特許 6896802 室温安定であるワクチンの乾燥製剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6896802

(24)【登録日】2021年6月11日

(45)【発行日】2021年6月30日

(54)【発明の名称】室温安定であるワクチンの乾燥製剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/00 20060101AFI20210621BHJP

   A61K 39/235 20060101ALI20210621BHJP

   A61K 39/175 20060101ALI20210621BHJP

   A61K 39/155 20060101ALI20210621BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20210621BHJP

   A61K 35/761 20150101ALI20210621BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20210621BHJP

   A61K 9/19 20060101ALI20210621BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20210621BHJP

   A61K 47/18 20060101ALI20210621BHJP

   A61K 47/42 20170101ALI20210621BHJP

【ＦＩ】

   A61K39/00 G

   A61K39/235

   A61K39/175

   A61K39/155

   A61K35/76

   A61K35/761

   A61P31/12

   A61K9/19

   A61K47/26

   A61K47/18

   A61K47/42

【請求項の数】1

【外国語出願】

【全頁数】47

(21)【出願番号】特願2019-124185(P2019-124185)

(22)【出願日】2019年7月3日

(62)【分割の表示】特願2016-516894(P2016-516894)の分割

【原出願日】2014年9月26日

(65)【公開番号】特開2019-196368(P2019-196368A)

(43)【公開日】2019年11月14日

【審査請求日】2019年7月3日

(31)【優先権主張番号】61/883,611

(32)【優先日】2013年9月27日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】510000976

【氏名又は名称】インターベット インターナショナル ベー． フェー．

(74)【代理人】

【識別番号】100114188

【弁理士】

【氏名又は名称】小野 誠

(74)【代理人】

【識別番号】100119253

【弁理士】

【氏名又は名称】金山 賢教

(74)【代理人】

【識別番号】100124855

【弁理士】

【氏名又は名称】坪倉 道明

(74)【代理人】

【識別番号】100129713

【弁理士】

【氏名又は名称】重森 一輝

(74)【代理人】

【識別番号】100137213

【弁理士】

【氏名又は名称】安藤 健司

(74)【代理人】

【識別番号】100143823

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 英彦

(74)【代理人】

【識別番号】100151448

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 孝博

(74)【代理人】

【識別番号】100183519

【弁理士】

【氏名又は名称】櫻田 芳恵

(74)【代理人】

【識別番号】100196483

【弁理士】

【氏名又は名称】川嵜 洋祐

(74)【代理人】

【識別番号】100203035

【弁理士】

【氏名又は名称】五味渕 琢也

(74)【代理人】

【識別番号】100185959

【弁理士】

【氏名又は名称】今藤 敏和

(74)【代理人】

【識別番号】100160749

【弁理士】

【氏名又は名称】飯野 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100160255

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 祐輔

(74)【代理人】

【識別番号】100146318

【弁理士】

【氏名又は名称】岩瀬 吉和

(74)【代理人】

【識別番号】100127812

【弁理士】

【氏名又は名称】城山 康文

(72)【発明者】

【氏名】チヤオ，ジーソーン

(72)【発明者】

【氏名】オコンネル，ケヴイン

【審査官】 柴原 直司

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００５−５３８９３９（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３９／００−３９／４４

Ａ６１Ｋ ９／００−９／７２

Ａ６１Ｋ ４７／００−４７／６９

Ａ６１Ｐ １／００−４３／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ワクチンの乾燥製剤の製造方法であって、該乾燥製剤は、
弱毒化生イヌウイルスおよび６．０ないし７．６のｐＨを有する緩衝剤を含み、ここで、該乾燥製剤は、ケーキ形態であるか又はビーズの凍結乾燥形態であり、ここで、該製造方法は、
ａ．治療的有効量の弱毒化生イヌウイルスを、８％ないし３０％（ｗ／ｖ）の非還元オリゴ糖、１％ないし６％（ｗ／ｖ）のバルキング安定剤、０．１Ｍないし０．５Ｍのアミノ酸安定剤、０．９％ないし１０％（ｗ／ｖ）のタンパク質安定剤および６．０ないし７．６のｐＨを有する緩衝剤を含む水溶液と組み合せることによってワクチン製剤を調製すること；ここで非還元オリゴ糖に対するバルキング安定剤の比が０．０５ないし０．４０である；
ｂ．ワクチン製剤を、ビーズ中で凍結すること及びバイアル中で凍結することよりなる群から選択される手法で処理すること、そして、
ｃ．ステップｂ．のワクチン製剤を真空下で乾燥し、室温安定な乾燥製剤を作成すること、
を含む、乾燥製剤の製造方法であって、
ここで、前記弱毒化生イヌウイルスが、イヌジステンパーウイルス（ＣＤＶ），イヌアデノウイルス２型（ＣＡＶ２）、イヌパラインフルエンザウイルス（ＣＰＩ）およびそのいずれかの組み合せから成る群より選択され、
バルキング安定剤がマンニトールであり、
アミノ酸安定剤が、アルギニンであるか又はアルギニンとグルタミン酸塩との組み合わせであり、そして、
タンパク質安定剤が、ゼラチン及びＮＺ−アミンである、
前記乾燥製剤の製造方法。

【発明の詳細な説明】

【発明の詳細な説明】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下で、２０１３年９月２７日に出願された米
国仮出願シリアル番号第６１／８８３，６１１号の優先権を主張し、その内容は、参照す
ることによりその全体が本明細書において援用される。

【技術分野】

【0002】

本発明は、一または複数の弱毒化生ウイルスを含むワクチンの、室温安定な乾燥製剤に
関する。本発明はまた、ワクチンの該乾燥製剤の製造、および該ワクチンにより動物被験
体にワクチンを接種する方法にも関する。

【背景技術】

【0003】

弱毒化生ウイルスは、室温で長期間保存されるとき不安定である。それ故にほとんどの
弱毒化生ウイルスワクチンは、使用の前に凍結乾燥されかつ冷蔵される。しかしながら該
ワクチンの輸送および保存は、ワクチン薬局、獣医、家畜飼育者／畜産農家および最終的
にペットの飼い主または消費者に転嫁されるに違いない多額の費用をもたらす。該費用は
、貧困な共同体および低開発国においてひどく高いものとなり得る。それ故にＷＨＯは、
ヒト用ＢＣＧワクチンに対し３７℃で２８日後に、＞２０％の最小生存率を要求する［例
えば、Ｊｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ ２９：４８４８‐４８５２（２０１１）
を参照されたい］。

【0004】

伴侶動物（イヌ、ネコおよびウマ等）かまたは家畜（家禽、畜牛およびブタ等）のいず
れかに感染し得る多数のウイルスが存在する。例えば、対応するウイルス感染による症状
は、軽い風邪のような症状を含み得る一方で、他方ではイヌジステンパーウイルス（ＣＤ
Ｖ）感染の場合のように致死的でもあり得る［例えば、ＵＳ２０１０／０１９６４２０を
参照されたい］。実際のところＣＤＶは、眼系、呼吸器系、消化器系、外皮系および神経
系に関係し得る多臓器感染症を引き起こす。イヌパルボウイルス（ＣＰＶ）の死亡率もま
た、比較的に高い［例えば、ＵＳ２００９／００１０９５５を参照されたい］。ＣＰＶは
、イヌ、特に幼いイヌに感染する主な腸管病原菌であり、４ないし５週齢のイヌおよびコ
イヌにおける急性下痢症、発熱および白血球減少症によって特徴づけられる。幼いコイヌ
でさえも心筋疾患を患い得る。イヌジステンパーウイルスおよびイヌパルボウイルスは、
それらからコイヌ／イヌを保護するのに、二つの最も重要なイヌウイルスである。

【0005】

さらなるイヌウイルスには：上気道疾患および伝染性気管気管支炎の罹病の原因となる
呼吸器疾患を引き起こす、伝染力の強いウイルスであるイヌパラインフルエンザ（ＣＰＩ
）ウイルス；感染性肝炎をもたらすイヌアデノウイルス１型；および伝染力が強く重病型
の呼吸器疾患を引き起こし得るイヌインフルエンザウイルス（ＣＩＶ）が含まれる。ＣＩ
Ｖは、８０％の罹患率、および重症感染症における５〜８％の死亡率を有する１００％の
感染を引き起こすことが可能であると報告されている［Ｃｒａｗｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．
，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１０（５７４７）：４８２‐４８５（２００５）；Ｕ．Ｓ．７，９
５９，９２９ Ｂ２］。同様に、ネコカリシウイルス（ＦＣＶ）、ネコ白血病ウイルス（
ＦｅＬＶ）、ネコ汎白血球減少症ウイルス（ＦＰＬＶ）、ネココロナウイルス（ＦＣｏＶ
）およびネコ鼻気管炎（ＦＶＲ）ウイルスを含む、ネコを苦しめる多数のネコウイルスが
存在する。

【0006】

また、畜牛に感染し得る多数のウイルスも存在する。該ウイルスには、ウシウイルス性
下痢症ウイルス１型および２型（ＢＶＤＶ１およびＢＶＤＶ２）、伝染性ウシ鼻気管炎（
ＩＢＲ）ウイルス、パラインフルエンザ３型（ＰＩ３）、ウシ呼吸器多核体ウイルス（Ｂ
ＲＳＶ）およびウシ呼吸器コロナウイルス（ＢＲＣＶ）が含まれる。さらに、パスツレラ
・ムルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、マンヘミア・ヘモリチ
カ（Ｍａｎｎｈｅｉｍｉａ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）、ヒストフィルス・ソムニ（Ｈｉ
ｓｔｏｐｈｉｌｕｓ ｓｏｍｎｉ）およびマイコプラズマ・ボビス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍ
ａ ｂｏｖｉｓ）を含む、畜牛にも感染し得る多数の細菌が存在する。

【0007】

同様に、家禽に感染し得る多数のウイルスが存在する。該ウイルスには、伝染性気管支
炎ウイルス（ＩＢＶ）、伝染性ファブリキウス嚢病ウイルス（ＩＢＤＶ）、ニューカッス
ル病ウイルス（ＮＤＶ）、伝染性喉頭気管炎（ＩＬＴＶ）、マレック病ウイルス（ＭＤＶ
）、ＭＤＶ３としても知られるシチメンチョウのヘルペスウイルス（ＨＶＴ）およびトリ
メタニューモウイルス（ａＭＰＶ）が含まれる。さらに、パスツレラ・ムルトシダ（Ｐａ
ｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、サルモネラ属菌種（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ
ｓｓｐ．）、大腸菌（Ｅｓｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、マイコプラズマ属菌種（Ｍ
ｙｃｏｐｌａｓｍａ ｓｓｐ．）、アビバクテリウム・パラガリナルム（Ａｖｉｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ ｐａｒａｇａｌｌｉｎａｒａｒｕｍ）、エリシペラス属菌種（Ｅｒｙｓｉｐ
ｅｌａｓ ｓｓｐ．）、カンピロバクター属菌種（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｐ
．）、ビブリオ属菌種（Ｖｉｂｒｉｏ ｓｓｐ．）、クロストリジウム・パーフリンジェ
ンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）およびアイメリア属（Ｅｉｍ
ｅｒｉａ）等の寄生生物を含む、家禽にも感染し得る多数の細菌が存在する。

【0008】

さらに、ブタに感染し得る多数のウイルスが存在する。該ウイルスには、ブタ繁殖・呼
吸障害症候群ウイルス（ＰＲＲＳ）、ブタサーコウイルス（ＰＣＶ）、伝染性胃腸炎ウイ
ルス（ＴＧＥ）、ブタ仮性狂犬病ウイルス（ＰＰＲＶ）、ブタパルボウイルス（ＰＰＶ）
、ブタインフルエンザウイルス（ＳＩＶ）、ブタロタウイルス（ＰＲＶ）およびブタ流行
性下痢症ウイルス（ＰＥＤ）が含まれる。さらに、複数の血清型からなるパスツレラ・ム
ルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、サルモネラ属菌種（Ｓａｌ
ｍｏｎｅｌｌａ ｓｓｐ．）、複数の線毛型からなる大腸菌（Ｅｓｈｅｒｉｃｈｉａ ｃ
ｏｌｉ）、ヘモフィルス・パラスイス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｓｕｉｓ）、
ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ
）、マイコプラズマ属菌種（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｓｓｐ．）、ボルデテラ・ブロンキ
セプチカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、エリシペラス属菌
種（Ｅｒｙｓｉｐｅｌａｓ ｓｓｐ．）、カンピロバクター属菌種（Ｃａｍｐｙｌｏｂａ
ｃｔｅｒ ｓｐｐ．）、アクチノバチルス・プルロニューモニア（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉ
ｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、クロストリジウム・パーフリンジェンス
（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）およびクロストリジウム・ディフ
ィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）を含み、ブタにも感染し得る多
数の細菌が存在する。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

動物におけるウイルス感染による疾患を予防するための最良の方法が、当該動物にこれ
らのウイルスに対するワクチンを接種することであることは、現在広く一般に受け入れら
れている。ほんの一例を挙げると、イヌにおいてイヌジステンパーウイルスワクチンは、
対応する疾患の流行を顕著に低減している。同様に伝染性イヌ肝炎は、イヌアデノウイル
ス２型ワクチン（ＣＡＶ２）によって極めて制限されている。近縁のＣＡＶ１に代わる、
ワクチンにおける弱毒化生ＣＡＶ２の使用は、弱毒化生ＣＡＶ１を接種されたイヌにおい
て認められる間質性腎炎および角膜混濁に関する懸念を払拭する［Ｔａｇｕｃｈｉ ｅｔ
ａｌ．，Ｃａｎ Ｖｅｔ Ｊ．５２（９）：９８３‐９８６（２０１１）］。さらに、
多価弱毒化生ウイルスワクチンは、安全に投与され得て、必要とされるワクチン注射の数
を限定する。それ故に、イヌジステンパー、イヌ伝染性肝炎、イヌパルボウイルスおよび
イヌパラインフルエンザウイルスから保護する、いくつかの市販の弱毒化生イヌウイルス
多価ワクチンが存在する。さらに、最新の多価ワクチンは同様にイヌインフルエンザウイ
ルスからもさらに保護する。しかしながら、室温で輸送し得て保存し得る、イヌウイルス
ワクチン等の弱毒化生ウイルス性ワクチンに対するニーズが強く残されている。

【0010】

本明細書におけるいかなる参考文献の引用も、該参考文献が本出願に対する「先行技術
」として利用できることを認めるものと解釈してはならない。

【課題を解決するための手段】

【0011】

現行のワクチンの欠陥を克服するために本発明は、例えばウイルスワクチン等の、生の
弱毒化ワクチンの新規で安定な乾燥製剤を提供し、該製剤は、その対応する免疫原性組成
物と同様に、室温で輸送および／または保存され得る。これらの乾燥製剤は、例えば１２
か月、１８か月またはそれ以上（例えば、１．５ないし３年間）等の長期間、２７℃で有
効である。

【0012】

特定の実施形態において、生の弱毒化ワクチンは、鳥類用ワクチンである。このタイプ
の特定の実施形態において、生の、弱毒化鳥類用ワクチンは生の、弱毒化家禽ウイルスを
含む家禽用ワクチンである。このタイプのさらなる特定の実施形態において、生の、弱毒
化家禽用ワクチンは、生の、弱毒化トリウイルスを含むニワトリ用ワクチンである。この
タイプの別の特定の実施形態において、生の、弱毒化家禽用ワクチンは、生の、弱毒化シ
チメンチョウウイルスを含むシチメンチョウ用ワクチンである。

【0013】

特定の実施形態において生の、弱毒化ワクチンは、哺乳動物用ワクチンである。このタ
イプの特定の実施形態において、生の、弱毒化哺乳動物用ワクチンは、生の、弱毒化ヒト
ウイルスを含むヒト用ワクチンである。他の該実施形態において生の、弱毒化哺乳動物用
ワクチンは、生の、弱毒化ウシウイルスを含むウシ用ワクチンである。さらなる他の実施
形態において生の、弱毒化哺乳動物用ワクチンは、生の、弱毒化ブタウイルスを含む豚用
ワクチンである。

【0014】

さらなる他の実施形態において生の、弱毒化哺乳動物用ワクチンは、伴侶動物用ワクチ
ンである。このタイプの特定の実施形態において生の、弱毒化伴侶動物用ワクチンは、犬
用ワクチンである。このタイプの他の実施形態において生の、弱毒化伴侶動物用ワクチン
は、ネコ用ワクチンである。さらなる他の実施形態において生の、弱毒化伴侶動物用ワク
チンは、ウマ用ワクチンである。従って特定の実施形態において、生の弱毒化イヌ用ワク
チンは、生の弱毒化イヌウイルスを含む。他の実施形態において、生の弱毒化ネコ用ワク
チンは、生の弱毒化ネコウイルスを含む。さらなる他の実施形態において、生の弱毒化ウ
マ用ワクチンは、生の弱毒化されたウマウイルスを含む。

