特許 6876111 ポンペ病の処置のための投与計画

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6876111

(24)【登録日】2021年4月27日

(45)【発行日】2021年5月26日

(54)【発明の名称】ポンペ病の処置のための投与計画

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/47 20060101AFI20210517BHJP

   A61K 31/445 20060101ALI20210517BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20210517BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20210517BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20210517BHJP

【ＦＩ】

   A61K38/47ZMD

   A61K31/445

   A61P3/00

   A61P21/00

   A61P43/00 121

【請求項の数】9

【外国語出願】

【全頁数】73

(21)【出願番号】特願2019-196583(P2019-196583)

(22)【出願日】2019年10月29日

(62)【分割の表示】特願2018-7672(P2018-7672)の分割

【原出願日】2013年5月2日

(65)【公開番号】特開2020-45346(P2020-45346A)

(43)【公開日】2020年3月26日

【審査請求日】2019年11月27日

(31)【優先権主張番号】61/664,011

(32)【優先日】2012年6月25日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】61/697,179

(32)【優先日】2012年9月5日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】61/642,311

(32)【優先日】2012年5月3日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】61/749,132

(32)【優先日】2013年1月4日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】61/749,234

(32)【優先日】2013年1月4日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】507170099

【氏名又は名称】アミカス セラピューティックス インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林特許業務法人

(72)【発明者】

【氏名】グリーン， ダグラス スチュアート

(72)【発明者】

【氏名】バレンツァノ， ケネス ジョセフ

【審査官】 鳥居 福代

(56)【参考文献】

【文献】 特許第６６１２３７０（ＪＰ，Ｂ２）

【文献】 特表２００８−５４５６５７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１０−５２５０８４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許出願公開第２０１０／０１１９５０２（ＵＳ，Ａ１）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３１／３３−３１／８０

Ａ６１Ｋ ３８／００−３８／５８

Ａ６１Ｋ ４５／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

組み換えヒト酸α−グルコシダーゼ酵素代替療法剤を含む、対象におけるポンペ病を治療するための医薬であって、
組み換えヒト酸α−グルコシダーゼ酵素代替療法剤が、１−デオキシノジリマイシン又はＮ−ブチル−デオキシノジリマイシンとの組み合わせで投与され、
１−デオキシノジリマイシン又はＮ−ブチル−デオキシノジリマイシンが、２５０ｍｇ〜６００ｍｇの量で投与され、かつ
１−デオキシノジリマイシン又はＮ−ブチル−デオキシノジリマイシンが、組み換えヒト酸α−グルコシダーゼ酵素代替療法剤の投与の４時間前〜直前に投与される、
医薬。

【請求項2】

対象が、１−デオキシノジリマイシン又はＮ−ブチル−デオキシノジリマイシンの投与の約０．５〜約４時間前に開始し、約０．５〜約４時間後に終了する期間の間、絶食する、請求項１に記載の医薬。

【請求項3】

対象が、１−デオキシノジリマイシン又はＮ−ブチル−デオキシノジリマイシンの投与前の少なくとも約２時間、及び１−デオキシノジリマイシン又はＮ−ブチル−デオキシノジリマイシンの投与後の少なくとも約２時間絶食する、請求項２に記載の医薬。

【請求項4】

１−デオキシノジリマイシン又はＮ−ブチル−デオキシノジリマイシンが、組み換えヒト酸α−グルコシダーゼ酵素代替療法剤の投与の約２時間前に投与される、請求項１〜３の何れか１項に記載の医薬。

【請求項5】

１−デオキシノジリマイシン又はＮ−ブチル−デオキシノジリマイシンが、組み換えヒト酸α−グルコシダーゼ酵素代替療法剤の投与の約１時間前に投与される、請求項１〜３の何れか１項に記載の医薬。

【請求項6】

１−デオキシノジリマイシンが１−デオキシノジリマイシン塩酸塩である、請求項１〜５の何れか１項に記載の医薬。

【請求項7】

組み換えヒト酸α−グルコシダーゼ酵素代替療法剤がアルグルコシダーゼαである、請求項１〜６の何れか１項に記載の医薬。

【請求項8】

１−デオキシノジリマイシン又はＮ−ブチル−デオキシノジリマイシンの第二の用量が、組み換えヒト酸α−グルコシダーゼ酵素代替療法剤の投与後４時間以内に対象に投与される、請求項１〜７の何れか１項に記載の医薬。

【請求項9】

組み換えヒト酸α−グルコシダーゼ酵素代替療法剤、及び１−デオキシノジリマイシン又はＮ−ブチル−デオキシノジリマイシンが、１〜４週間毎に投与される、請求項１〜８の何れか１項に記載の医薬。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本願は、それぞれ優先権が主張され、またそれぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる２０１２年５月３日出願の米国仮特許出願第６１／６４２，３１１号明細書、２０１２年６月２５日出願の米国仮特許出願第６１／６６４，０１１号明細書、２０１２年９月５日出願の米国仮特許出願第６１／６９７，１７９号明細書、２０１３年１月４日出願の米国仮特許出願第６１／７４９，１３２号明細書、及び２０１３年１月４日出願の米国仮特許出願第６１／７４９，２３４号明細書による利益を主張する。

【0002】

本願は、ポンペ病の処置のための１−デオキシノジリマイシン及び酵素代替療法の使用に関する投与計画及び投与スケジュールを提供する。

【背景技術】

【0003】

リソソーム酵素酸α−グルコシダーゼ（ＧＡＡ）における突然変異は、リソソームグリコーゲン異化作用を変化させ、グリコーゲン貯蔵疾患タイプＩＩ又は酸マルターゼ欠損とも称されるポンペ病をもたらす。ＧＡＡは、通常、α−１，４及びα−１，６結合においてグリコーゲンを加水分解して、グルコースを提供する。ＧＡＡ遺伝子における突然変異は、ＧＡＡ活性の欠乏又は不在をもたらし、これはグリコーゲンの蓄積に繋がる。グリコーゲン蓄積は、身体全体に進行性の筋疾患をもたらし、様々な身体組織、特に心臓、骨格筋、肝臓及び神経系を冒すと考えられている。ポンペ病のいくつかの場合、１１０−ｋＤａ ＧＡＡ前駆体タンパク質レベルの低下が観察される一方、他の場合では、正常レベルの１１０−ｋＤａ前駆体タンパク質が合成されるが、成熟した、適切にグリコシル化された７６−及び７０−ｋＤａ ＧＡＡ形態に加工されない。

【0004】

ポンペ病は、歴史的に、３つの主な表現型の表現（乳児、若年及び成人発症型）に分割されていた。しかしながら、この疾病は現在、より重篤な早期発症形態から、比較的重篤でない後期発症形態に亘る、一連の表現型であると認められている。この疾患は、発病年齢、関連器官の範囲、及び進行速度において臨床的に異質性である。疾病の早期発症形態は、最も重篤であり、最も急速に進行し、グリコーゲン蓄積が心筋、骨格筋及び肝組織内で最も優勢である。この疾病の形態は、一般に、筋骨格、肺、胃腸及び心臓の症状により特徴付けられる。心臓呼吸性不全による死は、通常、１〜２歳の間に起こる。疾病の遅い発病は、通常、小児期〜成人期の間に開始し、進行速度がより遅く、通常、心臓併発症を有さない。この表現型は、直進性衰弱及び呼吸不全をもたらす筋骨格及び肺の症状により特徴付けられる。症状は、比較的重篤でない傾向があり、グリコーゲン蓄積は、疾病の早期発症形態よりも後期発症形態でその規模が低く、より長い生存時間をもたらす。通常、心臓呼吸性不全により死に至る。

【0005】

ポンペ病の現在の処置は、心臓及び呼吸症状の対症療法を含む。根底にある遺伝子欠陥に関する認可された処置は存在しない。代替ＧＡＡ、アルグルコシダーゼα（Ｍｙｏｚｙｍｅ（登録商標）（Ｇｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）及びＬｕｍｉｚｙｍｅ（登録商標）（Ｇｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）の使用は、米国内でＦ．Ｄ．Ａ．により認可されている。しかしながら、乳児ポンペ患者における、欠損ＧＡＡを代替する酵素代替療法（ＥＲＴ）を用いた臨床的評価は、心臓及び骨格機能の改善に中程度にのみ成功した（Ｋｌｉｎｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ．２００５；３６（１）：６−１１）。組み換えＧＡＡは、骨格筋ミオパシーと比較して、心筋症の回復にてより効果的であることが示され（Ｒａｂｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２００５；１１（１）：４８−５６）、これは大部分は、組み換え酵素が結合組織に浸透できないためである。組み換えＧＡＡを使用したポンペ病の処置方法は、Ｃａｎｆｉｅｌｄに付与された米国特許第６，５３７，７８５号明細書に詳細に記載されている。ＥＲＴによる主な複雑化要因の１つは、治療的有効量の酵素を獲得及び維持することであり、これは、注入された酵素が急速に分解するためである。

【0006】

１−デオキシノジリマイシン及びその塩、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩は、酵素に選択的に結合することにより、突然変異体ＧＡＡの薬理学的シャペロンとして作用し、それによってその安定性を増大させ、また酵素がその正しい三次元形状に折り畳まれることを助ける。このＧＡＡの安定化により、酵素が適切に折り畳まれていることを認識するための細胞の品質制御機構が可能となり、従ってリソソームへの酵素の輸送が増大して、酵素の意図される生物学的機能、即ちグリコーゲンの代謝を行うことが可能となる。ＥＲからリソソームへのＧＡＡの適切な輸送を再建する結果として、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩はまたＥＲ内でのミスフォールドしたタンパク質の蓄積を低減し、このことは細胞に対するストレスと、ポンペ病における寄与因子であり得るいくつかの炎症様応答とを緩和することができる。１−デオキシノジリマイシン塩酸塩のインビトロ及びインビボでの複数の前臨床試験、及び臨床試験が行われている。１−デオキシノジリマイシン塩酸塩は、細胞内ＧＡＡタンパク質の量を増大させ、リソソームへの突然変異体酵素の輸送を向上させることが示されている。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0007】

本願は、ポンペ病の処置のための１−デオキシノジリマイシン及び酵素代替療法の使用に関する投与計画及び投与スケジュールを提供する。所定の実施形態において、本願は、ポンペ病の処置のための１−デオキシノジリマイシン塩酸塩及びアルグルコシダーゼαの使用に関する投与計画及び投与スケジュールを提供する。

【0008】

一実施形態において、本方法は、約２５ｍｇ〜約１０００ｍｇの１−デオキシノジリマイシン及び有効量のＧＡＡ酵素代替療法を、それを必要とする患者に投与することを含む。１−デオキシノジリマイシンは、ＧＡＡ酵素代替療法の前、後、又は代替療法と同時に投与されてもよい。一実施形態において、患者は、１−デオキシノジリマイシンの投与の約０．５〜約４時間前に開始し、約０．５〜約４時間後に終了する期間の間、絶食する。更なる実施形態において、患者は、１−デオキシノジリマイシンの投与前に少なくとも約２時間、及び投与後に少なくとも約２時間、絶食する。

