特許 6899400 ＬＡＣＴＯＢＡＣＩＬＬＵＳ ＰＬＡＮＴＡＲＵＭの新規プロバイオティクス細菌株ならびにそれらの組成物及び炎症の治療における使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6899400

(24)【登録日】2021年6月16日

(45)【発行日】2021年7月7日

(54)【発明の名称】ＬＡＣＴＯＢＡＣＩＬＬＵＳ ＰＬＡＮＴＡＲＵＭの新規プロバイオティクス細菌株ならびにそれらの組成物及び炎症の治療における使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 1/20 20060101AFI20210628BHJP

   A61K 35/747 20150101ALI20210628BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20210628BHJP

   A61K 9/107 20060101ALI20210628BHJP

   A61K 9/16 20060101ALI20210628BHJP

   A61K 9/20 20060101ALI20210628BHJP

   A61K 9/28 20060101ALI20210628BHJP

   A61K 9/48 20060101ALI20210628BHJP

   A61K 8/99 20170101ALI20210628BHJP

   A61Q 11/00 20060101ALI20210628BHJP

【ＦＩ】

   C12N1/20 A

   A61K35/747

   A61K9/08

   A61K9/107

   A61K9/16

   A61K9/20

   A61K9/28

   A61K9/48

   A61K8/99

   A61Q11/00

【請求項の数】17

【全頁数】18

(21)【出願番号】特願2018-556013(P2018-556013)

(86)(22)【出願日】2017年1月18日

(65)【公表番号】特表2019-506181(P2019-506181A)

(43)【公表日】2019年3月7日

(86)【国際出願番号】EP2017051003

(87)【国際公開番号】WO2017125446

(87)【国際公開日】20170727

【審査請求日】2019年11月29日

(31)【優先権主張番号】1600975.5

(32)【優先日】2016年1月19日

(33)【優先権主張国】GB

【微生物の受託番号】DSMZ  DSM 32131

(73)【特許権者】

【識別番号】509243300

【氏名又は名称】プロビ アーベー

(74)【代理人】

【識別番号】110001416

【氏名又は名称】特許業務法人 信栄特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】フィッシャー，ヨルグ ティロ

(72)【発明者】

【氏名】ゴッツ，マーカス ルドルフ

(72)【発明者】

【氏名】モリン，ゴーラン

(72)【発明者】

【氏名】アーネ，シヴ

【審査官】 山内 達人

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００２−５２６４１３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１３−５３５２２６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１４／１４００８０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特開２０１０−２０２５５７（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ１２Ｎ

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｑ

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０／ＪＳＴＣｈｉｎａ（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＧＯＳ ４２（ＤＳＭ ３２１３１）である微生物。

【請求項2】

前記微生物が、栄養細胞及び／または胞子として存在する、請求項１に記載の微生物。

【請求項3】

前記微生物が、弱毒化されているか、または死滅している、請求項１または２に記載の微生物。

【請求項4】

Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＧＯＳ ４２（ＤＳＭ ３２１３１）である微生物を、担体、賦形剤、及び／または希釈剤と共に含む、組成物。

【請求項5】

前記組成物が、薬学的組成物である、請求項４に記載の組成物。

【請求項6】

前記微生物が、栄養細胞及び／または胞子として存在する、請求項４または５に記載の組成物。

【請求項7】

前記微生物が、弱毒化されているか、または死滅している、請求項４または５に記載の組成物。

【請求項8】

前記微生物の総量が、前記組成物の総重量に対して、少なくとも０．０１重量％であり、かつ／または前記微生物の総量が、１×１０^３〜１×１０^１１コロニー形成単位（ＣＦＵ）の範囲内にある、請求項４〜７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項9】

前記微生物の総量が、前記組成物の総重量に対して０．１〜５０重量％の範囲内にあり、かつ／または前記微生物の総量が、１×１０^５〜１×１０^１０ＣＦＵの範囲内にある、請求項８に記載の組成物。

【請求項10】

前記微生物の総量が、前記組成物の総重量に対して１〜１０重量％の範囲内にあり、かつ／または前記微生物の総量が、１×１０^８〜１×１０^９ＣＦＵの範囲内にある、請求項９に記載の組成物。

【請求項11】

前記組成物が、コーティングまたはカプセル化されている、請求項４〜１０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項12】

前記組成物が、溶液、懸濁液、乳剤、錠剤、顆粒、粉末、またはカプセルの形態である、請求項４〜１１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項13】

前記組成物が、練り歯磨き粉、歯磨きジェル、歯磨き粉、歯洗浄液、歯洗浄フォーム、口内洗浄液、口内スプレー、糸ようじ、チューインガム、及びトローチ剤からなる群から選択される、請求項４〜１２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項14】

前記組成物が、動物用食品及び／または飲料構成成分を含む、請求項４〜１３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項15】

医薬として使用するための、請求項１〜３のいずれか一項に記載の微生物または請求項４〜１４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項16】

