特許 6906105 ＲＯＣＫを阻害する化合物及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6906105

(24)【登録日】2021年6月30日

(45)【発行日】2021年7月21日

(54)【発明の名称】ＲＯＣＫを阻害する化合物及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07D 217/02 20060101AFI20210708BHJP

   A61P 27/06 20060101ALI20210708BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20210708BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20210708BHJP

   A61K 31/4725 20060101ALI20210708BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20210708BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20210708BHJP

   C07D 409/12 20060101ALI20210708BHJP

   C07D 401/12 20060101ALI20210708BHJP

   A61K 31/472 20060101ALI20210708BHJP

【ＦＩ】

   C07D217/02

   A61P27/06

   A61P27/02

   A61P43/00 111

   A61K31/4725

   A61P25/00

   A61P21/00

   C07D409/12

   C07D401/12

   A61K31/472

【請求項の数】5

【全頁数】35

(21)【出願番号】特願2020-519170(P2020-519170)

(86)(22)【出願日】2018年6月13日

(65)【公表番号】特表2020-524708(P2020-524708A)

(43)【公表日】2020年8月20日

(86)【国際出願番号】CN2018091161

(87)【国際公開番号】WO2018228452

(87)【国際公開日】20181220

【審査請求日】2020年1月9日

(31)【優先権主張番号】201710459241.6

(32)【優先日】2017年6月16日

(33)【優先権主張国】CN

(73)【特許権者】

【識別番号】519448016

【氏名又は名称】成都先導薬物開発股▲ふん▼有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＨＩＴＧＥＮ ＬＴＤ．

(74)【代理人】

【識別番号】110001139

【氏名又は名称】ＳＫ特許業務法人

(74)【代理人】

【識別番号】100130328

【弁理士】

【氏名又は名称】奥野 彰彦

(74)【代理人】

【識別番号】100130672

【弁理士】

【氏名又は名称】伊藤 寛之

(72)【発明者】

【氏名】李進

(72)【発明者】

【氏名】張登友

(72)【発明者】

【氏名】馮静超

(72)【発明者】

【氏名】廖偉

(72)【発明者】

【氏名】林麗

(72)【発明者】

【氏名】李偲

(72)【発明者】

【氏名】陳偉

【審査官】 前田 憲彦

(56)【参考文献】

【文献】 特開２０１４−０７６９４８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００７−５２０５４３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１５−５２６５１９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，２０１１年，21(18)，p.5191-5196

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ ２１７／００

Ａ６１Ｋ ３１／００

Ｃ０７Ｄ ４０１／００

Ｃ０７Ｄ ４０９／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

以下の構造式で表され、ＲＯＣＫを阻害する化合物。

【請求項2】

請求項１の化合物を含む、ＲＯＣＫ活性異常に関連する疾患の治療薬。

【請求項3】

前記ＲＯＣＫ活性異常に関連する疾患は、細胞骨格調整、平滑筋細胞収縮、神経再生に関連する疾患であることを特徴とする、請求項２に記載の治療薬。

【請求項4】

前記疾患は、高眼圧症又は緑内障であることを特徴とする、請求項３に記載の治療薬。

【請求項5】

請求項１に記載の化合物を活性成分とし、薬学的に許容される補助材料を含んでなる製剤であることを特徴とする医薬品。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、薬物合成分野に属し、具体的には、ＲＯＣＫを阻害する化合物及びＲＯＣＫ
に関連する疾患の治療における当該化合物の使用に関する。

【背景技術】

【0002】

Ｒｈｏは、低分子モノマーＧＴＰａｓｅスーパーファミリーに属し、Ｒａｓスーパーフ
ァミリーの哺乳動物遺伝子ホモログであり、その下流の最も主なエフェクター分子Ｒｈｏ
キナーゼ（Ｒｈｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｃｏｉｌｅｄ−ｃｏｉｌ ｃｏｎｔａｉｎｉ
ｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ，ＲＯＣＫ）により細胞アクチン骨格の組換えを調
節することにより、細胞有糸分裂、細胞骨格調整、平滑筋細胞収縮、神経再生、腫瘍細胞
浸潤、アポトーシスの調節などの一連の生物学的過程に関与する。Ｒｈｏ／ＲＯＣＫが活
性化された後、多種の基質に作用することで生物学的過程が発生することができる。最も
主な２種類の基質はミオシン軽鎖（ＭＬＣ）及びミオシン軽鎖ホスファターゼ（ＭＬＣＰ
）であり、ＭＬＣのリン酸化レベルは、平滑筋収縮の程度を決定する重要な因子である。
ミオシン軽鎖キナーゼ（ＭＬＣＫ）は、ＭＬＣのＳｅｒ−１９位をリン酸化して平滑筋を
収縮させ、ＭＬＣＰの阻害は、ＭＬＣのリン酸化及び平滑筋の収縮をさらに増強させる。
ＲＯＣＫが活性化された後、それ自体はＭＬＣをリン酸化することで筋フィラメント収縮
作用が発生するとともに、ＭＬＣＰをリン酸化してＭＬＣＰを不活性化させることで、細
胞質内のＭＬＣのリン酸化程度が高くなり、筋フィラメント収縮が間接促進される。

【0003】

動物モデルにおいて、Ｒｈｏキナーゼ活性の阻害はヒト疾患治療の多くのメリットを示
している。前記疾患は、肺高血圧、高血圧、アテローム性動脈硬化、心臓肥大、高眼圧、
脳虚血、脳血管攣縮などの心血管疾患、及びニューロン変性などの中枢神経系障害を含む
。研究から分かるように、ＲＯＣＫ発現及び活性は、自然発症高血圧ラットには高くなり
、これは、これらの動物の高血圧の発症に関連することを示している（Ｉｎｖｏｌｖｅｍ
ｅｎｔ ｏｆ Ｒｈｏ−ｋｉｎａｓｅ ｉｎ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ ｖａｓｃｕｌ
ａｒ ｄｉｓｅａｓｅ：ａ ｎｏｖｅｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ ｉｎ
ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ［Ｊ］． ＦＡＳＥＢ Ｊ．，２００１，１５（６）：１０
６２−４）。ＲＯＣＫ阻害剤Ｙ−２７６３２は、３種類のラット高血圧モデル（自然発症
高血圧、腎性高血圧、酢酸デオキシコルチコステロン型高血圧）の血圧を顕著に下げるこ
とができるが、対照ラットに対する高血圧作用が小さい（Ｃａｌｃｉｕｍ ｓｅｎｓｉｔ
ｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ａ Ｒ
ｈｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｉｎ ｈｙｐｅｒｔｅｎ
ｓｉｏｎ［Ｊ］． Ｎａｔｕｒｅ，１９９７，３８９（６６５４）：９９０−４）。ＲＯ
ＣＫ阻害剤が肺高血圧に対して良好な作用を有することを証明する研究もある（Ａｃｕｔ
ｅ ｖａｓｏｄｉｌａｔｏｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａ Ｒｈｏ−ｋｉｎａｓｅ ｉｎ
ｈｉｂｉｔｏｒ，ｆａｓｕｄｉｌ，ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｅｖｅｒｅ
ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ［Ｊ］． Ｈｅａｒｔ，２００５：９１
（３）：３９１−２）。

【0004】

現在開発されたＲＯＣＫ阻害剤は、以下の５種類に大別される。（１）イソキノリン類
：このような化合物の構造は、１つのイソキノリン構造及びピペラジン環を有し、両者が
スルホニルを介して結合されることを特徴とする。代表的なものは、ファスジル（Ｕｅｈ
ａｔａ Ｍ，Ｉｓｈｉｚａｋｉ Ｔ，Ｓａｔｏｈ Ｈ，ｅｔ ａｌ． Ｃａｌｃｉｕｍ
ｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｍｅｄｉａｔｅｄ
ｂｙ ａ Ｒｈｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｉｎ ｈｙ
ｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ［Ｊ］． Ｎａｔｕｒｅ，１９９７，３８９：９９０−９９４）、
Ｈ−１１５２Ｐ（Ｔａｍｕｒａ Ｍ，Ｎａｋａｏ Ｈ，Ｙｏｓｈｉｚａｋｉ Ｈ，ｅｔ
ａｌ． Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｒｈｏ−ｋｉｎａｓｅ ｉ
ｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ
［Ｊ］． Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ，２００５，１７５４：２４５−
２５２）である。（２）４−アミノピリジン類：このような化合物の構造は、除４アミノ
ピリジンの母核以外、分子の中心位置にシクロヘキサン又はベンゼン環を含む構造があり
、シクロヘキサンの４位に側鎖構造を有する。代表的なものは、Ｙ−３０１４１（Ｔａｋ
ａｍｉ Ａ，Ｉｗａｋｕｂｏ Ｍ，Ｏｋａｄａ Ｙ，ｅｔ ａｌ． Ｄｅｓｉｇｎ ａｎ
ｄ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｒｈｏ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ［Ｊ］．
Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，２００４，１２：２１１５−２１３７）である。（
３）インダゾール類：このような化合物は、５−アミノ又は５−アルコキシ−１Ｈインダ
ゾールを骨格とする。（４）アミドと尿素類：このような化合物は、１つのフタルイミド
と１つのウレイド基とからなる構造を有する。（５）その他：前記構造を含まない他のＲ
ＯＣＫ阻害剤の代表的なものは、Ｒｏｃｋｏｕｔ（Ｙａｒｒｏｗ ＪＣ，Ｔｏｔｓｕｋａ
ｗａｇ，Ｃｈａｒｒａｓ ＧＴ，ｅｔ ａｌ． Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｆｏｒ ｃｅｌｌ
ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｖｉａ ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｍｉｃｒ
ｏｓｃｏｐｙ ｒｅｖｅａｌｓ ａ Ｒｈｏ−ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ［Ｊ］
． Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ，２００５，１２：３８５−３９５）である。

【0005】

現在市販されているＲＯＣＫ阻害剤薬物には、Ａｓａｈｉ Ｋａｓｅｉ社のＥｒｉｌ（
脳血管攣縮に適する）及びＫｏｗａ社のＧｌａｎａｔｅｃ（登録商標）（Ｋ−１１５）（
高眼圧症及び緑内障の治療に適する）がある。Ｇｌａｎａｔｅｃ（登録商標）は日本のみ
で市販されている。従って、ＲＯＣＫに作用する標的小分子薬を研究開発することで、よ
り有効で、選択性がより高く、作用時間がより長く、安定性がより高く、毒性及び副作用
がよく低く、より経済的なＲＯＣＫ阻害剤を得ることは、非常に重要な社会的および経済
的意義を有する。

【発明の概要】

【0006】

本発明は、式（Ｉ）で表される化合物又はその立体異性体を提供する。

ここで、ｎはそれぞれ０、１又は２であり、
Ｒ^１はそれぞれ独立して水素、ヒドロキシル基、ハロゲン、アミノ基、カルボキシル基
、トリフルオロメチル基、ニトロ基、シアノ基、Ｃ_１〜６アルキル基からなる群より選択
され、
ｍはそれぞれ０、１、２、３、４又は５であり、
Ｒ^３は−ＮＲ^２Ｒ^２’、Ｎ含有複素環アルキル基からなる群より選択され、Ｎ含有複素
環アルキル基は、さらに独立してハロゲン、Ｃ_１〜６アルキル基からなる群より選択され
る１〜２個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^２、Ｒ^２’はそれぞれ独立して水素、Ｃ_１〜６アルキル基からなる群より選択され、
Ａ環は５〜６員芳香環、５〜６員芳香族複素環又は

からなる群より選択され、
Ｂ環、Ｃ環はそれぞれ独立して５〜６員芳香環、５〜６員芳香族複素環からなる群より
選択され、
Ｒ^４はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、Ｃ_１〜６アルキル基、
Ｃ_２〜６アルケニル基、Ｃ_２〜６アルキニル基、３〜６員シクロアルキル基、３〜６員ヘ
テロシクロアルキル基、−（ＣＨ_２）_ｍＯＲ^ａ、−（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（Ｏ）Ｒ^ａ、−（Ｃ
Ｈ_２）_ｍＯＣ（Ｏ）ＮＲ^ａＲ^ｂ、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^ａＲ^ｂ、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^ａＣ（
Ｏ）Ｒ^ｂ、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^ａＣ（Ｏ）ＯＲ^ｂ、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｏ）Ｒ^ａ、−（Ｃ
Ｈ_２）_ｍＣ（Ｏ）ＯＲ^ａ、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｏ）ＮＲ^ａＲ^ｂからなる群より選択され、
Ｒ^ａ、Ｒ^ｂはそれぞれ独立して水素、Ｃ_１〜６アルキル基、Ｃ_２〜６アルケニル基、Ｃ
_２〜６アルキニル基、３〜６員シクロアルキル基、３〜６員ヘテロシクロアルキル基、５
〜６員芳香環、５〜６員芳香族複素環からなる群より選択され、３〜６員シクロアルキル
基、３〜６員ヘテロシクロアルキル基、５〜６員芳香環、５〜６員芳香族複素環は、さら
に独立してハロゲン、Ｃ_１〜６アルキル基からなる群より選択される１〜２個の置換基で
置換されていてもよい。

【0007】

好ましくは、前記Ｎ含有複素環アルキル基は、４〜５員のＮ含有複素環アルキル基であ
る。
さらに、Ｒ^３がＮ含有複素環アルキル基であり、かつＡ環に２つのＲ^４がある場合、２
つのＲ^４は同時にハロゲンではない。