【0009】

別の実施形態では、１−デオキシノジリマイシンは、ＧＡＡ酵素代替療法と同時〜代替療法の約４時間前に投与される（Ｔ＝−４時間〜Ｔ＝０時間）。更なる実施形態において、１−デオキシノジリマイシンは、ＧＡＡ酵素代替療法の投与の約２時間前に投与される。

【0010】

特定の実施形態において、１−デオキシノジリマイシンは、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩である。一実施形態において、ＧＡＡ酵素代替療法は、ｒｈＧＡＡである。更なる実施形態では、ＧＡＡ酵素代替療法は、アルグルコシダーゼαである。

【0011】

一実施形態において、１−デオキシノジリマイシンは、ＧＡＡ酵素代替療法に対する補助剤として投与される。別の実施形態では、１−デオキシノジリマイシン及びＧＡＡ酵素代替療法は、併用療法として投与される。

【0012】

特定の実施形態において、上述した方法に従って投与される１−デオキシノジリマイシンの量は、約５０ｍｇ〜約６００ｍｇである。一実施形態において、投与される１−デオキシノジリマイシンの量は、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２５０ｍｇ及び６００ｍｇから選択される。

【0013】

特定の実施形態において、１−デオキシノジリマイシンは、ＧＡＡ酵素代替療法の投与の直前、又は投与と同時に投与される。代替的な実施形態では、患者は、１−デオキシノジリマイシンの第二の用量を、ＧＡＡ酵素代替療法の投与と、投与の約４時間後との間に投与される。

【0014】

所定の実施形態において、１−デオキシノジリマイシンは、ＧＡＡ酵素代替療法も受容している患者に、１〜４週間毎に投与される。更なる実施形態では、１−デオキシノジリマイシンは、ＧＡＡ酵素代替療法も受容している患者に、１２〜１６日毎に投与される。所定の実施形態では、ＧＡＡ酵素代替療法は、補助剤療法の組み合わせとしての１−デオキシノジリマイシンも投与されている患者に１４日毎に投与される。

【0015】

本願は、対象におけるポンペ病の処置のためのキットも提供し、キットは、約２５ｍｇ〜約１０００ｍｇの１−デオキシノジリマイシン及び有効量のＧＡＡ酵素代替療法を含む。所定の実施形態では、キット内の１−デオキシノジリマイシンの量は、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２５０ｍｇ及び６００ｍｇから選択される。

【0016】

本願は、ポンペ病の処置のための１−デオキシノジリマイシン（１−ＤＮＪ）誘導体及び酵素代替療法の使用に関する投与計画及び投与スケジュールを提供する。

【0017】

一実施形態において、本方法は、約２５ｍｇ〜約１０００ｍｇの１−デオキシノジリマイシン誘導体及び有効量のＧＡＡ酵素代替療法を、それを必要とする患者に投与することを含む。１−デオキシノジリマイシン誘導体は、ＧＡＡ酵素代替療法の前、後、又は代替療法と同時に投与されてもよい。一実施形態において、患者は、１−デオキシノジリマイシン誘導体の投与の約０．５〜約４時間前に開始し、約０．５〜約４時間後に終了する期間の間、絶食する。更なる実施形態では、患者は、１−デオキシノジリマイシン誘導体の投与前に少なくとも約２時間、及び投与後に少なくとも約２時間、絶食する。

【0018】

別の実施形態では、１−デオキシノジリマイシン誘導体は、ＧＡＡ酵素代替療法と同時〜代替療法の約４時間前に投与される（Ｔ＝−４時間〜Ｔ＝０時間）。更なる実施形態では、１−デオキシノジリマイシン誘導体は、ＧＡＡ酵素代替療法の投与の約２時間前に投与される。

【0019】

いくつかの実施形態において、１−デオキシノジリマイシン誘導体は、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−１−ブチル−２−（ヒドロキシメチル）ピペリジン−３，４，５−トリオール、即ちミグルスタット、即ちＮ−ブチルＤＮＪである。一実施形態において、ＧＡＡ酵素代替療法は、ｒｈＧＡＡである。更なる実施形態において、ＧＡＡ酵素代替療法は、アルグルコシダーゼαである。

【0020】

一実施形態において、１−デオキシノジリマイシン誘導体は、ＧＡＡ酵素代替療法に対する補助剤として投与される。別の実施形態では、１−デオキシノジリマイシン誘導体及びＧＡＡ酵素代替療法は、併用療法として投与される。

【0021】

特定の実施形態において、上述した方法に従って投与される１−デオキシノジリマイシン誘導体の量は、約５０ｍｇ〜約６００ｍｇである。一実施形態では、投与される１−デオキシノジリマイシン誘導体の量は、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２５０ｍｇ及び６００ｍｇから選択される。

【0022】

特定の実施形態において、１−デオキシノジリマイシン誘導体は、ＧＡＡ酵素代替療法の投与の直前、又は投与と同時に投与される。代替的な実施形態では、患者は、１−デオキシノジリマイシン誘導体の第二の用量を、ＧＡＡ酵素代替療法の投与と、投与の約４時間後との間に投与される。

【0023】

所定の実施形態では、１−デオキシノジリマイシン誘導体は、ＧＡＡ酵素代替療法も受容している患者に、１〜４週間毎に投与される。更なる実施形態では、１−デオキシノジリマイシン誘導体は、ＧＡＡ酵素代替療法も受容している患者に、１２〜１６日毎に投与される。所定の実施形態では、ＧＡＡ酵素代替療法は、補助剤療法の組み合わせとしての１−デオキシノジリマイシン誘導体も投与されている患者に、１４日毎に投与される。

【0024】

特許請求される方法の更なる実施形態において、１−ＤＮＪ誘導体は、Ｎ−メチル−ＤＮＪ、Ｎ−ブチル−ＤＮＪ、Ｎ−シクロプロピルメチル−ＤＮＪ、Ｎ−（２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミド）エチルオキシ−ＤＮＪ、Ｎ−４−ｔ−ブチルオキシカルボニル−ピペリジニルメチル（ｐｉｐｅｒｉｄｎｙｌｍｅｔｈｙｌ）−ＤＮＪ、Ｎ−２−Ｒ−テトラヒドロフラニルメチル−ＤＮＪ、Ｎ−２−Ｒ−テトラヒドロフラニルメチル−ＤＮＪ、Ｎ−（２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）エチル−ＤＮＪ、Ｎ−２−メトキシエチル−ＤＮＪ、Ｎ−２−エトキシエチル−ＤＮＪ、Ｎ−４−トリフルオロメチルベンジル−ＤＮＪ、Ｎ−α−シアノ−４−トリフルオロメチルベンジル−ＤＮＪ、Ｎ−４−トリフルオロメトキシベンジル−ＤＮＪ、Ｎ−４−ｎ−ペントキシベンジル−ＤＮＪ及びＮ−４−ｎ−ブトキシベンジル−ＤＮＪ、又はＣ１−ノニルＤＮＪからなる群から選択される。

【0025】

本願は、対象におけるポンペ病の処置のためのキットも提供し、キットは、約２５ｍｇ〜約１０００ｍｇの１−デオキシノジリマイシン誘導体及び有効量のＧＡＡ酵素代替療法を含む。所定の実施形態では、キット内の１−デオキシノジリマイシン誘導体の量は、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２５０ｍｇ及び６００ｍｇから選択される。

【図面の簡単な説明】

【0026】

【図1A】実施例２に記載されている処置による４人のコホート１対象におけるｒｈＧＡＡ血漿活性の複合グラフを示す。ＧＡＡ ＥＲＴ単独による処置後のｒｈＧＡＡ血漿活性を示す。

【図1B】実施例２に記載されている処置による４人のコホート１対象におけるｒｈＧＡＡ血漿活性の複合グラフを示す。ＧＡＡ ＥＲＴ及び５０ｍｇ １−デオキシノジリマイシン塩酸塩の共投与による処置後のｒｈＧＡＡ血漿活性を示す。

【図2A】実施例２に記載されている処置による４人のコホート１対象における平均ｒｈＧＡＡ血漿活性を示す。

【図2B】実施例２に記載されている処置による４人のコホート１対象における、ウエスタンブロットにより測定された平均総ｒｈＧＡＡタンパク質を示す。

【図3A】実施例２に記載されている処置による６人のコホート２対象におけるｒｈＧＡＡ血漿活性の複合グラフを示す。ＧＡＡ ＥＲＴ単独による処置後のｒｈＧＡＡ血漿活性を示す。

【図3B】実施例２に記載されている処置による６人のコホート２対象におけるｒｈＧＡＡ血漿活性の複合グラフを示す。ＧＡＡ ＥＲＴ及び１００ｍｇ １−デオキシノジリマイシン塩酸塩の共投与による処置後のｒｈＧＡＡ血漿活性を示す。

【図4】処置による６人のコホート２対象における平均ｒｈＧＡＡ血漿活性を示す。

【図5】処置によるコホート１及び２対象の平均（ＳＤ）血漿１−ＤＮＪ−ＨＣＬ濃度−時間プロファイルを示す。

【図6】ウエスタンブロットにより測定した、処置によるコホート１及び２対象の総血漿ｒｈＧＡＡタンパク質濃度プロファイルを示す。

【図7】安全性データの一部として収集された、コホート１及び２対象の試験日による尿Ｈｅｘ４レベルを示す。

【図8】安全性データの一部として収集された、コホート１及び２対象の試験日による血清ＣＰＫレベルを示す。

【図9A】コホート３対象に関する、処置期間による複合血漿ｒｈＧＡＡ活性を示す。

【図9B】コホート３対象に関する、処置期間による複合血漿ｒｈＧＡＡ活性を示す。

【図10A】コホート１に関するＡＴ２２２０−０１０平均（ＳＤ）血漿ｒｈＧＡＡ活性を示す。

【図10B】コホート２に関するＡＴ２２２０−０１０平均（ＳＤ）血漿ｒｈＧＡＡ活性を示す。

【図10C】コホート３に関するＡＴ２２２０−０１０平均（ＳＤ）血漿ｒｈＧＡＡ活性を示す。

【図10D】コホート４に関するＡＴ２２２０−０１０平均（ＳＤ）血漿ｒｈＧＡＡ活性を示す。

【図11】コホート３対象に関する、血漿中のｒｈＧＡＡ活性に関するＡＵＣスティックプロットを示す。

【図12A】コホート３対象に関する、期間１及び２の３日目に採取された生検、及び任意選択的なフォローアップにおけるベースライン生検からの筋肉中ｒｈＧＡＡ活性を示す。

【図12B】コホート３対象に関する、期間１及び２の７日目に採取された生検、及び任意選択的なフォローアップにおけるベースライン生検からの筋肉中ｒｈＧＡＡ活性を示す。

