特許 6884653 新規化合物、並びにその製造方法及び用途

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6884653

(24)【登録日】2021年5月14日

(45)【発行日】2021年6月9日

(54)【発明の名称】新規化合物、並びにその製造方法及び用途

(51)【国際特許分類】

   C07C 49/573 20060101AFI20210531BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20210531BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20210531BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20210531BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20210531BHJP

   A61K 31/12 20060101ALI20210531BHJP

   C07C 45/66 20060101ALI20210531BHJP

   C07C 45/64 20060101ALI20210531BHJP

   C07B 51/00 20060101ALN20210531BHJP

   C07B 61/00 20060101ALN20210531BHJP

【ＦＩ】

   C07C49/573CSP

   A61P1/00

   A61P35/00

   A61P43/00 111

   A61P25/28

   A61K31/12

   C07C45/66

   C07C45/64

   !C07B51/00 B

   !C07B61/00 300

【請求項の数】8

【全頁数】16

(21)【出願番号】特願2017-125500(P2017-125500)

(22)【出願日】2017年6月27日

(65)【公開番号】特開2019-6728(P2019-6728A)

(43)【公開日】2019年1月17日

【審査請求日】2020年6月4日

(73)【特許権者】

【識別番号】506388130

【氏名又は名称】宮澤 三雄

(74)【代理人】

【識別番号】110000796

【氏名又は名称】特許業務法人三枝国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】宮澤 三雄

【審査官】 高森 ひとみ

(56)【参考文献】

【文献】 特開平４−２７３８５４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００３−１６０５２９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開昭６３−８３０３８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 WU, Guo-Sheng et al.，Photochemical syntheses of B-damascenone and B-damascone，ACTA CHIMICA SINICA，１９９０年，Vol.48, No.11，pp.1113-1119

【文献】 SOBEH, M. et al.，Chemical profiling of Phlomis thapsoides(Lamiaceae) and in vitro testing of its biological activities，Med Chem Res，２０１６年，Vol.25，pp.2304-2315，DOI:10.1007/s00044-016-1677-9

【文献】 GERHAUSER, C. et al.，Identificaion of 3-hydroxy-B-damascone and related carotenoid-derived aroma compounds as novel potent inducers of Nrf2-mediated phase 2 response with concomitant anti-inflammatory activity，Molecular Nutrition Food Research，２００９年，Vol.53, No.10，pp.1237-1244

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｃ

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（２）：

【化1】

で表される、１０−ヒドロキシ−β−ダマスコン。

【請求項2】

β−ダマスコンのヒト代謝産物である、請求項１に記載の１０−ヒドロキシ−β−ダマスコン。

【請求項3】

請求項１又は２に記載の１０−ヒドロキシ−β−ダマスコンを有効成分として含有する、胃がん細胞増殖抑制剤。

【請求項4】

請求項１又は２に記載の１０−ヒドロキシ−β−ダマスコンを有効成分として含有する、β−セクレターゼ阻害剤。

【請求項5】

請求項４に記載のβ−セクレターゼ阻害剤を含有する老人性痴呆症の予防又は治療薬。

【請求項6】

請求項４に記載のβ−セクレターゼ阻害剤を含有するアルツハイマー型痴呆症の予防又は治療薬。

【請求項7】

式（２）：

【化2】

で表される１０−ヒドロキシ−β−ダマスコンを製造する方法であって、
式（４）：

【化3】

で表されるβ−シクロシトラールと、式（５）：

【化4】

（式中、Ｘはハロゲン原子を示す。）
で表されるグリニャール試薬とを反応させて、式（６）：

【化5】

で表される第１中間体を得る第１工程、
該第１中間体のヒドロキシ基を酸化して、式（７）：

【化6】

で表される第２中間体を得る第２工程、
該第２中間体のアルケン部分をヒドロキシ化して、式（８）：

【化7】

で表される第３中間体を得る第３工程、
該第３中間体を脱水して、上記式（２）で表される目的物を得る第４工程
を含む方法。

【請求項8】

前記第４工程が、前記第３中間体の４位のヒドロキシ基を保護して、式（９）：

【化8】

(式中、Ｒは、ヒドロキシ基の保護基を示す。)
で表される第４中間体を得、得られた第４中間体を脱水して、式（１０）：

【化9】

(式中、Ｒは、前記と同じ。)
で表される第５中間体を得た後、脱保護することにより、上記式（２）で表される目的物を得る、請求項７に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、新規化合物、並びにその製造方法及び用途に関する。