【0008】

本発明は、構造が式（ＩＩ）で表される化合物又はその立体異性体をさらに提供する。

ここで、Ｒ^１は水素、ヒドロキシル基、ハロゲン、アミノ基、カルボキシル基、トリフ
ルオロメチル基、ニトロ基、シアノ基、Ｃ_１〜６アルキル基からなる群より選択され、
ｍはそれぞれ０、１、２又は３であり、
Ｒ^２、Ｒ^２’はそれぞれ独立して水素、Ｃ_１〜６アルキル基からなる群より選択され、
Ａ環は５〜６員芳香環、５〜６員芳香族複素環又は

からなる群より選択され、
Ｂ環、Ｃ環はそれぞれ独立して５〜６員芳香環、５〜６員芳香族複素環からなる群より
選択され、
Ｒ^４はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、Ｃ_１〜６アルキル基、
Ｃ_２〜６アルケニル基、Ｃ_２〜６アルキニル基、３〜６員シクロアルキル基、３〜６員ヘ
テロシクロアルキル基、−（ＣＨ_２）_ｍＯＲ^ａ、−（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（Ｏ）Ｒ^ａ、−（Ｃ
Ｈ_２）_ｍＮＲ^ａＲ^ｂ、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^ａＣ（Ｏ）Ｒ^ｂ、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｏ）Ｒ^ａ
、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｏ）ＯＲ^ａ、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｏ）ＮＲ^ａＲ^ｂ；からなる群より
選択され、
Ｒ^ａ、Ｒ^ｂはそれぞれ独立して水素、Ｃ_１〜６アルキル基、Ｃ_２〜６アルケニル基、Ｃ
_２〜６アルキニル基、３〜６員シクロアルキル基、３〜６員ヘテロシクロアルキル基、５
〜６員芳香環、５〜６員芳香族複素環からなる群より選択され、前記３〜６員シクロアル
キル基、３〜６員ヘテロシクロアルキル基、５〜６員芳香環、５〜６員芳香族複素環は、
さらに独立してハロゲン、Ｃ_１〜６アルキル基からなる群より選択される１〜２個の置換
基で置換されていてもよい。

【0009】

好ましくは、式（ＩＩ）の化合物は以下の構造式で表される。

【0010】

本発明は、構造が式（ＩＩＩ）で表される化合物又はその立体異性体をさらに提供する
。

ここで、Ｒ^１は水素、ヒドロキシル基、ハロゲン、アミノ基、カルボキシル基、トリフ
ルオロメチル基、ニトロ基、シアノ基、Ｃ_１〜６アルキル基からなる群より選択され、
ｍはそれぞれ０、１、２又は３であり、
Ａ環は５〜６員芳香環、５〜６員芳香族複素環又は

からなる群より選択され、
Ｂ環、Ｃ環はそれぞれ独立して５〜６員芳香環、５〜６員芳香族複素環からなる群より
選択され、
Ｅ環はＮ含有複素環アルキル基からなる群より選択され、前記Ｎ含有複素環アルキル基
は、さらに独立してハロゲン、Ｃ_１〜６アルキル基からなる群より選択される１〜２個の
置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^４はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、Ｃ_１〜６アルキル基、
Ｃ_２〜６アルケニル基、Ｃ_２〜６アルキニル基、３〜６員シクロアルキル基、３〜６員ヘ
テロシクロアルキル基、−（ＣＨ_２）_ｍＯＲ^ａ、−（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（Ｏ）Ｒ^ａ、−（Ｃ
Ｈ_２）_ｍＮＲ^ａＲ^ｂ、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^ａＣ（Ｏ）Ｒ^ｂ、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｏ）Ｒ^ａ
、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｏ）ＯＲ^ａ、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｏ）ＮＲ^ａＲ^ｂからなる群より選
択され、
Ｒ^ａ、Ｒ^ｂはそれぞれ独立して水素、Ｃ_１〜６アルキル基、Ｃ_２〜６アルケニル基、Ｃ
_２〜６アルキニル基、３〜６員シクロアルキル基、３〜６員ヘテロシクロアルキル基、５
〜６員芳香環、５〜６員芳香族複素環からなる群より選択され、前記３〜６員シクロアル
キル基、３〜６員ヘテロシクロアルキル基、５〜６員芳香環、５〜６員芳香族複素環は、
さらに独立してハロゲン、Ｃ_１〜６アルキル基からなる群より選択される１〜２個の置換
基で置換されていてもよい。

【0011】

好ましくは、Ｅ環は、４〜５員のＮ含有複素環アルキル基からなる群より選択される。

【0012】

より好ましくは、式（ＩＩＩ）の化合物は以下の構造式で表される。

【0013】

本発明の他の態様では、ＲＯＣＫ活性異常に関連する疾患の治療薬の製造における、前
記化合物、その立体異性体、結晶形、薬学的に許容される塩、水和物又は溶媒和物の使用
をさらに提供する。

【0014】

さらに、前記ＲＯＣＫ活性異常に関連する疾患は、細胞骨格調整、平滑筋細胞収縮、神
経再生に関連する疾患である。

【0015】

さらに、前記疾患は高眼圧症又は緑内障である。

【0016】

本発明の他の態様では、前記化合物、その立体異性体、結晶形、薬学的に許容される塩
、水和物又は溶媒和物を活性成分とし、薬学的に許容される補助材料を含んでなる製剤で
ある薬物を提供する。

【0017】

本発明に係る化合物および誘導体は、ＩＵＰＡＣ（国際純正・応用化学連合）またはＣ
ＡＳ（ケミカルアブストラクトサービス、Ｃｏｌｕｍｂｕｓ、ＯＨ）命名システムに基づ
いて命名できる。

【0018】

本発明に使用されている用語の定義について、特に断らない限り、本明細書において、
基または用語による最初の定義は明細書を通じて記載された該基または用語に適用でき、
本明細書において具体的に定義されていない用語の場合、開示内容および文脈から、当業
者が理解できる定義とされる。

【0019】

「置換」とは、分子中の水素原子がほかの異なる原子または分子により置換されること
を意味する。

【0020】

炭化水素基において炭素原子の含有量の最小値と最大値が接頭辞により示され、たとえ
ば、接頭辞Ｃ_ａ〜Ｃ_ｂアルキル基とは、「ａ」〜「ｂ」個におけるいずれかの炭素原子を
有するアルキル基である。従って、たとえば、Ｃ_１〜Ｃ_４アルキル基は１〜４個の炭素原
子を含むアルキル基である。

【0021】

本発明のアルケニル基は１つ又は複数の炭素−炭素二重結合を含んでもよい。本発明の
アルキニル基は１つ又は複数の炭素−炭素三重結合を含んでもよい。

【0022】

本発明のＣ_ａ〜_ｂアルコキシ基、Ｃ_ａ〜_ｂアルキルエステル、Ｃ_ａ〜_ｂアルキルアミノ
基、Ｃ_ａ〜_ｂアシル基は、それぞれ「ａ」〜「ｂ」個の炭素原子を含むアルキル基が対応
する酸素原子、エステル基、アミノ基、アシル基に結合して得られた基を指す。

【0023】

本発明の立体異性体は、エナンチオマー及びジアステレオマーを含む。

【0024】

本発明のハロゲンは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子などを含む。

【0025】

本発明のヘテロ原子は、窒素原子、酸素原子、硫黄原子などを含む。

【0026】

本発明のシクロアルキル基は、非芳香族環状炭化水素基を指し、飽和シクロアルキル基
及び部分飽和シクロアルキル基を含む。

【0027】

本発明のヘテロシクロアルキル基は、環にヘテロ原子を含む非芳香族シクロアルキル基
を指し、飽和ヘテロシクロアルキル基及び部分飽和ヘテロシクロアルキル基を含む。

【0028】

本発明の芳香環は、芳香性を有する環状炭化水素基を指す。

【0029】

本発明の芳香族複素環は、ヘテロ原子を含む芳香環を指す。

【0030】

用語「薬学的に許容可能な」とは、担体、送達物、希釈剤、補助材料および／または形
成される塩が通常ある薬物剤型を化学的または物理的に構成するほかの成分と適合性を有
するとともに、生理学的に被投与者と適合性を有することを意味する。

【0031】

用語「塩」および「薬学的に許容される塩」とは、上記化合物またはその立体異性体と
、無機および／または有機酸および塩基とが形成する酸性塩および／または塩基性塩を意
味し、両性イオン性塩（分子内塩）をも含み、さらに第四級アンモニウム塩、たとえば、
アルキルアンモニウム塩を含む。これら塩は、化合物の最後の分離・精製において直接得
られ得る。また、上記化合物、またはその立体異性体を、所定量の酸または塩基と適切に
（たとえば、等当量）混合して製造してもよい。これら塩は、溶液において沈殿を形成し
て濾過方法により収集するか、または溶媒蒸発後に回収されるか、または水媒体において
反応させた後に凍結乾燥させて製造される。本発明では、前記塩は、化合物の塩酸塩、硫
酸塩、クエン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、臭化水素酸塩、フッ化水素酸塩、リン酸塩、
酢酸塩、プロピオン酸塩、ブタン二酸塩、蓚酸塩、リンゴ酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩
、マレイン酸塩、酒石酸塩またはトリフルオロ酢酸塩であってもよい。

【0032】

いくつかの実施形態では、本発明の１種または複数種の化合物を併用してもよい。本発
明の化合物と任意の活性試薬を組み合わせて、細胞機能の制御または疾患治療用の薬物ま
たは薬物組成物を製造してもよい。１群の化合物を使用する場合、これら化合物は、同時
に、それぞれまたは順に被検体に投与できる。

【0033】

勿論、本発明の上記内容に基づいて、当分野の一般的な技術知識や慣用手段により、本
発明の上記技術的構想を逸脱することなく、ほかの複数種の形態の修正、置換または変更
を行ってもよい。

【0034】

以下、実施例を用いた実施形態にて、本発明の上記内容についてさらに詳細に説明する
。しかしながら、本発明の上記主題の範囲は以下の実例に制限されるものではない。本発
明の上記内容に基づいて実現される技術である限り、本発明の範囲に属する。

【図面の簡単な説明】

【0035】

【図1】正常眼圧のニュージーランド白ウサギに対するＫ１１５の眼圧降下活性の実験結果である。

【図2】正常眼圧のニュージーランド白ウサギに対する化合物５の眼圧降下活性の実験結果である。

【図3】正常眼圧のニュージーランド白ウサギに対する化合物１１ａの眼圧降下活性の実験結果である。

【図4】高眼圧のニュージーランド白ウサギに対する化合物１１ａの眼圧降下活性の実験結果である。

【発明を実施するための形態】

【0036】

化合物の構造は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）及び質量分析（ＭＳ）により確定される。ＮＭ
Ｒシフト（δ）は、１０^−６（ｐｐｍ）を単位とする。ＮＭＲの測定は、（Ｂｒｕｋｅｒ
ＡｖａｎｃｅＩＩＩ ４００及びＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ３００）ＮＭＲ測定器
を使用し、測定溶媒は、重水素化ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ−ｄ６）、重水素化ク
ロロホルム（ＣＤＣｌ_３）、重水素化メタノール（ＭｅＯＤ）であり、内部標準物質は、
テトラメチルシラン（ＴＭＳ）である。

【0037】

ＬＣ−ＭＳの測定は、島津製液体クロマトグラフ質量分析計（Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＬＣ
−ＭＳ ２０２０（ＥＳＩ））を使用する。

【0038】

ＨＰＬＣの測定は、島津製高圧液体クロマトグラフィー（Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＬＣ−２
０Ａ）を使用する。

【0039】

ＭＰＬＣ（中圧分取クロマトグラフィー）は、Ｇｉｌｓｏｎ ＧＸ−２８１ 逆相分取
クロマトグラフィーを使用する。

【0040】

カラムクロマトグラフィーは、一般に煙台黄海シリカゲルの２００〜３００メッシュの
シリカゲルを担体として使用する。

【0041】

薄層クロマトグラフィーシリカゲルプレートは、煙台黄海ＨＳＧＦ２５４又は青島ＧＦ
２５４シリカゲルプレートを使用し、薄層クロマトグラフィーにより０．４ｍｍ〜０．５
ｍｍで製品を分離精製する。

【0042】

本発明の実施形態で使用される原料、設備はいずれも既知製品であり、市販品を購入す
ることにより入手することができる。既知の出発原料は、等分野で知られている方法によ
り合成されてもよく、安耐吉化学、成都科龍化工、韶遠化学科技、百霊威科技などの会社
から購入してもよい。

【0043】

室温（２０℃〜３０℃）は、最適な反応温度である。実施例において、特に断りのない
限り、Ｍは、モル／リットル、溶液は、水溶液である。

【0044】

略称の説明
ＤＣＭ：ジクロロメタン；ＥＡ、ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル；ＰＥ：石油エーテル；ＴＨ
Ｆ：テトラヒドロフラン；ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド；ＤＩＥＡ：ジイソプ
ロピルエチルアミン；ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン；ＥＤＣＩ：１−エチル−
（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩；ＨＯＢＴ：１−ヒドロキシベン
ゾトリアゾール；ＨＢＴＵ：ヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ´，
Ｎ´−テトラメチルウロニウム；Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２：［１，１´−ビス（ジフェニ
ルホスフィノ）フェロセン］ 二塩化パラジウム。

