特許 6880023 改善された特性を有するβ−グアニジノプロピオン酸の薬学的に許容される塩及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6880023

(24)【登録日】2021年5月7日

(45)【発行日】2021年6月2日

(54)【発明の名称】改善された特性を有するβ−グアニジノプロピオン酸の薬学的に許容される塩及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07C 279/14 20060101AFI20210524BHJP

   A61K 31/197 20060101ALI20210524BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20210524BHJP

【ＦＩ】

   C07C279/14

   A61K31/197

   A61P35/00

【請求項の数】4

【全頁数】53

(21)【出願番号】特願2018-529503(P2018-529503)

(86)(22)【出願日】2016年8月25日

(65)【公表番号】特表2018-531280(P2018-531280A)

(43)【公表日】2018年10月25日

(86)【国際出願番号】US2016048643

(87)【国際公開番号】WO2017035331

(87)【国際公開日】20170302

【審査請求日】2019年8月21日

(31)【優先権主張番号】62/209,624

(32)【優先日】2015年8月25日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】518063388

【氏名又は名称】ルジェニクス，インコーポレーテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002572

【氏名又は名称】特許業務法人平木国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】マルティネス，エドアルド，ジェイ．

(72)【発明者】

【氏名】グリル，アンドレアス，ジー．

(72)【発明者】

【氏名】シング，アニルディ

(72)【発明者】

【氏名】カヴル，パドミニ

【審査官】 伊佐地 公美

(56)【参考文献】

【文献】 米国特許出願公開第２０１４／０１４１０６９（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 特開昭４８−０９６５９７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 中国特許出願公開第１０２８５０２４２（ＣＮ，Ａ）

【文献】 特開平０９−２０２７１０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 芦澤 一英、他，医薬品の多形現象と晶析の科学，丸善プラネット株式会社，２００２年 ９月２０日，第３０５−３１７頁

【文献】 Holm, F. H.，Archiv der Pharmazie，１９０４年，pp. 612-619

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｃ

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｐ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

β−グアニジノプロピオン酸の薬学的に許容される塩であって、前記薬学的に許容される塩が、２：１コハク酸塩である、薬学的に許容される塩。

【請求項2】

請求項１に記載の薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される賦形剤を含む、単位剤形の薬学的組成物。

【請求項3】

薬学的組成物が、カプセル又は錠剤として製剤化されている、請求項２に記載の薬学的組成物。

【請求項4】

請求項１に記載の薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物であって、前記薬学的組成物が、静脈内注入用に製剤化されている、薬学的組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

グアニジノプロピオン酸、ベータ−グアニジノプロピオン酸、またはＮ−（アミノイミノメチル）−ベータ−アラニンとも称されるβ−グアニジノプロピオン酸（β−ＧＰＡ）は、クレアチン類似体である。動物（ラット、サル、ハムスター）での研究により、β−ＧＰＡなどの酸性グアニジン誘導体が非インスリン依存糖尿病の動物モデルにおける高血糖を緩和し得ることが示されている。したがって、これは、血糖レベルを調節するために、糖尿病患者において栄養補助食品として使用されることがある。

【0002】

β−ＧＰＡは、水に非常に可溶性である（５０ｍｇ／ｍＬ超）、白色の結晶質粉末である。

【0003】

β−ＧＰＡは、近年、胃腸癌における転移、特に肝臓転移の抑制に有効であることが分かった（例えば、国際特許公開第ＷＯ２０１４／０７１０６７号を参照されたい）。しかしながら、固体状態でのβ−ＧＰＡの物理的特性、例えば、不良な流動特性及び圧縮性により、改善された物理的特性及び取扱適性を有するβ−ＧＰＡ塩及び製剤の必要性が存在する。

【発明の概要】

【0004】

本発明は、改善された物理的特性を呈するβ−ＧＰＡの新たな薬学的塩を特色とする。具体的には、本発明は、改善された流動特性（例えば、改善されたカール指数及び／またはハウスナー比）を有する、フマル酸塩、コハク酸塩、及びシュウ酸塩などのβ−ＧＰＡの塩を特色とする。本発明は、薬学的有効量のβ−ＧＰＡの１つ以上の塩を含む薬学的組成物、ならびに本発明のβ−ＧＰＡ塩を含む製剤を、癌の治療を必要とする対象に投与することを含む、癌を治療する方法も特色とする。

【0005】

したがって、第１の態様では、本発明は、２０未満（例えば、１５未満、１０未満、６未満）のカール指数、及び／または１．２５未満（例えば、１．２未満、１．１５未満、１．１未満）のハウスナー比を有するβ−グアニジノプロピオン酸の薬学的に許容される塩を特色とする。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ジカルボン酸（例えば、フマル酸、コハク酸、またはシュウ酸）の塩である。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、フマル酸塩（例えば、１：１フマル酸塩）、コハク酸塩（例えば、２：１コハク酸塩）、またはシュウ酸塩（例えば、１：１シュウ酸塩）である。

【0006】

いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、結晶質である（例えば、ロッド様結晶形態の１：１フマル酸塩。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、４０重量％未満（例えば、３０％未満、２０％未満、１０％未満、５％未満、１％未満、または３０〜４０％、２５〜３５％、２０〜３０％、１５〜２５％、１０〜２０％、５〜１５％、１〜１０％）の非晶質化合物を含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、非晶質化合物を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、β−ＧＰＡの任意の他の塩または結晶形態を実質的に含まない。

【0007】

いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、１：１フマル酸塩である。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）プロファイルにおいて、約１７１℃（例えば、１６９℃〜１７３℃、１７０℃〜１７３℃、１６９℃〜１７２℃、１７０℃〜１７２℃）の吸熱開始を有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、熱重量分析により測定される５％未満（例えば、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満）の３１℃〜１４０℃での重量損失を有する。

【0008】

いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、Ｘ線粉末回折法により測定される２０±０．５の回折角２θ（°）で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、Ｘ線粉末回折法により測定される２０±０．５、２０．５±０．５、及び／または２３±０．５の回折角２θ（°）で少なくとも１つのピークをさらに有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、Ｘ線粉末回折法により測定される、表１に列記される１つ以上（例えば、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０以上、１１以上、１２以上、１３以上、１４以上）のピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、Ｘ線粉末回折法により測定される、表１に列記されるピークの全てを有する。

【0009】

【表1】

【0010】

いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ラマン分光法により測定される３３００±１ｃｍ^−１で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ラマン分光法により測定される３１８８±１ｃｍ^−１で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ラマン分光法により測定される３０４９±１ｃｍ^−１で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ラマン分光法により測定される２９４１±１ｃｍ^−１で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ラマン分光法により測定される２８８６±１ｃｍ^−１で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ラマン分光法により測定される１７１３±１ｃｍ^−１で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ラマン分光法により測定される１６５３±１ｃｍ^−１で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ラマン分光法により測定される１４８３±１ｃｍ^−１で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ラマン分光法により測定される１４２１±１ｃｍ^−１で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ラマン分光法により測定される１３８２±１ｃｍ^−１で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ラマン分光法により測定される１３０５±１ｃｍ^−１で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ラマン分光法により測定される１２６８±１ｃｍ^−１で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ラマン分光法により測定される１１９０±１ｃｍ^−１で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ラマン分光法により測定される１０８４±１ｃｍ^−１で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ラマン分光法により測定される９９７±１ｃｍ^−１で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ラマン分光法により測定される８９６±１ｃｍ^−１で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ラマン分光法により測定される６８１±１ｃｍ^−１で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ラマン分光法により測定される６２５±１ｃｍ^−１で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ラマン分光法により測定される５５５±１ｃｍ^−１で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ラマン分光法により測定される４８６±１ｃｍ^−１で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ラマン分光法により測定される、表２に列記される１つ以上（例えば、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０以上、１１以上、１２以上、１３以上、１４以上）のピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ラマン分光法により測定される、表２に列記されるピークの全てを有する。

【0011】

【表2】

【0012】

いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、１：１シュウ酸塩である。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、Ｘ線粉末回折法により測定される２７．５±０．５の回折角２θ（°）で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、表３に列記される１つ以上（例えば、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０以上、１１以上、１２以上、１３以上、１４以上）のピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、Ｘ線粉末回折法により測定される、表３に列記されるピークの全てを有する。

【0013】

【表3】

【0014】

いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、２：１コハク酸塩である。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、Ｘ線粉末回折法により測定される２７±０．５の回折角２θ（°）で少なくとも１つのピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、表４に列記される１つ以上（例えば、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０以上、１１以上、１２以上、１３以上、１４以上）のピークを有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、Ｘ線粉末回折法により測定される、表４に列記されるピークの全てを有する。

【0015】

【表4】

【0016】

別の態様では、本発明は、前述の薬学的に許容される塩のうちのいずれか及び薬学的に許容される賦形剤を含む組成物（例えば、水性組成物）を特色とする。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、１０重量％未満（例えば、５％未満、１％未満）の非晶質化合物を含有する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、非晶質化合物を実質的に含まない。

【0017】

別の態様では、本発明は、β−グアニジノプロピオン酸のフマル酸塩を含む組成物（例えば、水性組成物）を特色とし、β−グアニジノプロピオン酸のフマル酸塩の少なくとも８０％（少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％）は、１：１塩（例えば、組成物は、β−グアニジノプロピオン酸の２：１フマル酸塩を実質的に含まない）及び薬学的に許容される賦形剤である。

【0018】

前述の組成物のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、１，３−ブランジオール、マンニトール、水、リンゲル液、または等張塩化ナトリウム溶液を含む。前述の組成物のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、組成物は、静脈内注入用に製剤化される。

【0019】

別の態様では、本発明は、癌（例えば、結腸癌または胃癌などの胃腸癌、膵臓癌、肝臓癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、及び黒色腫）の治療を必要とする対象における癌を治療するための方法を特色とし、対象に、有効量の前述の薬学的に許容される塩のうちのいずれかまたは組成物を投与することを含む。

【0020】

別の態様では、本発明は、転移性癌（例えば、結腸癌または胃癌などの転移性胃腸癌）の治療を必要とする対象における転移性癌を治療するための方法を特色とし、対象に、有効量の前述の薬学的に許容される塩のうちのいずれかまたは組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、有効量は、癌（例えば、結腸直腸癌または胃癌などの胃腸癌）の転移性コロニー形成（例えば、肝臓における転移性コロニー形成）を抑制するのに有効な量を含む。

【0021】

別の態様では、本発明は、癌（例えば、結腸癌または胃癌などの胃腸癌）の治療を必要とする対象における癌を治療するための方法を特色とし、対象に、有効量の、前述の薬学的に許容される塩のうちのいずれか及び薬学的に許容される賦形剤を含む水性組成物を注射することを含む。いくつかの実施形態では、癌は転移性癌である。いくつかの実施形態では、有効量は、癌の転移性コロニー形成を抑制するのに有効な量である。

