【図1】図１は、実施例で用いた末梢血単球が由来するドナー（健常者ドナー１０人、がん患者ドナー２人）の年齢、性別、及びヒト白血球抗原（ＨＬＡ）血清型、並びに増殖性ＣＤ１４−ＭＬの作製の結果を示した図である。”ＮＴ”＝Ｎｏｔ Ｔｅｓｔｅｄ。

【図2】本発明の方法により作製したＣＤ１４ＭＬ及びＣＤ１４−ＭＬ−ＤＣの形態観察の結果である。位相差顕微鏡画像（Ａ及びＢ，Ｃ：左図）及びＭａｙ-Ｇｒuｎｗａｌｄ Ｇｉｅｍｓａ 染色像（Ｂ，Ｃ：右図）を示している。（Ａ）：本発明の方法（ＭＹＣ、ＢＭＩ１、及びＬＹＬ１を導入）で作製したＣＤ１４−ＭＬの形態である。（Ｂ）及び（Ｃ）：本発明の方法（ＭＹＣ、ＢＭＩ１、及びＢＣＬ２を導入）で作製したＣＤ１４−ＭＬの形態である。（Ｂ）ヒト単球及びヒト単球由来ミエロイドセルライン（ＣＤ１４−ＭＬ）の形態を示している。（Ｃ）ＯＫ４３２で刺激したｍｏ−ＤＣｓ及びＣＤ１４−ＭＬ−ＤＣｓの形態を示している。

【図3】ＣＤ１４−ＭＬ−ＤＣｓの細胞表面分子とＣＤ１４−ＭＬ−ＤＣによるＩＬ−１２ｐ７０の生産の結果である。（Ａ）ＯＫ４３２による処置の前後のＣＤ１４−ＭＬ−ＤＣについて、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＨＬＡクラスＩ及びＨＬＡクラスＩＩの発現について分析した結果である。コントロールとして、ＯＫ４３２で刺激したｍｏ−ＤＣ（単球由来ＤＣ）の分析の結果を示した。特定のｍＡｂ（太線で示す）及びアイソタイプがマッチしたコントロールｍＡｂ（影領域）の染色プロファイルを示している。（Ｂ）ＣＤ１４−ＭＬ−ＤＣｓ及びｍｏ−ＤＣｓの６０時間後の培地上清中のＩＬ−１２ｐ７０の濃度をＥＬＩＳＡで測定した結果である。データは、２回の実験の結果である。

【図4】ＣＤ１４−ＭＬ−ＤＣｓによるＴ細胞刺激と抗原提示を示している。（Ａ）ＣＤ１４−ＭＬ（菱形）、ＩＬ−４（正方形）又はＯＫ４３２（三角形）で刺激した結果である。（Ｂ）示した数のＣＤ−１４−ＭＬ−ＤＣｓを、ＧＡＤ６５_111-131ペプチド（菱形）で負荷し、或いはそのまま負荷しなかった（正方形）場合の、Ｔ細胞の増殖反応を、最後の１６時間の培養での［³Ｈ］−メチルチミジンの取り込みで測定した結果である。実験は、２人の異なるドナー由来のＣＤ１４−ＭＬで行った。（Ｃ）ＣＤ１４−ＭＬ−ＤＣｓを、組み換えＧＳＴ融合ＧＡＤ６５タンパク質又はＧＳＴタンパク質で１６時間パルスした場合のＴ細胞の増殖反応を分析した結果である。実験は、２人の異なるドナー由来のＣＤ１４−ＭＬで行った。