【図13】コホート１〜３対象に関する、処置期間による複合筋肉ｒｈＧＡＡ活性の概略を示す。

【図14A】ＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）中のｒｈＧＡＡ活性：コホート３対象に関する、処置による３日目の複合を示す。

【図14B】ＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）中のｒｈＧＡＡ活性：コホート３対象に関する、処置による３日目の複合を示す。

【図15A】ＰＢＭＣ中のｒｈＧＡＡ活性：コホート３対象に関する、処置による７日目の複合を示す。

【図15B】ＰＢＭＣ中のｒｈＧＡＡ活性：コホート３対象に関する、処置による７日目の複合を示す。

【図16A】コホート３対象に関する、血漿ＡＴ２２２０濃度の複合及びセミログプロットを示す。

【図16B】コホート３対象に関する、血漿ＡＴ２２２０濃度の複合及びセミログプロットを示す。

【図17A】コホート４対象に関する、処置期間による複合血漿ｒｈＧＡＡ活性を示す。

【図17B】コホート４対象に関する、処置期間による複合血漿ｒｈＧＡＡ活性を示す。

【図18】コホート４対象に関する、血漿中のｒｈＧＡＡ活性に関するＡＵＣスティックプロットを示す。

【図19】コホート１〜４に関する、処置期間による複合筋肉ｒｈＧＡＡ活性の概略を示す。

【図20】ＥＲＴの前（上部）及び後（下部）の大腿筋肉ＭＲＩを示す。１年後に、大腿前部内の筋量が９．８％減少し、大腿後部内の筋量が１１％減少し、筋肉中脂肪蓄積が＋８．９％増大した（６．６％皮下脂肪）。

【図21】コホート１〜４に関する、血漿曲線下面積（ＡＵＣ）におけるｒｈＧＡＡ酵素活性の概略を示す。

【図22】コホート２〜４に関する、３日目の筋肉中のＧＡＡ酵素活性の概略を示す。

【図23】Ｎ−ブチル−ＤＮＪ（ＡＴ２２２１）の骨格筋分布及び半減期が、１−ＤＮＪ（ＡＴ２２２０）と同様であることを示す；Ｃｍａｘ ＡＴ２２２０：１２０ｕＭ；ＡＴ２２２１：１４０ｕＭ。８週齢の野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス、１００ｍｇ／ｋｇの１−ＤＮＪ又はＮ−ブチル−ＤＮＪの経口用量を投与された場合。血漿及び組織サンプルを投与の０．５、２、４、２４、４８、７２、９６、１２０、１４４及び１６８時間後に採取し、薬物の存在を分析した。血漿中の薬物の濃度を、ｎｇ／ｍｌとして表す。組織サンプル中の薬物の濃度を、ｎｇ／ｇとして表す。

【図23-2】Ｎ−ブチル−ＤＮＪ（ＡＴ２２２１）の骨格筋分布及び半減期が、１−ＤＮＪ（ＡＴ２２２０）と同様であることを示す；Ｃｍａｘ ＡＴ２２２０：１２０ｕＭ；ＡＴ２２２１：１４０ｕＭ。８週齢の野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス、１００ｍｇ／ｋｇの１−ＤＮＪ又はＮ−ブチル−ＤＮＪの経口用量を投与された場合。血漿及び組織サンプルを投与の０．５、２、４、２４、４８、７２、９６、１２０、１４４及び１６８時間後に採取し、薬物の存在を分析した。血漿中の薬物の濃度を、ｎｇ／ｍｌとして表す。組織サンプル中の薬物の濃度を、ｎｇ／ｇとして表す。

【図24】Ｎ−ブチル−ＤＮＪ（ＡＴ２２２１）及び１−ＤＮＪ（ＡＴ２２２０）がｒｈＧＡＡの薬物動態（Ｐｈｒａｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ）に対して同様の効果を有することを示す。８週齢のＧＡＡＫＯマウスに、ｒｈＧＡＡ（１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）を投与した。経口ＡＴ２２２０又はＡＴ２２２１（１００ｍｇ／ｋｇ）を、ＧＡＡ（Ｍｙｏｚｙｍｅ）の３０分前に投与した；血漿サンプルをＧＡＡの投与前、投与の０．０８、０．２５、０．５０、０．７５、１、２、４、８及び２４時間後に採取し、酵素活性を決定した。ＡＴ２２２０及びＡＴ２２２１は、ｒｈＧＡＡの循環半減期を少なくとも約２倍増大させた。

【図25】ＧＡＡのｉ．ｖ．投与から２、８及び２４時間後の血漿中の組み換えＧＡＡのウエスタンブロットである。

【図26】ＤＮＪ又はＮＢ−ＤＮＪとｒｈＧＡＡとの共投与が、グリコーゲン低下に対して同様の効果を有することを示す。１２週齢のＧＡＡＫＯマウスに、組み換えヒトＧＡＡ（Ｍｙｏｚｙｍｅ）２０ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．を１週間置きに８週間投与した。ＡＴ２２２０又はＡＴ２２２１（３０ｍｇ／ｋｇ）の経口用量を、ｒｈＧＡＡ Ｍｙｏｚｙｍｅの３０分前に投与した。ｒｈＧＡＡの最終用量から２１日後に組織を収集し、グリコーゲン（ＧＡＡ基質）のレベルを測定した。ｎ＝５−マウス／グループ；^＊ｐ＜０．０５対未処置ｔ検定；＃ｐ＜０．０５対Ｍｙｏｚｙｍｅ単独ｔ検定；点線は、野生型グリコーゲンレベルを示す。３０ｍｇ／ｋｇ ＡＴ２２２０又はＡＴ２２２１の投与後のＣｍａｘ〜４０μＭ；ヒトにおけるおよそ６００ｍｇと等価。

【図26-2】ＤＮＪ又はＮＢ−ＤＮＪとｒｈＧＡＡとの共投与が、グリコーゲン低下に対して同様の効果を有することを示す。１２週齢のＧＡＡＫＯマウスに、組み換えヒトＧＡＡ（Ｍｙｏｚｙｍｅ）２０ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．を１週間置きに８週間投与した。ＡＴ２２２０又はＡＴ２２２１（３０ｍｇ／ｋｇ）の経口用量を、ｒｈＧＡＡ Ｍｙｏｚｙｍｅの３０分前に投与した。ｒｈＧＡＡの最終用量から２１日後に組織を収集し、グリコーゲン（ＧＡＡ基質）のレベルを測定した。ｎ＝５−マウス／グループ；^＊ｐ＜０．０５対未処置ｔ検定；＃ｐ＜０．０５対Ｍｙｏｚｙｍｅ単独ｔ検定；点線は、野生型グリコーゲンレベルを示す。３０ｍｇ／ｋｇ ＡＴ２２２０又はＡＴ２２２１の投与後のＣｍａｘ〜４０μＭ；ヒトにおけるおよそ６００ｍｇと等価。

【図26-3】ＤＮＪ又はＮＢ−ＤＮＪとｒｈＧＡＡとの共投与が、グリコーゲン低下に対して同様の効果を有することを示す。１２週齢のＧＡＡＫＯマウスに、組み換えヒトＧＡＡ（Ｍｙｏｚｙｍｅ）２０ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．を１週間置きに８週間投与した。ＡＴ２２２０又はＡＴ２２２１（３０ｍｇ／ｋｇ）の経口用量を、ｒｈＧＡＡ Ｍｙｏｚｙｍｅの３０分前に投与した。ｒｈＧＡＡの最終用量から２１日後に組織を収集し、グリコーゲン（ＧＡＡ基質）のレベルを測定した。ｎ＝５−マウス／グループ；^＊ｐ＜０．０５対未処置ｔ検定；＃ｐ＜０．０５対Ｍｙｏｚｙｍｅ単独ｔ検定；点線は、野生型グリコーゲンレベルを示す。３０ｍｇ／ｋｇ ＡＴ２２２０又はＡＴ２２２１の投与後のＣｍａｘ〜４０μＭ；ヒトにおけるおよそ６００ｍｇと等価。

【発明を実施するための形態】

【0027】

本願は、ポンペ病の処置のための１−デオキシノジリマイシン及び酵素代替療法の使用に関する投与計画及び投与スケジュールを提供する。

【0028】

定義
酸マルターゼ欠損、ＩＩ型グリコーゲン貯蔵疾患（ＧＳＤＩＩ）及びＩＩ型糖原病とも称される「ポンペ病」は、グリコーゲンを代謝するＧＡＡ遺伝子内の突然変異により特徴付けられる遺伝的リソソーム貯蔵疾患である。本明細書で使用するように、この用語は、疾病の乳児、若年及び成人発症型を含む。

【0029】

「酸α−グルコシダーゼ」（ＧＡＡ）は、グリコーゲン、マルトース及びイソマルトースに存在するα−１，４−及びα−１，６−結合−Ｄ−グルコースポリマーを加水分解するリソソーム酵素である。代替的な名称は、以下の通りである：グルコアミラーゼ；１，４−α−Ｄ−グルカングルコハイドロラーゼ；アミログルコシダーゼ；γ−アミラーゼ；及びエキソ−１，４−α−グルコシダーゼ及びγ−アミラーゼ。

【0030】

用語「ｒｈＧＡＡ」は、ヒト組み換え酸α−グルコシダーゼを指す。ｒｈＧＡＡの非限定的な例としては、アルグルコシダーゼα、並びにＬｅｂｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．に付与された米国特許第７，５６０，４２４号明細書及び米国特許第７，３９６，８１１号明細書、Ｌｅｂｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．に付与された米国特許出願公開第２００９／０２０３５７５号明細書、米国特許出願公開第２００９／００２９４６７号明細書、米国特許出願公開第２００８／０２９９６４０号明細書、米国特許出願公開第２００８／０２４１１１８号明細書、米国特許出願公開第２００６／０１２１０１８号明細書及び米国特許出願公開第２００５／０２４４４００号明細書、米国特許第７，４２３，１３５号明細書、米国特許第６，５３４，３００号明細書及び米国特許第６，５３７，７８５号明細書；国際公開第２００５／０７７０９３号パンフレット、並びに米国特許出願公開第２００７／０２８０９２５号明細書及び米国特許出願公開２００４／００２９７７９号明細書に記載されているものが挙げられる。これらの参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0031】

用語「ＡＵＣ」は、一定時間に亘る、所定の薬物に対する身体の総暴露を評価する数学的計算を表す。投与後の血液中濃度の様子をプロットするグラフにおいて、薬物濃度変数はｙ軸上に存在し、時間はｘ軸上に存在する。指定された時間間隔における薬物濃度曲線とｘ軸との間の面積は、ＡＵＣである。ＡＵＣは、投与計画用のガイドとして使用され、身体内の異なる薬物のアベイラビリティを比較するのに使用される。