【0022】

別の態様では、本発明は、転移性癌（例えば、結腸直腸癌、食道癌、または胃癌などの胃腸癌、膵臓癌、肝臓癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、及び黒色腫）の治療を必要とする対象における転移性癌を治療する方法を特色とし、（ａ）ｍｉＲ−４８３−５ｐ及び／もしくはｍｉＲ−５５１ａの発現レベルが既定参照値を下回るか、またはＣＫＢ及び／もしくはＳＬＣ６ａ８の発現レベルが既定参照値を上回ることに基づいて、転移性癌を有するか、または転移性癌を起こす危険性があると特定された対象を提供することと、（ｂ）対象に、有効量の前述の薬学的に許容される塩のうちのいずれかまたは組成物を投与することを含む。

【0023】

いくつかの実施形態では、前述の方法のうちのいずれかは、対象に追加の療法（例えば、追加の治療薬）を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、シクロクレアチン、ＲＮＡｉ剤、核酸、ベクター、５−フルオロウラシル、オキサリプラチン、イリノテカン、カペシタビン、ゲムシタビン、セツキシマブ、タキソール、アバスチン、フォリン酸（ロイコボリン）、レゴラフェニブ、ザルトラップ、トポイソメラーゼＩ阻害剤、ＮＫＴＲ−１０２、チバンチニブ、ＰＸ−８６６、ソラフェニブ、リニファニブ、キナーゼ阻害剤、テラチニブ、ＸＬ２８１（ＢＭＳ−９０８６６２）、ロバツムマブ、またはＩＧＦ１−Ｒ阻害剤などの治療薬である。

【0024】

別の態様では、本発明は、β−グアニジノプロピオン酸の薬学的に許容される１：１フマル酸塩を産生する方法を特色とする。本方法は、β−グアニジノプロピオン酸の薬学的に許容される１：１フマル酸塩を産生するのに十分な量で、β−グアニジノプロピオン酸とフマル酸とを混合することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、β−グアニジノプロピオン酸及びフマル酸を溶媒中に溶解することを含み、β−グアニジノプロピオン酸の１：１フマル酸塩は、溶媒から沈殿する。いくつかの実施形態では、本方法は、β−グアニジノプロピオン酸の１：１フマル酸塩の再結晶化をさらに含む。

【図面の簡単な説明】

【0025】

【図1】β−ＧＰＡの１：１フマル酸塩の結晶質形態に関して得られたＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す画像である。

【図2】β−ＧＰＡの結晶質形態に関して得られたＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す画像である。

【図3】偏光顕微鏡下のβ−ＧＰＡ結晶の画像である。

【図4】β−ＧＰＡの結晶質形態に関して得られたＤＳＣサーモグラムを示す画像である。

【図5】β−ＧＰＡの結晶質形態に関して得られたＴＧＡ分析を示す画像である。

【図6】β−ＧＰＡの結晶質形態の^１Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す画像である。

【図7】β−ＧＰＡの結晶質形態のＤＶＳ分析を示す画像である。

【図8】β−ＧＰＡの１：１塩酸塩の結晶質形態に関して得られたＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す画像である。

【図9】β−ＧＰＡの１：１マレイン酸塩の結晶質形態に関して得られたＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す画像である。

【図10】β−ＧＰＡの１：１フマル酸塩の結晶質形態に関して得られたＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す画像である。

【図11】β−ＧＰＡの１：１Ｌ−リンゴ酸塩の結晶質形態に関して得られたＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す画像である。

【図12】β−ＧＰＡの２：１コハク酸塩の結晶質形態に関して得られたＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す画像である。

【図13】β−ＧＰＡの１：１シュウ酸塩の結晶質形態に関して得られたＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す画像である。

【図14】β−ＧＰＡの２：１マレイン酸塩の結晶質形態に関して得られたＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す画像である。

【図15】β−ＧＰＡの２：１マレイン酸塩の結晶質形態の^１Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す画像である。

【図16】β−ＧＰＡの１：１塩酸塩の結晶質形態に関して得られたＤＳＣサーモグラムを示す画像である。

【図17】高温顕微鏡によるβ−ＧＰＡの１：１塩酸塩の結晶質形態の画像である。

【図18】β−ＧＰＡの１：１マレイン酸塩の結晶質形態に関して得られたＤＳＣサーモグラムを示す画像である。

【図19】β−ＧＰＡの１：１フマル酸塩の結晶質形態に関して得られたＤＳＣサーモグラムを示す画像である。

【図20】β−ＧＰＡの１：１フマル酸塩の結晶質形態に関して得られたＴＧＡ分析を示す画像である。

【図21】β−ＧＰＡの１：１フマル酸塩の結晶質形態の^１Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す画像である。

【図22】β−ＧＰＡの２：１コハク酸塩の結晶質形態に関して得られたＤＳＣサーモグラムを示す画像である。

【図23】高温顕微鏡によるβ−ＧＰＡの２：１コハク酸塩の結晶質形態の画像である。

【図24】β−ＧＰＡの２：１コハク酸塩の結晶質形態に関して得られたＴＧＡ分析を示す画像である。

【図25】β−ＧＰＡの２：１コハク酸塩の結晶質形態の^１Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す画像である。

【図26】β−ＧＰＡの１：１シュウ酸塩の結晶質形態に関して得られたＤＳＣサーモグラムを示す画像である。

【図27】β−ＧＰＡの１：１シュウ酸塩の結晶質形態に関して得られたＴＧＡ分析を示す画像である。

【図28】β−ＧＰＡの１：１シュウ酸塩の結晶質形態の^１Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す画像である。

【図29A-29J】β−ＧＰＡ塩の結晶質形態の画像である。Ａ）β−ＧＰＡの１：１塩酸塩、Ｂ）β−ＧＰＡの１：１リン酸塩、Ｃ）β−ＧＰＡの１：１メシル酸塩、Ｄ）β−ＧＰＡの１：１マレイン酸塩、Ｅ）β−ＧＰＡの１：１マレイン酸、Ｆ）β−ＧＰＡの２：１マレイン酸塩、Ｇ）β−ＧＰＡの１：１フマル酸塩、Ｈ）β−ＧＰＡの１：１マレイン酸塩、Ｉ）β−ＧＰＡの２：１コハク酸塩、及びＪ）β−ＧＰＡの１：１シュウ酸。

【図30】β−ＧＰＡの１：１フマル酸塩のロッド様結晶形態を示す画像である（パターン７Ａ）。

【図31】β−ＧＰＡの１：１フマル酸塩のＤＶＳ前及びＤＶＳ後のＸＲＰＤ分析の比較を示す画像である（パターン７Ａ）。

【図32】溶媒をゆっくり蒸発させた後のβ−ＧＰＡの１：１フマル酸塩の結晶質形態に関して得られたＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す画像である。

【図33】４８時間にわたるテトラヒドロフラン：水（１：１）のスラリー実験後のβ−ＧＰＡの１：１フマル酸塩の結晶質形態に関して得られたＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す画像である。

【図34】β−ＧＰＡの２：１フマル酸塩の結晶質形態に関して得られたＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す画像である。

【図35】β−ＧＰＡの２：１フマル酸塩の結晶質形態の^１Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す画像である。

【図36】β−ＧＰＡの２：１フマル酸塩の結晶質形態に関して得られたＤＳＣサーモグラムを示す画像である。

【図37】β−ＧＰＡの１：１フマル酸塩の結晶質形態のラマンスペクトルを示す画像である。

【発明を実施するための形態】

【0026】

改善された特性を有するβ−ＧＰＡを特定するために、本発明は、１９の異なる対イオン及び８つの異なる溶媒系で塩スクリーニング実験を行った。これらの対イオンのうちの１０が結晶質形態で調製され、それらの特性が評価された。最適な特性を有する好ましい塩を特定した後、これらの塩の多形体スクリーニングが行われた。

【0027】

β−ＧＰＡ
β−ＧＰＡは、構造：

【0028】

【化1】

を有する。

【0029】

β−ＧＰＡは、双性イオンであり、水に非常に可溶性（５０ｍｇ／ｍＬ超）であるが、有機溶媒において低溶解度を有する。β−ＧＰＡは、塩基性グアニジノ基を保有し、したがって、二酸と１：１（β−ＧＰＡ：酸）及び２：１（β−ＧＰＡ：酸）塩の両方を形成することができる。本明細書で使用されるとき、二酸とのβ−ＧＰＡの「２：１塩」、例えば、２：１コハク酸塩は、２つのβ−ＧＰＡ分子及び１つの二酸分子を含む塩を指し、例えば、「２：１コハク酸塩」は、２つのβ−ＧＰＡ分子及び１つのコハク酸分子を含む。

【0030】

固体状態の遊離β−ＧＰＡは、非常に結晶質であり、一般的に、無水物として存在する。結晶質形態は、非吸湿性（例えば、８０％湿度、２５℃で約０．３％の吸水率）であり、ＤＳＣにより、２１９℃で明確な融点及び２３５℃で吸熱事象を有する。β−ＧＰＡの結晶は、プレート様結晶形態を有する。４０℃、７５％湿度の実験において、４週間後に分解は観察されなかった。

【0031】

β−ＧＰＡの流動特性は準最適である。かさ密度は０．３８９ｇ／ｃｃであり、タップ密度は０．６２７ｇ／ｃｃである。これらの測定値を使用して、物質のカール指数及びハウスナー比を計算することができる。カール指数及びハウスナー比は、粉末の流動性の指標である。当該技術分野において既知であるように、例えば、Ｃａｒｒ Ｒ．Ｌ．Ｃｈｅｍ．Ｅｎｇ．１９６５，７２，１６３−１６８に記載されるように、粉末の流動性とカール指数及びハウスナー比との関係は、下の表５に示されるスケールに基づく。

【0032】

【表5】

【0033】

β−ＧＰＡのカール指数及びハウスナー比は、それぞれ、３７．９（非常に不良）及び１．６１０（極めて不良）であった。Ｈａｎｓｏｎ Ｆｌｏｄｅｘ機器を利用する実験は、カール指数及びハウスナー比によって予測されたβ−ＧＰＡの不良な流動性を確認した。したがって、改善された物理的特性を有するβ−ＧＰＡ塩を見出す必要性がある。

【0034】

塩
エタノール：水（９：１）、イソプロピルアルコール、アセトン：水（９：１）、及びアセトニトリルを含む異なる溶媒系において、１９の異なる対イオンで、７６の塩スクリーニング実験を行った。結晶質形態で調製された１０の対イオンは、塩酸、リン酸、メタンスルホン酸、マレイン酸、フマル酸、Ｌ−リンゴ酸、コハク酸、及びシュウ酸で調製された塩であった。塩基性化合物、例えば、Ｌ−アスパラギン酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、または水酸化マグネシウムでの実験の全ては、個々に、β−ＧＰＡまたは塩基性化合物のみの単離をもたらした。

【0035】

調製された塩のうち、塩酸塩、Ｌ−リンゴ酸塩、リン酸塩、メタンスルホン酸塩、及びエタンスルホン酸塩は、乾燥状態で安定しているが、高い湿度状態下で潮解した。マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、及びシュウ酸塩は、乾燥及び多湿条件下の両方で安定していることが分かった。マレイン酸塩、フマル酸塩、及びシュウ酸塩は、１：１（β−ＧＰＡ：酸）化学量論を有することが分かり、一方でコハク酸塩は、２：１（β−ＧＰＡ：酸）化学量論を有することが分かった。フマル酸、シュウ酸、及びマレイン酸で２：１塩を生成するさらなる実験が行われ、これは、マレイン酸及びフマル酸で２：１塩の調製物をもたらした。

