特許 6903675 皮膚細胞分化促進用組成物及び皮膚細胞分化促進物質のスクリーニング方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6903675

(24)【登録日】2021年6月25日

(45)【発行日】2021年7月14日

(54)【発明の名称】皮膚細胞分化促進用組成物及び皮膚細胞分化促進物質のスクリーニング方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/7105 20060101AFI20210701BHJP

   A61K 31/713 20060101ALI20210701BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20210701BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20210701BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20210701BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20210701BHJP

   A61P 17/16 20060101ALI20210701BHJP

   A61K 8/60 20060101ALI20210701BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20210701BHJP

   A23L 33/13 20160101ALI20210701BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20210701BHJP

   G01N 33/50 20060101ALI20210701BHJP

   G01N 33/15 20060101ALI20210701BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/7105

   A61K31/713

   A61K48/00

   A61P43/00 105

   A61P43/00 111

   A61P17/00

   A61P37/08

   A61P17/16

   A61K8/60

   A61Q19/00

   A23L33/13

   G01N33/53 Q

   G01N33/53 D

   G01N33/50 Z

   G01N33/15 Z

【請求項の数】13

【全頁数】17

(21)【出願番号】特願2018-541199(P2018-541199)

(86)(22)【出願日】2017年2月28日

(65)【公表番号】特表2019-512463(P2019-512463A)

(43)【公表日】2019年5月16日

(86)【国際出願番号】KR2017002211

(87)【国際公開番号】WO2017171249

(87)【国際公開日】20171005

【審査請求日】2019年12月10日

(31)【優先権主張番号】10-2016-0036834

(32)【優先日】2016年3月28日

(33)【優先権主張国】KR

(73)【特許権者】

【識別番号】506213681

【氏名又は名称】アモーレパシフィック コーポレーション

【氏名又は名称原語表記】ＡＭＯＲＥＰＡＣＩＦＩＣ ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ

(74)【代理人】

【識別番号】110000556

【氏名又は名称】特許業務法人 有古特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ソン， ウィ ドン

(72)【発明者】

【氏名】キム， ヒョン ジュン

(72)【発明者】

【氏名】キム， キュ ハン

(72)【発明者】

【氏名】パク， ソン ヨン

(72)【発明者】

【氏名】イ， ソン フン

(72)【発明者】

【氏名】チェ， ミン シク

(72)【発明者】

【氏名】チョ， ウン ギョン

(72)【発明者】

【氏名】イ， テ リョン

【審査官】 榎本 佳予子

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１４−５０１５０３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１１−５２６２４４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許出願公開第２００５／００６９９１８（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 BMC Cancer，２００５年，Vol.5，Article No.17

【文献】 Journal der Deutschen Dermatologischen Gesellschaft，２０１１年，Vol.9，No.11，p.897-902

【文献】 Journal of Biological Chemistry，２０１３年，Vol.288，No.43，p.30969-30979

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３１／００−３３／４４

Ａ６１Ｋ ４８／００

Ａ６１Ｋ ４５／００−４５／０８

Ａ６１Ｐ １／００−４３／００

Ａ６１Ｋ ８／００− ８／９９

Ａ６１Ｑ １／００−９０／００

Ａ２３Ｌ ３３／００−３３／２９

Ｇ０１Ｎ ３３／００−３３／９８

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＪＡＢ−１（Ｊｕｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ−１）の発現または活性抑制物質を有効成分として含み、
前記ＪＡＢ−１の発現または活性抑制物質は、ＲＮＡ核酸分子であり、
前記ＲＮＡ核酸分子は、ＪＡＢ−１のｍＲＮＡに結合するｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、及びｍｉＲＮＡの一つ以上を含む、
皮膚細胞分化促進用組成物。

【請求項2】

当該組成物は、ソリアシン（ｐｓｏｒｉａｓｉｎ）の細胞核内への移動を抑制する、請求項１に記載の皮膚細胞分化促進用組成物。

【請求項3】

前記皮膚細胞は、角化細胞である、請求項１に記載の皮膚細胞分化促進用組成物。

【請求項4】

当該組成物は、皮膚細胞分化促進による皮膚保湿、皮膚バリア機能強化、またはアトピー緩和若しくは治療用組成物である、請求項１に記載の皮膚細胞分化促進用組成物。

【請求項5】

前記 ＪＡＢ−１の発現または活性抑制物質は、０．１ｎＭ〜１００ｎＭの濃度で含まれる、請求項１に記載の皮膚細胞分化促進用組成物。

【請求項6】

前記ＪＡＢ−１の発現または活性抑制物質は、組成物の総重量を基準に、０．０００１〜３０質量％で含まれる、請求項５に記載の皮膚細胞分化促進用組成物。

【請求項7】

当該組成物は、薬学的組成物、化粧料組成物、または健康食品組成物である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項8】