前記使用が炎症の治療及び／または予防におけるものである、請求項１５に記載の使用のための微生物または組成物。

【請求項17】

前記使用が、インターロイキン１（ＩＬ−１）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン８（ＩＬ−８）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）、イソプロスタン、及びマトリックスメタロペプチダーゼ９（ＭＭＰ９）からなる群から選択される１つ以上の炎症因子の放出を低減及び／または阻害するためのものである、請求項１６に記載の使用のための微生物または組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、新規細菌株Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ Ｇｏｓ ４２（ＤＳＭ ３２１３１）、及びプロバイオティクスとしての使用のためのそれらの組成物に関する。新規株は、医薬、特に炎症の治療及び／または予防における特定の使用を有する。それらの新規株及び組成物は、口腔内の炎症の治療及び／または予防において、好ましくは歯齦炎及び／または歯周炎の治療及び／または予防のための、特定の実用性を見出す。

【発明の概要】

【0002】

特に、それらの新規株及び組成物は、インターロイキン１（ＩＬ−１）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン８（ＩＬ−８）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）、イソプロスタン、マトリックスメタロペプチダーゼ９（ＭＭＰ９）、及びＮＦ−κＢからなる群から選択される１つ以上の炎症因子の放出を低減または阻害するため、抗炎症剤として使用され得る。

【0003】

好ましくは、本発明の新規株はプロバイオティクスであり、これは、特定の微環境で増殖した場合、例えば、同じ微環境内での他の有機体の増殖を阻害または防止することによって利益をもたらす微生物である。プロバイオティクス微生物の例としては、少なくとも一時的に胃腸管に定着し得て、病原菌を置き換えまたは破壊し、宿主に他の利益も提供する乳酸菌が挙げられる。

【0004】

本明細書で使用される場合、「プロバイオティクス」は、一過性または内生の微生物叢の少なくとも一部を形成し、それにより宿主生物に有利な予防的及び／または治療的効果を呈する微生物を指す。プロバイオティクスは、臨床的に安全（すなわち、非病原性）であると、当業者に一般的に知られている。一例として、しかしいずれの特定のメカニズムにも限定するものではないが、本発明の酸産生細菌の予防的及び／または治療的効果は、（ｉ）それらの優れた定着能力、（ｉｉ）望ましくない微生物の寄生、（ｉｉｉ）抗菌活性を有する酸（例えば、乳酸、酢酸、及び他の酸性化合物）及び／または他の細胞外産物の産生、ならびに（ｉｖ）それらの様々な組み合わせによる、病原菌の増殖の優位性のある阻害から、ある程度は、生じる。本発明の酸産生細菌の前述の産物及び活性は、相乗的に作用して、本明細書に開示される有利なプロバイオティクス効果を生成することに留意されたい。

【0005】

細菌株の精製または単離された調製物とは、調製物が、特定の温度での調製物の複製に影響するのに十分な量の別の細菌種または株を含有しないことを意味する。細菌株の精製または単離された調製物は、例えば、限界希釈でのプレーティング及び温度選択のような標準的な方法を使用して作製される。

【0006】

歯肉の炎症状態は、主に歯垢の形成によって引き起こされる。定着している細菌は、唾液の構成成分と食品の残渣の存在に助けられて、歯の表面上に生物膜を形成する。初期の段階で十分に除去されない場合、歯の表面上の歯垢の膜は、取り除くことが非常に困難な歯石の堆積をもたらす。歯肉の隙間の増大した数の細菌の存在は、歯肉炎として知られる歯肉の炎症につながる。感染しやすい個体において、歯肉炎は、歯の損失につながる場合がある歯周炎に進行することがある。特に、グラム陰性菌中に存在するリポ多糖（ＬＰＳ）は、患部組織中にプロスタグランジンＥ２（ＰＥＧ２）ならびにインターロイキン及びＴＮＦ−αのような炎症性メディエーターを放出するＬＰＳ刺激マクロファージによる非特異的免疫反応の原因となり得る。炎症性メディエーターは、存在する線維芽細胞から、さらなるＰＧＥ２及びマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）の放出を引き起こし、周囲の組織の細胞外マトリックスを破壊する。これは、細菌が、組織をより深く貫通し、上皮の外層及び歯根の独立した炎症プロセスを促進することを可能にし、歯周ポケット形成の原因となる。歯を支えている歯槽骨は、前進する細菌より先に再吸収を行い、歯を不安定にさせ、未治療で放置された場合は、歯を失う原因となる。

【0007】

歯肉の進行する破壊を避けるために、口腔内の炎症反応は、早期段階で抑えられるか、または理想的には予防される必要がある。

【0008】

歯垢の機械的除去の改善された方法から、強力な抗菌特性を有する口ケア製品の使用までにわたる、多数の異なるアプローチがこの問題に対処してきた。

【0009】

しかしながら、口腔内に存在する全ての細菌が病気に関連するわけではなく、多くは口の健康を促進さえする。それゆえ、常在細菌を一律に根絶する代わりに、口の微生物叢の健康的な配合に向けたバランスを確立することが望ましい。

【0010】

通常の口の微生物叢は、非常に複雑であり、古細菌、菌類、原生動物、及びウイルスと並んで、７００を超える細菌種を含む。乳酸菌及びビフィズス菌のような下側歯肉片利共生生物は、プロバイオティクスとして投与された場合、いくつかの抗炎症特性を含む胃腸の健康に有利な効果を有することが示されてきた。

【0011】

口腔内の細菌のプロバイオティクス作用は、いくつかの研究の対象となってきたが、結果は使用された種によって大きく異なり、作用が無関係の効果に大きく依存し得るため、効率的な適用の好適な指標は、確立が困難である。