【0032】

用語「Ｃ_ｍａｘ」は、投与後に達成される最大血漿濃度を表す。

【0033】

用語「治療的有効用量」及び「有効量」は、有益な治療的応答をもたらすのに十分な、特定の医薬化合物又は組成物の量を指す。有益な治療的応答は、使用者（例えば臨床医）が、前述の症状及び代理臨床マーカーを含む、治療に対する効果的な応答として認識する任意の応答であり得る。それ故、治療的応答は、概して、疾病又は疾患、例えばポンペ病に関して当技術分野にて既知のもの等の、疾病又は疾患、例えばポンペ病の１つ以上の症状の寛解である。

【0034】

ポンペ病の症状又は代理臨床マーカーの非限定的な例としては：ＧＡＡ組織活性の低下；心筋症；心拡大；特に体幹又は下肢における進行性の筋力低下；重度の低血圧症；大舌症（及びいくつかの場合、舌の突出）；嚥下、吸引及び／又は摂食の困難さ；呼吸不全；肝腫大（中等度）；顔面筋の弛緩；反射消失；運動不耐性；労作性呼吸困難；起座呼吸；睡眠時無呼吸症；起床時の頭痛；傾眠；脊柱前湾症及び／又は脊柱側弯症；深部腱反射の低下；腰痛；並びに運動発達マイルストーンの達成障害が挙げられる。

【0035】

「薬学的に許容され得る」というフレーズは、生理学的に容認でき、典型的にはヒトに投与された際に望ましくない反応を生じない分子存在物及び組成物を指す。好ましくは、本明細書で使用される用語「薬学的に許容され得る」は、動物、及びより詳細にはヒトでの使用のために、連邦若しくは州政府の規制当局により認可され、又は米国薬局方（Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ）若しくは他の一般に認識されている薬局方に列挙されていることを意味する。用語「担体」は、希釈剤、補助剤、賦形剤又はビヒクルを指し、これらと共に化合物が投与される。それらの医薬担体は、水及び油等の無菌液体であってもよい。特に注射用溶液のための担体として、水又は水溶液生理食塩水溶液並びにデキストロース及びグリセロール水溶液が使用されることが好ましい。好適な薬剤の担体は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」，第１８版又は他の版に記載されている。

【0036】

「１−デオキシノジリマイシン」（ＤＮＪ）は、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−２−ヒドロキシメチル−ピペリジン−３，４，５−トリオールを指す。本明細書で使用するように、本明細書全体における「１−デオキシノジリマイシン」又は「ＤＮＪ」に対する参照は、遊離塩基、及びその薬学的に許容され得る任意の塩形態の両方を含む。ＤＮＪの塩酸塩は、「１−デオキシノジリマイシン塩酸塩」又は「ＤＮＪ ＨＣｌ」として既知である。

【0037】

「１−デオキシノジリマイシン誘導体」又は「１−ＤＮＪ誘導体」又は「ＤＮＪ誘導体」は、下記の構造：

（式中、Ｒ_１は、Ｈ、又は１〜１２個の炭素原子を含む直鎖状若しくは分枝状アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシアルキル若しくはアミノアルキル、又は５〜１２個の環原子を含む、アリール、アルキルアリール、ヘテロアリール若しくはヘテロアリールアルキルであり、ここでＲ_１は、任意選択で１つ以上の−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−Ｃｌ、−Ｆ、−ＣＦ_３、−ＯＣＦ_３、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ−（アルキル）_２で置換され；
Ｒ_２は、Ｈ；１〜９個の炭素原子を含む直鎖状若しくは分枝状アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキルアリール若しくはアルコキシアルキル、又は、５〜１２個の炭素原子を含むアリールであり、ここでＲ_２は、任意選択でＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＣＦ_３、−ＯＣＦ_３又は複素環で置換され；
Ｒ_１及びＲ_２の少なくとも一方はＨではない）を有する化合物、又はその薬学的に許容され得る塩を指す。

【0038】

いくつかの実施形態において、「１−デオキシノジリマイシン誘導体」又は「１−ＤＮＪ誘導体」又は「ＤＮＪ誘導体」は、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−１−ブチル−２−（ヒドロキシメチル）ピペリジン−３，４，５−トリオール、即ちミグルスタット、即ちＮ−ブチル−ＤＮＪを指す。

【0039】

用語「補助剤」又は「補助剤療法」は、主要物質、処置又は手順の有効性、安全性を増大させ、又は別様に性能を促進若しくは向上させるのに使用される、任意の追加の物質、処置又は手順を指す。

【0040】

用語「併用療法」は、個々に実行された場合の各治療法の効果と比較して、結果を向上させる任意の治療法を指す。併用療法における個々の治療法は、同時に又は連続して投与されてもよい。

【0041】

向上には、治療法が単独で実行された際の治療法により達成される結果と比較して有利な結果をもたらし得る、様々な治療法の効果の任意の改善が挙げられる。向上された効果、及び向上された効果の決定は、非限定的に：一時的パラメーター（例えば、処置の長さ、回復時間、処置の長期間効果又は処置の可逆性）；生物学的パラメーター（例えば、細胞数、細胞容積、細胞組成、組織容積、組織サイズ、組織組成）；空間的パラメーター（例えば、組織強度、組織サイズ又は組織到達性）及び生理学的パラメーター（例えば、身体の輪郭、疼痛、不快感、回復時間又は可視マーカー）等の様々なパラメーターにより測定することができる。向上された効果は相乗的向上を含んでもよく、ここで向上された効果は、各治療法がそれ自体で実行された際の、各治療法の相加効果を超える。向上された効果は相加的向上を含んでもよく、ここで向上された効果は、各治療法がそれ自体で実行された際の、各治療法の相加効果と実質的に等しい。向上された効果は相乗効果未満を含んでもよく、ここで向上された効果は、各治療法がそれ自体で実行された際の、各治療法の相加効果よりも低いが、各治療法がそれ自体で実行された際の、各治療法の効果よりも高い。

【0042】

用語「約」及び「およそ」は、概して、測定の性質又は精度に鑑みて、測定された量に関して容認可能な誤差の程度を意味するものとする。一般に、誤差の例示的な程度は、所定の値、又は値の範囲の２０パーセント（％）以内、好ましくは１０％以内、より好ましくは５％以内である。代替的に、及び特に、生物系において、用語「約」及び「およそ」は、好ましくは所定の値の５倍以内、より好ましくは２倍以内の、大きさのオーダー以内の平均値であり得る。本明細書で提供する数量は、特に言及しない限り近似値である。

【0043】

処方及び投与
１−デオキシノジリマイシンは、遊離塩基、又は１−デオキシノジリマイシン塩酸塩を含むその薬理学的に許容され得る塩形態で投与されてもよい。１−デオキシノジリマイシンは、例えば錠剤、カプセル剤、若しくは液剤の形態での経口、又は注射用の無菌水溶液を含む、任意の投与経路に好適な形態で投与されてもよい。１−デオキシノジリマイシンは、任意選択で急速−、遅延−、変更−、持続−、パルス−又は制御−放出用途のために矯味矯臭剤及び着色剤と伴に錠剤、カプセル剤、オビュール剤、エリキシル剤、液剤若しくは懸濁剤、ゲル、シロップ、口腔洗浄剤、又は水若しくは他の好適なビヒクルにより使用前に構成される乾燥粉末の形態で経口投与されてもよい。錠剤、カプセル剤、ドロップ剤、トローチ剤、丸剤、ボーラス剤、散剤、ペースト剤、顆粒、ブレット剤（ｂｕｌｌｅｔ）、又はプレミックス製剤等の固体組成物も使用し得る。経口使用のための固体及び液体組成物は、当技術分野にて周知の方法に従って調製されてもよい。それらの組成物は、固体又は液体形態であってもよい１種以上の薬学的に許容され得る担体及び賦形剤も含み得る。化合物が経口投与用に処方される場合、錠剤又はカプセル剤は、結合剤（例えば、アルファ化デンプン、ポリビニルピロリドン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、乳糖、微結晶セルロース又はリン酸水素カルシウム）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク又はシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプン又はグリコール酸ナトリウムデンプン）；又は湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）等の、薬学的に許容され得る賦形剤と伴に、従来の手段により調製されてもよい。錠剤は、当技術分野にて周知の方法により被覆されてもよい。

【0044】

薬学的に許容され得る賦形剤はまた、非限定的に、微結晶セルロース、乳糖、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸水素カルシウム及びグリシン、デンプン（好ましくはトウモロコシ、ジャガイモ又はタピオカデンプン）、グリコール酸ナトリウムデンプン、クロスカルメロースナトリウム及び所定の複合ケイ酸塩等の崩壊剤、並びにポリビニルピロリドン（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｏｌｉｄｏｎｅ）、ヒドロキシプロピルエチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ショ糖、ゼラチン及びアカシア等の造粒結合剤を含む。加えて、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリル及びタルク等の平滑剤も含み得る。

【0045】

特定の実施形態において、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩は、ステアリン酸マグネシウム及びアルファ化デンプンと伴に、白色の硬ゼラチンカプセルに処方される。

【0046】

酵素代替療法
ポンペ病に現在認可されている処置は、酵素代替療法である。２つのアルグルコシダーゼα製品が、現在、ポンペ病の処置用に入手可能である：Ｍｙｏｚｙｍｅ（登録商標）（Ｇｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）及びＬｕｍｉｚｙｍｅ（登録商標）（Ｇｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）。ＥＲＴのこれらの２つの形態は、静脈内に投与される酵素の組み換え形態により、患者の不十分なＧＡＡ活性を補償することが意図される。ＥＲＴは多数の状況にて有効であるが、ｒｈＧＡＡは、短い循環半減期、低い組織取り込みを有し、耐容性及び有効性に悪影響を与える免疫応答を引き出す場合がある。

【0047】

アルグルコシダーゼαの推奨投与量は、静脈内注入としての２週間毎の２０ｍｇ／ｋｇ体重の注入である。この注入は、４時間の間に亘って投与される。

【0048】

１−デオキシノジリマイシン塩酸塩は、インビトロ及びインビボでｒｈＧＡＡを安定化させる。ｒｈＧＡＡに対する１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の結合により、熱変性及び酵素活性により測定して、中性ｐＨ緩衝剤中での酵素の物理的安定性の有意な濃度依存性増大がもたらされる。加えて、ヒト血液中でのｒｈＧＡＡの安定性は、活性により測定して、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩と伴にインキュベートされた際、有意に増大する（半減期は、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の不在下でおよそ６時間である一方、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の存在下では、２４時間の間に亘って酵素活性の測定可能な損失が存在しなかった）。

【0049】

ラットでは、３又は３０ｍｇ／ｋｇの１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の単一の経口投与から３０分後の、１０ｍｇ／ｋｇ ｒｈＧＡＡのボーラス静脈内投与が、活性及びウエスタンブロットにより測定して、各々１．５倍及び２．１倍のｒｈＧＡＡの循環半減期の増大をもたらした。ｒｈＧＡＡ（１０ｍｇ／ｋｇ）の１時間静脈内注入から３０分後に、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩（３又は３０ｍｇ／ｋｇ ＰＯ）がラットに投与された際、ｒｈＧＡＡの循環半減期に関して同様の効果が見られた。重要なことには、これらの用量の１−デオキシノジリマイシン塩酸塩は、各々５０又は６００ｍｇの１−デオキシノジリマイシン塩酸塩のヒトに対する経口投与後に達成され得るものと同等の、ラットにおける血漿暴露レベルをもたらした。