皮膚細胞に試験物質を処理するステップ；及び
試験物質を処理した皮膚細胞から、試験物質の処理前後におけるＪＡＢ−１（Ｊｕｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ−１）の相対的発現程度を確認するステップを含む、皮膚細胞分化促進物質のスクリーニング方法。

【請求項9】

当該スクリーニング方法は、試験物質の処理前後におけるケラチン１及びケラチン１０の一つ以上の相対的発現程度を確認するステップをさらに含む、請求項８に記載の皮膚細胞分化促進物質のスクリーニング方法。

【請求項10】

前記皮膚細胞は、角化細胞である、請求項８に記載の皮膚細胞分化促進物質のスクリーニング方法。

【請求項11】

当該スクリーニング方法は、皮膚細胞分化促進による、皮膚バリア機能強化、皮膚保湿、またはアトピー緩和若しくは治療用物質のスクリーニング方法である、請求項８に記載のスクリーニング方法。

【請求項12】

ＪＡＢ−１（Ｊｕｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ−１）に特異的に結合する抗体を含む、皮膚バリア機能、皮膚保湿能、またはアトピー皮膚の診断用組成物。

【請求項13】

ＪＡＢ−１（Ｊｕｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ−１）に特異的に結合する抗体を含む、皮膚バリア機能、皮膚保湿能、またはアトピー皮膚の診断用キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本明細書には、皮膚細胞分化促進用組成物及び皮膚細胞分化促進物質のスクリーニング方法が開示される。

【背景技術】

【0002】

表皮（ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ）は、皮膚（ｓｋｉｎ）の最外郭に位置し、表皮の中でも最も最外郭層は角質層である。角化細胞（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ）から構成された角質層が正常に存在するとき、外部からの多様な刺激を防御し、体内から発散される水分を保持することができる。角化細胞は、皮膚の最下層である基底層（ｂａｓａｌ ｌａｙｅｒ）から増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）しながら、徐々に有棘層（ｓｐｉｎｏｕｓ ｌａｙｅｒ）、顆粒層（Ｇｒａｎｕｌａｒ ｌａｙｅｒ）を経て分化する。このような角化過程（ｋｅｒａｔｉｎｏｚａｔｉｏｎ）を通じて、角化細胞は天然保湿因子（ＮＭＦ；Ｎａｔｕｒａｌ Ｍｏｉｓｔｕｒｉｚｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ）と脂質（セラミド、コレステロールまたは脂肪酸）を産生しながら、角質層（ｓｔｒａｔｕｍ ｃｏｒｎｅｕｍ）を形成するようになる。こうした角質層が正常に形成されて、ようやく皮膚バリア（ｓｋｉｎ ｂａｒｒｉｅｒ）機能が正常に遂行され得る。

【0003】

一方、アトピー、乾癬、またはにきびのような皮膚疾患やトラブルは、種々の要因によって皮膚角質層が正常な機能を保持することができないことが原因で発生するものであって、主に皮膚バリア破壊及び皮膚乾燥症状を発現する。現在、アトピーや乾癬の治療には免疫抑制剤などが主に用いられており、また皮膚バリア強化や皮膚乾燥症状の治療にはセラミド（ｃｅｒａｍｉｄｅ）が主に用いられていたが、これらを用いた後でも確然とした効果が現われず、完治しないという短所がある。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【特許文献1】国際公開第２０１４／１６７０３０号公報

【非特許文献】

【0005】

【非特許文献1】CALANDRA, Thierry et al., “Macrophage Migration Inhibitory Factor. A Regulator of Innate Immunity”, Nature Reviews Immunology, 2003, vol.3, pages 791-800

【非特許文献2】WEBB, Meghan et al., Expression Analysis of the Mouse S100A7/psoriasin Gene in Skin Inflammation and Mammary Tumorigenesis”, BMC Cancer, 2005, vol.5, article no.17 (inner pages 1-16)

【非特許文献3】EMBERLEY, Ethan D et al., “The S100A7-Jun Activation Domain Binding Protein 1 Pathway Enhances Prosurvival Pathway in Breast Cancer”, Cancer Research, 2005, vol.65, no.13, pages 5696-5702

【非特許文献4】GESSER, B. et al., “Dimethylfumarate Inhibits MIF-induced Proliferation of Keratinocytes by Inhibiting MSK1 and RSK1 Activation and by Inducing Nuclear pc-Jun (S63) and p-p53 (S15) Expression”, Inflammation Research, 2011, vol.60, pages 643-653

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

一側面において、本発明の目的は、皮膚細胞分化促進物質用組成物を提供することである。

【0007】

他の側面において、本発明の目的は、皮膚細胞分化促進物質をスクリーニングすることである。

【0008】

他の側面において、本発明の目的は、皮膚バリア強化用物質をスクリーニングすることである。

【課題を解決するための手段】

【0009】

一側面において、本発明は、ＪＡＢ−１（Ｊｕｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ−１）の発現または活性抑制物質（ＪＡＢ−１の発現または活性を抑制する物質）を有効成分として含む、皮膚細胞分化促進用組成物を提供する。