【0045】

実施例１：Ｎ−（３−アミノ−１−フェニルプロピル）イソキノリン−６−ホルムアミ
ドの製造

【0046】

ステップ１：（Ｓ）−Ｎ−フェニルメチレン−２−メチルプロパン−２−スルホンアミ
ド

室温でベンズアルデヒド（３０．０ｇ，２８３ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１５
０ｍＬ）溶液にｔｅｒｔ−ブチルスルフィンアミド（５１．４ｇ，４２４ｍｍｏｌ）及び
チタン酸テトライソプロピル（１００ｇ，３５３ｍｍｏｌ）を加え、６０℃で４時間撹拌
した後、水を加えて濾過し、酢酸エチルで抽出し、その後、水相を酢酸エチルで２回抽出
し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。カラムクロ
マトグラフィーにより精製したところ、（Ｓ）−Ｎ−フェニルメチレン−２−メチルプロ
パン−２−スルホンアミド（５４ｇ，２３２ｍｍｏｌ，収率８２％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２１０（Ｍ＋１）^＋。

【0047】

ステップ２：（Ｓ）−２−メチル−Ｎ−（２−ニトロ−１−フェネチル）−プロパン−
２−スルフィンアミドの製造

（Ｓ）−Ｎ−フェニルメチレン−２−メチルプロパン−２−スルホンアミド（４８．０ｇ
，２２９ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（５００ｍＬ）に溶解し、窒素ガスの保護下、
０℃でカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（３８．５ｇ，３４４ｍｍｏｌ）を加え、反応液を
１時間撹拌した後、ニトロメタン（１４０ｇ，２．２９ｍｏｌ）を加え、室温で２４時間
撹拌した。反応液を酢酸エチル及び水で抽出し、さらに水相を酢酸エチルで２回抽出し、
有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。カラムクロマト
グラフィーにより精製したところ、（Ｓ）−２−メチル−Ｎ−（２−ニトロ−１−フェネ
チル）−プロパン−２−スルフィンアミド（１８ｇ，６６．６ｍｍｏｌ，収率２９％）を
得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２７１（Ｍ＋１）^＋。

【0048】

ステップ３：（Ｓ）−２−メチル−Ｎ−（２−アミノ−１−フェネチル）−プロパン−
２−スルフィンアミドの製造

（Ｓ）−２−メチル−Ｎ−（２−ニトロ−１−フェネチル）−プロパン−２−スルフィン
アミド（８．００ｇ，２９．６ｍｍｏｌ） をメタノール（５０．０ｍＬ）に溶解し、ラ
ネーニッケル（８００ｍｇ，１０％）を加え、室温で２４時間撹拌した。反応液を珪藻土
により濾過し、溶媒を減圧留去し、（Ｓ）−２−メチル−Ｎ−（２−アミノ−１−フェネ
チル）−プロパン−２−スルフィンアミド（６．００ｇ，２１．５ｍｍｏｌ，収率８６％
）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２４１（Ｍ＋１）^＋。

【0049】

ステップ４：ベンジル−Ｎ−（（（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィンアミド）−２−
フェネチル）カルバメートの製造

（Ｓ）−２−メチル−Ｎ−（２−アミノ−１−フェネチル）−プロパン−２−スルフィン
アミド（７．００ｇ，２９．１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（７０．０ｍＬ）に溶解
し、トリエチルアミン（１１．８ｇ，１１６ｍｍｏｌ）及びベンジルオキシカルボニルオ
キシスクシンイミド（８．７０ｇ，３４．９ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した後、酢酸
エチル及び水で抽出し、さらに水相を酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせ、無水硫
酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィーにより精製し
たところ、ベンジル−Ｎ−（（（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィンアミド）−２−フェ
ネチル）カルバメート（６．０２ｇ，１２．８ｍｍｏｌ，収率４４％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３７５（Ｍ＋１）^＋。

【0050】

ステップ５．ベンジル−Ｎ−（２−アミノ−２−フェニル−エチル）カルバメートの製
造

ベンジル−Ｎ−（（（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィンアミド）−２−フェネチル）
カルバメート（５．００ｇ，１３．４ｍｍｏｌ）をメタノール（１０．０ｍＬ）に溶解し
、１，４−ジオキサンの塩酸溶液（４０．０ｍＬ，５ｍｏｌ／Ｌ）を加え、１時間撹拌し
た後、溶媒を減圧留去し、ベンジル−Ｎ−（２−アミノ−２−フェニル−エチル）カルバ
メート（３．０１ｇ，１０．２ｍｍｏｌ，収率７６％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２７１（Ｍ＋１）^＋。

【0051】

ステップ６．ベンジル−Ｎ−（（２Ｓ）−２−（イソキノリン−６−ホルムアミド）−
２−フェニル−エチル）カルバメートの製造

ベンジル−Ｎ−（２−アミノ−２−フェニル−エチル）カルバメート（２．００ｇ，７
．４０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０．０ｍＬ）に溶解し、ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ
´，Ｎ´−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（２．０７ｇ，８．１４
ｍｍｏｌ）、イソキノリン−６−ギ酸（１．２８ｇ，７．４０ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジ
イソプロピルエチルアミン（３．３８ｇ，２９．６ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した後
、酢酸エチル及び水で抽出し、さらに水相を酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせ、
無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィーにより
精製したところ、ベンジル−Ｎ−（（２Ｓ）−２−（イソキノリン−６−ホルムアミド）
−２−フェニル−エチル）カルバメート（２．０１ｇ，４．２４ｍｍｏｌ，収率５７％）
を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４２６（Ｍ＋１）^＋。

【0052】

ステップ７．Ｎ−（（Ｓ）−２アミノ−１フェニル−エチル）イソキノリン−６−ホル
ムアミドの製造

ベンジル−Ｎ−（（Ｓ）−２−（イソキノリン−６−ホルムアミド）−２−フェニル−
エチル）カルバメート（３００ｍｇ，０．７１ｍｍｏｌ）を酢酸（５．００ｍＬ）に溶解
し、臭化水素酢酸溶液（２．５０ｍＬ，３３％）を加え、１時間撹拌した後、溶媒を減圧
留去し、Ｎ−（（Ｓ）−２アミノ−１フェニル−エチル）イソキノリン−６−ホルムアミ
ド（１８０ｍｇ，５４０μｍｏｌ，収率７６％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２９２（Ｍ＋１）^＋。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ＝９．７８−９．８４（ｍ，２Ｈ
），８．９４（ｓ，１Ｈ），８．７３−８．７４（ｄ，Ｊ＝４，１Ｈ），８．５２−８．
５４（ｄ，Ｊ＝８ Ｈｚ，１Ｈ），８．３９−８．４６（ｍ，４Ｈ），７．５０−７．５
２（ｄ，Ｊ＝８，２Ｈ），７．３２−７．４２（ｍ，３Ｈ），５．４１−５．４６（ｍ，
１Ｈ），３．４４−３．４９（ｍ，１Ｈ），３．１７−３．２４（ｍ，１Ｈ）。

【0053】

実施例２：（Ｓ）−Ｎ−（３−アミノ−１−（３−ブロモフェニル）プロピル）イソキ
ノリン−６−ホルムアミドの製造

実施例１のステップ１のベンズアルデヒドを３−ブロモベンズアルデヒドに変更する以
外、実施例１のステップ１からステップ７の方法と同様にして、（Ｓ）−Ｎ−（３−ブロ
モフェニルメチレン）−２−メチル−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィンアミドを得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３７０，３７２（Ｍ＋１）^＋。
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝９．９１（ｓ，１Ｈ），８．９６（ｓ，
１Ｈ），８．６５−８．７１（ｍ，３Ｈ），８．４９−８．５２（Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ）
，７．７８（ｔ，Ｊ＝７．２ Ｈｚ，１Ｈ），７．５４−７．５７（ｍ，２Ｈ），７．３
６−７．４２（ｍ，１Ｈ），３．６４−３．７５（ｍ，１Ｈ），１．８７−１．８１（ｍ
，２Ｈ）。

【0054】

実施例３：（Ｓ）−Ｎ−（２−アミノ−１−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）エ
チル）イソキノリン−６−ホルムアミドの製造
ステップ１：（Ｓ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）イミン）メチル）安
息香酸イソプロピルの製造

室温で（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィンアミド（８３．１ｇ，６８５ｍｍｏｌ）の
ＴＨＦ（５０．０ｍＬ）溶液に４−ホルミル安息香酸メチル（５０．０ｇ，３０５ｍｍｏ
ｌ）及びテトライソプロピルチタン（１０８ｇ，３８１ｍｍｏｌ）を加え、２時間還流撹
拌した。反応液が冷却した後、水（２００ｍＬ）で反応を停止させ、白色固体を濾去した
。濾液を二層に分離し、水相を酢酸エチルで抽出した（２００ｍＬ×１）。有機相を合わ
せ、順に飽和食塩水（３００ｍＬ×１）、水（３００ｍＬ×１）でそれぞれ１回洗浄した
後、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧蒸留して溶媒を除去した。カラム
クロマトグラフィーにより精製したところ、（Ｓ，Ｅ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルス
ルフィニル）イミン）メチル）安息香酸イソプロピル（６０ｇ，２０３ｍｍｏｌ，収率６
７％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２９６（Ｍ＋１）^＋。

【0055】

ステップ２：４−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−１，１−ジメチルエチルスルフィンアミド
）−２−ニトロエチル）安息香酸イソプロピルの製造

氷浴でニトロメタン（３１．０ｇ，６５４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４００ｍＬ）溶液にカ
リウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１１．０ｇ，９８．１ｍｍｏｌ） をバッチに加え、窒素
ガスの保護下、室温で３０分間撹拌した。氷浴で（Ｓ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルス
ルフィニル）イミン）メチル）安息香酸イソプロピル（１８．０ｇ，６５．４ｍｍｏｌ）
のＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液を滴下し、窒素ガスの保護下、室温で一晩撹拌した。反応を
水（４００ｍＬ） で停止させ、酢酸エチル（４００ｍＬ）で抽出した。有機相を順に飽
和食塩水（４００ｍＬ）で１回洗浄した後、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濾液
を減圧蒸留して溶媒を除去した。カラムクロマトグラフィーにより精製したところ、４−
（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−１，１−ジメチルエチルスルフィンアミド）−２−ニトロエチ
ル）安息香酸イソプロピル（１２ｇ，３５．７ｍｍｏｌ，収率５５％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３５７（Ｍ＋１）^＋。

【0056】

ステップ３：４−（（Ｓ）−２−アミノ−１−（（Ｓ）−１，１−ジメチルエチルスル
フィンアミド）エチル）安息香酸イソプロピルの製造

窒素ガスの保護下、室温で４−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−１，１−ジメチルエチルスル
フィンアミド）−２−ニトロエチル）安息香酸イソプロピル（１０．０ｇ，２８．１ｍｍ
ｏｌ）のメタノール（３０．０ｍＬ）溶液にラネーニッケル（１．００ｇ，１０％ｗ／ｗ
）及びトリエチルアミン（１．４２ｇ，１４．０ｍｍｏｌ）を加えた。水素ガス下、室温
で４時間撹拌した。反応液を濾過し、濾過ケーキをメタノールで洗浄し、濾液を減圧蒸留
して溶媒を除去し、４−（（Ｓ）−２−アミノ−１−（（Ｓ）−１，１−ジメチルエチル
スルフィンアミド）エチル）安息香酸イソプロピル（９．４０ｇ，２６．９ｍｍｏｌ，収
率９６％ ）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３２７（Ｍ＋１）^＋。

【0057】

ステップ４：（Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−（ヒドロキシメチル）フ
ェニル）エチル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミドの製造

窒素ガスの保護下、室温で４−（（Ｓ）−２−アミノ−１−（（Ｓ）−１，１−ジメチ
ルエチルスルフィンアミド）エチル）安息香酸イソプロピル（８．００ｇ，２４．５ｍｍ
ｏｌ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液にＬｉＢＨ_４（４．５０ｇ，２０４ｍｍｏｌ）を加え
た。窒素ガス雰囲気で１６時間還流した。氷浴において水（３００ｍＬ）で反応を停止さ
せ、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ×２）で抽出した。有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、
濾過し、濾液を減圧蒸留して溶媒を除去し、（Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−２−アミノ−１−（
４−（ヒドロキシメチル）フェニル）エチル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンア
ミド（４．６ｇ，１５．７ｍｍｏｌ，収率７７％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２７１（Ｍ＋１）^＋。

【0058】

ステップ５．（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−１，
１−ジメチルエチルスルフィンアミド）−２−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）エ
チル）カルバメートの製造

室温で（Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル
）エチル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（３．９７ｇ，１４．７ｍｍｏ
ｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）及び水（２０ｍＬ）の溶液に（９Ｈ−フルオレン−９−イル）
メチル−（２，５−ジケトピロリジン−１−イル）カーボネート（７．４４ｇ，２２．１
ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ_３（３．７０ｇ，４４．１ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１時間
撹拌した。酢酸エチル（５０ｍＬ×２） で抽出し、有機相を合わせた後、飽和食塩水（
５０ｍＬ×１）で１回洗浄し、有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濾液を減
圧蒸留して溶媒を除去し、（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−２−（（Ｓ
）−１，１−ジメチルエチルスルフィンアミド）−２−（４−（ヒドロキシメチル）フェ
ニル）エチル）カルバメート（５．００ｇ，９．７０ｍｍｏｌ，収率６６％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４９３（Ｍ＋１）^＋。

【0059】

ステップ６．（Ｓ）−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（２−アミノ−２−（４
−（ヒドロキシ）フェニル）エチル）カルバメート塩酸塩の製造