【0036】

１：１マレイン酸塩、１：１フマル酸塩、２：１コハク酸塩、及び１：１シュウ酸塩で、動的水蒸気吸着実験を行った。フマル酸、コハク酸塩、及びシュウ酸塩は、ＤＶＳ実験中１％未満の吸湿率を呈することが分かり、形態変化は、実験後、ＸＲＰＤにより観察されなかった。マレイン酸塩は、約２５％の吸湿率を呈し、形態変化は、実験後、ＸＲＰＤにより観察されなかった。フマル酸塩、コハク酸塩、及びシュウ酸塩の固体形態安定性試験が、７日間にわたって、４０℃及び７５％湿度で行われた。３つ全ての塩は、これらの条件下で安定していることが分かった。

【0037】

３つの塩のかさ密度及びタップ密度は、下の表６に示されるように決定された。

【0038】

【表6】

【0039】

カール指数及びハウスナー比は、３つの塩の各々について計算され、表７に示されるように、３つの塩は、β−ＧＰＡと比較して、非常に改善された、予測された流動特性を呈した。予測された流動特性は、Ｈａｎｓｏｎ Ｆｌｏｄｅｘ機器を利用する実験により確認された。

【0040】

【表7】

【0041】

β−ＧＰＡの１：１フマル酸塩の多形体スクリーニングが１５℃及び４５℃で、１５の異なる溶媒系において行われ、塩の溶解度が重量測定により決定された。実験の大半は、多形体において変化をもたらさなかった。しかしながら、β−ＧＰＡの２：１フマル酸塩が１：１塩の凍結乾燥及び迅速な蒸発時、または２：１（β−ＧＰＡ：酸）化学量論におけるβ−ＧＰＡ及びフマル酸の凍結乾燥時に形成された。２：１塩の結晶質形態は、ある非晶質材料を含有し、不安定であることが分かった。２：１フマル酸塩は、水にスラリー化された、加熱された、または高湿度条件下にあるとき、１：１塩に変換された。

【0042】

結晶質β−ＧＰＡまたはその薬学的に許容される塩は、β−ＧＰＡまたはその薬学的に許容される塩を含む固体として定義され、成分分子は、３つ全ての空間次元に拡張する規則的に配列した繰り返しパターンに詰められる。結晶質の特定は、当業者に既知のいくつかの方法で容易に達成される。試験組成物の顕微鏡検査は、配列した内部構造を示唆する規則的形状の存在を明らかにし、例えば、実施例１において産生されたβ−ＧＰＡの１：１フマル酸塩は、ロッド様形態を有する。

【0043】

ＸＲＰＤは、結晶質β−ＧＰＡまたはその薬学的に許容される塩を特定するための別の方法である。結晶における成分分子の規則的に配列した構造は、ピークのスペクトルとして示される明確なパターンで入射Ｘ線を回折する。β−ＧＰＡの１：１フマル酸塩のピークのこのパターンは、図１に示される。特定の結晶のＸＲＰＤピークは強度により変動し得るが、同じ一般的なパターンが反復ＸＲＰＤ分析において存在する。

【0044】

β−ＧＰＡの結晶質１：１フマル酸塩は、約２７ ２θ（°）、通常約２６．７でＸＲＰＤ主ピークを呈する。本明細書で使用されるとき、「約」とは、ＸＲＰＤピークの測定の典型的な変動内であることを意味する。かかる変動は、異なる機器の使用、機器設定、産物のバッチ、微粉化または粉砕などの結晶化後処理、及び様々な試料調製方法により生じ得る。一般に、約は±０．５ ２θ（°）を意味する。

【0045】

β−ＧＰＡの結晶質１：１フマル酸塩の他の主ピークの例示的な例は、約１９、２０、２１、２３、及び２９ ２θ（°）、通常、１９．２、１９．７、２０．６、２２．９、及び２８．８ ２θ（°）である。β−ＧＰＡの結晶質１：１フマル酸塩の代表的なピークは、表１に示される。

【0046】

β−ＧＰＡの結晶質形態またはその薬学的に許容される塩の特定は、図１に見られる、または表１に列記される主ピークのうちのいずれか１つ以上の存在を必要とする必要がない。主ピークの存在または不在は、通常、多の診断特徴、例えば、ＤＳＣサーモグラムまたはＴＧＡグラフを考慮にいれて、β−ＧＰＡの特定の結晶質形態またはその薬学的に許容される塩として候補を特定する。

【0047】

β−ＧＰＡの結晶質１：１フマル酸塩は、示差走査熱量測定プロファイルにおいて、１７１℃での吸熱開始を明らかにするＤＳＣサーモグラムも特徴とする。典型的には、この測定においてある程度の変動にも直面する（例えば、±１〜３℃）。

【0048】

β−ＧＰＡの結晶質１：１フマル酸塩は、熱重量分析、例えば、１％未満の３１℃〜１４０℃での重量損失も特徴とする。
治療方法

【0049】

β−ＧＰＡは、近年、転移の抑制に有効であることが分かった。作用の機序はクレアチン輸送及び／またはクレアチンキナーゼの阻害と仮説された。ホスホクレアチン系は、肝低酸素に耐えるためにＡＴＰ生成のためのエネルギー貯蔵として作用することによる、肝臓における広汎性癌細胞の生存を増強することによって転移を促進する。癌細胞へのクレアチン輸送を阻害することにより、ＡＴＰの産生に使用するために利用可能なホスホクレアチンの量を制限する。クレアチンキナーゼの阻害は、ホスホクレアチンのクレアチンへの変換を通したＡＴＰの産生を阻害する。

【0050】

本方法で治療することができる典型的な血管形成腫瘍には、固形腫瘍、特に、酸素及び栄養素の供給のために血管構成成分を必要とする癌腫が含まれる。例示的な固形癌としては、肺癌、乳癌、骨癌、卵巣癌、胃癌、膵臓癌、咽頭癌、食道癌、精巣癌、肝臓癌、耳下腺癌、胆道癌、結腸癌、直腸癌、頸癌、子宮癌、子宮内膜癌、腎臓癌、膀胱癌、前立腺癌、甲状腺癌、扁平上皮細胞癌、腺癌、小細胞癌、黒色腫、膠芽腫、神経膠芽腫、神経芽細胞腫、カポジ肉腫、及び肉腫が挙げられるが、これらに限定されない。

【0051】

癌の治療は、腫瘍のサイズまたは体積の低減をもたらし得る。例えば、治療後の腫瘍サイズは、治療前のそのサイズに比べて、５％以上（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上）低減される。腫瘍のサイズは、任意の再現可能な測定手段によって測定することができる。例えば、腫瘍のサイズは、腫瘍の直径として測定され得る。

【0052】

癌の治療は、腫瘍の数の減少をさらにもたらし得る。例えば、治療後の腫瘍の数は、治療前の数に比べて、５％以上（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上）低減される。腫瘍の数は、任意の再現可能な測定手段によって測定することができ、例えば、腫瘍の数は、裸眼で、または特定の倍率（例えば、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、または５０倍）で目に見える腫瘍を計数することによって測定され得る。

【0053】

癌の治療は、原発腫瘍部位から離れた他の組織または臓器における転移結節の数の減少をもたらし得る。例えば、治療後の転移結節の数は、治療前の数に比べて、５％以上（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上）低減される。転移結節の数は、任意の再現可能な測定手段によって測定することができる。例えば、転移結節の数は、裸眼で、または特定の倍率（例えば、２倍、１０倍、または５０倍）で目に見える転移結節を計数することによって測定され得る。

【0054】

癌の治療は、未治療の対象集団と比較して、本発明により治療された対象集団の平均生存期間の増加をもたらし得る。例えば、平均生存期間は、３０日超（６０日超、９０日超、または１２０日超）増加する。集団の平均生存期間の増加は、任意の再現可能な手段によって測定することができる。集団の平均生存期間の増加は、例えば、集団に関して、本発明の化合物での治療開始後の平均生存長を計算することによって測定され得る。集団の平均生存期間の増加は、例えば、集団に関して、本発明の薬学的に許容される塩での１回目の治療完了後の平均生存長を計算することによっても測定することができる。

【0055】

癌の治療は、未治療の集団と比較して、治療された対象集団の死亡率の減少ももたらし得る。例えば、死亡率は、２％超（例えば、５％超、１０％超、または２５％超）減少する。治療された対象集団の死亡率の減少は、任意の再現可能な手段によって、例えば、集団に関して、本発明の薬学的に許容される塩での治療開始後の単位時間当たりの疾患関連死の平均数を計算することによって測定することができる。集団の脂肪率の減少は、例えば、集団に関して、本発明の薬学的に許容される塩での１回目の治療完了後の単位時間当たりの疾患関連死の平均数を計算することによっても測定することができる。

【0056】

組成物
適切な賦形剤及び上述の薬学的に許容される塩のうちの１つ以上を含有する組成物は、本発明の範囲内である。組成物は、薬学的に許容される賦形剤を含有する薬学的組成物、栄養的に許容される好適な賦形剤を含有する栄養組成物、または美容的に許容される賦形剤を含有する美容組成物であり得る。

【0057】

「薬学的組成物」という用語は、インビボもしくはエクスビボでの診断または治療用途に特に好適である組成物を作製する、活性薬剤と不活性または活性の賦形剤との組み合わせを指す。「薬学的に許容される賦形剤」は、対象に、または対象に対して投与された後、望ましくない生理学的作用を引き起こさない。薬学的組成物中の賦形剤は、活性成分と相溶性であり、それを安定化することができるという意味でも「許容可能」でなければならない。１つ以上の安定剤が活性化合物の送達のための薬学的賦形剤として利用され得る。薬学的に許容される賦形剤の例としては、剤形として使用可能な組成物を得るための、生体適合性ビヒクル、アジュバント、添加物、及び希釈剤が挙げられるが、これらに限定されない。他の賦形剤の例としては、コロイド状酸化ケイ素、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、ラウリル硫酸ナトリウム、及びＤ＆Ｃイエロー番号１０が挙げられる。