【0010】

他の側面において、本発明は、皮膚細胞に試験物質を処理するステップ；及び試験物質を処理した皮膚細胞から、試験物質の処理前後におけるＪＡＢ−１（Ｊｕｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ−１）の相対的発現程度を確認するステップを含む、皮膚細胞分化促進物質のスクリーニング方法を提供する。

【0011】

他の側面において、本発明は、角化細胞；及び指示書を含み、指示書には皮膚細胞分化促進物質のスクリーニング方法が記載されている、皮膚細胞分化促進物質のスクリーニングキットを提供する。

【0012】

他の側面において、本発明は、ＪＡＢ−１に特異的に結合する抗体を含む皮膚バリア機能、皮膚保湿能、またはアトピー皮膚の診断用組成物とキットを提供する。

【発明の効果】

【0013】

本発明の一側面に係る皮膚細胞分化促進用組成物は、ＪＡＢ−１（Ｊｕｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ−１）の発現を抑制し、またはＪＡＢ−１とソリアシンとの結合を抑制し、その結果、ソリアシンの細胞核内への移動を抑制して、皮膚細胞分化を有効に促進することができる。したがって、当該組成物は、皮膚保湿、皮膚バリア機能強化またはアトピー緩和治療に有効である。また、一側面に係る皮膚細胞分化促進物質のスクリーニング方法は、角化細胞に試験物質を処理しＪＡＢ−１の相対的発現程度を確認することで、簡便で迅速且つ効率的に角質細胞分化促進物質をスクリーニングすることができる。

【図面の簡単な説明】

【0014】

【図1a】正常ヒト角化細胞におけるＪＡＢ−１の発現程度を確認した写真である。

【図1b】アトピー患者の角化細胞におけるＪＡＢ−１の発現程度を確認した写真である（Ｊａｂ １はＪＡＢ−１である）。

【図2a】インターロイキン−６（ＩＬ−６）を処理していない角化細胞におけるＳ１００Ａ７の発現程度を確認した写真である。

【図2b】インターロイキン−６（ＩＬ−６）を処理した後の角化細胞におけるＳ１００Ａ７の発現程度を確認した写真である。

【図3】インターロイキン−６を処理した後の角化細胞におけるＪＡＢ−１の発現程度を確認した図である（左図：ＩＬ−６無処理群、右図：ＩＬ−６処理群）。

【図4】インターロイキン−６を処理した場合とＪＡＢ−１をノックダウンさせた場合とにおけるＳ１００Ａ７の細胞核内への移動の有無を確認した写真である（緑色：Ｓ１００Ａ７、赤色：核、黄色：Ｓ１００Ａ７が核内へ移動したもの）。

【図5】ＪＡＢ−１をノックダウンさせた場合における、ケラチン１とケラチン１０の発現程度を確認した図である。

【発明を実施するための形態】

【0015】

以下、本発明を詳しく説明する。

【0016】

ＪＡＢ−１（Ｊｕｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ−１またはＪｕｎ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｄｏｍａｉｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ−１）は、ＡＰ−１タンパク質の共活性化因子（ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ）として初めて知られたタンパク質であって、癌細胞の増殖に関連しては機序が知られているが、皮膚細胞の分化に関連しては知られていない。

【0017】

本発明者らは、ソリアシン（ｐｓｏｒｉａｓｉｎ）がＪＡＢ−１と反応した後に核内へ移動する機作を発見し、ＪＡＢ−１とソリアシンの発現量が、特に、アトピー患者や乾癬患者で高いという事実に着目して、ＪＡＢ−１の発現を抑制すれば、皮膚細胞の分化を促進することができることを見出した。具体的に、ソリアシンは、ＪＡＢ−１と反応して、細胞核内へ移動し、細胞核内へ移動したソリアシンは、皮膚細胞の分化を抑制するようになるが、ＪＡＢ−１の発現を抑制することで、ソリアシンの細胞核内への移動を抑制して、皮膚細胞分化を促進することができることを確認した。一方、ソリアシンは、Ｓ１００Ａ７（Ｓ１００ ｃａｌｃｉｕｍ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ７）ともいうタンパク質であって、Ｓ１００Ａ７遺伝子によってコーディングされる。

【0018】

本発明は、一側面において、ＪＡＢ−１（Ｊｕｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ−１）の発現または活性抑制物質を有効成分として含む、皮膚細胞分化促進用組成物である。

【0019】

本発明は、他の側面において、皮膚細胞分化促進、皮膚保湿、皮膚バリア機能強化、またはアトピー治療が必要な個体においてＪＡＢ−１の発現または活性抑制物質、またはこれを有効成分として含む組成物を投与することを含む、皮膚細胞分化を促進させる方法、皮膚保湿方法、皮膚バリア機能強化方法、またはアトピー治療方法であってよい。一具現例によれば、当該方法において投与は、本明細書に記載の投与方法及び投与用量に従って行われていてよい。

