特許 6893012 肺高血圧症の治療におけるカンナビジオールの応用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6893012

(24)【登録日】2021年6月2日

(45)【発行日】2021年6月23日

(54)【発明の名称】肺高血圧症の治療におけるカンナビジオールの応用

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/05 20060101AFI20210614BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20210614BHJP

   A61P 9/12 20060101ALI20210614BHJP

   A61K 36/185 20060101ALI20210614BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/05

   A61P11/00

   A61P9/12

   A61K36/185

【請求項の数】2

【全頁数】15

(21)【出願番号】特願2020-502341(P2020-502341)

(86)(22)【出願日】2017年7月18日

(65)【公表番号】特表2020-528055(P2020-528055A)

(43)【公表日】2020年9月17日

(86)【国際出願番号】CN2017093367

(87)【国際公開番号】WO2019014851

(87)【国際公開日】20190124

【審査請求日】2020年1月20日

(73)【特許権者】

【識別番号】520013755

【氏名又は名称】徳義制薬有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＤＥＹＩ ＰＨＡＲＭＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＬＴＤ．

(74)【代理人】

【識別番号】100088063

【弁理士】

【氏名又は名称】坪内 康治

(72)【発明者】

【氏名】張可

(72)【発明者】

【氏名】譚▲しん▼

(72)【発明者】

【氏名】于朝暉

(72)【発明者】

【氏名】李向東

【審査官】 梅田 隆志

(56)【参考文献】

【文献】 BURSTEIN, S. ，Bioorganic & Medicinal Chemistry，２０１５年，Vol.23, No.7，pp.1377-1385.

【文献】 飴嶋 慎吾，分子心血管病，２００８年，Vol.9, No.4，pp.29(355)-34(360).

【文献】 糸井 利幸，京都府立医科大学雑誌，２０１０年，Vol.119, No.4，pp.225-235.

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３１／０５

Ａ６１Ｋ ３６／１８５

Ａ６１Ｐ ９／１２

Ａ６１Ｐ １１／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

以下の（１）〜（３）から選ばれるいずれか１項の、肺高血圧症を治療及び／又は予防す
る医薬品の調製における使用。
（１）カンナビジオール又はその薬学的に許容可能な塩又はエステル、
（２）カンナビジオールを含有する植物抽出物、及び
（３）カンナビジオール又はその薬学的に許容可能な塩又はエステル、及び１種以上の薬
学的に許容可能な補助材を含有する医薬品組成物。

【請求項2】

前記肺高血圧症は、原発性肺高血圧症又は二次性肺高血圧症である、ことを特徴とする請
求項１に記載の肺高血圧症を治療及び／又は予防する医薬品の調製における使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、医薬分野に属し、肺高血圧症の治療におけるカンナビジオールの応用に関する
。

【背景技術】

【0002】

肺高血圧症（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｉａｌ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ、ＰＡ
Ｈ）は、病因が複雑であり、複数種の心臓、肺又は肺血管疾患により引き起こされる。肺
高血圧症は、肺細動脈血管リモデリング、肺動脈平滑筋の増殖を病理学的特徴とし、その
症状として、肺循環の圧力及び抵抗の増加、右心負荷の増大、右心機能不全、肺血流量の
減少が発生して、その結果、一連の臨床症状を引き起こし、肺高血圧症の病気の経過には
、通常、進行性発展が認められる。特に動脈血管緊張の強化による右心不全は、人間の生
命と健康に対する深刻な脅威である。

【0003】

肺高血圧症は、原発性と二次性の２種に分けられる。肺高血圧症の理解が深まるに伴い、
２００３年に、世界保健機関（ＷＨＯ）の「肺高血圧症会議」では、病因、病態生理、治
療計画及び予後の特徴によって肺高血圧症を分類し、２００４年に、米国胸部専門医学会
（ＡＣＣＰ）及び欧州心臓病学会（ＥＳＣ）は、それについて改訂し、この分類方法は、
肺高血圧症患者に対する治療には、指針意義がある。穏やかな状態で右心カテーテルを用
いて測定した平均肺動脈圧が２５ｍｍＨｇ以上であると、肺高血圧症であると考えられる
。２６−３５ｍｍＨｇを軽度、３６−４５ｍｍＨｇを中度、＞４５ｍｍＨｇを重度とする
ように、安静時ＰＡＰｍによって肺高血圧症が級分けされる。

【0004】

肺高血圧症は、主に肺動脈と右心に関係し、その症状として、右心室肥大、右心房拡張、
肺動脈幹拡張、末梢肺細動脈がまばらになること、肺細動脈内皮細胞および平滑筋細胞の
増殖・肥大、血管内膜が線維化して厚くなること、中膜肥厚、管腔の狭化、閉塞、歪み及
び変形、叢状病変が認められる。肺細静脈にも、内膜性線維増殖および管腔閉塞が出現す
ることがある。肺高血圧症患者の他の症状には、肺動脈外膜と静脈の肥大、ＴＧＦ−β発
現上昇、及びエラスチン、フィブロネクチン、シトクロムＣやムコ多糖などのマトリック
スタンパク質の発現上昇が含まれる。

【0005】

肺高血圧症は、治療できる疾患であるが、現在、特に有効な治癒方法がなかった。従来の
治療方法には、酸素吸入、強心、利尿、カルシウムチャネル遮断薬や抗凝固剤を用いた補
助治療などが含まれ、主に症状を緩和させる作用を果たす。

【0006】

近年、標的療法用の医薬品の研究開発及び普及（主に、プロスタサイクリン類医薬品、エ
ンドセリン受容体拮抗剤、ホスホジエステラーゼ−５阻害剤、及び新しく研究している可
溶性グアニル酸シクラーゼアゴニスト、５−セロトニン輸送体阻害剤、成長因子阻害剤、
Ｒｈｏキナーゼ阻害剤などを含む）及び生体肺移植などの治療方法は、患者の予後を大幅
に改善する。

【0007】

これら医薬品は、一定の程度でＰＡＨの症状を緩和することができるが、今のところ、肺
高血圧症は、治癒できず且つ死亡率が高い疾患であり、治療を受ける場合、患者の生存期
間中央値は、２．７年しかなく、現在、肺高血圧症に対して特に有効な治癒方法がなく、
このため、新しい特異的治療薬を見つけることが特に急務となっている。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

本発明者は、鋭意研究及び創造的な努力を行った結果、驚くことに、カンナビジオールが
肺高血圧症を効果的に阻害でき、特に低酸素血症により引き起こされる肺高血圧症の治療
に適用することを見出した。それによって、下記発明を提供する。

