特許 6903559 血圧降下用組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6903559

(24)【登録日】2021年6月25日

(45)【発行日】2021年7月14日

(54)【発明の名称】血圧降下用組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/06 20060101AFI20210701BHJP

   A23L 33/18 20160101ALI20210701BHJP

   A61P 9/12 20060101ALI20210701BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20210701BHJP

   C07K 5/083 20060101ALN20210701BHJP

【ＦＩ】

   A61K38/06

   A23L33/18

   A61P9/12

   A61P43/00 111

   !C07K5/083

【請求項の数】5

【全頁数】10

(21)【出願番号】特願2017-234358(P2017-234358)

(22)【出願日】2017年12月6日

(65)【公開番号】特開2019-99526(P2019-99526A)

(43)【公開日】2019年6月24日

【審査請求日】2020年10月7日

(73)【特許権者】

【識別番号】000106324

【氏名又は名称】サンスター株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】110000796

【氏名又は名称】特許業務法人三枝国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】正箱 尚久

(72)【発明者】

【氏名】石角 篤

(72)【発明者】

【氏名】小川 雄太郎

【審査官】 菊池 美香

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２００６／１０８２１１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 The Journal of Neuroscience, 1991, Vol.11, No. 12, pp.3960-3971

【文献】 Vascular action of parathyroid hormone fragments and analogs, International Congress Series, 1981, pp. 293-297

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３８／０６

Ａ２３Ｌ ３３／１８

Ａ６１Ｐ ９／１２

Ａ６１Ｐ ４３／００

Ｃ０７Ｋ ５／０８３

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＡＣＥ阻害による血圧降下不奏功、又はＡＣＥ阻害禁忌の対象のための、
Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａからなるトリペプチドを含む、血圧降下用組成物。

【請求項2】

ＡＣＥ阻害による血圧降下不奏功、又はＡＣＥ阻害禁忌の対象のための、
Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａからなるトリペプチドを含む、血管における一酸化窒素産生促進用組成物。

【請求項3】

経口組成物である、請求項１又は２に記載の組成物。

【請求項4】

食品組成物又は医薬品組成物である、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。

【請求項5】

対象がヒトである、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、血圧降下用組成物等に関する。

【背景技術】

【0002】

アンジオテンシン変換酵素（Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ Ｉ−Ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅ；本明細書において「ＡＣＥ」と記載する場合がある。）は、アンジオテンシンＩをアンジオテンシンＩＩに変換する酵素である。アンジオテンシンＩＩは血管の収縮などにより血圧を上げる働きがある。ＡＣＥの働きを阻害すると、アンジオテンシンＩＩの生成が抑制され、降圧作用を示すことが知られている。このため、ＡＣＥ阻害物質は、例えば血圧降下剤の有効成分や、血圧が高めの方に適した食品の関与成分などとして用いられている。

【0003】

高血圧患者や血圧が高めのヒトが増加している昨今、安全で優れたＡＣＥ阻害を示す物質の需要はますます高まっており、研究開発も盛んに行われている。このような研究開発の一態様として、ＡＣＥ阻害作用を示すペプチドを探索することが行われている。例えば、ゴマのサーモリシン（サーモライシンとも呼ばれる）による分解物からＡＣＥ阻害により血圧降下作用を有する３種のトリペプチドが見出されたこと（特許文献１）、ブタ由来タンパク質のペプシンによる分解物からＡＣＥ阻害活性を有するペプチドが見出されたこと（特許文献２）、魚肉由来タンパク質の酵素分解物からＡＣＥ阻害活性を有するペプチドが見出されたこと（特許文献３）、アンジオテンシンＩＩの分解フラグメントの配列を有するペプチドがＡＣＥ阻害活性を有すること（特許文献４）、ＡＣＥ阻害活性を有するジペプチド（特許文献５）などが報告されている。

【0004】

上記の通り、高血圧患者や血圧が高めのヒトが増加している現状において、血圧降下効果を奏する手段への需要はますます高まっているが、ＡＣＥ阻害物質による血圧降下効果がほとんど得られない（ＡＣＥ阻害による血圧降下不奏功）場合や、あるいはＡＣＥ阻害が禁忌とされる場合もあり、このような場合にはＡＣＥ阻害以外の血圧降下手段が必要となる。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【特許文献1】特表２００６−５２０８０９号公報