【0058】

本明細書で使用されるとき、「薬学的に許容される塩」という用語は、正しい医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、またはアレルギー応答を伴わずにヒト及び下等動物の組織との接触における使用に好適であり、妥当な利益／リスク比に見合うそれらの塩を指す。アミン、カルボン酸、及び他の種類の化合物の薬学的に許容される塩は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ ａｌ．ｄｅｓｃｒｉｂｅ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ ｓａｌｔｓ ｉｎ ｄｅｔａｉｌ ｉｎ Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，６６：１−１９（１９７７）。塩は、以下に一般的に記載されるように、本発明の化合物の最終単離及び精製中にインシツで、または遊離塩基もしくは遊離酸機能と好適な試薬とを反応させることにより別個に調製され得る。例えば、遊離塩基機能は、好適な酸と反応させることができる。さらに、本発明の化合物が酸性部分を保有する場合、好適なその薬学的に許容される塩は、アルカリ金属塩、例えば、ナトリウムもしくはカリウム塩、及びアルカリ土類金属、例えば、カルシウムもしくはマグネシウム塩などの金属塩を含む。薬学的に許容される非毒性酸付加塩の例としては、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、及び過塩素酸などの無機酸で、または酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸、フマル酸、もしくはマロン酸などの有機酸で形成された、またはイオン交換などの当該技術分野において使用される他の方法を使用することによって形成されたアミノ基の塩が挙げられる。他の薬学的に許容される塩は、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、二グルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グリコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ流酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチネート、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、及び吉草酸塩を含む。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、及びマグネシウムが含まれる。さらなる薬学的に許容される塩は、適切な場合、ハロゲン化物、水酸化物、カルボン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、低級アルキルスルホン酸塩、及びスルホン酸アリールなどの対イオンを使用して形成された非毒性アンモニウム、四級アンモニウム、ならびにアミンカチオンを含む。

【0059】

上述のように、本発明の薬学的組成物は、追加で、本明細書で使用されるとき、所望される特定の剤形に適する、ありとあらゆる溶媒、希釈剤、または他の液体ビヒクル、分散もしくは懸濁助剤、表面活性剤、等張剤、増粘剤もしくは乳化剤、保存剤、固体結合剤、及び潤滑剤を含む、薬学的に許容される賦形剤を含む。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｉｘｔｅｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８０）は、薬学的組成物の製剤化に使用される種々の賦形剤及びその調製のための既知の技法を開示する。任意の望ましくはい生物学的作用をもたらす、またはさもなければ薬学的組成物の任意の他の構成成分（複数可）と有害な様式で相互作用することなどにより、本発明の化合物と不相溶性である任意の従来の賦形剤媒体を除き、その使用は、本発明の範囲内であることが企図される。薬学的に許容される賦形剤として機能し得る材料のいくつかの例としては、ラクトース、グルコース、及びスクロースなどの糖類；コーンスターチ及びジャガイモデンプンなどのデンプン類；ナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、及び酢酸セルロースなどのセルロース及びその誘導体；粉末トラガカント；モルト；ゼラチン；タルク；ココアバター及び坐剤ワックスなどの賦形剤；落花生油、綿実油、紅花油、胡麻油、オリーブ油、コーン油、及び大豆油などの油類；プロピレングリコールなどのグリコール類；オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルなどのエステル類；寒天；大豆及び卵黄ホスファチド、レシチン、水素化大豆レシチン、ジミリストイルレシチン、ジパルミトイルレシチン、ジステアロイルレシチン、ジオレオイルレシチン、ヒドロキシル化レシチン、リゾホスファチジルコリン、カルジオリピン、スフィンゴミエリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ジアステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、及びそのペグ化エステル（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ７５０及びＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００など）、ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセロール、ならびにホスファチジルセリンなどの天然及び合成リン脂質が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい商業用グレードのレシチンは、商品名Ｐｈｏｓａｌ（登録商標）またはＰｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ（登録商標）で入手可能なものを含み、Ｐｈｏｓａｌ ５３ ＭＣＴ、Ｐｈｏｓａｌ ５０ ＰＧ、Ｐｈｏｓａｌ ７５ ＳＡ、Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ ９０Ｈ、Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ ９０Ｇ、及びＰｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ ９０ ＮＧを含み、大豆−ホスファチジルコリン（ＳｏｙＰＣ）及びＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００が特に好ましく、水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム；アルギン酸；発熱物質不含水；等張生理食塩水；リンゲル液；エチルアルコール、及びリン酸緩衝液などの緩衝剤、ならびにラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウムなどの他の非毒性の相溶性潤滑剤、ならびに着色剤、剥離剤、コーティング剤、甘未剤、風味剤、及び芳香剤、保存剤、及び酸化防止剤も、配合者の判断により組成物に存在し得る。

【0060】

上述の形態のうちのいずれかの上述の組成物は、本明細書に記載される癌または任意の他の疾患もしくは状態を治療するために使用され得る。有効量は、治療される対象に治療作用を生じさせるのに必要とされる活性化合物／活性薬剤の量を指す。有効用量は、当業者に認識されるように、治療される疾患の種類、投与経路、賦形剤の使用、及び他の治療上の処置との共使用の可能性により変動する。

【0061】

本発明の薬学的組成物は、非経口、経口、経鼻、直腸、局所、または頬側投与され得る。本明細書で使用されるとき、「非経口」という用語は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液嚢内、胸骨内、クモ膜下腔内、秒巣内、または頭蓋内注射、ならびに任意の好適な注入技法を指す。

【0062】

減菌された注入可能な組成物は、非毒性の非経口的に許容される希釈剤もしくは溶媒の溶液または懸濁液であり得る。かかる溶液としては、１，３−ブタンジオール、マンニトール、水、リンゲル液、及び等張塩化ナトリウム溶液が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、固定油が溶媒または懸濁培地として従来用いられる（例えば、合成モノ−またはジグリセリド）。限定されないが、オレイン酸及びそのグリセリド誘導体などの脂肪酸は、限定されないが、オリーブ油またはヒマシ油、それらのオルポリオキシエチル化形態などの天然の薬学的に許容される油であるため、注射剤の調製に有用である。これらの油溶液または懸濁液は、限定されないが、カルボキシメチルセルロースまたは類似する分散剤などの長鎖アルコール希釈剤または分散剤も含有し得る。薬学的に許容される固体、液体、または他の剤形の製造に一般的に使用される、他の一般的に使用される界面活性剤（限定されないが、ＴｗｅｅｎもしくはＳｐａｎなど）、または他の類似する乳化剤もしくは生物学的利用能のエンハンサーも製剤の目的のために使用され得る。

【0063】

経口投与用の組成物は、カプセル、錠剤、エマルジョン、及び水性懸濁液、分散液、及び溶液を含む、任意の経口的に許容される剤形であり得る。錠剤の場合、一般的に使用される賦形剤としては、ラクトース及びコーンスターチが挙げられるが、これらに限定されない。限定されないが、ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤も典型的に添加される。カプセル形態の経口投与に関して、有用な希釈剤としては、ラクトース及び乾燥コーンスターチが挙げられるが、これらに限定されない。水性懸濁液またはエマルジョンが経口投与されるとき、活性成分は、乳化剤または懸濁化剤と組み合わせた油相に懸濁または溶解され得る。所望する場合、ある特定の甘味剤、風味剤、または着色剤が添加され得る。

【0064】

記載される発明による局所投与用の薬学的組成物は、溶液、軟膏、クリーム、懸濁液、ローション、粉末、ペースト、ゲル、スプレー、エアロゾル、または油として製剤化され得る。あるいは、局所用製剤は、任意選択で、１つ以上の賦形剤または希釈剤を含み得る、活性成分（複数可）で含浸されたパッチまたは包帯の形態であり得る。いくつかの好ましい実施形態では、局所用製剤は、皮膚または他の患部を通して活性薬剤（複数可）の吸収または浸透を増強するだろう材料を含む。

【0065】

局所用組成物は、皮膚への適用に好適な、皮膚科学的に許容される賦形剤の安全かつ有効な量を含有する。「美容的に許容される」もしくは「皮膚科学的に許容される」組成物または構成成分は、過度の毒性、不相溶性、不安定性、またはアレルギー応答を伴わずに、ヒトの皮膚との接触に使用するのに好適である組成物または構成成分を指す。賦形剤は、活性薬剤及び任選択の構成成分が適切な濃度（複数可）で皮膚に送達されることを可能にする。したがって、賦形剤は、活性材料が適切な濃度で選択された標的にわたって等しく適用及び分配されることを確実にするための希釈剤、分散剤、溶媒などとしての機能を果たし得る。賦形剤は、固体、半固体、または液体であり得る。賦形剤は、ローション、クリーム、またはゲルの形態、特に、活性材料が沈降するのを阻止するのに十分な粘度または降伏点を有するものであり得る。賦形剤は、不活性であるか、または皮膚科学利益を有し得る。それは、本明細書に記載される活性構成成分と物理的及び化学的に相溶性でもあるべきであり、安定性、有効性、または組成物に関連する他の使用利益を極度に妨げるべきではない。

【0066】

併用療法
いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、増殖抑制活性を有する追加の化合物をさらに含み得る。増殖抑制活性を有する追加の化合物は、表８に示されるものを含む、増殖抑制剤の群から選択され得る。

【0067】

本発明の化合物及び薬学的組成物が製剤化され、併用療法において用いられる、つまり、化合物及び薬学的組成物が１つ以上の他の所望の治療薬または医学的手順と共に製剤化されるか、またはそれらと同時に、その前に、またはその後に投与され得ることも理解する。併用レジメンにおいて用いるための療法（治療薬または手順）の特定の組み合わせは、所望の治療薬及び／または手順、ならびに達成される所望の治療作用の適合性を考慮する。用いられる療法が同じ障害に関して所望の作用を達成し得るか、またはそれらが異なる作用を達成し得る（例えば、任意の有害作用の制御）ことも理解する。

【0068】

「増殖抑制剤」とは、表８に列記される増殖抑制剤を含む任意の増殖抑制剤を意味し、それらのうちのいずれかが、本明細書に列挙される医学的状態を治療するために、本発明の薬学的に許容される塩と組み合わせて使用され得る。増殖抑制剤は、そのオルガノ−プラチン誘導体、ナフトキノン及びベンゾキノン誘導体、クリソファン酸及びアントロキノン誘導体も含む。

【0069】

【表8】

【実施例】

【0070】

一般的な方法
示差走査熱量測定法
示差走査熱量測定（ＤＣＳ）データを、ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｑ１０ ＤＳＣを使用して収集した。典型的には、試料（２〜８ｍｇ）を、密封されないが、覆われた気密性のアロジン処理されたアルミニウム試料皿に設置し、５０ｍＬ／分の窒素パージを使用して、１０℃／分の速度で３０〜３００℃で走査した。

【0071】

熱重量分析
熱重量分析（ＴＧＡ）データを、ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ＴＧＡ Ｑ５００を使用して収集した。典型的には、試料（約１０ｍｇ）を、開放された、予め風袋引きされた（ｐｒｅ−ｔａｒｅｄ）アルミニウム試料皿に設置し、６０ｍＬ／分の窒素パージを使用して、１０℃／分の速度で２５〜３００℃まで走査した。

【0072】

Ｘ線粉末回折計
Ｘ線粉末回折パターンを、Ｃｕ Ｋα放射源（λ＝１．５４°Ａ）、９−位置試料ホルダー、及びＬＹＮＸＥＹＥ超高速検出器を装備したＢｒｕｋｅｒ Ｄ８ Ａｄｖａｎｃｅを使用して得た。試料をゼロ背景のシリコンプレートホルダー上に設置した。

【0073】

動的水蒸気吸着
試料を、Ａｑｕａｄｙｎｅ ＤＶＳ−２重量法水吸着分析器を使用して分析した。相対湿度は２〜９５％に調節され、試料の重量は継続して監視され、記録された。