【0012】

プロバイオティクス作用の中でも、抗炎症効果と並んで、病気に関連する種に対する一般的な抗菌効果、歯の表面への細菌の付着の低減または予防は、文献で論じられてきた。

【0013】

しかしながら、特に異なる炎症性メディエーターの抑制に関して、炎症メカニズムに対する具体的なプロバイオティクス株の影響は、ほとんど知られていない。注目すべきことには、本発明に先立つ広範な研究において、一般的に認知されているプロバイオティクス細菌のいくつかの株は、ある投与量で炎症性因子の放出を高め得ることも見出されている。したがって、炎症の炎症性及び抗炎症性メディエーターに対して望ましい効果を呈する新規株の満たされていない必要が残っている。

【0014】

本発明の目的は、医薬において、特に口腔内における炎症の治療及び／または予防において、特に歯齦炎及び／または歯周炎の治療及び／または予防において使用され得るそれらの新規株及び組成物を提供することである。

【0015】

本発明のさらなる目的は、インターロイキン１（ＩＬ−１）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン８（ＩＬ−８）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）、イソプロスタン、マトリックスメタロペプチダーゼ９（ＭＭＰ９）、及びＮＦ−κＢのような１つ以上の炎症因子の放出を低減または阻害することができる、それらの新規細菌株及び組成物を提供することである。

【0016】

本発明の目的は、２０１５年９月２日にＢｕｄａｐｅｓｔ Ｔｒｅａｔｙの要件に従ってＬｅｉｂｎｉｚ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ＤＳＭＺ−Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ、Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒ．７ Ｂ、Ｄ−３８１２４ ＢｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇでＳｏｌｖｅｇａｔａｎ ４１、２２３７０ Ｌｕｎｄ、ＳｗｅｄｅｎのＰｒｏｂｉ ＡＢによって寄託され、寄託受付番号ＤＳＭ ３２１３１を受けたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ株 ＧＯＳ ４２及びそれらの組成物を提供することによって達成される。

【0017】

本発明の株は、健康なヒトボランティアの唾液から単離され、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ、Ｂｉｆｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ＬＡＦＴＩ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｌｌｏｂｉｏｓｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、及びＬａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓの株を含む５０を超える候補プロバイオティクス株の中から選択された。

【0018】

広範なスクリーニングによって、本発明による細菌株は、同時に、他の炎症性因子の放出を高めないか、または無視できるほどのみ高める一方で、主に、特定の炎症性因子の放出に対する阻害方法において明らかな調節活性を呈することが確認された。本発明は、今回、炎症状態、特に、口腔内で発生するものの予防及び／または治療のためのプロバイオティクス細菌株の最適化された使用を可能にし、これは、以前は不可能であった。

【0019】

上で説明されたように、病気に関連する細菌による口粘膜の定着及び歯垢の形成は、口腔内の微生物バランスを、有害微生物の蓄積に傾け得て、これは腸内毒素症としても呼ばれる。それゆえ、本発明による口腔内の炎症の予防及び／または治療において使用する微生物は、歯垢及び歯垢に関連する病気の予防及び／または治療における使用を含み、口の微生物叢を健康な状態に整えることによって口の腸内毒素症を避けることを有利に助ける。

【0020】

本発明の好ましい実施形態において、上述された微生物は、理想的には７０〜１００℃の温度での２〜８分間の培養によって弱毒化されているか、または死滅していて、好ましくは熱失活されている。

【0021】

下に記述される研究において、本発明による微生物が、不活性状態においてさえ、炎症性因子の放出の阻害効果を提供し得ることが例証されてきた。それゆえ、死滅または熱失活されている場合に新規株を使用することも可能である。注目すべきことには、熱失活株は、特定の因子に対して同じまたは少し高められてさえいる抗炎症活性を示すことがある。

【0022】

一態様において、本発明は、抗炎症剤として使用されるための、特に、インターロイキン１（ＩＬ−１）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン８（ＩＬ−８）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）、イソプロスタン、マトリックスメタロペプチダーゼ９（ＭＭＰ９）、及びＮＦ−κＢからなる群から選択される１つ以上の炎症因子の放出を低減または阻害するための、上に引用された微生物に関する。

【0023】

本発明の別の態様に従って、上述された態様のいずれかにおいて定義されたような微生物の新規株の断片は、特に口腔内における炎症の治療及び／または予防において、好ましくは歯齦炎及び／または歯周炎の治療及び／または予防において使用され得る。

【0024】

微生物の断片のみ（例えば、分解された細胞の破片）を含む混合物が発明に関する効果を提供するのに十分であるため、本発明の新規株の全細胞を使用することが、不必要であり得る。

【0025】

さらなる態様において、本発明は、また、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＧＯＳ ４２またはそれらの断片ならびに薬学的に許容可能な担体、賦形剤、及び／または希釈剤を含む薬学的組成物に関する。微生物またはそれらの断片の総量は、好ましくは特に口腔内の炎症の治療及び／または予防のため、好ましくは歯齦炎及び／または歯周炎の治療及び／または予防のために十分である。好ましくは、微生物またはそれらの断片の総量が、各々の場合において組成物の総量に対して、０．０１〜１００％の範囲内にあり、より好ましくは、０．１〜５０％の範囲内にあり、最も好ましくは、１〜１０％の範囲内にあり、かつ／または微生物（複数可）またはそれらの断片の総量が、１×１０^３〜１×１０^１１コロニー形成単位（ＣＦＵ）の範囲内にあり、より好ましくは、１×１０^５〜１×１０^１０ＣＦＵ、理想的には、１×１０^８〜１×１０^９ＣＦＵの範囲内にある。