【0050】

ＧＡＡノックアウトマウスでは、ｒｈＧＡＡのボーラス静脈内投与（１０ｍｇ／ｋｇ、週に１回、１、２又は３週間迄）の３０分前及び８、１６及び２４時間後の１０、１００、又は１０００ｍｇ／ｋｇ１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の経口投与により、投与から２、４及び７日後の活性及びウエスタンブロットにより測定して、組織ＧＡＡレベルの有意な及び用量依存的な増大がもたらされた。１０ｍｇ／ｋｇの１−デオキシノジリマイシン塩酸塩（約２００ｍｇの投与後にヒト内で見られるものと同等の、マウス内での暴露を生じる）の共投与により、ｒｈＧＡＡ単独の投与後に見られるものと比較して、心臓、横隔膜、四頭筋、腓腹筋及び三頭筋内で、各々２．５倍、２．３倍、２．２倍、４．０倍及び１．７倍迄、より高い最大ＧＡＡ増大がもたらされた。ｒｈＧＡＡ（１０ｍｇ／ｋｇ）の単一のボーラス静脈内投与の３０分前の３、３０又は１００ｍｇ／ｋｇ １−デオキシノジリマイシン塩酸塩の単一の投与後に、同様の結果が野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいても見られた。重要なことには、３、１０及び３０ｍｇ／ｋｇ用量の１−デオキシノジリマイシン塩酸塩は、各々５０、１５０又は６００ｍｇの１−デオキシノジリマイシン塩酸塩のヒトに対する経口投与後に達成され得るものと同等の、マウスにおける血漿暴露レベルをもたらした。

【0051】

ｒｈＧＡＡ組織取り込みに対する１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の単一の経口投与の結果を、ＧＡＡノックアウトマウスにて試験した。１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の単一の経口投与（３０ｍｇ／ｋｇを１週間置きに８週間；合計４回の投与）から３０分後のｒｈＧＡＡ（２０ｍｇ／ｋｇ）のボーラス静脈内投与により、最終注入から７日後に測定して、ＧＡＡ活性の有意な増大がもたらされた。ＧＡＡ活性の増大は、各々心臓、横隔膜、腓腹筋、四頭筋、三頭筋及び舌内で、ｒｈＧＡＡ単独の投与と比較して、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩共投与後におよそ２．１倍、２．０倍、１．５倍、１．７倍、１．６倍及び２．０倍、より高かった。これらのデータは、ｒｈＧＡＡの投与の前の、１週間置きに８週間の３０ｍｇ／ｋｇの１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の投与は、ｒｈＧＡＡ投与単独後に見られたものと比較して、ＧＡＡノックアウトマウスにおいて有意により高いｒｈＧＡＡ組織取り込みを生じることを示している。

【0052】

ＧＡＡノックアウトマウスにおいて反復ｒｈＧＡＡ投与試験を行って、組織グリコーゲンレベルに対する効果を評価した。１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の単一の経口投与（１０又は３０ｍｇ／ｋｇを１週間置きに１回、８週間から３０分後のｒｈＧＡＡ（２０ｍｇ／ｋｇ）のボーラス静脈内投与により、最終注入から２１日後に測定して、組織グリコーゲンレベルの用量依存的低下がもたらされた。グリコーゲン低下は、各々心臓、横隔膜、四頭筋、腓腹筋、三頭筋、ヒラメ筋、二頭筋及び舌内で、ｒｈＧＡＡ単独と比較して、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩共投与後におよそ２．３倍、１．６倍、２．６倍、２．７倍、２．２倍、１．２倍、１．４倍及び１．３倍、より高かった。１−デオキシノジリマイシン塩酸塩（３０ｍｇ／ｋｇ）の４回の隔週経口投与と、その３０分後のｒｈＧＡＡ（４０ｍｇ／ｋｇ）のボーラス静脈内投与後に、組織グリコーゲンレベルに対して同様の効果が見られた。

【実施例】

【0053】

実施例１：１−デオキシノジリマイシン塩酸塩及びアルグルコシダーゼαを使用した、ポンペ病処置のための投与計画
本試験の目的の１つは、ポンペ病を有する患者における、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩（ＡＴ２２２０とも称される）及びアルグルコシダーゼαの共投与を含む投与計画の安全性、有効性及び薬物動態を評価することである。

【0054】

本試験の別の目的は、ＧＡＡ活性に対する様々な用量の１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の効果を評価することである。これは、投与から３及び／又は７日後にＧＡＡ活性及びタンパク質レベルを測定して、アルグルコシダーゼα単独と、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩と組み合わせたアルグルコシダーゼαとを投与した後の筋肉中のＧＡＡ活性を測定することによって評価される。

【0055】

アルグルコシダーゼαの注入の開始前に、ＷＢＣ（ＰＢＭＣ）ＧＡＡ活性及びタンパク質レベル、並びに抗−ｒｈＧＡＡ抗体価を測定する。ＧＡＡ酵素活性の血漿、ＷＢＣ及び筋肉測定の全ては、Ｃｏｎ Ａ捕捉を有し及び有さずに行われ、タンパク質レベルはウエスタンブロットにより決定される。

【0056】

試験設計
これは１−デオキシノジリマイシン塩酸塩及びアルグルコシダーゼαの共投与の安全性及び有効性を評価するための第二相臨床、単一用量、非盲検試験である。この試験は、試験エントリー前に少なくとも１ヶ月、アルグルコシダーゼαの安定用量を受容していた１８〜６５歳の男性及び女性対象において行われる。およそ１６人の対象が登録する。

【0057】

この試験は、アルグルコシダーゼαの注入開始の１時間前に投与された、漸増用量（５０、１００、２５０及び６００ｍｇ）の１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の、ＧＡＡの薬物動態に対する安全性及び効果を評価するものである。４つの１−デオキシノジリマイシン塩酸塩用量レベルのそれぞれに、４人の対象が登録する。４人の対象からなる各コホートは、アルグルコシダーゼα単独の単一の静脈内注入を受容し、２〜４週間後に、アルグルコシダーゼαの静脈内注入の開始の１時間前に投与される単一の経口用量の１−デオキシノジリマイシン塩酸塩を受容する。

【0058】

１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の次の用量レベルへの用量増大は、以前の用量レベルグループからの安全性及び耐容性データを再検討した後に進行され得る。再検討された安全性データは、有害事象（注入反応を含む）、臨床検査室試験（クレアチンキナーゼ、ＬＤＨ（ＬＤＨ−５）、アルカリホスファターゼ、ＡＳＴ、ＡＬＴを含む）、Ｈｅｘ４、１２誘導ＥＣＧ、理学的検査、筋力試験及び生命徴候を含む。

【0059】

各対象は、期間１においてアルグルコシダーゼα単独を静脈内注入として受容し、期間２においてアルグルコシダーゼαの静脈内注入の１時間前に、単一用量の１−デオキシノジリマイシン塩酸塩を受容する。期間１及び２に投与されるアルグルコシダーゼαの用量は、同一である。

【0060】

各コホートは、４人の対象からなる。対象は、期間２における以下の用量レベルの１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の４つの投与コホートの１つに連続的に登録される。

【0061】

コホート１：１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の単一の５０ｍｇ経口用量；
コホート２：１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の単一の１００ｍｇ経口用量；
コホート３：１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の単一の２５０ｍｇ経口用量；
コホート４：１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の単一の６００ｍｇ経口用量。

【0062】

期間１では、対象の次の予定されたアルグルコシダーゼα注入の前に、対象に以下の評価を行う：有害事象評価、併用薬物、理学的検査、体重、生命徴候、１２誘導ＥＣＧ、臨床検査室試験（クレアチン分析、ＬＤＨ（ＬＤＨ−５）、アルカリホスファターゼ、ＡＳＴ、ＡＬＴを含む）、Ｈｅｘ４及び筋力試験。

【0063】

１日目の朝、対象の現在のアルグルコシダーゼα用量を、注入ポンプを使用して点滴として投与する。注入速度（注入中の任意の速度変化）、注入継続時間及び投与されるアルグルコシダーゼαの用量は、期間１及び２で同一である必要がある。薬物動態分析用の血液サンプルを、アルグルコシダーゼα注入の開始の直前と、アルグルコシダーゼα注入の開始後の２４時間に亘って収集する。表２に纏めた時間に、収集した血液サンプルから血漿及びＷＢＣ ＧＡＡ酵素活性及び血漿抗−ｒｈＧＡＡ抗体価を決定する。アルグルコシダーゼα注入の終了時、注入後血液サンプルの収集の直後に、１２誘導ＥＣＧを行う。

【0064】

最後の薬物動態サンプルの収集後、以下の評価を行う：有害事象評価（注入反応を含む）、併用薬物、生命徴候、１２誘導ＥＣＧ、臨床検査室試験（クレアチンキナーゼ、ＬＤＨ（ＬＤＨ−５）、アルカリホスファターゼ、ＡＳＴ、ＡＬＴを含む）、Ｈｅｘ４及び筋力試験。

【0065】

７日目に、対象に以下の評価を行う：有害事象評価、併用薬物、理学的検査、生命徴候、臨床検査室試験（クレアチンキナーゼ、ＬＤＨ（ＬＤＨ−５）、アルカリホスファターゼ、ＡＳＴ、ＡＬＴを含む）、Ｈｅｘ４及び筋力試験。ＧＡＡ酵素活性が決定される筋生検を収集する。血漿及びＷＢＣ ＧＡＡ酵素レベル決定用の血液サンプルも収集する。

【0066】

ＧＡＡ酵素活性及び１−デオキシノジリマイシン塩酸塩レベルが決定される筋生検も３日目に収集する。

【0067】

期間２では、期間１におけるアルグルコシダーゼα注入の投与からおよそ２週間後、対象の次の予定されたアルグルコシダーゼα注入の前に、対象に以下の評価を行う：有害事象評価、併用薬物、理学的検査、体重、生命徴候、１２誘導ＥＣＧ、臨床検査室試験（クレアチン分析、ＬＤＨ（ＬＤＨ−５）、アルカリホスファターゼ、ＡＳＴ、ＡＬＴを含む）、Ｈｅｘ４及び筋力試験。

【0068】

１日目の朝、予定されたアルグルコシダーゼα注入の１時間前に、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の経口用量を投与する。対象は、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩投与前の少なくとも２時間と、投与後の少なくとも２時間、絶食する。注入速度（注入中の任意の速度変化）、注入継続時間及び投与されるアルグルコシダーゼαの用量は、期間１及び２で同一である必要がある。