【特許文献2】特開２００５−２２００９１号公報

【特許文献3】特開平６−１６６６９７号公報

【特許文献4】特開平７−２１５８８９号公報

【特許文献5】特開２００４−０９９５５２号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本発明は、血圧降下手段、特に、ＡＣＥ阻害による血圧降下不奏功又はＡＣＥ阻害禁忌の対象のための血圧降下手段を提供することを課題とする。

【課題を解決するための手段】

【0007】

血管内皮細胞により合成される一酸化窒素（ＮＯ）によっても、血圧降下効果が奏されることが知られている。より詳細には、血管内皮細胞において、一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）の１種である内皮型一酸化窒素合成酵素（ｅＮＯＳ）によりＮＯが合成され、当該ＮＯが血管平滑筋の酵素（グアニル酸シクラーゼ）を活性化することで血管が弛緩し、その結果血圧が低下する。

【0008】

本発明者らは、Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａからなるトリペプチドが、ＮＯＳでのＮＯ産生を介して血圧降下効果を奏することを見出し、さらに改良を重ねて本発明を完成させるに至った。

【0009】

本発明は例えば以下の項に記載の主題を包含する。
項０．
Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａからなるトリペプチドを含む、血圧降下用組成物。
項１．
ＡＣＥ阻害による血圧降下不奏功、又はＡＣＥ阻害禁忌の対象のための、
Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａからなるトリペプチドを含む、血圧降下用組成物。
項２．
ＡＣＥ阻害による血圧降下不奏功、又はＡＣＥ阻害禁忌の対象のための、
Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａからなるトリペプチドを含む、血管における一酸化窒素産生促進用組成物。
項３．
経口組成物である、項０、１又は２に記載の組成物。
項４．
食品組成物又は医薬品組成物である、項０及び１〜３のいずれかに記載の組成物。
項５．
対象がヒトである、項０及び１〜４のいずれかに記載の組成物。

【発明の効果】

【0010】

本発明により、血圧降下手段、特に、ＡＣＥ阻害による血圧降下不奏功又はＡＣＥ阻害禁忌の対象のための血圧降下手段が提供される。本発明に包含される血圧降下用組成物は、特に前記対象の血圧降下のために好ましく用いることができる。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1】実施例１で行った血圧降下作用の検討試験の結果を示すグラフである。図中、「Ｃｏｎｔｒｏｌ」は対照群の結果を示し、「ＬＲＡ ０．２５ｍｇ／ｋｇ」はＬＲＡペプチド投与群の結果を示し、「※」は対照群に対して有意差（ｐ＜０．０５）があったことを示す。また、ＳＢＰは収縮期血圧を示す。

【図2】収縮期血圧測定結果を、投与４時間後の収縮期血圧の変化量（投与０時間と比較）で示す。

【発明を実施するための形態】

【0012】

以下、本発明の各実施形態について、さらに詳細に説明する。

【0013】

本発明に包含される組成物は、Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａからなるトリペプチド（本明細書において「ＬＲＡペプチド」と記載する場合がある）を含む。なお、当該組成物を、「本発明の組成物」と記載する場合がある。

【0014】

ＬＲＡペプチドの製造方法は特に制限されず、例えば、公知のペプチド合成法を用いて化学合成により調製することができる。ペプチド合成法としては、例えば、アジド法、酸クロライド法、酸無水物法、混合酸無水物法、ＤＤＣ法、活性エステル法、カルボイミダゾール法、酸化還元法などのペプチド合成法を挙げることができる。これらのペプチド合成法は、固相合成法又は液相合成法のいずれによっても行うことができる。

【0015】

上記したペプチド合成法では、アミノ基、カルボキシ基、及び／又は側鎖官能基（例えば、アルギニン（Ａｒｇ）のグアニジノ基など）を保護基により保護しておくことが好ましい。保護基としては、特に限定されず公知の保護基を用いることができ、例えば、ベンジルオキシカルボニル基（Ｃｂｚ）、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）、フルオレニルメトキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ）、ベンジル基（Ｂｚ）、ｐ−トルエンスルホニル基（ｐ−Ｔｓ）などが挙げられる。

【0016】

また、上記したペプチド合成法によりＬＲＡペプチドを合成した後、必要に応じて、公知の方法により精製したものをＬＲＡペプチドとして用いることができる。

【0017】

ＬＲＡペプチドは、ＮＯＳでのＮＯ産生を介して血圧降下作用を有することから、本発明の組成物は、血圧降下用組成物、血管（特に血管内皮細胞）におけるＮＯ産生促進用組成物、血管（特に血管内皮細胞）におけるＮＯＳ（特にｅＮＯＳ）亢進用組成物などとして用いることができる。