【0026】

好ましい実施形態において、本発明の微生物（細菌）は、組成物中に、グラム当たり約１×１０^３〜１×１０^１４コロニー形成単位（ＣＦＵ）、好ましくは、約１×１０^５〜１×１０^１２ＣＦＵ／グラムの濃度で存在し、一方で他の実施形態において、濃度は約１×１０^９〜１×１０^１３ＣＦＵ／グラム、約１×１０^５〜１×１０^７ＣＦＵ／グラム、または約１×１０^８〜１×１０^９ＣＦＵ／グラムである。しかしながら、濃度よりも全体的なＣＦＵが最も重要であることが理解されるだろう。

【0027】

一実施形態において、本発明の細菌は、薬学的に許容可能な担体内または好ましくは粉末補助食品、ペレット化された製剤、または液体製剤のような哺乳動物への経口投与に好適な食料製品内にある。哺乳動物は、好ましくはヒトである。

【0028】

当業者は、本発明による組成物または製品に使用されるプロバイオティクス有機体が、その活性がバッチによって異なり得て、製品または加工方法にも依存する生物由来物質の典型であることを理解している。それゆえ、好適な量は、所与の範囲内でそれに従って調整され得る。

【0029】

さらに、本発明は、医薬、好ましくは特に口腔内における炎症の治療及び／または予防における、最も好ましくは歯齦炎及び／または歯周炎の治療及び／または予防において使用するための、上述された組成物または製品に関する。

【0030】

本発明による組成物は、担体、賦形剤、もしくは、例えば、非ステロイド性消炎剤、抗生剤、ステロイド、抗ＴＮＦ−アルファ抗体、または他のバイオテクノロジーによって製造された活性剤の群からの活性剤のようなさらなる活性成分、及び／もしくは、鎮痛剤、デクスパンテノール、プレドニゾロン、ポリビドンヨージド、クロルヘキシジン−ビス−Ｄ−グルコネート、ヘキセチジン、ベンジダミンＨＣｌ、リドカイン、ベンゾカイン、マクロゴールラウリルエーテル、セチジルピリジニウムクロライドと組み合わせたベンゾカイン、または子牛の血からのたんぱく質フリー血液透析と組み合わせたマクロゴールラウリルエーテルと並ぶ薬物、ならびに、例えば、充填剤（例えば、セルロース、炭酸カルシウム）、可塑剤または流れ向上剤（例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム）、コーティング剤（例えば、ポリビニルアセテートフタレート、ヒドロキシルプロピルメチルセルロースフタレート）、崩壊剤（例えば、デンプン、架橋ポリビニルピロリドン）、柔軟剤（例えば、トリエチルシトレート、ジブチルフタレート）、顆粒形成用物質（ラクトース、ゼラチン）、遅延剤（例えば、分散状態のポリ（メタ）アクリル酸メチル／エチル／２−トリメチルアミノメチルエステル共重合、ビニルアセテート／クロトン酸共重合）、圧縮剤（例えば、マイクロクリスタリンセルロース、ラクトース）、溶媒、懸濁化または分散剤（例えば、水、エタノール）、乳化剤（例えば、セチルアルコール、レクチン）、流動学的特性調整物質（シリカ、アルギン酸ナトリウム）、微生物安定化物質（例えば、ベンザルコニウムクロリド、ソルビン酸カリウム）、保存料及び抗酸化剤（例えば、ＤＬ−アルファ−トコフェノール、アスコルビン酸）、ｐＨ調整物質（乳酸、クエン酸）、発泡剤または不活性ガス（例えば、フッ素化塩素化炭化水素、二酸化炭素）、染料（酸化鉄、酸化チタン）、軟膏の基本成分（例えば、パラフィン、ビーズワックス）、及び文献で（例えば、Ｓｃｈｍｉｄｔ、Ｃｈｒｉｓｔｉｎ．Ｗｉｒｋ− ｕｎｄ Ｈｉｌｆｓｓｔｏｆｆｅ ｆｕｒ Ｒｅｚｅｐｔｕｒ、Ｄｅｆｅｋｔｕｒ ｕｎｄ Ｇｒｏβｈｅｒｓｔｅｌｌｕｎｇ．１９９９、Ｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｌｉｃｈｅ Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｍｂＨ Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ ｏｄｅｒ Ｂａｕｅｒ、Ｆｒｏｍｍｉｎｇ Ｆｕｈｒｅｒ．Ｌｅｈｒｂｕｃｈ ｄｅｒ Ｐｈａｒｍａｚｅｕｔｉｓｃｈｅｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ．８．Ａｕｆｌａｇｅ、２００６、Ｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｌｉｃｈｅ Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｍｂＨ Ｓｔｕｔｔｇａｒｔにおいて）記述されたような他のものからなる郡から選択された１つ以上の組成物をさらに含み得る。

【0031】

本発明による組成物または製品は、また、コーティングされるか、カプセル化され得る。

【0032】

本発明による組成物のカプセル化は、例えば、水に触れた途端の制御された放出または延長された時間にかけての継続的な放出を可能にするという有利性を有し得る。さらに、組成物は分解から保護され得て、製品の保存可能期間を向上する。活性成分のカプセル化のための方法は、当業界においてよく知られており、具体的な要件に従ってそれらを組成物に適用する方法と並んで多くのカプセル化材料が利用可能である。