【課題を解決するための手段】

【0009】

本発明の一態様は、以下の（１）〜（３）から選ばれるいずれか１項の肺高血圧症を治療
及び／又は予防する医薬品の調製における用途に関する。
（１）カンナビジオール又はその薬学的に許容可能な塩又はエステル、
（２）カンナビジオールを含有する植物抽出物、好ましくは、大麻抽出物、たとえば産業
用大麻抽出物、及び
（３）カンナビジオール又はその薬学的に許容可能な塩又はエステル、及び１種以上の薬
学的に許容可能な補助材を含有する医薬品組成物。

【0010】

本発明の一実施態様では、前記用途において、前記肺高血圧症は、原発性肺高血圧症又は
二次性肺高血圧症、好ましくは、肺動脈性肺高血圧症（たとえば、特発性肺高血圧症、遺
伝性肺高血圧症、医薬品及び毒物により引き起こされる肺高血圧症又は新生児持続性肺高
血圧症）、左心疾患関連肺高血圧症（たとえば、収縮期心不全により引き起こされる肺高
血圧症、拡張機能障害により引き起こされる肺高血圧症、弁膜症により引き起こされる肺
高血圧症）、肺疾患により引き起こされる肺高血圧症（たとえば、慢性閉塞性肺疾患によ
り引き起こされる肺高血圧症、肺気腫により引き起こされる肺高血圧症又は間質性肺疾患
により引き起こされる肺高血圧症）、低酸素血症により引き起こされる肺高血圧症（たと
えば、睡眠時無呼吸症候群により引き起こされる肺高血圧症、慢性高山病により引き起こ
される肺高血圧症、たとえば高地心臓病）又は慢性血栓塞栓性肺高血圧症、より好ましく
は、低酸素血症により引き起こされる肺高血圧症である。

【0011】

カンナビジオール（Ｃａｎｎａｂｉｄｉｏｌ、 ＣＢＤ）は、カンナビノイドのうちの１
種であり、その構造式が以下の式Ｉに示される。

式Ｉ
前記カンナビジオールである式Ｉ化合物は、市販品として購入でき（たとえば、Ｓｉｇｍ
ａなどから購入）又は市販原料を用いて従来技術により合成することができる。合成後、
カラムクロマトグラフィー法、液液抽出法、分子蒸留方法又は結晶化などの方法によりさ
らに精製し得る。また、カンナビジオールは、大麻、特に産業用大麻から抽出されてもよ
い。

【0012】

本発明では、実験により研究したところ、本発明の前記カンナビジオール及び上記化合物
は、低酸素症及び薬物誘導により引き起こされる肺高血圧症動物モデルに対して顕著な治
療作用を有する。

【0013】

カンナビジオールの薬学的に許容可能な塩は、有機アンモニウム塩、アルカリ金属塩（ナ
トリウム塩、カリウム塩）、アルカリ土類金属塩（マグネシウム塩、ストロンチウム塩、
カルシウム塩）などを含むが、これらに制限されない。

【0014】

本発明のいくつかの実施形態では、カンナビジオールの薬学的に許容可能な塩は、カンナ
ビジオール（ＣＢＤ）と、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸
化マグネシウム、水酸化アルミニウム、水酸化リチウム、水酸化亜鉛、水酸化バリウム、
アンモニア、メチルアミン、ジメチルアミン、ジエチルアミン、メチルピリジン、エタノ
ールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、エチレンジアミン、リジン、
アルギニン、オルニチン、コリン、Ｎ,Ｎ′−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロ
カイン、ジエタノールアミン、プロカイン、Ｎ−ベンジルフェネチルアミン、Ｎ−メチル
グルコサミンピペラジン、トリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタンなどとで形成され
る塩であってもよい。

【0015】

本発明のいくつかの実施形態では、カンナビジオールの薬学的に許容可能なエステルは、
カンナビジオールと１つのＣ_０−Ｃ_６アルキルカルボン酸とで形成されるモノエステルで
あってもよく、カンナビジオールと同じ又は異なる２つのＣ_０−Ｃ_６アルキルカルボン酸
とで形成されるジエステルであってもよく、前記Ｃ_０−Ｃ_６アルキルカルボン酸は、直鎖
アルキルカルボン酸、分岐アルキルカルボン酸又は環状アルキルカルボン酸、たとえば、
ＨＣＯＯＨ、ＣＨ_３ＣＯＯＨ、ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＯＯＨ、ＣＨ_３（ＣＨ_２）_２ＣＯＯＨ、Ｃ
Ｈ_３（ＣＨ_２）_３ＣＯＯＨ、ＣＨ_３（ＣＨ_２）_４ＣＯＯＨ、（ＣＨ_３）_２ＣＨＣＯＯＨ、
（ＣＨ_３）_３ＣＣＯＯＨ、（ＣＨ_３）_２ＣＨＣＨ_２ＣＯＯＨ、（ＣＨ_３）_２ＣＨ（ＣＨ_２
）_２ＣＯＯＨ、（ＣＨ_３）_２ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨＣＯＯＨ、（ＣＨ_３）_３ＣＣＨ_２ＣＯＯ
Ｈ、ＣＨ_３ＣＨ_２（ＣＨ_３）_２ＣＣＯＯＨ、シクロプロパンカルボン酸、シクロブタンカ
ルボン酸、シクロペンタンカルボン酸であってもよい。

【0016】

前記大麻抽出物は、カンナビジオールを含有する大麻、特に産業用大麻的抽出物、たとえ
ば、エタノール抽出液、エキスなどであってもよい。ここで、カンナビジオールの含有量
について特に限定がなく、さらに、当業者が公知する手段、たとえば濃縮などにより大麻
抽出物中のカンナビジオールの含有量をさらに向上することができる。本発明の一実施態
様では、前記大麻抽出物は、エキスであり、好ましくは、カンナビジオールの含有量が１
８％−２５％である。

【0017】

本発明の別の態様は、以下の（１）〜（３）から選ばれるいずれか１項の炎症を阻害する
医薬品、炎症性因子の発現を阻害する医薬品又は炎症誘発性遺伝子（たとえば、Ｍｇｌ_２
遺伝子）の発現を阻害する医薬品の調製における用途に関する。
（１）カンナビジオール又はその薬学的に許容可能な塩又はエステル、
（２）カンナビジオールを含有する植物抽出物、好ましくは、大麻抽出物、及び
（３）カンナビジオール又はその薬学的に許容可能な塩又はエステル、及び１種以上の薬
学的に許容可能な補助材を含有する医薬品組成物。