【0074】

プロトン核磁気共鳴
０．０５％（ｖ／ｖ）テトラメチルシラン（ＴＭＳ）を含む重水素化されたジメチルスルホキシドに化合物を溶解することによって試料を調製した。ＴｏｐＳｐｉｎソフトウェアを備えたＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ３００ ＭＨｚ ＮＭＲで、スペクトルを周囲温度で収集した。走査の数はプロトンＮＭＲに関して１６であった。

【0075】

カール・フィッシャー
試料中の見かけ含水量は、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＤＬ３９ Ｃｏｕｌｏｍｅｔｒｉｃ ＫＦ Ｔｉｔｒａｔｏｒを使用して、カール・フィッシャー滴定によって決定された。ＨＹＤＲＡＮＡＬ−Ｃｏｕｌｏｍａｔ ＡＤは滴定試薬として使用された。約２０ｍｇの固体を滴定に使用した。分析パラメータを表９に提示する。

【0076】

【表9】

【0077】

光学顕微鏡
ＰＡＸｃａｍ ３デジタル顕微鏡カメラを装備したＯｌｙｍｐｕｓ ＢＸ５３偏光顕微鏡使用して試料を分析した。

【0078】

実施例１．固体状態のβ−ＧＰＡのプロファイリング
固体状態のβ−ＧＰＡをＸＲＰＤによって分析し（図２）、偏光顕微鏡下でも観察した（図３）。材料は結晶質であることが分かった。

【0079】

β−ＧＰＡのＤＳＣサーモグラムを図４に図示する。β−ＧＰＡの融解開始はおよそ２１９℃であり、その後、およそ２３７℃で吸熱事象及び即時分解の可能性が続くことが分かった。しかしながら、この材料は、１８７℃で別の小さな吸熱事象も呈した（微量の別の形態のβ−ＧＰＡの可能性）。

【0080】

ＴＧＡ分析は、図５に図示されるように、試料において、３０〜１４５℃での０．１％未満の重量損失があることを明らかにする。

【0081】

β−ＧＰＡの^１Ｈ ＮＭＲを図６に示す。

【0082】

β−ＧＰＡのＤＶＳ実験は、０〜９５パーセントの相対湿度に曝されたとき、およそ０．１％の水分が吸収及び脱着したことを明らかにした（図７）。ＸＲＰＤによって確認されるように、ＤＶＳ実験後に固体形態の変化は観察されなかった。

【0083】

実施例２．塩スクリーニング
段階Ｉ
表１０は、β−ＧＰＡの塩スクリーニングに関して選択された対イオンを図示する。塩スクリーニング実験は、β−ＧＰＡ対対イオンに関して１：１．１当量（ｅｑ）に設計された。

【0084】

【表10】

【0085】

１９の異なる対イオンでのβ−ＧＰＡの７６の塩スクリーニング実験を、３０ｍｇのβ−ＧＰＡで設定した。各対イオンに関して一組４つのバイアルを、４つの異なる溶媒（０．３ｍＬ）：エタノール：水（９：１）、イソプロパノール、アセトン：水（９：１）、及びアセトニトリルで設定した。

【0086】

適切な量のβ−ＧＰＡ及び対イオンをそれぞれの溶媒中に溶解し、溶解するまで７０〜７５℃に加熱した。追加の０．１ｍＬの水を、イソプロパノール、アセトン：水（９：１）及びアセトニトリルに添加した。Ｌ−アスパラギン酸を含有する試料に対して、およそ１．５ｍＬの水が固体を溶解するのに必要であった。透明な溶液が得られた後、試料を室温で撹拌のために放置した。固体は以下の試料において観察された：２１６３−４２−４、２５、２６、２７、２８、４５、及び５３〜７５。固体を濾過し、湿潤試料として直ちにＸＲＰＤにより分析した。固体が得られなかった試料を、乾燥させるために５０℃のオーブンに設置した。以下の試料で、一晩乾燥させた後に固体が得られた：２１６２−４２−２、１、２、３、及び２１〜２４。Ｌ−アスパラギン酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、及び水酸化マグネシウムでの実験は、β−ＧＰＡまたは対イオンのいずれかの沈殿をもたらした。全ての実験観察を、各段階後に記録し、表１１に列記する。

【0087】

【表11】

ＥｔＯＨ＝エタノール、ＩＰＡ＝イソプロパノール、ＭｅＣＮ＝アセトニトリル

【0088】

図８〜１３は、スラリー／緩徐な蒸発実験から単離された新しい結晶質のＸＲＰＤを表す。

【0089】

段階ＩＩ
塩スクリーニング実験の段階Ｉでゲルをもたらした試料は、別の４つの新しい溶媒系（メタノール、水、酢酸エチル、及びトリフルオロエタノール）組が使用された、段階ＩＩが考慮された。ゲルを７０℃でそれぞれの溶媒（表１０）中に溶解し、一晩撹拌させた。沈殿が観察された場合、翌日に、撹拌を中止し、試料に対してＸＲＰＤ分析を行った。沈殿がない場合、試料を５０℃のオーブンで乾燥させた。メタノール中の臭化水素酸、及び酢酸エチル、ならびにメタノール中のＬ−乳酸の３つの実験が、ＸＲＰＤ分析により確認される沈殿β−ＧＰＡをもたらした。結晶質形態を、リン酸（酢酸エチル及びトリフルオロエタノールから）、メタンスルホン酸（酢酸エチルから）、エタンスルホン酸（４つ全ての溶媒から）、及びＬ−リンゴ酸（トリフルオロエタノールから）で調製した。

【0090】

実施例３．２：１（β−ＧＰＡ：酸）モル比の塩スクリーニング実験
２：１（β−ＧＰＡ：酸）比におけるマレイン酸、フマル酸、及びシュウ酸でのβ−ＧＰＡの塩スクリーニング実験を設定した。シュウ酸及びマレイン酸に関して、およそ０．３ｍＬの水を使用して、９０℃で、β−ＧＰＡ（１２０ｍｇ）及び対イオンを２：１（β−ＧＰＡ：酸）比で溶解した。しかしながら、フマル酸での実験に関して、０．２ｍＬのメタノールを使用して、６５℃で対イオンを溶解した。全ての実験は、１０分以内に白色固体の沈殿をもたらした。しかしながら、バイアルを週末にわたって撹拌のために放置した。

【0091】

固体を濾過し、濾過中に０．５ｍＬのイソプロパノールですすぎ、その後ＸＲＰＤ分析を行った。結果を表１２の表にまとめる。

【0092】

【表12】

【0093】

ＸＲＰＤ分析は、マレイン酸実験に関して新しいＸＲＰＤパターンを明らかにした（パターン６Ｂ、図１４）。１Ｈ−ＮＭＲは、２：１塩がβ−ＧＰＡとマレイン酸との間で形成されたことを明らかにした（図１５）。

【0094】

実施例４．β−ＧＰＡの物理的及び熱的特徴付け
塩酸塩
β−ＧＰＡ−ＨＣｌ塩（試料ＩＤ：２１６２−４２−２）のＤＳＣは、およそ１３５℃での吸熱事象、続いて、およそ１８５℃での発熱事象、及び２６５℃での吸熱の存在を明らかにした（図１６）。ＤＳＣにおける発熱事象は、高温顕微鏡により確認されるように、試料の再結晶化から生じる（図１７）。ＴＧＡ分析は、３１℃〜２１０℃でのおよそ１１％の重量損失を明らかにした。

【0095】

リン酸塩
リン酸でβ−ＧＰＡの結晶質材料をもたらした２つの試料のＸＲＰＤパターンにおいてある程度の相違があったが、ＤＳＣ及びＴＧＡ分析はほぼ同一であった。両試料は、およそ１３８℃の融点及び１％未満の重量損失を呈した。塩に関する誘導結合プラズマ／発光分光法（ＩＣＰ−ＯＥＳ）によるリン酸分析は、およそ１６％（実験値：１４％）であることが分かり、したがって、おそらく１：１塩である。

【0096】

マレイン酸塩（１：１塩）
β−ＧＰＡ−マレイン酸塩（試料ＩＤ：２１６２−４２−２１）は、次の温度：９０、１２４、及び１４１℃で、３つの吸熱を呈した（図１８）。ＴＧＡ分析は、３１〜１０５℃（第１の吸熱）でのおよそ１．２％の重量損失、１０５〜１３８℃（第２の吸熱）でのおよそ５．４％の重量損失を明らかにした。

【0097】

マレイン酸塩（２：１塩）
β−ＧＰＡ−マレイン酸塩（試料ＩＤ：２１６２−４８−６）は、それぞれ、８５及び１５５℃で、２つの吸熱を呈した。しかしながら、乾燥試料は、１５５℃で１つの吸熱のみを呈した。ＤＳＣ分析から、水和物が前の事例で形成されたことは明らかであり、一方で、無水形態が乾燥の結果として得られた。ＴＧＡ分析は、３１〜１４５℃での０．１％未満の重量損失を明らかにした。

【0098】

フマル酸塩（１：１塩）
β−ＧＰＡ−フマル酸塩（試料ＩＤ：２１６２−４２−２５）は、１７１℃で吸熱（図１９）、続いて、塩の分解の可能性を呈した。ＴＧＡ分析は、３１℃〜１４５℃での１％未満の重量損失を明らかにした。（図２０）１：１フマル酸塩の^１Ｈ ＮＭＲを図２１に示す。

【0099】

エタンスルホン酸塩
β−ＧＰＡとエタンスルホン酸との間の実験から得られた結晶質材料は、５０℃のオーブンで３日以上乾燥させた後でも完全に乾燥しなかった（４つ全てのバイアル）。

【0100】

試料をＤＳＣで分析したとき、広い吸熱事象、続いて分解が観察され、ＴＧＡも開始点（３１℃）からの重量損失を明らかにした。試料の^１Ｈ−ＮＭＲでは、試料においてエタンスルホン酸の痕跡が認められなかった。したがって、結晶質材料は、β−ＧＰＡとエタンスルホン酸との間の化学反応の産物であった可能性がある。

【0101】

Ｌ−リンゴ酸塩
β−ＧＰＡ−Ｌ−リンゴ酸塩（試料ＩＤ：２１６２−４２−４５）は、１１０℃で吸熱、続いて、塩の分解の可能性を呈した。ＴＧＡ分析は、３１℃〜１４５℃での１％未満の重量損失を明らかにした。塩の^１Ｈ−ＮＭＲでは、１：１塩であることが確認された。

【0102】

コハク酸塩（２：１塩）
β−ＧＰＡ−コハク酸塩（試料ＩＤ：２１６２−４２−５９）のＤＳＣは、およそ１３０℃での吸熱事象、続いて、およそ１７５℃で別の吸熱事象の存在を明らかにした。発熱事象はおよそ１７９℃（図２２）、続いて、２３２℃で吸熱事象が観察された。ＤＳＣにおける吸熱及び発熱事象を検証するために、高温顕微鏡検査を試料に対して行い、図２３に図示する。ＴＧＡ分析は、３１℃〜１３５℃でのおよそ０．４％の重量損失、１３５〜２１５℃での１３％の重量損失を明らかにした（図２４）。^１Ｈ−ＮＭＲは、β−ＧＰＡとコハク酸との間で形成された塩が２：１（β−ＧＰＡ：酸）モル比であることを明らかにした（図２５）。