【0033】

さらに、本発明による組成物または製品は、溶液、懸濁液、乳剤、錠剤、顆粒、粉末、またはカプセルの形態であり得る。

【0034】

本発明による組成物または製品は、練り歯磨き粉、歯磨きジェル、歯磨き粉、歯洗浄液、歯洗浄フォーム、口内洗浄液、口内スプレー、糸ようじ、チューインガム、及びトローチ剤からなる群から選択され得る。

【0035】

そのような組成物または製品は、シリケート、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、酸化アルミニウム、及び／またはヒドロキシルアパタイトのような研磨装置（研磨及び／または艶出し構成成分）、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルサルコシンナトリウム、及び／またはコカミドプロピルベタインのような界面活性剤、グリセロール及び／またはソルビトールのような保湿剤、増粘剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、カラギーナン、及び／またはＬａｐｏｎｉｔｅ（登録商標）、不快な味の印象のための芳香及び味修正剤、味調整物質（例えば、イノシトールホスフェート、ヌクレオチド、例えば、グアノシンモノホスフェイト、アデノシンモノホスフェイト、または他の物質、例えば、グルタミン酸ナトリウム、または２−フェノキシプロピオン酸）、メントール誘導体（例えば、Ｌ−メンチルラクテート、Ｌ−メンチルアルキルカーボネート、メントンケタール）、イシリン、及びイシリン誘導体のような着色剤、フッ化ナトリウム、モノフルオロリン酸ナトリウム、二フッ化スズ、第四級フッ化アンモニウム、クエン酸亜鉛、硫酸亜鉛、ピロリン酸スズ、二塩化スズ、異なるピロリン酸の混合物、トリクロサン、セチルピリジニウムクロリド、乳酸アルミニウム、クエン酸カリウム、硝酸カリウム、塩化カリウム、塩化ストロンチウム、過酸化水素のような安定剤及び活性剤、芳香物質、重曹、及び／または匂い修正剤を含有し得る。

【0036】

チューインガムまたは歯科ケアチューインガムは、エラストマー、例えばポリビニルアセテート（ＰＶＡ）、ポリエチレン、（低または中分子）ポリイソブタン（ＰＩＢ）、ポリブタジエン、イソブテン／イソプレンコポリマー、ポリビニルエチルエーテル（ＰＶＥ）、ポリビニルブチルエーテル、ビニルエステル及びビニルエーテルのコポリマー、スチレン／ブタジエンコポリマー（ＳＢＲ）、またはビニルエラストマー、例えば、ビニルアセテート／ビニルラウラート、ビニルアセテート／ビニルステアレート、またはエチレン／ビニルアセテートに基づいたもの、ならびに、例えば、ＥＰ０２４２３２５、ＵＳ４，５１８，６１５、ＵＳ５，０９３，１３６、ＵＳ５，２６６，３３６、ＵＳ５，６０１，８５８、またはＵＳ６，９８６，７０９に記述された例のように言及されたエラストマーの混合物を含むチューインガムベースを含み得る。加えて、チューインガムベースは、さらなる成分、例えば、（無機）充填剤、例えば、炭酸カルシウム、二酸化チタン、二酸化シリコン、タルク、酸化アルミニウム、リン酸二カルシウム、リン酸三カルシウム、水酸化マグネシウム、及びそれらの混合物、可塑剤（例えば、ラノリン、ステアリン酸、ステアリン酸ナトリウム、エチルアセテート、ジアセチン（グリセロールジアセテート）、トリアセチン（グリセロールトリアセテート）、及びトリエチルシトレート）、乳化剤（例えば、レクチンのようなホスファチド、ならびに脂肪酸のモノ及びジグリセリド、例えば、グリセロールモノステアレート）、酸化防止剤、ワックス（例えば、パラフィンワックス、カンデリラワックス、カルナバワックス、マイクロクリスタリンワックス、及びポリエチレンワックス）、脂肪または脂肪油（例えば、硬化された（水素添加された）植物または動物脂肪）、ならびにモノ、ジ、またはトリグリセリドを含有し得る。

【図面の簡単な説明】

【0037】

【図1】ヒト初代単球におけるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＧＯＳ ４２（ＤＳＭ ３２１３１）の、インターロイキン１ベータ（Ａ）、インターロイキン６（Ｂ）、インターロイキン８（Ｃ）、プロスタグランジンＥ２（Ｄ）、腫瘍壊死因子アルファ（Ｅ）、及びイソプロスタン（Ｆ）に対する抗炎症効果を示す。左の柱は未処理の細胞を指し、右の柱は弱毒化された細胞を指す。

【図2】弱毒化形態におけるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＧＯＳ ４２（ＤＳＭ ３２１３１）の、ヒト歯肉線維芽細胞内のインターロイキンに対する抗炎症効果を示す。左の柱はインターロイキン６を指し、右の柱はインターロイキン８を指す。

【0038】

以下の実施例は、その範囲を限定する意図はなく、本発明を例証するために加えられる。

【0039】

実施例１：プロバイオティクス株の培養及び取り扱いを確立
本発明の株は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ、Ｂｉｆｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ＬＡＦＴＩ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｌｌｏｂｉｏｓｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、及びＬａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓの株を含む５０を超える候補プロバイオティクス株の中から選択された。