【背景技術】

【0002】

β−ダマスコンは、下記式（１）：

【0003】

【化1】

【0004】

で表される化合物である。該化合物は、バラの精油等に含まれており、食品、香粧品等の香料原料として広く使用されている（例えば、特許文献１及び２）。

【0005】

特許文献１には、β−ダマスコンを、コラーゲン類含有飲食物の風味改善剤として使用することが記載されている。また、特許文献２には、β−ダマスコンを、毛髪化粧料のための香料組成物の香料成分として使用することが記載されている。

【0006】

また、β−ダマスコンの誘導体として、３−ヒドロキシ−β−ダマスコン、及び４−ヒドロキシ−β−ダマスコンが公知である。

【0007】

しかしながら、上記化合物以外のβ−ダマスコンの誘導体は報告されていない。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0008】

【特許文献1】特開２０１５−１８１３４９号公報

【特許文献2】特開２００９−２０９１５９号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

本発明の主な目的は、β−ダマスコン誘導体として新規な化合物を提供することにある。本発明はまた、その新規化合物の製造方法及び用途を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0010】

本発明者は、鋭意研究を重ねた結果、β−ダマスコンのヒト代謝産物が新規化合物であり、この新規化合物が胃がん細胞増殖抑制作用及びβ−セクレターゼ阻害作用を有することを見出した。本発明はこのような知見に基づき完成されたものである。

【0011】

本発明は、下記項１〜項８に示す１０−ヒドロキシ−β−ダマスコン、その製造方法等に係る。
項１．
式（２）：

【0012】

【化2】

【0013】

で表される、１０−ヒドロキシ−β−ダマスコン。
項２．
β−ダマスコンのヒト代謝産物である、上記項１に記載の１０−ヒドロキシ−β−ダマスコン。
項３．
上記項１又は２に記載の１０−ヒドロキシ−β−ダマスコンを有効成分として含有する、胃がん細胞増殖抑制剤。
項４．
上記項１又は２に記載の１０−ヒドロキシ−β−ダマスコンを有効成分として含有する、β−セクレターゼ阻害剤。
項５．
上記項４に記載のβ−セクレターゼ阻害剤を含有する老人性痴呆症の予防又は治療薬。
項６．
上記項４に記載のβ−セクレターゼ阻害剤を含有するアルツハイマー型痴呆症の予防又は治療薬。
項７．
式（２）：

【0014】

【化3】

【0015】

で表される１０−ヒドロキシ−β−ダマスコンを製造する方法であって、
式（４）：

【0016】

【化4】

【0017】

で表されるβ−シクロシトラールと、式（５）：

【0018】

【化5】

【0019】

（式中、Ｘはハロゲン原子を示す。）
で表されるグリニャール試薬とを反応させて、式（６）：

【0020】

【化6】

【0021】

で表される第１中間体を得る第１工程、
該第１中間体のヒドロキシ基を酸化して、式（７）：

【0022】

【化7】

【0023】

で表される第２中間体を得る第２工程、
該第２中間体のアルケン部分をヒドロキシ化して、式（８）：

【0024】

【化8】

【0025】

で表される第３中間体を得る第３工程、
該第３中間体を脱水して、上記式（２）で表される目的物を得る第４工程
を含む方法。
項８．
前記第４工程が、前記第３中間体の４位のヒドロキシ基を保護して、式（９）：