【0069】

１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の投与前と、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の投与から１時間後（即ち、アルグルコシダーゼα注入の開始の直前）及びアルグルコシダーゼα注入の開始後の２４時間に亘って、薬物動態分析用の血液サンプルを収集する。表２に纏めた時間において、血漿及びＷＢＣ ＧＡＡ酵素活性、血漿１−デオキシノジリマイシン塩酸塩濃度及び血漿抗−ｒｈＧＡＡ抗体価を収集血液サンプルから決定する。アルグルコシダーゼα注入の終了時、注入後血液サンプルの収集の直後に、１２誘導ＥＣＧを行う。

【0070】

最後の薬物動態サンプルの収集後、以下の評価を行う：有害事象評価（注入反応を含む）、併用薬物、生命徴候、１２誘導ＥＣＧ、臨床検査室試験（クレアチンキナーゼ、ＬＤＨ（ＬＤＨ−５）、アルカリホスファターゼ、ＡＳＴ、ＡＬＴを含む）、Ｈｅｘ４及び筋力試験。

【0071】

７日目に、対象に以下の評価を行う：有害事象評価、併用薬物、理学的検査、生命徴候、臨床検査室試験（クレアチンキナーゼ、ＬＤＨ（ＬＤＨ−５）、アルカリホスファターゼ、ＡＳＴ、ＡＬＴを含む）、Ｈｅｘ４及び筋力試験。ＧＡＡ酵素活性及び１−デオキシノジリマイシン塩酸塩レベルが決定される筋生検を収集する。血漿及びＷＢＣ ＧＡＡ酵素レベル決定用の血液サンプルも収集する。

【0072】

ＧＡＡ酵素活性及び１−デオキシノジリマイシン塩酸塩レベルが決定される筋生検も３日目に収集する。

【0073】

期間２における１−デオキシノジリマイシン塩酸塩及びアルグルコシダーゼαの投与の２６〜３０日後のフォローアップにて、対象に以下の評価を行う：有害事象評価、併用薬物、理学的検査、生命徴候、１２誘導ＥＣＧ、臨床検査室試験（クレアチンキナーゼ、ＬＤＨ（ＬＤＨ−５）、アルカリホスファターゼ、ＡＳＴ、ＡＬＴを含む）、Ｈｅｘ４、筋力試験及び抗−ｒｈＧＡＡ抗体価。

【0074】

評価及び試料収集スケジュール
表１は、期間１及び２に関する評価スケジュールを示す。１−デオキシノジリマイシン塩酸塩とアルグルコシダーゼαとの共投与に関する試料収集時間及び分析物を、表２に示す。

【0075】

【0076】

【0077】

１−デオキシノジリマイシン塩酸塩及びＧＡＡの血漿薬物動態
血液サンプル中の１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の濃度を、有効ＬＣ−ＭＳ／ＭＳアッセイを用いて血漿中で測定する。Ｃｏｎ Ａを有し及び有さずに、４−ＭＵＧを使用して酵素活性を測定する有効アッセイにより、血漿中のＧＡＡ活性を決定する。ＧＡＡタンパク質レベルは、抗−ヒトＧＡＡ抗体を用いたウエスタンブロットにより測定する。

【0078】

筋肉中のＧＡＡ酵素活性及び１−デオキシノジリマイシン塩酸塩レベル
ＧＡＡ酵素活性を筋生検サンプル内で試験する。一片の筋肉組織を、表１に記載したように除去する。Ｃｏｎ Ａを有し及び有さずに、４−ＭＵＧを使用して酵素活性を測定する有効アッセイにより、筋肉中のＧＡＡ活性を決定する。ＧＡＡタンパク質レベルは、抗−ヒトＧＡＡ抗体を用いたウエスタンブロットにより測定する。期間２にて収集した筋肉サンプル中の１−デオキシノジリマイシン塩酸塩濃度を、有効ＬＣ−ＭＳ／ＭＳアッセイを用いて決定する。

【0079】

ＷＢＣ（ＰＢＭＣ）ＧＡＡ活
Ｃｏｎ Ａを有し及び有さずに、４−ＭＵＧを使用して酵素活性を測定する有効アッセイにより、血液サンプルにおいてＷＢＣ中のＧＡＡ活性を決定する。ＧＡＡタンパク質レベルは、抗−ヒトＧＡＡ抗体を用いたウエスタンブロットにより測定する。

【0080】

抗（Ａｎｔ）−ｒｈＧＡＡ抗体価
血液サンプルを収集し、表２に記載したサンプル中の抗−ｒｈＧＡＡ抗体価を測定する。

【0081】

安全性パラメーター
理学的検査所見、生命徴候、ある時間に亘るＥＣＧ変化、臨床検査室試験（ｃｌｉｎｉｃａｌ ｌａｂｓ）、Ｈｅｘ４及び有害事象における変化を再検討することにより、安全性パラメーターを評価する。

【0082】

生命徴候、体重及び身長
スクリーニング及びチェックインにおいて体温及び呼吸を測定する。安全性を監視するために、投与前、並びにアルグルコシダーゼα（期間１）又は１−デオキシノジリマイシン塩酸塩（期間２）の投与からおよそ１、２、３、４及び６時間後、並びに表１に記載した日に、体温、呼吸、座った血圧及び心拍数を測定する。生命徴候監視の時間が採血と一致した場合、採血が優先し、それに従って生命徴候を調整する。

【0083】

ＥＣＧ監視
標準的な１２誘導ＥＣＧによりＥＣＧ監視を行う。

【0084】

臨床検査室試験
臨床検査室試験用の血液サンプル（血液学、血液生化学検査）及び検尿を表１のスケジュールに従って収集する。
・血液学的試験は、鑑別を伴う総ヘモグロビン、ヘマトクリット、赤血球、血小板及び白血球数を含む。
・凝固（スクリーニングのみ）は、ＩＮＲ及びａＰＴＴを含む。
・血液生化学検査は、ＡＳＴ、ＡＬＴ、アルカリホスファターゼ、総ビリルビン、クレアチニン、クレアチンキナーゼ、尿素、グルコース、カルシウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、総タンパク質、アルブミン、重炭酸塩、ＬＤＨ（ＬＤＨ−５）、血液尿素窒素、塩化物及びリン酸塩の測定を含む。
・検尿は、色、外観、比重、ｐＨ、タンパク質、グルコース、ケトン、血液、白血球エステラーゼ、亜硝酸塩、ビリルビン、ウロビリノーゲン及び沈降物の顕微鏡検査を含む。

【0085】

尿四糖類（Ｈｅｘ４）
Ｈｅｘ４決定用の尿サンプルを、表１に示す時間に収集する。

【0086】

筋力試験（手動握力計）
手動握力計により評価する筋力試験を、スクリーニング、各期間の１日目及び７日目、並びにフォローアップにて行う。近位及び遠位筋肉群を評価する。

【0087】

薬物動態パラメーター
ＡＵＣ_０−ｔ、ＡＵＣ_無限大、Ｃ_ｍａｘ、ｔ_ｍａｘ、ｋ_ｅｌ非区画薬物動態パラメーター及び半減期を血漿１−デオキシノジリマイシン塩酸塩濃度及び血漿ｒｈＧＡＡ酵素レベルから計算する。薬物動態パラメーターを、記述統計学を用いた処理により纏める。ＧＡＡ酵素活性単独、又は、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩との投与後に関するＡＵＣ_０−ｔ、ＡＵＣ_無限大比を計算する。Ｍｙｏｚｙｍｅ（登録商標）及びＬｕｍｉｚｙｍｅ（登録商標）を受容している対象に関する薬物動態及び薬力学データを別個に解析する。

【0088】

統計分析
記述統計学（Ｎ、平均、標準偏差及び変異係数、標準誤差、中央値、最小値及び最大値）を適宜提供する。ＧＡＡ酵素活性に対する１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の効果は、下記のように、（対象による）個々のＡＵＣ及びＣ_ｍａｘ比を計算することにより評価される。

【0089】

ＡＵＣ及びＣ_ｍａｘ比は、個々の比の平均として表され、また平均に関する９０％信頼区間として表される。Ｍｙｏｚｙｍｅ（登録商標）及びＬｕｍｉｚｙｍｅ（登録商標）を受容している対象に関する薬物動態及び薬力学データは、別個に分析される。１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の共投与を有する及び有さない筋肉中ＧＡＡ活性を比較する。結果を適宜、表及びグラフ形態で表す。試験薬物を投与され、信頼できる薬物動態パラメーターを生成するのに十分なデータを有する全対象は、安全性及び薬物動態分析に含まれる。

【0090】

本開示は、本明細書に記載した特定の実施形態によりその範囲を限定されるべきではない。実際、前述の記載及び付随する図面から、当業者には本明細書に記載したものに加えて、本願の様々な変更が明かとなるであろう。それらの修正は、付随する特許請求の範囲内に含まれるものとする。

【0091】

全ての値は、近似値であり、説明のために提供されることを更に理解するべきである。

【0092】

実施例２：１−デオキシノジリマイシン塩酸塩及びアルグルコシダーゼαを使用した、ポンペ病処置のための投与計画−コホート１及び２
本試験の目的の１つは、ポンペ病を有する患者における、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩及びアルグルコシダーゼαの共投与を含む投与計画の安全性、有効性及び薬物動態を評価することであった。

【0093】

本試験の別の目的は、ＧＡＡ活性に対する、様々な用量の１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の効果を評価することであった。これは、アルグルコシダーゼα単独の単一の静脈内注入後、及び、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の単一の漸増経口用量の前投与後の、３日目及び／又は７日目に、骨格筋内のＧＡＡ酵素活性及びタンパク質レベルを測定することにより評価された。

【0094】

方法
この試験は、基本的に実施例１に記載した方法に従って行われた。コホート１は、４人の対象を含んでいた。コホート２は、６人の対象を含んでいた。各対象は、アルグルコシダーゼα単独を期間１において静脈内注入として受容し、期間２においてアルグルコシダーゼαの静脈内注入の１時間前に、単一の５０ｍｇ用量（コホート１）又は１００ｍｇ（コホート２）の１−デオキシノジリマイシン塩酸塩を受容した。各対象に関するヌクレオチド及びアミノ酸変化を含む遺伝子型（入手可能な場合）を下記に示す。

【0095】

【0096】

結果：コホート１
血漿ｒｈＧＡＡ活性は、酸α−グルコシダーゼ単独と比較して、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩及び酸α−グルコシダーゼの共投与で増大する。

【0097】

表３に示すように、ＥＲＴ単独（期間１）と比較して、酸α−グルコシダーゼを５０ｍｇの１−デオキシノジリマイシン塩酸塩と共投与した場合（期間２）、血漿ｒｈＧＡＡ活性ＡＵＣ（曲線下面積）における１．５倍の平均増大が観察された。表３は、コホート１対象の筋生検の、期間１及び２の７日目の間の、ｒｈＧＡＡ活性における倍変化も示す。