【0015】

他の実施形態において生の弱毒化ワクチンは、組換えウイルスを含む。このタイプの特
定の実施形態において組換えウイルスは、異種タンパク質をコードする組換えベクターと
して用いられる。このタイプのさらなる特定の実施形態において異種タンパク質は、ウイ
ルス性または細菌性抗原である。本発明は、本発明の安定な乾燥製剤を作成する方法をさ
らに提供する。本発明は、使用の前に本発明のワクチンを安定な乾燥製剤として２７℃で
、１２か月またはそれ以上（例えば、１．５ないし３年）等の長期間保存する方法をさら
に提供する。

【0016】

本発明はまた、本発明の安定な乾燥製剤を動物に投与する方法も提供する。特定の実施
形態において安定な乾燥製剤は、投与の前に液体ワクチンへ再構成される。本発明は、本
発明の乾燥製剤（例えば、粉末の形態）および／または再構成液体ワクチンを投与するこ
とによって動物（すなわちヒト、伴侶動物または家畜動物）における疾患を予防する方法
をさらに提供する。特定の実施形態において伴侶動物はイヌである。関連する実施形態に
おいて伴侶動物はネコである。さらなる他の実施形態において伴侶動物はウマである。さ
らなる他の実施形態において家畜動物はウシである。さらなる他の実施形態において家畜
動物はブタである。さらなる他の実施形態において家畜動物はニワトリである。さらなる
他の実施形態において家畜動物はシチメンチョウである。

【0017】

従って本発明は、弱毒化生ウイルスを含む、室温安定であるワクチンの乾燥製剤を提供
する。特定の実施形態においてワクチンの乾燥製剤は、糖安定剤を含む。このタイプの関
連する実施形態においてワクチンは、１５％ないし８０％（ｗ／ｗ）の糖安定剤を含む。
特定の実施形態においてワクチンの乾燥製剤は、３０％ないし８０％（ｗ／ｗ）の糖安定
剤を含む。他の特定の実施形態においてワクチンは、４０％ないし８０％（ｗ／ｗ）の糖
安定剤を含む。特定の実施形態においてワクチンは、２５％ないし５０％（ｗ／ｗ）の糖
安定剤を含む。関連する実施形態においてワクチンは、３０％ないし７０％（ｗ／２）の
糖安定剤を含む。より特定の実施形態においてワクチンは、４０％ないし６０％（ｗ／ｗ
）の糖安定剤を含む。

【0018】

特定の実施形態において糖安定剤は、非還元オリゴ糖である。このタイプの特定の実施
形態において非還元オリゴ糖は、ショ糖である。さらなる他の実施形態において非還元オ
リゴ糖は、トレハロースである。さらなる他の実施形態において非還元オリゴ糖は、ラフ
ィノースである。他の実施形態において糖安定剤は、糖アルコールである。このタイプの
特定の実施形態において糖アルコールは、ソルビトールである。他の実施形態において糖
アルコールは、キリリトールである。さらなる他の実施形態において糖アルコールは、マ
ルチトールである。

【0019】

別の実施形態において糖安定剤は、実際には二以上の糖安定剤の組み合せである。この
タイプの特定の実施形態において糖安定剤は、ショ糖とソルビトールの組み合せである。
特定の実施形態において糖安定剤は、ショ糖とトレハロースの組み合せである。さらなる
他の実施形態において糖安定剤は、トレハロースとソルビトールの組み合せである。さら
なる実施形態において糖安定剤は、ショ糖、トレハロースとソルビトールの組み合せであ
る。

【0020】

本発明ワクチンの室温安定な乾燥製剤は、さらに一または複数のバルキング安定剤を含
み得る。特定の実施形態においてワクチン中のバルキング安定剤の量は、ワクチンの液剤
形で１％ないし６％（ｗ／ｖ）および乾燥製剤で２％ないし２５％（ｗ／ｗ）である。特
定の実施形態においてバルキング安定剤は、マンニトールである。関連する実施形態にお
いてバルキング安定剤は、グリシンである。特定の実施形態においてバルキング安定剤は
、デキストランである。特定の実施形態においてバルキング安定剤は、マルトデキストリ
ンである。特定の実施形態においてバルキング安定剤はブドウ糖である。他の実施形態に
おいてバルキング安定剤は、ポリビニルピロリドンである。さらなる他の実施形態におい
てバルキング安定剤は、ヒドロキシエチルデンプンである。さらなる他の実施形態におい
てワクチンは、バルキング安定剤の組み合わせを含む。特定の実施形態においてバルキン
グ安定剤は、以下：デキストラン、マンニトール、グリシン、マルトデキストリン、ポリ
ビニルピロリドンおよびヒドロキシエチルデンプンの二以上を含む。このタイプの特定の
実施形態においてバルキング安定剤は、マンニトールおよびグリシンを含む。関連する実
施形態においてバルキング安定剤は、デキストランおよびグリシンを含む。さらにこのタ
イプの他の実施形態においてバルキング安定剤は、マンニトール、デキストランおよびグ
リシンを含む。

【0021】

特定の実施形態においてタンパク質安定剤は、ゼラチンである。他の実施形態において
タンパク質安定剤は、全カゼインの加水分解物である。特定の実施形態において全カゼイ
ンの加水分解物は、全カゼインのタンパク分解性加水分解物である。さらなる他の実施形
態においてタンパク質安定剤は、ゼラチンと全カゼインのタンパク分解性加水分解物の双
方の組み合せである。

【0022】

本発明ワクチンの室温安定な乾燥製剤は、ｐＨ５．５からｐＨ８．５までのｐＨをとり
得る。特定の実施形態においてｐＨ範囲は、ｐＨ６．０からｐＨ８．０である。特定の実
施形態においてｐＨ範囲は、ｐＨ６．５からｐＨ７．８である。特定の実施形態において
ｐＨ範囲は、ｐＨ６．８からｐＨ７．５である。他の実施形態においてｐＨ範囲は、ｐＨ
６．０からｐＨ７．６である。さらなる他の実施形態においてｐＨ範囲は、ｐＨ６．０か
らｐＨ６．８である。さらなる他の特定の実施形態においてｐＨ範囲は、ｐＨ７．０から
ｐＨ７．４である。より特定の実施形態においてｐＨは、ｐＨ７．２である。他のより特
定の実施形態においてｐＨは、ｐＨ６．５である。

【0023】

本発明ワクチンの室温安定な乾燥製剤は、緩衝剤を含み得る。このタイプの特定の実施
形態において緩衝剤は、０．１％ないし２％（ｗ／ｗ）のヒスチジン（乾燥前、２．５な
いし５０ｍＭ）を含む。関連する実施形態において緩衝剤は、０．２％ないし１％（ｗ／
ｗ）のヒスチジンを含む。特定の実施形態において緩衝剤は、０．２５％ないし０．７５
％（ｗ／ｗ）のヒスチジンを含む。より特定の実施形態において緩衝剤は、０．５％（ｗ
／ｗ）のヒスチジンを含む。

【0024】

他の実施形態において緩衝剤は、０．１％ないし２％（ｗ／ｗ）のリン酸塩（リン酸ナ
トリウム、リン酸カリウムまたはその二つの混合物のいずれか；乾燥前、２．５ないし５
０ｍＭ）を含む。関連する実施形態において緩衝剤は、０．２％ないし１％（ｗ／ｗ）の
リン酸塩を含む。特定の実施形態において緩衝剤は、０．２５％ないし０．７５％（ｗ／
ｗ）のリン酸塩を含む。より特定の実施形態において緩衝剤は、０．５％（ｗ／ｗ）のリ
ン酸塩を含む。

【0025】

さらなる他の実施形態において緩衝剤は、２．５ないし５０ｍＭ Ｔｒｉｓを含み得る
。特定の実施形態において緩衝剤は、２．５ないし５０ｍＭ Ｔｒｉｓおよび２．５ない
し５０ｍＭヒスチジンを含む。より特定の実施形態において緩衝剤は、５ないし２０ｍＭ
Ｔｒｉｓおよび５ないし２０ｍＭヒスチジンを含む。さらなるより特定の実施形態にお
いて緩衝剤は、７．５ないし１５ｍＭ Ｔｒｉｓおよび７．５ないし１５ｍＭヒスチジン
を含む。

【0026】

本発明ワクチンの室温安定な乾燥製剤はまた、アミノ酸安定剤も含み得る。特定の実施
形態においてアミノ酸安定剤は、アルギニンである。さらなる他の実施形態においてアミ
ノ酸安定剤は、グルタミン酸である。さらなる他の実施形態にいてアミノ酸安定剤は、ア
スパラギン酸である。さらなる他の実施形態においてアミノ酸安定剤はリジンである。関
連する実施形態において本発明ワクチンの室温安定な乾燥製剤は、二以上のアミノ酸安定
剤を含む。このタイプの特定の実施形態においてアミノン酸安定剤は、アルギニンおよび
グルタミン酸塩である。

【0027】

特定の実施形態においてワクチン中のアミノ酸安定剤の濃度は、液体製剤において０．
１〜０．４Ｍである［乾燥製剤において１０％〜４０％（ｗ／ｗ）］。特定の実施形態に
おいてワクチン中のアミノ酸安定剤の濃度は、液体製剤において０．２５〜０．３５Ｍで
ある。より特定の実施形態においてワクチン中のアミノ酸安定剤の濃度は、液体製剤にお
いて０．２５〜０．３５Ｍである。さらにより特定の実施形態においてアミノ酸安定剤は
、液体製剤において０．３Ｍアルギニンである。

【0028】

本発明ワクチンの室温安定な乾燥製剤はまた、タンパク質安定剤も含み得る。タンパク
質安定剤は、インタクトなタンパク質および／またはタンパク質加水分解物であり得る。
特定の実施形態において安定化剤タンパク質は、ゼラチンである。別の実施形態において
タンパク質安定剤は、全カゼインの加水分解物である。特定の実施形態において全カゼイ
ンの加水分解物は、全カゼインのタンパク分解性加水分解物である。特定の実施形態にお
いて乾燥製剤は、タンパク質安定剤の２％ないし２０％（ｗ／ｗ）を含む。他の特定の実
施形態においてタンパク質安定剤は、１％ないし１０％（ｗ／ｗ）のゼラチンを含む。さ
らなる他の特定の実施形態においてタンパク質安定剤は、１％ないし１０％（ｗ／ｗ）の
全カゼイン加水分解物を含む。

【0029】

本発明ワクチンの乾燥製剤はまた、ゼラチンおよび全カゼイン加水分解物の双方を含む
タンパク質安定剤を含み得る。このタイプの特定の実施形態においてタンパク質安定剤は
、１％ないし１０％（ｗ／ｗ）のゼラチンおよび１％ないし１０％（ｗ／ｗ）の全カゼイ
ン加水分解物を含む。より特定の実施形態においてタンパク質安定剤は、２％ないし５％
（ｗ／ｗ）のゼラチンおよび２％ないし６％（ｗ／ｗ）の全カゼイン加水分解物を含む。
他の特定の実施形態においてタンパク質安定剤は、０．４％ないし３．０％のゼラチン（
ｗ／ｗ）および０．５％ないし０．３％（ｗ／ｗ）の全カゼイン加水分解物を含む。特定
の実施形態においてタンパク質安定剤は、２．３％（ｗ／ｗ）のゼラチンおよび２．８％
（ｗ／ｗ）の全カゼイン加水分解物を含む。他の特定の実施形態においてタンパク質安定
剤は、３．３％（ｗ／ｗ）のゼラチンおよび４．２％（ｗ／ｗ）の全カゼイン加水分解物
を含む。

【0030】

いかなる本発明の乾燥製剤も、さらに０．０２％ないし１％（ｗ／ｗ）の二価カチオン
の塩を含み得る。特定の実施形態において二価カチオンは、液体剤形において１ｍＭ〜５
ｍＭおよび乾燥製剤において０．１％〜０．５％（ｗ／ｗ）である。特定の実施形態にお
いて二価カチオンは、マグネシウム（Ｍｇ^＋＋）である。他の実施形態において二価カチ
オンは、カルシウム（Ｃａ^＋＋）である。さらなる他の実施形態において二価カチオンは
、亜鉛（Ｚｎ^＋＋）である。さらなる他の実施形態において二価カチオンは、Ｍｇ^＋＋、
および／またはＣａ^＋＋、および／またはＺｎ^＋＋の混合液である。

【0031】

いかなる本発明ワクチンの室温安定な乾燥製剤も、さらに一または複数の浸透圧調製剤
を含み得る。特定の実施形態において浸透圧調整剤は、エクトインである。他の特定の実
施形態において浸透圧調整剤は、ヒドロキシエクトインである。さらなる他の実施形態に
おいて浸透圧調整剤は、エクトインとヒドロキシエクトインの組み合せである。特定の実
施形態において製剤中の浸透圧調整剤のパーセンテージは、０．２％ないし７．５％（ｗ
／ｗ）である。より特定の実施形態において製剤中の浸透圧調整剤のパーセンテージは、
０．５％ないし５％（ｗ／ｗ）である。さらなるより特定の実施形態において製剤中の浸
透圧調整剤のパーセンテージは、１％ないし３％（ｗ／ｗ）である。

【0032】

本発明ワクチンの室温安定な乾燥製剤は、弱毒化生ウイルスを含み得る。本発明の一態
様において弱毒化生ウイルスは、イヌウイルスである。関連する実施形態において弱毒化
生ウイルスは、ネコウイルスである。他の実施形態において弱毒化生ウイルスは、ウマウ
イルスである。

【0033】

本発明のさらなるもう一つの態様において弱毒化生ウイルスは、家畜動物ウイルス、例
えば、食用動物ウイルスである。一つの該実施形態において弱毒化生ウイルスは、家禽ウ
イルスである。このタイプの特定の実施形態において家禽ウイルスは、ニワトリウイルス
である。このタイプの他の実施形態において家禽ウイルスは、シチメンチョウウイルスで
ある。他の該実施形態において弱毒化生ウイルスは、ウシウイルスである。さらなる他の
実施形態において弱毒化生ウイルスは、ブタウイルスである。

【0034】

特定の実施形態において弱毒化生ウイルスは、ジステンパーウイルス（ＣＤＶ）である
。他の実施形態において弱毒化生ワクチンは、アデノウイルスである。さらなる他の実施
形態において弱毒化生ウイルスは、パルボウイルスである。さらなる他の実施形態におい
て弱毒化生ウイルスは、パラインフルエンザウイルス（ＣＰＩ）である。さらなる他の実
施形態において弱毒化生ウイルスは、インフルエンザウイルスである。

【0035】

本発明のさらなる他の態様において弱毒化生ウイルスは、イヌウイルスである。特定の
実施形態において弱毒化生イヌウイルスは、イヌジステンパーウイルス（ＣＤＶ）である
。他の実施形態において弱毒化生イヌウイルスは、イヌアデノウイルス２型（ＣＡＶ２）
である。さらなる他の実施形態において弱毒化生イヌウイルスは、イヌパルボウイルス（
ＣＰＶ）である。このタイプの一つの特定の実施形態において、イヌパルボウイルスは、
イヌパルボウイルス２（ＣＰＶ‐２）である。このタイプの他の特定の実施形態において
、イヌパルボウイルスは、イヌパルボウイルス２ａ（ＣＰＶ‐２ａ）である。このタイプ
のさらなる他の特定の実施形態において、イヌパルボウイルスは、イヌパルボウイルス２
ｂ（ＣＰＶ‐２ｂ）である。このタイプのさらなる他の特定の実施形態において、イヌパ
ルボウイルスは、イヌパルボウイルス２ｃ（ＣＰＶ‐２ｃ）である。このタイプの特定の
実施形態において、ＣＰＶ‐２ｃは、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ‐１３４９２株である。さ
らなる他の実施形態においてイヌパルボウイルスは、異種ＣＰＶ‐２ｃ／ＣＰＶ‐２ゲノ
ム、すなわちカプシドタンパク質をコードする領域がＣＰＶ‐２ｃ単離株由来であり、お
よび非構造タンパク質をコードする領域がＣＰＶ‐２単離株由来であるゲノムを含むよう
に構築された組換えイヌパルボウイルスである［Ｕ．Ｓ．２０１２／０３２８６５２ Ａ
１を参照されたい。その内容は参照することによりその全体が本明細書において援用され
、それにおいてはＣＰＶ‐２ゲノム内のカプシドをコードするヌクレオチド配列が、ＣＰ
Ｖ‐２ｃのカプシドタンパク質をコードするヌクレオチド配列によって置換されており、
それによって異種ＣＰＶ‐２ｃ／ＣＰＶ‐２ゲノムをもたらしている］。さらなる他の実
施形態において弱毒化生イヌウイルスは、イヌパラインフルエンザウイルス（ＣＰＩ）で
ある。