【0020】

本発明は、他の側面において、皮膚細胞分化促進用途、皮膚保湿用途、皮膚バリア機能強化用途、またはアトピー治療用途に用いるためのＪＡＢ−１の発現または活性抑制物質であってよい。

【0021】

本発明は、他の側面において、皮膚細胞分化促進、皮膚保湿、皮膚バリア機能強化、またはアトピー緩和のための有効成分としてのＪＡＢ−１の発現または活性抑制物質の非治療的化粧用用途であってよい。

【0022】

本発明は、また他の側面において、皮膚細胞分化促進、皮膚保湿、皮膚バリア機能強化、またはアトピー治療のための組成物の製造に、ＪＡＢ−１の発現または活性抑制物質を用いる用途であってよい。

【0023】

本明細書においてＪＡＢ−１の活性抑制とは、ＪＡＢ−１とソリアシンの結合を抑制することを意味する。

【0024】

本明細書において「皮膚」とは、動物の体表を覆う組織を意味するものであって、顔または胴体などの体表を覆う組織だけでなく、頭皮や毛髪を含む最広義の概念である。なお、本明細書において皮膚は、生体皮膚だけでなく、生体皮膚の状態を具現した人工皮膚または皮膚模倣体を含んでいてよい。

【0025】

本発明の一側面において、前記皮膚細胞は、皮膚角化細胞（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ）を含む。本発明の他の一側面において、前記皮膚細胞は、ヒトの皮膚角化細胞を含む。本発明のまた他の一側面において、前記皮膚細胞は、ヒトの正常皮膚角化細胞を含む。

【0026】

本明細書において、「皮膚細胞分化」は、角化細胞が皮膚の最下層である基底層から機能的に分化して徐々に有棘層、顆粒層、角質層を形成する過程を意味していてよい。

【0027】

本明細書において、「相対的発現程度」は、試験物質を処理していない皮膚細胞におけるＪＡＢ−１の発現程度を、試験物質を処理していない皮膚細胞におけるＪＡＢ−１の発現程度と比較したときの発現程度であってよい。当該発現程度は、発現量や発現質（ｑｕａｌｉｔｙ）を含んでいてよい。

【0028】

前記したような側面において、前記ＪＡＢ−１の発現または活性抑制物質は、ＲＮＡ核酸分子であってよい。

【0029】

本発明の一観点である、皮膚細胞分化促進用組成物において、前記ＲＮＡ核酸分子は、ＪＡＢ−１のｍＲＮＡに結合するｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、及びｍｉＲＮＡの一つ以上を含んでいてよい。

【0030】

ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、及びｍｉＲＮＡは、ＲＮＡ干渉現象（ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ、ＲＮＡｉ）を引き起こすＲＮＡ断片である。ＲＮＡ干渉現象とは、二本鎖ＲＮＡ（ｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄｅｄ ＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ）によってターゲットｍＲＮＡが分解し、特定の遺伝子の発現が下向調節されることを意味する。

【0031】

ｍｉＲＮＡは、細胞内に存在する小さいＲＮＡ（ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｓｍａｌｌ ＲＮＡ）の一種であってタンパク質を合成しないＤＮＡに来由し、ヘアピン構造転写体（ｈａｉｒｐｉｎ−ｓｈａｐｅｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ）から生成される。ｍｉＲＮＡは、標的ｍＲＮＡの３’−ＵＴＲの相補的配列（ｓｅｑｕｅｎｃｅ）に結合して該ｍＲＮＡの翻訳抑制または不安定化を誘導して、究極的にその標的ｍＲＮＡのタンパク質合成を抑制するリプレッサー（ｒｅｐｒｅｓｓｏｒ）の役割をするようになる。かかる役割はＲＮＡｉと呼ばれたりもする。一つのｍｉＲＮＡは、複数個のｍＲＮＡをターゲットとすることができ、ｍＲＮＡもまた、複数個のｍｉＲＮＡによって調節され得ると知られている。ＲＮＡｉ現象を誘導する他のＲＮＡとして、１９〜２７ｍｅｒ前後の短いＲＮＡであるｓｈｏｒｔ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）があり、また短いヘアピン構造を有するｓｈＲＮＡがある。一般に、ｓｉＲＮＡやｓｈＲＮＡが人為的に細胞内に導入されてＲＮＡｉを誘導する物質であるとすれば、ｍｉＲＮＡは細胞内に自然的に存在する物質を意味する。