室温で（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−１，１−ジメ
チルエチルスルフィンアミド）−２−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）エチル）カ
ルバメート（２．３０ｇ，４．６７ｍｍｏｌ）のメタノール（３．０ｍＬ）溶液に飽和塩
酸ジオキサン溶液（３０ｍＬ）を加えた。室温で３０分間撹拌した。反応液を減圧蒸留し
て溶媒を除去し、（Ｓ）−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（２−アミノ−２−（
４−（ヒドロキシ）フェニル）エチル）カルバメート塩酸塩（１．９０ｇ，４．４７ｍｍ
ｏｌ，収率９６％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３８９（Ｍ＋１）^＋。

【0060】

ステップ７．（Ｓ）−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（２−（４−（ヒドロキ
シメチル）フェニル）−２−（イソキノリン−６−ホルムアミド）エチル）カルバメート
の製造

室温でイソキノリン−６−ギ酸（２９３ｍｇ，１．６９ｍｍｏｌ）及び（Ｓ）−（９Ｈ
−フルオレン−９−イル）メチル（２−アミノ−２−（４−（ヒドロキシ）フェニル）エ
チル）カルバメート塩酸塩（６００ｍｇ，１．４１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０．０ｍＬ）
溶液にＥＤＣＩ（３２５ｍｇ，１．６９ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（２２９ｍｇ，１．６９ｍ
ｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（１７．２ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２時間撹拌
した。水（３０ｍＬ）で反応を停止させ、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×２） で抽出した。有
機相を合わせ、飽和食塩水（３０ｍＬ×１）で１回洗浄し、有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で
乾燥させ、濾過し、濾液を減圧蒸留して溶媒を除去した。カラムクロマトグラフィーによ
り精製したところ、（Ｓ）−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（２−（４−（ヒド
ロキシメチル）フェニル）−２−（イソキノリン−６−ホルムアミド）エチル）カルバメ
ート（４９７ｍｇ，０．８６ｍｍｏｌ，収率６１％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５４４（Ｍ＋１）^＋。

【0061】

ステップ８．（Ｓ）−Ｎ−（２−アミノ−１−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）
エチル）イソキノリン−６−ホルムアミドの製造

室温で（Ｓ）−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（２−（４−（ヒドロキシメチ
ル）フェニル）−２−（イソキノリン−６−ホルムアミド）エチル）カルバメート（１４
０ｍｇ，０．２５８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５．０ｍＬ）溶液にピペリジン（２１９ｍｇ
，２．５８ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１時間撹拌した。反応液を減圧蒸留して溶媒を除
去し、ＭＰＬＣにより精製したところ、（Ｓ）−Ｎ−（２−アミノ−１−（４−（ヒドロ
キシメチル）フェニル）エチル）イソキノリン−６−ホルムアミド（３８．４ｍｇ，９２
．４μｍｏｌ，収率９５％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３２２（Ｍ＋１）^＋。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝９．９１（ｓ，１Ｈ），８．９０（ｄ
，Ｊ＝１６．４８ Ｈｚ，１Ｈ），８．７１（ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，１Ｈ），８．６６
（ｓ，１Ｈ），８．６４（ｓ，１Ｈ），８．４８（ｄｄ，Ｊ＝１．５２ Ｈｚ，Ｊ＝１．
６０ Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｓ，１Ｈ），７．５４（ｓ，１Ｈ），７．４７（ｓ，１
Ｈ），７．４５（ｓ，１Ｈ），５．５７（ｑ，１Ｈ），４．６７（ｑ，２Ｈ），３．６２
（ｔ，１Ｈ），３．４９（ｔ，１Ｈ）。

【0062】

実施例４：（Ｓ）−４−（２−アミノ−１−（イソキノリン−６−ホルムアミド）エチ
ル）フェニル ２，４−ジメチルベンゾエートの製造
ステップ１：（Ｓ）−４−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カ
ルボニル）アミノ）−１−（イソキノリン−６−ホルムアミド）エチル）フェニル２，４
−ジメチルベンゾエート

室温で（Ｓ）−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（２−（４−（ヒドロキシメチ
ル）フェニル）−２−（イソキノリン−６−ホルムアミド）エチル）カルバメート（１５
８ｍｇ，２８１μｍｏｌ）及び２，４−ジメチル安息香酸（５０．７ｍｇ，３２８μｍｏ
ｌ）のジクロロメタン溶液（４０．０ｍＬ）にＥＤＣＩ（７０．２ｍｇ，３６６μｍｏｌ
）及びＤＭＡＰ（３．４４ｍｇ，１２８μｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌した。溶媒を
減圧留去し、カラムクロマトグラフィーにより精製したところ、（Ｓ）−４−（２−（（
（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−１−（イソキノリ
ン−６−ホルムアミド）エチル）フェニル２，４−ジメチルベンゾエート（１５１ｍｇ，
０．２２ｍｍｏｌ，収率７７％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝６７６（Ｍ＋１）^＋。

【0063】

ステップ２：（Ｓ）−４−（２−アミノ−１−（イソキノリン−６−ホルムアミド）エ
チル）フェニル ２，４−ジメチルベンゾエートの製造

室温で（Ｓ）−４−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニ
ル）アミノ）−１−（イソキノリン−６−ホルムアミド）エチル）フェニル２，４−ジメ
チルベンゾエート（１５０ｍｇ，２２２μｍｏｌ）のＴＨＦ（１０．０ｍＬ）溶液にピペ
リジン（３７８ｍｇ，４．４４ｍｍｏｌ）を加えた。室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧留
去した後、ＭＰＬＣにより精製したところ、（Ｓ）−４−（２−アミノ−１−（イソキノ
リン−６−ホルムアミド）エチル）フェニル−２，４−ジメチルベンゾエート（３５ｍｇ
，７１．４μｍｏｌ，収率１４％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４５４（Ｍ＋１）^＋。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝９．８９（ｓ，１Ｈ），８．８８（
ｓ，１Ｈ），８．７０（ｄ，Ｊ＝６．５２ Ｈｚ，１Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝３．２４
Ｈｚ，１Ｈ），８．６３（ｓ，１Ｈ），８．４８（ｄｄ，Ｊ＝１．４８ Ｈｚ，Ｊ＝１
．５２ Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝７．９６ Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｑ，４
Ｈ），７．１２（ｓ，１Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，１Ｈ），５．５９（ｑ
，１Ｈ），５．３６（ｓ，２Ｈ），３．６３（ｑ，１Ｈ），３．５０（ｄｄ，Ｊ＝４．９
２ Ｈｚ，Ｊ＝４．５２ Ｈｚ，１Ｈ），２．５５（ｓ，３Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ）
。

【0064】

実施例５：Ｎ−（（１Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−１−フェニル−エチル）イソキ
ノリン−６−ホルムアミドの製造
ステップ１：Ｎ−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−１−フェニル−エチル）−２−
メチル−プロパン−２−スルフィンアミドの製造

（Ｓ）−２−メチル−Ｎ−（２−アミノ−１−フェネチル）−プロパン−２−スルフィ
ンアミド（７００ｍｇ，２．９６ｍｍｏｌ）をメタノール（７０ｍＬ）に溶解し、酢酸（
１７８ｍｇ，２．９６ｍｍｏｌ）及びホルムアルデヒド水溶液（２６６ｍｇ，８．８８ｍ
ｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した後、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（７４４ｍｇ，１１
．８ｍｍｏｌ）を加え、引き続き２時間反応させた後、ＥＡ及び水で抽出し、さらに水相
をＥＡで２回抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去
した。カラムクロマトグラフィーにより精製したところ、Ｎ−（（１Ｓ）−２−（ジメチ
ルアミノ）−１−フェニル−エチル）−２−メチル−プロパン−２−スルフィンアミド（
２０１ｍｇ，０．５９ｍｍｏｌ，収率２０％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２６９（Ｍ＋１）^＋。

【0065】

ステップ２：（１Ｓ）−Ｎ’，Ｎ’−ジメチル−１−フェニル−エタン−１，２−ヒド
ラジンの製造

Ｎ−（（１Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−１−フェニル−エチル）−２−メチル−プ
ロパン−２−スルフィンアミド（２００ｍｇ，０．７５ｍｍｏｌ）をメタノール（５．０
ｍＬ）に溶解し、塩酸ジオキサン溶液（１０ｍＬ，５Ｍ）を加え、１時間撹拌した後、溶
媒を減圧留去し、（１Ｓ）−Ｎ’，Ｎ’−ジメチル−１−フェニル−エタン−１，２−ヒ
ドラジン（１００ｍｇ，０．４８ｍｍｏｌ，収率６５％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝１６５（Ｍ＋１）^＋。

【0066】

ステップ３：Ｎ−（（１Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−１−フェニル−エチル）イソ
キノリン−６−ホルムアミドの製造

（１Ｓ）−Ｎ’，Ｎ’−ジメチル−１−フェニル−エタン−１，２−ヒドラジン（９０
．０ｍｇ，５５０μｍｏｌ）をＤＭＦ（１０．０ｍＬ）に溶解し、ベンゾトリアゾール−
Ｎ，Ｎ，Ｎ´，Ｎ´−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（１５３ｍｇ
，６００μｍｏｌ）、イソキノリン−６−ギ酸（１０５ｍｇ，６００μｍｏｌ）及びＮ，
Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２８４ｇ，２．１９ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌し
た後、酢酸エチル及び水で抽出し、さらに水相を酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わ
せ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィーに
より精製したところ、ベンジル−Ｎ−（（２Ｓ）−２−（イソキノリン−６−ホルムアミ
ド）−２−フェニル−エチル）カルバメート（５２ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ，収率２４％
）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３２０（Ｍ＋１）^＋。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ＝１０．１１（ｓ，１Ｈ），１０
．００−１０．３（ｄ，Ｊ＝８．４，１Ｈ），９．８８（ｓ，１Ｈ），９．０２（ｓ，１
Ｈ），８．７４−８．７５（ｄ，Ｊ＝６．４，１Ｈ），８．４６−８．５６（ｍ，３Ｈ）
，７．５９−７．６１（ｍ，２Ｈ），７．３４−７．４３（ｍ，３Ｈ），５．６２−５．
６６（ｍ，１Ｈ），３．８６−３．９２（ｍ，１Ｈ），３．４５−３．４９（ｍ，１Ｈ）
，２．８８−２．９２（ｍ，６Ｈ）。

【0067】

実施例６：Ｎ−（３−アミノ−１−（３−クロロフェニル）プロピル）イソキノリン−
６−ホルムアミドの製造。

【0068】

ステップ１：３−アミノ−３−（３−クロロフェニル）アクリロニトリルの製造

室温で３−クロロベンゾニトリル（８．００ｇ，５８．２ｍｍｏｌ）のトルエン（５０
．０ｍＬ）溶液にアセトニトリル（４．７７ｇ，１１６ｍｍｏｌ）及びカリウムｔｅｒｔ
−ブトキシド（１５．０ｇ，１３４ｍｍｏｌ）を加え、６時間撹拌し、酢酸エチル及び水
で抽出し、さらに水相を酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウム
で乾燥させ、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィーにより精製したところ、到
３−アミノ−３−（３−クロロフェニル）アクリロニトリル（４．９９ｇ，２８．０ｍｍ
ｏｌ，収率４８％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝１７９（Ｍ＋１）^＋。

【0069】

ステップ２：３−アミノ−３−（３−クロロフェニル）プロピオニトリルの製造

３−アミノ−３−（３−クロロフェニル）アクリロニトリル（５．００ｇ，２８．０ｍ
ｍｏｌ） をエタノール（１０．０ｍＬ）に溶解し、室温でシアノ水素化ホウ素ナトリウ
ム（２．１１ｇ，３３．６ｍｍｏｌ）及び０．５％のブロモクレゾールグリーンのエタノ
ール溶液を１滴加えた。その後、反応液が黄色に保持されるまで濃塩酸を加え、引き続き
室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧留去し、酢酸エチル及び水で抽出し、さらに水相を酢
酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留
去した。カラムクロマトグラフィーにより精製したところ、３−アミノ−３−（３−クロ
ロフェニル）プロピオニトリル（５．０２ｇ，２７．７ｍｍｏｌ，収率９９％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝１８１（Ｍ＋１）^＋。

【0070】

ステップ３：Ｎ−（１−（３−クロロフェニル）−２−シアノエチル）イソキノリン−
６−ホルムアミドの製造

６−イソキノリンカルボン酸 （１．５０ｇ，８．３０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１５．０
ｍＬ）に溶解し、室温でＨＢＴＵ（３．４７ｇ，９．１３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（３．２
１ｇ，２４．９ｍｍｏｌ）及び３−アミノ−３−（３−クロロフェニル）プロピオニトリ
ル（１．５８ｇ，９．１３ｍｍｏｌ）を加えた。室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧留去
し、酢酸エチル及び水で抽出し、さらに水相を酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせ
、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィーによ
り精製したところ、Ｎ−（１−（３−クロロフェニル）−２−シアノエチル）イソキノリ
ン−６−ホルムアミド（１．８ｇ，５．３６ｍｍｏｌ，収率６５％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３３６（Ｍ＋１）^＋。

【0071】

ステップ４：Ｎ−（３−アミノ−１−（３−クロロフェニル）プロピル）イソキノリン
−６−ホルムアミドの製造

Ｎ−（１−（３−クロロフェニル）−２−シアノエチル）イソキノリン−６−ホルムア
ミド（７０．０ｍｇ，２１０μｍｏｌ）をメタノール（５．００ｍＬ）に溶解し、室温で
ラネーニッケル（１０．０ｍｇ）を加えた。水素ガスの雰囲気、室温で３時間撹拌した。
濾過して固体を除去し、溶媒を減圧留去した。ＭＰＬＣにより精製したところ、Ｎ−（３
−アミノ−１−（３−クロロフェニル）プロピル）イソキノリン−６−ホルムアミド（１
５．２ｍｇ，４２．０μｍｏｌ，収率２０％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３４０（Ｍ＋１）^＋。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝９．３４（ｓ，１Ｈ），８．５６
−８．５４（ｍ，１Ｈ），８．４４（ｓ，１Ｈ），８．２５−８．２３（ｍ，１Ｈ），８
．１０−８．０８（ｍ，１Ｈ），７．９８−７．９６（ｍ，１Ｈ），７．５３−７．５２
（ｍ，１Ｈ），７．４４−７．４１（ｍ，１Ｈ），７．３９−７．３７（ｍ，１Ｈ），７
．３４−７．３１（ｍ，１Ｈ），５．３１−５．２７（ｍ，１Ｈ），２．９２−２．７８
（ｍ，２Ｈ），２．２４−２．０６（ｍ，２Ｈ）。