【0040】

最適な増殖条件及び集菌の時点を特定し、スクリーニングされるプロバイオティクス細菌のコロニー形成単位（ＣＦＵ）を判定するために、まず、対数期と増殖期の終わりとを判定した。

【0041】

細菌増殖
凍結した（−８０℃）プロバイオティクス株を一晩かけて４℃で解凍し、翌朝、６ｍｌの無菌９％ＮａＣｌ溶液を１．２ｍｌの細菌に添加した。試料を遠心分離（５分、５０００ｒｐｍ）し、上澄みを捨て、ペレットを８ｍｌの９％ＮａＣｌで洗浄し、再び５分間、５０００ｒｐｍで遠心分離した。その後、ペレットを１．２ｍｌの９％ＮａＣｌ中に再懸濁し、１ｍｌの試料を５０ｍｌの３７℃の温かい培地（ＭＲＳブイヨン、Ｃａｒｌ Ｒｏｔｈ ＫＧ、Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ）に添加し、３７℃でインキュベートした。５０ｍｌの無菌ポリプロピレン管（Ｇｒｅｉｎｅｒ）内でインキュベーションを実施し、増殖曲線を評価するために異なる時点で探針を取り入れた。

【0042】

ＯＤ判定
ＯＤの判定のために、５００μｌの細菌懸濁液を除去し、１．５ｍｌ−ＰＳ−キュベット（Ｂｒａｎｄ）内で１ｍｌのＭＲＳブイヨンで希釈した。６００ｎｍ（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｈｅｌｉｏｓ Ｅｐｓｉｌｏｎ）でＯＤ判定を実施した。１．５ｍｌのＭＲＳブイヨンをブランクとして使用した。

【0043】

ＣＦＵ判定
ＣＦＵの判定のために、細菌を希釈し（１：１０．０００．０００、１：５０．０００．０００、及び１：１００．０００．０００）、ＭＲＳ寒天プレート（ＭＲＳ寒天、Ｘ９２４、Ｃａｒｌ Ｒｏｔｈ）上に蒔き、２日間３７℃でインキュベートした。その後、増殖したコロニーを数え、ＣＦＵを計算した。

【0044】

開始直後から細菌は対数期に接近し、７〜８時間後に分裂停止期に到達し始めた。播種されるバクテリアの量は曲線の形を変化させない。５時間を対数期における細菌を集菌する最も急な増殖段階の時点として、７時間を対数期の終わりでそれらを集菌する時点として選択した。

【0045】

実施例２：プロバイオティクスによるヒト単球の刺激を確立
新規プロバイオティクス株による単球細胞培養物の刺激を、粉末として得られた株を使用することによって確立した。まず、増殖した細菌（対数期から採取）、増殖した細菌培養物の上澄み、溶解した粉末の直接適用、及び粉末の上澄みを使用するようないくつかの適用形態を試験した。結果に従って、対数期の終わりの細菌で、２バッチの凍結された株を用いてこれを試験した。上澄みを使用する代わりに、それら２つの株の熱失活を確立し、不活性化された細菌を活性化された細菌と比較した。

【0046】

サイトカインの測定、初代ヒト単球内のＭＭＰ−９及びＰＧＥ２
ヒト初代単球を、健康なヒト血液提供者の軟膜から単離した。細胞をＥＬＩＳＡ実験用の２４ウェルプレートに播種した。細胞をＬＰＳと共に２４時間インキュベートした。ＬＰＳ処理の３０分前にプロバイオティクス（５投与量）を添加した。２４時間後、上澄みを取り出し、遠心分離し、製造者のプロトコルを使用してＥＩＡ（ＰＧＥ２、ＡｓｓａｙＤｅｓｉｇｎから、イソプロスタン、Ｃａｙｍａｎから）またはＥＬＩＳＡ（全サイトカイン、Ｉｍｍｕｎｏｔｏｏｌｓ、ＭＭＰ−９、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）中のＩＬ−１ベータ、ＴＮＦアルファ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＭＭＰ−９、イソプロスタン−８、及びＰＧＥ_２濃度を調査した。各投与量を、２人の異なる提供者からの２つの軟膜内で２〜３度調査した。

【0047】

まず、ヒト単球刺激用プロバイオティクス凍結乾燥粉末調整物の異なる型が試験された。

【0048】

プロバイオティクスを集菌し、その後、遠心分離した。細胞を未使用の培地の中で溶解し、ヒト単球に適用した。

【0049】

その後、単球をプロバイオティクスと共に３０分間インキュベートし、その後、ＬＰＳを添加し、２４時間後に上澄みを取り出し、炎症指標の判定に使用した。

【0050】

実施例３：熱失活株の試験
熱失活の確立
熱失活は２バッチで確立された。細菌の増殖対数期の終わりで、細菌懸濁液のアリコートを取り出し、未使用の５０ｍｌ管に添加し、水浴中にて８０℃で５分間インキュベートした。８０℃での５分間が、細菌を不活性化し、このように細菌の増殖を止めた。

【0051】

熱失活した株のバッチを試験し、ＩＬ−１及びＴＮＦに対する効果を高めることは、熱処理によって影響されないことを見出した。さらに、加熱活性化は、両方の株によるＰＧＥ２阻害に影響しなかったか、またはわずかにのみ影響した。