【0032】

前記したような側面において、前記ｓｉＲＮＡは、これらとそれぞれ混成化可能な配列、またはこれらとそれぞれ相補的な配列を含んでいてよい。

【0033】

本明細書において「混成化可能」とは、特定の一本鎖のＲＮＡと結合して二本鎖のＲＮＡを形成することができることを意味する。

【0034】

本発明の一観点である、皮膚細胞分化促進用組成物において、当該組成物は、ソリアシン（ｐｓｏｒｉａｓｉｎ）の細胞核内への移動を抑制するものであってよい。具体的に、ソリアシンは、ＪＡＢ−１と結合した後、細胞核内へ移動して、細胞分化を抑制するが、当該組成物は、このような機作を抑制することができる。

【0035】

一具現例において、前記皮膚細胞は、角化細胞（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ）であってよい。

【0036】

前記したような側面において、当該組成物は、皮膚細胞分化促進による皮膚保湿、皮膚バリア機能強化またはアトピー緩和若しくは治療用組成物であってよい。皮膚細胞分化がうまくなされないと皮膚角質層が正常に機能できないことから、皮膚の水分保持力に劣り、且つ皮膚バリア機能が低下する。また、アトピー、乾癬のような皮膚疾患は、種々の要因によって正常な皮膚角質層の機能が保持できないことから発生する疾患であって、皮膚炎症や皮膚乾燥が主な症状として現われる。したがって、皮膚細胞分化を促進する物質は、皮膚保湿、皮膚バリア機能強化、及びアトピーを緩和または治療する効果を奏することができる。

【0037】

本発明の一側面である、皮膚細胞分化促進用組成物は、薬学的組成物であってよく、化粧料組成物であってよく、健康機能食品組成物であってもよい。

【0038】

前記化粧品組成物は、局所適用に適合したあらゆる剤形で提供されていてよい。例えば、溶液、水相に油相を分散させて得たエマルジョン、油相に水相を分散させて得たエマルジョン、懸濁液、固体、ゲル、粉末、ペースト、泡沫（ｆｏａｍ）またはエアロゾル組成物の剤形で提供されていてよい。このような剤形の組成物は、当該分野の通常的な方法に従って製造されていてよい。

【0039】

前記化粧品組成物は、前記した物質以外に主効果を損なわない範囲内で、好ましくは、主効果に相乗効果を与え得る他の成分を含有してよい。本発明に係る化粧品組成物は、ビタミン、高分子ペプチド、高分子多糖及びスフィンゴ脂質からなる群より選択された物質を含んでいてよい。また、本発明に係る化粧品組成物は、保湿剤、エモリエント剤、界面活性剤、紫外線吸収剤、防腐剤、殺菌剤、酸化防止剤、ｐＨ調整剤、有機及び無機顔料、香料、冷感剤または制汗剤を含んでいてよい。前記成分の配合量は、本発明の目的及び効果を損なわない範囲内において当業者が容易に選択可能であり、その配合量は、組成物の全重量を基準に０．０１〜５質量％、具体的に、０．０１〜３質量％であってよい。

【0040】

前記薬学組成物は、局所適用に適合したあらゆる剤形で提供されていてよい。例えば、皮膚外用溶液剤、懸濁剤、乳液剤、ゲル、パッチまたは噴霧剤であってよいが、これらに制限されるものではない。非経口投与のための製剤としては、注射剤、点滴剤、軟膏、ローション、スプレー、懸濁剤、乳剤または坐剤などが挙げられる。前記剤形は、当該分野の通常的な方法に従って容易に製造し得るものであって、界面活性剤、賦形剤、水和剤、乳化促進剤、懸濁剤、浸透圧調整のための塩または緩衝剤、着色剤、香辛料、安定化剤、防腐剤、保存剤またはその他常用する補助剤を適当に用いていてよい。

【0041】

本発明の一実施例に係る薬学組成物の有効成分は、対象の年齢、性別、体重、病理状態及びその深刻度、投与経路または処方者の判断によって変わってよい。これらの因子に基づく適用量の決定は当業者の水準内にあり、その１日投与量は、例えば、０．０００１ｍｇ／ｋｇ／日〜１０００ｍｇ／ｋｇ／日、より具体的には、０．０２ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日とされてよいが、これに制限されるものではない。

【0042】

前記製剤の投与量は、対象者の年齢、性別、体重、症状、投与方法によって異なるが、１日当たり１．０〜３．０ｍｌの範囲でこれを１日に１〜５回塗布し、１ヶ月以上続けた方がよい。

【0043】

また、健康食品は、日常食事で欠乏し易い栄養素や人体に有用な機能をもつ原料や成分（機能性原料）を用いて製造したものであって、人体の正常な機能を維持しまたは生理機能活性化によって健康を維持し改善する食品を意味するものであってよいが、これに制限されるものではない。前記健康食品は、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、液状、丸剤などの形態で製造、加工されていてよいが、これらに限定されるものではなく、法律に従って特に形態を問わず製造、加工されていてよい。