【0103】

シュウ酸塩（１：１塩）
図２６に表されるように、ＤＳＣにより分析したとき、β−ＧＰＡ−シュウ酸（試料ＩＤ：２１６２−４２−６９）は、およそ２１７℃での吸熱事象、続いて、およそ２２４℃での発熱事象、及び２６８℃での吸熱の存在を明らかにした。ＴＧＡ分析は、３１〜１９５℃での０．３％未満の重量損失を明らかにした（図２７）。材料を高温顕微鏡下で観察したとき、２１６〜２２６℃で、溶解したように見えた結晶は非常に少なかったが、観察された目に見える再結晶化事象はなかった。２６８℃から結晶の融解が生じ始め、２９１℃まで続いた。β−ＧＰＡシュウ酸塩の^１Ｈ−ＮＭＲを図２８に示す。元素分析から、β−ＧＰＡ対シュウ酸の化学量論比は、１：１であることが分かった（Ｉｎｔｅｒｔｅｋ）。

【0104】

実施例５．光学顕微鏡像
β−ＧＰＡの塩を光学顕微鏡によっても分析した。β−ＧＰＡ塩の光学顕微鏡像を図２９Ａ〜２９Ｊに示す。図３０に示されるように、β−ＧＰＡフマル酸塩（１：１）は、ロッド様結晶形態を有する。

【0105】

実施例６．過酷条件下のβ−ＧＰＡ塩の安定性試験
過酷条件下：湿潤、乾燥（真空下４５℃）、及び高湿度（ＲＨ９５％超）での各塩の固体形態安定性をＸＲＰＤにより試験した。結果を表１３の表にまとめる。

【0106】

【表13】

【0107】

実施例７．ＤＶＳ実験
β−ＧＰＡマレイン酸塩（１：１）（形態ＩＩ）、β−ＧＰＡフマル酸塩（１：１）、β−ＧＰＡマレイン酸塩（２：１）、β−ＧＰＡコハク酸塩（２：１）、及びβ−ＧＰＡシュウ酸塩（１：１）の４つの塩を、ＤＶＳ実験により分析し、続いて試料のＸＲＰＤ分析を実験の完了時に行った。

【0108】

１：１β−ＧＰＡマレイン酸塩（パターン６Ｄ）は、６０％ＲＨから吸湿率の増加を呈し、およそ９５％ＲＨで、およそ２５％の吸湿率であったが、ＸＲＰＤにより確認されるように、実験完了後、形態変化はなかった。

【0109】

１：１β−ＧＰＡフマル酸塩は、ＤＶＳ実験中、１％未満の吸湿率を呈した。ＤＶＳ後試料に対するＸＲＰＤ分析は、パターン７Ａと共にβ−ＧＰＡピークの存在を明らかにした（図３１）。

【0110】

２：１β−ＧＰＡコハク酸塩及び１：１β−ＧＰＡシュウ酸塩の両方は、ＤＶＳ実験中、０．５％未満の吸湿率を明らかにし、実験完了後、形態変化は観察されなかった。

【0111】

実施例８．異なる溶媒における塩の固体形態安定性
室温で４８時間にわたって、水（不均化試験）、メタノール、アセトニトリル、及びアセトン：水（９：１）における固体形態安定性に関して、３つの塩を試験した。

【0112】

１：１β−ＧＰＡシュウ酸塩及び１：１β−ＧＰＡフマル酸塩は、水中での４８時間のスラリー後、それらのＸＲＰＤパターンを維持した。２：１β−ＧＰＡコハク酸塩は、水中での６時間のスラリー後、β−ＧＰＡからアップピークを示し始めたため、実験は６時間後に中止した。

【0113】

メタノール、アセトニトリル、及びアセトン：水（９：１）中での１：１β−ＧＰＡフマル酸塩及び１：１β−ＧＰＡシュウ酸塩のスラリー化後、塩はそれらのＸＲＰＤパターンを維持することが分かった。

【0114】

メタノール及びアセトニトリル中での２：１β−ＧＰＡコハク酸塩のスラリー化後、塩はそのＸＲＰＤパターンを維持することが分かった。しかしながら、アセトン：水（９：１）中のスラリーは、４８時間後にβ−ＧＰＡの存在を明らかにした。

【0115】

実施例９．４０℃及び７５％湿度での塩の固体形態安定性
β−ＧＰＡフマル酸塩、コハク酸塩、及びシュウ酸塩の固体形態安定性試験を、７日間にわたって、４０℃及び７５％ＲＨで行った。およそ３０ｍｇの塩を、４０℃で、蓋を閉めて塩化ナトリウムの飽和溶液（２ｍＬ）中に設置された４ｍＬのバイアルに設置した。試料を１週間放置した後、塩のＸＲＰＤ分析を行った。３つ全ての塩は、それらの元のＸＲＰＤパターンを維持した。

【0116】

実施例１０．塩の純度
β−ＧＰＡ塩の純度を、以下の方法を使用してＨＰＬＣにより決定した。

【0117】

ＨＰＬＣ方法を以下に記載する：
カラム：ＳｅＱｕａｎｔ ＺＩＣ Ｈｉｌｉｃ ＰＥＥＫカラム（２５０×４．６ｍｍ、５μｍ）
移動相Ａ：０．０２Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ３．０

【0118】

２．７２ｇのリン酸二水素カリウムを１Ｌの脱イオン水に溶解し、８５％（ｗ／ｗ）リン酸で所望のｐＨを調節することにより移動相を調製した。
移動相Ｂ：１００％アセトニトリル
使用された勾配：

【0119】

【表14】

流量：１ｍＬ／分
注入量：１０μＬ
検出波長：２１０ｎｍ
実行時間：３０分
カラム温度：４０℃
希釈剤：アセトニトリル：水（１：１）

【0120】

対イオンも、それぞれの塩において存在したため、同じ濃度下で、ＨＰＬＣにより分析した。

【0121】

β−ＧＰＡ塩の純度を表１４に列記する。

【0122】

【表15】

【0123】

実施例１１．塩のスケールアップ
シュウ酸塩
およそ７．２ｇ（０．０５５モル）のβ−ＧＰＡを、３０ｍＬの水の入ったＥａｓｙＭａｘ反応槽に添加した。透明な溶液が得られるまで、反応混合物を９０℃で撹拌した。この溶液に、およそ５．４ｇ（０．０６モル）のシュウ酸をゆっくり添加し、反応器の温度を２０℃に下げた。およそ２０ｍＬのイソプロパノールを、反応混合物を一晩撹拌するために放置したに添加した。試料ＩＤ：２１６２−６４−２。

【0124】

翌日、スラリーを濾過し、固体を１０ｍＬのイソプロパノールで２回洗浄した。ケークを乾燥のために４５℃の真空オーブンに設置した。収量＝１１．４ｇ（９４％）。固体をＸＲＰＤにより分析し、β−ＧＰＡシュウ酸塩（パターン１８Ａ）形成が確認された。

【0125】

コハク酸塩
およそ７２ｇ（０．５５モル）のβ−ＧＰＡを、７５℃の５００ｍＬのジャケット付き槽中の４００ｍＬのエタノール：水（９：１）に添加し、スラリーを作製した。これに、６５℃の２００ｍＬのエタノール：水（９：１）に７１．２ｇ（０．６モル）を添加することにより調製されたコハク酸のスラリーを添加した。反応器の温度を１８℃に下げ、反応混合物を一晩撹拌するために放置した。試料ＩＤ：２１６２−６２−１。

【0126】

翌日、スラリーを濾過し、固体を２０ｍＬのイソプロパノールで２回洗浄した。ケークを乾燥のために４５℃の真空オーブンに設置した。収量＝１０１．３ｇ（９７％）。固体をＸＲＰＤにより分析し、β−ＧＰＡコハク酸塩（パターン１５Ａ）の形成を確認した。

【0127】

フマル酸塩
およそ４８ｇ（０．３７モル）のβ−ＧＰＡを、９０℃の５００ｍＬのジャケット付き槽中の１２０ｍＬの水に添加し、透明の溶液を得た。この溶液に、６５℃の２２０ｍＬのメタノールに４６．８ｇ（０．４０モル）を溶解することにより調製されたフマル酸の溶液を添加した。反応器の温度を１８℃に下げ、反応混合物を一晩撹拌するために放置した。試料ＩＤ：２１６２−６４−１。

【0128】

翌日、スラリーを濾過し、固体を２０ｍＬのイソプロパノールで２回洗浄した。ケークを乾燥のために４５℃の真空オーブンに設置した。収量＝６１．５ｇ（９０％）。固体をＸＲＰＤにより分析し、β−ＧＰＡフマル酸塩（パターン７Ａ）の形成を確認した。

【0129】

実施例１２．かさ密度およびタップ密度の決定
β−ＧＰＡシュウ酸塩（パターン１８Ｂ）、コハク酸塩（パターン１５Ａ）、及びフマル酸塩（パターン７Ａ）のかさ密度を、既知量の塩（ｇ）をメスシリンダーに注ぐことによって決定した。塩によって占められる体積（Ｖｉ）を記録し、方程式１を使用してかさ密度（ρ_Ｂ）を決定した。
ρ_Ｂ＝ｇ／Ｖ_ｉ（１）

【0130】

塩のタップ密度を、タップ密度分析器を使用して決定した。既知量の塩をメスシリンダーに注ぎ（ｇ）、初期体積を記録し、タップ密度分析器を使用してタップした。タップ後の最終体積（Ｖ_ｆ）を記録し、方程式２を使用してタップ密度（ρ_Ｔ）を計算した。
ρ_Ｔ＝ｇ／Ｖ_ｆ（２）

【0131】

表１５は、β−ＧＰＡ及びその塩のかさ密度及びタップ密度を列記する。

【0132】

【表16】

【0133】

実施例１３．カール指数及びハウスナー比の決定
カール指数またはカール圧縮指数（Ｃ）は、粉末の圧縮性の指標である。これは、下の方程式を使用して計算することができる：
カール指数（Ｃ）＝１００（Ｖ_ｉ−Ｖ_ｆ）／Ｖ_ｉ（３）

【0134】

２５を超えるカール指数は、不良な流動性の指標であるが、１５を下回る値は、良好な流動性の指標であると考えられる。

【0135】

ハウスナー比は、粉末または顆粒材料の流動性に相関する数である。これは、下の方程式を使用して計算することができる：
ハウスナー比＝Ｖ_ｉ／Ｖ_ｆ（４）

【0136】

表１６は、Ｒ．Ｌ．Ｃａｒｌによって提案された粉末の流動性質に対応するカール指数及びハウスナー比を列記する。

【0137】

【表17】

【0138】

表１７は、β−ＧＰＡ及びその塩のカール指数及びハウスナー比を列記する。

【0139】

【表18】

【0140】

実施例１４．Ｈａｎｓｏｎ Ｆｌｏｄｅｘユニットを使用した流動性測定
方法：円筒状の槽をスタンドに固定し、漏斗の下が槽に近接するように、その上に漏斗も固定する。次に、約５０〜６０ｇの粉末投入量を、漏斗を通してシリンダの中央に入れる。レバー装置を引っ張り、迅速かつ振動させることなくディスクに穴を空ける。粉末が小径穴を通ってゆっくり流れ、逆さまの円錐台のような形状の空洞を残す場合、試験は正と考えられる。粉末がバルクに凝集し、急に落下して、円筒状の空洞を形成する場合、試験は負と考えられる。粉末が小径穴を通って落下しない場合、試験は負と考えられる。実験が負である場合、より大きい穴を有するディスクで粉末を再度試験する。表１８〜２１は、β−ＧＰＡ及びその塩の流動性試験の結果を列記する。