【0098】

【0099】

ＥＲＴ単独（期間１）に対する酸α−グルコシダーゼと５０ｍｇ １−デオキシノジリマイシン塩酸塩との共投与（期間２）の場合、個々の対象の血漿ｒｈＧＡＡ活性ＡＵＣの増大は、表４〜７に示すように、１．２、１．５、１．５及び１．６倍であった。表４〜７はまた、筋生検の、期間１及び２の７日目の間の、ｒｈＧＡＡ活性における倍変化も示す。

【0100】

【0101】

【0102】

【0103】

【0104】

下記の表８は、コホート１の血漿中の、ｒｈＧＡＡ活性に関する累積ＡＵＣを示す。

【0105】

【0106】

表９は、ウエスタンブロットによる血漿ＰＫ概略における総ｒｈＧＡＡタンパク質を示す（コホート１）。

【0107】

【0108】

【0109】

結果：コホート２
血漿ｒｈＧＡＡ活性は、酸α−グルコシダーゼ単独と比較して、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩及び酸α−グルコシダーゼの共投与で増大する

【0110】

表１０Ａに示すように、ＥＲＴ単独（期間１）と比較して、酸α−グルコシダーゼを１００ｍｇ １−デオキシノジリマイシン塩酸塩と共投与した場合（期間２）、血漿ｒｈＧＡＡ活性ＡＵＣ（曲線下面積）における１．７倍の平均増大が観察された。表１０Ａは、コホート２対象の筋生検の、期間１及び２の３日目及び７日目の間の、ｒｈＧＡＡ活性における倍変化も示す。表１０Ｂは、コホート１及び２の期間２からの、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩に関する血漿ＰＫ概略を示す。表１０Ｃは、ウエスタンブロットで測定した、コホート１及び２からの総ｒｈＧＡＡタンパク質濃度を示す。

【0111】

【0112】

【0113】

【0114】

ＥＲＴ単独（期間１）に対する１００ｍｇ １−デオキシノジリマイシン塩酸塩との共投与（期間２）の場合、個々の対象の血漿ｒｈＧＡＡ活性ＡＵＣの増大は、表１１〜１６に示すように、１．５、１．５、１．６、１．７、１．８及び１．９倍であった。表１１〜１６は、コホート２対象の筋生検の、期間１及び２の３日目又は７日目の間の、ｒｈＧＡＡ活性における倍変化も示す。

【0115】

【0116】

【0117】

【0118】

【0119】

【0120】

【0121】

下記の表１７は、コホート２の血漿中の、ｒｈＧＡＡ活性に関する累積ＡＵＣを示す。

【0122】

【0123】

表１８Ａは、コホート２対象に関する、期間１及び２の３日目又は７日目に採取した筋生検、並びに、任意選択的なフォローアップにおける生検からのｒｈＧＡＡ活性を示す。

【0124】

【0125】

表１８Ｂは、コホート１及び２の、３又は７日目に採取した個々の筋肉の１−ＤＮＪ−ＨＣＬ（ＡＴ２２２０）濃度を示す。

【0126】

【0127】

結果の概要
５０ｍｇ及び１００ｍｇ １−ＤＮＪ−ＨＣｌ（ＡＴ２２２０）の単一用量は、ポンペ病を有する患者において安全かつ耐容性良好であると見出された。軽度の一過性有害事象（ＡＥ’ｓ）のみ報告されており、そのいずれもＡＴ２２２０に関連したものではなかった（代表的な有害事象を下記に記載する）。重篤なＡＥの１つは、シタロプラム誘導によるＱＴｃ延長であった。ＱＴｃ延長は、シタロプラム用量低下後に軽減された。概して、尿ｈｅｘ４レベルは、ベースラインから変化せず、又は単一用量のＡＴ２２２０後に一貫した傾向をいずれも示さなかった（図７）。加えて、ＣＰＫレベルはコホート１及び２においてベースラインから認め得るほど変化しなかった（図８）。

【0128】

血漿ｒｈＧＡＡ活性ＡＵＣは、アルグルコシダーゼα単独に対する両方の共投与用量に関して、全患者にて増大した。ＡＵＣの増大は、Ｔｍａｘ時点後のｒｈＧＡＡ活性の増大に起因した血漿半減期の延長により主に推進された（表１０Ａ、図２Ａ及び図４）。血漿ｒｈＧＡＡ活性ＡＵＣの増大は、組織分布に関するｒｈＧＡＡ取り込みの安定化の増大を示唆している。

【0129】

７日目に４人の全コホート１患者の筋生検を採取し、３日目又は７日目に６人のコホート２患者のうちの３人の各々の筋生検を採取した。コホート２からの３人の患者は、任意選択的な３０日目の筋生検を有し、これはそれらの患者のベースラインとして使用された。５０ｍｇ ＡＴ２２２０の共投与後、コホート１患者のうちの１人が、ｒｈＧＡＡ単独に対して筋肉ｒｈＧＡＡ活性の４０％増大を有し、２人が変化を示さず、１人がｒｈＧＡＡ活性の３０％の低下を有した。１００ｍｇ ＡＴ２２２０の共投与後、３日目に採取した生検から、コホート２患者のうちの２人の患者が、ｒｈＧＡＡ単独に対してｒｈＧＡＡ活性の６０％及び４０％増大を有したが、１人は２０％低下した。７日目に採取した生検から、２人が６０％及び１０％増大し、１人はｒｈＧＡＡ活性に変化を示さなかった。

【0130】

血漿ＡＴ２２２０の薬物動態は、５０ｍｇ及び１００ｍｇ用量に関して、試験中のこの時点で評価してほぼ線形であった。用量によりＣｍａｘ及びＡＵＣのおよそ２倍の増大が観察された（表１０Ｂ、図５）。吸収速度（Ｔｍａｘ）は２〜３時間であり、生体利用可能な全薬物が、ｒｈＧＡＡの注入中の早期に吸収されたことを示している。３日目又は７日目の生検からの筋肉ＡＴ２２２０濃度は、８ｎｇ／ｇの定量下限未満又は定量下限付近のいずれかであった（表１８Ｂ）。

【0131】

ウエスタンブロットによる総血漿ｒｈＧＡＡタンパク質は、ＡＴ２２２０用量関連の増大の観点から、血漿ｒｈＧＡＡ活性と同様の傾向に従った（図６、表１０Ｃ）。

【0132】

結論
１−ＤＮＪ−ＨＣｌは、現在迄評価して、５０ｍｇ及び１００ｍｇ用量レベルの両方で安全かつ耐容性良好であった。

【0133】

血漿ｒｈＧＡＡ活性は、５０ｍｇ及び１００ｍｇ １−ＤＮＪ−ＨＣｌの単一用量の後、各々２０％から４０％へ、及び５０％から９０％へ増大した。

【0134】

５０ｍｇ用量レベルでは、４人の患者のうち１人が筋肉中にｒｈＧＡＡ活性の増大を有した；しかしながら、１００ｍｇ １−ＤＮＪ−ＨＣｌでは、６人の患者のうち４人が、筋肉中にｒｈＧＡＡ活性の６０％迄の増大を有した。

【0135】

血漿１−ＤＮＪ−ＨＣｌは、現在迄評価して、２用量に関してほぼ線形のＰＫを示した。

【0136】

筋肉中の１−ＤＮＪ−ＨＣｌ濃度は、３又は７日目の生検から、定量下限未満又は定量下限のすぐ上のいずれかであり、１−ＤＮＪ−ＨＣｌは、１４日毎の複数投与後に蓄積しない可能性があることを示唆している。

【0137】

血漿総ｒｈＧＡＡタンパク質ＰＫは、ｒｈＧＡＡ活性ＰＫと同様の傾向に従った。

【0138】

有害事象
２０の有害事象（ＡＥ）が報告され、そのうちの１つは重篤であった。代表的な有害事象を、表１９及び２０に示す。スクリーニング訪問後であるが、投与前に生じた重篤なＡＥ、４７３から４９３ｍ秒への補正ＱＴｃ時間の延長は、重症度が中等度であり、研究者により、試験薬物とは無関係であると考慮された。他の全ＡＥは、重症度が軽度であり、全て試験薬物とは無関係であると考慮され、処置を有することなく解決した。各患者に関する尿ヘキソース四糖Ａ（尿Ｈｅｘ４）及び血清ＣＰＫレベルを、図７及び８に示す。

【0139】

【0140】

【0141】

実施例３：１−デオキシノジリマイシン塩酸塩及びアルグルコシダーゼαを使用した、ポンペ病処置のための投与計画−コホート３及び４
本試験の目的の１つは、ポンペ病を有する患者における、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩及びアルグルコシダーゼαの共投与を含む投与計画の安全性、有効性及び薬物動態を評価することであった。

【0142】

本試験の別の目的は、ＧＡＡ活性に対する様々な用量の１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の効果を評価することであった。これは、アルグルコシダーゼα単独の単一の静脈内注入後、及び、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩の単一の漸増経口用量の前投与後の、３日目及び／又は７日目に、骨格筋内のＧＡＡ酵素活性及びタンパク質レベルを測定することにより評価された。

【0143】

方法
この試験は、基本的に実施例１に記載した方法に従って行われた。コホート３は、６人の対象を含んでいた。コホート４は、７人の対象を含んでいた。各対象は、アルグルコシダーゼα単独を期間１において静脈内注入として受容し、期間２においてアルグルコシダーゼαの静脈内注入の１時間前に、単一の２５０ｍｇ用量（コホート３）又は６００ｍｇ（コホート４）の１−デオキシノジリマイシン塩酸塩を受容した。

【0144】

結果：コホート３
血漿及び筋肉ｒｈＧＡＡ活性は、酸α−グルコシダーゼ単独と比較して、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩及び酸α−グルコシダーゼの共投与で増大する。

【0145】

表２１に示すように、ＥＲＴ単独（期間１）と比較して、酸α−グルコシダーゼを２５０ｍｇ １−デオキシノジリマイシン塩酸塩と共投与した場合（期間２）、血漿ｒｈＧＡＡ活性における２．０倍の平均増大が観察された。

【0146】

【0147】

ＥＲＴ単独（期間１）に対する、酸α−グルコシダーゼと２５０ｍｇ １−デオキシノジリマイシン塩酸塩との共投与（期間２）の場合、コホート３対象の血漿ｒｈＧＡＡ活性の増大は、表２２〜３５に示されている。これらの表は、ＥＲＴ単独（期間１）に対する、酸α−グルコシダーゼと２５０ｍｇ １−デオキシノジリマイシン塩酸塩との共投与（期間２）後の筋肉組織内でのｒｈＧＡＡの増大も示している。