【0044】

本発明の一側面において、健康飲料組成物は、指示された割合にて必須成分として前記化合物を含有する以外は、他の成分に特別な制限がなく、通常の飲料と同様に種々の香味剤または天然炭水化物などを追加成分として含有していてよい。天然炭水化物の例としては、単糖類、多糖類、シクロデキストリンなどのような通常の糖、及びキシリトール、ソルビトール、エリトリトールなどの糖アルコールが挙げられる。上述したもの以外の香味剤として、天然香味剤（タウマチン、ステビア抽出物（例えば、レバウジオシドＡ、クリチルリチン）及び合成香味剤（サッカリン、アスパルテームなど）を用いていてよい。

【0045】

一般に、健康食品組成物によって投与される有効成分量は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ/日〜略１０００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であってよい。より好ましい投与量は、０．０２ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日であってよい。投与は、一日に一回投与してよく、数回に分けて投与してもよい。

【0046】

本発明の一観点である皮膚細胞分化促進用組成物において、前記ＪＡＢ−１の発現または活性抑制物質は、０．１ｎＭ〜５０ｎＭの濃度で含まれていてよい。

【0047】

また、前記ＪＡＢ−１の発現または活性抑制物質は、組成物の総重量を基準に、０．０００１〜３０質量％で含まれていてよい。例えば、０．０００１〜２５質量％、０．０００１〜２５質量％、０．０００１〜２０質量％または０．０００１〜１５質量％で含まれていてよく、好ましくは、０．０００１〜１０質量％で含まれていてよい。

【0048】

本発明は、他の側面において、皮膚細胞に試験物質を処理するステップ；及び試験物質を処理した皮膚細胞から、試験物質の処理前後におけるＪＡＢ−１（Ｊｕｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ−１）の相対的発現程度を確認するステップを含む、皮膚細胞分化促進物質のスクリーニング方法である。

【0049】

前記したような側面において、当該スクリーニング方法は、試験物質の処理後のＪＡＢ−１の発現程度が、処理前の程度に比べて低い場合、皮膚細胞分化促進物質と判断するステップをさらに含んでいてよい。一具現例において、試験物質の処理後のＪＡＢ−１の発現程度が、処理前の程度に比べて２０％以上低い物質を皮膚細胞分化促進物質と判断するステップをさらに含んでいてよい。例えば、試験物質の処理後のＪＡＢ−１の発現程度が、処理前の濃度に比べて、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上または５０％以上低いと、皮膚細胞分化促進物質と判断していてよい。

【0050】

例えば、試験物質を処理していない角質細胞におけるＪＡＢ−１の発現程度よりも試験物質を処理した角質細胞におけるＪＡＢ−１の発現程度の方が高いと、処理した試験物質がＪＡＢ−１の発現程度を増加させたと判断していてよい。逆に、試験物質を処理していない皮膚細胞におけるＪＡＢ−１の発現程度よりも試験物質を処理した皮膚細胞におけるＪＡＢ−１の発現程度が低いか同程度であると、処理した試験物質がＪＡＢ−１の発現程度を増加させなかったと判断していてよい。前述したように、処理した試験物質がＪＡＢ−１の発現程度を処理前の程度に比べて２０％以上低減させると、皮膚細胞分化を促進する物質と判断していてよい。

【0051】

前記ＪＡＢ−１の発現程度は、公知の技術、例えば、逆転写重合酵素連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットまたはイムノブロット（ｉｍｍｕｎｅ ｂｌｏｔ）を用いて確認していてよく、これらに制限されるものではない。

【0052】

なお、ＪＡＢ−１の発現程度の低減の有無は目視でも判断可能である。

【0053】

本発明の一側面であるスクリーニング方法において、当該方法は、試験物質の処理前後におけるケラチン１及びケラチン１０の一つ以上の相対的発現程度を確認するステップをさらに含んでいてよい。前記したような側面において、試験物質の処理後のケラチン１及びケラチン１０の一つ以上の発現程度が、処理前の程度に比べて高い物質を皮膚細胞分化促進物質と判断するステップをさらに含んでいてよい。一具現例において、試験物質の処理後のケラチン１及びケラチン１０の一つ以上の発現程度が、処理前の程度に比べて２０％以上高い物質を皮膚細胞分化促進物質と判断するステップをさらに含んでいてよい。例えば、前記ケラチン１またはケラチン１０の発現程度が、試験物質の処理前の程度に比べて１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、または５０％以上高い場合、皮膚細胞分化促進物質と判断していてよい。

【0054】

ケラチン１とケラチン１０は、皮膚細胞の分化程度のマーカーとされていてよく、ケラチン１とケラチン１０の発現程度が高いと、皮膚細胞の分化が活発であると判断していてよい。

【0055】

一具体例において、前記皮膚細胞は、角化細胞であってよいが、これに制限されるものではない。

【0056】

本発明の一側面であるスクリーニング方法において、当該スクリーニング方法は、皮膚細胞分化促進による、皮膚バリア機能強化、皮膚保湿、またはアトピー緩和若しくは治療用物質のスクリーニング方法であってよい。