【0018】

本発明の組成物は、ＡＣＥ阻害による血圧降下不奏功、又はＡＣＥ阻害禁忌の対象のために特に好ましく用いられる。

【0019】

ＡＣＥ阻害による血圧降下不奏功の対象としては、ＡＣＥ阻害剤の投与によっても血圧降下効果が得られない対象であれば、特に制限されず、例えばＡＣＥ阻害剤の長期投与等により効き目が弱まった対象や、その他、何らかの理由若しくは理由不明でＡＣＥ阻害剤投与によっても血圧降下効果が得られない対象等が例示される。

【0020】

また、ＡＣＥ阻害禁忌の対象としては、ＡＣＥ阻害剤の投与が制限される事情を有する対象であれば、特に制限されず、例えば、ＡＣＥ阻害剤投与により副作用が起こる可能性がある対象（例えば血管浮腫の既往歴を有する対象）や、ＡＣＥ阻害剤の作用により悪影響が考えられる薬剤を投与中の対象などが挙げられる。また、あるいは例えば妊婦若しくは妊娠の可能性のある対象が挙げられる。

【0021】

なお、本発明の組成物を用いる対象としては、例えば、ヒト、及びペット又は家畜などの非ヒト哺乳動物が挙げられ、特にヒトが好ましい。

【0022】

本発明の組成物の摂取量、摂取間隔などは特に限定的ではなく、適宜設定することができる。例えば、摂取量は、摂取対象の年齢、性別、体重、対象の健康状態、その他の条件（例えば種）に応じて適宜設定することができる。また、例えば、投与間隔については、１日１回又は複数回（好ましくは２〜３回）としてもよいし、数日〜数週間に１回又は複数回としてもよい。

【0023】

特に摂取対象がヒトである場合、ＬＲＡペプチド投与量は、例えば、成人一日あたり、１０〜３００μｇ程度が好ましく、１５〜２００μｇ程度がより好ましく、２０〜１００μｇ程度がさらに好ましく、３０〜８０μｇ程度がよりさらに好ましく、３５〜７０μｇ程度がなお好ましく、４０〜６０μｇ程度が特に好ましい。

【0024】

また、投与期間は、特に制限はされないが、３〜１２週間又はそれ以上（３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２週間又はこれら以上）であることが好ましく、９〜１２週又はそれ以上であることがより好ましい。

【0025】

投与対象が非ヒト哺乳動物の場合の投与形態、剤型、投与量、投与間隔などは、ヒトを投与対象とする場合を参考として適宜設定することができる。

【0026】

また、本発明の組成物の投与形態は本発明の効果が得られる限り特に制限されないが、経口組成物、又は経血管（経静脈又は経動脈）組成物が好ましく、経口組成物がより好ましい。

【0027】

本発明の組成物は、医薬組成物又は食品組成物などとして好ましく用いることができる。

【0028】

なお、本明細書において、食品組成物は、食品組成物のみならず、食塩代替物や甘味料、飲料等への添加物などの食品添加用組成物、業務用や家庭用の食材プレミックス品などの食品用材料組成物など、広く飲食品として摂取される組成物を包含する。

【0029】

本発明の組成物を医薬組成物として用いる場合、本発明の組成物は、ＬＲＡペプチドに加え、必要に応じて他の成分を含むことができる。当該他の成分としては特に制限されず、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、薬学的に許容される基剤、担体、及び／又は添加剤（例えば、溶剤、分散剤、乳化剤、緩衝剤、安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等）等が挙げられる。当該他の成分の配合量は目的に応じて適宜設定することができる。

【0030】

本発明の組成物を医薬組成物として用いる場合、その投与形態は特に限定的ではなく、例えば、経口投与、静脈内注射などが挙げられる。中でも、経口投与が好ましい。

【0031】

本発明の組成物を医薬組成物として用いる場合、その剤型は特に限定的ではなく、例えば、口腔内崩壊錠、チュアブル錠、発泡錠、分散錠、溶解錠などの錠剤；トローチ剤；散剤；懸濁剤；乳剤；エリキシル剤；リモナーデ剤；シロップ剤；ローション剤；顆粒剤；硬カプセル剤や軟カプセル剤などのカプセル剤；クリーム剤；軟膏剤；坐剤；パップ剤、テープ剤、マイクロニードル、イオントフォレシスやエレクトロポレーションなどの経皮／粘膜投与剤；エアゾール剤等が挙げられる。これらの形態は、ＬＲＡペプチドと、必要に応じて上記した他の成分とを組み合わせて常法により調製することができる。