【0036】

本発明はまた、組換えウイルスベクターも含む。特定の実施形態において組換えウイル
スベクターは、組換えパラインフルエンザウイルスベクターである。特定の実施形態にお
いて組換えパラインフルエンザウイルスベクターは、組換えイヌパラインフルエンザウイ
ルスベクターである。特定の実施形態において組換えパラインフルエンザウイルス（例え
ば、組換えイヌパラインフルエンザウイルスベクター）は、異種タンパク質をコードし発
現する。このタイプの特定の実施形態において異種タンパク質は、非イヌ抗原である。よ
り特定の実施形態において非イヌ抗原は、家禽ウイルス抗原または家禽細菌抗原である。
他の実施形態において非イヌ抗原は、ブタウイルス抗原またはブタ細菌抗原である。さら
なる他の実施形態において非イヌ抗原は、ウシウイルス抗原またはウシ細菌抗原である。
さらなる他の実施形態において非イヌ抗原は、ネコウイルス抗原またはイヌ細菌抗原であ
る。特定の実施形態において組換えパラインフルエンザウイルスは、組換えパラインフル
エンザウイルス５である。

【0037】

さらなる他の実施形態において弱毒化生イヌウイルスは、イヌコロナウイルスである。
さらなる他の実施形態において弱毒化生イヌウイルスは、イヌニューモウイルスである。
さらなる他の実施形態において弱毒化生イヌウイルスは、伝染性イヌ肝炎ウイルスである
。さらなる他の実施形態において弱毒化生イヌウイルスは、イヌヘルペスウイルスである
。さらなる他の実施形態において弱毒化生イヌウイルスは、狂犬病ウイルスである。さら
なる他の実施形態において弱毒化生イヌウイルスはイヌ微少ウイルスである。さらなる他
の実施形態において弱毒化生イヌウイルスは、イヌインフルエンザウイルスである。別の
実施形態において弱毒化生ウイルスは、仮性狂犬病ウイルスである。

【0038】

本発明ワクチンの室温安定な乾燥製剤は、弱毒化生ネコウイルスを含み得る。特定の実
施形態において弱毒化生ネコウイルスは、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）である。他の
実施形態において弱毒化生ネコウイルスは、ネコカリシウイルス（ＦＣＶ）である。さら
なる他の実施形態において弱毒化生ネコウイルスは、ネコニューモウイルス（ＦＰＮ）で
ある。さらなる他の実施形態において弱毒化生ネコウイルスは、ネコパルボウイルス（Ｆ
ＰＶ）である。さらなる他の実施形態において弱毒化ネコウイルスは、ネコ白血病ウイル
ス（ＦｅＬＶ）である。さらなる他の実施形態において弱毒化生ネコウイルスは、ネコ伝
染性腹膜炎ウイルス（ＦＩＰＶ）である。さらなる他の実施形態において弱毒化生ネコウ
イルスは、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）である。さらなる他の実施形態において弱毒
化生ネコウイルスは、ボルナ病ウイルス（ＢＤＶ）である。さらなる他の実施形態におい
て弱毒化生ネコウイルスは、ネコインフルエンザウイルスである。さらなる他の実施形態
において弱毒化生ネコウイルスは、ネコ汎白血球減少症ウイルス（ＦＰＬＶ）である。さ
らなる他の実施形態において弱毒化生ネコウイルスは、ネココロナウイルス（ＦＣｏＶ）
である。さらなる他の実施形態において弱毒化生ネコウイルスは、ネコ鼻腔気管炎ウイル
ス（ＦＶＲ）である。

【0039】

さらに本発明は、多価ワクチンであるワクチンの室温安定な乾燥製剤を提供する。特定
の実施形態において本発明の多価ワクチンは、弱毒化生ウイルスワクチンのみを含む。該
多価ワクチンは、弱毒化生ウイルスのいかなる組み合わせも含み得る。このタイプの特定
の実施形態において多価ワクチンは、弱毒化生イヌジステンパーウイルスおよび弱毒化生
イヌパルボウイルスを含む。関連する実施形態において多価ワクチンは、弱毒化生イヌジ
ステンパーウイルスおよび弱毒化生イヌアデノウイルス２型を含む。他の実施形態におい
て多価ワクチンは、弱毒化生イヌジステンパーウイルスおよび弱毒化生イヌパラインフル
エンザウイルスを含む。さらなる他の実施形態において多価ワクチンは、弱毒化生イヌジ
ステンパーウイルス、弱毒化生イヌパルボウイルスおよび弱毒化生イヌパラインフルエン
ザウイルスを含む。さらなる他の実施形態において多価ワクチンは、弱毒化生イヌジステ
ンパーウイルス、弱毒化生イヌパルボウイルスおよび弱毒化生イヌアデノウイルス２型を
含む。さらなる他の実施形態において多価ワクチンは、弱毒化生イヌジステンパーウイル
ス、弱毒化生イヌパラインフルエンザウイルスおよび弱毒化生イヌアデノウイルス２型を
含む。さらなる他の実施形態において多価ワクチンは、弱毒化生イヌジステンパーウイル
ス、弱毒化生イヌパルボウイルス、弱毒化生イヌパラインフルエンザウイルスおよび弱毒
化生イヌアデノウイルス２型を含む。特定の実施形態において多価ワクチンは、弱毒生イ
ヌジステンパーウイルス、弱毒化生イヌパルボウイルス、弱毒化生イヌパラインフルエン
ザウイルス、弱毒化生イヌアデノウイルス２型および弱毒化生イヌコロナウイルスを含む
。関連する実施形態において多価ワクチンは、弱毒化生イヌジステンパーウイルス、弱毒
化生イヌパルボウイルス、弱毒化生パラインフルエンザウイルス、弱毒化生イヌアデノウ
イルス２型および弱毒化生ネココロナウイルスを含む。このタイプの特定の実施形態にお
いて多価ウイルスは、弱毒化生イヌジステンパーウイルス、弱毒化生イヌアデノウイルス
２型、弱毒化生イヌパルボウイルス、弱毒化生イヌパラインフルエンザウイルスおよび弱
毒化生イヌインフルエンザウイルスを含む。

【0040】

他の実施形態において本発明は、弱毒化生アデノウイルス２型および弱毒化生イヌパラ
インフルエンザウイルスを含む、多価ワクチンの室温安定な乾燥製剤を提供する。さらな
る他の実施形態において多価ワクチンは、弱毒化生イヌアデノウイルス２型および弱毒化
生イヌパルボウイルスを含む。さらなる他の実施形態において多価ワクチンは、弱毒化生
イヌパルボウイルスおよび弱毒化生イヌパラインフルエンザウイルスを含む。さらなる他
の実施形態において多価ワクチンは、弱毒化生イヌアデノウイルス２型、弱毒化生イヌパ
ルボウイルスおよび弱毒化生イヌパラインフルエンザウイルスを含む。このタイプの特定
の実施形態において多価ワクチンは、弱毒化生イヌアデノウイルス２型、弱毒化生イヌパ
ルボウイルス、弱毒化生イヌパラインフルエンザウイルスおよび弱毒化生イヌインフルエ
ンザウイルスを含む。

【0041】

他の実施形態において本発明は、弱毒化生イヌアデノウイルス２型および弱毒化生イヌ
パラインフルエンザウイルスを含む、多価ワクチンの室温安定な乾燥製剤を提供する。さ
らなる他の実施形態において多価ワクチンは、弱毒化生イヌアデノウイルス２型および弱
毒化生イヌパルボウイルスを含む。さらなる他の実施形態において多価ワクチンは、弱毒
化生イヌパルボウイルスおよび弱毒化生イヌパラインフルエンザウイルスを含む。さらな
る他の実施形態において多価ワクチンは、弱毒化生イヌアデノウイルス２型、弱毒化生イ
ヌパルボウイルスおよび弱毒化生イヌパラインフルエンザウイルスを含む。このタイプの
特定の実施形態において多価ワクチンは、弱毒化生イヌアデノウイルス２型、弱毒化生イ
ヌパルボウイルス、弱毒化生イヌパラインフルエンザウイルスおよび弱毒化生イヌインフ
ルエンザウイルスを含む。

【0042】

前記の実施形態のいずれにおいても弱毒化生イヌウイルスは、組換えウイルスベクター
であり得る。特定の実施形態において組換えウイルスベクターは、組換えイヌパラインフ
ルエンザウイルスベクターである。このタイプの特定の実施形態において組換えイヌパラ
インフルエンザウイルスベクターは、異種抗原をコードし発現する。

【0043】

他の特定の実施形態においてイヌパルボウイルス（ＣＰＶ）を含む多価ワクチンの乾燥
製剤は、さらに０．５％ないし５％（ｗ／ｗ）のソルビトールを含み得る。

【0044】

特定の実施形態において、本発明ワクチン（または多価ワクチン中の各ウイルス）の乾
燥製剤中の弱毒化生ウイルスの力価は、１×１０^３ないし１×１０^１０である。より特定
の実施形態において力価は、１×１０^４ないし１×１０^９である。さらなるより特定の実
施形態において力価は、５×１０^４ないし１×１０^８である。

【0045】

従って本発明は、弱毒化生ウイルス（例えば、イヌウイルス、またはネコウイルス、ま
たはウマウイルス、またはブタウイルス、またはウシウイルス、または家禽ウイルス）、
３０％ないし８０％（ｗ／ｗ）の非還元オリゴ糖、６％ないし４０％（ｗ／ｗ）のアミノ
酸安定剤、２％ないし２０％（ｗ／ｗ）のタンパク質安定剤および６．０ないし８．０の
ｐＨを有する緩衝剤を含む、ワクチンの乾燥製剤を提供する。特定の実施形態において乾
燥製剤は、２７℃で少なくとも１８か月間有効である。関連する実施形態において乾燥製
剤は、さらに２％ないし２５％（ｗ／ｗ）のバルキング安定剤を含む。このタイプの特定
の実施形態において、非還元オリゴ糖および／または糖アルコールに対するバルキング安
定剤の比は、０．０２５ないし０．６０である。より特定の実施形態において、非還元オ
リゴ糖および／または糖アルコールに対するバルキング安定剤の比は、０．０５ないし０
．４０である。さらなるより特定の実施形態において、非還元オリゴ糖および／または糖
アルコールに対するバルキング安定剤の比は、０．０７５ないし０．３０である。さらな
るより特定の実施形態において、非還元オリゴ糖および／または糖アルコールに対するバ
ルキング安定剤の比は、０．１ないし０．２５である。

【0046】

特定の実施形態において、本発明ワクチンの乾燥製剤の非還元オリゴ糖は、ショ糖およ
び／またはトレハロース、および／またはラフィノースを含む。このタイプの特定の実施
形態において乾燥製剤のｐＨは、ｐＨ６．０ないし７．６である。本発明の特定の実施形
態において、バルキング安定剤はマンニトールである。関連する実施形態においてアミノ
酸安定剤は、アルギニンである。このタイプの特定の実施形態においてアミノ酸安定剤は
、さらにグルタミン酸塩を含む。

【0047】

特定の実施形態において本発明ワクチンの乾燥製剤は、非還元オリゴ糖として２０％な
いし８０％（ｗ／ｗ）のショ糖および１８％ないし６６％（ｗ／ｗ）のトレハロースの組
み合せ、バルキング安定剤として５％ないし２０％（ｗ／ｗ）のマンニトール、９％ない
し３４％（ｗ／ｗ）のアミノ酸安定剤、タンパク質安定剤として２％ないし５％（ｗ／ｗ
）のゼラチン、および２％ないし６％（ｗ／ｗ）の全カゼインのタンパク分解性加水分解
物の組み合せおよびｐＨ６．２ないし７．５の緩衝剤を含む。このタイプの特定の実施形
態において、非還元オリゴ糖に対するバルキング安定剤の比は、０．０８ないし０．３７
である。

【0048】

より特定の実施形態において、非還元オリゴ糖は、４５％ないし６０％（ｗ／ｗ）のシ
ョ糖および１５％ないし２５％（ｗ／ｗ）のトレハロースの組み合せであり、バルキング
安定剤は、５％ないし１７％（ｗ／ｗ）のマンニトールであり、アミノ酸安定剤は、１０
％ないし２５％（ｗ／ｗ）のアルギニンであり；タンパク質安定剤は、１．５％ないし３
．５％（ｗ／ｗ）のゼラチンおよび２％ないし４％（ｗ／ｗ）の全カゼインのタンパク分
解性加水分解物、およびｐＨ６．２ないし７．５の緩衝剤を含む。このタイプの特定の実
施形態において、非還元オリゴ糖に対するバルキング剤の比は、０．１ないし０．３であ
る。

【0049】

特定の実施形態において本発明のイヌ用ワクチンの乾燥製剤は、弱毒化生イヌジステン
パーウイルス（ＣＤＶ）、イヌアデノウイルス２型（ＣＡＶ２）およびイヌパラインフル
エンザウイルス（ＣＰＩ）；ショ糖およびトレハロースの合計量が３０％ないし８０％（
ｗ／ｗ）である、非還元オリゴ糖として１５％ないし８０％（ｗ／ｗ）のショ糖および１
５％ないし８０％（ｗ／ｗ）のトレハロースの組み合せ；合計非還元オリゴ糖に対する合
計バルキング安定剤の比が０．０５ないし０．４である、バルキング安定剤として２％な
いし２５％（ｗ／ｗ）のマンニトール；１％ないし１０％（ｗ／ｗ）の全カゼインのタン
パク分解性加水分解物と１％ないし１０％（ｗ／ｗ）のゼラチンとの組み合せであるタン
パク質安定剤；アミノ酸安定剤として６％ないし４０％（ｗ／ｗ）のアルギニン；および
ｐＨ６．２ないし７．５の緩衝剤を含む。このタイプの特定の実施形態において、乾燥製
剤は、以下：（ｉ）０．５％ないし５．０％のエクトイン、（ｉｉ）５％ないし１５％の
グルタミン酸塩、（ｉｉｉ）０．０２％ないし１％のＭｇＳＯ_４、および（ｉｖ）２％な
いし５％のソルビトールを有する弱毒化生イヌパルボウイルス（ＣＰＶ）、のさらに一ま
たは複数、またはすべてを含む。より特定の実施形態において緩衝剤は、ｐＨ６．２ない
し７．５の０．１％ないし２％のリン酸カリウムまたはリン酸ナトリウムである。

【0050】

特定の実施形態において本発明のイヌ用ワクチンの乾燥製剤は、ＣＤＶ、ＣＡＶ２およ
びＣＰＩ；ショ糖およびトレハロースの合計量が４５％ないし７９％（ｗ／ｗ）である、
非還元オリゴ糖として２０％ないし８０％（ｗ／ｗ）のショ糖および１８％ないし６６％
（ｗ／ｗ）のトレハロースの組み合せ；合計非還元オリゴ糖に対する合計バルキング安定
剤の比が０．０８ないし０．３７である、バルキング安定剤として５％ないし１７％（ｗ
／ｗ）のマンニトール；２％ないし６％（ｗ／ｗ）の全カゼインのタンパク分解性加水分
解物と２％ないし５％（ｗ／ｗ）のゼラチンとの組み合せであるタンパク質安定剤；９％
ないし３４％（ｗ／ｗ）のアルギニンであるアミノ酸安定剤、およびｐＨ６．５ないし７
．２の緩衝剤、を含む。このタイプの特定の実施形態において、乾燥製剤は、以下：（ｉ
）１％ないし３％のエクトイン、（ｉｉ）７％ないし１２％のグルタミン酸塩、（ｉｉｉ
）０．０５％ないし０．５％のＭｇＳＯ_４、および（ｉｖ）３％ないし４％のソルビトー
ルを有する弱毒化生ＣＰＶ、のさらに一または複数、またはすべてを含む。より特定の実
施形態において緩衝剤は、ｐＨ６．５ないし７．２の０．２％ないし１％のリン酸カリウ
ムまたはリン酸ナトリウムである。これらのタイプの特定の実施形態において、ワクチン
の乾燥製剤は、２７℃で少なくとも１８か月間有効である。

【0051】

別の態様において、本発明は、弱毒化生パルボウイルス、例えばイヌパルボウイルス（
ＣＰＶ）、１０％ないし８０％（ｗ／ｗ）の糖アルコール、１０％ないし７０％（ｗ／ｗ
）のバルキング安定剤、４％ないし５０％（ｗ／ｗ）のタンパク質安定剤、および６．８
ないし８．０のｐＨを有する緩衝剤を含む、ワクチンの乾燥製剤を提供する。このタイプ
の特定の実施形態において乾燥製剤は、さらに１０％ないし５０％（ｗ／ｗ）のアミノ酸
安定剤を含む。特定の実施形態においてワクチンの乾燥製剤は、２７℃で少なくとも１８
か月間有効である。