【0057】

本発明は、他の側面において、角化細胞；及び指示書を含み、指示書には前記皮膚細胞分化促進物質のスクリーニング方法が記載されている、皮膚細胞分化促進物質のスクリーニングキットである。

【0058】

本発明は、他の側面において、ＪＡＢ−１（Ｊｕｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ−１）に特異的に結合する抗体を含む皮膚バリア機能、皮膚保湿能、またはアトピー皮膚の診断用組成物である。

【0059】

また、本発明は、他の側面において、ＪＡＢ−１（Ｊｕｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ−１）に特異的に結合する抗体を含む皮膚バリア機能、皮膚保湿能、またはアトピー皮膚の診断用キットである。

【0060】

以下、実施例を通じて、本発明の構成及び効果をより具体的に説明する。なお、以下の実施例は本発明に対する理解を助けるための目的から例示したものであるに過ぎず、本発明の範疇及び範囲がそれらによって制限されるものではない。

【0061】

［実施例１］正常なヒトとアトピー患者の角化細胞からのＪＡＢ−１の発現程度の測定
アトピー患者と正常なヒトの皮膚組織からＪＡＢ−１の発現程度を確認した。アトピー患者の皮膚組織は中央大学校の皮膚科から得た。

【0062】

正常群（３２歳、男性）とアトピー群（２４歳、男性）の表皮２ｍｍを生検した後、切片を作るために凍結切片コンパウンド（ｆｒｏｚｅｎ ｓｅｃｔｉｏｎ ｃｏｍｐｏｕｎｄ（ＦＳＣ ２２(R)、Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＵＳＡ）で固定してから６μｍに切片した。組織切片されたスライドは、細胞核染色用試薬であるＤＡＰＩ（４’,６−ｄｉａｍｉｄｉｎｏ−２−ｐｈｅｎｙｌｉｎｄｏｌｅ）とＪＡＢ−１抗体を用いて免疫染色を行った。その結果、正常群では、表皮層の全般に青色（やや明るい部分）で染色された核が存在し且つＪＡＢ−１（緑色：やや明るい部分）の染色程度は見られないのに対し（図１ａ）、アトピー組織の場合は、核染色とともに表皮上層部に緑色（やや明るい部分）で染色されたＪＡＢ−１が増加していることを確認することができた（図１ｂ）。このことから、ＪＡＢ−１の発現程度は、アトピー患者の皮膚（表皮）でより高いことが分かった。

【0063】

［実施例２］イントルキン−６（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ６、ＩＬ−６）処理時のＳ１００Ａ７及びＪＡＢ−１の発現程度の測定
角化細胞はロンザ社から購入した。各細胞は、ＣＯ_２培養器（ＣＯ_２ ｉｎｃｕｂａｔｏｒ）で３７℃、５％ＣＯ_２条件下で培養した。細胞培養は、ロンザ社の指針書に従って行った。５００ｍｌのＫＧＭ−２（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ ＣＣ−３１０３）培地にＫＧＭ−２ブレットキット（Ｂｕｌｌｅｔ ｋｉｔ：ＢＰＥ（Ｂｏｖｉｎｅ ｐｉｔｕｉｔａｒｙ ｅｘｔｒａｃｔ）２ｍｌ、ｈＥＧＦ（ｈｕｍａｎ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）０．５ｍｌ、インスリン（Ｉｎｓｕｌｉｎ）０．５ｍｌ、ヒドロコルチゾン（Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ）０．５ｍｌ、トランスフェリン（Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ）０．５ｍｌ、エピネフリン（Ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ）０．５ｍｌ、及びゲンタマイシン硫酸＋アムホテリシン−Ｂ（Ｇｅｎｔａｍｙｃｉｎ Ｓｕｆｌａｔｅ＋Ａｍｐｈｏｆｅｒｉｃｉｎ−Ｂ：ＧＡ−１０００）０．５ｍｌを添加して用いた。前記皮膚角質細胞を６０ｍｍの培養皿に７０〜８０％の密度（ｃｏｎｆｌｕｅｎｃｙ）になるまで培養した後、炎症性サイトカインであるＩＬ−６（１０ｎＭ／ｍｌ）を処理時におけるＪＡＢ−１の結合タンパク質であるＳ１００Ａ７の発現量とＪＡＢ−１の発現量を知るために、Ｓ１００Ａ７の場合、Ｓ１００Ａ７の抗体を用いて免疫染色を行い（図２ａ及び図２ｂ）、ＪＡＢ−１の場合、細胞に対してウェスタンブロットを行った（図３）。