【図5】ＣＤ１４−ＭＬ−ＤＣｓによるガン抗原反応性ＣＤ８⁺Ｔセルラインの誘導の結果である。（Ａ）ＣＤ１４−ＭＬ−ＤＣｓによるガン抗原特異的ＣＤ８⁺Ｔ細胞の誘導プロトコルを示している。（Ｂ）２１日目に、ＣＤ８⁺Ｔ細胞を生産しているＩＦＮ−γの数をＥＬＩＳＰＯＴアッセイにより分析した結果である（Ｄａｙ ２１）。刺激培養前のＴ細胞の結果もまた示す（Ｄａｙ ０）。（Ｃ）２１日目に、Ｔ細胞を回収し、抗ＣＤ８ ｍＡｂ、及びＨＬＡ−Ａ＊２４：０２／ＣＤＣＡ１_56-64又はＨＬＡ−Ａ＊２４：０２／ＬＹ６Ｋ_177-186 ｔｅｔｒａｍｅｒで染色した結果である。図中の数は、ＨＬＡ−ペプチド複合体のｔｅｔｒａｍｅｒで染色されたＣＤ８⁺Ｔ細胞のパーセンテージを示している（Ｄａｙ ２１：右図）。刺激培養前のＴ細胞の結果もまた示す（Ｄａｙ ０：左図）。

【図6】ＣＤ１４−ＭＬ−ＤＣｓによるガン抗原反応性ＣＤ８⁺Ｔセルラインの誘導の結果である。（Ａ）ＣＤ８⁺Ｔ細胞を生産しているＩＦＮ−γの数をＥＬＩＳＰＯＴアッセイにより分析した結果である。（Ｂ）Ｔ細胞を回収し、抗ＣＤ８ ｍＡｂ、及びＨＬＡ−Ａ＊０２：０１／ＭＡＲＴ１_26-35 ｄｅｘｔｒａｍｅｒ、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１／ＣＤＣＡ１_351-359 ｔｅｔｒａｍｅｒ、又はＨＬＡ−Ａ＊０２：０１／ＩＭＰ３_515-523 ｔｅｔｒａｍｅｒで染色した結果である。図中の数は、ＨＬＡ−ペプチド複合体のｄｅｘｔｒａｍｅｒ又はｔｅｔｒａｍｅｒで染色されたＣＤ８⁺Ｔ細胞のパーセンテージを示している（右図）。刺激培養前のＴ細胞の結果もまた示す（Ｄａｙ ０：左図）

【図7】ＣＤ１４−ＭＬ−ＤＣｓによるがん抗原反応性ＣＤ４⁺Ｔセルラインの誘導を結果である。（Ａ）ＣＤ１４−ＭＬ−ＤＣｓによるガン抗原特異的ＣＤ４⁺Ｔ細胞の誘導プロトコルを示している。（Ｂ，Ｃ）刺激後（３回より多く）、各ペプチドに反応するＣＤ４⁺Ｔ細胞の数をＩＦＮ−γＥＬＩＳＰＯＴアッセイで分析した結果である（Ｄａｙ ２８）。刺激培養前のＴ細胞の結果も示す（Ｄａｙ ０）。ジメチルスルホキシドをコントロールとして用いた。健常者ドナー３（Ｂ）及びドナー２（Ｃ）の結果を示す。

【図8】ＨＮＣ患者から得られたＣＤ１４−ＭＬ−ＤＣｓによるがん抗原反応性ＣＤ８⁺Ｔセルラインの誘導の結果である。（Ａ、Ｃ）、２１日目に、ペプチドに反応するＣＤ８⁺Ｔ細胞の数をＩＦＮ−γ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイにより分析した結果である。ＨＩＶペプチドをコントロールペプチドとして用いた。（Ｂ，Ｄ）２１日目に、Ｔ細胞を回収し、抗ＣＤ８ ｍＡｂ、及びＨＬＡ−Ａ＊２４：０２／ＣＤＣＡ１_56-64、ＨＬＡ−Ａ＊２４：０２／ＫＩＦ２０Ａ_66-75又はＨＬＡ−Ａ＊２４：０２／ＬＹ６Ｋ１_77-186 ｔｅｔｒａｍｅｒで染色した結果である。図中の数は、ＨＬＡ−ペプチド複合体のｔｅｔｒａｍｅｒで染色されたＣＤ８⁺細胞のパーセンテージを示している。がん患者１（Ａ、Ｂ）とがん患者２（Ｃ、Ｄ）の結果を示す。

【図9】ＨＮＣ患者から得たＣＤ１４−ＭＬ−ＤＣｓによるがん抗原反応性ＣＤ４⁺Ｔセルラインの誘導の結果である。刺激後（３回より多く）、各ペプチドに反応したＣＤ４⁺Ｔ細胞の数をＥＬＩＳＰＯＴアッセイにより分析した結果を示す。がん患者１（Ａ）とがん患者２（Ｂ）の結果を示す。