【0052】

より特定の実施形態において本発明は、弱毒化生パルボウイルス、例えば、ＣＰＶ，２
３％ないし４９％（ｗ／ｗ）の糖アルコール、１６％ないし５０％（ｗ／ｗ）のバルキン
グ安定剤、７％ないし３６％（ｗ／ｗ）のタンパク質安定剤、および７．０ないし７．４
のｐＨを有する緩衝剤を含む、ワクチンの乾燥製剤を提供する。このタイプのさらなるよ
り特定の実施形態において乾燥製剤は、さらに２５％ないし３６％（ｗ／ｗ）のアミノ酸
安定剤を含む。特定の実施形態においてワクチンの乾燥製剤は、２７℃で少なくとも１８
か月間有効である。

【0053】

これらの一価パルボウイルスワクチン、例えば、一価ＣＰＶワクチンの乾燥製剤の糖ア
ルコールは、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、マルチトールおよびその組み
合せであり得て、バルキング安定剤は、デキストラン、マルトデキストリン、ポリビニル
ピロリドン、ヒドロキシエチルデンプン、グリシンまたはそのいずれかの組み合せであり
得る。タンパク質安定剤は、ゼラチン、全カゼイン加水分解物またはその二つの組み合せ
であり得る。このタイプの特定の実施形態において、全カゼインの加水分解物は、全カゼ
インのタンパク分解性加水分解物である。特定の実施形態において糖アルコールは、ソル
ビトールであり、バルキング安定剤は、デキストランおよびグリシンの組み合せであり、
ならびにタンパク質安定剤は、ゼラチンおよび全カゼインのタンパク分解性加水分解物の
組み合せである。

【0054】

より特定の実施形態において本発明は、弱毒化生パルボウイルス、例えば、ＣＰＶ、糖
アルコールとして１０％ないし８０％（ｗ／ｗ）のソルビトール、バルキング安定剤とし
て５％ないし３０％（ｗ／ｗ）のグリシンおよび５％ないし４０％（ｗ／ｗ）のデキスト
ランの組み合せ、タンパク質安定剤として２％ないし２５％（ｗ／ｗ）の全カゼインのタ
ンパク分解性加水分解物と２％ないし２５％（ｗ／ｗ）のゼラチンの組み合せ；および６
．５ないし７．８のｐＨを有する緩衝剤を含む、ワクチンの乾燥製剤を提供する。このタ
イプの特定の実施形態において、アミノ酸安定剤として１０％ないし５０％（ｗ／ｗ）の
アルギニンが含まれる。特定の実施形態において、緩衝剤は、ｐＨ６．５ないし７．８の
０．２％ないし５％（ｗ／ｗ）のリン酸カリウムまたはリン酸ナトリウムである。特定の
実施形態においてワクチンの乾燥製剤は、２７℃で少なくとも１８か月間有効である。

【0055】

さらなるより特定の実施形態において本発明は、弱毒化生パルボウイルス、例えば、Ｃ
ＰＶ、糖アルコールとして２３％ないし４９％（ｗ／ｗ）のソルビトール、バルキング安
定剤として８％ないし１７％（ｗ／ｗ）のグリシンおよび８％ないし３３％（ｗ／ｗ）の
デキストランの組み合せ、タンパク質安定剤として４％ないし１８％（ｗ／ｗ）の全カゼ
インのタンパク分解性加水分解物との３％ないし１８％（ｗ／ｗ）のゼラチンの組み合せ
；および７．０ないし７．４のｐＨを有する緩衝剤を含む、乾燥ワクチン製剤を提供する
。このタイプの特定の実施形態において、２５％ないし３６％（ｗ／ｗ）のアルギニンが
アミノ酸安定剤として含まれる。特定の実施形態において、緩衝剤は、ｐＨ７．０ないし
７．４の、０．５％ないし２％（ｗ／ｗ）のリン酸カリウムまたはリン酸ナトリウムであ
る。特定の実施形態においてワクチンの乾燥製剤は、２７℃で少なくとも１８か月間有効
である。

【0056】

特定の実施形態においてイヌパルボウイルス（ＣＰＶ）は、イヌパルボウイルス２（Ｃ
ＰＶ‐２）である。このタイプの他の特定の実施形態においてイヌパルボウイルスは、イ
ヌパルボウイルス２ａ（ＣＰＶ‐２ａ）である。このタイプのさらなる他の特定の実施形
態において、イヌパルボウイルスは、イヌパルボウイルス２ｂ（ＣＰＶ‐２ｂ）である。
このタイプのさらなる他の実施形態において、イヌパルボウイルスは、イヌパルボウイル
ス２ｃ（ＣＰＶ‐２ｃ）である。このタイプの特定の実施形態においてＣＰＶ‐２ｃは、
ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ‐１３４９２株である。さらなる他の実施形態においてイヌパル
ボウイルスは、異種ＣＰＶ‐２ｃ／ＣＰＶ‐２ゲノム、すなわちカプシドタンパク質をコ
ードする領域がＣＰＶ‐２ｃ単離株由来であり、および非構造タンパク質をコードする領
域がＣＰＶ‐２単離株由来である該ゲノム、を含むように構築された組換えイヌパルボウ
イルスである［Ｕ．Ｓ．２０１２／０３２８６５２ Ａ１を参照されたい。その内容は参
照することによりその全体が本明細書において援用され、それにおいてはＣＰＶ‐２ゲノ
ム内のカプシドをコードするヌクレオチド配列は、ＣＰＶ‐２ｃのカプシドタンパク質を
コードするヌクレオチド配列によって置換されており、それによって異種ＣＰＶ‐２ｃ／
ＣＰＶ‐２ゲノムをもたらしている］。

【0057】

本発明の弱毒化生ワクチンの、室温安定な乾燥製剤を作成するためのプロセスの一部と
して、対応する液体ワクチン製剤を膜に適用し、および／またはビーズの中に凍結し、お
よび／またはバイアル等の容器に凍結し、および／または噴霧乾燥し、および／または噴
霧凍結乾燥し、および／または泡への誘発し、および／または遅延放出性インプラントに
設置し得る。

【0058】

本発明は、本発明の再構成ワクチンを動物に投与することを含む、感染（例えば、ネコ
ウイルスまたはイヌウイルスによる感染）に起因する臨床疾患に対する動物の保護を促進
する方法をさらに提供する。特定の実施形態において投与は、粘膜に実施される。他の実
施形態において投与は、非経口的に実施される。さらなる他の実施形態において投与は、
皮内に実施される。さらなる他の実施形態において投与は、経皮的に実施される。より特
定の実施形態において、本発明のワクチンは、動物の皮下に投与される。他の特定の実施
形態において、本発明のワクチンは、動物に筋肉内に投与される。本発明はまた、一次ワ
クチンおよび／またはブースターワクチンの使用も含む。

【0059】

特定の実施形態において弱毒化生ウイルスの治療的有効量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａ
ｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）は、弱毒化生イヌウイルスの治療的有効量
である。このタイプの特定の実施形態において弱毒化生イヌウイルスの治療的有効量は、
弱毒化生イヌジステンパーウイルス、および／または弱毒化生アデノウイルス２型、およ
び／または弱毒化生イヌパルボウイルス、および／または弱毒化生イヌパラインフルエン
ザウイルスの治療的有効量を含む。

【0060】

特定の実施形態において動物の被験体はイヌであり、ならびに方法は、弱毒化生ウイル
スを含む、本発明の再構成した室温安定なワクチンをイヌに投与することを含む。特定の
実施形態において室温安定なワクチンは、弱毒化生イヌジステンパーウイルス、弱毒化生
イヌアデノウイルス２型および弱毒化生イヌパラインフルエンザウイルスを含む。このタ
イプの特定の実施形態において室温安定なワクチンは、弱毒化生イヌジステンパーウイル
ス、弱毒化生イヌアデノウイルス２型、弱毒化生イヌパラインフルエンザウイルス、およ
び弱毒化生イヌインフルエンザウイルスまたは弱毒化生イヌパルボウイルスまたは代わり
に、弱毒化生イヌインフルエンザウイルスおよび弱毒化生イヌパルボウイルスの双方を含
む。

【0061】

それ故に本発明は、本明細書で提供される乾燥製剤の一または複数のいずれか、および
薬剤的に許容可能な担体からなる再構成されたワクチンをさらに提供する。特定の実施形
態において本発明は、別々になった一価のＣＰＶワクチンの乾燥製剤と三価のＣＤＶ、Ｃ
ＡＶ２およびＣＰＩワクチンの乾燥製剤との組み合せ、および薬剤的に許容可能な担体か
ら作成される多価ワクチンを提供する。

【0062】

あらゆる本発明ワクチンの室温安定な乾燥製剤を製造する、および／または室温（例え
ば、２２〜２７℃）に保存する方法もまた提供される。特定の実施形態において該方法は
、治療的有効量の弱毒化生ネコまたはイヌウイルスを８％ないし３０％（ｗ／ｖ）の非還
元オリゴ糖、０．１Ｍないし０．５Ｍのアミノン酸安定剤、０．９％ないし１０％（ｗ／
ｖ）のタンパク質安定剤、および６．０ないし８．０のｐＨを有する緩衝剤と組み合わせ
ることによってワクチン製剤を調製することを含む。一般的に次に、必ずしもではないが
ワクチン製剤は、凍結され、それから真空下で乾燥され、室温安定な乾燥製剤を作成する
。凍結乾燥器内部の温度は、水分の除去を加速させるためにこのプロセスの間に上昇され
得る。好ましくは、ワクチンの乾燥製剤は、２７℃で保存されるとき少なくとも１８か月
間有効である。

【0063】

このタイプの特定の実施形態においてワクチン製剤は、さらに１％ないし６％（ｗ／ｖ
）のバルキング安定剤を含む。このタイプのより特定の実施形態において非還元オリゴ糖
に対するバルキング安定剤の比は、０．０５ないし０．４０である。特定の実施形態にお
いて０．５％ないし５％（ｗ／ｖ）のソルビトールもまた含まれる。特定の実施形態にお
いてバルキング安定剤は、マンニトールである。特定の実施形態においてアミノ酸安定剤
は、アルギニンである。他の実施形態おいてアミノ酸安定剤は、グルタミン酸塩である。
さらなる他の実施形態においてアミノ酸安定剤は、アルギニンとグルタミン酸塩の組み合
せである。

【0064】

本発明ワクチンのあらゆる室温安定な乾燥製剤を作成する方法は、乾燥前に液体ワクチ
ン製剤を膜に適用し、および／またはそれをビーズの中に凍結し、および／またはそれを
バイアル中に凍結し、および／または噴霧乾燥し、および／または噴霧凍結乾燥し、およ
び／またはそれを泡への誘発することを含み得る。

【0065】

室温安定なワクチンを作成する方法の特定の実施形態において該方法は、治療的有効量
の弱毒化生ウイルスを、５％ないし１８％（ｗ／ｖ）のショ糖、および５％ないし１８％
（ｗ／ｖ）のトレハロース、２％ないし４％（ｗ／ｖ）のブルキング安定剤、０．１Ｍな
いし０．３Ｍアミノ酸安定剤、および１．５％ないし６％（ｗ／ｖ）のタンパク質安定剤
の組み合せである非還元オリゴ糖と組み合わせることを含む。より特定の実施形態におい
て非還元オリゴ糖に対するバルキング安定剤の比は、０．０８ないし０．３７である。特
定の実施形態において弱毒化生ウイルスは、弱毒化生イヌウイルスである。関連する実施
形態において弱毒化生ウイルスは、弱毒化生ネコウイルスである。

【0066】

本発明のこれらのおよび他の態様は、以下の詳細な説明を参照することによりいっそう
良く理解されるであろう。

【発明を実施するための形態】

【0067】

本発明は、乾燥製剤として室温で保存し得て、１２、または１８、または２４カ月また
はそれ以上の間、安全で有効であり得る、安全で有効な弱毒化生ウイルスワクチンおよび
／または免疫原性組成物を提供する。それ故に本発明ワクチンの室温安定な乾燥製剤の一
つの主な優位性は、乾燥製剤が保存冷蔵庫または冷凍庫の必要性を除去することである。
これは、保存費用、特に遠隔地における保存費用を顕著に低減し、さらに保存冷蔵庫また
は冷凍庫が故障した後に、ワクチンが安全で有効であるかどうかを推測する必要性を除去
する。

【0068】

さらに驚いたことに、本発明の生ウイルスワクチンの室温安定な乾燥製剤は、いかなる
種類（ｔｙｐｅ）の弱毒化生ウイルスをも含み得る。従って、本発明の生ワクチンの室温
安定な製剤は、エンベロープウイルスおよび非エンベロープウイルスの双方を含み得る。
さらに本発明の生ワクチンの室温安定な乾燥製剤は、一本鎖ＲＮＡゲノム、一本鎖ＤＮＡ
ゲノムまたは二本鎖ＤＮＡゲノムを有する弱毒化生ウイルスを含み得る。本発明の一態様
において本発明の生ウイルスワクチンは、弱毒化生イヌウイルスおよび／またはネコウイ
ルスを含む。本発明は、さらに多価ワクチンである室温安定なワクチンを提供する。その
うえ本発明の室温安定なワクチンは、さらに死滅ウイルスおよび／または死菌（例えば、
バクテリン）および／またはバクテリンのサブフラクション、および／またはウイルスま
たは細菌のサブユニット（例えば、タンパク質抗原）を含み得る。

【0069】

さらに本発明の室温安定な生ウイルス製剤は、組換えベクター、例えば単独で、および
／または他の該組換えウイルスベクターと共に、および／または弱毒化生ウイルスと共に
および／または死菌および／または死滅ウイルス、例えば、死滅イヌウイルスとの組み合
わせである組換えウイルスベクター（組換えバキュロウイルスを含む）等を含み得る。該
組換えウイルスベクターは、さらに一または複数の異種ウイルス抗原または細菌抗原をコ
ードし得る。該組換えベクターの特定の例は、組換えパラインフルエンザウイルス、例え
ば、イヌパラインフルエンザウイルスである。一つの組換えパラインフルエンザベクター
は、最近、Ｌｉらにより記載された、組換えパラインフルエンザウイルス５である［Ｊ．
ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ８７（１０）５９８５‐５９９３（２０１３）；参照すること
により本明細書においてその全体が援用される］。該組換えウイルスベクター、例えば、
組換えパラインフルエンザウイルス５または組換えイヌパラインフルエンザウイルスベク
ターは、イヌウイルス、および／またはネコウイルス、および／またはウマウイルス、お
よびまたはヒトウイルス、および／またはシミアンウイルス、および／またはウシウイル
ス、および／またはヒツジウイルス、および／またはブタウイルス、および／または家禽
ウイルス（例えば、ニワトリウイルス）由来の異種抗原をコードし得る。特定の実施形態
において本発明ワクチンの室温安定な乾燥製剤は、ニワトリに感染する一または複数のニ
ワトリウイルスおよび／または細菌由来の一または複数の抗原をコードする、組換えパラ
インフルエンザウイルス（例えば、組換えパラインフルエンザウイルス５または組換えイ
ヌパラインフルエンザウイルス）を含む。

【0070】

本発明の別の実施形態において、本発明ワクチンの室温安定な乾燥製剤は、畜牛に感染
する弱毒化生ウシウイルスおよび／または細菌を含み得る。特定の実施形態において室温
安定なワクチンは、弱毒化生ＢＶＤＶ１、弱毒化生ＢＶＤＶ２および弱毒化生ＩＢＲウイ
ルスを含む。他の実施形態において室温安定なワクチンは、弱毒化生ＢＶＤＶ１、弱毒化
生ＢＶＤＶ２、弱毒化生ＰＩ３ウイルスおよび弱毒化生ＢＲＳＶを含む。さらなる他の実
施形態において室温安定なワクチンは、弱毒化生ＢＶＤＶ１、弱毒化生ＢＶＤＶ２、弱毒
化生ＰＩ３ウイルス、弱毒化生ＩＢＲウイルスおよび弱毒化生ＢＲＳＶを含む。さらなる
他の実施形態において、室温安定なワクチンは、弱毒化生ＢＶＤＶ１、弱毒化生ＢＶＤＶ
２、弱毒化生ＰＩ３ウイルス、弱毒化生ＩＢＲウイルス、弱毒化生ＢＲＳＶおよび弱毒化
生ＢＲＣＶを含む。いかなる本発明の室温安定なワクチンはまた、投与前に一または複数
の弱毒化抗原または死菌抗原、例えばパスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ
ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、マンヘミア・ヘモリチカ（Ｍａｎｎｈｅｉｍｉａ ｈａｅｍｏ
ｌｙｔｉｃａ）、ヒストフィルス・ソムニ（Ｈｉｓｔｏｐｈｉｌｕｓ ｓｏｍｎｉ）およ
びマイコプラズマ・ボビス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｂｏｖｉｄ）等と組み合わせ得る。
一つの該実施形態は、弱毒化生パスツレラ・ムルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕ
ｌｔｏｃｉｄａ）、弱毒化生マンヘミア・ヘモリチカ（Ｍａｎｎｈｅｉｍｉａ ｈａｅｍ
ｏｌｙｔｉｃａ）および弱毒化生ヒストフィルス・ソムニ（Ｈｉｓｔｏｐｈｉｌｕｓ ｓ
ｏｍｎｉ）と共に、弱毒化生ＢＶＤＶ１、弱毒化生ＢＶＤＶ２、弱毒化生ＰＩ３ウイルス
、弱毒化生ＩＢＲウイルスおよび弱毒化生ＢＲＳＶ（プラスまたはマイナス弱毒化生ＢＲ
ＣＶ）を含む室温安定なワクチンである。特定の実施形態において本発明は、弱毒化生ウ
シウイルスを含む本発明の室温安定なワクチンを、ウシに投与することを含む方法を提供
する。