【0064】

その結果、ＩＬ−６を処理した群のほうが、ＩＬ−６を処理していない群に比べて、緑色（細胞内にやや明るい部分）で染色されたＳ１００Ａ７及びＪＡＢ−１の発現程度が高いことを分かった（図２ａ、図２ｂ、及び図３）。特異事項として、ＪＡＢ−１の発現が増加した群においてＳ１００Ａ７が核内に多く分布することが分かるが、図２ａ及び図２ｂ中、黄色（円内部の非常に明るい部分）はＳ１００Ａ７の核内移動が増加した結果である。

【0065】

［実施例３］ＪＡＢ−１のノックダウン後のＳ１００Ａ７の細胞核内への移動評価
ＩＬ−６を実施例２と同法にて処理し、ＪＡＢ−１遺伝子のｓｉＲＮＡ（５０ｎＭ、ダーマコン社から購入、商品名：ＯＮ−ＴＡＲＧＥＴ ｐｌｕｓ ｓｉＲＮＡ Ｒｅａｇｅｎｔｓ）を、リポフェクタミンを用いてトランスフェクションして、ＪＡＢ−１をノックダウンさせた後、Ｓ１００Ａ７の核内側への移動の有無を観察した。

【0066】

核染色のためにヨウ化プロピジウム（ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ）を、Ｓ１００Ａ７の場合（蛍光がｌａｂｅｌされたＳ１００Ａ７抗体、Ａｂｃａｍ ａｂ１３６８０）を用いた。染色された核は赤色を、Ｓ１００Ａ７は緑色を呈した。なお、Ｓ１００Ａ７が核内に入ると、赤色と緑色とが併合して黄色を呈するようになる。その結果、ＩＬ−６を処理した群において、緑色のＳ１００Ａ７の場合、核内の黄色（図４中の３番目の図中の最も明るい部分）で存在するが、ＪＡＢ−１をノックダウンさせた場合、黄色がほとんど観察されないところ、核内に移動するＳ１００Ａ７がほとんどないことを確認することができた（図４）。

【0067】

［実施例４］ＪＡＢ−１のノックダウン後のケラチン１及びケラチン１０のｍＲＮＡ発現量の測定
実施例３と同法にてＩＬ−６を処理し、ＪＡＢ−１をノックダウンさせた後、表皮分化マーカーであるケラチン１とケラチン１０のｍＲＮＡ発現程度を測定した。その結果、ＪＡＢ−１をノックダウンさせた場合、ケラチン１及びケラチン１０のｍＲＮＡの発現量がより高くなるということと、ＪＡＢ−１をノックダウンさせた条件ではＩＬ−６による表皮分化マーカーの発現低減が回復することを確認することができた（図５）。

【0068】

［実施例５］ＪＡＢ−１のノックダウン後のＪＡＢ−１ ｍＲＮＡ発現量の測定
実施例３と同様、ＪＡＢ−１をノックダウンさせてから２日後に対照群（Ｎｏｎ−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＲＮＡ、５０ｎＭ）と比較のために、培養後培地を除去し、トリゾール（Ｔｒｉｚｏｌ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製を使用）１ｍｌを添加して、ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社のＲＮＡ分離法によってＲＮＡを分離した。紫外線検出器（ＨＥＷＬＥＴＴ ＰＡＣＫＡＲＤ）を利用して２６０ｎｍでＲＮＡを定量した後、ＲＴ−ＰＣＲ（Ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ−ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ）を実施した。各サンプルに対する遺伝子分析のために、相補的な遺伝子であるＲＰＬ１３Ａを基準に補正した。

【0069】

その結果、ＪＡＢ−１ノックダウン群の場合、ＪＡＢ−１の遺伝子発現量が対照群に比べて約２０〜７０％程度減少した。実験結果を表１に表した。

【0070】

【表1】

【0071】

以下、本発明の一側面に係る組成物の剤形例について説明するが、他の種々の剤形への応用も可能であり、これらは本発明を限定するためのものではなく、単に具体的に説明するためのものである。

【0072】

［剤形例１］栄養化粧水
下記の表２に記載の組成に従い、通常の方法にて栄養化粧水を製造することができる。

【0073】

【表2】

【0074】

［剤形例２］栄養ローション
下記の表３に記載の組成に従い、通常の方法にて栄養ローションを製造することができる。

【0075】

【表3】

【0076】

［剤形例３］栄養クリーム
下記の表４に記載の組成に従い、通常の方法にて栄養クリームを製造することができる。

【0077】

【表4】

【0078】

［剤形例４］パック
下記の表５に記載の組成に従い、通常の方法にてパックを製造することができる。

【0079】

【表5】

【0080】

［剤形例５］軟膏
下記の表６に記載の組成に従い、通常の方法にて軟膏を製造することができる。

【0081】

【表6】

【0082】

［剤形例６］注射剤
下記の表７に記載の組成に従い、通常の方法にて注射剤を製造することができる。

【0083】

【表7】

【図1a】

【図1b】

【図2a】

【図2b】

【図3】

【図4】

【図5】