【0072】

実施例７：４−（３−（３−アミノ−１−（イソキノリン−６−ホルムアミド）プロピ
ル）フェニル）チオフェン−２−カルボン酸エチルの製造
ステップ１：ｔｅｒｔ−ブチル（１−（３−クロロフェニル）−２−シアノエチル）カ
ルバメートの製造

３−アミノ−３−（３−クロロフェニル）プロピオニトリル（５．００ｇ，２７．７ｍ
ｍｏｌ）をＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ／ＭｅＯＨ＝４／１／１（１００．００ｍＬ）の混合溶液に溶
解し、室温で炭酸ナトリウム（８．８０ｇ，８３．０ｍｍｏｌ）及び炭酸ジｔｅｒｔ−ブ
チル（６．６５ｇ，３０．５ｍｍｏｌ）を加えた。室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧留
去し、酢酸エチル及び水で抽出し、さらに水相を酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わ
せ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィーに
より精製したところ、ｔｅｒｔ−ブチル（１−（３−クロロフェニル）−２−シアノエチ
ル）カルバメート（５．６ｇ，２０ｍｍｏｌ，収率７２％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２８１（Ｍ＋１）^＋。

【0073】

ステップ２：ｔｅｒｔ−ブチル（３−アミノ−１−（３−クロロフェニル）プロピル）
カルバミン酸メチルの製造

ｔｅｒｔ−ブチル（１−（３−クロロフェニル）−２−シアノエチル）カルバメート（
２．００ｇ，７．１２ｍｍｏｌ）をメタノール（２５．０ｍＬ）に溶解し、室温でラネー
ニッケル（２００ｍｇ）を加え、水素ガスの雰囲気、室温で３時間撹拌した。濾過して固
体を除去し、溶媒を減圧留去した。ＭＰＬＣにより精製したところ、ｔｅｒｔ−ブチル（
３−アミノ−１−（３−クロロフェニル）プロピル）カルバミン酸メチル（２．０１ｇ，
７．０２ｍｍｏｌ，収率９９％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２８５（Ｍ＋１）^＋。

【0074】

ステップ３：ベンジルｔｅｒｔ−ブチル（１−（３−クロロフェニル）プロパン−１，
３−置換基）ジカルバメートの製造

ｔｅｒｔ−ブチル（３−アミノ−１−（３−クロロフェニル）プロピル）カルバミン酸
メチル（２．００ｇ，７．０２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（５０．０ｍＬ）に溶解
し、室温でトリエチルアミン（２．１３ｇ，２１．１ｍｍｏｌ）を加えた。室温で３時間
撹拌した。溶媒を減圧留去し、酢酸エチル及び水で抽出し、さらに水相を酢酸エチルで２
回抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。カラ
ムクロマトグラフィーにより精製したところ、ベンジルｔｅｒｔ−ブチル（１−（３−ク
ロロフェニル）プロパン−１，３−置換基）ジカルバメート（２．８１ｇ，６．６８ｍｍ
ｏｌ，収率９５％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４１９（Ｍ＋１）^＋。

【0075】

ステップ４：ベンジルｔｅｒｔ−ブチル（１−（３−（４，４，５，５−テトラメチル
−１，３，２−ジオキサボラン−２−イル）フェニル）プロパン−１，３−置換基）ジカ
ルバメートの製造

ベンジルｔｅｒｔ−ブチル（１−（３−クロロフェニル）プロパン−１，３−置換基）
ジカルバメート（２．２０ｇ，５．２５ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（３０．０ｍＬ
）に溶解し、室温でビス（ピナコラート）ジボロン（５．３４ｇ，４２１ｍｍｏｌ）、２
−ジシクロヘキシルホスフィン−２´，６´−ジメトキシビフェニル（４３．１ｍｇ，１
１０μｍｏｌ）、酢酸パラジウム（１１８ｍｇ，５３０μｍｏｌ）及び酢酸カリウム（１
．５４ｇ，１５．８ｍｍｏｌ）を加えた。窒素ガスの保護下、１００℃で４時間撹拌した
。溶媒を減圧留去し、酢酸エチル及び水で抽出し、さらに水相を酢酸エチルで２回抽出し
、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。カラムクロマ
トグラフィーにより精製したところ、ベンジルｔｅｒｔ−ブチル（１−（３−（４，４，
５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボラン−２−イル）フェニル）プロパン−
１，３−置換基）ジカルバメート（１．５ｇ，２．９４ｍｍｏｌ，収率５６％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５１１（Ｍ＋１）^＋。

【0076】

ステップ５：４−（３−（３−（ベンジルオキシホルムアミド）−１−（ｔｅｒｔ−ブ
トキシカルボニルアミド）プロピル）フェニル）チオフェン−２−ギ酸エチルの製造

ベンジルｔｅｒｔ−ブチル（１−（３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２
−ジオキサボラン−２−イル）フェニル）プロパン−１，３−置換基）ジカルバメート（
１．２０ｇ，２．３５ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（１５．０ｍＬ）に溶解し、室温
でＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２（１７２ｍｇ，２４０μｍｏｌ）、炭酸カリウム（９７５ｍｇ
，７．０５ｍｍｏｌ）及び４−ブロモチオフェン−２−カルボン酸エチル（６０８ｍｇ，
２．５９ｍｍｏｌ）を加えた。窒素ガスの保護下、１００℃で４時間撹拌した。溶媒を減
圧留去し、酢酸エチル及び水で抽出し、さらに水相を酢酸エチルで２回抽出し、有機相を
合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィ
ーにより精製したところ、４−（３−（３−（ベンジルオキシホルムアミド）−１−（ｔ
ｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミド）プロピル）フェニル）チオフェン−２−ギ酸エチル
（１．１ｇ，２．０４ｍｍｏｌ，収率８７％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５３９（Ｍ＋１）^＋。

【0077】

ステップ６：４−（３−（１−アミノ−３−（ベンジルオキシホルムアミド）プロピル
）フェニル）チオフェン−２−カルボン酸エチルの製造

４−（３−（３−（ベンジルオキシホルムアミド）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボ
ニルアミド）プロピル）フェニル）チオフェン−２−ギ酸エチル（１．１０ｇ，２．０４
ｍｍｏｌ）をメタノール（１０．０ｍＬ）に溶解し、室温で濃塩酸（５．００ｍＬ）を加
えた。室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧留去した。ＭＰＬＣにより精製したところ、４
−（３−（１−アミノ−３−（ベンジルメトキシアミド）プロピル）フェニル）チオフェ
ン−２−カルボン酸エチル（８６４ｍｇ，１．９７ｍｍｏｌ，収率９７％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４３９（Ｍ＋１）^＋。

【0078】

ステップ７：４−（３−（３−（ベンジルオキシホルムアミド）−１−（イソキノリン
−６−ホルムアミド）プロピル）フェニル）チオフェン−２−カルボン酸エチルの製造

６−イソキノリンカルボン酸（３９０ｍｇ，２．２６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１５．０ｍ
Ｌ）に溶解し、室温でＨＢＴＵ（５７３ｍｇ，２．２６ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（７９４ｍ
ｇ，６．１６ｍｍｏｌ）及び４−（３−（１−アミノ−３−（ベンジルメトキシアミド）
プロピル）フェニル）チオフェン−２−カルボン酸エチル（９００ｍｇ，２．０５ｍｍｏ
ｌ）を加えた。室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧留去し、酢酸エチル及び水で抽出し、
さらに水相を酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ
、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィーにより精製したところ、４−（３−（
３−（ベンジルオキシホルムアミド）−１−（イソキノリン−６−ホルムアミド）プロピ
ル）フェニル）チオフェン−２−カルボン酸エチル（１．０１ｇ，１．６８ｍｍｏｌ，収
率８３％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５９４（Ｍ＋１）^＋。

【0079】

ステップ８：４−（３−（３−アミノ−１−（イソキノリン−６−ホルムアミド）プロ
ピル）フェニル）チオフェン−２−カルボン酸エチルの製造

４−（３−（３−（ベンジルオキシホルムアミド）−１−（イソキノリン−６−ホルム
アミド）プロピル）フェニル）チオフェン−２−カルボン酸エチル（１．００ｇ，１．６
８ｍｍｏｌ）を酢酸（５．００ｍＬ）に溶解し、室温で臭化水素酢酸溶液（５．００ｍＬ
）を加えた。室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧留去した。ＭＰＬＣにより精製したとこ
ろ、４−（３−（３−アミノ−１−（イソキノリン−６−ホルムアミド）プロピル）フェ
ニル）チオフェン−２−カルボン酸エチル（５０．３ｍｇ，０．０９ｍｍｏｌ，収率５．
３％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５９４（Ｍ＋１）^＋。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝９．３４（ｓ，１Ｈ），８．５５−８
．５４（ｍ，２Ｈ），８．４６（ｓ，１Ｈ），８．２５−８．２２（ｍ，１Ｈ），８．１
９−８．１８（ｍ，１Ｈ），８．１２−８．０９（ｍ，１Ｈ），８．０２−８．０１（ｍ
，１Ｈ），７．９７−７．９６（ｍ，１Ｈ），７．８５（ｓ，１Ｈ），７．７０−７．６
７（ｍ，１Ｈ），７．５１−７．５０（ｍ，２Ｈ），５．４０−５．３７（ｍ，１Ｈ），
４．４１−４．３６（ｍ，２Ｈ），３．３６−３．１２（ｍ，１Ｈ），３．０６−２．９
９（ｍ，１Ｈ），２．５１−２．３１（ｍ，２Ｈ），１．４０（ｔ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，
３Ｈ）。

【0080】

実施例８：Ｎ−（３−（ジメチルアミノ）−１−フェニル−プロピル）イソキノリン−
６−ホルムアミドの製造
ステップ１：ｔｅｒｔ−ブチル Ｎ−（３−（ジメチルアミノ）−１−フェニル−プロ
ピル）カルバメートの製造

ｔｅｒｔ−ブチル（１−（３−クロロフェニル）−２−シアノエチル）カルバメート（
５００ｍｇ，１．７８ｍｍｏｌ）をメタノール（１０．０ｍＬ）に溶解し、室温でパラジ
ウム炭素（５０．０ｍｇ）を加えた。水素ガスの雰囲気、室温で３時間撹拌した。ホルム
アルデヒド溶液（５３５ｍｇ，１７．８ｍｍｏｌ）を加え、水素ガスの雰囲気、室温で３
時間撹拌した。濾過して固体を除去し、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィー
により精製したところ、ｔｅｒｔ−ブチル Ｎ−（３−（ジメチルアミノ）−１−フェニ
ル−プロピル）カルバメート（４０２ｍｇ，１．４４ｍｍｏｌ，収率８１％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２７９（Ｍ＋１）^＋。

【0081】

ステップ２：Ｎ´，Ｎ´−ジメチル−１フェニル−プロピル−１，３−ジアミンの製造

ｔｅｒｔ−ブチル Ｎ−（３−（ジメチルアミノ）−１−フェニル−プロピル）カルバ
メート（２００ｍｇ，０．７２ｍｍｏｌ）をメタノール（５．００ｍＬ）に溶解し、室温
で濃塩酸（５．００ｍＬ）を加えた。室温で３時間撹拌し、溶媒を減圧留去した。ＭＰＬ
Ｃにより精製したところ、Ｎ´，Ｎ´−ジメチル−１フェニル−プロピル−１，３−ジア
ミン（１２１ｍｇ，０．６７ｍｏｌ，収率９４％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝１７９（Ｍ＋１）^＋。

【0082】

ステップ３：Ｎ−（３−（ジメチルアミノ）−１−フェニル−プロピル）イソキノリン
−６−ホルムアミドの製造

６−イソキノリンカルボン酸（１００ｍｇ，５７０μｍｏｌ）をＤＭＦ（５．００ｍＬ
）に溶解し、室温でＨＢＴＵ（２１９ｍｇ，５７０μｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（２２４ｍｇ，
１．７３ｍｍｏｌ）及びＮ´，Ｎ´−ジメチル−１フェニル−プロピル−１，３−ジアミ
ン（１００ｍｇ，５７０μｍｏｌ）を加えた。室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧留去し
、酢酸エチル及び水で抽出し、さらに水相を酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせ、
無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィーにより
精製したところ、Ｎ−（３−（ジメチルアミノ）−１−フェニル−プロピル）イソキノリ
ン−６−ホルムアミド（３９．６ｍｇ，１２０μｍｏｌ，収率２１％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３３４（Ｍ＋１）^＋。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝９．８０（ｓ，１Ｈ），８．７４（ｓ
，１Ｈ），８．４６（ｓ，１Ｈ），８．６６（ｄ，Ｊ＝６．０ Ｈｚ，１Ｈ），８．５８
−８．５４（ｍ，２Ｈ），８．３７−８．３５（ｍ，１Ｈ），７．５６−７．５３（ｍ，
１Ｈ），７．４６−７．４３（ｍ，１Ｈ），７．３８−７．３４（ｍ，１Ｈ），５．３４
−５．３１（ｍ，１Ｈ），３．４８−３．３６（ｍ，１Ｈ），３．２９−３．１９（ｍ，
１Ｈ），２．９６（ｓ，６Ｈ），２．５６−２．４６（ｍ，１Ｈ），２．４４−２．３５
（ｍ，１Ｈ）．