【0018】

本発明の一実施態様では、前記用途において、前記炎症は、慢性低悪性度炎症である。

【0019】

本発明の一実施態様では、前記用途において、前記炎症性因子は、ＴＮＦ−α及びＩＬ−
６、特にヒトＴＮＦ−α及びヒトＩＬ−６から選ばれる。

【0020】

本発明の別の態様は、カンナビジオール又はその薬学的に許容可能な塩又はエステルを含
み、又はカンナビジオール又はその薬学的に許容可能な塩又はエステルを含有する植物抽
出物（たとえば、大麻抽出物）、及び１種以上の薬学的に許容可能な補助材を含む医薬品
組成物に関する。

【0021】

本発明の一実施態様では、前記医薬品組成物において、カンナビジオールは、唯一の活性
成分である。本発明の別の実施態様では、カンナビジオールと肺高血圧症を予防及び治療
する他の１種以上の既知の活性成分とを併用する。

【0022】

本発明の一実施態様では、前記医薬品組成物において、前記医薬品組成物は、プロスタサ
イクリン類医薬品、エンドセリン受容体拮抗剤、ホスホジエステラーゼ−５阻害剤、可溶
性グアニル酸シクラーゼアゴニスト、５−セロトニン輸送体阻害剤、成長因子阻害剤及び
Ｒｈｏキナーゼ阻害剤から選ばれるいずれか１種又は複数種をさらに含む。

【0023】

本発明の一実施態様では、前記医薬品組成物において、
前記プロスタサイクリン類医薬品は、ベラプロスト（Ｂｅｎａｐｎｏｓｔ）、トレプロス
チニル（Ｔｒｅｐｒｏｓｔｉｎｉｌ）、イロプロスト（ｉｌｏｐｒｏｓｔ）及びベンテイ
ビス（Ｖｅｎｔａｖｉｓ）から選ばれるいずれかの１種又は複数種であり、
前記エンドセリン受容体拮抗剤は、ボセンタン（Ｂｏｓｅｎｔａｎ）であり、及び／又は
前記ホスホジエステラーゼ−５阻害剤は、シルデナフィル（Ｓｉｌｄｅｎａｆｉｌ）、バ
ルデナフィル（Ｖａｒｄｅｎａｆｉｌ）及びタダラフィル（Ｔａｄａｌａｆｉｌ）から選
ばれる。

【0024】

前記医薬品組成物の製剤形態は、任意の薬学的に許容される剤形であってもよく、これら
剤形には、錠剤、糖コーティング錠剤、フィルムコーティング錠剤、腸溶性コーティング
錠剤、カプセル剤、ハードカプセル剤、ソフトカプセル剤、経口液剤、トローチ剤、顆粒
剤、沖剤、丸剤、散剤、膏剤、丹剤、懸濁剤、粉末剤、溶液剤、注射剤、座剤、軟膏剤、
硬膏剤、クリーム剤、噴霧剤、滴剤、貼付剤が含まれ、好ましい経口剤形は、たとえば、
カプセル剤、錠剤、経口液剤、顆粒剤、丸剤、散剤、丹剤、膏剤などである。前記経口剤
形は、一般的に使用されている賦形剤、たとえば粘着剤、充填剤、希釈剤、打錠剤、潤滑
剤、崩壊剤、着色剤、矯味剤及び湿潤剤を含むことができ、必要に応じて錠剤を包衣して
もよい。適切な充填剤には、セルロース、マンニトール、乳糖や他の類似した充填剤が含
まれ、適切な崩壊剤には、澱粉、ポリビニルピロリドン及び澱粉誘導体、たとえば、デン
プングリコール酸ナトリウムが含まれ、適切な潤滑剤には、たとえば、ステアリン酸マグ
ネシウムが含まれる。薬学的に許容可能な適切な湿潤剤には、ドデシル硫酸ナトリウムが
含まれる。

【0025】

好ましくは、前記医薬品組成物は、経口製剤である。本発明者は、試験した結果、前記カ
ンナビジオールを用いて調製される医薬品を肺高血圧症に罹患したマウスに強制経口投与
すると、明らかな治療効果を有する。

【0026】

本発明の前記医薬品組成物の治療及び／又は予防上有効用量は、０．１−２００ｍｇ／ｋ
ｇ体重／日である。本発明の前記医薬品組成物の有効用量は、好ましくは、０．１−１０
０ｍｇ／ｋｇ体重／日であり、より好ましくは、０．１−５０ｍｇ／Ｋｇ体重／日である
。ヒトに用いられる前記医薬品組成物の推薦される有効用量は、好ましくは、０．１−５
０ｍｇ／ｋｇ体重／日、より好ましくは、０．５−３０ｍｇ／Ｋｇ体重／日である。前記
「治療及び／又は予防上有効用量」は、関連疾患の単剤又は併用薬による治療に適用でき
る。

【0027】

前記肺高血圧症を治療する医薬品組成物（薬剤）の好適使用方法は、経口であり、好適投
与量は、１日０．５−３０ｍｇ／Ｋｇである。

【0028】

本発明の別の態様は、製品１及び製品２を含み、
前記製品１は、
（１）カンナビジオール又はその薬学的に許容可能な塩又はエステル、
（２）カンナビジオールを含有する植物抽出物、好ましくは、大麻抽出物、及び
（３）カンナビジオール又はその薬学的に許容可能な塩又はエステル、及び１種以上の薬
学的に許容可能な補助材を含有する医薬品組成物から選ばれるいずれか１項の製品であり
、
前記製品２は、プロスタサイクリン類医薬品、エンドセリン受容体拮抗剤、ホスホジエス
テラーゼ−５阻害剤、可溶性グアニル酸シクラーゼアゴニスト、５−セロトニン輸送体阻
害剤、成長因子阻害剤及びＲｈｏキナーゼ阻害剤から選ばれるいずれか１種又は複数種で
あり、且つ
前記製品１及び製品２は、それぞれ単独で包装され、
好ましくは、前記製品１及び製品２は、いずれも経口製剤の形態である。
本発明の一実施態様では、前記複合製品において、
前記プロスタサイクリン類医薬品は、ベラプロスト（Ｂｅｎａｐｎｏｓｔ）、トレプロス
チニル（Ｔｒｅｐｒｏｓｔｉｎｉｌ）、イロプロスト（ｉｌｏｐｒｏｓｔ）及びベンテイ
ビス（Ｖｅｎｔａｖｉｓ）から選ばれるいずれか１種又は複数種であり、
前記エンドセリン受容体拮抗剤は、ボセンタン（Ｂｏｓｅｎｔａｎ）であり、及び／又は
前記ホスホジエステラーゼ−５阻害剤は、シルデナフィル（Ｓｉｌｄｅｎａｆｉｌ）、バ
ルデナフィル（Ｖａｒｄｅｎａｆｉｌ）及びタダラフィル（Ｔａｄａｌａｆｉｌ）から選
ばれる。