【0026】

【化9】

【0027】

(式中、Ｒは、ヒドロキシ基の保護基を示す。)
で表される第４中間体を得、得られた第４中間体を脱水して、式（１０）：

【0028】

【化10】

【0029】

(式中、Ｒは、前記と同じ。)
で表される第５中間体を得た後、脱保護することにより、上記式（２）で表される目的物を得る、上記項７に記載の方法。

【発明の効果】

【0030】

本発明の一般式（２）で表される化合物は新規であり、高い胃がん細胞増殖抑制作用を有しているため、胃がん細胞増殖抑制剤として有用である。また、該新規化合物は、高いβ−セクレターゼ阻害作用を有しているため、β−セクレターゼ阻害剤として有用であり、アルツハイマー型痴呆症等の老人性痴呆症の予防又は治療薬として利用可能である。本発明の化合物は、β−ダマスコンのヒト肝ミクロソームによる代謝によって製造することができる。また、本発明の製造方法を用いれば、β−シクロシトラールから該新規化合物を化学的に合成することが可能である。

【図面の簡単な説明】

【0031】

【図1】実施例２の製造方法を説明するスキームである。

【図2】β−ダマスコン（１）、１０−ヒドロキシ−β−ダマスコン（２）、及び４−ヒドロキシ−β−ダマスコン（３）の胃がん細胞に対する増殖抑制効果を示す図である。

【図3】β−ダマスコン（１）、１０−ヒドロキシ−β−ダマスコン（２）、及び４−ヒドロキシ−β−ダマスコン（３）のβ−セクレターゼ活性阻害効果を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0032】

本発明は、式（２）：

【0033】

【化11】

【0034】

で表される１０−ヒドロキシ−β−ダマスコン（以下、「化合物（２）」という場合もある。）である。上記化合物（２）は、文献未記載の新規化合物である。化合物（２）は、実施例で詳述するように、胃がん細胞増殖抑制作用を有していることから、胃がん細胞増殖抑制剤として用いることができる。また、化合物（２）は、実施例で詳述するように、β−セクレターゼ阻害作用を有していることから、β−セクレターゼ阻害剤として用いることができる。

【0035】

上記化合物（２）は、β−ダマスコンのヒト代謝産物である。すなわち、上記化合物（２）は、β−ダマスコンを、薬物代謝能力を有する酵素（例えば、ヒト肝ミクロソーム、Ｐ−４５０）による酵素反応によって得られる化合物である。

【0036】

上記化合物（２）は、β−ダマスコンのヒト肝ミクロソームによる代謝によって製造することができる。β−ダマスコンの代謝に使用するヒト肝ミクロソームとしては、市販の製品を用いてもよいし、公知の方法（例えば、「実験生物学講座６ 細胞分画法」、編集：毛利秀雄、香川靖雄、発行所：丸善株式会社、ISBN:4-621-02950-9 C3345、発行日：1984/12/25、「Method in Enzymolozy, Volume 206, Cytochrome P450」、EDITED BY Michael R. Waterman、Eric F. Johnson、ACADEMIC PRESS, INC.、1991等の文献参照）に従って調製してもよい。具体的には、ヒト肝ミクロソームは、由来の明らかなヒトの肝臓をホモジナイズして得られる組織破砕物を遠心分離（例えば、４℃、１００００×ｇ、３０min）した後、その上清をさらに遠心分離（例えば、４℃、１０００００×ｇ、９０min）し、得られた沈殿を、１００ｍＭ ピロリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）に再度懸濁し、遠心分離（例えば、４℃、１０００００×ｇ、６０min）して得られる沈殿を、適切な緩衝液に懸濁して得られる画分を試料として用いればよい。

【0037】

β−ダマスコンの代謝は、β−ダマスコンをヒト肝ミクロソームで処理し、産生された代謝産物を採取することにより行われる。ここで、「処理」とは、β−ダマスコンとヒト肝ミクロソームとの接触、β−ダマスコンをヒト肝ミクロソームの培養培地に含有させて行う培養等の該技術分野で通常行われる代謝手段を含む意味で用いられている。「採取」とは、該技術分野で通常行われる分離、抽出及び精製手段を含む工程を意味している。