【0083】

実施例９：（Ｎ−アゼチジン−イル−ベンジル）イソキノリン−６−ホルムアミドの製
造。
ステップ１：１−ジフェニルメチル−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−アゼチジン−３−ホ
ルムアミドの製造

室温で１−フェニルアゼチジン−３−ギ酸（１０．０ｇ，３７．４ｍｍｏｌ）のジクロ
ロメタン（１００ｍＬ）溶液にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１９．３ｇ，１５
０ｍｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシ−７−アゾベンゾトリアゾール（５．５６ｇ，４１．２ｍ
ｍｏｌ）及び１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（
７．９０ｇ，４１．２ｍｍｏｌ）を加えた後、室温で４時間撹拌し、酢酸エチルで抽出し
、さらに水相を酢酸エチル及び水で２回抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで
乾燥させ、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィーにより精製したところ、１−
ジフェニルメチル−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−アゼチジン−３−ホルムアミド（９．８
ｇ，２９．０ｍｍｏｌ，収率７８％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３１１（Ｍ＋１）^＋。

【0084】

ステップ２：（１−フェニルアゼチジン−３−イル）−フェニル−メタノンの製造

１−ジフェニルメチル−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−アゼチジン−３−ホルムアミド（
５．００ｇ，１６．１ｍｍｏｌ） をテトラヒドロフラン（５０ｍＬ）に溶解し、窒素ガ
スの保護下、０℃でフェニルマグネシウムブロミド（８０．６ｍＬ，１Ｍ，８０．６ｍｍ
ｏｌ）を加え、１時間撹拌した後、室温に昇温し、１時間反応させた。飽和塩化アンモニ
ウム溶液で反応を停止させ、酢酸エチルで抽出し、さらに水相を酢酸エチルで２回抽出し
、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。カラムクロマ
トグラフィーにより精製したところ、（１−フェニルアゼチジン−３−イル）−フェニル
−メタノン（３．０２ｇ，８．２５ｍｍｏｌ，収率５１％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３２８（Ｍ＋１）^＋。

【0085】

ステップ３：（１−ベンジルアゼチジン−３−イル）−フェニル−メチルアミノの製造

（１−フェニルアゼチジン−３−イル）−フェニル−メタノン（５００ｍｇ，１．５３
ｍｍｏｌ） をメタノール（２５ｍＬ）及びジクロロメタン（２５ｍＬ）に溶解し、酢酸
（９０．０ｍｇ，１．５３ｍｍｏｌ）及び酢酸アンモニウム（１．４７ｇ，６．１１ｍｍ
ｏｌ）を加え、窒素ガスの雰囲気で１時間反応させた後、シアノ水素化ホウ素ナトリウム
（３８０ｍｇ，６．１１ｍｍｏｌ）を加えた。反応を飽和塩化アンモニウム溶液で停止さ
せ、酢酸エチルで抽出し、さらに水相を酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせ、無水
硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィーにより精製
したところ、（１−ベンジルアゼチジン−３−イル）−フェニル−メチルアミノ（１９９
ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ，収率３４％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３２９（Ｍ＋１）^＋。

【0086】

ステップ４：テトラｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−（（１−ベンジルアゼチジン−３−イル）
−フェニル−メチル）カルバメートの製造

（１−ベンジルアゼチジン−３−イル）−フェニル−メチルアミノ（１．２０ｇ，３．
６５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（７０ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（２．０１ｇ
，１４．６ｍｍｏｌ） 及び二炭酸ジｔｅｒｔ−ブチル （８７５ｍｇ，４．０２ｍｍｏ
ｌ）を加え、１時間撹拌した後、酢酸エチル及び水で抽出し、さらに水相を酢酸エチルで
２回抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。カ
ラムクロマトグラフィーにより精製したところ、テトラｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−（（１−
ベンジルアゼチジン−３−イル）−フェニル−メチル）カルバメート（１．１０ｇ，２．
３１ｍｍｏｌ，収率６３％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４２９（Ｍ＋１）^＋。

【0087】

ステップ５：テトラｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−（アゼチジン−３−イル（フェニル）メチ
ル）カルバメートの製造

テトラｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−（（１−ベンジルアゼチジン−３−イル）−フェニル−
メチル）カルバメート（１．２０ｇ，２．８０ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）に溶
解し、水酸化パラジウム（３９ｍｇ，１０％）を加えた後、水素ガスの雰囲気で２４時間
撹拌した。珪藻土で濾過した後、溶媒を減圧留去し、テトラｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−（ア
ゼチジン−３−イル（フェニル）メチル）カルバメート（５０３ｍｇ，１．５２ｍｍｏｌ
，収率５４％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２６３（Ｍ＋１）^＋。

【0088】

ステップ６：アリル−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボキサミド）−フェニル−メチ
ル）アゼチジン−１−ギ酸エステルの製造

テトラｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−（アゼチジン−３−イル（フェニル）メチル）カルバメ
ート（１．００ｇ，３．８１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）に溶解し、ト
リエチルアミン（７７０ｍｇ，７．６２ｍｍｏｌ）及びクロロギ酸アリル（３６７ｇ，３
．０５ｍｍｏｌ）を加え、２時間撹拌した後、酢酸エチル及び水で抽出し、さらに水相を
酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧
留去した。カラムクロマトグラフィーにより精製したところ、アリル−３−（（ｔｅｒｔ
−ブトキシカルボキサミド）−フェニル−メチル）アゼチジン−１−ギ酸エステル（５９
７ｍｇ，１．３９ｍｍｏｌ，収率５５％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３４７（Ｍ＋１）^＋。

【0089】

ステップ７：アリル−３−（ベンジルアミン）アゼチジン−１−カルボン酸エステルの
製造

アリル−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボキサミド）−フェニル−メチル）アゼチジ
ン−１−ギ酸エステル（５００ｍｇ，１．４４ｍｍｏｌ）をメタノール（１０．０ｍＬ）
に溶解し、氷浴で濃塩酸（３．００ｍＬ）を加え、２時間撹拌した後、溶媒を減圧留去し
、アリル−３−（ベンジルアミン）アゼチジン−１−ギ酸エステル（１２１ｍｇ，０．３
９ｍｏｌ，収率２７％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２４７（Ｍ＋１）^＋。

【0090】

ステップ８：アリル−３−（イソキノリン−６−ホルムアミド）ベンジル）アゼチジン
−１−ギ酸エステルの製造

室温でアリル−３−（ベンジルアミン）アゼチジン−１−ギ酸エステル（１５０ｍｇ，
６１０μｍｏｌ）のＤＭＦ（１０．０ｍＬ）溶液にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
（３１５ｍｇ，２．４４ｍｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシ−７−アゾベンゾトリアゾール（１
２０ｍｇ，０．６１ｍｍｏｌ）及び１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカ
ルボジイミド塩酸塩（１５６ｍｇ，０．６１ｍｍｏｌ）を加え、室温で４時間撹拌した後
、酢酸エチルで抽出し、さらに水相を酢酸エチル及び水で２回抽出し、有機相を合わせ、
無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィーにより
精製したところ、アリル−３−（イソキノリン−６−ホルムアミド）ベンジル）アゼチジ
ン−１−ギ酸エステル（１２１ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ，収率４４％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４０２（Ｍ＋１）^＋。

【0091】

ステップ９：Ｎ−（アゼチジン−３−イル−ベンジル）イソキノリン−６−ホルムアミ
ドの製造

室温でアリル−３−（イソキノリン−６−ホルムアミド）ベンジル）アゼチジン−１−
ギ酸エステル（１２０ｍｇ，０．３０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（５．００ｍＬ）
溶液にテトラトリフェニルホスフィンパラジウム（３．４５ｍｇ，０．３０ｍｍｏｌ）及
びモルホリン（２６０ｍｇ，２．９９ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した後、溶媒
を減圧留去した。カラムクロマトグラフィーにより精製したところ、Ｎ−（アゼチジン−
３−イル−ベンジル）イソキノリン−６−ホルムアミド（６．０ｍｇ，０．１４μｍｏｌ
，収率４．９％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３１８（Ｍ＋１）^＋。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６ ＋ Ｄ_２Ｏ）：δ ＝ ９．７８（ｓ
，１Ｈ）， ８．６２−８．６８（ｍ，２Ｈ），８．４９−８．５５（ｍ，２Ｈ），８．
２４−８．２６（ｄ，Ｊ＝８．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．３１−７．４５（ｍ，５Ｈ），
５．３９−５．４１（ｄ，Ｊ＝１０．４ Ｈｚ，１Ｈ）， ４．１２−４．１６（ｍ，１
Ｈ）， ３．８５−３．９５（ｍ，２Ｈ），３．７２−３．７８（ｍ，１Ｈ），３．４２
−３．４８（ｍ，１Ｈ）。

【0092】

実施例１０：（メチル−Ｎ−アゼチジン−フェニル）イソキノリン−６−ホルムアミド
の製造。

【0093】

ステップ１：テトラｔｅｒｔ−ブチル（メチル−Ｎ−アゼチジン−３−イル（フェニル
）メチル）カルバメートの製造

テトラｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−（アゼチジン−３−イル（フェニル）メチル）カルバメ
ート（１．００ｇ，３．８１ｍｍｏｌ）をメタノール（１０．０ｍＬ）に溶解し、酢酸（
２６６ｍｇ，３．８１ｍｍｏｌ）及びホルムアルデヒド水溶液（５７２ｍｇ，１９．１ｍ
ｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した後、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（２３９ｍｇ，３．
８１ｍｍｏｌ）を加えた。飽和塩化アンモニウム水溶液で反応を停止させた後、酢酸エチ
ルで抽出し、さらに水相を酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィーにより精製したところ、
テトラｔｅｒｔ−ブチル（メチル−Ｎ−アゼチジン−３−イル（フェニル）メチル）カル
バメート（７９６ｍｇ，２．０３ｍｍｏｌ，収率５３％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２７７（Ｍ＋１）^＋。

【0094】

ステップ２：（１−メチルアゼチジン−３−イル）−ベンジルアミンの製造

テトラｔｅｒｔ−ブチル（メチル−Ｎ−アゼチジン−３−イル（フェニル）メチル）カ
ルバメート（７７３ｍｇ，２．８０ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）に溶解し、氷浴
で濃塩酸（３．００ｍＬ）を加え、２時間撹拌した後、溶媒を減圧留去し、アリル−３−
（ベンジルアミン）アゼチジン−１−ギ酸エステル（０．４８ｇ，２．２ｍｍｏｌ，収率
７８％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝１７７（Ｍ＋１）^＋。

【0095】

ステップ３：Ｎ−（（１−メチルアゼチジン−３−イル）−ベンジル）イソキノリン−
６−ホルムアミドの製造

室温でアリル−３−（ベンジルアミン）アゼチジン−１−ギ酸エステル（４００ｍｇ，
２．２７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０．０ｍＬ）溶液にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミ
ン（１．１７ｇ，９．０８ｍｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシ−７−アゾベンゾトリアゾール（
４３０ｍｇ，２．２７ｍｍｏｌ）及び１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチル
カルボジイミド塩酸塩（４６０ｍｇ，２．２７ｍｍｏｌ）を加え、室温で４時間撹拌し、
酢酸エチルで抽出し、さらに水相を酢酸エチル及び水で２回抽出し、有機相を合わせ、無
水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィーにより精
製したところ、Ｎ−（（１−メチルアゼチジン−３−イル）−ベンジル）イソキノリン−
６−ホルムアミド（２０．２ｍｇ，４８．０μｍｏｌ，収率２．１％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３３２（Ｍ＋１）^＋。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ ＝ ９．８６（ｓ，１Ｈ）， ８．７７
（ｓ，１Ｈ），８．６０−８．６８（ｍ ，３Ｈ），８．３６−８．３８（ｄ，Ｊ＝８．
８ Ｈｚ，１Ｈ），７．５２−７．５４（ｄ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，２Ｈ）， ７．４２−
７．４５（ｍ，２Ｈ）， ７．３６−７．３８（ｍ，１Ｈ）， ５．５１−５．６０（ｍ，
１Ｈ），４．４４−４．５８（ｍ，１Ｈ），４．１１−４．２３（ｍ，２Ｈ），３．９６
−４．０２（ｍ，１Ｈ），３．６２−３．７１（ｍ，１Ｈ），２．９６−３．０１（ｄ，
Ｊ＝１２ Ｈｚ，３Ｈ）。

【0096】

実施例１１：Ｎ−（（Ｓ）−フェニル−（（Ｒ）−テトラヒドロピロール−３−イル）
メチル）イソキノリン−６−ホルムアミド及びＮ−（（Ｒ）−フェニル−（（Ｒ）−テト
ラヒドロピロール−３−イル）メチル）イソキノリン−６−ホルムアミドの製造

ステップ１：（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル ３−（メトキシ（メチル）ホルムアミド）テ
トラヒドロピロール−１−ギ酸エステルの製造