【0029】

本発明のさらなる態様は、肺高血圧症の治療及び／又は予防するための以下の（１）〜（
３）から選ばれるいずれか１項の製品に関する。
（１）カンナビジオール又はその薬学的に許容可能な塩又はエステル、
（２）カンナビジオールを含有する植物抽出物、好ましくは、大麻抽出物、及び
（３）カンナビジオール又はその薬学的に許容可能な塩又はエステル、及び１種以上の薬
学的に許容可能な補助材を含有する医薬品組成物。

【0030】

本発明の一実施態様では、前記製品において前記肺高血圧症は、原発性肺高血圧症又は二
次性肺高血圧症、好ましくは、肺動脈性肺高血圧症（たとえば、特発性肺高血圧症、遺伝
性肺高血圧症、医薬品及び毒物により引き起こされる肺高血圧症又は新生児持続性肺高血
圧症）、左心疾患関連肺高血圧症（たとえば、収縮期心不全により引き起こされる肺高血
圧症、拡張機能障害により引き起こされる肺高血圧症、弁膜症により引き起こされる肺高
血圧症）、肺疾患により引き起こされる肺高血圧症（たとえば、慢性閉塞性肺疾患により
引き起こされる肺高血圧症、肺気腫により引き起こされる肺高血圧症又は間質性肺疾患に
より引き起こされる肺高血圧症）、低酸素血症により引き起こされる肺高血圧症（たとえ
ば、睡眠時無呼吸症候群により引き起こされる肺高血圧症、慢性高山病により引き起こさ
れる肺高血圧症、たとえば高地心臓病）又は慢性血栓塞栓性肺高血圧症、より好ましくは
、低酸素血症により引き起こされる肺高血圧症である。

【0031】

本発明のさらなる態様は、炎症、炎症性因子の発現又は炎症誘発性遺伝子（たとえば、Ｍ
ｇｌ_２遺伝子）の発現を阻害する以下の（１）〜（３）から選ばれるいずれか１項の製品
に関する。
（１）カンナビジオール又はその薬学的に許容可能な塩又はエステル、
（２）カンナビジオールを含有する植物抽出物、好ましくは、大麻抽出物、及び
（３）カンナビジオール又はその薬学的に許容可能な塩又はエステル、及び１種以上の薬
学的に許容可能な補助材を含有する医薬品組成物。
本発明の一実施態様では、前記製品において、前記炎症性因子は、ＴＮＦ−α及びＩＬ−
６、特にヒトＴＮＦ−α及びヒトＩＬ−６から選ばれる。

【0032】

本発明のさらなる態様は、ニーズがある受検者に以下の（１）〜（３）から選ばれるいず
れか１項の製品を有効量で投与するステップを含む肺高血圧症を治療及び／又は予防する
方法に関する。
（１）カンナビジオール又はその薬学的に許容可能な塩又はエステル、
（２）カンナビジオールを含有する植物抽出物、好ましくは、大麻抽出物、及び
（３）カンナビジオール又はその薬学的に許容可能な塩又はエステル、及び１種以上の薬
学的に許容可能な補助材を含有する医薬品組成物。

【0033】

本発明の一実施態様では、前記方法において、前記受検者は、哺乳動物、特にヒトである
。

【0034】

本発明の一実施態様では、前記方法において、前記肺高血圧症は、原発性肺高血圧症又は
二次性肺高血圧症、好ましくは、肺動脈性肺高血圧症（たとえば、特発性肺高血圧症、遺
伝性肺高血圧症、医薬品及び毒物により引き起こされる肺高血圧症又は新生児持続性肺高
血圧症）、左心疾患関連肺高血圧症（たとえば、収縮期心不全により引き起こされる肺高
血圧症、拡張機能障害により引き起こされる肺高血圧症、弁膜症により引き起こされる肺
高血圧症）、肺疾患により引き起こされる肺高血圧症（たとえば、慢性閉塞性肺疾患によ
り引き起こされる肺高血圧症、肺気腫により引き起こされる肺高血圧症又は間質性肺疾患
により引き起こされる肺高血圧症）、低酸素血症により引き起こされる肺高血圧症（たと
えば、睡眠時無呼吸症候群により引き起こされる肺高血圧症、慢性高山病により引き起こ
される肺高血圧症、たとえば高地心臓病）又は慢性血栓塞栓性肺高血圧症、より好ましく
は、低酸素血症により引き起こされる肺高血圧症である。

【0035】

本発明のさらなる態様は、ニーズがある受検者に以下の（１）〜（３）から選ばれるいず
れか１項の製品を有効量で投与するステップを含む炎症、炎症性因子の発現又は炎症誘発
性遺伝子（たとえば、Ｍｇｌ_２遺伝子）の発現を阻害する方法に関する。
（１）カンナビジオール又はその薬学的に許容可能な塩又はエステル、
（２）カンナビジオールを含有する植物抽出物、好ましくは、大麻抽出物、及び
（３）カンナビジオール又はその薬学的に許容可能な塩又はエステル、及び１種以上の薬
学的に許容可能な補助材を含有する医薬品組成物。

【0036】

本発明の一実施態様では、前記方法において、前記炎症は、慢性低悪性度炎症である。

【0037】

本発明の一実施態様では、前記方法において、前記炎症性因子は、ＴＮＦ−α及びＩＬ−
６から選ばれる。
なお、活性成分であるカンナビジオールの使用量及び使用方法は、患者の年齢、体重、性
別、自然健康状況、栄養状況、化合物の活性強度、投与時間、代謝速度、病症の重篤度及
び治療する医師の主観的判断を含める多数の要因による。カンナビジオールの投与量（有
効量）は、好ましくは、０．１−５０ｍｇ／ｋｇ体重／日、より好ましくは、０．５ｍｇ
／ｋｇ−３０ｍｇ／ｋｇ体重／日、０．５ｍｇ／ｋｇ−２０ｍｇ／ｋｇ体重／日、５ｍｇ
／ｋｇ−３０ｍｇ／ｋｇ体重／日又は５ｍｇ／ｋｇ−２０ｍｇ／ｋｇ体重／日、さらに好
ましくは、０．５ｍｇ／ｋｇ−１０ｍｇ／ｋｇ体重／日、特に好ましくは、０．５ｍｇ／
ｋｇ−５ｍｇ／ｋｇ体重／日である。好ましくは、経口により投与する。