【0038】

また、上記化合物（２）は、原料であるβ−シクロシトラールから、下記に示す工程を経て製造することができる。以下、製造方法について詳細に説明する。

【0039】

第１工程
第１工程は、式（４）：

【0040】

【化12】

【0041】

で表されるβ−シクロシトラールと、式（５）：

【0042】

【化13】

【0043】

（式中、Ｘはハロゲン原子を示す。）
で表されるグリニャール試薬とを反応させて、式（６）：

【0044】

【化14】

【0045】

で表される第１中間体を得る工程である。

【0046】

原料であるβ−シクロシトラール（４）として、市販品を使用することができる。

【0047】

ハロゲン原子として、臭素原子、塩素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。グリニャール試薬として、アリルマグネシウムブロミド、アリルマグネシウムクロリド等を使用することができる。

【0048】

グリニャール試薬の使用量は、β−シクロシトラール（４）に対して、通常１．０２〜２倍モル程度、好ましくは１．２倍モル程度である。

【0049】

グリニャール反応は、反応に悪影響を及ぼさない慣用の溶媒中で行うことが好ましい。このような溶媒として、ジメチルエーテル、ジエチルエーテル、エチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル系溶媒が挙げられる。これらの溶媒の中でも、ジエチルエーテルが好ましい。

【0050】

反応温度は、通常−２０〜２０℃程度、好ましくは０℃程度である。

【0051】

反応時間は、通常０．２〜１時間程度、好ましくは０．５時間程度である。

【0052】

反応が完了した後に、反応混合物を酸で酸性化することにより、ヒドロキシ基を有する第１中間体（６）が得られる。酸としては希酸、例えば、希塩酸、希酢酸、希硫酸、希硝酸等を用いることができる。

【0053】

得られた生成物は反応液のまま、又は粗生成物として次の工程に用いることができる。或いは、常法に従って反応混合物から生成物を単離することもでき、クロマトグラフィー、再結晶、蒸留等の通常の分離手段によって容易に精製することもできる。

【0054】

第２工程
第２工程は、第１工程で得られた第１中間体（６）のヒドロキシ基を酸化して、式（７）：

【0055】

【化15】

【0056】

で表される第２中間体を得る工程である。

【0057】

該工程は、第１中間体（６）のヒドロキシ基をカルボニル基に酸化することができる条件を、特に制限なく用いて行うことができる。

【0058】

例えば、酸化剤としてジメチルスルホキシドを用いて酸化反応を行うスワーン(Swern)酸化、酸化剤として超原子価ヨウ素化合物（デス・マーチン試薬）を用いて酸化反応を行うデス・マーチン（Dess-Martin）酸化の反応条件等を用いることができる。

【0059】

スワーン酸化は、ジメチルスルホキシドがアリル位又はベンジル位のアルコールを還流条件下で酸化してカルボニル化合物へと変換する反応である。該酸化には、活性化剤として塩化オキサリルを添加することが好ましい。

【0060】

スワーン酸化は、反応に悪影響を及ぼさない慣用の溶媒中で行うことが好ましい。このような溶媒として、ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン系溶媒が挙げられる。これらの溶媒の中でも、ジクロロメタンが好ましい。

【0061】

反応温度は、通常−８０〜−４０℃程度、好ましくは−８０℃程度である。

【0062】

反応時間は、通常０．２〜１時間程度、好ましくは０．５時間程度である。

【0063】

反応の最後に、トリエチルアミン等の塩基を加えることが好ましい。塩基を加えることにより、式（７）で表されるカルボニル化合物とジメチルスルフィドとが生成する。

【0064】

デス・マーチン酸化は、超原子価ヨウ素化合物（デス・マーチン試薬）を用いてアルコールをカルボニル化合物へと変換する酸化反応である。酸化剤として、１，１，１−トリアセトキシ−１，１−ジヒドロ−１，２−ベンズヨードキソール−３（１Ｈ）−オン（デス・マーチン・ペルヨージナン又はデス・マーチン試薬）が用いられる。

【0065】

デス・マーチン酸化は、反応に悪影響を及ぼさない慣用の溶媒中で行うことが好ましい。このような溶媒として、ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン系溶媒が挙げられる。これらの溶媒の中でも、ジクロロメタンが好ましい。