【0148】

【0149】

【0150】

【0151】

【0152】

【0153】

【0154】

【0155】

【0156】

【0157】

【0158】

【0159】

【0160】

【0161】

【0162】

結果：コホート４
血漿及び筋肉ｒｈＧＡＡ活性は、酸α−グルコシダーゼ単独と比較して、１−デオキシノジリマイシン塩酸塩及び酸α−グルコシダーゼの共投与で増大する。

【0163】

ＥＲＴ単独（期間１）に対する、酸α−グルコシダーゼと６００ｍｇ １−デオキシノジリマイシン塩酸塩との共投与（期間２）の場合、コホート４対象の血漿ｒｈＧＡＡ活性の増大は、表３６〜３８に示されている。これらの表は、ＥＲＴ単独（期間１）に対する、酸α−グルコシダーゼと１−デオキシノジリマイシン塩酸塩６００ｍｇとの共投与（期間２）後の筋肉組織内でのｒｈＧＡＡの増大も示している。

【0164】

【0165】

【0166】

【0167】

結果の概要
ポンペ病を有する人々の場合、欠損したＧＡＡ酵素は、疾病に罹患した組織内でのグリコーゲンの蓄積をもたらす（主に筋肉）。前臨床的データ（Ｋｈａｎｎａ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ（２０１２）７（７）：ｅ４０７７６．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００４０７７６）は、ＡＴ２２２０とＥＲＴとの組み合わせが、ポンペ病のマウスモデルにおいてｒｈＧＡＡ酵素活性を増大させ、グリコーゲン蓄積を低減し、潜在的にＥＲＴ関連の免疫原性を緩和することを示した。実施例１〜３に記載した本試験では、ポンペ患者へのＡＴ２２２０の共投与は、ＥＲＴ単独と比較して、ｒｈＧＡＡ酵素活性を増大させ、筋肉組織内へのｒｈＧＡＡ酵素取り込みを向上させた。

【0168】

実施例１〜３に記載した試験は、ポンペ病を有する男性及び女性における、ＥＲＴ単独に対する、ＥＲＴ（Ｍｙｏｚｙｍｅ（登録商標）／Ｌｕｍｉｚｙｍｅ（登録商標））と共投与したＡＴ２２２０（５０ｍｇ（コホート１）、１００ｍｇ（コホート２）、２５０ｍｇ（コホート３）、又は６００ｍｇ（コホート４））の４つの増大する経口用量の安全性及びＰＫ効果を評価するための第２相非盲検、多施設試験である。この試験は、少なくとも３ヶ月間、ＥＲＴの安定用量及び投与計画上にあった男性及び女性患者を登録した。規則的に予定されたＥＲＴ注入を全患者に与えた。次のＥＲＴ注入開始の１時間前に、患者は、ＡＴ２２２０の単一の経口用量を受けた。各注入中、血漿ｒｈＧＡＡ活性及びタンパク質レベルを評価した。各患者は、各注入の３又は７日後に筋生検を受けて、シャペロンを有する及び有さない組織ＧＡＡ酵素活性を測定し、また筋肉中のＡＴ２２２０のレベルを測定した。

【0169】

安全性：ＥＲＴと共投与したＡＴ２２２０の単一用量は耐容性良好であり、薬物関連の有害事象は報告されなかった。加えて、ＡＴ２２２０は、４つの全コホートにおいて、７日目迄に筋肉からほぼ検出不能なレベル迄排除された。

【0170】

血漿中の組み換えヒトＧＡＡ（ｒｈＧＡＡ）酵素活性：各注入中及び注入後、２４時間血漿薬物動態（ＰＫ）を測定した。血漿ｒｈＧＡＡ活性は、共投与後、２３人の患者のうち２３人（１００％）にて増大し、増大は用量に関連した。これらのデータは、共投与が、安定化された、組織内への取り込みに有用な、適切に折り畳まれた活性なｒｈＧＡＡ酵素の量を増大させることを示唆する。表３９及び図２１は、実施例１〜３に記載したコホート１〜４に関する血漿曲線下面積（ＡＵＣ）におけるｒｈＧＡＡ酵素活性の概略を示す。

【0171】

【0172】

筋肉中の酵素活性：筋生検を採取して、ＡＴ２２２０を有する及び有さない、筋肉組織内へのＧＡＡ酵素取り込みを測定した。コホート１では、４人の全患者が７日目に筋生検を有した。コホート２〜４では、半分の患者が３日目に筋肉生検を採取され、他の半分の患者が７日目に採取された。

【0173】

コホート１では、７日目にＧＡＡ酵素活性の一貫した変化は観察されなかった。コホート２、３及び４では、結果はＥＲＴ単独と比較してＡＴ２２２０共投与後に筋肉組織内へより大量の酵素が取り込まれることを示す。この効果は最大（６００ｍｇ）用量のＡＴ２２２０にて最も顕著であった。表４０及び図２２は、実施例１〜３に記載したコホート２〜４に関する３日目の筋肉中のＧＡＡ酵素活性の概略を示す。

【0174】

【0175】

３日目にて、評価可能な生検を有する患者における、ＥＲＴ単独と比較した共投与後の筋肉中のＧＡＡ酵素活性は、以下だけ増大した：コホート２（ｎ＝３）で２５％、コホート３（ｎ＝３）で７％及びコホート４（ｎ＝２）で１３３％。７日目にて、筋肉中のＧＡＡ酵素活性は、酵素の細胞半減期に基づいて予想した通り、３日目と比較して低かった。しかしながら、評価可能な生検を有する患者において、共投与後、ＥＲＴ単独と比較して、以下の増大が持続された：コホート２（ｎ＝３）で２０％、コホート３（ｎ＝２）で４０％及びコホート４（ｎ＝３）で２０％。

【0176】

エクスビボで測定したＥＲＴ関連の免疫原性に対するＡＴ２２２０の効果：変性凝集したタンパク質は、概して、適切に折り畳まれたタンパク質よりも抗原性であるため、ＡＴ２２２０は、ｒｈＧＡＡ酵素の折り畳まれた活性形態を安定化させることによってＥＲＴ−誘導免疫原性を緩和することができる。最近発行された研究論文は、投与されたＥＲＴのおよそ４０％が循環抗体により捕捉され得、ＥＲＴ注入を受けているポンペ患者のおよそ５０％に注入関連の反応が生じることを示している（Ｂａｎａｔｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｕｓｃｌｅ Ｎｅｒｖｅ．２０１１ Ｎｏｖ；４４（５）：７２０−６）。５０人の健康なドナーの血液に由来するＴ細胞を使用した初期エクスビボ試験は、ＡＴ２２２０の添加が、Ｍｙｏｚｙｍｅ（登録商標）及びＬｕｍｉｚｙｍｅ（登録商標）の免疫原性を有意に低下させ得ることを示した。この試験は、Ａｎｔｉｔｏｐｅ Ｌｔｄ．のＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイを使用し、実施例１〜３に記載した試験におけるポンペ患者からのサンプルにて反復されている。

【0177】

実施例４：Ｎ−ブチル−ＤＮＪ（ＡＴ２２２１）の骨格筋分布及び半減期は、１−ＤＮＪ（ＡＴ２２２０）と同様である。
８週齢の野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１００ｍｇ／ｋｇの１−ＤＮＪ又はＮ−ブチル−ＤＮＪの経口用量を投与した。投与の０．５、２、４、２４、４８、７２、９６、１２０、１４４及び１６８時間後に血漿及び組織サンプルを採取し、薬物の存在を分析した。血漿中の薬物の濃度を、ｎｇ／ｍｌとして表す。組織サンプル中の薬物の濃度を、ｎｇ／ｇとして表す。

【0178】

図２３に示すように、Ｎ−ブチル−ＤＮＪ（ＡＴ２２２１）の骨格筋分布及び半減期は、１−ＤＮＪ（ＡＴ２２２０）と同様である。ＡＴ２２２０のＣｍａｘは、１２０ｕＭであった。ＡＴ２２２１のＣｍａｘは、１４０ｕＭであった。

【0179】

実施例５：Ｎ−ブチル−ＤＮＪ（ＡＴ２２２１）及び１−ＤＮＪ（ＡＴ２２２０）は、ｒｈＧＡＡの薬物動態に対して同様の効果を有する。
８週齢のＧＡＡＫＯマウスに、ｒｈＧＡＡ（１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）を投与した。経口ＡＴ２２２０又はＡＴ２２２１（１００ｍｇ／ｋｇ）を、ＧＡＡ（Ｍｙｏｚｙｍｅ）の３０分前に投与した；血漿サンプルをＧＡＡの投与前、投与の０．０８、０．２５、０．５０、０．７５、１、２、４、８及び２４時間後に採取し、酵素活性を決定した。

【0180】

図２４に示すように、ＡＴ２２２０及びＡＴ２２２１は、ｒｈＧＡＡの循環半減期を少なくとも約２倍増大させた。Ｎ−ブチル−ＤＮＪ（ＡＴ２２２１）及び１−ＤＮＪ（ＡＴ２２２０）は、ｒｈＧＡＡの薬物動態に対して同様の効果を有する。

【0181】

ｒｈＧＡＡをＡＴ２２２０又はＡＴ２２２１と伴に又は伴わずに投与されたマウスに関する、ＧＡＡのｉ．ｖ．投与の２、８及び２４時間後の、血漿中の組み換えＧＡＡのウエスタンブロットを図２５に示す。

【0182】

実施例６：ＤＮＪ又はＮＢ−ＤＮＪとｒｈＧＡＡとの共投与は、グリコーゲン低下に対して同様の効果を有する
１２週齢のＧＡＡＫＯマウスに、２０ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．組み換えヒトＧＡＡ（Ｍｙｏｚｙｍｅ）を１週間置きに８週間投与した。ＡＴ２２２０又はＡＴ２２２１（３０ｍｇ／ｋｇ）の経口用量を、ｒｈＧＡＡ（Ｍｙｏｚｙｍｅ）の３０分前に投与した。ｒｈＧＡＡの最終用量の２１日後に組織を収集し、グリコーゲン（ＧＡＡ基質）のレベルを測定した。

【0183】

図２６に示すように、ＤＮＪ又はＮＢ−ＤＮＪとｒｈＧＡＡとの共投与は、グリコーゲン低下に対して同様の効果を有する。ｎ＝５−マウス／グループ；^＊ｐ＜０．０５対未処置ｔ検定；＃ｐ＜０．０５対Ｍｙｏｚｙｍｅ単独ｔ検定；点線は、野生型グリコーゲンレベルを示す。３０ｍｇ／ｋｇ ＡＴ２２２０又はＡＴ２２２１の投与後のＣｍａｘ約４０μＭ；ヒトにおけるおよそ６００ｍｇと等価。

【0184】

特許、特許出願、刊行物、製品の説明、及びプロトコルが本願全体を通して引用され、これらの開示全体は、全目的のために参照により本明細書に組み込まれる。

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図3A】

【図3B】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9A】

【図9B】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図10D】

【図11】

【図12A】

【図12B】

【図13】

【図14A】

【図14B】

【図15A】

【図15B】

【図16A】

【図16B】

【図17A】

【図17B】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図23-2】

【図24】

【図25】

【図26】

【図26-2】

【図26-3】