（Ｒ）−１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルテトラヒドロピロール−３−カルボン酸（
１５．０ｇ，６９．７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２００ｍＬ）に溶解し、ＥＤＣＩ（１４．６
ｇ，７６．７ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（１０．４ｇ，７６．７ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（２７
．０ｇ，２０９ｍｍｏｌ）及びジメチルヒドロキシルアミン（６．３８ｇ，１０４．５ｍ
ｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した後、酢酸エチル及び水で抽出し、さらに水相を酢酸エチ
ルで２回抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した
。カラムクロマトグラフィーにより精製したところ、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−３−（メ
トキシ（メチル）カルバモイル）テトラヒドロピロール−１−ギ酸エステル（１５ｇ，５
８ｍｍｏｌ，８３％ 収率）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２５９（Ｍ＋１）^＋和２０３（Ｍ＋１−５６）^＋。

【0097】

ステップ２：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−３−ベンゾイルテトラヒドロピロール−１−ギ
酸エステルの製造

ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−３−（メトキシ（メチル）カルバモイル）テトラヒドロピロ
ール−１−ギ酸エステル（１０ｇ，３８．７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３０ｍＬ）に溶解し、
フェニルマグネシウムブロミド（１９４ｍｍｏｌ，１Ｍ，１９４ｍＬ）を反応系に滴下し
、０^ｏＣで１時間撹拌した後、酢酸エチル及び水で抽出し、さらに水相を酢酸エチルで２
回抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。カラ
ムクロマトグラフィーにより精製したところ、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−３−ベンゾイル
テトラヒドロピロール−１−ギ酸エステル（９．１ｇ，３３ｍｍｏｌ，８４％ 収率）を
得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ＝２７６（Ｍ＋１）^＋和２２０（Ｍ＋１−５６）^＋。

【0098】

ステップ３：（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（（ヒドロキシイミン）（フェニル）メ
チル）テトラヒドロピロール−１−ギ酸エステルの製造

ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−３−ベンゾイルテトラヒドロピロール−１−ギ酸エステル（
１０ｇ，３６．３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）に溶解し、室温でＮａ_２ＣＯ_３（
１１．６ｇ，１０９ｍｍｏｌ）及びヒドロキシルアミン塩酸塩（６．００ｇ，１８２ｍｍ
ｏｌ）を加え、５０^ｏＣで２時間した後、酢酸エチル及び水で抽出し、さらに水相を酢酸
エチルで２回抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去
した。カラムクロマトグラフィーにより精製したところ、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル−３
−（（ヒドロキシイミン）（フェニル）メチル）テトラヒドロピロール−１−ギ酸エステ
ル（８．１ｇ，２８ｍｍｏｌ，７７％ 収率）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ＝２９１（Ｍ＋１）和２３５（Ｍ＋１−５６）^＋。

【0099】

ステップ４：ｔｅｒｔ−ブチル（３Ｒ）−３−（アミノ（フェニル）メチル）テトラヒ
ドロピロール−１−ギ酸エステルの製造

（３Ｒ）−３−（（Ｅ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｃ−フェニル−カルボジイミド）テトラヒ
ドロピロール−１−ギ酸エステル（８．０ｇ，２７ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１５０．００
ｍＬ）に溶解し、室温でラネーニッケルを加え、水素ガスの雰囲気、室温で２時間撹拌し
た後、吸引濾過し、濾液を減圧蒸留して溶媒を除去した。カラムクロマトグラフィーによ
り精製したところ、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−３−（アミノ（フェニル）メチル）テトラ
ヒドロピロール−１−ギ酸エステル（４．９ｇ，１８ｍｍｏｌ，６５％ 収率）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ＝２７７（Ｍ＋１）^＋和 ２２１（Ｍ＋１−５６）^＋。

【0100】

ステップ５：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−３−（（イソキノリン−６−ホルムアミド）−
フェニル−メチル）テトラヒドロピロール−１−ギ酸エステルの製造

イソキノリン−６−ギ酸（３．００ｇ，１７．３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２０．０ｍＬ）
に溶解し、ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ´，Ｎ´−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（７．２６ｇ，１９．０６ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−３
−（アミノ（フェニル）メチル）テトラヒドロピロール−１−ギ酸エステル（４．７９ｇ
，１７．３ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３．３８ｇ，２９．６
ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した後、酢酸エチル及び水で抽出し、さらに水相を酢酸エ
チルで２回抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去し
た。カラムクロマトグラフィーにより精製したところ、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−３−（
（イソキノリン−６−ホルムアミド）−フェニル−メチル）テトラヒドロピロール−１−
ギ酸エステル（６．０１ｇ，１３．９ｍｍｏｌ，８０％ 収率）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ＝４３２（Ｍ＋１）^＋和３７６（Ｍ＋１−５６）^＋。

【0101】

ステップ６：Ｎ−（（Ｓ）−フェニル−（（Ｒ）−テトラヒドロピロール−３−イル）
メチル）イソキノリン−６−ホルムアミド及びＮ−（（Ｒ）−フェニル−（（Ｒ）−テト
ラヒドロピロール−３−イル）メチル）イソキノリン−６−ホルムアミドの製造

ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−３−（（イソキノリン−６−ホルムアミド）−フェニル−メ
チル）テトラヒドロピロール−１−ギ酸エステル（５．００ｇ，１１．６ｍｍｏｌ）を酢
酸エチル（３０．０ｍＬ）に溶解し、濃塩酸（１０．０ｍＬ）を加え、１時間撹拌した後
、溶媒を減圧留去し、Ｐｒｅ−ＰＬＣによりＮ−（（Ｓ）−フェニル−（（Ｒ）−テトラ
ヒドロピロール−３−イル）メチル）イソキノリン−６−ホルムアミド（０．８９ｇ，２
．６９ｍｍｏｌ，２３％ 収率）及びＮ−（（Ｒ）−フェニル−（（Ｒ）−テトラヒドロ
ピロール−３−イル）メチル）イソキノリン−６−ホルムアミド（１．０ｇ，，３．０ｍ
ｍｏｌ，２６％ 収率）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３３２（Ｍ＋１）^＋。
化合物１１ａ：^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝９．３１（ｓ，１Ｈ），
８．５３−８．４９（ｍ，２Ｈ），８．３９（ｓ，１Ｈ），８．１９（ｄ，Ｊ＝８．８
Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝８．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝５．６
Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝７．６ Ｈｚ，２Ｈ），７．４５−７．４１（ｍ，２
Ｈ），７．３７−７．３３（ｍ，１Ｈ），５．１８（ｄ，Ｊ＝１０．０ Ｈｚ，１Ｈ），
３．５５−３．４９（ｍ，１Ｈ），３．４１−３．３６（ｍ，１Ｈ），３．１９−３．１
１（ｍ，２Ｈ），３．００−２．９４（ｍ，１Ｈ），２．４５−２．３９（ｍ，１Ｈ），
２．１１−２．０１（ｍ，１Ｈ）。
化合物１１ｂ：^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝９．３２（ｓ，１Ｈ），
８．５３（ｄ，Ｊ＝５．６ Ｈｚ，１Ｈ），８．４７（ｓ，１Ｈ），８．３９（ｓ，１Ｈ
），８．２０（ｄ，Ｊ＝８．４ Ｈｚ，１Ｈ），８．０５（ｄ，Ｊ＝８．８ Ｈｚ，１Ｈ
），７．９４（ｄ，Ｊ＝６．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝７．６ Ｈｚ，２Ｈ
），７．４５−７．４１（ｍ，２Ｈ），７．３７−７．３３（ｍ，１Ｈ），５．１５（ｄ
，Ｊ＝１０．８ Ｈｚ，１Ｈ），３．６９−３．６４（ｍ，１Ｈ），３．４９−３．４３
（ｍ，１Ｈ），３．３１−３．２６（ｍ，２Ｈ），３．１６−３．１０（ｍ，１Ｈ），１
．９３−１．８５（ｍ，１Ｈ），１．８０−１．７０（ｍ，１Ｈ）。

【0102】

実施例１２：Ｎ−（（Ｒ）−（（Ｒ）−１−メチルテトラヒドロピロール−３−イル）
（フェニル）メチル）イソキノリン−６−ホルムアミドの製造

Ｎ−（（Ｒ）−フェニル−（（Ｒ）−テトラヒドロピロール−３−イル）メチル）イソ
キノリン−６−ホルムアミド（２５０ｍｇ，１．５１ｍｍｏｌ）をメタノール（１５．０
ｍＬ）に溶解し、酢酸（９．１ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）及びホルムアルデヒド水溶液（
０．５８ｍＬ，１３Ｍ，７．５５ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した後、酢酸水素化ホウ
素ナトリウム（０．９６ｇ，４．５３ｍｍｏｌ）を加え、引き続き２時間反応させた後、
酢酸エチル及び水で抽出し、さらに水相を酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせ、無
水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィーにより精
製したところ、Ｎ−（（Ｒ）−（（Ｒ）−１−メチルテトラヒドロピロール−３−イル）
（フェニル）メチル）イソキノリン−６−ホルムアミド（３０ｍｇ，８３ ｕｍｏｌ，１
１％ 収率）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３４６（Ｍ＋１）^＋。
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ＝１１．０８−１０．７７（ｍ，１
Ｈ），９．７７（ｓ，１Ｈ），９．６５−９．６３（ｍ，１Ｈ），８．７６．−８．７０
（ｍ，２Ｈ），８．４７（ｄ，Ｊ＝８．４ Ｈｚ，１Ｈ），８．３７（ｓ １Ｈ），８．
２７（ｔ，Ｊ＝８．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｔ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，２Ｈ），７．
４１−７．３６（ｍ，２Ｈ），７．３２−７．２８（ｍ，１Ｈ），５．１６−５．０７（
ｍ，１Ｈ），３．８２−３．７７（ｍ，１Ｈ），３．５５−３．４８（ｍ，２Ｈ），３．
３０−３．１５（ｍ，１Ｈ），３．１３−３．０５（ｍ，１Ｈ），２．８１（ｓ，３Ｈ）
，１．７９−１．６１（ｍ，２Ｈ）。

【0103】

実施例１３：Ｎ−（（Ｓ）−（（Ｒ）−１−メチルテトラヒドロピロール−３−イル）
（フェニル）メチル）イソキノリン−６−ホルムアミドの製造

Ｎ−（（Ｓ）−フェニル−（（Ｒ）−テトラヒドロピロール−３−イル）メチル）イソ
キノリン−６−ホルムアミド（２５０ｍｇ，１．５１ｍｍｏｌ）をメタノール（１５．０
ｍＬ）に溶解し、酢酸（９．１ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）及びホルムアルデヒド水溶液（
０．５８ｍＬ，１３Ｍ，７．５５ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した後、酢酸水素化ホウ
素ナトリウム（０．９６ｇ，４．５３ｍｍｏｌ）を加え、引き続き２時間反応させた後、
酢酸エチル及び水で抽出し、さらに水相を酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせ、無
水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィーにより精
製したところ、Ｎ−（（Ｓ）−（（Ｒ）−１−メチルテトラヒドロピロール−３−イル）
（フェニル）メチル）イソキノリン−６−ホルムアミド（２１ｍｇ，５８ ｕｍｏｌ，７
．７％ 収率）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３４６（Ｍ＋１）^＋。
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ＝１１．１７−１０．９０（ｍ，１
Ｈ），９．７９（ｓ，１Ｈ），９．６５−９．４８（ｍ，１Ｈ），８．８１．−８．７０
（ｍ，２Ｈ），８．４９（ｄ，Ｊ＝８．４ Ｈｚ，１Ｈ），８．４０−８．３９（ｍ，１
Ｈ），８．２８（ｄ，Ｊ＝８．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．５７−７．４９（ｍ，２Ｈ），７
．４１−７．３７（ｍ，２Ｈ），７．３２−７．２９（ｍ，１Ｈ），５．１９−５．１０
（ｍ，１Ｈ），３．６３−３．５１（ｍ，２Ｈ），３．２５−３．１０（ｍ，２Ｈ），３
．０８−２．９１（ｍ，１Ｈ），２．７６−２．７３（ｍ，３Ｈ），２．３７−２．２３
（ｍ，１Ｈ），２．０３−１．８５（ｍ，１Ｈ）。

【0104】

実施例１４：Ｎ−（（Ｓ）−フェニル−（（Ｓ）−テトラヒドロピロール−３−イル）
メチル）イソキノリン−６−ホルムアミド及びＮ−（（Ｒ）−フェニル−（（Ｓ）−テト
ラヒドロピロール−３−イル）メチル）イソキノリン−６−ホルムアミドの製造