【0066】

反応温度は、通常０〜２５℃程度、好ましくは０℃程度である。

【0067】

反応時間は、通常０．１〜１時間程度、好ましくは０．５時間程度である。

【0068】

得られた生成物は反応液のまま、又は粗生成物として次の工程に用いることができる。或いは、常法に従って反応混合物から生成物を単離することもでき、クロマトグラフィー、再結晶、蒸留等の通常の分離手段によって容易に精製することもできる。

【0069】

第３工程
第３工程は、第２工程で得られた第２中間体（７）のアルケン部分をヒドロキシ化して、式（８）：

【0070】

【化16】

【0071】

で表される第３中間体を得る工程である。

【0072】

酸化剤として、四酸化オスミウム（ＯｓＯ_４）等を使用することができる。

【0073】

本酸化反応には、再酸化剤を共存させることが好ましい。再酸化剤として、Ｎ−メチルモルホリンＮ−オキシド（ＮＭＯ）、トリメチルアミンオキシド（（ＣＨ_３）_３ＮＯ）等が挙げられる。

【0074】

反応温度は、通常０〜２５℃程度、好ましくは２０℃程度である。

【0075】

反応時間は、通常０．５〜３時間程度、好ましくは２時間程度である。

【0076】

得られた生成物は反応液のまま、又は粗生成物として次の工程に用いることができる。或いは、常法に従って反応混合物から生成物を単離することもでき、クロマトグラフィー、再結晶、蒸留等の通常の分離手段によって容易に精製することもできる。

【0077】

第４工程
第４工程は、第３工程で得られた第３中間体を脱水して、目的物である化合物（２）を得る工程である。

【0078】

該工程は、第３中間体（８）から水(Ｈ_２Ｏ)が除去されて、化合物（２）を生成することができる条件を、特に制限なく用いて行うことができる。

【0079】

目的物を収率よく製造する観点から、第３中間体（８）の４位のヒドロキシ基を保護した後に、脱水剤を用いて脱水を行い、その後に脱保護して、化合物（２）を製造することが好ましい。

【0080】

具体的には、前記第４工程が、前記第３中間体の４位のヒドロキシ基を保護して、式（９）：

【0081】

【化17】

【0082】

(式中、Ｒは、ヒドロキシ基の保護基を示す。)
で表される第４中間体を得る工程（４−１）、該工程（４−１）で得られた第４中間体を脱水して、式（１０）：

【0083】

【化18】

【0084】

(式中、Ｒは、前記と同じ。)
で表される第５中間体を得る工程（４−２）、及び該工程（４−２）で得られた第５中間体を脱保護する工程（４−３）を含むことが好ましい。

【0085】

ヒドロキシ基の保護基としては、ヒドロキシ基の保護基として用いることができる基であれば特に制限なく使用することができる。ヒドロキシ基の保護基として、例えば、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリイソプロピルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基等のシリル系保護基；アセチル基、プロパノイル基、ベンゾイル基等のアシル系保護基が挙げられる。

【0086】

工程（４−１）において、第３中間体（８）へのヒドロキシ基の保護基の導入は、公知の方法を用いて行うことができる。例えば、ヒドロキシ基の保護基がｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基（ＴＢＤＰＳ）の場合には、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルクロロシラン（ＴＢＤＰＳＣｌ）を使用し、塩基存在下にジメチルホルムアミド等の有機溶媒中で行うことが好ましい。当該反応により、第３中間体（８）の側鎖末端のヒドロキシ基のみを保護することができ、第４中間体（９）を得ることができる。

【0087】

塩基としては、イミダゾール等のアミンが好ましく使用される。

【0088】

反応温度は、通常０〜２５℃程度、好ましくは２０℃程度である。反応時間は、通常０．１５〜１時間程度、好ましくは０．５時間程度である。

【0089】

工程（４−２）において、第４中間体（９）の脱水反応は、公知の脱水剤を用いて行うことができる。脱水剤として、例えば、バージェス(Burgess)試薬等を挙げることができる。ジメチルホルムアミド等の有機溶媒中で、第４中間体（９）に脱水剤を作用させることが好ましい。