【0071】

本発明ワクチンの室温安定な乾燥製剤は、あるいは家禽に感染する弱毒化生家禽ウイル
スおよび／または細菌を含み得る。特定の実施形態において弱毒化生家禽ウイルスは、伝
染性気管支炎ウイルス（ＩＢＶ）である。他の実施形態において弱毒化生家禽ウイルスは
、伝染性ファブリキウス嚢病ウイルス（ＩＢＤＶ）である。さらなる実施形態において弱
毒化生家禽ウイルスは、ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）である。さらなる他の実施
形態において弱毒化生家禽ウイルスは、伝染性喉頭気管炎（ＩＬＴＶ）である。さらなる
他の実施形態において弱毒生家禽ウイルスは、トリメタニューモウイルス（ａＭＰＶ）で
ある。さらなる他の実施形態において弱毒化生家禽ウイルスは、マレック病ウイルス（Ｍ
ＤＶ）である。さらなる他の実施形態において生家禽ウイルスは、シチメンチョウヘルペ
スウイルス（ＨＶＴ）である。［ＨＶＴはニワトリにおいて病原性ではない］。

【0072】

生家禽ウイルスはまた、組換えベクターでもあり得る。これは、特にＨＶＴおよび二つ
の他のＭＤＶ、すなわちＭＤＶ１およびＭＤＶ２に当てはまる。ニューカッスル病ウイル
スまたは伝染性喉頭気管炎由来の抗原をコードする組換えＨＶＴベクターは、既に市販さ
れている。ごく最近、ＮＤＶおよびＩＬＴＶの双方由来のまたはＮＤＶおよびＩＢＤＶの
双方由来の抗原をコードする、二つのユニークな組換えＨＶＴベクターが記載された［Ｕ
．Ｓ．２０１３／０１０１６１９ Ａ１およびＷＯ２０１３０５７２３５ Ａ１のそれぞ
れを参照されたい。その双方の内容は参照することにより本明細書においてその全体が援
用される］。本発明の室温安定なワクチンは、これらの組換え家禽ウイルスベクターのい
ずれをも、単独かまたは本明細書に記載のいずれかの組み合せで含み得る。さらに、一ま
たは複数の生家禽ウイルスワクチンを含む本発明の室温安定なワクチンのいずれも、さら
に死滅ウイルスおよび／または死菌および／またはバクテリンのサブフラクション、また
は弱毒化または非弱毒化の生アイメリア（Ｅｉｍｅｒｉａ）等の寄生生物でさえ含み得る
。特定の実施形態において本発明は、弱毒化生家禽ウイルスを含む本発明の室温安定なワ
クチンを家禽、例えば、ニワトリに投与することを含む方法を提供する。

【0073】

さらなる他の態様において本発明ワクチンの室温安定な乾燥製剤は、弱毒化生ブタウイ
ルスを含み得る。特定の実施形態において弱毒化生ブタウイルスは、伝染性胃腸炎ウイル
ス（ＴＧＥ）である。他の実施形態において弱毒化生ブタウイルスは、ブタ繁殖・呼吸障
害症候群ウイルス（ＰＲＲＳ）である。さらなる実施形態において弱毒化生ブタウイルス
は、ブタ流行性下痢症ウイルス（ＰＥＤ）である。さらなる他の実施形態において弱毒化
生ブタウイルスは、ブタインフルエンザウイルス（ＳＩＶ）である。さらなる他の実施形
態において弱毒化生ブタウイルスは、ブタロタウイルス（ＰＲＶ）である。さらなる他の
実施形態において弱毒化生ブタウイルスは、ブタパルボウイルス（ＰＰＶ）である。さら
なる他の実施形態において弱毒化生ブタウイルスは、ブタ仮性狂犬病ウイルス（ＰＰＲＶ
）である。さらなる他の弱毒化生ブタウイルスは、ブタサーコウイルス（ＰＣＶ）である
。

【0074】

本発明の多価ワクチンは、いかなる組み合わせのブタウイルスも含み得る。特定の実施
形態において本発明の多価ワクチンは、死滅ブタウイルスおよび弱毒化生ブタウイルスの
双方を含む。このタイプの特定の実施形態において多価ワクチンは、弱毒化生伝染性胃腸
炎ウイルス（ＴＧＥ）および弱毒化生ブタパルボウイルス（ＰＰＶ）と共に、死滅ブタイ
ンフルエンザウイルスＳＩＶ、死滅またはサブユニットブタサーコウイルス（ＰＣＶ）を
含む［バキュロウイルス発現ＰＣＶ抗原を含む。ＵＳ８，００８，００１を参照されたい
。その内容は参照することにより本明細書において援用される］。関連する実施形態にお
いて多価ワクチンは、死滅ブタサーコウイルス抗原（ＰＣＶ）、複数の血清型の死滅ブタ
インフルエンザウイルス（ＳＩＶ）、および弱毒化生伝染性胃腸炎ウイルス（ＴＧＥ）と
共に死滅したおよび弱毒化生ロタウイルス（ＰＲＶ）を含む。特定の実施形態において本
発明は、弱毒化生ブタウイルスを含む、本発明の室温安定なワクチンをブタに投与するこ
とを含む。関連する実施形態において多価ワクチンは、弱毒化生および／または不活化お
よび／またはサブユニットブタサーコウイルス抗原（ＰＣＶ）、弱毒化生および／または
不活化および／またはサブユニット繁殖・呼吸障害症候群ウイルス（ＰＲＲＳ）抗原、お
よび／または弱毒化生および／または不活化またはサブユニットブタ流行性下痢症ウイル
ス（ＰＥＤ）抗原を含む。

【0075】

本発明の室温安定な弱毒化生ブタウイルスワクチンは、さらに死滅ウイルスおよび／ま
たは死菌（例えば、バクテリン）および／またはバクテリンのサブフラクションを含み得
る。このタイプの特定の実施形態において多価ワクチンは、弱毒化生伝染性胃腸炎ウイル
ス（ＴＧＥ）および弱毒化生ブタパルボウイルス（ＰＰＶ）と共に、クロストリジウム・
パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）不活化トキソ
イド、以下：Ｋ９９、Ｋ８８，９８７ＰまたはＦ４１の血清型のいずれかの大腸菌（Ｅ．
ｃｏｌｉ）細菌から抽出された線毛抗原を含む。関連する実施形態において多価ブタワク
チンは、弱毒化生および／または不活化ブタ繁殖・呼吸障害症候群ウイルス（ＰＲＲＳ）
および／または弱毒化生または不活化ブタ流行性下痢症（ＰＥＤ）ウイルスと共に、死滅
またはサブユニットブタサーコウイルス抗原（ＰＣＶ）、死滅マイコプラズマ・ハイオニ
ューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａ）（Ｍ．ｈｙｏ）、不活
化または弱毒化生ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅ
ｌｌｕｌａｒｉｓ）バクテリンを含む。

【0076】

本発明ワクチンの室温安定な乾燥製剤は、少なくとも一つの糖安定剤、少なくとも一つ
のタンパク質安定剤、およびワクチンの液体製剤をｐＨ５．５ないし８．５のｐＨに維持
するための少なくとも一つの緩衝剤を含む。少なくとも一つのバルキング安定剤もまた、
添加され得る。本発明の室温安定なワクチンは、それ故に乾燥製剤として保存され得る。
該乾燥製剤は、ビーズ、例えば、以前記載された方法［例えば、ＷＯ ２０１０／１２５
０８４；ＵＳ ２０１２／００４９４１２ Ａ１；およびＵＳ ２０１４／００１７３１
８を参照されたい。そのすべての内容は、参照することにより本明細書においてその全体
が援用される］によって作成される溶媒圏（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）および／またはスフェ
リオン（ｓｐｈｅｒｅｏｎ）として知られる球体等中での凍結乾燥、またはケーキとして
、例えば、バイアル内で、または固体マトリックス、例えば、膜またはフィルター上での
乾燥、または代わりに粉末としての乾燥、または噴霧乾燥、または噴霧凍結乾燥、または
泡への誘発、を含む方法によって調製され得る。

【0077】

一価または多価ワクチンの免疫原性活性フラクションは、一または複数のウイルスおよ
び／または細菌を含み得る。従って、本発明の室温安定なワクチンは、保存のために凍結
乾燥（または代わりに液体容量を低減）され得て、それから例えば、投与前または投与時
に液体担体中で、例えば、ワクチングレードの水または他の希釈剤等の薬剤的に許容可能
な担体と共に再構成され得る。特定の実施形態において希釈剤は、一または複数の他のウ
イルスおよび／または細菌抗原を含む。あるいは、本発明の室温安定なワクチンは、固形
物として注入され得て、例えば、固形物が紛体であるとき注入器は、ＰｏｗｄｅｒＪｅｃ
ｔ（登録商標）等の無針粉末噴射器である。

【0078】

説明の便宜上のための単数形の用語の使用は、決してそのように制限されることを意図
するものではない。従って、例えば、「糖安定剤」（ａ “ｓｕｇａｒ ｓｔａｂｉｌｉ
ｚｅｒ”）との言及には、特に定めのない限り一または複数の該糖安定剤への言及が含ま
れる。複数形の用語の使用もまた、特に定めのない限り制限されることを意図するもので
はない。

【0079】

同様に、本明細書において酸またはその対応する塩基のどちらかとして言及され得る化
合物は、特に定めのない限り該化合物のいずれかを意味することを意図する。それ故に、
用語グルタミン酸（ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ）の使用は、グルタミン酸塩（ｇｌｕｔ
ａｍａｔｅ）を含むことを意味し、逆もまた同様である。

【0080】

本明細書で用いる場合、「ワクチン」とは、動物への投与に際して、野生型の微生物に
よる感染に起因する臨床疾患からの保護において最小限でも促進するために十分に強い、
すなわち臨床疾患の予防を促進するために、および／または臨床疾患を予防、回復または
治癒するために十分に強い免疫応答を誘導する、動物（特定の実施形態においてヒトを含
む）への適用に適した組成物である。別段の指示が明確にない限り、用語ワクチンの使用
は、多価ワクチンを含む。

【0081】

本明細書で用いる場合、「有効な（ｅｆｆｉｃａｃｉｏｕｓ）」ワクチンとは、ワクチ
ンが管理される、例えば、米国における動物ワクチンの管理は米国農務省（ＵＳＤＡ）に
よって統治される、司法権のためのその抗原に対する法的規制に適合するために、所定の
抗原に対する十分な力価を保持する。

【0082】

本発明で使用する場合、「多価ワクチン」とは、二以上の異なる抗原を含むワクチンで
ある。このタイプの特定の実施形態において多価ワクチンは、二以上の異なる病原体に対
する受容者の免疫系を刺激する。

【0083】

本明細書で用いる場合、ワクチンの「室温安定な」乾燥製剤とは、２７℃で保存される
とき少なくとも１年間有効である、ワクチン（多価ワクチンを含む）の乾燥製剤である。
特定の実施形態においてワクチンの室温安定な乾燥製剤は、２７℃で保存されるとき少な
くとも１．５年間有効である。より特定の実施形態においてワクチンの室温安定な乾燥製
剤は、２７℃で保存されるとき少なくとも２年間有効である。さらなるより特定の実施形
態においてワクチンの室温安定な乾燥製剤は、２７℃で保存されるとき少なくとも２．５
ないし３年間有効である。

【0084】

本明細書で用いる場合、ワクチンの「乾燥製剤」は、溶液中で処方されたワクチンの液
体を除去することによって調製される。液体の除去は、例えば、蒸発によって、例えば、
固体基質への液体ワクチンの適用および液体の蒸発等によって、および／または昇華によ
って、例えば凍結乾燥（ｌｙｉｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ（ｆｒｅｅｚｅ‐ｄｒｙｉｎｇ
））等によって達成され得る。本発明のワクチンは、一般的に０．５％ないし１０．０％
（ｗ／ｗ）の残留水分量（ＲＭＣ）を含む乾燥製剤として保存される。乾燥製剤は、投与
前に薬剤的に許容可能な担体中で再構成され得る。特定の実施形態において本発明のワク
チンは、０．５％ないし５％（ｗ／ｗ）の残留水分量を含む乾燥製剤として保存される。
より特定の実施形態において本発明のワクチンは、０．５％ないし３％（ｗ／ｗ）の残留
水分量を含む乾燥製剤として保存される。

【0085】

本発明のワクチンは乾燥製剤として保存されるので、本発明の「ワクチン」はまた、乾
燥製剤として保存される一または複数の抗原を含む製剤も表す。上記の通りこれらの乾燥
製剤は、投与前のいつかに薬剤的に許容可能な担体と組み合せられ得る。多価ワクチンの
ための抗原は、同一の乾燥製剤または別々の乾燥製剤中で保存され得る。従って一定の多
価ワクチンについて個々のワクチン抗原は、単一の乾燥製剤として別々に保存され、その
後投与前に薬剤的に許容可能な担体と共に組み合せられ、多価ワクチンを形成する。ある
いは多価ワクチン抗原は、単一の乾燥製剤として組み合せられ保存され得て、その後投与
前に薬剤的に許容可能な担体、および一または複数の別々の乾燥製剤中に保存された、一
または複数の他のワクチン抗原と共に混合され得る。

【0086】

本明細書で用いる場合、用語「担体」とは、化合物がそれと共に投与される希釈剤、ア
ジュバント、賦形剤またはビヒクルを表す。

【0087】

本明細書で用いる場合、用語「薬剤的に許容可能な」は、修飾される名詞が医薬製品で
の使用に適していることを意味するために、形容詞として使用される。例えば、それが医
薬ワクチン中の賦形剤を記載するために使用される場合、それは、該賦形剤を組成物の他
の成分と適合しており、所定の受容者、例えば、薬剤的に許容可能な担体に対し不都合な
ほどには有害でないと特徴付ける。薬剤的に許容可能な担体は、滅菌液体、例えば、水お
よび／または油であり、石油、動物、植物または合成起源のそれらを含み、例えば、ピー
ナッツ油、大豆油、鉱物油、ゴマ油およびその他であり得る。水または水溶液、生理食塩
水およびブドウ糖水溶液およびグリセリン溶液が、担体として特に注射剤用に用いられ得
る。特定の実施形態において薬剤的に許容可能な担体は、アジュバントでありおよび／ま
たはアジュバントを含有する。一定の実施形態において薬剤的に許容可能な担体は、投与
前に本発明のワクチンの乾燥製剤と組み合わせ得る、一または複数のワクチン抗原をさら
に含み得る。

【0088】

本明細書で用いる場合、「アジュバント」とは、最終的にはより良好な免疫応答、すな
わち抗原に対する統合された身体的応答をもたらす、免疫学的事象のカスケードを促進し
または増幅することのできる物質である。アジュバントは、一般的に免疫応答が発生する
ために必要とされないが、該応答を促進しまたは増幅する。

【0089】

本明細書で用いる場合、用語「保護する（ｐｒｏｔｅｃｔ）」、「保護している（ｐｒ
ｏｔｅｃｔｉｎｇ）」、「に対する保護を提供する（ｐｒｏｖｉｄｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉ
ｏｎ ｔｏ）」、「に対する保護を提供している（ｐｒｏｖｉｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｃｔ
ｉｏｎ ｔｏ」および「保護における促進（ａｉｄｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉ
ｏｎ）」は、いかなる感染症状からの完全な保護を必要としない。例えば「保護における
促進」とは、攻撃感染後に潜在的な感染の症状が少なくとも低減され、および／または症
状を引き起こす一または複数の潜在的な細胞的、生理学的または生化学的な原因または機
構が低減されおよび／または除去されるように、保護が十分であることを意味し得る。こ
の文脈において使用される場合、「低減される（ｒｅｄｕｃｅｄ）」とは、分子的な感染
状態を含むが生理学的な感染状態は含まない、感染状態に関して意味することを理解され
たい。