【0141】

【表19】

【0142】

【表20】

【0143】

【表21】

【0144】

【表22】

【0145】

実施例１５．１：１フマル酸塩の高湿度でのＤＶＳ及び安定性
試料２１６２−６４−１を、３つ組でＤＶＳにより分析し、ＤＶＳ後の試料を、ＸＲＰＤで特徴付けし、実験完了時に形態を特定した。３つ全ての実験において、β−ＧＰＡフマル酸塩の吸湿率は、０．１％未満であることが分かった。３つ全ての実験において、ＸＲＰＤは、β−ＧＰＡフマル酸塩（パターン７Ａ）と同一であることが分かり、ＤＶＳ後の試料２１６２−４２−３とは異なり、β−ＧＰＡピークの出現は観察されなかった（図３０）。

【0146】

２１６２−６４−１の固体形態安定性も、ＲＨ９５％超、室温で試験した。β−ＧＰＡフマル酸塩は、４８時間後、その元のＸＲＰＤパターン（パターン７Ａ）を維持することが分かった。

【0147】

塩スクリーニング実験の要約
１０のβ−ＧＰＡの塩、つまり、β−ＧＰＡ ＨＣｌ、β−ＧＰＡリン酸塩、β−ＧＰＡメシル酸塩、β−ＧＰＡマレイン酸塩（１：１、パターン６Ａ）、β−ＧＰＡマレイン酸塩（１：１、パターン６Ｄ）、β−ＧＰＡマレイン酸塩（２：１、パターン６Ｂ）、β−ＧＰＡフマル酸塩、β−ＧＰＡリンゴ酸塩、β−ＧＰＡコハク酸塩、及びβ−ＧＰＡシュウ酸塩を、塩スクリーニング実験から単離した（段階Ｉ及びＩＩ）。

【0148】

１０の塩のうち、６つの塩：β−ＧＰＡ ＨＣｌ、β−ＧＰＡリン酸塩、β−ＧＰＡメシル酸塩、β−ＧＰＡマレイン酸塩（１：１、パターン６Ａ）、β−ＧＰＡリンゴ酸塩、及びβ−ＧＰＡマレイン酸塩（２：１、パターン６Ｂ）を、それらの潮解性、非再現性、または純度問題のため、さらなる試験から除外した。

【0149】

ＤＶＳ実験を行った後に、β−ＧＰＡの３つの塩（β−ＧＰＡマレイン酸塩（１：１）、フマル酸塩（１：１）、コハク酸塩（２：１）、及びシュウ酸塩（１：１））を選択し、形態安定性をＸＲＰＤにより決定した。

【0150】

β−ＧＰＡフマル酸塩、コハク酸塩、及びシュウ酸塩は、ＤＶＳ実験後、それらのＸＲＰＤを維持した。しかしながら、β−ＧＰＡフマル酸塩は、塩の解離を示す、β−ＧＰＡからの２つのピークの存在を明らかにした。

【0151】

β−ＧＰＡフマル酸塩のスケールアップ試料を、再度、ＤＶＳにより３回分析し、これらの実験において、試料はいずれの塩の解離を呈さなかった。前のＤＶＳ実験を無視した。ＲＨ９５％超、２０℃で、β−ＧＰＡフマル酸塩の追加の固体形態安定性試験も、塩が安定していることを明らかにした。

【0152】

塩の純度評価をＨＰＬＣにより行い、塩の純度は以下の通りであった：β−ＧＰＡフマル酸塩−９７．７％、β−ＧＰＡコハク酸塩−９８．１％、及びβ−ＧＰＡシュウ酸塩−９８．４％。

【0153】

塩の安定性試験も、室温で４８時間にわたって、水（不均化の試験）、メタノール、アセトニトリル、及びアセトン：水（９：１）においてそれらをスラリー化することによって行った。以下の結果が得られた：
−β−ＧＰＡマレイン酸塩、フマル酸塩、及びシュウ酸塩は、水における４８時間のスラリー後、それらのＸＲＰＤパターンを維持したが、β−ＧＰＡコハク酸塩は、水中での６時間のスラリー後、β−ＧＰＡからの２つのピークを示した。
−４８時間のスラリー後、メタノール及びアセトニトリル中のβ−ＧＰＡマレイン酸塩は、その元の形態を維持することが分かった。しかしながら、アセトン：水（９：１）におけるスラリーは、ＸＲＰＤ分析におけるいくつかの追加のピークと共に、塩の元のパターン（パターン６Ｄ）と一致した。
−４８時間のスラリー後、メタノール及びアセトニトリル中のβ−ＧＰＡコハク酸塩は、そのＸＲＰＤパターンを維持することが分かった。しかしながら、アセトン：水（９：１）におけるスラリーは、ＸＲＰＤ分析における塩と共に、４８時間後、β−ＧＰＡの存在を明らかにした。

【0154】

β−ＧＰＡフマル酸塩、コハク酸塩、及びシュウ酸塩の固体形態安定性試験を、７日間にわたって、４０℃及び７５％ＲＨで行った。３つ全ての塩は、安定していることが分かり、それらの元のＸＲＰＤパターンを維持した。

【0155】

β−ＧＰＡの３つの塩を、６０〜１００ｇスケールにスケールアップした。β−ＧＰＡフマル酸塩及びコハク酸塩を、首尾よくスケールアップしたが、β−ＧＰＡシュウ酸塩は、塩のエタノール溶媒和物をもたらした（^１Ｈ−ＮＭＲにより確認した）。エタノール対β−ＧＰＡのモルパーセントは、０．２２〜１であることが分かった（パターン１８Ｂ）。

【0156】

それにもかかわらず、エタノール：水（９：１）から水及びイソプロパノールに溶媒系を変更することにより、元のβ−ＧＰＡシュウ酸塩が産生されたが、ＸＰＲＤパターンは、わずかな量の新しい追加のピークの存在を確認した。

【0157】

β−ＧＰＡ及びその塩：β−ＧＰＡシュウ酸塩（パターン１８Ａ及びＢ）、フマル酸塩、及びコハク酸塩のかさ密度及びタップ密度を、密度分析器ユニットを使用して決定した。同様に、塩の流動性測定を、Ｈａｎｓｏｎ Ｆｌｏｄｅｘユニットを使用して測定した。

【0158】

実験データから、β−ＧＰＡ及びβ−ＧＰＡシュウ酸塩（パターン１８Ｂ）は、不良な流動性質を呈することが分かったが、β−ＧＰＡシュウ酸塩（パターン１８Ａ）は、普通であり、β−ＧＰＡコハク酸塩は良好であり、β−ＧＰＡフマル酸塩は優れた流動特徴を呈した。

【0159】

固体形態安定性、再現性、密度、及び流動性特性に基づき、β−ＧＰＡフマル酸塩がスクリーニングされた塩の中で最良の特性を有するように見える。

【0160】

実施例１６．１：１β−ＧＰＡフマル酸塩の多形体スクリーニング
１：１β−ＧＰＡフマル酸塩の固体形態安定性
β−ＧＰＡフマル酸塩の固体形態安定性を、飽和塩溶液チャンバを使用して、表２２に列記される種々の温度／湿度条件で、１週間にわたって試験した。試料を、１週間後にＸＲＰＤにより分析した。種々の温度／ＲＨ条件下のβ−ＧＰＡフマル酸塩の安定性試料のＸＲＰＤ分析は、β−ＧＰＡフマル酸塩が元のＸＲＰＤパターン（パターン７Ａ）を維持したことを示した。

【0161】

【表23】

【0162】

１：１β−ＧＰＡフマル酸塩の溶解度
β−ＧＰＡフマル酸塩の溶解度を、１５及び４５℃で、１５の異なる溶媒及び溶媒混合物において、重量測定により測定した。約１００ｍｇの化合物を、１０体積（１ｍＬ）の溶媒／溶媒混合物に分配し、４８時間撹拌した。表２３は、異なる溶媒におけるβ−ＧＰＡフマル酸塩の溶解度を表す。４８時間後、バイアルを遠心分離機にかけた。上清を回収し、４５℃の真空下で緩徐な蒸発のために放置し、溶解度を決定した。遠心分離及び蒸発後に得た固体をＸＲＰＤにより分析した。４８時間のスラリー後の沈殿物のＸＲＰＤ分析は、１：１β−ＧＰＡフマル酸塩に関して形態の形質転換がなかったことを明らかにした。

【0163】

【表24】

ＩＰＡ＝イソプロパノール、ＥｔＯＨ＝エタノール、ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル、ＤＣＭ＝ジクロロメタン、ＴＢＭＥ＝ｔ−ブチルメチルエーテル、ＭｅＯＨ＝メタノール、ＭｅＣＮ＝アセトニトリル

【0164】

４５の試料のうち１０に関して、スラリー実験からの濾液の緩徐な蒸発後のＸＲＰＤはパターン７Ａをもたらした。１７の試料は、ＸＲＰＤ分析のための十分な固体を有しなかった。試料２１６２−７４−５Ｂは、濾液の緩徐な蒸発後に新しい結晶質形態をもたらし、試料２１６２−７４−６Ｂは、パターン７Ａと７Ｂの混合型ＸＲＰＤをもたらした（図３２）。

【0165】

β−ＧＰＡフマル酸塩を、４８時間かけてテトラヒドロフラン：水（１：１）中でスラリー化した。濾液を、真空下４５℃での蒸発に設定し、一晩蒸発させた後、オフホワイト色の固体を得た。スラリーからの固体及び緩徐な蒸発後に得られた固体の両方をＸＲＰＤにより分析した（図３３）。

【0166】

テトラヒドロフラン：水（１：１）のスラリー実験からのβ−ＧＰＡフマル酸塩の濾液の緩徐な蒸発（４５℃）により得られたパターン７Ｂを、ＤＳＣ及び^１Ｈ−ＮＭＲにより分析した。ＤＳＣは、１６１℃での吸熱の存在及びパターン７Ａ（元のβ−ＧＰＡフマル酸塩）の痕跡も明らかにした。

【0167】

抗溶媒添加実験
１：１β−ＧＰＡフマル酸塩の抗溶媒添加実験を、異なる抗溶媒を使用することによって行った。所与の量の１：１β−ＧＰＡフマル酸塩を、５０℃の溶媒中に溶解した。およそ１ｍＬの氷冷抗溶媒を塩溶液に添加し、氷浴中で２時間撹拌し、続いて２０℃で一晩撹拌し続けた。どの実験も新しい形態のβ−ＧＰＡフマル酸塩をもたらさなかった。