【0090】

バージェス試薬を用いる場合、反応温度は、通常０〜２５℃程度、好ましくは２０℃程度である。反応時間は、通常０．１５〜２時間程度、好ましくは１時間程度である。

【0091】

工程（４−３）において、第５中間体（１０）のヒドロキシ基の保護基の脱保護は、公知の方法を用いて行うことができる。例えば、ヒドロキシ基の保護基がｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基（ＴＢＤＰＳ）の場合には、テトラヒドロフラン等の有機溶媒中で、テトラブチルアンモニウムフルオリド（ＴＢＡＦ）等の脱シリル化剤を作用させることが好ましい。当該反応により、第５中間体（１０）の側鎖末端のヒドロキシ基の保護基が除去されて、目的物（２）を得ることができる。

【0092】

反応温度は、通常０〜２５℃程度、好ましくは２０℃程度である。反応時間は、通常０．１５〜１時間程度、好ましくは０．５時間程度である。

【0093】

得られた生成物は、常法に従って反応混合物から生成物を単離することもでき、クロマトグラフィー、再結晶、蒸留等の通常の分離手段によって容易に精製することもできる。

【0094】

このように、１０−ヒドロキシ−β−ダマスコン（２）を、β−シクロシトラール（４）から化学的に合成することができる。

【0095】

１０−ヒドロキシ−β−ダマスコン（２）は、高い胃がん細胞増殖抑制作用、β−セクレターゼ阻害作用等の活性を有している。

【0096】

胃がん細胞増殖抑制作用に関しては、１０−ヒドロキシ−β−ダマスコン（２）は、β−ダマスコン（１）、及び４−ヒドロキシ−β−ダマスコン（３）より高い胃がん細胞増殖抑制活性を有している（試験例１参照）。

【0097】

β−セクレターゼ阻害作用に関しては、１０−ヒドロキシ−β−ダマスコン（２）は、β−ダマスコン（１）、及び４−ヒドロキシ−β−ダマスコン（３）より高いβ−セクレターゼ阻害活性を有している（試験例２参照）。

【0098】

１０−ヒドロキシ−β−ダマスコン（２）は、上記の活性を有するため、医薬組成物（胃がん細胞増殖抑制剤、β−セクレターゼ阻害剤等）として用いることができる。

【0099】

また、本発明のβ−セクレターゼ阻害剤は、各種用途に用いることができる。例えば、本発明のβ−セクレターゼ阻害剤を医薬品として用いる場合、哺乳動物（特に、ヒト）における老人性痴呆症の予防薬又は治療薬、特にアルツハイマー型痴呆症の予防薬又は治療薬として用いることができる。

【0100】

１０−ヒドロキシ−β−ダマスコン（２）をヒト又は動物用の医薬組成物として用いる場合、１０−ヒドロキシ−β−ダマスコン（２）を、そのままの状態で又は適当な媒体で希釈して、医薬品等の製造分野における公知の方法により、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤又は液剤等の種々の形態にして用いることができる。

【0101】

これらの形態においては、適当な媒体を添加してもよい。適当な媒体としては、医薬的に許容される賦形剤、例えば、結合剤（例えば、シロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガント、ポリビニルピロリドン等）、充填剤（例えば、乳糖、砂糖、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトール、グリシン等）、錠剤用滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、シリカ等）、崩壊剤（例えば、馬鈴薯デンプン）、湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）等が挙げられる。

【0102】

錠剤とする場合は、通常の製薬における周知の方法でコートしてもよい。液体製剤とする場合は、例えば、水性又は油性の懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップ、又はエリキシルの形態であってもよい。また、使用前に水等の適切な賦形剤と混合する乾燥製品として提供してもよい。

【0103】

液体製剤は、通常の添加剤、例えば、ソルビトール、シロップ、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン水添加食用脂等の懸濁化剤；レシチン、ソルビタンモノオレエート、アラビアゴム等の乳化剤（食用脂を含んでもよい）；アーモンド油、分画ココヤシ油又はグリセリン、プロピレングリコール、エチレングリコール等の油性エステル等の非水性賦形剤；ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル、ソルビン酸等の保存剤を含んでもよく、さらに所望により着色剤、香料等を含んでもよい。