【0032】

本発明の組成物を医薬組成物や医薬部外品として用いる場合、当該医薬組成物におけるＬＲＡペプチドの配合量は、ＬＲＡペプチドの有する前記効果が発揮される量であれば特に限定的ではなく、適宜設定することができる。

【0033】

また、本発明の組成物を医薬組成物として用いる場合、投与量、投与間隔などは特に限定的ではなく、適宜設定することができる。例えば、投与量は、投与対象の年齢、性別、体重、対象の健康状態、その他の条件に応じて適宜設定することができる。また、例えば、投与間隔については、１日１回又は複数回（好ましくは２〜３回）としてもよいし、数日〜数週間に１回又は複数回としてもよい。また、投与対象は例えばヒト、及びペット又は家畜などの非ヒト哺乳動物が挙げられ、特にヒトが好ましい。

【0034】

特に投与対象がヒトである場合、ＬＲＡペプチド投与量は、例えば、成人一日あたり、１０〜３００μｇ程度が好ましく、１５〜２００μｇ程度がより好ましく、２０〜１００μｇ程度がさらに好ましく、３０〜８０μｇ程度がよりさらに好ましく、３５〜７０μｇ程度がなお好ましく、４０〜６０μｇ程度が特に好ましい。

【0035】

また、投与期間は、特に制限はされないが、３〜１２週間又はそれ以上（３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２週間又はこれら以上）であることが好ましく、９〜１２週又はそれ以上であることがより好ましい。

【0036】

投与対象が非ヒト哺乳動物の場合の投与形態、剤型、投与量、投与間隔などは、ヒトを投与対象とする場合を参考として適宜設定することができる。

【0037】

本発明の組成物を食品組成物として用いる場合、本発明の組成物は、ＬＲＡペプチドに加え、必要に応じて他の成分を含むことができる。当該他の成分としては特に制限されず、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、食品衛生学上許容される基剤、担体、添加剤や、その他食品として利用され得る成分・材料等が例示できる。

【0038】

本発明の組成物を食品組成物として用いる場合、その摂取形態は経口摂取である。この場合、本発明の組成物の形態は特に制限されず、一般食品や保健機能食品、特別用途食品に使用することができる。例えば、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、病者用食品、嚥下困難者用食品、健康補助食品、栄養補助食品、病院食、介護食、加工食品、飲料、などが挙げられる。これらは常法により調製することができる。また、食品組成物の剤形形態としては、例えば、ハードカプセル、ソフトカプセル、サプリメント、チュアブル錠、飲料、粉末飲料、顆粒、フィルムなどの形態のほか、飲食品として使用する場合、例えば、茶系飲料、スポーツ飲料、美容飲料、果汁飲料、炭酸飲料、アルコール飲料、清涼飲料、ゼリー飲料、水や湯、炭酸水等で希釈する濃縮タイプの飲料等の飲料、水や湯等に溶解または懸濁させて飲用する粉末や顆粒、タブレット等の乾燥固形物、タブレット菓子、ゼリー類、スナック類、焼き菓子、揚げ菓子、ケーキ類、チョコレート、ガム、飴、グミなどの菓子類、スープ類、めん類、米飯類、シリアル等などの食品形態にすることもできる。このうち通常の生活においては、サプリメントタイプ、チュアブル錠、ワンショットドリンクタイプなどの形態が好ましく、運動効果を高める目的で摂取する場合には、スポーツ飲料などの飲料の形態も好ましい。特に、保健機能食品、健康補助食品や栄養補助食品などとする場合には、継続的に摂取し易くするようにするため、例えば、顆粒、カプセル、タブレットや錠剤（チュアブル剤等を含む）、飲料（飲料パウダー、ドリンク剤等）、ゼリー剤などの形態とすることが好ましい。