【0090】

本明細書で用いる場合、用語「治療的有効量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ｅｆ
ｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）」とは、単回投与で提供されるときおよび／または一ま
たは複数の引き続くブースター投与を伴う初回投与として意図され提供されるとき、該抗
原がそれに対して保護するように投与される、病原体に対する保護を提供するためにおよ
び／または病原体からの保護において促進するために十分である、所定抗原、例えば弱毒
化生ウイルス等の量である。

【0091】

本明細書で用いる場合、「全身投与」とは、身体の循環器系（心血管系およびリンパ系
を含む）への投与であり、それ故に特定部位、例えば、消化管（例えば、経口または直腸
内投与による）および呼吸器系（例えば、鼻腔内投与による）等よりは全体としての身体
に影響する。全身投与は、例えば、筋肉組織内（筋肉内）、真皮内（皮内、経皮または上
皮）、皮膚下（皮下）、粘膜の下（粘膜下）、静脈の中（静脈内）等への投与によって実
施され得る。「非経口投与」には、皮下注射、粘膜下注射、静脈内注射、筋肉内注射、皮
内注射および注入が含まれる。

【0092】

本明細書で用いる場合、用語「家畜」および「家畜動物（ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ ａｎｉ
ｍａｌ）」には、畜牛、ブタおよび家禽が含まれる。本明細書で用いる場合、用語「ウシ
（ｂｏｖｉｎｅ）」および「畜牛（ｃａｔｔｌｅ）」は、特に断りのない限り同じ意味で
使われる。同様に、用語「ブタ（“ｐｏｒｃｉｎｅ”，“ｓｗｉｎｅ” ａｎｄ “ｐｉ
ｇ”）」も、特に断りのない限り同じ意味で使われる。本明細書で用いる場合、用語「ト
リ（ａｖｉａｎ）」および「大型のトリ（ｆｏｗｌ）」は、双方の用語とも家禽（ｐｏｕ
ｌｔｒｙ）を含むことを意図しながら同じ意味で使用される。本明細書で用いる場合、用
語「家禽（ｐｏｕｌｔｒｙ）」には、ニワトリ、シチメンチョウ、アヒル、ガチョウ、ウ
ズラおよびキジが含まれ得る。

【0093】

本明細書で用いる場合、用語「伴侶動物（ｃｏｍｐａｎｉｏｎ ａｎｉｍａｌ）」には
、イヌ、ネコおよびウマが含まれる。

【0094】

本明細書で用いる場合、用語「ネコ（ｆｅｌｉｎｅ）」は、ネコ科のいずれかのメンバ
ーを表す。この科のメンバーには、野生、動物園および飼育メンバー、例えば、ネコ亜科
のいずれかのメンバー、例えば、ネコ、ライオン、トラ、ピューマ、ジャガー、ヒョウ、
ユキヒョウ、クロヒョウ、北米マウンテンライオン、チータ、オオヤマネコ、ボブキャッ
ト、カラカルまたはそのいずれかの交雑種等が含まれる。ネコ（ｃａｔ）にはまた、飼い
ネコ、純血種および／または交雑種の伴侶ネコ、キャットショー用ネコ、実験室用ネコ、
クローン化ネコおよびヤマネコまたは野ネコも含まれる。

【0095】

本明細書で用いる場合、用語「イヌ（ｃａｎｉｎｅ）」には、特に断りのない限りすべ
ての飼いイヌ、カニス・ルプス・ファミリアリス（Ｃａｎｉｓ ｌｕｐｕｓ ｆａｍｉｌ
ｉａｒｉｓ）またはカニス・ファミリアリス（Ｃａｎｉｓ ｆａｍｉｌｉａａｒｉｓ）が
含まれる。

【0096】

イヌパルボウイルス「ＣＰＶ」は、１９７８年に最初に単離され、イヌパルボ微少ウイ
ルス（ＣＭＶまたはＣＰＶ‐１）と区別するためにＣＰＶ‐２と命名された。ＣＰＶ‐２
の最初の単離の約一年後に、遺伝的変異株ＣＰＶ‐２ａが同定された。１９８０年代半ば
に、第二の遺伝的変異株ＣＰＶ‐２ｂが同定された。ＣＰＶ‐２ａおよびＣＰＶ‐２ｂは
、直ぐにＣＰＶ‐２に完全に取って代った。今日ではＣＰＶ‐２ａは、もはや米国におい
て検出されない［Ｐａｒｒｉｓｈ ａｎｄ Ｋａｗａｏｋａ，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ．Ｍｉｃ
ｒｏｂｉｏｌ．，５９：５５３‐５８６（２００５）］。この科の第四番目のＣＰＶ変異
株、ＣＰＶ‐２ｃは、２０００年に最初に記載された［Ｕ．Ｓ． ８，２２７，５９３；
ＵＳ． ８，２５８，２７４；Ｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｅｔ．Ｄｉａｇｎ．Ｉｎ
ｖｅｓｔ．（５）：５３５‐９（２００７）を参照されたい］。その双方の内容が参照す
ることにより本明細書においてその全体が援用される、２０１２年１２月１９日に出願さ
れた米国仮出願６１／７３９，０６７および２０１３年３月１６日に出願された６１／７
７８，７５１は、特許手続上の微生物の寄託の国際承認に関するブタペスト条約の要件を
満たす条件下で、２０１３年１月２４日にアメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）（
１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ．２
０１１０‐２２０９，Ｕ．Ｓ．Ａ）に寄託された、特定の弱毒化ＣＰＶ‐２ｃ単離株（Ａ
ＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ‐１３４９２）を記載する。さらに、異種ＣＰＶ‐２ｃ／ＣＰＶ‐
２ゲノム、すなわちカプシドタンパク質をコードする領域がＣＰＶ‐２ｃ単離株由来であ
り、ならびに非構造タンパク質をコードする領域がＣＰＶ‐２単離株由来である該異種ゲ
ノムを含む、組換えイヌパルボウイルスが構築された［ＷＯ２０１１１０７５３４（Ａ１
）；ＵＳ ２０１２０３２８６５２；ＷＯ２０１２００７５８９（Ａ１）その内容は参照
することによりその全体が本明細書において援用され、それにおいてＣＰＶ‐２ゲノム内
のカプシドタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ＣＰＶ‐２ｃのカプシドタンパ
ク質をコードするヌクレオチド配列により置換されていて、それによって異種ＣＰＶ‐２
ｃ／ＣＰＶ‐２ゲノムがもたらされる］。本明細書で用いる場合、「イヌパルボウイルス
」を含む本発明のワクチンは、異種ＣＰＶ‐２ｃ／ＣＰＶ‐２ゲノムを含む最近構築され
た組換えイヌパルボウイルスを含む、一または複数のこれらのＣＰＶ基準株／変異株／単
離株を含み得る。

【0097】

本明細書で用いる場合、「非還元オリゴ糖」とは、グリコシド結合により結合した二な
いし十個の単糖残基からなる炭水化物であり、塩基性水性溶媒中でアルデヒド基を含むい
かなる化合物をも生じない。本発明の非還元オリゴ糖の例には、ショ糖、トレハロースお
よびラフィノースが含まれる。

【0098】

本発明で用いる場合、「糖安定剤」は、非還元オリゴ糖（例えば、上記を参照されたい
）または「糖アルコール」／ポリオール（例えば、ソルビトール、マンニトール、アラビ
トール、イノシトール、マンニトール）である。

【0099】

本明細書で用いる場合、「バルキング安定剤」は、高温、すなわち２５℃〜３０℃また
はそれ以上においてワクチンの安定化を促進する化合物である。該バルキング安定剤の例
は、マンニトール、グリシン、デキストラン、マルトデキストリン、ポリビニルピロリド
ン、ヒドロキシエチルデンプン、ポリエチレングリコール（４００ダルトンないし２０キ
ロダルトンの範囲の分子量を有するＰＥＧ）、またはそのいずれかの組み合せである。特
定の実施例において「バルキング安定剤」は、マンニトールである。

【0100】

本明細書で用いる場合、特に反対の明確な断りがない限り、固体添加剤、例えば非還元
オリゴ糖またはタンパク質安定剤等のワクチン中のパーセント（％）は、重量／重量（ｗ
／ｗ）および／または１％溶液が固体１ｇ／ワクチン容量１００ｍｌであることに基づく
、重量／容量（ｗ／ｖ）として与えられ得る。

【0101】

本明細書で用いる場合、特に反対の明確な断りがない限り、液体添加剤、例えばエタノ
ール等のワクチン中のパーセント（％）は、１％溶液が液体添加剤１ｍｌ／ワクチン容量
１００ｍｌ（ｖ／ｖ）であることに基づく。

【0102】

本明細書で記述する場合、所定の製剤中の二つの剤の比、例えば、非還元オリゴ糖およ
び／または糖アルコールに対するバルキング安定剤の比は、同一の単位、例えば（ｗ／ｗ
）を有する剤に基づく。

【0103】

本明細書で用いる場合、「アミノ酸安定剤」は、荷電アミノ酸、すなわちアルギニン、
リジン、グルタミン酸およびアスパラギン酸である。

【0104】

本明細書で用いる場合、「タンパク質安定剤」は、インタクトなタンパク質および／ま
たはタンパク質加水分解物であり得る。特定の実施形態において本発明の「タンパク質安
定剤」は、加水分解されたカゼインかまたはゼラチン等のコラーゲン／コラーゲン誘導体
である。本発明の室温安定なワクチンにおいて使用され得る全カゼイン加水分解物は、例
えば、酸加水分解物または酵素加水分解物を含む、いくつかの方法によって得られ得る。
該加水分解物は、カゼインにもともと含まれていた全アミノ酸を、混合されたアミノ酸お
よびペプチドの形態で含有する。本発明の室温安定なワクチンにおいて使用され得る一つ
の全カゼイン膵液加水分解物は、ＭＰ ＢｉｏｍｅｄｉｃａｌｓによりＣＡＳＥＩＮ Ｈ
ＹＤＲＯＬＹＳＡＴＥ ＥＮＺＹＭＡＴＩＣ（登録商標）として販売されている。同等の
製品が、Ｓｉｇｍａ‐ＡｌｄｒｉｃｈによりＮＺ‐ＡＭＩＮＥ（登録商標）、ＮＺ‐ＡＭ
ＩＮＥ（登録商標）Ａ、ＮＺ‐ＡＭＩＮＥ（登録商標）ＡＳ、ＮＺ‐ＡＭＩＮＥ（登録商
標）ＢおよびＴｒｙｐｔｏｎｅという名で販売されている。

【0105】

本発明の室温安定なワクチンは、理想的にはｐＨ５．５ないしｐＨ８．５のｐＨで変動
するので、本発明の室温安定なワクチンは緩衝化する薬剤、すなわち緩衝剤を含む。本発
明の室温安定なワクチンにおける使用のための緩衝剤には、制限されるものではないが：
ヒスチジン、リン酸カリウムおよび／またはリン酸ナトリウム、ピロリン酸ナトリウムま
たはピロリン酸カリウム、イミダゾール、Ｔｒｉｓ、Ｔｒｉｓ‐ヒスチジン、ＢＩＳ‐Ｔ
ｒｉｓおよびグッド緩衝剤：ＢＩＳ‐Ｔｒｉｓプロパン（ＢＴＰ）、ＰＩＰＥＳ、ＡＣＥ
Ｓ、ＭＯＰＳ、ＭＯＰＳＯ、ＢＥＳ、ＴＥＳ、トリシン、グリシルグリシンおよびＨＥＰ
ＥＳが含まれる。緩衝剤は、いずれかの適した対イオンの使用により所望のｐＨに調整さ
れ得る。

【0106】

本明細書で用いる場合、本発明ワクチンの乾燥製剤における緩衝剤のｐＨが与えられる
とき、当該ｐＨは、ワクチンを乾燥製剤とするためにワクチンからすべての液体を本質的
に除去（すなわち乾燥）する前の、緩衝液を含むワクチン製剤のｐＨである。本明細書で
用いる場合、特に反対の明確な断りがない限り与えられるｐＨ値は、２５℃で定量／測定
されたｐＨ値である。

【0107】

多価ワクチン：本発明は、本明細書で詳述する通りヒト、家畜または伴侶動物ウイルス
を含む、室温安定な多価ワクチンを提供する。本発明の室温安定なイヌ用多価ワクチンの
例には、制限されるものではないが：次の弱毒化生ウイルスまたは組換えベクター：イヌ
ジステンパーウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌパルボウイルス、イヌパラインフ
ルエンザウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、イヌコロナウ
イルス、イヌヘルペスウイルス、イヌ伝染性肝炎ウイルス、イヌ微少ウイルス、狂犬病ウ
イルス、仮性狂犬病ウイルス、組換えウイルスベクター、例えば、イヌ病原菌および／ま
たはネコ病原菌由来の異種抗原をコードし発現する、組換えイヌまたはネコウイルスベク
ター、の二以上が含まれる。

【0108】

さらに、本発明の室温安定なイヌ用ワクチンは、投与前に例えば、ボルデテラ・ブロン
キセプティカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、マイコプラズ
マ属菌種（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、エールリヒア・カニス（Ｅｈｒｌ
ｉｃｈｉａ ｃａｎｉｓ）、アナプラズマ属菌種（Ａｎａｐｌａｓｍａ ｓｐｅｃｉｅｓ
）、レプトスピラ・カニコーラ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｃａｎｉｃｏｌａ）、レプトス
ピラ・グリポティフォーサ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ）、レ
プトスピラ・ハルジョ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｈａｒａｄｊｏ）、レプトスピラ・イク
テロヘモラジア（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｉｃｔｅｒｏｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉａｅ）、
レプトスピラ・ポモナ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｐｏｍｏｎａ）、レプトスピラ・インテ
ロガンス（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓ）、レプトスピラ・オータム
ナリス（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ａｕｔｍｎａｌｉｓ）またはレプトスピラ・ブラチスラ
バ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ Ｂｒａｔｉｓｌａｖａ）；または死滅イヌインフルエンザウ
イルスまたは死滅イヌコロナウイルス等の一または複数の弱毒化または死滅抗原をさらに
含み、および／またはその後組み合せられ得る。

【0109】

本発明は、組換えウイルスベクター、例えば、ヒト病原菌、および／またはサル病原菌
、および／またはウシ病原菌、および／またはヒツジ病原菌、および／またはブタ病原菌
、および／または家禽病原菌（例えば、ニワトリウイルス）から得られた異種抗原をコー
ドする、組換えイヌパラインフルエンザウイルスベクター等を含む、室温安定な多価ワク
チンをさらに提供する。

【0110】

同様に、本発明の室温安定なネコ用多価ワクチンは、以下の弱毒化生ネコウイルス：ネ
コヘルペスウイルス、ネコカリシウイルス、ネコニューモウイルス、ネコパルボウイルス
、ネコ白血病ウイルス、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス、ネコ免疫不全ウイルス、ボルナ病ウ
イルス、ネコインフルエンザウイルスおよびトリインフルエンザの二以上を含み得る。室
温安定な該ワクチンは、投与前に弱毒化または死滅クラミドフィラ・フェリス（Ｃｈｌａ
ｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｆｅｌｉｓ）および／またはバルトネラ属菌種（Ｂａｒｔｏｎｅｌ
ｌａ ｓｐｐ．）（例えば、Ｂ．ヘンセラ（Ｂ．ｈｅｎｓｅｌａｅ））、をさらに含みお
よび／またはその後組み合せられ得る。

【0111】

本発明の室温安定なワクチンおよび多価ワクチンは、乾燥製剤として保存されるので、
従って個々の抗原は、薬剤的に許容可能な担体と混合し動物の受容者に投与する前に、別
々にかまたはいずれかの組み合わせで包装され保存され得る。一つの該実施例において、
イヌジステンパーウイルス抗原、イヌパラインフルエンザウイルスおよびイヌアデノウイ
ルス２型抗原を含む多価ワクチンが、単一の乾燥製剤中に保存され、ならびにイヌパルボ
ウイルス抗原が第二の乾燥製剤中に保存される。イヌの受容者に投与する前に、二つの乾
燥製剤は担体と組み合され、イヌジステンパーウイルス、イヌパラインフルエンザウイル
ス、イヌアデノウイルス２型およびイヌパルボウイルス多価ワクチンを形成する。