【0052】

実施例４：ヒト単球に関するプロバイオティクスのスクリーニング及びＮＦ−ｋａｐｐａＢ活性化に対する効果
様々なプロバイオティクス株を、それらの活性化されたもの及び不活性化されたもの（熱失活形態）において、ＬＰＳ誘発ヒト初代単球に関してスクリーニングした（ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦアルファ、ＰＧＥ２、８−イソプロスタン、及びＭＭＰ−９を判定する）。

【0053】

実施例１〜４による新規株の典型的な抗炎症パターンを図１に示す。

【0054】

ＴＮＦｉｎ ＮＩＨ−３Ｔ３線維芽細胞によって引き起こされたＮＦ−ｋａｐｐａＢ活性化に対する効果を試験する実験を、ＮＦ−ｋａｐｐａＢ依存性プロモーターによって安定的にトランスフェクトされたルシフェラーゼ遺伝子ドライブを含有した線維芽細胞株内で行った。細胞を、プロバイオティクスの存在または不在においてＴＮＦで刺激した。６時間の刺激後、細胞を溶解し、ルシフェラーゼ活性をルミノメーター内で測定した。

【0055】

実施例５：ヒト歯肉線維芽細胞に関する選択されたプロバイオティクスのスクリーニング
本発明の選択された株を、ヒト歯肉線維芽細胞に適用した。製造者のプロトコルに説明されるように、線維芽細胞培養物を維持した。刺激の前に、ＥＬＩＳＡ実験用の２４ウェルプレートに細胞を播種する。細胞をＩＬ−１ベータ無し（非刺激対照群）で、またはそれと共に２４時間インキュベートした。ＩＬ−１処理の３０分前にプロバイオティクス（５投与量、スクリーニング分析の結果による）を添加する。２４時間後、上澄みを取り出し、遠心分離し、製造者のプロトコルを使用してＥＩＡ（ＰＧＥ２、ＡｓｓａｙＤｅｓｉｇｎから、Ｃａｙｍａｎからのイソプロスタン）またはＥＬＩＳＡ（ＩＬ−６、ＩＬ−８、Ｉｍｍｕｎｏｔｏｏｌｓ）中のＩＬ−６、ＩＬ−８、イソプロスタン、及びＰＧＥ２濃度を調査した。各投与量を少なくとも２〜３度調査した。株は、いくつかのＩＬ−６阻害効果を示した。

【0056】

実施例５による株の抗炎症パターンを図２に示す。

【0057】

実施例６：プロバイオティクストローチ剤または錠剤

【0058】

【表1】

【0059】

製造方法：
●構成成分１及び６を真空コンパートメント乾燥機中で５０℃及び最大１０ｍｂａｒの圧力で１６時間乾燥する。
●全ての構成成分を正確に測る。
構成成分１、２、３、４、及び５を組み合わせて、完全に混合する（ブロックＡ）。グラム当たり約１０^５〜１０^１２コロニー形成単位（ＣＦＵ）の活性を有する凍結乾燥形態でプロバイオティクス物質を適用する。
●続いて、ブロックＡを構成成分６に添加し、５分間完全に混合する。
●粉末混合物を、錠剤プレスＥＫ０（Ｋｏｒｓｃｈ ＡＧ、Ｂｅｒｌｉｎ）中で１５〜２０ｋＮの調整圧力で錠剤にプレス加工する。
目標指標：
○錠剤直径：２０ｍｍ
○錠剤重量：２．０ｇ
●密封されたアルミニウム小袋内で室温にて保管する。５トローチ剤当たり１ｇの乾燥剤を除湿に使用する（真空コンパートメント乾燥機内で、１０５℃で３時間保管することによって活性化される）。

【0060】

実施例７：粉末歯磨き剤

【0061】

【表2】

【0062】

製造方法：
●構成成分７を真空コンパートメント乾燥機中で５０℃及び最大１０ｍｂａｒの圧力で１６時間乾燥する。
●全ての構成成分を正確に測る。
●構成成分１、２、３、及び４を組み合わせて、共に完全に混合する（ブロックＡ）。
●構成成分５及び６を、必要な場合は、組み合わせて、完全に混合する（ブロックＢ）。グラム当たり約１０^５〜１０^１２コロニー形成単位（ＣＦＵ）の活性を有する凍結乾燥形態でプロバイオティクス物質を適用する。
●続いて、ブロックＡ及びＢを組み合わせて、共に完全に混合する
●混合物を構成成分７に添加し、５分間完全に混合する。
●密封されたアルミニウム小袋内で、粉末混合物は、分量当たり１ｇの乾燥剤（真空コンパートメント乾燥機内で、１０５℃で３時間保管することによって活性化される）と共に室温での保管量当たり０．５ｇの分量に作り上げられる。