【0038】

本発明では、用語「有効量」とは、受検者において本発明の前記疾患又は病症を治療、予
防、低減及び／又は緩和することができる投与量である。

【0039】

用語「受検者」とは、患者、又は本発明の組成物を受けて本発明の前記疾患又は病症を治
療、予防、低減及び／又は緩和する他の動物、特に哺乳動物、たとえば、ヒト、イヌ、サ
ル、ウシ、ウマなどであってもよい。

【0040】

用語「疾患及び／又は病症」とは、前記受検者の１つの身体状態であり、この身体状態は
、本発明の前記疾患及び／又は病症に関連する。

【0041】

本発明では、用語「肺高血圧症」は、普通の高血圧とは完全に異なる疾患である。人間の
心臓は、左心系と右心系に分けられ、一般的に言われている高血圧は、全身へ血液を供給
する左心系からの動脈圧が上昇することを意味し、一方、特に肺部へ血液を供給する右心
系からの動脈は、肺動脈と呼ばれ、この動脈圧の上昇は、肺高血圧症と呼ばれる。

【0042】

肺高血圧症（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｉａｌ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ、ＰＡ
Ｈ）は、既知又は未知の原因により引き起こされる肺動脈内の圧力が異常に上昇する疾患
又は病態生理学的な症候群であり、肺循環障害及び右心高負荷があり、右心不全、さらに
死亡を引き起こす可能性があり、さらに、ＰＡＨの患者は、末期に心臓駆出機能障害のた
めに低血圧を発症する可能性がある。

【0043】

用語「高血圧」（ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）とは、全身循環の動脈血圧（収縮期血圧及
び／又は拡張期血圧）の上昇を主な特徴（収縮期血圧≧１４０ｍｍＨｇ水銀柱、拡張期血
圧≧９０ｍｍＨｇ水銀柱）とし、心臓、脳、腎臓などの器官の機能又は器質的損傷が伴い
得る臨床症候群である。

【0044】

用語「ＴＮＦ−α」とは、腫瘍壊死因子（Ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ
−α）であり、全身性炎症に関するサイトカインであり、急性期反応を引き起こす多数の
サイトカインのうちの１つでもあり、主にマクロファージから分泌される。腫瘍壊死因子
αの主な作用は、免疫細胞の機能を調整することにある。本発明では、特に断らない限り
、ＴＮＦ−αとは、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＮＰ＿０３８７２１．１に示されるタンパ
ク質、又はそのＴＮＦ−α機能を有するフラグメントである。本発明の一実施態様では、
ＴＮＦ−α遺伝子の核酸配列は、Ｇｅｎｅ ＩＤ：２１９２６又はその縮退配列に示され
るとおりである。

【0045】

用語「ＩＬ−６」とは、サイトカインの１種であるインターロイキン６（Ｉｎｔｅｒｌｅ
ｕｋｉｎ ６）であり、インターロイキンの１種である。それは、線維芽細胞、単球／マ
クロファージ、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、上皮細胞、ケラチノサイト又は複数種の腫瘍細
胞から生成し得る。インターロイキン６は、免疫反応に関与する細胞を刺激して増殖、分
化を促進してその機能を高めることができる。本発明では、特に断らない限り、ＩＬ−６
とは、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＮＰ＿００１３００９８３．１のタンパク質、又はその
ＩＬ−６機能を有するフラグメントである。本発明の一実施態様では、ＩＬ−６遺伝子の
核酸配列は、Ｇｅｎｅ ＩＤ：１６１９３又はその縮退配列に示されるとおりである。

【0046】

用語「Ｍｇｌ_２」とは、マクロファージガラクトースＮ−アセチル−ガラクトサミン特異
的レクチン２（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｇａｌａｃｔｏｓｅ Ｎ−ａｃｅｔｙｌ−ｇａｌ
ａｃｔｏｓａｍｉｎｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｌｅｃｔｉｎ ２）である。本発明では、特
に断らない限り、Ｍｇｌ_２とは、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＮＰ＿６６０１１９．１のタ
ンパク質、又はそのＭｇｌ_２機能を有するフラグメントである。本発明の一実施態様では
、Ｍｇｌ_２遺伝子の核酸配列は、Ｇｅｎｅ ＩＤ：２１６８６４又はその縮退配列に示さ
れるとおりである。

【0047】

本発明では、特に断らない限り、前記製品１、製品２は、明瞭さのために過ぎず、順番を
示す意味がない。

【0048】

本発明では、特に断らない限り、大麻は、好ましくは、産業用大麻であり、大麻抽出物は
、好ましくは、産業用大麻抽出物である。

【発明の効果】

【0049】

本発明では、試験により研究したところ、カンナビジオールは、肺高血圧症を阻害する作
用を有することを見出し、カンナビジオールは、肺高血圧症に対して良好な治療作用を有
し、特に低酸素血症により引き起こされる肺高血圧症の治療に適用することが証明される
。

【図面の簡単な説明】

【0050】

【図1】ＣＢＤは、低酸素によって引き起こされる右心室収縮期血圧の上昇を低下させる。Ｎ＝１０／群、値は、平均値±標準誤差であり、正常酸素野生群を参照とすると、^＊＊＊Ｐ＜０．００１である。低酸素野生群を参照とすると、^＃＃＃Ｐ＜０．００１である。

【図2】ＣＢＤは、低酸素によって引き起こされる右心室肥大を低下させる。Ｎ＝１０／群、値は、平均値±標準誤差であり、正常酸素野生群を参照とすると、^＊＊＊Ｐ＜０．００１であり、低酸素野生群を参照とすると、^＃＃＃Ｐ＜０．００１である。

【図3-ABCD】肺細動脈血管のＨＥ染色（図３Ａ−３Ｄ）の結果である。図３Ａ−３Ｄのサンプルは、順次第１群−第４群のマウス肺組織のパラフィン切片である。

【図3-EHFG】弾性繊維染色（図３Ｅ−３Ｈ）の結果である。図３Ｅ−３Ｈのサンプルは、順次第１群−第４群のマウス肺組織のパラフィン切片である。

【図4】ＣＢＤは、低酸素によって引き起こされる血管リモデリング率を低下させる。Ｎ＝１０／群、値は、平均値±標準誤差であり、正常酸素野生群を参照とすると、^＊＊＊Ｐ＜０．００１であり、低酸素野生群を参照とすると、^＃＃＃Ｐ＜０．０１である。