【0112】

ワクチン投与：担体と混合された後に本発明の室温安定なワクチンは、いずれかの慣用
法、例えば全身投与によって、または非経口的投与、制限されるものではないが例えば、
皮下または筋肉内投与等によって投与され得る。担体と混合された後に本発明の室温安定
なワクチンはまた、粘膜投与によって、例えば粘膜内、経口、気管内、直腸内投与および
／または点眼等によっても投与され得る。あるいはワクチンは、皮膚パッチ、乱切または
局所投与により投与され得る。本発明の室温安定なワクチンはまた、受容者の飲料水およ
び／または食物により投与されうると考えられる。該ワクチンは、さらにおやつまたは玩
具の形態で投与され得ると考えられる。

【0113】

本発明のワクチン（多価ワクチンを含む）はまた、併用療法、すなわちワクチン自体に
加えて一または複数のさらなる活性薬剤、治療等を施用することを含む該治療法の一部と
して投与され得る。その場合には、「治療的有効」量を構成するワクチン量は、ワクチン
が単独で投与されればおおよそ「治療的有効」量を構成するだろうワクチン量であり得る
ことを認識されたい。他の治療法には、当該分野で既知の治療法、例えば鎮痛剤、解熱剤
、去痰薬、抗炎症剤、抗ヒスタミン剤および／または液体の投与等が含まれ得る。

【0114】

免疫原性のレベルは、当該分野において周知の攻撃感染用量漸増法の技術によって定量
し得る。該技術は、典型的には多数の動物被験体に種々の投与量のワクチンで接種するこ
と、それから病原性ウイルスにより動物被験体を攻撃感染し、最小保護用量を定量するこ
とを含む。

【0115】

好ましい投与計画に影響する要因には、例えば、被験体の種または品種（例えば、イヌ
またはネコの種、品種）、年齢、体重、性別、食餌、活動性、肺の大きさ、および健康状
態；投与経路；使用される特定のワクチンの効能、安全性および免疫持続特性；送達系が
使用されるかどうか；およびワクチンが薬剤および／またはワクチンとの組み合わせの一
部として投与されるかどうか、が含まれ得る。従って特定の動物に対して実際に用いられ
る用量は変動し得て、従って上記の典型的な用量から逸脱し得る。該用量調整を決定する
ことは、一般的に慣用法を使用するワクチン開発の分野の当業者の技術の範囲内である。

【0116】

同様に、該服用量が投与され得る容量は、典型的には０．１ｍＬ（典型的には皮内また
は経皮適用にとって）および５．０ｍＬの間である。投与量の典型的な範囲は、０．２お
よび２．０ｍＬの間であり、筋肉内または皮下投与に対しては１．０および２．０ｍＬの
間である。

【0117】

ワクチンは、動物受容者に単回または代わりに数日、数週、数カ月または数年にわたり
二回以上投与され得る。いくつかの実施形態においてワクチンは、少なくとも二回投与さ
れる。特定の該実施形態において、例えばワクチンは、初回投与の少なくとも２週間後に
投与される二回目の投与（例えば、ブースター）により、二回投与される。特定の実施形
態においてワクチンは、初回投与の長くても８週間後に投与される二回目の投与により、
二回投与される。他の実施形態において二回目の投与は、初回投与の１週間後から２年後
、初回投与の１．週間後から８週間後または初回投与の２週間後から４週間後に投与され
る。他の実施形態において二回目の投与は、初回投与の３週間後に投与される。

【0118】

上記の実施形態において初回およびその後の投与は、量および／または形態等において
変動し得る。しかしながら多くの場合、投与は量および形態において同じである。単一の
用量だけが投与されるとき、その用量単独におけるワクチン量は、一般的に該ワクチンの
治療的有効量を含む。しかしながら二以上の用量が投与されるとき、これらの用量におけ
る総ワクチン量が治療的有効量を構成し得る。さらにワクチンが最初に投与され、その後
ブースターが投与され得る。ワクチンのあとの投与はまた、ブースターが投与されたかど
うかにかかわらず、年一回（１年）または二年に一回（２年）を基準としても行われ得る
。

【0119】

本発明は、本発明の代表的な例として提供される、以下の非限定的な実施例を参照する
ことによってより良く理解され得る。以下の実施例は、本発明の実施形態をより完全に説
明するために示される。それらは、しかしながら本発明の広い範囲を限定するものと解釈
されてはならない。

【0120】

実施例
材料および方法
材料：最小限、ＡＣＳグレード（アメリカ化学会規格適合）のショ糖およびソルビトール
を、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入する。９８％以上の純度を有する分子
生物学グレードのＬ‐アルギニン塩酸塩、Ｌ‐メチオニン、Ｌ‐ヒスチジン、マンニトー
ル、硫酸マグネシウム、エクトイン、ヒドロキシエクトイン、グリシンおよび食塩を、Ｓ
ｉｇｍａから購入する。純度＞９５％の平均分子量７０，０００を有するデキストランを
、Ｓｉｇｍａから購入する。分子生物学グレードの１．ＯＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）お
よびＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）溶液を、Ｓｉｇｍａから購入する。ブルーム２５０のゼラチ
ンの２０％溶液およびＮＺ Ａｍｉｎｅ ＡＳ溶液を、最も入手可能な販売供給業者から
調製した。

【0121】

原液（ｓｔｏｃｋ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）調製：以下の溶液：８０％のショ糖、７０％のソ
ルビトール、１．０Ｍ Ｌ‐アルギニン（ｐＨ７．２）、５％のＬ‐メチオニンおよび５
ｍＭ硫酸デキストラン溶液を調製し、０．２μｍの濾過によって滅菌した。６．５ないし
９．５の間の力価を有する原体抗原ＣＤＶ、ＣＡＶ２、ＣＰＶおよびＣＰＩを、混合する
直前に解凍するように−８０℃で凍結した。

【0122】

ワクチンの混合、充填および乾燥：ウイルス抗原および安定剤を、製剤表に掲載する通り
、各成分の最終濃度になるまで混合する。溶液を目標容量とするために、脱イオン水を使
用する。ワクチン混合液中の全成分を撹拌プレート上で少なくとも１０分間、撹拌により
徹底的に混合する。バイアル中で乾燥されるワクチンについて、混合液をバイアル当たり
０．５ｍＬで２．２ｃｃのガラス製バイアルに分注し、それから表４に示す通り展開され
る乾燥サイクルを使用して凍結乾燥器で凍結乾燥する。ビーズ（例えば、溶媒圏（ｌｙｏ
ｓｐｈｅｒｅ）／スフェリオン（ｓｐｈｅｒｅｏｎ））中で乾燥されるワクチンについて
、混合液を一滴当たり１００μＬで超低温のステンレス製の型に分注し、凍結した球状の
ビーズを得た。凍結したビーズをトレイに移し、表５に示すように最適乾燥サイクルを使
用して、凍結乾燥器で凍結乾燥した。膜上で乾燥されるワクチンについて、ワクチン混合
液を膜上に分注し、それから膜を１００ないし１０００ミリトールに制御された真空によ
り、２５℃で約１６時間チャンバー内で乾燥する。

【0123】

加速温度およびリアルタイムにおける安定性試験：
４５℃および３７℃での加速安定性試験を、種々の製剤をスクリーニングするために使
用する。望む場合には、優れた製剤を２７℃での長期間のリアルタイム試験においてモニ
ターする。示した時点において各製剤から３試料を回収し、各抗原の力価を組織培養に基
づく滴定試験法によって測定し、５０％組織培養感染量（ＴＣＩＤ_５０）としておよび／
または５０％蛍光抗体感染用量（ＦＡＩＤ_５０）として報告する。

【0124】

分析方法：
ＣＰＩ効力：ウイルス試料の希釈液を、イヌ腎（ＤＫ）細胞に接種する。４〜６日後に
、単層細胞を固定し、蛍光標識ＣＰＩ抗血清で染色し、ウイルス力価をスピアマン‐カー
バー法によって計算する［Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，Ｃ．Ｈ．Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｇｕｉｄｅ ｉｎ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（ウイルス学実験ガイド），７ｔｈ ｅｄｉｔｉｏ
ｎ（第７版），Ｂｕｒｇｅｓｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉ
ｓ（ミネアポリス），ＭＮ（ミネソタ州）．（１９７３）；Ｋａｐｌａｎ，Ｍ．Ｍ． ａ
ｎｄ Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉ，Ｈ．，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ
Ｒａｂｉｅｓ（狂犬病の実験技術），Ｗｏｒｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏ
ｎ（世界保健機関），Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ（スイス），（１９７３）］。

【0125】

ＣＤＶ効力：ウイルス試料の希釈液を、ベロ細胞に接種した。５〜７日後に単層細胞を
細胞変性効果について観察し、上記引用の通りスピアマン‐カーバー法によってウイルス
力価を計算する。

【0126】

ＣＡＶ２効力：ウイルス試料の希釈液を、ＤＫ細胞に接種した。７日後に単層細胞を細
胞変性効果について観察し、上記引用の通りスピアマン‐カーバー法によってウイルス力
価を計算する。

【0127】

ＣＰＶ効力：ウイルス試料の希釈液を、ＤＫ細胞に接種した。３日後に単層細胞を蛍光
標識ＣＰＶ抗血清により染色し、上記の通りスピアマン‐カーバー法によってウイルス力
価を計算する。

【0128】

乾燥ワクチンの水分および熱分析：バイアル中またはビーズ中の凍結乾燥ワクチンの水
分を、伝統的な真空オーブン重量法またはカールフィッシャー法を使用して定量した。［
凍結乾燥試料の残留水分含量（ＲＭＣ）は、０．５％から３％（ｗ／ｗ）まで変動するこ
とが見出だされた。］凍結乾燥ビーズまたはバイアル中のケーキのガラス転移温度を、示
差走査熱量測定（ＤＳＣ）装置で定量した。特に断りのない限りＲＭＣは、凍結乾燥製剤
中のパーセント（ｗ／ｗ）として示す。

【0129】

実施例１
安定剤の調製
各製剤の最終乾燥ワクチン中の各成分の最終目標濃度（ｗ／ｗ）を、表１ａおよび２ａ
に示す。各製剤のワクチン混合液中の各成分の最終濃度を、表１ｂおよび２ｂに示す。プ
ラスチックトレイ中でビーズ（例えば、溶媒圏（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）／スフェリオン（
ｓｐｈｅｒｅｏｎ））として乾燥されるワクチンについて、ワクチンの各用量は、１００
μＬまたは２５０μＬである。ガラス製バイアル中でケーキとして乾燥されるワクチンに
ついて、用量は２５０μＬ、または５００μＬまたは１０００μＬである。表１ａおよび
２ａに示す乾燥ワクチン中の安定剤について、すべての濃度単位は、総投与ワクチン重量
がｍｇである以外は、重量分の重量（ｗ／ｗ）である。表１ｂおよび２ｂに示すワクチン
混合液中の安定剤について：糖およびタンパク質に対する濃度は、容量分の重量（ｗ／ｖ
）のパーセンテージであり、アミノ酸、カチオンおよび緩衝剤に対する濃度は、モル濃度
（Ｍ）またはミリモル濃度（ｍＭ）であり、エクトインおよびヒドロキシエクトインに対
する濃度は、容量分の重量（ｗ／ｖ）である。表１ｂおよび２ｂに示す全ての濃度は、ウ
イルス抗原を含むワクチン混合液における最終濃度である。製剤ＳＰ３３およびＳＰ３４
中のＬ‐アルギニンは、それぞれリン酸塩または酢酸塩である。他のすべてのＬ‐アルギ
ニン製剤は塩化物塩である。ｐＨは、ウイルス抗原を含むワクチン混合液の最終ｐＨであ
る。製剤中のすべての緩衝剤は、１０ｍＭの最終濃度を有する。ＫＰＯ４は、リン酸一カ
リウムおよびリン酸二カリウムを含み、７．２の目標ｐＨを有する、リン酸緩衝剤である
。表１ｂおよび２ｂに記載された安定剤を適量の水と徹底的に混合し、それからウイルス
抗原を添加し、ワクチン混合液を分注し、次の、ワクチン混合液を分注し、凍結し、およ
びビーズかまたはバイアルの中で凍結乾燥する前に、徹底的に混合する。

【0130】

実施例２
３７℃および４５℃試験と２７℃安定性の相関関係
高温での加速安定性試験を、種々の安定剤をスクリーニングするために使用する。これ
らの試験において、４５℃および３７℃の高温を加速安定性試験のために使用する。リア
ルタイムの長期安定性試験を２７℃で実施する。種々の安定剤または製剤をスクリーニン
グするために、４５℃および３７℃での加速安定性試験を使用し得るかどうかを検討する
ために、各ウイルスに対する４５℃、３７℃および２７℃での少なくとも三つの製剤の安
定特性を比較した（表３）。各時点におけるウイルス力価ならびに力価喪失の全体的な傾
向に基づいて、種々の製剤における相対的なウイルス安定性をランク付けする。異なる温
度における同一の製剤に対して、同様のランク付けを使用する。表３に示す通り、すべて
の３の温度の間で、加速およびリアルタイム安定性試験の間には緊密な相関関係がある。
４５℃、３７℃および２７℃での相対的な安定性成績は、種々の製剤中の四つのすべての
ウイルスに対して常に一貫性がある。ほとんどの製剤についてランク付けは、三つのすべ
ての温度の間で一貫性がある。従ってデータは、４５℃および３７℃が、特に群中の最良
および最悪の製剤を区別するための、信頼できる製剤スクリーニング加速法であり得るこ
とを示す。４５℃および３７℃の高温において非常に類似する安定特性を有するいくつか
の製剤について、どの製剤が２７℃（リアルタイム）においてより良好な安定性を与える
か、を推定することはそれ程容易ではない。ＤＨＰＰｉ（ＣＤＶ、ＣＡＶ２、ＣＰＶおよ
びＣＰＩ）のための製剤スクリーニングにおいて、種々の安定剤および賦形剤をスクリー
ニングし優れた製剤を同定するために、４５℃および３７℃での加速安定性試験を使用す
る。それから望むならば、２７℃での長期リアルタイム安定性試験により優れた製剤を確
認し得る。

【0131】

実施例３
種々の製剤中のウイルスのための乾燥プロセス
安定剤およびウイルス抗原を徹底的に混合した後、ワクチン混合液のガラス転移温度（
Ｔｇ）プライムを示差走査型熱量計（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）により測定した。表１
および２中のすべての製剤は、−４０℃より高いＴｇプライムを有する。これらの結果に
基づき、それぞれ凍結ワクチンビーズおよびバイアル中の液体を乾燥するために、表４お
よび５の乾燥サイクルを使用する。

【0132】

乾燥ヒ゛ース゛中でワクチンを調製するために、最初に、予備冷却したステンレスプレ
ート（−１１０℃ないし−１３０℃）中のウェルにワクチン混合液を滴下することによっ
て、ビーズ当たり１００μＬの凍結ワクチンビーズを調製する。凍結ビーズをトレイに収
集し、凍結乾燥器で乾燥するまで−８０℃に保存した。ワクチンビーズの凍結乾燥の直前
に、凍結乾燥器の棚を−２０℃に予備冷却し、トレイ中のワクチンビーズを素早く棚上に
積載する。表４に示す乾燥サイクルによる凍結乾燥後、乾燥アルゴンまたは乾燥窒素ガス
を使用して真空を解除する。ビーズの乾燥トレイを、乾燥アルゴンまたは窒素によりホイ
ルパウチに密閉する。

【0133】

ワクチンをバイアル中のケーキとして調製するために、ワクチン混合液をバイアル当た
り２５０μＬで２．２ｃｃのガラス製バイアルの中に分注した。それから充填されたバイ
アルに栓をし、凍結乾燥器中の４℃に予備冷却された棚に移した。表５の乾燥サイクルを
使用して、バイアル中のワクチンを凍結乾燥した。凍結乾燥後、真空を解除し、バイアル
を乾燥アルゴンまたは窒素ガスにより充填した。それからバイアルをゴム栓により完全に
密閉し、その後けん縮機によりさらに蓋をした。

【0134】

実施例４
凍結乾燥ＣＤＶ、ＣＡＶ２、ＣＰＩおよびＣＰＶの安定性結果
ビーズ中で乾燥されたウイルスについて、抗原を含む凍結乾燥ビーズを乾燥窒素［相対
湿度（ＲＨ）＜１．０％］によりグローブボックスの中で容器の中へ包装し、その後異な
る温度において安定性を試験する。バイアル中においてケーキとして乾燥された試料につ
いて、密封されたバイアルを保存箱に入れ、その後、異なる温度においてインキュベータ
―中において安定性を試験する。異なる時点において、試料をインキュベーターから回収
し、各ワクチンの効力を細胞培養に基づく滴定法を使用して滴定する。

