＬ）中のＢ−１（７３０ｍｇ、２．１６ｍｍｏｌ）およびＢ−２．６（５１０ｍｇ、２．７９ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に、ＤＩＰＥＡ（５２０μＬ、３．０４ｍｍｏｌ）をＲＴで窒素雰囲気下にて添加する。反応物を１００℃で１時間の間加熱する。冷却した後、反応物を水に注ぎ入れ、ＥＡで抽出する。有機層を分離させ、クエン酸（希釈水溶液）で洗浄し、乾燥させ、濃縮する。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーによってシリカゲル上で（９７／３の溶媒混合物ＤＣＭ／ＭｅＯＨを使用する）精製することで、８２０ｍｇの実施例３を得る。ＥＳＩ−ＭＳ：４８４［Ｍ＋Ｈ］⁺；ＨＰＬＣ（Ｒｔ）：３．２５分（方法Ｃ）。

【0049】

（実施例４）

【化7】

ＤＩＰＥＡ（１２０μＬ、０．７０ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＭＡ中のＡ−５（１００ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）およびＢ−２（９０ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）の撹拌混合物にＲＴで添加する。２０分後、ＣＩＰ（１３０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を５０℃で５時間の間撹拌した後に、ＲＴに冷却し、終夜撹拌したまま放置した。混合物をＨ₂Ｏで処理し、ＥＡで抽出する。有機相をＨ₂Ｏで洗浄し、乾燥させ、蒸発させる。残留物を分取ＬＣＭＳによって（ＮＨ₄ＯＨを用いる溶媒勾配Ｈ₂Ｏ／ＡＣＮを使用する）精製することで、６０ｍｇの化合物実施例４を得る。ＥＳＩ−ＭＳ：４８５［Ｍ＋Ｈ］⁺；ＨＰＬＣ（Ｒｔ）：３．５３分（方法Ｃ）。
以下の実施例は、前に記載されている通りの対応する酸（酸中間体を参照されたい）およびアミン（アミン中間体を参照されたい）を使用する、上に記載されている手順に類似して調製される。実施例１について：反応はＲＴで終夜実施される。

【0050】

【表10】