【図5】ＣＢＤは、インビトロＬＰＳにより誘発されるプライマリ肺胞マクロファージの活性化を阻害する。値は、平均値±標準誤差であり、陰性対照群を参照とすると、^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１であり、ＬＰＳ処理群を参照とすると、^＃Ｐ＜０．０５、^＃＃Ｐ＜０．０１である。

【発明を実施するための形態】

【0051】

以下、実施例にて本発明の実施態様を詳細に説明するが、当業者にとって明らかなように
、以下の実施例は、本発明を説明するために過ぎず、本発明の範囲を限定するものとして
はならない。実施例では、具体的な条件を明記しない場合、通常の条件又はマーカーが推
薦する条件で行われる。使用される試薬又は器具は、メーカーが記載されていない場合、
市販品として入手できる一般的な製品である。

【0052】

実施例１：低酸素症により引き起こされる高血圧症へのカンナビジオールの影響について
の試験
１． 実験動物、試薬及び器具
（１）実験動物
４−６週齢、健康で活発であり、毛に艶があり、体重（２５．１５±２．１５）ｇ、Ｃ５
７ＢＬ／６（軍事科学医学院実験動物センター、ＳＰＦグレード）。以下の４群に分けら
れる。
第１群（正常酸素野生型、対照群）：正常酸素の条件下、雌マウス１０匹、雄マウス１０
匹；
第２群（低酸素野生型、対照群）：低酸素の条件下、雌マウス１０匹、雄マウス１０匹；
第３群（１０ｍｇ／ｋｇ、実験群）：低酸素の条件下で強制的経口投与処理、１０ｍｇ／
ｋｇ 雌マウス１０匹、雄マウス１０匹；
第４群（５０ｍｇ／ｋｇ、実験群）：低酸素条件下で強制的経口投与処理、５０ｍｇ／ｋ
ｇ 雌マウス１０匹、雄マウス１０匹。
（２）投与方法
第２−４群マウスを常圧低酸素動物飼育室に入れて、室内の酸素濃度を９％−１１％、室
内の温度を２２−２６℃に維持した。第１群マウスは、常圧空気を吸入させる以外、残り
の条件が第２−４群マウスと同様であった。
従来の研究結果から明らかなように、マウスを低酸素状態で１４日間維持すると、右心室
収縮期血圧が明らかに上昇することを基準とする肺高血圧症モデルを作成することができ
る（Ｒｉｃａｒｄ, Ｎ．, Ｔｕ, Ｌ．, Ｌｅ Ｈｉｒｅｓｓ, Ｍ．, Ｈｕｅｒｔａｓ, Ａ
．, Ｐｈａｎ, Ｃ．, Ｔｈｕｉｌｌｅｔ, Ｒ．, Ｓａｔｔｌｅｒ, Ｃ．, Ｆａｄｅｌ, Ｅ
．, Ｓｅｆｅｒｉａｎ, Ａ．, Ｍｏｎｔａｎｉ, Ｄ．, ｅｔ ａｌ． （２０１４）． Ｉ
ｎｃｒｅａｓｅｄ ｐｅｒｉｃｙｔｅ ｃｏｖｅｒａｇｅ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｅｎｄ
ｏｔｈｅｌｉａｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ
−２ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６ ｉｓ ａ ｓｏｕｒｃｅ ｏｆ ｓｍｏｏｔｈ ｍ
ｕｓｃｌｅ−ｌｉｋｅ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ
． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １２９, １５８６−１５９７．）。ＣＢＤが肺高血圧症に対
して治療作用を有するか否かを調べるために、本発明者は、まず、低酸素環境でマウスを
持続的に１４日間処理し、起肺高血圧症のモデル（第２−４群）を作成し、次に、強制的
経口投与の投与方式で、１５日目から２１日目まで投与し、１日に１回投与し、７日間持
続して毎日マウス（第３−４群）を処理して、２１日目に検査した。
具体的な検査ステップは、以下の第２部分「実験方法」に記載される。
（３）実験試薬
ペントバルビタールナトリウム（ｓｉｇｍａ）、カンナビジオール（雲南漢素生物科技有
限公司）、クリスタルバイオレット、ビクトリアブルーＢ（国薬集団化学試剤有限公司）
、ニューフクシン（東京化成工業株式会社）。
（４）実験器具
マルチチャンネル生理学レコーダ（ＢＥ−ＥＨ４） 北京拜安吉科技有限公司、ＯＬＹＭ
ＰＵＳ顕微鏡（ＣＸ４）オリンパス（中国）有限公司（ＯＣＮ）、低酸素箱（ＣＪ−ＤＯ
２）長沙長錦科技有限公司；蛍光定量ＰＣＲ機器（Ｌｉｇｈｔ Ｃｙｃｌｅｒ４８０II）
Ｒｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ。