【0168】

未希釈及び溶媒滴摩砕実験
未希釈及び溶媒滴摩砕実験も多形体スクリーニングの一部として行った。乳鉢及び乳棒を使用して、およそ３０ｍｇの試料を、２０μＬの溶媒（テトラヒドロフラン、イソプロパノール、アセトン、水、またはｔ−ブチルメチルエーテル）の存在下で、５分間摩砕した。摩砕後、試料をＸＲＰＤにより分析した。全ての実験は、パターン７Ａと同一であったＸＲＰＤをもたらした。

【0169】

β−ＧＰＡフマル酸塩の非晶質形態を生成する試み
１ｇの１：１β−ＧＰＡフマル酸塩を、丸底フラスコ中の５０℃の１０ｍＬの水に溶解した。試料が固化するまで丸底フラスコをドライアイス／アセトン冷却浴（−７８℃）に設置し、その後４８時間凍結乾燥させた。白色固体を得て、これを、ＸＲＰＤ、ＤＳＣ、及び^１Ｈ−ＮＭＲにより分析した。試料ＩＤ：２１６２−８４−１。ＸＲＰＤ分析は、図３４に示されるように、２１６２−８４−１（パターン７Ｃ）の新しいＸＲＰＤパターンを明らかにした。２１６２−８４−１の１Ｈ−ＮＭＲは、凍結乾燥後に得られた固体が２：１β−ＧＰＡフマル酸塩の形成をもたらしたことを明らかにした（図３５）。しかしながら、試料の顕微鏡像は、ある非晶質材料の存在を明らかにした。２：１β−ＧＰＡフマル酸塩の形成後の過剰なフマル酸が凍結乾燥された試料の顕微鏡像に見られる非晶質に形質転換された可能性があるということは可能であり得る。

【0170】

上記の仮設を確認するために、以下の実験（表２４）を凍結乾燥された試料（パターン７Ｃ）に対して行った。

【0171】

【表25】

【0172】

凍結乾燥された試料のＤＳＣは、発熱事象（再結晶化または固相形質転換の可能性）、続いて、２つの吸熱事象の存在を明らかにした（図３６）。第１の吸熱事象は、１：１β−ＧＰＡフマル酸塩、続いて、１：１β−ＧＰＡフマル酸塩の融解後に形成された可能性がある可能な副産物の融解であり得る。

【0173】

１ｇの１：１β−ＧＰＡフマル酸塩を、５０℃の１０ｍＬの水に溶解し、迅速な蒸発のために、１００℃の真空下に設置した。試料ＩＤ：２１６２−８４−２。得られた固体をＸＲＰＤにより分析し、試料が元のβ−ＧＰＡフマル酸塩粉末パターン（パターン７Ａ）を維持することが分かった。

【0174】

温度周期実験
以下（表２５）の実験を行い、１：１β−ＧＰＡフマル酸塩の可能な多形形態を単離した。

【0175】

【表26】

【0176】

１６０〜１６５℃でのβ−ＧＰＡフマル酸塩（２１６２−８４−７）の加熱により、黄色から褐色の固体（副反応の可能性、続いて分解）が得られ、これを、１Ｈ−ＮＭＲ及びＸＲＰＤによりさらに分析した。

【0177】

いくつかの冷却実験を行い、それらの全てが形態の変化をもたらさなかったか、またはフマル酸β形態の単離、または付随してフマル酸α及びβ形態の混合物をもたらした。

【0178】

２：１塩を形成するための凍結乾燥実験
およそ２６４ｍｇのβ−ＧＰＡ及び１１８ｍｇのフマル酸を、６５℃の１０ｍＬの水に溶解した。

【0179】

ドライアイス／アセトン混合物を使用して溶液を固化し、続いて、４８時間凍結乾燥させた。これは、２：１塩の単離をもたらした。

【0180】

拡散実験
１：１β−ＧＰＡフマル酸塩の拡散実験を、１ｇの塩を１０ｍＬの水に溶解することにより設定した。全ての拡散実験に関して、１ｍＬの上記溶液を小さな４ｍＬのバイアルに分配し、異なる溶媒の入った２０ｍＬのシンチレーションバイアルに設置した。実験のいずれも新しい形態のβ−ＧＰＡフマル酸塩をもたらさなかった。

【0181】

逆抗溶媒添加実験
１：１β−ＧＰＡフマル酸塩の逆抗溶媒添加実験を、異なる抗溶媒を使用することによって行った。所与の量の１：１β−ＧＰＡフマル酸塩を、４０℃の１ｍＬの溶媒中に溶解した。この溶液を既知量の抗溶媒に添加し、固体が沈殿するまで室温で撹拌した。実験のいずれも新しい形態のβ−ＧＰＡフマル酸塩をもたらさなかった。

【0182】

多形体スクリーニング実験の要約
スクリーニング実験から得た利用可能なデータに基づき、パターン７Ａ（元の１：１β−ＧＰＡフマル酸塩形態）が最も安定した形態であるように見える。

【0183】

実施例１７．１：１β−ＧＰＡフマル酸塩のラマン分光法
１：１β−ＧＰＡフマル酸塩（パターン７Ａ）のラマン分光法を、１０６４ｎｍレーザを装備したＢｒｕｋｅｒ ＩＦＳ ６６Ｖ／Ｓ ＦＴ−ＩＲ／ＦＴ−ラマン分光計で行った。（図３７）ラマンスペクトルのピークリストを表２６に列記する。

【0184】

【表27】

【0185】

他の実施形態
本発明はその特定の実施形態に関して記載されてきたが、さらなる修正が可能であり、本出願が、一般的に本発明の原理に従う本発明の任意の変形、使用、または適応を網羅するよう意図されており、これには、本発明が属する技術分野内の既知のまたは慣用の実施の範囲内に入り、前述の本明細書の本質的な特徴に適用され得る本開示から逸脱するものを含むことを理解されたい。
（付記）
（付記１）
２０未満のカール指数及び／または１．２５未満のハウスナー比を有する、β−グアニジノプロピオン酸の薬学的に許容される塩。
（付記２）
前記薬学的に許容される塩が、β−グアニジノプロピオン酸の塩及びジカルボン酸の塩である、付記１に記載の薬学的に許容される塩。
（付記３）
前記薬学的に許容される塩が、１：１フマル酸塩、２：１コハク酸塩、または１：１シュウ酸塩である、付記１または２に記載の薬学的に許容される塩。
（付記４）
前記薬学的に許容される塩が、１：１フマル酸塩である、付記１〜３のいずれか１つに記載の薬学的に許容される塩。
（付記５）
前記塩が、結晶質である、付記４に記載の薬学的に許容される塩。
（付記６）
４０重量％未満の非晶質化合物を含む、付記５に記載の薬学的に許容される塩。
（付記７）
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）プロファイルにおいて約１７１℃での吸熱開始を有する、付記５または６に記載の薬学的に許容される塩。
（付記８）
Ｘ線粉末回折法により測定される、２７±０．５の回折角２θ（°）で少なくとも１つのピークを有する、付記５〜７のいずれか１つに記載の薬学的に許容される塩。
（付記９）
Ｘ線粉末回折法により測定される、２０±０．５の回折角２θ（°）で少なくとも１つのピークをさらに有する、付記８に記載の薬学的に許容される塩。
（付記１０）
Ｘ線粉末回折法により測定される、２０．５±０．５の少なくとも１つの回折角２θ（°）をさらに有する、付記８または９に記載の薬学的に許容される塩。
（付記１１）
Ｘ線粉末回折法により測定される、２３±０．５の少なくとも１つの回折角２θ（°）をさらに有する、付記８〜１０のいずれか１つに記載の薬学的に許容される塩。
（付記１２）
ロッド様結晶の形態である、付記５〜１１のいずれか１つに記載の薬学的に許容される塩。
（付記１３）
熱重量分析により測定される、１％未満の３１℃〜１４０℃での重量損失を有する、付記５〜１２のいずれか１つに記載の薬学的に許容される塩。
（付記１４）
ラマン分光法により測定される、２９４１±１ｃｍ^-1で少なくとも１つのピークを有する、付記５〜１３のいずれか１つに記載の薬学的に許容される塩。
（付記１５）
ラマン分光法により測定される、１６５３±１ｃｍ^-1で少なくとも１つのピークを有する、付記５〜１４のいずれか１つに記載の薬学的に許容される塩。
（付記１６）
ラマン分光法により測定される、９９７±１ｃｍ^-1で少なくとも１つのピークを有する、付記５〜１３のいずれか１つに記載の薬学的に許容される塩。
（付記１７）
１０重量％未満の非晶質化合物及び薬学的に許容される賦形剤を含有する、付記１〜１６のいずれか１つに記載の薬学的に許容される塩を含む組成物。
（付記１８）
β−グアニジノプロピオン酸のフマル酸塩を含む組成物であって、β−グアニジノプロピオン酸の前記フマル酸塩の少なくとも８０％が１：１塩である、組成物。
（付記１９）
前記組成物が、β−グアニジノプロピオン酸の２：１フマル酸塩を実質的に含まない、付記１８に記載の組成物。
（付記２０）
付記１〜１６のいずれか１つに記載の薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される賦形剤を含む、単位剤形の薬学的組成物。
（付記２１）
付記１〜１６のいずれか１つに記載の薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物であって、前記薬学的組成物が、静脈内注入用に製剤化される、薬学的組成物。
（付記２２）
癌を治療する方法であって、有効量の付記１〜１６のいずれか１つに記載の薬学的に許容される塩、または付記１７〜２１のいずれか１つに記載される組成物を投与することを含む、方法。
（付記２３）
前記癌が、転移性癌である、付記２２に記載の方法。
（付記２４）
前記有効量が、前記癌の転移性コロニー形成を抑制するのに有効な量を含む、付記２２または２３に記載の方法。
（付記２５）
前記癌が、胃腸癌である、付記２２〜２４のいずれか１つに記載の方法。
（付記２６）
転移性癌の治療を必要とする対象における転移性癌を治療するための方法であって、前記対象に、前記癌の転移性コロニー形成を抑制するのに有効な量で、付記１〜１６のいずれか１つに記載の薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される賦形剤を含む水性組成物を注射することを含む、方法。
（付記２７）
前記転移性癌が、胃腸癌である、付記２６に記載の方法。
（付記２８）
β−グアニジノプロピオン酸の薬学的に許容される１：１フマル酸塩を産生する方法であって、β−グアニジノプロピオン酸の薬学的に許容される１：１フマル酸塩を産生するのに十分な量で、β−グアニジノプロピオン酸とフマル酸とを混合することを含む、方法。
（付記２９）
前記方法が、前記β−グアニジノプロピオン酸及び前記フマル酸を溶媒中に溶解することを含み、β−グアニジノプロピオン酸の前記１：１フマル酸塩が、前記溶媒から沈殿する、付記２８に記載の方法。
（付記３０）
前記方法が、β−グアニジノプロピオン酸の前記１：１フマル酸塩を再結晶化することをさらに含む、付記２８または２９に記載の方法。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29A-29J】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【図34】

【図35】

【図36】

【図37】