【0104】

医薬組成物における１０−ヒドロキシ−β−ダマスコン（２）の使用量は、使用目的、対象疾患、自覚症状の程度、使用者の体重、年齢等により、適宜調整される。

【0105】

製剤を投与する場合、その形態は特に限定されず、通常用いられる方法であればよく、経口投与でも非経口投与でもよい。本発明に係る投与量は、症状の程度、年齢、性別、体重、投与形態、塩の種類、疾患の具体的な種類等に応じて、製剤学的な有効量を適宜選ぶことができる。

【実施例】

【0106】

以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例等に限定されるものではない。

【0107】

実施例１
（ヒト肝ミクロソームを用いたβ−ダマスコンの代謝による１０−ヒドロキシ−β−ダマスコンの製造）
試験管に、ヒト肝ミクロソーム（ＨＬＭ）、β−ダマスコン（１）、リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）、NADPH-generating systemを加え、３７℃で２０分間培養を行った。その後、反応停止剤及び抽出溶媒として塩化メチレン（０．１〜０．２ｍＬ）を加えて撹拌し、遠心分離を行い、得られた有機層をＧＣ−ＭＳ測定を行った。ＧＣ−ＭＳ測定で解析した結果、１０−ヒドロキシ−β−ダマスコン（２）が生成したことが確認された。

【0108】

【数1】

【0109】

実施例２
β−シクロシトラールから１０−ヒドロキシ−β−ダマスコン（２）を合成する操作の一例を、図１に示す。また、以下の工程において、減圧濃縮は、ロータリーエバポレーターを用いて行った。

【0110】

（１）第１工程
ジエチルエーテル(５０ｍＬ)中において、β−シクロシトラール（１．０ｇ、６．６ミリモル）とグリニャール試薬である１Ｍアリルマグネシウムブロミド（７．９ｍＬ、７．９ミリモル）を０℃で０．５時間反応させ、１−（２，２，６−トリメチルシクロヘキサ−１−エン−イル）ブタ−３−エン−１−オールを１．１ｇ得た（収率８５％）。

【0111】

（２）第２工程
ジクロロメタン（５０ｍＬ）中において、１−（２，２，６−トリメチルシクロヘキサ−１−エン−イル）ブタ−３−エン−１−オール（１．０ｇ、５．２ミリモル）、塩化オキサリル（０．７ｇ、５．７ミリモル）及びＤＭＳＯ（０．５ｇ、６．２ミリモル）を−８０℃で０．５時間反応させ、その後、トリエチルアミン（２．７ｇ、２６ミリモル）を加えることで、ケトン体である１−（２，２，６−トリメチルシクロヘキサ−１−エン−イル）ブタ−３−エン−１−オンを０．８１ｇ得た（収率８１％）。

【0112】

（３）第３工程
アセトンと水との混合溶媒(１：１０(容積比)、２０ｍＬ)中において、第２工程で得られた化合物（０．８１ｇ、４．２ミリモル）を、再酸化剤であるＮ−メチルモルホリン Ｎ−オキシド（ＮＭＯ）（０．７７ｇ、６．６モル）の共存下、四酸化オスミウム（０．１モル％）と２５℃で１時間反応させてビニル基のジヒドロキシル化を行うことにより、３，４−ジヒドロキシ−１−（２，２，６−トリメチルシクロヘキサ−１−エン−イル）ブタン−１−オンを０．６７ｇ得た（収率７１％）。

【0113】

（４）第４工程
工程（４−１）
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（５ｍＬ）中において、第３工程で得られたジオール体（０．６７ｇ、３．０ミリモル）をｔｅｒｔ−ブチルジフェニルクロロシラン（ＴＢＤＰＳＣｌ）（１．６ｇ、６モル）と２５℃で１時間反応させることにより、前記ジオール体の第１級アルコールを選択的に保護した生成物を１．２ｇ得た（収率８８％）。