【0053】

２． 実験方法
（１）右心室収縮期血圧（ＲＶＳＰ）の測定
２１日目に、マウスにペントバルビタールナトリウム（３５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射し
て麻酔し、Ｓｏｎｇら（Ｓｏｎｇ, Ｙ．, Ｊｏｎｅｓ, Ｊ．Ｅ．, Ｂｅｐｐｕ, Ｈ．, Ｋ
ｅａｎｅｙ, Ｊ．Ｆ．, Ｊｒ．, Ｌｏｓｃａｌｚｏ, Ｊ．, ａｎｄ Ｚｈａｎｇ, Ｙ．Ｙ
． （２００５）． Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｐｕｌｍ
ｏｎａｒｙ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ｉｎ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓ ＢＭＰＲ２−ｍ
ｕｔａｎｔ ｍｉｃｅ． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １１２, ５５３−５６２．）が報道し
た右心カテーテル法を参照して、生理学レコーダに備えるカテーテルを用いて右心室収縮
期血圧を測定した。カテーテルの末端をマルチチャンネル生理学レコーダの信号収集処理
システムに接続し、モニターに表示された血圧値と圧力曲線の波形の変動に基づいてカテ
ーテル先端の位置を判断した。カテーテルが右心室に入った後、ＲＶＳＰを測定して記録
した。
（２）右心室肥大指数（ＲＶＨ）の測定
Ｒｙａｎらによる方法を用いて、マウスを麻酔した後、開胸して、心臓を摘出し、すべて
の血管及び心室を剥離して、右心室を切り取り、それぞれ右心室の重量と左心室の中隔の
重量を秤量し、右心室重量を左心室と膈の全重量で割った（ＲＶ／（ＬＶ＋Ｓ））。
（３）ＨＥ染色
サンプル：マウス肺組織のパラフィン切片。
目的：肺組織の病理的結果から、血管壁が厚くなる現象があるか否かを判定する。
作成したパラフィン切片を５５℃のオーブンに入れて１０ｍｉｎ放置した。
[1]パラフィン切片は、パラフィンを除去された後に、下へ移動して７０％エタノールに
入った。
キシレンＩ：１５ｍｉｎ
キシレンＩＩ：７ｍｉｎ
１：１キシレンエタノール溶液：５ｍｉｎ
各段のエタノール：それぞれ５ｍｉｎ
[2]ヘマトキシリン溶液で１０−１５ｍｉｎ染色した。
[3]水道水で２ｍｉｎ洗浄した。
[4]０．５％塩酸アルコール溶液で８ｓ分化した。
[5]水道水で１０ｍｉｎ青色を取り戻した。
[6]７０％アルコール→８０％アルコールでそれぞれ２ｍｉｎ。
[7]０．５％エオジンアルコール染液で５０−７０ｓ染色した、
[8]９０％エタノール、９５％エタノールでそれぞれ３ｍｉｎ色だしをした。
[9]無水エタノールＩ、ＩＩでそれぞれ３ｍｉｎ脱水した。
[10]無水エタノール：キシレン（１：１）で３ｍｉｎ。
[11]キシレンＩで３ｍｉｎ。
[12]キシレンＩＩで３ｍｉｎ。
中性ガムでブロックした。
染色終了後、細胞核は、青紫色、細胞質は、ピンク色を呈した。
（４）弾性繊維染色（Ｅｌａｓｔｉｃ染色）
サンプル：マウス肺組織のパラフィン切片。
染液調製：ビクトリアブルーＢ １ｇ。
ニューフクシン １ｇ、クリスタルバイオレット １ｇ。
熱湯２００ｍｌに溶解して、レゾルシノール４ｇ、デキストリン４ｇ、３０％塩化鉄５０
ｍｌ（使用時に調製）を順次加えて、５ｍｉｎ煮て濾過し、沈殿とろ紙を９５％エタノー
ル２００ｍｌで溶解して、１５ｍｉｎ−２０ｍｉｎ沸騰させて濾過し（水浴）、９５％エ
タノールを２００ｍｌになるまで補充し、最後に、濃塩酸２ｍｌを加えた。シールして、
遮光下で保存した。
染色方法：
キシレン Ｉ １０ｍｉｎ、キシレン ＩＩ １０ｍｉｎ、１００％エタノール ５ｍｉ
ｎ、９０％エタノール５ｍｉｎ、水道水５ｍｉｎ、０．５％過マンガン酸カリウム５ｍｉ
ｎで処理し、水道水で２−３ｍｉｎ洗浄し、１％シュウ酸溶液２−３ｍｉｎ（漂白すれば
よい）で処理し、水道水で２−３ｍｉｎ洗浄し、９５％エタノール ２−３ｍｉｎ、Ｅｌ
ａｓｔｉｃ 染液２ｈで染色し、９５％エタノールで染液を洗い落とし、水道水で２−３
ｍｉｎ洗浄し、Ｖａｎ Ｇｉｅｓｏｎ染液で１ｍｉｎ染色し、８０％エタノール １ｍｉ
ｎ、９０％エタノール １ｍｉｎ、無水エタノール Ｉ ５ｍｉｎ、無水エタノール Ｉ
Ｉ ５ｍｉｎ、キシレン Ｉ ５ｍｉｎ、キシレン ＩＩ ５ｍｉｎで素早く脱水した。
（５）血管リモデリング率
Ｋｅｅｇａｎらの方法（Ｋｅｅｇａｎ, Ａ．, Ｍｏｒｅｃｒｏｆｔ, Ｉ．, Ｓｍｉｌｌｉ
ｅ, Ｄ．, Ｈｉｃｋｓ, Ｍ．Ｎ．, ａｎｄ ＭａｃＬｅａｎ, Ｍ．Ｒ． （２００１）．
Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ５−ＨＴ（１Ｂ） ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｏ ｈｙ
ｐｏｘｉａ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ：ｃｏｎｖ
ｅｒｇｉｎｇ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｕｓｉｎｇ ５−ＨＴ（１Ｂ）−ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｋｎ
ｏｃｋｏｕｔ ｍｉｃｅ ａｎｄ ｔｈｅ ５−ＨＴ（１Ｂ／１Ｄ）−ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａ
ｎｔａｇｏｎｉｓｔ ＧＲ１２７９３５． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ｒｅｓｅａｒｃｈ ８
９, １２３１−１２３９）によって、前記の弾性繊維を染色した肺パラフィン切片を用い
て計数を行い、５０−１００μｍを取り、大気道から離れた肺細動脈血管を計数し、リモ
デリング部分が血管の周長の１／２以上を超えるものをリモデリング血管とした。
（６）統計学的処理
計測情報は、平均数±標準誤差で表され、ＳＰＳＳ ２２．０を用いて統計学的処理を行
い、統計的検定は、すべて両側Ｔ検定に基づいた。

【0054】

３． 実験結果
（１）ＰＡＨマウス右心室収縮期血圧
結果を図１に示した。
連続的に低酸素を２１日間保持したところ、低酸素モデル対照群の平均右心室収縮期血圧
は、（２５．５５±２．２９）ｍｍＨｇであり、正常酸素対照群（１７．５４±１．４８
）ｍｍＨｇよりも明らかに上昇し、差は統計的に有意であった（Ｐ＜０．００１）。
ＣＢＤで治療したところ、１０ｍｇ／ｋｇの実験群では、平均右心室収縮期血圧は、（１
６．９０±２．３１）ｍｍＨｇであり、低酸素モデル対照群よりも明らかに低下し、差は
統計的に有意であり（Ｐ＜０．００１）、５０ｍｇ／ｋｇの実験群では、平均右心室収縮
期血圧は、（１７．９２±２．３７）ｍｍＨｇであり、同様にモデル群よりも明らかに低
下したが、２つの投与量処理群（１０ｍｇ／ｋｇ及び５０ｍｇ／ｋｇ）の結果には、有意
差がなかった。
（２）ＣＢＤ処理によるＰＡＨマウス右心室の肥大指数の明らかな阻害
結果を図２に示した。
モデル群マウスの右心室肥大指数は、（３２．６２±１．４１）％であり、正常酸素対照
群マウス（２５．９９±１．１７）％よりもはるかに高かった。ＣＢＤで治療したところ
、１０ｍｇ／ｋｇ及び５０ｍｇ／ｋｇの実験群では、マウスの右心指数は、それぞれ（３
０．１８±１．０１）％、（２９．９０±１．１９）％であり、モデル群よりもはるかに
低下し、差は、統計的に有意であったが（Ｐ＜０．００１）、各投与量を用いた治療群の
間には、有意差がなかった。
（３）肺細動脈の病理学的変化
結果を、図３Ａ−３Ｈ及び図４に示した。
低酸素モデル群のマウスでは、管壁が明らかに厚くなり、リモデリングが明らかであった
。ＣＢＤで治療した後、肺細動脈リモデリングを顕著に低下させ、リモデリング率の低下
は、明らかであった。
カンナビジオールの２つの投与量群のいずれも、右心室収縮期血圧を低下させ、右心室（
ＲＶ）の肥大指数を阻害することができ、病理学的リモデリングに対して改善作用を果た
し、たとえば、動脈中層の壁厚比、管壁中層の断面積比を減少させたり、右心室肥大を低
下させたりした。