実施例１１のステップ１の（Ｒ）−１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルテトラヒドロピ
ロール−３−カルボン酸を（Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルテトラヒドロピロ
ール−３−カルボン酸に変更する以外、実施例１１のステップ１からステップ６の方法と
同様にしてＮ−（（Ｓ）−フェニル−（（Ｓ）−テトラヒドロピロール−３−イル）メチ
ル）イソキノリン−６−ホルムアミド（２８ｍｇ，総収率５．１％）及びＮ−（（Ｒ）−
フェニル−（（Ｓ）−テトラヒドロピロール−３−イル）メチル）イソキノリン−６−ホ
ルムアミド（２２ｍｇ，総収率４．９％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３３２（Ｍ＋１）^＋。
化合物１４ａ：^１ＨＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：９．９６（ｓ，１Ｈ
），９．７９−９．８１（ｄ，Ｊ＝ ８．４ Ｈｚ ，１Ｈ）， ９．５１（ｓ，２Ｈ）
，８．８８（ｓ，１Ｈ），８．７５−８．７６（ｄ，Ｊ＝６ Ｈｚ ，１Ｈ），８．５７
−８．６１（ｍ，２Ｈ），８．３７−８．４０（ｍ，１Ｈ），７．５８−７．５９（ｍ，
２Ｈ），７．３６−７．４０（ｍ，２Ｈ），７．３０−７．３１（ｍ，１Ｈ），５．０９
−５．１４（ｍ，１Ｈ）， ３．２９−３．３１（ｍ，１Ｈ）， ３．３６−３．１８（ｍ
，１Ｈ），３．２−３．０６（ｍ，１Ｈ），２．８３−２．８９（ｍ，２Ｈ），２．２３
−２．２７（ｍ，１Ｈ），１．８２−１．８８（ｍ，１Ｈ）。
化合物１４ｂ：^１ＨＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ＝９．９０（ｓ，
１Ｈ），９．８４（ｄ，Ｊ＝ ７．６ Ｈｚ，１Ｈ），９．６４（ｓ，Ｈ），９．５０（
ｓ，Ｈ），８．８８（ｓ，１Ｈ），８．７４（ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ ，１Ｈ），８．４
９−８．５７（ｍ，２Ｈ），８．３５（ｄ，Ｊ＝８．８ Ｈｚ ，１Ｈ），７．５５−７
．５７（ｍ，２Ｈ），７．３７−７．４０（ｍ，２Ｈ），７．３０−７．３１（ｍ，１Ｈ
），５．０６（ｔ，Ｊ＝ ６．０ Ｈｚ，１Ｈ），３．５２（ｍ，１Ｈ），３．２８（ｍ
，１Ｈ），３．０６（ｍ，３Ｈ），１．６４（ｍ，１Ｈ）。

【0105】

実施例１５：Ｎ−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−１−（３−メトキシフェニル）
エチル）イソキノリン−６−ホルムアミドの製造
ステップ１：Ｎ−（（１Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−１−（３−メトキシフェニル
）エチル）イソキノリン−６−ホルムアミドの製造

実施例１のステップ１のベンズアルデヒドの代わりに３−メトキシベンズアルデヒドを
使用する以外、実施例１のステップ１からステップ３、実施例５のステップ１からステッ
プ３の方法と同様にして、Ｎ−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−１−（３−メトキシ
フェニル）エチル）イソキノリン−６−ホルムアミドを得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３５０（Ｍ＋１）^＋。
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝９．７５（ｓ，１Ｈ），８．８７（ｓ，
１Ｈ），８．６６（ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，１Ｈ），８．５５−８．５３（ｍ，１Ｈ），
８．４８（ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，１Ｈ），８．４５−８．４２（ｍ，１Ｈ），７．３９
（ｔ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．２０−７．１６（ｍ，２Ｈ），６．９９−６．９
６（ｍ，１Ｈ），５．８０−５．７６（ｍ，１Ｈ），３．９９−３．９３（ｍ，１Ｈ），
３．８５（ｓ，１Ｈ），３．６７−３．６２（ｍ，１Ｈ），３．１１−３．０８（ｍ，６
Ｈ）。

【0106】

実施例１６：Ｎ−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−１−（３−クロロフェニル）エ
チル）イソキノリン−６−ホルムアミドの製造
ステップ１：Ｎ−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−１−（３−クロロフェニル）エ
チル）イソキノリン−６−ホルムアミドの製造

実施例１のステップ１のベンズアルデヒドの代わりに３−クロロベンズアルデヒドを使
用する以外、実施例１のステップ１からステップ３、実施例５のステップ１からステップ
３の方法と同様にして、Ｎ−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−１−（３−メトキシフ
ェニル）エチル）イソキノリン−６−ホルムアミドを得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３５４（Ｍ＋１）^＋。
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ）：δ＝９．９１（ｓ，１Ｈ），９．０６（ｓ，
１Ｈ），８．７２−８．６４（ｍ，３Ｈ），８．５７（ｄ，Ｊ＝８．８ Ｈｚ，２Ｈ），
７．６９（ｓ，１Ｈ），７．４８−７．４１（ｍ，２Ｈ），５．８２（ｄ，Ｊ＝１１．６
Ｈｚ，１Ｈ），４．０６（ｔ，Ｊ＝１１．６ Ｈｚ，１Ｈ），３．６４（ｔ，Ｊ＝１３
．６Ｈｚ，１Ｈ），３．１２（ｓ，３Ｈ），３．０８（ｓ，３Ｈ）。

【0107】

本発明の有益な効果を説明するために、以下の試験例を提供する。
試験例１：ＲＯＣＫ２阻害活性の検出
ＲＯＣＫ２は、Ｓ６Ｋ（ＫＲＲＲＬＡＳＬＲ）ポリペプチド基質をリン酸化してＡＴＰ
をＡＤＰに変換することができる。キナーゼ反応後に、ＡＤＰ−Ｇｌｏ^TM試薬を加えてキ
ナーゼ反応を停止させ、残りのＡＴＰを完全に消耗する。次いで、キナーゼ検出試薬を加
えることにより、ＡＤＰがＡＴＰに変換されると同時に、ＡＴＰがＵｌｔｒａ−Ｇｌｏ^TM
ルシフェラーゼにより発光信号に変換され、発光信号はキナーゼの活性に正の相関がある
。

【0108】

以下の手順に従ってＲＯＣＫ２阻害活性の検出を行う。
（１）検出緩衝液：４０ ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．５，２０ｍＭｍｇＣｌ_２，０．１
％ＢＳＡ（ｗ／ｖ），５０μＭ ＤＴＴ
（２）１２μＬ２．５ｘ０．１μｇ／ｍｌ ＲＯＣＫ２作動液を９６ウェルＰＣＲプレ
ートに加える。
（３）６μＬ６ｘ化合物作動液を９６ウェルＰＣＲプレートに加え、均一に混合し、２
５℃で１０分間プレインキュベートする。
（４）１２μＬ ２．５ｘ ３７．５ μｇ／ｍｌ Ｓ６Ｋ基質及び１２．５μＭ Ａ
ＴＰ混合作動液を加え、３０℃で６０分間インキュベートする。
（５）２５μＬ反応混合物を取り、新しい９６ウェルＰＣＲプレートに加えた後、２５
μＬ ＡＤＰ−Ｇｌｏ^TM試薬を加えて均一に混合し、２５℃で４０分間インキュベートし
た後、反応を停止させる。
（６）反応停止後の混合物を４０μＬ取り、新しい９６ウェルＰＣＲプレートに加えた
後、４０μＬキナーゼ検出試薬を加えて均一に混合し、２５℃で４０分間インキュベート
する。
（７）ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ（冷光）信号値を読み取り、阻害率を計算する。

【0109】

上記方法に従って実施例で製造された化合物に対してＲＯＣＫ２の阻害活性を検出し、
試験結果を表１に示し、各化合物のＩＣ_５０を測定する。表１中：
＋：ＩＣ_５０測定値が５００ｎＭ超えである。
＋＋：ＩＣ_５０測定値が５００ｎＭ以下かつ１００ｎＭ以上である。
＋＋＋：ＩＣ_５０測定値が１００ｎＭ未満である。

【0110】

表１：ＲＯＣＫ２に対する化合物の阻害活性

上記実験は、本発明の化合物がＲＯＣＫ２に対して良好な酵素学的阻害活性を有すること
を示している。

【0111】

試験例２：細胞インサイチュ免疫ブロット（Ｉｎ−Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ）による
ミオシン軽鎖リン酸化の検出
ラット平滑筋細胞株Ａ７ｒ５を使用する。ＲＯＣＫ２は、ミオシン軽鎖Ｔ１８／Ｓ１９
の２つのアミノ酸部位をリン酸化することにより細胞骨格を変化させる。Ａ７ｒ５細胞を
９６ウェル透明底黒色プレートに接種する。培養条件は、１０％ＦＢＳのＤＭＥＭである
。一晩培養した後、４時間血清飢餓培養を行った後、無血清培地中で細胞を化合物と１時
間インキュベートした。

【0112】

ｐｈｓｐｈｏ−ＭＬＣ−Ｔ１８／Ｓ１９特異性抗体及び第２検出抗体を使用し、細胞イ
ンサイチュ免疫ブロットによりミオシン軽鎖のリン酸化レベルを検出する。未処理の細胞
を陽性対照とし、一次抗体でインキュベートされてないサンプルを陰性対照とし、細胞内
総タンパク質を内部参照とする。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５．０１ソフトウェア
を使用し、傾きが変化する非線形回帰曲線によりフィッティングすることでＥＣ_５０値を
確定する。

【0113】

上記方法に従って実施例で製造された化合物に対してラット平滑筋細胞株Ａ７ｒ５のミ
オシン軽鎖リン酸化の阻害活性を検出する。試験結果を表１に示す。各化合物のＩＣ_５０
を測定する。表１中：
＋：ＩＣ_５０測定値が１μＭ超えである。
＋＋：ＩＣ_５０測定値が１μＭ以下かつ２５０ｎＭ以上である。
＋＋＋：ＩＣ_５０測定値が２５０ｎＭ未満である。

【0114】

表２：ラット平滑筋細胞株Ａ７ｒ５に対する化合物の阻害活性

【0115】

上記試験の結果は、本発明の化合物がラット平滑筋細胞株Ａ７ｒ５に対して良好な阻害
活性を有し、さらに、本発明の化合物がミオシン軽鎖Ｔ１８／Ｓ１９の２つのアミノ酸部
位に対するＲＯＣＫ２のリン酸化よる細胞骨格の変化を阻害することができ、これに関連
する疾患を治療する潜在的活性を有することを示している。

【0116】

試験例３：動物実験（正常眼圧モデル）
２４匹の雄ニュージーランド白ウサギを６匹／群で４群に分ける。体重を考慮したコン
ピューターランダム化アルゴリズムにより動物を各群にランダムに割り当てる。実験開始
の３日前から１日前まで、眼圧測定の操作に適応するようにすべての動物を訓練し、訓練
は、約３時間の間隔で１日に３回実行する。眼圧測定は、ＴｏｎｏＶｅｔ眼圧計を使用す
る。試験動物を固定し、測定される眼をＴｏｎｏＶｅｔ眼圧計に垂直である位置に置く。
眼圧の読み取りが安定するまで眼圧を少なくとも３回測定する。最後の３つの安定した測
定データ（±３ｍｍＨｇ）の平均値を最終眼圧値とする。検出化合物を秤量し、生理食塩
水で使用濃度まで溶解する。実験開始時に、測定される化合物、対照品Ｋ１１５又は陰性
対照溶媒（５０μＬ）を各動物の右眼に投与し、左眼に生理食塩水を滴下する。薬物滴下
のＰｒｅ、１、２、４、６、８、１０時間後に眼圧を測定する。ｓｔｕｄｅｎｔ−ｔ検定
により単一時点のデータを分析する。ＡＮＯＶＡ検定により眼圧−時間曲線を分析する。
Ｐ値が０．０５未満である場合、統計的に有意である。データは、平均値±標準誤差で表
される。

【0117】

実験結果（図１から３）は、本発明の化合物５及び化合物１１ａが対照品Ｋ１１５と類
似する眼圧降下活性を有し、かつ作用時間がより長いことを示している。

【0118】

試験例４：動物実験（高眼圧単眼モデル）
１０匹の雄ニュージーランド白ウサギを５匹／群で２群に分ける。体重を考慮したコン
ピューターランダム化アルゴリズムにより動物を各群にランダムに割り当てる。実験開始
の３日前から１日前まで、眼圧測定の操作に適応するようにすべての動物を訓練し、訓練
は、約３時間の間隔で１日に３回実行する。眼圧測定は、ＴｏｎｏＶｅｔ眼圧計を使用す
る。試験動物を固定し、測定される眼をＴｏｎｏＶｅｔ眼圧計に垂直である位置に置く。
眼圧の読み取りが安定するまで眼圧を少なくとも３回測定する。最後の３つの安定した測
定データ（±３ｍｍＨｇ）の平均値を最終眼圧値とする。検出化合物を秤量し、生理食塩
水で使用濃度まで溶解する。高眼圧前を誘導する前に、両眼の眼圧値を測定して基礎眼圧
として記録する。次いで、ペントバルビタールナトリウム（５０％）５０ｍｇ／ｋｇの静
脈注射により白ウサギを麻酔する。３０−Ｇ針を用いて一時的な前房穿刺を構築し、白ウ
サギの右眼前房に５０μＬの粘性物質を注射することで高眼圧を誘導し、左眼に等体積の
生理食塩水を投与する。その後、綿棒で前房穿刺を押して房水逆流を防止する。各群のモ
デリング動物の右眼に試験化合物を投与し、５０ μＬ／眼でそれぞれ０、３、及び６時
間目に１日３回投与する。左眼に対して同じ時点で等体積の生理食塩水又は特定の溶媒を
投与する。０、１、２、３、４、６、８時間後に眼圧を測定する。ｓｔｕｄｅｎｔ−ｔ検
定により単一時点のデータを分析する。ＡＮＯＶＡ検定により眼圧−時間曲線を分析する
。Ｐ値が０．０５未満である場合、統計的に有意である。データは、平均値±標準誤差で
表される。

【0119】

実験結果（図４）は、本発明の化合物１１ａが高眼圧に対して良好な降圧活性を有する
ことを示している。

【0120】

本発明の上記試験は、本発明の実施例に係る化合物が良好なＲＯＣＫ阻害活性を有し、
ＲＯＣＫ活性異常に関連する疾患の治療に効果的に適用できることを示している。

【0121】

以上より、本発明の式Ｉで表される新しい化合物は、良好なＲＯＣＫ阻害活性を示し、
ＲＯＣＫ活性異常に関連する疾患の臨床治療に新しい医学的可能性を提供する。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】