【0063】

実施例８：粉末歯磨き剤

【0064】

【表3】

【0065】

製造方法：
●構成成分６、９及び１０を真空コンパートメント乾燥機中で５０℃及び最大１０ｍｂａｒの圧力で１６時間乾燥する。
●全ての構成成分を正確に測る。
●構成成分１、２、３、４、５、及び６を組み合わせて、共に完全に混合する（ブロックＡ）。
●構成成分７及び８を組み合わせて、共に完全に混合する（ブロックＢ）。グラム当たり約１０^５〜１０^１２コロニー形成単位（ＣＦＵ）の活性を有する凍結乾燥形態でプロバイオティクス物質を適用する。
●続いて、ブロックＡ及びＢを組み合わせて、共に完全に混合する
●構成成分９及び１０を組み合わせて、共に完全に混合する（ブロックＣ）。
●２つの混合物（ブロックＡ／Ｂ及びブロックＣ）を組み合わせ、５分間完全に混合する。
●粉末混合物を、錠剤プレスＥＫ０（Ｋｏｒｓｃｈ ＡＧ、Ｂｅｒｌｉｎ）中で１５〜２０ｋＮの調整圧力で錠剤にプレス加工する。
目標指標
○錠剤直径：９ｍｍ
○錠剤重量：０．３ｇ
●密封されたアルミニウム小袋内で室温にて保管する。３錠剤当たり１ｇの乾燥剤を除湿に使用する（真空コンパートメント乾燥機内で、１０５℃で３時間保管することによって活性化される）。

【0066】

実施例９：チューインガム

【0067】

【表4】

【0068】

製造方法：
●構成成分２を真空コンパートメント乾燥機中で５０℃及び最大１０ｍｂａｒの圧力で１６時間乾燥する。
●全ての構成成分を正確に測る。
●構成成分１を、チューインガムラボ混練機内で４５〜５９℃に調節し、均質の塊が得られるまで加熱と共に混練する。加熱は、全混合プロセスの間で行われる。
●続いて、構成成分２、３、及び４を添加し、混合物が均質で、粉末がもう見えなくなるまで混練する。
●処方により、構成成分６を、構成成分５（ブロックＣ）または構成成分７（ブロックＤ）のいずれかに組み入れる。グラム当たり約１０^５〜１０^１２コロニー形成単位（ＣＦＵ）の活性を有する凍結乾燥形態でプロバイオティクス物質を適用する。構成成分を、均一な懸濁液が得られるまで混合する。
●まず、ブロックＣをチューインガムの塊に添加し、均質の塊が得られるまで再び混練する。
●最後に、ブロックＤをそれに従って処理する。添加の後、均一なチューインガムの塊が得られるまで、構成成分を混練しなければならない。
●ミキサーから塊を取り出し、エンボスセット「ｓｌａｂｓ」を使用し、エンボスローラにより小さな棒に形成する。
●密封されたアルミニウム小袋内で室温にて保管する。７つのチューインガム当たり１ｇの乾燥剤を除湿に使用する（真空コンパートメント乾燥機内で、１０５℃で３時間保管することによって活性化される）。

【0069】

実施例１０：プロバイオティクスビードレット

【0070】

【表5】

【0071】

製造方法：
アルジネートビードレットの沈殿物のための塩化カルシウム浴の製造：
●２％の塩化カルシウム溶液を蒸留水及び塩化カルシウムから製造する。ＣａＣｌ_２を完全に溶解するように注意を払わなければならない。
アルジネート溶液の製造（アルジネートの代わりに、また、ペクチンまたはゲランガムを使用し得る）：
●反応槽内で、攪拌機を用いて、バッチサイズに好適である水を提供する。
●攪拌機を作動し、高レベルでの攪拌の間、任意に必要なゲランガムと並んで、アルジネート、アラビアガム、小麦繊維、及びプロバイオティクスのそれぞれの量を、添加する。
●攪拌しながら混合物を８０℃に加熱し、この温度で５分間保持し、この手順の間、構成成分を形成しているジェルを溶解する。
●その後、加熱を止め、ダマがなくなるまで少なくとも３０分間熱いジェル溶液をさらに攪拌する。
●続いて、溶液を攪拌しながら冷蔵によって３９〜４３℃に冷却する。
●さらなる槽内で、必要な場合、芳香及び染料を提供し、完全に混合する。芳香が使用されない場合、染料はグリセロールと混合する。
●染料分散液を均質に混合した場合、バッチ槽にアルジネート溶液と添加する。混合槽を水を使用し分散液に添加される約１０％の量のアルジネート溶液で何度か洗浄する。
●アルジネート分散液を、少なくとも５分間さらに攪拌する。
●続いて、低速でさらに少なくとも１５分間バッチを攪拌し、存在する可能性のある空気を除去する。

【0072】

ビードレットの沈殿物のための塩化カルシウム溶液中にアルジネート溶液を滴下：
●アルジネート分散液を、２つの排水口を有する厳封可能圧力安定反応槽に移動する。１つの排水口で、加圧空気を適用する。第２の排水口は、管を介して滴下ユニットのノズルにつながる。
●アルジネート溶液が約４５℃に到達するように、反応槽を加熱プレート上で調節する。溶液を磁力攪拌機で少し攪拌する。
●反応槽への圧力の適用後、アルジネート溶液をノズルに押し込み、発振器によって発振を始める。圧力の適応及び発振器の振動数によって、ノズルの先端で結果として得られる滴のサイズを調整することができる。
●ノズルの先端で形成するアルジネート溶液の滴は、最初に調製された塩化カルシウム溶液が流れる漏斗の形態で収集槽内に落ちる。
●硬化されたアルジネートビードレットを、塩化カルシウム溶液と漏斗を通過し、篩で収集溶液され、収集された塩化カルシウムを滴下ユニットの下で漏斗内に送り戻し、このように再循環する。
４５℃の排気温度に到達するまで、８０℃の供給空気温度で、Ａｅｒｏｍａｔｉｃ流体ベッド乾燥機内でビードレットを乾燥する。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図1E】

【図1F】

【図2】