【0039】

また、本発明の組成物を食品添加用組成物や食品用材料組成物として用いる場合には、その形態としては特に制限されず、例えば、液状、粉末状、フレーク状、顆粒状、ペースト状のものが挙げられる。より具体的には、調味料（甘味料、食塩代替組成物、醤油、酢、味噌、ソース、ケチャップ、ドレッシング、スパイス、ハーブ等、フレーク（ふりかけ、炊飯添加剤など）、焼き肉のたれ、ルーペースト（カレールーペースト等）、食材プレミックス品等が挙げられる。

【0040】

本発明の組成物を食品組成物として用いる場合、当該食品組成物におけるＬＲＡペプチドの配合量は、ＬＲＡペプチドの有する前記効果が発揮される量であれば特に限定的ではなく、適宜設定することができる。

【0041】

また、本発明の組成物を食品組成物として用いる場合、摂取量、摂取間隔などは特に限定的ではなく、適宜設定することができる。例えば、摂取量は、摂取対象の年齢、性別、体重、対象の健康状態、その他の条件に応じて適宜設定することができる。例えば、摂取間隔については、上記した量を摂取する場合、１日１回又は複数回（好ましくは２〜３回）としてもよいし、数日〜数週間に１回又は複数回としてもよい。また、摂取対象はヒト、及びペット又は家畜などの非ヒト哺乳動物であってもよい。

【0042】

特に投与対象がヒトである場合、ＬＲＡペプチド摂取量は、例えば、成人一日あたり、１０〜３００μｇ程度が好ましく、１５〜２００μｇ程度がより好ましく、２０〜１００μｇ程度がさらに好ましく、３０〜８０μｇ程度がよりさらに好ましく、３５〜７０μｇ程度がなお好ましく、４０〜６０μｇ程度が特に好ましい。

【0043】

また、摂取期間は、特に制限はされないが、３〜１２週間又はそれ以上（３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２週間又はこれら以上）であることが好ましく、９〜１２週又はそれ以上であることがより好ましい。

【0044】

摂取対象となるヒトは、上記の通りＡＣＥ阻害による血圧降下不奏功、又はＡＣＥ阻害禁忌の対象であることが好ましく、これに加えて、年齢に伴う血圧上昇を予防したいヒトや血圧上昇を防止したり血圧を下げる必要があるヒトがより好ましい。具体的には、日本高血圧学会が発行している高血圧治療ガイドライン２０１４で分類されている、高血圧（収縮期血圧が１４０ｍｍＨｇ以上及び／又は拡張期血圧が９０ｍｍＨｇ以上）に分類されるヒトだけでなく、正常域血圧ではあるが、生涯のうちに高血圧へ移行する確立が高いことが明らかになっている正常血圧（収縮期血圧が１２０〜１２９ｍｍＨｇ及び／又は拡張期血圧が８０〜８４ｍｍＨｇ）や正常高値血圧（収縮期血圧が１３０〜１３９ｍｍＨｇ及び／又は拡張期血圧が８５〜８９ｍｍＨｇ）に分類されるヒトも好ましい。このうち、正常高値血圧、高血圧に分類されるヒトがより好ましく、正常高値血圧に分類されるヒトが更に好ましい。

【0045】

摂取対象が非ヒト哺乳動物の場合の形態、摂取量、摂取間隔などは、ヒトが摂取対象である場合を参考として適宜設定することができる。

【0046】

なお、本明細書において「含む」とは、「本質的にからなる」と、「からなる」をも包含する（The term "comprising" includes "consisting essentially of” and "consisting of."）。

【実施例】

【0047】

以下、本発明をより具体的に説明するが、本発明は下記の例に限定されるものではない。
製造例１：Ｆｍｏｃ法によるトリペプチドの合成
Ｆｍｏｃ法によりＬｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａからなるトリペプチド（ＬＲＡペプチド）を固相合成した。得られたＬＲＡトリペプチドをＨＰＬＣにより精製した後、プロテインシーケンサーにより配列を解析した結果、Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａからなるトリペプチドであることが確認された。
製造例２：Ｂｏｃ法によるトリペプチドの合成
Ｂｏｃ法によるＬＲＡペプチドの合成を株式会社ペプチド研究所に依頼した。なお、納品されたＬＲＡペプチドは、ＲＰ−ＨＰＬＣ、質量分析及びアミノ酸分析により、Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａからなるトリペプチドであることが確認されたものであった。
実施例１：血圧降下作用の検討
実験動物として、雄性の高血圧自然発症ラット （ＳＨＲ／Ｉｚｍ、１２週齢；清水実験材料社）を用いた。飼料は固形ＳＰ飼料（船橋農場）、飲用水は水道水を使用し、試験中も含め自由摂食・自由飲水とした。ラットは、３週間（１３〜１５週齢）血圧測定への馴化期間を設けた後、本試験に使用した。なお、ラットは、ＬＲＡペプチド投与群及び対照群の２群に群分けした（各群：Ｎ＝５）。