【0135】

各時点において、同一の製剤の少なくとも三個のバイアルを回収し、効果試験のために
バイアル当たり１ｍＬのＰＢＳにより再構成した。ウイルスの効力を、細胞培養に基づく
ＴＣＩＤ_５０および／またはＦＡＩＤ_５０法を使用して定量した。製剤のスクリーニング
を、種々の試験において段階的に実施する。各試験は、他の試験と比較するために、少な
くとも一のベースラインとなる製剤を含む。各試験内において、種々の製剤を一または複
数の「＋」で点数化し、それから複数時点における相対的な安定性データに基づいてラン
ク付けした。＋の数が多いほど、試料中の特定の試験ウイルスの相対的な安定性は良好で
ある。

【0136】

ほとんどのＳＰｘｘ製剤について、ビーズ（例えば、溶媒圏（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）／
スフェリオン（ｓｐｈｅｒｅｏｎ））の物理的安定性は、長期間保存の間のビーズまたは
ケーキの外観における変化がなく許容可能であり、それ故に物理的安定性のランク付けは
掲載しない。ＳＰＣＰＶｘｘ製剤について、物理的安定性は製剤中の成分に依存して変化
した。乾燥ワクチンの物理的安定性を、Ｔｇによっておよび物理的外観を肉眼的に点検す
ることによってランク付けした。

【0137】

表６は、種々の製剤中の２７℃での四つのウイルスの安定性、およびそれらの２７℃で
の推定シェルフライフを示す。これらの試験において、ＣＤＶ、ＣＰＩ、ＣＡＶ２および
ＣＰＶに対する目標抗原のインプットの力価［Ｌｏｇ_１０（ＴＣＩＤ_５０）］は、それぞ
れ７．０、７．０、４．０および５．０であった。各抗原についての失効時における最小
力価を、ＣＤＶ、ＣＰＩ、ＣＡＶ２およびＣＰＶそれぞれに対して４．７、５．０、３．
３および４．５に設定した。種々の製剤におけるＤＨＰＰｉについての推定シェルフライ
フを、安定性試験の間の複数の時点における力価変化の傾向から計算する。ＣＰＩについ
ての推定シェルフライフは、失効時における最小力価である５．０に基づいており、ＣＰ
Ｉに対する抗原のインプットは０．５ｌｏｇ以上である。他の試験において、表６に掲載
した製剤と比較して、数個の優れた製剤が４５℃および３７℃での改善された安定性を示
した。これらの優れた製剤を、２７℃での長期間のリアルタイム安定性試験によって再試
験し得る。表６に示すデータは、現在のワクチン製造仕様を使用して、ＳＰ１０製剤がＣ
ＤＶ、ＣＡＶ２およびＣＰＩについて最小限２７℃で１８か月またはそれ以上のシェルフ
ライフを提供し得ることを示している（ＣＰＩ抗原のインプットは０．５ｌｏｇ以上）。

【0138】

表７は、４５℃加速安定性試験を使用して同定された数個の優れた製剤を示す。ＣＤＶ
、ＣＡＶ２、ＣＰＩおよびＣＰＶウイルスをこれらの製剤に混合し、それからビーズ中で
凍結乾燥する。ビーズを乾燥窒素によりバイアル中に密閉し、それから４５℃で安定性試
験にかけた。同様に安定性のランク付けは、時間経過に沿う各時点における力価および力
価変化の速度に基づいている。表７に示す通り製剤ＳＰ４３およびＳＰ４４は、ＳＰ１０
よりもＣＤＶおよびＣＰＩに対して顕著に良好な安定性を提供する。ＳＰ１０における安
定性と比較してＳＰ４４におけるＣＤＶおよびＣＰＩの双方に対して、１、２および４週
目において３．２倍（ｈａｌｆ−ｌｏｇ）以上の改善が存在する。同様にＳＰ４４はまた
、ＣＡＶ２に対してＳＰ１０よりも顕著に良好な安定性を提供する。ＳＰ４４についての
４５℃での加速試験から得られるデータをＳＰ１０についての２７℃で得られる当該デー
タと比較するとき、ＳＰ１０と比較しての製剤ＳＰ４４についての安定性の改善は、２７
℃で２４か月またはそれ以上のシェルフライフを有する安定なＣＤＶ、ＣＡＶ２およびＣ
ＰＩワクチン（ＤＨＰｉワクチン）をもたらすと推定し得る。

【0139】

ウイルス安定性に及ぼす安定剤または賦形剤の効果を、ＣＤＶ、ＣＰＩ、ＣＡＶ２およ
びＣＰＶの製剤スクリーニングの間に徹底的に評価した。いくつかのスクリーニング例を
、表８〜１３に掲載する。

【0140】

ウイルス安定性に及ぼす緩衝剤およびｐＨの効果を、表８に示す。表８に記載の試験に
おいてワクチンを、バイアル中でケーキとして凍結乾燥した。表の通りすべて四個のウイ
ルスを製剤中に混合し、ガラス製バイアルに充填し、それから表５に示す乾燥サイクルを
使用する方法に記載された通り凍結乾燥器内で凍結乾燥した。掲載する緩衝剤［リン酸カ
リウム緩衝剤（ＫＰＯ４）、ヒスチジン、ビス‐ｔｒｉｓプロパン緩衝剤（ＢＴＰ）およ
びＭＯＰＳ（３‐（Ｎ‐モルホリノ）プロパンスルホン酸）］およびｐＨにおける差異を
除いて、本試験におけるすべての製剤は、４％のマンニトール、５％のショ糖、０．８％
のゼラチン、１．０％のＮＺアミンおよび２ｍＭ ＭｇＳＯ４を含む。本試験におけるす
べての製剤はまた、表に掲載する最終ｐＨを有する１０ｍＭ緩衝剤も含む。各ウイルスに
ついての４５℃および３７℃での安定性のデータを、製剤をランク付けするために使用す
る。

【0141】

表８に提供するデータは、ＣＤＶ、ＣＰＩおよびＣＡＶ２が中性またはより高いｐＨで
よりもより低いｐＨ（６．５）においてより良好な安定性を有し、一方でＣＰＶが中性な
いしより高いｐＨ（７．６）においてより良好な安定性を有することを示す。ＣＤＶおよ
びＣＰＩは、試験した他の二個の緩衝剤よりもＫＰＯ４またはヒスチジンにおいてより安
定であるが、一方でＣＡＶ２およびＣＰＶの安定性は、使用される緩衝剤にさほど依存し
ないように思われる。

【0142】

ワクチンの安定性に及ぼす糖濃度および糖の組み合せの効果を、表９ａおよび９ｂに示
す通り検討した。糖濃度を表９ａに掲載し、４５℃および３７℃でのこれらの製剤中のウ
イルスの安定性を表９ｂに掲載する。本試験においてすべての製剤は、同一のウイルス原
体抗原のインプットを有し、これらの製剤中のウイルスはビーズの中で凍結乾燥された。
相対的な安定性のランク付けは、種々の製剤における各ウイルスに対する４５℃および３
７℃の双方における、ならびに複数の時点における安定性のデータに基づく。表９ａおよ
び９ｂのデータは、ＣＤＶ、ＣＰＩおよびＣＡＶ２の安定性が、糖濃度への強い依存性を
有し、４〜３０％の範囲において糖の濃度が高いほどウイルスの安定性が良好であること
を示唆する。データはまた、ショ糖およびトレハロースの組み合せ（Ｓｕｃ＋ＴｒＨ）が
ショ糖またはトレハロース単独よりも良好に作用するように思われることも示唆する。

【0143】

ウイルスの安定性に及ぼすＬ‐アルギニン濃度の効果もまた検討した（表１０）。製剤
ＳＰ０２Ｂ、ＳＰ２６およびＳＰ２７は、Ｌ‐アルギニン塩酸塩の濃度のみによって異な
る。［いくつかのデータ点についてデータは、分析無効のために入手できない（ｎ／ａ）
］。４５℃および３７℃で得られたデータに基づくと、ＣＤＶ、ＣＰＩおよびＣＡＶ２の
安定性は、アルギニン濃度に依存し、アルギニン濃度が高いほどより安定であると思われ
る（表１０）。

【0144】

種々のアルキ゛ニン塩またはグルタミン酸と組み合わせたアルギニンの濃度の効果を、
更に検討した（表１１ａおよび１１ｂ）。表１１ａは、各製剤中のアルギニンの濃度およ
び塩、およびグルタミン酸濃度および乾燥ワクチンの対応するＴｇの開始点を示す。すべ
ての製剤は、前述のアルギニンおよびグルタミン酸における差異を除けば同一である。Ｌ
‐アルギニンを種々の酸によりｐＨ７．２に調整して、種々のアルギニン塩を作成した。
開始点Ｔｇは、製剤中の凍結乾燥ワクチンビーズのガラス転移温度の開始点である。開始
点Ｔｇは、示差走査熱量計によって定量し、少なくとも３回の反復の平均である。表１１
ａに掲載される製剤の４５℃および３７℃での安定性を、表１１ｂに示す。相対的な安定
性もまたランク付けし、表１１ｂに掲載する。表１１ａおよび１１ｂに示す通り、異なる
Ｌ‐アルギニン塩は、異なる安定性への効果を有し得る。製剤ＳＰ３３中のアルギニンリ
ン酸は、かなり高いＴｇをもたらすにもかかわらず、すべて３個のウイルスの安定性は、
他のアルギニン塩と比較して減少した。製剤ＳＰ３５における０．１５Ｍ一塩基性グルタ
ミン酸ナトリウムと０．１５Ｍアルギニン塩化物との組み合わせは、ＳＰ１０に見出され
る安定性と比較してすべて３個のウイルスの安定性をわずかに改善した。

【0145】

エクトインおよびヒドロキシエクトインは、好塩性微生物に見出される天然化合物であ
る。双方とも、浸透圧調整剤として作用することによって、保護物質として役立つ相溶性
溶質であり、それ故に塩および温度ストレスへの耐性を与えて、微生物が極端な浸透圧ス
トレスを生き抜くことを助ける。エクトインもヒドロキシエクトインも、多くの他の生物
製剤と同様に、強力なタンパク質の安定剤であることが明らかにされている。そこでＣＤ
Ｖ、ＣＰＩおよびＣＡＶ２の安定性に及ぼすそれらの安定化効果を試験した。製剤ＳＰ３
９およびＳＰ４０は、さらにそれらがそれぞれエクトインまたはヒドロキシエクトインを
含む以外はＳＰ１０と同一である（表１３）。三つの保存温度での安定性データを、それ
らの安定化効果を評価するために使用した。これらの３個のウイルス画分を含むワクチン
混合液を、同じ乾燥サイクルを使用してビーズ中で凍結乾燥した。

【0146】

安定性のランク付けは、３温度（４５℃、３７℃および２７℃）の安全性データに基づ
く。表１３における安定性データおよび安定性ランク付けは、エクトインおよびヒドロキ
シエクトインの双方が、３７℃および２７℃でのＣＤＶおよびＣＰＩの安定性を改善しう
るが、４５℃での安定化効果はそれほど顕著でないことを示す。ＣＡＶ２に及ぼすエクト
インおよびヒドロキシエクトインの安定化効果は、その低い劣化曲線のために判別し難い
。

【0147】

実施例５
凍結乾燥ＣＰＶの安定性結果
種々の製剤中における一価ＣＰＶの安定性もまた評価した。ＣＰＶを生存に適した室温
安定な製剤、例えば、ＳＰＣＰＶ‐０２およびＳＰＣＰＶ‐０３中で他の三個のイヌウイ
ルスと共に含むことができて、製剤はＣＰＶに対し２７℃で約１８か月のシェルフライフ
を提供し得るにもかかわらず、試験した四個の異なるイヌウイルスの中でＣＰＶは、その
最適な室温安定性に関し最も異なる。

【0148】

それ故にＣＰＶは、ＣＤＶ、ＣＰＩまたはＣＡＶ２とは違って糖への異なる嗜好性を有
し、例えば、還元等よりもソルビトール等の糖アルコールにより一層安定である。しかし
ながらソルビトールの存在下でさえも、凍結乾燥ビーズまたはケーキの物理的安定性は、
しばしば保存中に乾燥ビーズの収縮または崩壊をもたらし得る。それ故に、乾燥ＣＰＶ製
剤の効力の安定性および物理的安定性の双方を、製剤スクリーニングの間モニターした。
特に一価ＣＰＶワクチン製剤のスクリーニングは、ウイルスの効力安定性を乾燥製品の物
理的安定性と釣り合わせるワクチン製品を達成するための、モデル試験であることが判明
した。

【0149】

表１４は、五個の異なる製剤における４５℃、３７℃および２７℃でのＣＰＶの安定性
データを示す。一価ＣＰＶをこれらの製剤中に混合し、次に１００ｕＬサイズのビーズと
して凍結乾燥する。本試験におけるすべての製剤は、緩衝剤としてｐＨ７．２の１０ｍＭ
ＫＰＯ４、およびバルキング安定剤として２％のデキストラン７０ｋおよび２％のグリ
シンを含んだ。各製剤のソルビトール濃度（ｗ／ｖ）を表に示す。すべての製剤はまた、
安定化タンパク質「ＧＮ」（ゼラチンおよびＮＺ‐Ａｍｉｎｅ）も含んだ。１×ＧＮは：
０．８％のゼラチンおよび１．０％のＮＺ Ａｍｉｎｅであり；一方、２．５×ＧＮは：
２．５％のゼラチンおよび２．５％のＮＺ Ａｍｉｎｅである。効力安定性のランク付け
は、４５℃、３７℃および２７℃でのウイルス力価の変化に基づく。物理的安定性のラン
ク付けは、ガラス転移温度（Ｔｇ）および凍結乾燥後および安定性試験の間の凍結乾燥ビ
ーズの物理的構造の外観に基づく。より高いＴｇおよびビーズの物理的構造を維持するよ
り強い傾向は、物理的安定性における好成績をもたらす。

【0150】

表１４における安定性データは、より高い濃度のソルビトールがＣＰＶの効力安定性に
役立つが、ワクチンの物理的安定性を減ずること；一方でより高いタンパク質濃度が理的
安定性に有益であることを示す。さらにＬ‐アルギニンの混入は、ＣＰＶの安定性になん
ら負の効果を有さなかった。

【0151】

デキストランおよび異なる濃度のソルビトールの効果を、表１５に要約した試験におい
てさらに評価した。表１５のすべての製剤は、２％のグリシン、２．５％のゼラチン、２
．５％のＮＺ ＡｍｉｎｅおよびｐＨ７．２の１０ｍＭ ＫＰＯ４を含む。さらにすべて
の製剤は、ソルビトールおよびデキストラン７０ｋを含む。一価のＣＰＶをこれらの製剤
に混合し、次に１００ｕＬサイズのビーズとして凍結乾燥する。これらの製剤の効力安定
性および物理的安定性を、表１５の試験の通り同様にランク付けする。表１５のデータは
、より高い濃度のデキストラン７０ｋが凍結乾燥ＣＰＶビーズの物理的安定性に有益であ
るが、効力安定性を６％で損なうことを示す。その一方で、より高いソルビトール濃度は
、効力安定性に有益であるが、ビーズの構造を維持するためには中濃度のデキストラン７
０ｋが必要である。本試験のデータは、ソルビトールおよびデキストラン７０ｋの最適な
組み合わせが、高い効力および高い物理的安定性の双方を有する最適な凍結乾燥ＣＰＶワ
クチンのために必要であることを示唆する。

【0152】

実施例６
ウイルス安定性に及ぼす異なる乾燥方式の効果
異なる方式で乾燥されたワクチンが異なる安定特性を有するかどうかを検討するために
、同一の製剤中のウイルスをバイアル中のケーキとしてかまたはトレイ中のビーズとして
乾燥し、それからそれらの安定性を比較した。表１６は、ＳＰ０２Ｂのビーズ中およびＦ
ＤＩＶ‐０３のケーキ中のＣＤＶ、ＣＡＶ２およびＣＰＩの安定性試験結果を示す。（実
際上は、ＳＰ０２ＢおよびＦＤＩＶ‐０３は同一の製剤である）。表１６から分かるよう
に、バイアル中のＣＤＶ、ＣＰＩおよびＣＡＶ２の安定性は、ビーズにおいて観察される
それと同等（またはわずかにより良好）であった。本試験におけるデータは、ビーズにお
いて確認された最適製剤がまた、バイアル中でケーキとして乾燥されるウイルスワクチン
のためにも使用され得ることを示唆する。

【表1a】

【表1b】

【表2a】

【表2b】

【表3】

【表4】

【表5】

【表6】

【表7】

【表8】

【表9a】

【表9b】

【表10】

【表11a】

【表11b】

【表12】

【表13】

【表14】

【表15】

【表16】