【0114】

工程（４−２）
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（５ｍＬ）中において、工程（４−１）で得られた化合物（１．２ｇ、２．６ミリモル）を、バージェス試薬（１．２ｇ、５．２ミリモル）と４０℃で２時間反応させることにより、脱水された生成物を０．７６ｇ得た（収率６５％）。

【0115】

工程（４−３）
テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１０ｍＬ）中において、工程（４−２）で得られた化合物を、ＴＢＡＦ（０．６６ｇ、２．５ミリモル）と２５℃で０．５時間反応させることにより、目的の化合物２を０．２９ｇ得た（収率８１％）。

【0116】

試験例１（胃がん細胞増殖抑制試験）
ＪＣＲＢ細胞バンクから購入したＭＫＮ４５を、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１００ｕｎｉｔ／ｍｌペニシリンＧ及び１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｓｉｇｍａ社製）で培養（５％ＣＯ_２、３７℃）した。次に、細胞培養溶９６ウェル平底マイクロプレート（住友ベークライト社製）に、７．５×１０３ｃｅｌｌｓ（１００μｌ ｍｅｄｉｕｍ／ｗｅｌｌ）ずつ播種し、２４時間培養した。培地に被験物質を含む培地（１００μｌ、ＤＭＳＯ終濃度：０．１％）を添加して、さらに４８時間培養（５％ＣＯ_２、３７℃）した。

【0117】

培養後、５ｍｇ／ｍｌの３−（４，５−ジメチル−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラソリウム ブロミド（ＭＴＴ、ＰＢＳ（−）溶液）を２０μｌ／ｗｅｌｌ添加し、４時間培養した。培地を除去した後、生成したホルマザン（ｆｏｒｍａｚａｎ）をマイクロプレートリーダーにてＯ．Ｄ．値を測定し、以下の式により増殖抑制率を求めた（測定波長：５７０ｎｍ、参照波長：６５５ｎｍ）。

【0118】

O.D.(% of Control) =
[サンプル添加群のO.D. / 対照群（サンプル非添加群）のO.D.]×１００

【0119】

試験例２（β−セクレターゼ阻害試験）
β−セクレターゼ阻害活性を、PanVera社から購入したＢＡＣＥ１(組換えヒトＢＡＣＥ１)アッセイキットを用いて評価した。評価試験は、メーカーが作製したキットの取扱説明書の記載を改変した方法（Jeon S.Y., et. al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 13: 3905-3908 (2003)）に従って行った。以下、簡単に説明する。

【0120】

１０μＬのＢＡＣＥ１（１．０Ｕ／ｍＬ)、１０μＬの基質（１０ｍＭ重炭酸アンモニウム中の７５０ｎＭ Ｒｈ−ＥＶＮＬＤＡＥＦＫ−Ｑｕｅｎｃｈｅｒ）、及び１０μＬの試料溶液（試料を３０％ＤＭＳＯに溶かした溶液）を混合して試験試料とした。また、上記試料溶液の替わりに１０μＬのアッセイバッファー（３０％ＤＭＳＯ含有、５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．５）を加えたものをコントロールとした。これらを暗所において室温で６０分間インキュベーションした後に、５５０ｎｍの波長の光を照射して励起させ、５９０ｎｍの波長における発光強度を測定した。

【0121】

β−セクレターゼ活性の阻害パーセントを以下の式：
セクレターゼ活性（％）＝[１−{（Ｓ−Ｓ_０）／（Ｃ−Ｃ_０）}]×１００
（式中、Ｃは６０分間のインキュベーション後のコントロール（酵素、バッファー、及び基質）の発光強度を示し、Ｃ_０は０時におけるコントロールの発光強度を示し、Ｓはインキュベーション後の試験試料（酵素、試験溶液、及び基質）の発光強度を示し、Ｓ_０は０時における試料溶液の発光強度を示す。）に従って計算した。なお、全データは、３回の試験結果の平均である。結果を図３に示す。

【図1】

【図2】

【図3】