【0055】

実施例２：カンナビジオールでＬＰＳにより誘発されたマクロファージを処理するインビ
トロ実験
１． 実験動物、試薬及び器具
２月齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（軍事科学医学院実験動物センター、ＳＰＦグレード）
ＲＰＭＩ−１６４０（Ｓｉｇｍａ）
カンナビジオール（ＣＢＤ、雲南漢素生物科技有限公司）
ＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ）
蛍光定量ＰＣＲ機器（Ｒｏｃｈｅ）
２． 実験方法
Ｙａｎｇらの方法によってプライマリ肺胞マクロファージ（Ｙａｎｇ, Ｈ．Ｍ．, Ｍａ,
Ｊ．Ｙ．, Ｃａｓｔｒａｎｏｖａ, Ｖ．, ａｎｄ Ｍａ, Ｊ．Ｋ． （１９９７）． Ｅｆ
ｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｅｓｅｌ ｅｘｈａｕｓｔ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｒｅ
ｌｅａｓｅ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆ
ａｃｔｏｒ−ａｌｐｈａ ｆｒｏｍ ｒａｔ ａｌｖｅｏｌａｒ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．
Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｌｕｎｇ ｒｅｓｅａｒｃｈ ２３, ２６９−２８４．）を分
離し、つまり、２月齢のマウスにペントバルビタールを腹腔内注射して麻酔させた。仰臥
位に固定して、首部を消毒し、首部の皮膚を切り開き、腺筋を取り除いて、気管を露出さ
せた。断ち切らずに気管において小さな孔をあけ、１ｍｌ ピペットチップに小さな白色
ピペットチップを装着して、４℃のＰＢＳ １ｍｌ（Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋無し、０．６ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ）［５０ｍｌ ＰＢＳ＋０．００８７６ｇ ＥＤＴＡ］を吸い取って開口か
ら肺に吹き込み、吹き込んだ後に吸い出した。次に、新しいＰＢＳを吹き込んで吸出し、
このように３−４回繰り返した。収集した肺胞洗浄液を２００×ｇで５分間遠心分離し、
上澄液を捨てた。無血清ＲＰＭＩ−１６４０培養液を用いて細胞を１回洗浄し、２００×
ｇで５分間遠心分離した。血清含有ＲＰＭＩ−１６４０を加えて再懸濁させて接種した。
２ｈ付着させて、ＰＢＳで３回洗浄した。血清含有ＲＰＭＩ−１６４０を加えて、５％二
酸化炭素、３７℃の条件下で培養した。
マウスの肺胞マクロファージを、６つの処理群（１群ごとに約５×１０^６個の細胞）にラ
ンダムに分け、第１群は、陰性対照とし、第２群は、１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳで誘導さ
せ（培地にＬＰＳ添加）、生体内炎症反応モデルをシミュレーションし、第３群は、ＣＢ
Ｄ対照群（培地に５μＭ ＣＢＤ添加）とし、第４群は、０．５μＭのＣＢＤで０．５ｈ
前処理した後、１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳを加えて誘発させた（培地に０．５μＭ ＣＢ
Ｄと１００ｎｇ／ｍＬ ＬＰＳ添加）。第５群は、１μＭのＣＢＤで０．５ｈ前処理した
後、１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳを加えて誘発させた（培地に１μＭ ＣＢＤと１００ｎｇ
／ｍＬ ＬＰＳ添加）。第６群は、５μＭのＣＢＤで０．５ｈ前処理した後、１００ｎｇ
／ｍＬのＬＰＳを加えて誘発させた（培地に５μＭ ＣＢＤと１００ｎｇ／ｍＬ ＬＰＳ
添加）。５ｈ処理後、細胞を収集して、蛍光定量ＰＣＲ機器を用いて各群の細胞の炎症性
因子ＴＮＦ−α、ＩＬ−６及びＭｇｌ_２の発現の変化を検出した。
ＴＮＦ−αを検出するプライマー：
フォワードプライマー：ＣＣＣＴＣＡＣＡＣＴＣＡＧＡＴＣＡＴＣＴＴＣＴ（ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：１）
リバースプライマー：ＧＣＴＡＣＧＡＣＧＴＧＧＧＣＴＡＣＡＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
２）
ＩＬ−６を検出するプライマー：
フォワードプライマー：ＧＡＧＧＡＴＡＣＣＡＣＴＣＣＣＡＡＣＡＧＡＣＣ（ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：３）
リバースプライマー：ＡＡＧＴＧＣＡＴＣＧＴＴＧＴＴＣＡＴＡＣＡ（ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：４）
Ｍｇｌ_２を検出するプライマー：
フォワードプライマー：ＡＧＧＣＡＧＣＴＧＣＴＡＴＴＧＧＴＴＣＴＣＴＧＡ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：５）
リバースプライマー：ＡＧＴＴＧＡＣＣＡＣＣＡＣＣＡＧＧＴＧＡＧＡＡＴ（ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：６）

【0056】

３． 実験結果
結果を図５に示した。
結果から分かるように、ＣＢＤは、ＬＰＳにより引き起こされる炎症関連ＴＮＦ−α及び
ＩＬ−６の発現、炎症誘発性遺伝子Ｍｇｌ_２の発現を用量依存的に明らかに阻害できた。
本発明の特定の実施形態を詳細に説明したが、当業者にとって明らかなように、開示され
たすべての内容に基づいて、これら詳細についてさまざまな修正や置換を行うことができ
、これら変化は、すべて本発明の特許範囲に属する。本発明全体の範囲は、添付した特許
請求の範囲及びその任意の等同物により限定される。

【図1】

【図2】

【図3-ABCD】

【図3-EHFG】

【図4】

【図5】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]