【図10】抗原性タンパク質を発現するＣＤ１４−ＭＬ−ＤＣｓによるがん抗原反応性ＣＤ８⁺Ｔセルラインの誘導の結果である。（Ａ）ＣＭＶｐｐ６５（ＥＦ−ＣＭＶ−ＩＰ）及びＭＡＲＴ１（ＥＦ−ＭＡＲＴ１−ＩＰ）のレンチウイルス構築物を示す。（Ｂ）ＣＤ１４−ＭＬ／ＣＭＶによるＣＭＶｐｐ６５の発現をフローサイトメトリーで分析した結果である。特定のｍＡｂ（太線で示す）とアイソタイプがマッチしたコントロールｍＡｂ（影領域）の染色プロフェイルを示す。（Ｃ）９日目に、ＣＭＶｐｐ６５_341-349ペプチドに反応性のＴ細胞の数をＥＬＩＳＰＯＴアッセイにより分析した結果を示す。ＨＩＶペプチドをコントロールペプチドとして用いた。刺激培養前のＴ細胞の結果も示す（Ｄａｙ ０）。（Ｄ）９日目に、Ｔ細胞を回収し、抗ＣＤ８ ｍＡｂ及びＨＬＡ−Ａ＊２４：０２／ＣＭＶｐｐ６５_341-349複合体のｔｅｔｒａｍｅｒで染色した結果を示す。図中の数は、ＨＬＡ−ペプチド複合体のｔｅｔｒａｍｅｒで染色されたＣＤ８⁺Ｔ細胞のパーセンテージを示している（Ｄａｙ ９：右図）。刺激培養前のＴ細胞の結果も示す（Ｄａｙ ０：左図）。（Ｅ）９日目のＣＤ８⁺Ｔ細胞を生産するＩＦＮ−γの数をＥＬＩＳＰＯＴアッセイにより分析した結果である。刺激培養前のＴ細胞の結果も示す（Ｄａｙ ０）。

【図11】ＭＡＲＴ１／Ｍｅｌａｎ−Ａ提示ＣＤ１４−ＭＬ−ＤＣｓの作製の結果である。（Ａ）ＣＤ１４−ＭＬ／ＭＡＲＴ１によるＭＡＲＴ１の発現をフローサイトメトリー分析した結果である。特定のｍＡｂ（太線で示す）とアイソタイプがマッチしたコントロールｍＡｂ（影領域）の染色プロファイルを示す。（Ｂ）ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１ポジティブな健常者ドナーから得られたＣＤ８⁺Ｔ細胞を同一ドナー由来のＣＤ１４−ＭＬ−ＤＣ−ＭＡＲＴ１と共培養し、２１日目に、ＭＡＲＴ１_26-35に反応するＣＤ８⁺Ｔ細胞の頻度をＥＬＩＳＰＯＴアッセイにより分析した結果である。ＨＩＶペプチドをコントロールペプチドとして用いた。刺激培養前のＴ細胞の結果も示す（Ｄａｙ ０）。（Ｃ）２１日目に、抗ＣＤ８ ｍＡｂ及びＨＬＡ−Ａ＊０２：０１／ＭＡＲＴ１_26-35 ｄｅｘｔｒａｍｅｒで染色した結果を示す。図中の数は、ＨＬＡ−ペプチド複合体のｄｅｘｔｒａｍｅｒで染色されたＣＤ８⁺Ｔ細胞のパーセンテージを示している（Ｄａｙ ２１：右図）。刺激培養前のＴ細胞の結果も示す（Ｄａｙ ０：左図）。（Ｄ）ＭＡＲＴ１に反応性のＣＤ８⁺Ｔ細胞の頻度を、刺激物質としてＣＤ１４−ＭＬ−ＤＣ及びＣＤ１４−ＭＬ−ＤＣ／ＭＡＲＴ１を用いてＥＬＩＳＰＯＴアッセイにより分析した結果である。刺激培養前のＴ細胞の結果も示す（Ｄａｙ ０）。