【0048】

上記製造例２で合成したＬＲＡペプチドを生理食塩水に溶解させて、０．２５ｍｇ／ｍｌペプチド溶液を調製した。ＬＲＡペプチド投与群には、当該ペプチド溶液を０．２５ｍｇ／ｋｇとなるように、１ｍｌ容シリンジ及びテフロン（登録商標）製胃ゾンデを用いて胃内に強制経口投与し、対照群には、生理食塩水をサンプル投与群と同様にして強制経口投与した。投与前、並びに投与後２時間後及び４時間後の収縮期血圧をＴａｉｌ−ｃｕｆｆ法で測定した。なお、血圧の測定には、室町機械株式会社製の血圧測定器（ＭＫ−２０００ＳＴ）を用いた。なお、投与後２時間後及び４時間後の収縮期血圧が投与前の収縮期血圧に比べてどの程度低下したかを指標とした。結果を図１に示す。

【0049】

ＬＲＡペプチド投与群は対照群に比べて投与後２時間後及び４時間後の収縮期血圧が有意に低下したことが分かった。当該結果から、ＬＲＡペプチドは優れた血圧降下作用を有することが分かった。

【0050】

実施例２：血圧降下作用への一酸化窒素の影響の検討
ＬＲＡペプチドが奏する血圧降下効果が、一酸化窒素（ＮＯ）を介して得られているものかを調べるため、一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）阻害剤であるＬ−ＮＡＭＥを投与した場合にも血圧降下効果が得られるのかを検討した。なお、同人堂社から購入したＬ−ＮＡＭＥ塩酸塩を検討に用いた。

【0051】

【化1】

【0052】

また、上記と同様に調達した雄性の高血圧自然発症ラット （ＳＨＲ／Ｉｚｍ、１８〜２６週齢；清水実験材料社）を検討に用いた。ＬＲＡペプチドは、ＲＳ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ社に合成依頼して調製した。

【0053】

なお、ＬＲＡペプチド及びＬ−ＮＡＭＥ塩酸塩は、それぞれ生理食塩水に溶解させ、溶液として用いた。ＬＲＡペプチド溶液の濃度は１０μＭ、Ｌ−ＮＡＭＥ溶液の濃度は１００μＭとした。

【0054】

各ラットの収縮期血圧を測定した直後にＬＲＡペプチド溶液をゾンデを用いて経口投与し、さらにＬ−ＮＡＭＥ溶液を腹腔内投与した。さらに、当該投与２及び４時間後に収縮期血圧を測定した。血圧測定には、室町機械株式会社製の血圧測定器（ＭＫ−２０００ＳＴ）を用い、Ｔａｉｌ−ｃｕｆｆ法で測定した。一回の測定につき、６回収縮期血圧を測定し、その平均値を採用した。

【0055】

以下に、ラットの群分けについて示す。

【0056】

【表1】

【0057】

収縮期血圧測定結果を図２に示す。図２では、縦軸は各群での、投与４時間後の収縮期血圧の変化量（投与０時間と比較）を示している。各群とも平均値±ＳＥ（標準誤差）で示している。＊はＰ＜０．０５を示す。

【0058】

１ｍｇ／ｋｇのＬＲＡペプチドを投与したラット（群２）では、コントロール（群１）に対して有意な血圧降下が確認できた。一方、ＬＲＡペプチドに加えＬ−ＮＡＭＥも投与されたラット（群３）では、有意な血圧降下は確認できず、このことからＬＲＡの血圧降下作用がＬ−ＮＡＭＥにより阻害されたことがわかった。なお、Ｌ−ＮＡＭＥのみ投与したラット（群４）では有意な血圧降下は確認されなかった。

【0059】

以上の通り、ＬＲＡペプチドの血圧降下作用は、ＮＯＳの阻害剤であるＬ−ＮＡＭＥによって完全に阻害された（図２）ことから、ＬＲＡペプチドは主にＮＯＳでのＮＯ産出を亢進することにより血圧降下作用を発揮していると考えられた。

【図1】

【図2】